RS57210B1 - 2-amino-6-fluoro-n-(5-fluoro-4-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5alfa]pirimidin-3-karboksamid kao inhibitor atr kinaze - Google Patents

Description

Opis

OSNOVA PRONALASKA

[0001] ATR ("srodna sa ATM i Rad3") kinaza je protein kinaza uključena u ćelijske odgovore na određene oblike oštećenja DNK (npr., prekidi dvostrukog lanca i replikacioni stres). ATR kinaza deluje sa ATM ("ataksija telangiektazija mutiranom") kinazom i mnogim drugim proteinima tako da reguliše ćelijski odgovor na prekide dvostrukog lanca i replikacioni stres, uobičajeno označeni kao odgovor na oštećenje DNK ("DDR"). DDR stimuliše popravku DNK, stimuliše preživljavanje i zaustavlja napredovanje ćelijskog ciklusa aktivacijom kontrolnih tačaka ćelijskog ciklusa, što obezbeđuje vreme za popravku. Bez DDR, ćelije su mnogo osetljivije na oštećenje DNK i lako umiru od DNK lezija indukovanih endogenim ćelijskim procesima kao što je replikacija DNK ili egzogena sredstva koja oštećuju DNK koji se obično koriste u terapiji kancera.

[0002] Zdrave ćelije mogu da se oslone na domaćina različitih proteina za popravku DNK uključujući DDR kinaze ATR i ATM. U nekim slučajevima ovi proteini mogu da se međusobno kompenzuju aktivacijom funkcionalno suvišnih procesa popravke DNK. Nasuprot tome, mnoge ćelije kancera sadrže defekte u nekim od njihovih procesa popravke DNK, kao što je prenos signala ATM, i prema tome ispoljavaju veće oslanjanje na njihove preostale intaktne proteine za popravku DNK koji obuhvataju ATR.

[0003] Pored toga, mnoge ćelije kancera eksprimiraju aktivirane onkogene ili im nedostaju ključni tumorski supresori, i ovo može da učini ove ćelije kancera podložnim disregulisanim fazama DNK replikacije koja zauzvrat uzrokuje oštećenje DNK. ATR je uključen kao kritička komponenta DDR kao odgovor na prekinutu replikaciju DNK. Kao rezultat, ove ćelije kancera su više zavisne od ATR aktivnosti za preživljavanje od zdravih ćelija. Prema tome, inhibitori ATR mogu biti korisni za lečenje kancera, bilo korišćeni pojedinačno ili u kombinaciji sa sredstvima za oštećenje DNK, zbog toga što oni gase mehanizam popravke DNK koji je važniji za ćelijsko preživljavanje kod mnogih ćelija kancera nego kod zdravih normalnih ćelija.

[0004] Ustvari, pokazano je da prekid ATR funkcije (npr. delecijom gena) stimuliše smet ćelije kancera kako u odsustvu tako i u prisustvu agenasa koji oštećuju DNK. Ovo sugeriše to da inhibitori ATR mogu biti efikasni kao pojedinačna sredstva i kao potentni senzitizatori na radioterapiju ili genotoksičnu hemoterapiju.

[0005] ATR peptid može biti eksprimiran i izolovan upotrebom različitih postupaka poznatih u literaturi (videti npr., Ünsal-Kaçmaz et al, PNAS 99: 10, pp6673-6678, May 14, 2002; videti takođe Kumagai et al. Cell 124, pp943-955, March 10, 2006; Unsal-Kacmaz et al. Molecular i Cellular Biology, Feb 2004, p1292-1300; i Hall-Jackson et al. Oncogene 1999, 18, 6707-6713).

[0006] Zbog svih ovih razloga, postoji potreba za razvojem potentnih i selektivnih inhibitora ATR za lečenje kancera, bilo kao pojedinačna sredstva ili kao kombinovane terapije sa radioterapijom ili genotoksičnom hemoterapijom.

REZIME PRONALASKA

[0007] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja korisna kao inhibitori ATR protein kinaze. Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže jedinjenja prema ovom pronalasku; jedinjenja i kompozicije prema pronalasku za upotrebu u postupcima za lečenje različitih bolesti, poremećaja ili stanja; postupke za pripremu jedinjenja prema ovom pronalasku; intermedijere za pripremu jedinjenja prema ovom pronalasku; i postupke za upotrebu jedinjenja u in vitro primenama, kao što je ispitivanje kinaza u biološkim i patološkim fenomenima; ispitivanje intracelularnih puteva prenosa signala posredovanih takvim kinazama; i komparativnu procenu novih inhibitora kinaze.

[0008] Jedinjenja pronalaska su veoma potentni inhibitori ATR. Ova jedinjenja takođe pokazuju iznenađujuću sinergiju sa drugim sredstvima protiv kancera, kao što su cisplatin i gemcitabin, u kombinovanim terapijama.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0009] Jedan aspekt ovog pronalaska daje jedinjenje formule I, definisano uže u patentnim zahtevima:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde:

R1 je nezavisno izabran od -C(J1)2CN, halo, -(L)k-W, ili M;

R9 je nezavisno izabran od H, -C(J1)2CN, halo, -(L)k-W, ili M;

J1 je nezavisno izabran od H ili C1-2alkil; ili

dva slučaja J<1>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani, formiraju 3-4 –člani izborno supstituisani karbociklični prsten;

k je 0 ili 1;

M i L su C1-8alifatični gde su do tri metilenske jedinice izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-, svaki M i L1 je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<LM>;

JLM je nezavisno izabran od halo, -CN ili C1-4alifatičnog lanca, pri čemu su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-;

W je nezavisno izabran od 3-7 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu W je izborno supstituisan sa 0-5 slučajeva J<W>;

JW je nezavisno izabran od -CN, halo, -CF3; C1-4alifatičan, pri čemu do dve metilenske jedinice su izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; ili 3-6 –člani nearomatični prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

dva slučaja J<W>na istom atomu, zajedno sa atomom za koji su vezani, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili dva slučaja J<W>, zajedno sa W, formiraju 6-10 –člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

R2 je nezavisno izabran od H; halo; -CN; NH2; C1-2alkil izborno supstituisanog sa 0-3 slučajeva fluoro; ili C1-3alifatičnog lanca pri čemu, do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca su izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

R3 je nezavisno izabran od H; halo; C1-4alkila izborno supstituisanog sa 1-3 slučaja halo; C3-

4cikloalkil; 3-4 –članog heterociklila; -CN; ili C1-3alifatičnog lanca pri čemu su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-,-NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

R4 je nezavisno izabran od Q1 ili C1-10alifatičnog lanca, pri čemu do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca su izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; svaki R4 je izborno supstituisan sa 0-5 slučajeva J<Q>; ili

R3 i R4 , uzeti zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju 5-6 –člani aromatičan ili nearomatičan prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; prsten formiran pomoću R<3>i R<4>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<Z>;

Q1 je nezavisno izabran od 3-7 –članog poptuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena, 3-7 –članog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JZ je nezavisno izabran od C1-6alifatika, =O, halo ili →O;

JQ je nezavisno izabran od -CN; halo; =O; Q2; ili C1-8alifatičnog lanca u kome su do tri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; svaki slučaj J<Q>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<R>; ili dva slučaja J<Q>na istom atomu, uzeti zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu je prsten formiran sa dva slučaja J<Q>izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<X>; ili dva slučaja J<Q>, zajedno sa Q<1>, formiraju 6-10 –člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

Q2 je nezavisno izabran od 3-7 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JR je nezavisno izabran od -CN; halo; =O; →O; Q<3>; ili C1-6alifatičnog lanca gde su do tri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-,-C(O)- ili -S(O)n-; svaki JR je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<T>; ili dva slučaja J<R>na istom atomu, zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu prsten formiran pomoću dva slučaja J<R>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<X>; ili dva slučaja J<R>, zajedno sa Q<2>, formiraju 6-10 –člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

Q3 je 3-7 –člani potpuno zasićeni, delimično nezasićeni ili aromatični monociklični prsten koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 –člani potpuno zasićeni, delimično nezasićen ili aromatičan bicikličan prsten koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JX je nezavisno izabran od -CN; =O; halo; ili C1-4alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; JT je nezavisno izabran od halo, -CN; →O; =O; -OH; C1-6alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; ili 3-6 članog nearomatičnog prstena koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; svaki slučaj J<T>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<M>; ili

dva slučaja J<T>na istom atomu, zajedno sa atomom za koje su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili

dva slučaja J<T>, zajedno sa Q<3>, formiraju 6-10 –člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

JM je nezavisno izabran od halo ili C1-6alifatika;

n je 0, 1 ili 2; i

R je nezavisno izabran od H ili C1-4alifatika.

[0010] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje formule I, u kome R9 je H.

[0011] Sledeći aspekt pronalaska obezbeđuje jedinjenje formule I-A, definisano uže u patentnim zahtevima:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili prolek, u kome:

R1 je nezavisno izabran od fluoro, hloro ili -C(J1)2CN;

J1 je nezavisno izabran od H ili C1-2alkil; ili

dva slučaja J<1>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani, formiraju 3-4 -člani izborno supstituisan karbocikličan prsten;

R2 je nezavisno izabran od H; halo; -CN; NH2; C1-2alkila izborno supstituisanog sa 0-3 slučaja fluoro; ili C1-3alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

R3 je nezavisno izabran od H; halo; C1-4alkila izborno supstituisanog sa 1-3 slučaja halo; C3-

4cikloalkila; -CN; ili C1-3alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

R4 je nezavisno izabran od Q1 ili C1-10alifatičnog lanca u kome su do četiri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; svaki R4 je izborno supstituisan sa 0-5 slučaja J<Q>; ili

R3 i R4 , uzeti zajedno sa atomima za koje su vezani, formiraju 5-6 -člani nearomatičan prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu je prsten formiran pomoću R<3>i R<4>izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<Z>;

Q1 je nezavisno izabran od 3-7 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena, 3-7 –članog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

Jz je nezavisno izabran od C1-6alifatika, =O, halo ili →O;

JQ je nezavisno izabran od -CN; halo; =O; Q2; ili C1-8alifatičnog lanca u kome su do tri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; svaki slučaj J<Q>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<R>; ili

dva slučaja J<Q>na istom atomu, uzeta zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 – člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu je prsten formiran sa dva slučaja J<Q>izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<X>; ili

dva slučaja J<Q>, zajedno sa Q<1>, formiraju 6-10 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

Q2 je nezavisno izabran od 3-7 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 -članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JR je nezavisno izabran od -CN; halo; =O; →O; Q<3>; ili C1-6alifatičnog lanca u kome su do tri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-,-C(O)- ili -S(O)n-; svaki JR je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<T>; ili

dva slučaja J<R>na istom atomu, zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; pri čemu je prsten formiran sa dva slučaja J<R>izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<X>; ili

dva slučaja J<R>, zajedno sa Q<2>, formiraju 6-10 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

Q3 je 3-7 -člani potpuno zasićeni, delimično nezasićeni ili aromatični monociklični prsten koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 -člani potpuno zasićeni, delimično nezasićeni ili aromatični biciklični prsten koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JX je nezavisno izabran od -CN; halo; ili C1-4alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-;

JT je nezavisno izabran od -CN; =O; -OH; C1-6alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n-; ili 3-6 –članog nearomatičnog prstena koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; svaki slučaj J<T>je izborno supstituisan sa 0-3 slučaja J<M>; ili

dva slučaja J<T>na istom atomu, zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili

dva slučaja J<T>, zajedno sa Q<3>, formiraju 6-10 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

JM je nezavisno izabran od halo ili C1-6alifatika;

n je 0, 1 ili 2; i

R je nezavisno izabran od H ili C1-4alifatika.

[0012] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kome R1 je fluoro.

[0013] U jednom primeru, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, gde R2 je nezavisno izabran od -CF3, -NH(C1-2alkila), hloro ili H. U sledećem primeru, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, gde R2 je H.

[0014] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, gde R3 je nezavisno izabran od H, hloro, fluoro, CHF2, -CN, ciklopropila ili C1-4alkila. U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, gde R3 je fluoro.

[0015] U nekim primerima izvođenja, predmtni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, gde R4 je nezavisno izabran od:

[0016] -O-;

ili -CH2-R7, gde:

-O- je supstituisan sa jednim JQ;

Prsten A je nezavisno izabran od 3-7 -članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena koji ima 1-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 -članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 1-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

Prsten B je nezavisno izabran od 3-7 –članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog monocikličnog prstena koji ima 0-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 -članog potpuno zasićenog, delimično nezasićenog ili aromatičnog bicikličnog prstena koji ima 0-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

R6 je H;

R7 je nezavisno izabran od H ili C1-8alifatičnog lanca u kome su do tri metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -S-, -C(O)- ili -S(O)n-; i

p je 0 ili 1.

[0017] U sledećem primeru, referentna jedinjenja formule I i I-A su predstavljena u Tabeli 1. Stručnjacima iz date oblasti tehnike biće jasno da jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti predstavljena u različitim tautomernim oblicima.

�

�

�

�

�

�

�

[0018] U sledećem primeru, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, pri čemu R<4>je prsten A, koji je predstavljen strukturom:

2

[0019] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kome prsten A je 3-7 -člani potpuno zasićeni, delimično nezasićeni ili aromatični monociklični prsten koji ima 1-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora. U drugim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kome prsten A je 4-6 -člani heterociklil. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, pri čemu je prsten A nezavisno izabran od piperazinila ili piperidinila.

[0020] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, pri čemu kada je R<4>jednak prstenu A, J<Q>je C1-8alifatični lanac u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, ili -C(O)-. U drugim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kojoj kada je R4 jednak prstenu A, JQ je C1-4alkil, -O- ili -C(O)-.

[0021] U drugom primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kojoj kada je R4 jednak prstenu A, JR je 3-6 -člani heterociklil koji ima 1-3 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora. U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kojoj kada je R4 jednak prstenu A, JR je piperazinil.

[0022] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kojoj JT je 3-6 -člani nearomatičan prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora. U drugim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, u kojoj JT je oksitanil.

[0023] U sledećem primeru izvođenja, referentna jedinjenja formule I, I-A i I-A- su predstavljena u Tabeli 2.

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

�

[0024] Druga referentna jedinjenja su izabrana od jednog od sledećih:

[0025] U sledećem primeru, jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I ili I-A, je referentno jedinjenje predstavljeno u Tabeli 3.

�

�

�

[0026] U drugom primeru izvođenja, referentna jedinjenja su izabrana od jednog od sledećih:

[0027] Jedinjenje koje ima formulu I-B, definisano uže u patentnim zahtevima:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kome:

R1 je nezavisno izabran od fluoro, hloro ili -C(J1)2CN;

J1 je nezavisno izabran od H ili C1-2alkil; ili

dva slučaja J<1>, zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju izborno supstituisan 3-4 -člani karbociklični prsten;

R3 je nezavisno izabran od H; hloro; fluoro; C1-4alkila izborno supstituisanog sa 1-3 slučaja halo; C3-4cikloalkil; -CN; ili C1-3alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

L1 je H; 3-7 -člani aromatični ili nearomatični prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili C1-6alifatični lanac u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n; svaki L1 je izborno supstituisan sa C1-4alifatikom; -CN; halo; -OH; ili 3-6 –članim nearomatičnim prstenom koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

L2 je H; 3-7 -člani aromatični ili nearomatični prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili C1-6alifatični lanac u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n; svaki L2 je izborno supstituisan sa C1-4alifatikom; -CN; halo; -OH; ili 3-6 –članim nearomatičnim prstenom koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili

L1 i L2 , uzeti zajedno sa azotom za koji su vezani, formiraju prsten D; prsten D je izborno supstituisan sa 0-5 slučaja J<G>;

prsten D je nezavisno izabran od 3-7 -članog heterociklil prstena koji ima 1-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora; ili 7-12 -članog poptuno zasićenog ili delimično nezasićenog bicikličnog prstena koji ima 1-5 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

JG je nezavisno izabran od halo; -N(R )2; 3-6 –članog karbociklila; 3-6 -članog heterociklila koji ima 1-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota li sumpora; ili C1-4alkil lanca u kome su do dve metilenske jedinice alkil lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n; svaki JG je izborno supstituisan sa 0-2 slučaja J<K>.

dva slučaja J<G>na istom atomu, zajedno sa atomom za koji su spojeni, formiraju 3-6 –člani prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

dva slučaja J<G>, zajedno sa prstenom D, formiraju 6-10 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni premošćeni sistem prstena;

JK je 3-7 -člani aromatični ili nearomatični prsten koji ima 0-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora;

L3 je nezavisno izabran od H; hloro; fluoro; C1-4alkila izborno supstituisanog sa 1-3 slučaja halo; -CN; ili C1-3alifatičnog lanca u kome su do dve metilenske jedinice alifatičnog lanca izborno zamenjene sa -O-, -NR-, -C(O)- ili -S(O)n;

n je 0, 1 ili 2; i

R i R su H ili C1-4alkil.

[0028] U sledećem primeru izvođenja, R<1>formule I-B je fluoro.

[0029] U nekim primerima izvođenja, R<3>formule I-B je nezavisno izabran od H, hloro, fluoro, ciklopropila ili C1-4alkila. U drugim primerima izvođenja, R3 formule I-B je fluoro.

[0030] U drugim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I-B, u kojoj L1 i L2 , zajedno sa azotom za koji su vezani, formiraju prsten D. Sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I-B, u kojoj prsten D je 3-7 -člani heterociklil prsten koji ima 1-2 heteroatoma izabrana od kiseonika, azota ili sumpora. U drugim primerima izvođenja, prsten D je piperazinil.

[0031] U sledećem primeru, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I-B, u kojoj JG je halo, C1-4alkil, -O(C1-3alkil), C3-6cikloalkil, 3-6 -člani heterociklil, -NH(C1-3alkil), -OH ili -N(C1-4alkil)2. U drugim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I-B, u kojoj JG je oksetanil.

[0032] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak je jedinjenje predstavljeno strukturnom formulom I, I-A i I-B, specifično jedinjenje strukture I-G-32. Referentna jedinjenja su navedena u Tabeli 4, zajedno sa I-G-32.

�

�

�

�

�

�

[0033] Jedinjenje predmetnog pronalaska ima strukturu I-G-32:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0034] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule I-A, definisanog uže u patentnim zahtevima:

koji sadrži reakciju jedinjenja formule 6, definisanog uže u patentnim zahtevima:

pod pogodnim uslovima da bi se formirala amidna veza, u kome J, R1 , R2 , R3 i R4 su kao što su ovde definisani.

[0035] U nekim primerima, pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 6 sa supstituisanim 3-amino piridinom u aprotičnom rastvaraču uz zagrevanje. U drugim primerima, aprotični rastvarač je izabran od NMP, izborno supstituisanog piridina ili DMF. U drugom primeru izvođenja, aprotični rastvarač je izborno supstituisani piridin. U drugim primerima izvođenja, reakciona temperatura je najmanje 80°C. U drugom primeru izvođenja, reakciona temperatura je najmanje 100°C

[0036] U drugom primeru izvođenja, postupak, opisan u prethodnom tekstu, dalje sadrži pripremu jedinjenja formule 6, definisanog uže u patentnim zahtevima:

reakcijom jedinjenja formule 5:

pod pogodnim uslovima da bi se formirao aktivirani estar, pri čemu J i R<1>je kao što su ovde definisani.

[0037] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi za formiranje aktiviranog estra sadrže reakciju jedinjenja formule 5 sa amidnim kuplujući reagensom u prisustvu organske baze. U drugim primerima izvođenja, organska baza je alifatični amin. U drugim primerima izvođenja, organska baza je nezavisno izabrana od trietilamina ili DIPEA. U jednom ili više primera izvođenja, amidno kuplujuće sredstvo je nezavisno izabrano od EDCI, TBTU, TCTU, HATU, T3P ili COMU. U sledećem primeru izviđenja, amidno kuplujuće sredstvo je nezavisno izabrano od TBTU ili TCTU. U drugom primeru izvođenja, amidno kuplujuće sredstvo je TCTU.

[0038] Sledeći aspekt pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule I-A, definisanog uže u patentnim zahtevima:

koji sadrži reakciju jedinjenja formule 5:

pod stabilnim uslovima da bi se formirala amidna veza, gde R1 , R2 , R3 i R4 su kao što su ovde definisani.

[0039] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 5:

reakcijom jedinjenja formule 4:

pod pogodnim hidrolitičkim uslovima, gde R<1>je kao što je ovde definisan.

[0040] U nekim primerima izvođenja, pogodni hidrolitički uslovi sadrže reakciju jedinjenja formule 4 sa silanom u prisustvu metalnog katalizatora. U drugim primerima izvođenja, silan je fenilsilan. U drugom primeru izvođenja, metalni katalizator je paladijumov katalizator. U sledećem primeru izvođenja, paladijumov katalizator je Pd(PPh3)4. U drugom primeru izvođenja pogodni hidrolitički uslovi sadrže reakciju jedinjenja formule 4 sa 4-metilbenzensulfinatom u prisustvu metalnog katalizatora.

[0041] U drugim primerima izvođenja, pogodni hidrolitički uslovi sadrže reakciju jedinjenja formule 4 sa vodenim rastvorom alkalije. U nekim primerima izvođenja, vodeni rastvor alkalije je izabran od LiOH, NaOH ili KOH.

[0042] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 4:

reakcijom jedinjenja formule 3:

pod pogodnim uslovima kondenzacije da bi se formirao pirimidinski prsten.

[0043] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi kondenzacije za formiranje pirimidinskog prstena sadrže reakciju jedinjenja formule 3 sa 1,3-dielektrofilnim vrstama u prisustvu rastvarača. U drugom primeru izvođenja, 1,3-dielektrofilna vrsta je izabrana od 1,3-dialdehida ili 3-(dialkilamino)-prop-2-enala. U drugim primerima izvođenja, rastvarač je izabran od DMF ili DMSO u vodi. U drugim primerima izvođenja, 1,3-dielektrofilna vrsta je generisana in situ od zaštićene 1,3-dielektrofilne vrste. U drugom primeru izvođenja 1,3-dielektrofilna vrsta je generisana od ketala u prisustvu sulfonske kiseline. U sledećem primeru izvođenja, sulfonska kiselina je PTSA.

[0044] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 3:

reakcijom jedinjenja formule 2:

pod pogodnim uslovima kondenzacije da bi se formirao pirazol prsten.

[0045] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi kondenzacije za formiranje pirazol prstena sadrže reakciju jedinjenja formule 2 sa hidrazinom ili hidrazin hidratom u prisustvu aprotičnog rastvarača pod baznim uslovima. U sledećem primeru izvođenja, aprotični rastvarač je DMF. U sledećem primeru izvođenja, bazni uslovi sadrže reakciju jedinjenja formule 2 u prisustvu kalijum acetata ili natrijum acetata.

[0046] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 2:

reakcijom jedinjenja formule 1:

pod pogodnim anjonskim kondenzacionim uslovima.

[0047] U nekim primerima izvođenja, pogodni anjonski kondenzacioni uslovi sadrže 1) reakciju jedinjenja formule 1 sa bazom, u prisustvu rastvarača, da bi se generisao anjon jedinjenja formule 1; i 2) reakciju anjona jedinjenja formule 1 sa trihloroacetonitrilom. U drugim primerima izvođenja, baza je kalijum acetat. U sledećem primeru izvođenja, rastvarač je alkohol. U drugim primerima izvođenja, rastvarač je izopropilalkohol.

[0048] Jedan primer izvođenja predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule I-A:

koji sadrži reakciju jedinjenja formule 9:

pod pogodnim uslovima kondenzacije za formiranje pirimidinskog prstena, gde R1 , R2 , R3 i R4 su kao što su ovde definisani.

[0049] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi kondenzacije za formiranje pirimidinskog prstena sadrže reakciju jedinjenja formule 9 sa 1,3-dielektrofilnom vrstom u prisustvu rastvarača. U drugom primeru izvođenja, 1,3- dielektrofilna vrsta je izabrana od 1,3-dialdehida ili 3-(dialkilamino)-prop-2-enala. U drugim primerima izvođenja, rastvarač je

1

izabran od DMF ili DMSO u vodi. U drugim primerima izvođenja, 1,3-dielektrofilna vrsta je generisana in situ od zaštićene 1,3-dielektrofilne vrste. U drugom primeru izvođenja 1,3-dielektrofilna vrsta je generisana od ketala u prisustvu sulfonske kiseline. U sledećem primeru izvođenja, sulfonska kiselina je PTSA.

[0050] Sledeći primer izvođenja predmetnog pronalaska sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 9:

reakcijom jedinjenja formule 8:

pod pogodnim uslovima kondenzacije za formiranje pirazol prstena.

[0051] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi kondenzacije za formiranje pirazol prstena sadrže 1) reakciju jedinjenja formule 8 sa bazom, u prisustvu rastvarača, da bi se generisao anjon jedinjenja formule I; 2) reakciju anjona sa trihloroacetonitrilom; i 3) reakciju proizvoda iz 2) sa hidrazinom ili hidrazin hidratom u prisustvu aprotičnog rastvarača. U drugom primeru izvođenja, aprotični rastvarač je NMP ili DMF. U nekim primerima izvođenja, baza je izabrana od natrijum acetata ili kalijum acetata.

[0052] Sledeći primeri izvođenja sadrži postupak za pripremu jedinjenja formule 8:

reakcijom jedinjenja formule 7:

2

pod pogodnim uslovima da se formirala amidna veza.

[0053] U nekim primerima, pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 7 sa supstituisanim 3-amino piridinom sa amidnim kuplujućim sredstvom u prisustvu aprotičnog rastvarača i organske baze. U drugim primerima, aprotični rastvarač je izabran od NMP ili DMF. U drugom primeru izvođenja, organska baza je alifatični amin. U drugim primerima izvođenja, organska baza je nezavisno izabrana od trietilamina ili DIPEA. U sledećem primeru izvođenja, amidno kuplujuće sredstvo je nezavisno izabrano od TBTU ili TCTU.

[0054] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje postupak za pripremu jedinjenja formule I-G-32:

koji sadrži korak reakcije jedinjenja formule 30:

sa jedinjenjem formule 25:

pod pogodnim uslovima da bi se formirala amidna veza.

[0055] Drugi pripemri izvođenja predmetnog pronalaska obezbeđuju postupak za pripremu jedinjenja formule 30:

reakcijom jedinjenja formule 28:

4

pod pogodnim uslovima deportekcije da bi se formirala karboksilna kiselina.

[0056] Sledeći primer izvođenja obezbeđuje postupak za pripremu jedinjenja formule 28:

reakcijom jedinjenja formule 6a*:

sa jedinjenjem formule 27:

pod pogodnim uslovima da bi se formirala amidna veza.

[0057] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 30 sa jedinjenjem formule 25 u prisustvu amidnog kuplujućeg partnera, aprotičnog rastvarača i baze. U drugim primerima izvođenja, aprotični rastvarač je nezavisno izabran od NMP, DMF ili tetrahidrofurana. U drugim primerima izvođenja, aprotični rastvarač je tetrahidrofuran. U drugom primeru izvođenja, baza je alifatični amin. U sledećem primeru izvođenja, baza je DIPEA. U nekim primerima izvođenja, amidni kuplujući partner je nezavisno izabran od TBTU ili TCTU. U jednom ili više primera izvođenja, amidni kuplujući partner je TCTU.

[0058] U drugim primerima izvođenja, pogodni uslovi deprotekcije sadrže reakciju jedinjenja formule 28 sa kiselinom u prisustvu rastvarača. U nekim primerima izvođenja, kiselina je HCl. U drugom primeru izvođenja, rastvarač je 1,4-dioksan.

[0059] U sledećem primeru izvođenja, pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 6a* sa jedinjenjem formule 27 u aprotičnom rastvaraču uz zagrevanje. U drugim primerima izvođenja, aprotični rastvarač je nezavisno izabran od NMP, piridina ili DMF. U drugom primeru izvođenja, aprotični rastvarač je piridin. U nekim primerima izvođenja, reakcija je izvedena na temperaturi od najmanje 80°C.

[0060] Sledeći aspekt predmetnog pronalaska daje postupak za pripremu jedinjenja formule 27:

koji sadrži korak reakcije jedinjenja formule 26:

pod pogodnim uslovima da bi se formirao amin.

[0061] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi za formiranje amina sadrže reakciju jedinjenja formule 27 pod uslovima Buchwald-Hartwig aminacije, poznatim stručnjaku iz date oblasti tehnike.

[0062] Sledeći primer izvođenja daje postupak za pripremu jedinjenja formule 26:

putem 1) reakcije jedinjenja formule 18:

pod pogodnim uslovima izmene halogena da bi se generisalo jedinjenje formule 32

i 2) reakcije jedinjenja formule 32:

sa jedinjenjem formule 22:

pod pogodnim uslovima premeštanja.

[0063] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi izmene halogena sadrže reakciju jedinjenja formule 18 sa kalijum fluoridom u prisustvu aprotičnog rastvarača i katalizatora faznog prelaza. U drugim primerima izvođenja, aprotični rastvarač je nezavisno izabran od DMSO, DMF ili sulfolana. U drugim primerima izvođenja, katalizator faznog prelaza je Me4NCl. U drugim primerima izvođenja, pogodni uslovi premeštanja sadrže reakciju jedinjenja formule 32 sa jedinjenjem formule 22 u prisustvu baze. U drugom primeru izvođenja, baza je alifatični amin. U nekim primerima izvođenja, alifatični amin je DIPEA.

[0064] Drugi primeri izvođenja predmetnog pronalaska daju postupak za pripremu jedinjenja formule 18:

reakcijom jedinjenja formule 31:

pod pogodnim uslovima halogenacijhe.

[0065] U nekim primerima izvođenja, pogodni uslovi halogenacije sadrže 1) reakciju jedinjenja formule 31 sa bazom da bi se generisao anjon; i 2) reakciju anjona sa hlorinacionim sredstvom. U sledećem primeru izvođenja, baza je LDA. U drugom primeru izvođenja, hlorinaciono sredstvo je 1,1,1,2,2,2-heksahloroetan.

[0066] Za svrhe ove prijave, biće jasno da su termini primeri izvođenja, primer i aspekt korišćeni naizmenično.

[0067] Za svrhe ove prijave, biće jasno da kada dva slučaja J<Q>, zajedno sa Q<1>, formiraju premošćeni sistem prstena, dva slučaja J<Q>su vezana za posebne atome od Q<1>. Dodatno, kada dva slučaja od J<R>, zajedno sa Q<2>, formiraju premošćeni sistem prstena, dva slučaja J<R>su vezana za posebne atome od Q2. Pored toga, kada dva slučaja J<T>, zajedno sa Q<3>, formiraju premošćeni sistem prstena, dva slučaja J<T>su vezana za posebne atome Q<3>. Pored toga, kada dva slučaja J<W>, zajedno sa W, formiraju premošćeni sistem prstena, dva slučaja J<W>su vezana za posebne atome W. Konačno, kada dva slučaja J<G>, zajedno sa prstenom D, formiraju premošćeni sistem prstena, dva slučaja J<G>su vezana za posebne atome prstena D.

[0068] Stručnjacima iz date oblasti tehnike biće jasno da strelica u →O predstavlja dativnu vezu.

[0069] Jedinjenja opisa uključuju ona koja su ovde uopšteno opisana, i koja su dodatno ilustrovana ovde opisanim klasama, podklasama, i vrstama. Kako se ovde koriste, primeniće se sledeće definicije, osim ako nije drugačije naznačeno. U svrhu ovog pronalaska, hemijski elementi se identifikuju u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, CAS verzija, Handbook of Chemistry i Physics, 75th Ed. Dodatno, opšti principi organske hemije su opisani u "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, i "March’s Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith, M.B. i March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001.

[0070] Kao što je ovde opisano, naznačeni opseg broja atoma uključuje bilo koji ceo broj u datom opsegu. Na primer, grupa koja ima od 1-4 atoma može da ima 1, 2, 3, ili 4 atoma.

[0071] Kao što je ovde opisano, jedinjenja opisa mogu izborno da budu supstituisana sa jednim ili više supstituenata, kao oni koji su ovde uopšteno ilustrovani, ili kao što je prikazano određenim klasama, podklasama i vrstama pronalaska. Jasno je da se izraz "izborno supstituisan" koristi međusobno zamenljivo sa izrazom "supstituisan ili nesupstituisan". Uopšteno, termin "supstituisan", bez obzira da li mu prethodi termin "izborno" ili ne, odnosi se na zamenu radikala vodonika u datoj strukturi radikalom naznačenog supstituenta. Osim ako nije drugačije naznačeno, izborno supstituisana grupa može da ima supstituent na svakom pogodnom položaju grupe, i kada više od jednog položaja u bilo kojoj datoj strukturi može da bude supstituisano sa više od jednog supstituenta odabranog iz naznačene grupe, supstituent može da bude ili isti ili različit na svakom položaju. Kombinacije supstituenata predviđene ovim pronalaskom su poželjno one koje rezultiraju stvaranjem stabilnih ili hemijski izvodljivih jedinjenja.

[0072] Osim ako nije drugačije naznačeno, supstituent povezan vezom nacrtanom iz centra prstena znači da supstituent može da bude vezan za bilo koji položaj u prstenu. U primeru i ispod, na primer, Jw može da bude vezan za bilo koji položaj na prstenu piridila. Za biciklične prstenove, veza nacrtana kroz oba prstena označava da supstituent može da bude vezan u bilo kom položaju bicikličnog prstena. U primeru ii ispod, na primer, J<w>može da bude vezan za 5-člani prsten (na atomu azota, na primer), i za 6-člani prsten.

1

[0073] Termin "stabilno", kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja se suštinski ne menjaju kada se podvrgnu uslovima koji omogućavaju njihovu proizvodnju, detekciju, izdvajanje, prečišćavanje, i upotrebu za jednu ili više ovde opisanih svrha. U nekim primerima izvođenja, stabilno jedinjenje ili hemijski izvodljivo jedinjenje je ono koje se suštinski ne menja kada se čuva na temperaturi od 40°C ili nižoj, u odsustvu vlage ili drugih hemijski reaktivnih uslova, bar jednu nedelju.

[0074] Termin "dativna veza", kao što je ovde korišćen, je definisan kao koordinaciona veza formirana posle interakcije između molekularnih vrsta, od kojih jedna služi kao donor i druga kao akceptor elektronskog para koji se deli u formiranom kompleksu.

[0075] Termin "alifatik" ili "alifatična grupa", kako se ovde koristi, označava prav (tj., nerazgranat), razgranat, ili cikličan, supstituisan ili nesupstituisan ugljovodonični lanac koji je potpuno zasićen ili koji sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti koja ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula.

[0076] Osim ako nije drugačije naznačeno, alifatične grupe sadrže 1-20 alifatičnih atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, alifatične grupe sadrže 1-10 alifatičnih atoma ugljenika. U drugim primerima izvođenja, alifatične grupe sadrže 1-8 alifatičnih atoma ugljenika. U drugim primerima izvođenja, alifatične grupe sadrže 1-6 alifatičnih atoma ugljenika, i u sledećim primerima izvođenja alifatične grupe sadrže 1-4 alifatičnih atoma ugljenika. Alifatične grupe mogu da budu linearne ili razgranate, supstituisane ili nesupstituisane alkil, alkenil, ili alkinil grupe. Specifični primeri uključuju, ali bez ograničenja, metil, etil, izopropil, n-propil, sek-butil, vinil, n-butenil, etinil, i terc-butil. Alifatične grupe takođe mogu biti ciklične ili da imaju kombinaciju linearnih ili granatih i cikličnih grupa. Primeri takvih tipova alifatičnih grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil, -CH2-ciklopropil, CH2CH2CH(CH3)-cikloheksil.

[0077] Termin "cikloalifatični" (ili "karbocikl" ili "karbociklil") odnosi se na monociklični C3-C8ugljovodonik ili biciklični C8-C12ugljovodonik koji je potpuno zasićen ili koji sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti, ali koja nije aromatična, koja ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula, gde bilo koji pojedinačni prsten u pomenutom bicikličnom prstenastom sistemu ima 3-7 članova. Primeri cikloalifatičnih grupa uključuju, ali bez ograničenja, cikloalkil i cikloalkenil grupe. Specifični primeri uključuju, ali bez ograničenja, cikloheksill, ciklopropenil i ciklobutil.

[0078] Termin "heterocikl", "heterociklil", ili "heterociklični" kako se ovde koristi označava nearomatične, monociklične, biciklične, ili triciklične prstenaste sisteme u kojima su jedan ili

1 1

više članova prstena nezavisno odabrani heteroatomi. U nekim primerima izvođenja, "heterocikl", "heterociklil", ili "heterociklična" grupa ima tri do četrnaest članova prstena u kojima su jedan ili više članova prstena heteroatomi nezavisno odabrani od kiseonika, sumpora, azota, ili fosfora, i svaki prsten u sistemu sadrži 3 do 7 članova prstena.

[0079] Primeri heterocikla uključuju, ali bez ograničenja, 3-1H-benzimidazol-2-on, 3-(1-alkil)-benzimidazol-2-on, 2-tetrahidrofuranil, 3-tetrahidrofuranil, 2-tetrahidrotiofenil, 3-tetrahidrotiofenil, 2-morfolino, 3-morfolino, 4-morfolino, 2-tiomorfolino, 3-tiomorfolino, 4-tiomorfolino, 1-pirolidinil, 2-pirolidinil, 3-pirolidinil, 1-tetrahidropiperazinil, 2-tetrahidropiperazinil, 3-tetrahidropiperazinil, 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 1-pirazolinil, 3-pirazolinil, 4-pirazolinil, 5-pirazolinil, 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 4-piperidinil, 2-tiazolidinil, 3-tiazolidinil, 4-tiazolidinil, 1-imidazolidinil, 2-imidazolidinil, 4-imidazolidinil, 5-imidazolidinil, indolinil, tetrahidrokvinolinil, tetrahidroizokvinolinil, benzotiolan, benzoditian, i 1,3-dihidro-imidazol-2-on.

[0080] Ciklične grupe, (npr. cikloalifatične grupe i heterocikli), mogu da budu linearno fuzionisane, premošćene, ili spirociklične.

[0081] Termin "heteroatom" označava jedan ili više od kiseonika, sumpora, azota, fosfora, ili silicijuma (uključujući, bilo koji oksidovani oblik azota, sumpora, fosfora, ili silicijuma; kvaternizovani oblik bilo kog baznog azota ili; zamenljivog azota heterocikličnog prstena, na primer N (kao u 3,4-dihidro-2H-pirolil), NH (kao u pirolidinilu) ili NR+ (kao u N-supstituisanom pirolidinilu)).

[0082] Termin "nezasićen", kako se ovde koristi, označava da fragment ima jednu ili više jedinica nezasićenosti. Kao što je poznato stručnjaku u oblasti, nezasićene grupe mogu da budu delimično nezasićene ili potpuno nezasićene. Primeri delimično nezasićenih grupa uključuju, ali bez ograničenja, buten, cikloheksen i tetrahidropiridin. Potpuno nezasićene grupe mogu da budu aromatične, anti-aromatične, ili nearomatične. Primeri potpuno nezasićenih grupa uključuju, ali bez ograničenja, fenil, ciklooktatetraen, piridil, tienil i 1-metilpiridin-2(1H)-on.

[0083] Termin "alkoksi", ili "tioalkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu, kao što je prethodno definisana, spojenu preko atoma kiseonika ("alkoksi") ili sumpora ("tioalkil").

[0084] Termini "haloalkil", "haloalkenil", "haloalifatik" i "haloalkoksi" znače alkil, alkenil ili alkoksi, prema tome koji je slučaj, supstituisan sa jednim ili više halogenih atoma. Ovaj termin uključuje perfluorovane alkil grupe, kao -CF3i -CF2CF3.

[0085] Termini "halogen", "halo" i "hal" znače F, Cl, Br, ili I.

1 2

[0086] Termin "aril" korišćen sam, ili kao deo većeg fragmenta kao u "aralkil", "aralkoksi", ili "ariloksialkil", odnosi se na monociklične, biciklične i triciklične prstenaste sisteme koji imaju ukupno pet do četrnaest članova prstena, gde je najmanje jedan prsten u sistemu aromatičan i gde svaki prsten u sistemu sadrži 3 do 7 članova prstena. Termin "aril" može da se koristi naizmenično sa terminom "arilni prsten".

[0087] Termin "heteroaril", korišćen sam ili kao deo većeg fragmenta kao u "heteroaralkil" ili "heteroarilalkoksi", odnosi se na monociklične, biciklične, i triciklične prstenaste sisteme koji imaju ukupno pet do četrnaest članova prstena, gde je najmanje jedan prsten u sistemu aromatičan, najmanje jedan prsten u sistemu sadrži jedan ili više heteroatoma, i gde svaki prsten u sistemu sadrži 3 do 7 članova prstena. Termin "heteroaril" može da se koristi uzajamno zamenljivo sa terminom "heteroarilni prsten" ili sa terminom "heteroaromatični". Primeri heteroaril prstenova uključuju, ali bez ograničenja, 2-furanil, 3-furanil, N-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, 5-imidazolil, benzimidazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 5-oksazolil, N-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidinil, 4-pirimidinil, 5-pirimidinil, piridazinil (npr., 3-piridazinil), 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, tetrazolil (npr., 5-tetrazolil), triazolil (npr., 2-triazolil i 5-triazolil), 2-tienil, 3-tienil, benzofuril, benzotiofenil, indolil (npr., 2-indolil), pirazolil (npr., 2-pirazolil), izotiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,3-triazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, purinil, pirazinil, 1,3,5-triazinil, kvinolinil (npr., 2-kvinolinil, 3-kvinolinil, 4-kvinolinil), i izokvinolinil (npr., 1-izokvinolinil, 3-izokvinolinil, ili 4-izokvinolinil).

[0088] Podrazumeva se da termin "heteroaril" uključuje određene vrste heteroarilnih prstenova koji postoje u ravnoteži između dva različita oblika. Specifičnije, na primer, vrste kao hidropiridin i piridinon (i slično hidroksipirimidin i pirimidinon) treba da budu obuhvaćene definicijom "heteroaril."

[0089] Termini "grupa koja štiti" i "zaštitna grupa" kako se ovde koristi, su zamenljivi i odnose se na sredstvo koje se koristi da privremeno blokira jednu ili više željenih funkcionalnih grupa u jedinjenju sa višestrukim reaktivnim mestima. U određenim primerima izvođenja, zaštitna grupa ima jednu ili više, ili poželjno sve, od sledećih osobina: a) dodaje se

1

selektivno funkcionalnoj grupi u dobrom prinosu da bi se dobio zaštićeni supstrat koji je b) stabilan prema reakcijama koje se odvijaju na jednom ili više od ostalih reaktivnih mesta; i c) može selektivno da se ukloni u dobrom prinosu reagensima koji ne deluju na regenerisanu, funkcionalnu grupu sa koje je uklonjena zaštita. Kao što će stručnjak u oblasti razumeti, u nekim slučajevima, reagensi ne deluju na druge reaktivne grupe u jedinjenju. U drugim slučajevima, reagensi mogu takođe da reaguju sa drugim reaktivnim grupama u jedinjenju. Primeri zaštitnih grupa su detaljno prikazani kod Greene, T.W., Wuts, P. G u "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999 (i druga izdanja knjige). Termin "zaštitna grupa za azot", kako se ovde koristi, odnosi se na sredstvo koje se koristi da privremeno blokira jedno ili više željenih azotnih reaktivnih mesta u multifunkcionalnom jedinjenju. Poželjne zaštitne grupe za azot takođe imaju svojstva objašnjena na primeru zaštitne grupe gore u tekstu, i određene tipične zaštitne grupe za azot su takođe detaljno prikazane u poglavlju 7 kod Greene, T.W., Wuts, P. G u "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, John Wiley & Sons, New York: 1999.

[0090] U nekim primerima izvođenja, metilenska jedinica alkil ili alifatičnog lanca je izborno zamenjena drugim atomom ili grupom. Primeri takvih atoma ili grupa uključuju, ali bez ograničenja, azot, kiseonik, sumpor, -C(O)-, -C(=N-CN)-, -C(=NR)-, -C(=NOR)-, -SO- i -SO2-. Ovi atomi ili grupe mogu da se kombinuju tako da obrazuju veće grupe. Primeri takvih većih grupa uključuju, ali bez ograničenja, -OC(O)-, -C(O)CO-, -CO2-, -C(O)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(O)O-, -SO2NR-, -NRSO2-, -NRC(O)NR-, -OC(O)NR- i -NRSO2NR-, gde je R, na primer, H ili C1-6alifatik. Treba razumeti da ove grupe mogu da budu vezane za metilenske jedinice alifatičnog lanca preko proste, dvostruke, ili trostruke veze. Primer opcione zamene (atom azota u ovom slučaju) koja je vezana za alifatični lanac preko dvostruke veze bio bi -CH2CH=N-CH3. U nekim slučajevima, posebno na terminalnom delu, opciona zamena može da bude vezana za alifatičnu grupu preko trostruke veze. Jedan primer ovog slučaja bi bio CH2CH2CH2C≡N. Treba razumeti da u ovoj situaciji, terminalni azot nije vezan za drugi atom.

[0091] Treba takođe razumeti da, termin "metilenska jedinica" može takođe da se odnosi na razgranate ili supstituisane metilenske jedinice. Na primer, u fragmentu izopropila [-CH(CH3)2], atom azota (npr. NR) koji zamenjuje prvu navedenu "metilensku jedinicu" bi rezultovao u dimetilaminu [-N(CH3)2]. U slučajevima kao što su ovi, stručnjak u oblasti će razumeti da atom azota neće imati nikakve dodatne atome vezane za sebe, i da bi "R" iz "NR" bio odsutan u ovom slučaju.

1 4

[0092] Osim ako nije drugačije naznačeno, opcione zamene obrazuju hemijski stabilno jedinjenje. Opcione zamene mogu da se dogode i unutar lanca i/ili na bilo kom od krajeva lanca; tj. i na mestu spajanja i/ili na terminalnom kraju. Dve opcione zamene takođe mogu da budu jedna pored druge u lancu sve dok to rezultuje u hemijski stabilnom jedinjenju. Na primer, C3alifatik može da bude izborno zamenjen sa 2 atoma azota tako da obrazuje -C-N≡N. Opcione zamene mogu takođe potpuno da zamene sve atome ugljenika u lancu. Na primer, C3alifatik može da bude izborno zamenjen sa -NR-, -C(O)- i -NR- tako da obrazuje -NRC(O)NR- (ureu).

[0093] Osim ako nije drugačije naznačeno, ako se zamena dogodi na terminalnom kraju, zamenski atom je vezan za atom vodonika na terminalnom kraju. Na primer, ako je metilenska jedinica -CH2CH2CH3izborno zamenjena sa -O-, rezultujuće jedinjenje može da bude -OCH2CH3, -CH2OCH3, ili -CH2CH2OH. U sledećem primeru, ako je metilenska jedinica -CH2CH2CH3izborno zamenjena sa -NH-, rezultirajuće jedinjenje bi moglo biti -NHCH2CH3, -CH2NHCH3ili -CH2CH2NH2. Treba razumeti da ako terminalni atom ne sadrži nikakve slobodne valentne elektrone, tada atom vodonika nije potreban na terminalnom kraju (npr., -CH2CH2CH=O ili -CH2CH2C≡N).

