ES2241657T3

ES2241657T3 - Esteroides estrogenicos no aromaticos que tienen un sustituyente hidrocarburo en la posicion 11.

Info

Publication number: ES2241657T3
Application number: ES00964053T
Authority: ES
Inventors: Hubert Jan Jozef Loozen; Gerrit Herman Veeneman; Wilhelmus Gerardus Eduardus Joseph Schoonen
Original assignee: Akzo Nobel NV
Current assignee: Akzo Nobel NV
Priority date: 1999-09-06
Filing date: 2000-08-28
Publication date: 2005-11-01
Anticipated expiration: 2020-08-28
Also published as: CZ2002831A3; SK3282002A3; BR0013769A; ATE295851T1; DE60020260D1; AU7511700A; RU2245886C2; EP1224204B1; NO20021079L; AU770331B2; CA2382489C; HUP0202595A3; DE60020260T2; WO2001018027A1; HUP0202595A2; MXPA02001831A; TR200200575T2; IL148116A; ZA200201250B; CN100354299C

Abstract

Un esteroide estrogénico no aromático que satisface la fórmula general I: Fórmula I donde R1 es H, alquilo (C1-C3) o acilo (C2-C3); R2 es H, a-alquilo (C1-C4), a-alquenilo (C2-C4) o a-alquinilo (C2-C4); R3 es H o alquilo (C1-C4), alquenilo (C2-C4) o alquinilo (C2-C4), cada uno en la localización 15 ó 16 del esqueleto esteroideo; R4 es etinilo; R5 es H, alquilo (C1-C3) o acilo (C2-C3), y R6 es alquilo (C1-C5), alquenilo (C2-C5), alquinilo (C2-C5) o alquilideno (C1-C5), cada uno de ellos eventualmente substituido con halógeno o alquiloxi (C1-C3), donde los términos alquilo (C1-C5), alquenilo (C2-C5) y alquilideno (C1-C5) incluyen grupos alquilo ciclado, alquenilo ciclado y alquilideno ciclado, respectivamente. Las líneas discontinuas representan dobles enlaces eventuales; cuando R6 es alquilideno, la línea discontinua a R6 representa un enlace adicional presente en un resto de alquilideno y, cuando R6 es alquilo o alquenilo, el enlace del átomo 11 a R6 es un enlace sencillo.

Description

Esteroides estrogénicos no aromáticos que tienen un sustituyente hidrocarburo en la posición 11.

La invención se relaciona con el campo de los compuestos estrogénicos con un esqueleto esteroideo que tiene un anillo A no aromático y un grupo hidroxilo libre o rematado en el átomo de carbono Nº 3. Los compuestos estrogénicos tienen una utilidad reconocida, en general, en la contracepción y en el tratamiento de los trastornos relacionados con la deficiencia en estrógenos, tales como las afecciones menopáusicas y la osteoporosis.

Se conocen muchos compuestos estrogénicos. Por ejemplo, una publicación instructiva sobre compuestos estrogénicos con un anillo A no aromático y un grupo hidroxilo libre o rematado en el átomo de carbono 3 es la patente EE.UU. 3.413.287. Otros documentos que describen efectos estrogénicos u hormonales de esteroides no aromáticos con substitución 3-hidroxilo y un doble enlace 4-5 son WO 94 18224, EE.UU. 3.465.010, FR 2099385, EE.UU. 3.652.606 y EP 145.493. Un documento en el que se describen esteroides no aromáticos con substitución 3-ceto y un doble enlace 5-10 es Baran y col. (EE.UU. 3.377.366). Dichos compuestos están descritos en términos generales como agentes con, entre otros, efectos estrogénicos o antiestrogénicos. Recientemente, en el campo de los fármacos para los receptores de estrógenos (RE), se centra la atención en el descubrimiento de dos tipos diferentes de receptores de estrógenos, llamados ER\alpha y ER\beta (Mosselman y col., FEBS Letters 392 (1996), 49-53, así como EP-A-0.798.378). Como estos receptores tienen una distribución diferente en los tejidos humanos, el descubrimiento de compuestos que poseen una afinidad selectiva para cualquiera de los dos representa un progreso técnico importante, que hace posible un tratamiento más selectivo de los trastornos relacionados con la deficiencia en estrógenos, con una menor carga de efectos colaterales relacionados con los estrógenos.

Esta invención proporciona estrógenos que satisfacen la fórmula general

1

donde

R^{1}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3});

R^{2}: es H, \alpha-alquilo (C_{1}-C_{4}), \alpha-alquenilo (C_{2}-C_{4}) o \alpha-alquinilo (C_{2}-C_{4});

R^{3}: es H o alquilo (C_{1}-C_{4}), alquenilo (C_{2}-C_{4}) o alquinilo (C_{2}-C_{4}), cada uno en la localización 15 ó 16 del esqueleto esteroideo;

R^{4}: es etinilo;

R^{5}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3}), y

R^{6}: es alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}), alquinilo (C_{2}-C_{5}) o alquilideno (C_{1}-C_{5}), cada uno de ellos eventualmente substituido con halógeno o alquiloxi (C_{1}-C_{3}); se prefiere el alilo; los halógenos preferidos en R^{6} son flúor y cloro, donde los términos alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}) y alquilideno (C_{1}-C_{5}) incluyen grupos alquilo ciclado, alquenilo ciclado y alquilideno ciclado, respectivamente.

Las líneas discontinuas representan dobles enlaces eventuales. Cuando R^{6} es alquilideno, la línea discontinua a R^{6} representa un enlace adicional presente en un resto de alquilideno y, cuando R^{6} es alquilo o alquenilo, el enlace del átomo 11 a R^{6} es un enlace sencillo.

Se ha visto que estos derivados de estradiol no aromáticos con un substituyente en la posición 11 del esqueleto esteroideo poseen afinidad selectiva por el receptor ER\alpha.

Los compuestos según la presente invención son adecuados como estrógenos mejorados, en el sentido de que pueden ser usados en trastornos relacionados con los estrógenos, tales como las afecciones menopáusicas y la osteoporosis. También hallan utilidad en la contracepción y pueden ser también adecuados en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer, del tumor de mama, de la hipertrofia benigna de próstata y de los trastornos cardiovasculares. Los compuestos de la invención son particularmente adecuados en el tratamiento y la prevención de trastornos relacionados con la deficiencia en estrógenos, con efectos colaterales relacionados con estrógenos disminuidos.

En esta descripción, los términos tienen el siguiente significado:

Alquilo (C_{1}-C_{5}) es un grupo alquilo ramificado, no ramificado o cíclico de 1-5 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, 2-metilciclopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, etc.

Alquenilo (C_{2}-C_{5}) es un grupo alquenilo ramificado, no ramificado o cíclico de 2 a 5 átomos de carbono, tal como etenilo, 2-butenilo, etc.

Alquinilo (C_{2}-C_{5}) es un grupo alquinilo ramificado o no ramificado de 2-5 átomos de carbono, tal como etinilo y propinilo.

Acilo (C_{2}-C_{3}) es un grupo que tiene 2-3 átomos de carbono y que deriva de un ácido alquilcarboxílico, teniendo el resto de alquilo el significado definido previamente.

Alquilideno (C_{1}-C_{5}) es un grupo alquilideno ramificado, no ramificado o cíclico de 1-5 átomos de carbono, tal como metileno y etilideno.

En la fórmula general dada anteriormente, los compuestos de la invención son preferiblemente aquéllos que satisfacen la fórmula general II:

2

donde:

R^{1}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3});

R^{3}: es H o alquilo (C_{1}-C_{4}) en la localización 16 del esqueleto esteroideo;

R^{4}: es etinilo;

R^{5}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3}), y

R^{6}: es alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}) o alquinilo (C_{2}-C_{5}); cada uno de ellos puede estar substituido con cloro o flúor. Cuando R^{6} es alquilo (C_{1}-C_{2}), etenilo o etinilo, cada uno eventualmente substituido con cloro o flúor, se prefiere que R^{3} sea metilo en la localización 16 del esqueleto esteroideo.

Más preferidos son los esteroides de la invención en los que, en la anterior fórmula general II:

R^{1}: es H,

R^{2}: es H,

R^{3}: es H o 16\alpha-metilo,

R^{4}: es etinilo,

R^{5}: es H y

R^{6}: es propenilo, alilo o butenilo.

