RS60864B1 - Jedinjenja koja imaju aktivnost antagonista muskarinskog receptora i agonista beta2 adrenergičkog receptora - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja opšte formule I, koji deluju i kao antagonisti muskarinskog receptora i agonisti beta2 adrenergičkog receptora, na postupke za njihovu pripremu, na kompozicije koje ih sadrže, na terapijsku upotrebu i kombinacije sa drugim farmaceutskim aktivnim sastojcima.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Plućni poremećaji, kao što su astma i hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), su obično tretirani sa bronhodilatatorima. Poznata klasa bronhodilatatora se sastoji od agonista beta-2adrenergičkog receptora, kao što su salbutamol, fenoterol, formoterol i salmeterol. Ova jedinjenja se generalno primenjuju inhalacijom.

[0003] Druga poznata klasa bronhodilatatora se sastoji od antagonista muskarinskog receptora (antiholinergijskih jedinjenja), kao što su ipratropijum i tiotropijum. Ova jedinjenja se obično primenjuju inhalacijom.

[0004] Inhalacione formulacije i beta-2 agonista i antagonista muskarinskog receptora su dragoceni agensi u tretmanu astme i COPD, sa obe klase agenasa obezbeđujući simptomatsko olakšanje zbog svoje sposobnosti da relaksiraju sužene disajne puteve. Zapažanja da su bronhodilatatorni efekti dve klase agenasa bili aditivni, potstakla su studije sa kombinacijama dva agensa. 1975. godine je prikazano da korisni efekti mogu biti postgnuti kombinovanjem dva sastojka kao što su fenoterol i ipratropijum bromid u jednom aerosolu. Ovo je potstaklo razvoj kombinacija fiksnih doza ipratropijum bromida, prvo sa fenoterolom (Berodual, uveden 1980), i zatim sa salbutamolom (Combivent, uveden 1994).

[0005] Donedavno, dostupnost mukarinskih antagonista sa dugim delovanjem i beta-2 agonista sa dugim delovanjem je potstakla razvoj kombinacija ovih agenasa. Na primer, WO 00/69468 otkriva kompozicije leka koje sadrže antagonist muskarinskog receptora, kao što je tiotropijum bromid i agoniste beta-2 adrenergičkog receptora, kao što su formoterol fumarat ili salmeterol, i WO 2005/115467 otkriva kombinaciju koja sadrži beta-2 agonist i antagonist M3 muskarinskih receptora, koja je so 3(R)-(2-hidroksi-2,2-ditien-2-ilacetoksi)-1-(3-fenoksipropil)-1-azoniabiciklo [2.2.2]oktana.

US2009/181935 A1 otkriva kompozicije koje sadrže beta-2 agonist i muskarinski antagonist za tretman COPD.

[0006] Alternativni pristup razvoju kombinacija fiksnih doza je identifikacija molekula koji kombinuju obe aktivnosti muskarinskog antagonizma i beta-2 agonizma. U stvari, jedinjenja posedujući aktivnost i agonista beta-2 adrenergičkog receptora i antagonista muskarinskog receptora su veoma poželjna jer bi takva bifunkcionalna jedinjenja obezbedila bronhodilataciju kroz dva nezavisna mehanizma delovanja, imajući istovremeno farmakokinetiku jednog molekula.

[0007] Takve vrste jedinjenja su opisane u nekim patentnim prijavama, kao što su WO 2004/074246, WO 2004/074812, WO 2005/051946, WO 2006/023457, WO 2006/023460, WO 2010/123766, WO 2011/048409 i odgovarajuća patentna prijava PCT/EP2012/060795.

[0008] Biorganic & Medicinal Chemistry Letters, 21(5), 2011, strane 1354-1358 otkriva jedinjenje koje sadrži 8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin deo odgovoran za beta-2 agonističku aktivnost i difenilkarbamatni deo koji je odgovoran za muskarinsku antagonističku aktivnost. Delovi su povezani preko supstituisanog hinuklidinskog odstojnika.

[0009] Sada je utvrđeno da neki određeni derivati karbamata, osim što poseduju aktivnost i beta-2 adrenergičkog receptornog agonista i antagonista muskarinskog receptora, poseduju povišen afinitet prema M3 muskarinskim receptorima i dugotrajnu bronhodilatacionu aktivnost.

REZIME PRONALASKA

[0010] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja opšte formule I, koja deluju i kao antagonisti muskarinskog receptora i beta2 adrenergički receptorni agonisti, na postupak za njihovu pripremu, na kompozicije koje ih sadrže, na terapijsku upotrebu i kombinacije sa drugim farmaceutski aktivnim sastojcima, među kojima su, na primer, oni koji se trenutno koriste u tretmanu respiratornih poremećaja, među kojima beta2-agonisti, antimuskarinski agensi, inhibitori proteinske kinaze (P38 MAP kinaze) aktivirane mitogenom, inhibitori nuklearnog faktora kappa-B kinaze podjedinice beta (IKK2), inhibitori humane neutrofilne elastaze (HNE), inhibitori fosfodiesteraze 4 (PDE4), leukotrienski modulatori, nesteroidni antiinflamatorni agensi (NSAIDi), antitusivni agensi, regulatori sluzi, mukolitici, ekspektorans/mukokinetički modulatori, peptidni mukolitici, antibiotici, inhibitori JAK, SYK inhibitori, inhibitori PI3Kdelta ili PI3Kgamma, kortikosteroidi i M3-antagonisti/PDE4-inhibitori (MAPI).

DETALJN OPIS PRONALASKA

[0011] Pronalazak se naročito odnosi na jedinjenje opšte formule I

pri čemu

Q je grupa formule Q1

Z je H ili OH;

Y je izabran od Y’ i Y1 koji su dvovalentne grupe formule

ili

pri čemu

A1 je butilen;

A2 je odsutan ili (C1-C6)alkilen;

B je izabran iz grupe koja se sastoji od pirazoldiila i tiofendiila, opciono supstituisanih sa jednom ili više grupa izabranih od metila;

C je -OC(O)- ili C1

pri čemu R4je H;

D je odsutan ;

n’ je 1;

E je -O-;

G je fenilen;

R1i R2su nezavisno H ili aril;

R3je grupa formule J1 ili J2

pri čemu R5je grupa formule K

pri čemu p’ je 0 ili 1, P je odsutan ili je CO, q je odsutan ili je 1 i W je heteroaril; i farmaceutski prihvatljive soli ili solvate od njih.

[0012] Izraz "(C1-C6)alkilen" se odnosi na dvovalentne grupe, kao što je metilen, etilen, n-propilen, izopropilen, t-butilen, pentilen, heksilen i slično.

[0013] Izraz "aril" se odnosi na mono, bi- ili triciklične sisteme prstena koji imaju 5 do 20, poželjno od 5 do 15, atoma prstena, i pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan.

[0014] Izraz "heteroaril" se odnosi na mono, bi- ili triciklične sisteme sa 5 do 20 atoma prstena, poželjno od 5 do 15, u kojima je najmanje jedan prsten aromatičan i u kojem je najmanje jedan atom ugljenika u prstenu heteroatom ili heteroaromatična grupa (npr. N, NH, S ili O).

[0015] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih monocikličnih sistema uključuju, na primer, tiofen, benzen, pirol, pirazol, imidazol, izoksazol, oksazol, izotiazol, tiazol, piridin, imidazolidin, furanske radikale i slično.

[0016] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih bicikličnih sistema uključuju naftalen, bifenilen, purin, pteridin, benzotriazol, hinolin, izohinolin, indol, izoindol, benzotiofen, dihidrobenzo dioksin, dihidro-inden, dihidrobenzo dioksepin, benzo oksazin radikale i slično.

[0017] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih tricikličnih sistema uključuju fluorenske radikale kao i benzokondenzovane derivate prethodno pomenutih heteroarilnih bicikličnih sistema.

[0018] Kad god su u jedinjenjima formule I prisutne bazne amino ili kvaternarne amonijum grupe, fiziološki prihvatljivi anjoni, izabrani između hlorida, bromida, jodida, trifluoroacetata, formata, sulfata, fosfata, metan sulfonata, nitrata, maleata, acetata, citrata, fumarata, tartrata, oksalata, sukcinata, benzoata, p-toluensulfonata, pamoata i naftalen disulfonata mogu biti prisutni. Isto tako, u prisustvu kiselih grupa kao što su COOH grupe, odgovarajuće fiziološke katjonske soli mogu biti prisutne, na primer, uključujući jone alkalnih ili zemnoalkalnih metala.

[0019] Biće očigledno da jedinjenja opšte formule I mogu sadržavati asimetrične centre. Zbog toga, pronalazak takođe uključuje bilo koji od optičkih stereoizomera, dijastereoizomera i smeše od njih, u bilo kojoj proporciji.

[0020] Konkretno, atom ugljenika vezan na R1, R2, G i -NH-grupe, u zavisnosti od značenja koja su data za R1i R2među onima koja su ranije prikazana može predstavljati hiralni centar.

[0021] U jednom izvođenju, konfiguracija je (S).

[0022] U drugom izvođenju, apsolutna konfiguracija ovog hiralnog centra je poželjno (R).

[0023] U drugom poželjnom izvođenju, jedinjenja opšte formule I opisana u predmetnom pronalasku su prisutna kao smeše dijastereoizomera.

[0024] Stručnjacima sa ovog područja tehnike će biti očigledno da jedinjenja opšte formule I pri čemu R3je J1 ili J2

