RS56916B1 - Postupci za povećanje efikasnosti terapije kancera usmerene na folr1 - Google Patents

Postupci za povećanje efikasnosti terapije kancera usmerene na folr1

Info

Publication number
RS56916B1
RS56916B1 RS20180231A RSP20180231A RS56916B1 RS 56916 B1 RS56916 B1 RS 56916B1 RS 20180231 A RS20180231 A RS 20180231A RS P20180231 A RSP20180231 A RS P20180231A RS 56916 B1 RS56916 B1 RS 56916B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
folr1
antibody
cancer
staining
expression
Prior art date
Application number
RS20180231A
Other languages
English (en)
Inventor
Christina N Carrigan
Kathleen R Whiteman
Gillian Payne
Sharron Ladd
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Publication of RS56916B1 publication Critical patent/RS56916B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5758—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites
    • G01N33/5759—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites involving compounds localised on the membrane of tumour or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis
UNAKRSNA VEZA SA SRODNIM PRIJAVAMA
[0001] Ova prijava ima prioritet od SAD privremene patentne prijave br. 61/471,007, koja je podneta 01.04.2011.
OSNOVA PRONALASKA
Oblast pronalaska
[0002] Oblast pronalaska se uopšteno odnosi na povećanje efikasnosti lečenja kancera koji se odlikuju prekomernom ekspresijom humanog folatnog receptora 1 (FOLR1). Specifičnije, pronalazak se odnosi na efikasnije lečenje pacijenata koji su podložni ili im je dijagnostikovan kancer, u kome tumorske ćelije prekomerno eksprimiraju FOLR1 kao što je određeno testom ekspresije gena, sa FOLR1 antagonistom, npr., FOLR1 imunokonjugatom.
Stanje tehnike
[0003] Kancer je jedan od vodećih uzročnika smrtnosti u razvijenom svetu, sa preko milion ljudi kojima je dijagnostikovan kancer i 500 000 smrtnih slučajeva godišnje, samo u Sjedinjenim Američkim Državama. Ukupno uzevši, procenjuje se da će se kod više od 1 na svaka 3 čoveka tokom života razviti neki oblik kancera. Postoji više od 200 različitih tipova kancera, a četiri od njih - kancer dojke, pluća, kolorektalni kancer i kancer prostate - čine preko polovine svih novih slučajeva (Jemal et al., 2003, Cancer J. Clin. 53:5-26).
[0004] Folatni receptor 1 (FOLR1), poznat i kao folatni receptor-alfa, ili folat-vezujući protein, je N-glikozilovani protein koji se eksprimira na plazminoj membrani ćelija. FOLR1 ima visok afinitet za folnu kiselinu i za nekoliko redukovanih derivata folne kiseline. FOLR1 posreduje u dostavljanju fiziološkog folata, 5-metiltetrahidrofolata, u unutrašnjost ćelija.
[0005] FOLR1 se prekomerno eksprimira u velikoj većini kancera jajnika, kao i u mnogim kancerima uterusa, endometrijuma, pankreasa, bubrega, pluća i dojke, dok je ekspresija FOLR1 u normalnim tkivima ograničena na apikalnu membranu epitelnih ćelija proksimalnih kanalića bubrega, alveolarnih pneumocita pluća, mokraćnu bešiku, testise, horoidni pleksus i tiroideu (Weitman SD, et al., Cancer Res 52: 3396-3401 (1992); Antony AC, Annu Rev Nutr 16: 501-521 (1996); Kalli KR, et al. Gynecol Oncol 108: 619-626 (2008)). Ovaj obrazac ekspresije FOLR1 čini ga poželjnim ciljem za terapiju kancera usmerenu na FOLR1.
[0006] Zbog toga što je kancer jajnika tipično bez simptoma do uznapredovalog stadijuma, obično se dijagnostikuje u kasnom stadijumu i ima lošu prognozu kada se leči trenutno dostupnim postupcima, tipično hemioterapijskim lekovima posle hirurškog smanjenja mase tumora (von Gruenigen V et al., Cancer 112: 2221-2227 (2008); Ayhan A et al., Am J Obstet Gynecol 196: 81 e81-86 (2007); Harry VN et al., Obstet Gynecol Surv 64: 548-560 (2009)). Prema tome, postoji jasna nezadovoljena medicinska potreba za efikasnijim terapijskim sredstvima za kancere jajnika.
REZIME PRONALASKA
[0007] Predmetni pronalazak zasniva se na otkriću dinamičkog opsega ekspresije FOLR1 u tumorskom tkivu i otkriću da tumori sa povišenim nivoima ekspresije FOLR1 imaju bolji odgovor na lečenje anti-FOLR1 antitelima ili anti-FOLR1 imunokonjugatima. Predmetni pronalazak pogodno omogućava lečenje pacijenata koji imaju veću verovatnoću da odgovore na lečenje primenom terapijskih sredstava, tj., anti-FOLR1 antitela ili anti-FOLR1 imunokonjugata, kod pacijenata kod kojih je nađen povišeni nivo ekspresije FOLR1.
[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje antitelo protiv folatnog receptora 1 (FOLR1) ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta, gde je povišena ekspresija FOLR1 gena ili proteina u uzorku kancera kod pomenutog subjekta detektovana korišćenjem postupka za detekciju koji pravi razliku između intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1, u poređenju sa intenzitetom bojenja ili ravnomernošću bojenja u jednom ili više referentnih uzoraka, gde je efikasnost terapije kancera sa anti-FOLR1 antitelom ili anti-FOLR1 imunokonjugatom na taj način povećana;
gde anti-FOLR1 antitelo za upotrebu u terapiji kancera sadrži:
(i) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC), i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4 (huMov19 vLCv1.00) ili
(ii) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC) i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60); i
gde anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu u terapiji kancera sadrži anti-FOLR1 antitelo, linker, i citotoksin, gde anti-FOLR1 antitelo anti-FOLR1 imunokonjugata sadrži:
(i) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC), i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4 (huMov19 vLCv1.00) ili
(ii) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC) i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60).
[0009] Sledeći primeri izvođenja pronalaska definisani su patentnim zahtevima 2 do 17.
[0010] Predmetni pronalazak opisuje postupak za identifikaciju subjekta koji ima predispoziciju da odgovori pozitivno na terapijsko sredstvo protiv kancera koje ciljno deluje na folatni receptor 1 (FOLR1), postupak obuhvata detekciju ekspresije FOLR1 u uzorku tkiva subjekta.
[0011] Predmetni pronalazak takođe opisuje postupak za povećanje verovatnoće efikasnosti lečenja kancera, postupak obuhvata primenu terapijski efikasne doze antikancerskog terapeutika koji ciljno deluje na FOLR1 kod subjekta, gde je nađeno da je ekspresija FOLR1 u uzorku tkiva subjekta povećana.
[0012] Predmetni pronalazak takođe opisuje postupak za predviđanje efikasnosti lečenja kancera primenom niske doze, postupak obuhvata primenu terapijski efikasne doze terapijskog sredstva protiv kancera koje ciljno deluje na FOLR1 kod subjekta, gde je kod pomenutog subjekta nađena povišena ekspresija FOLR1 u uzorku.
[0013] U jednom primeru izvođenja, postupci su usmereni na karcinom jajnika, nesitnoćelijski adenokarcinom pluća (uključujući bronhioloalveolarni karcinom), bubrežne karcinome i karcinome endometrijuma.
[0014] U jednom primeru izvođenja, stepen i ravnomernost ekspresije FOLR1 detektuje se pomoću imunohistohemije (IHC), protočne citometrije, ili hibridizacije nukleinskih kiselina. U drugom primeru izvođenja, nivo ekspresije FOLR1 detektuje se pomoću imunohistohemije. Neograničavajući primeri IHC uključuju IHC metode koje prepoznaju razliku između različitih nivoa FOLR1 i kalibrisane IHC metode, kao što su one koje su ovde opisane. Ekspresija FOLR1 može da se oceni korišćenjem odgovarajućeg sistema ocenjivanja, uključujući, ali bez ograničenja ovde opisane postupke ocenjivanja. Na primer, ekspresija FOLR1 može da se oceni korišćenjem kalibrisanog IHC metoda koji uključuje opseg od 0, 1, 2, 3 i 3+ za intenzitet bojenja pri čemu je 0 najniži nivo intenziteta bojenja a 3+ najviši nivo intenziteta bojenja. Alternativno ili dodatno, ekspresija FOLR1 može da se oceni korišćenjem kalibrisanog IHC metoda koji uključuje ravnomernost bojenja koja se kreće od fokalnog (<25% ćelija obojeno), do heterogenog (25-75% ćelija obojeno), do homogenog (>75% ćelija obojeno), pri čemu je fokalno bojenje najmanje ravnomerno bojenje, a homogeno je najravnomernije bojenje.
[0015] U sledećem primeru izvođenja, meri se ekspresija FOLR1 u uzorku (npr., uzorak tumorskog tkiva) i upoređuje sa jednim ili više referentnih uzoraka, i ekspresija FOLR1 u uzorku tkiva iz tumora subjekta, ksenograftskog tumora, ili ćelijske linije ima rezultat specifičan za FOLR1 u korelaciji sa stepenom i ravnomernošću ekspresije u poređenju sa jednim ili više referentnih uzoraka. U različitim primerima, za uzorak tkiva ili ćeliju sa nivoom intenziteta bojenja FOLR1 od 1, 2, 3 ili 3+ sa homogenim obrascem bojenja smatra se da ima povećanu ekspresiju FOLR1; za uzorak tkiva ili ćeliju sa nivoom 3 intenziteta bojenja FOLR1 sa heterogenim ili fokalnim obrascima bojenja smatra se da ima povišenu ekspresiju FOLR1. U drugom primeru izvođenja, meri se ekspresija FOLR1 u uzorku i poredi sa jednim ili više referentnih uzoraka da bi se odredio uporedivi nivo bojenja. U jednom primeru izvođenja, referentni uzorak ima unapred dodeljeni IHC rezultat i/ili unapred određeni broj antigena po ćeliji (ili ABC) i broj antigena ili ABC za uzorak tkiva može da se odredi na osnovu poređenja.
[0016] U jednom primeru izvođenja, ekspresija FOLR1 u uzorku (npr., uzorak tumorskog tkiva) se meri i poredi sa jednim ili više kontrolnih uzoraka i ekspresija FOLR1 u uzorku tkiva iz tumora subjekta, ksenograftskog tumora, ili ćelijske linije ima specifični rezultat za FOLR1 u korelaciji sa stepenom i ravnomernošću ekspresije u poređenju sa jednim ili više kontrolnih uzoraka. U jednom primeru izvođenja, ekspresija FOLR1 u uzorku poredi se sa uzorkom negativne kontrole koji pokazuje odsustvo ili nisku detektabilnu ekspresiju FOLR1. U drugom primeru izvođenja, ekspresija FOLR1 u uzorku poredi se sa uzorkom pozitivne kontrole koji ima povišenu ekspresiju FOLR1 (nivo 1, 2, 3 ili 3+). U nekim primerima izvođenja, kontrolni uzorci uključuju, ali nisu ograničeni na Namalwa, SW2, SW620, T47D, IGROV-1, 300.19 FR1, HeLa, ili KB ćelije. U određenim primerima izvođenja, kontrolni uzorci uključuju ćelije ili taloge ćelija iz ćelija transficiranih folatnim receptorom (npr., 300.19 FR1).
[0017] U jednom primeru izvođenja, terapijsko antikancersko sredstvo koje ciljno deluje na FOLR1 je FOLR1 imunokonjugat. U jednom primeru izvođenja, imunokonjugat sadrži anti-FOLR1 antitelo, linker, i citotoksin.
[0018] U sledećem primeru izvođenja, anti-FOLR1 antitelo je huMOV19. U drugom primeru izvođenja, linker je odabran iz grupe koja se sastoji od linkera koji je podložan isecanju, linkera koji nije podložan isecanju, hidrofilnog linkera i linkera na bazi dikarboksilne kiseline. U drugom primeru izvođenja, linker je odabran iz grupe koja se sastoji od: N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)pentanoata (SPP) ili N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2-sulfopentanoata (sulfo-SPP); N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)butanoata (SPDB) ili N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2-sulfobutanoata (sulfo-SPDB); N-sukcinimidil 4-(maleimidometil) cikloheksankarboksilata (SMCC); N-sulfosukcinimidil 4-(maleimidometil) cikloheksankarboksilata (sulfoSMCC); N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoata (SIAB); i N-sukcinimidil-[(N-maleimidopropionamido)-tetraetilengikol] estra (NHS-PEG4-maleimid). U drugom primeru izvođenja, linker je N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2-sulfobutanoat (sulfo-SPDB). U drugom primeru izvođenja, citotoksično sredstvo je odabrano iz grupe koja se sastoji od majtanzinoida, analoga majtanzinoida, benzodiazepina, taksoida, CC-1065, analoga CC-1065, duokarmicina, analoga duokarmicina, kaliheamicina, dolastatina, analoga dolastatina, auristatina, derivata tomaimicina i derivata leptomicina ili proleka sredstva. U drugom primeru izvođenja, citotoksično sredstvo je majtanzinoid. U drugom primeru izvođenja, citotoksično sredstvo je N(2’)-deacetil-N(2’)-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtanzin ili N(2)-deacetil-N2-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil)-majtanzin. U drugom primeru izvođenja, citotoksično sredstvo je N(2’)-deacetil-N2-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil)-majtanzin (DM4). U sledećem primeru izvođenja, imunokonjugat sadrži antitelo HUMOV19, sulfo-SPDB i DM4 (IMGN853).
[0019] Pronalazak takođe opisuje kit za merenje ekspresije FOLR1 kod subjekta koji sadrži reagens za detekciju FOLR1, i uputstva za upotrebu. U jednom primeru izvođenja, reagens za detekciju FOLR1 sadrži peptid, protein ili molekulsku probu (tj. nukleinsku kiselinu) koja se vezuje za FOLR1. U drugom primeru izvođenja, reagens za detekciju FOLR1 je anti-FOLR1 antitelo. U drugom primeru izvođenja, kit dodatno sadrži sekundarno antitelo koje se vezuje za anti-FOLRI antitelo. U jednom primeru izvođenja antitelo je uključeno u koncentraciji od 0.5 do 7.5 µg/ml, poželjno 0.9 do 3.8 /- 0.5 µg/ml. U različitim primerima izvođenja, antitelo je uključeno u koncentraciji od 1.0 /- 0.5 µg/ml, 1.5 /- 0.5 µg/ml, 1.9 /- 0.5 µg/ml, 2.5 /- 0.5 µg/ml, 3.0 /- 0.5 µg/ml, 3.5 /- 0.5 µg/ml, 3.8 /- 0.5 µg/ml, ili do 42 µg/ml. U drugom primeru izvođenja, antitelo je uključeno u koncentrovanom rastvoru sa uputstvima za razblaživanje za postizanje finalne koncentracije od 0.9 do 3.8 /- 0.5 µg/ml. U drugom primeru izvođenja, kit dalje sadrži reagens za detekciju izabran iz grupe koja se sastoji od: enzima, fluorofora, radioaktivnog obeleživača i luminofora. U drugom primeru izvođenja, reagens za detekciju je odabran iz grupe koja se sastoji od: biotina, digoksigenina, fluoresceina, tricijuma i rodamina.
[0020] Kit može takođe da uključuje uputstva za detekciju i ocenjivanje ekspresije FOLR1. Kit može takođe da uključuje kontrolne ili referentne uzorke. Neograničavajući primeri kontrolnih ili referentnih uzoraka uključuju uzorke tkiva, taloga ćelija ili ćelija. Kontrolni ili referentni uzorci mogu da budu izvedeni iz uzoraka kulture tkiva ćelijskih linija (normalnih ili tumorskih), normalnog tkiva (normalna kontrola) ili tumorskih tkiva (pozitivna kontrola). Primeri ćelijskih linija uključuju SW620, T47D, IGROV-1, HELA, KB, JEG-3 i ćelijske linije stabilno ili prolazno transficirane ekspresionim vektorom koji eksprimira FOLR1 (npr., 300.19FR1). Primeri tkiva koja mogu da se koriste kao normalna referentna tkiva u postupcima za detekciju ekspresije FOLR1 su ovde opisani i uključuju normalna pluća, pljuvačnu žlezdu i pankreas.
[0021] Pronalazak takođe opisuje postupak za identifikaciju kancera za koji je verovatno da će odgovoriti na anti-FOLR1 antitelo, ili anti-FOLR1 imunokonjugat koji obuhvata: (a) dovođenje u kontakt biološkog uzorka koji sadrži ćelije iz pomenutog kancera sa sredstvom koje se vezuje za FOLR1 protein na površini ćelije; (b) detekciju vezivanja pomenutog sredstva koje se vezuje za FOLR1 protein na površini ćelije pomenutog biološkog uzorka iz koraka (a); (c) ocenjivanje pomenutog vezivanja iz koraka (b), gde je pomenuta ocena dodeljena na osnovu poređenja sa jednim ili više referentnih uzoraka; i (d) poređenje pomenutog rezultata u koraku (c) sa ocenom za referentno tkivo ili ćeliju, gde ocena nivoa FOLR1 pomenutog kancera koja je veća od ocene za normalni ili referentni uzorak sa niskom ekspresijom FOLR1, ili ocena za nivo FOLR1 pomenutog kancera koja je jednaka ili veća od ocene za referentni uzorak sa visokom ekspresijom FOLR1 identifikuje pomenuti kancer kao onaj koji će verovatno odgovoriti na anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat. U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer jajnika ili pluća.
[0022] Pronalazak takođe opisuje postupak za identifikaciju tumora kao osetljivog na lečenje sa anti-FOLR1 antitelom, ili anti-FOLR1 imunokonjugatom, pomenuti postupak obuhvata: (a) merenje nivoa ekspresije FOLR1 u uzorku tumorskog tkiva dobijenog iz pomenutog tumora, gde pomenuto merenje obuhvata upotrebu metoda za detekciju koji prepoznaje razliku između intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1 u poređenju sa intenzitetom bojenja ili ravnomernošću bojenja u jednom ili više referentnih uzoraka; (b) ocenjivanje intenziteta bojenja FOLR1 za pomenuti uzorak tumorskog tkiva; i (c) poređenje ocene intenziteta bojenja FOLR1 određene u koraku (b) sa relativnom vrednošću određenom merenjem ekspresije FOLR1 proteina u bar jednom referentnom uzorku, gde pomenuti bar jedan referentni uzorak predstavlja uzorak tkiva, ćelije, ili ćelijskog taloga koji nije osetljiv na lečenje anti-FOLR1 antitelom, ili anti-FOLR1 imunokonjugatom, i gde ocena intenziteta bojenja FOLR1 za pomenuti uzorak određena u koraku (b) koja je viši od pomenute relativne vrednosti identifikuje pomenuti tumor kao osetljiv na lečenje anti-FOLR1 antitelom, ili anti-FOLR1 imunokonjugatom. U određenim primerima izvođenja, metod detekcije se izvodi ručno ili korišćenjem automatizovanog sistema. U jednom primeru izvođenja, metod detekcije je IHC. U drugom primeru izvođenja, IHC je kalibrisana IHC koja može da identifikuje različite nivoe ekspresije FOLR1.
[0023] Pronalazak takođe opisuje postupak za optimizaciju terapijskog režima sa anti-FOLR1 antitelom ili anti-FOLR1 imunokonjugatom za subjekta koji ima kancer pluća ili jajnika, gde pomenuti postupak obuhvata: (a) dovođenje u kontakt pomenutog uzorka uzetog od pomenutog subjekta sa antitelom koje se specifično vezuje za FOLR1 na površini ćelije; (b) merenje vezivanja pomenutog antitela u koraku (a) za pomenuti FOLR1 na površini ćelije u pomenutom uzorku korišćenjem postupka za detekciju koji može da pokaže razliku između intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1 u poređenju sa intenzitetom bojenja ili ravnomernošću bojenja u jednom ili više referentnih uzoraka i ocenjivanje bojenja pomenutog uzorka; i (c) primenu visoke doze anti-FOLR1 imunokonjugata kada je ocena u koraku (b) manja od ili jednaka oceni za referentni uzorak sa normalnom ili niskom FOLR1 ekspresijom, ili primenu niske doze anti-FOLR1 imunokonjugata kada je ocena veća od ocene za referentni uzorak sa normalnom ili niskom ekspresijom FOLR1.
[0024] Pronalazak takođe opisuje postupak za detekciju ekspresije FOLR1 na površini ćelije na kancerskim ćelijama u uzorku tumorskog tkiva subjekta, gde pomenuti postupak obuhvata: (a) dobijanje uzorka tumorskog tkiva, gde je pomenuti uzorak kancera fiksiran u formalinu i ukalupljen u parafinu; (b) dovođenje u kontakt pomenutog uzorka sa antitelom koje se specifično vezuje za FOLR1 na površini ćelije; (c) merenje vezivanja pomenutog antitela u koraku (b) za pomenuti FOLR1 na površini ćelije u pomenutom uzorku tumorskog tkiva korišćenjem postupka za detekciju koji može da prepozna razliku između intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1 u poređenju sa intenzitetom bojenja ili ravnomernosti bojenja u jednom ili više referentnih uzoraka; i (d) ocenjivanje ekspresije FOLR1 pomenutog FOLR1 nakon poređenja nivoa intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja FOLR1 na površini ćelije u pomenutom uzorku tumorskog tkiva sa jednim ili više referentnih uzoraka.
[0025] Pronalazak takođe opisuje postupak za identifikaciju subjekta koji ima kancer pluća ili jajnika kao onog za koga je verovatno da će odgovoriti na režim lečenja niskom dozom anti-FOLR1 antitela ili anti-FOLR1 imunokonjugata, pomenuti postupak obuhvata: (a) dovođenje u kontakt biološkog uzorka koji sadrži ćelije iz pomenutog kancera jajnika ili pluća sa sredstvom koje se vezuje za protein FOLR1 na površini ćelije; (b) detekciju vezivanja pomenutog sredstva za pomenuti biološki uzorak iz koraka (a); (c) ocenjivanje pomenutog vezivanja iz koraka (b), gde je pomenuta ocena pripisana na osnovu poređenja sa jednim ili više referentnih uzoraka; i (d) poređenje pomenute ocene u koraku (c) sa ocenom za referentno tkivo ili ćeliju, gde ocena nivoa FOLR1 za pomenuti kancer jajnika ili pluća koja je veća od ocene za referentni uzorak sa normalnom ili niskom ekspresijom FOLR1, ili ocena nivoa FOLR1 za pomenuti kancer jajnika ili pluća koja je jednaka ili veća od ocene za referentni uzorak sa visokom ekspresijom FOLR1 identifikuje pomenuti kancer jajnika ili pluća kao onaj za koji je verovatno da će reagovati na nisku dozu anti-FOLR1 antitela ili anti-FOLR1 imunokonjugata. U određenim primerima izvođenja, postupak dalje obuhvata primenu
1
terapijski efikasne količine humanizovanog anti-FOLR1 antitela ili anti-FOLR1 imunokonjugata kod pomenutog subjekta.
KRATKI OPISI CRTEŽA
[0026]
Slika 1. Postupak za ručno bojenje: Anti-FOLRl antitela detektuju ekspresiju FOLR1 u transficiranim ćelijama. Ćelije 300.19 su transficirane polinukleotidom koji kodira humani FOLR1. Ekspresija proteina FOLR1 je detektovana korišćenjem mišjeg antitela BN3.2. Smith AE et al, Hybridoma (Larchmt). Oktobar 2007; 26(5):281-8.
Slika 2. Postupak za ručno bojenje: Anti-FOLRl antitela mogu da prepoznaju razliku između različitih nivoa ekspresije FOLR1. Antitelo BN3.2 je korišćeno za detekciju ekspresije FOLR1 u različitim ksenograftskim ćelijama. Granica detekcije za BN3.2 antitelo bila je približno 4000 antitela vezanih po ćeliji (ABC).
Slika 3. Postupak za ručno bojenje: Anti-FOLRl antitela mogu da prepoznaju razliku između različitih nivoa ekspresije FOLR1 u uzorcima tkiva. BN3.2 je korišćen za detekciju ekspresije FOLR1 i u tumorima jajnika (A), kao i u tumorima nesitnoćelijskog kancera pluća (B).
Slika 4. Postupak za ručno bojenje: Ravnomerna ekspresija FOLR1 u tumorima jajnika i NSCLC tumorima. Ekspresija FOLR1 bila je visoka u mnogim od karcinoma jajnika, kao i u adenokarcinomima pluća i bronhioloalveolarnim karcinomima koji su ispitivani. Većina uzoraka karcinoma jajnika imala je najviši intenzitet bojenja u seroznim ili endometrijalnim ćelijama. U NSCLC tumorima, najviše vrednosti ABC nađene su u bronhioloalveolarnom karcinomu i papilarnom adenokarcinomu.
