PT99669B

PT99669B - Processo para a preparacao de composicoes nematodicidas contendo como ingrediente activo 2r,5r-di-hidroximetil-3r,4r-di-hidroxipirrolidina (dmdp) como ingrediente activo

Info

Publication number: PT99669B
Application number: PT99669A
Authority: PT
Inventors: Thomas James William Alphey; Andrew Nicholas Edmund Birch; Linda Elizabeth Fellows; Walter Morris Robertson
Original assignee: British Tech Group
Priority date: 1990-12-03
Filing date: 1991-12-02
Publication date: 1998-01-30
Also published as: AU8937991A; CY1883A; BR9107112A; WO1992009202A1; IE66397B1; HU213526B; ES2086554T3; HU9301640D0; JPH06503318A; ZA919447B; US5376675A; IL100225A0; GB9026271D0; CN1049557C; AU658379B2; CA2097497A1; CA2097497C; ATE135527T1; CY2077B1; IL100225A

Description

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

Esta invenção refere-se ao controlo de doenças causadas pelos nemátodos parasíticos em plantas e mamíferos.

TÉCNICAS ANTERIORES

Desde o principio da década de 40 que existem disponíveis muitos compostos químicos activos contra os nemátodos parasitas de plantas. Estes compostos têm desencadeado frequentemente efeitos tóxicos indesejáveis, por exemplo, o fumigante dibromocloropropano foi retirado do mercado a partir de 1977, pois pensou-se que este originava esterilidade nos trabalhadores. Durante os anos 60 os fumigantes tipo nematodicidas foram vastamente substituídos por nematodicidas sistémicos granulares. Estes últimos têm sido usados desde o aparecimento dum composto representativo, o oxamilo. Estes compostos são principalmente oxiêcarbamatos ou derivados de organofosfatos, e devido à sua toxicidade têm de ser usados de uma forma rigorosamente controlada. De acordo, seria benéfico possuir agentes anti-nemátodo que fossem favoráveis ambientalmente, isto é, sendo eles mesmos não tóxicos e não atingindo os seus produtos de degradação organismos não considerados alvo.

Técnicas anteriores sao referidas numa secção separada, após o Sumário da Invenção sem o que o texto não f

seria claro.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção desenvolve o uso do composto 2R, 5R-di-hidroximetil-3R, 4R-di-hidroxipirrolidina (DMDP)

ou um seu sal de adição de ácido, para uso no controlo de doenças causadas por nemátodos parasitas de plantas, incluindo plantas úteis e mamíferos. A invenção compreende também semen tes revestidas ou impregnadas com DMDP ou com um seu sal.

mecanismo através do qual o DMDP que controla as doenças causadas por nemátodos parasitas de plantas, pode compreender qualquer efeito nematotóxico, nematostático, ou anti-alimentação quer em nemátodos adultos ou jovens; a inibi_ ção do desenvolvimento das formas larvares de nemátodos, inibição de formação de buracos na raiz devido à alimentação de nemátodos? e outras realizações de efeito sobre nemátodos que evitam a aquisição e/ou transmissão de viroses vegetais.

DMDP é um produto de origem natural e tem revelado baixa fitotoxicidade.

’Ι

TÉCNICAS ANTERIORES COMPLEMENTARES

A descoberta e extracção do DMDP são descritos por L.E.Fellows e G.W.J. Fleet em Alkaloid Glycodidase Inhibitors from Plants (Em Natural Products Isolation, G.H. Wa gman e R. Cooper, Edições Elsevier, Amesterdão, 1988, páginas 540-565). Nesta revista certas propriedades do DMDP, incluindo a actividade insecticida e actividade restringente de insectos, são determinadas a partir de ensaios de alimentação, também referidos. Estas são mais claramente apresentadas em L.E.Fellows, Chemistry in Britain, Páginas 842-844 (1987). Es tas e outras propriedades do DMDP são descritas mais extensivamente no Capítulo 11 do Plant Nitrogen Metabolism, Plenum Publishing Corporation, 1989, Páginas 395-427, por L.E. Fello ws et. al., especialmente nas páginas 410 (que refere S.V. Evans et. al., Entomol. Exp. Appl. 37 257-261 (1985), 411 (que refere os próprios autores do trabalho e W.M. Blaney et.al., Entomol., Exp. Appl. 36, 209-216 (1984) e 415. Ver também L. E.Fellows et. al., em Swainsonine and Related Glycosidase Tn hibitors, L. James, A. D. Elbein, R. J. Molineux e C. D. Warren, Edições Iowa State University Press, 1989, Páginas 396416. As propriedades do DMDP aqui referidas não são indicativas dum efeito anti-nemátodo.

