RS58705B1

RS58705B1 - Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora

Info

Publication number: RS58705B1
Application number: RS20190508A
Authority: RS
Inventors: Alan J Korman; Nils Lonberg; David J Fontana; Andres A Gutierrez; Mark J Selby; Katherine E Lewis
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2013-09-20
Filing date: 2014-09-18
Publication date: 2019-06-28
Also published as: BR112016005816A2; BR122023024195A2; PL3178849T3; HRP20190774T1; SMT202300204T1; CA2924524A1; RS64268B1; SI3508502T1; PT3178849T; CN112516302B; EP4249065A2; JP7480248B2; ES2728578T3; FI3508502T3; EA201690617A1; LT3178849T; HRP20230603T1; CY1126115T1; SMT201900332T1; EP3508502A1

Description

Opis

STANJE TEHNIKE

[0001] Limfocitni aktivacioni gen-3 (LAG-3; CD223) je transmembranski protein tipa I koji je eksprimiran na ćelijskoj površini aktiviranih CD4+ i CD8+ T ćelija i podgrupama NK i dendritskih ćelija (Triebel F, et al., J. Exp. Med.1990; 171:1393-1405; Workman CJ, et al., J. Immunol.2009; 182(4):1885-91). LAG-3 je blisko povezan sa CD4, koji je koreceptor za aktivaciju T pomoćnih ćelija. Oba molekula imaju 4 vanćelijska Ig-slična domena i zahtevaju vezivanje za njihov ligand, glavni kompleks histokompatibilnosti (major histocompatibility complex - MHC) klase II, za njihovu funkcionalnu aktivnost. Nasuprot CD4, LAG-3 je samo eksprimiran na ćelijskoj površini aktiviranih T ćelija i njegovo cepanje sa ćelijske površine okončava LAG-3 signalizaciju. LAG-3 može takođe biti nađen kao solubilni protein ali se ne vezuje za MHC klase II i njegova funkcija je nepoznata.

[0002] Prijavljeno je da LAG-3 igra značajnu ulogu u pospešivanju aktivnosti regulatornih T ćelija (Treg) i u negativnom regulisanju aktivacije i proliferacije T ćelija (Workman CJ, et al., J. Immunol. 2005; 174:688-695). I prirodne i indukovane Treg ćelije ekspirmiraju povećani LAG-3, koji je potreban za njihovu maksimalnu supresivnu funkciju (Camisaschi C, et al., J. Immunol.

2010; 184:6545-6551 i Huang CT, et al., Immunity. 2004; 21:503-513). Pored toga, ektopična ekspresija LAG-3 na CD4+ efektorskim T ćelijama smanjila je njihov proliferativni kapacitet i dodelila im je regulatorni potencijal za T ćelije treće strane (Huang CT, et al., Immunity. 2004; 21:503-513). Nedavne studije su takođe pokazale da visoka LAG-3 ekspresija na iscrpljenim limfocitarni horiomeningitis virus (LCMV)-specifičnim CD8+ T ćelijama doprinosi njihovom stanju neodgovaranja i ograničava CD8+ T ćelijske antitumorske odgovore (Blackburn SD, et al., Nat. Immunol. 2009; 10:29-37 i Grosso JF, et al., J. Clin. Invest.2007; 117:3383-3392). Zapravo, LAG-3 je održavao toleranciju na sopstvene i tumorske antigene preko direktnih efekata na CD8+ T ćelije u 2 murinska modela (Grosso JF, et al., J. Clin. Invest.2007; 117:3383-3392).

[0003] Imunska tolerancija opažena u okruženju tumorskog razvoja i tumorske rekurencije, međutim, deluje da je posredovana ko-ekspresijom raznih T ćelijski negativno regulatornih receptora, ne samo od LAG-3. Podaci iz modela za hroničnu virusnu infekciju (Blackburn SD, et al., Nat. Immunol. 2009; 10:29-37, Grosso JF, et al., J. Clin. Invest. 2007; 117:3383-3392, i Lyford-Pike S, et al., Cancer Res.2013;73(6):1733-41), nokaut miševa (Woo SR, et al., Cancer Res. 2012;72:917-927; Okazaki T, et al., J. Exp Med. 2011; 208:395-407, i Bettini M. et al., J. Immunol. 2011;187:3493-3498), modela tumorskih rekurencija (Goding SR, et al., J. Immunol.

2013; 190(9):4899-4909) i, do više ograničenog stepena, humanih kancerskih pacijenata (Goding SR, et al., J. Immunol. 2013; 190(9):4899-4909, Matsuzaki J, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., SAD.

2010;107:7875-7880, i Gandhi MK, et al., Blood.2006;108:2280-2289) podržavaju model u kome T ćelije koje su kontinuirano izložene antigenu postaju progresivno inaktivirane preko procesa nazvanog "iscrpljenost." Iscrpljene T ćelije su okarakterisane pomoću ekspresije T ćelijskih negativno regulatornih receptora, predominantno CTLA-4, PD-1, i LAG-3, čije dejstvo je da ograniče sposobnost ćelije da proliferiše, proizvodi citokine, i ubija ciljne ćelije i/ili povećava aktivnost Treg ćelija. Međutim, vreme i redosled ekspresije ovih molekula u razvoju i rekurenciji tumora nisu potpuno okarakterisani.

[0004] Programirana ćelijska smrt 1 (Programmed Cell Death 1 - PD-1) je ćelijski površinski signalizacioni receptor koji igra kritičnu ulogu u regulaciji T ćelijske aktivacije i tolerancije (Keir ME, et al., Annu Rev Immunol 2008; 26:677-704). To je transmembranski protein tipa I i zajedno sa BTLA, CTLA-4, ICOS i CD28, sadrži CD28 familiju T ćelijskih ko-stimulatornih receptora. PD-1 je primarno eksprimiran na aktiviranim T ćelijama, B ćelijama, i mijeloidnim ćelijama (Dong H, et al., Nat Med.1999; 5:1365-1369). On je takođe eksprimiran na ćelijama prirodnim ubicama (natural killer - NK) (Terme M, et al., Cancer Res 2011; 71:5393-5399). Vezivanje PD-1 pomoću njegovih liganada, PD-L1 i PD-L2, rezultuje u fosforilaciji tirozinskog ostatka u proksimalnom unutarćelijskom tirozinskom inhibitornom domenu imunskog receptora, praćeno angažovanjem fosfataze SHP-2, najzad rezultujući u negativnoj regulaciji T ćelijske aktivacije. Jedna značajna uloga PD-1 je da ograniči aktivnost T ćelija u perifernim tkivima u vreme inflamatornog odgovora na infekciju, tako ograničavajući razvoj autoimuniteta (Pardoll DM., Nat Rev Cancer 2012; 12:252-264). Dokaz ove negativne regulatorne uloge proizilazi iz otkrića da PD-1-deficijentni miševi razvijaju lupusu-slične autoimune bolesti uključujući artritis i nefritis, zajedno sa kardiomiopatijom (Nishimura H, et al., Immunity, 1999; 11:141-151; i Nishimura H, et al., Science, 2001; 291:319-322). U tumorskom okruženju, posledica je razvoj imunske rezistencije unutar tumorske mikrosredine. PD-1 je visoko eksprimiran na tumor-infiltrirajućim limfocitima, i njegovi ligandi su pozitivno regulisani na ćelijskoj površini mnogih različitih tumora (Dong H, et al., Nat Med 2002; 8:793-800). Više murinskih kancerskih modela je pokazalo da vezivanje liganda za PD-1 rezultuje u izbegavanju imunskog sistema. Dodatno, blokada ove interakcije rezultuje anti-tumorskom aktivnošću. (Topalian SL, et al. NEJM 2012; 366(26):2443-2454; Hamid O, et al., NEJM 2013; 369:134-144). Pored toga, pokazano je da inhibicija PD-1/PD-L1 interakcije posreduje u potentnoj antitumorskoj aktivnosti u prekliničkim modelima (američki patenti br.8,008,449 i 7,943,743).

[0005] WO 2010/019570 opisuje izolovana monoklonska antitela koja se specifično vezuju za LAG-3 i mogu da inhibiraju vezivanje LAG-3 za molekule MHC klase II i stimulišu antigenspecifične T ćelijske odgovore. Kombinovana blokada Lag-3 i PD-1/PD-L1 za lečenje tumora je istraživana u mišjim modelima (Goding SR, et al., Oncoimmunology 2013, 2(8); e25050-1 -XP002734389; Turnis ME, et al., Oncoimmunology 2012, 1(7); 1172 - 1174; Woo SR, et al., Cancer Res., 72(4) 2011; 917-927).

[0006] Pacijenti sa metastatskim ili refraktornim solidnim tumorima imaju veoma lošu prognozu (Rosenberg SA, et al., Cancer immunotherapy in Cancer: Principles & Practice of Oncology (Eds DeVita VT, Lawrence TS i Rosenberg SA) 2011; 332-344 (Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfija Pensilvanija)). Uprkos napredovanjima u multimodalnoj terapiji, povećanje ukupnog preživljavanja u ovoj populaciji pacijenata je ograničeno. Shodno tome, cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi poboljšane metode za lečenje subjekata sa takvim tumorima (npr. uznapredovalim refraktornim solidnim tumorima).

REZIME

[0007] Ovde su obezbeđene kombinacije anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela za primenu u metodama za lečenje solidnih tumora kod humanog pacijenta, posebno uznapredovalih refraktornih solidnih tumora, gde kombinacija je administrirana (ili je za oralnu administraciju) u skladu sa posebnim kliničkim doznim režimom (tj., u posebnoj doznoj količini i u skladu sa specifičnim rasporedom doziranja). U jednom aspektu, humani pacijent boluje od melanoma, nesitnoćelijskog kancera pluća (non-small cell lung cancer - NSCLC), virusno-povezanog kancera, kancera glave i vrata (head and neck cancer - HNC) ili gastričnog adenokarcinoma.

[0008] Prema tome, u skladu sa aspektom, predmetni pronalazak se odnosi na proizvod koji sadrži anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo za kombinovanu primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta,

gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg; anti-LAG-3 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom; i

anti-PD-1 antitelo sadrži

(a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:23; (b) CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:24; (c) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:25; (d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:26; (e) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:27; i (f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:28.

[0009] U skladu sa dodatnim aspektom, predmetni pronalazak odnosi se na anti-LAG-3 antitelo za primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta,

gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg; anti-LAG-3 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom; i anti-PD-1 antitelo sadrži

(a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:23; (b) CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:24; (c) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:25; (d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:26; (e) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:27; i (f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:28. U skladu sa dodatnim aspektom, predmetni pronalazak odnosi se na anti-PD-1 antitelo za primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta,

gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg; anti-PD-1 antitelo sadrži

(a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:23; (b) CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:24; (c) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:25; (d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:26; (e) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:27; i (f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:28; i

anti-LAG-3 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom.

[0010] Anti-LAG-3 antitelo za primenu u skladu sa pronalaskom za koji se traži zaštita sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom. Anti-LAG-3 antitelo koje služi kao primer je BMS-986016. BMS-986016 sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:1 i 2, redom. Ovde su takođe stavljena na uvid javnosti antitela koja sadrže regione koji određuju komplementarnost (complementarity determining regions - CDRs) teškog i lakog lanca ili varijabilne regione (VRs) od BMS-986016. Shodno tome, antitelo sadrži CDR1, CDR2, i CDR3 domene varijabilnog regiona teškog lanca (VH) od BMS-986016 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:3, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona lakog lanca (VL) od BMS-986016 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:5. Ili, antitelo sadrži sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 teškog lanca prikazane u SEK ID BRojevima:7, 8, i 9, redom, i sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 lakog lanca kao što je prikazano u SEK ID BRojevima:10, 11, i 12, redom. Dalje ovde stavljena na uvid javnosti su antitela koja imaju VH i/ili VL regione koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEK ID BR:3 i/ili SEK ID BR:5, redom. Dalje ovde stavljena na uvid javnosti su antitela koja sadrže VH i/ili VL regione kodirane pomoću sekvenci nukleinskih kiselina prikazanih u SEK ID BR:4 i/ili SEK ID BR:6, redom. U jednom tehničkom rešenju, antitelo se takmiči za vezivanje sa, i/ili vezuje se za isti epitop na LAG-3 kao, gore-pomenuta antitela. Takođe su ovde stavljena na uvid javnosti antitela koja imaju najmanje oko 90% identičnosti aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona sa gore-pomenutim antitelima (npr., najmanje oko 90%, 95% ili 99% identičnosti varijabilnog regiona sa SEK ID BR:3 ili SEK ID BR:5).

[0011] Anti-PD-1 antitelo za primenu prema pronalasku za koje se traži zaštita sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 domene teškog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:23, 24, i 25, redom, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima: 26, 27, i 28, redom. Anti-PD-1 antitelo koje služi kao primer je Nivolumab (takođe označeno kao "5C4" u WO 2006/121168; i poznato kao BMS-936558, MDX-1106 i ONO-4538). Nivolumab sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:17 i 18, redom. U drugim tehničkim rešenjima, antitelo sadrži CDR regione teškog i lakog lanca ili VR regione od BMS-936558. Shodno tome, u jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži CDR1, CDR2, i CDR3 domene VH regiona od BMS-936558 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:19, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene VL regiona od BMS-936558 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:21. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži VH i/ili VL regione koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEK ID BR: 19 i/ili SEK ID BR:21, redom. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži varijabilne teškog lanca (VH) i/ili varijabilne lakog lanca (VL) regione kodirane sekvencama nukleinskih kiselina koje su prikazane u SEK ID BR:20 i/ili SEK ID BR:22, redom. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo se takmiči za vezivanje sa, i/ili vezuje se za isti epitop na PD-1 kao, gore-pomenuta antitela. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo ima najmanje oko 90% identičnosti aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona sa gorepomenutim antitelima (npr., najmanje oko 90%, 95% ili 99% identičnosti varijabilnog regiona sa SEK ID BR:19 ili SEK ID BR:21).

[0012] U jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo su administrirana pri sledećim dozama:

(a) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 80 mg anti-PD-1 antitela;

(b) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(c) 20 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(d) 80 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela; ili

(e) 240 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela.

[0013] U jednom tehničkom rešenju, doza anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela je fiksno-stabilna doza.

[0014] U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo je administrirano na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa. U još jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo je administrirano na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa. U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo je administrirano pre administracije anti-LAG-3 antitela. U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo je administrirano posle administracije anti- LAG-3 antitela. U još jednom tehničkom rešenju, lečenje se sastoji od do 12 ciklusa.

[0015] U jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo i anti-LAG-3 antitelo su administrirani kao prva ("frontalna") linija lečenja (npr., inicijalno ili prvo lečenje). U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo i anti-LAG-3 antitelo su administrirani kao druga linija lečenja (npr., nakon inicijalnog lečenja sa istim ili različitim terapeutikom, uključujući nakon relapsa i/ili gde prvo lečenje nije uspelo). Anti-LAG-3 i anti-PD-1 antitela mogu biti administrirana subjektu pomoću bilo kog pogodnog načina. U jednom tehničkom rešenju, antitela su formulisana za intravensku administraciju. U još jednom tehničkom rešenju, antitela su administrirana simultano (npr., formulisana zajedno u jednoj formulaciji ili istovremeno kao odvojene formulacije). Alternativno, u još jednom tehničkom rešenju, antitela su administrirana sekvencijalno (npr., kao odvojene formulacije). U još jednom tehničkom rešenju anti-LAG-3 antitelo je administrirano u okviru oko 30 minuta (npr., u okviru oko 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, ili manje minuta) pre administracije anti-PD-1 antitela.

[0016] Efikasnost metoda lečenja obezbeđenih ovde može biti procenjena korišćenjem bilo kojih pogodnih načina. U jednom tehničkom rešenju, lečenje proizvodi najmanje jedan terapijski efekat odabran iz grupe koja sa sastoji od smanjenja veličine tumora, smanjenja broja metastatskih lezija tokom vremena, kompletnog odgovora, delimičnog odgovora, i stabilne bolesti.

[0017] Takođe su obezbeđeni kompleti koji uključuju farmaceutsku kompoziciju koja sadrži anti-LAG-3 antitelo, kao što je BMS-986016, i anti-PD-1 antitelo, kao što je BMS-936558, i farmaceutski-prihvatljiv nosač, u terapijski efikasnoj količini adaptiranoj za primenu u metodama opisanim ovde. U jednom tehničkom rešenju, komplet sadrži:

(a) dozu anti-LAG-3 antitela koje sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom;

(b) dozu anti-PD-1 antitela koje sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona teškog lanca koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:19, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona lakog lanca koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:21, tj.

(a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:23;

(b) CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:24;

(c) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:25;

(d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:26;

(e) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:27; i

(f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:28; i

(c) uputstva za primenjivanje anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela u metodi pronalaska.

[0018] U još jednom aspektu, anti-LAG-3 antitelo je obezbeđeno, anti-LAG-3 antitelo koje sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona teškog lanca koji ima sekvencu prikazanu u SEK ID BR:3, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona lakog lanca koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:5, za ko-administraciju sa anti-PD-1 antitelom koje sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona teškog lanca koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:19, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene varijabilnog regiona lakog lanca koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:21, u najmanje jednom ciklusu, gde za svaki ciklus četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg. U još jednom tehničkom rešenju, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 0.03, 0.25, 1, ili 3 mg/kg telesne mase i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 1 ili 3 mg/kg telesne mase.

KRATAK OPIS NACRTA

[0019]

Slika 1 prikazuje inhibiciju tumorskog rasta in vivo korišćenjem kombinovanog lečenja sa anti-LAG-3 antitelom i anti-PD-1 antitelom u murinskom tumorskom modelu.

Slike 2A i 2B su sheme koje ilustruju delove kliničkog ispitivanja u fazi I.

Slika 3 je shema koja ilustruje faze proveravanja, lečenja, kliničkog praćenja, i praćenja preživljavanja kliničkog ispitivanja.

DETALJAN OPIS

I. Definicije

[0020] Kao što je ovde korišćeno, termin "subjekat" ili "pacijent" je humani pacijent sa kancerom (npr., pacijent koji ima uznapredovali solidni tumor, kao što je uznapredovali refraktorni solidni tumor).

[0021] Kao što je ovde korišćeno, "efikasno lečenje" odnosi se na lečenje koje proizvodi blagotvorni efekat, npr., poboljšanje najmanje jednog simptoma bolesti ili poremećaja. Blagotvorni efekat može imati oblik poboljšanja iznad osnovnog nivoa, tj., poboljšanja u odnosu na merenje ili posmatranje izvršeno pre početka terapije u skladu sa metodom. Blagotvorni efekat takođe može biti u obliku zaustavljanja, usporavanja, odlaganja ili stabilizacije štetne progresije markera solidnog tumora. Efikasno lečenje može se odnositi na ublažavanje najmanje jednog simptoma solidnog tumora. Takvo efikasno lečenje može, npr., smanjiti bol pacijenta, smanjiti veličinu i/ili broj lezija, može smanjiti ili sprečiti metastaze tumora, i/ili može usporiti rast tumora.

[0022] Termin "efikasna količina" odnosi se količinu agensa koji obezbeđuje željeni biološki, terapijski, i/ili profilaktički rezultat. Taj rezultat može biti smanjenje, ublažavanje, palijacija, umanjivanje, odlaganje i/ili olakšavanje jednog ili više znakova, simptoma ili uzroka bolesti, ili bilo koja druga željena promena biološkog sistema. U odnosu na solidne tumore, efikasna količina sadrži količinu koja je dovoljna da izazove da se tumor skupi i/ili smanji brzina rasta tumora (kao da se suzbije rast tumora) ili da se spreči ili odloži druga neželjena ćelijska proliferacija. U nekim tehničkim rešenjima, efikasna količina je količina dovoljna da odloži razvoj tumora. U nekim tehničkim rešenjima, efikasna količina je količina dovoljna za sprečavanje ili odlaganje rekurencije tumora. Efikasna količina se može administrirati u jednoj ili više administracija. Efikasna količina leka ili kompozicije može: (i) smanjiti broj kancerskih ćelija; (ii) smanjiti tumorsku veličinu; (iii) inhibirati, odložiti, usporiti do nekog stepena i može zaustaviti infiltraciju kancerskih ćelija u periferne organe; (iv) inhibirati (tj., usporiti do nekog stepena i može zaustaviti tumorsku metastazu; (v) inhibirati tumorski rast; (vi) sprečiti ili odložiti pojavu i/ili rekurenciju tumora; i/ili (vii) olakšati do nekog stepena jedan ili više simptoma povezanih sa kancerom. U jednom primeru, "efikasna količina" je količina anti-LAG-3 antitela i količina anti-PD-1 antitela, u kombinaciji, klinički dokazanih da utiču na značajno smanjenje kancera ili usporavanje progresije kancera, kao što je uznapredovali solidni tumor. Kao što je ovde korišćeno, termini "fiksna doza", "stabilna doza" i "stabilno-fiksna doza" su korišćeni naizmenično i odnose se na dozu koja je administrirana pacijentu bez obzira na masu ili površinu tela (body surface area -BSA) pacijenta. Fiksna ili stabilna doza stoga nije obezbeđena kao doza u mg/kg, nego kao apsolutna količina agensa (npr., anti-LAG-3 antitela i/ili anti-PD-1 antitela).