Slika 5. Postupak za ručno bojenje: Ekspresija FOLR1 generalno je ograničena na membranu NSCLC ćelija. Mikroskopija visoke rezolucije otkrila je da je većina FOLR1 bojenja bila ograničena na membranu u NSCLC tumorima.
Slika 6. Postupak za ručno bojenje: Ekspresija FOLR1 generalno je ograničena na membranu ćelija kancera jajnika. Mikroskopija visoke rezolucije otkrila je da je većina FOLR1 bojenja bila ograničena na membranu u tumorima jajnika.
Slika 7. In vivo efikasnost huMovl9-ciljanih konjugata u KB ksenograftskom modelu. Konjugat podložan isecanju huMovl9-SPDB-DM4 koji ciljno deluje na FOLR1 (B) u poređenju sa huC242-SPDB-DM4 koji ne deluje ciljno na FOLR1 (D), i konjugat koji nije podložan isecanju huMov19-PEG4-Mal-DM4 (C) u poređenju sa huC242-PEG4Mal-DM4 koji ne deluje ciljno (E) ispitani su korišćenjem uspostavljenog ksenograftskog modela KB ćelija usađenih subkutano u SCID miševe. Ciljno delovanje huMovl9 na FOLR1 rezultovalo je u značajnom smanjenju srednje zapremine tumora.
Slika 8. Dozno-zavisna anti-tumorska aktivnost lečenja sa IMGN853 u ksenograftima OVCAR-3 humanog karcinoma jajnika. Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja primila je jednu intravensku injekciju PBS.
Slika 9. Dozno-zavisna anti-tumorska aktivnost lečenja sa IMGN853 u ksenograftima IGROV-1 humanog karcinoma jajnika. Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja primila je jednu intravensku injekciju PBS.
Slika 10. Dozno-zavisna anti-tumorska aktivnost lečenja sa IMGN853 u ksenograftima OV-90 humanog karcinoma jajnika. Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja primila je jednu intravensku injekciju PBS.
Slika 11. Dozno-zavisna anti-tumorska aktivnost lečenja sa IMGN853 u ksenograftima SKOV-3 humanog karcinoma jajnika. Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja primila je jednu intravensku injekciju PBS.
Slika 12. Dozno-zavisna anti-tumorska aktivnost lečenja sa IMGN853 u ksenograftima KB humanog cervikalnog adenokarcinoma. Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.0, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja primila je jednu intravensku injekciju PBS.
Slika 13. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativne fotografije i histogrami koji prikazuju ekspresiju FOLR1 u ćelijskim linijama pomoću IHC i protočne citometrije. Ćelije SW620, T47D, Igrov-1, 300.19/FR1, HeLa, i KB su sve ocenjene prema intenzitetu i ravnomernosti bojenja FOLR1. Ćelije SW630 i IGROV-1 su ocenjene kao 1-3 hetero, T47D su ocenjene kao 1-2 hetero, HeLa su ocenjene kao 2-3 hetero, dok su 300.19/FR1 i KB ocenjene kao 3 homo. Slika 14. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativno bojenje FOLR1 u seroznom kanceru jajnika. Obrasci bojenja koji pokazuju 3 homo, 2-3 homo, 2 homo i 2 hetero bojenje prikazani su za isečke tkiva iz seroznog kancera jajnika pomoću IHC.
Slika 15. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativno bojenje FOLR1 u endometrioidnom kanceru jajnika. Obrasci bojenja koji pokazuju 3 homo, 2-3 homo, 3 fokalno i 1-2 hetero bojenje prikazani su za isečke tkiva iz endometrioidnog kancera pomoću IHC.
Slika 16. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativno bojenje FOLR1 u NSCLC podtipu adenokarcinomu (isključujući bronhioloalveolarne karcinome). Obrasci bojenja koji pokazuju 3 homo, 2-3 homo, 2 hetero, 2 homo i 1-2 hetero bojenje prikazani su za isečke tkiva iz nesitnoćelijskog kancera pluća, podtipa adenokarcinoma pomoću IHC.
Slika 17. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativno bojenje FOLR1 u endometrijalnom adenokarcinomu. Obrasci bojenja koji pokazuju 3 hetero, 2 hetero i 1 hetero bojenje prikazani su za isečke tkiva iz endometrijalnog adenokarcinoma pomoću IHC.
Slika 18. Postupci za automatsko bojenje: Reprezentativno bojenje FOLR1 u bubrežnom karcinomu bistrih ćelija. Obrasci bojenja koji pokazuju 2 homo, 2 hetero i 1 hetero bojenje prikazani su za isečke tkiva iz ćelija kancera bubrega pomoću IHC.
Slika 19. Citotoksična aktivnost IMGN853 in vitro. Pet FOLR1-pozitivnih ćelijskih linija (KB, IGROV-1, JEG-3, SKOV-3 i OVCAR-3) i dve FOLR1-negativne ćelijske linije (Namalwa i SW2) ispitivane su prema njihovoj osetljivosti na citotoksična dejstva IMGN853. Ćelije su izložene IMGN853 (puna linija) ili IMGN853 uz dodatak 0.5 µM nekonjugovanog huMov19 (M9346A) (isprekidana linija) tokom 5 dana, i preživljavanje ćelija je određeno testom na bazi WST-8. Reprezentativni podaci su prikazani. Procenat preživljavanja ćelija je grafički prikazan nasuprot logaritma sa osnovom 10 koncentracije IMGN853.
1
Slika 20. Osetljivost FOLR1-pozitivnih ćelijskih linija na IMGN853 nasuprot nivou ekspresije FOLR1. Jačina dejstva i specifičnost IMGN853 ispitivana je prema FOLR1-pozitivnim ćelijskim linijama sa širokim opsegom ekspresije FOLR1. Ćelijske linije su inkubirane sa IMGN853 i KB, Igrov-1, i Jeg-3 su bile specifično osetljive na IMGN853 dok je nekonjugovani huMovl9 (M9346A) pokazao smanjenu aktivnost konjugata. Ćelije Skov-3 i Ovcar-3 nisu bile osetljive na IMGN853 i nekonjugovani huMov19 (M9346A) nije izmenio aktivnost konjugata.
Slika 21. Postupci za automatsko bojenje: Modeli efikasnosti ksenografta karcinoma jajnika, obojeni za FOLR1. Obrasci bojenja koji pokazuju 1-3 hetero (Ovcar 3), 1-3 homo (Igrov 1), 1-2 hetero (Ov 90) i negativno (SKOV 3) prikazani su za isečke tkiva iz ksenografta kancera jajnika pomoću IHC.
Slika 22. Postupci za automatsko bojenje: Mišji modeli ksenografta. Prikazani su obrasci bojenja za FOLR1 u ksenograftima za ćelijske linije NSCLC (A), karcinoma endometrijuma (B) i cervikalnog karcinoma (C). Uzorci NSCLC su pokazali 2-3 homo ili 2 homo bojenje, karcinom endometrijuma je pokazao 2 hetero/3 fokalno bojenje, i cervikalni karcinom je pokazao 3 homo bojenje. Slika 23. Smernice za automatsko bojenje kontrolnih tkiva testa. Prikazani su obrasci bojenja za negativni (ezofagus 0) i pozitivne kontrolne uzorke (pljuvačna žlezda 1-2 hetero, pluća 2 homo, pankreas 3 homo), kao što je utvrđeno pomoću automatizovane IHC.
Slika 24. Smernice za automatsko bojenje tumorskih tkiva. Prikazani su reprezentativni obrasci bojenja za nivo 3, nivo 2 i nivo 1 bojenja na kontrolnom tkivu, kao što je utvrđeno pomoću automatizovane IHC.
Slika 25. Smernice za automatsko bojenje tumorskih tkiva. Prikazani su reprezentativni obrasci bojenja za nivo 3, nivo 2 i nivo 1/negativno bojenje na kontrolnom tkivu, kao što je utvrđeno pomoću automatizovane IHC.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0027] Predmetni pronalazak opisuje postupke za povećanje efikasnosti ili verovatnoće odgovora na lečenje kancera koji se odlikuju prekomernim eksprimiranjem FOLR1. Predmetni pronalazak se zasniva na otkriću dinamičkog opsega ekspresije FOLR1 u tumorskom tkivu u poređenju sa normalnim tkivom i otkriću da su tumori sa povećanim nivoima ekspresije FOLR1 imaju bolji odgovor na lečenje anti-FOLR1 antitelima ili anti-FOLR1 imunokonjugatima. Otkrili smo takođe i razlike u osetljivosti i detekciji dinamičkih opsega između automatizovanih i ručnih postupaka. Kitovi koji sadrže jedan ili više reagenasa korisnih za praktično izvođenje postupaka pronalaska su dodatno opisani.
I. Definicije
[0028] Da bi se olakšalo razumevanje predmetnog pronalaska, slede definicije brojnih pojmova i izraza.
[0029] Pojmovi „humani folatni receptor 1“ ili „FOLR1“, kako se ovde koriste, odnose se na bilo koji nativni humani FOLR1, ukoliko nije drugačije naznačeno. Pojam „FOLR1“ obuhvata neobrađeni FOLR1, „pune dužine“ kao i svaki oblik FOLR1 koji je rezultat obrade unutar ćelije. Pojam takođe obuhvata prirodne varijante FOLR1, npr., varijante nastale splajsovanjem, alelske varijante i izoforme. FOLR1 polipeptidi opisani u ovom tekstu mogu da se izoluju iz različitih izvora, na primer iz različitih tipova humanih tkiva ili iz drugog izvora, ili mogu da se pripreme rekombinantnim ili sintetskim metodima. Primeri FOLR1 sekvenci uključuju, ali se ne ograničavaju na NCBI referentne brojeve P15328, NP_001092242.1, AAX29268.1, AAX37119.1, NP_057937.1, i NP_057936.1, i one prikazane u sekvencama SEQ ID NOs: 1 i 2.
[0030] Termin „povećana ekspresija“ FOLR1 odnosi se na uzorak koji sadrži povišene nivoe ekspresije FOLR1. U jednom primeru, ekspresija FOLR1 se meri pomoću IHC i daje se ocena intenziteta bojenja ili ocena ravnomernosti bojenja poređenjem sa kontrolama (npr., kalibrisane kontrole) koje ispoljavaju definisane ocene (npr. ocena intenziteta od 3 daje se test uzorku ako je intenzitet uporediv sa nivoom 3 kalibrisane kontrole, ili se test uzorku daje ocena intenziteta od 2 ako je intenzitet uporediv sa nivoom 2 kalibrisane kontrole). Na primer, ocena 1, 2, 3, ili 3+ ili veća dodeljena pomoću imunohistohemije označava povećanu ekspresiju FOLR1. Ravnomernost bojenja koja je heterogena ili homogena je takođe indikativna za povećanu ekspresiju FOLR1. Ocene intenziteta bojenja i ravnomernosti bojenja mogu da se koriste same, ili
1
u kombinaciji (npr., 2 homo, 2 hetero, 3 homo, 3 hetero, itd.). U drugom primeru, povećanje ekspresije FOLR1 može da se odredi pomoću detekcije povećanja od najmanje 2 puta, najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta) u odnosu na kontrolne vrednosti (npr., nivo ekspresije u tkivu ili ćeliji iz subjekta bez kancera ili sa kancerom koji nema povišene vrednosti FOLR1).
[0031] „Referentni uzorak“ može da se koristi za pravljenje korelacije i poređenje rezultata dobijenih u postupcima pronalaska iz ispitivanog uzorka. Referentni uzorci mogu da budu ćelije (npr., ćelijske linije, ćelijski talozi) ili tkivo. Nivoi FOLR1 u „referentnom uzorku“ mogu da predstavljaju apsolutnu ili relativnu količinu, opseg količina, minimalnu i/ili maksimalnu količinu, srednju količinu, i/ili medijanu količine FOLR1. Dijagnostički postupci pronalaska uključuju poređenje između nivoa ekspresije FOLR1 u ispitivanom uzorku i „referentne vrednosti“. U nekim primerima izvođenja, referentna vrednost je nivo ekspresije FOLR1 u referentnom uzorku. Referentna vrednost može da bude unapred određena vrednost i može takođe da se odredi iz referentnih uzoraka (npr., kontrolni biološki uzorci) koji se ispituju paralelno sa ispitivanim uzorcima. Referentna vrednost može da bude pojedinačna granična vrednost, kao što je medijana ili srednja vrednost ili opseg vrednosti, kao što je interval poverenja. Referentne vrednosti mogu da se uspostave za različite podgrupe pojedinaca, kao što su osobe sa predispozicijom za kancer, osobe koje imaju rani ili kasni stadijum kancera, osobe muškog i/ili ženskog pola, ili osobe koje prolaze kroz lečenje kancera. Primeri normalnih referentnih uzoraka ili vrednosti i pozitivnih referentnih uzoraka ili vrednosti su ovde opisani.
[0032] U nekim primerima izvođenja, referentni uzorak je uzorak iz zdravog tkiva, posebno odgovarajućeg tkiva koje nije pogođeno kancerom. Ove vrste referentnih uzoraka označene su kao negativni kontrolni uzorci. U drugim primerima izvođenja, referentni uzorak je uzorak iz tumorskog tkiva koje eksprimira FOLR1. Ove vrste referentnih uzoraka označene su kao pozitivni kontrolni uzorci. Pozitivni kontrolni uzorci mogu takođe da se koriste kao komparativni indikator za ravnomernost (hetero nasuprot homo) i/ili stepen (1, 2, 3, 3+) intenziteta bojenja, koji je u korelaciji sa nivoom ekspresije FOLR1. Pozitivni kontrolni uporedni uzorci takođe su označeni kao
1
kalibrisani referentni uzorci koji pokazuju dinamički opseg intenziteta bojenja ili ravnomernosti. Kao što je pokazano u primerima 1-9, referentni uzorci koji ne eksprimiraju FOLR1 uključuju humano ezofagusno tkivo; referentni uzorci za niski FOLR1 uključuje tkivo pljuvačne žlezde (naročito prelazne kanale) i pluća (naročito respiratorni epitelijum); i tkivo sa visokom ekspresijom FOLR1 uključuje pankreas (naročito duktalne ćelije). Kada su u pitanju ćelijske linije, one sa niskom ekspresijom uključuju, ali nisu ograničene na OVCAR3 i T47D, one sa umerenom ekspresijom uključuju, ali nisu ograničene na SW620, IGROV-1, JEG3, i one sa visokom ekspresijom uključuju, ali nisu ograničene na, KB i IGROV1. Naročito poželjna pozitivna referentna linija za visoki FOLR1 je ćelijska linija stabilno ili prolazno transficirana folatnim receptorom 1 (npr., 300.19/FR1). Odgovarajući pozitivni i negativni referentni nivoi FOLR1 za konkretni kancer, mogu da se odrede merenjem nivoa FOLR1 kod jednog ili više odgovarajućih subjekata, i takvi referentni nivoi mogu biti prilagođeni specifičnim populacijama subjekata (npr., referentni nivo može da se prilagodi uzrastu tako da poređenja mogu da se prave između nivoa FOLR1 u uzorcima iz subjekata određenog uzrasta i referentnih nivoa za konkretni stadijum bolesti, fenotip, ili kod njihovog nedostatka u grupi određenog uzrasta). Takvi referentni nivoi mogu da se prilagode specifičnim tehnikama koje se koriste za merenje nivoa FOLR1 u biološkim uzorcima (npr., imunološki testovi, itd.), gde nivoi FOLR1 mogu da se razlikuju u zavisnosti od specifične tehnike koja se koristi.
[0033] Termin „primarno antitelo“ ovde se odnosi na antitelo koje se vezuje specifično za antigen ciljnog proteina u uzorku tkiva. Primarno antitelo je uopšteno prvo antitelo koje se koristi u imunohistohemijskom (IHC) postupku. U jednom primeru izvođenja, primarno antitelo je jedino antitelo koje se koristi u IHC postupku. Termin „sekundarno antitelo“ ovde se odnosi na antitelo koje se vezuje specifično za primarno antitelo, obrazujući tako most između primarnog antitela i sledećeg reagensa, ukoliko ga ima. Sekundarno antitelo je uopšteno drugo antitelo koje se koristi u imunohistohemijskom postupku.
[0034] „Uzorak“ ili „biološki uzorak“ predmetnog pronalaska je biološkog porekla, u specifičnim primerima izvođenja, kao što je iz eukariotskih organizama. U poželjnim
1
primerima izvođenja, uzorak je humani uzorak, ali animalni uzorci mogu takođe da se koriste u praktičnom izvođenju pronalaska. Neograničavajući izvori uzorka za upotrebu u predmetnom pronalasku uključuju čvrsto tkivo, aspirate biopsije, ascite, tečne ekstrakte, krv, plazmu, serum, spinalnu tečnost, limfnu tečnost, spoljne delove kože, respiratornog, intestinalnog, i genitourinarnog trakta, suze, pljuvačku, mleko, tumore, organe, ćelijske kulture i/ili sastojke ćelijske kulture, na primer. Predmetni pronalazak je naročito koristan za uzorke kancera koji uopšteno sadrže čvrste uzorke tkiva, ili druge telesne tečnosti kao što su asciti gde je količina dostupnog materijala mala. Postupak može da se koristi za ispitivanje aspekta ekspresije FOLR1 ili stanja uzorka, uključujući, ali bez ograničenja, poređenje različitih tipova ćelija ili tkiva, poređenje različitih stadijuma razvoja, i detekciju ili određivanje prisustva i/ili vrste bolesti ili abnormalnosti.
[0035] Za ovu svrhu, „isečak“ uzorka tkiva odnosi se na pojedinačni deo ili parče uzorka tkiva, npr. tanak isečak tkiva ili ćelije isečen iz uzorka tkiva. Podrazumeva se da višestruki isečci uzoraka tkiva mogu da se uzmu i podvrgnu ispitivanju prema predmetnom pronalasku. U nekim slučajevima, odabrani deo ili sekcija tkiva sadrži homogenu populaciju ćelija. U drugim slučajevima, odabrani deo sadrži region tkiva, npr. lumen kao neograničavajući primer. Odabrani deo može da bude mali kao jedna ćelija ili dve ćelije, ili može da predstavlja mnogo hiljada ćelija, na primer. U većini slučajeva, sakupljanje ćelija je značajno, i dok je pronalazak opisan za upotrebu u detekciji ćelijskih komponenti, postupak može takođe da se koristi za detekciju komponenti organizma koje nisu ćelijske (npr. rastvorljive komponente u krvi kao neograničavajući primer).
[0036] Pod „napraviti korelaciju“ ili „korelisati“ misli se na upoređivanje, na bilo koji način, performanse i/ili rezultata prvog ispitivanja sa performansom i/ili rezultatima drugog ispitivanja. Na primer, mogu se koristiti rezultati prvog ispitivanja u izvođenju drugog ispitivanja i/ili se mogu koristiti rezultati prvog ispitivanja da se odredi da li drugo ispitivanje treba da se izvede i/ili mogu da se uporede rezultati prvog ispitivanja sa rezultatima drugog ispitivanja. U jednom primeru izvođenja, povećana ekspresija
1
FOLR1 je u korelaciji sa povećanom verovatnoćom efikasnosti antikancerske terapije koja ciljno deluje na FOLR1.
[0037] Pojam „antitelo“ označava imunoglobulinski molekul koji prepoznaje i specifično se vezuje za cilj, na primer protein, polipeptid, peptid, ugljeni hidrat, polinukleotid, lipid, ili kombinaciju gore navedenog, preko najmanje jednog mesta koje prepoznaje antigen unutar varijabilnog regiona imunoglobulinskog molekula. Kako se ovde koristi, pojam „antitelo“ obuhvata intaktna poliklonska antitela, intaktna monoklonska antitela, fragmente antitela (kao što su Fab, Fab’, F(ab’)2, i Fv fragmenti), jednolančane Fv (scFv) mutante, multispecifična antitela kao što su bispecifična antitela stvorena od najmanje dva intaktna antitela, himerna antitela, humanizovana antitela, humana antitela, fuzione proteine koji uključuju deo antitela koji prepoznaje antigen, i svaki drugi modifikovani imunoglobulinski molekul koji uključuje mesto koje prepoznaje antigen, dok god antitela ispoljavaju željenu biološku aktivnost. Antitelo može biti iz bilo koje od pet glavnih klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG, i IgM, ili njihovih potklasa (izotipovi) (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2), na osnovu identiteta njihovih konstantnih domena teškog lanca označenih kao alfa, delta, epsilon, gama i mi, redom. Različite klase imunoglobulina imaju različite i dobro poznate strukture i trodimenzionalne konfiguracije subjedinica. Antitela mogu biti „gola“ ili konjugovana sa drugim molekulima kao što su toksini, radioizotopi, itd.
[0038] „Blokirajuće“ antitelo ili „antagonističko“ antitelo je ono koje inhibira ili redukuje biološku aktivnost antigena za koji se vezuje, na primer FOLR1. U određenom primeru izvođenja, blokirajuća antitela ili antagonistička antitela suštinski ili potpuno inhibiraju biološku aktivnost antigena. Poželjno, biološka aktivnost se smanjuje za 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, ili čak 100%.
[0039] Pojam „anti-FOLR1 antitelo“ ili „antitelo koje se vezuje za FOLR1“ odnosi se na antitelo koje je sposobno da se vezuje za FOLR1 sa dovoljnim afinitetom tako da antitelo bude korisno kao dijagnostičko i/ili terapijsko sredstvo u ciljnom delovanju na FOLR1. Stepen vezivanja anti-FOLR1 antitela za nesrodni, protein koji nije FOLR1 iznosi manje od oko 10% od vezivanja antitela za FOLR1, mereno, npr.,
1
radioimunoesejom (RIA). U određenim formama, antitelo koje se vezuje za FOLR1 ima konstantu disocijacije (Kd) od ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ili ≤0.1 nM. Primeri anti-FOLR1 antitela su poznati u struci i opisani u SAD objavi prijave br.
2012/0009181, koja je ovde obuhvaćena po referenci.
[0040] Pojam „fragment antitela“ odnosi se na deo intaktnog antitela i označava antigen-determinišuće varijabilne regione intaktnog antitela. Primeri fragmenata antitela uključuju, ali se ne ograničavaju na Fab, Fab’, F(ab’)2, i Fv fragmente, linearna antitela, jednolančana antitela, i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.
[0041] „Monoklonsko antitelo“ odnosi se na homogenu populaciju antitela uključenih u visokospecifično prepoznavanje i vezivanje sa jednom antigenom determinantom ili epitopom. Ovo je različito u odnosu na poliklonska antitela koja tipično obuhvataju različita antitela usmerena protiv različitih antigenih determinanti. Pojam „monoklonsko antitelo“ obuhvata intaktna monoklonska antitela i monoklonska antitela pune dužine, kao i fragmente antitela (na primer Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv), jednolančane (scFv) mutante, fuzione proteine koji sadrže deo antitela, i svaki drugi modifikovani imunoglobulinski molekul koji sadrži mesto koje prepoznaje antigen. Pored toga, „monoklonsko antitelo“ odnosi se na antitela napravljena na bilo koji način uključujući, ali ne ograničavajući se na upotrebu hibridoma, fagnu selekciju, rekombinantnu ekspresiju i transgene životinje.
[0042] Pojam „epitop“ ili „antigena determinanta“ koriste se naizmenično u ovom tekstu i odnose se na onaj deo antigena koji može da bude prepoznat određenim antitelom i da se specifično veže sa njim. Kada je antigen polipeptid, epitopi mogu da se formiraju od kontinuiranih aminokiselina i aminokiselina koje nisu kontinuirane, koje su postavljene jedna uz drugu usled tercijarnog sklapanja proteina. Epitopi formirani od kontinuiranih aminokiselina se tipično zadržavaju posle denaturacije proteina, dok se epitopi koji su formirani tercijarnim sklapanjem tipično gube posle denaturacije. Epitop tipično uključuje najmanje 3, i češće, najmanje 5 ili 8-10 amino-kiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
2
[0043] „Afinitet vezivanja“ se uopšteno odnosi na jačinu ukupnog zbira nekovalentnih interakcija između jednog vezujućeg mesta molekula (npr., antitela) i njegovog vezujućeg partnera (npr., antigena). Ukoliko nije drugačije navedeno, kako se koristi u ovom tekstu, „afinitet vezivanja“ se odnosi na suštinski unutrašnji afinitet vezivanja koji odražava interakciju 1:1 između članova vezujućeg para (npr., antitelo i antigen). Afinitet molekula X prema njegovom partneru Y može uopšteno da se predstavi konstantom disocijacije (Kd). Afinitet može da se meri uobičajenim metodima poznatim u struci, uključujući one koje su opisane u ovom tekstu. Antitela sa niskim afinitetom obično se vezuju za antigen sporo, i teže lakoj disocijaciji, dok se antitela sa visokim afinitetom obično vezuju sa antigenom brže, i teže da duže ostanu vezana. U struci su poznati različiti metodi merenja afiniteta vezivanja, od kojih svaki može da se koristi u predmetnom pronalasku. Specifični ilustrativni primeri izvođenja opisani su u tekstu koji sledi.