sadrže tri stereogena centra, kao što je naznačeno ispod sa zvezdicom (*). ;[0025] To znači da je struktura formule I naznačena sa osam različitih stereoizomera. ;; ;;; [0026] Podrazumeva se da sve poželjne grupe ili izvođenja opisana ovde ispod za jedinjenja formule I mogu biti kombinovana jedna sa drugim i da se primenjuju kao mutatis mutandis (promenom onoga što treba promeniti). ;[0027] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije jedinjenja formule I, same ili u kombinaciji sa ili u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili ekscipijenasa. ;[0028] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I za pripremanje medikamenta. ;[0029] U daljem aspektu, pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I za prevenciju i/ili tretman bilo koje bronhoopstruktivne ili inflamatorne bolesti, poželjno astme ili hroničnog bronhitisa ili hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD). ;[0030] U daljem aspektu, pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I za proizvodnju leka za prevenciju i/ili tretman bilo koje bronho-opstruktivne ili inflamatorne bolesti, poželjno astme ili hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD). ;[0031] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije pogodne za primenu sa inhalacijom. ;[0032] Inhalacioni pripravci uključuju prahove za udisanje, dozirane aerosole koji sadrže potisni gas ili formulacije za udisanje koje ne sadrže potisni gas. ;[0033] Pronalazak se takođe odnosi na uređaj koji može biti pojedinačni ili više dozni inhalator za suvi prah, inhalator sa odmerenom dozom i nebulizator koji sadrži jedinjenja formule I u obliku meke magle. ;[0034] Pronalazak se takođe odnosi na komplet koji sadrži farmaceutske kompozicije jedinjenja formule I same ili u kombinaciji sa ili u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili ekscipijenasa i uređaj koji može biti inhalator sa jednom- ili više- doza za suvi prah, inhalator sa odmerenom dozom i nebulizator meke magle koji sadrži jedinjenja opšte formule I u obliku meke magle. ;[0035] Prema specifičnim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja prikazana ispod: ;; ;;; [0036] Predmetni pronalzak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje pronalaska, bilo kao takvo ili kao farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili ekscipijenasa. ;[0037] Jedinjenja pronalaska mogu biti primenjivana kao jedini aktivni agens ili u kombinaciji sa drugim farmaceutskim aktivnim sastojcima, uključujući one koji se trenutno koriste u tretmanu respiratornih poremećaja, npr. beta2-agoniste, antimuskarinske agense, inhibitore protein kinaza (P38 MAP kinaza) aktivirane mitogenom, inhibitore nuklearnog faktora kappa-B kinaze podjedinice beta (IKK2), inhibitore humane neutrofilne elastaze (HNE), inhibitore fosfodiesteraze 4 (PDE4), leukotrienske modulatore, ne-steroidne anti-inflamatorne agense (NSAIDe), antitusivne agense, regulatore sluzi, mukolitike, ekspektorans/mukokinetičke modulatore, peptidne mukolitike, antibiotike, inhibitore JAK, SYK inhibitore, inhibitore PI3Kdelta ili PI3Kgamma, kortikosteroide i M3-antagoniste/PDE4-inhibitore (MAPI). ;[0038] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa β2-agonistom uzabranim iz grupe koja se sastoji od karmoterola, GSK-642444, indakaterola, milveterola, arformoterola, arformoterol tartrata, formoterola, formoterol fumarata, salmeterola, salmeterol ksinafoata, salbutamola, albuterola, levalbuterola, terbutalina, indakaterola (QAB-149), AZD-3199, BI-1744-CL, LAS-100977, GSK159797, GSK59790, GSK159802, GSK642444, GSK678007, GSK96108, bambuterola, izoproternola, prokaterola, klenbuterola, reproterola, fenoterola, bitolterola, brodksatelora i ASF-1020 i soli od njih. ;[0039] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa antimuskarinskim agensom izabranim iz grupe koja se sastoji od aklidinijuma, tiotropijuma, tiotropijumbromida (Spiriva®), ipratropijuma, ipratropijum-bromida, trospijuma, glikopirolata, NVA237, LAS34273, GSK656398, GSK233705, GSK57319, LAS35201, QAT370 i soli oksitropijuma. ;[0040] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa PDE4 inhibitorom izabranim iz grupe koja se sastoji od AN-2728, AN-2898, CBS-3595, apremilasta, ELB-353, KF-66490, K-34, LAS-37779, IBFB-211913, AWD-12-281, cipamfilina, cilomilasta, roflumilasta, BAY19-8004 i SCH-351591, AN-6415, indus-82010, TPI-PD3, ELB-353, CC-11050, GSK-256066, oglemilasta, OX-914, tetomilasta, MEM-1414 i RPL-554. ;[0041] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli sa inhibitorom P38 MAP kinaze izabrane iz grupe koja se sastoji od semapimoda, talmapimoda, pirfenidona, PH-797804, GSK-725, GSK856553, GSK681323, minokina i losmapimoda i soli od njih. ;[0042] U poželjnom izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska sa inhibitorom IKK2. ;[0043] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska sa inhibitorom HNE izabranim iz grupe koja se sastoji od AAT, ADC-7828, aeriva, TAPI, AE-3763, KRP-109, AX-9657, POL-6014,AER-002, AGTC-0106, respriva, AZD-9668, zemaira, AAT IV, PGX-100, elafina, SPHD-400, prolastina C i inhalacionog prolastina. ;[0044] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa leukotrienskim modulatorom izabranim iz grupe koja se sastoji od montelukasta, zafirlukasta i pranlukasta. ;[0045] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa NSAID izabranim iz grupe koja se sastoji od ibuprofena i ketoprofena. ;[0046] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa antitusivnim agensom, izabranim iz grupe koja se sastoji od kodeina i dekstramorfana. ;[0047] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa mukolitikom, izabranim iz grupe koja se sastoji od N acetil cisteina i fudosteina. ;[0048] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa ekspektoransom /mukokinetički modulator, izabranim iz grupe koja se sastoji od ambroksola, hipertoničkih rastvora (npr. fiziološkog rastvora ili manitola) i surfaktanta. ;[0049] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa peptidnim mukolitikom, izabranim iz grupe koja se sastoji od rekombinantne humane deoksiribonukleaze I (dornaza-alfa i rhDNaza) i helicidina. ;[0050] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa antibiotikom, izabranim iz grupe koja se sastoji od azitromicina, tobramicina i aztreonama. ;[0051] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa regulatorom sluzi izabranim iz grupe koja se sastoji od INS-37217, dikvafozola, sibenadeta, CS-003, talnetanta, DNK-333, MSI -1956 i gefitiniba. ;[0052] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa inhibitorom JAK, izabranim iz grupe koja se sastoji od CP-690550 i GLPG0634. ;[0053] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja pronalaska, bilo kao takvog ili kao farmaceutski prihvatljive soli, sa SYK inhibitorom izabranim iz grupe koja se sastoji od R406, R343 i PRT062607. ;[0054] Pronalazak takođe obezbeđuje kombinacije jedinjenja formule (I) sa kortikosteroidom izabranim iz grupe koja se sastoji od deksametazona, flutikazona, flutikazon furoata, flutikazon propionata, prednizolona, betametazona, budesonida, mometazona, mometazon furoata, triamcinolon acetonida, ciklesonida, TPI-1020, beklometazona, beklometazon dipropionata, prednizona, deflazakorta, hidrokortizona, QAE-397 i flunisolida. ;[0055] Jedinjenja pronalaska mogu biti pripremljena iz lako dostupnih polaznih materijala korišćenjem sledećih opštih metoda i postupaka ili korišćenjem drugih informacija koje su lako dostupne stručnjacima sa ovog područja tehnike. Iako se ovde može prikazati ili opisati određeno izvođenje predmetnog pronalaska, stručnjaci sa ovog područja tehnike će znati da sva izvođenja ili aspekti predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena korišćenjem ovde opisanih metoda ili korišćenjem drugih metoda, reagenasa i polaznih materijala poznatih onim stručnjacima sa ovog područja tehnike. Takođe će se razumeti da tamo gde su dati tipični ili poželjni uslovi procesa (tj. temperature reakcije, vreme, molarni odnosi reaktanata, rastvarači, pritisci itd.), mogu biti korišćeni i drugi uslovi procesa, osim ako nije drugačije navedeno. Iako optimalni uslovi reakcija mogu varirati u zavisnosti od korišćenih određenih reaktanata ili rastvarača, takve uslove može lako odrediti stručnjak sa ovog područja tehnike rutinskim postupcima optimizacije. ;[0056] Jedinjenja opšte formule I mogu biti pripremljena prema sledećim sintetskim Šemama 1 i 2. ; ; ; Opšti potupak za pripremu jedinjenja formule I ;;[0057] Jedinjenja opšte formule VIII predstavljaju jedinjenje pri čemu je A1 alkilen supstituisan sa okso, dovodeći do aldehida ili ketona zaštićenog kao ciklični acetal. Ciklična acetalna zaštitna grupa (PG) može biti uklonjena dovodeći do jedinjenja opšte formule XXIII. ;[0058] Sinteza jedinjenja opšte formule I može zahtevati zaštitu potencijalne reaktivne funkcionalnosti pored već opisanih metoda. U takvom su slučaju primeri kompatibilnih zaštitnih grupa (PG) i njihove konkretne metode zaštite i zaštita opisani u "Protecting groups in organic Synthesis" by T.W. Green and P. Wutz (Wiley-Interscience publication, 1999). Jedinjenja opšte formule I mogu biti pripremljena na primer reakcijom jedinjenja opšte formule XVII sa jedinjenjem opšte formule XVIII. Ova reakcija reduktivne aminacije može biti izvedena prateći nekoliko različitih protokola opisanih u literaturi i poznatih stručnjacima sa ovog područja tehnike. Na primer, to može biti izvedeno u rastvaraču kao što je metanol, etanol, tetrahidrofuran (THF) ili dihlormetan (DCM) upotrebom redukujućeg agensa kao što je NaBH4, NaCNBH3ili NaBAcO3H. Bilo bi korisno dobiti imin pre dodavanja redukujućeg agensa. Reakcija se odvija lagano na sobnoj temperaturi preko 1 do 12 sati. ;[0059] Intermedijer opšte formule XVII može biti lako pripremljen reakcijom jedinjenja opšte formule XIII sa sjedinjenjem opšte formule XV. Reakcija se odvija glatko na sobnoj temperaturi ili nižoj temperaturi u rastvaraču kao što je DCM ili piridin preko 1-16 sati, dovodeći do jedinjenja formule XVI sa kojeg se može lako ukloniti zaštita u vodenom kiselinskom rastvoru, dovodeći do jedinjenja opšte formule XVII (videti Šemu 1). ;[0060] Jedinjenja opšte formule XV ili su komercijalno dostupna ili mogu biti pripremljena reagovanjem alkohola opšte formule XIV sa na primer difosgenom u rastvaraču kao što je DCM, THF ili acetonitril (ACN) na sobnoj temperaturi ili nižoj temperaturi, tokom perioda vremena u rasponu od 0.5 do 12 sati, dovodeći do jedinjenja opšte formule XV pri čemu je odlazeća grupa LG hlor. Alternativno, alkohol opšte formule XIV može reagovati sa, na primer, karbonildiimidazolom (CDI) dovodeći do istog intermedijera pri čemu je LG imidazol. Ostali mogući intermedijeri sa drugim poznatim LG-ma mogu biti pripremljeni kao što je opisano u literaturi. ;[0061] Jedinjenje opšte formule XIII može biti pripremljeno iz jedinjenja opšte formule XI Riterovom reakcijom (acetonitril i sumporna kiselina na sobnoj temperaturi) praćenom hidrolizom intermedijernog acetamida izvedenog pod baznim uslovom. ;[0062] Alternativno jedinjenja opšte formule XIII mogu biti pripremljena redukcijom azida formule XII hidrogenacijom pod atmosferom vodonika ili uslovima prenosa vodonika. Reakcija se odvija u alkoholima na sobnoj teperaturi ili višoj temperaturi i zaustavlja se za 1 do 12 sati. Alternativna metoda redukcije bi mogla biti Staudingerova reakcija koja uključuje tretman azidom, prvo sa na primer trifenilfosfinom, praćen hidrolizom iminofosforanskog intermedijera sa vodom. Ova reakcija se odvija na sobnoj temperaturi u rastvaraču koji se meša sa vodom, kao što je na primer THF. Upotreba snažnog redukujućeg agensa, kao što je na primjer LiAlH4u THF-u ili etru na -40°C ili nižoj temperaturi, može lako omogućiti izvođenje potrebne konverzije jedinjenja XIV u XIII. ;[0063] Azid XII je dobijen iz jedinjenja formule XI reakcijom sa difenil fosforil azidom. Reakcija je izvedena na visokoj tački ključanja, kao što je toluen ili ksilen, u prisustvu jake baze, kao što je, ali nije ograničeno na 1,8-diazabiciklo [5.4.0] undec-7-en (DBU) pri temperaturi u rasponu od 80 do 120°C, a završava se preko 12 do 24 sata. Alternativno, hidroksilni deo intermedijera formule XI može biti konvertovan u pogodnu odlazeću grupu (LG), kao što je na primer mezil, tozil ili halogen, i zatim reaguje sa alkalnim azidom u polarnom rastvaraču kao što je acetonitril, DMF ili N-Metil-2-pirolidon (NMP) na sobnoj temperaturi ili višoj temperaturi. ;[0064] Intermedijeri opšte formule XI mogu biti pripremljeni na nekoliko različitih načina. Na primer, oni mogu biti pripremljeni reakcijom jedinjenja opšte formule VII, gde je E -O-, i aldehid opšte formule V imajući karakteristiku pogodne hidroksilne grupe koja može povoljno reagovati pod standardnim Mitsunobu uslovima. Reakcija je izvršena u rastvaračima kao što su THF ili N-metil-morfolin (NMM) na temperaturi od -10°C do sobne temperature i završava se u 1 do 24 sata. To se dešava u prisustvu dietil azodikarboksilata (DEAD) ili diizopropil azodikarboksilata (DIAD) i organskog fosfina kao što je, ali nije ograničeno na, trifenilfosfin. ;[0065] Alkohol opšte formule VII je ili komercijalno dostupan ili može biti pripremljen iz jedinjenja formule II dodatkom Grinjarovog reagensa formule VI. Reakcija je normalno urađena u aprotičnom rastvaraču kao što je etar ili THF na sobnoj temperaturi ili nižoj temperaturi, i završava se preko 0.5 do 12 sati. Alternativno, može biti pripremljena redukcijom jedinjenja opšte formule II, pri čemu R2nije vodonik, sa redukujućim agensom, kao što je, ali nije ograničeno na, NaBH4, dovodeći u ovom slučaju do jedinjenja formule VII pri čemu je R1vodonik. Reakcija je izvedena u rastvaraču kao što je metanol, etanol ili THF i završava se kroz vremenski period u rasponu od 1 do 12 sati. Sličan sintetski protokol može biti upotrebljen za pripremu intermedijera XI iz jedinjenja opšte formule IV. ;[0066] Stručnjaku sa ovog područja tehnike će biti jasno da priprema jedinjenja opšte formule VII ili XI može biti ostvarena inverznom Grinjarovom reakcijom u kojoj Grinjar formule G-MgBr reaguje sa jedinjenjem formule R1C(O)R2pod istim reakcijskim uslovima opisanim iznad. ;[0067] Jedinjenja opšte formule IV pri čemu je E -O-, mogu biti pripremljena iz jedinjenja opšte formule II, prateći pristup sličan onom opisanom za pripremu jedinjenja formule XI iz VII. Alternativno jedinjenja opšte formule IV mogu biti dobijena alkilacijom jedinjenja opšte formule II, sa jedinjenjem opšte formule III, pri čemu je LG pogodna odlazeća grupa kao što je tozilat, mezilat ili halogen. Reakcija je normalno urađena u polarnim rastvaračima kao što su acetonitril ili DMF, odvija se u prisustvu baze kao što je na primer alkalni karbonat, bikarbonati ili organske baze i završava se preko vremenskog perioda koji varira od 1 do 24 sata. ;[0068] Priprema jedinjenja formule X može biti postignuta reakcijom jedinjenja opšte formule IX ili analoga pri čemu je brom supstituisan jodom ili triflatom, sa jedinjenjem opšte formule VIII, pri čenu je n 2, pod uslovima reakcije unakrsnog spajanja katalizirane prelaznim metalom. Terminalni alken VIII može reagovati pod, na primer, uslovom tzv. "heck reakcije" sa IX, dovodeći do alkenilenskog intermedijera X koji lako može biti redukovan klasičnom katalitičkom hidrogenacijom dvostruke veze, da bi se dobilo jedinjenje formule IV. Veliki broj protokola, reagenasa i katalizatora može biti povoljno upotrebljen da bi se postigla željena konverzija, kao što je poznato stručnjaku sa ovog područja tehnike. ;[0069] Alternativno, jedinjenja opšte formule I sadržavajući estarski deo u vezniku Y, mogu biti pripremljena tretiranjem jedinjenja opšte formule XXXVI sa jedinjenjem opšte formule XXXVII, pri črmu je A2 funkcionalizovan sa OH, pod uslovom reakcije kondenzacije za pripremu estara. Moguće je pripremiti jedinjenje opšte formule I, pri čemu je C jednak sa C1, reagovanje jedinjenja opšte formule XXXVI sa jedinjenjem XXXVII pri čemu je A2 supstituisan sa -NR4pod poznatim uslovom reakcije za pripremu amida polazeći od karboksilne kiseline i amina. ;[0070] U drugom izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenja opšte formule I mogu biti pripremljena prateći drugačiji sintetski pristup u kojem jedinjenje opšte formule XXIV reaguje sa jedinjenjem formule XXVI pod uslovima reakcije unakrsnog spajanja katalizirane prelaznim metalom, praćene redukcijom dvostruke veze -(CH)2-, dovodeći do jedinjenja formule I, pri čemu n = 2 ili n = 3 ako je reakcija izvedena sa jedinjenjem formule LGA1-B-A2-CD-CH2-(CH)2-E-H. Alternativno, to može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule XXI sa jedinjenjem formule XXVII, pod uslovom opisanim iznad za reakciju jedinjenja formule II, sa jedinjenjem formule III. ;[0071] Intermedijeri formule XXIV i XXI mogu biti pripremljeni reakcijom jedinjenja formule XVIII pod uslovima reduktivne aminacije, opisane iznad za reakciju jedinjenja formule XVII sa XVIII, počevši od jedinjenja formule XXIII i XX respektivno. Alternativno, jedinjenja formule XXIV i XXI mogu biti pripremljena alkilacijom jedinjenja XVIII sa jedinjenjem formule XXV i XXII, pod uslovima alkilacije opisane iznad, za pripremu jedinjenja IV reakcijom jedinjenja II sa jedinjenjem III. ;[0072] Jedinjenja opšte formule XVIII mogu biti dobijena jednostavnom redukcijom azida formule XIX. Reakcija može biti ostvarena katalitičkim hidrogenacijom u prisustvu paladijum katalizatora. Reakcija se odvija u polarnom rastvaraču, kao što je metanol ili etanol, pod atmosferom vodonika ili pod uslovima prenosa vodonika, korišćenjem na primer 1,4-cikloheksadiena ili 1-metil1,4-cikloheksadiena kao izvora vodonika. Reakcija se odvija na sobnoj temperaturi (RT). U slučaju da se izvodi u uslovima prenosa vodonika, može biti potrebna viša temperatura. ;[0073] Azid XIX može biti lako pripremljen iz XXIX poznatom nukleofilnom supstitucijom alkil bromida sa alkalnim azidom. Reakcija se odvija na temperaturi u rasponu od 50 do 80°C i u polarnom rastvaraču, kao što je na primer DMF od NMP, i može se ubrzati prisustvom alkalnog jodida. ;[0074] U dodatnom izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenja formule I, pri čemu R3je J2 ili druga grupa koja sadrži kvaternarnu amonijum so, može biti pripremljeno reagovanjem odgovarajućeg prekurzora tercijarnog amina od formule I gde R3je J1 sa jedinjenjem formule XXVIII. Reakcija se odvija glatko na sobnoj temperaturi ili višoj temperaturi u rastvaraču kao što je DCM, acetonitril, metanol ili AcOEt kroz vremenski period u rasponu od 1 do 24 sata. ;[0075] U drugom izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenja opšte formule XXI mogu biti pripremljena reagovanjem intermedijera opšte formule XXIX sa aminom opšte formule XXX. Ova reakcija je uobičajena alkilacija amina u kojoj je odlazeća grupa LG (obično hlor, brom ili sulfat) istisnuta nukleofilom kao što je amin XXX kao takav ili zaštićen na aminskom delu. U literaturi je opisano nekoliko postupaka za izvođenje ove reakcije koja se obično događa u polarnom rastvaraču na temperaturi višoj od sobne temperature. Slična reakcija može biti upotrebljena za pripremu jedinjenja opšte formule XXXVII. ;[0076] Stručnjacima sa ovog područja tehnike je očigledno da jedinjenja opšte formule I pri čemu R3 je J1 ili J2 sadrže tri stereogena centra, kao što je naznačeno ispod simbolom zvezdice (*). Ovo znači da je struktura formule I naznačena sa osam različitih stereoizomera.

