RS56197B1 - Jedinjenja imidazopirolidinona - Google Patents

Description

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja imidazopirolidinona, koji imaju sposobnost da inhibiraju interakciju izmedju p53, ili na njegove varijante, i MDM2 i/ili MDM4, ili njihove varijante, naročito na vezivanje za MDM2 i/ili MDM4, ili njihove varijante, proces za pripremu takvih jedinjenja, farmaceutske preparate koji sadrže takva jedinjenja, upotrebu i načine upotrebe takvih jedinjenja u lečenju (uključujući terapiju i/ili profilaksu), i/ili slične teme kao što je u daljem tekstu naznačeno. p53 se odnosi na sve gene i/ili proteine koje ti geni kodiraju a nazivaju se TP53, p53, TP73, p73, TP63, TP73L, p63. MDM2 se odnosi na sve gene i/ili proteine koje ti geni kodiraju, a nazivaju se MDM2, Mdm2, HDM2, Hdm2. MDM4 se odnosi na sve gene i/ili proteine koje ti geni kodiraju a koji se nazivaju MDM4, Mdm4, HDM4, Hdm4, MDMX, MdmX, HDMX, HdmX..

[0002] Protein p53 je poznat kao tumor supresorski protein koji pomaže u kontroli ćelijskog integriteta i sprečava proliferaciju trajno oštećenih ćelija na taj način što dovodi do zaustavljanja rasta ćelija ili apoptoze (kontrolisane smrti ćelije). p53 sprovodi svoje efekte zahvaljujući činjenici da je transkripcioni faktor koji ima sposobnost da reguliše brojne gene koji regulišu ćelijski ciklus i apoptozu. Dakle, p53 je važan inhibitor ćelijskog ciklusa. Ove aktivnosti su pod snažnom kontrolom MDM2, koji je važan negativni regulator p53 tumor supresora. “MDM2” (skraćeno od engleskog naziva za onkogen “murine double minute”) odnosi se i na ime gena i na ime proteina koji kodira taj gen. MDM2 protein funkcioniše i kao E3 ubikvitin ligaza koja prepoznaje N-terminalni trans-aktivacioni domen (TAD) p53 tumor supresora i tako posreduje ubikvitin-zavisnu degradaciju p53, a funkcioniše i kao inhibitor p53 transkripcione aktivacije.

[0003] Originalni mišiji onkogen, koji kodira MDM2 protein, je originalno kloniran iz transformisane ćelijske linije miša. Humani homolog ovog proteina je kasnije identifikovan i ponekad se takodje naziva HDM2 (skraćeno od engleskog “human double minute 2”). Dodatno podržavajući ulogu MDM2, pokazani su povećani nivoi MDM2 kod nekoliko tipova tumora i proliferativnih bolesti ljudi, uključujući izmedju ostalog sarkome mekih tkiva, kancer kostiju, npr. osteosarkome, tumore dojke, kancer mokraćne bešike, Li-Fraumeni-jev sindrom, tumor mozga, rabdomiosarkom i adrenokortikalni karcinom i njima slične, čime je dodatno podržana uloga MDM2 kao onkogena. Drugi protein koji pripada MDM2 familiji je MDM4, kojije poznat i kao MDMX.

[0004] Disregulacija odnosa MDM2/p53, npr. kao posledica mutacija ili molekularnih defekata u pogodjenim ćelijama, može biti nadjena u mnogim proliferativnim bolestima. MDM2, u svetlu njegovih pomenutih delovanja, je sposoban da inhibira aktivnost tumor supresorskog proteina p53, na taj način dovodeći do gubitka tumor supresorske aktivnosti p53 i inhibicije regulatornih mehanizama koji sprečavaju nekontrolisanu proliferaciju ćelija. Kao posledica toga, može se desiti nekontrolisana proliferacija, koja vodi ka razvoju tumora, leukemija ili drugih proliferativnih bolesti.

[0005] Američki patent br. US 2003/153580 opisuje jedinjenja cis-imidazolina kao inhibitore interakcije MDM2-p53. Američki Patent br. US 2011/0230457 opisuje azot koji sadrži biciklične heterocikle koji su sposobni da inhibiraju interakciju izmedju p53 i MDM2 i/ili MDM4.

[0006] Zbog toga postoji potreba za novim lekovima koji su sposobni da ometaju interakciju između p53 i MDM2 ili naročito njegovih onkogenih varijanti i da na taj način omoguće p53 da ispolji svoje korisne efekte kojima se sprečava nekontrolisani rast tumora, dopuštajući mu npr. da se akumulira, u cilju zaustavljanja ćelijskog ciklusa i/ili uzrokovanja apoptoze zahvaćenih ćelija.

[0007] Nadjeno je da nova klasa jedinjenja imifazopirolidinona pokazuje sposobnost snažne inhibicije interakcije MDM2/p53 (ovaj pojam u ovom tekstu uključuje interakciju MDM2/p53 i/ili interakciju MDM4/p53, posebno interakciju Hdm2/p53 i/ ili Hdm4/p53) i na posebno moćnu inhibiciju MDM2/p53 interakcije. U principu, jedinjenja iz pronalaska ovde deluju kao inhibitori MDM2 interakcije sa p53 vezivanjem za MDM2, i/ili deluju kao inhibitori MDM4 interakcije sa p53 vezivanjem za MDM4.

[0008] Odgovarajuća jedinjenja zbog toga predstavljaju novi tip jedinjenja koja su korisna u lečenju brojnih poremećaja, kao što su proliferativne bolesti, naročito kancer. Pronalazak se stoga odnosi na ova jedinjenja kao i na ostale načine izvodjenja koji su navedeni u ovom tekstu.

[0009] Posebno zanimljiva jedinjenja iz ovog pronalaska su veoma moćna u testu inhibicija interakcije p53-Hdm2 (TR-FRET) koji je opisan u ovom tekstu. Jedinjenja od posebnog značaja imaju povoljna farmakokinetička svojstva. Ona bi trebalo da budu ne-toksična i da pokažu neke neželjene efekte. Osim toga, idealan kandidat za lek postojaće u fizičkom obliku koji je stabilan, nehigroskopan i koji se lako može formulisati.

[0010] Prema prvom aspektu pronalaska, predstavljeno je jedinjenje formule (I) koje predstavlja 5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

ili njegova so.

[0011] Osim ukoliko drugačije nije naznačeno, izrazi “jedinjenja iz datog pronalaska” ili “jedinjenje formule (I)” odnose se na jedinjenja formule (I) i njihove podformule, njihove soli, hidrate ili solvate jedinjenja ili soli, kao i na sve stereoizomere (uključujući dijastereoizomere i enantiomere), tautomere i izotopski obeležena jedinjenja (uključujući zamene deuterijuma), kao i inherentno formirane delove grupa (na primer, polimorfe, solvate i/ili hidrate).

[0012] U ovom tekstu su opisana različita izvodjenja pronalaska. Prepoznato je da karakteristike koje su navedene u svakom izvodjenju mogu da se kombinuju sa drugim specifičnim karakteristikama da bi se obezbedila dalja izvodjenja. U svrhu tumačenja ove prijave, pojmovi koji se koriste u jednini takodje obuhvataju množinu i obrnuto.

[0013] U ovom tekstu, izrazi “jedinjenja iz datog pronalaska” ili “jedinjenja formule (I)” obuhvataju izotopski obeležena jedinjenja, kao što su zamene (supstitucije) deuterijuma:

[0014] Pronaskom su obuhvaćeni enantiomeri ili racemati jedinjenja. “Enantiomeri” su par stereoizomera koji predstavljaju nepreklopljive slike u ogledalu. Smeša para enantiomera u odnosu 1:1 je "racemska” smeša. Apsolutna stereohemija je označena prema Kan- lngold- Prelog R-S sistemu. Kada je jedinjenje u obliku čistog enantiomera, stereohemija na svakom hiralnom atomu ugljenika može da se označava ili sa R ili sa S.

[0015] U zavisnosti od izbora polaznih materijala i postupaka, jedinjenja mogu da budu prisutna u obliku jednog mogućeg izomera ili njihove smeše, na primer kao čistih optičkih izomera, ili smeše izomera, kao što su smeše racemata. Podrazumeva se da dati pronalazak uključuje sve moguće izomere, ukljućujući racemske smeše, optički čiste oblike. Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu da se dobiju korišćenjem hiralnih sintona (osnovnih delova molekula koji predstavljaju osnovu za sintetički postupak) ili hiralnih reagenasa, ili mogu da se razdvoje korišćenjem uobičajenih tehnika.

[0016] U ovom tekstu, izrazi “so” ili “soli” odnose se na kisele adicione ili bazne adicione soli jedinjenja iz pronalaska. “Soli” posebno obuhvataju “farmaceutski prihvatljive soli”. Izraz "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja iz datog pronalaska i, koja nisu nepoželjna na biološki ili na neki drugi način.

[0017] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu da se grade sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, kao što su na primer, acetatne, aspartatne, benzoatne, bezilatne, bromid/ hidrobromidne, bikarbonat/karbonatne, bisulfat/sulfatne, kamforsulfonatne, hlorid/hidrohloridne, hlorteofilonatne, citratne, etandisulfonatne fumaratne, gluceptatne, glukonatne, glukuronatne, hipuratne, hidrojodid/jodidne, izetionatne, laktatne, laktobionatne, laurilsulfatne, malatne, maleatne, malonatne, mandelatne, mezilatne, metilsulfatne, naftoatne, napzilatne, nikotinatne, nitratne, oktadekanoatne, oleatne, oksalatne, palmitatne, pamoatne, fosfat/hidrogen fosfat/dihidrogen fosfatne, poligalakturonatne, propionatne, stearatne, sukcinatne sulfosalicilatne, tartratne, tozilatne i trifluoroacetatne soli.

[0018] Neogranske kiseline iz koje se izvode soli, obuhvataju na primer hlorovodoničnu, bromovodoničnu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu i njima slične kiseline.

[0019] Organske kiseline iz kojih se mogu izvoditi soli obuhvataju na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzoevu kiselinu, bademovu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu i njima slične kiseline. Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu da se formiraju sa neorganskim i organskim bazama.

[0020 ] Farmaceutski prihvatljive soli iz datog pronalaska mogu da budu sintetizovane iz bazne ili kisele grupe, uobičajenim hemijskim postupcima. Te soli se generalno mogu dobiti reakcijom slobodnog oblika kiseline tih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reakcijom slobodnih oblika baze tih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se obično odigravaju u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u u njihovoj smeši. Gde je izvodljivo, poželjna je upotreba rastvarača u nevodenoj sredini, kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril. Lista dodatnih pogodnih soli može da se pronadje na primer, u "Remington’s Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton,

Pa., (1985); i u "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" od Stahl-a i Wermuth (Wiley- VCH, Weinheim, Germany, 2002).

[0021] Bilo koja data formula u ovom tekstu, predstavlja kako neobeležene oblike tako i izotopno obeležene oblike jedinjenja. Izotopno obeležena jedinjenja imaju strukture predstavljene formulama u okviru ovog teksta, kod kojih su jedan ili više atoma zamenjeni atomom odabrane atomske mase ili masenog broja. Primeri izotopa koji mogu biti uključeni u jedinjenja iz ovog pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su redom<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F,<31>P,<32>P,<18>F<35>S,<36>Cl,<125>I. Pronalazak obuhvata različita izotopno obeležena jedinjenja, na primer ona u koja su uključeni radioaktivni izotopi kao što su<3>H, i<14>C, ili ona u kojima su prisutni neradioaktivni izotopi poput<2>H i<13>C. Ovakva izotopno obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim studijama (najbolje sa<14>C), studijama kinetike reakcija (sa, na primer,<2>H ili<3>H), pri detekciji ili imidžing (“imaging”) tehnikama, kao što su pozitronska emisiona tomografija (PET) ili kompjuterska tomografija zasnovana na emisiji jednog fotona (SPECT) uključujući testove tkivne distribucije lekova ili supstrata, ili kod radioaktivnog tretmana pacijenata. Posebno,<18>F ili obeleženo jedinjenje su naročito poželjni za PET ili SPECT studije. Izotopno obeležena jedinjenja iz ovog pronalaska i njihovi pro-lekovi mogu se generalno dobiti postupcima opisanim u shemama ili u primerima i postupcima dobijanja opisanim u daljem tekstu, zamenom lako dostupnog izotopno obeleženog reagensa prethodno korišćenim neizotopno obeleženim reagensom.

[0022] Pored toga, obogaćivanje težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) može da proizvede odredjene terapijske prednosti kao rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer povećanog in vivo poluživota ili smanjene potrebne doze ili poboljšanog terapijskog indeksa. Jasno je da se deuterijum u ovom konteksu posmatra kao supstituent jedinjenja formule (I). Koncentracija takvog težeg izotopa, naročito deuterijuma, može se definisati faktorom obogaćenja izotopa. Izraz " faktor obogaćenja izotopa " kako se ovde koristi predstavlja odnos između zastupljenosti izotopa i prirodne zastupljenosti odredjenog izotopa. Ako je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska označeni deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor obogaćenja izotopa za svaki označeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52.5% ugradnje deuterijuma na svaki označeni atom deuterijuma), najmanje 4000 (60% ugradnje deuterijuma), najmanje 4500 (67.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 5000 (75% ugradnje deuterijuma), najmanje 5500 (82.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 6000 (90% ugradnje deuterijuma), najmanje 6333.3 (95% ugradnje deuterijuma), najmanje 6466.7 (97% ugradnje deuterijuma), najmanje 6600 (99% ugradnje deuterijuma), ili najmanje 6633.3 (99.5% ugradnje deuterijuma).

[0023] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa pronalaskom, obuhvataju one gde rastvarač za kristalizaciju može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-acetonom, d6-DMSO.

[0024] Jedinjenja iz pronalaska, tj. jedinjenja formule (I) koja sadrže grupe koje mogu da se ponašaju kao donori i/ili akceptori pri gradjenju vodoničnih veza mogu da formiraju ko-kristale sa odgovarajućim supstancama za koje se zna da grade kokristale (tzv. ko-kristalni formeri). Ovi kokristali mogu da se dobiju od jedinjenja formule (I) sprovodjenjem poznatih procedura za formiranje kokristala. U ove procedure se ubrajaju mlevenje, zagrevanje, ko-sublimacija, ko-topljenje, ili dovodjenje u kontakt rastvora jedinjenja formule (I) sa kokristal-formerom pod uslovima za kristalizaciju, i izolovanje kokristala koji se pritom formiraju. U odgovarajuće kokristalne-formere (supstance koje grade kristale) ubrajaju se oni koji su opisani u objavljenoj patentnoj prijavi WO 2004/078163. Stoga, pronalazak dalje opisuje kokristale koji sadrže jedinjenje formule (I).

[0025] p53 se odnosi na humani protein kako su ga opisali Matlashewski i sar. u EMBO J.3, 3257-62 (1984) ili povezanih članova porodice (na primer, p73 kako je opisan u Kaghad et al. u Cell 90, 809-19 (1997) i p63 kako je opisano u Yang et al in Mol Cell 2, 305-16 (1998)) (u ovom tekstu nazvan takodje i p53 “wild type” tj onakav kakav se nalazi u prirodi, neizmenjen) ili na bilo koju varijantu ovog proteina (npr. mutant, fragment ili izoforma koje nastaju kao posledica isecanja, ubacivanja i/ili izmene jedne ili više, npr. jedne do 200, aminokiselina) koja je još uvek sposobna da zadrži poželjno najmanje 1 %, poželjnije najmanje 5 %, još poželjnije najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50% ili više od 50% aktivnosti kojom p53 suprimira rast, npr. u testu supresije rasta koji su opisali Pietenpol i sar., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91, 1998-2002 (1994) i, ukoliko se poredi sa odgovarajućim sekvencama p53 “wild type”, pokazuje najmanje 20 %, još poželjnije barem 25 % identičnosti sa punom sekvencom, npr. barem 90% identičnosti sa njegovom nepotpunom sekvencom. Gde inače nije pomenuto, p53 se generalno odnosi na TP53, p53, TP73, p73, TP63, TP73L, p63 ili njihove varijante, kao što je upravo definisano.