[0044] „Ili bolje“, kada se koristi u ovom tekstu da označi afinitet vezivanja, odnosi se na snažnije vezivanje između molekula i njegovog vezujućeg partnera. „Ili bolje“, kada se koristi u ovom tekstu, odnosi se na snažnije vezivanje, predstavljeno manjom numeričkom vrednošću Kd. Na primer, ako antitelo ima afinitet prema antigenu od „0.6 nM ili bolji“, znači da je afinitet antitela za antigen <0.6 nM, tj.0.59 nM, 0.58 nM, 0.57 nM itd., ili bilo koja vrednost manja od 0.6 nM.
[0045] Izraz „suštinski sličan“ ili „suštinski isti“, kako se koristi u ovom tekstu, označava dovoljno visok stepen sličnosti između dve numeričke vrednosti (obično jedne udružene sa antitelom pronalaska i druge udružene sa referentnim/uporednim antitelom), tako da stručnjak u oblasti može da razmotri da li je razlika između dve vrednosti od malog ili nikakvog biološkog i/ili statističkog značaja, u kontekstu bioloških karakteristika merenih pomenutom vrednošću (npr., Kd vrednosti). Razlika između pomenute dve vrednosti je manja od oko 50%, manja od oko 40%, manja od oko 30%, manja od oko 20%, manja od oko 10% u poređenju sa vrednošću za referentno/uporedno antitelo.
[0046] Polipeptid, antitelo, polinukleotid, vektor, ćelija ili smeša koji su „izolovani“, predstavljaju polipeptid, antitelo, polinukleotid, vektor, ćeliju ili smešu koji su u obliku u kojem se ne nalaze u prirodi. Izolovani polipeptidi, antitela, polinukleotidi, vektori, ćelije ili smeše uključuju one koji su prečišćeni do stepena da više nisu u obliku koji se nalazi u prirodi. U nekim primerima izvođenja, antitelo, polinukleotid, vektor, ćelija, ili smeša koji su izolovani, suštinski su čisti.
[0047] Kako se koristi u ovom tekstu, „suštinski čist“ odnosi se na materijal koji ima čistoću najmanje 50% (tj., oslobođen je kontaminanata), ima čistoću najmanje 90%, ima čistoću najmanje 95%, ima čistoću najmanje 98%, ili ima čistoću najmanje 99%.
[0048] Pojam „imunokonjugat“ ili „konjugat“, kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na jedinjenje ili njegov derivat koji su povezani sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju (tj., anti-FOLR1 antitelo ili njegov fragment) i definisan je generičkom formulom: C-L-A, gde C = citotoksin, L = linker, i A = sredstvo koje se vezuje za ćeliju ili anti-FOLR1 antitelo ili fragment antitela. Imunokonjugati mogu da se definišu i generičkom formulom u obrnutom redosledu: A-L-C.
[0049] „Linker“ je bilo koja hemijska komponenta sposobna da povezuje jedinjenje, obično lek, kao što je majtanzinoid, sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju kao što je anti-FOLR1 antitelo ili njegov fragment, na stabilan i kovalentan način. Linkeri mogu biti podložni ili suštinski rezistentni na sečenje indukovano kiselinom, sečenje indukovano svetlošću, sečenje indukovano peptidazom, i sečenje disulfidne veze, pri uslovima u kojima jedinjenje ili antitelo ostaju aktivni. Pogodni linkeri dobro su poznati u struci i uključuju, na primer, disulfidne grupe, tioetarske grupe, grupe labilne prema kiselini, fotolabilne grupe, peptidaza-labilne grupe i esteraza-labilne grupe. Linkeri uključuju i naelektrisane linkere i njihove hidrofilne oblike, kako je opisano u ovom tekstu i poznato u struci.
[0050] Pojmovi „kancer“ i „kancerozan“ odnose se na, ili opisuju fiziološko stanje kod sisara pri kojem se populacija ćelija karakteriše neregulisanim ćelijskim rastom. Primeri kancera uključuju, ali se ne ograničavaju na, karcinom, limfom, blastom, sarkom i leukemiju. Preciznije primeri takvih kancera uključuju kancer skvamoznih ćelija, sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, adenokarcinom pluća, karcinom skvamoznih ćelija pluća, kancer peritoneuma, hepatocelularni kancer, gastrointestinalni kancer, kancer pankreasa, glioblastom, kancer cerviksa, kancer jajnika, kancer jetre, kancer mokraćne bešike, hepatom, kancer dojke, kancer kolona, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma ili uterusa, karcinom pljuvačne žlezde, kancer bubrega, kancer jetre, kancer prostate, kancer vulve, tiroidni kancer, karcinom jetre i različite tipove kancera glave i vrata.
[0051] „Tumor“ i „neoplazma“ odnose se na bilo koju masu tkiva koja je rezultat prekomernog rasta ćelija ili proliferacije ćelija, benignu (nekanceroznu) ili malignu (kanceroznu), uključujući prekancerozne lezije.
[0052] Pojmovi „kancerska ćelija“, „tumorska ćelija“ i gramatički ekvivalenti, odnose se na ukupnu populaciju ćelija poreklom od tumora ili prekancerozne lezije, uključujući netumorogene ćelije koje čine masu populacije tumorskih ćelija, i tumorogene matične ćelije (kancerske matične ćelije). Kako se koristi u ovom tekstu, pojam „tumorske ćelije“ biće modifikovan izrazom „netumorogene“ kada se odnosi samo na one tumorske ćelije koje nemaju kapacitet da se obnavljaju i diferenciraju, da bi se ove ćelije razlikovale od kancerskih matičnih ćelija.
[0053] Pojam „subjekt“ odnosi se na bilo koju životinju (npr., sisara), uključujući, ali ne ograničavajući se na nehumane primate, glodare i slično, koji će primati određeni tretman. Tipično, pojmovi „subjekt“ i „pacijent“ koriste se u ovom tekstu naizmenično da bi označili humanog subjekta.
[0054] Primena „u kombinaciji sa“ jednim ili više dodatnih terapijskih sredstava, uključuje istovremenu (uporednu) primenu i primenu jednog za drugim, bilo kojim redom.
[0055] Pojam „farmaceutska formulacija“ odnosi se na preparat koji je u takvom obliku
2
da dopušta efikasnu biološku aktivnost aktivnog sastojka, i ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za subjekta kojem se formulacija daje. Takve formulacije mogu biti sterilne.
[0056] „Efikasna količina“ antitela, kako je ovde objavljeno, je količina dovoljna da ispuni specifičnu svrhu kojoj je namenjena. „Efikasna količina“ može da se odredi empirijski i rutinski, u odnosu na svrhu kojoj je namenjena.
[0057] Pojam „terapijski efikasna količina“ odnosi se na količinu antitela ili drugog leka efikasnu u „lečenju“ oboljenja ili poremećaja kod subjekta ili sisara. U slučaju kancera, terapijski efikasna količina leka može da smanji broj kancerskih ćelija; smanji veličinu tumora; inhibira (tj., uspori u nekoj meri i, u određenom primeru izvođenja, zaustavi) infiltraciju kancerskih ćelija u periferne organe; inhibira (tj., uspori u nekoj meri i, u određenom primeru izvođenja, zaustavi) metastaziranje tumora; inhibira, u nekoj meri, rast tumora; i/ili ublaži u nekoj meri jedan ili više simptoma udruženih sa kancerom. Videti definiciju „lečiti“ u ovom tekstu. Zavisno od mere u kojoj lek može da spreči rast i/ili ubije postojeće kancerske ćelije, on može da bude citostatički i/ili citotoksičan. U određenim primerima izvođenja, identifikacija povećanih nivoa FOLR1 omogućava primenu smanjenih količina terapijskih sredstava koja deluju na FOLR1 za postizanje istog terapijskog delovanja kao sa većim dozama. „Profilaktički efikasna količina“ odnosi se na količinu koja je, u potrebnoj dozi i tokom potrebnog vremena, efikasna za postizanje željenog profilaktičkog rezultata. Tipično, ali ne obavezno, pošto se profilaktička doza koristi kod subjekata pre, ili u ranijem stadijumu bolesti, profilaktički efikasna količina biće manja od terapijski efikasne količine.
[0058] Termin „pozitivno odgovoriti“ uopšteno se odnosi na izazivanje povoljnog stanja kod subjekta. U odnosu na lečenje kancera, termin se odnosi na obezbeđivanje terapijskog dejstva na subjekta. Pozitivna terapijska dejstva kod kancera mogu da se mere na brojne načine (videti, W.A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)). Na primer, inhibicija rasta tumora, ekspresija molekulskog markera, ekspresija serumskog markera, i tehnike molekulskog snimanja sve mogu da se koriste za procenu terapijske efikasnosti terapijskog sredstva protiv kancera. U odnosu na inhibiciju rasta tumora, prema NCI standardima, T/C ≤ 42% je minimalni nivo antitumorske aktivnosti. T/C <10% se smatra visokim nivoom antitumorske aktivnosti, sa T/C (%) = Medijana zapremine tumora podvrgnutog terapiji / Medijana zapremine tumora koji služi kao kontrola x 100.
[0059] Reč „obeleživač“, kada se koristi u ovom tekstu, odnosi se na detektabilno jedinjenje ili smešu, konjugovane direktno ili indirektno sa antitelom tako da se napravi „obeleženo“ antitelo. Obeleživač može da bude detektabilan sam po sebi (npr. radioizotopski obeleživači ili fluorescentni obeleživači) ili, u slučaju enzimskog obeleživača, može da katalizuje detektabilnu hemijsku promenu jedinjenja ili smeše supstrata.
[0060] „Hemioterapijsko sredstvo“ je hemijsko jedinjenje korisno za lečenje kancera, bez obzira na mehanizam delovanja. Klase hemioterapijskih sredstava uključuju, ali se ne ograničavaju na: alkilirajuća sredstva, antimetabolite, biljne alkaloide koji deluju toksično na deobno vreteno, citotoksične/antitumorske antibiotike, inhibitore topoizomeraze, antitela, fotosenzitizere, i inhibitore kinaze. Hemioterapijska sredstva uključuju jedinjenja koja se koriste u „ciljanoj terapiji“ i konvencionalnoj hemioterapiji.
[0061] Pojmovi kao što su „lečiti/tretirati“ ili „lečenje/tretman“ ili „leči/tretira“ ili „ublažavati“ ili „ublažava“ odnose se na 1) terapijske mere koje leče, usporavaju, smanjuju simptome, i/ili zaustavljaju napredovanje dijagnostikovanog patološkog stanja ili poremećaja i 2) profilaktičke ili preventivne mere koje sprečavaju i/ili usporavaju razvoj ciljanog patološkog stanja ili poremećaja. Tako, oni kojima je lečenje potrebno uključuju one koji već imaju poremećaj; one koji su skloni da imaju poremećaj; i one kod kojih poremećaj treba da se spreči. U određenim primerima izvođenja, subjekt se uspešno „leči“ od kancera u skladu sa postupcima predmetnog pronalaska ako pacijent pokazuje jedno ili više od sledećeg: smanjenje kaheksije, povećanje vremena preživljavanja, produženje vremena do progresije tumora, smanjenje mase tumora, smanjenje opterećenja tumorom i/ili produženje vremena do metastaze tumora, vreme do recidiva tumora, tumorski odgovor, potpuni odgovor, delimični odgovor, stabilnu bolest, progresivnu bolest, preživljavanje bez progresije (PFS), ukupno preživljavanje
2
(OS), mereno standardima koje postavlja Nacionalni institut za kancer i SAD administracija za hranu i lekove za odobravanje novih lekova. Videti Johnson et al, (2003) J. Clin. Oncol.21(7):1404-1411.
[0062] „Preživljavanje bez progresije“ (PFS), takođe označeno i kao „vreme do progresije tumora“ (YIP) označava dužinu vremena tokom i posle lečenja tokom koga kancer ne raste. Preživljavanje bez progresije uključuje količinu vremena tokom koga su pacijenti iskusili potpuni odgovor ili delimični odgovor, kao i količinu vremena tokom koga su pacijenti iskusili stabilnu bolest.
[0063] „Preživljavanje bez bolesti“ (DFS) označava dužinu vremena tokom i posle lečenja tokom koga pacijent nema bolest.
[0064] „Ukupno preživljavanje“ (OS) se odnosi na produženje očekivanog trajanja života u poređenju sa osobama ili pacijentima koji nisu podvrgnuti nikakvom delovanju ili lečenju.
[0065] Kako se koristi u predmetnom opisu i patentnim zahtevima, oblici jednine uključuju oblike množine osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.
[0066] Podrazumeva se da su, gde god su primeri izvođenja ovde opisani izrazom „koji sadrži“, inače analogni primeri izvođenja opisani izrazima „sastoji se od“ i/ili „sastoji se uglavnom od“, takođe obezbeđeni.
[0067] Termin „i/ili“ korišćen u izrazu kao što je „A i/ili B“ ovde je namenjen da uključuje i „A i B,“ „A ili B,“ „A,“ i „B.“ Slično tome, termin „i/ili“ korišćen u izrazu kao što je „A, B, i/ili C“ namenjen je da obuhvata svaki od sledećih primera izvođenja: A, B, i C; A, B, ili C; A ili C; A ili B; B ili C; A i C; A i B; B i C; A (samo); B (samo); i C (samo).
2
II. Biološki uzorci
[0068] Biološki uzorci su često fiksirani fiksativom. Obično se koriste aldehidni fiksativi kao što su formalin (formaldehid) i glutaraldehid. Uzorci tkiva fiksirani korišćenjem drugih fiksacionih tehnika kao što je potapanje u alkohol (Battifora and Kopinski, J. Histochem. Cytochem. (1986) 34:1095) su takođe pogodni. Uzorci koji se koriste mogu takođe da budu ukalupljeni u parafin. U jednom primeru izvođenja uzorak tkiva je i fiksiran u formalinu i ukalupljen u parafinu (FFPE). U drugom primeru izvođenja, blok FFPE je obojen hematoksilinom i eozinom pre odabiranja jednog ili više delova za ispitivanje u cilju izbora specifične(ih) oblasti za jezgro FFPE uzorka. Postupci pripreme blokova tkiva iz ovih konkretnih uzoraka korišćeni su u prethodnim IHC ispitivanjima različitih prognostičkih faktora, i/ili su dobro poznati stručnjacima u oblasti (videti, na primer, Abbondanzo et al., Am J Clin Pathol. 1990 May;93(5):698-702; Allred et al., Arch Surg.1990 Jan;125(1):107-13).
[0069] Ukratko, intaktni organ ili tkivo može da se iseče na prilično male delove i inkubira u različitim fiksativima (npr. formalin, alkohol, itd.) tokom različitih perioda vremena dok se tkivo ne „fiksira“. Uzorci mogu da budu praktično intaktno tkivo hirurški uklonjeno iz tela. Uzorci mogu da budu isečeni na razumno mali komad(e) koji odgovaraju opremi koja se rutinski koristi u histopatološkim laboratorijama. Veličina isečenih delova tipično se kreće od nekoliko milimetara do nekoliko centimetara.
III. Konjugati antitela za detekciju
[0070] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje antitela protiv FOLR1, uopšteno monoklonskog tipa, koja su vezana za bar jedno sredstvo tako da obrazuju konjugat antitela za detekciju. Kako bi se povećala efikasnost molekula antitela kao dijagnostika pogodno je spojiti ili kovalentno vezati ili obrazovati kompleks najmanje jednog željenog molekula ili fragmenta. Takav molekul ili fragment može da bude, ali nije ograničen na najmanje jedan reporterski molekul. Reporterski molekul se definiše kao bilo koji fragment koji može da se detektuje korišćenjem testa. Neograničavajući primeri reporterskih molekula koji su konjugovani sa antitelima uključuju enzime, radioobeleživače, haptene, fluorescentne obeleživače, fosforescentne molekule,
2
hemiluminiscentne molekule, hromofore, luminiscentne molekule, fotoafinitetne molekule, obojene čestice i/ili ligande, kao što je biotin.
[0071] Bilo koje sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr., antitelo ili polipeptid) dovoljne selektivnosti, specifičnosti ili afiniteta može da se koristi kao osnova za detekciju FOLR1 polipeptida. Takva svojstva mogu da se procene korišćenjem uobičajenih imunoloških skrining metoda poznatih stručnjacima u oblasti. Mesta za vezivanje za biološki aktivne molekule u molekulu antitela, pored kanonskih antigen-vezujućih mesta, uključuju mesta koja se nalaze u varijabilnom domenu koji može da veže antigen. Osim toga, varijabilni domen je uključen u samovezivanje antitela (Kang et al., 1988) i sadrži epitope (idiotope) koje prepoznaju anti-antitela (Kohler et al., 1989).
[0072] Određeni primeri konjugata koji vezuju protein (npr., antitelo) su oni konjugati u kojima je sredstvo koje se vezuje za protein (npr., antitelo) vezano za detektabilni obeleživač. „Detektabilni obeleživači“ su jedinjenja i/ili elementi koji mogu da se detektuju zahvaljujući svojim specifičnim funkcionalnim svojstvima, i/ili hemijskim osobinama, čija upotreba omogućava detekciju antitela za koje su vezana, i/ili dalje kvantitativno određivanje ako je potrebno.
[0073] Mnoga pogodna sredstva za snimanje su poznata u struci, kao i postupci za njihovo vezivanje za antitela (videti, npr., SAD pat. br. 5,021,236; 4,938,948; i 4,472,509, koji su ovde obuhvaćeni po referenci). Fragmenti za snimanje koji se koriste mogu da budu paramagnetski joni; radioaktivni izotopi; fluorohromi; supstance koje se detektuju pomoću NMR; i/ili snimanje X-zracima, na primer.
[0074] Primeri fluorescentnih obeleživača razmatranih za upotrebu kao proteinvezujući (npr., antitelo) konjugati uključuju Alexa 350, Alexa 430, Alexa 488, AMCA, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665, BODIPY-FL, BODIPY-R6G, BODIPY-TMR, BODIPY-TRX, Cascade Blue, Cy3, Cy5,6-FAM, Dylight 488, fluorescein izotiocijanat, zeleni fluorescentni protein (GFP), HEX, 6-JOE, Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, fikoeritrin, REG, rodamin zeleno, rodamin crveno, tetrametil rodamin (TMR), Renographin, ROX, TAMRA, TET,
2
tetrametilrodamin, Texas Red, i derivate ovih obeleživača (tj. halogenovane analoge, modifikovane izotiocijanatom ili druge linkere za konjugovanje, itd), na primer. Primer radioobeleživača je tricijum.
[0075] Konjugati za detekcija koji vezuju protein (npr., antitelo) obuhvaćeni predmetnim pronalaskom uključuju one za upotrebu in vitro, gde je antitelo vezano za sekundarni vezujući ligand i/ili za enzim (enzimska oznaka) koji će dati obojeni proizvod nakon kontakta sa hromogenim supstratom. Primeri pogodnih enzima uključuju ureazu, alkalnu fosfatazu, vodonik peroksidazu (rena) i/ili glukoza oksidazu. Poželjni sekundarni vezujući ligandi su biotin i/ili avidin i jedinjenja streptavidina. Upotreba takvih obeleživača je dobro poznata stručnjacima u oblasti i opisana, na primer, u SAD pat. br. 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 i 4,366,241.
[0076] Molekuli koji sadrže azido grupe mogu takođe da se koriste za obrazovanje kovalentnih veza sa proteinima putem reaktivnih intermedijera nitrena koji nastaju pod dejstvom ultraljubičastog svetla niskog intenziteta (Potter & Haley, 1983). Naročito, 2- i 8-azido analozi purinskih nukleotida su korišćeni kao mesto-usmerene fotoprobe za identifikaciju proteina koji se vezuju za nukleotid u sirovim ćelijskim ekstraktima (Owens & Haley, 1987; Atherton et al., 1985). 2- i 8-azido nukleotidi su korišćeni za mapiranje domena koji se vezuju za nukleotid u prečišćenim proteinima (Khatoon et al., 1989; King et al., 1989; i Dholakia et al., 1989) i mogu da se koriste kao antitelovezujuća sredstva.
[0077] Nekoliko postupaka je poznato u struci za povezivanje ili konjugaciju antitela za njegov konjugacioni fragment. Neki postupci povezivanja uključuju upotrebu metalnog helatnog kompleksa koristeći, na primer, organsko helirajuće sredstvo kao anhidrid dietilentriaminpentasirćetne kiseline (DTPA); etilentriamintetrasirćetnu kiselinu; N-hloro-p-toluensulfonamid; i/ili tetrahloro-3α-6α-difenilglikouril-3 povezan sa antitelom (SAD pat. br.4,472,509 i 4,938,948, svaki ovde obuhvaćen po referenci). Monoklonska antitela mogu takođe da reaguju sa enzimom u prisustvu sredstva za kuplovanje kao što je glutaraldehid ili perjodat. Protein-vezujući (npr., antitelo) konjugati sa
2
fluoresceinskim markerima pripremaju se u prisustvu ovih sredstava za kuplovanje ili reakcijom sa izotiocijanatom. U SAD pat. br. 4,938,948, snimanje tumora dojke, na primer, postiže se korišćenjem monoklonskih antitela, i detektabilni fragmenti za snimanje su vezani za antitelo korišćenjem linkera kao što je metil-phidroksibenzimidat ili N-sukcinimidil-3-(4-hidroksifenil)-propionat.
[0078] Razmatrana je derivatizacija imunoglobulina selektivnim uvođenjem sulfhidrilnih grupa u Fc region imunoglobulina korišćenjem reakcionih uslova koji ne menjaju mesto kombinovanja u antitelu. Opisano je da konjugati antitela proizvedeni prema ovoj metodologiji pokazuju poboljšanu dugovečnost, specifičnost i osetljivost (SAD pat. br. 5,196,066, ovde obuhvaćen po referenci). Mesto-specifično vezivanje efektora ili reporterskih molekula, gde je reporter ili efektorski molekul konjugovan sa ostatkom ugljenog hidrata u Fc regionu, takođe je opisan u literaturi (O’Shannessy et al., 1987).
[0079] Imunoglobulini mogu da budu radioaktivno obeleženi nuklidima kao što je tricijum. Takođe se koriste nanočestice zlata (kao što su veličine od oko 0.5 nm-40 nm) i/ili Quantum Dots (Hayward, Calif.).
IV. Enzimi i supstrati (hromageni)
[0080] Upotreba supstrata i indikatora se razmatra za detekciju FOLR1, kao što je prikazano u primerima izvođenja datim u nastavku teksta, na primer.
[0081] Peroksidaza rena (HRP) je enzim koji prvo obrazuje kompleks sa vodonik peroksidom i zatim uzrokuje njegovo raspadanje, čime nastaje voda i atomski kiseonik. Kao mnogi drugi enzimi, HRP i neke aktivnosti slične HRP, mogu da se inhibiraju viškom supstrata. Kompleks obrazovan između HRP i vodonik peroksida u višku je katalitički neaktivan i u odsustvu donora elektrona (npr. hromogene supstance) je reverzibilno inhibiran. Vodonik peroksid u višku i odsustvo donora elektrona gasi endogene aktivnosti HRP.
[0082] Kada se koristi u test-sistemima, HRP može takođe da se koristi da pretvori definisani supstrat u njegov aktivirani hromagen, izazivajući tako promenu boje. Enzim HRP može da bude konjugovan sa antitelom, proteinom, peptidom, polimerom, ili drugim molekulom brojnim postupcima. Takvi postupci su poznati u struci. Dodavanje glutaraldehida rastvoru koji sadrži smešu HRP i antitelo će rezultovati u više molekula antitela konjugovanih jednog sa drugim nego sa enzimom. U dvostepenom postupku, HRP reaguje prvo sa bifunkcionalnim reagensom. U drugom stadijumu, samo aktivirani HRP se meša sa antitelom, rezultujući u mnogo efikasnijem obeležavanju i izostanku polimerizacije. HRP se takođe konjuguje sa (strept)avidinom korišćenjem dvostepenog postupka sa glutaraldehidom. Ovaj oblik se koristi u postupcima gde supstrat predstavljaju LAB i LSAB, na primer. Konjugacija sa biotinom takođe uključuje dva koraka, budući da biotin mora prvo da se derivatizuje u biotinil-N-hidroksisukcinimid estar ili u biotin hidrazid pre nego što može da reaguje sa epsilonamino grupama HRP enzima.
