RS64040B1 - Derivat pirimidin sulfamida i njegov postupak dobijanja i primena u medicini - Google Patents

Description

Opis

Pozivanje na srodne prijave

[0001] Sadašnja prijava zahteva sledeći prioritet:

[0002] CN201711168111.3, datum podnošenja: Novembar 21, 2017.

Oblast pronalaska

[0003] Sadašnje opis se odnosi na klasu jedinjenja koja potiče od pirimidin sulfamida i na njihovu upotrebu kao leka za bolesti koje su povezane sa antagonistom ETAreceptora. Određenije, prikazano je izvedeno jedinjenje formule (I), njegov tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva kompozicija.

Stanje tehnike

[0004] Endotelin (ET) je familija izomernih peptida koja sadrži 21-aminokiselinu, od kojih sve imaju hidrofobni C-kraj koji se sastoji od 6 identičnih aminokiselinskih ostataka i 2 disulfidne veze između lanaca. Postoje tri izoobilka endotelina kodirana različitim genima u telu čoveka, naime ET-1, ET-2 i ET-3. Između njih, ET-1 ima najjaču vazokonstriktornu aktivnost, na venama koje su 3 do 10 puta veće od arterija, što je glavni izoblik koji izaziva bolest. ET-1 je najrasprostranjeniji tip familije endotelina i takođe ima najvažniju funkciju. Uglavnom je eksprimovan kao vaskularni endotelijum, i takođe je raspoređen u nevaskularnim tkivima kao što su srce, bubreg, pluća, nadbubrežna žlezda i drugi organi.

[0005] ET ne funkcioniše samo kao vaskularni faktor koji moduliše krvni pritisak, nego takođe kao hormon koji izaziva progresiju mnogo ćelija (kao što je proliferacija, apoptoza i migracija) što vodi do hipertrofije tkiva, remodelovanja, fibroze i inflamacije. Novi ET-1 u plazmi i tkivu će povećati različite bolesti kao što je plućna arterijska hipertenzija, sepsa, ateroskleroza, akutni infarkt miokarda, kongestivna srčana slabost, migrena, astma i slično. Prema tome, antagonisti receptora endotelina se široko istražuju kao terapeutska sredstva velikih mogućnosti.

[0006] Receptori endotelina pripadaju receptorima kuplovanim sa G proteinom, koji mogu imati tri tipa: ETA, ETBi ITD. Oni imaju različitu rasprostranjenost u različitim tkivima i organima, imaju različite afinitete za tri podtipa endotelina, i imaju veliku razliku u fiziološkim dejstvima. Endotelinski ETAreceptori su uglavno raspoređeni na ćelijama glatkih mišića i selektivno se vezuju za ET-1 i posreduju u kontrakciju vaskularnih glatkih mišića. Endotelinski ETBreceptori se dele na dva podtipa, naime ETB1i ETB2, gde je raniji raspoređen na endotelijalnim ćelijama i posreduje u oslobađanju relaksacionog faktora koji potiće iz endotelijuma (eng. endothelium-derived relaxing factor -EDRF), prostaciklina (PGI2) i azotnog oksida (NO), tako izazivajuči vazodilataciju, dok je poslednji smešten na vaskularne glatke mišiće, efekat je isti kao i receptora ETAda direktno posreduje u kontrakciji venskog krvnog suda, i sličan je afinitet endotelinskog ETBreceptora za ET-1, ET-2 i ET-3. ETCreceptor je ET-3 selektivni receptor, uglavnom raspoređen u neuronskim ćelijama i funkcionište kao neurotransmiter. ET-1 deluje uglavnom preko ETAi ETBreceptora. Antagonist endotelinskog receptora može biti podeljen na antagonist ETAreceptora, antagonist ETBreceptora i dualni antagonist ETA/ETB, pri čemu su dokazani predklinički i/ili klinički efekti na različite bolesti kao što su subarahnoidno krvarenje, slabljenje srca, hipertenzija plućne arterije, primarna hipertenzija, refraktorna hipertenzija, neurogena inflamacija, dijabetička nefropatija, fokalna segmentna glomeruloskleroza, slabljenje bubrega, neurogena inflamacija, cerebralni vazospazam posle slabljenja bubrega i infarkta miokarda i slično. Visoko selektivni antagonisti ETAreceptora inhibiraju jak vazokonstriktorski efekat ET-1, dok se izbegava nešto od neželjenog dejstva neselektivnih dualni antagonista ETA/ETBreceptora, tako smanjujući klinička sporedna dejstva.

