RS59457B1 - Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, metoda pripreme istih i njihove farmaceutske upotrebe - Google Patents

Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, metoda pripreme istih i njihove farmaceutske upotrebe

Info

Publication number
RS59457B1
RS59457B1 RSP20191238A RS59457B1 RS 59457 B1 RS59457 B1 RS 59457B1 RS P20191238 A RSP20191238 A RS P20191238A RS 59457 B1 RS59457 B1 RS 59457B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
formula
methyl
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Hejun Lu
Piaoyang Sun
Bin Gui
Qing Dong
Original Assignee
Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd
Jiangsu Hengrui Medicine Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd, Jiangsu Hengrui Medicine Co filed Critical Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd
Publication of RS59457B1 publication Critical patent/RS59457B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/18—Feminine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/32—Antioestrogens

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Sadašnji pronalazak se odnosi na novi derivat pirazolopirimidona ili derivat pirolotriazona i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, postupak njegove pripreme i farmaceutski preparat koji sadrži isti, kao i upotrebu istog kao antagoniste receptora za gonadotropin-oslobađajući hormon (GnRH), posebno kao terapeutsko sredstvo za bolest poput endometrioze.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Endometrioza je uobičajena ginekološka bolest zavisna od estrogena, koja se često javlja kod žena u reproduktivnom periodu, mada je mehanizam nejasan. Teška dijagnoza i nejasna patogeneza endometrioze ozbiljno ometaju otkrivanje efikasnih lečenja. Trenutno se endometrioza uglavnom dijagnostikuje laparoskopijom i leči se hirurškim zahvatom, ili se kontroliše uzimanjem kontraceptiva, agonista receptora GnRH ili progestogena da bi se smanjili nivoi telesnog estrogena.
[0003] Trenutno je stopa pojave endometrioze visoka. Statistički podaci Datamonitor 2009 pokazuju da je broj žena pacijenata obolelih od endometrioze veći od 68 miliona samo u dve države (Indija i Kina) (31,288,000 u Indiji, 37,535,000 u Kini), dok su podaci u sedam glavnih tržišta bili više od 17 miliona. Datamonitor očekuje da će tokom 2009-2018, tržište lekova za endometriozu porasti sa 764 miliona američkih dolara u 2009. godini (596 miliona dolara u Americi, 117 miliona dolara u Evropskoj uniji, 51 miliona dolara u Japanu), na 1,156 milijardi američkih dolara u 2018. godini (844 miliona dolara u SAD, 206 miliona dolara u Evropskoj uniji, 106 miliona dolara u Japanu) i prostor rasta na kineskom tržištu će biti veći.
[0004] Gonadotropin-oslobađajući hormon (Gonadoliberin; GnRH), takođe, poznat kao hormon koji oslobađa luteinizirajući hormon (LHRR), je dekapeptidni hormon (pGlu-His-Trp-Ser-Tir-Gli-Leu-Arg-Pro-Gli-NH2) sintetizovan pomoću neuroendokrinih ćelija hipotalamusa i on je centralni regulacioni faktor endokrinog reproduktivnog sistema. GnRH igra važnu ulogu u sistemu hipotalamusno-hipofizno-gonadalna osa tako što se transportuje u hipofizu kroz hipotalamusno-hipofizni portalni cirkulacioni sistem i zatim se vezuje za ćelije receptora GnRH u prednjoj hipofizi, promovišući sekreciju i oslobađanje gonadotropin luteinizujućeg hormona, kao što je luteinizirajući hormon (LH) i folikulo-stimulišući hormon (FSH), a regulisanjem normalnog razvoja jajnika i žutog tela. GnRH receptor igra njegovu regulacionu ulogu spajanjem sa G proteinom koji je sposoban da aktivira sistem sekundarnog glasnika kalcijum-fosfatidilinozitola; LH reguliše proizvodnju polnih steroida; i FSH reguliše mušku spermatogenezu i sazrevanje ženskih folikula jajnika.
[0005] LH i FSH su oslobađeni u cirkulaciju i kombinovani sa receptorima na specifičnim ćelijama jajnika ili testisa da stimulišu proizvodnju steroida. Bolesti poput endometrioze, leiomioma materice i raka prostate su pogoršane u prisustvu polnih steroida. Za kontrolu bolesti potrebno je primenjivati peptidne GnRn receptorne agoniste i antagoniste dugog dejstva.
[0006] Peptidni GnRH receptorni antagonisti uključuju linearne peptide izvedene od GnRH (US 5,171,835), ciklične derivate heksapeptida (US 2002/0065309), bicikličke derivate peptida (Journal of Medicinal Chemistry, 1993; 36: 3265-73), itd .; i peptidi agonisti receptora GnRH uključuju Leuprorelin (pGlu-His-Trp-Ser-Tir-d-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt). Međutim, postoji mnogo nerešenih pitanja za peptidna jedinjenja, uključujući oralnu apsorpciju, oblik doziranja, zapreminu doze, stabilnost leka, produženo delovanje i metaboličku stabilnost i slično. Primarni razlog da je terapija malim molekulama antagonista receptora GnRH superiornija u odnosu na postojeću terapiju na bazi peptida, uglavnom je posledica oralne primene malih molekula antagonista receptora GnRH, koja je prikladna i efikasna. Studije su pokazale da antagonisti malih molekula imaju značajnu efikasnost za hormonski zavisne bolesti kao što su endometrioza, prevremeni pubertet, rak prostate.
[0007] Indirektni mehanizam inhibicije tumora posredovan agonistima GnRH je da agonisti GnRH smanjuju izlučivanje polnog hormona, a zatim indirektno inhibiraju rast tumorskih ćelija dugoročnim uticajem na hipotalamusnu-hipofiznu-gonadalnu osu, što dovodi do smanjenja gonadotropina hipofize (FSH, LH). Dok antagonisti receptora GnRH direktno inhibiraju oslobađanje gonadotropina hipofize i tada inhibiraju rast tumorskih ćelija.
[0008] S obzirom na ograničenja peptidnih antagonista receptora GnRH, predloženi su i uvedeni u razvoj, klinička ispitivanja i marketinške faze određeni nepeptidni antagonisti receptora GnRH. Na primer, Elagolix (takođe poznat kao NBI-56418 ili ABT-620), je mali molekulski antagonist receptora GnRH koji je zajednički razvijen od strane Abbott-a i Neurocrine Biosciences Inc, a koji je trenutno u fazi III kliničkog ispitivanja i koji se uglavnom koristi za lečenje endometrioza (III faza) i leiomioma materice (faza II). Podaci iz ispitivanja endometrioze II faze u junu 2012. predstavljeni su na 94. godišnjem sastanku Endokrinog društva u Hjustonu: među 131 žena koje su patile od endometrioze koje su lečene elagolixom (150 ili 250 mg qd), depoom leuprorelina (3,75 mg sc, jednom mesečno u trajanju od 12 nedelja) ili placebom, nivo estrogena u serumu kod pacijenta u grupi za lečenje elagolixom je niži od grupe za lečenje leuprorelinom i placebo grupi. U međuvremenu, sigurnost i podnošljivost elagolix-a su dobro provereni.
[0009] Relugolix, takođe poznat kao TAK-385, je oralni antagonist receptora GnRH male molekule razvijen od strane kompanije Takeda Pharmaceutical u Japanu, koji je korišćen za lečenje endometrioze, leiomioma materice i raka prostate. Studija endometrioze i leiomioma materice je bila u fazi II kliničkog ispitivanja u 2011. godini, a studija raka prostate je bila u fazi I kliničkog ispitivanja iste godine.
[0010] Trenutno je otkrivena serija patentnih prijava koje se tiču antagonista receptora GnRH malih molekula, uključujući WO2006096785, WO2010026993, WO2011076687, WO2012175514, itd.
[0011] Uprkos brojnim značajnim istraživanjima sprovedenih u ovom polju, i dalje ostaje potreba za razvijanjem efikasnijih malih molekula antagonista receptora GnRH. Sadašnje otkriće pruža novu strukturu antagonista receptora GnRH, a otkriveno je da jedinjenja koja imaju takve strukture imaju dobru aktivnost i pokazuju odličan efekat lečenja za bolesti endokrinog reproduktivnog sistema.
SUŠTINA PRONALASKA
[0012] Sadašnji pronalazak je usmeren na obezbeđivanje jedinjenja formule (I), njegovog tautomera, mezomera, racemata, enantiomera ili dijastereomera ili njihove smeše i njegove farmaceutski prihvatljive soli:
pri čemu:
kada G je N, D je C i E je -CH-;
kada G je C, D i E su N;
R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od 6-članog arila i 6-članog heteroarila, pri čemu su aril i heteroaril svaki nezavisno, opciono dalje supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena i -OR<6>;
R<2>je C1-6alkil, gde je alkil dalje supstituisan sa fenilom, pri čemu je fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, alkila i haloalkila;
R<3>je fenil, pri čemu je svaki fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>;
R<4>je C1-6alkil;
R<5>je vodonik;
R<6>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika i alkila;
n je 1 ili 2.
[0013] U poželjnoj realizaciji prema sadašnjem pronalasku, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je jedinjenje formule (II) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
gde: n, R<1>~R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0014] U drugoj poželjnoj realizaciji iz sadašnjeg pronalaska, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je jedinjenje formule (III) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
gde: n, R<1>~R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0015] U drugoj poželjnoj realizaciji prema sadašnjem pronalasku, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<1>izabran iz grupe koja se sastoji od fenila i piridazinila, gde su svaki fenil i piridazinil opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena i -OR<6>.
[0016] U drugoj poželjnoj realizaciji prema sadašnjem pronalasku, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<2>benzil, pri čemu je benzil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, alkila i haloalkila.
[0017] U drugoj poželjnoj realizaciji prema sadašnjem pronalasku, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>fenil, pri čemu je fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O )NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0018] U drugoj poželjnoj realizaciji sadašnjeg pronalaska, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<4>metil.
[0019] U drugoj poželjnoj realizaciji prema sadašnjem pronalasku, jedinjenje formule (I) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je jedinjenje formule (IV) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova mešavina ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
gde: n, D, E, G, R<1>, R<2>, R<4>i R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
Ra je izabran iz grupe koja se sastoji od alkila i -OR<6>;
i R<6>je alkil.
[0020] Tipična jedinjenja iz sadašnjeg pronalaska uključuju, ali nisu ograničena na sledeća:
(nastavak)
ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihovu smešu ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0021] U drugom aspektu, sadašnji pronalazak obezbeđuje postupak za pripremu jedinjenja formule (I), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrži korak:
reagovanja jedinjenja formule (IA) sa aminom NH(R<4>) (CH2)nR<5>; opciono redukciju ili / i acilaciju dobijenog proizvoda da bi se dobilo jedinjenje formule (I); gde: X je halogen; n, D, E, G i R<1>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0022] Redukciona sredstva uključuju, ali nisu ograničena na vodonik ili prašak gvožđa; Sredstva za acilovanje uključuju, ali nisu ograničena na karboksilne kiseline, acil hlorid, sulfuril hlorid, halogenovani metil format, izocijanat ili trifosgen i metoksiamin.
[0023] U drugom aspektu, sadašnji pronalazak obezbeđuje postupak za pripremu jedinjenja formule (I), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrži korak od:
reagovanja jedinjenja formule (IB) sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa; opciono redukciju ili / i acilaciju dobijenog proizvoda da bi se dobilo jedinjenje formule (I);
gde: X je halogen, n, D, E, G i R<1>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0024] Alkalni reagensi uključuju, ali nisu ograničeni na organsku bazu i neorgansku bazu, pri čemu organska baza uključuje, ali nije ograničena na, trietilamin, piridin, 2,6-lutidin, natrijum metoksid, litijum heksametildisilazid, natrijum heksametildisilazid, n-butillitijum, kalijum terc-butoksid i tetrabutil amonijum bromid; neorganska baza uključuje, ali nije ograničena na, natrijum hidrid, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat, kalijum bikarbonat, cezijum karbonat, litijum hidroksid, natrijum hidroksid i kalijum hidroksid, poželjno kalijum karbonat i natrijum metoksid;
Sredstva za redukciju uključuju, ali nisu ograničena na vodonik i gvožđe u prašku;
Sredstva za acilovanje uključuju, ali nisu ograničena na karboksilne kiseline, acil hlorid, sulfuril hlorid, halogenovani metil format, izocijanat ili trifosgen i metoksiamin.
[0025] Jedinjenje formule (IA) ili formule (IB), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja se koristi kao intermedijer u dobijanju jedinjenja formule (I):
gde: X je halogen, n, D, E, G i R<1>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0026] Postupak za pripremu jedinjenja formule (IA) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, obuhvata korak:
sprovođenje reakcije halogenacije jedinjenja formule (Ib) da bi se dobilo jedinjenje formule (IA);
gde su: D, E, G i R<1>~ R<3>kao što je definisano u formuli (I).
[0027] Postupak za pripremu jedinjenja formule (IB), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji obuhvata korak:
sprovođenje reakcije ciklizacije jedinjenja formule (Ig) da bi se dobilo jedinjenje formule (IB): pri čemu: n, D, E, G i R<1>, R<3>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I);
R<b>je alkil.
[0028] Tipična jedinjenja formule (IA) uključuju, ali nisu ograničena na sledeće:
(nastavak)
ili tautomer, mezomer, racema tj. enantiomer, dijastereomer ili njihovu smešu ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0029] Jedinjenje formule (IVA), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja se koristi kao intermedijer u pripremi jedinjenja formule (IV):
gde: n, D, E, G, R<1>, R<2>, R<4>i R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0030] Tipična jedinjenja formule (IVA) uključuju, ali nisu ograničena na sledeća:
(nastavak)
(nastavak)
ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihovu smešu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0031] Postupak za pripremu jedinjenja formule (IV), koja sadrži korak od:
dalje reagovanje jedinjenja formule (IVA) sa acilirajućim sredstvom da bi se dobilo jedinjenje formule (IV);
pri čemu: n, D, E, G, R<1>, R<2>, R<4>i R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0032] Sredstva za acilovanje uključuju, ali nisu ograničena na karboksilne kiseline, acil hlorid, sulfuril hlorid, halogenovani metil format, izocijanat ili trifosgen i metoksiamin.
[0033] Sadašnji pronalazak se dalje odnosi na farmaceutski preparat, koji sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule (I), ili njegov tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili smešu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.
[0034] Sadašnji pronalazak se dalje odnosi na jedinjenje formule (I), ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihovu smešu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski preparat koji sadrži iste, za upotrebu kao lekova za lečenje ili prevenciju bolesti zavisnih od polnih hormona (npr. karcinoma prostate, raka materice, karcinoma dojke, raka hipofize itd.), koštanih metastaza karcinoma zavisnih od seksualnih hormona, hiperplazije prostate, leiomioma materice, endometrioze, fibroida materice, prevremenog puberteta, amenoreje, predmenstrualnog sindroma, dismenoreje, sindroma multilokularnog jajnika, sindroma policističnih jajnika, akni, alopecije, Alzheimerove bolesti, steriliteta, sindroma iritabilnog creva, benignih ili malignih tumora koji su hormonski nezavisni i osetljivi na LH-RH ili crvenilo; ili za upotrebu kao reproduktivnog regulatora, kontraceptiva i evokatora ovulacije; ili za upotrebu kao lekova za lečenje ili prevenciju postoperativnog recidiva raka zavisnog od polnih hormona, poželjno raka prostate, raka materice, raka dojke, endometrioze ili leiomioma maternice.
[0035] Sadašnji pronalazak se dalje odnosi na postupak za inhibiciju aktivnosti receptora GnRH, koji obuhvata primenu kod subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera, ili njihove smeše ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutskog preparata koji ih sadrži.
[0036] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na postupak lečenja bolesti povezanih sa gonadalnim hormonima, koji obuhvata primenu kod subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutskog preparata koji sadrži iste.
[0037] Sadašnji pronalazak se dalje odnosi na postupak za prevenciju ili lečenje karcinoma zavisnih od polnih hormona (karcinom prostate, rak materice, karcinom dojke, rak hipofize, itd.), koštanih metastaza raka zavisnih od polnih hormona, hiperplazije prostate, leiomioma materice, endometrioze, fibroida materice, prevremenog puberteta, amenoreje, predmenstrualnog sindroma, dismenoreje, sindroma multilokularnog jajnika, sindroma policističnih jajnika, akni, alopecije, Alzheimerove bolesti, steriliteta, sindroma iritabilnog creva, benignih ili malignih tumora koji su hormonski nezavisni i LH-RH osetljivi, ili flush, poželjno raka prostate, raka materice, karcinoma dojke, endometrioze ili leiomioma materice; ili za regulisanje reprodukcije, kontracepciju ili izazivanje ovulacije; ili za prevenciju postoperativnog recidiva raka zavisnog od polnih hormona.
[0038] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje formule (I), ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihovu mešavinu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski preparat koji sadrži iste, za upotrebu kao leka za inhibiranje aktivnosti GnRH receptora.
[0039] Predmetni pronalazak se takođe, odnosi na jedinjenje formule (I), ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihovu smešu, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutski preparat koji sadrži iste, za upotrebu kao leka za lečenje bolesti povezanih sa polnim hormonima.