DESCRIÇÃO DAS REALIZAÇÕES PREFERIDAS

Uma outra vantagem do DMDP recaí sob o seu pro cesso de aplicação de quando são tratadas plantas especialmen te duma colheita. Muitos dos compostos anti-nemátodos são apl cados ao solo por arremesso e são aí incorporados usando cul-

ο

turas rotativas. 0 DMDP pode ser aplicado a folhas, que de alguma forma produzem uma acção antinemátodo nas raízes da planta. Possivelmente o DMDP é deslocado através do floema, mas tal não é certo. Consequentemente o DMDP pode ser aplicado sob a forma de pulverizador de folhas, em vez de, ou em adição aos processos de aplicação convencionais acima mencionados. Uma dosagem adequada para aplicação ao solo de DMDP es tá compreendida entre pelo menos 24 Kg/ha até ao máximo 48 Kg /ha a 20 cm de profundidade. 0 DMDP pode também ser aplicado a sementes de plantas em pré-tratamento antes de serem semeadas .

DMDP é solúvel em água e pode consequentemente ser aplicado sem agentes de superfície ou agentes auxiliares de dispersão. Ά concentração preferida do ingrediente activo e a taxa de aplicação depende do processo de aplicação e tipo de efeito desejado, por exemplo, pode diferir para a nemototoxicidade e para a inibição da transmissão virai. Para aspersão sobre as folhas sugere-se que as plantas sejam aspergidas com uma solução compreendendo entre 0,001 a 5% (p/v) correspondendo a 0,01 a 50g/l, de preferência entre 0,1 a 35 g/l, sendo preferencial entre 0,1 a 10 g/l do ingrediente activo, até a aspersão terminar. Baixas concentrações podem ser mais úteis em alguns casos, enquanto que as altas concentrações são ferquentemente toleráveis.

DMDP revela as suas propriedades contra uma vasta variedade de nemátodos, por exemplo nemátodos dos nódulos das raízes, nemátodos de vesícula e nemátodos transmissores de viroses. Deve realçar-se a sua actividade contra os ne mátodos danificadores de colheitas dos seguintes géneros: Meloidogyne, Globodera, Heterodera, Radopholus, Pratylenchus, Hirschmanniella, Scutellonema, Helicotylenchus, Tylenchus, Rg tylenchus, Ditylenchus, Longidorus, Xiphinema. No que se refere a nemátodos que infestam mamíferos, o DMDP é activo contra uma vasta variedade de nemátodos helmínticos, especialmente aqueles dos seguintes géneros: Haemonchus, Teladorsagia nematodirus, Trichostrongylus, Dictyocaulus e Cooperia, particularmente as espécies Haemonchus contortus, e Teladorsagia circumcincta (préviamente classificada como Ostertagia circuir cincta).

DMDP pode ser extraído a partir de bentos Der ris elliptica (leguminosa) como descrito por A. Welter et al. (Phytochem., 1976, 15, 747-749) ou pode ser sintetizado a par tir de D-glucose (Fuhrman et al, Nature, 1984, 307, 755-758); G.W.J. Fleet e R. W. Smith tetrahedron Letters 26 (11) 1465-1468 (1985) ou a partir de L-sorbose (P. Card et al., J. Org Chem., 1985, 50, 891-893).