[0094] Osim ako nije drugačije naznačeno, strukture koje su ovde prikazane takođe su namenjene da uključuju sve izomerne (npr., enantiomerne, dijastereomerne, geometrijske, konformacione i rotacione) oblike strukture. Na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, (Z) i (E) izomeri dvostruke veze i (Z) i (E) konformacioni izomeri su uključeni u ovaj pronalazak. Kao što će biti razumljivo stručnjaku u oblasti, supstituent može slobodno da rotira oko bilo kojih veza koje mogu da rotiraju. Na primer, supstituent prikazan kao

takođe predstavlja

[0095] Prema tome, pojedinačni stereohemijski izomeri kao i enantiomerne, dijastereomerne, geometrijske, konformacione i rotacione smeše predmetnih jedinjenja pripadaju oblasti opisa.

1

[0096] Osim ako nije drugačije naznačeno, svi tautomerni oblici jedinjenja pronalaska pripadaju oblasti pronalaska.

[0097] Dodatno, osim ako nije drugačije naznačeno, ovde prikazane strukture su takođe namenjene da uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo po prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koji imaju prikazane strukture osim zamene vodonika deuterijumom ili tricijumom, ili zamene ugljenika ugljenikom obogaćenim sa 13C ili 14C su unutar obima ovog pronalaska. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitički alati ili probe u biološkim testovima.

Farmaceutski prihvatljive soli, solvati, klatrati, prolekovi i drugi derivati

[0098] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu da postoje u slobodnom obliku, ili, gde je odgovarajuće, kao soli. One soli koje su farmaceutski prihvatljive su od naročitog interesa s obzirom na to da su korisne u primeni jedinjenja opisanih u daljem tekstu za medicinske svrhe. Soli koje nisu farmaceutski prihvatljive su korisne u postupcima proizvodnje, za svrhe izolacije i prečišćavanja, i u nekim slučajevima, za upotrebu u odvajanju stereoizomernih oblika jedinjenja prema pronalasku ili njihovih intermedijera.

[0099] Kao što je ovde korišćen, termin "farmaceutski prihvatljiva so" označava soli jedinjenja koje su, unutar obima racionalnog medicinskog mišljenja, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez nepotrebnih sporednih efekata kao što su toksičnost, iritacija, alergijski odgovor i slično, i u skladu su sa razumnim odnosom koristi/rizika.

[0100] Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u stanju tehnike. Na primer, S. M. Berge et al., detaljno opisuje farmaceutski prihvatljive soli u J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ovog pronalaska uključuju one izvedene iz pogodnih neorganskih i organskih kiselina i baza. Ove soli mogu da se pripreme in situ tokom finalnog izdvajanja i prečišćavanja jedinjenja.

[0101] Tamo gde jedinjenje koje je ovde opisan sadrži baznu grupu, ili dovoljno bazni bioizoster, kisele adicione soli mogu biti pripremljene pomoću 1) reakcije prečišćenog jedinjenja u njegovom obliku slobodne baze sa pogodnom organskom ili neorganskom kiselinom i 2) izolacije tako formirane soli. U praksi, kisele adicione soli bi mogle biti pogodniji oblik za upotrebu i upotreba soli predstavlja upotrebu oblika slobodne baze.

[0102] Primeri farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih kiselih adicionih soli su soli amino grupe obrazovane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina,

1

bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, sukcinska kiselina ili malonska kiselina ili korišćenjem drugih postupaka koji se koriste u stanju tehnike kao što je jonska izmena. Druge farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzensulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butirate, kamforate, kamforsulfonate, citrate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etansulfonate, formate, fumarate, glukoheptonate, glicerofosfate, glikolate, glukonate, glikolate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride, hidrobromide, hidrojodide, 2-hidroksi-etansulfonate, laktobionate, laktate, laurate, lauril sulfate, malate, maleate, malonate, metansulfonate, 2-naftalensulfonate, nikotinate, nitrate, oleate, oksalate, palmitate, palmoate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, salicilate, stearate, sukcinate, sulfate, tartrate, tiocijanate, p-toluensulfonate, undekanoate, valerate, i slično.

[0103] Tamo gde jedinjenje koje je ovde opisano sadrži karboksi grupu ili dovoljno kiseo bioizoster, bazne adicione soli mogu biti pripremljene preko 1) reakcije prečišćenog jedinjenja u njegovom kiselom obliku sa pogodnom organskom ili neorganskom bazom i 2) izolacije tako formirane soli. U praksi, upotreba bazne adicione soli bi mogla biti pogodnija i upotreba oblika soli suštinski predstavlja upotrebu oblika slobodne kiseline. Soli poreklom od odgovarajućih baza obuhvataju soli alkalnih metala (npr., natrijuma, litijuma i kalijuma), zemnoalkalnih metala (npr., magnezijuma i kalcijuma), amonijuma i N+(C1-4alkil)4. Ovaj pronalazak takođe predviđa kvaternizaciju bilo kojih baznih grupa koje sadrže azot jedinjenja koja su ovde otkrivena. Proizvodi rastvorljivi ili disperzibilni u vodi ili ulju mogu biti dobijeni pomoću takve kvaternizacije.

[0104] Bazne adicione soli obuhvataju farmaceutski prihvatljive soli metala i amina. Pogodne soli metala obuhvataju natrijum, kalijum, kalcijum, barijum, cink, magnezijum i aluminijum. Soli natrijuma i kalijuma su obično poželjne. Dodatne farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, kada je odgovarajuće, netoksične katjone amonijuma, kvaternarnog amonijuma i amina formirane upotrebom protiv-jona kao što su halogenid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, niži alkil sulfonat i aril sulfonat. Pogodne neorganske bazne adicione soli su pripremljene od baza metala, koje obuhvataju natrijum hidrid, natrijum hidroksid, kalijum hidroksid, kalcijum hidroksid, aluminijum hidroksid, litijum hidroksid, magnezijum hidroksid, cink hidroksid i slično. Pogodne bazne adicione soli amina su pripremljene od amina koji se često koriste u medicinskoj hemiji zbog njihove niske toksičnosti i prihvatljivosti za medicinsku upotrebu. Amonijak, etilendiamin, N-metil-glukamin, lizin,

1

arginin, ornitin, holin, N, N’-dibenziletilendiamin, hloroprokain, dietanolamin, prokain, N-benzilfenetilamin, dietilamin, piperazin, tris(hidroksimetil)-aminometan, tetrametilamonijum hidroksid, trietilamin, dibenzilamin, efenamin, dehidroabietilamin, N-etilpiperidin, benzilamin, tetrametilamonijum, tetraetilamonijum, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, etilamin, bazne aminokiseline, dicikloheksilamin i slično su primeri pogodnih baznih adicionih soli.

[0105] Druge kiseline i baze, dok nisu same po sebi farmaceutski prihvatljive, mogu biti korišćene u pripremi soli korisnih kao intermedijera u dobijanju jedinjenja koja su ovde opisana i njihovih farmaceutski prihvatljivih kiselih ili baznih adicionih soli.

[0106] Trebalo bi razumeti da ovaj pronalazak obuhvata smeše/kombinacije različitih farmaceutski prihvatljivih soli i takođe smeše/kombinacije jedinjenja u slobodnom obliku i farmaceutski prihvatljive soli.

[0107] Jedinjenja koja su ovde opisana takođe mogu da postoje kao farmaceutski prihvatljivi solvati (npr., hidrati) i klatrati. Kao što je ovde korišćen, termin "farmaceutski prihvatljiv solvat," je solvat formiran iz veze jednog ili više farmaceutskih prihvatljivih molekula rastvarača za jedno od jedinjenja koja su ovde opisana. Termin solvat obuhvata hidrate (npr., hemihidrat, monohidrat, dihidrat, trihidrat, tetrahidrat i slično).

[0108] Kao što je ovde korišćen, termin "hidrat" označava jedinjenje koje je ovde opisano ili njegovu so koje dalje obuhvata stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu vode vezanu nekovalentnim intermolekularnim silama.

[0109] Kao što je ovde korišćen, termin "klatrat" označava jedinjenje koje je ovde opisano ili njegovu so u obliku kristalne rešetke koja sadrži prostore (npr., kanale) koji imaju molekul gost (npr., rastvarača ili vode) uhvaćen unutar njega.

[0110] Pored jedinjenja koja su ovde opisana, farmaceutski prihvatljivi derivati ili prolekovi ovih jedinjenja takođe mogu biti korišćeni u kompozicijama za lečenje ili prevenciju ovde identifikovanih poremećaja.

[0111] "Farmaceutski prihvatljiv derivat ili prolek" obuhvata bilo koji farmaceutski prihvatljiv estar, so estra ili njegov drugi derivat ili so jedinjenja koje je ovde opisano koje, posle primene na primaoca, je sposobno da obezbedi, bilo direktno ili indirektno, jedinjenje koje je ovde opisano ili inhibitorni aktivan metabolit ili njegov ostatak. Naročito povoljni derivati ili prolekovi su oni koji povećavaju biodostupnost jedinjenja kada su takva jedinjenja primenjena na pacijenta (npr., omogućavajući da oralno primenjeno jedinjenje bude takvo da se lakše apsorbuje u krv) ili koja pojačavaju isporuku matičnog jedionjenja do biološkog odeljka (npr., mozga ili limfatičnog sistema) u odnosu na ishodnu vrstu

1

[0112] Kao što je ovde korišćen i osim ukoliko je drugačije naznačen, termin "prolek" ozna;ava derivat jedinjenja koji može da hidrolizuje, oksiduje ili na drugi način reaguje pod biološkim uslovima (in vitro ili in vivo) da bi se dobilo jedinjenje koje je ovde opisano. Prolekovi mogu da postanu aktivni posle takve reakcije pod biološkim uslovima, ili mogu da imaju aktivnost u njihovim neodreagovalim oblicima. Primeri prolekova razmatrani u ovom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja na, analoge ili derivate jedinjenja prema pronalasku koji sadrže grupe koje se mogu biološki hidrolizovati kao što su amidi koji se mogu biološki hidrolizovati, estri koji se mogu biološki hidrolizovati, karbamati koji se mogu biološki hidrolizovati, karbonati koji se mogu biološki hidrolizovati, ureidi koji se mogu biološki hidrolizovati i fosfatni analozi koji se mogu biološki hidrolizovati. Drugi primeri prolekova obuhvataju derivate jedinjenja koja su ovde opisana koja sadrže -NO, -NO2, -ONO ili -ONO2grupe. Prolekovi mogu tipično biti pripremljeni upotrebom dobro poznatih postupaka kao što su oni opisani u BURGER’S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG DISCOVERY (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed).

Skraćenice

[0113] Korišćene su sledeće skraćenice:

DMSO dimetil sulfoksid

DCM dihlorometan

ATP adenozin trifosfat

1HNMR protonska nuklearna magnetna rezonanca

HPLC tečna hromatografija visokog učinka

LCMS tečna hromatografija-masena spektrometrija

Rt vreme zadržavanja

RT sobna temperatura

TEA trietilamin

NMP N-metil-2-pirolidon

TFA trifluorosirćetna kiselina

Bp tačka ključanja

DMF dimetilformamid

PTSA p-toluensulfonska kiselina

DIPEA N,N-diizopropiletilamin

mCPBA meta-hloroperoksibenzoeva kiselina

1

HOBt hidroksibenzotriazol

HATU 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat

TBTU 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum tetrafluoroborat

T3P anhidrid propilfosfonske kiseline

COMU 1-[(1-(cijano-2-etoksi-2-oksoetilidenaminooksi)-dimetilaminomorfolino)]uronijumheksafluorofosfat

TCTU [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetilamonijum tetrafluoroborat

HBTU O-Benzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametil-uronijum-heksafluoro-fosfat

LDA Litijum diizopropilamid

EDCI 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid

Upotrebe jedinjenja

[0114] Jedan aspekt ovog pronalaska daje jedinjenja koja su inhibitori ATR kinaze i na taj način su za upotrebu u lečenju ili smanjenju težine bolesti, stanja ili poremećaja kod subjekta ili pacijenta gde je ATR uključen u bolest, stanje ili poremećaj.

[0115] Kao što su ovde korišćeni, termini "subjekt" i "pacijent" su korišćeni naizmenično. Termini "subjekt" i "pacijent" označavaju životinju, i specifičnije čoveka. U jednom primeru izvođenja, subjekt je nehumana životinja kao što je pacov ili pas. U poželjnom primeru izvođenja, subjekat je čovek.

[0116] Sledeći aspekt ovog pronalaksa obezbeđuje jedinjenja koja su za upotrebu u lečenju bolesti, poremećaja i stanja okarakterisanih prekomernom ili abnormalnom ćelijskom proliferacijom. Takve bolesti obuhvataju proliferativnu ili hiperproliferativnu bolest. Primeri proliferativnih ili hiperproliferativnih bolesti obuhvataju, bez ograničenja, kancer i mijeloproliferativne poremećaje.

[0117] U nekim primerima izvođenja, navedena jedinjenja su izabrana iz grupe koja se sastoji od jedinjenja formule I-A. U sledećem aspektu, navedena jedinjenja su izabrana iz grupe koja se sastoji od formule I-B. U sledećem aspektu, navedena jedinjenja su izabrana iz grupe koja se sastoji od formule I or I-A-1. Termin "kancer" obuhvata, ali bez ograničenja na sledeće kancere. Oralni: bukalne šupljine, usne, jezika, usta, farinksa; Srca: sarkom (angiosarkom, fibrosarkom, rabdomiosarkom, liposarkom), miksom, rabdomiom, fibrom, lipom i teratom; Pluća: nesitnoćelijski, bronhogeni karcinom (skvamoznih ćelija ili epidermoidni, nediferencirani karcinom malih ćelija, nediferencirani karcinom velikih ćelija,

11

adenokarcinom), alveolarni (bronhiolarni) karcinom, bronhijalni adenom, sarkom, limfom, hondromatozni hamartom, mezoteliom; Gastrointestinalni: jednjaka (karcinom skvamoznih ćelija, larinksa, adenokarcinom, leiomiosarkom, limfom), želuca (karcinom, limfom, leiomiosarkom), pankreasa (duktalni adenokarcinom, insulinom, glukagonom, gastrinom, karcinoidni tumor, vipom), tankog creva (adenokarcinom, limfom, karcinoidni tumori, Karpošijev sarkom, leiomiom, hemangiom, lipom, neurofibrom, fibrom), debelog creva (adenokarcinom, tubularni adenom, adenom vilusa, hamartom, leiomiom), kolona, kolonarektuma, kolorektalni, rektuma; Genitourinarnog trakta/ženski: bubrega (adenokarcinom, Vilmsov tumor [nefroblastom], limfom), mokraćne bešike i uretre (karcinom skvamoznih ćelija, karcinom prelaznih ćelija, adenokarcinom), prostate (adenokarcinom, sarkom), testisa (seminom, teratom, embrionalni karcinom, teratokarcinom, horiokarcinom, sarkom, karcinom interstitialnih ćelija, fibrom, fibroadenom, adenomatoidni tumori, lipom); Jetre: hepatom (hepatocelularni karcinom), holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom, žučnih puteva; Kosti: osteogeni sarkom (osteosarkom), fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Juingov sarkom, maligni limfom (sarkom retikularnih ćelija), multipli mijelom, maligni tumor hordoma sa gigantskim ćelijama, osteohronfrom (koštano-hrskavičave egzostoze), benigni hondrom, hondroblastom, hondromiksofibrom, osteoidni osteom i tumori gigantskih ćelija; Nervnog sistema: lobanje (osteom, hemangiom, granulom, ksantom, osteitis deformans), meningi (meningiom, meningiosarkom, gliomatoza), mozga (astrocitom, meduloblastom, gliom, ependimom, germinom [pinealom], multiformni glioblastom, oligodendrogliom, švanom, retinoblastom, kongenitalni tumori), kičmene moždine (neurofibrom, meningiom, gliom, i sarkom); Ginekološki: materice (endometrijalni karcinom), cerviksa (cervikalni karcinom, pretumorska cervikalna displazija), jajnika (karcinom jajnika [serozni cistadenokarcinom, mukozni cistadenokarcinom, neklasifikovani karcinom], tumori granulozno-tekalnih ćelija, tumori Sertoli-Leydig-ovih ćelija, disgerminom, maligni teratom), vulve (karcinom skvamoznih ćelija, intraepitelijalni karcinom, adenokarcinom, fibrosarkom, melanom), vagine (karcinom bistrih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, botrioidni sarkom (embrionalni rabdomiosarkom), Falopijevih tuba (karcinom), dojke; Hematološki: krvi (mijeloidna leukemija [akutna i hronična], akutna limfoblastna leukemija, hronična limfocitna leukemija, mijeloproliferativne bolesti, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom), Hočkinova bolest, non-Hočkinov limfom, [maligni limfom] vlasaste ćelije, limfoidni poremećaji; Kože: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Karpošijev sarkom, keratoakantom, displastični mladeži, lipom, angiom, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; Tiroidne žlezde: papilarni tiroidni karcinom, folikularni tiroidni karcinom, nediferencirani tiroidni kancer, medularni tiroidni karcinom, multipla endokrina neoplazija tipa 2A, multipla endokrina neoplazija tipa 2B, familijarni medularni tiroidni kancer, feohromocitom, paragangliom; i Nadbubrežna žlezda: neuroblastom.

[0118] U nekim primerima izvođenja, kancer je izabran od kancera pluća ili pankreasa. U drugim primerima izvođenja, kancer je izabran od kancera pluća, kancera glave i vrata, kancera pankreasa, kancera želudca ili kancera mozga. U drugim primerima izvođenja, kancer je izabran od nesitnoćelijskog kancera pluća, sitnoćelijskog kancera pluća, kancera pankreasa, kancera žučnog trakta, kancera glave i vrata, kancera bešike, kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera jednjaka, kancera dojke, hepatoćelijskog karcinoma ili kancera jajnika.

[0119] U nekim primerima izvođenja, kancer je kancer pluća. U drugim primerima izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća ili sitnoćelijski kancer pluća. U drugom primeru izvođenja, kancer je nesitnoćelijski kancer pluća. U sledećem primeru izvođenja, nesitnoćelijski kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća.

[0120] Tako, termin "kancerska ćelija" kako se ovde koristi, uključuje ćeliju pogođenu bilo kojim od prethodno identifikovanih stanja. U nekim primerima izvođenja, kancer je odabran od kolorektalnog, tiroidnog kancera, ili kancera dojke. U drugim primerima izvođenja, kancer je trostruko negativni kancer dojke.

[0121] Termin "mijeloproliferativni poremećaji", uključuje poremećaje kao što su policitemija vera, trombocitemija, mijeloidna metaplazija sa mijelofibrozom, hipereozinofilni sindrom, juvenilna mijelomonocitna leukemija, sistemska bolest mast ćelija i hematopoetski poremećaji, posebno, akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijeloidna leukemija (CML), akutna promijelocitna leukemija (APL) i akutna limfocitna leukemija (ALL).

Farmaceutske kompozicije

[0122] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja i kompozicije koji su korisni kao inhibitori ATR kinaza.

[0123] Jedan aspekt ovog pronalaska daje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže bilo koje od jedinjenja kao što su ovde opisana, i izborno sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač, ađuvans ili vehikulum.

[0124] Farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum, kako se ovde koristi, uključuje bilo koji i sve rastvarače, razblaživače, ili druge tečne vehikulume, pomoćna sredstva za dispergovanje ili suspendovanje, površinski aktivna sredstva, izotonična sredstva, sredstva za zgušnjavanje ili emulzifikaciju, konzervanse, čvrsta veziva, lubrikante i slično, prema tome šta je pogodno za određeni željeni dozni oblik. Remington’s Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) opisuje različite nosače koji se koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih kompozicija i poznate tehnike za njihovu pripremu. Osim ako neki konvencionalni nosač nije inkompatibilan sa jedinjenjima pronalaska, na primer stvaranjem bilo kakvog neželjenog biološkog dejstva ili na drugi način štetnom interakcijom sa bilo kojom drugom komponentom(ama) farmaceutski prihvatljive kompozicije, njegova upotreba je predviđena u okviru obima ovog pronalaska.

[0125] Neki primeri materijala koji mogu da posluže kao farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju, ali bez ograničenja, jonske izmenjivače, aluminijum oksid, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, ili kalijum sorbat, delimične glicerinske smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidnu siliku, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, poliakrilate, voskove, polietilen-polioksipropilenblok polimere, lanolin, šećere kao što su laktoza, glukoza i saharoza; skrobove kao što su kukuruzni skrob i skrob krompira; celulozu i njene derivate kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; sprašeni tragakant; slad; želatin; talk; ekscipijense kao što su kakao buter i voskovi za supozitorije; ulja kao što je ulje od kikirikija, ulje semena pamuka; ulje suncokreta; susamovo ulje; maslinovo ulje; kukuruzno ulje i sojino ulje; glikole; kao što je propilen glikol ili polietilen glikol; estre kao što su etil oleat i etil laurat; agar; sredstva za puferisanje kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginsku kiselinu; vodu bez pirogena; izotonični slani rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol i fosfatno puferisani rastvori, kao i drugi netoksični kompatibilni lubrikanti kao što su natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i sredstva za bojenje, sredstva za oslobađanje, sredstva za oblaganje, zaslađivači, sredstva za davanje arome i mirisa, konzervansi i antioksidansi mogu takođe da budu prisutni u kompoziciji, u skladu sa procenom osobe koja je formuliše.

Kombinovane terapije

[0126] Drugi aspekt ovog pronalaska je usmeren prema jedinjenju ili kompoziciji za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu jedinjenja prema ovom pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i dodatnog terapeutskog sredstvoa. U nekim primerima izvođenja, pomenuti postupak obuhvata

11

uzastopnu ili istovremenu primenu jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i dodatnog terapeutskog sredstva.

[0127] Kao što je ovde korišćen, termin "u kombinaciji" ili "ko-primena" mogu biti korišćeni naizmenično za označavanje upotrebe više od jedne terapije (npr., jednog ili više terapeutskih sredstava). Upotreba termina ne ograničava redosled po kome se terapije (npr., terapeutska sredstva) primenjuju na subjekta.

[0128] U nekim primerima izvođenja, pomenuto dodatno terapeutsko sredstvo je antikancersko sredstvo. U drugim primerima izvođenja, pomenuto dodatno terapeutsko sredstvo je sredstvo koje oštećuje DNK. U drugim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je izabrano od terapije zračenjem, hemoterapije, ili drugih sredstava tipično korišćenih u kombinaciji sa terapijom zračenjem ili hemoterapijom, kao što su radiosenzibilizatori i hemosenzibilizatori. U drugim primerima izvođenja, navedeno dodatno terapeutsko sredstvo je jonizujuće zračenje.

[0129] Kao što je poznato stručnjaku u oblasti, radiosenzibilizatori su sredstva koja mogu da se koriste u kombinaciji sa terapijom zračenjem. Radiosenzibilizatori deluju na brojne različite načine, uključujući, ali bez ograničenja, povećanje osetljivosti kancerskih ćelija na terapiju zračenjem, delovanje u sinergiji sa terapijom zračenjem da bi se obezbedilo poboljšano sinergističko dejstvo, aditivno delovanje sa terapijom zračenjem, ili zaštitu okolnih zdravih ćelija od oštećenja izazvanog terapijom zračenjem. Isto tako, hemosenzibilizatori su sredstva koja mogu da se koriste u kombinaciji sa hemoterapijom. Slično, hemosenzibilizatori deluju na brojne različite načine, uključujući, ali bez ograničenja, povećanje osetljivosti kancerskih ćelija na hemoterapiju, delovanje u sinergiji sa hemoterapijom da bi se obezbedilo poboljšano sinergističko dejstvo, aditivno delovanje sa hemoterapijom, ili zaštitu okolnih zdravih ćelija od oštećenja izazvanog hemoterapijom.

[0130] Primeri sredstava koja oštećuju DNK koja mogu da budu korišćena u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska uključuju, ali bez ograničenja: sredstva na bazi platine, kao što su karboplatin, nedaplatin, satraplatin i drugi derivati; inhibitore Topo I, kao što su topotekan, irinotekan/SN38, rubitekan i drugi derivati; antimetabolite, kao što su članovi familije folne kiseline (metotreksat, pemetreksed i srodna jedinjenja); purinski antagonisti i pirimidinski antagonisti (tioguanin, fludarabin, kladribin, citarabin, gemcitabin, 6-merkaptopurin, 5-fluorouracil (5FU) i srodna jedinjenja); alkilaciona sredstva, kao što su azotni iperiti (ciklofosfamid, melfalan, hlorambucil, mehloretamin, ifosfamid i srodna jedinjenja); nitrozouree (npr. karmustin); triazeni (dakarbazin, temozolomid); alkil sulfonati (npr. busulfan); prokarbazin i aziridini; antibiotike, kao što su hidroksiurea, antraciklini (doksorubicin, daunorubicin, epirubicin i drugi derivati); antracendioni (mitoksantron i srodna jedinjenja); članove familije Streptomyces (bleomicin, mitomicin C, aktinomicin); i ultraljubičasto zračenje.

[0131] Druge terapije ili antikancerska sredstva koja mogu da budu korišćena u kombinaciji sa inventivnim sredstvima predmetnog pronalaska uključuju hirurško lečenje, terapiju zračenjem (u nekoliko primera, gama-zračenje, terapiju zračenjem neutronskim zrakom, terapiju zračenjem elektronskim zrakom, protonsku terapiju, brahiterapiju i sistemske radioaktivne izotope, da navedemo nekoliko), endokrinu terapiju, modifikatore biološkog odgovora (interferone, interleukine, i faktor nekroze tumora (TNF) da navedemo nekoliko), hipertermiju i krioterapiju, sredstva za ublažavanje sporednih efekata (npr., antiemetike) i druge odobrene hemoterapeutske lekove, uključujući, ali bez ograničenja, sredstva koja oštećuju DNK koja su ovde nabrojana, otrove deobnog vretena (vinblastin, vinkristin, vinorelbin, paklitaksel), podofilotoksine (etopozid, irinotekan, topotekan), nitrozouree (karmustin, lomustin), neorganske jone (cisplatin, karboplatin), enzime (asparaginazu) i hormone (tamoksifen, leuprolid, flutamid i megestrol), Gleevec™, adriamicin, deksametazon i ciklofosfamid.

[0132] Jedinjenje predmetnog pronalaska može takođe da se upotrebi u lečenju kancera u kombinaciji sa bilo kojim od sledećih terapeutskih sredstava: abareliks (Plenaxis depot<®>); aldesleukin (Prokine®); aldesleukin (Proleukin®); alemtuzumab (Campath®); alitretinoin (Panretin®); alopurinol (Zyloprim®); altretamin (Hexalen®); amifostin (Ethyol®); anastrozol (Arimidex®); arsen trioksid (Trisenox®); asparaginaza (Elspar®); azacitidin (Vidaza®); bevacuzimab (Avastin®); beksaroten kapsule (Targretin®); beksaroten gel (Targretin®); bleomicin (Blenoksane®); bortezomib (Velcade®); busulfan intravenski (Busulfex®); busulfan oralni (Myleran®); kalusteron (Methosarb®); kapecitabin (Xeloda®); karboplatin (Paraplatin®); karmustin (BCNU®, BiCNU®); karmustin (Gliadel®); karmustin sa polifeprosan 20 implantom (Gliadel Wafer®); celekoksib (Celebrex®); cetuksimab (Erbitux®); hlorambucil (Leukeran®); cisplatin (Platinol®); kladribin (Leustatin®, 2-CdA®); klofarabin (Clolar®); ciklofosfamid (Cytoksan®, Neosar®); ciklofosfamid (Cytoksan Injection®); ciklofosfamid (Cytoksan Tablet®); citarabin (Cytosar-U®); citarabin lipozomal (DepoCyt®); dakarbazin (DTICDome®); daktinomicin, aktinomicin D (Cosmegen®); darbepoetin alfa (Aranesp®); daunorubicin lipozomal (Danuoksome®); daunorubicin, daunomicin (Daunorubicin®); daunorubicin, daunomicin (Cerubidine®); denileukin diftitoks (Ontak®); deksrazoksan (Zinecard®); docetaksel (Taxotere®); doksorubicin (Adriamycin PFS®); doksorubicin (Adriamycin®, Rubex®); doksorubicin (Adriamycin PFS Injection®); doksorubicin lipozomal

11

(Doxil®); dromostanolon propionat (dromostanolone®); dromostanolon propionat (masterone injection®); Elliott-ov B rastvor (Elliott’s B Solution<®>); epirubicin (Ellence<®>); epoetin alfa (epogen®); erlotinib (Tarceva®); estramustin (Emcyt®); etopozid fosfat (Etopophos®); etopozid, VP-16 (Vepesid®); eksemestan (Aromasin®); filgrastim (Neupogen®); floksuridin (intraarterijalni) (FUDR®); fludarabin (Fludara®); fluorouracil, 5-FU (Adrucil®); fulvestrant (Faslodex®); gefitinib (Iressa®); gemcitabin (Gemzar®); gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg®); goserelin acetat (Zoladex Implant®); goserelin acetat (Zoladex®); histrelin acetat (Histrelin implant®); hidroksiurea (Hydrea®); ibritumomab tiuksetan (Zevalin®); idarubicin (Idamycin®); ifosfamid (IFEX®); imatinib mezilat (Gleevec®); interferon alfa 2a (Roferon A®); interferon alfa-2b (Intron A®); irinotekan (Camptosar®); lenalidomid (Revlimid®); letrozol (Femara®); leukovorin (Wellcovorin®, Leucovorin®); leuprolid acetat (Eligard®); levamizol (Ergamisol®); lomustin, CCNU (CeeBU®); mekloretamin, azotni iperit (Mustargen®); megestrol acetat (Megace®); melfalan, L-PAM (Alkeran®); merkaptopurin, 6-MP (Purinethol®); mesna (Mesnex®); mesna (Mesnex tabs®); metotreksat (Methotrexate®); metoksalen (Uvadex®); mitomicin C (Mutamycin®); mitotan (Lysodren®); mitoksantron (Novantrone®); nandrolon fenpropionat (Durabolin-50®); nelarabin (Arranon®); nofetumomab (Verluma®); oprelvekin (Neumega®); oksaliplatin (Eloksatin®); paklitaksel (Paxene®); paklitaksel (Taxol®); čestice paklitaksela vezane za protein (Abraxane<®>); palifermin (Kepivance®); pamidronat (Aredia®); pegademaza (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargaza (Oncaspar®); pegfilgrastim (Neulasta®); pemetreksed-dinatrijum (Alimta®); pentostatin (Nipent®); pipobroman (Vercyte®); plikamicin, mitramicin (Mithracin®); porfimer natrijum (Photofrin®); prokarbazin (Matulane®); kvinakrin (Atabrine®); rasburikaza (Elitek®); rituksimab (Rituxan®); sargramostim (Leukine®); sargramostim (Prokine®); sorafenib (Nexavar®); streptozocin (Zanosar®); sunitinib maleat (Sutent®); talk (Sclerosol®); tamoksifen (Nolvadex®); temozolomid (Temodar®); tenipozid, VM-26 (Vumon®); testolakton (Teslac®); tioguanin, 6-TG (Tioguanine®); tiotepa (Tioplex®); topotekan (Hycamtin®); toremifen (Fareston®); tositumomab (Bexxar®); tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®); trastuzumab (Herceptin®); tretinoin, ATRA (Vesanoid®); uracil iperit (Uracil Mustard Capsules®); valrubicin (Valstar®); vinblastin (Velban®); vinkristin (Oncovin®); vinorelbin (Navelbine®); zoledronat (Zometa®) i vorinostat (Zolinza®).

[0133] Za sveobuhvatnu diskusiju o ažuriranim terapijama raka pogledati, http://www.nci.nih.gov/, listu onkoloških lekova odobrenih od strane FDA na http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm, i The Merck Manual, Seventeenth Ed.

1999.

11

Kompozicije za primenu kod subjekta

[0134] Inhibitori ATR kinaze ili njihove farmaceutske soli mogu da budu formulisane u farmaceutske kompozicije za primenu kod životinja ili ljudi. Ove farmaceutske kompozicije, koje sadrže određenu količinu ATR inhibitora efikasnu u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja koja su ovde opisana i farmaceutski prihvatljiv nosač, su drugi aspekt predmetnog opisa.

[0135] Tačna količina jedinjenja potrebna za lečenje će varirati od subjekta do subjekta, u zavisnosti od vrste, starosti, i opšteg stanja subjekta, ozbiljnosti infekcije, konkretnog sredstva, njegovog načina primene, i slično. Jedinjenja pronalaska su poželjno formulisana u jediničnom doznom obliku zbog lakoće primene i ujednačenosti doze. Izraz "jedinični dozni oblik", kako se ovde koristi, odnosi se na fizički odvojenu jedinicu sredstva pogodnu za pacijenta koji treba da se leči. Jasno je, međutim, da će ukupnu dnevnu upotrebu jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska odrediti nadležni lekar u okviru precizne medicinske procene. Specifični nivo efektivne doze za bilo kog konkretnog pacijenta ili organizam će zavisiti od brojnih faktora uključujući poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja; aktivnosti specifičnog jedinjenja koje se koristi; specifične kompozicije koja se koristi; starosti, telesne težine, opšteg zdravlja, pola i ishrane pacijenta; vremena primene, puta primene, i brzine ekskrecije specifičnog jedinjenja koje se koristi; trajanja lečenja; lekova koji se koriste u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se koristi, i sličnih faktora dobro poznatih u medicinskoj struci. Termin "pacijent", kako se ovde koristi, označava životinju, poželjno sisara, i najpoželjnije čoveka.

[0136] U nekim primerima izvođenja, ove kompozicije dodatno sadrže jedno ili više dodatnih terapeutskih sredstava. Na primer, hemoterapeutska sredstva ili druga antiproliferativna sredstva mogu da budu kombinovana sa jedinjenjima ovog pronalaska za lečenje proliferativnih bolesti i kancera. Primeri poznatih sredstava sa kojima ove kompozicije mogu da se kombinuju su nabrojani gore u tekstu u odeljku "Kombinovane terapije" i takođe u specifikaciji. Neki primeri izvođenja obezbeđuju istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu upotrebu kombinovanog preparata.

Načini primene i dozni oblici

11

[0137] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu da se primene kod ljudi i drugih životinja oralno, rektalno, parenteralno, intracisternalno, intravaginalno, intraperitonealno, topikalno (kao pomoću prahova, masti, ili kapi), bukalno, kao oralni ili nazalni sprej, ili slično, u zavisnosti od ozbiljnosti infekcije koja se leči. U određenim primerima izvođenja, jedinjenja pronalaska mogu da budu primenjena oralno ili parenteralno u doznim nivoima od oko 0.01 mg/kg do oko 50 mg/kg i poželjno od oko 1 mg/kg do oko 25 mg/kg, telesne težine subjekta dnevno, jedan ili više puta dnevno, da bi se dobilo željeno terapeutsko dejstvo. Alternativno, režim doziranja jedinjenja prema predmetnom pronalasku može da varira.

[0138] Tečni dozni oblici za oralnu primenu uključuju, ali bez ograničenja, farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnog jedinjenja, tečni dozni oblici mogu da sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u ovoj oblasti kao što su, na primer, voda ili drugi rastvarači, sredstva za solubilizaciju i emulzifikatori kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (naročito, ulje semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, masline, ricinusa, i susama), glicerol, tetrahidrofurfuril alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina sorbitana, i njihove smeše. Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije mogu takođe da uključuju adjuvanse kao što su sredstva za kvašenje, emulzifikatori i sredstva za suspendovanje, zaslađivači i sredstva za davanje arome i mirisa.

[0139] Injektabilni preparati, na primer, sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije mogu da budu formulisane u skladu sa poznatim stanjem tehnike korišćenjem pogodnih sredstava za dispergovanje ili kvašenje i sredstava za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor, suspenzija ili emulzija u netoksičnom razblaživaču ili rastvaraču prihvatljivom za parenteralnu primenu, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvarčima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rstvor, U.S.P. i izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodatno, sterilna, fiksna ulja se uobičajeno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. Za ovu svrhu bilo koje blago fiksno ulje može da se koristi uključujući sintetske mono- ili digliceride. Dodatno, masne kiseline, kao što je oleinska kiselina, koriste se u pripremi injektabilnih preparata.

[0140] Injektabilne formulacije mogu da se sterilišu, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije, ili uključivanjem sredstava za sterilizaciju u obliku sterilne čvrste

11

kompozicije koja može da se rastvori ili disperguje u sterilnoj vodi ili drugom sterilnom injektabilnom medijumu pre upotrebe.

[0141] U cilju produžavanja dejstva jedinjenja predmetnog pronalaska, često je poželjno usporiti apsorpciju jedinjenja iz subkutane ili intramuskularne injekcije. Ovo može da se postigne upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji je slabo rastvoran u vodi. Brzina apsorpcije jedinjenja tada zavisi od brzine njegovog rastvaranja koja, zauzvrat, može da zavisi od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno primenjenog oblika jedinjenja se postiže rastvaranjem ili suspendovanjem jedinjenja u uljanom vehikulumu. Injektabilni depo oblici se prave obrazovanjem mikroinkapsuliranih matrica jedinjenja u bio-razgradivim polimerima kao što je polilaktidpoliglikolid. U zavisnosti od odnosa jedinjenja prema polimeru i prirode konkretnog polimera koji se koristi, brzina oslobađanja jedinjenja može da se kontroliše. Primeri drugih biorazgradivih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo injektabilne formulacije se takođe pripremaju zatvaranjem jedinjenja u lipozome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa tkivima tela.

[0142] Kompozicije za rektalnu ili vaginalnu primenu su poželjno supozitorije koje mogu da se pripreme mešanjem jedinjenja ovog pronalaska sa pogodnim neiritantnim ekscipijensima ili nosačima kao što su kakao buter, polietilen glikol ili vosak za supozitorije, koji su čvrsti na sobnoj temperaturi, ali tečni na temperaturi tela i stoga se tope u rektumu ili vaginalnoj duplji i oslobađaju aktivno jedinjenje.

[0143] Čvrsti dozni oblici za oralnu primenu uključuju kapsule, tablete, pilule, prahove i granule. U takvim čvrstim doznim oblicima, aktivno jedinjenje se meša sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom ili nosačem kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili a) puniocima ili ekstenderima kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i silicijumska kiselina, b) vezivnim sredstvima kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinilpirolidinon, saharoza, i akacija, c) ovlaživačima kao što je glicerol, d) sredstvima za raspadanje kao što su agar-agar, kalcijum karbonat, skrob od krompira ili tapioke, alginska kiselina, određeni silikati i natrijum karbonat, e) sredstvima za usporavanje rastvaranja kao što je parafin, f) sredstvima za ubrzavanje apsorpcije kao što su kvaternarna amonijumova jedinjenja, g) sredstvima za kvašenje kao što su, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) apsorbentima kao što su kaolinska i bentonit glina, i i) lubrikantima kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat i njihove smeše. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblik može takođe da sadrži puferska sredstva.

11

[0144] Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe da se koriste kao punioci u meko i čvrsto punjenim želatinskim kapsulama korišćenjem takvih ekscipijenasa kao laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikola velike molekularne težine, i slično. Čvrsti dozni oblici tablete, dražeje, kapsule, pilule i granule mogu da se pripreme sa oblogama i omotačima kao što su enterične obloge i druge obloge dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije. One mogu izborno da sadrže sredstva za davanje neprozirnosti i mogu takođe da budu takvog sastava da oslobađaju samo aktivno sredstvo(a), ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, izborno, na odložen način. Primeri kompozicija za oblaganje koje mogu da se koriste uključuju polimerne supstance i voskove. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe da se koriste kao punioci u meko i čvrsto punjenim želatinskim kapsulama korišćenjem takvih ekscipijenasa kao laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikola velike molekularne težine, i slično.

[0145] Aktivna jedinjenja mogu takođe da budu u mikroinkapsuliranim oblicima sa jednim ili više ekscipijenasa kao što je gore navedeno. Čvrsti dozni oblici tableta, dražeja, kapsula, pilula i granula mogu da se pripreme sa oblogama i omotačima kao što su enterične obloge, obloge sa kontrolisanim oslobađanjem i druge obloge dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije. U takvim čvrstim doznim oblicima aktivno jedinjenje može da bude pomešano sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što su saharoza, laktoza ili skrob. Takvi dozni oblici mogu takođe da sadrže, što je uobičajena praksa, dodatne supstance koje nisu inertni razblaživači, npr., lubrikante za tabletiranje i druga pomoćna sredstva za tabletiranje, kao što su magnezijum stearat i mikrokristalna celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici mogu takođe da sadrže sredstva za puferisanje. Oni mogu izborno da sadrže sredstva za davanje neprozirnosti i mogu takođe da budu takvog sastava da oslobađaju samo aktivno sredstvo(a), ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, izborno, na odložen način. Primeri kompozicija za oblaganje koje mogu da se koriste uključuju polimerne supstance i voskove.

[0146] Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju masti, paste, kreme, losione, gelove, prahove, rastvore, sprejeve, inhalante ili flastere. Aktivna komponenta se meša pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i bilo kojim potrebnim konzervansima ili puferima koji mogu da budu potrebni. Oftalmičke formulacije, kapi za uši i kapi za oči su takođe obuhvaćene opsegom ovog pronalaska. Dodatno, predmetni pronalazak obuhvata upotrebu transdermalnih flastera, koji imaju dodatnu prednost obezbeđivanja kontrolisane dostave jedinjenja u telo. Takvi dozni oblici mogu da se naprave rastvaranjem ili raspoređivanja jedinjenja u odgovarajućem

12

medijumu. Poboljšivači apsorpcije mogu takođe da se koriste za povećanje protoka jedinjenja kroz kožu. Brzina može da se kontroliše ili obezbeđivanjem membrane koja kontroliše brzinu ili dispergovanjem jedinjenja u polimernoj matrici ili gelu.

[0147] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu da budu primenjene oralno, parenteralno, inhalacionim sprejem, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili putem implantiranog rezervoara. Termin "parenteralni", kako se ovde koristi, uključuje, ali nije ograničen na, subkutanu, intravensku, intramuskularnu, intraartikularnu, intrasinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu, intrahepatičnu, intralezionalnu i intrakranijalnu injekciju ili infuzione tehnike. Poželjno, kompozicije se primenjuju oralno, intraperitonealno ili intravenski.

[0148] Sterilni injektabilni oblici kompozicije ovog pronalaska mogu da budu vodena ili uljana suspenzija. Ove suspenzije mogu da budu formulisane u skladu sa tehnikama poznatim u stanju tehnike korišćenjem pogodnih srestava za dispergovanje ili kvašenje i sredstava za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom razblaživaču ili rastvaraču koji je parenteralno prihvatljiv, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodatno, sterilna, fiksna ulja se uobičajeno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. Za ovu svrhu, bilo koja blaga fiksna ulja mogu da se koriste uključujući sintetske mono- ili digliceride. Masne kiseline, kao što su oleinska kiselina i njeni derivati glicerida su korisne za pripremu injektabilnih preparata, kao i prirodna farmaceutski-prihvatljiva ulja, kao što su maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, posebno u njihovim polioksietilovanim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije mogu takođe da sadrže razblaživač ili sredstvo za dispergovanje na bazi alkohola dugog lanca, kao što su karboksimetil celuloza ili slična sredstva za dispergovanje koja se uobičajeno koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih doznih oblika uključujući emulzije i suspenzije. Ostali uobičajeno korišćeni surfaktanti, kao što su Tween, Span i druga emulzifikujuća sredstva ili poboljšivači bio-raspoloživosti koji se obično koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih, ili drugih doznih oblika mogu takođe da se koriste u svrhu formulacije.

[0149] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu da budu oralno primenjene u bilo kom oralno prihvatljivom doznom obliku uključujući, ali bez ograničenja, kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se uobičajeno koriste uključuju, ali bez ograničenja, laktozu i skrob kukuruza. Lubrikanti, kao što je magnezijum stearat, se takođe tipično dodaju. Za oralnu primenu u obliku kapsule, korisni razblaživači uključuju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada su vodene suspenzije potrebne za oralnu upotrebu, aktivni sastojak se kombinuje sa sredstvima za emulzifikovanje i suspendovanje. Po želji, određeni zaslađivači, sredstva za davanje arome i boje mogu takođe da se dodaju.

[0150] Alternativno, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu da se primene u obliku supozitorija za rektalnu primenu. One mogu da se pripreme mešanjem sredstva sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na rektalnoj temperaturi i stoga će se topiti u rektumu kako bi se oslobodio lek. Takvi materijali uključuju, ali bez ograničenja, kakao buter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[0151] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu takođe da se primene topikalno, posebno kada ciljna mesta za lečenje uključuju oblasti ili organe koji su lako dostupni za topikalnu primenu, uključujući bolesti oka, kože, ili donjeg intestinalnog trakta. Pogodne topikalne formulacije se lako pripremaju za svaku od ovih oblasti ili organa.

[0152] Topikalna primena za donji intestinalni trakt može da se postigne formulacijom rektalne supozitorije (videti gore) ili pogodnom formulacijom klizme. Topikalnotransdermalni flasteri mogu takođe da se koriste.

[0153] Za topikalne primene, farmaceutske kompozicije mogu da budu formulisane kao pogodna mast koja sadrži aktivnu komponentu suspendovanu ili rastvorenu u jednom ili više nosača. Nosači za topikalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju, ali bez ograničenja, mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, propilen glikol, jedinjenje polioksietilena, jedinjenje polioksipropilena, emulzifikujući vosak i vodu. Alternativno, farmaceutske kompozicije mogu da budu formulisane kao pogodni losion ili krema koja sadrži aktivnu komponentu suspendovanu ili rastvorenu u jednom ili više nosača. Pogodni nosači uključuju, ali bez ograničenja, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, cetil voštane estre, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu.

[0154] Za oftalmičku upotrebu, farmaceutske kompozicije mogu da budu formulisane kao mikronizovane suspenzije u izotoničnom, sterilnom slanom rastvoru sa podešenim pH, ili, poželjno, kao rastvori u izotoničnom, sterilnom slanom rastvoru sa podešenim pH, ili sa, ili bez konzervansa kao što je benzilalkonijum hlorid. Alternativno, za oftalmičke upotrebe, farmaceutske kompozicije mogu da budu formulisane kao mast kao što je vazelin.

[0155] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu takođe da se primene pomoću nazalnog aerosola ili inhalacijom. Takve kompozicije se pripremaju u skladu sa tehnikama koje su dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije i mogu da se pripreme kao rastvori u slanom rastvoru, uključujući benzil alkohol ili druge pogodne konzervanse, pokretače apsorpcije za pojačanje bio-raspoloživosti, fluorougljenike, i/ili druga uobičajena sredstva za poboljšaje rastvorljivosti ili dispergovanje.

[0156] Količina inhibitora protein kinaze koja može da se kombinuje sa materijalima nosača da bi se proizveo jedinični dozni oblik će varirati u zavisnosti od domaćina koji se leči, konkretnog načina primene. Poželjno, kompozicije treba da budu formulisane tako da doza od između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/danu inhibitora može da se primeni kod pacijenta koji prima ove kompozicije. Alternativno, doza od između 0.01 - 50 mg/kg telesne težine/dozi inhibitora može biti primenjena na pacijenta koji prima ova jedinjenja.

[0157] Takođe treba razumeti da će specifično doziranje i režim lečenja za svakog konkretnog pacijenta zavisiti od brojnih faktora, uključujući aktivnost specifičnog jedinjenja koje se koristi, starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol, dijetu, vreme primene, brzinu ekskrecije, kombinaciju leka, i procenu nadležnog lekara i ozbiljnost konkretne bolesti koja se leči. Količina inhibitora će takođe zavisiti od konkretnog jedinjenja u kompoziciji.

Primena sa dodatnim sredstvom

[0158] U zavisnosti od određenih stanja posredovanih protein kinazom koja treba da se leče ili spreče, dodatni lekovi, koji se normalno primenjuju za lečenje ili prevenciju tog stanja, mogu da budu primenjeni zajedno sa jedinjenjima ovog pronalaska.

