RS61874B1 - Derivati karboksamida - Google Patents

Derivati karboksamida

Info

Publication number
RS61874B1
RS61874B1 RS20210629A RSP20210629A RS61874B1 RS 61874 B1 RS61874 B1 RS 61874B1 RS 20210629 A RS20210629 A RS 20210629A RS P20210629 A RSP20210629 A RS P20210629A RS 61874 B1 RS61874 B1 RS 61874B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
dihydro
dimethyl
pyrazol
cyclohexyl
carboxamide
Prior art date
Application number
RS20210629A
Other languages
English (en)
Inventor
Anne-Marie D'souza
Mahbub Ahmed
Robert Alexander Pulz
Lisa Ann Rooney
Nichola Smith
Thomas Josef Troxler
Kamlesh Jagdis Bala
Andrew Brearley
James Dale
David Porter
David Andrew Sandham
Duncan Shaw
Jessica Louise Taylor
Roger John Taylor
Joe Wrigglesworth
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=50735903&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS61874(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of RS61874B1 publication Critical patent/RS61874B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4155—1,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Opis
[1] Predmetni pronalazak opisuje organska jedinjenja korisna u terapiji. Jedinjenja pokazuju svojstva selektivnih Smurf-1 inhibitora, te stoga mogu biti korisna u lečenju niza poremećaja, kao što su, na primer, plućna arterijska hipertenzija, glaukom, nasledna hemoragijska teleangiektazija (HHT), proteinurija, zaceljivanje rana, kao i HOBP i astma.
Pozadina pronalaska
[2] Smurf-1 (Smad ubikvitinacija regulatorni faktor 1) član je HECT porodice E3 ubikvitin ligaze koja označava specifične supstrate za proteolitičku razgradnju proteolitičkim putem zavisnim od ubikvitina. Glavni supstrati Smurf-1 uključuju RhoA, receptor koštanog morfogenetičkog proteina (BMP) (BMPR) 1 i 2, smad1 i 5, faktor povezan sa TNFα receptorima (TRAF) 6 i myD88 (Andrews, P.S. et al. Assay Drug Dev. Technol. 2010). Imajući u vidu spisak supstrata, Smurf-1 ima utvrđene uloge u regulisanju BMP signalizacije (Chen, D et al. Growth Factors, 2004), polarnosti neuronskih ćelija (Stiess, M. i Bradke, F. Neuron, 2011), ćelijske migracije (Huang, C. Cell Adh. Migr. 2010), invazije tumorskih ćelija (Sahai, E. et al. JCB, 2007), mitohondrijske autofagije (Orvedahl, A. Nature, 2011), proliferacije mezenhimskih matičnih ćelija (Zhao, L. et al. J. Bone Miner. Res. 2010) i epitelno-mezenhimske tranzicije (EMT) (Ozdamar, B et al. Science 2005).
Plućna arterijska hipertenzija (PAH) je agresivna i složena bolest više etiologija koja je opasna po život, koju karakteriše progresivna plućna vaskulopatija koja dovodi do hipertrofije/zatajenja desne komore, i u većini slučajeva do prerane smrti. Postojeće farmakološke terapije su palijativne. Na primer, WO2009/011850 otkriva jedinjenja koja su delotvorna za lečenje određenih stanja i bolesti, naročito inflamatornih stanja i bolesti. Iako su uočena poboljšanja očekivanog trajanja života, postojeće terapije, koje se fokusiraju na promenu vazokonstriktivnih elemenata bolesti, ne zaustavljaju niti preokreću progresiju bolesti, a transplantacija (oba plućna krila ili srca-pluća) ostaje jedino kurativno lečenje. S obzirom na ograničeno dejstvo trenutnih klasa terapije, potrebne su nove terapije koje ciljaju postojeće progresivno plućno vaskularno remodelovanje PAH.
[3] Mutacije germinativne linije u genu receptora koštanog morfogenetičkog proteina II (BMPR-II) superfamilije transformišućeg faktora rasta ß (TGF-ß) preovlađuju u sedamdeset posto naslednih oblika, i u nekim sporadičnim oblicima idiopatskog PAH (IPAH). Koštani morfogenetički proteini su signalni molekuli koji pripadaju superfamiliji TGF-β. Koštani morfogenetički proteini su prvobitno identifikovani po svojoj sposobnosti da indukuju stvaranje hrskavice i kostiju, a potom su identifikovani kao multifunkcionalni proteini koji regulišu širok spektar funkcija, poput proliferacije, diferencijacije i apoptoze u raznovrsnim vrstama ćelija, uključujući osteoblaste, epitelne ćelije, neurone, imunske ćelije i ćelije glatkih mišića. Do sada je identifikovano > 20 BMP sisara, ali su kod sisara klonirana samo tri receptora tip I i tri receptora tip II (BMPR-I, odnosno BMPR-II) koji su sposobni da se vezuju sa BMP. Koštani morfogenetički proteini se sintetišu i izlučuju iz različitih vrsta ćelija, uključujući plućne vaskularne ćelije glatkih mišića i endotelne ćelije. Pored mutacija BMPR-I i -II, pluća pacijenata sa nefamilijarnom PAH pokazuju izrazito smanjene nivoe vaskularnih BMPR-1 i -II, što ukazuje na centralnu ulogu poremećene BMP signalizacije u mnogim oblicima PAH (Du, L et al. N.Eng.J.Med, 2003). Obnavljanje BMP signalizacije u plućnoj vaskulaturi pacijenata sa PAH stoga je od velikog interesa za razvoj novih anti-remodelujućih terapeutskih sredstava za lečenje PAH.
[4] Pokazalo se da Smurf-1 posreduje u razgradnji BMPR-I, -II i smad1 i 5 u različitim vrstama ćelija, uključujući osteoblaste (Zhao, M et al. JBC, 2003), mioblaste (Ying, SX et al., JBC, 2003), epitel pluća (Shi W, et al. Am.J.Physiol.Cell.Mol.Physiol, 2004), neuronsko tkivo (Kallan, T et al. Mol. Cell. Biol, 2009) i endokardne ćelije (Towsend, TA, et al. Cells Tissues Organs, 2011). Nedavno su se pojavili prvi dokazi koji podržavaju ulogu Smurf-1 u PAH, gde su uočeni povećani nivoi Smurf-1 kod hronične hipoksije i u monokrotalinskim pretkliničkim in-vivo modelima PAH i povezani su sa nishodnom regulacijom BMPR1 i 2 (Murakami, K, et al. Exp. Biol. Med, 2010 i Yang, J. et al. Circ. Res, 2010).
Rezime pronalaska
[5] Ostaje potreba za novim lečenjima i terapijama za plućnu arterijsku hipertenziju. Pronalazak obezbeđuje jedinjenja, njihove farmaceutski prihvatljive soli ili kokristale, njihove farmaceutske kompozicije i njihove kombinacije, pri čemu su jedinjenja Smurf-1 inhibitori.
[6] Prema prvom aspektu pronalaska, otelotvorenju 1, obezbeđeno je jedinjenje formule (I):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu
R<1>je (C3-C6)alkil ili (C3-C6)cikloalkil;
R<2>je metil;
R<3>je izabran od (C6-C10)razgranatog alkila, (C6-C10)razgranatog alkenila, (C5-C8)cikloalkenila, (C5-C8)cikloalkila ili Het; pri čemu, (C5-C8)cikloalkenil ili (C5-C8)cikloalkil je nesupstituisan ili supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; i pri čemu je Het supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>;
svaki R<4>je nezavisno izabran od halo, (C1-C4)alkila, halo(C1-C4)alkila, (C1-C4)alkoksi ili halo(C1-C4)alkoksi; ili
dve R<4>grupe, kada su vezane za isti atom ugljenika, mogu zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezane da formiraju prsten ciklopentila, tetrahidrofurana ili dioksolana; pri čemu je Het 5- ili 6-člani potpuno zasićeni ili delimično zasićeni heterociklični prsten koji sadrži a) 1 atom kiseonika na poziciji 2 ili 3, ili b) 2 atoma kiseonika na pozicijama 2 i 5, ili 2 i 6, pri čemu je numeracija u odnosu na mesto vezivanja; i
(C5-C8)cikloalkil može biti monociklični prsten ili premošćeni sistem prstenova koji sadrži 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika.
[7] U još jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) kako je prethodno definisano ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[8] U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema definiciji formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kokristala, ili njegove podformule, i jedan ili više terapeutski prihvatljivih nosača. U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema definiciji formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove podformule, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
[9] U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili njegovu podformulu, za upotrebu u lečenju poremećaja ili bolesti izabrane od plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibroze, reumatoidnog artritisa, zaceljivanja preloma, glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, lečenja rana, kao i HOBP i astme, obuhvatajući primenu na ispitaniku terapeutski delotvorne količine jedinjenja prema definiciji formule (I), ili njegove terapeutski prihvatljive soli ili kokristala, ili njegove podformule ili njene farmaceutski prihvatljive soli ili kokristala. U nekim otelotvorenjima, na ispitaniku se primenjuje terapeutski delotvorna količina jedinjenja prema definiciji formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U drugim otelotvorenjima, na ispitaniku se primenjuje terapeutski delotvorna količina jedinjenja prema podrodu formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Druga otelotvorenja obezbeđuju jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili njegovu podformulu, za upotrebu u lečenju poremećaja ili bolesti izabrane od glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, lečenja rana, HOBP i astme.
[10] U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje kombinaciju, naročito farmaceutsku kombinaciju, koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema definiciji formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kokristala, ili njegove podformule, i jednog ili više terapeutski aktivnih agenasa.
[11] Ovde su opisana različita otelotvorenja pronalaska.
Detaljan opis
[12] Pronalazak tako obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili kokristal, kako je ovde prethodno opisano kao otelotvorenje 1.
Otelotvorenje 2. Jedinjenje prema otelotvorenju 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu, R<1>je izopropil, ciklobutil ili cikloheksil.
U još jednom otelotvorenju. Jedinjenje prema otelotvorenju 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu, R<1>je cikloheksil.
Otelotvorenje 3. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih otelotvorenja ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu je R<3>izabran od 2,2-dimetilpentila, 2,2-dimetilpent-2-enila, ciklopentila, cikloheksila, cikloheksenila, tetrahidropiranila, dihidropiranila, dioksanila, tetrahidrofuranila, dioksolanila i biciklo[2.2.2]oktanila; pri čemu je ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil ili biciklo[2.2.2]oktanil prsten supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; i pri čemu je tetrahidropiranil, dihidropiranil, dioksanil, tetrahidrofuranil ili dioksolanil supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>;
svaki R<4>je nezavisno izabran od halo, (C1-C4)alkila, halo(C1-C4)alkila, (C1-C4)alkoksi ili halo(C1-C4)alkoksi; ili
dve R<4>grupe, kada su vezane za isti atom ugljenika, mogu zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezane da grade prsten tetrahidrofurana ili dioksolana.
Otelotvorenje 4. Jedinjenje prema bilo kom prethodnom otelotvorenju ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu, R<3>je
;
i m je 1, 2, 3 ili 4.
U još jednom otelotvorenju. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih otelotvorenja, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu, R<3>je
i m je 1, 2, 3 ili 4.
Otelotvorenje 5. Jedinjenje prema bilo kom prethodnom otelotvorenju ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal, pri čemu je svaki R<4>nezavisno odabran od metila, izopropila, terc-butila i metoksi.
Otelotvorenje 6. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je otelotvorenje izabrano od
Primer 1
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 1.1
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6-etil-4-metilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 1.2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6,6-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 1.3
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-etilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 1.4
[5-(4-(terc-butil)cikloheks-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 1.5
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-metilcikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamida];
Primer 1.6
5-(ciklohept-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 1.7
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-(trifluormetil)cikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamida];
Primer 2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 2.1
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida];
Primer 2.2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 3
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 4
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida];
Primer 5
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 6
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheksil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 6,1
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilciklopentil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 7
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbutil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 8
(Z)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 9
(E)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 10
5-cikloheksil-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 11
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 12
5-(6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 13
5-(6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 14
5-(6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 15
5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 16
5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 17
5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 18
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 19
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 20
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 21.1
[5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida];
Primer 21.2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 22
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 23
5-(4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 24
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 25
5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 26
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kokristala.
[13] U još jednom otelotvorenju. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je otelotvorenje izabrano od
Primer 20
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamida;
Primer 26
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 2.2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida;
Primer 2.1
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida]; i
Primer 11
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamida;
ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kokristala.
[14] Otelotvorenje 7. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je jedinjenje
Primer 20
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal.
[15] Otelotvorenje 8. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je jedinjenje
Primer 26
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal.
[16] U još jednom otelotvorenju. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je jedinjenje
Primer 2.2
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal.
[17] U još jednom otelotvorenju 13. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je jedinjenje
Primer 2.1
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid], ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal.
[18] Otelotvorenje 9. Jedinjenje formule (I), prema otelotvorenju 1, pri čemu je jedinjenje
Primer 11
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal.
[19] Kako se ovde koristi, termin „halo“ (ili halogen) odnosi se na fluor, brom, hlor ili jod, naročito fluor, hlor. Halogen-supstituisane grupe i ostaci, kao što je alkil supstituisan halogenom (haloalkil), mogu biti mono-, poli- ili perhalogenovane.
[20] Kako se ovde koristi, termin „heteroatomi“ odnosi se na azot (N), kiseonik (O) ili sumpor (S), naročito azot ili kiseonik.
[21] Kako se ovde koristi, termin „alkil“ odnosi se na potpuno zasićeni razgranati ili nerazgranati ostatak ugljovodonika koji ima do 10 atoma ugljenika. Ako nije drugačije naznačeno, alkil se odnosi na ostatke ugljovodonika koji imaju 1 do 10 atoma ugljenika, 1 do 6 atoma ugljenika, ili 1 do 4 atoma ugljenika. Reprezentativni primeri za alkil uključuju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, n-pentil, izopentil, neopentil, nheksil, 3-metilheksil, 2,2- dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-decil, i slično. Reprezentativni primeri za razgranati alkil uključuju izopropil, sek-butil, izobutil, tercbutil, izopentil, 3-metilheksil, 2,2- dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, i slično. Supstituisani alkil je alkil grupa koja sadrži jedan ili više, recimo jedan, dva ili tri supstituenta izabrana od halogena, hidroksi ili alkoksi grupa.
[22] Kako se ovde koristi, termin „haloalkil“ odnosi se na alkil kako je ovde definisan, koji je supstituisan sa jednom ili više halo grupa kako su ovde definisane. Haloalkil može biti monohaloalkil, dihaloalkil ili polihaloalkil, uključujući perhaloalkil. Monohaloalkil može imati jedan jod, brom, hlor ili fluor u alkil grupi. Dihaloalkil i polihaloalkil grupe mogu imati dva ili više istih halo atoma, ili kombinaciju različitih halo grupa u alkilu. Polihaloalkil obično sadrži do 12, ili 10, ili 8, ili 6, ili 4, ili 3, ili 2 halo grupe. Primeri za haloalkil uključuju fluormetil, difluormetil, trifluormetil, hlormetil, dihlormetil, trihlormetil, pentafluoretil, heptafluorpropil, difluorhlormetil, dihlorfluormetil, difluoretil, difluorpropil, dihloretil i dihlorpropil. Perhaloalkil se odnosi na alkil koji ima atome vodonika zamenjene halo atomima.
[23] Kako se ovde koristi, termin „alkoksi“ odnosi se na alkil-O-, pri čemu je alkil ovde prethodno definisan. Reprezentativni primeri za alkoksi uključuju metoksi, etoksi, propoksi, 2-propoksi, butoksi, terc-butoksi, pentiloksi, heksiloksi, ciklopropiloksi, cikloheksiloksi, i slično. Alkoksi grupe uobičajeno imaju 1-4 atoma ugljenika.
[24] Kako se ovde koristi, termin „haloalkoksi“ odnosi se na alkoksi kako je ovde definisan, koji je supstituisan sa jednom ili više halo grupa kako su ovde definisane.
[25] Ako ovde nije drugačije naznačeno, kako se ovde koristi, termin „cikloalkil“ odnosi se na zasićene monociklične, biciklične ili spirociklične grupe ugljovodonika sa 3-8 atoma ugljenika. Ako nije drugačije naznačeno, cikloalkil se odnosi na ciklične ugljovodonične grupe koje imaju od 3 do 6, ili od 5 do 8 atoma ugljenika u prstenu.
[26] Kako se ovde koristi, termin „cikloalkenil“ odnosi se na delimično zasićene monociklične, biciklične ili spirociklične grupe ugljovodonika sa 3-8 atoma ugljenika. Ako nije drugačije naznačeno, cikloalkenil se odnosi na ciklične ugljovodonične grupe koje imaju od 3 do 6 ili od 5 do 8 atoma ugljenika u prstenu.
[27] U zavisnosti od izbora početnih supstanci i postupaka, jedinjenja mogu biti prisutna u obliku jednog od mogućih izomera ili njihove smeše, na primer, kao optički čisti izomeri, ili kao smeša izomera, kao što su racemske i dijastereomerne smeše, u zavisnosti od broja asimetričnih atoma ugljenika. Predmetni pronalazak treba da uključi sve takve moguće izomere, uključujući racemske smeše, dijastereomerne smeše i optički čiste oblike. Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu biti pripremljeni upotrebom hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili razdvojeni upotrebom konvencionalnih tehnika. Ukoliko jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može biti E ili Z konfiguracija. Ukoliko jedinjenje sadrži disupstituisani cikloalkil, cikloalkil supstituent može imati cis ili trans konfiguraciju. Svi tautomerni oblici takođe treba da budu obuhvaćeni.
[28] Kako je ovde korišćeno, pojmovi „so“ ili „soli“ odnose se na kiselu ili baznu adicionu so jedinjenja iz ovog pronalaska. „Soli“ obuhvataju posebno „farmaceutski prihvatljive soli“. Termin „farmaceutski prihvatljive soli“ odnosi se na soli koje zadržavaju biološku delotvornost i osobine jedinjenja iz ovog pronalaska, i koje tipično nisu biološki ili drugačije nepoželjne.
[29] Jedinjenja prema pronalasku, tj. jedinjenja formule (I) koja sadrže grupe koje mogu da deluju kao donori i/ili akceptori za vodonične veze mogu biti u stanju da formiraju kokristale sa pogodnim supstancama koje grade kokristale. Ovi kokristali mogu biti pripremljeni iz jedinjenja formule (I) prema poznatim postupcima za formiranje kokristala. Takvi postupci obuhvataju mlevenje, zagrevanje, zajedničku sublimaciju, zajedničko topljenje, ili dovođenje u kontakt u rastvoru jedinjenja formule (I) sa supstancom koja gradi kokristale pod uslovima kristalizacije i izolovanja kokristala koji se tako formiraju. Pogodne supstance koje grade kokristale obuhvataju one opisane u WO 2004/078163. Stoga, pronalazak dalje obezbeđuje kokristale koji sadrže jedinjenje formule (I).
[30] U mnogim slučajevima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da grade kisele i/ili bazne soli i kokristale zahvaljujući prisustvu karboksamidne grupe ili grupa sličnih njoj.
[31] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli ili kokristali mogu da se grade sa neorganskim i organskim kiselinama.
[32] Neorganske kiseline iz kojih se mogu izvesti soli ili kokristali obuhvataju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i slično.
[33] Organske kiseline iz kojih se mogu izvesti soli ili kokristali obuhvataju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, bademovu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, i slično.
[34] Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli ili kokristali mogu da se grade sa neorganskim i organskim bazama.
[35] Neorganske baze iz kojih se mogu izvesti soli ili kokristali obuhvataju, amonijumove soli i metale iz kolona I do XII periodnog sistema. U određenim otelotvorenjima, soli su dobijene od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra i cinka; naročito pogodne soli uključuju soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma.
[36] Organske baze iz kojih se mogu izvesti soli ili kokristali obuhvataju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, supstituisane amine uključujući supstituisane amine koji se nalaze u prirodi, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole, i slično. Određeni organski amini uključuju holinat, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[37] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I) u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[38] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, isetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[39] U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[40] U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[41] U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid] u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[42] U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mukata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebacata, stearata, sukcinata, sulfata, tartarata, tozilata trifenatata ili ksinafoata.
[43] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I) u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[44] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[45] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[46] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[47] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid] u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[48] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid u obliku soli ili kokristala natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, srebra, cinka, holinata, lizina, meglumina, piperazina ili trometamina.
[49] Bilo koja ovde data formula takođe je namenjena da predstavlja neobeležene oblike kao i izotopski obeležene oblike jedinjenja. Izotopski obeležena jedinjenja imaju strukture prikazane ovde datim formulama, osim što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom koji ima izabranu atomsku masu ili maseni broj. Primeri izotopa koji mogu biti uključeni u jedinjenja iz pronalaska obuhvataju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl,<123>I,<124>I, odnosno<125>I. Pronalazak obuhvata različita izotopski obeležena jedinjenja kao što je ovde definisano, na primer, ona u kojima su prisutni radioaktivni izotopi, kao što su<3>H i<14>C, ili ona u kojima su izotopi koji nisu radioaktivni, kao<2>H i<13>C. Takva izotopski označena jedinjenja su od koristi pri metaboličkim ispitivanjima (sa<14>C), reakcionim kinetičkim ispitivanjima (na primer, sa<2>H ili<3>H), detekciji ili tehnikama obrade slike, kao što je pozitronska emisiona tomografija (PET) ili jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija (SPECT), uključujući testove distribucije leka ili supstrata u tkivu, ili radioaktivno tretiranje pacijenata. Naročito,<18>F ili obeleženo jedinjenje mogu biti posebno poželjni za PET ili SPECT ispitivanja. Izotopski obeležena jedinjenja formule (I) uopšteno mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima u ovoj oblasti ili postupcima analognim sa ovima ovde opisanim u priloženim Primerima i Pripremama, upotrebom odgovarajućeg izotopski obeleženog reagensa umesto neobeleženog reagensa koji je prethodno korišćen.
[50] Dalje, supstitucija težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.<2>H ili D), može dati određene terapeutske prednosti koje nastaju usled veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećano vreme poluraspada in vivo ili smanjene potrebe za doziranjem, ili poboljšani terapeutski indeks. Podrazumeva se da se deuterijum u ovom kontekstu smatra supstituentom jedinjenja formule (I). Koncentracija takvog težeg izotopa, naročito deuterijuma, može biti definisana faktorom obogaćenja izotopa. Termin „faktor obogaćenja izotopa“ kao što se ovde koristi označava odnos između količine izotopa i prirodne količine naznačenog izotopa. Ukoliko je supstituent u jedinjenju iz ovog pronalaska naznačeni deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor obogaćenja izotopa za svaki naznačeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52,5% uključenje deuterijuma na svakom naznačenom atomu deuterijuma), najmanje 4000 (60% uključenje deuterijuma), najmanje 4500 (67,5% uključenje deuterijuma), najmanje 5000 (75% uključenje deuterijuma), najmanje 5500 (82,5% uključenje deuterijuma), najmanje 6000 (90% uključenje deuterijuma), najmanje 6333,3 (95% uključenje deuterijuma), najmanje 6466,7 (97% uključenje deuterijuma), najmanje 6600 (99% uključenje deuterijuma) ili najmanje 6633,3 (99,5% uključenje deuterijuma).
[51] Farmaceutski prihvatljivi solvati prema pronalasku uključuju one kod kojih rastvarač za kristalizaciju može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.
[52] Kao što se ovde koristi, termin „farmaceutski prihvatljiv nosač“ uključuje svaki rastvarač, disperzioni medijum, premaz, surfaktant, antioksidans, konzervans (npr. antibakterijski agens, antifungalni agens), izotonični agens, agens za odlaganje apsorpcije, so, konzervans, stabilizator leka, vezivo, ekscipijens, dezintegrans, lubrikans, zaslađivač, aromu, boju, i slično, i njihove kombinacije, kao što je poznato stručnjaku (vidite, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izd. Mack Printing Company, 1990, str. 1289– 1329). Osim u onoj meri u kojoj je neki klasični nosač nekompatibilan sa aktivnim sastojkom, njegova primena u terapeutskoj ili farmaceutskoj kompoziciji se razmatra.
[53] Termin „terapeutski delotvorna količina“ jedinjenja iz predmetnog pronalaska odnosi se na količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor ispitanika, na primer, smanjenje ili inhibiciju enzimske ili proteinske aktivnosti, ili poboljšavanje simptoma, ublažavanje stanja, usporavanje ili odlaganje progresije bolesti, ili sprečavanje bolesti, itd. U jednom otelotvorenju, termin „terapeutski delotvorna količina“ odnosi se na količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kako je ovde definisano, koja je, kada se primeni na ispitaniku, delotvorna da (1) najmanje delimično ublaži, inhibira, spreči i/ili poboljša stanje, ili poremećaj ili bolest (i) posredovane putem Smurf-1, ili (ii) povezane sa aktivnošću Smurf-1, ili (iii) okarakterisane aktivnošću (normalnom ili nenormalnom) Smurf-1; ili (2) smanji ili inhibira aktivnost Smurf-1; ili (3) smanji ili inhibira ekspresiju Smurf-1. U još jednom otelotvorenju, termin „terapeutski delotvorna količina“ se odnosi na količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, koja je, kada se primeni na ćeliji, ili tkivu, ili nećelijskom biološkom materijalu, ili medijumu, delotvorna da najmanje delimično smanji ili inhibira aktivnost Smurf-1; ili najmanje delimično smanji ili inhibira ekspresiju Smurf-1.
[54] Kao što se ovde koristi, termin „ispitanik“ odnosi se na životinju. Obično, životinja je sisar. Ispitanik se takođe odnosi, na primer, na primate (npr. ljude, muškarce ili žene), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, zečeve, pacove, miševe, ribe, ptice, i slično. U određenim primerima izvođenja, ispitanik je primat. U drugim primerima izvođenja, ispitanik je čovek.
[55] Kao što se ovde koristi, termin „inhibirati“, „inhibicija“ ili „inhibiranje“ odnosi se na smanjenje ili suzbijanje datog stanja, simptoma, ili poremećaja ili bolesti, ili značajno smanjenje osnovne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa.
[56] Kako je ovde korišćen, pojam „lečiti“, „lečenje“ ili „terapija“ bilo koje bolesti ili poremećaja se odnosi u jednom primeru izvođenja na poboljšanje bolesti ili poremećaja (tj. usporavanje ili zaustavljanje ili smanjenje razvoja te bolesti ili barem jednog od njenih kliničkih simptoma). U još jednom primeru izvođenja „lečiti“, „lečenje“ ili „terapija“ se odnosi na ublažavanje ili poboljšanje barem jednog od fizičkih parametara uključujući one koje pacijent možda ne zapaža. U još jednom primeru izvođenja, „lečiti“, „lečenje“ ili „terapija“ odnosi se na menjanje bolesti ili poremećaja fizički (npr. stabilizacija prepoznatljivog simptoma), fiziološki (npr. stabilizacija fizičkog parametra) ili na oba načina. U još jednom primeru izvođenja, „lečiti“, „lečenje“ ili „terapija“ odnosi se na sprečavanje ili prolongiranje ispoljavanja ili razvoja, ili napredovanja bolesti ili poremećaja.