A descrição anterior para o DMDP aplica-se tam bém aos seus sais de adição de ácido, que pode ser um qualquer que seja compatível com o uso pretendido, por exemplo agriculturamente ou veterináriamente aceitáveis, se o uso fôr apenas dirigido a plantas ou animais não-humanos, respectivamente. Tais sais podem ser preparados a partir dum processo convencional a partir da base livre.

Os exemplos que se sefuem ilustram a invenção. Tween é uma Marca Registrada. As unidades ppm significam uma solução compreendendo mg do composto ensaio por litro de água, em soluções para ensaios in vitro ou em soluções para aplicação às superfícies de folhas. Nos Exemplos, o DMDP reprsenta a base livre.

EXEMPLO 1

Experiências de transmissão e aquisição do vírus.

efeito dum produto quimico sobre a aquisição de virus por um vector nemátodo foi ensaiado expondo-se nemá todos isentos de vírus a uma vegetal originário infectado pe lo vírus em presença do produto químico para ensaio. Por comparação das taxas subsequentes da transmissão virai entre nemátodos não tratados, a eficácia do composto químico pode ser determinada.

Devido ao facto dum produto químico afectar a transmissão do vírus esta pode ser determinada por aplicação do produto químico após os nemátodos terem adquirido o vírus, ao mesmo tempo que estes se alimentam nas plantas receptoras.

As experiências foram realizadas em potes plásticos de 25 cm3 mantidos em gabinetes com temperatura controlada (Taylor & Brown, Nematol. medit., 1974, 2, 171-175) usan do para tal sementeiras de três semanas de Vilm Petunia hybri da. A combinação nemátodo/vírus usada foi o Xiphinema diversi caudatum que é o vector para o Arabis Mosaic Virus.

As sementeiras de Petunia foram colocadas em 22ml duma mistura de areia/marga. Quarenta e oito horas depois as plantas foram inoculadas com o vírus. Vinte e quatro horas depois, 5 nemátodos adultos forma adicionados a cada pote. (Os produtos químicos de ensaio são adicionados nessa altura se a aquisição do vírus está a ser testada). Existiram 10 a 15 replicações de cada tratamento. Após 4 semanas os nemátodos foram extraídos e então adicionados ao solo em que as plantas receptoras isentas de vírus foram crescendo. (Se a '7’ /•τ transmissão de vírus está a ser ensaiada, os produtos químicos em ensaio são adicionados ao mesmo tempo). Após terem pas_ sado quatro semanas os nemátodos foram novamente extraídos e contados. As excrecências das raízes das plantas receptoras foram contadas, as raízes maceradas e a seiva foi aplicada às folhas das plantas Chenopodium quinoa (indicador de vírus).

Doze dias depois as plantas C. quinoa foram exa minadas em relação aos sintomas de vírus. Fizeram-se 10 a 15 replicações de cada tratamento em ambos os ensaios de vírus. Em todos os casos os controlos decorreram sem a adição de pro dutos químicos.

Os produtos químicos testados foram DMDP (15 e 30 ppm) e um composto oxamilo nematotóxico convencional (7 ppm) .

A Tabela la mostra o efeito de inibição da formação de excrecências da raiz induzida pelo DMDP e a percentagem de aquisição de vírus em comparação com os valores de controlo.

A Tabela lb revela o efeito de inibição da formação de excrecências na raiz induzido por DMDP e a percentagem de transmissão em comparação com o valor de controlo.

TABELA la - Alimentação e aquisição de Vírus Mosaico Arabis por parte de Xiphinema diversicaudatum

Tratamento	N^e Médio NS	%de aquisição de	NS de
	excrecências	de vírus	çóes
Controlo	1.5	33	15
DMDP 15 ppm	0.5 (65%)	27 (18%)	15
DMDP 30 ppm	0.4 (74%)	7 (79%)	14

= 10 =

Oxamilo 7 ppm 0.3 (80%) 0 (100%) 10

() ê a percentagem de redução no tratamento em comparação com o controlo.

TABELA lb - Alimentação e transmissão do vírus Mosaico Arabis por parte de Xiphinema diversicaudatum.