[0040] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na jedinjenje formule (I), ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer, ili njihovu smešu ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili farmaceutski preparat koji sadrži iste, za upotrebu kao preventivno ili regulatorno sredstvo za hormonski zavisne bolesti, posebno; ili za upotrebu kao preventivno ili terapijsko sredstvo za kancere zavisne od polnih hormona (npr. rak prostate, rak materice, rak dojke, rak hipofize itd.), hiperplaziju prostate, leiomiom materice, endometriozu, fibroide materice, preuranjeni pubertet, sindrom amenoreje, predmenstrualni sindrom, sindrom multilokularnih jajnika, akne, alopeciju, Alzheimerovu bolest itd; ili za upotrebu kao regulator trudnoće (kontraceptiv i slično), terapijsko sredstvo za neplodnost ili regulator menstruacije; ili za upotrebu kao preventivno ili terapijsko sredstvo za sindrom iritabilnog creva; ili za upotrebu kao preventivno sredstvo kod postoperativnih recidiva raka zavisnog od polnih hormona i slično; poželjno raka prostate, raka materice, raka dojke, endometrioze ili leiomioma materice.
[0041] Farmaceutski preparati koje sadrže aktivni sastojak, mogu biti u obliku pogodnom za oralnu primenu, kao što su tablete, pastile, lozenge, vodene ili uljane suspenzije, disperzibilni praškovi ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule ili sirupi ili eliksiri. Oralni preparati mogu biti pripremljeni prema bilo kom poznatom postupku za dobijanje farmaceutskih preparata u tehnici. Takvi preparati mogu da sadrže jedan ili više aditiva izabranih iz grupe koja se sastoji od zaslađivača, korigensa ukusa, boje i konzervansa, da obezbede farmaceutsku formulaciju koja je prijatna i prijatnog ukusa. Tablete sadrže aktivni sastojak i netoksični farmaceutski prihvatljiv ekscipijens pogodan za proizvodnju tableta. Ovi pomoćni sastojci mogu biti inertni ekscipijensi, kao što su kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat ili natrijum fosfat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju kao što su mikrokristalna celuloza, unakrsno vezana natrijum karboksimetil celuloza, kukuruzni skrob ili alginska kiselina; vezivo poput skroba, želatine, polivinilpirolidona ili akacije; i lubrikans, kao što je magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete mogu biti neobložene ili obložene sredstvima poznate tehnike koja može maskirati ukus lekova ili odložiti dezintegraciju i apsorpciju leka u gastrointestinalnom traktu, pružajući tako dugotrajno oslobađanje tokom dužeg perioda. Na primer, materijal za maskiranje ukusa koji je rastvorljiv u vodi, koji može biti korišćen u sadašnjem pronalasku je takav kao što je hidroksipropil metilceluloza ili hidroksipropil celuloza, ili materijal produženog perioda koji može biti korišćen u sadašnjem pronalasku je takav kao etil celuloza, celuloza acetat butirat.
[0042] Oralne formulacije takođe, mogu biti obezbeđene kao tvrde želatinske kapsule u kojima je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, kao što su kalcijum karbonat, kalcijum fosfat ili kaolin, ili kao meke želatinske kapsule u kojima je aktivni sastojak pomešan sa nosačem rastvorljivim u vodi, kao što su polietilenglikol ili uljani medijum, na primer ulje kikirikija, tečni parafin ili maslinovo ulje.
[0043] Vodena suspenzija sadrži aktivni sastojak u mešavini sa pomoćnim sastojcima pogodnim za proizvodnju vodene suspenzije. Takav ekscipijens je sredstvo za suspendovanje, kao što je natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum alginat, polivinilpirolidon i akacija guma; disperzant ili humektans koji može biti prirodni fosfatid, kao što je lecitin, ili kondenzaciini proizvodi alkilen oksida sa masnim kiselinama, kao što je polioksietilen stearat, ili kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa alifatičnim alkoholom dugog lanca, kao što je heptadekaetilenoksi cetanol, ili kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa delovima estera dobijenih iz masnih kiselina i heksitola, kao što su polioksietilen sorbitol monooleat ili kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa delimičnim estrima dobijenim iz masnih kiselina i anhidrida heksitola, kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Vodena suspenzija takođe, može da sadrži jedan ili više konzervanasa, kao što su etilparaben ili n-propilparaben, jednu ili više boja, jedno ili više sredstava za aromatizaciju, i jedan ili više zaslađivača, kao što su saharoza, saharin ili aspartam.
[0044] Uljana suspenzija može biti formulisana suspendovanjem aktivnog sastojka u biljnom ulju, kao što je ulje kikirikija, maslinovo ulje, sezamovo ulje ili kokosovo ulje, ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljana suspenzija može da sadrži zgušnjivač, kao što je pčelinji vosak, čvrsti parafinski ili cetil alkohol. Pomenuti zaslađivači i arome mogu biti dodati da bi se dobio preparat prijatnog ukusa. Ovi preparati se mogu čuvati dodavanjem antioksidanasa kao što su butilovani hidroksianizol ili α-tokoferol.
[0045] Disperzibilni praškovi i granule pogodne za pripremu vodene suspenzije dodatkom vode obezbeđuju aktivni sastojak u mešavini sa disperzantom ili agensom za vlaženje, suspendujućim agensom ili jednim ili više konzervanasa. Pogodna sredstva za dispergovanje ili vlaženje i sredstva za suspendovanje su objašnjena primerima, onima koji su već gore pomenuti. Dodatni pomoćni sastojci mogu takođe, biti dodati poput zaslađivača, arome i boje. Ovi preparati mogu biti očuvani dodavanjem antioksidansa kao što je askorbinska kiselina.
[0046] Sadašnji farmaceutski preparat takođe, može biti u obliku emulzije ulje u vodi. Uljana faza može biti biljno ulje, kao što su maslinovo ulje ili kikirikijevo ulje, ili mineralno ulje, kao što je tečni parafin ili njihova mešavina. Pogodni emulgatori mogu biti fosfatidi koji se prirodno nalaze, kao što su lecitin iz soje, i estri ili delimični estri dobijeni iz masnih kiselina i anhidrida heksitola, kao što je sorbitan monooleat, i kondenzacioni proizvodi pomenutih delimičnih estara sa etilen oksidom, kao što je polioksietilen sorbitol monooleat. Emulzija može takođe da sadrži zaslađivač, sredstvo za aromatizaciju, konzervans i antioksidans. Sirup i eliksir mogu biti formulisati sa zaslađivačačem, kao što su glicerol, propilenglikol, sorbitol ili saharoza. Takve formulacije mogu takođ,e da sadrže demulcent, konzervans, boju i antioksidans.
[0047] Farmaceutski preparat može biti u obliku sterilnog vodenog rastvora za injektovanje. Prihvatljivi nosači i rastvarači koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Sterilni injektabilni preparat takođe, može da bude sterilna injektabilna mikroemulzija ulje u vodi u kojoj je aktivni sastojak rastvoren u uljanoj fazi. Na primer, aktivni sastojak može biti prvo rastvoren u mešavini sojinog ulja i lecitina, uljani rastvor je zatim uveden u mešavinu vode i glicerola i obrađen za formiranje mikroemulzije. Injektabilni rastvori ili mikroemulzije mogu biti uvedene u krvotok pojedinca lokalnom bolusnom injekcijom. Alternativno, može biti korisno davanje rastvora ili mikroemulzije na način da se održava konstantna cirkulišuća koncentracija sadašnjeg jedinjenja. Da bi se održala takva konstantna koncentracija, može biti korišćen uređaj za kontinuiranu intravenoznu isporuku. Primer takvog uređaja je Deltec CADD-PLUS. TM. 5400 intravenska injekciona pumpa.
[0048] Farmaceutski preparat može biti u obliku sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije za intramuskularnu i subkutanu primenu. Takva suspenzija može biti formulisana sa pogodnim agensima za dispergovanje ili agensima za vlaženje i suspendujućim agensima, kao što je gore opisano u skladu sa poznatim tehnikama. Sterilni preparat za injektovanje takođe, može biti sterilni rastvor za injektovanje ili suspenzija pripremljena u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, rastvor pripremljen u 1,3-butandiolu. Štaviše, lako se mogu koristiti sterilna fiksirana ulja kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. U tu svrhu se mogu koristiti sva usklađena fiksirana ulja, uključujući sintetički mono- ili di-glicerid. Štaviše, masne kiseline poput oleinske kiseline mogu biti korišćene u pripremi injekcije.
[0049] Sadašnje jedinjenje se može primenjivati u obliku supozitorija za rektalnu primenu. Ovi farmaceutski preparati se mogu pripremiti mešanjem leka sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensima, koji su čvrsti na običnim temperaturama, ali tečni u rektumu, i tako se otapaju u rektumu da oslobode lek. Takvi materijali uključuju kakao buter, glicerizovani želatin, hidrogenizovana biljna ulja, mešavinu polietilen glikola i estara masnih kiselina polietilen glikola sa različitim molekulskim težinama.
[0050] Stručnjacima u datoj oblasti tehnike je dobro poznato da doza leka zavisi od različitih faktora, uključujući, ali nije ograničena na sledeće faktore: aktivnost određenog jedinjenja, starost pacijenta, težine pacijenta, opšteg zdravstvenog stanja pacijenta, ponašanje pacijenta, ishranu pacijenta, vreme primene, način primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju leka i slično. Pored toga, najbolji tretman, kao što je model lečenja, dnevna doza jedinjenja formule (I) ili vrsta njegove farmaceutski prihvatljive soli, može biti verifikovana tradicionalnim terapijskim režimom.
DETALJNI OPIS PRONALASKA
[0051] Ukoliko nije drugačije navedeno, izrazi korišćeni u specifikaciji i patentnim zahtevima imaju značenja niže opisana.
[0052] "Alkil" se odnosi na zasićenu alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja uključuje C1-C20linarne i razgranate grupe lanca, poželjno alkil koji ima 1 do 10 atoma ugljenika, poželjnije alkil koji ima 1 do 6 atoma ugljenika, još poželjnije alkil koji ima 1 do 4 atoma ugljenika, i najpoželjnije metil. Reprezentativni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, sek-butil, n-pentil, 1,1-dimetilpropil, 1,2-dimetilpropil, 2,2-dimetilpropil, 1-etilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, n-heksil, 1-etil-2-metilpropil, 1,1,2-trimetilpropil, 1,1-dimetilbutil, 1,2-dimetilbutil, 2,2-dimetilbutil, 1,3-dimetilbutil, 2-etilbutil, 2-metilpentil, 3-metilpentil, 4-metilpentil, 2,3-dimetilbutil, n-heptil, 2-metilheksil, 3-metilheksil, 4-metilheksil, 5-metilheksil, 2,3-dimetilpentil, 2,4-dimetilpentil, 2,2-dimetilpentil, 3,3-dimetilpentil, 2-etilpentil, 3-etilpentil, n-oktil, 2,3-dimetilheksil, 2,4-dimetilheksil, 2,5-dimetilheksil, 2,2-dimetilheksil, 3,3-dimetilheksil, 4,4-dimetilheksil, 2-etilheksil, 3-etilheksil, 4-etilheksil, 2-metil-2-etilpentil, 2-metil-3-etilpentil, n-nonil, 2-metil-2-etilheksil, 2-metil-3-etilheksil, 2,2-dietilpentil, n-decil, 3,3-dietilheksil, 2,2-dietilheksil i razgranate izomere. Poželjnije, alkil grupa je niži alkil koji ima 1 do 6 atoma ugljenika.
Reprezentativni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, sek-butil, n-pentil, 1,1-dimetilpropil, 1,2-dimetilpropil, 2,2-dimetilpropil, 1-etilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, n-heksil, 1-etil-2-metilpropil, 1,1,2-trimetilpropil, 1,1-dimetilbutil, 1,2-dimetilbutil, 2,2-dimetilbutil, 1,3-dimetilbutil, 2-etilbutil, 2-metilpentil, 3-metilpentil, 4-metilpentil, 2,3-dimetilbutil i slično. Alkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituent grupa(e) mogu biti supstituisane na bilo kojoj dostupnoj tački veze, a supstituciona grupa(e) je(su) poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, alkinila, alkiloksil, alkiltiola, alkilamino, halogena, tiola, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterociklični alkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, okso, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0053] "Alkenil" se odnosi na alkil definisan kao gore, koji ima najmanje dva atoma ugljenika i najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, na primer, vinil, 1-propenil, 2-propenil, 1-, 2- ili 3-butenil itd., poželjno C2-10alkenil, poželjnije C2-6alkenil, i najpoželjnije C2-4alkenil. Alkenil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituciona grupa (e) je poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, alkinila, alkoksi, alkiltiola, alkilamino, halogena, tiola, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, okso, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0054] "Alkinil" se odnosi na alkil definisan kao gore, koji ima najmanje dva atoma ugljenika i najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, na primer, etinil, 1-propinil, 2-propinil, 1-, 2- ili 3-butinil itd., poželjno C2-10alkinil, poželjnije C2-6alkinil, i najpoželjnije C2-4alkinil. Alkinil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituciona grupa (e) je poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od alkila, alkenila, alkinila, alkoksi, alkiltiola, alkilamino, halogena, tiola, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, okso, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0055] "Cikloalkil" se odnosi na zasićenu ili delimično nezasićenu monocikličnu ili policikličku ugljovodoničnu grupu koja ima 3 do 20 atoma ugljenika, poželjno 3 do 12 atoma ugljenika, poželjnije 3 do 10 atoma ugljenika, još poželjnije 3 do 6 atoma ugljenika, i najpoželjnije ciklopropil. Reprezentativni primeri monocikličkog cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptil, cikloheptatrienil, ciklooktil, itd, poželjno ciklopropil, ili cikloheksenil. Policiklički cikloalkil uključuje cikloalkil sa spiro prstenom, fuzionisanim ili premoštenim prstenom. Cikloalkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituciona(e) grupa(e) je(su) poželjno jedna ili više grupa koje su nezavisno izabrane iz grupe koju čine alkil, alkenil, alkinil, alkiloksil, alkiltiol, alkilamino, halogen, tiol, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, okso, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0056] "Heterociklil" se odnosi na 3 do 20-članu zasićenu ili delimično nezasićenu monocikličnu ili policikličku ugljovodoničnu grupu koja ima jedan ili više heteroatoma izabranih iz grupe koja se sastoji od N, O i S(O)m (gde je m ceo broj između 0-2) kao atomi u prstenu, ali isključujući u prstenu -O-O-, -O-S- ili -S-S-, sa preostalim atomima prstena koji su C. Heterociklil je poželjno 3 do 12 atoma prstena, pri čemu 1 do 4 atoma su heteroatomi; poželjnije 3 do 10 atoma prstena; i najpoželjnije 5 do 6 atoma prstena. Reprezentativni primeri monocikličnog heterociklila uključuju, ali nisu ograničeni na, pirolidinil, piperidil, piperazinil, morfolinil, tiomorfolinil, homopiperazinil, piranil, tetrahidrofuranil i slično. Policiklički heterociklil uključuje heterociklil koji ima spiro-prsten, fuzioniosani prsten ili premošćeni prsten. Heterociklil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituciona(e) grupa(e) je(su) poželjno jedna ili više grupa koje su nezavisno izabrane iz grupe koju čine alkil, alkenil, alkinil, alkiloksil, alkiltiol, alkilamino, halogen, tiol, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, okso, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0057] "Aril" se odnosi na 6 do 14-člani monociklični prsten od ugljenika ili policiklički kondenzovani prsten ("fuzionisani" prstenasti sistem označava da svaki prsten deli susedni par atoma ugljenika sa drugim prstenom u sistemu), koji ima potpuno konjugovan π-elektronski sistem. Aril je poželjno 6 do 10 članova, poželjnije fenil i naftil, i najpoželjnije fenil. Aril može biti fuzionisan sa prstenom heteroarila, heterociklila ili cikloalkila, pri čemu je prsten vezan za matičnu strukturu aril. Reprezentativni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće grupe:
Aril grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituciona grupa(e) je(su) poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koju čine alkil, alkenil, alkinil, alkoksi, alkiltiol, alkilamino, halogen, tiol, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0058] "Heteroaril" se odnosi na 5 do 14-člani monociklični prsten od ugljenika ili policiklični kondenzovan prsten koji ima 1 do 4 heteroatoma odabranih iz grupe koja se sastoji od O, S i N, koji ima potpuno konjugovani π-elektronski sistem. Heteroaril je poželjno 5- do 10-člani, poželjnije 5- ili 6-člani, i najpoželjnije furil, tienil, piridinil, pirolil, N-alkil pirolil, pirimidinil, pirazinil, imidazolil, tetrazolil, i slično. Heteroaril može biti spojen sa prstenom arila, heterociklila ili cikloalkila, pri čemu je prsten vezan za matičnu strukturu heteroaril. Reprezentativni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće grupe:
Heteroaril grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituisana grupa(e) je(su) poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koju čine alkil, alkenil, alkinil, alkoksi, alkiltiol, alkilamino, halogen, tiol, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0059] "Alkoksi" se odnosi i na -O-(alkil) i na -O-(nesupstituisani cikloalkil) grupu, pri čemu su alkil i cikloalkil kao gore definisani. Reprezentativni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, ciklopropiloksi, ciklobutiloksi, ciklopentiloksi, cikloheksiloksi i slično. Alkoksi može biti supstituisan ili nesupstituisan. Kada je supstituisan, supstituent je poželjno jedna ili više grupa nezavisno izabranih iz grupe koju čine alkil, alkenil, alkinil, alkoksi, alkiltiol, alkilamino, halogen, tiol, hidroksi, nitro, cijano, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril , cikloalkoksi, heterocikloalkoksi, cikloalkiltio, heterocikloalkiltio, amino, haloalkil, hidroksialkil, karboksil, alkoksikarbonil, -OR<6>, -C(O)OR<6>, -OC(O)R<6>, -NHS(O)mR<6>, -C(O)R<6>, -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NR<7>R<8>, -OC(O)NR<7>R<8>, -C(O)NR<7>R<8>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0060] "Haloalkil" se odnosi na alkil grupu supstituisanu sa jednim ili više halogena, pri čemu je alkil kao što je gore definisano.