Los compuestos de la invención pueden ser producidos por diversos métodos conocidos en la técnica de la química orgánica en general, y especialmente en la técnica de la química de los esteroides. Véanse, por ejemplo: Fried, J. y Edwards, J.A., "Organic Reactions in Steroid Chemistry", Volúmenes I y II, Van Nostrand Reinhold Company, New York, 1972, y C. Djerassi, "Steroid Reactions", Holden-Day, Inc., San Francisco, 1963.

La síntesis de esteroides con substituyentes particulares en la posición C7 es posible, por ejemplo, por adiciones conjugadas de especies organometálicas a esteroides 4,6-dien-3-ona apropiados, produciéndose generalmente los esteroides 7\alpha-derivados (junto con cantidades menores de 7\beta-esteroides, que pueden ser fácilmente eliminados por cristalización o cromatografía. Se conocen muchos ejemplos de éstos en la literatura. La introducción de substituyentes en la posición C11 del esqueleto esteroideo puede ser realizada de varias formas. La adición conjugada de especies organometálicas a una 5\alpha,10\alpha-epoxi-9(11)-olefina adecuada protegida, según describen Teutsch y col. en Steroids 37, 361 (1981), es una aproximación de este tipo, pero se pueden usar también otros métodos que emplean la funcionalidad 11-oxo de un 19-norandrost-5-eno adecuadamente protegido como funcionalidad reactiva para la interconversión de grupos funcionales en, por ejemplo, un C11-aldehído según una metodología química bien conocida (véase a.o. E. Ottow y col., Tetr. Lett., 5253 (1993)) para terminar con los compuestos reivindicados. Por supuesto, una combinación de las dos aproximaciones señaladas sirve similarmente bien para conseguir los objetivos. Se consigue la introducción de un doble enlace en la posición 5(10) por aplicación de la así llamada reducción de Birch del anillo A de contrapartidas aromáticas de esteroides adecuadamente funcionalizados, disolviendo la reducción metálica de \Delta-4,5-9,11-dienonas o por cetalización de 3-ceto-\Delta-4,5-esteroides. Este último procedimiento conduce directamente a los isómeros \Delta-5(10) selectivos deseados o conduce a mezclas de cetales que pueden ser separados por cromatografía o cristalización en etapas apropiadas de la síntesis. La hidrólisis cuidadosa del cetal en C3 da, en general, los isómeros 3-oxo-\Delta-5(10) deseados, que pueden convertirse en los compuestos 3-OH por reducciones de hidruro. Se pueden obtener fácilmente esteroides saturados (es decir, derivados 5\alphaH) en condiciones reductoras, como disolviendo metales alcalinos en aminas o amoníaco. La introducción de dobles enlaces en C14,15 es generalmente realizada introduciendo primeramente un doble enlace en la posición C15,C16, seguido de isomerización de este enlace a la posición C14,C15 según procedimientos bien conocidos. Se puede usar alternativamente el doble enlace introducido en C15,C16 para realizar una adición conjugada con, por ejemplo, cianuro, para permitir una mayor construcción de substituyentes en C15. La introducción de la substitución C16 es fácilmente realizada por alquilación bases y electrófilos apropiados.

La presente invención se relaciona también con una composición farmacéutica que contiene el compuesto esteroideo según la invención mezclado con un agente auxiliar farmacéuticamente aceptable, tal como se describe en la referencia estándar Gennaro y col., Remington's Pharmaceutical Sciences (18ª ed., Mack Publishing Company, 1990; véase especialmente la Parte 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture). Se puede comprimir la mezcla de los compuestos esteroideos según la invención y el agente auxiliar farmacéuticamente aceptable en unidades sólidas de dosificación, tales como píldoras o tabletas, o se puede procesar en cápsulas o supositorios. Por medio de líquidos farmacéuticamente adecuados, los compuestos pueden ser también aplicados como preparación en inyección en forma de solución, suspensión, emulsión o spray, por ejemplo, spray nasal. Para preparar unidades de dosificación, por ejemplo tabletas, se contempla el uso de aditivos convencionales, tales como rellenantes, colorantes, ligantes poliméricos y similares. En general, se puede usar cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos. Los compuestos esteroideos de la invención pueden ser también incluidos en un implante, un anillo vaginal, un parche, un gel y cualquier otra preparación para liberación mantenida.

Como vehículos adecuados con los que se pueden administrar las composiciones, se incluyen lactosa, almidón, derivados de celulosa y similares, o mezclas de éstos usados en cantidades adecuadas.

Más aún, la invención se relaciona con el uso del compuesto esteroideo según la invención para la fabricación de un medicamento en el tratamiento de trastornos relacionados con la deficiencia de estrógenos, tales como afecciones peri- y/o post-menopáusicas. Por lo tanto, la invención también se relaciona con las indicaciones médicas de las afecciones peri- y/o post-menopáusicas (climatéricas) y la osteoporosis, es decir, con un método de tratamiento en el campo de la TRH (terapia de reemplazo hormonal), consistente en la administración a un paciente, tratándose de una mujer, de un compuesto según se ha descrito aquí anteriormente (en una forma de dosificación farmacéutica adecuada).

Además, la invención se relaciona con el uso del compuesto esteroideo según la invención en la fabricación de un medicamento que tiene actividad contraceptiva. Así, la invención también se relaciona con la indicación médica de la contracepción, es decir, con un método de contracepción consistente en la administración a un sujeto, tratándose de una mujer o de la hembra de un animal, de un progestágeno y un estrógeno como es habitual en este campo, donde el estró-
geno es un compuesto según se ha descrito aquí anteriormente (en una forma de dosificación farmacéutica adecuada).

Finalmente, la invención se relaciona con el uso del compuesto esteroideo para la fabricación de un medicamento que tiene actividad estrogénica selectiva, tal como un medicamento adecuado, en general, en el área de la TRH (terapia de reemplazo hormonal).

Las cantidades de dosificación de los presentes esteroides serán del rango normal para derivados de estradiol, por ejemplo, del orden de 0,01 a 10 mg por administración.

La invención es además ilustrada a continuación en relación a algunos Ejemplos no limitativos y a los correspondientes de fórmulas a los que se hace referencia.

Ejemplo ilustrativo 1

Se describe la síntesis de los compuestos (3\alpha,11\beta,17\beta)-11-(2-propenil)-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diol
(compuesto 11) y (3\alpha,11\beta,16\alpha,17\beta)-16-metil-11-(2-propenil)-19-norpregn-5(10)-en-20-in-3,17-diol (compuesto 16) en relación al esquema 1 (siguiente página). Se hace referencia a los compuestos mediante números. Los números se refieren a fórmulas correspondientes estructurales en los esquemas 1-7.

Compuesto 2

A una solución de 17,3 g de CuI y 3,84 g de LiCl en 250 ml de THF seco, se añadieron a -70ºC 90,6 ml de una solución 1M de bromuro de alilmagnesio en éter dietílico. Después de agitar durante 20 min. más, se añadieron 11,4 ml de trimetilclorosilano, seguido de una solución de 7,5 g de esteroide 1 en 100 ml de THF. Se mantuvo la mezcla de reacción durante todo el tiempo por debajo de -60ºC. Después de agitar durante 1 h, se apagó la reacción vertiéndola en una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl. Se extrajo el producto con acetato de etilo y se purificó a continuación por cromatografía en columna, para obtener 6,25 g de 2 como un aceite incoloro. RMN 5,20 (m, CH alilo), 5,0 (CH_{2}, alilo), 3,04 (m, H11).

3

A una solución de 9,6 g de 2 en una mezcla de 100 ml de metanol y 30 ml de cloruro de metileno, que contenía 800 mg de NaOH, se añadieron 0,4 g de borohidruro de sodio a 0-5ºC. Después de agitar durante 1,5 h, la reacción se hubo completado y se trató con 20 ml de acetona durante 0,5 h.

Se vertió entonces la reacción en agua y se extrajo con acetato de etilo, para obtener 9,5 g de 3. RMN 3,59 (t, CHOH), 2,98 (m, H11), 0,92 (s, CH_{3}).

Esquema I

3

4

A una solución de 9,5 g de 3 en 100 ml de acetona, se añadieron 8 ml de HCl 6 N. Después de agitar durante 2 h, se neutralizó la mezcla con NaHCO_{3} y se concentró a un pequeño volumen diluida con agua y se extrajo con acetato de etilo. Esto dio 8,2 g de 4 como un material amorfo incoloro. RMN 5,68 (m, H4), 3,10 (m, H11), 3,65 (m, CHOH).