[0159] Ova dodatna sredstva mogu da budu primenjena odvojeno od jedinjenja ili kompozicije koja sadrži inhibitor protein kinaze, kao deo višestrukog doznog režima. Alternativno, ova sredstva mogu da budu deo pojedinačnog doznog oblika, pomešana sa inhibitorom protein kinaze u jednoj kompoziciji.

[0160] Još jedan aspekt ovog pronalaska je usmeren na jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno; pomenuti postupak obuhvata uzastopnu ili istovremenu primenu jedinjenja ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i anti-kancerskog sredstva. U nekim primerima izvođenja, pomenuto antikancersko sredstvo je odabrano od sredstava na bazi platine, kao što su karboplatin, nedaplatin, satraplatin i drugi derivati; inhibitora Topo I, kao što su topotekan, irinotekan/SN38, rubitekan i drugi derivati; antimetabolita, kao što su članovi familije folne kiseline (metotreksat, pemetreksed i srodna jedinjenja); purinski antagonisti i pirimidinski antagonisti (tioguanin, fludarabin, kladribin, citarabin, gemcitabin, 6-merkaptopurin, 5-fluorouracil (5FU) i srodna jedinjenja); alkilacionih sredstava, kao što su azotni iperiti (ciklofosfamid, melfalan, hlorambucil, mehloretamin, ifosfamid i srodna jedinjenja);

12

nitrozouree (npr. karmustin); triazeni (dakarbazin, temozolomid); alkil sulfonati (npr. busulfan); prokarbazin i aziridini; antibiotika, kao što su hidroksiurea, antraciklini (doksorubicin, daunorubicin, epirubicin i drugi derivati); antracendioni (mitoksantron i srodna jedinjenja); članove familije Streptomyces (bleomicin, mitomicin C, aktinomicin); i ultraljubičastog zračenja.

[0161] Sleeći primer izvođenja obezbeđuje primenu jedinjenja ovog pronalaska sa dodatnim terapeutskim sredstvom koje inhibira ili modulira protein za popravku isecanja baze. U nekim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baze je izabran od UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNK glikozilaze); APE1, APEX2 (AP endonukleaze); LIG1, LIG3 (DNK ligaze I i III); XRCC1 (LIG3 pomoćni); PNK, PNKP (polinukleotid kinaza i fosfataza); PARP1, PARP2 (Poli(ADP-riboza) polimeraze); PolB, PolG (polimeraze); FEN1 (endonukleaze) ili aprataksin. U drugim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baze je izabran od PARP1, PARP2 ili PolB. U drugim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baze je izabran od PART1 ili PARP2. U nekim primerima izvođenja, sredstvo je izabrano od olapariba (takođe poznat kao AZD2281 ili KU-0059436), inipariba (takođe poznat kao BSI-201 ili SAR240550), velipariba (takođe poznat kao ABT-888), rukapariba (takođe poznat kao PF-01367338), CEP-9722, INO-1001,MK-4827, E7016, BMN673 ili AZD2461.

Biološki uzorci

[0162] Kao inhibitori ATR kinaze, jedinjenja i kompozicije ovog pronalaska su takođe korisni u biološkim uzorcima. Jedan aspekt pronalaska se odnosi na inhibiciju aktivnosti ATR kinaze u biološkom uzorku, gde postupak obuhvata dovođenje u kontakt pomenutog biološkog uzorka sa jedinjenjem koje je ovde opisano ili kompozicijom koja sadrži pomenuto jedinjenje. Termin "biološki uzorak", kako se ovde koristi, označava in vitro ili ex vivo uzorak, uključujući, bez ograničenja, ćelijske kulture ili njihove ekstrakte; materijal biopsije dobijen iz sisara ili njegove ekstrakte; i krv, pljuvačku, urin, feces, semenu tečnost, suze, ili druge telesne tečnosti ili njihove ekstrakte. Termin "jedinjenja koja su ovde opisana" uključuje jedinjenja formule I, IA, IIA i IA-iii.

[0163] Inhibicija aktivnosti ATR kinaze u biološkom uzorku je korisna za različite svrhe koje su poznate stručnjaku u oblasti. Primeri takvih svrha uključuju, ali bez ograničenja, transfuziju krvi, transplantaciju organa i skladištenje bioloških uzoraka.

Ispitivanje protein kinaza

[0164] Dodatni aspekt opisa odnosi se na ispitivanje protein kinaza u biološkim i patološkim fenomenima; ispitivanje puteva intracelularnog prenosa signala posredovanih takvim protein kinazama; i uporednu procenu novih inhibitora protein kinaze. Primeri takvih upotreba uključuju, ali bez ograničenja, biološke testove kao što su enzimski testovi i testovi na ćelijama.

[0165] Aktivnost jedinjenja kao inhibitora protein kinaze može da se ispituje in vitro, in vivo ili ćelijskoj liniji. In vitro testovi uključuju testove koji određuju inhibiciju aktivnosti kinaze ili ATPazne aktivnosti aktivirane kinaze. Alternativni in vitro testovi kvantitativno određuju sposobnost inhibitora da se veže za protein kinazu i merenje može da se postigne ili radioaktivnim obeležavanjem inhibitora pre vezivanja, izdvajanjem kompleksa inhibitor/kinaza i određivanjem količine vezane radioaktivne oznake, ili izvođenjem eksperimenta kompeticije u kome se novi inhibitori inkubiraju sa kinazom vezanom za poznate radioligande. Detaljni uslovi za ispitivanje jedinjenja koje je korišćeno u ovom pronalasku kao inhibitor ATR prikazani su u primerima u nastavku teksta.

[0166] Sledeći aspekt pronalaska daje postupak za modulaciju aktivnosti enzima dovođenjem u kontakt jedinjenja opisanog ovde sa ATR kinazom.

Jedinjenja ili kompozicije za upotrebu u postupcima lečenja

[0167] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti, stanja, ili poremećaja gde je ATR kinaza uključena u bolesno stanje. U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti, stanja, ili poremećaja povezanog sa ATR kinazom, gde je inhibicija enzimske aktivnosti uključena u lečenje bolesti. U dodatnom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti, stanja, ili poremećaja sa jedinjenjima koja inhibiraju enzimatsku aktivnost vezivanjem za ATR kinazu. Dodatni aspekt obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti, stanja, ili poremećaja inhibicijom enzimske aktivnosti ATR kinaze pomoću inhibitora ATR kinaze.

[0168] Jedan aspekt pronalaska odnosi se na jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku inhibicije aktivnosti ATR kinaze kod pacijenta, pri čemu postupak sadrži primenu

12

na pacijenta jedinjenja koje je ovde opisano ili kompozicije koja sadrži pomenuto jedinjenje. U nekim primerima izvođenja, pomenuti postupak se koristi za lečenje ili prevenciju stanja odabranog od proliferativne i hiperproliferativne bolesti, kao što je kancer.

[0169] Dodatni aspekt ovog pronalaska obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za lečenje, sprečavanje, ili smanjenje ozbiljnosti proliferativnih ili hiperproliferativnih bolesti, pri čemu pomenuti postupak sadrži primenu efikasne količine jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži jedinjenje, na subjekta kod koga postoji potreba za tim. U nekim primerima izvođenja, pomenuti postupak se koristi za lečenje ili prevenciju kancera. U nekim primerima izvođenja, pomenuti postupak se koristi za lečenje ili prevenciju tipa kancera sa solidnim tumorima. U još jednom primeru izvođenja, pomenuti kancer je odabran od sledećih kancera: oralnog: bukalne šupljine, usne, jezika, usta, farinksa; srca: sarkom (angiosarkom, fibrosarkom, rabdomiosarkom, liposarkom), miksom, rabdomiom, fibrom, lipom i teratom; pluća: nesitnoćelijski, bronhogeni karcinom (skvamoznih ćelija ili epidermoidni, nediferencirani karcinom malih ćelija, nediferencirani karcinom velikih ćelija, adenokarcinom), alveolarni (bronhiolarni) karcinom, bronhijalni adenom, sarkom, limfom, hondromatozni hamartom, mezoteliom; gastrointestinalnog: jednjaka (karcinom skvamoznih ćelija, larinksa, adenokarcinom, leiomiosarkom, limfom), želuca (karcinom, limfom, leiomiosarkom), pankreasa (duktalni adenokarcinom, insulinom, glukagonom, gastrinom, karcinoidni tumor, vipom), tankog creva (adenokarcinom, limfom, karcinoidni tumori, Karpošijev sarkom, leiomiom, hemangiom, lipom, neurofibrom, fibrom), debelog creva (adenokarcinom, tubularni adenom, adenom vilusa, hamartom, leiomiom), kolona, kolona-rektuma, kolorektalnog, rektuma; genitourinarnog trakta: bubrega (adenokarcinom, Vilmsov tumor [nefroblastom], limfom), mokraćne bešike i uretre (karcinom skvamoznih ćelija, karcinom prelaznih ćelija, adenokarcinom), prostate (adenokarcinom, sarkom), testisa (seminom, teratom, embrionalni karcinom, teratokarcinom, horiokarcinom, sarkom, karcinom interstitialnih ćelija, fibrom, fibroadenom, adenomatoidni tumori, lipom); jetre: hepatom (hepatocelularni karcinom), holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom, žučnih puteva; kosti: osteogeni sarkom (osteosarkom), fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Juingov sarkom, maligni limfom (sarkom retikularnih ćelija), multipli mijelom, maligni tumor hordoma sa gigantskim ćelijama, osteohronfrom (koštano-hrskavičave egzostoze), benigni hondrom, hondroblastom, hondromiksofibrom, osteoidni osteom i tumori gigantskih ćelija; nervnog sistema: lobanje (osteom, hemangiom, granulom, ksantom, osteitis deformans), meningi (meningiom, meningiosarkom, gliomatoza), mozga (astrocitom, meduloblastom, gliom, ependimom,

12

germinom [pinealom], multiformni glioblastom, oligodendrogliom, švanom, retinoblastom, kongenitalni tumori), kičmene moždine (neurofibrom, meningiom, gliom, i sarkom); ginekološkog: materice (endometrijalni karcinom), cerviksa (cervikalni karcinom, pretumorska cervikalna displazija), jajnika (karcinom jajnika [serozni cistadenokarcinom, mukozni cistadenokarcinom, neklasifikovani karcinom], tumori granulozno-tekalnih ćelija, tumori Sertoli-Leydig-ovih ćelija, disgerminom, maligni teratom), vulve (karcinom skvamoznih ćelija, intraepitelijalni karcinom, adenokarcinom, fibrosarkom, melanom), vagine (karcinom bistrih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, botrioidni sarkom (embrionalni rabdomiosarkom), Falopijevih tuba (karcinom), dojke; kože: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Karpošijev sarkom, keratoakantom, displastični mladeži, lipom, angiom, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; tiroidne žlezde: papilarni tiroidni karcinom, folikularni tiroidni karcinom, nediferencirani tiroidni kancer, medularnog tiroidnog karcinom, multipla endokrina neoplazija tipa 2A, multipla endokrina neoplazija tipa 2B, familijani medularni tiroidni kancer, feohromocitom, paragangliom; i adrenalnih žlezda: neuroblastom.

[0170] U nekim primerima izvođenja, kancer je izabran od kancera koji su ovde opisani. U nekim primerima izvođenja, navedeni kancer je kancer pluća, kancer glave i vrata, kancer pankreasa, kancer želudca ili kancer mozga. U drugim primerima izvođenja, kancer je izabran od kancera pluća ili pankreasa.

[0171] U drugim primerima izvođenja, kancer je izabran od nesitnoćelijskog kancera pluća, sitnoćelijskog kancera pluća, kancera pankreasa, kancera žučnog trakta, kancera glave i vrata, kancera bešike, kolorektalnog kancera, glioblastoma, kancera jednjaka, kancera dojke, hepatoćelijskog karcinoma ili kancera jajnika.

[0172] U nekim primerima izvođenja, kancer pluća je sitnoćelijski kancer pluća i dodatna terapeutska sredstva su cisplatin i etoposid. U drugim primerima izvođenja, kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća i dodatna terapeutska sredstva su gemcitabin i cisplatin. U drugim primerima izvođenja, nesitnoćelijski kancer pluća je skvamozni nesitnoćelijski kancer pluća. U drugom primeru izvođenja, kancer je kancer dojke i dodatno terapeutsko sredstvo je cisplatin. U drugim primerima izvođenja, kancer je trostruki negativni kancer dojke.

[0173] U određenim primerima izvođenja, "efikasna količina" jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive kompozicije je ona količina koja je efikasna u cilju lečenja navedene bolesti. Jedinjenja i kompozicije, prema postupku predmetnog pronalaska, mogu se primenjivati upotrebom bilo koje količine i bilo kog puta primene efikasnog za lečenje ili smanjenje težine navedene bolesti.

12

[0174] Jedan aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za inhibiciju ATR kod pacijenta koji sadrži primenu pomenutog jedinjenja kao što je ovde opisano. Drugi primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta pomenutog jedinjenja.

[0175] Neki primeri izvođenja koji obuhvataju primenu kod pomenutog pacijenta dodatnog terapeutskog sredstva odabranog od sredstva koje oštećuje DNK; gde je pomenuto dodatno terapeutsko sredstvo odgovarajuće za bolest koja se leči; i pomenuto dodatno terapeutsko sredstvo se primenjuje zajedno sa pomenutim jedinjenjem kao pojedinačni dozni oblik ili odvojeno od pomenutog jedinjenja kao deo višestrukog doznog oblika.

[0176] U nekim primerima izvođenja, pomenuto sredstvo koje oštećuje DNK je odabrano od jonizujućeg zračenja, radiomimetika neokarzinostatina, sredstva na bazi platine, Topo I inhibitora, Topo II inhibitora, antimetabolita, alkilacionog sredstva, alkil sulfonata, antimetabolita, ili antibiotika. U drugim primerima izvođenja, pomenuto sredstvo koje oštećuje DNK je odabrano od jonizujućeg zračenja, sredstva na bazi platine, Topo I inhibitora, Topo II inhibitora, ili antibiotika.

[0177] Primeri sredstava na bazi platine uključuju cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, nedaplatin, satraplatin i druge derivate. Druga sredstva na bazi platine uključuju lobaplatin, i triplatin. Druga sredstva na bazi platine uključuju tetranitrat, pikoplatin, satraplatin, ProLindac i aroplatin.

[0178] Primeri inhibitora Topo I uključuju kamptotecin, topotekan, irinotekan/SN38, rubitekan i druge derivate. Drugi Topo I inhibitori uključuju belotekan.

[0179] Primeri inhibitora Topo II uključuju etopozid, daunorubicin, doksorubicin, aklarubicin, epirubicin, idarubicin, amrubicin, pirarubicin, valrubicin, zorubicin i tenipozid.

[0180] Primeri antimetabolita uključuju članove familije folne kiseline, purinske familije (antagonisti purina), ili pirimidinske familije (antagonisti pirimidina). Primeri familije folne kiseline uključuju metotreksat, pemetreksed i srodna jedinjenja; primeri purinske familije uključuju tioguanin, fludarabin, kladribin, 6-merkaptopurin i srodna jedinjenja; primeri pirimidinske familije uključuju citarabin, gemcitabin, 5-fluorouracil (5FU) i srodna jedinjenja.

[0181] Neki drugi specifični primeri antimetabolita uključuju aminopterin, metotreksat, pemetreksed, raltitreksed, pentostatin, kladribin, klofarabin, fludarabin, tioguanin, merkaptopurin, fluorouracil, kapecitabin, tegafur, karmofur, floksuridin, citarabin, gemcitabin, azacitidin i hidroksiureu.

[0182] Primeri alkilacionih sredstava uključuju azotne iperite, triazene, alkil sulfonate, prokarbazin i aziridine. Primeri azotnih iperita uključuju ciklofosfamid, melfalan, hlorambucil

12

i srodna jedinjenja; primeri nitrozourea uključuju karmustin; primeri triazena uključuju dakarbazin i temozolomid; primeri alkil sulfonata uključuju busulfan.

[0183] Drugi specifični primeri alkilirajućih sredastava uključuju mehloretamin, ciklofosfamid, ifosfamid, trofosfamid, hlorambucil, melfalan, Prednimustine, bendamustin, uramustin, estramustin, karmustin, lomustin, semustin, fotemustin, nimustin, ranimustin, streptozocin, busulfan, manosulfan, treosulfan, karbokvon, TioTEPA, triazikvon, trietilenmelamin, prokarbazin, dakarbazin, temozolomid, altretamin, mitobronitol, aktinomicin, bleomicin, mitomicin i plikamicin.

[0184] Primeri antibiotika uključuju mitomicin, hidroksiureu; antracikline, antracenedione, antibiotike familije Streptomyces. Primeri antraciklina uključuju doksorubicin, daunorubicin, epirubicin i druge derivate; primeri antracenediona uključuju mitoksantron i srodna jedinjenja; primeri antibiotika familije Streptomyces uključuju bleomicin, mitomicin C i aktinomicin.

[0185] U određenim primerima izvođenja, pomenuto sredstvo na bazi platine je cisplatin ili oksaliplatin; pomenuti inhibitor Topo I je kamptotecin; pomenuti inhibitor Topo II je etopozid; i pomenuti antibiotik je mitomicin. U drugim primerima izvođenja, pomenuto sredstvo na bazi platine je odabrano od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, nedaplatina, ili satraplatina; pomenuti inhibitor Topo I je odabran od kamptotecina, topotekana, irinotekana/SN38, rubitekana; pomenuti inhibitor Topo II je odabran od etopozida; pomenuti antimetabolit je odabran od članova familije folne kiseline, purinske familije, ili pirimidinske familije; pomenuto alkilirajuće sredstvo je odabrano od azotnih iperita, nitrozourea, triazena, alkil sulfonata, prokarbazina, ili aziridina; i pomenuti antibiotik je odabran od hidroksiuree, antraciklina, antracenediona, ili antibiotika familije Streptomyces.

[0186] U nekim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je jonizujuće zračenje. U drugim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je cisplatin ili karboplatin. U drugim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je etoposid. U drugim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je temozolomid.

[0187] U određenim primerima izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo je izabrano od jednog ili više od sledećih: cisplatin, karboplatin, gemcitabin, etoposid, temozolomid ili jonizujuće zračenje.

[0188] Sledeći primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupcima za lečenje kancera pankreasa primenom navedenog jedinjenja u kombinaciji sa drugim poznatim tretmanom za kancer pankreasa. Jedan aspekt pronalaska obuhvata primenu jedinjenja koje je ovde opisano u kombinaciji sa gemcitabinom. U nekim primerima

12

izvođenja, kancer pankreasa sadrži jednu od sledećih ćelijskih linija: PSN-1, MiaPaCa-2 ili Panc-1. Prema sledećem aspektu, kancer sadrži jednu od sledećih primarnih tumorskih linija: Panc-M ili MRC5.

[0189] Sledeći aspekt pronalaska obuhvata primenu jedinjenja koje je ovde opisano u kombinaciji sa terapijom zračenjem. Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za poništavanje zračenjem indukovane G2/M kontrolne tačke putem primene navedenog jedinjenja u kombinaciji sa tretmanom zračenjem.

[0190] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za lečenje kancera pankreasa primenom na ćelije kancera penkareasa navedenog jedinjenja u kombinaciji sa jednom ili više terapija protiv kancera. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je kombinovano sa hemo-zračenjem, hemoterapijom, i/ili terapijom zračenjem. Kao što bi razumeo stručnjak iz date oblasti tehnike, hemo-zračenje označava režim lečenja koji obuhvata hemoterapiju (kao što je gemcitabin) i zračenje. U nekim primerima izvođenja, hemoterapija je gemcitabin.

[0191] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za povećanje osetljivosti ćelija kancera pankreasa na terapiju kancera izabranu od gemcitabina ili terapije zračenjem primenom navedenog jedinjenja u kombinaciji sa terapijom kancera.

[0192] U nekim primerima izvođenja, terapija kancera je gemcitabin. U drugim primerima izvođenja, terapija kancera je terapija zračenjem. U sledećem primeru izvođenja terapija kancera je hemo-zračenje.

[0193] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za inhibiciju fosforilacije Chk1 (Ser 345) u ćeliji kancera pankreasa koji sadrži primenu navedenog jedinjenja posle tretmana sa gemcitabinom (100 nM) i/ili zračenja (6 Gy) na ćeliju kancera pankreasa.

[0194] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku radiosenzitizacije hipoksičnih PSN-1, MiaPaCa-2 ili PancM tumorskih ćelija primenom navedenog jedinjenja na tumorsku ćeliju u kombinaciji sa terapijom zračenjem.

[0195] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za senzitizaciju hipoksičnih PSN-1, MiaPaCa-2 ili PancM tumorskih ćelija primenom navedenog jedinjenja na tumorsku ćeliju u kombinaciji sa gemcitabinom.

[0196] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za senzitizaciju PSN-1 i MiaPaCa-2 tumorskih ćelija na hemo-zračenje primenom navedenog jedinjenja na tumorske ćelije u kombinaciji sa hemo-zračenjem.

1

[0197] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za prekid kontrolnih tačaka ćelijskog ciklusa indukovanog oštećenjem primenom navedenog jedinjenja u kombinaciji sa terapijom zračenjem na ćeliju kancera pankreasa.

[0198] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za inhibiciju popravke DNK oštećenja homologom rekombinacijom u ćeliji kancera pankreasa primenom navedenog jedinjenja u kombinaciji sa jednim ili više od sledećih tretmana: hemozračenje, hemoterapija i terapija zračenjem.

[0199] U nekim primerima izvođenja, hemoterapija je gemcitabin.

[0200] Sledeći aspekt obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za inhibiciju popravke oštećenja DNK putem homologe rekombinacije u ćeliji kancera pankreasa primenom navedenog jedinjenja u kombinaciji sa gemcitabinom i terapijom zračenjem.

[0201] U nekim primerima izvođenja, ćelije kancera pankreasa su poreklom od ćelijske linije pankreasa izabrane od PSN-1, MiaPaCa-2 ili Panc-1.

[0202] U drugim primerima izvođenja, ćelije kancera pankreasa su u pacijentu koji pati od kancera.

[0203] Sledeći aspekt pronalaska obezbeđuje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu u postupku za lečenje nesitnoćelijskog kancera pluća koji sadrži primenu na pacijenta navedenog jedinjenja u kombinaciji sa jednim ili više od sledećih dodatnih terapeutskih sredstava: cisplatin ili karboplatin, etoposid i jonizujuće zračenje. Neki primeri izvođenja sadrže primenu na pacijenta jedinjenja koje je ovde opisano u kombinaciji sa cisplatinom ili karboplatinom, etoposidom i jonizujućim zračenjem. U nekim primerima izvođenja kombinacija je cisplatin, etoposid i jonizujuće zračenje. U drugim primerima izvođenja kombinacija je karboplatin, etoposid i jonizujuće zračenje.

[0204] Još jedan primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za podsticanje ćelijske smrti kancerskih ćelija; koji obuhvata primenu na pacijenta ovde pomenutog jedinjenja, ili kompozicije koja sadrži pomenuto jedinjenje.

[0205] Još jedan primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju za upotrebu u postupku za sprečavanje ćelijske popravke oštećenja DNK u kancerskim ćelijama koji sadrži primenu na pacijenta pomenutog jedinjenja, ili kompozicije koja sadrži pomenuto jedinjenje. Još jedan primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju koja je ovde opisana za upotrebu u postupku za sprečavanje ćelijske reparacije izazvane oštećenjem DNK u kancerskim ćelijama koji sadrži primenu na pacijenta pomenutog jedinjenja formule I ili kompozicije koja sadrži pomenuto jedinjenje.

1 1

[0206] Sledeći primer izvođenja obezbeđuje jedinjenje ili kompoziciju koji su ovde opisani za upotrebu u postupku za senzibilizaciju ćelija na sredstva koja oštećuju DNK koji sadrži primenu na pacijenta pomenutog jedinjenja, ili kompozicije koja sadrži pomenuto jedinjenje.

[0207] U nekim primerima izvođenja, postupak se koristi na kancerskoj ćeliji koja ima defekte u ATM signalnoj kaskadi. U nekim primerima izvođenja, pomenuti defekt je izmenjena ekspresija ili aktivnost jednog ili više od sledećeg: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP ili SMC1. U drugom primeru izvođenja, ćelija je kancerska ćelija koja eksprimira onkogene koji oštećuju DNK. U nekim primerima izvođenja, pomenuti defekt je promenjena ekspresija ili aktivnost jednog ili više od sledećih: ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 ili H2AX. Prema sledećem primeru izvođenja, postupak je korišćen na kanceru, ćeliji kancera ili ćeliji koja eksprimira onkogene koji oštećuju DNK.

[0208] U drugom primeru izvođenja, ćelija je ćelija kancera koja eksprimira onkogene koji oštećuju DNK. U nekim primerima izvođenja, navedena ćelija kancera ima promenjenu ekspresiju ili aktivnost jednog ili više od sledećih: K-Ras, N-Ras, H-Ras, Raf, Myc, Mos, E2F, Cdc25A, CDC4, CDK2, ciklin E, ciklin A i Rb.

[0209] Prema sledećem primeru izvođenja, postupak je korišćen na kancer, ćeliju kancera ili ćeliju koja ima defekt u proteinu uključenom u popravci isecanja baza ("protein za popravku isecanja baza"). U stanju tehnike postoje mnogi postupci za određivanje da li tumor ima defekt u popravci isecanja baza. Na primer, sekvenciranje genomske DNK ili iRNK proizvoda svakog gena za popravku isecanja baze (npr., UNG, PARP1 ili LIG1) može biti izvedeno na uzorku tumora da bi se ustanovilo da li su prisutne mutacije za koje se očekuje da moduliraju funkciju ili ekspresiju genskog proizvoda (Wang et al., Cancer Research 52:4824 (1992)). Pored mutacione inaktivacije, tumorske ćelije mogu da moduliraju gen za popravku DNK hipermetilacijom njegovog promotor regiona, što dovodi do smanjene ekspresije gena. Ovo je najčešće procenjeno upotrebom lančane reakcije polimeraze specifične za metilaciju (PCR) da bi se kvantitativno odredili nivoi metilacije na promotorima gena za popravku isecanja baza od interesa. Analiza metilacije genskog promotora gena za popravku isecanja baza je komercijalno dostupna (http://www.sabiosciences.com/dna_metilation_product/HTML/MEAH-421A.html).

[0210] Konačno, ekspresioni nivoi gena za popravku isecanja baza mogu biti procenjeni direktnim kvantitativnim određivanjem nivoa iRNK i proteinskih proizvoda svakog gena upotrebom standardnih tehnika kao što je kvantitativna reverzna lančana reakcija polimeraze

1 2

vezana za transkript (RT-PCR) i imunhohistohemija (IHC), respektivno (Shinmura et al., Carcinogenesis 25: 2311 (2004); Shinmura et al., Journal of Pathology 225:414 (2011)).

[0211] U nekim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baza je UNG, SMUG1, MBD4, TDG, OGG1, MYH, NTH1, MPG, NEIL1, NEIL2, NEIL3 (DNK glikozilaze); APE1, APEX2 (AP endonukleaze); LIG1, LIG3 (DNK ligaze I i III); XRCC1 (LIG3 pomoćni); PNK, PNKP (polinukleotid kinaza i fosfataza); PARP1, PARP2 (Poli(ADP-Riboza) polimeraze); PolB, PolG (polimeraze); FEN1 (endonukleaza) ili aprataksin.

[0212] U nekim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baza je PARP1, PARP2, ili PolB. U drugim primerima izvođenja, protein za popravku isecanja baza je PARP1 ili PARP2.

[0213] Postupci koji su opisani u prethodnom tekstu (genska sekvenca, metilacija promotora i ekspresija iRNK) takođe mogu biti korišćeni za karakterizaciju statusa (npr., ekspresije ili mutacije) drugih gena ili proteina od interesa, kao što su onkogeni koji oštećuju DNK eksprimirani od strane tumora ili defekti u kaskadi ATM prenosa signala ćelije.

[0214] Sledeći primer izvođenja daje jedinjenje koje je ovde opisano za upotrebu kao radiosenzitizator ili hemosensitizator.

[0215] Drugi primer izvođenja daje jedinjenje formule I za upotrebu kao pojedinačno sredstvo (monoterapija) za lečenje kancera. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja formule I su za upotrebu u lečenju pacijenata koji imaju kancer sa defektom odgovora na oštećenje DNK (DDR). U drugim primerima izvođenja, navedeni defekt je mutacija ili gubitak ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 ili H2AX.

Jedinjenja i kompozicije za upotrebu

[0216] Jedan primer izvođenja daje jedinjenje ili kompoziciju kao što je ovde opisano za upotrebu kao radio-senzitizator ili hemo-senzitizator. Sledeći primer izvođenja daje jedinjenje ili kompoziciju kao što je ovde opisana za upotrebu kao pojedinačno sredstvo (monoterapija) za upotrebu u lečenju kancera.

[0217] Sledeći primer izvođenja daje jedinjenje ili kompoziciju kao što je ovde opisana za upotrebu u lečenju pacijenata koji imaju kancer sa defektom odgovora na oštećenje DNK (DDR). U nekim primerima izvođenja, navedeni defekt je mutacija ili gubitak ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 ili H2AX. U drugim primerima izvođenja, navedeni defekt je mutacija ili gubitak ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP ili SMC1.

1

[0218] Sledeći primer izvođenja daje jedinjenja ili kompozicije opisane ovde za upotrebu u lečenju kancera. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje ili kompozicija je dalje spojeno sa dodatnim terapeutskim sredstvom koje je ovde opisano. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje ili kompozicija je dalje spojeno sa agensom koji oštećuje DNK koji je ovde opisan.

[0219] U nekim primerima izvođenja, kancer ima defekt u putu koji je ovde opisan.

Proizvodnja lekova

[0220] Jedan primer izvođenja daje upotrebu jedinjenja ili kompozicije koje je ovde opisano za proizvodnju leka za upotrebu kao radio-senzitizator ili hemo-senzitizator. Sledeći primer izvođenja daje upotrebu jedinjenja ili kompozicije koja je ovde opisana za proizvodnju leka za upotrebu kao pojedinačno sredstvo (monoterapija) za lečenje kancera.

[0221] Sledeći primer izvođenja daje upotrebu jedinjenja ili kompozicije koja je ovde opisana za proizvodnju leka za lečenje pacijenata koji imaju kancer sa defektom odgovora na oštećenje DNK (DDR).

[0222] U nekim primerima izvođenja, navedeni defekt je mutacija ili gubitak ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1 ili H2AX. U drugim primerima izvođenja, navedeni defekt je mutacija ili gubitak ATM, p53, CHK2, MRE11, RAD50, NBS1, 53BP1, MDC1, H2AX, MCPH1/BRIT1, CTIP ili SMC1.

[0223] Sledeći primer izvođenja daje upotrebu jedinjenja ili kompozicije koji su ovde opisani za proizvodnju leka za lečenje kancera. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje ili kompozicija se kombinuje sa dodatnim terapeutskim sredstvom, kao što je agens koji oštećuje DNK, koji je ovde opisan. U drugom primeru izvođenja, kancer ima defekt u putu koji je ovde opisan.

EKSPERIMENTALNI MATERIJALI I POSTUPCI

[0224] Svi komercijalno dostupni rastvarači i reagensi su korišćeni kao što su primljeni. Mikrotalasne reakcije su izvedene upotrebom CEM Discovery mikrotalasnog reaktora. „Flash“ hromatografija, npr., je izvedena na ISCO© CombiflashR Companion™ sistemu eluiranjem sa gradijentom od 0 do 100% EtOAc/petrol etra. Drugi postupci poznati u stanju tehnike su takođe korišćeni za izvođenje „flash“ hromatografije. Uzorci su primenjeni prethodno apsorbovani na siliki. Tamo gde je navedeno, superkritična fluidna hromatografija (SFC) je izvedena na Berger Minigram SFC mašini. Svi<1>H NMR spektri su zabeleženi

1 4

upotrebom Bruker Avance III 500 instrumenta na 500 MHz. MS uzorci su analizirani na Waters SQD masenom spektrometru sa elektrosprej jonizacijom koja funkcioniše u pozitivnom i negativnom josnkom režimu. Uzorci su uvedeni u maseni spektrometar upotrebom hromatografije. Svi finalni proizvodi su imali čistoću ≥95%, osim ukoliko je naznačeno drugačije u eksperimentalnim detaljima. HPLC čistoća je merena na Waters Acquity UPLC sistemu sa Waters SQD MS instrumentom opremljenim sa Waters UPLC BEH C8 1.7 mm, 2.1 x 50 mm kolonom i Vanguard BEH C8 1.7 µm, 2.1 x 5 mm guard kolonom.

[0225] Kao što je ovde korišćen, termin "Rt(min)" označava HPLC vreme zadržavanja, u minutima, povezano sa jedinjenjem. Osim ukoliko je drugačije naznačeno, HPLC postupak korišćen za dobijanje objavljenog vremena zadržavanja je kao što opisano u daljem tekstu:

HPLC postupak A

[0226]

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS;

Kolona: Waters UPLC BEH C81.7 µm, 2.1 x 50 mm sa Vanguard BEH C81.7 µm, 2.1 x 5 mm guard kolona;

Kolona temperature: 45°C;

Pokretna faza A: 10mM amonijum format u vodi:acetonitril 95:5, pH 9;

Pokretna faza B: acetonitril;

Detekcija: 210-400 nm

Gradijent: početni: 2% B, 0-1.15 min: 2% B do 98% B, 1.15-1.35 min: zadržavanje na 98% B, 1.35-1.40 min: 98% B do 2% B, 1.40-1.50 min: zadržavanje na 2% B;

Stopa protoka: 1.0 mL/minuti;

HPLC postupak B

[0227]

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS;

Kolona: Waters UPLC BEH C81.7 µm, 2.1 x 50 mm with Vanguard BEH C81.7 µm, 2.1 x 5 mm guard kolona;

Kolona temperature: 45°C;

Pokretna faza A: 10mM amonijum format u vodi:acetonitril 95:5, pH 9;

Pokretna faza B: acetonitril;

Detection: 210-400 nm;

1

Gradijent: 0-0.40 min: 2% B, 0.40-4.85 min: 2% B do 98% B, 4.85-4.90 min: 98% B do 2% B, 4.90-5.00 min: zadržavanje na 2% B;

Stopa protoka: 0.6 mL/minuti.

PRIMERI I ŠEME

[0228] Jedinjenja pronalaska mogu biti pripremljena u svetlu specifikacije korišćenjem koraka generalno poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike. Ta jedinjenja mogu biti analizirana pomoću poznatih postupaka, uključujući, ali bez ograničenja na LCMS (tečnu hromatografiju masenu spektrometriju) i NMR (nuklearnu magnetnu rezonancu). Sledeće generičke šeme i primeri ilustruju kako pripremiti jedinjenja predmetnog otkrića. Primeri su samo za svrhu ilustracije i ne bi ih trebalo tumačiti kao ograničavajuće za obim pronalaska ni na koji način.

[0229] Biće jasno da kada postoji neusaglašenost između hemijske strukture i odgovarajućeg naziva koje je ovde obezbeđeno, hemijska struktura će imati prednost.

[0230] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti sintetisana prema postupcima sličnim onome prikazanom u Šemi 1.

[0231] Anjon komercijalno dostupnog alil cijanoacetata 1 može da reaguje sa trihloroacetonitrilom da bi se dobio intermdijer 2. U koraku kondenzacije anjona, anjon

1

komercijalno dostupnog alil cijanoacetata 1 može biti generisan sa bazom kao što je kalijum acetat u odgovarajućem rastvaraču kao što je alkohol (npr., izopropilalkohol). Anjon zatim reaguje sa trihloroacetonitrilom na sobnoj temperaturi (specifični detalji su dati u Pripremi 1, Korak 1 u daljem tekstu).

[0232] Intermedijer 2 zatim reaguje sa hidrazinom da bi se formirao diaminopirazol 3. U koraku formiranja pirazola, intermedijer 2 je reagovao sa hidrazinom (ili njegovim hidratom) u aprotičnom rastvaraču, kao što je DMF, da bi se dobio diaminopirazol 3. Reakcija se javlja pod baznim uslovima (npr., u prisustvu kalijum acetata ili AcONa) uz zagrevanje (npr., 110°C) da bi se obezbedila potpuna ciklizacija (specifični detalji su dati u Pripremi 1, Korak 2 u daljem tekstu).

[0233] Imtermedijer 3 može dalje biti kondenzovan sa dielektrofilnim kuplujućim partnerom da bi se formirao pirimidin 4a-c. U koraku formiranja pirimidina, intermedijer 3 je reagovao sa 1,3-dielektrofilnom vrstom (npr., 1,3-dialdehidom ili 3-(dialkilamino)-prop-2-enalom) u različitim tipovima rastvarača (npr., DMF ili DMSO/vodi) da bi se dobila biciklična jezgra 4ac. Kada su jedan ili dva od elektrofilnih centara zaštićeni/maskirani (npr., aldehid maskiran kao ketal), uvođenje sulfonske kiseline (npr., PTSA) je potrebno za oslobađanje reaktivne funkcionalne grupe (specifični detalji su dati u Pripremi 4, Korak 1 u daljem tekstu).

[0234] Deprotekcija, npr, preko hidrolize, alil estra dovodi do karboksilnih kiselina 5a-c. U koraku deprotekcije, jedinjenje 4a-c je podvrgnuto hidrolitičkim uslovima koji su poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike. Na primer, tretman 4a-c sa fenilsilanom ili 4-metilbenzensulfinatom u prisustvu katalitičke količine paladijuma (npr., Pd(PPh3)4) dovodi do formiranja odgovarajuće karboksilne kiseline 5a-c. Alternativno, jedinjenja 4a-c bi se mogla tretirati vodenim rastvorom alkalije (npr., NaOH, KOH) da bi se proizvele kiseline 5a-c (specifični detalji su dati u Pripremi 4, Korak 2 below).

[0235] U koraku formiranja aktiviranog estra, karboksilne kiseline 5a-c su reagovale sa amidnim kuplujućim agensima poznatim stručnjacima iz date oblasti tehnike. Kada je kuplujuće sredstvo odgovarajuće izabrano, reakcije mogu biti brzo izvedene (~1 čas) na sobnoj temperaturi u prisustvu organske baze (npr., trietilamin, DIPEA) da bi se obezbedili aktivirani estri 6a-c. Na primer, kada su korišćena amidna kuplujuća sredstva TBTU [J=H] ili TCTU [J=Cl], jedinjenja 6a-c su lako dobijena filtracijom reakcione smeše (specifični detalji su dati u Pripremi 4, Korak 3 u daljem tekstu).

[0236] Formiranje aktiviranih estara 6a-c pre formiranja amidne veze za pripremu I-A je generalno poželjno, iako je takođe moguća direktna konverzija 5a-c u jedinjenja formule I-A ovog pronalaska. Alternativni aktivirani estri takođe mogu biti korišćeni (izolovani ili

1

formirani in situ) i biće poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike (npr., upotrebom TBTU, TCTU, HATU, T3P, COMU kuplujućih sredstava).

[0237] U koraku formiranja amidne veze, aktivirani estri 6a-c mogu da reaguju sa supstituisanim 3-aminopiridinom da bi se dobila jedinjenja formule I-A ovog pronalaska. Reakcioni uslovi za amidno kuplovanje su generalno u aprotičnom rastvaraču (npr., NMP, piridin, DMF, itd.) uz zagrevanje (npr., ≥ 90°C) (specifični detalji su dati u Primeru 1 u daljem tekstu).3-Aminopiridin može biti dalje funkcionalizoan posle formiranja amidne veze.

[0238] Alternativno, dva koraka opisana u prethodnom tekstu mogu biti kombinovana: karboksilne kiseline 5a-c mogu biti korišćene kao početne tačke za formiranje amidne veze, pri čemu su aktivirani estri generisani in situ, upotrebom istih amidnih kuplujućih sredstava kao što su ona opisana u prethodnom tekstu. Jedinjenja I-A ovog pronalaska su izolovana na sličan način onima koja su opisana u prethodnom tekstu (specifični detalji su dati u Primeru 3a u daljem tekstu).

[0239] Jedinjenja formule I, I-A-1 i I-B takođe mogu biti pripremljena upotrebom sličnih postupaka.

[0240] Alternativno, jedinjenja predmetnog otkrića mogu biti pripremljena prema postupcima sličnim onome prikazanim u Šemi 2.

[0241] Amid 8 može biti lako pripremljen od komercijalno dostupne cijanosirćetne kiseline 7.

U koraku formiranja amidne veze, cijanosirćetna kiselina 7 može da reaguje sa supstituisanim 3-aminopiridinom da bi se dobila jedinjenja 8 ovog pronalaska. Reakcioni uslovi za amidno kuplovanje su generalno u aprotičnom rastvaraču (npr., DCM, NMP, DMF, itd.), u prisustvu organske baze, kao što je alifatični amin, (npr., trietilamin ili DIPEA) i amidno kuplujuće sredstvo poznato stručnjacima iz date oblasti tehnike: na primer EDCI, TBTU, COMU, T3P, itd. (specifični detalji su dati u Primeru 3e, Korak 1 u daljem tekstu).

1

[0242] U koraku formiranja pirazola, anjon cijanoamida 8 može biti generisan sa bazom (kao što je kalijum ili natrijum acetat) u odgovarajućem rastvaraču kao što je alkohol (npr., etanol). Anjon zatim reaguje sa trihloroacetonitrilom na sobnoj temperaturi (specifični detalji su dati u Primeru 3e, Korak 2 u daljem tekstu). Dobijena čvrsta supstanca, koja može biti sakupljena filtracijom, je zatim reagovala sa hidrazinom (ili njegovim hidratom) u aprotičnom rastvaraču, kao što je DMF ili NMP, da bi se dobio diaminopirazol 9, pri čemu je poslednji navedeni dalje kondenzovan sa dielektrofilnim kuplujućim partnerom da bi se formirao pirimidinski deo jedinjenja formule I-A ovog pronalaska.

[0243] U koraku formiranja pirimidina, intermedijer 9 je reagovao sa 1,3-dielektrofilnom vrstom (npr., 1,3-dialdehidom ili 3-(dialkilamino)-prop-2-enalom) u različitim tipovima rastvarača (npr., iPrOH/voda, DMF ili DMSO/voda) da bi se obezbedili željeni proizvodi I-A.

Kada su jedan ili dva od elektrofilnih centara zaštićeni/maskirani (npr., aldehid maskiran kao ketal), uvođenje sulfonske kiseline (npr., PTSA) je potrebno za oslobađanje reaktivne funkcionalne grupe. (specifični detalji su dati u Primeru 3e, Korak 3 u daljem tekstu).

[0244] Jedinjenja formule I, I-A-1 i I-B takođe mogu biti pripremljena upotrebom sličnih postupaka.

Priprema 1: Alil 3,5-diamino-1H-pirazol-4-karboksilat

[0245]

Korak 1: alil 3-amino-4,4,4-trihloro-2-cijanobut-2-enoat 2

[0246] U rastvor KOAc (589.4 g, 6.006 mol) u izopropanolu (3 L) dodat je alil cijanoacetat (429.4 g, 403.2 mL, 3.432 mol) i reakciona smeša je hlađena do 5°C. Trihloroacetonitril (495.5 g, 3.432 mol) je dodavan u 50 mL porcijama, održavajući temperaturu ispod 15°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do 20°C i mešana je u trajanju od 3 časa. Voda (~4 L) je dodata da bi se rastvorili neorganski materijali i istaložio željeni proizvod. Smeša je mešana u trajanju od 20 minuta i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom pod vakuumom. Ova čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom (2 x 0.5 L) i sušena u vakuumskoj peći

1

preko noći na 40°C da bi se dobio alil 3-amino-4,4,4-trihloro-2-cijanobut-2-enoat 2 kao prljavo beli prah (787 g, 85%).

Korak 2: Alil 3,5-diamino-1H-pirazol-4-karboksilat 3

[0247] U suspenziju alil 3-amino-4,4,4-trihloro-2-cijano-but-2-enoata 2 (619 g, 2.297 mol) i KOAc (676.3 g, 6.891 mol) u DMF (2.476 L) na 0°C lagano je dodavan hidrazin hidrat (172.5 g, 167.6 mL, 3.446 mol) tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim mešana na temperaturi sredine u trajanju od 2 časa, na kom stadijumu<1>H NMR pokazuje potpunu potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je zatim zagrevana preko noći na 110°C pre omogućavanja da se hladi do temperature sredine i mešana još 48 časova. Smeša je filtrirana kroz levak od sinterovanog stakla da bi se uklonila istaložena čvrsta supstanca i filtrat je ispravana pod sniženim pritiskom da bi se dobila gusta tečnost. Dodat je DCM (približno 2 L) i smeša je ponovo filtrirana da bi se uklonile dodatne čvrste supstance koje su istaložene. Filtrat je prečišćen kroz čep od silika gela od 1 kg (gradijent od DCM/MeOH kao eluent), i rastvarač je uklonjen da bi se dobila narandžasta čvrsta supstanca koja je suspendovana u acetonitrilui i zagrevana na oko 70°C sve dok sva čvrsta supstanca nije otišla u rastvor, kada je omogućeno da se rastvor hladi do temperature sredine, zatim do 2°C. Talog koji je formiran je izolovan filtracijom pod vakuumom, ispran ohlađenim MeCN (50~mL) i sušen do konstantne mase u vakuumskoj peći da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (171.2 g, 41 %).

Priprema 2a: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat

[0248]

Korak 1: alil 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4a

[0249] U suspenziju alil 3,5-diamino-1H-pirazol-4-karboksilata 3 (42.72 g, 234.5 mmol) u DMSO (270.8 mL) / vodi (270.8 mL), dodat je p-TsOH hidrat (46.72 g, 245.6 mmol) i 3-(diizopropilamino)-2-fluoro-prop-2-enal (opisan u Tetrahedron Letters, 33(3), 357-60; 1992)

14

(38.69 g, 223.3 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 100°C u trajanju od 3 časa tokom kog vremena je čvrsta supstanca lagano istaložena iz rastvora. Narandžasta suspenzija je ostavljena da se hladi do sobne temperature preko noći. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i sušena pod vakuumom da bi se dobio alil 2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4a kao čvrsta supstanca boje peska (45.05 g, 85% prinos).

Korak 2: 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5a

[0250] U suspenziju alil 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 4a (45 g, 190.5 mmol) u DCM (1.35 L) dodat je fenilsilan (41.23 g, 46.96 mL, 381.0 mmol), a zatim Pd(PPh3)4(8.805 g, 7.620 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa i 30 min. Reakciona smeša je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa DCM da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca (43.2g). Ova čvrsta supstanca je triturisana dalje u DCM (225 mL) na sobnoj temperaturi u trajanju od 45 min, zatim je filtrirana i sušena preko noći pod vakuumom da bi se dobila 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5a kao svetlo žuta čvrsta supstanca (37.77g, 100% prinos).

