RS20070075A - 15beta-supstituisani steroidi sa selektivnom estrogenskom aktivnošću - Google Patents

Abstract

Pronalazak se odnosi na 15β-supstituisana steroidna jedinjenja sa selektivnom aktivnošću estrogenskih receptora Formule (I), gde je R1, C 1-5 alkil, C1.12 acil, di(C1-5 alkil) aminokarbonil, (C1-5 alkil) oksikarbonil ili sulfamoil, R2 je H, C1-3 alkil, C2-3 alkenil ili C2-3 alkinil, od kojih svaki može po potrebi da bude supstituisan halogenom, R3 je C1-2 alkil, etenil ili etinil, svaki po potrebi može da bude supstituisan halogenom i R4 je H ili C1-l2 acil.

Description

15p-SUPSTITUISANI STEROIDI SA SELEKTIVNOM ESTROGENSKOM

AKTIVNOŠĆU

Predmetni pronalazak se odnosi na 15(3-supstituisana steroidna jedinjenja koja imaju selektivnu estrogensku aktivnost, na farmaceutske preparate koji sadrže ova jedinjenja, na primenu datih jedinjenja u terapiji i na primenu datih jedinjenja u proizvodnji lekova za lečenje ili prevenciju oboljenja povezanih sa poremećajem estrogcnskog receptora ili regulaciju ili lečenje ili prevenciju drugih fizioloških stanja povezanih sa poremećajem estrogenskog receptora.

Jedinjenja sa afinitetom za estrogenske receptore su, već godinama, široko rasprostranjena za primen za lečenje širokog spektra medicinskih stanja. Budući daje raspodela estrogenskih receptora u tkivima veoma široka, od velikog je značaja je terapeutska primena liganada estrogenskih receptora. Posebno, njihova primena je implicirana u kontracepciji i prevenciji ili lečenju: • Problema u klimakterij umu: valunga, znojenja i promene raspoloženja; • Gubitka koštane mase usled: osteoporoze, osteoartritisa, hipokalcemije, Paget-ove bolesti, osteomalacije, osteohalistereze, multiplih mijeloma; • Frakture kostiju; • Urinarne inkontijencije, urogenitalne atrofije, vaginalne i kožne atrofije, akni, melanom, hirsutizma;

• Benignog oboljenja dojke, raka dojke, ginekomastije; i

• Kardiovaskulanih bolesti, visokih nivoa holsterola, visokog nivoa LDL-a, bolesti koagulacije, restenoze, vaskularne proliferacije ćelija glatkih mišića.

Uprkos dugoročnoj dostupnosti jedinjenja, posebno steroida, koji se mogu koristiti za ublažavanje stanja povezanih sa poremećajem estrogenskih receptora, još uvek postoji potreba za novim ekonomičnim, efikasnim i bezbednim lečenjima lekovima.

Jedinjenja koja pokazuju estrogensku aktivnost se trenutno koriste kod žena kao lekovi za lečenje tegoba vezanih za peri- i/ili post-menopazu (klimakteričnih) i osteoporoze. Međutim, ženama sa intaktnim uterusom, ovi neselektivni estrogeni, npr., konjugovani konjski estrogeni, 17(3-estradiol i 17a-etinil-17P-estradiol se ne mogu prepisati za dugotrajnu terapiju (> 3 meseca) budući da ova jedinjenja indukuju visok stepen endometrijske proliferacije (promene slične folikulanoj fazi) dovodeći do krvarenja, endometrijske hiperplazije i/ili endometrijskog kancera. Generalna klinička praksa obuhvata kombinovanje ovih neselektivnih estrogena sa progestagenskim jedinjenjem, dobro poznata procedura za smanjenje endomtrijske stimulacije i pomeranja endometrijum iz faze slične folikulanoj do faze slične lutealnoj i/ili atrofičnog endometrijuma. Nažalost, dodatak progestagenskog jedinjenja ovom tertmanu povećava rizik od nastanka raka dojke, što je pokazano u nedavnim Woman's Health Initiative (WHI) ispitivanjima (videti Writing Group for the Women's Health Initiative Investigators. Rizik i benefiti estrogena sa progestinom kod zdravih žena u postmenopauzi: Glavni rezultati od Woman's Health Intiative kontrolisano ispitivanje slučajnog uzorka. JAMA 2002; 288:321-333).