[0026] Kao što je već naznačeno u prethodnom delu teksta, MDM2 (naročito kada se pominje kao MDM2 ili njegove varijante) uopšteno se odnosi na sve gene i/ili njima kodirane proteine sa imenima MDM2, Mdm2, HDM2, Hdm2, ili njihove varijante. MDM4 (naročito kada je pomenut kao MDM4 ili njegove varijante) odnosi se na sve gene i/ili njima kodirane proteine sa imenima MDM4, Mdm4, HDM4, Hdm4, MDMX, MdmX, HDMX, HdmX, ili njihovom varijantom.

[0027] MDM2 se specifično odnosi na MDM2 kako su opisali Fakharzadeh i sar., 1991 u EMBO J.10, 1565-9, njegova varijanta se odnosi na varijantu koja se još uvek vezuje za p53 u test sistemu opisanom u delu teksta koji sledi (npr. izoforma, fragment, mutant ili onkogen nastali kao posledica isecanja, ubacivanja i/ili promene jedne ili više, npr. jedne do 430, animokiselina), i odgovara proteinu pune dužine kako je originalno opisan, sa poželjno najmanje 0.5 % afiniteta, poželjnije najmanje 5%, 10%, 20%, 30%, 40% ili naročito 50% ili više afiniteta MDM2 za p53, i ima najmanje 20% identičnosti sekvenci, poželjnije najmanje 25% identičnosti sekvenci sa MDM2 ili sa HDM2 kako je originalno opisano ili kako je specifično opisano u delu

teksta koji sledi. Tamo gde nije drugačije naglašeno, MDM2 se uopšteno odnosi na MDM2, Mdm2, HDM2 ili Hdm2, ili njihove varijante, po utvrdjenom redosledu, kao što je upravo definisano.

[0028] MDM4 se specifično odnosi na MDM4 kako su ga opisali Shvarts i sar., 1997 u Genomics 43, 34-42, njegova varijanta se odnosi na varijantu koja se još uvek vezuje za p53 u test sistemu opisanom u delu teksta koji sledi (splice varijanta izoforma, fragment, mutant ili onkogen nastali kao posledica isecanja, ubacivanja i/ili promene jedne ili više, npr. jedne do 430, animokiselina), i odgovara proteinu pune dužine kako je originalno opisan, sa poželjno najmanje 0.5 % afiniteta, poželjnije najmanje 5%, 10%, 20%, 30%, 40% ili naročito 50% ili više afiniteta MDM4 za p53, i ima najmanje 20% identičnosti sekvenci, poželjnije najmanje 25% identičnosti sekvenci sa MDM4, MDMX, HDM4 ili HDM2 kako je originalno opisano ili kako je specifično opisano u delu teksta koji sledi. Tamo gde nije drugačije naglašeno, MDM4 se uopšteno odnosi na MDM4, Mdm4, HDM4, Hdm4, MDMX, MdmX, HDMX ili HdmX, ili njihove varijante, po utvrdjenom redosledu, kao što je upravo definisano.

[0029] Procenat identičnosti sekvenci izmedju proteina i njegove varijante, takodje često nazvan homologija, poželjno je odredjen primenom kompjuterskog programa koji se često koristi za tu svrhu, kao što je Gap program (Wisconsin paket za analizu sekvenci, verzija 8 za Unix, Genetics Computer Group, University Reseach Park, Madison Wisconsin, SAD, koji koristi algoritam Smith-a i Watermana (Adv. Appl. Math.2: 482-489 (1981)., naročito koristeći pretragu u kojoj se vrednuje sličnost sekvenci prema skali vrednosti koja dodeljuje penal od 12 za otvoren gap, a penal od 1 za produženi gap sa viškom.

[0030] Kada se pomenu “njegove varijante” misli se na jednu ili više varijanti.

[0031] Proto-onkogen je je normalni gen koji može postati onkogen, ili nakon mutacije ili nakon povećane ekspresije. Proto-onkogeni kodiraju proteine koji pomažu regulaciju rasta i ćelijsku diferencijaciju. Proto-onkogeni su često uključeni u prenos signala i izvršavanje signala koji dovode do deobe ćelija, obično kroz delovanje proteinskih produkata koje kodiraju. Nakon aktivacije, protoonkogen (ili njegov produkt) postaje tumor indukujući pokretač, onkogen.

[0032] U ovom tekstu, izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" obuhvata bilo koje i sve rastvarače, disperziona sredstva, agense za presvlačenje, surfaktante, antioksidanse, konzervanse (npr., antibakterijske agense, antifungicidne agense), izotonične agense, agense za odlaganje apsorpcije, soli, konzervanse, lekove, stabilizatore lekova, vezivna sredstva, ekscipijente, dezintegraciona sredstva, lubrikante, zasladjivače, sredstva za podešavanje arome, boje, slične materijale i njihove kombinacije, kao što je poznato onima upoznatim sa stanjem tehnike (videti, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, str. 1289- 1329). Osim ukoliko je bilo koji konvencionalni nosač nekompatibilan sa aktivnim sredstvom, razmatrana je njegova upotreba u terapijskim ili farmaceutskim kompozicijama.

[0033] Izraz “terapijski efikasna količina” jedinjenja iz ovog pronalaska, odnosi se na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja će indukovati biološki ili medicinski odgovor ispitanika, na primer, redukciju ili inhibiciju aktivnosti enzima ili proteina, ili poboljšanje simptoma, olakšanje bolesti, usporavanje ili odlaganje progresije bolesti, ili sprečavanje bolesti, itd. U jednom neograničavajućem izvodjenju, izraz “terapijski efikasna količina” odnosi se na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja kada se primeni kod ispitanika dovodi do (1) najmanje delimičnog ublažavanja, inhibisanja, sprečavanja i/ili poboljšanja stanja, ili poremećaja ili bolesti (i) posredovane disregulacijom odnosa MDM2 i/ili MDM4 ili su (ii) povezane sa aktivnošću MDM2 i/ili MDM4, ili (iii) karakterisane ativnošću (normalnom ili abnormlanom) odnosa MDM2 i/ili MDM4, ili (2) redukovanja ili inhibiranja ekspresije MDM2 i/ili MDM4. U drugom neograničavajućem izvodjenju izraz “terapijski efikasna količina” se odnosi na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja kada se primeni na ćeliju ili tkivo, ili nećelijski biološki materijal, ili medijum (podlogu) dovodi do najmanje delimične redukcije ili inhibiranja aktivnosti MDM2 i/ili MDM4; ili barem delimične redukcije ili inhibicije ekspresije MDM2 i/ili MDM4.

[0034 ] U daljem izvodjenju, jedinjenja formule (I) su naročito korisna u treatmanu poremećaja ili oboljenja koji su u vezi sa aktivnošću MDM2.

[0035] U ovom tekstu, izraz “ispitanik” označava životinju. Obično je životinja sisar. Ispitanik takodje označava na primer, primate (npr., ljude, muškarce ili žene), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, kuniće, pacove, miševe, ribe, ptice i tome slično. U odredjenim izvodjenima, ispitanik je primat. U još jednom izvodjenju, ispitanik je čovek.

[0036] U ovom tekstu izrazi “inhibisati”, “inhibicija” ili “inhibišući” se koriste tako da označavaju smanjenje ili supresiju datog stanja, simptoma, ili poremećaja, ili bolesti, ili značajno smanjenje bazne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa.

[0037] U ovom tekstu, izraz “lečiti”, “lečenje” ili “tretman” ma koje bolesti ili poremećaja u jednom izvodjenju odnosi se na, poboljšanje bolesti ili poremećaja (tj.,usporavanje ili zaustavljanje ili redukovanje razvoja bolesti ili bar najmanje jednog njenog kliničkog simptoma). U drugom izvodjenju “lečiti”, “lečenje” ili “tretman”odnosi se na ublažavanje ili poboljšanje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući i one koje pacijent ne može da raspozna. U pak drugom izvodjenju, “lečiti”, “lečenje” ili “tretman (procedura)” označava modulisanje bolesti ili poremećaja, bilo fizičko, (npr., stabilizacija prepoznatljivog simptoma), fiziološko, (npr., stabilizacija fizičkih parametara), ili oba. U pak jednom drugom izvodjenju, izraz “lečiti”, “lečenje” ili “tretman” označava sprečavanje ili odlaganje javljanja ili razvoja ili napredovanja bolesti ili poremećaja.

[0038] U ovom tekstu, ispitanik “kome je potreban tretman/lečenje” označava takvog ispitanika kome bi takav tretman doneo biološku, medicinsku dobrobit ili bi mu poboljšao kvalitet života.

[0039] Kako se ovde koristi, izraz "a,” "an,” "the” i slični izrazi koji su korišćeni u kontekstu prikazanog pronalaska (naročito u kontekstu patentnih zahteva) treba pravilno da se tumače tako da obuhvataju i jedninu i množinu osim ako ovde nije drugačije naznačeno ili na osnovu konteksta nije jasno da je značenje drugačije.

[0040] Svi postupci koji su opisani u ovom tekstu, mogu da budu izvedeni bilo kojim pogodnim redom, osim ako ovde nije drugačije naznačeno ili na osnovu konteksta nije jasno da je značenje drugačije. Upotreba ma kog i svih primera, ili uzornog jezika (npr., “kao što je “) kojim je pisan ovaj tekst namenjen je jedino tome da baci bolje svetlo na pronalazak i ne nameće nikakva ograničenja na oblast pronalaska na koju inače pronalazak polaže pravo.

[0041] Svaki asimetrični atom (npr., ugljenik ili slično) jedinjenja prikazanog pronalaska može biti prikazan u racematnoj ili enantiomerski obogaćenoj, na primer (R)-, (S)- ili (R,S)- konfiguraciji. U odredjenim izvodjenjima, svaki asimetrični atom ima najmanje 50 % enantiomernog viška, najmanje 60 % enantiomernog viška, najmanje 70 % enantiomernog viška, najmanje 80 % enantiomernog viška, najmanje 90 % enantiomernog viška, najmanje 95 % enantiomernog viška, ili najmanje 99 % enantiomernog viška u (R)- ili (S)- konfiguraciji. Supstituenti na atomima sa nezasićenim vezama mogu, ako je moguće, da budu prisutni u cis- (Z)- ili trans- (E)- obliku.

[0042] Prema tome, kako se koristi u ovom tekstu, jedinjenje prikazanog pronalaska može biti u obliku jednog od mogućih izomera, rotamera, atropizomera, tautomera ili njihove mešavine, na primer, kao praktično čisti geometrijski (cis ili trans) izomeri, diastereomeri, optički izomeri (antipodi), racemati ili njihove smeše.

[0043] Bilo koje rezultujuće smeše izomera mogu da se razdvoje na osnovu fizikohemijske razlike konstituenata, na čisti ili gotovo čiste geometrijske ili optičke izomere, dijastereomere, racemate, na primer, hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom.

[0044] Bilo koji nastali racemati finalnog proizvoda ili intermedijera mogu da se razdvoje na optičke antipode pomoću poznatih postupaka, npr., razdvajanjem njihovih dijastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobadjanjem optički aktivnog kiselog ili baznog jedinjenja. Naročito, bazni ostatak može biti iskorišćen za razdvajanje jedinjenja prikazanog pronalaska na njihove optičke antipode, npr., frakcionom kristalizacijom soli obrazovane sa optički aktivnom kiselinom, npr., vinskom kiselinom, dibenzoil vinskom kiselinom, diacetil vinskom kiselinom, di-O,O'-p-toluoil vinskom kiselinom, bademovom kiselinom, jabučnom kiselinom ili kamfor-10-sulfonskom kiselinom. Racemski proizvodi se mogu takodje razdvojiti hiralnom hromatografijom, npr., tečnom hromatografijom pod visokim pritiskom (HPLC) korišćenjem hiralnog adsorbenta.

[0045] Dalje, jedinjenja iz ovog pronalaska, uključujući i njihove soli, takodje mogu da se dobiju u obliku njihovih hidrata, ili obuhvataju druge rastvarače koji mogu da se koriste za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu inherentno ili prema dizajnu da grade solvate sa farmaceutski prihvatljivim solventima (uključujući vodu), stoga je namera da pronalazak obuhvati kako solvatisane tako i nesolvatisane oblike. Izraz „solvat“ se odnosi na molekulski kompleks jedinjenja iz ovog pronalaska (uključujući negove farmaceutski prihvatljive soli) sa jednim ili više molekula rastvarača. Takvi molekuli solventa su oni koji se uobičajeno koriste u farmaciji, a za koje se zna da su neškodljivi po primaoca, npr. voda etanol i tome slično. Izraz „hidrat“ se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača voda. Jedinjenja iz ovog pronalaska, uključujući soli, njihove hidrate i solvate, mogu inherentno ili planirano da grade polimorfe. Solvati ili hidrati mogu da budu korisni u proizvodnji kristalnih oblika jedinjenja formule (I).

[0046] U narednom aspektu, datim pronalaskom predstavljena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule (I) ili njegovu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. U narednom aspektu, datim pronalaskom predstavljena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata terapijski efikasnu količnu jedinjenja formule (I) ili njenu so kako je definisano u tekstu, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.

[0047] Farmaceutska kompozicija može da bude formulisana posebnim načinom primene kao što je oralna primena, parenteralna primena, i rektalna primena. Osim toga, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska moguće je napraviti u čvrstom obliku (uključujući bez ograničenja kapsule, tablete, pilule, granule, praškove ili supozitorije), ili u tečnom obliku (uključujuči bez ograničenja rastvore suspenzije ili emulzije). Farmaceutske kompozicije mogu se podvrgnuti standardnim farmaceutskim procedurama kao što je sterilizacija i/ili mogu da sadrže standardne inertne diluente, sredstva za podmazivanje, ili sredstva za puferisanje, kao i adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za održavanje vlage, emulgatori i puferi, itd. Tipično, farmaceutske kompozicije se nalaze u obliku tableta ili želatinskih kapsula koje sadrže aktivni sastojak zajedno sa

a) diluentima, kao npr., laktoza, dekstroza, saharoza, manitol, sorbitol, celuloza i/ili glicin;

b) lubrikantima, kao npr., silika, talk, stearinska kiselina, njena so sa magnezijumom ili sa kalcijumom i/ili polietilenglikol, isto je i za tablete

c) vezujućim sredstvima, kao npr., magnezijum-aluminijum-silikat, skrobna pasta, želatin, tragakant, metil-celuloza, natrijum-karboksimetil-celuloza i/ ili polivinilpirolidon; i ukoliko je potrebno d) sredstvima protiv zgrudnjavanja (dezintegranti), npr., skrobovi, agar, alginska kiselina ili njena natrijumova so, ili šumeće mešavine; i/ili

e) apsorbensima, bojama, pojačivačima ukusa i zasladjivačima.

[0048] Tablete mogu biti ili filmom obložene ili enterično obložene prema postupcima koji su poznati u stanju tehnike.

[0049] Odgovarajuće kompozicije za oralnu primenu obuhvataju efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska u obliku tableta, pastila, vodenih ili uljanih suspenzija, disperzibilnih praškova ili granula, emulzija, čvrstih ili mekih kapsula, ili sirupa ili eliksira. Kompozicije koje su namenjene za oralnu upotrebu su spremljene prema bilo kojem postupku poznatom u stanju tehnike za proizvodnju farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu da sadrže jedno ili više sredstava odabranih iz grupe koja sadrži zasladjivače, poboljšivače ukusa, boje i sredstva za konzervisanje kako bi omogućili dobijanje farmaceutski elegantnih i ukusnih preparata. Tablete mogu da sadrže aktivni sastojak pomešan sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji su pogodni za proizvodnju tableta. U ove ekscipijense ubrajaju se, na primer, inertni diluenti, kao što je kalcijum-karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum-fosfat ili natrijum-fosfat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju, na primer, kukuruzni skrob, ili alginska kiselina, vezivna sredstva, na primer, skrob, želatin ili akacija, i lubrikanti, na primer magnezijum-stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete mogu biti neobložene ili obložene poznatim tehnikama, kako bi se odložila njihova dezintegracija i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu i tako obezbedilo produženo delovanje. Na primer, mogu da se koriste materiali koji omogućavaju kasno delovanje kao što je gliceril-monosterat ili gliceril-distearat. Formulacije za oralnu upotrebu mogu da se predstave kao čvrste želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim diluentom, kao što je na primer, kalcijum-kabonat, kalcijum-fosfat ili kaolin, ili kao mekane želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili nekim uljanim medijumom, na primer, uljem kikirikija, tečnim parafinom ili maslinovim uljem.

[0050] Odredjene injektabilne kompozicije su vodeni izotonični rastvori ili suspenzije, i supozitorije su praktično pripremljene od masnih emulzija ili suspenzija. Pomenute kompozicije mogu da se sterilišu i/ili sadrže adjuvanse, kao što su sredstva za konzervisanje, stabilizaciju, ovlaživač ili emulgovanje, sredstva za olakšano rastvaranje, soli za regulisanje osmotskog pritiska i/ili puferi. Osim toga, oni mogu takodje da sadrže druge terapijski vredne supstance. Pomenute kompozicije su pripremljene u skladu sa uobičajenim postupcima za mešanje, granulaciju odnosno oblaganje, redom, i sadrže oko 0.1-75%, ili sadrže oko 1-50%, aktivnog sastojka.

[0051] Odgovarajuće kompozicije za transdermalnu primenu obuhvataju efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska sa odgovarajućim nosačem. Nosači koji su pogodni za transdermalno dostavljanje uključuju lako upijajuće farmakološki prihvatljive rastvarače čija je uloga da pomognu prolaz kroz kožu domaćina.

Na primer sprave za transdermalnu primenu postoje u obliku poveske/zavoja koji poseduje zadnju potporu, rezervoar sa jedinjenjem i opciono nosačima, opciono barijeru kojom se kontroliše brzina dostavljanja i koja omogućava kontrolisanje brzine dostavljanja jedinjenja u kožu domaćina i njeno podešavanje na prethodno odredjenu vrednost tokom dužeg vremenskog perioda, zatim pomoćna sredstva koja treba da obezbedjuju spravu na koži.

[0052] Odgovarajuće kompozicije pogodne za topikalnu primenu, npr., na koži i očima, obuhvataju vodene rastvore, suspenzije, masti, kreme, gelove ili formulacije u spreju, npr., za dostavljanje u obliku aerosola ili tome slično. Takvi sistemi za dostavljanje će naročito biti podesni za dermalnu primenu, npr., u tetmanu raka kože, npr., za preventivnu upotrebu u kremama za sunčanje, losionima, sprejevima i tome slično. Oni su dakle naročito podešeni za upotrebu u topikalnim formulacijama, uključujući i kozmetičke, koje su dobro poznate u stanju tehnike. One mogu da sadrže sredstva za bolju rastvorljivost, stabilizatore, sredstva koja pojačavaju tonus, pufere i konzervanse.

[0053] U ovom tekstu topikalna primena može da se odnosi takodje na inhalaciju ili na intranazalnu primenu. Mogu biti povoljno dostavljeni u obliku suvog praška (bilo zasebno, ili u smeši, na primer suva mešavina sa laktozom, ili sastavna partikula u mešavini, na primer sa fosfolipidima, iz inhalatora sa suvim praškom ili aerosol za prskanje iz suda pod pritiskom, suda sa pumpom, sprejom, atomizerom ili nebulajzerom, sa ili bez upotebe odgovarajućeg propelenta (potisnog gasa).

[0054] Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja iz ovog pronalaska obuhvataju praškove, sprejove, masti, paste, kremove, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. Aktivno jedinjenje može da se meša pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i, sa bilo kojim od konzervanasa, pufera, ili potisnih gasova koji mogu biti poželjni.

[0055] Masti, paste, kreme i gelovi mogu da sadrže, uz aktivno jedinjenje iz ovog pronalaska, ekscipijense kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskove, parafine, skrob, tragakant, derivate celuloze, polietilen glikole, silikone, bentonite, silicijumovu kiselinu, talk i cink oksid, ili mešavine navedenih supstanci.

[0056] Puderi i sprejevi koji mogu da sadrže, uz jedinjenja iz ovog pronalaska, ekscipijente kao što je laktoza, talk, silicijumska kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijumovi silikati i poliamidni puder, ili mešavine ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno sadržati uobičajene pogonske gasove kao što su hlorofluorougljovodonici i isparljive nesupstituisane ugljovodnike, kao što su butan i propan.

[0057] Transdermalni flasteri imaju dodatnu prednost tako što obezbedjuju kontrolisanu isporuku jedinjenja u telo. Ovakvi dozni oblici mogu se obrazovati rastvaranjem ili suspendovanjem jedinjenja u odgovarajući medijum. Poboljšivači apsorpcije mogu se takodje koristiti, da bi ubrzali prodiranje jedinjenja kroz kožu. Brzina može biti kontrolisana bilo putem membrane za kontrolu brzine ili dispergovanjem jedinjenja u polimerni matriks ili u gel.

[0058] Oftalmološke formulacije, masti za oči, puderi, rastvori i slično,takodje se smatraju da ulaze u opseg ovog pronalaska.

[0059] U datom pronalasku dalje su predstavljene farmaceutske kompozicije i dozni oblici koji obuhvataju jedinjenja iz datog pronalaska kao aktivne sastojke, jer voda može da olakša degradaciju odredjenih jedinjenja.

[0060] Anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozni oblici iz pronalaska moguće je spremiti korišćenjem anhidrovanih ili sastojaka sa malim sadržajem vlage i pri uslovima sa niskim sadržajem vlage. Anhidrovanu farmaceutsku kompoziciju je moguće spremiti i čuvati tako da se sačuva njeno svojstvo da je anhidrovana. U skladu sa tim, anhidrovane kompozicije su pakovane korišćenjem materijala za koje je poznato da sprečavaju izlaganje vodi tako da se učine moguće da ih odgovarajuće formulisani kitovi obuhvataju. U primere za odgovarajuća pakovanja se ubrajaju, ali nisu time ograničena, hermetički zapečaćene folije, plastični, kontejneri za jedinične doze (npr. vajle), blister pakovanja, i strip pakovanja.

[0061] Pronalazak nadalje obezbedjuje farmaceutske kompozicije i dozne oblike koji sadrže jedno ili više sredstava koja smanjuju brzinu kojom se jedinjenja iz ovog pronalaska kao aktivna supstanca degradiraju. Takva sredstva, ovde pomenuta kao "stabilizatori,” uključuju, ali se ne ograničavaju na, antioksidanse kao što su askorbinska kiselina, pH puferi ili puferi na bazi soli itd.

[0062] Farmaceutska kompozicija ili kombinacija iz ovog pronalaska može biti u doznim jedinicama od oko 1-1000 mg aktivnog sastojka (sastojaka) za subjekta od oko 50-70 kg, ili oko 1-500 mg ili oko 1-250 mg ili oko 1-150 mg ili oko 0,5-100 mg, ili oko 1-50 mg aktivnih sastojaka. Terapijski efikasna doza jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili pak njihove kombinacije, zavisi od vrste ispitanika, telesne težine, uzrasta i individualnog stanja i težine poremećaja ili oboljenja koje se tretira. Lekar, kliničar ili veterinar prosečne veštine može lako da utvrdi efikasnu količinu svakog od aktivnih sastojaka potrebnih za prevenciju, tretman ili zaustavljanje napredovanja poremećaja ili oboljenja.

[0063] U gornjem tekstu citirani dozni režimi mogu se potvrditi u in vitro i in vivo testovima, najbolje na sisarima, npr. miševima, pacovima, psima, majmunima ili na izolovanim organima, tkivima i njihovim preparacijama. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se primeniti in vitro u obliku rastvora, npr. vodenih rastvora, kao i in vivo bilo enteralno, parenteralno, najbolje intravenski, npr. kao suspenzija ili u vodenom rastvoru. Doziranje in vitro može ići izmedju 10<-3>molarnih i 10<-9>molarnih koncentracija. Terapijski efikasna količina in vivo može varirati u zavisnosti od načina primene, izmedju oko 0,1-500 mg/kg, ili u opsegu od 1-100 mg/kg.

[0064] Dejstvo jedinjenja iz ovog pronalaska može se proceniti korišćenjem sledećih in vitro & in vivo postupaka.

[0065] Jedinjenja formule I u slobodnom obliku ili u obliku soli pokazuju značajne farmakološke osobine, npr. u modulaciji MDM2 i/ili MDM4, npr. kako je pokazano u testovima predstavljenim u sledećim poglavljima, i stoga su indikovana u terapiji.

[0066] U smislu njihovog inhibitornog efekta na p53/MDM2 i/ili p53/MDM4 interakciju, jedinjenja formule (I) u slobodnom ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli, korisna su u tretmanu stanja posredovanih delovanjem (uključujući normalnu aktivnost ili posebno hiperaktivnost) MDM2 i/ili MDM4, ili njihovim varijantama, redosledom, kako je opisano, kao što su proliferativna i/ili upalna stanja, npr. aktivacijom P53/MDM2 interakcije, i/ili koja reaguju (misli se posebno u smislu terapijskog pozitivnog efekta) na inhibiciju p53/MDM2 interakcije, posebno kod oboljenja ili poremećaja pomenutih u daljem tekstu.

[0067] Smatra se da su jedinjenja iz pronalaska korisna u tretmanu oboljenja na osnovu disregulacije ćelijskog ciklusa, kao što su proliferativnii poremećaji ili bolesti, na primer iz grupe kancera ili tumorskih bolesti. Konkretno, takve bolesti ili poremećaju uključuju benigne ili maligne tumore, sarkome mekih tkiva ili sarkome kao što je liposarkom, rabdomiosarkom ili kancer kostiju, npr. osteosarkomi, karcinomi, kao što su karcinom mozga, bubrega, jetre, nadbubrežne žlezde, bešike, dojke, želuca, jajnika, kolona, rektuma, prostate, pankreasa, pluća, vaginalni ili štitaste žlezde, glioblastom, meningiom, gliom, mezoteliom, multipli mijelom, gastrointestinalni kancer, naročito karcinom kolona ili kolorektalni adenom, tumor glave i vrata, melanom, hiperplazija prostate, neoplazija, neoplazija epitelnog karaktera, leukemije kao što je akutna mijeloidna leukemija ili hronična limfocitna leukemija B-ćelija, limfom, kao što je B- ili T-ćelijski limfom, i metastaze u drugim organima), virusne infekcije (na primer, herpes, papiloma, HIV, Kapošijev sindrom, virusni hepatitis). Posebne upotrebe su za lečenje benignih ili malignih tumora, sarkoma mekog tkiva ili sarkoma kao što je liposarkom, rabdomiosarkom ili kancer kostiju, npr. osteosarkomi, karcinomi, kao što su karcinomi bubrega, jetre, nadbubrežne žlezde, mokraćne bešike, dojke, želuca, jajnika, debelog creva, rektuma, prostate, pankreasa, pluća, vagine ili štitaste žlezde, mezoteliom, multipli mijelom, gastrointestinalni kancer, naročito karcinom debelog creva ili kolorektalni adenom, tumor vrata i glave, melanom, hiperplazija prostate, neoplazije, neoplazije epitelnog porekla, leukemija kao što je akutna mijeloidna leukemija ili hronična limfocitna leukemija B-ćelija, limfomi, kao što je B- ili T-ćelijski limfom, i metastaze u drugim organima.

[0068] Smatra se da su jedinjenja iz pronalaska korisna u tretmanu poremaćaja ili oboljenja koje uključuju imuni sistem iz grupe autoimunih bolesti ili bolesti imunog sistema koje se javljaju usled transplantacije (kao što je reumatoidni artritis, bolest kalema protiv domaćina, sistemski eritemski lupus, Sjergenov sindrom, multipla skleroza, Hašimotov tiroiditis, polimiozitis), hronična inflamatorna stanja, kao što su astma, osteoartritis, ateroskleroza, Kronova bolest ili inflamatorna ili alergijska stanja kože, na primer psorijaza, kontaktni dermatitis, atopijski dermatitis, alopecija areata, eritema multiforma, dermatitis herpetiformis, skleroderma, vitiligo, angiitis usled preosetljivosti, urtikarija, bulozni pemfigoid, pemfigus, epidermolizis buloza akvizita, ili druga inflamatorna ili alergijska stanja kože ili hiperproliferativni poremećaji, (npr. sindrom Li-Fraumeni)<.>

[0069] U narednom izvodjenju prikazano je jedinjenje formula (I) ili njegova so kako je ovde definisana, za upotrebu kao farmaceutskog sredstva.

[0070] U narednom izvodjenju predstavljeno je jedinjenje formule (I) ili njegova so kako je definisana u tekstu, za upotrebu u tretmanu poremećaja ili oboljenja koja su posredovana aktivnošću MDM2 i/ili MDM4.

[0071] Još jedno dalje izvodjenje opisuje upotrebu jedinjenja formule (I) ili njegove soli kako je definisano u tekstu, za proizvodnju leka za tretman poremećaja ili oboljenja kod ispitanika koja su posredovana aktivnošću MDM2 i/ili MDM4.

[0072] Takodje je opisana upotreba jedinjenja formule (I) u terapiji. U daljem izvodjenju, terapija je odabrana za oboljenje koje može da se tretira inhibicijom MDM2/p53 i/ili interakcijom MDM4/p53, naročito oboljenja ili poremećaja koja su ovde navedeni. U jednom izvodjenju, oboljenje ili poremećaj je proliferativno oboljenje, naročito kancer. Kancer naročito predstavlja jedan od vrsta karcinoma koji su ovde prikazani.

[0073] Jedinjenja formule (I) imaju korisna farmakološka stojstva i ometaju interakciju vezivanja (ovde se pominje kao p53/MDM2 i p53/MDM4 interakcija ili jedino kao p53/MDM2 interakcija) izmedju p53 sa jedne strane i MDM2 i/ili MDM4 ili (posebno onkogensko) varijanti koje su, sa druge strane, još uvek sposobne za vezivanje za p53. Poremećaj prilikom formiranja p53-MDM2 ili kompleksa p53-MDM4 je posledica vezivanja molekula inhibitora za vezivno mesto p53 od MDM2 ili MDM4.

