RS59383B1 - Vodeni oftalmološki rastvor i postupak za lečenje sindroma suvog oka - Google Patents

Vodeni oftalmološki rastvor i postupak za lečenje sindroma suvog oka

Info

Publication number
RS59383B1
RS59383B1 RSP20191216A RS59383B1 RS 59383 B1 RS59383 B1 RS 59383B1 RS P20191216 A RSP20191216 A RS P20191216A RS 59383 B1 RS59383 B1 RS 59383B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
chitosan
ophthalmic solution
polymer
container
nac
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Martin Prinz
Original Assignee
Croma Pharma Ges M B H
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=50693490&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS59383(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Croma Pharma Ges M B H filed Critical Croma Pharma Ges M B H
Publication of RS59383B1 publication Critical patent/RS59383B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/05—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes for collecting, storing or administering blood, plasma or medical fluids ; Infusion or perfusion containers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/05—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes for collecting, storing or administering blood, plasma or medical fluids ; Infusion or perfusion containers
    • A61J1/10—Bag-type containers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/14—Details; Accessories therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/14—Details; Accessories therefor
    • A61J1/1468—Containers characterised by specific material properties
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/04—Artificial tears; Irrigation solutions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B65—CONVEYING; PACKING; STORING; HANDLING THIN OR FILAMENTARY MATERIAL
    • B65D—CONTAINERS FOR STORAGE OR TRANSPORT OF ARTICLES OR MATERIALS, e.g. BAGS, BARRELS, BOTTLES, BOXES, CANS, CARTONS, CRATES, DRUMS, JARS, TANKS, HOPPERS, FORWARDING CONTAINERS; ACCESSORIES, CLOSURES, OR FITTINGS THEREFOR; PACKAGING ELEMENTS; PACKAGES
    • B65D65/00—Wrappers or flexible covers; Packaging materials of special type or form
    • B65D65/38—Packaging materials of special type or form
    • B65D65/40—Applications of laminates for particular packaging purposes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B65—CONVEYING; PACKING; STORING; HANDLING THIN OR FILAMENTARY MATERIAL
    • B65D—CONTAINERS FOR STORAGE OR TRANSPORT OF ARTICLES OR MATERIALS, e.g. BAGS, BARRELS, BOTTLES, BOXES, CANS, CARTONS, CRATES, DRUMS, JARS, TANKS, HOPPERS, FORWARDING CONTAINERS; ACCESSORIES, CLOSURES, OR FITTINGS THEREFOR; PACKAGING ELEMENTS; PACKAGES
    • B65D81/00—Containers, packaging elements, or packages, for contents presenting particular transport or storage problems, or adapted to be used for non-packaging purposes after removal of contents
    • B65D81/24—Adaptations for preventing deterioration or decay of contents; Applications to the container or packaging material of food preservatives, fungicides, pesticides or animal repellants
    • B65D81/26—Adaptations for preventing deterioration or decay of contents; Applications to the container or packaging material of food preservatives, fungicides, pesticides or animal repellants with provision for draining away, or absorbing, or removing by ventilation, fluids, e.g. exuded by contents; Applications of corrosion inhibitors or desiccators
    • B65D81/266—Adaptations for preventing deterioration or decay of contents; Applications to the container or packaging material of food preservatives, fungicides, pesticides or animal repellants with provision for draining away, or absorbing, or removing by ventilation, fluids, e.g. exuded by contents; Applications of corrosion inhibitors or desiccators for absorbing gases, e.g. oxygen absorbers or desiccants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)