"Hidroksi" se odnosi na -OH grupu.
"Hidroksi alkil" se odnosi na alkil grupu supstituisanu sa hidroksi grupom, pri čemu je alkil kao što je gore definisano.
"Halogen" se odnosi na fluor, hlor, brom ili brom.
"Amino" se odnosi na -NH2grupu.
"Cijano" se odnosi na -CN grupu.
"Nitro" se odnosi na -NO2grupu.
"Okso grupa" se odnosi na a = O grupa.
"Karboksilna kiselina" se odnosi na (alkil) ili (cikloalkil) -C(O)OH.
[0061] "Sulfuril hlorid" se odnosi na (alkil) ili (cikloalkil) -S (O) m-X (halo).
"Izocijanat" se odnosi na (alkil) ili (cikloalkil) -N = C = O.
"Trifosgen" se odnosi na bis (trihlorometil) karbonat.
"Karboksil" se odnosi na -C(O)OH grupu.
"Alkoksikarbonil" se odnosi na -C(O)O (alkil) ili (cikloalkil) grupu, pri čemu su alkil i cikloalkil definisani kao gore.
[0062] "Opcionalno" ili "opciono" znači da se događaj ili okolnost koje su kasnije opisane mogu dogoditi, ali ne i neophodno. Takav izraz znači u slučaju da se događaj ili okolnost desi ili ne desi. Na primer, "heterociklička grupa opciono supstituisana alkilom" označava da alkil grupa može biti, ali nije neophodno da bude prisutna, i takva ekspresija uključuje slučaj da je heterociklička grupa supstituisana sa alkilom i heterociklička grupa nije supstituisana sa alkilom.
[0063] "Supstituisan" se odnosi na jedan ili više atoma vodonika u grupi, poželjno do 5, poželjnije 1 do 3 atoma vodonika, svaki nezavisno zamenjen sa odgovarajućim brojem supstituenata. Podrazumeva se da supstituenti postoje u njihovom jedino mogućem hemijskom položaju. Osoba koja je stručna u ovoj oblasti može da utvrdi da li je zamena moguća ili nemoguća bez ulaganja prevelikih napora eksperimentom ili teorijom. Na primer, kada se amino ili hidroksi grupa koja ima slobodan vodonik vezuje sa atomima ugljenika koji imaju nezasićene veze (poput olefinske), može biti nestabilna.
[0064] "Farmaceutski preparat" se odnosi na smešu jednog ili više jedinjenja opisanih u sadašnjem pronalasku ili njihove fiziološki / farmaceutski prihvatljive soli ili prolekove i druge hemijske komponente kao što su fiziološki / farmaceutski prihvatljivi nosači i ekscipijensi. Svrha farmaceutskog preparata je da olakša primenu jedinjenja u organizmu, što je pogodno za apsorpciju aktivnog sastojka, čime se pokazuje biološka aktivnost.
Gde su R<6>~ R<8>kao što je definisano u formuli (I).
METODA SINTEZE SADAŠNJEG JEDINJENJA
[0065] Da bi se postigao cilj sadašnjeg pronalaska, sadašnji pronalazak primenjuje sledeće tehničko rešenje:
Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera, ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadrži sledeće korake:
Šema 1
jedinjenje formule (Ia) je reagovalo sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa da bi se dobilo jedinjenje formule (Ib); jedinjenje formule (Ib) podleže reakciji halogenacije pod katalizatorom da bi se dobilo jedinjenje formule (IA), pri čemu je katalizator poželjno azobisizobutironitril, a halogenaciono sredstvo je poželjno N-bromosukcinimid; jedinjenje formule (IA) reaguje sa aminom NH(R<4>) (CH2) nR<5>da bi se dobilo jedinjenje formule (I); gde: X je halogen; n, D, E, G i R1 ~ R5 su kao što je definisano u formuli (I);
R<3>je poželjno aril, poželjnije fenil, pri čemu je aril opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0066] Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadrži sledeće korake:
Šema 2
reagovanje jedinjenja formule (Ic) podvrgnuto reakciji halogenovanja pod katalizatorom radi dobijanja jedinjenja formule (Id), pri čemu je katalizator poželjno azobisizobutironitril, a sredstvo za halogenovanje je poželjno N-bromosukcinimid; jedinjenje formule (Id) reaguje sa aminom NH (R<4>) (CH2) nR<5>da bi se dobilo jedinjenje formule (Ie); jedinjenje formule (Ie) je dalje zagrevano pod trifluorosirćetnom kiselinom da bi se dobilo jedinjenje formule (If); jedinjenje formule (If) reaguje sa trifosgenom i aminom R<1>NH2sukcesivno da bi se dobilo jedinjenje formule (Ig); jedinjenje formule (Ig) je podvrgnuto reakciji ciklizacije pod bazom da bi se dobilo jedinjenje formule (IB); jedinjenje formule (IB) je reagovalo sa R<2>X u prisustvu analkalnog reagensa da bi se dobilo jedinjenje formule (I);
gde:
X je halogen; Rb je alkil;
n, D, E, G, R<1>-R<5>su kao što je definisano u formuli (I); i
R<3>je poželjno aril, poželjnije fenil, pri čemu je aril opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0067] Postupak za dobijanje jedinjenja formule (II), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadrži sledeće korake:
Šema 3
jedinjenje formule (IIa) je zagrevano pod trifluorosirćetnom kiselinom da bi se dobilo jedinjenje formule (IIb); jedinjenje formule (IIb) reaguje sa trifosgenom i aminom R<1>NH2sukcesivno da se dobije jedinjenje formule (IIc); jedinjenje formule (IIc) je podvrgnuto reakciji ciklizacije pod alkalijom da bi se dobilo jedinjenje formule (IId); jedinjenje formule (Id) reaguje sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa za dobijanje jedinjenja formule (IIe); jedinjenje formule (IIe) podleže reakciji halogenovanja pod katalizatorom da bi se dobilo jedinjenje formule (IIA), pri čemu je katalizator poželjno azobisizobutironitril, a sredstvo za halogenovanje je poželjno N-bromosukcinimid; jedinjenje formule (IIA) je reagovalo sa aminom NH (R<4>) (CH2) nR<5>da bi se dobilo jedinjenje formule (II);
gde: X je halogen; Rb je alkil;
n, R<1>- R<5>su kao što je definisano u formuli (I);
R<3>je poželjno aril, poželjnije fenil, pri čemu je aril opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0068] Postupak za dobijanje jedinjenja formule (III), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadrži sledeće korake:
Šema 4
jedinjenje formule (IIIa) je reagovalo sa trifosgenom i aminom R<1>NH2sukcesivno da bi se dobilo jedinjenje formule (IIIb); jedinjenje formule (IIIb) je reagovalo pod bazom da bi se dobilo jedinjenje formule (IIIc); jedinjenje formule (IIIc) je sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa da bi se dobilo jedinjenje formule (IIId); jedinjenje formule (IIId) je podvrgnuto reakciji halogenovanja pod katalizatorom da bi se dobilo jedinjenje formule (IIIA), pri čemu je katalizator poželjno azobisizobutironitril, a agens za halogenovanje je poželjno N-bromosukcinimid; jedinjenje formule (IIIA) je reagovalo sa aminom NH (R<4>) (CH2) nR<5>da bi se dobilo jedinjenje formule (III);
gde: X je halogen; Rb je alkil;
n, R<1>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I);
R<3>je poželjno aril, poželjnije fenil, pri čemu je aril opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
[0069] Postupak za dobijanje jedinjenja formule (IV), ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove mešavine, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadrži sledeće korake:
Šema 5
formula (IVa) je pripremljena prema šemama 1-4; jedinjenje formule (IVa) reaguje sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa da bi se dobilo jedinjenje formule (IVb); jedinjenje formule (IVb) je podvrgnuto reakciji halogenovanja pod katalizatorom da bi se dobilo jedinjenje formule (IVc), pri čemu je katalizator poželjno azobisizobutironitril, a halogenirajuće sredstvo je poželjno N-bromosukcinimid; jedinjenje formule (IVc) reaguje sa aminom NH (R<4>) (CH2) nR<5>da bi se dobilo jedinjenje formule (IVd); jedinjenje formule (IVd) je podvrgnuto redukcionoj reakciji sa gvožđem u prisustvu amonijum-hlorida radi redukcije nitro grupe u amino grupu da bi se dobilo jedinjenje formule (IVA); jedinjenje formule (IVA) dalje reaguje sa acilujućim reagensom da bi se dobilo jedinjenje formule (IV);
gde: X je halogen, n, D, E, G, R<a>, R<1>~ R<5>su kao što je definisano u formuli (I).
[0070] U gore pomenutim tehničkim rešenjima, alkalno stanje je obezbeđeno organskom ili neorganskom bazom, pri čemu organska baza uključuje, ali nije ograničena na, trietilamin, piridin, 2,6-lutidin, natrijum metoksid, litijum heksametildisilazid, natrijum heksametildisilazid, n-butilitijum, kalijum terc-butoksid ili tetrabutil amonijum bromid; a neorganska baza uključuje, ali nije ograničena na, natrijum hidrid, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat, kalijum bikarbonat, cezijum karbonat, litijum hidroksid, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid. U postupku iz sadašnjeg pronalaska, alkalno stanje ciklizacije je poželjno organska baza, a poželjnije je natrijum metoksid
Sredstvo za redukciju uključuje, ali nije ograničeno na, vodonik ili prašak gvožđa;
Sredstvo za acilovanje uključuje, ali nije ograničeno na, karboksilnu kiselinu, acil hlorid, sulfuril hlorid, halogenovani metil format, izocijanat ili trifosgen i metoksiamin.
[0071] Pronalazak će dalje biti ilustrovan referencom na sledeće specifične primere. Treba shvatiti da su ovi primeri namenjeni samo da ilustruju pronalazak bez ograničavanja obima pronalaska.
[0072] Eksperimentalne metode u sledećim primerima za koje nisu naznačeni specifični uslovi biće sprovedene u skladu sa konvencionalnim uslovima ili preporučenim uslovima sirovina i proizvođača proizvoda. Eksperimentalni reagensi za koje nisu naznačeni specifični izvori biće uobičajeni reagensi koji su komercijalno dostupni.
Primeri
[0073] Strukture jedinjenja su identifikovane nuklearno magnetnom rezonancom (NMR) i / ili masenom spektrometrijom (MS). NMR hemijski pomak (δ) je dat u 10<-6>(ppm). NMR je određen pomoću Bruker AVANCE-400. Rastvarači za NMR su deuterisani-dimetil sulfoksid (DMSO-d6), deuterisani-hloroform (CDCl3) i deuterisani-metanol (CD3OD), sa tetrametilsilanom (TMS) kao unutrašnjim standardom.
[0074] MS je određena pomoću masenog spektrometra FINNIGAN LCQAd (ESI) (proizvođač: Thermo, tip: Finnigan LCQ prednost MAX).
[0075] Tečna hromatografija visoke performanse (HPLC) je određena je na Agilent 1200DAD tečno hromatografskom spektrometru pod visokim pritiskom (Sunfire C18 150 x 4,6 mm hromatografska kolona) i Waters 2695-2996 tečno hromatografskom spektrometru pod visokim pritiskom (Gimini C18150 x 4,6 mm hromatografska kolona).
[0076] Prosečna stopa inhibicije kinaze i IC50su određeni pomoću NovoStar ELISA (BMG Co., Nemačka).
[0077] Yantai Huanghai HSGF254 ili Qingdao GF254 ploča sa silikagelom je korišćena za tankoslojnu hromatografiju na silikagelu (TLC). Dimenzija ploča korišćenih u TLC-u bila je 0,15 mm do 0,2 mm, a dimenzija ploča korišćenih za prečišćavanje proizvoda je 0,4 mm do 0,5 mm.
[0078] Kao nosač u kolonskoj hromatografiji koristi se silika gel Yantai Huanghai veličine čestica 200 do 300 mesh.
[0079] Poznati polazni materijali prema sadašnjem pronalasku, mogu biti pripremljeni konvencionalnim postupcima sinteze u tehnici ili se mogu nabaviti od ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Compani, Accela ChemBio Inc., ili Dari Chemical Company, itd.
[0080] Ako nije drugačije navedeno, reakcije se mogu izvesti u atmosferi azota ili atmosferi argona.
[0081] Izraz "atmosfera argona" ili "atmosfera azota" znači da je reakciona tikvica opremljena sa argonskim ili azotnim balonom od 1 L.
[0082] Ako nije drugačije navedeno, rastvor u primerima se odnosi na vodeni rastvor.
[0083] Ako nije drugačije navedeno, reakciona temperatura u primerima je sobna temperatura, a raspon sobne temperature je bio od 20 ° C do 30 ° C.
[0084] Reakcioni proces je nadgledan tankoslojnom hromatografijom (TLC), a sistem za razvijanje rastvarača uključuje: A: sistem dihlorometana i metanola, B: n-heksan i sistem etil acetata, C: sistem petroletera i etil acetata, D: aceton. Odnos rastvarača može biti podešen u skladu sa polaritetom jedinjenja.
[0085] Elucioni sistem za prečišćavanje jedinjenja kolonskom hromatografijom i tankoslojnom hromatografijom uključuje: A: sistem dihlorometana i metanola, B: sistem n-heksana i etil acetata, C: sistem dihlorometana i acetona, D: sistem etil acetata i dihlorometana, E: sistem etil acetata i dihlorometana i n-heksana, F: sistem etil acetata i dihlorometana i acetona. Zapreminski odnos rastvarača može biti podešen u skladu sa polaritetom jedinjenja, a ponekad se može dodati i malo alkalnog reagensa, poput trietilamina ili kiselog reagensa, poput sirćetne kiseline.
Primer 1
N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) acetamid
[0086]
Korak 1
Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0087] Etil 3-(terc-butilamino)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1a (12,10 g, 34,93 mmol, pripremljen dobro poznatim postupkom otkrivenim u "Synthesis, 1988, (3), 203-207") i 100 mL trifluorosirćetne kiseline dodato je postepeno u 250 ml tikvicu. Smeša je mešana tokom 2,5 sata na 85 ° C, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati u kapima sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata da se podesi pH > 7, i filtrirani. Filterski kolač je rastvoren u dihlorometanu, a organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su suspendovani sa 50 ml smeše dihlorometana i metanola (V/V = 20:1), i filtrirani. Proizvod je osušen da bi se dobilo 5,30 g žute, čvrste supstance. Matični rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1b (ukupan proizvod 6,07 g, žuta, čvrsta supstanca), prinos: 60,1%.
MS m/z (ESI): 291,2 [M 1]
Korak 2
Etil 3-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0088] Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1b (550 mg, 1,89 mmol) je rastvoren u 50 ml dihlorometana. Dodata je smeša koja je bila nedovoljno rastvorljiva na sobnoj temperaturi sa trietilaminom (0,66 mL, 4,75 mmol) i trifosgenom (225 mg, 0,76 mmol), i mešana sve dok se nije potpuno rastvorila. Nakon mešanja tokom 30 minuta, reakcioni rastvor je dodat sa 2-fluoro-3-metoksianilinom (283 mg, 2 mmol) i mešan tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su dodavani sa 20 ml vode, ekstrahovani sa dihlorometanom (50 mL x 2). Organske faze su kombinovane, osušene preko bezvodnog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova etil 3-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1c (640 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 73,9%.
MS m/z (ESI): 458,1 [M 1]
Korak 3
5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0089] Etil 3-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1c (640 mg, 1,40 mmol) je rastvoren u 30 ml etanola, a zatim je dodat natrijum metoksid (190 mg, 3,52 mmol). Nakon reakcije tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je zagrevan do 80 ° C i dalje reagovao tokom 1 sata. Tada je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, a zatim je dodato 3,5 ml 1 M rastvora hlorovodonične kiseline, i filtriran. Filterski kolač je ispran sukcesivno sa vodom (20 mL x 1), etanolom (10 mL x 1) i metil terc-butil etrom (5 mL x 1), i osušen da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion, 1d (536 mg, svetlo žuta, čvrsta supstanca), prinos: 93,2%.
MS m/z (ESI): 412,2 [M 1]
Korak 4
7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0090] 5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1d (530 mg, 1,29 mmol), 2-(hlorometil)-1,3-difluorobenzen (230 mg, 1,41 mmol), kalijum jodid (235 mg, 1,41 mmol) i kalijum karbonat (196 mg, 1,42 mmol) su postepeno rastvoreni u 15 mL N,N-dimetil formamida. Nakon 24 sata reakcije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena, a reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodavani sa 30 ml vode i 20 ml metil terc-butil etra uz mešanje, a zatim su filtrirani. Filterski kolač je rastvoren u 50 ml dihlorometana, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 570 mg čvrste supstance. Matični rastvor je ekstrahovan, organska faza je postepeno isprana vodom (20 mL X 3), zasićenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL X 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su suspendovani sa 15 ml smeše n-heksana i metil terc-butil etra (V/V = 1: 1), i filtrirani. Filterski kolač je osušen da bi se dobilo 110 mg čvrste supstance. Dobijeno je naslovljeno jedinjenje 7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1e (ukupan proizvod 680 mg, žutosmeđa čvrsta supstanca), prinos: 98.3%.
