RS62899B1 - Modulatori kalijumovih kanala - Google Patents

Description

Opis

SRODNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava zahteva prioritet U.S. privremene prijave br. 62/449,270, koja je podneta 23 januara, 2017.

STANJE TEHNIKE

[0002] Kalijumovi kanali su najviše zastupljeni i najrazličitiji od svih jonskih kanala, nalaze se u različitim životinjskim ćelijama kao što su nervne, mišićne, žlezdane, imunske, reproduktivne, i epitelnog tkiva. Ovi kanali omogućuju prolaz kalijuma u i/ili van ćelije pod određenim uslovima. Ovi kanali su regulisani, npr., osetljivošću na kalijum, voltažu, sekundarnim glasnicima, vanćelijskim ligandima, i osetljivošću na ATP.

[0003] Poznato je da disfunkcija kalijumovih kanala i disfunkcija od strane drugih uzročnika koji imaju uticaja na ove kalijumove kanale generiše gubitak ćelijske funkcije, izmenjenu ćelijsku funkciju, i stanja bolesti. Zbog njihove sposobnosti da moduliraju funkciju jonskih kanala i/ili povrate aktivnost jonskih kanala, modulatori kalijumovih kanala su korišćeni u farmakološkom tretmanu širokog opsega patoloških bolesti i imaju potencijal za rešavanje još većeg spektra terapeutskih indikacija.

[0004] Kalcijumom aktivirani kalijumovi kanali niske provodljivosti (SK kanali) su podfamilija Ca2+-aktiviranih K<+>kanala i familija SK kanala sadrži 4 člana - SK1, SK2, SK3, i SK4 (često naznačeni sa srednjom provodljivosti). Fiziološke uloge SK kanala su naročito proučavane u nervnom sistemu, gde su na primer ključni regulatori neuronske ekscitabilnosti i oslobađanja neurotransmitera, i u glatkom mišiću, gde su od suštinske važnosti u modulaciji tonusa vaskularne, bronho-trahealne, uretralne, materične ili gastro-intestinalne muskulature.

[0005] Imajući u vidu ove implikacije, mali molekuli modulatori kalijumovih jonskih kanala mogli bi imati potencijal u lečenju velikog broja različitih bolesti koje se karakterišu disfunkcijom kalijumovih jonskih kanala i disfunkcijom od drugih uzročnika koji imaju uticaja na ove kalijumove kanale.

SUŠTINA PRONALASKA

[0006] Prikazana su jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli, i njihove farmaceutske kompozicije, koje su korisne u lečenju bolesti koje su povezane sa disfunkcijom kalijumovih jonskih kanala i disfunkcijom od drugih uzročnika koji imaju uticaja na ove kalijumove kanale. (Videti npr., Tabelu 1).

[0007] Pronađeno je da ovde opisana jedinjenja imaju jedno ili više od sledećih korisnih svojstava: visoku rastvorljivost, visoku slobodnu frakciju u mozgu, malu ili bez inhibicije hERG, produžene in vivo polu-živote, dobru biodostupnost, visoku mikrozomalnu stabilnost u jetri, poboljšanu permeabilnost kao što je propustljivost paralelne veštačke membrane (PAMPA), i/ili nisku Cyp inhibiciju. Videti npr., uporedne podatke u Tabelama 2 i 3.

KRATAK OPIS NACRTA

[0008]

SL. 1 je dijagram koji ilustruje efekat jedinjenja 1 nakon oralnog (PO) doziranja na tremor izazvan harmalinom.

SL.2 prikazuje efikasnost i dozni odgovor jedinjenja 1 u procentima mišićne snage.

SL.3 prikazuje efekte jedinjenja 1 na iregularnost u okidanju Purkinjeovih ćelija u ex vivo presecima iz SCA258Q transgenih miševa.

SL. 4 prikazuje efekte jedinjenja 1 na osnovnoj ataksiji u EA2 modelu drhtavog, trzajućeg (eng. tottering) miša.

DETALJNI OPIS

1. Jedinjenja

[0009] Ovde su obezbeđena jedinjenja formule:

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

2. Definicije

[0010] Kao što su ovde korišćeni izrazi "subjekt" i "pacijent" mogu se naizmenično koristiti, i označavaju sisara kome je potreban tretman, npr., životinju kućnog ljubimca (npr., pse, mačke, i slično), životinje sa farme (npr., krave, svinje, konje, ovce, koze i slično) i laboratorijske životinje (npr., pacove, miševe, zamorčiće i slično). Obično, subjekt je humano biće kome je potreban tretman.

[0011] Kada je stereohemija prikazanog jedinjenja imenovana i predstavljena strukturno, imenovani ili prikazani stereoizomer je najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99.9% čist u odnosu na težinu u odnosu na sve druge stereoizomere. Procent u odnosu na težinu čistog u odnosu na sve druge stereoizomere je odnos težine jednog stereoizomera u odnosu na težinu drugih stereoizomera. Kada je jedan izomer imenovan ili prikazan strukturno, prikazan i imenovani enantiomer je najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99.9% optički čist u odnosu na težinu. Procent optičke čistoće u odnosu na težinu je odnos težine enantiomera u odnosu na težinu enantiomera plus težina njegovog optičkog izomera.

[0012] Kada je prikazano jedinjenje imenovano ili prikazano strukturno bez označavanja stereohemije, i kada jedinjenje ima jedan hiralni centar, treba razumeti da ime ili struktura obuhvata jedan enantiomer ili jedinjenje slobodno od odgovarajućeg optičkog i geometrijskog izomera, racemske smeše jedinjenja, i smeše koje su obogaćene u jednom enantiomeru u odnosu na njegov odgovarajući optički izomer.

[0013] Uključene su farmaceutski prihvatljive soli kao i neutralni oblici ovde opisanih jedinjenja. Za upotrebu u lekovima, soli jedinjenja odnose se na ne-toksične "farmaceutski prihvatljive soli." Oblici farmaceutski prihvatljivih soli uključuju farmaceutski prihvatljive kisele/anjonske ili bazne/katjonske soli. Farmaceutski prihvatljive bazne/katjonske soli uključuju, natrijumove, kalijumove, kalcijumove, magnezijumove, dietanolamin, n-metil-D-glukamin, L-lizin, L-arginin, amonijumove, etanolamin, piperazin i trietanolaminske soli. Farmaceutski prihvatljive kisele/anjonske soli uključuju, npr., acetatne, benzenesulfonatne, benzoatne, bikarbonatne, bitartratne, karbonatne, citratne, dihidrohloridne, glukonatne, glutamatne, glikolilarsanilatne, heksilresorcinatne, hidrobromidne, hidrohloridne, malatne, maleatne, malonatne, mezilatne, nitratne, salicilatne, stearatne, sukcinatne, sulfatne, tartratne, i tozilatne.

[0014] Termin "farmaceutski prihvatljivi nosač, adjuvans, ili nosač" odnosi se na ne-toksični nosač, adjuvans, ili nosač koji ne može da uništi farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisano. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi ili nosači koji se mogu koristiti u ovde prikazanim kompozicijama uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, aluminijum oksid, aluminijum stearat, lecitin, proteine iz seruma, kao što je humani albumin iz seruma, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinsku kiselinu, kalijum sorbat, posebne gliceidne mešavine zasićenih biljnih masnih kiselina, vode, soli ili elektrolita, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance zasnovane na celulozi, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloze, poliakrilate, voskove, polietilen-polioksipropilen- blok polimere, polietilen glikole i vunene masti.

[0015] Termin "tretman," "lečiti," i "lečenje" odnosi se na reverziju, ublažavanje, smanjenje verovatnoće razvoja, ili inhibicije napredovanja bolesti ili poremećaja, ili jednog ili više njihovih simptoma, kao što je ovde opisano. U nekim izvođenjima, tretman se može primeniti nakon razvijanja jednog ili više simptoma, tj., terapeutsko lečenje. U drugim izvođenjima, tretman se može primeniti u odsustvu simptoma. Na primer, tretman se može davati osetljivoj osobi pre početika simptoma (npr., u pogledu istorije simptoma i/ili u pogledu genetskih ili drugih faktora osetljivosti), tj., profilaktički tretman. Lečenje se takođe može nastaviti nakon što se simptomi povuku, na primer da bi se sprečilo ili odložilo njihovo ponavljanje.