Pored otkrića dve različite podvste estrogenskih receptora, označeni kao ERa i ERp\sada postoji mogućnost da se otkrije i podvrste - selektivni estrogenski receptor ligandi. Budući da dve podvrste pokazuju različitu distribuciju u humanim tkivima, svako od podvrste-selektivnih jedinjenja može da obezbedi efikasno lečenje ili prevenciju oboljenja povezanih sa poremećajem cstrogenskog receptora sa minimalnim neželjenim efektima.

Nađeno je da serija 15|3-supstituisanih estradiol derivata predstavlja snažen (potentne) steroide koji poseduju visok nivo funkcionalne selektivnosti za a-podvrstu estrogenskog receptora

Predmetni pronalazak opisuje jedinjenja Formule I:

gdeje,

R<1>, H, Ci_5alkil, Ci-12 acil, di-(Ci_5alkil)aminokarbonil, (C1.5alkil)oksikarbonil ili sulfamoil, R2 je H, Cualkil, C2-3alkenil ili C2-3alkinil, svaki po potrebi supstituisan halogenom,

R3 je Ci-2alkil, etenil ili etinil, svaki po potrebi može biti supstituisan halogenom i R<4>jeHiliC,-,2acil.

Steroidi gde R<1>i/ili R<4>nisu/nije vodonik, nazivaju se prolekovima.

Izraz Ci-jalkil, kao što je korišćen u definiciji za Formulu I, predstavlja razgranatu ili nerazgranatu alkil grupu sa 1-5 atoma ugljenika. Primeri ovih grupa su metil, etil, izopropil, tercijerna butil i pentil. Slično, izraz Ci-salkil i Ci-2alkil odnosi se na (razgranatu ili nerazgranatu) alkil grupu sa 1-3 i 1-2 atoma ugljenika.

Izraz C2_3alkenil predstavlja alkinil grupu sa 2-3 atoma ugljenika i jednom trostrukom vezom. Primeri ovakvih grupa su etinil i propinil.

Izraz Ci-i2acil predstavlja acil grupu izvedenu od karboksilne kiseline sa 1-12 atoma ugljenika. Acil grupa je ugljovodonik koji može biti razgranat, nerazgranat, zasićen ili nezasićen. Primeri ovuih grupa su formil, acetil, propanoil, propenoil, pivaloil, heptanoil, dekanoil i undekanoil. Takođe obuhvaćene definicijom C|-i2acil grupa su i grupe izvedene od dikarboksilnih kiselina kao što je hemi-maloil, hemi-sukcinoil i hemiglutaroil.

Primeri di-(Ci_5alkii) aminokarbonil grupa je dimetilkarbamoil.

Primer (Ci-5alkil)oksikarbonil grupe je etoksikarbonil.

Halogen može biti jedan ili više atoma halogena, kao što je jedan ili više atoma hlora ili fluora.

U realizaciji predmetnog pronalaska, R je Ci^alkil, C2-3alkenil ili C2-3alkinil, od kojih svaka može o potrebi biti supstituisana halogenom.

U sledećoj realizaciji, i R<1>i R<4>su H.

U narednoj realizaciji, R<1>je H, R2 je H, Ci^alkil, C2-3alkienil ili C2-3alkinil, R3 je C]_2alkil, etenil ili etinil i R4 je H.

12*' 3

U sledećej realizaciji, R je H, R je H ili C^alkil po potrebi supstituisan halogenom, R je C).2alkil po potrebi supstituisan halogenom i R<4>jeH.

U narednoj realizaciji, R<1>je H, R2 je H ili Ci^alkil, R1 je Ci-2alkil i R4 je H.

U sledećoj realizaciji R<1>je H, R<2>je H ili Ci^alkil, R<3>je metil, a R<4>je H.

U narednoj realizaciji jedinjenje je 7a-etil-15(3-metil-19-nor-17a-pregna-l,3,5(10)-trien-20-ien-3,17p-diol.

U sledećoj realizaciji, R<1>je H, Ci.salkii ili Cn2acil, R2 je H ili Ci-3alkil, R3 je Ci-2alkil i R4 je H ili Cikadi.

U sledećoj realizaciji, R<1>je H, Ci^alkil ili Ci.^acil, R2 je Ci-3alkil, R3 je metil i R4 je H ili Crnacil.