[0023] Kao što je ovde korišćeno, "doza koja je zasnovana na površini tela (BSA)" odnosi se na dozu (npr., anti-LAG-3 antitela i/ili anti-PD-1 antitela) koja je podešena na površinu tela (BSA) pojedinačnog pacijenta. BSA-zasnovana doza može biti obezbeđena kao mg/kg telesne mase. Razna izračunavanja su objavljena kao bi se stiglo na BSA bez direktnog merenja, od kojih je najčešće korišćena Du Bois formula (videti Du Bois D, Du Bois EF (Jun 1916) Archives of Internal Medicine 17 (6): 863-71; i Verbraecken, J. et al. (Apr 2006). Metabolism - Clinical and Experimental 55 (4): 515-24). Druge BSA formule koje služe kao primer uključuju Mosteller formulu (Mosteller RD. N Engl J Med., 1987; 317:1098), Haycock formulu (Haycock GB, et al., J Pediatr 1978, 93:62-66), Gehan i George formulu (Gehan EA, George SL, Cancer Chemother Rep 1970, 54:225-235), Boyd formulu (Current, JD (1998), The Internet Journal of Anesthesiology 2 (2); i Boyd, Edith (1935), University of Minnesota. The Institute of Child Welfare, Monograph Series, No. x. London: Oxford University Press), Fujimoto formulu (Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), Takahira formulu (Fujimoto S, et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), i Schlich formulu (Schlich E, et al., Ernährungs Umschau 2010;57:178-183).

[0024] Termin "antitelo" opisuje polipeptide koji sadrže najmanje jedno mesto za vezivanje antigena izvedeno iz antitela (npr., VH/VL region ili Fv, ili CDR). Antitela uključuju poznate oblike antitela. Na primer, antitelo može biti humano antitelo, humanizovano antitelo, bispecifično antitelo, ili himerno antitelo. Antitelo takođe može biti Fab, Fab’2, ScFv, SMIP, Affibody®, nanotelo, ili domensko antitelo. Antitelo takođe može biti bilo kog od sledećih izotipova: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, i IgE. Antitelo može biti antitelo koje se prirodno javlja ili može biti antitelo koje je izmenjeno (npr., mutacijom, delecijom, supstitucijom, konjugacijom za segment koji nije od antitela). Na primer, antitelo može da uključi jednu ili više različitih aminokiselina (u poređenju sa antitelom koje se prirodno javlja) koje menjaju svojstvo (npr., funkcionalno svojstvo) antitela. Na primer, brojne takve izmene su poznate u oblasti koje utiču na, npr., polu-život, efektorsku funkciju i/ili imunske odgovore na antitelo kod pacijenta. Termin antitelo takođe uključuje veštačke polipeptidne konstrukte koji sadrže najmanje jedno mesto za vezivanje antigena izvedeno iz antitela.

[0025] Termin "LAG-3" odnosi se na Limfocitni Aktivacioni Gen-3. Termin "LAG-3" uključuje varijante, izoforme, homologe, ortologe i paraloge. Na primer, antitela specifična za humani LAG-3 protein mogu, u određenim slučajevima, unakrsno reagovati sa LAG-3 proteinom iz vrste koja nije ljudska. U drugim tehničkim rešenjima, antitela specifična za humani LAG-3 protein mogu biti kompletno specifična za humani LAG-3 protein i ne moraju da ispoljavaju po vrsti ili druge tipove unakrsne reaktivnosti, ili mogu unakrsno da reaguju sa LAG-3 iz određenih drugih vrsta, ali ne svih drugih vrsta (npr., unakrsno reaguju sa LAG-3 majmuna ali ne LAG-3 miša). Termin "humani LAG-3" odnosi se na sekvencu humanog LAG-3, kao što je kompletna aminokiselinska sekvenca humanog LAG-3 koja ima pristupni br. Banke gena NP_002277 (SEK ID BR:13). Termin "mišji LAG-3" odnosi se na sekvencu mišjeg LAG-3, kao što je kompletna aminokiselinska sekvenca mišjeg LAG-3 koja ima pristupni broj Banke gena NP_032505. LAG-3 je takođe poznat u oblasti kao, na primer, CD223. Sekvenca humanog LAG-3 može da se razlikuje od humanog LAG-3 sa pristupnim br. Banke gena NP_002277 tako što ima, npr., konzervirane mutacije ili mutacije u ne-konzerviranim regionima i LAG-3 ima suštinski istu biološku funkciju kao humani LAG-3 sa pristupnim br. Banke gena NP_002277. Na primer, biološka funkcija humanog LAG-3 je da ima epitop u vanćelijskom domenu LAG-3 koji je specifično vezan pomoću antitela predmetne objave ili biološka funkcija humanog LAG-3 je vezivanje za molekule MHC klase II.

[0026] Termin "LAG-3 majmuna" bi trebalo da obuhvati LAG-3 proteine eksprimirane od strane majmuna Starog sveta i Novog sveta, uključujući ali bez ograničenja na LAG-3 cinomolgus majmuna i LAG-3 rezus majmuna. Reprezentativna aminokiselinska sekvenca za LAG-3 majmuna je aminokiselinska sekvenca LAG-3 rezus majmuna koja je takođe deponovana kao pristupni br. Banke gena XM_001108923. Druga reprezentativna aminokiselinska sekvenca za LAG-3 majmuna je alternativna sekvenca rezus majmuna klona pa23-5 kao što je opisano u US 2011/0150892 Al. Ova alternativna rezus sekvenca pokazuje jednu aminokiselinsku razliku, na poziciji 419, u poređenju sa deponovanom sekvencom u Banci gena.

[0027] Posebna sekvenca humanog LAG-3 će generalno biti najmanje 90% identična u aminokiselinskoj sekvenci sa humanim LAG-3 sa pristupnim br. Banke gena NP_002277 i sadrži aminokiselinske ostatke koji identifikuju aminokiselinsku sekvencu kao humanu kada se poredi sa LAG-3 aminokiselinskim sekvencama druge vrste (npr., murinske). U određenim slučajevima, humani LAG-3 može biti najmanje 95%, ili čak najmanje 96%, 97%, 98%, ili 99% identičan u aminokiselinskoj sekvenci sa LAG-3 sa pristupnim br. Banke gena NP_002277. U određenim tehničkim rešenjima, sekvenca humanog LAG-3 će ispoljiti ne više od 10 aminokiselinskih razlika od LAG-3 sekvence sa pristupnim br. Banke gena NP_002277. U određenim tehničkim rešenjima, humani LAG-3 može da ispolji ne više od 5, ili čak ne više od 4, 3, 2, ili 1 aminokiselinske razlike od LAG-3 sekvence sa pristupnim br. Banke gena NP_002277. Identičnost u procentima može biti određena kao što je opisano ovde.

[0028] Kao što je ovde korišćeno, termini "programirana smrt 1," "programirana ćelijska smrt 1," "Protein PD-1," "PD-1," PD1," "PDCD1," "hPD-1" i "hPD-I" su korišćeni naizmenično, i uključuju varijante, izoforme, homologe vrsta humanog PD-1, i analoge koji imaju najmanje jedan zajednički epitop sa PD-1. Kompletna PD-1 sekvenca može biti nađena pod pristupnim br. Banke gena U64863 (SEK ID BR:29).

[0029] Protein Programirana smrt 1 (Programmed Death 1 - PD-1) je inhibitorni član CD28 familije receptora, koja takođe uključuje CD28, CTLA-4, ICOS i BTLA. PD-1 je eksprimiran na aktiviranim B ćelijama, T ćelijama, i mijeloidnim ćelijama (Agata et al., supra; Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). Inicijalni članovi familije, CD28 i ICOS, su otkriveni pomoću funkcionalnih efekata na povećavanje proliferacije T ćelija nakon dodavanja monoklonskih antitela (Hutloff et al. Nature (1999); 397:263-266; Hansen et al. Immunogenics (1980); 10:247-260). PD-1 je otkriven tokom ispitivanja za diferencijalnu ekspresiju u apoptotičnim ćelijama (Ishida et al. EMBO J (1992); 11:3887-95). Ostali članovi familije, CTLA-4 i BTLA, otkriveni tokom ispitivanja za diferencijalnu ekspresiju u citotoksičnim T limfocitima i TH1 ćelijama, redom. CD28, ICOS i CTLA-4 svi imaju nespareni cisteinski ostatak koji omogućava homodimerizaciju. Nasuprot tome, pretpostavlja se da PD-1 postoji kao monomer, koji nema nespareni cisteinski ostatak karakterističan za druge članove CD28 familije.

[0030] PD-1 gen je transmembranski protein tipa I od 55 kDa koji je deo Ig genske superfamilije (Agata et al. (1996) Int Immunol 8:765-72). PD-1 sadrži membranski proksimalni imunoreceptorski tirozinski inhibitorni motiv (ITIM) i membranski distalni prekidački motiv na bazi tirozin (ITSM) (Thomas, M.L. (1995) J Exp Med 181:1953-6; Vivier, E i Daeron, M (1997) Immunol Today 18:286-91). Iako strukturno sličan sa CTLA-4, PD-1 nema MYPPPY motiv koji je kritičan za B7-1 i B7-2 vezivanje. Dva liganda za PD-1 su identifikovana, PD-L1 i PD-L2, za koje je pokazano da negativno regulišu T ćelijsku aktivaciju nakon vezivanja sa PD-1 (Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). I PD-L1 i PD-L2 su B7 homolozi koji se vezuju za PD-1, ali se ne vezuju za druge članove CD28 familije. PD-L1 je obilan u raznim humanim kancerima (Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). Interakcija između PD-1 i PD-L1 rezultuje u smanjenju tumor infiltrirajućih limfocita, smanjenju proliferacije posredovane receptorimaT ćelija, i izbegavanja imunskog sistema od strane kancerskih ćelija (Dong et al. (2003) J. Mol. Med.81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res.

10:5094-100). Imunska supresija može biti preokrenuta inhibiranjem lokalne interakcije PD-1 sa PD-L1, i efekat je aditivan kada je interakcija PD-1 sa PD-L2 blokirana takođe (Iwai et al. (2002) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol.170:1257-66).

[0031] U skladu sa PD-1 koji je inhibitorni član CD28 familije, životinje sa nedostatkom PD-1 razvijaju različite autoimune fenotipove, uključujući autoimunu kardiomiopatiju i lupusu-sličan sindrom sa artritisom i nefritisom Nishimura et al. (1999) Immunity 11:141-51; Nishimura et al. (2001) Science 291:319-22). Pored toga, nađeno je da PD-1 igra ulogu u autoimunskom encefalomijelitisu, sistemskom eritematoznom lupusu, bolesti kalema-protiv-domaćina (GVHD), dijabetesu tipa I i reumatoidnom artritisu (Salama et al. (2003) J Exp Med 198:71-78; Prokunina i Alarcon-Riquelme (2004) Hum Mol Genet 13:R143; Nielsen et al. (2004) Lupus 13:510). U murinskoj liniji tumora B ćelija, pokazano je da je ITSM od PD-1 esencijalan za blokiranje BCR-posredovanog Ca<2+->fluksa i tirozinske fosforilacije nizvodnih efektorskih molekula (Okazaki et al. (2001) PNAS 98:13866-71).

[0032] "Ligand-1 programirane smrti (Programmed Death Ligand-1 - PD-L1)" je jedan od dva glikoproteinska liganda na ćelijskoj površini za PD-1 (drugi je PD-L2) koji negativno regulišu T ćelijsku aktivaciju i citokinsku sekreciju nakon vezivanja za PD-1. Termin "PD-L1" kao što je ovde korišćeno uključuje humani PD-L1 (hPD-L1), varijante, izoforme i homologe vrsta od hPD-L1, i 5 analoge koji imaju najmanje jedan zajednički epitop sa hPD-L1. Kompletna hPD-L1 sekvenca može biti nađena pod pristupnim br. Banke gena Q9NZQ7.

IIa. Anti-LAG-3 antitela

[0033] Anti-humana-LAG-3 antitela (ili VH/VL domeni izvedeni odatle) pogodna za upotrebu u pronalasku mogu biti generisana korišćenjem metoda dobro poznatih u oblasti. Alternativno, anti-LAG-3 antitela prepoznata u oblasti mogu biti korišćena.

[0034] Anti-LAG-3 antitelo za primenu prema pronalasku za koji se traži zaštita sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom. Anti-LAG-3 antitelo koje služi kao primer je BMS-986016. BMS-986016 sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:1 i 2, redom, kao što je opisano u PCT/US13/48999.

[0035] Ovde su stavljena na uvid javnosti takođe antitela koja imaju CDR regione teškog i lakog lanca ili varijabilne regione od BMS-986016. Shodno tome, antitelo sadrži CDR1, CDR2, i CDR3 domene VH regiona od BMS-986016 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:3, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene VL regiona od BMS-986016 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:5. Ili, antitelo sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 domene koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:7, 8, i 9, redom, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:10, 11, i 12, redom. Dalje stavljena ovde na uvid javnosti su antitela koja sadrže VH i/ili VL regione koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEK ID BR:3 i/ili SEK ID BR: 5, redom. Dalje su ovde stavljena na uvid javnosti antitela koja sadrže varijabilne teškog lanca (VH) i/ili varijabilne lakog lanca (VL) regione kodirane pomoću sekvenci nukleinskih kiselina prikazanih u SEK ID BR:4 i/ili SEK ID BR:6, redom. U jednom tehničkom rešenju, antitelo se takmiči za vezivanje sa i/ili vezuje se za isti epitop na LAG-3 kao gore-pomenuta antitela. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo vezuje epitop humanog LAG-3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu PGHPLAPG (SEK ID BR:14). U još jednom tehničkom rešenju, antitelo vezuje epitop humanog LAG-3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu HPAAPSSW (SEK ID BR:15) ili PAAPSSWG (SEK ID BR:16).

[0036] Takođe su ovde stavljena na uvid javnosti antitela koja imaju najmanje oko 90% identičnosti aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona sa gore-pomenutim antitelima (npr., najmanje oko 90%, 95% ili 99% identičnosti varijabilnog regiona sa SEK ID BR:3 ili SEK ID BR:5).

IIb. Anti-PD-1 Antitela

[0037] Anti-human-PD-1 antitela (ili VH i/ili VL domeni izvedeni odatle) pogodni za primenu u pronalasku mogu biti generisani korišćenjem metoda dobro poznatih u oblasti. Alternativno, anti-PD-1 antitela prepoznata u oblasti mogu biti korišćena. Na primer, monoklonsko antitelo 5C4 (označeno ovde kao Nivolumab ili BMS-936558), opisano u WO 2006/121168 može biti korišćeno. Druga poznata PD-1 antitela uključuju Lambrolizumab (MK-3475) opisan u WO 2008/156712, i AMP-514 opisan u WO 2012/145493. Dalje poznata PD-1 antitela i drugi PD-1 inhibitori uključuju one opisane u WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335 i WO 2011/161699. Antitela koja se takmiče sa ovim antitelom prepoznatim u oblasti za vezivanje za PD-1 takođe mogu biti korišćena.

[0038] Anti-PD-1 antitelo za primenu prema pronalasku za koji se traži zaštita sadrži domene CDR1, CDR2 i CDR3 teškog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:23, 24, i 25, redom, i domene CDR1, CDR2 i CDR3 lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima: 26, 27, i 28, redom. Anti-PD-1 antitelo koje služi kao primer je BMS-936558. BMS-936558 sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:17 i 18, redom.

[0039] U drugim tehničkim rešenjima, antitelo ima CDR regione teškog i lakog lanca ili varijabilne regione od BMS-936558. Shodno tome, u jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži CDR1, CDR2, i CDR3 domene od VH od BMS-936558 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:19, i CDR1, CDR2 i CDR3 domene od VL od BMS-936558 koji imaju sekvencu prikazanu u SEK ID BR:21 U još jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži VH i/ili VL regione koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEK ID BR: 19 i/ili SEK ID BR: 21, redom. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo sadrži varijabilne teškog lanca (VH) i/ili varijabilne lakog lanca (VL) regione kodirane pomoću sekvenci nukleinskih kiselina prikazanih u SEK ID BR:20 i/ili SEK ID BR:22, redom. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo se takmiči za vezivanje sa i/ili vezuje se za isti epitop na PD-1 kao gore-pomenuta antitela. U još jednom tehničkom rešenju, antitelo ima najmanje oko 90% identičnosti aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona sa gore-pomenutim antitelima (npr., najmanje oko 90%, 95% ili 99% identičnosti varijabilnog regiona sa SEK ID BR:19 ili SEK ID BR:21).

III. Farmaceutske kompozicije

[0040] Farmaceutske kompozicije pogodne za administraciju humanim pacijentima su tipično formulisane za parenteralnu administraciju, npr., u tečnom nosaču, ili pogodne za rekonstituciju u tečni rastvor ili suspenziji za intravensku administraciju.

[0041] Uopšteno, takve kompozicije tipično sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač. Kao što je ovde korišćeno, termin "farmaceutski prihvatljiv" znači odobren od strane vladine regulatorne agencije ili naveden u američkoj farmakopeji ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, posebno kod ljudi. Termin "nosač" odnosi se na razblaživač, adjuvans, ekscipijens, ili agens za transportovanje sa kojim je jedinjenje administrirano. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući one iz nafte, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, sezamovo ulje, glicerol polietilen glikol ricinoleat, i slično. Voda ili fiziološki rastvor i vodeni rastvori dekstroze i glicerola se mogu koristiti kao nosači, naročito za injektabilne rastvore (npr., koji sadrže anti-LAG-3 ili anti-PD-1 antitelo). Tečne kompozicije za parenteralnu administraciju mogu biti formulisane za administraciju injekcijom ili kontinualnom infuzijom. Putevi administracije injekcijom ili infuzijom uključuju intravensku, intraperitonealnu, intramuskularnu, intratekalnu i subkutanu. U jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela su administrirana instravenski (npr., u odvojenim formulacijama ili zajedno (u istoj formulaciji ili u odvojenim formulacijama)). IV. Populacije pacijenata

[0042] Obezbeđene ovde su kombinacije anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela za primenu u kliničkim metodama za lečenje kancera u vidu solidnih tumora (npr., uznapredovali refraktorni solidni tumori) kod humanih pacijenata.

[0043] Primeri kancera koji se mogu lečiti primenom metoda ovog pronalaska uključuju kancer jetre, kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kancer dojke, kancer pluća, kutani ili intraokularni maligni melanom, renalni kancer, kancer materice, kancer jajnika, kolorektalni kancer, kancer debelog creva, kancer rektuma, kancer analnog regiona, kancer želuca, kancer testisa, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, ne-Hočkinov limfom, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer tiroidne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretre, kancer penisa, solidni tumori detinjstva, limfocitni limfom, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežne karlice, neoplazmu centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS-a, angiogenezu tumora, tumor kičmenog stuba, gliom moždanog stabla, adenom hipofize, Kapošijev sarkom, epidermoidni karcinom, kancer skvamoznih ćelija, kancere izazvane okolinom uključujući one izazvane azbestom, hematološke malignitete uključujući, na primer, multipli mijelom, B-ćelijski limfom, Hočkinov limfom/primarni medijastinalni B-ćelijski limfom, ne-Hočkinove limfome, akutni mijeloidni limfom, hroničnu mijelogenu leukemiju, hroničnu limfoidnu leukemiju, folikularni limfom, difuzni krupnoćelijski B-limfom, Burkitov limfom, imunoblastični krupnoćelijski limfom, prekursor B-limfoblastni limfom, limfom mantle ćelija, akutnu limfoblastičnu leukemiju, mycosis fungoides, anaplastični krupnoćelijski limfom, limfom T-ćelija i prekursorski T-limfoblastični limfom, i bilo koju kombinaciju navedenih kancera. Predmetni pronalazak je takođe primenljiv za lečenje metastatskih kancera.

[0044] U jednom tehničkom rešenju, humani pacijenti boluju od nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC) ili virusno povezanih kancera (npr., humani papiloma virus (HPV)-povezani tumor) ili gastrični adenokarcinom. U posebnom tehničkom rešenju, HPV-povezani tumor je HPV+ kancer glave i vrata (HNC). U još jednom posebnom tehničkom rešenju, gastrični adenokarcinom je povezan sa Epštajn-Bar virusnom (EBV) infekcijom.

[0045] Pacijenti se mogu testirati ili izabrati za jedan ili više gore opisanih kliničkih atributa pre, tokom ili posle lečenja.

V. Kombinovana terapija

[0046] Kombinovane terapije obezbeđene ovde uključuju administraciju anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela, za lečenje subjekata koji imaju solidne tumore (npr., uznapredovale refraktorne solidne tumore).