5

Se añadió una solución de 8,2 g de 4 en 100 ml de THF seco a 500 ml de NH_{3} líquido a -70ºC. Se trató esta mezcla con una cantidad de litio metálico (aproximadamente 500 mg) hasta que el color azul de la mezcla de reacción hubo persistido durante al menos 15 min. Se apagó la reacción por adición de una porción de NH_{4}Cl.

Se diluyó el residuo que quedó tras la evaporación del NH_{3} con agua y se extrajo con acetato de etilo.

La purificación cromatográfica dio 4,0 g de 5 como un aceite incoloro; R_{f} 0,55 (heptano/acetato de etilo 1/1 v/v).

RMN 2,80 (ab, CH_{2} en C4), 0,93 (s, CH_{3}).

6

A una solución de 4,0 g de 5 en 80 ml de metanol, se añadieron 6 ml de ortoformiato de trimetilo, seguido de 0,8 g de ácido toluensulfónico. Después de agitar durante 2 h, se completó la cetalización. Se trató la mezcla con 6 ml de piridina y se concentró a un pequeño volumen. Se diluyeron los restos con agua y se extrajeron con acetato de etilo. El residuo, 4,7 g, consistía en 6 casi puro; TLC, R_{f} 0,78 (heptano./acetato de etilo 1/1, v/v).

RMN 3,22, 3,25 (2x s, OCH_{3}).

7

A una solución de 33 g de 6 en 50 ml de acetona, se añadieron 6 g de cribas moleculares (4\ring{A}), seguido de 3,2 g de N-óxido de N-metilmorfolina y 150 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadieron a la mezcla de reacción 5 g de gel de sílice, seguido de 50 ml de heptano, y se agitó durante 5 minutos más. Se filtró la mezcla Hy-Flow y, después de concentrarla en parte, se recogió en acetato de etilo, se lavó con agua y se concentró. Se pasó el residuo sobre una corta columna de sílice y se obtuvieron 2,9 g de 7, R_{f} 0,52 (heptano/acetato de etilo 7/3). RMN 1,02 (s, CH_{3}).

8

Para la etinilización, se preparó acetiluro de litio a partir de dibromoeteno y butil-litio.

A una solución de 0,74 ml de 1,2-dibromoeteno en 20 ml de THF, se añadieron a -70ºC 11 ml de una solución 1,6M de BuLi en hexano. Después de agitar durante 15 minutos, se añadió una solución de 800 mg de 7 en 2 ml de THF. Se dejó calentar a la mezcla hasta la temperatura ambiente en 15 minutos y, después de 15 minutos más a temperatura ambiente, se detuvo la reacción con agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. La concentración, seguida de pase a través de una corta columna de gel de sílice, dio 810 mg de 8 como un material amorfo blanco, R_{f} 0,48 (heptano-acetato de etilo 7/3), R_{f} del material de partida 0,52, RMN 2,61 (s, acetileno).

9

A una suspensión de 3,2 g de 8 en 60 ml de etanol, se añadieron 0,16 g de ácido oxálico en 16 ml de agua. Se agitó la mezcla durante 2,5 horas y se volvió gradualmente homogénea. Se trató la mezcla de reacción con NaHCO_{3} y se concentró a un pequeño volumen. Se añadió entonces agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se pasó el producto bruto así aislado a través de una corta columna de gel de sílice y se cristalizó a partir de éter diisopropílico, para obtener 2,3 g de 9. P.f. 136ºC, R_{f} 0,66 (heptano-acetato de etilo 1/1), RMN 2,78 (ab, 2, H4), 2,61 (s, acetileno).

10, 11

A una solución de 1 g de 9 en 12 ml de THF, se añadieron 1,6 g de hidruro de litio y tri-t-butoxialuminio. Después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, se trató la mezcla con agua y se neutralizó por adición de HCl 2N. Se extrajo el producto con acetato de etilo y se cromatografió sobre gel de sílice (heptano/acetato de etilo 8/2 como eluyente). Se obtuvieron así 0,56 g de alcohol 3\beta 10 (p.f. 121-123ºC) y 0,24 g de alcohol 3\alpha 11 (p.f. 84-87ºC).

R_{f} 0,53 (10) y 0,45 (11), heptano/acetato de etilo 1/1, RMN (3\alphaOH) 3,82 (m, CHOH), (3\betaOH) 4,08 (m, CHOH).

12

A una solución de hexametildisilazuro de litio (preparado a partir de 1,9 ml de una solución 1,6M de BuLi-hexano y 0,71 ml de hexametildisilazano en 4 ml de THF seco), se añadieron a -40ºC 1 g de 7 y 0,7 ml de DMPU en 5 ml de THF. Se agitó la mezcla durante 0,5 horas a una temperatura de -40ºC y luego se añadieron 225 \mul de CH_{3}I con una jeringa. Después de agitar durante 0,5 horas más a -40ºC, se completó la reacción. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con acetato de etilo. La cromatografía del producto bruto así aislado dio 1,3 g de 12, R_{f} 0,43 (heptano/acetato de etilo 8/2).

13

Según el procedimiento descrito para la preparación de 8, se convirtieron 1,3 g de 12 en el 13 requerido, para obtener 1,2 g, R_{f} 0,46 (heptano/acetato de etilo 7/3), R_{f} (12) 0,55.

14

A una solución de 800 mg de 13 en 20 ml de etanol, se añadió una solución de 80 mg de ácido oxálico en 5 ml de agua. Se agitó la mezcla durante 1 hora y se neutralizó después por adición de NaHCO_{3}. Después de diluir con agua y
de extraer con acetato de etilo, quedaron 0,7 g de 14 como un material cristalino, R_{f} 0,47 (heptano/acetato de

\hbox{etilo
7/3).}

15, 16

A una solución de 725 mg de 14 en 20 ml de una mezcla 1/1 de etanol y THF, se añadieron 130 mg de borohidruro de sodio. Después de agitar durante 1 hora, se añadieron 2 ml de acetona para destruir algún exceso de reactivo. Después de 15 minutos, se vertió la mezcla en agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se purificó el material así obtenido por cromatografía en gel de sílice usando cloruro de metileno-acetona o hexano-acetato de etilo como eluyente. Se obtuvieron así 300 mg de 16 (3\alpha-OH) y 75 mg de 15 (3\beta-OH). R_{f} (15) 0,47 (cloruro de metileno/acetona 95/5). R_{f} (16) 0,54 (cloruro de metileno/acetona 95/5).

Ejemplo 2

Se describe la síntesis del compuesto (3\beta,5\alpha,11\beta,17\beta)-11-difluorometil-19-norpregn-20-ino-3,17-diol (compuesto 21) en relación al esquema 2 (página siguiente).

18

A una solución de 4 g del conocido aldehído 17 en 200 ml de cloruro de metileno, se añadieron 10 ml de trifluoruro de dimetilazufre. Se agitó la mezcla durante 48 h a temperatura ambiente y se vertió después en agua helada y se extrajo con cloruro de metileno, seguido de lavado con NaHCO_{3}. Tras la concentración y la cromatografía (SiO_{2}-heptano-acetato de etilo 2/1), se obtuvieron 2,5 g de 18. P.f.138-139. RMN (CDCl_{3} 6,05 ppm doble triplete de CHF_{2}; 5,9 s, H4; 0,95 (s, CH_{3}).

Esquema II

4

19

Se pasó acetileno gaseoso durante 45 min. en una mezcla desgasificada de 1,3 g de terc-butóxido de potasio y 1 g de 18 en 7 ml de THF y 2 ml de terc-butanol a 0ºC. Se vertió entonces la mezcla en agua y se extrajo con acetato de etilo. Después de lavar y de concentrar, se trató el material residual con éter diisopropílico, para obtener 0,85 g de 19 como un sólido blanco. P.f. 178-180. R_{f} 0,43 (heptano-acetato de etilo 1/1).

20

A una solución de 20 mg de Li en 10 ml de NH_{3} líquido, se añadió a -60ºC una solución de 300 mg de 19 en 6 ml de THF. Después de agitar durante 1 min., se trató la mezcla con 0,5 g de NH_{4}Cl. Se evaporó el NH_{3} y se trató el residuo con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se purificó el material así obtenido por cromatografía, para obtener 140 mg de 20. P.f. 224-225, R_{f} 0,64 (heptano-acetato de etilo 7/3).

