RS62464B1

RS62464B1 - Pirimidopirimidinoni korisni kao inhibitori wee-1 kinaze

Info

Publication number: RS62464B1
Application number: RS20211277A
Authority: RS
Inventors: Peter Hewitt; Frank Burkamp; Andrew Wilkinson; Hugues Miel; Colin O'dowd
Original assignee: Almac Discovery Ltd
Priority date: 2017-03-10
Filing date: 2018-03-12
Publication date: 2021-11-30
Also published as: PH12019502049A1; MA47736B1; US11208413B2; AU2018231671B2; MY195580A; SG11201908114UA; BR112019018753A2; NZ756945A; CL2019002557A1; GB201703881D0; US20220194947A1; UA125093C2; AU2018231671A1; CA3055874A1; SA519410093B1; EP3592745A1; MA47736A; EP3592745B1; CN110603256A; KR20190128673A

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje koje je korisno kao inhibitor aktivnosti Wee-1 kinaze. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže ovo jedinjenje i na upotrebu ovog jedinjenja u lečenju kancera.

POZADINA PRONALASKA

[0002] elije su svakodnevno izložene brojnim izazovima, što rezultuje formiranjem višestrukih lezija u DNK. Lezije, ukoliko se ne poprave, mogu dovesti do mutacija ili ćelijske smrti, stoga postoje kompleksne signalne mreže koje osiguravaju da se lezije detektuju i poprave kako bi se održao integritet DNK.

[0003] Detekcija oštećenja DNK inicira niz događaja koji su ključni za održavanje integriteta genoma. Kontrolne tačke ćelijskog ciklusa dizajnirane su da zaustave ćelijski ciklus i omoguće popravku lezije pre nego što ćeliji omoguće da nastavi u mitozu.

[0004] Identifikovane su dve ključne kontrolne tačke, jedna na kraju G1 faze i druga u G2, koje rade u tandemu kako bi se osiguralo da se sve lezije identifikuju i poprave. U oko 50% humanih kancera G1 kontrolna tačka je nefunkcionalna usled mutacija u tumor supresorskom genu TP53. Međutim, G2 kontrolna tačka je retko mutirana i često se aktivira u kancerskim ćelijama. Kancerske ćelije to iskorištavaju kako bi dale rezistentnost na modalitete lečenja, uključujući agense koji oštećuju DNK i zračenje.

[0005] Tri kinaze su identifikovane kao ključni regulatori G2 kontrolne tačke, poimenice Chk1, Chk2 i Wee-1. Inhibitori ovih kinaza se trenutno procenjuju u kliničkim ispitivanjima.

[0006] Wee-1 je nukleusna tirozin kinaza koja negativno reguliše ulazak u mitozu na G2/M kontrolnoj tački katalizujući fosforilaciju kompleksa cdc2 / ciklin B. Fosforilacija se dešava na ostatku tirozina-15 i dovodi do inaktivacije kompleksa cdc2 / ciklin B, što na kraju sprečava mitozu. Funkcija Wee-1 je blisko povezana sa funkcijom Chk1 i Chk2 zbog njihove fosforilacije i inaktivacije cdc25 na serinu-216, kao i saopštene aktivacije Wee-1 od strane Chk 1 i 2 (Ashwell, 2012, DNK Repair in Cancer Therapy, DOI: 10.1016/B978-0-12-384999-1.10010-1).

[0007] Wee-1 je nizvodno od Chk porodice i ključna je komponenta signalne kaskade kontrolne tačke pošto sprečava ćelije da uđu u mitozu ukoliko su detektovane lezije (Do et al., Cell Cycle 201312 (19) 3159-3164.

[0008] Uobičajeno primenjena antikancerska jedinjenja indukuju oštećenje DNK, uključujući antimetabolite, agense platine, inhibitore topoizomeraze i alkilujuće agense. Međutim, njihova efikasnost je ograničena zbog prevelike toksičnosti, rezistencije i nedostatka tumorske selektivnosti. Jedinjenja koja rade u kombinaciji sa ovim agensima da spreče popravku DNK selektivno u tumorskim ćelijama bila bi izuzetno korisna. Pošto je tumor supresorski gen TP53 uobičajeno mutiran u tumorskim ćelijskim linijama, primena inhibitora Wee-1 kinaze, koji ukida G2 kontrolnu tačku, može dovesti do povećane osetljivosti na agense koji oštećuju DNK. Saopšten je potencijal za ovo, pošto je utišavanje aktivnosti Wee-1 bilo dovoljno da senzibilizuje HeLa ćelije na doksorubicin usled ukidanja G2 zaustavljanja. Nasuprot tome, u normalnom epitelu dojke usled potpuno kompetentnog proteina p53, uklanjanje funkcije Wee-1 imalo je mali dopunski efekat u poređenju sa samim doksorubicinom (Wang et al., 2004, Cancer Biology and Therapy, 3 (3), 305- 313).

[0009] Saopšteno je da su ćelijske linije koje sadrže mutacije tumor supresorskog gena TP53 imale povećanu osetljivost na agense koji oštećuju DNK kada se primenjuju zajedno sa inhibitorima Wee-1 malog molekula. Saopštena je sinergistička in vitro i in vivo efikasnost kada su inhibitori malog molekula kombinovani sa gemcitabinom, 5-fluorouracilom, karboplatinom, cisplatinom (Hirai et al. 2010, Cancer Biology & Therapy 9:7, 514-522), citarabinom (Tibes et al., 2012, Blood, 119 (12), 2863-2872), Chk-1 inhibitorima (Carrasa et al., 2012 Cell Cycle 1:11 (13):2507-2517, Russell et al., 2013 Cancer Res. 15; 73 (2) 776-784) i Src inhibitorima (Cozzi et al., 2012, Cell Cycle 11 (5), 1029-1039). Apoptotska efikasnost jednog agensa, nezavisno od statusa TP53, saopštena je u ćelijskim linijama sarkoma i u uzorcima sarkoma poreklom od pacijenata (Kreahling et al., 2012, Mol. Cancer Ther., 11 (1), 174-182) i efikasnost je demonstrirana u panelu kancerskih ćelijskih linija in vivo (Guertin et al., 2013 Mol. Cancer Ther., 12 (8) 1442-1452).

[0010] Poznato je da zračenje, putem indukcije oštećenja DNK, povećava fosforilaciju Tyr15 i Thr14 ostataka cdc2, koja zaustavlja ćelije u G2 i omogućava vreme za popravku DNK, što dovodi do radiorezistentnog fenotipa. Inhibicija aktivnosti Wee-1 inhibitorima malog molekula (Wang et al., 2004, Cancer Biology and Therapy 3 (3), 305-313), (Caretti et al., 2013 Mol. Cancer Ther. 12 (2) 141-150) dovodi do redukovanja CDC2 fosforilacionog ukidanja G2 kontrolne tačke i radiosenzibilizacije, pri čemu je efekat izraženiji u p53 mutiranim ćelijskim linijama.