[0047] U jednom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo u kombinaciji prema definisanom kliničkom režimu doziranja, za primenu u lečenju subjekata koji imaju solidan tumor (npr., uznapredovali refraktorni solidni tumor). U posebnom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo je BMS-986016. U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo je BMS-936558. U još jednom tehničkom rešenju, režimi doziranja se podešavaju kako bi se obezbedio optimalni željeni odgovor (npr., efikasan odgovor).

[0048] Kao što je ovde korišćeno, adjunktivna ili kombinovana administracija (koadministracija) uključuje simultanu administraciju jedinjenja u istom ili različitom doznom obliku, ili odvojenu administraciju jedinjenja (npr., sekvencijalna administracija). Prema tome, anti-LAG-3 i anti-PD-1 antitela se mogu simultano administrirati u jednoj formulaciji. Alternativno, anti-LAG-3 i anti-PD-1 antitela mogu biti formulisani za odvojenu administraciju i administrirani su istovremeno ili sekvencijalno (npr., jedno antitelo je administrirano u roku od oko 30 minuta pre administracije drugog antitela).

[0049] Na primer, anti-PD 1 antitelo može biti administrirano prvo praćeno (npr., odmah praćeno sa) administracijom anti-LAG-3 antitela, ili obrnuto. U jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo se administrira pre administracije anti-LAG-3 antitela. U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo se administrira nakon administracije anti-LAG-3 antitela. U još jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo se administriraju istovremeno. Takva istovremena ili sekvencijalna administracija poželjno dovodi do toga da su oba antitela simultano prisutna kod tretiranih pacijenata.

VI. Protokoli lečenja

[0050] Pogodni protokoli lečenja za lečenje solidnog tumora kod humanog pacijenta uključuju, na primer, administriranje pacijentu efikasne količine svakog od: anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela,

gde lečenje sadrži najmanje jedan ciklus administracije, gde svaki ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg; anti-LAG-3 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom; i

anti-PD-1 antitelo sadrži

[0051] U jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo su administrirani u sledećim dozama:

(a) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 80 mg anti-PD-1 antitela;

(b) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(c) 20 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(d) 80 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela; ili

(e) 240 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela.

[0052] U jednom tehničkom rešenju, doza anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela je stabilno-fiksna doza. U još jednom tehničkom rešenju, doza anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela se menja tokom vremena. Na primer, anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo mogu biti inicijalno administrirani u visokoj dozi i mogu biti snižavani tokom vremena. U još jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo je inicijalno administrirano u niskoj dozi i povećavano tokom vremena.

[0053] U još jednom tehničkom rešenju, količina anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela koja su administrirana je konstantna za svaku dozu. U još jednom tehničkom rešenju, količina antitela administriranog se menja sa svakom dozom. Na primer, doza održavanja (ili nastavljanja) antitela može biti viša ili ista kao udarna doza koja je prva administrirana. U još jednom tehničkom rešenju, doza održavanja antitela može biti niža ili ista kao udarna doza.

[0054] U još jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela su formulisana za intravensku administraciju. U jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo je administrirano na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa. U još jednom tehničkom rešenju, anti-LAG-3 antitelo je administrirano na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa.

[0055] U drugim tehničkim rešenjima, anti-LAG-3 i/ili anti-PD-1 antitela su administrirana jednom svake dve nedelje, sve dok se klinička korist opaža ili dok postoji potpun odgovor, potvrđena progresivna bolest ili toksičnost koja se ne može kontrolisati.

[0056] Ciklus administracije je osam nedelja, koji može biti ponovljen, ako je neophodno. U još jednom tehničkom rešenju, lečenje se sastoji od do 12 ciklusa.

[0057] 4 doze anti-PD-1 antitela su administrirane po osmonedeljnom ciklusu. 4 doze anti-LAG-3 antitela su administrirane po osmonedeljnom ciklusu.

[0058] U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo i anti-LAG-3 antitelo su administrirani kao prva linija lečenja (npr., inicijalno ili prvo lečenje). U još jednom tehničkom rešenju, anti-PD-1 antitelo i anti-LAG-3 antitelo su administrirani kao druga linija lečenja (npr., nakon inicijalnog ili prvog lečenja, uključujući nakon relapsa i/ili gde prvo lečenje nije bilo uspešno).

VII. Ishodi

[0059] Što se tiče ciljnih lezija, odgovori na terapiju mogu uključivati:

[0060] Što se tiče ne-ciljnih lezija, odgovori na terapiju mogu da uključuju:

[0061] Pacijenti koji su tretirani sa anti-LAG-3 antitelom i anti-PD-1 antitelom za kombinovanu primenu kao što je ovde stavljeno na uvid javnosti poželjno doživljavaju poboljšanje u najmanje jednom znaku kancera. U jednom tehničkom rešenju, poboljšanje se meri smanjenjem količine i/ili veličine merljivih tumorskih lezija. U još jednom tehničkom rešenju, lezije se mogu meriti na rendgenskim snimcima grudnog koša ili CT ili MRI filmovima. U još jednom tehničkom rešenju, citologija ili histologija mogu se koristiti za procenu reagovanja na terapiju.

[0062] U jednom tehničkom rešenju, pacijent koji je tretiran pokazuje potpun odgovor (CR), delimični odgovor (PR), stabilnu bolest (SD), imunski-povezanu potpunu bolest (irCR), imunskipovezan delimični odgovor (irPR), ili imunski-povezanu stabilnu bolest (irSD). U još jednom tehničkom rešenju, pacijent koji je tretiran doživljava skupljanje tumora i/ili smanjenje stope rasta, tj. supresiju rasta tumora. U još jednom tehničkom rešenju, neželjena ćelijska proliferacija je smanjena ili inhibirana. U još jednom tehničkom rešenju, može se desiti jedno ili više od sledećeg: broj kancerskih ćelija se može smanjiti; veličina tumora se može smanjiti; infiltracija kancerskih ćelija u periferne organe može biti inhibirana, odložena, usporena, ili zaustavljena; tumorska metastaza se može usporiti ili inhibirati; rast tumora može biti inhibiran; rekurencija tumora se može sprečiti ili odložiti; jedan ili više simptoma povezanih sa kancerom može se ublažiti do nekog stepena.

[0063] U drugim tehničkim rešenjima, anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu kao što je ovde stavljeno na uvid javnosti proizvodi najmanje jedan terapijski efekat odabran iz grupe koja se sastoji od smanjenja u veličini tumora, smanjenja u broju metastatskih lezija koje se javljaju tokom vremena, potpune remisije, delimične remisije, ili stabilne bolesti. U još nekim drugim tehničkim rešenjima, lečenje proizvodi uporedivu stopu kliničke koristi (clinical benefit rate) (CBR = CR+ PR+ SD ≥ 6 meseci) bolje od onoga što je postignuto pomoću anti-LAG-3 antitela ili anti-PD-1 antitela samog. U drugim tehničkim rešenjima, poboljšanje stope kliničke koristi je oko 20% 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ili više u poređenju sa anti-LAG-3 antitelom ili anti-PD-1 antitelom samim.

VIII. Kompleti i jedinični dozni oblici

[0064] Takođe su ovde obezbeđeni kompleti koji uključuju farmaceutsku kompoziciju koja sadrži anti-LAG-3 antitelo, kao što je BMS-986016, i anti-PD-1 antitelo, kao što je BMS-936558, i farmaceutski-prihvatljiv nosač, u terapijski efikasnoj količini adaptiranoj za primenu u prethodnim metodama. Kompleti opciono takođe mogu da uključe uputstva, npr., koja sadrže rasporede administracije, da bi se dozvolilo praktičaru (npr., lekaru, sestri, ili pacijentu) da administrira kompoziciju sadržanu tu da administrira kompoziciju pacijentu koji ima kancer (npr., solidni tumor). Komplet takođe može da uključi špric.

[0065] Po izboru, kompleti uključuju više paketa farmaceutskih kompozicija sa jednom dozom od kojih svaka sadrži efikasnu količinu anti-LAG-3 ili anti-PD-1 antitela za jednokratnu primenu u skladu sa gore obezbeđenim metodama. Instrumenti ili uređaji neophodni za administriranje farmaceutske kompozicije(a) mogu biti uključeni u komplete. Na primer, komplet može da obezbedi jedan ili više prethodno-napunjenih špriceva koji sadrže količinu anti-LAG-3 ili anti-PD-1 antitela.

[0066] U jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje komplet za lečenje solidnog tumora kod pacijenta sa kancerom, komplet koji sadrži:

(c) uputstva za korišćenje anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela u metodama opisanim ovde.

[0067] Sledeći primeri su samo ilustrativni. Mnoge varijacije i ekvivalenti će postati očigledni prosečnim poznavaocima oblasti nakon čitanja ove predmetne objave.

PRIMERI

Primer 1: Pre-klinička farmakologija anti-PD-1 antitela (BMS-936558)

[0068] BMS-936558 je potpuno humano, IgG4 (kapa) izotipsko monoklonsko antitelo koje se vezuje za PD-1 sa nanomolarnim afinitetom kao što je izmereno površinskom plazmonskom rezonancom korišćenjem Biacore® biosenzorskog sistema i visokog stepena specifičnosti, tako sprečavajući vezivanje za njegove ligande PD-L1 i PD-L2. BMS-936558 ne vezuje druge povezane članove familije, kao što su BTLA, CTLA-4, ICOS ili CD28. Pre-kliničko testiranje BMS-936558 pokazalo je da vezivanje za PD-1 rezultuje u poboljšanoj T ćelijskoj proliferaciji i oslobađanju interferona-gama (IFN-gama) in vitro. Aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca od BMS-936558 su obezbeđene u SEK ID BRojevima:1 i 2, redom.

Primer 2: In Vivo toksičnost anti-PD-1 antitela Novolumaba (BMS-936558)

[0069] Studije toksikologije kod cinomolgus majmuna potvrdile su da je BMS-936558 bio dobro tolerisan u dozama do 50 mg/kg davanim dva puta nedeljno za 27 doza. Nalazi vezani za doze su bili ograničeni na reverzibilno smanjenje u trijodotironinu (T3) za 28%, bez pratećih abnormalnosti u drugim markerima tiroidne funkcije (podaci nisu prikazani).

Primer 3: Klinička farmakologija i bezbednost anti-PD-1 antitela (BMS-936558)

[0070] Sveukupno iskustvo u vezi sa bezbednošću sa BMS-936558, kao monoterapija ili u kombinaciji sa drugim terapeuticima, zasniva se na iskustvu približno 1500 subjekata koji su do sada tretirani. Generalno, za monoterapiju, profil bezbednosti je sličan kod svih tipova tumora. Jedini izuzetak su neželjeni događaji inflamacije pluća (adverse events - AEs) koji mogu biti brojčano veći kod osoba sa NSCLC jer u nekim slučajevima, može biti teško da se napravi razlika između BMS-936558-povezanih i nepovezanih uzroka pulmonarnih simptoma i radiografskih promena. Profil bezbednosti je generalno konzistentan u svim završenim i tekućim kliničkim ispitivanjima bez maksimalne tolerisane doze koja je dostignuta u bilo kojoj dozi testiranoj do 10 mg/kg. Nije bilo šablona u incidenci, težini ili uzročnosti neželjenih događaja za nivo doze BMS-936558.

[0071] Studija CA209003 doprinela je većini kliničkih iskustava sa BMS-936558 kod subjekata sa NSCLC i drugim solidnim malignitetima do danas. CA209003 je bila studija eskalacije višestruke doze faze 1 kod subjekata sa prethodno lečenim uznapredovalim ili metastatskim melanomom, RCC, NSCLC, kolorektalnim kancerom ili hormonsko-refraktornim kancerom prostate. U CA209003, subjektima je administriran BMS-936558 intravenski svake 2 nedelje sa dozama od 0.1, 0.3, 1, 3 ili 10 mg/kg. U CA209003 nije identifikovana maksimalna tolerisana doza. Maksimalni dozni nivo koji je procenjen je bio 10 mg/kg. Incidenca, težina i odnos neželjenih događaja su generalno slični u svim doznim nivoima i tipovima tumora.

[0072] Od 03. jula 2012, 296 (97.4%) od 304 subjekata tretiranih sa BMS-936558 imalo je najmanje 1 prijavljeni neželjeni događaj bez obzira na uzročnost. Nije bilo šablona u incidenci, težini, ili vezi neželjenih efekata sa doznim nivovom BMS-936558. Neželjeni događaji povezani sa tretmanom bilo kog stepena desili su se kod 220 (72.4%) subjekata. Najučestaliji neželjeni događaji povezani sa lekom koji se javljaju kod > 5% subjekata uključili su umor (25.7%), osip (13.5%), dijareju (11.8%), pruritus (10.2%), mučninu (7.9%), smanjeni apetit (7.9%), smanjeni hemoglobin (5.9%), i pireksiju (5.3%). Većina neželjenih događaja povezanih sa tretmanom bili su niskog stepena (Stepen 1 ili 2). Neželjeni događaji visokog stepena (Stepen 3 ili 4) koji su povezani sa tretmanom su prijavljeni kod 45 (14.8%) subjekata, pri čemu je većina bila umor (1.6%), smanjeni apetit (1.0%), i dijareja (1.0%). Najmanje jedan ozbiljan neželjeni događaj (serious adverse event - SAE) je prijavljen za 150 (49.3%) od 304 subjekata na svim doznim nivoima. SAE događaji 3-4 Stepena su prijavljeni za 23 subjekta (7.6%). SAE događaji bilo kog stepena povezani sa lekom javili su se kod 11.5% subjekata. SAE događaji povezani sa lekom Stepena 3-4 prijavljeni kod najmanje 2 subjekta uključili su dijareju (3 subjekta [1.0%]), pneumonitis (3 subjekta [1.0%]), pneumoniju (2 subjekta [0.7%]), i povećanje lipaze (2 subjekta[0.7%]). Slično celokupnom profilu neželjenih događaja, nije bilo očigledne veze u incidenci ili težini neželjenih događaja povezanih sa lekom sa nivoom doze BMS-936558. Nije bilo očiglednih razlika u učestalosti neželjenih događaja zasnovanih na tipu tumora subjekata.

[0073] Odabrani neželjeni efekti povezani sa tretmanom su se javili sa niskom učestalošću (< 5%), ali se smatraju klinički značajnim jer zahtevaju veću opreznost za rano prepoznavanje i brzu intervenciju. Ovi neželjeni efekti uključuju alanin aminotransferazu (ALT) povećanu (4.3%), aspartat aminotransferazu (AST) povećanu (3.6%), pneumonitis (3.3%), hipotiroidizam (3.0%), hipertiroidizam (1.3%), adrenalnu insuficijenciju (0.7%), i kolitis (0.7%). Događaji pneumonitisa Stepena 3-4 su prijavljeni kod 3 subjekta (1.0%) kao što je opisano iznad (1 događaj je bio Stepena 4). Događaji kolitisa Stepena 3-4, ALT povećane, i AST povećane su prijavljeni kod 2 subjekta (0.7%) svaki. Događaji Stepena 3 adrenalne insuficijencije, hipertiroidizam, i hipotiroidizma su prijavljeni kod 1 subjekta (0.3%) svaki. Zbog potencijala za klinički značajne neželjene događaje povezane sa BMS-936558 koji zahtevaju rano prepoznavanje i brzu intervenciju, razvijeni su algoritmi upravljanja za sumnju na plućnu toksičnost, dijareju ili sumnju na kolitis, hepatotoksičnost, endokrinopatiju i nefrotoksičnost.

[0074] Neželjeni događaji povezani sa tretmanom koji vode ka prekidanju su prijavljeni kod 18 (5.9%) od 304 tretiranih subjekata iz CA209003. Jedini događaji koji su prijavljeni kod više od 1 subjekta su bili pneumonitis (4 subjekta [1.3%]) i hepatitis (2 subjekta [0.7%]). Postoji 3 (1.0%) smrti vezanih za lek; svaka se desila nakon razvoja pneumonitisa. Bezbednost BMS-936558 u kombinaciji sa drugim terapeticima je istražena u nekoliko tekućih kliničkih ispitivanja.

Primer 4: Farmakokinetika anti-PD-1 antitela (BMS-936558)

[0075] Jedno-dozna farmakokinetika (FK) od BMS-936558 je procenjena kod 39 subjekata sa više tipova tumora u CA209001 u doznom opsegu od 0.3 do 10 mg/kg. Medijana Tmax kroz dozne nivoe je bila u opsegu od 1.6 do 3.1 sati sa pojedinačnim vrednostima koje su bile u opsegu od 0.9 do 7 sati. FK od BMS-936558 je bila linearna u opsegu od 0.3 do 10 mg/kg sa doznoproporcionalnim povećanjem u Cmax i AUC(INF) i niska do umerena varijabilnost među subjektima je opažena na svakom doznom nivou (tj., koeficijent varijacije [coefficient of variation - CV] koji je u opsegu od 16 do 45%). Geometrijski srednji klirens (Geometric mean clearance -CLT) nakon jedne IV doze je bio u opsegu od 0.13 do 0.19 mL/h/kg, dok je srednja zapremina distribucije (Vz) varirala između 83 do 113 mL/kg kroz doze. Srednji terminalni T-HALF od BMS-936558 je bio 17 do 25 dana, konzistentno sa polu-životom endogenog IgG4, ukazujući na to da mehanizam eliminacije od BMS-936558 može biti sličan sa IgG4. I eliminacija i distribucija od BMS-936558 deluju kao nezavisni od doze unutar ispitanog doznog opsega. U studiji više doza više tipova tumora (CA209003), dostupni podaci od 128 subjekata, srednji T-HALF je bio 21 - 24 sati i T-max medijana je bila u opsegu 0.6 do 3.3 kroz dozne nivoe, što se slaže sa podacima o pojedinačnoj dozi.

Primer 5: Kliničko ispitivanje Faza I sa anti-PD-1 antitelom (BMS-936558)

[0076] BMS-936558 je pokazao kliničku aktivnost u završenoj studiji pojedinačne doze u Fazi 1 i 2 tekuće studije eskalacije višestrukih doza (monoterapija u Fazi 1: CA209003 i kombinovana terapija u Fazi 1b sa ipilimumabom) kod subjekata sa NSCLC, melanomom, RCC i drugim malignitetima. Odgovor tumora je određen modifikovanim Kriterijumima procene odgovora kod solidnih tumora (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors - RECIST) koji je uspostavljen od strane NCI (Nacionalni institut za rak). Procenljiva populacija se sastoji od 294 subjekata sa različitim malignitetima u vidu solidnih tumora (melanom, n = 138; NSCLC, n = 122; RCC, n = 34) koji se trenutno leče nivolumabom.

[0077] U CA209003, objektivna stopa odgovora (objective response rate - ORR) od 31.1% (33 od 106 subjekata kod kojih se može procenjivati odgovor) je prijavljena kod subjekata sa melanomom lečenim sa BMS-936558 monoterapijom svake 2 nedelje (Q2W) u dozama koje su u opsegu od 0.1 do 10 mg/kg. Većina odgovora su trajni i premašili su 6 meseci.

[0078] U najaktivnijem doznom opsegu (3 do 10 mg/kg), ORR od 13.5% do 27.8% je prijavljen među subjektima sa NSCLC sa 24-nedeljnom stopom preživljavanja bez progresije (progressionfree survival rate - PFSR) od 23% do 51%. Trajni odgovori su opaženi i kod skvamoznih i kod neskvamoznih podtipova.

[0079] Od 34 RCC subjekata koji se mogu proceniti za odgovor u CA209003, odgovori su prijavljeni i u grupama koje se tretiraju sa 1-mg/kg (5 od 18 subjekata, 27.8%) i 10-mg/kg (5 od 16 subjekata, 31.3%). Procenjena stopa preživljavanja bez progresije (PFSR) na 24 nedelja je bila 50% i 67% u grupama koje se tretiraju sa 1-mg/kg i 10-mg/kg BMS-936558.

[0080] Preliminarni rezultati iz studije u Fazi 1b kombinovane terapije sa BMS-936558 i ipilimumabom ukazuje na prednost u kombinovanju dve T ćelijski-ciljane terapije za subjekte sa melanomom. U grupi koja se tretira sa 0.3 mg/kg BMS-936558 3 mg/kg ipilimumaba, odgovori su opaženi kod 5 od 14 procenjenih subjekata (35.7%, 1 potpuno odgovor i 2 delimična odgovora pomoću konvencionalnih modifikovanih kriterijuma Svetske zdravstvene organizacije (World Health Organization) [mWHO], i 2 delimična odgovora pomoću imunski-povezanih mWHO kriterijuma). U grupi koja se tretira sa 1 mg/kg BMS-936558 3 mg/kg ipilimumaba, odgovori su opaženi kod 9 od 15 subjekata koji se mogu proceniti (60%, 3 CRs i 6 PRs; svi pomoću konvencionalnih mWHO kriterijuma). U grupi koja se tretira sa 3 mg/kg BMS-936558 3 mg/kg ipilimumaba, objektivni odgovori su opaženi kod 4 od 6 subjekata koji se mogu proceniti (66.7%, 3 delimična odogovora pomoću konvencionalnih mWHO kriterijuma i 1 delimični odgovor pomoću imunski-povezanih mWHO kriterijuma). Dodatni detalji su obezbeđeni od strane Wolchok et al. (2013) NEJM 369(2):122-33, i/ili PCT/US2013/040764.