MS m/z (ESI): 538,2 [M 1]
Korak 5
3-(bromometil)-7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0091] U atmosferi argona, 7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1e (660 mg, 1,23 mmol), azobisizobutironitril (24 mg, 0,15 mmol) i N-bromosukcinimid (262 mg, 1,47 mmol) su postepeno rastvoreni u 20 ml hlorobenzena. Nakon 12 sati reakcije na 85 ° C, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, a zatim je ispran sukcesivno zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (15 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum-tiosulfata (15 mL x 1). Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (40 mL x 2). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova 3-(bromometil)-7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1f (900 mg, svetlo žuta, čvrsta supstanca), koje je korišćeno direktno u sledećem koraku.
MS m/z (ESI): 616,1 [M 1]
Korak 6
7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0092] Sirovi 3-(bromometil)-7-(2,6-difluorobenzil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1f (900 mg, 1,46 mmol) je rastvoren u 3 mL rastvora dimetilamina u tetrahidrofuranu. Nakon 12 sati reakcije na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje D da bi se dobilo 627 mg sirovog jedinjenja. Sirovo jedinjenje je prečišćeno tankoslojnom hromatografijom sa sistemima za ispiranje E da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1g (223 mg, svetlo žuta čvrsta supstanca), prinos: 31,0%.
MS m/z (ESI): 581,3 [M 1]
Korak 7
2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro- 3-metoksifenil) -2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0093] 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2-(4 nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1g (212 mg, 0,36 mmol) je rastvoren u 8 mL mravlje kiseline , a zatim mu je dodato 0,25 mL rastvora 4M HCl u 1,4-dioksanu i 10% paladijuma na ugljeniku (40 mg). Smeša je prečišćena tri puta sa vodonikom i reagovala tokom 2 sata u atmosferi vodonika i normalnom pritisku, a zatim je zaustavljena i reakciona smeša je filtrirana. Filterski kolač je ispran sa metanolom (20 mL x 2). Organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 50 mL dihlorometana i 15 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i mešani tokom 10 minuta. Zasićeni rastvor natrijum bikarbonata je dodavan u kapima da se podesi pH > 7, a vodena faza je podvrgnuta ekstrakciji.Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (20 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko bezvodnog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima za ispiranje A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1h (180 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 89,5%.
MS m/z (ESI): 551,3 [M 1]
Korak 8
N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) acetamid
[0094] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1h (33 mg, 0,059 mmol) je rastvoren u 5 ml dihlorometana, dodato je trietilamina (13 μL, 0,094 mmol) i anhidrida sirćetne kiseline (7 μL, 0,072 mmol). Nakon reakcije tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, reakcija je bila nepotpuna. Zatim je dopunjeno 5 μL anhidrida sirćetne kiseline i smeša je zagrevana do 35 ° C i dalje reagovala tokom 2 sata. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 2 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata, mešan tokom 10 minuta i ekstrahovan. Vodena faza je ekstrahovana dihlorometanom (15 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima za ispiranje A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova N-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il) fenil) acetamid1 (25 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 71,4%.
MS m/z (ESI): 593,1 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,89 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,25-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,08 (t, 1H), 7,89-7,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,69-3,70 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 2,25 (s, 3H).
Primer 2
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0095]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0096] 2-(4-aminofenil)-7-(2 6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksi fenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1h (30 mg, 0,054 mmol) je rastvoren u 5 ml dihlorometana, dodat sa trietilaminom (0,045 ml, 0,32 mmol) i trifosgenom (6,5 mg, 0,022 mmol). Nakon reagovanja tokom 1 sata, reakcioni rastvor je dodat sa metoksiaminom (6,8 mg, 0,081 mmol) i dalje je reagovao tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je dopunjen sa trifosgenom (18 mg, 0,061 mmol) i dalje je reagovao tokom 1 sata na 35 ° C, praćen dodavanjem metoksiamina (100 mg, 1,20 mmol) i nastavljanjem reakcije tokom 2 sata na 35 ° C. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 10 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan. Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (15 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea 2 (12 mg, bledo žuta čvrsta supstanca), prinos: 35,3%.
MS m/z (ESI): 624,5 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,90 (d, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,20-7,30 (m, 3H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,89-6,94 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,86 (s, 2H), 2,35 (s, 6H).
Primer 3
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0097]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0098] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1h (26 mg, 0,047 mmol) je rastvoren u 3 ml tetrahidrofurana i dodat je etil izocijanat (55 μL, 0,69 mmol), i reagovao tokom 12 sati na 35 ° C. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 10 ml vode i 20 ml dihlorometana, i ekstrahovani. Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (15 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima za eluiranje A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) -3-etilurea3 (12 mg , bela čvrsta supstanca), prinos: 41,4%.
MS m/z (ESI): 622,5 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,80 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,22-7,26 (m, 2H), 7,13-7,15 (m, 1H), 6,99-7,04 (m, 1H), 6,84-6,89 (m, 3H), 6,45 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,65 (s, 2H), 3,33-3,35 (m, 2H), 2,30 (s, 6H), 1,20 (t, 3H).
Primer 4
Metil (4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) karbamat
[0099]
Korak 1
Metil (4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) karbamat
[0100] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1h (35 mg, 0,064 mmol) je rastvoren u 5 ml dihlorometana i dodato je trietilamina (0,8 ml, 5,8 mmol) i metil hloroformata (0,5 ml, 4,14 mmol). Nakon 12 sati reakcije na 35 ° C, reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcioni rastvor je dodat sa 10 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan. Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (15 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova metil (4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) karbamat 4 (24 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 61,5%.
MS m/z (ESI): 609,5 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,88 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25-7,27 (m, 1H), 7,18-7,20 (m, 1H), 7,06-7,08 (m, 1H), 6,88-6,94 (m, 3H), 6,78 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,65-3,73 (m, 2H), 2,35 (s, 6H).
Primer 5
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea
[0101]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea
[0102] Sirćetna kiselina (46 mg, 0,77 mmol) je rastvorena u 1 ml toluena i dodati su N,N-diizopropiletilamin (0,2 ml, 1,13 mmol) i difenilfosforil azid (0,16 ml, 0,73 mmol). Smeša je mešana tokom 1 sata na 70 ° C, a zatim je ohlađena u ledenom kupatilu, nakon čega je dodat 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-diona 1h (30 mg, 0,050 mmol) i 2 mL dihlorometana u ledenom kupatilu. Smeša je reagovala tokom 12 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 10 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan sa dihlorometanom (25 mL x 1). Organska faza je isprana sa vodom (10 ml x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea 5 (8 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 24,4%.
MS m/z (ESI): 607,9 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,79 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,27-7,30 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,06 (t, 1H), 6,880-6,93 (m, 4H), 5,44 (s, 2H), 4,95 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,78 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,39 (s, 6H).
Primer 6
1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0103]
Korak 1
5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0104] 5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 1d (1,90 g 4,62 mmol), 2-(bromometil)-1-fluoro-3-(trifluorometil) benzen (1,31 g, 5,10 mmol), kalijum jodid (844 mg, 5,08 mmol) i kalijum karbonat (702 mg, 5,09 mmol) su sukcesivno rastvoreni u 54 mL N, N-dimetilformamida. Nakon mešanja tokom 20 sati na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodavani sa vodom i etrom u suspenziju tokom 1 sata, i filtrirani. Filterski kolač je ispran sa etrom (10 mL x 3) i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6a (1,91 g, bela čvrsta supstanca), prinos 70,7%. MS m/z (ESI): 588,1 [M 1]
Korak 2
3-(bromometil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H) -dion
[0105] 5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6a (1,81 g, 3,08 mmol), azobisizobutironitril (61 mg, 0,37 mmol) i N-bromosukcinimid (660 mg, 3,71 mmol) je rastvoren u 53 ml hlorobenzena. Dobijeni rastvor je pročišćen tri puta argonom i reagovao tokom 19 sati na 85 ° C u atmosferi argona. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je ispran sa zasićenim rastvorom natrijum-tiosulfata (30 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijumhlorida (50 mL x 2), osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova 3-(bromometil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6b (2,18 g, bledo žuta, čvrsta supstanca), koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
MS m/z (ESI): 666,0 [M 1]
Korak 3
3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil) benzil)-2-(4-nitrofenil) -2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0106] Sirovi 3-(bromometil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil) 2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6b (2,18 g, 3,27 mmol) i dimetilamin (2 M rastvor u THF-u) (6,8 mL 13,6 mmol) su dodati u reakcionu bocu i mešani tokom 12 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni metodom preparativnog odvajanja da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H) -dion 6c (455 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 22,1%.
MS m/z (ESI): 630,8 [M 1]
Korak 4
2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0107] 3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6c (200 mg, 0,32 mmol) je rastvoren u 8 ml mravlje kiseline, i dodat sa 0,25 ml rastvora 4 M HCl u 1,4-dioksanu i 10% Pd / C (50 mg). Smeša je tri puta pročišćena vodonikom i mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena i filtrirana. Filterski kolač je ispran sa malom količinom metanola. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dodat sa 50 ml dihlorometana i 20 ml rastvora natrijum bikarbonata, i mešan tokom 10 minuta. Vodena faza je podešena na pH 8 i ekstrahovana. Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (25 mL x 2) i organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6d (135 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 71,1%.
MS m/z (ESI): 600,9 [M 1]
Korak 5
1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0108] 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6d (30 mg, 0,050 mmol) je rastvoren u 1 ml dihlorometana, i dodat sa etil izocijanatom (0,06 ml, 0,76 mmol). Nakon 12 sati reakcije na 35 ° C, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 5 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i 20 ml rastvora dihlorometana i podvrgnut ekstrakciji. Organska faza je isprana sa vodom (10 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (5 mL x 1), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea 6 (15 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 44,1%.
MS m/z (ESI): 671,9 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,75 (d, 2H), 7,51 (d, 1H), 7,46 (d, 2H), 7,37-7,40 (m, 1H), 7,18-7,24 (m, 2H), 7,15 (t, 1H), 6,91 (t, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,60 (s, 2H), 4,92 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,69-3,76 (m, 2H), 3,28-3,35 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 1,19 (t, 3H).
Primer 7
1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0109]
Korak 1
1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) -3-metoksiurea
[0110] 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6d (30 mg, 0,050 mmol) je rastvoren u 3 mL dihlorometana, i dodati su trietilamin (0,07 mL, 0,50 mmol) i trifosgen (15 mg, 0,051 mmol). Nakon reagovanja tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcionom rastvoru je dodato 10 mL vode, a zatim je ekstrahovan sa dihlorometanom (25 mL x 1). Organska faza je sukcesivno ispirana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 mL x 1), vodom (10 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)- 3-metoksiurea 7 (12 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 33,6%. MS m/z (ESI): 673,8 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,85 (d, 2H), 7,64-7,70 (m, 3H), 7,53 (d, 1H), 7,39-7,42 (m, 1H), 7,23-7,28 (m, 3H), 7,06 (t, 1H), 6,92 (t, 1H), 5,57-5,65 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,72 (s, 2H), 2,36 (s, 6H).
Primer 8
1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea
[0111]
Korak 1
1-(4-(3-((dimetilamino)metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea
[0112] Sirćetna kiselina (62 mg, 1,03 mmol) je rastvorena u 1 mL toluena, i dodato je N,N-diizopropiletilamina (0,28 mL, 1,58 mmol) i difenilfosforil azida (0,20 mL, 0,98 mmol). Nakon reakcije tokom 1,5 sati na 70 ° C, reakcionom rastvoru je dodat 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 6d (30 mg, 0,050 mmol) i 1 mL dihlorometana, i dalje reagovao tokom 12 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena. Reakcionom rastvoru je dodato 5 mL zasićenog natrijum bikarbonata, a zatim je ekstrahovan sa dihlorometanom (25 mL x 1). Organska faza je isprana sa vodom (10 ml x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 ml x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova, koje je dalje prečišćeno tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-5-(2-fluoro-3-metoksifenil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea 8 (13 mg, bela čvrsta supstanca), prinos 39,4%.
MS m/z (ESI): 658,2 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,76 (d, 2H), 7,51-7,53 (m, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,39-7,40 (m, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,19 (t, 1H), 7,04 (t, 1H), 6,89 (t, 1H), 6,74 (m, 1H), 5,56-5,64 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,77 (s, 2H), 2,88 (d, 3H), 2,38 (s, 6H).
Primer 9
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea
[0113]
korak 3 korak 5
Korak 1
Etil 5-(bromometil)-3-(terc-butilamino)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0114] Etil 3-(terc-butilamino)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1a (23 g, 66,40 mmol), azobisizobutironitril (2,18 g, 13,28 mmol), N-bromosukcinimid (14,18 g, 79,68 mmol) i 400 ml hlorobenzena je dodato u 1 L reakcionu bocu sa jednim grlom. Reakcioni rastvor je mešan ujednačeno i pročišćen sa argonom tri puta. Nakon reagovanja tokom 64 sati na 85 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 300 ml dihlorometana i sukcesivno ispirani sa vodom (100 mL x 2), zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (100 ml x 2) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (100 ml x 2). Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova etil 5(bromometil)-3-(terc-butilamino)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9a (25 g, smeđe ulje), koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
MS m/z (ESI): 427,1 [M 2]
Korak 2
Etil 3-(terc-butilamino)-5-((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0115] Sirovi etil 5-(bromometil)-3-(terc-butilamino)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9a (25 g, 58,78 mmol), rastvor dimetilamina u THF-u (88 mL, 176,35 mmol) i 120 mL THF-a su dodati u reakcionu bocu sa jednim grlom od 500 ml i mešani do rastvaranja. Nakon mešanja tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela sa sistemima za ispiranje C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova etil 3-(terc-butilamino)-5 -((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4 -karboksilat 9b (6 g, smeđe ulje), prinos 26,2%.
MS m/z (ESI): 390,2 [M 1]
Korak 3
Metil 3-amino-5-((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0116] Etil 3-(terc-butilamino)-5-((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9b (6 g, 15,41 mmol) i 80 mL trifluorosirćetne kiseline su dodati u 100 mL reakcionu tikvicu sa jednim grlom i mešani ravnomerno. Smeša je zagrevana do refluksa tokom 1 sata i reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 50 ml dihlorometana, a zatim dodavani u kapima sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata da se podesi pH > 7. Organska faza je osušena preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 100 ml metanola i 20 ml dihlorometana i mešani do rastvaranja. Dobijeni rastvor je dodat sa kalijum karbonatom (6,37 g, 46,16 mmol), i mešan tokom 17 sati na sobnoj temperaturi, a zatim filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje B kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova metil 3amino-5-((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9c (3,30 g, žuta čvrsta supstanca), prinos 67,1%.
MS m/z (ESI): 320,2 [M 1]
Korak 4
Metil 5-((dimetilamino) metil)-3-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0117] Metil 3-amino-5-((dimetilamino) metil)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9c (3,30 g, 10,33 mmol) i 100 mL dihlorometana su dodati u reakcionu tikvicu sa jednim grlom od 250 ml i mešani ravnomerno. Dobijenom rastvoru je dodat trietilamin (5,8 mL, 41,32 mmol) i trifosgen (1,84 g, 6,20 mmol), a zatim je mešan tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Reakcioni rastvor je dopunjen sa 3-amino-6-metoksipiridazinom (1,94 g, 15,50 mmol, pripremljen poznatim postupkom otkrivenim u "Joumal of Medicial Chemistry, 2006, 49 (14), 4409-4424"), i mešan tokom 2 sati na sobnoj temperaturi, a onda je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je dopunjen sa 200 mL vode i ekstrahovan sa dihlorometanom (100 mL x 3). Organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje B kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova metil 5-((dimetilamino) metil)-3-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9d (2,80 g, žuta čvrsta supstanca), prinos 57,6%.
MS m/z (ESI): 470,9 [M 1]
Korak 5
3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0118] Metil 5-((dimetilamino) metil)-3-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 9d (2,80 g, 5,95 mmol) i 120 ml metanola je dodato u reakcionu tikvicu sa jednim ulazom od 250 mL i uniformno mešani. Dobijeni rastvor je dodat sa natrijummetoksidom (1,61 g, 29,76 mmol). Smeša je zagrevana do 50 ° C i mešana tokom 4 sata, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 100 ml vode, a zatim dodavani u kapima sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom da se podesi pH na 5-6. Rastvor je ekstrahovan sa dihlorometanom (100 mL x 3). Organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima elucije B da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9e (1,80 g, žuta čvrsta supstanca), prinos 69,0%.
MS m/z (ESI): 438,9 [M 1]
Korak 6
7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0119] 3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9e (900 mg, 2,05 mmol) i 50 ml N,N-dimetilformamida je dodato u 100 ml tikvicu sa jednim grlom reaktora i mešano ravnomerno. Dobijeni rastvor je dodat sa 2,6-difluorobenzil hloridom (367 mg, 2,26 mmol) i kalijum karbonatom (850 mg, 6,16 mmol). Smeša je zagrevana do 40 ° C i mešana tokom 17 sati, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je dopunjen sa 250 mL vode i mešan tokom 20 minuta. Smeša je filtrirana, a filterski kolač je osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9f (1,10 g, žuta čvrsta supstanca), prinos 94,9%. MS m/z (ESI): 564,9 [M 1]
Korak 7
2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0120] 7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9f (1 g, 1,77 mmol), paladijum 10% na ugljeniku (200 mg) i 80 ml metanola je dodato u reakcionu tikvicu sa jednim grlom od 250 ml i uniformno mešano. Dobijeni rastvor je pročišćen 6 puta sa vodonikom i zatim mešan tokom 17 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje
[0121] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9g (785 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos 82,9%.