[0016] Termin "efikasna količina" ili "terapeutski efikasna količina" uključuje količinu ovde opisanog jedinjenja koji će izazvati biološki ili medicinski odgovor kod subjekta.

3. Upotrebe, formulacija i davanje

[0017] U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja i kompozicije su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja koji su u vezi sa aktivnostima kalijumovih kanala. Takve bolesti i/ili poremećaji uključuju npr., neurodegenerativne i neurološke poremećaje (npr., Parkinsonova bolest, tremore, Alchajmerova bolest, demencija, amiotrofična lateralna skleroza (ALS) ataksija, anksioznost, depresija, poremećaji raspoloženja, poremećaji u memoriji i pažnji, bipolarni poremećaj, psihoza, šizofrenija, traumatska povreda mozga, i narkolepsija), oboljenje srca i povezana stanja (npr., ishemijsko oboljenje srca, koronarno oboljenje srca, angina pektoris, i koronarni arterijski spazmi), metabolička bolest i oboljenje bešike (npr., spazmi bešike, urinarna inkontinencija, opstrukcija protoka mokraćne bešike, gastrointestinalna disfunkcija, sindrom iritabilnog creva, i dijabetes), simptomi odvikavanja povezani sa prestankom zavisnosti, i druga stanja povezana sa modulacijom kalijumovih kanala kao što su npr., respiratorne bolesti, epilepsija, konvulzije, napadi, odustvo napada, vaskularni spazmi, premećaji bubrega (npr., policistična bolest bubrega), erektilna disfunkcija, sekretorna dijareja, ishemija, cerebralna ishemija, dismenoreja, Rejnaudova bolest, intermitentna klaudikacija, Sjorgrenov sindrom, aritmija, hipertenzija, miotonična mišićna distrofija, spastičnost, kserostomi, hiperinsulinemija, prevremeni poremećaj, ćelavljenje, kancer, imunska supresija, migrena i bol.

[0018] Predmetni prikaz se takođe odnosi na postupak modulacije kalijumovih kanala kod subjekta koji obuhvata korak davanja ovde opisanog jedinjenja. U drugom izvođenju, predmetni prikaz obezbeđuje postupak za pozitivno modulisanje SK2 kanala u ćeliji koji sadrži korak dovođenja u kontakt ćelije sa ovde opisanim jedinjenjem.

[0019] U jednom aspektu, obezbeđena jedinjenja i kompozicije su korišćena za lečenje tremora. Tremori uključuju, ali nisu ograničeni na mirovanje, aktivni, posturalni, kinetički, sa namerom, specifičan za zadatak, i idiopatske tremore. U jednom aspektu, obezbeđena jedinjenja i kompozicije su korišćene za lečenje posturalnih i aktivnih tremora. Primeri posturalnih i/ili aktivnih tremora uključuju esencijalni tremor, parkinsonizam indukovan lekom, neuropatski tremor, i tremore indukovane od strane toksina (npr., simptoma odvikavanja od alkohola ili od izlaganja teškim metalima). U jednom aspektu, obezbeđena jedinjenja i kompozicije korišćeni su za lečenje esencijalnog tremora.

[0020] Predmetni prikaz se dalje odnosi na postupak za lečenje esencijalnog tremora kod subjekta koi obuhvata korak davanja jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kompozicije koje su ovde opisane.

[0021] Esencijalni tremor je jedan od najzastupljenijih neuroloških poremećaja, koji pogađa -0.9% opšte populacije. Esencijalni tremor je karakterisan sa akcionim tremorom u gornjim ekstremitetima i, ređe, glave, glasa, i trupa. Porodična istorija esencijalnog tremora može se identifikovati kod približno polovine pacijenata, što ukazuje na genetsku komponentu. Konzumiranje alkohola često privremeno smanjuje tremor.

[0022] U nekim izvođenjima, predmetni prikaz se odnosi na postupak lečenja bolesti ili stanja koje je izabrano od neurodegenerativne bolesti, demencije, oboljenja srca, simptoma povlačenja povezanih sa prestankom zavisnosti, metaboličke bolesti, i oboljenja bešike. U drugim izvođenjima, predmetni prikaz obezbeđuje postupak za lečenje bolesti ili stanja koje je izabrano od ataksije, distonije, Parkinsonove bolesti, ishemije, traumatske povrede mozga, amiotrofične lateralne skleroze, hipertenzije, ateroskleroze, dijabetesa, aritmije, prekomerno aktivne bešike, i simptoma povlačenja uzrokovanih sa prestankom zloupotrebe alkohola i zloupotrebe drugih lekova. U nekim izvođenjima, predmetni prikaz obezbeđuje postupak za lečenje ataksije. U nekim izvođenjima, predmetni prikaz obezbeđuje postupak za lečenje spinocerebelarne ataksije.

[0023] Predmetni prikaz obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže ovde opisano jedinjenje; i farmaceutski prihvatljivi nosač. Ove kompozicije se mogu koristiti za lečenje jedne ili više bolesti i stanja koji su opisani gore u tekstu.

[0024] Ovde opisane kompozicije mogu se davati oralno, parenteralno, sprejom za inhalaciju, lokalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Termin "parenteralno" kao što je ovde korišćen uključuje subkutanoznu, intravenoznu, intramuskularnu, intra-artikularnu, intrasinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu, intrahepatičnu, intralezionalnu i intrakranijalnu injekciju ili postupke primenom infuzije. Tečni dozni oblici, injektabilni preparati, oblici čvrstih disperzija, i dozni oblici za lokalno ili transdermalno davanje jedinjenja su ovde uključeni.

[0025] Količina obezbeđenih jedinjenja koja se mogu kombinovati sa materijalima nosačima da bi se proizvela kompozicija u jediničnom doznom obliku će zavisiti od pacijenta koji se leči i određenog načina davanja. U nekim izvođenjima, obezbeđene kompozicije mogu biti formulisane tako da doza od između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/danu obezbeđenog jedinjenja, kao što je npr., 0.1 - 100 mg/kg telesne težine/danu, može se davati pacijentu koji prima ove kompozicije.

[0026] Takođe treba razumeti da specifična doza i tretman lečenja za bilo kog posebnog pacijenta će zavisiti od različitih faktora, uključujući starost, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vremena davanja, brzine ekskrecije, kombinacije lekova, procene odgovornog lekara, i težine određene bolesti koja se leči. Količina obezbeđenog jedinjenja u kompoziciji će takođe zavisiti od određenog jedinjenja u kompoziciji.

PRIMERI

[0027] Predstavljeni primeri koji slede su namenjeni da pomognu predstavljanje predmetnog prikaza, i nisu namenjeni da, niti bi trebalo da se tumače tako da, ograničavaju obim pronalaska.

N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)-6-morfolinopirimidin-4-amin

Korak 1:

[0028]

[0029] Balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 4,6-dihloro-2-(metilsulfonil)pirimidinom (20.0 g, 88.080 mmol, 1.0 eq) u tetrahidrofuranu na -10°C i 3-metil-1H-pirazol (7.23 g, 88.080 mmol, 1.0 ekviv.) je dodat u kapima pomoću šprica tokom perioda od pet minuta. Reakciona smeša je mešana tokom 16 h na 25 °C i završetak reakcije je određen sa TLC. Reakciona smeša je podeljena u delove između vode (500 mL) i etil acetata (500 mL). Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2<∗>100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni (etil acetat/heksan kao sistem rastvarača) da se dobije 4,6-dihloro-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)pirimidin (10.0 g, 43.859 mmol, 50% prinos) kao čvrsti beli čisti oblik. MS (MH+): m/z=229.1.

Korak 2:

[0030]

[0031] Balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 2,4-dihloro-6-metilpirimidinom (11.0 g, 48.24 mmol, 1.0 ekviv.), 4,4-difluorocikloheksan-1-amin hidrohloridom (9.89 g, 57.89 mmol, 1.2 ekviv.), i Cs2CO3(39.19 g, 120.61 mmol, 2.5 ekviv.) u acetonitrilu (200 mL). Reakciona smeša je mešana tokom pet sati na 80 °C i završetak reakcije je određen sa TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena je u delove između vode (100 mL) i etil acetata (200 mL). Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2x100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni (etil acetat/heksan kao sistem rastvarača) da se dobije 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amin (11.0 g, 33.62 mmol, 71%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=328.1.

Korak 3:

[0032]

[0033] Balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-aminom (14.0 g, 42.79 mmol, 1.0 eq), morfolinom (14.91 mL, 171.19 mmol, 4.0 eq), i trietilaminom (23.89 mL, 171.19 mmol, 4.0 eq) u acetonitrilu (200 mL). Reakciona smeša je mešana tokom 16 h na 80 °C i završetak reakcije je određen sa TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena je u delove između vode (100 mL) i etil acetata (300 mL). Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2x100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni (etil acetat/heksan kao sistem rastvarača) da se dobije N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)- 6-morfolinopirimidin-4-amin (1) (12.8 g, 33.84 mmol, 79% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca.

Analitički podaci:

1

[0034] MS (MH ): m/z=379.2; H NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ 8.41 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 3.9 (bs, 1H), 3.67 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.49 (S, 4H), 2.23 (s, 3 H), 2.23-1.97 (m, 3H), 1.92-1.90 (m, 3H), 1.55-1.53 (m, 2H). 1H NMR ispoljava, preko integrisanja, 3 protonske rezonancije u aromatičnom regionu i 1 široku rezonanciju koja odgovara izmenjivom protonu na N-18. Aromatični protoni su uočeni kao dva dubleta i singlet, označavajući dva susedna protona, i jedan izolovani aromatični proton. U alifatičnom regionu, uočene su rezonancije koje odgovaraju 20 protona, pokazujući 1 singlet koji se razlikuje. Integracija ovih rezonancija odgovara dvema uz polje ( eng,„upfield“) dublet-dublet rezonancama, jedna koja parcijalno preklapa multiplet proton, i četiri niz polje (eng.„downfield“) multipleta, od kojih se dva delimično preklapaju. Uz polje alifatični multipleti su povezani sa ostatkom morfolina u strukturi. Niz polje multipleti su dodatno podeljeni blizinom CF2sa ovim protonima. U analizi visoke rezolucije (HR) LC/MS, pseudomolekularni jon (M+H+) je uočen na niskoj voltaži fragmentora (70V) u ESI pozitivnom jonskom načinu na m/z 379.20580. Drugi istaknuti jon koji se uočava na m/z 779.38575 može se pripisati aduktu dimera u

izvoru 2M Na .

13 13

[0035] C NMR podaci su otkrili 14 odvojenih rezonancija ugljenika i generisani su iz dekuplovanog C ugljenikovog spektra stečenom na 25 °C u CDCl3. 14 rezonancija su konzistentne sa strukturom 1 u kojoj je četiri para od 18 ugljenika spektroskopski evivalentno. Primećeno je da je jedna ugljenikova rezonancija (C-12 na 77.05 ppm) delom zatamnjena sa CHCl3 rezonancijom u spektru. Prisustvo ugljenika na ovoj rezonanciji je potvrđeno sakupljanjem 13C spektra u C6D6; rezonancija na 79.7 ppm je uočena bez interferencije sa pika rastvarača, pored svih drugih uočenih rezonancija. Triplet (2J = 244 Hz) je uočen na C-22 rezonanciji 122.29, dva dodatna tripleta su uočena na 31.53 ppm (C-21 & C-23, 3J = 24.93 Hz), i na 31.53 ppm (C-20 & C-24, 4J = 5.37 Hz). Svaki od uočenih tripleta su konzistentni sa F2 supstitucijom na C-22, i smanjenje konstante kuplovanja u odnosu na fluor kako se povećava broj intervenirajućih veza.

[0036] Povezanost ugljenik-proton, i povezanost ugljenik-ugljenik (preko 2 i 3-veze C-C-H korelacija) molekularnog regiona okvira potvrđena je sakupljanjem 2D NMR spektra. Direktna povezanost C-H je potvrđena sa HSQC, i povezanost 2- i 3-veze koja je demonstrirana sa HMBC. Unakrsne korelacije kratkog i dugog dometa (preko 2 ili 3 veze) konzistentne su sa vezama koje su očekivane iz predložene strukture. Konačno, uočeni podaci o hemijskom pomaku dodeljeni kao što je gore prikazano bili su u skladu sa kompjuterski predviđenim hemijskim pomacima 1H i 13C za predloženu strukturu.

N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-6-metoksipirimidin-4-amin

Korak 1:

[0037]

[0038] Četvorogrli balon sa okruglim dnom zapremine 5000-mL, osušen na plamenu, opremljen sečivom za mešanje obloženim teflonom (5 cm) sa pričvršćenom staklenom šipkom (grlo 1), zatvaračem (grlo 2), i dodatnim levkom za dodavanje sa zatvaračem (grlo 3) i adapterom U-cevi za ulazizlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 4), napunjen je sa suspenzijom natrijum hidrida (35.2 g, 880 mmol, 1 ekviv.) u dihlorometanu (1000 mL) je dodat 3,5-dimetilpirazol (84.6g, 880 mmol, 1 ekviv.) na 0 °C i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, 4,6-dihloro-2-(metilsulfonil)pirimidin (200 g, 880 mmol, 1 ekviv.) (razblažen u dihlorometanu (1000 mL)) je dodavan u kapima kroz levak za ukapavanje u reakcionu smešu na -78 °C. Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi i završetak reakcije je određivan sa TLC i UPLC. Nakon 2 h, reakciona smeša je zaustavljena sa vodom na - 78 °C i razblažena je sa dihlorometanom. Nakon 5 min, dihlorometan je dekantovan i ispran je sa rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata i pet-etra kao rastvarača da se dobije 4,6-dihloro-2-(3, 5-dimetil-1h-pirazol-1-il) pirimidin (138 g, 567.71 mmol, 65 %) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z = 244.2.

Korak 2:

[0039]

[0040] Trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 2000-mL, osušen na plamenu, opremljen sa mešalicom obloženom teflonom (5 cm), jednom pregradom (grlo 1), zatvaračem (grlo 3) i kondenzerom za refluks opremljenim sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 2), je napunjen sa rastvorom 4,6-dihloro-2-(3,5-dimetil-1h-pirazol-1-il)pirimidina (136 g, 559.4 mmol, 1 ekviv.) u acetonitrilu (1500 mL) praćeno sa 4,4-difluorocikloheksilamin hidrohloridom (105.6 g, 615.4 mmol, 1.1 ekviv.) i N,N-diizopropil etilaminom (194.88 mL, 1118.8 mmol, 2 ekviv). Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Završetak reakcije je određen sa TLC i UPLC. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je razmućen sa vodom (500 mL). Dobijena čvrsta supstanca je proceđena, isprana sa pet-etrom, osušena pod vakumom da se dobije 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3,5-dimetil-1h-pirazol-1-il)pirimidin-4-amin (191 g, 556 mmol, >95%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z = 342.0.

Korak 3:

[0041]

[0042] Trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 250 mL, osušen na plamenu, opremljen sa mešalicom koja je obložena teflonom (2 cm), jednom pregradom (grlo 1), zatvaračem (grlo 3) kondenzerom za refluks opremljen sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 2), je napunjen sa rastvorom 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3,5-dimetil-1h-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina (20 g, 58.51 mmol, 1 ekviv.) u metanolu praćeno sa natrijum metoksidom (21% u metanolu, 5.37 g, 99.47 mmol, 1.7 ekviv.). Reakcija je zagrejana do 60 °C, i završetak reakcije je određen sa TLC i UPLC. Nakon 5 h, reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i ostatak je razblažen sa etil acetatom, ispran sa vodom, i ispran sa rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u pet-etru kao sistemu rastvarača da se dobije N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)-6-metoksipirimidin-4-amin (2) [16 g (11 g ( 99 % čistoće)+ 5 g (92 % čistoće), 47.41 mmol, -80 %) kao bela čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z =338.1.

1

Analitički podaci: H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.45 (bs, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.72 (s, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.11- 1.82 (m, 6H), 1.60-1.55 (m, 2H).

N-(4, 4-difluorocikloheksil)-6-metoksi-2-(4-metiltiazol-2-il) pirimidin-4-amin

Korak 1:

[0043]

[0044] Trogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa dietil etrom (250 mL) i n-BuLi (241.98 mL, 604.96 mmol, 2.5M u heksanu) je prenet na -78 °C. Rastvor 4-metiltiazola (50.0 g, 504.13 mmol) u dietil etru (200 mL) je dodavan tokom perioda od 30 min. Reakciona smeša je pretvorena u bledo žutu suspenziju. Nakon 1.5 h, DMF (58.54 mL, 756.20 mmol) je dodat i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Nakon završetka reakcije, smeša je sipana u hladni aq. HCl (400 mL, 4N) pod mešanjem i razdvojena je u dva sloja. Organski sloj je ispran sa hladnim aq. HCl (2 x 80 mL, 4N)). Kombinovani aq. slojevi su postepeno zabaženi sa K2CO3(pH 7) i ekstrahovani su sa dietil etrom (3 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i upareni su do isušivanja na sobnoj temperaturi pod vakumom da se dobije 4-metiltiazol-2-karbaldehid (60.0 g, sirov) kao bledo žuta tečnost. Ovaj sirovi materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

1

Korak 2:

[0045]

2 koraka

[0046] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 4-metiltiazol-2-karbaldehidom (60.0 g, sirov) u piridinu (38.04 ml, 472.40 mmol). Hidroksilamin hidrohlorid (32.82 g, 472.40 mmol) je dodavan u delovima tokom perioda od 15 min. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 h pod atmosferom azota. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Nakon završetka reakcije, smeša je sipana u ledeno hladnu vodu i mešana je tokom 20 min, dobijena čvrsta supstanca je proceđena i osušena pod vakumom da se dobije 4-metiltiazol-2-karbaldehid oksim (40.0 g, 281.69 mmol, 59% za dva koraka) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=143.0.

Korak 3:

[0047]

,

[0048] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa rastvorom 4-metiltiazol-2-karbaldehid oksima (35.0 g, 246.44 mmol) i piridinom (87.33 mL, 1084.35 mmol) u 1, 4-dioksanu (140 mL). Trifluoroacetatni anhidrid (51.38 mL, 369.66 mmol) je dodavan polako na -10 °C i omogućeno je mešanje na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Nakon završetka reakcije, smeša je razblažena sa vodom (250 mL) i ekstrahovana je sa dietil etrom (3 x 350 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (2 x 250 mL), rastvorom soli (100 mL) osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da se dobije 4-metiltiazol-2-karbonitril (35.0 g, sirovo) kao svetlo braon tečnost. Ovaj sirovi materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Analitički podaci: 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.90 (s, 1 H), 2.51 (s, 3 H).

Korak 4:

[0049]

,

[0050] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 4-metiltiazol-2-karbonitrilom (35.0 g, sirov) u metanolu (280 mL) i natrijum metoksid (16.77 g, 310.45 mmol) je dodat. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 h, amonijum hlorid je dodat (30.19 g, 564.66 mmol) i mešanje je nastavljeno dodatnih 16 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Nakon završetka reakcije, smeša je proceđena i isprana sa metanolom. Ostatak nakon ceđenja je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i ostatak je razmućen sa dietil etrom (150 mL). Obrazovana čvrsta supstanca je proceđena i osušena pod vakumom da se dobije 4-metiltiazol-2-karboksimidamid hidrohlorid (35.0 g, sirovo) kao beličasta čvrsta supstanca. Ovaj sirovi materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (MH+): m/z=142.0.

Korak 5:

[0051]

[0052] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 4-metiltiazol-2-karboksimidamid hidrohloridom (35.0 g, sirov) u etanolu (350 mL) i dietil malonatu (150.81 mL, 988.64 mmol). Natrijum etoksid (320 mL, 988.64 mmol, 21% u EtOH) je dodavan u kapima na sobnoj temperaturi i zagrejan je do 85 °C. Nakon 3 h, reakciona smeša je zagrejana pod redukovanim pritiskom. Voda (20 mL) je dodata i zakišeljeno je sa 1.5 N HCl (pH 2-3). Dobijena čvrsta supstanca je proceđena i osušena pod vakumom da se dobije 2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4, 6-diol (29.0 g, sirov) kao bledo žuta čvrsta supstanca. Ovaj sirovi materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (MH+): m/z=210.0.

Korak 6:

[0053]

[0054] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa suspenzijom 2-(4-metiltiazol-2-il) pirimidin-4, 6-diola (29.0 g, sirov) i POCl3(290 mL). N,N-dietilanilin (37.84 mL, 235.85 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi i zagrevan na refluksu na 100 °C tokom 2 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Višak POCl3je uklonjen destilovanjem. Ostatak je razblažen sa 500 mL hladne vode, neutralizovan sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, ekstrahovan sa dietil etrom (2 x 500 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (3 x 200 mL), rastvorom soli (100 mL), osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Ostatak je razmućen sa n-pentanom (100 mL). Dobijena čvrsta supstanca je proceđena i osušena pod vakumom da se dobije 2-(4, 6-dihloropirimidin-2-il)-4-metiltiazol 7 (19.5 g, 79.59 mmol, 32% za četiri koraka) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=245.9.

Korak 7:

[0055]

[0056] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa suspenzijom 2-(4,6-dihloropirimidin-2-il)-4-metiltiazola (19.0 g, 77.56 mmol) i 4, 4-difluorocikloheksan-1-amin hidrohlorida (13.30 g, 77.56 mmol) u acetonitrolu (190 mL). U reakciju je dodat cezijum karbonat (37.89 g, 116.34 mmol) i reakciona smeša je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, proceđena, i čvrsta supstanca je isprana sa etil acetatom (500 mL). Ostatak nakon ceđenja je ispran sa vodom (2 x 100 mL), rastvorom soli (100 mL), osušen preko natrijum sulfata, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (60-120 silika gel) elucijom sa 15% EtOAc u heksanu. Relevantne frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su kombinovane i uparane do isušivanja pod redukovanim pritiskom da se dobije 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-amin (22.5 g, 65.25 mmol, 84%) kao beličasto penasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=344.9.

Korak 8:

[0057]

[0058] Dvogrli balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom koja je obložena teflonom je napunjena sa 6-hloro-N-(4, 4-difluorocikloheksil)-2-(4-metiltiazol-2-il) pirimidin-4-aminom (27.0 g, 78.47mmol) u metanolu (450 mL). Dodat je natrijum metoksid (21.19 g, 392.36 mmol) i zagrevano je do 80 °C tokom 16 h. Napredovanje reakcije je praćeno sa TLC. Metanol u višku je uklonjen pod redukovanim pritiskom i ostatak je razblažen sa 10% rastvorom amonijum hlorida u vodi (100 mL) i ekstrahovan je sa etil acetatom (3 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (2 x 100 mL), rastvorom soli (100 mL), osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (60-120 silika gel) elucijom sa 35-40% EtOAc u heksanu. Relevantne frakcije koje sadrže ciljno jedinjenje su kombinovane i uparene do isušivanja pod redukovanim pritiskom da se dobije N-(4, 4-difluorocikloheksil)-6-metoksi-2-(4-metiltiazol-2-il) pirimidin-4-amin (3) (23.4 g, 68.82 mmol, 87%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=341.0.

1

Analitički podaci: H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.41 (s, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 5.81 (s, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 2.43 (s, 3 H), 2.08-1.89 (m, 6 H), 1.61-1.52 (m, 2 H).

(S)-1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-ol

Korak 1:

[0059]

[0060] Zatvorena epruveta zapremine 250-mL, koja je opremljena sa mešalicom obloženom teflonom (2 cm), je napunjena sa rastvorom 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-amina (4.9 g, 14.24 mmol, 1.0 eq ) i tributil(1-etoksivinil)stanana (5.65 g, 15.66 mmol, 1.1 eq) u N,N-dimetilformamidu (60 mL). Reakciona smeša je degazirana upotrebom gasovitog argona tokom 5-10 min, praćeno sa dodavanjem bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida (0.2 g, 0.28 mmol, 0.02 eq). Reakciona smeša je zatvorena i zagrejana na 80 °C tokom 16 h (završetak reakcije je određen sa LCMS) i ohlađena je do sobne temperature. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (300 mL) i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i upareni da se dobije sirovi proizvod kao svetlo braon lepljiva čvrsta supstanca. Sirovi materijal je prečišćen sa hromatografijom na koloni (etil acetat/heksan kao sistem rastvarača) da se dobije N-(4,4-difluorocikloheksil)-6-(1-etoksivinil)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-amin (4.1 g, 10.78 mmol, 75%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=381.0.

Korak 2:

[0061]

Aceton,

Korak 2

[0062] Balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa N-(4,4-difluorocikloheksil)-6-(1-etoksivinil)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-aminom (9.0 g, 23.67 mmol, 1.0 eq) u acetonu (120 mL) zatim sledi dodavanje 2N vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (20 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i završetak reakcije je određen sa LCMS. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio aceton, razblažena sa ledenom hladnom vodom (100 mL), zabažena sa zasićenim natrijumom sa karbonatnim rastvorom, i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i upareni pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod kao svetlo braon lepljiva čvrsta supstanca. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni (etil acetat/heksan kao sistem rastvarača) da se dobije 1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-on (6.1 g, 17.32 mmol, 73%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS (MH+): m/z=353.0.

Korak 3:

[0063]

(Racemsko jedinjenje)

[0064] Balon sa okruglim dnom opremljen sa mešalicom obloženom teflonom je napunjen sa 1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-onom (5.6 g, 15.90 mmol, 1.0 eq) u metanolu (80 mL) na -10 °C zatim sa natrijum borohidridom (0.302 g, 7.95 mmol, 0.5 eq). Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi u trajanju od 1 h i završetak reakcije je određen sa LCMS. Reakciona smeša je zaustavljena sa vodom i koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se uklonio metanol. Ostatak je razblažen sa ledenom hladnom vodom (100 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i upareni pod redukovanim pritiskom da se dobije 1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-ol 4 (5.5 g, 15.53 mmol, 97%) kao beličasta čvrsta supstanca racemske smeše. MS (MH+): m/z=355.0.

Korak 4:

[0065]

(Racemsko jedinjenje)

[0066] Racemsko jedinjenje 1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-ol 4 (5.5 g) je prečišćeno sa hiralnom HPLC (Kolona: Chiralpak-IC (250<∗>20<∗>5.0m); Mobilna faza-A:N-Heksan (0.1%DEA), Mobilna faza-B: IPA:DCM(90:10) izokratksi : 50:50 (A:B); Brzina protoka: 15.0ml/min; 120/inj; Vreme trajanja: 15 min) da se dobije (S)- 1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-ol 5 (2.1 g, 5.93 mmol, 38%) kao beličasta čvrsta supstanca iz

1

prvih frakcija eluiranja (Pik-1, RT= 4.24 min.). MS (MH+): m/z=355.0.1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 7.59-7.57 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.37(s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.37-5.36 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.52-4.50 (t, J = 11.2 Hz, 5.6 Hz, 1H), 4.05 (bs, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.10-1.96 (m, 6H), 1.62-1.59 (m, 2H), 1.35-1.33 (d, J = 6.4 Hz, 3H). Drugi enantiomer: (R)-1-(6-((4,4-difluorocikloheksil)amino)-2-(4-metiltiazol-2-il)pirimidin-4-il)etan-1-ol 6 (2.05 g, 5.78 mmol, 37%) kao beličasta čvrsta supstanca iz drugih frakcija eluiranja (Pik-2, RT= 6.45 min.). MS (MH+): m/z=355.0. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.60-7.59 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.37(s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.38 (bs, 1H ), 4.52-4.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.10 (bs, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.10-1.91 (m, 6H), 1.65-1.57 (m, 2H), 1.35-1.34 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

2-(3-ciklopropil-1H-pirazol-1-il)-N-(4,4-difluorocikloheksil)-6-morfolinopirimidin-4-amin

Korak 1:

[0067]

[0068] Trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 1000-mL, osušen na plamenu, opremljen sa mešalicom obloženom teflonom (3 cm), jednom pregradom (grlo 1), zatvaračem (grlo 3) i refluks kondenzerom koji je opremljen sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 2), je napunjen sa rastvorom 4,6-dihloro-2-(metiltio)pirimidina (150 g, 768.94 mmol, 1.0 ekviv.) u acetonitrilu (1500 mL) zatim sa 4,4-difluorocikloheksilamin hidrohloridom (158.35 g, 922.733 mmol) i cezijum karbonatom (526 g, 1614 mmol, 2.1 ekviv.). Reakcina smeša je zagrejana na 75 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je proceđena da se ukloni cezijum karbonat, zatim je ostatak nakon ceđenja koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije 210 g (93% prinos) 6-hloro-N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(metiltio)pirimidin-4-amina kao svetlo žute čvrste supstance. MS (MH+): m/z = 294.0.

Korak 2:

[0069]

1

[0070] Rastvor 6-hloro-N-(4, 4-difluorocikloheksil)-2-(metiltio)pirimidin-4-amina (60 g, 204.24 mmol, 1.0 ekviv.) i morfolina (35.6 mL, 408.48 mmol, 2.0 ekviv.) u acetonitrilu (600 mL) je zagrejan na 85 °C u zatvorenoj epruveti u trajanju od 16h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana, i dobijeni ostatak je zaustavljen sa ledeno hladnom vodom. Dobijena čvrsta supstanca je proceđena i isprana sa vodom (500 mL), heksanom (250 mL), osušena je pod visokim vakumom da se dobije N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(metiltio)-6-morfolinopirimidin-4-amin kao beličasta čvrsta supstanca (62 g, 88% prinos). MS (MH+): m/z =345.2.

Korak 3:

[0071]

[0072] Trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 100-mL, osušen na plamenu, opremljen sa mešalicom koja obložena teflonom (3 cm), jednom pregradom (grlo 1), zatvaračem (grlo 3) i refluks kondenzerom koji je opremljen sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 2), je napunjen sa rastvorom N-(4,4-difluorocikloheksil)-2-(metiltio)-6-morfolino pirimidin-4-amina (1g, 2.90 mmol) u tetrahidrofuranu (15 mL) praćeno sa 4-N,N-dimetilaminopiridinom (0.1g, 0.87 mmol, 0.3 ekviv.), trietilaminom (1.2 mL, 8.71 mmol, 3.0 ekviv.) i Boc anhidridom (3.16 g, 14.51 mmol, 5.0 ekviv.) zatim je reakciona smeša zagrejana na 80 °C tokom 16h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je zaustavljena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom (2x75 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan je da se dobije terc-butil (4,4-difluorocikloheksil)(2-(metiltio)-6-morfolino pirimidin-4-il)karbamat kao žuta guma (1.1 g, 85%). MS (MH+): m/z =445.2.