[0074] Pronalazak se odnosi i na upotrebu jedinjenja formule (I) (ili farmaceutskog oblika koji se sastoji od jedinjenja formule (I) u lečenju jedne ili više oboljenja pomenutih u prethodnom ili u delu teksta koji sledi, gde bolest(i) odgovara(ju) na (blagotvornim učinkom, npr. delimičnim ili kompletnim nestankom jednog ili više simptoma bolesti do potpunog izlečenja ili remisijom), inhibiciju interakcije MDM2/p53 ili ili MDM4/p53, naročito kada uključeni MDM2 ili MDM4 i/ili njihove varijante pokazuju (npr. u kontekstu drugih regulatornih mehanizama, zbog prekomerne ekspresije, mutacije ili tome slično) neadekvatno visoku aktivnost ili aktivnost veću od normalne.

[0075] Pronalazak se takodje odnosi na upotrebu jedinjenja formule (I) u indukciji usporavanja ćelijskog ciklusa ili poželjno zaustavljanja ćelijskog ciklusa i/ili apoptoze u ćelijama koje sadrže p53 ili njegove varijante koje su još uvek funkcionalne, za delovanje na ćelije da postanu osetljivije na jedan ili više dodatnih farmaceutski aktivnih sredstava, kao što su induktori apoptoze i/ili usporavanja ili zaustavljanja ćelijskog ciklusa, i za hemoprotekciju normalnih ćelija kroz indukciju usporavanja ili zaustavljanja ćelijskog ciklusa pre tretmana sa jednim ili više drugih hemoterapeutskih sredstava, za upotrebu u cilju delovanja na normalne ćelije da postanu otporne na hemoterapeutska sredstva i/ili tretmane, i/ili upotrebu u zaštiti ćelija od toksičnih sporednih efekata hemoterapeutskih sredstava ili tretmana, kao što su sporedni efekti koji dovode do mukozitisa, stomatitsa, kserostomije, gastrointestinalnih poremećaja i/ili alopecije.

[0076] Jedinjenje formule (I) može takodje biti korišćeno u cilju poboljšanja delovanja u kombinaciji sa drugim antiproliferativnim jedinjenjima. Takva antiproliferativna jedinjenja uključuju ali nisu ograničena na, inhibitore aromataza; antiestrogene; inhibitore topoizomeraze I; inhibitore topoizomeraze II; jedinjenja koja aktiviraju mikrotubule; alkilirajuća jedinjenja; inhibitore histon deacetilaze; jedinjenja koja indukuju procese diferentovanja ćelija; inhibitore cikolooksigenaze; inhibitore MMP; inhibitore mTOR, kao što je RAD001; antineoplastične antimetabolite; jedinjenja platine; jedinjenja koja ciljano deluju na smanjenje aktivnosti proteinskih ili lipidnih kinaza i druga anti-angiogena jedinjenja; jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteinskih ili lipidnih fosfataza; agoniste gonadorelina; anti-androgene; inhibitore metionin aminopeptidaze; bisfosfonate; modifikatore biološkog odgovora; antiproliferativna antitela, kao što je HCD122; inhibitore heparanaze; inhibitore onkogenih izoformi Ras; inhibitore telomeraze; inhibitore proteazoma; jedinjenja koja se koriste u lečenju hematoloških maligniteta, kao što je FLUDARABINE; jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost Flt-3, kao što je PKC412; inhibitore Hsp90 kao što su 17-AAG (17-alilaminogeldanamicin, NSC330507), 17-DMAG (17-dimetilaminoetilamino-17-demetoksi-geldanamicin, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010 od Conforma Therapeutics i AUY922; temozolomid (TEMODAL ®); inhibitore kinezina koji učestvuje u formiranju deobnog vretena, kao što su SB715992 ili SB743921 od GlaxoSmithKline, ili pentamidin/hlorpromazin od CombinatoRx; inhibitori PI3K, kao što je BEZ235; inhibitore RAF, kao što je RAF265; inhibitore MEK kao što je ARRY142886 od Array PioPharma, AZD6244 od AstraZeneca, PD181461 od Pfizera, leukovorin, EDG vezujuća sredstva, antileukemjska jedinjenja, inhibitore ribonukleotid reduktaze, inhibitore S-adenozilmetionin dekarboksilaze, regulatore apoptoze, antiproliferativna antitela ili druga hemoterapijska jedinjenja. Osim toga, alternativno ili kao dodatak oni mogu biti korišćeni u kombinaciji sa drugim načinima lečenja tumora, uključujući hirurške zahvate, jonizujuće zračenje, fotodinamsku terapiju, implantate, npr. sa kortikosteroidima, hormonima, ili mogu biti korišćeni kao sredstva koja tumorske ćelije čine osetljivijim na delovanje zračenja. Takodje, u anti-inflamatornom i/ili antiproliferativnom lečenju, uključena je kombinacija sa anti-inflamatornim lekovima. Moguće je i udruživanje sa antihistaminicima, bronhodilatatorima, NSAID ili antagonistima hemokinskih receptora.

[0077] Pojam “inhibitor aromataza” kako je ovde korišćen odnosi se na jedinjenje koje inhibira produkciju estrogena, tj. konverziju supstrata androstenediona u estron i testosterona u estradiol. Pojam uključuje, ali nije ograničen na steroide, naročito atamestan, eksemestan i formestan i, naročito nesteroide, naročito aminoglutetimid, rogletimid, piridoglutetimid, trilostan, testolakton, ketokonazol, vorozol, fadrozol, anastrozol i letrozol. Eksemestan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AROMASIN. Formestan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom LENTARON. Fadrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AFEMA. Anastrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ARIMIDEX. Letrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FEMARA ili FEMAR. Aminoglutetimid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ORIMETEN. Kombinacija pronalaska koja obuhvata hemoterapeutsko sredstvo koje je inhibitor aromataza je naročito korisna za lečenje tumora koji ispoljavaju receptore hormona (hormon receptor pozitivni tumori), npr. tumori dojke.

[0078] Pojam “antiestrogen” kako je ovde korišćen odnosi se na jedinjenje koje antagonizuje (neutrališe) delovanje estrogena na nivou receptora za estrogen. Pojam uključuje, ali nije ograničen na tamoksifen, fulvestran, raloksifen i raloksifen hidrohlorid. Tamoksifen može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom NOLVADEX. Raloksifen hidrohlorid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom EVISTA. Fulvestran može biti formulisan kao što je opisano u US 4,659,516 ili može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FASLODEX. Kombinacija pronalaska koja obuhvata hemoterapeutsko sredstvo koje je antiestrogen je naročito korisna za lečenje tumora koji ispoljavaju receptore za estrogen (estrogen receptor pozitivni tumori) npr. tumori dojke.

[0079] Pojam “anti-androgen” kako je ovde korišćen odnosi se na bilo koju supstancu koja je sposobna da inhibira biološko delovanje androgenih hormona i uključuje, ali nije ograničen na, bikalutamid (CASODEX), koji može biti formulisan, npr. kako je opisano u Američkom Patentu br. US 4,636,505.

[0080] U ovom tekstu, izraz “agonista gonadorelina” obuhvata, ali nije ograničen na abareliks, goserelin i goserelin acetat. Goserelin je opisan u Američkom Patent br. US 4,100,274 i može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZOLADEX. Abareliks može biti formulisan, npr. kao što je opisano u Američkom Patentu br. US 5,843,901.

[0081] U ovom tekstu, izraz “inhibitor topoizomeraze I” obuhvata, ali nije ograničen na topotekan, gimatekan, irinotekan, kamptotecian i njegove analoge, 9-nitrokamptotecin i makromolekularni kamptotecin konjugat PNU-166148 (jedinjenje A1 u objavljenoj prijavi WO99/ 17804). Irinotekan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CAMPTOSAR. Topotekan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom HYCAMTIN.

[0082] U ovom tekstu, izraz “inhibitor topoizomeraze II” obuhvata, ali nije ograničen na antracikline kao što su doksorubicin (uključujući lipozomalni oblik, npr. CAELYX), daunorubicin, epirubicin, idarubicin i nemorubicin, antrahinone mitoksantron i losoksantron, i podofilotoksine etoposid i teniposid. Etoposid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ETOPOPHOS. Teniposid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom VM 26-BRISTOL. Doksorubicin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ADRIBLASTIN ili ADRIAMYCIN. Epirubicin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FARMORUBICIN. Idarubicin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZAVEDOS. Mitoksantron može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom NOVANTRON.

[0083] Pojam “aktivno jedinjenje mikrotubula ” odnosi se na jedinjenja koja stabilizuju mikrotubule, jedinjenja koja destabilizuju mikrotubule i inhibitore polimerizacije mikrotubulina uključujući, ali ne samo njih, taksane, npr. paklitaksel i doketaksel, vinka alkaloide, npr. vinblastin, naročito vinblastin sulfat, vinkristin naročito vinkristin sulfat, i vinorelbin, diskodermolide, kohicin i epotilone i njihove derivate, npr. epotilon B ili D ili njihove derivate. Paklitaksel može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. TAXOL (reg. žig). Doketaksel može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom TAXOTERE. Vinblastin sulfat može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom VINBLASTIN R.P. Vinkristin sulfat može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FARMISTIN. Diskodermolid može biti dobijen, npr. kako je opisano u US 5,010,099. Takodje su uključeni derivati Epotilona koji su opisani u objavljenim patentima WO 98/10121, US 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 i WO 00/31247. Naročito poželjni su Epotilon A i/ili B.

[0084] U ovom tekstu, izraz “alkilirajuće jedinjenje” obuhvata, ali nije ograničen na, ciklofosfamid, ifosfamid, melfalan ili nitrozoureju (BCNU ili Gliadel). Ciklofosfamid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CYCLOSTIN. Ifosfamid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom HOLOXAN.

[0085] Pojam “antineoplastični antimetaboliti” uključuje, ali nije ograničen na, 5-fluorouracil ili 5-FU, kapecitabin, gemcitabin, DNA demetilirajuća jedinjenja, kao što su 5-azacitidin i decitabin, metotreksat i edatreksat, i antagoniste folne kiseline kao što je pemetreksed. Kapecitabin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom XELODA. Gemcitabin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom GEMZAR.

[0086] U ovom tekstu, izraz “jedinjenje platine” obuhvata, ali nije ograničen na, karboplatin, cis-platin, cisplatin i oksaliplatin. Karboplatin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CARBOPLAT. Oksaliplatin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr., pod zaštićenim imenom ELOXATIN.

[0087] Pojam “jedinjenja koja ciljano deluju na smanjenje aktivnosti proteinske ili lipidne kinaze”; ili “aktivnosti proteinske ili lipidne fosfataze”; ili “druga anti-angiogenska jedinjenja” na način na koju su ovde prikazana uključuju, ali nisu ograničena na, inhibitore protein tirozin kinaze i/ili serin i/ili treonin kinaze ili inhibitore lipid kinaze, npr.,

a) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost receptora za faktor rasta koji vodi poreklo od trombocita (PDGFR), kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost PDGFR, naročito jedinjenja koja inhibiraju PDGF receptor, npr. N-fenil-2-pirimidin-amin derivat, npr. imatinib, SU101, SU6668 i GFB-111;

b) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost receptora za faktor rasta fibroblasta (FGFR);

c) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost receptora I za insulinu sličan faktor rasta (IGF-IR), kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost IGF-IR, naročito jedinjenja koja inhibiraju kinaznu aktivnost IGF-I receptora, kao što su ona jedinjenja koja su opisana u objavljenom patentu WO 02/092599, ili antitela koja ciljano prepoznaju vanćelijski domen IGF-I receptora ili faktora rasta koji se vezuju za ovaj receptor;

d) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost familije Trk receptorske tirozin kinaze, ili efrin B4 inhibitori

e) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost familije Axl receptorske tirozin kinaze;

f) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost Ret receptorske tirozin kinaze; g) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost Kit/SCFR receptorske tirozin kinaze, tj. C-kit receptorske tirozin kinaze - (deo familije PDGFR), kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije c-Kit receptorske tirozin kinaze, naročito jedinjenja koja inhibraju c-Kit receptor, npr. imatinib;

h) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost članova familije c-Abl, produkte fuzije njihovih gena (npr. BCR-Abl kinaze) i mutante, kao što su jedinjenja koja ciljano deluju smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova familije c-AbI i produkata fuzije njihovih gena, npr. N-fenil-2-pirimidin-amin derivate, npr. imatinib ili nilotinib (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 od ParkeDavis; ili dasatinib (BMS-354825);

i) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost članova familije protein kinaze C (PKC) i familije Raf serin/treonin kinaza, članove familija MEK, SRC, JAK, FAK, PDK1, PKB/Akt, i familije Ras/MAPK, i/ili članove familije ciklin-zavisnih kinaza (CDK) i to su naročito oni derivati staurosporina opisani u Američkom patentu br. US 5,093,330, npr. midostaurin; primeri drugih jedinjenja koja deluju na istu način uključuju npr. UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Briostatin 1, Perifosin; Ilmofosin; RO 318220 i RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; izohinolinska jedinjenja kao što su ona opisana u objavljenim prijavama WO 00/09495; FTIs; BEZ235 (P13K inhibitor) ili AT7519 (CDK inhibitor);

j) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost inhibitora protein-tirozin kinaze, kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora protein-tirozin kinaze koja uključuju imatinib mesilat (GLEEVEC) ili tirfostin. Tirfostin je poželjno jedinjenje male molekulske mase (Mr < 1500), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naročito jedinjenje odabrano iz grupe jedinjenja klase benzilidenemalonitril ili S-arilbenzenemaloniril ili bisupstrat hinolin, poželjnije bilo koje jedinjenje odabrano iz grupe koju čine tirfostin A23/RG-50810; AG 99; tirfostin AG 213; tirfostin AG 1748; tirfostin AG 490; tirfostin B44; tirfostin B44 (+) enantiomer; tirfostin AG 555; AG 494; tirfostin AG 556, AG957 i adafostin (adamantil estar 4-{[(2,5-dihidroksifenil)metil]amino}-benzoične kiseline; NSC 680410, adafostin);

k) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost familije receptorskih tirozin kinaza nazvanih epidermalni faktor rasta (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 kao homo- ili heterodimeri) i njihovih mutiranih oblika, kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije EGF receptorskih kinaza, naročito jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju članove familije EGF receptorskih tirozin kinaza, npr. EGF receptor, ErbB2, ErbB3 i ErbB4 ili se vezuju za EGF ili ligande koji su u vezi sa EGF, a to su naročito ona jedinjenja, proteini i monoklonska antitela čije su generičke i specifične osobine prikazane i opisane u objavljenom patentu WO 97/02266, npr. jedinjenje iz pr.39, ili u EP 0 564 409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0787 722, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 i, naročito, WO 96/30347 (npr. jedinjenje poznato kao CP 358774), WO 96/33980 (npr. jedinjenje ZD 1839) i WO 95/03283 (npr. jedinjenje ZM105180); npr. trastuzumab (Herceptin ™), cetuksimab (Erbitux ™), Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 ili E7.6.3, i 7H-pirol-[2,3-d]pirimidin derivati koji su opisani u objavljenom patentu WO 03/013541; i

l) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost c-Met receptora, kao što su jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost c-Met, naročito jedinjenja koja inhibiraju kinaznu aktivnost c-Met receptora, ili antitela koja ciljano deluju na vanćelijski c-Met ili se vezuju za HGF;

m) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost PI3K, kao što je BEZ235 ili BKM120;

n) jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost familije ciklin zavisne kinaze, kao što je PD 0332991.

[0088] Ostala anti-angiogenska jedinjenja imaju drugi mehanizam za njihovu aktivnost, na primer, nevezano za inhibiciju proteinske ili lipidne kinaze kao što je na primer, talidomid (THALOMID) i TNP-470.