Tratamento NSMédio N^Q excrecên	%de de i	aquisiçao de N^e de re-
	cias raís	zí rus	plicações
Controlo	1.5	64		11
DMDP 15 ppm	0.4 (74%)	72	(0%)	10
DMDP 30 ppm	0.5 (56%)	18	(72%)	11
Oxamilo 7ppm	0.7 (53%)	1	(98%)	11
Ovalores de	tratamento mais elevados	do que o	controlo.

EXEMPLO 2

Ensaio de incubação.

O ensaio de resíduos verifica o efeito dos prg dutos químicos sobre os resíduos do ovo da Globodera pallida,; o nemátodo quisto da batata branca (PCN).

quisto PCN de tamanho e coloração uniformes foi colocado num tubo de ensaio com 0,25 ml de composto a ensaiar (concentrações 50 ppm e 100 ppm) e 0,75 ml de difusão de raiz de batata. A difusão de raízes normalmente estimula as populações jovens a retirarem a partir de ovos nos quistos a

Fizeram-se quatro aplicações repetidas de cada tratamento. Du as vezes por semana, o líquido foi removido e o número de jovens retirados vivos e mortos, foram contados. A mistura dispersa/liquido foi completada após cada contagem de nemátodos. Os tubos foram armazenados a 19θ0 entre as contagens.

A Tabela 2a mostra o número de jovens incubados mortos ou vivos, sob a forma de valores médios obtidos a partir das quatro aplicações seguidas. Os mesmos dados estão expressos como efeito percentual. Esta Tabela mostra que o DMDP diminuiu grandemente o número de nascimentos de jovens a partir de quistos.

Estas experiência foi repetida usando Globodera rostochiensis. A Tabela 2a mostra a percentagem de diminuição de nemátodos vivos em comparação com o controlo após quatro semanas. A partir da tabela 2b, pode ver-se que o DMDP desenvolve superiores ao seu sal de adição de ácido.

Tabela 2a - Ensaio de incubação de nemátodos quisto de batata

Tratamentos

Jovens criados vivos mortos (% aumentado)

Jovens desenvolvido (% de diminuição) dias de exposição- 15

controlo	698	16	714
DMDP 50 ppm	374 (46)	68 (325)	442 (38)
DMDP lOOppm	203 (71)	91 (468)	294 (59)
dias de exposição	- 24
controlo	1257	32	1289
DMDP 50 ppm	1056 (16)	112 (250)	1168 (9)
DMDP lOOppm	601 (52)	150 (368)	751 (42)

= 12

Q

Tabela 2b - Ensaio de incubaçao de quisto

Composto a ensaiar CONC (ppm)	220	100	50	25	12.	5 6.25	3.12
DMDP	32	38	52	52	41	0	10
DMDP. HCL	0	0	0	0	27	31	21

* todas as % são baseadas nos valores de controlo

EXEMPLO 3

Ensaio de toxicidade in vitro

Grupos de 10 adultos activos Xiphinema diversicaudatum foram picados manualmente para vidros de relógio individuais que continham água destilada. A um dado momento, os lotes de nemátodos foram transferidos para dentro de aliquotas de 1 ml a ensaiar, a várias concentrações do referido com posto, ou para o controlo usou-se 1 ml de água destilada. Fizeram-se três aplicações seguidas de cada tratamento. A dois intervalos, 48 e 72 horas depois, o número de nemátodos que se encontravam imobilizados foram registados. Foram considera dos como imobilizados aqueles que não se moviam quando estimu lados por picagem com uma cerda. Todos os ensaios foram reali^ zados a 5°C.

A Tabela 3a mostrou a toxicidade in vitro do DMDP acima de uma gama de várias concentrações. A percentagem de imobilidade apresentada é corrigida a partir das imobilida des controlo usando a fórmula de Abbott. É de nutar a diminui çao da toxicidade in vitro a 200 ppm e acima. Existe também uma gota anómala de toxicidade a 25 ppm.

Q ι 1 = 13

í„

Em ensaios similares encontram-se diferenças na toxicidade de nemátodos adultos e jovens. A Tabela 3b mostra os valores EC5o(^concentração efectiva requerida para imobilizar 50% do número total de nemátodos) calculados a partir dos resultados.

