RS20070078A - Inaktivirana vakcina protiv poliomijelitisa nastala iz sabinovog soja polio virusa - Google Patents

Abstract

Proizvedena je inaktivirana Polio Vakcina nastala iz Sabinovog soja, koja se koristi za sigurnu i efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa. Takođe je obezbeđen i postupak za dobijanje takve vakcine i njenih formulacija. Davanje vakcine iz ovog pronalaska zajedno sa drugim antigenima obezbeđuje imunizaciju ne samo protiv polio infekcije, već takođe protiv drugih patogena koji prouzrokuju Hepatitis C, Hepatitis D, Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Bacil Calmette Guerin, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slično, kojima su podložna deca i odrasli koji nisu prethodno imunizovani, a naročito deca

Description

INAKTIVIRANA VAKCINA PROTIV POLIOMIJELITISA NASTALA IZ

SABINOVOG SOJA POLIO VIRUSA

Oblast pronalaska

Ovaj pronalazak se odnosi na Polio vakcinu, pogodno u inaktiviranom obliku, nastalu iz Sabinovog soja, koja se koristi za bezbednu i efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa, i na postupak za dobijanje takve vakcine i njenih formulacija.

Formulacije Polio vakcine ovog pronalaska mogu da se upotrebe zajedno sa jednim ili više drugih antigena da bi se obezbedila imunizacija ne samo protiv polio infekcija, već takođe protiv drugih patogena kao što su oni koji prouzrokuju Hepatitis C, Hepatitis D., Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Bacil Calmette Guerin, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slični, kojima su podložni deca i odrasli koji nisu prethodno imunizovani, a kojima su naročito podložna deca.

Formulacije Polio vakcine pripremljene prema ovom pronalasku su vrlo pogodne za primarnu imunizaciju dece, zbog toga što ne samo da sprečavaju polio infekciju, već takođe i druge tipove infekcija kojima su podložna deca i odrasli koji nisu ranije imunizovani, a naročito kojima su podložna deca.

Pozadina pronalaska

Poliomijelitis (koji se takođe pominje i kao "Polio") je akutna infekcija koja obuhvata gastrointestinalni trakt i, ponekad, centralni nervni sistem. Dobija se fekalno-oralnim prenosom. U periodima pre nego što je postojala vakcinacija, infekcija sa poliovirusom je bila česta, sa epidemijama koje su nastajale u leto i jesen u umerenim podnebljima. Učestalost poliomijelitisa je značajno opala posle registrovanja inaktivirane polio vakcine 1955. i oralne polio vakcine 1960-tih. Poslednji slučajevi spontano dobijenog polio-a zabeležen je u SAD 1979. Mada je program iskorenjivanja polia doveo do njegove eliminacije u Zapadnoj Hemisferi, gde je poslednji slučaj vezan za divlji poliovirus zabeležen 1991., do izbijanja poliovirusa tipa I nastalog iz vakcine došlo je u Dominikanskoj Republici i Haitiju u julu 2000. i na Filipinima 2001. I pored ovih skorašnjih slučajeva, globalna inicijativa iskorenjivanja polia smanjila je broj registrovanih slučajeva polia u svetu za više od 99% od sredine 1980-ih i iskorenjivanje ove bolesti u svetu izgleda izvodljivo u skoroj budućnosti. Kliničke manifestacije poliovirusne infekcije idu od asimptomatičkih (većina infekcija) do simptomatičkih, uključujući akutnu paralizu pojedinačnog uda do kvadriplegije, respirativnu slabost i, retko, smrt.

Polio uzrokuju tri tipa dosta stabilnih virusa - Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3, koji pripadaju familiji enterovirusa. Na tržištu su dostupne različite polio vakcine. Ove vakcine su trivalentne s obzirom da sadrže smešu sva tri tipa poliovirusa, tako da obezbeđuju imunitet protiv sva tri tipa.

Jedan dostupni tip Polio vakcina je Inaktivirana Polio Vakcina (IPV) bazirana na Salkovom soju (Salk IPV). Vakcina sadrži sva tri tipa polio virusa, inaktivirana formalinom. Osnovna prednost Salkove IPV je što može da bude inkorporirana sa drugim imunizacijama za decu, kao što je DPT. Ipak, Salkova IPV ima nekoliko nedostataka, kao što su potreba za strogim standardima za uzgoj Salkovog soja poliovirusa i potencijalni rizik od akcidentalnog oslobađanja živih polio virusa u okolinu tokom rukovanja virulentnim sojem polio virusa za vreme proizvodnog procesa. Štaviše, formulacije koje sadrže Salkov soj poliovirusa su skupe i komparativno su slabije.

Drugi dostupni tip Polio Vakcine je Oralna Polio Vakcina (OPV) zasnovana na Sabinovom soju. Ova Polio vakcina koja se daje oralno sastoji se od živih inaktiviranih sojeva polio virusa. Takvi sastavi vakcina koji sadrže žive inaktivirane Sabinove sojeve polio virusa su komparativno jeftiniji od Inaktivirane Polio Vakcine (IPV) bazirane na Salkovom soju.

OPV se obično koristi zbog lake dostupnosti monovalentnih sastava, više olakšica pri proizvodnji, lakoće davanja i, najznačajnije, proizvodnja OPV ne izaziva nikakav rizik od oslobađanja virulentnih polio virusa u okolinu. Ipak, neki nedostaci vezani za OPV su kvarljivost OPV na temperaturama iznad minus 20° C, ponovno prelaženje oslabljenih sojeva u virulentne sojeve i paralitički poliomijelitis povezan sa vakcinom.