Korak 4:

[0073]

[0074] Jednogrli balon sa okruglim dnom zapremine 100-mL, koji je povezan sa refluksnim kondenzerom opremljenim sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem, mešalicom koja je obložena sa teflonom (1 cm), napunjen je sa rastvorom terc-butil (4,4-difluorocikloheksil)(2-(metiltio)-6-morfolinopirimidin-4-il)karbamata (50 g, 112.47 mmol) u dihlorometanu (600 mL) zatim sa 3-hloroperbenzojevom kiselinom (m-hloroperbenzojeva kiselina) (58.2 g, 337.42 mmol, 3.0 ekviv.) na 0°C. Reakciona smeša je polako zagrejana do st i mešana je u

1

trajanju od 30 min. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je zaustavljena sa zasićenim bikarbonatnim rastvorom i ekstrahovana je sa dihlorometanom (2x250mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da se dobije terc-butil (4,4-difluorocikloheksil)(2-(metil- sulfonil)-6-morfolinopirimidin-4-il)karbamat kao beličasta guma (52 g, 97% prinos). MS (MH+): m/z =477.3.

Korak 5:

[0075]

[0076] Jednogrli balon sa okruglim dnom zapremine 100-mL, koji je povezan sa refluksnim kondenzerom opremljenim sa adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem, mešalicom koja je obložena sa teflonom (2 cm), napunjen je sa rastvorom terc-butil (4,4-difluorocikloheksil)(2-(metilsulfonil)-6-morfolinopirimidin-4-il)karbamata (0.9 g, 1.88 mmol) u acetonitrilu (10 mL) zatim sa 3-ciklopropil-1H-pirazolom (0.3 g, 2.83 mmol, 1.5 ekviv.) i cezijum karbonatom (1.23 g, 3.77 mmol, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je zagrejana na 80 °C u trajanju od 16 h, i završetak reakcije je određivan sa TLC i LCMS. Reakciona smeša je proceđena i ostatak nakon ceđenja je koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na koloni korišćenjem 60-120 silika gela sa etil acetat-pet etrom kao sistemom rastvarača. Izolovani materijal je osušen pod vakumom da se dobije terc-butil (2-(3-ciklopropil-1H-pirazol-1-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)(4,4-difluorocikloheksil)karbamat kao beličasta čvrsta supstanca (0.8 g, 84%). MS (MH+): m/z =505.

Korak 6:

[0077]

[0078] Trogrli balon sa okruglim dnom zapremine 100-mL, osušen na plamenu, opremljen sa mešalicom koja je obložena teflonom (2 cm), jednom pregradom (grlo 1), zatvaračem (grlo 3) i adapterom U-cevi za ulaz-izlaz gasa azota napunjenim sa uljem (grlo 2), napunjen je sa rastvorom tercbutil (2-(3-ciklopropil-1H-pirazol-1-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)(4,4-difluorocikloheksil)karbamata (1.2 g, 1.98 mmol, 1 eq) u dihlorometanu (40 mL) zatim sa trifluorosirćenom kiselinom (2.5 mL, 32.55 mmol, 16.4 eq) na 0 °C. Reakciona smeša je polako zagrejana do st i mešana je na istoj temperaturi tokom 6

1

h. Završetak reakcije je određivan sa TLC i UPLC. Reakciona smeša je koncentrovana i dobijeni ostatak je zaustavljen sa 10% zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, ekstrahovan sa etil acetatom (2x100 mL), i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na koloni korišćenjem 60-120 silika gela, etil acetat-pet etra kao sistema rastvarača. Dobijena čvrsta supstanca je osušena pod vakumom da se dobije 2-(3-ciklopropil-1H-pirazol-1-il)-N-(4,4-difluorocikloheksil)-6-morfolinopirimidin-4-amin 7 (0.73g, 90%). MS (MH+): m/z=405. Analitički podaci: 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.39 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.69-3.67 (m, 4H), 3.50 (m, 4H), 1.99-1.90 (m, 7H), 1.56-1.54 (m, 2H), 0.93-0.89 (m, 2H), 0.72-0.71 (m, 2H).

BIOLOŠKI TESTOVI

[0079] Biološka aktivnost je određivana prema sledećem. Jonska struja kroz Ca<2+->aktivisane K<+>kanale niske provodljivosti (SK kanali, podtip 2) je merena korišćenjem konfiguracije cele ćelije tehnikom nametanja voltaže na deliću membrane (eng. “patch-clamp”) u postavci “patch-clamp” koristeći ćelije kulture tkiva HEK293 koje eksprimuju SK2 kanale kao što je opisano u Hougaard et al., British Journal of Pharmacology 151, 655 - 665, May 8, 2007, čija su celokupna učenja ovde uključena referencom. U jednom aspektu, jedinjenje je definisano kao SK pozitivni alosterni modulator (PAM) ukoliko jedinjenje povećava struju u ovom testu, na primer, ukoliko je SC100vrednost jedinjenja manja od ili jednaka sa 10 µM kao što je određeno u ovom testu. Definisano je da vrednost SC100 da bude koncentracija jedinjenja koja povećava osnovnu struju za 100%.

[0080] SC100vrednost je data u Tabeli 1.

[0081] Mužjacima Sprague Dawley pacova je davan ili nosač, 10, ili 30 mg/Kg Jedinjenja 1 oralnom primenom 30 minuta pre injekcije harmalina da bi se ispitao terapeutski efekat Jedinjenja 1 na tremor izazvan harmalinom. Odmah nakon injekcije harmalina, životinje su smeštene u aparat za kvantifikovanje tremora i događaji tremora su kvantifikovani tokom 60 minuta. Signal događaja tremora je generisan kada se traka malog metalnog predajnika koji je postavljen na desnu prednju šapu životinje pomerila unutar elektromagnetnog polja koje generiše petlja antene unutar aparata za testiranje. Izlazi iz pojačivača su digitalizovani brzinom uzorkovanja od 1,000 Hz i signal je obrađen i analiziran korišćenjem LabView softvera (National Instruments). Da bi se minimizirao signal iz kretanja u pokretu i ponašanja, signal je filtriran sa 128-ms neprilagođenim filtrom pokretnog proseka, i događaji sa amplitudama > 0.5 V i trajanjima > 300 ms računati su kao događaj tremora. Podaci su analizirani u “jednominutnim odbacivanjima” tokom trajanja testa i predstavljeni su kao zbir događaja tremora tokom celog 60 minutnog testa. Kao što je prikazano na SL. 1, uočena je značajna inhibicija tremora u dozi od 30 mg/Kg Jedinjenja 1.

[0082] Smanjenje tremora sa Jedinjenjem 1 takođe je pokazano u merenjima frekvencije tremora celog tela preko “force-plate” akcelerometra.

[0083] Tremor celog tela je meren sa San Diego Instruments Tremor Monitor (San Diego, California, USA). Životinje su prethodno tretirane sa 3, 10, ili 30 mg/kg Jedinjenja 1 oralno 30 minuta pre intraperitonealnog davanja 5 mg/kg harmalina. Tremor je meren tokom 30 minuta nakon davanja harmalina, i podaci su zatim analizirani sa brzom Fourierovom transformacijom i prijavljeni su kao spektar snage frekvencije. Harmalin je izazvao značajno povećanje u spektru snage u opsegu frekvencija između 10 i 14 Hz. U ovom opsegu, 3, 10, i 30 mg/kg svi značajno smanjuju tremor. Podaci su dalje analizirani izračunavanjem procenta snage pokreta (%MP), definisane kao snaga u opsegu od 9 - 13 Hz podeljeno sa ukupnom snagom u spektru (0 - 30 Hz) umnoženo sa 100. Ovom analizom, 3, 10, i 30 mg/kg značajno je smanjilo tremor izazvan harmalinom (harmalin nosač (n=13); harmalin

1

3 mg/kg Jedinjenja 1 (n=8), P<0.01; 10 mg/kg Jedinjenja 1 (n=16) i 30 mg/kg Jedinjenja 1 (n=13), redom, P<0.05) (SL.2).

[0084] Uzeti zajedno, ovi podaci pokazuju da Jedinjenje 1 značajno smanjuje tremor koji je izazvan harmalinom mereno pomoću dva različita eksperimentalna dizajna.

