RS55224B1 - N1-pirazolospiroketon acetil-coa karboksilaza inhibitori - Google Patents

N1-pirazolospiroketon acetil-coa karboksilaza inhibitori

Info

Publication number
RS55224B1
RS55224B1 RS20160845A RSP20160845A RS55224B1 RS 55224 B1 RS55224 B1 RS 55224B1 RS 20160845 A RS20160845 A RS 20160845A RS P20160845 A RSP20160845 A RS P20160845A RS 55224 B1 RS55224 B1 RS 55224B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
oxo
isopropyl
carbonyl
piperidin
tetrahydro
Prior art date
Application number
RS20160845A
Other languages
English (en)
Inventor
Mary Theresa Didiuk
Robert Lee Dow
David Andrew Griffith
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of RS55224B1 publication Critical patent/RS55224B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/20—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

POLJE PRONALASKA
[0001]Ovaj pronalazak, odnosi se na supstituisana pirazolospiroketon jedinjenja koja deluju kao inhibitori acetil-CoA karboksilaze(a) i na njihovu upotrebu u lečenju bolesti, stanja i poremećaja regulisanih inhibicijom acetil-CoA karboksilaze enzima.
POZADINA PRONALASKA
[0002]Acetil-CoA karboksilaze (ACC) su familija enzima koji se mogu naći u većini vrsta i povezani su sa sintezom masnih kiselina i metabolizmom preko katalitičke proizvodnje malonil-CoA iz acetil-CoA. Kod sisara, identifikovana su dva izomorfa ACC enzima. ACC1, koji se pojavljuje u vizokom nivou u lipogenom tkivu, kao što su mast i jetra, kontroliše prvi korak u biosintezi masnih kiselina dugačkog niza. Ako acetil-CoA nije karboksilovan kako bi stvorio malonil-CoA, on se metaboliše kroz Krebsov ciklus. ACC2, manjinska komponenta ACC jetre ali pretežni izomorf u srcu i skeletnoj muskulaturi, katalizuje proizvodnju malonil-CoA na citosolnoj površini mitohondrija i reguliše količinu masnih koja se troši u 0-oksidaciji inhibišući karnitin palmitoil transferazu. Tako, povećavanjem upotrebe masnih kiselina i prevencijom sintezede novomasnih kiselina, kontinuiranim davanjem ACC inhibitora (ACC-I) može se smanjiti deponovanje triglicerida (TG) u jetri i adipoznom tkivu kod gojaznih pacijenata koji su na visoko ili nisko - masnoj dijeti, dovodeći do selektivnog smanjivanja telesne masnoće.
[0003]Studije sprovedene od strane Abu-Etheiga, et al., nagoveštavaju da ACC2 igra esencijalnu ulogu u kontroli oksidacije masnih kiselina i da kao takav može biti meta u terapiji gojaznosti i bolesti povezanih sa gojaznošću, kao što su dijapetes- tipa 2. Videti, Abu-Etheiga, L., et al, "Acetyl-CoA karboxylase 2 mutant mice are protected against obesitv and diabetes induced by high-fat/high-karbohydrate diets"). PNAS, 100(18) 10207-10212 (2003). Videti takođe, Choi, C.S., et al.,"Continuous fat oxidation in acetyl-CoA karboxylase 2 knockout mice increases total energy expenditure, reduces fat mass, and improves insulin sensitivity", PNAS, 104(42) 16480-16485 (2007)
[0004]Postalo je sasvim jasno da akumulacija masti u jetri uzrokuje rezistenciju jetre na insulin i doprinosi patogenom diabetesu-tipa 2. Salvage, et al., su pokazali da ACC 1 i ACC2 uključeni u regulaciju oksidacije masti u hepatocitima dok ACC1, dominantni izomorf u jetri pacova, je jedini regulator sinteze masnih kiselina. Uz to, u modelu koji su prikazali, kombinovana redukcija oba izomorfa je neophodna da bi se značajnije smanjio nivo malonil-CoA u jetri, povećala oksidacija masti u stanju sitosti, smanjila akumulacija masti i poboljšalo dejstvo insulina in vivo. Tako je pokazano da ACC1 i ACC2 inhibitori iz jetre mogu biti korisni u lečenju bolesti ne-alkoholičarske masne jetre (NAFLD) i hepatične rezistencije na insulin. Videti, Savage, D.B., et al., "Reversal of diet-induced hepatic steatosis and hepatic insulin resistance by antisense oligonucleotide inhibitors of acetyl-CoA karboxylases 1 and 2", J Clin Invest doi:10.1172/JCI27300. Videti takođe, Oh, W., et al., "Glucose and fat metabolism in adipose tissue of acetyl-CoA karboxylase 2 knockout mice" PNAS, 102(5) 1384-1389 (2005).
[0005]Proizilazi da postoji potreba za lekovima koji sadrže ACC1 i/ili ACC2 inhibitore radi lečenja gojaznosti i bolesti vezane za gojaznost (kao što su, NAFLD i diabetes-tipa2) putem inhibicije sinteze masnih kiselina i povećavanjem oksidacije masnih kiselina.
SAŽETAK PRONALASKA
[0006]Pre svege ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje stukturne formule (I)
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; gde
R<1>je (Ci-C6)alkil, (C3-Cv)cikloalkil, tetrahidrofuranil ili oksetanil; gde navedeni (Ci-C6)alkil je opcionalno supstituisan sa 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od (Ci-C3)alkoksi, hidroksi, fluoro, fenil, tetrahidrofuranil ili oksetanil;
R2 je vodonik, halo, (Ci-C3)alkil, ili cijano;
R<3>su svaki nezavisno vodonik ili (Ci-C3)alkil;
L je direktna veza ili (Ci-C6)alkilen gde jedan ugljenik iz (Cl-C6)alkilena je opcionalno supstituisan sa -C(O)-, -C(0)NH-, -NHC(O), O, S, NH ili N(Ci-C3)alkil;
ZjeCH2iliO;
A 1 i A 2 su svaki nezavisno (C6-Cio)aril, 5 do 12- člani heteroaril ili 8 do 12 člani fuzionisani heterocikloaril; gde navedeni (C6-Cio)aril, 5 do 12- člani heteroaril ili 8 do 12 - člani fuzionisani heterocikloaril su svaki opcionalno supstituisani sa jednim do tri supstituenta, nezavisno izabranim od (Ci-C3)alkil, (Ci-C3)alkoksi, halo, amino, (Ci-C3)alkilamino, di(Ci-C3)alkilamino, hidroksi, cijano i amido gde alkil deo iz (Ci-C3)alkil, (Ci-C3)alkoksi, (Ci-C3)alkilamino i di(Ci-C3)alkilamino je opcionalno supstituisan sa jednim do pet atoma fluora; i kada jedan od Al ili A2 je supstituisan sa CO2R4, (Ci-C6)C02R4, tetrazolil ili (Ci-C6)tetrazolil; i R4 je (Ci-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil ili (Ci-C6)alkil-(C3-C8)cikloalkil;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0007] Drugi vid ovog pronalaska je jedinjenje iz prethodnog stava gde R<1>je (Ci-C6)alkil, (C3-C7)cikloalkil, ili tetrahidrofuranil; R2 je vodonik ili metil; svaki R3 je vodonik; i Lje direktna veza ili O; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0008] Sledeći vid ovog pronalaska je jedinjenje iz prethodnog stava gde R<1>je (C2-C4)alkil; Al i A2 su svaki nezavisno fenil, pirazolil, imidazolil, triazolil, piridinil, pirimidinil,
indolil, benzopirazinil, benzoimidazolil, benzoimmidazolonil, pirolopiridinil, pirolopirimidinil, pirazolopiridinil, pirazolopirimidinil, indazolil, indolinonil, naftiridinil, hinolinil, hinolinonil, dihidrohinolinonil, okso-dihidrohinolinonil, izohinolinil, izohinolinonil, dihidroizohinonil ili okso-dihidroizohinonil, svaki opcionalno supstituisan sa jednim do tri supstituenta nezavisno odabrana od fluoro, hloro, metil, metoksi, amino, metilamino, dimetilamino, amido ili cijano; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0009] Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje iz prethodnog stava gde R<1>je izopropil ili t-butil; R2 je vodonik i R4 je vodonik; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje iz prethodnog stava gde A<1>je fenil, piridinil, indazolil, indolil, benzoimidazolil, pirolopiridinil ili pirolopirimidinil; svaki opcionalno supstituisan sa jednom grupom metil, metoksi, metilamino ili dimetilamino; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje iz jednog od prethodna dva stava gde A je fenil supstituisan sa CO2H ili tetrazolil grupom; i L je direktna veza; ili farmaceutski prihvatljiva so ovog jedinjenja.
[0010] Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje iz prethodnog stava gde A<1>je fenil, indolil ili benzoimidazolil opcionalno supstituisan sa metil, ili piridinil opcionalno supstituisan sa metilamino ili dimetilamino grupama; ili farmaceutski prihvatljiva so ovog jedinjenja.
[0011]Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje odabrano od: 4-((4-(l-Terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)fenoksi)metil)benzenska kiselina; 3-(4-(l-Izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro [indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzenska kiselina; 3-(4-(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-6-okso-1,6-dihidropiridin-2-il)benzenskakiselina; 3-{5-[(l-tercbutil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -iljkarbonil] -6-(metilamino)piridin-2-il} benzenska kiselina; 3- {5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4'-[(l-terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]bifenil-3-karboksilna kiselina; 4'-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]bifenil-3-karboksilna kiselina; 4-{5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {4- [(1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' - il)karbonil]-6-metoksipiridin-2-il}benzenska kiselina; 3- {4-[(1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro- 1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -6-metoksipiridin-2-il} benzenska kiselina; 4-{4-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-6-metoksipiridin-2-il}benzenska kiselina; 3-{4-[(l-terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -6-metoksipiridin-2-il} benzenska kiselina; 4-{5-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{5-[( 1 -tercbutil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro- 1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -6-(etilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{6-(etilamino)-5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -1H-indol-4-il}benzenska kiselina; 4- {2-[( 1 -izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-il)karbonil]-1 H-indol-4-il}benzenska kiselina; 3- {2-[( 1 -terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-lHindol-4-il}benzenska kiselina; 4-{2-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lHindol-4-il}benzenska kiselina; 3-{5-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-(etilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 3-{6-(etilamino)-5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 3-[(l-terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-5-( 1,3-oksazol-2-il)benzenska kiselina; 4-({4-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-il)karbonil]fenoksi}metil)benzenska kiselina; 3-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-5-(l,3-oksazol-2-il)benzenska kiselina; 3-{6-(izopropilamino)-5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{5-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-(izopropilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{6-(izopropilamino)-5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]piridin-2-il}benzenskakiselina; 4-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-lH-indazol-4-il} benzenska kiselina; 3-{4-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-okso-l,6-dihidropiridin-2-il}benzenskakiselina; 4-{4-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-6-okso-l,6-dihidropiridin-2-il}benzenskakiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il}benzenska kiselina; 4-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-1' H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1'-il)karbonil] -1 H-pirolo[2,3 -b]piridin-4-il} benzenska kiselina; 4- {2-[(1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-il)karbonil]-lH-pirolo[3,2-c]piridin-4-il}benzenska kiselina; (5-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-lH-indol-4-il}-2-metoksifenil) sirćetna kiselina; 3-{6-(dimetilamino)-4-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'- il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{6-(dimetilamino)-4-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 4-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-iljbenzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-pirolo[3,2-c]piridin-4-il}benzenska kiselina; 3-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-te1xahidro-r<H>-s<p>iro[indazol-5,4'-pi<p>eridin]-<r->il)karbonil]-7H-pirolo[2,3-d]pyrimidin-4-il}benzenska kiselina; 4-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-il)karbonil]-1 H-indol-4-il}benzenska kiselina; 4- {2-[(1 - izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-lH-pirolo[2,3-c]piridin-4-il}benzenska kiselina; 3-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-lH-indol-4-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -1H-pirolo[2,3-c]piridin-4-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-1'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -1 H-indol-6-il} benzenska kiselina; 4- {5- [(1 - izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-[(2,2,2-trifluoroetil)amino]piridin-2-il}benzenska kiselina; 3-{5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-1' Hspiro [indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -6-(metilamino)piridin-3 - il}benzenska kiselina; 4-{5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-3-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -il)karbonil] -1 H-benzimidazol-4-il}benzenskakiselina; 4-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina; 3-(6-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)-2-metil-lH-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; 4-(6-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-2-metil-lH-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; 1-izopropil-l '-{[3'-(lH-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]karbonil}-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(6H)-on; i 1-terc-butil-l'-{[3'-(lH-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]karbonil}-1,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(6H)-on; orili njegofa farmaceutski prihvatljiva so.
[0012]Još jedan vid ovog pronalaska predstavlja jedinjenje iz prethodnog stava odabrano od: 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-lH-benzimidazol-4-il}benzenska kiselina; 4-{6-(dimetilamino)-4-[(l-izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]piridin-2-iljbenzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-indol-4-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-pirolo[2,3-b]piridin-4-il}benzenska kiselina; 4-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-l 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-lH-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-lH-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina; 3-(6-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)-2-metil-lH-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; i 4-(6-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-2-metil-l H-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0013]Još jedan aspekt ovog pronalaska odnosi se na farmaceutski oblik koji sadrži određenu količinu jedinjenja formule (I) kao što je opisano u bilo kom od gore navedenih vidova jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljivu so ovog jedinjenja u farmaceutski prihvatljivom ekscipijentu, rastvaraču ili noosaču. Poželjno je da farmaceutski oblik sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Farmaceutski oblik može da sadrži najamanje jedan dodatni farmaceutski agens. Poželjni agensi uključuju anti-dijabetske agense i/ili agense za mršavljenje (opisane niže)
[0014]U još jednom aspektu ovog pronalaska uključenje metod za lečenje bolesti, stanja ili poremećaja na koje se inhibicijom acetil-CoA karboksilaza enzima u sisara koji uključuje korake davanja sisaru, poželjno je ljudima u potrebi za takvim tretmanom, terapeutski efikasne količine jedinjenja prema ovom pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli
[0015]Bolesti, poremećaji ili stanja na koje se utiče inhibicijom acetil-CoA karboksilaze podrazumevaju dijabetes tipa 2 i bolesti vezane za dijabetes, kao što su nealkoholna masna jetra (NAFLD), rezistencija jetre na insulin, hiperglikemija, metabolički sindrom, neuparena tolerancija na glukozu, dijabetska neuropatija, dijabetska retinopatija, gojaznost, dislipidemija, hipertenzija, hiperinsulinemija, i sindrom rezistencije na insulin. Pogotovu se ovo odnosi na bolesti, poremećaje ili stanja dijabetes tipa 2, nealkoholičarska masna jetra (NAFLD), insulinska rezistencija jetre, hiperglikemija i gojaznost. Još specifičnije to je dijabetes tipa 2.
[0016]Omiljenje metod za lečenje, (npr., odlaganje ili sprečavanje pojave), dijabetesa tipa 2 i sa dijabetesom povezanih poremećaja kod životinja koji sadrži korak davanja nekoj životinji, kojoj je takav tretman potreban, terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0017]Dalje omiljenje metod za lečenje gojaznosti i poremećaja vezanih za gojaznost kod životinja koji sadrži korak davanja nekoj životinji, kojoj je takav tretman potreban, terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0018]Još dalje, omiljenje metod za lečenje nealkoholičarske masne jetre (NAFLD) ili hepatične insulinske rezistencije kod životinja koji sadrži korak davanja nekoj životinji, kojoj je takav tretman potreban, terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0019]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu se davati u kombinaciji sa drugim farmaceutskim agensima (pogotovu sa sredstvima za mršavljenje i protiv dijabetesa navedenim niže). Kombinovana terapija može se davati kao (a) jedinstveni farmaceutski oblik koji sadrži jedinjenje prema ovom pronalasku ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, najmanje jedan dodatni farmaceutski agens opisan ovde i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač ili nosač; ili (b) dva odvojena farmaceutska oblika koji sadrže (i) prvi farmaceutski oblik sadrži jedinjenje prema ovom pronalasku i neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač, ili nosač, i (ii) drugi farmaceutski oblik koji sadrži najmanje jedan dodatni farmaceutski agens opisan ovde i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač, ili nosač. Farmaceutski oblici mogu se davati simultano ili uzastopno bilo kojim redom.
KRATK OPIS CRTEŽA
[0020]SLIKA 1 prikazuje sekvencu humane rekombinantne ACC1 (SEQ. ID NO. 1) koja se može koristiti u Transskenirajućojin vitroprobi. SLIKA 2 prikazuje sekvencu humane rekombinantne ACC2 (SEQ. ID NO. 2) koja se može koristiti u Transscenirajućojin vitroprobi.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Definicije
[0021]Izraz "terapeutski efikasna količina" označava količinu jedinjenja iz ovog pronalaska ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli koja: (i) leči ili sprečava pojavu određene bolesti, stanja ili poremečaja, (ii) slabi, ublažava ili eliminiše jedan ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja, ili (iii) sprečava ili odlaže pojavu jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja opisanih ovde.
[0022]Izraz "životinjski" odnosi se na ljude (muškog ili ženskog roda), domaće životinje (npr., pse, mačke i konje), životinje za ishranu, životinje iz zoološkog vrta, morske životinje, ptice i slične životinjske vrste. "Životinje za ishranu" odnosi se na životinje koje se gaje radi ishrane kao što su krave, svinje, ovce i živina.
[0023]Izraz "farmaceutski prihvatljiv" označava da supstanca ili farmaceutski oblik mora biti kompatibilna hemijski i/ili toksikološki, sa ostalim sastojcima koji se nalaze u formuleciji i/ili da može služiti za tretman sisara
[0024]Izrazi "lečenje", "leči", ili "tretman" obuhvataju oba preventivni npr. profilaktički i palijativni tretman.
[0025]Izrazi "regulisan" ili "regulišući, ili "regulisan(i)", kao što se ovde koristi, osim ako nije drugačije navedeno, odnosi se na inhibiciju Acetil-CoA karboksilaze (ACC) enzim(a) sa jedinjenjima iz ovog pronalaska.
[0026]Termini "posredovan" or "posredovanje" or "posredstvon",)", kao što se ovde koristi, osim ako nije drugačije navedeno, odnosi se na (i) lečenje ili prevenciju određene bolesti, stanja ili poremećaja, (ii) slabljenje, ublažavanja ili uklanjanja jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja, ili (iii) prevenciju ili odlaganje pojave jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja opisanih ovde, inhibiranjem Acetil-CoA karboksilaza (ACC) enzim(a).
[0027]Izraz "jedinjenja prema ovom pronalasku" (osim ako specifično nije navedeno drugačije) odnosi se na jedinjenja formule (I) i na farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja kao i na sve stereoizomere (uključujući diastereoizomere i enantiomere), tautomere, conformacione izomere, i izotopski obečležena jedinjenja. Hidrati i solvati jedinjenja prema ovome pronalasku smatraju se jedinjenjima prema ovom pronalasku, kada je jedinjenje u asocijaciji sa vodom ili rastvaračem redom.
[0028]Izrazi "(Ci-C6)alkil" i "(Ci-C3)alkil" su alkil grupe za označenimbrojem ugljenikovih atoma, od jedan do šest ili od jedan do tri, redom, koji mogu biti ravnog ili razgranatog niza. Na primer, izraz "(Ci-C3)alkil" označava alkil sa jedan do tri ugljenikova atoma koji može biti metil, etil, n-propil i izopropil.
[0029]Izraz "(C3-C7)cikloalkil" označava cikloalkil grupu sa tri do sedam ugljenikovih atoma koji podrazumeva ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil. Izraz "halo" označava fluoro, hloro, bromo ili jodo. Izraz "(C6-Cio)aril" označava aromatičnu karbocikličnu grupu koja se sastoji od šest do deset atoma ugljenika, kao stoje fenil ili naftil.
[0030]Izraz "5 do 12 -člani heteroaril" označava pet do dvanaesto-članu aromatičnu grupu koja sadrži najmanje jedan heteroatom odabran od azota, kiseonika i sumpora. Kao što je ovde navedeno tačka na kojoj se nalazi supstituent na "5 do 12-očlanoj heteroarilnoj" grupi je na ugljenikovom atomu te grupe. Grupa "5 to 12 člani heteroaril" može biti monociklična ili biciklična. Omiljeni oblik monocikličnog heteroarila uključuje, ali nije ograničavajuće, pirazolil, imidazolil, triazolil, piridinil, i pirimidinil. Omiljeni oblik bicikličnog heteroarila uključuje, ali nije ograničavajuće, radikale sledećih prstenastih sistema:
[0031]
[0031]Izraz "8 do 12 -očlani fuzionisani heterocikloaril" označava jedan 8 do 12 -očlani prstenast sistem u kojem nearomatični heterociklični prstenje fuzionisan zajedan arilni prsten. Kao što se ovde koristi mesto supstituenta na "8 do 12 -očlanom fuzionisanom heterocikloaril" grupi je na ugljeniku iz te grupe. Omiljeni oblik uključije radikale prstenastog sistema kao što su:
[0032]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu se sintetizovati putevima sinteze koji uključuju procese analogne onima koji su već poznati u hemijskoj struci, posebno u svetlu
opisa koji su dati ovde. Početni materijali su obično dostupni komercijalno npr. preko Aldrich Chemicals (Mihvaukee, WI) ili se lako mogu napraviti upotrebom dobro poznatih metodama (npr., pripremom prema metodama generalno opisanim kod Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Svnthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.), ili Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, uključujući dodatni materijal (takođe dostupan preko Beilstein online database)).
[0033]Radi ilustrovanja, dole prikazane reakcione šeme prikazuju potencijalne puteve sinteze jedinjenja iz ovog pronalaska kao i ključne intermedijere. Za detaljniji opis individualnih reakcionih koraka, videti odeljak sa Primerima niže. Ljiduma iz struke je jasno da su mogući i drugi putevi sinteze jedinjenja iz ovog pronalaska. Iako su specifični polazni materijali i reagens navedeni u šemama i razmatrani niže, drugi početni materijali i reagensi mogu se primeniti kako bi se dobili različiti derivati i/ili reakcioni uslovi. Uz to, mnoga jedinjenja dobijena prema dole navedenim metodama, mogu se dalje modifikovati u svetlu ovog pronalaska, upotrebom konvencionalnih hemijskih metoda poznatih ljudima iz struke.
[0034]U pripremi jedinjenja prema ovom pronalasku zaštita udaljene funkcionalne grupe (npr. primarni ili sekundarni amin) intermedijera može biti neophodna. Potreba za ovakvom zaštitom zavisiće od prirode udaljene funkcionalne grupe i od uslova primenjene metode. Odgovarajuće amino-zaštitne grupe (NH-Pg) podrazumevaju acetil, trifluoroacetil,t-butoksikarbonil (BOC), benziloksikarbonil (CBz) and 9-fluorenilmetilenoksikarbonil (Fmoc). Slično, "hidroksi-zaštitna grupa" se odnosi na supstituent hidroksi grupe koji blokiraili štiti hidroksi funkcionalnost. Odgovarajući hidroksi-zaštitne grupe (O-Pg) podrazumevaju na primer alil, acetil, silil, benzil, parametoksibenzil, tritil, i tome slično. Potreba za takvom zaštitom se lako određuje od strane ljudi iz struke. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihovu upotrebu videti T. W. Greene, Protective Grupas in Organic Svnthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
[0035]Sledeće reakcione šeme, Reakciona Šema I kroz reakcionu šemu daje reprezentativne postupke koji se koriste za dobijanje jedinjenja formule (I). Treba razumeti su napravljene u obliku koji nije ograničavajući i da razumne varijacije odabranih metoda se mogu koristiti radi dobijanja jedinjenja formule (I).