[57] Kako je ovde korišćeno, ispitanik „ima potrebu“ za terapijom ako bi takav ispitanik imao korist biološku, medicinsku ili u pogledu kvaliteta života, od takve terapije.
[58] Kako su ovde korišćeni, termine koji označavaju jedninu i množinu upotrebljene u kontekstu predmetnog pronalaska (posebno u kontekstu zahteva) treba tumačiti tako da pokrivaju i jedninu i množinu, ako to ovde nije drugačije naznačeno ili je u jasnoj suprotnosti sa kontekstom.
[59] Svi ovde opisani postupci mogu biti izvršeni po bilo kojem pogodnom redosledu ukoliko ovde nije drugačije ukazano ili na drugačiji način nije jasno kontradiktorno sa kontekstom. Upotreba svih primera ili formulacija koje upućuju na ovde navedene primere (npr. „kao što je“) namenjena je samo da bolje objasni pronalazak, i ne služi kao ograničenje obima pronalaska koji je inače zahtevan.
[60] Asimetrični atom (npr. ugljenik ili slično) jedinjenja iz predmetnog pronalaska može biti prisutan u racemskoj ili enantiomerno obogaćenoj konfiguraciji, na primer, (R)-, (S)- ili (R,S)- konfiguraciji. U određenim otelotvorenjima, svaki asimetrični atom ima najmanje 50% enantiomernog viška, najmanje 60% enantiomernog viška, najmanje 70% enantiomernog viška, najmanje 80% enantiomernog viška, najmanje 90% enantiomernog viška, najmanje 95% enantiomernog viška ili najmanje 99% enantiomernog viška u (R) ili (S) konfiguraciji. Supstituenti kod atoma sa nezasićenim dvostrukim vezama mogu biti, ukoliko je moguće, prisutni u cis (Z) ili trans (E) obliku.
[61] Prema tome, kao što se ovde koristi, jedinjenje iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, može biti u obliku jednog od mogućih izomera, rotamera, atropizomera, tautomera ili njihove smeše, na primer, kao suštinski čisti geometrijski (cis ili trans) izomeri, dijastereomeri, optički izomeri (antipodi), racemati, ili njihove smeše.
[62] Sve dobijene smeše izomera se mogu razdvojiti na osnovu fizičko-hemijskih razlika konstituenata, dajući čiste ili suštinski čiste geometrijske ili optičke izomere, dijastereomere, racemate, na primer, putem hromatografije i/ili frakcione kristalizacije.
[63] Bilo koji dobijeni racemati krajnjih proizvoda ili intermedijera mogu biti razdvojeni na optičke antipode poznatim postupcima, npr. odvajanjem njihovih dijastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobađanjem optički aktivnog kiselog ili baznog jedinjenja. Konkretno, bazni ostatak može tako da se koristi za razdvajanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, na njihove optičke antipode, npr. putem frakcione kristalizacije soli formiranih iz optički aktivne kiseline, npr. vinske kiseline, dibenzoil vinske kiseline, diacetil vinske kiseline, di-O,O'-p-toluoil vinske kiseline, bademove kiseline, jabučne kiseline ili kamfor-10-sulfonske kiseline. Racemski proizvodi mogu takođe biti razdvojeni hiralnom hromatografijom, npr. tečnom hromatografijom pod visokim pritiskom (HPLC) upotrebom hiralnog adsorbenta.
[64] Nadalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kao što je ovde otkriveno, uključujući njihove soli, takođe se mogu dobiti u obliku svojih hidrata, ili mogu uključiti druge rastvarače korišćene za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu suštinski ili namenski da formiraju solvate sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima (uključujući vodu); stoga, nameravano je da pronalazak obuhvati i solvatne i nesolvatne forme. Termin „solvat“ se odnosi na molekulski kompleks jedinjenja iz predmetnog pronalaska (uključujući njegove farmaceutski prihvatljive soli) sa jednim ili više molekula rastvarača. Takvi molekuli rastvarača su oni koji se obično koriste u farmaceutskoj struci, za koje je poznato da nisu štetni za primaoca, npr. voda, etanol i slično. Termin „hidrat“ se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača voda.
[65] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kao što je ovde otkriveno, uključujući njihove soli, kokristale, hidrate i solvate, mogu prirodno ili namerno da formiraju polimorfe.
OPŠTE ŠEME
[66] Uobičajeno, jedinjenja formule (I) mogu da se pripreme prema šemama obezbeđenim u nastavku.
[67] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, mogu da se pripreme postupcima koji su opisani u sledećim šemama ili primerima.
[68] Sve skraćenice su kao što je definisano u odeljku sa primerima u nastavku.
Šema 1
[69] Pri čemu su X i Y nezavisno H ili -(C1-C6)alkil.
Korak 1: Reakcija unakrsnog kuplovanja katalizovana paladijumom.
[70] Uobičajeni uslovi: Paladijum (0) katalizator; odgovarajuće jedinjenje bora, kalaja ili cinka kao što je boronska kiselina, boronatni estar ili stanan; organska ili neorganska baza; u vodi; u odgovarajućem rastvaraču na 80-110°C
[71] Poželjni uslovi: Bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid, so vinil trifluorborata, trietilamin u etanolu na 90°C
Korak 2: Dihidroksilacija
[72] Uobičajeni uslovi: Osmijum tetroksid; odgovarajući kooksidans kao što je N-metilmorfolin-N-oksid; u odgovarajućem rastvaraču
[73] Poželjni uslovi: Osmijum tetroksid (Admix alfa ili Admix beta) može da se koristi za pristup hiralnim diolima, sa odgovarajućim aditivom, kao što je metan sulfonamid. Poželjni sistem rastvarača je t-butanol/voda.
Korak 3: Oksidativno cepanje
[74] Uobičajeni uslovi: Natrijum perjodat u sistemu rastvarača THF/voda
Šema 2
Kada je R<2>metil, jedinjenje formule (I) može da se pripremi prema Šemi 2.
[75] Pri čemu su X<2>i Y<2>definisani tako da, zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani, grade R<3>supstituent.
Korak 1: Stvaranje vinil boronata
[76] Uobičajeni uslovi: a) enolizacija u prisustvu jake baze, kao što je LDA ili LHMDS, zatim prekid reakcije odgovarajućim haloalkil sulfonatom ili sulfonamidom kako bi se dobio stabilizovani enolni oblik. b) borilacija enolata katalizovana paladijumom (0) upotrebom odgovarajućeg paladijum (0) katalizatora i bis pinakolatodibora
[77] Poželjni uslovi: a) LDA u THF-u na -78°C, zatim prekid reakcije 1,1,1-trifluor-N-(piridin-2-il)-N-((trifluormetil)sulfonil)metansulfonamidom. b) Kompleks 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetana i bispinakolatodibora, kalijum acetat, u dioksanu, na 80-100°C, tokom 4-16 h.
Korak 2: Unakrsno kuplovanje katalizovano paladijumom
[78] Uobičajeni uslovi: Kao što je opisano u Šemi 1, korak 1
[79] Poželjni uslovi: Kompleks 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocen-paladijum (II) dihlorid dihlormetan, kalijum karbonat (2 M u vodi) u MeCN na 80°C, tokom 1,5 h
Korak 3a Saponifikacija
[80] Uobičajeni uslovi: Pogodna vodena baza, opciono sa odgovarajućim korastvaračem kao što je THF
[81] Poželjni uslovi: 2 M natrijum hidroksid (vod.) sa THF na r.t. tokom 30 minuta
Korak 3b Kuplovanje amida
[82] Uobičajeni uslovi: Odgovarajući reagens za kuplovanje kao što je HATU, T3P, EDCI, itd., u prisustvu odgovarajuće baze kao što je trietilamin, DIPEA, itd., u odgovarajućem aprotičnom rastvaraču.
[83] Poželjni uslovi: HATU i DIPEA u DMF-u na r.t. oko 2 h
Korak 4 Hidrogenovanje
[84] Jedinjenje formule (I), pri čemu R<3>sadrži C=C dvostruku vezu, može da se konvertuje u jedinjenje formule (I), pri čemu je R<3>u potpunosti zasićen, putem reakcije hidrogenovanja.
[85] Uobičajeni uslovi: Nerastvorljivi paladijumski katalizator, gasoviti vodonik, u odgovarajućem rastvaraču kao što je alkohol
[86] Poželjni uslovi: 10% paladijum na ugljeniku i gasoviti vodonik u etanolu
Šema 3
kada je X<3>Br ili I, proizvod iz koraka 3 takođe je jedinjenje formule (I).
Korak 1: Prinsova reakcija
[87] Uobičajeni uslovi: Kiseli katalizator i odgovarajući dehidratacioni agens u hlorovanom rastvaraču.
[88] Poželjni uslovi: (i) Trifluorsirćetna kiselina i molekulska sita u DCM-u; ili (ii) InBr3i trimetil silil bromid u DCM-u; ili (iii) InOTf3i trimetil silil triflat u DCM-u.
Korak 2a: Reakcija saponifikacije kako je opisana u Šemi 2, korak 3a
Korak 2b: Micunobuova inverzija
[89] Uobičajeni uslovi: Triarilfosfin, dialkilazodikarboksilat i benzojeva kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je THF na r.t.
[90] Poželjni uslovi: Trifenilfosfin, diizopropilazodikarboksilat i 2,4-dinitrobenzojeva kiselina u THF-u na r.t.
Korak 2c: Metilovanje
[91] Uobičajeni uslovi: Odgovarajuća jaka baza i alkilujući agens u odgovarajućem rastvaraču
[92] Poželjni uslovi: Natrijum hidrid i metil jodid u DMF-u
Korak 2d, Korak 3a, Korak 4a: Reakcija saponifikacije kako je opisana u Šemi 2, korak 3a
Korak 2e, 3b i 4b: Kuplovanje amida kako je opisano u Šemi 2, korak 3b
Korak 5: Hidrogenovanje kako je opisano u Šemi 2, korak 4
Šema 4
Korak 1: Prinsova reakcija kako je opisana u Šemi 3, korak 1 Korak 2a: Reakcija saponifikacije kako je opisana u Šemi 2, korak 3a Korak 2b: Kuplovanje amida kako je opisano u Šemi 2, korak 3b Korak 3: Hidrogenovanje kako je opisano u Šemi 2, korak 4
Šema 5
Korak 1: Formiranje acetala
[93] Uobičajeni uslovi: Katalizator jaka kiselina u odgovarajućem rastvaraču u uslovima za dehidrataciju
[94] Poželjni uslovi: pTSOH i toluen pod Din Starkovim uslovima na 110°C tokom 2-16 h. Korak 2a: Reakcija saponifikacije kako je opisana u Šemi 2, korak 3a
Korak 2b: Kuplovanje amida kako je opisano u Šemi 2, korak 3b
Šema 6
[95] PG je odgovarajuća zaštitna grupa kao što je<t>butildimetilsilil
[96] X<6>i Y<6>su oba nezavisno H ili -(C1-C6)alkil.
Korak 1: Zaštita
[97] Uobičajeni uslovi: Odgovarajuće zaštitne grupe, kao što je trialkilsilil hlorid, u prisustvu odgovarajuće baze u odgovarajućem rastvaraču.
[98] Poželjni uslovi: t-butildimetilsilil hlorid u prisustvu trietilamina i DMAP u DMF-u. Korak 2: Reakcija alkilovanja
[99] Uobičajeni uslovi: Alil bromid u prisustvu odgovarajuće baze u odgovarajućem rastvaraču
[100] Poželjni uslovi: 3-brom-2-metilprop-1-en i natrijum hidrid u THF-u.
Korak 3a: Reakcija saponifikacije kako je opisana u Šemi 2, korak 3a
Korak 3b: Kuplovanje amida kako je opisano u Šemi 2, korak 3b
Korak 4: Deprotekcija
[101] Uobičajeni uslovi: Izvor fluorida u odgovarajućem rastvaraču
[102] Poželjni uslovi: TBAF u THF-u
Korak 5: Reakcija ciklizacije
[103] Uobičajeni uslovi: Živa (II) trifluoracetat i živa (II) oksid u THF-u na sobnoj temperaturi, zatim dodavanje trietilborana i natrijum borhidrida na -78°C.
[104] Pronalazak dalje uključuje bilo koju varijantu predmetnih procesa, u kojima se intermedijerni proizvod koji se može dobiti u bilo kojoj njihovoj fazi koristi kao polazna supstanca i preostali koraci su sprovedeni, ili u kojima su polazne supstance nastale in situ u reakcionim uslovima, ili u kojima se reakcione komponente koriste u obliku soli ili optički čiste supstance.
[105] Jedinjenja iz pronalaska i intermedijeri takođe mogu da se konvertuju jedni u druge prema postupcima koji su uopšteno poznati stručnjacima.
[106] U drugom aspektu, predmetni pronalazak, kako je ovde otkriveno, obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje iz predmetnog pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljivi nosač. U daljem otelotvorenju, kompozicija sadrži najmanje dva farmaceutski prihvatljiva nosača, kao što su oni koji su ovde opisani. Za svrhe predmetnog pronalaska, ako nije drugačije naznačeno, solvati i hidrati se uopšteno smatraju kompozicijama. Poželjno, farmaceutski prihvatljivi nosači su sterilni. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za posebne načine primene, kao što je oralna primena, parenteralna primena i rektalna primena, itd. Pored toga, farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu biti načinjene u čvrstom obliku (uključujući kapsule, tablete, pilule, granule, praškove ili supozitorije), ili u tečnom obliku (uključujući rastvore, suspenzije ili emulzije). Farmaceutske kompozicije mogu da se podvrgnu konvencionalnim farmaceutskim operacijama, kao što je sterilizacija i/ili mogu da sadrže konvencionalne inertne razblaživače, lubrikante, ili puferujuće agense, kao i adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, kvašljivci, emulgatori i puferi, itd.
[107] Najčešće, farmaceutske kompozicije su tablete ili želatinske kapsule koje obuhvataju aktivni sastojak zajedno sa jednim ili više od:
a) razblaživača, npr. laktozu, dekstrozu, saharozu, manitol, sorbitol, celulozu i/ili glicin;
b) lubrikansa, npr. silicijum dioksid, talk, stearinsku kiselinu, njenu magnezijumovu ili kalcijumovu so i/ili polietilen glikol; takođe za tablete
c) veziva, npr. magnezijum aluminijum silikat, skrobnu pastu, želatin, tragakant, metilcelulozu, natrijum karboksimetil celulozu i/ili polivinil pirolidon; po želji
d) dezintegransa, npr. skrob, agar, alginsku kiselinu ili njene natrijumove soli, ili efervescentne smeše; i
e) apsorbente, boje, arome i zaslađivače.
[108] Tablete mogu da budu obložene filmom ili enteričnom oblogom prema postupcima poznatim u ovoj oblasti.
[109] Pogodne kompozicije za oralnu primenu obuhvataju delotvornu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska u obliku tableta, lozengi, vodenih ili uljanih suspenzija, disperzibilnih prahova ili granula, emulzija, tvrdih ili mekih kapsula, ili sirupa ili eliksira. Kompozicije namenjene za oralnu upotrebu pripremaju se prema bilo kom postupku poznatom u struci za proizvodnju farmaceutskih kompozicija, i takve kompozicije mogu da sadrže jedan ili više agenasa odabranih iz grupe koja se sastoji od zaslađivača, aroma, boja i konzervanasa kako bi se dobili farmaceutski elegantni i ukusni preparati. Tablete mogu da sadrže aktivni sastojak u smeši sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji su pogodni za proizvodnju tableta. Ti ekscipijensi su, na primer, inertni razblaživači, kao što je kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat ili natrijum fosfat; agensi za granulaciju i dezintegraciju, na primer, kukuruzni skrob, ili alginska kiselina; vezujući agensi, na primer, skrob, želatin ili akacija; i lubrikansi, na primer magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete su neobložene ili obložene poznatim tehnikama da bi se usporila dezintegracija i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu i tako obezbedilo odloženo dejstvo u dužem periodu. Na primer, mogu se koristiti supstance za vremensko odlaganje, kao što je gliceril monostearat ili gliceril distearat. Formulacije za oralnu primenu mogu se prezentovati kao tvrde želatinske kapsule, pri čemu se aktivni sastojak meša sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili kao meke želatinske kapsule, pri čemu se aktivni sastojak meša sa vodenim ili uljanim medijumom, na primer, uljem kikirikija, tečnim parafinom ili maslinovim uljem.
[110] Izvesne kompozicije koje je moguće ubrizgati su vodeni izotonični rastvori ili suspenzije, i supozitorije su pogodno pripremljene iz masnih emulzija ili suspenzija. Pomenute kompozicije mogu biti sterilisane i/ili sadržati adjuvanse, kao što su agensi za konzervisanje, stabilizaciju, kvašenje ili emulgovanje, promoteri rastvora, soli za regulisanje osmotskog pritiska i/ili puferi. Pored toga, one takođe mogu da sadrže druge terapeutski vredne supstance. Pomenute kompozicije se dobijaju prema konvencionalnim postupcima za mešanje, granulaciju, odnosno oblaganje, i sadrže oko 0,1-75%, ili sadrže oko 1-50%, aktivnog sastojka.
[111] Pogodne kompozicije za transdermalnu primenu sadrže delotvornu količinu jedinjenja iz pronalaska sa pogodnim nosačem. Nosači pogodni za transdermalnu isporuku uključuju farmaceutski prihvatljive rastvarače da pomognu u prolasku kroz kožu domaćina. Na primer, transdermalna sredstva su u obliku zavoja koji sadrži potporni član, rezervoara koji sadrži jedinjenje opciono sa nosačima, opciono barijeru koja kontroliše brzinu isporučivanja jedinjenja koži domaćina kontrolisanom i prethodno određenom brzinom u dužem vremenskom periodu, i uređaj za učvršćivanje sredstva za kožu.
[112] Pogodne kompozicije za topikalnu primenu, npr. za kožu i oči, uključuju vodene rastvore, suspenzije, masti, kremove, gelove ili formulacije u spreju, npr. za isporuku putem aerosola i slično. Takvi sistemi za topikalnu isporuku će konkretno biti prikladni za dermalnu primenu, npr. za lečenje karcinoma kože, npr. za profilaktičku primenu u kremama za sunčanje, losionima, sprejevima, i slično. Oni su tako posebno prikladni za primenu u topikalnim formulacijama dobro poznatim u struci, uključujući kozmetiku. Oni mogu da sadrže solubilizatore, stabilizatore, agense za povećanje toničnosti, pufere i konzervanse.
[113] Kao što se ovde koristi, topikalna primena može takođe da se odnosi na inhalaciju ili intranazalnu aplikaciju. Oni mogu pogodno da se isporučuju u obliku suvog praška (sami, kao smeša, na primer suva mešavina sa laktozom, ili smeša čestica komponenata, na primer sa fosfolipidima) iz inhalatora suvog praha ili prezentacija spreja aerosola iz kontejnera pod pritiskom, pumpe, spreja, atomizera ili nebulizera, uz primenu odgovarajućeg pogonskog sredstva ili bez njega.
[114] Predmetni pronalazak, kako je ovde otkriveno, dalje obezbeđuje anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozne oblike koji sadrže jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao aktivne sastojke, jer voda može da olakša razgradnju nekih jedinjenja.
[115] Anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozni oblici iz pronalaska se mogu dobiti korišćenjem anhidrovanih sastojaka ili sastojaka sa malim sadržajem vlage, u uslovima sa malom vlagom ili vlažnošću. Anhidrovana farmaceutska kompozicija se može dobiti i čuvati tako da se očuva njena anhidrovana priroda. Prema tome, anhidrovane kompozicije se pakuju koristeći materijale za koje se zna da sprečavaju izloženost vodi, tako da se mogu uključiti u pogodne komplete za formulaciju. Primeri odgovarajućeg pakovanja uključuju hermetički zaptivene folije, plastiku, ambalažu za jediničnu dozu (npr. bočice), blister pakovanja i strip pakovanja.
[116] Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutske kompozicije i dozne oblike koji sadrže jedan ili više agenasa koji smanjuju brzinu kojom će se jedinjenje iz predmetnog pronalaska kao aktivni sastojak razlagati. Takvi agensi, koji se ovde pominju kao „stabilizatori“, uključuju antioksidanse, kao što je askorbinska kiselina, pH pufere, ili puferske soli, itd.
[117] Jedinjenja formule (I) u slobodnom obliku ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli pokazuju vredna farmakološka svojstva, npr. Smurf-1 modulišuća svojstva, npr. kako pokazuju in vitro i in vivo testovi, kao što je dato u sledećim odeljcima, i zato su naznačena za terapiju ili za upotrebu kao istraživačke hemikalije, npr. kao jedinjenja alati.
[118] Jedinjenja iz pronalaska ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su korisna u lečenju različitih indikacija, uključujući:
Plućnu hipertenziju, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH)
Fibrozu
Reumatoidni artritis
Zaceljivanje preloma
Glaukom
naslednu hemoragijsku teleangiektaziju (HHT)
proteinuriju
zarastanje rana
HOBP
astmu
Plućna arterijska hipertenzija (PAH)
[119] Plućna arterijska hipertenzija ima multifaktorsku patobiologiju. Vazokonstrikcija, remodelovanje zida plućnih krvnih sudova i tromboza doprinose porastu plućne vaskularne rezistencije kod PAH (Humbert et al. J. Am. Coll. Cardiol., 2004.). Ovde otkrivena jedinjenja iz predmetnog pronalaska su korisna u lečenju PAH i njenih simptoma. Podrazumeva se da plućna arterijska hipertenzija obuhvata sledeće oblike plućne hipertenzije: idiopatsku PAH (IPAH), naslednu PAH (HPAH), PAH indukovanu lekovima ili toksinima, PAH povezanu sa drugim stanjima (APAH), kao što je PAH povezana sa bolestima vezivnog tkiva, PAH povezana sa HIV infekcijom, PAH povezana sa portalnom hipertenzijom, PAH povezana sa kongenitalnim bolestima srca, PAH povezana sa šistozomijazom, PAH povezana hronična hemolitička anemija ili perzistentna plućna hipertenzija novorođenčeta (Galiẻ et al., ERJ, 2009; Simonneau et al., JACC, 2009).
[120] Idiopatska PAH odnosi se na PAH sa neutvrđenim uzrokom. Nasledna PAH se odnosi na PAH za koju se sumnja ili je dokumentovano nasledno prenošenje uključujući one koje nose mutacije u BMP receptoru, BMPR2 ili one sa mutacijama u ALK1 ili endoglinu (sa naslednom hemoragijskom teleangiektazijom ili bez nje).
[121] Podrazumeva se da PAH povezana sa lekovima ili toksinima obuhvata PAH povezanu sa uzimanjem aminoreksa, fenfluraminskog jedinjenja (npr. fenfluramin ili deksfenfluramin), određenih toksičnih ulja (npr. ulje uljane repice), pirolizidin alkaloida (npr. crveni žbun), monokrotalina, amfetamina, L-triptofana, metamfetamina, kokaina, fenilpropanolamina, kantariona, hemoterapeutskih agenasa ili SSRI.
[122] Podrazumeva se da PAH povezana sa bolestima vezivnog tkiva obuhvata PAH povezanu sa sistemskom sklerozom, fibrozom pluća, polimiozitisom, reumatoidnim artritisom, Šegrenovim sindromom ili PAH povezanu sa sistemskim eritemskim lupusom.
[123] Podrazumeva se da PAH povezana sa kongenitalnim bolestima srca obuhvata pacijente sa sistemskim do plućnim šantovima, PAH povezanu sa Ajzenmengerovim sindromom, malim ventrikularnim septalnim ili atrijalnim septalnim defektima ili PAH povezanu sa korektivnom kardijalnom hirurgijom.
[124] Podrazumeva se da PAH povezana sa hroničnom hemolitičkom anemijom obuhvata pacijente sa hroničnim naslednim i stečenim anemijama uključujući pacijente sa bolešću srpastih ćelija, talasemijom, naslednom sferocitozom, stomatocitozom i mikroangiopatskom hemolitičkom anemijom.
[125] Simptomi PAH uključuju dispneju, anginu, sinkopu i edem (McLaughlin et al., Circulation, 2006, 114:1417-1431). Ovde otkrivena jedinjenja iz predmetnog pronalaska su korisna u lečenju simptoma PAH.
Plućna hipertenzija (PH)
[126] Podrazumeva se da je plućna hipertenzija (PH) povezana sa sledećim stanjima koja su grupisana prema Dana Point kliničkoj klasifikaciji (Simonneau, G et al. JACCC, 2009):
Grupa 1' - podrazumeva se da je PH povezana sa pacijentima koji imaju plućnu venookluzivnu bolest (PVOD) i plućnu kapilarnu hemangiomatozu (PCH).
Grupa 2 - PH povezana sa bolešću levog srca uključuje pacijente sa bolestima leve komore ili zaliska.
Grupa 3 - PH kao rezultat bolesti pluća i/ili hipoksije. Podrazumeva se da bolesti pluća koje dovode do PH obuhvataju pacijente sa plućnom fibrozom, emfizemom, kombinovanom plućnom fibrozom i emfizemom, bronhiektazijom, cističnom fibrozom i hroničnom opstruktivnom bolešću pluća (HOBP).
Grupa 4 - PH povezana sa hroničnom tromboembolijom (CTEPH).
Grupa 5 - PH povezana sa neodređenom ili multifaktorskom etiologijom. Ova kategorija pacijenata sa PH obuhvata pacijente u jednoj od sledećih grupa: 1) hronični mijeloproliferativni poremećaji, uključujući policitemiju veru, esencijalnu trombocitemiju ili hroničnu mijeloidnu leukemiju; 2) sistemski poremećaji, uključujući sarkoidozu, stanja koja dovode do uništavanja plućnog kapilarnog korita, poput fibroze, ekstrinzične kompresije velikih plućnih arterija, pacijenata sa plućnom Langerhansovom ćelijskom histiocitozom, limfangiolejomiomatozom, neurofibromatozom tipa 1 i vaskulitisom povezanim sa antineutrofilnim citoplazmatskim antitelima; 3) metabolički poremećaji, uključujući bolest skladištenja glikogena tipa Ia, nedostatak glukoza-6-fosfataze, Gošeovu bolest i tiroidne bolesti (hipotireoza i hipertireoza); 4) uključuje pacijente sa tumorima koji se šire u lumen plućne arterije, okluziju plućne mikrovaskulature metastatskim tumorskim embolijama, medijastinalnu fibrozu, ili pacijente sa krajnjim stadijumom bolesti bubrega koji primaju dugoročnu hemodijalizu.