[0083] 3,3’-Diaminobenzidin (DAB) je supstrat za enzime kao što je HRP koji proizvodi krajnji proizvod smeđe boje koji je visoko nerastvorljiv u alkoholu i drugim organskim rastvaračima. Oksidacija DAB takođe izaziva polimerizaciju, rezultujući u njegovoj sposobnosti da reaguje sa osmijum tetroksidom, i tako povećavajući njegov intenzitet bojenja i elektronsku gustinu. Od nekoliko metala i postupaka korišćenih za povećanje intenziteta optičke gustine polimerizovanog DAB, izgleda da je najuspešnije zlato hlorid u kombinaciji sa srebro sulfidom.
[0084] 3-Amino-9-etilkarbazol (AEC) je supstrat za enzime kao što je HRP. Nakon oksidacije, obrazuje roze-crveni krajnji proizvod koji je rastvorljiv u alkoholu. Stoga, uzorci obrađeni sa AEC ne smeju da budu potopljeni u alkohol ili alkoholne rastvore (npr., Harris-ov hematoksilin). Umesto toga, treba koristiti kontrast i medijum za oblaganje na bazi vode. AEC je nažalost podložan daljoj oksidaciji i, kada je izložen jakom svetlu, intenzitet mu opada. Zbog toga je preporučljivo skladištenje u mraku.
[0085] 4-Hloro-1-naftol (CN) je supstrat za enzime kao što je HRP i taloži se kao krajnji proizvod plave boje. Budući da je CN rastvorljiv u alkoholu i drugim organskim rastvaračima, uzorak ne sme da bude dehidratisan, izložen alkoholnim kontrastima, ili
1
pokriven medijumom za oblaganje koji sadrži organske rastvarače. Za razliku od DAB, CN ima tendenciju da difunduje sa mesta taloženja.
[0086] p-Fenilendiamin dihidrohlorid/pirokatehol (Hanker-Yates reagens) supstrat za enzime kao što je HRP koji predstavlja donor elektrona i daje plavo-crni reakcioni proizvod koji je nerastvorljiv u alkoholu i drugim organskim rastvaračima. Kao polimerizovani DAB, ovaj reakcioni proizvod može da se fiksira u rastvoru osmijumske kiseline. Različiti rezultati su postignuti sa Hanker-Yates reagensom u tehnikama imunoperoksidaze.
[0087] Alkalna fosfataza (AP) telećih creva (molekulska težina 100 kD) je enzim koji uklanja (hidrolizom) i premešta fosfatne grupe iz organskih estara raskidanjem P-0 veze; intermedijerna veza enzim-supstrat se privremeno obrazuje. Glavni metalni aktivatori za AP su Mg<++>, Mn<++>i Ca<++>.
[0088] AP nije intenzivno korišćena u imunohistohemiji do objavljivanja postupka sa neobeleženom alkalnom fosfatazom-antialkalnom fosfatazom (APAAP). Rastvorljivi imunski kompleksi koji se koriste u ovom postupku imaju molekulske težine od približno 560 kD. Glavna prednost postupka APAAP u poređenju sa PAP tehnikom je nedostatak interferencije izazvane endogenom aktivnošću peroksidaze. Zbog mogućeg ometanja PAP bojenja endogenom aktivnošću peroksidaze, APAAP tehnika se preporučuje za upotrebu na razmazima krvi i koštane srži. Endogena aktivnost alkalne fosfataze iz kosti, bubrega, jetre i nekih belih krvnih ćelija može da se inhibira dodatkom 1 mM levamizola rastvoru supstrata, iako je nađeno da je 5 mM efikasnije. Crevne alkalne fosfataze se ne inhibiraju na odgovarajući način pomoću levamizola.
[0089] U imunohistohemijskom postupku za bojenje alkalnom fosfatazom, enzim hidrolizuje naftol fosfatne estre (supstrat) u fenolna jedinjenja i fosfate. Fenoli se kupluju sa bezbojnim diazonijum solima (hromogen) da bi proizveli nerastvorljive, obojene azoboje. Nekoliko različitih kombinacija supstrata i hromogena je uspešno korišćeno.
2
[0090] Naftol AS-MX fosfat može da se koristi u obliku kiseline ili kao natrijumova so. Hromogeni Fast Red TR i Fast Blue BB proizvode svetlo crveni ili plavi krajnji proizvod, redom. Oba su rastvorljiva u alkoholnim i drugim organskim rastvaračima, tako da mora da se koristi vodeni medijum za oblaganje. Fast Red TR je poželjan za bojenje razmaza ćelija.
[0091] Dodatni primeri supstrata uključuju naftol AS-BI fosfat, naftol AS-TR fosfat i 5-bromo-4-hloro-3-indoksil fosfat (BCIP). Drugi mogući hromogeni uključuju Fast Red LB, Fast Garnet GBC, Nitro Blue tetrazol (NBT) jodonitrotetrazolijum Violet (INT), i derivate struktura, na primer.
V. Postupci za imunodetekciju
[0092] Predmetni pronalazak se tiče postupaka za imunodetekciju za vezivanje, prečišćavanje, uklanjanje, kvantitativno određivanje i/ili na drugi način uopšteno detektovanje bioloških komponenti kao što je ligand, razmatranih predmetnim pronalaskom. Antitela pripremljena u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu da se koriste za detekciju proteinskih, polipeptidnih i/ili peptidnih liganda koji su divljeg tipa i/ili mutantni. Kao što je opisano u predmetnoj prijavi, razmatrana je upotreba antitela specifičnih za divlji tip liganda i/ili mutantni ligand. Neki postupci za imunodetekciju uključuju protočnu citometriju, enzimski imunoadsorpcioni test (ELISA), radioimunoesej (RIA), imunoradiometrijski test, fluoroimunoesej, hemiluminescentni test, bioluminescentni test, i Western blot, da pomenemo nekoliko. Koraci različitih korisnih postupaka za imunodetekciju opisani su u naučnoj literaturi, kao što je, npr., Doolittle M H and Ben-Zeev O, Methods Mol Biol. 1999;109:215-37; Gulbis B and Galand P, Hum Pathol. 1993 Dec;24(12):1271-85; i De Jager R et al., Semin Nucl Med. 1993 Apr;23(2):165 -79.
[0093] Uopšteno, postupci za imunološko vezivanje uključuju dobijanje uzorka za koji se pretpostavlja da sadrži proteinski, polipeptidni i/ili peptidni ligand, i dovođenja u kontakt uzorka sa prvim ligand-vezujućim peptidom (npr., anti-ligand antitelom) kao što to može biti slučaj, pod uslovima efikasnim da obezbede obrazovanje imunokompleksa.
[0094] U smislu detekcije antigena, ispitivani biološki uzorak može da bude bilo koji uzorak za koji se pretpostavlja da sadrži proteinski ligand divljeg tipa ili mutantni proteinski ligand-specifični antigen, kao što je isečak ili uzorak tkiva, homogenizovani ekstrakt tkiva, aspirati biopsije, ćelija, razdvojeni i/ili prečišćeni oblici bilo koje od gore pomenutih kompozicija koje sadrže FOLR1 divljeg tipa ili mutantni FOLR1, ili čak bilo koji biološki fluid koji dolazi u kontakt sa tkivom, uključujući krv i/ili serum, mada su uzorci ili ekstrakti tkiva poželjni.
[0095] Dovođenje u kontakt odabranog biološkog uzorka sa antitelom pod efikasnim uslovima i tokom perioda vremena dovoljnog da omogući obrazovanje imunskih kompleksa (primarni imunski kompleksi) je suštinski samo pitanje dodavanja kompozicije antitela uzorku i inkubacije smeše tokom perioda vremena dovoljno dugog da antitela obrazuju imunske komplekse sa, tj., da se vežu za, bilo koje prisutne antigene proteinske ligande. Nakon ovog vremena, kompozicija uzorak-antitelo, kao što je isečak tkiva, ploča za ELISA test, „dot blot“ ili „western blot“, će uopšteno biti isprani da bi se uklonila bilo koje nespecifično vezane vrste antitela, omogućavajući detekciju samo onih antitela koja su specifično vezana u primarnim imunskim kompleksima.
[0096] Uopšteno, detekcija obrazovanja imunokompleksa je dobro poznata u struci i može da se postigne primenom različitih pristupa. Ovi postupci se uglavnom zasnivaju na detekciji obeleživača ili markera, kao što je bilo koja od radioaktivnih, fluorescentnih, bioloških i enzimskih oznaka. SAD patenti koji se tiču upotrebe takvih obeleživača uključuju SAD pat. br. 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 i 4,366,241. Naravno, mogu se naći dodatne pogodnosti putem upotrebe sekundarnog vezujućeg liganda kao što je drugo antitelo i/ili biotin/avidin ligand vezujući kompleks, kao što je poznato u struci.
[0097] Anti-ligand antitelo koje se koristi u detekciji može da bude vezano za
4
detektabilni obeleživač, pri čemu može jednostavno da se detektuje ovaj obeleživač, čime se omogućava određivanje količine primarnih imunskih kompleksa u kompoziciji koji treba da se odrede. Alternativno, prvo antitelo koje se vezuje u primarnim imunskim kompleksima može da se detektuje pomoću drugog vezujućeg sredstva koje ima vezujući afinitet za antitelo. U ovim slučajevima, drugo vezujuće sredstvo može da bude vezano za detektabilni obeleživač. Drugo vezujuće sredstvo je po sebi obično antitelo, koje prema tome može da se označi kao „sekundarno“ antitelo, ili polimerni sistem za detekciju. Primarni imunski kompleksi se dovode u kontakt sa obeleživačem, sekundarnim vezujućim sredstvom, ili sistemom za detekciju antitelo/polimer, pod efikasnim uslovima i tokom perioda vremena dovoljnog da se omogući obrazovanje sekundarnih imunskih kompleksa. Sekundarni imunski kompleksi se zatim uglavnom ispiraju da bi se uklonila bilo koja nespecifično vezana obeležena sekundarna antitela ili ligandi, i preostali obeleživač u sekundarnim imunskim kompleksima se zatim detektuje.
[0098] Sledeći postupci uključuju detekciju primarnih imunskih kompleksa dvostepenim pristupom. Drugo vezujuće sredstvo, kao što je antitelo, koje ima vezujući afinitet za antitelo, koristi se da obrazuje sekundarne imunske komplekse, kao što je ovde opisano. Nakon ispiranja, sekundarni imunski kompleksi dovode se u kontakt sa trećim vezujućim sredstvom ili antitelom koje ima vezujući afinitet za drugo antitelo, opet pod efikasnim uslovima i tokom perioda vremena dovoljnog da se omogući obrazovanje imunskih kompleksa (tercijarni imunski kompleksi). Treći ligand ili antitelo se vezuje za detektabilni obeleživač, omogućavajući detekciju tercijarnih imunskih kompleksa koji su tako obrazovani. Ovaj sistem može da omogući umnožavanje signala ako je poželjno.
[0099] Biotinilizovano monoklonsko ili poliklonsko antitelo može da se koristi za detekciju ciljnog(ih) antigena, a antitelo drugog koraka se zatim koristi za detekciju biotina vezanog za kompleksni biotin. U ovom postupku uzorak koji se ispituje prvo se inkubira u rastvoru koji sadrži antitelo iz prvog koraka. Ako je ciljni antigen prisutan, neka od antitela se vezuju za antigen i obrazuju kompleks biotinilizovano antitelo/antigen. Kompleks antitelo/antigen se zatim amplifikuje inkubacijom u sukcesivnim rastvorima streptavidina (ili avidina), biotinilizovana DNK, i/ili komplementarna biotinilizovana DNK, sa svakim korakom dodaje dodatna biotinska mesta kompleksu antitelo/antigen. Koraci umnožavanja se ponavljaju dok se ne postigne odgovarajući nivo umnoženosti, i u tom trenutku uzorak se inkubira u rastvoru koji sadrži antitelo iz drugog koraka protiv biotina. Antitelo iz drugog koraka se obeležava, kao na primer enzimom koji može da se koristi za histoenzimološku detekciju prisustva kompleksa antitelo/antigen korišćenjem hromogenog supstrata. Pogodnom amplifikacijom može da se proizvede protein vezujući (npr., antitelo) konjugat koji je makroskopski vidljiv.
[0100] Drugi poznati postupak za imunodetekciju koristi prednost metodologije imuno-PCR (lančana reakcija polimeraze). PCR postupak koristi kompleks DNK/biotin/streptavidin/antitelo koji se ispira puferom sa niskim pH ili puferom sa visokim sadržajem soli koji oslobađa antitelo. Rezultujući rastvor za ispiranje se zatim koristi za izvođenje PCR reakcije sa pogodnim prajmerima sa odgovarajućim kontrolama. Ogromna sposobnost amplifikacije i specifičnost PCR metode mogu se koristiti za detekciju pojedinačnog molekula antigena. Takva detekcija može da se odvija u realnom vremenu. Na primer, razmatra se upotreba kvantitativne PCR metode u realnom vremenu.
[0101] U kliničkoj dijagnostici i/ili praćenju pacijenata sa različitim oblicima bolesti, detekcija mutanta FOLR1, i/ili promena nivoa FOLR1, u poređenju sa nivoima u odgovarajućem biološkom uzorku uzetom od normalnog subjekta je indikativna za pacijenta sa bolešću. Međutim, kao što je stručnjacima u oblasti poznato, takva klinička dijagnoza ne bi neophodno bila utvrđena samo na osnovu ovog postupka. Stručnjaci u oblasti su dobro upoznati sa pravljenjem razlike između značajnih razlika u vrstama i/ili količinama biomarkera, koji predstavljaju pozitivnu identifikaciju, i/ili niskog nivoa i/ili promena pozadinskog šuma biomarkera. Zaista, nivoi pozadinskog šuma ekspresije se često koriste da obrazuju „graničnu vrednost“ iznad koje će povišena detekcija biti označena kao značajna i/ili pozitivna.
[0102] U jednom primeru izvođenja, imunološka detekcija (imunohistohemijska) FOLR1 se ocenjuje i prema intenzitetu i prema ravnomernosti (procenat obojenih ćelija – samo membrane). Uporedne skale za ekspresiju FOLR1 za intenzitet su u korelaciji kao 0 - negativno, 0-1 – veoma slabo, 1 - slabo, 1-2 – slabo do umereno, 2 - umereno, 2-3 – umereno do jako, 3 - jako. Kvantitativno, ocena 0 označava da bojenje membrane nije zapaženo u tumorskim ćelijama. Ocena 1 predstavlja slabo/jedva primetno bojenje membrane u tumorskim ćelijama. Kod ocene 2, u tumorskim ćelijama je zapaženo umereno bojenje membrane. Najzad, ocena 3 ili 3+ predstavlja umereno do jako bojenje membrane u tumorskim ćelijama. Oni uzorci sa ocenom 0 ili 1 za ekspresiju FOLR1 mogu da se okarakterišu kao oni kod kojih nema prekomerne ekspresije FOLR1, dok oni uzorci sa ocenama 2 ili 3 mogu da se okarakterišu kao oni koji prekomerno eksprimiraju FOLR1. Uzorci koji prekomerno eksprimiraju FOLR1 mogu takođe da se klasifikuju pomoću imunohistohemijskih rezultata koji odgovaraju broju kopija molekula FOLR1 eksprimiranih po ćeliji, i određeni su biohemijski: 0=0-10 000 kopija/ćeliji, 1=najmanje oko 200 000 kopija/ćeliji, 2=najmanje oko 500 000 kopija/ćeliji, i 3=najmanje oko 2 000 000 kopija/ćeliji. Uporedne skale za procenat ravnomernosti bojenja ćelijskih membrana na FOLR1 su u korelaciji na sledeći način: 0 - negativno, fokalno - <25%, heterogeno (hetero) - 25-75%, i homogeno (homo) ->75%.
VI. Hibridizacija nukleinskih kiselina
[0103] In situ hibridizacija se uglavnom izvodi na ćelijama ili isečcima tkiva fiksiranim na predmetnim staklima. In situ hibridizacija može da bude izvedena pomoću nekoliko uobičajenih metodologija (videti npr. Leitch et al. In situ Hybridization: a practical guide, Oxford BIOS Scientific Publishers, Microscopy handbooks v. 27 (1994)). U jednom in situ postupku, fluorescentne boje (kao što je fluorescein izotiocijanat (FITC) koji fluorescira zeleno kada se pobudi pomoću argonskog jonskog lasera) koriste se za obeležavanje probe sekvence nukleinske kiseline koja je komplementarna sa ciljnom nukleotidnom sekvencom u ćeliji. Svaka ćelija koja sadrži ciljnu nukleotidnu sekvencu će se vezati za obeleženu probu, proizvodeći fluorescentni signal posle izlaganja ćelije izvoru svetla odgovarajuće talasne dužine za pobuđivanje specifičnog fluorohroma koji je korišćen.
[0104] Mogu da se koriste različiti stepeni strogosti uslova hibridizacije. Kako uslovi hibridizacije postaju stroži, potreban je veći stepen komplementarnosti između probe i ciljne sekvence da bi se obrazovao i održao stabilni dupleks. Strogost uslova se povećava podizanjem temperature, snižavanjem koncentracije soli, ili povećanjem koncentracije formamida. Dodavanje dekstran sulfata ili povećanje njegove koncentracije može takođe da poveća efikasnu koncentraciju obeležene probe da bi se povećala brzina hibridizacije i krajnji intenzitet signala. Nakon hibridizacije, predmetna stakla se ispiraju u rastvoru koji uglavnom sadrži reagense slične onima nađenim u hibridizacionom rastvoru sa vremenom pranja koje se kreće od minuta do časova u zavisnosti od potrebne strogosti uslova. Duža ili intenzivnija pranja obično snižavaju nespecifični pozadinski šum ali nose rizik od smanjenja ukupne osetljivosti.
[0105] Probe koje se koriste u analizi nukleinske hibridizacije mogu da budu ili RNK ili DNK oligonukleotidi ili polinukleotidi, i mogu da sadrže ne samo prirodne nukleotide već i njihove analoge, kao digoksigenin dCTP, biotin dcTP 7-azaguanozin, azidotimidin, inozin, ili uridin, na primer. Druge korisne probe uključuju peptidne probe i njihove analoge, razgranatu gensku DNK, peptidometike, peptidnu nukleinsku kiselinu (PNK) i/ili antitela, na primer.
[0106] Probe treba da imaju dovoljno komplementarnosti sa ciljnom sekvencom od interesa nukleinske kiseline tako da dođe do stabilnog i specifičnog vezivanja između ciljne sekvence nukleinske kiseline i probe. Stepen homologije potreban za stabilnu hibridizaciju varira sa strogošću uslova hibridizacije medijuma i/ili medijuma za pranje. Poželjno, potpuno homologe probe se koriste u predmetnom pronalasku, ali stručnjaci u oblasti će lako shvatiti da probe koje ispoljavaju nižu, ali dovoljnu homologiju mogu da se koriste u predmetnom pronalasku (videti npr. Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, (1989)).
[0107] Probe mogu takođe da se naprave i izaberu na nekoliko načina uključujući, ali bez ograničenja, mapiranje pomoću in situ hibridizacije, panele hibrida somatskih ćelija, ili „spot blot“-ove sortiranih hromozoma; analize hromozomskih spojeva; ili kloniranje i izdvajanje iz sortiranih biblioteka hromozoma iz humanih ćelijskih linija ili hibrida somatskih ćelija sa humanim hromozomima, zračenjem hibrida somatskih ćelija, mikrodisekcijom regiona hromozoma, ili iz veštačkih hromozoma kvasca (YACs) identifikovanih pomoću PCR prajmera specifičnih za jedinstveni hromozomski lokus ili drugim pogodnim sredstvima kao što je susedni klon YAC. Probe mogu da budu genomska DNK, cDNK, ili RNK klonirana u plazmid, fag, kozmid, YAC, bakterijske veštačke hromozome (BACs), virusni vektor, ili bilo koji drugi pogodni vektor. Probe mogu da budu klonirane ili hemijski sintetisane pomoću uobičajenih postupaka. Kada se kloniraju, izdvojeni fragmenti probe nukleinske kiseline se tipično ubacuju u vektor, kao što je lambda fag, pBR322, M13, ili vektori koji sadrže SP6 ili T7 promotor i kloniraju kao biblioteka u bakterijskog domaćina. [videti npr. Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, (1989)].
[0108] Probe su poželjno obeležene, kao sa fluoroforom, na primer. Primeri fluorofora uključuju, ali nisu ograničeni na, helate retkih zemljanih metala (helati europijuma), Texas Red, rodamin, fluorescein, dansil, lisamin, umbeliferon, fikokriterin, fikocijanin, ili komercijalno dostupne fluorofore kao što je SPECTRUM ORANGE™ i SPECTRUM GREEN™ i/ili derivate bilo kog ili više od gore navedenih. Višestruke probe koje se koriste u testu mogu da budu obeležene sa više od jedne odvojene fluorescentne ili pigmentne boje. Ove razlike u boji obezbeđuju način identifikacije položaja hibridizacije specifičnih proba. Osim toga, probe koje nisu prostorno razdvojene mogu da se identifikuju pomoću različite boje svetlosti ili pigmenta koji rezultuje iz mešanja druge dve boje (npr., svetlo crvena+zelena=žuta) pigment (npr., plavo+žuto=zeleno) ili korišćenjem seta filtera koji propuštaju samo jednu boju u jednom trenutku.
[0109] Probe mogu da budu obeležene direktni ili indirektno fluoroforom, korišćenjem uobičajenih metodologija poznatih stručnjaku u oblasti.
VII. Kitovi i kompozicije za detekciju
[0110] Pronalaskom su takođe opisani kitovi za upotrebu u praktičnom izvođenju predmetnog pronalaska kao što je ovde opisano. Takvi kitovi mogu da sadrže kontejnere, svaki sa jednim ili više različitih reagenasa (tipično u koncentrovanom obliku) koji se koriste u postupcima, uključujući, na primer, jedno ili više vezujućih sredstava (antitela), koja su već vezana za marker ili izborno sa reagensima za kuplovanje vezujućeg sredstva sa antitelom ili molekulom nukleinske kiseline (kao i samim markerom); pufere, odgovarajuće nukleotid trifosfate (npr. dATP, dCTP, dGTP, dTTP, dUTP, ATP, CTP, GTP i UTP), reverznu transkriptazu, DNK polimerazu, RNK polimerazu, i jedan ili više sekvenca-specifičnih ili degenerativnih prajmera za upotrebu u detekciji molekula nukleinske kiseline amplifikacijom; i/ili reagense i instrumente za izdvajanje (izborno mikrodisekcijom) za podršku praktičnom izvođenju pronalaska. Opis obeleživača ili indikatora, ili set uputstava za upotrebu komponenti kita u postupku za detekciju liganda predmetnog pronalaska, biće takođe tipično uključen, gde uputstva mogu da budu povezana sa umetkom u pakovanju i/ili pakovanjem kita ili njegovih komponenti.
[0111] Predmetni pronalazak opisuje kitove za imunodetekciju za upotrebu sa ovde opisanim postupcima imunodetekcije. Kako se antitela uglavnom koriste za detekciju divljeg tipa i/ili mutantnih proteina, polipeptida i/ili peptida, antitela će poželjno biti uključena u kit. Kitovi za imunodetekciju će stoga sadržati, u pogodnim kontejnerima, prvo antitelo koje se vezuje za protein, polipeptid i/ili peptid koji je divljeg tipa i/ili mutantni, i/ili izborno, imunoreagens za detekciju i/ili dalje izborno, protein, polipeptid i/ili peptid koji je divljeg tipa i/ili mutantni.
[0112] Imunoreagensi za detekciju kita mogu da imaju bilo koji od različitih oblika, uključujući one detektabilne obeleživače koji su udruženi sa, i/ili vezani za dato antitelo. Detektabilni obeleživači koji su udruženi sa, i/ili vezani za sekundarni vezujući ligand su takođe obuhvaćeni. Primeri sekundarnih liganda su ona sekundarna antitela ili polimeri koji imaju vezujući afinitet za prvo antitelo.
[0113] Dodatni pogodni reagensi za imunodetekciju za upotrebu u predmetnim kitova
4
uključuju dvokomponentni reagens koji sadrži sekundarno antitelo koje ima vezujući afinitet za prvo antitelo, zajedno sa trećim antitelom ili polimerom koji ima vezujući afinitet za drugo antitelo, gde je treće antitelo vezano za detektabilni obeleživač. Kao što je gore navedeno, brojni primeri obeleživača su poznati u struci i/ili svi takvi obeleživači mogu pogodno da se koriste zajedno sa predmetnim pronalaskom.
[0114] Kitovi mogu dalje da sadrže pogodno alikvotiranu kompoziciju divljeg tipa i/ili mutantnog proteina, polipeptida i/ili polipeptida, bilo obeleženog i/ili neobeleženog, koja može da se koristi za pripremu standardne krive za test detekcije. Kitovi mogu da sadrže konjugate antitelo- ili polimer-obeleživač bilo u potpuno konjugovanom obliku, u obliku intermedijera, i/ili kao odvojene fragmente koje treba da konjuguje korismik kita. Komponente kitova mogu da budu spakovane ili u vodenom medijumu i/ili u liofilizovanom obliku.