Primer 6: Pre-Klinička farmakologija anti-LAG-3 antitela (BMS-986016)

[0081] BMS-986016 je potpuno humano antitelo specifično za humani LAG-3 koji je izolovan iz humanih transgenih miševa koji eksprimiraju humane imunoglobulinske gene. Eksprimirano je kao IgG4 izotipsko antitelo koje uključuje stabilizirajuće zglobne mutacije (S228P) za atenuirano vezivanje Fc receptora kako bi se smanjila ili eliminisala mogućnost ubijanja ciljnih ćelija posredovanog antitelom ili komplementom. Aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca od BMS-986016 su obezbeđene u SEK ID BRojevima:17 i 18, redom.

[0082] Sposobnost BMS-986016 da se veže za rekombinantni humani LAG-3 antigen je određen korišćenjem Biacore i enzim-vezanog imunosorbent testa (ELISA). Vezivanje za LAG-3+ transfektante čoveka i primata i za aktivirane T ćelije čoveka i primata je izmereno korišćenjem protočne citometrijske i Skačard analize. BMS-986016 se vezuje za humani LAG-3 sa visokim afinitetom (KD = 0.12-0.5 nM), i inhibira vezivanje LAG-3 za ćelije koje eksprimiraju svoj ligand, MHC klase II (IC50, 0.67 nM). BMS-986016 se vezuje za cinomolgus LAG-3 na transfektovanim CHO ćelijama i na aktiviranim cinomolgus T ćelijama sa nižim afinitetom (EC50, 21.5-34.3 nM) nego za aktivirane humane T ćelije. Visoka koncentracija BMS-986016, u odsustvu sekundarne ko-stimulacije, ne izaziva merljivi citokinski odgovor iz kultivisanih humanih ćelija periferne krvi niti lek posreduje u merljivom ubijanju ciljnih ćelija zavisnom od antitela ili zavisnom od komplementa. BMS-986016 promoviše aktivaciju antigen-specifičnog mišjeg T ćelijskog hibridoma koji eksprimira humani LAG-3 u kokulturi sa antigen-prezentujućom ćelijom pozitivnom za MHC klase II. Pored toga, BMS-986016 pojačava aktivaciju humanih T ćelija u testovima superantigen stimulacije kada se dodaju pojedinačno ili u kombinaciji sa BMS-936558 (anti-PD-1 antitelo).

Primer 7: Toksičnost anti-LAG-3 antitela (BMS-986016) samog ili u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom (BMS-936558)

[0083] Sledeće prekliničke toksikološke studije su izvedene:

A. Farmakodinamička i studija toksičnosti četvoronedeljne povremene (QW) intravenske eksploratorne kombinacije kod cinomolgus majmuna sa anti-LAG3.1 antitelom (prekursor za BMS-986016) i BMS-936558

[0084] Ključni rezultati su kao što sledi. Anti-LAG3.1 administriran u 50 mg/kg/nedelji, sam ili u kombinaciji sa 50 mg/kg/nedelji BMS-936558, nije rezultovao neželjenim događajima. Nivo na kom se nisu primetili neželjeni događaji (No-observed-adverse-effect level - NOAEL) za jedan agens anti-LAG3.1 se smatrao da je 50 mg/kg/nedelji (AUC[0-168h] = 231,000 mg·h/mL), i NOAEL za anti-LAG3.1 u kombinaciji sa 50 mg/kg/nedelji BMS-936558 se smatrao da je 50 mg/kg/nedelji (srednji anti-LAG3.1 AUC[0-168h]= 210,000 mg·h/mL; srednji BMS-936558AUC[0-168h] = 159,500 mg·h/mL).

B. GLP-usaglašena studija toksičnosti četvoronedeljne intravenske kombinacije kod cinomolgus majmuna sa 6-onedeljnim oporavkom sa BMS-986016 i BMS-936558

[0085] Ključni rezultati su bili kao što sledi. BMS-986016 zasebno administriran u do 100 mg/kg/nedelji nije rezultovao u neželjenim promenama. BMS-936558 zasebno administriran u 50 mg/kg/nedelji rezultovao je neznatnom do minimalnom ne-reverzibilnom limfoplazmacitnom inflamacijom horoidnog pleksusa mozga, koja se nije smatrala neželjenom s obzirom na manju ozbiljnost i incidencu limfoplazmacitne inflamacije u poređenju sa kombinovanim tretmanom sa BMS-986016 i BMS-936558, nedostatkom vaskulitisa ili razaranja tkiva, i odsustvom kliničkih manifestacija tokom tretmana. Kombinovana administracija BMS-986016 i BMS-936558 (100 i 50 mg/kg/ nedelji, redom) rezultovala je smrtnošću 1 mužjaka od 9 majmuna na 29. dan studije. Od Dana 26 do 29, ovaj majmun je imao povišenu telesnu temperaturu, drhtavice, crveni ili bistar nazalni iscedak, fekalne promene (neformirani, oskudni ili bez fecesa), smanjenu aktivnost vezano za hranu, blagu dehidraciju, kijanje, smanjenu aktivnost i pogrbljeno držanje. Posle 2 dana veterinarske brige i lečenja antibioticima, ova životinja nije pokazala nikakvo poboljšanje i bila je eutanazirana 29. Dana zbog lošeg kliničkog stanja.

[0086] Nije bilo značajnih nalaza makroskopske nekropsije. Histopatološki nalazi kod ovog majmuna su uključivali: neznatnu limfoplazmacitnu upalu horoidnog pleksusa; minimalnu do umerenu limfohistocitnu upalu vaskulature moždanog parenhima, moždanih ovojnica, kičmene moždine (vratne i lumbalne); i minimalnu do umerenu inflamaciju mešovitih ćelija epididima, seminalnih vezikula i testisa. Kliničke patološke promene ukazale su na smanjenja u broju crvenih krvnih ćelija, koncentraciji hemoglobina i hematokrita čiji je uzrok bio nejasan, i povećanje fibrinogena koji je u korelaciji sa inflamacijom u centralnom nervnom sistemu (CNS) i muškom reproduktivnom traktu.

[0087] Dodatni histopatološki nalazi nakon kombinovane administracije BMS-986016 i BMS-936558 (100 i 50 mg/kg/nedelji, redom) bili su ograničeni na minimalnu do neznatnu nereverzibilnu limfoplazmacitnu inflamaciju horoidnog pleksusa u mozgu kod 7 od 8 preostalih majmuna, i minimalnu limfohistiocitnu inflamaciju vaskulature moždanog parenhima kod 1 od 8 preostalih majmuna, čija reverzibilnost nije mogla biti procenjena.

[0088] NOAEL za BMS-986016 zasebno se smatra da je 100 mg/kg/nedelji (srednja AUC[0-168h] = 474,000 mg·h/mL); NOAEL za BMS-936558 zasebno se smatra da je 50 mg/kg/nedelji (srednja AUC[0-168h] = 193,000 mg·h/mL); NOAEL za kombinaciju BMS-986016 i BMS-936558 nije određena. Međutim, kombinovana terapija je generalno dobro tolerisana i klinički znaci toksičnosti su bili opaženi kod samo 1 od 9 majmuna (približno 10%). Stoga, 100/50 mg/kg/nedelji BMS-986016/nivolumaba (srednja BMS-986016 AUC[0-168h] = 514,000 mg·h/mL; srednja nivolumab AUC [0-168h] = 182,000 mg·h/mL) se smatra STD10.

[0089] Doze koje su administrirane (100 mg/kg BMS-986016 i 50 mg/kg BMS-936558) su ≥ 10 puta više od maksimalnih doza predloženih za trenutnu studiju. Početna doza od 20 mg (0.25 mg/kg) za BMS-986016 monoterapiju (Deo A) je manja od 1/10 humanog ekvivalenta za NOAEL cinomolgus majmuna (636 mg; 8.0 mg/kg), i ispod je HED nakon linearnog podešavanja NOAEL ciljnog izlaganja za procenu najviše razlike afiniteta od 265-puta (24 mg; 0.30 mg/kg). Izračunata vrednost za uvećavanje bezbednosti za izlaganja pri početnoj dozi od 20 mg (0.25 mg/kg) je 315-puta na osnovu NOAEL cinomolgus majmuna od 100 mg/kg/nedelji bez obračunavanja razlika u afinitetu.

[0090] Početna doza od 3 mg (0.03 mg/kg) za BMS-986016 za kombinovanu terapiju (Deo B) je zasnovana na linearnom podešavanju STD10 cinomolgus majmuna za 265-ostruku procenu najviše razlike afiniteta sa dodatim 10-ostrukim faktorom bezbednosti. Maksimalna preporučena početna doza (maximum recommended starting dose - MRSD) za BMS-986016 bazirana na 100 mg/kg/nedelji STD10 je 0.03 mg/kg kod ljudi. Početna doza od 80 mg (1 mg/kg) za BMS-936558 za kombinovanu terapiju (Deo B) je zasnovana na poznatim FK parametrima za humani BMS-936558 sa dodatim 10-ostrukim faktorom za bezbednost. MRSD za BMS-936558 zasnovana na 50 mg/kg/nedelji STD10 cinomolgus majmuna je 4.3 mg/kg kod ljudi, i dalje je smanjena kako bi se identifikovala doza sa prihvatljivim nivoima neželjenih događaja.

C. GLP-usaglašena studija unakrsne reaktivnosti tkiva u humanim i odabranim tkivima cinomolgus majmuna sa BMS-986016.

[0091] Pozitivno bojenje sa BMS-986016-FITC uočeno je u plazma membrani ili granulama plazma membrane sledećih humanih tkiva: mononuklearni leukociti mokraćne bešike, krvne ćelije, kolon - debelo crevo, oko, jednjak, tanko crevo, želudac, bubreg, pluća, limfni čvor, posteljica, pljuvačna žlezda, koža, slezina, timus, krajnik, materica - grlić materice i materica -endometrijum; i hematopoetske ćelije koštane srži. Pored toga, bojenje sa BMS-986016-FITC je uočeno u citoplazmi epitela humanih endokrinih ćelija hipofize. U okviru ograničenog panela procenjenih tkiva cinomolgus majmuna, opaženo je bojenje sa BMS-986016-FITC u plazma membrani ili granulama plazma membrane mononuklearnih leukocita slezine. Sa naučnim izveštajima o LAG-3-eksprimirajućim ćelijama u germinalnim centrima i interfolikularnim T-ćelijskim oblastima normalnih humanih limfoidnih tkiva (limfni čvor, krajnik, slezina, timus, koštana srž i mukozalno-povezano limfno tkivo) i koje imaju morfologiju i distribuciju limfocita, bojenje mononuklearnih leukocita i hematopoetskih ćelija sa BMS-986016-FITC u ovoj studiji (u tkivima čoveka i cinomolgus majmuna) je očekivano. Imajući u vidu da je LAG-3 iRNK eksprimirana u humanoj hipofizi i LAG3.1-G4P-FITC bojenje je opaženo u adenohipofizi humane hipofize u pilot studiji unakrsne reaktivnosti tkiva, takođe je očekivano BMS-986016-FITC bojenje citoplazme epitela endokrinih ćelija humane hipofize i citoplazmatskih granula. Iako se ne očekuje da će BMS-986016 imati pristup citoplazmatskom odeljku in vivo i toksikološke studije sa ponovljenom dozom kod majmuna nisu pokazale nikakve efekte na hipofizu, ovi nalazi mogu biti klinički značajni.

D. In Vitro oslobađanje citokina i procena aktivacije limfocita sa BMS-986016 korišćenjem mononuklearnih ćelija periferne krvi čoveka..

[0092] BMS-986016 nije indukovao oslobađanje citokina kada je prezentovan humanim PBMC ćelijama bez obzira na koncentraciju, donora, ili vreme inkubacije. Nivoi citokina koji su opaženi su bili ili na ili blizu donjih granica testa kvantifikacije bez dokaza za doznu zavisnost ili šablon među donorima (IL-1β, IL-2, IL-5, IL-10, IL-12p70, i IFN-γ) ili su se generalno preklapali sa nivoima citokina iz PBMC ćelija sa negativnim kontrolama (IL-6, IL-8, TNF-α).

[0093] U skladu sa nedostatkom oslobađanja citokina, nije bilo dokaza da je BMS-986016 indukovao aktivaciju T ili NK ćelija, kako je izmereno površinskom ekspresijom CD25 i CD69. Nivoi ekspresije ovih markera na T i NK ćelijama nakon stimulacije sa BMS-986016 bili su slični onima koji su primećeni kod stimulacije sa negativnim kontrolama.

[0094] Uopšte, ovi podaci ukazuju da BMS-986016 nema agonistički potencijal da indukuje ni T ni NK ćelijsku aktivaciju niti oslobađanje citokina.

Primer 8: Preklinička farmakokinetika anti-LAG-3 antitela(BMS-986016)

[0095] U skladu sa regulatornim smernicama za biotehnološki-izvedene farmaceutske supstance (ICH Harmonised Tripartite Guideline, S6(R1) Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals. International Conference on Harmonisation, 2011), nisu sprovedena ispitivanja metabolizma sa BMS-986016 na životinjama. Očekivana in vivo degradacija monoklonskih antitela (mAbs) je na male peptide i aminokiseline putem biohemijskih puteva koji su nezavisni od citohrom P450 enzima.

[0096] BMS-986016 je pokazao povoljne farmakokinetičke (FK) osobine kod cinomolgus majmuna. Iz FK studija sa IV i jednom dozom i ponovljenom dozom, BMS-986016 se raspao bieksponencijalno i izloženost je bila približno proporcionalna dozi. Sistemski klirens (CLTp) je u rasponu od 0.12 do 0.22 mL/h/kg i terminalni poluživot (terminal half-life - T-HALF) od 133 do 414 sati. Volumen distribucije u ravnotežnom stanju (Vss) bio je 62 do 72 mL/kg, što ukazuje na ograničenu distribuciju izvan plazme. Anti-BMS-986016 antitela su detektovana kod nekih majmuna, ali izgleda da prisustvo anti-BMS-986016 antitela nema uticaja na izloženost BMS-986016.

Primer 9: Inhibicija rasta tumora in vivo kombinovanim lečenjem sa anti-LAG-3 antitelom i anti-PD-1 antitelom

[0097] Eksperiment je izveden u murinskom tumorskom modelu da bi se testirala hipoteza da bi kombinacija anti-LAG-3 i anti-PD-1 pojačala anti-tumorsku efikasnost. Ove studije su procenile inhibiciju rasta tumora u singeničnim tumorskim modelima (Sa1N fibrosarkom i MC38 adenokarcinom kolona) i pratile su ubrzanje autoimuniteta u modelu negojazanih dijabetičara (NOD). Administracija anti-LAG-3 antitela rezultovala je i u sveukupnoj inhibiciji tumorskog rasta i povećanju u broju miševa bez tumora (tumor-free - TF) u onim grupama koje se tretiraju, kao što je prikazano na Slici 1. Anti-LAG-3 antitelo administrirano u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom je obezbedilo poboljšanu anti-tumorsku aktivnost iznad aktivnosti bilo kog agensa zasebno. Na primer, u više Sa1N tumorskih modela, anti-LAG-3 antitelo rezultovalo je u 20%-30% TF miševa u poređenju sa kontrolnim i anti-PD-1 antitelom-tretiranim miševima (0%-10% TF miševi), dok je kombinacija anti-LAG-3 i anti-PD-1 antitela rezultovala u 60%-90% TF miševa. U MC38 modelu, anti-LAG-3 antitelo pokazalo je umerenu inhibiciju tumorskog rasta zasebno, ali kada je administrirano u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom, rezultovalo je u poboljšanoj antitumorskoj aktivnosti iznad one opažene za anti-PD-1 antitelo zasebno (80% u odnosu na 40% TF miševa, redom).

Primer 10: Ispitivanje u Fazi I kod pacijenata koji imaju solidne tumore

[0098] Ispitivanje u Fazi I anti-LAG-3 antitela (BMS-986016) i anti-PD-1 antitela (BMS-936558) je izvedeno kod pacijenata koji imaju uznapredovale solidne tumore kako bi se pokazala efikasnost administriranja BMS-986016 i BMS-936558 kao kombinovanog tretmana.

1. Ciljevi

[0099] Primarni cilj studije je da se proceni bezbednost i podnošljivost BMS-986016 datog u kombinaciji sa BMS-936558 i da se identifikuju dozno ograničavajuće toksičnosti (dose limiting toxicities - DLTs) i maksimalno tolerisana doza (maximally tolerated dose - MTD) kombinacije, kod subjekata sa uznapredovalim solidnim tumorima.

[0100] Sekundarni ciljevi obuhvataju procenjivanje preliminarne anti-tumorske aktivnosti kombinacije BMS-986016 i BMS-936558 kod subjekata sa uznapredovalim solidnim tumorima, karakterisanje farmakokinetike (FK) za BMS-986016 i BMS-936558 kada su ko-administrirani, praćenje imunogenosti BMS-986016 i BMS-936558 administriranih kao kombinovana terapija, i procenjivanje efekta BMS-986016 i BMS-936558 na korigovani QT ("QTc"). Dodatni istraživački ciljevi uključuju procenu farmakodinamičkih efekata kombinovane terapije BMS-986016 i BMS-936558 na osnovu odabranih biomarkera u uzorcima periferne krvi i biopsije tumora, karakterisanje funkcije T ćelija tokom kombinovane terapije BMS-986016 i BMS-936558, procenjivanje 2-godišnjeg značajnog ukupnog preživljavanja kod subjekata koji su tretirani sa BMS-986016 i BMS-936558, istraživanje preliminarne antitumorske aktivnosti kombinovane terapije BMS-986016 i BMS-936558 kod subjekata sa uznapredovalim solidnim tumorima, karakterizaciju farmakokinetike i odnose izlaganje-odgovor kod subjekata tretiranih sa BMS 986016 i BMS-936558, i istraživanje odnosa između kliničke efikasnosti i odabranih perifernih i tumorskih biomarkera.

2. Dizajn studije i trajanje

[0101] Ovo je u Fazi 1, otvorena studija za BMS-986016 koji je administriran kao pojedinačni agens u kombinaciji sa BMS-936558 (nivolumabom) subjektima sa uznapredovalim solidnim tumorima. Studija se sprovodi u 3 dela. Deo A i deo B se sastoje od dizajna povećanja doze 3 3 3 sa BMS-986016 administriranim kao pojedinačni agens (Deo A) ili u kombinaciji sa BMS-936558 (Deo B) kod subjekata sa uznapredovalim solidnim tumorima. Tretman u Delu B inicira se nakon odluke da se poveća u trećoj doznoj kohorti u Delu A (u skladu sa pravilima eskalacije doze). Nakon toga, eskalacija u dva dela odvija se paralelno. Ni u jednom trenutku doza BMS-986016 administrirana u kombinaciji sa BMS-936558 (Deo B) ne prevazilazi doze BMS-986016 koje su prethodno pokazale da su bezbedne u grani eskalacije doze u monoterapiji (Deo A). Deo C se sastoji od ekspanzije kohorte u 6 populacija ograničenih bolešću od približno 16 subjekata svaka, sa BMS-986016 administriranim u kombinaciji sa BMS-936558. Tretman u Delu C je iniciran kada je određena maksimalna tolerisana doza (MTD) (ili maksimalna administrirana doza (MAD) ako MTD nije određena) za Deo B. Doze izabrane za Deo C ne prelaze MTD ili MAD Dela B, ali određivanje doze može uključiti procenu drugih podataka, uključujući toksičnosti i FK i farmakodinamičke podatke iz Delova A i B. Shema studije je data na Slici 2.

[0102] Subjekti završavaju do 4 perioda studije kao što sledi: ispitivanje (do 28 dana), lečenje (do maksimalno dvanaest 8-nedeljnih ciklusa studijske terapije), kliničko praćenje (135 dana) i praćenje preživljavanja (do 2 godine nakon prve doze studijskog leka; u određenim slučajevima može se razmotriti duži period praćenja ako je očigledan signal efikasnosti). Tokom ovog perioda, dijagnostičko snimanje se može vršiti svakih 12 nedelja do progresije kod subjekata koji prekidaju zbog CR i kod ispitanika sa PR na kraju Ciklusa 12.

[0103] Period lečenja se sastoji od do dvanaest 8-nedeljnih ciklusa tretmana. Svaki ciklus tretmana se sastoji od 4 doze samog BMS-986016 (Deo A) ili u kombinaciji sa BMS-936558 (Delovi B i C), administrirane na Dane 1, 15, 29 i 43 svakog ciklusa tretmana. U Delovima B i C kada su oba antitela administrirana u kombinaciji, nivolumab će se dati prvo, praćeno sa BMS-986016 unutar 30 minuta od završetka infuzije nivolumaba. Tumorski odgovor se procenjuje pomoću RECIST v1.1. Subjektima je dozvoljeno da nastave studijsku terapiju do pojave bilo kog: (1) potvrđenog potpunog odgovora (CR), (2) završetka maksimalnog broja od dvanaest 8-nedeljnih ciklusa, (3) progresivne bolesti (PD), (4) kliničkog pogoršanja, i/ili (5) ispunjavanje drugih kriterijuma za prekid. Tretman izvan progresije je dozvoljen kod odabranih subjekata sa inicijalnom RECIST v1.1-definisanom PD koji su dobijali kliničku korist i koji su tolerisali tretman. Subjekti koji su prekinuli tretman ušli su u period kliničkog praćenja od 135 dana.