U narednoj realizaciji, R<1>je H, Ci-salkil ili Ci-^acil, R2 je etil, R3 je metil i R4 je H ili Ci-nacil.

U sledećoj realizaciji, R1 je H ili Ci.^acil R2 je H ili Ci^alkil, R3 je metil i R4 je H ili Ci.^acil.

U narednoj realizaciji, R<1>je H ili Ci.^acil, R2 je etil, R3 je metil i R4 je H ili Ci.^acil.

Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu sintetisati prema postupcima opšte poznatim u organskoj herniji, a posebno u herniji steroida. Videti na primer, Fried, J. And Edwards, J.A.' Organic reactions in Steroid Chemistry, ' Volumes I and II,van Nostrand Reinhold Companv, Nevv York, 1972; i C. Djerassi,' Steroid Reactions\Holden-Day, Inc., San Francisco, 1963. Prosečan stručnjak može leko sprovesti varijacije na predložene sheme.

Supstrat A, polazni materijal za proceduru sinteze prikazanoj na Shemi I je sintetisan u 4 koraka. Prvo dodavanjem konjugata organometalnih vrsta (npr. kuprati) u C17-zaštićen estra-4,6-dien-3-one dajući tražene 7a-supstituisane estar-4-en-3-one. Male količine nastalog 7(3-izomera se mogu lako ukloniti ili hromatografijom ili kristalizacijom u ovom stupnju sinteze ili po potrebi u kasnijim stupnjevima. 7a-supstituisani estrenoni sc lako pretvaraju u aromatične dodatkom npr., halogenizacijom/dehalogenizacijom, u 7a-estrone, koji posle alkilovanja na C3 i uklanjanja zaštite na C17 daje supstrat A.

a,(3-nezasićeni keton C je dobijen posle oksidacije silil enol etra B dodatkom npr. paladijum

diacetata. Mihael-ova adicija organometalnih vrsta npr. dialkil kurpata u C daje adukt D. Metil estron D posle uklanjanja zaštite dodatkom npr., bortrifluorid dimetilsulfidnog kompleksa daje fenol E, koji je ponovo zaštićen kao npr., sililetar F. Dodavanjem npr. litijum acetilida u keton F nastaje adukt G, nakon čega sledi uklanjanje zaštitne grupe sa silil etra dodatkom npr.

tetrabutilamonijum fluorida pri čemu se dobij a željeni proizvod.

(Prolek) derivati slobodnih hidroksi grupa jedinjenja G ili H se jednostavno dobijaju od ovih jedinjenja prema procedurama poznatim u tehnici npr., acilovanjem hloridom karboksilne kiseline u prisustvu baze ili acilovanjem karboksilnom kiselinom u prisustvu agensa za kuplovanje kao što je dicikloheksilkarbodiimid itd., nakon čega sledi uklanjanje zaštitne grupe sa silil etar u slučaju jedinjenja G.

Jedinjenje formule I sa grupama kao što je defmisano u zahtevu 1 i gde su R 1i R 2 vodonici, nađeno je da imaju konzistentno bolju selektivnost za a-podvrstu estrogenskog receptora u kombinaciji sa visokom potentnosti a- estrogenskog receptora, tj. koji ima ponentnost od ili veću od 1.0% (u odnosu na 17|3-estradiola koji ima EC50približno 4x10-1 IM i po definiciji potentnost od 100%). Ovo jedinjenje je antagonist a- estrogenskog receptora i najmanje je 10-puta manje aktivno kao (3- estrogenski receptor i/ili parcijalni agonist (3-strogenski receptor, sa efikasnošću od ili manjom od 60% maksimalne aktivacije kao što je indukuje 17P-estradiol. Ovo za rezultat ima visoku funkcionalnu selektivnost za a-estrogenski receptor tj. selektivnu aktivaciju a-estrogenskog receptora uz neistovremenu ili delimičnu aktivaciju P-estrogenskog receptora.

Steroidi Formule I gde R<1>i/ili R<2>nisu/ nije vodonici/vodonik, su prolekovi, koji ne moraju da ispune gore navedene definicije. Ovi lekovi su konvertovani metaboličkim procesima u telu u jedinjenja gde su R<1>i R<2>, vodonici, a koja jedinjenja ispunjavaju date definicije.