Description

Opis
OBLAST TEHNIKE
[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na vodeni oftalmološki rastvor. Ovaj pronalazak takođe se odnosi na a kontejner koji sadrži vodeni oftalmološki rastvor. Ovaj pronalazak dalje se odnosi na pomenuti rastvor u postupku lečenja sindroma suvog oka upotrebom novog vodenog oftalmološkog rastvora. Ovaj postupak koristan je u olakšavanju znakova/simptoma suvog oka. Ovaj postupak uključuje primenu vodenog oftalmološkog rastvora koji sadrži tiolirani hitosan na subjektu kome je to potrebno.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Sindrom suvog oka (DES), takođe se naziva bolest suvog oka, široko je rasprostranjena bolest površine oka. Približno 40 million Amerikanaca boluju od nekog tipa suvog oka, od čega značajan deo onih od 50 godina ili stariji boluju od umerenog-do-ozbiljnog suvog oka (Schaumberg, Sullivan et al., 2003, Prevalence of the dry eye syndrome among US women, Am J Ophthalmol (136): 318-326; Schaumberg, Dana et al., 2009, Prevalence of dry eye disease among US men: estimates od the Physicians' Health Studies, Arch Ophthalmol (127): 763-768).
[0003] U širem smislu, bolest suvog oka može biti bilo koji sindrom povezan sa nestabilnošću suznog filma i disfunkcijom (kao što je povećano isparavanje suza i/ili smanjena vodena sekrecija). Među pokazateljima koji se odnose na opšti pojam "bolest suvog oka" javljaju se: Keratoconjunctivitis sicca (KCS), suvo oko povezano sa starenjem, Stevens-Johnson sindrom, Sjogren-ov sindrom, očni cicatrični pemfigoid, povreda rožnjače, očna površinska infekcija, Riley-Day-ov sindrom, kongenitalna alacrima, poremećaji ili deficijencije u ishrani (uključujući deficijencije vitamina), farmakološki sporedni efekti, razaranje žlezda i tkiva, autoimuni i drugi imunodeficijenti poremećaji, i nesposobnost treptanja koja se javlja kod komatoznih pacijenata. Takođe su uključeni simptomi suvog oka izazvani spoljnom izloženošću česticama iz vazduha, dimom, smogom i izuzetno suvim vazduhom; kao i netolerancija na kontaktna sočiva i očni stres izazvani radom na računaru ili igranjem igrica na računaru.
[0004] Postoje i druge bolesti koje imaju visok stepen ko-morbidnosti sa bolešću suvog oka: Alergijski konjuktivitis (sezonski i hronični), blefaritis i disfunkcija Meibomovih žlezda. Ova stanja utiču na kvalitet i stabilnost suznog filma, što rezultuje kao znaci i simptomi suvog oka .
[0005] Postupci laserske korekcije vida kao što je fotorefraktivna keratektomija (PRK), lasersko potpomognuta subepitelna keratektomija (LASEK) i lasersko potpomognut in situ keratomileusis (LASIK) takođe negativno utiču na funkcionalnost suznog filma i često izazivaju (privremenu) bolest suvog oka.
[0006] Trenutno upravljanje DES obuhvata i farmakološke i ne-farmakološke tretmane, uključujući upravljanje životnom sredinom, izbegavanje pogoršavajućih faktora, higijena kapaka, suplementacija suza (veštačke suze), supstance koje stimulišu sekreciju (da bi se povećala proizvodnja suza), silikonske čepiće, anti-zapaljenske agense (ciklosporin, steroidi), komoru za ovlaživanje, čak i autotransplantaciju pjuvačnih žlezda (Behrens, Doyle et al., 2006, Dysfunctional tear syndrome: a Delphi approach to treatment recommendations, Cornea (25): 900-907). Trenutno dostupne opcije za lečenje DES su neadekvatne. Čak i suplementacija suza nije idealna tretmanska opcija jer zahteva da subjekt ponavlja unošenje veštačkih suza veoma veliki broj puta tokom dana.
[0007] Opisani su razni polimeri kao moguća pomoć u obezbeđivanju nekakve dobrobiti u ublažavanju DES simptoma, a čak neke veštačke suze sadrže jedan ili više polimera, uključujući trenutno top 5 najbolje prodavanih proizvoda koji se izdaju bez recepta (OTC) za retiranje suvog oka u EU (Celluvisc®, Systane®, Hylo-Comod®, Optive® i Artelac®). Ovi polimeri namenjeni su da zaštite očne mukozne membrane i obezbede lubrikaciju površine oka. Primeri uključuju derivate celuloze, hijaluronsku kiselinu, tečne poliole, polivinil alkohol, povidon, karbopol i hidroksipropil-guar. Polimeri koji se koriste u proizvodima za lečenje DES imaju relativno kratko vreme zadržavanja na površini oka i zahtevaju često nanošenje. Kako bi se povećalo vreme zadržavanja na oku, neke formulacije sadrže vazelin ili mineralno ulje; međutim, zbog značajnog zamućenja, ovi veoma viskozni proizvodi mogu se koristiti samo uveče pre spavanja. (Abelson et al., 2008, Tear Substitutes. In: Albert and Miller, eds. Principles and Practices of Ophthalmology, 3rd edition, vol.1. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 287-292). Sve ostale supstitucije za suze moraju se iznova nanositi tokom dana.
[0008] Opisana su neka potencijalna poboljšanja na ovim polimerima. Jedno potencijalno poboljšanje moglo bi biti primena polimera koji ima izuzetno mukoadhezivne osobine u cilju povećanja vremena zadržavanja formulacije na površini oka bez izazivanja značajnog zamućenja. Hitosan, polikatjonski polimer koji je izveden iz prirodnog polimera hitina, dobro je poznat po svojim mukoadhezivnim osobinama. Vreme zadržavanja na oku oftalmoloških formulacija koje sadrže hitosan može se povećati ne samo zbog njegovih osobina pojačivanja viskoznosti, već i zbog interakcija hitosana sa negativno naelektrisanim mucinima na površini oka (Wadhwa, Paliwal et al., 2009, Chitosan and its role in ocular therapeutics, Mini Rev Med Chem (9): 1639-1647). Pored toga, hitosan ima antimikrobno dejstvo protiv raznih patogenih mikroorganizama (Felt, Carrel et al., 2000, Chitosan as tear substitute: a wetting agent endowed with antimicrobial efficacy, J Ocul Pharmacol Ther (16): 261-270; Dai, Tanaka et al., 2011, Chitosan preparations for wounds i burns: antimicrobial and wound-healing effects, Expert Rev Anti Infect Ther (9): 857-879).
[0009] Opisano je da tiolacija polimera dalje povećava njihove mukoadhezivne osobine. EP 1126881 B1 opisuje mukoadhezivni polimer koji obuhvata najmanje jednu ne-terminalnu tiol grupu. Upotreba tioliranih polisaharida za pripremu implanta za povećanje tkiva opisana je u WO 2008/077172, u kojem su pomenuti tiolirani polimeri okarakterisani formulisanjem disulfidnih veza koje dovode do stabilizacije polimerne mreže. Prioritetna prijava WO 2008/077172, A 2136/2006, opisuje dalja polja primene za tiolirane polimere.
[0010] Opisana je modifikacija hitosana kovalentnim vezivanjem tiol grupe koja nosi ligande (tj., tiolacija). Takođe je opisano da tiolacija povećava mukoadhezivne osobine hitosana (Kast and Bernkop-Schnurch, 2001, Thiolated polymers--thiomers: development and in vitro evaluation of chitosanthioglycolic acid conjugates, Biomaterials (22): 2345-2352; Bernkop-Schnurch, Hornof et al., 2004, Tiolirani hitosans, Eur J Pharm Biopharm (57): 9-17; Bernkop-Schnurch, 2005, Thiomers: a new generation of mucoadhesive polymers, Adv Drug Deliv Rev (57): 1569-1582; Schmitz, Grabovac et al., 2008, Synthesis and characterization of a hitosan-N-acetil cistein conjugate, Int J Pharm (347): 79-85). Antimikrobna efikasnost nekih tioliranih hitosana je takođe procenjena (WO2009132226
A1 ; WO2009132227 A1 ; WO2009132228 A1 ; Geisberger, Gyenge et al., 2013, Chitosan-thioglikolic acid as a versatile antimikrobial agent, Biomacromolecules (14): 1010-1017). Gerhard Garhöfer et al. (Cataract & Refractive Surgery Today Europe, 2011) opisuju hitosan-N-acetilcistein kapi za oči sa visokim vremenom zadržavanja na površini oka.
[0011] N-acetilcistein (NAC) može se dobiti iz tiol grupe koja nosi amino kiselina L-cistein. NAC je redukujući agens sa antioksidativnom aktivnošću. Takođe je dobro poznato da poseduje sposobnost da smanji mukoznu sposobnost smanjivanjem disulfidnih veza mucina. Zbog ovih mukolitičkih osobina, NAC se široko koristi za redukovanje mukozne viskoznosti kod bronho-pulmonarnih poremećaja sa prekomernom proizvodnjom sluzi. Topikalne oftalmološke formulacije koje sadrže mukolitički i antioksidans agens NAC koriste se za lečenje bolesti rožnjače kao što je disfunkcija Meibomovih žlezda i DES (Lemp, 2008, Management of dry eye disease, Am J Manag Care (14): S88-101; Akyol-Salman, Azizi et al., 2010, Efficacy of topical N-acetylcysteine in the treatment of meibomian gland dysfunction, J Ocul Pharmacol Ther (26): 329-333). EP 0551848 B1 opisuje oftalmološku farmaceutsku kompoziciju za lečenje DES koja sadrži NAC u koncentraciji između 3% i 5% (w/v) i polivinilalkohol.
[0012] Opisano je da tiolacija hitosana upotrebom NAC povećava vreme njegovog zadržavanja na oku na primeru zečijih očiju u poređenju sa ne-tioliranim hitosanom (Dangl, Hornof et al., 2009, In vivo Evaluation of Ocular Residence Time of 124I-labelled Thiolated Chitosan in Rabbits Using MicroPET Technology, ARVO Meeting Abstracts (50): 3689).
[0013] Opisano je da N-(N-acetilcisteinil-)hitosan HCl ima neke dobrobitne efekte na površini oka u modelima suvog oka koji se ispituje na mišjem oku (Hongyok, Chae et al., 2009, Effect of chitosan-N-acetylcysteine conjugate in a mouse model of botulinum toxin B-induced dry eye, Arch Ophthalmol (127): 525-532; Hornof, Goyal et al., 2009, Thiolated Chitosan for the Treatment of Dry Eye - Evaluation in Mice Using the Controlled-Environment Chamber Model, ARVO Meeting Abstracts (50): 3663).
[0014] Dalje objave koje daju pregled i diskutuju o raznim upotrebama tioliranih polimera, navedene su u nastavku:
Hornof et al., Mucoadhesive ocular insert based on thiolated poly(acrylic acid): development and in vivo evaluation in humans; Journal of Controlled Release 89 (2003) 419-428; Hornof, M., In vitro and in vivo evaluation of novel polymeric excipients in the ophthalmic field, Thesis, University of Vienna, 2003; Bernkop-Schnurch et al., Permeation enhancing polymers in oral delivery of hydrophilic macromolecules: Thiomer/GSH systems, J. Contr. Release 93(2003) 95-103; M. Hornof et al., In Vitro Evaluation of the Permeation Enhancing Effect of Polycarbophil-Cystein Conjugates on the Cornea of Rabbits, J. Pharm. Sci.91 (12) 2002, 2588-2592; and Clausen et al., The Role of Glutathione in the Permeation Enhancing Effect of Thiolated Polymers, Pharm. Res.19 (5) 2002, 602-608; Yamashita et al., Sinteza and Evaluation of Thiol Polymers, J. Macromol.Sc.26 (1989), 9, 1291-1304; Zheng et al., Disulfide Cross-Linked Hyaluronan Hydrogels, Biomacromolecules 3 (6) 2002, 1304-1311; Wang et al., Chitosan-NAC Nanoparticles as a Vehicle for Nasal Absorption Enhancement of Insulin, J. Biomed Mater Res Part B: Appl Biomater 88B: 150-161, 2009; WO 2008/094675 A2; US 5,412,076 A.
[0015] Međutim, do sada nije opisana formulacija koja sadrži tiolirani hitosan koja ispunjava zahteve dugoročne stabilnosti, tolerantnosti, bezbednosti, efektivnbosti u lečenju sindroma suvog oka i uz poboljšanu usaglašenost sa pacijentom. Kao rezultat neefikasnosti i nepraktičnosti trenutnih terapija koje se primenjuju u lečenju suvog oka, preostaje potreba za postupkom za lečenje sindroma suvog oka koji ispunjava gore navedene zahteve.
KRATAK PREGLED PRONALASKA
[0016] Ovaj pronalazak odnosi se na sterilni vodeni oftalmološki rastvor koji sadrži 0.05% do 0.5% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosana ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u rastvoru nosača, pri čemu N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ima sadržaj grupa slobodnih tiola u količini od 80 µmol/g polimera do 280 µmol/g polimera.
[0017] Pored toga, ovaj pronalazak se odnosi na kontejner koji obuhvata pomenuti vodeni oftalmološki rastvor.
[0018] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na pomenuti vodeni oftalmološki rastvor u prevenciji ili lečenju sindroma suvog oka znakova/simptoma suvog oka. Shodno tome, ovaj pronalazak je takođe usmeren na pomenuti oftalmološki rastvor u postupku lečenja pomenutih bolesti i simptoma kod subjekta kome je takvo lečenje potrebno. Ovaj postupak obuhvata fazu u kojoj se prvo identifikuje subjekt koji je oboleo od sindroma suvog oka ili ima simptome suvog oka, a zatim se na tom subjektu primenjuje efektivna količina vodenog oftalmološkog rastvora koji sadrži N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0019] Određenije, ovaj pronalazak pogodan je za lečenje znakova/simptoma suvog oka izazvanih sa ili povezani sa jednim ili više od keratoconjunctivitis sicca (KCS), suvo oko povezano sa starenjem, Stevens-Johnson sindrom, Sjogren-ov sindrom, očni cicatrični pemfigoid, povreda rožnjače, infekcija, Riley-Dayov sindrom, kongenitalna alacrima, PRK, LASEK i/ili LASIK tretmani, alergijski konjuktivitis, blefaritis i disfunkcija Meibomovih žlezda, poremećaji ili deficijencije u ishrani (uključujući deficijenciju vitamina), farmakološki sporedni efekti, razaranje žlezda i tkiva, autoimuni i drugi imunodeficijenti poremećaji, i nesposobnost treptanja koja se javlja kod komatoznih pacijenata. Takođe su uključeni simptomi suvog oka izazvani spoljnom izloženošću česticama iz vazduha, dimu, smogu, i izuzetno suvom vazduhu; kao i netolerancija na kontaktna sočiva i očni stres izazvan radom na računaru ili igranjem igrica na računaru.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0020]
FIG.1 prikazuje poređenje stabilnosti grupa slobodnih tiola u vodenom oftalmološkom rastvoru koji sadrži 0.1% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosan.HCl tokom dugoročnog skladištenja na 25 °C i 40% relativne vlažnosti upotrebom različitih pakovanja kako je opisano u Primeru 3. Sivi stubići označavaju sadržaj grupa tiola u različitim vremenskim tačkama (početna tačka, 1 mesec, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci, i 12 meseci) tokom skladištenja u grupi 1 (pakovanje i skladištenje sa apsorberom kiseonika), beli stubići označavaju stabilnost tiol grupe u grupi 2 (pakovanje i skladištenje bez apsorbera kiseonika).
FIG.2 prikazuje stabilnost grupa slobodnih tiola u vodenom oftalmološkom rastvoru koji sadrži 0.1% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosan.HCl tokom kratkoročnog skladištenja pojedinačnih doznih jedinica pod uslovima ambijentalnog vazduha, vlažnosti i temperature tokom 30 dana kako je opisano u Primeru 4.
FIG.3 prikazuje šematski nacrt N-(N-acetilcisteinil-)hitosan.HCl podstrukture.