Američki patent br. 5.639.649 Almonda i dr. odnosi se na izradu vakcina protiv rinovirusa i enterovirusa, naročito poliovirusa, uvođenjem definisanih mutacija u njihove genome. Ove mutacije oslabljuju virulentnost virusa divljeg tipa i mogu dalje da oslabe postojeće oslabljene sojeve virusa vakcine, čime čine manje verovatnim njihovo preobraćivanje u virulentan oblik.

Američki patent br. 5.618.539 Dorvala i dr. odnosi se na stabilizovane viralne vakcine, naročito viralne vakcine protiv poliomijelitisa, koje sadrže vodeni rastvor živog virusa i stabilizujuću količinu jedinjenja koje sadrži bar dve amino ili imin grupe, kao što su osnovne amino kiseline, na pr. lizin.

Američki patent br. 4,525,349 Montagnon-a i dr. opisuje postupak za proizvodnju poliomijelitis vakcine u većim razmerama. Međutim, ne pominje postupak stabilizacije polio virusa pre faze inaktivacije.

Otuda, još uvek postoji nezadovoljena potreba za razvijanjem jeftinijih sastava vakcine koji bi obuhvatali živ oslabljeni polio virus, koji bi mogao da se daje injekcijom i koji bi bio lišen, ili imao smanjenu toksičnost, bez kompomisa u pogledu stvaranja imuniteta.

Štaviše, iako su u nauci poznati ratličiti tipovi polio vakcine, ne postoji opis u stanju tehnike stabilne i efikasne formulacije koja sadrži inaktiviranu polio vakcinu nastalu iz Sabinovog soja i drugih antigena efikasnih protiv patogena koji prouzrokuju infekcije kod dece ili odraslih, naročito kod dece, a koja je oslobođena toksičnosti ili je manje toksična, i koje su imunogene.

Suština pronalaska

Cilj ovog pronalaska je da obezbedi Inaktiviranu Polio Vakcinu nastalu iz Sabinovog soja, radi efikasne imunizacije protiv Poliomijelitisa.

Takođe je cilj ovog pronalaska da obezbedi postupak za dobijanje Inaktivirane Polio Vakcine nastale iz Sabinovog soja radi efikasne imunizacije protiv Poliomijelitisa. okarakterisanog time što se Sabinov soj Polio virusa prvo stabiliše dodavanjem stabilizatora, a zatim inaktivira inaktivatorom.

Prema sadašnjem pronalasku, monovalentna masa polio virusa se prvo stabilizuje, a zatim inaktivira. što obuhvata sledeće faze:

i) početnu stabilizaciju mase polio virusa dodavanjem stabilizatora,

ii) dodavanje inaktivatora kao što je formaldehid (formalin) ili beta-propiolakton svakom filtriranom i prečišćenom mono valentnom rasnom ili samo zagrevanje

.rastvora,

iii) inkubaciju na oko 370 C do 48 sati i zatim na 2<0>C do 80 C do 12 dana u jednom

ciklusu pre dalje obrade,

iv) testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida ili na koncentraciju inaktivatora koje se izvodi posle svakih 12 sati u toku postupka inaktiviranja i pri čemu se

željeni nivo koncentracije održava naizmeničnim podešavanjima,

v) opciono izvođenje druge filtracije posle postupka inaktiviranja.

Prema drugom postupku ovog pronalaska, monovalentna masa polio virusa se prvo stabilizuje dodavanjem stabilizatora, a zatim inaktivira, što obuhvata sledeće faze:

i) početnu stabilizaciju mase polio virusa dodavanjem stabilizatora,

ii) dodavanje inaktivatora kao što je formaldehid (formalin) ili beta-propiolakton

ili samo zagrevanje,

iii) inkubaciju na oko 370 C 4 sata i zatim hlađenje na 20 C do 80 C 20 sati,

iv) ponavljanje ciklusa inkubacije i hlađenja do 12 puta tako da ukupno izlaganje

temperaturi od 37° C ne prelazi 48 sati u toku 12 dana inkubacije,

v) testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida ili na koncentraciju inaktivatora koje se izvodi posle svakih 12 sati u toku postupka inaktiviranja i pri čemu se

željeni nivo koncentracije održava naizmeničnim podešavanjima,

vi) opciono izvođenje druge filtracije posle postupka inaktiviranja.

Drugi cilj ovog pronalaska je da obezbedi formulaciju koja sadrži inaktiviranu Polio Vakcinu nastalu iz Sabinovog soja, radi imunizacije protiv Poliomijelitisa, okarakterisanu time što se sojevi Polio virusa prvo stabilizuju dodavanjem stabilizatora, a zatim inaktiviraju dodavanjem inaktivatora.

Sledeći cilj ovod pronalaska je da obezbedi stabilne i efikasne formulacije Polio Vakcine sa drugim antigenima koji posle uzimanja obezbeđuju imunizaciju ne samo protiv polio infekcije, već takođe protiv drugih patogena koji prouzrokuju Hepatitis C, Hepatitis D., Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Bacil Calmette Guerin, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slično, kojima su podložni deca i odrasli, a kojima su naročito podložna deca.