Fibroza
[127] Pokazalo se da poremećaj regulacije signalnih puteva TGFβ/BMP ima uzročnu ulogu u fibrozi različitih organa, uključujući bubrege, srce, pluća, kožu, pankreas i jetru, kao i kod sistemske skleroze i srodnih patologija (prema preglednom članku Leask i Abraham, FASEB, 2004). Pokazalo se da BMP7 suzbija TGFβ1-indukovanu epitelno-mezenhimsku tranziciju (EMT) (Zeisberg, M et al. Nat. Med, 2003) i indukciju kolagena (Izumi, N et al. AJP. Lung, Cell, Mol., Physiol. 2005), dva ključna mehanizma u razvoju fibroze. Neposredni dokaz za ulogu Smurf-1 u fibrotičkim patologijama pokazan je na mišjem modelu unilateralne ureteralne opstrukcije (UUO) progresivne tubulointersticijalne fibroze bubrega, kada su povišeni nivoi Smurf-1 prisutni u obolelim bubrezima, što je povezano sa smanjenim nivoima zaštitnog Smurf-1 supstrata, Smad7 (Fukasawa, H et al. PNAS, 2004). Skorije, uloga Smurf-1 u plućnoj fibrozi je sugerisana u podacima koji su stvoreni u plućnim epitelnim ćelijama, gde je identifikovana ključna uloga Smurf-1 supstrata Smad7 u ograničavanju EMT (Shukla, MA, et al. Am. J. Resp. Cell. Mol. Biol. 2009). Ovde otkrivena jedinjenja iz predmetnog pronalaska su korisna u lečenju fibroze i njenih simptoma. Podrazumeva se da fibroza obuhvata sledeće: pacijente sa plućnom fibrozom, idiopatskom plućnom fibrozom, cističnom fibrozom, cirozom, endomiokardijalnom fibrozom, medijastinalnom fibrozom, mijelofibrozom, retroperitonealnom fibrozom, progresivnom masivnom fibrozom, nefrogenom sistemskom fibrozom, Kronovom bolešću, keloidom, starim infarktom miokarda, sklerodermom (sistemska skleroza), artrofibrozom ili adhezivnim kapsulitisom.
Reumatoidni artritis
[128] Proinflamatorni citokini kao što je faktor nekroze tumora alfa (TNFα) igraju ključnu ulogu u nastanku i održavanju hroničnih inflamatornih uslova kao što je reumatoidni artritis (RA). Smanjenje gustine kostiju obično je povezano as RA, a pokazalo se da Smurf-1 igra ključnu ulogu u posredovanju koštanog gubitka izazvanog RA. Pokazano je da je TNFα pokrenuo proteolitičku razgradnju supstrata Smurf-1, Smad1 i Runx2, koji su neophodni za aktivnost osteoblasta u formiranju kostiju. Neposredni dokazi u korist ove veze pokazani su kod smurf-1 KO miševa kada TNFα nije uspeo da utiče na aktivnost osteoklasta kod kostiju Smurf-1 KO miševa, ali ne i kod kostiju odgovarajućih miševa divljeg tipa (Guo, R i sar. JBC, 2008). Ovde otkrivena jedinjenja iz predmetnog pronalaska su korisna u lečenju reumatoidnog artritisa i njegovih simptoma. Podrazumeva se da RA obuhvata pacijente sa hroničnom inflamacijom sinovijuma koja je sekundarna oticanju sinovijalnih ćelija, višku sinovijalne tečnosti i nastanku fibroznog tkiva u zglobovima. Pored toga, RA će takođe obuhvatati pacijente sa RA usled nekrotizirajućih granuloma, vaskulitisa, pioderme gangrenozum, Svitovog sindroma, eriteme nodozum, lobularnog panikulitisa, atrofije digitalne kože, palmarnog eritema ili difuznog stanjivanja kože. RA takođe zahvata druge organe i ovde će obuhvatiti pacijente sa fibrozom pluća, amiloidozom bubrega, aterosklerozom usled RA, perikarditisom, endokarditisom, zatajenjem leve komore, valvulitisom i fibrozom. RA će takođe obuhvatati pacijente sa očnim stanjima episkleritisom i keratokonjunktivitisom sika, hematološkim poremećajima tople autoimune hemolitičke anemije, neutropenijom i trombocitozom, neurološkim stanjima perifernom neuropatijom, mononeuritis multipleksom i sindromom karpalnog tunela, osteoporozom i limfomom.
Zaceljivanje preloma
[129] BMP put ovde igra ulogu i Smurf-1 inhibitori povećavaju signalizaciju BMP. Ovde otkrivena jedinjenja iz predmetnog pronalaska su korisna u lečenju preloma. Zaceljivanje preloma obuhvata tehniku lečenja preloma kostiju u kojoj se endoosealni implant koji sadrži pore u koje osteoblasti i potporno vezivno tkivo mogu da migriraju hirurški implantira na mestu preloma kosti. Primena inhibitora Smurf-1 nakon umetanja prethodno opisanog implanta može pomoći u integraciji implanta i ubrzati oporavak pojačavanjem proliferacije mezenhimskih matičnih ćelija koje se diferenciraju u osteoblaste (Zhao, M et al., JBC, 2004).
Glaukom
[130] Povišeni intraokularni pritisak (IOP) jedan je od glavnih faktora rizika za primarni glaukom otvorenog ugla (POAG). IOP se održava u prednjoj komori pomoću vodenog humora koji je proizveden u cilijarnom telu i odliva se kroz region trabekularne mreže. Povećana otpornost na odliv vodenog humora povezana sa akumulacijom taloženja ekstracelularne matrice (ECM) u regionu trabekularne mreže primećena je kod pacijenata sa glaukomom. Ova ECM patologija kod pacijenata sa POAG podseća na fibrozu indukovanu proteinima TGFb u mnogim neokularnim sistemima. TGFb2 indukovano povećanje IOP pokazano je na pretkliničkim in vivo i ex vivo modelima. U nekoliko kliničkih studija malog opsega, zabeleženo je i da je nivo TGFb2 proteina u vodenom humoru povišen kod pacijenata sa POAG. Moduliranje aktivnosti TGFb kod pacijenata sa glaukomom moglo bi potencijalno da smanji IOP i dovede do novih terapija glaukoma (Wordinger RJ JOURNAL OF OCULAR PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS
[131] sveska 30, broj 2, 2014). S obzirom na ulogu Smurf1 u regulaciji signalizacije TGFb putem njegovih supstrata BMP9 i SMAD 7, ovde opisana jedinjenja iz predmetnog pronalaska (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli) bila bi korisna u lečenju glaukoma.
Nasledna hemoragijska teleangiektazija (HHT)
[132] Nasledna hemoragijska teleangiektazija (HHT), poznata i kao Osler-Weber-Rendu sindrom, genetski je poremećaj krvnih sudova koji pogađa od 1:5000 do 1:40.000. Osoba s HHT ima tendenciju stvaranja krvnih sudova kojima nedostaju normalni kapilari između arterije i vene, što uzrokuje da arterijska krv pod visokim pritiskom teče direktno u venu, koja može da pukne i krvari. Simptomi HHT mogu da se manifestuju kao blagi ili teški, s tim da 90-95% pacijenata doživi krvarenje iz nosa do odraslog doba, 90-95% razvije teleangiektazije na licu ili šakama do sredovečnosti, a 40% razvije plućne arteriovenske malformacije (AVM), koje mogu predstavljaju značajan rizik. AVM mogu da se jave i u mozgu, jetri i crevima, uz različitu težinu zdravstvenih implikacija. HHT se može lečiti, najčešće koagulacionom terapijom, embolizacijom ili hirurškim uklanjanjem zahvaćenog tkiva. HHT mutacije uzrokuju haploinsuficijenciju u BMP signalizaciji (Ricard et al. Blood, 2010) što dovodi do defekta sazrevanja krvnih sudova i prekomernog grananja vaskulature koje je delimično pripisano oštećenoj signalizaciji BMP9 (Choi, et al. PlosOne, 2013). Smurf1 nishodno reguliše BMP signalizaciju (Murakami Exp. Biol. Res. 2010 i Cao, et al. Sci. Rep. 2014) i prijavljeno je da se eksprimira u endotelnim ćelijama (Crose, et al. JBC, 2009 i Human Protein Atlas i GeneCards), te stoga inhibitori Smurf1 mogu da služe za obnavljanje signalizacije BMP i ispravku abnormalnosti angiogeneze. Tako, ovde opisana jedinjenja iz predmetnog pronalaska (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli) biće korisna u lečenju HHT.
Proteinurija
[133] Abnormalne količine proteina u mokraći jedan su od najranijih znakova hronične bolesti bubrega koja može biti posledica hipertenzije, dijabetesa ili bolesti povezanih sa inflamacijom u bubrezima. Ako se ne leči, hronična bolest bubrega može prerasti u krajnji stadijum bolesti bubrega i zatajenje bubrega. Smurf1 je uključen u više mehanizama povezanih sa funkcijom bubrega i proteinurijom. Ras supstrat Smurf1 familije homologa gena, član A (RhoA), igra ključnu ulogu u regulisanju migracije bubrežnih podocita. Sinaptopodin omogućava stvaranje stresnih vlakana unutar bubrežnih podocita putem blokiranja sposobnosti Smurf1 da vezuje i ubikvitinuje RhoA, promovišući na taj način pokretljivost podocita i modulaciju svojstava prosejavanja bubrežne barijere za filtracije podocita (Asanuma, et al. Nat. Cell Biol. 2006). Uz to, intracelularni antagonist transformišućeg faktora rasta (TGF) ß, Smad7, ima ključnu zaštitnu ulogu u bubregu. Dokazano je da aktivnost Smurf1 ubikvitinira i razgrađuje Smad7 što dovodi do tubulointersticijalne fibroze i disfunkcije bubrega (Fukasawa, et al. PNAS 2004). Zajedno, ovi izveštaji sugerišu da inhibitor Smurf1 može da omogući migraciju podocita i održavanje barijere za filtraciju podocita, uz blokiranje širenja profibrotičke signalizacije, pri čemu bubreg na kraju pruža terapeutsku korist kod proteinurije. Shodno tome, jedinjenja iz pronalaska (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli) bila bi korisna u lečenju proteinurije.
Zarastanje rana
[134] Hronične nezarastajuće rane su najčešće kod osoba starijih od 60 godina i one dovode do značajnog fizičkog bola i grubo mogu da se klasifikuju u tri grupe: venske čireve, dijabetičke i rane izazvane pritiskom. Precizan tajming aktivnosti puteva signalizacije transformišućeg faktora rasta (TGF) ß i koštanog morfogenetičkog proteina (BMP) je od suštinske važnosti kod normalnog zarastanja rana koje reguliše ključne procese migracije fibroblasta i taloženja ekstracelularne matrice, influksa inflamatornih ćelija, angiogeneze i reepitelizacije koji podržavaju zaceljenje (Pakyari, M et al. Adv. Wound Care 2013). Produžena aktivacija TGF β može dovesti do odloženog zarastanja rane i terapeutska intervencija na potvrđenim nezarastajućim ranama pomoću anti-TGF β antitela dovodi do poboljšanog zalečenja i smanjene hipertrofije ožiljka (Lu et al. J. Am. Coll. Surg. 2005). Smurf1 reguliše opseg signalizacije TGF β i BMP (Murakami Exp. Biol. Res. 2010 i Cao, et al. Sci. Rep.2014, Wang et al. J. Cell. Mol. Med.2012), te je stoga očekivano da bi inhibitor Smurf1 normalizovao prekomernu signalizaciju TGF β, što omogućava lečenje hroničnih rana. Shodno tome, jedinjenja iz pronalaska (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli), kako su ovde otkrivena, bila bi korisna u lečenju hroničnih nezarastajućih rana i/ili uopšteno u lečenju rana.
HOBP i astma
[135] Preoblikovanje disajnih puteva je primetno kod pacijenata sa hroničnom opstruktivnom bolešću pluća (HOBP) ili astmom. Predominantna svojstva preoblikovanja disajnih puteva kod astme su fibroza, zadebljanje bazalne membrane, povećan broj peharastih ćelija i povećana ćelijska masa glatkih mišića sa pojačanim kontraktilnim odgovorom za koji se veruje da su indukovani putem hronične inflamacije koja je odgovorna za hiperresponsivnost disajnih puteva i reverzibilnu opstrukciju disajnih puteva (Carroll et al. Am.Rev Resp. Dis. 1993, Metcalfe, et al. Physiol. Rev. 1997 i Roche, et al. Lancet 1989). Kod HOBP, preoblikovanje pluća je okarakterisano dezorganizacijom epitela u velikim disajnim putevima sa skvamoznom metaplazijom, hiperplazijom peharastih ćelija i hipersekrecijom sluzi, i preoblikovanjem malih disajnih puteva sa ekspanzijom glatkih mišića, fibrozom i razaranjem alveola kod razvoja emfizema, što na kraju dovodi do ograničenog protoka vazduha (De, Decramer, et al. Lancet, 2012, Pain et al. Eur. Respir. Rev. 2014 i Chung, Proc. Am. Thorac. Soc. 2005). Kod obe bolesti, postoje dokazi o nishodno regulisanoj signalizaciji BMP (Kariyawasam, et al. Am. J Resp. Crit. Care Med. 2008) i povišenom TGF β (Mak. et al. Respir. Med.2009 i Chakir et al. J. All. Clin. Immunol. 2003) povezanim sa mehanizmom koji podržava preoblikovanje kao što je fibroblastnomezenhimska tranzicija (Araya, et al. J. Clin. Invest. 2007), taloženje ekstracelularne matrice (Baarsma, et al. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. PHysiol.2011) i inflamacija (Chakir et al. J. All. Clin. Immunol. 2003). Inhibitori Smurf1 mogu da normalizuju TGF β signalizaciju u ključnim ćelijama koje podržavaju preoblikovanje, kao što su glatki mišići i fibroblasti, i da blokiraju progresiju preoblikovanja, što dovodi do terapeutske koristi za pacijente sa HOBP ili astmom. Shodno tome, jedinjenja iz pronalaska (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli), kako su ovde otkrivena, bila bi korisna u lečenju HOBP i/ili astme.
[136] Prema tome, u vidu daljeg otelotvorenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji. U daljem otelotvorenju, terapija je izabrana od bolesti koja može da se leči inhibicijom Smurf-1. U drugom otelotvorenju, bolest je izabrana sa prethodno pomenutog spiska, pogodno plućna hipertenzija, uključujući
[137] plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanje preloma; pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH). U drugom otelotvorenju, bolest je izabrana od glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[138] U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je ovde otkriveno, za upotrebu u lečenju bolesti koja se leči inhibicijom Smurf-1, što obuhvata primenu terapeutski prihvaljive količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U daljem otelotvorenju, bolest je izabrana sa prethodno pomenutog spiska, pogodno plućna hipertenzija, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanje preloma;
pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[139] U još jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je ovde otkriveno, za upotrebu u lečenju poremećaja ili bolesti putem inhibicije Smurf-1, što obuhvata primenu terapeutski prihvatljive količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su poremećaj ili bolest izabrani od glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[140] U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal za upotrebu u lečenju
plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanje preloma;
pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[141] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[142] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal za upotrebu u lečenju plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanje preloma; pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[143] U još jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[144] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal za upotrebu u lečenju plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanja preloma; pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[145] U još jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[146] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid] ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal za upotrebu u lečenju plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanja preloma; pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[147] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid] ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[148] U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kokristal za upotrebu u lečenju plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanja preloma; pogodnije plućne arterijske hipertenzije (PAH).
[149] U daljem otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, zarastanja rana, HOPB i astme.
[150] Farmaceutska kompozicija ili kombinacija iz predmetnog pronalaska može biti u jediničnoj dozi od oko 1-1000 mg aktivnih sastojaka za ispitanika od oko 50-70 kg, ili oko 1-500 mg ili oko 1-250 mg ili oko 1-150 mg ili oko 0,5-100 mg ili oko 1-50 mg aktivnih sastojaka. Terapijski delotvorna doza jedinjenja, farmaceutske supstance, ili njihove kombinacije, zavisne su od vrste ispitanika, telesne težine, starosti i zdravstvenog stanja pojedinca, poremećaja ili bolesti ili njihove ozbiljnosti koje se leče. Lekar, klinički lekar ili veterinar prosečne stručnosti može lako da odredi delotovornu količinu svakog od aktivnih sastojaka neophodnih da se spreči, leči ili inhibira napredak poremećaja ili bolesti.
[151] Gore navedena svojstva doze je moguće pokazati in vitro i in vivo testovima, pogodno upotrebom sisara, npr. miševa, pacova, pasa, majmuna ili njihovih izolovanih organa, tkiva i preparata. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se primene in vitro u obliku rastvora, npr. vodenih rastvora, i in vivo bilo enteralno, parenteralno, pogodno intravenski, npr. kao suspenzija ili u vodenom rastvoru. Doza in vitro može biti u opsegu između oko 10<-3>molarne i 10<-9>molarne koncentracije. Terapeutski delotvorna količina in vivo, u zavisnosti od načina isporuke, može biti u rasponu od oko 0,1-500 mg/kg, ili od oko 1-100 mg/kg.
[152] Aktivnost jedinjenja prema predmetnom pronalasku može da se proceni pomoću sledećih in vitro i in vivo postupaka.
Farmaceutski test
[153] Jedinjenja iz pronalaska i njihove farmaceutski prihvatljive soli, u nastavku ovog teksta označeni kao „agensi iz pronalaska“, korisni su kao farmaceutski agensi. Jedinjenja su naročito selektivni inhibitori Smurf-1 i mogu da se testiraju u sledećim testovima.
[154] Da bi se utvrdila selektivnost jedinjenja HECT E3 ligaze, korišćen je panel biohemijskih testova autoubikvitinilacije HECT E3 ligaze (Smurf-1, Smurf-2, WWP1, WWP2, ITCH, Nedd4, Nedd4L i E6AP). Konjugacija ubikvitina sa proteinskim supstratom je postupak u više koraka. U početnom koraku koji zahteva ATP, tioestarska veza nastaje između karboksilnog terminusa ubikvitina i internog cisteinskog ostatka enzima koji aktivira ubikvitin (E1). Aktivirani ubikvitin je zatim prenet u specifični cisteinski ostatak enzima koji konjuguje ubikvitin (E2). E2 daju ubikvitin HECT E3 ligazi (E3) iz koje se on prenosi u protein supstrata. HECT E3 ligaze mogu da se autoubikvitiniluju. Ovaj događaj je otkriven u TR-FRET (vremenski razloženi transfer energije rezonantne fluorescencije) testu koji se koristi u ovom panelu. Reakciona smeša sadrži E1, E2, označeni-E3, ubikvitin konjugovan sa biotinom, jedinjenje i ATP u odgovarajućem puferu, i inkubira se tokom 45 minuta kako bi se omogućila autoubikvitinilacija E3 ligaze. Da bi se izmerio opseg ubikvitinilovane E3 ligaze pomoću TR-FRET, donorski fluorofor evropijum kriptat (Eu3+ kriptat), konjugovan sa streptavidinom koji se potom vezuje za biotinilovani ubikvitin, i modifikovani alofikocijanin XL665 (HTRF® primarni akceptorski fluorofor) kuplovan sa antitelom specifičnim za oznaku (HA, His ili GST), koji prepoznaje odgovarajuće fuzione proteine E3 ligaze, dodati su nakon što je reakcija završena. Kada se ova dva fluorofora sjedine biomolekulskom interakcijom (u ovom slučaju ubikvitinilacijom E3 ligaze), deo energije koju hvata kriptat tokom ekscitacije oslobađa se emisijom fluorescencije na 620 nm, dok se preostala energija prenosi na XL665. XL665 zatim oslobađa ovu energiju kao specifičnu fluorescenciju na 665 nm. Svetlost na 665 nm se emituje samo kroz FRET sa evropijumom. Budući da je u testu prisutan evropijum kriptat, svetlost na 620 nm se detektuje čak i kada biomolekulska interakcija ne dovodi XL665 u neposrednu blizinu.
[155] Autoubikvitinilacija Smurf-1 u ćelijama dovodi do proteozomske razgradnje Smurf-1. Tako inhibicija katalitičkog domena Smurf-1 ukida autoubikvitinilaciju i razgradnju Smurf-1, što dovodi do akumulacije inhibiranog proteina Smurf-1 u ćeliji.
[156] Ćelijska aktivnost jedinjenja na Smurf-1 HECT domen procenjuje se merenjem akumulacije proteina Smurf-1 u HEK293 ćelijama koje stabilno eksprimiraju Prolabeloznačeni Smurf-1 pod kontrolom promotera koji može da se indukuje tetraciklinom, koristeći DiscoverX PathHunter ProLabel komplet za detekciju. Ova tehnologija meri količinu Prolabel-označenog Smurf-1 u testu komplementacije enzima ćelijskog lizata. U ovom pristupu, mali komplementni fragment beta-galaktozidaze od 4 kDa, nazvan ProLabel, eksprimiran je kao N-terminalna fuzija sa humanim Smurf-1. Ova oznaka je enzimski donor (ED) i omogućava detekciju nivoa ciljnog proteina nakon komplementacije sa većim udelom beta-galaktozidaze, koji se naziva EA za enzimski akceptor, kako bi se formirao funkcionalni enzim beta-galaktozidaza. EA se egzogeno dodaje ćelijskim lizatima. Aktivnost enzima se meri koristeći hemiluminescentni supstrat, i proporcionalna je količini rekonstituisanog enzima, te stoga i nivoima Smurf-1.
[157] Testirana i referentna jedinjenja su pripremljena sa 180x [konačno] u 90% DMSO, i razblažena 1:3 u 90% DMSO.
[158] Za panel biohemijskih testova, 50 nl testiranih jedinjenja, referentnih jedinjenja i pufera/DMSO kontrole preneto je u odgovarajuće bunarčiće bele GREINER „SMALL VOLUME“ PS ploče sa 384 bunarčića. Panel test se obavlja na sobnoj temperaturi na Biomek FX radnoj stanici za rukovanje tečnostima. U test ploče koje sadrže 50 nl jedinjenja ili kontrolnih rastvora u 90% DMSO dodato je 4,5 ul rastvora E3 ligaze po bunarčiću, a zatim 4,5 ul prethodno inkubirane smeše E1/E2/Ub ili prethodno razblaženog ubikvitina (niska kontrola). Ploče su snažno mućkane nakon svakog dodavanja. U ovom testu, koncentracije jedinjenja se kreću u rasponu od 3 nM do 10 uM na krivoj zavisnosti doza-odgovor sa 8 tačaka.
[159] Nakon 45 minuta inkubacije, reakcije ubikvitinilacije su zaustavljene dodavanjem 4,5 ul 2 mM NEM, odmah zatim 4,5 ul detekcionog rastvora, uključujući XL665-obeleženo antitelo i evropijum kuplovan sa strepatividinom, kako bi se dobila ukupna zapremina od 18 ul. Nakon inkubacije u mraku u trajanju od 45 minuta, ploče su prenete na Pherastar čitač fluorescencije kako bi se izmerio TR-FRET signal.
[160] Za ćelijski test, 250 nl testiranih jedinjenja, referentnih jedinjenja i pufera/DMSO kontrole je zatim preneto u odgovarajuće bunarčiće sterilne bele GREINER PS, CELLSTAR, uClear ploče za uzgajanje tkiva sa 384 bunarčića od 120 ul. Da bi se rastvor jedinjenja ravnomerno rasporedio u medijumu pre dodavanja ćelija, 10 ul medijuma za ćelijsku kulturu je dodato u svaki bunarčić ploče koja sadrži jedinjenje koristeći MULTIDROP 384 dozator i snažno je tresena. Ćelije su odvojene od balona nakon kratke inkubacije sa tripsinom-EDTA, prebrojane su i razblažene do koncentracije od 1,5x10<6>ćelija/ml u medijumu za uzgajanje. Ekspresija Smurf-1 je indukovana dodatkom doksiciklina do finalne koncentracije od 0,2 ug/ml. 10 ul ćelijske suspenzije je dodato u svaki bunarčić ploča koje sadrže jedinjenje koristeći dozator MULTIDROP 384. Ploče su inkubirane preko noći na 37°C, 5% CO2. U ovom testu, koncentracije jedinjenja se kreću u rasponu od 6,75 nM do 22,5 uM na krivoj zavisnosti doza-odgovor sa 8 tačaka.
[161] Nakon inkubacije preko noći sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, nivoi Smurf-1 su utvrđeni koristeći PathHunter Prolabel komplet za detekciju proizvođača DiscoverX. Prvih 10 ul radnog rastvora za lizu/detekciju CL dodato je ručno pomoću višekanalnog pipetora, pa je dodato 5 ul akceptora enzima EA. Ploče su mešane na tresilici za ploče i inkubirane tokom 2-3 sata na sobnoj temperaturi pre merenja hemiluminescentnog signala na čitaču ploča PherStar.
[162] Jedinjenja iz Primera, u nastavku ovog teksta, imaju vrednosti IC50za Smurf-1 u prethodno opisanim merenjima podataka kako je prikazano u Tabeli A.
Tabela A.
[163] Jedinjenje iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, može da se primeni istovremeno sa jednim ili više terapeutskih agenasa, ili pre ili posle njih. Jedinjenje iz predmetnog pronalaska, kako je ovde otkriveno, može da se primeni odvojeno, istim ili različitim načinom primene, ili zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji kao drugi agensi. Terapeutski agens je, na primer, hemijsko jedinjenje, peptid, antitelo, fragment antitela ili nukleinska kiselina koji su terapeutski aktivni ili pojačavaju terapeutsku aktivnost kada se primene na pacijentu u kombinaciji sa jedinjenjem iz pronalaska, kako je ovde otkriveno.
[164] U jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje proizvod koji sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i najmanje jedan drugi terapeutski agens kao kombinovani preparat za istovremenu, odvojenu ili rednu upotrebu u terapiji. U jednom otelotvorenju, terapija je lečenje bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1. Proizvod obezbeđen kao kombinovani preparat uključuje kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) i drugi terapeutski agens (agense) zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji, ili jedinjenje formule (I) i drugi terapeutski agens (agense) u odvojenom obliku, npr. u obliku kompleta.
[165] U jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i drugi terapeutski agens (agense). Opciono, farmaceutska supstanca može obuhvatiti farmaceutski prihvatljiv nosač, kao što je opisano gore u tekstu.
[166] U jednom otelotvorenju, pronalazak obezbeđuje komplet koji sadrži dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija, od kojih najmanje jedna sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U jednom otelotvorenju, komplet sadrži sredstvo za odvojeno sadržavanje pomenutih kompozicija, kao što je sud, podeljena bočica, ili podeljeno pakovanje od folije. Primer za takav komplet je blister pakovanje, koje se tipično koristi za pakovanje tableta, kapsula, i slično.
[167] Komplet iz ovog pronalaska moguće je koristiti za isporuku različitih oblika doziranja, na primer, oralnog i parenteralnog, za isporuku odvojenih supstanci u različitim intervalima doziranja, ili za titraciju odvojenih supstanci jedne u odnosu na drugu. Da bi se olakšalo poštovanje propisa, komplet iz pronalaska tipično sadrži uputstvo za primenu.
[168] U kombinovanim terapijama iz pronalaska, jedinjenje iz pronalaska i drugi terapeutski agens mogu da se proizvedu i/ili formulišu od strane istog ili različitih proizvođača. Pored toga, jedinjenje iz ovog pronalaska i drugi lek mogu biti uzeti zajedno u kombinovanoj terapiji: (i) pre puštanja kombinovanog proizvoda lekarima (npr. u slučaju kompleta koji obuhvata jedinjenje iz ovog pronalaska i drugi terapeutski agens); (ii) od strane samog lekara (ili prema smernicama lekara) neposredno pre isporuke; (iii) kod samih pacijenata, npr. tokom sekvencijalne isporuke jedinjenja iz ovog pronalaska i drugog terapeutskog agensa.