[0011] Saopšteno je da je kod melanoma prekomerna ekspresija Wee-1 u korelaciji sa lošim kliničkim ishodom (Magnussen et al., 2012 PLoS One 7; (6) e38254), što ukazuje da može imati značajnu ulogu kao biomarker i kao ciljana terapija.

[0012] Jedinjenja koja imaju inhibitorni efekat na kinazu, na primer inhibitorni efekat na Wee-1 kinazu, opisana su u WO 2007/126122, US 2010/0063024, EP 2,213,673, WO 2008/133866, US 2007/0254892, WO 2012/161812, WO2013/126656, US 2013/0102590, WO 2013/059485 i WO 2013/013031.

[0013] WO 2010/067886, WO 2010/067888, US 2011/0135601, EP 2,168,966, WO 2005/090344, US 2009/0048277 i Bioorg. Med. Chem. Lett., 2005, 15, 1931-1935 opisuju različita jedinjenja kao što su derivati dihidropirimidopirimidina, piridopirimidinona i piridopirimidina koji imaju inhibitorni efekat na kinazu. Posebno, kaže se da jedinjenja iz WO 2005/090344 pokazuju aktivnost kao inhibitori protein kinaze, posebno inhibitori tirozin kinaze iz Src porodice. Za jedinjenja opisana u Bioorg. Med. Chem. Lett., 2005, 15, p1931-1935 se kaže da su 10-100 puta potentniji inhibitori c-Src nego Wee-1, i varijacije supstituenata na 6-fenilnom prstenu ne menjaju značajno ovu prednost. Za 5-alkil supstituisane analoge se kaže da su generalno Wee-1 selektivni, ali na štetu potentnosti vezivanja.

[0014] WO 2013/013031 opisuje piridazino[4,5-d]pirimidin-(6H-on inhibitore Wee-1 kinaze za koje se kaže da su korisni za inhibiciju kinaza kao što je Wee-1 i u postupcima lečenja bolesti kao što je kancer. Jedinjenja iz WO 2013/013031 imaju atom azota na '3-poziciji' prstena u odnosu na karbonil grupu.

[0015] US 2013/0018045 opisuje različita triciklična-sulfonamidna jedinjenja koja su korisna za inhibiranje kinaza kao što je Wee-1 i postupke lečenja bolesti kao što je kancer. Jedinjenja iz US 2013/0018045 imaju sulfonamidnu grupu na '1-poziciji' na prstenu i atomi na '3- i '4-pozicijama' formiraju deo fuzionisanog arilnog ili heteroarilnog prstena ("A").

[0016] WO 2015/092431 se odnosi na jedinjenja koja su korisna kao inhibitori aktivnosti Wee-1 kinaze, farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja i upotrebu ovih jedinjenja u lečenju kancera.

[0017] Jedan cilj predmetnog pronalaska je prevazilaženje barem nekih nedostataka iz stanja tehnike ili obezbeđivanje komercijalno korisne alternative za njih.

[0018] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima pojačan ili sličan inhibitorni efekat na kinazu u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0019] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje sa poboljšanom pCDC2 potentnošću, u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0020] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje sa poboljšanom ili uporedivom kinetičkom solubilnošću, u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0021] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje sa poboljšanom ili uporedivom permeabilnošću, u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0022] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje sa poboljšanom metaboličkom stabilnošću, u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0023] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima povećanu ili sličnu izloženost plazmi i/ili tumoru posle oralnog doziranja u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0024] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima povećanu ili sličnu bioraspoloživost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0025] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima povećanu ili sličnu penetraciju u mozak u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama kako bi se ciljali tumori mozga i metastaze.

[0026] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima redukovani rizik od reaktivnih metabolita u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0027] Dodatni cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje koje ima redukovani rizik od interakcije sa komedikacijama koje metabolišu enzimi iz CYP3A porodice u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

SAŽETAK PRONALASKA

[0028] U prvom aspektu predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule (I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat.

[0029] Svaki aspekt ili primer izvođenja kao što je ovde definisano može se kombinovati sa bilo kojim drugim aspektom(ima) ili primerom(ima) izvođenja osim ukoliko nije jasno naznačeno suprotno. Posebno bilo koje svojstvo označeno kao poželjno ili povoljno može se kombinovati sa bilo kojim drugim svojstvom ili svojstvima označenim kao poželjna ili povoljna.

[0030] U drugom aspektu predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0031] U trećem aspektu predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutsku kompoziciju kao što je ovde opisano, za upotrebu u terapiji.

[0032] U četvrtom aspektu predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutsku kompoziciju kao što je ovde opisano, za upotrebu kao medikament.

[0033] U petom aspektu predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutsku kompoziciju kao što je ovde opisano, za upotrebu u lečenju ili preveniranju kancera.

[0034] Takođe je obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili N-oksidnog derivata, ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde opisano, za proizvodnju medikamenta za lečenje ili preveniranje kancera. Takođe je obezbeđen postupak lečenja ili preveniranja kancera kod humanih ili životinjskih pacijenta koji sadrži primenu pacijentu kome je to potrebno efikasne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili N-oksidnog derivata, ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde opisano.

[0035] Drugi poželjni primeri izvođenja jedinjenja u skladu sa pronalaskom pojavljuju se kroz celu specifikaciju i posebno u primerima.

[0036] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje poboljšani ili sličan inhibitorni efekat na kinazu u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama. Posebno, jedinjenje iz predmetnog pronalaska poželjno pokazuje poboljšani ili sličan inhibitorni efekat na Wee-1 kinazu u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0037] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje poboljšanu ili sličnu pCDC2 potentnost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0038] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje poboljšanu ili sličnu kinetičku solubilnost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0039] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje poboljšanu ili sličnu permeabilnost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0040] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje poboljšanu ili sličnu metaboličku stabilnost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0041] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje povećanu ili sličnu izloženost posle oralnog doziranja u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0042] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje povećanu ili sličnu bioraspoloživost u poređenju sa poznatim jedinjenjima ili kompozicijama.

[0043] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pronašli da jedinjenje kao što je ovde opisano može pokazati superiorne fizičko-hemijske odlike u poređenju sa onima poznatim u stanju tehnike.

[0044] Bez želje da bude vezano teorijom smatra se da jedinjenje iz predmetnog pronalaska ima tendenciju da pokaže povoljne efekte koji su prethodno razmatrani usled svoje specifične hemijske strukture.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0045] Osim ukoliko ovde nije drugačije definisano, naučni i tehnički termini koji se upotrebljavaju u vezi sa predmetnim pronalaskom imaće značenja koja su uobičajeno poznata onima sa prosečnim iskustvom u struci. Značenje i obim termina treba da budu jasni, međutim, u slučaju bilo kakve latentne nejasnoće, ovde obezbeđene definicije imaju presedan nad bilo kojom definicijom iz rečnika ili spoljnom definicijom.

[0046] Jedinjenje iz predmetnog pronalaska može posedovati tautomerizam. Predviđeno je da svaki tautomerni oblik spada unutar obima pronalaska.

[0047] Pored toga, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može biti obezbeđeno kao prolek. Prolekovi se transformišu, generalno in vivo, iz jednog oblika u aktivne oblike ovde opisanih lekova. Na primer, prolek se može formirati zaštitom -NH grupe sa hidrolizabilnom grupom koja daje -NH pri hidrolizi.

[0048] Pored toga, podrazumevaće se da ovde opisani elementi mogu biti uobičajeni izotop ili izotop drugi nego uobičajeni izotop. Na primer, jedan ili više atoma vodonika mogu biti<1>H,<2>H (deuterijum) ili<3>H (tricijum).

[0049] Iako je jedinjenje iz predmetnog pronalaska poželjno prisutno kao njegova slobodna baza, bilo u svom anhidrovanom obliku ili u svom obliku bez solvata, ono se takođe može obezbediti u obliku njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kao ko-kristal ili kao solvat. Na primer, jedinjenje se može obezbediti sa protonovanim amino grupama.

[0050] Termin "farmaceutski prihvatljiva so" označava jonsko jedinjenje formirano dodavanjem kiseline u bazu. Termin označava takve soli za koje se u struci smatra da su pogodne za upotrebu u kontaktu sa pacijentom, na primer in vivo i farmaceutski prihvatljive soli se generalno biraju zbog svojih netoksičnih, neiritirajućih karakteristika.

[0051] Termin "ko-kristal" označava višekomponentni molekulski kristal, koji može sadržati nejonske interakcije.

[0052] Farmaceutski prihvatljive soli i ko-kristali mogu se pripremiti pomoću jonoizmenjivačke hromatografije ili pomoću reagovanja slobodne baze ili kiselog oblika jedinjenja sa stehiometrijskim količinama ili sa viškom željene neorganske ili organske kiseline ili baze koja formira so u jednom ili više pogodnih rastvarača, ili mešanjem jedinjenja sa drugim farmaceutski prihvatljivim jedinjenjem sposobnim za formiranje ko-kristala.

[0053] Soli za koje je u struci poznato da su generalno pogodne za upotrebu u kontaktu sa pacijentom uključuju soli izvedene od neorganskih i/ili organskih kiselina, uključujući hidrobromid, hidrohlorid, sulfat, bisulfat, nitrat, acetat, oksalat, oleat, palmitat, stearat, laurat, benzoat, laktat, fosfat, tozilat, citrat, maleat, fumarat, sukcinat i tartarat. One mogu uključivati katjone na bazi alkalnih i zemnoalkalnih metala, kao što su natrijum, kalijum, kalcijum i magnezijum, kao i amonijum, tetrametilamonijum, tetraetilamonijum. Poželjno, pogodna so je hidrohloridna ili citratna so. Dodatno se poziva na brojne literaturne izvore koji prave pregled pogodnih farmaceutski prihvatljivih soli, na primer Handbook of pharmaceutical salts koji je publikovao IUPAC.

[0054] Predmetni pronalazači su otkrili da je jedinjenje iz predmetnog pronalaska korisno u lečenju medicinskih stanja povezanih sa poremećenim ćelijskim rastom, uključujući, ali bez ograničavanja na, kancer, posebno (ali bez ograničavanja na) kancere povezane sa inaktivacijom u tumor supresorskom genu TP53. Jedinjenje može imati korisnost i aktivnost kao jedini agens koji upotrebljava sintetičke ili kontekstualne letalne odnose kao i kod bolesti uključujući kancere sa povišenom podložnošću povećanom replikativnom stresu i narušenom progresijom kroz ćelijski ciklus. Inhibitori Wee1 u skladu sa pronalaskom mogu se takođe upotrebljavati u kombinovanim modalitetima, uključujući kombinacije sa genotoksičnim agensima, radioterapijom, ciljanim agensima i imunomodulatorima uključujući, ali bez ograničavanja na imunske inhibitore kontrolnih tačaka.

[0055] Na primer, kanceri uključuju kardijačne kancere, kancere pluća, gastrointestinalne kancere, kancere genitourinarnog trakta, kancere jetre, kancere kostiju, kancere nervnog sistema, ginekološke kancere, hematološke kancere, kancere kože i kancere nadbubrežnih žlezda, i kancere kao što su tumori nadbubrežnih žlezda, žučnih puteva, mokraćne bešike, krvi, koštanog i vezivnog tkiva, mozga i centralnog nervnog sistema, dojke, grlića materice, kolona i rektuma (kolorektalni), endometrijuma, jednjaka, žučne kese, glave i vrata, Hočkinov (Hodgkinꞌs) limfom, hipofaringealni, bubrega, larinksa, leukemija, jetre, pluća, limfom, tumori medijastinuma, melanom (maligni melanom), mezoteliom, multipli mijelom, nosne šupljine, nazofaringealni, neuroendokrini tumori, ne-Hočkinov limfom, oralni, jednjaka, orofaringealni, jajnika, pankreasa, paranazalnih sinusa, paraštitne žlezde, penisa, tumori hipofize, prostate, pljuvačnih žlezda, sarkom, kože, kičme, želuca, testisa, štitne žlezde, uretre, materice, vagine i vulve. Poželjno kancer je odabran od kancera kolona i rektuma (kolorektalni), kancera glave i vrata, kancera pluća, kancera jednjaka, kancera jajnika i kancera pankreasa. Poželjnije, kancer je kancer kolona i rektuma (kolorektalni). Alternativno, poželjno, kancer je kancer pluća, poželjnije nesitnoćelijski kancer pluća.

[0056] Jedinjenje iz predmetnog pronalaska je takođe korisno u pripremi medikamenta koji je koristan u lečenju prethodno opisanih bolesti, posebno kancera.

[0057] Takođe je obezbeđen postupak inhibiranja aktivnosti Wee-1 koji sadrži primenu sisaru, poželjno čoveku, kome je to potrebno, farmaceutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska.