21

A una solución de 25 mg de LiAlH_{4} en 4 ml de THF, se añadieron a -60ºC 85 mg de 20 en 1 ml de THF. Después de agitar durante 5 min., se calentó rápidamente la mezcla hasta la TA y se trató por adición de 45 \mul de agua, 45 \mul de una solución de NaOH 3N y 140 \mul de agua. Se filtraron los precipitados y se recogió el filtrado en acetato de etilo y se lavó con HCl 2N y agua. Se trituró el residuo que quedaba después de secar y de concentrar con éter diisopropílico y se obtuvieron 50 mg de 21. P.f. 168-169ºC, R_{f} 0,30 (tolueno-acetato de etilo 7/3). RMN 3,6 ppm CHOH, 2,65 CH acetileno, 6,0 doble triplete CHF_{2}.

Ejemplo 3

Se describe la síntesis de los compuestos (3\beta,5\alpha,11\beta,17\beta)-11-(2-fluoroetil)-19-norpregn-20-ino-3,17-diol (compuesto 31) y (3\alpha,5\alpha,11\beta,17\beta)-11-(2-fluoroetil)-19-norpregn-20-ino-3,17-diol (compuesto 32) en relación al esquema 3.

Esquema III

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A una solución de 4,95 g de 11\beta-hidroxietilestrona-3-metiléter (22) en 115 ml de THF, se añadieron 66 g de cribas moleculares de 4\ring{A}, seguido de 45 ml de TBAF 1M en THF (seco) y luego de 5,3 g de fluoruro de tosilo. Se agitó la mezcla y se la sometió a reflujo durante dos horas. Se enfrió entonces la reacción y se vertió en 700 ml de una solución acuosa de NaHCO_{3} al 10% y se extrajo con acetato de etilo. Tras la concentración del solvente y la cromatografía, se aislaron 3,4 g de 23. R_{f} 0,39 (heptano/acetato de etilo 7/3).

24

Se trató una solución de 4 g de 23 en una mezcla de 30 ml de THF y 30 ml de metanol con 0,1 ml de NaOH 4 N y luego con 0,23 g de NaBH_{4}. Después de agitar durante 1 h, se vertió la reacción en agua y se extrajo con acetato de etilo. Se filtró el material bruto a través de una corta columna de sílice, para obtener 3,8 g de 24. R_{f} 0,26 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} 23 0,33.

25

A una solución de 3,8 g de 24 en una mezcla de 40 ml de THF y 230 ml de NH_{3} líquido, se añadieron 5 g de Li a -33ºC. Se agitó la mezcla durante 5 h. Se destruyó entonces el exceso de litio por tratamiento con 45 ml de etanol. Se dejó que se evaporara el amoníaco y se diluyó el residuo con agua y se extrajo con acetato de etilo. Después de secar y de concentrar, se obtuvieron 3,7 g de éter 1,2,5(10)dienólico bruto. Se disolvió éste en 30 ml de acetona, a la que se añadieron 3 ml de HCl 6N. Después de agitar durante 3 h, se neutralizó la mezcla con NaHCO_{3}, seguido de dilución con agua y extracción con acetato de etilo, para obtener 2,8 g de 25. R_{f} 0,10 (heptano/acetato de etilo
4/6).

26

Se trató una solución de 0,84 g de 25 en una mezcla de 30 ml de NH_{3} líquido y 6 ml de THF a -60ºC con pequeñas piezas de litio hasta que el color azul de la mezcla de reacción hubo persistido durante al menos 5 minutos. Se destruyó entonces el exceso de reactivo por adición de una pequeña cantidad de NH_{4}Cl y se evaporó el NH_{3}. Se diluyó el material residual con agua y se extrajo en acetato de etilo. La concentración del solvente dejó 0,80 g de material esencialmente puro; R_{f} 0,39 (heptano/acetato de etilo 1/1), R_{f} 25 0,24.

27

A una solución de 0,8 g de 26 en 8 ml de diclorometano, se añadieron 2,8 ml de etilenglicol, 2,5 ml de ortoformiato de trietilo y 5 mg de ácido toluensulfónico. Se agitó la mezcla durante la noche y se vertió después sobre una solución saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con acetato de etilo. Se purificó el material bruto así obtenido pasándolo a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 0,72 g de 27. R_{f} 0,46 (heptano/acetato de etilo 1/1), R_{f} 26, 0,38.

28

A una solución de 0,72 g de 27 en 15 ml de acetona, se añadió 1 g de cribas moleculares (4\ring{A}), seguido de 0,70 g de N-óxido de N-metilmorfolina y 30 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadió a la mezcla de reacción 1 g de gel de sílice, seguido de 15 ml de heptano, y se agitó durante 5 minutos más. Se filtró la mezcla sobre Hy-Flow y, después de concentrarla en parte, se recogió en acetato de etilo, se lavó con agua y se concentró. Se pasó el residuo sobre una corta columna de sílice y se obtuvieron 0,59 g de 28, R_{f} 0,62 (heptano/acetato de etilo 1/1).

29

A una solución de 0,74 ml de 1,2-dibromoeteno en 20 ml de THF, se añadieron a -70ºC 11 ml de una solución 1,6 M de BuLi en hexano. Después de agitar durante 15 minutos, se añadió una solución de 590 mg de 28 en 2 ml de THF. Se dejó calentar a la mezcla hasta la temperatura ambiente en 15 minutos y, después de 15 minutos más a temperatura ambiente, se detuvo la reacción con agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. La concentración, seguida de pase a través de una corta columna de gel de sílice, dio 430 mg de 29 como un material amorfo blanco. R_{f} 0,11 (heptano-acetato de etilo 9/1), R_{f} del material de partida 0,21.

30

A una solución de 0,43 g de 29 en 15 ml de acetona, se añadió 1 ml de HCl 2N. Se agitó la mezcla durante 2 horas y se trató a continuación con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, seguido de extracción con acetato de etilo, para obtener 0,40 g de 30 esencialmente puro; R_{f} 0,18 (heptano-acetato de etilo 7/3) R_{f} 29: 0,23.

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31, 32

A una solución de 0,40 g de 30 en 4 ml de THF y 4 ml de etanol, se añadieron 30 mg de borohidruro de sodio. Después de agitar durante 0,5 horas, se añadieron unas cuantas gotas de acetona para descomponer el exceso de reactivo. Después de agitar durante 15 minutos más, se vertió la reacción en agua y se extrajo con acetato de etilo y se sometió el material bruto así obtenido a cromatografía en columna, para obtener 80 mg del isómero 3\alphaOH 32 y 160 mg del derivado 3\betaOH 31. R_{f} 31: 0,37, R_{f} 32: 0,42, R_{f} material de partida: 0,48 (heptano/acetona 6/4).

Ejemplo ilustrativo 4

Se describe la síntesis de los compuestos (3\alpha,11\beta,17\beta)-11-(3-butenil)-19-norpregn-5(10)-en-20-ino-3,17-diol
(compuesto 42) y (3\beta,11\beta,17\beta)-11-(3-butenil)-19-norpregn-5(10)-en-20-ino-3,17-diol (compuesto 43) en relación al esquema 4.

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Esquema IV

6

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33

Se trató una solución de 55 g de esteroide 1 en una mezcla de 300 ml de THF y 300 ml de metanol con una solución de 2,7 g de borohidruro de sodio en 30 ml de agua (que contenía 3 mg de NaOH). Después de agitar durante 1 h, se completó la reducción y se destruyó el exceso de hidruro por adición de 75 ml de acetona. Después de agitar durante 1 h más, se vertió la mezcla de reacción en agua y se extrajo con acetato de etilo. La concentración de la fase orgánica dio 54 g de 33, R_{f} 0,31 (heptano/acetato de etilo 4/6), R_{f} del material de partida 0,42.

34

A una solución de 54 g de 33 en 350 ml de DMF, se añadieron 35 g de imidazol, seguido de 37 ml de cloruro de trimetilsililo a -10ºC. Después de agitar durante 0,5 h más, se completó la reacción. Se vertió la mezcla en 1,5 litros de agua y se extrajo con éter. Se trituró el residuo obtenido tras la concentración del material orgánico en etanol acuoso al
80%, para obtener 50 g de 34 puro, p.f. 90-91ºC, R_{f} 0,79 (heptano/acetato de etilo 4/6), R_{f} del material de partida 0,36.

35

A una solución de bromuro de butenilmagnesio, preparada a partir de 0,51 ml de 4-bromo-1-buteno y 119 mg de Mg en 20 ml de THF, se añadieron a 10ºC 100 mg de CuI. Después de agitar durante 0,5 h, se enfrió la mezcla a -30ºC y se añadió 1 g de 34 en 5 ml de THF. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente en aproximadamente 1 h. Se añadieron entonces 100 ml de una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl, seguido de extracción con acetato de etilo. La cromatografía dio 0,9 g de 35. R_{f} 0,54 (heptano/acetato de etilo 6/4), R_{f} del material de partida 0,60.

36

A una solución de 8,65 g de 35 en 80 ml de acetona, se añadieron 2 ml de HCl 2N. Se agitó la mezcla durante 2 h y se neutralizó a continuación con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, se concentró a un pequeño volumen y se diluyó con agua, seguido de extracción con acetato de etilo. Se pasó el material bruto así obtenido a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 5,3 g de 36; R_{f} 0,18 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,51.

37

Se añadieron pequeñas piezas de litio metálico a una solución de 5,3 g de 36 en una mezcla de 340 ml de NH_{3} líquido, 110 ml de THF y 9 ml de t-butanol a -70ºC hasta que el color azul hubo persistido (\pm 350 mg) durante 45 minutos. Se destruyó el exceso de reactivo por adición de NH_{4}Cl. Se evaporó el amoníaco gaseoso y se diluyó el residuo con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se pasó el material bruto así obtenido a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 3,8 g de 37. R_{f} 0,46 (heptano/acetato de etilo 6/4); R_{f} del material de partida 0,22.

38

A una solución de 3,3 g de 37 en 60 ml de metanol, se añadieron 5 ml de ortoformiato de trimetilo y 0,3 g de ácido p-toluensulfónico. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, se neutralizó la mezcla por adición de 1 ml de piridina. Se concentró la mezcla a un tercio del volumen original y se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo, obteniéndose 3,7 g de 38 tras la purificación cromatográfica. R_{f} 0,60 (heptano/acetato de etilo 1/1); R_{f} del material de partida 0,48.

39

A una solución de 3,7 g de 38 en 45 ml de acetona, se añadieron 5 g de cribas moleculares (4\ring{A}), seguido de 3,6 g de N-óxido de N-metilmorfolina y 100 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadieron a la mezcla de reacción 5 g de gel de sílice, seguido de 100 ml de heptano, y se agitó durante 5 minutos más. Se filtró la mezcla sobre Hy-Flow y, después de concentrar en parte, se recogió en acetato de etilo, se lavó con agua y se concentró. Se pasó el residuo a través de una corta columna de sílice y se obtuvieron 3,3 g de 39. R_{f} 0,51 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,38.

40

A una solución de 0,74 ml de 1,2-dibromoeteno en 20 ml de THF, se añadieron a -70ºC 11 ml de una solución 1,6M de BuLi en hexano. Después de agitar durante 15 minutos, se añadió una solución de 0,8 g de 39 en 2 ml de THF. Se dejó calentar a la mezcla hasta la temperatura ambiente en 15 minutos y, después de 15 minutos más a temperatura ambiente, se detuvo la reacción con agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. La concentración, seguida de pase a través de una corta columna de gel de sílice, dio 0,96 g de 40 como un material amorfo blanco, R_{f} 0,15 (heptano-acetona 95/5), R_{f} del material de partida 0,30.

41

A una solución de 0,95 g de 40 en 20 ml de etanol, se añadieron 0,6 g de ácido oxálico en 3 ml de agua. Se agitó la mezcla durante 1,5 horas. Se trató la mezcla de reacción con NaHCO_{3} y se concentró a un pequeño volumen. Se añadió entonces agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se pasó el producto bruto así aislado a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 0,55 g de 41. R_{f} 0,33 (heptano-acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,40.

42/43

A una solución de 0,55 g de 41 en 4 ml de THF y 4 ml de etanol, se añadieron 30 mg de borohidruro de sodio. Después de agitar durante 0,5 horas, se añadieron unas cuantas gotas de acetona para descomponer el exceso de reactivo. Después de agitar durante 15 minutos más, se vertió la reacción en agua y se extrajo con acetato de etilo y se sometió el material bruto así obtenido a cromatografía en columna, para obtener 90 mg del isómero 3\alphaOH 42, p.f. 159ºC, y 150 mg del derivado 3\betaOH 41, p.f. 90ºC. R_{f} 41: 0,31, R_{f} 42: 0,23, R_{f} material de partida: 0,41 (heptano/acetato de etilo 6/4).

Ejemplo ilustrativo 5

Se describe la síntesis de los compuestos (3\beta,7\alpha,11\beta,17\beta)-11-(2-fluoroetil)-7-metil-19-norpregn-5(10)-en-20-ino-3,17-diol (compuesto 54) y (3\alpha,7\alpha,11\beta,17\beta)-11-(2-fluoroetil)-7-metil-19-norpregn-5(10)-en-20-ino-3,17-diol (compuesto 55) en relación al esquema 5 (página siguiente).

45

A una solución de 4 g de 44 en 35 ml de metanol, se añadieron 12 ml de ortoformiato de trimetilo, seguido de 0,3 g de ácido toluensulfónico. Después de agitar durante 1 h, el material de partida se había consumido y se neutralizó la mezcla de reacción añadiendo 1 g de NaHCO_{3} y se concentró. Se diluyó el residuo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La cromatografía del material bruto dio 3,4 g de 45. R_{f} 0,61 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,35.

46

A una solución de 3,4 g de 45 en 50 ml de metanol, se añadieron 0,5 g de NaOH. Después de agitar durante 2 h, la saponificación se había completado. Se concentró la mezcla, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo, obteniéndose 3 g de 46 como un aceite incoloro. R_{f} 0,31 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,65.

47

A una solución de 3,6 g de 46 en 30 ml de DMF, se añadieron 2,8 g de imidazol, seguido de 2 g de cloruro de terc-butildimetilsililo. Después de agitar durante 2 h, se vertió la mezcla en agua y se extrajo con acetato de etilo. Se pasó el material bruto a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 3,8 g de 47 como un aceite. R_{f} 0,70 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,61.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema V

7

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48

Se preparó una solución de 9-BBN a partir de 1,75 ml de 1,5-ciclooctadieno y 1,4 ml de complejo de borano-sulfuro de dimetilo en 40 ml de THF. Se añadieron a ésta 3,8 g de 47 en 5 ml de THF. Se agitó la mezcla durante 2 h y se apagó después por adición cuidadosa de agua (5 ml), seguido de 10 ml de NaOH 2N y 8 ml de H_{2}O_{2} al 30%. Después de agitar vigorosamente durante 2 h, se diluyó aún la mezcla de reacción con agua, se extrajo con acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa de Na_{2}SO_{3} al 10%. Tras la concentración y la cromatografía, se aislaron 2,8 g de 48. R_{f} 0,27 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,70.

49

Se agitó una mezcla de 1 g de 48 y 0,5 g de cloruro de tosilo en 5 ml de piridina durante 5 h a 0-5ºC. Se añadió entonces 1 ml de agua y se prolongó la agitación durante 15 minutos. Se diluyó aún la mezcla de reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo y se purificó el producto bruto por cromatografía, para obtener 1,1 g de 49, p.f. 120ºC, R_{f} 0,57 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,30.

50

Se agitó una solución de 400 mg de 49 en 5 ml de TBAF 1M seco en THF durante 5 h, dando lugar a la formación del fluoruro y a la escisión concomitante de la función sililo. Se vertió la mezcla en agua y se extrajo con acetato de etilo. La purificación por cromatografía dio 185 mg de 50, p.f. 161-162ºC, R_{f} 0,35 (heptano/acetato de etilo 7/3). R_{f} del material de partida 0,53.

51

A una solución de 180 mg de 50 en 5 ml de acetona, se añadieron 0,5 g de cribas moleculares (4\ring{A}), seguido de 200 mg de N-óxido de N-metilmorfolina y 10 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Se agitó la mezcla durante 1 h. Se añadieron a la mezcla de reacción 0,5 g de gel de sílice, seguido de 10 ml de heptano, y se agitó durante 5 minutos más. Se filtró la mezcla sobre Hy-Flow y, después de concentrar en parte, se recogió en acetato de etilo, se lavó con agua y se concentró, para obtener 150 mg de 51, p.f. 166ºC. R_{f} 0,45 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,35.

52

A una solución de 0,30 ml de 1,2-dibromoeteno en 6 ml de THF, se añadieron a -70ºC 4,5 ml de una solución 1,6M de BuLi en hexano. Después de agitar durante 15 minutos, se añadió una solución de 150 mg de 50 en 1 ml de THF. Se dejó calentar a la mezcla hasta la temperatura ambiente en 15 minutos y, después de 15 minutos más a temperatura ambiente, se detuvo la reacción con agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. La concentración y el tratamiento con algo de heptano dieron 140 mg de 40 como un sólido blanco, p.f. 168ºC. R_{f} 0,38 (heptano-acetona 95/5), R_{f} del material de partida 0,40.

53

A una solución de 145 mg de 52 en 3 ml de etanol y 1,5 ml de THF, se añadieron 0,2 g de ácido oxálico en 3 ml de agua. Se agitó la mezcla durante 1,5 horas. Se trató la mezcla de reacción con NaHCO_{3} y se concentró a un pequeño volumen. Se añadió entonces agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se pasó el producto bruto así aislado a través de una corta columna de gel de sílice, para obtener 125 mg de 53. R_{f} 0,23 (heptano-acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,38.

54/55

A una solución de 125 mg de 53 en 2 ml de THF y 1 ml de etanol, se añadieron 20 mg de borohidruro de sodio. La reducción se completó después de 0,5 h. Se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se purificó el producto bruto así aislado pasándolo a través de una columna C-18 de fase invertida, usando acetonitrilo-agua como eluyente, para obtener 40 mg de 3\alphaOH 55 y 20 mg de 3\betaOH 54, ambos como materiales amorfos con idénticos valores de R_{f} en gel de sílice; Rf 0,43 (CH_{2}Cl_{2}/acetona 9/1), R_{f} del material de partida 0,70.

Ejemplo ilustrativo 6

Los compuestos de este ejemplo fueron preparados según el esquema VI (página siguiente).

57

Se añadió gota a gota a 0ºC una solución de 80 mg de borohidruro de sodio y 112 mg de hidróxido de sodio en 12 ml de metanol a una solución de 7\alpha,11\beta-dimetilestr-4-eno-3,17-diona (56) en una mezcla de 18 ml de metanol y 4 ml de dicloruro de metileno. Después de agitar durante una hora, se destruyó el exceso de borohidruro por adición de 12 ml de acetona y agitación durante 15 minutos más. Se vertió la mezcla en agua y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron una vez las fases orgánicas combinadas con una solución de NaCl saturada y se secaron, se concentraron y se purificaron sobre una columna de sílice, para obtener 0,74 g de 57, contaminado con algo de 3,17-diol. (Se eliminó este último en la etapa siguiente); R_{f} 0,40 (heptano/acetato de etilo 6/4). RMN (CDCl_{3}) \delta 3,60 (t, 1, 17\alphaH), 0,77 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 1,08 (d, 3, 11\betaCH_{3}).

58

A una solución de 0,74 g de 57 en 15 ml de metanol y 1,1 ml de ortoformiato de trimetilo, se añadieron 0,2 g de ácido p-toluensulfónico. Se agitó la mezcla durante 2 h. Se añadió entonces 0,1 ml de piridina y se vertió en agua. Se extrajo el producto con acetato de etilo y se purificó por cromatografía sobre sílice, usando heptano/acetato de etilo como eluyente, para obtener 0,59 g de 3,3-dimetilcetal 58, R_{f} 0,47 (heptano/acetato de etilo 6/4); RMN \delta 3,20 (2 s, 6, OCH_{3}), 3,65 (t, 1, 17\alphaH), 0,86 (s, 3, 18CH_{3}), 0,77 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,90 (d, 3, 11\betaCH_{3}).

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Esquema VI

8

59

A una solución de 0,59 g del esteroide 58 en 10 ml de acetona, se añadieron sucesivamente 0,6 g de N-óxido de N-metilmorfolina y 40 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Después de agitar durante 1 h, se añadieron 10 ml de heptano y 1 g de sílice. Se agitó la mezcla durante 15 minutos más y se filtró después sobre Celite, se concentró y se pasaron los restos sobre una corta columna de sílice, para obtener 0,56 g de 59; R_{f} 0,55 (heptano/acetato de etilo 6/4); RMN \delta 0,98 (s, 3, 18 CH_{3}), 0,82 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,92 (d, 3, 11\betaCH_{3}), 3,20 (2xs, 6, OCH_{3}).

60

Se preparó hexametildisilazuro de litio por adición de 1,24 ml de una solución 1,55 M de BuLi-hexano a -40ºC a una solución de 0,44 ml de bistrimetilsililamina en 4 ml de THF. Después de agitar durante ½ hora, se añadió una solución de 0,56 g de 59 y 0,46 ml de DMPU en 8 ml de THF. Se continuó agitando durante 45 minutos a una temperatura de -40ºC, seguido de adición de 140 \mul de yoduro de metilo. Tras agitar durante 30 minutos más, se completó la alquilación. Se vertió la mezcla en 40 ml de una solución saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con acetato de etilo. La purificación cromatográfica dio 0,55 g de producto 60 16\alpha-metilado. R_{f} 0,73 (heptano/acetato de etilo 1/1); R_{f} del material de partida 0,69; RMN \delta 1,11 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 1,02 (s, 3, 18CH_{3}), 0,82 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,91 (d, 3, 11\betaCH_{3}).

61

Se preparó acetiluro de litio por adición de una solución de 9,5 ml de BuLi-hexano 1,55 M a 0,60 ml de 1,2-dibromoetano en 20 ml de THF a -60ºC. Después de agitar durante ½ hora, se añadió una solución de 0,55 g de cetona 60 en 2 ml de THF y se retiró el dispositivo refrigerante para permitir que la mezcla se calentara gradualmente hasta la temperatura ambiente. Se añadió entonces agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Tras la purificación cromatográfica, se obtuvieron 0,50 g de 61; R_{f} 0,22 (heptano/acetato de etilo 9/1); R_{f} del material de partida 0,42; RMN \delta 1,18 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 1,02 (s, 3, 18CH_{3}), 0,78 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,94 (d, 3, 11\betaCH_{3}), 2,66 (s, 1, acetileno).

62

A una solución de 0,49 g de 61 en 20 ml de etanol, se añadieron 50 mg de ácido oxálico en 3 ml de agua. Se agitó la mezcla durante 4 h. Se trató la mezcla de reacción con una solución acuosa al 5% de bicarbonato de sodio y se extrajo el producto con acetato de etilo y se pasó a través de una columna de sílice para eliminar algunas impurezas, obteniéndose 250 mg de 63; R_{f} 0,40 (heptano/acetato de etilo 6/4), R_{f} del material de partida 0,49; RMN \delta 2,80 (m, 2, H4), 1,19 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 1,04 (s, 3, 18CH_{3}), 0,82 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,93 (d, 3, 11\betaCH_{3}), 2,67 (s, 1, acetileno).

63/64

A una solución de 240 mg de 62 en 5 ml de THF, se añadieron 360 mg de (terc-butoxi)_{3}AlH de litio. Se agitó la mezcla durante 1 hora y se vertió después en agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se separaron los alcoholes isoméricos así obtenidos por medio de HPLC preparatoria (C18 de fase invertida) usando un gradiente de acetonitrilo/agua. Se cristalizaron los productos obtenidos tras concentrar el eluyente a partir de agua-etanol. Esto dio 68 mg del derivado 3\alpha-hidroxi 64 y 70 mg del isómero 3\beta 63.

R_{f} (63/64 0,36 (heptano/acetato de etilo 6/4), R_{f} del material de partida 0,54. P.f. (63) 165-167ºC, P.f. (64) 171-172ºC. RMN (64) \delta 3,80 (m, 1, H3), 2,67 (s, 1, acetileno), 1,17 (d, 3, 16\alphaCH_{3}, 1,02 (s, 3, 18 CH_{3}), 0,77 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,90 (d, 3, 11\betaCH_{3}). RMN (63) \delta 4,05 (m, 1, H3), 2,67 (s, 1, acetileno), 1,18 (d, 3, 16\alpha-CH_{3}), 1,02 (s, 3, 18 CH_{3}), 0,77 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,93 (d, 3, 11\betaCH_{3}).

Ejemplo 7

Se preparó el compuesto de este ejemplo según el esquema VII (página siguiente):

Esquema VII

9

66

A una solución de 10 g de 11\alpha-hidroxinor-dienodiona (65) en 45 ml de DMF, se añadieron 10 g de imidazol, seguido, a 0ºC, de 8,6 ml de cloruro de trimetilsililo. Después de agitar durante 1 h, se vertió la mezcla en agua helada y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se cromatografió el material bruto y se trituró luego con heptano, para obtener 7,8 g del derivado 11-trimetilsililoxi 66, p.f. 89-90ºC, RMN \delta 4,08 (m, 1, 11\alphaH), 5,80 (s, 1H, H4), 6,25 (m, 2, H6,7), 0,15 (s, 9, trimetilsililo).

67

A una solución de 5,3 g de 66 y 500 mg de Cu(OAc)_{2} en 20 ml de THF, se añadieron a -30ºC gota a gota 9,8 ml de cloruro de metilmagnesio 1M en THF. Se agitó la mezcla durante 1 hora y se vertió luego en una solución de 6 ml de ácido sulfúrico concentrado en 300 ml de agua y se agitó durante la noche. Se extrajo el producto con acetato de etilo, se secó y se concentró, obteniéndose 4,8 g de un material sólido, lo suficientemente puro como para una posterior reacción. RMN \delta 5,85 (s, 1, H4), 3,92 (m, 1, H11\alpha), 0,83 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,95 (s, 3, 18CH_{3}); R_{f} 0,22 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,65.

68

A una solución de 4,8 g de 67 y 6,6 g de NMO en 100 ml de acetona, se añadieron 130 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Después de agitar durante 2 h, se añadieron 2 g de gel de sílice, seguido de 100 ml. Se agitó la mezcla durante ½ hora más y se filtró sobre Celite. Se concentró el filtrado y se trató el residuo con éter diisopropílico, para obtener 4 g de la triona esencialmente pura 68. RMN \delta 5,89 (s, 1, H4), 0,89 (s, 3, 18CH_{3}), 0,92 (d, 3, 7\alphaCH_{3}); R_{f} 0,46 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,24.

69

Se sometió a reflujo una mezcla de 3,5 g de esteroide 67, 1,3 ml de etanoditiol, 300 mg de ácido p-toluensulfónico y 35 ml de etanol durante 1 hora. Se enfrió la reacción a la temperatura ambiente y se añadieron 80 ml de NaOH ½ N frío. Después de agitar durante 1 hora, se filtró el producto y se lavó con agua fría. Después de secar a vacío a 50ºC, se obtuvieron 4,6 g de 69; RMN \delta 5,66 (s, 1H4), 3,22 y 3,38 (m, 4, tiocetal), 0,85 (s, 3, 18CH_{3}), 0,88 (d, 3, 7\alphaCH_{3}); R_{f} 0,88 (tolueno/ac. 7/3); R_{f} del material de partida 0,59.

70

A una solución de 4,0 g de 69 en una mezcla de 100 ml de metanol y 50 ml de cloruro de metileno, se añadieron a -20ºC 450 mg de NaBH_{4} en pequeñas porciones. Después de agitar durante 1 hora más, se completó la reducción y se trató la reacción con 5 ml de acetona, se concentró después a un pequeño volumen, se diluyó con 100 ml de agua y se extrajo con cloruro de metileno. Después de secar y de concentrar, se obtuvieron 3,9 g de 70 esencialmente puro. RMN \delta 3,90 (m, 1, 17\alphaH), 0,82 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,73 (s, 3, 18CH_{3}); R_{f} 0,39 (heptano/acetato de etilo 1/1); R_{f} del material de partida 0,65.

71

Se añadió gota a gota una solución de 2,5 ml de cloruro de trimetilsililo en 20 ml de éter a una mezcla de 4,7 g de 70 y 2,6 g de imidazol en 50 ml de DMF a 0ºC. Después de agitar durante 1 hora, se diluyó la reacción con agua helada y se extrajo el producto con acetato de etilo. Después de secar y de concentrar la fase orgánica, se trituró el residuo con etanol acuoso al 80% en un baño de hielo y se filtró y secó a 50ºC a vacío, para obtener 5,2 g de 71. RMN \delta 3,76 (t, 1, 17\alphaH), 0,65 (s, 3, 18CH_{3}), 0,80 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 5,60 (s, 1, H4); R_{f} 0,86 (heptano/acetato de etilo 1/1); R_{f} del material de partida 0,37.

73

Se calentó una suspensión de 4,4 g de terc-butóxido de potasio y 16,2 g de bromuro de metiltrifenilfosfonio en 130 ml de tolueno a 100ºC durante ½ hora bajo una atmósfera de nitrógeno. Se enfrió la mezcla amarilla a 50ºC y se añadió una solución de 4,6 g del esteroide 71 en 20 ml de tolueno. Se agitó la reacción durante otra hora a 100ºC, se enfrió y se vertió en 500 ml de agua helada. Se extrajo el producto con tolueno y se lavó, se secó y se concentró. Se cromatografió el residuo sobre tolueno/gel de sílice para eliminar la mayor parte de la contaminación con el reactivo. Se disolvió el 72 bruto así obtenido (6,3 g) en 20 ml de THF y se añadió una solución de 18 ml de TBAF 1M en THF. Después de agitar durante ½ hora, se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se purificó el producto así obtenido por cromatografía, obteniéndose 4,7 g de 73; p.f. 177-180ºC; RMN \delta 4,77 y 4,86 (AB, 2, H's de metileno), 5,60 (s, 1, H4), 3,72 (m, 1, 17\alphaH), 0,70 (s, 3, 18CH_{3}), 0,77 (d, 3, 7\alphaCH_{3}); R_{f} 0,10 (heptano/acetato de etilo 9/1); R_{f} del material de partida 0,73.

74

Se añadió una solución de 2,45 g de ácido peryódico en una mezcla de 12 ml de agua y 12 ml de metanol a una solución de 4,7 g de 73 en 40 ml de cloruro de metileno. Se agitó la mezcla durante 45 minutos y se diluyó después con agua. Se extrajo el producto con cloruro de metileno. Se lavó la capa orgánica varias veces con una solución acuosa de tiosulfato de sodio al 5% y agua y se secó y concentró después. Se purificó el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice, para obtener 2,6 g de 74. RMN \delta 0,73 (s, 3, 18CH_{3}), 0,79 (d, 3, 7\alphaCH_{3}), 5,88 (s, 1, H4), 4,83, 4,94 (AB, 2, H's de metileno), 3,78 (m, 1, 17\alphaH); R_{f} 0,25 (heptano/acetato de etilo 6/4); R_{f} del material de partida 0,48.

75

Se agitó una mezcla de 2,6 g de 74, 7 ml de ortoformiato de trimetilo, 480 mg de ácido p-toluensulfónico y 50 ml de metanol a temperatura ambiente mientras se monitorizaba la reacción por TLC. Después de 2,5 horas, se vertió la reacción en NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Después de secar y de concentrar a vacío, se obtuvieron 3,1 g de una mezcla 1/1 de \Delta5,6- y \Delta5(10)-cetal; R_{f} 0,46 (heptano/acetato de etilo 6/4); R_{f} del material de partida 0,25; RMN (mezcla 1/1 de cetales) \delta 3,15, 3,22, 3,24 (singletes, 6, señales de OCH_{3}), 0,77, 0,87 (2xd, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,65, 0,71 (2xs, 3, 18CH_{3}).

76

Se disolvió el producto bruto 75 en 60 ml de acetona. A esto se le añadieron 3,7 g de N-óxido de N-metilmorfolina y 75 mg de perrutenato de tetrapropilamonio. Se agitó la mezcla durante 2 horas y se añadieron luego 1 g de gel de sílice y 60 ml de heptano. Después de agitar durante 15 minutos, se filtró la reacción sobre Celite y se concentró el filtrado a sequedad. Se pasó el residuo a través de una corta columna de sílice y se obtuvieron 1,9 g de la cetona 76 como una mezcla de \Delta5(10)- y \Delta5,6-cetales; RMN: señales típicas a \delta 0,82, 0,93 (2xd, 3, 7\alphaCH_{3}), 0,79, 0,85 (2xs, 3, 18CH_{3}), 3,15, 3,22, 3,25 (s, 6, señales de OCH_{3}), 4,70, 4,85 y 4,87 y 4,93 (2xAB, 2, H's de metileno); R_{f} 0,58 (heptano/acetato de etilo 6/4; R_{f} del material de partida 0,45.