Reakciona šema I prikazuje sintetičke puteve počevši od predposlednjeg intermedijera do jedinjenja formule (I). Ujednačim l(Eq.l), jedinjenje Formule (II) reaguje sa A 2 '-L-A 1-C(0)Lg, gde Lg je odgovarajuća odlazeća grupa (leaving grupa), kao što je hidroksi ili halid, da bi se dobilo jedinjenje Formule (I). Na primer, jedinjenje (I) može se dobiti upotrebom standardne reakcije peptidnog kuplovanja sa željenom karboksilnom kiselinom (A<2>'-L-A'-CO2H, gde A<2>' predstavlja ili sam A<2>ili zaštićenu verziju A<2>kojoj se može ukloniti zaštita kako bi se dobio A"). Na primer, spiropiperidin intermedijer (II) i karboksilna kiselina (A 2-L-A'-CCbH) mogu se kuplovati tako što formiraju jedan aktivirani karboksi kiselinski estar, tako što sedovede u kontakt karboksilna kiselina (A 2 '-L-A 1-CO2H) sa reagensom za kuplovanje peptida, kao što je 0-(7-azaberizotriazol-l-il)-N,N,N\N'-tetrametiluronijurn heksafluorofosfat (HATU) ili l-Etil-3-(3-dimetillaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (EDC-HC1), uprisustrvu ili u odsustrvu aktivirajućeg agensa, kao što je hidroksibenzotriazol (HOBt) i u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je N,N-diizopropiletilamin (DIEA), trietilamin ili N-metilmorfolin (NMM), u odgovarajućem rastvaraču kao što je THF i/ili DMF ili dihlorometan i zatim dovodeći u kontakt aktivirani karboksi kiselinski estar sa spiropiperidin derivatom (Ha) da bi se dobilo jedinjenje Formule (I). Reakcija se obično dešava na 0 °C do 90 °C u trajanju od 1 do 24 sata.
[0036]Alternativno, jedinjenja Formule (I) se mogu dobiti tako što se prvo karboksilna kiselina (A^L-A'-CC^H) prevede ujedan kiselinski hlorid (A<2->L-A<1->COCl), reakcijom sa tionil hloridom, i zatim se dovodi u reakciju kiselinski hlorid sa spiropiperidien derivatom (Ha) u prisustvu odgovarajuće baze kao što je trietilamin u jednom odgovarajućem rastvaraču kao što je dihlorometan da bi se dobilo jedinjenje Formule (I). Još jedan alternativni metod podrazumeva tretiranje karboksilne kiseline (A 2 '-L-A 1-CO2H) sa 2-hloro-4,6-dimetoksitriazinom u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je N-metilmorfolin u odgovarajućem rastvaraču kao što je THF i/ili DMF. U aktivirani estar se doda rastvor spiropiperidin derivata (Ha) i baza, kao što je N-metilmorfolin, u odgovarajućem rastvaraču, kao što je THF i/ili DMF kako bi se dobilo jedinjenje Formule (I).
[0037]Druga i treća reakcija u Reakcionoj Šemi I prikazujedobijanje jedinjenja Formule (I) upotrebom reakcije kuplovanja Suzuki-tipa. Ove reakcije mogu se izvoditi u skladu sa metodama poznatim ljudima iz struke kao što su one opisane u Mivaura, N.; Suzuki, A. Chem. Rev. 1995, 95, 2457-2483. Ujednačim 2 (Eq. 2) iz Šeme Ijedinjenje Formule (II') u kojem Lg predstavlja odgovarajuću odlazeću grupu kao što je triflat, hloro, bromo ili jodo reaguje sa adekvatno supstituisanim boronatom, A '-B(OR)2. Reakcija se obično odvija u prisustvu paladijum katalizatora i baze u jednom odgovarajućem rastvaraču. Boronat može biti ili u obliku boronske kiseline ili boronskog estra. U jednačini 3 (Eq.3) u Šemi I boronat jedinjenje Formule (II") reaguje sa odgovarajuće supstituisanim jedinjenjem A<2>'-Lg u kojem Lg predstavlja odgovarajuću odlazeću grupu kao što je triflate, hloro, bromo ili jodo. Treba primetiti da se reakcija može odvijati kada A 1 i A 2 komponente jedinjenja formulee (IF) i (II") mogu da sadržezaštićenu karboksilno kiselinsku grupu koja se zatim može osloboditi zaštite kako bi se dobila kiselinska grupa ujedinjenju formule (I).
[0038]Reakciona šema IA ističe glavne procedure koje se mogu upotrebiti za dobijanje jedinjenja iz ovog pronalaska koja imaju formulu (Ia) koja su jedinjenja Formule (I) u kojima svaki R 2 i svaki R 3 predstavlja vodoniki Z je CH2. Zaštićeni spiropiperidin derivat (VHIa) se može dobiti tretiranjem adekvatno zaštićenog piperidin aldehida (Xa) sa metil vinil ketonom (IXa). Grupa Pg predstavlja odgovarajuću amino-zaštitnu grupu i poželjno je da to bude N-terc-butoksikarbonil (BOC) ili karbobenziloksi (Cbz). Ova reakcija se može odvijati u prisustvu etanolnog kalijum hidroksida u skladu sa procedurom analognom onoj opisanoj kod Roy, S. et al., Chem. Eur. J. 2006, 12, 3777-3788 at 3786. Alternativno, reakcija se može izvesti u prisustvu para-toluenesulfonske kiseline (pTSA) u refluktujućem benzenu, kako bi sedobio željeni proizvod (VHIa). Spiropiperidin derivat (VHIa) može da reaguje sa*ra-(N,N-dimetilamino)metanom u refluktujućem toluenu da bi se dobio enamine funkcionalizovani spiropiperidin derivat (Vila). Jedinjenje (Vila) zatim reaguje sa odgovarajućim hidrazin derivatom R<1>NHNH2u prisustvu sirćetne kiseline u refluktujućem etanolu da bi se dobilo željeno ciklično jedinjenje formule (Via) (videti Murali Dhar, T.G. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 17, 5019-5024 at 5020. Jedinjenje formule (Via) se može tretirati sa Nbromosukcinimidom (NBS) u prisustvu vode u THF kako bi se dobio odgovarajući bromo hidroksi derivat formule (Va). Bromo hidroksi derivat (Va) se zatim oksiduje sa Jones reagensom po metodi analognoj onoj opisanoj kod Wolinsky, J. et al., J. Org. Chem. 1978, 43(5), 875-881 at 876, 879 da bi se dobio h-bromo keto derivat formule (IVa). Iz jedinjenja formule (IVa) se može ukloniti brom upotrebom konvencionalnih metoda kao što je tretman sa cinkom i sirćetnom kiselinom ili alternativno, cinkom u prisustvu vodenog amonijum hlorida kako bi se dobilo jedinjenje formule (lila).
[0039]Sa jedinjenja formule (lila) može se ukloniti zaštita kako bi se dobio slobodni spiropiperidin derivat formule (Ha) upotrebom standardnih metoda koje zavise od toga koja je zaštitna grupa Pg bila upotrebljena. Na primer, kada Pg predstavlja terc-butiloksikarbonil (BOC) standardno jako kiseli uslovi za uklanjanje zaštite se primenjuju kao što je 4N hlorovodonična kiselina u dioksanu ili trifluorosirćetna kiselina u jednom odgovarajućem rastvaraču kao što je dihlorometan se koriste da bi se uklonila BOC grupa. Kada Pg predstavlja karbobenziloksi (Cbz), vodonikizacija preko paladijuma na ugljeniku u etanolu ili tretiranje sa amonijum formijatom u prisustvu paladijuma na ugljeniku u etanolu može se upotrebiti kako bi se izvelo uklanjanje zaštite.
[0040]Spiropiperidin derivat Formule (Ha) može se acilovati upotrebom standardnih metoda da bi se dobilo jedinjenje Formule (Ia). Na primer, jedinjenje (Ia) se tako može dobiti upotrebom reakcije standardnog peptidnog kuplovanja sa željenom karboksilnom kiselinom (A<2>'-L-A'-C02H, gde A<2>' predstavlja ili samA<2>ili zaštićenu verziju A<2>kojoj se može ukloniti zaštita kako bi se obezbedio A<2>). Na primer, spiropiperidin intermedijer (Ha) i karboksilna kiselina (A 2 '-L-A 1-C02H) mogu se kupio vati kako bi se formirao aktivirani karboksi kiselinski estar, dovođenjem u kontakt karboksilne kiseline (A 2 '-L-A 1-C02H) sa reagensom za kuplovanje peptida, kao što je 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU) ili l-Etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidrohlorid (EDC-HC1), u prisustvu ili u odsustvu aktivirajućeg agensa, kao što je hidroksibenzotriazol (HOBt) i u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je N,N-diizopropiletilamin (DIEA), trietilamin ili N-metilmorfolin (NMM), u odgovarajućem rastvaraču kao što je THF i/ili DMF ili dihlorometan i zatim dovođenjem u kontakt aktiviranog karboksi kiselinskog estra sa spiropiperidin derivatom (Ha) da bi se dobilo jedinjenje Formule (Ia).
[0041]Alternativno, jedinjenje Formule (Ia) može se formirati tako što se prvo karboksilna kiselina (A 2 '-L-A 1 -CO2H) prevede u kiselinski hlorid (A 2 -L-A 1-COC1), reakcijom sa tionil hloridom, i zatim dovođenjem u reakciju kiselinskog hlorida sa spiropiperidien derivatom (Ha) u prisustvu odgovarajuće baze kao što je trietilamin u jednom odgovarajućem rastvaraču kao što je dihlorometan da bi se dobilo jedinjenje Formule (Ia). Još jedan alternativni metod podrazumeva tretiranje karboksilne kiseline (A<2>'-L-A<1->C02H) sa 2-hloro-4,6-dimetoksitriazinom u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je N-metilmorfolin u odgovarajućem rastvaraču kao što je THF i/ili DMF. U aktivirani estar se doda rastvor spiropiperidin derivata (Ha) i baze, kao što je N-metilmorfolin, u odgovarajućem rastvaraču, kao što je THF i/ili DMF što dovodi do formiranja jedinjenja formule (Ia).
[0042]Reakciona Šema II obezbeđuje alternativnu sintezu jedinjenja formule (Ia) počevši od intermedijera formule (Via). Jedinjenje formule (Via) se tretira sa N-bromosukcinimidom (NBS) u prisustvu metanola u THF (Nishimura, T. et al. Org. Lett. 2008, 10(18), 4057-4060 at 4059) kako bi se dobio metoksi bromo spiropiperidin derivat formule (Vb). Bazom indukovano uklanjanje jedinjenja (Vb), tretiranjem sa jakim bazom kao što je kalijumterc-butoksid u THF obezbeđuje se dobijanje jedinjenja formule (IVb) koje se onda tretira sa jakom kiselinom kao što je 2N hlorovodonična kiselina u THF da bi se dobilo jedinjenje formule (lila). Sa jedinjenja (lila) se može ukloniti zaštita i može se acilovatikao što je opisano prethodno u Reakcionoj Šemi I da bi se dobilo jedinjenje formule (Ia).
[0043]Reakciona Šema III prikazuje sintezu jedinjenja formule (lb) koje je jedinjenje formule (I) u kojem R 2 je bromo i svaki R ^ je vodonik. Jedinjenje formule (Via) reaguje sa približno dva ekvivalenta N-bromosukcinimida u prisustvu metanola kako bi se dobio dibromo metoksi spiropiperidin derivat formule (Vc). Jedinjenje (Vc) se zatim podvrgava uslovima eliminacije tretmanom sa jakom bazom kao što je kalijum tercbutoksid u jednom odgovarajućem rastvaraču kako bi se dobilo jedinjenje formule (IVc). Tretiranje jedinjenja formule (IVc) sa jakom kiselinom kao što je 2N hlorovodonična kiselina obezbeđuje dobijanje jedinjenja formule (Illb). Uklanjanje zaštite na jedinjenju (Illb) da bi se dobilo jedinjenje (Ilb) praćeno reakcijom acilovanja kojom se obezbeđuje dobijanje jedinjenja formule (lb) odvija se kao što je opisano prethodno u Reakcionoj Šemi I.
Reakciona Šema IV opisuje dobijanje drugih određenih jedinjenja u okviru formule (I) od određenih prethodno odabranih intermedijera. Prva reakcija u Šemi IV prikazuje uvođenje metil grupe na R<2>položaj, reagovanjem bromo spiropiperidin derivata formule (Illb) sa trimetoksiboratom u prisustvu odgovarajućeg paladijum katalizatora, kao što je paladijum tetrakis trifenilfosfin u prisustvu kalijum karbonata i vode kako bi se dobio (IIIc). Druge alkil grupe mogu se uvesti na R' položaj na analogan način. Sa jedinjenja formule (IIIc) možese ukloniti zaštita i može se acilovati kao što je ranije opisano. Druga reakcija u Reakcionoj Semi IV opisuje uvođenje cijano grupe na položaj R . Bromo spiropiperidin jedinjenje (Illb) reaguje sa cink cijanidom u prisustvu cinka i odgovarajućeg paladijum katalizatora kako bi se dobilo jedinjenje (IHd) kojem se može ukloniti zaštita i koje se može acilovati kako bi se dobilo jedinjenje formule (Id). Treća reakcija u Šemi IV opisuje uvođenje odgovarajuće grupe na položaj R3 jedinjenja (lile). Jedinjenje (lile) je deprotonovano sa jakom bazom, kao što je litijum heksametildisilazid (LHMDS) u odgovarajućim anhidrovanim uslovima u jednom odgovarajućem rastvaraču , poželjno je na niskoj temperaturi. Tako formirani enolat zatim reaguje sa odgovarajućim elektrofilom R<3>Lg gde Lg predstavlja odgovarajuću odlazeću grupu (kao što je halid kada R<3>Lg je jedan alkil halid) kako bi se dobio (Illf) gde R<3>je jedna odgovarajuća grupa kao što je alkil grupa. Deprotonovanje (Illf) i reakcija sa drugim R Lg može se sprovesti ponovo u koliko se želi dobijanje di-R3 (Illf) jedinjenja gde R grupe mogu biti iste ili različite. Sa jedinjenja formule (Illf) može se skinuti zaštita i može se acilovati kao što je prethodno opisano, da bi se dobio jedinjenje formule (Ie).
[0044]Reakciona Šema VI opisuje sintezu jedinjenja u okviru Formule (I) gde R<1>je izopropil, R 2 je vodonik, svaki R 3 je vodonik i Z je kiseonik. l-(l-(4-metoksi benzil)-4-hidroksi-lH-pirazol-3-il)etanon reaguje sa 1-benzil piperidin-4-on u refluktujućem metanolu u prisustvu pirolidina da bi se dobio dizaštićeno spiro-jedinjenje (IHg). Zatim se ukloni para-metoksibenzil grupa sa (Illg) tretiranjem sa trifluorosirćetnom kiselinom u dihloroetanu na povišenoj temperaturi, kao što je 90 °C, da bi se dobio benzil zaštićeni N-l (H) pirazol derivat (Illh). Ovaj benzil zaštićeni N-l(7^)pirazol derivat se zatim podvrgava uslovima Mitsonubo kuplovanja upotrebom izopropanola u prisustvu Di-t-butilazodikarboksilata (DBAD) i trifenilfosfina u tetrahidrofuranu da bi se dobio odgovarajući benzil zaštićeno N-l-izopropil jedinjenje (Uli). Sa benzil zaštićenog N-l-izopropil jedinjenja može se ukloniti benzil tretiranjem sa a-hloroetil hloroformijatom (ACE-C1) i metanolom kako bi se dobio odgovarajući slobodni spiropiperidin derivat (IIc). Slobodni spiropiperidin derivat (IIc) može zatim biti acilovan kao što je prethodno opisano kako bi se dobilo jedinjenje Formule (If).
[0045]Reakciona Šema VII opisuje hidrolizu zaštićenog kiselog intermedijera Formule (Ij) da bi se dobilo jedinjenje Formule (lg) koje nosi kiselinu. Na primer, jedinjenje Formule (Ij) gde R predstavlja zaštitnu grupu kiseline kao što je /-butil ili para-metoksibenzil može se tretirati sa jakom kiselinom kao što je trifluorosirćetna kiselina ili hlorovodonična kiselina u jednom odgovarajućem rastvaraču kao što je dihlorometan kako bi se dobilo jedinjenje Formule (lg). U ovoj Reakcionoj Semi kiselinska grupa je prikazana kao prikačena za Az' i kiselina u koju je uračunat i A<2>' predstavlja grupu A<2>ujedinjenju Formule (I). Treba primetiti da kiselinska grupa može takođe biti deo od A<1>na sličan način.
[0046]Reakciona ŠemaVIII opisuje metode za dobijanje određenih intermedijera korisnih za dobijanje određenih jedinjenja Formule (I). Jednačina 1 (Eq. 1) iz Reakcione ŠemeVIII opisuje kuplovanje tipa Suzuki između odgovarajućeg kiselinskog derivata X-A'-C02R<a>sa odgovarajućim boronatom (RO)2B-A<2>'-C02R<b>gde R<a>i R<b>su različito zaštićeni ili jedan od R<a>i R<b>je vodonik, X je halid ili sulfonat kao što je triflat i R je vodonik ili jedan alkil kao što je metil. Jednačina 2 (Eq. 2) iz Reakcione Šeme VIII opisuje drugi tip Suzuki kuplovanja između X-A1-CC'2Ra sa odgovarajućim boronatom (RO)2B-A2'-tetrazolil. KuplovanjeSuzuki tipa može se izvesti kao što je prethodno opisano u Reakcionoj Šemi I. Krajnje intermedijerno jedinjenje u Jednačini 1 i 2 gde Ra je vodonik može se zatim upotrebiti u reakcijama acilovanja sa jedinjenjem Formule (II) kao što jeopisano u Jednačini 1 (Eq. 1) iz Reakcione Šeme I.
[0047]Reakciona ŠemaIX opisujedrugi metod korisan za dobijanje određenih intermedijera korisnih za dobijanje jedinjenja Formule (I). Jednačina 1 (Eq. 1) iz Reakcione Šeme IX opisuje reakciju 2,6-dihloronikotinske kiseline sa adekvatno supstituisanim boronatom (gde R je vodonik ili alkil kao što je metil i Rb je obično zaštitna grupa kiseline kao što je ^-butil) pod uslovima kuplovanja Suzuki tipa kako bi se dobila 2-hloro-6-supstituisana nikotinska kiselina. Zatim 2-hloro-6-supstituisana nikotinska kiselina može da reaguje sa odgovarajućim nukleofilom HY-R' (gde R' je obično alkil opcionalno supstituisan sa halo, R" je obično alkil kao što je metil, etil, propil ili izopropil) kako bi se dobio disupstituisani derivat nikotinske kiseline. Alternativno, reakcija se može odvijati prvo reagovanjem sa nukleofilom HY-R' praćeno kuplovanjem tipa Suzuki sa boronatom kao što je gore opisano. Disupstituisani derivat nikotinske kiseline može se upotrebiti u acilovanju sa jedinjenjem Formule (II) praćeno sa skidanjem zaštite po potrebi kao što je to opisano u Reakcionoj Šemi I kako bi se dobilo jedinjenje Formule (I) gde A<1>je supstituisan piridin član kao što je prikazano u Jednačini 2 (Eq. 2) iz Reakcione Šeme IX gde se opisuje reakcija 5-bromo-6-hloronikotinske kiseline sa odgovarajućim nukleofilom HY-R' da bi se dobio deribvat 5-bromo-6-supstituisane nikotinske kiseline koji zatim reaguje sa odgovarajućim boronatom pod uslovima kuplovanja tipa Suzuki da bi se odbio 5,6-disupstituisan derivat nikotinske kiseline. 5,6-disupstituisan derivat nikotinske kiseline može se upotrebiti u acilovanju sa jedinjenjem Formule (II) praćeno saskidanjem zaštite po potrebi kao što je opisano u Reakcionoj Šemi I kako bi se dobilo jedinjenje Formule (I) gde A<1>je he supstituisan piridin član kao što pokazano.
[0048] Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu biti izolovana ikorišćena per seili u obliku njihove farmaceutski prihvatljive soli. U skladu sa ovim pronalaskom, jedinjenja sa nekoliko baznih azotovih atoma, mogu da formiraju soli sa različitim brojem ekvivalenata ("eq.") kiselina. Podrazumeva se među praktičarima da su sve ove soli u okviru sastava ovog pronalaska.
[0049] Farmaceutski prihvatljive soli, koje se ovde koriste u odnosu na jedinjenja iz ovog pronalaska, uključuju farmaceutski prihvatljive neorganske i organske soli navedenih jedinjenja. Ove soli se mogu pripremitiin situtokom postupka izolovanja i prečišćavanja jedinjenja ili odvojenom reakcijom jedinjenja prema pronalasku sa odgovarajućim organskim ili neorganskim kiselinama i izolovanjem tako dobij enih soli. Reprezentativne soli uključuju, ali nisu ograničene samo na, bromvodonične, hlorovodonične, jodvodonične, sulfat, bisulfat, nitrat, acetat, trifluoroacetat, oksalat, besilat, palmitat, pamoat, malonat, stearat, laurat, malat, borat, benzoat, laktat, fosfat, heksafluorofosfat, benzen sulfonat, tosilat, formijat, citrat, maleat, fumarat, sukcinat, tartarat, naftilat, mesilat, glukoheptonat, laktobionat i laurilsulfonat soli, i njima slične. Ovo može takođe da uključi katjone zasnovane na alkalnim i zemnoalkalnim metalima, kao što su natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i njima slične, kao i ne-toksične amonijum, kvaternerni amonijum i amin katjoni uključujući, bez da ograničava, amonijum, tetrametilamonijum, tetraetilamonijum, metilamonijum, dimetilamonijum, trimetilamonijum, trietilamonijum, etilamonijum, i njima slične. Za dodatne primere videti, na primer, Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
[0050]Određena jedinjenja prema ovom pronalasku, mogu postojati u više kristalnih oblika. Polimorfi jedinjenja Formule (I) i njihove soli (uključujući solvate i hidrate) čine deo ovog pronalaska i mogu se pripremiti kristalizacijom jedinjenj prema ovom pronalasku pod različitim uslovima. Na primer, upotrebom različitih rastvarača ili različitih mešavina rastvarača za rekristalizaciju; kristalizaciju na različitim temperaturama; različitim uslovima hlađenja, koji mogu da variraju od veoma brzih do veoma sporih tokom procesa kristalizacije. Polimorfi se takođe mogu dobiti grejanjem ili topljenjem jedinjenja prema ovom pronalasku, praćeno pokorakenim ili brzim hlađenjem. Peisustvo polimorfa, može se odrediti spektorkopskim metodama nuklearna magnetna rezonanca u čvrstom stanju (NMR), infracrvena spektroskopija (IR), različitim skenirajuće kalometrijskim metodama, rendgenskom difrakcionom analizom praha i sličnim tehnikama.