[0085] Stepen do kog jedinjenja moduliraju SK2 kanale in vivo je izražen kao %SK2 SC100, što je odnos koncentracije slobodnog leka u mozgu u odnosu na izmerenu snagu jedinjenja na SK2 kanalu. Izračunato je prema sledećem: CFB= CMBx BFF, gde CMBje koncentracija jedinjenja merena sa tečnom hromatografijom masenom spektrometrijom iz mozgova sakupljenih neposredno nakon snimanja tremora (Tabela 1, "Izmerena koncentracija u mozgu"). CFBje količina slobodnog jedinjenja koje nije u kompleksu da proteinom i prema tome slobodno je da interaguje sa SK2 kanalom (Tabela 1, "Izračunata slobodna koncentracija u mozgu"). BFF je prosečna slobodna frakcija jedinjenja kao što je merena ravnotežnom dijalizom u odvojenim eksperimentima (1 uM ispitivana koncentracija inkubirana u 10% homogenatu moždanog tkiva pacova tokom 5 h na 37°C) (Tabela 1, "Frakcija bez mozga"). Slobodan lek u mozgu dostupan za interakciju sa SK2 kanalima (CFB)dolazi sa množenjem izmerenog ukupnog nivoa mozga (CMB) sa prosečnom slobodnom frakcijom (BFF).

[0086] Količina slobodnog jedinjenja je zatim izražena u terminima njegove potencije protiv SK2 kanala kao što sledi: %SK2 SC100= CFB/SK2 SC100X 100, gde je SK2 SC100(Tabela 1, "SK2 SC100") izmerena vrednost potencije jedinjenja na SK2 kanalima i %SK2 SC100(Tabela 1, "%SK2 SC100") je koncentracija bez mozga (CFB) normalizovana sa SK2 SC100. Vrednosti su date u Tabeli 1.

Tabela 1

Efekat na nepravilnost u aktivaciji Purkinjeovih ćelija u in Ex Vivo presecima iz SCA258Q transgenih Miševa

[0087] U presecima cerebeluma iz SCA258Q miševa, Purkinjeovi neuroni ispoljavaju haotično paljenje, mereno kao povećanje u koeficijentu varijacije intervala između šiljaka (ISI CV), mera regularnosti intervala paljenja između akcionih potencijala. Razlika u ISI CV između divljeg tipa (N=8) i SCA258Q (N=11) miševa je ilustrovana na SL.3 (P<0.005). Takođe je prikazana, sekvencijalna primena u kupatilu 1 (N=11) ili 3 µM (N=10) Jedinjenja 1 delimično je preokrenula ISI CV uočenom u cerebralnim presecima iz jedanaest meseci starih SCA258Q miševa (P<0.05). Ovi podaci ukazuju na to da Jedinjenje 1 reguliše paljenje Purkinjeovih ćelija time što delimično vraća interval između šiljaka u ovom mišjem modelu Spinocerebelarne Ataksije.

Procena efekta jedinjenja u mišjem trzajućem modelu epizodne ataksije 2 (EA2)

[0088] Jedinjenje 1 je ispoljilo efikasnost u validiranim životinjskim modelima nasledne ataksije (EA2) i ET (tremor izazvan harmalinom). Da bi se ispitalo da Jedinjenje 1 može ublažiti ataksiju u modelu bolesti, procenjeno je u EA2 "Trzajućem" mišjem modelu. Ovi miševi ispoljavaju bazalnu ataksiju koja nastaje zbog nepravilnosti u aktiviranju pejsmejkera Purkinjeovih ćelija zbog mutacije gubitka u funkciji

2

u P/Q Ca<2+>kanala (isti protein koji je mutirao u SCA6), koja uzrokuje epizodnu ataksiju 2 (EA2). Životinje su procenjene u aparatu za pod sa paralelnim šipkama koji automatski broji koliko puta životinjska noga klizi kroz ravnomerno raspoređene metalne šipke i ukupnu udaljenost koju životinja pređe. Bazalana ataksija je nakon toga izražena kao odnos ataksije, koji je ukupan broj proklizavanja stopala podeljen sa ukupnom razdaljinom koju životinja pređe u centimetrima. Povećanje u odnosu ataksije između divljeg tipa i EA2 miševa je ilustrovano na SL.4.

[0089] U ovom ispitivanju, EA2 (8-10 meseci stari; n=18) miševi su primili intraperitonealnu injekciju Jedinjenja 1 ili nosača 30 minuta pre postavljanja u aparat na podu sa paralelnim šipkama. Životinje su procenjivane u modelu studije u kome je svaka životnja primila i 10 mg/kg Jedinjenja 1. Tri dana su dozvoljena između doza za ispiranje jedinjenja. U dozi koja je primenjena u ovoj studiji, Jedinjenje 1 je potpuno preokrenulo povećanje u odnosu ataksije koji je uočen u EA2 u odnosu na miševe divljeg tipa. Ovi podaci ukazuju na to da Jedinjenje 1 obnavlja normalne performanse u ovom merenju motoričke funkcije u modelu nasledne cerebelarne ataksije.

Uporedne prednosti

[0090] Sledeće studije ilustruju dalje tehničke prednosti ovde prikazanih jedinjenja.

[0091] Ispitivanja rastvorljivosti u vodi (kinetička rastvorljivost) jedinjenja su sprovedena u fiziološkom rastvoru fosfatnog pufera (pH 7.4) mereno metodom mućkanja. U ovom testu, DMSO štok rastvor jedinjenja koje se ispituje je dodato u pufer a nakon toga sledi ekvilibracija (mućkanje), ceđenje i određivanje rastvorljive količine pomoću HPLC-UV. Uslovi korišćeni u testu su prikazani u tekstu ispod. Rezultati su prikazani u Tabeli 2 i Tabeli 3.

- Koncentracija jedinjenja: 200µM sa 1% DMSO (n=2)

- Vodeni puder: 0.05M sistem fosfatnog pufera pH 7.4

- Period ekvilibracije: 16 h na sobnoj temperaturi (~23°C) sa mešanjem

- Priprema uzorka: Ceđenje

- Analiza: HPLC-UV

- Referentna jedinjenja: kofein (visoke rastvorljivosti) i dietilstilbestrol (niske rastvorljivosti)

[0092] Profilisanje metaboličke stabilnosti jedinjenja je sprovedeno u mikrozomima jetre. U ovom testu, ispitivano jedinjenje je inkubirano sa mikrozomima jetre u prisustvu NADPH za 2 vremenske tačke na 37°C. Na kraju inkubacije, reakcija je zaustavljena sa acetonitrilom koji sadrži unutrašnji standard i preostalo matično jedinjenje je određeno sa LC- MS/MS. Uslovi koji su korišćeni u ovom testu su sažeto predstavljeni u tekstu ispod. Rezultati su prikazani u Tabeli 2.

- Vreme inkubacije: 0 i 30 minuta na pH 7.4, 37°C

- Ispitivana koncentracija: 1µM u 0.02% DMSO na pH 7.4 (n=2)

- Koncentracija NADPH u testu: 1mM

- Koncentracija proteina mikrozoma jetre u testu: 0.5mg/ml

- Analiza: LC-MS/MS

- Prijavljeni podaci: % Preostalog matičnog jedinjenja (%PCR)

- Referentna jedinjenja za visok i nizak klirens su uključeni

- Ispitivane vrste: miš, pacov, pas, majmun, i čovek

[0093] Ovde opisana jedinjenja su ispitivana za CYP inhibiciju kroz 5 izooblika (3A4, 2D6, 2C9, 2C19 & 1A2). U ovom testu, specifični supstrati CYP izooblika su inkubirani sa mikrozomom humane jetre (HLM) u prisustvu ispitivanih jedinjenja, i određeno je obrazovanje metabolita. Izračunat je procenat inhibicije obrazovanih metabolita u različitim koncentracijama ispitivanog jedinjenja i određena je IC50.Uslovi koji su korišćeni u testu su prestavljeni u tekstu ispod. Rezultati su prikazani u Tabeli 2.

