RS63401B1 - Derivati 2,4-diaminohinazolina i njihova upotreba u lečenju virusnih infekcija, kancera ili alergija - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Prijava opisuje derivate hinazolina, postupak za njihovu pripremu, farmaceutske kompozicije i njihovu medicinsku upotrebu, konkretnije u oblasti terapije. Sredstva koja su opisana u prijavi su pogodna za modulaciju, konkretnije agonizaciju, zvonastih receptora (TLR), konkretnije TLR8. Sredstva koja su opisana u prijavi su naročito korisna u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja, kao što su virusne infekcije, imunski ili inflamatorni poremećaji.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Zvonasti receptori su primarni transmembranski proteini koje karakteriše ekstracelularni domen bogat leucinom i citoplazmatična ekstenzija koja sadrži očuvani region. Urođeni imunski sistem može da prepozna molekulske obrasce povezane sa patogenima putem ovih TLR koji su eksprimirani na ćelijskoj površini određenih vrsta imunskih ćelija. Prepoznavanje stranih patogena aktivira proizvodnju citokina i ushodnu regulaciju kostimulatornih molekula na fagocitima. To dovodi do modulacije ponašanja T ćelija.

[0003] Procenjuje se da većina ćelija sisara ima između deset i petnaest vrsta zvonastih receptora. Ukupno trinaest TLR (nazvanih prosto TLR1 do TLR13) identifikovano je kod ljudi i miševa, a ekvivalentni oblici mnogih od njih su pronađeni kod drugih vrsta sisara. Međutim, ekvivalenti određenih TLR koji se mogu naći kod ljudi nisu prisutni kod svih sisara. Na primer, gen koji kodira protein analogan TLR10 kod ljudi je prisutan kod miševa, ali deluje da je u nekom trenutku u prošlosti oštećen retrovirusima. S druge strane, miševi eksprimiraju TLR 11, 12 i 13, od kojih nijedan nije zastupljen kod ljudi. Drugi sisari mogu da eksprimiraju TLR koji se ne nalaze kod ljudi. Druge nesisarske vrste mogu imati TLR koji su različiti od onih kod sisara, kao što se može videti na osnovu TLR14, koji je otkriven kod fugu ribe. To može da zakomplikuje proces korišćenja eksperimentalnih životinja kao modela humanog urođenog imuniteta.

[0004] U lečenju određenih oboljenja, može biti korisno da se indukuje IL-12, ili IFNy, između ostalih citokina, putem agonizacije receptora TLR 7/8 (Schurich et. al PLoS Pathology 2013, 9, e1003208 i Jo, J et. al PLoS Pathology 2014, 10, e1004210).

[0005] Za pregled zvonastih receptora vidite sledeće članke u časopisima. Hoffmann, J.A., Nature, 426, str.33-38, 2003; Akira, S., Takeda, K., i Kaisho, T., Annual Rev. Immunology, 21, str.335-376, 2003; Ulevitch, R. J., Nature Reviews: Immunology, 4, str.512-520, 2004. O'Neil et. al Nature Reviews Immunology 13, 453-460, 2013. Prethodno su opisana jedinjenja koja ukazuju na aktivnost zvonastih receptora, recimo

u WO2006117670, WO98/01448, WO9928321, WO2009067081, WO2012136834, WO2012 156498, WO2014076221 i WO2016141092, kao i u Pieters et al., Bioorg. Med. Chem. Lett, sveska 28 br.4 (2018), 711-71.

[0006] Postoji velika potreba za novim modulatorima zvonastih receptora koji imaju poželjnu selektivnost i poboljšani bezbednosni profil u poređenju sa jedinjenjima iz prethodnog stanja struke.

SAŽETAK PRONALASKA

[0007] Prijava obezbeđuje jedinjenje formule (I)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf, pri čemu,

• R1je C4-8alkil supstituisan hidroksilom,

• ugljenik iz R1vezan za amin na 4-poziciji hinazolina ima (R)-konfiguraciju,

• R2je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil, metoksi, ciklopropil, trifluormetil ili karboksil amid, pri čemu su metil, metoksi i ciklopropil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata (konkretnije jednim supstituentom) nezavisno izabranih od fluora i nitrila,

• R3je vodonik ili deuterijum,

• R4je vodonik, deuterijum, fluor, metil, karboksil estar, karboksil amid, nitril, ciklopropil, C4-7heterocikl ili 5-člana heteroaril grupa, pri čemu su metil, ciklopropil, C4-7heterocikl i 5-člana heteroaril grupa opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata (konkretnije sa 1 ili 2 supstituenta, konkretnije 1 supstituentom) nezavisno izabranih od fluora, hidroksila i metila,

i

• R5je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil ili metoksi, pod uslovom da najmanje jedan od R2, R3, R4i R5nije vodonik.

[0008] Proizvodi iz prijave mogu pogodno da pokazuju poboljšani TLR8 agonizam (ili selektivnost) u odnosu na TLR7.

[0009] Prijava takođe obezbeđuje sredstva, koja obuhvataju ili sadrže jedinjenje iz prijave, kao što su farmaceutska kompozicija, imunološka kompozicija i kompleti.

[0010] Proizvodi i sredstva iz prijave mogu biti korisni za aktivaciju ili stimulaciju TLR8.

[0011] Proizvodi i sredstva iz prijave mogu biti korisni za aktivaciju ili stimulaciju Th1 imunskog odgovora i/ili proizvodnje citokina, kao što je IL12.

[0012] Proizvodi i sredstva iz prijave naročito su korisni u lečenju ili prevenciji virusne infekcije ili bolesti indukovane virusom, konkretnije HBV infekcije ili bolesti indukovane putem HBV, kao i u drugim indikacijama, konkretnije za lečenje ili prevenciju malignih tumora, kancera ili alergije.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0013] Prijava opisuje predmet opisan u nastavku, predmet ilustrovan u nastavku kao i predmet definisan u podnetim zahtevima, koji su ovde obuhvaćeni referencom.

[0014] Prijava obezbeđuje jedinjenje formule (I)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf, pri čemu,

• R1je C4-8alkil supstituisan hidroksilom,

• ugljenik iz R1vezan za amin na 4-poziciji hinazolina ima (R)-konfiguraciju,

• R2je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil, metoksi, ciklopropil, trifluormetil ili karboksil amid, pri čemu su metil, metoksi i ciklopropil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata (konkretnije jednim supstituentom) nezavisno izabranih od fluora ili nitrila,

• R3je vodonik ili deuterijum,

• R4je vodonik, deuterijum, fluor, metil, karboksil estar, karboksil amid, nitril, ciklopropil, C4-7heterocikl ili 5-člana heteroaril grupa, pri čemu su metil, ciklopropil, C4-7heterocikl i 5-člana heteroaril grupa opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata (konkretnije sa 1 ili 2 supstituenta, konkretnije 1 supstituentom) nezavisno izabranih od fluora, hidroksila ili metila, i

• R5je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil ili metoksi,

pod uslovom da najmanje jedan od R2, R3, R4i R5nije vodonik (tj. R2, R3, R4i R5ne mogu svi u isto vreme biti H).

[0015] R4može imati (R) ili (S) konfiguraciju.

[0016] Proizvodi iz prijave mogu pogodno da pokazuju poboljšani TLR8 agonizam (ili selektivnost) u odnosu na TLR7.

[0017] Agonisti TLR 7/8 su takođe od interesa kao adjuvansi za vakcine zbog sposobnosti da indukuju Th1 odgovor. Agonisti TLR8 su od posebnog interesa za delovanje na indukciju IL12 kao i drugih citokina.

[0018] Uopšteno, može biti pogodno da jedinjenja formule (I) imaju malu metaboličku stabilnost, ili da se na drugi način brzo izbacuju, čime se ograničava koncentracija u sistemskoj cirkulaciji i prekomerna imunska stimulacija koja može dovesti do neželjenih dejstava.

[0019] Osim ako nije drugačije naznačeno ili osim ako kontekst ne nalaže drugačije, svi termini imaju svoja uobičajena značenja u relevantnim oblastima.

[0020] Termin „alkil“ odnosi se na ravni ili razgranati zasićeni alifatični ugljovodonik koji sadrži naznačeni broj atoma ugljenika.

[0021] Termin „alkoksi“ odnosi se na alkil (lanac ugljenika i vodonika) grupu koja je jednom vezom vezana za kiseonik, kao što je, na primer, metoksi grupa ili etoksi grupa.

[0022] Termin „aril“ označava aromatičnu strukturu prstenova koja opciono sadrži jedan ili dva heteroatoma izabrana od N, O i S, naročito od N i O. Pomenuta aromatična struktura prstenova može imati 5, 6 ili 7 atoma prstena. Konkretno, pomenuta aromatična struktura prstenova može imati 5 ili 6 atoma prstena.