Dalje, selektivni (estrogenski) ligandi predmetnog pronalaska neočekivano ne indukuju visok stepen endometrijske proliferacije (promene kao u fazi sličnoj folikularnoj) pa se prema tome može koristiti kao lek za (dugotrajno) lečenje i/ili prevenciju peri- i/ili post-menopauznih (klimakteričnih) tegoba i osteoporoze bez dodavanja progestagenskih jedinjenja.

Profil aktivacije selektivnih estrogenskih receptora jedinjenja predmetnog pronalaska čini ih pogodnim za primenu u terapiji.

Predmetni pronalazak se dalje odnosi na primenu jedinjenja Formule I za proizvodnju leka za lečenje ili prevenciju oboljenja povezanih sa poremećajem estrogenskog receptora ili regulaciju ili lečenje ili prevenciju drugih fizioloških stanja povezanih sa poremećajem estrogenskog receptora.

U sledećem aspektu, pronalazak se odnosi na primenu jedinjenja Formule I za proizvodnju leka za hormonsku supstitucionu terapiju ili lečenje hormonima (hormonsku terapiju).Ova primena je posebno pogodna za žene sa indikacijom per- i/ili post-menopazalnih (klimakteričnih) tegoba i osteoporoze.

U sledećem aspektu, pronalazak se odnosi na primenu jedinjenja Formule I za proizvodnju leka za primenu kao kontracepcija. U ovu svrhu jedinjenje predmetnog pronalaska se može administrirati kao deo režima koji obuhvata i odgovarajuću količinu progestagena. Ovaj režim je dobro poznat u oblasti kontracepcije.

Administracija jedinjenja predmetnog pronalaska je u mnogome potpomognuta proizvodnjom odgovarajućih doznih oblika. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske preparate ili dozne oblike koji sadrže jedinjenje predmetnog pronalaska u kombinaciji sa (a) farmaceutskim prihvatljivim eksipijensima, poput onih opisanih u Gennaro et al., Remmington: The Science and Practice of Pharmacv, 20<th>Edition, Lippincott, Williams and Wilkins, 2000; Posebno videti deo 5: farmaceutska proizvodnja. Odgovarajući eksipijensi su opisani u npr., Handbook of Phramaceutical Excipients, 2<nd>edition; Editors A. Wade and P.J. Weller, American Pharmaceutical Association, Washington, The Pharmaceutical Press, London, 1994. Smeše jedinjenja predmetnog pronalaska i (a) farmaceutski prihvatljivih eksipijenasa se mogu komprimovati u čvrste dozne jedinice, kao što su tablete ili se mogu procesirati u kapsule ili supozitorije. U obliku farmaceutski prihvatljivih tečnosti, jedinjenja se takođe mogu aplicirati i kao formulacije injekcija u obliku rastvora, suspenzije, emulzije ili kao sprej, npr., nazalni ili bukalni sprej. Za dobijanje doznih jedinica, npr. tableta, razmatrana je primena konvencionalnih aditiva kao što su punioci, boje, polimerna vezivna sredstva i slično. Generalno, može se koristiti bilo koji farmaceutski aditiv. Jedinjenja pronalaska se takođe mogu ubaciti u implantat, vaginalni prsten, flaster, gel ili bilo koji drugi preparat sa trenutnim i/ili kontinuiranim oslobađanjem.

Odgovarajući punioci sa kojima se farmaceutski preparati mogu pripremiti i administrirati, su laktoza, škrob, celuloza i njihovi derivati islično ili njihove smeše upotrebljene u odgovarajućim količinama.

Dozna količina predmetnog pronalaska će biti uobičajenog reda veličine za estrogenska jedinjenja, npr., od 0.01 do 100 mg, odnosno 0.1 do lOmg po adminstraciji.

Predmetni pronalazak je prikazan sledećim primerima:

Primer 1

Pobijanje 7a- etil- 15P- metil- 19- nor- 17a- pregna- l, 3, 5( 10)- trien- 20- ien- 3 , 17[ 3- diol ( 8) ( videti

shemu II)

Pobijanje 7a- etil- 3- metoksi- estra- 1, 3, 5( 10), 15- tetraen- 17- on ( 3).

7a-etil-3-metoskiestron 1 je dobijen od 17(3-17-(acetiloksi)-estra-4,6-dien-3-on i etilmagnezijum bromid analogno postupku opisanom u EP 0869132 Al (videti Primer I i Shemu I, Jedinjenja 1-5).