[0104] Nakon završetka perioda kliničkog praćenja, subjekti ulaze u period praćenja preživljavanja. Tokom ovog perioda, kliničke posete ili telefonski kontakt svakih 12 nedelja se obavljaju da bi se procenio status preživljavanja. Trajanje ovog perioda je do 2 godine nakon prve doze studijskog leka, iako se duži period praćenja razmatra u odabranim slučajevima ako je signal efikasnosti očigledan. Subjektima u periodu praćenja preživljavanja koji imaju progresiju bolesti je dozvoljeno da primaju terapiju usmerenu na tumore prema potrebi. Shema studije je prikazana na Slici 3.

[0105] Procene, uključujući fizičke preglede, merenje vitalnih znakova, EKG u 12 odvoda i kliničke laboratorijske procene se izvode u odabranim vremenima tokom intervala doziranja. Subjekti su pažljivo praćeni zbog neželjenih događaja tokom studije. Uzorci krvi se prikupljaju do 4 sata nakon početka administracije studijskog leka za farmakokinetičku analizu.

[0106] Subjektima je dozvoljeno da nastave sa terapijom do dvanaest 8-nedeljnih ciklusa ili dok se ne potvrdi potpuni odgovor, progresivna bolest, kliničko pogoršanje ili ispunjavanje kriterijuma za prekid. Subjekti mogu biti na studiji ukupno do otprilike 2.3 godine, uključujući 28-dnevni period ispitivanja, do dvanaest 8-nedeljnih ciklusa lečenja, 135-dnevni period kliničkog praćenja i do 2 godine praćenja preživljavanja (počevši od prve doze studijskog leka). Očekuje se da će ukupno trajanje studije biti približno 5 godina od trenutka prve posete prvog subjekta do potrebnog praćenja preživljavanja poslednjeg subjekta koji je uključen u studiju.

3. Eskalacija doze

Deo A

[0107] U Delu A, 3 3 3 dizajn je korišćen kako bi se procenila bezbednost BMS-986016 koji je dat kao zasebni agens. Četvrti subjekat može da uđe u studiju na početku kohorte sa eskalacijom doze, ako je subjekat sposoban da započne prvi dan doziranja unutar približno jedne nedelje trećeg subjekta u istoj kohorti sa eskalacijom doze. Doze tokom eskalacije doze su obezbeđene na Slikama 2A i 2B i Tabeli 1 (prikazano ispod). Tri subjekta (ili 4, ako je primenljivo) su inicijalno tretirani u svakoj doznoj kohorti. U Doznoj Kohorti 1, svaki od prva 3 subjekta (ili 4, ako je primenljivo) je označen kao stražarski subjekt i počinje sa tretmanom najmanje 5 dana razdvojeno. Subjekti u sledećim kohortama nisu obavezni da se pridržavaju 5-odnevnog intervala između datuma započinjanja lečenja. Dozna eskalacija u Delu A se odvija kao što sledi:

• Ako 0 od prva 3 subjekta (ili 4, ako je primenljivo) doživljavaju dozno-ograničavajuću toksičnost (dose-limiting toxicity - DLT) u okviru intervala procene DLT, nova kohorta od 3 subjekta (ili 4, ako je primenljivo) je tretirana na sledećem višem doznom nivou.

• Ako 1 od 3 subjekta (ili 4, ako je primenljivo) doživljava DLT u okviru intervala procene DLT, ta kohorta je proširena na 6 subjekata.

• Ako 2 od 6 subjekata doživljava DLT u okviru intervala procene DLT, ta kohorta je proširena na 9 subjekata.

• Ako ≥ 2 od 3 (ili 4, ako je primenljivo), ≥ 3 od 6, ili ≥ 3 od 9 subjekata doživljava DLTs unutar dozne kohorte tokom intervala procene DLT, onda je taj dozni nivo utvđen da je premašio MTD.

[0108] Pre deklarisanja MTD (ili MAD), bilo koja kohorta koja je prethodno ustanovljena da je bezbedna se proširuje da bi se dobilo dodatno iskustvo ili da se ispitaju nivoi doza intermedijerni u odnosu na one definisane u protokolu. Pravila eskalacije doze (veličina kohorte, DLT evaluacioni interval, kriterijumi ekspanzije kohorte, itd.) primenjuju se na ove proširene ili dodatne kohorte. Maksimalno 9 ispitanika je uključeno u bilo koje dodatne ili proširene dozne kohorte.

[0109] Nisu dozvoljene dozne eskalacije kod istog subjekta. Ako se utvrdi da nivo doze premašuje MTD, subjekti uključeni u taj nivo doze leče se nižom dozom.

Deo B

[0110] Lečenje u Delu B je započeto nakon što je donesena odluka da se eskalira do treće dozne kohorte u Delu A (u skladu sa pravilima eskalacije doze). Nakon toga, eskalacija u 2 dela se nastavlja paralelno. Nije u jednom trenutku doza BMS-986016 koja je administrirana u kombinaciji sa BMS-936558 (Deo B) ne premašuje doze od BMS-986016 koje su pokazane prethodno kao bezbedne u grani dozne eskalacije monoterapije (Deo A). Zaduženja koja se tiču lečenja za subjekte koji ispunjavaju uslove i za Deo A i Deo B se smenjuju između 2 dela, sa uzastopno tretiranim subjektima koji su dodeljeni različitim delovima kroz sistem interaktivnih glasovnih odgovora (interactive voice response system- IVRS) kad god je moguće. Ako nema dostupnih slobodnih mesta u delu kome je subjekat dodeljen ovim algoritmom, subjekt se dodeljuje sledećoj otvorenoj kohorti ili delu. Kao u Delu A, 3 3 3 dizajn bi takođe trebalo da se koristi u Delu B kako bi se procenila bezbednost za BMS-986016 datog u kombinaciji sa nivolumabom. Četvrti subjekat se može uključiti na početku kohorte sa doznom eskalacijom, ako je subjekat sposoban da započne prvi dan doziranja u okviru približno jedne nedelje trećeg subjekta u istoj kohorti sa eskalacijom doze. Doze procenjene tokom dozne eskalacije su obezbeđene na Slikama 2A i 2B i Tabeli B (prikazano ispod). Kao u Delu A, svaki od prva 3 subjekta (ili 4, ako je primenljivo) u prvoj doznoj kohorti u Delu B će biti označen kao stražarski subjekt i počeće lečenje najmanje 5 dana razdvojeno.

[0111] Tri subjekta su inicijalno tretirana u svakoj doznoj kohorti. U Doznoj Kohorti 1, svaki od prva 3 subjekta, označen kao subjekat stražar, započinje tretman u razmaku od najmanje 5 dana. Od subjekata u narednim kohortama se neće tražiti da se pridržavaju 5-dnevnog intervala između datuma početka tretmana.

[0112] Dozna eskalacija u Delu B nastavlja kao što je opisano za Deo A. Ako je MTD premašena u Doznoj Kohorti 2, naredna kohorta je tretirana sa 20 mg BMS-986016 i 80 mg BMS-936558. Ako se utvrdi da je ova dozna kombinacija bezbedna, eskalacija se nastavlja pri prethodno definisanim BMS-986016 dozama, održavajući BMS-936558 dozu na 80 mg.

[0113] Ako MTD nije postignuta kroz Doznu Kohortu 5, onda se dodatne kohorte od BMS-986016 datog u kombinaciji sa BMS-936558 razmatraju na osnovu ukupnih iskustava koja se odnose na bezbednost tokom dozne eskalacije.

[0114] Pre deklarisanja MTD (ili MAD), bilo koja kohorta koja je prethodno uspostavljeno da je bezbedna je proširena da bi se dobilo dodatno iskustvo ili da bi se ispitali nivoi doza intermedijarni u odnosu na one definisane u protokolu. Pravila eskalacije doze (veličina kohorte, interval procenjivanja DLT, kriterijumi ekspanzije kohorte, itd.) primenjuju se na ove proširene ili dodatne kohorte. Maksimalno 9 subjekata je uključeno u bilo koje dodatne ili proširene dozne kohorte.

[0115] Nisu dozvoljene dozne eskalacije kod istog subjekta. Ako se utvrdi da nivo doze premašuje MTD, subjekti uključeni u taj dozni nivo leče se nižom dozom.

4. Ekspanzija kohorte

[0116] Svrha ekspanzije kohorte je da prikupi dodatne informacije koje se odnose na bezbednost, podnošljivost, preliminarnu efikasnost, farmakokinetičke, i farmakodinamske koje se odnose na kombinaciju BMS-986016 i BMS-936558. Doze odabrane za Deo C ne premašuju MTD (ili MAD ako MTD nije utvrđena) u Delu B, ali mogu uključiti procenu drugih podataka uključujući toksičnosti i FK i farmakodinamske podatke iz Delova A i B. Doze uključuju doze koje su intermedijerne u odnosu na one koje su procenjene u Delu B. Modelovanje se koristi da pomogne prilikom odabira doznog nivoa kombinacije za prenos u Deo C ako se izabere doza ispod MTD. Šest ekspanzionih kohorti je ograničeno na tipove tumora koji su dole navedeni u Tabelama 3A i 3B. Kontinuirana procena toksičnih događaja u ekspanzijama kohorte se vrši kroz uključivanje u ekspanzione kohorte. Ako, u bilo kom trenutku, ukupna stopa toksičnosti povezanih sa tretmanom koje zadovoljavaju DLT kriterijume prelazi 33% za sve subjekte tretirane u ekspanziji kohorte u Delu C, dalje uključivanje se prekida. U zavisnosti od prirode i stepena toksičnosti i nakon procene odnosa rizik:korist, nova doza(e) za sve kohorte se pokreće na prethodno testiranom nižem doznom nivou ili u nivou doze koji je intermedijerni u odnosu na prethodno testirane niže dozne nivoe.

[0117] Po određivanju MTD (ili MAD ako MTD nije određena) u Delu A, BMS-986016 monoterapijska kohorta je evaluirana u ekspanziji kohorte. Ova ekspanziona kohorta je ograničena na tumorski tip(ove) za koji je nađeno da reaguje na BMS-986016 monoterapiju. Doza odabrana za ekspanziju monoterapije ne prelazi MTD Dela A (ili MAD ako MTD nije utvrđena) i inkorporira procenu drugih podataka, uključujući toksičnosti i FK i farmakodinamske podatke iz Dela A. Odabrana doza je intermedijerna u odnosu na one testirane u Delu A. Modelovanje je korišćeno da pomogne u odabiru doznog nivoa da se prenese dalje u Deo C ako je doza ispod MTD izabrana.

a ICMARs: režimi antitela koji modulišu imunske ćelije (immune cell-modulating antibody regimens) (kao što su, ali ne ograničeno na, ipilimumab, tremelimumab, antiPD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, i/ili anti-OX40 antitela)

b Subjekti sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom su subjekti koji ne reaguju sa progresijom u okviru 16 nedelja od početne terapije. Subjekti moraju da daju informisani pristanak u okviru 60 dana nakon poslednje doze anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitela i ne bi trebalo da imaju diskontinuiranu terapiju antitelom zbog ozbiljne i/ili životnougrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuća toksičnost u prethodnoj studiji). Subjekti sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom ne mogu imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMAR-ima.

c NSCLC: ne-sitnoćelijski kancer pluća

d HPV: humani papiloma virus

Tabela 3B: Tipovi tumora kvalifikovani za Deo C - Kombinovana terapija u ekspanziji kohorte

a ICMARs: režimi antitela koji modulišu imunske ćelije (kao što su, ali ne ograničeno na, anti-CTLA-4, i anti-PD-1 ili anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, i/ili anti-OX40 antitela)

b Subjekti sa melanomom koji napreduju dok su na ili nakon primanja terapija sa anti-CTLA-4 i anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom (u sekvencijalnim ili kombinovanim režimima), su kvalifikovani. Ne-kvalifikovani subjekti sa melanomom u ovoj grupi uključuju one sa: 1) poslednjom dozom terapije anti-CTLA-4 antitelom primljenom u okviru 100 dana od prve doze studijskog leka; 2) prethodnim izlaganjem ICMAR-ima osim terapijskim režimimima sa anti-CTLA-4, anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom; 3) prekidom terapije anti-CTLA-4, anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom usled ozbiljne i/ili životno-ugrožavajuće toksičnosti (npr., doznoograničavajuća toksičnost u prethodnom izlaganju).

c NSCLC: ne-sitnoćelijski kancer pluća

d NSCLC subjekti čija bolest napreduje dok su na ili posle terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom. Subjekti ne bi trebalo da imaju diskontinuiranu terapiju antitelom usled ozbiljne ili životno-ugrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuća toksičnost u prethodnoj studiji). Subjekti sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom ne mogu imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMARs.

5. Dozno ograničavajuće toksičnosti

[0118] BMS-986016 ima potencijal da poveća učestalost i težinu prethodno opisanih neželjenih događaja povezanih sa BMS-936558, ili da proizvede nove toksičnosti. U svrhu vođenja odluka u vezi sa eskalacijom doze u Delu A i Delu B, određuje se dozno-ograničavajuća toksičnost (doselimiting toxicity - DLT) na osnovu incidence, intenziteta i trajanja neželjenih događaja koji se odnose na studijski lek i koji se javljaju u roku od 56 dana (8 nedelja) od započinjanja studijskog leka (tj. interval procene DLT, kroz završetak Ciklusa 1). Težina neželjenih događaja ocenjuje se prema Zajedničkim kriterijumima za terminologiju prema Nacionalnom institutu za rak (NCI) za neželjena dejstva (CTCAE) v4.0. U svrhu upravljanja subjektom, DLTs koje se javljaju u bilo kom trenutku, bilo tokom eskalacije doze (Deo A i Deo B) ili ekspanzije kohorte (Deo C) rezultiraju svim studijskim lekovima koji se održavaju, tokom procene povezanosti događaja sa studijskim lekom. Subjekti moraju ispuniti kriterijume za ponovni tretman pre ponovnog pokretanja studijskog tretmana.

[0119] Subjekti koji se povlače iz studije tokom intervala procene DLT iz razloga koji nisu DLT mogu se zameniti na istom doznom nivou. U slučaju da se infuzija ne može administrirati na zakazanoj poseti tokom intervala procene DLT, ona se mora administrirati što je pre moguće. Ako je kašnjenje između 1 i 7 dana, procedure na prvobitnoj zakazanoj poseti treba da se izvrše i subjekti će se smatrati procenjivim za određivanje DLT. Ako je kašnjenje duže od 7 dana, doza će se smatrati propuštenom i neće biti zamenjena. U svrhu donošenja odluka o eskalaciji doze iz perspektive sigurnosti, smatra se da se subjekti mogu proceniti ako su primili 3 od 4 planirane doze BMS-986016 u Delu A (ili 3 od 4 planirane doze BMS-986016 i nivolumaba u Delu B) tokom perioda posmatranja od 8 nedelja, samo ako je jedna propuštena doza bila sekundarna u odnosu na progresivnu bolest ili nemedicinske razloge. Subjekti koji se ne mogu proceniti mogu biti zamenjeni na istom doznom nivou.

[0120] Hepatične, ne-hematološke, i hematološke DLTs su definisane odvojeno kao što je definisano ispod.

Hepatična DLT

[0121] Bilo koji od sledećih događaja koji su povezani sa lekom se smatra hepatičnom DLT:

<•>ALT ili AST > 8 x ULN, bez obzira na trajanje, ili

<•>ALT ili AST > 5 x i ≤ 8 x ULN, koji ne uspeva da se vrati do ≤ Stepena 1 u okviru 2 nedelje uprkos medicinskoj intervenciji, ili

<•>Ukupni bilirubin > 5 x ULN, ili

<•>ALT ili AST > 3 x ULN i istovremeni ukupni bilirubin > 2 x ULN

Ne-hematološka DLT

[0122] Bilo koji od sledećih događaja povezanih sa lekom se smatra ne-hematološkom DLT:

<•>Imunski-povezana bol u oku Stepena 2 ili smanjenje oštrine vida koja zahteva sistemsko lečenje, ili

<•>Bol u oku Stepena 2 ili smanjenje oštrine vida koji ne odgovara na topikalnu terapiju i ne poboljšava se do Stepena 1 u okviru 2 nedelje od inicijacije topikalne terapije, ili

<•>≥ ne-hepatična ili ne-hematološka toksičnost Stepena 3 sa izuzecima zabeleženim ispod.

[0123] Sledeći ne-hematološki događaji Stepena 3 nisu smatrani da su DLTs:

<•>Elektrolitska abnormalnost Stepena 3 koja traje < 72 sata, nije klinički komplikovana, i rešava se spontano ili odgovara na konvencionalnu medicinsku intervenciju

<•>Porast Stepena 3 u amilazi i lipazi koji istrajava tokom < 3 nedelje i nije povezan sa kliničkim ili radiografskim dokazom pankreatitisa

<•>Mučnina ili povraćanje Stepena 3 koje traje < 48 sati, i rešava se do ≤ Stepena 1 ili spontano ili sa konvencionalnom medicinskom intervencijom

<•>Groznica Stepena 3 koja 3 traje < 72 sata, i nije povezana sa hemodinamskim kompromisom (uključujući hipotenziju, ili klinički ili laboratorijski dokaz krajnjeg poremećaja perfuzije organa)

<•>Endokrinopatija Stepena 3 koja je dobro kontrolisana hormonskom zamenom

<•>Tumorsko rasplamsavanje Stepena 3 (definisano kao bol, iritacija ili osip koji se lokalizuje na mesta poznatog ili suspektnog tumora)

<•>Zamor Stepena 3 tokom manje od 7 dana

Hematološka DLT

[0124] Bilo koji od sledećih događaja koji su povezani sa lekom se smatraju hematološkom DLT:

<•>Febrilna neutropenija Stepena 4 bilo kog trajanja

<•>Neutropenija Stepena 4 koja traje > 5 dana

<•>Trobocitopenija Stepena 4

<•>Anemija Stepena 4

<•>Trobocitopenija Stepena 3 povezana sa klinički značajnim krvarenjem

<•>Febrilna neutropenija Stepena 3 koja traje > 48 sati

<•>Hemoliza Stepena 3

6. Inkluzioni kriterijumi

Potpisani pisani informisani pristanak

[0125] Subjekat mora da potpiše i dodeli datum IRB/IEC odobrenom formularu pisanog informisanog pristanka pre izvođenja bilo koje procedure koja se odnosi na studiju koja se ne smatra delom standarda nege.

[0126] Pristanak za uzorke biopsije tumora za eskalaciju doze Dela A ili Dela B: Subjekat mora pristati da se dozvoli pristup postojećem tumorskom tkivu koje je fiksirano u formalinu i ugrađeno u parafin (formalin-fixed paraffin-embedded FFPE), bilo blok ili neobojenim pločicama, radi izvođenja korelativnih studija. Ako arhivirani uzorak nije dostupan, subjekat mora dati pristanak da se dozvoli biopsija tumora pre tretmana. U oba slučaja, osoblje koje učestvuje u studiji mora osigurati da blok ili pločice tkiva fizički postoje pre započinjanja terapije. Subjekti koji nisu u stanju da obezbede arhivirani uzorak tumora i koji ili ne pristaju na biopsiju tumora pre tretmana ili nemaju dostupne lezije nisu kvalifikovani. (Međutim, subjekti čija biopsija pre tretmana daje neadekvatnu količinu ili kvalitet tkiva nisu samo na toj osnovi nekvalifikovani.)

[0127] Pristanak na uzorke tumorske biopsije za Ekspanziju Kohorte u Delu C: Subjekti sa malonomom ili tumorima glave i vrata: Svi subjekti u 2 melanomske kohorte i svi subjekti u kohorti sa tumorom glave i vrata moraju se podvrgnuti biopsijama pre lečenja i tokom lečenja; stoga, subjekti moraju imati leziju lociranu tako da uzorak može biti dobijen pri prihvatljivom kliničkom riziku kako je procenio Istraživač. Mesta biopsije za bilo koje subjekte se moraju razlikovati od lezija koje se mogu proceniti. Subjekti u kohortama sa melanomom i kancerom glave i vrata koji ne ispunjavaju kriterijume nisu kvalifikovani; međutim, subjekti čija skrining biopsija daje neadekvatnu količinu ili kvalitet tkiva nisu nekvalifikovani samo na toj osnovi. Subjekti u preostalim kohortama (NSCLC ili gastrični adenokarcinom): Subjekat mora pristati da se dozvoli pristup postojećem tumorskom tkivu koje je fiksirano u formalinu i ugrađeno u parafin (formalin-fixed paraffin-embedded FFPE), bilo blok ili neobojenim pločicama, radi izvođenja korelativnih studija. Ako arhivirani uzorak nije dostupan, subjekat mora dati pristanak da se dozvoli biopsija tumora pre tretmana. U oba slučaja, osoblje koje učestvuje u studiji mora osigurati da blok ili pločice tkiva fizički postoje pre započinjanja terapije. Subjekti koji nisu u stanju da obezbede arhivirani uzorak tumora i koji ili ne pristaju na biopsiju tumora pre tretmana ili nemaju dostupne lezije nisu kvalifikovani. (Međutim, subjekti čija biopsija pre tretmana daje neadekvatnu količinu ili kvalitet tkiva nisu samo na toj osnovi nekvalifikovani.) Biopsije ne mogu biti sakupljene kod subjekata sa jednom merljivom lezijom, čak iako dostupnom.