Svaki dijastereoizomer može teorijski biti dobijen hromatografskim razdvajanjem smeše dobijene reakcijom racemskih smeša potrebnih intermedijera. Jasno je da ovaj pristup nije prikladan i da se može koristiti samo za odvajanje smeša koje sadrže nekoliko dijastereoizomera.

[0077] U pogodnijem pristupu, sinteza svakog pojedinačnog stereoizomera može biti postignuta korišćenjem, u iznad opisanim reakcijama, samo enantiomerno čistih intermedijera.

[0078] Enantiomerno čisti alkohol potreban za pripremu jedinjenja opšte formule I pri čemu R3 je J1 ili J2 su komercijalno dostupni.

[0079] Priprema pojedinačnih enantiomerno čistih jedinjenja opšte formule XXIX pri čemu LG je brom je opisana u WO2005/080324, US2005-2222128, WO2004/032921, US2005/215590 i WO2005/092861 (navedeno u WO2007/107228). Enantiomerno čista jedinjenja opšte formule XXXII mogu biti dobijena hiralnim hromatografskim odvajanjem racemske smeše ili polazeći od enantiomerno čistih jedinjenja amina opšte formule XXXI. Intermedijerna jedinjenja formule XXXI sadrže baznu grupu, moguće je dobiti dva enantiomera kristalizacijom dijastereomerne soli, dobijene salifikacijom racemske smeše sa enantiomerno čistom karboksilnom kiselinom. Široko korišćene karboksilne kiseline za ovu svrhu su, na primer, mandelinska kiselina, vinska kiselina i njeni derivati. Baza XXXI je rastvorena u pogodnom polarnom rastvaraču, i zatim tretirana sa enantiomerno čistom karboksilnom kiselinom uzrokujući precipitaciju jedne od dve dijastereoizomerne soli. Moglo bi se zatražiti ponavljanje postupka nekoliko puta da se dobije željeni nivo enantiomernog viška.

[0080] Alternativno, amini formule XXXI mogu biti dobijeni putem enantioselektivne sinteze prateći na primer pristup opisan u literaturi (Tetrahedron: Asymmetry 13 (2002) 303-310) u kojoj je aldehid formule II pri čemu je R2 H, tretiran prvo sa enantiomerno čistim tert-butil sulfinimidom, a zatim sa R2MgBr ili R2Li (pri čemu R2nije H), nakon čega sledi hidroliza intermedijera dovodeći do formacije enantiomerno obogaćenih jedinjenja formule XXXI koja mogu biti korišćena kao takva ili dalje prečišćena da povećaju enantiomerni višak.

[0081] Racemski amin opšte formule XXXI može biti pripremljen na nekoliko različitih načina, na primer dodatkom hidroksilamina jedinjenju opšte formule II, nakon čega sledi redukcija dobijenog oksimskog intermedijera, što se može izvesti pod nekoliko reakcijskih uslova poznatih stručnjacima sa ovog područja tehnike. Na primjer, katalitička hidrogenacija ili upotreba redukujućeg agensa kao što je LiAlH4 ili Cink u prisustvu amonijum formata su vrlo efikasni metod za postizanje redukcije oksima u amin.

[0082] Dostupni amin formule XXXI može biti lako dalje derivatizovan pod iznad opisanim reakcijskim uslovima. Na primer, može biti tretiran zaštićenim aldehidom formule III, pod uslovima opisanim za alkilaciju jedinjenja formule II sa jedinjenjima formule III, dovodeći do jedinjenja ili opšte formule XXXIII. Uklanjanje zaštite amino grupe i reakcija jedinjenja formule XV, dovodi do pripreme jedinjenja opšte formule XVI.

[0083] Alternativno, jedinjenje opšte formule I može biti pripremljeno pripajanjem jedinjenja opšte formule XXXVI sa jedinjenjem opšte formule XXXVII, dovodeći do jedinjenja opšte formule I pri čemu C je -OCO- ili C1. Ovaj estar ili amid mogu biti dobijeni pod različitim reakcijskim uslovima poznatim stručnjaku sa ovog područja tehnike. Reakcija zahteva aktivaciju kiseline XXXVI sa reaktantom kao što je N,N’-Dicikloheksilkarbodiimid (DCC), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (EDC), 2-(1H-Benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-Tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HBTU), (O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU) ili se može pretvoriti u odgovarajući acil hlorid. Aktivirani estar može glatko reagovati, u DCM-u, piridinu ili drugim aprotičnim rastvaračima, sa jedinjenjem formule XXXVII.