- Koncentracija ispitivanog leka (Inhibitor): 8 različitih koncentracija (100µM do 0.005µM) - Matriks: Mikrozom humane jetre (Invitrogen, life technologies)

- Specifični supstrati probe će se koristiti za izooblike kao što je dato u tekstu ispod:

- CYP3A4: Midazolam

- CYP2D6: Bufuralol

- CYP2C9: Diklofenak

- CYP2C19: Mefinitoin

- CYP1A2: Fenacetin

- Kofaktori: NADPH (1mM konačno u testu)

- Analiza uzorka: LC-MS/MS (metaboliti)

- Specifični referentni inhibitori uključeni u svim testovima (Ketokonazol/Hinidin/Sulfafenazol/Tiklopidin/Furafilin)

- Pufer: Kalijumfosfatni pufer (100mM) pH 7.4

- nivo DMSO u testu: 0.1%

- Analiza podataka: % Inhibiije u odnosu na kontrolu

[0094] Jedinjenja su ispitivana u hERG testu kalijumovog kanala srca. hERG je odgovora na brzu odloženu ispravljačku struju (IKr) u humanim komorama. Inhibicija IKrje najčešći uzrok produženja srčanog akcionog potencijala od strane ne-kardijalnih lekova. Videti npr., Brown, A.M. i Rampe, D. (2000). Drug-induced long QT syndrome: is HERG the root of all evil? Pharmaceutical News 7, 15-20.

[0095] HEK-293 ćelije su stabilno transfektovane sa hERG cDNK. Stabilnu transfektanti su selektovani sa istovremenom ekspresijom G418-gena rezistencije koji je ugrađen u ekspresioni plazmid. Selekcioni pritisak je održavan uključivanjem G418 u medijumu kulture. Ćelije su kultivisane u Dulbekovom Modifikovanom Eagle Medijumu / Smeša Nutrijenata F-12 (D-MEM/F- 12) koja je dopunjena sa 10% serumom iz fetusa govečeta, 100 U/mL penicilin G natrijum, 100 µg/mL streptomicin sulfata i 500 µg/mL G418. Snimanja ćelijske culture se čuvaju u u dosijeu u Charles River Laboratories.

[0096] Ćelije su prenete u komoru za snimanje i superfuzionisane su sa kontrolnim rastvorom nosača. Rastvor u pipeti za snimanja ukupne ćelije (kompozicija u mM): kalijum aspartat, 130; MgCl2, 5; EGTA, 5; ATP, 4; HEPES, 10; pH podešena do 7.2 sa KOH. Rastvor pipete je pripremljen u delovima, alikvotiran, skladišten nakon smrzavanja, i sveži alikvota je otopljena svakog dana. Pipete za nametanje voltaže (“patch”) su napravljene od staklenih kapilarnih cevi pomoću P-97 izvlakača mikropipeta (Sutter Instruments, Novato, CA). Komercijalni “patch clamp” amplifikator je korišćen za snimanja na punoj ćeliji. Pre digitalizacije, snimanja struje su niskopropusno filtrirana na jednoj petini frekvencije uzorkovanja.

[0097] Inhibicija hERG struje početka i stanja mirovanja je merena korišćenjem obrasca impulsa sa fiksiranim amplitudama (prepuls kondicioniranja: 20 mV za 2 s; test puls: -50 mV za 2 s) ponovljeno u intervalima od 10 s, sa potencijala zadržavanja od -80 mV. Pik struje repa je izmeren tokom koraka 2 s do -50 mV.

[0098] Koncentracija jednog ispitivanog člana primenjena je na svakoj ćeliji (n = 3). Strujni pik je meren tokom rampe testa. Stanje u mirovanju je održavano bar 30 sekundi pre nanošenja ispitivanog člana ili pozitivne kontrole. Struja pika je merena sve do postizanja novog stanja mirovanja. Rezultati su prikazani u Tabeli 2.

[0099] Podaci oralne biodostupnosti su sakupljeni kod pacova prema sledećem.

Rezultati su prikazani u Tabeli 2.

- Soj pacova/pol: Sprague Dawley/Mužjaci

- Starost / telesna težina: 6 do 8 nedelja/ 250-300gms

- Br životinja po grupi: n=3

- Ukupan broj grupa: 2 (1mpk IV & 10mpk PO)

- Način davanja: Oralno (PO)/ Intravenozno (IV)

- Zapremina doziranja: Intravenozno (2ml/kg) & Oralno (10ml/kg)

- Nosači formulacije: Standardne formulacije sugerisane sa Sponsor Doznim nivoima (IV & Oral): 1mg/kg; intravenozno & 10mg/kg; oralno ili kao što je sugerisano

- Izgladnjivanje/Ishana: Oralno doziranje će biti sprovedeno sa prekonoćnim izgladnjivanjem životinja Učestalost doziraja: Pojedinačna doza

- Vremenske tačke za sakupljanje krvi: (57 plazma uzoraka za analizu)

- IV - 10 tačaka (pre-doziranja; 5min; 15 min; 30 min; 1 h; 2 h; 4 h; 6 h; 8 h; 24 h) [n=3 pacova] - PO - 9 tačaka (pre-doziranja; 15 min; 30 min; 1 h; 2 h; 4 h; 6 h; 8 h; 24 h) [n=3 pacova]

- Sakupljanje uzoraka krvi: kanula za jugularnu venu

- Anti-koagulans: 0.2% K2 EDTA

- Analiza uzorka sa bioanalitičkim postupkom za utvrđivanje gradusa koji je razvijen za procenu ispitivanog jedinjenja u plazmi korišćenjem LC-MS/MS sistema.

2

2 a bela

[0100] Kao što je pokazano podacima u Tabeli 2 gore u tekstu, Jedinjenje 1 je preko 3-puta potentnije na SK2 od Komparatora A i preko 14-puta potentnije na SK2 od Komparatora B. Jedinjenje 1 takođe ima bolju rastvorljivost, veću BFF, veću mikrozomalnu stabilnost, i veću oralnu biodostupnost od Komparatora A. Sveukupno poboljšanje u BFF i rastvorljivosti u odnosu na Komparator A i fenilni derivat Komparatora C je takođe pokazano kroz ovde opisana jedinjenja kao što je predstavljeno u Tabeli 3. Jedinjenje 1 je reprodukovano iz gornjeg dela radi lakšeg poređenja.

Tabela 3

2

(nastavak)

2

[0101] Dok su opisana brojna izvođenja iz pronalaska, očigledno je da naši osnovni primeri mogu biti izmenjeni da bi se obezbedila druga izvođenja koja koriste jedinjenje i postupke iz ovog pronalaska. Prema tome, biće jasno da obim ovog pronalaska treba definisati priloženim zahtevima radije od specifičnih izvođenja koji su predstavljeni kao primer.

[0102] Osim ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji su ovde korišćeni u skladu su sa značenjem koje je opšte poznato stručnjaku iz oblasti tehnike.

2

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu 2

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. 7. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i farmaceutski prihvatljiv nosač.
8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6 ili kompozicija prema zahtevu 7 za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja koje reaguje na modulaciju kalicijum aktiviranog kalijumovog kanala niske provodljivosti (SK kanal).
9. 9. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 8, pri čemu je bolest ili stanje odgovor na modulaciju SK2 kanala.
10. 10. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 8, pri čemu je bolest ili stanje izabrano od neurodegenerativne bolesti, demencije, oboljenja srca, simptoma apstinentske krize povezanih sa prekidom zavisnosti, metaboličke bolesti, i oboljenje bešike.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 8, pri čemu je bolest ili stanje izabrano od ataksije, distonije, tremora, Parkinsonove bolesti, ishemije, traumatske povrede mozga, amiotrofične lateralne skleroze, hipertenzije, ateroskleroze, dijabetesa, aritmije, prekomerno aktivne bešike, i simptoma apstinentske krize koji su uzrokovani prekidom zloupotrebe alkohola i zloupotrebe drugih lekova.
12. 12. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 11, pri čemu je bolest ili stanje esencijalni tremor.
13. 13. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 11, pri čemu je bolest ili stanje ataksija.
14. 14. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13, pri čemu je bolest ili stanje spinocerebelarna ataksija.
15. 15. Jedinjenje za upotrebu ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 8, pri čemu je bolest ili stanje anksioznost.