[0058] Jedinjenje iz ovog pronalaska može biti primenjeno sisarima, uključujući ljude, bilo samo ili, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipijensima ili razblaživačima, u farmaceutskoj kompoziciji, u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom. Jedinjenje se može primenjivati oralno ili parenteralno, uključujući intravenske, intramuskularne, intraperitonealne, subkutane, rektalne i topikalne puteve primene.

[0059] Predmetni pronalazak takođe uključuje unutar svog obima upotrebu jedinjenja iz predmetnog pronalaska u kombinaciji sa drugim ili dodatnim lekom u lečenju kancera. Drugi ili dodatni lek može biti lek koji je već poznat u struci za lečenje kancera.

[0060] Predmetni pronalazak takođe uključuje upotrebu jedinjenja iz pronalaska u režimu koji uključuje korak radioterapije. Radioterapija može biti uobičajeni postupak lečenja zračenjem rendgenskim, y-zracima, neutronima, α-česticama, protonskim ili zračenjem elektronskim snopom. Zajednička primena jedinjenja sadržanog u ovom pronalasku može dovesti do potenciranja terapije zračenjem, klasifikujući ga tako kao radio-senzibilizator.

[0061] Posebno, kanceri često postaju rezistentni na terapiju. Razvoj rezistencije može biti odložen ili prevaziđen primenom kombinacije lekova koja uključuje jedinjenje iz predmetnog pronalaska, na primer kod kancera za koje je poznato da su rezistentni na agense koji oštećuju DNK, radioterapiju ili bilo koji drugi oblik agenasa i modaliteta lečenja.

[0062] Na primer, lekovi koji se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska mogu ciljati isti ili sličan biološki put onom koji cilja jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili mogu delovati na drugačiji ili nepovezani put.

[0063] U zavisnosti od bolesti koja se leči, različiti kombinatorni partneri se mogu zajednički primenjivati sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, na primer genotoksični agensi, ciljani agensi i imunomodulatori. Drugi aktivni sastojak može uključivati, ali nije ograničen na: alkilujuće agense, uključujući ciklofosfamid, ifosfamid, tiotepu, melfalan, hloroetilnitrozoureu i bendamustin; derivate platine, uključujući cisplatin, oksaliplatin, karboplatin i satraplatin; antimitotičke agense, uključujući vinka alkaloide (vinkristin, vinorelbin i vinblastin), taksane (paklitaksel, docetaksel), epotilone i inhibitore mitotičkih kinaza uključujući auroru i polo-slične kinaze; inhibitore topoizomeraze, uključujući antracikline, epipodofilotoksine, kamptotecin i analoge kamptotecina; antimetabolite, uključujući 5-fluorouracil, kapecitabin, citarabin, gemcitabin, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, fludarabin, metotreksat i pemetreksed; ciljane terapije, na primer inhibitore protein kinaze, uključujući imatinib, gefitinib, sorafenib, sunitinib, erlotinib, dasatinib, i lapatinib; inhibitore proteazoma, uključujući bortezomib; inhibitore histon deacetilaze, uključujući valproat i SAHA; inhibitore ćelijskog ciklusa i kontrolnih tačaka, uključujući CDK4 / 6, CDC7, CHK1 i CHK2; modulatore za popravku DNK, uključujući, ali bez ograničavanja na, inhibitore PARP, DNA-PK, ATM, ATR; antiangiogene lekove, uključujući bevacizumab; monoklonalna antitela, uključujući trastuzumab, rituksimab, alemtuzumab, tositumomab, cetuksimab, panitumumab; konjugate mioklonalnih antitela, uključujući gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab tiuksetan; hormonske terapije, uključujući antiestrogene (tamoksifen, raloksifen, anastrazol, letrozol, eksemestan), antiandrogene (flutamid, bikalutamid), analoge ili antagoniste luteinizirajućeg hormona, terapije radionuklidima

1

peptidnih receptora, uključujući lutateru, imunoterije, uključujući anti-PD1 ili anti-PD-L1, i IDO inhibitore.

[0064] Vezano za kombinovanu terapiju jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se primenjivati odvojeno, uzastopno, simultano, istovremeno ili može biti hronološki raspoređeno sa jednim ili više standardnih terapeutika kao što je bilo koji od prethodno pomenutih.

[0065] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule (I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat.

[0066] Poželjno, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0067] Pogodni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi bi bili poznati osobi sa iskustvom u struci, na primer, masti, voda, fiziološki rastvor, alkohol (npr. etanol), glicerol, polioli, vodeni rastvor glukoze, agens za produživanje, agens za dezintegraciju, vezivo, lubrikant, agens za vlaženje, stabilizator, emulgator, disperzant, konzervans, zaslađivač, kolorant, agens za začinjavanje ili aromatizator, agens za koncentrovanje, razblaživač, supstanca za puferisanje, rastvarač ili agens za solubilizovanje, hemikalija za postizanje efekta skladištenja, so za modifikovanje osmotskog pritiska, agens za oblaganje ili antioksidans, saharidi kao što su laktoza ili glukoza; skrob kukuruza, pšenice ili pirinča; masne kiseline kao što je stearinska kiselina; neorganske soli kao što je magnezijum metasilikat aluminat ili anhidrovani kalcijum fosfat; sintetički polimeri kao što su polivinilpirolidon ili polialkilen glikol; alkoholi kao što su stearil alkohol ili benzil alkohol; sintetički derivati celuloze kao što su metilceluloza, karboksimetilceluloza, etilceluloza ili hidroksipropilmetilceluloza; i drugi konvencionalno upotrebljavani aditivi kao što su želatin, talk, biljno ulje i gumarabika.

[0068] Poželjno, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0069] Poželjno, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, koja sadrži jedan ili više drugih farmaceutski aktivnih agenasa. Poželjno, u određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija dodatno sadrži antikancerski agens, na primer kao kombinovanu terapiju, kao što je ovde opisano. U takvim primerima izvođenja, pogodan antikancerski agens može biti bilo koji jedan ili više od genotoksičnog agensa, ciljanog agensa i imunomodulatora.

[0070] Poželjno, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde opisano, za upotrebu u terapiji.

[0071] Poželjno, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde opisano, za upotrebu kao medikament.

[0072] Poželjno, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde opisano, za upotrebu u lečenju ili preveniranju kancera. Poželjno kancer je odabran od kancera kolona i rektuma (kolorektalni), kancera glave i vrata, kancera pluća, kancera jednjaka, kancera jajnika i kancera pankreasa. Poželjnije, kancer je kancer kolona i rektuma (kolorektalni). Alternativno, poželjno, kancer je kancer pluća, poželjnije nesitnoćelijski kancer pluća.

[0073] Poželjno, predviđena je upotreba jedinjenja Formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili N-oksidnog derivata, ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde opisano, za proizvodnju medikamenta za lečenje ili preveniranje kancera. Poželjno kancer je odabran od kancera kolona i rektuma (kolorektalni), kancera glave i vrata, kancera pluća, kancera jednjaka, kancera jajnika i kancera pankreasa. Poželjnije, kancer je kancer kolona i rektuma (kolorektalni). Alternativno, poželjno, kancer je kancer pluća, poželjnije nesitnoćelijski kancer pluća.

[0074] Poželjno, obezbeđen je postupak lečenja ili preveniranja kancera kod humanog ili životinjskog pacijenta, koji sadrži primenu pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine jedinjenja Formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili N-oksidnog derivata, ili farmaceutske kompozicije kao što je ovde opisano. Poželjno kancer je odabran od kancera kolona i rektuma (kolorektalni), kancera glave i vrata, kancera pluća, kancera jednjaka, kancera jajnika i kancera pankreasa. Poželjnije, kancer je kancer kolona i rektuma (kolorektalni). Alternativno, poželjno, kancer je kancer pluća, poželjnije nesitnoćelijski kancer pluća.

[0075] Poželjno, jedinjenje iz predmetnog pronalaska ima IC50vrednost za Wee-1 kinazu od oko 0,1 nM do oko 1 nM. Postupak za određivanje IC50vrednosti jedinjenja za Wee-1 kinazu opisan je u WO 2015/092431 (videti strane 350 do 351).

[0076] Prilikom introdukovanja elemenata iz predmetne objave ili njegovog(ih) poželjnog(ih) primera izvođenja, neodređeni i određeni članovi i "navedeno" su namenjeni da znače da postoji jedan ili više elemenata. Termini "koji sadrži", "koji uključuje" i "koji ima" su namenjeni da budu inkluzivni i znače da mogu postojati dodatni elementi osim navedenih elemenata.

[0077] Prethodni detaljan opis je obezbeđen kao objašnjenje i ilustracija, i nije namenjen da ograniči obim priloženih patentnih zahteva. Mnoge varijacije u trenutno poželjnim primerima izvođenja koji su ovde ilustrovani biće očigledne onima sa prosečnim iskustvom u struci, i ostaće unutar obima priloženih patentnih zahteva i njihovih ekvivalenata.

EKSPERIMENTALNI DEO

Skraćenice

[0078] aq: vodeni; dba: dibenzilidenaceton; DCM: dihlorometan; DIPEA: diizopropiletilamin (Hunigova (Hunig’s) baza); DMF: N,N-dimetilformamid; DMF: N,N-dimetilformamid dimetil acetal; dppf: 1,1ꞌ-bis(difenilfosfino)ferocen; EtOAc: etil acetat; ESI: elektrosprej jonizacija; h: sat; HPLC: tečna hromatografija pod visokim pritiskom; LC: tečna hromatografija; LCMS: tečna hromatografija masena spektrometrija; M: molarni; m/z: odnos mase i naelektrisanja; mCPBA: 3-hloroperbenzoeva kiselina; MeOH: metanol; min: minuti; MS: masena spektrometrija; NMR: nuklearna magnetna rezonanca; RT: vreme zadržavanja; RB: sa zaobljenim dnom; RT: sobna temperatura; SOP: standardna radna procedura; SM: početni materijal; TFA: trifluorosirćetna kiselina; THF: tetrahidrofuran; TLC: tankoslojna hromatografija.

Opšti eksperimentalni uslovi

Rastvarači i reagensi

[0079] Uobičajeni organski rastvarači koji su upotrebljavani u reakcijama (npr. THF, DMF, DCM, IPA, i metanol) kupljeni su anhidrovani od Sigma-Aldrich® u Sure/Seal™ bočicama i

1

sa njima se pravilno rukovalo pod azotom. Voda je dejonizovana upotrebom Elga PURELAB Option-Q. Svi drugi rastvarači koji su upotrebljavani (tj. za procedure dorade i prečišćavanje) su generalno bili HPLC kvaliteta i upotrebljavani su kako su isporučeni od različitih komercijalnih izvora. Osim ukoliko nije drugačije navedeno, svi upotrebljavani početni materijali kupljeni su od komercijalnih dobavljača i upotrebljavani su kako su isporučeni.

Fleš hromatografija

[0080] Prečišćavanje jedinjenja fleš hromatografijom je postignuto upotrebom Biotage Isolera Four sistema. Osim ukoliko nije drugačije navedeno, upotrebljavane su Biotage KP-Sil SNAP kolone sa patronama (10-340 g) zajedno sa navedenim sistemom rastvarača i odgovarajućim gradijentom rastvarača u zavisnosti od polarnosti jedinjenja (određeno TLC analizom). U slučaju polarnijih i baznijih jedinjenja, upotrebljavane su Biotage KP-NH SNAP kolone sa patronama (11 g).

NMR spektroskopija

[0081]<1>H NMR spektri su zabeleženi na temperaturi okoline upotrebom Bruker Avance (500 MHz) spektrometra ili Bruker Avance (400 MHz) spektrometra. Svi hemijski pomaci (δ) su izraženi u ppm. Signali zaostalog rastvarača su upotrebljeni kao interni standard i karakteristični pikovi rastvarača korigovani su na referentne podatke navedene u J. Org. Chem., 1997, 62, p7512-7515; u drugim slučajevima, NMR rastvarači su sadržali tetrametilsilan, koji je upotrebljen kao interni standard.

Tečna hromatografija pod visokim pritiskom

[0082] Eksperimenti tečne hromatografije masene spektrometrije (LCMS) za određivanje vremena zadržavanja (RT) i mase pridruženih jona izvedeni su upotrebom jednog od sledećih postupaka:

Postupak A: Sistem se sastoji od Agilent Technologies 6140 single quadrupole masenog spektrometra povezanog sa Agilent Technologies 1290 Infinity LC sistemom sa UV diodnim detektorom i autosemplerom. Spektrometar se sastoji od višemodnog izvora jonizacije (elektrosprej i hemijske jonizacije pod atmosferskim pritiskom) koji radi u pozitivnom i negativnom jonskom režimu. LCMS eksperimenti su izvedeni na svakom dostavljenom uzorku upotrebom sledećih uslova: LC kolona: Zorbax Eclipse Plus C18 RRHD 1,8 micron 50 x 2,1 mm održavana na 40 °C. Mobilne faze: A) 0,1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u vodi; B) 0,1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u acetonitrilu.

Postupak B: Sistem se sastoji od Agilent Technologies 6130 quadropole masenog spektrometra povezanog sa Agilent Technologies 1290 Infinity LC sistemom sa UV diodnim detektorom i autosemplerom. Spektrometar se sastoji od izvora elektrosprej jonizacije koji radi u pozitivnom i negativnom jonskom režimu. LCMS eksperimenti su izvedeni na svakom dostavljenom uzorku upotrebom sledećih uslova: LC kolona: Agilent Eclipse Plus C18 RRHD 1,8 micron 50 x 2,1 mm održavana na 40 °C. Mobilne faze: A) 0,1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u vodi; B) 0,1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u acetonitrilu.

Intermedijer 1: terc-butil 4-(4-amino-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat:

[0083]

1

Korak 1: terc-butil 4-(2-metil-4-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat:

[0084] 1-bromo-2-metil-4-nitrobenzen (123 g, 0,572 mol) i N-terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (177 g, 0,571 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (2,5 l). Dodat je 3M rastvor natrijum karbonata (570 ml, 1,71 mol), smeša je oslobođena gasa i stavljena pod atmosferu azota. Dodat je PdCl2(dppf) dihlorometan adukt (9,3 g, 0,011 mol) i smeša je zagrevana na 100 °C preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (tri puta po 1 l). Kombinovani organski ekstrakti su isprani rastvorom soli, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (0 - 50% EtOAc / heks.) da da 154 g (94,5%) naslovnog jedinjenja kao žućkaste kristale.

Korak 2: terc-butil 4-(4-amino-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat:

[0085] terc-butil 4-(2-metil-4-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (130 g, 0,408 mola) je rastvoren u metanolu (3,5 l) upotrebom Parove (Parr) reakcione boce od 5 l. Pošto je smeša oslobođena gasa, dodat je Pd/C (10%) (13 g) i suspenzija je mućkana pod pritiskom vodonika od 55 psi preko noći na RT. Smeša je filtrirana kroz Celite™ jastuče i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se obezbedilo 117 g (98,7%) naslovnog jedinjenja kao svetlobež čvrste supstance.

[0086] Analitički podaci su u skladu sa Primerom 37 korak 4 kao što je opisano u US200710254892A1.

PRIMERI

[0087] Sledeći neograničavajući primer dodatno ilustruje predmetni pronalazak.

Primer 1: 3-(2,6-dihlorofenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

1

Korak 1: 4-hloro-N-(2,6-dihlorofenil)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid:

[0089] Rastvoru 2,6-dihloroanilina (41,02 g, 253 mmol) i piridina (25,03 g, 316 mmol) u CH2Cl2(400 ml) je kap po kap dodat rastvor 4-hloro-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonil hlorida (56,5 g, 253 mmol) u CH2Cl2(400 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na RT tokom 2 dana, rastvarač je evaporisan in vacuo i preostali ostatak je ispran vodom dva puta, praćeno 10% aq. HCl i vodom. Sirovi proizvod je prečišćen rekristalizacijom iz EtOH da da 67,7 g (76,7%) naslovnog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LCMS (Postupak B): RT= 1,53 min, m/z = 348/350 [M+H]<+>.

Korak 2: N-(2,6-dihlorofenil)-4-(metilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid;

[0090] Rastvoru 4-hloro-N-(2,6-dihlorofenil)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (70 g, 201 mmol) u THF (1 l) dodat je rastvor MeNH2(40% u vodi, 46,74 g, 603 mmol) na 0 °C. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i rastvarač je evaporisan in vacuo. Preostali ostatak je ispran vodom dva puta i osušen da bi se dobilo 68,35 g (99%) naslovnog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LCMS (Postupak A): RT= 1,21 min, m/z = 343/345 [M+H]<+>.

Korak 3: 3-(2,6-dihlorofenil)-1-metil-7-(metiltio)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

[0091] N-(2,6-dihlorofenil)-4-(metilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (131 g, 382 mmol) je suspendovan u anhidrovanom acetonitrilu (1,5 l), upotrebom RB flaska od 5 l, i dodat je cezijum karbonat (203,3 g, 1190 mmol), praćeno dibromometanom (132,7 g, 763 mmol). Smeša je zagrevana na 80 °C uz mešanje tokom 7 dana i rezultujuća smeša je

1

filtrirana. Ostatak je ispran sa dve porcije vrućeg acetonitrila (200 ml) i kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen kristalizacijom iz MeCN da bi se dobilo 59,6 g (44%) naslovnog jedinjenja kao bledožute čvrste supstance. LCMS (Postupak A): RT= 1,26 min, m/z = 355/357 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-(4-((6-(2,6-dihlorofenil)-8-metil-5-okso-5,6,7,8-tetrahidropirimido[4,5-d]pirimidin-2-il)amino)-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat:

[0092] U 6-(2,6-dihlorofenil)-8-metil-2-metilsulfanil-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-5-on (10,0 g, 28 mmol) u DCM (440 ml) napunjen je rastvor 3-hloroperoksibenzoeve kiseline (7,63 g, 31 mmol) u DCM (75 ml) na RT i reakcija je mešana tokom dva sata. U reakcionu smešu je dodat aq. Na2S2O3i slojevi su odvojeni upotrebom separatora faza. Organski sloj je koncentrovan do suvog i ostatku su dodati terc-butil 4-(4-amino-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat (8,17 g, 28 mmol) i 2-propanol (625 ml). Reakcija je zatim zagrevana na 95 °C preko noći. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (Biotage 340 g KP-Sil; 10-45% EtOAc u cikloheksanu) do naslovnog jedinjenja (11,13 g, 66%) kao bele čvrste supstance. LCMS (Postupak A): RT1,86 min, m/z = 597/599 [M+H]<+>.

Korak 5: 3-(2,6-dihlorofenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin~4(1H)-on hidrohlorid:

[0093] terc-butil 4-[4-[[6-(2,6-dihlorofenil)-8-metil-5-okso-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-2-il]amino]-2-metil-fenil]piperidin-1-karboksilat (7,0 g, 11,7 mmol) je rastvoren u DCM (300 ml) i dodata je 4N HCl u dioksanu (35 ml, 140 mmol) i smeša je mešana preko noći na RT. Čvrsta supstanca je sakupljena filtriranjem kroz sinterovan levak i isprana sa DCM i osušena na sinteru da bi se dobilo naslovno jedinjenje (6,3 g, kvant. prinos). LCMS (Postupak A): RT0,80 min, m/z = 497/499 [M+H]<+>.

Korak 6: 3-(2,6-dihlorofenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

[0094] Suspenziji 6-(2,6-dihlorofenil)-8-metil-2-[3-metil-4-(4-piperidil)amino]-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-5-on hidrohlorida (6,77 g, 12,7 mmol) u acetonitrilu (90 ml) dodat je metanol (20 ml) i 37% vodeni rastvor formaldehida (12,76 ml, 63,4 mmol). Rezultujući

1

rastvor je ohlađen na 0 °C i u obrocima je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (13,44 g, 63,4 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 sata i zatim je rastvarač koncentrovan in vacuo. Ostatak je preuzet u DCM i ispran sa 2M aq. Na2CO3, vodom i rastvorom soli posle čega je dvofazna smeša propuštena kroz separator faza i rezultujuća organska faza je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Rekristalizacijom iz etil acetata dobijeno je naslovno jedinjenje (3,83 g, 59%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Postupak A): RT0,70 min, m/z = 511/513 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,75 (br s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,52-7,62 (m, 2H), 7,46-7,51 (m, 1H), 7,14 (d, 1H), 4,98 (s, 2H), 3,12 (s, 3H), 2,79-2,91 (m, 2H), 2,55-2,62 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,93-2,03 (m, 2H), 1,58-1,68 (m, 4H).

Uporedni primer 1: 3-(2-hloro-6-metilfenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

[0095]

Korak 1: 4-hloro-N-(2-hloro-6-metilfenil)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid:

[0096] 2-hloro-6-metilanilin (14 g, 62,8 mmol) je konvertovan u skladu sa primerom 1 korak 1 da rezultuje naslovnim jedinjenjem (10 g; 30,5 mmol, 48%) kao belom čvrstom supstancom. LCMS (Postupak A): RT= 1,28 min, m/z = 328/330 [M+H]<+>.

Korak 2: N-(2-hloro-6-metilfenil)-4-(metilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid:

[0097] 4-hloro-N-(2-hloro-6-metilfenil)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (7 g, 21,33 mmol) je konvertovan u skladu sa primerom 1 korak 2 da rezultuje naslovnim jedinjenjem (6 g; 18,59 mmol, 87%) kao prljavobelom čvrstom supstancom. LCMS (Postupak A): RT= 1,22 min, m/z = 323/325 [M+H]<+>. Analitički podaci su u skladu sa Primerom 92, korak 1 kao što je opisano u WO2015/092431.

1

Korak 3: 3-(2-hloro-6-metilfenil)-1-metil-7-(metiltio)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

[0098] N-(2-hloro-6-metilfenil)-4-(metilamino)-2-metiltio)pirimidin-5-karboksamid (6 g, 18,59 mmol) je konvertovan u skladu sa primerom 1 korak 2 da rezultuje naslovnim jedinjenjem (2,9 g; 8,66 mmol, 47%) kao prljavobelom čvrstom supstancom. LCMS (Postupak A): RT= 1,25 min, m/z = 335/337 [M+H]<+>. Analitički podaci su u skladu sa Primerom 92, korak 2 kao što je opisano u WO2015/092431.

Korak 4: terc-butil 4-(4-((6-(2-hloro-6-metilfenil)-8-metil-5-okso-5,6,7,8-tetrahidropirimido[4,5-d]pirimidin-2-il)amino)-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat:

[0099] 3-(2-hloro-6-metilfenil)-1-metil-7-(metiltio)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on (150 mg, 0,45 mmol) je rastvoren u DCM (6 ml) i dodata je mCPBA (121 mg, 0,49 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min na RT. Reakciona smeša je razblažena sa DCM do 10 ml i isprana sa aq. rastvorom tiosulfata. Organski sloj je odvojen, osušen (anh. MgSO4) i rastvarač je evaporisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je suspendovan u 2-propanolu (6 ml) i dodat je terc-butil 4-(4-amino-2-metilfenil)piperidin-1-karboksilat (130 mg, 0,45 mmol). Reakciona smeša je mešana na 90 °C preko noći. Isparljive supstance su evaporisane i proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (20-80% EtOAc u cikloheksanu) dajući naslovno jedinjenje kao bistro ulje (206 mg, 80%). LCMS (Postupak B): RT= 1,80 min, m/z = 577 [M+H]<+>.

Korak 5: 3-(2-hloro-6-metilfenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on hidrohlorid:

[0100] terc-butil 4-[4-[[6-(2-hloro-6-metil-fenil)-8-metil-5-okso-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-2-il]amino]-2-metil-fenil]piperidin-1-karboksilat (206 mg, 0,36 mmol) je rastvoren u DCM (4 ml) i dodata je TFA (2 ml). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min na RT. Isparljive supstance su evaporisane pod redukovanim pritiskom i ostatak je rastvoren u DCM (2 ml) i napunjen u SCX-2 patronu (5 g; kolona eluirana sa DCM pre upotrebe). Patrona je isprana sa 20% MeOH u DCM i željeno jedinjenje je eluirano sa 20% 7N NH3MeOH u DCM. Frakcije koje sadrži proizvod su evaporisane pod redukovanim pritiskom

2

dajući naslovno jedinjenje kao belu vrstu supstancu (138 mg, 81%). LCMS (Postupak A): RT= 0,80 min, m/z = 477 [M+H]<+>.

Korak 6: 3-(2-hloro-6-metilfenil)-1-metil-7-((3-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-on:

[0101] 6-(2-hloro-6-metil-fenil)-8-metil-2-[3-metil-4-(4-piperidil)anilino]-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-5-on (70 mg, 0,15 mmol) je rastvoren u smeši MeCN (3 ml) / MeOH (1 ml) i dodat je 37% vodeni rastvor formaldehida (0,11 ml, 1,47 mmol), praćeno natrijum triacetoksi borohidridom (311 mg, 1,47 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT preko noći. Isparljive supstance su evaporisane pod redukovanim pritiskom i ostatak je rastvoren u DCM / 1 M NaOH (5 ml / 5 ml). Organski sloj je odvojen i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 5 ml). Organski ekstrakti su kombinovani, osušeni (anh. K2CO3) i evaporisani pod redukovanim pritiskom. Proizvod je liofilizovan (MeOH/MeCN/voda) dajući naslovno jedinjenje kao belu vrstu supstancu (58 mg, 80%). LCMS (Postupak B): RT= 0,79 min, m/z = 491 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 9,70 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,63 - 7,52 (m, 2H), 7,48 - 7,41 (m, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 2H), 7,13 (d, 1H), 4,98 - 4,86 (m, 2H), 3,11 (s, 3H), 2,87 (d, 2H), 2,62 -2,53 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,03 - 1,92 (m, 2H), 1,70 - 1,56 (m, 4H).

Pore enje jedinjenja iz predmetnog pronalaska sa jedinjenjima iz stanja tehnike i drugim jedinjenjima:

[0102] Jedinjenje kao što je opisano u Primeru 1 je testirano za inhibitorni efekat na Wee-1 kinazu (Wee-1 IC50vrednost), Wee-1 potentnost u ćelijama (pCDC2 vrednost), kineti ku solubilnost, permeabilnost u caco-2 ćelije (Caco-2 Pappvrednost), klirens iz plazme in vivo (CL vrednost) i poluživot eliminacije (T1/2vrednost) kod pacova posle intravenske primene, izloženost plazmi kod pacova posle oralne primene (AUC vrednost), oralnu bioraspoloživost kod pacova (F% vrednost), odnos koncentracije mozak:plazma kod zdravog miša, odnos koncentracije tumor:plazma kod miša koji ima tumor, in vivo CYP3A4/5 vremenski zavisnu inhibiciju (CYP3A4/5 IC50pomak vrednosti) i detekciju reaktivnih metabolita u humanim hepatocitima. Uporedna jedinjenja su tako e testirana upotrebom istih testova. Postupci testiranja koji su korišćeni za odre ivanje inhibitornog efekta na Wee-1 kinazu, Wee-1 potentnosti u ćelijama i kineti ke solubilnosti bili su isti kao oni koji su opisani u WO 2015/092431 (videti strane 350 do 358). Drugi postupci testiranja koji su korišćeni bili su sledeći:

i. Odre ivanje Caco-2 permeabilnosti pri pH 6,5 (pH 7,4 za Uporedni primer 6) je izvedeno u Cyprotex Ltd upotrebom standardnih protokola i SOP.

ii. Odre ivanje farmakokineti kih parametara (CL/T1/2/AUC/F%) kod mužjaka Sprag-Dauli (Sprague-Dawley) pacova u Primeru 1 i Uporednim primerima 6 i 165 izvedeno je u Axis BioServices Ltd upotrebom standardnih protokola i SOP. Doziranje je bilo sledeće: jedna oralna doza 5 mg/kg; jedna intravenska doza 1 mg/kg.

iii. Odre ivanje farmakokineti kih parametara (CL/T1/2/AUC/F%) kod mužjaka Sprag-Dauli pacova u Uporednom primeru 18 izvedeno je u BioDuro upotrebom standardnih protokola i SOP. Doziranje je bilo sledeće: oralno doziranje 5 mg/kg; intravensko doziranje 1 mg/kg.

iv. Odre ivanje odnosa koncentracije mozak:plazma kod zdravog miša izvedeno je u Bioduro Inc. (Primer 1) i u Axis Bioservices Ltd (Uporedni primer 18) upotrebom standardnih protokola i SOP. Doziranje je bilo sledeće: ponovljena oralna doza od 30 mg/kg, jednom dnevno tokom 7 dana. Koncentracije su merene 4 h posle doze na dan 7. v. Odre ivanje odnosa koncentracije tumor:plazma kod miša koji ima tumor izvedeno je u Axis Bioservices Ltd upotrebom standardnih protokola i SOP. Doziranje je bilo sledeće: jedna oralna doza od 30 mg/kg.

vi. Odre ivanje CYP3A4/5 vremenski zavisne inhibicije (CYP3A4/5 IC50pomak vrednosti) izvedeno je u Cyprotex Ltd upotrebom standardnih protokola i SOP. In vitro test sistem je bio: pulirani mikrozomi humane jetre; uklju en je 30-minutni korak preinkubacije sa i bez NADPH kako bi se posmatrao pomak IC50.

vii. Odre ivanje formiranja reaktivnih metabolita izvedeno je u Admescope Ltd upotrebom standardnih protokola i SOP. In vitro test sistem je bio: humani hepatociti; trajanje inkubacije je bilo: 2 sata; tehnika za analizu metabolita je bila: LC-MS/MS.

[0103] Jedinjenje opisano u Primeru 1 pokazuje poboljšanu hemijsku stabilnost u rastvoru (pufer na pH 7,4 i u DMSO). Tako e pokazuje poboljšanu solubilnost u simuliranoj želuda noj te nosti natašte (FaSSGF).

[0104] Podaci su obezbe eni u Tabelama 1a i 1b u nastavku:

Tabela 1a

�

[0107] Tabela 1a pokazuje da jedinjenje iz predmetnog pronalaska pokazuje pojačan inhibitorni efekat na Wee-1 kinazu, povećanu Wee-1 potentnost u ćelijama, povećanu ili sličnu kinetičku solubilnost, povećanu ili sličnu permeabilnost, poboljšanu metaboličku stabilnost in vivo kod pacova, povećanu izloženost kod pacova i/ili povećanu bioraspoloživost kod pacova, u poređenju sa Primerima 18, 95, 165, 178 i 183 iz WO 2015/092431, i Uporednim primerom 1.

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima formulu (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat.
2. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili N-oksidni derivat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
3. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 koja sadrži jedan ili više dodatnih farmaceutski aktivnih agenasa.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u terapiji.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu kao medikament.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u lečenju ili preveniranju kancera.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od kardijačnih kancera, kancera pluća, gastrointestinalnih kancera, 2 kancera genitourinarnog trakta, kancera jetre, kancera kostiju, kancera nervnog sistema, ginekoloških kancera, hematoloških kancera, kancera kože i kancera nadbubrežnih žlezda, i kancera kao što su tumori nadbubrežnih žlezda, žučnih puteva, mokraćne bešike, krvi, koštanog i vezivnog tkiva, mozga i centralnog nervnog sistema, dojke, grlića materice, kolona i rektuma (kolorektalni), endometrijuma, jednjaka, žučne kese, glave i vrata, Hočkinov limfom, hipofaringealni, bubrega, larinksa, leukemije, jetre, pluća, limfom, tumori medijastinuma, melanom (maligni melanom), mezoteliom, multipli mijelom, nosne šupljine, nazofaringealni, neuroendokrini tumori, ne-Hočkinov limfom, oralni, jednjaka, orofaringealni, jajnika, pankreasa, paranazalnih sinusa, paraštitne žlezde, penisa, tumori hipofize, prostate, pljuvačnih žlezda, sarkom, kože, kičme, želuca, testisa, štitne žlezde, uretre, materice, vagine i vulve.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je kancer odabran od kancera kolona i rektuma (kolorektalni), kancera glave i vrata, kancera pluća, kancera jednjaka, kancera jajnika i kancera pankreasa.
9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je kancer kancer pluća.
10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je kancer kancer jajnika.
11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili N-oksidni derivat, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 ili 3, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je kancer kancer mozga i centralnog nervnog sistema. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5