Detaljan opis pronalaska

Ovaj pronalazak obezbeđuje Inaktiviranu Polio Vakcinu nastalu iz Sabinovog soja, za efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa.

Sadašnji pronalazak obezbeđuje Polio Vakcinu nastalu iz Sabinovog soja za efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa, dobijenu iz zasejanog Sabinovog soja, ili suspenzija monovalentne mase Sabinovog soja korišćenih za dobijanje smeše trivalentnih oralnih polio vakcina, ili nastalu uzgojem Polio virusa Sabinovog soja (iz monovalentne mase upotrebljene za trivalentnu OPV) uverolinijskim ćelijama (linijske ćelije nastale iz ćelija bubrega afričkih zelenih majmuna), ili u bilo kojoj pogodnoj kulturi ćelija, a koji je okarakterisan time što se Polio virus prvo stabiliše dodavanjem stabilizatora, kao što je ovde opisano, a zatim inaktivira dodavanjem formaldehida (formalina) prema specifičnom ostvarenju pronalaska.

Polio vakcina ovog pronalaska eliminiše nedostatke vezane za poznate Polio vakcine OPV i Salkovu IPV.

U ostvarenju, inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja je trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, naime Tip 1, Tip 2 i Tip 3.

U drugom ostvarenju, inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja je bivalentna i sadrži smešu bilo koja dva tipa polio virusa izabrana od Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3.

U glavnom ostvarenju ovog pronalaska polio virusi su stabilizovani pre inaktiviranja virusa da bi zadržali svoj oblik, jer je trodimenzioni oblik virusa vrlo važan za njihov antigenicitet (imunogenicitet). Postupak stabilizacije pre inaktiviranja štiti već oslabljene Sabinove sojeve od deformacija ili oštećenja u toku procesa inaktivacije.

Postupak stabilizacije monovalentne mase polio virusa obuhvata dodavanje stabilizatora izabranog od (ali ne ograničenog na njih), saharoze, trehaloze, arginin hidrohlorida, želatina, magnezijum hlorida, aluminijurn hlorida i dinatrijum EDTA, korišćenih ili pojedinačno, ili u međusobnoj kombinaciji, radi zadržavanja antigeniciteta vakcine u toku procesa inaktivacije.

U ostvarenju, postupak inaktiviranja svakog pro filtriranog i prečišćenog mono valentnog basena obuhvata dodavanje inaktivatora kao što je (ali ne ograničen na njih) formaldehid (formalin) ili beta-propiolakton, ili njihove smeše, pogodno u koncentraciji od 0.001% do 0.1%, pogodnije od oko 0.025%, i/ili zagrevanje i inkubaciju na oko 37<0>C u toku optimiziranog broja dana.

Sadašnji pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje Inaktivirane Polio Vakcine nastale iz Sabinovog soja radi efikasne imunizacije protiv Poliomijelitisa.

U ostvarenju, sadašnji pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje Polio Vakcine nastale iz Sabinovog zasejanog soja, ili suspenzija monovalentne mase Sabinovog soja korišćenih za dobijanje smeše trivalentnih oralnih polio vakcina, ili nastale uzgojem Polio virusa Sabinovog soja uverolinijskim ćelijama ili bilo kojoj kulturi ćelija pogodnoj za proizvodnju oralne polio vakcine, okarakterisan time što se pripremljena polio vakcina stabilizuje stabilizatorom, a zatim inaktivira inaktivatorom.

U pogodnom ostvarenju, Polio vakcina dobijena iz Sabinovog soja, kao što je prethodno navedeno, može da se stabilizuje i inaktivira, prema sadašnjem pronalasku, jednim od sledeća dva postupka.

Postupak I:

Postupak stabilizacije: Monovalentna masa polio virusa se prvo stabilizuje dodavanjem stabilizatora kao što je saharoza, trehaloza ili arginin hidrohlorid, da bi se zadržao antigenicitet vakcine u toku postupka inaktivacije.

Postupak inaktivacije: Neposredno zatim započinje postupak inaktivacije. Inaktivacija svakog od profiltriranih i prečišćenih mono valentnih basena se izvodi dodavanjem formaldehida (formalina) u koncentraciji od 0.025% ili beta-propiolaktona i inkubacijom na oko 370 C u trajanju do 48 sati i zatim na 20 C do 8<0>C do 12 dana u jednom ciklusu pre dalje obrade.Bilo koji od ovih tretmana može da se upotrebi za inaktiviranje. Testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida se izvodi posle svakih 12 sati tokom procesa inaktivacije i željeni nivo koncentracije se održava naizmeničnim podešavanjima. Drugo filtriranje se izvodi posle procesa inaktivacije. Korizistentna inaktivacija virusa se posmatra i verifikuje.

PostupakII:

Postupak stabilizacije: Vakcine sa monovalentnom masom se stabilizuju korišćenjem istog procesa kao u Postupku I.

Postupak inaktivacije: Inaktivacija se izvodi dodavanjem formaldehida (formalina) u koncentraciji od 0.025% ili beta-propiolaktona i inkubacijom na oko 37<0>C u toku 4 sata i zatim hlađenjem na2°Cdo8°Cu toku 20 sati. Ovaj ciklus inkubacije i hlađenja može da se ponovi do 12 puta, tako da ukupno izlaganje temperaturi od 37<0>C ne pređe 48 sati u toku 12 dana inkubacije. Testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida se izvodi posle svakih 12 sati tokom procesa inaktivacije i željeni nivo koncentracije se održava naizmeničnim podešavanjima. Drugo filtriranje se izvodi posle procesa inaktivacije. Konzistentna inaktivacija virusa se posmatra i verifikuje.