[0084] Jedinjenje formule XXXVI može biti pripremljeno počevši od XXXII putem alkilacije sa jedinjenjem formule XXXIV, uklanjanjem zaštite i reakcijom sa jedinjenjem formule XV. Uslovi reakcije za ovu konverziju su opisani iznad i opisani u literaturi. Kiselina XXXVI može lako reagovati sa jedinjenjem formule XXXVIII, kao što je opisano iznad za reakciju sa jedinjenjem formule XXXVII, dovodeći do jedinjenja formule XVI.

[0085] Jedinjenje opšte formule XXXVII može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja opšte formule XXIX sa aminom formule NH2-A1-B-A2-OH ili NH2-A1-B-A2-NHR4, pod uslovima reakcije opisanim za reakciju jedinjenja opšte formule XXIX sa jedinjenjima opšte formule XXX.

[0086] Zbog svega navedenog, sinteza jedinjenja opšte formule I može biti izvedena prateći nekoliko različitih pristupa. Naročito se mora primetiti da redosled potrebne reakcije, jako zavisi od prirode veznika Y i Y1 i od funkcionalnih grupa prisutnih na vezniku. Gornji primer za pripremu jedinjenja formule I pri čemu C je -OC(O)- ili C1, omogućava stručnjaku sa ovog područja tehnike da proceni ovaj aspekt pronalaska.

[0087] LCMS metode A, B, C i D korišćene za karakterizaciju jedinjenja predmetnog pronakaska, su opisane u sledećem:

LCMS/HPLC metode

Metoda A (10cm_ESCI_MRAVLJA)

Podešavanje HPLC

[0088] Rastvarači: Acetonitril (krajnji UV stepen) sa 0.1% (V/V) mravlje kiseline

Voda (visoke čistoće putem PureLab Option jedinice) sa 0.1% mravlje kiseline

Kolona: - Phenomenex Luna 5µ C18 (2), 100 x 4.6 mm. (Plus zaštitni uložak)

Brzina protoka: - 2ml/min

Tipične injekcije 2-7ul (koncentracija ~ 0.2 -1 mg/ml). UV detekcija putem HP ili tzv. "Waters DAD" Početni raspon (nm) 210 Krajnji raspon (nm) 400 Interval raspona (nm) 4.0

Drugi tragovi talasnih dužina izvučeni su iz DAD podataka.

Opciono otkrivanje ELS-a korišćenjem Polymer Labs ELS-1000.

MS detekcija: Mikromasa ZQ, pojedinačni kvadrapol LC-MS ili tzv. "Quattro Micro LC-MS-MS".

Procenjivač protoka daje približno 300 ul/min u specifikaciji mase

Raspon skeniranja za MS podatke (m/z)

Početak (m/z) 100

Kraj (m/z) 650 ili 1500 kada je potrebno Sa ve /-ve prebacivanjem

Jonizacija je rutinska ESCI opcija koja daje i ESI i APCI podatke iz jednog pokretanja.

Tipični ESI naponi i temperature su:

Izvor 120-150C 3.5KV kapilar 25V konus

Tipični APCI naponi i temperature su:

Izvor 140-160C 17uA korona 25V konus

Metoda B (HPLC uslovi - 15cm_Mravlja _Ascentis_HPLC_CH3CN)

[0089] Podešavanje HPLC

Rastvarači: - Acetonitril (krajnji UV stepen) sa 0.1% (V/V) mravlje kiseline

Voda (visoke čistoće putem PureLab Ultra jedinice) sa 0.1% mravlje kiseline Kolona: - Supelco, Ascentis® Express C18 ili Hichrom Halo C18, 2.7 µm C18, 150 x 4.6 mm. Brzina Protoka: - 1ml/min

Tipične injekcije 0.2-10ul

[0090] Podešavanje maksimalnog pritiska od 400 bara.

Instrument: Agilent 1100, binarna pumpa, Agilent uzorak i Agilent DAD detektor

Otkrivanje niza dioda: (300nm, širina opsega 200nm; ref. 450nm, širina opsega 100nm) Metoda C (HPLC uslovi- 10cm_Mravlja _ACE-AR_HPLC_CH3CN)

[0091] Podešavanje HPLC

Rastvarači: - Acetonitril (krajnji UV stepen) sa 0.1% (V/V) mravlje kiseline Voda (visoke čistoće putem PureLab Ultra jedinice) sa 0.1% mravlje kiseline

Kolona: - Hichrom ACE 3 C18-AR kolona mešovitog režima-načina 100x4.6 mm

Brzina protoka: - 1ml/min

Gradijent: - A: Voda/mravlja B: MeCN/mravlja

Vreme A% B%

0.00 98 2

3.00 98 2

12.00 0 100

15.4 0 100

15.5 98 2

17 98 2

Tipične injekcije 0.2-10 µl

Podešavanje maksimalnog pritisaka od 400 bara.

Instrument: Agilent 1100, binarna pumpa, Agilent uzorak i Agilent DAD detektor

Otkrivanje niza dioda: (300nm, širina opsega 200nm; ref. 450nm, širina opsega 100nm)

Metoda D (HPLC uslovi- 25cm_Acidic_Prodigy_HPLC)

[0092] Podešavanje HPLC

Rastvarači: - Acetonitril (Far UV grade -krajnji UV stepen) sa 0.1% mravlje kiseline

Voda (visoke čistoće putem PureLab opcione jedinice) sa 0.1% mravlje kiseline

Kolona: - Phenominex Prodigy 5µ ODS 3, 250 x 4.6mm.

Brzina Protoka: - 1ml/min

Gradijent: - A: Voda/mravlja B: MeCN/mravlja

Vreme A% B%

0.00 95.5 4.5

1.0 95.5 4.5

22 0 100

23 0 100

25 95.5 4.5

30 95.5 4.5

Tipične injekcije 2-7 µl

Instrument: Agilent 1100, binarna pumpa, Agilent uzorak i Agilent DAD detektor

[0093] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije jedinjenja formule I u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, na primer onih opisanih u Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed., Mack Pub., N.Y., U.S.A.

[0094] Primena jedinjenja predmetnog pronalaska može biti ostvarena prema potrebama pacijenta, na primjer oralno, nazalno, parenteralno (subkutano, intravenozno, intramuskularno, intrasternalno i infuzijom), inhalacijom, rektalno, vaginalno, topikalno, lokalno, transdermalno, i okularnom primenom.

[0095] Razni čvrsti oralni oblici doziranja mogu biti upotrebljeni za primenjivanje jedinjenja prema pronalasku, uključujući takve čvrste oblike kao što su tablete, gelkape, kapsule, kaplete, granule, pastile i rasuti prah. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti primenjivana sama ili kombinovana sa različitim farmaceutski prihvatljivim nosačima, razblaživačima (kao što su saharoza, manitol, laktoza, skrobovi) i poznatim ekscipijensima, uključujući suspenzijske agense, solubilizatore, puferske agense, veziva, agense za dezintegraciju, konzervanse, bojila, arome, maziva i slično. Kapsule sa vremenskim oslobađanjem, tablete i gelovi su takođe korisni u primenjivanju jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0096] Razni tečni oralni oblici doziranja mogu takođe biti korišćeni za primenjivanje jedinjenja pronalaska, uključujući vodene i ne-vodene rastvore, emulzije, suspenzije, sirupe i eliksire. Takvi oblici doziranja mogu takođe sadržavati pogodne poznate inertne razblaživače kao što su voda i pogodni poznati ekscipijensi kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, zaslađivači, arome, kao i agensi za emulgovanje i/ili suspendovanje jedinjenja pronalaska. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti injektirana, na primer, intravenozno, u obliku izotoničnog sterilnog rastvora. Takođe su moguće druge pripreme.

[0097] Supozitorije za rektalnu primenu jedinjenja prema pronalasku mogu biti pripremljene mešanjem jedinjenja sa pogodnim ekscipijensom kao što su kakao puter, salicilati i polietilen glikoli.

[0098] Formulacije za vaginalnu primenu mogu biti u obliku kreme, gela, paste, pene ili sadržavajući formulu za raspršivanje, pored aktivnog sastojka, kao što su pogodni nosači, takođe su poznate.

[0099] Za topikalnu primenu farmaceutska kompozicija može biti u obliku krema, masti, linimenata, losiona, emulzija, suspenzija, gelova, rastvora, pasta, prahova, sprejeva i kapi pogodnih za primenu na koži, oku, uhu ili nosu. Topikalna primena može takođe uključiti transdermalnu primenu putem sredstava kao što su transdermalni flasteri.

[0100] Za tretman bolesti respiratornog trakta, jedinjenja prema pronalasku su poželjno primenjivana inhalacijom.

[0101] Pripravci za udisanje uključuju praškove za udisanje, dozirne aerosole koji sadrže potisni gas ili inhalacione formulacije bez potisnog gasa.

[0102] Za primenu kao suvog praha mogu biti korišćeni inhalatori sa jednom ili više doza poznati iz stanja tehnike. U tom slučaju prah može biti punjen u želatin, plastiku ili druge kapsule, patrone ili blister pakovanja ili u spremnik.

[0103] Razblaživač ili nosač, generalno netoksičan i hemijski inertan prema jedinjenjima pronalaska, npr. laktoza ili bilo koji drugi aditiv pogodan za poboljšanje frakcije koja se može udahnuti može biti dodat u praškasta jedinjenja pronalasaka.

[0104] Inhalacioni aerosoli koji sadrže potisni gas kao što su hidrofluoroalkani mogu sadržavati jedinjenja pronalaska, bilo u rastvoru ili u disperziranom obliku. Formulacije koje pokreću potisni gas mogu takođe sadržavati druge sastojke kao što su korastvarači, stabilizatori i opciono drugi ekscipijensi.

[0105] Formulacije za udisanje bez potisnog gasa koje sadrže jedinjenja pronalaska mogu biti u obliku rastvora ili suspenzija u vodenom, alkoholnom ili hidroalkoholnom medijumu, i mogu biti isporučene mlaznim ili ultrazvučnim nebulizatorom poznatim iz prethodnog stanja tehnike ili nebulizatorom sa mekom maglom kao što je Respimat®.

[0106] Jedinjenja pronalaska mogu biti primenjivana kao jedini aktivni agens ili u kombinaciji sa drugim farmaceutskim aktivnim sastojcima, uključujući one koji se trenutno koriste u tretmanu respiratornih poremećaja, među kojima su beta2-agonisti, antimuskarinski agensi, inhibitori protein kinaza (P38 MAP kinaza) aktivirane mitogenom, inhibitori nuklearnog faktora kappa-B kinaze podjedinice beta (IKK2), inhibitori humane neutrofilne elastaze (HNE), inhibitori fosfodiesteraze 4 (PDE4), modulatori leukotriena, ne-steroidni anti-inflamatorni agensi (NSAIDs), antitusivni agensi, regulatori sluzi, mukolitici, ekspektoransi/mukokinetički modulatori, peptidni mukolitici, antibiotici, inhibitori JAK, SYK inhibitori, inhibitori PI3Kdelta ili PI3Kgamma, kortikosteroidi i M3-antagonisti/PDE4-inhibitori (MAPI).

[0107] Doze jedinjenja prema pronalasku zavise od raznih faktora uključujući određenu bolest koja je tretirana, ozbiljnost simptoma, put primene, učestalost intervala doziranja, određeno korišćeno jedinjenje, efikasnost, toksikološki profil i farmakokinetički profil jedinjnenja.