FIG.4 prikazuje rezultate merenja tiol grupe (bez TCEP: sivi stubići, posle redukcije sa TCEP: beli stubići; srednje vrednosti 3 merenja sa standardnim devijacijama) za polimer 1 i polimer 6 koji su sintetizovani kako je opisano u Primeru 6 i analizirani kako je opisano u Primeru 7.
FIG.5 prikazuje rezultate određivanja dinamičke viskoznosti (bez TCEP: sivi stubići, posle redukcije sa TCEP: beli stubići) 0.5% (masenih) rastvora polimera 1 i polimera 6, koji su sintetizovani kako je opisano u Primeru 6 i analizirani kako je opisano u Primeru 7.
FIG.6, 7 i 8 prikazuju određivanje linearnog viskoelastičnog opsega za N-(N-acetilcisteinil-)hitosan.HClmucin mrežu.
FIG.9 prikazuje izračunate vrednosti površine ispod krive (0-96h) izvedene na osnovu pojedinačnih krivih za koncentracije vremenske radioaktivnosti očiju tretiranih sa<124>I-hitosan-NAC,<124>I-hitosan.HCl i Na<124>I, respektivno.
FIG.10 prikazuje vrednosti (0-72h) površine ispod krive (AUC) izračunate na osnovu pojedinačnih krivih za koncentracije vremnske aktivnosti (%AD*h/g) očiju tretiranih sa<124>I-hitosan-NAC i<124>I-obeleženim tioliranim hijaluronanom (HA-cisteamin). ;;DETALJAN OPIS PRONALASKA ;[0021] Pronalazači su neočekivano otkrili stabilan oftalmološki rastvor koji je efektivan u lečenju sindroma suvog oka ili poboljšavanju jednog ili više znakova/simptoma suvog oka kod pacijenata koji boluju od sindroma suvog oka i/ili poboljšavanju kvaliteta suznog filma kod pacijenata obolelih od bolesti suvog oka. Ovaj inventivni sterilni vodeni oftalmološki rastvor sadrži 0.05% do 0.5% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosana ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u rastvoru nosača, pri čemu N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ima sadržaj grupa slobodnih tiola u količini 80 µmol/g polimera do 280 µmol/g polimera. Poželjno, kao farmaceutski prihvatljiva so, koristi se so hidrohlorida. ;[0022] U nastavku, pojam "hitosan-NAC" označava i N-(N-acetilcisteinil-)hitosan i njegove farmaceutski prihvatljive soli. ;[0023] Postupak ovog pronalaska predstavlja poboljšanje u odnosu na trenutno najučestaliji tretman za bolest suvog oka - veštačke suze (tj., slani rastvor ili rastvori koji sadrže polimere) i anti-zapaljenske agense (ciklosporin). ;[0024] Ovaj pronalazak pogodan je za lečenje bilo kog sindroma suvog oka. U [irem smislu, sindrom suvog oka ili bolest suvog oka u skladu sa ovim pronalaskom može biti bilo koji sindrom povezan sa nestabilnošću suznog filma i/ili disfunkcijom (kao što je povećano isparavanje suza i/ili smanjena vodena sekrecija). ;[0025] Određenije, ovaj pronalazak pogodan je za lečenje bolesti suvog oka izazvanih sa ili povezanih sa jednim ili više od keratoconjunctivitis sicca, suvo oko povezano sa starenjem, Stevens-Johnson sindrom, Sjogren-ov sindrom, očni cicatrični pemfigoid, povreda rožnjače, infekcija, Riley-Day-ov sindrom, kongenitalna alacrima, PRK, LASEK i/ili LASIK tretmani, alergijski konjuktivitis, blefaritis i disfunkcija Meibomovih žlezda, poremećaji ili deficijencije u ishrani (uključujući deficijencije vitamina), farmakološki sporedni efekti, razaranje žlezda i tkiva, autoimuni poremećaji, imuno-deficijentni poremećaji, i nesposobnost treptanja koja se javlja kod komatoznih pacijenata. Takođe su uključeni simptomi suvog oka izazvani spoljnom izloženošću česticama iz vazduha, dimu, smogu, i izuzetno suvom vazduhu; kao i netolerancija na kontaktna sočiva i očni stres izazvan radom na računaru ili igranjem igrica na računaru. ;[0026] Kako je navedeno u pozadini ovog pronalaska, postoji i druge bolesti koje imaju visok stepen komorbidnosti sa bolešću suvog oka: Alergijski konjuktivitis (sezonski i hronični), blefaritis i disfunkcija Meibomovih žlezda. Ova stanja utiču na kvalitet i stabilnost suznog filma, što rezultuje kao znaci i simptomi suvog oka. ;[0027] Postupci laserske korekcije vida kao što je fotorefraktivna keratektomija (PRK), lasersko potpomognuta subepitelna keratektomija (LASEK) i lasersko potpomognut in situ keratomileusis (LASIK) takođe negativno utiču na funkcionalnost suznog filma i često izazivaju (privremenu) bolest suvog oka. ;[0028] Oftalmološko rešenje u postupku lečenja obuhvata faze: (i) identifikovanja subjekta koji boluje od bolesti suvog oka; i (ii) nanošenje na oči tog subjekta vodenog oftalmološkog rastvora koji obuhvata vodeni oftalmološki rastvor koji sadrži hitosan-NAC; pri čemu je pomenuta bolest suvog oka izazvana sa ili povezana sa jednom ili više bolesti, sindromia i stersnih faktora koji su prethodno pomenuti. ;[0029] Značajna prednost formulacije ovog pronalaska je u tome što, nakon jednog nanošenja na oko subjekta, hitosan-NAC ima efekat restoracije na debljinu suznog filma čak do 24h. To znači da taj subjekt ne mora da konstantno nanosi proizvod na oko što je neophodno u slučaju terapije kojima se zamenjuju suze, kao šro je kada se koriste veštačke suze. Dnevna topikalna doza vodenog oftalmološkog hitosan-NAC rastvora, efektivna da redukuje simptome suvog oka i/ili da poboljša kompoziciju suznog filma, može se podeliti između jedne ili nekoliko primena jedinične doze. Subjekt bi koristio proizvod po potrebi, ali uopšteno to ne bi bilo češće od dva puta dnevno i u mnogim slučajevima proizvod bi se koristio samo jednom dnevno. Poželjan režim za hitosan-NAC rastvor ovog pronalaska je jedna kap 0.1% (masenih) rastvora po oku jednom dnevno. Na taj način, značajna prednost formulacije ovog pronalaska je da može biti proizvod za jedno dnevno nanošenje i obezbedio bi bolju usaglašenost sa pacijentom. ;[0030] Nakon lečenja ovim postupkom, jedan ili više znakova/simptoma suvog oka smanjeni su ili ublaženi kod subjekta. Simptomi suvog oka uključuju suvoću, peckanje, svrab oka, nelagodnost u oku, fotofobiju, osećaj prisutnosti stranog tela, zamućeni vid, hrapavost, i poremećaj vida i/ili gubitak istog, uključujući zamućen vid, smanjena brzina čitanja, fotofobija, i gubitak oštrine vida. Znaci suvog oka procenjuju se merenjem kao što je: kornealno i/ili konjunktivalno bojenje (upotrebom fluoresceina, lizamin zeleno ili ružičasto Bengal boje), Schirmer-ovo ispitivanje trakama, ispitivanje nitima Zone-Quick, osmolaritet suznog filma, vreme prekida suze i visina meniskusa. ;[0031] Jedan razlog zbog kog se poboljšavaju znakovi i/ili simptomi DES upotrebom formulacije ovog pronalaska je mogućnost restorativnog efekta formulacije na debljinu očnog suznog filma, koji može biti izazvan hemijskom interakcijom tioliranog hitosana sa mucinima na površini oka ili prisustvom zaštitne obloge na površini oka koja je formirana umrežavanjem hitosana-NAC nakon nanošenja na površinu oka, ili zbog kombinacije oba efekta. ;[0032] "Efektivna količina" vodenog oftalmološkog rastvora koji sadrži hitosan-NAC polimer koja se primenjuje na subjektu je neka količina efektivna da redukuje kliničke znake i/ili simptome bolesti suvog oka. Ova količina je 0.05% do 0.5% (masenih) hitosana-NAC polimer, u rastvoru nosača. ;[0033] Pri količini ispod 0.05%, hitosan-NAC je pri toliko niskoj koncentraciji da se ni jedan klinički efekat ne javlja kod pacijenta. Sa znatno više od 0.5%, tolerancija pacijenta je ugrožena i počinje da oseća efekte, a bilo koji efekti za ojačavanje prožimanja hitosana postaju naglašeniji. Koncentracija hitosanNAC u vodenom oftalmološkom rastvoru je poželjno 0.05 do 0.3% (masenih), poželjnije 0.05 do 0.2% (masenih), najpoželjnije 0.08 - 0.16% (masenih). Pri koncentraciji znatno ispod 0.05%, mukoadhezivne osobine i samim tim klinički efekti, nisu tako naglašeni. Pri koncentraciji znatno višoj od 0.3%, visoka viskoznost hitosan-NAC formulacije dovodi do formiranja "grudvica" nakon nanošenja u oko, i rastvor se ne raspoređuje ravnomerno na površinu oka. Rastvori hitosana-NAC u koncentracionom opsegu od 0.05% do 0.3% ravnomerno su raspoređeni na površinu oka kako je pokazano in vivo ispitivanjima sa jod-<124>radioobeleženi hitosan-NAC (videti primere 9 i 10). Koncentracija hitosana-NAC u vodenom oftalmološkom rastvoru je najpoželjnije oko 0.1% jer su tada i klinički efekat i tolerantnost pacijenta optimalni. ;[0034] Veliki pocenat grupa tiola vezanih na hitosan-NAC koji su prisutni u vodenom oftalmološkom rastvoru potrebno je da budu u obliku grupa slobodnih tiola, što znači, ne-umreženih tiola kako je definisano u nastavku. Značajno je da većina ovih grupa tiola ostane slobodna kako bi reagovala samo nakon nanošenja na površinu oka. U nekim slučajevima, količina grupa slobodnih tiola može biti veoma niska, a da se i dalje obezbedi neki farmaceutski benefit na oko kada se nanosi. Hitosan-NAC polimer u formulaciji ovog pronalaska ima sadržaj grupa slobodnih tiola u količini od 80 µmol/g polimera do 280 µmol/g polimera; poželjno sa opsegom grupa slobodnih tiola od oko 105 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, poželjnije od 110 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera i najpoželjnije od poželjno 140 do 250 µmol/g polimera. ;[0035] Pri koncentraciji grupa slobodnih tiola znatno nižoj od 80 µmol/g polimera, interakcije između hitosan-NAC i mucina su slabe u mogu se uporediti sa nemodifikovanim hitosanom HCl, međutim pri veoma visokim koncentracijama grupe slobodnih tiola od 300 µmol/g i više, fizičkohemijske osobine jezgra polimernog hitosana menjanju se do te mere da taj polimer nije koristan u pripremi vodenog oftalmološkog rastvora zbog svog smanjenog katjonskog karaktera i ograničene rastvorljivosti u vodi. ;[0036] Ta količina grupa slobodnih tiola imobilisanih na hitosan-NAC mora biti prisutna kada je oftalmološka formulacija ovog pronalaska spremna za nanošenje u oči pacijenta koji boluje od suvog oka. To znači da grupe slobodnih tiola prisutne u vodenom oftalmološkom rastvoru ovog pronalaska moraju da prežive relativno duga vremena skladištenja. Zbog toga, dobijeni proizvod za tretiranje suvog oka mora biti stabilan i zadržati prethodno navedene grupe slobodnih tiola tokom najmanje oko 12 meseci, poželjnije najmanje oko 18 meseci, a čak poželjnije najmanje oko 24 meseci. ;[0037] Ta količina grupa slobodnih tiola imobilisanih na hitosan-NAC u vodenom oftalmološkom rastvoru može se odrediti na poznat način od strane stručnjaka iz ove oblasti, kao što je putem Ellmanovog reagensa (videti primer 1). ;[0038] Pored činjenica da je visoka količina grupa slobodnih tiola u hitosan-NAC polimeru u vodenom oftalmološkom rastvoru značajna, niska količina umreženih tiola (disulfida) na hitosan-NAC polimer u rastvoru ovog pronalaska takođe je poželjna. Tokom pripremanja i skladištenja vodenog oftalmološkog rastvora, može doći do umrežavanje grupa tiola imobilisanih na hitosan-NAC. Niska količina umreženih tiola prisutnih u ovoj formulaciji je poželjan parametar hitosan-NAC polimerne formulacije ovog pronalaska. ;[0039] Prema tome, prema poželjnom primeru izvođenja ovog pronalaska, količina umreženih grupa tiola u N-(N-acetilcisteinil-)hitosanu iznosi 30% ili manje od u njemu ukupnih grupa tiola, poželjno 25% ili manje, najpoželjnije 15% ili manje. ;[0040] Naročito, u ovom poželjnom primeru izvođenja, količina umreženih grupa tiola u N-(N-acetilcisteinil-)hitosanu iznosi 30% ili manje od u njemu ukupnih grupa tiola, poželjno 25% ili manje, najpoželjnije 20% ili manje nakon skladištenja tog rastvora tokom najmanje 12 meseci na sobnoj temperaturi. ;[0041] Ukoliko je količina umreženih grupa tiola prisutnih u formuli previsoka, osobine vodenog oftalmološkog rastvora mogu se promeniti izvan poželjnih parametara, na primer, viskoznost vodenog oftalmološkog rastvora može postati previsoka da bi bila pogodna za kapi za oči. ;[0042] Kako je u nastavku objašnjeno detaljnije, pronađeno je da je moguće proizvesti hitosan-NAC grupe tiola koji nisu ili su samo minimalno umrežene, kao što je sa količinom umreženih grupa tiola od manje od 5%, poželjno 4% ili manje od ukupne grupe tiola. Naročito ako je takav hitosan-NAC uposlen u proizvodnji oftalmološkog rastvora ovog pronalaska, grupe slobodnih tiola teže da budu stabilne tokom celog životnog ciklusa tog rastvora: ;Na taj način, pronađeno je da nakon upotrebe takvog hitosan-NAC tokom proizvodnje formulacije, povećanje umreženih grupa tiola je < 10% od količine grupa slobodnih tiola koja je prvenstveno prisutna na hitosan-NAC sirovom materijalu. Pored toga, tokom skladištenja tog rastvora preko 12 meseci ili čak 18 meseci, povećanje umreženih grupa tiola je < 15% količine grupa slobodnih tiola koja je prvenstveno prisutna u formulaciji. Konačno, čak iako je drugi kontejner tog rastvora (kako je definisano u nastavku) koji obezbeđuje barijeru protiv kiseonika otvoren, 30 dana nakon otvaranja, povećanje umreženih grupa tiola je < 15% u odnosu na količinu grupa slobodnih tiola koja je prvenstveno prisutna u formulaciji pre otvaranja. ;[0043] Suštinski, oftalmološka formulacija tioliranog hitosana, prema ovom pronalasku, pripremljena je u skladu sa sledećim fazama: ;1. Hitin je izolovan iz oklopa ljuskara, kao što su oklopi račića ili snežne krabe, ;2. Hitosan je priprimljen od hitina putem hemijskog procesa koji je dobro poznat u struci kao, na primer alkalna deacetilacija; ;3. Hitosan je tioliran kovalentnim vezivanjem veznika koji nosi tiol, kao što je upotrebom N-acetilcisteina kako je ovde navedeno; ;4. Hitosan-NAC zatim se formuliše u obliku vodenog oftalmološkog rastvora kako je ovde navedeno; i ;5. Vodeni oftalmološki rastvor koji sadrži hitosan-NAC zatim se smešta u pogodan kontejner koji obezbeđuje njegovu stabilnost, kako je ovde navedeno. ;;[0044] Kako je ovde detaljno opisano, hemijski, hitosan je polikatjonski biopolimer sa povoljnim biološkim osobinama kao što je visoka biokompatibilnost i niska toksičnost. Izvor sirovih materijala za proizvednju hitosana za formulaciju ovog pronalaska nije kritičan dokle god je dobijeni hitosan dovoljno čist i bez kontaminanata. Na primer, hitosan se takođe može proizvesti od ne-životinjskog izvora. ;Hitosan ovog pronalaska može se obraditi raznim postupcima dokle god hitosan ima osobine potrebne i navedene u ovoj specifikaciji. Najčešće, sirovi materijal za hitosan dolazi od