Ciljna populacija

[0128]

a) Subjekti moraju imati histološku ili citološku potvrdu neizlečivog solidnog maligniteta koji je uznapredovao (metastatski i/ili neoperabilan):

i) Dozna eskalacija Dela A: BMS-986016 monoterapija

(1) Histologije svih solidnih tumora su dozvoljene osim za subjekte sa primarnim tumorima CNS-a

(2) Samo subjekti bez prethodnog izlaganja režimima antitela koji modulišu imunske ćelije (ICMARs) kao što su, ali ne ograničeno na, CTLA-4, ipilimumab, tremelimumab, anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-KIR, antiCD137, ili anti-OX40 antitela, su dozvoljeni;

(3) Subjekti su morali primiti, i zatim napredovati ili biti netoleranti na, najmanje jedan standardni režim lečenja u uznapredovalom ili metastatskom okruženju, ako takva terapija postoji.

ii) Dozna eskalacija Dela B: BMS-986016 BMS-936558

(1) Histologije svih solidnih tumora su dozvoljene osim za subjekte sa primarnim tumorima CNS-a. Subjekti sa ili bez prethodne terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom su kvalifikovani. Alternativno, sve histologije solidnih tumora naivne za ICMARs kao što su, ali ne ograničeno na, anti-CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-KIR, antiCD137, ili anti-OX40 antitela, biće dozvoljene osim za subjekte sa primarnim tumorima CNS-a.

(2) Subjekti bez prethodne terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom nisu mogli imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMAR-ima kao što su, ali ne ograničeno na, ipilimumab, tremelimumab, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela. Alternativno, subjekti bez prethodne terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom nisu mogli imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMAR-ima kao što su, ali ne ograničeno na, ipilimumab, tremelimumab, antiPD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela.

(3) NSCLC subjekti čija bolest napreduje dok su na ili posle terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom. Alternativno, subjekti sa prethodnim anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom:

(a) Bolest ne reaguje dok traje terapija anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom i predstavlja se sa PD (po RECIST) u okviru 16 nedelja od početne terapije.

(b) Ne mogu imati terapiju prekinutu zbog ozbiljne i/ili životno ugrožavajuće toksičnosti povezane sa anti-PD-1 ili anti-PDL1 antitelom (npr., doznoograničavajuća toksičnost u prethodnoj studiji).

(c) Moraju da obezbede informisani pristanak u okviru 60 dana nakon poslednje doze terapije anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom.

(d) Ne mogu imati prethodno izlaganje ICMAR-ima kao što su, ali ne ograničeno na, terapija anti-CTLA-4 antitelom, ipilimumab, tremelimumab, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela.

(4) Subjekti sa melanomom čija bolest napreduje dok su na ili posle primanja terapija anti-CTLA-4 i anti-PD1 ili anti-PD-L1 antitelom (a) Terapije anti-CTLA-4 i anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom mogu biti primljene u sekvencijalnim ili kombinovanim režimima (b) Poslednja doza terapije anti-CTLA-4 antitelom morala se primati ≥ 100 dana od prve doze studijskog leka (c) nisu mogli imati terapiju prekinutu usled ozbiljnih i/ili životno ugrožavajućih toksičnosti povezanih sa antitelom (npr., doznoograničavajuća toksičnost u prethodnoj studiji). (d) Nisu mogli imati prethodno izlaganje ka bilo kojim ICMAR-ima drugačijim od terapije anti-CTLA-4 i anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom.

(5) Subjekti su morali primiti, i zatim napredovati ili biti netolerantni ka najmanje jednom standardnom režimu lečenja.

iii) Ekspanzija kohorte Dela C

(1) Sledeće grupe su uključene:

(a) Melanom – subjekti naivni za ICMARs

(b) Melanom – subjekti čija bolest ne reaguje dok su na terapiji anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom i predstavljen je sa PD (po RECIST) u okviru 16 nedelja od početne terapije. Subjekti moraju da obezbede informisani pristanak u okviru 60 dana nakon poslednje doze terapije anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom i treba da imaju neprekinutu terapiju antitelom usled ozbiljne ili životno-ugrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuće toksičnosti u prethodnoj studiji). Ovi subjekti ne mogu imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMARs kao što su, ali ne ograničeno na, ipilimumab, tremelimumab, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela. Alternativno, subjekti čija bolest napreduje dok su na ili nakon primanja terapije anti-CTLA-4 i anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom (u sekvencijalnim ili kombinovanim režimima), su kvalifikovani. Poslednja doza terapije anti-CTLA-4 antitelom mora biti primljena ≥ 100 dana od prve doze studijskog leka. Subjekti treba da imaju neprekinutu terapiju antitelom usled ozbiljne ili životnougrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuće toksičnosti u prethodnoj studiji). Ovi subjekti ne mogu imati prethodno izlaganje bilo kojim ICMARs osim terapije anti-CTLA-4 i PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom.

(c) Ne-sitnoćelijski kancer pluća (NSCLC) – subjekti naivni za ICMARs (d) NSCLC – subjekti čija bolest ne reaguje dok su na terapiji anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom i predstavljeni sa PD (po RECIST) u okviru 16 nedelja od početne terapije. Subjekti moraju da obezbede informisani pristanak u okviru 60 dana nakon poslednje doze terapije anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom i treba da imaju neprekinutu terapiju antitelom usled ozbiljne ili životno-ugrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuće toksičnosti u prethodnoj studiji). Ovi subjekti nisu mogli imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMARs kao što su, ali bez ograničenja na ipilimumab, tremelimumab, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela. Alternativno, NSCLC subjekti čija bolest napreduje dok su na ili posle terapije sa anti-PD-1 ili anti-PD-L1 antitelom kao najskorijom terapijom. Subjekti bi trebalo da imaju neprekinutu terapiju antitelom zbog ozbiljne ili životno-ugrožavajuće toksičnosti (npr., dozno-ograničavajuće toksičnosti u prethodnoj studiji). Ovi subjekti ne mogu imati prethodno izlaganje bilo kojim drugim ICMARs kao što su, ali ne ograničeno na, antiCTLA-4, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137, ili anti-OX40 antitela.

(e) HPV-vezani tumori glave u vrata – subjekti naivni na ICMARs i sa pozitivnošću na HPV kao što je definisano pomoću p16 imunohistohemijski (IHC)-pozitivnih i/ili HPV-16 in situ hibridizaciono (ISH)-pozitivnih

(i) Histologija ograničena na karcinom skvamoznih ćelija. Alternativno, subjekti sa uznapredovalim/metastatskim tumorima glave i vrata – naivnim na ICMARs (i) Histologija ograničena na karcinom skvamoznih ćelija.

(f) Subjeki sa gastričnim adenokarcinomom naivni za ICMARs

(i) HER2(+) i HER2(-) subjekti su dozvoljeni

b) Subjekti su morali primiti, i zatim napredovati ili biti netolerantni na, najmanje jedan standardni režim lečenja u uznapredovalom ili metastatskom okruženju, ako takva terapija postoji.

c) Subjekti sa bilo kojim prethodnim režimima lečenja su kvalifikovani. Sledeći se ne smatraju odvojenim linijama lečenja: dodavanje jedinjenja u tekući režim, ponovno započinjanje istog režima nakon odmora od leka, ili prebacivanje sa IV na oralnu terapiju. d) Prisustvo najmanje jedne lezije sa merljivom bolešću kao što je definisano pomoću RECIST v1.1 kriterijuma za procenu odgovora. Subjektima sa lezijama u prethodno ozračenom polju kao jedinim mestom merljive bolesti je dozvoljeno da se uključe pod uslovom da lezija(e) je pokazala jasnu progresiju pre vremena informisanog pristanka i može biti tačno izmerena.

e) ECOG status od 0 ili 1.

f) Očekivano trajanje života ≥ 12 nedelja u vreme informisanog pristanka.

g) Adekvatna funkcija organa kao što je definisano po sledećem:

i) Bele krvne ćelije (White blood cells - WBCs) ≥ 2000/mL (stabilne od bilo kog faktora rasta u okviru 4 nedelje od prve administracije studijskog leka)

ii) Neutrofili ≥ 1500/mL (stabilni od bilo kog faktora rasta u okviru 4 nedelje od prve administracije studijskog leka)

iii) Trombociti ≥ 100 x 10<3>/mL (transfuzija da bi se postigao ovaj nivo nije dozvoljena u okviru 2 nedelje od prve administracije studijskog leka)

iv) Hemoglobin ≥ 8.5 g/dL (transfuzija da bi se postigao ovaj nivo nije dozvoljena u okviru 2 nedelje od prve administracije studijskog leka)

v) Kreatinin < 1.5 x ULN ili klirens kreatinina ≥ 40mL/min (Cockcroft-Gault formula) vi) ALT i AST ≤ 3 x ULN

vii) Lipaza i amilaza < 1.5 x ULN

viii) Ukupni bilirubin ≤ 1.5 x ULN (osim subjekti sa Gilbert-ovim sindromom koji moraju imati normalni direktni bilirubin)

h) Normalna tiroidna funkcija, ili stabilna na hormonskoj suplementaciji

i) Sposobnost pridržavanja tretmana, FK, i prikupljanjem farmakodinamičkog uzorka i potrebnim studijskim praćenjem.

j) Ponovno uključivanje subjekta: Ova studija dozvoljava ponovno uključivanje subjekta koji je prekinuo studiju kao predtretmanski neuspeh (tj., subjekat nije randomizovan / nije bio tretiran). Ako je ponovo uključen, subjekat mora dati ponovo saglasnost.

Starost i reproduktivni status

[0129]

a) Muškarci i žene, starosti ≥ 18 godina u vreme informisanog pristanka

b) Žene koje mogu zatrudneti (Women of childbearing potential - WOCBP) moraju primeniti metode kontracepcije. Za teratogeni studijski lek i/ili kada nema dovoljno informacija da se proceni teratogenost (prekliničke studije nisu završene), 2 oblika kontracepcije su zahtevana. Jedan metod mora biti visoko efikasan (stopa neuspeha manja od 1% kada se primenjuje konzistentno i ispravno) i druga metoda može takođe biti visoko efikasna. Individualne metode kontracepcije treba da budu određene u konsultaciji sa ispitivačem. WOCBP moraju pratiti uputstva za kontrolu začeća tokom ukupno 24 nedelje nakon poslednje doze ispitivanog leka (period od 30 dana plus vreme potrebno ispitivanom leku da prođe 5 polu-života). Žene koje mogu zatrudneti (WOCBP) su definisane kao bilo koja ženska osoba koja je dobila menarhu i koja nije podvrgnuta hirurškoj sterilizaciji (histerektomiji ili bilateralnoj ooforektomiji) i nije u postmenopauzi. Menopauza je definisana kao 12-omesečna amenoreja kod žena starijih od 45 godina u odsustvu drugih bioloških ili fizioloških uzroka. Dodatno, ženske osobe ispod 55 godina starosti moraju imati dokumentovani serumski folikulostimulirajući hormonski (FSH) nivo > 40 mIU/mL da bi se potvrdila menopauza. Ženske osobe lečene sa hormonskom zamenskom terapijom, (hormone replacement therapy - HRT) verovatno imaju veštački potisnute FSH nivoe i mogu zahtevati period za potpuno eliminisanje leka iz organizma (“washout” period) sa ciljem dobijanja fiziološkog nivoa FSH. Trajanje “washout” perioda je funkcija tipa primenjene HRT-e. Trajanje “washout” perioda ispod, su predložene smernice i istražitelji treba da primene njihovu procenu u proveravanju serumskih FSH nivoa. Ukoliko je serumski FSH nivo > 40 mlU/ml u bilo koje vreme tokom “washout” perioda, žena se može smatrati da je u postmenopauzi.

1 nedelja minimum za vaginalne hormonske proizvode, (prstenovi, kreme, gelovi) 4 nedelja minimum za transdermalne proizvode

8 nedelja minimum za oralne proizvode

Drugi parenteralni proizvodi mogu zahtevati “washout” periode duge 6 meseci.

c) Žene moraju imati negativan test trudnoće u serumu ili urinu (minimum osetljivosti testa trudnoće u urinu od 25 IU/L bilo ukupnog humanog horionog gonadotropina (hCG) bilo beta frakcije) u okviru 24 sata pre startovanja ispitivanog proizvoda.

d) Žene ne smeju biti dojilje.

e) Muškarci koji su seksualno aktivni sa WOCBP moraju primenjivati metode kontracepcije. Za teratogeni studijski lek i/ili kada nema dovoljno informacija da se proceni teratogenost (prekliničke studije nisu završene), 2 oblika kontracepcije su zahtevana. Jedna metoda mora biti visoko efikasna (stopa neuspeha niža od 1% kada se koristi konzistentno i ispravno) i druga metoda može takođe biti visoko efikasna. Muškarci koji su seksualno aktivni sa WOCBP moraju pratiti uputstva za kontrolu začeća tokom ukupno 33 nedelje nakon poslednje doze ispitivanog leka (period od 90 dana plus vreme potrebno ispitivanom leku da prođe 5 polu-života).

[0130] Žene koje ne mogu zatrudneti (t.j., koje su u postmenopauzi ili hirurški sterilne; i trajno azoospermni muškarci (npr., bilateralna orhiektomija) ne zahtevaju kontracepciju. Žene koje mogu zatrudneti (WOCBP) su definisane kao ženske osobe koje su dobile menarhu i koje nisu podvrgnute hirurškoj sterilizaciji (histerektomiji ili bilateralooforektomiji) ili nisu u postmenopauzi. Menopauza je definisana klinički kao 6-omesečna amenoreja kod žena starosti preko 45 godina u odsustvu drugih bioloških ili fizioloških uzroka. Dodatno, žene ispod 55 godina starosti moraju imati dokumentovani serumski folikulostimulirajući hormonski (FSH) nivo > 40 mIU/mL da bi se potvrdila menopauza.

7. Kriterijumi isključenja

Izuzeci ciljne bolesti

[0131] Subjekti sa poznatim ili suspektnim CNS metastazama ili sa CNS-om kao jedinim mestom aktivne bolesti su isključeni sa sledećim izuzecima:

i) Subjektima sa kontrolisanim metastazama na mozgu je dozvoljeno da učestvuju. Kontrolisane metastaze na mozgu su definisane kao one bez radiografske progresije tokom najmanje 4 nedelje nakon zračenja i/ili hirurškog tretmana u vreme pristanka. Subjekti ne smeju primati steroide tokom najmanje 2 nedelje pre informisanog pristanka, i ne smeju imati nove ili progresivne neurološke znake i siptome.

ii) Subjekti sa znacima ili simptomima metastaza na mozgu nisu poželjni sem ako metastaze na mozgu nisu odbačene kompjuterskom tomografijom (computed tomography – CT) ili magnetnim rezonantnim snimanjem (magnetic resonance imaging - MRI).

[0132] Učešće u bilo kojoj prethodnoj kliničkoj studiji sa BMS-936558, uključujući subjekte u uporednim granama, u kojoj je celokupno preživljavanje navedeno kao primarna ili ko-primarna završna tačka i koja nije završila analizu na osnovu primarne završne tačke.

Medicinska istorija i istovremene bolesti

[0133] Subjekti sa prethodnim malignitetom su isključeni, izuzev adekvatno lečenog kancera bazalnih ćelija ili skvamoznih ćelija kože, lokalizovanog kancera prostate, in situ karcinoma grlića materice ili in situ karcinoma bešike, ili in situ duktalnog ili lobularnog karcinoma dojke. Subjekti sa drugim prethodnim malignitetima koji su dijagnostifikovani više od 2 godine ranije (u vreme informisanog pristanka), koji su primili terapiju sa namerom lečenja bez dokaza bolesti tokom vremena, za koje se smatra da ispoljavaju nizak rizik za rekurencu ispunjavaju uslove.

[0134] Subjekti sa bilo kojom aktivnom autoimunom bolesti ili istorijom poznate ili suspektne autoimune bolesti sa izuzetkom subjekta sa izolovanim vitiligom, rešenom dečijom astmom/atopijom, kontrolisanim hipoadrenalizmom ili hipopituitarizmom, i eutiroidni pacijenti sa istorijom Grave-sove bolesti (subjekti sa kontrolisanim hipertiroidizmom moraju biti negativni za antitela na tireoglobulin i tiroid peroksidazu i tiroid-stimulirajući imunoglobulin pre administriranja studijskog leka).

[0135] Poznato ili osnovno medicinsko stanje koje bi moglo da učini administraciju studijskog leka opasnom po subjekta ili bi moglo štetno uticati na sposobnost subjekta da se pridržava ili toleriše studiju .

[0136] Zahtev za dnevnim dopunskim kiseonikom.

[0137] Nekontrolisana ili značajna kardiovaskularna bolest uključujući, ali nije ograničeno na, bilo koju od sledećih: infarkt miokarda ili moždani udar/tranzitorni ishemijski napad (TIA) u okviru 6 meseci pre pristanka, nekontrolisana angina unutar 3 meseca pre priznanja, bilo koje istorija klinički značajnih aritmija (kao što su ventrikularna tahikardija, ventrikularna fibrilacija, ili torsades de pointes), QTc prolongiranje > 480 msec, istorija druge klinički značajne bolesti srca (tj., kardiomiopatija, kongestivna insuficijencija srca sa funkcionalnom klasifikacijom III-IV Njujorške asocijacije za srce [New York Heart Association - NYHA], perikarditis, značajna perikardijalna efuzija).

[0138] Zahtev, u vezi sa kardiovaskularnom bolesti, za dnevnim dopunskim kiseonikom.

[0139] Potvrđena istorija encefalitisa, meningitisa, ili nekontrolisani napadi u godini pre informisanog pristanka.

[0140] Pozitivan test krvi za virus humane imunodeficijencije (HIV) ili poznati sindrom stečene imunodeficijencije (acquired immunodeficiency syndrome - AIDS).

[0141] Istorija bilo kog hroničnog hepatitisa kao što je dokazano pozitivnim testom za hepatitis A antitelo (HepA IgM) (Napomena: istorija rešene hepatitis A virusne infekcije nije kriterijum za isključivanje), pozitivni test za hepatitis B površinski antigen (hepatitis B surface antigen -HBsAg) i/ili antigen jezgra hepatitisa B, pozitivni test za kvalitativno virusno opterećenje hepatitisom C (pomoću PCR).

[0142] Dokaz aktivne infekcije koja zahteva sistemsku antibakterijsku, antivirusnu, ili antigljivičnu terapiju ≤ 7 dana pre započinjanja terapije studijskim lekom.

[0143] Bilo koje drugo značajno akutno ili hronično medicinsko oboljenje.

[0144] Subjekti koji nisu u stanju da se podvrgnu venskoj punkciji i/ili tolerišu venski pristup.

[0145] Bilo koji drugi razuman medicinski, psihijatrijski, i/ili socijalni razlog.

[0146] Bilo koji od sledećih postupaka ili lekova:

Unutar 2 nedelje pre informisanog pristanka: sistemski ili topikalni kortikosteroidi u imunosupresivnim dozama (≥ 7.5 mg/dan prednizona ili ekvivalenta), palijativno zračenje i radiohirurgija gama nožem u CNS-u, ili medicinski biljni preparati.

Unutar 4 nedelje pre administracije studijskog leka: bilo koji lek koji se ispituje ili placebo, bilo koja antikancerska terapija (hemoterapija, biološki lekovi, terapijske vakcine, radioterapija, ili hormonsko lečenje), ne-onkološke vakcine koje sadrže živi virus, alergen hiposenzitizaciona terapija, faktori rasta, npr., stimulirajući faktor granulocitne kolonije (granulocyte-colony stimulating factor - GCSF), stimulirajući faktor granulocitno makrofagne kolonije (granulocyte macrophage-colony stimulating factor - GM-CSF), eritropoetin, velika operacija, ili bifosfonati.

Unutar 10 nedelja pre administracije studijskog leka: receptorski aktivator inhibitora nuklearnog faktora kapa-B liganda (RANK-L).

Alergije i neželjena reakcija na lek

[0147] Istorija alergije na terapiju anti-PD-1 ili anti-PD-Ll antitelom ili na druga monoklonska antitela ili srodna jedinjenja ili na bilo koji od njihovih sastojaka (npr., istorija ozbiljnih hipersenzitivnih reakcija na lekove formulisane sa polisorbatom 80).