Rastvor 7a-etil-3-metoksiestron 1 (lg) u THF-u ( 3ml) je u kapima na -60°C dodat u rastvor LDA [pripremljen dodatkom 1.6M rastvora n-BuLi u heptan (4.7ml) na -50°C u diizopropilamin (2.1ml) u THF-u (15ml)]. Smeša jemešana lAh na -60°C i zatim tretirana trimetilsilil hloridom (2ml). Reakciona smeša je zatim ugrejana na 0°C u perioduo d Vzh zatim dodata u 10% vodeni rastvor NH4CI (lOOml) i ekstrahovana etil acetatom. Posle ispiranja, sušenja (Na2S04) i na kraju koncentrovanja dobijen je sirov sililenolat 2 (l.lg) koji je korišten u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.

U rastvor sirovog sililenoletra 2, (l.lg) u acetonitrilu (15ml) dodat je Pd(OAc)2(750mg). Smeša je zagrevana 15 minuta. Zatim je dodata voda i etil acetat, organska smeša je profiltrirana kroz Celite i proizvod je ekstrahovan u etil acetat. Ovako izolovan organski materijal je prečišćen provlačenjem kroz kratku silikagel kolonu, eluiranjem sa smešom heptan/etil acetat, dajući jedinjenje 3 (710mg) kao bezbojno ulje. Rf(l) 0.47, Rf(2) 0.80, Rf (3) 0.46.eluent heptan/etil acetat 8/2. NMR (CDC13), 5 7.58 (IH), 7.21(1H), 6.74(1H), 6.66 (IH), 3.79(3H, CH3O), 1.11 (s, 3H, I8-CH3), 1.00 (t, 3H, etil).

Dobijanje 7a- etil- 15[ 3- metil- 3- metoksi- estra- 1, 3, 5( 10)- trien- 17- ona ( 4).

U rastvor jedinjenja 3 (300mg) u suvom THF-u (5ml) dodat je anhidrovan Cu(OAc)2(100 mg). Smeša je mešana 2 minuta na -70°C, zatim je u kapima dodat metilmagnezijum hlorid (IM u THF-u, 5ml). Smeša je uza Vih zagrejana na 0°C i dodat je rastvor 10% vodenog rastvora NH4C1. Proizvod je ekstrahovan etil acetatom i zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu., eluiranjem sa smešom heptan/etilacetat dajući jedinjenje 4 kao belu čvrstu supstancu (280mg), t.t. 120-122°C; NMR (CDCI3) 8 7.22(1H), 6.73(1H), 6.65(1H), 3.79(1H), 1.20(3H, s, I8CH3), 0.98, 0.96 (6H, 2t, 7a i 15(3 etil).

Dobij anje 7a- etil- 15 ( 3- metil- 3 - [( trimetilsilil( oksi)] - estra- 1, 3, 5( 10)- trien- 17- ona ( 6)

U rastvor jedinjenja 4 (270mg) u dihlormetanu (lml) dodat je BF3.DMS kompleks (800^1) Smeša je mešana 1.5h i zatim sipana u smešu leda-vode i ekstrahovana etilacetatom. Ovako dobijen ostatak je sprašen dodatkom etar/heptana (1/1) dajući 5, (250mg) kao amorfni čvrsti ostatak svetio ružičaste boje; Rf 0.27 (heptan/etil acetat 8/2). Ovaj materijal je rastvoren u DMF-u (3ml), dodat je imidazol (300mg), pa zatim t-butildimetilsilil hlorid. Posle mešanja od 2 h na sobnoj temperaturi, završena je si li lanja.

Reakciona smeša je razblažena dodatkom ledene vode, zatim je proizvod ekstrahovan etil acetatom. Hromatografskim prečišćavanjem na kratkoj koloni silika gela (heptan/etil acetat 9/1) dobiejno je jedinjenje 6 (220mg) kao čvrsto bezbojno ulje; Rt (heptan/etila cetat 8/2). NMR (CDC13) 6" 7.12(1H), 6.62(1H), 6.18(1H), 1.03(s, 3H. I8-CH3), 0.98 (s, 9H, terc-butilsilil), 0.97, 0.95(2t, 6H, 7a i 15<p>etil), 0.20 (s, 6H, CH3-sililetar).

Dobiianie7a- etil- 15B- metil- 19- nor- 17a- pregna- 1, 3, 5( 10)- trien- 20- en- 3, 17p- diol ( 8).