Održavanje potentnosti/antigenskog integriteta Sabinovog virusa nestabilnog na višim pemperaturama je obezbeđeno. Procesi inaktiviranja su standardizovani na takav način da je svaki tip živog inaktiviranog virusa potpuno inaktiviran i proces osigurava netaknutu antigensku strukturu Sabinovog soja. Inaktivirana vakcina je sposobna da obezbedi odgovarajući imunitet kod vakcina, u poređenju sa standardnom vakcinom. Polio virus Sabinovog soja, kod sadašnjeg pronalaska, se stabilizuje pre inaktiviranja korišćenjem stabilizatora kao što su saharoza, trehaloza, arginin hidrohlorid, magnezij um hlorid, aluminijum hlorid, i dinatrijum EDTA, da a bi se izbegla degradacija prirodne i antigenske strukture. Inaktivirana Polio Vakcina proizvedena prema ovom pronalasku, u monovalentnom, bivalentnom ili trivalentnom obliku, ima potrebne količine D-antigena ili antigenskog oblika koji mogu da se porede sa ustanovljenim referentnim standardom inaktivirane polio vakcine i/ili koji obezbeđuju sero-konverziju i potrebnu zaštitu.

Inaktivirana Polio Vakcina nastala iz Sabinovog soja (SEPV) proizvedena prema ovom pronalasku poseduje prednosti i u odnosu na OPV i na Salkovu IPV. Postupak proizvodnje ne zahteva uzgoj virulentnih sojeva polio virusa i otuda su šance za akcidentalno oslobađanje živih virulentnih polio virusa u okolinu vrlo male. Takođe sojevi Polio virusa zadržavaju svoj oblik čak i u formulacijama koje sprečavaju kompromis u imunogencitetu, s obzirom da je tro-dimenzionalan oblik virusa vrlo bitan za njihovu efikasnost. Štaviše, SIPV su lišene nepogodnosti kao što je paralitički poliomijelitis povezan sa vakcinom. Takođe, SIPV ovog pronalaska može efikasno da se kombinuje sa drugim antigenima tako obezbeđujući efikasnu imunizaciju protiv nekoliko bolesti u isto vreme.

Polio vakcina nastala iz Sabinovog soja koja se koristi u formulacijama prema ovom pronalasku može da bude trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, naime Tip 1, Tip 2 i Tip 3 ili može da bude smeša bilo koja dva od pomenutih tipova.

Davanje formulacija Polio Vakcine proizvedenih prema ovom pronalasku rešava ili bar olakšava probleme vezane sa višestrukim davanjem injekcija različitih antigena. Formulacije koje obezbeđuje ovaj pronalazak su stabilne i visoko imunogene, što je pogodno za davanje deci ili odraslima, a naročito je pogodno za davanje deci.

U ostvarenju ovog pronalaska, Polio Vakcina proizvedena standardizovanim metodama se koristi za obezbeđivanje formulacije multivalentne vakcine koja sadrži Sabinov soj nastao iz inaktivirane Polio vakcine (SIPV).

U drugom ostvarenju, Polio vakcina proizvedena standardizovanim metodama upotrebljena je da bi se dobila formulacija multivalentne vakcine koja sadrži inaktiviranu polio vakcinu nastalu iz Sabinovog soja (SIPV) i broj 'n' drugih antigena, opciono u kombinaciji sa adjuvansom koji sadrži jednu ili više aluminijumskih soli, kod kojih je vrednost 'n'jedan ili veća od jedan. Pogodno, vrednost 'ri je oko 1 do 30. Još pogodnije, vrednost 'n' je 2, 3,4, 5 ili 6. Izraz 'multivalentni' kako se ovde koristi označava formulaciju vakcine koja sadrži bar dva ili više antigena.

U jednom drugom ostvarenju ovog pronalaska proizvedena je formulacija u kojoj je inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, naime Tip 1, Tip 2 i Tip 3, ili bivalentna i sadrži smešu bilo koja dva tipa polio virusa izabrana od Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3.

U još jednom drugom ostvarenju ovog pronalaska, proizvedena je formulacija gde je vakcina multivalentna.

Drugi antigeni prisutni u formulacijama Polio vakcine prema ovom pronalasku su izabrani od onih (ali nisu ograničeni na njih) koji obezbeđuju imunitet protiv jednog ili više patogena koji prouzrokuju infekcije kao što su Hepatitis C, Hepatitis D, Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slično, kojima su podložni deca i odrasli, a kojima su naročito podložna deca.

Adjuvans(i) koji se koriste u ovom pronalasku obuhvataju (ali nisu ograničeni na njih) aluminijum fosfat, kalcijum fosfat, uljne emulzije kao što su adjuvansi sa Freundovim emulzifikovanim uljem (kompletni i nekompletni), Arlacel A, Mineralno ulje, adjuvans sa emulzifikovanim kikirikijevim uljem (adjuvans 65), bakterijske produkte (njihove sintetičke derivate, kao i lipozome) ili gram-negativne bakterije, endotoksine, holesterol, masne kiseline, alifatične amine, parafinska i biljna ulja, Algamulin i QS-21. Pogodno, aluminijum hidroksid i aluminijum fosfat se koriste kao adjuvansi bilo pojedinačno, bilo u kombinaciji.