[0108] Povoljno, jedinjenja formule I mogu biti primenjivana, na primer, u dozi koja sadrži između 0.001 i 1000 mg/dan, poželjno između 0.1 i 500 mg/dan.

[0109] Kada se jedinjenja formule I primenjuju putem inhalacije, poželjno se daju u dozi između 0.001 i 500 mg/dan, poželjno između 0.1 i 200 mg/dan.

[0110] Jedinjenja formule I mogu biti primenjivana za prevenciju i/ili tretman bronho-opstruktivnih ili inflamatornih bolesti, kao što su astma, hronični bronhitis, hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), bronhijalna hiperreaktivnost, kašalj, emfizem ili rinitis; uroloških poremećaja kao što je urinarna inkontinencija, polakiurija, cistospazam, hronični cistitis i prekomerna aktivnost bešike(OAB); gastrointestinalnih poremećaja kao što su crevni sindrom, spastični kolitis, divertikulitis, peptični ulkus, gastrointestinalna pokretljivost ili lučenje želudačne kiseline; suva usta; midrijaza, tahikardija; oftalmološke intervencije kardiovaskularnih poremećaja kao što je sinusna bradikardija indukovana vagusom.

[0111] Predmetni pronalazak će sada biti dalje opisan kroz sledeće primere.

[0112] Intermedijerna jedinjenja za sintezu konačnih jedinjenja opšte formule (I) su dobijena kroz ispod opisane pripravke.

Priprema (R)-5-(2-amino-1-hidroksietil)-8-hidroksihinolin-2(1H)-on hidrohlorid [0113]

Korak 1; 8-(Benziloksi)-5-(2-bromoacetil)hinolin-2(1H)-on

[0114]

[0115] Suspenzija 5-acetil-8-(benziloksi)hinolin-2(1H)-on (19.4 g, 66.4 mmol) u anhidrovanom THF (240 mL) i anhidrovanom metanolu (165 mL) je dodata sa rastvorom tetra-n-butilamonijum tribromida (Bu4NBr3) (54.5 g, 113.0 mmol) u anhidrovanom THF (130 mL) u kapima preko 1.5 sata. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći pre koncentrovanja pod smanjenim pritiskom bez zagrevanja. Ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (200 mL). Zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (390 mL) je dodat uz hlađenje ledom. Dobijena suspenzija je filtrirana, i čvrsta supstanca je isprana sa vodom i osušena na vazduhu pod vakumom. Čvrsta supstanca je suspendovana u DCM i metanolu (1: 1 v/v, 100 mL) tokom 90 minuta. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa DCM i osušena na vazduhu dajući jedinjenje iz naslova (18.0 g, 73%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.07 (s, 1 H); 8.51 (d, J = 10.0 Hz, 1 H); 7.94-7.83 (m, 1 H); 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 2 H); 7.44-7.27 (m, 4 H); 6.79-6.65 (m, 1 H); 5.53-5.39 (s, 2 H); 4.93 (s, 2 H)

Korak 2; (R)-8-(Benziloksi)-5-(2-bromo-1-hidroksietil)hinolin-2(1H)-on

[0116]

[0117] 8-(Benziloksi)-5-(2-bromoacetil)hinolin-2(1H)-on (26.0 g, 69.9 mmol) i (R)-3,3-difenil-1-metiltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborol (21.3 g, 76.8 mmol) su azeotropirani sa toluenom (x 3), zatim suspendovani u anhidrovanom THF (400 mL) pod atmosferom azota. Suspenzija je ohlađena do-20°C (spoljna temperatura) i kompleksni rastvor boran dimetil sulfida (BH3-Me2S) (45.4 mL, 90.8 mmol, 2.0 M rastvora u THF) je dodat pomoću pumpe sa špricem preko 3 sata. Nakon završenog dodavanja reakciona smeša je mešana tokom jednog sata pre gašenja sa metanolom (25 mL). Reakcija je zagrevana do sobne temperature preko 20 minuta. Smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, i ostatak je suspendovan u vodenoj hlorovodoničnoj kiselini (500 mL, 1 M rastvor) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Nakon ovog vremena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa vodom (3 × 100 mL). Čvrsta supstanca je delimično rastvorena u etil acetatu i refluksovana tokom 2 sata. Preostala čvrsta supstanca je uklonjena vrućom filtriracijom, i filtrat je evaporisan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. Čvrsta supstanca sakupljena iz vrućeg etil acetata je ponovo delimično rastvorena u etil acetatu i refluksovana tokom 2 sata, zatim filtrirana da bi se dobio filtrat koji sadrži čisti produkt. Ovaj postupak je ponovljen još četiri puta. Kombinovana čvrsta supstanca je prekristalisana iz petroleum etra da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20.0 g, 76%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.68 (s, 1 H); 8.19 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 7.58 (d, J = 7.5 Hz, 2 H); 7.41-7.36 (m, 2 H); 7.34-7.29 (m, 1 H); 7.23-7.19 (m, 2 H); 6.57 (d, J = 9.8 Hz, 1 H); 5.94 (d, J = 4.7 Hz, 1 H); 5.31 (s, 2 H); 5.25-5.19 (m,

1 H); 3.71-3.58 (m, 2 H).

Korak 3; (R)-8-(Benziloksi)-5-(2-bromo-1-((tert-butildimetilsilil)oksi)etil)hinolin-2(1H)-on

[0118]

[0119] 2,6-Lutidin (6.9 mL, 59.5 mmol) je dodat u rastvor (R)-8-(benziloksi)-5-(2-bromo-1-hidroksietil)hinolin-2(1H)-on (10.1 g, 27.0 mmol) u DCM (100 mL) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 5 minuta, zatim je u kapima dodat tert-butildimetilsilil trifluorometansulfonat (tBuMe2SiOtf) (13.0 mL, 56.8 mmol) tokom 15 minuta. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, praćena na sobnoj temperaturi preko noći. Posle ovog vremena reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (x 3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni (magnezijum sulfat), filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Izo-heksan (500 mL) je dodat u sirovi materijal i dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Čvrsta supstanca je prekristalisana iz etil-acetata i petroleum etra (40:60), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11.3 g, 85%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.19 (s, 1 H); 8.23 (dd, J = 9.9, 4.4 Hz, 1 H); 7.43 (d, J = 4.6 Hz, 5 H); 7.17 (dd, J = 8.3, 4.5 Hz, 1 H); 7.03 (dd, J = 8.2, 4.4 Hz, 1 H); 6.71 (dd, J = 9.9, 3.7 Hz, 1 H); 5.18 (d, J = 4.5 Hz, 3 H); 3.63-3.56 (m, 1 H); 3.49 (dd, J = 10.4, 4.8 Hz, 1 H); 0.88 (t, J = 4.4 Hz, 9 H); 0.14 (d, J = 4.4 Hz, 3 H); - 0.11 (d, J = 4.4 Hz, 3 H).

Korak 4; (R)-5-(2-Azido-1-((tert-butildimetilsilil)oksi)etil)-8-(benziloksi)hinolin-2(1H)-on

[0120]

[0121] (R)-8-(Benziloksi)-5-(2-bromo-1-((tert-butildimetilsilil)oksi)etil)-hinolin-2(1H)-on (10.0 g, 20.5 mmol) je rastvoren u dimetil formamidu (180 mL) i vodi (20 mL). Uzastopno su dodati natrijum jodid (3.39 g, 22.6 mmol) i natrijum azid (1.47 g, 22.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi sve dok je sva čvrsta supstanca bila u rastvoru. Rastvor je zagrevan na 80°C tokom 40 sati, zatim ohlađen do sobne temperature i razblažen sa etil-acetatom (300 mL). Smeša je isprana sa vodom, fiziološkim rastvorom (x2) i organski ekstrakt je osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi ostatak je trituriran sa izo-heksanom da bi se dobilo željeno jedinjenje (8.16 g, 88%). Korišćeno je bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.19 (s, 1 H), 8.18 (d, J = 9.9 Hz, 1 H), 7.45-7.36 (m, 4 H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.04 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 6.70 (dd, J = 9.9, 2.2 Hz, 1 H), 5.19-5.13 (m, 3 H), 3.48 (dd, J = 12.7, 8.1 Hz, 1 H), 3.26 (dd, J =

12.7, 3.8 Hz, 1 H), 0.89 (s, 9 H), 0.14 (s, 3 H), -0.11 (s, 3 H).

Korak 5; (R)-5-(2-Amino-1-hidroksietil)-8-hidroksihinolin-2(1H)-on hidrohlorid

[0122]

[0123] Rastvor (R)-5-(2-azido-1-((tert-butildimetilsilil)oksi)etil)-8-(benziloksi)hinolin-2(1H)-on (4.50 g, 10.0 mmol) u etanolu (50 mL) je dodat sa 10% paladijumom na ugljenu (4.50 g), praćen sa 1-metil-1,4-cikloheksadienom (11.0 mL, 97.9 mmol). Reakcija je zagrevana do 60°C, i zatim mešana na 60°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi i filtrirana kroz celitni sloj. Filterski kolač je ispran sa još etanola i filtrat je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je evaporisan iz izo-propanola (x2) i rastvoren u izo-propanolu (30 mL). HCl-dioksan (4M, 50 mL, 200 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Dobijena suspenzija je filtrirana, filterski kolač je ispran sa etrom i čvrsta supstanca je osušena pod vakumom u prisustvu P2O5da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.65 g, 62%).

<1>H NMR (400 MHz, MeOD): δ 7.71 (d, J = 9.8 Hz, 1 H), 6.57 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.31 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.02 (dd, J = 9.8, 6.5 Hz, 1 H), 4.58 (dd, J = 9.6, 3.5 Hz, 1H), 2.47-2.31 (m, 2 H).

Sinteza jedinjenja 1 (nije deo pronalaska)

[0124]

Primer 1 (nije deo pronalaska)

2-(4-((((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)metil)-2-metilfenoksi)etil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat

(Jedinjenje 1)

[0125]

Korak 1; N-((3-hidroksifenil)(fenil)metil)formamid

[0126]

[0127] 3-Hidroksibenzofenon (25 g, 126.1 mmol) u formamidu (130 mL, 3.3 mmol) je zagrevan na 180°C tokom 18 sati. Reakcija je ostavljena da se malo ohladi, zatim je sipana u vodu ohlađenu ledom i mešana tokom 30 minuta, filtrirana i isprana sa vodom. Čvrsta supstanca je mešana u vodi (60 mL) i etanolu (60 mL) i zagrevana do 50°C tokom 1 sata, zatim je ostavljena da se ohladi. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa vodom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca (33.94 g, 118%).

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.39-7.28 (m, 5 H); 7.21-7.13 (m, 1 H); 6.79 (d, J = 7.78 Hz, 1 H); 6.73-6.68 (m, 2 H); 5.45 (s, 1 H).

Korak 2; 3-(Amino(fenil)metil)fenol hidrohlorid

[0128]

[0129] Metanol (125 mL), je ohlađen do 0°C i acetil hlorid (17.8 mL) je dodat u kapima da bi se dobilo 2M rastvora metanolnog hlorovodonika. N-((3-hidroksifenil)(fenil)metil)formamid je mešan na 40°C tokom 1.5 sata sa 2M metanolnim hlorovodonikom. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom i ostatak je ponovo rastvoren u metanolu i rastvarač uklonjen pod smanjenim pritiskom. Postupak je ponovljen tri puta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca (29.09 g, 97.9 %)

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.76 (s, 1 H); 9.07 (s, 3 H); 7.59-7.53 (m, 2 H); 7.51-7.37 (m, 3 H); 7.26 (t, J = 7.89 Hz, 1 H); 6.99 (d, J = 7.75 Hz, 1 H); 6.90 (t, J = 1.97 Hz, 1H); 6.81 (dd, J = 8.10, 2.32 Hz, 1H); 5.58 (d, J = 5.82 Hz, 1 H).