[169] Prema tome, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu je lek pripremljen za upotrebu sa drugim terapeutskim agensom. Pronalazak takođe obezbeđuje drugi terapeutski agens za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu se lek primenjuje sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.
[170] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so pripremljeno za primenu sa drugim terapeutskim agensom. Pronalazak takođe obezbeđuje drugi terapeutski agens za upotrebu u postupku lečenja bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu je drugi terapeutski agens pripremljen za primenu sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju. Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju sa drugim terapeutskim agensom. Pronalazak takođe obezbeđuje drugi terapeutski agens za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu se drugi terapeutski agens primenjuje sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.
[171] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu je pacijent prethodno (npr. u protekla 24 sata) lečen drugim terapeutskim agensom. Pronalazak takođe obezbeđuje drugi terapeutski agens za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog putem Smurf-1, pri čemu je pacijent prethodno (npr. u protekla 24 sata) lečen jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.
[172] Sledeći primeri su namenjeni ilustraciji pronalaska. Temperature su date u stepenima Celzijusa. Ako nije drugačije navedeno, sva uparavanja se izvode pod sniženim pritiskom, obično od oko 15 mm Hg do 100 mm Hg (= 20-133 mbar). Struktura finalnih proizvoda, intermedijera i polaznih supstanci je potvrđena standardnim analitičkim postupcima, npr. mikroanalizom i spektroskopskim karakteristikama, npr. MS, IR, NMR. Skraćenice koje su korišćene su uobičajene u struci.
[173] Sve polazne supstance, gradivni blokovi, reagensi, kiseline, baze, sredstva za dehidrataciju, rastvarači i katalizatori koji se koriste za sintezu jedinjenja iz predmetnog pronalaska su komercijalno dostupni ili se mogu proizvesti postupcima organske sinteze koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Dalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se proizvedu postupcima organske sinteze koji su poznati osobi sa uobičajenim znanjem u struci, kako je pokazano u sledećim primerima.
Opšti uslovi:
[174] Maseni spektri su dobijeni na LC-MS, SFC-MS ili GC-MS sistemima koristeći postupke elektrosprej, hemijske jonizacije i jonizacije udarom elektrona na nizu instrumenata sa sledećim konfiguracijama: Agilent 1100 HPLC sistemi sa Agilent 6110 masenim spektrometrom [M+H]+ odnosi se na protonovani molekulski jon hemijskih vrsta.
[175] NMR spektri su urađeni na Bruker AVANCE 400 MHz ili 500 MHz NMR spektrometrima koristeći ICON-NMR, pod TopSpin programskom kontrolom. Spektri su izmereni na 298 K, osim ako nije drugačije naznačeno, i navedeni su u odnosu na rezonancu rastvarača.
Instrumenti
[176] MS postupci: Korišćenje Agilent 1100 HPLC sistema sa masenim spektrometrom Agilent 6110
LowpH_v002
Kolona Phenomenex Gemini C1850x4,6 mm, 3,0 µm
Temperatura kolone 50 °C
Eluenti A: H2O, B: metanol, oba sadrže 0,1% TFA
Protok 1,0 ml/min
Gradijent 5% do 95% B za 2,0 min, 0,2 min 95% B
2minLC_v003
Kolona Waters BEH C1850x2,1 mm, 1,7 µm
Temperatura kolone 50 °C
Eluenti A: H2O, B: acetonitril, oba sadrže 0,1% TFA
Protok 0,8 ml/min
Gradijent 0,20 min 5% B; 5% do 95% B za 1,30 min, 0,25 min 95% B 8minLowpHv01:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 100 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% mravlja kiselina B: Acetonitril 0,1% mravlja kiselina
Protok: 0,7 ml/min
Gradijent: 0,0 min 2%B, 0,3-6,5 min 2-98% B, 6,5-7,5 min 98% B, 7,5-8,0 min 5-98% B
2minLowpH:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 50 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% mravlja kiselina B: Acetonitril 0,1% mravlja kiselina
Protok: 1,0 ml/min
Gradijent: 0,0 min 5% B, 0,2-1,3 min 5-98% B, 1,3-1,55 min 98% B, 1,55-1,6 min 98-5%B
2minLowpHv01:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 50 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% mravlja kiselina B: Acetonitril 0,1% mravlja kiselina
Protok: 1,0 ml/min
Gradijent: 0,0 min 5% B, 0,2-1,55 min 5-98% B, 1,55-1,75 min 98% B, 1,75-1,8 min 98-5% B
2minLowpHv03:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 50 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% mravlja kiselina B: Acetonitril 0,1% mravlja kiselina
Protok: 1,0 ml/min
Gradijent: 0,0 min 5% B, 0,2-1,8 min 5-98% B, 1,8-2,1 min 98% B, 2,1-2,3 min 98% B
2minHighpHv03:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 50 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% amonijak B: Acetonitril 0,1% amonijak
Protok: 1,0 ml/min
Gradijent: 0,0 min 5% B, 0,2-1,8 min 5-98% B, 1,8-2,1 min 98% B, 2,1-2,3 min 98-5% B
10minLowpHv01:
Kolona: Waters Acquity CSH 1,7 µm, 2,1 x 100 mm
Temperatura: 50 °C
Mobilna faza: A: Voda 0,1% mravlja kiselina B: Acetonitril 0,1% mravlja kiselina
Protok: 0,7 ml/min
Gradijent: 0,0 min 2% B, 0,5-8,0 min 2-98% B, 8,0-9,0 min 98% B, 9,0-9,1 min 98-2% B
LCMS (SRPb)
Kolona: Acquity HSS T32,1 x 50 mm, 1,8 mikrona
Temperatura kolone: 60 °C
Eluenti: A: H2O (0,05% mravlje kiseline, 3,75 mM amonijum acetat)
B: acetonitril (0,05% mravlje kiseline)
Protok: 1,0 ml/min
Gradijent 5% do 98% za 1,4 min
Skraćenice:
[177]
vod. vodeni
br široki
d dublet
dd dublet dubleta
DBU 1,8-diazabicikloundec-7-en
DCM dihlormetan
DIBAL-H diizobutil aluminijum hidrid
DIPEA dietil izopropilamin
DME dimetoksietan
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO dimetilsulfoksid
°C stepeni Celzijusa
EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid
Et2O dietiletar
EtOAc etil acetat
EtOH etanol
Et3N trietilamin
HATU (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfat
HCl hlorovodonična kiselina
h sat(i)
H2SO4sumporna kiselina
K2CO3kalijum karbonat
KHMDS kalijum bis(trimetilsilil)amid
KOAc kalijum acetat
LCMS tečna hromatografija i masena spektrometrija LDA litijum diizopropil amid
M molarni
MgSO4magnezijum sulfat
MeCN acetonitril
MeOH metanol
MS masena spektrometrija
Mult(i) multiplet(i)
mg miligram
min minuti
ml mililitar
mmol milimol
m/z odnos mase i naelektrisanja
NaBH4natrijum borhidrid
NaH natrijum hidrid
NaHCO3natrijum hidrogen karbonat
NaOH natrijum hidroksid
Na2SO4natrijum sulfat
n-BuLi butil litijum
NH4Cl amonijum hlorid
NMP N-metilpirolidon
NMR nuklearna magnetna rezonanca
PdCl2(PPh3)2paladijum(bis trifenilfosfin) dihlorid
PdCl2(dppf) 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid
PdCl2(dppf)-CH2Cl2kompleks 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan
Pd(Ph3P)4tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)
ppm delova na milion
pTsOH p-toluensulfonska kiselina
q kvartet
rac racemski
Rt retenciono vreme
s singlet
t triplet
TBAI tetrabutil amonijum jodid TBAF tetrabutil amonijum fluorid TBME metil terc-butil etar TFA trifluorsirćetna kiselina THF tetrahidrofuran
TMSCl trimetilsilil hlorid TMSOTf trimetilsilil triflat
UV ultraljubičasta Priprema finalnih jedinjenja
Primer 1:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[178]
Korak 1: [4-izopropilcikloheks-1-en-1-il trifluormetansulfonat]
[179] Rastvor 4-izopropilcikloheksanona (1 g, 7,13 mmol) u suvom THF-u (3 ml) u atmosferi azota i ohlađen na -70°C tretiran je dodavanjem 2 M LDA (u THF/heptanu/etilbenzenu) (4,28 ml, 8,56 mmol) ukapavanjem. Po završetku dodavanja, smeša je ostavljena da se meša na -70°C tokom 1,5 sati. U smešu je dodat rastvor 1,1,1-trifluor-N-(piridin-2-il)-N-((trifluormetil) sulfonil)metansulfonamida (2,81 g, 7,84 mmol) u suvom THF-u (2 ml). Reakcija je održavana na -70°C, mešana 3 h i pažljivo prekinuta vodom i ostavljena da stoji preko noći. Dobijena smeša je ekstrahovana dietil etrom, i kombinovani organski ekstrakti su isprani pomoću 10% NaOH (vod.), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja sirove supstance. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje 100% izoheksanom dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.76 (1H, t), 2.45-2.30 (2H, multi), 2.22 (1H, br d), 1.99-1.90 (2H,multi), 1.61-1.52 (1H, multi), 1.48-1.36 (2H, multi), 0.93 (6H, dd).
Korak 2: [2-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan]
[180] Rastvor [4-izopropilcikloheks-1-en-1-il trifluormetansulfonata] (1,75 g, 6,43 mmol) u dioksanu (30 ml) uz mešanje je tretiran bispinakolatodiborom (1,714 g, 6,75 mmol), kalijum acetatom (1,892 g, 19,28 mmol) i aduktom PdCl2(dppf).CH2Cl2(0,157 g, 0,193 mmol), i smeša je mešana na 80°C tokom 6 h. Dobijena smeša je razblažena pomoću EtOAc i isprana vodom. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja sirove supstance. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 3: [Etil 5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat]
[181] U bočicu za mikrotalasnu pećnicu od 2-5 ml dodat je [2-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan] (282 mg, 1,127 mmol), etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (264 mg, 1,127 mmol), PdCl2(dppf) (82 mg, 0,113 mmol), kalijum karbonat (467 mg, 3,38 mmol), MeCN (2 ml) i voda (0,667 ml). Bočica je evakuisana azotom, zaptivena i stavljena u mikrotalasnu pećnicu na 80°C tokom 1 h. Dobijena smeša je razblažena pomoću EtOAc i vode, i slojevi su razdvojeni. Organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja smeđeg ulja, sirovog. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.73 min; MS m/z [M+H]+ 278.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: [5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina]
[182] U rastvor [etil 5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata] (92 mg, 0,332 mmol) u THF-u (5 ml) i MeOH (3 ml) dodat je 2 M natrijum hidroksid (vod.) (0,166 ml, 0,332 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i razblažena vodom. Vodeni sloj je ispran pomoću EtOAc, zakiseljen sa 2 M HCl (vod.) i ekstrahovan pomoću EtOAc. Organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.70 min; MS m/z [M+H]+ 250.2; Postupak 2minLowpHv03
Korak 5: [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[183] U rastvor [5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline] (42 mg, 0,168 mmol) u suvom DCM-u (3 ml) u atmosferi azota dodat je DMF (0,026 ml, 0,337 mmol), a zatim oksalil hlorid (0,016 ml, 0,185 mmol), i smeša je 30 minuta mešana na sobnoj temperaturi. Dodat je 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (38,8 mg, 0,185 mmol), zatim trietilamin (0,070 ml, 0,505 mmol), i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodata je voda, i smeša je snažno mešana pre prolaska kroz uložak za odvajanje faza. Organski eluent je sakupljen i koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja narandžastog ulja. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO (0,9 ml) i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene putem mase, gradijenta od 50-98% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcija proizvoda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Preostala vodena supstanca je tretirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata i ekstrahovana pomoću DCM, uz propuštanje organskih ekstrakata kroz uložak za odvajanje faza. Rastvarač je uklonjen pod mlazom vazduha i osušen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 4.98 min; MS m/z [M+H]+ 441.4; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, br s), 6.33 (1H, s), 4.06 (1H, tt), 3.26 (3H, s), 2.62 (1H, br d), 2.48-2.35 (2H, multi), 2.31 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.05-1.86 (8H,multi), 1.71 (1H, br d), 1.60-1.52 (1H,multi), 1.43-1.17 (5H, multi), 0.96 (3H, d), 0.94 (3H, d).
[184] Primeri 1.1 do 1.2 pripremljeni su postupkom koji je sličan postupku iz Primera 1, uz zamenu 4-izopropilcikloheksanona (korak 1) odgovarajućim derivatom ketona (koji je komercijalno dostupan ili je priprema opisana u nastavku).
Primer 1.1:
Dijastereomerna smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6-etil-4-metilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[186] LC-MS: Rt = 4.90 min; MS m/z [M+H]+ 441.1; Postupak 8minLowpHv01
Primer 1.2:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6,6-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[187]
[188] LC-MS: Rt = 4.60 min; MS m/z [M+H]+ 427.7; Postupak 8minLowpHv01
[189] Primeri 1.3 do 1.7 pripremljeni su postupkom koji je sličan postupku iz Primera 1, uz zamenu 2-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (korak 3) odgovarajućom boronskom kiselinom ili derivatom dioksaborolana (koji je komercijalno dostupan ili je priprema opisana u nastavku).
Primer 1.3:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-etilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[191] LC-MS: Rt = 4.77 min; MS m/z [M+H]+ 427.6; Postupak 8minLowpHv01
Primer 1.4:
[5-(4-(terc-butil)cikloheks-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[192]
[193] LC-MS: Rt = 5.16 min; MS m/z [M+H]+ 455.4; Postupak 8minLowpHv01
Primer 1.5:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-metilcikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamid]
[194]
[195] LC-MS: Rt = 4.47 min; MS m/z [M+H]+ 414.5; Postupak 8minLowpHv01
Primer 1.6:
5-(ciklohept-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[196]
[197] LC-MS: Rt = 4.42 min; MS m/z [M+H]+ 413.6; Postupak 8minLowpHv01
Primer 1.7:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-(trifluormetil)cikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamid]
[198]
[199] LC-MS: Rt = 1.36 min; MS m/z [M+H]+ 467.4; Postupak 2minLowpHv03 Primer 2:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid
[200]
Korak 1: Spiro[4.5]dec-6-en-8-on
[201] U rastvor ciklopentan karbaldehida (Aldrich) (0,82 g, 8,36 mmol) u suvom toluenu (10 ml) dodat je metil vinil keton (Alfa Aesar) (0,684 ml, 8,36 mmol), a zatim katalitička količina koncentrovane H2SO4(0,045 ml, 0,836 mmol). Smeša je zagrejana na 45°C tokom 1,5 sati, a zatim refluktovana 1 sat koristeći Din Starkovu aparaturu. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i dodato je još metil vinil ketona (Alfa Aesar) (0,684 ml, 8,36 mmol). Reakciona smeša je zagrevana uz refluks tokom 1 sata, ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i tretirana 1 M vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml). Vodena supstanca je ekstrahovana toluenom, i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-20% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.74 (1H, d), 5.86 (1H, d), 2.45 (2H, t), 1.92 (2H, t), 1.80-1.71 (4H, br multi), 1.71-1.61 (4H, br multi).
Korak 2: Spiro[4.5]dekan-8-on
[202] Rastvor spiro[4.5]dec-6-en-8-ona (442 mg, 2,94 mmol) u etanolu (15 ml) produvan je argonom i tretiran pomoću 10% Pd-C, 50% vlažan (Alfa Aesar, 38303) (313 mg, 2,94 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 16 sati u atmosferi vodonika i filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje etanolom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>) δ 2.31-2.25 (4H, t), 1.72-1.66 (4H, t), 1.65-1.60 (4H, br multi), 1.53-1.47 (4H, br H NMR (400 MHz, CDCl3mult).
Korak 3: Spiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonat
[203] 1,6 M n-BuLi u heksanu (1,900 ml, 3,04 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor diizopropil amina (0,454 ml, 3,19 mmol) u suvom THF-u (20 ml) u atmosferi azota na -78°C. Rastvor je ostavljen da se zagreje na 0°C tokom 20 minuta pre ponovnog hlađenja na -78°C. Rastvor spiro[4.5]dekan-8-ona (0,440 g, 2,89 mmol) u suvom THF-u (5 ml) dodat je tokom 5 minuta, i rastvor je mešan na -78°C tokom 50 minuta pre dodavanja rastvora 2-[N,N-bis(trifluormetilsulfonil)amino]piridina (Alfa Aesar) (1,141 g, 3,19 mmol) u suvom THF-u (5 ml). Smeša je mešana i ostavljena da se preko noći zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim NaHCO3(4 ml). Vodeni deo je ekstrahovan pomoću TBME (x2) i kombinovani organski ekstrakti su isprani 10% vodenim rastvorom NaOH, zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 4: 4,4,5,5-tetrametil-2-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan
[204] U rastvor spiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonata (635 mg, 2,234 mmol) u suvom 1,4-dioksanu (15 ml) uz mešanje je dodat bis(pinakolato)dibor (Alfa Aesar) (567 mg, 2,234 mmol), zatim kalijum acetat (Acros) (438 mg, 4,47 mmol) i adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (54,7 mg, 0,067 mmol). Reakciona smeša je produvana azotom i zagrevana na 80°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje pomoću TBME. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je raspodeljen između EtOAc (50 ml) i vode (50 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 5: Etil 4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilat
[205] U bočicu za mikrotalasnu pećnicu od 2-5 ml koja sadrži rastvor 4,4,5,5-tetrametil-2-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolana (168 mg, 0,641 mmol) u MeCN (2 ml) dodat je etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (150 mg, 0,641 mmol), a zatim K2CO3(266 mg, 1,923 mmol), adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (52,3 mg, 0,064 mmol) i voda (1 ml). Bočica je produvana azotom, zaptivena i tretirana u mikrotalasnoj pećnici (Biotage Smith Initiator) na 90°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je raspodeljena između vode (20 ml) i EtOAc (20 ml), i organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja narandžastog ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.75 min; MS m/z [M+H]+ 290.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 6: 4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilna kiselina
[206] U rastvor etil 4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilata (180 mg, 0,622 mmol) u etanolu (10 ml) uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (0,311 ml, 0,622 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena vodom (30 ml) i zakiseljena na pH 5-6 dodavanjem 2 M HCl (vod.). Vodena supstanca je ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 20 ml), i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.61 min; MS m/z [M+H]+ 262.3; Postupak 2minLowpHv03
Korak 7: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid
[207] U rastvor 4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilne kiseline (95 mg, 0,364 mmol) u suvom NMP (3ml) uz mešanje je dodat HATU (152 mg, 0,400 mmol), zatim 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (84 mg, 0,400 mmol) i trietilamin (0,111 ml, 0,800 mmol), i to je mešano na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Reakciona smeša je raspodeljena između EtOAc (30 ml) i 1 M NaOH (vod.) (30 ml) i organska faza je isprana vodom (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja narandžastog ulja. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 50-98% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcija proizvoda je dodata u EtOAc (50 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.59 min; MS m/z [M+H]+ 453.7; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (1H, br s), 6.19 (1H, mult), 4.00 (1H, tt), 3.25 (3H, s), 2.46-2.40 (2H, br mult), 2.23 (3H, s), 2.14 (3H, s), 2.10-2.05 (2H, mult), 1.99-1.88 (2H, multi), 1.84-1.74 (4H, br multi), 1.66-1.53 (7H, br mult), 1.41-1.35 (4H, br mult), 1.34-1.23 (2H, br multi), 1.21-1.10 (1H, br mult).
Primer 2,1:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid]
[208]
[209] Naslovno jedinjenje je pripremljeno postupkom koji je sličan postupku iz Primera 2, uz zamenu spiro[4.5]dekan-8-ona (korak 3) [1-oksaspiro[4.5]dekan-8-onom] (Fluorochem);
LC-MS: Rt = 1.10 min; MS m/z [M+H]+ 455.5; Postupak 2minLowpHv01
Primer 2,2:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[210]
[211] Naslovno jedinjenje je pripremljeno postupkom koji je sličan postupku iz Primera 2, uz zamenu 4,4,5,5-tetrametil-2-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolana (korak 5) pinakol estrom 4,4-dimetilcikloheksen-1-il boronske kiseline (Combi Blocks);
LC-MS: Rt = 5.52 min; MS m/z 427.6 [M+H]+; Postupak 10minLowpHv01
Primer 3:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[212]
Korak 1: 4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il trifluormetansulfonat
[213] U rastvor 4,4-dimetilciklopent-2-enona (Atlantic) (0,500 g, 4,54 mmol) u suvom THF-u (25 ml) u atmosferi azota na -78°C uz mešanje je dodat 1 M L-selektrid u THF-u (4,539 ml, 4,54 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 1 sata i tretirana rastvorom 1,1,1-trifluor-N-(piridin-2-il)-N-((trifluormetil)sulfonil)metansulfonamida (Alfa Aesar) (1,626 g, 4,54 mmol) u suvom THF-u (5 ml). Smeša je mešana i ostavljena da se preko noći zagreje na sobnu temperaturu. Nastala smeša je raspodeljena između heksana (60 ml) i vode (50 ml), faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana heksanom (50 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani 10% vodenim rastvorom NaOH (40 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja bledožutog ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje 100% izoheksanom dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.54 (1H, mult), 2.42-2.39 (2H, mult), 2.23-2.20 (2H, mult), 1.17 (3H, s), 1.17 (3H, s).
Korak 2: 2-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan
[214] U rastvor 4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il trifluormetansulfonata (367 mg, 1,503 mmol) u suvom 1,4-dioksanu (10 ml) uz mešanje je dodat bis(pinakolato)dibor (Alfa Aesar) (382 mg, 1,503 mmol), zatim kalijum acetat (Acros) (295 mg, 3,01 mmol) i adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (36,8 mg, 0,045 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 80°C i mešana tokom 16 sati. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje pomoću TBME (100 ml). Organski filtrat je ispran vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja smeđeg ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje 100% izoheksanom dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.34-6.31 (1H, mult), 2.21-2.18 (2H, mult), 2.17-2.14 (2H, mult), 1.20 (12H, s) 0.99 (6H, s).
Korak 3: Etil 5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[215] U bočicu za mikrotalasnu pećnicu od 2-5 ml koja sadrži rastvor 2-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (214 mg, 0,966 mmol) u acetonitrilu (2 ml) dodat je etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (226 mg, 0,966 mmol), a zatim K2CO3(400 mg, 2,90 mmol), adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (79 mg, 0,097 mmol) i voda (1 ml). Bočica je produvana azotom, zaptivena i zagrevana u mikrotalasnoj pećnici (Biotage Smith Initiator) na 90°C tokom 1 sata. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje pomoću EtOAc (50 ml). Filtrat je ispran vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja smeđeg ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje 100% izoheksanom dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.64 min; MS m/z [M+H]+ 250.9/251.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: 5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[216] U rastvor etil 5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (243 mg, 0,975 mmol) u etanolu (5 ml) uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (0,975 ml, 1,949 mmol), i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i zakiseljena na pH 5-6 dodavanjem 2 M HCl (vod.). Vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (2 x 20 ml) i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.46 min; MS m/z [M+H]+ 222.5; Postupak 2minLowpHv03.
Korak 5: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[217] U rastvor 5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (105 mg, 0,475 mmol) u suvom NMP-u (3 ml) uz mešanje je dodat HATU (198 mg, 0,522 mmol), a zatim 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (109 mg, 0,522 mmol) i trietilamin (0,146 ml, 1,044 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je raspodeljena između EtOAc (20 ml) i 1 M NaOH (vod.) (20 ml), i organska faza je isprana vodom (20 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-60% EtOAc u izoheksanu dalo je sirovu supstancu. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene preko mase, putem gradijenta od 40-80% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) za 9,5 minuta. Frakcija proizvoda je dodata u EtOAc (50 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.40mins; MS m/z [M+H]+ 413.1/414.6; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (1H, br s), 6.27 (1H, br t), 4.06 (1H, tt), 3.27 (3H, s), 2.66 (2H, mult), 2.40 (2H, mult), 2.34 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.06-1.95 (2H, br mult), 1.75-1.68 (1H, br mult), 1.44-1.31 (2H, br mult), 1.30-1.23 (1H, br mult), 1.19 (6H, s).
Primer 4:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid]
[218]
Korak 1: Etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat
[219] Smeša etil 4-oksocikloheksankarboksilata (11,7 g, 68,7 mmol), etilen glikola (5,75 ml, 103 mmol) i p-TsOH (0,620 g, 3,26 mmol) u toluenu (60 ml) mešana je pod refluksom koristeći Din-Starkovu aparaturu za sakupljanje vode tokom 4 sata. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml) i razblažena pomoću EtOAc (100 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja žutog ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>) δ 4.14 (2H, q), 3.96 (4H, s), 2.38-2.31 (1H, br mult), 1.99-1.91 (2H, br multi), 1.87-1.76 (4H, br multi), 1.61-1.53 (2H, br mult), 1.26 (3H, t).
Korak 2: Etil 8-(2-(benziloksi)etil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat
[220] (8-alil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)metanol (6 g, 28,0 mmol) u suvom THF-u (100 ml) dodat je u prethodno ohlađeni rastvor KHMDS (1 M u THF-u) (36,4 ml, 36,4 mmol) u THF-u (100 ml) na -78°C u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 2 h, i dodat je rastvor ((2-brometoksi)metil)benzena (5,31 ml, 33,6 mmol) u THF-u (100 ml). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu, i mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida, i dodat je EtOAc. Organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-40% EtOAc u izoheksanu dalo je sirovu supstancu. Sirova supstanca je ponovo adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-20% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.36-7.31 (2H, multi), 7.30-7.26 (3H, multi), 4.39 (2H, s), 4.01 (2H, q), 3.84 (4H, s), 3.40 (2H, t), 2.05-1.98 (2H, br multi), 1.78 (2H, t), 1.61-1.54 (2H, br multi), 1.49-1.41 (4H, br mult), 1.12 (3H, t).
Korak 3: [1, 4, 10-trioksadispiro[4.2.4.2] tetradekan-9-on]
[221] [Etil 8-(2-(benziloksi)etil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat] (1,6 g, 4,59 mmol) u etanolu (5 ml) temeljno je degasiran uz ponovno punjenje azotom. Dodat je Pd-C (0,147 g, 1,378 mmol), i smeša je mešana u atmosferi vodonika. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz Celite® uložak, uz eluiranje pomoću EtOH. Filtrat je sakupljen, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>) δ 4.29 (2H, t), 3.97 (4H, mult), 2.19 (2H, t), 2.08-1.99 (2H, br multi), 1.97-1.89 (2H, br multi), 1.71-1.56 (4H, br mult).