hitina u oklopu ljuskara. Hitin se može dobiti tokom sakupljanja ljuskarskih izvora hrane, kao što je jastog, rakovi i škampi. Jedan poželjan izvor sirovog materijala hitina za hitosan obrađen i primenjen u formulaciji prema ovom pronalasku je iz oklopa snežne krabe (Chionoecetes opilio). Razni izvori ljuskara mogu se koristiti za dobijanje hitina radi pripreme hitosana dokle god je adekvatno. Priprema hitosana iz bioloških izvora sirovih materijala dobro je poznata i opisana u brojnim naučnim publikacijama, na primer (Chang, Tsai et al., 1997, Heterogeneous N-deacetylation of chitin in alkaline solution, Carbohydr Res (303): 327-332; Dutta, Dutta et al., 2004, Chitin and chitosan: Chemistry, properties and applications, J Sci Ind Res (63): 20-31). ;[0045] Hitosan-NAC može biti sintetizovan reagovanjem hitosana sa veznikom koji nosi tiol grupu. ;Postupci za tiolaciju su opisani u brojnim naučnim publikacijama, na primer (Seki, Aoi et al., 1999, Partially deacetylated chitin or chitosan derivative with selectively substituted free amino group by amino acid and peptide and having substantially no substituted hydroxide group, and its proizvesti, JP2000-302803; Bernkop-Schnurch, Hornof et al., 2004, Thiolated chitosans, Eur J Pharm Biopharm (57): 9-17; Schmitz, Grabovac et al., 2008, Sinteza and characterization of a chitosan-N-acetyl cysteine conjugate, Int J Pharm (347): 79-85; Zhu, Su et al., 2012, Sinteza of thiolated chitosan and preparation nanoparticles with sodium alginate for ocular drug delivery, Mol Vis (18): 1973-1982). ;[0046] Hitosan-NAC koji se koristi u ovom pronalasku mora biti u vodi rastvoran u koncentracionom opsegu korisnom za pripremu vodenog oftalmološkog rastvora, a dobijeni rastvori moraju biti bistri i bez boje. Formiranje soli hitosana-NAC sa organskim ili neorganskim kiselinama povećava rastvorljivost hitosana u vodi. Pogodne soli tioliranog hitosana ovog pronalaska uključuju bilo koje farmaceutski prihvatljive soli sa organskim kiselinama kao što je sirćetna, limunska, mravlja i vinska kiselina, kao i mineralne kiseline kao što su HCl i H2SO4. Hitosan-NAC hidrohloridna so je poželjan primer izvođenja ovog pronalaska. ;[0047] Ono što je važno jeste da se takve reakcione putanje i reakcioni uslovi koriste da su nakon sinteze i prečišćavanja suštinski sve grupe tiola imobilisane na kičmi hitosana prisutne u slobodnom obliku, a ne u umreženom obliku kao disulfidi, tj. samo su minimalno umrežene. Virtualno, svi vezani tioli u tioliranom hitosanu ovog pronalaska su u obliku grupa slobodnih tiola, tj. nisu umreženi. Minimalna količina umrežavanja tokom sinteze prihvatljiva je dokle god viskoznost tioliranog hitosana ostaje unutar navedenih parametara, a njegova rastvorljivost u vodi je dovoljna za pripremu vodenog oftalmološkog rastvora. ;[0048] Pronađeno je da je moguće proizvesti hitosan-NAC sa veoma niskim ili bez ikakvog stepena umrežavanja grupa tiola izlaganjem hitosan-NAC agensu za redukovanje nakon sinteze, na primer nakon alkalne hidrolize tioacetil grupa. Redukujući agens može biti odabran iz grupe DTT, TCEP ili NaBH4, pri čemu je NaBH4poželjan. Dalje je pronađeno da bi faza redukcije trebalo da se izvodi pri povišenoj temperaturi, kao što je 30°C ili više ili poželjno 40°C ili više. Dalje, potrebno je da se koriste velike količine redukujućih agenasa, kao što je stehiometrijski odnos redukujućeg agensa prema polimeru hitosanske kičme od 2:1 ili više. ;[0049] Hitosan-NAC polimeri sa stepenom umreženih grupa tiola ood manje od 5%, poželjno 4% ili manje od ukupne grupe tiola može biti sintetizovana u skladu sa ovim primerom izvođenja. ;[0050] Viskoznost u vodenom rastvoru konačnog hitosan-NAC ovog pronalaska poželjno potpada pod određeni opseg, a pronalazači su neočekivano otkrili da viskoznost hitosan-NAC potpada pod ovaj poželjan opseg samo ako se tokom proizvodnje hitosan-NAC, hitosan-NAC obrađuje pod određenim uslovima i u okviru određenih parametara, određenije u skladu sa uslovima redukcije koji su prethodno navedeni, što vodi ka polimerima koji su samo minimalno umreženi. Viskoznost dobijenog proizvoda poželjno potpada pod prihvatljiv opseg tako da je hitosan-NAC najkorisniji u dobijenoj formulaciji kapi za oči. Tako, kinematička viskoznost (0.5% u vodi na 25°C) hitosan-NAC polimera, poželjno je unutar opsega od oko 1 do 15 mm<2>/s, poželjnije unutar opsega od oko 2 do 10 mm<2>/s. Ukoliko je viskoznost previsoka, tada se koristan rastvor kapi za oči ne može pripremiti sa poželjnim koncentracionim opsegom hitosana-NAC u formulaciji, budući da polimer ostaje kao nerastvoriva viskozna masa u kontejneru. ;[0051] Hitosan-NAC treba da bude prečišćen da bi bio koristan u formulaciji ovog pronalaska (kao što je nakon faze #3 i, naročito, nakon tretiranja hitosana-NAC sa redukujućim agensom). Hitosan-NAC bi trebalo da se opere tako da je dobijeni proizvod čist. Jedan poznat postupak je opisan Kast and Bernkop-Schnurch, 2001, Thiolated polymers - thiomers: development and in vitro evaluation of chitosanthioglycolic acid conjugates, Biomaterials (22): 2345-2352. ;[0052] Još jedan postupak bio bi pranje hitosan-NAC sa polarnim rastvaračima praćeno sušenjem kako bise ti rastvarači uklonili. Jedan poželjan rastvarač je izopropil alkohol, budući da je netoksičan, dostupan i ekonomičan, međutim, i drugi alkoholi pored izopropil alkohola takođe mogu poslužiti. To pranje se može ponoviti ukoliko je potrebno, zavisno od zapremine rastvarača koji je svaki put upotrebljen. Poželjno, faze pranja i sušenja ponavljaju se najmanje jedanput. ;[0053] Faza sušenja može se sprovesti na sobnoj temperaturi i pri standardnoj vlažnosti, ali ovaj postupak je veoma dugotrajan. Prema tome, postupak sušenja poželjno se izvodi pri povišenoj temperaturi i/ili pod sniženim pritiskom. Sušenuje hitosan-NAC poželjno se sprovodi pri povišenoj temperaturi od najmanje oko 40°C do oko 70°C i poželjno tokom najmanje oko pet sati. Poželjniji postupak sušenja sprovodi se pri tenperaturama od najmanje oko 50°C do oko 60°C tokom oko 10 do 24 sata. Jedan poželjan više-fazni postupak prečišćavanja bio bi pranje hitosan-NAC polimera tri puta izopropil alkoholom radi izdvajanja čvrste materije centrifugiranjem praćeno sušenjem na oko 60°C tokom oko 15 do 20 sati. ;[0054] Vodeni oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku može da sadrži najmanje jedan oftalmološki kompatibilan ekscipijens. Bilo koji ekscipijens koji je pogodan za, na primer, podešavanje toničnosti, viskoznosti tog rastvora ili za stabilizaciju pH, za povećavanje rastvorljivosti aktivnog sastojka, za povećanje konfora u oku nakon nanošenja, ili za stabilizaciju formulacije uopšteno, može biti uključen. ;[0055] pH vodenog oftalmološkog rastvora podešava se dodavanjem bilo koje fiziološki i oftalmološki prihvatljive pH podešavajuće kiseline, baze, ili pufera sa pH unutar opsega od oko 5.5 do oko 7. pH znatno ispod oko 5.5 bila bi izvan fiziološki prihvatljivih parametara (taj rastvor izazvao bi snažan osećaj peckanja i svraba u oku). Pri pH znatno iznad 7, formiranje stabilnog rastvora hitosan-NAC u kojem se ne taloži iz rastvora je teško. Tako, zbog jednostavnosti formulisanja stabilnog rastvora, pH ispod 7 je poželjna. Poželjna pH vodenog oftalmološkog rastvora ovog pronalaska je između oko 5.8 do oko 6.8, sa pH od 6.0 do 6.6 kao najpoželjnija. ;[0056] Primeri pogodnih kiselina koje se koriste u formulaciji ovog pronalaska su sirćetna, borna, limunska, mlečna, forforna, hlorovodnična, i slično, a primeri baza su natrijum hidrooksid, natrijum fosfat, natrijum borat, natrijum citrat, natrijum acetat, natrijum laktat, trometamin, THAM (trishidroksimetilamino-metan), i slično. Poželjan primer izvođenja ovog pronalaska je borna kiselina i natrijum boratni puferski sistem, koji takođe sadrži poliol kao što je manitol radi povećanja kapaciteta pufera pri najpoželjnijem pH opsegu od 6.0 do 6.6. ;[0057] Primeri pogodnih ekscipijenasa koji se koriste u formulaciji ovog pronalaska radi povećanja stabilnosti ove formulacije su dinatrijum etilendiamintetraacetat (Na2-EDTA), natrijum metabisulfit, manitol, polietilen glikol i slično. ;[0058] Osmolarnost topikalne oftalmološke formulacije ovog pronalaska generalno je od oko 150 do oko 400 miliosmolarnosti (mOsM), poželjnije od oko 200 do oko 350 mOsM, sa osmolarnošću od oko 250 do oko 330 mOsM kao najpoželjnije. Osmolarnost se može podesiti upotrebom pogodne količine fiziološki i oftalmološki prihvatljivog jonskog ili nejonskog agensa. Natrijum hlorid je uobičajeni osmotski agens. Ekvivalent količine jedne ili više soli izvedene od katjona kao što je kalijum, amonijum i slično i anjona kao što je hlorid, citrat, askorbat, borat, fosfat, bikarbonat, sulfat, tiosulfat, bisulfat, i slično, mogu se primeniti pored ili umesto natrijum hlorida da bi se postigla osmolarnost unutar gore navedenih opsega. Dalje, nejonski agensi kao što je manitol, dekstroza, sorbitol, glicerol, glukoza i slično takođe se mogu upotrebiti za podešavanje osmolarnosti. Natrijum hlorid i manitol su poželjni agensi za podešavanje osmotskog pritiska. ;[0059] Oftalmološka formulacija može da sadrži lubrikante za obezbeđivanje visokog nivoa konfora u oku pogodnih za regularnu upotrebu koja je potrebna u lečenju DES. Postoje mnoge vrste agenasa za lurikaciju kao što je polivinilpirolidon, polivinilalkohol, tečni polioli, hijaluronska kiselina i njihove farmaceutski prihvatljive soli, lubricin i derivati celuloze; međutim poželjni agensi su polietilen glikol i hidroksipropil metilceluloza (HPMC). ;[0060] U poželjnom primeru izvođenja, oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku sadrži sledeće ekscipijensi pored N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorida: ;Bornu kiselinu u količini od 1.0 do 16.0 mg/ml, poželjno 8 do 16 mg/ml; ;Polietilenglikol 400 u količini od 0.01 do 5.0 mg/ml, poželjno 1 do 5 mg/ml; ;Na2-EDTA u količini od 0.01 do 0.5 mg/ml; ;Manitol u količini od 0.01 do 5.5 mg/ml, poželjno 0.1 do 4 mg/ml; ;Natrijum hlorid u količini od 0.01 do 9 mg/ml, poželjno 1 do 3 mg/ml; i ;Hidroksipropil metilcelulozu u količini od 0.01 do 20 mg/ml, poželjno 1 do 3 mg/ml. ;;[0061] Oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku mora biti sterilan i može se sterilisati na bilo koji pogodan način. Jedan naročito pogodan postupak sterilizacije je sterilna filtracija. Oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku može da sadrži prezervative, kao što je benzalkonijum hlorid, iako je manje poželjan. ;[0062] Vodeni oftalmološki rastvor koji sadrži hitosan-NAC može se primeniti na oči pacijenta na bilo koji pogodan način za topikalno davanje. Poželjno je da je to u obliku vodenog rastvora kapi za oči. Ovaj rastvor može biti u kontejneru za jednokratnu upotrebu koji je sterilan do otvaranja, te tada nema potrebe za prezervativima, ili može biti u obliku kontejnera za više upotreba koji ostaje sterilabn i nakon otvaranja ili u kontejneru za više upotreba sa formulacijom koja sadrži prezervativ. ;[0063] Grupe tiola hitosan-NAC polimera teže da formiraju disulfidne veze u vodenim rastvorima, čime redukuju mukoadhezivne osobine hitosana-NAC. Otkriveno je da ovaj težnja zavisi od prisustva kiseonika u vodenom oftalmološkom rastvoru. ;[0064] Pronađeno je da je moguće stabilizovati grupe slobodnih tiola hitosan-NAC uposlenog prema ovom pronalasku u vodenom rastvoru čak i u većoj meri kada se skladišti rastvor pod uslovima bez kiseonika, ili uslovima suštinski bez kiseonika. Atmosfera bez kiseonika može biiatmosfera azota, vakuum atmosfera, ili atmosfera koju čine plemeniti gasovi. ;[0065] Tako, kada se rastvor smešta u kontejner to je potrebno izvesti u odsustvu kiseonika. Dalje, pošto se kontejner ispini vodenim oftalmološkim rastvorom ovog pronalaska, morao bi ostati bez kiseonika. ;Prema tome, ovaj pronalazak takođe se odnosi na kontejner koji održava vodeni oftalmološki rastvor bez kiseonika tokom skladištenja. Shodno tome, jedan aspekt ovog pronalaska obuhvata kontejner suštinski bez kiseonika, koji sadrži vodeni oftalmološki rastvor. Pod "suštinski bez kiseonika", podrazumeva se atmosfera sa količinom od 1.5% kiseonika ili manje. Koncentracija rastvorenog kiseonika u rastvoru tokom proizvodnje formulacije i punjena u kontejnere je ispod 1.0 mg/L, poželjnije ispod 0.5 mg/L, još poželjnije u opsegu od 0.1 mg/L. ;[0066] U poželjnom primeru izvođenja, kontejner se izrađuje od materijala koji je nepropustan za kiseonik tako da nakon punjenja, oftalmološki rastvor ostaje bez kiseonika tokom produženog vremenskog perioda. Takvi kontejneri mogu biti stakleni ili staklom obloženi polimeri, metalni ili metalom obloženi polimeri. U još jednom poželjnom primeru izvođenja, kontejner je izrađen od polimera koji u sebi sadrži apsorber kiseonika koji sprečava da kiseonik uđe u rastvor kroz zidove kontejnera. Takvi apsorberi kiseonika uključuju soli železa, sulfite, askorbinsku kiselinu, soli nezasićenih masnih kiselina, metal-poliamid komplekse ili paladijum/H2bazirane sisteme. Na primer, WO 09/32526 opisuje film sa barijernim slojem aktivnog kiseonika koji obuhvata kompoziciju za šišćenje kiseonika umešanu od termoplastične smole sa ugljenik-ugljenik dvostrukim vezama suštinski u svom glavnom lancu, so prelaznog metala, i polimernu barijeru za kiseonik sa osobinama barijere za kiseonik. ;[0067] Dalje, sam kontejner može se proizvesti od gas nepropusnog materijala sa čistačem kiseonika ugrađenim u njega i bezvazdušnimsistemom zatvaranja. ;[0068] U poželjnom primeru izvođenja, obezbeđen je prvi kontejner koji sadrži oftalmološki rastvor i drugi kontejner koji sadrži pomenuti prvi kontejner. ;[0069] Tako, na primer, kontejner koji drži oftalmološki rastvor ovog pronalaska sam je sadržan unutar gas nepropusne vrećice ili kesice. Određenije vrećica ili kesica izrađena od aluminijuma ili aluminijum laminata ili aluminijumske kompozicije može u sebi da sadrži jedan ili više podkontejnera (tj. "prvi kontejneri") koji sadrži oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku. Drugi kontejner, tj. vrećica ili kesica takođe može da sadrži dodatni apsorber kiseonika (na primer