U ostvarenju, formulacije ovog pronalaska dodatno obuhvataju zaštitna sredstva ili učvršćivače tkiva ili oba, ali nisu ograničena na njih.

Zaštitna sredstva koja se koriste u formulacijama se biraju (ali nisu ograničena na njih) od živedietila, timerosala, mertiolata i 2-fenoksi etanola, korišćene bilo pojedinačno, bilo u kombinaciji.

Tkivni učvršćivač koji se koristi u formulacijama ovog pronalaska može da bude (ali se ne ograničava na njega) formaldehid.

S druge strane, pronalazak obezbeđuje formulacije vakcina koje sadrže inaktiviranu polio vakcinu nastalu iz Sabinovog soja (SIPV) adsorbovanu na Aluminijum Fosfatu (AP) i antigen adsorbovan na AP ili aluminijum Hidroksidu (AH) ili na bilo kom pogodnom adjuvansu izabranom od antigena koji obezbeđuje imunitet protiv jednog ili više od sledećih patogena: Hepatitisa C, Hepatitisa D., Hepatitisa E, Meningitisa A, Meningitisa B, Meningitisa C, Meningitisa W, Meningitisa Y, Pneumococcal-a (23 valentni ili više), Malih boginja, Tifusa, Bacila Calmette Guerin, Tuberkuloze, Humanog imunodeficijentnog virusa, Antraksa, ili slično.

U drugom aspektu ovog pronalaska, obezbeđena je stabilna i efikasna formulacija vakcine usmerena na prevenciju najmanje dva oboljenja, koja sadrži SIPV i bar jedan antigen izabran od Hepatitisa C, Hepatitisa D., Hepatitisa E, Meningitisa A, Meningitisa B, Meningitisa C, Meningitisa W, Meningitisa Y, Pneumococcal-a (23 valentnog ili više), Malih boginja, Tifusa, Bacila Calmette Guerin, Tuberkuloze. Humanog imunodeficijentnog virusa, Antraksa ili sličnog.

U drugom ostvarenju pronalaska, formulacija takođe obuhvata antigene kompatibilne sa SIPV, kao što su antigeni protiv Meningitisa B, Meningitisa A i C, ili usnih oboljenja.

U daljem ostvarenju, inaktivirani monovalentni virusi se mešaju sa (ali nisu ograničeni na njih) stabilizatorima i/ili sredstvima za konzerviranje da bi se dobila monovalentna, bivalentna ili multivalentna inaktivirana vakcina. Dobijena vakcina može da bude sušena raspršivanjem i ponovo suspendovana u tečnosti spremne za injektovanje kao što su ugljovodonici zasićeni fluorom, koje ne zahtevaju smeštanje u frižideru za skladištenje niti pripremanje pre injektiranja.

Formulacije prema ovom pronalasku mogu da se daju oralno, transdermalno, parenteralno, nazalno, mukozno i slično, ali načini nisu ograničeni na pomenute.

U pogodnom ostvarenju pronalaska, formulacija se daje u obliku injekcije parenteralnim putem, naročito potkožno ili intramuskularno.

Primeri dati niže ilustruju ostvarenja ovog pronalaska. Međutim, njima se ne ograničava obim sadašnjeg pronalaska.

Primer 1

Zasejan soj istog tipa i prenos kao što je korišćen za vakcinu protiv poliomijelitisa (oralnu): Oralna Polio Vakcina (OPV) je razmnožena da bi se dobila monovalentna suspenzija za inaktiviranje.

ĆELIJSKA KULTURA:

i) Supstrati različitih ćelija za razmnožavanje virusa obuhvataju niz humanih diploidnih ćelija, ćelija bubrega majmuna, niz Vero ćelija ili bilo koju drugu

pogodnu ćelijsku kulturu.

ii) Proizvodnja ćelija u velikom obimu:

1. Priprema radne banke ćelija proizvođača (MWCB): MWCB u slučaju primarnih ćelijskih kultura (ćelije nastale od normalnog tkiva i čuvane smrznute na minus 70° C) ili od bilo kog drugog dozvoljenog kontinualnog ćelijskog niza (ćelijske linije) se proizvode od ćelija i ćelijskih basena posle serije subkultura u okviru specifiranog broja ćelijskih kultura. 2. Za postepeno povećanje u zapremini ćelija može da se upotrebi bilo koji pogodan od sledećih sistema: - Rotirajuće boce: rast u rotirajućim bocama se razlikuje od onog u stacionarnim kulturama po rasporedu ćelija na staklenoj površini i maksimalnoj postignutoj gustini ćelija. Kulture iz rotirajućih boca ne slabe sporije jer mogu da podnose gustinu skoro dva puta veću od one kod stacionarnih kultura. Ćelije sisara koje rastu u monoslojnoj kulturi se najbolje adaptiraju na tehniku sa rotirajućim bocama. - Fabrike ćelija: to su naslage pločica sa kulturama koje imaju zajednički ulaz i izlaz. One obezbeđuju ćelije sa površinom koja raste onoliko koliko dopušta unutrašnjost rotirajuće boce, ali zauzima manje prostora u unutrašnjosti inkubatora. One su idealne za adherentne kulture ćelija, imaju mali rizik od kontaminacije i kompaktne su.