[0251] U alternativnom postupku, 4-metilbenzensulfinat (anhidrovani, 1.2 ekv., 22.6g, 127mmol) je suspendovan u suvom DMSO (20 zapr., 500ml). Mešana smeša je zagrevana do 30°C pod atmosferom azota. Posle završetka rastvaranja dodat je Pd(PPh3)4(2 mol%, 2.4g, 2.1 mmol). Smeša je mešana u trajanju od 10 min na 25-30°C nakon kog vremena je bio prisutan mutan žuti rastvor. Alil 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat (25g, 105.8mmol) je dodat u porcijama, održavajući temperaturu na 25-30°C. Pošto je dodavanje završeno mutan rastvor je mešan sve dok reakcija nije završena što je potvrđeno pomoću HPLC (2-3 časa). Težak talog je formiran posle 15 minuta posle dodavanja supstrata. Smeša postaje gušća kako reakcija traje. Reakciona smeša je razblažena vodom (125 ml) i lagano je dodata 2M HCl (66 ml), održavajući temperaturu na 25-30°C. Suspenzija je mešana u trajanju od 30 minuta, zatim filtrirana. Filtracija je bila spora (2 časa). Dobijena čvrsta supstanca je isprana vodom, zatim sušena na sinteru. Čvrsta supstanca je suspendovana u DCM (8 zapr.) u trajanju od 1 časa. Čvrsta supstanca je filtrirana (brza filtracija) i isprana sa DCM. Čvrsta supstanca je resuspendovana u hloroformu (8 zapr.) u trajanju od 1 časa. Kiselina je filtrirana i sušena na sinteru. Dalje je sušena u vakuumskoj peći na 50°C u trajanju od 24 časa. Proizvod je dobijen kao prljavo bela čvrsta supstanca (18.6g, 85%);<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.14 (1H, brs), 9.31 (1H, dd), 8.69 (1H, m), 6.47 (2H, brS); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ - 153.65; MS (ES+) 197.1.

Korak 3: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 6a

[0252] U suspenziju 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilne kiseline 5a (20 g, 102.0 mmol) u hloroformu (300 mL) dodat je Et3N (11.35 g, 15.63 mL, 112.2 mmol). Suspenzija je mešana u trajanju od ~ 5 min. I zatim je dodat (benzotriazol-1-iloksidimetilamino-metilen)-dimetil-amonijum bor tetrafluorid (32.75 g, 102.0 mmol). Suspenzija je zagrevana do 60°C u trajanju od 1 časa pre nego što je gusta suspenzija ostavljena da se hladi do sobne temperature. Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana hloroformom (200 mL) i sušena pod vakuumom preko noći da bi se dobilo jedinjenje 6a iz naslova kao svetlo žuti prah (32.5g, 88%).

Priprema 2b: (6-hlorobenzotriazol-1-il)-2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 6a*

[0253]

[0254] U posudu od 2.5 L sa tri grlića opremljenoj sa šipkom za mešanje, kondenzatorom, linijom za azot i Hanna temperaturnom sondom sipana je 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5a (60 g, 305.9 mmol), hloroform (900.0 mL) i trietilamin (32.44 g, 44.68 mL, 320.6 mmol). U porcijama je dodavan [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetilamonijum (jon bor tetrafluorida (1)) (87.00 g, 244.7 mmol) tokom 5 min. (unutrašnja je pala do 22.7 do 21.5°C posle završenog dodavanja). Smeša je zagrevana na 60°C (unutrašnja temp.) u trajanju od 2 časa, koja je još uvek krem suspenzija. Smeša je hlađena do sobne temperature, zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, dobro isprana hloroformom (sve dok filtrat nije uglavnom bezbojan) i sušena usisavanjem da bi ostao proizvod 6a* kao krem čvrsta supstanca (82.2g, 77% prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (dd, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.22 (dd, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H) i 6.87 (s, 2H). MS (ES+) 348.1.

[0255] U alternativnom postupku, 2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5a (30g, 153 mmol) je suspendovana u acetonitrilu (540ml). Dodat je trietilamin (22.5ml, 153mmol), a zatim [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetilamonijum tetrafluoroborat (TCTU, 54.4g, 153mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Proizvod je izolovan filtracijom – filter kolač je ispran acetonitrilom (2x60ml) (49.3g, 93%); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (dd, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.22 (dd, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H) i 6.87 (s, 2H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ -150.1; MS (ES+) 348.1.

Priprema 3: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat

[0256]

Korak 1: 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4b

[0257] U suspenziju alil 3,5-diamino-1H-pirazol-4-karboksilata 3 (1 g, 5.489 mmol) u DMF (5 mL) dodat je (Z)-2-hloro-3-dimetilamino-prop-2-eniliden]-dimetil-amonijum heksafluorofosfat (1.683 g, 5.489 mmol), a zatim trietilamin (722.1 mg, 994.6 µL, 7.136 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 60°C u trajanju od 4 časa, tokom kog vremena je čvrsta supstanca lagano istaložena iz rastvora. Braon suspenzija je ostavljena da se hladi do sobne temperature. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i sušena pod vakuumom da bi se dobio alil 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4b kao braon čvrsta supstanca (1.092 g, 72% prinos).

Korak 2: 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5b

[0258] U suspenziju alil 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 4b (1 g, 3.96 mmol) u DCM (15 mL) dodat je fenilsilan (856.6 mg, 0.9756 mL, 7.916 mmol), a zatim Pd(PPh3)4(182.9 mg, 0.1583 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 7 časa. Reakciona smeša je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa DCM da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca (43.2g). Ova čvrsta supstanca je triturisana dalje u DCM (225 mL) na sobnoj temperaturi u trajanju od 45 min, zatim filtrirana i sušena preko noći pod vakuumom da bi se dobila 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5b kao žuta čvrsta supstanca (791m, 94% prinos).

Korak 3: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 6b

14

[0259] U rastvor 2-amino-6-hloro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilne kiseline 5b (1.51 g, 7.103 mmol) u hloroformu (15.1 mL) dodat je TBTU bor tetrafluorid (2.737 g, 8.524 mmol) i TEA (862.5 mg, 1.188 mL, 8.524 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50°C u trajanju od jednog časa. Rezultujuća suspenzija je filtrirana, i čvrsta supstanca je triturisana u etil acetatu da bi se dobilo jedinjenje 6b iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (2.05 g, 88%).

Priprema 4: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat

[0260]

Korak 1: alil 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4c

[0261] U suspenziju alil 3,5-diamino-1H-pirazol-4-karboksilata 3 (63.49 g, 348.5 mmol) u smeši DMSO (340 mL) i vode (340 mL), dodat je 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksi-butan nitril (Šema 3, u daljem tekstu) (85 g, 418.2 mmol), a zatim hidrat para-toluen sulfonske kiseline (1) (11.27 g, 59.24 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 85°C i mešana preko noći. Reakciona smeša je hlađena sa ledenim kupatilom. Smeša je razblažena sa EtOAc (680 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(1.36 L). Talog je filtriran i ispran vodom, zatim smešom vode i EtOAc. Braon čvrsta supstanca je sušena pod vakuumom da bi se dobio alil 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 4c kao braon čvrsta supstanca (55.94 g, 62% prinos).

Korak 2: 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5c [0262] U suspenziju alil 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 4c (10.2 g, 39.65 mmol) u DCM (350 mL) dodat je fenilsilan (8.581g, 9.773 mL, 79.3 mmol), a zatim Pd(PPh3)4(1.5 g, 1.298 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa DCM i sušena pod vakuumom da bi se dobila 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina 5c kao žuta čvrsta supstanca (8.61g, 100% prinos).

Korak 3: 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 6c

[0263] U rastvor 2-amino-6-(cijanometil)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilne kiseline 5c (5.11 g, 23.53 mmol) u DCM (51 mL) dodat je TBTU bor tetrafluorid (9.067 g, 28.24 mmol) i TEA (2.858 g, 3.937 mL, 28.24 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od jednog časa. Rezultujuća suspenzija je filtrirana, i čvrsta supstanca je triturisana u vrelom hloroformu da bi se dobilo jedinjenje 6c iz naslova kao bež čvrsta supstanca (6.59 g, 84%).

Primer 1: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-1 – referentno jedinjenje)

[0264]

[0265] U suspenziju benzotriazol-1-il 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 6a (pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi 2a) (5 g, 15.62 mmol) u NMP (78.27 mL) dodat je 4-[4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il]piridin-3-amin (pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-1, opisanoj u daljem tekstu) (3.660 g, 15.62 mmol) i dobijena smeša je zagrevana na 100°C u trajanju od 18 časova. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i zatim propuštena kroz prethodno ovlaženi SCX kertridž (2 x 50 g kertridž) i kertridž je ispran metanolom. Proizvod je eluiran sa 2M amonijakom u metanolu i eluent je koncentrovan in vacuo da bi ostala tamna čvrsta supstanca koja je prečišćena hromatografijom na koloni silike upotrebom ISCO „companion“ kolona, eluiranjem sa DCM i 90:10:1 DCM:MeOH:NH3(0-100% gradijent, 40 g kolona). Frakcije proizvoda su spojene i koncentrovane in vacuo da bi ostao proizvod kao žuta čvrsta supstanca koja je zatim rekristalizovana iz metanola da bi ostao čisti proizvod kao žuta čvrsta supstanca. MS (ES+) 413.2.

Primer 2: 2-amino-N-(4-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-2 – referentno jedinjenje)

[0266]

14

[0267] U rastvor terc-butil N-[1-[3-[[2-amino-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil]amino]-4-piridil]-4-piperidil]karbamaat pripremljenog prema postupku sličnom onome opisanom u Primeru 1 (70 mg, 0.1424 mmol) u DCM (4 mL) dodata je TFA (1 mL, 12.98 mmol) i smeša je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 1.5 časa. Reakciona smeša je isparavana do sušenja i prečišćena pomoću HPLC: 10-90% ACN u vodi (TFA modifikator) i frakcije su sušene zamrzavanjem. Čvrsti ostatak je rastvoren u metanolu (1 mL) i sipan na prethodno ovlaženi (15 mL metanol) 2 g SCX-2 kertridž. Kertridž je ispran metanolom (2x15 mL) zatim je proizvod eluiran kao slobodna baza upotrebom 2M amonijaka u metanolskom rastvoru (3x15 mL). Frakcije koje sadrže proizvod su isparavane do sušenja, ponovo rastvorene u vodi/metanolu i sušene zamrzavanjem da bi se dobio željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (17 mg, 31 %). MS (ES+) 391.1.

Primer 3a: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-3 - referentno jedinjenje)

[0268]

[0269] Smeša 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina (pripremljenog prema postupcima sličnog onome opisanom u Pripremi N-1, koja je opisana u daljem tekstu) (588.1 mg, 3.059 mmol), 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilne kiseline 5a (pripremljena prema postupcima sličnih onima prikazanim u sekvenci Korak 1 - Korak 2 Pripreme 2a) (500 mg, 2.549 mmol), TBTU (1.146 g, 3.569 mmol) i Et3N (515.9 mg, 710.6 µL, 5.098 mmol) u NMP (7 mL) mešana je na 110°C u hermetički zatvorenoj epruveti, u trajanju od 20 časova. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, isprana zasićenim vodenim rastvorom bikarbonata i fiziološkim rastvorom. Organska materija je sušena preko MgSO4i

14

koncentrovana posle filtracije. Čvrsta supstanca je triturisana u DCM i zatim otfiltrirana. Dalje je prečišćena pomoću Fractionlynx HPLC da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca. MS (ES+) 371.3.

[0270] Alternativno, jedinjenje I-N-3 može biti pripremljeno prema Šemi 2 upotrebom postupka opisanog u Primeru 3b.

Primer 3b: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-3 - referentno jedinjenje)

Korak 1: 2-cijano-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)acetamid 8

[0271] U ledeno hladan rastvor 2-cijanosirćetne kiseline 7 (1.15 g, 13.52 mmol) u DCM (40 mL) ukapavanjem je dodat oksalil hlorid (1.3 mL, 14.90 mmol), a zatim katalitička količina DMF. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa i zatim koncentrovana in vacuo da bi se uklonio rastvarač. Ostatak je dodat u rastvor 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina (pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-1, opisanoj u daljem tekstu) (1.3 g, 6.762 mmol) i Et3N (1.026 g, 1.413 mL, 10.14 mmol) u THF (40 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 18 časova. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana zasićenim vodenim rastvorom bikarbonata i fiziološkim rastvorom. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa DCM (20mL x 2). Spojeni organski slojevi su sušeni preko Na2SO4i koncentrovani da bi se dobio 2-cijano-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)acetamid 8 kao žuto ulje. MS (ES+) 260.1.

Korak 2: 3,5-diamino-N-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-piridil]-1H-pirazol-4-karboksamid 9 [0272] U suspenziju 2-cijano-N-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-piridil]acetamida 8 (1.6 g, 6.170 mmol) u etanolu (40 mL) dodat je natrijum acetat (1.052 g, 12.83 mmol), a zatim trihloroacetonitril (1.042 g, 733.8 µL, 7.219 mmol) ukapavanjem. Heterogena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota u trajanju od 18 časova. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, i ostatak je rastvoren u NMP (30 mL). Dodat je hidrazin hidrat (803 mg, 780.4 µL, 16.04 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom i ostatak je triturisan u DCM da bi se formirala braon čvrsta supstanca koja je izolovana filtracijom da bi se dobio 3,5-diamino-N-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-piridil]-1H-pirazol-4-karboksamid 9 (1g, 51%). MS (ES+) 317.1.

Korak 3: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0273] Smeša (Z)-3-(diizopropilamino)-2-fluoro-prop-2-enala (Tetrahedron Letters (1992), 33(3), 357-60) (22.81 mg, 0.1317 mmol), 4-metilbenzensulfonske kiseline (Water (1)) (30.05

14

mg, 0.1580 mmol), 3,5-diamino-N-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-piridil]-1H-pirazol-4-karboksamida (50 mg, 0.1580 mmol) u DMSO (1 mL) / H2O (0.5 mL) je mešana na 140°C u trajanju od 25 min. Sirova smeša je prečišćena pomoću Fractionlynx HPLC. Vodene frakcije su spojene i liofilizovane da bi se proizveo 2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. (10mg, 21 %).

Primer 3c: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-4 - referentno jedinjenje)

[0274]

[0275] Suspenzija benzotriazol-1-il 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilata 6a (6.271 g, 20.02 mmol), [1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanon hidrobromid 17a (6.98 g, 16.68 mmol) i DIPEA (2.802 g, 3.776 mL, 21.68 mmol) u piridinu (63 mL) postavljeni su hermetički zatvorenu epruvetu i zagrevani na 100°C na 24 časa. Smeša je hlađena do sobne temperature i zatim koncentrovana in vacuo. Dobijena čvrsta supstanca je sipana na siliku i prečišćena pomoću hromatografije (330g SiO2, 0.5-7.5% MeOH (koja sadrži 10% amonijum hidroksid)/DCM). Ostatak je mešan u etanolu u trajanju od 5 min. Formirana čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom etanola, sušena usisavanjem u trajanju od 2 časa, dajući željeni proizvod bledo žutu čvrstu supstancu (4.71 g, 56.5%). MS (ES+) 500.2;<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.63 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.47 (dd, J = 4.8, 2.5 Hz, 1H), 9.25 (dd, J = 2.6, 0.7 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.79 (s, 2H), 3.60 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.55 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.03 (m, 2H), 2.95 (tt, J = 11.7, 3.6 Hz, 1H), 2.34 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.29 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.13 (qd, J = 12.4, 3.9 Hz, 2H), 1.75 - 1.72 (m, 2H).

Primer 3d: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-4 - referentno jedinjenje)

14

U postupku alternativnom onome objavljenom u Primeru 3c, jedinjenje I-G-4 može biti pripremljeno kao što sledi:

[0277] Posuda od 2 L opremljena visećom mešalicom, vazdušnim kondenzatorom, termometrom i linijom za azot napunjena je sa 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilnom kiselinom 5a (14.19 g, 72.36 mmol), zatim piridinom (353 mL), a zatim [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetil-amonijum trifluoroboratom (22.14 g, 65.78 mmol), uz mešanje na temperaturi sredine. Suspenzija je zagrevana na 50°C tokom perioda od 1 časa. Dodat je DIPEA (17.85 g, 24.06 mL, 138.1 mmol), a zatim [1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid 17b (pripremljen prema Pripremi N-14) (23.54 g, 65.78 mmol). Unutrašnja temperatura je povišena do 90°C i reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi u trajanju od 13 časova. Smeša je zatim ostavljena da se lagano hladi i rastvarač je isparavan in vacuo. Ostatak je suspendovan u DCM (250 ml) i narandžasta čvrsta supstanca je podeljena između DCM (1 L) i 2M natrijum karbonata (200 mL). Organski sloj je odvojen, ispran sa 2M natrijum karbonatom (200 mL), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi ostala narandžasta čvrsta supstanca. Ovaj čvrsti ostatak je dalje suspendovan u EtOH (115 mL) u trajanju od 10 min., zatim je sakupljen filtracijom, ispran dodatno etanolom (približno 100 mL), sušen usisavanjem da bi se dobio proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca, 18.75g, 57%).

Primer 3e: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-4 - referentno jedinjenje)

[0278]

14

[0279] U postupku alternativnom onima objavljenim u Primeru 3c i 3d, jedinjenje I-G-4 može biti pripremljeno kao što sledi:

Korak 1: 2-cijano-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)acetamid 8a

[0280] U rastvor [1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorida 17b (300 mg, 0.8383 mmol) i DIPEA (541.8 mg, 730.2 µL, 4.192 mmol) u DCM (8 mL) dodata je cijanosirćetna kiselina 7 (106.9 mg, 1.257 mmol). Reakciona smeša je hlađena na ledenom kupatilu i dodat je EDCI (241.0 mg, 1.257 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim zagrevana pod refuksom u trajanju od 4 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i razblažena sa DCM (30 mL), isprana vodom (2 x 10 ml), zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (10 mL). Organski sloj je sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobio željeni proizvod 8a kao narandžasta pena (292mg, 90%). MS (ES+) 389.2.

Korak 2: 3,5-diamino-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-1H-pirazol-4-karboksamid 9a

[0281] 2-Cijano-N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]acetamid 8a (290 mg, 0.7466 mmol) je suspendovan u etanolu (3.3 mL). Dodat je natrijum acetat (127.4 mg, 1.553 mmol), a zatim trihloroacetonitril (129.4 mg, 91.13 µL,

1

0.8959 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa, nakon kog vremena je formiran prljavo beli talog. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom etanola i zatim minimalnom količinom vode i sušena usisavanjem da bi se dobila bela čvrsta supstanca (155 mg). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se uklonio etanol, zatim je rezidualni vodeni rastvor ekstrahovan sa EtOAc (3x). Spojeni organski slojevi su sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani do sušenja in vacuo da bi ostalo viskozno ulje koje je triturisano u EtOAc (5 mL) da bi se formirao prljavo beli talog koji je sakupljen filtracijom, ispran minimalnom količinom EtOAc i sušen usisavanjem da bi ostao drugi prinos čvrste supstance (49 mg). Izolovano je ukupno 204 mg (51%) 3-amino-4,4,4-trihloro-2-cijano-N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]but-2-enamida; MS (ES+) 532.0.

[0282] 3-Amino-4,4,4-trihloro-2-cijano-N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]but-2-enamid (4.1g, 7.695 mmol) je rastvoren u N-metilpirolidinonu (40 mL). Dodat je hidrazin hidrat (1.002g, 973.8 µL, 20.01 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 min., zatim zagrevana na 80°C u trajanju od 3.5 časa. Smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je zatim podeljen između EtOAc/vode. Organski sloj je ispran vodom (2x), fiziološkim rastvorom (1x), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo željeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. (64%). MS (ES+) 446.1, 1H NMR (500 MHz, DMSO) 11.03 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.52 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 7.36 (br s, 4H),4.47 - 4.43 (m, 1H), 4.23 - 4.21 (m, 1H), 3.50 - 3.47 (m, 2H), 3.41 - 3.39 (m,2H), 3.24 - 3.15 (m, 2H) 3.05 - 2.98 (m, 2H), 2.93 - 2.88 (m, 2H), 2.77 - 2.76 (m, 4H), 1.73 - 1.71 (m, 4H).

Korak 3: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid I-G-4

[0283] U suspenziju 3,5-diamino-N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]-1H-pirazol-4-karboksamida 9a (106 mg, 1.19 mmol) u IPA/vodi (1:1, 1 mL) i sirćetnoj kiselini (71.46 mg, 67.67 µL, 0.1078 mmol) dodat je 3-(diizopropilamino)-2-fluoroprop-2-enal (41.21 mg, 0.2379 mmol). Reakciona smeša je zagrevana pod refluksom u trajanju od 6 časova i zatim je ostavljena da se hladi do sobne temperature preko noći. IPA je uklonjen in vacuo, i dobijeni vodeni rastvor je podeljen između DCM i 2M rastvora natrijum karbonata. Organski sloj je ispran sa 1:1 fiziološkim rastvorom/vodom, sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi ostala žuta čvrsta supstanca koja je mešana kao suspenzija u etanolu (0.5 mL) u trajanju od 2 časa. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobilo željeno jedinjenje I-G-4 (63mg, 53%).

1 1

[0284] Primer 3f: 2-amino-6-fluoro-N-[5-fluoro-4-[4-[4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil]-1-piperidil]-3-piridil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-32)

Korak 1: terc-butil 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilat 28

[0285] Smeša (6-hlorobenzotriazol-1-il) 2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilaat 6a* (44.02 g, 126.6 mmol) i terc-butil 1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-karboksilata 27 (pripremljen prema Pripremi N-15) (34 g, 115.1 mmol) u piridinu (510.0 mL) zagrevana je na 95°C interno preko noći (18 časova). Smeša je hlađena do sobne temperature (proizvod je istaložen), zatim je dodat etanol (340.0 mL) i mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 mins. Žuta čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, dobro isprana etanolom, sušena usisavanjem, zatim na liniji visokog vakuuma u trajanju od 1 časa

1 2

da bi ostao proizvod 28 kao žuta čvrsta supstanca, (32.5g 56% prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 9.51 (dd, 1H), 8.72 (dd, 1H), 8.25 (d, 1H), 6.81 (s, 2H), 3.15 - 2.93 (m, 4H), 2.55 - 2.47 (maskirani signal, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 4H), 1.47 (s, 9H). MS (ES+) 474.2.

Korak 2: trifluoroacetat 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilne kiseline 29

[0286] U suspenziju terc-butil 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilata 28 (69.7 g, 147.2 mmol) u DCM (348.5 mL) i trietilsilana (18.83 g, 25.87 mL, 161.9 mmol) dodata je TFA (151.1 g, 102.1 mL, 1.325 mol) (smeša taloži čvrstu supstancu posle početnog dodavanja TFA i zatim prelazi u rastvor pošto je dodavanje završeno). Rezultujući narandžasti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je nova količina TFA (16.78 g, 11.34 mL, 147.2 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Smeša je zatim zagrevana na 40°C u trajanju od 20 min. da bi se reakcija dovela do završetka. Smeša je koncentrovana in vacuo, dodat je hloroform (300 mL) i smeša je ponovo koncentrovana in vacuo da bi ostala narandžasta čvrsta suspenzija. Smeša je triturisana u DCM (približno 200 mL), mešana u trajanju od 20 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom DCM i sušena usisavanjem da bi ostala žuta čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan in vacuo, ostatak je resuspendovan u DCM (približno 50 mL), mešan u trajanju od 20 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom DCM i sušena usisavanjem da bi ostala žuta čvrsta supstanca koja je kombinovana sa prvim prinosom čvrste supstance. Čvrsta supstanca je sušena pod vakuumom preko noći da bi ostao željeni proizvod 29 kao žuta čvrsta supstanca (82.8g, 96%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.44 (s, 1H), 9.59 (s, 1H), 9.50 (dd, 1H), 8.84 (dd, 1H), 8.33 (d, 1H), 3.13 - 3.10 (m, 4H), 2.57 - 2.47 (maskirani signal, 1H) i 2.08 - 1.93 (m, 4H). MS (ES+) 418.1.

Korak 3: hidrohlorid 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilne kiseline 30

[0287] U rastvor 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilne kiseline (trifluorosirćetna kiselina) 29 (73 g, 124.7 mmol) u NMP (662.7 mL) dodat je hlorovodonik (4M u 1,4-dioksanu) (37.40 mL od 4 M, 149.6 mmol). Posle nekoliko sekundi formiran je žuti talog. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom NMP, zatim sa MTBE, i sušena usisavanjem da bi ostao čisti proizvod 30 kao svetlo žuta čvrsta supstanca, (59.7g, kvantitativan prinos). MS (ES+) 418.1.

1

Korak 4: 2-amino-6-fluoro-N-[5-fluoro-4-[4-[4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil]-1-piperidil]-3-piridil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-32)

[0288] U žutu suspenziju 1-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-5-fluoro-4-piridil]piperidin-4-karboksilne kiseline (hlorovodonična kiselina) 30 (59.7 g, 131.5 mmol) u NMP (477.6 mL) dodat je DIPEA (50.99 g, 68.72 mL, 394.5 mmol), zatim [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetilamonijum (jon bor tetrafluorida (1)) (51.44 g, 144.7 mmol). Žuta suspenzija se formira posle nekoliko minuta. Smeša je mešana u trajanju od 30 min. na sobnoj temperaturi, zatim je dodat 1-(oksetan-3-il)piperazin 25 (pripremljen prema Pripremi N-32, u daljem tekstu) (26.18 g, 184.1 mmol). Suspenzija krem/žuto-mrke boje prelazi u narandžasti rastvor (egzoterme od 23.9 do 29.4°C). Posuda je postavljena na ledeno/vodeno kupatilo sve dok interna temperatura nije bila na 24°C, zatim je ledeno kupatilo uklonjeno i interna temperatura je zatim stabilno bila na 24°C.

[0289] Rastvor je mešan u trajanju od 30 min. na sobnoj temperaturi, zatim je hlađena na ledenom/slanom/vodenom kupatilu do 10°C pre sporog dodavanja vode (1.015 L) u porcijama od 100 mL. Pre dodavanja sledećih 100mL vode, sačekana je egzoterma do između 17°C i 20°C (interna) zatim je ostavljena da se hladi do između 10 i 15°C. To je ponavljano sve dok nije dodata sva voda. Pošto je egzoterma prestala, ledeno/slano/vodeno kupatilo je uklonjeno i smeša je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 20 min. (formira se gusta žuta/krem suspenzija). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kroz sinterovani levak, dobro isprana vodom i zatim sušena usisavanjem u trajanju od 10 min. Vakuum je uklonjen i čvrsta supstanca je suspendovana u vodi na sinterovanom levku, zatim je vakuum ponovo primenjen i čvrsta supstanca je sušena usisavanjem preko noći i zatim sušena u vakuumskoj peći u trajanju od 24 časa na 40°C <10 mBar.

[0290] Čvrsta supstanca (54.5g) je suspendovana u etanolu (545 mL, 10 vol ekv.) i zagrevana pod refluksom u trajanju od 2 časa, zatim je hlađena do sobne temperature tokom 2 časa. Čvsrta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom etanola i sušena usisavanjem u trajanju od 1 časa da bi ostao proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je postavljena u vakuumsku peć na 23.5°C i <10mBar preko noći da bi ostao proizvod I-G-32 kao bledo žuta čvrsta supstanca, (51g, 64% prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.64 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.48 (dd, 1H), 9.26 (dd, 1H), 8.26 (d, 1H), 6.79 (s, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.47 (t, 2H), 4.34 (t, 0.7H), 3.61 (dt, 4H), 3.48 - 3.41 (m, 2.5H), 3.22 - 3.17 (m, 2H), 3.05 - 3.03 (m, 2H), 3.99 - 2.93 (m, 1H), 2.28 (dt, 4H), 2.17 - 2.10 (m, 2H), 1.74 (d, 2H), 1.07 (t, 2H). MS (ES+) 542.3.

1 4

Korak 1: terc-butil 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 28

[0291] 6-hloro-1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il 2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilat 6a* (45g, 129.4mmol) i terc-butil 1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 27 (40.1 g, 135.9mmol) su suspendovani u piridinu (675ml). Smeša je zagrevana na 95°C pod azotom sve dok reakcija nije završena (što je određeno pomoću HPLC analize). Smeša je hlađena i ukapavanjem je dodat etanol (450ml). Smeša je filtrirana i filter kolač je ispran etanolom (2x70ml). Vlažni kolač je sušen da bi se dobio proizvod 28 kao žuta kristalna čvrsta supstanca (47.7g, 78%);<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 9.51 (dd, 1H), 8.72 (dd, 1H), 8.25 (d, 1H), 6.81 (s, 2H), 3.15 - 2.93 (m, 4H), 2.55 - 2.47 (maskirani signal, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 4H), 1.47 (s, 9H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ - 153.5, -136.3; MS (ES+) 474.2.

Korak 2: hidrohlorid 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilne kiseline 30

[0292] Terc-butil 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 28 (36g, 76mmol) je suspendovan u rastvor HCl u 1,4-dioksanu (4M, 670ml). Voda (36ml) je dodata ukapavanjem u brzo mešanu suspenziju. Smeša je mešana pod azotom sve dok reakcija nije završena (što je određeno pomoću HPLC analize). Smeša je razblažena sa 1,4-dioksanom (180ml) i filtrirana. Filter kolač je ispran sa TBME (2x72ml). Vlažni kolač je sušen da bi se dobila bledo braon čvrsta supstanca (hidrohloridna so, 32.7g, 95%); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.34 (s, 1H), 9.53-9.49 (m, 2H), 8.82 (m, 1H), 8.50 (m, 1H), 3.13 - 3.22 (m, 4H), 2.57 - 2.47 (maskirani signal, 1H) i 2.08 - 1.93 (m, 4H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ - 152.9, -133.8; MS (ES+) 418.1. Korak 3: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (jedinjenje I-G-32)

1

[0293] U rastvor 1-(oksetan-3-il)piperazina (525mg, 3.69mmol) u THF (12ml) dodat je DIPEA (1.72ml, 9.91mmol), a zatim 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilna kiselina (hidrohloridna so, 1.5g, 3.3mmol). Dodat je [(6-hlorobenzotriazol-1-il)oksi-(dimetilamino)metilen]-dimetil-amonijum tetrafluoroborat (TCTU, 1.29g, 3.64mmol) i smeša je mešana pod azotom sve dok reakcija nije završena (što je određeno pomoću HPLC analize). Smeša je hlađena i ukapavanjem je dodata voda (24ml). Smeša je ostavljena da se zagreva do temperature sredine i mešana u trajanju od 3 časa, zatim je filtrirana. Filter kolač je ispran sa (3x3ml). Vlažni kolač je sušen pod vakuumom (sa dotokom azota) na 40°C. Proizvod je dobijen kao žuta čvrsta supstanca (1.54g, 86%); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.64 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.48 (dd, 1H), 9.26 (dd, 1H), 8.26 (d, 1H), 6.79 (s, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.47 (t, 2H), 4.34 (t, 0.7H), 3.61 (dt, 4H), 3.48 - 3.41 (m, 2.5H), 3.22 - 3.17 (m, 2H), 3.05 - 3.03 (m, 2H), 3.99 - 2.93 (m, 1H), 2.28 (dt, 4H), 2.17 - 2.10 (m, 2H), 1.74 (d, 2H), 1.07 (t, 2H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ -152.8, - 136.1; MS (ES+) 542.3.

Korak 1: 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksibutan nitril 11

[0294] 2-(dimetoksimetil)-3,3-dimetoksi-propan-1-ol 10 (Journal of the American Chemical Society (1973), 95(26), 8741) (92 g, 473.7 mmol) je rastvoren u suvom THF (920 mL) i smeša je hlađena sa ledenim kupatilom. Trietilamin (143.8g, 198.1 mL, 1.421 mol) je dodat odjednom, a zatim je ukapavanjem dodavan metan sulfonil hlorid (59.69g, 40.33mL, 521.1 mmol), tokom 1 časa i održavajući unutrašnju temperaturu ispod 5°C. Reakciona smeša je mešana 1 čas i zatim ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Smeša je razblažena etil acetatom (920mL) i vodom (920mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je izolovan, ispran zasićenim rastvorom NaHCO3, zatim fiziološkim rastvorom. Organske materije su sušene preko MgSO4, filtrirane i isparavane da bi se dobio [2-(dimetoksimetil)-3,3-dimetoksipropil]metansulfonat kao narandžasto ulje (125.31g, 97%) koje je korišćeno direktno bez dodatnog prečišćavanja.

1

[0295] Tetraetilamonijum cijanid (142.3g, 910.8mmol) je dodavan u porcijama tokom 10 minuta u rastvor [2-(dimetoksimetil)-3,3-dimetoksipropil]metansulfonata (124g, 455.4mmol) u MeCN (1.24L). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 72 časa, zatim je podeljena između etil acetata (1.24L) i vode (1.24L). Slojevi su odvojeni i organski sloj je izolovan, ispran fiziološkim rastvorom. Organske materije su sušene preko MgSO4, filtrirane i isparavane da bi se dobio 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksibutan nitril 11 kao tamno braon ulje (86.1g).

Korak 2: 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksi-2-metilbutan nitril 12a i 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksi-2,2-dimetilbutan nitril 13a

[0296] U rastvor 3-(dimetoksimetil)-4,4-dimetoksi-butan nitrila 11 (250 mg, 1.205 mmol) u THF (3 mL) na -75°C dodat je rastvor jodometana (513.1 mg, 225.0 µL, 3.615 mmol) u THF (1 ml). THF rastvor (bis(trimetilsilil)amino)natrijuma (1.808 mL od 2M, 3.615 mmol) je zatim dodavan, održavajući temperaturu ispod -60°C. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana na -75°C u trajanju od 2 časa i zatim je lagano ugašena vodenim zasićenim rastvorom NH4Cl (5ml). Smeša je razblažena vodom i etrom i slojevi su odvojeni. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (Na2SO4) i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo žuto ulje koje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa gradijentom petrol etra:EtOAc od 100:0 do 80:20. Rastvarači su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo bistro ulje (194mg). NMR je dokazala da je to ulje smeša 80% mono metil jedinjenja 12a sa 20% bis metil jedinjenja 13a. Ova smeša je korišćena direktno u sledećim koracima.

Korak 3: 3-(dimetoksimetil)-2-etil-4,4-dimetoksibutan nitril 12b i 3-(dimetoksimetil)-2-dietil-4,4-dimetoksibutan nitril 13b

[0297] Kada je etil jodid korišćen umesto metil jodida u postupku sličnom Šemi 3, Korak 2, iz prethodnog teksta, smeša monosupstituisanog jedinjenja 12b i disupstituisanog jedinjenja 13b je izolovana i korišćena direktno u kasnijim koracima.

Priprema N-1: 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin 15

[0298]

1

Korak 1: 1-metil-4-(3-nitro-4-piridil)piperazin 14

[0299] 4-hloro-3-nitro-piridin (2g, 12.61 mmol) u dioksanu (15 mL) je tretiran sa 1-metilpiperazinom (1.515 g, 1.678 mL, 15.13 mmol) i DIPEA (2.445 g, 3.295 mL, 18.92 mmol). Smeša je mešana na 80°C u trajanju od 1 časa, hlađena do sobne temperature. Smeša je podeljena između EtOAc i vodenog zasićenog rastvora NaHCO3(40ml). Kombinovani organski ekstrakt je sušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo narandžasto ulje koje je prečišćeno hromatografijom na siliki eluiranjem sa 5-10%MeOH/EtOAc/0.5-1%NH4OH da bi se dobio 1-metil-4-(3-nitro-4-piridil)piperazin 14 kao tamno žuto ulje koje kristališe tokom stajanja. (2.56 g, 11.52 mmol, 91.36%). MS (ES+) 223.4.

Korak 2: 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin 15

[0300] 1-metil-4-(3-nitro-4-piridil)piperazin 14 (2.56g, 11.52 mmol) u metanolu (200 mL) je tretiran paladijumom na uglju (10% tež.% Degussa) (300 mg) i hidrogenizovan pod pritiskom balona na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 časa. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin 15 kao bezbojno ulje (2.124 g, 11.05 mmol, 95.89%). MS (ES+) 193.1.

[0301] Sledeći 3-aminopiridin intermedijeri su pripremljeni upotrebom Pripreme N-1:

4-morfolinopiridin-3-amin;

4-(pirolidin-1-il)piridin-3-amin:

1

4-(piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(azepan-1-il)piridin-3-amin:

(1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

4-(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-amin:

4-(3-aminopiridin-4-il)tiomorfolin 1-oksid:

1

metil 1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat:

4-(4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-amin:

1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-ol:

8-(3-aminopiridin-4-il)-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-3-ol:

1-(3-aminopiridin-4-il)-4-metilpiperidin-4-ol:

1

2-(1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)propan-2-ol:

terc-butil ((1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)metil)karbamat:

terc-butil (1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)karbamat:

(3R,4R)-1-(3-aminopiridin-4-il)-4-(dimetilamino)piperidin-3-ol:

4-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)piridin-3-amin:

1 1

4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)piridin-3-amin:

(S)-4-(heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-amin:

(R)-4-(heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-amin:

1-(3-aminopiridin-4-il)-4-((dimetilamino)metil)piperidin-4-ol:

4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

1 2

(4-(3-aminopiridin-4-il)-1-metilpiperazin-2-il)metanol:

4-(4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-((dimetilamino)metil)-4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-(terc-butil)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

1 -(4-izopropilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

-(5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-7(8H)-il)piridin-3-amin:

-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

-(5,6-dihidroimidazo[1,5-a]pirazin-7(8H)-il)piridin-3-amin:

-(3-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

1 4 -(4-((dimetilamino)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(3-(trifluorometil)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-amino-4-metilpiperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-ciklopropilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-ciklobutilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

1

4-(4-(2-metoksietil)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

terc-butil (1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)karbamat:

terc-butil 4-(3-aminopiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat:

terc-butil ((4-(3-aminopiridin-4-il)morfolin-2-il)metil)karbamat:

1

4-(4-(3-metiloksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

(R)-4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-amin:

(S)-4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-amin:

8-(3-aminopiridin-4-il)heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-4(3H)-on:

1

4-(4-(morfolinosulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-metil-1-oksa-4,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-amin:

terc-butil 8-(3-aminopiridin-4-il)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-karboksilat:

1

4-(2-ciklopropil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

4-(3-aminopiridin-4-il)-1-metilpiperazin-2-on:

4-(3-aminopiridin-4-il)tiomorfolin 1,1-dioksid:

(R)-2-(3-aminopiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

4-(3,5-dimetil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-amin:

1

-(2-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

-(2,2-dimetilpirolidin-1-il)piridin-3-amin:

-(3-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(3-aminopiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-4(1H)-on:

-(2-oksa-7-azaspiro[3.5]nonan-7-il)piridin-3-amin:

1

-(3-aminopiridin-4-il)heksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

-(3-aminopiridin-4-il)tetrahidro-1H-oksazolo[3,4-a]pirazin-3(5H)-on:

-(3-aminopiridin-4-il)-1-metil-1,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-on:

-(3-aminopiridin-4-il)-2-metil-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-3-on:

1 1

-(3-aminopiridin-4-il)-N,N-dimetilmorfolin-2-karboksamid:

-(3-aminopiridin-4-il)-2-metiloktahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-1-on:

-(3-aminopiridin-4-il)-2-metil-2,9-diazaspiro[5.5]undekan-3-on:

-(1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)pirolidin-2-on:

1 2

8-(3-aminopiridin-4-il)-3-metil-1-oksa-3,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-on:

(3aS,7aS)-5’-(3-aminopiridin-4-il)-2-metilheksahidro-1H-pirolo[3,4-c]piridin-3(2H)-on:

4-(4-((metilsulfonil)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(3-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin:

1

-(5-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin:

-(3-aminopiridin-4-il)-N,N-dimetilpiperidin-3-karboksamid:

-(4,5-dimetil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

-(4-(1,3,4-oksadiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-amin:

1 4

4-(4-((dimetilamino)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-(4-(4-metil-1,2,5-oksadiazol-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

(S)-2-(3-aminopiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

1

-(4-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

-(2-oksa-6-azaspiro[3.5]nonan-6-il)piridin-3-amin:

-(4-(1,2,4-oksadiazol-3-il)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(3-aminopiridin-4-il)-2,2-dimetiltiomorfolin 1,1-dioksid:

1 4-(4-(metoksimetil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

Različite pripreme aminopiridina

Priprema N-2: 1-(3-aminopiridin-4-il)-N,N-dimetilpiperidin-4-karboksamid

[0302]

Korak 1: 1-(3-amino-4-piridil)piperidin-4-karboksilna kiselina

[0303] Bočica za mikrotalasni reaktor je napunjena sa metil 1-(3-amino-4-piridil)piperidin-4-karboksilatom (pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-1) (176 mg, 0.7106 mmol), MeOH (3 mL) i H2O (0.1 mL). Dodat je LiOH (51.06 mg, 2.132 mmol) i smeša je mešana preko noći na 50°C. Reakcija je ugašena dodavanjem vodenog rastvora HCl sve dok se ne dostigne pH= 3-4. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se proizvela 1-(3-amino-4-piridil)piperidin-4-karboksilna kiselina koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 222.1.

Korak 2: 1-(3-aminopiridin-4-il)-N,N-dimetilpiperidin-4-karboksamid

[0304] Bočica za mikrotalasni reaktor je napunjena sa 1-(3-amino-4-piridil)piperidin-4-karboksilnom kiselinom (125 mg, 0.197mmol), TBTU (200 mg, 0.62mmol) i N-metilmetanaminom (3.5mL, 2M u MeOH). Epruveta je hermetički zatvorena i smeša je mešana u trajanju od 3 časa na 120°C. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u MeOH i sipan u SCX kolonu prethodno ispranu sa, ispran sa MeOH i proizvod je oslobođen sa metanolskim

1

amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se proizveo 1-(3-aminopiridin-4-il)-N,N-dimetilpiperidin-4-karboksamid. MS (ES+) 249.2.

Priprema N-3: 4-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-amina

[0305]

Korak 1: terc-butil (1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)(metil)karbamat

[0306] U rastvor terc-butil N-[1-(3-nitro-4-piridil)-4-piperidil]karbamata (2100 mg, 6.514 mmol) (pripremljen prema postupcima sličnim onima prikazanim u Koraku 1 Pripreme N-1) i jodometana (4.623 g, 2.028 mL, 32.57 mmol) u DMF na 0°C u porcijama je dodat natrijum hidrid (312.7 mg, 7.817 mmol). Reakcija je mešana na 0°C u trajanju od 1 časa, i na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Reakcija je ugašena sipanjem reakcione smeše na zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida, zatim ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 50 mL). Spojene organske materije su isprane fiziološkim rastvorom (2 x 50 mL), sušene i isparavane da bi ostala narandžasta čvrsta supstanca. U sirovu čvrstu supstancu rastvorenu u MeOH (50 mL) dodat je Pd/C (10%) (346mg) i smeša je mešana pod atmosferom vodonika u trajanju od 4 časa. Reakcija je filtrirana kroz celit i isparavana da bi ostao terc-butil (1-(3-aminopiridin-4-il)piperidin-4-il)(metil)karbamat kao žuto ulje. (600mg, 20%) MS (ES+ -tBu) 251.1.

Korak 2: 4-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-amin

[0307] Rastvor LiAlH4(49.57 mg, 1.306 mmol) dodat je ukapavanjem u rastvor terc-butil N-[1-(3-amino-4-piridil)-4-piperidil]-N-metil-karbamata (100 mg, 0.3264 mmol) u THF na sobnoj temp. Reakcija je mešana na 50°C u trajanju od 3 časa, zatim na sobnoj temperaturi, Reakciona smeša je ugašena ukapavanjem vlažnog THF. Reakciona smeša je podeljena između 1N NaOH (50 mL) i dietil etra (50 mL). Kombinovane organske materije su sušene (MgSO4) i isparavane da bi ostao 4-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-amin kao žuto ulje. MS (ES+) 221.1.

Priprema N-4: 4-(3-(metoksimetil)-4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0308]

1

Korak 1: 2-(metoksimetil)-1-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)piperazin

[0309] U (1-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)piperazin-2-il)metanol (pripremljen prema postupcima sličnim onome prikazanom u Koraku 1 Pripreme N-1) (250 mg, 0.9910 mmol) u DMF (2 mL) na 0°C dodat je NaH (59.43 mg, 1.486 mmol). Reakciona smeša je mešana u trajanju od 10 min pre ukapavanja MeI (281.3 mg, 123.4 µL, 1.982 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana je 2 časa. Reakciona smeša je sipana na prethodno ispranu SCX kolonu, isprana sa MeOH i proizvod je oslobođen metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike, eluiranjem sa 1-15% MeOH:DCM proizvodeći 2-(metoksimetil)-1-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)piperazin (84 mg, 32%). MS (ES+) 237.1.

Korak 2: 4-(3-(metoksimetil)-4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0310] U rastvor 2-(metoksimetil)-1-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)piperazina (84mg, 0.31mmol) u metanolu dodat je Pd na C (10%, vlažan, Degussa) (10 mg) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod balonom azota. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se proizveo 4-(3-(metoksimetil)-4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao film. (72 mg, 96%). MS (ES+) 267.1.

Priprema N-5: 4-(2,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0311]

Korak 1: 2-metil-1-(3-nitro-4-piridil)piperazin

[0312] U rastvor terc-butil 3-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (pripremljen prema postupcima sličnim onome koji je prikazan u Koraku 1 Pripreme N-1) u DCM (5 mL) dodata je TFA (1.445 g, 976.4 µL, 12.67 mmol). Reakciona smeša je mešana u trajanju

1

od 48 časova na sobnoj temperaturi, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u MeOH i sipan u SCX kolonu prethodno ispranu sa MeOH, ispran sa MeOH i proizvod je oslobođen metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se proizveo 2-metil-1-(3-nitro-4-piridil)piperazin (334mg, 71%). MS (ES+) 223.1.

Korak 2: 2,4-dimetil-1-(3-nitropiridin-4-il)piperazin

[0313] U 2-metil-1-(3-nitro-4-piridil)piperazin u DMF (1.5 mL od 0.3 M, 0.4500 mmol) na 0°C dodat je NaH (18.00mg, 0.4500 mmol). Reakcija je mešana u trajanju od 10 min., zatim je dodat MeI (60.68 mg, 26.61 gel, 0.4275 mmol). Reakciona smeša je mešana u trajanju od 4 časa na sobnoj temperaturi i ugašena dodavanjem vode. Sirovi proizvod je sipan na SCX kolonu ispranu sa MeOH, ispran sa MeOH i proizvod je oslobođen metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa 1-15% MeOH:DCM da bi se proizveo 2,4-dimetil-1-(3-nitropiridin-4-il)piperazin. MS (ES+) 237.2.

Korak 3: 4-(2,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0314] Rastvor 2,4-dimetil-1-(3-nitro-4-piridil)piperazina (89 mg, 0.3767 mmol) u metanolu (4 mL) i Pd na C (10%, vlažan, Degussa) (20 mg) je hidrogenizovan preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika (balon). Katalizator je otfiltriran kroz kertridž celita, ispran metanolom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom proizvodeći 4-(2,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin (71 mg, 91%). MS (ES+) 207.2.

Priprema N-6: 4-(3,3,4-trimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0315]

[0316] U 4-(3,3-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin (pripremljen prema postupcima sličnim onome prikazanim u Pripremi N-1) (120 mg, 0.5817 mmol) u DMF (2 mL) na 0°C dodat je NaH (20.94 mg, 0.5235 mmol). Reakciona smeša je mešana u trajanju od 10 min. na 0°C, zatim je dodat MeI (276.3uL, 0.5526mmol, 2M u TBDME). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana 2 časa na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je sipan na SCX kolonu prethodno ispranu sa MeOH, ispran sa MeOH i proizvod je oslobođen

1

metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se proizveo 4-(3,3,4-trimetilpiperazin-1-il)piridin-3-amin (128mg, 73%). MS (ES+) 221.1.