PKT KH-20 Pharmakeep® ili Stabilox® čistač kiseonika) kakv se koristi u nekim standardnim pakovanjima. Čak i u slučaju kada je vrećica zaptivena pod vakuumom ili u inertnoj atmosferi, dodavanje apsorbera kiseonika može biti potrebno da bi se uklonio višak kiseonika iz podkontejnera. Vrećica može da sadrži ili jedan ili više pojedinačnnih doznih kontejnera ili više-doznih kontejnera, na primer pet pojedinačnih doznih kontejnera po vrećići. U slučaju više doznog kontejnera, oftalmološki rastvor prema ovom pronalasku mora se sačuvati u sterilnim uslovima i u uslovima koji su suštinski bez kiseonika. ;[0070] Hitosan-NAC sadržan u kontejneru prema ovom pronalasku poželjno ima sadržaj grupa slobodnih tiola od 80 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, poželjno 105 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera nakon skladištenje od najmanje 12 meseci na sobnoj temperaturi. To znači da, prema ovom pronalasku, grupe slobodnih tiola ostaju na hitosan-NAC i da je dobijena formulacija stabilna tokom produženog vremenskog perioda. Taj vremenski period poželjno je najmanje oko 12 meseci, poželjnije najmanje 18 meseci, i čak poželjnije najmanje oko 24 meseca. Ova preferenca duge stabilnostio je usled činjenice da neki proizvodi završe kao proizvodi sa dugim vremenima skladištenja i zbog toga se odlaže njihovo stavljanje u promet i lance dostave što može da rezultuje u manje stabilnom proizvodu koji ostaje bez prihvatljivih parametara. ;[0071] Dalje, poželjno količina umreženih grupa tiola u hitosan-NAC sadržanom u kontejneru prema ovom pronalasku iznosi 30% ili manje od u njemu ukupnih grupa tiola, poželjno 25% ili manje, najpoželjnije 20% ili manje nakon skladištenja od najmanje 12 meseci, poželjnije najmanje 18 meseci. Kako je prethodno pomenuto, stabilnost grupa slobodnih tiola u rastvoru, naročito je dobra ukoliko je hitosan-NAC sa minimalnim stepenom umreženih grupa tiola upotrebljen za proizvodnju ovog rastvora. ;[0072] U gore opisanom primeru izvođenja u kojem postojhi i drugi kontejner, npr. gas nepropusna vrećica, koji sadrži jedan ili više prvih kontejnera(a), npr. jednokratni kontejneri izrađeni od LDPE, sadržaj grupa slobodnih tiola u rastvoru poželjno ostaje u opsegu kakav je definisan prema ovom pronalasku nakon otvaranja prvog kontejnera tokom najmanje 30 dana. Terapeutsko vreme potrebno za npr. 5 kontejnera je 5 dana, tako da je trajanje stabilnosti i više od dovoljnog. ;[0073] Kako je prethodno pomenuto, pronađeno je da naročito ako je hitosan-NAC sa samo minimalnim stepenom umreženih grupa tiola upotrebljen za proizvodnju oftalmološkog rastvora ovog pronalaska, grupe slobodnih tiola ostaju stabilne čak i nakon otvaranja drugog kontejnera koji obezbeđuje bariojeru kiseoniku, tj. pronađeno je da 30 dana nakon otvaranja drugog kontejnera, porast umreženih grupa tiola iznosi <15% količine grupe tiola koji su prvenstveno bili prisutni u rastvoru pre otvaranja. ;[0074] Ovaj pronalazak pre svega se odnosi na oftalmološke rastvore u lečenju humanih subjekata, ali se takođe mogu primeniti i u lečenju drugih sisara, kao što su psi i mačke, u veterinarske svrhe. ;[0075] Ovaj pronalazak dalje islustrovan primerima koji slede, koji nisu namenjeni da ograniče ovaj pronalazak na u njemi specifično opisane postupke. ;;PRIMERI ;Primer 1: Određivanje sadržaja grupe tiola ;[0076] Kvantifikacija grupe tiola bazirana je na postupku mokre hemije upotrebom 5,5'-Ditio-bis(2-nitrobenzojeve kiseline, DTNB, "Ellman-ovog reagensa"). Grupe slobodnih tiola reaguju sa reagensom pod formiranjem mešovitih disulfida, dok se jedan ekvivalent 2-Nitro-5-thiobenzojeve kiseline oslobađa. U puferovanoj alkalnoj podlozi (pH=8.05), dobijeni tiolat daje distinktivno žut rastvor, čija se apsorpcija može izmeriti fotometrički na 450nm. ;[0077] 119.0 - 121.0 mg uzoraka rastvora koji sadrži 0.1% N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid odmereni su u 1.5 ml Eppendorf sudove. Tri vrednosti određene su za svaki rastvor.25.0 mg N-acetilcisteina precizno je odmereno i rastvoreno u 25.0 ml boratnog pufera (pH 6.75). Ovaj rastvor zatim je dalje razblažen za kalibracionu krivu. Boratni pufer je upotrebljen kao blanko vrednost. U svaki rastvor fosfatni pufer pH 8.0 dodat je do konačne zapremine od 600 µl.600 µl sveže pripremljenog Ellman-ovog rastvora (koji sadrži 20 mg 5,5'-Ditio-bis(2-Nitrobenzojeve kiseline) u 100 ml fosfatnog pufera (pH 8.0)) dodat je u svaki rastvor (standardni rastvor, uzorak rastvora i blanko vrednost). Ti rastvori su dobro promešani i inkubisani tokom 1.5 h pod UV zaštitom. Nakon toga uzorci rastvora koji sadrže N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid, centrifugirani su na 13400 o/min tokom 5 minuta. Konačno 1.1 ml svakog rastvora (standardni rastvor, uzorak rastvora i blanko vrednost) transferovani su u polu mikro kivete i ispitani na 450 nm u spektrofotometru u odnosu na blanko vrednost. ;[0078] Prosečan sadržaj grupa slobodnih tiola tioliranog hitosana u uzorcima rastvora, određen je da iznosi 2.61 % (w/v) što odgovara vrednošću od 178.5 µM grupe slobodnih tiola/g polimera. ;;Primer 2: Kompozicija formulacije: ;[0079] Sledeći vodeni oftalmološki rastvor pripremljen je upotrebom N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorida sa sadržajem grupa slobodnih tiola od 158 µM/g polimera i kinematičkom viskoznošću (25°C, 0.5% vodeni rastvor) od 5.63 mm<2>/s. Svi ostali sastojci su farmaceutski aditivi. Rastvor je sterilizovan putem sterilne filtracije. ;[0080] Formulacija kapi za oči imala je sledeći sastav: ;Tabela 1 Kompozicija vodenog oftalmološkog rastvora ;;; ;;; [0081] The fizičko-hemijske osobine formulacije were within sledeći specifications: ;Tabela 2 Fizičko-hemijske osobine vodenog oftalmološkog rastvora ;;; ; ;;; [0082] Ovaj primer prikazuje da hitosan-NAC može biti formulisan prema ovom pronalasku kako bi se ispunile potrebe za oftalmološke preparate. ;;Primer 3: Dugoročna stabilnost vodenog oftalmološkog rastvora: ;[0083] ;Grupa 1: Formulacija prema ovom pronalasku koja sadrži 1 mg N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid/ml pripremljena je pod inertnim uslovima i naknadno aseptično sipana upotrebom tehnologije za zaptivno punjenje uduvavanjem u karte pet pojedinačnih doznih kontejnera izrađenih od LDPE (polietilen niske gustine) do zapremine od 0.3 ml. Svaka karta je zapakovana u aluminijumsku vrećicu koja sadrži apsorber kiseonika (PKT KH-20 Pharmakeep®). ;Grupa 2: Formulacija prema ovom pronalasku koja sadrži 1 mg N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid/ml pripremljena je, ispunjena u karte pet pojedinačnih doznih kontejnera i upakovana u aluminijumske vrećice kako je prethodno opisano, ali u ovoj grupu aluminijumske vrećice nisu sadržavale apsorbere kiseonika. ;[0084] Uzorci formulacija pripremljenih pod uslovima proizvodnje za grupu 1 i grupu 2 uskladišteni su pod kontrolisanim uslovima na temperaturi od 25°C i 40% relativnim vlažnostima tokom 18 meseci. Sadržaj grupa slobodnih tiola izmeren je kako je opisano u Primeru 1 u pravilnim vremenskim intervalima. U isto vreme, koncentracija kiseonika unutar kesice je izmerena analizatorom za gas kiseonika (PBI Dansensor CheckPoint II). Rezultati merenja tiol grupe prikazani su na FIG.1 (grupa 1: sivi stubići, grupa 2: beli stubići). Rezultati ukazuju da kada je vodena oftalmološka formulacija ovog pronalaska koja sadrži hitosan-NAC polimer uskladištena u atmosferi suštinski bez kiseonika sa maksimalnim nivoima kiseonika od manje od 1.5% (što je obezbeđeno apsorberom kiseonika), sadržaj slobodnih tiola ostaje visok, sa prihvatljivim parametrima za vremenski period od najmanje 18 meseci. Iznenađujuće, čak i kada se skladišti bez apsorbera kiseonika, sadržaj grupa tiola tog rastvora ostaje stabilan tokom vremenskog perioda od oko 1 mesec. Nakon 4 meseca, sadržaj grupa tiola i dalje ostaje unutar prihvatljivih parametara, ali je primećen snižen sadržaj grupe tiola od 20%. Nivoi kiseonika u kesicama grupe 2 su u opsegu od 3.0 do 5.7% tokom čitavog perioda skladištenja od 18 meseci. ;Primer 4: Kratkoročna stabilnost vodenog oftalmološkog rastvora nakon uklanjanja pojedinačnih doznih kontejnera iz aluminijumske vrećice ;[0085] Formulacija prema ovom pronalasku koja sadrži 1 mg N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid/ml pripremljena je pod inertnim uslovima i naknadno aseptično sipana u karte pet pojedinačnih doznih kontejnera izrađenih od LDPE (polietilen niske gustine) do zapremine od 0.3 ml upotrebom tehnologije za zaptivno punjenje uduvavanjem. Svaka karta je zapakovana u aluminijumsku vrećicu koja sadrži apsorber kiseonika (PKT KH-20 Pharmakeep®). U roku od jednog meseca nakon proizvodnje, karte su uklonjene iz vrećica i uskladištene u zatvorene preklapajuće kutije pod uslovima ambijentalnog vazduha, vlažnosti i temperature tokom 30 dana. Sadržaj grupa slobodnih tiola u formulaciji izmeren je na dan 0, dan 5, dan 12, dan 19 i dan 30. ;[0086] Rezultati su prikazani na FIG.2 (srednje vrednosti 3 serije sa standardnim devijacijama). Ovi results ukazuju da proizvod ostaje unutar poželjnih parametara tokom vremenskog perioda od 30 dana kada se skladišti u LDPE pojedinačnim doznim jedinicama u prisustvu kiseonika pod uslovima ambijentalnog vazduha. Snižena grupa slobodnih tiola nakon 30 dana iznosi oko 10%. Slični rezultati primećeni su čak i kada je aluminijumska vrećica koja sadrži karte uskladištena tokom 5 meseci na temperaturi od 40°C pre uklanjanja karti. ;;Primer 5: Sinteza N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorida ;[0087] N-(N-acetilcisteinil-)hitosan hidrohlorid polimeri (FIG.3) sa različitim sperenima tiolacije sintetizovani su kovalentnim vezivanjem N,S-diacetilcisteina sa primarnim aminima hitosana putem nukleofilne supstitucije praćeno oslobađanjem grupa slobodnih tiola u alkalnu podlogu. Različiti hitosani upotrebljeni su kao sirovi materijali za sintezu (videti Tabelu 3). Podaci o izvoru i stepenu deacetilacije obezbeđeni su od strane dobavljača. Molekulske mase su određene putem ekskluzione hromatografije po veličini (SEC)-kuplovane trostruke detekcije upotrebom Viscotek TDA305 od Malvern Instruments. Uzorci su rastvoreni u sirćetnoj kiselini 5% i izokratski izdvojeni na ViscoGEL kolonama. ;Tabela 3 Spisak specifikacija sirovih materijala hitosana ;;; ; ;;; [0088] Dobijeni stepen tiolacije bio je zavisan od masenog odnosa hitosana i aktivnog estra N'S-diacetilcistein kao i od reakcionih uslova (pH vrednost i temperatura tokom nukleofilne supstitucije). Sintetizovani su hitosan-NAC polimeri sa stepenom tiolizacije u opsegu od 40 µM/g polimera do 400 µM/g polimera. ;[0089] Za sintezu 5 različitih serija hitosana-NAC polimer navedenih u Tabeli 4, upotrebljeni su sledeći reakcioni uslovi: Hitosan sa molekulskom masom od 100 kDa do 250 kDa (dobavljač HMC+) upotrebljen je kao početni materijal. Maseni odnos između hitosan i aktivni estri N'S-diacetilcisteina iznosio je 1:1 (mas.%), a maseni odnos između hitosana i redukujućeg agensa natrijum borohidrida, iznosio je 1:2 (mas.%). Redukcija natrijum borohidridom izvedena je pri povišenoj temperaturi od oko 40°C. ;Tabela 4 Karakterizacija hitosan-NAC polimera u smislu molekulske mase i stepena tiolizacije ;;; ;;; [0090] Svi hitosan-NAC polimeri navedeni u Tabeli 4 pogodni su za pripremu vodenog oftalmološkog rastvora prema ovom pronalasku u smislu rastvorljivosti u vodi, viskoznosti i sadržaja grupa tiola. ;;Primer 6: Reakcioni uslovi za sintezu minimalno umreženog hitosan-NAC ;[0091] Kovalentno vezivanje N,S-diacetilcisteina za primarne amine hitosana praćeno je alkalnom hidrolizom tioacetil-grupa pri pH 8 ± 0.2. Dobijene intra- i intermolekulske disulfidne veze zatim su redukovane pod inertnim uslovima na 40°C upotrebom natrijum borohidrida u velikom višku (hitosan : natrijum borohidrid = 1 : 2 (mas.%)). Naknadno, višak natrijum borohidrida uništen je dodavanjem 5N HCl koja je jednovremeno generisala hitosan-NAC hidrohloridnu so pri pH 1 ± 0.1. Beličasti proizvod je istaložen 2-propanolom, izolovan centrifugiranjem i osušen u skladu sa definisanim postupkom. ;[0092] Kako je prikazano u brojnim eksperimentima, povišene temperature kao i začuđujuće visoke količine redukujućih reagenasa bili su od suštinskog značaja za kvantitativnu i reproducibilnu redukciju jer su disulfidni umreženi hitosan-NAC polimeri obrazovali hidrogelove ili postali nerastvorivi u vodenim sistemima (videti Tabelu 5). ;Tabela 5 Uslovi redukcije ;;; ;;; [0093] Jedina opcija da se potencijalno primene Polimeri 1-5 za proizvodnju vodenog oftalmološkog rastvora prema ovom pronalasku bila je da se termički degradiraju ovi disulfidni umreženi derivati na 60°C tokom više od 4 dana (zavisno od stepena i vrste (inter- i intramolekulsko) umrežavanja) kako bi se se ispunile specifikasnosti u smislu kinematičke viskoznosti 0.5 mas.