Drugi kriterijumi isključenja

[0148] Zatvorenici ili subjekti koji su nevoljno zatvoreni.

[0149] Subjekti koji su prinudno zadržani radi lečenja bilo psihijatrijskog bilo fizičkog (npr., infektivna bolest) oboljenja.

[0150] Nesposobnost pridržavanja ograničenja i zabranjenih aktivnosti i lečenja.

8. Smernice za modifikaciju doze

[0151] Eskalacija doze BMS-986016 ili BMS-936558 kod subjekta nije dozvoljena u ovoj studiji. Sa mogućim izuzetkom subjekata koji su lečeni pri doznom nivou za koji se naknadno smatralo da premašuje MTD, redukcija doze BMS-986016 ili BMS-936558 kod subjekta nije dozvoljena.

[0152] U nekim slučajevima, prirodna istorija odabranih neželjenih događaja koji su povezani sa imunoterapijom može se razlikovati i biti ozbiljnija od neželjenih događaja izazvanih drugim terapijskim klasama. Rano prepoznavanje i upravljanje ublažava ozbiljnu toksičnost.

Dodatno, algoritmi upravljanja mogu pomoći u odabranim toksičnostima. Toksičnosti za koje su algoritmi upravljanja razvijeni uključuju:

• Plućne

• Gastrointestinalne

• Hepatične

• Endokrine

• Renalne

• Dermatološke

• Neurološke

[0153] Subjekti koji doživljavaju naredno moraju imati svaki studijski lek(ove) održavan:

• DLTs (po definiciji, se odnose na studijski lek)

• Odabrane neželjene događaje povezane sa lekom i laboratorijske abnormalnosti povezane sa lekom:

- ≥ pneumonitis stepena 1

- ≥ abnormalnost stepena 2 u AST, ALT, ukupnom bilirubinu, amilazi, ili lipazi

- ≥ kreatinin stepena 2

- ≥ dijareja ili kolitis stepena 2

- ≥ neurološki neželjeni događaj stepena 2

• Neželjeni događaj, laboratorijsku abnormalnost, ili istovremeno obolenje koje, po proceni ispitivača, garantuje odlaganje doze studijskog leka.

[0154] Dozna odlaganja > 7 dana se smatraju propuštenima i neće biti zamenjena.

9. Procene bezbednosti

[0155] Neželjeni događaji su procenjeni kontinuirano tokom studije i tokom 135 dana nakon poslednjeg tretmana. Neželjeni događaji su evaluirani u skladu sa NCI CTCAE verzijom 4.0. Neželjeni događaji su kodirani primenom najnovije verzije Medicinskog rečnika za regulatorne aktivnosti (MedDRA) i ponovo razmotren na mogući značaj i važnost.

10. Druge analize

[0156] Razni serološki tumor markeri, status mutacije gena, i dodatne analize su zahtevane zavisno od tipa tumora kod subjekta kao što je navedeno ispod u Tabeli 4. Sa izuzetkom seroloških tumor markera, procene nisu izvedene ukoliko su laboratorijski rezultati iz prethodnog testiranja dostupni.

Tabela 4: Biomarkeri po tipu tumora

a CEA: karcinoembrionski antigen

b EGFR: receptor epidermalnog faktora rasta

c MSI: mikrosatelitna nestabilnost

d HER-2: status receptora 2 humanog epidermalnog faktora rasta putem IHC i/ili ISH e Real time qPCR: kvantitativna polimerazna lančana reakcija u realno vreme za BamH1-A Reading Frame-1(BARF1) gen

f EBV: Epstein-Barr-ov virus

g βhCG: beta-humani horionski gonadotropin

h AFP: alfa-fetoprotein

i IHC i/ili ISH: pl6 imunohistohemija (IHC) i/ili HPV-16 in situ hibridizacija (ISH) j HPV: humani papiloma virus

[0157] Dodatna merenja, uključujući laboratorijske testove koji nisu studijski zahtevani, su sprovedena kao klinički indikovana. Rezultati svih laboratorijskih testova koji su zahtevani ovim protokolom su zabeleženi.

11. Procene efikasnosti

[0158] Efikasnost je procenjena u delovima A i B (dozna eskalacija), kao i u delu C (ekspanzija kohorte). Promene u tumorskim merama i tumorskom odgovoru u vreme svake procene su određene. Početna procena tokom perioda ispitivanja zahteva CT ili MRI snimke grudi, abdomena, i karlice, i drugih anatomskih oblasti kao što je indikovano tipom tumora i/ili istorijom bolesti pojedinačnog subjekta. Naknadne vremenske tačke zahtevaju snimke grudi, abdomena, i karlice, kao i drugih anatomskih oblasti koje su snimane u osnovnom stanju na osnovu tipa tumora i/ili istorije bolesti pojedinačnog subjekta. Snimci mozga su inače zahtevani kao klinički indikovani.

[0159] Analiza završnih tačaka odgovora su izvedene u skladu sa kriterijumom za imuskivezani odgovor, irRECIST koji odražava kliničko iskustvo sa drugim T ćelijski-usmerenim imunoterapijama u kojima su objektivni i trajni odgovori primećeni kod subjekata nakon progresije i bez mešanja alternativne antikancerske terapije (Wolchok JD, et al., Clin. Can. Res. 2009;15(23):7412-7420). Najbolji celokupan odgovor (best overall response - BOR) pojedinačnog subjekta, trajanje preživljavanja bez progresije (progression-free survival - PFS), i trajanje odgovora (duration of response - DOR) je izračunato na odgovarajući način.

[0160] Statusi tumora su procenjeni u osnovnom stanju, tokom tretmana (svakih 8 nedelja) za do dvanaest 8-onedeljnih ciklusa terapije, i jednom tokom perioda praćenja. CT i MRI snimci su pročitani i procenjeni lokalno po RECIST v1.1. Svi snimci skeniranja su de-identifikovani i arhivirani u svom prirodnom formatu Digitalnog snimanja i komunikacije u medicini (Digital Imaging and Communications in Medicine - DICOM) kao deo studijskog predmeta subjekta.

[0161] Procene efikasnosti uključuju ORR (npr., PR CR), DOR, i PFSR na indikatorskim vremenskim tačkama (npr., 24 nedelje), na osnovu procene tumorskog odgovora primenom irRECIST i RECIST v1.1. indikatora 2-godišnjeg celokupnog preživljavanja (overall survival - OS).

12. Farmakokinetičke procene

[0162] Uzorci seruma za procene BMS-986016 farmakokinetike i anti-lek antitela (ADA) su sakupljeni za sve subjekte. Uzorci seruma za procene BMS-936558 farmakokinetike i ADA su sakupljeni za sve subjekte uključene u Deo B i C. Uzorci seruma su analizirani za BMS-986016 i BMS-936558 pomoću validiranog imunotesta. Dodatno, odabrani uzorci seruma su analizirani pomoću istraživačke ortogonalne metode (npr., tečna hromatografija [LC]-masena spektrometrija [MS]/MS) koja meri ukupni BMS-986016 i/ili BMS-936558.

13. Istraživačka procena biomarkera

[0163] Farmakodinamika BMS-986016 tretmana administriranog zasebno ili u kombinaciji sa BMS-936558 je procenjena pomoću kvantifikujućih biomarkera u perfernoj krvi i tkivu tumora kod prva 3 subjekta koji su uključeni na svakom doznom nivou tokom dozno eskalacionih (Delovi A i B) i kod subjekata sa melanomom i kancerima glave i vrata tokom kohortno ekspanzionih (Deo C) faza studije. Detaljni rasporedi farmakodinamičkih procena su obezbeđeni ispod u Tabelama 5-6. Detalji vezani za zahteve za tkiva tumora za subjekte u Delovima A, B, i C studije su obezbeđeni ispod u Tabeli 7.

Tabela 5A: Deo A & B (eskalacija doze) – raspored biomarker uzorkovanja (SAMO za prva 3 subjekta na svakom doznom nivou)

Tabela 5B: Deo A & B (eskalacija doze) – raspored biomarker uzorkovanja (SAMO za prva 3 subjekta na svakom doznom nivou)

Tabela 6A: Deo C (Ekspanzija kohorte) - raspored biomarker uzorkovanja (SAMO za subjekte sa melanomom i kancerom glave i vrata)

p ; pj p Tabela 6B: Deo C (Ekspanzija kohorte) - raspored biomarker uzorkovanja (SAMO za subjekte sa melanomom i kancerom glave i vrata)

Tabela 7: Zahtevi za tkivo tumora za Delove A, B, i C

Rastvorljivi biomarkeri (serumski biomarkeri) – delovi A, B, i C

[0164] Pre-tretmanski i u toku tretmana serumski nivoi hemokina, citokina, i rastvorljivih proteina povezanih sa tumorom su procenjeni pomoću tehnika koje uključuju, ali nisu ograničene na, ELISA ili multipleks testove. Analiti uključuju markere zapaljenja, imunu aktivaciju, faktore rasta tumora domaćina, i proteine poreklom iz tumora.

Antitumorska antitela (serumski biomarkeri) – delovi A, B, i C

[0165] Tretman sa BMS-986016 i BMS-936558 može dovesti do stvaranja novih, ili porasta postojećih, antitela na antigene povezane sa tumorom. Procena antitela na panel od > 8000 proteina je sprovedena primenom pre-tretmanskog i seruma u toku tretmana u multipleksu i ELISAs. Ovi podaci su primenjeni da se istraži da li su antitumorska antitela povezana sa kliničkim odgovorom i bezbednosnim parametrima, kao i da pruži informacije o farmakodinamici aministracije leka.

Imunofenotipiziranje (Protočna citometrija/PBMC) - Delovi A, B, i C

[0166] Mononuklearne ćelije periferne krvi (peripheral Krv mononuclear cells - PBMCs) su primenjene da se karakterizuje i kvantifikuje aktivacija i regulatorni status mijeloidnih i limfoidnih ćelija pomoću polihromatske protočne citometrije. Podskupovi ćelija okarakterisanih imunofenotipiziranjem uključuju naivne, aktivirane, i iscrpljene populacije efektorskih i memorijskih T ćelija, regulatorne T ćelije, i supresorske ćelije izvedene iz mijeloida.

Ex vivo funkcionalni testovi (ćelijski test) - delovi A, B, i C

[0167] Da bi se procenilo da li BMS-986016 i BMS-936558 vraćaju T ćelijsku aktivaciju i funkciju, PBMC ćelije su izolovane i čuvane u zamrznutom stanju. Funkcionalni status efektorskih T ćelija, uključujući, ali nije ograničeno na, IFN-γ i granzim B, je procenjen pomoću protočnog citometrijskog bojenja.

Genska ekspresija periferne krvi (mRNK pune krv) i ekspresija tumorskog gena - delovi A, B, i C [0168] Ekspresioni nivo gena koji su u vezi sa odgovorom na BMS-986016 ± BMS-936558 je kvantifikovan pomoću mikroerej i/ili kvantitativne reverzno transkripcione polimerazno lančano reakcione (RT-PCR) analize u uzorcima pune krvi i tumora. Analiza uključuje, ali nije obavezno ograničena na, gene koji kodiraju BMS-986016-stimulisane efektorske funkcije (perforin, granzim B, i IFN-γ) i gene koji kodiraju T ćelijske ko-stimulatorne receptore (PD-1, PD-L1, i CTLA-4).

Analiza cirkulišuće tumorske DNK (serumski (plazma) biomarkeri) - deo C

[0169] Prisustvo DNK bez ćelija u cirkulišućoj krvi je dobro-dokumentovan fenomen. Fragmenti DNK su pušteni u krvotok iz ćelija u deobi tokom ćelijske proliferacije ili ćelijske smrti. Kod pacijenata sa kancerom, frakcija ove DNK je poreklom iz tumora i naziva se cirkulišuća tumorska DNK (ctDNK). Iako mali, fragmenti DNK prosečno između 180 do 200 bp i specifični genomski regioni mogu biti prošireni sa PCR. Pored toga, nekoliko studija je otkrilo mutacije u ctDNK koje tačno odgovaraju mutacijama iz osnovnog tumora. Primenom tkiva i plazme od pacijenata sa poznatim pokretačkim mutacijama u melanomu ili kanceru glave i vrata, BEAMujuća tehnologija se primenjuje da se broji učestalost mutacija u cirkulaciji.

Analiza polimorfizma pojedinačnih nukleotida (Single Nucleotide Polymorphism - SNP) - delovi A, B, i C

[0170] Da bi se identifikovali mogući polimorfizmi povezani sa bezbednošću i efikasnošću od BMS-986016, odabrani geni su procenjeni na polimorfizme pojedinačnih nukleotida (SNPs). Geni od interesa uključuju, ali nisu ograničeni na, PD- 1, PD-L1, MHC klase II, LAG-3, i CTLA-4. Biopsijska analiza tumora - delovi A i B

[0171] Tumorsko tkivo je prikupljeno od svih subjekta u dozno eskalacionom delu protokola. Imunohistohemija je primenjena da se proceni broj i sastav imunih infiltrata da bi se definisali podskupovi imunskih ćelija prisutni unutar FFPE tumorskog tkiva pre i potencijalno nakon izlaganja ka BMS-986016 i BMS-936558. Ove IHC analize uključuju, ali nisu obavezno ograničene na, sledeće markere: CD4, CD8, LAG-3, MHC II, PD-1, PD-L1, i PD-L2. Veze između genske ekspresije i IHC ekspresije su formirane među testovima koji su izvedeni ukoliko se smatra da su informativni.

Biomarker mere na bazi tumora - deo C

[0172] Uparene biopsije tumora pre i u toku tretmana su obavezne za sve subjekte sa melanomom ili kancerom glave i vrata koji su pripadaju Delu C (ekspanzija kohorte). Subjekti od kojih adekvatne upareni uzorci biopsije pre i u toku tretmana nisu prikupljeni mogu biti zamenjeni.

[0173] Subjekti imaju najmanje jednu leziju dovoljno veliku da se podvrgne ponovljenim biopsijama (biopsije pre i u toku tretmana) putem široke igle (minimalna veličina 18 gejdža) ili imaju najmanje 2 različite lezije pogodne za biopsiju širokom iglom ili ekscizionu biopsiju. Očekivana dužina široke igle treba da bude veća od 5 mm. Ubodna („punch“) biopsija je prihvatljiva za kutane lezije. Aspiracione biopsije tankom iglom nisu prihvatljive. Najmanje dva uzorka biopsije širokom iglom su uzeta u svakoj vremenskoj tački, ali kolekcija dodatnih uzoraka („cores“) se preporučuje ukoliko istraživač smatra da je klinički bezbedno. Procena kvaliteta uzorka biopsije od strane patologa je preporučena u vreme postupka. Svi uzorci biopsije koji su prikupljeni moraju imati detaljni patološki izveštaj koji se dostavlja sa uzorkom.

[0174] Uzorci biopsije tumora su dobijeni od saglasnih subjekta pre i tokom tretmana sa BMS-986016 i BMS-936558 da bi se okarakterisale populacije imunskih ćelija i eksprimiranje odabranih tumorskih markera. Uzorci biopsije su primenjeni za sledeće procene:

• Karakterizacija TIL ćelija i tumorskih antigena. Imunohistohemija se primenjuje da se proceni broj i sastav imunih infiltrata da bi se definisali podskupovi imunih ćelija prisutni unutar FFPE tumorskog tkiva pre i nakon izlaganja ka BMS-986016 i nivolumabu. Ove IHC analize uključuju, ali nisu obavezno ograničene na, sledeće markere: CD4, CD8, LAG-3, MHC II, PD-1, PD-L1, i PD-L2. Veze između genske ekspresije i IHC ekspresije su formirane među testovima koji su izvedeni ukoliko se smatra da su informativni.

• Mikrodisekcija laserskog hvatanja. Izolacija tumora i/ili TIL na FFPE sekcijama je izvedena pomoću mikrodisekcije laserskog hvatanja (laser capture microdissection - LCM) za profilisanje visokog protoka molekulskih događaja unutar mikrosredine tumora.

• Karakterizacija T ćelijskog repertoara. DNK sekvenciranje je izvedeno na FFPE tumorskom tkivu pre i posle tretmana da bi se procenio sastav T ćelijskog repertoara. Mala raznolikost receptora T ćelija može biti loš prognostički faktor celokupnog preživljavanja kod pacijenata sa metastazom kancera dojke. Trenutno, postoji slabo razumevanje raznolikosti receptora T ćelija kao predskazujućeg faktora za odgovor na imunoterapiju, imajući u vidu da je pretpostavljeno da je glavni mehanizam od BMS-936558 i BMS-986016 obnova funkcije T ćelijske antitumorske imunosti. Stoga, karakterizacija raznolikosti T ćelijskog odeljka na periferiji, i unutar tumora, u osnovnom stanju i tokom tretmana je izvedena pomoću sledeće generacije DNK sekvenciranja receptora T ćelija. Analiza T ćelijskog repertoara je takođe izvedena od DNK koja je izolovana iz periferne krvi da bi se uporedio status tumora i periferni T ćelijski repertoar pre i nakon tretmana. • Profilisanje genske ekspresije. Uzorci biopsije tumora koji su prikupljeni u RNAlater ili sličnom reagensu su ispitani na mRNK gensku ekspresiju pomoću Affymetrix tehnologije genskih setova i/ili kvantitativne polimerazne lančane reakcije u realnom vremenu (qPCR) da bi se otkrila ekspresija odabranih imunski-povezanih gena.

• In situ citokinsko i negativno regulatorsko eksprimiranje. Uzorci biopsija tumora su kvantitativno procenjeni za RNK, uključujući CD3, IFN-γ, LAG-3, i PD-1

[0175] Subjektima čiji uzorak biopsije koji se proverava daje neadekvatni kvantitet ili kvalitet tkiva je dozvoljeno da nastave testiranje. Ukoliko biopsija tokom tretmana nije uspešna, subjekti takođe nastavljaju testiranje. Takvi subjekti su zamenjeni da bi se dobilo 48 subjekta sa adekvatnim uparenim biopsijama tumora. Ukoliko subjekti daju odgovor na tretman, biopsije tokom tretmana možda neće biti moguće. U ovom slučaju, subjekti takođe nastavljaju testiranje.

[0176] Tkivo tumora koje je dobijeno iz ovih biopsija je jednako podeljeno na FFPE i zamrznute uzorke, koji mogu biti primenjeni za histološku potvrdu melanoma, kao i za testove navedene iznad.

[0177] Biopsije su obavljene sa lokalnom anestezijom ili svesnom sedacijom. Institucionalne smernice za bezbedno izvođenje biopsija su praćene. Ekscizione biopsije su izvedene da bi se dobili uzorci biopsije tumora. Invazivni postupci koji zahtevaju opštu anesteziju nisu izvedeni da bi se dobio uzorak biopsije. Međutim, ukoliko se hirurška procedura izvodi za kliničku indikaciju, višak tkiva tumora se koristi za svrhe istraživanja uz pristanak subjekta.

14. Procene imunogeničnosti

[0178] Serumski uzorci prikupljeni u vremenskim tačkama su analizirani pomoću validiranog testa imunogeničnosti. Odabrani uzorci seruma su analizirani pomoću eksploratorne ortogonalne metode koja meri anti-BMS-986016 ili anti-BMS-936558. Mogući rezultati dobijeni iz bilo koje ortogonalne metode su namenjene kao informativni za svrhe tehnološkog istraživanja i nisu prijavljeni.

[0179] Dodatno, ad hoc uzorci seruma namenjeni za procene farmakokinetike ili biomarkera su primenjeni za anlizu imunogeničnosti ukoliko je zahtevano (npr., nedovoljna zapremina za potpunu procenu imunogeničnosti ili za praćenje suspektne imunogeničnosti vezano za neželjeni događaj).

15. Neželjeni događaji

[0180] Neželjeni događaj (adverse event - AE) je definisan kao bilo koja nova nepoželjna pojava ili pogoršanje prethodnog medicinskog stanja kod subjekta u kliničkom ispitivanju kome je administriran ispitivani (medicinski) proizvod i koje nema obavezno uzročnu vezu sa ovim tretmanom. AE je stoga bilo koji nepoželjni i nenameravani znak (kao što je nenormalni laboratorijaki nalaz), simptom, ili bolest privremeno povezana sa primenom ispitivanog proizvoda, bilo da se smatra ili ne da se odnosi na ispitivani proizvod.

[0181] Uzročna veza sa studijskim lekom je određena od strane lekara i primenjena da se procene svi neželjeni događaji (AE). Uobičajena veza može biti jedna od sledećih:

Povezana: Postoji razumna uzročna veza između administracije studijskog leka i AE. Nepovezana: Ne postoji razumna uzročna veza između administracije studijskog leka i AE.

[0182] Termin " razumna uzročna veza " označava da postoji dokaz za nagoveštavanje uzročne veze.