Priprema N-7: 4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin

[0317]

Korak 1: 1-(3-nitropiridin-4-il)-4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin

[0318] Posuda sa okruglim dnom je napunjena sa 1-(3-nitro-4-piridil)piperazinom (pripremljen prema postupcima sličnim onome prikazanom u Koraku 1 Pripreme N-1), dihidrofuran-3(2H)-onom (98mg, 1.13 mmol) i sirćetnom kiselinom (129uL, 2.27 mmol) u MeCN (4mL). Dodatje Na(OAc)3BH (482.4mg, 2.27 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Reakciona smeša je podeljena između EtOAC i vodenog zasićenog rastvora Na2CO3. Organski ekstrakti su sušeni preko MgSO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1-(3-nitropiridin-4-il)-4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin kao žuta čvrsta supstanca. MS (ES+) 279.1.

Korak 2: 4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin

[0319] Rastvor 1-(3-nitropiridin-4-il)-4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazina (316mg, 1.13mmol) u MeOH (15 mL), Pd na C (10%, vlažan, Degussa) (120mg) je mešan preko noći na sobnoj temperaturi pod atmsoferom vodonika (balon). Smeša je filtrirana kroz čep od celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u MeOH i sipan u SCX kolonu ispranu sa MeOH, ispran sa MeOH i proizvod je oslobođen sa metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin kao čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. (300mg, purity 77%, prinos 82%). MS (ES+) 249.2.

[0320] Sledeći aminopiridin je pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-7:

4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

1 1

4-(4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

i

4-(1-metil-9-oksa-1,4-diazaspiro[5.5]undekan-4-il)piridin-3-amin:

Priprema N-8: 4-(1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin

[0321]

Korak 1: 3-nitro-4-(1H-pirazol-1-il)piridin

[0322] Suspenzija pirazola (150mg, 2.2mmol) i Cs2CO3(526mg, 1.6mmol) u anhidrovanom MeCN (3.5 mL) je mešana u trajanju od 20 min pod inertnom atmosferom. Zatim je dodat 4-hloro-3-nitro-piridin (233mg, 1.47mmol) i izvršeno je mešanje preko noći na 75°C. Nerastvorljivi proizvod je otfiltriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom

1 2

proizvodeći 3-nitro-4-(1H-pirazol-1-il)piridina koji je korišćen bez dodatnog prečišćavanja. (410mg, 98%). MS (ES+) 191.1.

Korak 2: 4-(1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin

[0323] U rastvor 3-nitro-4-(1H-pirazol-1-il)piridina (410mg, 2.15mmol) u MeOH (15mL) dodat je Pd na C (10%, vlažan, Degussa) (129mg) i reakciona smeša je snažno mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika (balon). Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom proizvodeći 4-(1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin. (285mg, 82%). MS (ES+) 161.1.

[0324] Sledeći aminopiridin je pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-8:

4-(4-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

4-(2-metil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

4-(1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

4-(2-metil-4-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-amin:

1

4-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-amin:

i

4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-amin:

Priprema N-9: 5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin

[0325]

Korak 1: 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperazin

[0326] U 100 mL hermetički zatvorenu reakcionu posudu/bombu, 3-hloro-5-fluoro-4-jodopiridin (5600 mg, 21.75 mmol) je apsorbovan u NMP (12 mL). U dobijeni bistar braon rastvor dodat je DIPEA (3.373 g, 4.546 mL, 26.10 mmol), a zatim piperazin (2.810 g, 32.62 mmol). Posuda je hermetički zatvorena i zagrevana termalno na 120°C u trajanju od 18 časova. Smeša je ostavljena da se hladi do sobne temperature i koncentrovana in vacuo da bi se dobila

1 4

braon guma koja je prečišćena hromatografijom na siliki, eluiranjem sa gradijentom od DCM-DCM:MeOH:NH3(90:10:1) 100-0 do 0:100. Frakcije koje sadrže čisti proizvod su sakupljene i koncentrovane in vacuo da bi se dobio 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperazin kao krem čvrsta supstanca. (3.52g, 75%). MS (ES+) 216.0.

Korak 2: 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-(oksetan-3-il)piperazin

[0327] U suspenziju 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperazina (900 mg, 4.173 mmol) u THF (9.000 mL) dodat je 3-oksetanon (601.4 mg, 8.346 mmol). U ovu smešu, pod N2, dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (2.034 g, 9.598 mmol) u porcijama tokom 5 min i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. MeOH (2ml) je dodat u posudu pre nego što je smeša koncentrovana in vacuo. Ostatak je podeljen između vode (50ml) i EtAOc (50ml). Vodena faza je bazifikovana do pH 7-8 sa NH4OH. Spojene organske materije su isprane fiziološkim rastvorom (30ml), sušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane in vacuo da bi se dobio 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-(oksetan-3-il)piperazin kao krem čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 272.1. Korak 3: 5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin

[0328] U epruvetu pod pritiskom koja sadrži 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-(oksetan-3-il)piperazin (800 mg, 2.944 mmol) dodat je dioksan (6 mL). U ovaj rastvor dodat je terc-butil karbamat (517.3 mg, 4.416 mmol), Cs2CO3(1.918 g, 5.888 mmol), xantphos (85.17 mg, 0.1472 mmol), a zatim Pd2(dba)3(134.8 mg, 0.1472 mmol). Epruveta je hermetički zatvorena termalno u trajanju od 60 časova na 115°C. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i filtrirana na čepu od celita. Kolač je ispran sa EtOAc i kombinovani filtrat je koncentrovan in vacuo do crnog ulja. Ostatak je apsorbovan u DCM (2ml) i dodata je TFA (3ml). Dobijeni tamno braon bistar rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa i zatim koncentrovan in vacuo. Ostatak je sipan na SCX-2 (10g) kertridž. Ispran sa MeOH (x3, CV) pre eluiranja željenog proizvoda sa 2M NH3u MeOH (x3 CV). Bazni eluent je koncentrovan in vacuo da bi se dobilo tamno braon ulje koje je prečišćeno hromatografijom na siliki eluiranjem sa DCM-DCM:MeOH:NH3(90:10:1) gradijentom od 100-0 do 30:70. Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i koncentrovane in vacuo da bi se dobio 5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin kao svetlo braon čvrsta supstanca. 295mg: MS (ES+) 253.2.

[0329] Sledeći aminopiridini su pripremljeni prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-9:

4-(5-(oksetan-3-il)-2,5-diazabiciklo[4.1.0]heptan-2-il)piridin-3-amin:

1

Priprema N-10: 5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina

[0330]

Korak 1: 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4-metilpiperazin

[0331] Rastvor 3-hloro-5-fluoro-4-jodo-piridina (2.18 g, 8.468 mmol), 1-metilpiperazina (1.272 g, 1.409 mL, 12.70 mmol) i DIPEA (2.189 g, 2.950 mL, 16.94 mmol) u MeCN (13.08 mL) zagrevan je na 130°C u mikrotalasnom reaktoru u trajanju od 300 min. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena hromatografijom na koloni silike eluiranjem sa 0-10% MeOH/ DCM. Frakcije proizvoda su spojene i koncentrovane in vacuo da bi ostao 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4-metilpiperazin kao žuto/braon ulje. (1.16g, 59%). MS (ES+) 230.0. Korak 2: 5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0332] Smeša terc-butil karbamata (709.9 mg, 6.060 mmol), Cs2CO3(3.291 g, 10.10 mmol), xantphos (146.1 mg, 0.2525 mmol), Pd2(dba)3(231.2 mg, 0.2525 mmol) i 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-metil-piperazina (1.16 g, 5.050 mmol) u dioksanu (11.60 mL) je zagrevana na 110°C u trajanju od 1 časa. Na sobnoj temperaturi, dodati su terc-butil karbamat (709.9 mg, 6.060 mmol), xantphos (146.1 mg, 0.2525 mmol) i Pd2(dba)3(231.2 mg, 0.2525 mmol) i smeša je dalje zagrevana na 120°C u mikrotalasnom reaktoru u trajanju od 1 časa. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz čep od celita i isprana metanolom i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike, upotrebom sistema ISCO companion kolone eluiranjem sa 0-10% MeOH/DCM. Frakcije proizvoda su spojene i koncentrovane in vacuo da bi se proizveo 5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao svetlo braon viskozno ulje oil. (642mg, 60%). MS (ES+) 211.1.

Priprema N-11: terc-butil 4-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat [0333]

1

Korak 1: terc-butil 4-(3-hloro-5-nitropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0334] Smeša 4-bromo-3-hloro-5-nitro-piridina (700 mg, 2.948 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (823.6 mg, 4.422 mmol) i DIPEA (762.0 mg, 1.027 mL, 5.896 mmol) u NMP (2.5 mL) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i vode. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko MgSO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 4-(3-hloro-5-nitropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja (1g, 99%). MS (ES+) 343.1.

Korak 2: terc-butil 4-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0335] U rastvor terc-butil 4-(3-hloro-5-nitropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (900 mg, 2.626 mmol) i ZnBr2(118.3 mg, 28.16 µL, 0.5252 mmol) u metanolu (27.00 mL) dodat je Pd na C (10%, vlažan, Degussa) (300 mg). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 4 časa pod atmosferom vodonika (balon). Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se proizveo terc-butil 4-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat koji je korišćen bez dodatnog prečišćavanja (820mg, 99%). MS (ES+) 313.2.

[0336] Sledeći aminopiridini su pripremljeni prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi N-11:

5-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin:

(1-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

1

(1-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)piperidin-4-il)(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)metanon:

5-hloro-4-(3-(metilsulfonil)pirolidin-1-il)piridin-3-amin:

5-hloro-4-(5-metilheksahidropirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)piridin-3-amin:

(R)-1-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)pirolidin-3-karbonitril:

1

1-(3-amino-5-hloropiridin-4-il)pirolidin-3-ol:

i

5-hloro-4-(pirolidin-1-il)piridin-3-amin:

Priprema N-12: 1-metil-4-(3-metil-5-nitropiridin-4-il)piperazin

[0337]

Korak 1: 1-metil-4-(3-metil-5-nitro-4-piridil)piperazin

[0338] U posudu ohlađenu u peći pod azotom dodat je 1-(3-bromo-5-nitro-4-piridil)-4-metilpiperazin (sintetisan od 3-bromo-4-hloro-5-nitropiridina prema postupcima sličnim onima prikazanim u Koraku 1 Pripreme N-1) (750 mg, 2.491 mmol), Pd2dba3(34.21 mg, 0.03736 mmol) i X-Phos (35.62 mg, 0.07473 mmol). Dodat je anhidrovani THF (37.50 mL), a zatim 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan trimetilaluman (638.6 mg, 2.491 mmol). Reakcija je zagrevana na refluksu u trajanju od 2 časa i zatim je hlađena do temperature sredine. Reakciona smeša je podeljena između vode i EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim

1

rastvorom, sušeni (MgSO4) i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike upotrebom „companion“ sistema ISCO kolone (24 g kolona, Etil acetat/ petrol etar (0-100% EtOAc)) da bi se proizveo 1-metil-4-(3-metil-5-nitro-4-piridil)piperazin kao žuto ulje. (290mg, 49%). MS (ES+) 237.1.

Korak 2: 5-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0339] Suspenzija Pd na C, (10%, vlažan, Degussa) (130.6 mg, 0.1227 mmol) sa 1-metil-4-(3-metil-5-nitro-4-piridil)piperazinom (290 mg, 1.227 mmol) u metanolu (5.800 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći pod atmosferom vodonika (balona). Reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita i isprana metanolom i etil acetatom i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostao 5-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao žuto ulje (243mg, 96%). MS (ES+) 207.1.

Priprema N-13: (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon (hidrobromid) 17a

Korak 1: (1-(2-bromo-5-fluoro-3-nitropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon 16

[0341] Posuda sa okruglim dnom je napunjena sa (4-metilpiperazin-1-il)-(4-piperidil)metanon dihidrohloridom (16.45 g, 57.89 mmol) i DIPEA (23.20 g, 31.27 mL, 179.5 mmol) u NMP (160 mL). Dodat je 2,4-dibromo-5-fluoro-3-nitropiridin (17.36 g, 57.89 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dodata je dodatna količina (4-metilpiperazin-1-il)-(4-piperidil)metanon dihidrohlorida (1.65g, 0.1ekv.) i DIPEA (1mL, 0.1ekv.) i izvedeno je mešanje na sobnoj temperaturi u trajanju od dodatna 3 časa. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana vodom (3x). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski ekstrakti su kombinovani, isprani fiziološkim rastvorom, sušeni (natrijum sulfat), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen

1

hromatografijom (330g SiO2, 0 do 5% MeOH (koji sadrži 10% amonijum hidroksid)/DCM) da bi se dobio proizvod kao žuta čvrsta supstanca (20.24 g, 81 %). MS (ES+) 432.0.

Korak 2: (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon hidrobromid 17a

[0342] [1-(2-Bromo-5-fluoro-3-nitro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanon 16 (20.24 g, 47.04 mmol) je rastvoren/suspendovan u MeOH (389 mL)/EtOAc (78 mL) i dodat je Pd(OH)2(1.651 g, 2.352 mmol). Dobijena smeša je degazirana pomoću vakuumskih/azotnih ciklusa (x5) i atmosfera je izmenjena sa vakuumskim/vodoničnim ciklusima (x5). Reakciona smeša je snažno mešana pod atmosferom vodonika (balon) u trajanju od 6 časova. Dodata je dodatna količina Pd(OH)2(4.95g) i reakciona smeša je mešana preko noći pod vodonikom. Smeša je filtrirana kroz celit, ispiranjem metanolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostala narandžasta guma. Dodato je približno 150 mL i smeša je rotirana na „buchii“ u trajanju od 10 min, tokom ovog vremena formiran je žuti talog. Suspenzija je ultrazvučno obrađivana u trajanju od 5 min. i čvrsta supstanca je zatim sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom etanola i sušena usisavanjem u trajanju od 1 časa da bi se dobio proizvod kao bledo žuta čvrsta supstanca. Drugi prinos proizvoda je dobijen koncentrovanjem filtrata in vacuo. Ostatak je zatim suspendovan u minimalnoj količini etanola i ultrazvučno obrađivan 5 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, sušena usisavanjem da bi ostao drugi prinos proizvoda kao žuta čvrsta supstanca. Oba prinosa proizvoda su kombinovana da bi se dobio proizvod kao žuta čvrsta supstanca (15.8 g, 79%). MS (ES+) 322.2.

Priprema N-14: (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon(hidrohlorida )17b

[0343]

Korak 1: 3-bromo-4-hloro-5-fluoropiridin hidrohlorid 18

1 1

[0344] U rastvor diizopropilamina (6.899 g, 9.555 mL, 68.18 mmol) u THF (75 mL) ohlađenom do -78°C, dodat je butil litijum (25 mL od 2.5 M u heskanima, 62.5 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do -20°C, zatim hlađena do -78°C. Ukapavanjem je dodat rastvor 3-bromo-5-fluoro-piridina (10 g, 56.82 mmol) u THF (25 mL) održavajući temperaturu ispod -70°C (priblčižno 30 min). Reakciona smeša je mešana na -78°C u trajanju od 30 min i zatim je ukapavanjem dodavan rastvor 1,1,1,2,2,2-heksahloroetana (14.8 g, 62.5 mmol) u THF (20 mL), održavajući temperaturu ispod -70°C (tokom približno 30 min). Smeša je mešana na -78°C u trajanju od 20 minuta, ostavljajući da se zagreje do sobne temperature, hlađena nazad do 0°C i ugašena vodom (100 mL). Zaim je dodat EtOAc (400 mL) i organski sloj je odvojen, ispran vodom (2x), fiziološkim rastvorom (1x), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi ostala braon čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je triturisana u pentanu (100mL) u trajanju od 10 minuta, zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio proizvod kao braon ulje koje je prešlo u kristalnu čvrstu supstancu usled stajanja, 11.85 g, 89%).1H NMR (DMSO-d6) δ 8.78 (s, 1H), 8.76 (s, 1H).

[0345] U rastvor 3-bromo-4-hloro-5-fluoro-piridina (7.56 g, 32.18 mmol) u pentanu (100 mL) dodat je hlorovodonik (2M u etru) (17.7 mL od 2 M, 35.4 mmol). Prljavo beli talog je odmah formiran. Smeša je mešana u trajanju od 5 minuta, zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana pentanom i osušena usisavanjem da bi se dobio željeni proizvod kao prljavo bela čvrsta supstanca (4.79 g, 60%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.77 (s, 1H), 8.75 (s, 1H). Korak 2: (1-(3-bromo-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon 19 [0346] Smeša (4-metilpiperazin-1-il)-(4-piperidil)metanon dihidrohlorida (50.65 g, 178.2 mmol), 3-bromo-4-hloro-5-fluoro-piridin hidrohlorida 18 (40 g, 162 mmol) i dikalijum karbonata (94.04 g, 680.4 mmol) u NMP (400 mL) je zagrevana na 150°C preko noći. Smeša je hlađena do sobne temperature, zatim filtrirana da bi se uklonile neorganske soli i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je rastvoren u EtOAc (800 mL), ispran fiziološkim rastvorom (100 mL x 4), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo braon viskozno ulje. Ovaj ostatak je prečišćen pomoću kolone silika gela (približno 800 g silike), proizvod je sipan na siliku u DCM, zatim eluiran sa 3% metanolom (koji sadrži 10% amonijum hidroksid)/DCM da bi se dobio željeni proizvod kao braon ulje koje je usled stajanja kristalizovalo (27.44 g, 44%). MS (ES+) 387.1.

Korak 3: (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid 17b

[0347] Pd2(dba3) (3.818 g, 4.169 mmol) i Xantphos (4.824 g, 8.337 mmol) su dodati u degaziranu (3 x vakuumski/N2ciklusi) smešu difenilmetanimina (16.62 g, 15.39 mL, 91.71

1 2

mmol), [1-(3-bromo-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanona 19 (32.12 g, 83.37 mmol), terc-butil karbamata (3.649 g, 31.15 mmol) i Cs2CO3(81.49 g, 250.1 mmol) u dioksanu (550 mL) u posudi sa okruglim dnom pod N2. Reakciona smeša je isprana azotom preko 2 x vakuumska/N2ciklusa i zatim mešana na 100°C preko noći pod N2. Smeša je hlađena do sobne temperature, zatim podeljena između EtOAc (1 L) i vode (100 mL). Organski sloj je odvojen, ispran vodom (2x 100 mL), fiziološkim rastvorom (1x 100 mL), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo tamno narandžasto viskozno ulje (56.15 g). Ovaj sirovi ostatak je zatim rastvoren u THF (482 mL) i hlorovodoniku (300 mL od 2 M, 600 mmol) i smeša je zagrevana na 60°C u trajanju od 30 minuta. THF je uklonjen in vacuo i preostali vodeni rastvor je ispran sa EtOAc (2x), zatim bazifikovan do pH = 8 sa 2M NaOH rastvorom (približno 310 mL), i ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (1x), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobila narandžasta čvrsta supstanca (25.44 g). Narandžasta čvrsta supstanca je rastvorena u dioksanu (300 mL), zatim je lagano dodat 4M HCl u dioksanu (19.8 mL, 79.16 mmol) tokom 10 min. Smeša je mešana u trajanju od 20 minuta i talog koji je formiran je sakupljen filtracijom, ispran dioksanom (približno 100 mL), dietil etrom (100 mL), sušen usisavnjem da bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (25.13 g, 84%). MS (ES+) 322.2.

Korak 3a: (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon 17

[0348] U postupku alternativnom Koraku 3, u prethodnom tekstu, tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (1.189 g, 1.298 mmol) i xantphos (1.502 g, 2.596 mmol) su dodati u degaziranu (3 x vakuumska/N2ciklusa) smešu [1-(3-bromo-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]-(4-metilpiperazin-1-il)metanona 19 (10 g, 25.96 mmol) i Cs2CO3(16.92 g, 51.92 mmol) u dioksanu (150 mL) pod N2. Smeša je mešana na 100°C preko noći. Reakcija je hlađena do temperature sredine i talog je otfiltriran i ispran sa EtOAc (50mL). Filtrat je podeljen između EtOAc i vode. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom, sušeni (MgSO4) i koncentrovani in vacuo da bi ostao terc-butil N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]karbamat kao crvena čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 422.2.

[0349] U suspenziju terc-butil N-[5-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1-piperidil]-3-piridil]karbamata (3.34 g, 7.924 mmol) u dioksanu (25 mL) dodat je HCl (4M u dioksanu) (8 mL od 4 M) i smeša je zagrevana na 40°C preko noći. Smeša je je hlađena do sobne temperature i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana dioksanom (15 mL), zatim sa EtOAc (2 x 20 ml) i sušena in vacuo da bi ostala bela čvrsta supstanca koja je podeljena

1

između EtOAc (70 ml) i 1M natrijum karbonata (50 ml). Kombinovani organski ekstrakt je sušen i koncentrovan in vacuo da bi se proizvelo 2.26 g praljavo bele čvrste supstance koja je suspendovana u MeCN (5 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom MeCN (3 do 5 mL), i sušena usisavanjem da bi ostao (1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon kao bela čvrsta supstanca. MS (ES+) 322.1.

[0350] Sledeći intermedijeri aminopiridina su pripremljeni upotrebom postupka sličnog Pripremi N-13 ili Pripremi N-14:

5-fluoro-4-(4-(3-metoksipropil)piperazin-1-il)piridin-3-amin:

(4-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperazin-1-il)(hinuklidin-3-il)metanon:

(R)-5-fluoro-4-(heksahidropirazino[2,1-c]1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-amin:

(S)-5-fluoro-4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H-il)piridin-3-amin:

1 4

5-fluoro-4-(4-morfolinopiperidin-1-il)piridin-3-amin:

1-(4-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperazin-1-il)-2-metilpropan-2-ol:

(4-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)-N,N-dimetilpiperidin-4-sulfonamid:

1

-(1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)pirolidin-2-on:

-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)-N-metil-N-(1-metilpiperidin-4-il)piperidin-4-sulfonamid:

-fluoro-4-(4-(morfolinometil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

1

-(1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)-4-metilpiperazin-2-on:

-fluoro-4-(4-(morfolinosulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

-fluoro-4-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

1

5-fluoro-4-(4-(2-(pirolidin-1-il)etoksi)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

4-((1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)metil)-1-metilpiperazin-2-on:

(R)-2-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

(S)-2-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

1

-fluoro-4-(4-metil-1-oksa-4,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-amin:

-fluoro-4-(4-(tiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-fluoro-4-(8-metilheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H-il)piridin-3-amin:

-fluoro-4-(piperidin-1-il)piridin-3-amin:

1

2-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

4-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)tiomorfolin 1,1-dioksid:

(R)-7-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)tetrahidro-1H-oksazolo[3,4-a]pirazin-3(5H)-on:

5-fluoro-4-(pirolidin-1-il)piridin-3-amin:

2-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-6(2H)-on:

8-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)-2-metiloktahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-1-on:

2

-fluoro-4-(2-oksa-7-azaspiro[3.5]nonan-7-il)piridin-3-amin:

-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-4(1H)-on:

-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)-3-metil-1-oksa-3,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-on:

-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)-1-metilpiperazin-2-on:

-((1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)metil)pirolidin-2-on:

2 1

5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

5-fluoro-4-(4-metil-1-oksa-4,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-amin:

i

4-(4-(1H-imidazol-1-il)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-amin:

Priprema N-15: terc-butil 1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-karboksilat [0351]

2 2

Korak 1: terc-butil 1-(3-bromo-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-karboksilat 26

[0352] 3L posuda sa obodom opremljena termometrom, kondenzatorom, linijom za azot i visećom mešalicom zagrevana je na 40°C (spoljašnji) i zatim napunjena cikloheksanolom (750 mL), dinatrijum karbonatom (129.8 g, 1.225 mol), 3-bromo-4-hloro-5-fluoro-piridinom (hlorovodonična kiselina 18) (137.5 g, 556.8 mmol) i terc-butil piperidin-4-karboksilatom (123.8 g, 668.2 mmol), isprana cikloheksanolom (350 mL). Smeša je zagrevana do 120°C interne temperature preko noći (18 časova). Reakciona smeša je uklonjena sa rešoa i ostavljena da se hladi do sobne temperature. Dodati su voda (687.5 mL) i EtOAc (687.5 mL), mešanje je izvedeno u trajanju od 10 min., zatim prebačeni u levak za odvajanje. Dodat je dodatni EtOAc (1.238 L), mešan i vodena faza je uklonjena. Organska faza je dalje isprana vodom (687 mL), vodena faza je uklonjena, organski sloj je sakupljen. Vodene faze su spojene i ponovo ekstrahovane sa EtOAc (687.5 mL), vodeni sloj je uklonjen i organska faza je kombinovana sa drugim organskim materijama. Organske materije su koncentrovane in vacuo (temp. vodenog kupatila = 60°C, vakuum nadole do 2 mBar) ostavljajući viskozno braon ulje.

[0353] Ulje je rastvoreno u 25% EtOAc/petrolej i zatim propuštano kroz kratak čep od silike, eluiranjem sa 25% EtOAc/petrolejom sve dok se više nije dobijao proizvod. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostalo braon ulje, 127.1g. Proizvod je ponovo prečišćen pomoću ISCO companion (1.5Kg silike, sipan u DCM, eluiranjem 0 do 20% EtOAc/petroleja), frakcije proizvoda su spojene i koncentrovane in vacuo da bi ostao željeni proizvod 26 kao bledo žuta do krem čvrsta supstanca, (98g, 49% prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (s, 1H), 8.41 (d, 1H), 3.39 - 3.36 (m, 2H), 3.12 (tt, 2H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 1.91 - 1.87 (m, 2H), 1.71 - 1.64 (m, 2H) i 1.43 (s, 9H). MS (ES+) 361.0.

Korak 2: terc-butil 1-(3-amino-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-karboksilat 27

2

[0354] U rastvor terc-butil 1-(3-bromo-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-karboksilata 26 (98 g, 272.8 mmol), difenilmetanimina (59.34 g, 54.94 mL, 327.4 mmol) i Cs2CO3(177.8 g, 545.6 mmol) u dioksanu (1.274 L) dodat je xantphos (15.78 g, 27.28 mmol) i Pd2(dba)3(12.49 g, 13.64 mmol). Smeša je mešana pod azotom na 95°C preko noći. Smeša je hlađena do sobne temperature, zatim podeljena između EtOAc (1000 mL, 10 zapr. ekv.) i vode (490 mL, 5 zapr. ekv.), mešana i organski sloj je odvojen. Organske materije su isprane dodatno vodom (1 x 250 mL), fiziološkim rastvorom (250 mL), sušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovane in vacuo da bi se ostao sirovi proizvod kao tamno crveno viskozno ulje, 185.3g.

[0355] Dobijeni proizvod u obliku ulja (185.3g) je rastvoren u THF (882.0 mL) i dodata je HCl (545.5 mL 2 M, 1.091 mol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 20 min. THF je uklonjen in vacuo, zatim je dodata dodatna količina (HCl (2M) (588.0 mL). Vodeni sloj je ispran dva puta sa EtOAc (294.0 mL). Velika količina žutog taloga je formirana u toku ekstrakcije u obe organskoj i vodenoj fazi, čvrsta faza iz obe organske i vodene faze je sakupljena filtracijom i sušena usisavanjem. Mešani organski i vodeni filtrat je dodat u levak za odvajanje, ekstrahovan sa 2M HCl (2 x 200 mL). Sve vodene faze plus čvrsta su sakupljene na sinteru (proizvod) su spojene da bi se dobila suspenzija. pH je podešena do 6 upotrebom 2M NaOH i ekstrahovana sa DCM (3 x 600 mL). Organske materije su spojene, sušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovane in vacuo da bi ostala bledo narandžasta voskasta čvrsta supstanca, 112.2g. Ova čvrsta supstanca je suspendovana u MeCN (200 mL), mešana u trajanju od 10 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana minimalnom količinom MeCN i sušena usisavanjem da bi ostao proizvod 27 kao bela čvrsta supstanca (66.8 g, 83% prinos). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.11 - 3.00 (m, 2H), 2.91 (tt, 2H), 2.36 (tt, 1H), 1.88 - 1.83 (m, 2H), 1.79 - 1.71 (m, 2H), 1.43 (s, 9H). MS (ES+) 297.1.

2 4

Korak 1: 3-bromo-4-hloro-5-fluoropiridin hidrohlorid 18

[0356] Rastvor diizopropilamina (101.2 g, 140.2 mL, 1.000 mol) u tetrahidrofuranu (1.148 L) je hlađen do između -25°C i -20°C. Dodat je butil litijum (2.5M u heksanima) (400 mL od 2.5 M, 1.000 mol) takvom stopom da se reakciona temperatura održava ispod -20°C (dodavanje 20 minuta). Smeša je zatim ostavljena da se zagreva do 4°C tokom 1 časa, zatim je ponovo hlađena do -78°C. Dodavan je 3-bromo-5-fluoro-piridin (153.0 g, 869.6 mmol) u tetrahidrofuranu (382.5 mL) tokom 40 minuta. Smeša je mešana u trajanju od 90 minuta, zatim je ukapavanjem dodavan rastvor 1,1,1,2,2,2-heksahloroetana (205.9 g, 869.6 mmol) u tetrahidrofuranu (350.0 mL) tokom 40 minuta. Pošto je dodavanje završeno smeša je ostavljena da se zagreva do temperature sredine preko noći. Smeša je hlađena do 0°C, zatim je prebačena u hladnu vodu (2 L), mešana 20 min., zatim je dodat MTBE (2.5 L) i mešana snažno u trajanju od 30 min., zatim prebačena u levak za odvajanje i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je prebačen nazad u reakcionu posudu i dalje ekstrahovan sa MTBE (2.5 L), snažno mešan 10 min. i zatim prebačen u levak za odvajanje i organski sloj je odvojen. Organske materije su spojene, sušene (MgSO4), filtriran i koncentrovan do braon ulja. Ulje je rastvoreno u pentanu (500 ml) i etru (300ml). Lagano je dodat HCl (2M u etru) (434.8 mL od 2 M, 869.6 mmol) uz mešanje. Posle završenog dodavanja smeša je mešana u trajanju od 20 min., zatim je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana etrom i sušena pod vakuumom u trajanju od 1 časa da bi ostao proizvod 18 kao bež čvrsta supstanca (148.9g, 69%);<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (2H, s); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ -124.8; MS 210.8. Korak 2: terc-butil 1-(3-bromo-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 26

[0357] 3-bromo-4-hloro-5-fluoro-piridin hidrohlorid 18 (62 g, 251.1 mmol) je suspendovan u DCM (600 mL) i mešan. Smeša je hlađena u ledenom kupatilu i lagano je dodat natrijum hidroksid (276.2 mL od 1 M, 276.2 mmol). Dobijena smeša je mešana 1 čas. Smeša je razdvojena u faze. Dodato je još DCM/vode da bi se pomoglo odvajanje faza. Ostao je izvestan zadržani čestični materijal u vodenoj fazi. Organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, sušena (MgSO4), filtrirana i koncentrovana. Ostatak je triturisan heptanom. Rastvor heptana je filtriran kroz florsil čep, eluiranjem sa heptanom. Filtrat je koncentrovan do ulja koje očvršćava. Ovo je dalo 41 g slobodne baze.

[0358] Temeljno mešana smeša 3-bromo-4-hloro-5-fluoropiridin slobodne baze (55 g, 0.26 mol), kalijum fluorida (31 g, 0.53 mol) i Me4NCl (5.8 g, 53 mmol) u DMSO (400 mL) je zagrevana do 130°C u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i dodati su terc-butil piperidin-4-karboksilat hidrohlorid 22 (66 g, 0.30 mol) i DIPEA (65 g, 0.50 mol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je

2

isparavan in vacuo. Ostatak je podeljen između DCM/vode. Organski sloj je ispran vodom (3x), sušen preko Na2SO4i filtriran preko silika gela upotrebom DCM kao eluenta. Filtrat je isparavan da bi se dobio terc-butil 1-(3-bromo-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 26 (61g, 65%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (s, 1H), 8.41 (d, 1H), 3.39 - 3.36 (m, 2H), 3.12 (tt, 2H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 1.91 - 1.87 (m, 2H), 1.71 - 1.64 (m, 2H) i 1.43 (s, 9H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ -135.2; MS (ES+) 361.0. Korak 3: terc-butil 1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 27

[0359] Terc-butil 1-(3-bromo-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilat 26 (800g, 2.23mol) je rastvoren u 1,4-dioksanu (7.5L). Difenilmetanimin (484g, 2.67mol) je dodat u jednoj porciji, a zatim cezijum karbonat (1.45Kg, 4.45mol), xantphos (129g, 223mmol) i Pd2(dba)3(102g, 111mmol). Dodata je nova količina 1,4-dioksana (2.9L) i smeša je zagrevana do 95°C pod azotom sve dok reakcija nije završena (određeno pomoću HPLC analize). Smeša je hlađena do 20°C i dodati su etil acetat (8L) i voda (4L). Organska faza je izolovana i isprana vodom (4L) i fiziološkim rastvorom (3.5L) i sušena preko magnezijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do braon ulja (1.3Kg). Ulje je rastvoreno u 2-metiltetrahidrofuranu (7.2L) i dodat je 2M HCl na 20°C i smeša je mešana u trajanju od 30 minuta. Vodeni sloj je izolovan i organski sloj je ekstrahovan sa 2M HCl (1.2L). Kombinovani vodeni sloj je neutralizovan sa 2M NaOH (5.4L, pH 8-9). Proizvod je ekstrahovan u 2-metiltetrahidrofuran (14L zatim 2x5L). Kombinovani ekstrakti su isprani vodom (1.6L) i organski rastvor je koncentrovan. Ostatak je suspendovan u acetonitrilu (2L), filtriran i sušen. Ovo je dalo proizvod 27 kao belu čvrstu supstancu (568.7g, 86.5%);<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.11 - 3.00 (m, 2H), 2.91 (tt, 2H), 2.36 (tt, 1H), 1.88 -1.83 (m, 2H), 1.79 - 1.71 (m, 2H), 1.43 (s, 9H); 19F NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ - 140.0; MS (ES+) 297.1.

Priprema N-16: 5-ciklopropil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina

[0360]

Korak 1: 1-(3-ciklopropil-5-nitropiridin-4-il)-4-metilpiperazin

2

[0361] Smeša 1-(3-bromo-5-nitro-4-piridil)-4-metil-piperazina (sintetisan od 1-metilpiperazina i 3-bromo-4-hloro-5-nitropiridina upotrebom postupka iz Koraka 1 iz Pripreme N-1) (467.4 mg, 1.552 mmol), gvožđe (II); dihlorobis[ciklopenta-1,4-dien-1-il(difenil)fosfanijumil]paladijuma(2-); dihlorometana (63.37 mg, 0.07760 mmol), kalijum karbonata (429.0 mg, 3.104 mmol) i ciklopropilboronske kiseline (200.0 mg, 2.328 mmol) u dioksanu (5 mL) je degazirana i isprana azotom (x2). Reakcija je zagrevana na 100°C u hermetički zatvorenoj epruveti u trajanju od 18 časova. Na sobnoj temperaturi reakciona smeša je filtrirana kroz Celit i isparavana do sušenja, proizvodeći 1-(3-ciklopropil-5-nitropiridin-4-il)-4-metilpiperazin kao tamno narandžastu čvrstu supstancu koja je korišćena direktno u sledećoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja (288mg, 66%). MS (ES+) 263.2 Korak 2: 5-ciklopropil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0362] U rastvor 1-(3-ciklopropil-5-nitro-4-piridil)-4-metil-piperazina (220.4 mg, 0.8403 mmol) u metanolu (25 mL) dodat je Pd na uglju (10%, Degussa, 6.387 mg, 0.006002 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod balonom vodonika, u trajanju od 7 časova. Reakcija je filtrirana kroz čep od Celita, isprana sa MeOH i filtrat je koncentrovan in vacuo proizvodeći 5-ciklopropil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao narandžasti ostataki. (194mg, 99%).

Priprema N-17: 6-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0363]

Korak 1: 1-(2-hloro-5-nitropiridin-4-il)-4-metilpiperazin

[0364] 1-metilpiperazin (298.5 mg, 330.6 µL, 2.980 mmol) u THF (5 mL) dodat je u mešani rastvor 2,4-dihloro-5-nitro-piridina (500 mg, 2.591 mmol) i DIPEA (401.8 mg, 541.5 µL, 3.109 mmol) u THF (10 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Reakcija je ostavljena da se meša na temperaturi sredine u trajanju od 1 časa, zatim je rastvarač uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM rastvora) da bi se dobio 1-(2-hloro-5-nitropiridin-4-il)-4-metilpiperazin kao žuta čvrsta supstanca (638 mg, 96% Prinos). MS (ES+) 257.1.

Korak 2: 6-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

2

[0365] 1-(2-hloro-5-nitro-4-piridil)-4-metil-piperazin (580 mg, 2.260 mmol) je rastvoren u AcOH (20 mL) / vodi (2 mL) i dodato je Fe (2.524 g, 45.20 mmol). Dobijena smeša je mešana na 50°C u trajanju od 30 minuta. Reakcija je hlađena do temperature sredine i zatim sipana na 50 g SCX-2 kertridž (prethodno ispran sa MeOH). Kertridž je ispran sa DCM/MeOH smešama, pre nego što je proizvod eluiran sa 2M NH3u MeOH/DCM smešama. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio 6-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao ljubičasta čvsta supstanca (510 mg, 99% Prinos). MS (ES+) 227.1.

Priprema N-18: 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin

[0366]

Korak 1: 4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amin

[0367] 1-metilpiperazin (265.5 mg, 294.0 µL, 2.651 mmol) u THF (5 mL) dodat je u mešanu suspenziju 4-hloro-5-nitro-piridin-2-amina (400 mg, 2.305 mmol) i DIPEA (357.5 mg, 481.8 µL, 2.766 mmol) u THF (10 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Reakcija je ostavljena da se meša na temperaturi sredine u trajanju od 90 časova pre uklanjanja rastvarača in vacuo. Ostatak je triturisan iz DCM/MeOH i dobijeni talog je je ispran sa DCM/MeOH rastvorima. Filtrat je koncentrovan in vacuo i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% 2M NH3u MeOH/DCM) da bi se dobio 4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amin kao žuta čvrsta supstanca (355 mg, 65% Prinos). MS (ES+) 238.1.

Korak 2: 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin

[0368] Pd na C, (10%, vlažan, Degussa) (140 mg, 0.1316 mmol) dodat je u mešani rastvor 4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amina (355 mg, 1.496 mmol) u smešu EtOAc (5 mL) i EtOH (50 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 16 časova. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz čep od celita i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin kao braon čvrsta supstanca (291 mg, 94% Prinos). MS (ES+) 208.1.

Priprema N-19: 5-(difluorometil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0369]

2

Korak 1: 5-bromo-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0370] 1-metilpiperazin (2.109 g, 21.06 mmol) u DCM (62.50 mL) dodat je u mešani rastvor 3-bromo-4-hloro-5-nitro-piridina (5000 mg, 21.06 mmol) i DIPEA (3.266 g, 4.402 mL, 25.27 mmol) u DCM (62.50 mL) na sobnoj temperaturi. Reakcija je ostavljena da se meša na temperaturi sredine u trajanju od 2 časa, zatim je koncentrovana in vacuo. Ostatak je podeljen između zasićenog vodenog rastvora NaHCO3i DCM. Kombinovani organski ekstrakt je sušen i koncentrovan in vacuo. Narandžasta čvrsta supstanca je suspendovana u sirćetnoj kiselini (60.00 mL) pre dodavanja gvožđa (7.059 g, 126.4 mmol). Smeša je zagrevana na 50°C i mešana u trajanju od 15min. Smeša je ostavljena da se hladi do sobne temperature i u reakciju je dodat DCM:EtOAc (4:1) (400mL). Dobijena braon suspenzija je filtrirana upotrebom prethodno navlaženog Celit kertridža (25g), ispiranjem sa još DCM:MeOH (4:1) (200mL). Kombinovani filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobila crvena/braon guma koja je prečišćena hromatografijom na siliki (Rf companion, 80g kertridž), eluiranjem sa DCM-DCM:Me-OH:NE3(90:10:1) gradijentom od 100-0 do 20:80. Frakcije koje sadrže čist proizvod su sakupljene i koncentrovana in vacuo da bi se dobio 5-bromo-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin kao viskozno, bistro svetlo žuto ulje koje očvršćava prilikom stajanja. MS (ES+) 273.1.

Korak 2: 1-(3-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)piridin-4-il)-4-metilpiperazin

[0371] 5-bromo-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin (3000 mg, 11.06 mmol), heksan-2,5-dion (6.312 g, 6.487 mL, 55.30 mmol) u sirćetnoj kiselini (20 mL) je zagrevan na 70°C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je podeljen između EtOAc i vodenog zasićenog rastvora NaHCO3. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan in vacuo proizvodeći ulje koje je prečišćeno filtracijom na siliki da bi se proizveo 1-(3-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)piridin-4-il)-4-metilpiperazin kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS (ES+) 351.1.

Korak 3: 5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)nikotinaldehid

[0372] Rastvor 1-[3-bromo-5-(2,5-dimetilpirol-1-il)-4-piridil]-4-metilpiperazina (1250 mg, 3.579 mmol) u THF (35.79 mL) je hlađen do -78°C i ukapavanjem je dodat t-BuLi (2.105 mL od 1.7 M, 3.579 mmol). Smeša je mešana u trajanju od 30 min. na -78°C pre dodavanja DMF

2

(261.6 mg, 277.1 gel, 3.579 mmol) putem ukapavanja. Smeša je mešana u trajanju od 2 časa na -78°C. Reakcija je ugašena sa MeOH (5 mL) i ostavljena da se zagreva do sobne temperature. Reakcija je isprana vodenim zasićenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL i 50 mL). Komibovane organske materije su sušene (MgSO4) i isparavane da bi ostalo narandžasto ulje. Prečišćavanje hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc:MeOH 20%) proizvelo je 5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)nikotinaldehid kao bledo žutu kristalnu čvrstu supstancu. MS (ES+) 299.2. Korak 4: 1-(3-(difluorometil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)piridin-4-il)-4-metilpiperazin [0373] U rastvor 5-(2,5-dimetilpirol-1-il)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-karbaldehida (100 mg, 0.3351 mmol) u metilen hloridu (335.1 µL) na sobnoj temperaturi dodat je 2-metoksi-N-(2-metoksietil)-N-(trifluoro-{4}-sulfanil)etanamin (370.8 mg, 1.676 mmol) i smeša je zagrevana na refluksu u trajanju od 18 časova. Na sobnoj temperaturi, reakcija je ugašena vodom (2 mL) i ekstrahovana sa metilen hloridom (2 x 5mL) da bi se proizveo 1-(3-(difluorometil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)piridin-4-il)-4-metilpiperazin kao žuto ulje. MS (ES+) 321.2.

Korak 5: 5-(difluorometil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin

[0374] Rastvor 1-[3-(difluorometil)-5-(2,5-dimetilpirol-1-il)-4-piridil]-4-metil-piperazina (80 mg, 0.2497 mmol) i NH2OH (165.0 mg, 4.994 mmol) u smeši trietilamina (101.1 mg, 139.3 µL, 0.9988 mmol), etanola (1 mL) i H2O (0.25 mL) je zagrevan na refluksu u trajanju od 20 časova. Posle hlađenja do sobne temperature reakcija je ugašena sipanjem direktno na SCX-2 kertridž i eluirana sa MeOH, a zatim sa NH3/MeOH. Bazna frakcija je koncentrovana in vacuo proizvodeći 5-(diftuorometil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-amin koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 243.1.

Priprema N-20: (S)-5-fluoro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin [0375]

Korak 1: (S)-1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin

21

[0376] MsCl (393.3 mg, 265.7 µL, 3.433 mmol) dodat je u rastvor (3R)-tetrahidrofuran-3-ola (275 mg, 3.121 mmol) i Et3N (379.0 mg, 522.0 µL, 3.745 mmol) u DCM (5 mL) na 0°C i dopbijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena vodom (5 mL) i DCM (5 mL) i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan dodatno sa DCM (2 x 5 mL) i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (1 x 5 mL), sušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo. Ostatak je apsorbovan u n-BuOH (5 mL) i dodat je 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)piperazin (1.010 g, 4.682 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 118°C preko noći. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike (24 g kolona, 0-100% EtOAc/ petrol etar). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi ostao (S)-1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS (ES+) 288.1.

Korak 2: (S)-5-fluoro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-amin

[0377] BrettPhos pre-katalizator (4.183 mg, 0.005250 mmol) i BrettPhos (2.818 mg, 0.005250 mmol) su dodati u rastvor terc-butil karbamata (153.7 mg, 1.312 mmol), natrijum terc-butoksida (128.7 mg, 1.339 mmol) i 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]piperazina (75 mg, 0.2625 mmol) u toluenu (1.500 mL) i dobijena smeša je hermetički zatvorena (reakcija u epruveti za mikrotalasni reaktor) i postavljena u prethodno zagrejani „drysyn“ bloc na 100°C i zagrevana u trajanju od 6 časova. Dodata je nova količina BrettPhos pre-katalizatora (4.183 mg, 0.005250 mmol) i BrettPhos (2.818 mg, 0.005250 mmol) i reakciona smeša je ponovo hermetički zatvorena i zagrevana na 100°C preko noći. Reakciona smeša je hlađena do sobne temperature i ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl i zatim filtrirana kroz čep od celita ispiranjem sa etil acetatom. Filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 5 mL) i kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo da bi ostalo bledo žuto ulje (102 mg). Ostatak je apsorbovan u DCM (2 mL) i dodata je TFA (299.3 mg, 202.2 gel, 2.625 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Smeša je koncentrovana in vacuo i propuštena kroz SCX kertridž eluiranjem proizvoda sa 2M amonijakom u metanolu. Filtrat je koncentrovan in vacuo i prečišćen hromatografijom na koloni silike eluiranjem sa 0-20% MeOH/ DCM, 4 g kolona. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi ostao proizvod kao bezbojno ulje. MS (ES+) 267.2.

Priprema N-21: N2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin

[0378]

Korak 1: 1-(2-hloro-5-nitropiridin-4-il)-4-metilpiperazin

[0379] 1-metilpiperazin (119.3 mg, 132.6 µL, 1.191 mmol) u THF (1.5 mL) dodat je u mešani rastvor 2,4-dihloro-5-nitro-piridina (200 mg, 1.036 mmol) i DIPEA (160.6 mg, 216.4 µL, 1.243 mmol) u THF (3.000 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Reakcija je ostavljena da se meša na temperaturi sredine preko noći. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata i NaHCO3(zasićeni vodeni rastvor). Kombinovane organske materije su isprane fiziološkim rastvorom, sušene preko MgSO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se proizveo 1-(2-hloro-5-nitro-4-piridil)-4-metil-piperazin. (100%) MS (ES+) 257.1.

Korak 2: N-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amin

[0380] 1-(2-hloro-5-nitro-4-piridil)-4-metil-piperazin (265.9 mg, 1.036 mmol) i metilamin 2M u THF (2.590 mL od 2 M, 5.180 mmol) su zagrevani preko noći u hermetički zatvorenoj epruveti na 60°C. Smeša je prečišćena hromatografijom na siliki (Companion 12g) eluiranjem sa 0.5-15% MeOH:DCM, proizvodeći N-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amin (243 mg, 93%). MS (ES+) 252.1.

Korak 3: N2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin

[0381] N-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-5-nitro-piridin-2-amin (243 mg, 0.9670 mmol) je rastvoren u metanolu (10 mL) i dodat je Pd na C, vlažan, Degussa (50 mg, 0.4698 mmol). Reakcija je ispražnjena i napunjena vodonikom tri puta i ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Katalizator je otfiltriran i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se proizveo N2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-2,5-diamin (173 mg, 81%). MS (ES+) 222.1.