% vodenog rastvora, koja je poželjno u opsegu od 1 do 15 mm<2>/s. Pored toga, postupak sušenja traje veoma dugo. Nasuprot tome, minimalno umreženi hitosan-NAC polimer Br.6 sintetizovan pod optimizovanim reakcionim uslovima potpada pod poželjan opseg viskoznosti nakon vremena sušenja od manje od 20 sati na 60°C. ;;Primer 7: Karakterizacija minimalno umreženog hitosan-NAC ;[0094] Hitosan-NAC polimeri Br.1 i 6 u skladu sa primerom 6 okarakterisani su u smislu relativnog sadržaja grupa slobodnih tiola, molekulskih masa i dinamičke viskoznosti pre i nakon selektivne i kvantitativne redukcije bilo kojih disulfida prisutnih u finalnim polimerima sa tris(2-karboksietil)fosfinom (TCEP). ;[0095] Određivanje relativnog sadržaja grupa tiola: Hitosan-NAC polimeri rastvoreni kao vodeni rastvori od 1.5% (masenih) inkubisani su sa/bez TCEP (3 mg/ml) tokom 90 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon zakišeljavanja sa IN HCl, hitosan-NAC polimeri su više puta istaloženi 2-propanolom i izdvojeni centrifugiranjem. Ostatak je rastvoren u destilovanoj vodi praćeno dodavanjem 2,2'-Ditiodipiridina koji generiše stabilni tion nakon reakcije sa grupama slobodnih tiola. Ova tautomerna supstanca mogla bi se lako kvantifikovati UV analizom na 343 nm. ;[0096] Merenja dinamičke viskoznost: Hitosan-NAC polimeri rastvoreni kao vodeni rastvori od 0.5% (masenih) inkubisani su sa/bez TCEP (2 mg/ml) tokom 90 minuta na sobnoj temperaturi. Reološka karakterizacija izvedena je putem rotacionalnog merenja pri konstantnoj brzini smicanja od 5s<-1>na 25°C. ;[0097] Merenje molekulske mase (SEC analiza): Kako bi se odredio uticaj reakcionih uslova na molekulsku masu hitosan kičme, nemodifikovana hitosan HCl so pripremljena je upotrebom identičnih reakcionih uslova za sintezu polimera 6 kako je opisano u Primeru 6, ali bez dodavanja aktivnih estara N'S-diacetilcisteina. Hitosan i Hitosan-NAC polimeri rastvoreni u sirćetnoj kiselini 5% u koncentraciji od 0.1% (masenih) inkubisani su sa/bez TCEP (1 mg/ml) tokom 90 minuta na sobnoj temperaturi. ;Molekulske mase izokratski su odvojene pro brzini protoka od 0.7 ml / min i određene trostrukom detekcijom upotrebom Viscotek TDA305 od Malvern Instruments. ;[0098] Rezultati merenja tiol grupe polimera 1 i polimera 6 prikazani su na FIG.4 (bez TCEP: sivi stubići, posle redukcije sa TCEP: beli stubići; srednje vrednosti 3 merenja sa standardnim devijacijama). Rezultati određivanja dinamičke viskoznosti 0.5% (masenih) rastvora polimera 1 i polimera 6, respektivno, prikazani su na FIG.5 (bez TCEP: sivi stubići, posle redukcije sa TCEP: beli stubići). ;[0099] Ovi rezultati ukazuju da čak i prisustvo relativno male količine disulfidnih umreženih struktura (9% svih N-acetilcistein grupa imobilizovanih na polimeru u slučaju polimera 1, bez TCEP tretiranja) ima značajan uticaj na viskoznost hitosan-NAC polimera u vodenom rastvoru, dok su minimalno umreženi hitosan-NAC sa samo oko 3% svojih grupa tiola prisutnih kao disulfidi rastvoreni kao vodeni rastvor niske viskoznosti što je pogodno za pripremu kapi za oči. ;[0100] Dodatno, veza između reoloških osobina polimera i sadržaja disulfidog umrežavanja potvrđena je SEC analizom. Minimalno umreženi hitosan-NAC polimeri (polimer 6) pokazuju blago smanjenje molekulske mase od 20 - 30% nakon kvantifikacione redukcije putem TCEP. Nakon kvantifikacione redukcije molekulska masa polimera 6 može da se uporedi sa molekulskom masom nemodifikovanog hitosan.HCl. Međutim, glavna količina delimično umreženog (9%) hitosan-NAC (polimer 1) pokazuje molekulske mase izvan granica isključivanja sa kolona, a čak je i frakcija koja se može analizirati (oko 20%) dala molekulske mase četiri puta uvećane od svoje početne mase. Nakon kvantifikacione redukcije sa TCEP, molekulska masa polimera 1 bila je u istom opsegu kao molekulska masa nemodifikovanog hitosan HCl. Kako je očekivano, reakcija nemofidikovanog hitosan.HCl sa TCEP nije dalo nikakvo smanjenje u molekulskoj masi. ;;Primer 8: Mukoadheziono ispitivanje ;[0101] Mukoadhezivne osobine hitosan-NAC polimera sa raszličitim stepenima grupa slobodnih tiola, procenjene su merenjem njihove interakcije sa izolovanim mucinima. Hitosan-NAC polimeri sintetizovani su kako je opisano u Primeru 5 i upotrebljeni da bi se pripremile vodene oftalmološke formulacije kako je opisano u Primeru 2. Nemodifikovan hitosan.HCl upotrebljen je kao kontrola. ;[0102] Vodene oftalmološke formulacije koje sadrže hitosan-NAC ili hitosan.HCl, respektivno, inkubisane su na 32°C tokom 30 min sa vodenim rastvorima izolovanih i gradijentom cezijum hlorid prečišćenih mucina iz svinjskog želuca. Finalna koncentracija polimera u svakom uzorku bila je 0.15% (masenih). Agregati koji su ostavljeni da se formiraju preko noći, uklonjeni su narednog dana iz rastvora centrifugiranjem. Nakon centrifugiranja, agregati su resuspendovani u destilovanoj vodi radi reoloških merenja. Stabilnost dobijenih suspenzija procenjena je putem testovi pomeranja oscilatorne amplitude (Rheometer MCR 101, sistem za merenje konusnih ploča) pri ugaonoj frekvenciji od 10 rad/s da bi se odredio linearni viskoelastični opseg. ;[0103] Rezultati ovog primera pokazuju da hitosan-NAC polimeri sa stepenom tiolacije u opsegu od oko 80µM do 250µM po g polimera međusobno reaguju snažno sa mucinima što je potvrđeno širokim linearnim viskoelastičnim podričjem i velikom razlikom između skladištenja modulusa G' i gubitka modulusa G". Jedan primer prikazan je na FIG.8 (sadržaj grupa slobodnih tiola 80 µmol/g). ;[0104] Gore opisani efekat zavisan je od stepena tiolacije. Nemodifikovani hitosan HCl i hitosan-NAC sa stepenom modifikacije od 40µM grupe tiola/g polimera pokazuje samo slabu interakciju sa mucinima što je potvrđeno postojoćeim i veoma uskim linearnim viskoelastičnim opsegom, respektivno. Rezultati su prikazani na FIG.6 (bez tiolacije, nemodifikovan hitosan.HCl), FIG.7 (sadržaj grupa slobodnih tiola 40 µmol/g) i FIG.8 i opisani u Tabeli 6. Samo kada je stepen tiolacije bio oko 80 µM/g polimera, hitosan-NAC počinje da pokazuje snažne mukoadhezivne osobine kako je potvrđeno snažnom interakcijom sa mucinima. ;Tabela 6 Određivanje jačine interakcije polimer-mucin ;;; ;;; Primer 9: Određivanje vremena zadržavanja na oku vodenih oftalmoloških rastvora koji sadrže 0,1% radioobeleženi hitosan-NAC nakon jednog nanošenja na oko zečeva ;[0105] Cilj ovog ispitivanja bio je da se obezbede farmakokinetički podaci<124>I obeleženog hitosan-NAC pri koncentraciji od 0.1% (masenih) nakon jedne topikalne primene test supstance u fiziološkom puferskom rastvoru na oko ženki novozelandskog belog zeca. U okviru ovog pilot ispitivanja, sve od četiri test životinje primile su jedno topikalno nanošenje<124>I -Hitosan-NAC 0.1% (masenih) u desno oko. Kao kontrole, dve životinje primile su dodatno jedno topikalno nanošenje<124>I -Hitosan-HCl 0.1% (masenih) u levo oko i a preostale dve životinje primile su puferovan<124>I-NaI u levo oko. Dinamička microPET merenja (350 - 650 keV energetski prozor, 6 ns vremenski prozor) izvedena su tokom 1 sata nakon primene test supstanci. Dodatno, 15-min statični skenovi izvedeni su na 3, 6, i 9 sati, 30-min statični skenovi izvedeni su na 24 sata, a 60-min statični skenovi izvedeni su 48, 72 i 96 sati nakon primene test supstance. Kao glavni parametar ishoda, praćene su koncentracije radioaktivnosti na mestu nanošenja. Kalibracioni faktor za konvertovanje jedinica microPET slika u apsolutne koncentracije radioaktivnosti prvi je generisan merenjem fantoma kalibracionog cilindra koji je ispunjen poznatom koncentracijom radioaktivnosti za Na<124>I rastvor. Koncentracija radioaktivne test supstance kvantifikovana je iz svake slike upotrebom softvera za analiziranje slika AMIDE2. Elipsoidno područje od interesa (ROIs) pozicionirano je na ivicu očiju na sagitalnoj transmisionoj slici, dok je oblast sa visokim preuzimanjem aktivnosti smešten u caruncle (unutrašnji ugao oka) isključena iz ROI. Iz definisanih ROIs, izračunate su krive koncentracije vremenske radioaktivnosti (TACs), koje označavaju koncentraciju radioaktivnosti (µCi/g) u funkciji vremena u tkivu definisanom putem ROI. Procenat nanete doze po gramu tkiva (%AD/g) izračunat je kao procečna koncentracija tkiva (µCi/g) podeljena sa ukupno primenjenom radiokativnošću (µCi) na početku eksperimenta. Vrednosti površina ispod krive izračunate su iz kriva koncentracije vremenske radioaktivnosti upotrebom PRISM5 softvera (GraphPad Software, La Jolla, CA). ;[0106] Kao dodatni parametar kontrole kvaliteta, sadržaj grupa tiola u<124>I obeleženom hitosan-NAC rastvoru izmeren je pre upotrebe. ;[0107] Rezultati su prikazani na FIG.9. Na<124>I je brzo nestao iz oka i teško je mogao da se zapazi 6 sati nakon primene. Jedno nanošenje 0.1% (masenih)<124>I-Hitosan-NAC rastvora dalo je povećanu aktivnost koncentracija na tretiranom oku u poređenju sa<124>I-Hitosan-HCl što ukazuje na povećanje mukoadhezivnih osobina.24 sata nakon primene, koncentracija aktivnosti u oku tretiranom sa 0.1% (masenih)<124>I-Hitosan-NAC bila je gotovo 2.2-puta viša u poređenju sa<124>I-Hitosan-HCl očima (2.16±0.36 vs 1.21±0.26% AD/g, respektivno). Ova razlika je održavana tokom sledećeg perioda opservacije tako da su 48 sati nakon primene pronađene 2.35±0.15% AD/g (<124>I-Hitosan-NAC) vs.1.06±0.30% AD/g (<124>I-Hitosan-HCl). Koncentracije aktivnosti za obe primenjene supstance zatim su se snizile i gotovo su mogl da se uporede 96 sati nakon primene. ;[0108] Određivanje sadržaja grupa tiola za<124>I obeležene hitosan-NAC rastvore koji su primenjeni za ovo ispitivanje (dva rastvora pripremljena na dva različita dana) pokazala su da je oko 110 µM i 130 µM grupe tiola/g polimera, respektivno, ostalo u slobodnom, tj.neoksidovanom obliku nakon radioobeležavanja sa Bolton-Hunter reagensom. ;;Primer 10: Poređenje vremena zadržavanja na oku vodenih oftalmoloških rastvora koji sadrže 0.1% radioobeleženi Hitosan-NAC ili 0.1% radioobeleženi HA-cisteamin nakon jednog nanošenja na oko zečeva ;[0109] Pored gore navedenog ispitivanja farmakokinetički podaci dobijeni su za<124>I-obeleženi Hitosan-NAC i<124>I-obeleženi tiolirani hijaluronan (HA-cisteamin) nakon topikalnog nanošenja test supstance pri koncentraciji od 0.1% (masenih) u fiziološkom puferskom rastvoru na oko ženki novozelandskog belog zeca. U okviru ovog ispitivanje, test subjekti primili su jedno topikalno nanošenje ili 0.1% (masenih)<124>I-HA-cisteamina (n=3) ili 0.1% (masenih)<124>I-Hitosan-NAC (n=2) u desno oko dok je levo oko ostalo netretirano. Ponovljena microPET merenja izvedena su tokom do 3 dana (72 sata) nakon primene test supstanci. Kao glavni parametar ispitivanja, praćene su koncentracije radioaktivnosti na mestu nanošenja. Prema tome, dinamička microPET merenja (350 - 650 keV energetski prozor, 6 ns vremenski prozor) izvedena su tokom 1 sata nakon primene test supstanci. Dodatno, 15-min statični skenovi izvedeni su na 6 sati, 30-min statični skenovi izvedeni su na 24 sata, i 60-min statični skenovi izvedeni su 48 sati i 72 sata nakon primene test supstance. ;[0110] Kvantitativna analiza dobijenih microPET slika izvedena je kako je prethodno opisano, a rezultati prikazani na FIG.10 dati su kao vrednosti površine ispod krive (AUC) izračunate iz krivih koncentracija vremenske radioaktivnosti (%AD*h/g). Određivanje sadržaja grupa tiola u<124>I obeleženim hitosan-NAC i
<124>I-HA-cisteamin rastvorima upotrebljenim za ovo ispitivanje, pokazalo je da oko 154 µM i 54 µM grupa tiola/g polimera, respektivno, ostaje u slobodnom, tj. neoksidizovanom obliku nakon radioobeležavanja.
Primer 11: Poređenje farmakokinetičkog ponašanja<124>I obeleženog hitosan-NAC rastvora nakon jednog nanošenja na oko zečeva
[0111] Očna distribucija<124>I obeleženih hitosan-NAC rastvora koji sadrže<124>I obeleženi hitosan-NAC u koncentracijama od 0.05%; 0.1%; 0.3% i 0.5% (masenih), respektivno, nakon jednog nanošenja, procenjena je putem kvalitativnog određivanja microPET Scan projekcionih slika sumiranih podataka u različitim vremenskim tačkama. Rezultati su navedeni u Tabeli 7.
Tabela 7 Kvalitativno određivanje očne distribucije 4 različita radioaktivno obeležena hitosan-NAC rastvora
[0112] Kvalitativna procena distribucije po površini oka za 4 različita radioaktivno obeležena hitosan-NAC rastvora, jasno pokazuje da rastvori sa koncentracijama od 0.1% i 0.3% hitosan-NAC pokazuju najbolje rezultate u pogledu ravnomerne distrubucije na površini oka zečeva tokom 24 h. Rastvor koji sadrži 0.05% brže je nestao sa površine oka. Rastvor koji sadrži 0.5% hitosan-NAC nije bio tako ravnomerno raspoređen na oku, a takođe je nestao brže sa površine oka.
Primer 12: Efekat hitosana-NAC na debljinu suznog filma kod pacijenata sa sindromom suvog oka
[0113] Cilj ovog ispitivanja bio je da se ispita efekat kapi za oči koji sadrži 0.1% hitosan-NAC (171 µmol/g grupe slobodnih tiola) na debljinu suznog filma kod pacijenata sa sindromom suvog oka nakon pojedinačnog doziranja i nakon 5 dnevnog tretmana. U tom cilju, isplanirane su 2 kohorte: U Kohorti I, hitosan-N-acetilcistein kapi za oči nanete su jednom u nasumično izabrano oko, dok je u drugo oko nanet placebo. Merenja debljine suznog filma izvedena su optičkom koherentnom tomografijom (OCT) pre nanošenja i 10 minuta, 1 sat, 2 sata, 4 sata, 8 sati, 10 sati, 12 sati i 24 sata nakon nanošenja.
Rezultati (srednja debljina suznog filma u µm, opseg u parentezi, n=16) prikazani su u Tabeli 8.
Tabela 8 Rezultati merenja debljine suznog kohorte I
[0114] U Kohorti II, 16 pacijenata je nausmično primilo hitosan-NAC kapi za oči 0.1% jednom dnevno u desno oko ili dva puta na dan u levo oko ili obrnuto. U drugo oko nanet je placebo kao drugo nanošenje. Merenja debljine suznog filma sa OCT izvedena su svaki ispitni dan pre jutarnjeg nanošenja i dan nakon poslednjeg nanošenja. Indeks očne površinske bolesti (OSDI) procenjen je kao sekundarna varijabla efikasnosti u kohorti II na skriningu i na dan 6.
[0115] Rezultati merenja debljine suznog filma u kohorti II prikazani su u Tabeli 9 (srednja debljina suznog filma (µm) za "jednodnevnu" i "dvodnevnu" grupu u Kohorti II; opseg u parentezi, n=16).
Tabela 9 Rezultati merenja debljine suznog filma kohorte II
[0116] Na osnovu regresione analize tokom čitavog 24 časovnog post-doznog perioda, povećanje u debljini suznog filma bilo je statistički značajno ukoliko se tretirana grupa kohorte I poredila sa placebo grupom (Regresiona analiza radi identifikovanja među-tretmanskih razlika tokom vremena, p<0.0001). Ovi rezultati pokazuju da hitosan-NAC kapi za oči izazivaju statistički značajno povećanje debljine suznog filma tokom vremenskog perioda od 24h, što sugeriše dugo vreme zadržavanja na rožnjači. Debljina suznog filma povraćena je do nivoa koji se javlja kod zdravih subjekata (Werkmeister, Alex et al., 2013, Measurement of tear film thickness using ultrahigh-resolution optical coherence tomography, Invest Ophthalmol Vis Sci (54): 5578-5583). U kohorti II jedno-dnevna nanošenja bila su dovoljna da se povrati debljina suznog filma i nisu bili lošija u odnosu na nanošenja dva puta dnevno.
[0117] U Kohorti II, srednji indeks bolesti površine oka pri skriningu iznosio je 38.5 i poboljšao se do 13.0 na dan 6, što odgovara smanjenju od 60.5%. To ukazuje da se subjektivna težina DES kako je procenjeno putem OSDI, poboljšala nakon pet dana tretiranja sa hitosan-NAC kapima za oči 0.1%.