[0115] Kontejneri kitova će uglavnom uključivati najmanje jednu bočicu, test epruvetu, flask, bocu, špric i/ili druge kontejnere, u koje antitelo može da bude smešteno, i/ili poželjno, pogodno alikvotirano. Kitovi prema predmetnom pronalasku će takođe tipično uključivati sredstva za držanje kontejnera za antitelo, antigen, i/ili bilo koji drugi reagens dobro zatvorenim za komercijalnu prodaju. Takvi kontejneri mogu da uključuju injekciju i/ili kontejnere oblikovane duvanjem plastike u koje su smeštene željene bočice.
[0116] Kitovi mogu dalje da sadrže jedno ili više terapijskih sredstava za lečenje kancera, kao što je FOLR1 imunokonjugat i/ili hemioterapijsko sredstvo.
[0117] Kit može dalje da sadrži reagens za detekciju FOLR1 koji se koristi za merenje ekspresije FOLR1 kod subjekta, koji sadrži reagens za detekciju FOLR1 i uputstva za upotrebu. U jednom primeru izvođenja, reagens za detekciju FOLR1 sadrži peptid, protein ili molekulsku probu (tj. nukleinsku kiselinu) koja se vezuje za FOLR1. Reagens za detekciju FOLR1 može da bude anti-FOLR1 antitelo. Kit može dalje da sadrži sekundarno antitelo koje se vezuje za anti-FOLR1 antitelo. Antitelo specifično za FOLR1 može da bude uključeno u koncentraciji od 0.5 do 7.5 µg/ml, poželjno 0.9 do 3.8 /-0.5 µg/ml. Antitelo može da bude uključeno u koncentraciji od 1.0 /- 0.5 µg/ml, 1.5 /- 0.5 µg/ml, 1.9 /- 0.5 µg/ml, 2.5 /- 0.5 µg/ml, 3.0 /- 0.5 µg/ml, 3.5 /- 0.5 µg/ml, 3.8 /- 0.5 µg/ml, ili do 4.2 µg/ml. Antitelo može da bude uključeno u koncentrovanom rastvoru sa uputstvima za razblaživanje za postizanje finalne koncentracije od 0.9 do 3.8 /- 0.5 µg/ml. Kit može dalje da sadrži reagens za detekciju izabran iz grupe koja se sastoji od: enzima, fluorofora, radioaktivnog obeleživača i luminofora. Ragens za detekciju može da bude izabran iz grupe koja se sastoji od: biotina, digoksigenina, fluoresceina, tricijuma i rodamina.
[0118] Kit može takođe da uključuje uputstva za detekciju i ocenjivanje ekspresije FOLR1. Kit može takođe da uključuje kontrolu ili referentne uzorke. Neograničavajući primeri kontrole ili referentnih uzoraka uključuju ćelijske taloge ili kulturu tkiva ćelijskih linija izvedenih iz normalnih (normalna kontrola) ili tumorskih (pozitivna kontrola) uzoraka. Primeri ćelijskih linija uključuju KB, NCI-H2110, Igrov-1, Ishikawa, Jeg-3, Skov-3, Hela, T47D, Caco2, SW620, OAW28, HCC827, Ovcar-8, i Ovcar-3, Ov-90, druge tumorske ćelijske linije za koje je poznato da eksprimiraju FOLR1, i ćelijske linije stabilno ili prolazno transficirane ekspresionim vektorom koji eksprimira FOLR1. Dodatni primeri tkiva pozitivne kontrole mogu takođe da se nađu u primerima 9-11. Kit može takođe da uključuje smernice za bojenje koje vizuelno oslikavaju pozitivne i normalne referentne uzorke za ravnomernost i intenzitet bojenja. Takve smernice za bojenje mogu da imaju referentne uzorke iz normalnih pluća, pankreasa, i/ili pljuvačne žlezde, i obojene tumore sa standardizovanim rezultatima (npr., kancere jajnika, pluća, bubrega i endometrijalne kancere, kao i one opisane u primerima i na slikama 23-25).
VIII. Vezujuća sredstva za FOLR1
[0119] Bilo koja antitela koja se vezuju za FOLR1 mogu da se koriste u postupcima detekcije prema predmetnom pronalasku. Primeri terapijski efikasnih anti-FOLR1 antitela mogu da se nađu u SAD publikovanoj prijavi br. US 2012/0009181. Cele dužine aminokiselinskih (ak) i nukleotidnih (nt) sekvenci za FOLR1 su poznate u struci i ovde su takođe obezbeđene prikazivanjem u sekvencama SEQ ID NOs: 1 i 2, redom. Specifično korisno antitelo za detekciju FOLR1 je mišje monoklonsko anti-huFOLRI klon BN3.2 (Leica br. NCL-L-FRalpha) antitelo. Primer terapijski efikasnog antiFOLR1 antitela je huMov19 (M9346A). Polipeptidi sekvenci SEQ ID NOs: 3-5 sadrže varijabilni domen teškog lanca iz huMov19 (M9346A), i varijabilni domen lakog lanca verzija 1.00, varijabilni domen lakog lanca verzija 1.60 iz huMovl9, redom. U određenim primerima izvođenja, antitelo huMov19 (M9346A) je kodirano plazmidima deponovanim u Američkoj kolekciji kultura sojeva (ATCC), na adresi 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110 7. aprila 2010., pod uslovima Budimpeštanskog ugovora sa ATCC depozitnim br. PTA-10772 i PTA-10773 ili 10774. Primeri imunokonjugata FOLR1 korisnih u terapijskim postupcima pronalaska obezbeđeni su u nastavku teksta.
IX. Imunokonjugati FOLR1
[0120] Predmetni pronalazak takođe opisuje postupke za povećanje efikasnosti konjugata (takođe ovde označenih kao imunokonjugati), koji sadrže anti-FOLR1 antitela, fragmente antitela, funkcionalne ekvivalente, poboljšana antitela i njihove aspekte kao što je ovde opisano, vezane ili konjugovane sa citotoksinom (lekom) ili prolekom. Primeri FOLR1 imunokonjugata mogu da se nađu u SAD publikovanoj prijavi br. US 2012/0009181. Naročito efikasan terapijski imunokonjugat pronalaska je huMov19 antitelo koje je gore opisano.
[0121] Pogodni lekovi ili prolekovi su poznati u struci. U određenim primerima izvođenja, lekovi ili prolekovi su citotoksična sredstva. Citotoksično sredstvo koje se koristi u citotoksičnom konjugatu predmetnog pronalaska može da bude bilo koje jedinjenje koje rezultuje u ćelijskoj smrti, ili indukuje ćelijsku smrt, ili na neki način smanjuje vijabilnost ćelije, i uključuje, na primer, majtanzinoide i analoge majtanzinoida, benzodiazepine, taksoide, analoge CC-1065 i CC-1065, duokarmicine i analoge duokarmicina, enedine, kao što su kaliheamicini, dolastatin i analoge dolastatina uključujući auristatine, derivate tomaimicina, derivate leptomicina, metotreksat, cisplatin, karboplatin, daunorubicin, doksorubicin, vinkristin, vinblastin, melfalan, mitomicin C, hlorambucil i morfolino doksorubicin. U određenim primerima izvođenja, citotoksična sredstva su majtanzinoidi i analozi majtanzinoida.
[0122] Lek ili prolek može, na primer, da bude vezan za anti-FOLR1 antitelo, kao što
4
je huMov19, ili njegov fragment preko disulfidne veze. Povezujući molekul ili sredstvo za obrazovanje unakrsne veze sadrži reaktivnu hemijsku grupu koja može da reaguje sa anti-FOLR1 antitelom ili njegovim fragmentom. U određenim primerima izvođenja, reaktivne hemijske grupe za reakciju sa sredstvom koje se vezuje za ćeliju su N-sukcinimidil estri i N-sulfosukcinimidil estri. Dodatno molekul linkera sadrži reaktivnu hemijsku grupu, u određenim primerima izvođenja ditiopiridil grupu koja može da reaguje sa lekom i obrazuje disulfidnu vezu. U određenim primerima izvođenja, molekuli linkera uključuju, na primer, N-sukcinimidil 3-(2-piridilditio) propionat (SPDP) (videti, npr., Carlsson et al., Biochem. J., 173: 723-737 (1978)), N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)butanoat (SPDB) (videti, npr., SAD patent br. 4,563,304), N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)2-sulfobutanoat (sulfo-SPDB) (videti SAD objavu br.
20090274713), N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio) pentanoat (SPP) (videti, npr., CAS registarski broj 341498-08-6), 2-iminotiolan, ili acetilsukcinski anhidrid.
[0123] Konjugati antitelo-majtanzinoid sa vezama koje nisu podložne isecanju takođe mogu da se pripreme. Takva sredstva za unakrsno vezivanje su opisana u struci (videti ThermoScientific Pierce Crosslinking Technical Handbook i SAD objavu patentne prijave br. 2005/0169933) i uključuju, ali nisu ograničena na, N-sukcinimidil 4-(maleimidometil) cikloheksankarboksilat (SMCC), N-sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproat), koji je „dugolančani“ analog SMCC (LC-SMCC), N-sukcinimidil estar κ-maleimidoundekanske kiseline (KMUA), N-sukcinimidil estar β-maleimidopropanske kiseline (BMPS), N-sukcinimidil estar γ-maleimidobutene kiseline (GMBS), N-hidroksisukcinimid estar εmaleimidokapronske kiseline (EMCS), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (MBS), N-(α-maleimidoacetoksi)-sukcinimid estar (AMAS), sukcinimidil-6-(βmaleimidopropionamido)heksanoat (SMPH), N-sukcinimidil 4-(p-maleimidofenil)-butirat (SMPB), i N-(p-maleimidofenil)izocijanat (PMPI), N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoat (SIAB), N-sukcinimidil jodoacetat (SIA), N-sukcinimidil bromoacetat (SBA) i N-sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionat (SBAP). U određenim primerima izvođenja, antitelo je modifikovano reagensima za unakrsno vezivanje kao što je sukcinimidil 4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), sulfo-SMCC, maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (MBS), sulfoMBS ili sukcinimidil-jodoacetat, kao što je opisano u literaturi, za uvođenje 1-10 reaktivnih grupa (Yoshitake et al, Eur. J. Biochem., 101:395-399 (1979); Hashida et al, J. Applied Biochem., 56-63 (1984); i Liu et al, Biochem., 18:690-697 (1979)).
[0124] Predmetni pronalazak opisuje aspekte u kojima je oko 2 do oko 8 molekula leka („opterećenje lekom“), na primer, majtanzinoida, spojeno sa anti-FOLR1 antitelom ili njegovim fragmentom, antitumorsko dejstvo konjugata je mnogo efikasnije u poređenju sa opterećenjem lekom manjeg ili većeg broja molekula leka vezanih za isto sredstvo koje se vezuje za ćeliju. „Opterećenje lekom“, kako se ovde koristi, odnosi se na broj molekula leka (npr., majtanzinoida) koji mogu da budu vezani za sredstvo koje se vezuje za ćeliju (npr., anti-FOLR1 antitelo ili njegov fragment). Broj molekula leka koji mogu da budu vezani za sredstvo koje se vezuje za ćeliju može da bude u proseku od oko 2 do oko 8 (npr., 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1). U određenim primerima izvođenja, lek je N<2’>-deacetil-N<2’>-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtanzin (DM1) ili N<2’>-deacetil-N<2’>-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil) majtanzin (DM4). Tako, u određenom primeru izvođenja, antitelo huMov19 je konjugovano sa DM1 ili DM4. Antitelo FR-1-21 može da bude konjugovano sa DM1 ili DM4. Antitelo FR-1-48 može da bude konjugovano sa DM1 ili DM4. Antitelo FR-1-49 može da bude konjugovano sa DM1 ili DM4. Antitelo FR-1-57 može da bude konjugovano sa DM1 ili DM4. Antitelo FR-1-65 može da bude konjugovano sa DM1 ili DM4.
X. Korelacija ekspresije FOLR1 i terapijske efikasnosti
[0125] Pronalazak opisuje postupak za identifikaciju subjekata kod kojih postoji povećana verovatnoća da će odgovoriti na antikancerske terapije koje ciljno deluju na FOLR1. Pronalazak je zasnovan, delom, na otkriću da su povišeni nivoi ekspresije FOLR1 u korelaciji sa efikasnošću terapijskih sredstava protiv kancera koja ciljno deluju na FOLR-1.
[0126] Procena uzoraka uzetih od pacijenta i korelacija sa in vivo efikasnošću
4
korišćenjem ksenograftskih modela pokazuje snagu analize ekspresije u odabiru subjekata za koje postoji veća verovatnoća da će odgovoriti na lečenje. IHC obezbeđuje rezultat ekspresije FOLR1 na tumorskim ćelijama: 0 (nema ekspresije) do 3+ (veoma visoki nivoi ekspresije). In vivo podaci dobijeni korišćenjem ksenograftskih modela pokazuju da uzorci kojima je dodeljena ocena 1, 2, 3, ili 3+ za ekspresiju FOLR1, poželjno ocena 2, 3, ili 3+, imaju povećanu verovatnoću da odgovore na antikancerske terapije usmerene na FOLR-1 pri klinički relevantnim dozama FOLR1 imunokonjugata (npr., doza FOLR1 imunokonjugata od 5 mg/kg ksenografta približno odgovara dozi od 185 mg/m<2>kod pacijenata). Tako, identifikacija osoba koje imaju povišeni rezultat FOLR1 bi pomogla da se identifikuju one osobe koje bi mogle da odgovore na klinički relevantnu dozu. Kao što je detaljnije opisano u nastavku teksta, osetljivost na FOLR1 terapeutike je u korelaciji sa ocenom FOLR1 od 2 ili više, naročito sa ocenom nivoa 3. Osim toga, ekspresija ujednačenijih nivoa FOLR1 obezbeđuje bolju korelaciju sa terapijskom koristi. Tako, homogena ravnomernost bojenja je poželjna, ali kombinacije povećanog intenziteta bojenja sa heterogenom ravnomernošću bojenja takođe ukazuju na povećanu ekspresiju FOLR1. Na primer, ocene veće od 2 hetero predstavljaju kriterijum za izbor pacijenta za lečenje FOLR1 terapijskim sredstvom.
[0127] Analiza ekspresije FOLR1 takođe identifikuje pacijente kod kojih sniženi nivoi antikancerske terapije usmerene na FOLR1 („niskodozna terapija“) mogu da budu efikasni u izazivanju antitumorskih odgovora. Kao što je poznato u struci, jedinjenja se uglavnom primenjuju u najmanjoj dozi kojom se postiže željeni terapijski odgovor. Ovo je naročito važno za terapeutike koji izazivaju klinička, i često neželjena, sporedna dejstva. Sposobnost prepoznavanja onih subjekata koji imaju povišene nivoe ekspresije FOLR1 omogućava smanjivanje količine terapeutika usmerenih na FOLR-1, čime se smanjuju moguća sporedna dejstva, uz održavanje terapijske efikasnosti.
[0128] Kao što je ovde pokazano, ocene ekspresije FOLR1 od 2 hetero ili više su u korelaciji sa povećanim odgovorom na anti-FOLR1 imunokonjugate. U određenim primerima izvođenja, povećani odgovor je kaheksija, povećanje vremena preživljavanja, produženje vremena do progresije tumora, smanjenje mase tumora, smanjenje tumorskog opterećenja i/ili produženje vremena do metastaze tumora, vremena do
4
ponovne pojave tumora, odgovor tumora, potpuni odgovor, delimični odgovor, stabilna bolest, progresivna bolest, preživljavanje bez progresije (PFS), ili ukupno preživljavanje (OS). U određenim primerima izvođenja, ocene ekspresije FOLR1 od 2 hetero ili više su u korelaciji sa rastućim PFS, DFS, ili OS.
[0129] Kitovi za upotrebu u postupcima za detekciju i korelaciju sa referentnim/kontrolnim uzorcima mogu da sadrže kontrolne (pozitivne i/ili negativne) ili referentne uzorke. Pozitivna kontrola ili pozitivni referentni uzorci mogu da budu izvedeni iz kulture tkiva ćelijskih linija, normalnog tkiva ili tumorskog tkiva. Pozitivni i negativni referentni uzorci mogu da budu izvedeni iz ćelijskih linija uključujući SW620, T47D, IGROV-1, HeLa, KB, JEG-3, druge tumorske ćelijske linije, i ćelijske linije stabilno ili prolazno transficirane ekspresionim vektorom koji kodira FOLR1. Normalni ili uzorak tumorskih tkiva i kulture tkiva ćelijskih linija mogu takođe da se koriste kao negativni kontrolni referentni uzorci. Za dodatne uzorke, videti primere 9-11 i slike 23-25.
XI. Farmaceutske kompozicije i terapijski postupci
[0130] Sredstva koja vezuju FOLR1 (uključujući antitela, imunokonjugate i polipeptide) su korisna u različitim primenama uključujući, ali bez ograničenja, postupke za terapijsko lečenje, kao što je lečenje kancera. U određenim primerima izvođenja, sredstva su korisna za inhibiciju tumorskog rasta, indukujući diferencijaciju, smanjujući zapreminu tumora, i/ili smanjujući tumorogenost tumora. Postupci za upotrebu mogu da budu in vitro, ex vivo, ili in vivo postupci. U određenim primerima izvođenja, sredstvo ili antitelo ili imunokonjugat, ili polipeptid koji se vezuje za FOLR1 je antagonist humanog FOLR1 za koji se vezuje.
[0131] Bolest koja se leči sredstvom ili antagonistom koji se vezuje za FOLR1 (tj. huMov19 antitelo ili imunokonjugat) je kancer. U određenim primerima izvođenja, kancer se odlikuje tumorima koji eksprimiraju folatni receptor 1 za koji se FOLR1-vezujuće sredstvo (npr., antitelo) vezuje.
[0132] Predmetni pronalazak obezbeđuje antitelo protiv folatnog receptora 1 (FOLR1)
4
ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu u postupku za lečenje kancera koji obuhvata primenu terapijski efikasne količine sredstva koje se vezuje za FOLR1 kod subjekta (npr., subjekta kome je lečenje potrebno). U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog kancera, kancera pankreasa, kancera pluća, kancera jajnika, kancera jetre, kancera dojke, kancera mozga, kancera bubrega, kancera prostate, gastrointestinalnog kancera, melanoma, cervikalnog kancera, kancera bešike, glioblastoma, i kancera glave i vrata. U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer jajnika. U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer pluća. U određenim primerima izvođenja, subjekt je čovek.
[0133] Predmetni pronalazak dalje opisuje postupke za inhibiciju tumorskog rasta korišćenjem antitela ili drugih sredstava koja su ovde opisana. U određenim primerima izvođenja, postupak za inhibiciju tumorskog rasta obuhvata dovođenje u kontakt ćelija sa sredstvom koje se vezuje za FOLR1 (npr., antitelo) in vitro. Na primer, imortalizovana ćelijska linija ili kancerska ćelijska linija koja eksprimira FOLR1 se gaji u medijumu kome je dodato antitelo ili drugo sredstvo za inhibiciju tumorskog rasta. U nekim primerima izvođenja, tumorske ćelije su izolovane iz uzorka dobijenog od pacijenta kao što je, na primer, biopsija tkiva, pleuralna efuzija, ili uzorak krvi, i gajene u medijumu kome je dodato sredstvo koje se vezuje za FOLR1 da bi se inhibirao rast tumora.
[0134] U nekim primerima izvođenja, postupak za inhibiciju rasta tumora obuhvata dovođenje u kontakt tumora ili tumorskih ćelija sa sredstvom koje se vezuje za FOLR1 (npr., antitelo) in vivo. U određenim primerima izvođenja, dovođenje u kontakt tumora ili tumorskih ćelija sa sredstvom koje se vezuje za FOLR1 se preduzima u životinjskom modelu. Na primer, sredstvo koje se vezuje za FOLR1s može da se primeni na ksenografte koji eksprimiraju jedan ili više FOLR1 koji su rasli u imunokompromitovanim miševima (npr. NOD/SCID miševi) da bi se inhibirao rast tumora. U nekim primerima izvođenja, sredstvo koje se vezuje za FOLR1 se primenjuje u isto vreme ili kratko nakon uvođenja tumorogenih ćelija u životinju da bi se sprečio rast tumora. U nekim primerima izvođenja, sredstvo koje se vezuje za FOLR1 primenjuje se kao terapijsko nakon što tumorogene ćelije porastu do određene veličine.
4
[0135] U određenim primerima izvođenja, postupak za inhibiciju rasta tumora obuhvata primenu kod subjekta terapijski efikasne količine sredstva koje se vezuje za FOLR1. U određenim primerima izvođenja, subjekt je čovek. U određenim primerima izvođenja, subjekt ima tumor ili mu je tumor uklonjen.
[0136] U određenim primerima izvođenja, tumor je tumor izabran iz grupe koja se sastoji od tumora mozga, kolorektalnog tumora, tumora pankreasa, tumora pluća, tumora jajnika, tumora jetre, tumora dojke, tumora bubrega, tumora prostate, gastrointestinalnog tumora, melanoma, cervikalnog tumora, tumora bešike, glioblastoma, i tumora glave i vrata. U određenim primerima izvođenja, tumor je tumor jajnika.
[0137] U određenim primerima izvođenja, pronalazak opisuje postupke za inhibiciju rasta tumora korišćenjem niskih doza sredstva koje se vezuje za FOLR1. Termin „niska doza“, kako se ovde koristi, odnosi se na terapijski efikasnu dozu sredstva koje se vezuje za FOLR1 koja je manja od uobičajene ili konvencionalne doze potrebne da se proizvede terapijsko dejstvo.
[0138] Na taj način, pronalazak obezbeđuje postupke za lečenje kancera korišćenjem huMov19 antitela i imunokonjugata. U određenim primerima izvođenja, imunokonjugat huMov19 je huMov19-SPDB-DM4; huMov19-sulfo-SPP-DM1; huMov19-SPP-DM1; ili huMov19-PEG4-Mal-DM4. U određenom primeru izvođenja, huMov19 imunkonjugat je huMov19-SPDB-DM4, koji je takođe označen kao IMGN853.
[0139] Formulacije mogu da budu pripremljene za skladištenje i upotrebu kombinovanjem prečišćenog antitela ili sredstva prema predmetnom pronalasku sa farmaceutski prihvatljivim vehikulumom (npr. nosač, ekscipijens) (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Edition Mack Publishing, 2000). Pogodni farmaceutski prihvatljivi vehikulumi uključuju, ali nisu ograničeni na, netoksične pufere kao što su fosfat, citrat, i druge organske kiseline; soli kao što je natrijum hlorid; antioksidanse uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (npr.
4
oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid; benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene, kao što je metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide niske molekulske težine (npr. manje od oko 10 aminokiselinskih ostataka); proteine kao što je serum albumin, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilne polimere kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, ili lizin; ugljene hidrate kao što su monosaharidi, disaharidi, glukoza, manoza, ili dekstrini; helirajuća sredstva kao što je EDTA; šećere kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; protiv-jone koji obrazuju soli kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. Zn-protein komplekse); i nejonske surfaktante kao što je TWEEN ili polietilen glikol (PEG).
[0140] Farmaceutske kompozicije mogu da se primene na bilo koji način za lokalno ili sistemsko lečenje. Primena može da bude topikalna (kao što je na mukozne membrane uključujući vaginalnu i rektalnu dostavu) kao što su transdermalni flasteri, masti, losioni, kreme, gelovi, kapi, supozitorije, sprejevi, tečnosti i prahovi; pulmonalna (npr., inhalacijom ili insuflacijom prahova ili aerosola, uključujući pomoću nebulizera; intratrahealno, intranazalno, epidermalno i transdermalno); oralna; ili parenteralna uključujući intravensku, intraarterijalnu, subkutanu, intraperitonealnu ili intramuskularnu injekciju ili infuziju; ili intrakranijalnu (npr., intratekalnu ili intraventrikularnu) primenu.
[0141] Antitelo ili imunokonjugat pronalaska može da se kombinuje u formulaciji farmaceutske kombinacije, ili režimu doziranja kao kombinovana terapija, sa drugim jedinjenjem koje ima antikancerska svojstva. Drugo jedinjenje formulacije farmaceutske kombinacije ili doznog režima poželjno ima komplementarne aktivnosti sa ADC kombinacije tako da oni ne utiču negativno jedno na drugo. Farmaceutske kompozicije koje sadrže sredstvo koje se vezuje za FOLR1 i drugo antikancersko sredstvo su takođe obezbeđene.