[0089] Jedinjenja koja ciljano deluju, smanju ili inhibiraju aktivnost proteinskih ili lipidnih fosfataza su npr. inhibitori fosfataze 1, fosfataze 2A, ili CDC25, npr. okadaična kiselina ili njen derivat.

[0090] Jedinjenja koja indukuju procese ćelijske diferencijacije su npr. retinoična kiselina, α- γ- ili δtokoferol ili α- γ- ili δ-tokotrienol.

[0091] Pojam inhibitor ciklooksigenaze kako je ovde korišćen uključuje, ali nije ograničen na, npr. Cox-2 inhibitore, 5-alkil supstituisanu 2-arilaminofenilacetatnu kiselinu i derivate, kao što su celekoksib (CELEBREX), rofekoksib (VIOXX), etorikoksib, valdekoksib ili 5-alkil-2-arilaminofenilacetatnu kiselinu, npr.5-metil-2-(2’-hloro-6’-fluoroanilin)fenil acetatna kiselina, lumirakoksib.

[0092] Pojam “bisfosfonati” kako je ovde korišćen uključuje, ali nije ograničen na, etidronsku, klodronsku, tiludronsku, pamidronsku, alendronsku, ibandronsku, risedronsku i zoledronsku kiselinu. “Etidronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom DIDRONEL. “Klodronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom BONEFOS. “Tiludronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom SKELID. “Pamidronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AREDIA™. “Alendronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FOSAMAX. “Ibandronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom BONDRANAT. “Risedronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ACTONEL. “Zoledronska kiselina” može biti primenjena u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZOMETA.

[0093] Pojam “inhibitori mTOR” odnosi se na jedinjenja koja inhibiraju ciljni molekul na koji deluje rapamicin kod sisara (mTOR) i koji poseduju antiproliferativnu aktivnost kao što su sirolimus (Rapamune ®), everolimus (Certican™), CCI-779 i ABT578.

[0094] Pojam “inhibitor heparanaze” na način na koji se ovde koristi odnosi se na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju degradaciju heparin sulfata. Pojam uključuje, ali nije ograničen na, PI-88.

[0095] Pojam “modifikator biološkog odgovora” na način na koji se ovde koristi odnosi se na limfokine ili interferone, npr. interferon γ.

[0096] Pojam “inhibitor onkogenih izoformi Ras”, npr. H-Ras, K-Ras, ili N-Ras, na način na koji se ovde koristi odnosi se na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju onkogenu aktivnost Ras npr. “inhibitor farnesil transferaze” npr. L-744832, DK8G557 ili R115777 (Zarnestra).

[0097] Pojam “inhibitor telomeraze” na način na koji se ovde koristi odnosi se na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze. Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze su naročito jedinjenja koja inhibiraju telomerazni receptor, npr. telomestatin.

[0098] Pojam “inhibitor metionin aminopeptidaze” na način na koji se ovde koristi odnosi se na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metionin aminopeptidaze. Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metionin aminopeptidaze su npr. bengamid ili njegove derivate.

[0099] Pojam “inhibitor proteazoma” na način na koji se ovde koristi odnosi se na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma. Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma uključuju npr. Bortezomid (Velcade ™) i MLN 341.

[0100] Pojam “inhibitor metaloproteinaze matriksa” ili (“MMP” inhibitor) na način na koji se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, peptidomimetike kolagena i nepeptidomimetske inhibitore, derivate tetraciklina, npr. hidroksamat peptidomimetski inhibitor batimastat i njegov bioiskoristljivi analog marimastat koji se koristi oralno (BB-2516), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B ili AAJ996.

[0101] Pojam “jedinjenja koja se koriste za lečenje hematoloških maligniteta” na način na koji se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, FMS-slične inhibitore tirozin kinaze npr. jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora za FMS-slične tirozin kinaze (Flt-3R); interferon, 1-b-D-arabinofuranzilcitozin (ara-c) i bisulfan; i ALK inhibitore npr. jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju kinaze anaplastičnih limfoma.

[0102] Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora FMS-sličnih kinaza (Flt-3R) su naročito ona jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju članove familije Flt-3R receptorskih kinaza, npr. PKC412, TKI258, midostaurin, derivat staurosporina, SU11248 i MLN518.

[0103] Pojam “inhibitori HSP90” na način na koji se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući intrinzičnu ATPaznu aktivnost HSP90; razlažući, ciljano delujući, smanjujući ili inhibirajući proteine koji su supstrati za HSP90 mehanizmima koji uključuju ubikvitin proteozomski put. Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući intrizičnu ATPaznu aktivnost HSP90 su naročito ona jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju ATPaznu aktivnost HSP90 npr., 17-alilamino,17-demetoksigeldanamicin (17AAG), derivat geldanamicina; druga sa geldanamicinom povezana jedinjenja; inhibitori radicikol i HDAC. Primer inhibitora HSP90 je AUY922.

[0104] Pojam "regulatori apoptoze" kako se koristi u ovom tekstu, obuhvata ali nije ograničen na jedinjenja koja ciljano deluju, smanjujući ili inhibirajući aktivnost članova familije Bcl2 (kao što je ABT-263) i članova familje IAP (kao što je AEG40826); ili izazivanje apoptoze poznatim ii nepoznatim mehanizmom(ima) dejstva (na primer, TRAIL antitelo, DR5 antitelo).

[0105] Pojam “antiproliferativna antitela“ na način na koji se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, trastuzumab (Herceptin ™), trastuzumab-DM1, erbituks, bevacizumab (Avastin ™), rituksimab (Rituxan<®>), PRO64553 (anti-CD40), 2C4 antitelo i HCD122 antitelo (anti-CD40). Pod antitelima se misli na npr. intaktna monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela nastala iz najmanje 2 intaktna antitela, i fragmente antitela čija dužina nije ograničena dok god ta antitela ispoljavaju željenu biološku aktivnost.

[0106] Za lečenje akutne mijeloidne leukemije (AML), jedinjenja formule (I) mogu biti korišćena u kombinaciji sa standardnim načinima lečenja leukemija, naročito u kombinaciji sa načinima lečenja koji se koriste za lečenje AML. Naročito treba istaći da jedinjenja formule (I) mogu biti primenjivana u kombinaciji sa inhibitorima farnezil transferaze i/ili drugim lekovima koji su korisni u lečenju AML, kao što su Daunorubicin, Adriamicin, Ara-C, VP-16, Teniposid, Mitoksantron, Idarubicin, karboplatin i PKC412.

[0107] Pojam “antileukemijska jedinjanja” uključuje, na primer, Ara-C, analog pirimidina, koji je 2 ́-alfa-hidroksi riboza (arabinozid) derivat deoksicitidina. Takodje je uključen i analog purina hipoksantin, 6-merkaptopurin (6-MP) i fludarabin fosfat.

[0108] Jedinjenja koja ciljano deluju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora histon deacetilaze (HDAC) kao što su natrijum biturat i suberoilanilid hidroksamska kiselina (SAHA) inhibiraju aktivnost enzima poznatih kao histon deacetilaze. Specifičnim inhibitorima HDAC pripadaju MS275, SAHA, FK228 (raniji naziv FR901228), Trihostatin A i jedinjenja opisana u US 6,552,065, naročito, N-hidroksi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i N-hidroksi-3-[4-[(2-hidroksietil){2-(1H-indol-3-il)etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naročito laktat.

[0109] Antagonisti receptora za somatostatin na način na koji se ovde koriste odnose se na jedinjenja koja ciljano deluju na ili inhibiraju somatostatinski receptor kao što je oktreotid, i SOM230 (pasireotid).

[0110] Pristupi koji dovode do oštećenja tumorskih ćelija odnose se na pristupe kao što je jonizujuće zračenje. Pojam “jonizujuće zračenje” u ovom tekstu znači jonizujuće zračenje koje se dešava kao posledica delovanja ili elektromagnetnih talasa (kao što su X-zraci i gama zraci) ili čestica (kao što su alfa i beta čestice). Jonizujuće zračenje se sprovodi tokom radijacione terapije i poznato je u struci, ali nije ograničeno samo na radijacionu terapiju. Videti Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, u Principles and Practice of Oncology, Devita i sar., Eds., 4<th>Edition, Vol.1, str.248-275 (1993).

[0111] Pojam “EDG vezujuća sredstva” kako je ovde korišćen odnosi se na klasu imunosupresanata koji modulišu recirkulaciju limfocita, kao što je FTY720.

[0112] Pojam “inhibitori ribonukleotid reduktaze” odnosi se na analoge pirimidinskih ili purinskih nukleotida, uključujući, ali ne samo, fludarabin i/ili citozin arabinozide (ara-C), 6-tiogvanin, 5-fluorouracil, kladribin, 6-merkaptopurin (naročito u kombinaciji sa ara-C u slučaju lečenja ALL) i/ili pentostatin. Inhibitori ribonukleotid reduktaze koji se izdvajaju su hidroksiureja ili derivati 2hidroksi-1H-izoindol-1,3-diona, kao što su PL-1, PL-2, PL-3, PL-4, PL-5, PL-6, PL-7 ili PL-8 koji su pomenuli Nandy i sar., Acta Oncologica, Vol.33, No.8, str.953-961 (1994).

[0113] U ovom tekstu , izraz “inhibitori S-adenosilmetionin dekarboksilaze” uključuje, ali nije ograničen na jedinjenja koja su opisana u Američkom Patentu br. US 5,461,076.

[0114] Takodje su uključena naročito ona jedinjenja, proteini ili monoklonska antitela specifična za VEGF opisana u objavljenoj prijavi WO 98/35958, npr. 1-(4-hloroanilin)-4-(4-piridilmetil)ftalazin ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, npr. sukcinat, ili u objavljenim patentima WO 00/09495, WO 00/27820, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 i EP 0769947; ona koja su opisani od strane Prewett i sar, Cancer Res, Vol.59, str.5209-5218 (1999); Yuan i sar., Proc Natl Acad Sci U S A, Vol.93, str.14765-14770 (1996); Zhu i sar., Cancer Res, Vol.58, str.3209-3214 (1998); i Mordenti i sar., Toxicol Pathol, Vol. 27, No. 1, str. 14-21 (1999); u WO 00/37502 i WO 94/10202; ANGIOSTATIN, koji su opisali O’Reilly i sar., Cell, Vol.79, str.315-328 (1994); ENDOSTATIN, koji su opisali O’Reilly i sar., Cell, Vol.88, str.277-285 (1997); amidi antranilne kiseline; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; bevacizumab; ili anti-VEGF antitela ili anti-VEGF receptor antitela, npr. rhuMAt i RHUFab, VEGF aptamer npr. makugen; inhibitori FLT-4, inhibitori FLT-3, VEGFR-2 IgG1 antitelo, angiozim (RPI 4610) i bevacizumab (Avastin ™),aksitinib, (N-metil-2-[[3-[(E)-2-piridin-2-ilethenil]-1H-indazol-6-il]sulfanil]benzamid, koji je poznat i kao AG013736, i opisan u objavljenoj PCT prijavi br. WO 01/002369), Brivanib Alaninat ((S)-((R)-1-(4-(4-Fluoro-2-metil-1H-indol-5-iloksi)-5-metilpirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-iloksi)propan-2-il)2-aminopropanoat, koji je poznat i kao BMS-582664), motesanib (N-(2,3-dihidro-3,3-dimetil-1H-indol-6-il)-2-[(4-piridinilmetil)amino]-3-piridinekarboksamid, i opisan u objavljenoj PCT prijavi br. WO 02/066470), pazireotid (takodje poznati i kao SOM230, i opisan u objavljenoj PCT prijavi br. WO 02/010192), sorafenib (prodaje se pod trgovačkim imenom Nexavar®)<.>

[0115] Pojam fotodinamska terapija kao što je ovde korišćeno odnosi se na terapiju u kojoj se u lečenju i prevenciji kancera primenjuju izvesne hemikalije poznate kao fotosenzitivna jedinjenja. Primeri fotodinamske terapije uključuju lečenje jedinjenjima kao što su npr. VISUDYNE (reg. žig) i porfimer natrijum.

[0116] U ovom tekstu, izraz angiostatički steroidi odnosi se na jedinjenja koja blokiraju ili inhibiraju angiogenezu, kao što su npr., anekortav, triamcinolon, hidrokortizon, 11- α-epihidrokotizol, korteksolon, 17 α-hidroksiprogesteron, kortikosteron, dezoksikortikosteron, testosteron, estron i deksametazon.

[0117] Implantati koji sadrže kortikosteroide odnose se na jedinjenja, kao što su npr. fluocinolon, deksametazon.

[0118] “Ostala hemoterapijska jedinjenja” uključuju, ali nisu ograničena na, alkaloide biljaka, jedinjenja hormona i njihovih antagonista; modifikatore biološkog odgovora, poželjno limfokine ili interferone; antisens oligonukleotide ili derivate oligonukleotida; shRNA ili siRNA; ili mešovita jedinjenja ili jedinjenja sa drugim ili nepoznatim mehanizmom delovanja.

[0119 ] Struktura aktivnih jedinjenja identifikovanih pomoću koda nos., generičkih ili zaštićenih imena može se preuzeti iz aktuelnog izdanja standardnog priručnika “The Merck Index” ili iz baze podataka, npr. Patents International (npr. IMS World Publications).

[0120] Ni jedna od citiranih referenci iz ovog teksta nije navedena da bi pružila mogućnost da se citirane reference smatraju predhodnim stanjem tehnike što bi imalo negativan uticaj na patentabilnost ovog pronalaska.

[0121] Jedinjenja pomenuta u gornjem tekstu, koja se mogu koristiti u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I), mogu se dobiti i primeniti kao što je opisano u ovoj oblasti, kao na primer u dokumentima citiranim u gronjem tekstu.

[0122] Jedinjenje formule (I) može se primeniti samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više terapijskih jedinjenja, pri čemu moguća kombinaciona terapija može biti u obliku fiksne kombinacije, ili pak primena jedinjenja iz ovog pronalaska i jednog ili više terapijskih (uključujući profilaktička) jedinjenja može biti jedno za drugim ili nezavisno jedno od drugog, ili kombinovana primena fiksnih kombinacija i jednog ili više terapijskih jedinjenja. Jedinjenje formule (I) može, pored toga ili dodatno, biti primenjeno posebno u terapiji tumora u kombinaciji sa hemioterapijom, radioterapijom, imunoterapijom, fototerapijom, hirurškom intervencijom ili sa kombinacijom navedenih. Dugoročna terapija je jednako moguća kao i adjuvantna terapija u kontekstu drugih strategija tretmana, kako je opisano u prethodnom tekstu. Drugi mogući tretmani su terapija održavanja statusa kod pacijenta nakon regresije tumora, ili čak kao hemiopreventivna terapija, na primer kod rizičnih pacijenata.

[0123] U drugom izvodjenju, pronalazak obezbedjuje jedinjenje formule (I) ili njegovu so (kako je definisano u ovom tekstu), u kombinaciji sa jednim ili više terapijski aktivnih sredstava. Konkretno, drugo terapijsko sredstvo je izabrano od jednog ili više kombinacionih partnera opisanih u ovom tekstu.

[0124] Jedinjenje iz ovog pronalaska može se primeniti bilo simultano, ili pak pre ili nakon jednog ili više drugih terapijskih sredstava. Jedinjenje iz ovog pronalaska može se primeniti odvojeno, istim ili različitim putem primene, ili zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji kao ostala sredstva.