MS m/z (ESI): 534,9 [M 1]
Korak 8
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) -3-metilurea
[0122] Sirćetna kiselina (483 mg, 8,04 mmol) i 15 mL toluena je mešano do rastvaranja u 600 mL autoklavu. Dobijeni rastvor je sukcesivno dodat sa N, N-diizopropiletilaminom (2,1 mL, 12,07 mmol) i difenilfosforil azidom (2,22 g, 8,07 mmol). Smeša je zagrevana do 75 ° C i mešana tokom 1,5 sata. Reakcioni rastvor je dodat sa 10 ml rastvora 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-diona 9g (480 mg, 0,80 mmol) u THF-u u ledenom kupatilu na 0 ° C. Nakon završetka dodavanja, reakcioni rastvor je zagrevan na 55 ° C i mešan tokom 16 sati, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je dodat sa 20 ml dihlorometana i 20 ml vode i podvrgnut je ekstrakciji. Organska faza je sukcesivno ispirana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL x 1), vodom (50 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL x 1). Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela sa sistemima za ispiranje A da bi se dobio sirovi proizvod, koji je dalje prečišćen pomoću tankoslojne hromatografije sa eluentnim sistemima A da bi se dobio sirovi proizvod (387 mg, smeđa čvrsta supstanca), sirovi prinos: 81,3%. Dve sirove šarže su kombinovane da bi se dobio ukupni proizvod od 823 mg, koji je prečišćen pomoću tankoslojne hromatografije sa eluentnim sistemima F. Nastali proizvod je rastvoren u metanolu, i koncentrovan pod sniženim pritiskom sve do odvajanja čvrste supstance, koja je podvrgnuta kristalizaciji da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7- tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metilurea 9 (450 mg, bela čvrsta supstanca), ukupan prinos: 36,0%.
MS m/z (ESI): 592,3 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8,17 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,42-7,45 (m, 4H), 7,24-7,30 (m, 2H), 6,88 (t, 2H), 5,95 (s, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,33 (s, 6H).
Primer 10
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6 7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0123]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-etilurea
[0124] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9g (22 mg, 0,041 mmol) je rastvoren u 2 ml dihlorometana, i dodat sa etil izocijanatom (0,1 ml, 1,26 mmol). Nakon reagovanja tokom 12 sati na 35 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je dodat sa 5 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i ekstrahovan sa dihlorometanom (30 mL x 1). Organska faza je sukcesivno isprana vodom (10 mL x 1), zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) -3-etilurea 10 (10 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 40,0%.
MS m/z (ESI): 606,2 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8,07 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,38-7,43 (m, 4H), 7,25-7,28 (m, 2H), 6,858 (t, 2H), 5,87 (t, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,37 (t, 2H), 2,25 (s, 6H), 1,23 (t, 3H).
Primer 11
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0125]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0126] 2-(4-aminofenil)-7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 9g (100 mg, 0,18 mmol) je rastvoren u 5 ml dihlorometana, i dodati su N,N-diizopropiletilamin (0,5 mL, 2,90 mmol) i trifosgen (46 mg, 0,15 mmol). Smeša je reagovala tokom 45 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim je dodat metoksiamin hidrohlorid (92 mg, 1,12 mmol). Smeša je dalje reagovala tokom 12 sati na 40 ° C, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcionom rastvoru je dodato 5 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata, a zatim je ekstrahovan sa dihlorometanom (25 mL x 1). Organska faza je sukcesivno isprana vodom (10 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da se dobije 62 mg sirovog proizvoda koji je dalje prečišćen tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A tokom dva puta da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea 11 (45 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 24,7%.
MS m/z (ESI): 608,3 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,90 (d, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,41 (d, 1H), 7,26-7,30 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,92 (t, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,21 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,70 (s, 2H), 2,35 (s, 6H).
Primer 12
1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6- (trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) 3-metilurea
[0127]
Korak 1
Etil 3- (3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat
[0128] Etil 3-amino-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 1b (10,80 g, 37,20 mmol) je rastvoren u 500 ml dihlorometana, a zatim su sukcesivno dodati trietilamin (20 mL, 144 mmol) i trifosgen (5,20 g, 17,5 mmol). Nakon reakcije tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, dodat je reakcioni rastvor sa 3-amino-6-metoksipiridazinom (6,60 g, 52,3 mmol), i mešan tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija zaustavljena. Dobijeni proizvodi su kombinovani i dodati sa 100 mL vode. Rastvor je podvrgnut ekstrakciji. Organska faza je isprana vodom (100 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova etil 3-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil) -1H-pirazol-4-karboksilat 12a (8,72 g, bledo žuta čvrsta supstanca), prinos: 53,0%.
Korak 2
5-(6-metoksipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6(5H, 7H) -dion
[0129] Etil 3-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-5-metil-1-(4-nitrofenil)-1H-pirazol-4-karboksilat 12a (8,72 g, 19,70 mmol) je rastvoren u 150 ml metanola, i dodat je natrijum metoksid (2,70 g, 50 mmol). Smeša je zagrevana do 55 ° C i mešana tokom 12 sati, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodavani u kapima sa 1 M rastvorom hlorovodonične kiseline da se podesi pH < 7 i filtrirani. Filterski kolač je sukcesivno ispran sa vodom (30 mL x 1), metanolom (30 mL x 1) i etrom (20 mL x 1) i osušen u vakuumu da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova 5-(6-metoksipiridazin-3-il )-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12b (8,34 mg, svetlo žuta čvrsta supstanca), koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
MS m/z (ESI): 396,0 [M 1]
Korak 3
7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0130] 2-(bromometil)-1-fluoro-3-(trifluorometil) benzen (nabavljen od Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., broj proizvoda XW239870821) (308 mg, 1,20 mmol) je rastvoren u 20 ml N,N-dimetil formamida, i dodati su sukcesivno sirovi 5-(6-metoksipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil) -2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12b (395 mg, 1 mmol) i kalijum karbonat (276 mg, 2 mmol). Nakon reagovanja tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je zaustavljen. Reakcioni rastvor je sipan u 100 ml vode i filtriran. Filterski kolač je osušen da se dobije jedinjenje iz naslova 7-(2-fluoro-6- (trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12c (465 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 81,4%.
MS m/z (ESI): 570,0 [M-1]
Korak 4
3-(bromometil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0131] 7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-3-metil-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12c (465 mg, 0,81 mmol), azobisizobutironitril (13 mg, 0,081 mmol), N-bromosukcinimid (174 mg, 0,97 mmol) i 20 ml hlorobenzena su dodati u reakcionu bocu od 100 mL. Smeša je reagovala tokom 17 sati na 80 ° C u atmosferi argona, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova 3-(bromometil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12d (600 mg, žuto ulje), koji je korišćen direktno u sledećem koraku.
MS m/z (ESI): 650,1 [M 1]
Korak 5
3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0132] Sirovi 3-(bromometil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12d (15 mg, 0,033 mmol) je rastvoren u 20 ml THF-a, i dodat je 2M rastvor dimetilamina u THF-u (1 mL, 2.03 mmol). Smeša je reagovala 2 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima eluiranja A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12e (85 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 17,0%.
MS m/z (ESI): 615,2 [M 1]
Korak 6
2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il) -2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion
[0133] 3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2-(4-nitrofenil)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12e (100 mg, 0,14 mmol) je rastvoreno u 5 mL mravlje kiseline, i dodato sa paladijom 10% na ugljeniku (48 mg). Smeša je tri puta pročišćena sa vodonikom pod normalnim pritiskom, a zatim je reagovala tokom 3 sata na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika. Reakcija je zaustavljena i filtrirana. Filtrat je sipan u 10 mL vode, a zatim je dodavan u kapima sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata da se podesi pH > 7. Rastvor je ekstrahovan sa dihlorometanom (25 mL x 3). Organske faze su kombinovane, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2-(4-aminofenil) -3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12f (50 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 53,0%.
MS m/z (ESI): 585,2 [M 1]
Korak 7
1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksiprididazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) 3-metilurea
[0134] Sirćetna kiselina (51 mg, 0,85 mmol) i N, N-diizopropiletilamin (0,22 mL, 1,28 mmol) su rastvoreni u 2 mL toluena i dodati sa difenilfosforil azidom (236 mg, 0,86 mmol). Nakon reakcije 1,5 sata na 75 ° C, reakcioni rastvor je dodat sa 2 ml rastvora 2-(4-aminofenil)-3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil) benzil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-4,6 (5H, 7H)-dion 12f (15 mg, 0,033 mmol) u THF-u. Dobijeni rastvor je reagovao tokom 12 sati na 50 ° C, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je dodat sa 10 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata, a zatim ekstrahovan sa dihlorometanom (20 mL x 1). Organska faza je sakupljena i sukcesivno ispirana sa vodom (10 mL x 1) i zasićenim natrijum hloridom (10 mL x 1). Organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(3-((dimetilamino) metil)-7-(2-fluoro-6-(trifluorometil)benzil)-5-(6-metoksiprididazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil) 3-metilurea 12 (20 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 36,3%. MS m/z (ESI): 642,3 [M 1]
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) • 8,19 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,43-7,46 (m, 3H), 7,34-7,39 (m, 3H), 7,27 (d, 1H), 7,16 (t, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,22 (s, 3H), 3,48 (s, 2H), 2,93 (d, 3H), 2,21 (s, 6H).
Primer 13
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3 4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-etilurea
[0135]
Korak 1
(E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil) but-3-en-2-on
[0136] 1-(4-nitrofenil) propan-2-on 13a (3,8 g, 21,21 mmol) i N,N-dimetil formamid dimetil acetal su dodati u bocu od 50 ml. Nakon ragovanja tokom 30 minuta na 100 ° C, reakcija je zaustavljena i dodato je 150 mL dihlorometana uz mešanje. Dobijeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje A kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil) but-3-en-2-on 13b (3g, žuta čvrsta supstanca), prinos: 60,5%.
MS m/z (ESI): 235,0 [M 1]
Korak 2
Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat
[0137] (E)-4-(dimetilamino)-3-(4-nitrofenil) but-3-en-2-on 13b (1,50 g, 6,48 mmol) i 2-aminoacetilacetathidrohlorid (1,40 g, 7,78 mmol) su rastvoreni u 40 ml sirćetne kiseline. Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi tokom 16 sati i na 100 ° C tokom 5 sati, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostaci su dodati sa 120 ml dihlorometana i isprani sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL x 1). Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su suspendovani sa 15 mL etilacetata, a zatim filtrirani. Filterski kolač je osušen da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13c (412 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 24,5%.
MS m/z (ESI): 273,1 [M-1]
Korak 3
Etil 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat
[0138] Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13c (412 mg, 1,50 mmol) je rastvoren u 6 mL N,N-dimetil formamida, a zatim je dodat natrijum hidrid (72 mg, 1,80 mmol) u ledenom kupatilu. Smeša je reagovala tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim dodata sa 20 mL rastvora hloramina. Smeša je dalje reagovala tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcionom rastvoru je dodato 50 ml zasićenog rastvora natrijum-tiosulfata i mešano tokom 10 minuta do formiranja slojeva. Vodena faza je ekstrahovana sa etrom (30 mL x 3). Organska faza je isprana sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL x 2), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 1-amino-3-metil-4- (4-nitrofenil) -1H-pirol-2-karboksilat 13d (381 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos 87,7%.
MS m/z (ESI): 290,2 [M 1]
Korak 4
Etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol- 2-karboksilat
[0139] Etil 1-amino-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13 d (381 mg, 1,30 mmol) je dodat u 30 ml dihlorometana i mešan do rastvaranja, zatim je dodato trietilamina (328 mg, 3,25 mmol) i trifosgena (157 mg, 0,53 mmol). Nakon reagovanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, u reakcioni rastvor je dodat 2-fluoro-3-metoksianilin (202 mg, 1,43 mmol). Smeša je dalje reagovala na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je filtriran. Filterski kolač je sukcesivno ispiran sa vodom (10 mL x 2) i etilacetatom (2 mL x 3), a zatim osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13e (296 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos 49,9%.
MS m/z (ESI): 457,3 [M 1]
Korak 5
3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0140] Etil 1-(3-(2-fluoro-3-metoksifenil) ureido)-3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13e (290 mg, 0,64 mmol) i natrijum hidroksid (128 mg, 3,20 mmol) su rastvoreni u 10 ml dihlorometana. Nakon reagovanja tokom 2 sata na 80 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, a zatim je u kapima dodavan rastvor 1M hlorovodonične kiseline da se pH podesi na 3-4. Čvrsta supstanca je odvojena i filtrirana. Filterski kolač je sukcesivno ispran sa vodom (20 mL x 3) i etanolom (10 mL x 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13f (192 mg, siva čvrsta supstanca), prinos 73,3%.
MS m/z (ESI): 411,0 [M 1]
Korak 6
1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2, 4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0141] 3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil ) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13f (192 mg, 0,47 mmol), 2-(hlorometil)-1,3-difluorobenzen (84 mg, 0,52 mmol) i kalijum karbonat (162 mg, 1,75 mmol) su dodati u 10 mL N,N-dimetil formamida.
Nakon reagovanja tokom 16 sati na 50 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 20 ml vode, (20 ml x 1) i ekstrahovani sa dihlorometanom (20 mL x 1). Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (10 mL џ 3). Organske faze su sakupljene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13 g (160 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos 63,7%.
MS m/z (ESI): 537,0 [M 1]
Korak 7
5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2, 1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0142] 1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-5-metil-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13g (120 mg, 0,22 mmol), azobisizobutironitril (8 mg, 0,044 mmol) i N-bromosukcinimid (47 mg, 0,26 mmol) su rastvoreni u 5 ml hlorobenzena. Smeša je reagovala tokom 16 sati na 85 ° C u atmosferi argona, a zatim je zaustavljena reakcija. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 10 ml vode i ekstrahovani sa dihlorometanom (10 mL x 1). Vodena faza je ekstrahovana sa dihlorometanom (10 mL x 3). Organska faza je kombinovana, isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL x 1), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13h (130 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 96,2%.
MS m/z (ESI): 616,0 [M 1]
Korak 8
1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0143] Sirovi 5-(bromometil)-1-(2,6-difluorobenzil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13h (130 mg, 0,21 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (81 mg, 0,63 mmol) su rastvoreni u 5 ml THF-a i dodati sa 1,6 ml rastvora dimetilamina u tetrahidrofuranu. Smeša je reagovala tokom 1 sata na 0 ~ 5 ° C, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13i (40 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 33,1%.
MS m/z (ESI): 580,2 [M 1]
Korak 9
6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0144] 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-6-(4 nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13i (40 mg, 0,069 mmol), amonijum hlorid (30 mg, 0,55 mmol) i gvožđe (16 mg, 0,28 mmol) su rastvoreni u 5 ml smeše etanola i vode (V / V = 4: 1). Smeša je reagovala tokom 1 sata na 80 ° C, a zatim je reakcija zaustavljena. Reakcioni rastvor je dodat sa 20 mL vode, a zatim je ekstrahovan sa dihlorometanom (10 mL x 3). Organske faze su kombinovane, isprane sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL x 1), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13j (20 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos : 52,6%.
MS m/z (ESI): 550,2 [M 1]
Korak 10
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil) -3-etilurea
[0145] 6-(4- aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13j (20 mg, 0,036 mmol) i etil izocijanat (13 mg, 0,18 mmol) su rastvoreni u 5 ml tetrahidrofurana u zatvorenoj epruveti od 30 mL. Nakon reagovanja tokom 16 sati na 50 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-etilurea 13 (15 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 68,1%.
MS m/z (ESI): 621,3 [M 1]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,87-7,77 (m, 4H), 7,69 (s, 1H), 7,58-7325 (m, 4H), 7,12-7,08 (m, 1H), 6,80-6,71 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,45-3,50 (m, 2H), 3,20-3,31 (m, 2H), 2,16 (s, 6H), 1,12-1,03 (m, 3H).
Primer 14
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metilurea
[0146]
Korak 1
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metilurea
[0147] Sirćetna kiselina (70 mg, 1,12 mmol) i N, N-diizopropiletilamin (0,32 mL, 1,80 mmol) su rastvoreni u 1 mL toluena, a zatim je dodat difenilfosforilazid (0,25 mL, 1,20 mmol). Nakon reagovanja tokom 1,5 sata na 70 ° C, reakcionom rastvoru je dodat 1 ml rastvora 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-diona 13j (30 mg, 0,054 mmol) u dihlorometanu. Reakcioni rastvor je dalje reagovao tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je dodato 15 ml vode i ekstrahovan sa dihlorometanom (30 mL x 1). Organska faza je sukcesivno ispirana sa zasićenim natrijum bikarbonatom (10 mL x 1), vodom (10 mL x 1) i zasićenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL x 1), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova
[0148] 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metilurea 14 (9 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 27,3%.
MS m/z (ESI): 606,9 [M 1]
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,86 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 7,24-7,35 (m, 3H), 7,68-7,14 (m, 6H), 6,21 (s, 1H), 5,60-5,74 (m, 2H), 4,54-4,59 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 2,77 (s, 3H), 2,55 (s, 6H).