[0007] Patent WO02/053557 opisuje jedinjenje macitentan, koji se može koristiti za lečenje bolesti u vezi sa dejstvom endotelina.

Sadržaj sadašnjeg pronalaska

[0008] Ovaj opis obezbeđuje jedinjenje formule (I), njegovog geometrijskog ili steroizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli,

gde,

R1je izabran između H, F, Cl, Br, I, OH i NH2;

R2je izabran između H i C1-3alkila, gde C1-3alkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R;

R3je izabran između H, C1-6alkila, C1-6heteroalkila, -C1-3alkil-C3-6cikloalkila, C3-6cikloalkila i -C1-3alkil-3-7 članog heterocikloalkila, gde C1-6alkil, C1-6heteroalkil, -C1-3alkil-C3-6cikloalkil, C3-6cikloalkil ili -C1-3alkil-3-7-člani heterocikloalkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R;

ili, R2i R3su povezani da obrazuju 3-8 člani prsten opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R; prsten B je izabran između 3-7 članog heterocikloalkila i 5-6 članog heteroarila, 3-7 člani heterocikloalkil ili 5-6 članog heteroaril je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R;

R je nezavisno izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-6alkila i C1-6heteroalkila, gde C1-6alkil ili C1-6heteroalkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R’;

R’ je nezavisno izabran između F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2, CF3i Et;

svaki od C1-6heteroalkila, 3-7 članog heterocikloalkila i 5-6 članog heteroarila sadrži jedan, dva tri ili četiri heteroatoma ili grupe heteroatoma nezavisno izabrane između N, -O-, -S-, -NH -, -S(=O)2-i -S(=O).

[0009] U nekim izvođenjima ovog opisa , R je izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3alkil, C1-3alkil-S(=O)2-i C1-3alkil-O-, gde C1-3alkil, C1-3alkil-S(=O)2- ili C1-3alkil-O-je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R’, i druge promenjive su definisane u ovom opisu .

[0010] U nekim izvođenjima ovog opisa, R je izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, Et,

gde Me, Et,

ili

je opciono supstituisano sa jednim, dva ili tri R’, i druge promenjive su definisane u prikazanom opisu.

[0011] U nekim izvođenjima ovog opisa, R je izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2, CF3, Et,

i druge promenjive su definisane u prikazanom opisu.

[0012] U nekim izvođenjima ovog opisa, R2je izabran između H i Me, i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0013] U nekim izvođenjima ovog opisa, R3je izabran između H, C1-4alkil, C1-4alkil-O-C1-4alkil, ciklobutil, -C1-3alkil-ciklobutil, -C1-3alkil-ciklopropil, -C1-3alkil-tetrahidrofuranil i -C1-3alkil-tetrahidropiranil, gde C1-4alkil, C1-4alkil-O-C1-4alkil, ciklobutil, -C1-3alkil-ciklobutil, -C1-3alkil-ciklopropil, -C1-3alkiltecrahidrofuranil ili -C1-3alkil-tetrahidropiranil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R, i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0014] U nekim izvođenjima ovog opisa, R3je izabran između H, Me, Et,

ili

je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R, i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0015] U nekim izvođenjima ovog opisa, R3je izabran između H, Me, Et,

i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0016] U nekim izvođenjima ovog opisa, R2i R3su povezani da obrazuju 6-8 člani heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R.

[0017] U nekim izvođenjima ovog opisa, strukturna jedinica

je izabrana između

gde

je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R, i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0018] U nekim izvođenjima ovog opisa, strukturna jedinica

je izabrana između

i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0019] U nekim izvođenjima ovog opisa, prsten B je izabran između tetrahidrofuranila, tetrahidrotienila, 1,3-dioksolanila, pirolidinila, tiazolila, pirazolila i imidazolila, gde tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, 1,3-dioksolanil, pirolidinil, tiazolil, pirazolil ili imidazolil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R, i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0020] U nekim izvođenjima ovog opisa, strukturna jedinica

je izabrana između

i druge promenjive su kako je definisano u prikazanom opisu.

[0021] Duga izvođenja iz prikazanog opisa mogu biti dobijena proizvoljnom kombinacijom promenjivih.