[0125] U jednom izvodjenju, pronalazak obezbedjuje proizvod koji sadrži jedinjenje formule (I) i barem jedno drugo terapijsko sredstvo kao kombinovanu preparaciju za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u terapiji. U jednom izvodjenju, terapija je tretman oboljenja ili stanja posredovanog inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcija. Proizvodi obezbedjeni kao kombinovana preparacija uključuju kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) i druga terapijska sredstva zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji, ili jedinjenje formule (I) i drugo terapijsko sredstvo (sredstva) u odvojenom obliku, npr. u obliku kompleta.

[0126] U jednom izvodjenju, pronalazak obezbedjuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) i drugo terapijsko sredstvo (sredstva). Opciono, farmaceutska kompozicija može sadržati farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, kako je opisano u prethodnom tekstu.

[0127] U jednom izvodjenju, pronalazak obezbedjuje komplet koji sadrži dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija, od kojih barem jedna sadrži jedinjenje formule (I). U jednom izvodjenju, komplet sadrži sredstva za odvojeno držanje navedenih kompozicija, kao što su kontejner, podeljena boca ili podeljeno pakovanje u foliji. Primer ovakvih kompleta je blister pakovanje, obično korišćeno za pakovanje tableta, kapsula i slično.

[0128] Komplet iz pronalaska može se koristiti za primenu različitih doznih oblika, na primer oralnih i parenteralnih, za primenu odvojenih kompozicija u različitim doznim intervalima, kao i za titraciju odvojenih kompozicija jedne prema drugoj. Da bi se poboljšala komplijansa, komplet iz ovog pronalaska obično sadrži uputstvo za primenu.

[0129] Kod kombinacionih terapija iz ovog pronalaska, jedinjenje iz pronalaska i drugo terapijsko sredstvo mogu biti proizvedeni i/ili formulisani od strane istih ili različitih proizvodjača. Štaviše, jedinjenje iz pronalaska i drugo terapijsko sredstvo mogu se udružiti u kombinacionu terapiju: (i) pre nego što se kombinacioni proizvod pošalje lekarima (npr. u slučaju kompleta koji sadrži jedinjenje iz pronalaska i drugo terapijsko sredstvo); (ii) od strane samih lekara (ili prema uputstvima lekara) neposredno pre primene; (iii) kod samih pacijenata, npr. tokom sekvencijalne primene jedinjenja iz pronalaska i drugog terapijskog sredstva.

[0130] Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku tretmana oboljenja ili stanja posredovanog inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcije, gde je jedinjenje formule (I) pripremljeno za primenu sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugo terapijsko sredstvo za upotrebu u postupku tretmana oboljenja ili stanja posredovanog inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcije, gde je drugo terapijsko sredstvo pripremljeno za primenu sa jedinjenjem formule (I). Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku tretmana oboljenja ili stanja posredovanog inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcije, gde je jedinjenje formule (I) primenjeno sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugo terapijsko sredstvo za upotrebu u postupku tretmana oboljenja ili stanja posredovanog inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcije, gde je drugo terapijsko sredstvo pripremljeno za primenu sa jedinjenjem formule (I). Konkretno, oboljenje ili stanje posredovano inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcije je proliferativno oboljenje, poželjno kancer, još bolje jedan od tipova kancera opisanih u ovom tekstu.

[0131] Pronalazak takodje opisuje upotrebu jedinjenja formule (I) u tretmanu oboljenja ili stanja [0132] posredovanih inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcija, pri čemu je pacijent ranije (npr. u okviru 24 časa) tretiran drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje opisuje upotrebu drugog terapijskog sredstva za tretman oboljenja ili stanja posredovanih inhibicijom MDM2/p53 i/ili MDM4/p53 interakcija, pri čemu je pacijent ranije (npr. u okviru 24 sata) tretiran jedinjenjem formule (I).

Sintetički postupci

[0133] Jedinjenja formule (I) mogu se dobiti prema Shemama, intermedijernim postupcima i primerima koji su predstavljeni u daljem delu teksta. Stručnjak upućen u stanje tehnike je svestan da se takvi postupci mogu izmeniti korišćenjem postupaka koji su poznati u stanju tehnike. Na primer, hiralna separacija se može vršiti ranije i kasnije u toku postupka. Reagensi, ili njihove količine, mogu biti zamenjene ili optimizovane, i reakcione smeše mogu da se modifikuju da bi se omogućile tzv. reakcije u jednoj posudi/ sistemu.

[0134] Skraćenice

Ac acetil

AcOH sirćetna kiselina

AlCl3 aluminijum trihlorid

aq. vodeni

API jonizacija pod atmosferskim pritiskom

Boc terc-butoksikarbonil

Konc. rastvor soli zasićeni (na sobnoj temperaturi) rastvor natrijum hlorida

bs široki singlet

<n>BuOH n-butanol

<t>Bu terc-butil

CDI karbonil diimidazol

Celite robin žig Celite Corp. (World Minerals Inc.), Santa Barbara, CA, USA, za filtriranje pomoću dijatomejske zemlje-kieselguhr

CH3CN acetonitril

conc. koncentrovani

d dublet

DCM dihlorometan

DEA dietilamin

DIEIA N,N-dietil-izopropilamin

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DMF N,N-dimetilformamid

DMSO dimetilsulfoksid

ES-MS masena spektrometrija jonizacijom elektrosprejevima

Et etil

Et3N trietilamin

Et2O dietil etar

EtOAc etil acetat

EtOH etanol

equiv ekvivalenti

h čas(ovi)

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum-heksafluorofosfat HBr bromovodonik

HCl hlororovodonik

HOAt 1-hidroksi-7-azabenzotriazol

HPLC tečna hromatografija pod visokim pritiskom

IPAm izopropilamin

iPr izopropil

K2CO3 kalijum karbonat

KHMDS kalijum heksametildisilazid

KO<t>Bu kalijum-terc-butoksilat

KOH kalijum hidroksid

K3PO4 kalijum fosfat

LAH litijum aluminijum hidrid

LC tečna hromatografija

LDA litijium diizopropilamid

LiOH litijum hidroksid

Me metil

MeI metil jodid

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

M multiplet

min minut(i)

mL millilitar(mililitri)

MS Masena Spektrometrija MsCl metansulfonil hlorid

Ms2O anhidrid metansulfonske kiseline NaH natrijum hidrid

NaHCO3natrijum bikarbonat

Na2CO3natrijum karbonat

NaOH natrijum hidroksid

NaOMe natrijum metoksid

NaOEt natrijum etoksid

NaO<t>Bu natrijum terc-butoksid Na2SO4natrijum sulfat

NBS N-bromosukcinimid

NCS N-hlorosukcinimid

n.d. nije odredjen

NH4Cl amonijum hlorid

NH4OH amonijum hidroksid

NIS N-jodosukcinimid

NMM 4-N-metilmorfolin

NMR nuklearna magnetna rezonanca Ph fenil

POCl3 fosfor (III) oksihlorid

s. t (ili ST) sobna temperatura

Rf TLC retencioni faktor

s singlet

scCO2superkritični CO2

sep septet

t triplet

TBAF tetrabuilamonijum fluorid

TBAHS tetrabutilamonijum hidrogen sulfat

TBME terc-butilmetiletar

TBTU O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametilamonijum

tetrafluoroborat

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

TFAA anhidrid trifluorosirćetne kiseline

THF tetrahidrofuran

TLC tankoslojna hromatografija

TMS trimetilsilil

TMSCl trimetilsilil hlorid

tRretenciono vreme

TsCl p-toluensulfonil hlorid

TsOH p-toluensulfonska kiselina

UV ultraljubičasto (zračenje)

[0135] Merenja 1H-NMR se vrše pomoću Bruker Ultrashield<TM>400 (400 MHz), Bruker Ultrashield<TM>600 (600 MHz) ili 500 MHz DRX Bruker CryoProbe (500 MHz) spektrometra korišćenjem trimetilsilana (ili bez upotrebe trimetilsilana) kao unutrašnjeg standarda. Hemijska pomeranja (d-vrednosti) su izražena u ppm nizvodno od signala za trimetilsilan, konstante kuplovanja (J) su izražene u Hz, obrasci cepanja spektara su označeni kao singlet (s), dublet (d), dublet dubleta (dd), triplet (t), kvadriplet (q), multiplet ili više preklapajućih signala (m), široki signal (br). Rastvarači su navedeni u zagradama.

[0136] Hromatografije TLC su uradjene na staklenim pločama koje su prethodno obložene silika-gelom 60 F254 (Merck, Darmstadt, Germany) koristeći odgovarajuće navedene sisteme rastvarača. Vizuelizacija je najčešće radjena pod UV svetlom (254 nm).

Uslovi za HPLC:

LC-MS 1:

[0137]

Kolona: Ascentis Express C182.1 x 30 mm, 2.7 µm. Protok: 1.2 mL/min. Temperatura kolone: 50°C. Gradijent: 2% do 98% B u 1.4 min, 98% B za 0.75 min, 98% do 2% B u 0.04 min, 98% B za 0.01 min; A = voda 0.05% mravlja kiselina 0.05% amonijum acetat, B = acetonitril 0.04%-tna mravlja kiselina

Detekcija-potpuno skeniranje: 215-350 nM

LC-MS 2:

[0138] Kolona: Acquity HSS T32.1 x 50 mm, 1.8 µm. Protok: 1.2 mL/min. Temperatura kolone: 50°C. Gradijent: 2% do 98% B u 1.4 min, 98% B za 0.75 min, 98% do 2% B u 0.04 min, 2% B za 0.01 min; A = voda 0.05%-tna mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetata, B = acetonitril 0.04%-tna mravlja kiselina

Detekcija-potpuno skeniranje: 215-350 nM

LC-MS 3:

[0139] Kolona: Acquity HSS T32.1 x 50 mm, 1.8 µm. Protok: 1.2 mL/min. Temperatura kolone: 50°C. Gradijent: 2% do 98% B u 1.4 min, 98% B za 0.75 min, 98% do 2% B u 0.04 min, 2% B za 0.01 min; A = voda 0.05%-tna mravlja kiselina 0.05%-tni amonijum acetat, B = acetonitril 0.04%-tna mravlja kiselin

Detekcija potpuno skeniranje: 215-350 nM

LC-MS 4:

[0140] Kolona: Acquity HSS T32.1 x 50 mm, 1.8 µm. Protok: 1.0 mL/min. Temperatura kolone: 60°C. Gradijent: 5% do 98% B u 1.4 min, 98% B za 0.75 min, 98% do 2% B u 0.04 min, 2% B za 0.01 min; A = voda 0.05 %-tna mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat, B = acetonitril 0.04%-tna mravlja kiselina

Detekcija-potpuno skeniranje: 215-350 nM

HPLC:

HPLC 1:

[0141] Kolona: Waters Chromolith Performance RP-18e 100-4,6. Protok: 2 mL/min. temperatura kolona: Ret. vreme. Gradijent: 2% B za 1 min, 2% do 100% B u 8 min, 100% B za 2min, A = 0.1% HCOOH u vodi, B = acetonitril 0.1% HCOOH

HPLC 2:

[0142] Kolona: Nukleosil 100-3 C18 HD, 4.0 x 70 mm. Protok: 1 mL/min. temperature kolone: 30°C. Gradijent: 2% do 100% B u 5 min, 100% B za 1.5 min, 100% do 2% B u 0.5 min; A = 0.01% TFA u vodi, B = 0.01% TFA u acetonitrilu

Postupci MS:

MS 1:

[0143] Maseni spektar jonizacija elektrosprejom. Pozitivno i negativno naizmenično.

DAD-UV 210-400 nm.

Opseg skeniranja 100-1600 Da u 0.4 sekonde

[0144] Ukoliko drugačije nije naznačeno sve reakcije se vrše u inertnoj atmosferi (argon).

Intermedijer A: etil estar 2-Bromo-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline

[0145]

[0146] U rastvor etil estra 1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (faza A1; 30.6 g, 168 mmol) u THF-u (500 ml) dodaje se NBS (38.9 g, 218 mmol) i smeša se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire dva puta sa 30%-tnim vod. Na2S2O3 i vodom i reekstrahuje sa EtOAc. Sakupljeni organski slojevi se suše i uparavaju. Preostali sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom (silika gel, smeša rastvarača heptani/EtOAc, 100:0 → 25:75). tR: 0.81 min (LC-MS 2); ESI-MS: 261.3/263.3 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ (ppm) 8.20 (s, 1H), 4.46 (sep, 1H), 4.23 (q, 2H), 1.42 (d, 6H), 1.26 (t, 3H).

Faza A1: etil estar 1-Izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline

[0147]

[0148] U rastvor ((Z)-2-N,N-dimetilamino-1-etoksikarbonil-vinil)-metilidin-amonijuma (step A2; 32 g, 189 mmol) u n-BuOH (250 ml) dodaje se propan-2-amin (161 ml, 189 mmol) i smeša se meša 15 h na temperaturi od 130 °C. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom i preostali sirovi materijal se prečišćava fleš hromatografijom (smeša rastvarača heptani/EtOAc, 100:0 → 20:80).<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ (ppm) 7.96 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 4.44 (sep, 1H), 4.19 (q, 2H), 1.40 (d, 6H), 1.23 (t, 3H).

Faza A2: etil estar (Z)-3-Dimetilamino-2-izocijano-akrilne kiseline

[0149]

[0150] U rastvor etil-2-izocijanata (575 g, 5083 mmol) u EtOH (6.5 L) na temperaturi od 0°C, dodaje se u kapima 1,1-dietoksi-N,N-dimetanamin (1.2 L, 6608 mmol). Smeša se meša tokom 30 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razblažuje sa TBME (1.5 L), fiksira na silika gelu i filtrira. Matični rastvor se koncentruje. Ostatak se prečišćava pomoću MPLC (Kolona 880 x 150 mm, 7 kg silika gel, Protok 1000 mL/min, smeša rastvarača heptan/EtOAc, 85:15 → 0:100). tR: 0.74 min (LC-MS 2); ESI-MS: 169.1 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm) 7.15 (s, 2H), 4.18 (q, 2H), 3.20 (bs, 6H), 1.26 (t, 3H).