- boce sa suženim grlom

- sistem sa mikro-nosačem

Uzorci za kontrolu ćelijskih kultura su inkubirani odvojeno u toku najmanje dve nedelje i ispitani na prisustvo citopatičnih promena.

RAZMNOŽAVANJE POLIO VIRUSA U ĆELIJSKIM KULTURAMA:

i) Sistem sa zasejanom masom:

a) Nivo prenosa kao za Oralnu Polio Vakcinu (OR)

b) njegov sledeći nivo prenosa kakav je nastao iz suspenzije monovalentne mase

koja bi mogla da se koristi za proizvodnju oralne polio vakcine.

1. Vakcina se proizvodi na bazi sistema sa zasejanom virusnom masom. Zasejana virusna masa je količina virusa koja se istovremeno obrađuje i uniformnog je sastava dobijenog od zasejane mase. 2. Sub-kultura zasejanog virusa ne bi trebalo da se obrađuje više od 10 puta, računajući od zasejane mase upotrebljene za proizvodnju vakcine na kojoj se izvode laboratorijski testovi i testovi na terenu.

POJEDINAČNO SAKUPLJANJE IMONOVALENTNI BASENI:

Virus se razmnožava u ćelijskim kulturama i sakuplja iz ćelijskih kultura nastalih iz pojedinačne grupe ćelija koje su zajedno obrađene. To je poznato kao pojedinačno sakupljanje. Pojedinačna sakupljanja suspenzije jednog tipa virusa se obavljaju istovremeno da bi se dobio monovalentni basen u sirovom obliku.

FILTRIRANJE ILI PREČIŠĆAVANJE MONOVALENTNOG BASENA:

Sirova virusna suspenzija svakog monovalentnog basena se prečišćava postepeno kroz filtere sa smanjujućom poroznošću. Svrha faze filtracije je da ukloni čestice materijala i druge materije koje mogu da utiču na proces inaktivacije, s obzirom da takvi agregati mogu da se uvećavaju stajanjem.

KONCENTRISANJE MONOVALENTNOG BASENA:

Svaki profiltriran monovalentni basen se koncentriše Ultra-filtriranjem.

PREČIŠĆAVANJE MONOVALENTNOG BASENA:

Hromatografija sa DEAE sefaroza/imobilisana DNA-aza kolonom/imunoadsorptivnom kolonom je korišćena za prečišćavanje monovalentnog basena. Proces prečišćavanja smanjuje konzistentno nivo celularne DNA u odnosu na početni virusni sakup najmanje IO<8>puta. Koncentracija D-antigena je određena pomoću ELISA-e i prikazuje komparativni imunogenicitet kod pacova. Potentnost se podešava u skladu sa tim. Monovalentni baseni Polio virusa su izmešani da bi se dobio proizvod sa trivalentnom masom.

STABILIZACIJA SABINOVOG VIRUSA PRE INAKTIVIRANJA:

Antigenicitet vakcine je tesno povezan sa stabilnošću antigena prirodnog virusa u toku procesa inaktivacije. Antigenska struktura polio virusa treba prvo da se stabilizuje dodavanjem stabilizatora kao što su saharoza, trehaloza, ili arginin hidrohlorid.

INAKTIVIRANJE KORIŠĆENJEM FORMALDEHIDA:

i) Proces inaktivacije započinje pogodno u periodu od 24 sata, ali ne kasnije od 72 sata posle filtracije.

ii) Inaktiviranje svakog filtriranog i prečišćenog monovalentnog basena se izvodi dodavanjem formaldehida (formalina) u koncentraciji od 0.025% i inkubacijom na 37° C u toku određenog vremenskog perioda kao što je prethodno opisano. Testiranje na slobodan formaldehid se izvodi u određenim intervalima i željeni nivo koncentracije se održava naizmeničnim podešavanjima.

iii) Druga filtracija se izvodi posle postupka inaktivacije.

iv) Konzistentno inaktiviranje virusa se prati i verifikuje.

v) Radi testiranja stepena inaktivacije, formaldehid se neutralizuje dodavanjem natrijum bisulfita i zatim se on odstranjuje dijalizom.

FORMULISANJE I PROIZVODNJA VAKCINE:

Prečišćena inaktivirana masa se profiltrira, pogodno kroz filtere od 0.22 mikrona ili 0.45 mikrona. Inaktivirani monovalentni virusi se opciono pomešaju sa stabilizatorom i/ili sredstvom z akonzerviranje da bi se dobila monovalentna, bivalentna, trivalentna ili multivalentna vakcina.

TESTIRANJE EFIKASNOSTI VAKCINE:

Ustanovljeno je da je efikasnost vakcine proizvedene kao što je prethodno navedeno, u ispitivanjima in-vitro i/ili in-vivo, slična kao kod postojeće referentne vakcine.

Različiti drugi testovi zasnovani na standardnim usvojenim metodama su izvođeni sa vakcinom proizvedenom prema prethodnom opisu, kao što su određivanje pH, test steriliteta, testiranje efikasnosti inaktivacije, studija abnormalne toksičnosti, merenje zapremine, određivanje potentnosti in vitro, endotoksinski test, test identiteta, procena sadržaja proteinskog azota i određivanje sadržaja stabilizatora i sadržaja formaldehida, da bi se osigurala njena efikasnost, sigurnost i potentnost.