[0022] U nekim izvođenjima ovog opisa, jedinjenje, njegovi geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrano između

gde, R, R1ili R2je kako je definisano u prikazanom opisu.

[0023] Prikazani opis takođe obezbeđuje jedinjenje, ili njegov geometrijski ili stereopizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so , koje je izabrano između

[0024] U nekim izvođenjima ovog opisa, jedinjenje, njegova geometrijski ili steroizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je izabrano između

[0025] Opis takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kao aktivnog sredstva, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0026] Prikazani opis takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili kompozicije u proizvodnji leka u vezi sa antagonistom ETAreceptora .

1

[0027] U nekim izvođenjima ovog opisa, lek u vezi sa antagonistom ETAreceptora je lek za indikacije kao što su plućna arterijska hipertenzija, primarna hipertenzija, refraktorna hipertenzija, dijabetička nefropatija i intakranijalni vazospazam.

Definicija i opis

[0028] Osim ako nije drugačije navedeno, sledeći izrazi korišćeni u opisu i patentnim zahtevima ovog izlaganja imaju sledeća značenja. Određeni izraz ili frazu ne treba smatrati neodeđenim ili nejasnim u odsustvi određene definicije, nego ga treba shvatiti u uobičajenom smislu. Kada se ovde javlja ime žiga, namera je da se odnosi na njegovu odgovarajuću robu ili njegov aktivni sastojak. Izraz "farmaceutski prihvatljiv" je ovde korišćen u smislu onih jedinjenja, materijala, kompozicija i/ili doznih oblika, koji su pogodni za upotrebu u kontaktu sa humanim i životinjskim tkivima u okviru pouzdane medicinske prakse, bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije ili drugih problema ili komplikacija, proporcijalne sa razumnim odnosom korist/ rizik .

[0029] Izraz "farmaceutski prihvatljiva so" odnosi se na so jedinjenja prema prikazanom opisu koja je pripremljena reagovanjem jedinjenja koje ima specifični supstituent prema prikazanom opisu sa relativno netoksičnom kiselinom ili bazom. Kada jedinjenje prema prikazanom opisu sadrži relativno kiselu funkcionalnu grupu, bazna adiciona so može biti dobijena dovođenjem neutralnog oblika jedinjenja u kontakt sa dovoljnom količinom baze u čistom rastvoru ili pogodnom inertnom rastvaraču. Farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so obuhvata so natrijuma, kalijuma, kalcijuma, amonijuma, organskog amina ili magnezijuma ili sličnih soli. Kada jedinjenje prema prikazanom pronalasku sadrži relativno baznu funkcionalnu grupu, kisela adiciona so može biti dobijena dovođenjem neutralnog oblika jedinjenja u kontakt sa dovoljnom količinom kiseline u čistom rastvoru ili pogodnom inertnom rastvaraču. Primeri farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli uključuju so neorganske kiseline, gde so neorganske kiselne uljučuje, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, azotnu kiselinu, ugljenu kiselinu, bikarbonat, fosfornu kiselinu, monohidrogen fosfat, dihidrogen fosfat, sumpornu kiselinu, hidrogen sulfat, jodovodoničnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i slično; i so organske kiseline, pri čemu organska kiselina uključuje, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, izobuternu kiselinu, jabučnu kiselinu, malonsku kiselinu, benzojevu kiselinu, ćilibarnu kiselinu, suberinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, mlečnu kiselinu, bademovu kiselinu, ftalnu kiselinu, benzensulfonsku kiselinu, p-toluensulfonsku kiselinu, limunsku kiselinu, vinsku kiselinu i metansulfonsku kiselinu i slično; i so aminokiseline (kao šo je arginin i slično), i so organske kiseline kao što je glukuronska kiselina i slično. Izveasna specifična jedinjenja prema prikazanom opisu koja sadrže i bazne i kiselinske funkcionalne grupe mogu biti konvertovana u bilo koju baznu ili kiselu adicionu so .

[0030] Farmaceutski prihvatljiva so prema prikazanom opisu može biti pripremljana iz osnovnog jedinjenja koje sadrži kiselinski ili bazni deo konvancionalnim hemijskim postupcima . Generalno, takva so može biti dobijena reagovanjem oblika slobodne kiseline ili baze jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili organskom rastvaraču ili njihovoj smeši.

[0031] Jedinjenje prema prikazanom opisu može imati specifični geometrijski ili stereoizomerni oblik. Prikazani opis uzima u obzir sva takva jedinjenja , uključujući cis i trans izomer, (-)-i (+)-enantiomer, (R)-i (S)-enantiomer, diastereoizomer, (D)-izomer, (L)-izomer, i racemski smešu i ostale smeše, na primer, smeša obogaćena enantiomerom ili diastereoizomerom, od kojih su svi obuhvaćeni obimom prikazanog opisa . Supstituent kao što je alkil može imati dodatni asimetrični ugljenikov atom. Svi ovi izomeri i njihove smeše su obuhvaćeni obimom prikazanog pronalaska.

[0032] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "enantiomer" ili "optički izomer" odnosi se na stereoizomere koji su slike u ogledalu jedan drugog .

[0033] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "cis-trans izomer" ili "geometrijski izomer" je izazvan nemogućnošću dvostruke veze ili proste veze ugljenikovih atoma u prstenu da slobodno rotira.

[0034] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "diastereomer" odnosi se na stereoizomere u kojima molekuli imaju dva ili više hiralnih centara i nisu slika jedan drugog u ogledalu.

[0035] Osim ako nije drugačije navedeno, "(D)" ili "(+)" označava rotaciju u desno, "(L)" ili "(-)" označava rotaciju u levo, "(DL)" ili "(±)" označava racemizaciju.

[0036] Osim ako nije drugačije navedeno, apsolutna konfiguracija stereogenog centra je prikazana kao klinasta puna veza

i klinasta isprekidana veza

i relativna konfiguracija sterogenih centara je prikazana pravom punom vezom

i pravom isprekidanom vezom

Talasasta linija

predstavlja klinastu punu vezu

ili klinastu isprekidanu vezu

ili predstavlja pravu punu vezu

ili pravu isprekidanu vezu

[0037] Osim ako nije drugačije navedeno, izrazi "tautomer" ili "tautomerni oblik" odnosi se na činjenicu da različiti funkcionalni izomeri su u dinamičkom ekvilibrijumu na sobnoj temperaturi i mogu biti brzo pretvoreni jedan u drugi. Ako su mogući tautormeri (kao u rastvoru), može se postići hemijska ravnoteža izomera. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverziju prelaskom protona, kao što keto-enolna izomerizacija i imin-enaminska izomerizacija. Valenti tautomer uključuje međusobnu transformaciju nekih vezivnih elektrona. Specifični primer keto-enolne tautomerizacije je interkonverzija između dva tautomera pentan-2,4-diona i 4-hidroksipent-3-en-2-ona.

[0038] Osim ako nije drugačije navedeno, izrazi "obogaćen u jednom izomeru", "izomerno obogaćen", "obogaćen u jednom enantiomeru" ili "enantiomerno obogaćen" odnosi se na sadržaj jednog od izomera ili enantiomera koji je manji od 100%, i sadržaj izomera ili enantiomera je 60% ili veći, ili 70% ili veći, ili 80% ili veći, ili 90% ili veći, ili 95% ili veći, ili 96% ili veći, ili 97% ili veći, ili 98% ili veći, ili 99% ili veći, ili 99.5% ili veći, ili 99.6% ili veći, ili 99.7% ili veći, ili 99.8% ili veći, ili 99.9% ili veći.

[0039] Osim ako nije drugačije navedeno, izrazi "višak izomera" ili "višak enantiomera" odnosi se na razliku između relativnih procenata dva izomera ili enantiomera. Na primer, kada je, sadržaj jednog od izomera ili enantiomera 90%, a drugog je 10%, tada višak izomera ili enantiomera (ee vrednost) je 80%.

[0040] Optički aktivan (R)-i (S)-izomer, ili D i L izomer mogu biti dobijeni pomoću hiralne sinteze ili hiralnog reagensa ili drugih konvencionalnih tehnika. Ukoliko jedna vrsta enantiomera izvesnog jedinjenja prikazanog opisa treba da se dobije. Čisti željeni enantiomer može da se dobije asimetričnom sitezom ili dejstvom derivata hiralnog pomoćnog sredstva praćenim odvajanjem dobijene diastereoizomerne smeše i cepanjem pomoćne grupe. Alternativno, kada molekul sadrži baznu funkcionalnu grupu (kao što je amino) ili kiselu funkcionalnu grupu (kao što je karboksil). Jedinjenje reaguje sa odgovarajućom optički aktivnom kiselinom ili bazom da bi se obrazovala so diastereomernog jedinjenja koja je zatim podvrgnuta diastereoizomernom razdvajanju pomoću konvencionalnog postupka u stanju tehnike da bi se dobio čist enantiomer. Dodatno, enantiomer i diastereoizomer su generalno izolovani pomoću hromatografije koja koristi hiralnu stacionarnu fazu i opciono kombinovanu sa postupkom hemijske derivatizacije (kao što je karbamat dobijen iz amina). Jedinjenje prema prikazanom opisu može sadržati neprirodni odnos atomskih izotopa u jednom ili više od jednog atoma koji čine jedinjenje. Na primer, jedinjenje može biti radioaktivno obeleženo sa radioaktivnim izotopima, kao što su tricijum (<3>H), jod-125 (<125>I) ili C-14 (<14>C). Za drugi primer, vodonik može biti zamenjen sa težim vodonikom da bi se obrazovao deuterisani lek i veza koja se sastoji iz barijuma i ugljenika je jača od veze koja je između običnog vodoka i ugljenika. U poređenju sa nedeuterisanim lekovima, deuterisani lekovu imaju redukovana sporedna dejstva i povećanu stabilnost leka, povećanu efikasnost i produženi biološki poluživot leka. Sve izotopske varijacije jedinjenja prema prikazanom opisu, bilo radioaktivne ili ne, su obuhvaćene obimom prikazanog pronalaska.

[0041] "Opcioni" ili "opcionalni" označava da slučaj ili stanja koja slede se mogu javiti ali nisu potrebni, da izraz uključuje slučaj u kome događaj ili stanje javljaju i slučaj u kome se događaj ili stanje ne javalja.

[0042] Izraz "supstituisani" označava jedan ili više od jednog atoma vodonika na specifičnom atomu su zamenjeni sa supstituentom, uključujući deuterijum i varijante vodonika, dok god je valenca određenog atoma normalna i supstituisano jedinjenje stabilno. Kada je supstituent kiseonik (tj. =O), to znači da su dva ugljenikova atoma supstituisana. Položaji na aromatčnom prstenu ne mogu biti

1

supstituisani sa ketonom. Izraz "opciono supstituisani" označava da atom može biti supstituisan ili ne, osim ako nije drugačije navedeno. Tip i broj supstituenata može biti proizvoljan dokle god se to može hemijski postići.

[0043] Kada se bilo koja promenjiva (kao što je R) javlja u sastavu ili strukturi jedinjenja više od jednom, definicija promenjive u svakom javljanju je nezavisna. Prema tome, na primer, ukoliko je grupa supstituisana sa 0-2 R, grupa može biti opciono supstituisana sa do dve R, gde je definicija R u svakom javljanju nezavisna. Povrh svega, kombinacija supstituenta i/ili njegovih varijanti je dozvoljena samo kada kombinacija dovodi do stabilnog jedinjenja.

[0044] Gde broj povezujućih grupa je 0, kao što je -(CRR)0-, to znači da je povezujuća grupa jednostruka veza.

[0045] Kada je jedna od promenjivih izabrana između jednstruke veze, to znači da dve grupe povezane sa jednom vezom su direktno povezane. Na primer, kada L u A-L-Z predstavlja jednostruku vezu, struktura A-L-Z je ustvari A-Z.

[0046] Kada je supstituent upražnjen, to znači da supstituent ne postoji. Na primer, kada je X upražnjen u A-X, struktura A-X je ustvari A. Kada navedeni supstituenti nisu naznačeni za koji su atom vezani za supstituisanu grupu, takav supstituent može biti vezan preko bilo kog od njegovih atoma, na primer, piridil grupa kao supstituent može biti vezana za supstituisanu grupu preko bilo kog od ugljenikovih atoma na piridinskom prstenu. Kada nabrojana povezujuća ne ukazuje na smer vezivanja, smer je proizvoljan, na primer, povezujuća grupa L koja se nalazi u

je -MW-, tada -MW-može vezati prsten A i prsten B da obrazuje

u smeru istom kao smer čitanja levo prema desno, i obrazovati

i u smeru suprotom smeru čitanja levo prema desnom . Kombinacije povezujućih grupa, supstituenata i/ili njihovih varijanti su dozvoljene samo ukoliko takve kombinacije dovode do stabilnih jedinjenja.

[0047] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "hetero" predstavlja heteroatom ili heteroatomsku grupu (npr., atomsku grupu koja sadrži heteroatom), uključujući atom osim ugljenika (C) i vodonika (H) i atomsku grupu koja sadrži heteroatom, na primer, uključujući kiseonik (O), azot (N), sumpor (S), silicijum (Si), germanijum (Ge), aluminijum (Al), bor (B), -O-, -S-, =O, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O), - S(=O)2-, i grupu koja se sastoji od -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=O)2N(H)-i -S(=O)N(H)-, od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0048] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "prsten" odnosi se na supstituisani ili nesusptituisani cikloalkil, heterocikloalkil, cikloalkenil, heterocikloalkenil, cikloalkinil, heterocikloalkinil, aril ili heteroaril. Takozvani prsten uključuje jedan prsten, dvostruki prsten, spiralni prsten, spojeni prsten ili premošćeni prsten. Broj atoma na prstenu je uglavnom definisan kao broj članova prstena, na primer, "5-7 člani prsten " označava da 5 do 7 atoma je raspoređeno u prstenu. Osim ako nije drugačije navedeno, prsten opciono sadrži 1 do 3 heteroatoma. Prema tome, "5-7 člani prsten" uključuje, na primer, fenil, piridinil i piperidinil; sa druge strane. Izraz "5-7 člani heterocikloalkil prsten" uključuje piridil i piperidinil, ali isključuje fenil. Izraz "prsten " takođe uključuje sistem prstena koji sadrži bar jedan prsten, gde svaki prsten nezavisno zadovoljava definiciju.

[0049] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "heterocikličan" ili "heterociklo" odnosi se na stabilni monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji sadrži heteroatom ili heteroatomsku grupu, koja može biti zasićena, parcijalno nezasićena ili nezasićena (aromatična) i može sadržati ugljenikove atome i jedan, dva, tri ili četiri heteroatoma u prstenu nezavisno izabrana između N, O i S, gde bilo koji od heterocikla može biti spojen sa benzenovim prstenom da bi se obrazovano biciklični prsten. Heteroatomi azot i sumpr mogu optimalno biti oksidoavani (tj., NO i S(O)p, p je 1 ili 2). Atom azota može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR, gde R je H ili drugi supstituenti već ovde definisani). Heterocikl može biti vezan za privezanu grupu bilo kog heteroatoma ili ugljenikovog atoma da obrazuju stabilnu strukturu. Ukoliko je dobijeno jedinjenje stabilno, ovde opisani heterocikl može imati supstituciju na položaju ugljenika ili azota. Atom azota na heterociklu je opciono kvaternizovan. U poželjnom izvođenju, ukupan broj S i O atoma heterocikla je veći od 1, heteroatom nije susedan jedan drugom. Ukupan broj S i O atoma heterocikla nije veći od 1. Kako je ovde korišćeno, izraz "aromatična heterociklična grupa" ili "heteroaril" odnosi se na stabilni 5-, 6-ili 7-člani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-ili 10-člani biciklični heterociklični aromatični prsten koji sadrži ugljenikove atome i jedan, dva, tri ili četiri heteroatoma u prstenu nezavisno izabrana između N, O i S. Atom azota može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR, gde R je H ili drugi ovde već definisani supstituenti ). Heteroatomi azota i sumpora mogu opciono biti oksidovani (tj., NO i S(O)p, p je 1 ili 2). Vredi napomenuti da je ukupan broj S i O atoma aromatičnog heterocikla nije veći od jedan. Premošćeni prsten je takođe uključen u definiciju heterocikla. Premošćeni prsten je obrazovan kada jedan ili više od jednog atom (tj, C, O, N ili S) povezuje dva nesusedna ugljenikova ili azotova atoma. Poželjni premošćeni prsten uključuje, ali bez ograničena jedan ugljenikov atom. Dva ugljenikova atoma, jedan azotov atom, dva azotova atoma i jednu ugljenik-azot grupu. Vredi napomenuti da most se uvek pretvara monociklični prsten u triciklični prsten. U premošćenom prstenu, supstituent na prstenu može takođe biti prisutan na mostu.