[0142] Za lečenje bolesti, odgovarajuće doziranje antitela ili sredstva prema predmetnom pronalasku zavisi od vrste bolesti koja treba da se leči, ozbiljnosti i toka bolesti, odgovora bolesti, od toga da li se antitelo ili sredstvo primenjuje u terapijske ili preventivne svrhe, prethodne terapije, pacijentove kliničke istorije, i tako dalje, prema slobodi odlučivanja nadležnog lekara. Antitelo ili sredstvo može da se primeni jednokratno ili u nizu tretmana koji traju od nekoliko dana do nekoliko meseci, ili sve do izlečenja ili postizanja smanjenja stanja bolesti (npr. smanjenja veličine tumora). Optimalni rasporedi doziranja mogu da se izračunaju na osnovu merenja akumulacije leka u telu pacijenta i variraće u zavisnosti od relativne jačine dejstva pojedinačnog antitela ili sredstva. Nadležni lekar može lako da odredi optimalne doze, metodologije doziranja i tempo ponavljanja. U određenim primerima izvođenja, doza je od 0.01 µg do 100 mg po kg telesne težine, i može se dati jednom ili više puta dnevno, nedeljno, mesečno ili godišnje. U određenim primerima izvođenja, antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat se primenjuje jednom na svake dve nedelje ili jednom na svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, doziranje antitela ili imunokonjugata je od oko 0.1 mg do oko 20 mg po kg telesne težine. Nadležni lekar može da proceni učestalost ponavljanja doziranja na osnovu izmerenih vremena zadržavanja i koncentracija leka u telesnim tečnostima ili tkivima.
[0143] Kombinovana terapija može da obezbedi „sinergiju“ i pokaže „sinergističko“, tj. dejstvo koje se postiže kada aktivni sastojci koji se koriste zajedno imaju veće dejstvo od zbira dejstava koja nastaju kada se jedinjenja koriste pojedinačno. Sinergističko dejstvo može da se postigne kada se aktivni sastojci: (1) zajedno formulišu i primenjuju ili dostavljaju istovremeno u kombinovanoj formulaciji jedinične doze; (2) dostavljaju naizmenično ili paralelno kao odvojene formulacije; ili (3) nekim drugim režimom. Kada se dostavljaju naizmeničnom terapijom, sinergističko dejstvo može da se postigne kada se jedinjenja primenjuju ili dostavljaju jedno za drugim, npr. različitim injekcijama u posebnim špricevima. Uopšteno, tokom naizmenične terapije, efikasna doza svakog sastojka se primenjuje sekvencijalno, tj. u nizu, dok se u kombinovanoj terapiji, efikasne doze dva ili više aktivnih sastojaka primenjuju zajedno.
[0144] Primeri izvođenja predmetnog opisa mogu dalje da se definišu po referenci na neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih antitela ovog opisa i postupke za korišćenje antitela predmetnog opisa. Stručnjacima u oblasti će biti jasno
1
da mnoge izmene, i u materijalima i postupcima, mogu da se sprovedu bez odstupanja od obima predmetnog opisa.
PRIMERI
[0145] Podrazumeva se da su primeri i primeri izvođenja koji su ovde opisani dati samo u ilustrativne svrhe i da će njihove različite modifikacije ili izmene biti predložene stručnjacima u oblasti, i one treba da budu uključene u ovu prijavu.
[0146] Prijavljeno je da je folatni receptor-1 (FOLR1) visoko eksprimiran u tumorima jajnika i visoko do umereno eksprimiran u karcinomima mozga, dojke, bešike, endometrioidnim karcinomima, karcinomima pluća, pankreasa i bubrega. Međutim, ekspresija FOLR1 je ograničena u normalnim tkivima i uključuje bubreg, pluća, horoidni pleksus, pankreas, dojku, tiroideu, jajnike, prostatu i pluća.
[0147] Prijavljeni su postupci koji kvantitativno određuju FOLR1 korišćenjem sveže zamrznutih homogenata tkiva. Homogenati celog tkiva ne mogu da naprave razliku između citoplazmatske i ekspresije povezane sa membranom i sveže zamrznuti uzorci nisu pogodni u kliničkom okruženju. Međutim, uzorci koji su fiksirani u formalinu i ukalupljeni u parafinu (FFPE) mogu da se dobiju za kliničke pacijente.
Primer 1
[0148] Imunohistohemijsko bojenje FOLR1 u uzorcima ćelija – kao ispitivani uzorci korišćeni su ručni postupci za fiksiranje u formalinu i kalupljenje u parafinu ćelijskih taloga i tkiva sa sledećim reagensima i uslovima bojenja.
IHC Antitela
2
Uslovi testa FFPE
[0149] Fiksirane u formalinu i ukalupljene u parafinu (FFPE) biopsije tumora jajnika pacijenta i ksenograftski tumori jajnika su obojeni mišjim anti-FOLR1 antitelom klon BN3.2, (Leica, kat. br. NC1-L-FRalpha) i kontrolnim muIgG1 firme Coulter. Nakon demaskiranja antigena u puferu pH 9.5, pločice su blokirane 2% konjskim serumom uz dodatak avidina. Pločice su oprane u PBS, i inkubirane na sobnoj temperaturi 60 minuta sa anti-FOLR1 ili kontrolnim muIgG1 antitelom, a nakon toga 30 minuta sa biotinilizovanim anti-mišjim IgG i 40 minuta sa kompleksom avidin-biotin-peroksidaza za detekciju vezanog sekundarnog antitela. Inkubacija tokom 5 minuta sa DAB (3,3-diaminobenzidin tetrahidrohlorid) je rezultovala u bojenom signalu. Pločice su kontrastno obojene hematoksilinom.
[0150] Intenzitetu bojenja FOLR1 i obrascima raspodele su dodeljene ocene u odnosu na kontrolno IgG bojenje (nespecifično). Intenzitet je ocenjen na skali od 0 do 3 (0 = nema bojenja, 1 = slabo, 2 = umereno i 3 = jako), a raspodela je ocenjena kao fokalna (<25% ćelija obojeno), heterogena (25-75% ćelija obojeno) i homogena (>75% ćelija obojeno).
[0151] Uzorci FFPE su dobijeni iz tumorske mikromatrice, kao i blokovi humanog tkiva iz sedam različitih tumora, kao što je dole prikazano.
FFPE ispitivani uzorci
4
[0152] Ispitivani preparat FOLR1, mišji anti-FOLR1 klon BN3.2, ispitivan je da bi se odredila specifičnost vezivanja za huFQLR1 antigen. Korišćenjem prijavljenih postupaka IHC bojenja, isečci FFPE ćelijskih taloga 300-19 i 300-19 transficiranih sa huFOLR1 (300-10/FOLR1) obojeni su i procenjeni za FOLR1. Ispitivani preparat FOLR1 je doveo do specifičnog bojenja 300-19/FQLR1+ ćelija i izostanka bojenja 300-19 ćelija (3 homo i negativne, redom). Ovi rezultati pokazuju da je klon BN3.2 specifično usmeren na huFOLR1 antigen. (Slika 1).
[0153] Antitelo BN3.2 je takođe korišćeno za detekciju ekspresije FOLR1 na uzorcima tkiva. Imunoreaktivnost svakog ispitivanog i kontrolnog preparata sa tkivima i ćelijskim talozima određena je u konsultaciji sa patologom, Dr. David Dorfman. Prvo so ocenjene kontrole ćelijskog taloga, a zatim uzorci tkiva. Za svako procenjeno tkivo, zabeležen je opis intenziteta bojenja i ravnomernosti bojenja. Ocena intenziteta bojenja i skale ravnomernosti su opisane u nastavku. Finalna prijavljena ocena procenjena za svaki uzorak tkiva predstavlja ocenu ispitivanog preparata umanjenu za ocenu odgovarajućeg kontrolnog preparata. Nivo ABC za svaki uzorak procenjen je poređenjem rezultata bojenja sa kalibrisanim kontrolama ćelijskog taloga.
[0154] Vrednosti antitela vezanih po ćeliji (ABC) određene su za FOLR1-pozitivne tumorske ćelijske linije (KB, IGROV1, JEG3, i OVCAR3) korišćenjem anti-FQLR1-fikoeritirina, BD Quantibrite Beads, i protočne citometrije i pokazano je da imaju različite vrednosti ABC. (Slika 2). Uslovi bojenja su optimizovani za FOLR1 tako da su ćelijski talozi pripremljeni iz FOLR1-pozitivnih tumorskih ćelijskih linija pokazali različite nivoe intenziteta bojenja pomoću IHC. Talog ćelija KB ispoljio je veoma snažno (3+) homogeno bojenje visokog intenziteta, talog ćelija IGROV1 je pokazao snažno (3) bojenje, talog ćelija JEG3 je pokazao umereno (2-3) heterogeno bojenje, dok je bojenje taloga ćelija OVCAR3 pokazalo nizak intenzitet (1-2) heterogenog bojenja. Primećeni trendovi intenziteta bojenja FOLR1 u ćelijskim talozima odgovaraju prijavljenoj ABC vrednosti, gde su ćelije KB ispoljile najvišu ABC vrednost od 1700 000, ćelije IGROV-1 su ispoljile sledeću najvišu ABC vrednost od 260 000, JEG-3 su ispoljile nižu ABC vrednost ili 41000 ABC, dok su ćelije OVCAR3 pokazale najnižu ABC vrednost od 4000. Rezultati bojenja i odgovarajuće ABC vrednosti su prikazane u tabeli ispod.
[0155] ABC vrednosti i odgovarajući rezultati bojenja za huFOLR1 na ćelijskim linijama i odgovarajućim ćelijskim talozima.
Dodatne ćelijske linije, uključujući Capan-1, Jar, Hec-1-A, Hec-1-B, Ishikawa, NCI H292, BT474EEI, PA-1, OV-90, CaOv-4, CaOv-3, A2780, Ovcar-5, Ovcar-4, HCT-15, 786-O, NCI H838, NCI H 522, NCI H2110, NCI H1734, NCI H228 i FU.OV-3 su ispitivane i nađeno je da su FOLR1 pozitivne, ali nivoi ekspresije FOLR1 i osetljivost na aktivnost anti-FOLR1 imunokonjugata su varirale. U referentne svrhe poželjne su ćelijske linije koje imaju konzistentnu ekspresiju FOLR1 i osetljivost na anti-FOLR1 imunokonjugate.
[0156] Naročito važno bilo je to što je IHC postupak bio u stanju da pouzdano otkrije ekspresiju FOLR1 u uzorcima tkiva karcinomima jajnika i nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC). Kao što je prikazano na slici 3, ekspresija FOLR1 mogla je pouzdano da se detektuje u uzorcima karcinoma jajnika i NSCLC koji su ocenjeni od 2 hetero do 3 homo. ABC vrednosti ovih uzoraka bile su u opsegu od oko 41000, za uzorke kojima je dodeljena ocena 2 hetero, do više od 260 000 za uzorke kojima je dodeljena ocena 3 homo. Kao što je prikazano na slici 4, visok intenzitet bojenja i ravnomernost bojenja takođe je primećena kod karcinoma jajnika, adenokarcinoma pluća, i bronhioloalveloarnih karcinoma. Osim toga, dalje je nađeno da je ekspresija FOLR1 u uzorcima NSCLC (slika 5) i u karcinomima jajnika (slika 6) uglavnom smeštena u membrani u uzorcima tkiva. Ekspresija je detektovana u višestrukim uzorcima iz istog, kao i iz različitih uzoraka tumora. Zanimljivo, nijednom od uzoraka iz kolorektalnih tumora, tumora dojke, ili sitnoćelijskih tumora pluća nije dodeljena ocena veća od 2 hetero.
Primer 2
In vivo efikasnost huMovl9-PEG4Mal-DM4 i huMov19-SPDB-DM4 konjugata u poređenju sa sličnim konjugatima koji ne deluju ciljno u KB ksenograftskom modelu
[0157] Konjugat huMov19-SPDB-DM4 podložan isecanju koji ciljno deluje na FOLR1 u poređenju sa huC242-SPDB-DM4 koji nema ciljno delovanje, i konjugat huMov19-PEG4-Mal-DM4 koji nije podložan isecanju u poređenju sa huC242-PEG4Mal-DM4 koji nema ciljno delovanje, ispitani su korišćenjem uspostavljenog ksenograftskog modela KB ćelija (veoma visoka ekspresija FOLR1, 3+ homo, pomoću ručne IHC) implantiranog subkutano u SCID miševe. Miševi su nasumično odabrani prema telesnoj težini u tretmanske grupe i tretirani ili pojedinačno (SPDB konjugatima) 3. dana nakon ćelijske inokulacije, ili tri puta nedeljno, 3, 10. i 17. dana nakon ćelijske inokulacije sa 5 i 10 mg/kg konjugata, redom. Medijana zapremine tumora različitih tretmanskih grupa grafički je prikazana na slici 7. Tretmani sa huMov19-SPDB-DM4, ili huMovl9-PEG4Mal-DM4 su rezultovali u smanjenju medijane zapremine tumora u poređenju sa PBS kontrolom, dok tretmani sa bilo kojim od odgovarajućih konjugata koji nemaju ciljno delovanje nisu proizveli nikakvo značajno dejstvo.
Primer 3
Dozno-zavisna antitumorska aktivnost tretmana sa IMGN853 u ksenograftima humanog karcinoma jajnika OVCAR-3
[0158] Antitumorsko dejstvo IMGN853 procenjeno je u modelu uspostavljenog subkutanog ksenografta karcinoma jajnika. SCID miševi su inokulisani ćelijama OVCAR-3 karcinoma jajnika (1 x 10<7>ćelija/životinji) injektovanih subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli veličinu oko 100 mm3 (21 dan posle inokulacije tumorskim ćelijama), miševi su slučajnim izborom podeljeni u četiri grupe (6 životinja po grupi). Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja je primila jednu intravensku injekciju PBS. Rast tumora je praćen merenjem veličine tumora dva puta nedeljno. Veličina tumora je izračunata pomoću formule: dužina x širina x visina x 1⁄2.
[0159] Antitelo IMGN853 je bilo visoko aktivno protiv OVCAR-3 tumora (IHC ocena 3 homo korišćenjem postupaka za ručno IHC bojenje) u smislu inhibicije rasta tumora (T/C = 0%) pri oba dozna nivoa, 2.5 i 5.0 mg/kg (slika 8). Došlo je do potpunih regresija tumora (CR) kod 6/6 miševa tretiranih sa IMGN853 pri 5.0 mg/kg. Došlo je do delimičnih regresija tumora (PR) kod 6/6 miševa i do CR kod 4/6 miševa tretiranih sa IMGN853 pri nivou doze od 2.5 mg/kg. IMGN853 je bilo aktivno pri nivou doze od 1.2 mg/kg, rezultujući u T/C od 18%, sa 2/6 PR i 1/6 CR. Prema standardima NCI vrednosti T/C u opsegu od 10% do 42% smatraju se aktivnim, T/C od manje od 10% smatraju se visoko aktivnim.
Primer 4
Dozno-zavisna antitumorska aktivnost tretmana sa IMGN853 u ksenograftima humanog karcinoma jajnika IGROV-1.
[0160] Antitumorsko dejstvo IMGN853 procenjivano je na modelu uspostavljenog subkutanog ksenografta karcinoma jajnika. SCID miševi su inokulisani ćelijama IGROV-1 karcinom jajnika (1 x 10<7>ćelija/životinji) injektovanih subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli veličinu oko 100 mm3 (7 dan posle inokulacije tumorskim ćelijama), miševi su slučajnim izborom podeljeni u četiri grupe (6 životinja po grupi). Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja je primila jednu intravensku injekciju PBS. Rast tumora je praćen merenjem veličine tumora dva puta nedeljno. Veličina tumora je izračunata pomoću formule: dužina x širina x visina x 1⁄2.
[0161] Antitelo IMGN853 je bilo visoko aktivno protiv tumora IGROV-1 (IHC ocena 3 homo pomoću ručnih postupaka) pri nivoima doze od 2.5 i 5.0 mg/kg, rezultujući u T/C vrednosti od 5% za oba dozna nivoa (slika 9). Došlo je do delimičnih regresija tumora kod 5/6 i 6/6 miševa u grupama sa dozama od 2.5 i 5.0 mg/kg, redom. IMGN853 je bio neaktivan pri dozi od 1.2 mg/kg (T/C = 47%).
Primer 5
Dozno-zavisna antitumorska aktivnost tretmana sa IMGN853 u ksenograftima humanog karcinoma jajnika OV-90.
[0162] Antitumorsko dejstvo IMGN853 procenjivano je na modelu uspostavljenog subkutanog ksenografta karcinoma jajnika. SCID miševi su inokulisani ćelijama OV-90 karcinom jajnika (1 x 10<7>ćelija/životinji) injektovanih subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli veličinu oko 100 mm3 (13 dana posle inokulacije tumorskim ćelijama), miševi su slučajnim izborom podeljeni u četiri grupe (6 životinja po grupi). Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja je primila jednu intravensku injekciju PBS. Kontrolna grupa životinja je primila PBS primenjen intravenski prema istom rasporedu. Rast tumora je praćen merenjem veličine tumora dva puta nedeljno. Veličina tumora je izračunata pomoću formule: dužina x širina x visina x 1⁄2.
[0163] IMGN853 je bio aktivan protiv OV-90 tumora (IHC ocena 3 hetero-homo ručnim postupcima) pri doznim nivoima od 2.5 i 5.0 mg/kg, rezultujući u T/C vrednostima od 36 i 18%, redom (slika 10). Dve životinje su imale delimičnu regresiju tumora u grupi od 5.0 mg/kg; nije bilo drugih regresija tumora u bilo kojoj od tretmanskih grupa. IMGN853 je bio neaktivan u dozi od 1.2 mg/kg (T/C = 77%).
Primer 6
Dozno-zavisna antitumorska aktivnost tretmana sa IMGN853 u ksenograftima humanog karcinoma jajnika SKOV-3.
[0164] Antitumorsko dejstvo IMGN853 procenjivano je na modelu uspostavljenog subkutanog ksenografta karcinoma jajnika. SCID miševi su inokulisani ćelijama SKOV-3 karcinom jajnika (1 x 10<7>ćelija/životinji) injektovanih subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli veličinu oko 100 mm3 (26 dana posle inokulacije tumorskim ćelijama), miševi su slučajnim izborom podeljeni u četiri grupe (6 životinja po grupi). Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja je primila jednu intravensku injekciju PBS. Rast tumora je praćen merenjem veličine tumora dva puta nedeljno. Veličina tumora je izračunata pomoću formule: dužina x širina x visina x 1⁄2.
[0165] IMGN853 je bio neaktivan protiv SKOV-3 tumora (IHC ocena 1-3 fokalno pomoću ručnih postupaka) u svim dozama, sa rastom tumora tretiranih sa IMGN853 uporedivim sa onim kod PBS kontrolne grupe (slika 11). Nije urađena analiza podataka, i ispitivanje je rano završeno na osnovu neaktivnosti IMGN853 u ovom modelu.
Primer 7
Dozno-zavisna antitumorska aktivnost tretmana sa IMGN853 u ksenograftima humanog cervikalnog adenokarcinoma KB.
[0166] Antitumorsko dejstvo IMGN853 procenjivano je na modelu uspostavljenog subkutanog ksenografta cervikalnog adenokarcinoma. SCID miševi su inokulisani ćelijama KB cervikalnog adenokarcinoma (1 x 10<7>ćelija/životinji) injektovanih subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli veličinu oko 100 mm3 (7 dana posle inokulacije tumorskim ćelijama), miševi su slučajnim izborom podeljeni u četiri grupe (6 životinja po grupi). Miševi su tretirani jednom intravenskom injekcijom IMGN853 pri 1.2, 2.5 ili 5.0 mg/kg. Kontrolna grupa životinja je primila jednu intravensku injekciju PBS. Rast tumora je praćen merenjem veličine tumora dva puta nedeljno. Veličina tumora je izračunata pomoću formule: dužina x širina x visina x 1⁄2.
[0167] IMGN853 je bio visoko aktivan protiv KB tumora u smislu inhibicije rasta tumora (T/C = 0%) pri oba dozna nivoa, 2.5 i 5.0 mg/kg (slika 12). Šest od šest miševa u tretmanskoj grupi od 5.0 mg/kg i pet od šest miševa u tretmanskoj grupi od 2.5 mg/kg imalo je CR, i nije im se razvio tumor do kraja ispitivanja (120. dan). Doza od 1.0 mg/kg je bila aktivna, rezultujući u T/C od 37%, ali nije bilo delimičnih ili potpunih regresija.
Primer 8
Imunohistohemijsko bojenje FOLR1 u uzorcima fiksiranim u formalinu i ukalupljenim u parafinu (FFPE) - automatizovani postupci.
[0168] Test sa IHC bojenjem koristi IVD reagense klase I uključujući Novocastra FOLR1 antitelo (Novocastra/Leica kat. br. NCI-L-FRalpha, klon BN3.2) kao ispitivani preparat i automatizovani uređaj za bojenje Leica Bond RX. Vezani ispitivani ili kontrolni preparat su detektovani inkubacijom sa sistemom za detekciju Leica Bond Refine koji uključuje post-primarni reagens (zečji anti-mišji IgG), praćen polimernim reagensom (kozji anti-zečji polimer) i 3,3-diaminobenzidin tetrahidrohlorid (DAB) hromogenom. FFPE uzorci su obojeni naznačenom koncentracijom(ama) primarnog antitela (pripremljenog razblaživanjem u Leica razblaživaču za FOLR1) kao što je dole navedeno.
1
Antitela za IHC
Postupak testa FFPE korišćenjem Leica Bond RX
K
T
U
D
B
p
I
D
K
[0169] Svi obojeni uzorci su ispitani i ocenjeni. Prvo su procenjeni kontrolni uzorci, a nakon toga ispitivani uzorci (celi preseci i pojedinačna jezgra TMA). Za svako ocenjivano tumorsko tkivo ili ćelijski talog, dat je opis intenziteta bojenja i odgovarajuća proporcija obojenih tumorskih ćelija. Bojenje povezano sa membranom je zabeleženo za svaki uzorak. Kada su za jednog pacijenta dodeljene dvostruke ocene, samo viša ocena je uključena u analizu. Ako je ocena opisivala samo citoplazmatsko
2
bojenje, tada je finalna ocena prijavljena kao nula (0). Intenzitet i ravnomernost su date za svaki uzorak kako je opisano u tabeli koja je prikazana u nastavku. Intenzitet bojenja i obrasci raspodele ocenjeni su u odnosu na kontrolno IgG bojenje (nespecifično). Intenzitet je ocenjen na skali od 0 do 3 (0 = nema bojenja, 1 = slabo, 2 = umereno i 3 = jako), a raspodela je ocenjena kao fokalna (<25% ćelija obojeno), heterogena (25-75% ćelija obojeno) i homogena (>75% ćelija obojeno). U normalnom tkivu, samo definisane substrukture su procenjene pri računanju intenziteta i proporcije.
Sistem ocenjivanja IHC koji se sastoji od skala intenziteta i ravnomernosti
[0170] FFPE uzorci tumora su dobijeni iz tumorskih mikromatrica, kao i iz humanih blokova tkiva iz sedam različitih tumora, kao što je dole prikazano.
Uzorci za test FFPE: TMA
Uzorci za test FFPE: celi isečci
4
[0171] Ćelije (tumorske ćelije ili transficirane ćelije) su fiksirane u formalinu i ukalupljene u parafinu (FFPE). FFPE uzorci ćelijskog taloga za koje je protočnom citometrijom pokazano da ispoljavaju različite opsege ekspresije FOLR1 i normalna humana tkiva su korišćena u ovom ispitivanju da bi se okarakterisale pozitivne i negativne kontrole i za ispitivanje specifičnosti. Ćelijski talozi koji ispoljavaju različite nivoe FOLR1 i odgovarajuće ocene su prikazane u nastavku. Postoji slaba korelacija između ocena bojenja i odgovarajućih nivoa ekspresije FOLR1 (antitela vezana po ćeliji, ABC, određeno pomoću kalibrisane protočne citometrije) u ćelijskim talozima. Na primer ocena 1-3 hetero dodeljena je za SW620 i IGROV-1 koje ispoljavaju ABC vrednosti od 40 098 i 565 481, redom. Dodatno, Hela ćelijama koje pokazuju ABC vrednost od 1.5 milion dodeljena je ocena 2-3 hetero, dok je 300.19/FR1 ćelijama koje ispoljavaju ABC od 830003 dodeljena viša ocena od 3 homo.
Finalne ocene za ćelijske taloge pri koncentraciji ispitivanog preparata od 1.9 µg/mL
<a>Prijavljena ABC vrednost je prosek antitela vezanih po ćeliji u ćelijskoj populaciji i određena je kao što sledi: koncentracija od 1.0 x 10<-8>M anti-FOLR1-PE (1:1) korišćena je za određivanje ABC vrednosti na odgovarajućoj ćelijskoj liniji korišćenjem postupaka protočne citometrije i Quantibrite ™ Beads (BD Biosciences).