Intermedijer B: etil estar 2-Bromo-5-[(4-hlorofenil)-hidroksi-metil]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline

[0151]

[0152] U rastvor etil estra 2-bromo-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (intermedijer A; 11.0 g, 42.1 mmol) u THF-u (200 mL) na -78 °C dodaje se lagano LDA (63 mL, 2M rastvor u THF-u, 126 mmol) (preko 30 min). Nakon 2 h na temperaturi od -78 °C, dodaje se lagano rastvor 4-hlorobenzaldehida (8.9 g, 63.2 mmol) u THF-u (10 mL) i reakciona smeša se ostavlja da se zagreva tokom 30 min minuta na temperaturi od -20 °C. Reakciona smeša se kvenčuje na temperaturi od -20 °C sa 6 ml sirćetne kiseline, koncentruje i dodaje u smešu rastvarača EtOAc/voda, ekstrahuje dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se ispiraju sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suše (Na2SO4) i koncentruju. Sirovi materijal se prečišćava hromatografijom (smeša rastvarača heksan/EtOAc, u odnosu 60:40) dajući penu narandžaste boje. Pena se tokom noći obradjuje sa 100 ml 10 %-tnog Et2O/heksan i dobijeni čvrsti proizvod se filtrira i ispire sa heksanom dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje. ESI-MS: 403.1 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.90 (d, J=7.04 Hz, 3 H) 1.26 (t, J=7.04 Hz, 3 H) 1.45 (d, J=7.04 Hz, 3 H) 4.25 (qd, J=7.04, 3.13 Hz, 2 H) 4.69 (quin, J=7.04 Hz, 1 H) 6.73 (d, J=4.30 Hz, 1 H) 6.83 (d, J=4.30 Hz, 1 H) 7.27 (m, J=8.60 Hz, 2 H) 7.41 (m, J=8.60 Hz, 2 H); Rf= 0.15 (smeša rastvarača heksan/EtOAc, 60:40)

Intermedijer E: 2-Bromo-5-[(5-hloro-2-metil-fenil)-6-(4-hloro-fenil)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0153]

[0154] 2-Bromo-5-[(4-hloro-fenil)-5-hloro-2-metil-fenilamino]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksina kiselina (faza E1; 4.7 g, 9.4 mmol), TBTU (3.6 g, 11.3 mmol), DIEA (3.6 g, 28.2 mmol) se rastvaraju u DMF-u (50 mL) i mešaju 7 h na temperaturi od 80 °C. Reakciona smeša se razblažuje sa smešom rastvarača EtOAc/voda, ekstrahuje dva puta sa EtOAc i kombinovani organski ekstrakti se ispiraju sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suše (Na2SO4) i koncentruju. Sirovi materijal se prečišćava fleš hromatografijom (silika gel, smeša rastvarača heksani/EtOAc, 100:0 → 40:60) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje; ESI-MS: 479.2 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.74 (d, J=6.65 Hz, 3 H) 1.25 (d, J=6.65 Hz, 1 H) 1.30 - 1.46 (m, 3H) 1.84 (br. s., 2 H) 4.52 (dt, J=13.39, 6.79 Hz, 1 H) 6.55 (br. s., 1 H) 7.03 - 7.30 (m, 4 H) 7.36 (d, J=7.82 Hz, 2 H) 7.72 (d, J=1.56 Hz, 1 H).

Faza E1: 2-Bromo-5-[(4-hloro-fenil)-5-hloro-2-metil-fenilamino]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina

[0156] U rastvor etil estra 2-bromo-5-[(4-hloro-fenil)-5-hloro-2-metil-fenilamino]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (faza E2; 5.0 g, 9.6 mmol) u THF-u (100 mL) i MeOH (100 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se NaOH (100 mL, 2 M vodeni rastvor, 200 mmol) i reaktanti se mešaju tokom 2 h na sobnoj temperaturi. THF i MeOH se upare, onda se smeša razblažuje u smeši rastvarača EtOAc/H2O i pH smeše se podesi do 5 sa razblaženom HCl. Vodeni sloj se ekstrahuje jedanput sa EtOAc. Organski ekstrakt se suši (Na2SO4) i koncentruje dajući beličastu penu; ESI-MS: 598.2 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 1.20 (d, J=18.38 Hz, 3 H) 1.44 (d, J=6.65 Hz, 3 H) 2.16 (s, 3 H) 4.97 (d, J=7.04 Hz, 1 H) 6.62 (dd, J=7.82, 1.95 Hz, 2 H) 6.78 (d, J=2.35 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 7.27 (m, 2 H) 7.42 (m, J=8.60 Hz, 2 H).

Faza E2: etil estar 2-Bromo-5-[(4-hloro-fenil)-5-hloro-2-metil-fenilamino]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline

[0157]

[0158] U mešani rastvor etil estra 2-bromo-5-[(4-hlorofenil)-hidroksi-metil]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (intermedijer B; 4.2 g, 20.9 mmol) i TEA (5.3 g, 52.0 mmol) u DCM-u (80 mL) na temperaturi od 5 °C dodaje se rastvor Ms2O (3.6 g, 20.9 mmol) i reakciona smeša se meša 15 minuta na temperaturi od 5°C. Onda se dodaje 5-hloro-2-metil anilin (2.2 g, 15.7 mmol). Reakciona smeša se ostavlja da tokom 45 minuta dostigne vrednost sobne temperature i meša na istoj tokom 2 h. Reakciona smeša se razblažuje u smeši rastvarača DCM/voda, ekstrahuje dva puta sa DCM-om i kombinovani organski ekstrakti se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše (Na2SO4) i koncentruju. Sirovi ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (silika gel, smeša rastvarača EtOAc/heksani u odnosu 2:8) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bele pene; ESI-MS: 526.2 [M+H]<+>(LC-MS 2);<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 1.15 (dd, J=9.97, 4.11 Hz, 2 H) 1.15 (s, 1 H) 1.24 (t, J=7.23 Hz, 3 H)1.45 (d, J=7.04 Hz, 3 H) 2.17 (s, 3 H) 4.24 (quin, J=6.74 Hz, 2 H) 4.83 - 5.04 (m, 1 H) 5.92 (d, J=5.47 Hz,1 H) 6.47 (bs, 1 H) 6.63 (dd, J=7.82, 1.95 Hz, 1 H) 6.79 (bs, 1 H) 7.04 (d, J=8.21 Hz, 1 H) 7.26 (m,J=8.60 Hz, 2 H) 7.43 (m, J=8.60 Hz, 2 H).

Primer 29: 5-(5-hloro-2-metil-fenil)-6-(4-hloro-2-metil-fenil)-2-(2,6-dimetoksi-piridin-3-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0159]

[0160] U zagrejanu smešu (80°C) 2-bromo-5-(5-hloro-2-metil-fenil)-6-(4-hloro-2-metil-fenil)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on-a (200 mg, 0.405 mmol) i K3PO4 (344 mg, 1.62 mmol) u dioksanu (3 mL) i vodi (1 mL), u struji argona, dodaje se kompleks PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (33.1 mg, 0.041 mmol). Temperatura se podiže do vrednosti od 100°C i dodaje se 2,6-dimetoksipiridin-3-il borna kiselina (89 mg, 0.487 mmol). Reakciona smeša se meša 15 min na temperaturi od 100°C, ostavlja da se ohladi do sobne temperature, razblažuje u smeši rastvarača EtOAc/voda, i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se ispire sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši (Na2SO4), filtrira, i koncentruje. Ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (smeša rastvarača heksan/EtOAc, 3:1), nakon čega sledi trituracija u smeši rastvarača Et2O/heksan (4:1), što za rezultat ima dobijanje 85 mg jedinjenja iz naslova. tR: 1.40 min (LC-MS 2); ESI-MS: 551.3/553.3 [M+H]<+>(LC-MS 2); Rf: 0.31 (smeša rastvarača heksan/EtOAc, 3:1).

Faza 100.4: 3-Amino-5-hloro-1-metil-1H-piridin-2-on

[0161]

[0162] Smeša jedinjenja koja je dobijena u fazi 100.5 (1.7 g, 9 mmol) i Reni nikal (300 Mg) u MeOH (100 mL) i THF-u (30 mL) se mešaju 16.5 h na sobnoj temperaturi, u atmosferi vodonika. Reakciona smeša se filtrira kroz sloj celita, i koncentruje. Ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (smeša rastvarača heksan/EtOAc, 30:70) dajući jedinjenje iz naslova. tR: 0.52 min (LC-MS 2); ESI-MS: 159.1/161.1 [M+H]<+>(LC-MS 2), Rf= 0.22 (smeša rastvarača heksan/EtOAc, 3:7).

Faza 100.5: 5-hloro-1-metil-3-nitro-1H-piridin-2-on

[0163]

[0164] Smeša NaH (577 mg, 14.4 mmol) i 5-hloro-2-hidroksi-3-nitropiridina (2.1 g, 12.0 mmol) u DMF-u (21 mL) meša se 1 h na temperaturi od 5°C. Dodaje se metil jodid (1.1 mL, 18.0 mmol). Rezultujuća smeša se ostavlja da se zagreje do sobne temperature, meša preko noći, ohladi do temperature od 0°C, kvenčuje dodatkom vode, i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši (Na2SO4), filtrira, i koncentruje. Ostatak se koristi bez daljeg prečišćavanja. tR: 0.61 min (LC-MS 2); ESI-MS: 189.1/191.1 [M+H]<+>(LC-MS 2).

Primer 101: 5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0165]

[0166] Jedinjenje iz naslova se priprema analogno postupku koji je opisan za primer 29 ali korišćenjem proizvoda iz faze 101.1 i 2,4-dimetoksipirimidin.5.ilborne kiseline. Reakcija se odigrava na temperaturi od 110°C. Ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (smeša rastvarača CH2Cl2/MeOH, u odnosu 95:5) zatim se prečišćava preparativnom HPLC (Kolona: Sunfire C18, 30 x 100 mm, 5 µm. Protok: 30 mL/min. Gradijent 30-80% B u 20 min; A = 0.1 % TFA u vodi, B = CH3CN) dajući jedinjenje iz naslova. tR: 1.05 min (LC-MS 2); ESI-MS: 555.3/557.2 [M+H]<+>(LC-MS 2); Rf=0.19 (CH2Cl2/MeOH, 95:5).

Faza 101.1: 2-Bromo-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0167]

[0168] Jedinjenje iz naslova se priprema analogno postupku koji je opisan za intermedijer E ali uz korišćenje proizvoda iz faze 101.2. Nakon ekstrakcije, ostatak se trituriše u EtOAc dajući jedinjenje iz naslova. tR: 1.07 min (LC-MS 2); ESI-MS: 495.0/497.1/499.0 [M+H]<+>(LC-MS 2).

Faza 101.2: 2-Bromo-5-[(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-ilamino)-(4-hloro-fenil)-metil]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina

[0169]

[0170] Jedinjenje iz naslova se priprema analogno postupku koji je opisan za fazu E1 ali korišćenjem proizvoda iz faze 101.3. Ostatak se trituriše u Et2O dajući jedinjenje iz naslova. tR: 1.05 min (LC-MS 2); ESI-MS: 513.2/515.1/517.1 [M+H]<+>(LC-MS 2).

Faza 101.3: etil estar 2-Bromo-5-[(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-ilamino)-(4-hlorofenil)-metil]-1-izopropil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline

[0172] Jedinjenje iz naslova se priprema analogno postupku koji je opisan za fazu E2 ali korišćenjem proizvoda iz faze 100.4. Nakon ekstrakcije, ostatak se trituriše u EtOAc dajući jedinjenje iz naslova. tR: 1.27 min (LC-MS 2); ESI-MS: 541.1/543.1/545.1 [M+H]<+>(LC-MS 2).

Primer 102: (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0173]

[0174] Jedinjenje iz naslova se priprema preparativnim hiralnim razdvajanjem racemskih proizvoda iz primera 101 pomoću HPLC-a. (Kolona: Chiralpak AD, 76.5 x 390 mm. Protok 120 mL/min. heksan/EtOH/MeOH 50:25:25). tR: 5.5 min (Kolona: Chiralpak AD, 4.6 x 250 mm. Protok 1 mL/min. heksan/EtOH/MeOH 50:25:25);<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 8.49 (s, 1H), 7.92 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.33 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 1.33 (d, 3H), 0.51 (d, 3H).

Primer 103: (R)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

[0175]

[0176] Jedinjenje iz naslova se priprema preparativnim hiralnim razdvajanjem racemskih proizvoda iz primera 101 pomoću HPLC. (Kolona: Chiralpak AD, 76.5 x 390 mm. Protok 120 mL/min. heksan/EtOH/MeOH 50:25:25). tR: 10.9 min (Kolona: Chiralpak AD, 4.6 x 250 mm. Protok 1 mL/min. heksan/EtOH/MeOH 50:25:25).<1>H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 8.49 (s, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.43 (m, 2H), 7.31 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 1.33 (d, 3H), 0.51 (d, 3H).

[0177] Odabrana jedinjenja se kristalizuju i dalje karakerišu. Eksperimentalni postupci i opis instrumenata i postupka prikazani su u nastavku:

naziv instrumenta: rendgenski Difraktometar

[0178]

Model: D8 Advance

Proizvodjač: Bruker AXS GMBH

Talasna dužina: 1.5406 A (Cu)

Podešavanje generatora: 30 Kv; 40 mA

Monohromator

Detektor: PSD-Lynx Eye

Eksperimentalni postupak:

[0179]

polazna vrednost za 2-Teta: 2.0 stepena

završna vrednost za 2-Teta: 40.0 stepeni

Veličina koraka integracije: 0.0157 stepeni

Vreme skeniranja: 13.02 min

Temperatura: sobna temperatura

[0180] Sledeći postupci C, D i E opisuju postupke za dobijanje odredjenih kristalnih oblika iz primera jedinjenja koji su ovde opisani.

C. (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on (Primer 102) kristalni oblik A (etanol solvat)

[0181]

[0182] Jedinjenje iz primera 102 (2.02g, ee 99.8%) se sipa u etanol i smeša se zagreva na refluksu uz mešanje da bi se dobio bistar rastvor (ukupna količina etanola koja se koristi: 48ml). Bistar žušćkasti rastvor se ostavlja da se ohladi do sobne temperature uz mešanje tokom noći. Talog se otfiltrira i suši na visokom vakuumu dajući 1.78 g bezbojnog čvrstog oblika A solvata etanola. Čvrsti proizvod sadrži 7.5% etanola (1 ekvivalent), što se vidi pomoću 1H-NMR.

Ugao d vrednost Intenzitet (pikova)

2-Teta ° Angstrem

9.44 9.36 Nizak

9.89 8.94 Visok

10.69 8.27 Nizak

12.33 7.17 Srednji

14.61 6.06 Srednji

16.21 5.46 Srednji

16.66 5.32 Srednji

17.50 5.07 Srednji

17.78 4.98 Srednji

19.83 4.47 Srednji

20.56 4.32 Srednji

22.35 3.97 Srednji

22.98 3.87 Srednji

25.81 3.44897 Srednji

D. (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on (Primer 102) kristalni oblik B (ko-kristal ćilibarne kiseline)

[0183] Jedinjenje iz primera 102 (100 mg) se rastvara u 2 ml etil acetata i zagreje do temperature od 55°C. U rastvor se dodaje 25.5 mg (1.2 ekvivalent) ćilibarne kiseline i smeša se ohladi do temperature od 5°C i ponovo zagreje do temperature od 55°C 4 puta u jednom danu. Formirani talog se filtrira i suši na temperaturi od 40°C na vakuumu u vremenu od 4 časa da bi se dobio proizvod u obliku bezbojnog praha oblika B ćilibarne kiseline (stehiometrija je odredjena pomoću NMR 1.04 ćilibarne kiseline prema I slobodnom obliku).

Ugao d vrednost Intenzitet (pika)

2-Teta ° Angstrem

9.037 9.78 Visok

11.64 7.60 Nizak

14.55 6.08 Nizak

15.14 5.85 Nizak

15.60 5.68 Nizak

16.55 5.35 Nizak

17.27 5.13 Visok

19.52 4.54 Srednji

19.87 4.46 Nizak

20.85 4.26 Srednji

21.14 4.20 Srednji

23.42 3.80 Srednji

23.67 3.76 Srednji

24.54 3.62 Srednji

26.95 3.31 Srednji

E. (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksipirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on (Primer 102) kristalni oblik C (hidrat)

[0184] Jedinjenje iz primera 102 (10 mg) se rastvara u 0.1 ml IPA (izopropil alkohol) uz mućkanje ili zagrevanje na temperaturi od 50°C. Nakon sonifikacije u trajanju od 5 sekundi formira se čvrsti proizvod bele boje i suspenzija se meša 2 dana na sobnoj temperaturi. Čvrsti proizvod se odvaja centrifugiranjem i suši na temperaturi od 40°C na vakuumu u vremenu od 2 dana da bi se dobio IPA solvat. Pomenuti IPA solvat (8 mg) se suspenduje u 0.2 ml MeOH: H2O (1: 9, v/v) uz mešanje na sobnoj temperaturi u vremenu od 2 dana. Dobijeni čvrsti ostatak se odvaja centrifugiranjem i suši na vazduhu u vremenu od 2 h da bi se dobio oblik C hidrata u obliku belog praha.