Ozbiljni neželjeni događaji

[0183] Ozbiljni neželjeni događaj (serious adverse event - SAE) je bilo koja od nepoželjnih medicinskih pojava koja pri bilo kojoj dozi:

• dovodi do smrti

• je životno-ugrožavajuća (definisana kao događaj u kome je subjekt u riziku od smrti u vreme događaja; ne odnosi se na događaj koji hipotetički može izazvati smrt da je ozbiljniji)

• zahteva hospitalizaciju pacijenta ili izaziva produžetak postojeće hospitalizacije

• dovodi do trajne ili značajne invalidnosti/nesposobnosti

• je kongenitalna anomalija/defekt pri rođenju

• je važan medicinski događaj (definisan kao medicinski događaj(i) koji ne mora odmah biti životno-ugrožavajući ili dovesti do smrti ili hospitalizacije ali, na osnovu odgovarajuće medicinske i naučne procene, može ugroziti subjekta ili može zahtevati intervenciju (npr., medicinsku, hiruršku) da bi se sprečio jedan od drugih ozbiljnih ishoda navedenih u definiciji iznad). Primeri ovakvih događaja uključuju, ali nisu ograničeni na, intenzivni tretman u hitnoj službi ili kod kuće za alergijski bronhospazam; krvne diskrazije ili konvulzije koje ne rezultiraju hospitalizacijom.) Moguće oštećenje jetre indukovano lekom (drug induced liver injury - DILI) se takođe smatra važnim medicinskim događajem.

[0184] Suspektno prenošenje infektivnog agensa (npr., patogenog ili nepatogenog) putem studijskog leka je SAE. Iako trudnoća, predoziranje, kancer, i moguće oštećenje jetre indukovano lekom (DILI) nisu uvek ozbiljni prema regulatornoj definiciji, ovi događaji moraju se tretirati kao SAE-i. Bilo koja komponenta završne tačke studije za koju se smatra da je u vezi sa studijskom terapijom (npr., smrt je završna tačka, ukoliko je smrt nastupila usled anafilakse, anafilaksa mora biti prijavljena) je prijavljena kao SAE.

[0185] Sledeće hospitalizacije se ne smatraju SAE-ima:

- poseta hitnoj službi ili drugom bolničkom odelenju < 24 sata, koja ne dovodi do prijema (sem ako se ne smatra važnim medicinskim ili životno-ugrožavajućim događajem)

- elektivna operacija, planirana pre potpisivanja pristanka

- prijem po protokolu zbog planirane medicinske/hirurške procedure

- rutinska zdravstvena procena koja zahteva prijem radi osnovnog/razvojnog zdravstvenog statusa (npr., rutinska kolonoskopija)

- medicinski/hirurški prijem sem onog za saniranje lošeg zdravlja i planiran pre ulaska u studiju. Odgovarajuća dokumentacija se zahteva u ovim slučajevima

- prijem na koji se nailazi zbog druge životne okolnosti koja ne utiče na dravstveni status i ne zahteva medicinsku/hiruršku intervenciju (npr., nedostatak smeštaja, ekonomska neadekvatnost, odmor staratelja, porodične okolnosti, administrativni razlog).

[0186] Nakon subjektovog pisanog pristanka za učestvovanje u studiji, svi SAE, bilo da su u vezi ili nisu u vezi sa studijskim lekom, su prikupljeni, uključujući one za koje se smatra da su povezani sa procedurama koje su određene protokolom. Prikupljeni su svi SAE koji se javljaju tokom perioda ispitivanja i u toku 135 dana od prekida doziranja. Ukoliko je primenljivo, prikupljaju se SAE koji su u vezi sa bilo kojom kasnijom procedurom koja je određena protokolom (npr., praćenje biopsije kože). Svi SAE su praćeni do razrešavanja ili stabilizacije.

Neželjeni događaji koji nisu ozbiljni

[0187] Neželjeni događaj koji nije ozbiljan je AE koji nije klasifikovan kao ozbiljan. Prikupljanje informacija vezanih za AE koji nije ozbiljan započinje pri inicijaciji studijskog leka i nastavlja se tokom 135 dana nakon prekida doziranja. AE koji nisu ozbiljni se prate do razrešavanja ili stabilizacije, ili se prijavljuju kao SAE ukoliko oni postanu ozbiljni. Praćenje je takođe zahtevano za AE koji nisu ozbiljni koji izazivaju ometanje ili ukidanje studijskog leka i za one prisutne na kraju studijskog tretmana po potrebi. Svi identifikovani AE koji nisu ozbiljni su zabeleženi i opisani na strani za AE koji nisu ozbiljni u CRF (papirni ili elektronski). Završetak dodatnih CRF-a je zahtevan za AE događaje i/ili laboratorijske abnormalnosti koje su prijavljene/identifikovane tokom studije.

16. Statistička razmatranja

Određivanje veličine uzorka

[0188] Dozna eskalacija (delovi A i B): Veličina uzorka pri svakoj dozi zavisi od uočene toksičnosti i ne može se precizno odrediti. Deo A i deo B imaju 3 do 9 subjekta u svakoj kohorti.

[0189] Ekspanzija kohorte (deo C): ekspanzija kohorte dozvoljava bolju procenu stope toksičnosti i obezbeđuje bolju preciznost za preliminarne procene efikasnosti. Ukoliko ≤ 5 od 16 subjekta (tj., -30% iz kohorte) iskusi toksičnost, postoji barem 90% pouzdanosti da prava stopa toksičnosti nije veća od 50.4% (na osnovu Clopper-Pearson-ovog tačnog binomnog 1-stranog 90% intervala pouzdanosti). Veličina uzorka od 16 subjekata po kohorti takođe dozvoljava procenu odnosa subjekata sa objektivnim odgovorom (tj., CR PR) unutar kohorte tako da maksimalna rastojanje između procenjene stope i obe granice tačnog 2-stranog 95% Clopper-Pearson-ovog intervala pouzdanosti je 27.4%.

Populacije za analizu

[0190]

• Skup za analizu od svih registrovanih subjekta: Ovaj skup za analizu sadrži sve subjekte (uključujući neuspešna snimanja) koji su potpisali informisani pristanak za studiju.

• Skup za analizu od svih tretiranih subjekta: Ovaj skup za analizu uključuje sve subjekte koji su primili bilo koji lek.

• Subjekti sa odgovorom koji se može evaluirati: Ovaj skup za analizu uključuje sve subjekte koji su primili bilo koji studijski lek, imaju osnovnu procenu tumora sa merljivom bolesti, i jedno od sledećih: (1) barem jednu procenu tumora u toku lečenja koja može da se evaluira, (2) kliničku progresiju, ili (3) smrt pre prve evaluacije tumora u toku tretmana.

• Skup za analizu BMS-986016 farmakokinetike: Ovaj skup za analizu uključuje sve subjekte koji su primili BMS-986016 i imaju barem jedan validan FK parametar koji treba da bude uključen u statističke analize BMS-986016 FK podataka.

• Skup za analizu BMS-986016 imunogeničnosti: Ovaj skup za analizu uključuje sve subjekte koji su primili BMS-986016 i imaju barem jedan dostupan uzorak BMS-986016 imunogeničnosti. • Skup za analizu BMS-936558 imunogeničnosti: Ovaj skup za analizu uključuje sve subjekte koji su primili BMS-936558 i imaju barem jedan dostupan uzorak BMS-936558 imunogeničnosti. • Skup za analizu farmakodinamike: Ovaj skup za analizu uključuje sve tretirane subjekte za koje su dostupna farmakodinamička merenja u početku i najmanje jednoj drugoj vremenskoj tački. Završne tačke

[0191] Primarna završna tačka ove studije u Fazi 1 je bezbednost izmerena stopom AE događaja, ozbiljnih neželjenih događaja (SAEs), smrti, i laboratorijskih abnormalnosti (npr., Stepen 3 ili više po CTCAE v 4), procenjena tokom tretmana i za do 135 dana praćenja. Svi subjekti koji su primili barem jednu dozu BMS-986016 ili BMS-936558 su analizirani na bezbednost.

[0192] FK od BMS-986016 koji je administriran i zasebno i u kombinaciji sa BMS-936558 je procenjena kao sekundarni cilj primenom sledećih završnih tačaka izvedenih iz podataka koncentracije seruma naspram vremena u Ciklusu 1 i Ciklusu 3:

Cmax Maksimalna uočena serumska koncentracija

Tmax Vreme maksimalne uočene serumske koncentracije

Ctrough Minimalna uočena serumska koncentracija

Ctau Koncentracija na kraju doznog intervala (npr., koncentracija na 336 sata) Css,avg Prosečna koncentracija tokom doznog intervala ([AUC(TAU)/tau] AUC(TAU) Površina ispod krive koncentracija-vreme u jednom doznom intervalu CLT Ukupni telesni klirens

Vss Volumen distribucije u ravnotežnom stanju

T-HALFeff AUC Efikasan polu-život eliminacije koji objašnjava stepen AUC akumulacije koji je uočen

T-HALFeff Cmax Efikasan polu-život eliminacije koji objašnjava stepen Cmax akumulacije koji je uočen

AI_AUC Indeks akumulacije; proporcija AUC(TAU) u ravnotežnom stanju prema AUC(TAU) nakon prve doze

AI_Cmax Cmax akumulacioni indeks; odnos Cmax u ravnotežnom stanju prema Cmax nakon prve doze

AI_Ctau Ctau akumulacioni indeks; odnos Ctau u ravnotežnom stanju prema Ctau nakon prve doze

DF Stepen fluktuacije ili fluktuacioni indeks ([Cmax - Ctau]/Css,avg)

Vrednosti FK parametara pojedinačnih subjekata su izvedene pomoću nekompartmentalnih metoda pomoću validiranog programa analize FK. Stvarna vremena su primenjena za analize. Efikasnost

[0193] Efikasnost je procenjena kao sekundarni cilj primenom završnih tačaka koje su opisane ispod za irRECIST i RECIST v1.1. U svrhe upravljanja pacijentima, donošenje kliničkih odluka je zasnovano na RECIST. Statistička analiza i izveštavanje su zasnovani na oba kriterijuma. • Najbolji celokupni odgovor (Best overall response - BOR) je naznaka najboljeg odgovora zabeležena od početka studijskog tretmana do poslednje procene tumora određene protokolom (npr., poseta 30 odnevnog praćenja) uzimajući u obzir bilo koji zahtev za potvrdu, na osnovu RECIST v1.1 ili irRECIST kriterijuma. CR ili PR odrednice uključene u BOR procenu su potvrđene pomoću konsekutivne sekundarne (konfirmatorne) evaluacije koja ispunjava kriterijume za odgovor i izvedene najmanje 4 nedelje nakon što su kriterijumi za odgovor prvi put ispunjeni.

• Objektivna stopa odgovora (Objective response rate - ORR) je definisana kao ukupni broj subjekata čiji je BOR bilo CR bilo PR podeljen sa ukupim brojem subjekata u populaciji od interesa.

• Trajanje odgovora (Duration of response - DOR) računato samo za subjekte sa BOR od CR ili PR je definisano kao broj dana između datuma prvog odgovora i narednog datuma objektivno dokumentovane progresije bolesti na osnovu kriterijuma (RECIST v1.1 ili irRECIST) ili smrti, štagod se prvo pojavi. Za one subjekte koji ostaju živi i koji nisu imali progresiju ili primili naknadnu terapiju, trajanje odgovora je cenzurisano na datum poslednje procene tumora određene protokolom. Subjekti koji primaju naknadnu terapiju su cenzurisani na početku naknadne terapije.

• Preživljavanje bez progresije (Progression-free survival - PFS) je definisano kao verovatnoća da subjekt ostane bez progresije i da preživi. Verovatnoća je računata na osnovu broja dana između prve doze studijskog leka i progresivne bolesti (kao što je definisano pomoću RECIST ili irRECIST) ili smrti. Za one subjekte koji prežive i nemaju progresiju, PFS je cenzurisan na datum poslednje procene tumora određene protokolom.

[0194] Ove završne tačke su određene na osnovu merenja tumora koja su se obavljala svakih 8 nedelja tokom Perioda tretmana (do dvanaest 8-nedeljnih ciklusa), i jednom tokom Kliničkog perioda praćenja (30 dana), tokom ukupno ∼ 1.9 godina.

Imunogeničnost

[0195] Na nivou uzorka, pojedinačni uzorci su okarakterisani kao ADA-pozitivni ili ADA-negativni. Subjekt se ne smatra da ima pozitivan uzorak u osnovnom stanju ukoliko je poslednji uzorak pre započinjanja tretmana ADA-pozitivan. Na primer, uzorak nakon osnovnog stanja iz subjekta koji je ADA-negativan u osnovnom stanju se smatra ADA-pozitivnim ukoliko je ADA otkriveno. Uzorak nakon osnovnog stanja iz subjekta koji je ADA-pozitivan u osnovnom stanju se smatra ADA-pozitivnim ukoliko postoji relevantan porast u titru (razmera porasta u titru koja se smatra relevantnom može varirati u odnosu na lek i test, i obeležena je u planu statističke analize). Na nivou subjekta, relevantne ADA završne tačke mogu uključivati:

• Razmera subjekata sa ADA-pozitivnim uzorkom u osnovnom stanju

• Razmera ADA- pozitivnih subjekata (na tretmanu i uopšteno)

• Razmera subjekata koji su uporno pozitivni (npr., 2 ili više uzastopnih ADA-pozitivnih uzoraka sa adekvatnim protokom vremena u-između)

• Razmera subjekata koji imaju neutralizujuća antitela koja su detektovana u jednom ili više uzoraka

Centralno očitani ECG-i (Delovi A i B)

[0196] U delu A i delu B, QTc je procenjen pomoću centralnog čitača pri poseti 1 u toku praćenja, i na dan 1 Ciklusa 1 i Ciklusa 3 (vremenske tačke pre-doze i 4 sata posle-doze). Ove procene su primenjene da se reši sekundarni cilj procenjivanja efekta od BMS-986016 administriranog zasebno i u kombinaciji sa BMS-936558 na QTc. ECG-i procenjeni lokalno od strane istraživača su takođe prikupljeni na početku svakog ciklusa.

Biomarker završne tačke

[0197] Biomarker završne tačke iz periferne krvi su generalno merene u višestrukim vremenskim tačkama, i evaluirane i kao prediktivni i farmakodinamički markeri u smislu istraživačkih biomarker ciljeva. Ovi mogu uključiti mere kao što su nivoi i promena od osnovnog stanja u nivoima sledećeg u svakoj planiranoj vremenskoj tački:

• Serumskih rastvornih faktora

• Odnosa specifičnih podskupova limfocita/nivoa eksprimiranja T ćelijskih ko-stimulatornih markera koji je procenjen primenom protočne citometrije

• Eksprimiranja gena koji kodiraju BMS-986016-stimulisane efektorske funkcije (perforin, granzim B, i IFN-γ) i gena koji kodiraju T ćelijske ko-stimulatorne receptore (PD-1, PD-L1, i CTLA-4).

• Procenta subjekata koji eksprimiraju polimorfizme pojedinačnog nukleotida povezane sa PD-1 genima (po SNP)

• Mera kvantiteta i raznolikosti antitela primećenih prema antigenima povezanim sa tumorom (Deo C samo)

[0198] Biomarker završne tačke iz biopsija tumora su istražene prevashodno u cilju da se identifikuju markeri osnovnog stanja prediktivni za efikasnost, jer su oni samo mereni u osnovnom stanju za većinu subjekta. Za podskup subjekata koji imaju biopsije i pre-tretmana i u toku tretmana, farmakodinamičke veze su istražene. Završne tačke mogu uključivati mere, kao što su nivoi pre tretmana i promena u nivoima primećena tokom tretmana:

• Funkcionalnog statusa limfocita mereno kao procenat CD8+ T-ćelija za IFN-γ i granzim B eksprimiranje, and the geometrijski srednji intenzitet (log-skala) CD8+ ćelija koje su pozitivne za IFN-γ i granzim B eksprimiranje (putem ex vivo funkcionalnog testa)

• Ekspresije gena koji kodiraju BMS-986016-stimulisane efektorske funkcije (perforin, granzim B, i IFN-γ) i gena koji kodiraju T ćelijske ko-stimulatorne receptore (PD-1, PD-L1, i CTLA-4) • IHC procene prisustva/odsustva i intenziteta (mereno primenom diskretne skale: kao što je 0, 1, 2, 3, 4) eksprimiranja LAG-3, MHC klase II, PD-1, PD-L1, i PD-L2.

[0199] Odgovarajuća funkcionalna transformacija ovih istraživačkih mera je primenjena ako je neophodno.

Farmakokinetika

[0200] Podaci BMS-936558 koncentracija-vreme u planiranim minimalnim (Ctrough) i vremenskim tačkama na kraju infuzije su evaluirani kao istraživačka završna tačka. Merenja su prikupljena tokom tretmana (do 12 ciklusa) i za do 135 dana tokom praćenja posle tretmana.

[0201] FK parameteri za BMS-986016 su računati primenom nekompartmentalnih analiza. Sumarne statistike su prikazane u tabeli za FK parametre od BMS-986016 po dozi i studijskom danu/ciklusu. Da bi se opisala veza ovih parametara sa dozom od BMS-986016, grafički prikazi raspršenja („scatter plots“) od Cmax i AUC(TAU) naspram doze su obezbeđeni za svaki dan/ciklus koji je izmeren. Dozna proporcionalnost od BMS-986016 kada je administriran zasebno ili koadministriran sa BMS-936558 je takođe procenjena na osnovu modela moći. Minimalne koncentracije od BMS-986016 su grafički prikazane naspram studijskog dana i ciklusa. Koncentracije BMS 936558 na kraju infuzije i minimalne (Ctrough) koncentracije su tabelarno prikazane primenom sumarne statistike.

REZIME SEKVENCI

Claims

Patentni zahtevi

1. Proizvod koji sadrži anti-LAG-3 antitelo i anti-PD-1 antitelo za kombinovanu primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta,

gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg;

anti-LAG-3 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:3 i 5, redom; i

anti-PD-1 antitelo sadrži

(f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži sekvencu prikazanu u SEK ID BR:28.

2. Anti-LAG-3 antitelo za primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta, gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg;

anti-PD-1 antitelo sadrži

3. Anti-PD-1 antitelo za primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta, gde lečenje obuhvata najmanje jedan ciklus administracije, gde ciklus je period od osam nedelja, gde za svaki od najmanje jednog ciklusa, četiri doze anti-LAG-3 antitela su administrirane u dozi od 3, 20, 80, ili 240 mg i četiri doze anti-PD-1 antitela su administrirane u dozi od 80 ili 240 mg;

anti-PD-1 antitelo sadrži

4. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, gde lečenje obuhvata administraciju anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela u sledećim dozama:

(a) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 80 mg anti-PD-1 antitela;

(b) 3 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(c) 20 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela;

(d) 80 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela; ili

(e) 240 mg anti-LAG-3 antitela i 240 mg anti-PD-1 antitela.

5. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-4, gde anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela su formulisana za intravensku administraciju.

6. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-5, gde anti-PD-1 i anti-LAG-3 antitela su formulisana zajedno.

7. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-5, gde antiPD-1 i anti-LAG-3 antitela su formulisana odvojeno.

8. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, gde se lečenje sastoji od do 12 ciklusa.

9. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8, gde lečenje obuhvata administraciju anti-PD-1 antitela na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa.

10. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-9, gde lečenje obuhvata administraciju anti-LAG-3 antitela na Dane 1, 15, 29, i 43 svakog ciklusa.

11. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10, gde lečenje obuhvata administraciju anti-PD-1 antitela pre administracije anti-LAG-3 antitela.

12. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10, gde lečenje obuhvata administraciju anti-PD-1 antitela nakon administracije anti-LAG-3 antitela.

13. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10, gde lečenje obuhvata administraciju anti-PD-1 antitela istovremeno sa anti-LAG-3 antitelom.

14. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, gde lečenje proizvodi najmanje jedan terapijski efekat izabran od smanjenja veličine tumora, smanjenja broja metastatskih lezija tokom vremena, potpunog odgovora, delimičnog odgovora, i stabilne bolesti.

15. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-14, gde solidni tumor je izabran od melanoma, ne-sitnoćelijskog kancera pluća (non-small cell lung cancer - NSCLC), tumora povezanog sa humanim papiloma virusom (HPV), i gastričnog adenokarcinoma.

16. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-15, gde anti-LAG-3 antitelo sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:1 i 2, redom.

17. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-16, gde anti-PD-1 antitelo sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže sekvence prikazane u SEK ID BRojevima:19 i 21, redom.

18. Anti-LAG-3 antitelo i/ili anti-PD-1 antitelo za primenu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-17, gde anti-PD-1 antitelo sadrži teške i lake lance koji sadrže sekvence kao što su prikazane u SEK ID BRojevima:17 i 18, redom.

19. Komplet za primenu u lečenju solidnog tumora kod humanog pacijenta, komplet koji sadrži:

(b) dozu anti-PD-1 antitela koje sadrži

(c) uputstva za primenjivanje anti-LAG-3 antitela i anti-PD-1 antitela u skladu sa patentnim zahtevom 1.