RS62580B1 - Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9 - Google Patents

Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9

Info

Publication number
RS62580B1
RS62580B1 RS20211437A RSP20211437A RS62580B1 RS 62580 B1 RS62580 B1 RS 62580B1 RS 20211437 A RS20211437 A RS 20211437A RS P20211437 A RSP20211437 A RS P20211437A RS 62580 B1 RS62580 B1 RS 62580B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
seq
hpcsk9
pcsk9
antigen
Prior art date
Application number
RS20211437A
Other languages
English (en)
Inventor
Mark W Sleeman
Joel H Martin
Tammy T Huang
Douglas Macdonald
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41668268&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS62580(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
Publication of RS62580B1 publication Critical patent/RS62580B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Gram-positive bacteria
    • C07K16/1282—Clostridium (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21061—Kexin (3.4.21.61), i.e. proprotein convertase subtilisin/kexin type 9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/33—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Clostridium (G)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/809—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fv, fc, heavy chain or light chain

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na humana antitela i fragmente humanih antitela koji se vezuju za antigen koji specifično vezuju humanu proprotein konvertazu subtilizin/keksin tip 9 (PCSK9), i terapeutske postupke korišćenja tih antitela.
Izjava o srodnom stanju tehnike
[0002] Proprotein konvertaza subtilizin/keksin tip 9 (PCSK9) je proprotein konvertaza koja pripada podfamiliji proteinaze K iz porodice sekretorne subtilaze. Kodirani protein se sintetiše kao rastvorljivi zimogen koji se podvrgava autokatalitičkoj intramolekularnoj obradi u endoplazmatskom retikulumu. Dokazi sugerišu da PCSK9 povećava LDL holesterol u plazmi promovišući degradaciju LDL receptora, koji posreduje LDL endocitozu u jetri, glavni put uklanjanja LDL iz cirkulacije. Struktura proteina PCSK9 pokazuje da ima signalnu sekvencu, praćenu poddomenom, katalitičkim domenom koji sadrži očuvanu trijadu ostataka (D186, H226 i S386) i C-terminalnim domenom. Sintetizuje se kao rastvorljivi 74-kDa prekursor koji se podvrgava autokatalitičkom deljenju u ER, stvarajući 14-kDa prodomen i 60-kDa katalitički fragment. Pokazalo se da je autokatalitička aktivnost potrebna za sekreciju. Nakon deljenja, prodomen ostaje čvrsto povezan sa katalitičkim domenom.
[0003] Antitela na PCSK9 su opisana u npr., WO 2008/057457, WO 2008/057458, WO 2008/057459, WO 2008/063382, WO 2008/125623, i US 2008/0008697.
[0004] Lagace, Thomas A i dr. (The Journal of clinical investigation vol.116,11 (2006): p2995-3005) opisuje kako izlučeni PCSK9 smanjuje broj LDL receptora u hepatocitima i u jetrama parabiotskih miševa.
[0005] Alborn, William E i dr, (Clinical Chemistry, Volume 53, Issue 10, 1 (2007) p18141819) opisuje kako je serumska proprotein konvertaza subtilizin keksin tip 9 direktno u korelaciji sa serumskim LDL holesterolom.
KRATAK REZIME PRONALASKA
[0006] U prvom aspektu, pronalazak obezbeđuje potpuno humana monoklonska antitela (mAbs) i njihove fragmente koji se vezuju za antigen kao što je definisano u patentnim zahtevima koji specifično vezuju i neutrališu humanu PCSK9 (hPCSK9) aktivnost.
[0007] Konkretno, pronalazak obezbeđuje humano antitelo ili fragment humanog antitela koji se vezuje za antigen koji specifično vezuje humanu proprotein konvertazu subtilizin/keksin tipa 9 (hPCSK9) koji sadrži CDR1 (HCDR1) domen teškog lanca SEQ ID NO: 76, teški lanac CDR2 (HCDR2) domena SEQ ID NO: 78, teški lanac CDR3 (HCDR3) domena SEQ ID NO: 80, laki lanac CDR1 (LCDR1) domena SEQ ID NO: 84, laki lanac CDR2 (LCDR2) domena SEQ ID NO: 86 i laki lanac CDR3 (LCDR3) domena SEQ ID NO: 88, pri čemu antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen blokira vezivanje hPCSK9 za humani receptor lipoproteina niske gustine (hLDLR)-ekto domen, hLDLR EGF-A domen i hLDLR EGF-AB domen.
[0008] Ovde su opisana antitela ili fragmenti koji se vezuju za antigen koji specifično vezuju hPCSK9 i karakteriše ih najmanje jedno od:
(i) sposoban da smanji ukupni holesterol u serumu za najmanje oko 25-35% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 24 dana u odnosu na nivo pre doze, poželjno je smanjenje ukupnog holesterola u serumu najmanje oko 30-40%;
(ii) sposoban da smanji serumski LDL holesterol za najmanje oko 65-80% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 24 dana u odnosu na nivo pre doze;
(iii) sposoban da smanji trigliceride u serumu za najmanje 25-40% u odnosu na nivo pre doze;
(iv) ne smanjuje serumski HDL holesterol ili smanjuje serumski HDL holesterol ne više od 5% u odnosu na nivo pre doze.
[0009] Takođe su opisana antitela ili fragmenti koji se vezuju za antigen koji specifično vezuju hPCSK9 i karakteriše ih najmanje jedno od:
(i) sposoban da smanji serumski LDL holesterol za najmanje oko 40-70% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 60 ili 90 dana u odnosu na nivo pre doze;
(ii) sposoban da smanji trigliceride u serumu za najmanje 25-40% u odnosu na nivo pre doze; (iii) ne smanjuje serumski HDL holesterol ili smanjuje serumski HDL holesterol ne više od 5% u odnosu na nivo pre doze.
[0010] U jednom otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment je okarakterisan kao vezujući epitop koji sadrži aminokiselinski ostatak 238 hPCSK9 (SEQ ID NO:755). U specifičnijem otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment vezuju epitop koji sadrži jedan ili više aminokiselinskih ostataka 238, 153, 159 i 343 hPCSK9 (SEQ ID NO:755). U specifičnijem otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment je okarakterisan kao vezujući epitop koji ne sadrži aminokiselinski ostatak na poziciji 192, 194, 197 i/ili 237 SEQ ID NO:755.
[0011] Ovde je takođe opisano antitelo ili njegov fragment okarakterisan kao vezujući epitop koji sadrži aminokiselinski ostatak 366 hPCSK9 (SEQ ID NO:755). Ovde je opisan njegov fragment antitela koji vezuje epitop koji sadrži jedan ili više aminokiselinskih ostataka na pozicijama 147, 366 i 380 SEQ ID NO:755. Tačnije, antitelo ili njegov fragment se može okarakterisati kao vezujući epitop koji ne sadrži aminokiselinski ostatak na poziciji 215 i/ili 238 SEQ ID NO:755.
[0012] U jednom otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment je okarakterisan kao da pokazuje pojačan afinitet vezivanja (KD) za hPCSK9 pri pH 5,5 u odnosu na KD pri pH 7,4, mereno plazmonskom površinskom rezonancom. U specifičnom otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment pokazuju najmanje 20 puta, najmanje 40 ili najmanje 50 puta povećan afinitet za PCSK9 pri kiselom pH u odnosu na neutralni pH, mereno površinskom plazmenom rezonancijom.
[0013] Ovde su opisana antitela ili njihovi fragmenti okarakterisani kao da ne pokazuju pojačan afinitet vezivanja za PCSK9 pri kiselom pH u odnosu na neutralni pH, mereno površinskom plazmonskom rezonancom. Vezivanje pri kiselom pH može biti manje, a T1/2kraći nego pri neutralnom pH.
[0014] U drugom aspektu, antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen vezuje humanu, ljudsku GOF mutaciju D374Y, cinomolgus majmuna, rezus majmuna, miša, pacova i hrčka PCSK9.
[0015] Ovde su opisana antitela ili fragmenti koji se vezuju za antigen koji vezuju PCSK9 ljudi i majmuna, ali ne vezuju PCSK9 miša, pacova ili hrčaka.
[0016] mAbs mogu biti pune dužine (npr., IgG1 ili IgG4 antitelo) ili mogu da sadrže samo deo koji se vezuje za antigen (npr., Fab, F(ab')2ili scFv fragment), i mogu biti modifikovani da utiču na funkcionalnost, na primer, da se eliminišu rezidualne efektorske funkcije (Reddy i dr. (2000) J. Immunol.164: 1925-1933).
[0017] Ovde je opisano antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antitela koji sadrži varijabilni region teškog lanca (HCVR) izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:2, 18, 22, 26, 42, 46, 50, 66, 70, 74, 90, 94, 98, 114, 118, 122, 138, 142, 146, 162, 166, 170, 186, 190, 194, 210, 214, 218, 234, 238, 242, 258, 262, 266, 282, 286, 290, 306, 310, 314, 330, 334, 338, 354, 358, 362, 378, 382, 386, 402, 406, 410, 426, 430, 434, 450, 454, 458, 474, 478, 482, 498, 502, 506, 522, 526, 530, 546, 550, 554, 570, 574, 578, 594, 598, 602, 618, 622, 626, 642, 646, 650, 666, 670, 674, 690, 694, 698, 714, 718, 722, 738 i 742, ili njena suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence. HCVR može imati aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO:50, 66, 70, 74, 90, 94, 122, 138, 142, 218, 234, 238, 242, 258, 262, 314, 330 i 334. U konkretnijem aspektu, HCVR obuhvata SEQ ID NO:90 ili 218.
[0018] Antitelo ili njegov fragment kako je ovde opisano može dalje da sadrži varijabilni region lakog lanca (LCVR) izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO: 10, 20, 24, 34, 44, 48, 58, 68, 72, 82, 92, 96, 106, 116, 120, 130, 140, 144, 154, 164, 168, 178, 188, 192, 202, 212, 216, 226, 236, 240, 250, 260, 264, 274, 284, 288, 298, 308, 312, 322, 332, 336, 346, 356, 360, 370, 380, 384, 394, 404, 408, 418, 428, 432, 442, 452, 456, 466, 476, 480, 490, 500, 504, 514, 524, 528, 538, 548, 552, 562, 572, 576, 586, 596, 600, 610, 620, 624, 634, 644, 648, 658, 668, 672, 682, 692, 696, 706, 716, 720, 730, 740 i 744, ili njena suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence. LCVR može imati aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koju čine SEQ ID NO: 58, 68, 72, 82, 92, 96, 130, 140, 144, 226, 236, 240, 250, 260, 264, 322, 332 i 336. U konkretnom aspektu, LCVR obuhvata SEQ ID NO:92 ili 226.
[0019] Ovde opisano antitelo ili njegov fragment može da sadrži par sekvenci HCVR i LCVR (HCVR/LCVR) izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO: 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402/404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598/600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 i 742/744. HCVR i LCVR se mogu izabrati iz parova sekvenci aminokiselina SEQ ID NO: 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 122/130, 138/140, 142/144, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 314/322, 330/332 i 334/336. Tačnije, HCVR/LCVR par može da sadrži SEQ ID NO:90/92 ili 218/226.
[0020] Ovde je takođe opisano antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antitela koji sadrži CDR3 (HCDR3) domen teškog lanca izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:8, 32, 56, 80, 104, 128, 152, 176, 200, 224, 248, 272, 296, 320, 344, 368, 392, 416, 440, 464, 488, 512, 536, 560, 584, 608, 632, 656, 680, 704 i 728, ili njegova suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; i lakog lanca CDR3 (LCDR3) domen izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:16, 40, 64, 88, 112, 136, 160, 184, 208, 232, 256, 280, 304, 328, 352, 376, 400, 424, 448, 472, 496, 520, 544, 568, 592, 616, 640, 664, 688, 712 i 736, ili njihove suštinski slične sekvence koje imaju najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence. Parovi sekvenci HCDR3/LCDR3 mogu biti SEQ ID NO:56/64, 80/88, 128/136, 224/232, 248/256 ili 320/328. HCDR3/LCDR3 može da sadrži SEQ ID NO:80/88 ili 224/232.
[0021] Ovde je takođe opisano antitelo ili njegov fragment koji sadrži CDR1 (HCDR1) domen teškog lanca izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:4, 28, 52, 76, 100, 124, 148, 172, 196, 220, 244, 268, 292, 316, 340, 364, 388, 412, 436, 460, 484, 508, 532, 556, 580, 604, 628, 652, 676, 700 i 724, ili njegova suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; CDR2 (HCDR2) domen teškog lanca izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:6, 30, 54, 78, 102, 126, 150, 174, 198, 222, 246, 270, 294, 318, 342, 366, 390, 414, 438, 462, 486, 510, 534, 558, 582, 606, 630, 654, 678, 702 i 726, ili njihova suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; CDR1 (LCDR1) domen lakog lanca izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:12, 36, 60, 84, 108, 132, 156, 180, 204, 228, 252, 276, 300, 324, 348, 372, 396, 420, 444, 468, 492, 516, 540, 564, 588, 612, 636, 660, 684, 708 i 732, ili njihova suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence; CDR2 (LCDR2) domen lakog lanca izabran iz grupe koju čine SEQ ID NO:14, 38, 62, 86, 110, 134, 158, 182, 206, 230, 254, 278, 302, 326, 350, 374, 398, 422, 446, 470, 494, 518, 542, 566, 590, 614, 638, 662, 686, 710 i 734, ili njihova suštinski slična sekvenca koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sekvence. CDR sekvence teškog i lakog lanca mogu biti SEQ ID NO:52, 54, 56, 60, 62, 64; 76, 78, 80, 84, 86, 88; 124, 126, 128, 132, 134, 136; 220, 222, 224, 228, 230, 232; 244, 246, 248, 252, 254, 256; i 316, 318, 320, 324, 326, 328. CDR sekvence teškog i lakog lanca mogu biti SEQ ID NO: 76, 78, 80, 84, 86, 88; ili 220, 222, 224, 228, 230, 232.
[0022] Ovde je takođe opisano antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen koji specifično vezuje hPCSK9, pri čemu antitelo ili fragment obuhvata CDR domene teškog i lakog lanca sadržane u parovima sekvenci teškog i lakog lanca izabranih iz grupe koju čine SEQ ID NO: 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402/404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598/600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 i 742/744. CDR sekvence sadržane u HCVR i LCVR mogu se izabrati iz parova aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NO: 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 122/130, 138/140, 142/144, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 314/322, 330/332 i 334/336. CDR sekvence mogu biti sadržane u HCVR i LCVR odabranim od parova aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NO: 90/92 ili 218/226.
[0023] Ovde je takođe opisano potpuno ljudsko monoklonsko antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično vezuje za neutralizaciju aktivnosti hPCSK9, pri čemu antitelo ili njegov fragment pokazuju jednu ili više od sledećih karakteristika:
(i) sposoban da smanji ukupni holesterol u serumu za najmanje oko 25-35% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 24 dana u odnosu na nivo pre doze, poželjno je smanjenje ukupnog holesterola u serumu najmanje oko 30-40%;
(ii) sposoban da smanji serumski LDL holesterol za najmanje oko 65-80% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 24 dana u odnosu na nivo pre doze;
(iii) sposoban da smanji trigliceride u serumu za najmanje 25-40% u odnosu na nivo pre doze;
(iv) ne smanjuje serumski HDL holesterol ili smanjuje serumski HDL holesterol ne više od 5% u odnosu na nivo pre doze;
(v) vezuje epitop koji sadrži aminokiselinski ostatak 238 hPCSK9 (SEQ ID NO:755);
(vi) pokazuje pojačan afinitet vezivanja (KD) za hPCSK9 pri pH 5,5 u odnosu na KD pri pH 7,4, mereno plazmonskom površinskom rezonancom, pri čemu je poboljšani afinitet najmanje oko 20 do 50 puta povećanje afiniteta;
(vii) vezuje humanu, humanu GOF mutaciju D374Y, cynomolgus majmun, rezus majmun, miš, pacov i hrčak PCSK9;
(viii) obuhvata CDR3 sekvence teškog i lakog lanca koje sadrže SEQ ID NO:80 i 88;
(ix) sadrži CDR sekvence iz SEQ ID NO:90 i 92.
[0024] Ovde je takođe opisano potpuno ljudsko monoklonsko antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično vezuje i neutrališe aktivnosti hPCSK9, pri čemu antitelo ili njegov fragment pokazuju jednu ili više od sledećih karakteristika:
(i) sposoban da smanji serumski LDL holesterol za najmanje oko 40-70% i da održi smanjenje tokom perioda od najmanje 60 ili 90 dana u odnosu na nivo pre doze;
(ii) sposoban da smanji trigliceride u serumu za najmanje 25-40% u odnosu na nivo pre doze; (iii) ne smanjuje serumski HDL holesterol ili smanjuje serumski HDL holesterol ne više od 5% u odnosu na nivo pre doze;
(iv) vezuje epitop koji sadrži aminokiselinski ostatak 366 hPCSK9 (SEQ ID NO:755);
(v) ne pokazuje pojačan afinitet vezivanja za PCSK9 pri kiselom pH u odnosu na neutralni pH, mereno površinskom plazmonskom rezonancom;
(vi) vezuje PCSK9 ljudi i majmuna, ali ne vezuje PCSK9 miša, pacova ili hrčaka;
(vii) obuhvata CDR3 sekvence teškog i lakog lanca koje sadrže SEQ ID NO:224 i 232; i (viii) sadrži CDR sekvence iz SEQ ID NO:218 i 226.
[0025] U trećem aspektu, pronalazak obezbeđuje molekule nukleinske kiseline koji kodiraju anti-PCSK9 antitela ili njihove fragmente pronalaska. Rekombinantni ekspresioni vektori koji nose nukleinske kiseline pronalaska, i ćelije domaćini u koje su takvi vektori uvedeni, takođe su obuhvaćeni pronalaskom, kao i metode za proizvodnju antitela kultivisanjem ćelija domaćina pod uslovima koji dozvoljavaju proizvodnju antitela, i obnavljanje proizvedenih antitela.
[0026] Ovde je takođe opisano antitelo ili njegov fragment koji sadrži HCVR kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 17, 21, 25, 41, 45, 49, 65, 69, 73, 89, 93, 97, 113, 117, 121, 137, 141, 145, 161, 165, 169, 185, 189, 193, 209, 213, 217, 233, 237, 241, 257, 261, 265, 281, 285, 289, 305, 309, 313, 329, 333, 337, 353, 357, 361, 377, 381, 385, 401, 405, 409, 425, 429, 433, 449, 453, 457, 473, 477, 481, 497, 501, 505, 521, 525, 529, 545, 549, 553, 569, 573, 577, 593, 597, 601, 617, 621, 625, 641, 645, 649, 665, 669, 673, 689, 693, 697, 713, 717, 721, 737 i 741, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije. HCVR može biti kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 49, 65, 69, 73, 89, 93, 121, 137, 141, 217, 233, 237, 241, 257, 261, 313, 329 i 333. HCVR može biti kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 89 i 217.
[0027] Antitelo ili njegov fragment mogu dalje sadržati LCVR kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 9, 19, 23, 33, 43, 47, 57, 67, 71, 81, 91, 95, 105, 115, 119, 129, 139, 143, 153, 163, 167, 177, 187, 191, 201, 211, 215, 225, 235, 239, 249, 259, 263, 273, 283, 287, 297, 307, 311, 321, 331, 335, 345, 355, 359, 369, 379, 383, 393, 403, 407, 417, 427, 431, 441, 451, 455, 465, 475, 479, 489, 499, 503, 513, 523, 527, 537, 547, 551, 561, 571, 575, 585, 595, 599, 609, 619, 623, 633, 643, 647, 657, 667, 671, 681, 691, 695, 705, 715, 719, 729, 739 i 743, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije. LCVR može biti kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 57, 67, 71, 81, 91, 95, 129, 139, 143, 225, 235, 239, 249, 259, 263, 321, 331 i 335. Tačnije, LCVR može biti kodiran sekvencom nukleinske kiseline izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 91 i 225.
[0028] Ovde je takođe opisano antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen koji sadrži HCDR3 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO:7, 31, 55, 79, 103, 127, 151, 175, 199, 223, 247, 271, 295, 319, 343, 367, 391, 415, 439, 463, 487, 511, 535, 559, 583, 607, 631, 655, 679, 703 i 727, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% homologije; i LCDR3 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 15, 39, 63, 87, 111, 135, 159, 183, 207, 231, 255, 279, 303, 327, 351, 375, 399, 423, 447, 471, 495, 519, 543, 567, 591, 615, 639, 663, 687, 711 i 735, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije. HCDR3 i LCDR3 sekvence mogu biti kodirane sekvencom nukleinske kiseline SEQ ID NO: 55/63, 79/87, 127/135, 223/231, 247/255 i 319/327, respektivno. Par sekvenci HCDR3 i LCDR3 može biti kodiran sekvencom nukleinske kiseline SEQ ID NO: 79/87 i 223/231.
[0029] Antitelo ili njegov fragment mogu dalje da sadrže HCDR1 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 3, 27, 51, 75, 99, 123, 147, 171, 195, 219, 243, 267, 291, 315, 339, 363, 387, 411, 435, 459, 483, 507, 531, 555, 579, 603, 627, 651, 675, 699 i 723, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije; HCDR2 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO:5, 29, 53, 77, 101, 125, 149, 173, 197, 221, 245, 269, 293, 317, 341, 365, 389, 413, 437, 461, 485, 509, 533, 557, 581, 605, 629, 653, 677, 701 i 725, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% homologije; LCDR1 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 11, 35, 59, 83, 107, 131, 155, 179, 203, 227, 251, 275, 299, 323, 347, 371, 395, 419, 443, 467, 491, 515, 539, 563, 587, 611, 635, 659, 683, 707 i 731, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije; i LCDR2 domen kodiran nukleotidnom sekvencom izabranom iz grupe koju čine SEQ ID NO: 13, 37, 61, 85, 109, 133, 157, 181, 205, 229, 253, 277, 301, 325, 349, 373, 397, 421, 445, 469, 493, 517, 541, 565, 589, 613, 637, 661, 685, 709 i 733, ili suštinski identičnu sekvencu koja ima najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98%, ili najmanje 99% homologije. CDR sekvence teškog i lakog lanca mogu biti kodirane sekvencama nukleinske kiseline SEQ ID NO: 51, 53, 55, 59, 61, 63; 75, 77, 79, 83, 85, 87; 123, 125, 127, 131, 133, 135; 219, 221, 223, 227, 229, 231; 243, 245, 247, 251, 253, 255; i 315, 317, 319, 323, 325, 327. CDR sekvence teškog i lakog lanca mogu biti kodirane sekvencama nukleinske kiseline SEQ ID NO: 75, 77, 79, 83, 85, 87; i 219, 221, 223, 227, 229, 231.
1
[0030] Ovde je takođe opisano izolovano antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen koji specifično vezuje hPCSK9, koji sadrži HCDR3 i LCDR3, pri čemu HCDR3 sadrži aminokiselinsku sekvencu formule X<1>- X<2>- X<3>- X<4>- X<5>- X<6>- X<7>- X<8>- X<9>- X<10>-X<11>- X<12>- X<13>- X<14>- X<15>- X<16>- X<17>- X<18>- X<19>- X<20>(SEQ ID NO:747) gde je X<1>Ala, X<2>je Arg ili Lys, X<3>je Asp, X<4>je Ser ili Ile, X<5>je Asn ili Val, X<6>je Leu ili Trp, X<7>je Gly ili Met, X<8>je Asn ili Val, X<9>je Phe ili Tyr, X<10>je Asp, X<11>je Leu ili Met, X<12>je Asp ili nije prisutan, X<13>je Tyr ili nije prisutan, X<14>je Tyr ili nije prisutan, X<15>je Tyr ili nije prisutan, X<16>je Tyr ili nije prisutan, X<17>je Gly ili nije prisutan, X<18>je Met ili nije prisutan, X<19>je Asp ili nije prisutan, i X<20>je Val ili nije prisutan; i LCDR3 sadrži sekvencu aminokiselina formule X<1>-X<2>- X<3>- X<4>- X<5>- X<6>- X<7>- X<8>- X<9>(SEQ ID NO:750) gde j X<1>Gln ili Met, X<2>je Gin, X<3>je Tyr ili Thr, X<4>je Tyr ili Leu, X<5>je Thr ili Gin, X<6>je Thr, X<7>je Pro, X<8>je Tyr ili Leu, i X<9>je Thr.
[0031] Antitelo ili njegov fragment mogu dalje da sadrže HCDR1 sekvencu formule X<1>- X<2>-X<3>- X<4>- X<5>- X<6>- X<7>- X<8>(SEQ ID NO:745), gde je X<1>Gly, X<2>je Phe, X<3>je Thr, X<4>je Phe, X<5>je Ser ili Asn, X<6>je Ser ili Asn, X<7>je Tyr ili His, i X<8>je Ala ili Trp; HCDR2 sekvenca formule X<1>- X<2>- X<3>- X<4>- X<5>- X<6>- X<7>- X<8>(SEQ ID NO:746), gde je X<1>Ile, X<2>je Ser ili Asn, X<3>je Gly ili Gln, X<4>je Asp ili Ser, X<5>je Gly, X<6>je Ser ili Gly, X<7>je Thr ili Glu, i X<8>je Thr ili Lys; LCDR1 sekvenca formule X<1>- X<2>- X<3>- X<4>- X<5>- X<6>- X<7>- X<8>- X<9>- X<10>- X<11>-X<12>(SEQ ID NO:748) gde je X<1>Gin, X<2>je Ser, X<3>je Val ili Leu, X<4>je Leu, X<5>je His ili Tyr, X<6>je Arg ili Ser, X<7>je Ser ili Asn, X<8>je Asn ili Gly, X<9>je Asn, X<10>je Arg ili Asn, X<11>je Asn ili Tyr, i X<12>je Phe ili nije prisutan; LCDR2 sekvenca formule X<1>- X<2>- X<3>(SEQ ID NO:749) gde je X<1>Trp ili Leu, X<2>je Ala ili Gly, i X<3>je Ser. Sl.1 prikazuje poravnanje sekvenci varijabilnih regiona teškog i lakog lanca za 316P i 300N mAbs.
[0032] Ovde je takođe opisano humano anti-PCSK9 antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen koji sadrži varijabilni region teškog lanca (HCVR) kodiran segmentima nukleotidne sekvence izvedene iz sekvenci VH, DHi JHgerminalne linije, i varijabilni region lakog lanca (LCVR ) kodiran segmentima nukleotidne sekvence izvedene iz sekvenci VKi JKgerminalne linije, pri čemu su sekvence germinalne linije (a) VH genski segment 3-23, DHgenski segment 7-27, JHgenski segment 2, VKgenski segment 4-1 i JKgenski segment 2; ili (b) VHgenski segment 3-7, DHgenski segment 2-8, JHgenski segment 6, VKgenski segment 2-28 i JKgenski segment 4.
[0033] U nekim otelotvorenjima, antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se vezuje za PCSK9 protein SEQ ID NO:755, pri čemu je vezivanje antitela ili njegovog fragmenta za varijantni PCSK9 protein manje od 50% vezivanja između antitela ili njegov fragment i PCSK9 protein SEQ ID NO:755. U specifičnom otelotvorenju, antitelo ili njegov fragment se vezuju za varijantni PCSK9 protein sa afinitetom vezivanja (KD) koji je manji od oko 50%, manji od oko 60%, manji od oko 70%, manji od oko 80%, manji od oko 90% ili manje od oko 95% u poređenju sa vezivanjem za PCSK9 (SEQ ID NO:755).
[0034] U jednom otelotvorenju, varijanta PCSK9 proteina sadrži najmanje jednu mutaciju na poziciji 238 SEQ ID NO:755. U specifičnijem otelotvorenju, mutacija je D238R. U jednom otelotvorenju, afinitet vezivanja antitela ili fragmenta antitela za varijantni PCSK9 protein je najmanje 90% manji u odnosu na divlji tip proteina SEQ ID NO:755, pri čemu varijantni protein sadrži mutaciju na ostatku 238. U jednom otelotvorenju, afinitet vezivanja antitela ili fragmenta antitela za varijantni PCSK9 protein je najmanje 80% manji u odnosu na divlji tip proteina SEQ ID NO:755, gde varijantni protein sadrži mutaciju na jednom ili više ostataka 153, 159 , 238 i 343. U specifičnijem otelotvorenju, mutacija je jedna od S153R, E159R, D238R i D343R.
[0035] Takođe ovde opisana, varijanta PCSK9 proteina sadrži najmanje jednu mutaciju na poziciji 366 SEQ ID NO:755. Mutacija može biti E366K. Afinitet vezivanja antitela ili fragmenta antitela za varijantni PCSK9 protein može biti najmanje 95% manji u odnosu na divlji tip proteina SEQ ID NO:755, pri čemu varijantni protein sadrži mutaciju na ostatku 366. Afinitet vezivanja antitela ili fragmenta antitela za varijantni PCSK9 protein može biti najmanje 70%, 80% ili 90% manji u odnosu na divlji tip proteina SEQ ID NO:755, pri čemu varijantni protein sadrži mutaciju na jednom ili više ostataka 147, 366 i/ili 380. Mutacija može biti jedna od S147F, E366K i V380M.
[0036] Pronalazak obuhvata anti-PCSK9 antitela koja imaju modifikovani obrazac glikozilacije. U nekim primenama, modifikacija radi uklanjanja nepoželjnih mesta glikozilacije može biti korisna, ili npr., uklanjanje fukoznog dela radi povećanja funkcije ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) (pogledajte Shield i dr. (2002) JBC 277:26733). U drugim primenama, može se izvršiti modifikacija galaktozilacije da bi se modifikovala citotoksičnost zavisna od komplementa (CDC).
[0037] U daljem aspektu, pronalazak karakteriše farmaceutski sastav koji sadrži rekombinantno humano antitelo ili njegov fragment kao što je definisano u patentnim zahtevima koji specifično vezuje hPCSK9 i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednom otelotvorenju, pronalazak karakteriše sastav koji je kombinacija antitela ili fragmenta antitela pronalaska koji se vezuje za antigen i drugog terapeutskog sredstva. Drugo terapeutsko sredstvo može biti bilo koje sredstvo koje je povoljno kombinovano sa antitelom ili njegovim fragmentom iz pronalaska, na primer, agens sposoban da indukuje ćelijsku depleciju sinteze holesterola inhibiranjem 3-hidroksi-3-metilglutaril (HMG)-koenzima A (CoA) reduktaza, kao što je, na primer, cerivastatin, atorvastatin, simvastatin, pitavastin, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, itd.; sposoban da inhibira unos holesterola i/ili ponovnu apsorpciju žučne kiseline; sposoban da poveća katabolizam lipoproteina (kao što je niacin); i/ili aktivatori LXR transkripcionog faktora koji igra ulogu u eliminaciji holesterola kao što je 22-hidroksiholesterol.
[0038] Ovde su takođe opisani postupci za inhibiciju aktivnosti hPCSK9 korišćenjem anti-PCSK9 antitela ili dela antitela pronalaska koji se vezuje za antigen, pri čemu terapeutski postupci obuhvataju davanje terapeutski efikasne količine farmaceutskog sastava koja sadrži antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen antitelo pronalaska. Poremećaj koji se leči je svaka bolest ili stanje koje je poboljšano, poboljšano, inhibirano ili sprečeno uklanjanjem, inhibicijom ili smanjenjem aktivnosti PCSK9. Specifične populacije koje se leče terapijskim postupcima uključuju ispitanike indukovane za LDL aferezu, ispitanike sa mutacijama koje aktiviraju PCSK9 (pojačanje mutacija funkcije, "GOF"), ispitanike sa heterozigotnom porodičnom hiperholesterolemijom (heFH); ispitanike sa primarnom hiperholesterolemijom koji su netolerantni na statine ili nekontrolisani statin; i ispitanike sa rizikom od razvoja hiperholesterolemije koji se mogu lečiti preventivno. Druge indikacije uključuju dislipidemiju povezanu sa sekundarnim uzrocima kao što su dijabetes melitus tipa 2, holestatska oboljenja jetre (primarna bilijarna ciroza), nefrotski sindrom, hipotiroidizam, gojaznost; i prevenciju i lečenje ateroskleroze i kardiovaskularnih bolesti.
[0039] Anti-hPCSK9 antitelo ili fragment antitela iz pronalaska mogu biti korisni za smanjenje povišenog ukupnog holesterola, ne-HDL holesterola, LDL holesterola i/ili apolipoproteina B (apolipoproteina B100).
[0040] Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema pronalasku može da se koristi
1
sam ili u kombinaciji sa drugim sredstvom, na primer, inhibitorom HMG-CoA reduktaze i/ili drugim lekovima za snižavanje lipida.
[0041] Dalja otelotvorenja uključuju antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antitela kao što je gore definisano za upotrebu za ublažavanje ili inhibiranje bolesti ili stanja posredovanih PCSK9.
[0042] Pronalazak obuhvata upotrebu antitela ili fragmenta antitela koji se vezuje za antigen kako je iznad definisano u proizvodnji leka za upotrebu za ublažavanje ili inhibiciju bolesti ili stanja posredovanih PCSK9. U specifičnim otelotvorenjima, gde je PCSK9 posredovana bolest ili stanje hiperholesterolemija, hiperlipidemija, LDL afereza, heterozigot za porodičnu hiperholesterolemiju, netolerantna na statine. statini nekontrolisani, rizik od razvoja hiperholesterolemije, dislipidemije, holestatske bolesti jetre, nefrotskog sindroma, hipotireoze, gojaznosti, ateroskleroze i kardiovaskularnih bolesti.
[0043] Ostala otelotvorenja će postati očigledne iz pregleda detaljnog opisa koji sledi.
KRATAK OPIS SLIKA
[0044]
Sl. 1. Tabele poređenja sekvenci varijabilnih regiona teškog lanca (A) i lakog lanca (B) i CDR-ova antitela H1H316P i H1M300N.
Sl. 2. Koncentracije antitela u serumu tokom vremena.316P 5 mg/kg (□); 300N 5 mg/kg (O); 316P 15 mg/kg (v); 300N 15 mg/kg (●).
Sl. 3. Nivo ukupnog holesterola u serumu kao procenat promene u odnosu na kontrolu pufera. Kontrola (T); 316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (σ); 316P 15 mg/kg (□); 300N 15 mg/kg (Δ).
Sl. 4. Nivo LDL holesterola u serumu kao procenat promene u odnosu na kontrolu pufera. Kontrola (T); 316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (σ); 316P 15 mg/kg (□); 300N 15 mg/kg (Δ).
Sl. 5. Nivo LDL holesterola u serumu normalizovan na kontrolu pufera. Kontrola bafera (T); 316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (σ); 316P 15 mg/kg (□); 300N 15 mg/kg (Δ).
Sl. 6. Nivo HDL holesterola u serumu kao procenat promene u odnosu na kontrolu pufera. Kontrola (T); 316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (σ); 316P 15 mg/kg (□); 300N 15 mg/kg (Δ).
Sl. 7. Nivo triglicerida u serumu kao procenat promene u odnosu na kontrolu pufera.
Kontrola bafera (T); 316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (σ); 316P 15 mg/kg (□); 300N 15 mg/kg (Δ).
Sl. 8. Nivo LDL holesterola u serumu izražen kao procenat promene u odnosu na početnu vrednost nakon subkutanog davanja jedne doze.316P 5 mg/kg (v); 300N 5 mg/kg (●).
Sl. 9. Koncentracije antitela u serumu tokom vremena nakon subkutanog davanja jedne doze.
316P 5 mg/kg (●); 300N 5 mg/kg (σ).
Sl. 10. Vestern blot za mišji LDL receptor ukupnih homogenata jetre. Uzorci su uzeti 24 sata nakon PBS (trake 1-3), 5 mg/kg 316P (trake 4-6) ili 5 mg/kg ne-hPCSK9 specifičnih mAb (trake 7-8) i 4 sata nakon 1,2 mg /kg hPCSK9-mmh (sve trake).
Sl. 11. Efekti 316P na nivo LDL holesterola u serumu PCSK9<hu/hu>miševa. Kontrola pufera ( );316P 1 mg/kg (▤); 316P 5 mg/kg ( ); 316P 10 mg/kg ( ).
Sl. 12. Farmakokinetički profil anti-hPCSK9 mAb seruma kod C57BL/6 miševa. Pojedinačna doza kontrolnog I mAb (λ) na 10 mg/kg; 316P (σ) na 10 mg/kg i 300N (v) na 10 mg/kg. Sl. 13. Farmakokinetički profil anti-hPCSK9 mAb seruma kod hPCSK9 heterozigotnih miševa: pojedinačna doza od 10 mg/kg: Kontrola I mAb (λ); 316P (σ) i 300N (v).
Sl. 14. Uticaj 316P na nivoe LDL holesterola u serumu kod sirijskog hrčka hranjenog normalnom ishranom. Kontrola pufera (●); 316P 1 mg/kg (v); 316P 3 mg/kg (σ); 316P 5 mg/kg (τ).
DETALJNI OPIS
[0045] Pre nego što se opišu predmetni postupci, treba razumeti da predmetni pronalazak nije ograničen na određene postupke i opisane eksperimentalne uslove, pošto takvi postupci i uslovi mogu da variraju. Takođe treba razumeti da je terminologija korišćena ovde samo u svrhu opisivanja određenih otelotvorenja, i nije namera da bude ograničavajuća, pošto će obim predmetnog pronalaska biti ograničen samo priloženim patentnim zahtevima.
[0046] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što se uobičajeno shvataju oni koji su uobičajeno upoznati sa stanjem tehnike kojem pripada pronalazak. Mada se bilo koji postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, sada su opisani poželjni postupci i materijali.
Definicije
[0047] Termin "humana proprotein konvertaza subtilizin/keksin tip 9" ili "hPCSK9", kako se ovde koristi, odnosi se na hPCSK9 koji ima sekvencu nukleinske kiseline prikazanu u SEQ
1
ID NO:754 i aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:755, ili njegov biološki aktivan fragment.
[0048] Termin "antitelo", kako se ovde koristi, ima za cilj da se odnosi na molekule imunoglobulina koji se sastoje od četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama. Svaki teški lanac se sastoji od varijabilnog regiona teškog lanca ("HCVR" ili "VH") i konstantnog regiona teškog lanca (sastoji se od domena CH1, CH2 i CH3). Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca („LCVR ili „VL“) i konstantnog regiona lakog lanca (CL). VH i VL regioni mogu biti dalje podeljeni na regione hipervarijabilnosti, nazvani regioni koji određuju komplementarnost (CDR), isprepleteni sa regionima koji su konzerviraniji, nazvani okvirni regioni (FR). Svaki VH i VL je sastavljen od tri CDR-a i četiri FR-a, raspoređena od amino-završecima do karboksi-završetaka sledećim redosledom: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
[0049] Zamena jednog ili više CDR ostataka ili izostavljanje jednog ili više CDR je takođe moguća. Antitela su opisana u naučnoj literaturi u kojoj se jedan ili dva CDR mogu izostaviti radi vezivanja. Padlan i dr. (1995 FASEB J.9:133-139) analizirali su kontaktne regione između antitela i njihovih antigena, na osnovu objavljenih kristalnih struktura, i zaključili da samo jedna petina do jedne trećine CDR ostataka stvarno dolazi u kontakt sa antigenom. Padlan je takođe pronašao mnoga antitela u kojima jedan ili dva CDR-a nisu imali aminokiseline u kontaktu sa antigenom (videti takođe, Vajdos i dr.2002 J Mol Biol 320:415-428).
[0050] CDR ostaci koji ne dolaze u kontakt sa antigenom mogu se identifikovati na osnovu prethodnih studija (na primer, ostaci H60-H65 u CDRH2 često nisu potrebni), iz regiona Kabat CDR-a koji leže izvan Chothia CDR-a, molekularnim modeliranjem i/ili empirijski. Ako je CDR ili njegov(i) ostatak(i) izostavljen, on se obično supstituiše sa aminokiselinom koja zauzima odgovarajući položaj u drugoj sekvenci humanog antitela ili konsenzusom takvih sekvenci. Pozicije za supstituciju unutar CDR-a i aminokiseline za supstituciju takođe mogu biti odabrane empirijski. Empirijske supstitucije mogu biti konzervativne i nekonzervativne supstitucije .
[0051] Termin "humano antitelo", kao što je ovde korišćeno, podrazumeva da uključuje antitela koja imaju promenljive i konstantne oblasti izvedene iz humanih germlinih sekvenci
1
imunoglobulina. Humani mAb prema pronalasku mogu uključivati ostatke aminokiselina koje nisu kodirane sekvencama imunoglobulina humane zametne linije (npr., mutacije uvedene nasumičnom ili specifičnom za mesto mutageneze in vitro ili somatskom mutacijom in vivo), na primer u CDR-ovima i posebno CDR3. Međutim, termin "humano antitelo", kako se ovde koristi, nije namenjen da uključi mAbs u kojima su CDR sekvence izvedene iz zametne linije druge vrste sisara (npr., miša), kalemljene na humane FR sekvence.
[0052] Termin "specifično vezuje" ili slično, znači da antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen formira kompleks sa antigenom koji je relativno stabilan u fiziološkim uslovima. Specifično vezivanje se može okarakterisati konstantom ravnoteže disocijacije od najmanje oko 1x10<-6>M ili manje (npr., manji KDoznačava čvršće vezivanje). Postupci za određivanje da li se dva molekula specifično vezuju su dobro poznate u tehnici i uključuju, na primer, ravnotežnu dijalizu, površinsku plazmonsku rezonancu i slično. Izolovano antitelo koje specifično vezuje hPCSK9 može, međutim, da pokaže unakrsnu reaktivnost na druge antigene kao što su PCSK9 molekuli drugih vrsta. Štaviše, multispecifična antitela (npr., bispecifična) koja se vezuju za hPCSK9 i jedan ili više dodatnih antigena se ipak smatraju antitelima koja „specifično vezuju“ hPCSK9, kako se ovde koristi.
[0053] Termin antitelo „visokog afiniteta“ odnosi se na ona mAbs koja imaju afinitet vezivanja za hPCSK9 od najmanje 10<-10>M; poželjno 10<-11>M; još poželjnije 10<-12>M, mereno površinskom plazmonskom rezonancom, npr., BIACORE™ ili ELISA sa afinitetom prema rastvoru.
[0054] Pod pojmom „spora brzina“, „Koff“ ili „kd“ podrazumeva se antitelo koje se odvaja od hPCSK9 sa konstantom brzine od 1 x 10<-3>s<-1>ili manje, poželjno 1 x 10<-4>s<-1>ili manje, kao što je određeno površinskom plazmonskom rezonancom, npr., BIACORE™.
[0055] Termin "deo koji se vezuje za antigen" antitela (ili jednostavno "fragment antitela"), kako se ovde koristi, odnosi se na jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost specifičnog vezivanja za hPCSK9. Fragment antitela može uključivati Fab fragment, F(ab')2fragment, Fv fragment, dAb fragment, fragment koji sadrži CDR ili izolovani CDR.
1
[0056] Specifična otelotvorenja, antitelo ili fragmenti antitela prema pronalasku mogu biti konjugovani sa terapijskim delom ("imunokonjugat"), kao što je citotoksin, hemoterapeutski lek, imunosupresiv ili radioizotop.
[0057] „Izolovano antitelo“, kako se ovde koristi, ima za cilj da se odnosi na antitelo koje je suštinski oslobođeno drugih mAb koji imaju različite antigene specifičnosti (npr., izolovano antitelo koje se specifično vezuje za hPCSK9 je u suštini bez mAb koji specifično vezuju antigene različite od hPCSK9 ). Izolovano antitelo koje specifično vezuje hPCSK9 može, međutim, da ima unakrsnu reaktivnost na druge antigene kao što su PCSK9 molekuli drugih vrsta.
[0058] "Neutralizirajuće antitelo", kako se ovde koristi (ili "antitelo koje neutrališe aktivnost PCSK9"), treba da se odnosi na antitelo čije vezivanje za hPCSK9 dovodi do inhibicije najmanje jedne biološke aktivnosti PCSK9. Ova inhibicija biološke aktivnosti PCSK9 može se proceniti merenjem jednog ili više indikatora biološke aktivnosti PCSK9 pomoću jednog ili više od nekoliko standardnih in vitro ili in vivo testova poznatih u tehnici (pogledajte primere ispod).
[0059] Termin "površinska plazmonska rezonanca", kako se ovde koristi, odnosi se na optički fenomen koji omogućava analizu bispecifičnih interakcija u realnom vremenu otkrivanjem promena u koncentracijama proteina unutar matriksa biosenzora, na primer korišćenjem BIACORE™ sistema (Pharmacia Biosensor AB, Upsala, Švedska i Piscataway, NJ).
[0060] Termin "KD", kako se ovde koristi, odnosi se na konstantu ravnotežne disocijacije određene interakcije antitelo-antigen.
[0061] Termin "epitop" je region antigena koji je vezan antitelom. Epitopi se mogu definisati kao strukturni ili funkcionalni. Funkcionalni epitopi su generalno podskup strukturnih epitopa i imaju one ostatke koji direktno doprinose afinitetu interakcije. Epitopi takođe mogu biti konformacioni, odnosno sastavljeni od nelinearnih aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, epitopi mogu uključivati koje su hemijski aktivne površinske grupe molekula kao što su aminokiseline, bočni lanci šećera, fosforilne grupe ili sulfonilne grupe, i, u nekim otelotvorenjima, mogu imati specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike i/ili specifične karakteristike naelektrisanja.
1
[0062] Termin "suštinski identitet" ili "suštinski identičan", kada se odnosi na nukleinsku kiselinu ili njen fragment, ukazuje na to da, kada je optimalno usklađen sa odgovarajućim nukleotidnim insercijama ili delecijama sa drugom nukleinskom kiselinom (ili njenim komplementarnim lancem), postoji identitet nukleotidne sekvence u najmanje oko 90%, a poželjnije najmanje oko 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% nukleotidnih baza, kao što je mereno bilo kojim dobro poznatim algoritmom identičnosti sekvence, kao što su FASTA, BLAST ili GAP, kao što je objašnjeno u nastavku.
[0063] Kako se primenjuje na polipeptide, termin „značajna sličnost“ ili „suštinski sličan“ znači da dve peptidne sekvence, kada su optimalno usklađene, kao što je program GAP ili BESTFIT koristeći podrazumevane težine praznina, dele najmanje 90% identiteta sekvence, još poželjnije najmanje 95%, 98% ili 99% identičnost sekvence. Poželjno, pozicije ostataka koji nisu identični razlikuju se konzervativnim supstitucijama aminokiselina.
"Konzervativna aminokiselinska supstitucija" je ona u kojoj je aminokiselinski ostatak supstituisan drugim amino kiselinskim ostatkom koji ima bočni lanac (R grupa) sa sličnim hemijskim svojstvima (npr., naelektrisanje ili hidrofobnost). Generalno, konzervativna supstitucija aminokiselina neće bitno promeniti funkcionalna svojstva proteina. U slučajevima kada se dve ili više sekvenci aminokiselina razlikuju jedna od druge konzervativnim supstitucijama, procenat ili stepen sličnosti se može podesiti naviše da bi se korigovala konzervativna priroda zamene. Sredstva za ovo podešavanje su dobro poznata stručnjacima u ovoj oblasti. Videti npr., Pearson (1994) Methods Mol. Biol.24: 307-331. Primeri grupa aminokiselina koje imaju bočne lance sa sličnim hemijskim svojstvima uključuju 1) alifatične bočne lance: glicin, alanin, valin, leucin i izoleucin; 2) alifatičkohidroksil bočni lanci: serin i treonin; 3) bočni lanci koji sadrže amid: asparagin i glutamin; 4) aromatični bočni lanci: fenilalanin, tirozin i triptofan; 5) osnovni bočni lanci: lizin, arginin i histidin; 6) kiseli bočni lanci: aspartat i glutamat, i 7) bočni lanci koji sadrže sumpor: cistein i metionin. Poželjne konzervativne supstitucione grupe aminokiselina su: valin-leucinizoleucin, fenilalanin-tirozin, lizin-arginin, alanin-valin, glutamat-aspartat i asparaginglutamin. Alternativno, konzervativna zamena je svaka promena koja ima pozitivnu vrednost u matrici logičke verovatnoće PAM250 obelodanjenoj u Gonnet i dr. (1992) Science 256: 1443 45. „Umereno konzervativna“ zamena je svaka promena koja ima ne-negativnu vrednost u matrici logaritamske verovatnoće PAM250.
1
[0064] Sličnost sekvenci za polipeptide se obično meri korišćenjem softvera za analizu sekvenci. Softver za analizu proteina poklapa slične sekvence koristeći mere sličnosti dodeljene različitim supstitucijama, delecijama i drugim modifikacijama, uključujući konzervativne supstitucije amino kiselina. Na primer, GCG softver sadrži programe kao što su GAP i BESTFIT koji se mogu koristiti sa podrazumevanim parametrima za određivanje homologije sekvence ili identiteta sekvence između blisko povezanih polipeptida, kao što su homologni polipeptidi iz različitih vrsta organizama ili između proteina divljeg tipa i njegovog muteina. Videti, npr., GCG verziju 6.1. Polipeptidne sekvence se takođe mogu uporediti korišćenjem FASTA sa podrazumevanim ili preporučenim parametrima; program u GCG verziji 6.1. FASTA (npr., FASTA2 i FASTA3) obezbeđuje poravnanja i procentualni identitet sekvenci regiona najboljeg preklapanja između sekvenci upita i pretrage (Pearson (2000) supra). Drugi poželjni algoritam kada se poredi sekvenca pronalaska sa bazom podataka koja sadrži veliki broj sekvenci iz različitih organizama je kompjuterski program BLAST, posebno BLASTP ili TBLASTN, koji koristi podrazumevane parametre. Videti npr., Altschul i dr. (1990) J. Mol. Biol.215: 403410 i (1997) Nucleic Acids Res.25:3389 402.
[0065] U specifičnim otelotvorenjima, antitelo ili fragment antitela za upotrebu u postupku prema pronalasku može biti monospecifičan, bispecifičan ili multispecifičan. Multispecifična antitela mogu biti specifična za različite epitope jednog ciljnog polipeptida ili mogu da sadrže domene koji se vezuju za antigen specifične za epitope više od jednog ciljnog polipeptida. Primer formata bispecifičnog antitela koji se može koristiti u kontekstu ovog pronalaska uključuje upotrebu prvog imunoglobulinskog (Ig) CH3 domena i drugog Ig CH3 domena, pri čemu se prvi i drugi Ig CH3 domen razlikuju jedan od drugog po najmanje jednu aminokiselinu, i pri čemu najmanje jedna aminokiselinska razlika smanjuje vezivanje bispecifičnog antitela za protein A u poređenju sa bispecifičnim antitelom kome nedostaje razlika u aminokiselinama. U jednom otelotvorenju, prvi Ig CH3 domen vezuje protein A, a drugi Ig CH3 domen sadrži mutaciju koja smanjuje ili ukida vezivanje proteina A kao što je modifikacija H95R (pomoću IMGT numerisanja egzona; H435R prema EU numerisanju). Drugi CH3 može dalje da sadrži modifikaciju I96F (od strane IMGT; Y436F prema EU). Dalje modifikacije koje se mogu naći u drugom CH3 uključuju: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, i V82I (prema IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, i V422I prema EU) u slučaju IgG1 mAbs; N44S, K52N, i V82I (IMGT; N384S, K392N, i V422I by EU) u slučaju IgG2 mAbs; i Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, i V82I (prema IMGT;
2
Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, i V422I prema EU) u slučaju IgG4 mAbs. Razmatrane su varijacije formata bi-specifičnog antitela opisanog iznad.
[0066] Pod terminom "terapeutski efikasna količina" podrazumeva se količina koja proizvodi željeni efekat zbog kojeg se primenjuje. Tačan iznos će zavisiti od svrhe tretmana, a stručnjak će ga moći utvrditi koristeći poznate tehnike (videti, na primer, Lloyd (1999) The Art, Science i Technology of Pharmaceutical Compounding).
Priprema humanih antitela
[0067] Postupci za generisanje humanih antitela kod transgenskih miševa su poznate (videti, na primer, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE™). Tehnologija VELOCIMMUNE™ uključuje stvaranje transgenskog miša koji ima genom koji se sastoji od varijabilnih regiona teškog i lakog lanca čoveka koji su operativno povezani sa lokusima endogenog mišjeg konstantnog regiona tako da miš proizvodi antitelo koje se sastoji od humanog varijabilnog regiona i mišjeg konstantnog regiona kao odgovor na antigene stimulacija. DNK koja kodira varijabilne regione teških i lakih lanaca antitela je izolovana i operativno povezana sa DNK koja kodira konstantne regione teškog i lakog lanca čoveka. DNK se zatim eksprimira u ćeliji sposobnoj da ekspresuje potpuno humano antitelo. U specifičnom otelotvorenju, ćelija je CHO ćelija.
[0068] Antitela mogu biti terapeutski korisna u blokiranju interakcije ligand-receptor ili inhibiciji interakcije komponenti receptora, pre nego ubijanjem ćelija kroz fiksaciju komplementa i učešćem u citotoksičnosti zavisnoj od komplementa (CDC), ili ubijanju ćelija putem citotoksičnosti posredovane ćelijama zavisne od antitela ( ADCC). Konstantni region antitela je stoga važna u sposobnosti antitela da fiksira komplement i posreduje ćelijsku citotoksičnost. Prema tome, izotip antitela može biti izabran na osnovu toga da li je poželjno da antitelo posreduje citotoksičnost.
[0069] Humana antitela mogu postojati u dva oblika koji su povezana sa heterogenošću šarke. U jednom obliku, molekul antitela sadrži stabilnu konstrukciju od četiri lanca od oko 150160 kDa u kojoj su dimeri povezani međusobnom lančanom disulfidnom vezom teškog lanca. U drugom obliku, dimeri nisu povezani preko disulfidnih veza između lanaca i formira se molekul od oko 75-80 kDa sastavljen od kovalentno povezanog lakog i teškog lanca (polu antitela). Ove oblike je izuzetno teško odvojiti, čak i nakon prečišćavanja afiniteta.
[0070] Učestalost pojavljivanja drugog oblika kod različitih netaknutih IgG izotipa nastaje usled, ali ne ograničavajući se na, strukturne razlike povezane sa izotipom antitela šarke. Jedna supstitucija aminokiselina u zglobnom delu humanog IgG4 šarke može značajno smanjiti pojavu drugog oblika (Angal i dr. (1993) Molecular Immunology 30:105) do nivoa koji se obično posmatraju korišćenjem humane IgG1 šarke. Predmetni pronalazak obuhvata antitela koja imaju jednu ili više mutacija u zglobnom, CH2 ili CH3 regionu, što može biti poželjno, na primer, u proizvodnji, da se poboljša prinos željenog oblika antitela.
[0071] Generalno, VELOCIMMUNE™ miš je izazvan antigenom od interesa, a limfne ćelije (kao što su B-ćelije) se dobijaju od miševa koji eksprimiraju antitela. Limfne ćelije mogu biti spojene sa ćelijskom linijom mijeloma da bi se pripremile besmrtne ćelijske linije hibridoma, a takve ćelijske linije hibridoma se pregledaju i biraju da identifikuju hibridomske ćelijske linije koje proizvode antitela specifična za antigen od interesa. DNK koja kodira varijabilne regione teškog i lakog lanca može se izolovati i vezati za poželjne izotipske konstantne regione teškog lanca i lakog lanca. Takav protein antitela može se proizvesti u ćeliji, kao što je CHO ćelija. Alternativno, DNK koja kodira antigen-specifična himerna antitela ili varijabilne domene lakih i teških lanaca može se izolovati direktno iz limfocita specifičnih za antigen.
[0072] U početku se izoluju himerna antitela visokog afiniteta koja imaju humani varijabilni region i mišji konstantni region. Kao što je ispod opisano, antitela su okarakterisana i odabrana za poželjne karakteristike, uključujući afinitet, selektivnost, epitop, itd. Konstantni regioni miša se zamenjuju željenim ljudskim konstantnim regionom da bi se generisalo potpuno humano antitelo pronalaska, na primer divljeg tipa. ili modifikovani IgG1 ili IgG4 (na primer, SEQ ID NO:751, 752, 753). Dok odabrani konstantni region može da varira u zavisnosti od specifične upotrebe, karakteristike vezivanja antigena visokog afiniteta i specifičnosti cilja nalaze se u varijabilnom regionu.
Mapiranje epitopa i srodne tehnologije
[0073] Za skrining antitela koja se vezuju za određeni epitop (npr., ona koja blokiraju vezivanje IgE za receptor visokog afiniteta), rutinski test unakrsnog blokiranja kao što je opisani Antibodies, Harlow i Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY) mogu se izvesti. Drugi postupci uključuju mutante za skeniranje alanina, peptidne mrlje (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443-63), ili analizu deljenja peptida. Pored toga, mogu se koristiti metode kao što su ekscizija epitopa, ekstrakcija epitopa i hemijska modifikacija antigena (Tomer (2000) Protein Science 9: 487-496).
[0074] Termin "epitop" se odnosi na mesto na antigenu na koje reaguju B i/ili T ćelije.
Epitopi B-ćelija mogu da se formiraju i od susednih amino kiselina ili od ne susednih aminokiselina suprotstavljenih tercijarnim savijanjem proteina. Epitopi formirani od susednih aminokiselina se tipično zadržavaju pri izlaganju denaturirajućim rastvaračima, dok se epitopi formirani tercijarnim savijanjem tipično gube pri tretmanu sa denaturirajućim rastvaračima. Epitop obično uključuje najmanje 3, i češće, najmanje 5 ili 8-10 aminokiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
[0075] Profilisanje uz pomoć modifikacije (MAP), takođe poznato kao Profilisanje antitela zasnovano na strukturi antigena (ASAP) je postupak koji kategoriše veliki broj monoklonskih antitela (mAbs) usmerenih protiv istog antigena u skladu sa sličnostima profila vezivanja svakog antitela za hemijski ili enzimski modifikovane površine antigena (US 2004/0101920). Svaka kategorija može odražavati jedinstveni epitop ili izrazito različit ili se delimično preklapa sa epitopom koji predstavlja druga kategorija. Ova tehnologija omogućava brzo filtriranje genetski identičnih mAb, tako da se karakterizacija može fokusirati na genetski različita mAb. Kada se primeni na skrining hibridoma, MAP može olakšati identifikaciju retkih hibridomskih klonova koji proizvode mAbs sa željenim karakteristikama. MAP se može koristiti za sortiranje anti-PCSK9 mAbs pronalaska u grupe mAbs koji vezuju različite epitope.
[0076] Ovde su opisana anti-hPCSK9 antitela ili fragment koji vezuje antigen koji vezuju epitop unutar katalitičkog domena, što je oko 153 do 425 SEQ ID NO:755); preciznije, epitop od oko 153 do oko 250 ili od oko 250 do oko 425; tačnije, antitelo ili fragment antitela vezuje epitop unutar fragmenta od oko 153 do oko 208, od oko 200 do oko 260, od oko 250 do oko 300, od oko 275 do oko 325, od oko 300 do oko 360, od oko 300 do oko 360, od oko 250 do oko 300. oko 350 do oko 400, i/ili od oko 375 do oko 425.
[0077] Anti-hPCSK9 antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen ovde opisan može da veže epitop unutar pro peptidnog domena (ostaci 31 do 152 SEQ ID NO:755); preciznije, epitop od oko ostatka 31 do oko ostatka 90 ili od oko ostatka 90 do oko ostatka 152; tačnije,
2
antitelo ili fragment antitela vezuju epitop unutar fragmenta od oko ostatka 31 do oko ostatka 60, od oko ostatka 60 do oko ostatka 90, od oko ostatka 85 do oko ostatka 110, od oko ostatka 100 do oko ostatka 100, ostatka oko 100 od oko ostatka 125 do oko ostatka 150, od oko ostatka 135 do oko ostatka 152, i/ili od oko ostatka 140 do oko ostatka 152.
[0078] Anti-hPCSK9 antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen može da veže epitop unutar C-terminalnog domena, (ostaci 426 do 692 SEQ ID NO:755); preciznije, epitop od oko ostatka 426 do oko ostatka 570 ili od oko ostatka 570 do oko ostatka 692; preciznije, antitelo ili fragment antitela mogu da vežu epitop unutar fragmenta od oko ostatka 450 do oko ostatka 500, od oko ostatka 500 do oko ostatka 550, od oko ostatka 550 do oko ostatka 600, i/ili od oko ostatka do 600 o ostatku 692.
[0079] Antitelo ili fragment antitela mogu da vežu epitop koji uključuje više od jednog od nabrojanih epitopa u okviru katalitičkog, pro peptidnog ili C-terminalnog domena, i/ili unutar dva ili tri različita domena (na primer, epitope unutar katalitičkog i C-terminalnog domena domene, ili unutar propeptidnih i katalitičkih domena, ili unutar propeptidnih, katalitičkih i C-terminalnih domena.
[0080] U nekim otelotvorenjima, antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen vezuje epitop na hPCSK9 koji sadrži aminokiselinski ostatak 238 hPCSK9 (SEQ ID NO:755).
Eksperimentalni rezultati (Tabela 27) pokazuju da kada je D238 mutiran, KDmAb 316P je pokazao >400 puta smanjenje afiniteta vezivanja (~1 x10<9>M do ~410 x10<-9>M) i
T1/2 smanjen >30 puta ( od ~37 do ~1 min). U specifičnom otelotvorenju, mutacija je bila D238R. U specifičnim otelotvorenjima, antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen iz pronalaska vezuju epitop hPCSK9 koji sadrži dva ili više aminokiselinskih ostataka na pozicijama 153, 159, 238 i 343.
[0081] Kao što je prikazano u nastavku, mutacija aminokiselinskog ostatka 153, 159 ili 343 dovela je do smanjenja afiniteta od oko 5 do 10 puta ili sličnog skraćivanja T1/2. U specifičnim otelotvorenjima, mutacija je bila S153R, E159R i/ili D343R.
[0082] Antitelo ili fragmenti koji se vezuju za antigen ovde opisani mogu da vežu epitop na hPCSK9 koji sadrži aminokiselinski ostatak 366 hPCSK9 (SEQ ID NO:755).
Eksperimentalni rezultati (Tabela 27) pokazuju da kada je E366 mutiran, afinitet mAb 300N pokazao je pad od oko 50 puta (~0,7 x10<-9>M do -36 x10<-9>M) i slično skraćenje T1/2(od ~ 120 do ~2 min). Mutacija može biti E366K.
[0083] Ovde su opisana anti-PCSK9 antitela koja se vezuju za isti epitop kao bilo koje od specifičnih primera antitela opisanih ovde. Takođe su opisana anti-PCSK9 antitela koja se takmiče za vezivanje za PCSK9 ili PCSK9 fragment sa bilo kojim od specifičnih primera antitela opisanih ovde.
[0084] Može se lako utvrditi da li se antitelo vezuje za isti epitop kao ili se takmiči za vezivanje sa referentnim anti-PCSK9 antitelom korišćenjem rutinskih postupaka poznatih u tehnici. Na primer, da bi se utvrdilo da li se test antitelo vezuje za isti epitop kao referentno anti-PCSK9 antitelo pronalaska, referentnom antitelu je dozvoljeno da se veže za PCSK9 protein ili peptid pod uslovima zasićenja. Zatim se procenjuje sposobnost test antitela da se vezuje za molekul PCSK9. Ako je test antitelo sposobno da se veže za PCSK9 nakon vezivanja zasićenja sa referentnim anti-PCSK9 antitelom, može se zaključiti da se test antitelo vezuje za drugačiji epitop od referentnog anti-PCSK9 antitela. S druge strane, ako test antitelo nije u stanju da se veže za molekul PCSK9 nakon vezivanja zasićenja sa referentnim anti-PCSK9 antitelom, onda se test antitelo može vezati za isti epitop kao epitop vezan za referentno anti-PCSK9 antitelo pronalaska.
[0085] Da bi se utvrdilo da li se antitelo takmiči za vezivanje sa referentnim anti-PCSK9 antitelom, gore opisana metodologija vezivanja se izvodi u dve orijentacije: U prvoj orijentaciji, referentnom antitelu je dozvoljeno da se veže za molekul PCSK9 pod uslovima zasićenja, nakon čega sledi procena vezivanja test antitela za molekul PCSK9. U drugoj orijentaciji, test antitelu je dozvoljeno da se veže za molekul PCSK9 pod uslovima zasićenja, nakon čega sledi procena vezivanja referentnog antitela za molekul PCSK9. Ako je u obe orijentacije samo prvo (zasićeno) antitelo sposobno da se veže za molekul PCSK9, onda se zaključuje da se test antitelo i referentno antitelo takmiče za vezivanje za PCSK9. Kao što će proceniti osoba sa uobičajenim veštinama u ovoj oblasti, antitelo koje se takmiči za vezivanje sa referentnim antitelom ne mora nužno da se veže za identičan epitop kao referentno antitelo, ali može sterički blokirati vezivanje referentnog antitela vezivanjem preklapajućeg antitela. ili susedni epitop.
[0086] Dva antitela se vezuju za isti ili preklapajući epitop ako svako kompetitivno inhibira
2
(blokira) vezivanje drugog za antigen. To jest, 1-, 5-, 10-, 20- ili 100-struki višak jednog antitela inhibira vezivanje drugog za najmanje 50%, ali poželjno 75%, 90% ili čak 99% mereno u kompetetivnom vezivanju test (videti npr., Junghans i dr., Cancer Res.1990 50: 1495-1502). Alternativno, dva antitela imaju isti epitop ako u suštini sve mutacije aminokiselina u antigenu koje smanjuju ili eliminišu vezivanje jednog antitela smanjuju ili eliminišu vezivanje drugog. Dva antitela imaju epitope koji se preklapaju ako neke mutacije aminokiselina koje smanjuju ili eliminišu vezivanje jednog antitela smanjuju ili eliminišu vezivanje drugog.
[0087] Dodatni rutinski eksperimenti (npr., mutacija peptida i analize vezivanja) se zatim mogu sprovesti da bi se potvrdilo da li je uočeni nedostatak vezivanja test antitela u stvari posledica vezivanja za isti epitop kao referentno antitelo ili je sterično blokiranje (ili neko drugo fenomen) odgovoran je za nedostatak uočenog vezivanja. Eksperimenti ove vrste se mogu izvesti korišćenjem ELISA, RIA, površinske plazmonske rezonance, protočne citometrije ili bilo kog drugog kvantitativnog ili kvalitativnog testa vezivanja antitela koji je dostupan u tehnici.
[0088] Ovde je opisano antitelo na PCSK9 ili fragment antitela koji se vezuje za antigen koji vezuje PCSK9 protein SEQ ID NO:755, pri čemu je vezivanje između antitela ili njegovog fragmenta za PCSK9 i varijantnog PCSK9 proteina manje od 50% proteina. vezivanje između antitela ili fragmenta i PCSK9 proteina SEQ ID NO:755. U jednom specifičnom otelotvorenju, varijanta PCSK9 proteina sadrži najmanje jednu mutaciju ostatka na poziciji izabranoj iz grupe koju čine 153, 159, 238 i 343. U specifičnijem otelotvorenju, najmanje jedna mutacija je S153R, E159R, D238R i D343R. Varijanta PCSK9 proteina može da sadrži najmanje jednu mutaciju ostatka na poziciji izabranoj iz grupe koja se sastoji od 366.
Varijanta PCSK9 proteina može da sadrži najmanje jednu mutaciju ostatka na poziciji izabranoj iz grupe koju čine 147, 366 i 380. Mutacija može biti S147F, E366K i/ili V380M.
Imunokonjugati
[0089] Pronalazak obuhvata humano anti-PCSK9 monoklonsko antitelo konjugovano za terapeutski deo ("imunokonjugat"), kao što je citotoksin, hemoterapeutski lek, imunosupresiv ili radioizotop. Citotoksinska sredstva uključuju bilo koje sredstvo koje je štetno za ćelije. Primeri pogodnih sredstava citotoksina i hemoterapeutskih sredstava za formiranje imunokonjugata su poznati u tehnici, videti na primer, WO 05/103081.
2
Bispecifičnosti
[0090] Antitela iz predmetnog pronalaska mogu biti monospecifična, bispecifična ili multispecifična. Multispecifična mAbs mogu biti specifična za različite epitope jednog ciljnog polipeptida ili mogu da sadrže domene koji se vezuju za antigen specifične za više od jednog ciljnog polipeptida. Videti npr., Tutt i dr. (1991) J. Immunol.147:60-69. Humana anti-PCSK9 mAbs mogu biti povezana ili ko-ekspresirana sa drugim funkcionalnim molekulom, npr., drugim peptidom ili proteinom. Na primer, antitelo ili njegov fragment mogu biti funkcionalno povezani (npr., hemijskim spajanjem, genetskom fuzijom, nekovalentnom asocijacijom ili na neki drugi način) sa jednim ili više drugih molekularnih entiteta, kao što je drugo antitelo ili fragment antitela, da bi se proizveo bispecifičan ili multispecifičan antitelo sa drugom specifičnošću vezivanja.
[0091] Primer formata bispecifičnog antitela koji se može koristiti u kontekstu ovog pronalaska uključuje upotrebu prvog imunoglobulinskog (Ig) CH3 domena i drugog Ig CH3 domena, pri čemu se prvi i drugi Ig CH3 domen razlikuju jedan od drugog po najmanje jednu aminokiselinu, i pri čemu najmanje jedna aminokiselinska razlika smanjuje vezivanje bispecifičnog antitela za protein A u poređenju sa bispecifičnim antitelom kome nedostaje razlika u aminokiselinama. U jednom otelotvorenju, prvi Ig CH3 domen vezuje protein A, a drugi Ig CH3 domen sadrži mutaciju koja smanjuje ili ukida vezivanje proteina A kao što je modifikacija H95R (pomoću IMGT numerisanja egzona; H435R prema EU numerisanju). Drugi CH3 može dalje da sadrži modifikaciju Y96F (od strane IMGT; Y436F prema EU). Dalje modifikacije koje se mogu naći u drugom CH3 uključuju: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, i V82I (prema IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, i V422I prema EU) u slučaju IgG1 antitela; N44S, K52N, i V82I (IMGT; N384S, K392N, i V422I prema EU) u slučaju IgG2 antitela; i Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, i V82I (prema IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, i V422I prema EU) u slučaju IgG4 antitela. Razmatrane su varijacije formata bi-specifičnog antitela opisanog iznad.
Bioekvivalenti
[0092] Opisana anti-PCSK9 antitela i fragmenti antitela obuhvataju proteine koji imaju sekvence aminokiselina koje variraju od onih opisanih mAbs, ali koje zadržavaju sposobnost da vezuju humani PCSK9. Takve varijante mAbs i fragmenti antitela sadrže jedan ili više dodataka, delecija ili supstitucija amino kiselina u poređenju sa roditeljskom sekvencom, ali
2
pokazuju biološku aktivnost koja je suštinski ekvivalentna onoj opisanih mAbs. Slično, DNK koja kodira anti-PCSK9 antitelo obuhvata sekvence koje sadrže jedan ili više dodataka, brisanja ili supstitucija nukleotida u poređenju sa otkrivenom sekvencom, ali koje kodiraju anti-PCSK9 antitelo ili fragment antitela koji je u suštini bioekvivalentan antitelu -PCSK9 antitelo ili fragment antitela prema pronalasku. Primeri takvih varijanti sekvenci aminokiselina i DNK su diskutovani iznad.
[0093] Dva proteina koja vezuju antigen, ili antitela, smatraju se bioekvivalentnima ako su, na primer, farmaceutski ekvivalenti ili farmaceutske alternative čija brzina i obim apsorpcije ne pokazuju značajnu razliku kada se primenjuju u istoj molarnoj dozi pod sličnim eksperimentalnim uslovima, bilo pojedinačno radi ili višestruka doza. Neka antitela će se smatrati ekvivalentima ili farmaceutskim alternativama ako su ekvivalentna po obimu svoje apsorpcije, ali ne i po stopi apsorpcije, a ipak se mogu smatrati bioekvivalentnim jer su takve razlike u brzini apsorpcije namerno i odražavaju se u obeležavanju, nisu od suštinskog značaja za postizanje efektivne telesne koncentracije leka na, na primer, hroničnu upotrebu, i smatraju se medicinski beznačajnim za određeni lek koji se proučava. U jednom otelotvorenju, dva proteina koji vezuju antigen su bioekvivalentna ako ne postoje klinički značajne razlike u njihovoj bezbednosti, čistoći i snazi.
[0094] U jednom otelotvorenju, dva proteina koji vezuju antigen su bioekvivalentna ako se pacijent može jednom ili više puta prebaciti između referentnog proizvoda i biološkog proizvoda bez očekivanog povećanja rizika od neželjenih efekata, uključujući klinički značajnu promenu imunogenosti, ili smanjenje efikasnost, u poređenju sa nastavkom terapije bez takve promene.
[0095] U jednom otelotvorenju, dva proteina koji vezuju antigen su bioekvivalentna ako oba deluju zajedničkim mehanizmom ili mehanizmima delovanja za stanje ili uslove upotrebe, u meri u kojoj su takvi mehanizmi poznati.
[0096] Bioekvivalencija se može dokazati in vivo i in vitro postupcima. Mere bioekvivalencije obuhvataju, npr., (a) in vivo test na ljudima ili drugim sisarima, u kome se koncentracija antitela ili njegovih metabolita meri u krvi, plazmi, serumu ili drugoj biološkoj tečnosti kao funkcija vremena; (b) in vitro test koji je u korelaciji sa podacima o bioraspoloživosti in vivo kod ljudi i koji razumno predviđa; (c) in vivo test na ljudima ili
2
drugim sisarima u kome se odgovarajući akutni farmakološki efekat antitela (ili njegovog cilja) meri kao funkcija vremena; i (d) u dobro kontrolisanom kliničkom ispitivanju koje utvrđuje bezbednost, efikasnost ili biodostupnost ili bioekvivalentnost antitela.
[0097] Bioekvivalentne varijante anti-PCSK9 antitela iz pronalaska mogu se konstruisati, na primer, pravljenjem različitih supstitucija ostataka ili sekvenci ili brisanjem terminalnih ili unutrašnjih ostataka ili sekvenci koje nisu potrebne za biološku aktivnost. Na primer, cisteinski ostaci koji nisu neophodni za biološku aktivnost mogu biti izbrisani ili zamenjeni drugim aminokiselinama da bi se sprečilo stvaranje nepotrebnih ili netačnih intramolekularnih disulfidnih mostova nakon renaturacije.
Lečenje populacije
[0098] Pronalazak se odnosi na terapeutske postupke za lečenje humanog pacijenta kome je potreban sastav pronalaska. Dok su modifikacije životnog stila i konvencionalno lečenje lekovima često uspešne u smanjenju nivoa holesterola, nisu svi pacijenti u stanju da postignu preporučeni ciljni nivo holesterola takvim pristupima. Čini se da su različita stanja, kao što je porodična hiperholesterolemija (FH), otporna na snižavanje nivoa LDL-C uprkos agresivnoj upotrebi konvencionalne terapije. Homozigotna i heterozigotna porodična hiperholesterolemija (hoFH, heFH) je stanje povezano sa prevremenom aterosklerotskom vaskularnom bolešću. Međutim, pacijenti sa dijagnozom hoFH uglavnom ne reaguju na konvencionalnu terapiju lekovima i imaju ograničene mogućnosti lečenja. Konkretno, tretman statinima, koji smanjuju LDL-C inhibiranjem sinteze holesterola i regulacijom hepatičnog LDL receptora, može imati mali efekat kod pacijenata čiji LDL receptori ne postoje ili su defektni. Prosečno smanjenje LDL-C od samo manje od oko 20% je nedavno prijavljeno kod pacijenata sa hoFH potvrđenim genotipom koji su lečeni maksimalnom dozom statina. Dodavanje ezetimiba 10 mg/dan ovom režimu je dovelo do ukupnog smanjenja nivoa LDL-C od 27%, što je još uvek daleko od optimalnog. Slično tome, mnogi pacijenti ne reaguju na statine, slabo se kontrolišu terapijom statinima ili ne mogu da tolerišu terapiju statinima; generalno, ovi pacijenti nisu u stanju da postignu kontrolu holesterola alternativnim tretmanima. Postoji velika nezadovoljena medicinska potreba za novim tretmanima koji mogu rešiti nedostatke trenutnih opcija lečenja.
[0099] Specifične populacije koje se mogu lečiti terapijskim postupcima uključuju pacijente indukovane za LDL aferezu, subjekte sa PCSK9-aktivirajućim (GOF) mutacijama,
2
heterozigotnu porodičnu hiperholesterolemiju (heFH); ispitanike sa primarnom hiperholesterolemijom koji su netolerantni na statine ili nekontrolisani statin; i ispitanike sa rizikom od razvoja hiperholesterolemije koji se mogu lečiti preventivno.
Terapeutska primena i formulacije
[0100] Pronalazak obezbeđuje terapeutske sastave koje sadrže anti-PCSK9 antitela ili njihove fragmente koji se vezuju za antigen iz predmetnog pronalaska. Primena terapeutskih sastava u skladu sa pronalaskom će se primenjivati sa odgovarajućim nosačima, ekscipijensima i drugim sredstvima koji su ugrađeni u formulacije da bi se obezbedio poboljšani transfer, isporuka, tolerancija i slično. Mnogo odgovarajućih formulacija može se pronaći u formularu poznatom svim farmaceutskim hemičarima: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Ove formulacije obuhvataju, na primer, praškove, paste, masti, želee, voskove, ulja, lipide, sredstvom za prenošenje koja sadrže lipide (katjonske ili anjonske) (kao što je LIPOFECTIN™), DNK konjugate, bezvodne adsorpcione paste, emulzije ulje u vodu i voda u ulju, emulzione karbovoskove (polietilen glikoli različitih molekulskih masa), polu-čvrste gelove i polu-čvrste mešavine koje sadrže karbovoskove. Videti takođe Powell i dr. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
[0101] Doza može da varira u zavisnosti od starosti i veličine subjekta koji se primenjuje, ciljne bolesti, stanja, načina davanja i slično. Kada se antitelo iz predmetnog pronalaska koristi za lečenje različitih stanja i bolesti povezanih sa PCSK9, uključujući hiperholesterolemiju, poremećaje povezane sa LDL i apolipoproteinom B, i poremećaje metabolizma lipida i slično, kod odraslog pacijenta, prednost je da se intravenozno daje antitelo predmetnog pronalaska normalno u jednoj dozi od oko 0,01 do oko 20 mg/kg telesne mase, poželjnije oko 0,02 do oko 7, oko 0,03 do oko 5, ili oko 0,05 do oko 3 mg/kg telesne mase. U zavisnosti od ozbiljnosti stanja, učestalost i trajanje tretmana mogu se podesiti.
[0102] Poznati su različiti sistemi isporuke i mogu se koristiti za davanje farmaceutske sastave pronalaska, npr., inkapsulacija u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije sposobne da eksprimiraju mutantne viruse, endocitoza posredovana receptorima (videti, npr., Wu i dr. (1987) J. Biol. Chem.262:4429-4432). Postupci unošenja uključuju, ali nisu ograničeni na, intradermalni, intramuskularni, intraperitonealni, intravenski, potkožni, intranazalni, epiduralni i oralni putevi. Sastav može biti dat na bilo koji pogodan način, na primer sa infuzijom ili bolusnom injekcijom, adsorpcijom preko epitela i sluzokože (npr., oralna sluzokoža, rektalna i crevna sluzokoža itd.) i može biti dat zajedno sa drugim biološki aktivnim sredstvima. Davanje može biti sistemsko ili lokalno.
[0103] Farmaceutski sastav se takođe može isporučiti u vezikuli, posebno u lipozomu (videti Langer (1990) Science 249:1527-1533; Treat i dr. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease i Cancer, Lopez Berestein i Fidler (eds.), Liss, New York, pp.353-365; Lopez-Berestein, ibid., pp.317-327; videti generalno ibid.).
[0104] U određenim situacijama, farmaceutski sastav se može davati u sistemu sa kontrolisanim oslobađanjem. U jednom otelotvorenju može se koristiti pumpa (videti Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng.14:201). U drugom otelotvorenju, polimerni materijali mogu biti korišćeni; videti, Medical Applications of Controlled Release, Langer i Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974). U još jednom otelotvorenju, sistem sa kontrolisanim oslobađanjem može biti postavljen u blizini ciljanog sastava, tako da je potreban samo delić sistemske doze (videti npr., Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp.115-138, 1984).
[0105] Preparati za ubrizgavanje mogu da sadrže oblike doziranja za intravenske, subkutane, intrakutane i intramuskularne injekcije, kapaljke infuzija, itd. Ovi preparati za ubrizgavanje mogu se pripremiti poznatim postupcima. Na primer, preparati za ubrizgavanje mogu se pripremiti, npr., rastvaranjem, suspenzijom ili emulgiranjem antitela ili njegove soli opisane u sterilnoj vodenoj podlozi ili uljanoj podlozi koji se uobičajeno koristi za injekcije. Kao vodena podloga za injekcije, na primer, postoje fiziološki rastvor soli, izotonični rastvor koji sadrži glukozu i druga pomoćna sredstva, itd., koji se mogu koristiti u kombinaciji sa odgovarajućim sredstvom za otapanje, poput alkohola (npr., etanola), polialkohol (npr., propilen glikol, polietilen glikol), nejonsko površinski aktivno sredstvo [npr., polisorbat 80, HCO-50 (polioksietilen (50 mol) adukt hidrogenisanog ricinusovog ulja)] itd., susamovo ulje, sojino ulje, itd., koja se mogu koristiti u kombinaciji sa rastvorljivim sredstvom kao što je benzil benzoat, benzil alkohol, itd. Tako pripremljena injekcija poželjno je napunjena u odgovarajućoj ampuli. Farmaceutski sastav iz predmetnog pronalaska može se davati subkutano ili intravenozno sa standardnom iglom i špricem. Pored toga, u pogledu subkutane isporuke, uređaj za isporuku olovke lako ima primenu u isporuci farmaceutskog sastava predmetnog pronalaska. Takav uređaj za davanje olovke može biti za višekratnu ili
1
jednokratnu upotrebu. Uređaj za davanje olovkom za višekratnu upotrebu obično koristi zamenljivi uložak koji sadrži farmaceutski sastav. Jednom kada je sav farmaceutski sastav unutar kertridža primenjen i kertridž je prazan, prazan uložak se može lako izbaciti i zameniti novim uloškom koji sadrži farmaceutski sastav. Uređaj za isporuku u obliku olovke tada se može ponovo koristiti. U uređaju za isporuku u obliku olovke za jednokratnu upotrebu nema zamenljivog uloška. Umesto toga, uređaj za davanje u obliku olovke za jednokratnu upotrebu dolazi sa napunjenim farmaceutskim sastavom koji se nalazi u rezervoaru unutar uređaja. Jednom kada rezervoar isprazni sastav, ceo uređaj se odbacuje.
[0106] Brojne olovke za višekratnu upotrebu i uređaji za isporuku za autoinjekciju imaju primenu u subkutanom davanju farmaceutskog sastava predmetnog pronalaska. Primeri obuhvataju, ali sigurno nisu ograničeni na AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ olovku (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Švajcarska), HUMALOG MIX 75/25™ olovku, HUMALOG™ olovku, HUMALIN 70/30™ olovku (Eli Lilly i Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II i III (Novo Nordisk, Copenhagen, Danska), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Danska), BD™ olovku (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, i OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Nemačka), kako bi se samo navelo nekoliko.
Primeri uređaja za isporuku olovke za jednokratnu upotrebu koji imaju primenu u subkutanoj isporuci farmaceutskog sastava predmetnog pronalaska uključuju, ali svakako nisu ograničeni na SOLOSTAR™ olovku (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) i KWIKPEN™ (Eli Lilly).
[0107] Pogodno, iznad opisani farmaceutski sastavi za oralnu ili parenteralnu upotrebu se pripremaju u oblike doziranja u jediničnoj dozi koja je pogodna za prilagođavanje doze aktivnih sastojaka. Takvi dozni oblici u jediničnoj dozi obuhvataju, na primer, tablete, pilule, kapsule, injekcije (ampule), supozitorije, itd. Količina prethodno pomenutog antitela sadržana je generalno oko 5 do oko 500 mg po doznom obliku u jediničnoj dozi; posebno u obliku injekcije, poželjno je da se prethodno pomenuto antitelo sadrži u oko 5 do oko 100 mg i u oko 10 do oko 250 mg za druge dozne oblike.
[0108] Pronalazak se odnosi na terapeutske postupke u kojima je antitelo ili fragment antitela iz pronalaska korisni za lečenje hiperholesterolemije povezane sa različitim stanjima koja uključuju hPCSK9. Anti-PCSK9 antitela ili fragmenti antitela prema pronalasku su posebno
2
korisni za lečenje hiperholesterolemije i slično. Kombinovane terapije mogu uključivati anti-PCSK9 antitelo pronalaska sa, na primer, jednim ili više bilo kog agensa koji (1) indukuje ćelijsko osiromašenje sinteze holesterola inhibicijom 3-hidroksi-3-metilglutaril (HMG)-koenzima A ( CoA) reduktaza, kao što su cerivastatin, atorvastatin, simvastatin, pitavastatin, rosuvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin; (2) inhibira unos holesterola i/ili ponovnu apsorpciju žučne kiseline; (3) povećati katabolizam lipoproteina (kao što je niacin); i aktivatori LXR transkripcionog faktora koji igra ulogu u eliminaciji holesterola kao što je 22-hidroksiholesterol ili fiksne kombinacije kao što je ezetimib plus simvastatin; statin sa žučnom smolom (npr., holestiramin, kolestipol, kolesevelam), fiksna kombinacija niacina plus statin (npr., niacin sa lovastatinom); ili sa drugim sredstvima za snižavanje lipida kao što su etil estri omega-3-masnih kiselina (na primer, omacor).
PRIMERI
[0109] Sledeći primeri su izneti tako da stručnjacima sa uobičajenom veštinom u ovoj oblasti pruže kompletno obelodanjivanje i opis kako da naprave i koriste postupke i sastave pronalaska. Uloženi su napori da se osigura tačnost u pogledu korišćenih brojeva, ali treba uzeti u obzir neke eksperimentalne greške i odstupanja. Osim ako nije drugačije naznačeno, molekulska težina je prosečna molekulska masa, temperatura je u stepenima Celzijusa, a pritisak je na ili blizu atmosferskog.
Primer 1: Generisanje humanih antitela na humani PCSK9
[0110] VELOCIMMUNE™ miševi su imunizovani humanim PCSK9, a imuni odgovor na antitela praćen je antigen-specifičnim imunološkim testom korišćenjem seruma dobijenog od ovih miševa. B ćelije koje eksprimiraju anti-hPCSK9 su sakupljene iz slezine imunizovanih miševa za koje se pokazalo da imaju povišene titre anti-hPCSK9 antitela spojene sa ćelijama mijeloma miša da bi se formirali hibridomi. Hibridomi su pregledani i odabrani da identifikuju ćelijske linije koje eksprimiraju hPCSK9-specifična antitela korišćenjem testova kao što je opisano u nastavku. Testovi su identifikovali nekoliko ćelijskih linija koje su proizvele himerična anti-hPCSK9 antitela označena kao H1M300, H1M504, H1M505, H1M500, H1M497, H1M498, H1M494, H1M309, H1M312, H1M499, H1M493, H1M496, H1M503, H1M502, H1M508, H1M495 i H1M492.
[0111] Humana PCSK9-specifična antitela su takođe izolovana direktno iz B ćelija imunizovanih antigenom bez fuzije sa ćelijama mijeloma, kao što je opisano u U.S.
2007/0280945A1. Varijabilni regioni teškog i lakog lanca su klonirani da bi se generisala potpuno humana anti-hPCSK9 antitela označena kao H1H313, H1H314, H1H315, H1H316, H1H317, H1H318, H1H320, H1H321 i H1H334. Ustanovljene su stabilne ćelijske linije CHO koje eksprimiraju rekombinantna antitela koje eksprimiraju ova antitela.
Primer 2. Analiza korišćenja gena
[0112] Da bi se analizirala struktura proizvedenih mAbs, klonirane su i sekvencionirane nukleinske kiseline koje kodiraju varijabilne regione antitela. Predviđene aminokiselinske sekvence varijabilnih regiona su potvrđene N-terminalnim sekvenciranjem aminokiselina. Iz sekvence nukleinske kiseline i predviđene sekvence aminokiselina mAbs, identifikovana je upotreba gena za svaki lanac antitela.
Tabela 1
4
Primer 3. Određivanje afiniteta vezivanja antigena
[0113] Konstante ravnoteže disocijacije (KD) za vezivanje hPCSK9 za mAbs generisane od strane hibridomskih ćelijskih linija opisanih gore su određene površinskom kinetikom u testu površinske plazmonske rezonance biosenzora u realnom vremenu (BIACORE™ T100). Svako antitelo je uhvaćeno brzinom protoka od 4 µl/min tokom 90 sekundi na površini poliklonalnog antitela kozjeg anti mišjeg IgG stvorenog direktnim hemijskim spajanjem sa BIACORE™ čipom da bi se formirala uhvaćena površina antitela. hPCSK9-myc-myc-his (hPCSK9-mmh) u koncentraciji od 50 nM ili 12,5 nM je ubrizgan preko uhvaćenih površina antitela pri protoku od 50 µl/min tokom 300 sekundi, a disocijacija antigen-antitelo je praćena 15 minuta. na 25°C ili 37°C (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 2
[0114] Konstante ravnoteže disocijacije (KD) za vezivanje hPCSK9 za mAbs generisane direktnom izolacijom splenocita određene su površinskom kinetikom u testu površinske plazmonske rezonance biosenzora u realnom vremenu (BIACORE™ T100). Svako odabrano antitelo je uhvaćeno pri protoku od 2 ul/min tokom 6 minuta na površini poliklonskog antitela kozjeg anti-humanog IgG stvorenog direktnim hemijskim spajanjem sa BIACORE™ čipom da bi se formirala uhvaćena površina antitela. Humani PCSK9-mmh u koncentraciji od 50 nM ili 12,5 nM je ubrizgan preko uhvaćene površine antitela pri protoku od 70 ul/min tokom 5 minuta, a disocijacija antigen-antitelo je praćena 15 minuta na 25°C ili 37° C (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 3
[0115] Stopa disocijacije (kd) odabranih mAbs za označene rezus majmune (Macaca mulata) PCSK9 (mmPCSK9; SEQ ID NO:756) (mmPCSK9-mmh) na 25°C je određen kao što je iznad opisano.
Tabela 4
Primer 4. Efekat pH na afinitet vezivanja antigena
[0116] Efekti pH na afinitet vezivanja antigena za potpuno humana anti-hPCSK9 mAbs proizvedena od CHO ćelija su procenjeni kao što je iznad opisano. Testirana mAbs su potpuno ljudske verzije H1H316P („316P“) (HCVR/LCVR SEQ ID NO: 90/92; CDR sekvence SEQ ID NO: 76/78/80 i 84/86/88) i H1M300N ("300N") (HCVR/LCVR SEQ ID NO: 218/226; CDR sekvence SEQ ID NO:220/222/224 i 228/230/232). hPCSK9-mmh je uhvaćen na površini anti-myc mAb ili pri visokoj gustini (oko 35 do 45 rezonantnih jedinica) (RU) ili pri maloj gustini (oko 5 do 14 RU). Svako antitelo, na 50 nM u HBST (pH 7,4 ili pH 5,5) je ubrizgano preko uhvaćene površine hPCSK9 pri brzini protoka od 100 µl/min tokom 1,5 min na 25°C i disocijacija antigen-antitelo je praćena 10 minuta. Kontrola I: anti-hPCSK9 mAb SEQ ID NO:79/101 (WO 2008/063382) (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 5
[0117] Svojstva vezivanja antigena 316P i 300N na pH 7,4 ili pH 5,5 određena su modifikovanim BIACORE™ testom kao što je iznad opisano. Ukratko, mAbs su imobilisana na BIACORE™ CM5 senzorske čipove preko aminskog sprega. Različite koncentracije micmic-his označenog hPCSK9, miš PCSK9 (mPCSK9, SEK ID NO:757), hPCSK9 sa mutacijom tačke pojačanja funkcije (GOF) D374Y (hPCSK9(D374Y)), cinomolgus majmun (Macaca fascicularis) (mfPCSK9, SEQ ID NO:761) (mfPCSK9), pacov (Rattus norvegicus) PCSK9 (rPCSK9, SEQ ID NO:763) i njegovim označenim sirijskim zlatnim hrčkom (Mesocricetus auratus) PCSK9 (maPCSK9, SEQ ID NO:762) (maPCSK9), u rasponu od 11 do 100 nM, ubrizgani su preko površine antitela pri brzini protoka od 100 µl/min tokom 1,5 min i disocijacija antigen-antitelo je praćena u realnom vremenu tokom 5 minuta na bilo 25°C (Tabela 6) ili 37°C (Tabela 7). Kontrola II: anti-hPCSK9 mAbs SEQ ID NO:67/12 (WO 2009/026558). NB: nije primećeno vezivanje pod eksperimentalnim uslovima (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 6. pH efekat na 25°C
Tabela 7. pH efekat na 37°C
Primer 5. Anti-hPCSK9 mAbs vezuje se za hPCSK9 sa tačkastom mutacijom D374Y [0118] Afinitet vezivanja odabranih anti-hPCSK9 mAbs za hPCSK9 sa mutacijom tačke povećanja funkcije (GOF) D374Y (hPCSK9(D374Y)-mmh) je određen kao što je iznad opisano. Svako antitelo je uhvaćeno pri protoku od 40 ul/min tokom 8-30 sekundi na površini poliklonskog antitela kozjeg anti-humanog IgG stvorenog direktnim hemijskim spajanjem sa BIACORE™ čipom da bi se formirala uhvaćena površina antitela. hPCSK9(D374Y)-mmh u različitim koncentracijama od 1,78 nM do 100 nM je ubrizgan preko uhvaćene površine antitela pri protoku od 50 µl/min tokom 5 minuta, a disocijacija hPCSK9(D374Y)-mmh i antitela je praćena min na 25°C. Kontrola III: anti-hPCSK9 mAbs SEQ ID NO:49/23 (WO 2009/026558) (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 8
Primer 6. Specifičnost vezivanja anti-hPCSK9 mAbs
[0119] 316P, 300N i Kontrola I anti-hPCSK9 mAbs su uhvaćeni na aminom spregnutom antihFc CM5 čipu na BIACORE™2000. Označeni (myc-myc-his) ljudski PCSK9, humani
4
PCSK1 (hPCSK1) (SEQ ID NO:759), humani PCSK7 (hPCSK7) (SEQ ID NO:760) ili mišji PCSK9 su ubrizgani (100 nM) preko uhvaćenog mAb površine i ostaviti da se veže na 25°C 5 minuta. Promene u RU su zabeležene. Rezultati: 300N i Kontrola I vezali su se samo za hPCSK9, a 316P je vezao i hPCSK9 i mPCSK9.
[0120] Specifičnosti vezivanja anti-hPCSK9 mAbs određene su pomoću ELISA. Ukratko, anti-hPCSK9 antitelo je obloženo na ploči sa 96 udubljenja. Humani PCSK9-mmh, mPCSK9-mmh, maPCSK9-h, hPCSK1-mmh ili hPCSK7-mmh, na 1,2 nM, dodati su u ploče obložene antitelom i inkubirane na sobnoj temperaturi 1 sat. PCSK protein vezan za ploču je zatim detektovan HRP-konjugovanim anti-His antitelom. Rezultati pokazuju da 316P vezuje PCSK9 čoveka, miša i hrčka, dok 300N i Kontrola I vezuju samo hPCSK9. Nijedno od antihPCSK9 mAbs nije pokazalo značajno vezivanje za hPCSK1 ili hPCSK7.
Primer 7. Unakrsna reaktivnost anti-hPCSK9 mAbs
[0121] Unakrsna reaktivnost anti-hPCSK9 mAbs sa mmPCSK9, mfPCSK9, mPCSK9, maPCSK9 ili rPCSK9 određena je korišćenjem BIACORE™3000. Anti-hPCSK9 mAbs su uhvaćeni na anti-hFc površini stvorenoj direktnim hemijskim spajanjem na BIACORE™ čip. Prečišćeni označeni hPCSK9, hPCSK9 (D374Y), mmPCSK9, mfPCSK9, mPCSK9, maPCSK9 ili rPCSK9, svaki na 1,56 nM do 50 nM, ubrizgan je preko površine antitela na 25°C ili 37°C. Određeno je vezivanje između 316P, 300N, Kontrola I, Kontrola II ili Kontrola III i PCSK9 proteina (KD= pM; T1/2= min).
Tabela 9. 316P mAb
Tabela 10. 300N mAb
Tabela 11. Kontrola I mAb
Tabela 12. Kontrola II mAb
Tabela 13. Kontrola III mAb
Primer 8. Inhibicija vezivanja između hPCSK9 i hLDLR domena
[0122] Sposobnost odabranih anti-hPCSK9 mAbs da blokiraju vezivanje hPCSK9 za humani LDLR vanćelijski domen pune dužine (hLDLR-ecto SEQ ID NO:758), hLDLR EGF-A domen (aminokiseline 313-355 od SEQ ID NO:758), ili hLDLR EGF-AB domeni (aminokiseline 314-393 SEQ ID NO:758) (LDLR Genbank broj NM_000527) procenjeni su korišćenjem BIACORE™ 3000. Ukratko, protein hLDLR-ecto, EGF-A-hFc ili EGF-AB-hFc je spojen sa aminom na CM5 čipu da bi se stvorila površina receptora ili fragmenta receptora. Odabrana anti-hPCSK9 mAbs, na 62,5 nM (2,5 puta višak u odnosu na antigen), prethodno su pomešana sa 25 nM hPCSK9-mmh, nakon čega je usledila inkubacija od 40 minuta na 25°C da bi se omogućilo vezivanje antitelo-antigen da dostigne ravnotežu da bi se formirao ekvilibrijum. Uravnoteženi rastvori su ubrizgani preko površine receptora ili fragmenta receptora pri 2 µl/min tokom 40 minuta na 25°C. Određene su promene u RU usled vezivanja anti-hPCSK9 mAbs za hLDLR-ekto, EGF-A-hFc ili EGF-AB-hFc. Rezultati pokazuju da su H1H316P i H1M300N blokirali vezivanje hPCSK9-mmh za hLDLR-ecto, hLDLR EGF-A domen i hLDLR EGF-AB domene; H1H320P je blokirao vezivanje hPCSK9-mmh za hLDLR-ecto i hLDLR EGF-A domen; i H1H321P blokirali su vezivanje hPCSK9-mmh za hLDLR EGF-A domen.
[0123] Sposobnost mAbs da blokiraju vezivanje hPCSK9 za hLDLR-ekto, hLDLR EGF-A domen ili hLDLR EGF-AB domene takođe je procenjena imunotestom zasnovanim na ELISA testu. Ukratko, hLDLR-ecto, hLDLR EGF-A-hFc ili hLDLR EGF-AB-hFc, svaki u količini od 2 µg/ml, obloženi su na ploči sa 96 udubljenja u PBS puferu preko noći na 4°C, a nespecifična mesta vezivanja su blokirana sa BSA. Ova ploča je korišćena za merenje slobodnog hPCSK9-mmh u PCSK9-mmh rastvoru prethodno ekvilibrisanom sa različitim koncentracijama anti-hPCSK9 mAbs. Konstantna količina hPCSK9-mmh (500 pM) je prethodno pomešana sa različitim količinama antitela, u rasponu od 0 do -50 nM u serijskim razblaženjima, nakon čega je usledila inkubacija od 1 sata na sobnoj temperaturi (RT) da bi
4
se omogućilo vezivanje antitela i antigena za dostići ravnotežu. Uravnoteženi rastvori uzoraka su prebačeni na ploče obložene receptorima ili fragmentima receptora. Posle 1 sata vezivanja, ploče su isprane i vezani hPCSK9-mmh detektovani korišćenjem HRP konjugovanog anti-myc antitela. IC50vrednosti (u pM) su određene kao količina antitela potrebna za postizanje 50% smanjenja hPCSK9-mmh vezanog za receptor obložen pločicom ili fragment receptora. Rezultati pokazuju da specifična mAbs funkcionalno blokiraju PCSK9 od vezivanja tri receptora i pri neutralnom pH (7,2) i kiselom pH (5,5).
Tabela 14
[0124] Sposobnost mAbs da blokiraju hPCSK9 GOF mutantni hPCSK9(D374Y)-mmh vezivanje za hLDLR EGF-A domen ili hLDLR EGF-AB domen (IC50vrednosti u pM) takođe je procenjena pomoću ELISA baziranog imunoeseja opisanog iznad korišćenjem konstantne količine od 0,05 nM hPCSK9(D374Y)-mmh.
Tabela 15
[0125] Sposobnost mAbs-a da blokiraju vezivanje mmPCSK9 ili mPCSK9 za hLDLR-ekto domen, hLDLR EGF-A domen ili hLDLR EGF-AB domen (IC50vrednosti u pM) procenjena je na neutralnom pH (7,2) imunotestom zasnovanom na ELISA opisati iznad koristeći konstantnu količinu od 1 nM mmh-označenog mmPCSK9 ili 1 nM mPCSK9.
Tabela 16
[0126] Sposobnost mAbs da blokiraju vezivanje hPCSK9, mmPCSK9, rPCSK9, maPCSK9, mfPCSK9 ili mPCSK9 za hLDLR EGF-A domen (IC50 vrednosti u pM) procenjena je pri neutralnom pH (7,2) (Tabela 17) kiselom pH (Tabela 18) sa iznad opisanim imunološkim testom zasnovanim na ELISA koristeći konstantnu količinu od 0,5 nM hPCSK9-mmh, 1 nM mmPCSK9-mmh, 1 nM rPCSK9-mmh, 1 nM maPCSK9-h, 0,3 nM PC9-mmf od 0,3 nM od mPCSK9-mmh. ili 1 nM mPCSK9-mmh.
Tabela 17
Tabela 18
4
[0127] Takođe je određena sposobnost 316P i Kontrola I da blokiraju vezivanje hPCSK9 za hLDLR. Ukratko, bilo rekombinantni hLDLR ili hLDLR-EGFA-mFc je imobilisan na BIACORE™ CM5 čipove preko aminskog spajanja. Mešavina antigen-antitelo od 100 nM hPCSK9-mmh i 316P, kontrolna I mAb, ili ne-hPCSK9 specifična mAb (svako na 250 nM) je inkubirana na sobnoj temperaturi 1 sat, a zatim ubrizgana preko površine hLDLR ili hLDLR-EGFA pri brzini protoka od 10 µl/min tokom 15 min na 25°C. Zabeležene su promene u RU usled vezivanja između slobodnog hPCSK9-mmh u smeši za hLDLR ili hLDLR-EGFA. Vezivanje hPCSK9 za hLDLR ili hLDLR-EGFA je potpuno blokirano 316P i 300N, ali ne i Kontrolnim I mAb.
Primer 9. Mapiranje epitopa
[0128] Da bi se odredila specifičnost vezivanja epitopa, generisana su tri himerna PCSK9-mmh proteina u kojima su specifični humani PCSK9 domeni supstituisani sa mišjim PCSK9 domenima. Himerni protein #1 sastoji se od mišjeg PCSK9 pro-domena (aminokiselinski ostaci 1-155 SEQ ID NO:757) praćenog humanim PCSK9 katalitičkim domenom (ostaci 153-425 SEQ ID NO:755) i mišjim PCSK9 C-terminalni domen (ostaci 429-694 SEQ ID NO:757) (mPro-hCat-mC-term-mmh). Himerni protein #2 sastoji se od humanog PCSK9 pro-domena (ostaci 1-152 SEQ ID NO:755) praćenog mišjim PCSK9 katalitičkim domenom (ostaci 156-428 SEQ ID NO:757) i mišjim PCSK9 C-terminalom (hPro-mCat-mC-termmmh). Himerni protein #3 sastoji se od mišjeg PCSK9 pro-domena i mišjeg PCSK9 katalitičkog domena praćenog humanim PCSK9 C-terminalnim domenom (ostaci 426-692 SEQ ID NO:755) (mPro-mCat-hC-term-mmh). Pored toga, generisan je hPCSK9 sa tačkastom mutacijom D374Y (hPCSK9(D374Y)-mmh).
[0129] Specifičnost vezivanja mAbs za testiranje proteina hPCSK9-mmh, PCSK9-mmh miša, himernih proteina #1, #2 i #3, i hPCSK9(D374Y)-mmh testirani su na sledeći način: mAbs su obložena na ploči sa 96 udubljenja preko noći na 4°C, a zatim je svaki test protein (1.2 nM) dodat na ploču. Posle 1 sata vezivanja na sobnoj temperaturi, ploča je isprana i vezani test protein je detektovan korišćenjem HRP-konjugovanog anti-mic poliklonskog antitela (++ = OD>1,0; = OD 0,4 - 1,0; - = OD < 0,4).
4
Tabela 19
[0130] Specifičnost vezivanja 316P, 300N i kontrolnih anti-hPCSK9 mAbs za hPCSK9-mmh, mPCSK9-mmh, mmPCSK9-mmh, mfPCSK9-mmh, rPCSK9-mmh, himerne proteine #1, #2 i #3 i hPCSK9(D374Y)-mmh su testirani kao što je iznad opisano osim što je koncentracija proteina 1,7 nM (- = OD < 0,7; = OD 0,7 - 1,5; + = OD > 1,5).
Tabela 20
4
[0131] Slični rezultati za odabrana mAbs dobijeni su BIACORE™ testom vezivanja.
Ukratko, 316P, 300N ili Kontrola I mAb je uhvaćen na aminom spregnutom anti-hFc CM5 čipu i 100 nM svakog proteina je ubrizgano preko površine uhvaćene mAb. Određene su promene u RU usled vezivanja svakog proteina za površinu mAb.
Tabela 21
[0132] Da bi se dalje procenila specifičnost vezivanja 316P, koji unakrsno reaguje sa mPCSK9-mmh, razvijen je ELISA test unakrsne konkurencije da bi se odredila specifičnost domena vezivanja. Ukratko, mAbs specifična za himerni protein #1, #2 ili #3, prvo su obložena na ploči sa 96 udubljenja preko noći pri 1 µg/ml. Humani PCSK9-mmh (2 µg/ml) je zatim dodat u svaki bunar nakon čega je usledila inkubacija od 1 sata na sobnoj temperaturi.
316P (1 µg/ml) je dodat i inkubiran još jedan sat na RT.316P vezan za ploču je detektovan korišćenjem HRP-konjugovanog anti-hFc poliklonskog antitela. Iako na vezivanje 316P za
4
hPCSK9-mmh nije uticalo prisustvo mAbs specifičnih za himerni protein #2 ili himerni protein #3, vezivanje 316P za hPCSK9-mmh je u velikoj meri smanjeno prisustvom antitela specifičnog za himerni protein #1.
Primer 10. Procena profila vezivanja antigena zasnovana na BIACORE™
[0133] Profili vezivanja antitela su takođe uspostavljeni za 316P, 300N, Kontrola I, II i III mAbs korišćenjem BIACORE™1000. Ukratko, hPCSK9-mmh je uhvaćen na anti-myc površini. Prvo anti-hPCSK9 mAb (50 µg/ml) je ubrizgano preko PCSK9-vezane površine tokom 10 minuta, pri brzini protoka od 10 µl/min na 25°C. Drugo anti-hPCSK9 mAb (50 µg/ml) je zatim ubrizgano preko prve površine vezane za mAb tokom 10 minuta, pri brzini protoka od 10 µl/min na 25°C. Izmerena je sposobnost prvog mAb da blokira vezivanje drugog mAb i izražena je kao procenat inhibicije.
Tabela 22
Primer 11. Povećanje uzimanja LDL antitela protiv hPCSK9
[0134] Sposobnost anti-hPCSK9 mAbs da povećaju unos LDL in vitro je određena korišćenjem ćelijske linije humanog hepatocelularnog karcinoma jetre (HepG2). HepG2 ćelije su zasejane na ploče sa 96 udubljenja pri 9 x 10<4>ćelija/bunariću u kompletnom medijumu DMEM i inkubirane na 37°C, 5% CO2, tokom 6 sati da bi se formirali monoslojevi HepG2. Humani PCSK9-mmh, na 50 nM u medijumu sa nedostatkom lipoproteina (LPDS), i test mAb su dodati u različitim koncentracijama od 500 nM do 0,98 nM u medijumu LPDS. Podaci su izraženi kao IC50vrednosti za svaki eksperiment (IC50= koncentracija antitela pri kojoj se povećava unos LDL-a za 50%). Pored toga, eksperiment je takođe pokazao da su i 316P i 300N bili u stanju da potpuno preokrenu inhibitorni efekat hPCSK9 na unos LDL-a, dok su Kontrola I mAb ili H1M508 anti-hPCSK9 mAb preokrenula inhibitorni efekat za oko 50%.
4
Tabela 23
[0135] Sposobnost anti-hPCSK9 mAbs da preokrenu inhibitorni efekat na unos LDL proteina PCSK9 iz različitih vrsta sisara takođe je testirana u ćelijskoj liniji HepG2 kao što je iznad opisano. Ukratko, HepG2 ćelije su inkubirane preko noći sa serijskim razblaženjima antitela u LPDS medijumu (počevši sa 500 nM) i 50 nM hPCSK9-mmh, mfPCSK9-mmh, mPCSK9-mmh, rPCSK9-mmh ili maPCSK9-h. HepG2 ćelije su takođe inkubirane preko noći sa serijskim razblaženjima antitela u LPDS (počevši sa 50 nM) i 1 nM hPCSK9 (D374Y). Kao što je prikazano u Tabeli 24, dok je 316P bio u stanju da potpuno preokrene inhibitorni efekat na LDL od strane svih testiranih PCSK9 proteina, 300N je bio u stanju da preokrene samo inhibitorni efekat na LDL unos od strane hPCSK9, hPCSK9(D374Y) i mfPCSK9. Vrednosti su izražene kao nM IC50.
Tabela 24
Primer 12. Neutralizacija biološkog efekta hPCSK9 in vivo
[0136] Da bi se procenio biološki efekat neutralisanja PCSK9, hPCSK9 je prekomerno eksprimiran kod C57BL/6 miševa hidrodinamičkom dostavom (HDD) DNK konstrukata koji kodiraju hPCSK9-mmh pune dužine. 4 miša (C57BL/6) je ubrizgan prazan vektor/fiziološki rastvor (kontrola), a 16 miševa je ubrizgano sa 50 µg hPCSK9-mmh-DNK/fiziološki rastvor mešavine u repnu venu koja je jednaka 10% njihove telesne mase. Dana 7 nakon HDD, isporuka hPCSK9 je dovela do 1,6-strukog povećanja ukupnog holesterola, 3,4-strukog povećanja LDL-holesterola (LDL-C) i 1,9-strukog povećanja ne-HDL holesterola (u odnosu na kontrolu). Nivoi hPCSK9 u serumu 7. dana bili su veći od 1 µg/ml, kao što je procenjeno kvantitativnom ELISA testom.
[0137] Primena H1M300N 6. dana nakon HDD u 3 eksperimentalne grupe (1, 5 ili 10 mg/kg) (n=4 po grupi) putem intraperitonealne (i.p.) injekcije rezultirala je značajnim smanjenjem nivoa holesterola u serumu.18 sati nakon primene, ukupni holesterol je smanjen za 9,8%, 26,3% i 26,8%, LDL-C je smanjen za 5,1%, 52,3% i 56,7%, a ne-HDL holesterol je smanjen za 7,4%, 33,8% i 28,6 % u grupama tretiranim sa 1, 5 ili 10 mg/kg H1M300N, respektivno.
Primer 13. Ispitivanje farmakokinetike i hemije seruma kod majmuna
[0138] Farmakokinetičko (PK) ispitivanje je sprovedena na naivnim mužjacima cinomolgus majmuna (Macaca fascicularis) sa rasponom telesne mase između 5-7 kg i starosti između 3-5 godina.
[0139] Grupni zadaci. Majmuni su raspoređeni u 5 grupa za tretman: Grupa za tretman 1 (n=3) je primila kontrolni pufer (10 mM natrijum fosfat, pH 6, 1 ml/kg); Grupa za tretman 2 (n=3) je primila 1 ml/kg 316P (5 mg/ml); Grupa za tretman 3 (n=3) je primila 1 ml/kg 300N (5 mg/ml); Grupa za tretman 4 (n=3) je primila 1 ml/kg 316P (15 mg/ml); i Grupa za tretman 5 (n=3) primila je 1 ml/kg 300N (15 mg/ml). Svi tretmani su davani IV bolusom nakon čega je usledilo ispiranje od 1 ml fiziološkog rastvora. Ukupna zapremina doze (ml) je izračunata na osnovu poslednje telesne mase (svaka životinja je izmerena dva puta tokom aklimatizacije i jednom nedeljno tokom ispitivanja). Pojedinačna doza test mAb ili pufer kontrole je primenjena 1. dana.
[0140] Briga o životinjama. Životinje su bile smeštene u okruženju koje je praćeno temperaturom i vlažnošću. Ciljani opseg temperature i relativne vlažnosti bio je između 18-29°C i 30-70%, respektivno. Automatski sistem osvetljenja je obezbedio 12-časovni dnevni ciklus. Tamni ciklus bi mogao biti prekinut za aktivnosti vezane za učenje ili ustanovu.
Životinje su bile pojedinačno smeštene u kavezima koji su u skladu sa Zakonom o dobrobiti životinja i preporukama navedenim u Vodiču za negu i upotrebu laboratorijskih životinja
1
(Nacionalni istraživački savet 1996).
[0141] Dijeta i hranjenje. Životinje su hranjene dva puta dnevno prema SNBL USA SOP. Životinje su postile kada su to zahtevale specifične procedure (npr., pre vađenja krvi za hemiju seruma, prikupljanja urina ili kada se izvode procedure koje uključuju sedaciju). Ishrana je rutinski analizirana na kontaminante i utvrđeno je da je u skladu sa specifikacijama proizvođača.
[0142] Eksperimentalni dizajn. Odgovarajući broj životinja je odabran iz SNBL USA stoke. Životinje su pregledane na zdravlje od strane veterinarskog osoblja i podvrgnute su hemiji seruma, hematologiji i koagulacionom skriningu. U ispitivanju je dodeljeno 16 muškaraca, za koje je potvrđeno da su zdravi.15 mužjaka je dodeljeno određenim ispitivanim grupama, a preostala životinja je bila dostupna kao rezervna. Stratifikovana šema nasumičnog postavljanja koja uključuje nivo holesterola u serumu (zasnovana na proseku dva izvlačenja u aklimatizaciji) je korišćena za dodeljivanje životinja u grupe za proučavanje.
[0143] Period aklimatizacije. Prethodno stavljene u karantin životinje su aklimatizovane u prostoriji za proučavanje najmanje 14 dana pre početka doziranja. Podaci o fazi aklimatizacije su prikupljeni od svih životinja, uključujući rezervne. Sve životinje su procenjene na abnormalnosti u ponašanju koje bi mogle uticati na performanse tokom ispitivanja. Rezervna životinja je vraćena na stoku nakon prvog dana.
[0144] Sakupljanje krvi. Krv je sakupljena venepunkcijom iz periferne vene od uzdržanih, svesnih životinja. Kad god je to bilo moguće, krv je sakupljena jednim potezom, a zatim podeljena na odgovarajući način.
[0145] PK ispitivanje: Uzorci krvi (1,5 ml) su sakupljeni pre doze, 2 min, 15, min, 30 min, 1 sat, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h, 24 h, a zatim jednom na svaka 24 h u separatoru seruma cevi (SST). Serum za skladištenje uzoraka se prenosi u 2 bočice i čuva na -60°C ili niže.
[0146] Uzorci seruma su analizirani korišćenjem optimizovane procedure ELISA (enzimski imunosorbantni test). Ukratko, mikrotitarska ploča je prvo obložena sa hPCSK9-mmh. Test mAb 316P ili 300N je zatim uhvaćen na hPCSK9-mmh ploču. Uhvaćeni 316P ili 300N je detektovan korišćenjem biotinilovanog mišjeg anti-hlgG4 praćenog vezivanjem za NeutrAvidin-HRP. Kao standard su korišćene različite koncentracije 316P ili 300N, u rasponu od 100 do 1,56 ng/ml. Kao nulti standard (0 ng/ml) korišćen je jedan procenat
2
seruma majmuna (matrica za ispitivanje) u odsustvu 316P ili 300N. Rezultati, prikazani na Slici 2, ukazuju na dozno-zavisno povećanje nivoa 316P i 300N u serumu. PK parametri su analizirani korišćenjem WinNonlin softvera (nekompartmentalna analiza, model 201-IV bolus davanja).
Tabela 25
[0147] Hemija seruma. Uzorci krvi su sakupljeni pre doze, 12 sati, 48 sati, a zatim jednom na svakih 48 sati, za kliničko-hemijsku analizu, posebno lipidnih profila (tj. holesterol, LDL-C, HDL-C, trigliceridi). Sa izuzetkom uzorka od 12 sati posle doze, sve životinje su bile podvrgnute postu preko noći pre uzimanja uzorka. Zapremina uzorka bila je približno 1 ml. Hemijski parametri su određivani korišćenjem Olympus automatskog analizatora. Izmereni parametri (Xybion kod): Albumin (ALB); Alkalna fosfataza (ALP); Alanin aminotransferaza (ALT); Aspartat transaminaza (AST); Ukupan bilirubin (TBIL); Kalcijum (Ca); Ukupni holesterol (TCho); Kreatin kinaza (CK); Kreatinin (CRN); Gama glutamiltransaminaza (GGT); Glukoza (GLU); Neorganski fosfor (IP); Ukupno proteina (TP); Trigliceridi (TRIG); Azot uree u krvi (BUN); Globulin (GLOB); Odnos albumin/globulin (A/G); Hlorid (CI); Kalijum (K); Natrijum (Na); LDL i HDL holesterol. Preostali serum je čuvan na -20°C ili niže i odložen je ne pre nedelju dana nakon analize.
[0148] Rezultati od uzoraka do 105. dana nakon vremenske tačke doze prikazani su na Sl.3-7. Došlo je do smanjenja ukupnog holesterola i LDL-C kod životinja koje su primale 316P i 300N, bez obzira na dozu, u roku od 24 sata od prve doze. Ukupni holesterol u serumu se brzo i snažno smanjuje (~ 35%, Sl.3). Uočeno je snažno smanjenje od ~80% LDL-C (Sl.4-5) do 6. dana. Kod životinja koje su primile dozu od 15 mg/kg od 300N, smanjenje ukupnog holesterola (~10-15% smanjenje) i LDL-C (~40% smanjenje) nastavilo se do najmanje 80. dana ispitivanja. Pored toga, HDL-C je bio povišen kod životinja koje su primale 316P u dozi od 15 mg/kg (Sl.6). Životinje koje su primile veću dozu (15 mg/kg) bilo 316P ili 300N takođe su pokazale smanjenje triglicerida tokom studije (Sl.7). 316P je pokazao maksimalnu supresiju nivoa LDL-C do 80% u odnosu na početnu liniju. Dužina ove supresije zavisila je od doze sa najmanje 60% supresije (u odnosu na početne nivoe LDL-C) koja je trajala približno 18 dana (doza od 5 mg/kg) i približno 45 dana (doza od 15 mg/kg).300N pokazuje različit farmakodinamički profil od 316P. Supresija LDL-C za 300N se održavala mnogo duži vremenski period u uporedivim dozama (50% supresija LDL-C tokom 28 dana nakon doze od 5 mg/kg i 50% supresija LDL-C tokom približno 90 dana nakon 15 mg /kg doze). Bilo je malo ili nimalo merljivih promena u funkciji jetre kao što je utvrđeno merenjima ALT i AST. Sve životinje koje su primile anti-PCSK9 antitelo u studiji su pokazale brzu supresiju LDL-C i ukupnog holesterola.
[0149] Sličan efekat snižavanja LDL-C od 316P i 300N takođe je primećen kod cinomolgoznih majmuna koji su primili jednokratnu potkožnu (SC) primenu ili 5 mg/kg 316P ili 5 mg/kg 300N (Sl.8). I 316P i 300N dramatično su potisnuli nivoe LDL-C i održavali efekat snižavanja LDL-C približno 15 i 30 dana, respektivno (Sl.8). Čini se da farmakodinamički efekat (približno 40% supresije LDL-C) približno korelira sa funkcionalnim nivoima antitela u serumu majmuna (Sl.9). Kako se nivoi antitela smanjuju ispod 10 µg/ml, izgleda da se supresija LDL-C takođe smanjuje. Pored toga, 300N je pokazao znatno duži polu-raspad u cirkulaciji od 316P i stoga duže primećeno supresiju LDL-C.
Tabela 26
Primer 14. Slabljenje degradacije LDL receptora anti-hPCSK9 antitelima
[0150] Da bi se procenio biološki efekat PCSK9 na nivoe LDL receptora u jetri i naknadni efekti na nivoe LDL-C u serumu, hPCSK9 je davan intravenskom injekcijom miševima koji eksprimiraju hPCSK9, ali ne i mPCSK9 (PCSK9<hu/hu>miševi).
Konkretno, PCSK9<hu/hu>miševima je ubrizgan PBS (kontrola) ili 1,2 mg/kg hPCSK9-mmh preko repne vene. Šest sati nakon isporuke hPCSK9, primećeno je 1,4-struko povećanje (u odnosu na početni nivo) ukupnog holesterola i 2,3-struko povećanje LDL-C) u serumu.
Analiza nivoa hepatičnog LDL receptora u odvojenoj kohorti (n=3) životinja 4 sata nakon
4
primene hPCSK9 otkrila je značajno smanjenje detektabilnog LDL receptora u homogenatima jetre.
[0151] Da bi se procenio biološki efekat anti-hPCSK9 na nivoe jetrenih LDL receptora i naknadnih efekata na nivoe LDL-C u serumu, 316P i ne-hPCSK9 specifična mAb su davani PCSK9<hu/hu>miševima u ekvivalentnoj dozi (5 mg/kg i.p.) 20 sati pre iznad opisane injekcije proteina hPCSK9-mmh. Četiri sata nakon primene hPCSK9, miševi su žrtvovani i ukupno je osam tkiva (jetra, mozak, pluća, bubrezi, srce, ileum, nadbubrežna žlezda i pankreas) sakupljeno i nivoi LDL receptora su određeni Vestern blotom. Promene u nivou LDL receptora primećene su samo u jetri. U poređenju sa kontrolnom dozom PBS, primena 316P je značajno blokirala PCSK9 posredovana povećanja ukupnog holesterola i LDL holesterola (LDL-C = 2,49 mg/dl na početku i 3,1 mg/dl 6 sati nakon PCSK9; povećanje od 25% u poređenju sa 135% kod vozila). Prethodna primena ne-hPCSK9 specifičnog mAb blokiranog LDL-C povećava se za približno 27% od samog PBS (LDL-C = 4,1 mg/dl u poređenju sa PBS 5,6 mg/dl). Analiza nivoa LDL receptora u odvojenoj kohorti miševa (n=3 po grupi) otkrila je značajno smanjenje nivoa LDL receptora pri administraciji PCSK9, koji je blokiran 316P, ali ne i ne-hPCSK9 specifičnim mAb (Sl.10).
[0152] Efekat različitih doza 316P je takođe procenjen kod PCSK9<hu/hu>miševa sa povišenim nivoima LDL-C i povišenim nivoima hPCSK9. PCSK9<hulhu>miševi su prvo stavljeni na ishranu sa visokim sadržajem ugljenih hidrata tokom 8 nedelja, što je rezultiralo ~dvostrukim povećanjem nivoa LDL-C i hPCSK9. Miševima su davani ili 316P ili ne-hPCSK9 specifična mAb, svaki u dozi od 1 mg/kg, 5 mg/kg ili 10 mg/kg. Serumi su sakupljeni 24 sata kasnije i analizirani su nivoi LDL-C.316P je bio efikasan u smanjenju nivoa LDL-C na način koji zavisi od doze (Sl.11). Pored toga, 316P primenjen u dozi od 10 mg/kg, brzo je smanjio nivoe LDL-C na prvobitne vrednosti (pre dijete) u roku od 24 sata (podaci nisu prikazani).
Primer 15. Mišije PK ispitivanje
[0153] PK ispitivanje je sprovedeno na 6 nedelja starim C57BL/6 miševima i 11-15 nedelja starim hPCSK9 heterozigotnim miševima. Jedna injekcija Kontrole I, 316P ili 300N, svaka od 10 mg/kg, je primenjena SC. Krvarenje u serumu je mereno za nivoe hlgG u 0 sati (pre krvarenja), 6 sati, 1, 3, 6, 10, 14, 21, 28, 35, 42 i 56, za ukupno 12 vremenskih tačaka, koristeći anti-hFc hvatanje i anti-hFc detekcija sendvič ELISA (Sl.12 i 13). Sva mAb su postigla svoj Tmaxza otprilike 3 dana sa odgovarajućim Cmaxnivoima od približno 47-115 µg/ml za C57BL/6 miševe i 55-196 µg/ml za hPCSK9 heterozigotne miševe. Dana 56, nivoi kontrolnih I mAb su bili oko 12 µg/ml, a nivoi 300N su bili oko 11 µg/ml, dok su nivoi 316P bili oko 0,02 µg/ml kod C57BL/6 miševa. Dana 56 kod hPCSK9 heterozigotnih miševa, nivoi Kontrole I mAb bili su oko 29 µg/ml, dok su nivoi 300N i 316P bili ispod kvantifikovane granice (BQL) od 0,02 µg/ml.
Primer 16. Vezivanje antitela na hPCSK9 za mutant/varijantu hPCSK9
[0154] Da bi se dalje procenilo vezivanje između hPCSK9 i anti-hPCSK9 mAbs, generisana je 21 varijanta proteina hPCSK9 u kojima je svaka varijanta sadržala mutaciju u jednoj tački i dve varijante proteina hPCSK9 od kojih je svaki sadržao dvostruku mutaciju. Svako odabrano antitelo je uhvaćeno na F(ab')2 anti-hlgG površini stvorenoj direktnim hemijskim spajanjem na BIACORE™ čip da bi se formirala uhvaćena površina antitela. Svaka mmh označena varijanta hPCSK9 u različitim koncentracijama od 100 nM do 25 nM je zatim ubrizgana preko uhvaćene površine antitela pri protoku od 60 µl/min tokom 240 sekundi, a disocijacija varijante hPCSK9 i antitela je praćena u realnom vremenu tokom 20 minuta na 25°C. nb: nije primećeno vezivanje u ovim eksperimentalnim uslovima (KD=M x10<-9>; T1/2= min; WT = divlji tip).
Tabela 27
[0155] Rezultati pokazuju da kada je ostatak D238 mutiran, afinitet vezivanja 316P za hPCSK9 je smanjen >400 puta, sa KDod 1 x 10<-9>M na 410 x 10<-9>M; i T1/2skraćen oko 30 puta, sa 37 na 1 minut, što ukazuje da 316P vezuje epitop na hPCSK9 koji sadrži D238 od hPCSK9 (SEQ ID NO:755). Pored toga, BIACORE™ testovi pokazuju da su afinitet vezivanja 316P i T1/2smanjeni oko 5 do 10 puta kada je mutiran ostatak na 153, 159 ili 343. Konkretno, KDje smanjen sa oko 1 x 10<-9>M na oko 5 – 8 x10<-9>M kada je bilo koji od S153, E159 ili D343 mutiran; dok je T1/2smanjen sa oko 37 min na oko 4 - 6 minuta.
[0156] Vezivanje 300N za hPCSK9 je smanjeno oko 50 puta kada je ostatak na poziciji 366 mutiran, što je rezultiralo smanjenim KDod oko 0,7 x 10<-9>M na oko 36 x 10<-9>M i kraćim T1/2sa oko 120 do 2 minuta. Ovi rezultati pokazuju da 300N vezuje epitop na hPCSK9 koji sadrži E366 od hPCSK9 (SEQ ID NO:755). Pored toga, BIACORE™ testovi pokazuju da su afinitet vezivanja 300N i T1/2smanjeni između 2- >10 puta kada je mutiran ostatak na 147 ili 380. Konkretno, KDje smanjen sa oko 0,69 x 10<-9>M na oko 2 – 9 x10<-9>M kada je bilo koji od S147 ili V380 mutiran; dok je T1/2skratio sa oko 120 minuta na oko 24 - 66 minuta. U poređenju sa 316P, vezivanje 300N za hPCSK9 nije smanjeno mutacijom na ostatku 238.
[0157] Nasuprot tome, Kontrola I antitelo nije pokazalo izmenjeni afinitet vezivanja ili T1/2kao odgovor na bilo koju od testiranih pozicionih mutacija; Kontrola II antitelo je pokazalo 40 puta smanjen afinitet kada je ostatak 215 mutiran (R215E) (od ~0,1x10<-9>do ~4,5x10<-9>), a T1/2je bio oko 27 puta kraći (od ~333 do 12 min ); dok je Kontrola III antitelo pokazalo smanjeni afinitet kada je ostatak 237 mutiran (KDse smanjio sa ~0,6x10<-9>na ~5,9 x10<-9>, a T1/2se smanjio sa ~481 na -43 minuta).
[0158] Specifičnost vezivanja 316P, 300N i kontrolnih anti-hPCSK9 mAbs za hPCSK9 varijante je testirana korišćenjem imunoeseja zasnovanog na ELISA testu. Anti-PCSK9 mAbs su obložene na ploči sa 96 udubljenja preko noći na 4°C. Svaka mmh-označena varijanta hPCSK9 u supernatantima lizata CHO-k1 prolazne transfekcije dodata je ploči obloženoj antitelom u različitim koncentracijama u rasponu od 0 do 5 nM. Posle 1 sata vezivanja na sobnoj temperaturi, ploča je isprana i vezana varijanta hPCSK9 je detektovana korišćenjem HRP-konjugovanog anti-mic poliklonskog antitela (- = OD < 0,7; = OD 0,7 -1,5; + = OD > 1,5).
Tabela 28
Primer 17. Efekat 316P na normolipemične i hiperlipemične hrčke
[0159] Sposobnost anti-PCSK9 mAb 316P da smanji LDL-C u serumu testirana je na normolipemičnih ili hiperlipemičnih zlatnih sirijskih hrčaka (Mesocricetus auratus). Muškim sirijskim hrčcima, starosti 6-8 nedelja, mase između 80-100 grama, dozvoljeno je da se aklimatiziraju u periodu od 7 dana pre ulaska u ispitivanje. Sve životinje su stavljene na standardnu ishranu ili hiperlipemijsku ishranu sa dodatkom 0,1% holesterola i 10% kokosovog ulja. 316P mAb je isporučen hrčcima jednom subkutanom injekcijom u dozama od 1, 3 ili 10 mg/kg za normolipemične hrčke i u dozama od 3, 10 ili 30 mg/kg za hiperlipemične hrčke. Uzorci seruma su uzeti iz svih grupa 24 sata i 7, 14 i 22 dana nakon injekcije, u to vreme su procenjeni nivoi lipida u serumu i upoređeni sa osnovnim nivoima uzetim 7 dana pre davanja mAbs. Cirkulišući ukupni holesterol i LDL-C kod normolipemičnih hrčaka su značajno smanjeni na način koji zavisi od doze u poređenju sa injekcijom sredstva za prenošenje. Kao što je prikazano na Sl.14, primena 316P je efikasno smanjila nivoe LDL-C za do 60% sedam dana nakon injekcije pri najvišoj testiranoj dozi (10 mg/kg). Sličan efekat smanjenja holesterola 316P nije primećen kod hiperlipemičnih hrčaka.
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
21
21
21
21
21
21
21
22
22
22
22
22
22
22
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
24
24
24
24
24
24
24
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
2
21
22
2
��
2
2
�
2
�
2
21
22
�

Claims (13)

Patentni zahtevi
1. Humano antitelo ili fragment humanog antitela koji se vezuje za antigen koji specifično vezuje humanu proprotein konvertazu subtilizin/keksin tipa 9 (hPCSK9) koji sadrži CDR1 (HCDR1) domen teškog lanca SEQ ID NO: 76, teški lanac CDR2 (HCDR2) domena SEQ ID NO: 78, teški lanac CDR3 (HCDR3) domena SEQ ID NO: 80, laki lanac CDR1 (LCDR1) domena SEQ ID NO: 84, laki lanac CDR2 (LCDR2) domena SEQ ID NO: 86 i laki lanac CDR3 (LCDR3) domena SEQ ID NO: 88, pri čemu antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen blokira vezivanje hPCSK9 za humani receptor lipoproteina niske gustine (hLDLR)-ekto domen, hLDLR EGF-A domen i hLDLR EGF-AB domen.
2. Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema patentnom zahtevu 1, gde varijabilni region teškog lanca (HCVR) ima najmanje 90% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 90 i/ili varijabilni region lakog lanca (LCVR) ima najmanje 90% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 92.
3. Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema patentnom zahtevu 2, gde HCVR ima najmanje 95% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 90 i/ili LCVR ima najmanje 95% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 92.
4. Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema patentnom zahtevu 3, gde HCVR ima najmanje 98% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 90 i/ili LCVR ima najmanje 98% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 92.
5. Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema patentnom zahtevu 4, gde HCVR ima najmanje 99% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 90 i/ili LCVR ima najmanje 99% identičnost sekvence sa SEQ ID NO: 92.
6. Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva 2-5, pri čemu se pozicije ostataka koje nisu identične razlikuju konzervativnim supstitucijama aminokiselina.
7. Antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, koje je IgG1 ili IgG4.
2 4
8. Izolovani molekul nukleinske kiseline koji kodira antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, ili antitelo prema patentnom zahtevu 7.
9. Ekspresioni vektor koji sadrži molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 8.
10. Postupak za proizvodnju anti-humanog PCSK9 antitela ili fragmenta antitela koji se vezuje za antigen koji obuhvata korake uvođenja vektora ekspresije prema patentnom zahtevu 9 u izolovanu ćeliju domaćina, uzgoj ćelije pod uslovima koji dozvoljavaju proizvodnju antitela ili njegovog fragmenta, i obnavljanje tako proizvedenog antitela ili fragmenta.
11. Farmaceutski sastav koji sadrži antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili antitelo prema patentnom zahtevu 7 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
12. Antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antitela prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili antitelo prema patentnom zahtevu 7, za upotrebu za ublažavanje ili inhibiranje bolesti ili stanja posredovanih PCSK9 kod ispitanika, pri čemu PCSK9 posredovan bolest ili stanje je hiperholesterolemija.
13. Antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antitela prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili antitelo prema patentnom zahtevu 7, za upotrebu za ublažavanje ili inhibiranje bolesti ili stanja posredovanih PCSK9 kod ispitanika, pri čemu PCSK9 posredovan bolest ili stanje je hiperholesterolemija.
RS20211437A 2008-12-15 2009-12-15 Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9 RS62580B1 (sr)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12248208P 2008-12-15 2008-12-15
US21056609P 2009-03-18 2009-03-18
US16875309P 2009-04-13 2009-04-13
US21813609P 2009-06-18 2009-06-18
US24913509P 2009-10-06 2009-10-06
US26177609P 2009-11-17 2009-11-17
EP16200305.7A EP3156422B1 (en) 2008-12-15 2009-12-15 High affinity human antibodies to pcsk9

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62580B1 true RS62580B1 (sr) 2021-12-31

Family

ID=41668268

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20170255A RS55771B2 (sr) 2008-12-15 2009-12-15 Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9
RS20211437A RS62580B1 (sr) 2008-12-15 2009-12-15 Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20170255A RS55771B2 (sr) 2008-12-15 2009-12-15 Humana antitela visokog afiniteta prema pcsk9

Country Status (46)

Country Link
US (9) US8062640B2 (sr)
EP (3) EP3943510A3 (sr)
JP (2) JP5318965B2 (sr)
KR (2) KR101699707B1 (sr)
CN (2) CN104447997A (sr)
AR (1) AR077724A1 (sr)
AU (1) AU2009333326B9 (sr)
BR (1) BRPI0922885B1 (sr)
CA (1) CA2747123C (sr)
CO (1) CO6571847A2 (sr)
CR (1) CR20110296A (sr)
CY (2) CY1118896T1 (sr)
DK (2) DK3156422T3 (sr)
DO (1) DOP2011000184A (sr)
EC (1) ECSP11011134A (sr)
ES (2) ES2898661T3 (sr)
FI (2) FI2358756T4 (sr)
FR (1) FR17C1022I2 (sr)
HN (1) HN2011001659A (sr)
HR (2) HRP20170488T4 (sr)
HU (3) HUE032681T2 (sr)
IL (2) IL213050A (sr)
JO (1) JO3672B1 (sr)
LT (3) LT3156422T (sr)
LU (1) LUC00024I2 (sr)
ME (2) ME01327B (sr)
MX (2) MX341041B (sr)
MY (1) MY203040A (sr)
NI (1) NI201100111A (sr)
NL (1) NL300879I2 (sr)
NO (1) NO2017029I2 (sr)
NZ (2) NZ593155A (sr)
PA (1) PA8854201A1 (sr)
PE (1) PE20120014A1 (sr)
PL (2) PL3156422T3 (sr)
PT (2) PT3156422T (sr)
RS (2) RS55771B2 (sr)
RU (2) RU2697773C2 (sr)
SI (2) SI3156422T1 (sr)
SM (1) SMT201700183T1 (sr)
TN (1) TN2011000300A1 (sr)
TW (1) TWI465249B (sr)
UA (1) UA105650C2 (sr)
UY (1) UY32329A (sr)
WO (1) WO2010077854A1 (sr)
ZA (1) ZA201103762B (sr)

Families Citing this family (312)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130072665A1 (en) * 2007-08-23 2013-03-21 Simon Mark Jackson Antigen binding proteins to proprotein convertase subtilisin kexin type 9 (pcsk9)
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
LT2975051T (lt) 2009-06-26 2021-07-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Lengvai išskiriami bispecifiniai antikūnai su natyvios formos imunoglobulinu
CN102638971B (zh) 2009-07-08 2015-10-07 科马布有限公司 动物模型及治疗分子
US9445581B2 (en) 2012-03-28 2016-09-20 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US8518405B2 (en) 2009-10-08 2013-08-27 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibodies and uses therefor
IN2012DN03824A (sr) * 2009-10-30 2015-08-28 Merck Sharp & Dohme
AR079336A1 (es) 2009-12-11 2012-01-18 Irm Llc Antagonistas de la pro-proteina convertasa-subtilisina/quexina tipo 9 (pcsk9)
JO3274B1 (ar) 2009-12-24 2018-09-16 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للبروتين 4 المشابه لأجيوبيوتين البشري
BR112012022917A2 (pt) * 2010-03-11 2017-01-10 Pfizer anticorpos com ligação a antígeno dependente de ph
MX339622B (es) * 2010-08-02 2016-06-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos.
US9845362B2 (en) 2010-10-08 2017-12-19 The University Of North Carolina At Charlotte Compositions comprising chimeric antigen receptors, T cells comprising the same, and methods of using the same
JO3756B1 (ar) 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
BR112013015687A2 (pt) * 2010-12-22 2016-10-11 Genentech Inc anticorpo anti-pcsk9 ou um fragmento de anticorpo que se liga a pcsk9, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para fabricar um anticorpo anti-pcsk9, composição farmacêutica, método de redução do nível de colesterol ldl em um sujeito e método de tratamento de hipercolesterolemia em um sujeito
EP2650016A1 (en) 2011-01-28 2013-10-16 Sanofi Human antibodies to PSCK9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens (11565)
EP2481758A1 (en) * 2011-01-28 2012-08-01 Sanofi Human antibodies to PSCK9 for use in methods of treating particular groups of subjects (11566)
MX385311B (es) 2011-01-28 2025-03-18 Sanofi Biotechnology Anticuerpos humanos frente a pcsk9 para su uso en métodos de tratamiento de grupos concretos de pacientes.
CA2827923C (en) 2011-02-25 2021-11-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc.gamma.riib-specific fc antibody
US8337530B2 (en) 2011-03-09 2012-12-25 Zimmer Spine, Inc. Polyaxial pedicle screw with increased angulation
AR088782A1 (es) 2011-04-29 2014-07-10 Sanofi Sa Sistemas de ensayo y metodos para identificar y caracterizar farmacos hipolipemiantes
JOP20200043A1 (ar) * 2011-05-10 2017-06-16 Amgen Inc طرق معالجة أو منع الاضطرابات المختصة بالكوليسترول
RS57024B1 (sr) 2011-06-10 2018-05-31 Medimmune Ltd Anti-pseudomonas psl vezujući molekuli i njihova upotreba
JO3412B1 (ar) 2011-06-17 2019-10-20 Regeneron Pharma أجسام مضادة ل angptl3 واستخداماتها
JP5997151B2 (ja) 2011-06-30 2016-09-28 中外製薬株式会社 ヘテロ二量化ポリペプチド
BR112014000392A2 (pt) * 2011-07-14 2017-02-21 Pfizer tratamento com anticorpos anti-pcsk9
AR087305A1 (es) * 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
HUE069234T2 (hu) * 2011-09-16 2025-02-28 Regeneron Pharma Eljárások lipoprotein(a)-szint csökkentésére proprotein-konvertáz szubtilizin/kexin 9 (PCSK9) inhibitorának beadásával
AR087715A1 (es) * 2011-09-16 2014-04-09 Lilly Co Eli Anticuerpos anti pcsk9 y usos de los mismos
AU2012311286B2 (en) * 2011-09-19 2018-07-26 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
WO2013045916A1 (en) 2011-09-26 2013-04-04 Kymab Limited Chimaeric surrogate light chains (slc) comprising human vpreb
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
ITPC20110013U1 (it) 2011-10-07 2013-04-08 Giovanni Merli Struttura di protezione superiore veicoli.
US10597439B2 (en) 2011-11-07 2020-03-24 Medimmune Limited Combination therapies using anti-pseudomonas PSL and PCRV binding molecules
CA3233142A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Drug containing carrier into cell for forming immune complex
US9253965B2 (en) 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
CA2858572C (en) 2011-12-08 2023-01-17 Amgen Inc. Human lcat antigen binding proteins and their use in therapy
NZ627859A (en) 2012-01-23 2015-09-25 Regeneron Pharma Stabilized formulations containing anti-ang2 antibodies
AU2013215254B2 (en) * 2012-01-31 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-ASIC1 antibodies and uses thereof
WO2013125667A1 (ja) 2012-02-24 2013-08-29 中外製薬株式会社 FcγRIIBを介して抗原の消失を促進する抗原結合分子
HK1200271A1 (en) 2012-03-16 2015-08-07 瑞泽恩制药公司 Mice that produce antigen-binding proteins with ph-dependent binding characteristics
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
DK2825036T3 (en) 2012-03-16 2018-07-16 Regeneron Pharma Histidine engineered light chain antibodies and genetically modified rodents to generate them
KR102213535B1 (ko) 2012-03-16 2021-02-08 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 pH-민감성 면역글로불린 서열을 발현하는 비-사람 동물
GB2502127A (en) 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
US20130281355A1 (en) * 2012-04-24 2013-10-24 Genentech, Inc. Cell culture compositions and methods for polypeptide production
EA039663B1 (ru) 2012-05-03 2022-02-24 Амген Инк. Применение антитела против pcsk9 для снижения сывороточного холестерина лпнп и лечения связанных с холестерином расстройств
US9255154B2 (en) 2012-05-08 2016-02-09 Alderbio Holdings, Llc Anti-PCSK9 antibodies and use thereof
RU2015101113A (ru) * 2012-06-15 2016-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против pcsk9, составы, дозы и способы применения
EP2882778B1 (en) * 2012-08-13 2018-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 antibodies with ph-dependent binding characteristics
JO3462B1 (ar) 2012-08-22 2020-07-05 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية تجاه gfr?3 وطرق لاستخدامها
SG11201500873XA (en) 2012-08-24 2015-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcgriib-specific fc region variant
EP2703009A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
EP2703008A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Human antibodies to PCSK9 for use in methods of treating particular groups of subjects
EP2706070A1 (en) 2012-09-06 2014-03-12 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
SI3081249T1 (sl) 2012-11-21 2021-03-31 Amgen Inc. Naprava za dajanje zdravila
US10766960B2 (en) 2012-12-27 2020-09-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
US20150335615A1 (en) * 2013-01-04 2015-11-26 Toshihisa Kawai Cholesterol-lowering compounds in combination with lipid metabolism-altering compounds of non-absorbable sugars, compounds that convert nh3 to nh4+, or hydrogen-generating compounds for the treatment of high cholesterol and inflammation
WO2014107739A1 (en) * 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
CN105142695B (zh) 2013-03-15 2020-06-02 安进公司 身体轮廓可调适的自动注射器装置
WO2014149699A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Eli Lilly And Company Bifunctional protein
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
CA2906508A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Amgen, Inc. Human antigen binding proteins that bind to proprotein convertase subtilisin kexin type 9
EP2968775B1 (en) 2013-03-15 2019-12-18 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
TWI580451B (zh) 2013-03-15 2017-05-01 安美基公司 用於注射器之匣盒及使用具有自動注射器及匣盒之自動注射器設備之方法
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
SG11201507878SA (en) 2013-03-22 2015-10-29 Amgen Inc Injector and method of assembly
TWI636062B (zh) 2013-04-02 2018-09-21 中外製藥股份有限公司 Fc region variant
US9783618B2 (en) 2013-05-01 2017-10-10 Kymab Limited Manipulation of immunoglobulin gene diversity and multi-antibody therapeutics
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
US11707056B2 (en) 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US10111953B2 (en) * 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
TWI682780B (zh) * 2013-05-30 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 醫藥組成物用於製造治療與ｐｃｓｋ９功能獲得性突變有關之體染色體顯性高膽固醇血症的藥物之用途
EP2810955A1 (en) 2013-06-07 2014-12-10 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
KR20160024906A (ko) * 2013-06-07 2016-03-07 사노피 바이오테크놀로지 Ｐｃｓｋ9의 억제제를 투여함에 의한 죽상경화증의 억제 방법
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
ES2901400T3 (es) * 2013-06-07 2022-03-22 Regeneron Pharma Métodos para inhibir la ateroesclerosis administrando un inhibidor de PCSK9
CA2916259C (en) 2013-06-28 2024-02-20 Amgen Inc. Methods for treating homozygous familial hypercholesterolemia
CA2925723A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
ES2914978T3 (es) * 2013-10-11 2022-06-20 Sanofi Biotechnology Uso de un inhibidor de PCSK9 para tratar hiperlipidemia
EP3421066B1 (en) 2013-10-24 2021-03-03 Amgen Inc. Injector and method of assembly
EP3060281B1 (en) 2013-10-24 2019-01-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
EP3068803B1 (en) * 2013-11-12 2021-01-20 Sanofi Biotechnology Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors
TW202017595A (zh) * 2013-11-12 2020-05-16 法商賽諾菲生物技術公司 使用ｐｃｓｋ９抑制劑之給藥療程
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
DE202014010499U1 (de) 2013-12-17 2015-10-20 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
US8992927B1 (en) 2014-07-15 2015-03-31 Kymab Limited Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain
US8986694B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
US8883157B1 (en) 2013-12-17 2014-11-11 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US9045548B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9023359B1 (en) 2014-07-15 2015-05-05 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9034332B1 (en) 2014-07-15 2015-05-19 Kymab Limited Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9045545B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer
KR20240042192A (ko) * 2013-12-17 2024-04-01 크링 바이오테라퓨틱스 비.브이. 골수 증식성 또는 림프 증식성 질환에 대응하는 수단 및 방법
US8945560B1 (en) 2014-07-15 2015-02-03 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US9051378B1 (en) 2014-07-15 2015-06-09 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
EP3104879A2 (en) 2014-02-14 2016-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with hypercholesterolemia that is not adequately controlled by moderate-dose statin therapy
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
PL3119810T3 (pl) * 2014-03-17 2024-07-15 Sanofi Biotechnology Sposoby obniżania ryzyka sercowo-naczyniowego
JP6640113B2 (ja) 2014-05-07 2020-02-05 アムジエン・インコーポレーテツド 衝撃低減要素を有する自動注入器
ES2913205T3 (es) 2014-05-13 2022-06-01 Bioatla Inc Proteínas biológicas activas condicionalmente
CN112237662B (zh) 2014-06-03 2022-10-21 安姆根有限公司 药物递送系统和使用方法
WO2015200438A1 (en) * 2014-06-24 2015-12-30 Eleven Biotherapeutics, Inc. High affinity antibodies against pcsk9
US9150660B1 (en) 2014-07-15 2015-10-06 Kymab Limited Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain
DE202015009007U1 (de) 2014-07-15 2016-08-19 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
EP4328245A3 (en) 2014-07-15 2024-06-05 Kymab Ltd. Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
EP2975059A1 (en) 2014-07-15 2016-01-20 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
US9139648B1 (en) 2014-07-15 2015-09-22 Kymab Limited Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain
JP6912374B2 (ja) * 2014-07-16 2021-08-04 サノフィ・バイオテクノロジー 高コレステロール血症を有する高心血管リスク患者を処置するための方法
CN107206068A (zh) 2014-07-16 2017-09-26 赛诺菲生物技术公司 用于治疗杂合型家族性高胆固醇血症(heFH)患者的方法
AR101262A1 (es) 2014-07-26 2016-12-07 Regeneron Pharma Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos
US20170224816A1 (en) 2014-08-06 2017-08-10 Rinat Neuroscience Corp. Methods for reducing ldl-cholesterol
WO2016020799A1 (en) 2014-08-06 2016-02-11 Rinat Neuroscience Corp. Methods for reducing ldl-cholesterol
WO2016023916A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
US11554181B2 (en) 2014-09-05 2023-01-17 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibody conjugates and uses therefor
BR112017005110A2 (pt) 2014-09-16 2018-01-23 Regeneron Pharma anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, molécula isolada de ácido nucleico, composição farmacêutica, e, método para diminuir níveis de glicose no sangue ou para tratar uma condição ou doença.
WO2016046684A1 (en) 2014-09-23 2016-03-31 Pfizer Inc. Treatment with anti-pcsk9 antibodies
WO2016061220A2 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
IL287947B2 (en) 2014-10-23 2024-08-01 Amgen Inc Viscosity reduction of pharmaceutical preparations
WO2016071701A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
US11357916B2 (en) 2014-12-19 2022-06-14 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
NZ730607A (en) 2014-12-19 2022-07-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
EP3848072A1 (en) 2014-12-19 2021-07-14 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
WO2016125495A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses therof
CN105461809B (zh) * 2015-02-11 2018-10-12 康融东方（广东）医药有限公司 Pcsk9抗体、其药物组合物及其用途
CA2976935C (en) 2015-02-17 2020-03-10 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
WO2016138434A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Amgen Inc. Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement
US9139653B1 (en) 2015-04-30 2015-09-22 Kymab Limited Anti-human OX40L antibodies and methods of treatment
CN107531798B (zh) 2015-03-20 2022-02-18 奥胡斯大学 Pcsk9的抑制剂用于脂蛋白代谢病症的治疗
JP6857138B2 (ja) * 2015-05-18 2021-04-14 アジェンシス，インコーポレイテッド Ａｘｌタンパク質に結合する抗体
US10787517B2 (en) 2015-05-18 2020-09-29 Agensys, Inc. Antibodies that bind to AXL proteins
CN106084058B (zh) * 2015-07-15 2019-08-27 北京天广实生物技术股份有限公司 抗人pcsk9单克隆抗体
TWI870789B (zh) 2015-08-04 2025-01-21 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
KR20240172758A (ko) 2015-08-18 2024-12-10 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
WO2017055966A1 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Pfizer Inc. Low viscosity antibody compositions
CN106589127A (zh) * 2015-10-16 2017-04-26 钜川生物医药 一种pcsk9抗体及其制备方法和应用
CN105348390B (zh) * 2015-10-26 2018-08-28 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人pcsk9单克隆抗体
CN106810609A (zh) * 2015-11-27 2017-06-09 苏州君盟生物医药科技有限公司 抗pcsk9抗体及其应用
ES2755717T3 (es) 2015-12-09 2020-04-23 Amgen Inc Autoinyector con tapa de señalización
WO2017110981A1 (en) 2015-12-25 2017-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
CN107406511B (zh) * 2015-12-31 2021-01-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pcsk9抗体、其抗原结合片段及其医药用途
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
HRP20230992T1 (hr) * 2016-02-17 2023-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Postupci za liječenje ili sprečavanje ateroskleroze davanjem inhibitora angptl3
MX2018010401A (es) 2016-03-03 2019-03-06 Regeneron Pharma Metodos para el tratamiento de pacientes con hiperlipidemia administrando un inhibidor de pcsk9 en combinacion con un inhibidor de angptl3.
US11200298B2 (en) 2016-03-15 2021-12-14 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
WO2017163049A1 (en) 2016-03-21 2017-09-28 Kymab Limited Anti-malarial antibodies that bind circumsporozoite protein
US11066464B2 (en) 2016-03-21 2021-07-20 Kymab Limited Anti-malarial antibodies that bind circumsporozoite protein
CN107266575B (zh) * 2016-04-07 2021-12-24 天士力生物医药股份有限公司 前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型的结合蛋白及其应用
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
WO2017192287A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
EP3455142B1 (en) 2016-05-13 2023-08-09 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
US11541176B2 (en) 2016-06-03 2023-01-03 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
CN107474140B (zh) * 2016-06-08 2022-06-03 常州博嘉生物医药科技有限公司 Pcsk9特异性的结合蛋白mv072及其应用
WO2018029474A2 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Kymab Limited Anti-icos antibodies
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
JP7461741B2 (ja) 2016-06-20 2024-04-04 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１およびｉｌ－２サイトカイン
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
CN109641947B (zh) * 2016-07-20 2023-04-14 犹他大学研究基金会 Cd229 car t细胞及其使用方法
BR112019001902A2 (pt) 2016-08-05 2019-07-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha composição para profilaxia ou tratamento de doenças relacionadas à il-8
CA3032897A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Kymab Limited Anti-icos antibodies
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
EP3504328A1 (en) 2016-08-24 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
KR20190049866A (ko) 2016-09-20 2019-05-09 우시 바이올로직스 아일랜드 리미티드 신규한 항-ｐｃｓｋ９ 항체
WO2018054240A1 (en) * 2016-09-20 2018-03-29 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel anti-pcsk9 antibodies
WO2018067987A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Amgen Inc. Reduced viscosity protein pharmaceutical formulations
US11667697B2 (en) 2016-10-19 2023-06-06 Vanderbilt University Human orthopoxvirus antibodies and methods of use therefor
US20190248888A1 (en) 2016-10-20 2019-08-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of lowering blood glucose levels
US20200261643A1 (en) 2016-10-25 2020-08-20 Amgen Inc. On-body injector
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
JOP20190112A1 (ar) 2016-11-14 2019-05-14 Amgen Inc علاجات مدمجة لتصلب الشرايين، شاملة مرض قلبي وعائي تصلبي
CN108239150A (zh) * 2016-12-24 2018-07-03 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pcsk9抗体及其用途
WO2018136398A1 (en) 2017-01-17 2018-07-26 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
CN107698680B (zh) 2017-01-22 2019-03-01 北京东方百泰生物科技有限公司 抗pcsk9单克隆抗体
CN108424457B (zh) * 2017-02-13 2021-06-01 成都金洛克锶生物技术有限公司 针对pcsk9抗体与检测试剂盒的制备及其用途
US11752258B2 (en) 2017-02-17 2023-09-12 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
US11369736B2 (en) 2017-02-17 2022-06-28 Amgen Inc. Cannula insertion and retraction mechanisms
JP7377596B2 (ja) 2017-02-22 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド 低粘度、高濃度エボロクマブ製剤及びそれらの製造方法
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
KR102627069B1 (ko) 2017-03-07 2024-01-18 암겐 인코포레이티드 과압에 의한 바늘 삽입
EP3592404A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
KR102651078B1 (ko) 2017-03-28 2024-03-22 암겐 인코포레이티드 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법
US9989519B1 (en) * 2017-05-04 2018-06-05 Clayton Pharmaceuticals, LLC Method for determining in vitro bioequivalence of a sucralfate suspension sample to a sucralfate suspension reference listed drug (RLD)
JP7200134B2 (ja) 2017-06-08 2023-01-06 アムジエン・インコーポレーテツド トルク駆動式薬物送達デバイス
US11590294B2 (en) 2017-06-08 2023-02-28 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
TW202310872A (zh) * 2017-06-09 2023-03-16 法商賽諾菲生物技術公司 藉由投予ｐｃｓｋ９抑制劑治療糖尿病患者高血脂症之方法
US20190031774A1 (en) 2017-06-09 2019-01-31 Sanofi Biotechnology Methods for treating hyperlipidemia in diabetic patients by administering a pcsk9 inhibitor
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
JP7195276B2 (ja) 2017-06-22 2022-12-23 アムジエン・インコーポレーテツド デバイス起動による衝突／衝撃の低減
MA49461A (fr) 2017-06-23 2020-04-29 Amgen Inc Dispositif électronique d'administration de médicament comprenant un bouchon activé par un ensemble commutateur
BR112020000127A2 (pt) 2017-07-06 2020-07-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. método para selecionar um hidrolisado de soja, e, glicoproteína
MA49562A (fr) 2017-07-14 2020-05-20 Amgen Inc Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion
EP3655063A1 (en) 2017-07-21 2020-05-27 Amgen Inc. Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
MA49677A (fr) 2017-07-25 2021-04-21 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament avec module d'engrenage et procédé d'assemblage associé
US11484648B2 (en) 2017-07-25 2022-11-01 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
WO2019036181A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Amgen Inc. BODY INJECTOR WITH STERILE ADHESIVE PATCH
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
US12605469B2 (en) 2017-10-02 2026-04-21 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibody conjugates and uses therefor
WO2019070472A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Amgen Inc. FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE
CN111132711B (zh) 2017-10-06 2022-07-01 安进公司 带有联锁组件的药物递送装置及相关组装方法
MA50348A (fr) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament comprenant un ensemble d'entraînement et procédé d'assemblage associé
WO2019090086A1 (en) 2017-11-03 2019-05-09 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
IL273664B1 (en) 2017-11-06 2026-02-01 Amgen Inc Full-fledged assemblies and related methods
US20200261648A1 (en) 2017-11-06 2020-08-20 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
IL319987A (en) 2017-11-10 2025-06-01 Amgen Inc Plungers for drug delivery devices
EP3710589A4 (en) 2017-11-14 2021-11-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-C1S ANTIBODIES AND METHOD OF USING
AU2018368338B2 (en) 2017-11-16 2024-07-25 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
SG11202003004RA (en) 2017-11-16 2020-04-29 Amgen Inc Door latch mechanism for drug delivery device
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
GB201721338D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Kymab Ltd Anti-icos Antibodies
BR112020010615A2 (pt) 2017-12-22 2020-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. produto farmacêutico proteico, método e sistema para caracterizar impurezas de produto farmacêutico proteico e de fármaco de baixo peso molecular, método para produzir um anticorpo, anticorpo, e, usos do método e do sistema
US12110342B2 (en) 2018-01-31 2024-10-08 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Nucleic acid monoclonal antibodies targeting PCSK9 and methods of use
MX2020008095A (es) 2018-01-31 2020-09-24 Regeneron Pharma Sistemas y métodos para caracterizar variantes de tamaño y carga de impurezas de productos farmacológicos.
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
WO2019165184A1 (en) * 2018-02-22 2019-08-29 Vanderbilt University Human japanese encephalitis virus antibodies and methods of use therefor
KR20200127979A (ko) 2018-02-28 2020-11-11 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 바이러스 오염물질을 확인하기 위한 시스템 및 방법
EP3762026B1 (en) 2018-03-06 2026-04-08 Sanofi Biotechnology Use of pcsk9 inhibitor for reducing cardiovascular risk
US12259355B2 (en) 2018-03-19 2025-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
US12253490B2 (en) 2018-03-19 2025-03-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
CA3246952A1 (en) 2018-03-19 2025-10-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
MY208638A (en) 2018-07-02 2025-05-21 Amgen Inc Anti-steap1 antigen-binding protein
WO2020023451A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
CA3103681A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
EP3829692A1 (en) 2018-07-31 2021-06-09 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
IL317002A (en) 2018-08-10 2025-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-CD137 antigen binding molecule and use thereof
CN120795059A (zh) 2018-08-27 2025-10-17 瑞泽恩制药公司 拉曼光谱在下游纯化中的应用
US11754569B2 (en) 2018-08-30 2023-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for characterizing protein complexes
CN110872353B (zh) * 2018-09-03 2021-05-04 深圳华大基因科技有限公司 特异性结合pcsk9抗原的纳米抗体及其制备方法和应用
EP3856284A1 (en) 2018-09-24 2021-08-04 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
MA53718A (fr) 2018-09-28 2022-01-05 Amgen Inc Ensemble d'activation d'échappement de fil de muscle pour un dispositif d'administration de médicament
MX2021003492A (es) 2018-10-02 2021-06-18 Amgen Inc Sistemas de inyeccion para la administracion de farmacos con transmision de fuerza interna.
JP7547325B2 (ja) 2018-10-05 2024-09-09 アムジエン・インコーポレーテツド 投薬量インジケータを有する薬物送達デバイス
AU2019359801B2 (en) 2018-10-15 2025-01-02 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
SG11202103800RA (en) 2018-10-15 2021-05-28 Amgen Inc Drug delivery device having damping mechanism
SG11202104120VA (en) * 2018-10-31 2021-05-28 Delinia Inc Multivalent regulatory t cell modulators
CN111110841A (zh) * 2018-10-31 2020-05-08 上海君实生物医药科技股份有限公司 含有抗pcsk9抗体的稳定制剂
MA54057A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament
ES3010833T3 (en) 2018-11-01 2025-04-04 Amgen Inc Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
GB201820687D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Kymab Ltd Antagonists
PL3857237T3 (pl) 2019-01-16 2023-07-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sposoby charakteryzowania mostka disiarczkowego
CN109734813B (zh) * 2019-01-28 2022-06-17 广东昭泰体内生物医药科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
AU2020263289B2 (en) 2019-04-24 2025-05-22 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
AU2020275406A1 (en) 2019-05-13 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Improved competitive ligand binding assays
CN114096562B (zh) 2019-05-15 2025-02-21 中外制药株式会社 抗原结合分子、药物组合物和方法
WO2020236670A1 (en) 2019-05-17 2020-11-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genome-based methods for reducing cardiovascular risk
US12559551B2 (en) 2019-05-24 2026-02-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stabilized formulations containing anti-ANGPTL3 antibodies
MX2022002149A (es) 2019-08-23 2022-03-17 Amgen Inc Dispositivo de suministro de farmacos con componentes de acoplamiento de capuchon de aguja configurable y metodos relacionados.
WO2021058597A1 (en) 2019-09-24 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of determining whether a subject is at risk of developing arterial plaques
IL291020B2 (en) 2019-09-24 2025-04-01 Regeneron Pharma Systems and methods for use in chromatography and regeneration
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
MY207613A (en) 2019-11-25 2025-03-06 Regeneron Pharma Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
WO2021119321A1 (en) 2019-12-10 2021-06-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of a pcsk9 inhibitor to treat homozygous familial hypercholesterolemia
US11835527B2 (en) 2020-01-21 2023-12-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins
US20230416355A1 (en) * 2020-08-06 2023-12-28 Stelexis Therapeutics, Llc Il-8 antibodies and methods of use thereof
IL300828A (en) 2020-08-31 2023-04-01 Regeneron Pharma Asparagine feeding strategies to improve cell culture performance and reduce asparagine sequence variants
MX2023006077A (es) 2020-11-25 2023-06-06 Regeneron Pharma Formulaciones de liberacion sostenida mediante emulsificacion por membrana no acuosa.
US12350374B2 (en) 2020-12-17 2025-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fabrication of protein-encapsulating microgels
TW202233827A (zh) 2021-01-20 2022-09-01 美商再生元醫藥公司 改良細胞培養中蛋白質效價的方法
AR125585A1 (es) 2021-03-03 2023-08-02 Regeneron Pharma Sistemas y métodos para cuantificar y modificar la viscosidad de proteínas
CA3211302A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Ross Kenyon Methods and systems for developing mixing protocols
TW202313682A (zh) 2021-05-18 2023-04-01 英商凱麥博有限公司 抗icos抗體之用途
MX2023013640A (es) 2021-05-21 2023-11-30 Amgen Inc Metodo de optimizacion de una receta de llenado para un contenedor de medicamento.
BR112023024984A2 (pt) 2021-06-01 2024-02-20 Regeneron Pharma Tampão de amostra de eletroforese aquosa, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de droga proteica, e, kit
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
WO2023283134A1 (en) 2021-07-05 2023-01-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Utilization of antibodies to shape antibody responses to an antigen
TW202326138A (zh) 2021-09-08 2023-07-01 美商再生元醫藥公司 用於定量抗體及其他含Ｆｃ蛋白之高通量及基於質譜之方法
CA3232463A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Philip Mellors Methods of controlling antibody heterogeneity
JP2024538673A (ja) 2021-10-07 2024-10-23 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ｐＨモデリング及び制御のシステム及び方法
KR20240090312A (ko) 2021-10-07 2024-06-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Ph 미터 보정 및 교정
MX2024005090A (es) 2021-10-26 2024-07-19 Regeneron Pharma Sistemas y metodos para generar agua de laboratorio y distribuir agua de laboratorio a diferentes temperaturas.
EP4493921A1 (en) 2022-03-18 2025-01-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for analyzing polypeptide variants
US20250340641A1 (en) 2022-05-18 2025-11-06 Kymab Limited Uses of anti-icos antibodies
WO2024040020A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Absci Corporation Quantitative affinity activity specific cell enrichment
CN120418653A (zh) 2022-12-16 2025-08-01 里珍纳龙药品有限公司 评估色谱柱完整性的方法和系统
WO2024130165A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angptl3 inhibitors for triglyceride reduction in multifactorial chylomicronemia syndrome
US20240245779A1 (en) 2023-01-25 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modeling liquid protein composition stability
WO2024158961A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo
WO2024163708A1 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis
US20240280551A1 (en) 2023-02-22 2024-08-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System suitability parameters and column aging
TW202508625A (zh) 2023-05-01 2025-03-01 美商再生元醫藥公司 使用苯酚或苯甲醇之多劑量抗體藥物產品
EP4467563A1 (en) * 2023-05-23 2024-11-27 JLP Health GmbH Ldlr derived polypeptides for anti-viral uses
EP4688822A1 (en) * 2023-05-23 2026-02-11 JLP Health GmbH Ldlr derived polypeptides for anti-viral uses
WO2025054406A1 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for assessing chromatographic column integrity
WO2025064403A2 (en) 2023-09-18 2025-03-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for developing chromatography protocols
CN121925272A (zh) 2023-09-29 2026-04-24 瑞泽恩制药公司 利用受控成核进行冻干
WO2025085594A1 (en) 2023-10-18 2025-04-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rapid purification of monoclonal antibody from in-process upstream cell culture material
AU2024373307A1 (en) 2023-11-02 2026-05-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipase activity using stress
WO2025144700A1 (en) 2023-12-27 2025-07-03 Absci Corporation Nanobody library screening using bacterial surface display
WO2025166281A1 (en) 2024-02-01 2025-08-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Platform for charge-detection mass spectrometry analysis of aavs
WO2025175164A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of producing concentrated formulated drug substances comprising proteins, and concentrated formulated drug substance made by the methods
WO2025194043A1 (en) 2024-03-15 2025-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Polysorbate and polyoxyethylene sorbitan as excipients for stable protein formulations
WO2025259840A1 (en) 2024-06-13 2025-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for scaled chromatography
WO2026025028A1 (en) 2024-07-26 2026-01-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making ultra-high concentrated protein formulations using lyophilization
WO2026030152A1 (en) 2024-07-29 2026-02-05 Amgen Inc. System and method for assessing transferability of a fill recipe
WO2026060350A1 (en) 2024-09-13 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving photo stability and controlling formation of hmw species in biologic formulations, and biologic formulations produced by the methods
WO2026076201A2 (en) 2024-10-03 2026-04-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for producing therapeutic proteins using single pass tangential flow filtration for in-line concentration and volume reduction of production pools
WO2026080597A1 (en) 2024-10-08 2026-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained delivery of biologics and non-aqueous manufacture of same

Family Cites Families (184)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0747045B2 (ja) 1986-10-15 1995-05-24 株式会社大協精工 積層した注射器用滑栓
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
US5670373A (en) 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
FI94339C (fi) 1989-07-21 1995-08-25 Warner Lambert Co Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen /R-(R*,R*)/-2-(4-fluorifenyyli)- , -dihydroksi-5-(1-metyylietyyli)-3-fenyyli-4-/(fenyyliamino)karbonyyli/-1H-pyrroli-1-heptaanihapon ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
ES2284161T3 (es) 1990-01-12 2007-11-01 Amgen Fremont Inc. Generacion de anticuerpos xenogenicos.
US5016784A (en) 1990-02-15 1991-05-21 Dexus Research Inc. Applicator for highly reactive materials
ES2134212T3 (es) 1991-04-25 1999-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo humano reconstituido contra el receptor de la interleuquina 6 humano.
JP2648897B2 (ja) 1991-07-01 1997-09-03 塩野義製薬株式会社 ピリミジン誘導体
WO1993000807A1 (en) 1991-07-03 1993-01-21 Cryolife, Inc. Method for stabilization of biomaterials
JP3100727B2 (ja) 1992-01-23 2000-10-23 株式会社大協精工 変性ポリシロキサン組成物及び該組成物を被覆した衛生ゴム製品
DE69333928T2 (de) 1992-04-30 2006-08-17 Probitas Pharma Inc., Los Angeles Verbesserte solubilisierung und stabilisierung des faktor viii-komplexes
CA2147466A1 (en) 1992-10-20 1994-04-28 Just P. J. Brakenhoff Interleukin-6 receptor antagonists
US6177401B1 (en) 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5888511A (en) 1993-02-26 1999-03-30 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS
US5888510A (en) 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
GB9410534D0 (en) 1994-05-26 1994-07-13 Lynxvale Ltd Improvements in or relating to growth factor inhibitors
PL182089B1 (en) 1994-10-21 2001-11-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6
AU704723B2 (en) 1994-12-29 1999-04-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antitumor agent effect enhancer containing IL-6 antagonist
DK0811384T3 (da) 1995-02-13 2006-10-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Muskelproteinnedbrydningsinhibitor indeholdende IL-6-receptor-antistof
JP3172057B2 (ja) 1995-04-05 2001-06-04 株式会社大協精工 ラミネートゴム栓
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
CA2226575C (en) 1995-07-27 2011-10-18 Genentech, Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
JPH09154588A (ja) 1995-10-07 1997-06-17 Toagosei Co Ltd Ｖｅｇｆ結合性ポリペプチド
JP2000509018A (ja) 1996-03-26 2000-07-18 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 肥満タンパク質製剤
US6100071A (en) 1996-05-07 2000-08-08 Genentech, Inc. Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production
PT923941E (pt) 1996-06-27 2006-09-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Medicamentos para mieloma a serem utilizados com agentes antitumorais de mostarda nitrogenada
EP0852951A1 (de) 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
US7312196B2 (en) 1997-01-08 2007-12-25 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Formulations for amylin agonist peptides
US20070224663A1 (en) 1997-03-07 2007-09-27 Human Genome Sciences, Inc. Human Secreted Proteins
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20020187150A1 (en) 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
DE69900746T2 (de) 1998-01-30 2002-08-14 Scios Inc., Mountain View Gesteuerte verabreichung von peptiden oder proteinen
PT1074268E (pt) 1998-03-17 2008-02-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes profilácticos ou terapêuticos para doenças intestinais inflamatórias contendo anticorpos antagonistas do receptor il-6
JP3512349B2 (ja) 1999-01-29 2004-03-29 株式会社大協精工 柱状ゴム要素の成形型
US7001892B1 (en) 1999-06-11 2006-02-21 Purdue Research Foundation Pharmaceutical materials and methods for their preparation and use
EP1067182A3 (en) 1999-07-08 2001-11-21 Helix Research Institute Secretory protein or membrane protein
US7129338B1 (en) * 1999-07-08 2006-10-31 Research Association For Biotechnology Secretory protein or membrane protein
US7029895B2 (en) * 1999-09-27 2006-04-18 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 27411, a novel human PGP synthase
WO2001027116A2 (en) 1999-10-07 2001-04-19 Eli Lilly And Company Condensed dihydroquinolinone derivatives for inhibiting mrp1
AU2001241461A1 (en) 2000-02-07 2001-08-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Narc-1, novel subtilase-like homologs
US6659982B2 (en) 2000-05-08 2003-12-09 Sterling Medivations, Inc. Micro infusion drug delivery device
US6629949B1 (en) 2000-05-08 2003-10-07 Sterling Medivations, Inc. Micro infusion drug delivery device
US7148197B2 (en) 2000-08-24 2006-12-12 The Regents Of The University Of California Orally administered small peptides synergize statin activity
AU2001290846B2 (en) 2000-09-08 2006-02-02 Massachusetts Institute Of Technology G-CSF analog compositions and methods
JP4340062B2 (ja) 2000-10-12 2009-10-07 ジェネンテック・インコーポレーテッド 粘度の減少した濃縮タンパク質製剤
WO2002034292A1 (fr) 2000-10-25 2002-05-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents preventifs ou therapeutiques contre le psoriasis renfermant l'antagoniste de l'il-6 comme substance active
WO2002036165A1 (fr) 2000-10-27 2002-05-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent à base d'antagoniste d'il-6, faisant baisser le niveau des mmp-3 dans le sang
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
JP2002209975A (ja) 2001-01-19 2002-07-30 Daikyo Seiko Ltd 医薬バイアル用ラミネートゴム栓
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
AU2002324556A1 (en) 2001-07-25 2003-02-17 Protein Design Labs, Inc. Stable lyophilized pharmaceutical formulation of igg antibodies
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20060078533A1 (en) 2004-10-12 2006-04-13 Omoigui Osemwota S Method of prevention and treatment of aging and age-related disorders including atherosclerosis, peripheral vascular disease, coronary artery disease, osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia, alzheimer's disease and cancer
US20060275294A1 (en) 2002-08-22 2006-12-07 Omoigui Osemwota S Method of prevention and treatment of aging, age-related disorders and/or age-related manifestations including atherosclerosis, peripheral vascular disease, coronary artery disease, osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia, alzheimers disease and cancer
US20060078531A1 (en) 2004-10-12 2006-04-13 Osemwota Sota Method of prevention and treatment of atherosclerosis, peripheral vascular disease, coronary artery disease, and age-related disorders including osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia and Alzheimer's disease
US20060078532A1 (en) 2004-10-12 2006-04-13 Omoigui Osemwota S Method of prevention and treatment of Atherosclerosis, Peripheral vascular disease, Coronary artery disease, aging and age-related disorders including osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia and Alzheimer's disease
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
US20040191243A1 (en) 2002-12-13 2004-09-30 Bei Chen System and method for stabilizing antibodies with histidine
US7534427B2 (en) 2002-12-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins
AU2004229335C1 (en) 2003-04-04 2010-06-17 Genentech, Inc. High concentration antibody and protein formulations
EP1471152A1 (en) * 2003-04-25 2004-10-27 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Mutations in the human PCSK9 gene associated to hypercholesterolemia
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
DE10355251A1 (de) 2003-11-26 2005-06-23 Merck Patent Gmbh Pharmazeutische Zubereitung enthaltend einen Antikörper gegen den EGF-Rezeptor
AR048210A1 (es) 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
DE602005020743D1 (de) 2004-02-11 2010-06-02 Warner Lambert Co Verfahren zur behandlung von osteoarthritis mit anti-il-6 antikörpern
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
CZ200755A3 (cs) 2004-07-26 2007-04-11 Biogen Idec Ma Inc. Peptidy protilátek anti-CD154
US20110313024A1 (en) 2004-08-20 2011-12-22 Leonid Beigelman RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROPROTEIN CONVERTASE SUBTILISIN KEXIN 9 (PCSK9) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20070036788A1 (en) 2004-09-22 2007-02-15 Ahmed Sheriff Use of a compound for reducing the biological effectiveness of il-6
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
AU2005316405A1 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Genentech, Inc. Methods for treating autoimmune disorders
US20060147945A1 (en) 2005-01-06 2006-07-06 Edmonds Brian T Novel secreted proteins and their uses
KR20080071192A (ko) 2005-11-22 2008-08-01 와이어쓰 면역글로불린 융합 단백질 제형
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
DK2021472T3 (da) 2006-05-05 2011-09-19 Isis Pharmaceuticals Inc Forbindelser og fremgangsmåder til modulering af genekspression
ES2366973T3 (es) 2006-05-05 2011-10-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compuestos y procedimiento para modular la expresión génica.
CN101484588B (zh) 2006-05-11 2013-11-06 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法
NZ587107A (en) 2006-06-02 2012-05-25 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
SI2944306T1 (sl) 2006-06-16 2021-04-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Formulacije antagonista VEGF, primerne za intravitrealno dajanje
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
US7608693B2 (en) 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
EP2083860A4 (en) * 2006-11-07 2010-05-26 Merck Sharp & Dohme PCSK9 ANTAGONISTS
WO2008057459A2 (en) 2006-11-07 2008-05-15 Merck & Co., Inc. Antagonists of pcsk9
WO2008057457A2 (en) 2006-11-07 2008-05-15 Merck & Co., Inc. Antagonists of pcsk9
EP2106261A4 (en) 2006-11-07 2010-05-26 Merck Sharp & Dohme ANTAGONISTS OF PCSK9
CN101589143A (zh) 2006-11-27 2009-11-25 Isis药物公司 用于治疗高胆固醇血症的方法
EP2455471A3 (en) 2006-11-27 2012-09-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
JP5100101B2 (ja) 2006-12-12 2012-12-19 キヤノン株式会社 画像形成装置
BRPI0810551A2 (pt) * 2007-04-13 2019-09-03 Novartis Ag moléculas e métodos para modulação da pró-proteína convertase subtilisina/quexina tipo 9 (pcsk9)
EP2152752B1 (en) 2007-05-15 2017-11-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody directed to g protein coupled receptors (gpcr)
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
WO2009042765A1 (en) 2007-09-25 2009-04-02 The Regents Of The University Of California Methods of modulating prokineticin 2 for treatment of stress response and anxiety-related disorders
CN101939425B (zh) 2007-09-26 2014-05-14 中外制药株式会社 抗il-6受体抗体
KR20100091191A (ko) 2007-10-26 2010-08-18 쉐링 코포레이션 항-ｐｃｓｋ9, 및 지질 및 콜레스테롤 질환의 치료 방법
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
AR070316A1 (es) 2008-02-07 2010-03-31 Merck & Co Inc Antagonistas de pcsk9 (proproteina subtilisina-kexina tipo 9)
AR070315A1 (es) 2008-02-07 2010-03-31 Merck & Co Inc Anticuerpos 1b20 antagonistas de pcsk9
EP2275443B1 (en) 2008-04-11 2015-12-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
TWI516501B (zh) 2008-09-12 2016-01-11 禮納特神經系統科學公司 Ｐｃｓｋ９拮抗劑類
BRPI0918419A2 (pt) 2008-09-19 2015-11-24 Hoffmann La Roche nova formulação anticorpo
CA2736864C (en) 2008-09-19 2020-10-13 Pfizer Inc. Stable liquid antibody formulation
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
US8748115B2 (en) 2008-12-12 2014-06-10 Merck Sharp & Dohme Corp. PCSK9 immunoassay
US8357371B2 (en) 2008-12-15 2013-01-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to PCSK9
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
US20100216667A1 (en) 2008-12-17 2010-08-26 Meyer Brian K Method for determining compatibility of an active pharmaceutical ingredient with materials
BRPI1006519A2 (pt) 2009-03-06 2016-08-09 Genentech Inc formulação de anticorpos
AU2010260148A1 (en) 2009-06-15 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsRNA targeting the PCSK9 gene
CA2764180A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Wyeth Llc Lyophilized formulations for small modular immunopharmaceuticals
US20110009628A1 (en) 2009-07-08 2011-01-13 Haiyan Liu Compounds and Compositions for Modulating Lipid Levels and Methods of Preparing Same
US8563528B2 (en) 2009-07-21 2013-10-22 Santaris Pharma A/S Antisense oligomers targeting PCSK9
WO2011028938A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for lowering serum cholestrol in a subject using inhibition of pcsk9
WO2011037791A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Antagonists of pcsk9
EP2483682A1 (en) 2009-10-02 2012-08-08 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Combination of spla2 activity and lp(a) cardiovascular risk factors for the diagnosis/prognosis of a cardiovascular disease/event
IN2012DN03824A (sr) 2009-10-30 2015-08-28 Merck Sharp & Dohme
CN102596249A (zh) 2009-10-30 2012-07-18 默沙东公司 Ax1和ax189 pcsk9拮抗剂和变体
BR112012012080B1 (pt) 2009-11-20 2022-11-29 Biocon Limited Formulações de histidina-trealose do anticorpo t1h
AR079336A1 (es) 2009-12-11 2012-01-18 Irm Llc Antagonistas de la pro-proteina convertasa-subtilisina/quexina tipo 9 (pcsk9)
JO3274B1 (ar) 2009-12-24 2018-09-16 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للبروتين 4 المشابه لأجيوبيوتين البشري
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
BR112012022917A2 (pt) 2010-03-11 2017-01-10 Pfizer anticorpos com ligação a antígeno dependente de ph
GB201005005D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Angeletti P Ist Richerche Bio New vaccine
AU2011202239C1 (en) 2010-05-19 2017-03-16 Sanofi Long-acting formulations of insulins
DE102010024698A1 (de) 2010-06-23 2011-12-29 Eads Deutschland Gmbh Verfahren, Vorrichtung und Anordnung zur Entfernung organischer Verschmutzung von Anströmbereichen eines Luftfahrzeugs
US10023657B2 (en) * 2010-10-01 2018-07-17 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Reversible protein multimers, methods for their production and use
CN106267189B (zh) 2010-10-06 2021-02-26 瑞泽恩制药公司 含有抗白介素-4受体(il-4r)的抗体的稳定制剂
WO2012054438A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Schering Corporation Anti-pcsk9
US9518132B2 (en) 2010-11-09 2016-12-13 Altimab Therapeutics, Inc. Protein complexes for antigen binding and methods of use
JO3756B1 (ar) * 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
US8771696B2 (en) * 2010-11-23 2014-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of reducing the severity of stress hyperglycemia with human antibodies to the glucagon receptor
US9458240B2 (en) 2010-12-10 2016-10-04 Novartis Pharma Ag Anti-BAFFR antibody formulations
BR112013015687A2 (pt) 2010-12-22 2016-10-11 Genentech Inc anticorpo anti-pcsk9 ou um fragmento de anticorpo que se liga a pcsk9, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para fabricar um anticorpo anti-pcsk9, composição farmacêutica, método de redução do nível de colesterol ldl em um sujeito e método de tratamento de hipercolesterolemia em um sujeito
MX385311B (es) 2011-01-28 2025-03-18 Sanofi Biotechnology Anticuerpos humanos frente a pcsk9 para su uso en métodos de tratamiento de grupos concretos de pacientes.
KR20140006022A (ko) 2011-02-11 2014-01-15 아이알엠 엘엘씨 Pcsk9 길항제
US8440890B1 (en) 2011-03-09 2013-05-14 Pioneer Hi Bred International Inc Maize variety inbred PH1D0D
CA3021845C (en) 2011-04-20 2022-03-29 Amgen Inc. Autoinjector apparatus
AR088782A1 (es) 2011-04-29 2014-07-10 Sanofi Sa Sistemas de ensayo y metodos para identificar y caracterizar farmacos hipolipemiantes
TWI907924B (zh) 2011-05-02 2025-12-11 日商武田藥品工業股份有限公司 抗-α4β7抗體之調配物
US20140004122A1 (en) 2011-05-10 2014-01-02 Amgen Inc. Methods for treating or preventing cholesterol related disorders
JOP20200043A1 (ar) 2011-05-10 2017-06-16 Amgen Inc طرق معالجة أو منع الاضطرابات المختصة بالكوليسترول
WO2012168491A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Pharmaceutical formulations of pcsk9 antagonists
CA2746171C (en) 2011-07-13 2018-11-06 William Jani Retrievable stimulation frac (rsf) plug
BR112014000392A2 (pt) 2011-07-14 2017-02-21 Pfizer tratamento com anticorpos anti-pcsk9
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
AR087715A1 (es) 2011-09-16 2014-04-09 Lilly Co Eli Anticuerpos anti pcsk9 y usos de los mismos
HUE069234T2 (hu) 2011-09-16 2025-02-28 Regeneron Pharma Eljárások lipoprotein(a)-szint csökkentésére proprotein-konvertáz szubtilizin/kexin 9 (PCSK9) inhibitorának beadásával
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
US9943594B2 (en) 2011-10-11 2018-04-17 Sanofi Biotechnology Methods for the treatment of rheumatoid arthritis
AU2013229613B2 (en) 2012-03-08 2015-07-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Abeta antibody formulation
EP2839037B1 (en) 2012-04-19 2018-12-26 Acetylon Pharmaceuticals, Inc. Biomarkers to identify patients that will respond to treatment and treating such patients
EA039663B1 (ru) 2012-05-03 2022-02-24 Амген Инк. Применение антитела против pcsk9 для снижения сывороточного холестерина лпнп и лечения связанных с холестерином расстройств
US9255154B2 (en) 2012-05-08 2016-02-09 Alderbio Holdings, Llc Anti-PCSK9 antibodies and use thereof
KR20150059638A (ko) 2012-05-25 2015-06-01 카타베이시스 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 전구단백질 전환효소 섭틸리신/켁신 9형 저하 방법
EP2882778B1 (en) * 2012-08-13 2018-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 antibodies with ph-dependent binding characteristics
EP2703009A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
EP2703008A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Human antibodies to PCSK9 for use in methods of treating particular groups of subjects
EP2706070A1 (en) 2012-09-06 2014-03-12 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
RU2538801C2 (ru) 2013-02-07 2015-01-10 Закрытое акционерное общество "Инновационный научно-производственный центр "Пептоген" ПРИМЕНЕНИЕ ТЕТРАПЕПТИДА Arg-Pro-Gly-Pro В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ, СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
TWI682780B (zh) 2013-05-30 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 醫藥組成物用於製造治療與ｐｃｓｋ９功能獲得性突變有關之體染色體顯性高膽固醇血症的藥物之用途
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
KR20160024906A (ko) 2013-06-07 2016-03-07 사노피 바이오테크놀로지 Ｐｃｓｋ9의 억제제를 투여함에 의한 죽상경화증의 억제 방법
ES2914978T3 (es) 2013-10-11 2022-06-20 Sanofi Biotechnology Uso de un inhibidor de PCSK9 para tratar hiperlipidemia
EP3068803B1 (en) 2013-11-12 2021-01-20 Sanofi Biotechnology Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors
US9034332B1 (en) * 2014-07-15 2015-05-19 Kymab Limited Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8945560B1 (en) 2014-07-15 2015-02-03 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US8883157B1 (en) * 2013-12-17 2014-11-11 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
EP3104879A2 (en) 2014-02-14 2016-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with hypercholesterolemia that is not adequately controlled by moderate-dose statin therapy
PL3119810T3 (pl) 2014-03-17 2024-07-15 Sanofi Biotechnology Sposoby obniżania ryzyka sercowo-naczyniowego
US20150283236A1 (en) 2014-03-17 2015-10-08 Marie Baccara-Dinet Methods for treating subjects with primary hypercholesterolemia that is not adequately controlled
JP6912374B2 (ja) 2014-07-16 2021-08-04 サノフィ・バイオテクノロジー 高コレステロール血症を有する高心血管リスク患者を処置するための方法
CN107206068A (zh) 2014-07-16 2017-09-26 赛诺菲生物技术公司 用于治疗杂合型家族性高胆固醇血症(heFH)患者的方法
KR20240172758A (ko) 2015-08-18 2024-12-10 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체
US10933134B2 (en) 2017-03-16 2021-03-02 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Combination therapies for treatment of cancer
TW202310872A (zh) 2017-06-09 2023-03-16 法商賽諾菲生物技術公司 藉由投予ｐｃｓｋ９抑制劑治療糖尿病患者高血脂症之方法
US20190031774A1 (en) 2017-06-09 2019-01-31 Sanofi Biotechnology Methods for treating hyperlipidemia in diabetic patients by administering a pcsk9 inhibitor
EP3762026B1 (en) 2018-03-06 2026-04-08 Sanofi Biotechnology Use of pcsk9 inhibitor for reducing cardiovascular risk
DE102023206495B3 (de) 2023-07-07 2024-11-21 Volkswagen Aktiengesellschaft Integrierter Schaltkreis, Anordnung sowie Verfahren zum Einkoppeln von optischen Signalen in einen integrierten Schaltkreis

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015109166A3 (sr) 2018-11-14
ME01327B (me) 2017-07-31
NO2017029I1 (no) 2017-06-27
CY2017021I2 (el) 2025-05-09
US20130085266A1 (en) 2013-04-04
JP5318965B2 (ja) 2013-10-16
NZ593155A (en) 2012-11-30
JP2012511913A (ja) 2012-05-31
PA8854201A1 (es) 2010-07-27
CO6571847A2 (es) 2012-11-30
NZ601923A (en) 2013-03-28
HUE032681T2 (en) 2017-10-30
SI3156422T1 (sl) 2022-01-31
LT3156422T (lt) 2021-11-25
CR20110296A (es) 2011-07-14
KR20110094067A (ko) 2011-08-19
US8501184B2 (en) 2013-08-06
RS55771B2 (sr) 2023-11-30
CY1118896T1 (el) 2017-11-14
ZA201103762B (en) 2012-01-25
BRPI0922885B1 (pt) 2021-12-21
CN102245641B (zh) 2015-01-07
US20100166768A1 (en) 2010-07-01
EP2358756B1 (en) 2017-01-11
ES2898661T3 (es) 2022-03-08
FR17C1022I2 (fr) 2018-07-20
IL213050A0 (en) 2011-07-31
US20110065902A1 (en) 2011-03-17
US8062640B2 (en) 2011-11-22
CA2747123C (en) 2018-01-09
US20250154286A1 (en) 2025-05-15
SI2358756T1 (sl) 2017-05-31
ECSP11011134A (es) 2011-07-29
CA2747123A1 (en) 2010-07-08
US10023654B2 (en) 2018-07-17
AU2009333326B9 (en) 2015-02-26
JO3672B1 (ar) 2020-08-27
RU2697773C2 (ru) 2019-08-20
HUE056244T2 (hu) 2022-02-28
KR101504494B1 (ko) 2015-03-20
MX2011006197A (es) 2011-07-20
KR101699707B1 (ko) 2017-01-25
WO2010077854A8 (en) 2011-07-07
HRP20211688T1 (hr) 2022-03-18
IL230771A (en) 2015-05-31
EP2358756A1 (en) 2011-08-24
US20190135941A1 (en) 2019-05-09
FR17C1022I1 (sr) 2017-08-09
UY32329A (es) 2010-07-30
CY2017021I1 (el) 2017-11-14
DOP2011000184A (es) 2012-08-15
LUC00024I1 (sr) 2017-07-06
CN104447997A (zh) 2015-03-25
AU2009333326B2 (en) 2014-09-11
US20230340153A1 (en) 2023-10-26
EP3943510A3 (en) 2022-04-20
RU2015109166A (ru) 2015-08-10
AU2009333326A1 (en) 2010-07-08
MX341041B (es) 2016-08-05
AR077724A1 (es) 2011-09-21
US12269897B2 (en) 2025-04-08
US20150284474A1 (en) 2015-10-08
TN2011000300A1 (en) 2012-12-17
US20210253735A1 (en) 2021-08-19
EP2358756B2 (en) 2023-07-26
RS55771B1 (sr) 2017-07-31
SI2358756T2 (sl) 2023-09-29
US9550837B2 (en) 2017-01-24
ES2613489T5 (es) 2024-01-25
ME02760B (me) 2018-01-20
PL3156422T3 (pl) 2022-01-31
DK3156422T3 (da) 2021-11-22
ES2613489T3 (es) 2017-05-24
PT2358756T (pt) 2017-02-24
DK2358756T4 (da) 2023-09-04
EP3156422A2 (en) 2017-04-19
HN2011001659A (es) 2015-02-02
FI2358756T4 (fi) 2023-09-08
LTPA2017019I1 (lt) 2017-07-10
HUS1700029I1 (hu) 2017-07-28
WO2010077854A1 (en) 2010-07-08
DK2358756T3 (en) 2017-04-10
PT3156422T (pt) 2021-11-24
HRP20170488T4 (hr) 2023-09-15
LUC00024I2 (sr) 2017-09-08
HRP20170488T1 (hr) 2017-06-02
RU2552169C2 (ru) 2015-06-10
MY203040A (en) 2024-06-05
RU2011129316A (ru) 2013-01-20
US10941210B2 (en) 2021-03-09
NI201100111A (es) 2011-12-14
PL2358756T3 (pl) 2017-06-30
US20170096496A1 (en) 2017-04-06
JP5902122B2 (ja) 2016-04-13
LTC2358756I2 (lt) 2022-04-25
LT2358756T (lt) 2017-03-27
RU2552169C3 (ru) 2018-01-19
FIC20170031I1 (fi) 2017-07-03
SMT201700183T1 (it) 2017-05-08
EP3156422B1 (en) 2021-08-25
JP2013198487A (ja) 2013-10-03
BRPI0922885A2 (pt) 2016-10-04
PE20120014A1 (es) 2012-02-07
EP3943510A2 (en) 2022-01-26
NL300879I2 (nl) 2017-11-02
CN102245641A (zh) 2011-11-16
TWI465249B (zh) 2014-12-21
KR20150013359A (ko) 2015-02-04
PL2358756T5 (pl) 2023-11-06
UA105650C2 (uk) 2014-06-10
EP3156422A3 (en) 2017-07-05
IL230771A0 (en) 2014-03-31
NO2017029I2 (no) 2017-06-27
TW201036633A (en) 2010-10-16
IL213050A (en) 2015-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12269897B2 (en) Anti-PCSK9 antibodies
US8357371B2 (en) Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to PCSK9
US9724411B2 (en) Methods for treating hypercholesterolemia and reducing LDL-C using antibodies to PCSK9
AU2014262171B2 (en) High affinity human antibodies to PCSK9
HK40067101A (en) High affinity human antibodies to pcsk9
HK1155180B (en) High affinity human antibodies to pcsk9
HK1155180A (en) High affinity human antibodies to pcsk9