Korak 5: [1, 4, 10-trioksadispiro[4.2.4.2]tetradekan-9-ol]
[222] 1, 4, 10-trioksadispiro[4.2.4. 2] tetradekan-9-on (880 mg, 4,15 mmol) u toluenu (30 ml), u atmosferi azota, ohlađen je na -78°C i tretiran pomoću 1 M DIBAL-H (1 M u toluenu) (4,56 ml, 4,56 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 2 sata. Dobijena smeša je tretirana 10% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (18 ml)/led 60 g) i mešana 5 minuta sa hloroformom (150 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan hloroformom (x3), i kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.13 (1H, s), 4.11 (1H, mult), 3.97 (4H, mult), 3.93 (1H, mult), 2.12 (1H, s), 1.95-1.77 (3H, br mult), 1.76-1.60 (6H, br mult), 1.58-1.49 (1H, br mult).
Korak 6: [1, 4,10-trioksadispiro[4.2.4.2]tetradekan]
[223] U rastvor trietilsilana (1,965 ml, 12,30 mmol) u DCM-u (40 ml), u atmosferi azota, na -78°C uz mešanje su redom dodati trifluorsirćetna kiselina (0,948 ml, 12,30 mmol) i [1,4,10-trioksadispiro[4.2.4.2]tetradekan-9-ol] (0,878 g, 4,1 mmol) u DCM-u (40 ml) na -78°C.
Dobijena smeša je polako zagrejana na 0°C i mešana tokom 2 sata. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NaHCO3i smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
Korak 7: [2-oksaspiro[4,5]dekan-8-on]
[224] Rastvor 1,4,10-trioksadispiro[4.2.4.2]tetradekana (813 mg, 4,1 mmol) u acetonu (28 ml) na sobnoj temperaturi uz mešanje je tretiran 10% vodenim rastvorom HCl (12,46 ml, 41,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Dobijena smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 30 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(2 x 30 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (1 x 30 ml), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (2H, t), 3.70 (2H, s), 2.45-2.36 (4H, br multi), 1.95-1.89 (6H, multi).
Korak 8: [2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonat]
[225] Rastvor diizopropil amina (0,407 ml, 2,85 mmol) u THF-u (25 ml), u atmosferi azota, ohlađen je na -78°C i tretiran pomoću n-BuLi (1,0 M u heksanu) (1,702 ml, 2,72 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 0°C tokom 30 minuta i ohlađena na -78°C pre dodavanja 2-oksaspiro[4.5]dekan-8-ona (400 mg, 2,59 mmol) u THF-u (25 ml). Nakon 1,5 sati na -78°C, reakciona smeša je tretirana 1,1,1-trifluor-N-(piridin-2-il)-N-((trifluormetil)sulfonil)metansulfonamidom (1208 mg, 3,37 mmol) u THF-u (10 ml) i ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu preko noći. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NaHCO3, i smeša je razblažena pomoću EtOAc. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-25% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.77 (1H, t), 3.92 (2H, t), 3.56 (2H, multi), 2.46-2.29 (2H, br multi), 2.25-2.22 (2H, br multi), 1.83-1.76 (4H, br multi).
Korak 9: [4,4,5,5-tetrametil-2-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan]
[226] [2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonat] (270 mg, 0,943 mmol) i 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (251 mg, 0,990 mmol) u dioksanu (5 ml) tretirani su kalijum acetatom (185 mg, 1,886 mmol), i smeša je temeljno degasirana uz ponovno punjenje azotom. Dodat je adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(23,11 mg, 0,028 mmol), i smeša je zagrevana na 80°C tokom 16 sati. Sirova reakciona smeša je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-15% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.54 (1H, mult), 3.88 (2H, t), 3.52 (2H, mult), 2.24-2.18 (2H, br mult), 2.15-2.12 (2H, br mult), 1.76-1.68 (2H, br mult), 1.62-1.57 (2H, br mult), 1.28 (12H, s).
Korak 10: [Etil 4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilat]
[227] [4,4,5,5-tetrametil-2-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan] (0,172 g, 0,651 mmol), etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (0,183 g, 0,781 mmol) i Cs2CO3(0,849 g, 2,60 mmol) kombinovani su u DME (3 ml) i vodi (1,250 ml). Dodat je adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(0,016 g, 0,020 mmol), i smeša je temeljno degasirana uz ponovno punjenje azotom. Smeša je mešana u mikrotalasnoj pećnici na 90°C tokom 1 sata. Dvofazna reakciona smeša je razdvojena, i organska faza je adsorbovana na silicijum dioksidu. Prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje gradijentom EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.27 (1H, mult), 4.42 (2H, q), 3.91(2H, t), 3.56 (2H, multi), 2.56-2.51 (2H, br multi), 2.31-2.27 (2H, br mult), 2.28 (3H, s), 1.83-1.72 (4H, br mult), 1.41 (3H, t).
Korak 11: [4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilna kiselina]
[228] [Etil 4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilat] (170 mg, 0,584 mmol) u MeOH (3,60 ml) i THF-u (6 ml) tretiran je na sobnoj temperaturi pomoću 2 M NaOH (vod.) (0,584 ml, 1,167 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi i tretirana pomoću 2 M HCl (vod.) (0,2 ml) i EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad MgSO4i filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 0.61 min; MS m/z [M+H]+ 264.4; Postupak 2minHighpHv03
Korak 12: [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamid]
[229] Rastvor [4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilne kiseline] (40 mg, 0,152 mmol) u DMF-u (3 ml) tretiran je 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-onom (Intermedijer D) (38,2 mg, 0,182 mmol), DIPEA (0,106 ml, 0,608 mmol) i HATU (75 mg, 0,198 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. U smešu je dodata voda, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (x2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani 0,5 M litijum hloridom (vod.), osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-5% MeOH u EtOAc dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.19 min; MS m/z [M+H]+ 455.5; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (1H, s), 6.23 (1H, mult), 4.01 (1H, tt), 3.88 (2H, t), 3.53 (2H, s), 3.26 (3H, s), 2.51-2.44 (2H, br mult), 2.28-2.25 (2H, mult), 2.23 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.98-1.87 (2H, br multi), 1.81-1.70 (8H, multi), 1.65-1.58 (1H, br mult), 1.38-1.33 (1H, br mult), 1.31-1.25 (1H, br multi), 1.18-1.05 (1H br mult).
Primer 5:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
Korak 1: 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol
[231] U rastvor 1,4-cikloheksadion monoetilen acetala (Aldrich) (2 g, 12,81 mmol) u suvom MeOH (30 ml) na 0°C, uz mešanje je u porcijama dodat NaBH4(0,727 g, 19,21 mmol), pri čemu je temperatura održavana ispod 5°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta, i na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (4H, s), 3.86-3.78 (1H, br multi), 1.94-1.79 (4H, br multi), 1.73-1.76 (4H, br multi), 1.43 (1H, br s).
Korak 2: 8-izopropoksi-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan
[232] U rastvor 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ola (0,5 g, 3,16 mmol) u 2-jodpropanu (5,37 g, 31,6 mmol) uz mešanje je dodato srebro (I) oksid (1,392 g, 6,01 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Po završetku, nastala suspenzija je razblažena pomoću EtOAc, i suspenzija je filtrirana pod sniženim pritiskom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja bledožutog ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.84 (4H, s), 3.63 (1H, mult), 3.44 (1H, multi), 1.72-1.62 (4H, br multi), 1.53-1.42 (4H, br mult), 1.06 (3H, s), 1.05 (3H, s).
Korak 3: 4-izopropoksi cikloheksanon
[233] U rastvor 8-izopropoksi-1,4-dioksaspiro[4.5]dekana (0,464 g, 2,317 mmol) u THF-u (2 ml) i vodi (2 ml) uz mešanje je dodat p-TsOH (0,080 g, 0,463 mmol). Smeša je zagrevana na 100°C preko noći. Dobijena smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, i raspodeljena između EtOAc (30 ml) i vode (30 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4i filtrirana. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.78 (1H, mult), 3.73 (1H, mult), 2.40-2.31 (2H, br mult), 2.27-2.18 (2H, br mult), 1.96-1.87 (2H, br mult), 1.85-1.75 (2H, br mult), 1.12 (3H, s), 1.11 (3H, s).
Korak 4: [4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il trifluormetansulfonat]
[234] 1,6 M nBuLi u heksanu (Aldrich) (1,285 ml, 2,057 mmol) dodat je u rastvor diizopropilamina (Acros) (0,307 ml, 2,155 mmol) u suvom THF-u (30 ml) u atmosferi azota na -78°C. Rastvor je ostavljen da se zagreje na 0°C tokom 30 minuta, pre nego što je ponovo ohlađen na -78°C. Rastvor 4-izopropoksi cikloheksanona (306 mg, 1,959 mmol) u suvom THF-u (5 ml) dodat je tokom 5 minuta, i smeša je mešana na -78°C tokom 1 sata pre dodavanja rastvora 2-[N,N-bis(trifluormetilsulfonil)amino]piridina (Alfa Aesar) (772 mg, 2,155 mmol) u suvom THF-u (5 ml). Smeša je mešana i ostavljena da se preko noći zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml) i vodena supstanca je ekstrahovana pomoću TBME (2 x 20 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani 10% vodenim rastvorom NaOH (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.76 (1H, mult), 3.72-3.63 (2H, mult), 2.44-2.30 (3H, br mult), 2.14-2.06 (1H, mult), 1.86-1.73 (2H, br mult), 1.09-1.04 (6H, mult).
Korak 5: [2-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan]
[235] U rastvor [4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il trifluormetansulfonata] (459 mg, 1,592 mmol) u suvom dioksanu (15 ml) uz mešanje je dodat bis(pinakolato)dibor (Alfa Aesar) (404 mg, 1,592 mmol), a zatim kalijum acetat (Acros) (313 mg, 3,18 mmol) i adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (39,0 mg, 0,048 mmol). Balon je produvan azotom i zagrevan na 80°C preko noći. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje sa TBME. Organski filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je raspodeljen između EtOAc (50 ml) i vode (50 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 6: [Etil 5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat]
[236] U bočicu za mikrotalasnu pećnicu od 2-5 ml koja sadrži rastvor [2-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana] (375 mg, 1,410 mmol) u acetonitrilu (2 ml) dodat je etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (330 mg, 1,410 mmol), a zatim K2CO3(585 mg, 4,23 mmol), adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(11,51 mg, 0,014 mmol) i voda (2 ml). Bočica je produvana azotom i tretirana u mikrotalasnoj pećnici (Biotage Smith Initiator) na 80°C tokom 90 minuta. Reakciona smeša je raspodeljena između vode (30 ml) i EtOAc (30 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana kroz sloj Celite®, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-60% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.33 minut; MS m/z [M+H]+ 294.4; Postupak 2minLowpHv01
Korak 7: [5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina]
[237] U rastvor [etil 5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata] (393 mg, 1,340 mmol) u THF-u (3 ml) i etanolu (3 ml) uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (4,179 ml, 8,36 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijena smeša je sipana u vodu (20 ml), i pH je podešen na pH 6 dodavanjem 1 M HCl (vod.). Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću EtOAc (30 ml) i organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.13 minut; MS m/z [M+H]+ 266.1; Postupak 2minLowpHv01
Korak 8: [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[238] U rastvor 5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (174 mg, 0,656 mmol) u suvom NMP (3 ml) uz mešanje je dodat HATU (274 mg, 0,721 mmol), a zatim 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (151 mg, 0,721 mmol) i trietilamin (0,201 ml, 1,443 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je raspodeljena između EtOAc (20 ml) i 1 M NaOH (vod.) (20 ml) i organska faza je isprana vodom (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV sa gradijentom od 40-80% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcija proizvoda je dodata u EtOAc (50 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organska faza je osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.19 minut; MS m/z [M+H]+ 457.3; Postupak 2minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (1H, s), 6.27 (1H, mult), 3.91 (1H, multi), 3.75 (1H, mult), 3.75-3.67 (1H, br mult), 3.22 (3H, s), 2.58-2.40 (4H, br ), 2.19 (3H, s), 2.19-2.09 (1H, br multi), 2.06-2.01 (4H, multi), 1.99 (1H, ), 1.96-1.86 (1H, br ), 1.82-1.74 (2H, br mult), 1.72-1.58 (4H, br mult), 1.38-1.24 (2H, br multi), 1.11-1.07 (6H, mult).
Primer 6:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheksil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[239]
[240] Rastvor N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida (Primer 2,2) (40 mg, 0,094 mmol) u etanolu (20 ml) produvan je azotom i tretiran pomoću 10% Pd-C, 50% vlažan (Alfa Aesar, 38303) (14,97 mg, 0,141 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 3 sata. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje etanolom, a zatim DCM-om. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je propušten kroz uložak od 500 mg silika gela-TMT, uz eluiranje smešom etanol:etar (1:1). Filtrat je sakupljen, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS; Rt = 1.33 minut; MS m/z [M+H]+ 429.5; Postupak 2minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (1H, s), 3.92 (1H, tt), 3.21 (3H, s), 2.84 (1H, mult), 2.07 (3H, s), 2.02 (3H, s), 2.03-1.95 (2H, multi), 1.82-1.58 (9H, multi), 1.50-1.43 (2H, multi), 1.37-1.22 (5H, multi), 0.97 (3H, s), 0.95 (3H, s).
Primer 6,1:
[N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilciklopentil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
[241]
[242] Naslovno jedinjenje je pripremljeno postupkom koji je sličan postupku iz Primera 6, uz zamenu N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida (Primer 2,2) (korak 1) N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamidom (Primer 3).
LC-MS: Rt = 1.46 min; MS m/z [M+H]+ 415.1/416.4; Postupak 2minLowpHv03
Primer 7:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbutil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[243]
Korak 1: Etil 5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[244] Etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (100 mg, 0,427 mmol) i 3,3-dimetilbut-1-in (0,058 ml, 0,470 mmol) u acetonitrilu (3 ml) temeljno su degasirani uz ponovno punjenje azotom. Dodati su dicikloheksilamin (0,085 ml, 0,427 mmol), CuI (2,85 mg, 0,015 mmol) i PdCl2(PPh3)2(7,50 mg, 10,68 µmol). Smeša je mešana u mikrotalasnoj pećnici na 100°C tokom 45 minuta. Dobijena smeša je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.53 min; MS m/z [M+H]+ 236.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: 5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[245] Etil 5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat (101 mg, 0,429 mmol) u THF-u (3 ml) i MeOH (1,800 ml) tretiran je na sobnoj temperaturi pomoću 2 M NaOH (vod.) (0,429 ml, 0,859 mmol) tokom 1 sata. Dodati su 2 M HCl (vod.) (0,6 ml) i voda, i vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.07 (1H, br s), 2.14 (3H, s), 1.33 (9H, s).
Korak 3: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[246] 5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina (85 mg, 0,410 mmol) i 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (86 mg, 0,410 mmol) u DMF-u (2 ml) tretirani su pomoću DIPEA (0,287 ml, 1,641 mmol) i HATU (172 mg, 0,451 mmol) na sobnoj temperaturi, i mešani su tokom 16 sati. Dobijena smeša je razblažena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani 0,5 M rastvorom litijum hlorida (vod.), osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.42 min; MS m/z [M+H]+ 399.7; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbutil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[247] N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (30 mg, 0,075 mmol) u etanolu (5 ml) temeljno je degasiran uz ponovno punjenje azotom i dodat je Pd-C (16,02 mg, 7,53 µmol). Smeša je mešana u atmosferi vodonika. Po završetku, reakciona smeša je filtrirana kroz Celite®, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.37 min; MS m/z [M+H]+ 403.1/404.4; Postupak 2minLowpHv03
<1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.97 (1H, br s), 4.04 (1H, tt), 3.24 (3H, s), 2.72-2.66 (2H, mult), 2.19 (3H, s), 2.16 (3H, s), 2.04-1.92 (2H, br multi), 1.90-1.81 (4H, br multi), 1.70 (1H, br>mult), 1.60-1.54 (2H, mult), 1.43-1.29 (2H, br multi), 1.27-1.18 (1H, br mult), 0.96 (9H, s).
Primer 8:
(Z)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[248]
[249] Korak 1: (Z)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-in-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (Primer 7, korak 3) (30 mg, 0,075 mmol) u EtOAc (3 ml) tretiran je 2,2'-(etan-1,2-diilbis(sulfandiil))dietanolom (13,72 mg, 0,075 mmol) i Pd-5% barijum sulfatom (16,02 mg, 7,53 µmol). Smeša je degasirana, temeljno dopunjena azotom, i smeša je mešana u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Dodato je još Pd-5% barijum sulfata (16,02 mg, 7,53 µmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 16 sati. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite® uz eluiranje pomoću EtOAc, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt =1.35 min; MS m/z [M+H]+ 401.2; Postupak 2minLowpHv03
<1>) δ 7.94 (1H, br s), 6.00 (1H, d, J = 12.9 Hz), 5.91 (1H, d, J = 12.9 Hz), 4.01-3.92 (1H, tt), 3.16 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.09 (3H, s), 1.96-1.84 (2H, br multi), 1.82-1.74 (4H, br multi), 1.62 (1H, br mult), 1.34-1.23 (2H, multi), 1.19-1.10 (1H, br mult), 1.05 (9H, s).
Primer 9:
(E)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[250]
Korak 1: (E)-tributil(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)stanan
[251] Tributilkalaj hidrid (1,637 ml, 6,09 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 3,3-dimetilbut-1-ina (500 mg, 6,09 mmol) i Pd(Ph3P)4(70 mg, 0,06 mmol) u THF-u (4 ml) na 0°C u mraku. Nakon 30 minuta mešanja, reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana je tokom 16 sati. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje 100% izoheksanom dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 2: (E)-etil 5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[252] (E)-tributil(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)stanan (1194 mg, 0,8 mmol) i etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (187 mg, 0,8 mmol) rastvoreni su u dioksanu (6 ml) i smeša je temeljno degasirana, uz dopunjavanje azotom. Dodat je Pd(Ph3P)4(92 mg, 0,080 mmol) i smeša je mešana na 100°C tokom 16 sati. Sirova reakciona smeša je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.64 (1H, d, J = 17 Hz), 6.19 (1H, d, J = 17 Hz), 2.23 (3H, s), 1.45 (3H, t), 1.16 (9H, s).
Korak 3: (E)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[253] (E)-etil 5-(3,3-imetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat (160 mg, 0,674 mmol) u THF-u (3 ml) i MeOH (1,8 ml) tretiran je pomoću 2 M NaOH (vod.) (1,349 ml, 2,70 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dobijena smeša je tretirana pomoću 2 M HCl (vod.) i ekstrahovana etil acetatom (x3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
Korak 4: (E)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[254] (E)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina (102 mg, 0,487 mmol) i 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (112 mg, 0,536 mmol) u DMF-u (2 ml) tretirani su pomoću DIPEA (0,341 ml, 1,950 mmol) i HATU (222 mg, 0,585 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dobijena smeša je tretirana vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani pomoću 0,5 M LiCl (vod.), osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.41 min; MS m/z [M+H]+ 401.0/402.5; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.64 (1H, d, J = 17 Hz), 6.33 (1H, d, J = 17 Hz), 4.16 (1H, tt), 3.36 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.20-2.09 (2H, br multi), 2.17 (3H, s), 1.95-1.82 (4H, br multi), 1.76-1.69 (1H, br mult), 1.50-1.38 (2H, br multi), 1.35-1.25 (1H, br mult), 1.18 (9H, s).
Primer 10:
5-cikloheksil-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[255]
Korak 1: 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[256] U rastvor etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer A) (8,65 g, 37,0 mmol) u MeOH (100 ml) dodat je 2 M NaOH (vod.) (18,48 ml, 37,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, i dobijena smeša je zakiseljena koristeći 1 M HCl (vod.) i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi uklanjanja MeOH. Vodena supstanca je razblažena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc (x3) i kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 0.82 min; MS m/z [M+H]+ 206.0; Postupak 2minLowpH
Korak 2: 5-brom-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[257] Rastvor DMF-a (5,33 ml, 68,8 mmol) u DCM-u (200 ml) ohlađen je na 0°C i tretiran oksalil hloridom (3,31 ml, 37,9 mmol). Dodata je 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina (7,09 g, 34,4 mmol) i mešana je uz hlađenje ledom tokom 10 minuta. Na 0°C su dodati 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (7,92 g, 37,9 mmol) i trietilamin (14,39 ml, 103 mmol), i smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 30 minuta. Dobijena smeša je razblažena DCM-om i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3(vod.). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 100% TBME dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 0.93mins; MS m/z [M+H]+ 397.2/400.2; Postupak 2minLowpH
Korak 3: 5-cikloheksil-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[258] U 5-brom-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (75 mg, 0,189 mmol) dodat je cikloheksil cink(II) bromid (0,5 M u THF-u) (1133 µl, 0,566 mmol) i bis(tri-t-butilfosfin)paladijum(0) (9,65 mg, 0,019 mmol), i smeša je mešana na 100°C u mikrotalasnoj pećnici tokom 30 minuta. Dobijena smeša je razblažena pomoću EtOAc i filtrirana, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.12 min; MS m/z [M+H]+ 401.0/402.4; Postupak 2minLowpH
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (1H, s), 3.90 (1H, m), 3.20 (3H, s), 2.90 (1H, m), 2.05 (3H, s), 2.00 (3H, s), 2.80-1.00 (20H, m).
Primer 11:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid
[259]
Korak 1: 1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonat
[260] Rastvor 1,4-cikloheksadion monoetilen acetala (Aldrich) (2 g, 12,81 mmol) u suvom THF-u (30 ml) u atmosferi azota uz mešanje je ohlađen na -70°C, i ukapavanjem je dodat 0,6 M LDA (u heptanu/THF-u/ etilbenzenu) (25,6 ml, 15,37 mmol) uz održavanje temperature ispod -65°C. Reakciona smeša je mešana tokom 20 minuta na -70°C, pa je ukapavanjem tretirana rastvorom 2-[N,N-bis(trifluormetilsulfonil)amino]piridina (Alfa Aesar) (5,05 g, 14,09 mmol) u suvom THF-u (10 ml) tokom 30 minuta, pri čemu temperatura nije prešla -65°C. Reakciona smeša je mešana na -70°C tokom 1 sata pre nego što je ostavljena da se postepeno zagreje na sobnu temperaturu i mešana preko noći. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim NaHCO3(100 ml) i ekstrahovana pomoću TBME (2 x 150 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani pomoću 10% NaOH (vod.) (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 5.80 (1H, mult), 3.91 (4H, mult), 2.51-2.49 (2H, mult), 2.49-2.43 (2H, br mult), 2.37-2.34 (2H, br mult), 1.86-1.81 (2H, mult).
Korak 2: 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan
[261] U rastvor 1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluormetansulfonata (1,19 g, 4,13 mmol) u suvom dioksanu (15 ml) uz mešanje je dodat bis(pinakolato)dibor (Alfa Aesar) (1,048 g, 4,13 mmol), a zatim kalijum acetat (Acros) (0,810 g, 8,26 mmol) i adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(Alfa Aesar) (0,101 g, 0,124 mmol). Reakciona smeša je produvana azotom i mešana na 80°C preko noći. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje pomoću TBME. Organski filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i raspodeljen je između EtOAc (50 ml) i vode (50 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 3: Etil 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilat
[262] U bočicu za mikrotalasnu pećnicu od 2-5 ml koja sadrži rastvor 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolana (586 mg, 2,200 mmol) u acetonitrilu (2 ml) dodat je etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer D) (515 mg, 2,200 mmol), zatim K2CO3(912 mg, 6,60 mmol), adukt PdCl2(dppf).CH2Cl2(17,97 mg, 0,022 mmol) i voda (0,667 ml). Bočica je produvana azotom i mešana u mikrotalasnoj pećnici (Biotage Smith Initiator) na 80°C tokom 1 sata i na 100°C tokom 30 minuta. Dobijena smeša je raspodeljena između vode (30 ml) i EtOAc (30 ml). Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja narandžastog ulja. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-40% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.26 (1H, mult), 4.37 (2H, q), 3.93 (4H, s), 2.62-2.56 (2H, br multi), 2.47-2.43 (2H, multi), 2.23 (3H, s), 1.82 (2H, mult), 1.23 (3H, t).
Korak 4: Etil 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksilat
[263] Rastvor etil 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksilata (556 mg, 1,896 mmol) u etanolu (20 ml) pročišćen je azotom i zatim tretiran pomoću 10% Pd-C, 50% vlažan (Alfa Aesar, 38303) (303 mg, 2,84 mmol). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje etanolom i DCM-om. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je propušten kroz uložak od 500 mg silika gela-TMT, uz eluiranje smešom etanol:etar (1:1). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja; LC-MS: Rt = 1.11 min; MS m/z [M+H]+ 296.2; Postupak 2minLowpHv01
Korak 5: 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksilna kiselina
[264] U rastvor etil 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksilata (558 mg, 1,889 mmol) u THF-u (5 ml) uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (4,179 ml, 8,36 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Dobijena smeša je sipana u vodu (20 ml) i pH je podešen na pH 5-6 dodavanjem 1 M HCl. Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću EtOAc (30 ml) i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 0.89 minut; MS m/z [M+H]+ 268.2; Postupak 2minLowpHv01
Korak 6: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid
[265] U rastvor 4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksilne kiseline (239 mg, 0,894 mmol) u suvom NMP (3 ml) uz mešanje je dodat HATU (374 mg, 0,984 mmol), a zatim 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (206 mg, 0,984 mmol) i trietilamin (0,274 ml, 1,967 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Dobijena smeša je raspodeljena između EtOAc (20 ml) i 1 M NaOH (20 ml). Organska faza je isprana vodom (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-2% MeOH u DCM-u dalo je sirovu supstancu. Izolovana supstanca je rastvorena u DMSO (2 ml) i triturirana vodom (30 ml). Nastala suspenzija je filtrirana pod sniženim pritiskom, i čvrsta supstanca je isprana vodom (20 ml) i ostavljena da se osuši pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 0.96 minut; MS m/z [M+H]+ 459.5: Postupak 2minLowpHv01
<1>), 1.22-1.11 (1H, br H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (1H, s), 3.96-3.86 (5H, mult), 3.21 (3H, s), 3.02 (1H, mult), 2.07 (3H, s), 2.05-1.92 (2H, br mult), 2.02 (3H, s), 1.84-1.72 (8H, br mult), 1.70-1.57 (5H, br mult), 1.38-1.23 (2H, br mult).