In vitro potentnost SIPV proizvedene kao što je prethodno opisano određivana je pomoću Sandwich-ove ELISA-e. Dva primarna antitela uzgojena u različitim vrstama protiv polio virusa su korišćena protiv istog, a drugo antitelo konjugovano sa HRP je upotrebljeno protiv drugog primarnog antitela. Rezultati su analizirani poređenjem sa referentnim standardom.

Test identiteta vakcine je izveden korišćenjem direktno ELISA-e. Antigen je dobro prevučen u 96 ELISA pločica i za određivanje prisustva sva tri tipa polio virusa u vakcini upotrebljen je specifičan tip anti polio seruma sa antitelima.

Claims (35)

1. Inaktivirana Polio Vakcina naznačena t i m e, što je nastala iz Sabinovog soja za efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa.

2. Polio vakcina prema zahtevu 1, naznačena time, što je inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, odnosno Tip 1, Tip 2 i Tip 3.

3. Polio vakcina prema zahtevu 1,naznačena time, što je inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja bivalentna i sadrži smešu dva tipa polio virusa izabrana od Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3.

4. Polio vakcina prema zahtevu 1, n a z n a č e n a t i m e, što je dobijena iz zasejanog Sabinovog soja ili iz suspenzija monovalentne mase Sabinovog soja upotrebljenih za pripremu smeše trivalentne oralne polio vakcine ili od uzgojenih polio virusa uveroćelijskoj liniji, ili u bilo kojoj pogodnoj ćelijskoj kulturi za dobijanje oralne polio vakcine, okarakterisana time što se pripremljena polio vakcina stabilizuje stabilizatorom, a zatim inaktivira inaktivatorom.

5. Polio vakcina prema zahtevu 4, n a z n a č e n a t i m e, što se stabilizator bira iz grupe koja sadrži saharozu, trehalozu, arginin hidrohlorid, želatin, magnezij um hlorid, aluminijum hlorid i dinatrijum EDTA, korišćenih ili pojedinačno, ili u međusobnoj kombinaciji.

6. Polio vakcina prema zahtevu 4, n a z n a č e n a t i m e, što se inaktivator bira iz grupe koja sadrži formaldehid ili beta-propiolakton ili njihovu smešu.

7. Postupak za dobijanje polio vakcine, naznačen t i m e, što je ona nastala iz Sabinovog soja, a radi efikasne imunizacije protiv Poliomijelitisa.

8. Postupak za dobijanje polio vakcine prema zahtevu 7, iz zasejanog Sabinovog soja ili suspenzija monovalentne mase Sabinovog soja upotrebljenih za pripremu smeše trivalentne polio vakcine ili od uzgoja Sabinovog soja polio virusa uveroćelijskoj liniji ili u bilo kojoj ćelijskoj kulturi za dobijanje oralne polio vakcine, naznačen t i m e, što se pripremljena polio vakcina stabilizuje stabilizatorom i zatim inaktivira inaktivatorom.

9. Postupak prema zahtevima 7 i 8, n a z n a č e n t i m e, što se monovalentna masa polio virusa prvo stabilizuje dodavanjem stabilizatora, a zatim inaktivira, što obuhvata sledeće faze: i) početnu stabilizaciju mase polio virusa dodavanjem stabilizatora, ii) dodavanje inaktivatora kao što je formaldehid ili beta-propiolakton svakom profiltriranom i prečišćenom mono valentnom basenu ili samo zagrevanje basena, iii) inkubaciju na oko 37<0>C do 48 sati i zatim na 2<0>C do 8<0>C do 12 dana u jednom ciklusu pre dalje obrade, iv) testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida ili na koncentraciju inaktivatora koje se izvodi posle svakih 12 sati u toku postupka inaktiviranja i pri čemu se željeni nivo koncentracije održava naizmeničnim podešavanjima, v) opciono izvođenje druge filtracije posle postupka inaktiviranja.

10. Postupak prema zahtevima 7 i 8, n a z n a č e n a t i m e, što se monovalentna masa polio virusa prvo stabilizuje dodavanjem stabilizatora, a zatim inaktivira, što obuhvata sledeće faze: i) početnu stabilizaciju mase polio virusa dodavanjem stabilizatora, ii) dodavanje inaktivatora kao što je formaldehid ili beta-propiolakton ili samo zagrevanje, iii) inkubaciju na oko 37<0>C u toku 4 sata i zatim hlađenje na 2<0>C do 8<0>C 20 sati, iv) ponavljanje ciklusa inkubacije i hlađenja do 12 puta tako da ukupno izlaganje temperaturi od 37<0>C ne prelazi 48 sati u toku 12 dana inkubacije, v) testiranje na sadržaj slobodnog formaldehida ili na koncentraciju inaktivatora koje se izvodi posle svakih 12 sati u toku postupka inaktiviranja i pri čemu se željeni nivo koncentracije održava naizmeničnim podešavanjima, vi) opciono izvođenje druge filtracije posle postupka inaktiviranja.

11. Postupak prema zahtevima 8 do 10, n a z n a č e n t i m e, što se stabilizator bira iz grupe koja sadrži saharozu, trehalozu, arginin hidrohlorid, želatin, magnezijum hlorid, aluminijum hlorid i dinatrijum EDTA, korišćenih ili pojedinačno, ili u međusobnoj kombinaciji.