[0023] Heterocikl označava molekule koji su zasićeni ili delimično zasićeni i uključuju tetrahidrofuran, oksetan, dioksan ili druge ciklične etre. Heterocikli koji sadrže azot uključuju, na primer, azetidin, morfolin, piperidin, piperazin, pirolidin, i slično. Drugi heterocikli uključuju, na primer, tiomorfolin, dioksolinil i ciklične sulfone.

[0024] Heteroaril grupe su heterociklične grupe koje su po prirodi aromatične. One su monociklične, biciklične ili policiklične i sadrže jedan ili više heteroatoma izabranih od N, O ili S. Heteroaril grupe mogu biti, na primer, imidazolil, izoksazolil, oksadiazolil, oksazolil, pirolil, piridonil, piridil, piridazinil, pirazinil. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) uključuju njihove kisele adicione i bazne soli. Pogodne kisele adicione soli nastaju od kiselina koje grade netoksične soli. Pogodne bazne soli nastaju od baza koje grade netoksične soli.

[0025] Jedinjenja iz prijave takođe mogu da postoje u nesolvatisanim i solvatisanim oblicima. Termin „solvat“ se ovde koristi da opiše molekulski kompleks koji sadrži jedinjenje iz prijave i molekule jednog ili više farmaceutski prihvatljivih rastvarača, na primer, etanola.

[0026] Termin „polimorf“ odnosi se na sposobnost jedinjenja iz prijave da postoji u više od jednog oblika ili kristalne strukture.

[0027] Prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R1je C4-8alkil supstituisan hidroksilom, i pri čemu su R2, R3, R4i R5kao što je prethodno naznačeno. U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu R1ima formulu (II):

ili formulu (III):

i pri čemu su R2, R3, R4i R5kao što je prethodno naznačeno.

[0028] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R2je fluor, hlor ili metil, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora i nitrila, i pri čemu su R1, R3, R4i R5kao što je prethodno opisano.

[0029] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R2je fluor, hlor ili metil, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora i nitrila, i pri čemu R1ima formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (III), i pri čemu su R3, R4i R5kao što je prethodno opisano.

[0030] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R2je fluor ili hlor, konkretnije fluor, i pri čemu su R1, R3, R4i R5kao što je prethodno opisano.

[0031] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R2je fluor ili hlor, konkretnije fluor, pri čemu R1ma formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (II), i pri čemu su R3, R4i R5kao što je prethodno opisano.

[0032] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R5je fluor ili hlor, konkretnije fluor, i pri čemu su R1, R2, R3i R4kao što je prethodno opisano.

[0033] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R5je fluor ili hlor, konkretnije fluor, pri čemu R1ima formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (II), i pri čemu su R2, R3i R4kao što je prethodno opisano.

[0034] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R4je fluor ili metil, konkretnije fluor, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora, hidroksila ili metila, i pri čemu su R1, R2, R3i R5kao što je prethodno opisano.

[0035] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R4je fluor ili metil, konkretnije fluor, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora, hidroksila ili metila, i pri čemu ima formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (II), i pri čemu su R2, R3i R5kao što je prethodno naznačeno.

[0036] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R4je fluor ili hlor, konkretnije fluor, i pri čemu su R1, R2, R3i R5kao što je prethodno opisano.

[0037] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R4je fluor ili hlor, konkretnije fluor, pri čemu R1ima formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (II), i pri čemu su R2, R3i R5kao što je prethodno opisano.

[0038] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu, R2je fluor, hlor, metil, konkretnije fluor, pri čemu R4je fluor ili hlor, konkretnije fluor, pri čemu ima formulu (II), (III), (IV) ili (V), konkretnije formulu (II) ili (III), konkretnije formulu (II), i pri čemu su R3i R5kao što je prethodno naznačeno.

[0039] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenje broj 1 do jedinjenja broj 10, jedinjenje broj 12 do jedinjenja broj 19 i jedinjenje broj 21 do jedinjenja broj 32 (jedinjenja 1-10, 12-19 i 21-32), kao što je opisano u Tabeli 5 u nastavku.

Tabela 5:

[0040] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 21, 22, 23, 24 i 26 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0041] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 21, 23, 24 i 26 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0042] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja 2, 13, 14, 15, 16, 21 i 23 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0043] U otelotvorenjima, prijava obezbeđuje jedinjenja 2, 13, 15, 21 i 23 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0044] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 2 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0045] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 13 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0046] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 15 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0047] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 16 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0048] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 21 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0049] U jednom otelotvorenju, prijava obezbeđuje jedinjenje 23 (kao što je opisano, npr. u Tabeli 5).

[0050] Jedinjenja iz prijave i njihove farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili polimorfi imaju aktivnost kao farmaceutski agensi, naročito modulatori aktivnosti TLR7 i/ili TLR8, konkretnije aktivnosti TLR8.

1

[0051] Termin „modulator“ obuhvata i inhibitor i aktivator, gde inhibitor označava jedinjenja koja smanjuju ili deaktiviraju aktivnost receptora, i gde aktivator označava jedinjenja koja povećavaju ili aktiviraju aktivnost receptora. Konkretnije, jedinjenja iz prijave i njihove farmaceutski prihvatljive soli, solvati ili polimorfi mogu imati aktivnost kao agonisti aktivnosti TLR7 i/ili TLR8, konkretnije aktivnosti TLR8.

[0052] Proizvodi iz prijave mogu pogodno da pokazuju poboljšani TLR8 agonizam (ili selektivnost) u odnosu na TLR7. Alternativno ili komplementarno, proizvodi iz prijave mogu pogodno imati poboljšani TLR8 agonizam u poređenju sa jedinjenjima koja su opisana u WO2012156498.

[0053] Sredstva za određivanje aktivnosti TLR7 i/ili aktivnosti TLR8, konkretnije aktivnosti TLR8, poznata su osobama sa uobičajenim znanjem i veštinama u oblasti. Sredstva za određivanje aktivnosti TLR7 i/ili aktivnosti TLR8, konkretnije aktivnosti TLR8, mogu da obuhvataju ćelije koje su genetski konstruisane da eksprimiraju TLR7 ili TLR8, kao što je ćelijska linija (luc)-HEK293 NF-KB reportera.

[0054] Aktivnost TLR7 ili TLR8 može da se izrazi kao vrednost najniže efektivne koncentracije (LEC), tj. koncentracija koja indukuje dejstvo koje je najmanje dvostruko veće od standardne devijacije u testu.

[0055] Proizvodi iz prijave mogu pogodno da stimulišu ili aktiviraju proizvodnju (ili sekreciju) citokina, konkretnije proizvodnju IL12 (kod sisara).

[0056] Prijava obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, ili imunološku kompoziciju, ili vakcinu, koji sadrže jedinjenje iz prijave ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, razblaživača ili nosača.

[0057] Jedinjenje iz prijave ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf, ili farmaceutska kompozicija iz prijave, mogu da se koriste kao lek.

[0058] Jedinjenje iz prijave ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf, ili farmaceutska kompozicija iz prijave, mogu da se koriste kao adjuvans za vakcinu ili kao

1

imunomodulator, konkretno za aktivaciju ili stimulaciju Th1 odgovora i/ili za stimulaciju ili aktivaciju proizvodnje jednog ili više citokina, konkretnije IL12.

[0059] Jedinjenje iz prijave ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf, ili farmaceutska kompozicija iz prijave, mogu da se koriste u lečenju ili prevenciji bolesti ili poremećaja u kojima učestvuje modulacija TLR7 i/ili TLR8, konkretnije TLR8.

[0060] Takve bolesti ili stanja mogu konkretno da obuhvataju virusnu infekciju, bolesti indukovane virusima, (virusno indukovane ili nevirusno indukovane) kancere i alergije, konkretnije virusnu infekciju, (virusno indukovane ili nevirusno indukovane) bolesti indukovane virusima i kancere, konkretnije virusne infekcije i bolesti indukovane virusima.

[0061] Takve bolesti ili stanja mogu konkretno da obuhvataju virusnu infekciju, konkretnije hroničnu virusnu infekciju, kao i (virusno indukovane ili nevirusno indukovane) tumore, konkretnije maligne tumore ili kancere.

[0062] Takve bolesti ili stanja konkretnije obuhvataju virusnu infekciju, konkretnije HBV infekciju, konkretnije hroničnu HBV infekciju.

[0063] Takve bolesti ili stanja konkretnije obuhvataju virusno indukovane bolesti (ili poremećaje), konkretnije bolesti (ili poremećaje) indukovane putem HBV.