Primer 12:
Smeša 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[266]
Korak 1: Etil 5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[267]
[268] U rastvor etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (350 mg, 1,911 mmol) u DCM-u (19 ml) dodat je alil trimetilsilan (276 µl, 1,911 mmol) i smeša je ohlađena na -78°C. Rastvor bor trifluorid eterata (278 µl, 2,198 mmol) u DCM-u (5 ml) ohlađen je na -78 °C i dodat u reakcionu smešu tokom 5 minuta. Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta, i dodat je trietilamin (266 µl, 1,911 mmol). Reakciona smeša je održavana na -78 °C tokom 15 minuta i ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(10 ml) i ekstrahovana DCM-om (2 x 10 ml). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za razdvajanje faza, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-40% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.06 min; MS m/z [M+H]+ 225.8/226.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2:
[269] 2a: Racemska smeša etil 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
i 2b: Racemska smeša etil 5-((2S,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2R,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[270] U rastvor etil 5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (140 mg, 0,622 mmol) u DCM-u (6,2 ml) dodat je pivalaldehid (67,5 µl, 0,622 mmol). U kapima je dodat TMSOTf (112 µl, 0,622 mmol), i reakciona smeša je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Dodat je MeOH (2 ml), i dobijena smeša je raspodeljena između vode (5 ml) i DCM-a, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM (2 x 5 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-50% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
2a: Racemska smeša etil 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata LC-MS: Rt = 1.64 min; MS m/z [M+H]+ 326.6; Postupak 2minLowpHv03
2b: Racemska smeša etil 5-((2S,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2R,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata LC-MS: Rt = 1.54 min; MS m/z [M+H]+ 326.6; Postupak 2minLowpHv03
Korak 3: Racemska smeša 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline
[271]
[272] U rastvor racemske smeše 2a: etil 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (9 mg, 0,028 mmol) u MeOH (0,45 ml) i THF (0,75 ml) dodat je 2 M NaOH (vod.) (59,9 µl, 0,120 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja ostatka koji je razblažen pomoću 2 M NaOH (vod.) (5 ml) i ispran DCM-om (5 ml). Vodeni sloj je zakiseljen pomoću 2 M HCl (vod.) (8 ml) i ekstrahovan pomoću DCM (3 x 5 ml). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza, a rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja racemske smeše 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline;
LC-MS: Rt = 1.44mins; MS m/z [M+H]+ 298.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: Racemska smeša 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[273] U rastvor racemske smeše 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (9 mg, 0,030 mmol) u NMP (0,3 ml) dodat je HATU (12,66 mg, 0,033 mmol), a zatim 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (6,33 mg, 0,030 mmol) i Et3N (8,39 µl, 0,061 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je raspodeljena između EtOAc (10 ml) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(10 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% MeOH u DCM-u dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 4.57 min; MS m/z [M+H]+ 489.3; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 4.98 (1H, dd), 4.06 (1H, tt), 3.82 (1H, mult), 3.50 (1H, dd), 3.40 (3H, s), 3.26 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.14-2.07 (1H, multi), 2.05-1.82 (8H, br multi), 1.71 (1H, br mult), 1.51 (1H, mult), 1.43-1.29 (2H, br multi), 1.29-1.17 (1H, br mult), 0.92 (9H, s).
Primer 13:
Smeša 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[274]
[275] Primer 13 je pripremljen postupkom koji je sličan postupku iz Primera 12 uz zamenu 2a sa 2b u koraku 3;
LC-MS: Rt = 4.40mins; MS m/z [M+H]+ 489.4; Postupak 8minLowpHv01
Primer 13a: 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid i Primer 13b: 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[276]
[277] Hiralna separacija Primera 13 koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je pojedinačne enantiomere:
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 10 mm, 5 um na 35 stepeni C
Mobilna faza: 35% izopropanola 0,1% V/V DEA / 65% CO2
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC1
Primer 13a: 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
SFC retenciono vreme = 4,86 min
LCMS: Rt 1.42 min MS m/z [M+H]+ 489.5; Postupak 2minLowpHv03
Primer 13b: 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[279]
SFC retenciono vreme = 2,85 min
LCMS: Rt 1.42 min MS m/z [M+H]+ 489.5; Postupak 2minLowpHv03
Primer 14:
Dijastereomerna smeša 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[280]
Korak 1: Smeša etil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-(2,2,2-trifluoracetoksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-(2,2,2-trifluoracetoksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[281] Etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilat (100 mg, 0,546 mmol) i 2,2-dimetilheks-5-en-3-ol (Intermedijer F) (70,0 mg, 0,546 mmol) kombinovani su u DCM-u (12 ml) i tretirani molekulskim sitima osušenim u pećnici (100 mg, 0,546 mmol) i TFA (3,15 ml, 40,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dodat je pivaldehid (0,059 ml, 0,546 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana DCM-om (x3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
Korak 2: Smeša etil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[282] Natrijum (45,7 mg, 1,988 mmol) je rastvoren u etanolu, i dobijeni rastvor je na sobnoj temperaturi dodat u smešu etil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-(2,2,2-trifluoracetoksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-(2,2,2-trifluoracetoksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (270 mg, 0,663 mmol) u EtOH (5 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Dodata je 0,1 M HCl (vod.) (50 ml), i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (x3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 4: Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-4-oksotetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-4-oksotetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[283] Smeša etil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (35 mg, 0,112 mmol) u DCM-u (20 ml) tretirana je na sobnoj temperaturi Des-Martinovim reagensom (47,7 mg, 0,112 mmol), i mešana je tokom 30 minuta. Dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum metabisulfita, i smeša je mešana tokom 15 minuta. Dobijeni slojevi su odvojeni, i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Vodeni deo je ekstrahovan pomoću DCM, i kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-40% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.78 (1H, dd), 4.38 (2H, q), 3.34 (1H, dd), 2.83 (1H, mult), 2.62-2.56 (1H, multi), 2.45-2.33 (2H, br multi), 2.21 (3H, s), 1.35 (3H, t), 0.90 (9H, s).
Korak 5: Dijastereomerna smeša jedinjenja 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (1:1)
[284] Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-4-oksotetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-4-oksotetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (420 mg, 1,358 mmol) u THF-u (20 ml) ohlađena je na -78°C i tretirana 1 M L-selektridom u THF-u (1,426 ml, 1,426 mmol) i mešana na -78°C tokom 3 h. Dobijena smeša je ugašena sirćetnom kiselinom i isprana pomoću 1 M HCl (vod.). Vodena supstanca je ekstrahovana pomoću EtOAc (x2). Svi organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-50% EtOAc u izoheksanu dalo je sirovu supstancu. Sirova supstanca je rastvorena u THF-u, tretirana pomoću 2 M NaOH (vod.) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dobijena smeša je zakiseljena koristeći 1 M HCl (vod.) i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.10 min; MS m/z [M+H]+ 284.3; Postupak 2minLowpHv03
Korak 6: Dijastereomerna smeša jedinjenja metil 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i metil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) i jedinjenja metil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i metil 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)
[285] Dijastereomerna smeša jedinjenja 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-hidroksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (1:1) (31 mg, 0,109 mmol) u DMF-u (0,5 ml) dodata je u rastvor natrijum hidrida (10,94 mg, 0,274 mmol) u DMF-u (2 ml) na 0°C. Smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu, mešana je tokom 2 sata, i dodat je metil jodid (0,068 ml, 1,094 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je ugašena pomoću 2 M HCl (vod.) i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani pomoću 0,5 M LiCl (vod.), zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 7: Dijastereomerna smeša 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline
[286] Dijastereomerna smeša jedinjenja metil 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i metil 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) i jedinjenja metil 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i metil 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) (14 mg, 0,045 mmol) u THF-u (1 ml) i MeOH (0,6 ml) tretirana je pomoću 2 M NaOH (vod.) (0,090 ml, 0,180 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Dobijena smeša je tretirana pomoću 2 M HCl (vod.) (4 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (x2). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
[287] Korak 8: Dijastereomerna smeša 5-((2R,4R,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2R,4S,6S)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4R,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4S,6R)-6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (20 mg, 0,067 mmol) i 4-amino-2-ciklobutil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-ona (Intermedijer E) (12,80 mg, 0,071 mmol) u DMF-u (0,5 ml) tretirana je pomoću DIPEA (0,047 ml, 0,269 mmol) i HATU (33,2 mg, 0,087 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je tretirana vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc (x2). Kombinovani organski ekstrakti su isprani 0,5 M litijum hloridom (vod.), zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.38 min; MS m/z [M+H]+ 461.6; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.99 (1H, d), 4.63 (1H, mult), 3.82 (1H, mult), 3.51 (1H, d), 3.41 (3H, s), 3.28 (3H, s), 2.88-2.75 (2H, br multi), 2.41-2.31 (2H, br multi), 2.28 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.14-2.06 (1H, br mult), 1.99-1.83 (3H, br multi), 1.83-1.72 (1H, br mult), 1.52 (1H, mult), 0.92 (9H, s).
Primer 15:
5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[288]
Korak 1: Smeša etil 5-((2R,6S)-4-brom-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-4-brom-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)
[289] U ledeno ohlađeni balon u atmosferi azota koji sadrži 2,2-dimetilheks-5-en-3-ol (Intermedijer F) (400 mg, 3,12 mmol) i indijum (III) bromid (55,4 mg, 0,156 mmol) u suvom DCM-u (31 ml) dodat je brom trimetilsilan (0,405 ml, 3,12 mmol). Reakciona smeša je mešana uz hlađenje ledom tokom 30 minuta. Rastvor etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (572 mg, 3,12 mmol) u suvom DCM-u (31 ml) u drugom balonu u atmosferi azota ohlađen je u ledu. To je u kapima dodato u prvi balon tokom 30 minuta uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana uz hlađenje ledom tokom 1,5 h i na sobnoj temperaturi preko noći. U reakcionu smešu je dodat pivalaldehid (0,085 ml, 0,781 mmol) i to je mešano tokom 2 sata. Dodato je još pivalaldehida (0,085 ml, 0,781 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(vod.) i smeša je žustro mešana tokom 2 minuta. Dobijena smeša je propuštena kroz uložak za odvajanje faza, i organski eluent je sakupljen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS; Rt = 1.68 min; MS m/z [M+H]+ 376.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)
[290] U smešu etil 5-((2R,6S)-4-brom-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-4-brom-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) (233 mg, 0,623 mmol) u EtOH (7,1 ml) i EtOAc (0,7 ml) pod mlazom azota dodat je 10% Pd/C (26,5 mg, 0,249 mmol) i smeša je mešana u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi tokom 7 sati. Dodat je natrijum bikarbonat (209 mg, 2,490 mmol) i reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika preko noći. Dodato je još 10% Pd/C (26,5 mg, 0,249 mmol) i mešanje je nastavljeno u atmosferi azota preko noći. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite® uložak, uz eluiranje pomoću EtOAc, i organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-50% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.72 min; MS m/z [M+H]+ 296.3; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.54 (1H, d), 4.66 (2H, q), 3.01 (1H, d), 2.19 (3H, s), 1.94 (1H, mult), 1.83-1.77 (1H, mult), 1.73-1.48 (3H, multi), 1.34 (3H, t), 1.35-1.26 (1H, multi), 0.84 (9H, s).
Korak 3: Smeša 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (1:1)
[291] U rastvor etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)(112 mg, 0,379 mmol) u THF-u (2 ml) i MeOH (1,2 ml) na sobnoj temperaturi uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (0,209 ml, 0,417 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen pomoću EtOAc i vode. Slojevi su odvojeni, i vodeni sloj je ispran pomoću EtOAc (x2). Vodeni sloj je zakiseljen dodatkom 2 M HCl (vod.) i ekstrahovan pomoću EtOAc (x3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnih jedinjenja;
LC-MS; Rt 1.57 min; MS m/z [M+H]+ 268.3; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid i 5-((2R,6S)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[292] U rastvor smeše 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (1:1) (40 mg, 0,150 mmol) u suvom DCM-u (3 ml) u atmosferi azota dodat je oksalil hlorid (0,014 ml, 0,165 mmol) i DMF (0,023 ml, 0,299 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta i dodati su 4-amino-2-ciklobutil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer E) (27,1 mg, 0,150 mmol) i trietilamin (0,063 ml, 0,449 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 minuta. U dobijenu smešu je dodata voda i snažno je mešana pre propuštanja kroz uložak za odvajanje faza. Organski slojevi su sakupljeni, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je sirovu supstancu kao smešu enantiomera.
[293] Hiralna separacija supstance koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je pojedinačne enantiomere:
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Kolona Phenomenex LUX C2 250 x 10 mm, 5 um na 35 stepeni C
Mobilna faza: 50% metanola 0,1% V/V DEA / 50% CO2
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC sistem 2
Primer 15a: 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,6S)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[294]
Hiralna SFC: Rt = 14,26 min
LC-MS: Rt = 4.59 min; MS m/z [M+H]+ 431.5; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (1H, br s), 4.69-4.59 (2H, multi), 3.32 (3H, s), 3.10 (1H, d), 2.83 (2H, multi), 2.41-2.34 (2H, multi), 2.29 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.03 (1H, br d), 1.96-1.60 (6H, multi), 1.45-1.33 (1H, multi), 0.93 (9H, s).
Primer 15b: 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2S,6R)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[295]
Hiralna SFC: Rt = 18,40 min
LC-MS: Rt = 4.58 min; MS m/z [M+H]+ 431.5; Postupak 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (1H, br s), 4.69-4.59 (2H, multi), 3.32 (3H, s), 3.10 (1H, d), 2.83 (2H, multi), 2.41-2.34 (2H, multi), 2.29 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.03 (1H, br d), 1.96-1.60 (6H, multi), 1.45-1.33 (1H, multi), 0.93 (9H, s).
Primer 16:
5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,6S)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[296]
[297] Naslovno jedinjenje je pripremljeno postupkom koji je sličan postupku iz Primera 15 uz zamenu 4-amino-2-ciklobutil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-ona (Intermedijer E) u koraku 4 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-onom (Intermedijer D). Hiralna separacija koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je pojedinačni enantiomer:
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Chiralpak OD-H 250x10 mm, 5 μm na 35 stepeni C
Mobilna faza: sc-CO2:izopropanol 0,1% DEA
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC1
[298] 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,6S)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
Hiralna SFC Rt = 8,19 min;
LC-MS: Rt = 4.87 min; MS m/z [M+H]+ 459.5; Postupak 8minLowpHv01
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, s), 4.53 (1H, dd), 3.97 (1H, tt), 3.18 (3H, s), 3.01 (1H, dd), 2.20 (3H, s), 2.12 (3H, s), 1.96-1.86 (2H, multi), 1.83-1.74 (4H, multi), 1.72-1.49 (6H, multi), 1.35-1.22 (2H, multi), 1.21-1.11 (2H, multi), 0.84 (9H, s).
Primer 17:
Smeša 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,6R)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[299]
Korak 1: Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-4-jodtetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-4-jodtetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)
[300] U rastvor etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1 g, 5,46 mmol), 2,2-dimetilheks-5-en-3-ola (Intermedijer F) (0,700 g, 5,46 mmol) i natrijum jodida (0,818 g, 5,46 mmol) u suvom MeCN (20 ml) u atmosferi azota na sobnoj temperaturi uz mešanje je ukapavanjem dodat TMSCl (0,698 ml, 5,46 mmol) tokom 10 sekundi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat pivalaldehid (0,593 ml, 5,46 mmol), i reakciona smeša je mešana tokom 3 sata. Dobijena smeša je razblažena pomoću EtOAc i isprana 10% rastvorom (vod.) natrijum tiosulfata (x1) i vodom (x1). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-50% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.76 min; MS m/z [M+H]+ 422.3; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1)
[301] U rastvor smeše etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-4-jodtetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-4-jodtetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) (794 mg, 1,885 mmol) u toluenu (3,8 ml) dodat je DBU (0,284 ml, 1,885 mmol), i to je mešano na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat DBU (0,142 ml, 0,94 mmol) i to je mešano na sobnoj temperaturi 4 sata. Dobijena smeša je razblažena pomoću EtOAc i vode, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-20% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.64 min; MS m/z [M+H]+ 294.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 3: Smeša etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[302] U rastvor smeše etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (1:1) (212 mg, 0,723 mmol) u etanolu (14,5 ml) u atmosferi azota dodat je 10% Pd/C (769 mg, 0,723 mmol). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite® uložak u atmosferi azota uz eluiranje pomoću EtOAc. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.70 min; MS m/z [M+H]+ 296.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina i 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina (1:1)
U rastvor smeše etil 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (100 mg, 0,339 mmol) u THF-u (3 ml) i MeOH (1,8 ml) dodat je 2 M NaOH (vod.) (0,186 ml, 0,372 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je razblažen pomoću EtOAc i vode. Organski sloj je ekstrahovan pomoću 0,1 M NaOH (vod.). Kombinovani vodeni slojevi su zakiseljeni pomoću 1 M HCl (vod.) i ekstrahovani pomoću EtOAc (x3). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnih jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.52 min; MS m/z [M+H]+ 268.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 5: Smeša 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,6R)-6-(tercbutil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida (1:1)
[303] U rastvor smeše 5-((2R,6S)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,6R)-6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (1:1) (77 mg, 0,288 mmol) u DCM-u (2 ml) u atmosferi azota dodat je oksalil hlorid (0,026 ml, 0,302 mmol) i DMF (2,230 µl, 0,029 mmol). Dodati su 4-amino-2izopropil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer G) (48,7 mg, 0,288 mmol) i trietilamin (0,161 ml, 1,152 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat 1 M NaOH i DCM, i smeša je propuštena kroz kolonu za odvajanje faza. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovna jedinjenja;
LC-MS: Rt = 4.50 min; MS m/z [M+H]+ 419.5; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (1H, s), 4.72 (1H, mult), 4.36 (1H, mult), 3.22 (3H, s), 3.16 (1H, d), 2.14 (3H, s), 2.04 (3H, s), 1.99-1.90 (1H, mult), 1.84-1.78 (1H, mult), 1.70-1.59 (3H, br mult), 1.35 (6H, d), 1.38-1.23 (1H, br mult), 0.88 (9H, s).
Primer 18:
Smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,6R)-6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,6S)-6-izopropil-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,6R)-6-izopropil-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,6S)-6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[304]
Korak 1: Etil 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilat
[305] Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno sa Intermedijerom C, korak 1.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.86 (1H, dd), 6.02 (1H, d), 5.69 (1H, d), 4.37 (2H, q), 2.19 (3H, s), 1.33 (3H, t).
Korak 2: 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[306] Etil 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilat (250 mg, 0,993 mmol) rastvoren je u THF-u (5,3 ml) i MeOH (3,2 ml), i u to je dodat 2 M NaOH (vod.) (497 µl, 0,993 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 minuta. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i tretirana pomoću 2 M HCl (5 ml) i vode (5 ml). DCM je dodat u vodenu fazu, što je dovelo do nastanka emulzije. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je suspendovan u DCM-u (25 ml) i propušten kroz kolonu za odvajanje faza. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.04 min: MS m/z [M+H]+ 154.1: Postupak 2minLowpHv03
Korak 3: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksamid
[307] Suspenzija 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilne kiseline (172 mg, 0,809 mmol) u DCM-u (10 ml) ohlađena na 0 °C tretirana je oksalil hloridom (0,142 ml, 1,617 mmol) i DMF-om (4 kapi). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata, i na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u DCM-u (8 ml). Dodati su 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (169 mg, 0,809 mmol) (Intermedijer D) i trietilamin (0,338 ml, 2,426 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je razblažena vodom (15 ml) i ekstrahovana pomoću DCM-a (x2). Organski ekstrakti su kombinovani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 20-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt 1.11 min: MS m/z [M+H]+ 345.4: Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[308] U rastvor N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksamida (53 mg, 0,154 mmol) u THF-u (1 ml) i vodi (0,5 ml) dodat je natrijum perjodat (99 mg, 0,462 mmol) i Os EnCat™ (mikrokapsulirani OsO4) (10,26 mg, 3,08 µmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je filtrirana kroz čep od vate, i eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.09 (1H, s), 8.34 (1H, br s), 4.07 (1H, mult), 3.32 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.08-1.95 (2H, br mult), 1.94-1.80 (4H, br mult), 1.71 (1H, br mult), 1.44-1.30 (2H, br mult), 1.30-1.16 (1H, br mult).
Korak 5: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[309] Rastvor N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksamida (53 mg, 0,153 mmol) u THF-u (1,5 ml) ohlađen je na 0°C, i ukapavan je 1 M alil magnezijum bromid u Et2O (337 µl, 0,337 mmol) tokom 15 minuta. Reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i dodat je zasićeni NH4Cl (vod.). Vodeni sloj je ekstrahovan DCM-om (x3). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza, i organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 50-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 6: Smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,6R)-6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,6S)-6-izopropil-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,6R)-6-izopropil-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,6S)-6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[310] Rastvor N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida (26 mg, 0,054 mmol) u DCM-u (0,5 ml) ohlađen je na 0°C i dodati su izobutiraldehid (5,38 µl, 0,059 mmol) i TMSOTf (10,66 µl, 0,059 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata, i na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat zasićeni rastvor NH4Cl (vod.), i to je ekstrahovano pomoću DCM (x3). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza, i organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 30-70% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta, koristeći Xselect CSH Prep C18 kolonu radi dobijanja naslovnih jedinjenja kao smeše alkena, predloženi odnos proizvoda putem NMR je 3:2 4-en:3-en; predložena stereohemija je sin.
LC-MS: Rt = 1.40 min; MS m/z [M+H]+ 443.3: Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 - 8.07 (m, 2H), 6.08 - 6.03 (m, 1H), 5.936 - 5.92 (m, 1H), 5.80 - 5.73 (m, 2H), 5.46 - 5.42 (m, 1H), 4.85 (dd, J = 10.37, 3.3, 1H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.10 - 4.04 (m, 3H), 3.43 - 3.40 (m, 1H), 3.32 - 3.24 (m, 7H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.24 - 2.21 (m, 8H), 2.02 - 1.50 (m, 16H), 1.44 - 1.06 (m, 8H), 1.01-0.94 (m, 12H).
Primer 19:
Smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2S,6S)-6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,6R)-6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida
[312] Korak 1: Etil 5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat Rastvor bor trifluorid dietileterata (54,1 µl, 0,427 mmol) u DCM-u (0,3 ml) ohlađen je na -78°C. U zasebnom balonu, rastvor etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (68 mg, 0,371 mmol) i alil trimetilsilana (59,0 µl, 0,371 mmol) u DCM-u ohlađen je na -78°C, i ovaj rastvor je ukapavanjem dodat u rastvor bor trifluorid dietiletarata. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 1 sata, i na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat zasićeni rastvor NaHCO3(vod.) (5 ml), i ekstrahovana je pomoću DCM (x3). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza, i eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-50% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.07 min; MS m/z [M+H]+ 226.1: Postupak 2minLowpHv03
[313] Korak 2: Etil 4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilat
Rastvor etil 5-(1-hidroksibut-3-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (35 mg, 0,155 mmol) u DCM-u (1 ml) tretiran je acetaldehidom (8,72 µl, 0,155 mmol), i reakciona smeša je ohlađena na 0°C. Dodat je rastvor TMSOTf (80,4 µl, 0,465 mmol) u DCM-u (1,5 ml) ohlađen na 0°C, i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, i na sobnoj temperaturi preko noći. U dobijenu smešu je dodat zasićeni rastvor amonijum hlorida (vod.) (2 ml), i ekstrahovana je pomoću DCM (x3). Kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza, i eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.32 min: MS m/z [M+H]+ 252.2: Postupak 2minLowpHv03
[314] Korak 3: 4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilna kiselina
U rastvor etil 4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilata (14 mg, 0,056 mmol) u MeOH (0,2 ml) i THF-u (0,3 ml) dodat je 2 M NaOH (vod.) (27,9 µl, 0,056 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dodati su 2 M NaOH (vod.) (1 ml) i voda (1 ml). Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću DCM (x3) i kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza. Eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
[315] Korak 4: Racemska smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2S,6S)-6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,6R)-6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida
[316] U rastvor 4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilne kiseline) (12,03 mg, 0,054 mmol) u NMP (0,5 ml) dodat je HATU (20,49 mg, 0,054 mmol). Dodati su 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (11,28 mg, 0,054 mmol) i trietilamin (7,49 µl, 0,054 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je raspodeljena između zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (10 ml) i EtOAc (10 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 40-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 3.65 min: MS m/z [M+H]+ 415.3: Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H), 5.86 - 5.77 (m, 1H), 5.68 - 5.60 (m, 1H), 4.77 (dd, J = 10.9, 3.3 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.04 - 3.93 (m, 1H), 3.31 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.67 - 2.54 (m, 1H), 2.31 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 7H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.86 - 1.72 (m, 2H), 1.64 - 1.59 (m, 1H), 1.36 - 1.05 (m, 7H).
Primer 20:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid
[317]
Korak 1: Etil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksipropil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[318] Terc-butil dimetilsilil hlorid (6,3 g, 41,5 mmol) je u porcijama dodat u etil 5-((1R,2S)-1,2-dihidroksipropil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer B) (8,65 g, 37,7 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1,38 g, 11,32 mmol) i trietilamin (5,80 ml) u DMF-u (100 ml) na 0°C, i reakcija je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Nakon 18 h, reakcija je raspodeljena između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora soli, isprana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida, zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 15% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.59 min; MS m/z [M+H]+ 344.4; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: etil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat i 2-metilalil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[319] NaH (700 mg 60 mas.% disperzija u mineralnom ulju, 17,47 mmol) dodat je u porcijama u etil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksipropil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat (3,0 g, 8,73 mmol) u THF-u (75 ml) na sobnoj temperaturi, nakon čega je tokom 10 minuta ukapavan 3-brom-2-metilprop-1-en (8,81 ml, 87 mmol). Dodat je tetrabutil amonijum jodid (2,58 g, 6,99 mmol), i dobijena reakcija je zagrevana na 58°C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i ugašena zasićenim vodenim rastvorom soli (75 ml), zatim pomoću EtOAc (75 ml), osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirova naslovna jedinjenja kao smešu približno 9:1;
LC-MS: Rt = 1.90 min; MS m/z [M+H]+ 398.5; Postupak 2minLowpHv03
LC-MS: Rt = 1.95 min; MS m/z [M+H]+ 424.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 3: 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilna kiselina
[320] Litijum hidroksid monohidrat (3,20 g, 76 mmol) u porcijama je dodat u smešu etil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetil silil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i 2-metilalil 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilata [4,5 g kao smeša približno 9:1 koja sadrži rezidualni tetrabutil amonijum jodid (25% m/m)] u THF-u/vodi (300 ml, 1,5/1,0), i dobijena smeša je pažljivo zagrevana na 70°C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, slojevi su razdvojeni, i preostali vodeni sloj je zakiseljen 1 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline i ekstrahovan pomoću EtOAc. Organski ekstrakti su kombinovani i isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.75 min; MS m/z [M+H]+ 370.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[321] 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (2,63 g, 12,55 mmol) u porcijama je dodat u 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksilnu kiselinu (4,14 g, ~70% m/m) u DMF-u (100 ml), pa zatim DIPEA (7,8 ml, 44,8 mmol) i HATU (4,8 g, 12,55 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 18 sati, reakciona smeša je raspodeljena na EtOAc i zasićeni vodeni rastvor soli. Vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 50-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.77 min; MS m/z [M+H]+ 561.8; Postupak 2minLowpHv03
Korak 5: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((1R,2S)-2-hidroksi-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[322] Tetrabutil amonijum fluorid (15,16 ml, 15,16 mmol) u kapima je dodat u 5-((1R,2S)-2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-((2-metilalil)oksi)propil)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (5,06 g, 7,58 mmol (pretpostavljena čistoća 76%)) u THF-u (160 ml), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dobijena smeša je ugašena redom dodavanjem vode (150 ml) i EtOAc (200 ml). Organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom soli, osušene iznad Na2SO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 50-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.12 min; MS m/z [M+H]+ 447.5; Postupak 2minLowpHv03
Korak 6: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid
[323] Živa(II) trifluoracetat (3,92 g, 9,19 mmol) u porcijama je dodata u N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((1R,2S)-2-hidroksi-1-((2-metilalil)oksi)propil)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (3,59 g, 8,03 mmol) u THF-u (160 ml) na sobnoj temperaturi. Dodata je živa(II) oksid (1,99 g, 9,19 mmol), i dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, reakcija je ohlađena na -78°C i u kapima je dodat trietilboran (16,84 ml, 16,84 mmol), a zatim u porcijama natrijum borhidrid (579 mg, 15,31 mmol). Nakon 1 h na -78°C, reakcija je ostavljena da se postepeno zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je ugašena dodatkom zasićenog vodenog rastvora soli i EtOAc, razdvojena i osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodati su DCM (200 ml) i Biotage Si-tiol (17 g, 1,4 mmol/g, ~3 ekv.) i nastala suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je filtrirana, isprana pomoću DCM i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 90-95% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje (>95% ee);
LC-MS: Rt = 1.16mins; MS m/z [M+H]+ 447.5; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR. ([400MHz], [DMSO] 9.55 (1H, s), 4.36 (1H, d), 4.09 (1H, m), 3.91 (1H, m), 3.65 (1H, d), 3.42 (1H, d), 3.21 (3H, s), 2.16 (3H, s), 2.03 (3H, s), 1.98 (2H, m), 1.78 (2H, m), 1.64 (3H, m), 1.37 (3H, s), 1.31 (2H, m), 1.17 (1H, m), 1.10 (3H, s), 0.87 (3H, d).
Primer 21.1
[324] 21.1 [5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid]
i Primer 21.2: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamid
Korak 1: [Etil 5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat]
[325] U ledeno hladnu smešu 2-metilbut-3-en-1-ola (Aldrich) (0,171 ml, 1,638 mmol), indijum (III) bromida (28,3 mg, 0,082 mmol) i suvog DCM (10 ml) u atmosferi azota dodat je brom trimetilsilan (0,213 ml, 1,638 mmol). Reakciona smeša je mešana uz hlađenje ledom tokom 30 minuta. Rastvor ledeno hladnog etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (300 mg, 1,638 mmol) u suvom DCM-u (2 ml) dodavan je u reakcionu smešu u periodu od 5 minuta. Reakciona smeša je mešana uz hlađenje ledom i zagrejana na sobnu temperaturu preko vikenda. Dobijena smeša je tretirana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(10 ml) uz mešanje na 0°C. Dobijena smeša je propuštena kroz uložak za odvajanje faza, i rastvarač iz eluenta je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 50-98% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcije proizvoda su dodate u EtOAc (50 ml) i isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organske supstance su osušene iznad MgSO4, filtrirane, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.47mins; MS m/z [M+H]+332.2/334.2: Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: [Kalijum 5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat] i kalijum (R)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilat i kalijum (S)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilat
[326] U rastvor [etil 5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata] (211 mg, 0,635 mmol) u suvom THF-u (5 ml) dodat je kalijum trimetilsilanolat (Aldrich) (107 mg, 0,953 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi i podvrgnuta ultrazvuku. Dodato je još THF, i smeša je mešana tokom 3 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja smeše naslovnih jedinjenja; LC-MS: Rt = 1.07mins; MS m/z [M+H]+ 224.2; Rt = 1.20mins; MS m/z [M+H]+ 306.2: Postupak 2minLowpHv03.
Korak 3: [5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid] i smeša jedinjenja (R)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida i (S)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida (1:1)
[327] U rastvor kalijum 5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i kalijum 4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksilata (sirova supstanca) (217 mg, 0,634 mmol) u suvom NMP (4 ml) uz mešanje je dodat HATU (Fluorochem) (265 mg, 0,697 mmol), 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (133 mg, 0,634 mmol) i trietilamin (0,194 ml, 1,395 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i raspodeljena na EtOAc (25 ml) i 1 M NaOH (25 ml). Organski sloj je ispran vodom (30 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 30-70% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcije proizvoda su dodate u EtOAc (50 ml) i isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnih jedinjenja.
Primer 21,1: [5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid] LC-MS: Rt = 1.30mins; MS m/z [M+H]+ 497.5: Postupak 2minLowpHv03
[328]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 (1H, s), 4.47 (1H, mult), 4.03-3.87 (2H, br multi), 3.80-3.72 (1H, mult), 3.14 (3H, s), 2.43-2.36 (1H, br mult), 2.13 (3H, s), 2.08 (3H, s), 2.01 (1H, br multi), 1.91-1.80 (3H, br multi), 1.79-1.68 (5H, br mult), 1.58 (1H, br mult), 1.31-1.18 (2H, br multi), 1.16-1.05 (1H, br mult), 0.95 (3H, d).
Primer 21,2: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamid LC-MS: Rt = 1.25 min; MS m/z [M+H]+ 415.4: Postupak 2minLowpHv03
[329]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, s), 5.63 (1H, mult), 4.78 (1H, dd), 4.26-4.00 (3H, br mult), 3.26 (3H, s), 2.72-2.61 (1H, br mult), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.93 (3H, br multi), 1.92-1.81 (5H, br multi), 1.75-1.66 (2H, br multi), 1.67 (3H, s), 1.44-1.30 (2H, br multi), 1.30-1.18 (1H, br mult).
Primer 22:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,5R)-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamid
[330]
[331] U smešu jedinjenja (R)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida i (S)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida (1:1) (Primer 21,2) (35 mg, 0,084 mmol) u EtOH (15 ml) pod mlazom azota dodat je Pd-C (3,59 mg, 0,034 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika na 0,35 bar tokom 2 sata. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite®, uz ispiranje etanolom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i propušten kroz Biotage Silica-TMT uložak od 1 g pod dejstvom gravitacije. Uložak je ispran etanolom, i eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 30-70% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcije proizvoda su dodate u EtOAc (30 ml) i isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml). Organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt 1.23 min; MS m/z [M+H]+ 417.4; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (1H, mult), 4.77 (1H, multi), 4.17-3.99 (2H, mult), 3.72 (1H, dd), 3.50 (1H, dd), 3.34 (3H, mult), 2.29-2.22 (6H, ), 2.08-1.97 (4H, multi), 1.86 (3H, multi), 1.75 (1H, ), 1.63 (1H ), 1.37 (2H, mult), 1.30-1.22 (3H, mult), 1.05 (2H, multi), 0.87 (1H, mult).
[332] Hiralna separacija Primera 22 koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je dva pojedinačna enantiomera cis dijastereomera i racemsku smešu trans dijastereomera:
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Chiralpak AD-H 250 x 10 mm, 5 um na 35 stepeni C
Mobilna faza: 30% metanola / 70% CO2
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC2
Primer 22.a Pojedinačni stereoizomer N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida
[333]
[334] SFC retenciono vreme = 9,74 min
[335]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (1H, br s), 4.80-4.75 (1H, br mult), 4.05 (1H, tt), 3.76-3.70 (1H, dd), 3.55-3.48 (1H, dd), 3.25 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.93 (2H, br multi), 1.93-1.75 (8H, br multi), 1.71 (1H, br mult), 1.67-1.58 (1H, br mult), 1.44-1.30 (2H, br multi), 1.30-1.18 (1H, br mult), 1.05 (3H, d).
Primer 22.b:
Pojedinačni stereoizomer N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida
[336]
[337] SFC retenciono vreme = 8,12 min
[338]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.79-4.76 (1H, br mult), 4.06 (1H, tt), 3.75-3.70 (1H, dd), 3.53-3.48 (1H, dd), 3.27 (3H, s), 2.28 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.03-1.95 (2H, mult), 1.92-1.77 (8H, br multi), 1.71 (1H, br mult), 1.66-1.59 (1H, br mult), 1.42-1.32 (2H, br multi), 1.27-1.20 (1H, br mult), 1.05 (3H, d).
Primer 22.c:
[339] Smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2S, 5R)-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R, 5S)-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida
[340] SFC retenciono vreme = 5,84 min
[341]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, br s), 4.50 (1H, dd), 4.10-3.98 (2H, br multi), 3.26 (3H, s), 3.17 (1H, t), 2.27 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.09-1.92 (4H, br multi), 1.93-.177 (7H, br multi), 1.71 (1H, br d), 1.42-1.17 (3H, br multi), 0.87 (3H, d).
Primer 23:
Smeša 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[342]
Korak 1: 2,2-dimetilbut-3-en-1-ol
[343] U rastvor 2,2-dimetilbut-3-in-1-ola (PharmaBlocks) (3 g, 30,6 mmol) u suvom dietil etru (40 ml) dodat je 2,2'-(etan-1,2-diilbis(sulfandiil))dietanol (5,57 g, 30,6 mmol), a zatim 5% Pd na barijum sulfatu (Aldrich) (6,51 g, 3,06 mmol). Smeša je degasirana, temeljno dopunjena azotom i mešana u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Dobijena smeša je filtrirana pod sniženim pritiskom, uz ispiranje katalizatora dietil etrom. Filtrat je pažljivo koncentrovan pod sniženim pritiskom radi uklanjanja većeg dela rastvarača. Dobijena suspenzija je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.71 (1H, dd), 5.05-4.97 (2H, multi), 3.27 (2H, s), 1.41 (1H, br mult), 0.95 (6H, s).
Korak 2: Smeša etil 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata
[344] U ledeno hladnu smešu 2,2-dimetilbut-3-en-1-ola (328 mg, 3,28 mmol), indijum (III) bromida (56,6 mg, 0,164 mmol) i suvog DCM-a (20 ml) u atmosferi azota dodat je brom trimetilsilan (0,425 ml, 3,28 mmol), i dobijena smeša je mešana uz hlađenje ledom tokom 30 minuta. Rastvor ledeno hladnog etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (600 mg, 3,28 mmol) u suvom DCM-u (2 ml) dodavan je u reakcionu smešu u periodu od 15 minuta, i reakciona smeša je mešana uz hlađenje ledom tokom 85 minuta. Dobijena smeša je tretirana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(10 ml) uz mešanje na 0°C. Dvofazna smeša je propuštena kroz uložak za odvajanje faza, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-60% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.48mins; MS m/z [M+H]+ 346.2/348.2: Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.12 (1H, dd), 4.45 (2H, q), 4.10-4.01 (2H, mult), 2.73-2.65 (1H, mult), 2.46-2.39 (1H, mult), 2.27 (3H, s), 1.82 (3H, s), 1.80 (3H, s), 1.43 (3H, t).
Korak 3: Smeša 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline
[345] U rastvor smeše etil 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata i etil 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (442 mg, 1,277 mmol) u THF-u (10 ml) i MeOH (1 ml) uz mešanje je dodat 2 M NaOH (vod.) (1,277 ml, 2,55 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija je dodata u vodu (20 ml) i zakiseljena do pH 5-6 dodatkom 1 M HCl (vod.). Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću EtOAc (40 ml) i kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušeni iznad MgSO4i filtrirani. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.18 min; MS m/z [M+H]+ 318.4/320.5: Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: Smeša 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[346] U smešu DMF (0,073 ml, 0,943 mmol) u suvom DCM-u (15 ml) u atmosferi azota na 0°C uz mešanje je dodat oksalil hlorid (0,045 ml, 0,519 mmol). Nakon 5 minuta, dodat je rastvor smeše 5-((2R,4S)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline i 5-((2S,4R)-4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilne kiseline (150 mg, 0,471 mmol) u suvom DCM-u (3 ml), i reakciona smeša je mešana tokom 10 minuta. Dodati su rastvor 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-ona (Intermedijer D) (109 mg, 0,519 mmol) u suvom DCM-u (2 ml) i trietilamin (0,197 ml, 1,414 mmol), i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 40 minuta. Dobijena smeša je raspodeljena na DCM (30 ml) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organske supstance su propuštene kroz kolonu za odvajanje faza, i eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je rastvorena u DMSO i prečišćena upotrebom automatizovane reversno fazne hromatografije praćene pomoću UV, sa gradijentom od 30-70% MeCN u vodi (0,1% mravlje kiseline) tokom 9,5 minuta. Frakcije proizvoda su dodate u EtOAc (50 ml) i isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml). Organski slojevi su osušeni iznad MgSO4, filtrirani i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnih jedinjenja;
LC: Rt = 1,26 min: Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 5.19 (1H, t), 4.53 (1H, mult), 4.40 (1H, mult), 4.05 (1H, tt), 3.26 (3H, s), 2.92-2.77 (2H, br mult), 2.28 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.06-1.94 (2H, br multi), 1.92-1.83 (4H, br multi), 1.72 (3H, s), 1.72-1.63 (1H, br multi), 1.64 (3H, s), 1.44-1.30 (2H, br multi), 1.29-1.19 (1H, br mult).
Primer 24:
Smeša N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,4R)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,4S)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[347]
[348] U 5-(4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid (62 mg, 0,122 mmol) u etanolu (10 ml) pod mlazom azota dodat je Pd-C (5,18 mg, 0,049 mmol). Smeša je mešana u atmosferi vodonika na 0,35 bar i sobnoj temperaturi preko noći. U reakcionu smešu je dodat NaHCO3(40,9 mg, 0,487 mmol), i reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika na 0,35 bar i sobnoj temperaturi tokom 2,5 sati. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite<®>, uz ispiranje pomoću EtOH. Filtrat je propušten kroz Biotage Silica-TMT uložak od 1 g, i eluent je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena preparativnom HPLC-MS sa gradijentom od 30-98% MeCN u vodi (0,1% TFA) tokom 9,5 minuta. Frakcije proizvoda su rastvorene u EtOAc (20 ml) i isprane zasićenim vodenim NaHCO3(20 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnih jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.30 min; MS m/z [M+H]+ 431.5: Postupak 2minLowpHv03.
[349] Hiralna separacija Primera 24 koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je pojedinačne enantiomere.
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Chiralpak IB, 250 x 10 mm, 5 um na 35 stepeni C
Mobilna faza: 40% izopropanola 0,1% V/V DEA / 60% CO2
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC1
Primer 24.a: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,4R)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,4S)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[350]
SFC Rt = 3,99 min
LC-MS; Rt = 1.30 min; MS m/z [M+H]+ 431.5; Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, br s), 5.09 (1H, mult), 4.09 (1H, t), 4.10-4.00 (1H, tt), 3.69 (1H, t), 3.24 (3H, s), 2.45-2.36 (1H, mult), 2.25 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.18-2.09 (1H, br mult), 2.06-1.93 (2H, br multi), 1.91-1.83 (5H, br multi), 1.71 (1H, br mult), 1.67-1.60 (1H, br mult), 1.44-1.30 (2H, br multi), 1.29-1.19 (1H, br mult), 1.00 (3H, d), 0.95 (3H, d).
Primer 24.b: N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2R,4R)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-((2S,4S)-4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
SFC Rt = 5,42 min
LC-MS: Rt 1.30 min; MS m/z [M+H]+ 431.6: Postupak 2minLowpHv03
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 5.12-5.06 (1H, mult), 4.12-4.01 (2H, multi), 3.69 (1H, t), 3.26 (3H, s), 2.44-2.36 (1H, mult), 2.26 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.18-2.08 (1H, mult), 2.05-1.95 (2H, br multi), 1.91-1.83 (5H, br multi), 1.71 (1H, br mult), 1.68-1.59 (1H, mult), 1.44-1.31 (2H, br multi), 1.30-1.19 (1H, br mult), 1.00 (3H, s), 0.95 (3H, s).
Primer 25:
5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[352]
[353] Korak 1: Etil 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
U rastvor etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer C) (50 mg, 0,273 mmol) u toluenu (0,5 ml) dodat je 3,3-dimetilbutan-1,2-diol (32,3 mg, 0,273 mmol), i smeša je zagrevana na 110°C tokom 4,5 sati. Dobijena smeša je raspodeljena na EtOAc i vodu, i organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.42mins; MS m/z [M+H]+ 284.3: Postupak 2minHighpHv03
[354] Korak 2: Kalijum 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
U rastvor etil 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (42 mg, 0,148 mmol) u THF-u (4 ml) dodat je kalijum trimetilsilanolat (19,02 mg, 0,148 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sati. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
[355] Korak 3: Smeša 5-((2R,4R)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2R,4S)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,4R)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida i 5-((2S,4S)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida
[356] U rastvor kalijum 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksilata (43,5 mg, 0,148 mmol) u NMP (0,7 ml) dodat je HATU (62,0 mg, 0,163 mmol), trietilamin (45,5 µl, 0,326 mmol) i 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (Intermedijer D) (31,0 mg, 0,148 mmol), i reakciona smeša je preko noći mešana na sobnoj temperaturi. U dobijenu smešu su dodati voda i EtOAc. Organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom soli (x2), osušene iznad MgSO4, filtrirane, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje kao smešu dijastereoizomera.
Primer 25a-25d:
5-((2R,4R)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2R,4S)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2S,4R)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid ili 5-((2S,4S)-4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[357]
[358] Hiralna separacija 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida koristeći superkritičnu tečnu hromatografiju dala je pojedinačne enantiomere.
DETALJI POSTUPKA:
Kolona: Chiralpak IB, 250 x 10 mm, 5 um na 35 stepeni C
Mobilna faza: 35% izopropanola 0,1% V/V DEA / 65% CO2
Protok: 10 ml/min
Detekcija: UV na 220 nm
Instrument: Berger Minigram SFC1
Primer 25a: Jedan stereoizomer 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida SFC: Rt = 3,36 min
[359] LC-MS: Rt = 4.11 min; MS m/z [M+H]+ 447.6: Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (1H, br s), 6.02 (1H, s), 4.14-4.00 (2H, multi), 3.97-3.87 (2H, multi), 3.36 (3H, s), 2.31 (3H, s), 2.23 (3H, s), 2.09-1.97 (2H, multi), 1.88 (3H, br t), 1.73 (1H, br d), 1.44-1.31 (2H, multi), 1.30-1.20 (2H, multi), 1.01 (9H, s).
Primer 25b: Jedan stereoizomer 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida Hiralna SFC: Rt = 3,78 min
[360]
LC-MS: Rt = 4.12 min; MS m/z [M+H]+ 447.5; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (1H, br s), 6.19 (1H, s), 4.16-4.00 (3H, multi), 3.85 (1H, t), 3.30 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.22 (3H, s), 2.07-1.94 (2H, multi), 1.87 (3H, br t), 1.72 (1H, br d), 1.45-1.20 (4H, multi), 0.99 (9H, s).
Primer 25c: Jedan stereoizomer 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida Hiralna SFC: Rt = 4,05 min
[361]
LC-MS: Rt = 4.09 min; MS m/z [M+H]+ 447.5; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (1H, br s), 6.02 (1H, s), 4.10-4.01 (2H, multi), 3.97-3.87 (2H, multi), 3.25 (3H, s), 2.32 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.06-1.93 (2H, multi), 1.88 (3H, br t), 1.71 (1H, br d), 1.44-1.30 (2H, multi), 1.30-1.20 (2H, multi), 1.00 (9H, s).
Primer 25d: Jedan stereoizomer 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida Hiralna SFC: Rt = 5,95 min
[362]
LC-MS: Rt = 4.15 min; MS m/z [M+H]+ 447.6; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (1H, br s), 6.20 (1H, s), 4.16-4.09 (2H, multi), 4.07-4.00 (2H, multi), 3.27 (3H, s), 2.30 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.07-1.94 (2H, multi), 1.87 (3H, br t), 1.72 (1H, br d), 1.45-1.20 (4H, multi), 0.99 (9H, s).
Primer 26:
N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid
[363]
[364] Naslovno jedinjenje je pripremljeno postupkom koji je sličan postupku iz Primera 25, uz zamenu 3,3-dimetilbutan-1,2-diola (korak 1) 2,2-dimetilpropan-1,3-diolom;
LC-MS: Rt = 3.68 min; MS m/z [M+H]+ 433.4; Postupak 8minLowpHv01
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (1H, s), 5.58 (1H, s), 3.96 (1H, tt), 3.71 (2H, d), 3.55 (2H, d), 3.18 (3H, s), 2.26 (3H, s), 2.11 (3H, s), 1.97-1.86 (2H, multi), 1.80-1.74 (3H, multi), 1.62 (1H, br d), 1.33-1.11 (4H, multi), 1.23 (3H, s), 0.75 (3H, s).
Intermedijer A:
Etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[365]
Korak 1: Etil 4-metil-5-okso-4,5-dihidroizoksazol-3-karboksilat
[366] U dietil oksalil propionat (300 g, 1,48 mol) u etanolu (2 l) dodat je hidroksilamin hidrohlorid (124 g, 1,78 mol), i reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 3 sata. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je tretiran vodom i DCM-om, i vodena supstanca je ekstrahovana DCM-om. Kombinovane organske supstance su osušene, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.40 (2H, q), 2.09 (3H, s), 1.38 (3H, t).
Korak 2: Etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[367] Etil 4-metil-5-okso-4,5-dihidroizoksazol-3-karboksilat (42,5 g, 248 mmol) i fosfor oksibromid (199 g, 695 mmol) mešani su zajedno i zagrejani na 80°C. Trietilamin (34,6 ml, 248 mmol) je dodavan u kapima tokom 15 minuta, i reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 3 sata. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu. Dodat je DCM (400 ml), i smeša je uz mešanje sipana u led (~400 ml). Dodavan je 2 M NaOH (vod.) (1250 ml) do pH 7, i nastali slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM (2 x 300 ml), a nastali organski ekstrakti su kombinovani, isprani vodom (400 ml), natrijum tiosulfatom (5% m/V rastvor, 400 ml), vodom (400 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (400 ml). Organske supstance su osušene iznad MgSO4i aktivnog uglja, filtrirane, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.02 min: MS m/z [M+H]+ 234.0: Postupak 2minLowpH
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 4.47 (2H, q), 2.21 (3H, s), 1.44 (3H, t).
Intermedijer B:
Etil 5-((1R,2S)-1,2-dihidroksipropil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[368]
Korak 1: (E)-Etil 4-metil-5-(prop-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksilat
[369] Suspenzija kalijum trans-1-propenil trifluorborata (9,86 g, 66,7 mmol), adukta PdCl2(dppf).DCM (907 mg, 1,11 mmol), etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilata (Intermedijer A) (13 g) i trietilamina (7,7 ml) u EtOH (250 ml) degasirana je pod vakuumom i ponovo napunjena azotom pre zagrevanja na 90°C tokom 18 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je raspodeljena na EtOAc i zasićeni vodeni rastvor soli, razdvojena, osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 5-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.30 min; MS m/z [M+H]+ 196.2; Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: Etil 5-((1R,2S)-1,2-dihidroksipropil)-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[370] (E)-Etil 4-metil-5-(prop-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksilat (500 mg, 2,56 mmol) u terc-BuOH-vodi (1 ml) dodat je u porcijama u smešu AD-mix-beta (3,59 g, 7,63 mmol), metan sulfonamida (731 mg, 7.68 mmol), modifikovanog AD-mix-β (DHQD)2PHAL (80 mg, 0,102 mmol) i osmijum tetroksida (0,836 ml 2,5 mas.% rastvor u terc-BuOH, 0,067 mmol) u terc-BuOH-vodi (1:1, 19 ml), i dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Natrijum sulfit (3,9 g) je dodat u jednoj porciji, i reakcija je ostavljena da se meša tokom 30 minuta. Faze su odvojene, i faza EtOAc je osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 65-75% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje (96%ee);
LC-MS: Rt = 0.78 min; MS m/z [M+H]+ 230.2; Postupak 2minLowpHv03
Intermedijer C:
Etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[371]
Korak 1: Etil 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilat
[372] Etil 5-brom-4-metilizoksazol-3-karboksilat (Intermedijer A) (15 g, 64,1 mmol) i tributil(vinil)stanan (22,48 ml, 77 mmol) mešani su u suvom dioksanu (250 ml) i pročišćeni azotom tokom 90 minuta na sobnoj temperaturi. Dodat je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (3,70 g, 3,20 mmol), i reakciona smeša je mešana na 100°C preko noći. Reakciona smeša je raspodeljena između etil acetata (250 ml) i vode (250 ml) i odvojena. U organski sloj je dodat rastvor natrijum fluorida (~1 M, 250 ml) i nastala suspenzija je filtrirana kroz Celite®.
Slojevi su odvojeni, a organske supstance su isprane vodom, zasićenim vodenim rastvorom soli, osušene iznad MgSO4i filtrirane. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-30% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.20 min: MS m/z [M+H]+ 182.5: Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: Etil 5-formil-4-metilizoksazol-3-karboksilat
[373] U etil 4-metil-5-vinilizoksazol-3-karboksilat (3 g, 16,56 mmol) u THF-u (40 ml) i vodi (20 ml) na sobnoj temperaturi dodati su natrijum perjodat (10,62 g, 49,7 mmol) i osmijum ENCAT 40 (828 mg, 0,248 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Dobijena smeša je filtrirana kroz Celite® (5 g), uz ispiranje pomoću EtOAc. Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je suspendovana u DCM-u, podvrgnuta ultrazvuku i propuštena kroz uložak za odvajanje faza. Eluent je sakupljen, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.12 (1H, s), 4.50 (2H, q), 2.56 (3H, s), 1.46 (3H, s).
Intermedijer D:
4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[374]
Korak 1: 2-cikloheksil-5-metil-1H-pirazol-3(2H)-on
[375]
[376] Cikloheksil hidrazin hidrohlorid (AK Scientific) (700 g, 4643 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor DCM (3000 ml) i ledeno hladnog 2 M rastvora natrijum hidroksida (1778 ml, 3556 mmol). Reakciona smeša je mešana 10 minuta na sobnoj temperaturi. Nastale faze su razdvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM (4 x 2000 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u vodi (1300 ml), u koju su dodati sirćetna kiselina (1300 ml) i etil acetoacetat (Fluka) (450 ml, 3556 mmol), i reakciona smeša je mešana na 85°C tokom 1 sata. Dobijena smeša je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom, i ostatak je rastvoren u DCM-u (3000 ml) i vodi (1000 ml). pH je podešen na pH 9 pomoću 2 M K2CO3(vod.), faze su razdvojene, i organski ekstrakt je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (1 x 2 l). Prvi vodeni sloj je zasićen natrijum hloridom, a kombinovane vodene faze su ekstrahovane pomoću DCM (4 x 2 l). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja čvrste supstance. Sirova čvrsta supstanca je usitnjena u prah, dodat je TBME (2000 ml) i smeša je mešana na 50°C tokom 1 sata, a zatim 1 sat na sobnoj temperaturi. Dobijena suspenzija je filtrirana, uz ispiranje čvrste supstance pomoću TBME (4 x 500 ml). Izolovana čvrsta supstanca je sušena pod vakuumom na 45°C tokom 16 sati radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 10.62 (1H, br s), 5.06 (1H, s), 3.89 (1H, mult), 1.98 (3H, s), 1.81-1.55 (7H, multi), 1.36-1.22 (2H, multi), 1.18-1.05 (1H, mult).