Korak 3; tert-Butil ((3-hidroksifenil)(fenil)metil)karbamat

[0130]

[0131] 3-(Amino(fenil)metil)fenol hidrohlorid (29.09 g, 123.4 mmol) u dihlorometanu (450 mL) je ohlađen na 0°C i diizopropiletilamin (65.9 ml, 370.2 mmol) i di-tert-butil dikarbonat (59.2 g, 271.5 mmol) je dodat polako. Reakcija je mešana na 0°C tokom 2 sata, zatim zagrevana do sobne temperature preko 16 sati. Rastvarač je uklonjen i jedinjenje je prečišćeno kroz silika čep, eluiranjem sa 0-20% etil acetatom u izo-heksanu da bi se dobilo crno ulje. Ovoj smeši u metanolu (300 mL) je dodat kalijum karbonat (51 g, 370.2 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Suspenzija je filtrirana i filtrat je evaporisan pod smanjenim pritiskom i ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu (370 mL). Dodat je silicijum dioksid (73 g) i suspenzija je mešana tokom 30 minuta, filtrirana i filterski kolač je ispran sa još etil acetata. Filtrat je evaporisan do suvoće. Tamni čvrsti ostatak je rastvoren u etil-acetatu (200 mL), dodat je ugljen i suspenzija je zagrevana tokom 1 sata pod refluksom. Suspenzija je filtrirana kroz celit i rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Tamna čvrsta supstanca je rastvorena u dihlorometanu i dodat je izo-heksan, zatim je rastvarač evaporisan (ponovljeno 3 puta) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (34.81 g, 92%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.36-7.16 (m, 6 H); 6.80 (d, J = 7.79 Hz, 1 H); 6.74-6.69 (m, 2 H); 5.83 (s, 1 H); 5.15 (s, 1 H); 1.53-1.30 (s, 9 H).

Korak 4; (S)-tert-Butil ((3-hidroksifenil)(fenil)metil)karbamat

[0132]

[0133] Racemska smeša iz koraka 3 je prečišćena sa SFC korišćenjem CHIRALPAK® AD 20µM 250x110 mm kolone korišćenjem n-heptan/2-propanol/dietilamina (60/40/0.1) kao eluensa sa brzinom protoka od 570 ml/min na 25°C. Od 54.1 g sirovog materijala (S)-tert-butil ((3-hidroksifenil) (fenil) metil) karbamat (Rt = 8.5-8.6 min, 23.9 g, 99.2 e.e.) je dobijen.

Korak 5; (S)-Metil 4-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino) (fenil)metil)fenoksi)metil)benzoat

[0134]

[0135] Smeša (S)-tert-butil ((3-hidroksifenil)(fenil)metil)karbamata (3.20 g, 10.7 mmol), metil 4-(bromometil) benzoata (2.70 g, 11.8 mmol) i kalijum karbonata (2.20 g, 16.1 mmol) u acetonitrilu (54 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, i ostatak je podeljen između etil acetata i vode. Vodena faza je ekstrahovana dalje sa etil acetatom i kombinovani i organski ekstrakti kombinovani, osušeni sa anhidrovanim magnezijum sulfatom, filtrirani i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ponovo kristalizovan iz etil acetata i izo-heksana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (3.25 g, 68 %).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.04 (d, J = 8.2 Hz, 2 H); 7.46 (d, J = 8.2 Hz, 2 H); 7.34-7.20 (m, 6 H); 6.90-6.81 (m, 3 H); 5.87 (s, 1 H); 5.13 (s, 1 H); 5.07 (s, 2 H); 3.92 (s, 3 H); 1.44 (s, 9 H).

Korak 6; (S)-Metil 4-((3-(amino(fenil)metil)fenoksi)metil)benzoat hidrohlorid

[0136]

[0137] Rastvor metil 4-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino) (fenil)metil)fenoksi)metil)benzoata (3.21 g, 7.20 mmol) u metanolu (36 mL) je dodat sa hlorovodonikom u dioksanu (4 M, 9.0 mL, 36 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.65 g, >95 %).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.21 (s, 2 H); 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 2 H); 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 2 H); 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 2 H); 7.49-7.34 (m, 5 H); 7.17 (d, J = 7.7 Hz, 1 H); 7.06 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1 H); 5.64 (s, 1 H); 5.28 (s, 2 H); 3.91 (s, 3 H).

Korak 7; Metil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat [0138]

[0139] Mešani rastvor (S)-metil 4-((3-(amino(fenil)metil)fenoksi)metil)benzoat hidrohlorida (12.0g, 31.3 mmol) u piridinu (100 mL) na 0°C je dodat u obrocima sa (R)-hinuklidin-3-il karbonohloridatom (8.50 g, 37.5 mmol). Reakcija je mešana na 0°C tokom 1 sata, i zatim ostavljena da se zagreje na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Voda je dodata u reakcionu smešu i ekstrahovana sa etil-acetatom (x 3). Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni (natrijum sulfat), filtrirani i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na KP-NH Biotage ulošku eluiranjem sa 0-20% metanola u etil acetatu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10.3 g, 66%).

Korak 8; 4-((3-((S)-Fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoeva kiselina [0140]

[0141] Mešani rastvor metil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoata (2.27 g, 4.50 mmol) u THF (23 mL) je dodat sa vodenim rastvorom litijum hidroksida (2.0 M, 9.0 ml, 18.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. PH reakcione smeše je podešen do 6 dodatkom 4M vodenog rastvora hlorovodonične kiseline. Smeša je zatim ekstrahovana sa 10% metanolnim etil acetatom (x2) i kombinovani organski ekstrakti su evaporisani pod smanjenim pritiskom. Ostatak je zatim rastvoren u etanolu i ponovo evaporisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bledo žuta čvrsta supstanca (1.85 g, 84%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (d, J = 9.4 Hz, 1 H); 7.99 (d, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 7.42-7.26 (m, 6 H); 7.09 (s, 1 H); 7.02-6.91 (m, 2 H); 5.87 (d, J = 9 Hz, 1 H); 5.21 (s, 2 H); 4.76 (s, 1 H); 3.98-2.72 (m, 6 H); 2.12-1.54 (m, 5 H).

Korak 9; 4-(2-Hidroksietoksi)-3-metilbenzaldehid

[0142]

[0143] Mešani rastvor 4-hidroksi-3-metil-benzaldehida (0.545 g, 4.00 mmol) u DMF (10 mL) je dodat sa kalijum karbonatom (1.10 g, 7.97 mmol). Reakciona smeša je mešana je na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta, i zatim je dodat rastvor etilen karbonata (0.705 g, 8.00 mmol) u DMF (2 mL). Dobijena smeša je zagrevana na 80°C tokom 90 sati. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi i razblažena sa etil acetatom i vodom. Organska faza je uklonjena, isprana sa fiziološkim rastvorom (x2), osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.677 g, 94%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.87 (s, 1 H); 7.72-7.70 (m, 2 H); 6.95-6.93 (m, 1 H); 4.20-4.18 (m, 2 H); 4.04-4.03 (m, 2 H); 2.29 (s, 3 H); 1.98 (s, 1 H).

Korak 10; 2-(4-Formil-2-metilfenoksi)etil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat

[0144]

[0145] Mešani rastvor 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoeve kiseline (0.778 g, 1.49 mmol) u DMF (6 mL) je dodat sa di-izo-propiletilaminom (0.649 mL, 1.79 mmol) i HATU (0.679 g, 1.79 mmol) i smeša je mešana na sobnoj tempraturi tokom 20 minuta. Dobijeni rastvor je dodat u rastvor 4-(2-hidroksietoksi)-3-metilbenzaldehida (0.670 g, 3.72 mmol) u DMF (2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Smeša je razblažena sa etil acetatom, isprana sa 10% vodenim rastvorom kalijum karbonata, fiziološkim rastvorom (x2), osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je stavljen na SCX-2 uložak i eluiran sa acetonitrilom (4 zapremine kolone) i zatim 10% trietilamin/acetonitrilom (4 zapremine kolone).

[0146] Frakcije 10% trietilamin/acetonitril su analizirane sa TLC i frakcije koje sadrže produkt kombinovane i evaporisane pod smanjenim pritiskom. Materijal je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 11; 2-(4-((((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)metil)-2-metilfenoksi)etil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-benzoat (Jedinjenje 1)

[0147] Suspenzija (R)-5-(2-amino-1-hidroksietil)-8-hidroksihinolin-2(1H)-on hidrohlorida (0.211 g, 0.83 mmol) u metanolu (6 mL) je dodata sa trietilaminom (0.229 mL, 1.65 mmol). Smeša je mešana tokom 10 minuta, i zatim je dodat rastvor 2-(4-formil-2-metifenoksi)etil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloski) karbonil)amino)metil)fenoksi)metil) benzoata(0.445 g, 0.69 mmol) u metanolu (2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (0.292 g, 1.38 mmol), praćen sirćetnom kiselinom (0.188 mL, 3.28 mmol) i reakcija je nastavljena daljih 18 sati. Reakciona smeša je ugašena sa vodom i evaporisana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u izo-butanolu i ispran sa vodom. Organska faza je evaporisana pod smanjenim pritiskom, i sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.065 g, 11%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.29-8.20 (m, 2 H); 8.10 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 7.32-7.18 (m, 6 H); 7.17-7.01 (m, 4 H); 6.98-6.85 (m, 4 H); 6.47 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 5.81 (s, 1 H); 5.17 (s, 2H); 5.09 (dd, J = 7.9, 4.7 Hz, 1 H); 4.60 (d, J = 16.8 Hz, 3 H); 4.31 (d, J = 5.0 Hz, 2 H); 3.71 (s, 2 H); 3.12 (m, 1 H); 2.81-2.52 (m, 6 H); 2.09 (s, 4 H); 1.92 (s, 1 H); 1.69-1.26 (m, 4 H).

[0148] Sledeća jedinjenja su pripremljena na isti način spajanjem potrebnog alkohola dobijenog u Koraku 9 sa kiselinom iz Koraka 8 i upotrebom produkta u sledećim koracima.

[0149] Alternativna metoda za pripremanje potrebnog alkohola je istaknuta sintezom 3-hloro-4-(2-hidroksietoksi)-5-metoksibenzaldehida.

Priprema 3-hloro-4-(2-hidroksietoksi)-5-metoksibenzaldehida

[0150]

[0151] Suspenzija natrijum hidrida (60% disperzija u mineralnom ulju, 0.24 g, 6.00 mmol) u DMF-u (8 mL) je dodata sa rastvorom 5-hlorovanilina (0.746 g, 4.00 mmol) u DMF-u (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta i dodat je 2-bromoetanol (0.42 mL, 5.93 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 50°C tokom 90 sati. Reakciona smeša je razblažena sa etil-acetatom i isprana sa vodom, fiziološkim rastvorom (x2), osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 0-50% etil acetata u izo-heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.413 g, 48%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.87 (s, 1H); 7.53 (d, J = 1.6 Hz, 1H); 7.38 (d, J = 1.6 Hz, 1 H); 4.29-4.27 (m, 2 H); 3.96 (s, 3 H); 3.90-3.85 (m, 2 H); 2.77 (t, d, J = 6.4 Hz, 1 H).

[0152] Sledeća jedinjenja su pripremljena na isti način spajanjem potrebnog alkohola dobijenog u Koraku 9 sa kiselinom iz Koraka 8 i upotrebom produkta u sledećim koracima.