[0172] Histogrami protočne citometrije predstavljaju raspodelu ćelija nasuprot broju anti-FOLR1 antitela vezanih po ćeliji (nivo ekspresije FOLR1). I histogrami i odgovarajući rezultati IHC bojenja ukazuju na to da svaka od ovih ćelijskih linija sadrži heterogenu populaciju ćelija koje imaju širok opseg ekspresije FOLR1. Izuzetak je ćelijska linija 300.19/FR1 koja pokazuje i ravnomeran histogram protočne citometrije i rezultat IHC bojenja. Ovi podaci sugerišu da ćelijske linije koje eksprimiraju ravnomerniji nivo FOLR1 mogu da obezbede bolju korelaciju između ABC vrednosti i odgovarajućih rezultata bojenja. Iako je test pokazao pozitivno bojenje u svim kontrolama ćelijskog taloga pozitivnim na FOLR1, postoji slaba korelacija između rezultata bojenja i odgovarajućih nivoa ekspresije FOLR1 u većini od ovih ćelijskih taloga. Stoga, ćelijski talozi iz ove grupe nisu mogli da budu identifikovani kao visoko-, srednje- i nisko-eksprimirajuće kontrole. Reprezentativne fotografije i histogrami koji prikazuju ekspresiju FOLR1 u ćelijskim linijama pomoću IHC i protočne citometrije prikazani su na SLICI 13.
[0173] Za određivanje uslova testa, opseg razblaženja ispitivanog i kontrolnog preparata su ispitivani da bi se odabrali uslovi koji ispoljavaju odgovarajući nivo osetljivosti. Eksperimenti su izvedeni na panelu FFPE uzoraka uključujući ćelijske taloge pozitivne na FOLR1i TMA koji sadrži normalna tkiva pozitivna i negativna na FOLR1 (adrenalna žlezda (kora/srž), dojka (kanali i režnjići/vezivno tkivo), falopijeva tuba (površinski epitelijum/mišićni zid), bubreg (tubuli/glomeruli), pluća (pneumociti tipa I/II/interalveolarna vezivna tkiva), pankreas (kanali/ Langerhansova ostrvca), pljuvačna žlezda (kanali/stroma), koža (ekrine žlezde/epidermis), želudac (površinski epitelijum/submukoza)), i celi isečci tumorskih tkiva (10 uzoraka tumora jajnika i 10 uzoraka tumora pluća). Svaki uzorak je obojen serijskim razblaženjem koncentracija ispitivanog preparata (0.25, 0.5, 0.9, 1.9, 3.8, i 7.5 µg/mL) ili kontrolnim preparatom u koncentraciji od 1.9 µg/mL ili 3.8 µg/mL. Relativni intenziteti bojenja za svako razblaženje su upoređeni za svaki uzorak da bi se identifikovalo optimalno razblaženje. Kriterijum za optimalno razblaženje bio je razblaženje koje 1) ne izaziva pozadinski šum bojenja u uzorcima obojenim izotipskom kontrolom 2) ne izaziva bojenje u negativnim kontrolama tkiva obojenim ispitivanim preparatom i 3) pokazuje razliku između različitih nivoa ekspresije FOLR1 povezane sa membranom među ispitivanim uzorcima koji predstavljaju indikaciju od interesa (FFPE tkiva tumora jajnika, endometrijalnog tumora, NSCLC tumora i tumora bubrega). Od pet procenjivanih razblaženja ispitivanog preparata, koncentracija od 1.9 µg/mL pokazala je najbolji dinamički opseg u rezultatima bojenja korišćenjem automatizovanih protokola Leica Bond RX (protokol termičke obrade i uklanjanja parafina, protokol HIER koji koristi ER2 tokom 20 minuta i protokol bojenja IHC F-sa dodatnim ispiranjima).
Primer 9
Identifikacija i karakterizacija kontrola koje karakterišu dinamički opseg testa -automatizovani postupci za bojenje
[0174] Kontrole kvaliteta: Humana normalna pljuvačna žlezda, pluća i pankreas su identifikovani kao pozitivne kontrole tkiva koje treba da budu uključene u svaki test kako bi se potvrdilo da je postupak bojenja izveden kako je očekivano. Humani normalni ezofagus je identifikovan kao negativna kontrola. Ove kontrole su okarakterisane kao što sledi: u cilju uspostavljanja kontrola koje pokrivaju dinamički opseg testa, mikromatrica tkiva (TMA) koja se sastoji od nekoliko uzoraka normalnih tkiva pozitivnih i negativnih na FOLR1 za koje se očekivalo da ispolje dinamički opseg testa, korišćena je kao verifikaciona kontrola testa tokom faza optimizacije i validacije. Četiri normalna tkiva sa identifikovanim strukturama u TMA su identifikovana kao pogodne kontrole za test kao što sledi: respiratorni epitelijum normalnih humanih pluća (ocena 2 homo); kanali normalnog humanog pankreasa (ocena 3 homo apikalno); prelazni kanali normalne humane pljuvačne žlezde ocena 1-2 hetero); i normalni humanni ezofagus (ocena 0). Tokom ukupno 4 ciklusa testa, identifikovane pogodne kontrole testa iz ovog TMA dale su istovetne rezultate. Ovi rezultati ukazuju na to da odabrane kontrole daju konzistentne rezultate i obuhvataju dinamički opseg testa.
Strukture u normalnim tkivima identifikovane kao kontrole koje obuhvataju dinamički opseg testa
Apikalno bojenje se definiše kao polarizovano neravnomerno bojenje membrane
Primer 10
Ispitivanje performanse postupka za automatizovano bojenje.
[0175] Namena ovog testa je da specifično detektuje FOLR1, ponovljivo, i sa odgovarajućom osetljivošću za razlikovanje različitih nivoa i različite ravnomernosti ekspresije FOLR1 povezane sa membranom (optimalni dinamički opseg) u FFPE tumorskim tkivima jajnika, endometrijuma, NSCLC i bubrega. Stoga, specifičnost, ponovljivost i osetljivost su smatrane kriterijumima performanse.
[0176] Specifičnost i osetljivost ispitivanog testa procenjena poređenjem bojenja normalnog tkiva u ispitivanom testu sa prethodno objavljenim rezultatima. Rezultati bojenja iz ovog ispitivanja upoređeni su sa odgovarajućim rezultatima bojenja autora Scorer et al 2010 (A Full Immunohistochemical Evaluation of a Novel Monoclonal Antibody to Folate Receptor-alpha. The Novocastra Journal of Histopathology, REAGENSS: 2010(3):8-12, koji opisuje isti klon antitela BN3.2) sa FFPE normalnog tkiva i iz ispitivanja ukrštene reaktivnosti tkiva (TCR) korišćenjem IMGN853 (huMov19 (M9346A) antitelo) na sveže zamrznutom normalnom tkivu (ImmunoGen Report IMH28-003). Poređenje rezultata bojenja iz svakog metoda ukazuje na to da su tri testa pokazala uglavnom slične profile bojenja normalnog tkiva sa različitim relativnim osetljivostima, pri čemu je Scorer test bio najmanje osetljiv, ispitivani test (IMH28-011) je imao srednju osetljivost, i metod TCR testa je imao najveću osetljivost. Neke strukture su pokazale pozitivno bojenje samo u dva osetljivija postupka (ispitivani test i TCR test). Nije bilo primera pozitivnog bojenja u najmanje osetljivom testu Scorer-a koji nisu bili takođe pozitivni u ispitivanom testu i TCR metodu. Ovi rezultati pokazuju da su specifičnost i osetljivost testa odgovarajuće za procenu ekspresije FOLR1 u normalnim tkivima.
[0177] Specifičnost i osetljivost ispitivanog testa je dalje okarakterisana bojenjem i procenom panela TMA tumora koji se sastoji od tumora jajnika, endometrijuma, NSCLC i tumora bubrega (set uzoraka reprezentativnih za namenjenu kliničku upotrebu testa). Pozitivno bojenje je dosledno lokalizovano u tumorskom tkivu sa normalnim okolnim tkivnim komponentama uključujući stromu, krvne sudove, limfocite i normalno tkivo organa obojenim negativno ili pozitivno, kao što je očekivano. Za svaki podtip karcinoma jajnika ili NSCLC, raspodela rezultata bojenja među TMA koji potiču od različitih prodavaca pokazala je sličnu raspodelu rezultata sugerišući da ovaj metod nije osetljiv na različite uslove fiksacije i obrade. Budući da su obrasci raspodele bili slični među TMA, podaci iz različitih matrica su kombinovani i rezultati su razvrstani u kategorije. Rezime ovih rezultata za podtipove tumora koji su sadržali 20 ili više uzoraka po podtipu navedeni su u tabelama koje slede. Kao što je rezimirano u ovim tabelama, dinamički opseg rezultata je zabeležen za svaki tip tumora i ukazuje na to da ovaj test pokazuje odgovarajuću osetljivost u razlikovanju različitih nivoa i različitih ravnomernosti ekspresije FOLR1 povezane sa membranom u FFPE tumorskim tkivima jajnika, endometrijuma, NSCLC i bubrega. Reprezentativne fotografije seroznog jajnika, endometrioidnog karcinoma jajnika, NSCLC, endometrijalnog karcinoma i bubrežnog karcinoma sitnih ćelija date su na slikama 14-18. Dodatne reprezentativne fotografije korisne, na primer, u smernicama za bojenje ili dijagnostičkom kitu, prikazane su na slikama 23-25. Ova ispitivanja ukazuju na to da je test specifičan i da ima odgovarajuću osetljivost za upotrebu kao dijagnostički ili prateći dijagnostički reagens.
Rezime rezultata bojenja za preovlađujuće podtipove tumora jajnika [0178]
Rezime rezultata bojenja za tumore NSCLC
1
�
[0180] Svi uzorci adenokarcinoma su uključeni osim specifikovanih uzoraka bronhioloalveolarnog karcinoma.
Rezime rezultata bojenja za adenokarcinom endometrijuma i tumora bistrih ćelija bubrega
[0181]
[0182] Preciznost ispitivanog testa je istraživana procenom ponovljivosti testa unutar ciklusa i između ciklusa korišćenjem tri FFPE uzorka tumorskih tkiva, tumora jajnika, NSCLC, ili tumora bubrega gde svaki uzorak ispoljava visoku, srednju, ili nisku ocenu. Za ponovljivost unutar ciklusa, devet pločica od kojih svaka sadrži isečak tumora pluća, jajnika i bubrega smešteno je na devet slučajno odabranih pozicija uređaja Leica Bond RX. Za ponovljivost između ciklusa, tri pločice koje sadrže isečke iz istih uzoraka su obojene u tri različita dana. Sve pločice iz oba eksperimenta, za ponovljivost između ciklusa i unutar ciklusa, su procenjene i pokazale su ekvivalentne rezultate bojenja za svaki odgovarajući uzorak: tumor pluća (visok: 3 homo), tumor jajnika (srednji: 2 hetero), i tumor bubrega (nizak: 1-2 hetero). Ovi podaci pokazuju ponovljivost između tipova tkiva sa niskim, srednjim i visokim nivoom ekspresije.
Primer 11
Ocena ekspresije FOLR1 od ≥ 2 heterogeno dobijena pomoću IHC predstavlja kriterijum za izbor pacijenata za lečenje sa IMGN853.
[0183] Nivoi ekspresije FOLR1 u tumorskim ćelijskim linijama su određeni korišćenjem konjugata antitelo-PE (FR1-24-PE) i sistema QuantiBRITE. Tri ćelijske linije karcinoma jajnika (Igrov-1, Skov-3 i Ovcar-3), ćelijska linija horiokarcinoma Jeg-3 i ćelijska linija cervikalnog karcinoma KB bile su uključene u ispitivanje. U cilju dobijanja pouzdanih vrednosti ABC, eksperimenti vezivanja sa konjugatom antitelo-PE treba da budu izvedeni pri koncentraciji zasićenja (koncentracija na kojoj su sva dostupna vezujuća mesta zauzeta konjugatom). Da bi se odredila takva koncentracija za FR1-24-PE konjugat, izveli smo eksperimente vezivanja na panelu ćelijskih linija pozitivnih na FOLR1 sa različitom ekspresijom FOLR1. Ćelije su inkubirane sa širokim opsegom koncentracija FR1-24-PE konjugata dva časa na ledu, oprane puferom FACS (PBS sa 1% BSA), fiksirane u 1% formaldehidu u PBS i ispitane pomoću protočnog citometra FACSCalibur. Pri koncentraciji od 1x10<-8>M konjugat je zasitio vezujuća mesta ćelijske površine na svim ispitivanim ćelijskim linijama Igrov-1, Jeg-3, Skov-3, Ovcar-3, i KB. U narednim eksperimentima vezivanja ABC, konjugat FR1-24-PE je korišćen u koncentraciji od 1x10<-8>M. Svaki uzorak je ispitivan u triplikatima; nekoliko nezavisnih eksperimenata je izvedeno na svakoj ćelijskoj liniji. Najviša ekspresija nađena je na KB ćelijama sa približnom vrednošću ABC od 4 000 000±300 000, praćena Igrov-1 i Jeg-3 ćelijskim linijama sa vrednošću ABC od 400000±85 000 i 150 000±75 000, redom. Dve ćelijske linije, Skov-3 i Ovcar-3, imale su nisku ekspresija FOLR1, 20 000±10 000 i 7 000±4 000 ABC, redom. Značajna međueksperimentalna varijacija vrednosti ABC primećena je za Jeg-3 ćelije, gde su ABC vrednosti varirale od 40 000 do 300 000. Ova varijabilnost je verovatno odražavala neka biološka svojstva ćelijske linije pre nego varijabilnost testa, s obzirom da su ABC vrednosti dobijene za druge ispitivane ćelijske linije bile mnogo manje varijabilne (videti tabelu ispod).
4
[0184] Jačina dejstva i specifičnost IMGN853 je ispitivana prema ćelijskim linijama pozitivnim na FOLR1 sa širokim opsegom ekspresije FOLR1 (ABC vrednosti za ćelijske linije su date gore u tekstu). Dodatno, ćelijske linije negativne na FOLR1 Namalwa i SW2 bile su uključene u eksperimente. IMGN853 je bilo visoko citotoksično prema ćelijama sa visokom ekspresijom FOLR1, KB (4000 000±300 000 ABC), Igrov-1 (400000±85 000 ABC) i Jeg-3 (150000±75 000 ABC), sa vrednostima IC50od 0.10±0.01 nM, 0.50±0.07 nM i 1.00±0.05 nM, redom. Aktivnost ubijanja ćelija prema sve tri ćelijske linije bila je zavisna od FOLR1, budući da je višak nemodifikovanog huMov19 (M9346A) antitela (0.5 µM) značajno snižavao jačinu dejstva konjugata do tipičnih nespecifičnih nivoa (od 10 do 20 puta). IMGN853 je bio aktivan samo u maloj meri protiv ćelija koje imaju nisku ekspresiju FOLR1, Skov-3 i Ovcar-3 ćelija (20000±10 000 i 7000±4 000 ABC, redom), i protiv ćelija negativnih na FOLR1, Namalwa i SW2, sa IC50vrednošću većom od 2 nM. Citotoksična aktivnost IMGN853 protiv ovih ćelijskih linija bila je niska i nije zavisila od FOLR1, budući da blokiranje sa huMov19 (M9346A) nije uticalo na nju. Videti slike 19 i 20.
[0185] FFPE uzorci pripremljeni iz mišjih ksenograftskih modela tumora su ocenjivani na pozitivnost na FOLR1 korišćenjem optimizovanih i validiranih testova koji su gore opisani. Bojenje nije zapaženo u tumorskim ćelijama bilo kog ksenograftskog uzorka obojenog sa kontrolnim preparatom. FFPE tkiva mišjeg ksenografta izvedena iz sledećih ćelijskih linija pokazala su sledeće obrasce bojenja: Igrov-1, KB i NCI-H2110 su pokazale homogene obrasce bojenja sa intenzitetom nivoa 3; Ishikawa i Ovcar 3 su pokazale heterogene obrasce bojenja sa intenzitetom nivoa 3; LXFA737 je pokazala homogene obrasce bojenja sa intenzitetom nivoa 2; OV-90 je pokazala heterogene obrasce bojenja sa intenzitetom nivoa 2; i SKOV3 je bila negativna. Reprezentativne fotografije ksenografta tumora obezbeđene su na slikama 21 i 22.
[0186] Prag bojenja (≥2 heterogeno) zahteva i minimalni nivo ekspresije (intenzitet bojenja) i minimum raspodele bojenja (procenat tumorskih ćelija koje eksprimiraju FOLR1). Predklinički podaci obezbeđuju opravdanje za ovaj prag kod karcinoma jajnika. Uzorci mišjeg ksenograftskog tumora sa rezultatima IHC od ≥ 2 heterogeno ispoljavaju osetljivost na IMGN 853 in vivo. FFPE uzorci pripremljeni iz mišjih ksenograftskim modela tumora jajnika procenjeni su za pozitivnost na FOLR1 korišćenjem optimizovanog i validiranog testa koji je gore opisan. Dva ksenograftska modela karcinoma jajnika OVCAR-3, i IGROV- 1 pokazala su obrasce heterogenog ili homogenog bojenja sa nivoom intenziteta od 3. Ksenograftski model izveden iz OV-90 ćelija karcinoma jajnika pokazao je obrazac heterogenog bojenja sa nivoom intenziteta od 2; model Skov-3 karcinoma jajnika bio je negativan na FOLR1. IMGN853 su bila visoko aktivna u dva modela jajnika sa nivoom FOLR1 intenziteta od 3 i aktivna u OV-90 modelu sa nivoom FOLR1 intenziteta od 2. Aktivnost nije zapažena u SKOV-3 modelu. Ksenograftski modeli su takođe procenjeni za druge indikacije bolesti uključujući tumore pluća, endometrijuma, i cervikalne tumore i, iako su detektovane korelacije između aktivnosti i rezultata bojenja FOLR1, dodatni uzorci moraju da budu ispitani.
[0187] Osetljivost ksenograftskih modela tumora jajnika na IMGN853 nasuprot nivou ekspresije FOLR1
Osetljivost drugih ksenograftskih modela tumora na IMGN853 nasuprot nivou ekspresije FOLR1
SEKVENCE [0188]

Claims (17)

Patentni zahtevi
1. Antitelo protiv folatnog receptora 1 (FOLR1) ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu u terapiji kancera kod subjekta, gde je povećana ekspresija gena ili proteina FOLR1 u uzorku kancera pomenutog subjekta detektovana korišćenjem postupka za detekciju koji omogućava razlikovanje intenziteta bojenja ili ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1 u poređenju sa intenzitetom bojenja ili ravnomernošću bojenja u jednom ili više referentnih uzoraka, gde je efikasnost terapije kancera anti-FOLR1 antitelom ili anti-FOLR1 imunokonjugatom na taj način povećana; naznačeno time što anti-FOLR1 antitelo za upotrebu u terapiji kancera sadrži:
(i) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC), i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4 (huMov19 vLCv1.00) ili
(ii) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC) i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60); i
gde anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu u terapiji kancera sadrži anti-FOLR1 antitelo, linker i citotoksin, gde anti-FOLR1 antitelo anti-FOLR1 imunokonjugata sadrži:
(i) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC), i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4 (huMov19 vLCv1.00) ili
(ii) varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 (huMov19 vHC) i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60).
2. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1,
naznačeno time što varijabilni domen lakog lanca anti-FOLR1 antitela za upotrebu u terapiji kancera sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60), naročito gde anti-FOLR1 antitelo za upotrebu u terapiji kancera sadrži (i) teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu istu kao aminokiselinska sekvenca teškog lanca kodirana plazmidom deponovanim u Američkoj kolekciji kultura sojeva (ATCC) kao PTA-10772, i (ii) laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu istu kao aminokiselinska sekvenca lakog lanca kodirana plazmidom deponovanim u ATCC kao PTA-10774; i
gde varijabilni domen lakog lanca anti-FOLR1 antitela anti-FOLR1 imunokonjugata sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 (huMov19 vLCv1.60), naročito gde anti-FOLR1 antitelo anti-FOLR1 imunokonjugata za upotrebu u terapiji kancera sadrži (i) teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu istu kao aminokiselinska sekvenca teškog lanca kodirana plazmidom deponovanim u Američkoj kolekciji kultura sojeva (ATCC) kao PTA-10772, i (ii) laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu istu kao aminokiselinska sekvenca lakog lanca kodirana plazmidom deponovanim u ATCC kao PTA-10774.
3. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što postupak za detekciju predstavlja imunohistohemijski (IHC) postupak, naročito gde pomenuti IHC predstavlja kalibrisani IHC koji omogućava razlikovanje različitih nivoa ekspresije FOLR1.
4. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 3, naznačeno time što postupak za detekciju proizvodi opseg ravnomernosti bojenja za uzorke koji imaju fokalnu raspodelu FOLR1 (< 25% ćelija obojeno), heterogenu raspodelu FOLR1 (25-75% ćelija obojeno), ili homogenu raspodelu FOLR1 (> 75% ćelija obojeno).
5. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što postupak za detekciju omogućava razlikovanje intenziteta bojenja i ravnomernosti bojenja u uzorku kancera koji eksprimira FOLR1 u poređenju sa referentnim uzorkom.
6. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što uzorak kancera ima ravnomernost bojenja koja je heterogena ili homogena i ocenu intenziteta bojenja od 1, 2, 3, ili 3+ za ekspresiju FOLR1 pomoću IHC, posebno pomoću IHC na uzorku fiksiranom u formalinu i ukalupljenom u parafinu.
1
7. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što uzorak kancera ima ocenu intenziteta bojenja od 1 ili više za ekspresiju FOLR1 pomoću IHC, naročito
a) gde uzorak kancera ima ravnomernost bojenja za ekspresiju FOLR1 koja je heterogena;
b) gde uzorak kancera ima ravnomernost bojenja za ekspresiju FOLR1 koja je homogena;
c) gde je 25-75% ćelija u uzorku kancera obojeno za ekspresiju FOLR1; ili d) gde je više od 75% ćelija u uzorku kancera obojeno za ekspresiju FOLR1.
8. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time što uzorak kancera ima ocenu intenziteta bojenja od 2 ili više za ekspresiju FOLR1 pomoću IHC, naročito
a) gde uzorak kancera ima ravnomernost bojenja za ekspresiju FOLR1 koja je heterogena;
b) gde uzorak kancera ima ravnomernost bojenja za ekspresiju FOLR1 koja je homogena;
c) gde je 25-75% ćelija uzorka kancera obojeno za ekspresiju FOLR1; ili d) gde je više od 75% ćelija uzorka kancera obojeno za ekspresiju FOLR1.
9. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što se IHC sprovodi ručno ili korišćenjem automatizovanog sistema.
10. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je pomenuti referentni uzorak pozitivni referentni uzorak ili negativni referentni uzorak, naročito gde pomenuti referentni uzorak sadrži ćelije, ćelijske taloge, ili tkivo.
11. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što postupak za detekciju obuhvata detekciju ekspresije FOLR1 antitelom BN3.2
12. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što subjekt ima kancer izabran iz grupe koja se
2
sastoji od: kancera jajnika, endometrijalnog kancera, kancera peritoneuma, ili kancera pluća.
13. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, naznačen time što je linker anti-FOLR1 imunokonjugata odabran iz grupe koja se sastoji od: linkera podložnog isecanju, linkera koji nije podložan isecanju, hidrofilnog linkera i linkera na bazi dikarboksilne kiseline, posebno gde je pomenuti linker odabran iz grupe koja se sastoji od: N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)pentanoata (SPP); N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2-sulfopentanoata (sulfo-SPP); N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)butanoata (SPDB); N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2-sulfobutanoata (sulfo-SPDB); N-sukcinimidil 4-(maleimidometil) cikloheksankarboksilata (SMCC); N-sulfosukcinimidil 4-(maleimidometil) cikloheksankarboksilata (sulfoSMCC); N-sukcinimidil-4-(jodoacetil)-aminobenzoata (SIAB); i N-sukcinimidil-[(N-maleimidopropionamido)-tetraetilenglikol] estra (NHS-PEG4-maleimida).
14. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što linker anti-FOLR1 imunokonjugata predstavlja N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2 sulfobutanoat (sulfo-SPDB).
15. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što je citotoksično sredstvo anti-FOLR1 imunokonjugata odabrano iz grupe koja se sastoji od: majtanzinoida, analoga majtanzinoida, benzodiazepina, taksoida, CC-1065, analoga CC-1065, duokarmicina, analoga duokarmicina, kaliheamicina, dolastatina, analoga dolastatina, auristatina, derivata tomaimicina i derivata leptomicina ili proleka sredstva,
posebno gde je pomenuto citotoksično sredstvo majtanzinoid,
naročito gde je pomenuto citotoksično sredstvo N(2’)-deacetil-N(2’)-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtanzin (DM1) ili N(2’)-deacetil-N(2’)-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil)-majtanzin (DM4).
16. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 15, naznačeno time što je citotoksično sredstvo anti-FOLR1 imunokonjugata N(2’)-deacetil-N(2’)-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil)-majtanzin (DM4).
17. Anti-FOLR1 antitelo ili anti-FOLR1 imunokonjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 15, naznačeno time što je linker anti-FOLR1 imunokonjugata N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio)-2 sulfobutanoat (sulfo-SPDB), i naznačen time što je citotoksično sredstvo anti-FOLR1 imunokonjugata N(2’)-deacetil-N(2’)-(4-merkapto-4-metil-1-oksopentil)-majtanzin (DM4).
4
RS20180231A 2011-04-01 2012-03-30 Postupci za povećanje efikasnosti terapije kancera usmerene na folr1 RS56916B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161471007P 2011-04-01 2011-04-01
PCT/US2012/031544 WO2012135675A2 (en) 2011-04-01 2012-03-30 Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
EP12764885.5A EP2694106B1 (en) 2011-04-01 2012-03-30 Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56916B1 true RS56916B1 (sr) 2018-05-31

Family

ID=46932392

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180231A RS56916B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Postupci za povećanje efikasnosti terapije kancera usmerene na folr1

Country Status (30)

Country Link
US (5) US8709432B2 (sr)
EP (4) EP4309671A3 (sr)
JP (7) JP6018621B2 (sr)
KR (6) KR102489185B1 (sr)
CN (3) CN108743965A (sr)
AU (4) AU2012236219B2 (sr)
BR (1) BR112013025415B1 (sr)
CA (2) CA3182262A1 (sr)
CY (1) CY1119960T1 (sr)
DK (1) DK2694106T3 (sr)
EA (2) EA201791843A3 (sr)
ES (2) ES2965109T3 (sr)
HR (1) HRP20180358T1 (sr)
HU (1) HUE036172T2 (sr)
IL (5) IL281714B2 (sr)
LT (1) LT2694106T (sr)
ME (1) ME03025B (sr)
MX (3) MX340640B (sr)
MY (2) MY180894A (sr)
NO (1) NO2893540T3 (sr)
PL (1) PL2694106T3 (sr)
PT (1) PT2694106T (sr)
RS (1) RS56916B1 (sr)
SG (2) SG193514A1 (sr)
SI (1) SI2694106T1 (sr)
SM (1) SMT201800103T1 (sr)
TR (1) TR201802659T4 (sr)
UA (2) UA113403C2 (sr)
WO (1) WO2012135675A2 (sr)
ZA (1) ZA202007440B (sr)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
EP3539572A1 (en) 2005-08-24 2019-09-18 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
BRPI1010620B8 (pt) 2009-06-03 2021-05-25 Immunogen Inc métodos de conjugação
CN103037900B (zh) 2010-02-24 2016-04-06 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
RS58367B1 (sr) 2011-03-29 2019-03-29 Immunogen Inc Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom
IL281714B2 (en) 2011-04-01 2023-11-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
HUE049693T2 (hu) 2012-08-31 2020-10-28 Immunogen Inc Diagnosztikai ASSAY-k és készletek a folát receptor 1 kimutatására
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
WO2014089177A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines
JP6224619B2 (ja) * 2012-12-07 2017-11-01 協和発酵キリン株式会社 抗ｆｏｌｒ１抗体
RU2015129800A (ru) 2012-12-21 2017-01-30 Биоэллаенс К. В. Гидрофильные саморазрушающиеся линкеры и их конъюгаты
US20140302037A1 (en) * 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
CA2911499A1 (en) * 2013-05-14 2014-11-20 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
AU2014312086B2 (en) * 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
IL298044B2 (en) 2013-10-08 2024-11-01 Immunogen Inc Dosing regimens of anti-FOLR1 immunoconjugate
US20150297744A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-22 Immunogen, Inc. Anti-FOLR1 Immunoconjugate Dosing Regimens
SG11201610620UA (en) * 2014-06-20 2017-01-27 Bioalliance Cv Anti-folate receptor aplha (fra) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
CN106999604B (zh) 2014-09-02 2021-08-03 伊缪诺金公司 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
ES2815353T3 (es) 2014-09-03 2021-03-29 Immunogen Inc Derivados de benzodiazepina citotóxicos
EP3189057A1 (en) 2014-09-03 2017-07-12 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
RS61010B1 (sr) 2014-11-20 2020-11-30 Hoffmann La Roche Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije protiv folr1 i cd3
DK3221355T3 (da) 2014-11-20 2020-12-07 Hoffmann La Roche Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler CD3 og folatreceptor 1 (FolR1) samt PD-1-aksebindende antagonister
SI3221357T1 (sl) 2014-11-20 2020-09-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Pogoste lahke verige in načini uporabe
WO2017020048A1 (en) * 2015-07-30 2017-02-02 Expression Pathology, Inc. QUANTIFYING FR-α AND GART PROTEINS FOR OPTIMAL CANCER THERAPY
AU2016323968B2 (en) 2015-09-17 2023-07-06 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-FOLR1 immunoconjugates
PT3380525T (pt) 2015-11-25 2024-02-05 Immunogen Inc Formulações farmacêuticas e métodos que as utilizam
SG11201805557SA (en) 2016-01-08 2018-07-30 Bioalliance Cv Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
EP4353319A3 (en) 2016-09-28 2024-06-05 Atossa Therapeutics, Inc. Methods of adoptive cell therapy
KR20250171447A (ko) 2017-02-28 2025-12-08 이뮤노젠 아이엔씨 자기희생적 펩티드 링커 및 이들의 접합체를 갖는 메이탄시노이드 유도체
WO2018195243A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
IT201700087291A1 (it) * 2017-07-28 2019-01-28 Fondazione St Italiano Tecnologia Metodo di imaging di un campione biologico e relativa sonda
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
TW202413360A (zh) 2017-12-28 2024-04-01 美商伊繆諾金公司 苯二氮平衍生物
CN115925952A (zh) * 2018-03-13 2023-04-07 东莞凡恩世生物医药有限公司 抗叶酸受体1抗体及其用途
US11833214B2 (en) 2019-03-21 2023-12-05 Immunogen, Inc. Methods of preparing cell-binding agent-drug conjugates
EP3947395A1 (en) 2019-03-29 2022-02-09 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic bis-benzodiazepine derivatives and conjugates thereof with cell-binding agents for inhibiting abnormal cell growth or for treating proliferative diseases
JP7561141B2 (ja) 2019-04-26 2024-10-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド カンプトテシン誘導体
WO2020223221A1 (en) 2019-04-29 2020-11-05 Immunogen, Inc. Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates
EP3980127A1 (en) * 2019-06-06 2022-04-13 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
CN111579798A (zh) * 2020-05-29 2020-08-25 深圳市锦欣医疗科技创新中心有限公司 一种评估子宫内膜容受性的试剂盒及其使用方法
CA3194182A1 (en) * 2020-09-12 2022-03-17 Medimmune Limited A scoring method for an anti-b7h4 antibody-drug conjugate therapy
WO2022256507A1 (en) * 2021-06-04 2022-12-08 Immunogen, Inc. Treatment of cancer in patients with soluble fr-alpha
IL314452A (en) * 2022-03-11 2024-09-01 Astrazeneca Ab Scoring method for anti-frα antibody-drug treatment
WO2025094146A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Immunogen Switzerland Gmbh Vasconstrictors for reducing ocular toxicity of antibody-maytansinoid conjugates
US12600795B2 (en) 2023-12-26 2026-04-14 Medicovestor, Inc. Oligomeric IgG for immunotherapeutics and diagnostics
US12258396B1 (en) * 2024-02-02 2025-03-25 Medicovestor, Inc. Methods of using immunotherapeutics that bind folate receptor alpha
CN117741149A (zh) * 2024-02-19 2024-03-22 卡秋(江苏)生物科技有限公司 一种用于卵巢癌细胞叶酸受体α的检测试剂盒及其应用
WO2025195447A1 (zh) * 2024-03-22 2025-09-25 北京桦冠生物技术有限公司 结合folr1蛋白的抗体、抗体药物偶联物及其用途

Family Cites Families (115)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
US4957939A (en) 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
US4472509A (en) 1982-06-07 1984-09-18 Gansow Otto A Metal chelate conjugated monoclonal antibodies
US4938948A (en) 1985-10-07 1990-07-03 Cetus Corporation Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US20040049014A1 (en) 1988-12-28 2004-03-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
JPH049249A (ja) 1990-04-27 1992-01-14 Kusuda:Kk 塗型剤吹き付け機
US6916605B1 (en) 1990-07-10 2005-07-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
EP1306095A3 (en) 1992-03-05 2003-06-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors
US5965132A (en) 1992-03-05 1999-10-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors
US20030148406A1 (en) 1992-03-17 2003-08-07 David John King Multivalent antigen-binding proteins
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
AU7378096A (en) 1995-09-28 1997-04-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Porcine cell interaction proteins
US6596850B1 (en) 1998-01-30 2003-07-22 Ixsys, Incorporated Anti-αv3β3 recombinant human antibodies, nucleic acids encoding same
WO2000023082A1 (en) 1998-10-19 2000-04-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of systemic lupus erythematosus by down-regulating the autoimmune response to autoantigens
US20040031072A1 (en) 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
IT1307309B1 (it) 1999-12-30 2001-10-30 Enea Ente Nuove Tec Peptidi stabilizzanti, polipeptidi ed anticorpi che li comprendono.
PL211872B1 (pl) 2000-03-31 2012-07-31 Purdue Research Foundation Kompozycja farmaceutyczna
DE10037759A1 (de) 2000-08-03 2002-07-04 Gruenenthal Gmbh Screeningverfahren
MXPA03007316A (es) 2001-02-19 2003-12-04 Merck Patent Gmbh Metodo para la identificacion de epitopes de celulas t y el uso para la preparacion de moleculas con inmunogenicidad reducida.
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
CA2445826C (en) 2001-05-02 2014-03-25 Purdue Research Foundation Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
US7314974B2 (en) 2002-02-21 2008-01-01 Monsanto Technology, Llc Expression of microbial proteins in plants for production of plants with improved properties
WO2003074704A1 (fr) 2002-03-01 2003-09-12 Japan Envirochemicals, Ltd. Proteines capables de se lier aux hormones sexuelles feminines et procede de preparation
AU2003224073C1 (en) 2002-04-22 2010-03-11 AgroProtect GmbH Antibodies, recombinant antibodies, recombinant antibody fragments and fusions mediated plant disease resistance against fungi
WO2004043989A2 (en) 2002-11-07 2004-05-27 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to heparanase
EP1481993A1 (en) 2003-05-28 2004-12-01 Xerion Pharmaceuticals AG Modulation of the poliovirus receptor function
US20050255114A1 (en) 2003-04-07 2005-11-17 Nuvelo, Inc. Methods and diagnosis for the treatment of preeclampsia
US20050025763A1 (en) 2003-05-08 2005-02-03 Protein Design Laboratories, Inc. Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
CA2525251C (en) 2003-05-09 2015-10-27 Duke University Cd20-specific antibodies and methods employing same
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
KR101424624B1 (ko) 2003-05-14 2014-07-31 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
ZA200510282B (en) 2003-07-02 2007-03-28 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2548942C (en) 2003-12-05 2013-10-15 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Health Anti-sars monoclonal antibodies
CA2556027C (en) * 2004-02-12 2015-11-24 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically block biological activity of a tumor antigen
CA2562833A1 (en) 2004-04-27 2005-11-03 Galapagos N.V. Methods, agents, and compound screening assays for inducing differentiation of undifferentiated mammalian cells into osteoblasts
US7241598B2 (en) 2004-06-29 2007-07-10 The Chinese University Of Hong Kong Frame-shifting PCR for germline immunoglobulin genes retrieval and antibody engineering
US7780963B2 (en) 2004-10-25 2010-08-24 Merck & Co., Inc. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
AU2005337132B2 (en) 2004-12-21 2011-01-20 Monsanto Technology, Llc Transgenic plants with enhanced agronomic traits
BRPI0518994A2 (pt) 2004-12-31 2008-12-02 Biogen Idec Inc anticorpos ou polipeptÍdeos que se ligam a br3, seus usos e formulaÇÕes lÍquidas
US7700738B2 (en) 2005-01-27 2010-04-20 The Regents Of The University Of California Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins
US7608413B1 (en) 2005-03-25 2009-10-27 Celera Corporation Kidney disease targets and uses thereof
AU2006230099B2 (en) 2005-03-25 2012-04-19 Gitr, Inc. GITR binding molecules and uses therefor
ATE460668T1 (de) 2005-03-30 2010-03-15 Purdue Research Foundation Verfahren zur prognose von brustkrebs mittels quantifizierung von zellulären folat vitamin rezeptoren
EP2172487A1 (en) * 2005-04-22 2010-04-07 Morphotek Inc. Antibodies with Immune Effector Activity that Internalize in Folate Receptor Alpha-Positive Cells
US7786266B2 (en) 2005-05-12 2010-08-31 Oncotherapy Science, Inc. Methods for damaging cells using effector function of anti-DSC2 antibody
WO2006122822A2 (en) 2005-05-20 2006-11-23 Lonza Biologics Plc. High-level expression of recombinant antibody in a mammalian host cell
MX2007014673A (es) 2005-05-24 2008-04-08 Avestha Gengraine Tech Pvt Ltd Metodo para la produccion de un anticuerpo monoclonal para cd20 para el tratamiento de linfoma de celular b.
US20070009434A1 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Low Philip S Imaging and therapeutic method using monocytes
US7521195B1 (en) 2005-07-21 2009-04-21 Celera Corporation Lung disease targets and uses thereof
CA2619725C (en) 2005-08-18 2016-06-07 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Single chain antibodies against beta-amyloid peptide
AU2006291990B2 (en) 2005-09-13 2012-05-31 National Research Council Of Canada Methods and compositions for modulating tumor cell activity
CA2625403A1 (en) 2005-10-17 2007-04-26 Institute For System Biology Tissue-and serum-derived glycoproteins and methods of their use
EP1790664A1 (en) 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
HRP20130494T1 (en) 2005-12-20 2013-08-31 Sbi Biotech Co., Ltd. Anti-ilt7 antibody
US8486412B2 (en) 2006-06-01 2013-07-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Immunity to folate receptors
CA2655933C (en) 2006-06-23 2014-09-09 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer
US7910702B2 (en) 2006-07-28 2011-03-22 The Governors Of The University Of Alberta Recombinant antibodies to sclerotinia antigens
EP2520935A3 (en) 2006-08-09 2013-02-13 Homestead Clinical Corporation Organ-specific proteins and methods of their use
EP1900752A1 (en) 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
EP1900533A1 (de) 2006-09-16 2008-03-19 J. Zimmer Maschinenbau Gesellschaft m.b.H. Vorrichtung zum Auftragen von Substanz auf flächige Substrate
MY162056A (en) 2006-10-12 2017-05-31 Univ Tokyo Diagnosis and treatment of cancer using anti -ereg antibody
JP5632582B2 (ja) 2006-12-14 2014-11-26 中外製薬株式会社 抗Ｃｌａｕｄｉｎ３モノクローナル抗体およびそれを用いる癌の治療および診断
BRPI0720565A2 (pt) 2006-12-20 2013-09-17 Mmr Information Systems Inc anticorpos e mÉtodos para a sua preparaÇço e seu uso
US20080227704A1 (en) 2006-12-21 2008-09-18 Kamens Joanne S CXCL13 binding proteins
WO2008101231A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
EP2604284A1 (en) 2007-02-16 2013-06-19 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
WO2008145136A1 (en) 2007-05-30 2008-12-04 Aarhus Universitet Stat3 inactivation by inhibition of the folate receptor pathway
BRPI0812970A2 (pt) 2007-06-25 2019-09-24 Endocyte Inc conjugados contendo espaçadores hidrofílicos
WO2009017679A2 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Merck & Co., Inc. Igf-1r specific antibodies useful in the detection and diagnosis of cellular proliferative disorders
CN101139613B (zh) 2007-08-01 2011-06-08 姜荣锡 抗肿瘤二元多肽及其应用与制备方法
WO2009032974A2 (en) 2007-09-06 2009-03-12 Tripath Imaging, Inc. Nucleic acid-based methods for the detection of ovarian cancer
JP5660900B2 (ja) 2007-12-21 2015-01-28 ノバルティス アーゲー 有機化合物
CN101918450A (zh) 2008-01-11 2010-12-15 国立大学法人东京大学 抗cldn6抗体
WO2009132081A2 (en) 2008-04-24 2009-10-29 The Research Foundation Of State University Of New York Monoclonal antibody-based targeting of folate receptors
KR20200058590A (ko) 2008-04-30 2020-05-27 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
US8383351B2 (en) 2008-06-11 2013-02-26 Oxford Brookes University Antibody to inhibin/ activin β-B subunit
AU2009293140A1 (en) 2008-09-17 2010-03-25 Endocyte, Inc. Folate receptor binding conjugates of antifolates
US20100092470A1 (en) 2008-09-22 2010-04-15 Icb International, Inc. Antibodies, analogs and uses thereof
EP2367939A4 (en) 2008-11-20 2012-07-04 Oncotherapy Science Inc METHOD FOR DIAGNOSIS OR TREATMENT OF PROSTATE CANCER
CN101440130B (zh) 2008-11-21 2011-07-27 中国人民解放军第四军医大学 一种抗人IL-13Rα2单克隆抗体的重链和轻链的可变区
AU2010229924B2 (en) 2009-03-24 2016-07-21 Plus Therapeutics Inc. Devices and methods of cell capture and analysis
ES2624835T3 (es) * 2009-08-06 2017-07-17 Immunas Pharma, Inc. Anticuerpos que se unen específicamente a los oligómeros A beta y uso de los mismos
AU2010295172B2 (en) 2009-09-21 2016-08-04 Ranju Ralhan Methods and compositions for the diagnosis and treatment of thyroid cancer
TW201129383A (en) 2010-02-10 2011-09-01 Immunogen Inc CD20 antibodies and uses thereof
CN103037900B (zh) 2010-02-24 2016-04-06 伊缪诺金公司 叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途
AU2011323124C1 (en) * 2010-11-05 2016-09-22 Eisai Inc. Folate receptor alpha as a diagnostic and prognostic marker for folate receptor alpha-expressing cancers
RS58367B1 (sr) * 2011-03-29 2019-03-29 Immunogen Inc Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom
MX2013011201A (es) * 2011-03-29 2013-12-16 Immunogen Inc Proceso para la elaboracion de conjugados de mejor homogeneidad.
WO2012135517A2 (en) * 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
IL281714B2 (en) 2011-04-01 2023-11-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
US20120282282A1 (en) 2011-04-04 2012-11-08 Immunogen, Inc. Methods for Decreasing Ocular Toxicity of Antibody Drug Conjugates
WO2012145112A2 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with sulfoxide linker
PL2731972T3 (pl) 2011-07-15 2018-06-29 Eisai R&D Management Co., Ltd. Przeciwciała skierowane przeciwko receptorowi folianowemu alfa i ich zastosowania
HUE049693T2 (hu) 2012-08-31 2020-10-28 Immunogen Inc Diagnosztikai ASSAY-k és készletek a folát receptor 1 kimutatására
WO2014055842A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
CA2911499A1 (en) 2013-05-14 2014-11-20 Immunogen, Inc. Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
AU2014312086B2 (en) 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
IL298044B2 (en) * 2013-10-08 2024-11-01 Immunogen Inc Dosing regimens of anti-FOLR1 immunoconjugate
US20150297744A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-22 Immunogen, Inc. Anti-FOLR1 Immunoconjugate Dosing Regimens
CN107110840A (zh) 2014-07-01 2017-08-29 爱科谱迅病理研究公司 针对化疗靶标的srm测定
CN106999604B (zh) 2014-09-02 2021-08-03 伊缪诺金公司 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
AU2016323968B2 (en) 2015-09-17 2023-07-06 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-FOLR1 immunoconjugates
KR20250171447A (ko) 2017-02-28 2025-12-08 이뮤노젠 아이엔씨 자기희생적 펩티드 링커 및 이들의 접합체를 갖는 메이탄시노이드 유도체
RU2019141270A (ru) 2017-05-16 2021-06-16 Иммуноджен, Инк. Комбинации анти-folr1 иммуноконъюгатов и анти-pd-1 антител

Also Published As

Publication number Publication date
US20250228960A1 (en) 2025-07-17
US11135305B2 (en) 2021-10-05
US20120282175A1 (en) 2012-11-08
ES2965109T3 (es) 2024-04-11
EP3318273B1 (en) 2019-08-21
IL262956B (en) 2020-04-30
KR102489185B1 (ko) 2023-01-17
IL303208A (en) 2023-07-01
AU2012236219A1 (en) 2013-10-10
DK2694106T3 (en) 2018-03-05
TR201802659T4 (tr) 2018-03-21
JP2019194257A (ja) 2019-11-07
IL228538A0 (en) 2013-12-31
HK1254759A1 (en) 2019-07-26
AU2021206842A1 (en) 2021-08-12
KR20190058696A (ko) 2019-05-29
IL281714B1 (en) 2023-07-01
JP2024099612A (ja) 2024-07-25
UA125636C2 (uk) 2022-05-11
EP3636279B1 (en) 2023-09-13
NZ615742A (en) 2015-09-25
EP3636279A1 (en) 2020-04-15
EA201791843A3 (ru) 2018-05-31
IL262956A (en) 2018-12-31
JP2016147901A (ja) 2016-08-18
PL2694106T3 (pl) 2018-06-29
AU2012236219B2 (en) 2017-02-23
MX2019010336A (es) 2019-10-14
JP2014513068A (ja) 2014-05-29
EP2694106A4 (en) 2015-04-08
HRP20180358T1 (hr) 2018-04-06
AU2019202611A1 (en) 2019-05-02
SG193514A1 (en) 2013-10-30
IL281714A (en) 2021-05-31
KR20210088746A (ko) 2021-07-14
KR20240017965A (ko) 2024-02-08
KR102101160B1 (ko) 2020-04-16
IL228538B (en) 2018-12-31
UA113403C2 (xx) 2017-01-25
US20140363453A1 (en) 2014-12-11
JP2018118997A (ja) 2018-08-02
EA028805B1 (ru) 2018-01-31
ZA202007440B (en) 2025-04-30
NZ711375A (en) 2017-02-24
SI2694106T1 (en) 2018-04-30
KR20140027969A (ko) 2014-03-07
KR20200039843A (ko) 2020-04-16
EP4309671A3 (en) 2024-03-20
EP2694106B1 (en) 2017-12-13
BR112013025415B1 (pt) 2021-03-16
CN108743965A (zh) 2018-11-06
WO2012135675A2 (en) 2012-10-04
CA2831426A1 (en) 2012-10-04
EA201791843A2 (ru) 2017-12-29
HUE036172T2 (hu) 2018-06-28
SG10201602553VA (en) 2016-05-30
MY180894A (en) 2020-12-11
EP4309671A2 (en) 2024-01-24
KR20230013283A (ko) 2023-01-26
CY1119960T1 (el) 2018-12-12
SMT201800103T1 (it) 2018-05-02
KR101982317B1 (ko) 2019-05-27
US8709432B2 (en) 2014-04-29
WO2012135675A3 (en) 2012-12-06
JP2021006547A (ja) 2021-01-21
MY186591A (en) 2021-07-29
CN103747802A (zh) 2014-04-23
US20220143208A1 (en) 2022-05-12
NO2893540T3 (sr) 2018-06-09
IL273614A (en) 2020-05-31
MX340640B (es) 2016-07-19
EP2694106A2 (en) 2014-02-12
CA2831426C (en) 2023-02-21
PT2694106T (pt) 2018-03-05
JP2022062219A (ja) 2022-04-19
EA201391351A1 (ru) 2014-11-28
MX2013011098A (es) 2013-12-16
US20180200383A1 (en) 2018-07-19
CA3182262A1 (en) 2012-10-04
JP6018621B2 (ja) 2016-11-02
ME03025B (me) 2018-10-20
BR112013025415A2 (pt) 2016-12-27
ES2661466T3 (es) 2018-04-02
CN114441757A (zh) 2022-05-06
EP3318273A1 (en) 2018-05-09
AU2017202927B2 (en) 2019-01-17
MX346555B (es) 2017-03-24
AU2021206842B2 (en) 2024-12-19
CN103747802B (zh) 2018-06-01
AU2017202927A1 (en) 2017-05-25
LT2694106T (lt) 2018-04-25
IL281714B2 (en) 2023-11-01
AU2019202611B2 (en) 2021-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2021206842B2 (en) Methods for increasing efficacy of FOLR1 cancer therapy
HK40099496A (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
HK40017480B (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
HK40017480A (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
HK1254759B (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
HK1193760B (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
HK1193760A (en) Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy