RS62017B1 - Mk2 inhibitori i njihova upotreba - Google Patents

Description

Opis

TEHNIČKA OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja korisna kao inhibitori MK2 kinaze. Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže jedinjenja predmetnog pronalaska. Otkrivene su metode korišćenja pomenutih kompozicija u lečenju različitih poremećaja.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Pretraga za novim terapijskim agensima poslednjih godina uveliko pomaže boljem razumevanju struktura enzima i drugih biomolekula povezanih sa bolestima. Jedna važna klasa enzima koja je bila predmet opsežnih studija su proteinske kinaze.

[0003] Proteinske kinaze čine veliku familiju strukturno srodnih enzima koji su odgovorni za kontrolu različitih procesa transdukcije signala unutar ćelije. Smatra se da su proteinske kinaze evoluirale iz zajedničkog gena predaka zbog očuvanja njihove strukture i katalitičke funkcije. Gotovo sve kinaze sadrže slični katalitički domen od 250-300 aminokiselina. Kinaze mogu biti kategorizovane u familijama prema supstratima koje fosforilišu (npr. protein-tirozin, protein-serin/treonin, lipidi itd.).

[0004] Mitogenom-aktivirana proteinska kinaza 2 (MAPKAP K2 ili MK2) posreduje u više ćeljskih odgovora zavisnih od p38 MAPK. MK2 je važan intraćelijski regulator produkcije citokina, kao što je faktor nekroze tumora alfa (TNF-ɑ ), interleukin 6 (IL-6) i interferon gama (IFNy), koji su uključeni u mnoge akutne i hronične inflamatorne bolesti, npr reumatoidni artritis i inflamatorne bolesti creva. MK2 se nalazi u jezgru nestimulisanih ćelija i nakon stimulacije, se translocira u citoplazmu i fosforilše i aktivira tuberin i HSP27. MK2 je takođe uključen u srčanu insuficijenciju, ishemijsku povredu mozga, regulaciju otpornosti na stres i produkciju TNF-ɑ . (videti Deak et al., EMBO. 17:4426-4441 (1998); Shi et al., Biol. Chem. 383:1519-1536 (2002); Staklatvala., Curr. Opin. Pharmacol.4:372-377 (2004), i Shiroto et al., J. Mol. Cardiol. 38:93-97 (2005)).

[0005] Mnoge bolesti su povezane sa abnormalnim ćelijskim odgovorima izazvanim događajima posredovanim proteinskom kinazom, kao što je opisano iznad. Ove bolesti uključuju, ali nisu ograničene na, autoimune bolesti, inflamatorne bolesti, bolesti kostiju, metaboličke bolesti, neurološke i neurodegenerativne bolesti, rak, kardiovaskularne bolesti, alergije i astmu, Alchajmerovu bolest i bolesti povezane sa hormonima. Shodno tome, ostaje potreba za pronalaženjem inhibitora proteinske kinaze korisnih kao terapijski agensi.

REZIME PRONALASKA

[0006] Obim pronalaska je definisan sa priloženim patentnim zahtevima. Svi primeri ili izvođenja koji ne spadaju u obim dodanih patentnih zahteva su opisani u referentne svrhe.

[0007] Sada je utvrđeno da su jedinjenja ovog pronalaska, i farmaceutski prihvatljive kompozicije od njih efikasni inhibitori MK2. Pronalazak obezbeđuje jedinjenja izabrana od:

ili farmaceutski prihvatljivih soli od njih.

[0008] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže iznad navedena jedinjenja pronalaska i farmaceutski prihvatljivi nosač, adjuvans ili nosač.

[0009] Jedinjenja predmetnog pronalaska i farmaceutski prihvatljive kompozicije od njih su korisni za lečenje raznih bolesti, poremećaja ili stanja povezanih sa abnormalnim ćelijskim odgovorima izazvanim događajajima posredovanim proteinskom kinazom. Takve bolesti, poremećaji ili stanja uključuju ovde opisane.

[0010] Jedinjenja obezbeđena ovim pronalaskom su takođe korisna za proučavanje kinaza u biološkim i patološkim fenomenima; proučavanje puteva intraćelijske transdukcije signala posredovanih takvim kinazama; i komparativ procene novih inhibitora kinaze.

DETALJAN OPIS ODREĐENIH IZVOĐENJA

1. Opšti opis jedinjenja pronalaska:

[0011] U određenim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje ireverzibilne inhibitore MK2. U nekim izvođenjima takva jedinjenja uključuju ona ovde opisanih formula ili farmaceutski prihvatljivu so od njih.

[0012] U nekim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja izabrana od:

ili farmaceutski prihvatljivu so od njih.

2. Jedinjenja i definicije:

[0013] Kao što se ovde koriste, primenjivaće se sledeće definicije, ako nije drugačije naznačeno. Za potrebe ovog pronalaska hemijski elementi su identifikovani u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, verzija CAS, Priručnik za hemiju i fiziku, 75. izd. Pored toga, opšti principi organske hemije su opisani u "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, i "March’s Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith, M.B. i March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001.

[0014] Kao što se ovde koristi, termin "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na one soli koje su u okviru zdrave medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez nepotrebne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije i slično, i proporcionalne su razumnom odnosu korist/rizik. Farmaceutski prihvatljive soli dobro su poznate u tehnici. Na primer, S. M. Berge i sar., opisuju farmaceutski prihvatljive soli detaljno u J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ovog pronalaska uključuju one dobijene iz pogodnih neorganskih i organskih kiselina i baza. Primeri farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih adiciononih kiselih soli su soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, sukcinska kiselina ili maleinska kiselina ili upotrebom drugih metoda koje se koriste u tehnici, kao što je jonska izmena. Ostale farmaceutski prihvatljive soli uključuju adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dodecil-sulfat, etansulfonat, format, fumarat, glukoheptonat, glicerofosfat, glukonat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, hidrojodid, 2-hidroksi-etansulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartrat, tiocijanat, p-toluensulfonat, undekanoat, valerat soli i slično.

[0015] Soli izvedene iz odgovarajućih baza uključuju alkalni metal, zemnoalkalni metal, amonijumove i soli N<+>(C1-4alkil)4soli. Reprezentativne soli alkalnog ili zemnoalkalnog metala uključuju natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i slično. Dalje farmaceutski prihvatljive soli uključuju, prema potrebi, netoksični amonijum, kvarternarni amonijum i aminske katjone formirane korišćenjem kontrajona kao što su halid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, niži alkil sulfonat i aril sulfonat.

[0016] Ako nije drugačije naznačeno, ovde prikazane strukture takođe treba da uključe sve izomerne (npr. enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione)) oblike strukture; na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, Z i E izomere dvostruke veze i Z i E konformacijske izomere. Zbog toga, pojedinačni stereohemijski izomeri, kao i enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione) smeše predmetnih jedinjenja, su unutar obima pronalaska. Ako nije drugačije navedeno, svi tautomerni oblici jedinjenja pronalaska se nalaze unutar obima pronalaska. Pored toga, ako nije drugačije naznačeno, ovde prikazane strukture takođe uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo u prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju sadašnje strukture, uključujući zamenu vodoniika sa deuterijumom ili tricijumom, ili zamenu ugljenika sa<13>C- ili<14>C- obogaćenim ugljenikom, su unutar obima ovog pronalaska. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitički alati, kao sonde u biološkim testovima ili kao terapijski agensi u skladu sa predmetnim pronalaskom.

[0017] Kombinacije supstituenata i varijabile predviđene ovim pronalaskom su samo one koje rezultiraju stvaranjem stabilnih jedinjenja. Termin "stabilan", kao što se ovde koristi, se odnosi na jedinjenja koja poseduju stabilnost dovoljnu da omogući proizvodnju i koja održava integritet jedinjenja u dovoljnom vremenskom periodu da bude korisno u svrhe detaljno opisane ovde (npr. terapijska ili profilaktička primena na subjektu).

[0018] Izlaganje spiska hemijskih grupa u bilo kojoj definiciji varijabile ovde uključuje definicije te varijable-promenljive kao bilo koje pojedinačne grupe ili kombinacije navedenih grupa. Izlaganje izvođenja za varijablu ovde uključuje to izvođenje kao bilo koje pojedinačno izvođenje ili u kombinaciji sa bilo kojim drugim izvođenjima ili delovima od njih.

[0019] Termin "biološki uzorak", kao što se ovde koristi, uključuje, bez ograničenja, ćelijske kulture ili ekstrakte od njih; biopsirani materijal dobijen od sisara ili ekstrakta od njih; i krv, pljuvačku, urin, izmet, seme, suze ili druge telesne tečnosti ili ekstrakte od njih. Inhibicija aktivnosti proteinske kinaze, na primer, MK2 ili njenog mutanta, u biološkom uzorku je korisna u raznim svrhama koje su poznate stručnjaku u ovom području tehnike. Primeri takvih svrha uključuju, ali nisu ograničeni na, transfuziju krvi, transplantaciju organa, čuvanje bioloških uzoraka i biološke analize.

[0020] Kao što se ovde koristi, "bolest ili poremećaj povezan sa MK2" ili, alternativno, "bolest ili poremećaj posredovani sa MK2" označava bilo koju bolest ili drugo štetno stanje u kojem je MK2 ili njegov mutant poznat ili se sumnja na njega da igra ulogu.

[0021] Termin "subjekt", kao što se ovde koristi, znači sisar i uključuje ljude i životinje, kao što su domaće životinje (npr. konji, psi, mačke itd.). Termini "subjekt" i "pacijent" se koriste naizmenično. U nekim izvođenjima, "pacijent" ili "subjekt" znači životinju, požejno sisara, a najpoželjnije čoveka.

[0022] Termin "farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač" se odnosi na netoksični nosač, adjuvans ili nosač koji ne uništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisan. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi ili nosači koji mogu biti korišćeni u kompozicijama ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, izmenjivače jona, glinicualuminijum oksid, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične smeše glicerida zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što je protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance bazirane na celulozi, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen polioksipropilenblok polimeri, polietilen glikol i masti iz vune. Količina jedinjenja predmetnog pronalaska koja može biti kombinovana sa materijalima nosača da bi se dobila kompozicija u jediničnom obliku doziranja će varirati u zavisnosti od lečenog domaćina, određenog načina primene itd. Poželjno, obezbeđene kompozicije su formulisane tako da se doza između 0.01 do oko 100 mg/kg ili oko 0.1 mg/kg do oko 50 mg/kg, i poželjno od oko 1 mg/kg do oko 25 mg/kg, telesne težine ispitanika/dan inhibitora može dati pacijentu koji prima ove kompozicije da bi se dobio željeni terapijski efekat. Količina jedinjenja predmetnog pronalaska u kompoziciji će takođe zavisiti od određenog jedinjenja u kompoziciji.

[0023] Izraz "jedinični oblik doziranja", kao što se ovde koristi, se odnosi na fizički diskretnu jedinicu obezbeđenog jedinjenja i/ili njegove kompozicije prikladne za subjekt koji se leči. Razumće se, međutim, da će lekar koji je prisutan odlučiti o ukupnoj dnevnoj upotrebi aktivnog agensa (tj. jedinjenja i kompozicija predmetnog pronalaska) u okviru zdrave medicinske procene. Specifični efikasni nivo doze za bilo koji određeni subjekt (tj. pacijenta) ili organizam će zavisiti od raznih faktora, uključujući poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja; aktivnost specifičnosti aktivnog agensa koji se koristi; upotrebljenu specifičnu kompoziciju; starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i ishranu subjekta; vreme primene, put primene i brzinu izlučivanja određenog aktivnog agensa koji se koristi; trajanje lečenja; i slične faktore dobro poznate u medicinskoj struci.

[0024] Termin "parenteralno", kao što se ovde koristi, uključuje potkožne, intravenozne, intramuskularne, intraartikularne, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intrahepatične, intralezijske i intrakranijalne tehnike injekcije ili infuzije.

[0025] Kao što se ovde koristi, "terapijski efikasna količina" znači količinu supstance (npr. terapijski agens, kompoziciju i/ili formulaciju) koja izaziva željeni biološki odgovor. U nekim izvođenjima, terapijski efikasna količina supstance je dovoljna količina kada se daje kao deo režima doziranja na subjektu koji pati od ili je podložan bolesti, poremećaju i/ili stanju za lečenje, dijagnostikovanje, sprečavanje i/ili odlaganje pojave bolesti, poremećaja i/ili stanja. Kao što će ceniti stručnjaci u ovoj oblasti tehnike, efikasna količina supstance može varirati u zavisnost od faktora kao što su željena biološka krajnja tačka, supstanca koja se isporučuje, ciljana ćelija ili tkivo itd. Na primer, efikasna količina obezbeđenog jedinjenja u formulaciji za lečenje bolesti, poremećaja i/ili stanja je količina koja ublažava, poboljšava, ublažava, inhibira, sprečava, odlaže početak, smanjuje ozbiljnost i/ili smanjuje učestalost-incidenciju jednog ili više simptoma ili karakteristika bolesti, poremećaja i/ili stanja. U nekim izvođenjima, "terapijski efikasna količina" je bar minimalna količina obezbeđenog jedinjenja, ili kompozicije koja sadrži obezbeđeno jedinjenje, što je dovoljno za lečenje jednog ili više simptoma bolesti ili poremećaja posredovanih sa MK2.

[0026] Kao se ovde koriste, termini "tretman", "tretirati" i "lečenje" se odnose na delimično ili potpuno ublažavanje, inhibiranje, odlaganje početka, sprečavanje, ublažavanje i/ili olakšavanje poremećaja ili stanja ili jednog ili više simptoma poremećaja ili stanja, kao što je ovde opisano. U nekim izvođenjima lečenje može biti primenjeno nakon što se razviju jedan ili više simptoma. U nekim izvođenjima, termin "lečenje" uključuje sprečavanje ili zaustavljanje napredovanja bolesti ili poremećaja. U drugim izvođenjima, lečenje može biti primenjeno u odsustvu simptoma. Na primer, lečenje se može primeniti kod osetljive osobe pre pojave simptoma (npr. u svetlu istorije simptoma i/ili u svetlu genetskih ili drugih faktora osetljivosti). Lečenje takođe može biti nastavljeno nakon što simptomi nestanu, na primer da bi se sprečilo ili odložilo njihovo ponavljanje. Prema tome, u nekim izvođenjima, termin "lečenje" uključuje sprečavanje relapsa-vraćanja ili recidiva bolesti ili poremećaja.

[0027] Kao što se ovde koristi, termin "inhibitor" je definisan kao jedinjenje koje veže i/ili inhibira ciljnu proteinsku kinazu, MK2, sa merljivim afinitetom. U određenim izvođenjima, inhibitor ima IC50i/ili konstantu vezivanja manju od oko 50 µM, manju od oko 1 µM, manju od oko 500 nM, manju od oko 100 nM ili manju od oko 10 nM.

[0028] Termini "merljivi afinitet" i "merljiva inhibicija", kao što se ovde koriste, znače merljivu promenu aktivnosti MK2 između uzorka koji sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegovu kompoziciju, i MK2, i ekvivalentnog uzorka koji sadrži MK2, u odsustvu pomenutog jedinjenja ili njegove kompozicije.

[0029] Kao što se ovde koristi, izraz "ireverzibilan" ili "ireverzibilni inhibitor" se odnosi na inhibitor (tj. jedinjenje) koji je u stanju biti kovalentno vezano za kinazu na suštinski nereverzibilan način. To jest, dok je reverzibilni inhibitor sposoban da se veže (ali generalno nije u stanju formirati i kovalentnu vezu sa) za kinazu, pa prema tome se može odvojiti od kinaze, ireverzibilni inhibitor će ostati suštinski vezan za kinazu nakon formiranja kovalentne veze. Ireverzibilni inhibitori obično pokazuju vremensku zavisnost, pri čemu se stepen inhibicije povećava sa vremenom sa kojim je inhibitor u kontaktu sa enzimom. U određenim izvođenjima, ireverzibilni inhibitor će ostati suštinski vezan za kinazu nakon formiranja kovalentne veze i ostatće vezan tokom vremenskog perioda koji je duži od veka trajanja proteina.

[0030] Metode za identifikovanje da li jedinjenje deluje kao ireverzibilni inhibitor su poznate prosečnim stručnjacima u stanju tehnike. Takve metode uključuju, ali nisu ograničene na, enzimsku kinetičku analizu profila inhibicije jedinjenja sa kinazom, upotrebu masene spektrometrije ciljnog proteinskog leka modifikovanog u prisustvu inhibitora jedinjenja, isprekidnu izloženost, takođe poznatu kao "ispiranje", eksperimente i upotrebu označavanja, kao što je radioobeleženi inhibitor, kako bi se pokazala kovalentna modifikacija enzima, kao i druge metode poznate stručnjaku u ovom području tehnike.

[0031] Kao što se ovde koristi, termin "rezistencija na lek" se odnosi na promene u sekvenci nukleinske kiseline divljeg tipa koja kodira ciljni protein i/ili aminokiselinsku sekvencu ciljnog proteina i/ili aminokiselinsku sekvencu drugog proteina, koje promene smanjuju ili ukidaju inhibitorni efekat inhibitora na ciljni protein. Bez želje da se veže za bilo koju određenu teoriju, veruje se da određena jedinjenja predmetnog pronalaska, tj. jedinjenja koja su ireverzibilni inhibitori kinaze, mogu biti efikasni inhibitori oblika proteinskih kinaza otpornih na lekove.

3. Opis primera izvođenja:

[0032] Kao što je ovde opisano, predmetni pronalazak obezbeđuje ireverzibilne inhibitore MK2 kinaze. Bez želje da se veže za bilo koju određenu teoriju, veruje se da jedinjenja pronalaska sadrže ostatak sposoban kovalentnom vezivanju za ključni ostatak cisteina u domeni vezivanja MK2 kinaze. Takav ostatak se ovde odnosi na "reaktivni ostatak". Prosečan stručnjak u ovoj oblasti tehnike shvatiće da MK2 kinaza i njeni mutanti imaju ostatak cisteina u domenu vezivanja. Bez želje da se veže za bilo koju određenu teoriju, veruje se da blizina reaktivnog ostatka, prisutnog na obezbeđenom MK2 inhibitoru, cisteinu od interesa olakšava kovalentnu modifikaciju tog cisteina sa reaktivnim ostatkom.

[0033] Cisteinski ostaci od interesa mogu takođe biti opisani identifikujućim delom aminokiselinske sekvence MK2 kinaze koji uključuje cistein od interesa. Tako, u određenim izvođenjima, -naznačen je Cys140 od MK2 u tom je Cys140 cistein ugrađen u sledeću aminokiselinsku sekvencu MK2:

SEK ID BR.1:

[0034] Za svrhu jasnoće, Cys140 je dat u skraćenoj aminokiselinskoj sekvenci ispod:

SEK ID BR.2:

NLYAGRKCLLIVMEC(140)LDGGELFSRIQDR.

[0035] U obe SEK ID BRI.1 i 2, Cistein 140 je podebljano istaknut.

[0036] U nekim izvođenjima, jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju reaktivni ostatak naznačen time da obezbeđuje jedinjenja koja kovalentno modifikuju Cys140 od MK2.

[0037] U određenim izvođenjima, jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju reaktivni ostatak naznačen time da jedinjenje kovalentno modifikuje metu Cys140 od MK2, čime ireverzibino inhibira kinazu.

[0038]Tako, u nekim izvođenjima, reaktivni ostatak prisutan u obezbeđenom jedinjenju inhibitora MK2 je sposoban kovalentnom vezivanju na cisteinski ostatak, čime ireverzibilno inhibira enzim. U nekim izvođenjima cisteinski ostatak je Cys140 od MK2. Prosečan stručnjak u ovoj oblasti tehnike će prepoznati da su različiti reaktivni ostaci, kao što su ovde definisani, pogodni za takvo kovalentno vezivanje. Takvi reaktivni ostaci uključuju, ali nisu ograničeni na, one opisane ovde i prikazane ispod.

[0039] Prema jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja izabrana od:

ili

ili farmaceutski prihvatljive soli od njih.

[0040] Kao što je opisano iznad i kao što je izloženo u priloženim patentnim zahtevima, pronalazak obezbeđuje specifična jedinjenja (jedinjenja 1-82, 1-96, 1-97, I-100, 1-121, 1-127 i 1-135), i farmaceutski prihvatljive soli od njih. Jedinjenja iz pronalaska su prikazana u Tabeli 1, ispod zajedno sa drugim otkrivenim jedinjenjima.

Tabela 1

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

[0041] U nekim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje pronalaska (jedno od jedinjenja I-82, I-96, I-97, I-100, I-121, I 127 i 1-135), prikazano u Tabeli 1, ili farmaceutski prihvatljivu so od njih.

4. Upotreba, formulacija i primena

Farmaceutski prihvatljive kompozicije

[0042] Prema drugom izvođenju, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedinjenje ovog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač. U određenim izvođenjima, količina jedinjenja u kompozicijama ovog pronalaska je takva da je efikasno merljivo inhibirati MK2 ili njegov mutant u biološkom uzorku ili kod pacijenta. U određenim izvođenjima, kompozicija ovog pronalaska je formulisana za primenu na pacijentu kojem je takva kompozicija potrebna. U nekim izvođenjima, kompozicija ovog pronalaka je formulisana za oralnu primenu na pacijentu.

[0043] Jedinjenja i kompozicije, prema ovde opisanoj metodi, primenjuju se bilo kojom količinom i bilo kojim načinom primene koji je efikasan za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti ovde datog poremećaja (tj. bolesti ili poremećaja posredovanog sa MK2). Tačna potrebna količina će varirati od subjekta do subjekta, u zavisnosti od vrste, starosti i opšteg stanja subjekta, ozbiljnosti infekcije, određenog agensa, načina njegove primene i slično. Jedinjenja pronalaska su poželjno formulisana u obliku jedinične doze radi lakše primene i ujednačenosti doziranja.

[0044] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti primenjivane oralno, parenteralno, inhalacijskim sprejom, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno, intraperitonealno, intracisternalno ili putem implantiranog spremnika. U nekim otkrićima, kompozicije se daju oralno, intraperitonealno ili intravenozno.

[0045] Sterilni oblici za injekcije kompozicija ovog pronalaska mogu biti vodena ili uljana suspenzija. Ove suspenzije mogu biti formulisane prema tehnikama poznatim u struci, korišćenjem pogodnih agenasa za dispergovanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje. Sterilni injekcioni pripravak takođe može biti sterilni injekcioni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji mogu biti upotrebljeni su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksna ulja uobičajeno se koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje.

[0046] U tu svrhu može biti upotrebljeno bilo koje fiksirano ulje, uključujući sintetičke mono- ili di-gliceride. Masne kiseline, kao što je oleinska kiselina i njeni derivati glicerida, su korisne u pripremi injekcija, kao i prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što je maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, posebno u njihovim polioksietiliranim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije mogu takođe sadržavati razblaživač ili disperzant alkohola sa dugim lancem, kao što je karboksimetil celuloza ili slični agensi za dispergovanje koji se obično koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih oblika doziranja, uključujući emulzije i suspenzije. I drugi uobičajeno korišćeni surfaktantii, kao što su tzv. "Tweens", "Spans" i drugi agensi za emulgovanje ili pojačivači bioraspoloživosti se obično koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih ili drugih oblika doziranja.

[0047] Formulacije za injekcije mogu biti sterilisane, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije ili ugradnjom agenasa za sterilizaciju u obliku sterilnih čvrstih kompozicija koje mogu biti rastvorene ili dispergovane u sterilnom vodenom ili drugom sterilnom medijumu za injekcije pre upotrebe.

[0048] Da bi se produžio efekat jedinjenja iz predmetnog pronalaska, često je poželjno usporiti apsorpciju jedinjenja iz potkožne ili intramuskularne injekcije. Ovo se može postići upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala sa slabom rastvorljivošću u vodi. Brzina apsorpcije jedinjenja tada zavisi od njegove brzine rastvaranja koja, pak, može zavisiti od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija oblika parenteralno primenjenog jedinjenja se postiže rastvaranjem ili suspendovanjem jedinjenja u uljanom nosaču. Depoi forme za injekcije su napravljeni formiranjem matrica mikrokapsula jedinjenja u biorazgradivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. U zavisnosti od odnosa jedinjenja prema polimeru i prirode određenog polimera koji se koristi, brzina oslobađanja jedinjenja može biti konrrolisana. Primeri drugih biorazgradivih polimera uključuju poli (ortoestre) i poli (anhidride). Formulacije za depo za injekcije takođe se pripremaju stavljanjem jedinjenja u lipozome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivima.

[0049] U nekim izvođenjima, date farmaceutski prihvatljive kompozicije su formulisane za oralnu primenu. Takve formulacije se mogu davati sa hranom ili bez nje. U nekim otkrićima, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska se daju bez hrane. U drugim otkrićima, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska se daju sa hranom. Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu biti primenjene oralno u bilo kojem oralnom prihvatljivom obliku doziranja, uključujući, ali bez ograničenja, kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se često koriste uključuju laktozu i kukuruzni skrob. Tipično se dodaju i maziva, kao što je magnezijum stearat. Za oralnu primenu u obliku kapsule korisni razblaživači uključuju laktozu i osušeni kukuruzni skrob. Kada su vodene suspenzije potrebne za oralnu upotrebu, aktivni sastojak je kombinovan sa agensima za emulgovanje i suspendovanje. Po želji, mogu se dodati određeni zaslađivači, arome ili bojila.

[0050] Čvrsti oblici doziranja za oralnu primenu uključuju kapsule, tablete, pilule, praškove i granule. U takvim čvrstim oblicima doziranja, aktivno jedinjenje je mešano sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom ili nosačem kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili a) punila ili punila kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol i silicijumova kiselina, b) veziva kao što su, na primjer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinilpirolidinon, saharoza, i akacija, c) ovlaživači kao što je glicerol, d) agensi za dezintegraciju kao što su agar-agar, kalcijum karbonat, skrob krompira ili tapioke, alginska kiselina, određeni silikati i natrijum karbonat, e) agensi za usporavanje rastvora kao što je parafin, f) ubrzivači apsorpcije kao što su kvaternarna amonijum jedinjenja, g) agensi za vlaženje kao što su, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) apsorbenti kao što su kaolin i bentonitna glina i/ili i) maziva kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat i smeše od njih. U slučaju kapsula, tableta i pilula, oblik doziranja može takođe sadržavati puferske agense.

[0051] Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe biti upotrebljene kao punila u mekim i tvrdo napunjenim želatinskim kapsulama, koristeći takve ekscipijense kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli velike molekulske težine i slično. Čvrsti oblici doziranja tableta, dražeja, kapsula, pilula i granula mogu biti pripremljeni sa prevlakama i ljuskama kao što su enteričke prevlake i druge prevlake dobro poznate u farmaceutskoj formulaciji. Oni mogu opciono sadržavati agense za zamućivanje, i takođe mogu biti od kompozicije koja oslobađa aktivni sastojak (e) samo, ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, opciono, na odložen način. Primeri kompozicija za ugrađivanje koje mogu biti korišćene uključuju polimerne supstance i voskove. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe biti upotrebljene kao punila u mekim i tvrdo napunjenim želatinskim kapsulama, koristeći takve ekscipijense kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli velike molekulske težine i slično.

[0052] Aktivna jedinjenja takođe mogu biti u mikrokapsuliranom obliku sa jednim ili više ekscipijenasa kao što je pomenuto iznad. Čvrsti oblici doziranja tableta, dražeja, kapsula, pilula i granula mogu biti pripremljeni sa prevlakama i ljuskama kao što su enteričke prevlake, prevlake koje kontrolišu oslobađanje i druge prevlake dobro poznate u farmaceutskoj formulaciji. U takvim čvrstim oblicima doziranja aktivno jedinjenje može biti pomešano sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što je saharoza, laktoza ili skrob. Takvi oblici doziranja mogu takođe sadržavati, kao što je uobičajena praksa, dodatne supstance osim inertnih razblaživača, npr. maziva za tabletiranje i druga pomoćna sredstva za tabletiranje, kao što je magnezijum stearat i mikrokristalna celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, oblici doziranja takođe mogu sadržavati puferske agense. Oni mogu opciono sadržavati agense za zamućivanje, a mogu biti i kompozicija koja oslobađa aktivni sastojak (e) samo, ili poželjno, u određenom delu crevnog trakta, opciono, na odložen način. Primeri kompozicija za ugrađivanje koji mogu biti korišćeni uključuju polimerne supstance i voskove.

[0053] Tečni oblici doziranja za oralnu primenu uključuju, ali nisu ograničeni na, farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnih jedinjenja, tečni oblici doziranja mogu sadržavati inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u tehnici, kao što su, na primer, voda ili drugi rastvarači, agensi zarastvaranje i emulgatori kao što je etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (naročito ulja semenki pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, maslina, ricinusa i susama), glicerol, tetrahidrofurfuril alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina od sorbitana i smeše od njih. Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije mogu takođe uključiti adjuvanse kao što su agensi za vlaženje, agensi za emulgovanje i suspendovanje, zaslađivači, arome i mirisi.

[0054] Alternativno, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu biti primenjene u obliku supozitorija za rektalnu primenu. Oni mogu biti pripremljeni mešanjem agensa sa pogodnim ne-iritirajućim ekscipijensom koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečni na rektalnoj temperaturi i zato će se rastopiti u rektumu da se oslobodi lek. Takvi materijali uključuju kakao puter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[0055] Kompozicije za rektalnu ili vaginalnu primenu su poželjno čepići koji mogu biti pripremljeni mešanjem jedinjenja prema ovom pronalasku sa pogodnim ne-iritirajućim ekscipijensima ili nosačima kao što su kakao puter, polietilen glikol ili vosak za supozitorije koji su čvrsti na sobnoj temperaturi, i tečni na telesnoj temperaturi i zato se tope u rektumu ili vagini i oslobađaju aktivno jedinjenje.

[0056] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska takođe mogu biti primenjene topikalno, naročito kada cilj lečenja uključuje područje ili organe koji su lako dostupni lokalnom primenom, uključujući bolesti oka, kože ili donji intestinalni trakt. Pogodne topikalne formulacije lako se pripremaju za svako od ovih područja ili organa.

[0057] Lokalna primena za donji intestinalni trakt može se izvršiti u formulaciji rektalnih čepića (videti iznad) ili u pogodnoj formulaciji klistira. Takođe mogu biti korišćeni topikalni transdermalni flasteri.

[0058] Za topikalnu primenu, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane u pogodnoj masti koja sadrži aktivnu komponentu suspendovanu ili rastvorenu u jednom ili više nosača. Nosači za topikanu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, propilen glikol, polioksietilen, polioksipropilensko jedinjenje, emulgirajući vosak i vodu. Alternativno, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane u pogodnom losionu ili kremi koji sadrže aktivne komponente suspendovane ili rastvorene u jednom ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Pogodni nosači uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, vosak cetil estara, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu.

[0059] Za oftalmološku upotrebu, obezbeđene farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu biti formulisane kao mikronizovane suspenzije u izotoničnom, pH podešenom sterilnom fiziološkom rastvoru ili, poželjno, kao reastvori u izotoničnom pH podešenom fiziološkom rastvoru, bilo sa ili bez konzervansa kao što je benzilalkonijum hlorid. Alternativno, za oftalmološke svrhe, farmaceutski prihvatljive kompozicijee mogu biti formulisane u masti kao što je vazelin.

[0060] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu takođe biti primenjene nazalnim aerosolom ili inhalacijom. Takve kompozicije su pripremljene prema tehnikama dobro poznatim u području farmaceutske formulacije i mogu biti pripremljene kao rastvori u fiziološkom rastvoru, koristeći benzil alkohol ili druge pogodne konzervanse, promotere apsorpcije za poboljšanje bioraspoloživosti, fluorougljovodonike i/ili druge uobičajene agense za rastvaranje ili dispergovanje.

[0061] Oblici doziranja za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju masti, paste, kreme, losione, gelove, praškove, rastvore, sprejeve, inhalante ili flastere. Aktivna komponenta je pomešana u sterilnim rastvorima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i bilo kojim potrebnim konzervansima ili puferima prema potrebi. Oftalmološka formulacija, kapi za uši i kapi za oči takođe se razmatraju kao deo obima ovog pronalaska. Pored toga, predmetni pronalazak razmatra upotrebu transdermalnih flastera, koji imaju dodatnu prednost u pružanju kontrolisane isporuke jedinjenja u telo. Takvi oblici doziranja mogu biti napravljeni rastvaranjem ili doziranjem jedinjenja u odgovarajući medijum. Pojačivači apsorpcije takođe mogu biti korišćeni za povećanje protoka jedinjenja kroz kožu. Brzina može biti kontrolisana bilo obezbeđivanjem membrane za kontrolu brzine ili dispergovanjem jedinjenja u polimernom matriksu ili gelu.

Upotreba jedinjenja i farmaceutski prihvatljivih kompozicija

[0062] Ovde opisana jedinjenja i kompozicije su generalno korisne za inhibiciju aktivnosti kinaze jednog ili više enzima. Primeri kinaza koje su inhibirane ovde opisanim jedinjenjima i kompozicijama protiv kojih su ovde opisane metode korisne uključuju MK2 ili njegov mutant.

[0063] Aktivnost jedinjenja koja se koriste u ovom pronalasku kao inhibitor MK2 kinaze ili njenog mutanta, može biti ispitana in vitro, in vivo ili u ćelijskoj liniji. In vitro testovi uključuju testove koji određuju inhibiciju aktivnosti fosforilacije i/ili naknadnih funkcionalnih posledica, ili aktivnosti ATPaze aktivirane MK2 kinaze ili mutanta od njih. Alternativni testovi in vitro određuju sposobnost ispitivanog jedinjenja da se veže na MK2. Vezivanje inhibitora može biti izmereno radioaktivnim obeležavanjem testnog jedinjenja pre vezivanja, izolovanjem testnog jedinjenja/MK2 kompleksa i određivanjem količine radioaktivno obeležene veze. Alternativno, vezivanje inhibitora može biti određeno sprovođenjem takmičarskog eksperimenta gde se ispitivana-test jedinjenja inkubiraju sa MK2 kinazom vezanom za poznate radioligande. Detaljni uslovi za ispitivanje jedinjenja koji se koristi u ovom pronalasku kao inhibitor MK2, ili njegov mutant, su navedeni u primerima ispod.

[0064] Prema jednom otkriću, opisana je metoda inhibicije aktivnosti proteinske kinaze u biološkom uzorku obuhvatajući korak dovođenja u kontakt navedenog biološkog uzorka sa jedinjenjem ovog pronalaska ili kompozicijom koja sadrži navedeno jedinjenje.

[0065] Prema drugom otkriću, opisana je metoda inhibiranja MK2 kinaze ili njenog mutanta, aktivnosti u biološkom uzorku obuhvatajući korak dovođenja u kontakt navedenog biološkog uzorka sa jedinjenjem ovog pronalaska ili kompozicijom koja sadrži navedeno jedinjenje. U određenim otkrićima opisan je metod ireverzibilne inhibicije MK2 kinaze ili njenog amutanta, aktivnost u biološkom uzorku obuhvatajući korak dovođenja u kontakt navedenog biološkog uzorka sa jedinjenjem ovog pronalaska ili kompozicijom koja sadrži navedeno jedinjenje.

[0066] Prema drugom otkriću, opisana je metoda inhibiranja MK2 kinaze ili njenog mutanta, aktivnost kod pacijenta obuhvatajući korak primenjivanja na pomenutom pacijentu jedinjenja predmetnog pronalaska ili kompozicije sadržavajući navedeno jedinjenje. Prema određenim otkrićima, opisana je metoda ireverzibinog inhibiranja MK2 kinaze ili njenog mutanta, aktivnost kod pacijenta obuhvatajući korak primenjivanja na pomenutom pacijentu jedinjenja predmetnog pronalaska ili kompozicije koja sadrži navedeno jedinjenje. U drugim otkrićima opisana je metoda za lečenje bolesti ili poremećaja posredovanih MK2 kod pacijenta kojem je to potrebno, obuhvatajući korak primenjivanja na pomenutom pacijentu jedinjenja prema predmetnom pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive kompozicije. Takvi poremećaji su ovde detaljno opisani.

MK2 Kinaze

[0067] Proteinska kinaza 2 ("MK2") aktivirana MAP kinazom je enzim koji je kod ljudi kodiran sa genom MAPKAPK2. Ovaj gen kodira član familije Ser/Thr proteinske kinaze. Ova kinaza je regulisana direktnom fosforilacijom sa p38 MAP kinazom. U konjunkciji sa p38 MAP kinazom, poznato je da je ova kinaza uključena u mnoge ćelijske procese, uključujući stres i inflamatorne odgovore, nuklearni izvoz, regulaciju ekspresije gena i ćelijsku proliferaciju. Pokazalo se da je protein toplotnog šoka HSP27 jedan od supstrata ove kinaze in vivo. Za ovaj su gen pronađene dve varijante transkripta koje kodiraju dve različite izoforme.

[0068] MK2 je protein sa više domena koji se sastoji od N-terminalnog domena bogatog prolinom, katalitičkog domena, autoinhibitornog domena i na C-terminusu nuklearnog izvoznog signala (NES) i nuklearnog lokalizacionog signala (NLS). Okarakterisana su dva izoforma humanog MK2. Jedan izoform se sastoji od 400 aminokiselina, i drugi izoform od 370 ostataka za koji se smatra da je varijanta spajanja koja nedostaje C-terminalnom NLS. MK2 se nalazi u jezgru ćelije i nakon vezivanja i fosforilacije sa p38, MK2 NES postaje funkcionalan i obe kinaze su ko-transportovane iz nukleusa u citoplazmu. Zanimljivo je da za transport kompleksa MK2/p38 nije potreban katalitički aktivan MK2, jer se mutant aktivnog mesta, Asp207Ala, još uvek transportuje u citoplazmu. Smatra se da fosforilacija humanog MK2 sa p38 na ostacima T222, S272 i T334 aktivira enzim indukujući konformacionu promenu autoinhibitornog domena, izlažući na taj način aktivno mesto za vezivanje supstrata. Mutacije dva autoinhibitorna ostatka domena W332A i K326E u mišjem MK2 pokazuju povećanje bazalne aktivnosti i deleciju C-terminalnog autoinhibitornog domena čine enzim konstitutivno aktivnim, obezbeđujući dodatne dokaze o ulozi ovog domena u inhibiciji aktivnosti MK2.

[0069] Bolesti ili poremećaji povezani sa MK2 koji se leče sa jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju autoimune poremećaje, hronične inflamatorne poremećaje, akutne inflamatorne poremećaje, auto- inflamatorne poremećaje, fibrozne poremećaje, metaboličke poremećaje, neoplazije ili kardiovaskularne ili cerebrovaskularne poremećaje. Tako, u nekim otkrićima je opisan metod za lečenje bolesti ili poremećaja posredovanih MK2 kod pacijenta kojem je to potrebno, pri čemu navedeni metod obuhvata primenjivanje na navedenom pacijentu terapijski efikasne količine obezbeđenog jedinjenja, ili njegove kompozicije. Takve bolesti ili poremećaji posredovani MK2 uključuju, ali nisu ograničeni na one opisane ovde.

[0070] U nekim otkrićima, bolest ili poremećaj posredovan MK2 je autoimuni poremećaj, hronični i/ili akutni inflamatorni poremećaj, i/ili auto-inflamatorni poremećaj. Primer autoimunih i/ili inflamatornih i/ili auto-inflamatornih poremećaja uključuje: inflamatorne bolesti creva (na primer, ulcerozni kolitis ili Kronovu bolest), multiplu sklerozu, psorijazu, artritis, reumatoidni artritis, osteoartritis, juvenilni artritis, psorijatični artritis, reaktivni artritis, ankilozirajući spondilitis, periodične sindrome povezane sa kriopirinom, tzv."Muckle-Wells" sindrom, familijarni hladni auto-inflamatorni sindrom, multisistemsku inflamatornu bolest sa neonatalnim početkom, periodične sindrome povezane sa TNF receptorom, akutni i hronični pankreatitis, aterosklerozu, giht, akilozirajući spondilitis, fibrozne poremećaje (na primer, fibrozu jetre ili idiopatsku pulmonalnu fibrozu), nefropatiju, sarkoidozu, sklerodermu, anafilaksu, dijabetes (na primer, dijabetes melitus tip 1 ili dijabetes melitus tip 2), dijabetesnu retinopatiju, Stilovu bolest, vaskulitis, sarkoidozu, pulmonalnu inflamaciju, akutni respiratorni distres sindrom, vlažnu i suvu makularnu degeneraciju povezanu sa godinama, autoimune hemolitičke sindrome, autoimuni i inflamatorni hepatitis, autoimunu neuropatiju, autoimuno otkazivanje jajnika, autoumuno zapaljenje testisa, autoimunu trombocitopeniju, autoimunu bolest povezanu sa silikonskim implantom, Sjogrenov sindrom, familijarnu mediteransku groznicu, sistemski eritemski lupus, sindrome vaskulitisa (na primer, temporalni, Takaiasuov i arteritis gigantskih ćelija, Behčetovu bolest ili Vegenerovu granulomatozu), vitiligo, sekundarnu hematološku manifestaciju autoimunih bolesti (na primer, anemije), autoimunost izazvanu lekom, Hašimotov tireoiditis, hipofizitis, idiopatsku trombocitnu pupuru, autoimunost izazvanu metalom, miasteniju gravis, pemfigus, autoimunu gluvoću (na primer, Menijerovu bolest), tzv. "Goodpasture’s" sindrom, Gravesovu bolest, autoimune sindrome povezane sa HW, Gijen Bareovu bolest, Adisonovu bolest, anti-fosfolipidni sindrom, astmu, atopijski dermatitis, celijakiju, Kušingov sindrom, dermatomiozitis, idiopatsku nadbubrežnu atrofiju, idiopatsku trombocitopeniju, Kavasakijev sindrom, Lambert-Eatonov sindrom, pernicioznu anemiju, polinozu, poliarteritis nodozu, primarnu bilijarnu cirozu, primarni sklerozirajući holangitis, Rejnov, Reiterov sindrom, recidivni polihondritis, tzv. "Schmidt’s sindrom", tirotoksidozu, sepsu, septički šok, endotoksični šok, toksični šok izazvan egzotoksinom, gram negativnu sepsu, sindrom toksičnog šoka, glomerulonefritis, peritonitis, intersticijski cistitis, inflamacije izazvane hiperoksijom, hroničnu opstruktivnu bolest pluća (COPD), vaskulitis, reakciju graft vs. host (na primer, bolest domaćina protiv transplantata), odbacivanje alografta (na primer, akutno odbacivanje alografta ili hronično odbacivanje alografta), rano odbacivanje transplantacije (na primer, akutno odbacivanje alografta), reperfuzionu povredu, bol (na primer, akutni bol, hronični bol, neuropatski bol ili fibromialgiju), hronične infekcije, meningitis, encefalitis, miokarditis, gingivitis, posthiruršku traumu, povredu tkiva, traumatsku povredu mozga, enterokolitis, sinuzitis, uveitis, očnu inflamaciju, optički neuritis, čir na želucu, ezofagitis, peritonitis, pariodontitis, dermatomiozitis, gastritis, miozitis, polimialgiju, upalu pluća i bronhitis.

[0071] U nekim otkrićima, bolest ili poremećaj posredovan sa MK2 je fibrozni poremećaj. Primeri fibroznih poremećaja uključuju sistemsku sklerozu/sklerodermiju, lupusni nefritis, bolest vezivnog tkiva, zaceljivanje rana, hirurške ožiljke, povrede kičmene moždine, ožiljke na CNS-u, akutnu povredu pluća, plućnu fibrozu (na primer, idiopatska plućnu fibrozu ili cističnu fibrozu), hroničnu opstruktivnu bolest pluća, sindrom respiratornog distresa odraslih, akutnu povredu pluća, povredu pluća izazvanu drogom, glomerulonefritis, hroničnu bolest bubrega (na primer, dijabetičku nefropatiju), nefropatiju izazvanu hipertenzijom, probavnu stazu ili gastrointestinalnu fibrozu, bubrežnu fibrozu, hepatičnu ili bilijarnu fibrozu, fibrozu jetre (na primer, bezalkoholni steatohepatitis, hepatitis C ili hepatocelularni karcinom), cirozu (na primer, primarnu bilijarnu cirozu ili cirozu zbog masne jetre) bolest (na primer, alkoholnu i bezalkoholnu steatozu)), zračenjem indukovanu fibrozu (na primer, glave i vrata, gastrointestinalnu ili plućnu), primarni sklerozirajući holangitis, restenozu, srčanu fibrozu (na primer, endomiokardijalnu fibrozu ili atrijsku fibrozu), oftalmološke ožiljke, fibrosklerozu, fibrotične karcinome, fibroide, fibrom, fibroadenome, fibrosarkome, transplantacijsku arteriopatiju, keloid, mediastinalnu fibrozu, mijelofibrozu, retroperitonealnu fibrozu, progresivnu masivnu fibrozu i nefrogenu sistemsku fibrozu.

[0072] U nekim otkrićima, bolest ili poremećaj posredovan sa MK2 je metabolički poremećaj. Primeri metaboličkih poremećaja uključuju gojaznost, otpornost na steroide, netoleranciju na glukozu i metabolički sindrom.

[0073] U nekim otkrićima, bolest ili poremećaj posredovan sa MK2 je neoplazija. Primeri neoplazije uključuju karcinome. U nekim izvođenjima primeri neoplazije uključuju poremećaje angiogeneze, multipli mijelom, leukemije (na primer, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu i hroničnu mijelogenu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju ili promijelocitnu leukemiju), limfome (na primer, B-ćelijski limfom, T-ćelijski limfom, limfom plaštnih ćelija, limfom ćelija kose, Burkitov limfom, tumore mastocita, Hodžkinovu bolest ili ne-Hodžkinovu bolest), mijelodisplastični sindrom, fibrosarkom, rabdomiosarkom; astrocitom, neuroblastom, gliom i švanom; melanom, seminom, teratokarcinom, osteosarkom, kserodermu pigmentozum, keratoakantom, folikularni karcinom štitne žlezde, Kapošijev sarkom, melanom, teratom, rabdomiosarkom, metastatske i koštane poremećaje, kao i karcinom kostiju, usta/ždrela, ezofagusa, larinksa, stomaka, creva, rektuma, pluća (na primer, nemaloćeljski karcinom pluća ili karcinom pluća malih ćelija), jetre, pankreasa, nerva, mozga (na primer, gliom ili multiformni glioblastom), glave i vrata, grla, jajnika, materice, prostate, testisa, bešike, bubrega, dojke, žučne kese, grlića materice, tireoidee, prostate i kože.

[0074] U nekim otkrićima, MK2 posredovani poremećaj je kardiovaskularni ili cerebrovaskularni poremećaj. Primeri kardiovaskularnih poremećaja uključuju aterosklerozu, restenozu aterosklerotske koronarne arterije, akutni koronarni sindrom, infarkt miokarda, vaskulopatiju srčanog alografta i moždani udar. Primeri cerebrovaskularnih bolesti uključuju poremećaje centralnog nervnog sistema sa inflamatornom ili apoptotskom komponentom, Alchajmerovu bolest, Parkinsonovu bolest, Hantingtonovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, povredu kičmene moždine, neuronsku ishemiju i perifernu neuropatiju.

OBRAZLOŽENJE

[0075] Kao što je prikazano u primerima ispod, u određenim primerima izvođenja, jedinjenja su pripremljena prema sledećim opštim postupcima. Podrazumeva se da, iako opšte metode prikazuju sintezu određenih jedinjenja predmetnog pronalaska, sledeće opšte metode i druge metode poznate prosečnom stručnjaku u ovom području tehnike mogu se primeniti na sva jedinjenja i podklase i vrste svakog od ovih jedinjenja, kao što je ovde opisano.

[0076] Obim pronalaska je definisan u priloženim patentnim zahtevima. Bilo koji od sledećih primera koji ne spadaju u obim priloženih patentnih zahteva je opisan za svrhu reference.

[0077] Enantio-obogaćena jedinjenja pronalaska su pripremljena u enantio-obogaćenom obliku korišćenjem hiralnih polaznih materijala ili su odvojeni nakon reakcije sa racemskim polaznim materijalom, upotrebom hiralne hromatografije. Za jedinjenja pripremljena kao racemske ili dijastereomerne smeše, pojedinačni izomeri mogu biti pripremljeni u optički čistom obliku bilo upotrebom hiralnih polaznih materijala ili hiralnom hromatografijom.

[0078] U ilustrativnim primerima koji slede, reakcije su izvedene na sobnoj ili abijentnoj temperaturi, u rasponu od 18-25°C, ako nije drugačije navedeno. Organski rastvori su osušeni preko anhidrovanog magnezijum sulfata ili natrijum sulfata, i evaporacija rastvarača je izvedena upotrebom rotacionog isparivača pod smanjenim pritiskom. Generalno, tokovi reakcije su praćeni sa TLC ili LCMS i reakcijska vremena su reprezentativna. Prinosi su dati samo radi ilustracije i nisu nužno oni koji se mogu dobiti marljivim razvojem procesa.

[0079] Mikrotalasne reakcije su izvedene u reakcijskom mikrotalasnom sitemu tzv." Biotage Explorer". Podaci<1>H NMR u delta vrednostima za glavne dijagnostičke protone, su dati u delovima na milion (ppm) u odnosu na tetrametilsilan (TMS) ili rezidualni rastvarač.<1>H NMR spektri su određeni na 400 MHz. Odnosi rastvarača su dati u terminima zapremine: zapremina (v/v). Podatak masenog spektra (MS) je generisan na LCMS sistemu gde se HPLC komponenta uglavnom sastojala od Agilenta ili tzv. "Shimadzu LCMS-2020 instrumenta" i pokrenut je na koloni tzv. "Sepax BR-C18 " (4.6 x 50 mm, 3 µm) ili slično, eluirajući sa kiselim eluensom (na primer, koristeći gradijent između 0-95% vode/acetonitrila sa 0.1% mravlje kiseline ili trifluorosirćetne kiseline). Hromatogrami su bili u elektrospreju (ESI) pozitivnom, negativnom i/ ili UV zračenju. LCMS vrednosti za m/z su obezbeđene u celini i generalno se prikazuju samo joni koji ukazuju na matičnu masu. Ako nije drugačije naznačeno, navedena vrednost je (M+H) ili (M+1) za mod pozitivnog jona. Preparativna HPLC je izvedena na silicijum dioksidu reverzne faze C18, koristeći sve manje polarne smeše kao eluens, na primer sve manje polarne smeše vode i acetonitrila koje sadrže 1% trifluorosirćetne kiseline.

[0080] Enantio-obogaćeni intermedijeri i konačna jedinjenja su sintetizovana korišćenjem komercijalno dostupnih hiralnih materijala i njihova stereohemija, kako je zabeleženo, je apsolutna. Ako nije drugačije naznačeno, polazni materijali su bili komercijalno dostupni ili sintetizovani prema poznatim metodama.

Tabela skraćenica

[0081] Složeni brojevi korišćeni u primerima ispod odgovaraju složenim brojevima prikazanim u Tabeli 1, iznad.

Sinteza uobičajenih intermedijera

[0082]

S1-Korak 1: Sinteza 6-aminohinolin-5-karbonitrila (S1-2)

[0083] U rastvor 6-nitrohinolina (100 g, 0.57 mola) u dimetilformamidu (1 L) su dodati kalijum hidroksid (96.4 g, 1.7 mol) i etil cijanoacetat (183.3 mL, 1.7 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 48 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. U dobijeni ostatak, je dodata 30% HCl (1.0 L) i mešan na 100°C tokom 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C i bazifikovana sa 2N rastvorom natrijum hidroksida (800 g) i formirana je čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana vodom. Zatim je rastvorena u 20 zapremina etil acetata i zagrevana do 60°C i tretirana sa ugljenom (20.0 g) tokom 1 sata. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijena žuta čvrsta supstanca je osušena da se dobije jedinjenje iz naslova S1-2 (55.0g, 56%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.84 (br s, 2H), 7.26 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.51 (dd, J =4.2 Hz, 8.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 4.2 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 170.1.

S1-Korak 2: Sinteza 6-aminohinolin-5-karbonitrila (S1-3)

[0084] U rastvor 6-aminohinolin-5-karbonitrila (S1-2) (55.0 g, 325 mmol) u acetonitrilu (1.3 L) dodat je tert-butil nitrit (102 mL, 858.5 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata. Zatim je dodat bakar (II) bromid (115 g, 520 mmol) na 0°C i mešan i zatim zagrevan do 60°C tokom 12 sati. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i dodata je voda (2.5 L). Ova smeša je ekstrahovana sa 2% hloroformom u metanolu (2.5 L). Organski sloj se osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Čvrsta supstanca koja je formirana tokom koncentrovanja je filtrirana i osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-3 (45.0g, 62%) kao braon čvrsto ulje.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.85 (dd, J = 4.2 Hz, 8.5 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 3.6 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 233.2.

S1 - Korak 3: Sinteza metil 1-aminotieno [3,2-f] hinolin-2-karboksilata (S1-4)

[0085] U rastvor 6-bromohinolin-5-karbonitrila (S1-3) (45.0 g, 193 mmol) u metanolu (500 mL) je dodat natrijum metoksid (20.8 g, 386 mmol), i zatim metil tioglikolat (30.7 g, 289.6 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana je na 90°C tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen vodom i mešan tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, nakon čega je formirana čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-4 (40 g, 80%) kao čvrsta supstanca žute boje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.84 (s, 3H), 7.09 (br s, 2H), 7.68 (dd, J = 4.2 Hz, 8.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 9.12 (d, J = 8.5 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 259.0

S1-Korak 4: Sinteza Metil 1-bromotieno [3, 2-f] hinolin-2-karboksilata (S1-5)

[0086] U rastvor metil 1-aminotieno [3,2-f] hinolin-2-karboksilata (S1-4) (40 g, 154.8 mmol) u acetonitrilu (1000 mL), tertbutil nitrit (27.6 mL, 232 mmol) je dodat u kapima na 0°C i mešan 1 sat na 0°C. U dobijenu smešu, je dodat bakar (II) bromid (41.5 g, 185.8 mmol) u obrocima na 0°C i mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa vodom (3.0 L) i ekstrahovana sa 2% metanolom u hloroformu (3.0 L). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom dajući jedinjenje iz naslova S1-5 (20 g, 40%) kao bledo žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.93 (s, 3H), 7.77 (dd, J = 4.2 Hz, 8.7 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 9. 0 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 9.02 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 10.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 323.9.

S1-Korak 5: Sinteza Metil 1-[[(2R)-2-(tert-butoksikarbonilamino)propil] amino]tieno[3,2-f]hinolin-2-karboksilata (S1-6)

[0087] U rastvor metil 1-bromtieno [3,2-f] hinolin-2-karboksilata (S1-5) (14 g, 43.4 mmol) u toluenu (140 mL), cezijum karbonat (28.3 g, 86.9 mmol) i ( R)-tert-butil 1-aminopropan-2-ilkarbamat (11.3 g, 65.0 mmol, pripremljeni kao što je opisano u Šemi 2, ispod) su dodati na sobnoj temperaturi i degazirani tokom 15 minuta. U dobijenu smešu su dodati BINAP (2.7 g, 4.3 mmol) i Pd2(dba)3(3.9 g, 4.3 mmol) na sobnoj temperaturi i ponovo degazairani tokom 10 minuta. Dobijena reakciona smeša je mešana na 110°C tokom 16 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i isprana sa etil-acetatom i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-6 (12g, 66%) u obliku beličaste čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 1.01 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.34 (s, 9H), 3.12 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 6.55 (t, J=7.0 Hz, 1H), 6.71 (br s, 1H), 7.70 (dd, J= 4.2 Hz, 8.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.94 (d, J=3.9 Hz, 1H), 9.04 (d, J=8.3 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 416.1.

S1-Korak 6: Sinteza metil 1-[[(2R)-2-aminopropil]amino]tieno[3,2-f]hinolin-2-karboksilat trifluoroacetata (S1-7)

[0088] U rastvor metil 1-[[(2R)-2-(tert-butoksikarbonilamino)propil]amino] tieno[3,2-f]hinolin-2-karboksilata (S1-6) (11g, 26.0 mmol) u dihlorometanu (120 mL), dodata je trifluorosirćetna kiselina (24.0 g, 211.8 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 2 sata. Po završetku reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, kodestilovana sa dihlorometanom (3 x 20 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-7 (9.0 g, sirovo) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.26 (d, J=6.2 Hz, 3H), 3.16-3.19 (m, 1H), 3.36-3.49 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 6.39 (br s, 1H), 7.76 (dd, J=4.2 Hz, 8.5 Hz, 1H), 7.86 (br s, 2H), 8.09 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.27 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.99 (d, J=4.2 Hz, 1H), 9.10 (d, J=8.5 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 316.1.

S1-Korak 7: Sinteza (14R)-14-Metil-20-tia-16,17,18-triazatetraciklooktadeka-2(6),3(8),4,9(16),10,12-heksaen-15-on (S1-8)

[0089] U rastvor trifluoroacetatne soli od metil 1-[[(2R)-2-aminopropil]amino]tieno[3,2-f]hinolin-2-karboksilata (S1-7) (9.0 g, 28.5 mmol) u metanolu (640 mL), natrijum metoksid (7.7 g, 142.7 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 12 h. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa vodom i mešan tokom 15 minuta, a za to vreme je formirana čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-8 (4.5 g, 55%) kao zelena čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J=6.7 Hz, 3H), 3.46 (d, J=2.4Hz, 2H), 3.59-3.61 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.64 (dd, J= 4.2 Hz, 8.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.00 (br s, 1H), 8.09 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.89 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 9.15 (d, J=8.5 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 284.1.

S1-Korak 8: Sinteza di-tert-butil (20R)-20-metil-21-okso-34-tia-26,27,28-triazatetraciklooktadeka-8(12),9(14),10,15(26),16,18-heksaen-27,28-dikarboksilata (S1-9)

[0090] U rastvor (14R)-14-metil-20-tia-16,17,18-triazatetraciklooktadeka-2(6),3(8),4,9(16),10,12-heksaen-15-on (S1-8) (4.5 g, 15.9 mmol) u dihlorometanu (100 mL), 4-dimetilaminopiridin (0.5g, 4.0 mmol) i trietilamin (5.5 mL, 39.7 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana tokom 10 minuta, zatim je na sobnoj temperaturi dodat di-tertbutildikarbonat (15.5 mL, 67.5 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa dihlormetanom i isprana sa vodom. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S1-9 (6.8 g, 88%) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 484.2.

S1-Korak 9: Sinteza di-tert-butil (20R)-20-metil-26-oksido-21-okso-35-tia-27,28-diaza-26-azoniatetraciklookta deka-8(12),9(14),10,15(26),16,18-heksaen-27,28-dikarboksilat (S1-10)

[0091] U rastvor di-tert-butil (20R)-20-metil-21-okso-34-tia-26,27,28-triazatetraciklooktadeka-8(12),9(14),10,15(26),16,18-heksaen-27,28 dikarboksilata (S1-9) (6.8 g, 14.0 mmol) u dihlorometanu (200 mL), m- hloroperoksibenzojeva kiselina (3.6 g, 21.0 mmol) je dodata u porcijama na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 3 sata. Po završetku reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Sloj dihlorometana je ispran sa rastvorom natrijum bikarbonata, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je trituriran sa dietil etrom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-10 (6.5 g, 92%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 500.1.

S1-Korak 10: Sinteza di-tert-butil (20R)-16-hloro-20-metil-21-okso-34-tia-26,27,28-triazatetraciklooktadeka-8(13),9,11(16),14(26),15(17),18-heksaen-27,28-dikarboksilat (S1-11)

[0092] U rastvor di-tert-butil (20R)-20-metil-26-oksido-21-okso-35-tia-27,28-diaza-26-azoniatetraciklooktadeka-8(12),9(14),10,15(26),16,18-heksaen-27,28-dikarboksilata (S1-10) (4.0 g, 8.0 mmol) u dimetilformamidu (100 mL), oksalil hlorid (1.03 mL, 12.0 mmol) je dodat u kapima na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa vodom i mešan tokom 5 minuta za koje vreme se stvorila čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana sa petroleum etrom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-11 (3.9 g, 93%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 518.1.

S1-Korak 11: Sinteza (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12)

[0093] U rastvor di-tert-butil (20R)-16-hloro-20-metil-21-okso-34-tia-26,27,28-triazatetraciklooktadeka-8(13), 9,11(16), 14 (26), 15(17), 18-heksaen-27,28-dikarboksilata (S1-11) (3.0 g, 5.8 mmol) u dihlormetanu (30.0 mL), dodata je trifluorosirćetna kiselina (3.3 g, 28.9 mmol) u kapima na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i ko-destilovana tri puta s dihlorometanom. Dobijeni ostatak je bazifikovan sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (pH~ 8) i formirana je čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S1-12 (1.8 g, 96%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J=6.7 Hz, 3H), 3.44 (m, 2H), 3.59 (m, 1H), 7.07 (br s, 1H), 7.72 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.89 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.10 (d, J=4.1 Hz, 1H), 8.20 (d, J=8.9 Hz, 1H), 9.21 (d, J=8.9 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 318.2.

[0094] Rastvor jedinjenja S1-4 (200 g, 775 mmol) u DMF (7.75 L) je ohlađen na 0°C pod azotom. NaH (37.2 g, 930 mmol, 60% u mineralu) je dodat u porcijama tokom 0.5 h. Smeša je mešana na 0°C još 0.5 h i jedinjenje S2-6 (185.5 g, 783 mmol) je dodato u porcijama tokom 0.5 h. Nakon završetka dodavanja, TLC analiza je pokazala da je polazni materijal gotovo potrošen. Polako je dodata voda (4 L) i smeša je mešana tokom 10 minuta. Zatim je dodat vodeni rastvor HCl (4 L, 1 N) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Dodat je Na2CO3da se podesi pH 8, i dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa vodom i zatim rastvorena u DCM (2.0 L). Organska faza je odvojena, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je pretvoren u gustu suspenziju tokom 1 sata u etil acetatu (2.0 L) i zatim filtriran. Filtracioni kolač je osušen pod vakumom, da bi se dobilo jedinjenje S1-6 (196 g, prinos 61%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.01 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.34 (s, 9H), 3.12 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 6.55 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.71 (br, 1H), 7.70 (dd, J= 4.2 Hz, 8.3 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.94 (d, J=3.9 Hz, 1H), 9.04 (d, J=8.3 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 416.1.

[0095] Rastvor jedinjenja S1-6 (450 g, 1.08 mol) u DCM (5.4 L) je ohlađen do 0°C. TFA (989 g, 8.67 mola) je dodata u kapima i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je uz mešanje sipana u vodeni rastvor NaHCO3(1.0 kg u 10.0 L H2O). Dve faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa DCM. Organske faze su kombinovane, isprane sa vodom, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje S1-7 kao slobodna baza (330 g, prinos 96%) kao braon ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6):δ 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 3.08 (m, 1H), 3.12 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 6.67 (t, J = 6.0 Hz), 7.52 (m, 1H), 7.92 (d, 8.8 Hz, 1H), 8.06 (d, 8.8 Hz, 1H), 8.92 (m, 1H), 9.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H).

[0096] U rastvor S1-7 slobodne baze (170 g, 0.54 mol) u metanolu (9 L) je dodat natrijum metoksid (29 g, 0.54 mol). Reakciona smeša je mešana na 70°C preko noći, i zatim koncentrovana. Dodata je voda (7.0 L) i dobijena smeša je mešana stokom 20 minuta i filtrirana. Filterski kolač je ispran sa vodom, osušen u vakumu i zatim pretvoren u gustu suspenziju u DCM (3.0 L) tokom 1 h. Smeša je filtrirana i filtrerski kolač je ispran sa DCM i osušen pod vakumom da bi se dobilo jedinjenje S1-8 (274 g, prinos 90%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J=6.7 Hz, 3H), 3.46 (d, J=2.4Hz, 2H), 3.59-3.61 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.64 (dd, J=4.2 Hz, 8.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.00 (br s, 1H), 8.09 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.89 (d, J=4.0 Hz, 1H), 9.15 (d, J=8.5 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 284.1.

S2-Korak 1: Sinteza (R)-2-(tert-butoksikarbonilamino)propil metansulfonata (S2-2)

[0097] U mešani rastvor (R)-tert-butil 1-hidroksipropan-2-ilkarbamata (S2-1) (10.0 g, 57 mmol) u dihlorometanu (100 mL), trietilamin (8.65 g, 86 mmol) i metansulfonilhlorid rastvoren u dihlorometanu (5 mL, 63 mmol) su dodati u kapima na 0°C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša podeljena između dihlormetana (200 mL) i vode (100 mL). Organska faza je isprana sa rastvorom 0.1M HCl (50 mL), rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i rastvorom fiziološkog rastvora (50 mL). Organski sloj se osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S2-2 (12 g, 83%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.06 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.37 (s, 9H), 3.15 (s, 3H), 3.73 (m, 1H), 4.03 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 7.6 Hz, 1H).

S2-Korak 2: Sinteza (S)-tert-butil 1-azidopropan-2-ilkarbamata (S2-3)

[0098] U rastvor (R)-2-(tert-butoksikarbonilamino)propil metansulfonata (S2-2) (12 g, 47 mmol) u dimetil -sulfoksidu (75.0 mL), natrijum azid (3.7 g, 57 mmol) je dodat polako na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je zagrevana na 45°C tokom 24 sata. Reakciona smeša je zatim podeljena između dihlormetana (200 mL) i ledene vode (100 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S2-3 (6.0 g, 64%) kao svetlo žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.02 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.37 (s, 9H), 3.20 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.64 (m, 1H), 6.84 (br s, 1H).

S2-Korak 3: Sinteza (R)-tert-butil 1-aminopropan-2-ilkarbamata (S2-4)

[0099] U mešani rastvor (S)-tert-butil 1-azidopropan-2-ilkarbamata (S2-3) (6.0 g, 30 mmol) u etil-acetatu (50.0 mL) dodat je 10% Pd/C (2.3 g). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom vodonika (1 atm) tokom 15 sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, celit je ispran sa etil-acetatom i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S2-4 (4.8 g, 92%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,95 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,36 (s, 9H), 2,49 (m, 2H), 3,32 (m, IH), 6,49 (br s, 1H).

[0100] Rastvor (R)-aminopropan-1-ol (100 g, 1.33 mola) u metanolu (1.0 L) je ohlađen do 0°C. Dodati su TEA (278 mL, 2.0 mol) i Boc20 (320 g, 1.47 mol). Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 1h. Smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u DCM (1.0 L). Dobijeni rastvor je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl. Vodena faza je ponovo ekstrahovana sa DCM (0.2 L). Organske faze su kombinovane, isprane sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da se dobije S2-1 kao viskozno ulje (240 g), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0101] Rastvor imidazola (562 g, 8.26 mol) u DCM (5.5 L) je ohlađen na 0°C. U ovaj rastvor je dodat rastvor tionil hlorida (180 mL, 2.48 mola) u DCM (1.9 L) u kapima tokom 0.5 h. Kupka za hlađenje je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom najmanje 1h. Smeša je ohlađena do -10°C i rastvor jedinjenja S2-1 (dobijen iz koraka iznad) u DCM (2.6 L) je dodat u kapima. Kupka za hlađenje je uklonjena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Dodat je vodeni rastvor limunske kiseline (7.2 L, 10%) i dobijena smeša je mešana tokom 15 minuta. Organska faza je odvojena, isprana sa fiziološkim rastvorom (10 L), osušena prekoo anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje S2-5 kao smeša dijastereoizomera, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 1.6H), 1.50 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H), 1.53 (s, 9H), 4.06 (m, 0.5H), 4.31 (m, 1H), 4.68 (t, J = 9.6 Hz, 0.5H), 4.79 (t, J = 9.2 Hz, 0.5H), 5.02 (m, 0.5H).

[0102] U rastvor sirovog jedinjenja S2-5 (320 g) u acetonitrilu (5.0 L) je dodat RuCl3(150 mg, 0.725 mmol), praćen rastvorom NalO4(310 g, 1.45 mol) u vodi (3.3 L). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta, i zatim razblažena dodatkom DCM (5.0 L) i vode (5.0 L). Organska faza je odvojena, isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana, da bi se dobilo jedinjenje S2-6 (218 g) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.51 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.56 (s, 9H), 4.20 (dd, J = 9.2 Hz, 6.4 Hz, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.67 (dd, J = 8.8 Hz, 6.0 Hz, 1H).

Sinteza (S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-1)

[0103] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao i (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12), supstituirajući (S)-tert-butil 4-(aminometil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilat tokom (R)-tert-butil (1-aminopropan-2-il)karbamat. Ovo je dalo jedi njenje iz naslova INT-1. Videti Anderson, D.; Meyers, M. et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 (2009) 4878-4881.

Sinteza (R)-tert-butil3-amino-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-hinolin-12(9H)-karboksilat (INT-2)

[0104] Rastvor (R)-di-tert-butil3-hloro-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino-[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-9,12-dikarboksilata (S1-11) (400 mg, 0.7 mmol) in THF je tretiran sa Pd2(dba)3(76 mg, 0.07 mmol) i 2-(dicikloheksilfosfino)bifenilom (65 mg, 0.18 mmol) u hermetički zatvorenoj epruveti. Dobijeni rastvor je kratko degaziran primenom vakuma, i zatim ispran azotom tri puta. Zatim je dodat litijum heksametildisilazid (1.0 M u THF) (1.9 mL, 1.9 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 65°C tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa hladnom vodom (10.0 mL) i ekstrahovana sa etil-acetatom (3 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen sa hromatografijom na silikagelu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-2 (180 mg, 58%) kao braon čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 399.1.

Sinteza (R)-3-amino-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-3)

[0105] (R)-tert-butil 3-amino-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-12(9H)-karboksilat (INT-2) (8.0 mg, 0.02 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (1 mL) i mešan na sobnoj temperaturi. U ovaj rastvor je dodata trifluorosirćetna kiselina (0.5 ml, 6.49 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom jednog sata nakon čega su isparljive materije uklonjene pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u dihlorometanu, koncentrovan na silikagelu i prečišćen hromatografijom na silikagelu (8:1 MeOH/NH4OH u dihlormetanu (0-10%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-3 (4.0 mg, 67% prinos). MS: m/z 299.0 (M+H)<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.01 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.45 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.52 (m, 1H), 1.36 (d, 3H).

Sinteza (R)-di-tert-butil 3-bromo-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-9,12-dikarboksilata (INT-4)

[0106] U rastvor (R)-9,12-bis(tert-butoksikarbonil)-10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin 4-oksid (S1-10) (2.5 g, 5.0 mmol) u dimetilformamidu (70.0 mL), fosforni oksibromid (2.15 g, 7.5 mmol) je dodat u porcijama na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa vodom i mešan tokom 5 minuta i formirana je čvrsta supstanca. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa petroleum etrom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-4 (2.4 g, 78%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 562.1.

Sinteza (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-5)

[0107] U rastvor (R)-di-tert-butil 3-bromo-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-9,12-dikarboksilata (INT-4) (1.4 g, 2.5 mmol) u dihlorometanu (90.0 mL), trifluorosirćetna kiselina (36.0 mL, 12.4 mmol) je dodata u kapima na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i tri puta ko-destilovana sa dihlormetanom. Dobijena čvrsta supstanca je razblažena sa zasićenom rastvorom natrijum bikarbonata na 0°C do pH~8 i mešana tokom 10 minuta. U ovo vreme formirana je čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-5 (830 mg, 88%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 7.05 (br s, 1H), 7.81 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.06 (d, J=3.16 Hz, 1H), 8.19 (d, J=8.9 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 8.9 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 362.0.

Sinteza (R)-3-hidroksi-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino-[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-6)

[0108] U bočici od 10 mL u mikrotalasnoj pećnici (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tiieno[3,2-f]hinolin-8-on, sintetizovan u Šemi 1A (S1-12) (0.1 g, 0.315 mmol) je suspendovan u 3 mL ledenoj sirćetnoj kiselini sa 1 mL H2O. Bočica je hermetički zatvorena i ozračena na 130°C tokom 3 sata u mikrotalasnom reaktoru tzv."Biotage Explorer". Reakcija je ohlađena, precipitat koji je formiran je izolovan filtracijom, ispran 3 puta vodom i osušen pod visokim vakumom. Filtrat je koncentrovan na silikagelu i hromatografiran sa 8: 1 MeOH/ NH4OH u dihlormetanu (0-10%). Precipitat i produkt izolovani hromatografijom su kombinovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-6 (0.080 g, 0.267 mmol, 85% prinos) kao žuti prah.

Sinteza velikih razmera (R)-3-hidroksi-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino-[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-6)

[0109] (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H- [1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12, 40 g, 0.126 mol) je suspendovan u 300 mL ledenoj sirćetnoj kiselini sa 100 mL H2O. Smeša je mešana na 110°C tokom 4 dana, zatim ohlađena i koncentrovana do suvoće. Ostatku je dodat amonijum hidroksid (28-30% vod.) (200 mL) i dobijena smeša je mešana tokom 30 minuta, zatim filtrirana. Kolač je ispran sa vodom i osušen pod vakumom. Sirovi produkt je pretvoren u gustu suspenziju u etil-acetatu (350 mL) tokom 1h, zatim filtriran. Kolač je osušen pod vakumom da se dobije INT-6 kao žuta čvrsta supstanca (33 g, 87.6%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.16 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 3.40 (br, 2H), 3.56 (br, 1H), 6.61 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.88 (br, 1H), 7.44 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.8Hz, 1H), 8.12 (d, J = 4.0Hz, 1H), 8.81 (d, J = 10Hz, 1H) 11.99 (br, 1H). MS m/z (M+H): 300.1.

Sinteza R)-3-merkapto-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-7)

[0110] U rastvor S1-12 (150 mg, 0.5 mmol), u dimetilformamidu (2.0 mL), natrijum hidrosulfid (30% w/v, 52.9 mg, 0.9 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 5 sati. Nakon završetka reakciona smeša je ugašena sa vodom i zakiseljena sa 1N HCl (pH~2), nakon čega je formirana čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-7 (100 mg, 55%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.16 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.39 (br s, 2H), 3.56 (br s, 1H), 6.91 (br s, 1H), 7.36 (d, J=9.3 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.04 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.07 (br s, 1H), 8.66 (d, J=9.4 Hz, 1H), 13.87 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 316.2.

Sinteza etil 4-amino-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (INT-8)

[0111] U 15 mL bočici, etil 4-hloro-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (1.00 g, 4.30 mmol) je rastvoren u THF (10 mL) i trietilamin (2.00 ml, 14.35 mmol) je dodat praćen amonijakom (2 ml, 4.30 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon završetka reakcije, rastvarači su evaporisani, i sirova smeša je prečišćena hromatografijom na silikagelu upotrebom heksana/etil acetata (0-40%) kao eluensa da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-8 (0.72 g, 3.38 mmol, 79 % prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.55 (s, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.64 (br s, 1H), 4.24 (q, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.27 (t, 3H).

Sinteza 2-((4,6-difluoropirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetiletanamin (S3-2a) i 2-((2,6-difluoropirimidin-4-il)oksi)-N,N-dimetiletanamina (S3-2b)

[0112] U tikvici sa okruglim dnom od 20 mL je rastvoren 2,4,6-trifluoropirimidin (S3-1) (0.370 ml, 4.48 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Dodat je 2-(dimetilamino)etanol (0.450 ml, 4.48 mmol) na -78°C i reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana na silikagelu i hromatografirana sa 8:1 MeOH/NH4OH u dihlormetanu (0-10%). Frakcije koji sadrže produkt su sakupljene i koncentrovane da bi se dobila jedinjenja iz naslova (S3-2a) (0.500 g, 2.462 mmol, 55% prinos) i (S3-2b) (0.045 g, 0.224 mmol, 5% prinos) kao neodvojivu smešu. Ova smeša je korišćena takva kakva je u narednim koracima.

Sinteza of 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amina (S3-3a)

[0113] 7N amonijaka u MeOH (0.352mL, 2.461 mmol) je dodato u rastvor 2-((4,6-difluoropirimidin-2-il)oksi)-N,N-dimetiletanamina (S3-2a) (0.5 g, 2.461 mmol) i 2-((2,6-difluoropirimidin-4-il)oksi)-N,N-dimetiletanamina (S3-2b) (0.045 g, 0.221 mmol) u metanolu (3 mL). Reakcija je zatim zagrevana do 70°C. Nakon 30 minuta zagrevanja formiran je beli precipitat. Reakcija je ohlađena, razblažena sa dihlormetanom i isprana zasićenim natrijum bikarbonatom (vod.). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan još 3 puta sa dihlormetanom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani da se dobije bela čvrsta supstanca koja je prekristalisana iz etil acetata i heptana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S3-3a (0.246 g, 1.230 mmol, 50% prinos).

Sinteza 6-fluoro-2-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-4-amina (INT-9a) i 4-fluoro-6-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-2-amina (INT-9b)

[0114] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) supstituirajući oksetan-3-ol za 2-(dimetilamino)etanol. Reakciona smeša je zagrevana do 45°C i produkt je izolovan hromatografijom na silikagelu dajući jedinjenje iz naslova INT-9a (0.266 g, 1.437 mmol, 62% prinos). Kao nusproizvod takođe je izolovana mala količina 4-fluoro-6-(oksetan-3-iloksi) pirimidin-2-amina (INT-9b).

Sinteza (rac)-6-fluoro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-10)

[0115] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) supstituirajući 1-metilpiperidin-3-ol za 2-(dimetilamino)eanol. Reakciona smeša je zagrevana do 45°C i produkt je izolovan hromatografijom na silikagelu, dajući jedinjenje iz naslova INT-10 (20 mg, 41% prinos) kao bezbojno ulje. MS m/z (M+H): 227.0.

Sinteza 6-fluoro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amina (INT-11)

[0116] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) supstituirajući 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanol za 2-(dimetilamino)etanol. Reakciona smeša je zagrevana do 45°C i produkt je izolovan hromatografijom na silikagelu, dajući jedinjenje iz naslova INT-11 (60 mg, 51.6%) kao bezbojnu lepljivu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.34 (s, 3H), 2.34-2.36 (m, 1H), 2.50-2.54 (m, 6H), 2.55-2.65 (m, 3H), 4.25 (t, J= 5.6Hz, 2H), 5.63 (s, 1H), 7.19 (br s, 2H). MS m/z (M+H): 256.2.

Sinteza (R)-6-fluoro-2-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-12)

[0117] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) supstituirajući (R)-1-metilpirolidin-3-ol za 2-(dimetilamino)etanol. Reakciona smeša je zagrevana do 45°C i produkt je izolovan hromatografijom na silikagelu, dajući jedinjenje iz naslova INT-12 (60 mg, 51.6%) (140 mg, 70%) kao belu čvrstu supstancu MS m/z (M+H): 213.1.

Sinteza 4,6-difluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidina (INT-13) i 2,4-difluoro-6-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidina (INT-14)

[0118] U 20 mL bočicu (3-metiloksetan-3-il)metanol (0.744 ml, 7.46 mmol), cezijum karbonat (2.430 g, 7.46 mmol), i 2,4,6-trifluoropirimidin (S3-1) (1 g, 7.46 mmol) su rastvoreni u 10 mL suvog THF dajući bezbojnu suspenziju. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, sipana u zasićeni natrijum bikarbonat (vod.) i ekstrahovana 3 puta sa dihlormetanom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, dekantovani, koncentrovani na silikagelu i prečišćeni hromatografijom (0-100% etil acetat u heptanu) dajući neodvojivu 1.3: 1 smešu izomera INT-13 i INT-14, favorizujući 4,6-difluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin INT-13. Smeša je korišćena takva kakva je za naknadne korake.

Sinteza 6-fluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-4-amina (INT-15a) i 4-fluoro-6-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-2-amina (INT-15b)

[0119] U bočici od 20 mL, iznad izolovana smeša je zagrevana preko noći na 40°C u 10 mL 7N NH3u metanolu. Nakon završetka, reakciona smeša je ohlađena i koncentrovana na silikagelu pod smanjenim pritiskom. 6-fluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-4-amin (INT-15a) je izolovan hromatografijom na silikagelu (0 - 100% etil acetat u heptanu) kao polarnija frakcija (0.557 g, 2.6 mmol, prinos 35.0%) . Mala količina 4-fluoro-6((3- metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-2-amina (INT-15b) je takođe izolovana kao nusprodukt.

Sinteza 4,6-difluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidina (INT-16) i 2,4-difluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidina (INT-17)

[0120] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 4,6-difluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin (INT-13) supstituirajući 2-metoksietanol za (3-metiloksetan-3-il)metanol. Ovo je dalo nerazdvojivu smešu (1:1) jedinjenja iz naslova INT-17 i INT-16 kao bezbojnu tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.24 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.50 (m, 2H), 4.48 (m, 2H), 3.71 (m, 4H), 3.39 (s, 6H).

Sinteza 4-fluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (INT-18) i 6-fluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina(INT-19)

[0121] U 20 mL bočicu, smeša (1:1) 2,4-difluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidina (INT-17) i 4,6-difluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidina (INT-16) je zatim zagrevana do 65°C u 10 mL 30% NH3u vodi. Nakon završetka, reakcija je ohlađena, ekstrahovana tri puta sa dihlormetanom, i kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata. Organska frakcija je zatim koncentrovana na silikagelu i prečišćena hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat u heptanu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-18.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 5.62 (1H), 5.09 (br s, 2H), 4.40 (m, 2H), 3.69 (m, 2H), 3.39 (s, 3H) i INT-19<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 5.67 (1H), 5.10 (br s, 2H), 4.42 (m, 2H), 3.67 (m, 2H), 3.40(s, 3H) kao zasebne frakcije.

Sinteza (S)-2,4-difluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-20) i (S)-4,6-difluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-21) (1.00:0.77)

[0122] Jedinjenje iz naslova je sintetisano na isti način kao 4,6-difluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin (INT-13) supstituirajući (S)-tetrahidrofuran-3-ol za (3-metiloksetan-3-il)metanol. Nerazdvojiva smeša (S)-2,4-difluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-20) i (S)-4,6-difluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-21) (1.00:0.77) je izolovana i korišćena direktno u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.19 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.47 (m, 1H), 3.98 (m, 4H), 3.91 (m, 4H), 2.27 (m,2H), 2.24 (m, 2H).

Sinteza (S)-4-fluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-amina (INT-22) i (S)-6-fluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-23) (1.00:0.77)

[0123] Jedinjenje iz naslova je sintetisano na isti način kao 4-fluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-amin (INT-18) i 6-fluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amin (INT-19) da bi se dobila jedinjenja iz naslova INT-22<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.04 (br s, 2H), 5.66 (s, 1H), 5.44 (m, 1H), 3.84-3.72 (m, 4H), 2.20-2.15 (m, 1H), 1.97-1.95 (m, 1H) i INT-23<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.23 (br s, 2H), 5.63 (s, 1H), 5.31 (m, 1H), 3.83-3.71 (m, 4H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.95-1.92 (m, 1H) koja su odvojena hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat u heptanu).

Sinteza (R)-2,4-difluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-24) i (R)-4,6-difluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-25) (1.3:1)

[0124] Jedinjenje iz naslova je sintetisano na isti način kao 4,6-difluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin (INT-13) supstituirajući (R)-tetrahidrofuran-3-ol za (3-metiloksetan-3-il)metanol. Nerazdvojiva smeša (R)- 2,4-difluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-24) i (R)-4,6-difluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-25) (1.3:1) je izolovana i korišćena direktno u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.19 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 5.60 (m, 1H), 5.48 (m, 1H), 3.98 (m, 4H), 3.91 (m, 4H), 2.30 (m, 2H), 2.20 (m, 2H).

Sinteza (R)-4-fluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-amina i (R)-6-fluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (1.3:1)

[0125] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 4-fluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-amin (INT-18) i 6-fluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amin (INT-19), polazeći od smeše (R)-2,4-difluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-24) i (R)-4,6-difluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidina (INT-25) da bi se dobila smeša jedinjenja iz nasova INT-26<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.64 (s, 1H), 5.43 (m, 1H), 5.13 (br s, 2H), 4.05-3.88 (m, 4H), 2.18-2.16 (m, 2H) i INT-27<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.61 (s, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.10 (br s, 2H), 3.96-3.86 (m, 4H), 2.21-2.11 (m, 2H) koja su odvojena hromatografijom na silikagelu (0-100% etil acetat u heptanu).

S4-Korak 1: Sinteza N-tert-butil-6-hloro-2-jodo-pirimidin-4-amina (S4-2)

[0126] U mešani rastvor natrijum hidrida (122 mg, 5.1 mmol) i 2-metilpropan-2-amina (399 mg, 5.4 mmol) u tetrahidrofuranu (15.0 mL), je dodat 4,6-dihloro-2-jodo-pirimidin (S4-1) (1.0 g, 3.6 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa etil-acetatom i isprana sa vodom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu (100-200 mesh) upotrebom 2-5% etil acetat/petroleum etar da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S4-2 (480 mg, 42.3%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 312.0.

S4-Korak 2: Sinteza (rac)-N-tert-butil-6-hloro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amina (S4-3)

[0127] U rastvor natrijum hidrida (18 mg, 0.7 mmol) u tetrahidrofuranu (10.0 mL) su dodati (rac)-1-metil-piperidin-3-ol (85 mg, 0.7 mmol) i N-tert-butil-6-hloro-2-jodo-pirimidin-4-amin (S4-2) (200 mg, 0.6 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela upotrebom 5% metanola u dihlormetanu da se dobije jedinjenje iz naslova S4-3 (100 mg, 52%) u obliku gumene tečnosti. MS: m/z 299.1 (M+H).

S4-Korak 3: Sinteza (rac)-6-Hloro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amina (S4-4)

[0128] U mešani rastvor (rac)-N-tert-butil-6-hloro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amina (S4-3) (25 mg, 0.1 mmol) u dihlorometanu (6.0 mL), je dodata sumporna kiselina (4.1 mg, 0.04 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je bazifikovana sa vodenim rastvorom amonijaka i ekstrahovana sa dihlormetanom. Organski sloj je ispran sa vodom, fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S4-4 (10 mg, 49%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.33-1.34 (m, 2H), 1.42-1.51 (m, 1H), 1.67-1.71 (m, 1H), 1.87-1.89 (m, 1H), 1.99-2.02 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.75-2.81 (m, 1H), 4.81-4.87 (m, 1H), 6.08 (s, 1H), 7.12 (br s, 2H). MS: m/z 243.1 (M+H).

Sinteza (R)-6-hloro-2-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-28)

[0129] Jedinjenje iz naslova je sintetisano na isti način kao (rac)-6-hloro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amin (S4-4) supstituišući (R)-1-metilpirolidin-3-ol za (rac)-1-metilpiperidin-3-ol u Koraku 2 sinteze S4-4 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-28 (90 mg, 58%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.76-1.80 (m, 1H), 2.20-2.27 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.43-2.45 (m, 1H), 2.62-2.65 (m, 1H), 2.71-2.75 (m, 1H), 2.83-2.88 (m, 1H), 5.19-5.22 (m, 1H), 6.10 (s, 1H), 7.13 (br s, 2H). MS m/z (M+H): 229.1.

S5-Korak 1: Sinteza 2,6-dihloro-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-4-amina (S5-2)

[0130] U rastvor 2,4,6-trihloropirimidina (2.0 g, 0.01 mol mmol) u t-butanolu (5.0 mL), trietilamin (2.2 g, 0.02 mol) i pmetoksibenzil amin (1.6 g, 0.012 mol) su dodati na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 75°C tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je razblažen sa dihlorometanom i ispran sa vodom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni sa 1-10% etil acetata u petroleum etru, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S5-2 (650 mg, 17%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.72 (s, 3H), 4.42 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 6.54 (s, 1H), 6.89 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.23 (d J= 8.8 Hz,, 2H), 8.51 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 284.3.

S5-Step 2: Sinteza 6-hloro-N-(4-metoksibenzil)-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (S5-3)

[0131] U rastvor 2,6-dihloro-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-4-amina (S5-2) (750 mg, 2.6 mmol) u tetrahidrofuranu (15.0 mL), natrijum hidrid (76.02 mg, 3.2 mmol) je dodat na 0°C i mešan tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat 2-etoksietanol (241.01 mg, 3.2 mmol) na 0°C. Reakcija je ostavljena da se zagreje do 25°C i mešana tokom 12 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (30.0 mL) i ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 50 mL). Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50.0 mL), osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentriovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni sa 20% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S5-3 (550 mg, 64%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.26 (s, 3H), 3.57 (t, J= 4.7 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 4.29 (t, J= 4.6 Hz, 2H), 4.42 (br s, 2H), 6.20 (s, 1H), 6.89 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.23 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 8.09 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 324.1.

S5-Korak 3: Sinteza 6-hloro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (S5-4)

[0132] Rastvor 6-hloro-N-(4-metoksibenzil)-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (S5-3) (350 mg, 1.1 mmol) u dihlorometanu (10.0 mL) je ohlađen na 0°C i dodata je sumporna kiselina (212.05 mg, 2.1 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa rastvorom amonijaka i ekstrahovana sa dihlormetanom (2 x 100 mL). Organski sloj je ispran sa 2 x 50 mL vode, praćen sa 20 mL zasićenim fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S5-4 (200 mg, 89%) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 204.1.

Sinteza 6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amina (INT-29)

[0133] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 6-hloro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amin (S5-4) supstituiranjem 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanol za 2-metoksietanol u S5-Koraku 2 da bi se dobio 6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amin INT-29 (120 mg, 57%) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 272.3.

S6-korak 1: Sinteza 4,6-dihloro-2-jodo-pirimidina (S6-2)

[0134] U rastvor 4,6-dihloropirimidin-2-amina (S6-1) (5.0 g, 30.5 mmol) u tetrahidrofuranu (40.0 mL), bakar (I) jodid (5.8 g, 30.5 mmol), dijodometan (41.6 g, 155.5 mmol) i izoamil nitrit (10.7 g, 91.4 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 3 sata. Nakon završetka je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je rastvoren u etil-acetatu (60 mL) i ispran sa vodom (2 x 30 mL), zatim fiziološkim rastvorom (30 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela sa 10% etil acetatom u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S6-2 (4.2 g, 50%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.38 (s, 1H).

S6-Korak 2: Sinteza 6-hloro-2-jodo-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-4-amina (S6-3)

[0135] U rastvor 4,6-dihloro-2-jodo-pirimidina (S6-2) (2.0 g, 7.3 mmol) u t-butanolu (20.0 mL), trietilamin (1.47 g, 14.5 mmol) i p-metoksibenzil amin (1.0 g, 7.3 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u etil acetatu (20.0 mL), i organski sloj je ispran sa vodom (2 x 10 mL), zatim zasićenim fiziološkim rastvorom (1 x 10 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa 10% etil-acetatom u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S6-3 (1.8 g, 65%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 376.1.

S6-Korak 3: Sinteza metil 4-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)pirimidin-2-karboksilata (S6-4)

[0136] U rastvor 6-hloro-2-jodo-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-4-amina (S6-3) (1.0 g, 2.6 mmol) u metanolu (8.0 mL), trietilamin (1.1 mL, 8.0 mmol) i kompleks dihloro[1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum (II) dihlorometana (108.6 mg, 0.1 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 80°C pod atmosferom CO (g) tokom 5 sati. Nakon završetka, reakcija je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u etil acetatu (20.0 mL), i organski sloj je ispran sa vodom (2 x 10 mL), zatim fiziološkim rastvorom (1 x 10 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem u 5% etil acetatu u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S6-4 (800 mg, 97%) kao braon tečnost. MS m/z (M+H): 308.2.

S6-Korak 4: Sinteza metil 4-amino-6-hloropirimidin-2-karboksilata (S6-5)

[0137] Metil 4-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)pirimidin-2-karboksilat (S6-4) (400 mg, 1.3 mmol) je ohlađen do 0°C i trifluorosirćetna kiselina (0.2 mL, 6.5 mmol) i trifluorometansulfonska kiselina (0.2 mL, 6.5 mmol) su dodate na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Nakon završetka reakcija je bila koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovan sa dihlorometanom (200 mL). Organski sloj je ispran sa 2 x 10 mL vode, zatim 10 mL zasićenim fiziološkim rastvorom. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa 1% metanolom u hloroformu, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S6-5 (110 mg, 45%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.81 (s, 3H), 6.51 (s, 1H), 7.57 (br s, 2H).

S7-Korak 1: Sinteza N<4>-tert-Butil-6-fluoro-pirimidin-2,4-diamina (S7-2)

[0138] U hermetički zatvorenoj epruveti, rastvor 4,6-difluoropirimidin-2-amina (1.0 g, 7.6 mmol) u 1,4-dioksan/dimetilformamidu (20.0 mL, 1:1), kalijum karbonat (1.6 g, 11.9 mmol) i tert-butilamin (1.7 g, 23.0 mmol) su dodati. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 48 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je razblažen sa hladnom vodom (10.0 mL), nakon čega je formirana čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena na vazduhu dajući jedinjenje iz naslova S7-2 (1.2 g, 85%) kao beličastu čvrstu supstancu. MS m/z (M+H): 185.1.

S7-Korak 2: Sinteza N-tert-Butil-6-fluoro-2-jodo-pirimidin-4-amina (S7-3)

[0139] U rastvor N<4>-tert-butil-6-fluoro-pirimidin-2,4-diamina (S7-2) (2.1 g, 11.4 mmol) u tetrahidrofuranu (10.0 mL), bakar (I) jodid (3.0 g, 15.7 mmol), dijodometan (3.16 mL, 39.2 mmol), i izoamil nitrit (5.0 mL, 34.2 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je bio prečišćen kolonskom hromatografijom na silikagelu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova S7-3 (1,5 g, 45%) kao braon uljasta tečnost. MS m/z (M+H): 296.0.

S7-Korak 3: Sinteza metil 4-(tert-butilamino)-6-fluoropirimidin-2-karboksilata (S7-4)

[0140] U rastvor N-tert-butil-6-fluoro-2-jodo-pirimidin-4-amina (S7-3) (1.5 g, 5.1 mmol) u metanolu (20.0 mL), PdCl2(dppf) (0.33 g, 0.4 mmol), i trietilamin (0.8 g, 7.6 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana pod 20 psi CO tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S7-4 (800 mg, 69%) kao braon tečnost.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 1.39 (s, 9H), 3.83 (s, 3H), 6.20 (s, 1H), 7.72 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 228.1.

S7-Korak 4: Sinteza (4-(tert-butilamino)-6-fluoropirimidin-2-il)metanol (S7-5)

[0141] U rastvor metil 4-(tert-butilamino)-6-fluoropirimidin-2-karboksilata (S7-4) (800 mg, 3.5 mmol) u metanolu (20.0 mL), natrijum borohidrid (1.3g, 35.2 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi i reakciona smeša je mešana tokom 3 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je rastvoren u vodi (10.0 mL) i ekstrahovan sa etil-acetatom (2 x 10.0 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S7-5 (600 mg, 86%) kao beličasta tečnost. MS m/z (M+H): 200.1.

S7- Korak 5: Sinteza N-(tert-butil)-6-fluoro-2-(jodometil)pirimidin-4-amina (S7-6)

[0142] U rastvor (4-(tert-butilamino)-6-fluoropirimidin-2-il)metanola (S7-5) (600 mg, 3.0 mmol) u dihlorometanu (20.0 mL), imidazol (512 mg, 7.5 mmol) i trifenilfosfin (1.6 g, 6.0 mmol) su dodati praćeni dodavanjem joda u porcijama (382 mg, 1.5 mmol) na 25°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa zasićenim rastvorom natrijum tiosulfita (3.0mL) i ekstrahovana sa dihlormetanom (2 x 10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S7-6 (400 mg, 43%) kao viskozna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 1.39 (s, 9H), 4.22 (s, 2H), 5.89 (s, 1H), 7.45 (br s, 1H).

S7-Korak 6: Sinteza N-(tert-butil)-6-fluoro-2-(piperidin-1-ilmetil)pirimidin-4-amina (S7-7)

[0143] U rastvor piperidina (82.6 mg, 0.97 mmol) u acetonitrilu (5.0 mL), kalijum karbonat (220 mg, 1.6 mmol) je dodat praćen dodatkom N-(tert-butil)-6-fluoro-2-(jodometil)pirimidin-4-amina (S7-6) (250 mg, 0.8 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa vodom (10.0 mL) i ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 10 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S7-7 (170 mg, 79%) kao bledozelena tečnost.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6):δ1.33-1.36 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.44-1.50 (m, 4H), 2.44-2.46 (m, 4H), 3.37 (s, 2H), 5.90 (s, 1H), 7.26 (br s, 1H).

S7-Korak 7: 6-fluoro-2-(piperidin-1-ilmetil)pirimidin-4-amin (S7-8)

[0144] U rastvor N-(tert-butil)-6-fluoro-2-(jodometil)pirimidin-4-amina (S7-7) (170 mg, 0.6 mmol) u dihlorometanu (15.0 mL), koncentrovana H2SO4(0.3 mL) je dodata na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, dihlorometan je pretočen i u dobijenu gumenu čvrstu supstancu nekoliko kapi rastvora NH3je dodato, nakon čega sledi azeotropna destilacija upotrebom toluena (2 x 5 mL) da bi se dobio sirovi produkt. Čvrsta supstanca je triturirana sa 10% metanolom u hloroformu (4 x 5 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz nasova S7-8 (120 mg, 95%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 211.1.

S8-Korak 1: Sinteza (S)-(3-hloro-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-10-il)metil metansulfonat (S8-2)

[0145] U mešani rastvor S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-1) (50 mg, 0.1 mmol) u dihlorometanu (5.0 mL) je dodat trietilamin (0.86 mL, 0.4 mmol) praćen metansulfonil hloridom (0.24 mL, 0.2 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je razblažen sa ledeno hladnom vodom i formirana je čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da bi se dobilo jedinjenje S8-2 (50 mg, 81%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.18 (s, 3H), 3.42-3.43 (m, 1H), 3.85-3.90 (m, 2H), 4.09-4.13 (m, 1H), 4.28-4.32 (m, 1H), 7.13 (br s, 1H), 7.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 9.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 412.2.

S8-Korak 2: Sinteza S)-10-(azidometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-3)

[0146] U mešani rastvor (S)-(3-hloro-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hiinolin-10-il)metil metansulfonata (S8-2) (50.0 mg, 0.1 mmol) u dimetilformamidu (2.0 mL), je dodat natrijum azid (15.78 mg, 0.2 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 50°C tokom 10 h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirova supstanca je razblažena sa ledeno hladnom vodom, pri čemu su formirane čvrste supstance. Dobijene čvrste supstance su filtrirane i osušene da bi se dobilo jedinjenje S8-3 (30 mg, 69%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.37-3.51 (m, 2H), 3.63-3.66 (m, 1H), 3.74-3.79 (m, 1H), 7.15 (br s, 1H), 7.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 9.17 (d, J = 8.8 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 359.1.

S8-Korak 3: Sinteza (S)-10-(azidometil)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-4)

[0147] Rastvor (S)-10-(azidometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-3) (200 mg, 0.5 mmol) u 1,4-dioksanu (6.0 mL) na kratko je degaziran primenom vakuma i zatim ispran azotom. Tome su dodati 6-fluoropirimidin-4-amin (75.4 mg, 0.7 mmol), Pd2(dba)3(509 mg, 0.06 mmol), Ksantfos (32.1 mg, 0.06 mmol) i cezijum karbonat (541.9 mg, 1.6 mmol) sekvencijalno na sobnoj temperaturi. Smeša je ponovo degazirana i mešana na 90°C tokom 10 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je ispran sa vodom, zatim 5% metanolom u dihlormetanu, da bi se dobilo jedinjenje S8-4 (80 mg, 32%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.42-3.55 (m, 2H), 3.63-3.66 (m, 1H), 3.76-3.80 (m, 1H), 7.07 (br s, 1H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.17 (br s, 1H), 8.26 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 8.58 (br s, 1H), 9.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 10.92 (br s, 1H).

S8-Korak 4: Sinteza (S)-tert-butil ((3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’ :4,5] tieno [3,2-f]hinolin-10-il)metil)karbamata (S8-5)

[0148] U mešani rastvor (S)-10-(azidometil)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-4) (150 mg, 0.3 mmol) u tetrahidrofuranu/vodi (2:1) (6.0 mL) je dodat trifenilfosfin (270 mg, 1.0 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 85°C tokom 16 h. Nakon završetka reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je ispran sa dietil etrom, zatim 5% metanolom u dihlormetanu, da bi se dobio sirovi (R)-10-(aminometil)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5',6':4,5]tieno [3,2-f] hinolin-8-on (100 mg) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Izolovani sirovi materijal je rastvoren u dimetilformamidu (5.0 mL) i dodati su trietilamin (86 mg, 0.7 mmol) i di- tert-butil dikarbonat (106 mg, 0.4 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC dajući jedinjenje S8-5 (20 mg, 11% nakon 2 koraka) kao žutu čvrstu supstancu. MS m/z (M+H): 510.1.

Sinteza 6-fluoro-2-((4-metilpiperazin-1-il)metil)pirimidin-4-amina (INT-30)

[0149] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 6-fluoro-2-(piperidin-1-ilmetil)pirimidin-4-amin (S7-8) supstituiranjem 1-metilpiperazin za piperidin u S7-Koraku 6 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-30 (120 mg, 88%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) (D2O Razmena): δ 2.29 (s, 3H), 2.52-2.65 (m, 8H), 3.36 (s, 2H), 5.90 (s, 1H), 7.12 (br s, 2H). MS m/z (M+H): 226.2.

Sinteza 4-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-amina (INT-31)

[0150] U balonu sa okruglim dnom od 10 mL 4,6-dihloro-1,3,5-triazin-2-amin (0.047 g, 0.285 mmol) i 1-metilpiperazin (0.032 ml, 0.285 mmol) su rastvoreni u tetrahidrofuranu (5 mL) da se dobije bezbojni rastvor. Reakcija je bila zagrevana na 65°C i nakon jednog sata reakcija je postala mutna. Reakcija je ohlađena i koncentrovana na silikagelu i hromatografisana sa 8:1 MeOH/NH4OH u dihlorometanu (0-10%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-31 (0.057 g, 0.251 mmol, 88 % prinos).

Sinteza N<1>-(6-fluoropirimidin-4-il)-N2,N2-dimetiletan-1,2-diamina (INT-32)

[0151] U balon sa okruglim dnom od 10 mL, 4,6-difluoropirimidin (0.305 g, 2.63 mmol) i K2CO3(0.363 g, 2.63 mmol) su dodati u 1,4-dioksan (5 mL) da bi se dobila bezbojna suspenzija. Tome je dodat N<1>, N<1>-dimetiletan-1,2-diamin (0.287 ml, 2.63 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon jednog sata reakcija je koncentrovana na silikagelu i hromatografisana sa 8:1 MeOH/NH4OH u dihlormetanu (0-10%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-32 (0.290 g, 1.577 mmol, 60% prinos).

Sinteza 6-fluoro-N-(2-metoksietil)pirimidin-4-amina (INT-33)

[0152] U balon sa okruglim dnom od 10 mL, 4,6-difluoropirimidin (.35 mL, 4.13 mmol) i tzv. "Hünig’s baza" (0.722 mL, 4.13 mmol) su rastvoreni u tetrahidrofuranu (5 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Reakcija je ohlađena do 0°C i dodat je 2-metoksietanamin (0.322 ml, 4.13 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 3 sata. Nakon završetka reakcija je koncentrovana na silikagelu prečišćena hromatografijom (0-100% etil acetata u heptanu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-33 (0.318 g, 1.859 mmol, 45 % prinos).

Sinteza 2,4-dihloro-6-(pirolidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-34)

[0153] U 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (662 mg, 3.59 mmol) u 4 mL THF na 0°C je dodata tzv. "Hünig’s baza" (732 µL, 4.19 mmol) praćena pirolidinom (100 µL, 1.197 mmol) u 2 mL THF u kapima. Reakcija je mešana na 0°C. LCMS je nakon 1 h pokazala željenu masu kao glavni pik i malu količinu adukta di-pirolidina. Sirova smeša je bila filtrirana, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na silikagelu (0-25% etil acetat/heptani) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-34 (223 mg, 1.018 mmol, 85% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z: 219.1 [M+H].

Sinteza 4-(4,6-dihloro-1,3,5-triazin-2-il)morfolina (INT-35)

[0154] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2,4-dihloro-6-(pirolidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-34) supstituiranjem morfolina za pirolidin da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-35 kao bela čvrsta supstanca. MS: m/z 235.1 [M+H].

Sinteza 2,4-dihloro-6-(piperidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-36)

[0155] U 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (300 mg, 1.627 mmol) i natrijum karbonat (259 mg, 2.440 mmol) je dodat tetrahidrofuran (8 mL) na 0°C, praćen piperdinom (163 µl, 1.627 mmol). Reakciona smeša je zamućena u roku od nekoliko minuta. LCMS nakon 1 h je pokazala željenu masu kao glavni produkt, a neki adukt di-dodatka kao sporedni produkt. Sirovi materijal je filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na silikagelu (0-20% etil acetat/heptani) da bi se dobila smeša jedinjenja iz naslova (INT-36, glavni) i di-adukta (sporedni). LCMS m/z: 233.0 [M+H].

Sinteza 4,6-dihloro-N,N-dimetil-1,3,5-triazin-2-amina (INT-37)

[0156] U 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (300 mg, 1.627 mmol) i cezijum karbonat (689 mg, 2.115 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) je dodat dimetilamin (1 M in THF (813 µl, 1.627 mmol)) u kapima na 0°C. Posle 45 minuta, LCMS je pokazala željenu masu kao glavni produkti i manju količinu di-adicionog adukta. Sirova smeša je filtrirana i prečišćena hromatografijom na silikagelu (0-20% etil acetat/heptani) da bi se dobilo 144 mg smeše uglavnom jedinjenja iz naslova INT-37 i nekog neželjenog 6-hloro-N<2>, N<2>, N<4>, N<4>-tetrametil-1,3,5-triazin-2,4-diamina. Smeša je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Sinteza 2,4-dihloro-6-metoksi-1,3,5-triazina (INT-38)

[0157] U 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (300 mg, 1.627 mmol) u MeOH (32.500 mL) je dodat natrijum bikarbonat (137 mg, 1.627 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Smeša je zatim razblažena sa vodom i ekstrahovana sa dihlormetanom, isprana sa zasićenim NaCl (vod.), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-38 (271 mg, 1.506 mmol, 93% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.14 (s, 3H).

Sinteza 2,4-dihloro-6-(3,3-difluoropirolidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-39)

[0158] U 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (150 mg, 0.813 mmol) i cezijum karbonat (583 mg, 1.789 mmol) u THF (8 mL) na 0°C je dodat 3,3-difluoropirolidin hidrohlorid (120 mg, 0.813 mmol) u jednoj porciji. Ovome je dodato 2.2 eq (313 µL) tzv."Hünigove baze". LCMS nakon 2 h je pokazala željenu masu kao glavni pik. Reakciona smeša je filtrirana, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na silikagelu (0-10% etil acetat/heptani) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-39 (123 mg, 0.482 mmol, 59.3 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z: 254.8 [M+H].

Sinteza 2,4-dihloro-6-(3,3-difluoropiperidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-40)

[0159] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 2,4-dihloro-6-(3,3-difluoropirolidin-1-il)-1,3,5-triazin (INT-39) supstituiranjem 3,3-difluoropiperidin hidrohlorida za 3,3-difluoropirolidin hidrohlorid da bi se dobilo jedinjenje iz naslova INT-40. MS: m/z 268.9 [M+H].

Sinteza (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5]tieno [3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksilne kiseline (INT-41)

[0160] U 20 mL epruvetu (R)-etil 2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksilat (1-18) (0.112 g, 0.232 mmol) je dodat u 5 mL 4:1 metanola/vodeni rastvor. LiOH (0.371 ml, 0.371 mmol) je dodat i reakcija je zagrevana do 35°C. Nakon završetka dodata je HCl (0.371 ml, 0.371 mmol) i produkt je istaložen iz rastvora. Reakcija je filtrirana, i čvrste supstance su isprane sa hladnom vodom i osušene pod vakumom dajući jedinjenje INT-41 (0.103 g, 0.226 mmol, 98 % prinos).

Sinteza (R)-tert-butil 10-metil-3-((2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)amino)-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-12(9H)-karboksilata (INT-42)

[0161] U rastvor (R)-tert-butil 3-amino-10-metil-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-12(9H)-karboksilata (INT-2) (100.0 mg, 0.2 mmol) u 1,4-dioksanu (2.0 mL), 4-hloro-2-metilsulfonil-pirimidin (58.0 mg, 0.3 mmol) i kalijum karbonat (102.4 mg, 0.7 mmol), su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je kratko degaziran primenom vakuma, i zatim tri puta ispran sa azotom. Konačno, Pd2(dba)3(45.9 mg, 0.05 mmol) i tzv. "DavePhos" (2.5 mg, 0.01 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi i smeša je dalje degazirana. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 100°C tokom 3 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je razblažena se vodom (10.0 mL) i ekstrahovana sa etilacetatom (2 puta, 10.0 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativom da bi se dobilo jedinjenje INT-42 (45 mg, 32 %) kao braon čvrsta supstanca. MS m/z: 555.2 (M+H).

Sinteza 4-amino-2-chloro-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-5-karboksamida (INT-43b)

[0162] U rastvor 2,4-dihloro-N-[(4-metoksifenil)metil]pirimidin-5-karboksamida (INT-43a, 500 mg, 1.6 mmol, pripremljenog prema postupku opisanom u WO 2011/090760 A1) u THF (5 mL) je dodat amonijak (1 mL, 24.03 mmol) na 0°C i mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa etil-acetatom. Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom, zatim sa fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovaog Na2SO4i koncentrovan pod smanjenim pritiskom dajući 1 (440 mg, 85% prinos) kao beličastu čvrstu supstancu.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ3.71 (s, 3H), 4.35 (d, J = 6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 8.22 (s, br, 2H), 8.54 (s, 1H), 9.09 (d, J = 5.7 Hz, 1H).

Sinteza (R)-2-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’ :4,5] tieno [3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karbksamida (INT-43)

[0163] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem INT-43b za 5-fluoro-2-nitroanilin, i (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-5) za (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on. Zagrevanje je završeno uobičajeno na 100°C tokom 6 sati (umesto mikrotalasnim zračenjem). Ovo je dalo (R)-2-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamid INT-43 (141 mg, 88%) kao žutu čvrstu supstancu. MS m/z (M+H): 574.1.

Sinteza (R)-2-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-(metil(10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5] tieno [3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (INT-44)

[0164] U mešani rastvor (R)-2-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (INT-43) (180 mg, 0.3 mmol) u dimetilformamidu (2.0 mL) su dodati kalijum karbonat (86.66 mg, 0.6 mmol), kalijum jodid (10.4 mg, 0.06 mmol), i metil jodid (66.7 mg, 0.5 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 75°C tokom 1 h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je razblažen sa vodom, i formirane čvrste supstance su filtrirane i isprane sa vodom, zatim osušenene pod vakumom, dajući jedinjenje INT-44 (120 mg, 53%) kao žutu čvrstu supstancu MS m/z (M+H): 588.4.

Sinteza 4-Hloro-6-(2-metoksietoksi) pirimidin-2-amina (INT-45)

[0165] U rastvor 4,6-dihloropirimidin-2-amina (1.0 g, 6.1 mmol) u tetrahidrofuranu (20.0 mL), natrijum hidrid (175.6 mg, 7.3 mmol) je dodat na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 min. U reakcionu smešu je dodat 2-metoksietanol (556.8 mg, 7.3 mmol) na 0°C i mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa ledeno hladnom vodom (50 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 50 mL), i isprana sa fiziološkim rastvorom (50.0 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije 1 (900 mg, 68%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.27 (s, 3H), 3.58-3.61 (m, 2H), 4.33-4.35 (m, 2H), 6.08 (s, 1H), 6.96 (br s, 2H). MS m/z (M+H): 204.1.

Sinteza 4-Hloro-6-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]pirimidin-2-amina (INT-46)

[0166] U suspenziju natrijum hidrida (13.4 mg, 0.3 mmol) u tetrahidrofuranu (5.0 mL) je dodat 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanol (43.9 mg, 0.3 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Rastvor 4,6-dihloropirimidin-2-amina (50 mg, 0.3 mmol) u dimetilformamidu (0.5 mL) je dodat reakcionoj smeši na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je ispran sa dietil etrom da se dobije jedinjenje 1 (20 mg, 24%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.11 (s, 3H), 2.26 (br s, 4H), 2.41 (br s, 4H), 2.58-2.61 (t, J = 5.8 Hz, , 2H), 4.29-4.32 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 6.06 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 6.99 (br s, 2H). MS m/z (M+H): 272.1.

Sinteza (R)-10-(aminometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahudro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-47)

[0167] U mešani rastvor (S)-10-(azidometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-3) (50 mg, 0.1 mmol) u vodi/tetrahidrofuranu (1:3, 4.0 mL) je dodat trifenilfosfin (146 mg, 0.4 mmol) na sobnoj tempperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 85°C tokom 16 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je ispran sa dietil etrom da se dobije jedinjenje INT-47 (35 mg, 76%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca MS m/z (M+H): 333.2.

Sinteza (S)-3-hloro-10-((dimetilamino)metil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-48)

[0168] U rastvor (R)-10-(aminometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (10.0 mg, 0.03 mmol) (INT-47) u metanolu (4.0 mL) je dodat formaldehid (0.01 mL, 0.6 mmol) i reakcija je mešana tokom 10 min. na sobnoj temperaturi. Sirćetna kiselina (1.0 µL) i natrijum cijanoborohidrid (1.9 mg, 0.03 mmol) su dodati i mešanje je nastavljeno na 25°C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa etil-acetatom. Organski sloj je ispran sa vodom, zatim fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silikagelu upotrebom 5% metanola u dihlormetanu kao eluensa da se dobije jedinjenje INT-48 (7.0 mg, 64%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.21 (s, 6H), 2.33-2.35 (m, 2H), 3.37-3.45 (m, 1H), 3.53-3.62 (m, 1H), 3.63-3.70 (m, 1H), 7.07 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.19 (d, J=9.2 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 361.3.

Sinteza (S)-3-hloro-10-(jodometil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-49)

[0169] U mešani rastvor (S)-(3-hloro-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-10-il)metil metansulfonata (S8-2) (140 mg, 0.3 mmol) u acetonu (5.0 mL) je dodat natrijum jodid (506.46 mg, 3.4 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 16 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je razblažen sa ledeno hladnom vodom, pri čemu su formirane čvrste supstance. Čvrste supstance su filtrirane i osušene da bi se dobilo jedinjenje INT-49 (135 mg, 90%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.20-3.24 (m, 1H), 3.31-3.35 (m, 1H), 3.42-3.45 (m, 1H), 3.68-3.71 (m, 1H), 3.86-3.89 (m, 1H), 7.18 (br s, 1H), 7.74 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 9.18 (d, J= 8.8 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 444.2.

Sinteza (R)-3-hloro-10-((metilamino)metil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-50)

[0170] Smeša (S)-3-hloro-10-(jodometil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-49) (20 mg, 0.05 mmol) i metilamina (2M u THF) (1.8 mL, 4 mmol) je mešana na 90°C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativnom TLC da se dobije jedinjenje INT-50 (6.0 mg, 40%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.25 (s, 3H), 2.52-2.54 (m, 2H), 3.22-3.25 (m, 1H), 3.32-3.35 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 7.14 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.23 (br s, 1H), 9.24 (d, J= 9.2 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 347.1.

Sinteza (R)-6-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinamida (INT-51)

[0171] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-1 supstituisanjem 4-amino-6-hloro-N-(4-metoksibenzil) nikotinamida za 5-fluoro-2-nitroanilin. Zagrevanje je izvršeno uobičajeno na 100°C tokom 3 sata (umesto mikrotalasnom pećnicom) da se dobije jedinjenje INT-51 (15 mg, 47% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. MS: m/z 573.2 (M+H).

Sinteza (S)-2-hloro-4-((10-(hidroksimetil)-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’ :4,5]tieno [3,2-f] hinolin-3-il)amino)-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-5-karboksamida (INT-52)

[0172] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-17 supstituisanjem 4-amino-2-hloro-N-(4-metoksibenzil) pirimidin-5-karboksamida za 6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje INT-52 (22 mg, 14%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS m/z (M+H): 590.3.

Sinteza 5-(hidroksimetil)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (S9-1)

[0173] U smešu 1H-pirimidin-2,4-diona (20 g, 178.4 mmol) u vodenom rastvoru kalijum hidroksida (8.0 g, 142.7 mmol) u vodi (160.0 mL), paraformaldehid (6.96 g, 231.9 mmol) je dodat u porcijama na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 55°C tokom 36 sati. Nakon završetka, reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana na 1/3 zapremine pod smanjenim pritiskom dajući belu gustu masu. Ostatak je razblažen sa acetonom (150 mL) i mešan na 25°C tokom 15 minuta, u kojem trenutku je formiran talog. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa acetonom (3 x 50 mL) i osušena pod vakumom, da bi se dobilo S9-1 (25 g, 98%) kao bela čvrsta supstanca. MS m/z (M-H): 140.9.

Sinteza 2,4-Dihloro-5-(hlorometil)pirimidina (S9-2)

[0174] U suspenziju S9-1 (25 g, 175.9 mmol) u toluenu (50.0 mL), fosfor oksihlorid (134.87 g, 879.6 mmol) je dodat na 0°C, i mešanje je nastavljeno tokom 15 min. U reakcionu smešu, DIPEA (68.1 g, 527.7 mmol) je dodat u kapima uz održavanje temperature na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 120°C tokom 7 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u dvofaznu smešu etil acetata i vode (150 mL/150 mL) na 0°C tokom 45 minuta i mešana na istoj temperaturi za drugi 1.5 h. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa 25% etil acetata u toluenu (4 x 150 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom (2 x 500 mL) i zasićenim fiziološkim rastvorom (1 x 500 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo S9-2 (28 g, 81%) kao braon tečnost koja se koristi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.96 (s, 1H), 4.84 (s, 2H).

Sinteza 2,4-Dihloro-5-(jodometil)pirimidina (INT-53)

[0175] U rastvor natrijum jodida (23.4 g, 156.0 mmol) u suvom acetonu (150 mL), S9-2 (28.0 g, 141.8 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi i mešan tokom 30 minuta. Dobijena reakciona smeša je mešana na 65°C tokom 20 minuta. Nakon završetka, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i isprana sa acetonom (2 x 50 mL). Kombinovani filtrat je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (silikagel 60-120, 10% aceton u Pet. etru) da bi se dobilo INT-53 (21 g, 48%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.95 (s, 1H), 4.53 (s, 2H). MS m/z (M+H): 287.9.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((metilsulfonil)metil)pirimidina (INT-54)

[0176] INT-53 (.3 g, 1.038 mmol) je rastvoren u 10 mL DCM sa 2 mL DMSO. Natrijum metansulfinat (0.106 g, 1.038 mmol) je dodat i reakcija je zagrevana na 50°C. Nakon 3 h reakcija je razblažena sa heptanom, filtrirana i koncentrovana da se dobije INT-54 u DMSO koji je direktno korišćen za sledeći korak. MS m/z (M+H): 241.0, 243.0.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((difluorometoksi)metil)pirimidina (INT-55)

[0177] U mešani rastvor (2,4-dihloropirimidin-5-il)metanola (400 mg, 2.23 mmol) u CH3CN (16 mL) je dodat bakar (I) jodid (45.6 mg, 0.24 mmol) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi, nakon čega sledi mešanje na 60°C tokom 10 min. 2,2-Difluoro-2-(fluorosulfonil) sirćetna kiselina (2.39 g, 14.4 mmol) je dodata u kapima i reakciona smeša je održavana na 60°C još 4 sata. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem ledeno hladne vode (30 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL), osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Prečišćavanje kolonskom hromatografijom na silikagelu (eluens: 15% EtOAc/Heksani) da se dobije jedinjenje INT-55 (200 mg, 0.55 mmol, 24.5%) kao bezbojno ulje. MS m/z (M+H): 229.0.

Sinteza 5-(tert-butoksimetil)-2,4-dihloropirimidina (INT-56)

[0178] U mešani rastvor 2,4-dihloropirimidin-5-il)metanola (200.mg, 1.12mmol) u smeši DCM (2 mL) i cikloheksana (2 mL) je dodat tert-butil 2,2,2-trihloroetanimidat (268.56 mg, 1.23 mmol) i BF3Et2O (50 uL) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 sati. Sirovi produkt je prečišćen preparativnomTLC (heksan/etil acetat, 5:1) da se dobije INT-56 (200 mg, 76.1%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 4.52 (s, 2H), 1.33 (s, 9H).

Sinteza 5-(bromometil)-4-hloropirimidina (INT-57)

[0179] U mešani rastvor 4-hloro-5-metil-pirimidina (1.2 g, 9.33 mmol) u CCl4(30 mL) je dodat 1-bromopirolidin-2,5-dion (2.66 g, 14.9 mmol) i AIBN (0.31g, 1.87 mmol) na sobnoj temperaturi i mešan je na 80°C tokom 4 sata. Reakcija je ugašena dodatkom zasićenog vodenog rastvora Na2SO3(40 mL). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlormetanom (2 × 30 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (100 mL), filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi materijal. Prečišćavanjem hromatografijom na koloni (petroleum etar: etil acetat = 10:1) dobijen je INT-57 (500 mg, 25.8%) kao bezbojno ulje.

Sinteza N-((4-hloropirimidin-5-il)metil)-N,2-dimetilpropan-2-amina (INT-58)

[0180] U mešani rastvor 5-(bromometil)-4-hloro-pirimidina (300.0 mg, 1.45 mmol) u MeCN (20 mL) je dodat N,2-dimetilpropan-2-amin (113.4 mg, 1.3 mmol) i K2CO3(393.3 mg, 2.9 mmol) na 0°C i mešan na ovoj temperaturi tokom 1.5 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Prečišćavanjem hromatografijom na koloni (petroleum etar:etil acetat = 15:1) je dobijen INT-58 (140 mg, 45.3%) kao bezbojno ulje.

5-(Aliloksimetil)-2,4-dihloro-pirimidin (INT-59)

[0181] U rastvor alil alkohola (0.08 mL, 1.25 mmol) u tetrahidrofuranu (3.0 mL), kalijum tert-butoksid (174.8 mg, 1.56 mmol) je dodat na 0°C i mešan tokom 30 min, praćen dodatkom INT-53 (300 mg, 1.0 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta. Nakon završetka, reakcionoj smeši je dodata ledena voda (5.0 mL), koja je zatim ekstrahovana sa etil acetatom (10.0 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (10.0 mL), praćen sa zasićenim fiziološkim rastvorom (10.0 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi ostatak (300 mg). Ostatak je prečišćen preparativnom TLC da se dobije INT-59 (50 mg, 10%) kao braon tečnost. MS m/z (M+H): 219.1

2,4-Dihloro-5-(etoksimetil)pirimidin (INT-60): Metoda A

[0182] Rastvor natrijum hidrida (ili KOtBu, 8.3 mmol) (199.4 mg, 8.3 mmol) u etanolu (15.0 mL) je mešan na 50°C tokom 45 min. U smešu je dodat INT-53 (3.0 g, 10.4 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (50.0 mL), ekstrahovana sa etilacetatom (2 x 100 mL) i isprana fiziološkim rastvorom (50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritisom (2.8 g). Dobijeni sirovi materijal je prečišćen je preparativnom TLC da se dobije INT-60 (402 mg, 19%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.69-3.64 ((m, 2H), 1.30 (t, J=7.2 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 207.1.

Alternativna sinteza 2,4-Dihloro-5-(etoksimetil)pirimidina (INT-60): Metoda B

[0183]

[0184] U rastvor etanola (20 mL) je dodat acetil hlorid (0.55 g, 7.04 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, zatim je dodat S9-1 (1.0 g, 7.04 mmol). Smeša je zagrevana na 75-80°C preko noći, ohlađena i koncentrovana da se dobije sirovi 5-(etoksimetil)pirimidin-2,4 (1H, 3H)-dion (1.15 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca, koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

[0185] U suspenziju 5-(etoksimetil)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (0.5 g, 2.94 mmol) u toluenu (1 mL), fosfor oksihlorid (0.67, 7.35 mmol) je dodat na 0°C i mešan tokom 15 minuta. Reakcionoj smeši je dodata tzv. "Hünigova baza" (0.77 ml, 4.41 mmol) u kapima na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 120°C tokom 1h, zatim ohlađena do sobne temperature i sipana u dvofaznu smešu etil acetata i vode (1/1, v/v) na 0°C tokom peroioda od 45 minuta. Mešanje je nastavljeno na istoj temperaturi dodatnog 1.5 h. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa etil acetatom. Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije INT-60 (0.40 g, 65%) kao braon tečnost. Sirovi produkt je dalje prečišćen hromatografijom na silikagelu (petroleum etar/etil acetat, 30/1 do 20/1).<1>H NMR (400 MHz, CDC13): δ 8.67 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.66 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

Metoda C:

[0186]

[0187] U suspenziju NaH (79.75 mg, 3.32 mmol) u anhidrovanom THF (50 mL) na 0°C pod atmosferom azota dodat je 3-metiloksetan-3-ol (268.39 mg, 3.05 mmol). Nakon mešanja tokom 30 minuta na 0°C, reakciona smeša je prenesena putem kanile u rastvor INT-53 (800 mg, 2.77 mmol) u anhidrovanom THF (50 mL). Nakon dodatnog mešanja tokom 2 sata na 0°C, dodat je NH4Cl (zasićeni vod.) i reakcija je ekstrahovana sa etil-acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko MgSO4, koncentrovani pod smanjenim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa smešom petroleum etra:etil acetata (1/1). Dobijen je INT-61 (350 mg, 51%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.71 (s, 1H), 4.77-4.75 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.53 (s, 2H), 4.48-4.46 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.66 (s, 3H). MS m/z (M+H): 249.1.

[0188] Sledeći intermedijeri su sintetizovani sa jednom ili više Metoda A, Metoda B ili Metoda C kao što je opisano iznad, zamenjujući etanol ili 3-metiloksetan-3-ol ovih metoda sa odgovarajućim alkoholom u koloni obeleženom "Alkohol" da bi se dobila jedinjenja prikazana u koloni "produkt" tabele ispod.

Metode A and C

[0189]

Metoda B

[0190]

(nastavak )

Sinteza rac-2,4-dihloro-5-((2-(metoksimetil)pirolidin-1-il)metil)pirimidina

[0191] U mešaniu suspenzoju INT-53 (500.0 mg, 1.73 mmol) u anhidrovanom CH3CN (20 mL, DMF je takođe prihvatljiv rastvarač za ovu transformaciju) je dodat kalijum karbonat (358.3 mg, 2.6 mmol) i rac-2-(metoksimetil)pirolidin hidrohlorid (262.4 mg, 1.73 mmol) na 0 °C da se dobije braon rastvor. Rastvor je mešan tokom 3 sata. Reakciona smeša je razblažena sa hloroformom i koncentriovana. Prečišćavanje preparativnom TLC (heksan: etil acetat 3/1) je dalo INT-69 (160 mg, 33.4%) MS m/z (M+H): 276.2.

[0192] Sledeći intermedijeri su sintetizovani sa istom metodom kao INT-69 zamenjujući rac-2-(metoksimetil)pirolidin hidrohlorid sa odgovarajućim aminom u koloni obeleženom "Amin" koristeći postupak iznad za data jedinjenja prikazana u koloni produkt.

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

Sinteza (R)-metil 2-hloro-6-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)oksi)pirimidin-4-karboksilata (INT-91)

[0193] INT-6 (0.3 g, 1.002 mmol) je dodat u 15 mL suvog DMF i podvrgnut ultrazvuku. U dobijeni rastvor dodat je K2CO3(1.385 g, 10.02 mmol) i reakcija je zagrevana na 90°C tokom 10 minuta. Reakcija je zatim ohlađena i dodat je metil 2,6dihloropirimidin-4-karboksilat (0.270 g, 1.303 mmol). Reakcija je isprana argonom i ponovo zagrevana na 90°C tokom 3 sata. Nakon što je procenjeno da je reakcija završena, reakcija je ohlađena, filtrirana i sipana u vodu. Nastali žuti talog je izolovan filtracijom, trituriran sa EtOAc i osušen pod vakumom preko noći. Dobijeni prah, INT-91 (0.373 g, 0.794 mmol, 79% prinos) je korišćen bez daljeg prečišćavanja za naknadne transformacije. MS m/z (M+H): 470.0.

Sinteza (R)-3-((2-hloro-6-(hidroksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-92)

[0194] INT-91 (0.373 g, 0.794 mmol) je rastvoren u DCM (6 mL) sa MeOH (1.2 mL) i ohlađen do 0°C. Natrijum borohidrid (0.120 g, 3.18 mmol) je dodat u dve porcije tokom 30 minuta. Reakciona smeša je ostavljena da se meša tokom dva sata, nakon toga je razblažena sa 5 mL metanola i koncentrovana na silikagelu. Zatim je prečišćena fleš hromatografijom koristeći gradijent 0-10% MeOH u DCM da se dobije INT-92 (0.141 g, 0.319 mmol, 40.2 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 9.35 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (br, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.59 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.4 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 442.1.

Sinteza (R)-3-((2-hloro-6-(hlorometil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino [5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-93)

[0195] U 20 mL bočicu, CCl4(0.277 ml, 2.87 mmol) i trifenilfosfin (753 mg, 2.87 mmol) su mešani na sobnoj temperaturi u 5 mL DCM tokom 15 minuta. Pomenuti rastvor je zatim prebačen u bočicu koja sadrži INT-92 (141 mg, 0.319 mmol). Dodato je 2 mL suvog DMF-a kao pomoć u solubilizaciji početnog materijala i reakcija je zagrevna na 50°C preko noći. Sledećeg jutra je procenjeno da je reakcija završena, koncentrovana na silika gelu i prečišćena fleš hromatografijom koristeći gradijent od 0-10% MeOH u DCM, da bi se dobio INT-93 (137 mg, 0.298 mmol, 93% prinos). MS m/z (M+H): 460.0; 462.0.

Sinteza (R)-tert-butil 4-(2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5] tieno [3,2-f] hinolin-3-il)oksi)pirimidin-5-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (INT-94)

[0196] 1-116 (240 mg, 0.489 mmol), tert-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (227 mg, 0.734 mmol), kalijum karbonat (203 mg, 1.467 mmol), i PdCl2(dppf) (35.8 mg, 0.049 mmol) u DMF (8.0 mL) su degazirani evakuacijom/ultrazvukom (3x), svaki put punjeni sa N2. Reakciona smeša je zagrevana na 85°C uz mešanje. Nakon 3 sata, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM (5x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Prečišćavanje sa HPLC (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) je dalo INT-94 (54 mg, 0.091 mmol, prinos 19%) kao žutu čvrstu supstancu.

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-95)

[0197] INT-94 (54 mg, 0.091 mmol) je rastvoren u TFA (1.0 mL) da se dobije crveni rastvor. Nakon 3 minuta, UPLC pokazuje kompletnu reakciju. TFA je uklonjen rotacionim isparavanjem-evaporacijom, i dobijeni tamnocrveni ostatak je tretiran sa amonijum hidroksidom (~ 2 ml, pažljivo, u kapima). Boja se promenila iz tamnocrvene u žutu i stvorio se talog. Smeša je podvrgnuta ultrazvuku da bi se formirala suspenzija koja je koncentrovana rotaciionim isparavanjem da bi se dobio žuti čvrsti ostatak koji je korišćen direktno bez daljeg prečišćavanja.

Sinteza (R)-3-((5-((aliloksi)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-96)

[0198] U rastvor INT-6 (50 mg, 0.2 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL), je dodat kalijum tert-butoksid (37.2 mg, 0.3 mmol) na 0°C i mešan tokom 10 min, praćen dodavanjem INT-59 (72.7 mg, 0.3 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa vodom (5.0 ml) i ekstrahovana sa 10% metanola/ dihlorometan (2 x 10 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (10 mL), praćen zasićenim fiziološkim rastvorom (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal (50 mg) je prečišćen je preparativnom TLC da se dobije INT-96 (5 mg, 6%) kao svetlo žuta čvtsta supstanca. MS m/z (M+H): 482.1.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((4-(2-metoksietoksi)piperidin-1-il)metil)pirimidin (INT-99)

[0199] U mešanu suspenziju K2CO3(539.0 mg, 3.9 mmol) i INT-53 (750 mg, 2.6 mmol) u CH3CN (25.0 mL) je dodat 4-(2-metoksietoksi)piperidin hidrohlorid (250.0 mg, 1.3 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Nakon završetka reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije INT-99 (152-0 mg, 36.5%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 3.62-3.53 (m, 6H), 3.45-3.37 (m, 4H), 2.85-2.72 (m, 2H), 2.35-2.22 (m, 2H), 2.00-1.82 (m, 2H), 1.72-1.55 (m, 2H). MS m/z (M+H): 320.1.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((4-(2-fluoroetoksi)piperidin-1-il)metil) (INT-100)

[0200] U mešanu suspenziju K2CO3(602.0 mg, 4.4 mmol) i INT-53 (1.6 g, 5.5 mmol) u CH3CN (25.0 mL) je dodat 2-(piperidin-4-iloksi)etanol hidrohlorid (604.0 mg, 2.2 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Nakon završetka reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije 2-((1-((2,4-dihloropirimidin-5-il)metil)piperidin-4-il)oksi)etan-1-ol (304.0 mg, 45%) kao bezbojna tečnost. MS m/z (M+H): 302.1.

[0201] U mešani rastvor 2-((1-((2,4-dihloropirimidin-5-il)metil)piperidin-4-il)oksi)etan-1-ol (304.0 mg, 1.0 mmol) u CH2Cl2(8.0 mL) je dodat DAST (322.0 mg, 2.0 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Nakon završetka reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije INT-100 (70.0 mg, 23%) kao bezbojna tečnost MS m/z (M+H): 308.2.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((4-(metoksi-d3)piperidin-1-il)metil)pirimidina (INT-101)

[0202] U mešanu suspenziju K2CO3(539.0 mg, 3.9 mmol) i INT-53 (750 mg, 2.6 mmol) u CH3CN (25.0 mL) je dodat 4-(metoksi-d3)piperidin hidrohlorid (250.0 mg, 1.3 mmol)na 0 °C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije INT-101 (167.0 mg, 46%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1H), 3.57 (s, 2H), 3.31-3.20 (m, 1H), 2.78-2.65 (m, 2H), 2.38-2.22 (m, 2H), 1.95-1.82 (m, 2H), 1.70-1.54 (m, 2H). MS m/z (M+H): 279.1.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((4-izopropoksipiperidin-1-il)metil)pirimidina (INT-102)

[0203] U mešanu suspenziju K2CO3(1.45 g, 10.5 mmol) i INT-53 (2.0 g, 6.9 mmol) u CH3CN (50 mL) je dodat 4-izopropoksipiperidin hidrohlorid (623 mg, 3.5 mmol) na 0°C u porcijama. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić-sloj Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije INT-102 (547 mg, 51.5%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 3.72-3.66 (m, 1H), 3.61-3.54 (m, 2H), 3.47-3.38 (m, 1H), 2.81-2.69 (m, 2H), 2.35-2.22 (m, 2H), 1.93-1.79 (m, 2H), 1.68-1.54 (m, 2H), 1.14 (d, J = 4.0 Hz, 6H). MS m/z (M+H): 304.2.

Sinteza 5-((4-(tert-butoksi)piperidin-1-il)metil)-2,4-dihloropirimidina (INT-103)

[0204] U mešanu suspenziju K2CO3(478.0 mg, 3.5 mmol) i INT-53 (500.0 mg, 1.7 mmol) u CH3CN (15.0 mL) je dodat 4-tertbutoksipiperidin hidrohlorid (200.0 mg, 1.0 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon završetka, reakciona smeša je filtrirana kroz jastučić--sloj Celite® i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom da se dobije INT-103 (168 mg, 53%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 (s, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.53-3.47 (m, 1H), 2.80-2.76 (m, 2H), 2.35-2.20 (m, 2H), 1.83-1.69 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 2H), 1.20 (s, 9H). MS m/z (M+H): 318.0.

Sinteza 2,4-dihloro-5-((etoksi-d5)metil)pirimidina (INT-104)

[0205] Natrijum etan-1-olat-d5(0.969 mmol) u 3.0 mL THF je pripremljen kao što sledi. U suspenziju natrijum hidrida (60% u mineralnom ulju, 44.3 mg, 1.108 mmol) u THF (3.0 ml) na 0°C je dodat etan-1,1,2,2,2-d5-1-ol-d (0.057 mL, 0.969 mmol). Kupka za hlađenje je uklonjena i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min.

[0206] Prvi deo natrijum etan-1-olata-d5u THF (3.0 mL; 0.969 mmol) je pripremljen prema iznad navedenom postupku i ohlađen do 0°C. Ohlađenom rastvoru natrijum etan-1-olata-d5u THF je dodat rastvor INT- 53 (400 mg, 1.385 mmol) u THF (3.0 mL). Nakon 2 sata, drugi deo-porcija natrijum etan-1-olata-d5u THF (3.0 mL; 0.969 mmol) je pripremljen prema iznad navedenom postupku, ohlađen do 0°C i dodat u reakcionu smešu. Nakon 14 h, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (5.0 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 20 mL) i isprana sa fiziološkim rastvorom (5 mL). Organski sloj se osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskm. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 5% do 20% gradijenta EtOAc-heptana da se dobije INT-104 (99 mg, 34% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 4.53 (s, 2H). MS m/z (M+H): 212.1.

Primer 1

[0207]

Sinteza (R)-etil 2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksilat (I-18)

[0208] U 20 mL bočicu, (R)-3-amino-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-3) (0.095 g, 0.318 mmol), etil 2,4-dihloropirimidin-5-karboksilat (0.084 g, 0.382 mmol), i tzv. "Hunigova baza" (0.111 ml, 0.637 mmol) su dodati u 5 mL i-PrOH. Bočica je hermetički zatvorena i suspenzija je zagrevana do 95°C tokom 24 sata. Jednom kada se utvrdi da je završena, reakcija je ohlađena i formiran je talog. 5 mL etil etra je dodato, bočica je kratko podvrgnuta ultrazvuku, i produkt je izolovan filtracijom da se dobije jedinjenje I-18 (0.112 g, 0.232 mmol, prinos 72.8%).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 7 Hz, 3H), 3.42-3.46 (m, 2H), 3.60 (m, 1H), 4.39 (q, J = 7 Hz, 2H), 7.08 (br s, 1H), 7.81 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.93 (s, 1H), 9.27 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 10.99 (s, 1H). MS m/z (M+H): 483.29.

Primer 2

[0209]

Sinteza (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidina-5-karbonitrila (1-16)

[0210] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-18 supstitisanjem 2,4-dihloropirimidin-5-karbonitrila umesto etil 2,4-dihloropirimidin-5-karboksilata da se dobije jedinjenje I-16 (13 mg, 11% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 3.40-3.44 (m, 2H), 3.56-3.60 (m, 1H), 7.08 (br s, 1H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.81 (br s, 1H), 9.20 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 11.14 (s, 1H). MS m/z (M+H): 436.27.

Primer 3

[0211]

Sinteza (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino-[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)-N-(1-metilpiperidin-4-il)pirimidin-5-karboksamida (1-19)

[0212] U bočici od 4 dram , DMF (0.5 mL) je dodat u smešu (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksine kiseline (INT-41) (10 mg, 0.022 mmol) i HATU (9.19 mg, 0.024 mmol). Dobijena smeša je ohlađena do 0°C korišćenjem hlađenja led-metanol kupkom. Zatim prethodno pomešani 1-metilpiperidin-4-amin (2.51 mg, 0.022 mmol) i DIPEA (0.012 mL, 0.066 mmol) u 0.5 mL DMF (0.5 mL) su dodati polako gornjoj smeši i reakcija je mešana zagrevajući se na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Nakon završetka reakcije, sirova smeša je prečišćena na preparativnoj HPLC upotrebom acetonitrila/H2O (01% TFA) da se dobije jedinjenje I-19 (4 mg, 7.26 mmol, 33.0% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSOd6):δ 9.20-9.04 (m, 3H), 8.38-8.09 (m, 4H), 7.40 (d, 1H), 7.13 (br s, 1H), 3.52-3.36 (m, 4H), 3.05-3.01 (m, 2H), 2.73 (m, 3H), 2.17-1.71 (m, 4H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 514.9 (M-36<+>).

Primer 4

[0213]

Sinteza (R)- 2-hloro-N-ciklopropil-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (I-21)

[0214] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-19 upotrebom ciklopropilamina umesto 1-metilpiperidin-4-amina, da se dobije jedinjenje 1-21 kao čvrsta supstanca. MS m/z: 457.9 (M-36).

Primer 5

[0215]

Sinteza (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5] tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)-N-(oksetan-3-il)pirimidin-5-karboksamida (1-20)

[0216] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-19 upotrebom oksetan-3-amina umesto 1-metilpiperidin-4-amina da se dobije jedinjenje I-20, izolovano kao čvrsta supstanca. MS m/z: 473.9 (M-36).

Primer 6

[0217]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((R)-3-(dimetilamino)pirolidin-1-karbonil)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-24)

[0218] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-19 upotrebom (R)-N,N-dimetilpirolidin-3-amina umesto 1-metilpiperidin-4-amina da se dobije jedinjenje I-24, izolovano kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 9.90 (br s, 1H), 9.24 (d, 1H), 9.20 (d, 1H), 9.04 (d, 1H), 8.20 (m 1H), 8.19 (d, 1H), 7.34 (m, 1H), 7.11 (br t, 1H), 4.07-3.30 (m, 5H delimično prekriven vodom), 2.87 (br s, 6H), 2.49-2.15 (m, 2H, delimično spojen sa pikom rastvarača), 1.17 (d, 3H).

Primer 7

[0219]

Sinteza (R)-6-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinonitrila (I-25)

[0220] U rastvor (R)-3-amino-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-3) (60 mg, 0.2 mmol) u 1,4-dioksanu (3.0 mL), 6-hloro-4-jodonikotinonitril (63.8 mg, 0.2 mmol) i kalijum karbonat (55.6 mg, 0.4 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je degazirana toko 5 minuta nakon čega sledi dodavanje Pd2(dba)3(9.1 mg, 0.01 mmol) i Ksantfosa (19.2 mg, 0.03 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 8 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa vodom (7-0 mL), dovodeći do formiranja čvrstog taloga. Čvrste supstance su filtrirane i osušene na vazduhu, zatim kristalizovane iz dimetilsulfoksida/vode da se dobije jedinjenje I-25 (40 mg, 43%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.59 (br s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 7.64 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.03-8.08 (m, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 9.13 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 10.1 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 435.2.

Primer 8

[0221]

Sinteza (R)-6-fluoro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinonitrila (I-27)

[0222] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-25, supstitisanjem 6-fluoro-4-jodonikotinonitrila za 6-hloro-4-jodonikotinonitril da se dobije jedinjenje I-27 (40 mg, 28%), izolovano kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.55 (br s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 7.67 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 8.03-8.07 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 9.14 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 10.1 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 419.3.

Primer 9

[0223]

Sinteza (R)-6-fluoro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’ :4,5] tieno [3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinamida (1-29)

[0224] (R)-6-Fluoro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinonitril (I-27) (30 mg, 0.1 mmol) je tretiran sa konc. H2SO4(0.5 mL) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 1 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je ugašena sa hladnom vodom (1.0 mL), pri čemu su formirane čvrste supstance. Dobijene čvrste supstance su filtrirane i osušene na vazduhu da bi se dobio sirovi produkt. Sirovi produkt je rastvoren u dimetil sulfoksidu (1.0 mL) i zagrevan na 80°C, zatim filtriran da se uklone nerastvorene čestice. Filtratu je dodata voda (1.0 mL). Formirane čvrste supstance su filtrirane i osušene na vazduhu da se dobije jedinjenje I-29 (6.0 mg, 17%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 3.44 (br s, 2H), 3.58-3.59 (m, 1H), 7.01 (br s, 1H), 7.28 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 7.88 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.02 (br s, 1H), 8.06 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.42 (br s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 9.11 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 12.08 (s, 1H). MS m/z (M+H): 437.2.

Primer 10

[0225]

Sinteza (R)-10-metil-3-((2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-14)

[0226] U rastvor (R)-tert-butil 10-metil-3-((2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)amino)-8-okso-10,11-dihidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-12(9H)-karboksilat (INT-42) (15.0 mg, 0.03 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL), trifluorosirćetna kiselina (2.0 mL) je dodata na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0°C tokom 20 min. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i azeotropirana sa hloroformom (2 x 10 mL). Dobijeni ostatak je razblažen sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt je prečišćen preparativnom TLC da se dobije jedinjenje I-14 (6.0 mg, 49%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.59 (br s, 1H), 7.02 (br s, 1H), 7.88 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.93 (br s, 1H), 8.03 (d, J= 4.1 Hz, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.09 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.70 (d, J=5.9 Hz, 1H), 9.15 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 11.19 (br s, 1H). MS: m/z 455.3 (M+H).

Primer 11

[0227]

Sinteza (R)-3-((5-fluoro-2-nitrofenil)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-1)

[0228] (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12) (120 mg, 0.4 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je tretiran sa 5-fluoro-2-nitroanilinom (70 mg, 0.4 mmol). Dobijen rastvor je kratko degaziran primenom vakuma, i zatim ispran sa azotom. Dodati su cezijum karbonat (246 mg, 0.7 mmol), Pd2(dba)3(17 mg, 0.01 mmol) i Ksantfos (43 mg, 0.07 mmol), i smeša je dalje degazirana kao što je opisano iznad. Reakciona smeša je mešana tokom 1 sata pod mikrotalasnim zračenjem na 130°C. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je filtrirana kroz celit, isprana sa etil-acetatom i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je trituriran sa dietil etrom i dalje prečišćen preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje I-1 (16 mg, 10%) kao svetlo braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (br s, 2H), 3.58 (br s, 1H), 7.00-7.04 (m, 2H), 7.47 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.01-8.03 (m, 2H), 8.24 (dd, J = 6.1, 9.2 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 2.6, 12.1 Hz, 1H), 9.07 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 10.26 (s, 1H). MS: m/z (M+H): 438.22 (M+H).

Primer 12

[0229]

Sinteza (R)-4-fluoro-2-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)benzonitrila (1-2)

[0230] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem 2-amino-4-fluoro benzonitrila za 5-fluoro-2-nitroanilin da se dibije jedinjenje I-2, dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.57-3.59 (m, 1H), 6.97 (t, J = 5 Hz, 1H), 7.03 (dt, J = 2.5, 8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 6.4, 8.7 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.35 (dd, J = 2.5, 12 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 9 Hz, 1H), 9.61 (s, 1H). MS: m/z 418.1(M+H).

Primer 13

[0231]

Sinteza (R)-3-((2-hloropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-5)

[0232] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem 2-hloropirimidin-4-amina za 5-fluoro-2-nitroanilin da se dobije jedinjenje I-5, , dobijeno kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (br s, 2H), 3.58-3.59 (m, 1H), 7.07 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.03-8.08 (m, 2H), 8.33 (br s, 1H), 8.45 (d, J = 6 Hz, 1H), 9.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 10.99 (s, 1H). MS: m/z 411.1(M+H).

Primer 14

[0233]

Sinteza (R)-3-((2-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-8)

[0234] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisa njem 2-fluoropirimidin-4-amina za 5-fluoro-2-nitroanilin. Zagrevanje je izvršeno uobičajeno na 90°C tokom 16 sati (umesto mikrotalasnim zračenjem) da se dobije jedinjenje I-8 (8 mg, 11% prinos), dobijeno kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.58 (s, 1H), 7.05 (br s, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.46 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 9.15 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 10.98 (s, 1H). MS: m/z 395.32 (M+H).

Primer 15

[0235]

Sinteza (R)-etil4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5] tieno [3,2-f] hinolin-3-il)amino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (1-12)

[0236] U 15 mL bočicu, 1,4-dioksan je dodat u (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2:f]hinolin-8-on (INT-5) (10 mg, 0.028 mmol) i etil 4-amino-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (INT-8) (8.83 mg, 0.041 mmol) praćen NaOt-Bu (7.96 mg, 0.083 mmol), i tzv. "BrettPhos-G1" prekatalizatorom (4.00 mg, 0.552 µmol). Dobijena heterogena smeša je prečišćena sa argonom tokom 3 minuta i zagrevana na 80°C preko noći. Nakon završetka, reakcija je prečišćena preparativnom HPLC upotrebom acetonitril/H2O (0.1% TFA) da se dobije jedinjenje I-12 (6 mg, 0.012 mmol, prinos 43.9%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.01 (s, 1H), 9.23 (d, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.69 (d, 1H), 8.10 (m, 2H), 7.81 (d, 1H), 7.10 (br.s, 1H), 4.38 (q, 2H), 3.60 (m, 1H), 3.45 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 1.35 (d, 3H), 1.18 (t, 3H). MS m/z: 494.9 (M+H).

Primer 16

[0237]

Sinteza (R)-2-hloro-4-(metil(10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamid (1-34)

[0238] U mešani rastvor (R)-2-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-(metil(10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (INT-44) (60 mg, 0.1 mmol) u dihlorometanu (1.0 mL) su dodati trifluorosirćetna kiselina (1.0 mL, 0.1 mmol) i trifluorometansulfonska kiselina (153.12 mg, 1.0 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom i formirane čvrste supstance su filtrirane i isprane sa vodom, zatim osušene u vakumu. Sirovi produkt je prečišćen preparativnom TLC eluiranjem sa 5% metanolom u dihlormetanu da se dobije jedinjenje I-34 (6.0 mg, 12%) kao narandžasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.42 (m, 2H), 3.57 (m, 1H), 4.14 (s, 3H), 7.09 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 7.76 (br s, 1H), 7.84 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.85 (br s, 1H), 9.10 (d, J =9.9 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 468.4.

Primer 17

[0239]

Sinteza (R)-2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidina-5-karboksamida (1-9)

[0240] U mešani rastvor (R)-2-hloro-N-(4-metoksaibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (INT-43) (20 mg, 0.03 mmol) u dihlorometanu (1.0 mL) su dodati trifluorosirćetna kiselina (1 mL) i trifluorometansulfonska kiselina (0.03 mL, 0.3 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je razblažena sa vodom, i formirane čvrste supstance su filtrirane, isprane sa dihlorometanom i osušene. Dobijeni prah je prečišćen preparativnom TLC eluiranjem sa 5% MeOH u dihlormetanu da bi se dobilo jedinjenje I-9 (11 mg, 68%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.46 (m, 2H), 3.60 (m, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.82 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.01 (br s, 1H), 8.07-8.09 (m, 2H), 8.51 (br s, 1H), 8.61 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 9.26 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 12.11 (br s, 1H). MS: m/z 454.3(M+H).

Primer 18

[0241]

Sinteza (R)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-11)

[0242] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1, supstituisanjem 6-fluoropirimidin-4-amina za 5-fluoro-2-nitroanilin. Zagrevanje je izvršeno uobičajeno na 100°C tokom 16 sati (umesto mikrotalasnim zračenjem) da bi se dobilo jedinjenje I-11 kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.59-3.60 (m, 1H), 6.99 (t, J = 5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.06 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.17 (s,1H), 8.59 (d, J = 2 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 9 Hz, 1H), 10.93 (s, 1H). MS: m/z 395.1 (M+H).

Primer 19

[0243]

Sinteza (R)-3-((6-hloropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-7)

[0244] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem 6-hloropirimidin-4-amina za 5-fluoro-2-nitroanilin. Zagrevanje je izvršeno uobičajeno na 100°C tokom 16 sati (umesto mikrotalasnim zračenjem) da bi se dobilo jedinjenje I-7 kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.47 (br s, 2H), 3.58 (br s, 1H), 7.00 (br s, 1H), 7.76 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.04-8.08 (m, 2H), 8.46 (s, 1H), 8.64 (s, 1), 9.11 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 10.88 (s, 1H). MS m/z (M+H): 411.3.

Primer 20

[0245]

Sinteza (R)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)(metil)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on(I-38)

[0246] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem 6-fluoro-N-metilpirimidin-4-amina za 5-fluoro-2-nitroanilin. Zagrevanje je izvršeno uobičajeno na 90°C tokom 16 h (umesto mikrotalasnim zračenjem) da bi se dobilo jedinjenje I-38 kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44-3.46 (m, 2H), 3.59-3.60 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 6.88 (s, 1H), 7.10 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.85 (d, , J = 8.9 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 9.18 (d, J = 9.1 Hz, 1H). MS: m/z 409.3(M+H).

Primer 21

[0247]

Sinteza (R)-6-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’:4,5]tieno [3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinamida (I-15)

[0248] U mešani rastvor (R)-6-hloro-N-(4-metoksibenzil)-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)nikotinamida (INT-51) (20 mg, 0.04 mmol) u dihlorometanu: trifluorosirćetna kiselina (2 mL, odnos 1: 1), je dodata trifluorometansulfonska kiselina (52 mg, 0.34 mmol) na 0°C i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i dodat je zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(3 mL) na 0°C i mešan tokom 20 minuta. Formirana čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa vodom, i sirovo jedinjenje je prečišćeno preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje 1-15 (8 mg, 61 prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ 1.20 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.44-3.49 (m, 2H), 3.58 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.04 (, J = 5.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.93 (br s, 1H), 8.08 (d, J = 9 Hz, 2H), 8.48 (br s, 1H), 8.72 (s, 1H), 9.10 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 9.27 (s, 1H), 11.97 (s, 1H). MS: m/z 453.28(M+H).

Primer 22

[0249]

Sinteza (R)-etil 4-hloro-2-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksilata (I-23)

[0250] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-1 supstituisanjem etil 2-amino-4-hloro-pirimidin-5-karboksilata za 5-fluoro-2-nitroanilin i (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[ 5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-5) za (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12). Jedinjenje iz naslova I-23 je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 4.32 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.29-4.34 (m, 2H), 7.07 (t, J =5.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz,

1H), 8.40 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.19 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 11.2 (brs, 1H). MS m/z (M+H): 483.1.

Primer 23

[0251]

Sinteza (R)-3-((2,6-difluoropiridin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-6)

[0252] Rastvor (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12) (50 mg, 0.16 mmol), 2,6-difluoropiridin-4-amina (40.9 mg, 0.3 mmol) i cezijum karbonata (154 mg, 0.5 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je degaziran sa argonom tokom 10 min. BINAP (9.8 mg, 0.02 mmol) i Pd2(dba)3(14.4 mg, 0.02 mmol) su dodati, rastvor je ponovo degaziran sa argonom tokom 5 minuta, i zatim zagrevan na 100°C tokom 16 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeno sirovo jedinjenje je prečišćeno kolonskom hromatografijom (100-200 silika mreže, 10% metanol u dihlormetanu kao eluens), praćenom koncentracijom relevantnih frakcija i daljim prečišćavanjem HPLC reverzne faze, da se dobije jedinjenje 1-6 (7 mg, 10% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 3.43 (s, 2H), 3.59 (d, J = 4 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 7.87 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.03-8.06 (m, 2H), 9.09 (d, J = 9 Hz, 1H), 10.51 (s, 1H). MS: m/z 412.1(M+H).

Primer 24

[0253]

Sinteza (R)-3-((2-fluoropiridin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-3)

[0254] U 10 mL mikrotalasnoj bočici, Pd2(dba)3(21.61 mg, 0.024 mmol), cezijum karbonat (77 mg, 0.236 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2’-(N,N-dimetilamino)-bifenil (tzv. "DavePhos", 18.58 mg, 0.047 mmol), 4-amino-2-fluoropiridin (8.82 mg, 0.079 mmol), i (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12) (25 mg, 0.079 mmol) su rastvoreni u 0.5 mL suvog t-BuOH. Reakcija je stavljena pod vakum, zatim je zasipana azotom. Reakcija je zagrevana na 100°C preko noći, zatim ohlađena, filtrirana i koncentrovana do suvoće. Ostatak je ponovo rastvoren u DMSO i prečišćen sa HPLC reverzne faze sa 95%-5% H2O (sadržavajući 0.5% TFA v/v)/acetonitril da se dobije jedinjenje I-3 (0.004 g, 7.8 µmol, 10.0% prinos). MS: m/z 393.6 (M+H), 391.7 (M-H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 1.13 (d, 3H), 3.39 (m, 2H), 3.55 (m, 1H), 6.94 (br s, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.99 (m, 4H), 9.02 (d, 1H), 10.21 (s, 1H).

Primer 25

[0255]

Sinteza (R)-3-((2-hloropiridin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-4)

[0256] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-3 supstituisanjem 4-amino-2-hloro piridina za 4-amino-2-fluoropiridin da se dobije jedinjenje I-4 (0.003g, 5.7 µmol, 7.3% prinos). MS: m/z 409.7 (M+H), 407.8 (M-H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.13 (d, 3H), 3.38 (br s, 2H), 3.55 (m, 1H), 6.95 (br s, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 8.01 (m, 2H), 8.16 (d, 1H), 9.03 (d, 1H).

Primer 26

[0257]

Sinteza (R)-3-((2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on(1-32)

[0258] U 5 mL mikrotalasnu bočicu, (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hiinolin-8-on (S1-12) (0.04 g, 0.126 mmol), BINAP (7.84 mg, 0.013 mmol), Pd(OAc)2(8.48 mg, 0.013 mmol), cezijium karbonat (0.082 g, 0.252 mmol) i 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) (0.028 g, 0.138 mmol) su suspendovani u 3 mL 1,4-dioksana. Reakciona smeša je stavljena pod vakum, podvrgnuta ultrazvuku zatim zasipana azotom. Reakcija je zračena 1 sat u mikrotalasnoj pećnici tzv. "Biotage Explorer" na 130°C tokom 1h. Reakcija je ohlađena, filtrirana i koncentrovana do suvoće. Ostatak je ponovo rastvoren u DMSO i prečišćen sa HPLC reverzne faze sa 95% -5% H2O (sadržavajući 0.5% TFA v/v)/acetonitril da se dobije jedinjenje I-32 (0.017 g, 0.035 mmol, prinos 28.0%). MS: m/z 466.1(M+H), 463.8(M-H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, 3H), 2.88 (s, 6H), 3.43 (m, 2H), 3.59 (m, 3H), 4.67 (m, 2H), 7.04 (m, 1H), 7.78 (br s, 1H), 7.88 (d, 1H), 8.08 (d, 1H), 9.14 (d, 1H), 9.89 (br s, 1H), 10.93 (s, 1H).

Primer 27

[0259]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-37)

[0260] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 6-fluoro-2-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-4-amina (INT-9a) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-37 (0.0033g, 7.07 µmol, 5.6% prinos). MS: m/z 467.1 (M+H), 464.6(M-H).

Primer 28

[0261]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-39)

[0262] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 6-fluoro-2-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-4-amina (INT-15a) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a) da se dobije jedinjenje I-39 (0.01g, 0.02 mmol, 12.9 % prinos). MS: m/z 495.0(M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, 3H), 1.38 (s, 3H), 3.55 (m, 3H), 4.33 (d, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.51 (d, 2H), 7.03 (t, 1H), 7.75 (br s, 1H), 7.88 (d, 1H), 8.07 (m, 2H), 9.12 (d, 1H), 10.91 (s, 1H).

Primer 29

[0263]

Sinteza (R)-3-((4-fluoro-6-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on(1-42)

[0264] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 4-fluoro-6-(oksetan-3-iloksi)pirimidin-2-amina (INT-9b) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin (S3-3a). Ovo je dalo jedinjenje I-42 (0.02g, 0.04 mmol, 26.7% prinos). MS: m/z 467.1(M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.20 (d, 3H), 3.47 (m, 2H), 3.62 (m, 1H), 4.64 (m, 2H), 4.97 (m, 2H), 5.67 (m, 1H), 6.28 (sm 1H), 7.08 (br s, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 9.18 (d, 1H), 10.66 (s, 1H).

Primer 30

[0265]

Sinteza (R)-3-((4-fluoro-6-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on(I-43)

[0266] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 4-fluoro-6-((3-metiloksetan-3-il)metoksi)pirimidin-2-amina (INT-15b) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin. Ovo je dalo jedinjenje I-43 (0.01g, 0.02 mmol, 13.8% prinos). MS: m/z 495.1(M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, 3H), 1.38 (s, 3H), 3.46 (br s, 2H), 3.61 (m, 1H), 4.33 (d, 2H), 4.52 (m, 4H), 6.25 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 9.17 (d, 1H), 10.64 (s, 1H).

Primer 31

[0267]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(((S)-tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-40)

[0268] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem (S)-6-fluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-23) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-40 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.82 (s, 1H), 9.11 (d, 1H), 8.06 (d, 2H), 7.84 (d, 2H), 7.53 (br s, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.47 (t, 1H), 3.95-3.78 (m, 4H), 3.78-3.30 (m, 4H), 2.27-2.01 (m, 2H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 480.8 (M+H).

Primer 32

[0269]

Sinteza (R)-3-((4-fluoro-6-(((S)-tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2f]hinolin-8-on (I-50)

[0270] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem (S)-4-fluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-amina (INT-22) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-50 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.61 (s, 1H), 9.15 (d, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.05 (d, 2H), 7.76 (d, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.19 (s, 1H), 4.01-3.83 (m, 4H), 3.60-3.45 (m, 3H), 2.48-2.01 (m, 2H), 1.18 (d, 3H). MS m/z: 480.8 (M+H).

Primer 33

[0271]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(((R)-tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2f]hinolin-8-on (I-41)

[0272 Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem (R)-6-fluoro-2-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-27) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-41 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.83 (s, 1H), 9.11 (d, 1H), 8.05 (d, 2H), 7.84 (d, 2H), 7.65 (br s, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.48 (t, 1H), 3.95-3.82 (m, 4H), 3.51 (m, 1H), 3.43 (m, 2H), 2.30-2.06 (m, 2H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 481.0 (M+H).

Primer 34

[0273]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2f]hinolin-8-on (I-44)

[0274] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 6-fluoro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (INT-19) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-44 (18 mg, 0.038 mmol, 27.2% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 10.82 (s, 1H), 9.10 (d, 1H), 8.05 (m, 2H), 7.84 (m, 2H), 7.01 (br s, 1H), 4.42 (t, 2H), 3.67 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 1.16 (d, 3H). MS m/z: 469.0 (M+H). Primer 35

[0275]

Sinteza (R)-3-((4-fluoro-6-(((R)-tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2f]hinolin-8-on (I-46)

[0276] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem (R)-4-fluoro-6-((tetrahidrofuran-3-il)oksi)pirimidin-2-amina (INT-26) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-46 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.61 (s, 1H), 9.14 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.04 (d, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.57 (t, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.87-3.77 (m, 3H), 3.61 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 2.31 (m, 1H), 2.04 (m, 1H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 481.0 (M+H).

Primer 36

[0277]

Sinteza (R)-3-((4-fluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-45)

[0278] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 4-fluoro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-amina (INT-18) za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-45 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.62 (s, 1H), 9.15 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.07 (m, 2H), 7.76 (d, 1H), 7.05 (br s, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.52 (t, 2H), 3.69 (t, 2H), 3.59 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 469.0 (M+H).

Primer 37

[0279]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(metoksimetil)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-51)

[0280] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-32 supstituisanjem 6-hloro-2-(metoksimetil)pirimidin-4-amina za 2-(2-(dimetilamino)etoksi)-6-fluoropirimidin-4-amin. Ovo je dalo jedinjenje I-51 (0.025 g, 0.06 mmol, 10.7 % prinos MS: m/z 454.9 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d,3H), 3.41 (s, 3H), 3.44 (m, 3H), 4.49 (s, 2H), 7.05 (br s, 1H), 7.85 (d, 1H), 8.08 (m, 2H), 9.12 (d, 1H), 10.99, (s, 1H).

Primer 38

[0281]

Sinteza (10R)-3-((6-fluoro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1:1 smeša dijastereoizmera) (1-47)

[0282] Rastvor (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12) (150 mg, 0.47 mmol) i (rac)-6-fluoro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amin (INT-10) (128.1 mg, 0.56 mmol) rastvoren u 1,4-dioksanu (6.0 mL) je kratko degaziran primenom vakuma, zatim ispran sa azotom tri puta. Gornjem rastvoru su dodati cezijum karbonat (461.3 mg, 1.41 mmol), Pd2(dba)3(43.2 mg, 0.05 mmol) i Ksantfos (27.3 mg, 0.05 mmol) na sobnoj temperaturi, i rastvor je ponovo degaziran tokom 5 minuta. Dobijena reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 6 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, pri čemu su nastale čvrste supstance. Dobijene čvrste supstance su isprane sa vodom, dietil etrom i acetonom da se dobije jedinjenje I-47 (30 mg, 12%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.43-1.57 (m, 2H), 1.73 (m, 1H), 1.97-2.15 (m, 2H), 2.19 (s, 4H), 2.5 (m, 1H), 2.88 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 3.44-3.49 (m, 2H), 3.55-3.59 (m, 1H), 4.99 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 7.69 (s, br, 1H), 7.79 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.01-8.06 (m, 2H), 9.10 (d, J=9.1 Hz, 1H), 10.76 (s, br, 1H). MS m/z (M+H): 508.3.

Primer 39

[0283]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f] hinolin-8-on (I-48)

[0284] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-47 supstituisanjem 6-fluoro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amina (INT-11) za (rac)-6-fluoro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amin (INT-10) da se dobije jedinjenje I-48 kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 1.18 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.29 (br s, 4H), 2.49 (br s, 4H), 2.68 (br s, 2H), 3.43 (br s, 2H), 3.58 (br s, 1H), 4.41 (s, 2H), 6.99 (s, 1H), 7.58 (br s, 1H), 7.78-7.85 (m, 2H), 8.00-8.05 (m, 2H), 9.12 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 10.39 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 537.2.

Primer 40

[0285]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f] hinolin-8-on (I-49)

[0286] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-47 supstituisanjem (R)-6-fluoro-2-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-12) za (rac)-6-fluoro-2-[(1-metil-3-piperidil)oksi]pirimidin-4-amin (INT 10) da se dobije jedinjenje I-49 (8.0 mg, 16%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.31-2.40 (m, 2H), 2.61-2.68 (m, 3H), 2.82-2.84 (m, 1H), 3.44 (br s, 2H), 3.59 (br s, 1H), 5.33 (br s, 1H), 6.99 (br s, 1H), 7.49 (br s, 1H), 7.83-7.85 (m, 2H), 8.01 (br s, 1H), 8.05 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 9.13 (d, J=9.3 Hz, 1H), 10.75 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 494.5.

Primer 41

[0287]

Sinteza (10R)-3-((6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1:1 smeša dijastereoizomera) (I-59)

[0288] Rastvor (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-5) (100 mg, 0.3 mmol) i (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (S4-4) (67 mg, 0.3 mmol) rastvoren u 1,4-dioksanu (5.0 mL) je kratko degaziran primenom vakuma, zatim tri puta ispran sa azotom. Gornjem ratvoru su dodati cezijum karbonat (269.8 mg, 0.8 mmol), Pd2(dba)3(25.3 mg, 0.03 mmol) i ksantfos (15.9 mg, 0.03 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je dalje degazirana i mešana na 100°C tokom 6 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana i formirana je čvrsta supstanca. Dobijena čvrsta supstanca je isprana sa vodom, dihlormetanom i prečišćena preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje I-59 (13 mg, 9%) kao crvena čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.35 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.88-1.97 (m, 2H), 2.19-2.30 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 3.07-3.15 (m, 2H), 3.51-3.60 (m, 3H), 3.70-3.79 (m, 1H), 3.88-3.91(m, 1H), 5.57 (br s, 1H), 7.54 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 9.08 (d, J= 9.2 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 524.6.

Primer 42

[0289]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(((R)-1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-60)

[0290] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem (R)-6-hloro-2-((1-metilpirolidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amina (INT-28) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-60 (10.0 mg, 7%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.32-2.36 (m, 2H), 2.66-2.68 (m, 3H), 2.83-2.87 (m, 1H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 5.34 (br s, 1H), 6.98 (br s, 1H), 7.72-7.74 (m, 1H), 7.81(d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.91-7.97 (m, 2H), 8.06 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 9.14 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 10.7 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 510.4.

Primer 43

[0291]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-67)

[0292] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 2-hloro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-4-amina (S5-4) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-67 (25 mg, 18%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 3.68 (t, J=4.4 Hz, 2H), 4.44 (t, J=4.4 Hz, 2H), 6.98 (br s, 1H), 7.79-7.82 (m, 2H), 7.97-7.98 (m, 2H), 8.06 (d, J=8.8 Hz, 1H), 9.14 (d, J=9.3 Hz, 1H), 10.73 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 485.4.

Primer 44

[0293]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-66)

[0294] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amina (INT-29) za 6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-66 (10 mg, 4.1%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.88 (s, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.30 (br s, 4H), 2.50 (br s, 4H), 2.67-2.70 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 4.41-4.43 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.80-7.91 (br m, 3H), 7.98 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 9.13 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 10.72 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 553.1.

Primer 45

[0295]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-61)

[0296] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 6-hloro-2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)pirimidin-4-amina (INT-46) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje 1-61 (14 mg, 14.6%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.27 (br s, 4H), 2.49 (br s, 4H), 2.67-2.70 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 4.49-4.52 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.54 (s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 9.15 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 10.39 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 553.2.

Primer 46

[0297]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-69)

[0298] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 4-hloro-6-(2-metoksietoksi)pirimidin-2-amina (INT-45) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje 1-69 (8.0 mg, 12%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J=6.7 Hz, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 3.59-3.60 (br m, 1H), 3.70 (t, J=4.5 Hz, 2H), 4.52 (t, J=4.3 Hz, 2H), 6.57 (s, 1H), 7.00 (br s, 1H), 7.76 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.96 (br s, 1H), 8.03 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.40 (d, J=9.3 Hz, 1H), 9.15 (d, J=9.4 Hz, 1H), 10.41 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 485.1.

Primer 47

[0299]

Sinteza (R)-metil 4-hloro-6-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-2-karboksilata (I-70)

[0300] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem metil 4-amino-6-hloropirimidin-2-karboksilata (S6-5) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-70 (10.0 mg, 11%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 3.45 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 3.92 (s, 3H), 6.98 (br s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.87 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.98 (br s, 1H), 8.08 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.67 (br s, 1H), 9.14 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 11.23 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 469.0.

Primer 48

[0301]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-(piperidin-1-ilmetil)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-74)

[0302] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 6-fluoro-2-(piperidin-1-ilmetil)pirimidin-4-amina (S7-8) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-74 (44 mg, 29%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.38 (m, 2H), 1.51 (m, 4H), 2.45-2.48 (m, 4H), 3.44 (m, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.59 (m, 1H), 6.96 (m, 1H), 7.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.96 (m, 1H), 8.03-8.05 (m, 2H), 9.08 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 10.89 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 492.4.

Primer 49

[0303]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-((4-metilpiperazin-1-il)metil)pirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-73)

[0304] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-59 supstituisanjem 6-fluoro-2-((4-metilpiperazin-1-il)metil)pirimidin-4-amina (INT-30) za (rac)-6-hloro-2-((1-metilpiperidin-3-il)oksi)pirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje I-73 (40 mg, 39%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.32-2.40 (m, 4H), 2.52-2.58 (m, 4H), 3.44 (m, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.59-3.65 (m, 1H), 6.96 (m, 1H), 7.72 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.97 (m, 1H), 8.03-8.05 (m, 2H), 9.09 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 10.89 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 507.5.

Primer 50

[0305]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-10)

[0306] U tikvici sa okruglim dnom od 10 mL je bio (R)-3-bromo-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f] hinolin-8-on (INT-31) (0.03 g, 0.083 mmol), 4-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)-1,3,5-triazin- 2-amin (0.019 g, 0.083 mmol, videti odeljak "sinteza intermedijera" za sintezu) i K2CO3(0.034 g, 0.248 mmol) u 1,4-Dioksanu (5 mL) da se dobije žuta suspenzija. Pd2(dba)3(7.58 mg, 8.28 µmol) i 2’-(dicikloheksilfosfino)-N,Ndimetil-[1,1’-bifenil]-2-amin (tzv. "DaveFos" 6.52 mg, 0.017 mmol) su dodati i reakcija je zagrevana do refluksa pod azotom tokom 4 sata. Reakcija je zatim ohlađena, filtrirana preko kratkog čepa od silike i koncentrovana. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u 1 mL DMSO i prečišćen sa HPLC reverzne faze sa 95%-5% H2O (sadržavajući 0.5% TFA v/v)/acetonitril da se dobije jedinjenje I-10 (0.0027 g, 5.29 µmol, 6.39 % prinos). MS: m/z 510.1 (M+H), 507.7 (M-H).

Primer 51

[0307]

Sinteza (R)-3-((4-hloropirimidin-2-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-13)

[0308] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-10 supstituisanjem 4-hloropirimidin-2-amina za 4-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-amin da se dobije jedinjenje I-13 (0.0018g, 4.38 µmol, 5.29 % prinos). MS: m/z 410.2(M+H).

Primer 52

[0309]

Sinteza (R)-3-((2-(dimetilamino)etil)(6-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-33)

[0310] U 10 mL mikrotalasnu bočicu Pd2(dba)3(7.20 mg, 7.87 µmol), cezijum karbonat (0.051 g, 0.157 mmol), dicikloheksil(2’,6’-diizopropoksi-[1,1’-bifenil]-2-il)fosfin (SPhos, 7.34 mg, 0.016 mmol), N<1>-(6-fluoropirimidin-4-il)-N<2>,N<2>-dimetiletan-1,2-diamin (INT-32) (0.017 g, 0.094 mmol), i (R)-3-hloro-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S1-12) (0.025 g, 0.079 mmol) su rastvoreni u 5 mL suvog 1,4-dioksana. Reakciona smeša je stavljena pod vakum, tretirana ultrazvukom i napunjena azotom. Reakcija je ozračena u mikrotalasnoj pećnici tzv."Biotage Explorer" na 130°C tokom 3 sata. Reakcija je ohlađena, filtrirana i koncentrovana do suvoće. Ostatak je ponovo rastvoren u DMSO i prečišćen sa HPLC reverzne faze sa 95%-5% H2O (sadržavajući 0.5% TFA v/v)/acetonitril da se dobije jedinjenje I-33 (0.0066 g, 0.014 mmol, 18.02 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, 3H), 2.99 (s, 6H), 3.48 (m, 6H), 3.60 (m, 2H), 4.61 (m, 2H), 7.17 (t, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.18 (m, 2H), 8.61 (s, 1H), 9.24 (d, 1H), 9.58 (br s, 1H).

Primer 53

[0311]

Sinteza (R)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)(2-metoksietil)amino)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-36)

[0312] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-33 supstituisanjem 6-fluoro-N-(2-metoksietil)pirimidin-4-amina (INT-33) za N1-(6-fluoropirimidin-4-il)-N2,N2-dimetiletan-1,2-diamin da se dobije jedinjenje I-36 (0.0019g, 4.20 µmol, 3.34 % prinos). MS: m/z 453.0(M+H), 450.8(M-H).

Primer 54

[0313]

Sinteza (R)-3-((2-fluoropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-52)

[0314] U 20 mL bočicu, (R)-3-hidroksi-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-6) (0.072 g, 0.241 mmol) je suspendovan u 3 mL suvog DMF. Dodat je natrijum hidrid (60% po tež. u disperzionom ulju, 9.62 mg, 0.241 mmol) i reakcija je zagrevana do 90°C. Polazni materijal polako ulazi u rastvor kako se gas oslobađa i boja postaje tamno ćilibarna. Nakon 10 minuta zagrevanja, reakcija je ohlađena do 0°C i 2,4-difluoropirimidin (0.028 g, 0.241 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi ili zagrevana do 50°C. Po završetku reakcija je ugašena sa zasićenim NH4Cl (vod.) i sipana u vodu. Reakciona smeša je ekstrahovana tri puta sa dihlorometanom, i organski ekstrakti su kombinovani, osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod vakumom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u DMSO i prečišćen sa HPLC reverzne faze sa 95%-5% H2O (sadržavajući 0.5% TFA v/v)/acetonitril da se dobije jedinjenje I-52 (0.036 g, 0.091 mmol, 37.9 % prinos). MS: m/z 395.9(M+H), 393.7(M-H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.17 (d, 3H), 3.43 (m, 2H), 3.59 (m, 1H), 5.72 (s, 1H), 7.14 (t, 1H) 7.39 (m,1H), 7.64 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.15 (m, 2H), 8.77 (m, 1H), 9.36 (d, 1H).

Primer 55

[0315]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-metilpirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-58)

[0316] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4,6-dihloro-2-metilpirimidina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-58 (0.005g, 0.01 mmol, 16.9% prinos). MS: m/z 425.9(M+H), 423.6(M-H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.42 (d, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.75 (d, 1H), 3.84 (m, 1H), 5.36 (br s, 1H), 7.07 (br s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.92 (d, 2H), 7.99 (d, 1H) 9.00 (d, 1H).

Primer 56

[0317]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(metoksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-57)

[0318] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4,6-dihloro-2-(metoksimetil)pirimidina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-57 (0.025 g, 0.055 mmol, 11 % prinos) MS: m/z 455.8(M+H), 453.6(M-H).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.61 (m, 3H), 4.42 (s, 2H), 7.15 (br s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 8.16 (m, 2H), 9.35 (d, 1H).

Primer 57

[0319]

Sinteza (R)-3-((6-hloropirazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-55)

[0320] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 2,6-dihloropirazina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-55 (2.4 mg, 4.51 mmol, 9.01 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS m/z: 411.8 [M+H].

Primer 58

[0321]

Sinteza (R)-3-((6-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-56)

[0322] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4,6-dihloropirimidina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-56. MS m/z: 411.8 [M+H].<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.02 (d, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.04-7.92 (m, 2H), 7.39 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.80-3.72 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 1.44 (d, 3H).

Primer 59

[0323]

Sinteza (R)-3-((2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-53)

[0324] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstitisanjem 2,4-dihloropirimidina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-53 (30 mg, 20%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.20 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.46 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 7.10 (br s, 1H), 7.42 (d, J=5.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.04 (br s, 1H), 8.17 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.74 (d, J=5.6 Hz, 1H), 9.37 (d, J=9.0 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 412.3.

Primer 60

[0325]

Sinteza (R)-3-((6-fluoro-2-metilpirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-65)

[0326] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4,6-difluoro-2-metilpirimidina za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-65 kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, 1H), 8.15 (m, 2H), 7.82 (m, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.13 (br s, 1H), 7.03 (s, 1H), 3.58-3.43 (m, 3H), 2.40 (s, 3H), 1.17 (d, 3H). MS m/z: 409.9 (M+H).

Primer 61

[0327]

Sinteza (R)-metil 4-hloro-6-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[ 5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)oksi)pirimidin-2-karboksilata (1-71)

[0328] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem metil 4,6-dihloropirimidin-2-karboksilata za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-71 (16 mg, 11.3%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.20 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.46 (br s, 2H), 3.61 (br s, 1H), 3.82 (s, 3H), 7.10 (br s, 1H), 7.61 (d, J=9.1Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 8.05 (br s, 1H), 8.17 (d, J=8.9 Hz, 1H), 9.37 (d, J=9.1 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 470.1.

Primer 62

[0329]

Sinteza (R)-3-((6-hloro-2-(hidroksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-68)

[0330] U rastvor (R)-metil 4-hloro-6-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)oksi)pirimidin-2-karboksilata (I-71) (30 mg, 0.06 mmol) u tetrahidrofuranu (3.0 mL), diizobutilaluminijum hidrid (1M) (72.6 mg, 0.50mL, 0.5 mmol) je dodat na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka reakciona smeša je ugašena sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (5 mL) i ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 15 mL). Organski sloj je ispran sa (2 x 10 mL) vode, praćen fiziološkim rastvorom (1 x 10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen preparativnom TLC da se dobije jedinjenje I-68 (6.0 mg, 18%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.46 (br s, 2H), 3.60 (br s, 1H), 4.43 (d, J=6.6 Hz, 2H), 5.34 (t, J=6.2 Hz, 1H), 7.09 (br s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.57 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.04 (br s, 1H), 8.15 (d, J=8.8 Hz, 1H), 9.35 (d, J=9.1 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 442.4.

Primer 63

[0331]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(pirolidin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-62)

[0332] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 2,4-dihloro-6-(pirolidin-1-il)-1,3,5-triazina (INT-34) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-62. MS: m/z: 481.9 [M+1].<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.98 (d, 1H), 7.99-7.88 (m, 2H), 7.32 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.28 (t, 1H), 3.87-3.79 (m, 1H), 3.76-3.69 (m, 1H), 3.63 (t, 2H), 3.60-3.52 (m, 1H), 3.44 (t, 2H), 2.02-1.89 (m, 4H), 1.40 (d, 3H).

Primer 64

[0333]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-63)

[0334] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4-(4,6-dihloro-1,3,5-triazin-2-il)morfolina (INT-35) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje 1-63. MS: m/z 497.9 [M+H].<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, 1H), 8.20-8.13 (m, 2H), 7.87 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.80-3.70 (m, 3H), 3.68-3.62 (t, 2H), 3.59-3.53 (m, 4H), 3.45 (m, 2H), 1.199d, 3H).

Primer 65

[0335]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(piperidin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-64)

[0336] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 2,4-dihloro-6-(piperidin-1-il)-1,3,5-triazina (INT-36) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-64. MS: m/z: 495.8 [M+H].

Primer 66

[0337]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(dimetilamino)-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-75)

[0338] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 4,6-dihloro-N,N-dimetil-1,3,5-triazin-2-amina (INT-37) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-75. MS: m/z 455.8 [M+H].<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, 1H), 8.21-8.14 (m, 2H), 7.889d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.65-3.57 (m, 1H), 3.50-3.44 (m, 2H), 3.12 (s, 3H0, 2.96 (s, 3H), 1.199d, 3H).

Primer 67

[0339]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-metoksi-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-76)

[0340] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 2,4-dihloro-6-metoksi-1,3,5-triazina (INT-38) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-76. MS: m/z 442.7 [M+H].<1>H-NMR (400 MHz, DMSOd6):δ 9.38 (d, 1H), 8.24-8.14 (m, 2H), 7.92-7.87 (m, 1H), 7.71-7.66 (m, 1H), 7.17 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.50-3.40 (m, 2H), 1.19 (d, 3H).

Primer 68

[0341]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(3,3-difluoropirolidin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-77)

[0342] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstitisanjem 2,4-dihloro-6-(3,3-difluoropirolidin-1-il)-1,3,5-triazina (INT-39) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-77. MS: m/z 517.8 [M+H].

Primer 69

[0343]

Sinteza (R)-3-((4-hloro-6-(3,3-difluoropiperidin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)oksi)-10-meti-l-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-78)

[0344] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-52 supstituisanjem 2,4-dihloro-6-(3,3-difluoropiperidin-1-il)-1,3,5-triazina (INT-40) za 2,4-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-78. MS: m/z 531.8 [M+H].<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (dd, 1H), 8.20 (dd, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.88 (dd, 1H), 7.66 (dd, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.15 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.84 (t, 3H), 3.65 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.78-1.60 (m, 2H), 1.19 (d, 3H).

Primer 70

[0345]

Sinteza (R)-3-((6-hloropiridazin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-:f]hinolin-8-on

[0346] U mikrotalasnoj bočici, NaH (26.7 mg, 0.668 mmol) je dodat u INT-6 (50 mg, 0.167 mmol) u DMF (4 mL) i uobičajeno zagrevan na 55°C tokom jednog sata. Zatim je reakciona smeša ohlađena na 0°C i dodat je 3,5-dihloropiridazin (49.8 mg, 0.334 mmol) u 0.5 ml DMF. Dobijena smeša je zračena na 100°C tokom 1 sata i 45 minuta. Nakon završetka reakcije, sirova smeša je prečišćena direktno preparativnom HPLC upotrebom CH3CN/H2O (0.1% mravlje kiseline) kao eluensima da se dobije I-79 (15 mg, 0.036 mmol, prinos 21.80%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.43 (s, 1H), 9.34 (d, 1H), 8.14-8.07 (m, 3H), 7.74 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.10 (br t, 1H), 3.44-3.30 (m, 3H, spojeni sa DMSO-H2O pikom), 1.16 (d, 3H). MS m/z = 411.8 (M+1<+>).

Primer 71

[0347]

Sinteza (R)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)tio)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-54)

[0348] U suspenziju natrijum hidrida (22.83 mg, 0.9 mmol) u dimetilformamidu (1.0 mL), ((R)-3-merkapto-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-7) (100 mg, 0.3 mmol) i 4,6-difluoropirimidin (73.6 mg, 0.6 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je ugašena sa vodom i ekstrahovana sa 5% metanolom u dihlorometanu (3 x 5 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativnom TLC da se dobije jedinjenje I-54 (15 mg, 10%) kao žuta čvrsta supstanca. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje I-54 (15 mg, 10%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J=6.7 Hz, 3H), 3.46 (br s, 2H), 3.61 (br s, 1H), 7.11 (br s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.92-7.96 (m, 2H), 8.05 (br s, 1H), 8.20 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.78 (br s, 1H), 9.25 (d, J=9.0 Hz, 1H). MS: m/z 412.3(M+H).

Primer 72

[0349]

Sinteza (R)-3-((2-hloropirimidin-4-il)tio)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-72)

[0350] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao I-54 supstituisanjem 2,4-dihloropirimidina za 4,6-difluoropirimidin da se dobije jedinjenje I-72 (25 mg, 18%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, J=6.6 Hz, 3H), 3.45 (br m, 2H), 3.60 (br m, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.57 (d, J=5.4 Hz, 1H), 77.95-7.97 (m, 2H), 8.07 (br s, 1H), 8.21 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.53 (d, J=5.4 Hz, 1H), 9.26 (d, J=8.9 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 428.3.

Primer 73

[0351]

Sinteza (S)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-17)

[0352] U mešani rastvor (S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-1) (50 mg, 0.15 mol) 6-fluoropirimidin-4-amina (33.9 mg, 0.3 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) je dodat cezijum karbonat (146.42 mg, 0.45 mmol), i rastvor je degaziran sa argonom tokom 10 min. U gornji rastvor su dodati Ksantfos (8.6 mg, 0.015 mmol), praćen sa Pd2(dba)3(14 mg, 0.015 mmol) i rastvor je ponovo degaziran tokm 5 minuta sa argonom i mešan na 100°C tokom 16 sati. Nakon završetka ledena voda (5 mL) i dihlormetan (10 mL) su dodati u reakcionu smešu i mešani tokom 30 minuta. Formirana je čvrsta supstanca i sakupljena filtracijom i isprana sa vodom (5 mL), praćena metanolom (5 mL), da se dobije jedinjenje I-17 (40 mg, 63% prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.43-3.59 (m, 5H), 4.95 (t, J = 5 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.89 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 9.09 (d, J = 9 Hz, 1H), 10.92 (s, 1H). MS m/z (M+H): 411.2.

Primer 74

[0353]

Sinteza (S)-3-((6-hloropirimidin-4-il)amino)-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-22)

[0354] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-17 supstituisanjem 6-hloropirimidin-4-amina za 6-fluoropirimidin-4-amin da se dobije jedinjenje 1-22 (20 mg) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ 3.43-3.59 (m, 5H), 4.95 (t, J = 5 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.06 (d, J = 9 Hz, 1H), 8.46 (br s, 1H), 8.63 (s, 1H), 9.10 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 10.86 (s, 1H). MS m/z (M+H): 427.37.

Primer 75

[0355]

Sinteza (S)-2-hloro-4-((10-(hidroksimetil)-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)pirimidin-5-karboksamida (I-30)

[0356] U rastvor (S)-2-hloro-4-((10-(hidroksimetil)-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)amino)-N-(4-metoksibenzil)pirimidin-5-karboksamida (INT-52) (22 mg, 0.04 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL) su dodati trifluorosirćetna kiselina (0.5 mL, 0.04 mmol) praćena trifluorometansulfonskom kiselinom (55.9 mg, 0.4 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom i ko-destilovana sa dihlorometanom (2 x 10 mL). Dobijeni sirovi materijal je razblažen sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 mL) i mešan tokom 10 minuta nakon čega je formiran talog. Talog je filtriran i ispran sa vodom, praćen 2% metanolom u dihlorometanu i osušen da bi se dobilo jedinjenje I-30 (11 mg, 52%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3.42-3.50 (m, 3H), 3.55-3.58 (m, 2H), 4.95 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 7.82 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.85 (br s, 1H), 8.07-8.09 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 8.61 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 9.25 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 12.12 (s, 1H). MS m/z (M+H): 470.2.

Primer 76

[0357]

Sinteza (R)-10-(aminometil)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (S8-6, I-26)

[0358] U mešani rastvor (S)-tert-butil ((3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-10-il)metil) karbamata (S8-5) (16.0 mg, 0.03 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL) je dodata trifluorosirćetna kiselina (1.1 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi materijal je bio trituriran sa dietil etrom da se dobije trifluoracetatna so jedinjenja I-26 (14 mg) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.81-2.88 (m, 1H), 2.97-3.02 (m, 1H), 3.78-3.80(m, 1H), 3.80-3.88 (m, 2H), 7.05 (br s, 1H), 7.72 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.83 (br s, 2H), 7.93 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.07-8.10 (m, 2H), 8.17 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 9.07 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 10.94 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 410.3.

Primer 77

[0359]

Sinteza (R)-10-(aminometil)-3-((6-hloropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-28)

[0360] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-17 supstituisanjem 6-hloropirimidin-4-amina za 6-fluoropirimidin-4-amin i (R)-10-(aminometil)-3-hloro-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-47) za (S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-1) da se dobije jedinjenje I-28 kao narandžasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.79-2.80 (m, 1H), 2.98-3.01 (m, 2H), 3.07-3.10 (m, 1H), 3.69-3.79 (m, 2H), 3.82-3.88 (m, 1H), 7.78-7.88 (m, 3H), 8.08-8.10 (m, 2H), 8.45 (br s, 1H), 8.64 (s, 1H), 9.08 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 10.89 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 426.3.

Primer 78

[0361]

Sinteza (S)-10-((dimetilamino)metil)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-31)

[0362] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-17 supstituisanjem (S)-3-hloro-10-((dimetilamino)metil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-48) za (S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahdro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2- f]hinolin-8-on (INT-1), da se dobije jedinjenje I-31 (6.0 mg, 40%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.25 (s, 3H), 2.52-2.54 (m, 2H), 3.22-3.25 (m, 1H), 3.32-3.35 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 7.14 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.23 (br s, 1H), 9.24 (d, J= 9.2 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 347.1.

Primer 79

[0363]

Sinteza (R)-3-((6-fluoropirimidin-4-il)amino)-10-((metilamino)metil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-35)

[0364] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano na isti način kao 1-17 supstitisanjem (R)-3-hloro-10-((metilamino)metil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-50) za (S)-3-hloro-10-(hidroksimetil)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (INT-1) da se dobije jedinjenje I-35 (17 mg, 14%) kao svetlo braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2.26 (s, 3H), 2.31-2.33 (m, 1H), 2.40-2.50 (m, 1H), 3.22-3.25 (m, 1H), 3.55 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 7.69 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.06 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 9.5 Hz, 2H), 8.58 (s, 1H), 9.14 (d, J=9.1 Hz, 1H), 10.9 (br s, 1H). MS m/z (M+H): 424.2.

Primer 80

[0365]

Sinteza R)-3-((5-((tert-butil(metil)amino)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-80)

[0366] U mešanu suspenziju INT-6 (75 mg, 0.2 mmol) u anhidrovanom DMF (5 mL) je dodat t-BuOK (28.1 mg, 0.25 mmol) na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan za daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-90 (93.2 mg, 0.4 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-80 (24 mg, 18%) kao žutu čvrstu supstancu. (400 MHz, DMSO-d6):δ 9.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.03 (br, 1H), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.10-7.11 (m, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.61 (br, 1H), 3.46 (br, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H). MS m/z (M+H): 511.3.

Primer 81

[0367]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((2-metoksietoksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-81)

[0368] U bocu od 100 mL sa okruglim dnom, prečišćenoj i održavanoj u inertnoj atmosferi azota, rastvoren je INT-6 (115.9 mg, 0.39 mmol) u DMF (10 mL). t-BuOK (1M u THF) (0.64 mL, 0.64 mmol) je dodat polako pomoću šprica u rastvor na 0°C i reakcija je promenjena u bistru braon. Dobijeni rastvor je mešan tokom 20 min na 0°C. Nakon ovih 20 minuta, INT-64 (137 mg, 0.58 mmol) u DMF-u (2 mL) je dodat u kapima sa mešanjem na 0°C. Dobijeni rastvor je zagrevan do sobne temperature i mešan preko noći. LCMS je potvrdio formaciju željenog produkta. Reakcija je koncentrovana do suvoće, i ostatak je razblažen sa EtOAc (300 mL) i ispran sa 2 x 300 ml vode, zatim 1 x 300 ml zasićenim fiziološkim rastvorom. Organski ekstrakt je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan do suvoće. Sirovi materijal je zatim prečišćen kolonskom hromatografijom (DCM:MeOH = 30:1). Željene frakcije su koncentrovane do suvoće u vakumu i dalje prečišćene pomoću Prep HPLC da bi se dobio (I-81) (536.7 mg, 28.5%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 9,37 (d, J = 9,2 Hz, IH), 8,72 (s, IH), 8,20 (d, J = 9,2 Hz, IH), 8,15 (d, J = 4,4 Hz, IH), 7,87 (d, J = 9,2 Hz, IH), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, IH), 7,19-7,16 (m, IH), 4,71 (s, 2H), 3,73-3,71 ( m, 2H), 3,63-3,61 (m, IH), 3,55-3,54 (m, 2H), 3,51-3,44 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 500.0.

Primer 82

[0369]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(etoksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-82)

[0370] U rastvor INT-6 (270 mg, 0.9 mmol) u DMA (ili DMF) (3.0 mL) je dodat kalijum tert-butoksid (202.4 mg, 1.8 mmol) na 0°C i mešan tokom 10 min. U dobijenu smešu, INT-60 (280.1 mg, 1.4 mmol) je dodat na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 30 minuta. Nakon završetka reakciona smeša je razblažena sa vodom (20.0 mL), pri čemu je formirana čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakumom dajući 250 mg. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) da se dobije I-82 (80 mg, 19%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.70 (br, 1H), 8.17 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.60-3.64 (m, 2H), 3.58 (br, 1H), 1.17-1.20 (m, 6H). MS m/z (M+H): 470.5.

Primer 83

[0371]

Sinteza ((10R)-3-((5-((3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-83)

[0372] U mešanu suspenziju INT-6 (130 mg, 0.43 mmol) u anhidrovanom DMF (15 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.87 mL, 0.87 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan tokom 0.5 h na ovoj temperaturi. I-75 (110 mg, 0.45 mmol) u DMF (3 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (50 mL) i vode (20 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2× 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom (30 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-83 (57.7 mg, 26.5%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.20-8.14 (m, 2H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.63-3.43 (m, 3H), 2.98 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.40-1.38 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.68-0.65 (m, 1H), 0.36-0.29 (m, 1H).

Primer 84

[0373]

Sinteza ((R)-3-((2-hloro-5-((((S)-tetrahidrofuran-3-il)oksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino [5’,6’:4,5]tieno [3,2-f]hinolin-8-on (I-84)

[0374] U mešanu suspenziju INT-6 (207 mg, 0.690 mmol) u DMF (15 mL) je dodat t-BuOK (155.19 mg, 1.38 mmol) na 0°C i reakcija je mešana tokom 10 min. Zatim je rastvor INT-66 (189.47 mg, 0.76 mmol) u DMF (5 mL) dodat na 0°C i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (50 mL) i vode (20 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom (30 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-84 (63.3 mg, 18%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.19-8.12 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 4.70-4.63 (m, 2H), 4.36-4.32 (m, 1H), 3.80-3.77 (m, 2H), 3.75-3.67 (m, 2H), 3.61-3.60 (m, 1H), 3.47-3.46 (m, 2H), 2.02-1.97 (m, 2H), 1.22-1.17 (m, 3H). MS m/z (M+H): 511.9.

Primer 85

[0375]

Sinteza (R)-3-((5-((3-azabiciklo[3.1.1]heptan-3-il)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-85)

[0376] U mešanu suspenziju INT-6 (100 mg, 0.33 mmol) u anhidrovanom DMF (10 mL), je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.67 mL, 0.67 mmol) na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan tokom 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-76 (110 mg, 0.40 mmol) u DMF (3 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (50 mL) i vode (20 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (30 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-85 (43.7 mg, 24.7%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.19-8.13 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.62-3.42 (m, 3H), 2.91 (s, 4H), 2.32-2.30 (m, 2H), 1.97-1.92 (m, 2H), 1.50-1.46 (m, 2H), 1.22 (d, J = 11.2 Hz, 3H).

Primer 86

[0377]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5,7-dihidrofuro[3,4-d]pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-86)

[0378] U 20 mL bočicu, INT-6 (0.05 g, 0.167 mmol) je dodat u 3 mL suvog DMF i kratko izložen ultrazvuku.Ovome je dodat K2CO3(0.231 g, 1.670 mmol) i reakcija je zagrevana na 90°C tokom 10 minuta. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i 2,4-dihloro-5,7-dihidrofuro [3,4-d] pirimidin (0.055 g, 0.288 mmol) je dodat i naknadno zagrevan do 90°C tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je ohlađena, filtrirana da se ukloni nerastvorljivi kalijum karbonat i sirova reakciona smeša je direktno prečišćena prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) da se dobije I-86 (0.052 g, 0.114 mmol, prinos 68%) kao žuta čvrsta supstanca nakon liofilizacije.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6): δ 9.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.11 (br, 1H), 4.98 (s, 4H), 3.55 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 1.12 (d, J= 6.9 Hz, 3H) MS m/z (M+H): 453.8.

Primer 87

[0379]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((diizopropilamino)metl)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-87)

[0380] U suspenziju INT-6 (128 mg, 0.429 mmol) u DMF (3 mL) na sobnoj temperaturi je dodat natrijum hidrid (60% u ulju) (20.59 mg, 0.515 mmol). Boja reakcije je promenjena iz žuto-zelene u tamno braon i u roku od 10 minuta reakcija je postala homogena. Nakon 20 minuta, reakciona smeša je ohlađena na 0°C i rastvor INT-89 (135 mg, 0.515 mmol) u DMF (1.5 mL) je dodat u kapima tokom 2 min. Reakcija je mešana preko noći i sledećeg jutra reakcija je ohlađena do 0°C, ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (~ 1 mL, u početku u kapima, oprez: razvoj gasa) i vode ~ 3 mL. Kupka za hlađenje je uklonjena i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta da se dobije žuta suspenzija. Reakcija je ekstrahovana sa DCM (5 x 10 mL), emulzija je bila postojana. Organski ekstrakti su filtrirani preko Na2SO4i koncentrovani. Sirovi produkt je prečišćen prep HPLC (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA). I-87 (133 mg, 0.253 mmol, prinos 59.0%) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.88 (br, 2H), 8.17 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.14 (br, 1H), 4.51 (d, J = 5.0 Hz, 2H) 3.82 (m, 2H), 3.57 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 1.34 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 1.14 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H):524.8.

Primer I-88

[0381]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((diizobutilamino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-88)

[0382] U mešanu suspenziju INT-6 (31.3 mg, 0.1 mmol) u anhidrovanom DMF (4 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.2 mL, 0.2 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor i dobijeni rastvor je mešan tokom daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-77 (60.2 mg, 0.2 mmol) u DMF-u (1 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (5 mL) i vode (5 mL), organski sloj je odvojen,i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 5 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (10 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-88 (8.5 mg, 13.8%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.19-8.15 (m, 2H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.17-7.15 (m, 1H), 3.66-3.61 (m, 3H), 3.61-3.48 (m, 2H), 2.19-2.17 (m, 4H), 1.84-1.77 (m, 1H), 1.23-1.18 (m, 3H), 0.86-0.82 (m, 12H). MS m/z (M+H): 553.1.

Primer 89

[0383]

Sinteza (10R)-3-((2-hloro-5-((2-(metoksimetil)pirolidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-89)

[0384] U mešanu suspenziju INT-6 (100 mg, 0.3 mmol) u anhidrovanom DMF (10 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.7 mL, 0.7 mmol) na 0°C, u kapima, da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 10 min na sobnoj temperaturi.

INT-78 (184 mg, 0.6 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan tokom 4 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombiniovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-89 (72.5 mg, 38.6%) kao 1:1 smešu dijastereoizomera.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.70(s, 1H), 8.25 - 8.09 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.70 - 3.55 (m, 2H), 3.52 - 3.34 (m, 3H), 3.30 - 3.17 (m, 4H), 3.10-2.95 (m, 1H), 2.90-2.75 (m, 1H), 2.50-2.25 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 1H), 1.75-1.59 (m, 2H),1.57-1.40 (m, 1H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 3H) MS m/z (M+H): 539.2.

Primer 90

[0385]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((2-metoksietil)(metil)amino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-90)

[0386] U mešanu suspenziju INT-6 (72 mg, 0.24 mmol) u anhidrovanom DMF (5 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.48 mL, 0.48 mmol) na 0°C, u kapima, da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-79 (120 mg, 0.48 mmol) u DMF (1 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-90 (36.9 mg, 28.4%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.19-8.13 (m, 2H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.51-3.49(m, 1H), 3.48-3.46 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.74-2.59 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 513.0.

Primer 91

[0387]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((izopropil(metil)amino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-91)

[0388] U mešanu suspenziju INT-6 (39.9 mg, 0.13 mmol) u anhidrovanom DMF (4 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.26 mL, 0.26 mmol) na 0°C u kapima, da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-70 (62 mg, 0.26 mmol) u DMF (1 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (5 mL) i vode (5 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 5 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (10 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-91 (19 mg, 29%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.19-8.14 (m, 2H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.17-7.15 (m, 1H), 3.65-3.61 (m, 3H), 3.48-3.46 (m, 2H), 2.94-2.87 (m, 1H), 2.18 (s, 3H), 1.19 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 6H). MS m/z (M+H): 497.0.

Primer 92

[0389]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((cikloheksil(metil)amino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-92)

[0390] U mešanu suspenziju INT-6 (198 mg, 0.66 mmol) u anhidrovanom DMF (15 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 1.3 mL, 1.32 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor i dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-72 (199.5 mg, 0.73 mmol) u DMF (5 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-92 (19.4 mg, 9.7%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.19-8.14 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.8 Hz ,1H), 7.59 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.62-3.61 (m, 1H), 3.48-3.47 (m, 2H), 2.46-2.44 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.81-1.71 (m, 4H), 1.32-1.15 (m, 9H). MS m/z (M+H): 537.4.

Primer 93

[0391]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-metoksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-93)

[0392] U mešanu suspenziju INT-6 (90 mg, 0.3 mmol) u anhidrovanom DMF (9 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.6 mL, 0.6 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor i dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-73 (166.1 mg, 0.6 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo željeni produkt I-93 (43.5 mg, 26.2%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.19-8.14 (m, 2H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.61-3.46 (m, 2H), 3.22-3.15 (m, 4H), 2.77-2.75 (m, 2H), 2.27-2.20 (m, 2H), 1.86-1.72 (m, 2H), 1.51-1.40 (m, 2H), 1.20 (d, J= 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 539.0.

Primer 94

[0393]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-94)

[0394] U mešanu suspenziju INT-6 (80 mg, 0.27 mmol) u anhidrovanom DMF (8 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.54 mL, 0.54 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor i dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-74 (147.1 mg, 0.54 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-94 (38.9 mg, 26.7%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.20-8.14 (m, 2H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 1H), 3.66-3.62 (m, 2H), 3.47-3.45 (m, 2H), 2.49-2.27 (m, 10H), 1.19 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.99 (br s, 3H). MS m/z (M+H): 538.1.

Primer 95

[0395]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((3,3-dimetilpiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-95)

[0396] U mešanu suspenziju INT-6 (115 mg, 0.38 mmol) u anhidrovanom DMF (15 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.76 mL, 0.76 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5h na ovoj temperaturi. INT-80 (115.8 mg, 0.42 mmol) u DMF (5 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-95 (33.5 mg, 29.1%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.17-8.12 (m, 2H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.15-7.13 (m, 1H), 3.60-3.58 (m, 3H), 3.58-3.41 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 2H), 2.14-2.06 (m, 2H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.20-1.13 (m, 5H), 0.90 (s, 6H). MS m/z (M+H): 537.0.

Primer 96

[0397]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(metoksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-96)

[0398] U mešanu suspenziju INT-6 (203.3 mg, 0.68 mmol) u anhidrovanom DMF (17 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 1.36 mL, 1.36 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-63 (262.2 mg, 1.36 mmol) u DMF (3 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (40 mL) i vode (50 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-96 (110.4 mg, 35.5%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.16 (m, 1H), 4.62 (s, 2H), 3.62 - 3.61 (m, 1H), 3.51 - 3.47 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 455.9.

Primer 97

[0399]

Sinteza (R)-3-((5-(tert-butoksimetil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-97)

[0400] U mešani rastvor INT-6 (100 mg, 0.3 mmol) u DMF (10 mL) je dodat t-BuOK (1 M in THF, 0.7 mL, 0.7 mmol) na 0°C u kapima da bi se dobio braon rastvor koji je mešan tokom 10 min. INT-56 (157 mg, 0.7 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (100 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-97 (70.4 mg, 42.2%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.21-8.10 (m, 2H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.17-7.14 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.70-3.55 (m, 1H), 3.54-3.38 (m, 2H), 1.25 (s, 9H), 1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 498.1.

Primer 98

[0401]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)oksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-98)

[0402] U mešanu suspenziju INT-6 (170 mg, 0.57 mmol) u anhidrovanom DMF (17 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 1.14 mL, 1.14 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5h na ovoj temperaturi. INT-67 (179.3 mg, 0.68 mmol)) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (40 mL) i vode (50 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-98 (78.9 mg, 26.1%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.20-8.14 (m, 2H), 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 1H), 4.73 (s, 2H), 3.86-3.81 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 1H), 3.63-3.61 (m, 1H), 3.49-3.47 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 1.96-1.92 (m, 2H), 1.55-1.46 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 526.2.

Primer 99

[0403]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((R)-2-metilpirolidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-99)

[0404] U mešani rastvor INT-6 (100 mg, 0.3 mmol) u DMF (10 mL) su dodati t-BuOK (1M in THF, 0.7 mL, 0.7 mmol) na 0°C u kapima da bi se dobio braon rastvor i reakcija je mešana tokom 10 min. INT-81 (90 mg, 0.4 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i reakcija je mešana tokom 4 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (50 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-99 (16.5 mg, 9.3%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.23-8.09 (m, 2H), 7.83 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.68-7.55 (m, 1H), 7.20-7.10 (m, 1H), 4.02 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.70-3.55 (m, 1H), 3.54-3.38 (m, 3H), 3.05-2.90 (m, 1H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.30-2.15 (m, 1H), 2.00-1.85 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 2H), 1.40-1.22 (m, 1H),1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.09 (d, J= 6.0 Hz, 3H) MS m/z (M+H): 509.1.

Primer 100

[0405]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((2-fluoroetoksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-100)

[0406] U mešanu suspenziju INT-6 (444.mg, 1.48 mmol) u anhidrovanom DMF (40 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 3 mL, 3 mmol) na 0°C u kapima da bi se dobio braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan tokom daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-65 (400.6 mg, 1.8 mmol) u DMF-u (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (60 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (60 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-100 (187.5 mg, 25.9%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.21-8.11 (m, 2H), 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.70 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.90 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.62-3.46 (m, 3H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 488.0.

Primer 101

[0407]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((S)-2-metilpirolidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H [1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-101)

[0408] U mešani rastvor INT-6 (100 mg, 0.3 mmol) u DMF (10 mL) su dodati t-BuOK (1M in THF, 0.7 mL, 0.7 mmol) na 0°C u kapima da bi se dobio braon rastvor i reakcija je mešana tokom 10 min. INT-82 (90 mg, 0.4 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan tokom 4 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (100 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-101 (32.0 mg, 18.1%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.23-8.09 (m, 2H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.68-7.55 (m, 1H), 7.20-7.10 (m, 1H), 4.02 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.54-3.37 (m, 3H), 3.05-2.90 (m, 1H), 2.56-2.50(m, 1H),2.30-2.15 (m, 1H), 2.00-1.85 (m, 1H), 1.71-1.55 (m, 2H), 1.40-1.22 (m, 1H),1.18 (d, J i= 6.8 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 6.0 Hz, 3H) MS m/z (M+H): 509.1.

Primer 102

[0409]

Sinteza (R)-3-((5-((tert-butilamino)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-102)

[0410] U suspenziju INT-6 (77 mg, 0.256 mmol) u DMF (5 mL) je dodat na sobnoj temperaturi kalijum karbonat (283 mg, 2.050 mmol). Smeša je degazirana evakuacijom i ponovo napunjena sa N2(3x). Smeša je zagrevana do 90°C tokom 10 minuta, i zatim je pomoću šprica dodat rastvor INT-88 (78 mg, 0.333 mmol) u DMF (2 mL). Nakon 1 sata na 90°C reakcija je završena. Reakciona smeša je filtrirana i razblažena sa vodom i cela reakciona masa je prečišćena direktno preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) dajući I-102 (136 mg, 0.223 mmol, prinos 87%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.96 (br, 2H), 8.85 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 (br, 1H), 4.36 (br, 2H) 3.80-3.48 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.19 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 497.1.

Primer 103

[0411]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((3-metiloksetan-3-il)oksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-103)

[0412] U mešanu suspenziju INT-6 (251 mg, 0.84 mmol) u anhidrovanom DMF (15 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 1.68 mL, 1.68 mmol) na 0°C u kapima da bi se dobio braon rastvor i dobijeni rastvor je mešan tokom daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-61 (190 mg, 0.76 mmol) u DMF-u (5 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-103 (53.1 mg, 27.9%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.37 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.21-8.13 (m, 2H), 7.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 1H), 4.67-4.65 (m, 4H), 4.37 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.62-3.61 (m, 1H), 3.47-3.46 (m, 2H), 1.59 (s, 3H), 1.24-1.18 (m, 3H). MS m/z (M+H): 512.1.

Primer 104

[0413]

Sinteza (R)-3-((5-((tert-butil(metil)amino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-104)

[0414] U mešani rastvor INT-6 (100 mg, 0.3 mmol) u DMF (10 mL) je dodat NaH (33 mg, 0.8 mmol) na 0°C i mešan tokom 2 sata. INT-58 (86 mg, 0.4 mmol) u DMF-u (2 mL) je dodat u kapima u gornji rastvor, i zatim zagrevan do 135°C tokom 70 minuta pod mikrotalasnim zračenjem. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između etil acetata (50 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) je dalo I-104 (21.4 mg, 13.3%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.20-8.09 (m, 2H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.13-7.11 (m, 1H), 3.70-3.52 (m, 3H), 3.50-3.38 (s, 2H), 2.25-2.13 (m, 5H), 1.90-1.75 (m, 1H), 1.18 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.85 (d, J= 6.4 Hz, 6H). MS m/z (M+H): 477.2.

Primer 105

[0415]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-6,6-dioksido-7,8-dihidro-5H-tiopirano [4,3-d] pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-105)

[0416] INT-6 (50 mg, 0.167 mmol) je suspendovan u 10 mL suvog DMF i posuda je isprana sa azotom. Dodat je kalijum karbonat (0.231 g, 1.670 mmol) i reakcija se zagrevana do 90°C tokom 10 minuta. Ovoj smeši je dodat 2,4-dihloro-7,8-dihidro-5H-tiopirano [4,3-d]pirimidin 6,6-dioksid (51 mg, 0.200 mmol) i reakcija je mešana dodatno 1 sat na 90°C. LC/MS je ocenjeno da je reakcija završena, sipana u zasićeni NH4Cl (vodeni) i ekstrahovana 3 x sa DCM. Kombinovani DCM je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je zatim prečišćen sa HPLC reverzne faze, da se dobije 1-105 (4 mg, 7.75 µmol, prinos 4.64%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 9.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.57 (m, 1H), 3.38 (m, 4H), 1.12 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 516.0.

Primer 106

[0417]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((S)-3-metoksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-106)

[0418] U mešanu suspenziju INT-6 (90 mg, 0.3 mmol) u anhidrovanom DMF (9 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.6 mL, 0.6 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-85 (166 mg, 0.6 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-106 (4.0 mg, 2.5%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.17-8.12 (m, 2H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 3.66-3.52 (m, 3H), 3.47-3.44 (m, 2H), 3.23 3.20 (m, 4H), 2.98-2.95 (m, 1H), 2.70-2.67 (m, 1H), 2.11-2.06 (m, 1H), 2.01-1.96 (m, 1H) , 1.86-1.89 (m, 1H), 1.67-1.62 (m, 1H), 1.45-1.36 (m, 1H), 1.21-1.12 (m, 4H). MS m/z (M+H): 539.2.

Primer 107

[0419]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((R)-3-metoksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-107)

[0420] U mešanu suspenziju INT-6 (90 mg, 0.3 mmol) u anhidrovanom DMF (9 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.6 mL, 0.6 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-86 (166 mg, 0.6 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-107 (56.3 mg, 33.6%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.17-8.12 (m, 2H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 3.66 (s, 1H), 3.62-3.57 (m, 3H), 3.47-3.44 (m, 2H), 3.23-3.20 (m, 4H), 2.98-2.95 (m, 1H), 2.70-2.67 (m, 1H), 2.11-2.06 (m, 1H), 2.01-1.96 (m, 1H) , 1.86-1.89 (m, 1H), 1.67-1.62 (m, 1H), 1.45-1.36 (m, 1H), 1.21-1.12 (m, 4H). MS m/z (M+H): 539.1.

Primer 108

[0421]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((2-etoksietil)(metil)amino)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-108)

[0422] U mešanu suspenziju INT-6 (400 mg, 1.34 mmol) u anhidrovanom DMF (35 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 2.67 mL, 2.67 mmol) na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-87 (271.4 mg, 1.34 mmol) u DMF (5 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-108 (36.9 mg, 13.6%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.17-8.11 (m, 2H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16-7.13 (m, 1H), 3.60-3.59 (m, 1H), 3.50-3.40 (m, 2H), 2.80-2.79 (m, 2H), 2.74-2.71 (m, 2H), 1.84-1.83 (m, 4H), 1.17 (d, J = 9.2 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 466.0.

Primer 109

[0423]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5,6,7,8-tetrahidrohinazolin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-109)

[0424] U mešanu suspenziju INT-6 (339 mg, 1.13 mmol) u anhidrovanom DMF (25 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 2.26 mL, 2.26 mmol) u kapima na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. 2,4-dihloro-5,6,7,8-tetrahidrohinazolin (299.1 mg, 1.13 mmol) u DMF (5 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-109 (87.4 mg, 29.2%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.18-8.11 (m, 2H), 7.83 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.10-7.20 (m, 1H), 3.70 (s, 2H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.52-3.36 (m, 6H), 2.63-2.60 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.17 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 1.06 (t, J = 7.8 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 527.0.

Primer 110

[0425]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((2,2-difluoroetoksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]thieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-110)

[0426] U mešanu suspenziju INT-6 (154.4 mg, 0.52 mmol) u anhidrovanom DMF (30 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.5 mL, 0.88 mmol) u kapima na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-62 (150.4 mg, 0.62 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (40 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-110 (70.0 mg, 26.8%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.37 (br d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.19 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.16 (br t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.45-6.42 (m, 1H), 4.82 (s, 2H), 3.96-3.84 (m, 2H), 3.65-3.56 (m, 1H), 3.47 (t, J = 4.5 Hz, 2H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 506.0.

Primer 111

[0427]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-4-((10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino [5’,6’ :4,5] tieno [3,2-f]hinolin-3-il)oksi)pirimidin-5-il)metoksi)propanonitrila (I-111)

[0428] U mešanu suspenziju INT-6 (120 mg, 0.4 mmol) u anhidrovanom DMF (12 mL) je dodat t-BuOK (1 M u THF, 0.8 mL, 0.8 mmol) u kapima na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-68 (186 mg, 0.8 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-111 (55.9 mg, 27.6%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.19-8.12 (m, 2H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 3.77 (t, J = 6.0 Hz, 2H)), 3.60-3.59 (m, 1H), 3.49-3.45 (m, 2H), 2.88-2.85 (m, 2H), 1.18 (d, J = 6.8 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 495.1.

Primer 112

[0429]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((metilsulfonil)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-112)

[0430] INT-6 (0.207 g, 0.692 mmol) je rastvoren u 2 mL suvog DMF i K2CO3(0.956 g, 6.92 mmol) je dodat. Reakcija je zagrevana na 90°C tokom 5 min, ohlađena i INT-54 (0.250 g, 1.038 mmol) u DMSO je dodat. Reakcija je mešana na 90°C tokom 3 sata za koje vreme je utvrđeno da je reakcija završena. Reakcija je ohlađena i višak baze je filtriran. Sirova reakciona smeša je prečišćena sa HPLC reverzne faze, da se dobije I-112 (0.105 g, 0.208 mmol, 30 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.18 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.75 (s, 2H), 3.59 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 3.17 (s, 3H), 1.16 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 504.0.

Primer 113

[0431]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((difluorometoksi)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-113)

[0432] U mešanu suspenziju INT-6 (109.0 mg, 0.36 mmol) u anhidrovanom DMF (10 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.62 mL, 0.62 mmol) u kapima na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-55 (100.1 mg, 0.42 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (10 mL) i vode (10 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (10 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je propušten kroz silikagel (DCM/MeOH 30:1) da se dobije I-113 (13.4 mg, 7.48%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.18-8.09 (m, 2H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.13-6.62 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 3.57-3.56 (m, 1H), 3.50-3.49 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 492.2.

Primer 114

[0433]

Sinteza (R)-3-((5-((3-oksa-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-114)

[0434] U mešanu suspenziju INT-6 (120.0 mg, 0.40 mmol) u anhidrovanom DMF (12 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.8 mL, 0.8 mmol) u kapima na 0°C da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi. INT-83 (131.9 mg, 0.48 mmol) u DMF (3 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (30 mL) i vode (40 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC je dalo I-114 (40.9 mg, 19%) kao smešu dijastereoizomera.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.15-8.08 (m, 2H), 7.80 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.12-7.09 (m, 1H), 3.58-3.54 (m, 5H), 3.45-3.39 (m, 4H), 3.11-3.09 (m, 2H), 1.94-1.90 (m, 2H), 1.76-1.72 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 537.0.

Primer 115

[0435]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(((3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-115)

[0436] U mešani rastvor INT-6 (215.37 mg, 0.720 mmol) u DMF (30 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF) (0.96 mL, 0.960 mmol) na 0°C i reakcija je mešana na ovoj temperaturi tokom 20 minuta da se dobije braon rastvor. Zatim INT-84 (360 mg, 0.96 mmol) je dodat reakcionoj smeši na 0°C, zagrevan do sobne temperature i ostavljen da se meša preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa vodom, vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (3 x 50 mL) i organski ekstrakt je ispran sa 2 x 20 mL zasićenog fiziološkog rastvora. Organski sloj se osušen preko natrijum sulfata, filtriran i zatim koncentrovan. Sirovi materijal je filtriran kroz silikagel eluiranjem sa etil-acetatom da se dobije (2R,6S)-4-((2-hloro-4-(((R)-10-metil-8-okso-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-3-il)oksi)pirimidin-5-il)metil)-2,6-dimetilpiperazin-1-karboksilat (180 mg, 29%) kao žuta čvrsta supstanca. Ovom materijalu (100.0 mg, 0.16 mmol) rastvorenom u DCM, je dodat TFA (1.0 mL, 0.16 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 minute. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(10 mL), nakon čega sledi ekstrakcija sa etil-acetatom (3 × 30 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentriovani u vakumu. Dalje prečišćavanje preparativnom TLC na silika gelu 4:1) je dalo I-115 (67 mg, 65.5%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.20-8.12 (m, 2H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16-7.14 (m, 1H), 3.66-3.52 (m, 3H), 3.49-3.41 (m, 2H), 3.11-2.79 (m, 4H), 1.91-1.75 (m, 2H), 1.22-1.17 (m, 4H), 1.02 (d, J = 5.6 Hz, 6H). MS m/z (M+H): 538.1.

Primer 116

[0437]

Sinteza (R)-3-((5-bromo-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-116)

[0438] INT-6 (1.6 g, 5.34 mmol) je suspendovan u 20 mL suvog DMF. Dodat je K2CO3(7.39 g, 53.4 mmol) i reakcija je isprana sa azotom. Reakcija je zagrevana na 90°C tokom 10 minuta, ohlađena i dodat je 5-bromo-2,4-dihloropirimidin (1.583 g, 6.95 mmol). Reakcija je ponovo zagrevana na 90°C tokom dodatna 4 sata. Reakciona smeša je ohlađena, filtrirana da se ukloni nerastvorena baza, i zatim sipana u vodu (200 mL). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i osušen pod smanjenim pritiskom dajući I-116 (1.922 g, 3.92 mmol, 73.3% prinos) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.39 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.46 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Primer 117

[0439]

Sinteza (R)-3-((6-((tert-butilamino)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-117)

[0440] t-Butil amin (0.019 mL, 0.363 mmol), natrijum jodid (0.272 g, 1.814 mmol) i (R)-INT-93 (0.167 g, 0.363 mmol) su rastvoreni u 3 mL suvog DMF. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 sati. Jednom završena reakcija je filtrirana da bi se uklonio višak soli i prečišćena direktno preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/voda, 0.1% TFA) da se dobije I-117.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 9.10 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.16 (m, 1H), 4.39 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.59 (m, 1H), 3.44 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz). MS m/z (M+H): 484.1.

Primer 118

[0441]

Sinteza (R)-3-((6-((tert-butil(metil)amino)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-118)

[0442] 1-117 (0.025 g, 0.050 mmol) i formaldehid (37% vod) (0.011 mL, 0.151 mmol) su rastvoreni u 3 mL THF, 1 mL MeOH i 0.1 mL sirćetne kiseline. Ovoj smeši je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (0.053 g, 0.252 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, koncentrovana do suvoće i ponovo rastvorena u 3 mL DMSO w/1 mL H2O i direktno prečišćena preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) da se dobije I-118.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.62 (br, 1H), 9.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.7 Hz), 8.16 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.17 (br, 1H), 4.69 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 13.3 Hz, 8.7 Hz, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.45 (m, 2H), 2.72 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 511.1.

Primer 119

[0443]

Sinteza (R)-3-((2-fluoro-5,7-dihidrofuro[3,4-d]pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-119)

[0444] U rastvor I-86 (302 mg, 0.66 mmol) u DMSO (15 mL), KF (383.3 mg, 6.6 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na 110°C tokom 2 sata. Reakcija je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj se odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinirani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentriran pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) je dalo željeni produkt I-119 (24.4 mg, 8.4%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.38 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 8.14-8.12 (m, 1H), 7.86 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.15-7.10 (m, 1H), 5.04 (s, 4H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.47-3.42(m, 2H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 438.1.

Primer 120

[0445]

Sinteza (R)-3-((5-((tert-butil(metil)amino)metil)-2-fluoropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-120)

[0446] U rastvor I-80 (80.0 mg, 0.16 mmol) u DMSO (6 mL), KF (90.8 mg, 1.57 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 110°C tokom 2 sata. Reakcija je ohlađena i zatim podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentriran pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) je dalo željeni produkt I-120 (10.4 mg, 12.8%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.15-8.11 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.17-7.15 (m, 1H), 3.70-3.65 (m, 3H), 3.47-3.41(m, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.19 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.13 (s, 9H). MS m/z (M+H): 495.2.

Primer 121

[0447]

Sinteza (R)-3-((5-(etoksimetil)-2-fluoropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-121)

[0448] U rastvor I-82 (180 mg, 0.38 mmol) u DMSO (15 mL), KF (222.2 mg, 3.8 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 110°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (30 mL), organski sloj se odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (50 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentriran pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje preparativnom HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) je dalo željeni produkt I-121 (49.2 mg, 26.9%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.09-8.07 (m, 1H), 7.86 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.14-7.05 (m, 1H), 4.67 (s, 1H), 3.64-3.62 (m, 3H), 3.47-3.41(m, 2H), 1.23-1.18 (m, 6H). MS m/z (M+H): 454.1.

Primer 122

[0449]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-122)

[0450] U rastvor I-95 u THF (2 mL) i metanolu (1 mL) je dodata sirćetna kiselina ( 10.45 µl. 0.183 mmol) i formaldehid (0.68 mL, 0913mmol) (37% u vodi). Nakon mešanja tokom 10 minuta, natrijum triacetoksiborohidrid (58.0 mg, 0.274 mmol) je dodat. Nakon 40 minuta, reakciona smeša je ohlađena do 0°C, ugašena sa zas. vod. NaHCO3, ekstrahovana sa DCM-MeOH (4x, 9:1). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Prečišćavanje pomoću HPLC (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) je dalo I-122 (9.0 mg, 0.018 mmol, 19% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6): δ 9.90 (br, 1H), 9.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.22-8.17 (m, 2H), 7.86 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.10-3.74 (m, 2H), 3.62-3.28 (m, 5H), 2.97-2.81 (m, 5H), 1.19 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 507.0.

Primer 123

[0451]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(piridin-3-il)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-123)

[0452] U suspenziju I-116 (30.1 mg, 0.062 mmol) u anhidrovanom 1,4-dioksanu (1.5 mL) je dodat Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(0.12 mL, 5 mol%, 0.025M u anhidrovanom 1,4-dioksanu) na sobnoj temperaturi da se dobije svetlo braon rastvor guste suspenzije. 3-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (15.2 mg, 0.074 mmol) u anhidrovanom 1,4-dioksanu (0.2 mL) je dodat u dobijeni rastvor i praćen dodatkom Cs2CO3(0.1 mL, 1.0 M u vodi). Dobijena smeša je degazirana sa azotom i mešana na 80°C na šejkeru preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature i uklanjanja rastvarača, ostatak je ponovo rastvoren u DMSO (3.0 mL) i filtriran. Filtrirani rastvor je prečišćen sa HPLC reverzne faze (0.01% mravlja kiselina u Vodi-CH3CN) da se dobije željeni produkt I-123 (6.1 mg, 20.6%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 1.8Hz, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.66 (dd, J = 4.8, 1.8 Hz, 1H), 8.21 (m, 1H), 8.16 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.13-8.14 (br, 1H ),7.82 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.2, 1.0 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 5.7 Hz), 3.57-3.60 (m, 1H), 3.45-3.46 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.6Hz, 3H). MS m/z (M+H): 489.4.

Primer 124

[0453]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-124)

[0454] I-116 (180 mg, 0.367 mmol), 2-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (154 mg, 0.733 mmol), PdCl2(dppf) (0.027 g, 0.037 mmol), i kalijum karbonat (152 mg, 1.100 mmol) su rastvoreni u 8 mL suvog DMF i degazirani evakuacijom/ultrazvukom (2x) ponovo napunjeni svaki put sa argonom. Reakcija je tada bila zagrevana do 85°C uz mešanje. Nakon što se sa LC/MS utvrdilo da je reakcija završena, smeša je ohlađena, sipana u vodu i ekstrahovana 3 x sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen HPLC reverzne faze da bi se dobio I-124 (16 mg, 0.032 mmol, 8.84 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.17 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 9.34 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 11 Hz, 1H), 7.17 (br, 1H), 6.43 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.79 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.60 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.19 (d, J = 6.6Hz, 3H).

Primer 125

[0455]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5,6,7,8-tetrahidropirido [4,3-d] pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-125)

[0456] INT-6 (50 mg, 0.167 mmol) je suspendovan u 10 mL suvog DMF i ispran azotom. Kalijum karbonat (0.231 g, 1.670 mmol) je dodat i reakcija je mešana na 90°C tokom 10 minuta. U ovu smešu, tert-butil 2,4-dihloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (61 mg, 0.200 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana dodatnog 1 sata na 90°C. Jednom kada je sa LC/MS ocenjeno da je reakcija završena, smeša je sipana u zasićeni NH4Cl, ekstrahovana 3 × sa DCM. Kombinovani DCM ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani na silicijum dioksidu. Sirovi materijal je zatim prečišćen fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta od 0-30% MeOH u EtOAc. Frakcije koje sadrže produkt su kombinovane, koncentrovne i dobijeni ostatak je zatim rastvoren u TFA (1.162 ml, 15.08 mmol) i mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka reakcija je koncentrovana, tretirana sa 3 mL NH4OH (vod.) i dobijena čvrsta supstanca je izolovana filtracijom, isprana sa vodom i osušena pod visokim vakumom da se dobije I-125 kao žuta čvrsta supstanca (68 mg, 87% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 9.53 (br, 1H), 8.22 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H) 7.18 (br, 1H), 4.45 (br, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.46 (m, 2H), 3.12 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.19 (d, 6.4 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 466.6.

Primer 126

[0457]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-6-metil-5,6,7,8-tetrahidropirido [4,3-d] pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-126)

[0458] 1-125 (0.1 g, 0.214 mmol) je rastvoren u 3 mL 1:2 MeOH-THF smeši. Sirćetna kiselina (0.025 mL, 0.428 mmol) i formaldehid (0.080 mL, 1.071 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 10 minuta, zatim je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (0.136 g, 0.642 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša još jedan sat na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija je razblažena sa 1 mL vode, koncentrovana i dobijeni ostatak je rastvoren u 4 mL DMSO i prečišćen direktno prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.1% TFA) da se dobije I-126 (0.05 g, 49% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.36 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 8.7Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.65 (br, 2H), 3.75 (m, 3H), 3.59 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 480.8.

Primer 127

[0459]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-(hidroksimetil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-127)

[0460] U rastvor INT-96 (60 mg, 0.1 mmol) u dimetilformamidu (2.0 mL), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (14.4 mg, 0.01 mmol) i trietilsilan (72.4 mg, 0.6 mmol) su dodati na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa vodom (4.0 mL) i ekstrahovana sa 10% metanola/dihlorometan (2 x 10 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (5 mL) praćen zasićenim rastvorom slane vode (5 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobio I-127 (22 mg, 40%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1.18 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 3.46 (br s, 1H), 3.60 (br s, 1H), 4.68 (s, 2H), 5.66 (br s, 1H), 7.15 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 9.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H). MS m/z (M+H): 442.4.

Primer 128

[0461]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-hidroksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-128)

[0462] U mešanu suspenziju INT-6 (150.0 mg, 0.5 mmol) u anhidrovanom DMF (7.5 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.6 mL, 0.6 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5h na ovoj temperaturi. INT-97 (144.5 mg, 0.55 mmol) u DMF (2 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (10 mL) i vode (20 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 10 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (30 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje prep- HPLC je dalo I-128 (30 mg, 11.4%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.19-8.12 (m, 2H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.47-3.45 (m, 3H), 2.81-2.71 (m, 2H), 2.30-2.11 (m, 2H), 1.75-1.65 (m, 2H), 1.46-1.40 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 525.0.

Primer 129

[0463]

(R)-3-((2-hloro-5-((4-etoksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-129)

[0464] U mešanu suspenziju INT-6 (131.0 mg, 0.44 mmol)) u anhidrovanom DMF (11 mL) je dodat t-BuOK (1M u THF, 0.72 mL, 0.72 mmol) na 0°C u kapima da se dobije braon rastvor. Dobijeni rastvor je mešan daljih 0.5 h na ovoj temperaturi.

INT-98 (128.0 mg, 0.44 mmol) u DMF (1 mL) je dodat u kapima gornjem rastvoru i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (15 mL) i vode (15 mL), organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil-acetatom (2 × 15 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (30 mL) i organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje prep- HPLC je dalo I-129 (49.8 mg, 20.4%) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.89 (brs, 1H), 9.39 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.23-8.14 (m, 2H), 7.88 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.20-7.05 (m, 1H), 4.68-4.43 (m, 2H), 3.80-3.63 (m, 2H), 3.60-3.44 (m, 6H), 3.26-3.03 (m, 2H), 2.27-2.17 (m, 1H), 2.16-1.88 (m, 2H), 1.76-1.56 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.19-1.02 (m, 3H). MS m/z (M+H): 553.

Primer 130

[0465]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-(2-metoksietoksi)piperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-130)

[0466] U rastvor INT-96 (135.6 mg, 0.4 mmol) u DMF (20 mL), je dodat kalijum karbonat (625.9 mg, 4.5 mmol) na 0°C na sobnoj temperaturi i mešan na 90°C tokom 10 min. Dobijenoj smeši je dodat INT-99 (145.0 mg, 04 mmol) na 90°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 1h. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (150mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 10 mL) i isprana sa slanim rastvorom (30 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da de dobije sirovi materijal. Sirovi materijal je prečišćen prep- HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.05% NH4HCO3) da se dobije I-130 (14.5 mg, 6%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.12-8.08 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 3.63-3.52 (m, 3H), 3.52-3.39 (m, 7H), 3.23 (s, 3H), 2.78-2.74 (m, 2H), 2.26-2.19 (m, 2H), 1.84-1.81 (m, 2H), 1.50-1.44 (m, 2H), 1.20 (d, J = 5.4 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 583.4.

Primer 131

[0467]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-(2-fluoroetoksi)piperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-131)

[0468] U rastvor INT-6 (54.4 mg, 0.2 mmol) u DMF) (10 mL) je dodat kalijum tert-butoksid (1M u THF, 0.4 mL, 0.4 mmol) na 0 °C i mešan tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat, INT-100 (56.0 mg, 0.2 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 25°C preko noći. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (15.0 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 10 mL) i isprana fiziološkim rastvorom (30 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Sirovi materijal je prečišćen prep- HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.05% NH4HCO3) da se dobije I-131 (19.3 mg, 19%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.12-8.08 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.57 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.68 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.58 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 2H), 3.36-3.33 (m, 1H), 2.78-2.75 (m, 2H), 2.27-2.20 (m, 2H), 1.87-1.83 (m, 2H), 1.50-1.47 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS m/z (M+H):571.0.

Primer 132

[0469]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-(metoksi-d3)piperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-132)

[0470] U rastvor INT-6 (107.2 mg, 0.4 mmol) u DMF (15 mL) je dodat kalijum karbonat (495.0 mg, 3.6 mmol) na sobnoj temperaturi i mešan na 90°C tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat, INT-101 (100.0 mg, 0.4 mmol) je dodat na 90°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 1 h. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (30.0 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 20 mL) i isprana sa slanim rastvorom (50 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Sirovi materijal je prečišćen prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.05% NH4HCO3) da se dobije I-132 (7.6 mg, 4%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.12-8.08 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 3.64-3.53 (m, 3H), 3.47-3.40 (m, 2H), 3.28-3.17 (m, 1H), 2.76-2.73 (m, 2H), 2.27-2.24 (m, 2H), 1.87-1.83 (m, 2H), 1.47-1.44 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.6Hz, 3H). MS m/z (M+H): 542.0.

Primer 133

[0471]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((4-izopropoksipiperidin-1-il)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-133)

[0472] U rastvor INT-6 (147.6 mg, 0.5 mmol) u DMF (30 mL) je dodat kalijum karbonat (681.5 mg, 5.0 mmol) na sobnoj temperaturi i mešan na 90°C tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat, INT-102 (150.0 mg, 0.5 mmol) na 90°C. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 1h. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (30.0 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 20 mL) i isprana sa slanim rastvorom (50 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Sirovi materijal je prečišćen prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.05% NH4HCO3) da se dobije I-133 (24.2 mg, 10.2%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.67 (br, 1H), 8.17 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.12-8.08 (m, 1H),, 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.70-3.63 (m, 4H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.41-3.36 (m, 1H), 2.78-2.74 (m, 2H), 2.26-2.19 (m, 2H), 1.79-1.63 (m, 2H), 1.44-1.41 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.0 Hz, 6 H). MS m/z (M+H): 567.1.

Primer 134

[0473]

Sinteza (R)-3-((5-((4-(tert-butoksi)piperidin-1-il)metil)-2-hloropirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4] diazepino[5’,6’:4,5] tieno[3,2-f]hinolin-8-on (I-134)

[0474] U rastvor INT-6 (158.0 mg, 0.5 mmol) u DMF (20 mL) je dodat kalijum karbonat (828.0 mg, 6.0 mmol) na 90°C i mešan tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat, INT-103 (168.0 mg, 0.5 mmol) i mešan na 90°C tokom 1h. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena sa ledeno hladnom vodom (30.0 mL), ekstrahovana sa etil-acetatom (2 x 20 mL) i isprana sa fiziološkim rastvorom (50 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom da se dobije sirovi materijal. Sirovi materijal je prečišćen prep-HPLC reverzne faze (10-95% MeCN/Voda, 0.05% NH4HCO3) da se dobije I-134 (11.7 mg, 4%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.35 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.18 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.12-8.08 (m, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.68-3.55 (m, 3H), 3.54-3.40 (m, 3H), 2.76-2.73 (m, 2H), 2.27-2.24 (m, 2H), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.44-1.41 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.13 (s, 9H). MS m/z (M+H): 581.2.

Primer 135

[0475]

Sinteza (R)-3-((2-hloro-5-((etoksi-d5)metil)pirimidin-4-il)oksi)-10-metil-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5’,6’:4,5]tieno[3,2-f]hinolin-8-on (1-135)

[0476] U suspenziju INT-6 (66 mg, 0.220 mmol) u DMF (3.0 mL) je dodat kalijum karbonat (274 mg, 1.980 mmol) i dobijena smeša je mešana na 90°C tokom 10 min. U dobijenu smešu je dodat, INT-103 (168.0 mg, 0.5 mmol) i mešan na 90°C tokom 10 min. Rastvor INT-104 (56 mg, 0.264 mmol) u DMF (2.0 mL) je dodat. Dobijena reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 4 sata. Nakon završetka reakciona smeša je filtrirana i filtrati su koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa 1% do 15% gradijenta MeOH-EtOAc da se dobije I-135 (68 mg, 65% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.17 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.56-3.60 (m, 1H), 3.40-3.47 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.9 Hz, 3H). MS m/z (M+H): 475.1. Biološki primeri

[0477] U nastavku su opisani in vitro testovi koji se koriste za merenje biološke aktivnosti obezbeđenih jedinjenja kao selektivnih inhibitora MK2.

PRIMER 136

Test aktivirane proteinske kinaze 2 Omnia® aktivirane mitogenom za procenu snage jedinjenja:

[0478] Ispod navedeni protokol opisuje kontinuirano očitavanje testa kinaze koji je optimizovan za merenje snage jedinjenja protiv aktiviranog p38ɑ , mitogenom- aktivirane proteinske kinaze- aktivirane proteinske kinaze 2 (MAPKAP-K2 ili MK2) enzima. Dalji detalji ovog testa su opisani od strane Life Technologies, Carlsbad, CA na svojoj web stranici na sledećem URL: http://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/omnia_kinase_assay_man.pdf.

[0479] [Reagens] korišćen:

[MK-2] = 0.4 nM,

[ATP] = 10 µM i

[ST3-Sox] = 10 µM (ATP<app>KM= 10 µM)

[0480] Ukratko, 10X osnovni rastvori MK2 (PV3317, iz Life Technologies), 1.13X ATP (AS001A), i Sox konjugovani peptidni supstrat, S/T3-Sox, (KZN1031) su pripremljeni u 1X kinaznom reakcionom puferu sastojeći se od 20 mM Tris, pH 7.5,5 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 5 mM β-glicerofosfata, 5% glicerola (10X osnovni, KB001A) i 0.2 mM DTT (DS001A). Enzimski rastvor (5 µL) je dodat u svaki DMSO (5 µL) ili serijski razblažena test jedinjenja pripremljena u DMSO u tzv. "Corning (# 3574) 384 jažice", beloj, nevezujućoj površinskoj mikrotitarskoj ploči (Corning, NY). Reakcije kinaze su započete sa dodatkom 45 mL ATP-peptidnog supstrata S/T3-Sox i mešanje i praćenje svake 71 sekunde tokom 120 minuta naex360/em485 u čitaču pločica tzv."Synergy" H4 iz BioTek (Winooski, VT) na sobnoj temperaturi.

[0481] Pozadinski signali iz jažica bez enzimske kontrole su oduzimani iz svih kriva napretka. Početni linearni delovi kriva neto napretka su bili uklopljeni prema linearnoj jednačini kako bi se dobio nagib i procenat inhibicije (% inhibicije) pri svakoj koncentraciji jedinjenja. Krive neto napretka dobijene tokom prva dva sata reakcija takođe su uklopljene prema rastućoj jednoeksponentnoj jednačini (jednačina 1) da bi se dobile kobsvrednosti pri svakoj koncentraciji jedinjenja. Grafikoni % koncentracije inhibicije naspram inhibitora su bili u skladu sa jednačinom doza-reakcija (jednačina 2) da bi se generisale vrednosti IC50i nagiba Hill-a, dok su parcele kobsnasuprot koncentraciji inhibitora odgovarale jednačini 3 (jednačina 3) za generisnje prividne kinakt/KIvrednosti pomoću softvera GraphPad PRISM (verzija 6.00; GraphPad San Diego, CA).

gde je F intenzitet fluorescencije iz čitača ploče, V0je konstanta koja odražava odnos između očitavanja instrumenta i koncentracije produkta, t je vreme, e je Ojlerov broj, i kobsje posmatrana konstanta brzine inaktivacije.

gde % inhibicije je procenat inhibicije, IC50je polovina maksimalne inhibitorne koncentracije, [I] je koncentracija inhibitora, i n je nagib Hill.

gde je kobsposmatrana konstanta brzine inaktivacije, kinactje prividna konstanta brzine inaktivacije, KIje prividna konstanta inhibicije, i [I] je koncentracija inhibitora. Rezultati ovog testa, koji pokazuju IC50(tj. koncentraciju pri kojoj ispitivano jedinjenje inhibira 50% fosforilacije supstrata peptida), su prikazani u nanomolarima. Rezultati snage za ispitivana jedinjenja su prikazani u Tabeli A u koloni naslovljenoj "MK2 IC50".

PRIMER 137

Analiza masene spektrometrije za otkrivanje nivoa kovalentne modifikacije MK2

[0482] Jedinjenja I-1 do I-50 pronalaska su ispitivana u masenom spektrometrijskom testu da bi se izmerila njihova sposobnost kovalentne modifikacije proteina MK2. Sledi postupak za ovaj test. Intaktni protein MK2 (Invitrogen, kat. Br. PR5320A) je inkubiran za 60 minuta na sobnoj temperaturi sa 10 puta viškom testnog jedinjenja na protein. Alikvoti dobijene smeše 6 µL svaki) su razblaženi sa 0.2% trifluorosirćetne kiseline (TFA, 10 µL) pre mikro C4 ZipTippinga direktno na cilj MALDI koristeći sinapinsku kiselinu kao matricu desorpcije (10 mg/ml u 0.1% TFA: acetonitril 50:50, v/v). Težišna masa ciljnog proteina u kontrolnom uzorku upoređena je sa centroidnom masom ciljnog proteina inkubiranog sa jedinjenjem. Promena težišne mase tretiranog proteina u poređenju sa netretiranim proteinom podeljena je sa molekularnom težinom jedinjenja. Ovaj broj odgovara procentu modifikovanog proteina (mera proporcije ukupnog ciljnog proteina kovalentno vezanog za testno jedinjenje) nakon jednosatne inkubacije. Rezultati ovog ispitivanja su prikazani u Tabeli A u koloni "Modifikacija mase".

[0483] Jedinjenja I-51 do I-129 su ispitivana u masenom spektrometrijskom testu magnetskih zrnaca da bi se izmerila njihova sposobnost kovalentne modifikacije proteina MK2. Sledi postupak za ovaj test. Protein MK2 (Invitrogen, Cat. No. PR5320A) je inkubiran tokom 60 minuta na sobnoj temperaturi sa 10 puta viškom testnog jedinjenja na protein. 3 µL magnetskih zrnaca Ni-NTA su dodati u alikvote uzorka od 6 µL, isprani, eluirani sa 0.2% trifluorosirćetne kiseline (TFA, 2 µL), i primećeni direktno na cilj MALDI koristeći sinapinsku kiselinu kao desorpcijsku matricu (10 mg/mL u 0.1% TFA: acetonitril 50:50, v/v). Težišna masa ciljnog proteina u kontrolnom uzorku je upoređena sa težišnom masom ciljnog proteina inkubiranog sa jedinjenjem. Promena u težišnoj masi tretiranog proteina u poređenju sa netretiranim proteinom je podeljena sa molekularnom težinom jedinjenja. Ovaj broj odgovara procentu modifikovanog proteina (mera proporcije ukupnog ciljnog proteina kovalentno vezanog za testno jedinjenje) nakon jednosatne inkubacije. Rezultati ovog ispitivanja su prikazani u Tabeli A u koloni "Modifikacija mase".

PRIMER 138

MK2 ćelijski test - Detekcija ukupnog i fosfo-Hsp27 (Serin 78) MSD pomoću ELIZA (Thp1)

[0484] Jedinjenja pronalaska su ispitivana u Thp-1 humanim ćelijama akutne monocitne leukemije radi merenja inhibicije aktivnosti MK2. Thp-1 ćelije su gajane u medijumu za kulturu koji sadrži RPMI/10% FBS (fetalni goveđi serum)/0.05 mM 2-merkaptoetanol. 72 sata pre testa , 8x10<4>ćelija po jažici je stavljeno u ploču sa 96 jažica ravnog dna, zajedno sa 10 ng/mL forbol 12-miristat 13-acetata (PMA). Ćelije su kultivisane u inkubatoru na 37°C dok je bilo potrebno za test. Medijum ćelijske ploče je zamenjen sa medijumom za kulturu neposredno pre testa dok su pravljena razblaženja jedinjenja.

[0485] Pripremljeni su osnovni rastvori test jedinjenja, 1 mM u DMSO. U 300 µL ćelijskog medijuma je dodato 0.9 µl testnog jedinjenja za početnu koncentraciju od 3000 nM. Trostruka serijska razblaženja (1:3) su napravljena u medijimu za ćelijsko ispitivanje do konačne koncentracije od 0.15 nM. Medijum sa ćelijskom pločom je odbačen, nakon čega je dodano 100 µL jedinjenja sadržavajući medijum. Dobijeni pripravak je inkubiran na 37°C tokom 1 sata.

[0486] Uklonjen je medijum za ispitivanje ćelije koji sadrži ispitivano-test jedinjenje i ćelije su isprane jednom sa medijumom za ispitivanje ćelije. U svaku jažicu je dodat medijum za ispitivanje ćelije koji sadrži 50 ng/mL LPS (lipopolisaharid) i inkubiran tokom 45 minuta. Nakon LPS inkubacije, ćelije su isprane jednom sa PBS (fiziološki rastvor puferisan sa fosfatom) i lizirane sa 60 µl pufera za ekstrakciju ćelije (Invitrogen # FNN0011) plus inhibitori proteaze i fosfataze. Ploča je zatim pohranjena na - 80°C do daljnje analize.

[0487] Komplet MULTI-SPOT Fosfo (Ser78)/Total HSP27 ELIZA test je kupljen od Meso Scale Delivery (MSD; kataloški broj: K15128D). MSD obezbeđuje ploču koja je prethodno presvučena antitielima za hvatanje fosfora-HSP27 (Ser78) i ukupni HSP27. Prethodno presvučena MSD ploča je blokirana sa 150 µL/jažici 3% BSA u MSD puferu za ispiranje. Pripravak je stavljen na šejker na sobnoj temperaturi tokom sata vremena. Dok je ELIZA pločica bila blokirana, ispitivna ćeijska ploča pohranjena na -80°C je stavljena na šejker na 4°C tokom 1 sata da se otopi.

Blokirana MSD ploča je isprana na uređaju za pranje ploča, istiskivanjem poslednjeg dela rastvora za ispiranje, nakon čega je dodano 30 µl lizata sa ploče za ispitivanje ćelije. Pripravak je pokriven i inkubiran tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Lizat je uklonjen, ploča je isprana 3 puta na ploči za ispiranje, i zadnji komad pufera za ispiranje je istisnut i zamenjen sa 25 µl/jažici za detekciju antitela (anti-ukupni HSP27 konjugovan sa elektrohemiluminescentnim jedinjenjem, MSD SULFO-TAG oznaka, isporučen u kompletu) izrađen u 1% BSA/MSD puferu za ispranje. Ploča je inkubirana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi na šejkeru, nakon čega slede 3 ispiranja. Izvučen je ooslednji komad pufera za ispiranje. Dodano je 150 µl/jžici 1x MSD pufera za očitavanje (4x pufer za očitavnje isporučen sa kompletom) i ploča je analizirana na tzv. "MSD SFCTOR®Imager-u" za analizu. SFCTOR®Imager meri intenzitet emitovane svetlosti kako bi pružio kvantitativnu meru fosforilisanog HSP27 (Ser78) i ukupnog HSP27 prisutnog u uzorku. Relativni procenat fosfoproteina u uzorku je izračunat deljenjem intenziteta signala Fosfo-HSP27 sa ukupnim intenzitetom signala HSP27 izmerenim u svakoj jažici. Analiza uklapanja krive je izvedena pomoću softvera Graph Pad Prism za generisanje EC50na osnovu inhibitornih odgovora LPS-indukovanog odnosom signala p-HSP27/ukupnog HSP27 signala normalizovanog na DMSO-tretirane kontrole (podešene na 100% intenziteta signala). Rezultati iz ovog testa, pokazujući EC50(tj. koncentraciju pri kojoj ispitivano jedinjenje inhibira fosforilaciju Hsp27 za 50%) su prikazani u nanomolarima. Rezultati ovog ispitivanja su prikazani u Tabeli A pod kolonom "pHSP27 koji signalizira EC50".

[0488] Tabela A prikazuje podatke za izabrana jedinjenja u raznim testovima. Jedinjenja koja imaju aktivnost označenu kao "A" obezbeđuju EC50/IC50≤100 nM; jedinjenja koja imaju aktivnost označenu kao "B" obezbeđuju EC50/IC50od 101-500 nM; jedinjenja koja imaju aktivnost označenu kao "C" daju EC50/IC50od 501-999 nM; jedinjenja koja imaju aktivnost označena kao "D" obezbeđuju EC50/IC50od ≥1000 nM. Jedinjenja koja imaju aktivnost označenu kao "E" obezbeđuju modifikaciju mase ≥70%; jedinjenja koji imaju aktivnost označenu kao "F" obezbeđuju modifikaciju mase od 31-69%; jedinjenja koja imaju aktivnost označenu kao "G" obezbeđuju modifikaciju mase ≤30%.

Tabela A.

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

[0489] Iako smo opisali brojna izvođenja ovog pronalaska, očigledno je da se naši osnovni primeri mogu izmeniti da bi se obezbedila druga izvođenja koja koriste jedinjenja iz ovog pronalaska. Zbog toga će to biti cenjeno da obim ovog pronalaska treba biti definisan priloženim patentnim zahtevima, a ne specifičnim izvođenjima koja su predstavljena kao primer.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje izabrano od:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. 9. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 2 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
10. 10. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 3 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
11. 11. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 4 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
12. 12. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 5 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
13. 13. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
14. 14. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 7 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
15. 15. Farmaceutski prihvatljiva kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 8 i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5