12. Postupak prema zahgtevima 8 do 10, n a z n a č e n t i m e, što se inaktivator bira iz grupe koja sadrži formaldehid ili beta-propiolakton ili njihovu smešu.

13. Postupak prema zahtevima 7 do 12, n a z n a č e n t i m e, što obuhvata mešanje inaktivirane polio vakcine nastale iz Sabinovog soja adsorbovane na uobičajenom adjuvansu sa 'n' brojem drugih antigena.

14. Postupak prema zahtevu 13, n a z n a č e n t i m e, što su antigeni izabrani iz grupe koja sadrži Hepatitis C, Hepatitis D, Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Bacil Calmette Guerin, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slično, a koji se koriste ili pojedinačno ili u međusobnoj kombinaciji.

15. Postupak prema zahtevu 13, n a z n a č e n t i m e, što je vrednost 'n' oko 1 do 30.

16. Postupak prema zahtevu 13, n a z n a č e n t i m e, što je vrednost 'n' 2, 3, 4, 5 ili 6.

17. Postupak prema zahtevima 7 do 16, n a z n a č e n t i m e, što je inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, naime Tip 1, Tip 2 i Tip 3.

18. Postupak prema zahtevima 7 do 16, naznačen time, stoje inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja bivalentna i sadrži smešu bilo koja dva tipa polio virusa izabrana od Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3.

19. Postupak prema zahtevima 7 do 16, n a z n a č e n t i m e, što je vakcina multivalentna.

20. Formulacija inaktivirane polio vakcine nastale iz Sabinovog soja, naznačena tim e, što se koristi za efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa.

21. Formulacija inaktivirane polio vakcine nastale iz Sabinovog soja prema zahtevu 20 za efikasnu imunizaciju protiv Poliomijelitisa, naznačena time, što je vakcina adsorbovana na adjuvansu opciono sa brojem'n'antigena.

22. Formulacija prema zahtevu 21, n a z n a č e n a t i m e, što su antigeni izabrani izabrani iz grupe koja sadrži Hepatitis C, Hepatitis D, Hepatitis E, Meningitis A, Meningitis B, Meningitis C, Meningitis W, Meningitis Y, Pneumococcal (23 valentni ili više), Male boginje, Tifus, Bacil Calmette Guerin, Tuberkulozu, Humani imunodeficijentni virus, Antraks, ili slično, koji se koriste ili pojedinačno ili u međusobnoj kombinaciji.

23. Formulacija prema zahtevu 21, n a z n a č e n a t i m e, što je vrednost 'n' oko 1 do 30.

24. Formulacija prema zahtevu 21, n a z n a č e n a t i m e, što je vrednost 'n' 2, 3, 4, 5 ili 6.

25. Formulacija prema zahtevima 20 do 24, n a z n a č e n a t i m e, što je inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja trivalentna i sadrži smešu sva tri tipa polio virusa, naime Tip 1, Tip 2 i Tip 3.

26. Formulacija prema zahtevima 20 do 24, n a z n a č e n a time, štoje inaktivirana polio vakcina nastala iz Sabinovog soja bivalentna i sadrži smešu bilo koja dva tipa polio virusa izabrana od Tipa 1, Tipa 2 i Tipa 3.

27. Formulacija prema zahtevima 20 do 24, n a z n a č e n a t i m e, što je vakcina multivalentna.

28. Formulacija prema zahtevima 20 do 27, n a z n a č e n a t i m e, što obuhvata adjuvans(e) izabrane od (ali ne ograničene na njih) aluminijum hidroksida, aluminijum fosfata, kalcijum fosfata, uljnih emulzija kao što su adjuvansi sa Freund-ova emulzifikovana ulja (kompletna i nekompletna), Arlacel-a A, Mineralnog ulja, adjuvansa sa emulzifikovanim kikirikijevim uljem (adjuvast 65), bakterijskih produkata (njihovih sintetičkih derivata, kao i lipozoma) ili gram-negativnih bakterija, endotoksina, holesterola, masnih kiselina, alifatičnih amina, parafinskih i biljnih ulja, Algamulina i QS-21, korišćenih bilo pojedinačno, bilo u međusobnoj kombinaciji.

29. Formulacija prema zahtevu 28, n a z n a č e n a t i m e, što je adjuvans aluminijum hidroksid ili aluminijum fosfat ili njihova smeša.

30. Formulacija prema zahtevima 20 do 29, n a z n a č e n a t i m e, što dodatno sadrži sredstva za konzerviranje ili učvršćivače tkiva ili oba.

31. Formulacija prema zahtevu 30, n a z n a č e n a t i m e, što su sredstva za konzerviranje izabrana od živedietila, timerosala, mertiolata i 2-fenoksi etanola, korišćene bilo pojedinačno, bilo u kombinaciji.

32. Formulacija prema zahtevu 30, n a z n a č e n a t i m e, što se kao učvršćivač tkiva koristi formaldehid.

33. Polio vakcina nastala iz Sabinovog soja, suštinski kao štoje ovde opisana i ilustrovana.

34. Postupak za dobijanje Polio vakcine nastale iz Sabinovog soja, suštinski kao štoje ovde opisan i ilustrovan.

35. Formulacija Polio vakcine nastale iz Sabinovog soja, suštinski kao što je ovde opisana i ilustrovana.