Priprema N-22: 5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin

[0382]

Korak 1: 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-ol

[0383] U rastvor 3-hloro-5-fluoro-4-jodo-piridina (1 g, 3.885 mmol) u NMP (1 mL) dodat je DIPEA (753.1 mg, 1.015 mL, 5.828 mmol) i piperidin-4-ol (589.4 mg, 5.828 mmol) i smeša je zagrevana do 120°C u trajanju od 4 časa. Smeša je razblažena etil acetatom (30ml), isprana dva puta vodom (20ml) i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen sa MgSO4i koncentrovan in vacuo do žute čvrste supstance koja je prečišćena hromatografijom na koloni upotrebom DCM i zatim 2% MeOH/DCM kao eluenta, proizvodeći 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-ol. MS (ES+) 231.0.

Korak 2: S-(1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il) etantioat

[0384] Izopropil (NE)-N-izopropoksikarboniliminokarbamat (723.1 mg, 3.576 mmol) dodat je ukapavanjem u rastvor 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-ola (750 mg, 3.251 mmol) i trifenilfosfina (937.9 mg, 828.5 µL, 3.576 mmol) u THF na -20°C. Posle mešanja od 15 min., dodata je etantioična S-kiselina (272.2 mg, 255.6 gel, 3.576 mmol), smeša je ostavljena da se zagreva do sobne temperature i mešana dodatnih 30 minuta. Smeša je zatim razblažena etilacetatom (30ml), isprana dva puta vodom (20ml) i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen sa MgSO4i koncentrovan in vacuo do žute čvrste supstance koja je prečišćena hromatografijom na koloni eluiranjem sa 5/95 etrom/petrol etrom da bi se eluirali sporedni proizvodi i zatim 10/90 etrom/petrol etrom. Relevantne frakcije su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se dobio S-(1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il) etantioat kao zelena čvrsta supstanca. MS (ES+) 289.0.

Korak 3: 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-sulfonil hlorid,

[0385] U smešu HCl (1.038 mL od 2 M, 2.077 mmol) i MeCN (8 mL) dodat je NCS (693.4 mg, 5.193 mmol) i smeša je hlađena do 10°C i mešana sve dok nije rastvorena većina NCS (693.4 mg, 5.193 mmol). Rastvor S-[1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil] etantioata (500 mg, 1.731 mmol) u MeCN (8 mL) je dodat ukapavanjem. Rastvor je mešan u trajanju od 30

21

minuta na 10°C, razblažen etrom i ispran razblaženim fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen sa MgSO4i koncentrovan in vacuo da bi se proizveo 1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-sulfonil hlorid kao žuta čvrsta supstanca. MS (ES+) 313.0.

Korak 4: 1-((1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)sulfonil)-4-metilpiperazin [0386] U rastvor 1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)piperidin-4-sulfonil hlorida (400 mg, 1.277 mmol) u DCM (5 mL) dodat je TEA (129.2 mg, 178.0 µL, 1.277 mmol), a zatim 1-metilpiperazin (255.8 mg, 2.554 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Smeša je razblažena etilacetatom (30ml), isprana dva puta vodom (20ml) i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je sušen sa MgSO4i koncentrovan in vacuo do žute čvrste supstance. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa 5/95 metanolom/DCM. Relevantne frakcije su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se dobili 1-((1-(3-hloro-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)sulfonil)-4-metilpiperazini kao zelena čvrsta supstanca. MS (ES+) 377.1.

Korak 5: 5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin [0387] Terc-butil karbamat (211.3 mg, 1.804 mmol), natrijum terc-butoksid (173.4 mg, 1.804 mmol), BrettPhos pre-katalizator (143.7 mg, 0.1804 mmol) i BrettPhos (96.83 mg, 0.1804 mmol) su degazirani pomoću vakuumskih/azotnih ciklusa (x5). Dodat je rastvor 1-[[1-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-4-piperidil]sulfonil]-4-metil-piperazina (340 mg, 0.9022 mmol) u suvom toluenu (9.884 mL) i dobijena smeša je zagrevana do 80°C. Posle 5 minuta na 80°C reakcija je hlađena do sobne temperature i podeljena između etil acetata i vode. Kombinovane organske materije su sušene sa MgSO4i koncentrovane in vacuo do žute čvrste supstance. Žuta čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni upotrebom 1% MeOH/DCM da bi se eluirali sporedni proizvodi i zatim 5-10% MeOH/DCM da bi se eluirao proizvod. Relevantne frakcije su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se proizvela svetlo žuta čvrsta supstanca. Ona je rastvorena u DCM (10 mL), a zatim je dodata TFA (1.029 g, 695.3 gel, 9.022 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Smeša je koncentrovana in vacuo da bi se proizveo 5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin kao svetlo narandžasta čvrsta supstanca. MS (ES+) 358.1.

[0388] Sledeći amini su pripremljeni prema postupcima sličnim onome opisanom u Postupku N-22

4-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-amin:

-(4-(morfolinosulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-ilsulfonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-amin:

-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

21

4-(4-(oksetan-3-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

i

4-(4-((2-metoksietil)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin:

Priprema N-23: 1-((1-(3-amino-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-il)metil)-4-metilpiperazin-2-on

[0389]

21

Korak 1: terc-butil 4-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat

[0390] Metansulfonil hlorid (186.3 mg, 125.9 gel, 1.626 mmol) dodat je ukapavanjem u mešani rastvor terc-butil 4-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata (350 mg, 1.626 mmol) i DIPEA (222.8 mg, 300.3 µL, 1.724 mmol) u DCM (5 mL) na 0°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreva do temperature sredine tokom 16 časova i zatim je tretirana vodom. Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova kao bela čvrsta supstanca (505 mg, > 100% prinos) koje je korišćeno direktno pretpostavljajući 100% prinos i čistoću. MS (ES+ - t-Bu) 238.0.

Korak 2: terc-butil 4-((4-metil-2-oksopiperazin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0391] 60% disperzija natrijum hidrida (84.55 mg, 2.114 mmol) dodata je u mešani rastvor 4-metilpiperazin-2-ona (241.3 mg, 2.114 mmol) u DMF (10 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 30 minuta. Ukapavanjem je dodat terc-butil 4-(metilsulfoniloksimetil)piperidin-1-karboksilat (477 mg, 1.626 mmol) u DMF (5 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine dodatna 92 časa, zatim na 50°C tokom dodatnih 20 časova. Reakcija je hlađena do temperature sredine, ugašena dodavanjem vode i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x 3), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM, sipan u DCM) da bi se dobio terc-butil 4-((4-metil-2-oksopiperazin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat proizvod kao bezbojno ulje (99 mg, 20% Prinos). MS (ES+) 312.2.

Korak 3: 4-metil-1-(piperidin-4-ilmetil)piperazin-2-on

[0392] TFA (1 mL, 12.98 mmol) je dodata u mešani rastvor terc-butil 4-[(4-metil-2-oksopiperazin-1-il)metil]piperidin-1-karboksilata (98 mg, 0.3147 mmol) u DCM (2 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 16 časova. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropski obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz 5g SCX-

21

2 kertridž i ispran sa MeOH/DCM smešama. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u MeOH/DCM smešama. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio 4-metil-1-(piperidin-4-ilmetil)piperazin-2-on kao bezbojno ulje (65 mg, 98% Prinos). MS (ES+) 212.0. Korak 4: terc-butil 4-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperidin-1-karboksilat

[0393] Praćena je Priprema N-13. MS (ES+) 322.1.

Priprema N-24: 4-(4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin [0394]

Korak 1: terc-butil 4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0395] Smeša 3,3-difluoropirolidina (hlorovodonična kiselina (1)) (965 mg, 6.722 mmol), terc-butil 4-formilpiperidin-1-karboksilata (1.720 g, 8.066 mmol), DIPEA (955.6 mg, 1.288 mL, 7.394 mmol) i izmrvljenih 4A molekularnih sita (965 mg,) u DCE(30 mL) mešana je na temperaturi sredine u trajanju od 3 časa. Dodat je NaBH(OAc)3(natrijum jon (1)) (2.848 g, 13.44 mmol) i reakcija je mešana na temperaturi sredine dodatnih 16 časova. Smeša je filtrirana kroz Celit (ispiranjem sa DCM) i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 80 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM, sipan na DCM) da bi se dobio terc-butil 4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat kao bezbojno ulje koje je deprotektovano direktno pretpostavljajući 100% prinos i čistoću. MS (ES+) 305.1.

Korak 2: 4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin

[0396] TFA (766.5 mg, 517.9 mL, 6.722 mmol) je dodata u mešani rastvor terc-butil 4-[(3,3-difluoropirolidin-1-il)metil]piperidin-1-karboksilata (2.046 g, 6.722 mmol) u DCM (15 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 66 časova. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropski obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz 50 g SCX-2 kertridž i ispran sa MeOH/DCM smešama. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u MeOH/DCM smešama. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio 4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin kao bledo žuta čvrsta supstanca (1.15 g, 84% prinos iz 2 koraka). MS (ES+) 205.1.

21

Korak 3: 4-(4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-amin

[0397] Praćena je Priprema N-1. MS (ES+) 297.2.

Priprema N-25: 4-(4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin

[0398]

Korak 1: terc-butil 1-tia-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboksilat

[0399] U smešu terc-butil 1-oksa-8-azaspiro[2.5]oktan-8-karboksilata (1 g, 4.689 mmol) i tiouree (356.9 mg, 4.689 mmol) dodata je voda i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 72 časa. Reakciona smeša je podeljena između DCM i vode, organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan da bi se dobio 1-tia-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboksilat kao bledo žuto ulje koje očvršćava tokom stajanja (910 mg, 84%). MS (ES+ - t-Bu) 173.9.

Korak 2: terc-butil 4-merkapto-4-metilpiperidin-1-karboksilat

[0400] U rastvor terc-butil 1-tia-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboksilata (430 mg, 1.875 mmol) u THF (5 mL) dodat je LiAlH4(jon litijuma (1)) (0.9375 mL od 2 M, 1.875 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Reakcija je ugašena pažljivim ukapavanjem vode (2 ml), mešana u trajanju od 10 min. pre nego što je reakciona smeša podeljena između vode i EtOAc. Organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan da bi se dobio terc-butil 4-metil-4-sulfanil-piperidin-1-karboksilat kao bezbojno ulje. (380 mg, 87%). MS (ES-) 231.0.

Korak 3: terc-butil 4-metil-4-(metiltio)piperidin-1-karboksilat

[0401] U rastvor terc-butil 4-metil-4-sulfanil-piperidin-1-karboksilata (380 mg, 1.642 mmol) u THF (5 mL) ohlađen do -78°C dodat je LiHMDS (1.724 mL od 1 M, 1.724 mmol) i rastvor je mešan u trajanju od 10 min. pre dodavanja MeI (256.3 mg, 0.1124 mL, 1.806 mmol) i rastvor je ostavljen da se zagreva do 0°C tokom prubližno 1 časa. Reakcija je zatim pažljivo ugašena dodavanjem zasićenog amonijum hlorida i ekstrahovana u EtOAc. Vodeni deo je zatim dalje ekstrahovan sa EtOAc i kombinovane organske materije su isprane fiziološkim rastvorom, sušene (MgSO4) i koncentrovane da bi se dobilo žuto ulje (390 mg, 96%).

Korak 4: terc-butil 4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin-1-karboksilat

21

[0402] Rastvor terc-butil 4-metil-4-metilsulfanil-piperidin-1-karboksilata (380 mg, 1.549 mmol) u DCM (15 mL) je hlađen do 0°C i 3-hloroperoksibenzoeva kiselina (867.8 mg, 3.872 mmol) je dodavana u porcijama tokom približno 10 min. Rastvor je mešan u trajanju od 30 min. i zatim je ostavljen da se zagreva do sobne temperature i mešan tokom dodatnog 1 časa. Reakcija je ugašena zasićenim natrijum hidrogen karbonatom (4 ml) i zasićenim natrijum tiosulfatom (4 ml) i snažno mešana u trajanju od 5 min. DCM sloj je uklonjen i vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim natrijum karbonatom i fiziološkim rastvorom, sušeni (MgSO4) i koncentrovani da bi se dobio terc-butil 4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin-1-karboksilat kao lepljivo ulje koje usled stajanja očvršćava (450 mg, 100%).

Korak 5: 4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin

[0403] U rastvor terc-butil 4-metil-4-metilsulfonil-piperidin-1-karboksilata (430 mg, 1.550 mmol) u DCM (10 mL) dodata je TFA (3 mL, 38.94 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Reakcija je koncentrovana i azeotropski obrađena dva puta sa DCM da bi se dobio 4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin kao lepljivo ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 178.0.

Korak 6: 4-(4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-amin

[0404] Praćena je Priprema N-1. MS (ES+) 270.1.

Priprema N-26: 8-(3-aminopiridin-4-il)-2-izopropiloktahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-1-on

[0405]

Korak 1: 2-izopropil-8-(3-nitropiridin-4-il)oktahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-1-on [0406] NaH (15.87 mg, 0.3967 mmol), zatim 2-jodopropan (73.56 mg, 43.19 mL, 0.4327 mmol) dodati su u rastvor 2-(3-nitro-4-piridil)-3,4,6,7,8,9a-heksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-9-ona (100 mg, 0.3606 mmol) (pripremljen prema postupku sličnom Koraku 1 iz Pripreme N-1) u THF (5 mL) pod N2. Reakciona smeša je mešana na refluksu u trajanju od 24 časa, zatim je podeljena između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora bikarbonata. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko MgSO4i

22

koncentrovan in vacuo da bi se proizvelo ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 320.1.

Korak 2: 8-(3-aminopiridin-4-il)-2-izopropiloktahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-1-on [0407] Praćen je Korak 2 Pripreme N-1. MS (ES+) 290.2

Priprema N-27: (S)-5-(3-aminopiridin-4-il)heksahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin 1,1-dioksid

Korak 1: (S)-terc-butil 4-(metilsulfonil)-3-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1-karboksilat [0408] U rastvor terc-butil (3S)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata (2.5 g, 11.56 mmol) u DCM (16.25 mL) na 0°C pod atmosferom azota dodat je TEA (1.872 g, 2.579 mL, 18.50 mmol), a zatim ukapavanjem MsCl (2.913 g, 1.968 mL, 25.43 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreva do temperature sredine i mešana u trajanju od 18 časova. Suspenzija je podeljena između DCM (2x50 mL) i vode (50 mL). Kombinovane organske materije su isprane fiziološkim rastvorom (50 mL), sušene (Na2SO4) i koncentrovane in vacuo da bi se dobilo ulje blede boje meda (4.9 g). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na ISCO Companion (ELSD) eluiranjem sa DCM (A): Metanol (B) (0-10% (B), 80 g, 16.0 CV, 60 mL/min) da bi se dobila smeša proizvoda (2.3 g). Ovaj uljasti ostatak je ponovo prečišćen hromatogarfijom na koloni na ISCO Companion (ELSD) eluiranjem sa DCM (A): Etil acetat (B) (0-50% (B), 40 g, 25.0 CV, 40 mL/min) da bi se dobio (S)-terc-butil 4-(metilsulfonil)-3-(((metilsulfonil)oksi)metil)piperazin-1-karboksilat kao bezbojno ulje (1.58 g, 37%). MS (ES+) 317.0.

Korak 2: (S)-terc-butil tetrahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin-5(3H)-karboksilat 1,1-dioksid [0409] U rastvor terc-butil (3S)-4-metilsulfonil-3-(metilsulfoniloksimetil)piperazin-1-karboksilata (500 mg, 1.342 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) na -78°C ukapavanjem je dodat LiHMDS (1 M u THF) (1.476 mL od 1.0 M, 1.476 mmol). Reakciona smeša je mešana i ostavljena lagano da dostigne temperaturu sredine tokom 90 min. i mešana u trajanju od 18 časova. Reakcija je hlađena ponovo do -78°C i zatim je ukapavanjem dodat LiHMDS (1 M u THF) (1.476 mL od 1.0 M, 1.476 mmol). Reakciona smeša je mešana i ostavljena da lagano dostigne temperaturu sredine tokom 90 min. i mešana dodatna 2 časa. Reakcija je ugašena vodom (5 mL) i podeljena između vodenog sloja i etil acetata (3x50 mL). Kombinovane organske materije su sušene (Na2SO4) i koncentrovane in vacuo da bi se dobilo narandžasto ulje (490 mg). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na ISCO Companion (ELSD) eluiranjem sa petrol etrom (A): etil acetatom (B) (0-40% (B), 12 g, 21.0 min, 30 mL/min) da bi se dobio (S)-terc-butil tetrahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin-5(3H)-karboksilat 1,1-dioksid kao svetlo krem čvrsta supstanca (361 mg, 97%). MS (ES+ -t-Bu) 221.0

Korak 3: (S)-heksahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin 1,1-dioksid

[0410] U rastvor terc-butil (3aS)-1,1-diokso-2,3,3a,4,6,7-heksahidroizotiazolo[2,3-a]pirazin-5-karboksilata (360 mg, 1.303 mmol) u DCM (5 mL) na 0°C ukapavanjem je dodata TFA (1.25 mL, 16.22 mmol) i reakcija je mešana i lagano zagrevana do temperature sredine tokom 45 min. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je adsorbovan na prethono navlaženi (metanol/DCM (1:1), 10 mL) SCX-2 kertridž (10 g) i ispran sa DCM/metanolom (1:1, 50 mL) i zatim su bazne komponente eluirane sa 2 M amonijakom u metanolu (50 mL). Bazni eluent je isparavan do sušenja da bi se dobio (S)-heksahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin 1,1-dioksid kao bezbojno ulje (192 mg, 84%).

Korak 4: (S)-5-(3-aminopiridin-4-il)heksahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin 1,1-dioksid [0411] Praćena je Priprema N-1. MS (ES+) 269.1

Priprema N-28: 4-(3-metil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piridin-3-amin

[0412]

Korak 1: 3-bromo-4-izotiocijanatopiridin

[0413] 3-bromopiridin-4-amin (5 g, 28.90 mmol) je suspendovan u suvom toluenu (100 mL) i hlađen u ledenom kupatilu. Rastvor trifozgena (6.646 g, 4.407 mL, 57.80 mmol) u suvom toluenu (100 mL) dodavan je ukapavanjem tokom 25 min. Rezultujuća narandžasta/crvena suspenzija je mešana na refluksu preko noći. Crvena suspenzija je ostavljena da se hladi do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila tamno braon/crvena čvrsta supstanca. Ovaj materijal je podeljen između zasićenog NaHCO3i DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim DCM (3 x 50mL) i kombinovane organske materije su sušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobila tamno crvena čvrsta supstanca/guma. Ovaj materijal je suspendovan u MeOH/DCM, adsorbovan na siliki pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na koloni (75% EtOAc u heksanima, ~300 mL silika) da bi se dobio 3-bromo-4-izotiocijanatopiridin kao crveno ulje koje očvršćava usled stajanja (3.513g, 57% Prinos). MS (ES+) 216.9.

Korak 2: 2-acetil-N-(3-bromopiridin-4-il)hidrazinkarbotioamid

[0414] 3-bromo-4-izotiocijanato-piridin (1 g, 4.650 mmol) i acetilhidrazin (344.5 mg, 4.650 mmol) su rastvoreni u suvom 1,4-dioksanu (10 mL) i mešani na 80°C u trajanju od 0.75 časova. Narandžasta suspenzija je ostavljena da se hladi do sobne temperature. Visokozna suspenzija je razblažena etrom i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana etrom (3 x 5mL) da bi se dobio 2-acetil-N-(3-bromopiridin-4-il)hidrazinkarbotioamid kao čvrsta supstanca roze-losos boje (1.2187g, 91% Prinos). MS (ES-) 288.9.

Korak 3: 4-(3-bromopiridin-4-il)-5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-tiol

[0415] 2-acetil-N-(3-bromopiridin-4-il)hidrazinkarbotioamid (200 mg, 0.6917 mmol) je rastvoren u natrijum hidrogen karbonatu (4 mL) i mešan na 50°C u trajanju od 2 časa i na 100°C u trajanju od 5 časova. Reakciona smeša je zatim ostavljena da odstoji na sobnoj temperaturi u trajanju od 48 časova pre nego što je pažljivo neutralisana sa razblaženom HCl i podeljena sa 10% MeOH u DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim 10% MeOH u DCM (3 x 10mL) i kombinovani ekstrakti su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4-(3-bromopiridin-4-il)-5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-tiol kao narandžasta čvrsta supstanca (152.6 mg). MS (ES+) 272.9.

Korak 4: 3-bromo-4-(3-metil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piridin

[0416] 4-(3-bromo-4-piridil)-5-metil-1,2,4-triazol-3-tiol (145 mg, 0.5348 mmol) je suspendovan u suvom DCM (4 mL) i hlađen u ledenom kupatilu. Rastvor vodonik peroksida (133.5 µL od 30 %tež./zapr., 1.177 mmol) u AcOH (1.5 mL) lagano je ukapavanjem dodavan i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je hlađena ledenim kupatilom i ugašena laganim dodavanjem 2M NaOH i podeljena sa DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim DCM (3 x 10mL) i kombinovane organske materije su sušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobila žuta guma/čvrsta supstanca (112.5mg). Ovaj materijal je ponovo rastvoren u MeOH/DCM, adsorbovan na siliki pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na koloni (7.5% MeOH u DCM, ~75 mL silike) da bi se dobio 3-bromo-4-(3-metil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piridin kao krem čvrsta supstanca (82.3mg, 64% Prinos). MS (ES+) 240.9.

Korak 5: 4-(3-metil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piridin-3-amin

[0417] Korišćen je postupak sličan Koraku 3a Pripreme N-14.

Priprema N-29: 5-metil-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin

[0418]

22

Korak 1: 3-bromo-4-hidrazinil-5-nitropiridin

[0419] Rastvor 3-bromo-4-hloro-5-nitro-piridina (500 mg, 2.106 mmol), hidrazin hidrata (158.1 mg, 153.6 µL, 3.159 mmol) u etanolu (5.000 mL) je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Svetlo žuti talog je filtriran, ispran metanolom i sušen pod vakuumom da bi ostao 3-bromo-4-hidrazinil-5-nitropiridin (390 mg, 79.5%). MS (ES-) 232.8.

Korak 2: 3-bromo-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)-5-nitropiridin

[0420] 2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)acetaldehid (320 mg, 2.459 mmol) i (3-bromo-5-nitro-4-piridil)hidrazin (286.4 mg, 1.229 mmol) su zagrevani pod refluksom u etanolu (2.864 mL) preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je podeljen između DCM i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata. Kombinovani organski ekstrakt je sušen preko MgSO4i koncentrovan in vacuo da bi ostao 3-bromo-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)-5-nitropiridin kao žuto ulje. (200mg, 85%). MS (ES+) 284.9.

Korak 3: 3-metil-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)-5-nitropiridin

[0421] U posudu osušenu u peći pod azotom dodat je 3-bromo-4-(5-metilpirazol-1-il)-5-nitropiridin (200 mg, 0.6005 mmol), Pd2dba3(8.249 mg, 0.009008 mmol) i X-Phos (8.590 mg, 0.01802 mmol). Dodat je anhidrovani THF (1.700 mL), a zatim 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan; trimetilaluman (153mg, 0.6005 mmol). Reakcija je zagrevana na refluksu u trajanju od 2 časa, zatim hlađena do temperature sredine pre gašenja dodavanjem vode. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (x 3) i kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan in vacuo da bi ostala 3/1 smeša 3-metil-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)-5-nitropiridina i 4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)-3-nitropiridina, koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. (140 mg proizvoda izolovanog kao smeša). MS (ES+) 219.0. Korak 4: 5-metil-4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-amin

[0422] Redukcija je izvedena prema Koraku 2 Pripreme N-1. MS (ES+) 189.0.

Priprema N-30: 5-fluoro-4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-amin

[0423]

Korak 1: 3-bromo-5-fluoro-4-hidrazinilpiridin

[0424] 3-bromo-4-hloro-5-fluoro-piridin (500 mg, 2.376 mmol), hidrazin (761.4 mg, 745.7 µL, 23.76 mmol), Na2CO3(503.7 mg, 4.752 mmol) u cikloheksanolu je zagrevan na 100ºC preko noći. Reakciona smeša je filtrirana na celitu i sipana na SCX kolonu, isprana sa DCM/MeOH smešama i eluirana sa 2M rastvorom NH3u MeOH. Filtrat je koncentrovan in vacuo i 3/1 smeša 3-bromo-5-fluoro-4-hidrazinilpiridina i 3-bromo-4-hloro-5-hidrazinilpiridina je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 205.9.

Korak 2: 3-bromo-5-fluoro-4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin

[0425] Acetamid (136.7 mg, 2.315 mmol), 1,1-dimetoksi-N,N-dimetil-metanamin (382.0 mg, 425.9 µL, 3.206 mmol), u dioksanu je zagrevan na 45-50°C pod 150mm Hg vakuumom u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. U ostatak, dodat je (3-bromo-5-fluoro-4-piridil)hidrazin (367 mg, 1.781 mmol) i dioksan-sirćetna kiselina (1/1) i smeša je zagrevana na 130°C u trajanju od 1 časa, zatim na 160°C u trajanju od 2 časa. Na sobnoj temperaturi, ostatak je sipan na SCX kolonu, ispran sa MeOH/DCM smešom. Filtrat je koncentrovan in vacuo proizvodeći čist 3-bromo-5-fluoro-4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin kao tamno ulje. MS (ES+) 257.0.

Korak 3: 5-fluoro-4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-amin

[0426] Reakcija aminacije je izvedena prema postupku sličnom Koraku 3 iz Pripreme N-14.

MS (ES+) 194.0.

Priprema N-31: terc-butil piperidin-4-karboksilat

[0427]

Korak 1: O1-benzil O4-terc-butil piperidin-1,4-dikarboksilat 21

22

[0428] U 5L posudu sa obodom sipana je 1-benziloksikarbonilpiperidin-4-karboksilna kiselina 20 (200 g, 759.6 mmol) u DCM (500.0 mL), a zatim dodatni DCM (2.000 L), tbutanol (140.8 g, 181.7 mL, 1.899 mol) i DMAP (46.40 g, 379.8 mmol). Smeša je hlađena na ledenom/slanom/vodenom kupatilu (unutrašnja -3.4°C). U porcijama je dodavan 3-(etiliminometilenamino)-N,N-dimetil-propan-1-amin (hlorovodonična kiselina (1)) (145.6 g, 759.6 mmol) tokom 15 min., sa levkom za dodavanjem ispiranim sa DCM (500.0 mL). Smeša je mešana na ledenom kupatilu približno 2 časa. Ledeno kupatilo je zatim uklonjeno (unutrašnja 3°C) i ostavljeno da se zagreva do sobne temperature preko noći. Smeša je isprana sa 5% limunskom kiselinom (2 x 500 mL), zatim zasićenim NaHCO3(500 mL), vodom (500 mL) i organske materije su sušene preko MgSO4, koji je zatim filtriran i koncentrovan in vacuo da bi ostao proizvod 21 kao visokozno svetlo žuto ulje koje je prešlo u belu čvrstu supstancu usled stajanja. (246.1g, 101%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 5.08 (s, 2H), 3.90 (dt, 2H), 2.93 (br s, 2H), 2.43 (tt, 1H), 1.80 - 1.76 (m, 2H) i 1.45 - 1.37 (m, 11H).

Korak 2: terc-butilpiperidin-4-karboksilat 22

[0429] U 3L posudu „florentine“ pod azotom sipan je Pd na C, vlažan, Degussa (10%Pd, 50% voda) (8.120 g, 76.30 mmol), zatim EtOAc (1.706 L). Smeša je degazirana preko N2/vakuumskih ciklusa (3x), zatim je dodat rastvor O1-benzil O4-terc-butil piperidin-1,4-dikarboksilata 21 (243.7 g, 763.0 mmol) u EtOAc (243.7 mL). Smeša je mešana pod atmosferom vodonika preko noći. Vodonik je dopunjen i smeša je mešana dodatnih 3.5 časa. Dodat je metanol (60 mL) da bi se pomoglo rastvaranje taloga, zatim je izvršeno filtriranje kroz celit, ispiranjem metanolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostalo braon ulje sa blagom suspenzijom bele čvrste supstance, 138.6g. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom, i isprana minimalnom količinom EtOAc. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostao željeni proizvod kao svetlo braon ulje (129g, 91%). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.88 (dt, 2H), 2.44 (td, 2H), 2.23 (tt, 1H), 1.69 - 1.64 (m, 2H) i 1.41 - 1.33 (m, 11H).

Priprema N-32: 1-(oksetan-3-il)piperazin

[0430]

22

Korak 1: benzil 4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karboksilat 24

[0431] Benzil piperazin-1-karboksilat 23 (27.3 mL, 142.2 mmol) je rastvoren u suvom THF (313.1 mL) i dodat je oksetan-3-on (12.29 g, 10.93 mL, 170.6 mmol). Dobijeni rastvor je hlađen u ledenom kupatilu. U porcijama je dodavan NaBH(OAc)3(59.99 g, 284.4 mmol) tokom 30 min., dodato je oko četvrtine. Smeša je uklonjena iz ledenog kupatila, ostavljena da se zagreva do sobne temperature, zatim je nastavljeno dodavanje NaBH(OAc)3u porcijama tokom 30 min. Pošto je dodavanje završeno, zabeležena je egzoterma od 22°C lagano do 32°C, pri čemu je smepa zatim hlađena na ledenom kupatilu sve dok se nije dostigla unutrašnja temperatura od 22°C. Ledeno kupatilo je uklonjeno i unutrašnja temperatura reakcione smeše je postojano bila na 22°C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći.

[0432] Dobijena bela suspenzija je ugašena dodavanjem 2M rastvora natrijum karbonata (približno 150 mL) (pH = 8) i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio THF. Proizvod je zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 x 250 mL). Organske materije su kombinovane, sušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi ostao proizvod 24 kao bela čvrsta supstanca (32.7g 83% prinos).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.39 -7.30 (m, 5H), 5.07 (s, 2H), 4.52 (t, 2H), 4.42 (t, 2H), 3.43 - 3.39 (m, 5H) i 2.22 (t, 4H). MS (ES+) 276.8.

Korak 2: 1-(oksetan-3-il)piperazin 25

[0433] U 1L „florentine“ posudu dodat je Pd(OH)2(1.661 g, 2.366 mmol) pod azotom. Dodati su MeOH (130.8 mL) i EtOAc (261.6 mL) i smeša je degazirana preko vakuumskih/azotnih ciklusa (3x). Zatim je dodat benzil 4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karboksilat 24 (32.7 g, 118.3 mmol) i smeša je mešana pod atmsoferom vodonika tokom vikenda. Smeša je filtrirana kroz čep od celita, ispiranjem sa EtOAc, zatim metanolom. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostao proizvod 25 kao narandžasto ulje 1 (8.1g, kvantitativan prinos).<1>H NMR (500 MHz,

22

DMSO-d6) δ 4.51 (t, 2H), 4.41 (t, 2H), 3.36 - 3.30 (maskirani signal, 1H), 2.69 (t, 4H) i 2.14 (br s, 4H).

[0434] Sledeća referentna jedinjenja su uspešno pripremljena upotrebom postupka sličnog Primeru 1 ili Primerima 3a-3e:

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-izopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-4);

2-amino-N-(5-ciklopropil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-5);

2-amino-N-(5-hloro-4-(8-metilheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-6);

N-(4-(1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-7);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(2-(metilamino)etil)-1H-pirazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-8);

2-amino-N-(4-(4-(2-(dimetilamino)etil)-1H-pirazol-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-9);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-10);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-11);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-12);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-13);

2-amino-6-hloro-N-(5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-14);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-15);

2-amino-6-fluoro-N-(5-metil-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-16);

2-amino-N-(4-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-17);

22

N-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-18);

(R,S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-19);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-20);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-21);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(2-metoksietil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-22);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-23);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-24);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-metiloksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-25);

N-(4-(1H-pirazol-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-26);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-27);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-28);

N-(4-(1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-29);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-4-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-30);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-(oksetan-3-il)-2,5-diazabiciklo[4.1.0]heptan-2-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-31);

2-amino-N-(5-ciklopropil-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-32);

2-amino-N-(4-(4-ciklopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-33);

2-amino-N-(4-(4-(terc-butil)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-34);

22

2-amino-6-hloro-N-(4-((3S,4S)-4-(dimetilamino)-3-hidroksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-35);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-((dimetilamino)metil)-4-hidroksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-36);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-37);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-izopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-39);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-40);

2-amino-6-hloro-N-(5-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-41);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-hidroksi-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-42);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-43);

2-amino-6-hloro-N-(4-(5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-7(8H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-44);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-((dimetilamino)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-45);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-((dimetilamino)metil)-4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-46);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-(metoksimetil)-4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-47);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-ciklobutilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-48);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(2-(dimetilamino)etil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-49);

2-amino-N-(6-amino-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-50);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-etilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-51);

2-amino-6-hloro-N-(6-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-52);

2

2-amino-6-hloro-N-(4-(3,3,4-trimetilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-53);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-54);

2-amino-N-(4-(3-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-55);

N-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-56);

2-amino-6-hloro-N-(5-metil-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-57);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-58);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-59);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(2-metoksietil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-60);

2-amino-6-hloro-N-(4-(8-metilheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-61);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-metiloksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-62);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-(hidroksimetil)-4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-63);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-ciklopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-64);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-(heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-65);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-66);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-67);

2-amino-6-hloro-N-(4-(1-oksidotiomorfolino)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-68);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(2-hidroksipropan-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-69);

2 1

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-(trifluorometil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-70);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-(heksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-71);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2,4-dimetilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-72);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-73);

metil-1-(3-(2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)piperidin-4-karboksilat (Jedinjenje I-N-74);

2-amino-6-hloro-N-(4-(5,6-dihidroimidazo[1,5-a]pirazin-7(8H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-75);

2-amino-6-(2-cijanopropan-2-il)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-76);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(pirolidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-77);

2-amino-6-(1-cijanoetil)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-78);

2-amino-N-(4-(azepan-1-il)piridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-79);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-80);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-morfolinopiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-81);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-82);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(4-hidroksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-83);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-84);

2-amino-N-(5-hloro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-85);

2-amino-N-(5-(difluorometil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-111)

2 2

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-(oksetan-3-il)-2,5-diazabiciklo[4.1.0]heptan-2-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-112);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(8-metilheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-114);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-115);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-116);

2-amino-6-hloro-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-117);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-125);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-metoksietil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-127);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(hinuklidine-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-130);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-9-oksa-1,4-diazaspiro[5.5]undekan-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-133);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-135);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-oksoheksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-136);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(heksahidropirazino[2,1-c][1,4]oksazin-8(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-137);

2-amino-6-(2-cijanopropan-2-il)-N-(5-fluoro-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-138);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-hidroksi-2-metilpropil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-139);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-140);

2-amino-6-fluoro-N-(4-morfolinopiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-141);

2-amino-6-(2-cijanopropan-2-il)-N-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-142);

2

2-amino-6-(1-cijanoetil)-N-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-143);

2-amino-6-(1-cijanoetil)-N(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-144);

2-amino-6-(2-cijanopropan-2-il)-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-145);

2-amino-N-(4-(4-(N,N-dimetilsulfamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-146);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-oksopirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-147);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(N-metil-N-(1-metilpiperidin-4-il)sulfamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-148);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(morfolinometil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-149);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-150);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metil-2-oksopiperazin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-151);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-152);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(morfolinosulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-155);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-161);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-162);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-163);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-165);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-166);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-(pirolidin-1-il)etoksi)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-167);

2 4

2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-169);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(morfolinosulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-170);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((4-metil-3-oksopiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-171);

2-amino-6-(1-cijanociklopropil)-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-180);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-182);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metil-1-oksa-4,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-183);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(tiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-184);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-186);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-(pirolidin-1-il)acetil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-187);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-morfolinopiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-189);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-190);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(3-(4-metilpiperazin-1-karbonil)pirolidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-191);

2-amino-6-(1-cijanociklopropil)-N-(5-fluoro-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-192);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((4-metil-2-oksopiperazin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-193);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-196);

2-amino-N-(4-(4-((3,3-difluoropirolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-197);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(oksetan-3-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-200);

2

2-amino-N-(4-(2-ciklopropil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-202);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((2-metoksietil)sulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-208);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metil-3-oksopiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-209);

2-amino-N-(4-(1,1-dioksidotiomorfolino)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-210);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-metil-3-oksopiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-212);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-213);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((metilsulfonil)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-215);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metil-2-okso-1-oksa-3,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-216);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(6-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-217);

2-amino-N-(4-(3,5-dimetil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-218);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-(trifluorometil)-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-219);

2-amino-N-(4-(2,2-dimetilpirolidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-220);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-221);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-222);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-223);

2-amino-6-fluoro-N-(4-((3aR,7aR)-2-metil-3-oksoheksahidro-1H-pirolo[3,4-c]piridin-5(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-224);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metil-1H-pirazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-225);

2

N-(4-(2-oksa-7-azaspiro[3.5]nonan-7-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-226);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(3-metil-2-okso-1-oksa-3,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-229);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(2-oksopirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-230);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-3-okso-2,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-231);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-232);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(8-metil-9-oksoheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-233);

4-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)-N,N-dimetilmorfolin-2-karboksamid (Jedinjenje I-N-234);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-2-okso-1,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-235);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-3-okso-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-236);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-oksotetrahidro-1H-oksazolo[3,4-a]pirazin-7(3H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-238);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(2-oksa-7-azaspiro[3.5]nonan-7-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-239);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(8-metil-9-oksoheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-240);

N-(4-(4-(1,2,4-oksadiazol-3-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-241);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-242);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metil-4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-243);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(6-oksoheksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-244);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(8-izopropil-9-oksoheksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-245);

2

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(pirolidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-246);

(S)-2-amino-N-(4-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-izotiazolo[2,3-a]pirazin-5(3H)-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-247);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(3-oksotetrahidro-1H-oksazolo[3,4-a]pirazin-7(3H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-248);

2-amino-N-(4-(1,1-dioksidotiomorfolino)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-250);

2-amino-N-(4-(2,2-dimetil-1,1-dioksidotiomorfolino)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-252);

N-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.5]nonan-6-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-253);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-256);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(6-oksoheksahidropirolo[1,2-a]pirazin-2(1H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-258);

2-amino-6-fluoro-N-(1-metil-1H-pirolo[3,2-c]piridin-7-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-259);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(4-metil-1,2,5-oksadiazol-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-260);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metil-4H-1,2,4-triazol-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-263);

2-amino-N-(4-(azepan-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-264);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-265);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metoksipiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-266);

2-amino-N-(4-(4-((dimetilamino)metil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-267);

N-(4-(4-(1,3,4-oksadiazol-2-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-268);

2-amino-N-(4-(4,5-dimetil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-269);

2

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-270);

2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-271);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-metil-1-oksa-4,9-diazaspiro[5.5]undekan-9-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-272);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-ilsulfonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-273);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-277);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-279);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(6-oksoheksahidro-1H-pirido[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-280);

2-amino-N-(5-hloro-4-(pirolidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-281);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(metoksimetil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-282);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-metil-1H-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-283);

2-amino-N-(5-hloro-4-(3-hidroksipirolidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-284);

(R)-2-amino-N-(5-hloro-4-(3-cijanopirolidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-285);

2-amino-N-(5-hloro-4-(5-metilheksahidropirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-286);

2-amino-N-(5-hloro-4-(3-(metilsulfonil)pirolidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-287);

N-(4-(4-(1H-imidazol-1-il)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-288)

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(3-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-289);

2-amino-N-(4-(3-(dimetilkarbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-290);

2

2-amino-6-fluoro-N-(5’-metoksi-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-82);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(2-metoksietil)-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-83);

2-amino-N-(4-ciklopropil-5-metoksipiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IC-84);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-1);

2-amino-N-(4-(4-(dimetilkarbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-2);

2-amino-N-(5-hloro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-3);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-4);

2-amino-6-hloro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-5);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metil-1,4-diazepan-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-6);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-7);

2-amino-N-(4-(4-(4-ciklopropilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-13);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3,3,4-trimetilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-15);

2-amino-N-(4-(4-cijano-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-25);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-metil-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-54);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(5-metil-2,5-diazabiciklo[4.1.0]heptan-2-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-65); i

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-hloropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-66).

24

[0435] Sledeća referentna jedinjenja su pripremljena prema postupcima koji su slični onome prikazanom u postupku opisanom u Primeru 2:

2-amino-N-(4-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-86);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(metilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-87);

2-amino-6-hloro-N-(4-(piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-88);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-89);

2-amino-N-(4-(2-(aminometil)morfolino)piridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-90);

2-amino-N-(4-(4-(aminometil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-91);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-118);

2-amino-N-(5-hloro-4-(piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-126);

2-amino-6-fluoro-N-(6-(metilamino)-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-129); i

N-(4-(2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-255).

Primer 4: 2-amino-N-(4-(4-(4-etilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (jedinjenje I-G-9 – referentno jedinjenje)

[0436]

Korak 1: 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilna kiselina (Jedinjenje I-N-92)

[0437] terc-butil 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)piperidin-4-karboksilat pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Primeru 1 je rastvoren u DCM (5mL). Dodata je TFA (1 mL, 12.98 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 časova. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobila 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karboksilna kiselina kao bež čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 418.1.

Korak 2: 2-amino-N-(4-(4-(4-etilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0438] Smeša 1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)piperidin-4-karboksilne kiseline (trifluorosirćetna kiselina (2)) (30 mg,), (benzotriazol-1-iloksi-dimetilamino-metilen)-dimetil-amonijuma (jon bor tetrafluorida (1)) (46.17 mg, 0.1438 mmol) i TEA (33.07 mg, 45.55 mL, 0.3268 mmol) u DMF je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 minuta, nakon čega je usledilo dodavanje 1-etilpiperazina (13.68 mg, 0.1198 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa. Smeša je filtrirana i prečišćena direktno pomoću „fractionlynx“ proizvodeći 2-amino-N-(4-(4-(4-etilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. prinos 38% MS (ES+) 514.0.

[0439] Sledeće jedinjenje je uspešno pripremljeno upotrebom postupka sličnog Primeru 4: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-32);

[0440] Sledeća referentna jedinjenja su uspešno pripremljena upotrebom postupka sličnog Primeru 4:

2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-8);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oktahidropirolo[1,2-a]pirazin-2-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-10);

(R)-2-amino-N-(4-(4-(3-(dimetilamino)pirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-11);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-14);

2-amino-N-(4-(4-((3-(dimetilamino)propil)(metil)karbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-16);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(5-metiloktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-18);

2-amino-N-(4-(4-(terc-butilkarbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-19);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((1-metilpiperidin-4-il)karbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-20);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-metoksiazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-21);

2-amino-N-(4-(4-(3-(dimetilamino)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-22);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((1-metilazetidin-3-il)karbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-23);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((1-metilpirolidin-3-il)karbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-24);

2-amino-N-(4-(4-((3-(dimetilamino)propil)karbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-26);

2-amino-N-(4-(4-(dimetilkarbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-29);

2-amino-N-(4-(4-((2-(dimetilamino)etil)karbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-30);

2-amino-N-(4-(4-((2-(dimetilamino)etil)(metil)karbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-31);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(metilkarbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-33);

24

2-amino-N-(4-(4-(4-ciklobutilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-35);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(morfolin-4-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-36);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-ilkarbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-37);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metil-4,7-diazaspiro[2.5]oktan-7-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-38);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((2-metoksietil)(metil)karbamoil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-40);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-hidroksiazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-41);

2-amino-N-(4-(4-((2-(azetidin-1-il)etil)karbamoil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-42);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(pirolidin-1-il)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-43);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.1]oktan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-46);

(S)-2-amino-N-(4-(4-(3,4-dimetilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-47);

N-(4-(4-([1,3’-biazetidin]-1’-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-49);

(R)-2-amino-N-(4-(4-(3,4-dimetilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-50);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(8-metil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-52);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(5-metil-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-53);

2-amino-6-fluoro-N-(5-metil-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-55);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(piperidin-1-il)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-57); (S)-N-(4-(4-([1,3’-bipirolidin]-1’-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-58);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-(pirolidin-1-il)piperidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-59);

N-(4-(4-([1,4’-bipiperidin]-1’-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-60);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-hidroksi-3-metilazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-63);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(piperidin-1-il)pirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-64);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-fluoroazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-67);

2-amino-N-(4-(4-(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-68);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.1]oktan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-hloropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-69);

N-(4-(4-((5S)-1,4-diazabiciklo[3.2.1]oktan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-70);

N-(4-(4-((5R)-1,4-diazabiciklo[3.2.1]oktan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-71);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-72);

2-amino-N-(4-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-73);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-fluoroazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-74);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-metoksi-3-metilazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-75);

2-amino-N-(4-(4-(3-cijanoazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-76);

2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-77);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-metoksiazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-78);

24

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-metoksi-3-metilazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-79);

2-amino-N-(4-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-80);

2-amino-N-(4-(4-(3-cijanoazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-81);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-fluoroazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-82);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(pirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-83);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.4]oktan-6-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-84);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(morfolin-4-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-85);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(metilsulfonil)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-86);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-87);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-88);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-(metilsulfonil)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-89);

N-(4-(4-(1-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-90);

2-amino-N-(4-(4-(3-etoksiazetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-91);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-(3-metiloksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-92);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-metoksipirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-93);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(3-metoksipirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-94);

4-(1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karbonil)-1-metilpiperazin 1-oksid (Jedinjenje I-G-95);

24

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-(1-metilazetidin-3-il)piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-96);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(metoksimetil)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-98); i

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-metoksipirolidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-99).

Primer 5: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-12 - referentno jedinjenje)

[0441]

[0442] terc-butil 4-(1-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperidin-4-karbonil)piperazin-1-karboksilat pripremljen upotrebom postupka sličnog Primeru 4 rastvoren je u smeši DCM (5 mL) / TFA (1 mL, 12.98 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 90 min., zatim koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću „fractionlynx“. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se proizveo 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 486.2.

[0443] Sledeća referentna jedinjenja su uspešno pripremljena upotrebom postupka sličnog Primeru 5:

2-amino-N-(4-(4-(3,3-dimetilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-27);

N-(4-(4-(4,7-diazaspiro[2.5]oktan-7-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-28);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-(metilamino)azetidin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-34);

N-(4-(4-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-44);

24

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-45);

2-amino-N-(5-hloro-4-(4-(piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-48);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-51);

2-amino-6-fluoro-N-(5-metil-4-(4-(piperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-56);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(3-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-61); i

N-(4-(4-(2,5-diazabiciklo[4.1.0]heptan-2-karbonil)piperidin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-G-62).

Primer 6: 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-93 - referentno jedinjenje)

[0444]

Korak 1: 2-amino-6-hloro-N-(4-(4-oksopiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0445] U rastvor 2-amino-6-hloro-N-[4-(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekan-8-il)-3-piridil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (pripremljen prema postupku sličnom Primeru 1) (420 mg, 0.9771 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) dodat je HCl (4.886 mL od 2 M, 9.771 mmol). Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rezultujuća reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL), napravljena baznom sa 2.5 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida i ekstrahovana tri puta sa dihlorometanom (100 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-amino-6-hloro-N-(4-(4-oksopiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao bledo žuta čvrsta supstanca koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 386.1.

24

Korak 2: 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0446] Rastvor 2-amino-6-hloro-N-[4-(4-okso-1-piperidil)-3-piridil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (50 mg, 0.1296 mmol), azetidina (hlorovodonična kiselina (1)) (12.12 mg, 0.1296 mmol) i amonijum formata (8.172 mg, 0.1296 mmol) u toluenu je zagrevan na refluksu u trajanju od 1 časa sa Dean-Stark aparatom. Reakcija je hlađena do sobne temperature i isparavana. Dobijena žuta čvrsta supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena pomoću „fractionlynx“ da bi se proizveo 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao bela čvrsta supstanca. (27mg, 31%). MS (ES+) 427.2.