Esta experiência foi repetida, substituindo o X, diversicaudatum por Globodera rostochiensis. Estes resulta dos estão referidos na Tabela 3c a partir dos quais se pode ver que tanto o DMDP como os seus sais de adição de ácido são tóxicos para os nemátodos.

Tabela 3a -	Toxicidade	in	vitro
Composto a	Con (ppm)	10	25 50	100	200	500
ensaiar			(%)	percentagem de	imobilidade
DMDP 48 horas		15	5 11	35	0	0
72 horas		39	9 63	78	4	0
Tabela 3b -	Toxicidade	in	vitro	- valores	(ppm)
Composto a	Estádio	de		Duração	de ensaio
ensaiar	ensaios			48 hrs	72	hrs
DMDP	Adultos			87.0	44	.0
DMDP	Jovens			94.0	0	.08
Tabela 3c -	Toxicidade	in	vitro
Composto ensaio '	Cone (ppm)	2.5 10	2.5	50	100
DMDP				25 37	44	50	73
DMDP. HCl				88 56	50	50	50

ύ.

Λ

Vtí··' it

EXEMPLO 4

A Tabela 4 mostra a actividade em função da dose de DMDP, usando três ensaios: A experiência de separação de vasos, experiência de separação de minivasos e experiências de ensaio em excrecência de plantas.

A) Experiência de separação de vasos ensaio revela que os agentes anti-nemátodos da invenção possuem um efeito anti-alimentador e um efeito re pulsivo sobre os nemátodos e um efeito nematodicida.

Usou-se uma reparação de vaso, isto é, um vaso dividido em duas secções por um material de malha fina (ver Aphey et. al., Eevue Nematol. 1988, 11(4), 339-404). Cada lado foi enchido com 37 ml de terra (3:1 mistura de areia:). Os ensaios de compostos nas concentrações apresentadas na Tabela 4 foram acrescidos à terra no lado em que as sementes de Petu nia foram plantadas. No outro lado adicionaram-se cem Xiphine ma adultos diversicaudatum. Fizeram-se oito aplicações segui_ das de cada tratamento.

dias depois as duas metades do vaso foram separadas e os nemátodos foram extraídos de cada metade da terra. As excrecências da raiz foram registradas nas plantas dos lados tratados (Tabela 4a (i))· Os números de nemátodos vivos e mortos de cada metade foram contados e apresentados na Tabela 4a (i)

A Tabela 4a (i) revela que o DMDP possui uma acção anti-alimentadora contra nemátodos a todas as concentrações ensaiadas. A Tabela 4a (ii) revela que 80 ppm de DMDP

possui também um efeito nematotóxico em que no lado da planta foram imobilizados mais nemátodos do que no vaso em que se aplicou oxamilo.

B) Ensaio em mini-vaso

Este ensaio identifica o efeito nematodicida do quimico no solo e seu efeito no comportamento de alimentação do nemátodo. As sementes de Petunia foram plantadas em 22 ml de solo (areia: 3:1). A solução do composto ensaio ou água (controlo) com 5 a 10 adultos Xipbinema diversicaudatum foram adicionados ao solo. Fizeram-se 10 réplicas-test por cada tra^ tamento. 3 semanas depois os nemátodos foram extraídos e o nú mero de excrecências das raízes induzidas pela alimentação dos nemátodos a partir das raízes foram extraídas e registradas e expressas sob a forma de % média de redução do valor do controlo.

A Tabela 4b mostra que o DMDP possui uma acção anti-alimentadora ou repelente de nemátodos. A taxa mais efec tiva de DMDP foi de 25 ppm.

C) Ensaio de excrecências de raízes

No ensaio de excrecências de raízes, sementes de tomate, estimuladas para produzir raízes adventícias finas por remoção do sistema de raiz principal foram plantadas em tubo de ensaio compreendendo 25g de areia seca peneirada fina 350 Meloidogyne incógnita (J2) e DMDP, numa solução em água.

efeito do DMDP sobre a capacidade dos nemátodos produzirem excrecências de raízes nas raízes das plantas foi estudada du rante um período de 10 a 12 dias. Fizeram-se 10 réplicas a cada tratamento.

$ β

ί/ y / fa = 16

A Tabela 4c mostra os resultados, a partir dos quais se verifica que o DMDP é igualmente efectivo no intervalo entre 2,5 a 25 ppm mas menos efectiva a 50 e a 240 ppm. Os vários ensaios indicam

DMDP usados entre 2,5 ppm níveis idênticos de actividade de e 100 ppm.

Tabela 4 - Experiência de separação de vasos

Químico	conc.(ppm)	Redução média vesículas (raiz)
		como % de controlo
DMDP /	15	63
DMDP /	30	83
DMDP /	80	89
4a(ii)

Quimica a Total de Nemátodos Nemátodos

ensaiar	nemátodos	móveis	imóveis
DMDP	16	27	15	24	10	3	5
DMDP	32	24	14	21	11	3	3
DMDP	80	25	15	12	11	13	4
Oxamilo	15	17	21	13	14	4	7
Controlo	-	33	16	31	12	2	4
4b - Experiência	mini	-vaso
Quimico	(ppm)		Reduç.	média	vesícula/raíz	como % cont

nemátodos/vaso 10 nemátodos/vaso

DMDP/8	70	-
DMDP/14	70	-
DMDP/25	94	72
DMDP/50	72	83
DMDP/100	65	100

> Γ

Ο

J,

4c. Ensaio de vesícula

Quimico/conc (ppm)	Redução vesículas/raíz como % con-
DMDP/ 2.5	76
DMDP/12.5	70
DMDP/25	72
DMDP/50	50
DMDP/240	47

EXEMPLO 5

Modo de aplicação

a) Aplicação à raiz ensaio com o agente anti-nemátodo quando absorvido sistematicamente pelas plantas. Foi adaptado o ensaio mini-vaso. As raízes de Petunia hibrida foram removidas e as extremidades cortadas dos caules a partir dos quais cresceram as raízes recentemente formadas foram colocadas numa solução do composto ensaio (concentrações apresentadas na Tabela 5) durante 24 horas antes do inicio da experiência. Os efeitos destas plantas tratadas com X. Diversicaudatum foram comparados com as plantas cujas extremidades cortadas foram imersas em água durante 24 horas. A Tabelz 5 que as raízes apanhadas após a aplicação ao solo é um processo adequado de tratamento com DMDP.

b) Aplicação às folhas ensaio mini-vaso e o ensaio de vesículas descritos no Exemplo 4 foram repetidos mas os compostos ensaios

foram administrados pintando-se as folhas das sementeiras de tomate. Neste ensaios, 0,4 ml do composto ensaio em solução em água a 200 ppm, ou apenas em água, conjuntamente com 0,05% de uma solução humedecida com Tween 80, foram aplicados sobre as folhas.

As reduções de excreções de raízes em 86% no ensaio de mini-vaso e 79% no ensaio de excrecêncías de raízes sobre os controlos, revelam que o efeito dos compostos ensaio foram expressos em sistemas de raízes para desenvolver uma protecção contra nemátodos.

Tabela 5 - Actividade posterior à recolha de raízes-detalhes como no texto

Quimico % em relaçao ao controlo

Oxamilo/ 50	92
DMDP/ 15	83
DMDP/ 30	100
DMDP/ 100	58

EXEMPLO 6

Dados de fitotoxicidade

DMDP foi ensaiado em três diferentes espécies de plantas a 200 ppm durante 14 dias usando processos descritos no ensaio mini-vaso. Deixaram-se as sementes crescer durante 16 dias e a % de crescimento foi medida relativamente às plantas de controlo. Foram medidas os comprimentos das raízes e dos caules.

= 19 =

A Tabela 6 mostra o efeito do DMDP sobre o crescimento das plantas. Todos os números são a percentagem de crescimento em relação ao controlos (100% = igual ao controlo, 100% = ou superior ao controlo).

A relva quando tratada com DMDP apenas cresceu cerca de 65% do peso controlado. Tal não pode ser significati vo no campo pois a concentração de DMDP usada (200 ppm) foi duas vezes superior à sua dosagem efectiva requerida para con trolo de nemátodos.

Tabela 6 ados de Fitotoxicidade (todos a 200 ppm de solo água

Quimico	Comprimento Raís	Comp Caule	Peso TOM	Total OSR	RG
TOM	ORS	RG	TOM	OSR	RG
Oxamilo	107	84	108	91	95	93	103	104	107
DMDP	90	98	105	90	97	74	100	100	65

EXEMPLO 7

Ensaio em caixas

Caixas limpas pequenas, de 60 ml, foram enchidos com, aproximadamente, 25g de terra. Adicionaram-se lml do composto para ensaio e lml de água compreendendo 1500 ovos PCN. Pequenos pedaços de batata Desiree foram colocados dentro do composto. Tampas perfuradas 3 a 4 vezes foram usadas para fechar as caixas e, então, colocadas num tabuleiro, cobbertos com polietileno, manteve-se uma temperatura constante de 20 C. 4 semanas depois procedeu-se à primeira contagem de quistos, após o que se fizeram contagens nas semanas até ao fim da oitava. A Tabela 7 revela a percentagem de redução de quistos, em comparação ao controlo. Pode ver-se que o DMDP

Λ = 20 & // / foi efectivo na redução do número de desenvolvimento de quistos .

Tabela 7

Composto ensaio conc(ppm) 3.12 6.26 12.5 25 50 100 200

DMDP 7 0 14 46 43 35 7

DMDP.HCi 0 0 0 7 ⁷ 43 0

EXEMPLO 8

Processos de aplicaçao II

Como uma extensão do Exemplo 5 outras experimen tações foram levadas a cabo em areia e terra, com várias plan tas e nemátodos para demonstrar os diferentes processos de aplicação do DMDP.

(1) Ensaio com areia ensopada num tubo de ensaio

Tubos de ensaio de vidro (7,5 cm X 2,5 cm) foram enchidos com 24,5g de areia seca peneirada. 4 ml de água com impurezas foram adicionados e foi feito um buraco na arei, a, lml do composto para ensaio e lml de água compreendendo 350 Meloidogyne javanica foram adicionados imediatamente antes de tomate terem sido plantados no buraco. Todos os tubos foram deixados em repouso durante 14 dias. Nestaexperiência e na 8(2) abaixo, as sementeiras foram preparadas cortando-se as suas raízes e permitindo-se a regeneração de raízes adventícias antes do uso. A Tabela 8(i) mostra o efeito do DMDP e do seu sal de adição de ácido num intervalo de concentrações. Os resultados são apresentados como percentagem de nemátodos vivos em relação ao controlo (sem composto de ensaio).

(2) Ensaio Foliar em areia num tubo de ensaio tubos de vidro de ensaio (7,5 cm X 2,5 cm) foram enchidos com 24,5g de areia seca peneirada. 5 ml de água nao pura foram adicionadas sementes de tomate plantadas no .tubo. La de algodão não absorvente foi inserida em torno da base da semente para proteger a areia do composto quimico aspergido. Os tubos colocados num incubador durante a noite.

No dia seguinte cada planta foi pulverizada com 0,1 ml de produto quimico para ensaio a partir dum secador e voltou para a incubadora. No dia seguinte, 1 ml de água com preendendo 350 Meloidogyne javanica foram adicionados a cada tubo. Os tubos foram mantidos em repouso 14 dias. A Tabela 8 (2) revela o efeito do DMDP e o seu sal de adição de ácido so bre várias plantas. Os resultados são apresentados em percentagens na Tabela 8 (1).

(3) Aplicação às folhas

Encheram-se vasos de 2,5 cm com 75g de Levington universal e areia numa taxa de 3:1. As plantas de tomate (34 dias de idade) foram plantados nestes vasos e adicionou-se Iml de água. A terra foi protegida com papel de filtro e os vasos foram deixados durante a noite numa câmara de vidro. No dia seguinte, cada planta foi pulverizada com 0,3 ml do composto a ensaiar a partir dum fluxo de ar e posteriormente colocados na câmara de vidro durante a noite. No dia seguinte foi removido o papel de filtro e adicionaram-se à terra 350 Meloidogyne javanica ou Melodoidogyne incógnita e lml de água Os vasos foram, então, deixados durante 12 dias após o que se contou o número de nemátodos vivos e mortos. A tabela 8(3) mostra o efeito do DMDP sobre a Meloidogyne javanica e b) Meloidgyne incógnita.

= 22 ®

.•Μ (4) Aplicação à terra

A técnica de 8 (3) foi repetida excepto que no primeiro dia, lml do composto a ensaiar e lml de água com nemátodos foram adicionados à terra e os vasos foram deixados durante 14 dias em repouso. Os resultados são apresentados da forma usual na Tabela 8 (4).

Tabela 8 (1) Areia ensopada % Redução vesículas por M.javanice

Composto a	ensaiar(ppm)	200	100	50	25	10	5	1
DMDP. HCl			47	51	30	18	43	13
DMDP (EXP)	1	77		72		79		76
DMDP (EXP)	2	56	57	53	56	68	63	71

•Ότ;

$

Μ

Claims

REIVINDICAÇÕES:

la. Processo para a preparação de composições nematodicidas contendo como ingrediente activo 2R,5R-di-hidroximetil-3R,4R-di-hidroxipirrólidina (DMDP) da fórmula ou um seu sal de adição aceitável para o controlo parasitas em plantas ou de ácido fisiologicamente da presença de nemátodos em animais mamíferos, caraeterizado pelo facto de se misturar uma quantidade nematodicidamente eficaz de DMDP com um dissolvente fisiologicamente aceitável contendo opcionalmente um agente tensioactivo e/ou outros agentes auxiliares, empregando-se preferivelmente entre cerca de 0,001 e 5 por cento de ingrediente activo, em peso/volume mais preferivelmente entre 0,01 e 1 por cento em peso/volume.
2a. Processo de acôrdo com a reivindicação 1, caraeterizado pelo facto de, como dissolvente, se empregar água.
3a. Processo para combater a presença de nemátodos, nomeadamente, dos géneros Meloidogyne, Globodera ou Xiphinema com uma composição nematodicida de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo facto de se pulverizar sobre as folhas das plantas a proteger uma composição nematodicida de acordo com as reivindicações 1 ou 2, até as folhas ficarem a escorrer, numa quantidade que corresponde de preferência a uma dosagem de subst ncia activa do solo compreendida entre cerca de 24 quilogramas e 48 quilogramas de ingrediente activo por hectare.
4a. Processo para combater a presença de nemátodos em plantas, nomeadamente, dos géneros referidos na reivindicação 3, caracterizado pelo facto de se tratar, impregnar ou revestir as sementes das plantas cultivadas, antes de proceder à sua sementeira, com soluções aquosas de DMDP contendo de preferência entre cerca de 0,01 e 50 gramas de ingrediente activo por litro.
5a. Processo para combater a presença de nemátodos em plantas de culturas, nomeadamente, dos géneros mencionados na reivindicação 3, caracterizado pelo facto de se aplicar ao solo onde se desenvolvem as plantas uma composição nematodicida de acordo com as reivindicações 1 ou 2, numa quantidade tal que a dosagem de ingrediente activo aplicada à profundidade de cerca de 20cm em relação à superfície do terreno esteja de preferência compreendida entre cerca de 24 e cerca de 48 gramas de ingrediente activo por hectare.
6à. Processo para combater a presença de nemátodos parasitas em organismos de animais mamíferos,

nomeadamente, dos géneros Haemonchus, Teladorsagia, Nematodirus, Trichostrongylus, Dictyocaulus ou Cooperia, caracterizado pelo facto de se administrar aos referidos animais uma solução aquosa de DMDP que contém, preferivelmente, entre cerca de 0,01 e 1 grama de ingrediente activo por litro.

Lisboa, 2 de Dezembro de 1991