[0185] Alternativno, etanol solvat iz gore navedenog postupka C se rastvara u metanolu, i dobija se bistar rastvor nakon 10 min uz stalno mešanje na sobnoj temperaturi. Dodaje se voda i talog se primećuje nakon 10 min na sobnoj temperaturi, zatim se dodaje dodatna količina vode uz mešanje u vremenu do 24 časa. Dobijeni čvrsti proizvod se odvaja centrifugiranjem, zatim se suši na sobnoj temperaturi što za rezultat ima dobijanje oblika C hidrata.

Ugao d vrednost Intenzitet (pika)

2-Teta ° Angstrem

8.14 10.86 Nizak

10.09 8.76 Srednji

11.92 7.42 Nizak

14.52 6.10 Srednji

14.88 5.95 Srednji

16.93 5.23 Srednji

17.56 5.05 Srednji

17.98 4.93 Nizak

19.18 4.62 Srednji

20.46 4.34 Visok

20.87 4.25 Srednji

21.86 4.06 Srednji

25.00 3.56 Visok

25.68 3.47 Srednji

25.95 3.43 Nizak

28.57 3.12 Srednji

32.17 2.78 Srednji

Opis crteža:

[0186]

Crtež 3 opisuje mapu difrakcije X-zraka za čvrsti oblik koji je dobijen iz primera 102 korišćenjem postupka C.

Crtež 4 opisuje mapu difrakcije X-zraka za čvrsti oblik dobijen iz primera 102 korišćenjem postupka D. Crtež 5 opisuje mapu difrakcije X-zraka za čvrsti oblik dobijen iz primera 102 korišćenjem postupka E.

Biološki podaci:

Test prenosa energije fluorescence u funkciji vremena (TR-FRET)

[0187] Inhibicija interakcije p53-MDM2 i p53-MDM4 je merena pomoću prenosa energije fluorescence u funkciji vremena (TR-FRET). Prenos energije fluorescence (ili Foerster-ov prenos rezonantne energije) opisuje prenos energije izmedju fluorescentnih molekula, donora (davaoca) i akceptora (primaoca). Za izvodjenje ovog testa se koristi MDM2 protein (amino kiseline 2-188) i MDM4 protein (amino kiseline 2-185) obeležen na C-terminalnoj polovini biotinom u kombinaciji sa streptavidinom koji je obeležen europijumom (Perkin Elmer, Inc., Waltham, MA, SAD) koji služi kao donor fluorofora. Cy5 obeležen peptid koji vodi poreklo od p53 nazvan Cy5-TFSDLWKLL (p53 aa18-26) je akceptor energije. Nakon pobudjivanja molekula donora na 340nm, interakcija vezivanja izmedju MDM2 ili MDM4 i p53 peptida indukuje prenos energije i pojačan odgovor na talasnoj dužini emisije akceptora na 665nm. Nemogućnost formiranja p53-MDM2 ili p53-MDM4 kompleksa zbog vezivanja inhibitornog molekula za p53 vezujuće mesto na MDM2 ili MDM4 ima za posledicu povećanje emitovanja donora na 620nm. Rezultati očitavanja FRET testa se izračunavaju na osnovu tzv. sirovih podataka, direktno izmerena dva različita signala fluorescence merena u tzv. “time-resolved” (vremenski odredjenom) modu (countrate 665nm/countrate 615nm x 1000).

[0188] Test se izvodi na belim pločama sa 384 bunarčića (Greiner Bio-One, referenca 781207) u ukupnoj zapremini od 60 µL, dodatkom 1 µL jedinjenja testiranih na različitim koncentracijama, razblaženim u 100% DMSO-u (finalna DMSO koncentracija 1,7%) u reakcionom puferu (PBS, 125 mM NaCl, 0,001% Novexin (sastoji se od karbonatnih polimera, i dizajniran je tako da se poveća rastvorljivost i stabilnost proteina; Expedeon Ltd., Cambridgeshire, United Kingdom), 0,01% želatina, 0,01% 0,2%, pluronske F-127 (blok kopolimer iz etilenoksida i propilenoksida), 1 mM DTT). Nakon dodatka 0,1 nM biotinilovanog MDM2 ili 2,5 nM biotinilovanog MDM4 (interne preparacije, oba MDM2 i MDM4 su biotinilovani na Cterminalu peptidnog konstrukta), i 0,1 nM (p53-MDM2 test) ili 0,625 nM (p53-MDM4 test) streptavidina obeleženog europijumom (Perkin Elmer), redosledom, rastvor se pre- inkubira 15 minuta na sobnoj temperaturi, zatim se dodaje 10 nM Cy5-p53 peptida (interna priprema, Cy5 boja se direktno vezuje za N-terminalni kraj p53 peptidnog konstrukta) pre inkubacije na sobnoj temperaturi 15 min pre očitavanja ploče. Za merenje uzoraka, Victor II čitač mikro ploča (Perkin Elmer) se koristi sa sledećom postavkom kod p53-MDM4 testa: Ekscitacija 340 nm, emisioni donor 620 nm a emisioni primač 665 nm. Tecan genios Pro se koristi kao čitač za mikrotitar ploče za fluorescentna merenja u testu p53-MDM2. IC50vrednosti se izračunavaju fitovanjem krivih pomoću XLfit softvera. Ukoliko nije specifikovano, reagensi se kupuju od Sigma-Aldrich Chemie GmBH, Buchs, Švajcarska.

n.d. = nije odredjeno

[0189] Postoje takodje testovi koji se mogu koristiti da se pokaže efekat jedinjenja iz ovog pronalaska u ćelijskom kontekstu.

Ćelijski test proliferacije na SJSA-1 i SAOS-2 ćelijama zasnovan na YO-PRO®-1 bojenju jodom [0190] Efekat inhibitora PPI (protein-protein interakcija) na rast ćelija p53 “wild-type” ili mutantnih ćelija se ispituje u testu proliferacije zasnovanom na YO-PRO®-1 bojenju jodom (J Immunol Methods.

1995;185(2):249-58). Osnovna karakteristika ovog testa je upotreba boje DNK-interkalatora YO-PRO®-1 jodida koja nakon vezivanja za DNK emituje jak fluorescentni signal. Dodatno, boja ne prolazi kroz membranu tako da se apoptotične ćelije mogu razlikovati od vijabilne ćelijske populacije tokom ovog eksperimenta. U odsustvu ćelijske permeabilnosti, boja ulazi jedino u ćelije koje se nalaze na početku procesa apoptoze. Nakon tretmana ćelija puferom za lizu, može se proceniti ukupan broj ćelija.

[0191] Da bi se PPI inhibitori testirali na rast ćelija, SJSA-1 ćelije (p53 “wild-type” ćelije) i SAOS-2 ćelije (p53 “zero” ćelije) se zasejavaju na mikrotitarskim pločama sa 96 bunarčića i tretiraju opadajućim koncentracijama jedinjenja. Nakon inkubacionog perioda od 72 sata, 2,5 µM YO-PRO®-1 jodida dodaje se direktno na ćelije i prvo očitavanje se vrši na standardnom čitaču ploča za fluorescenciju (filter se setuje na 485/530 nm) da bi se otkrio relativan broj apoptotičnih ćelija. Zatim se ćelije učine permeabilnim direktnim dodavanjem pufera za lizu koji sadrži detergente NP40, EDTA i EGTA tako da se dobiju finalne koncentracije od 0,01 % i 5 mM, redosledom. Nakon završene permeabilizacije, ukupan broj ćelija se kvantifikuje tokom drugog očitavanja, uz korišćenje čitača ploča za fluorescenciju sa istim podešavanjima.

[0192] Pronalazak dalje uključuje bilo koju varijantu prikazanih procesa, u kojima se intermedijerni proizvod koji se može dobiti u bilo kojoj fazi procesa, koristi kao polazni materijal i preostale faze postupka se izvode, ili u kojima se polazni material formira in situ pod uslovima reakcije, ili u kome se komponente reakcije koriste u obliku njihove soli ili optički čistog materijala. Jedinjenja iz pronalaska i intermedijeri se takodje mogu prevesti jedni u druge, na osnovu postupaka koji su generalno poznati stručnjacima koji su upućeni u stanje tehnike.

[0193] Sledeći primeri su namenjeni da ilustruju pronalazak i ne treba ih tumačiti kao ograničenje istog. Temperature su merene u stepenima Celzijusa. Ukoliko nije dugačije naznačeno, sva uparavanja se vrše pod sniženim pritiskom, po mogućstvu izmedju 15 mm Hg i 100 mm Hg (= 20-133 mbar). Struktura finalnih proizvoda, intermedijera i polaznih materija potvrdjena je standardnim analitičkim metodama, na primer, mikroanalizom i spektroskopskim karakteristikama, kao što su na primer, MS, IR, NMR. Skraćenice koje su ovde korišćene, uobičajene su u stanju tehnike.

[0194] Svi polazni materijali, gradivni blokovi, reagensi, kiseline, baze, dehidratacioni agensi, rastvarači i katalizatori korišćeni za sintezu jedinjenja prikazanog pronalaska su ili komercijalno dostupni ili se mogu dobiti postupcima organske sinteze koji su poznati stručnjacima u stanju tehnike (Houben-Weil 4<th>Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volumen 21). Jedinjenja iz datog pronalaska se mogu dobiti postupcima organske sinteze koji su poznati stručnjacima upućenim u stanje tehnike kako je pokazano u sledećim primerima.

In vivo eksperimenti

[0195] Takodje postoje eksperimenti koji mogu da pokažu antitumorsku aktivnost jedinjenja formule (I) in vivo.

[0196] Na primer, ženke miševa Harlan kojima nedostaje timus (Indianapolis, Indiana, SAD) atimusni nu/nu miševi sa podkožno (s.c) presadjenim humanim osteosarkom SJSA-1 tumorima mogu da se koriste za odredjivanje anti-tumorske aktivnosti inhibitora interakcije p53/MDM2. Nultog dana, kada su životinje pod narkozom nakon peroralne primene Forene® (1-hloro-2,2,2-trifluoroetildifluormetiletra, Abbot, Wiesbaden, Nemačka), u levi bok pod kožu im se ubaci 3x10<6>ćelija tumora. Kada tumori dostignu zapreminu od 100 mm<3>, miševi se nasumično podele u grupe od 6-8 životinja i započinje se sa tretmanom. Tretman se izvodi u periodu od 2-3 nedelje i sastoji se u peroralnom, intravenskom ili intraperitonealnom davanju jedinjenja formule (I) jednom dnevno (ili manje često) pogodnim aplikatorom u odredjenoj dozi. Tumori se mere dva puta nedeljno pomoću kliznog mernog instrumenta i izračunava se volumen tumora.

[0197] Kao zamena za ćelijsku liniju SJSA-1, na isti način se mogu koristitu druge ćelijske linije, na primer,

• HCT116 ćelijska linija karcinoma kolona (ATCC No. CCL-247);

• klon LNCaP ćelijske linije karcinoma prostate FGC (ATCC No. CRL-1740);

• RKO ćelijska linija karcinoma kolona (ATCC No.CRL-2577);

• HT1080 ćelijska linija fibrosarkoma (ATCC No. CCL-121);

• A375 ćelijska linija malignog melanoma (ATCC No. CRL-1619),

• NCI-H460 ćelijska linija velikih ćelija karcinoma pluća (ATCC No. HTB-177);

• JEG-3 horiokarcinom (ATCC No. HTB-36)

• ZR-75-1 duktalni karcinom dojke (ATCC No. CRL-1500)

Claims (11)

1. PATENTNI ZAHTEVI: 1. Jedinjenje koje predstavlja 5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on

   ili njegova so.
2. 2. Jedinjenje koje predstavlja (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on:

   ili njegova so.
3. 3. Kristalni oblik A (etanol solvat) (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hlorofenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on, kako je traženo u patentnom zahtevu 2, naznačen time, što mapa difrakcije X-zraka obuhvata 4 ili više 2 teta vrednosti koje su odabrane iz grupe koju čine 9.89 ±0.2, 12.33 ±0.2, 14.61 ±0.2, 16.21 ±0.2, 16.66 ±0.2,17.50 ±0.2, 17.78 ±0.2, 19.83±0.2 , 20.56±0.2 , 22.35±0.2, 22.98±0.2 ° na temperaturi od oko 22ºC.
4. 4. Kristalni oblik B (ko-kristal ćilibarne kiseline) (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on kako je traženo u patentnom zahtevu 2, naznačen time što mapa difrakcije X-zraka obuhvata 4 ili više od 2 teta vrednosti koje su odabrane iz grupe koja se sastoji od 9.04 ±0.2 , 17.27 ±0.2, 19.52 ±0.2, 20.85 ±0.2, 21.14 ±0.2, 23.42 ±0.2, 23.67 ±0.2, 24.54 ±0.2, 26.95 ±0.2 ° na temperaturi od oko 22ºC.
5. 5. Kristalni oblik C (hidrat) (S)-5-(5-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)-6-(4-hloro-fenil)-2-(2,4-dimetoksi-pirimidin-5-il)-1-izopropil-5,6-dihidro-1H-pirolo[3,4-d]imidazol-4-on kako je traženo u patentnom zahtevu 2, naznačen time, što mapa difrakcije X-zraka obuhvata 4 ili više 2 teta vrednosti koje su odabrane iz grupe koja se satoji od 10.09 ±0.2, 14.52 ±0.2,14.88 ±0.2, 16.93 ±0.2, 17.56 ±0.2,19.18 ±0.2, 20.46 ±0.2, 20.87 ±0.2, 21.86 ±0.2, 25.00 ±0.225.68 ±0.2 , 28.57±0.2 , 32.17±0.2° na temperaturi od oko 22ºC.
6. 6. Jedinjenje iili njegova so kako je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva 1, 2, 3, 4 i 5, za upotrebu kao farmaceutskog sredstva.
7. 7. Jedinjenje iili njegova so kako je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva 1, 2, 3, 4 i 5, za upotrebu u tretmanu poremećaja ili oboljenja koja su posredovana aktivnošću MDM2 i/ili MDM4.
8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time, što poremećaj ili oboljenje posredovano aktivnošću MDM2 i/ili MDM4 predstavlja kancer.
9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, gde poremećaj ili oboljenje posredovano aktivnošću MDM2 i/ili MDM4 predstavlja benigne ili maligne tumore, sarkome mekih tkiva ili sarkome kao što je liposarkom, rabdomiosarkom ili kancer kostiju, karcinom, kao što su karcinom bubrega, jetre, nadbubrežne žlezde, bešike, dojke, želuca, jajnika, kolona, rektuma, prostate, pankreasa, pluća, vaginalni ili štitaste žlezde, mezoteliom, multipli mijelom, gastrointestinalni kancer, naročito karcinom kolona ili kolorektalni adenom, tumor glave i vrata, melanom, hiperplazija prostate, neoplazija, neoplazija epitelnog karaktera, leukemije kao što je akutna mijeloidna leukemija ili hronična limfocitna leukemija B-ćelija, limfom, kao što je B- ili T-ćelijski limfom i metastaze na drugim organima.
10. 10. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje ili njegovu so kao što je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva 1, 2, 3, 4 i 5, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
11. 11. Jedinjenje formule (I) ili njegova sp kako je traženo u bilo kojem od patentnih zahteva 1, 2, 3, 4 i 5, u kombinaciji sa jednim ili više terapijski aktivnih sredstava.