[0051]Ovaj pronalazak takođe podrazumeva izotopsi označena jedinjenja, koja su identična onima opisanim sa Formulom (1), osim što je jedan ili više atoma zamenjeno sa atomima koji imaju atomski maseni broj različit od atomskog masenog broja koji se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji mogu biti inkorporirani ujedinjenja iz ovog pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, sumpora i fluora, kao što su "H, H,13C,14C,1<5>N,<ls>O,<17>0,<35>S,36C1,<125>I, 129I, i<18>F redom. Određena izotopski obeležena jedinjenja prema ovom pronalasku, na primer ona u koja su uključeni radioaktivni izotopi kao što su<3>H i 14C, korisna su u ispitivanju i testiranju distribucije lekova i/ili supstrata u tkivima, tertiranim sa (npr.,<3>H), i ugljenik-14 (npr., 14C), izotopi su naročito često upotrebljavani zbog lakoće pripreme i detektibilnosti. Dalje, substitucija sa težim izotopima kao što je deuterijum (npr., H), može pružiti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer iz povećanjain vivoživota poluraspada ili smanjenja potrebnih doza, tako da mogu imati prednosti pod određenim uslovima. Izotopski obeležena jedinjenja prema ovom pronalasku uopšteno se mogu dobiti prema šemamam koje su priložene i/ili primerima datim niže, zamenom dostupnog izotopski obeleženog agensa i ne-izotopski obeleženog reagensa.
[0052]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da sadrže stereogene centre. Ova jedinjenja mgu da postoje u obliku mešavine enantiomera ili kao čisti enantiomeri. Kada jedinjenje ima stereogeni centar, jedinjenja se mogu razdvojiti u čiste enantiomere metodama poznatim ljudima iz struke, na primer, formiranjem diastereoizomernih soli koje se recimo mogu razdvojiti kristalizacijom; formiranjem diastereoizomernih derivata ili kompleksa koji se mogu razdvojiti recimo kristalizacijom, gasno-tečnom ili tečnom hromatografijom; selektivnim reakcijama jednog enantiomera sa enantiomer-specifičnim reagensom, na primer enzimskom esterifikacijom; gasno-tečnom ili tečnom hromatografijom u hiralnoj sredini, na primer na hiralnoj podlozi recimo silika gela za koji je vezan hiralni ligand ili u prisustvu hiralnog rastvarača. Bilo bi poželjno da kada se željeni diastereoizomer pretvara u drugi hemijski entitet jednom od gore spomenutih procedura, izvrši sledeći korak kako bi se oslobodio željeni enantiomerni oblik. Alternativno, specifični diastereoizomeri mogu biti sintetizovani upotrebom optički aktivnog početnog materijala, asimetričnom sintezom uz upotrebu optički aktivnih reagenasa, substrata, katalizatora ili rastvarača, ili pretvaranjem jednog stereoizomera u drugi putem asimetrične transformacije.
[0053]Određena jedinjenja prema ovom pronalasku mogu postojati u različitim stabilnim konformacionim oblicima koje je moguće razdvojiti. Torziona asimetrija prouzrokovana ograničenom rotacijom oko jedne asimetrične jednostruke veze, na primer zbog sternih ograničenja prstena, mogu omogućiti razdvajanje različitih konformera. Jedinjenja prema ovom pronalasku dalje uključuju konformacione izomere jedinjenja Formule (1) i njihove smeše.
[0054]Jedinjenja prema ovom pronalasku su korisna za lečenje bolesti, stanja i/ili poremećaja uslovljenih regulisanjem inhibicije acetil-CoA karboksilaza enzim(a) (posebno, ACC1 i ACC2); tako da, još jedan vid ovog pronalaska je farmaceutski oblik koji sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja prema ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač ili nosač. Jedinjenja prema ovom pronalasku (uključujući jedinjenja i procese ovde korišćene) mogu se koristiti za dobijanje lekova namenjenih terapeutskoj upotrebi koja je ovde opisana.
[0055]Tipičan farmaceutski oblik se dobija mešanjem jedinjenja premaovom pronalasku i nosača, razblaživača ili ekscipijenta. Odgovarajući nosači, razblaživači i ekscipijenti su dobro poznati ljudima iz struke i podrazumevaju materijale kao što su ugljeni hidrati, voskovi, u vodi rastvorljivi i/ili topljivi polimeri, hidrofilni ili hidrofobni materijali, želatin, ulja, rastvarači, voda i tome slično. Vrsta nosača, razblaživača ili ekscipijenta će zavisiti od načina i svrhe za koje se jedinjenje prema ovom pronalasku priprema. Rastvarači se uopšteno biraju od strane ljudi iz struke tako da budu bezbedni (GRAS) za upotrebu i davanje sisarima. Uopšteno, bezbedni rastvarači, su ne-toksični vodeni rastvori kao što je voda ili neki drugi ne-toksičan rastvarač koji je rastvoran ili se meša sa vodom. Odgovarajući vodeni rastvarači uključuju vodu, etanol, propilen glikol, polietilen glikole (npr., PEG400, PEG300), itd. i njihove smeše. Farmaceutski oblici, takođe mogu da sadrže jedan ili više pufera, stabilizujućih agenasa, površinski aktivnih supstanci, ovlaživača, lubikanata, emulgatora, suspendirajućih agenasa, konzervanasa, antioksidanasa, obezbojivača, lakova, procesnih pomagala, boja, zaslađivača, parfema, veštačkih aroma i drugih aditiva kako bise obezbedio prilježan izgled leka (na primer, jedinjenja prema ovom pronalasku ili nekog njegovog farmaceutskog oblika) ili pomoć prilikom proizvodnje farmaceutskog oblika (npr., leka).
[0056]Farmaceutski oblici mogu se dobiti standardnim metodama rastvaranja i mešanja. Na primer, sirova supstanca leka (npr. jedinjenje prema ovom pronalasku ili stabilizovani oblik ovog jedinjenja (npr., kompleks sa ciklodekstrin derivatom ili drugim poznatim kompleksirajućim agensom)) se rastvori u odgovarajućem rastvaraču u prisustvu jednog ili više ekscipijenata koji su gore opisani. Koraken rastvorljivosti slaborastvorljivog jedinjenja se može povećati upotrebom disperzijom sa suvim sprejom, kao što je opisano kod Takeuchi, H., et al. in "Enhancement of the dissolution rate of a poorlv voda-soluble drug (tolbutamide) by a spray-drying solvent depostion method and disintegrants" J. Pharm. Pharmacol., 39, 769-773 (1987); i EP0901786 BI (US2002/009494). Jedinjenje prema ovom pronalasku se obično pakuje u farmaceutske doze kako bi se obezbedilo lako i kontrolisano davanje primerenih doza leka i da bi se pacijentima obezbedio elegantan i lak za upotrebu proizvod.
[0057]Farmaceutski oblik takođe podraumeva solvate i hidrate jedinjenja prema ovom pronalasku. Termin "solvat" se odnosina molekulski kompleks jedinjenja predstavljenog Formulom (I) (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli), sa jednim ili više molekula rastvarača. Ovi molekuli rastvarača su odabrani os onih koji se često upotrebljavaju u farmaceutskoj praksi, koji su poznati po tome da su neutralni u odnosu na recipijent, npr., voda, etanol, etilen glikol, i tome slično. Termin "hidrat" se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača zapravo voda. Solvati i/ili hidrati najčešće postoje u kristalnom obliku. Drugi rastvarači se mogu koristiti kao intermedijerni solvati prilikom pripreme poželjnijih solvata, kao što su metanol, metil t-butil etar, etil acetat, metil acetat, (S)-propilen glikol, (R)-propilen glikol, 1,4-butin-diol, i tome slično.
[0058]Farmaceutski oblik(ili formulacija) za upotrebu može biti upakovan u različitim pakovanjima, u zavisnosti od metoda koje se upotrebljavaju za korišćenje leka. Uopšteno, proizvod za korišćenje podrazumeva pakovanje u kojem se nalazi farmaceutska formulacija u odgovarajućem obliku. Odgovarajuća pakovanja su dobro poznata ljudima iz struke i uključuju materijale kao što su boce (plastične ili staklene), table, ampule, plastične kese, metalne cilindre, i tome slično. Pakovanje može da sadrži zaštitne providne folije kako bi se obezbedilo od indiskretnog pristupa sadržaju pakovanja. Uz to, pakovanja imaju na sebi oznaku na kojoj je opisan njihov sadržaj. Oznake mogu da sadrže i odgovarajuća upozorenja.
[0059]U ovom pronalasku takođe prikazanje i metod lečenja bolesti, stanja i/ili poremećaja regulisanih sa inhibicijom acetil-CoA karboksilazes enzim(a) u životinja koji podrazumeva davanje, životinji kojoj je to potrebno, terapeutski efikasne količine jedinjenja prema ovom pronalasku ili farmaceutskog oblika koji sadrži jedinjenj prema ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač ili nosač. Metod je pogotovo korisan za lečenje bolesti, stanja i/ili poremećaja na koje pozitivno utiče inhibicija acetil-CoA karboksilaza enzim(a).
[0060]Jedan od aspekata ovog pronalaska je lečenje gojaznosti i sa gojaznošću povezanih poremećaja (npr. prekomerna težina, porast težine, održavanje težine).
[0061]Gojaznost i prekomerna uhtranjenost se generalno definišu preko indeksa telesne mase (BMI), koji je u korelaciji sa ukupnim telesnim masnoćama i daje procenu relativnog rizika bolesti. BMI se izračunava tako što se kilogrami podele sa kvadratom visine izražene u metrima (kg/m2). Prekomerna uhranjenost se obično definiše u granicama BMI od 25-29.9 kg/m2, a gojaznost se obično definiše kao BMI od 30 kg/m . Videti, npr., National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Tokomweight and Obesitv in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, NIH publication no. 98-4083 (1998).
[0062]Drugu aspekt ovog pronalaska se odnosi na lečenje, ili usporavanja progresije ili zaustavljanje dijabetesa ili sa dijabetesom povezanih poremećaja uključujući Tip 1 (insulin-zavisan dijabetes, takođe poznat kao "IDDM") i Tip 2 (neinsulinski zavisan diabetes melitus, takođe poznat kao "NIDDM") diabetes, neuparena tolerancija na glukozu, rezistencija na insulim, hiperglikemija i komplikacije vezane za diabetes (kao što su ateroskleroza, koronarne bolesti srca, šlog, periferne bolesti krvnih sudova, nefropatija, hipertenzija, neuropatija i retinopatija).
[0063]U još jednom svom aspektu ovog pronalaska je tretman gojaznosti co-morbidities, kao što je metabolički sindrom. Metabolički sindrom uključije bolesti, stanja i poremećaje kao što je dislipidemija, hipertenzija, insulinska rezistencija, diabetes (npr. Tip 2 diabetes), koronarne arterijske bolesti i insuficijencije srca. Za više informacija o Metaboličkom sindromu pogledati, npr., Zimmet, P.Z., et al., "The Metabolic Svndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth-Where Does the International Diabetes Federation Štand?," Diabetes & Endocrinologv, 7(2), (2005); i Alberti, K.G., et al., "The Metabolic Svndrome - A New Worldwide Definition," Lancet, 366, 1059-62 (2005). Pretežno, davanje jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom, daje statistički značajna (p<0.05) smanjenja najmanje jednog fakktora rizika kardiovaskularnih oboljenja, kao što je smanjenje plazma leptina, C-reaktivnog proteina (CRP) i/ili holesterola, u poređenju sa šlepom probom koja ne sadrži lek. Davanje jedinjenja prema ovom pronalasku može da da statistički značajno (p<<>0.05) umanjenje nivoa glukoze u serumu.
[0064]U još jednom aspektu ovog pronalaska je tretiranje bolesti nealkoličarske masne jetre (NAFLD) i hepatične insulinske rezistencije.
[0065]Za normalnu odraslu osobu koja ima telesnu težinu od oko 100 kg, obično su dovoljne doze od oko 0.001 mg do oko 10 mg po kilogramu telesne težine, obično od oko 0.01 mg/kg do oko 5.0 mg/kg, još bolje od oko 0.01 mg/kg do oko 1 mg/kg. Ipak, određena varijabilnost u generalnom opsegu doza može biti neophodna u zavisnosti od subjekta koji se tretira, nameravanog načina davanja, vrste jedinjenja koje se daje i tome slično. Određivanje doze i optimalno doziranje za određenog pacijenta je u okvirima sposobnosti uobičajeno obučenih u struci koji imaju priliku da se služe ovim pronalaskom. Takođe treba pomenuti da jedinjenja prema ovom pronalasku mogu biti korišćena u formulacijama sa sustained otpuštanjem, kontrolisanim otpuštanjem i odloženim otpuštanjem, koji su poznati ljudima iz struke.
[0066]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu se takođe koristiti u kombinaciji sa drugim farmaceutskim agensima za lečenje bolesti, stanja i/ili poremećaja opisanih ovde. Dakle, metode za lečenje koje podrazumevaju davanje jedinjenja prema ovom pronalasku u kombinaciji sa farmaceutskim agensima su takođe obezbeđene. Odgovarajući farmaceutski agensi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima prema ovom pronalasku uključuju anti-gojaznost agense (uključujući blokatore apetita), anti-diabetske agense, antihiperglikemijske agense, agense umanjivače masti, i antihipertenzivne agense.
[0067]Odgovarajući anti-gojaznost agens uključuje 1 ip-hidroksi steroid dehidrogenaza-1 (llp-HSD tip 1) inhibitore, stearoil-CoA desaturaza-1 (SCD-1) inhibitor, MCR-4 agoniste, holecistokinin-A (CCK-A) agonist, monoamin ponovnog preuzimanja inhibitore (kao što je sibutramin), simpatomimetičke agense, 03adrenergični agonisti, dopamin agonisti (kao što je bromokriptin), melanocit-stimulišuće hormonske analoge, 5HT2c agoniste, melanin koncentrujući hormon antagonisti, leptin (OB protein), leptin analoge, leptin agoniste, galanin antagoniste, lipasa inhibitore (kao što je tetrahidrolipstatin, npr., orlistat), anorektičke agense (kao što je bombesin agonist), neuropeptid-Y antagoniste (npr., NPY Y5 antagoniste), PYY3-36 (uključujući njegove analoge), thiromimetičke agense, dehidroepiandrosteron ili njegov analog, glukokortikoidne agoniste ili antagoniste, oreksin antagoniste, glukagon-sličan peptid-1 agonisti, ciliarni neurotrofni faktori (kao što je Axokine™, dostupan kod Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY and Procter & Gamble Companv, Cincinnati, OH), humani aguti-povezan protein (AGRP) inhibitori, grelin antagonisti, histamin 3 antagonisti ili inverzni agonisti, neuromedin U agonisti, MTP/ApoB inhibitori (npr., gut-selektivni MTP inhibitori, kao što je dirlotapid), opioid antagonist, oreksin antagonist, i tome slično.
[0068]Omiljeni anti-gojaznost agensi za kombinovanje uskladu sa obim pronalsakom su gut-selektivni MTP inhibitori (npr., dirlotapid, mitratapid i implitapid, R56918 (CAS No. 403987) i CAS No. 913541-47-6), CCKa agonisti (npr., N-benzil-2-[4-(lH-indol-3-ilmetii)-5-okso-l-fenil-4,5-dihidro-2,3,6,10b-tetraaza-benzo[e]azulen-6-il]-N-izopropil-acetamid opisan u patentnojprijavi No. WO 2005/116034 ili US Publication No. 2005-0267100 Al), 5HT2c agonisti (npr., lorcaserin), MCR4 agonist (npr., jedinjenja opisana u US 6,818,658), lipasa inhibitor (npr., Cetilistat), PYY3-36 (kao što je ovde korišćeno "PYY3-36" podrazumeva analoge, kao što je peglated PYY3-36 npr., opisani u US priajvi 2006/0178501), opioid antagonisti (npr., naltrekson), oleoil-estron (CAS No. 180003-17-2), obinepitid (TM30338), pramlintid (Svmlin®), tesofensin (NS2330), leptin, liraglutid, bromokriptin, orlistat, eksenatid (Bvetta®), AOD-9604 (CAS No. 221231-10-3) i sibutramin. Poželno je, jedinjenja prema ovom pronalasku i kombinovana terapija da se daju u kombinaciji sa vežbama i odmerenom dijetom.
[0069]Odgovarajući anti-diabetski agensi podrazumevaju natrijum-glukozni ko-prenosilac (SGLT) inhibitor, fosfodiesteraza (PDE)-IO inhibitor, diacilglicerol aciltransferaza (DGAT) 1 ili 2 inhibitor, sulfonilurea (npr., acetoheksamid, hlorpropamide, diabinez, glibenklamid, glipizid, gliburid, glimepirid, gliklazid, glipentid, glihuidon, glizolamid, tolazamid, i tolbutamid), meglitinide, jedan a-amilaza inhibitor (npr., tendamistat, trestatin i AL-3688), jedan a-glukozid hidrolaza inhibitor (npr., akarboza), jedan a-glukozidaza inhibitor (npr., adipozin, kamigliboza, emiglitat, miglitol, vogliboza pradimicin-Q, i salbostatin), PPARa/ yagonist (npr., balaglitazon, ciglitazon, darglitazon, englitazon, isaglitazon, pioglitazon, rosiglitazon i troglitazon, PPAR e.g.agonist (npr., CLX-0940, GW-1536, GW-1929,GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 i SB-219994), biguanid (npr., metformin), glukagon-nalik peptid 1 (GLP-1) agonist (npr., Bvetta™, exendin-3 i exendin-4), protein tirozin fosfataza-lB (PTP-1 B) inhibitor (npr., trodusqkvemin, hirtiosal ekstrakt, i jedinjenja opisana od strane Zhang, S., et al., Drug Disctokomv Today, 12(9/10), 373-381,(2007)), SIRT-1 inhibitor (npr., reservatrol), dipeptidil peptideaza IV (DPP-IV) inhibitor (npr., sitagliptin, vildagliptin, alogliptin i saksagliptin), insulin sekratogorni, inhibitor oksidacije masnih kiselina, jedan A2 antagonist, c-jun aminoterminalna kinaza (JNK) inhibitor, insulin, mimetik insulina, glikogen fosforilaza inhibitor, VPAC2 receptor agonist i glukokinaza aktivator. Omiljeni antidijabetski agensi su metformin, glukagon-nalik peptid 1 (GLP-1) agonist (npr., Bvetta™) i DPP-IV inhibitori (npr., sitagliptin, vildagliptin, alogliptin i saksagliptin).
[0070]Primeri koji su dati ovde niže dati su samo radi ilustracije. Farmaceutski oblici, metode i različiti parametri ovde navedeni namenjeni su samo prikazivanju različitih aspekata i vidova ovog pronalaska i nisu nemaju namenu da ograniče ovaj pronalazak na bilo koji način.
PRIMERI
[0071]Jedinjenja i intermedijeri opisani niže su generalno imenovani u skladu sa IUPAC (International Union for Pure and Applied Chemistrv) preporukama o nomenklaturi u organskoj herniji i CAS Index pravilima. Osim ako nije drugačije navedeno, svi reaktanti se mogu obezbediti komercijalno.
[0072]Fleš hromatografija je izvedena u skladu sa motodom opisanom kod Still et al., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923.
[0073]Sva Biotage® prečišćavanja, koja se ovde pominju, urađena su ili na 40M ili 40S Biotage® koloni koja sadrži KP-SIL silika (40-63 mM, 60 Angstroms) (Bioatge AB; Uppsala, Sweden).
[0074]Sva Combiflash® prečišćavanja, koja se ovde pominju, urađena su pomoću CombiFlash® Companion svstem (Teledvne Isco; Lincoln, Nebraska) upotrebom spremljenih RediSep® silika kolona.
[0075]Maseni spektri su beleženi na Vodaš (Vodaš Corp.; Milford, MA) Micromass Platform II spektrometru. Osim ako nije drugačije navedeno, maseni spektri su beleženi na Vodaš (Milford, MA) Micromass Platform II spektrometru.
[0076]Proton NMR hemijska pomeranja su data u milionitim delovima polja od tetrametilsilana i beleženi su na Varian Unity 400 or 500 MHz (megaHertz) spektrometru (Varian Inc.; Palo Alto, CA). NMR hemijsko pomeranje je dato u milionitim delovima polja od tetrametilsilana (za proton) ili fluorotrihlorometana (za fluor).
[0077]Dole navedeni preparati su korišćeni u sintezi jedinjenja datim u primerima oisanim niže.
Dobijanje Intermedijera i Početnog materijala
Intermedijer 1
[0078]5-(4-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-6-etoksinikotinska kiselina, prikazana niže, dobijena je na sledeći način.
[0079]Korak 1. 5-Bromo-6-etoksinikotinska kiselina, prikazana niže, dobijena je na sledeći način.
[0080]Smeša5-bromo-6-hloronikotinske kiseline (240 mg, 1.0 mmol) i natrijum etoksida (138 mg, 2.0 mmol) u anhidrovanom etanolu (2 mL) zagrevano je pod mikrotalasima na 100°C u trajanju od 15 min; dodatna porcija natrijum etoksida (79 mg, 1.0 mmol) je dodata i zagrevanje je nastavljeno u trajanju od 1 hr. Nakon hlađenja reakcione smeša je dovedena na pH 4 sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline, dobij ene čvrste supstance su sakupljene i osušene u vakuumu kako bi se dobila 5-bromo-6-etoksinikotinska kiselina (140 mg). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.33 (t, J=7.02 Hz, 3 H) 4.43 (q, J=7.09 Hz, 2 H) 8.32 (d, J=2.15 Hz, 1 H) 8.64 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 13.28 (br. s., 1 H); m/z = 248.2 (M+l).
[0081]Korak 2. Jedinjenje iz naslova, prikazano gore, dobijeno je na sledeći način: Smeša 5-bromo-6-etoksinikotinske kiseline (60 mg, 0.24 mmol), 4-terc-butoksikarbonilfenilboronske kiseline (70 mg, 0.32 mmol), 2 N vodenog rastvora natrijum karbonata (0.37 mL, 0.73 mmol) i paladijum l,r-bis(difenilfosfino)ferocen dihlorida (9 mg, 0.05 mmol) u p-dioksanu (2 mL) se zagreva na 100°C u trajanju od 2 hr. Dodatna porcija 4-terc-butilkarboksilfenilboronske kiseline (70 mg, 0.32 mmol) i paladijum l,l'-bis(difenilfosfino)ferocen dihlorida (9 mg, 0.05 mmol) se doda i nastavi sa zagrevanjem još 1.5 hr. Reakciona smeša se ohladi, razblaži se u vodi, pH podesi na —5 sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline. Ova smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x), kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim tastvorom natrijum hlorida, suše preko magnezijum sulfata i koncentruju u vakuumu, kako bi se dobilo jedinjenje iz naslovljeno jedinjenje (100 mg), koje se upotrebljava bez daljeg prečišćavanja;
m/z = 344.2 (M+l).
Intermedijer 2
[0082]2-(4-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-6-(dimetilamino)izonikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao u opisu koji sledi.
[0083]Korak 1. 2-Hloro-6-(dimetilamino)izonikotinska kiselina, hidrohlorid so, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0084]2,6-Dihloroizonikotinska kiselina (2.00 g, 10.42 mmol) stavi se u tubu sa pritiskom i rastvor dimetilamina u tetrahidrofuranu (26 mL, 2 M, 52 mmol) se doda. Posuda se zatvori i zagreva 22 h na 80 °C. Smeša se ohladi do sobne temperature, prebacu i erlenmajer balon sa okruglim dnom i koncentruje do suva. Rezultujuća bela polučvrsta supstanca se preuzme sa 30 mL 0.1 N rastvora natrijum hidroksida. 1 N HC1 se doda kap po kap uz mešanje kako bi se podesio pH rastvora na ca. 3.5, na kojoj tački se formira žuta čvrsta supstanca. Ova se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom na 45 °C preko noći kako bi se dobila unutrašnja so 2-hloro-6-(dimetilamino)izonikotinske kiseline (916 mg, 44 %). Dalje zakišeljavanjem vodenog rastvora do pH 1 dovodi do formiranja bledo žute supstance, koja se takođe sakupi i suši pod vakuumom da bi se dobio hidrohlorid 2-hloro-6-(dimetilamino) izonikotinske kiseline (1.15 g, 46 %).mir.201 + [M+H]; 199- [M-H]. Za HC1 so:lH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 13.64 (br. s., 1 H), 6.96 (d, 7=1.0 Hz, 1 H), 6.89 (d, 7=0.8 Hz, 1 H), 3.06 (s, 6 H), 2.53 (t, 7=5.1 Hz, 1 H).
[0085]Za unutrašnju so:lH NMR (400 MHz, DMSO-rf6) 5 ppm 6.95 (s, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 3.04(s, 6H).
[0086]Korak 2. 2-(4-(terc-butoksikarbonil)fenil)-6-(dimetilamino)izonikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što sledi.
[0087]2-Hloro-6-(dimetilamino)izonikotinska kiselina (450 mg, 2.24 mmol),4-( terc-butoksikarbonil)benzen boronska kiselina (648 mg, 2.92 mmol), 1,4-dioksan (7.5 mL) i natrijum karbonat (713 mg, 6.73 mmol) rastvorenu vodi (3.36 mL) stave se u balon i kroz smešu se pušta azot uz mešanje u trajanju od 10 min. Paladijum(II) acetat (20 mg, 0.09 mmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-dimetoksibifenil (75 mg, 0.18 mmol) sezatim dodaju zajedno i posuda se napuni azotom, zatvori i zagreva na 90 °C u trajanju od 5 h. Smeša se zatim ohladi do sobne temperature, razblaži sa etil acetatom (50 mL), zakiseli do pH 2 sa 1.5 N HC1 i filtrira kroz celit. Slojevi se razdvoje i vodena porcija se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovane organske porcije se tretiraju sa anhidrovanom natrijum sulfatom i obezbojavajućim ugljenom i mešaju u trajanju od 30 min pre filtriranja. Rastvor se koncentruje do suva i ostatak se prečisti tretiranjem sa smešom metil terc-butil etra (5 mL) i heptana (100 mL). Čvrste supstance se sakupe filtriranjem i sušenjem do suva da bi se dobila 2-(4-(terc-butoksikarbonil)fenil)-6-(dimetilamino)izonikotinska kiselina (502 mg, 65 %) u obliku bledo žutog praha, m/z: 343+ [M+H]; 341- [M-H]; IH NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 8.12 - 8.21 (m, 2 H), 8.04 - 8.11 (m, 2 H), 7.67 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H), 3.23 (s, 6 H), 1.64 (s, 9 H).
Intermedijer 3
[0088]2-(4-(7erc-butoksikarbonil)fenil)-6-etoksiizonikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što sledi.
[0089]Natrijum (65 mg, 3 mmol) se doda u apsolutni etanol (3 mL) pod argonom na sobnoj temperaturi. Nakon potpunog rastvaranja natrijuma, sveže pripremljen etoksid rastvor se doda u 2,6-dihloronikotinsku kiselinu 1 (0.5g, 2.6 mmol). Ova smeša se zagreva pod mikrotalasima na 150 °C u trajanju od 3 hrs. Smeša se koncentruje do suva kako bi se dobila sirova 2-hloro-6-etoksiizonikotinska kiselina (0.5g), koja se koristi bez prečišćavanja, m/z: 202+ [M+H] Sirova 2-hloro-6-etoksiizonikotinska kiselina (0.5 g, ca. 2.6 mmol), 4-(terc-butoksikarbonil) benzen boronska kiselina (0.5g, 2.2 mmol), kalijum karbonat (0.5g, 3.6 mmol) i voda (0.1 mL) u 1,2-dimetoksietanu (10 mL) se meša i degasifikuje u trajanju od 10 min. Zatim se doda tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0.1 g, 0.08 mmol). Zaptivena cev se zatim zagreva preko noći na 90 °C. Nakon hlađenja reakciona smeša se propušta kroz celita i razdvaja između dihlormetana i vode. Organski rastvor se koncentruje i čvrst ostatak se prečisti hromatografljom (silika gel, 10% metanol u dihlorometanu) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (97 mg, 20%). IH NMR (400 MHz, CDC13) 5 ppm 8.11 (2H, d), 8.08 (2H, d), 7.96 (1 H, s), 7.34 (1 H, s), 4.54 (2H, qd), 1.61 (9H, s), 1.46 (3H, t); m/z: 344+ [M+H].
Intermedijer 4
[0090]2-((2-Terc-butoksi-2-oksoetil)(metil)amino)-6-metoksiizonikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što sledi.
[0091]Mešavina koja se satoji od 2-hloro-6-metoksiizonikotinske kiseline (100 mg, 0.53 mmol), sakrcozin terc-butil estra (116 mg, (0.64 mmol), hloro(di-2-norborilfosfino)(2-dimetilaminometilferocen-lil)paladijuma (II) (9.8 mg, 0.02 mmol) i natrijum terc-butoksida (128 mg, 1.3 mmol) u p-dioksanu (3 mL) meša se na 110°C u trajanju od 18 hr. Reakciona smeša se ohladi i rastvarač se odstrani u vakuumu. Ostatak se razblaži sa vodom, pH se podesi na 4 sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline i ekstrahuje sa etil acetatom (3x10 mL). Kombinovane organske frakcije se osuše preko magnesijum sulfata, filtriraju, koncentruju u vakuumu i ostatak se prečisti fleš hromatografijom (0-10% metanol/dihlorometan) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg) u občiku bledo žute supstance. m/z = 297.5 (M+l).
Intermedijer 5
[0092]2-(4-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-6-metoksiizonikotinska kiselina, prokazana niže, dobija se kao što sledi.
[0093]2-Hloro-6-metoksiizonikotinska kiselina (15.0 g, 80.0 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (29.2 g, 96.0 mmol), 1,4-dioksan (500 mL) i natrijum karbonat (25.4 g, 240 mmol) rastvoren u vodi (160 mL) se kombinuje u 1 L, 3 grlom balonu snabdevenom sa unutrašnjim termometrom, kondenzatorom i uvodnikom za azot. Rastvor se degasifikuje uvođenjem azota u trajanju od 15 min uz mešanje. Zatim se doda tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (3.70 g, 3.20 mmol) i smeša se meša na refluksu u trajanju od 17 h. Smeša se zatim ohladi do sobne temperature i koncentruje u vakuumu, kako bi se dobila gusta braon suspenzija, koja se razdeli između etil acetata (400 mL) i vode (150 mL). Vodeni sloj se odvoji i ekstrahuje još sa etil acetatom (2 x 100 mL). Organske frakcije se spoje i isperu sa 1 N HC1 i vodom, i crna čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem kroz celit. Vodeni sloj se odbaci i organski rastvor se suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrira. Rastvor se zatim tretira sa obezbojavajućim ugljenom i zagreva do 70 °C u trajanju od 20 min. Rastvor se zatim filtrira kroz celit dok je još vruć i rastvarač se ukloni pod vakuumomkako bi se dobio žuti prah. Ovaj materijal se prečisti dodavanjem metilterc-butiletra (55 mL), praćeno sa sporim dodavanjem 1.85 L heptana uz mešanje. Smeša se meša u trajanju od 2 dana i filtrira kako bi se dobila 2-(4-(terc-butoksikarbonil)fenil)-6-metoksiizonikotinska kiselina (22.01 g, 84 %) u obliku bledo žutog praha. IH NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) 5 ppm 1.61 (s, 9 H) 4.08 (s, 3 H) 7.34 (d, J=0.98 Hz, 1 H) 7.97 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 8.09 (s, 2 H) 8.13 (s, 2 H);mlz:330.2+ [M+H].
Intermedijer 6
[0094]6-(4-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-2-(metilamino)nikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0095]Korak 1. 6-Hloro-2-(metilamino)nikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što sledi.
[0096]U čelični autoklav doda se 2,6-dihloronikotinska kiselina (tech.) (30 g, 156.2 mmola), tetrahidrofuran (30 mL) i monometilamin (68.2 mL. 33 wt% u etanolu, 500 mmol). Reakciona posuda se zagreva na 100 °C u trajanju od 4 h. Reakciona smeša se ohladi i rastvor se prenese iz autoklava u balon od 500 mL i koncentruje pod vakuumom kako bi sedobila zelena čvrsta supstanca. Ova supstanca se rastvori u 300 mL MeOH i 1.2 L EtOAc, prenese u levak za odvajanje i ispere sa 1 N HC1 (2 x 300 mL) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida. Organski rastvor se zatim koncentruje do suva kako bi se dobila 6-hloro-2-(metilamino)nikotinska kiselina (29 g, 96 %) kao mutno bela čvrsta supstanca. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 13.14 (br. s., 1 H), 8.17 (d, J=2.7 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.57 (br. s., 1 H), 6.58 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 2.89 (d, J=4.1 Hz, 3 H).
mir187+ [M+H]; 185- [M-H]
[0097]Korak 2. U 2 L 3-grli balon doda se 6-hloro-2-(metilamino)nikotinska kiselina (22.9 g, 122.6 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (31.2 g, 102.6 mmol), 1,4-dioksan (1.02 L) i natrijum karbonat (32.6 g, 307.7 mmol) rastvoren u vodi (300 mL). U smešu se uvodi suvi azot uz mešanje u trajanju od 20 min. Zatim se doda tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (5.93 g, 5.13 mmol) i smeša se zagreva da refluktuje (89 °C) u trajanju od 2 h. Smeša se ohladi do sobne temperature, doda se voda (250 mL), i smeša se meša još 10 min. Smeša se ekstrahuje sa 1.5 L etil acetata i organski sloj se odvoji i ispere sa 10 % vodenog rastvora natrijum karbonata (250 mL), 1 N HC1 (2 x 250 mL) i zasićenog natrijum hlorida. Rastvor se zatim koncentruje do minimalne zapremine za mešanje, doda se metanol (650 mL) i smeša se meša na refluksu kako bi se rastvorila čvrsta supstanca. Destilacijom se ukloni 300 mL MeOH i doda se 100 mL vode. Smeša se zatim ohladi do sobne temperature i proizvod se sakupi filtriranjem, ispere sa 150 mL rastvora 2:1 metanol/voda, i suši na vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 g, 71 %) uobliku žute čvrste supstance. 1 H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) 8 ppm 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 8.13 - 8.21 (m, 2 H), 8.03 - 8.13 (m, 2 H), 7.82 (br. s., 1 H), 7.11 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 3.21 (s, 3 H), 1.63 (s, 9 H); m/z: 329+ [M+H]; 327- [M-H].
Intermedijer 7
[0098]6-(3-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-2-(etilamino)nikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0099]Korak 1. 6-(3-(terc-butoksikarbonil)fenil)-2-hloronikotinska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0100]2,6-Dihloronikotinska kiselina (1.20 g, 6.25 mmol), 3-(terc-butoksikarbonil)benzen boronska kiselina (2.08 g, 9.10 mmol), kalijum karbonat (2.60 g, 18.8 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0.72 g, 0.62 mmol), degasifikovani 1,2-dimetoksietan (30 mL) i voda (0.5 mL) se kombinuju pod atmosferom argona i smeša se zagreva na 90 °C preko noći. Reakciona smeša se zatim ohladi do sobne temperature, razblaži sa vodom (100 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 150 mL). Vodeni sloj se zakiseli do pH 3-4 korišćenjem 2N HC1 rastvora i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 200 mL). Kombinovane organske frakcije se osuše preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruju. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (silika gel, 20% metanol/dihlorometan) i frakcije se koncentruju da bi se dobio čvrst proizvod koji se usitni sa 2:1 heptan/etil acetata kako bi se dobila čista 6-(3-(terc-butoksikarbonil)fenil)-2-hloronikotinska kiselina (1.4 g, 67 %) u obliku mutno bele pene. IH NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 8.64 (s,l H), 8.34 (d, 1 H), 8.29 (d, 1 H), 8.04 (d, 1 H), 7.95 (d, 1 H), 7.59 (t, 1 H), 1.60 (s, 9H);mlz334 [M+H].
[0101]Korak 2. 6-(3-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-2-hloronikotinska kiselina (500 mg, 1.50 mmol) se rastvori u 2 M rastvoru etilamina u tetrahidrofuranu (7.0 mL, 14.0 mmol) i smeša se zagreva pod mikrotalasima na 140 °C u trajanju od 4 h. Rasvor se zatim koncentruje do suva i sirova smeša se prečisti na hromatografiji na koloni (silika gel, 10% metanol/dihlorometan). Dobijena čvrsta supstanca se usitni sa etil acetat/heptan (1:4) i filtrira kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova 330 mg, 64% prinos) u obliku žute čvrste supstance. IH NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 8.70 (s, 1 H), 8.27 (dd, 2H), 8.06 (d, 1 H), 7.85 (br.s, 1 H), 7.52 (t, 1 H), 7.09 (d, 1 H), 3.71 (q, 1 H), 1.62 (s, 9H), 1.27 (t, 3H);mlz343 [M+H].
Intermedijer 8
[0102]4-(3-(Terc-butoksikarbonil)fenil)-l H-pirolo[2,3-b]piridin-2-karboksilna kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0103]Korak 1. Metil 4-(3-(terc-butoksikarbonil)fenil)-lH-pirolo[2,3-b]piridin-2-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0104]Smešu koja se meša i sastoji od metil 4-hloro-7-azaindol-2-karboksilata (100 mg, 0.48 mmol), terc-butil 3-(hidroksi(metil)boril)benzoata (137 mg, 0.62 mmol), kalijum fosfata (309 mg, 1.42 mmol), tetrakis(trifenilfosfin) paladijuma (28 mg, 0.02 mmol) u p-dioksanu (3 mL)/voda (1 mL) zagreva se na 100°C u trajanju od 15 hr. Reakciona smeša se ohladi, koncentruje u vakuumu i prečisti fleš hromatografijom (0-100% etil acetatheptan) kako bi se dobio metil 4-(3-(tercbutoksikarbonil)fenil)-lH-pirolo[2,3-b]piridin-2-karboksilat u obliku belog praha (148 mg). IH NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) d ppm 1.62 (s, 9 H) 3.99 (s, 3 H) 7.28 (d, J=5.23 Hz, 1 H) 7.36 (d, J= 2.62 Hz, 1 H) 7.59 (t, 1 H) 7.90 (d,l H) 8.09 (d, 1 H) 8.35 (t, 1 H) 8.64 (d, J=4.70 Hz, 1 H); m/z (M+l) = 353.2.
[0105]Korak 2. U promešani rastvor metil 4-(3-(terc-butoksikarbonil)fenil)-lH-pirolo[2,3-b]piridin-2-karboksilata (145 mg, 0.41 mmol) u metanol (2 mL)/tetrahidrofuran (2 mL) doda se 1 N vodeni rastvor litijum hidroksida (0.82 mL,0.82 mmol). Nakon 18 hr, reakciona smeša se koncentruje u vakuumu, rastvori u vodi, pH podesi na~5 sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline, žute supstance se sakupe filtriranjem i suše u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (122 mg), m/z = 339.5 (M+l); IH NMR (400 MHz, DMSO-<4) 6 ppm 12.56 (s, 1 H) 8.47 (d, J=4.88 Hz, 1 H) 8.24 (t, J=1.66 Hz, 1 H) 8.01 (tt, J=8.36, 1.29 Hz, 2 H) 7.69 (t, J=7.80 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=4.88 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=2.15 Hz, 1 H) 1.52 - 1.59 (m,9H).
Intermedijer 9
[0106]l-izopropil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0107]Korak 1. terc-butil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undec-7-ene-3-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0108]Metil vinil keton (146 mL) sedoda u rastvor terc-butil 4-formilpiperidin-l-karboksilata (375 g) u tetrahidrofuranu (18 L). Reakciona smeša se ohladi do - 5 °C i kap po kap se doda rastvor od kalijum hidroksida u etanolu (3N, 0.243 L) u trajanju od 10 minuta. Reakciona smeša se ostavi dase zagreje do sobne temperature i meša u trajanju od 16 sati. Doda se cikloheksan (10 L) i rastvor se ispere sa zasićenim natrijum hloridom (3 x 10 L). Organski sloj se koncentruje do ulja. Ulje se rastvori u 2L 80:20 cikloheksan / etil acetat i filtrira kroz Celite® kako bi se uklonio nerastvomi materijal. Filtrat se prečisti preko fleš hromatografije na koloni (70:30 heksan / etil acetat) kako bi se dobio proizvod u obliku ulja. The oil was tretirasa heksanom kako bi se dobio željeni proizvod u obliku bele čvrste supstance (131 g, 28%).
[0109]Korak 2. (E)-terc-butil 10-((dimetilamino)metilen)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0110]terc-Butil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat (101 g) i tris(dimetilaminometan) (133 mL) se rastvore u toluenu (800 mL) i zagrevaju na refluksu u trajanju od 17 sati. Reakciona smeša se koncentruje do minimalne zapremine za mešanje i doda se etil acetat (600 mL). Ova smeša se zagreva do refluksa i doda se heptan (1.2 L) u trajanju od 20 minuta. Vruć rastvor se ohladi do sobne temperature u trajanju od 3 sata. Čvrsta supstanca se filtrira kroz stakleni filter i ispere sa heptanom (300 mL). Rezultujuća
čvrsta supstanca se suši u vakuumskoj sušnici na 40 °C u trajanju od 3 sata kako bi se dobio željeni proizvod u obliku žute čvrste supstance (107 g). IH NMR (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 7.48 (s, 1 H), 6.57 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 5.99 (d, J=10.16 Hz, 1 H), 3.32 - 3.51 (m, 4 H), 3.06 (s, 6 H), 2.72 (s, 2 H), 1.57 - 1.66 (m, 2 H), 1.41 - 1.53 (m, 11 H).
[0111]Korak 3. terc-Butil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0112](E)-terc-Butil 10-((dimetilamino)metilen)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat (107 g) se preuzme sa toluenom (700 mL) i doda se izopropil hidrazin (44.4 g). Reakciona smeša se meša na refluksu u trajanju od 4 sata. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature i doda se etil acetat (500 mL). Reakcioni rastvor se ispere sa limunskom kiselinom (2 x 300 mL, 10% vodeni rastvor), i vodom (400 mL). Organski sloj se koncentruje u vakuumu kako bi se dobio tercbutil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-karboksilat u obliku žute čvrste supstance (109 g). IH NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.25 (s, 1 H) 6.42 (dd, J=10.05, 0.49 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=9.95 Hz, 1 H) 4.42 - 4.52 (m, 1 H) 3.36 - 3.53 (m, 4 H) 2.62 (s, 2 H) 1.56 - 1.68 (m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 17 H).
[0113]Korak 4. terc-butil l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0114]U rastvor terc-butil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-karboksilata (109 g) u metanolu (1 L) doda se Af-bromo sukcinimida (61.4 g). Reakciona smeša se meša u trajanju od 1 sat. Reakciona smeša se ohladi sa natrijum tiosulfatom (10 g u 300 mL vode) i zatim destiluje do krajnje zapremine od 500 mL. Rastvor se ohladi do sobne temperature i dodaju se 2-metil tetrahidrofuran (1 L) i voda (100 mL) .Organski sloj se ukloni i vodeni sloj se ekstrahuje sa 2-metil tetrahidrofuranom. Organski slojevi se spoje i isperu sa vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 N, 250 mL), vodom i zasićenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj se osuši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje do oranž ulja. Ulje se rastvori u tetrahidrofuranu (500 mL) i doda se kalijum terc-butoksida (76.8 g) u tetrahidrofuranu (500 mL). Rastvor se zagreva do 60 °C i meša u trajanju od 1 sat. Vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (1 N, 1 L) se doda i rastvor se meša u trajanju od 30 minuta. Faze se odvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (700 mL). Organski slojevi se spoje, isperu sa vodom (400 mL) i zasićenim, vodenim natrijum hloridom (100 mL). Organski sloj se osuši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje u vakuumu da bi se dobio ostatak. Ostatak se osuši u vakuumskoj sušnici na 40 °C u trajanju od 16 sati kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku organskog voska (117 g). IH NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.35 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.29 - 3.51 (m, 4 H), 2.73 (s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47 - 1.57 (m, 4 H), 1.42 - 1.46 (m, 15 H); +ESIMS (M+H) = 348.5.
[0115]Korak 5. l-izopropil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[01161terc-Butil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat (250 g), i tris (dimetilaminometan) (325 mL) se rastvori u toluenu (1.9 L) i zagreva na refluksu u trajanju od sata. Smeša se destiluje i koncentruje do najmanje zapremine za mešanje (110 °C) i zatim se doda toluee (1.9 L). Reakciona smeša se redestiluje do minimalne zapemine za mešanje i ohladi do sobne temperature. Dodaju se toluen (1.8 L) i izopropil hidrazin hidrohlorid (135 g) i rastvor se zagreva do refluksa u trajanju od 5 sati. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature i ispere sa limunskom kiselinom (10% vodeni rastvor, 2 x 150 mL) i vodom (200 mL), i zatim se vodeni sloj destiluje do minimalne zapremine za mešanje. Doda se metanol (2 L) i destiluje do minimalne zapremine za mešanje. Ovo se ponavlja sa metanolom (2 L). Rastvor se ponovo rastvori sa metanolom (2.5 L) i N-bromosukcimimid (176 g) se doda odjednom. Rastvor se meša na 23 °C utrajanju od 2 sata. Doda se vodeni rastvor natrijum tiosulfata (5 wt%, 0.5 L) i smeša se meša u trajanju od 15 minut. Reakciona smeša se koncentruje destilovanjem (45 °C, 210 mm Hg) do~0.5 L i zatim se doda 2-metil tetrahidrofurana (2.5 L). Nakon mešanja u trajanju od 15 minuta, vodeni sloj se odbaci. Organski sloj se koncentruje do~0.2 L i doda se tetrahidrofuran (0.5 L). U smešu se doda rastvor kalijum terc-butoksida u tetrahidrofurana (1.9 L, 1 M rastvor). Rastvor se zagreva do 60 °C i meša se u trajanju od 1 sat. Nakon hlađenja do sobne temperature, doda se vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (1 N, 2.2 L) u trajanju od 20 minuta. Smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 minuta, i zatim se slojevi razdvoje. Vodeni sloj se ukloni i ostatak se ekstrahuje sa etil acetatom (1.75 L). Spojeni organski slojevi se isperu sa vodom (1 L) i organski sloj se koncentruje destilovanjem (4 L rastvarača se ukloni). Etil acetat (1.8 L) se doda i rastvor se koncentruje do minimalne zapremine za mešanje. Dodaju se etil acetat (3
L) i metanol (0.8 L) i rastvor se ohladi do 0 °C. Acetil hlorid (401 mL) se doda kap po kap u trajanju od 20 minuta i rastvor se meša na 0 °C u trajanju od 4 sata. Precipitat se sakupi filtriranjem pod azotom. Filtrat se ispere sa etil acetatom (0.5 L) i suši u vakumskoj sušnici na 40 °C kako bi se dobio l-izopropil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on kao mutno beličasta čvrsta supstanca. (241 g). IH NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 7.43 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89 (s,2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37
- 1.45 (m, 6 H); +ESI (M+H) = 248.4
Intermedijer 10
[0117]l-terc-butil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao stoje opisano niže.
[0118]Korak 1. Benzil 10-((dimetilamino)metilen)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0119]Benzil estar 9-okso-3-aza-spiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilne kiseline (15.2 g, 51 mmol) se rastvori u 180 mL toluena i doda se tris(dimetilamino)metan (22.2 g, 27 mmol). Reakciona smeša se zagreva na refluksu u trajanju od 5 sati i ostavi da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša se koncentruje u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (18.0 g, 100 %): +APC1MS (M+H) 354.6; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.49 (s, 1 H), 7.28 - 7.40 (m, 5 H), 6.59 (d, 7=10.16 Hz, 1 H), 6.01 (d, 7=9.97 Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.52 - 3.66 (m, 2 H), 3.39 - 3.52 (m, 2 H), 3.07 (s, 6 H), 2.74 (s, 2 H), 1.58 - 1.73 (m, 2 H), 1.41 - 1.58 (m, 2 H).
[0120]Korak2. Benzil l-terc-butil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0121]Benzil 10-((dimetilamino)metilene)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat (59.2 g, 167 mmol) se rastvori u 835 mL etanola. U reakcionu smešu doda se sirćetna kiselina (20 mL, 345 mmol) i tercbutilhidrazin hidrohlorid (29.1 g, 234 mmol). Reakciona smeša se zagreva do refluksa u trajanju od 1 sata. Reakcioni rastvor se ohladi do sobne temperature i zatim koncentruje u vakuumu kako bi se dobilo oranž ulje koje se prečisti fleš hromatografijom uz upotrebu etil acetata 20-40% u heptanu kao eluentom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bledo žute čvrste supstance (50 g, 79%): +ESIMS (M+H) 380.5; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.26 - 7.40 (m, 5 H) 7.17 (s, 1 H) 6.66 (d, J=9.95 Hz, 1 H) 5.77 (d, 7=10.15 Hz, 1 H) 5.12 (s, 2 H) 3.38 - 3.64 (m, 4 H) 2.58 (s, 2 H) 1.60 (s, 12 H) 1.50 (br. s., 1 H).
[0122]Korak 3. Benzil 6-bromo-l-terc-butil-7-hidroksi-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidinj-l'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0123]Benzil l-terc-butil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (50 g, 132 mmol) se rastvori u 1 L tetrahidrofurana. U reakcionu smešu se doda N-bromosukcinimid (24.6 g, 138 mmol) i 250 mL vode. Reakciona smeša se meša u trajanju od 1 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razdvoji između etil acetata i vode. Faze se odvoje i organska faza se ispere dodatno 2 puta sa vodom i jedanput sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organska faza se osuši preko magnezijum sulfata, koncentruje u vakuumu, i kristališe iz etra kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku čvrste supstance krem-boje (60.7 g, 97%): +ESI MS (M+H) 476.5; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8ppm 7.28 - 7.36 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.23 (t, 7=4.68 Hz, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 4.24 (d, 7=4.49 Hz, 1 H), 3.87 (br. s., 2 H), 3.12 (br. s., 2 H), 2.79 (d, J=16.00 Hz, 2 H), 2.59 (d, J=15.80 Hz, 2 H), 1.95 (br. s., 1 H), 1.66 (s, 11 H), 1.58 (br. s., 1 H).
[0124]Korak 4. Benzil 6-bromo-l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetraliidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže..
[01251Benzil 6-bromo-l-terc-butil-7-hidroksi-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-karboksilat (57.9 g, 122 mmol) se rastvori u 1 L acetona i zatim ohladi do 0 °C u ledenom kupatilu. U rastvor se doda 122 mL Jones Reagensa (Fillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094). Vodeno kupatilo se ukloni i reakciona smeša sezagreje do sobne temperature i meša još 45 minuta. Doda se zasićeni, vodeni rastvor natrijum bikarbonata dok ne prestane izdvajanje gasova i pH dostigne 7. Dobijena smeša se filtrira kroz Celite® uzispiranje sa etil acetatom. Slojevi filtrata se razdvoje i vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa etil acetatom. Organski ekstrakti se spoje, isperu dva puta sa vodom, jedanput sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuše preko magnezijum sulfata i koncentruju u vakuumu. Ostatak se kristališe iz etil acetat/heptan kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50.4 g, 87%): +ESI MS (M+H) 474.5; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.32 (d, J=9.38 Hz, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 4.24 (s, 1 H), 3.58 - 3.84 (m, 2 H), 3.16 - 3.41 (m, 2 H), 2.67 - 2.91 (m, 2 H), 1.80 (br. s., 1 H), 1.61 - 1.76 (m, 11 H), 1.52 - 1.61 (m, 1 H).
[0126]Korak 5. Benzil l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0127]Benzil 6-bromo-l-terc-butil-7-hidroksi-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (50.4 g, 106 mmol) se rastvori u 600 mL tetrahidrofurana, u ovo se doda zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (600 mL) i cink u prahu (20.8 g, 319 mmol). Reakciona smeša se meša u trajanju od 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se filtrira kroz Celite®, faze se odvoje i organska faza se ispere sa vodom i zasićenim, vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuši preko magnezijum sulfata i koncentruje u vakuumu kakobi sedobila pena. Ova pena se tretira jedanput sa etil acetat/heptan i jedanput sa etrom ifiltrira kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (40.4 g, 96%): +ESI MS (M+H) 396.5; IH NMR (400 MHz, CDC13) Uppm 7.24 - 7.38 (m, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 3.36 - 3.61 (m, 4 H), 2.74 (s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.64 (s, 9 H), 1.51 (br. s., 4 H).
[0128]Korak 6. l-terc-butil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0129]Benzil l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (46.6 g, 118 mmol) se rastvori u 730 mL etanola i rastvor se doda u 10% paladijum na ugljeniku (9.4 g). U ovo se doda 1 -metil- 1,4-cikloheksadien (90 mL, 769 mmol). Reakciona smeša se meša na refluksu u trajanju od 2 sata. Reakciona smeša se ohladi na sobnoj temperaturi i filtrira kroz Celite®. Filtrat se koncentruje u vakuumu kako bi se dobila siva supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u 150 mL etil acetata, u ovo se doda 35 mL 4 M hlorovodonične kiseline u dioksanu. Dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (34 g, 97%): +ESI MS (M+H) 262.5; 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 7.34 (s, 1 H) 3.12 - 3.25 (m, 4 H) 2.90 (s, 2 H) 2.66 (s, 2 H) 1.67 - 1.85 (m, 4 H) 1.62 (s, 9 H).
Intermedijer 11
[0130]l-(Oksetan-3-il)-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0131]Korak 1. terc-Butil l-(2-etoksi-2-oksoetil)-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0132]Etilhidrazinoacetat hidrohlorid (0.92 g, 5.95 mmol) se doda u rastvor benzil 10-((dimetilamino)metilen)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilata (1.25 g, 3.90 mmol), opisanog prilikom dobijanja intermedijera 10, u etanolu (30 mL). Smeša se meša na refluksu u trajanju od 1 sata. Na osnovu alikvota za koji je urađen 'HNMR, određuje se kraj reakcije. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature i koncentruje pod visokim vakuumom kako bi se dobilo braon ulje. Ulje se tretira sa dietil etrom (50 mL). Precipitat se filtrira i filtrat se koncentruje i suši pod visokim vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.50 g, 100%) u obliku braon ulja. +APC1 MS (M+H) 376.2; 'H NMR (400 MHz,CDCl3) 8 ppm 1.21-1.26 (m, 3 H), 1.43 (s, 9 H), 1.45 - 1.52 (m, 2 H), 1.54 - 1.64 (m, 2 H), 2.62 (s, 2 H), 3.33 - 3.49 (m, 4 H), 4.15 - 4.22 (m, 2 H), 4.82 (s, 2 H), 5.87 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 6.26 (d,J=9.97Hz, 1 H), 7.24 (s, 1 H).
[0133]Korak 2. Dietil 2-(l'-(terc-butoksikarbonil)spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l (4H)-il)malonat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0134]terc-Butil l-(2-etoksi-2-oksoetil)-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (1.45 g 3.86 mmol) u toluenu (5 mL) se doda u suspenziju natrijum hidrida
(0.148 g, 60% disperzija u mineralnom ulju) u dietil karbonatu (30 mL), kap po kap na 80 °C u trajanju od 30 minuta. Reakciona smeša se mešana refluksu u trajanju od 1.5 sata. 'H NMR je pokazao da se početni materijal potrošio i da je stvoren željeni proizvod. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature. Metanol (1 mL) se doda i rastvor se meša na sobnoj
temperaturi u trajanju od 5 minuta. Doda se voda (5 mL). Rastvor se zakiseli do pH~3 sa 2 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (3 mL) i zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (3x 15 mL). Spojene organske frakcije se suše preko magnezijum sulfata, filtrira,
koncentruje, i suši pod vakuumom, kako bi se ddobila braon guma (1.59 g, 92%). Sirovi materijal se tretira sa 1:1 dietil etanheptani (50 mL). Precipitat se filtrira. Filtrat se koncentruje i suši pod visokim vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.25g, 72%). +APC1 MS (M+H) 348.1;<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 1.13-1.32 (m, 6 H), 1.40 -1.46 (m, 9 H), 1.46 - 1.54 (m, 2 H), 1.59 (d, J=13.68 Hz, 3 H), 2.62 (s, 2 H), 3.31 - 3.51 (m, 4 H), 4.27 (q, J=7.23 Hz, 4H), 5.85 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 6.34 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 7.24 (s,
IH).
[0135]Korak 3. terc-Butil l-(l,3-dihidroksipropan-2-il)-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidinl-1'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže..
[0136]Tetrahidrofuran (40 mL) se doda u litijum aluminijum hidrid (900 mg) u 3-grlom balonu od, 125 mL sa okruglim dnom koji je opremljen sa dovodnikom za azot i sa unutrašnjim termometrom. Rastvor se ohladi do -2 °C. Dietil 2-(l'-(terc-butoksikarbonil) spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l(4H)-il)malonat (1 g) u tetrahidrofuranu (5 mL) se dodaje kap po kap u trajanju od 5 minuta. Temperatura nije nikada veća od -0.2 °C dok traje dodavanje. Reakciona smeša se meša na 0 °C u trajanju od 3 sata i reakciona smeša se ohladi sa uzastopnim dodavanjem vode (1.0 mL), 15% vodenog rastvora natrijum hidroksid (1.0 mL), i vode (3 mL). Unutrašnja temperatura nije nikada prelazila 3.2 °C tokom dodavanja. Reakciona smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature 15 minuta. Reakciona smeša se filtrira kroz Celite® i ispere sa dietil etrom (3 x 20 mL). Spojene organske frakcije se isperu sa zasićenim rastvorom natrijum hloridabrine (5 mL) osuše preko natrijum sulfata, filtrira, koncentruje, i suši pod visokim vakuumom kako bi se dobila bledo žućkasta staklasta materija (548 mg, 67%). Ovaj materijal se hromatografiše na 25 g silika gela uz eluiranje sa 2% do 8% metanola u dihlorometanu sa 0.1% amonijum hidroksida u trajanju od 30 minuta kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (133 mg, 16%). +APC1 MS (M+H) 364.2;<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 1.45 (s, 9 H), 1.51 (br. s., 2 H), 1.60 (br. s., 4 H), 2.62 (s, 2 H), 3.32 - 3.53 (m, 4 H), 4.05 (br. s., 4 H), 4.26 (t, J=4.89 Hz, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 6.40 (d, J=9.77 Hz, 1 H), 7.23 - 7.25 (m, 1 H).
[0137]Korak 4. terc-Butil l-(oksetan-3-il)-l,4-dihidros<p>iro[indazol-5,<4>'-<p>i<p>eridin]-<r->karboksilat, prikazan niže, se dobija ko što sledi.
[0138]2.5 M n-butil litijum u heksanu (0.33 mll65 uL) se doda u rastvor terc-Butil 1-(1,3-dihidroksipropan-2-il)-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-karboksilata (150 mg, 0.41 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) na -6.2 °C. Temperatura ne prelazi -3.7 °C tokom dodavanja. Rastvor se meša na -8 °C u trajanju od 30 minuta. Doda se rastvor p-toluenesulfonil hlorida (79 mg) u tetrahidrofuranu (2 mL) u reakcionu smešu na -5 °C. Temperatura nije nikada veća od -2 °C tokom dodavanja. Reakciona smeša se meša na -5 °C u trajanju od 1 sata i reakciona smeša se ohladi do -6 °C i doda se 2.5 M n-butil litijum u heksanima (0.33 mL, 165 uL) u trajanju od 2 minuta. Temperatura ne prelazi -3.5 °C tokom dodavanja. Ledeno kupatilo se ukloni i reakciona smeša se meša na unutrašnjoj temperaturi od 60 °C u trajanju od 16 sati. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature i doda se etil acetat (20 mL). Reakcioni rastvor se ispere sa vodom (35 mL) i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (15 mL). Spojene organske frakcije se isperu sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (5 mL) suše preko magnezijum sulfata, filtrira, koncentruje, i suši pod visokim vakuumomkako bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se prečisti hromatografski na 8 g silika gela uz eluiranje sa 25% do 75% etil acetata u heptanima u trajanju od 36 minuta kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (58 mg, 40%).+ESI MS (M+H);
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5 ppm 1.45 (s, 9 H), 1.49 (d, J=3.71 Hz, 1 H), 1.55 (s, 4 H), 1.59 (br. s., 1 H), 2.61 (s, 2 H), 3.32 - 3.50 (m, 4 H), 5.00 (m,J=7.22,7.22 Hz, 2 H), 5.13 (t,J=6MHz, 2 H), 5.36 - 5.46 (m, 1 H), 5.88 (d,J=9.95Hz, 1 H), 6.43 (d,J=9.95Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H).
[0139]Korak 5. terc-Butil 6-bromo-7-metoksi-l-(oksetan-3-il)-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0140]N-Bromosukcinimid (30 mg, 0.17 mmol) se doda u terc-butil l-(oksetan-3-il)-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-karboksilat (56 mg, 0.17 mmol) u metanolu (1.0 mL) na sobnoj temperaturi. Reakcionasmeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 sata i zatim se doda 7Y-bromosukcinimid (4.5 mg) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 sata. Reakciona smeša se koncentruje pod strujom azota do dobijanja ostataka. U reakcioni rastvor se doda etil acetat (15 mL) i rastvor se ispira sa 10% limunskom kiselinom (3 mL), 1 N natrijum hidroksidom (3 mL), i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (3 mL). Organski sloj se koncentruje i suši pod visokim vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (74 mg, 100%) u obliku bezbojne čvrste supstance. +APC1 MS (M+H) 458.2; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 1.44 (s, 9 H), 1.69 (br. s., 4H), 2.51 (d, J=15.83 Hz, 1 H), 2.67 (d, J=15.83 Hz, 1 H), 3.06 - 3.31 (m, 3 H), 3.54 (s, 3 H), 3.62 - 3.72 (m, 1 H), 4.39 (s, 1 H), 4.66 (s, 1 H), 4.87 - 4.93 (m, 1 H), 4.97 (t, J=6.84 Hz, 1 H), 4.99 - 5.04 (m, 1 H), 5.30 (s, 1 H), 5.34 - 5.40 (m, 1 H), 7.43 (s, 1 H).
[0141]Korak 6. terc-Butil l-(oksetan-3-il)-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0142]1 M kalijum terc-butoksid u tetrahidrofuranu (0.320 mL) se doda u rastvor terc-butil 6-bromo-7-metoksi-1 -(oksetan-3-il)-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4' -piperidin] -1' -
karboksilata 72 mg, 0.16 mmol) u tetrahidrofuranu (1.0 mL) na sobnoj temperaturi. Bezbojni rastvor postane žut nakon dodavanja. Rastvor se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 sati. 1 N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (0.475 mL, 3 eq.) se doda i rastvor se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 sata. Tetrahidrofuran se koncentruje pod strujom azota. Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (3x5 mL). Kombinovani organski slojevi se
isperu sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (3 mL) zatim se organski sloj koncentruje i suši pod visokim vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje u obliku bledo žute supstance (54 mg, 96%). -APC1 MS (M-H) 360.2; 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 1.38 - 1.45 (m, 9 H), 1.46 - 1.56 (m, 4 H), 2.57 (s, 2H), 2.82 (s, 2 H), 3.33 - 3.53 (m, 4 H), 4.94 - 5.06 (m, 4 H), 6.08 - 6.21 (m, 1 H), 7.53 (s, 1 H).
[0143]Korak 7. l-(oksetan-3-il)-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0144]Trifluorosirćetna kiselina (0.2 mL) se doda u rastvor terc-butil l-(oksetan-3-il)-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilata (50 mg, 0.14 mmol) u dihlorometanu (2 mL) na 0 °C. Ledeno kupatilo se ukloni i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 1.5 sati. Reakciona smeša se koncentruje do dobijanja ostatka pod stujom azota i suši pod visokim vakuumom u trajanju od 20 minuta. Ostatak se tretira sa dietil etrom (5 mL). Rastvarač se dekantuje i preostali presipitat se suši pod visokim vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (52 mg, 100) u obliku bledo žute čvrste supstance. +APC1 MS (M+H) 262.2; *H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 1.65 -1.86 (m, 4 H), 2.63 (s, 2 H), 2.89 (s, 2 H), 3.14 - 3.27 (m, 4 H), 5.02 (s, 4 H), 6.07 - 6.21 (m, 1 H), 7.53 - 7.60 (m, 1 H).
Intermedijer 12
[0145]l-Izopropil-3-metil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0146]Korak 1. Benzil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0147]Benzil 10-((dimetilamino)metilen)-9-okso-3-azaspiro[5.5]undeka-7-en-3-karboksilat (6.38 g, 18 mmol), dobijen kao što je opisano u pripremi Intermedijera 10, rastvori se u 90 mL etanola. U reakcioni rastvor doda se sirćetna kiselina (2.16 g, 36 mmol) i 1-izopropilhidrazin hidrohlorid (2.79 g, 25 mmol). Reakcioniona smeša se zagreva na refluksu u trajanju od 2 sata i zatim se reakcioni rastvor ohladi do sobne temperature i koncentruje u vakuumu kako bi se dobilo oranž ulje koje se prečisti fleš hromatografijom uz upotrebu 12-100% etil acetata u heptanu kao eluenta, kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku žute gume (6.58 g, 69%): +ESI MS (M+H) 366.5; 'H NMR (400 MHz, CDCL) 5 ppm 7.28 - 7.39 (m, 5 H), 7.25 (s, 1 H), 6.42 (d, J=9.95 Hz, 1 H), 5.84 (d, J=9.95 Hz, 1 H), 5.14 (s, 2 H), 4.41 - 4.54 (m, 1 H), 3.42 - 3.65 (m, 4 H), 2.62 (s, 2 H), 1.58 - 1.70 (m, 2 H), 1.50 - 1.58 (m, 2 H), 1.49 (d, J=6.83 Hz,6H).
[0148]Korak 2. Benzil 3,6-dibromo-l-izopropil-7-metoksi-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0149]Benzil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1'-karboksilat (679 mg, 1.86 mmol) se rastvori u 5 mL metanola i tretira sa N-bromosukcinimidom (728 mg, 4.09 mmol) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 18 sati. Metanol se ukloni pod smanjenim pritiskom. Dobijena pena se preuzme u 50 mL etil acetata i ispere sa 0.5 M natrijum hidroksidom (2x50 mL) i 20 mL zasićenim vodenim rastvorom natrijum tiosulfata. Organske faze se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruje. Dobijeno ulje se prečisti fleš hromatografijom (25 g silika gela, 10-80% etil acetat/heptan gradijent) da bi se dobilo 784 mg (76%) jedinjenja iz naslova u obliku bele pene: +APC1-MS (M+H) = 554.1,556.2, 558.2: 'HNMR (400 MHz, CDC13) 8ppm 7.26 - 7.42 (m, 5 H), 5.12 (s, 2 H), 4.67 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 4.36 (s, 1 H), 4.27 (m, 1 H), 3.79 (d, J=l 1.90 Hz, 1 H), 3.59 - 3.73 (m, 1 H), 3.53 (s, 3 H), 3.24 - 3.40 (m, 1 H), 3.19 (ddd, J=13.61, 10.00, 3.12 Hz, 1 H), 2.56 (d, J=16.19 Hz, 1 H), 2.34 (d, J=16.19 Hz, IH), 1.56 - 1.85 (m, 4 H), 1.38 - 1.55 (m, 6 H).
[0150]Korak 3. Benzil 3-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0151]Benzil 3,6-dibromo-l-izopropil-7-metoksi-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-karboksilat (784 mg, 1.4 mmol) se rastvori u 15 mL tetrahidrofurana. Doda se kalijum t-butoksid (2.82 mL, 2 eq, 1 M tetrahidrofuran) i reakciona smeša se meša u trajanju od 18 sati na sobnoj temperaturi. U reakcionu smešu se doda 25 mL 2 N hlorovodonične kiseline. Smeša se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi. Smeša se razblaži sa 25 mL vode i ekstrahuje sa etil acetatom (2x50 mL). Organski ekstrakti se spoje i ekstrakt se osuši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje. Dobijeno ulje se prečisti fleš hromatografijom (50 g silika gela, 8-66% etil acetat/heptan gradijent) kako bi se dobilo 612 mg jedinjenja iz naslova u obliku bele pene: +ESI MS (M+H) = 462.5 IH NMR (400 MHz, CDC13) S ppm 7.25 - 7.38 (m, 5 H), 5.24 - 5.42 (m, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 3.49 - 3.66 (m, 2 H), 3.46 (dd, J=7.41, 4.88 Hz, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.52 (s, 2 H), 1.48 - 1.65 (m, 4 H), 1.44 (d, J=6.63 Hz, 6 H).
[0152]Korak 4. terc-Butil 3-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0153]Benzil 3-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (612 mg, 1.33 mmol) se rastvori u 10 mL 33% hlorovodonična kiselina/ sirćetna kiselina i smeša se meša 60 minuta na temperaturi okoline. Rastvarač se upari i crveno-oranž ostatak se preuzme u 50 mL vode i podesi se da bude bazan sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata i ekstrahuje sa etil acetatom (2x50 mL). Organska faza se koncentruje do 20 mL i tretira sa 20 mL zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i di-terc-butil dikarbonata (348 mg). Dvofazna smeša se meša jedan sat na sobnoj temperaturi. Slojevi se odvoje i organska faza se osuši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod smanenim pritiskom. Dobij eno ulje se prečisti fleš hromatografijom (10-70% etil acetat/heptan, 10 g silika gela) da bi se dobilo 364 mg jedinjenja iz naslova. +ESI MS (M+H) = 413.5; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 5.24 - 5.43 (m, 1 H), 3.41 - 3.56 (m, 2 H), 3.28 - 3.41 (m, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47 - 1.56 (m, 4 H), 1.40 - 1.49 (m, 15 H).
[0154]Korak 5. terc-Butil l-izopropil-3-metil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže..
[0155]terc-Butil 3-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (440 mg, 1.03 mmol), paladijum tetrakis trifenilfosfin (119 mg, 0.103 mmol), kalijum karbonate (146 mg, 1.03 mmol), i voda (94 mg, 5.16 mmol) se pomešaju u dimetilformamidu (2 mL) i degasifikuje pod strujom azota u trajanju od 2 minuta. Reakciona epruveta se zapečati i zagreva na mikrotalasima u trajanju od 30 minuta na 100 °C. Epruveta se izvadi iz mikrotalasnog grejača i zagreva u običnom bloku za zagrevanje na 100 °C u trajanju od 4 dana. Reakciona smeša se koncentruje u vakuumu i zatim se razdeli između vode (5 mL) i etil acetat (5 mL). Faze se odvoje i organski sloj se koncentruje i zatim hromatografiše na 40 g koloni uz eluiranje sa 20-40 % etil acetatom u heptanu kao gradijentom kako bi se dobilo 268 mg (72 %) jedinjenja iz naslova. +ESI MS (M+H) = 362.5; 'H NMR (400 MHz, CDCI3) 8 ppm 5.20 - 5.53 (m, 1 H), 3.32 - 3.54 (m, 4 H), 2.62 (s, 2 H), 2.50 (s, 2 H), 2.23 (s, 3 H), 1.53 (t, J=5.76 Hz, 4 H), 1.46 (s, 9 H), 1.44 (d, J=6.64 Hz, 6
H).
[0156]Korak 6. l-Izopropil-3-metil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0157]terc-Butil l-izopropil-3-metil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (375 mg, 1.04 mmol) se rastvori u 3 mL dietil etra i tretira sa 4 M hlorovodoničnom kiselinom u dioksanu (1 mL). Rastvor se meša u trajanju od jednog sata i zatim se koncentruje u vakuumu da bi se dobilo 300 mg jedinjenja iz naslova u obliku bele pene: 'H NMR (400 MHz, DMSO-c/6) 5 ppm 5.10 - 5.35 (m, 1 H), 4.34 (br. s., 4 H), 2.70 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 2.17 (s, 3 H), 1.66 (br. s., 4 H), 1.34 (d, J=6.64 Hz, 6 H).
Intermedijer 13
[0158]l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-3-karbonitril, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0159]Korak 1. terc-Butil 3-cijano-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0160]U šlenkovu tubu kroz koju se sprovodi azot, sipa se terc-butil 3-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (250 mg, 0.59 mmol), dobijen kao što je opisano u pripremi Intermedijera 12,
tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)-hloroform adukta (23.8 mg, 0.02 mmol), cinka u prahu (9.6 mg, 0.15 mmol), cink cijanida (75.7 mg, 0.65 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocena (26.1 mg, 0.05 mmol). Doda se anhidrovani dimetilacetamid (3.5
mL) i kroz posudu se pusti azot, zatim se zatvori sa Teflon® poklopcem. Reakciona smeša se meša na 120 °C u trajanju od 16 sati. Reakciona smeša se ohladi i zatim filtrira kroz Celite® i ispere sa etil acetatom. Filtrate seispere sa vodom i vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom. Spojene organske faze se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuše
preko magnezijum sulfata i koncentruje u vakuumu. Ostatak se prečisti fleš hromatografijom uz upotrebu 5-30% etil acetata u heptanu kao gradijentom da bi se dobilo 204 mg jedinjenja iz naslova u čvrstom stanju (93 %): +ESI MS (M-Boc+H) 273.5; 'H NMR (400 MHz, CDjOD) Sppm 5.44 (m, 1 H), 3.44 (m, 4H), 2.89 (s, 2H), 2.64 (s, 2H), 1.53 (m, 4H), 1.46-1.43 (m, 15H).
[0161]Korak 2. l-Izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-3-karbonitril
[0162]terc-Butil 3-cijano-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (70 mg, 0.19 mmol) se rastvori u dihlorometanu (3 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (0.2 mL) i meša se na sobnoj temperaturi u trajanju od 90 minuta. Rastvarač se koncentruje koncentruje u vakuumu i ostatak se ko-destiluje sa toluenom praćeno sa etil acetatom da bi se dobilo 149 mg (100 %) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance: +ESI MS (M+H) 273.5.
Intermedijer 14
[0163]l-izopropil-6-metil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0164]Korak 1. Benzil 6-bromo-7-hidroksi-l-izopropil-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0165]Benzil l-izopropil-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (4.20 g, 11 mmol), dobijen kao što je opisano u pripremama Intermedijera 12, rastvori se u 130 mL
tetrahidrofurana. U reakcionu smešu se doda N-bromosukcinimid (2.49 g, 14 mmol) i 30 mL vode. Reakciona smeša se meša u trajanju od 1 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razdvoji između etil acetata i zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida. Organska faza se odvoji i ispere iznova sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organska faza se osuši preko natrijum sulfata i koncentruje u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku mutno-bele pene (5.31 g, 100%): +ESI MS (M+H) 463.8.
[0166]Korak 2. Benzil 6-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0167]Benzil 6-bromo-7-hidroksi-l-izopropil-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (5.30g, 11 mmol) se rastvori u 53 mL acetona i zatim ohladi do 0 °C u
vodenom kupatilu. U rastvor se doda 83 mL Jones Reagensa (Fillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094). Vodeno kupatilo se ukloni i reakciona smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature na kojoj se meša u trajanju od 45 minuta. Reakciona smeša se ohladi do 0 °C u ledenom kupatilu i zatim se doda zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata sve do prestanka izdvajanja gasova. Rezultujuća smeša se filtrira kroz Celite®, ispira sa etil acetatom. Filtrati se odvoje i vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa etil acetatom. Organski ekstrakti se spoje, isperu dva puta sa vodom, jedanput sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuše preko natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.27 g, 100%): +ESI MS (M+H) 460.4.
[0168]Korak 3. Benzil l-izo<p>ro<p>il-7-okso-l,4,6,7-tetrahidros<p>iro[indazol-5,<4>'-<p>i<p>eridin]-<r->karboksilat, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0169]Benzil 6-bromo-l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-karboksilat (5.63 g, 12 mmol) se rastvori u 55 mL sirćetne kiseline, u ovo se doda cink u prahu (2.40 g, 37 mmol). Reakciona smeša se meša u trajanju od 35 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se koncentruje u vakuumu i zatim se razdvoji između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i etil acetata. Faze se odvoje i vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom. Organski ekstrakti se spoje, isperu sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuše preko natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu da bi se dobilo ulje. Ulje se prečisti fleš hromatografijom uz upotrebu 12-100% etil acetata u heptanu kao eluentu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku ulja (2.25 g, 48%): +ESI MS(M+H) 382.4;<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.28 - 7.40 (m, 6 H), 5.32 - 5.45 (m, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.41 - 3.61 (m, 4 H), 2.76 (s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.50 - 1.62 (m, 4H), 1.47 (d, J=6.63 Hz, 6 H).
[0170]Korak 4. Benzil l-izopropil-6-metil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0171]Benzil l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (397 mg, 1.04 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) se ohladi do -70 °C. U ovo se doda litijum bis(trimetilsilil)amid (1.56 mL, 1.56 mmol) kao 1.0 M rastvor u tetradhidrofuranu u toku perioda od deset minuta. Rezultujuća žuta supstanca se meša u trajanju od trideset minuta na -70 °C. l,3-Dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(li:f)-pirimidon (1.6 mL) se doda u reakcionu smešu, mešanje se nastavi na -70 °C u trajanju od dest minuta. U reakcionu smešu se doda jodmetan (746 mg, 5.2 mmol). Reakciona smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature na kojij se meša još 18 sati. U reakcionu smešu se doda zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (2 mL), smeša se zatim razdvoji između vode (20 mL) i etil acetata (150 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (150 mL). Organski slojevi se spoje, suše preko magnezijum sulfata, filtrira i zatim koncentruje kako bi se dobilo bistro ulje. Ulje se prečisti sa silika gelom hromatografski uz upotrebu 10-40% etil acetata u heptanu kao eluent kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (351 mg, 85%): +ESI MS (M+H) 396.2; 'H NMR (400 MHz, DMSO-</6) 8 ppm 7.44 (s, 1 H), 7.35 (s, 5 H), 5.17 - 5.34 (m, IH), 5.06 (s, 2 H), 3.52 - 3.72 (m, 4 H), 2.79 (s, 2 H), 2.42 - 2.48 (m, 1 H), 1.38 - 1.49 (m, 4 H), 1.35 (t, J=6.74 Hz, 6 H), 1.04 (d, J=7.04 Hz, 3 H).
[0172]Korak 5. l-Izopropil-6-metil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže..
[0173]Jedinjenje iz naslova se dobija iz benzil 1 -izopropil-6-metil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-karboksilata na analogan način kao što je prikazano za Intermedijer 10, Korak 6.
Intermedijer 15
[0174]l-izopropil-6,6-dimetil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0175]Korak 1. Benzil l-izopropil-6,6-dimetil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro [indazol-5,4'-piperidin]-!'-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0176]Rastvor benzil l-izopropil-6-metil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilata (84 mg, 0.21 mmol), opisan kod dobijanja Intermedijera 14, u 1 mL tetrahidrofurana se ohladi do -70 °C i zatim se tretira sa litijum bis(trimetilsilil)amidom (0.318 mL, 0.318 mmol) u obliku 1.0 M rastvora u tetradhidrofuranu u trajanju od deset minuta. Zatim se u reakcionu smešu doda l,3-Dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(li<:>f)-pirimidon (0.2 mL). Nastavi se sa mešanjem na -70 °C u trajanju od dest minuta, zatim se doda jodmetan (152 mg, 1.06 mmol). Smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature i tako drži još četiri sata. U reakcionu smešu se doda zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (1 mL), smeša se zatim podeli između vode (2 mL) i etil acetata (10 mL). Slojevi se zatim razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (5 mL). Organski spojevi se spoje, suši se preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje kako bi se dobilo bistro žuto ulje. Ulje se prečišćava hromatografijom na silika gelu uz upotrebu 10-40% etil acetata u heptanu kao eluentom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bistog ulja (58 mg, 67%): +ESI MS (M+H) 410.3; 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8ppm 7.28 - 7.44 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.40 (m, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.85 - 4.24 (m, 2 H), 2.86 - 3.11 (m, 2 H), 1.58 - 1.79 (m, 2 H), 1.56 (s, 2 H), 1.46 (d, J=6.64 Hz, 6 H), 1.19-1.40(m,2H),1.15(s,6H).
[0177]Korak 2. l-Izopropil-6,6-dimetil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0178]Jedinjenje iz naslova se dobija iz benzil l-izopropil-6,6-dimetil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidrospiro [indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilata na analogan način onome koji je opisan za Intermedijer 10, Korak 6.
Intermedijer16
[0179]3-bromo-l-terc-butil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0180]Korak 1. terc-Butil l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0181]HidrohloridNA so IntermedijerA 10 (1040 mg, 3.492 mmol), di-terc-butil dikarbonat (800 mg, 3.67 mmol) i trietilamin (730 mg, 7.2 mmol) se iskombinuju u dihlorometanu (30 mL). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 sati. U reakcionu smešu se doda dihlorometan (20 mL). Reakciona smeša se ispere sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (5 mL), vodom (5 mL), i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (5 mL). Organska faza se osuši preko magnezijum sulfata i koncentruje da bi se dobio terc-butil l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (1262 mg, 100 %):-APCI MS (M-H) 360.3;<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.30 (s, 1 H), 3.29 - 3.56 (m, 4 H), 2.77 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 1.67 (s, 9 H), 1.48 - 1.56 (m, 4 H), 1.46 (s, 9
H).
[0182]Korak 2. terc-Butil 3-bromo-l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-karboksilat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0183]terc-Butil l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-karboksilat (1090 mg, 3.015 mmol) i natrijum acetat (1050 mg, 12.80 mmol) se kombinuju u etanolu (40 mL) i vodi (10 mL). U ovaj rastvor se doda brom (1870 mg, 11.7 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u trajanju od 4 sata. U reakcionu smešu se doda etanol (40 mL). Reakciona smeša se meša još 16 sati. Reakcioni rastvor se prespe u vodu (20 mL) i ekstrahuje dva puta sa etil acetatom (75 mL svaki). Spojeni organski ekstrakti se isperu dva puta sa vodenim zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (25 mL each) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organska faza se osuši preko magnezijum sulfata i koncentruje do krajnje zapremine od 20 mL da bi se dobio precipitat. Smeša se filtrira i čvrsta supstanca se sakupi kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku čvrste supstance (679 mg, 51 %): +APCI MS (M+H-Boc) 342.1;<!>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 3.28 - 3.60 (m, 4 H), 2.66 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 1.65 (s, 9 H), 1.48 - 1.55 (m, 4H), 1.46 (s, 9H).
[0184]Korak 3. 3-Bromo-l-terc-butil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(l H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0185]terc-Butil 3-bromo-l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-karboksilat (670 mg, 1.52 mmol) i 4 M hlorovodonik u dioksanu (8 mL) se kombinuju i mešaju u trajanju od 2.5 sata. U reakcionu smešu se doda dietil etar (20 mL). Dobijeni precipitat se filtrira i dobijena čvrsta supstanca se sakupi kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (573 mg, 97%): +APCI MS (M+H) 342.1; 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 3.24 (t,J=5.96Hz, 4 H), 2.80 (s, 2 H), 2.74 (s, 2 H), 1.71 - 1.92 (m, 4 H), 1.65 (s, 9 H).Intermedijer17
[0186]r-Izopropil-rH-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0187]Korak 1. l-(4-Hidroksi-l-(4-metoksibenzil)-l H-pirazol-3-il)etanon, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0188]U promešani rastvor (4-metoksibenzil)hidrazin hidrohlorida (13.5 g, 71.5 mmol) u vodi (400 mL) doda se rastvor piruvaldehida (5.2 g, 71.5 mmol) i vodi (200 mL) tokom perioda od 10 minuta. Nakon dodatnih 50 min, reakciona smeša se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 300 mL), spojeni ekstrakti se suše preko natrijum sulfata, koncentruje u vakuumu i ostatak se koristi takav kakav je bez dodatnog prečišćavanja u sledećoj transformaciji.
[0189]Promešani rastvor proizvoda iz prethodne reakcije (12.3 g, 59.8 mmol) i glioksala (43 g, 299 mmol) u metanol (34 mL)/voda (300 mL) zagreva se na 100 °C u trajanju od 5 h. Reakciona smeša se ohladi, razblaži sa etil acetatom, organska faza se osuši preko natrijum sulfata i koncentruje u vakuumu. Prečišćavanje ostatka se odvija na Combiflash® jedinici (300 g kolona, gradijent 10-35% etil acetatheptani) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.04 g). 'H NMR (400 MHz, CDC13) 5 ppm 8.05 (s, 1 H) 7.18 (m, J=8.79 Hz, 2 H), 6.93 (s, 1 H), 6.87 (m, J=8.60 Hz, 2 H), 5.15 (s, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 2.55 (s, 3 H); m/z (M+l) = 247.0.
[0190]Korak 2. l-Benzil-2'-(4-metoksibenzil)-2'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0191]U suspendovani l-(4-hidroksi-l-(4-metoksibenzil)-l-H-pirazol-3-il)etanon (350 mg, 1.42 mmol) u 10 mL metanola, doda se N-benzil-4-piperidon (0.25 mL, 1.42 mmol) i pirolidin (0.036 mL, 0.3 eq). Smeša se zatim zagreva na refluksu u trajanju od 18 h. Reakciona smeša se zatim ohladi do sobne temperature i metanol se ukloni pod smanjenim pritiskom. Rezultujuće oranž ulje se razdeli između 50 mL etil acetata i 50 mL vode. Vodena faza se ekstrahuje sa dodatnih 50 mL etil acetata. Organske faze se spoje i osuše preko narijum sulfata, filtrira i koncentruje. Dobijeno ulje se prečisti fleš hromatografijom (50-100% etil acetat/heptan gradijent, 25 g silika gel) da bi se dobilo 428 mg (72%) l-benzil-2'-(4-metoksibenzil)-2'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]- 7'(6'H)-ona u obliku bledo žute čvrste supstance.<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 8 ppm 7.25 - 7.37 (m, 6 H), 6.95 (s, 1 H), 6.81 - 6.92 (m, 2 H), 5.20 (s, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 3.49 (s, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.57 (d,J=11. 3Hz, 2 H), 2.25 - 2.44 (m, 2 H), 2.02 (d, J=12.5 Hz, 2 H), 1.62 - 1.77 (m, 2 H); m/z (M+l) = 418.5.
[0192]Korak 3. l-Benzil-l'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0193]Rastvoreni l-benzil-2'-(4-metoksibenzil)-2'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on (428 mg,1.02 mmol) u 20 mL 1,2-dihloroetana se tretira sa 10 mL trifluorosirćetnom kiselinom. Dobijena smeša se zagreva u trajanju od 18 h na 90 °C. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature i koncentruje do suva pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak se preuzme u 50 mL zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahuje sa 2 x 50 mL etil acetata. Organske faze se spoje i suše preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod smanjenim pritiskom. Dobijeno ulje se prečisti fleš hromatografijom (25g silika, postepeni gradijent 5 zapremina kolone 50 % etil acetat/ heptan, 10 CV 100 % etil acetat) kako bi se dobilo 278 mg (91%) 1-benzil-l'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-ona u obliku žute čvrste supstance.<*>H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 7.27 (m, 6 H), 3.55 (s, 2 H), 2.64 (m, 4 H), 2.45 (td, J=l 1.7, 2.5 Hz, 2 H), 2.06 (d, J=12.1 Hz, 2 H), 1.74 (m, 2 H); m/z (M+l) = 298.5.
[0194]Korak 4. 1-Benzil-r-izopropil-rH-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0195]l-Benzil-l'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on (204 mg, 0.67 mmol) rastvori se u 10 mL tetrahidrofurana. Dodaju se 2-propanol (0.11 mL, 1.37 mmol) i na polimeru podržan trifenilfosfin (0.5g, 3 mmol/g šarža) praćeno sa dodavanjem DBAD (322 mg, 1.37 mmol) i mešanjem na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 dana. Filtrira trifenil fosfin 1 kolač se ispere sa 100 mL etil acetata. Filtrat se koncentruje i dobija se žuto ulje koje se tretira sa 10 mL 4N HCl/dioksan. Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Isparljivi deo se ukloni pod smanjenim pritiskom. Rezultujući mulj se razdeli između 50 mL zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i 50 mL etil acetata. Organska faza se osuši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod smanjenim pritiskom. Dobijeno ulje se prečisti fleš hromatografijom (30-100% etil acetat/heptan gradijent, 10 g silika gela) kako bi se dobilo 90 mg (35%) 1-benzil-l'-izopropil-l'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-onau obliku bledo žute čvrste supstance.<*>H NMR (400 MHz, CDC13) 5 ppm 7.30 (m, 3 H), 7.24 (m, 2 H), 7.18 (s, 1 H), 5.14 (spt, 1 H), 3.52 (s, 2 H), 2.60 (m, 4 H), 2.41 (td, J=11.6, 2.5 Hz, 2 H), 2.06 (d, J=12.5 Hz, 2 H), 1.71 (m, 2 H), 1.44 (m, 6 H): m/z (M+l) = 340.5.
[0196]Korak 5. r-Izopropil-rH-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0197]1-Benzil-l'-izopropil-1 'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-on (81 mg, 0.22 mmol) se rastvori u 10 mL 1,2-dihloroetana. Doda se 1-hloroetil hloroformijat (60 mL, 0.54 mmol) i smeša se meša 1 h na refluksu i zatim ohladi do sobne temperature. Isparljivi deo se ukloni pod smanjenim pritiskom i ostatak se preuzme u 10 mL metanola i zagreva na refluksu u trajanju od 1 h. Smeša se ohladi do sobne temperature i isparljivi deo se ukloni pod smanjenim pritiskom . Ostatak se preuzme u 50 mL zasićenom vodenom rastvoru natrijum bikarbonata i ekstrahuje 2x30 mL sa etil acetatom. Spojeni organski ekstrakti se suše preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje kako bi se dobilo 46 mg (86%) l'-izopropil-l'H-spiro[piperidin-4,5'-pirano[3,2-c]pirazol]-7'(6'H)-ona u obliku bele čvrste supstance.<*>H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 ppm 7.20 (s, 1 H), 5.13 (spt, 1 H), 2.93 (m, 2 H), 2.80 (dt, J=12.8, 4.0 Hz, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 2.02 (m, 2 H), 1.63 (m, 2 H), 1.40 (m, 6 H); m/z (M+l) = 250.2
Example 1
[0198]4-((4-(l -Terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)fenoksi)metil)benzenska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0199]Korak 1. Metil 4-((4-(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)fenoksi)metil)benzoat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže..
[0200]Rastvor od 4-(4-(metoksikarbonil)benziloksi)benzenske kiseline (25 mg, 0.087 mmol), l-terc-butil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-ona (26 mg, 0.087 mmol), diizopropiletilamina (53 mL, 0.30 mmol), 1,2,3-benzotriazol-l-ol monohidrata (14 mg, 0.087 mmol), 4-dimetilaminopiridina (1.1 mg, 0.01 mmol) i l-etil-3-(3-dimetilaminopropil) Karbodiimida (19 mg, 0.96 mmol) u dihlorometanu (0.2 mL) zagrebva se na 30°C u trajanju od 18 h. Reakciona smeša se razdeli između etil acetat/vodeni rastvor 0.3N hlorovodonične kiseline, organska faza se osuši preko natrijum sulfata, koncentruje u vakuumu i prečisti na preparativnoj HPLC kako bi se dobio metil 4-((4-(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[ indazol-5,4'-piperidin]-l ilkarbonil)fenoksi)metil) benzoat. HPLC kolona: Vodaš Atlantis C18 4.6x50mm, 5um, rastvarač: acetonitrikvoda (0.05% TFA); protok 2 mL/min; gradijent (% organski) start = 5%, kraj = 95%, vreme gradijenta = 4 min, retenciono vreme = 3.68 min;
m/z = 530 (M+l).
[0201]Korak 2. U promešani rastvor metil 4-((4-(l-terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)fenoksi)metil)benzoata (39 mg, 0.07 mmol) u tetrahidrofuranu (0.75 mL) doda se vodeni rastvor litijum hidroksida (0.22 mL, 0.22 mmol). Nakon 18 hr, dodaju se 0.3 mL 1 N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline, i 0.2 mL zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida. Rezultujuća smeša se ekstrahuje sa 2-metiltetrahidrofuranom (3x4 mL), spojene organske faze se suše preko natrijum sulfata i koncentruje u vakuumu kako bi se dobila guma (46 mg). Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLC dobija se jedinjenje iz naslova (26 mg). HPLC kolona: Vodaš Atlantis C18 4.6x50mm, 5um, rastvarač: acetonitrikvoda (0.05% TFA); protok 2 mL/min; gradijent (% organski) start = 5%, kraj = 95%, vreme gradijenta = 4 min, retenciono vreme = 3.19 min;
m/z = 516 (M+l).
Example 2
[0202]3-(4-(l-lsopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzenska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0203]Korak 1. Terc-butil 3-(4-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzoat, prikazan niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0204]Rastvor od 2-(4-(terc-butoksikarbonil)fenil)-6-metoksiizonikotinske kiseline (500 mg, 1.52 mmol) i 1,1-karbonildiimidazola (271 mg, 1.67 mmol) u tetrahidrofuranu (30 mL) meša se na refluksu u trajanju od 1 hr. Nakon hlađenja na sobnoj temperaturi dodaju se postepeno l-izopropil-4,6-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(lH)-on (539 mg, 1.68 mmol) i trietilamin (0.32 mL, 2.28 mmol) i rezultujuća mešavina se zagreva na temperaturi refluksa u trajanju od 1 hr. Nakon hlađenja, reakciona smeša se razblaži u etil acetatu, ispere sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline, zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osuši preko natrijum sulfata kako bi se dobio terc-butil 3-(4-(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzoat (850 mg) u obliku bele pene. Ovaj materijal se koristi u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.
'H NMR (400 MHz, CDC13) 5 ppm 8.60 (t, J=1.66 Hz, 1 H), 8.20 (dt, J=8.05, 1.44 Hz, 1 H), 8.01 (dt, J=7.80, 1.37 Hz, 1 H), 7.50 (t, J=7.80 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.33 (d, J=0.98 Hz, 1 H), 6.64 (d, 1 H), 5.35 (spt, J=6.44 Hz, 1 H), 4.04 (s, 3 H), 3.71 - 3.84 (m, 2 H), 3.36 - 3.42 (m, 2 H), 2.79 (d, J=2.34 Hz, 2 H), 2.58 (s, 2 H), 1.66 - 1.72 (m, 2 H), 1.61 (s, 9 H), 1.56 (s, 2 H), 1.40 - 1.48 (m, 6 H); m/z (M+l) = 559.2.
[0205]Korak 2. Rastvor terc-butil 3-(4-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzoat (850 mg, 1.52 mmol) u dihlorometanu (40 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (13 mL) meša se u trajanju od 18 sati. Rastvarači se uklone pod vakuumom i ostatak se prečisti fleš hromatografijom (40 g silika gel kolona, eluiranje sa gradijentom od 20-100% etil acetatheptani (0.5% sirćetna kiselina) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (568 mg).<*>H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 8.72 (t, J=1.66 Hz, 1 H), 8.31 (dt, J=8.15, 1.39 Hz, 1 H), 8.06 (dt, J=7.80, 1.27 Hz, 1 H), 7.57 (t, J=7.80 Hz, 1 H), 7.48 (d, J=0.98 Hz, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 6.74 (d, 1 H), 5.36 (spt, J=6.76 Hz, 1 H), 4.05 (s, 3 H), 3.82 - 3.91 (m, 1 H), 3.65 - 3.74 (m, 1 H), 3.44 (t, J=5.76 Hz, 2 H), 3.24 (s, 0H), 2.87 (d, J=1.37 Hz, 2 H), 2.63 (d, J=2.93 Hz, 2 H), 1.63
- 1.71 (m, 2 H), 1.52 - 1.60 (m, 2 H), 1.41 (d, J=6.24 Hz, 3H), 1.38 (d, J=6.24 Hz, 3 H); m/z (M+l) = 503.2
Example 3
[0206]3-(4-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)-6-okso-l,6-dihidropiridin-2-il)benzenska kiselina, prikazana niže, dobija se kao što je opisano niže.
[0207]Smeša od 3-(4-(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-l'-ilkarbonil)-6-metoksipiridin-2-il)benzenske kiseline (30 mg, 0.06 mmol), kalijum jodida (30 mg, 0.18 mmol) u sirćetnoj kiselini (1 mL) meša se na 120°C u tarjanju od 7 hr. Reakciona
FARMAKOLOŠKI PODACI
Biološki protokoli
[0209JKorisnost jedinjenja iz ovog pronalaska, u lečenju bolesti (kao što je ovde detaljno opisano) kod životinja, posebno sisara (npr., ljudi) može se prikazati njihovom aktivnošću u uobičajenim probama poznatim prosečno obučenim ljudima iz struke, uključujućiin vitroiin vivoprobe opisane niže. Ove probe takođe obezbeđuju sredstva pomoću kojih se aktivnost jedinjenja prema pronalasku može uporediti sa aktivnošću drugih poznatih jedinjenja.
Direktna inhibicija aktivnosti ACC1 i ACC2
[0210]ACC inhibitorska aktivnost jedinjenja prema pronalasku je demonstrirana metodama baziranim standardnim procedurama. Na primer direktna inhibicija ACC aktivnosti, za jedinjenje Formule (1) je određena korišćenjem preparata rekombinantne humane ACC1 (rhACCl) i rekombinantne humane ACC2 (rhACC2). Reprezentativne sekvence rekombinantne humane ACC1 i ACC2 koje se mogu koristiti u probama date su u Slici 1 (SEQ ID NO. 1) i Slici 2 (SEQ. ID NO. 2), redom.
[1] Priprema rhACCl. Dva litra SF9 ćelija, inficiranih sa rekombinantnim baculovirusom koji sadrži u punoj dužini humani ACC1 cDNA, suspenduje se na ledu- ohlaženom puferom za liziranje (25 mM Tris, pH 7.5; 150 mM NaCl; 10% glicerol; 5 mM imidazol (EMD Bioscience; Gibbstown, NJ); 2mM TCEP (BioVectra; Charlottetovra, Canada); Benzonaza nukleaza (10000U/100 g ćelijska pasta; Novagen; Madizon, WI); EDTA-slobodna proteaza inhibitorski koktel (1 tab/50 mL; Roche Diagnostics; Mannheim, Germanv). Ćelije se liziraju u 3 ciklusa smrzavanja-odmrzavanja i centrifugira se na 40,000 X g u trajanju od 40 minuta (4 °C). Supernatant se direktno prespe u HisTrap FF čvrstu kolonu (GE Healthcare; Piscataway, NJ) i elura sa imidazol gradijentom do 0.5 M za 20 zapremina kolone (CV). Frakcije koje sadrže -ACC1 se objedine i razblaže 1:5 sa 25 mM Tris, pH 7.5,2mM TCEP, 10% glicerolom i direktno se prespu na CaptoQ (GE Healthcare) kolonu i eluiraju sa NaCl gradijentom do 1 M tokom 20 CV-a. Fosfatne grupe se uklone iz prečišćene ACC1 inkubacijom sa lambda fosfatazom (100U/10 mM ciljani protein; New England Biolabs; Beverlv, MA) u trajanju od 14 sati na 4 °C; okadaik kiselina se doda (1 mM krajnja koncentracija; Roche Diagnostics) kako bi se inhibirala fosfataza. Prečišćena ACC1 se zameni u 25 mM Tris, pH 7.5, 2 mM TCEP, 10% glicerol, 0.5 M NaCl u 6 časovnoj dijalizi na 4 °C. Pripreme se alikvoti i zamrznu na -80 °C.
[2] Merenje rhACCl inhibicije. hACCl je postavljen na Costar #3676 (Costar, Cambridge, MA) 384-udubljenja pločica pomoću Transcreener ADP detection FP assay kit (Bellbrook Labs, Madizon, Wisconsin) uz upotrebu uslova po preporuci proizvođača za 50 mM ATP reakciju. Krajnji uslovi za probu bili su 50 mM HEPES, pH 7.2, 10 mM MgC12, 7.5 mM trikalijum citrat, 2 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 30 mM acetil-CoA, 50 mM ATP, i 10 mM KHC03. Tipično, 10 ml reakcione smeše je držano 120 min na 25 °C, i 10 ml Transcreener stop i direktni pufer su dodavani i kombinacija inkubirana na sobnoj temperaturi još 1 sat. Podaci su sakupljani na Envision Fluorescence čitaču (Perkinelmer) sa ekscitacijom od 620 Cy5 FP general dual mirror, 620 ekscitacijom Cy5 FP filter, 688 emisionim (S) i 688 (P) emisionim filterom.
[3] Priprema rhACC2. Humana ACC2 inhibicija, merana je korišćenjem prečišćene rekombinantne humane ACC2 (hrACC2). Ukratko, u punoj dužini Cytomax klon ACC2 nabavljen kod Cambridge Bioscience Limited je podeljen i subkloniran u PCDNA5 FRT TO-TOPO (Invitrogen, Carlsbad, CA). ACC2 je ubačen u CHO ćelije pomoću tetraciklin indukcije i sakupljen u 5 litara DMEM/F12 sa glutaminom, biotinom, higromicinom i blasticidinom sal mg/mL tetraciklina (Invitrogen, Carlsbad, CA). Kondicionirani medijum koji sadrži ACC2 je zatim primenjen na Softlink Soft Release Avidin kolonu (Promega, Madizon, Wisconsin) i eluiran sa 5 mM biotinom. 4 mg ACC2 je eluirano do koncentracije od 0.05 mg/mL (determinisano sa A280) procenjena čistoća bila je 95% (određeno sa A280). Prečišćeni ACC2 je dializovan u 50 mM Tris, 200 mM NaCl, 4 mM DTT, 2 mM EDTA, i 5% glicerolu. Sakupljeni protein je zamrznut i čuvan na -80 °C, bez gubljenja aktivnosti nakon odmrzavanja. Za merenje ACC2 aktivnosti i određivanje ACC2 inhibicije, testirano jedinjenja je rastvoreno u DMSO i dodato u rhACC2 enzim kao 5x porcija sa finalnom DMSO koncentracijom od 1%.
[4] Merenje humane ACC2 inhibicije. hACC2 je isproban u Costar #3676 (Costar, Cambridge, MA) 384-udupljenja pločici uz upotrebu Transcreener ADP detection FP assay kit (Bellbrook Labs, Madizon,Wisconsin) uz upotrebu uslova preporučenih od strane proizvođača za 50 uM ATP reakciju. Krajnji uslovi probe bili su 50 mM HEPES, pH 7.2, 5 mM MgC12, 5 mM trikalijum citrat, 2 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 30 mM acetil-CoA, 50 mM ATP, i 8 mM KHC03. Obično , 10 ml reakcione smeše je držano 50 min na 25°C, i 10 ml Transcreener stop i detekcionog pufera je dodato i kombinacija je inkubirana na sobnoj temperaturi još lsat. Podaci su sakupljani na Envision Fluorescence čitaču (Perkinelmer) upotrebom 620 ekscitacije Cy5 FP general dual mirror, 620 ekscitacije Cy5 FP filter, 688 emisionog S) i 688 (P) emisionog filtera.
[0211]Rezultati upotrebe rekombinantni hACCl i rekombinantni hACC2 Transcreener probe opisane gore, sumirani su u tabeli niže za jedinjenja Formule (I) data u Primerima iznad. Svi primeri iz obe probe rađeni su po najmanje tri puta.
Akutniin vivotest ACC inhibicije na eksperimentalnim životinjama
[0212]ACC inhibitorska aktivnost jedinjenja prema ovom pronalasku može se potvrditiin vivoevaluacijom njihove sposobnosti da smanje novo malonil-CoA u ketri i mišićnom tkivu tretiranih životinja.
[0213]Merenje inhibicije proizvodnje malonil-CoA u eksperimentalnim životinjama. U ovom metodu, muški Sprague-Dawley pacovi, održavani na standardnoj ishrani i vodiad libitum(225-275g), su razdeljeni pre eksperimenta. Životinje su ili izgladnjivane ili gojene tokom 18 sati pre početka eksperimenta. Dva sata u krug životinjama je oralno davana zapremina od 5 mL/kg, (0.5% metil celulaoza; nosač) ili odgovarajuće jedinjenje (pripremljeno na nosaču). Kontrole su vršene kod izgladnelih životinja koje su dobijale samo nosač kako bi se odredila osnovna količina u tkivima malonil-CoA dok su životinje koje su se gojile kontrolisale kako bi se odredio efekat gojenja na nivo malonil-CoA. Jedan sat nakon davanja jedinjenja, životinje su ugušene sa CO2i tkiva su uklonjena. Specifično, sakupljena je krv kardijalnom punktacijom i stavljena u BD Microtainer epruvete koje sadrže EDTA
(BD Biosciences, NJ), promešano, i stavljeno na led. Plazma je korišćena kako bi se odredila izloženost leku. Jetra i kvadriceps su uklonjeni, odmah zamrznuti-stegnuti, umotani u foliju i čuvani u tečnom azotu.
[0214]Tkiva su usitnjena pod tečnim azotom kako bi se obezbedila uniformnost uzorkovanja. Malonil-CoA je ekstrahovan iz tkiva (150-200 mg) sa 5 zapremina 10% trikarboksilne kiseline u Lysing Matrix A (MP Biomedicals, PN 6910) in a FastPrep FP120 (Thermo Scientific, brzina=5.5; za 45 sekunde). Supematant koji sadrži malonil-CoA je uklonjen iz ćelijskog taloga nakon centrifugiranja na 15000 xgu trajanju od 30 minuta (Eppendorf Centrifuge 5402). Uzorci su zaleđeni na -80C do završetka analize.
[0215]Analiza malonil CoA nivoa u jetri i mišićnom tkivu može se izvesti prateći sledeću metodologiju.
[0216]Prema metodi, koriste se sledeći materijali: Malonil-CoA tetralitijum so i malonil-13C3-CoA trilitijum so koje su nabavljene kod Izotec (Miamisburg, OH, USA), natrijum perhlorat (Sigma, cat no. 410241), trihlorosirćetna kiselina (ACROS, cat no. 42145), fosforna kiselina (J.T. Baker, cat no. 0260-01), amonijum formijat (Fluka, cat no. 17843), metanol (HPLC grade, J.T. Baker, cat no. 9093-33), i voda (HPLC grade, J.T. Baker, 4218-03) su korišćeni kako bi se napravile neophodne mobilne faze. Strata-X na linijsko čvrstoj faznim ekstrakcionim kolonama, 25 mm, 20 mm x 2.0 mm I.D (cat no. 00M-S033-B0-CB) su nabavljene kod Phenomenex (Torrance, CA, USA). SunFire C18 kolone reverzno fazne, 3.5 mm, 100 mm x 3.0 mm I.D. (cat no.186002543) su nabavljene kod Vodaš Corporation (Milford, MA, USA).
[0217]Ovaj metod se može izvesti korišćenjem sledeće opreme. Dvo-dimenziona hromatografija upotrebom Agilent 1100 binarne pumpe, Agilent 1100 kvaternerne pumpe i dva Valco Cheminert 6-port dvo poziciona ventila. Uzorci se unose pomoću LEAP HTC
PAL auto sampler-a sa Peltier cevi za hlađenje koje se održavaju na 10°C i 20 mL petljom za uzorkovanje. Rastvori za ispiranje igle auto semplera su 10% trihlorosirćetna kiselina u vodi (w/v) za Wash 1 i 90:10 metanokvoda za Wash 2. Analitička kolona (Sunfire) se održava na 35°C uz upotrebu MicroTech Scientific Micro-LC Column rerne. Eluent se analizira na ABI Sciex API3000 triple kvadrupol masenom spektrometru sa Turbo Ion Spray-om.
[0218]Dvo-dimenzionalna hromatografija se obavlja paralelno upotrebom određenih gradijent eluirajućih uslova za online u čvrstoj fazi ekstrakciju i hromatografiju u reverznoj-fazi. Opšti dizajn metode je takav daje prva dimenzija korišćena za čišćenje uzorka i držanje analita od interesa, praćeno sa brzim kuplovanjem obe dimenzije za eluiranje iz prve dimenzije u drugu dimenziju. Dimenzije su potom dekuplovane omogućavajući da gradijent eluiranja analita iz druge dimenzije iskoristi za kvantifikovanje dok se simultano priprema prva dimenzija za sledeći uzorak u nizu. Kada su obe dimenzije na kratko kuplovane zajedno, protok mobilne faze u prvoj dimenziji je obrnut za eluiranje eluenta u drugu dimenziju, omogućavajući optimalnu širinu pika, oblik pika i vreme eluiranja.
[0219]Prva dimenzija HPLC sistema koristila je Phenomenex strata-X on-line solid phase ekstrakcionu kolonu i mobilna faza se sastojala od 100 mM natrijum perhlorata / 0.1% (v/v) fosforne kiseline za rastvarač A i metanola za rastvarač B.
[0220]Druga dimenzija HPLC sistema koristila je Vodaš SunFire C18 reversed-phase kolonu i mobilna faza se sastojala od 100 mM amonijum formijaata za rastvarač A i metanola za rastvarač B. Početni uslovi gradijenta su održavani u trajanju od 2 minuta i tokom ovog vremena analit je premešten u analitičku kolonu. Važno je da se početni uslovi takvi da imaju jačinu da da eluiraju analit iz on-line SPE kolone dok je zadržavaju na analitičkoj. Nakon toga, gradijent se linearno penje do 74.5% A za 4.5 minuta pre pranja i koraka reekvilibracije.
[0221]Masena spektrometrija kuplovana sa HPLC može biti visoko selektivna i senzibilna metoda za kvantitativno merenje analita u kompleksnom matriksu ali je i dalje podložna interferencijama i supresiji. Kuplovanjem dvo-dimenzionalne HPLC sa masenim spektrometrom, ove interference se značajno smanjuju. Dodatno, upotrebom Multiple Reaction Monitoring (MRM) komponente na triple kuadripol masenom spektrometru, odnos signal-šum je znatno poboljšan.
[0222]ZA ovaj eksperiment, maseni spektrometar je radio u pozitivnom jonskom modu sa TurbolonSpray voltažom od 2250V. Gas nebulizatora je zagrevan do 450°C. Declustering Potential (DP), Focusing Potential (FP), i CollisionEnergv (CE) podešeni su na 60, 340, i 42 V, redom. Kvadrupol 1 (Ql) rezolucija je podešena na jedan dok je za Quadrupole 3 (Q3) podešena na nisku (low). CAD gas je podešen na 8. MRM tranzicije praćene su za malonil CoA: 854.1 -^347.0 m/z (L. Gao et al. (2007) J. Chromatogr. B 853,303-313,); i za malonil-13C3-CoA: 857.1—>-350.0 m/z sa dwell times od 200 ms. Eluent je dovođen u maseni spectrometer blizu očekivanog vremena eluiranja za analit, drugim rečima preusmeravan je u otpad kako bi se pomoglo očuvanju izvora i poboljšale performanse instrumenta. Dobijeni hromatogarmi su integrisani upotrebom Analvst softvvare (Applied Biosvstems). Koncentracije malonil CoA u tkivima su računate iz standardne krive dobijene sa 10% rastvorom trihlorosirćetne kiseline i vode.
[0223]Uzorci za standardnu krivu za određivanje malonil-CoA u ekstraktima tkiva, pripremani su u 10% (w/v) trihlorosirćetnoj kiselini (TCA) u rasponu od 0.01 do 1 pmol/mL. Malonil-13C3-CoA (finalna koncentracija od 0.4 pmol/mL) je dodat u svaki standard za pripremu krive kao interni standard.
[0224]Šest intra-test kontrola kvaliteta je pripremljeno; tri iz spojenog ekstrakta dobijenog od izgladnelih životinja i tri od gojenih životinja. Oni su mereni kao nezavisni uzorci spajkovani sa 0, 0.1 ili 0.3 pmol/mL 12C-malonil-CoA kao i sa malonil-13C3-CoA (0.4 pmol/mL). Svaki unutrašnji-test uzorak kontrole kvaliteta sadrtžao je 85% vodenog ekstrakta tkiva sa istom porcijom doprinosa od strane internog standarda (0.4 pmol/mL) i 12C-malonil-CoA. U svakoj seriji merenja uključene su i kontrolne probe, koje se sastoje od uzorka kvadricepsa jedne izgladnele ijedne ugojene životinje i/ili jetre. Sve ovakve kontrole su spajkovane sa malonil-13C3-CoA (0.4 pmol/mL).

Claims (16)

  1. I. Jedinjenje Formule (I)
    Hi njegova farmaceutski prihvatljiva so; gde
    R<1>je (Ci-Cs)alkil, (C3-C7)cikloalkiI, tetrahidrofuranil ili oksetanil,. gde navedeni (C]-C6>alkil je opcionalno supstituisan sa 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana od (Ci-C^alkoksi, hidroksi, fluoro, fenil, leirahidrofuranil ili oksetanil;
    R2 je vodonik, halo, (Ci-C3)alkil, ili cijano;
    R<3>je svaki nezavisno vodonik ili (Ci-C3)alkil;
    L je direktna veza ili (Cl-C6)alkilcn gde jedan od ugljenika iz (Ci-Cs)alkilen je opcionalno supstituisan sa -C(O)-, -C(0)NH-, -NHC(O)-, -O-, -S-, NH ili N{C,-C3)alkil; 7. je CH2 ili O;
    A1 i A<2>svaki nezavisno su (CVCio)aril, 5 do 12 člani heteroaril ili 8 do 12 člani fuzionisani heterocikloaril; gde navedeni (Cć-C]o)aril, 5 do 12 člani heteroaril ili 8 do 12 člani fuzionisani heterocikloaril su svaki opcionalno supstituisani sa jednim ili tri supstituenta nezavisno odabrana od (C]-C3>alkil, (Ci-C3)alkoksi, halo, amino, (C[-C3)alkilamino, di(Ct-C3>alkilamino, hidroksi, cijano i amido gde aJkilni deo od (Ci-Cj)alkil, (Ci-C3)alkoksi, (Cj-C3)alkilamino i di(C|-C3)alkilamino su opcionalno supstituisani sa jednim do pet fluoro atoma; i gde jedan od A<1>ili A2 je supstituisan sa CO2R<4>, (C5-CsDCChR'', tetrazolil ili (Ci-C6)tetrazolil; i
    fč jc (C,-C8>alkil, (Ca-C^cikloalkil ili (Ci-C6)alkil-(C3-Cs)cikloalkil;
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje premazahtevu 1 gde R<1>je (Ci-C6)alkil, (C3-C7)cikloalkil, ili tetrahidrofuranil:
    R<2>je vodonik ili metil; svaki R<3>je vodonik; i L jc direktna ve^-a ili O; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 2 gde Rl je (C2-Cn)alkil; A<1>i A<2>su svaki nezavisno fenil, pirazolil, imidazolil, triazolil, piridinil, pirimidinil, indolil, benzopirazinil, benzoimidazolil,
    benzoimidazolonil, pirolopiridinil, pirolopirimidinil, pirazolopiridinil, pirazolopirimidinil, indazolil, indolinonii, naftiridinil, hinolinil, hinolinonil, dihiđrohinolinonil, okso-dihidrohmolinonil, izohinolinil. izohinolinonil, đihidrotzohinonil ili okso-hinoml, gđe svaki A<1>i A1 su opcionalno supstituisani sa jednim do supstituenta nezavisno odabrana od fluoro. hloro, metil, metoksi, amino, metilamino, dimetilamino, amido ili cijano; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 3 gde R<1>je izopropil ili t-butil; i Rz je vodonik; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 4 gde A<1>jc fenil, piridinil, indazolil, indolil, benzoimidazolil, pirolopiridinil ili pirolopirimidinil; svaki opcionalno supstituisan sa jednim metil, metoksi, metilamino ili dimetilamino; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 4 ili 5 gde A2 je fenil supstituisan sa COiH ili tetrazolil; i L je direktna veza; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 6 gde A<1>je fenil, indolil ili benzoimidazolil opcionalno supstituisan sa metil, ili piridinil opcionalno supstituisan sa metilamino ili dimetilamino; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje odabrano od: 4-((4-( 1 -Terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidix5spiro[indazoi-554*-pipcridin)-1'-ilkarboniI)fenoksi)mctil)bcnzcnska kiselina;
    3-(4-(l-IzopropiU7-okso-l,4s6,7Hetrahidix)spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-ilkajbonil)-6-metoksipindin-2-il)bcnzenska kiselina; 3-(4-( 1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tctrahidrospiro[mđax.ol-5)4? -piperidin]-1 ilkarbonil)-6-okso-1,6-dihidropiridin-2-il)benzeuska kiselina;
    3-{5-[(l-tcrc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-lli-spiro[indazol-5,4,-piperidin]-r-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-2-i 1}benzenska kiselina; 3- {5-[( 1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[ indazol-5,4 * -piperidinj-1' - il)karbonilj-6-(metilamino)piridin-2-il} benzenska kiselina; 4<*->[(] -terc-butil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-rH-spirofindazol-5,4'-piperidin]-1 i 1 )karbonil]bifeni 1-3-karboksilna kiselina; 4(1 - izopropi 1- 7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1' H-spiro [indazol-5,4 '-pipeird in] -1' - iOkaibonii]bifeni 1-3-karboksilna kiselina; 4- {5-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6J7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5.4>-piperidin]-l il)karbonil]-6-(melilamino)piridin-2-il} benzenska kiselina; 4- { 4-[( 1 - izopropi l-7-ok$o-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiroli ndazol-5,4' -piperid in] -1+ - iljkarbonil]-6-metoksipiridin-2-i 1}benzenska kiselina;3 - { 4-[( 1 - izopropi 1-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro -1 * H-spiro [indazo 1-5,4'-pi peridin] -1il)karbonilJ-ć-metoksipiridin-2-il}benzenska kiselina;
    4-{4^(l-terc-butil-7-okso-lA6,7-tetraliidro-lM-I-spiro(mdazol-5,4'-piperidin]-l'-il)karbonil]-6-metoksipiridin-2-il}benzenska kiselina; 3-{4-[(l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4,-piperidin]-r-il)karbonil j-ć-metoksipiridin-2-il} benzenska kiselina; 4- {5-[( 1 -terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil] -6-(metilamino)piridiri-2-il} benzenska kiselina; 4- {5-[( l-terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4 '-piperidin]-1 '-il)karbonil]-6-(etilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {6-(etilammo)-5-[(l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro [indazol-5,4 '-piperidin] - 1 '-iI)karboniI]piridin-2-il} benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropiI-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-indol-4-il} benzenska kiselina; 4- {2-[(l-izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1' H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karboniI]-l H-indol-4-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-inđol-4-il} benzenska kiselina; 4- {2-[( 1 -terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-l H-indol-4-il}benzenska kiselina; 3- {5-[(l -terc-butil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-6-(etilamino)pyridin-2-il}benzenska kiselina; 3-{6-(etilamino)-5-[(l-izopropil-7-okso-^ 1 '-iI)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina, 3- [(l -terc-butil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l iI)karbonil]-5-(1,3-oksazol-2-il)benzenska kiselina; 4- ( {4-[(l -terc-butil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]fenoksi}metil)benzenska kiselina; 3-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4' -piperidin]-1 '-il)karbonil]-5-(1,3-oksazol-2-il)benzenska kiselina; 3- {6-(izopropilamino)-5-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-r<H>-s<p>iro[indazo 1-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]piridin-2-il} benzenska kiselina; 4- {5-[( l-terc-butil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-6-(izopropilamino)piridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {6-(izopropilamino)-5-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-! '-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {6-[(l -izopropiI-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-indazol-4-il}benzenska kiselina; 3- {4-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-6-okso-l,6-dihidropiridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {4-[(l -izopropiI-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-6-okso-l ,6-dihidropiridin-2-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l il)karbonil]-l H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il}benzenska kiselina; 4- {2-[(l-izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[inđazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karboniI]-l H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il} benzenska kiselina; 4-{2-[(l-izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-l H-pirolo[3,2-c]piridin-4-il}benzenska kiselina; (5- {2-[( l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-l 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-l H-indol-4-il}-2-metoksifenil)sirćetna kiselina; 3- {6-(dimetilamino)-4-[( 1 -izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 4- {6-(diraetilamino)-4-[( 1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]piridin-2-il} benzenska kiselina; 4- {6-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il}benzenska kiselina; 3- {2-[( 1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[inđazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karboniI]-l H-pirolo[3,2-c]piridin-4-il} benzenska kiselina; 3- {6-[( 1 -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1' H-spiro[indazol-5,4 '-piperidin]-1' - iI)karbonil]-7H-pirolo[2,3-d]piirmidin-4-il} benzenska kiselina; 4- {6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-l H-indol-4-il}benzenska kiselina; 4- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karboniI]-l H-pirolo[2,3-c]piridin-4-il} benzenska kiselina; 3-{6-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-l H-indol-4-il}benzenska kiselina; 3- {2-[( 1 -izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro- l'H-spiro[indazol-5,4 '-piperidin]-1'-il)karbonil]-l H-pirolo[2,3-c]piirdin-4-il} benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-l 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-indol-6-il} benzenska kiselina; 4- {5-[( 1 -izopropil-7-okso-l A6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-pipeirdin]-l '-iI)karbonil]-6-[(2,2,2-trifluoroetil)amino]piridin-2-il^ kiselina; 3- {5-[(l-izopropii-7-okso-l,4,6J-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-(metilamino)piridin-3-il}benzenska kiselina; 4- {5-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-6-(metilamino)piirdin-3-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-I H-benzimidazol-4-il} benzenska kiselina; 4- {2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperiđin]-r-il)karbonil]-l H-5-il}benzenska kiselina; 3-{2-[(l-izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,<4>'-<p>i<p>eridin]-<r->il)karbonil]-l H-benzimidazol-5-il} benzenska kiselina; 3- (6-(l -izopropil-7-okso-l,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 ilkarbonil)-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; 4- (6-(l -izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 ilkarbonil)-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-4-il)benzenska kiselina; l-izopropil-r-{[3'-(lH-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]karbonil}-l,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(6H)-on; i 1 -terc-butil-1'- {[3'-(lH-tetrazol-5-yl)bifenil-4-il]karbonil} -1,4-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(6H)-on;
    ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 8 odabrano od 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-benzimidazol-4-il} benzenska kiselina; 4- {6-(dimetilamino)-4-[( l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-l 'H-spiro[indazo 1-5,4'-piperidin]-l ,-il)karbonil]piridin-2-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro- rH-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-l H-indol-4-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-l H-pirolo[2,3-b]piridin-4-yl}benzenska kiselina; 4- {2-[(l-izopropil-7-okso-l ,4,6,7-tetrahidro-l'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-1 '-il)karbonil]-lH-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina; 3- {2-[(l -izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-l '-il)karbonil]-l H-benzimidazol-5-il}benzenska kiselina;
    ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  10. 10. Jedinjenje prema zahtevu 8 koje je 4- {4-[( l-izopropil-7-okso-1,4,6,7-tetrahidro-1 'H-spiro[indazol-5,4'-piperidin]-r-il)karbonil]-6-metoksipiridin-
    2-il}benzenska kiselina; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Farmaceutski oblik koji sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz bilo kog od zahteva od 1 do 10; ili farmaceutski prihvatljivu so ovog jedinjenja i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, razblaživač ili nosač.
  12. 12. Farmaceutski oblik prema zahtevu 11 koji još sadrži dodatno bar jedan anti-dijabetski sgens.
  13. 13. Farmaceutski oblik prema zahtevu 12, gde navedeni anti-dijabetski agens je odabran iz grupe koja s esastoji od metformin, acetoheksamid, hlorpropamid, diabinez, glibenklamid, glipizid, gliburid, glimepirid, gliklazid, glipentid, glikuidon, glizolamid, tolazamid, tolbutamid, tendamistat, trestatin, akarboza, adipozin, kamigliboza, emiglitat, miglitol, vogliboza, pradimicin-Q, salbostatin, balaglitazon, kiglitazon, darglitazon, englitazon izaglitazon, pioglitazon, rosiglitazon, troglitazon, eksendin-3, eksendin-4, troduskvuemin, reservatrol, hirtiosal ekstrakt, sitagliptin, vildagliptin, alogliptin i saksagliptin.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 1 do 10 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutski oblik prema bilo kojem od zahteva 11 do 13 za upotrebu kao lek.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 1 do 10 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u metodi lečenja ili usporavanja progresije ili otpočinjanja dijabetesa Tipa 2 i sa dijabetesom povezanih poremećaja kod životinja.
  16. 16. Farmaceutski oblik prema bilo kojem od zahteva 11 do 13 za upotrebu u metodu lečenja ili usporavanja progresije ili otpočinjanja dijabetesa Tipa 2 i sa dijabetesom povezanih poremećaja kod životinja.
RS20160845A 2010-09-30 2011-09-20 N1-pirazolospiroketon acetil-coa karboksilaza inhibitori RS55224B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US38810210P 2010-09-30 2010-09-30
EP11768163.5A EP2621493B1 (en) 2010-09-30 2011-09-20 N1-PYRAZOLOSPIROKETONE ACETYL-CoA CARBOXYLASE INHIBITORS
PCT/IB2011/054119 WO2012042433A1 (en) 2010-09-30 2011-09-20 N1-PYRAZOLOSPIROKETONE ACETYL-CoA CARBOXYLASE INHIBITORS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55224B1 true RS55224B1 (sr) 2017-02-28

Family

ID=44789556

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160845A RS55224B1 (sr) 2010-09-30 2011-09-20 N1-pirazolospiroketon acetil-coa karboksilaza inhibitori

Country Status (15)

Country Link
US (8) US8859577B2 (sr)
EP (1) EP2621493B1 (sr)
JP (1) JP5824055B2 (sr)
CA (1) CA2811033C (sr)
CY (1) CY1118016T1 (sr)
DK (1) DK2621493T3 (sr)
ES (1) ES2602111T3 (sr)
HR (1) HRP20161178T1 (sr)
HU (1) HUE031616T2 (sr)
LT (1) LT2621493T (sr)
PL (1) PL2621493T3 (sr)
PT (1) PT2621493T (sr)
RS (1) RS55224B1 (sr)
SI (1) SI2621493T1 (sr)
WO (1) WO2012042433A1 (sr)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040198483A1 (en) 2003-04-03 2004-10-07 Amaitis Lee M. System and method for betting on a subset of participants in an event
US9098883B2 (en) 2004-02-03 2015-08-04 Cantor Index, Llc Managing bets that select events and participants
US8636571B2 (en) 2004-02-03 2014-01-28 Cantor Index, Llc System and method for managing select five horseracing bets
WO2009144554A1 (en) 2008-05-28 2009-12-03 Pfizer, Inc. Pyrazolospiroketone acetyl-c0a carboxylase inhibitors
WO2011058474A1 (en) 2009-11-10 2011-05-19 Pfizer Inc. N1-pyrazolospiroketone acetyl-coa carboxylase inhibitors
HRP20161178T1 (hr) 2010-09-30 2016-11-04 Pfizer Inc. N1-PIRAZOLOSPIROKETONSKI INHIBITORI ACETIL-CoA-KARBOKSILAZE
BR112013010310A2 (pt) 2010-10-29 2016-11-29 Pfizer inibidores de acetil-coa carboxilase de lactama n1/n2
MY162167A (en) * 2011-04-22 2017-05-31 Pfizer Substituted acetyl-coa carboxylase inhibitors
WO2013116359A1 (en) 2012-01-30 2013-08-08 Cfph, Llc Event wagering with group and/or in run options
US11055967B2 (en) 2014-03-26 2021-07-06 Cfph, Llc Event wagering with group and/or in run options
US20170178994A1 (en) * 2015-12-21 2017-06-22 Intel Corporation Integrated circuit package support structures
KR102579876B1 (ko) 2016-02-22 2023-09-18 삼성전자주식회사 반도체 패키지
CN110536682B (zh) * 2017-04-18 2023-01-06 基恩菲特公司 依拉非诺或其衍生物与抗nash、抗纤维化或抗胆汁淤积药剂的组合
FI3713942T3 (fi) 2017-11-21 2023-05-04 Pfizer 4-(4-(1-isopropyyli-7-okso-1,4,6,7-tetrahydrospiro[indatsoli-5,4'-piperidiini]-1'-karbonyyli)-6-metoksipyridin-2-yyli)bentsoehapon kiteinen 2-amino-2-(hydroksimetyyli)propaani-1,3-diolisuola
CA3045644C (en) 2018-06-13 2024-01-16 Pfizer Inc. Glp-1 receptor agonists and uses thereof
CR20210110A (es) * 2018-08-31 2021-05-13 Pfizer Combinaciones para tratamiento de ehna/ehgna y enfermedades relacionadas
WO2020234726A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Pfizer Inc. Combinations comprising benzodioxol as glp-1r agonists for use in the treatment of nash/nafld and related diseases
CN110183456A (zh) * 2019-07-11 2019-08-30 河南师范大学 一种2-芳基吲唑琥珀酰亚胺螺环化合物的合成方法
MX2022007105A (es) 2019-12-10 2022-07-11 Pfizer Formas solidas de sal de 1,3-dihidroxi-2-(hidroximetil)propan-2-am ina de acido 2-((4-((s)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-metilbenzo[d][1, 3] dioxol-4-il)piperidin-1-il)metil)-1-(((s)-oxetan-2-il) metil)-1h- benzo[d]imidazol-6-carboxilico.
CA3166630A1 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Berg Llc Polycyclic amides as ube2k modulators for treating cancer
CN119841865A (zh) 2020-02-07 2025-04-18 加舒布鲁姆生物公司 杂环glp-1激动剂
JP2021134211A (ja) 2020-02-24 2021-09-13 ファイザー・インク Ｎａｆｌｄ／ｎａｓｈおよび関連疾患の処置のための組合せ
JP2022058085A (ja) 2020-02-24 2022-04-11 ファイザー・インク ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２阻害剤とアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤との組合せ
EP4125896B1 (en) 2020-03-27 2025-05-07 Pfizer Inc. Treatment of type 2 diabetes with 2-[(4-{6-[(4-cyano-2-fluorobenzyl)oxy]pyridin-2-yl} piperidin-1-yl)methyl]-1-[(2s)-oxetan-2-ylmethyl]-1h-benzimidazole-6-carboxylic acid or a pharmaceutically salt thereof
FI4143183T3 (fi) 2020-04-29 2026-01-07 Gasherbrum Bio Inc Heterosyklisiä glp-1-agonisteja
CN117940422A (zh) 2021-08-31 2024-04-26 辉瑞大药厂 2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟芐基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2s)-氧杂环丁烷-2-基甲基]-1h-苯并咪唑-6-羧酸，1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-胺盐的固体形式
CN119137124A (zh) 2022-03-09 2024-12-13 加舒布鲁姆生物公司 杂环glp-1激动剂
WO2023198140A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Gasherbrum Bio, Inc. Heterocyclic glp-1 agonists
WO2023228023A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Pfizer Inc. Treatment of type 2 diabetes or weight management control with 2-((4-((s)-2-(5-chloropyridin-2-yl)-2-methylbenzo[d][1,3]dioxol-4-yl)piperidin-1-yl)methyl)-1-(((s)-oxetan-2-yl)methyl)-1h-benzo[d]imidazole-6-carboxylic acid or a pharmaceutically salt thereof
AU2023364628A1 (en) 2022-10-18 2025-04-03 Pfizer Inc. Patatin-like phospholipase domain-containing protein 3 (pnpla3) modifiers
JP2026501171A (ja) 2022-12-15 2026-01-14 ガシャーブラム・バイオ・インコーポレイテッド Ｇｌｐ－１アゴニスト活性を有する化合物の塩および固体形態
WO2025099561A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Pfizer Inc. Oral controlled-release matrix formulations of 2-[(4-{6-[(4-cyano-2-fluorobenzyl)oxy]pyridin-2-yl}piperidin-1-yl)methyl]-1-[(2s)-oxetan-2-ylmethyl]-1h-benzimidazole-6-carboxylic acid or a pharmaceutically salt thereof
WO2025224648A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Pfizer Inc. Oral compositions/formulations of 2-({4-[(2s)-2-(4-chloro-2-fluorophenyl)-2-methyl-1,3-benzodioxol-4-yl]piperidin-1-yl}methyl)-1-[(2s)-oxetan-2-ylmethyl]-1h-benzimidazole-6-carboxylic acid or a pharmaceutically salt thereof

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE364374T1 (de) 1997-08-11 2007-07-15 Pfizer Prod Inc Feste pharmazeutische dispersionen mit erhöhter bioverfügbarkeit
IL157253A0 (en) 2001-02-28 2004-02-19 Merck & Co Inc Acylated piperidine derivatives as melanocortin-4 receptor agonists
NZ534582A (en) 2002-02-27 2006-03-31 Pfizer Prod Inc ACC inhibitors
US7105526B2 (en) 2002-06-28 2006-09-12 Banyu Pharmaceuticals Co., Ltd. Benzimidazole derivatives
JPWO2004092179A1 (ja) 2003-04-14 2006-07-06 日本曹達株式会社 スピロ誘導体、製造法および抗酸化薬
JP2005119987A (ja) 2003-10-15 2005-05-12 Ajinomoto Co Inc アシルスルホンアミド誘導体
WO2005113069A2 (en) 2004-05-14 2005-12-01 Research Development Foundation Use of circumin and analogues as inhibitors of acc2
UA84208C2 (en) 2004-05-25 2008-09-25 Пфайзер Продактс Инк. Tetraazabenzo(e)azulene derivatives and analogs thereof
PA8660701A1 (es) 2005-02-04 2006-09-22 Pfizer Prod Inc Agonistas de pyy y sus usos
MX2008000966A (es) 2005-07-19 2008-03-26 Merck & Co Inc Nuevos derivados de espirocromanona.
US20100160255A1 (en) 2005-07-29 2010-06-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Spiro-cyclic compound
DE102006016566B4 (de) 2005-09-22 2008-06-12 Beru Ag Zusammengesetzter Leiter, insbesondere für Glühkerzen für Dieselmotoren
ATE493412T1 (de) 2005-11-18 2011-01-15 Merck Sharp & Dohme Spirohydantoin-aryl-cgrp-rezeptorantagonisten
CN101384568B (zh) 2006-02-15 2012-12-12 雅培制药有限公司 乙酰辅酶a羧化酶(acc)抑制剂及其在糖尿病、肥胖症和代谢综合征中的应用
EA200900613A1 (ru) 2006-11-29 2009-10-30 Пфайзер Продактс Инк. Спирокетоновые ингибиторы ацетил-коа-карбоксилаз
WO2008088692A2 (en) * 2007-01-12 2008-07-24 Merck & Co., Inc. Spirochromanon derivatives
PE20081559A1 (es) 2007-01-12 2008-11-20 Merck & Co Inc DERIVADOS DE ESPIROCROMANONA SUSTITUIDOS COMO INHIBIDORES DE ACETIL CoA CARBOXILASA
EP2123652A1 (en) 2007-02-20 2009-11-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound
EP2195321B1 (en) 2007-04-12 2016-10-19 Pfizer Inc. 3-amido-pyrrolo[3,4-c]pyrazole-5(1h, 4h,6h) carbaldehyde derivatives as inhibitors of protein kinase c
US7981904B2 (en) 2008-03-20 2011-07-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Acetyl CoA carboxylase inhibitors
US20110009443A1 (en) 2008-05-28 2011-01-13 Kevin Daniel Freeman-Cook Pyrazolospiroketone Acetyl-Coa Carboxylase Inhibitors
WO2009144554A1 (en) * 2008-05-28 2009-12-03 Pfizer, Inc. Pyrazolospiroketone acetyl-c0a carboxylase inhibitors
CA2729412A1 (en) 2008-07-04 2010-01-07 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Novel spirochromanone carboxylic acids
US8110570B2 (en) 2008-07-14 2012-02-07 Cropsolution, Inc. Modulators of acetyl-coenzyme A carboxylase and methods of use thereof
EP2499140A1 (en) * 2009-11-10 2012-09-19 Pfizer Inc. N2-pyrazolospiroketone acetyl-coa carboxylase inhibitors
WO2011058474A1 (en) 2009-11-10 2011-05-19 Pfizer Inc. N1-pyrazolospiroketone acetyl-coa carboxylase inhibitors
HRP20161178T1 (hr) 2010-09-30 2016-11-04 Pfizer Inc. N1-PIRAZOLOSPIROKETONSKI INHIBITORI ACETIL-CoA-KARBOKSILAZE
US20160034775A1 (en) 2014-08-02 2016-02-04 General Vault, LLC Methods and apparatus for bounded image data analysis and notification mechanism

Also Published As

Publication number Publication date
US10294225B2 (en) 2019-05-21
JP2013540119A (ja) 2013-10-31
PL2621493T3 (pl) 2017-01-31
EP2621493A1 (en) 2013-08-07
HRP20161178T1 (hr) 2016-11-04
SI2621493T1 (sl) 2016-10-28
US9908883B2 (en) 2018-03-06
LT2621493T (lt) 2016-10-25
ES2602111T3 (es) 2017-02-17
CA2811033A1 (en) 2012-04-05
JP5824055B2 (ja) 2015-11-25
US9145416B2 (en) 2015-09-29
US20230322777A1 (en) 2023-10-12
PT2621493T (pt) 2016-11-14
DK2621493T3 (en) 2016-10-24
US20160347752A1 (en) 2016-12-01
US20190218218A1 (en) 2019-07-18
US20150011470A1 (en) 2015-01-08
WO2012042433A1 (en) 2012-04-05
US8859577B2 (en) 2014-10-14
US20180162858A1 (en) 2018-06-14
US20210047325A1 (en) 2021-02-18
US11673890B2 (en) 2023-06-13
CA2811033C (en) 2015-10-20
US20130190334A1 (en) 2013-07-25
HUE031616T2 (hu) 2017-07-28
US20150376185A1 (en) 2015-12-31
US10822335B2 (en) 2020-11-03
CY1118016T1 (el) 2017-05-17
EP2621493B1 (en) 2016-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11673890B2 (en) N1-pyrazolospiroketone acetyl-CoA carboxylase inhibitors
US8288405B2 (en) N1-pyrazolospiroketone acetyl-CoA carboxylase inhibitors
US20150152109A1 (en) N1/n2-lactam acetyl-coa carboxylase inhibitors
MX2013012313A (es) Derivados de pirazoloespirocetona para usarse como inhibidores de acetil-coa carboxilasa.
US20120225900A1 (en) N2-pyrazolospiroketone acetyl-coa carboxylase inhibitors