Primer 2 (nije deo pronalaska)

4-(2-(((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)etil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)-karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat (Jedinjenje 18)

[0153]

Korak 1; Metil 4-(2-metoksivinil)benzoat

[0154]

[0155] Suspenzija ohlađena u ledu (metoksimetil) trifenilfosfonijum hlorida (6.48 g, 20.0 mmol) u THF (40 mL) je dodata u porcijama sa natrijum hidridom (60% disperzija u mineralnom ulju, 0.88 g, 22.0 mmol). Reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 10 minuta, a zatim 50 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je rastvor metil 4-formil benzoata (1.16 g, 10.0 mmol) u THF (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata i ekstrahovana sa DCM. Organska faza je sipana kroz hidrofobni frit i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 0-10% etil acetata u izo-heksanu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.36 g, 71%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): Smeša izomera: δ 7.98-7.90 (m, 2 H); 7.63-7.59 (m, 1 H); 7.29-7.25 (m, 1 H); 7.17 (d, J = 13.0 Hz, 0.5 H); 6.25 (d, J = 7.0 Hz, 0.5 H); 5.82 (d, J = 13.0 Hz, 0.5 H); 5.31-5.25 (m, 0.5 H); 3.90 (s, 3 H); 3.83 (s,

1.5 H); 3.72 (s, 1.5 H).

Korak 2; Metil 4-(2,2-dimetoksietil)benzoat

[0156]

[0157] Rastvor metil 4-(2-metoksivinil)benzoata (1.36 g, 7.08 mmol) u metanolu (30 mL) je dodat sa paratoluensulfonskom kiselinom monohidratom (pTSA) (0.135 g, 0.71 mmol) i reakciona smeša zagrevana pod refluksom tokom 18 sati. Rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je podeljen između DCM-a i 10% -tnog vodenog rastvora kalijum karbonata. Organska faza je sipana kroz hidrofobni frit i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3; (4-(2,2-Dimetoksietil)fenil)metanol

[0158]

[0159] Ohlađeni (-78°C) rastvor metil 4-(2,2-dimetoksietil)benzoata (pretpostavimo 7.08 mmol) u THF (30 mL) je dodat u kapima sa rastvorom litijum aluminijum hidrida (2.0 M u THF-u, 3.50 mL, 7.00 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 4 sata. Smeša je sekvencijalno tretirana sa vodom (0.266 mL), 2M vodenim rastvorom natrijum hidroksida (0.266 mL) i vodom (3 x 0.266 mL). Smeša je razblažena sa etil acetatom i dodat je magnezijum sulfat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim filtrirana kroz celit. Filterski kolač je ispran dalje sa etil acetatom i filtrati kombinovani. Rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 0-30% etil acetata u izo-heksanu da se dobije jedinjenje iz naslova (0.854 g, 62%).

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.32-7.30 (m, 2 H); 7.26-7.23 (m, 2 H); 4.68 (d, J = 5.6 Hz, 2 H); 4.55-4.52 (m, 1 H); 3.34 (s, 6 H); 2.92 (d, J = 5.6 Hz, 1 H); 1.28 - 1.24 (m, 1 H).

Korak 4; 3-((3-((S)-Fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)-metil)fenoksi)metil)benzojeva kiselina [0160]

[0161] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1, Koraka 5, kroz 8 sa metil 3-(bromometil)benzoatom koji zamenjuje metil 4- (bromometil)benzoat u Koraku 5.

Korak 5; 4-(2,2-Dimetoksietil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat

[0162]

[0163] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što jeopisano u Primeru 1 Koraka 10 sa (4-(2,2-dimetoksietil)fenil)metanolom i 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoevom kiselinom zamenjujući 4-(2-hidroksietoksi)-3-metilbenzaldehid i metil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)-metil)benzoat hidrohlorid respektivno.

Korak 6; 4-(2-Oksoetil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil) fenoksi)metil)benzoat

[0164]

[0165] Mešani rastvor 4-(2,2-dimetoksietil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-benzoata (0.100 g, 0.15 mmol) u acetonu (5 mL) je dodat sa paratoluensulfonskom kiselinom monohidratom (0.086 g, 0.45 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakciona smeša je razblažena sa zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata i ekstrahovana sa etil-acetatom.

Kombinovani organski ekstrakti su osušeni (magnezijum sulfat), filtrirani i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 7; 4-(2-(((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)etil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)benzoat (Jedinjenje 18)

[0166] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 Koraka 11 sa 4-(2-oksoetil)benzil 3-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)-amino)metil)fenoksi)metil)benzoatom zamenjujući 2-(4-formil-2-metilfenoksi)etil 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)-amino)metil)fenoksi) metil)benzoat.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.28-8.19 (m, 3 H); 8.17 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 8.05 (s, 1 H); 7.94 (d, J = 7.8 Hz, 1 H); 7.72 (d, J = 7.7 Hz, 1 H); 7.58-7.52 (m, 1 H); 7.38 (d, J = 7.8 Hz, 2 H); 7.31-7.17 (m, 7 H); 7.10-7.02 (m, 2 H); 6.96-6.86 (m, 3 H); 6.51 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 5.81 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 5.33 (s, 2 H); 5.16 (s, 2 H); 5.07 (dd, J = 7.5, 4.8 Hz, 1 H); 4.57 (s, 1 H); 3.10 (s, 1 H); 2.86-2.65 (m, 8 H); 2.50 (m, 4 H); 1.90 (s, 1 H); 1.79 (s, 1H); 1.46 (t, J = 49.4 Hz, 3 H).

Primer 3

4-(((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)butil 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat

(Jedinjenje 36)

[0167]

Korak 1; Metil 1-metil-5-(((metilsulfonil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat

[0168]

[0169] Rastvor ohlađen ledom metil 5 (hidroksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilata (0.60 g, 3.51 mmol) i trietilamina (1.22 mL, 8.77 mmol) u DCM (10 mL) je dodat sa metansulfonilom hloridom (0.41 mL, 5.26 mmol). Reakciona smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 15 minuta i uklonjena je rashladna tečnost. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakciona smeša je razblažena sa DCM-om i isprana sa vodom i fiziološkim rastvorom. Organska faza je osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je upotribljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2; (S)-Metil 5-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino) (fenil)metil)fenoksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilat

[0170]

[0171] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 Kraka 5 sa metil 1-metil-5-(((metilsulfonil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilatom zamenjujući metil 4-(bromometil)benzoat.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.37-7.21 (m, 7 H); 6.92 (d, J = 7.7 Hz, 1 H); 6.87-6.81 (m, 3 H); 5.88 (s, 1 H); 5.25-4.98 (m, 1 H); 5.00 (s, 2 H); 4.05-3.91 (m, 3 H); 3.92 (s, 3 H); 1.44 (s, 9 H).

Korak 3; Metil 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat

[0172]

[0173] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 Kraka 6 sa (S)-metil 5-((3-(((tertbutoksikarbonil) amino)(fenil)metil)fenoksi)-metil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilatom zamenjujući metil 4-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino)(fenil)metil)fenoksi)metil)benzoat i produkt iz ovog koraka korišćen u Primeru 1 Koraka 7.

Korak 4; 1-Metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilna kiselina

[0174]

[0175] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 Kraka 8 sa metil 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)-metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat zamenjujući 4-((3-(fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil) benzoat.

Korak 5; 3-(1,3-Dioksolan-2-il)propil 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat

[0176]

[0177] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 1 Kraka 10 sa 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)-fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilnom kiselinom i 3-(1,3-dioksolan-2-il)propan-1-ol zamenjujući 4-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino) metil)fenoksi)metil)benzojevu kiselinu i 4-(2-hidroksietoksi)-3-metilbenzaldehid respektivno.

Korak 6; 4-(((R)-2-Hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)butil 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat

(Jedinjenje 36)

[0178] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 2 Koraka 6 i Koraka 7.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.48-8.07 (m, 3 H); 8.18 (d, J = 9.93 Hz, 1 H); 7.33-7.19 (m, 6 H); 7.13-7.04 (m, 2 H); 7.00-6.90 (m, 3 H); 6.88 (s, 1 H); 6.51 (d, J = 9.86 Hz, 1 H); 5.83 (d, J = 8.56 Hz, 1 H); 5.32-5.03 (m, 3 H); 4.60 (s, 2 H); 4.26-4.19 (m, 2 H); 4.10-3.66 (m, 3 H); 3.20-3.08 (m, 1 H); 2.93-2.54 (m, 9 H); 2.06-1.28 (m, 8 H).

[0179] Sledeće jedinjenje je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 3 sa odgovarajućim alkilirajućim agensom u Koraku 1 (metil 1-metil-5-(((metilsulfonil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilata u slučaju Jedinjenja 36) korišćenog u Koraku 2 i produkt upotrebljen u sledećim koracima u Primeru 4.

Primer 4

(R)-Hinuklidin-3-il((S)-(3-((3-((4-(((R)-2-hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)butil)karbamoil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metoksi)fenil)(fenil)metil)karbamat (Jedinjenje 39) [0180]

Korak 1; (R)-Hinuklidin-3-il((S)-(3-((3-((4,4-dietoksibutil)karbamoil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metoksi)fenil) (fenil)metil)karbamat

[0181]

[0182] Mešani rastvor 1-metil-5-((3-((S)-fenil((((R)-hinuklidin-3-iloksi)karbonil)amino)metil)fenoksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline (0.30 g, 0.61 mmol) u DMF (6 mL) je dodat sa trietilaminom (0.2 mL, 1.53 mmol), 4-aminobutiraldehid dietil acetalom (0.20 mL, 1.22 mmol), EDCI (0.18 g, 0.91 mmol) i 2-hidroksipiridin-N-oksidom (0.09 g, 0.91 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa zasićenim natrijum hidrogen karbonatom, fiziološkim rastvorom, osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi ciljani materijal (0.22 g, 57%) koji je direktno korišćen bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2; (R)-Hinuklidin-3-il((S)-(3-((3-((4-(((R)-2-hidroksi-2-(8-hidroksi-2-okso-1,2-dihidrohinolin-5-il)etil)amino)butil)karbamoil)-1-metil-1H-pirazol-5-il)metoksi)fenil)(fenil)metil)karbamat

(Jedinjenje 39)

[0183]

[0184] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno kao što je opisano u Primeru 2, Koraka 7.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6): δ 10.30 (br s, 1 H); 8.48-8.07 (m, 3 H); 8.21-8.10 (m, 2 H); 7.34-7.19 (m, 6 H); 7.15-7.04 (m, 2 H); 7.00-6.91 (m, 2H); 6.75 (s, 1 H); 6.53 (d, J = 9.86 Hz, 1H); 5.84 (d, J = 8.57 Hz, 1H); 5.31-5.10 (m, 3 H); 4.61 (s, 1H); 3.88 (s, 3 H); 3.31-2.97 (m, 3 H); 2.95-2.56 (m, 7 H); 1.94 (s, 1H); 1.82 (s, 1H); 1.73-1.16 (m, 9 H).

Sinteza velikih razmera (S)-3-(amino (fenil) metil) fenol hidrohlorida

[0185]

Korak 1; (3-Metoksifenil)(fenil)metanon

[0186]

[0187] Smeši fosfornog pentahlorida (3763 g, 18.1 mol) u 7500 mL benzena, dodata je u porcijama 3-metoksi benzojeva kiselina (2500 g, 16.4 mol). Smeša je mešana tokom 50 minuta dok nije postala homogena. Stvaranje kiselog hlorida je kontrolisano pomoću TLC. Po završetku, smeša je ohlađena na 10°C, reaktor je prekriven aluminijskom folijom i u porcijama je dodat aluminijum trihlorid (4820 g, 36.1 mol) (unutrašnja temperatura je održavana do najviše 30°C). Mešanje je nastavljeno tokom 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena pomoću TLC (AcOEt: heks 1:9). Po završetku, reakciona smeša je sipana u led i razblažena sa AcOEt (7 L). Zatim je odvojen organski sloj i vodeni sloj je ekstrahovan sa AcOEt (2 x 10 L, 1 x 6 L). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (5 x 3 L) do pH~ 6-7, zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (15 L), osušeni (natrijum sulfat), filtrirani i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo sirovo ulje. Produkt je prečišćen vakumskom destilacijom (130-139°C, 2 mbar) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao (2637 g 76%) bledo žuto ulje.

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3); δ 7.80 (m, 2 H); 7.57 (m, 1 H);. 7.46 (m, 2 H); 7.32-7.37 (m, 3 H); 7.12(m, 1H); 3.83 (s, 3 H). Korak 2; (3-Hidroksifenil)(fenil)metanon

[0188]

[0189] 1458 g (6.9 mol) (3-metoksifenil)(fenil)metanona je rastvoreno u 2090 mL AcOH. U rastvor je dodato 2320 ml (20.6 mol) 48% HBr i smeša je mešana na 90°C tokom 18 sati. Reakcija je praćena pomoću TLC (AcOEt: heks 1: 9). Po završetku reakcije smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u led uz mešanje. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa vodom i osušena dajući jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (1234 g, 91%).

<1>H NMR (600 MHz, CDCl3); δ 7.80 (m, 2 H); 7.58 (m, 1 H); 7.47 (m, 2 H); 7.39 (m, 1 H); 7.28-7.34 (m, 2 H); 7.11 (m, 1H); 5.59 (brs, 1H).

Korak 3; 3-(Amino(fenil)metil)fenol

[0190]

[0191] (3-Hidroksifenil)(fenil)metanon (400 g, 2 mol) je rastvoren u metanolu (4 L). U dobijeni rastvor su dodati hidroksilamin hidrohlorid (168 g, 2.4 mola) i natrijum acetat (331 g, 4 mola). Smeša je refluksirana tokom 18 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom, zatim je u ostatak dodata voda (3 L). Produkt je ekstrahovan sa etil-acetatom (3 x 3L). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata, koncentrovanim rastvorom soli, osušeni (natrijum sulfat), filtrirani i rastvarač evaporisan pod smanjenim pritiskom. Sirovi ostatak (1085 g) je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.

[0192] Sirovi oksim, 362 g, (287 g, 1.3 mola čistog oksima na osnovu analize) je rastvoren u etanolu (860 mL) i 25% vodenog amonijaka (3000 mL). U ovu smešu je dodat amonijum acetat (52 g, 0.7 mola), praćen u porcijama cinkom u prahu (440 g, 6.7 mol) da se održi unutrašnja temperatura koja ne prelazi 40°C. Smeša je mešana bez zagrevanja tokom 18 sati, zatim filtrirana kroz sloj celita. Filterski kolač je ispran etil-acetatom. Filtrat je sakupljen i formirani slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (5 x 5L), kombinovani slojevi organskih ekstrakata su isprani sa koncentrovanim rastvorom soli (x 2) i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Produkt je osušen u vakumu (35°C, 18 sati).

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6); δ 9.25 (brs, 1 H); 7.36 (m, 2 H); 7.25 (m, 2 H); 7.15 (m, 1 H); 7.03 (m, 1 H); 6.79 (m, 2 H); 6.54 (m, 1 H); 4.98 (s, 1 H); 2.17 (brs, 2 H).

Korak 4; Kristalizacija (S)-3-(amino(fenil)metil)fenol (S)-mandelata

[0193]

[0194] Stvaranje soli: 3-(Amino(fenil)metil)fenol (1081 g, 5.4 mol) je rastvoren u izo-propanolu (21.62 L) i zagrevan do refluksa. Smeši je dodat rastvor S-mandelinske kiseline (908 g, 6 mol) u izo-propanolu (2160 mL) u kapima. Smeša je refluksirana tokom 1 sata, i zatim ostavljena da se ohladi do 10°C (preko 18 sati). Nastali talog je filtriran, ispran sa hladnim izo-propanolom i osušen u vakumu na 35°C.

[0195] Dobijena so je refluksirana tokom 1 sata u 95% izo-propanolu. Smeša je ostavljena da se ohladi do 10°C preko 18 sati. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa hladnim izo-propanolom i osušena u vakumskoj peći na 35°C. Postupak kristalizacije je ponovljen dva ili više puta sve dok je ee bio > 98% hiralnom HPLC analizom.

Korak 5; (S)-3-(Amino(fenil)metil)fenol hidrohlorid

[0196]

[0197] (S)-3-(Amino(fenil)metil)fenol (S)-mandelat (1027 g, 2.9 mol) je suspendovan u etil acetatu. Rastvor natrijum hidrogen karbonata (737 g, 8.8 mol) u vodi (11.05 L) je dodat u kapima i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Smeša je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (5 x 10 L). Kombinovani organski ekstrakti su kombinovani i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo 464 g (85%) amina kao bledo žutih kristala.

[0198] Amin (464 g, 2.3 mola) je suspendovan u metanolu i 4M HCl u AcOEt (3500 mL, 14 mola) je dodato u kapima. Smeša je mešana tokom 18 sati, i rastvarač je evaporisan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je trituriran sa etrom (2740 mL) tokom 18 sati. Suspenzija je filtrirana, filterski kolač je ispran sa etrom i osušen.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6); δ 9.74 (s, 1 H); 9.19 (s, 3 H); 7.54 (m, 2 H); 7.40 (m, 2 H); 7.33 (m, 1 H); 7.19 (m, 1 H); 7.00 (m, 1 H); 6.89 (m, 1 H); 6.78 (m, 1 H); 5.49 (s, 1H, CH).

Biološka karakterizacija

Primer 5

Analiza vezivanja za radioligand M3 receptora

[0199] Membrane humanog receptora M3 (15 ug/jažici) iz Perkin Elmera su inkubirane sa 0.52 nM Skopolamin metil hlorida, [N-metil-3H] sa ili bez testnih jedinjenja ili zasićujućom koncentracijom Atropina (5 µM) za određivanje ne- specifičnog vezivanja. Ispitivanje je izvedeno na polipropilenskim pločama sa 96 jažica u zapremini od 250 ul. Korišćeni pufer za ispitivanje je bio 50 mM Tris-HCl, 154 mM NaCl (pH 7.4). Konačna test koncentracija DMSO je bila 0.5% (v/v). Ploče su hermetički zatvorene i inkubirane tokom 2 sata na sobnoj temperaturi na orbitalnom šejkeru (spora brzina). Membrane su sakupljene na filtriranim pločama unifiltera GF/C sa 96 jažica, prethodno tretiranim sa 0.5% polietileniminom (v/v), koristeći filter kolektor, isprane četiri puta sa 200 ul pufera za ispitivanje. Ploče su osušene pre dodatka 50 µl mikroscinta-0, hermetički zatvorene i zatim očitane u scintilacionom brojaču tzv. "Trilux Microbeta". Vrednosti IC50 su određene iz kriva konkurencije korišćenjem nelinearnog programa ugradnje kriva. Vrednosti Ki su izračunate iz vrednosti IC50 sa tzv. "Cheng-ovom i Prusoff-ovom" jednačinom.

[0200] Vrednosti Ki većine jedinjenja iz primera su manje od 10 nM.

Primer 15

Analiza vezivanja radioliganda za β2 adrenoceptor

[0201] Membrane humanog β2adrenoceptora (7.5 ug/jažici) iz Perkin Elmera su inkubirane sa 0.3 nM 125-I Cijanopindolola sa ili bez testnih jedinjenja ili zasićujućom koncentracijom s-propranolola (2 µM) za određivanje nespecifičnog vezivanja. Ispitivanje je izvedeno na polipropilenskim pločama sa 96 jažica u zapremini od 200 ul. Upotrebljeni pufer za ispitivanje je bio 25 mM HEPES, 0.5% BSA (w/v), 1 mM EDTA, 0.02% askorbinske kiseline (v/v), (pH 7.4). Konačni test koncentracije DMSO je bio 0.5% (v/v). Ploče su hermetički zatvorene i inkubirane tokom 1 sata na sobnoj temperaturi na orbitalnom šejkeru (spora brzina). Membrane su sakupljene na filter pločama unifiltera GF/C sa 96 jažica prethodno tretirane sa 0.5% polietileniminom (v/v), upotrebom filter razvodnika, isprane šest puta sa 200 ul pufera za ispiranje koji sadrži 10 mM HEPES i 500 mM NaCl. Ploče su bile osušene pre dodatka 50 µl microscint-0, hermetički zatvorene i očitane u tzv. "Trilux Microbeta" scintilacionom brojaču. Vrednosti IC50 su određene iz kriva konkurencije korišćenjem programa ugradnje nelinearnih kriva. Vrednosti Ki su izračunate iz vrednosti IC50 tzv. "Cheng-ovom i Prusoff-ovom" jednačinom. Vrednosti Ki većine jedinjenja iz primera su manje od 10 nM.

Claims (7)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje opšte formule I

   pri čemu Q je grupa formule Q1

   Z je H ili OH; Y je izabrano od Y’ i Y1 koje su dvovalentne grupe formule

   ili

   pri čemu A1 je butilen; A2 je odsutan ili (C1-C6)alkilen; B je izabran iz grupe koja se sastoji od pirazoldiila i tiofenediila, opciono supstituisanih sa jednom ili više grupa izabranih od metila; C je -OC(O)- ili je C1

   pri čemu R4je H; D je odsutan; n’ je 1; E je -O-; G je fenilen; R1i R2su nezavisno H ili aril; R3je grupa formule J1 ili J2

   pri čemu je R5grupa formule K

   pri čemu p’ jeste 0 ili 1, P je odsutan ili je CO, q je odsutan ili je 1 i W je heteroaril, i farmaceutski prihvatljive soli ili solvati od njih.
2. 2. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje formule I kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili ekscipijenata.
3. 3. Jedinjenje formule I prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu u prevenciji i/ili tretmanu bronho-opstruktivnih ili inflamatornih bolesti.
4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 3, pri čemu su bronho-opstruktivne ili inflamatorne bolesti astma ili hronični bronhitis ili hronična opstruktivna bolest pluća (COPD).
5. 5. Kombinacija jedinjenja formule I kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, sa jednim ili više aktivnih sastojaka izabranih iz klasa koje se sastoje od beta2-agonista, antimuskarinskih agenasa, inhibitora protein kinaza aktiviranih mitogenom (P38 MAP kinaza), inhibitora nuklearnog faktora kappa-B kinaze podjedinice beta (IKK2), inhibitora humane neutrofilne elastaze (HNE), inhibitora fosfodiesteraze 4 (PDE4), leukotrienskih modulatora, ne-steroidnih anti-inflamatornih agenasa (NSAIDs), antitusivnih agenasa, regulatora sluzi, mukolitika, ekspektorans/mukokinetičkih modulatora, peptidnih mukolitika, antibiotika, inhibitora JAK, SYK inhibitora, inhibitora PI3Kdelta ili PI3Kgamma, kortikosteroida i M3-antagonista/PDE4-inhibitora (MAPI).
6. 6. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2, koja bi se primenila inhalacijom, kao što su praškovi za udisanje, dozirni aerosoli koji sadrže potisni gas ili inhalacione formulacije bez potisnog gasa.
7. 7. Uređaj koja sadrži farmaceutsku kompoziciju prema patentnom zahtevu 6, koji može biti inhalator sa jednom- ili višedoza za suvi prah, inhalator sa odmerenom dozom i nebulizator meke magle. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5