Rastvor Li-acetilidaje dobijen ukapavanjem n-butillitijuma (1.6M u heksanu, 5ml) u 1,2-dibrometan (300ul) u suvom THF-u (6ml) na -60°C. Posle mešanja od 20 minuta, dodat je

rastvor jedinjenja 6 (220mg) u THF-u (2 ml), uklonjen je uređaj za hlađenje i reakciona smeša je mešana 1 hr na 0°C. Zatim je dodat 5% rastvor NH4C1 (50ml), pa je smeša ekstrahovana etil acetatom. Nakon propuštanja sirovog proizvoda kroz kratku kolonu od silika gela (eluiranjem smešom heptan/etila acetat 8/2) dobijeno je jedinjenje 7 (180mg) u obliku bele pene u čistom obliku; Rf 0.28 (heptan/etil acetat 8/2), Rf polaznog materijala, 0.48. NMR (CDC13) 5 7.14 (IH), 6.62 (IH), 6.57 (IH, 2.60, acetilen), 0.99 (s, 12H, I8-CH3i terc butilsilil), 0.95 i 0.86 (2xt, 3H, etil), 0.20 (s, 6H, dimetilsilil).

U rastvor 7 (180mg) u THF-u (lml) dodat je TBAF (IM u THF-u, 0.7ml). Smeša je mešana 15 minuta i zatim dodata u 10% vodeni rastvor NH4CI (2ml). Proizvod je ekstrahovan etil acetatom i propušten kroz kratku kolonu silika gela, eluiranjem smešom heptan/etil acetat 7/3 dajući jedinjenje 8 (120mg) kao amorfni materijal. NMR (DMSO D6) 5 8.89 (s, fenolni OH), 7.08 (IH), 6.5 (IH), 6.43 (s, IH, 17-OH), 0.84 (s, 3H, 18-CH3), 0.80 i 0.90 (2xt, 6H, 15(3 i 17-a etil).

Primer 2

Dobijanje 3- pivaloiloksi- 7a- etil- 15ft- metil- 19- nor- 17a- pregna- 1, 3, 5( 10)- trien- 20- in- 17[ 3- ol

( M

Jedinjenje 8 (300 mg) je rastvoreno u piridinu (lOml). U kapima je dodat pivaloil hlorid (1.5 ekv.). Posle 2 sata reakcionoj smeši je dodata voda. Reakciona smeša je koncentrovana, ponovo rastvorena u etil aceatu i ekstrahovana vodenim rastvorom natrij um bikarbonata i vodom. Organski sloj je osušen (Na2S04) i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela (heptan-etil acetat (1:0 ->4:1) dajući čisto jedinjenje 9a (347mg). NMR (CDC13) 5 1.35 (s, 9H, pivaloil), 1.08 (d, 311, 15p-Me), 1.02 (s, 3H, 18-Me), 0.94 (t, 3H, 7-etil).

Jedinjenja 9b (289mg; NMR (CDC13) 8 3.0 i 3.08 (2 x s, 6H, NME2), 1.08 (d, 3H, 15p-Me), 1.02(s, 3H, 18-Me), 0.93 (t, 3H, 7-etil)) i 9c (283mg, NMR (CDCI3) 5 4.32 (q, 2H, OCH2CH3), 1.38 (d, 3H, OCH2CH3), 1.08(d, 3H, 15p-Me), 1.02(s, 3H, 18-Me), 0.93 (t, 3H, 7-etil)) su dobijena na sličan način, polazeći od N,N-dimetilkarbamoil hlorida i etiloksikarbonil hlorida)

Primer 3

Agonistička aktivnost jedinjenja estrogenskih receptora je određenain vitrobioanalizom sa rekombinantnim jajnim ćelijama kinsekog hrčka (CHO) koje su stabilno transfektovane humanim a-estrogenskim receptorom (hERa) ili p (hERP), oksitocinskim promotorom kod pacova (RO) i luciferaza reporter genom (LUC). Jačina (potentnost) jedinjenja koje se ispituje, a koja stimuliše transaktivaciju enzima luciferaze posredstvom estrogenskih receptora hERa ili hERp, tj. estrogensku agonističku transaktivaciju, izražena je kao procenat (%) u odnosu na EC50standarda estrogen 17P-estradiola (jačina (potentnost) ispitivanog jedinjenja = (EC5017P-estradiol/EC5oispitivanog jedinjenja) x 100%). Efikasnost (delotvornost), tj. količina maksimalne aktivacije receptora jedinjenjem, je izražena kao procenat (%) u odnosu na maksimalnu aktivaciju indukovanu standardom estrogen 17p-estradiola (efikasnost ispitivanog jedinjenja = (maksimalna aktivacija ispitivanog jedinjenja/maksimalna aktivacija 170-estradiola) x 100%. Detaljniji opis metodologije se može naći u De Goover M.E., Deckers, G.H. Schoonen W.G.E.J., Verheul H.A.M. and Kloosterboer H.J., Steroids, Vol. 68, 2003, pp.21-30.