Primer 15
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea
[0149]
Korak 1
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea
[0150] 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 13j (55 mg, 0,10 mmol) je rastvoren u 4 ml tetrahidrofurana, a zatim je dodat 4-nitrofenil hloroformat (30 mg, 0,15 mmol) i piridin (32 mg, 0,40 mmol). Nakon reagovanja tokom 3 sata na 30 ° C, reakcioni rastvor je dodat sa metoksilamin hidrohloridom (25 mg, 0,30 mmol) i reagovao je tokom 8 sati pod zatvaranjem. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A tokom tri vremena da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(2-fluoro-3-metoksifenil)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea 15 (5 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 8,1%.
MS m/z (ESI): 623,4 [M 1]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 7,90-7,87 (m, 2H), 7,85-7,80 (m, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,55 -7,25 (m, 4H), 7,09-7,02 (m, 1H), 6,71-6,65 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,15 (s, 6H)
Primer 16
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metilurea
[0151]
Korak 1
[0152] Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat
Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 13c (4,30 g, 15,70 mmol) je rastvoren u 200 ml dihlorometana, i sukcesivno je dodat trietilamin (21,7 ml, 157 mmol), 4-dimetilaminopiridin (192 mg, 1,57 mmol) i di-terc-butil dikarbonil (5,14 g, 23,50 mmol). Nakon reagovanja tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 100 ml vode, a zatim ekstrahovani sa dihlorometanom (50 mL x 4). Organske faze su kombinovane, isprane zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (150 mL x 1), osušene iznad anhidrovanog natrijumsulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje B kako bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat 16b (4 g, žuta čvrsta supstanca), prinos: 68,1%.
MS m/z (ESI): 273,1 [M-100]
Korak 2
[0153] Etil 3-bromometil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat Etil 3-metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat 16b (4 g, 10,70 mmol), azobisizobutironitril (351 mg, 2,14 mmol) i N-bromosukcinimid (2,28 g, 12,80 mmol) su sukcesivno rastvoreni u 40 mL hlorobenzena. Reakcioni rastvor je reagovao tokom 16 sati na 80 ° C u atmosferi argona. Reakcija je zaustavljena i ohlađena do sobne temperature. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i osušen u vakuumu da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-bromometil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat 16c (5,2 g, žuta čvrsta supstanca), koja je korišćena direktno u sledećem koraku. MS m/z (ESI): 453,0 [M-100]
Korak 3
Etil 3-(dimetilamino) metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat
[0154] Etil 3-bromometil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat 16c (4,80 g, 10,70 mmol) je rastvoren u 50 mL tetrahidrofurana i dodat je rastvor dimetilamina u tetrahidrofuranu (26 mL, 53,50 mmol). Nakon reagovanja tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostaci su prečišćeni hromatografijom na koloni silikagela sa sistemima za ispiranje kako bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-(dimetilamino)metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-tercbutilkarboksilat-2-karboksilat 16d (3 g, žuta čvrsta supstanca), prinos: 67,4%.
MS m/z (ESI): 317,0 [M-100]
Korak 4
Etil 3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat
[0155] Etil 3-(dimetilamino)metil-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-1-terc-butilkarboksilat-2-karboksilat 16d (3 g, 7,18 mmol) je rastvoren u 30 mL rastvora 2 M hlorovodonične kiseline u metanolu. Nakon reagovanja tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su dodati sa 30 ml zasićenog rastvora natrijum karbonata i ekstrahovani sa dihlorometanom (30 ml x 4). Organske faze su kombinovane, isprane sa zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (60 mL x 1), osušene iznad anhidrovanog natrijum-sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 16e (2 g, žuta čvrsta supstanca), prinos: 90,9%.
MS m/z (ESI): 318,1 [M 1]
Korak 5
[0156] Etil 1-amino-3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat Etil 3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 16e (1,8 g, 5,68 mmol) je rastvoren u 20 ml N, N-dimetilformamida i dodato je 60% natrijum hidroksida (307 mg, 7,66 mmol). Nakon reagovanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je dodata sa 50 ml hloramina, i dalje je reagovala tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 200 mL vode i ekstrahovan sa etrom (50 mL x 3). Organske faze su kombinovane, isprane sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL x 1), osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 1-amino-3-((dimetilamino) metil) -4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 16f (620 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 32,9%.
MS m/z (ESI): 333,2 [M 1]
Korak 6
Etil 3-((dimetilamino) metil)-1-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat
[0157] Etil 1-amino-3-((dimetilamino) metil)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 16f (420 mg, 1,26 mmol) je rastvoren u 15 mL dihlorometana, a zatim su sukcesivno dodavani trietilamin (382 mg, 3,78 mmol), trifosgen (131 mg, 0.44 mmol) i 3-amino-6-metoksipiridazin (236 mg, 1,89 mmol). Nakon reagovanja tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje etil 3-((dimetilamino) metil)-1-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-4-(4-nitrofenil) -1H-pirol-2-karboksilat 16 g (298 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 30,2%.
Korak 7
5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0158] Etil 3-((dimetilamino) metil)-1-(3-(6-metoksipiridazin-3-il) ureido)-4-(4-nitrofenil)-1H-pirol-2-karboksilat 16 g (260 mg, 0,54 mmol) je rastvoreno u 10 ml metanola, a zatim je dodat natrijum metoksid (151 mg, 2,69 mmol). Nakon reagovanja tokom 3 sata na 50 ° C, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima za ispiranje A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16h (76 mg, žuta čvrsta supstanca): 32,3%.
MS m/z (ESI): 438,3 [M 1]
Korak 8
1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0159] 5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16h (78 mg, 0,18 mmol), 2-hlorometil-1,3-difluorofenil (35 mg, 0,21 mmol) i kalijum karbonat (37 mg, 0,26 mmol) su rastvoreni u 5 ml N,N-dimetilformamida. Nakon reagovanja tokom 16 sati na 50 ° C, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16i (72 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 72,0%. MS m/z (ESI): 564,1 [M 1]
Korak 9
6- (4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion
[0160] 1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-6-(4-nitrofenil) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16i (72 mg, 0,13 mmol), gvožđe (29 mg, 0,51 mmol) i amonijum hlorid (55 mg, 1,02 mmol) su rastvoreni u 20 ml smeše etanola i vode (V / V = 4: 1). Nakon reagovanja tokom 1 sata na 80 ° C, reakcija je zaustavljena. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, a zatim je dodat sa 20 mL vode i ekstrahovan dihlorometanom (10 mL x 4). Organske faze su kombinovane, isprane sa zasićenim natrijum hloridom (10 mL x 1), osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima elucije A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 6-(4-aminofenil) -1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16j (25 mg, čvrsta supstanca), prinos: 42,8%.
MS m/z (ESI): 534,3 [M 1]
Korak 10
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metilurea
[0161] Sirćetna kiselina (51 kg 0,84 mmol) je dodata u zatvorenu epruvetu od 25 mL, a zatim su sukcesivno dodavani 2 ml toluena, N, N-diizopropiletilamin (163 mg, 1,26 mmol) i difenilfosforilazid (231 mg, 0,84 mmol). Smeša je reagovala tokom 1 sata u zatvorenoj epruveti. Nakon hlađenja do 0 ° C, reakcionom rastvoru je dodato 2 mL rastvora 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzila)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16j (45 mg, 0,084 mmol) u dihlormetanu i dalje reagovao tokom 16 sati 40 ° C u zatvorenoj epruveti. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metil urea 16 (18 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 36,0%.
MS m/z (ESI): 591,3 [M 1]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,92-7,87 (m, 2H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,60-7,55 (m, 1H), 7,25-7,13 (m, 2H), 7,05-6,99 (m, 1H), 6,79-6,71 (m, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,54 (s, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,16 (s, 6H)
Primer 17
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-hidroksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0162]
Korak 1
1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino)metil)-5-(6-hidroksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea
[0163] 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-metoksipiridazin-3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea 11 (122 mg, 0,20 mmol) je rastvorena u 6 ml tetrahidrofurana i mešana dok se nije potpuno rastvorila. Rastvor je dodat sa 40% bromovodične kiseline (103 mg, 0,51 mmol) i mešan tokom 12 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je dodat sa 5 ml zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i dalje mešan tokom 5 minuta. Dobijena smeša je ekstrahovana. Organske faze su kombinovane i prečišćene hromatografijom na koloni silikagela sa elucionim sistemima A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(7-(2,6-difluorobenzil)-3-((dimetilamino) metil)-5-(6-hidroksipiridazin -3-il)-4,6-diokso-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-2-il) fenil)-3-metoksiurea 17 (16 mg, bela čvrsta supstanca), prinos: 13,5%. MS m/z (ESI): 594,3 [M 1]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,36-13,18 (m, 1H), 9,69 (s, 1H), 9,21-9,14 (m, 1H), 7,83-7,76 (m, 2H), 7,71-7,64 (m, 2H), 7,52-7,46 (m, 1H), 7.46-7.36 (m, 1H), 7,09 (s, 3H), 5,32-5,21 (m, 2H), 3,71-3,62 (m, 5H), 2,17 (s, 6H)
Primer 18
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1- f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea
[0164]
Korak 1
1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino)metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea
[0165] 6-(4-aminofenil)-1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il) pirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-2,4 (1H, 3H)-dion 16j (170 mg, 0,319 mmol), metil 4-nitrofenilmetoksiamino format (81 mg, 0,382 mmol, pripremljen poznatim postupkom otkrivenim u "WO 2011090935") i N, N-diizopropiletilamin (109 μL, 0,638 mmol) su rastvoreni u 10 mL tetrahidrofurana. Nakon reagovanja tokom 4 sata na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena i reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostaci su prečišćeni tankoslojnom hromatografijom sa sistemima eluiranja A da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1-(4-(1-(2,6-difluorobenzil)-5-((dimetilamino) metil)-3-(6-metoksipiridazin-3-il)2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo [2,1-f] [1,2,4] triazin-6-il) fenil)-3-metoksiurea 18 (15 mg, žuta čvrsta supstanca), prinos: 7,8%.
MS m/z (ESI): 607,2 [M 1]
Primer testa
Biološka evaluacija
[0166] Test Primer 1. Analiza aktivnosti humanog GnRHr (GnRH receptora) od sadašnjih jedinjenja
[0167] In vitro aktivnost proteina GnRHr je ispitivana sledećim metodama.
[0168] Ovaj test je korišćen da se odredi inhibicioni efekat sadašnjeg jedinjenja na aktivnost humanog GnRHr proteina izraženog pomoću humanih GnRHr/CHO stabilno transfektovanih ćelijskih linija.
1. Eksperimentalni materijali i oprema
[0169]
1) Fluo-4 NW kompleti za ispitivanje kalcijuma (F36206, Invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, Invitrogen)
4) FlexStation3 čitač mikroploče
2. Eksperimentalni protokol
[0170] Ekspresioni vektor sisara koji sadrži humani GnRHr gen je prenet u CHO ćelije dodavanjem Lipofectamine®LTX reagensa koji sadrži Plus<TM>; sledeći dan su dodavani antibiotici za skrining da bi se izdvojile monoklonske ćelijske linije.
[0171] Humane GnRHr/CHO stabilno transfektovane ćelijske linije su inokulisane u pločama sa 96 bazenčica sa gustinom inokulacije od 25, 000/ bazenčiću. Medijum za kulturu je uklonjen sledećeg dana, a pufer za punjenje koji sadrži boju Fluo-4 je dodat u ploču (100 μL/bazenčiću) i inkubiran tokom 30 minuta na 37 ° C. Ploča je pomerena na sobnu temperaturu i uravnotežena tokom 10 minuta. Svako jedinjenje je razblaženo sa DMSO u sedam koncentracionih gradijenata od 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Zatim je dodato 1 μl od svakog gradijenta svakom bazenčiću i inkubirano tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon automatskog dodavanja 50 μL GnRH polipeptidnog stimulišućeg rastvora, vrednost je odmah detektovana na 494/516 nM od strane čitača mikroploče (flexstation 3). IC50vrednosti jedinjenja su izračunate pomoću softvera iz različitih fluorescentnih signala, pri različitim odgovarajućim koncentracijama.
[0172] Aktivnost inhibicije sadašnjih jedinjenja na humanom GnRHr je određena gornjim testom, a vrednosti IC50su prikazane u Tabeli 1.
Tabela 1 IC50efekta inhibicije sadašnjeg jedinjenja na aktivnost humanog
GnRHr
[0173] Zaključak: Sadašnja jedinjenja imaju značajnu inhibitornu aktivnost humanog GnRHr.
[0174] Test Primer 2. Ispitivanje inhibitorne aktivnosti GnRHr majmuna od strane sadašnjih jedinjenja. Ovo ispitivanje je korišćeno da se odredi efekat inhibicije sadašnjih jedinjenja na aktivnost majmunskog GnRHr proteina izraženog majmunskim GnRHr/CHO stabilno transfektovanim ćelijskim linijama.
1. Eksperimentalni materijali i oprema
1) Fluo-4 NW kompleti za ispitivanje kalcijuma (F36206, Invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, Invitrogen)
4) FlexStation3Microplate Reader
2. Eksperimentalni protokol
[0176] Ekspresioni vektor sisara koji sadrži majmunski GnRHr gen je prenet u CHO ćelije dodavanjem Lipofectamine®LTX reagensa koji sadrži PlusTM; sledeći dan su dodavani antibiotici za skrining da bi se izdvojile monoklonske ćelijske linije.
[0177] Majmunske GnRHr/CHO stabilno transfektovane ćelijske linije su inokulisane u pločama sa 96 bazenčića sa gustinom inokulacije od 25,000/bazenčiću. Medijum za kulturu je uklonjen sledećeg dana, a pufer za punjenje koji sadrži boju Fluo-4 je dodat u ploču (100 μL/bazenčiću) i inkubiran tokom 30 minuta na 37 ° C. Ploča je pomerena na sobnu temperaturu i uravnotežena tokom 10 minuta. Svako jedinjenje je razblaženo sa DMSO u sedam koncentracionih gradijenata od 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Zatim je dodato 1 μl od svakog gradijenta svakom bazenčiću i inkubirano tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon automatskog dodavanja 50 μL stimulišućeg rastvora polipeptida GnRH, vrednost je odmah detektovana na 494/516 nM od strane čitača mikroploče (flexstation 3). IC50vrednosti jedinjenja su izračunate pomoću softvera iz različitih fluorescentnih signala, pri različitim odgovarajućim koncentracijama.
Aktivnost inhibicije sadašnjih jedinjenja na majmunskom GnRHr je određena gornjim testom, a vrednosti IC50su prikazane u Tabeli 2.
Tabela 2 IC50inhibicionog efekta sadašnjih jedinjenja na aktivnost humanog GnRHr
[0178] Zaključak: Sadašnja jedinjenja imaju značajnu inhibitornu aktivnost majmunskog GnRHr.
[0179] Test Primer 3. Ispitivanje inhibitorne aktivnosti zečjeg GnRHr od strane sadašnjih jedinjenja
[0180] Ovo ispitivanje je korišćeno za određivanje efekta inhibicije sadašnjih jedinjenja na aktivnost zečjeg GnRHr proteina izraženog od strane zečjih GnRHr/CHO stabilno transfektovanih ćelijskih linija.
1. Eksperimentalni materijali i oprema
[0181]
1) Fluo-4 NW kompleti za ispitivanje kalcijuma (F36206, Invitrogen)
2) DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
3) G418 (11811-031, Invitrogen)
4) FlexStation3Microplate Reader
2. Eksperimentalni protokol
[0182] Ekspresioni vektor sisara koji sadrži zečiji GnRHr gen je prenet u CHO ćelije dodavanjem Lipofectamine®LTX reagensa koji sadrži PlusTM; sledeći dan su dodavani antibiotici za skrining za sortiranje monoklonskih ćelijskih linija.
[0183] Zečije GnRHr/CHO stabilno transfektovane ćelijske linije su inokulisane u pločama sa 96 bazenčića sa gustinom inokulacije od 25,000/bazenčiću. Medijum za kulturu je uklonjen sledećeg dana, a pufer za punjenje koji sadrži boju Fluo-4 je dodat u ploču (100 μL/bazenčiću) i inkubiran tokom 30 minuta na 37 ° C. Ploča je pomerena na sobnu temperaturu i uravnotežena tokom 10 minuta. Svako jedinjenje je razblaženo sa DMSO u sedam koncentracionih gradijenata od 100 μM, 10 μM, 1 μM, 0,1 μM, 0,01 μM, 0,001 μM, 0,0001 μM. Zatim je dodato 1 μl od svakog gradijenta svakom bazenčiću i inkubirano tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon automatskog dodavanja 50 μL stimulišućeg rastvora polipeptida GnRH, vrednost je odmah detektovana na 494/516 nM od strane čitača mikroploče (flexstation 3). IC50vrednosti jedinjenja su izračunate pomoću softvera iz različitih fluorescentnih signala, pri različitim odgovarajućim koncentracijama.
[0184] Aktivnost inhibicije sadašnjih jedinjenja na zečjem GnRHr je određena gornjim testom, a vrednosti IC50su prikazane u Tabeli 3.
Tabela 3 IC50efekta inhibicije sadašnjeg jedinjenja na aktivnost zečjeg
GnRHr
[0185] Zaključak: Sadašnja jedinjenja imaju značajnu inhibitornu aktivnost zečjeg GnRHr.