Claims (20)

Patentni zahtevi
1. Sterilni vodeni oftalmološki rastvor koji obuhvata 0.05% do 0.5% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosana ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u rastvoru nosača, pri čemu N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ima sadržaj grupa slobodnih tiola u količini od 80 µmol/g polimera do 280 µmol/g polimera.
2. Oftalmološki rastvor prema zahtevu 1, pri čemu koncentracija N-(N-acetilcisteinil-)hitosana ili njegove pomenute farmaceutski prihvatljive soli u pomenutom rastvoru iznosi od 0.05 do 0.3% (masenih), poželjno od 0.05 do 0.2% (masenih), poželjnije 0.08 - 0.16% (masenih).
3. Oftalmološki rastvor prema zahtevu 1 ili 2, u kojem je pomenuta farmaceutski prihvatljiva so odabrana iz grupe koju čine soli organskih kiselina kao što je sirćetna, limunska, mravlja i vinska kiselina, i soli mineralnih kiselina kao što su HCl i H2SO4.
4. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ima sadržaj grupa slobodnih tiola u količini od 105 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, poželjno od 110 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, najpoželjnije od poželjno 140 do 250 µmol/g polimera.
5. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, u kojem količina umreženih grupa tiola u N-(N-acetilcisteinil-)hitosanu iznosi 30% ili manje od u njemu ukupnih grupa tiola, poželjno 25% ili manje, najpoželjnije 15% ili manje.
6. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, koji dalje obuhvata najmanje jedan ekscipijens odabran iz grupe koju čine borna kiselina i njene soli, soli limunske kiseline, soli sirćetnih kiselina polietilen glikol, Na2-EDTA, manitol, sorbitol, gilcerol, natrijum hlorid, natrijum metabisulfit, hidroksipropil metilceluloza, polivinilpirolidon, polivinilalkohol, lubricin, hijaluronska kiselina i njene farmaceutski prihvatljive soli ili njihove mešavine.
7. Oftalmološki rastvor prema zahtevu 6, koji obuhvata:
0.05% do 0.5% (masenih), poželjno 0.05% do 0.3% (masenih) N-(N-acetilcisteinil-)hitosana ili njegove farmaceutski prihvatljive soli;
Bornu kiselinu u količini od 1.0 do 16.0 mg/ml, poželjno 8 do 16 mg/ml;
Polietilenglikol 400 u količini od 0.01 do 5.0 mg/ml, poželjno 1 do 5 mg/ml;
Na2-EDTA u količini od 0.01 do 0.5 mg/ml;
Manitol u količini od 0.01 do 5.5 mg/ml, poželjno 0.1 do 4 mg/ml;
Natrijum hlorid u količini od 0.01 do 9 mg/ml, poželjno 1 do 3 mg/ml; i
Hidroksipropil metilcelulozu u količini od 0.01 do 20 mg/ml, poželjno 1 do 3 mg/ml.
8. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu N-(N-acetilcisteinil-)hitosan koji je upotrebljen za pripremu tog rastvora pokazuje pri koncentraciji od 0.5% u vodi na 25°C, kinematičku viskoznost unutar opsega od 1 do 15 mm<2>/s, poželjno 2 do 10 mm<2>/s.
9. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu taj rastvor pokazuje osmotski pritisak od 150 do 400 mOsM, poželjno 200 do 330 mOsM, najpoželjnije 250 do 330 mOsM.
10. Oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu taj rastvor pokazuje pH vrednost od 5.8 do 6.8, poželjno 6.0 do 6.6.
11. Kontejner koji obuhvata oftalmološki rastvor prema bilo kom od prethodnih zahteva u atmosferi koja je suštinski bez kiseonika.
12. Kontejner prema zahtevu 11, koji obuhvata prvi kontejner koji sadrži oftalmološki rastvor i drugi kontejner koji sadrži pomenuti prvi kontejner.
13. Kontejner prema zahtevima 11 ili 12, u kojem pomenuti kontejner i/ili pomenuti prvi kontejner i/ili pomenuti drugi kontejner je/su u obliku gas nepropusne vrećice, određenije vrećice izrađene od aluminijuma ili aluminijum laminata ili aluminijumske kompozicije.
14. Kontejner prema zahtevu 13, u kojem pomenuta gas nepropusna vrećica sadrži jedan ili više podkontejnera sa pojedinačnom dozom, koji sadrže pomenuti oftalmološki rastvor.
15. Kontejner prema bilo kom od zahteva 11 do 14, pri čemu pomenuti kontejner i/ili pomenuti prvi kontejner i/ili pomenuti drugi kontejner sadrži materijal koji apsorbuje kiseonik.
16. Kontejner prema bilo kom od zahteva 11 do 15, u kojem pomenuti u njemu sadržan N-(N-acetilcisteinil-)hitosan ima sadržaj grupa slobodnih tiola od 80 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, poželjno 105 µmol/g polimera do 250 µmol/g polimera, nakon skladištenja od najmanje 12 meseci na sobnoj temperaturi.
17. Kontejner prema bilo kom od zahteva 11 do 16, u kojem količina umreženih grupa tiola u N-(N-acetilcisteinil-)hitosanu iznosi 30% ili manje od u njemu ukupnih grupa tiola, poželjno 25% ili manje, najpoželjnije 20% ili manje nakon skladištenja od najmanje 12 meseci na sobnoj temperaturi.
18. Sterilni vodeni oftalmološki rastvor prema bilo kom od zahteva 1 do 10 za specifičnu upotrebu u prevenciji ili lečenju sindroma suvog oka ili znakova/simptoma suvog oka.
19. Sterilni vodeni oftalmološki rastvor za specifičnu upotrebu prema zahtevu 18, gde su pomenuti znakovi/simptomi suvog oka izazvani ili povezani sa keratoconjunctivitis sicca (KCS), suvim okom povezanim sa starenjem, Stevens-Johnson-ovim sindromom, Sjogren-ovim sindromom, očnim cicatričnim pemfigoidom, povredom rožnjače, infekcijom, Riley-Day-ovim sindromom, kongenitalnom alacrima-om, PRK, LASEK i/ili LASIK tretmanima, alergijskim konjuktivitisom, blefaritisom i disfunkcijom Meibomovih žlezda, poremećajima ili deficijencijama u ishrani (uključujući i vitamine), farmakološkim sporednim efektima, razaranjem žlezda i tkiva, autoimunim i drugim imunodeficijentim poremećajima, netolerancijom na kontaktna sočiva, spoljnom izloženošću česticama iz vazduha, spoljnom izloženošću dimu, spoljnom izloženošću smogu, i spoljnom izloženošću veoma suvom vazduhu, nemogućnošću treptanja koja se javlja kod komatoznih pacijenata, ili stresom oka koji je izazvan radom na računaru ili igranjem igrica na računaru.
20. Sterilni vodeni oftalmološki rastvor za specifičnu upotrebu prema zahtevu 18 ili 19, naznačen time, što se primenjuje ne više od dva puta dnevno, poželjno jednom dnevno.
RSP20191216 2014-05-07 2015-05-04 Vodeni oftalmološki rastvor i postupak za lečenje sindroma suvog oka RS59383B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14167381 2014-05-07
EP15718956.4A EP3139903B1 (en) 2014-05-07 2015-05-04 Aqueous ophthalmic solution and method for treating dry eye syndrome
PCT/EP2015/059674 WO2015169728A1 (en) 2014-05-07 2015-05-04 Aqueous ophthalmic solution and method for treating dry eye syndrome