Selektivnost ERa/ERp je definisana kao odnos jačina Era / jačina Erp. Jedinjenja pronalaska su agonistička na a-estrogenskom receptom, jačine od ili većom od 1.0% (u odnosi na 170-estradiol) i najmanje su 10 puta manje aktivne na 0-estrogenskom receptom (Era/ErP selektivnost je jednaka ili veća od 10) i/ili su paricjalni agonisti na P-estrogenskom receptom, sa efikasnošću od ili manjom od 60% od maksimalne aktivacije indukovane 17p-estradiolom).

Histopatološka evaluacija tkiva uterusa Cvnomogulus majmuna je izveo patolog posle 8

nedelja oralnog lečenja ispitivanim jedinjenjem i to na četiri životinje po grupi. Komparativno jedinjenje X je dozirano jednom dnevno u dozi od 40irg/kg, komparativno jedinjenje Y u dozi od 200|ig/kg i jedinjenje 8 u dozi od 40 i 200 ug/kg. Ispitane su sledeće morfološke karakteristike u delovima obojenim sa H&E, na osnovu uterusa normalnih faza menstrualnof ciklusa kod Cvnomolgus majmuna.

A. Promene slične folikularnoj fazi:

labava endometrialna troma

prave endometrijalne žlezde

hipertrofija endometrijalnog epitela

mitotičke slike

hipertofija miometrijuma

rana angiogeneza (klijanje ili rana proliferacija)

bazalna sekrecija

B. Promene slične lutealnoj fazi

pseudodecideralno uvećane stromalne ćelije

uvijanje endometrijalnih žlezdi

kasna angiogeneza (formiranje spiralnih arterija)

vakuolaija endometijalnog epitela

luminalna sekrecija

C. Endometrija sa ostanjenim jamcima ili nestimulisan (atrofičan) endometrijum čvrsta endometijalne stroma

atrofija endometrijalnog epitela

atrofija endometrijalni žlezdi

atrofija miometrijuma

Rezultati prethodno navedenih ispitivanja su okarakterisani prema sledećim merilima:

Stepen 0: bez nalaza

Stepen 1: minimalan, poneki, veloma malo

Stepen 2: neznatan, nekoliko, malo

Stepen 3: umeren, umeren broj, umerene veličine

Stepen 4: naglašen, veliki broj, veliko

Stepen 5. obilno, opsežan broj, opsežne veličine

Za svaku životinju urađena je ovakva karakterizacija. Zatim je za svaku karakteristiku izračunata prosečna vrednost po grupi koja se tertira. Na kraju, prošek bodova po kategoriji, atrofična faza, faza slična folikularnoj ili metalnoj, je izračunat od prosečnih individualnih karakteristika. Povoljan profil endometrijske bezbednosti za jedinjenje je okarakterisano manjom aktivnošću faze slične folikularnoj indokvane jedinjenjem kombinovane sa karakteristkika koje su sličnije lutealnoj fazi i/ili atrofičnim endometrijumom.

Podaci za Jedinjenje 8 i za komparativna jedinjenja X (17a-etinil-17(3-estradiol, Formule I, gde su R1-R4 svi H) i Y (17(3-estradiol) dati su uTablici 1 (in vitro ćelijski podaci) i Tablica 2{ in vivopodaci)

Rezultati dati u Tablici 1 pokazuju da jedinjenja pronalaska imaju konzistentno bolju funkcionalnu selektivnost za a-podvrstu estrogenskih receptora u kombinaciji sa visokom potencijom a-estrogenskih receptora., tj. selektivno aktivirajući a-estrogenski receptor bez istovremene ili uz delimičnu aktivaciju p-estreognski receptor. Jedinjenje 8 pokazuje potenciju p-estrogenskog receptora od 23.45% i 15.2 puta selektivniji za a -estrogenski receptor u odnosu na p -estrogenski receptor i parcijalni agonist na P -estrogenskom receptom sa efiksanošću od 40%. Srodna jedinjenja 17a-etilnil-17<p->estradiol (Jedinjenje X) i 17P-estradiol (Jedinjenje Y) pokazuje jednaku sklonost za obe podvrste estrogenskih receptora i i potpuni su agonisti na P-estrogenskom receptom.