[0447] Sledeća referentna jedinjenja su uspešno pripremljena upotrebom postupka sličnog Primeru 6:

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-94);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-metoksipirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-95);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-96);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-97);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-fluoropirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-98);

N-(4-(4-(2-oksa-6-azaspiro[3.4]oktan-6-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-99);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(1-oksidotiomorfolino)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-100);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(5,6-dihidroimidazo[1,5-a]pirazin-7(8H)-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-101);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(5,6-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-7(8H)-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-102);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-fluoropirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-103);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-morfolinopiperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-104);

24

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(pirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-105);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[l,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-106);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3-metoksiazetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-107);

2-amino-6-hloro-N-(4-(4-(3,3-difluoroazetidin-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-108); and

N-(4-(4-(6-oksa-1-azaspiro[3.3]heptan-1-il)piperidin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-109).

Primer 7: 2-amino-N-(5-hloro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-110 - referentno jedinjenje)

[0448]

[0449] U rastvor 2-amino-N-(5-hloro-4-(piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (51mg, 0.13mmol) (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 2) u THF (4 mL) dodat je oksetan-3-on (14.31 mg, 11.63 µL, 0.1986 mmol) i triacetoksiborohidrid (jon natrijuma (1)) (56.12 mg, 0.2648 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 4 časa. Reakciona smeša je podeljena između vodenog zasićenog rastvora NaHCO3i etil acetata. Organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću „fractionlynx“ da bi se dobio 2-amino-N-(5-hloro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 447.2.

[0450] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana prema postupku sličnom Primeru 7:

2-amino-N-(5-hloro-4-(8-(oksetan-3-il)heksahidro-1H-pirazino[1,2-a]pirazin-2(6H)-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-38);

2

(R)-2-amino-N-(5-ciklopropil-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-119);

(S)-2-amino-N-(5-ciklopropil-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-120);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-121);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-122);

2-amino-6-fluoro-N-(5-metil-4-(4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-123); i

2-amino-N-(5-hloro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-124).

Primer 8: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpiperidin-4-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-128 - referentno jedinjenje)

[0451]

[0452] Bočica za mikrotalasni reaktor je napunjena sa 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-piperazin-1-il-3-piridil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamidom (79 mg, 0.2110 mmol) (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 2), 1-metilpiperidin-4-karboksilnom kiselinom (hlorovodonična kiselina (1)) (37.90 mg, 0.2110 mmol), TBTU (74.52 mg, 0.2321 mmol), Et3N (46.97 mg, 64.70 µL, 0.4642 mmol) u NMP (0.5 mL), epruveta je hermetički zatvorena i mešana na 100°C preko noći. Smeša je hlađena do sobne temperature i sipana u SCX kolonu ispranu sa MeOH, isprana sa MeOH i oslobođena metanolskim amonijakom. Amonijačni ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 110 mg braon ulja/gume, koja je prečišćena pomoću hromatografije na Fraction Lynx reverzno faznoj koloni. Čiste frakcije su kombinovane i sušene zamrzavanjem, proizvodeći 2-amino-6-fuoro-N-(5-fluoro-4-

2 1

(4-(1-metilpiperidin-4-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 500.2.

[0453] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana prema postupku sličnom Primeru 8: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(hinuklidin-4-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-134);

2-amino-N-(4-(4-(2-(dimetilamino)acetil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-153);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpirolidin-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-156);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-157);

2-amino-N-(4-(4-(2-(azetidin-1-il)acetil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-160);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpiperidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-173);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilmorfolin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-174);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-181);

2-amino-N-(4-(4-(1-etilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-185);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(2-(pirolidin-1-il)acetil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-187);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(1-metilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-198);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(1-metilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-199);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oktahidroindolizin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-203);

2-amino-N-(4-(4-(1-etilpiperidin-2-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-204);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-izopropilpirolidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-205);

2 2

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-izopropilpirolidin-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-206);

2-amino-N-(4-(4-(1-etilpirolidin-3-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-207);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-211);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(1-metilpiperidin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-214);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilmorfolin-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-227);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(oksetan-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-254);

N-(4-(2-acetil-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-251);

N-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IN-254);

N-(4-(2-acetil-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-257);

metil-4-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Jedinjenje I-N-261);

N-(4-(1-acetil-1,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-262);

N-(4-(1-acetilpiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-69);

2-amino-N-(4-(1-(ciklopropankarbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-70);

2-amino-N-(4-(1-(1-cijanociklopropankarbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-71);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(tetrahidrofuran-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-274);

N-(4-(4-acetilpiperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-275);

2-amino-N-(4-(4-(ciklopropankarbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-276); i

2

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-278).

Primer 9: 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-3-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-168 - referentno jedinjenje)

[0454]

[0455] Terc-butil 3-(4-(3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-5-fluoropiridin-4-il)piperazin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilat (73 mg, 0.1309 mmol) (pripremljen upotrebom postupka sličnog Primeru 8) rastvoren je u DCM (219.0 µL). Dodata je TFA (298.5 mg, 201.7 µL, 2.618 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je prečišćen pomoću „fractionlynx“ proizvodeći 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-3-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao krem čvrstu supstancu. MS (ES+) 458.1.

[0456] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana prema postupku sličnom Primeru 9:

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(morfolin-2-karbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-172).

Primer 10: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-158 - referentno jedinjenje)

[0457]

2 4

[0458] Tetrahidropiran-4-sulfonil hlorid (16.28 mg, 0.08815 mmol) dodat je u suspenziju 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-piperazin-1-il-3-piridil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (30 mg, 0.08014 mmol) (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 2) i Et3N (12.16 mg, 16.75 µL, 0.1202 mmol) u DMF (0.2 mL). Sirova smeša je prečišćena pomoću „Fractionlynx“ HPLC. Čiste vodene frakcije su kombinovane i liofilizovane, proizvodeći 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 523.1.

[0459] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana prema postupcima sličnim onome prikazanom u postupku opisanom u Primeru 10:

2-amino-N-(4-(4-(ciklopropilsulfonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-159);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((1-metilpiperidin-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-175);

2-amino-N-(4-(4-(ciklopropilsulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-176);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-177);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-178);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((tetrahidrofuran-3-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-179);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((1-metilpiperidin-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-188);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(oksetan-3-ilsulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-195); i

2

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(oksetan-3-ilsulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-202).

Primer 11: 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-131 - referentno jedinjenje)

[0460]

[0461] U rastvor (R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(pirolidin-3-iloksi)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 2) rastvoren u smeši DCE (5.0 mL) i AcOH (0.050 mL). Dodat je formaldehid (37% u vodi, 47.46mg, 0.5848 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min. U porcijama je dodavan triacetoksiboranuid (jon natrijuma (1)) (186 mg, 0.8772 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa i ugašena dodavanjem vode i metanola. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću „fractionlynx“ da bi se proizveo 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)sulfonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 455.2.

[0462] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana prema postupku sličnom Primeru 11:

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-132);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-154); i

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-((1-metilazetidin-3-il)oksi)piperidin-1-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-164).

Primer 12: 2-amino-N-(5-cijano-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-113 - referentno jedinjenje)

[0463]

2

[0464] Smeša 2-amino-N-[5-bromo-4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-piridil]-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (80.4 mg, 0.1790 mmol) sintetisanog prema postupku sličnom Primeru 1, Pd2(dba)3(6.557 mg, 0.007160 mmol), cink cijanida (18.92 mg, 10.23 µL, 0.1611 mmol) i xantphos (8.286 mg, 0.01432 mmol) postavljena je u epruvetu za mikrotalasni reaktor koja se hermetički zatvara i ispažnjena i isprana azotom. Dodat je rastvarač DMF (1.6 mL) i azot je barbotiran kroz reakciju (sa iglom kao ulazom i izlazom) u trajanju od 5 min. Reakcija je zagrevana na 120°C u trajanju od 1 časa. LCMS pokazuje da je reakcija blizu završetka, tako da je hlađena do sobne temperature i sipana na SCX-2 kertridž, eluiranjem sa MeOH i zatim NH3/MeOH. Bazna frakcija je isparavana i prečišćena pomoću „fractionlynx“ i liofilizovana da bi se proizveo 2-amino-N-(5-cijano-4-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao bela čvrsta supstanca. MS (ES+) 396.2. Primer 13: 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-3-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-194 - referentno jedinjenje);

[0465] Rastvor 2-amino-N-[4-[4-(azetidin-3-karbonil)piperazin-1-il]-5-fluoro-3-piridil]-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (trifluorosirćetna kiselina (2)) (20 mg, 0.02918 mmol), (sintetisan prema Primeru 9) i formaldehida (3.552 µL od 37 %tež./zapr., 0.04377 mmol) u DMF (1 mL) mešan je u trajanju od 1 časa na sobnoj temperaturi. Dodat je triacetoksiboranuid (jon natrijuma (1)) (9.277 mg, 0.04377 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa pre gašenja dodavanjem metanola. Sirova smeša je prečišćena pomoću „Fractionlynx“ HPLC. Vodene frakcije su kombinovane i liofilizovane, proizvodeći 2-amino-N-(4-(4-(azetidin-3-karbonil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (3mg, 21%). MS (ES+) 472.1.

Primer 14: 2-amino-N-(4-(4-(2-(azetidin-1-il)-2-oksoetil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-N-228 - referentno jedinjenje)

2

[0466] 1-(azetidin-1-il)-2-hloro-etanon (12.03 mg, 0.09003 mmol) dodat je u rastvor 2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-piperazin-1-il-3-piridil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (trifluorosirćetna kiselina (3)) (50 mg, 0.06002 mmol) (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 2) i Et3N (30.37 mg, 41.83 mL, 0.3001 mmol) u DMF (2 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 18 časova.

[0467] Sirova smeša je prečišćena pomoću „Fractionlynx“ HPLC. Vodene frakcije su kombinovane i liofilizovane proizvodeći 2-amino-N-(4-(4-(2-(azetidin-1-il)-2-oksoetil)piperazin-1-il)-5-fluoropiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (30mg, 71%). MS (ES+) 472.1.

Analitički podaci jedinjenja

[0468]

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

Priprema O-1: (S)-terc-butil 3-((3-aminopiridin-4-il)oksi)piperidin-1-karboksilat [0469]

2

Korak 1: terc-butil (3S)-3-[(3-nitro-4-piridil)oksi]piperidin-1-karboksilat

[0470] Natrijum hidrid (492.0 mg, 12.30 mmol) dodat je u rastvor terc-butil (3S)-3-hidroksipiperidin-1-karboksilata (2.095 g, 10.41 mmol) u THF (20 mL) i reakcija je mešana na 0°C u trajanju od 15 minuta. Dodata je suspenzija 4-hloro-3-nitro-piridina (1.5 g, 9.461 mmol) u THF (10 mL) i reakcija je ostavljena da se lagano zagreva do temperature sredine tokom 2 časa. Reakcija je ugašena vodom i smeša je podeljena između EtOAc i fiziološkog rastvora. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 80 g kolona, eluiranjem sa 0 do 100% EtOAc/petrol etra) da bi se dobio tercbutil (3S)-3-[(3-nitro-4-piridil)oksi]piperidin-1-karboksilat kao bledo žuta čvrsta supstanca (2.65 g, 87% prinos, 93% ee). MS (ES+) 324.1.

Korak 2: (S)-terc-butil 3-((3-aminopiridin-4-il)oksi)piperidin-1-karboksilat

[0471] Pd na C, (10%, vlažan, Degussa) (1 g, 0.9397 mmol) dodat je u mešani rastvor tercbutil (3S)-3-[(3-nitro-4-piridil)oksi]piperidin-1-karboksilata (2.65 g, 8.196 mmol) u EtOAc (30 mL) / EtOH (15 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 16 časova. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz čep od celita i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova kao prljavo bela čvrsta susptanca (2.46 g, >100 % Prinos). MS (2ES+) 587.3.

[0472] Sledeći aminopiridini su pripremljeni upotrebom Pripreme O-1:

(R)-4-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)piridin-3-amin:

4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin:

2 4

(R)-4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-amin:

(S)-4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-amin:

4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-amin:

4-(2-metoksietoksi)piridin-3-amin:

2-((3-aminopiridin-4-il)oksi)etanol:

2

3-((3-aminopiridin-4-il)oksi)propan-1-ol:

4-(2-(dimetilamino)etoksi)piridin-3-amin:

4-(2-morfolinoetoksi)piridin-3-amin:

(R)-4-((1-(2-metoksietil)piperidin-3-il)oksi)piridin-3-amin:

6-hloro-4-(2-(dimetilamino)etoksi)piridin-3-amin:

2

-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)etoksi)piridin-3-amin:

-(3-(dimetilamino)propoksi)piridin-3-amin:

-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-(trifluorometil)piridin-3-amin:

-hloro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin:

2 (R)-4-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)piridin-3-amin:

(1s,4s)-metil 4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)cikloheksankarboksilat:

(1r,4r)-metil 4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)cikloheksankarboksilat:

(S)-4-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)piridin-3-amin:

4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin:

(S)-4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin:

2

-(2,2,2-tritluoroetoksi)piridin-3-amin:

-etoksipiridin-3-amin:

-metoksipiridin-3-amin:

-izopropoksipiridin-3-amin:

-ciklobutoksipiridin-3-amin:

2

-(ciklopentiloksi)piridin-3-amin:

-(oksetan-3-iloksi)piridin-3-amin:

-(ciklopropilmetoksi)piridin-3-amin:

-(cikloheksiloksi)piridin-3-amin:

-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-amin:

(R)-4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-amin:

(S)-4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-amin:

4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oksi)piridin-3-amin:

4-((tetrahidro-2H-piran-3-il)oksi)piridin-3-amin:

(R)-terc-butil 3-((3-aminopiridin-4-il)oksi)piperidin-1-karboksilat:

terc-butil (2-((3-aminopiridin-4-il)oksi)etil)karbamat:

1

(4r,6s)-terc-butil 6-((3-aminopiridin-4-il)oksi)-1-azaspiro[3.3]heptan-1-karboksilat:

(4s,6r)-terc-butil 6-((3-aminopiridin-4-il)oksi)-1-azaspiro[3.3]heptan-1-karboksilat:

4-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)oksi)piridin-3-amin:

terc-butil 6-((3-aminopiridin-4-il)oksi)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat:

6-hloro-4-metoksipiridin-3-amin:

2

terc-butil 3-((3-aminopiridin-4-il)oksi)azetidin-1-karboksilat:

i

(R)-4-((6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-6-il)oksi)piridin-3-amin:

Raznovrsna priprema aminopiridina

Priprema O-2: 4-((6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)oksi)piridin-3-amin

[0473]

Korak 1: 6-((dimetilamino)metil)piridin-3-ol

[0474] 6-(aminometil)piridin-3-ol (150 mg, 1.208 mmol), mravlja kiselina (1 mL, 26.51 mmol), formaldehid (1 mL, 36.30 mmol) je zagrevan na 100°C preko noći. Smeša je koncentrovana in vacuo da bi se dobio 6-((dimetilamino)metil)piridin-3-ol koji je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

Korak 2: N,N-dimetil-1-(5-((3-nitropiridin-4-il)oksi)piridin-2-il)metanamin

[0475] U rastvor 6-((dimetilamino)metil)piridin-3-ola u DMF (5 mL) dodat je, K2CO3(834.8 mg, 6.040 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 min pre dodavanja 4-hloro-3-nitro-piridina (191.5 mg, 1.208 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 60 časova. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i vodenog zasićenog rastvora NH4Cl. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4i koncentrovan in vacuo proizvodeći ulje koje je prečišćeno pomoću SCX kolone, proizvodeći N,N-dimetil-1-(5-((3-nitropiridin-4-il)oksi)piridin-2-il)metanamin kao bezbojno ulje. MS (ES+) 275.1.

Korak 3: 4-((6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)oksi)piridin-3-amin

[0476] N,N-dimetil-1-(5-((3-nitropiridin-4-il)oksi)piridin-2-il)metanamin (150 mg, 0.5469 mmol), Pd/C (10%) (58.20 mg, 0.5469 mmol) u MeOH (15 mL) je mešan preko noći na sobnoj temperaturi pod vodonikom (balon). Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se proizveo proizvod iz naslova kao bistro ulje. MS (ES+) 245.2.

[0477] Sledeći aminopiridin sintetisan upotrebom Koraka 2 i Koraka 3 iz Pripreme O-2: 4-(piridin-3-iloksi)piridin-3-amin:

i

4-fenoksipiridin-3-amin:

Priprema O-3: (1s,4s)-4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)-N,N-dimetilcikloheksankarboksamid

[0478]

4

Korak 1: 4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksilna kiselina

[0479] Rastvor metil 4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksilata (250.0 mg, 0.8920 mmol) (pripremljen prema postupcima sličnim onome prikazanom u Koraku 1 iz Pripreme O-1) u THF (2.748 mL), vodi (2.748 mL) i MeOH (1.5mL) je mešan na sobnoj temperaturi i tretiran litijum hidroksid monohidratom (voda (1)) (224.6 mg, 5.352 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonile organske materije. Vodeni rastvor je hlađen u ledenom kupatilu, zatim zakišeljen sa HCl (5.352 mL od 1 M, 5.352 mmol) do pH 4-5. Zatim je dodat etil acetat i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan dodatno sa etil acetatom (2 x 5 mL) i kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo da bi ostala 4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksilna kiselina kao žuto ulje. Korišćena je u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 267.0.

Korak 2: N,N-dimetil-4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksamid

[0480] TBTU (630.0 mg, 1.962 mmol) i dimetilamin (1.784 mL od 2 M, 3.568 mmol) su dodati u rastvor 4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksilne kiseline (475 mg, 1.784 mmol) i DIPEA (253.6 mg, 341.8 µL, 1.962 mmol) u THF (9.500 mL) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc i vode, i kombonovani organski ekstrakti su sušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike eluiranjem sa 0-100% EtOAc/ petrol etrom upotrebom ISCO companion sistema kolone (12 g kolona). Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane in vacuo da bi se proizveo N,N-dimetil-4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksamid kao bledo žuto ulje. (180mg, 34%). MS (ES+) 294.3. Korak 3: (1s,4s)-4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)-N,N-dimetilcikloheksankarboksamid [0481] Pd na C, (10%, vlažan, Degussa) (65.31 mg, 0.06137 mmol) dodat je u rastvor N,N-dimetil-4-[(3-nitro-4-piridil)oksi]cikloheksankarboksamida (180 mg, 0.6137 mmol) u metanolu (6.300 mL) i reakciona smeša je mešana pod atmosferom vodonika preko noći. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostao proizvod iz naslova kao žuto ulje. (160mg, 99%), MS (ES+) 264.3.

[0482] Sledeći aminopiridin je sintetisan prema postupcima sličnim onome prikazanom u Pripremi O-3:

((1s,4s)-4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)cikloheksil)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

Priprema O-4: 4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)tetrahidro-2H-tiopiran 1-oksid i 4-((3-aminopiridin-4-il)oksi)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid

[0483]

[0484] Količina mCPBA (513.0 mg, 2.081 mmol) dodata je u rastvor 3-nitro-4-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)oksi)piridina (pripremljen prema postupcima sličnim onome opisanom u Pripremi O-1) (400 mg, 1.665 mmol) u DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći pre dodavanja 5 mL vodenog zasićenog rastvora NaHCO3i 5mL vodenog zasićenog rastvora Na2S2O3. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 min, podeljena između DCM i vode. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan in vacuo proizvodeći ulje koje je rastvoreno u MeOH (15mL). Dodat je Pd/C 10% (177.2 mg, 1.665 mmol) i smeša je hidrogenizovana (H2balon) preko noći. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se proizvela 1/1 smeša intermedijera "sulfoksida i sulfon aminopiridina" koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 227.1 (sulfoksid); i MS (ES+) 243.1 (sulfon).

Priprema O-5: 5-fluoro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin

[0485]

Korak 1: 2-bromo-5-fluoro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)-3-nitropiridin

[0486] NaH (86.67 mg, 2.167 mmol) dodat je u porcijama u rastvor 1-metilpiperidin-4-ola (192.0 mg, 1.667 mmol) in THF (5.000 mL) na 0°C i dobijeni rastvor je mešan u trajanju od 15 min i zatim je dodat 2,4-dibromo-5-fluoro-3-nitropiridin (500 mg, 1.667 mmol) u THF (5.000 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je podeljena između vode (10 mL) i etil acetata (10 mL). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silike eluiranjem sa etil acetatom/ petrol etrom (24 g kolona, 0-100% EtOAc) upotrebom companion sistema ISCO kolone. Frakcije proizvoda su spojene i koncentrovane in vacuo da bi ostao proizvod kao žuto ulje koje očvršava usled stajanja. (125mg). MS(ES+) 334.0 336.0.

Korak 2: 5-fluoro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin

[0487] Rastvor 2-bromo-5-fluoro-4-[(1-metil-4-piperidil)oksi]-3-nitro-piridina (96 mg, 0.2873 mmol), ZnBr2(12.94 mg, 3.080 µL, 0.05746 mmol) i Pd na C, vlažan, Degussa (31 mg) u metanolu (5 mL) ispran je vodonikom i ispražnjen (3 x) i zatim mešan pod atmosferom vodonika preko noći. Katalizator je otfiltriran krot čep od celita i ispran smešama metanola i etil acetata i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostalo bledo žuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 226.1.

[0488] Sledeći aminopiridin je pripremljen upotrebom Koraka 1 i Koraka 2 iz Pripreme O-5:

5-fluoro-4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)oksi)piridin-3-amin:

Priprema O-6: terc-butil (5-amino-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat

Korak 1: terc-butil (5-jodo-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat

[0489] Natrijum hidrat (37.70 mg, 0.9425 mmol) dodat je u mešanu suspenziju terc-butil N-(5-jodo-4-metoksi-2-piridil)karbamata (300 mg, 0.8568 mmol) u DMF (3 mL) i reakcija je mešana na 0°C u trajanju od 15 minuta. Dodat je MeI (145.9 mg, 63.99 µL, 1.028 mmol) i reakcija je ostavljena da se zagreva do temperature sredine tokom 1 časa. Smeša je ugašena dodavanjem vode, razblažena sa EtOAc i slojevi su odvojeni. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(x 1), fiziološkim rastvorom (x 2), sušen (MgSO4) filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc/petrol etra, sipan u DCM) da bi se dobio terc-butil (5-jodo-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat kao bezbojno ulje (269 mg, 86% Prinos). MS (ES+ -t-Bu) 309.4.

Korak 2: terc-butil (5-((difenilmetilen)amino)-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat [0490] Pd2(dba)3(33.70 mg, 0.03680 mmol) i Xantphos (42.58 mg, 0.07359 mmol) su dodati u epruvetu koja se hermetički zatvara koja sadrži terc-butil N-(5-jodo-4-metoksi-2-piridil)-N-metilkarbamat (268 mg, 0.7359 mmol), difenilmetanimin (173.4 mg, 160.6 µL, 0.9567 mmol) i Cs2CO3(719.4 mg, 2.208 mmol) u dioksanu (2.5 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu azota i zagrevana na 100°C u trajanju od 4 časa. Na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc/petrol etra, sipan na DCM) da bi se dobio terc-butil (5-((difenilmetilen)amino)-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat kao žuta čvrsta supstanca (213 mg, 69% Prinos). MS(ES+) 418.2.

Korak 3: terc-butil (5-amino-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat

[0491] HCl (100 µL od 2 M, 0.2000 mmol) dodat je u mešani rastvor terc-butil N-[5-(benzhidrilidenamino)-4-metoksi-2-piridil]-N-metil-karbamata (212 mg, 0.5078 mmol) u THF (2 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 18 časova. Dobijeni talog je izolovan filtracijom i filtrat je mešan na temperaturi sredine dodatnih 6 časova. Reakcija je razblažena sa 1M HCl i ekstrahovana sa Et2O (x 3). Vodeni sloj je napravljen baznim dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3i ekstrahovan sa DCM (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobio terc-butil (5-amino-4-metoksipiridin-2-il)(metil)karbamat kao crveno ulje (98.2 mg, 76% Prinos). MS(ES+) 254.1.

[0492] Sledeća referentna jedinjenja su sintetisana upotrebom postupka sličnog Primeru 1 ili Primeru 3a:

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-1);

(R,S)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(piperidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-2);

2-amino-N-(4-((6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)oksi)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-3);

2-amino-6-fluoro-N-(4-metoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-4);

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-5);

(R,S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-6);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(piridin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-7);

4-((3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)oksi)cikloheksankarboksilna kiselina (Jedinjenje I-O-8);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-9);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-10);

2-amino-6-fluoro-N-(4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-11);

2-amino-6-fluoro-N-(4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-12);

(1r,4r)-metil 4-((3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)oksi)cikloheksankarboksilat (Jedinjenje I-O-13);

2-amino-N-(4-etoksipiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-14);

(R,S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-15);

(S)-2-amino-N-(4-((6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-6-il)oksi)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-16);

2-amino-N-(4-(((1s,4s)-4-(dimetilkarbamoil)cikloheksil)oksi)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-17);

(1s,4s)-metil 4-((3-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)piridin-4-il)oksi)cikloheksankarboksilat (Jedinjenje I-O-18);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(((1s,4s)-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)cikloheksil)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-19);

2-amino-6-(1-cijanopropil)-N-(4-metoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-20);

2-amino-6-(1-cijanoetil)-N-(4-metoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-21);

(R,S)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-22);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-23);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(2-(dimetilamino)etoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-24);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-fenoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-25);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-metoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-26);

2-amino-N-(6-hloro-4-metoksipiridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-27);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-etoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-28);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(2-metoksietoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-29);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-30);

(R)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-31);

1

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(ciklopropilmetoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-32);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(2-hidroksietoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-33);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(2,2,2-trifluoroetoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-34);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-izopropoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-35);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-ciklobutoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-36);

(R,S)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-37);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(oksetan-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-38);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(cikloheksiloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-39);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(3-hidroksipropoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-40);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((tetrahidro-2H-piran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-41);

(S)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-42);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(ciklopentiloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-43);

2-amino-6-fluoro-N-(4-((1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-44);

2-amino-N-(4-((1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)oksi)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-45);

2-amino-6-hloro-N-(5-hloro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-46);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-(2-(dimetilamino)etoksi)etoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-47);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-(dimetilamino)etoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-48);

11

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-49);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-50);

2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-51);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-(dimetilamino)propoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-52);

2-amino-6-hloro-N-(4-(3-hidroksipropoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-53);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-54);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-metoksietoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-55);

2-amino-6-hloro-N-(4-etoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-56);

2-amino-6-hloro-N-(4-metoksipiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-57);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-58);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2,2,2-trifluoroetoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-59);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-morfolinoetoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-60);

2-amino-6-hloro-N-(4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-61);

2-amino-6-hloro-N-(4-(hinuklidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-62);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-63);

2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-64);

2-amino-6-hloro-N-(4-((tetrahidro-2H-piran-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-65);

12

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-hidroksietoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-66);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-((1-(2-metoksietil)piperidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-67);

2-amino-6-hloro-N-(6-hloro-4-(2-(dimetilamino)etoksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-68);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-69);

2-amino-6-hloro-N-(4-(piridin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-70);

2-amino-6-hloro-N-(4-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-(trifluorometil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-71);

2-amino-N-(4-(terc-butoksi)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-88);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-((1-metilpiperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-89);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-((1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)oksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-91); i

2-amino-6-fluoro-N-(4-(oksetan-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-92).

[0493] Sledeća referentna jedinjenja su pripremljena upotrebom postupka sličnog Primeru 2:

N-(4-(2-azaspiro[3.3]heptan-6-iloksi)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-72);

2-amino-N-(4-(azetidin-3-iloksi)piridin-3-il)-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-73);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-(piperidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-74);

2-amino-6-hloro-N-(4-(piperidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-75);

(S)-2-amino-6-hloro-N-(4-(pirolidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-76);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-(pirolidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-77);

1

N-(4-((4s,6r)-1-azaspiro[3.3]heptan-6-iloksi)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-78);

N-(4-((4r,6s)-1-azaspiro[3.3]heptan-6-iloksi)piridin-3-il)-2-amino-6-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-79);

2-amino-6-hloro-N-(4-(piperidin-4-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-80);

(R)-2-amino-6-hloro-N-(4-(piperidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-81);

2-amino-N-(4-(azetidin-3-iloksi)piridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-82);

2-amino-N-(4-(2-aminoetoksi)piridin-3-il)-6-(cijanometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-83);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(piperidin-4-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-84);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(piperidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IO-85);

(S)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(pirolidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-86);

(R)-2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-(pirolidin-3-iloksi)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-87); i

2-amino-6-fluoro-N-(4-metoksi-6-(metilamino)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-O-90).

Analitički podaci jedinjenja

[0494]

14

1

1

1

1

1

2

21

22

2

Priprema C-1: 4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin

[0495]

Korak 1: 4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)-3-nitro-piridin

[0496] U rastvor 4-hloro-3-nitro-piridina (350 mg, 2.208 mmol) u toluenu (7.00 mL), etanolu (1.75 mL) i vodenom rastvoru natrijum karbonata (2.21 mL od 1 M, 2.21mmol) dodat je 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin (985.3 mg, 4.416 mmol), Pd2(dba)3(60.66 mg, 0.07 mmol) i trifenil fosfin (115.8 mg, 102.3 µL, 0.44 mmol). Smeša je mešana na 75°C (refluks) u trajanju od 18 časova. Reakciona smeša je isparavana do sušenja i ostatak je podeljen između vode (30 mL) i DCM (2x30 mL). Kombinovane organske materije su isprane vodom (30 mL) i fiziološkim rastvorom (30 mL), sušene i isparavane do sušenja da bi se dobilo tamno braon ulje koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silike gel eluiranjem sa petrol etrom (A): etil acetatom (B) (20-100% (B), 24 g, 30.0 CV, 35 mL/min), zatim etil acetatom (A): metanolom (B) (0-10% (B)) da bi se dobio 4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)-3-nitro-piridin kao crveno ulje (305 mg, 63%). MS (ES+) 220.1.

Korak 2: 4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin

[0497] U rastvor 4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)-3-nitro-piridina (300 mg, 1.37 mmol) u metanolu (3.00 mL) dodat je Pd na C, (10%, vlažan, Degussa) (29.12 mg, 0.274 mmol) i smeša je mešana na temperaturi sredine pod atmosferom vodonika, u trajanju od 18 časova. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin. MS (ES+) 192.1.

24

[0498] Sledeći aminopiridin je sintetisan prema Pripremi C-1:

4-(tetrahidrofuran-3-il)piridin-3-amin:

Priprema C-2: terc-butil 5-amino-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-2(1H)-karboksilat [0499]

Korak 1: 7-terc-butoksikarbonil-6,8-dihidro-5H-2,7-naftiridin-4-karboksilna kiselina [0500] U rastvor 5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-4-karboksilne kiseline (hlorovodonična kiselina (2)) (1 g, 3.982 mmol) u smeši NaHCO3(1.673 g, 19.91 mmol) u vodi (20.00 mL) i dioksanu (20.00 mL), dodat je Boc2O (869.1 mg, 914.8 µL, 3.982 mmol), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je rastvoren u smeši etil acetata i vode i pH vodene faze je podešena do pH4 upotrebom rastvora natrijum bisulfata. Organski i vodeni slojevi su odvojeni, organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko MgSO4, i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se proizvela 7-terc-butoksikarbonil-6,8-dihidro-5H-2,7-naftiridin-4-karboksilna kiselina (440 mg, 40%). MS (ES+) 279.2.

Korak 2: terc-butil 5-amino-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-2(1H)-karboksilat

[0501] U rastvor 7-terc-butoksikarbonil-6,8-dihidro-5H-2,7-naftiridin-4-karboksilne kiseline (440 mg, 1.581 mmol) u NMP (6 mL) dodata je TEA (207.9 mg, 286.4 µL, 2.055 mmol), a zatim difenilfosforil azid (478.6 mg, 374.8 µL, 1.739 mmol) na sobnoj temperaturi pod azotom. Reakcija je zagrevana do 90°C u trajanju od 2 časa. Na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podeljena između vodenog zasićenog rastvora NaHCO3i EtOAc. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na siliki, eluiranjem sa 1-15%

2

MeOH:DCM da bi se proizveo terc-butil 5-amino-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-2(1H)-karboksilat. (397mg, 100.7%). MS (2ES+) 501.2.

Priprema C-3: [4,4’-bipiridin]-3-amin

[0502]

[0503] 4-hloro-3-nitro-piridin (100 mg, 0.6307 mmol), 4-piridilboronska kiselina (77.52 mg, 0.6307 mmol), paladijum; trifenilfosfan (36.45 mg, 0.03154 mmol), K3PO4(946.0 µL od 2 M, 1.892 mmol) u dioksanu (3 mL) zagrevani su na 130°C u trajanju od 30 min u mikrotalasnom reaktoru. Smeša je sipana na SCX kolonu, isprana sa MeOH. Proizvod je eluiran sa 2M NH3u MeOH. Filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je rastvoren u MeOH (20 mL), dodat je Pd/C 10% (42.04 mg, 0.3950 mmol) i smeša je hidrogenizovana (balon H2) preko noći. Katalizator je otfiltriran i filtrat je koncentrovan in vacuo proizvodeći [4,4’-bipiridin]-3-amin koji je korišćen us ledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 172.1.

Priprema C-4 : 3’-metil-[4,4’-bipiridin]-3-amin

[0504] [3-(terc-butoksikarbonilamino)-4-piridil]boronska kiselina (100 mg, 0.4201 mmol), paladijum; trifenilfosfan (48.55 mg, 0.04201 mmol), 4-bromo-3-metil-piridin (113.9 mg, 0.5461 mmol), K3PO4(630.0 µL od 2 M, 1.260 mmol), u dioksanu (4.000 mL) zagrevani su na 130°C u trajanju od 30 min u mikrotalasnom reaktoru. Reakciona smeša je podeljena između vode i DCM. Kombinovani organski ekstrakt je sušen i koncentrovan in vacuo. Ostatak je rastvoren u DCM (10mL) i dodata je TFA (2mL). Posle 1 časa, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je sipan na SCX koloni, ispran sa MeOH. Proizvod je eluiran sa 2M NH3u MeOH, filtrat je koncentrovan in vacuo proizvodeći 3’-metil-[4,4’-bipiridin]-3-amin koji je korišćen u sledećoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja (90mg). MS (ES+) 172.1.

[0505] Sledeći amino piridini su pripremljeni upotrebom postupaka sličnih Pripremi C-3 ili Pripremi C-4:

[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

2

2-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

6-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

(4-(3-aminopiridin-4-il)fenil)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

4-(piridazin-4-il)piridin-3-amin:

6-metoksi-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

2

-(pirimidin-5-il)piridin-3-amin:

-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

-(3-metilpiridazin-4-il)piridin-3-amin:

’-amino-[3,4’-bipiridin]-2-ol:

-(4-metilpiridazin-3-il)piridin-3-amin:

2

6-tluoro-2-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

2-fluoro-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

3-metil-[2,4’-bipiridin]-3’-amin:

2-hloro-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

terc-butil 4-(4-(3-aminopiridin-4-il)benzoyl)piperazin-1-karboksilat:

2

(4-(3-aminopiridin-4-il)-3-metilfenil)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

(3’-amino-3-hloro-[2,4’-bipiridin]-5-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

(3’-amino-2-metil-[3,4’-bipiridin]-6-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

2-metil-6-(4-metilpiperazin-1-il)-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

(S)-2-metil-6-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

(3’-amino-[3,4’-bipiridin]-6-il)(4-metilpiperazin-1-il)metanon:

6-(4-metilpiperazin-1-il)-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

4-(1-metil-1H-imidazol-2-il)piridin-3-amin:

1

4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

4-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-amin:

3’-amino-1-metil-[2,4’-bipiridin]-6(1H)-on:

3’-amino-1-metil-[3,4’-bipiridin]-6(1H)-on:

[2,4’-bipiridin]-3’-amin:

2

-(4-(metilsulfonil)fenil)piridin-3-amin:

-(3-metilpirazin-2-il)piridin-3-amin:

-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-amin:

-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piridin-3-amin:

-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)fenil)piridin-3-amin:

-(5-metilpirimidin-4-il)piridin-3-amin:

-(1-metil-1H-pirazol-3-il)piridin-3-amin:

-(1,2-dimetil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

-(1,4-dimetil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

-(1-etil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

4

5-metoksi-4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

4-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-amin:

(S)-4-(4-(4-metilmorfolin-3-il)fenil)piridin-3-amin:

5-fluoro-4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

(4-(3-aminopiridin-4-il)fenil)(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)metanon:

(4-(3-aminopiridin-4-il)fenil)(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)metanon:

(4-(3-aminopiridin-4-il)-3-fluorofenil)(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-il)metanon:

(4-(3-aminopiridin-4-il)-3-tluorofenil)(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)metanon:

(3’-amino-[3,4’-bipiridin]-6-il)(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)metanon:

(3’-amino-[3,4’-bipiridin]-6-il)(4-(pirolidin-1-il)piperidin-1-il)metanon:

(3’-amino-[3,4’-bipiridin]-6-il)(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-il)metanon:

5’-metoksi-[3,4’-bipiridin]-3’-amin:

4-ciklopropil-5-metoksipiridin-3-amin:

4-(1-(2-metoksietil)-1H-imidazol-5-il)piridin-3-amin:

Priprema C-5: 4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin

[0506]

Korak 1: terc-butil 3’-nitro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-karboksilat

[0507] 4-hloro-3-nitro-piridin (1 g, 6.307 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilat (2.145 g, 6.938 mmol) i PdCl2(PPh3)2(221.4 mg, 0.3154 mmol) u DME (20.00 mL) degazirani su upotrebom 3x vakuumskih/azotnih ciklusa. Dodat je Na2CO3(9.460 mL od 2 M, 18.92 mmol), a zatim je dodatno izvršeno degaziranje i reakcija je zagrevana na 80°C u trajanju od 18 časova. Reakcija je hlađena do temperature sredine i razblažena sa EtOAc/vodom. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 120 g kolona, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc/petrol etrom, suv punjen) da bi se dobio terc-butil 3’-nitro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-karboksilat kao beldo žuta čvrsta supstanca (884 mg, 46% Prinos). MS (ES Na+) 328.1.

Korak 2: 3’-nitro-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin

[0508] TFA (2 mL, 25.96 mmol) dodat je u mešani rastvor terc-butil 4-(3-nitro-4-piridil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilata (883 mg, 2.892 mmol) u DCM (10 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 15 časova. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropski obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz 25 g SCX-2 kertridž i ispran sa smešama MeOH/DCM. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u smešama MeOH/DCM i koncentrovan in vacuo da bi se dobio 3’-nitro-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin kao narandžasto ulje (523 mg, 88% Prinos). MS (ES+) 206.1.

Korak 3: 3’-nitro-1-(oksetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin

[0509] Natrijum triacetoksiborohidrid (jon natrijuma (1)) (1.189 g, 5.608 mmol) dodat je u porcijama u mešani rastvor 3-nitro-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridina (523 mg, 2.549 mmol) i 3-oksetanona (312.2 mg, 277.8 µL, 4.333 mmol) u THF (10 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Reakcija je ostavljena da se zagreva do temperature sredine i mešana je u trajanju od 16 časova. MeOH (2 mL) je dodat ukapavanjem i smeša je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 30 minuta. Smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je podeljen između vode i EtAOc. pH vodenog sloja je podešen do pH 7-8 dodavanjem NH4OH i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3) i kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x 1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobio 3’-nitro-1-(oksetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin kao crveno ulje (615 mg, 92% Prinos). MS (ES+) 262.1.

Korak 4: 4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin

[0510] Pd na C, vlažan, Degussa (240 mg, 0.2255 mmol) dodat je u mešani rastvor 3-nitro-4-[1-(oksetan-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il]piridina (614 mg, 2.350 mmol) u EtOAc (20 mL) / EtOH (20 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 15 časova. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz čep od celita i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin kao bledo žuta čvrsta supstanca (518 mg, 95% Prinos). MS (ES+) 234.2.

Priprema C-6 : 5-fluoro-4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin

[0511]

Korak 1: 3’-hloro-5’-fluoro-1-metil-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin

[0512] 3-hloro-5-fluoro-4-jodo-piridin (500 mg, 1.942 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin (476.6 mg, 2.136 mmol) i Pd(PPh3)2Cl2(68.15 mg, 0.09710 mmol) u DME (10.00 mL) su degazirani upotrebom 3 x vakuumska/azotna ciklusa. Dodat je Na2CO3(2.913 mL od 2 M, 5.826 mmol), a zatim je izvršeno degaziranje i reakcija je zagrevana na 80°C u trajanju od 18 časova. Reakcija je hlađena do temperature sredine i razblažena sa EtOAc/vodom. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je propušten kroz 10 g SCX-2 kertridž i ispran sa smešama MeOH/DCM. Proizvod je eluiran ispranjem kertridža sa 2M NH3u smešama MeOH/DCM i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM 1% NH4OH, sipan na DCM) da bi se dobio 3’-hloro-5’-fluoro-1-metil-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin kao crveni rastvor (378 mg, 86% Prinos). MS (ES+) 227.1. Korak 2: terc-butil (5-fluoro-1’-metil-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat [0513] 3-hloro-5-fluoro-4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)piridin (377 mg, 1.663 mmol), terc-butil karbamat (974.1 mg, 8.315 mmol), natrijum terc-butoksid (815.1 mg, 8.481 mmol), BrettPhos pre-katalizator (66.25 mg, 0.08315 mmol) i BrettPhos (44.63 mg, 0.08315 mmol) postavljeni su u epruvetu koja se može hermetički zatvarati i degazirani vakuumskim/azotnim ciklusima (x 5). Dodat je suvi dioksan (10 mL) i dobijena smeša je postavljena u prethodno zagrejani blok na 100°C i mešana na ovoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Dodate su dodatne porcije BrettPhos pre-katalizator (66.25 mg, 0.08315 mmol) i BrettPhos (44.63 mg, 0.08315 mmol) i reakcija je zagrevana na 100°C u trajanju od 8 časova. Reakciona smeša je hlađena do temperature sredine i ugašena zasićenim NH4Cl. Smeša je propuštena kroz prethodno ovlaženi (EtOAc) celitni kertridž (2.5 g). Kertridž je ispran sa EtOAc/zasićenim NH4Cl i slojevi filtrata su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3) i kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x 1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM, sipan na DCM) da bi se dobio terc-butil (5-fluoro-1’-metil-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat. MS (ES+) 308.2.

Korak 3: 5-fluoro-1’-metil-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-amin

[0514] TFA (2 mL, 25.96 mmol) je dodata u mešani rastvor terc-butil N-[5-fluoro-4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)-3-piridil]karbamata (483 mg, 1.571 mmol) u DCM (10 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 6 časova. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropno obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz

4

10 g SCX-2 kertridž i ispran sa smešama MeOH/DCM. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u smešama MeOH/DCM i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 40 g kolona, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH/DCM 1% NH4OH, sipan na DCM) da bi se dobio 5-fluoro-1’-metil-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-amin kao prljavo bela čvrsta supstanca (61 mg, 19% prinos iz 2 koraka). MS (ES+) 208.1.

Korak 4: 5-fluoro-4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin

[0515] Pd na C, vlažan, Degussa (25 mg, 0.1175 mmol) dodat je u mešani rastvor 5-fluoro-4-(1-metil-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il)piridin-3-amina (61 mg, 0.2943 mmol) u EtOAc (5 mL) / EtOH (5 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 15 časova. Dodata je dodatna porcija Pd na C, vlažan, Degussa (25 mg, 0.1175 mmol) i reakcija je postavljena pod amtosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 24 časa. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz čep od celita i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio 5-fluoro-4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-amin kao prljavo bela čvrsta supstanca (58 mg, 95% Prinos). MS (ES+) 210.1.

Priprema C-7 : 5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin

[0516]

Korak 1: terc-butil 3’-hloro-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-karboksilat [0517] 3-hloro-5-fluoro-4-jodo-piridin (750 mg, 2.913 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilat (990.7 mg, 3.204 mmol) i Pd(PPh3)2Cl2(102.2 mg, 0.1456 mmol) u DME (15 mL) degazirani su upotrebom 3 x vakuumskih/azotnih ciklusa. Dodat je Na2CO3(4.370 mL od 2 M, 8.739 mmol), a zatim je dodatno izvršeno degaziranje i reakcija je zagrevana na 90°C u trajanju od 2 časa. Reakcija je hlađena do temperature sredine i razblažena sa EtOAc/vodom. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 80 g kolona, eluiranjem sa 0 do 20%

41

EtOAc/petrol etra, sipan u DCM) da bi se dobio terc-butil 3’-hloro-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-karboksilat kao prljavo bela čvrsta supstanca (708 mg, 78% Prinos). MS (ES+) 313.1.

Korak 2: 3’-hloro-5’-fluoro-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin

[0518] TFA (2 mL, 25.96 mmol) je dodata u mešani rastvor terc-butil 4-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilata (708 mg, 2.264 mmol) u DCM (10 mL) i reakcija je mešana stirred na temperaturi sredine u trajanju od 2 časa. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropski obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz 10 g SCX-2 kertridž i ispran smešom MeOH/DCM. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u smešama MeOH/DCM i koncentrovan in vacuo da bi se dobio 3’-hloro-5’-fluoro-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin kao prljavo bela čvrsta supstanca (468 mg, 97% Prinos). MS (ES+) 213.1.

Korak 3: 3’-hloro-5’-fluoro-1-(oksetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin

[0519] Natrijum triacetoksiborohidrid (jon natrijuma (1)) (1.026 g, 4.842 mmol) dodat je u porcijama u mešani rastvor 3-hloro-5-fluoro-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridina (468 mg, 2.201 mmol) i 3-oksetanona (269.7 mg, 239.9 µL, 3.742 mmol) u THF (10 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Reakcija je ostavljena da se zagreva do temperature sredine tokom 16 časova. Ukapavanjem je dodat MeOH (2 mL) i smeša je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 30 minuta. Smeša je koncentrovana in vacuo i podeljena između vode i EtAOc. pH vodenog sloja je podešena do p H 7-8 dodavanjem NH4OH i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3) i kombinovani organski ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (x 1), sušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobio 3’-hloro-5’-fluoro-1-(oksetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidro-4,4’-bipiridin kao bela čvrsta supstanca (573 mg, 97% Prinos). MS (ES+) 269.1.

Korak 4: terc-butil (5-fluoro-1’-(oksetan-3-il)-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat

[0520] 3-hloro-5-fluoro-4-[1-(oksetan-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il]piridin (572 mg, 2.129 mmol), terc-butil karbamat (1.246 g, 10.64 mmol), natrijum terc-butoksid (1.044 g, 10.86 mmol), BrettPhos pre-katalizator (84.78 mg, 0.1064 mmol) i BrettPhos (57.11 mg, 0.1064 mmol) su postavljeni u epruvetu koja se može hermetički zatvarati i degazirani pomoću vakuumskih/azotnih ciklusa (x5). Dodat je suvi dioksan (10 mL) i dobijena smeša je postavljena u prethodno zagrejani blok na 100°C i mešana na ovoj temperaturi u trajanju od 16 časova. Reakciona smeša je hlađena do temperature sredine i ugašena zasićenim NH4Cl. Smeša je propuštena kroz prethodno ovlaženi (EtOAc) celitni kertridž (2.5 g). Kertridž je

42

ispran sa EtOAc/zasićenim NH4Cl i slojevi filtrata su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (x 3) i kombinovani organski ekstrakti su sušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO Companion, 80 g kolona, eluiranjem sa 0 do 100% EtOAc/petrol etrom, sipan u DCM) da bi se dobio terc-butil (5-fluoro-1’-(oksetan-3-il)-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat kao bledo žuta čvrsta supstanca (180 mg, 24% Prinos). Takođe je izolovano 197 mg smeše početnog materijala i proizvoda. MS (ES+) 350.2.