Farmakokinetička evaluacija
[0186] Test Primer 4. Ispitivanje farmakokinetike jedinjenja iz Primera 2, Primera 3, Primera 5, Primera 9, Primera 10, Primera 11 i Primera 13 sadašnjeg pronalaska kod pacova
1. Rezime
[0187] Pacovi Sprague-Dawley (SD) su korišćeni kao ispitivane životinje. Koncentracije u plazmi u različitim vremenima su određene pomoću LC/MS/MS, nakon intragastrične primene jedinjenja iz Primera 2, Primera 3, Primera 5, Primera 9, Primera 10, Primera 11 i Primera 13 i intravenske primene jedinjenja iz primera 11 kod pacova. Proučeno je farmakokinetičko ponašanje sadašnjih jedinjenja kod pacova i procenjene su farmakokinetičke karakteristike.
2. Protokol ispitivanja
2.1. Uzorci
[0188] Jedinjenja iz Primera 2, Primera 3, Primera 5, Primera 9, Primera 10, Primera 11 i Primera 13
2.2. Ispitivane životinje
[0189] 32 zdrava odrasla SD pacova (polovina ženke i polovina mužjaci) su podjednako označena u 8 grupa (4 za svaku grupu). Životinje su nabavljene od Shanghai Super B&K Laboratory Animal Corp. Ltd (Br. sertifikata laboratorijske proizvodnje životinja SCXK (HU) 2008-0016).
2.3 Formulacija leka
[0190] Odmerena je odgovarajuća količina uzorka i dodato je 0,5% CMC-Na da se formira suspenzija od 1 mg / ml po ultrazvučnom tretmanu;
Odgovarajuće količine lekova su izmerene i rastvorene sa 0,5 ml DMSO i 0,5 ml Tween 80; konačnom volumenu je dodat fiziološki rastvor.
2.4 Primena
[0191] 32 pacova SD (polovina ženke i polovina mužjaci) su ravnomerno naznačena u 8 grupa (po 4 za svaku grupu) i primenjeni oralnom sondom ili intravenskom injekcijom (i.v.) (oralna sonda pri dozi od 10 mg/kg ili 30 mg/kg, i i.v. u dozi od 5,0 mg / kg), odnosno u zapremini od 10 ml/kg, nakon gladovanja preko noći,
2. Operacija
[0192] Prethodno je uzet uzorak od 0,1 ml krvi i 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 sata nakon primene, sakupljeni u heparinizovanoj epruveti za ispitivanje i centrifugirani 10 minuta na 3500 o/min da bi se odvojila plazma, koja je bila čuvana na -20 ° C. Životinjama je dozvoljen pristup hrani 2 sata nakon primene.
[0193] Sadržaj ispitivanog jedinjenja u plazmi pacova, nakon primene jedinjenja oralnom sondom je određen pomoću LC/MS/MS.
4. Rezultati farmakokinetičkih parametara
[0194] Farmakokinetički parametri sadašnjih jedinjenja su prikazani u sledećoj tabeli 4:
[0195] Zaključak: Sadašnja jedinjenja se dobro oralno apsorbuju kod pacova i imaju očiglednu farmakokinetičku apsorpciju. Primer 11 ima posebno poželjnu oralnu bioraspoloživost.
[0196] Test Primer 5. Analiza farmakokinetike primera 11 prema sadašnjem pronalasku kod zeca
1. Rezime
[0197] Zečevi su korišćeni kao ispitivane životinje. Koncentracije u plazmi u različitim vremenima su određene pomoću LC/MS/MS, nakon intragastrične primene jedinjenja iz Primera 11 i intravenske primene jedinjenja iz Primera 11 kod zečeva. Proučeno je farmakokinetičko ponašanje sadašnjeg jedinjenja kod zečeva i procenjene su farmakokinetičke karakteristike.
2. Protokol ispitivanja
2.1 Uzorak
Jedinjenje iz primera 11
2.2. Ispitivane životinje
[0198] 6 zdravih novozelandskih zečeva (ženke) su ravnomerno označene u 2 grupe. Životinje su nabavljene od Jie Sijie Corp. Ltd.
2.3 Formulacija leka
[0199] Odgovarajuća količina uzorka je izmerena i dodato je 0,5% CMC-Na da se formira suspenzija 3 mg/ml po ultrazvučnom tretmanu;
Odgovarajuće količine lekova su izmerene i rastvorene sa 1 ml DMSO i 1 ml Tween 80; u konačni volumen je dodat fiziološki rastvor.
2.4 Primena
[0200] 6 zdravih novozelandskih zečeva (ženki) ravnomerno je označeno u dve grupe, i primenjeno je oralnom sondom ili intravenskom injekcijom (i.v.) (oralna sonda u dozi od 30 mg/kg sa zapreminom primene od 5 ml/kg, i i.v. doza od 5 mg/kg sa zapreminom primene od 2 ml/kg), nakon gladovanja preko noći.
3. Operacija
[0201] Prethodno je uzorkovano 0,2 ml krvi i 5 min, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 11, 24 sata nakon intravenske primene, prikupljeno u heparinizovanu test epruvetu i centrifugirano na 3500 o/ min tokom 10 min da se odvoji plazma, koja je bila čuvana na -20 ° C. Uzorak krvi je uzet pre i 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 11, 24 sata nakon oralne primene i tretiran je isto kao i kod intravenske grupe primene. Sadržaj ispitivanog jedinjenja u plazmi zečeva nakon primene jedinjenja oralnom sondom i intravenskom injekcijom je određen pomoću LC/MS/MS.
4. Rezultati farmakokinetičkih parametara
[0202] Farmakokinetički parametri sadašnjih jedinjenja su prikazani u sledećoj tabeli 5:
[0203] Zaključak: Primer 11 jedinjenja prema sadašnjem pronalasku se dobro apsorbuje kod zečeva i ima poželjnu oralnu bioraspoloživost.
[0204] Test Primer 6. Farmakokinetička analiza primera 11 prema sadašnjem pronalasku kod kratkonog psa Beagle
1. Rezime
[0205] Kratkonogi psi su korišćeni kao ispitivane životinje. Koncentracije u plazmi u različitim vremenima su određene pomoću LC/MS/MS, nakon intragastrične primene jedinjenja iz Primera 11 i intravenske primene jedinjenja iz Primera 11 kod kratkonogih pasa. Proučeno je farmakokinetičko ponašanje sadašnjeg jedinjenja kod kratkonogog psa i procenjene su farmakokinetičke karakteristike.
2. Protokol ispitivanja
2.1 Uzorak
Jedinjenje iz primera 11
2.2. Testirane životinje
[0206] 8 zdravih kratkonogih pasa (polovina ženke i polovina mužjaci) su ravnomerno označeni u 2 grupe. Životinje su nabavljene od SuzhouXishan Zhongke Laboratory Animal Corp. Ltd.
2.3 Formulacija leka
[0207] Izmerena je odgovarajuća količina uzorka i dodato je 0,5% CMC-Na da se formira suspenzija 1,0 mg/ml po ultrazvučnom tretmanu;
Odgovarajuće količine lekova su izmerene i rastvorene sa 5 ml DMSO i 5 ml Tween 80; u konačni volumen je dodat fiziološki rastvor.
2.4 Primena
[0208] 8 zdravih kratkonogih pasa (polovina ženke i polovina mužjaci) su ravnomerno označeni u 2 grupe, i primenjeno im je oralnom cevčicom ili intravenskom injekcijom (i.v.) (oralna sonda u dozi od 5 mg/kg sa zapreminom primene od 5 ml/kg, i i.v. u dozi od 2 mg/kg sa zapreminom primene od 2 ml/kg), nakon gladovanja preko noći.
2. Operacija
[0209] 1,0 ml krvi je prethodno uzorkovan iz vene prednje noge i 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 sata nakon oralne primene, sakupljen u heparinizovanu epruvetu za ispitivanje i centrifugiran na 3500 o/min tokom 10 min da se odvoji plazma, koja je čuvana na -20 ° C. Životinjama je dozvoljen pristup hrani 2 sata nakon primene. Uzorak krvi je uzet pre i 5 min, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 sata posle intravenske primene i tretiran isto kao gore. Sadržaj ispitivanog jedinjenja u plazmi kratkonogih pasa nakon primene jedinjenja oralnom sondom i intravenskom injekcijom određivan je pomoću LC/MS/MS.
3. Rezultati farmakokinetičkih parametara
[0210] Farmakokinetički parametri sadašnjih jedinjenja su prikazani u sledećoj tabeli 6:
[0211] Zaključak: Primer 11 jedinjenja sadašnjeg pronalaska se dobro apsorbuje kod kratkonogih pasa i ima poželjnu oralnu bioraspoloživost.
[0212] Test Primer 7. In vivo farmakodinamički test primera 11 prema sadašnjem pronalasku kod pacova
1. Rezime
[0213] Model endometrioze je utvrđen sa zecom, sproveden je farmakodinamički skrining test za zečju endometriozu tretiran jedinjenjem iz Primera 11.
2. Protokol ispitivanja
2.1 Uzorak
Jedinjenje iz primera 11
2.2. Ispitivane Životinje
[0214] 15 zdravih novozelandskih zečeva (ženki) je ravnomerno označeno u 3 grupe. Životinje su nabavljene od farme laboratorijskih životinja u okruženju Songjiang Shanghai (sertifikat za laboratorijsku proizvodnju životinja br SCXK (HU) 2008-0016).
2.3 Operacija
[0215] Zečevi su bili adaptivno hranjeni i smešteni u karantinu tokom sedam dana i subkutano injektovani sa 30 μg/kg estradiol benzoata, jedanput dnevno tokom dva dana pre operacije; kada je uspostavljen model, zečevi su anestezirani sa 3% natrijum pentobarbitala, laparotomizovani sterilno. Zatim je odvojena jedna strana materice i podvezan sud materice mezorektuma. Zatim je odsečen deo materice i stavljen u toplu fiziološku posudu, a zatim je sekciran longitudinalno i razdvojen na miometrijum i endometrijum. Deo endometrijuma (oko 0,5 cm x 0,5 cm) je zašiven na trbušnom zidu bogatom krvnim sudovima sa intimnom površinom okrenutom prema trbušnoj šupljini. Tri nedelje nakon usađivanja endometrijuma, zečevi su laparotomizovani za proveru intimalne veličine transplantata. 15 životinja uspešnog modelovanja su nasumično podeljene u 3 grupe (5 za svaku grupu) koje su bile kontrolna grupa sa nosačem, nisko-dozna grupa (10 mg/kg jedinjenja iz primera 11) i visoko-dozna grupa (30 mg/kg jedinjenja iz primera 11) respektivno. Svakoj grupi je primenjeno oralnom sondom jednom dnevno u zapremini od 5 ml/kg, kontinuirano 28 dana nakon uspešnog modelovanja. Konačno, zec je izmeren i izmeren je volumen ektopičnog endometrijuma kako bi se procenio uticaj sadašnjeg jedinjenja na endometrijalnu aktivnost.
2.4 Rezultati:
[0216] Nakon primene 30 mg/kg jedinjenja iz primera 11 na modelu zečje endometrioze, tokom 4 nedelje oralnom primenom iste količine 0,5% CMC-Na kao kontrole, rast ektopičnog endometrijuma je značajno inhibiran, dok inhibicija jedinjenja iz Primera 11 za zapreminu ektopičnog endometrijuma pri 10 mg/kg nije bila očigledna. Zbog toga, toksikološka doza NOAEL (doza ispod koje nije primećena doza sa efektom oštećenja) jedinjenja iz Primera 11 u modelu endometrioze zeca je 30 mg/kg.
[0217] Test Primer 8 Sedmodnevna toksikokinetička evaluacija jedinjenja iz primera 11 kod pacova
1. Rezime
[0218] SD pacovi su korišćeni kao ispitivane životinje. Koncentracije u plazmi u različitim vremenima su određene pomoću LC/MS/MS nakon primene jedinjenja iz Primera 11 oralnom sondom tokom 7 dana. Toksičnost jedinjenja kod glodara je preliminarno procenjena u skladu sa potencijalnom reakcijom toksičnosti i stepenom akutnosti tela.
2. Protokol ispitivanja
2.1 Uzorak
Jedinjenje iz primera 11
2.2. Ispitivane životinje
[0219] 24 zdrava odrasla SD pacova (polovina ženke i polovina mužjaci) su ravnomerno označena u 4 grupe (6 za svaku grupu). Životinje su nabavljene od kompanije Shanghai SLAC Laboratory Animal Corp. Ltd (Sertifikat laboratorijske proizvodnje životinja br. SCXK (HU) 2012-0002).
2.3 Formulacija leka
[0220] Odgovarajuća količina uzorka je tačno odmerena i dodata sa neznatnim 0,5% CMC-Na da bi se formirala uniformna suspenzija nakon ultrazvučnog tretmana ili mlevenjem, a zatim razblažena do krajnjeg volumena. Ostali rastvori uzoraka 1. i 7. dana su zadržani za određivanje toksikokinetike primenjene koncentracije.
2.4 Primena
[0221] Ponovljene oralne doze su bile 80, 240 i 720 mg/kg, a primenjene koncentracije su bile 8, 24 i 72 mg/ml respektivno. Zapremina doziranja je bila 10 ml/kg, jednom dnevno tokom 7 dana.
2. Operacija
[0222] Krv je uzorkovana 1. i 7. dana nakon primene, uz vreme uzimanja uzoraka kao pre i 1, 2, 4, 8 i 24 sata nakon oralne primene 1. dana, a pre i 1, 2, 4, 8, 24 i 48 sati nakon oralne primene 7. dana. Uzorak krvi je sakupljen u heparinizovanoj test epruveti i centrifugiran da bi se odvojila plazma, koja je čuvana na -20 ° C. Sadržaj ispitivanog jedinjenja u plazmi pacova nakon primene jedinjenja oralnom sondom je određen pomoću LC/MS/MS.
4. Rezultati
4.1. Uticaj na kliničke simptome
4.1.1 Smrtnost
[0223] Pacov br.1 u grupi toksičnosti od 720 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 uginuo je 7. dana pre doziranja; Pacov br.5 u toksikokinetičkoj grupi 720 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 uginuo je 7. dana pre doziranja, a br.6 je uginuo 9. dana.
4.1.2 Kliničko posmatranje
[0224] Tokom primene, u poređenju sa kontrolnom grupom nosača, pacovi u grupi toksičnosti od 720 mg/kg i toksikokinetičkoj grupi su svi ispoljili gubitak težine i loše mentalno stanje nakon primene jedinjenja iz Primera 11 na dan 6; pacovi u grupi toksičnosti od 720 mg/kg i toksikokinetičkoj grupi nakon primene jedinjenja iz Primera 11 na dan 7 su svi pokazali smanjenje unosa hrane, gubitak težine, smanjenu aktivnost, loše mentalno stanje, slabo krzno leđa, zastoj dlake, roachback, krvarenje oko nosa i očiju, dijareju i prljavo područje krzna.
4.2. Uticaj na telesnu težinu
[0225] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, procenat promene težine visoko dozne grupe je pokazao značajno smanjenje (P <0,05) nakon primene jedinjenja iz Primera 11, dana 3. i 7.
4.2 Uticaj na unos hrane
[0226] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, unos hrane u grupi od 147280720 mg/kg je značajno smanjen 3. i 7. dana.
4.3. Rezultati hematoloških ispitivanja
[0227] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, WBC (bela krvna zrnca), Neut (relativna vrednost neutrofila i apsolutni broj neutrofila), Lymph (apsolutni broj limfocita), EO (apsolutni broj ćelija eozinofila) i RET (relativna vrednost retikulocita i apsolutni broj retikulocita) pacova u grupi doziranja od 720 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 su bili značajno smanjeni (P <0,05).
4.4. Rezultati biohemijskih ispitivanja krvi
[0228] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, BUN (azot uree u krvi), CHOL (ukupni holesterol), CREA (kreatinin), TBIL (ukupni bilirubin), TP (ukupni protein), AST (aspartat aminotransferaza) pacova u doznoj grupi od 720 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 su bili značajno povećani (P <0,05). Iako nema statističkih razlika u ALT (alanin aminotransferazi), ALT dve životinje je bio značajno povećan. ALB (albumin), ALP (alkalna fosfataza) su bili značajno smanjeni (P <0,05). Dok je rezultat detekcije jona nedostajao zbog nedostatka uzoraka krvi SHR 147280 dozne grupe od 720 mg/kg. Nisu otkrivene druge očigledne toksikološke abnormalnosti.
4.5. Parametri koagulacije
[0229] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, pacovi u doznoj grupi od 80 mg/kg i doznoj grupi od 240 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 nisu pokazali značajnu razliku. Rezultat parametara koagulacije je nedostajao zbog nedostatka uzoraka krvi SHR 147280 grupe doziranja od 720 mg/kg.
4.6. Test urina
[0230] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, tretmanske grupe nisu pokazale redovno abnormalne promene indeksa urina.
4.7. Opšti rezultati patologije
[0231] Autopsija je bila opšte vidljiva. U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, dozna grupa 720 mg/kg jedinjenja iz primera 11 je pokazala krvarenje i atrofiju timusa; atrofiju i kongestiju slezine; različite stepene nagomilavanja u režnjevima jetre sa pahuljastim sivocrvenim nekrotičnim lezijama; hiperemiju pluća i krvarenje; krvarenje i hipertrofiju nadbubrežne žlezde; krvarenje u jajnicima i kongestiju; istanjivanje gastrointestinalnog zida; beli sadržaj u stomaku; žuti sadržaj u tankom crevu, crevno krvarenje, hemoragiju rektalnog debelog creva i intestinalni mukoid. Pored toga, uginule životinje su pokazale nekrotične srčane lezije. Ostale grupe nisu imale vidljive abnormalnosti.