Povoljan endometrijski bezbednosni profil jedinjenja pronalaska je neočekivan budući da se odnosi na jedinjenja 17a-etinil-17P-estradiol i 17<p->estradiol koja stiumulišu endometirjum kao stoje dato u Tablici 2 sa jasnim znakom aktivnosti slične folikularnoj fazi sa jedva primetnom aktivnošću faze slične lutealnoj, pa shodno tome bez atrofičnog endometrijuma.

Primer 4

Seksualno ponašanje ženke pacova zavisi od hormona. Kod ženki pacova koje su podvrgnute estrogenu uočeno je da progesteron jasno pospešuje žensko seksualno ponašanje ili nagon za parenje. Međutim, progesteron nije efikasan u indukovanju ponašanja prilikom parenja kod ženki kojima su uklonjeni jajnici, a koje nisu primale estrogen (videti takođe J.B.Becker, S.M. Breedlove and D. Crews (Eds.), Behavioral Endrocrinologv, 1992, pp.82-84).

Kapacitet ispitivanih jedinjenja koja omogućavaju odgovarajuće nagone za parenje indukovane progesteronom kod ženki pacova kojima su uklonjeni jajnici, korišćen je za prikazivanjein vivoestrogenske aktivnosti posle oralnog doziranja datog jedinjenja. Ženke su prethodno tretirane tri dana ispitivanim jedinjenjem, pa zatim podvrgnute tretmanu progestagen četvrtog dana. Četiri sata posle tertmana progesteronom, mereno je seksualno ponašanje ženki pacova u prisustvu mužjaka, brojanjem reakcija koje podstiču na parenje u toku 10 minuta.

Prolekovi jedinjenja 8, gde je R<1>, pivaloil (Jedinjenje 9a), R<1>je dimetilkarbamoil (Jedinjenje 9b) ili R<1>je etoksikarbonil (Jedinjenje 9c) su se pokazali kao aktivna estrogenska jedinjenja posle oralnog doziranja od 1 mg/kg na dan.

Claims (10)

1. 15(3-supstituisano steroidno jedinjenje Formule I: gde je, R<1>, H, Ci-5alkil, Ci.i2acil, di-(Ci.5alkil)aminokarbonil, (Cj-salkiljoksikarbonil ili sulfamoil, R2 je H, Ci^alkil, C2-3alkenil ili C2-3alkinil, od kojih svaki može po potrebi da bude supstituisan halogenom, R<3>je C|_2alkil, etenil ili etinil, od kojih svaki može po potrebi da bude supstituisan halogenom i R4 jeH ili d.12 acil.

2. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time, stoje R , Ci^alkil, C2-3alkenil ili C2-3alkinil, od kojih svaki može da bude supstituisan halogenom.

3. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, naznačeno time, što su i R<1>i R<2>, vodonik.

4. Farmaceutski preparat, naznačen time, što sadrži jedinjenje prema jednom od zahteva 1-3 i farmaceutski prihvatljiv eksipijens.

5. Jedinjenje prema jednom od zahteva 1-3 za primenu u terapiji.

6. Primena jedinjenja prema jednom od zahteva 1-3 za dobij anje leka za lečenje ili prevenciju oboljenja povezanih sa poremećajem estrogenskog receptora ili regulaciju ili lečenje ili prevenciju drugih fizioloških stanja povezanih sa poremećajem estrogenskog receptora.

7. Primena prema zahtevu 6 za proizvodnju leka za hormonsko lečenje.

8. Primena prema zahtevu 7, naznačena time, što je hormonsko lečenje za klimakterične tegobe.

9. Primena jedinjenja prema zahtevu 7, naznačena time, što je hormonsko lečenje za osteoporozu.

10. Primena jedinjenja prema zahtevu 6, naznačena time, što je lek za primenu u kontracepciji.