Korak 2: 2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[377]
[378] Suspenzija 2-cikloheksil-5-metil-1H-pirazol-3(2H)-ona (525 g, 2834 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2200 ml) zagrejana je na 40°C i dodat je metil jodid (532 ml, 8502 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 70°C tokom 20 sati. Dodato je još metil jodida (177 ml, 2834 mmol), i smeša je mešana na 75°C tokom 3,5 sati, zatim na 80°C tokom 20 sati. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je trituriran pomoću TBME (2000 ml). Proizvod je sakupljen filtracijom, uz ispiranje pomoću TBME (5x 500 ml) radi dobijanja čvrste supstance. Izolovana čvrsta supstanca je suspendovana u DCM-u (2500 ml) i vodi (500 ml), i pH je podešen na pH 9 koristeći 2 M vodeni rastvor K2CO3(1700 ml). Faze su odvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM (3 x 500 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (1000 ml) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u etil acetatu (2000 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i filtriran kroz 200 g silika gela (40-63 µm), eluiranje sa 10% MeOH u EtOAc (7 x 300 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i osušen na 65°C radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 5.02 (1H, s), 3.84 (1H, tt), 3.14 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.98-1.86 (2H, multi), 1.78-1.53 (5H, multi), 1.33-1.20 (2H, multi), 1.18-1.04 (1H, mult).
Korak 3: 2-cikloheksil-1,5-dimetil-4-nitro-1H-pirazol-3(2H)-on
[379]
[380] U trifluorsirćetnu kiselinu (1940 ml) ohlađenu na -15°C dodat je 2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on (535 g, 2231 mmol), i reakciona smeša je ohlađena na 0°C.90% azotna kiselina (211 ml, 4461 mmol) u kapima je dodavana tokom 90 minuta uz održavanje temperature ispod 15°C, i reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta na 10°C. Dobijena smeša je polako sipana u ledenu vodu (8 l) i mešana tokom 30 minuta. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana vodom (2 x 2 l), zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (1 x 2 l), vodom (2 x 2 l), TBME (3 x 2 l) i heptanom (2 x 2 l). Izolovana čvrsta supstanca je osušena u vakuum sušnici radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 4.06 (1H, tt), 3.61 (3H, s), 2.57 (3H, t), 2.15-2.03 (2H, multi), 1.81-1.65 (4H, multi), 1.64-1.55 (1H, mult), 1.38-1.24 (2H, multi), 1.19-1.06 (1H, mult).
Korak 4: 4-amino-2-cikloheksil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[381]
[382] U 2-cikloheksil-1,5-dimetil-4-nitro-1H-pirazol-3(2H)-on (415 g, 1,73 mol) u MeOH (4500 ml) i THF-u (4500 ml) dodat je 10% Pd/C (70 g), i reakciona smeša je hidrogenovana na 0,1 bar i RT tokom 57,5 h. Dobijena smeša je filtrirana kroz filter pod pritiskom i isprana metanolom (1x1 l) i THF-om (2x 1 l). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja tamnocrvenog ulja. Ulje je odmah rastvoreno u TBME (4 l), koncentrovano pod sniženim pritiskom do oko 2 l i pelcovano (100 mg). Suspenzija je mešana tokom 2 h na RT i ohlađena u ledenom kupatilu tokom 1 h. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i ispirana ledeno hladnim TBME u porcijama do obezbojavanja filtrata, i osušena je pod vakuumom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt 0.55 min; MS m/z 210.1 [M+H]<+>; Metod (SRPb)
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 3.68 (1H, tt), 3.53 (2H, br s), 2.77 (3H, s), 1.96-1.83 (2H, multi), 1.92 (3H, s), 1.78-1.69 (2H, multi), 1.64-1.53 (3H, multi), 1.33-1.19 (2H, multi), 1.17-1.04 (1H, mult).
Intermedijer E:
4-amino-2-ciklobutil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[383]
Korak 1: terc-butil 2-ciklobutiliden hidrazin karboksilat
[384] Smeša ciklobutanona (16,96 ml, 227 mmol) i terc-butil hidrazin karboksilata (30 g, 227 mmol) u izoheksanu (378 ml) u atmosferi azota mešana je uz refluks tokom 1 sata. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i mešana 1 sat. Dobijena suspenzija je filtrirana, uz ispiranje čvrste supstance izoheksanom (x2). Čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom na 30°C radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.16 (1H, br s), 3.02 (2H, mult), 2,81 (2H, mult), 2.10-2.00 (2H, mult), 1.53 (9H, s).
Korak 2: terc-butil 2-ciklobutil hidrazin karboksilat
[385] Rastvor terc-butil 2-ciklobutiliden hidrazin karboksilata (5,0 g, 27,1 mmol) u THF-u (50 ml) dodavan je kap po kap tokom 1,5 sati u rastvor kompleksa boran tetrahidrofurana (33,9 ml, 33,9 mmol) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2,5 sati. Boran tetrahidrofuran (3 ml, 3 mmol) dodat je ukapavanjem, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je pažljivo ugašena dodatkom vode (50 ml) i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan pomoću EtOAc (2 x 200 ml), koristeći zasićeni vodeni rastvor soli kao pomoć u razdvajanju. Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 0-10% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje.
Korak 3: 1-ciklobutil-2-metilhidrazin
[386] Rastvor terc-butil 2-ciklobutil hidrazin karboksilata (1,0 g, 5,37 mmol) u THF-u (26,8 ml) ukapavanjem je dodat u rastvor 2,4 M litijum aluminijum hidrida u THF-u (11,63 ml, 27,9 mmol) u atmosferi azota. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana uz refluks tokom 20 sati. Dobijena smeša je ohlađena koristeći ledeno kupatilo u koje su dodati voda (1 ml), 15% NaOH (1 ml) i voda (3 ml). Dobijena suspenzija je mešana tokom 15 minuta i zatim filtrirana kroz Celite®. U filtrat je dodata HCl (4 M u dioksanu, 1,4 ml, 5,6 mmol) i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, uz azeotropsku destilaciju sa EtOH (x2). Smeša je triturirana etrom, a dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i isprana etrom. Čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja.
Korak 4: (S)-metil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-oksobutanoat
[387] Rastvor Des-Martinovog perjodinana (2,84 g, 6,69 mmol) u DCM-u (50 ml) dodat je u rastvor Boc-L-treonin metil estra (1,3g, 5,57 mmol) u DCM-u (20 ml) na sobnoj temperaturi i u atmosferi azota. Bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Dobijena smeša je razblažena pomoću DCM (50 ml) i ugašena dodatkom zasićenog NaHCO3(vod.) (50 ml) koji sadrži 0,5 M natrijum sulfit (6,2 g). Faze su odvojene i organski sloj je ispran zasićenim NaHCO3(vod.) (50 ml) i vodom, osušen iznad MgSO4, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 10-50% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.72 (1H, br d), 5.07 (1H, d), 3.84 (3H, s), 2.38 (3H, s), 1.46 (9H, s).
Korak 5: terc-butil (2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamat
[388] Rastvor (S)-metil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-oksobutanoata (400 mg, 1,730 mmol) u EtOAc (6,407 ml) tretiran je 1-ciklobutil-2-metilhidrazinom (284 mg, 2,076 mmol), zatim natrijum acetatom (213 mg, 2,59 mmol). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, i na 80°C tokom 4 sata. Dobijena smeša je razblažena vodom (10 ml) i dodat je EtOAc. Slojevi su odvojeni, i vodena supstanca je ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EtOAc i dodat je izoheksan. Dobijena suspenzija je filtrirana, i čvrsta supstanca je isprana izoheksanom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom uz eluiranje pomoću 50-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 6.19 (1H, br s), 4.61 (1H, mult), 3.23 (3H, s), 2.85-2.72 (2H, multi), 2.39-2.30 (2H, multi), 2.17 (3H, s), 1.93-1.83 (1H, mult), 1.81-1.71 (1H, mult), 1.48 (9H, s).
Korak 6: 4-amino-2-ciklobutil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[389] U rastvor terc-butil (2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamata u DCM-u (5 ml) dodata je sumporna kiselina (0,034 ml, 0,634 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U reakcionu smešu je dodato još sumporne kiseline (0,068 ml, 1,268 mmol) i ona je mešana 2 sata. Dobijena smeša je razblažena pomoću DCM i vode, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je zalužen dodatkom 2 M NaOH (vod.). Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM (x3), i kombinovani organski ekstrakti su propušteni kroz uložak za odvajanje faza. Eluent je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.54 (1H, mult), 2.94 (3H, s), 2.72 (2H, multi), 2.43 (2H, br s), 2.36-2.26 (2H, multi), 2.04 (3H, s), 1.90-1.78 (1H, mult), 1.78-1.67 (1H, mult).
Intermedijer F:
2,2-dimetilheks-5-en-3-ol
[390]
[391] U rastvor trimetilacetaldehida (10,2 ml, 90,9 mmol) u dietil etru (200 ml) na 0°C dodat je alil magnezijum bromid (100 ml, 1 M u etru). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Dobijena smeša je ugašena zasićenim amonijum hloridom i ekstrahovana dietil etrom. Organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO4i filtrirani. Rastvarač je pažljivo uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.95-5.83 (1H, mult), 5.18 (1H, mult), 5.15 (1H, mult), 3.28 (1H, mult), 2.45-2.35 (1H, mult), 2.06-1.95 (1H, mult), 1.62 (1H, s), 0.95 (9H, s).
Intermedijer G:
4-amino-2-izopropil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[392]
Korak 1: Metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoat
[393] U rastvor 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-hidroksibuterne kiseline (5 g, 14,65 mmol) u MeOH (50 ml) dodata je H2SO4(0,781 ml, 14,65 mmol). Reakciona smeša je mešana uz refluks preko noći. Dobijena smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom koristeći gradijent 0-100% EtOAc u izoheksanu dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.27mins; MS m/z [M+H]+ 356.3: Postupak 2minLowpHv03
Korak 2: Metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-oksobutanoat
[394] U rastvor metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoata (1,5 g, 4,22 mmol) u DCM-u (25 ml) u porcijama je dodat Des-Martinov perjodinan (1,790 g, 4,22 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je razblažena pomoću DCM, i dodati su 1:1 2 M natrijum karbonat (vod.) i zasićeni rastvor natrijum sulfita (vod.) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je osušen iznad MgSO4i filtriran. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.36 min; MS m/z [M+H]+ 354.3: Postupak 2minLowpHv03
Korak 3: (9H-fluoren-9-il)metil (2-izopropil-5-metil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamat
[395] U rastvor metil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-oksobutanoata (2,766 g, 7,83 mmol) u 1,25 M HCl u etanolu (25 ml) dodat je izopropil hidrazin hidrohlorid (1,298 g, 11,74 mmol). Reakciona smeša je mešana uz refluks. Po završetku, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom koristeći gradijent 0-100% EtOAc u izoheksanu i 10% MeOH u EtOAc dalo je sirovu supstancu. Sirova supstanca je rastvorena u IPA u koju je dodata voda radi dobijanja zamućene smeše koja je podvrgnuta ultrazvuku i ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi. Dobijena suspenzija je filtrirana, i čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom radi dobijanja naslovnog jedinjenja;
LC-MS: Rt = 1.14 min; MS m/z [M+H]+ 378.3/379.3: Postupak 2minLowpHv03
Korak 4: (9H-fluoren-9-il)metil (2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamat
[396] U rastvor (9H-fluoren-9-il)metil (2-izopropil-5-metil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamata (2,109 g, 5,59 mmol) u DMF-u (30 ml) dodat je metil jodid (2,80 ml, 44,7 mmol). Reakciona smeša je mešana na 90 °C preko noći. Dobijena smeša je ugašena pomoću IPA i vode, i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, filtrirani, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom koristeći gradijent 0-10% MeOH u EtOAc dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.20 min; MS m/z [M+H]+ 392.4: Postupak 2minLowpHv03
Korak 5: 4-amino-2-izopropil-1,5-dimetil-1H-pirazol-3(2H)-on
[397] U rastvor (9H-fluoren-9-il)metil (2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)karbamata (2,047 g, 5,23 mmol) u DMF-u (30 ml) dodat je piperidin (2,59 ml, 26,1 mmol) na sobnoj temperaturi. Po završetku dodavanja, reakciona smeša je dodata u vodu (30 ml). Dobijena suspenzija je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovane organske supstance su ekstrahovane pomoću 2 M HCl (vod.) i kiseli vodeni ekstrakti su neutralisani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i naneti na uložak C18. Kolona je eluirana vodom, a sakupljena vodena supstanca je pomešana sa SCX-2 i filtrirana. Smola je isprana pomoću MeOH i 7 M amonijaka u MeOH. MeOH i rastvarač iz vodenog filtrata uklonjeni su pod sniženim pritiskom. U dobijenu smešu dodat je MeOH (150 ml), podvrgnuta je ultrazvuku, filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. EtOH je dodat u dobijenu smešu i filtrirana je. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom koristeći gradijent 0-10% MeOH u DCM-u dalo je sirovu supstancu. Sirova supstanca u MeOH pomešana je sa SCX-2 (30 g). Suspenzija je filtrirana i isprana pomoću MeOH. Smola je zatim eluirana pomoću 7 M NH3u MeOH. Metanolni amonijak je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanje sirove supstance. Sirova supstanca je zatim adsorbovana na silicijum dioksidu, i prečišćavanje hromatografijom koristeći gradijent 0-10% MeOH u DCM-u dalo je naslovno jedinjenje;
LC-MS: Rt = 1.48 min; MS m/z [M+H]+ 170.2: 8minHighpHv01
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.72 (2H, br s), 4.42 (1H, mult), 3.28 (3H, s), 2.25 (3H, s), 1.36 (6H, d).

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R<1>je (C3-C6)alkil ili (C3-C6)cikloalkil; R<2>je metil; R<3>je izabran od (C6-C10)razgranatog alkila, (C6-C10)razgranatog alkenila, (C5-C8)cikloalkenila, (C5-C8)cikloalkila ili Het; pri čemu, (C5-C8)cikloalkenil ili (C5-C8)cikloalkil je nesupstituisan ili supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; i pri čemu je Het supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; svaki R<4>je nezavisno izabran od halo, (C1-C4)alkila, halo(C1-C4)alkila, (C1-C4)alkoksi ili halo(C1-C4)alkoksi; ili dve R<4>grupe, kada su vezane za isti atom ugljenika, mogu zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezane da grade prsten ciklopentila, tetrahidrofurana ili dioksolana; pri čemu je Het 5- ili 6-člani potpuno zasićeni ili delimično zasićeni heterociklični prsten koji sadrži a) 1 atom kiseonika na poziciji 2 ili 3, ili b) 2 atoma kiseonika na pozicijama 2 i 5 ili 2 i 6, pri čemu je numeracija u odnosu na mesto vezivanja; i (C5-C8)cikloalkil može biti monociklični prsten ili premošćeni sistem prstenova koji sadrži 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika.
  2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<1>je izopropil, ciklobutil ili cikloheksil.
  3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1 ili zahteva 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<3>izabran od 2,2-dimetilpentila, 2,2-dimetilpent-2-enila, ciklopentila, cikloheksila, cikloheksenila, tetrahidropiranila, dihidropiranila, dioksanila, tetrahidrofuranila, dioksolanila i biciklo[2.2.2]oktanila; pri čemu je ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil ili biciklo[2.2.2]oktanil prsten nesupstituisan ili supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; i pri čemu je tetrahidropiranil, dihidropiranil, dioksanil, tetrahidrofuranil ili dioksolanil prsten supstituisan sa jednim, dva, tri ili četiri supstituenta R<4>; i svaki R<4>je nezavisno izabran od halo, (C1-C4)alkila, halo(C1-C4)alkila, (C1-C4)alkoksi ili halo(C1-C4)alkoksi; ili dve R<4>grupe, kada su vezane za isti atom ugljenika, mogu zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezane da grade prsten tetrahidrofurana ili dioksolana.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<3>je
    ili ; i m je 1, 2, 3 ili 4.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je svaki R<4>nezavisno izabran od metila, izopropila, terc-butila i metoksi.
  6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je izabrano iz grupe koja se sastoji od: [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6-etil-4-metilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6,6-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-etilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; [5-(4-(terc-butil)cikloheks-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-metilcikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamida]; 5-(ciklohept-1-en-1-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(4-(trifluormetil)cikloheks-1-en-1-il)izoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(spiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilciklopent-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(2-oksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)izoksazol-3-karboksamida]; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropoksicikloheks-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4,4-dimetilcikloheksil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; [N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilciklopentil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbutil)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; (Z)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; (E)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(3,3-dimetilbut-1-en-1-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-cikloheksil-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamida; 5-(6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-(6-(terc-butil)-4-metoksitetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-ciklobutil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-(6-(terc-butil)tetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-izopropil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(6-izopropil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(6-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamida; [5-(4-brom-5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida]; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metil-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(5-metiltetrahidro-2H-piran-2-il)izoksazol-3-karboksamida; 5-(4-(2-brompropan-2-il)tetrahidrofuran-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(4-izopropiltetrahidrofuran-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; 5-(4-(terc-butil)-1,3-dioksolan-2-il)-N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamida; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-((2R,3S)-3,5,5-trimetil-1,4-dioksan-2-il)izoksazol-3-karboksamid sa sledećom formulom: , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-5-(5,5-dimetil-1,3-dioksan-2-il)-4-metilizoksazol-3-karboksamid sa sledećom formulom: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 1 koje je N-(2-cikloheksil-1,5-dimetil-3-okso-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-il)-4-metil-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)izoksazol-3-karboksamid sa sledećom formulom: , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  10. 10. Farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
  11. 11. Kombinacija koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i jedan ili više terapeutski aktivnih agenasa.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju poremećaja ili bolesti izabrane od plućne hipertenzije, uključujući plućnu arterijsku hipertenziju (PAH), fibrozu, reumatoidni artritis i zarastanje preloma.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju poremećaja ili bolesti izabrane od glaukoma, nasledne hemoragijske teleangiektazije (HHT), proteinurije, lečenja rana, HOBP i astme.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 5 ili 7 do 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 13, pri čemu je fibroza idiopatska plućna fibroza. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20210629A 2014-05-14 2015-05-14 Derivati karboksamida RS61874B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14168303 2014-05-14
EP15725195.0A EP3143018B1 (en) 2014-05-14 2015-05-14 Carboxamide derivatives
PCT/US2015/030817 WO2015175796A1 (en) 2014-05-14 2015-05-14 Carboxamide derivatives

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61874B1 true RS61874B1 (sr) 2021-06-30

Family

ID=50735903

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210629A RS61874B1 (sr) 2014-05-14 2015-05-14 Derivati karboksamida

Country Status (38)

Country Link
US (6) US9403810B2 (sr)
EP (1) EP3143018B1 (sr)
JP (1) JP6523338B2 (sr)
KR (3) KR20260023080A (sr)
CN (1) CN106661012B (sr)
AP (1) AP2016009550A0 (sr)
AR (1) AR100440A1 (sr)
AU (1) AU2015259083B2 (sr)
BR (1) BR112016026552B1 (sr)
CA (1) CA2948543C (sr)
CL (1) CL2016002839A1 (sr)
CR (1) CR20160527A (sr)
CU (1) CU24434B1 (sr)
CY (1) CY1124251T1 (sr)
DK (1) DK3143018T3 (sr)
EA (1) EA030938B1 (sr)
ES (1) ES2874882T3 (sr)
HR (1) HRP20210783T1 (sr)
HU (1) HUE054590T2 (sr)
IL (1) IL248785B (sr)
JO (1) JO3610B1 (sr)
LT (1) LT3143018T (sr)
MA (1) MA39983B1 (sr)
MX (1) MX374383B (sr)
MY (1) MY186598A (sr)
PE (1) PE20171443A1 (sr)
PH (1) PH12016502246A1 (sr)
PL (1) PL3143018T3 (sr)
PT (1) PT3143018T (sr)
RS (1) RS61874B1 (sr)
SG (1) SG11201609217UA (sr)
SI (1) SI3143018T1 (sr)
SV (1) SV2016005313A (sr)
TN (1) TN2016000489A1 (sr)
TW (2) TWI714528B (sr)
UY (1) UY36124A (sr)
WO (1) WO2015175796A1 (sr)
ZA (1) ZA201607658B (sr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9403810B2 (en) 2014-05-14 2016-08-02 Novartis Ag Carboxamide derivatives
US9403833B2 (en) 2014-05-14 2016-08-02 Novartis Ag Carboxamide derivatives
CA3081424A1 (en) * 2017-11-01 2019-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Spirocyclic compounds as farnesoid x receptor modulators
CN108689976B (zh) * 2018-07-23 2021-12-28 陕西师范大学 5-磺基水杨酸协同二氯二茂钛催化合成4-碘代四氢吡喃衍生物的方法
IL299680A (en) * 2020-07-09 2023-03-01 Bristol Myers Squibb Co Pyrazolone formyl peptide 2 receptor agonists
JP2023541601A (ja) 2020-09-10 2023-10-03 プレシリックス・ナームローゼ・ベンノートシヤープ Ｆａｐに対する抗体フラグメント
WO2023203135A1 (en) 2022-04-22 2023-10-26 Precirix N.V. Improved radiolabelled antibody
AU2023264245A1 (en) 2022-05-02 2024-12-19 Precirix N.V. Pre-targeting
WO2024242594A1 (ru) * 2023-05-23 2024-11-28 Общество С Ограниченной Ответственностью "Ифар" Средство для лечения легочных гипертензий

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2655009A1 (de) 1976-12-04 1978-06-15 Hoechst Ag Isoxazolderivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende mittel
EP1192174A4 (en) * 1999-06-11 2002-08-28 Univ New York State Res Found ANTAGONISTS OF BMP AND TGF BETA SIGNAL PATHS
US7354722B1 (en) 1999-06-11 2008-04-08 Signal Pharmaceuticals Modulators of Smurf and BMP/TGFβ signaling pathways
JP2007524596A (ja) 2003-02-28 2007-08-30 トランスフォーム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 共結晶医薬組成物
GB0312368D0 (en) 2003-05-30 2003-07-02 Univ Aston Novel ureido- and amido-pyrazolone derivatives
EP1667983A4 (en) 2003-09-23 2010-07-21 Merck Sharp & Dohme PYRAZOL MODULATORS OF METABOTROPIC GLUTAMATE RECEPTORS
US7291743B2 (en) 2005-03-29 2007-11-06 Geneblue Corporation Isoxazole derivatives and methods of treating nitric oxide mediated diseases
WO2008121861A2 (en) 2007-03-28 2008-10-09 Xenon Pharmaceuticals Inc. Pyrazole and pyrrole compounds useful in treating iron disorders
WO2009011850A2 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Abbott Laboratories Novel therapeutic compounds
JP2011511756A (ja) 2007-08-02 2011-04-14 ナームローゼ・フエンノートチヤツプ・オルガノン Ｔｒｐｖ１モジュレータとしての５−フェニル−イソオキサゾール−３−カルボキサミド誘導体
US8293757B2 (en) 2007-08-22 2012-10-23 Irm Llc 5-(4-(haloalkoxy)phenyl) pyrimidine-2-amine compounds and compositions as kinase inhibitors
WO2009086303A2 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
WO2011151361A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Glaxo Group Limited Novel compounds
CA2823877C (en) 2011-02-18 2020-01-07 Idorsia Pharmaceuticals Ltd Novel pyrazole and imidazole derivatives useful as orexin antagonists
US9403810B2 (en) 2014-05-14 2016-08-02 Novartis Ag Carboxamide derivatives
US9403833B2 (en) 2014-05-14 2016-08-02 Novartis Ag Carboxamide derivatives
KR20170002623A (ko) 2014-05-14 2017-01-06 화이자 인코포레이티드 피라졸로피리딘 및 피라졸로피리미딘
US20170088546A1 (en) * 2014-05-14 2017-03-30 Novartis Ag Carboxamide inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
AU2015259083A1 (en) 2016-11-24
SG11201609217UA (en) 2016-12-29
CY1124251T1 (el) 2022-07-22
ZA201607658B (en) 2017-09-27
JP2017515853A (ja) 2017-06-15
US20190381011A1 (en) 2019-12-19
BR112016026552A8 (pt) 2021-07-06
AP2016009550A0 (en) 2016-11-30
AR100440A1 (es) 2016-10-05
CU24434B1 (es) 2019-09-04
CR20160527A (es) 2017-04-28
JO3610B1 (ar) 2020-08-27
US11672782B2 (en) 2023-06-13
IL248785B (en) 2020-04-30
US20200268718A1 (en) 2020-08-27
EA030938B1 (ru) 2018-10-31
TWI714528B (zh) 2021-01-01
US20230301970A1 (en) 2023-09-28
CN106661012B (zh) 2019-12-20
CA2948543C (en) 2022-08-16
MY186598A (en) 2021-07-29
KR102534033B1 (ko) 2023-05-19
CA2948543A1 (en) 2015-11-19
NZ725918A (en) 2023-09-29
EP3143018B1 (en) 2021-03-10
TW201946921A (zh) 2019-12-16
BR112016026552B1 (pt) 2023-02-14
US20170014388A1 (en) 2017-01-19
MX2016014939A (es) 2017-02-28
EP3143018A1 (en) 2017-03-22
AU2015259083B2 (en) 2017-09-14
DK3143018T3 (da) 2021-05-31
US20150329529A1 (en) 2015-11-19
TN2016000489A1 (en) 2018-04-04
BR112016026552A2 (pt) 2017-08-15
UY36124A (es) 2016-01-08
US9403810B2 (en) 2016-08-02
US20210052554A1 (en) 2021-02-25
US10195181B2 (en) 2019-02-05
IL248785A0 (en) 2017-01-31
MA39983A (fr) 2017-03-22
MX374383B (es) 2025-03-06
SV2016005313A (es) 2018-06-12
SI3143018T1 (sl) 2021-08-31
KR20260023080A (ko) 2026-02-20
JP6523338B2 (ja) 2019-05-29
WO2015175796A1 (en) 2015-11-19
LT3143018T (lt) 2021-06-10
CL2016002839A1 (es) 2017-01-27
PE20171443A1 (es) 2017-09-29
PT3143018T (pt) 2021-06-01
HRP20210783T1 (hr) 2021-06-25
HUE054590T2 (hu) 2021-09-28
CU20160166A7 (es) 2017-03-03
KR20170003666A (ko) 2017-01-09
PL3143018T3 (pl) 2021-08-30
PH12016502246B1 (en) 2017-01-09
EA201692300A1 (ru) 2017-04-28
PH12016502246A1 (en) 2017-01-09
TW201623296A (zh) 2016-07-01
ES2874882T3 (es) 2021-11-05
CN106661012A (zh) 2017-05-10
MA39983B1 (fr) 2021-05-31
KR20230074827A (ko) 2023-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11672782B2 (en) Carboxamide derivatives
US9931319B2 (en) Carboxamide derivatives
US20160002221A1 (en) Substituted Pyridopyrazines as Syk Inhibitors
WO2015173659A2 (en) Carboxamide derivatives
HK1229326B (en) Carboxamide derivatives
WO2015173656A1 (en) Carboxamide derivatives
NZ725918B2 (en) Carboxamide derivatives