[0064] Takve bolesti ili stanja konkretnije obuhvataju jednu ili više bolesti (ili poremećaja) izabranih od fibroze jetre, zapaljenja jetre, nekroze jetre, ciroze, bolesti jetre i hepatocelularnog karcinoma.

[0065] Takve bolesti ili stanja konkretnije obuhvataju (virusno indukovane ili nevirusno indukovane) tumore, konkretnije maligne tumore ili kancere.

[0066] Takve bolesti ili stanja konkretnije obuhvataju alergiju.

[0067] Termin „sisar“ obuhvata sisare koji nisu ljudi, kao i ljude. Nehumani sisari obuhvataju ovce, goveda, svinje, pse, mačke, glodare i miševe, kao i nehumane primate. Termin

1

„čovek“ obuhvata konkretnije ljude koji su inficirani putem HBV, konkretnije koji imaju hroničnu infekciju putem HBV.

[0068] Termin „lečenje“ nije ograničen na značenje kurativnog lečenje, već obuhvata svako lečenje koje bi osoba sa uobičajenim znanjem u struci ili obučeni lekar razmatrali kao terapiju ili u okviru terapije. Termin „lečenje“ tako može da obuhvata ameliorativno lečenje, palijativna lečenja, remisiono lečenje.

[0069] Proizvodi iz prijave mogu pogodno imati poboljšani klirens (iz sistemske cirkulacije sisara), konkretno u poređenju sa agonistima TLR7 i/ili TLR8 iz prethodnog stanja struke.

[0070] Jedinjenja iz prijave mogu da se primenjuju kao kristalni ili amorfni proizvodi. Oni mogu da se dobiju, na primer, kao čvrsti čepići, praškovi ili filmovi postupcima kao što je taloženje, kristalizacija, liofilizacija, sušenje raspršivanjem ili sušenje uparavanjem. Mogu da se primenjuju samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih jedinjenja iz prijave, ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekova. Obično će se primenjivati kao formulacija zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

[0071] Termin „ekscipijens“ se ovde koristi da opiše bilo koji sastojak koji nije jedinjenje iz prijave. Odabir ekscipijensa u velikoj meri zavisi od faktora kao što su režim primene, dejstvo ekscipijensa na rastvorljivost i stabilnost i priroda doznog oblika.

[0072] Jedinjenja iz prijave ili bilo koja njihova podgrupa mogu da se formulišu u različite farmaceutske oblike za svrhe primene. Kao odgovarajuće kompozicije mogu se navesti sve kompozicije koje se uobičajeno koriste za sistemsku primenu lekova. Za pripremu farmaceutskih kompozicija iz prijave, delotvorna količina jedinjenja, opciono u obliku soli, koje predstavlja aktivni agens, kombinuje se u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, pri čemu taj nosač može imati veliki raspon oblika u zavisnosti od oblika preparata koji se želi za primenu. Te farmaceutske kompozicije su poželjno u jediničnom doznom obliku koji je pogodan, na primer, za oralnu, rektalnu ili perkutanu primenu. Na primer, za pripremu kompozicije u oralnom doznom obliku, mogu da se koriste bilo koji uobičajeni farmaceutski medijumi kao što su, na primer, voda, glikoli, ulja, alkoholi i slično, u slučaju oralnih tečnih preparata kao što su suspenzije, sirupi, eliksiri, emulzije i rastvori; ili čvrsti nosači kao što su skrobovi, šećeri, kaolin, razblaživači, lubrikansi, veziva, dezintegransi, i slično, u slučaju

1

praškova, pilula, kapsula i tableta. Zbog njihove lakoće primene, tablete i kapsule predstavljaju najpogodnije oralne dozne jedinične oblike, u kom slučaju se očigledno koriste čvrsti farmaceutski nosači. Takođe su uključeni oblici čvrstih preparata koji mogu da se konvertuju, neposredno pre upotrebe, u tečne oblike. U kompoziciji koja je pogodna za perkutanu primenu, nosač opciono sadrži agens za pojačavanje penetracije i/ili pogodni kvašljivac, opciono u kombinaciji sa pogodnim aditivima bilo koje vrste u manjim proporcijama, pri čemu ti aditivi ne dovode do značajnog štetnog dejstva po kožu. Takvi aditivi mogu olakšati primenu na koži i/ili mogu biti korisni za pripremu željenih kompozicija. Te kompozicije mogu da se primene na različite načine, npr. kao transdermalni flaster, kao tačkasta primena, kao mast. Jedinjenja iz prijave takođe mogu da se primenjuju inhalacijom ili insuflacijom putem postupaka i formulacija koje se u struci koriste za ovaj vid primene. Tako, jedinjenja iz prijave obično mogu da se primene na pluća u obliku rastvora, suspenzije ili suvog praška.

[0073] Posebno je korisno formulisati prethodno pomenute farmaceutske kompozicije u jedinični dozni oblik radi lakoće primene i jednoobraznosti doze. Jedinični dozni oblik, kako se ovde koristi, označava fizički diskretne jedinice koje su pogodne kao jedinične doze, pri čemu svaka doza sadrži prethodno utvrđenu količinu aktivnog sastojka koja je izračunata za dobijanje željenog terapeutskog dejstva povezanog sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Primeri za takve jedinične dozne oblike su tablete (uključujući deljive ili obložene tablete), kapsule, pilule, pakete praška, pločice, supozitorije, injektabilne rastvore ili suspenzije, i slično, i njihovi podeljeni umnošci.

[0074] Osobe sa uobičajenim znanjem i veštinama u lečenju infektivnih bolesti moći će da odrede efektivnu količinu za primenu kod pojedinca kome je to potrebno. Uopšteno, smatra se da bi efektivna dnevna doza bila od 0,01 mg/kg do 200 mg/kg telesne težine. Može biti odgovarajuće da se potrebna doza primeni u vidu dve, tri, četiri ili više subdoza u odgovarajućim intervalima tokom dana. Pomenute subdoze mogu biti formulisane kao jedinični dozni oblici, na primer, koji sadrže 0,1 do 1000 mg, a naročito 1 do 200 mg aktivnog sastojka po jediničnom doznom obliku. Takođe može biti pogodno da se potrebna doza primenjuje manje često, na primer, jednom ili dva puta nedeljno, ili retko, na mesečnom nivou.

2

[0075] Delotvorna količina može biti količina koja je dovoljna da stimuliše ili aktivira TLR8 receptor (njegovu aktivnost) ili TLR8 i TLR7 receptore.

[0076] Delotvorna količina može biti količina koja je dovoljna da stimuliše ili aktivira proizvodnju (ili sekreciju) citokina, konkretnije IL12.

[0077] Tačna doza i učestalost primene zavise od jedinjenja koje se koristi, konkretnog stanja koje se leči, težine stanja koje se leči, starosti, težine i opšteg fizičkog stanja konkretnog pacijenta, kao i od drugih lekova koje pojedinac možda uzima, kao što je dobro poznato stručnjacima za oblast.

[0078] Nadalje, jasno je da delotvorna količina može biti smanjena ili povećana u zavisnosti od odgovora kod lečenog ispitanika i/ili u zavisnosti od procene lekara koji prepisuje jedinjenja iz prijave. Rasponi delotvorne količine koji su prethodno pomenuti stoga su samo smernice, i ne treba da ograničavaju obim ili upotrebu prijave na bilo koji način.

[0079] Prijava takođe obezbeđuje proizvod ili komplet koji sadrži prvo jedinjenje i drugo jedinjenje kao kombinovani preparat za simultanu, odvojenu ili rednu upotrebu u prevenciji ili lečenju HBV infekcije ili bolesti indukovane putem HBV kod sisara kome je to potrebno, pri čemu je pomenuto prvo jedinjenje različito od pomenutog drugog jedinjenja.

[0080] Pomenuto prvo jedinjenje je jedinjenje iz prijave ili farmaceutska kompozicija iz prijave, a pomenuto drugo jedinjenje je inhibitor HBV. Pomenuto drugo jedinjenje može biti, npr. inhibitor HBV koji je izabran od:

• citokina koji imaju aktivnost inhibicije replikacije HBV, kao što je interferon, konkretnije interferon-alfa,

• supstituisanih sulfonamida koji imaju aktivnost inhibicije kapsidnog sklopa HBV i/ili imaju aktivnost inhibicije HBsAg, kao što su jedinjenja opisana u WO 2014033170, WO2014184350, ili druge kombinacije (npr., WO2017181141), ili karboksilne kiseline kao što je opisano u WO2017140750,

• analoga antiretrovirusnog nukleozida, konkretnije inhibitora reversne transkriptaze ili inhibitora polimeraze, kao što je lamivudin (ili 3TC, CAS registarski broj 134678-17-4), adefovir dipivoksil, tenofovir disoproksil fumarat,

• antivirusne vakcine ili imunoloških kompozicija, konkretnije anti-HBV vakcine ili imunoloških kompozicija, i

• njihovih kombinacija.