77

Se añadió gota a una solución de 500 mg de 76 en 10 ml de THF a -40ºC a una solución de 1,6 ml de hexametildisilazuro de Li 1M en 10 ml de THF. Después de agitar durante 45 minutos más, se añadieron 120 \mul de yoduro de metilo. Se continuó agitando durante 1 hora a -20ºC y se vertió entonces la reacción en agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se pasó el material obtenido después de lavar, secar y concentrar la fase orgánica a través de una columna de sílice y se obtuvieron 510 mg del derivado 16\alpha-metílico 77 como una mezcla de isómeros de doble enlace; R_{f} 0,56 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,48. RMN \delta 1,15, 1,17 (2xd, 16\alpha
CH_{3}).

78

Se generó acetiluro de Li por adición gota a gota de 7,1 ml de BuLi-hexano 1,6M a 0,46 ml de 1,2-di-bromoetano en 10 ml de THF a -60ºC. Después de agitar durante ½ hora, se añadió una solución de 500 mg del esteroide 77 en 10 ml de THF y se agitó la mezcla de reacción durante ½ hora dejando al mismo tiempo que la temperatura se elevara hasta la temperatura ambiente durante este período. Se añadió entonces agua y se extrajo el producto con acetato de etilo. Se pasó el material así obtenido a través de una corta columna de sílice y se obtuvieron 540 mg de 78 como una mezcla de isómeros de doble enlace. RMN \delta 2,74 y 2,76 (2xs, 1, acetileno), 1,17, 1,19 (2xd, 3, 16\alphaCH_{3}), 0,78, 0,88 (2xd, 3, 7\alphaCH_{3}); R_{f} 0,50 (heptano/acetato de etilo 7/3); R_{f} del material de partida 0,60.

79

A una solución de 440 mg de 78 en 20 ml de acetona, se añadieron 4 ml de HCl 4N. Después de agitar durante 1 hora, la reacción se hubo completado y se vertió la mezcla en NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Después de lavar, secar y concentrar, se obtuvieron 380 mg de 78 esencialmente puro, que se utilizó directamente en la etapa siguiente. RMN \delta 5,88 (s, 1, H4), 5,90 (AB, 2, metileno), 2,76 (s, 1, acetileno), 1,18 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 0,88 (s, 3, 18CH_{3}), 0,79 (d, 3, 7\alphaCH_{3}).

80

A una solución de 280 mg de 79 en una mezcla de 30 ml de NH_{3} líquido y 10 ml de THF a -40ºC, se añadieron pequeñas piezas de una hoja de Li hasta que el color azul hubo persistido durante 15 minutos. Se apagó entonces rápidamente el pequeño exceso de Li por adición de NH_{4}Cl sólido y se dejó que se evaporara el amoníaco. Se añadieron al material residual 100 ml de agua y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. El material orgánico aislado después de lavar, secar y concentrar, contenía 80 casi puro; R_{f} 0,57 (heptano/acetato de etilo 6/4). RMN \delta 4,78, 4,88 (AB, 2, metileno), 2,66 (s, 1, acetileno), 1,19 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 0,86 (s, 3, 18CH_{3}), 0,90 (d, 3, 7\alphaCH_{3})

81

A una solución de 160 mg de 80 en 10 ml de THF, se añadieron a 0ºC pequeñas porciones de LiAlH_{4} hasta que se hubo completado la reducción. Se añadió entonces 0,1 ml de Na_{2}SO_{4} acuoso saturado, seguido de algo de Na_{2}SO_{4} sólido. Se agitó la mezcla durante 15 minutos y se filtró después sobre Celite. Se concentró el filtrado y se purificó el residuo pasándolo a través de una columna de HPLC preparatoria, empaquetada con sílice C-18 de fase invertida y usando acetonitrilo-agua como eluyente, para obtener 55 mg de 81. P.f. 198-199ºC; R_{f} 0,33 (heptano/acetato de etilo 6/4); R_{f} del material de partida 0,57. RMN \delta 3,67 (m, 1, 3\alphaH), 4,70, 4,82 (AB, 2, metileno), 2,65 (s, 1, acetileno), 1,18 (d, 3, 16\alphaCH_{3}), 0,83 (s, 3, 18CH_{3}), 0,89 (d, 3, 7\alphaCH_{3}).

Ejemplo 8

Se estudian los compuestos en cuanto a su actividad sobre los receptores de estrógenos en un ensayo de unión y en un ensayo de transactivación.

Se usa la determinación de la unión competitiva al receptor estrogénico humano citoplásmico de células CHO recombinantes para calcular la afinidad relativa (razón de potencias) de un compuesto de ensayo por los receptores de estrógenos presentes en el citosol de células de ovario de hámster Chino (CHO) recombinantes establemente transfectadas con el receptor de estrógenos humano, en comparación con el estradiol (E_{2}). Citosol preparado a partir de células CHO recombinantes establemente transfectadas con el receptor de estrógenos humano. Se preparó la línea celular en el Department of Biotechnology and Biochemistry (BBC) (N.V. Organon) y se la conoce bajo el nombre CHO-ER (2B1). Son compuestos de referencia el etinilestradiol y el estriol.

Se determina la actividad antiestrogénica de los compuestos en un bioensayo in vitro con células de ovario de hámster Chino (CHO) recombinantes establemente cotransfectadas con el receptor estrogénico humano \alpha (hER\alpha) o \beta (hER\beta), el promotor de oxitocina de rata (RO) y el gen informador de la luciferasa (LUC). Se compara la actividad antiestrogénica (razón de potencias) de un compuesto de ensayo para inhibir la transactivación de la enzima luciferasa mediada a través del receptor de estrógenos por el estrógeno Org 2317 (estradiol, 1,3,5(10)-estratrieno-3,17\beta-diol) con el patrón Org 34790 (ICI 164.384, (7\alpha,17\beta)-N-butil-3,17-dihidroxi-N-metilestra-1,3,5(10)-trieno-7-undecanamida).

Medio de ensayo: Células CHO recombinantes intactas establemente cotransfectadas con el receptor estrogénico humano, el promotor de oxitocina de rata y el gen informador de la luciferasa. La línea celular fue producida en el Department of Biotechnology and Biochemistry (BBC) (N.V. Organon) y se la conoce bajo el nombre CHO-ERRO 2B1-1E9.

En la siguiente Tabla se presentan los resultados.

Los datos son expresados en porcentaje de la acción del compuesto de referencia en el ensayo.

TABLA

10

\hskip0.5cm

s.r.e.: No se dispone de resultados de ensayo.

Claims

1. Un esteroide estrogénico no aromático que satisface la fórmula general I:

11

donde

R^{1}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3});

R^{4}: es etinilo;

R^{5}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3}), y

R^{6}: es alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}), alquinilo (C_{2}-C_{5}) o alquilideno (C_{1}-C_{5}), cada uno de ellos eventualmente substituido con halógeno o alquiloxi (C_{1}-C_{3}), donde los términos alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}) y alquilideno (C_{1}-C_{5}) incluyen grupos alquilo ciclado, alquenilo ciclado y alquilideno ciclado, respectivamente.

Las líneas discontinuas representan dobles enlaces eventuales; cuando R^{6} es alquilideno, la línea discontinua a R^{6} representa un enlace adicional presente en un resto de alquilideno y, cuando R^{6} es alquilo o alquenilo, el enlace del átomo 11 a R^{6} es un enlace sencillo.

2. Un esteroide estrogénico no aromático según la reivindicación 1, caracterizado por satisfacer la fórmula general II:

12

donde:

R^{1}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3});

R^{4}: es etinilo;

R^{5}: es H, alquilo (C_{1}-C_{3}) o acilo (C_{2}-C_{3}), y

R^{6}: es alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{2}-C_{5}) o alquinilo (C_{2}-C_{5}); cada uno de ellos puede estar substituido con cloro o flúor.

3. Un esteroide estrogénico no aromático según la reivindicación 2, caracterizado por el hecho de que:

R^{1}: es H,

R^{2}: es H,

R^{3}: es H, 16\alpha-metilo o 16\alpha-etilo,

R^{4}: es etinilo,

R^{5}: es H y

R^{6}: es propenilo, alilo o butenilo.

4. Una composición farmacéutica consistente en un compuesto esteroideo según cualquiera de las reivindicaciones precedentes y agentes auxiliares farmacéuticamente aceptables.

5. El uso de un compuesto esteroideo según cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para la fabricación de una medicina para el tratamiento de los trastornos dependientes de la deficiencia de estrógenos.