4.8. Rezultati organskog koeficijenta
[0232] U poređenju sa kontrolnom grupom nosača, apsolutna vlažna težina timusa, srca, pluća i slezine kod mužjaka i ženki pacova grupe od 720 mg/kg jedinjenja iz Primera 11 je bila značajno smanjena (p <0,05), suprotno apsolutno vlažna težina nadbubrežne žlezde je bila značajno povećana (p <0,05). Relativni koeficijent organa timusa, slezine je bio značajno smanjen (p <0,05), dok je relativni organski koeficijent mozga, jetre, pluća, bubrega i nadbubrežne žlezde bio značajno povećan (p <0,05).
4.10. Rezultati toksikokinetičkih parametara
[0233] Toksikokinetički parametri ženki pacova nakon intragastrične primene
[0234] Stoga, toksikološka NOAEL doza Primera 11 je 240 mg/kg, a letalna doza je 720 mg/ kg. Potencijalni toksični ciljni organi su bili hematopoetski sistem koštane srži, timus, srce, jetra, pluća, slezina, nadbubrežna žlezda, jajnik i digestioni sistem.
[0235] U zaključku: Upoređivanjem farmakokinetičkog ispitivanja test primera 5, farmakodinamičkog ispitivanja test primera 7 i toksikološkog farmakokinetičkog ispitivanja test primera 8, preliminarna procena sigurnosnog okvira jedinjenja u Primeru 11 je bila sledeća:

Claims (18)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (I), ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu: kada G je N, D je C i E je -CH-; kada G je C, D i E su N; R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od 6-članog arila i 6-članog heteroarila, pri čemu su aril i heteroaril svaki nezavisno opciono dalje supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena i -OR<6>; R<2>je C1-6alkil, gde je alkil dalje supstituisan sa fenilom, pri čemu je fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, alkila i haloalkila; R<3>je fenil, pri čemu je svaki fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)R<6>, -NHC(O)OR<6>, -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>; R<4>je C1-6alkil; R<5>je vodonik; R<6>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika i alkila; n je 1 ili 2.
  2. 2. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 1, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je jedinjenje formule (II) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    gde: n i R<1>do R<5>su kao što je definisano u patentnom zahtevu 1.
  3. 3. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 1, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je jedinjenje formule (III) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    gde: n i R<1>do R<5>su kao što je definisano u patentnom zahtevu 1.
  4. 4. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<1>izabran iz grupe koji se sastoji od fenila i piridazinila, pri čemu su fenil i piridazinil svaki opciono dalje supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena i -OR<6>.
  5. 5. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<2>benzil, pri čemu je benzil opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, alkila i haloalkila.
  6. 6. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>fenil, pri čemu je fenil opciono dalje supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)NHR<6>i -NHC(O)NHOR<6>.
  7. 7. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<4>metil.
  8. 8. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 1, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je jedinjenje formule (IV) ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu: n, D, E, G, R<1>, R<2>, R<4>i R<5>su kaon što je definisano u patentnom zahtevu 1; R<a>je izabran iz grupe koja se sastoji od alkila i -OR<6>; i R<6>je alkil.
  9. 9. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od :
  10. 10. Postupak za pripremu jedinjenja formule (I) prema patentnom zahtevu 1, ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrži korak:
  11. reagovanja jedinjenja formule (IA) sa aminom NH(R<4>) (CH2) nR<5>; opciono redukcija ili / i acilacija dobijenog proizvoda da bi se dobilo jedinjenje formule (I); gde: X je halogen; n, D, E, G i R<1>do R<5>su kako je definisano u patentnom zahtevu 1. 11. Postupak za pripremu jedinjenja formule (I) prema patentnom zahtevu 1, ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrži korak:
  12. reagovanja jedinjenja formule (IB) sa R<2>X u prisustvu alkalnog reagensa; opciono redukcija ili / i acilacija dobijenog proizvoda da bi se dobilo jedinjenje formule (I); gde: X je halogen; n, D, E, G i R<1>do R<5>su kako je definisano u patentnom zahtevu 1. 12. Jedinjenje formule (IA), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je korišćena kao intermedijer u pripremi jedinjenja formule (I):
  13. gde: X je halogen; D, E, G i R<l>do R<3>su kao što je definisano u formuli (I). 13. Jedinjenje formule (IB), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je korišćena kao intermedijer u pripremi jedinjenja formule (I):
  14. pri čemu: n, D, E, G, R<1>i R<3>do R<5>su kao što je definisano u formuli (I). 14. Postupak za pripremu jedinjenja formule (IA) prema patentnom zahtevu 12, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrži korak:
  15. sprovođenje reakcije halogenovanja jedinjenje formule (Ib) da bi se dobilo jedinjenje formule (IA); gde su: D, E, G i R<l>do R<3>kao što je definisano u patentnom zahtevu 1. 15. Postupak za pripremu jedinjenja formule (IB) prema patentnom zahtevu 13, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji obuhvata korak:
  16. sprovođenje ciklizacije jedinjenja formule (Ig) da bi se dobilo jedinjenje formule (IB); pri čemu: n, D, E, G, R<1>i R<3>~R<5>su kaon što je definisano u patentnom zahtevu 1; R<b>je alkil. 16. Jedinjenje je izabrano iz grupe koja se sastoji od:
  17. 17. Farmaceutski preparat koji sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, ili tautomera, mezomera, racemata, enantiomera, dijastereomera ili njihove smeše, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.
  18. 18. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, ili tautomer, mezomer, racemat, enantiomer, dijastereomer ili njihova smeša, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 17, za upotrebu kao lekova za lečenje ili prevenciju karcinoma zavisnih od polnih hormona, koštanih metastaza od karcinoma zavisnih od polnih hormona, hiperplazije prostate, leiomioma materice, endometrioze, fibroida materice, preuranjenog puberteta, amenoreje, predmenstrualnog sindroma, dismenoreje, sindroma multilokularnog jajnika, sindroma policističnih jajnika, akni, alopecije, Alzheimerove bolest, steriliteta, sindroma iritabilnog creva, benignih ili malignih tumora koji nisu zavisni od hormona i osetljivi na LH-RH ili crvenila; za upotrebu kao reproduktivni regulator, kontracepcijska pilula, evokator ovulacije; ili za upotrebu kao lekova za prevenciju postoperativnog recidiva raka zavisnog od polnih hormona, izabranog iz grupe koja se sastoji od raka prostate, raka materice, raka dojke i raka hipofize; poželjno raka prostate, raka materice, raka dojke, endometrioze ili leiomioma materice. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RSP20191238 2013-10-30 2014-09-30 Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, metoda pripreme istih i njihove farmaceutske upotrebe RS59457B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310525956 2013-10-30
EP14858090.5A EP3064498B1 (en) 2013-10-30 2014-09-30 Pyrazolopyrimidone or pyrrolotriazone derivatives, method of preparing same, and pharmaceutical applications thereof
PCT/CN2014/087906 WO2015062391A1 (zh) 2013-10-30 2014-09-30 吡唑并嘧啶酮类或吡咯并三嗪酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59457B1 true RS59457B1 (sr) 2019-11-29

Family

ID=53003302

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP20191238 RS59457B1 (sr) 2013-10-30 2014-09-30 Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, metoda pripreme istih i njihove farmaceutske upotrebe

Country Status (22)

Country Link
US (3) US10005781B2 (sr)
EP (1) EP3064498B1 (sr)
JP (1) JP6412563B2 (sr)
CN (1) CN104884457B (sr)
AU (1) AU2014344504C1 (sr)
BR (1) BR112016008799B1 (sr)
CA (1) CA2927641C (sr)
CY (1) CY1122196T1 (sr)
DK (1) DK3064498T3 (sr)
ES (1) ES2747839T3 (sr)
HR (1) HRP20191679T1 (sr)
HU (1) HUE046314T2 (sr)
LT (1) LT3064498T (sr)
MX (1) MX380546B (sr)
PL (1) PL3064498T3 (sr)
PT (1) PT3064498T (sr)
RS (1) RS59457B1 (sr)
RU (1) RU2674977C2 (sr)
SI (1) SI3064498T1 (sr)
SM (1) SMT201900573T1 (sr)
TW (1) TWI675838B (sr)
WO (1) WO2015062391A1 (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HRP20191679T1 (hr) * 2013-10-30 2019-12-13 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, postupak pripreme jednakih i njihove farmaceutske uporabe
TWI751220B (zh) * 2016-11-07 2022-01-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種ＧｎＲＨ受體拮抗劑的多晶型及其製備方法
DK3539545T3 (da) * 2016-11-14 2021-09-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co Krystallinsk form af gnrh-receptorantagonist og fremgangsmåde til fremstilling deraf
AU2018305633B2 (en) * 2017-07-28 2022-11-24 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Method for preparing pyrimidone heteroaryl derivative and intermediate of pyrimidone heteroaryl derivative
CN109970662B (zh) * 2017-12-27 2023-06-30 上海科胜药物研发有限公司 一种制备噁拉戈利中间体的方法
CN117203209A (zh) * 2021-04-02 2023-12-08 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种GnRH受体拮抗剂的结晶形式及其制备方法
CN115260211B (zh) * 2021-04-29 2024-02-06 长春金赛药业有限责任公司 含噻吩稠环类衍生物、药物组合物及其制备方法和应用
CN117769424A (zh) * 2021-08-30 2024-03-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种GnRH受体拮抗剂的结晶工艺
CN115141809B (zh) * 2022-08-30 2023-05-02 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种检测gnrh结合蛋白生物学活性的方法及试剂盒
IL322520A (en) * 2023-02-24 2025-10-01 Japan Tobacco Inc Modified pyrazolopyrimidine compounds and their medical use
JP7729000B2 (ja) * 2023-02-24 2025-08-25 日本たばこ産業株式会社 ６－アルコキシピラゾロピリミジン化合物及びその医薬用途

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5171835A (en) 1988-10-21 1992-12-15 The Administrators Of The Tulane Educational Fund LHRH antagonists
US20020065309A1 (en) 1999-08-04 2002-05-30 Ge Peng Novel Bicyclic and tricyclic pyrrolidine derivatives as GnRH antagonists
JP5072166B2 (ja) * 2002-01-30 2012-11-14 武田薬品工業株式会社 チエノピリミジン化合物、その製造法および用途
US7569570B2 (en) * 2002-01-30 2009-08-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Thienopyrimidines, process for preparing the same and use thereof
AU2003253165A1 (en) * 2002-08-13 2004-02-25 Warner-Lambert Company Llc Pyrimidine fused bicyclic metalloproteinase inhibitors
JP4039574B2 (ja) * 2003-01-29 2008-01-30 武田薬品工業株式会社 チエノピリミジン化合物およびその用途
CN101076531A (zh) * 2004-10-12 2007-11-21 解码遗传学公司 用于阻塞性血管疾病的羧酸迫位取代的双环化合物
EP1841448A2 (en) * 2004-12-30 2007-10-10 Diakine Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions and methods for restoring beta-cell mass and function
EP1847541A4 (en) * 2005-02-03 2009-12-30 Takeda Pharmaceutical CONDENSED PYRIMIDINE DERIVATIVE AND USE THEREOF
WO2006096785A1 (en) 2005-03-07 2006-09-14 Wyeth Quinoxaline dihydrohalide dihydrates and synthetic methods therefor
CN101468988A (zh) * 2007-12-26 2009-07-01 上海恒瑞医药有限公司 哌嗪类衍生物,其制备方法及其在医药上的应用
EP2329823A4 (en) 2008-09-03 2013-04-03 Takeda Pharmaceutical PROCESS FOR INCREASING THE ABSORPTION ABILITY OF A PREPARATION AND PREPARATION WITH INCREASED ABSORPTION ABILITY
SI2411393T1 (sl) * 2009-03-23 2014-03-31 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Kondenzirani pirimidin-dionski derivati kot TRPA 1 modulatorji
TW201130854A (en) 2009-12-22 2011-09-16 Bayer Schering Pharma Ag Pyridinone derivatives and pharmaceutical compositions thereof
EP2525659B1 (en) 2010-01-19 2019-02-27 Merck Sharp & Dohme Corp. PYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS mTOR INHIBITORS
CN102807568B (zh) 2011-05-31 2015-11-25 正大天晴药业集团股份有限公司 噻二唑衍生物类dpp-iv抑制剂
WO2012175514A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Bayer Intellectual Property Gmbh Pyridinone derivatives and pharmaceutical compositions thereof
RS57157B1 (sr) * 2011-11-11 2018-07-31 Gilead Apollo Llc Acc inhibitori i njihove primene
MX357841B (es) 2012-02-28 2018-07-26 Tiumbio Co Ltd Antagonistas de los receptores de la hormona liberadora de gonadotropina, método para la preparación de éstos y composición farmacéutica que los contienen.
CN102807569B (zh) * 2012-08-21 2015-02-25 四川大学 一种镇静催眠的化合物及其制备方法和用途
HRP20191679T1 (hr) * 2013-10-30 2019-12-13 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Derivati pirazolopirimidona ili pirolotriazona, postupak pripreme jednakih i njihove farmaceutske uporabe

Also Published As

Publication number Publication date
SI3064498T1 (sl) 2019-11-29
CN104884457B (zh) 2016-12-07
CA2927641C (en) 2023-03-14
US10005781B2 (en) 2018-06-26
PL3064498T3 (pl) 2020-03-31
WO2015062391A1 (zh) 2015-05-07
HUE046314T2 (hu) 2020-02-28
US10633388B2 (en) 2020-04-28
MX2016005142A (es) 2016-10-28
ES2747839T3 (es) 2020-03-11
AU2014344504B2 (en) 2018-07-19
BR112016008799B1 (pt) 2023-02-23
RU2016119135A3 (sr) 2018-05-18
EP3064498A4 (en) 2017-03-22
DK3064498T3 (da) 2019-10-07
RU2674977C2 (ru) 2018-12-14
PT3064498T (pt) 2019-10-14
HRP20191679T1 (hr) 2019-12-13
CN104884457A (zh) 2015-09-02
TWI675838B (zh) 2019-11-01
RU2016119135A (ru) 2017-12-04
US20180244679A1 (en) 2018-08-30
JP6412563B2 (ja) 2018-10-24
CA2927641A1 (en) 2015-05-07
AU2014344504C1 (en) 2018-11-01
TW201536787A (zh) 2015-10-01
CY1122196T1 (el) 2020-11-25
US10344034B2 (en) 2019-07-09
SMT201900573T1 (it) 2019-11-13
MX380546B (es) 2025-03-12
EP3064498A1 (en) 2016-09-07
US20190270748A1 (en) 2019-09-05
BR112016008799A8 (pt) 2020-03-24
EP3064498B1 (en) 2019-07-17
AU2014344504A1 (en) 2016-05-12
US20160264578A1 (en) 2016-09-15
JP2016534989A (ja) 2016-11-10
LT3064498T (lt) 2019-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10633388B2 (en) Pyrazolopyrimidone derivatives and methods of use thereof
CN104302649B (zh) 基于吡唑并[1,5‑a]嘧啶的化合物、包含它们的组合物及其使用方法
CN118176198A (zh) 含氮的四环化合物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2018157857A1 (zh) 凋亡信号调节激酶抑制剂及其制备方法和应用
CN103172648B (zh) 三杂环衍生物、制备方法及应用
WO2004067535A1 (ja) チエノピリミジン化合物およびその用途
RS56121B1 (sr) Novi derivati benzimidazola kao ep4-antagonisti
BR112020019824A2 (pt) Composto de fórmula estrutural i ou um sal do mesmo, composição farmacêutica, método de inibição de cbp, método de inibição de p300, método de tratamento de uma doença mediada por cbp, método de tratamento de uma doença mediada por p300 e método para alcançar um efeito em um paciente
CZ243093A3 (en) Benzofuran derivatives, process of their preparation and pharmaceutical preparations in which they are comprised
CN105517552A (zh) 基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法
WO2018171611A1 (zh) 6-吡唑-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
JP2022000432A (ja) アンドロゲン除去療法随伴症状の治療
JP6181172B2 (ja) アンドロゲン受容体拮抗薬としてのｎ−［４−（キノリン−４−イルオキシ）シクロヘキシル（メチル）］（ヘテロ）アリールカルボキサミド類、医薬品としてのその製造および使用
JP2002503660A (ja) 性腺刺激ホルモン放出ホルモン拮抗薬
JP2002503661A (ja) 性腺刺激ホルモン放出ホルモン拮抗薬
WO2023040771A1 (zh) 含氮稠环类化合物及其制备方法和医药用途
JP2002030087A (ja) チエノピリジン−５−カルボン酸エステル化合物、その製造法および用途
WO2024245169A1 (zh) 一种靶向雌激素受体的protac化合物及其制备方法和用途
CN117586265A (zh) 含氮杂环类化合物、其制备方法及其在医药上的应用
US20110105476A1 (en) Substituted 7,8-dihydro-1hpyrimido[4,5-b]diazepin-4-amines are novel kinase inhibitors
WO2025140599A1 (zh) 一种杂环类化合物及其制备方法和医药用途
CA2608974C (en) Substituted 7,8-dihydro-1h-pyrimido[4,5-b][1,4]diazepin-4-amines are novel kinase inhibitors
WO2003051885A1 (en) Nitrogen-containing heterocyclic compounds and use thereof
WO2023186058A1 (zh) 吲唑类化合物、其制备方法及其在医药上的应用
TW201542564A (zh) 螺二氫吲哚衍生物及其醫藥組合物