[0081] Konkretnije, pomenuto drugo jedinjenje može biti, npr. inhibitor HBV koji je izabran od:

• supstituisanih sulfonamida koji imaju aktivnost inhibicije kapsidnog sklopa HBV i/ili imaju aktivnost inhibicije HBsAg, kao što su jedinjenja opisana u WO 2014033170, WO2014184350, ili druge kombinacije (npr., WO2017181141), ili karboksilne kiseline kao što je opisano u WO2017140750,

• lamivudina (ili 3TC, CAS registarski broj 134678-17-4), adefovir dipivoksila, tenofovir disoproksil fumarata),

• antivirusnih vakcina i antivirusnih imunoloških kompozicija, konkretnije anti-HBV vakcina i anti-HBV imunoloških kompozicija, i

• njihovih kombinacija.

[0082] Prijava takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive prolekove jedinjenja iz prijave, i njihovu upotrebu u terapiji (prolekovi i njihova upotreba nisu deo pronalaska iz patentnih zahteva), konkretnije u lečenju ili prevenciji HBV infekcije, konkretnije hronične HBV infekcije. Termin „prolek“ generalno označava prekursor naznačenog jedinjenja koji, nakon primene na ispitaniku, daje jedinjenje in vivo putem hemijskog ili fiziološkog procesa kao što je solvoliza ili enzimsko cepanje, ili u fiziološkim uslovima (npr. prolek se nakon dovođenja na fiziološki pH konvertuje u jedinjenje iz prijave). Farmaceutski prihvatljiv prolek može konkretnije biti prolek koji je netoksičan, biološki podnošljiv, i na drugi način biološki pogodan za primenu na ispitaniku.

[0083] Prijava takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive metabolite jedinjenja iz prijave, i njihovu upotrebu u terapiji (metaboliti i njihova upotreba nisu deo pronalaska iz patentnih zahteva), konkretnije u lečenju ili prevenciji bolesti ili poremećaja u kojima učestvuje modulacija TLR7 i/ili TLR8, konkretnije TLR8, konkretnije HBV infekcije, konkretnije hronične HBV infekcije, ili u lečenju kancera.

[0084] Farmaceutski aktivan metabolit uopšteno označava farmakološki aktivan proizvod metabolizma u organizmu jedinjenja iz prijave ili njegove soli. Prolekovi i aktivni metaboliti jedinjenja mogu da se odrede koristeći rutinske tehnike koje su poznate ili dostupne u struci.

[0085] Termin „sadrži“, koji je sinonim sa „uključuje“ ili „obuhvata“, je otvoren i ne isključuje dodatne, nenavedene elemente, sastojke ili korake postupka, dok je termin „sastoji se od“ zatvoren termin, koji isključuje bilo koji dodatni element, korak ili sastojak koji nije izričito naveden.

[0086] Termin „suštinski se sastoji od“ je delimično otvoren termin, koji ne isključuje dodatne, nenavedene elemente, korake ili sastojke, sve dok ti dodatni elementi, koraci ili sastojci ne utiču materijalno na osnovna i nova svojstva prijave.

[0087] Termin „sadrži“ stoga obuhvata termin „sastoji se od“, kao i termin „suštinski se sastoji od“. Shodno tome, u prijavi se smatra da termin „sadrži“ konkretnije obuhvata termin „sastoji se od“ i termin „suštinski se sastoji od“. Radi pogodnosti za čitaoca, opis je podeljen na različite paragrafe i odeljke. To razdvajanje ne treba razumeti kao odvajanje sadržaja paragrafa ili odeljka od sadržaja drugog paragrafa ili odeljka. Nasuprot tome, opis obuhvata sve kombinacije različitih odeljaka, paragrafa i rečenica koje osoba sa uobičajenim znanjem i veštinama u struci može da razmatra.

[0088] Sledeći primeri su dati u vidu ilustracija, i ne predstavljaju ograničenje.

PRIMERI

[0089]

Tabela 1:

2

Priprema jedinjenja

[0090] 2-amino-5-bromhinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-6,7-difluorhinazolin-4-ol. Rt: 1,16, m/z = 240/242 [M+H], Postupak: G.

[0091] (R)-2-((2-amino-5-bromhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol. Rastvor 2-amino-5-bromhinazolin-4-ola (2,4 g, 8,68 mmol), D-norleucinola (2,75 g, 23,43 mmol), DBU (3,9 ml, 26,0 mmol) i BOP (4,61 g, 10,42 mmol) u anhidrovanom DMF-u (40 ml) mešan je na rt tokom 2 h i koncentrovan je radi dobijanja naslovnog proizvoda. Rt: 2,16, m/z = 339/341 [M+H], Postupak: D.

[0092] (R)-2-((2-amino-5-ciklopropilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (1). Smeša (R)-2-((2-amino-5-bromhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ola (200 mg, 0,59 mmol), ciklopropilboronske kiseline (151 mg, 1,77 mmol) i kalijum fosfata (375 mg, 1,77 mmol) u dioksanu (10 ml) i vodi (0,1 ml) produvana je azotom tokom 10 min. Dodat je PdCl2(dppf) (38 mg, 0,06 mmol) i smeša je mešana na 100°C tokom 18 h. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je raspodeljena na etar i vodu, organski sloj je osušen (MgSO4), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarač iz filtrata je koncentrovan pod vakuumom. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent od CH2Cl2do [CH2Cl2: CH3OH: NH3(9:1:0,1)].

[0093] Opšti postupak A. Rastvor 2-amino-hinazolin-4-ola (2,4 g, 8,68 mmol), D-norleucinola (2 ekv.), DBU (3 ekv.) i BOP (1,3 ekv.) u anhidrovanom DMF-u mešan je na rt tokom 2 h i koncentrovan je radi dobijanja naslovnog proizvoda.

[0094] 2-amino-5-fluorhinazolin-4-ol. U autoklav od 500 ml stavljeni su 2-amino-6-fluorbenzojeva kiselina (25 g, 161,16 mmol), EtOH (350 ml), cijanamid (10,16 g, 241,74 mmol) i koncentrovana HCl (8 ml). Smeša je mešana na 80°C tokom 16 h, zatim ohlađena na rt i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i isprana etanolom i osušena pod vakuumom. Rt: 0,93, m/z = 180 [M+H], Postupak: H.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 6.98 (m, 1 H), 7.13 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.51 (br. s., 2 H), 7.64 (m, 1 H), 12.30 (br. s, 1 H)

[0095] (R)-2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (2). Rastvor 2-amino-5-fluorhinazolin-4-ola (1,07 g, 6 mmol), DBU (1,8 ml, 12 mmol) u anhidrovanom DMF-u (30 ml) mešan je na rt u atmosferi azota. U porcijama je dodat BOP (3,2 g, 7,2 mmol) i mešan je 15 minuta. Dodat je D-norleucinol (1,41 g, 12 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 2 dana. Smeša je sipana u ledenu vodu i mešana 1 h. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc, kombinovani organski slojevi su isprani vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli.

Organska faza je osušena iznad MgSO4, čvrste supstance su uklonjene filtracijom i rastvarač iz filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena pomoću preparativne HPLC (XBridge Prep C18 OBD-10 µm, 50 x 150 mm, mobilna faza: 0,25% vod. NH4HCO3, CH3CN), dajući 0,81 g naslovnog jedinjenja.

[0096] 5-(trifluormetil)hinazolin-2,4-diamin. U zaptivenoj epruveti, smeša 2-fluor-6-(trifluormetil)benzonitrila (4,5 g, 23,8 mmol) i guanidin karbonata (8,57 g, 47,6 mmol) u DMA (54 ml) mešana je na 130°C tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena na rt, razblažena sa EtOH, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je pomešan sa hladnom vodom, i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom, dajući naslovno jedinjenje kao mrku čvrstu supstancu (5,2 g) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0097] 2-amino-5-(trifluormetil)hinazolin-4-ol. U Šlenkovoj boci, suspenzija 5-(trifluormetil)hinazolin-2,4-diamina (5,2 g, 0,02 mol) u NaOH (1 M, vod., 329 ml) mešana je na 100°C tokom 5 h. pH je podešen na 2-3 dodavanjem HCL (1 N vod.). Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dodata je voda, i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom, dajući naslovni proizvod kao belu čvrstu supstancu (4,25 g). Rt: 1,79 min, m/z = 169 [M+H], postupak I.

[0098] (R)-2-((2-amino-5-(trifluormetil)hinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (3). Rastvor 2-amino-5-(trifluormetil)hinazolin-4-ola (1,5 g, 6,55 mmol), D-norleucinola (2,30 g, 19,6 mmol), DBU (2,94 ml, 19,6 mmol) i benzotriazol-1-il-oksi-trispirolidinofosfonijum heksafluorfosfata (PyBOP) (4,43 g, 8,51 mmol) u anhidrovanom DMF-u (30 ml) mešan je na rt tokom 2 h i koncentrovan je radi dobijanja naslovnog proizvoda.

2

[0099] (R)-2-((2-amino-5-(trifluormetil)hinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol fumarat. Fumarna kiselina (346 mg, 2,99 mmol) dodata je u rastvor (R)-2-((2-amino-5-(trifluormetil)hinazolin-4-il)amino)heksan-1-ola (0,98 g, 2,99 mmol) u CH3OH (14,3 ml). Dobijeni rastvor je mešan na rt tokom 20 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, zatim osušen pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje kao beli prašak (1,3 g).

[0100] (R)-2-((2-amino-7-bromhinazolin-4-il)amino)heksan-l-ol. Rastvor 2-amino-7-bromhinazolin-4(3H)-ona (3,00 g, 12,5 mmol), D-norleucinola (3,66 g, 31,2 mmol), (DBU) (4,67 ml, 31,2 mmol) i PyBOP (8,45 g, 16,2 mmol) u anhidrovanom (55 ml) mešan je na rt tokom 2 h i koncentrovan, dajući naslovni proizvod. Rt: 1,32 min, m/z = 339/341 [M+H], postupak J3.

[0101] (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karbonitril (4). U zaptivenoj epruveti, rastvor (R)-2-((2-amino-7-bromhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ola (1,43 g, 4,22 mmol), Zn(CN)2(594 mg, 5,06 mmol) i Pd(PPh3)4(487 mg, 0,422 mmol; 0,1 ekv.) u dioksanu (31 ml) degasiran je produvavanjem N2 i mešan je na 100°C tokom 16 h. Dodato je još Zn(CN)2(297 mg; 2,53 mmol) i Pd(PPh3)4(487 mg, 0,422 mmol), smeša je degasirana azotom i mešana je na 110°C tokom 4 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, čvrste supstance su uklonjene filtracijom i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, zatim prečišćen hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent mobilne faze CH2Cl2/ CH3OH (100/0 do 80/20), dajući naslovno jedinjenje kao bledonarandžastu čvrstu supstancu (840 mg).

[0102] (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karbohidrazid. Hidrazin (3,00 ml, 96,4 mmol) dodat je u rastvor metil (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karboksilata (1,50 g, 4,71 mmol) u EtOH (30 ml). Rastvor je zagrevan na 80°C tokom 18 h, zatim ohlađen na rt. Sirova supstanca je uparena pod vakuumom, dajući 1,55 g naslovnog jedinjenja kao bledonarandžastu supstancu koja je u sledećem koraku korišćena bez daljeg prečišćavanja.

[0103] (R)-2-((2-amino-7-(1,3,4-oksadiazo)-2-i))hinazolin-4-il)amino)heksan-1-οl (5). U Šlenkovom reaktoru, rastvor (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karbohidrazida (1,30 g, 3,88 mmol), trietil ortoformata (22,8 ml, 137 mmol) i ptoluensulfonske kiseline (57 mg, 0,33 mmol) mešan je na 90°C tokom 17 h. Reakciona smeša

2

je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa EtOAc i ispran sa NaHCO3(zas., vod.), vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, čvrste supstance su uklonjene filtracijom i rastvarač iz filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena reversno faznom hromatografijom (YMC-actus Triart-C1810 µm 30 x 150 mm, gradijent od 85% vod. NH4HCO30,2%, 15% ACN do 45% vod. NH4HCO30,2%, 55% ACN), dajući naslovni proizvod (25 mg)

[0104] 2-amino-8-metilhinazolin-4-ol. U balon sa okruglim dnom od 250 ml opremljen magnetnom šipkom za mešanje stavljeni su 2-amino-3-metilbenzojeva kiselina (10 g, 66,15 mmol), EtOH (250 ml), cijanamid (4,17 g, 99,2 mmol) i koncentrovana HCl (3 ml). Smeša je mešana na refluksu tokom 6 h. U intervalima od 1 h, koncentrovana HCl (0,5 ml) dodavana je pipetom. Reakciona smeša je ohlađena na rt, i čvrste supstance su izolovane filtracijom i isprane sa EtOH i osušene pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje kao beličastu čvrstu supstancu (4,8 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 2.41 (s, 3 H), 7.15 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.43 (br. s., 2 H), 7.55 (d, J=7.0 Hz, 1 H), 7.80 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 11.17 - 12.49 (m, 1 H). Rt: 0.50min., m/z = 176 [M+H], method B.

[0105] (R)-2-((2-amino-8-metilhinazolin-4-il)amino)pentan-1-ol (6). U staklenu bočicu od 50 ml ubačeni su 2-amino-8-metilhinazolin-4-ol (500 mg, 2,71 mmol), anhidrovani DMF (10 ml), DBU (1,22 ml, 8,13 mmol) i D-norvalinol (1,40 g, 13,6 mmol). U ovaj rastvor je dodat BOP (1,44 g, 3,3 mmol). Bočica je zaptivena i trešena tokom 15 h na rt. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dodat je NaOH (1 M, vod., 10 ml) i ispran sa EtOAc (5 x 20 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod sniženim pritiskom. U smešu je dodat EtOAc, proizvod je istaložen i izolovan kao bela čvrsta supstanca (309 mg).

[0106] (R)-2-((2-amino-8-metilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (7). U bočicu od 50 ml ubačeni su 2-amino-8-metilhinazolin-4-ol (500 mg, 2,24 mmol), anhidrovani DMF (10 ml), DBU (1,01 ml, 6,7 mmol) i (R)-(-)-2-amino-1-heksanol (1,32 g, 11,2 mmol). U ovaj rastvor je dodat BOP (1,19 g, 2,7 mmol). Bočica je zaptivena, i reakcija je trešena tokom 15 h na rt. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dodat je NaOH (1 M, vod., 10 ml) i ispran sa EtOAc (5 x 20 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod sniženim pritiskom. U smešu je dodat EtOAc, i naslovno jedinjenje je istaloženo kao bela čvrsta supstanca (161 mg).

2

[0107] 2-amino-8-hlorhinazolin-4-ol. U balon sa okruglim dnom od 1 l opremljen magnetnom šipkom za mešanje stavljeni su 2-amino-3-hlorbenzojeva kiselina (25 g, 146 mmol), EtOH (400 ml), cijanamid (9,2 g, 219 mmol) i konc. HCl (5 ml). Smeša je zagrejana do refluksa uz mešanje. U intervalima od 1 h, dodavana je konc. HCl (1 ml). Nakon 6,5 h, zagrevanje je prestalo i reakcija je ohlađena na rt. Čvrste supstance su izolovane filtracijom i isprane sa EtOH i etrom, dajući naslovno jedinjenje kao belu čvrstu supstancu (3,38 g). Rt: 3,37 min., m/z = 196 [M+H], postupak J2.

[0108] (R)-2-((2-amino-8-hlorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (8). U bočicu od 50 ml ubačeni su 2-amino-8-hlorhinazolin-4-ol (390 mg, 2,0 mmol), anhidrovani DMF (10 ml), DBU (0,89 ml, 6,0 mmol) i D-norleucinol (1,17 g, 10,0 mmol). U ovaj rastvor je dodat BOP (1,06 g, 2,4 mmol). Bočica je zaptivena i reakcija je mešana 15 h na rt. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dodat je NaOH (1 M, vod., 10 ml) i ispran sa EtOAc (5 x 20 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (magnezijum sulfat), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod sniženim pritiskom. U smešu je dodat EtOAc, nečistoće su rastvorene i proizvod je odvojen taloženjem. Supernatant je uklonjen, i postupak je ponovljen dva puta. Preostali rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje kao belu čvrstu supstancu (64 mg).

[0109] 2-amino-8-fluorhinazolin-4-ol. Metil estar 2-amino-3-fluor-benzojeve kiseline (15 g, 88,68 mmol) rastvoren je u EtOH (100 ml) u epruveti za rad pod pritiskom od 250 ml, zatim su dodati cijanamid (5,59 g, 133 mmol) i HCl (37% u H2O) i reakciona smeša je mešana tokom 18 h na 80°C. Nakon hlađenja, nastao je talog i izolovan je filtracijom, ispran sa EtOH i osušen pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje kao beli prašak. Rt: 0,44min., m/z = 180 [M+H], metoda B.

[0110] (R)-2-((2-amino-8-fluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (9). U bočicu od 50 ml ubačeni su 2-amino-8-fluorhinazolin-4-ol (400 mg, 1,9 mmol), anhidrovani DMF (10 ml), DBU (0,83 ml, 5,6 mmol) i D-norleucinol (1,09 g, 9,3 mmol). U ovaj rastvor je dodat BOP (0,98 g, 2,2 mmol). Bočica je zaptivena i reakcija je tresena 15 h na rt. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dodat je NaOH (1 M, vod., 10 ml) i ispran sa EtOAc (5 x 20 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (magnezijum sulfat), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod sniženim pritiskom. U smešu je dodat

2

EtOAc i proizvod je istaložen, dajući naslovno jedinjenje kao belu čvrstu supstancu (224 mg).

[0111] (R)-2-((2-amino-8-fluorhinazolin-4-il)amino)pentan-1-ol (10). U bočicu od 50 ml ubačeni su 2-amino-8-fluorhinazolin-4-ol (400 mg, 1,9 mmol), anhidrovani DMF (10 ml), DBU (0,83 ml, 5,6 mmol) i D-norvalinol (766 mg, 7,4 mmol). U ovaj rastvor je dodat BOP (0,98 g, 2,2 mmol). Bočica je zaptivena i reakcija je tresena 15 h na rt. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dodat je NaOH (1 M, vod., 10 ml) i ispran sa EtOAc (5 x 20 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (magnezijum sulfat), čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod sniženim pritiskom. U smešu je dodat EtOAc, nečistoće su rastvorene i naslovni proizvod je istaložen kao bela čvrsta supstanca (161 mg).

[0112] (R)-2-((2-amino-8-metilhinazolin-4-il)amino)heksil izobutirat (11). (R)-2-((2-amino-8-metilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (2,1 g, 7,65 mmol) rastvoren je u DCM-u (40 ml) i ohlađen na 0°C. Dodat je DBU (2,3 ml, 15,3 mmol) i smeša je mešana tokom 30 min. Ukapavanjem je dodat izobutirilhlorid (1,6 ml, 15,3 mmol) u DCM-u (10 ml) i smeša je mešana na rt tokom 18 h. Smeša je razblažena sa CH2Cl2i isprana vodom. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i rastvarač iz filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena na koloni silika gela koristeći CH2Cl2/ CH3OH 100/0 do 95/5 kao gradijent. Najbolje frakcije su uparene, a zatim osušene pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje.

[0113] 2-amino-5-metoksihinazolin-4-ol. U balon sa okruglim dnom od 1 l opremljen magnetnom šipkom za mešanje stavljeni su 2-amino-6-metoksibenzojeva kiselina (50 g, 299 mmol), EtOH (400 ml), cijanamid (18,9 g, 448,7 mmol) i konc. HCl (5 ml). Smeša je zagrejana do refluksa uz mešanje, i konc. HCl (1 ml) dodavana je u intervalima od 1 h tokom 6 h. Reakcija je ohlađena na rt i naslovno jedinjenje je istaloženo, i izolovano je kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 3.82 (s, 3 H), 5.40 (br. s., 1 H), 6.77 (m, 1 H), 6.84 (m, 1 H), 7.23 (br. s., 2 H), 7.55 (m, 1 H). Rt: 0.89min, m/z = 192 [M+H], method G.

2

[0114] (R)-2-((2-amino-5-metoksihinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (12). Naslovno jedinjenje je sintetisano prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-5-metoksihinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0115] 2-amino-7-fluorhinazolin-4-ol. U balon sa okruglim dnom od 250 ml opremljen magnetnom šipkom za mešanje stavljeni su 2-amino-4-fluorbenzojeva kiselina (10 g, 64,46 mmol), EtOH (200 ml), cijanamid (4,06 g, 96,7 mmol) i konc. HCl (3 ml). Smeša je mešana na refluksu tokom 6 h. U intervalima od 1 h, dodavana je konc. HCl (0,5 ml). Reakciona smeša je ohlađena na rt, i čvrste supstance su izolovane filtracijom i isprane sa EtOH i osušene pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje kao beličastu čvrstu supstancu (2,8 g). Rt: 0,49 min, m/z = 180 [M+H], postupak B.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 7.01 -7.16 (m, 2 H), 7.56 (br. s., 2 H), 7.99 (m, 1 H), 10.38 - 13.48 (m, 1 H).

[0116] (R)-2-((2-amino-7-fluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (13). Naslovno jedinjenje je sintetisano prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-7-fluorhinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0117] 2-amino-7-metilhinazolin-4-ol. U balon sa okruglim dnom od 250 ml opremljen magnetnom šipkom za mešanje stavljeni su 2-amino-4-metilbenzojeva kiselina (10 g, 64,17 mmol), EtOH (200 ml), cijanamid (4,05 g, 96,3 mmol) i konc. HCl (3 ml). Smeša je mešana na refluksu tokom 6 h. U intervalima od 1 h, dodavana je konc. HCl (0,5 ml). Reakciona smeša je ohlađena na rt i čvrste supstance su izolovane, dajući naslovno jedinjenje kao beličastu čvrstu supstancu, Rt: 0,50 min, m/z = 176 [M+H], postupak B.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 2.43 (s, 3 H), 7.22 (d, J=1.0 Hz, 1 H), 7.24 (s, 1 H), 7.89 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 8.29 (br. s., 2 H), 12.65 (br. s, 1 H)

[0118] (R)-2-((2-amino-7-metilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (14). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-7-metilhinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0119] 2-amino-6-fluorhinazolin-4-ol. Metil 2-amino-5-fluorbenzoat (25 g, 147,8 mmol) rastvoren je u EtOH (150 ml) u epruveti za rad pod pritiskom od 250 ml, zatim su dodati cijanamid (9,32 g, 221,7 mmol) i konc. HCl (27 ml), i reakciona smeša je mešana preko noći na 80°C. Reakcija je ohlađena na rt, i naslovno jedinjenje je izolovano kao beli talog.

[0120] 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-6,7-difluorhinazolin-4-ol. Rt: 3,19min., m/z = 196 [M+H], postupak J2.

[0121] (R)-2-((2-amino-5-hlorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (15). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0122] 2-amino-5-metilhinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Rt: 0,17, m/z = [M+H] 176,1, Postupak: K.

[0123] (R)-2-((2-amino-5-metilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (16). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-5-metilhinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0124] Metil estar 2-amino-3-metoksibenzojeve kiseline. Smeša 2-amino-3-metoksibenzojeve kiseline (6,22 g, 37,21 mmol) i cezijum karbonata (18,18 g, 55,81 mmol) u DMF-u (100 ml) mešana je na rt tokom 40 min. Dodat je CH3I (2,31 ml, 37,21 mmol) u DMF-u (15 ml) i smeša je mešana na rt preko noći. Smeša je razblažena vodom i ekstrahovana dietil etrom. Vodena faza je povratno ekstrahovana dietil etrom. Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, razdvojeni, osušeni iznad MgSO4, čvrste supstance su uklonjene filtracijom i filtrat je koncentrovan, dajući naslovno jedinjenje (5,75 g, 31,73 mmol). LC-MS ES<+>m/z = 182,1; Rt: 0,68 min, postupak K.

[0125] 2-amino-8-metoksihinazolin-4-ol. Smeša metil estra 2-amino-3-metoksibenzojeve kiseline (5,70 g, 41,46 mmol), cijanamida (1,984 g, 47,19 mmol), HCl 37% (1 ml) u EtOH zagrevana je do refluksa tokom 6 h. U intervalima od 1 h, dodavana je 37% HCl (0,1 ml). Reakciona smeša je ohlađena na rt i čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa EtOH, dajući 2-amino-8-metoksi-hinazolin-4-ol (2,70 g, 11,86 mmol). LC-MS ES+ m/z = 192,1; Rt: 0,15 min, postupak K.

1

[0126] (R)-2-((2-amino-8-metoksihinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (17). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-8-metoksihinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0127] metil 2-amino-4-hidroksihinazolin-7-karboksilat. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Rt: 1,02 min, m/z = 220 [M+H], postupak H.

[0128] Metil (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karboksilat (18). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći metil 2-amino-4-hidroksihinazolin-7-karboksilat kao polazni heterocikl.

[0129] 2-amino-7,8-difluorhinazolin-4(3H)-on. Dimetilsulfon (13,9 g, 147 mmol), zatim sulfolan (1,15 ml, 12,0 mmol), 2-amino-3,4-difluorbenzojeva kiselina (5 g, 28,9 mmol) i hlorformamidin hidrohlorid (6,64 g, 57,8 mmol) redom su dodati u zaptivenu epruvetu i smeša je mešana na 165°C tokom 2 h. Dobijena čvrsta supstanca je dodata u vodu i sonikovana. pH je podešen na 7-8 dodavanjem NH3(vod.). Talog je sakupljen filtracijom, dajući naslovno jedinjenje (5,54 g) kao mrku čvrstu supstancu. Rt: 1,72 min., m/z = 198 [M+H], postupak J.

[0130] (R)-2-((2-amino-7,8-difluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (19). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći metil 2-amino-7,8-difluorhinazolin-4(3H)-on kao polazni heterocikl.

[0131] (R)-2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)-4-(metiltio)butan-1-ol (20). Rastvor 2-amino-5-fluorhinazolin-4-ola (1 g, 3,964 mmol), DBU (1,183 ml, 7,93 mmol) u anhidrovanom DMF-u (20 ml) mešan je na rt u atmosferi azota. U porcijama je dodat BOP (1,93 g, 4,36 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 15 min. Dodat je D-norleucinol (929 mg, 7,93 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 18 h na rt. Rastvor je prečišćen pomoću preparativne HPLC (stacionarna faza: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 µm, 30 x 250 mm, mobilna faza: 0,25% NH4HCO3vod., CH3CN, CH3OH). (Rt: 0,66 min, m/z = 297 [M+H], Postupak: B)

2

[0132] (2R,3S)-2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)-3-metilpentan-1-ol (21). Rastvor 2-amino-5-fluorhinazolin-4-ola (200 mg, 1,12 mmol), DBU (0,333 ml, 2,23 mmol) u anhidrovanom DMF-u (10 ml) mešan je na rt u atmosferi azota. U porcijama je dodat BOP (543 mg, 1,23 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 15 min. Dodat je L-izoleucinol (162 mg, 1,34 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 18 h na rt. Rastvor je prečišćen pomoću preparativne HPLC (stacionarna faza: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 µm, 30 x 250 mm, mobilna faza: 0,25% NH4HCO3vod., CH3CN). Željene frakcije su sakupljene i uparene do suva, dajući naslovno jedinjenje kao ulje. (Rt: 0,79min, m/z = 279 [M+H], Postupak: B).

[0133] 2-amino-4-hidroksi-N-metilhinazolin-5-karboksamid. Autoklav od nerđajućeg čelika od 75 ml ispran je azotom i napunjen 2-amino-5-bromhinazolin-4-olom (0,5 g, 2,08 mmol), Pd(OAc)2 (4 mg, 0,02 mmol), 1,3-bis(difenilfosfino)propanom (17 mg, 0,042 mmol), KOAc (408 mg, 4,17 mmol), metilaminom (2 M u THF-u, 10 ml), THF-om (25 ml) i diizopropiletilaminom (2 ml). Autoklav je zaptiven i stavljen pod pritisak od 50 bar CO i zagrevan na 100°C tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak je rastvoren u smeši CH3OH/NH3(7 N), zatim prečišćen pomoću preparativne HPLC (stacionarna faza: RP SunFire Prep C18 OBD-10 µm, 30 x 150 mm, mobilna faza: 0,25% NH4HCO3vod., CH3OH). Rt: 0,78 min, m/z = 219 [M+H], postupak A.

[0134] (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)-N-metilhinazolin-5-karboksamid (22). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći metil 2-amino-4-hidroksi-N-metilhinazolin-5-karboksamid kao polazni heterocikl.

[0135] 2-amino-5,7-difluorhinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Rt: 1,01, m/z = 198 [M+H], Postupak: B.

[0136] (R)-2-((2-amino-5,7-difluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (23). Rastvor 2-amino-5,7-difluorhinazolin-4-ola (200 mg, 1,01 mmol), DBU (0,303 ml, 2,03 mmol) u anhidrovanom DMF-u (10 ml) mešan je na rt u atmosferi azota. U porcijama je dodat BOP (494 mg, 1,12 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 15 min. Dodat je D-norleucinol (162 mg, 1,38 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 18 h. Smeša je sipana u 1 ml vode i mešanje je nastavljeno tokom 1 h. Rastvarač je uparen i ostatak je prenet u 30 ml CH3OH, mešan i neutralisan pomoću konc. HCl. Rastvor je prečišćen pomoću preparativne HPLC (stacionarna faza: RP XBridge Prep C18 ODB- 5 µm, 30 x 250 mm, mobilna faza: 0,25% NH4HCO3vod., CH3OH).

[0137] 2-amino-7-(trifluormetil)hinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Rt:

1,29, m/z = 230 [M+H], Postupak: A.

[0138] (R)-2-((2-amino-7-(trifluormetil)hinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (24). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-7-(trifluormetil)hinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0139] (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)-N,N-dimetilhinazolin-7-karboksamid (32). U zaptivenoj epruveti, smeša metil (R)-2-amino-4-((1-hidroksiheksan-2-il)amino)hinazolin-7-karboksilata (1,50 g, 4,71 mmol), dimetilamina (2 M u THF-u, 7 ml) i triazabiciklo[4.4.0]dec-5-ena (TBD) (268 mg, 1,89 mmol) u THF-u (81 ml) mešana je na 50°C tokom 24 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca je prečišćena reversno faznom hromatografijom (regularna kolona C1825 µm, 120 g YMC ODS-25), gradijent mobilne faze: od 70% vod. NH4HCO3(0,2%), 30% CH3CN do 50% vod. NH4HCO3(0,2%), 50% MeCN), dajući naslovno jedinjenje kao bledožutu čvrstu supstancu (940 mg).

[0140] 2-amino-5-fluor-8-metilhinazolin-4-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno u postupku koji je analogan onom koji je opisan za 2-amino-5-hlorhinazolin-4-ol. Rt:

1,09, m/z = 194 [M+H], Postupak: A.

[0141] (R)-2-((2-amino-5-fluor-8-metilhinazolin-4-il)amino)heksan-1-ol (26). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A, koristeći 2-amino-5-fluor-8-metilhinazolin-4-ol kao polazni heterocikl.

[0142] 2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)-2-metilheksan-1-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.85 (t, J=6.9 Hz, 3 H) 1.05 - 1.33 (m, 4 H) 1.41 (s, 3 H) 1.81 - 2.02 (m, 2 H) 3.47 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 3.66 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 5.10 (br s, 1 H) 6.23 (s, 2 H) 6.64 - 6.83 (m, 2 H) 7.00 (dd, J=8.5, 1.0 Hz, 1 H) 7.36 - 7.51 (m, 1 H). Rt: 0.92 min., m/z = 293 [M+H], Method: B

4

[0143] 2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)-2,4-dimetilpentan-1-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.88 (dd, J=6.6, 4.0 Hz, 6 H) 1.44 (s, 3 H) 1.69 - 1.86 (m, 3 H) 1.87 - 1.92 (m, 2 H) 3.49 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 3.73 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 6.25 (s, 2 H) 6.67 (d, J=18.7 Hz, 1 H) 6.71 - 6.86 (m, 2 H) 7.01 (dd, J=8.5, 1.0 Hz, 1 H) 7.33 - 7.52 (m, 1 H).

[0144] 2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)heksan-1,3-diol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A. Rt: 1.29 min., m/z = 295 [M+H], Method: H

[0145] 2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)-3-metilheksan-1-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.82 - 0.89 (m, 3 H) 0.89 - 0.98 (m, 3 H) 1.06 - 1.50 (m, 4 H) 1.73 - 2.03 (m, 1 H) 3.44 - 3.75 (m, 2 H) 4.17 - 4.43 (m, 1 H) 4.74 - 4.95 (m, 1 H) 6.23 (s, 2 H) 6.54 - 6.74 (m, 1 H) 6.75 - 6.85 (m, 1 H) 7.03 (dd, J=8.4, 0.9 Hz, 1 H) 7.32 - 7.59 (m, 1 H). Rt: 0.87 min., m/z = 293 [M+H], Method: B

[0146] 5-fluor-N<4>-(1-metoksiheksan-2-il)hinazolin-2,4-diamin. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.83 - 0.95 (m, 3 H) 1.23 - 1.39 (m, 4 H) 1.54 - 1.69 (m, 2 H) 3.29 (s, 3 H) 3.36 - 3.56 (m, 2 H) 4.47 -4.57 (m, 1 H) 6.26 (s, 2 H) 6.65 (dd, J=15.4, 8.4 Hz, 1 H) 6.73 - 6.81 (m, 1 H) 7.02 (dd, J=8.5, 1.0 Hz, 1 H) 7.44 (td, J=8.2, 6.7 Hz, 1 H). Rt: 1.02 min., m/z = 293 [M+H], Method: B.