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59383B1 true RS59383B1 (sr) 2019-11-29

Family

ID=50693490

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP20191216 RS59383B1 (sr) 2014-05-07 2015-05-04 Vodeni oftalmološki rastvor i postupak za lečenje sindroma suvog oka

Country Status (28)

Country Link
US (2) US10342759B2 (sr)
EP (1) EP3139903B1 (sr)
JP (1) JP6639480B2 (sr)
KR (1) KR102378391B1 (sr)
CN (1) CN106456536B (sr)
AR (1) AR100334A1 (sr)
AU (1) AU2015257874B2 (sr)
BR (1) BR112016024454B1 (sr)
CA (1) CA2947065C (sr)
CL (1) CL2016002815A1 (sr)
CY (1) CY1122122T1 (sr)
DK (1) DK3139903T3 (sr)
ES (1) ES2747808T3 (sr)
HR (1) HRP20191667T1 (sr)
HU (1) HUE046425T2 (sr)
IL (1) IL248804B (sr)
LT (1) LT3139903T (sr)
MA (1) MA39767B1 (sr)
ME (1) ME03505B (sr)
MX (1) MX377727B (sr)
PL (1) PL3139903T3 (sr)
PT (1) PT3139903T (sr)
RS (1) RS59383B1 (sr)
RU (1) RU2688935C2 (sr)
SG (1) SG11201608402WA (sr)
SI (1) SI3139903T1 (sr)
SM (1) SMT201900525T1 (sr)
WO (1) WO2015169728A1 (sr)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3140296B1 (en) 2014-05-07 2018-04-11 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolidine gpr40 modulators for the treatment of diseases such as diabetes
US9463201B2 (en) 2014-10-19 2016-10-11 M.G. Therapeutics Ltd Compositions and methods for the treatment of meibomian gland dysfunction
FR3039765B1 (fr) * 2015-08-07 2018-08-24 Oreal Procede cosmetique de traitement des matieres keratiniques
US10688122B2 (en) * 2015-09-28 2020-06-23 Azura Ophthalmics Ltd. Thiol and disulfide-containing agents for increasing meibomian gland lipid secretion
KR20180066240A (ko) 2015-10-30 2018-06-18 크로마-파르마 게젤샤프트 엠.베.하. 무균 수성 안과용 액제의 치료적 용도
RU2741912C2 (ru) 2015-10-30 2021-01-29 Крома-Фарма Гезелльшафт М.Б.Х. Применение в терапии стерильного водного офтальмологического раствора
KR20180081597A (ko) * 2015-12-22 2018-07-16 니치유 가부시키가이샤 누액 유층 안정화제 및 이것을 함유하는 점안제
US11040062B2 (en) 2016-04-14 2021-06-22 Azura Ophthalmics Ltd. Selenium disulfide compositions for use in treating meibomian gland dysfunction
ES2650981B2 (es) * 2016-07-20 2018-05-04 Ocupharm Diagnostics, Sl Preparación y uso de un extracto de Artemia salina para tratar la superficie ocular
JP6777812B2 (ja) * 2016-10-19 2020-10-28 アルコン インク． ペンダントチオール基を有する親水性コポリマー
AR110125A1 (es) 2016-11-07 2019-02-27 Croma Pharma Ges M B H Compuestos poliméricos que liberan sulfuro de hidrógeno
ES2669446B1 (es) * 2016-11-24 2019-03-13 Saiz Manuel Munoz Producto oftálmico
EP3600272A4 (en) * 2017-03-29 2021-01-13 Azura Ophthalmics Ltd. MEANS OF INCREASING LIPID SECRETION OF THE MEIBOMAN GLAND
WO2018202783A1 (en) 2017-05-03 2018-11-08 Croma-Pharma Gmbh Sterile aqueous ophthalmic solution containing n-(n-acetylcysteinyl)-chitosan for treating non-infectious corneal disorders
CN117137866A (zh) * 2018-02-28 2023-12-01 参天制药株式会社 含有地夸磷索及阳离子性聚合物的眼科用组合物
JP2020075918A (ja) * 2018-11-02 2020-05-21 千寿製薬株式会社 角膜上皮創傷治癒促進用の眼科用組成物
CN109793707B (zh) * 2019-01-30 2022-04-08 温州医科大学 一种透明质酸—n-乙酰半胱氨酸—壳聚糖滴眼液及其制备方法
JP7789659B2 (ja) 2019-08-18 2025-12-22 ピーエムアイディージー リミテッド ライアビリティ カンパニー 日焼け止め化合物用組成物及びその方法
JP6966667B2 (ja) * 2019-08-27 2021-11-17 参天製薬株式会社 ジクアホソルまたはその塩、およびポリビニルピロリドンを含有する水性眼科用組成物
WO2021101883A1 (en) * 2019-11-18 2021-05-27 Pamel Gregory J Chitosan containing compositions and methods relating to same
EP4087655A4 (en) 2020-01-10 2024-02-21 Azura Ophthalmics Ltd INSTRUCTIONS FOR COMPOSITION AND SENSITIVITY
CN114848670B (zh) * 2022-05-26 2023-06-02 青岛博益特生物材料股份有限公司 一种滴眼液及其制备方法
US20240226180A1 (en) * 2023-01-11 2024-07-11 MAM Holdings of West Florida, L.L.C. Methods and compositions for treating dry eye, tear hyperosmolarity, and other ocular conditions
US20240330778A1 (en) * 2023-04-03 2024-10-03 Halliburton Energy Services, Inc. Borehole holdup prediction using machine learning and pulsed neutron logging tool data

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1258781B (it) 1992-01-16 1996-02-29 Zambon Spa Composizione farmaceutica oftalmica contenente n-acetilcisteina e polivinilalcol
FR2692582B1 (fr) 1992-06-18 1998-09-18 Flamel Tech Sa Nouveaux derives reticulables de collagene, leur procede d'obtention et leur application a la preparation de biomateriaux.
KR19980703582A (ko) * 1995-04-04 1998-11-05 가와구치 시게키 염산 프로카테롤 수용액 제제를 보지하는 패키지 및 염산 프로카테롤 수용액 제제
EP0938896A1 (en) * 1998-01-15 1999-09-01 Novartis AG Autoclavable pharmaceutical compositions containing a chelating agent
AT406054B (de) 1998-11-04 2000-02-25 Andreas Bernkop-Schnuerch Verfahren zur verbesserung der mucoadhäsion von polymeren sowie deren herstellung und verwendung
JP2000302803A (ja) 1999-04-22 2000-10-31 Noevir Co Ltd アミノ酸及びペプチドにより遊離アミノ基が選択的に置換され、実質的に水酸基の置換のない部分脱アセチル化キチン・キトサン誘導体、及びその製造方法
ITRM20010438A1 (it) * 2001-07-23 2003-01-23 Farmigea Spa Preparato oftalmico a base di n-acetilcisteina per il trattamento della sindrome dell'occhio secco.
WO2008052037A2 (en) * 2006-10-24 2008-05-02 Alcon Research, Ltd. Packaging materials for formulations containing 2-pyrrolidone derivatives
RU2432181C2 (ru) * 2006-12-22 2011-10-27 Кромафарма Гезельшафт М.Б.Х. Применение полимеров
BRPI0807065A2 (pt) 2007-01-31 2017-03-21 Allergan Inc biomateriais novos para liberação de fármaco ocular e um método para fazer e usar os mesmos
US9452592B2 (en) 2007-08-28 2016-09-27 Cryovac, Inc. Multilayer film having an active oxygen barrier layer with radiation enhanced active barrier properties
CN102065849B (zh) 2008-04-24 2015-04-29 麦德托尼克公司 基于壳聚糖和氧化多糖的保护性凝胶
CN102883715B (zh) 2008-04-24 2014-11-12 麦德托尼克公司 包含壳聚糖的保护性组合物
EP2313104B2 (en) 2008-04-24 2020-08-26 Medtronic, Inc Thiolated chitosan gel

Also Published As

Publication number Publication date
CY1122122T1 (el) 2020-11-25
JP2017514916A (ja) 2017-06-08
HUE046425T2 (hu) 2020-02-28
BR112016024454B1 (pt) 2023-03-07
WO2015169728A1 (en) 2015-11-12
EP3139903B1 (en) 2019-07-03
EP3139903A1 (en) 2017-03-15
KR20170030471A (ko) 2017-03-17
US20190269613A1 (en) 2019-09-05
CN106456536B (zh) 2020-05-12
DK3139903T3 (da) 2019-09-09
AU2015257874B2 (en) 2019-11-28
CA2947065A1 (en) 2015-11-12
US20170224614A1 (en) 2017-08-10
SI3139903T1 (sl) 2019-10-30
RU2016143341A (ru) 2018-06-07
AU2015257874A1 (en) 2016-10-20
AR100334A1 (es) 2016-09-28
BR112016024454A8 (pt) 2021-06-29
KR102378391B1 (ko) 2022-03-24
LT3139903T (lt) 2019-09-10
US10342759B2 (en) 2019-07-09
SMT201900525T1 (it) 2019-11-13
CN106456536A (zh) 2017-02-22
ME03505B (me) 2020-04-20
MX377727B (es) 2025-03-11
PL3139903T3 (pl) 2019-12-31
JP6639480B2 (ja) 2020-02-05
RU2688935C2 (ru) 2019-05-23
BR112016024454A2 (pt) 2017-08-15
MA39767B1 (fr) 2019-10-31
CL2016002815A1 (es) 2017-05-12
SG11201608402WA (en) 2016-11-29
IL248804B (en) 2020-05-31
PT3139903T (pt) 2019-10-24
HRP20191667T1 (hr) 2019-12-13
IL248804A0 (en) 2017-01-31
MX2016013710A (es) 2017-03-31
CA2947065C (en) 2022-04-19
US10653620B2 (en) 2020-05-19
RU2016143341A3 (sr) 2018-12-25
MA39767A (fr) 2015-11-12
ES2747808T3 (es) 2020-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10653620B2 (en) Method for treating dry eye syndrome
US20230321145A1 (en) Compositions and methods of treating dry eye syndrome and other traumatized non-keratinized epithelial surfaces
TWI910236B (zh) 包含水凝膠及環孢菌素之持續釋放可生物降解淚小管內插入物
RU2741912C2 (ru) Применение в терапии стерильного водного офтальмологического раствора
US10813943B2 (en) Therapeutic use of a sterile aqueous ophthalmic solution
Agarwal et al. A Survey on Ocular in Situ Gel: An Original Medication Conveyance Framework
HK1260456A1 (en) Therapeutic use of a sterile aqueous ophthalmic solution
HK1260456B (en) Therapeutic use of a sterile aqueous ophthalmic solution