Korak 5: terc-butil (5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-il)karbamat [0521] Pd na C, vlažan, Degussa (70 mg, 0.06578 mmol) dodat je u mešani rastvor terc-butil N-[5-fluoro-4-[1-(oksetan-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il]-3-piridil]karbamata (180 mg, 0.5152 mmol) u EtOH (5 mL) / EtOAc (5 mL). Reakcija je postavljena pod atmosferu vodonika i mešana na temperaturi sredine u trajanju od 46 časova. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz čep celita i filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobio terc-butil (5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-il)karbamat kao prljavo bela čvrsta supstanca (175 mg, 97% Prinos). MS (ES+) 352.2.

Korak 6: 5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin

[0522] TFA (1 mL, 12.98 mmol) dodata je u mešani rastvor terc-butil N-[5-fluoro-4-[1-(oksetan-3-il)-4-piperidil]-3-piridil]karbamata (174 mg, 0.4951 mmol) u DCM (5 mL) i reakcija je mešana na temperaturi sredine u trajanju od 4 časa. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak je azeotropski obrađen sa DCM (x 2) i etrom (x 2). Ostatak je propušten kroz 5 g SCX-2 kertridž i ispran sa MeOH/DCM smešama. Proizvod je eluiran ispiranjem kertridža sa 2M NH3u MeOH/DCM smešama i koncentrovan in vacuo da bi se dobio 5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-amin kao žuto ulje (109 mg, 88% Prinos). MS (ES+) 252.1.

Priprema C-8: (3’-amino-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon

[0523]

4

Korak 1: (3’-hloro-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon

[0524] U rastvor 3-hloro-5-fluoro-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)piridina (540 mg, 2.539 mmol) (pripremljen prema postupcima sličnim onima opisanim u koraku 1 i koraku 2 Pripreme C-7) u NMP (5 mL) dodat je TBTU (1.223 g, 3.809 mmol), 1-metilpiperidin-4-karboksilna kiselina (hlorovodonična kiselina (1)) (547.4 mg, 3.047 mmol) i DIPEA (656.3 mg, 884.5 µL, 5.078 mmol) i reakcija je mešana na temperaturi sredine 2 časa. Reakciona smeša je adsorbovana na prethodno ovlaženi (metanol, 20 mL) SCX-2 kertridž (10 g) i isprana sa DCM/metanolom (1:1, 2 x 20 mL) i zatim su bazne komponente eluirane sa 2 M aminijakom u metanolu (2x20 mL). Bazni eluent je isparavan do sušenja da bi se dobio bledo narandžasto ulje (744 mg). Ostatak je triturisan u DCM (2 mL) i bela čvrsta supstanca je otfiltrirana. Filtrat je prečišćen hromatografijom na koloni silike gel eluiranjem sa DCM (A): DCM/Metanolom/NH4OH (90:10:1, (B)) (0-100% (B), 40 g, 20.0 CV, 40 mL/min) da bi se dobio (3’-hloro-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon kao bledo narandžasto ulje (410 mg, 48%). MS (ES+) 338.5.

Korak 2: (3’-amino-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon

[0525] [4-(3-hloro-5-fluoro-4-piridil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-il]-(1-metil-4-piperidil) metanon (400 mg, 1.184 mmol), terc-butil karbamat (693.5 mg, 5.920 mmol), BrettPhos (63.55 mg, 0.1184 mmol), BrettPhos pre-katalizator (94.34 mg, 0.1184 mmol) i natrijum tercbutoksid (580.3 mg, 6.038 mmol) dodati su Schlenk epruvetu pod atmosferom azota. Čvsrta smeša je degazirana vakuuskim/azotnim ciklusima (x5), zatim je dodat anhidrovani toluen (8.000 mL) i dobijena smeša je postavljena u prethodno zagrejani blok na 100°C i mešana u trajanju od 4 časa. Reakciona smeša je hlađena do temperature sredine, ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl i podeljena između DCM/Me-OH (9:1, 2x50 mL) i vode (50 mL). Kombinovane organske materije su isprane fiziološkim rastvorom (50 mL), sušene i koncentrovane in vacuo da bi se dobio bledo narandžasto ulje (456 mg). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa DCM (A): DCM/MeOH/NH4OH (90:10:1, (B)) (0-100% (B), 40 g, 20.0 CV, 40 mL/min) da bi se dobio (3’-amino-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon (200 mg). On je rastvoren u DCM (2.000 mL) i dodata je TFA (1.0 mL) i smeša je mešana na temperaturi sredine preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i ostatak je sipan na prethodno ovlaženi (DCM/metanol, (1:1) 10 mL) SCX-2 kertridž (5 g) i isprana sa DCM/metanolom (1:1, 25 mL) i zatim su bazne komponente eluirane sa 2 M amonijakom u metanolu (20 mL). Bazni eluent

44

je isparavan do sušenja da bi se dobilo bledo žuto ulje (325 mg) koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa DCM (A): DCM/Metanolom/NH4OH (90:10:1, (B)) (50-100% (B), 24 g, 20.0 CV, 35 mL/min) da bi se dobio (3’-amino-5’-fluoro-5,6-dihidro-[4,4’-bipiridin]-1(2H)-il)(1-metilpiperidin-4-il)metanon kao bezbojno ulje (55 mg, 12%). MS (ES+) 319.2.

Priprema C-9: 4-(3-aminopiridin-4-il)-1-metilpiperidin-2-on

[0526]

Korak 1: terc-butil (1’-metil-2’-okso-1’,2’-dihidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat

[0527] U suspenziju [3-(terc-butoksikarbonilamino)-4-piridil]boronske kiseline (200 mg, 0.8402 mmol), 4-bromo-1-metil-piridin-2-ona (158.0 mg, 0.8402 mmol) i Pd(PPh3)4(48.55 mg, 0.04201 mmol) u dioksanu (2 mL) dodat je Na2CO3(840.0 µL od 2 M, 1.680 mmol) i zagrevan na 80°C preko noći. Reakciona smeša je hlađena do temperature sredine i filtrirana kroz prethodno ovlaženi (metanol, 5 mL) Celitni kertridž (2.5 g) i ispran metanolom (35 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi se dobilo bledo braon ulje (500 mg). Ostatak je podeljen između DCM (2x30 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (30 mL). Kombinovane organske materije su sušene (kertridž za odvajanje faza) i koncentrovane in vacuo da bi se dobilo narandžasto ulje (280 mg). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na ISCO Companion eluiranjem sa DCM (A): DCM/Metanolom/NH4OH (90:10:1, (B)) (0-100% (B), 12 g, 16.0 CV, 30 mL/min) da bi se dobio terc-butil (1’-metil-2’-okso-1’,2’-dihidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)karbamat kao bledo žuto ulje (121 mg, 48%). MS (ES+) 302.1.

Korak 2: terc-butil (4-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)karbamat

[0528] 0.05 M rastvor terc-butil N-[4-(1-metil-2-okso-4-piridil)-3-piridil]karbamata (120 mg, 0.3982 mmol) u etanolu (8 mL) propušten je kroz Pd/C CatCart u „H-cube“ na stopi protoka od 0.5 mL/min na 50ºC i 50 bar. Postupak je ponovljen još 3 puta. Rastvor proizvoda je koncentrovan in vacuo da bi se dobio terc-butil (4-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)karbamat kao bezbojno ulje (74 mg, 61%). MS (ES+) 306.1.

Korak 3: 4-(3-aminopiridin-4-il)-1-metilpiperidin-2-on

4

[0529] TFA (0.75 mL, 9.735 mmol) dodat je u rastvor terc-butil N-[4-(1-metil-2-okso-4-piperidil)-3-piridil]karbamata (74 mg, 0.2423 mmol) u DCM (2 mL) i mešan na temperaturi sredine u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je adsorbovana na prethodno ovlaženi (metanol/DCM (1:1), 2 mL) SCX-2 kertridž (2 g) ispiran sa DCM/metanolom (1:1, 20 mL) i zatim su bazne komponente eluirane sa 2 M amonijakom u metanolu (20 mL). Bazni eluent je isparavan do sušenja da bi se dobio 4-(3-aminopiridin-4-il)-1-metilpiperidin-2-on kao bledo žuto ulje (50 mg, 97%). MS (ES+) 206.1.

Priprema C-10: 1-((3-aminopiridin-4-il)metil)pirolidin-2-on

[0530]

Korak 1: 1-((3-bromopiridin-4-il)metil)pirolidin-2-on

[0531] Rastvor A: Natrijum hidrid (141.5 mg, 3.537 mmol) dodat je u rastvor pirolidin-2-ona (316.1 mg, 282.2 µL, 3.714 mmol) u THF (5 mL) i rastvor je mešan u trajanju od 30 min.

[0532] Rastvor B: U rastvor (3-bromo-4-piridil)metanola (665 mg, 3.537 mmol) u DCM (20 mL) na 0°C dodat je trietilamin (0.467 mL, 3.351 mmol) i metansulfonil hlorid (0.287 mL, 3.708 mmol) i rastvor je ostavljen da se zagreva do sobne temperature i mešan u trajanju od 1 časa.

[0533] Rastvor B dodat je u rastvor A i smeša je mešana u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je podeljena između vode i EtOAc. Kombinovani organski ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, sušen (MgSO4) i koncentrovan in vacuo (na sobnoj temperaturi) da bi se dobilo ulje koje je prečišćeno hromatografijom na siliki (eluiranjem sa 2-4% MeOH u EtOAc) da bi se dobio 1-((3-bromopiridin-4-il)metil)pirolidin-2-on kao žuto ulje. MS (ES+) 211.0.

Korak 2: 1-((3-aminopiridin-4-il)metil)pirolidin-2-on

[0534] Pripremljen prema postupku sličnom koraku 3 Pripreme N-14. MS (ES+) 192.0.

[0535] Sledeći amidi (referentna jedinjenja) su formirana upotrebom postupka sličnog Primeru 1 ili Primeru 3a:

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IC-1);

4

2-amino-6-hloro-N-(4-metilpiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-2);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-metilpiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-3);

2-amino-6-fluoro-N-(4-metilpiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-4);

2-amino-6-fluoro-N-(4-fenilpiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-5);

2-amino-6-(cijanometil)-N-(4-fenilpiridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-6);

2-amino-6-fluoro-N-(5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-7);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-10);

2-amino-6-hloro-N-(4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-11);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-1’-(oksetan-3-il)-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-12);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(1-(oksetan-3-il)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-13);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-14);

N-([3,4’-bipiridin]-3’-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-15);

2-amino-6-fluoro-N-(6-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-19);

2-amino-6-fluoro-N-(2-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-20)

2-amino-6-fluoro-N-(6-(4-metilpiperazin-1-il)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-21);

2-amino-6-fluoro-N-(6-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-22);

2-amino-6-(2-cijanopropan-2-il)-N-(4-(1-metilpiperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-23);

4

N-([4,4’-bipiridin]-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-24);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-25);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(piridazin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-26);

2-amino-6-fluoro-N-(6-metoksi-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-27);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(pirimidin-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-28);

2-amino-6-fluoro-N-(3’-metil-[4,4’-bipiridin]-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-29);

2-amino-6-fluoro-N-(4-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-30);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metilpiridazin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-31);

2-amino-6-fluoro-N-(2-hidroksi-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-32);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-metilpiridazin-3-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-33);

2-amino-6-fluoro-N-(6-fluoro-2-metil-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-34);

2-amino-6-fluoro-N-(2-fluoro-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-35);

2-amino-6-fluoro-N-(3-metil-[2,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-36);

2-amino-N-(2-hloro-[3,4’-bipiridin]-3’-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-37);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-1’-(1-metilpiperidin-4-karbonil)-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[4,4’-bipiridin]-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-38);

2-amino-6-fluoro-N-(2-metil-6-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-39);

2-amino-6-fluoro-N-(2-metil-6-(4-metilpiperazin-1-il)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-40);

4

(R)-2-amino-6-fluoro-N-(2-metil-6-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-41);

2-amino-N-(4-ciklopropilpiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-42);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-43);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(piperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-44);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-metil-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-45);

2-amino-N-(3-hloro-5-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-[2,4’-bipiridin]-3’-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-46); i

2-amino-N-(4-(1-(ciklopropilsulfonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-47);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karbonil)fenil)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-48);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-49);

N-(4-(4-(1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karbonil)-2-fluorofenil)piridin-3-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-50);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(2-fluoro-4-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-51);

2-amino-6-fluoro-N-(6-(4-(oksetan-3-il)piperazin-1-karbonil)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-52);

2-amino-6-fluoro-N-(6-(4-(pirolidin-1-il)piperidin-1-karbonil)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-53);

2-amino-N-(6-(4-(azetidin-1-il)piperidin-1-karbonil)-[3,4’-bipiridin]-3’-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-54);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-imidazol-2-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-55);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-56);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-57);

4

2-amino-6-fluoro-N-(1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[2,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-58);

2-amino-6-fluoro-N-(1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-59);

N-([2,4’-bipiridin]-3’-il)-2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-60);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(metilsulfonil)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-61);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(3-metilpirazin-2-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IC-62);

2-amino-N-(4-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-63);

2-amino-N-(4-(4-(azetidin-1-ilsulfonil)fenil)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-64);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-65);

(S)-2-amino-6-fluoro-N-(4-(4-(4-metilmorfolin-3-il)fenil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-66);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(5-metilpirimidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-67);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-pirazol-3-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-68);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-72);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-73);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(tetrahidrofuran-3-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IC-75);

2-amino-6-fluoro-N-(4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-76);

2-amino-N-(4-(1,2-dimetil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-77);

2-amino-N-(4-(1,4-dimetil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-78);

2-amino-6-fluoro-N-(5-fluoro-4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-79);

2-amino-N-(4-(1-etil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-80);

2-amino-6-fluoro-N-(5-metoksi-4-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-81);

2-amino-6-fluoro-N-(5’-metoksi-[3,4’-bipiridin]-3’-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-82);

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(2-metoksietil)-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-83); i

2-amino-N-(4-ciklopropil-5-metoksipiridin-3-il)-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje IC-84).

Primer 15: 2-amino-6-fluoro-N-(7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-8 - referentno jedinjenje) [0536]

[0537] terc-butil 5-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-3,4-dihidro-2,7-naftiridin-2(1H)-karboksilat je rastvoren u MeOH (8 mL). Redom su dodavani sirćetna kiselina (91.88 mg, 87.01 µL, 1.530 mmol), formaldehid (37% rastvor u vodi, 99.33 mg, 91.13 µL, 1.224 mmol) i NaBH(OAc)3(324.3 mg, 1.530 mmol) i smeša je mešana u trajanju od 1 časa na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između vodenog zasićenog rastvora NaHCO3i DCM. Nerastvorljive supstance su otfiltrirane i kombinovani organski ekstrakt je sušen i koncentrovan in vacuo. Nerastvorljive supstance i ostatak su spojeni i prečišćeni pomoću „fractionlynx“ da bi se proizveo 2-amino-6-fluoro-N-(7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid. MS (ES+) 342.2.

Primer 16: 5-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-2,7-naftiridin 2-oksid (Jedinjenje I-C-9 - referentno jedinjenje)

[0538]

1

[0539] U 2-amino-6-fluoro-N-(7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-2,7-naftiridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (12 mg, 0.03516 mmol) u DCM (2 mL) dodat je mCPBA (5.764 mg, 0.03340 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa pre nego što je rastvarač uklonjen in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću FractionLynx da bi se proizveo 5-(2-amino-6-fluoropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamido)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-2,7-naftiridin 2-oksid. MS (ES+) 358.2.

Primer 17: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-16 - referentno jedinjenje)

[0540]

Korak 1: 2-amino-6 fluoro-N-(4-(piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0541] U rastvor terc-butil 4-[3-[(2-amino-6-fluoro-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)amino]-4-piridil]piperidin-1-karboksilata (555 mg, 1.218 mmol) (pripremljen upotrebom postupka sličnog Primeru 2) u MeOH (2.135 mL) i DCM (2.135 mL) dodata je TFA (6.2 g, 4.2 mL, 54 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 96 časova. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i asporbovana u metanolu i DCM i propuštena kroz 25 g SCX kertridž ispiranjem metanolom (3 zapremine kolone), a zatim 2M amonijakom u metanolu (3 zapremine kolone) da bi se eluirao proizvod. Filtrat je koncentrovan in vacuo da bi ostao 2-amino-6-fluoro-N-(4-(piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao žuta čvrsta supstanca koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. MS (ES+) 356.1.

2

Korak 2: 2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid

[0542] TBTU (154.5 mg, 0.4812 mmol) i DIPEA (82.92 mg, 111.8 µL, 0.6416 mmol) su dodati u rastvor 2-amino-6-fluoro-N-[4-(4-piperidil)-3-piridil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (114 mg, 0.3208 mmol) i 1-metilpiperidin-4-karboksilne kiseline (hlorovodonična kiselina (1)) (69.16 mg, 0.3850 mmol) u NMP (2.280 mL) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa. Propušten je kroz SCX kertridž ispiranjem željenog proizvoda sa 2M amonijakom u metanolu i filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću fractionlynx HPLC i frakcije proiozvoda su kombinovane i osušene zamrzavanjem da bi ostao 2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid kao žuta kristalna čvrsta supstanca. MS (ES+) 481.3.

[0543] Sledeća referentna jedinjenja su formirana upotrebom postupka sličnog Primeru 17:

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(4-metilpiperazin-1-karbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-17); i

2-amino-6-fluoro-N-(4-(1-(hinuklidine-4-karbonil)piperidin-4-il)piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-18).

Primer 18: 2-amino-6-fluoro-N-(1-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (Jedinjenje I-C-74 - referentno jedinjenje)

[0544] NaH (3.958 mg, 0.09894 mmol) dodat je u suspenziju 2-amino-6-fluoro-N-(1H-pirolo[2,3-c]piridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamida (28 mg, 0.08995 mmol) (sintetisan prema postupku sličnom Primeru 1 ili Primeru 3a) i MeI (11.49 mg, 5.039 µL, 0.08096 mmol) u DMF (3 mL) pod N2. Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 časova pre dodavanja vode (2 kapi). Sirova smeša je prečišćena pomoću fractionlynx HPLC. Čiste frakcije su liofilizovane da bi se proizveo 2-amino-6-fluoro-N-(1-metil-1H-pirolo[2,3-c]piridin-4-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid (5mg, 16%). MS (ES+) 326.1.

Analitički podaci za jedinjenje

[0545]

4

1

Primer 19: Test inhibicije ćelijske ATR:

[0546] Sposobnost jedinjenja da inhibiraju intracelularnu ATR kinazu može da se ispita korišćenjem testa imunofluorescentne mikroskopije za detekciju fosforilacije ATR supstrata histona H2AX u ćelijama obrađenim hidroksiureom. HT29 ćelije se zasejavaju pri gustini od 14 000 ćelija po komorici u crne ploče za snimanje sa 96 komorica (BD 353219) u McCoyevom 5A medijumu (Sigma M8403) obogaćenom sa 10% fetalnim goveđim serumom (JRH Biosciences 12003), rastvorom penicilina/streptomicina razblaženim 1:100 (Sigma P7539) i 2mM L-glumtaminom (Sigma G7513), i ostave preko noći da se pričvrste za podlogu na 37°C u 5% CO2. Jedinjenja se zatim dodaju ćelijskom medijumu od finalne koncentracije od 25 µM u trostrukim serijskim razblaženjima i ćelije se inkubiraju na 37°C u 5% CO2. Nakon 15 minuta, hidroksiurea (Sigma H8627) se dodaje u finalnoj koncentraciji od 2mM.

[0547] Nakon 45 minuta obrade sa hidroksiureom, ćelije se operu u PBS, fiksiraju 10 minuta u 4% formaldehidu razblaženom u PBS (Polysciences Inc 18814), operu u 0.2% Tween-20 u PBS (pufer za pranje), i permeabilizuju tokom 10 minuta u 0.5% Triton X-100 u PBS, sve na sobnoj temperaturi. Ćelije se zatim operu jednom u puferu za pranje i blokiraju 30 minuta na sobnoj temperaturi u 10% kozjem serumu (Sigma G9023) razblaženom u puferu za pranje (pufer za blokiranje). Za detekciju nivoa fosforilacije H2AX, ćelije se zatim inkubiraju 1 čas na sobnoj temperaturi u primarnom antitelu (mišje monoklonsko antitelo protiv fosforilisanog histona H2AX Ser139; Upstate 05-636) razblaženom 1:250 u puferu za blokiranje. Ćelije se zatim operu pet puta u puferu za pranje pre inkubacije tokom 1 časa na sobnoj temperaturi u mraku u smeši sekundarnog antitela (kozje anti-mišje antitelo konjugovano sa Alexa Fluor 488; Invitrogen A11029) i Hoechst boje (Invitrogen H3570); razblaženim 1:500 i 1:5000, redom, u puferu za pranje. Ćelije se zatim operu pet puta u puferu za pranje i najzad se doda 100 ul PBS u svaku komoricu pre snimanja.

[0548] Snima se intenzitet Alexa Fluor 488 i Hoechst boja u ćelijama korišćenjem programa BD Pathway 855 Bioimager i Attovision softvera (BD Biosciences, Version 1.6/855) da bi se kvantitativno odredilo bojenje fosforilisanog H2AX Ser139 i DNK, redom. Procenat nukleusa pozitivnih na fosforilisani H2AX u sklopu od 9 snimaka pri uvećanju od 20x se zatim izračunava za svaku komoricu korišćenjem BD Image Data Explorer softvera (BD

2

Biosciences Version 2.2.15). Nukleusi pozitivni na fosforilisani H2AX se definišu kao Hoechst-pozitivni regioni od interesa koji sadrže intenzitet Alexa Fluor 4881.75-puta veći od prosečnog intenziteta Alexa Fluor 488 u ćelijama koje nisu obrađene hidroksiureom. Procenat H2AX-pozitivnih nukleusa se na kraju predstavlja na grafiku nasuprot koncentraciji za svako jedinjenje i vrednosti IC50 za intracelularnu inhibiciju ATR se određuju korišćenjem Prism softvera (GraphPad Prism version 3.0cx for Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).

[0549] Ovde opisana jedinjenja mogu takođe da budu ispitivana drugim postupcima poznatim u stanju tehnike (videti Sarkaria et al, "Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine: Cancer Research 59: 4375-5382 (1999); Hickson et al, "Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM" Cancer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al, "Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members" The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); i Chiang et al, "Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family" Methods Mol. Biol.281:125-41 (2004)).

Primer 20: Test inhibicije ATR:

[0550] Sposobnost jedinjenja da inhibiraju ATR kinazu može da se ispita korišćenjem testa ugradnje radioaktivnog fosfata. Testovi se izvode u smeši 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2i 1 mM DTT. Finalne koncentracije supstrata su 10 µM [γ-33P]ATP (3mCi 33P ATP/mmol ATP, Perkin Elmer) i 800 µM ciljnog peptida (ASELPASQPQPFSAKKK).

[0551] Testovi se izvode na 25°C u prisustvu 5 nM ATR pune dužine. Stok rastvor pufera za test se priprema tako da sadrži sve gore navedene reagense, osim ATP i ispitivanog jedinjenja od interesa. 13.5 µL stok rastvora se dodaje u ploču sa 96 komorica nakon čega se dodaje 2 µL stoka DMSO koji sadrži serijska razblaženja ispitivanog jedinjenja (tipično počevši od finalne koncentracije od 15 µM sa trostrukim serijskim razblaženjima) u duplikatu (finalna koncentracija DMSO je 7%). Ploča se pre-inkubira 10 minuta na 25°C i reakcija započinje dodatkom 15 µL [γ-33P]ATP (finalne koncentracije 10 µM).

[0552] Reakcija se zaustavlja posle 24 časa dodatkom 30 µL 0.1M fosforne kiseline koja sadrži 2mM ATP. „Multiscreen“ ploča sa 96 komorica sa fosfoceluloznim filterom (Millipore, kat. br. MAPHN0B50) se prethodno obrađuje sa 100 µl 0.2M fosforne kiseline pre dodavanja 45µL ispitivane smeše u kojoj je reakcija zaustavljena. Ploča se opere sa 5 x 200 µl 0.2M fosforne kiseline. Nakon sušenja, 100 µL tečnog scintilacionog koktela Optiphase ’SuperMix’ (Perkin Elmer) se dodaje u svaku komoricu pre scintilacionog brojanja (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac).

[0553] Nakon uklanjanja srednjih vrednosti pozadinskog šuma za sve eksperimentalne tačke, Ki(app) podaci se izračunavaju nelinearnom regresionom analizom podataka o početnoj brzini korišćenjem programskog paketa Prism (GraphPad Prism verzija 3.0cx za Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, USA).

[0554] Tabela 5, u daljem tekstu, prikazuje Ki vrednosti inhibicije ATR jedinjenja prema otkriću. Jedinjenja sa Ki vrednošću od < 0.01 µM označena su sa "+++." Jedinjenja sa Ki vrednošću > 0.01 µM, ali < 1 µM označena su sa "++." Jedinjenja sa Ki vrednošću > 1 µM, ali < 5 µM su označena sa "+."

Tabela 5

4

Primer 21: Test senzibilizacije na cisplatin

[0555] Sposobnost jedinjenja da senzibilizuju kolorektalne kancerske ćelije HCT116 na cisplatin može da se ispita korišćenjem testa ćelijske vijabilnosti tokom 96 časova (MTS). HCT116 ćelije, koje imaju defekt u ATM prenosu signala za cisplatin (videti, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); videti takođe, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)) se zaseju pri gustini od 470 ćelija po komorici u polistirenske ploče sa 96 komorica (Costar 3596) u 150 µl McCoy-evog 5A medijuma (Sigma M8403) obogaćenog 10% fetalnim goveđim serumom (JRH Biosciences 12003), rastvorom penicilina/streptomicina razblaženim 1:100 (Sigma P7539), i 2 mM L-glumtaminom (Sigma G7513), i ostave preko noći da se pričvrste za podlogu na 37°C u 5% CO2. Jedinjenja i cisplatin se zatim dodaju istovremeno u ćelijski medijum u dvostrukim serijskim razblaženjima od najveće finalne koncentracije od 10 µM kao potpuna matrica koncentracija u finalnoj ćelijskoj zapremini od 200 µl, i ćelije se zatim inkubiraju na 37°C u 5% CO2. Posle 96 časova, 40 µl reagensa MTS (Promega G358a) se dodaje u svaku komoricu i ćelije se inkubiraju 1 čas na 37°C u 5% CO2. Najzad, apsorbancija se meri na 490 nm korišćenjem čitača SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) i koncentracija jedinjenja potrebna da smanji vrednost IC50 samog cisplatina za najmanje 3 puta (do 1 decimalnog mesta) može da se saopšti.

[0556] Tabela 6, u daljem tekstu, prikazuje vrednosti senzitizacije na cisplatin jedinjenja otkrića. Jedinjenja sa vrednošću senzitizacije na cisplatin od < 0.02 µM su označena sa "+++." Jedinjenja sa vrednošću senzitizacije na cisplatin > 0.02 µM, ali < 0.2 µM su označena sa "++." Jedinjenja sa vrednošću senzitizacije na cisplatin > 0.2 µM, ali < 5 µM su označena sa "+."

Tabela 6

1

�

�

Primer 22: Aktivnost protiv HCT116 pojedinačnog sredstva

[0557] Aktivnost jedinjenja kao pojedinačnog sredstva protiv kolorektalnih kancerskih ćelija HCT116 može da se ispita korišćenjem testa ćelijske vijabilnosti tokom 96 časova (MTS). HCT116 ćelije se zaseju pri gustini od 470 ćelija po komorici u polistirenske ploče sa 96 komorica (Costar 3596) u 150 µl McCoy-evog 5A medijuma (Sigma M8403) obogaćenog 10% fetalnim goveđim serumom (JRH Biosciences 12003), rastvorom penicilina/streptomicina razblaženim 1:100 (Sigma P7539), i 2 mM L-glumtaminom (Sigma G7513), i ostave preko noći da se pričvrste za podlogu na 37°C u 5% CO2. Jedinjenja se zatim dodaju u ćelijski medijum u dvostrukim serijskim razblaženjima od najveće finalne koncentracije od 10 µM kao potpuna matrica koncentracija u finalnoj ćelijskoj zapremini od 200 µl, i ćelije se zatim inkubiraju na 37°C u 5% CO2. Posle 96 časova, 40 µl reagensa MTS (Promega G358a) se dodaje u svaku komoricu i ćelije se inkubiraju 1 čas na 37°C u 5% CO2. Najzad, apsorbancija se meri na 490 nm korišćenjem čitača SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) i vrednosti IC50 mogu da se izračunaju.

Primer 23: Analiza inhibicije ATR-kompleksa

[0558] Jedinjenja su ispitivana za njihovu sposobnost da inhibiraju ATR kinazu, u prisustvu partner proteina ATRIP, CLK2 i TopBP1, upotrebom analiza ugradnje radioaktivnog fosfata. Analize su izvedene u smeši 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2i 1 mM DTT. Finalne koncentracije supstrata bile su 10 µM [g-33P]ATP (3.5 µCi 33P ATP/nmol ATP, Perkin Elmer, Massachusetts, USA) i 800 µM ciljnog peptida (ASELPASQPQPFSAKKK, Isca Biochemicals, Cambridgeshire, UK).

[0559] Analize su izvedene na 25°C u prisustvu 4 nM ATR pune dužine, 40 nM ATRIP pune dužine, 40 nM CLK2 pune dužine i 600 nM TopBP1(A891-S1105). Enzimski stok puferski rastvor je pripremljen i sadrži sve reagense navedene u prethodnom tekstu, sa izuzetkom ciljnog peptida, ATP i test jedinjenje interesa. Ovaj enzimski stok je prethodno inkubiran u trajanju od 30 minuta na 25°C.8.5 µL enzimskog stok rastvora je postavljeno u 96-komornu ploču, a zatim je dodato 5µl ciljnog peptida i 2 µL DMSO stoka koji sadrži serijska razblaženja test jedinjenja (tipično počevši od krajnje koncentracije od 1.5 µM sa 2.5-strukim serijskim razblaženjima) u dve kopije (krjanja koncentracija DMSO 7%). Ploča je prethodno inkubirana u trajanju od 10 minuta na 25°C i reakcija je započeta dodavanjem 15 µL [g-33P]ATP (krajnja koncentracija 10 µM).

[0560] Reakcija je prekinuta posle 20 časova dodavanjem 30 µL 0.3 M fosforne kiseline koja sadrži 2 mM ATP. Fosforcelulozna filterska 96-komorna ploča (Multiscreen HTS MAPHNOB50, Merck-Millipore, Massachusetts, USA) je prethodno tretirana sa 100 µL 0.1 M fosfornom kiselinom pre dodavanja 45 µL zaustavljene smeše za analizu. Ploča je isprana sa 5 x 200 µL 0.1 M fosfornom kiselinom. Posle sušenja, 50 µL Optiphase ’SuperMix’ tečnog scintilacionog koktela (Perkin Elmer, Massachusetts, USA) dodato je u komoricu pre scintilacionog brojanja (Wallac 1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Perkin Elmer, Massachusetts, USA).

[0561] Posle uklanjanja srednjih vrednosti pozadine za sve tačke podataka, Ki(app) podaci su izračunati iz nelinearne regresione analize podataka početne stope upotrebom Prism softverskog paketa (GraphPad Prism verzija 6.0c za Macintosh, GraphPad Software Inc., San Diego, USA).

[0562] Tabela 7, u daljem tekstu, prikazuje vrednosti senzitizacije na cisplatin jedinjenja prema otkriću. Jedinjenja sa vrednošću senzitizacije na cisplatin od < 0.02 µM su označena sa "+++." Jedinjenja sa Ki vrednošću > 0.02 µM, ali < 0.2 µM su označena sa "++." Jedinjenja sa Ki vrednošću > 0.2 µM, ali < 5 µM su označena sa "+."

Tabela 7

Claims (31)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima strukturu I-G-32:
2. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu I-G-32:
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje je farmaceutski prihvatljiva so od:
4. 4. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
5. 5. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta.
6. 6. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je navedeno jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili navedena farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta u kombinaciji sa agensom koji oštećuje DNK; pri čemu je agens koji oštećuje DNK odgovarajući za bolest koja se leči; i navedeni agens koji oštećuje DNK se primenjuje zajedno sa navedenim jedinjenjem kao jedan oblik doze ili posebno od navedenog jedinjenja kao deo višestrukog oblika doze.
7. 7. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 6, pri čemu navedeni agens koji oštećuje DNK je hemoterapija ili tretman zračenjem; izborno pri čemu, navedeni agens koji oštećuje DNK je jonizujuće zračenje, radiomimetički neokarzinostatin, platinaciono sredstvo, inhibitor Topo I, inhibitor Topo II, antimetabolit, alkilaciono sredstvo, alkil sulfonat ili antibiotik.
8. 8. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu navedeno platinaciono sredstvo je cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, nedaplatin, lobaplatin, triplatin tetranitrat, pikoplatin, satraplatin, prolindak ili aroplatin; navedeni inhibitor Topo I je kamptotecin, topotekan, irinotekan/SN38, rubitekan ili belotekan; navedeni inhibitor Topo II je etoposid, daunorubicin, doksorubicin, aklarubicin, epirubicin, idarubicin, amrubicin, pirarubicin, valrubicin, zorubicin ili teniposid; navedeni antimetabolit je izabran iz grupe koja se sastoji od aminopterina, metotreksata, pemetrekseda, raltitrekseda, pentostatina, kladribina, klofarabina, fludarabina, tioguanina, merkaptopurina, 6-merkaptopurina, fluorouracila, 5-fluorouracila, kapecitabina, tegafura, karmofura, floksuridina, citarabina, gemcitabina, azacitidina i hidroksiuree; navedeno alkilaciono sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od azotnih iperita, nitrozourea, triazena, alkil sulfonata, aziridina; mehloretamina, ciklofosfamida, ifosfamida, trofosfamida, hlorambucila, melfalana, prednimustina, bendamustina, uramustina, estramustina, karmustina, lomustina, semustina, fotemustina, nimustina, ranimustina, streptozocina, busulfana, manosulfana, treosulfana, karbokvona, tioTEPA, triazikvona, trietilenmelamina, prokarbazina, dakarbazina, temozolomida, altretamina i mitobronitola; i navedeni antibiotik je izabran iz grupe koja se sastoji od hidroksiuree, antraciklina, antracendiona, Streptomyces familije, aktinomicina, bleomicina, mitomicina i plikamicina.
9. 9. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu, agens koji oštećuje DNK je platinaciono sredstvo ili jonizujuće zračenje; gemcitabin; jonizujuće zračenje; platinaciono sredstvo nezavisno izabrano od cisplatina i karboplatina; etoposid; ili temozolomid.
10. 10. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu agens koji oštećuje DNK je jedan ili više od sledećih: cisplatin, karboplatin, gemcitabin, etoposid, temozolomid i jonizujuće zračenje; na primer, gde je agens koji oštećuje DNK jedan ili više od sledećih: gemcitabin, cisplatin ili karboplatin, i etoposid.
11. 11. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 10, pri čemu navedeni kancer je solidni tumor izabran iz grupe koja se sastoji od oralnog kancera, kancera srca, kancera pluća, gastrointestinalnog kancera, kancera genitourinarnog trakta, kancera jetre, kancera kosti, kancera nervnog sistema, ginekološkog/ženskog kancera, kancera kože, kancera tiroidne žlezde i kancera nadbubrežnih žlezda; na primer, gde je navedeni oralni kancer izabran iz grupe koja se sastoji od: kancera bukalne šupljine, kancera usne, kancera jezika, kancera usta i kancera ždrela; pri čemu je navedeni kancer srca izabran iz grupe koja se sastoji od: sarkoma (angiosarkoma, fibrosarkoma, rabdomiosarkoma, liposarkoma), miksoma, rabdomioma, fibroma, lipoma i teratoma; pri čemu je navedeni kancer pluća izabran iz grupe koja se sastoji od: bronhogenog karcinoma (skvamoznih ćelija ili epidermoida, nediferenciranog sitnoćelijskog, nediferenciranog krupnoćelijskog, adenokarcinoma), alveolarnog (bronhiolarnog) karcinoma, bronhijalnog adenoma, sarkoma, limfoma, hondromatoznog hamartoma i mezotelioma; pri čemu je navedeni gastrointestinalni kancer izabran iz grupe koja se sastoji od: kancera jednjaka (karcinoma skvamoznih ćelija, larinksa, adenokarcinoma, leiomiosarkoma, limfoma), kancera želudca (karcinoma, limfoma, leiomiosarkoma), kancera pankreasa (duktalnog adenokarcinoma, insulinoma, glukagonoma, gastrinoma, karcinoidnih tumora, vipoma), kancera tankog creva (adenokarcinoma, limfoma, karcinoidnih tumora, Karpošijevog sarkoma, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), kancera debelog creva (adenokarcinoma, tubularnog adenoma, viloznog adenoma, hamartoma, leiomioma), kancera debelog creva, kancera debelog creva-rektuma, kolorektalnog kancera; i kancera rektuma; pri čemu je navedeni kancer genitourinarnog trakta izabran iz grupe koja se sastoji od: kancera bubrega (adenokarcinoma, Wilm-ovog tumora [nefroblastoma], limfoma), kancera bešike i uretre (karcinoma skvamoznih ćelija, karcinoma prelaznih ćelija, adenokarcinoma), kancera prostate (adenokarcinoma, sarkoma) i testikularnog kancera (seminoma, teratoma, embrionalnog karcinoma, teratokarcinoma, horiokarcinoma, sarkoma, karcinoma intersticijalnih ćelija, fibroma, fibroadenoma, adenomatoidnih tumora, lipoma); pri čemu je navedeni kancer jetre izabran iz grupe koja se sastoji od: hepatoma (hepatoćelijskog karcinoma), holangiokarcinoma, hepatoblastoma, angiosarkoma, hepatoćelijskog adenoma, hemangioma i žučnih puteva; pri čemu je navedeni kancer kosti izabran iz grupe koja se sastoji od: osteogenog sarkoma (osteosarkoma), fibrosarkoma, malignog fibroznog histiocitoma, hondrosarkoma, Ewing-ovog sarkoma, malignog limfoma (sarkoma retikularnih ćelija), multiplog mijeloma, hordoma tumora malignih džinovskih ćelija, osteohronfroma (koštano-hrskavičavih egzostoza), benignog hondroma, hondroblastoma, hondromiksofibroma, osteoidnog osteoma i tumora džinovskih ćelija; pri čemu je kancer nervnog sitema izabran iz grupe koja se sastoji od: kancera lobanje (osteoma, hemangioma, granuloma, ksantoma, osteitis deformans), kancera meningi (meningioma, meningiosarkoma, gliomatozisa), kancera mozga (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiform, oligodendroglioma, švanoma, retinoblastoma, kongenitalnih tumora), kancera kičmene moždine, neurofibroma, meningioma, glioma i sarkoma; pri čemu je navedeni ginekološki/ženski kancer izabran iz grupe koja se sastoji od: kancera materice (karcinoma endometrijuma), kancera grlića materice (karcinoma grlića materice, pre-tumorske cervikalne displazije), kancera jajnika (karcinoma jajnika [seroznog cistadenokarcinoma, mucinoznog cistadenokarcinoma, neklasifikovanog karcinoma], tumora granuloza-tekalnih ćelija, tumora Sertoli-Leydig-ovih ćelija, disgerminoma, malignog teratoma), vulvarnog kancera (karcinoma skvamoznih ćelija, intraepitelijalnog karcinoma, adenokarcinoma, fibrosarkoma, melanoma), vaginalnog kancera (karcinoma providnih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, botrioidnog sarkoma (embrionalnog rabdomiosarkoma), kancera jajovoda (karcinoma), i kancera dojke; pri čemu navedeni kancer kože je izabran iz grupe koja se sastoji od: malignog melanoma, karcinoma bazalnih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, Karpošijevog sarkoma, keratoakantoma, mladeža dysplastic nevi, lipoma, angioma i dermatofibroma; pri čemu navedeni kancer tiroidne žlezde je izabran iz grupe koja se sastoji od: papilarnog tiroidnog karcinoma, folikularnog tiroidnog karcinoma; medularnog tiroidnog karcinoma, multiple endokrine neoplazije tipa 2A, multiple endokrine neoplazije tipa 2B, porodičnog medularnog tirodinog kancera, feohromocitoma i paraganglioma; i pri čemu navedeni kancer nadbubrežne žlezde je neuroblastom.
12. 12. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 10, pri čemu navedeni kancer je kancer pluća, kancer glave i vrata, kancer pankreasa, kancer želudca ili kancer mozga; ili navedeni kancer je nesitnoćelijski kancer pluća, sitnoćelijski kancer pluća, kancer pankreasa, kancer žučnog trakta, kancer bešike, kolorektalni kancer, glioblastom, kancer jednjaka, kancer dojke, hepatoćelijski kancer ili kancer jajnika; na primer, navedeni kancer je kancer pluća ili pankreasa.
13. 13. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 11, pri čemu, kancer je kancer pluća i kancer pluća je sitnoćelijski kancer pluća, i agens koji oštećuje DNK je cisplatin i etoposid; ili pri čemu kancer pluća je nesitnoćelijski kancer pluća, i agens koji oštećuje DNK je gemcitabin i cisplatin, na primer, pri čemu nesitnoćelijski kancer pluća je skavmozni nesitnoćelijski kancer pluća.
14. 14. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnim zahtevima 5 do 10, pri čemu, kancer je kancer dojke, i agens koji oštećuje DNK je cisplatin; na primer, pri čemu, kancer je trostruko negativan kancer dojke.
15. 15. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu, kancer je kancer pankreasa i agens koji oštećuje DNK je gemcitabin.
16. 16. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu u lečenju kancera pankreasa u kombinaciji sa agensom koji oštećuje DNK izabranim iz grupe koja se sastoji od gemcitabina, terapije zračenjem i oba, gemcitabina i terapije zračenjem zajedno.
17. 17. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu u povećanju osetljivosti ćelija kancera pankreasa na terapiju kancera izabranu od hemoterapije i terapije zračenjem; na primer, gde a) hemoterapija je gemcitabin; b) terapija kancera je gemcitabin; c) terapija kancera je zračenje; ili d) terapija kancera je gemcitabin i zračenje.
18. 18. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, u kombinaciji sa gemcitabinom (100 nM) i/ili zračenjem (6 Gy) za upotrebu u inhibiciji fosforilacije Chk1 (Ser 345) u ćeliji kancera pankreasa.
19. 19. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, u kombinaciji sa hemoradijacijom za upotrebu u senzitizaciji ćelija kancera pankreasa na hemoradijaciju; na primer, pri čemu hemoradijacija je gemcitabin i zračenje.
20. 20. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, u kombinaciji sa terapijom zračenjem, za upotrebu u radiosenzitizaciji hipoksičnih ćelija kancera pankreasa; ili u kombinaciji sa hemoterapijom, za upotrebu u senzitizaciji hipoksičnih ćelija kancera pankreasa.
21. 21. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, u kombinaciji sa terapijom zračenjem i/ili gemcitabinom, za upotrebu u a) prekidu kontrolnih tačaka ćelijskog ciklusa indukovanih oštećenjem; ili b) inhibiciji popravke oštećenja DNK putem homologe rekombinacije u ćeliji kancera pankreasa; na primer, pri čemu, jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, se primenjuje na pacijenta ili ćeliju kancera pankreasa.
22. 22. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, u kombinaciji sa jednim ili više od sledećih agenasa koji oštećuju DNK: cisplatina ili karboplatina, etoposida i jonizujućeg zračenja, za upotrebu u lečenju nesitnoćelijskog kancera pluća.
23. 23. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu u a) stimulaciji ćelijske smrti u ćelijama kancera u pacijentu; b) prevenciji popravke ćelija od oštećenja DNK u pacijentu; ili c) senzitizaciji ćelije na agens koji oštećuje DNK u pacijentu.
24. 24. In vitro ili ex vivo postpak za inhibiciju ATR u biološkom uzorku koji sadrži korak dovođenja u kontakt jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutske kompozicije prema patentnom zahtevu 4, sa navedenim biološkim uzorkom, na primer, pri čemu navedeni biološki uzorak je ćelija.
25. 25. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 7-23, pri čemu, navedeni kancer, ćelija kancera ili ćelija ima defekt u proteinu za popravku isecanja baza, pri čemu, protein za popravku isecanja baza je PART1 ili PARP2.
26. 26. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, za upotrebu prema bilo kom od patentih zahteva 7-23, pri čemu upotreba dalje sadrži primenu dodatnog terapeutskog sredstva koje inhibira ili modulira protein za popravku isecanja baza, pri čemu, protein za popravku isecanja baza je PART1 ili PARP2.
27. 27. Postupak za pripremu jedinjenja formule I-G-32:

    koji sadrži korak reakcije jedinjenja formule 30:

    sa jedinjenjem formule 25:

    pod pogodnim uslovima da bi se formirala amidna veza; na primer, pri čemu pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 30 sa jedinjenjem formule 25 u prisustvu amidnog kuplujućeg partnera, aprotičnog rastvarača i baze; na primer, pri čemu, aprotični rastvarač je NMP, DMF ili tetrahidrofuran; na primer, pri čemu, baza je alifatični amin, izborno pri čemu baza je DIPEA; i na primer, pri čemu, amidni kuplujući partner je TBTU ili TCTU.
28. 28. Postupak prema patentnom zahtevu 27, koji dalje sadrži korak pripreme jedinjenja formule 30:

    reakcijom jedinjenja formule 28:

    pod pogodnim uslovima deprotekcije da bi se formirala karboksilna kiselina; na primer, koji dalje sadrži korak pripreme jedinjenja formule 28:

    reakcijom jedinjenja formule 6a*: ;sa jedinjenjem formule 27: ;pod pogodnim uslovima da bi se formirala amidna veza.
29. 29. Postupak prema patentnom zahtevu 28, pri čemu pogodni uslovi deprotekcije sadrže reakciju jedinjenja formule 28 sa kiselinom u prisustvu rastvarača; na primer, pri čemu, kiselina je HCl; i na primer, pri čemu, rastvarač je 1,4-dioksan.
30. 30. Postupak prema patentnom zahetvu 28, pri čemu pogodni uslovi za formiranje amidne veze sadrže reakciju jedinjenja formule 6a* sa jedinjenjem formule 27 u aprotičnom rastvaraču pod zagrevanjem; na primer, pri čemu, aprotični rastvarač je NMP, piridin ili DMF; i na primer, pri čemu je reakcija izvedena na temperaturi od najmanje 80°C.
31. 31. Postupak za pripremu jedinjenja formule 27:

    koji sadrži korak reakcije jedinjenja formule 26:

    pod pogodnim uslovima da bi se formirao amin; izborno pri čemu, postupak dalje sadrži korak pripreme jedinjenja formule 26:

    putem 1) reakcije jedinjenja formule 18: 1

    pod pogodnim uslovima izmene halogena da bi se generisalo jedinjenje formule 32

    i 2) reakcije jedinjenja formule 32:

    sa jedinjenjem formule 22:

    pod pogodnim uslovima zamene; izborno, dalje sadrži korak pripreme jedinjenja formule 18:

    putem reakcije jedinjenja formule 31: 2

    pod pogodnim uslovima halogenizacije. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5