[0147] 2-((2-amino-5-fluorhinazolin-4-il)amino)heks-5-en-1-ol. Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema opštem postupku A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.60 - 1.83 (m, 2 H) 2.02 - 2.20 (m, 2 H) 3.51 - 3.61 (m, 2 H) 4.26 - 4.44 (m, 1 H) 4.92 - 4.97 (m, 1 H) 4.99 - 5.06 (m, 1 H) 5.77 - 6.00 (m, 1 H) 6.28 (s, 2 H) 6.68 - 6.87 (m, 2 H) 7.03 (dd, J=8.4, 0.9 Hz, 1 H) 7.35 - 7.54 (m, 1 H). Rt: 1.49 min., m/z = 277 [M+H], Method: A.

Tabela 2. Jedinjenja formule (I).

4

4

4

4

4

4

4

1

2

4

Analitički postupci.

[0148]

Tabela 3. Jedinjenja su okarakterisana putem LC-MS koristeći jedan od sledećih postupaka:

2

4

[0149] LCMS postupak K. Analize su obavljene na Phenomenex Kinetex 00B-4475-AN C18 koloni (50 mm × 2,1 mm I.D.; 1,7 µm) na 60°C, sa protokom 1,5 ml/min. Gradijentna elucija je obavljena od 90% (voda 0,1% HCOOH) / 10% CH3CN do 10% (voda 0,1% HCOOH) / 90% CH3CN za 1,50 minuta; dobijena kompozicija je zadržana tokom 0,40 min; zatim finalna kompozicija mobilne faze; od 10% (voda 0,1% HCOOH) / 90% CH3CN do 90% (voda 0,1% HCOOH) / 10% CH3CN za 0,10 minuta. Injekciona zapremina je bila 2 µl sa Agilent injektorom za samouzorkovanje ili 5 µl sa Gerstel MPS injektorom. Raspon MS akvizicije i DAD detektor su bili podešeni na 100-800 m/z, odnosno 190-400 nm.

[0150] Tačka topljenja. Tačke topljenja su utvrđene prema sledećim postupcima:

A. Mettler Toledo MP50

B. DSC: Od 30 do 300°C sa 10°C/min 50 ml N2

C. DSC: 25°C do 350°C/10°C min/40 µl Al

Opis bioloških testova

Procena aktivnosti TLR7 i TLR8

[0151] Sposobnost jedinjenja da aktiviraju humani TLR7 i/ili TLR8 procenjena je u testu ćelijskog reportera koristeći HEK293 ćelije tranzijentno transficirane sa ekspresionim vektorom TLR7 ili TLR8 i reporterskim konstruktom NFκB-luc. U jednom slučaju, ekspresioni konstrukt TLR eksprimira odgovarajuću sekvencu divljeg tipa ili mutantnu sekvencu koja ima deleciju u drugom leucinom bogatom ponavljanju TLR. Prethodno se pokazalo da su takvi mutantni TLR proteini podložniji aktivaciji agonista (US 7,498,409 u ime Schering Corporation, čiji je sadržaj ovde obuhvaćen referencom).

[0152] HEK293 ćelije su uzgajane u medijumu za kulturu (DMEM sa dodatkom 10% FCS i 2 mM glutamina). Za transfekciju ćelija u posudama od 10 cm, ćelije su odvojene sa tripsin-EDTA, transficirane smešom CMV-TLR7 ili TLR8 plazmida (750 ng), NFκB-luc plazmida (375 ng) i transfekcionog reagensa, i inkubirane tokom 24 h na 37°C u vlažnoj atmosferi sa 5% CO2. Transficirane ćelije su zatim odvojene sa Trypsin-EDTA, isprane u PBS-u i ponovo suspendovane u medijumu do gustine od 1,67 × 10<5>ćelija/ml. Trideset mikrolitara ćelija je zatim raspoređeno u svaki bunarčić ploča sa 384 bunarčića, gde se već nalazilo 10 µl jedinjenja u 4% DMSO. Nakon 6 h inkubacije na 37°C, 5% CO2, aktivnost luciferaze je utvrđena dodavanjem 15 µl supstrata STEADY LITE PLUS (PERKIN ELMER) u svaki bunarčić, i očitavanje je obavljeno na čitaču mikroploča VIEWLUX ULTRAHTS (PERKIN ELMER). Krive doznog odgovora su dobijene od merenja obavljenih u četiri primerka.

Vrednosti najniže efektivne koncentracije (LEC), definisane kao koncentracija koja indukuje dejstvo koje je najmanje dvostruko veće od standardne devijacije testa, određene su za svako jedinjenje.

[0153] Toksičnost jedinjenja je paralelno određena koristeći slične serije razblaženja jedinjenja sa 30 µl po bunarčiću ćelija transficiranih samo konstruktom CMV-TLR7 (1,67 × 10<5>ćelija/ml), na pločama sa 384 bunarčića. Vijabilnost ćelija je izmerena 6 h nakon inkubacije na 37°C, 5% CO2dodavanjem 15 µl ATP lite (PERKIN ELMER) po bunarčiću i očitavanjem na čitaču mikroploča ViewLux ultraHTS (PERKIN ELMER). Podaci su objavljeni kao CC50

Tabela 4. Biološka aktivnost jedinjenja formule (I) kako je definisana u zahtevu 1

Claims (21)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenja formule (I)

   ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf, pri čemu, - R1je C4-8alkil supstituisan hidroksilom, - ugljenik iz R1vezan za amin na 4-poziciji hinazolina ima (R)-konfiguraciju, - R2je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil, metoksi, ciklopropil, trifluormetil ili karboksil amid, pri čemu su metil, metoksi i ciklopropil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora i nitrila, - R3je vodonik ili deuterijum, - R4je vodonik, deuterijum, fluor, metil, karboksil estar, karboksil amid, nitril, ciklopropil, C4-7heterocikl ili 5-člana heteroaril grupa, pri čemu su metil, ciklopropil, C4-7heterocikl i 5-člana heteroaril grupa opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora, hidroksila ili metila, i - R5je vodonik, deuterijum, fluor, hlor, metil ili metoksi, pod uslovom da najmanje jedan od R2, R3, R4i R5nije vodonik.
2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu R1ima formulu (II):

   ili formulu (III):
3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1 ili 2, pri čemu, R2je fluor, hlor ili metil, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora i nitrila.
4. 4. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-3, pri čemu, R2je fluor ili hlor ili metil, konkretnije fluor ili hlor, konkretnije fluor.
5. 5. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-4, pri čemu, R4je fluor ili metil, i pri čemu je metil opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata nezavisno izabranih od fluora, hidroksila ili metila.
6. 6. Jedinjenje iz zahteva 1 ili 2 koje je izabrano od jedinjenja 1-10, 12-19 i 21-26:
7. 7. Jedinjenje iz zahteva 6 koje je izabrano od jedinjenja 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 21, 22, 23, 24 i 26.
8. 8. Jedinjenje iz zahteva 6 ili 7 koje je izabrano od jedinjenja 2, 13, 14, 15, 16, 21 i 23.
9. 9. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 2 sa strukturnom formulom:
10. 10. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 13 sa strukturnom formulom:
11. 11. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 14 sa strukturnom formulom:
12. 12. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 15 sa strukturnom formulom:
13. 13. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 16 sa strukturnom formulom:
14. 14. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 21 sa strukturnom formulom:
15. 15. Jedinjenje iz zahteva 8 koje je jedinjenje 23 sa strukturnom formulom:
16. 16. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-15, koje je agonist TLR8 i koje pokazuje poboljšani agonizam TLR8 u odnosu na TLR7.
17. 17. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-15, koje stimuliše ili aktivira Th1 imunski odgovor i/ili koje stimuliše ili aktivira proizvodnju citokina, konkretnije proizvodnju IL12.
18. 18. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-17 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, razblaživača ili nosača.
19. 19. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-17 ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 18 za upotrebu kao lek.
20. 20. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-17 ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 18 za upotrebu u lečenju ili prevenciji virusne infekcije, bolesti indukovane virusom, kancera ili alergije, konkretnije u lečenju ili prevenciji virusne infekcije, bolesti indukovane virusom ili kancera, konkretnije u lečenju ili prevenciji virusne infekcije ili bolesti indukovane virusom.
21. 21. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-17 ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 18 za upotrebu u lečenju ili prevenciji hronične virusne infekcije ili bolesti indukovane hroničnom virusnom infekcijom, konkretnije za upotrebu u lečenju ili prevenciji HBV infekcije ili bolesti indukovane putem HBV, konkretnije za upotrebu u lečenju ili prevenciji hronične infekcije HBV ili jedne ili više bolesti izabranih od fibroze jetre, zapaljenja jetre, nekroze jetre, ciroze, bolesti jetre i hepatocelularnog karcinoma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5