[0050] Primeri heterocikličnog jedinjenja uključuju, ali bez ograničenja samo njih: akridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzomerkaptofuranil, benzomerkaptofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benzotiazolil, benzotriazolil, benzotetrazolil, benzoizoksazolil, benzoizotiazolil, benzoimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromen, cinolinil dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-dithiazinyl, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuranil, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izobenzofuranil, izoindolil, izoindolinil, izohinolinil, izotiazolil, izoksazolil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, oktahidro-izohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, hidroksindolil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazin, fenotiazin, benzoksantinil, fenoloksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazolil, pirido-imidazolil, pirido-tiazolil, piridinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil,

1

hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, tetrazolil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-thiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, izotiazoliltienil, tieno-oksazolil, tieno-tiazolil, tieno-imidazolil, tienil, triazinil, 1H-1,2,3-triazolil, 2H-1,2,4-triazolil, 1H-1,2,4-triazolil, 4H-1,2,4-triazolil i ksantenil. Takođe su uključena jedinjenja sa spojenim prstenovima i spiro jedinjenja.

[0051] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "hidrokarbil" ili njegovi hiponimi (npr., alkil, alkenil, alkinil, i aril, itd.), sami ili kao deo drugog supstitutenta, odnose se na linearan, razgranati lanac ili ciklični ugljovodinični radikal ili bilo koju njegovu kombinaciju, oni mogu biti potpuno zasičeni (npr., alkil), mono-ili polinezasićeni (npr., alkenil, alkinil, i aril), mogu biti mono-, di-ili poli-supstituisani, mogu biti monovalentni (npr., metil), divalentni (npr., metilen) ili multivalentni (npr., metenil), mogu takođe uključivati divalentnu ili multivalentnu gupu, imaju određeni broj ugljenikovih atoma (na primer, C1-C12ukazuje 1 do 12 ugljenikovih atoma, C1-12je izabran između C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11i C12; C3-12je izabran između C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11i C12). Izraz "hidrokarbil" uključuje, ali nije ograničen na alifatični hidrokarbil i aromatični hidrokarbil, alifatični hidrokarbil uključuje linearni i ciklični hidrokarbil, posebno uključuje ali bez ograničenja alkil, alkenil, i alkinil. Aromatični hidrokarbil uključuje ali bez ograničenja 6-12 člani aromatični hidrokarbil kao što je fenil, naftil i slično. U nekim izvođenjima, izraz "hidrokarbil" odnosi se na lineranu ili razgranatu grupu ili njihovu kombinaciju koja može biti potpuno zasićena, mono ili polinezasićena, i može uključivati divalentnu ili multivalentnu grupu. Primeri zasićene hidrokarbil grupe uključuju, ali bez ograničenja samo na njih, metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, terc-butil, izobutil, sek-butil, cikloheksil, (cikloheksil)metil, ciklopropilmetil, i homolog ili izomer n-amil, n-heksil, n-heptil, n-oktil i druge atomske grupe. Nezasićeni hidrokarbil ima jednu ili više dvostrukih i trostrukih veza. Primeri nezasičenog alkila uključuju ali bez ograničenja samo na njih, vinil, 2-propenil, butenil, crotil, 2-izopentenil, 2-(butadienil), 2,4-pentadienil, 3-(1,4-pentadienil), etinil, 1-i 3-propinil, 3-butinil, i više njihovih homolga ili izomera.

[0052] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "heterohidrokarbil" ili njegovi hiponimi (kao što su heteroalkil, heteroalkenil, heteroalkinil, i heteroaril, itd.), sami ili kao deo drugog supstituenta, odnosi se na linearnu, razgranatu ili cikloalkil ugljovodoničnu grupu ili bilo koju njenu kombinaciju, koja ima određeni broj ugljenikovih atoma i bar jedan heteroatom. U nekim izvođenjima, izraz "heteroalkil" sam ili u kombinaciji sa drugim izrazom odnosi se na stabilni linearni lanac, razgranati ugljovodonični radikal ili njihovu kombinaciju koja ima navedeni broj ugljenikovih atoma i bar jedan heteroatom. U specifičnom izvođenju, heteroatom je izabran između B, O, N i S, gde atomi azota i sumpora su opciono oksidovani i atom azota je opciono kvaternizovan. Heteroatom ili heteroatomska grupa mogu biti smešteni u bilo koji unutrašnji položaj heterohidrokarbila, uključujući položaj gde se hidrokarbil vezuje za ostatak molekula. Ali izrazi "alkoksi", "alkilamino" i "alkiltio" (ili tioalkil) su korišćeni na konvencionalni način i odnose se na alkil grupu povezanu sa ostatkom molekula preko odgovarajućeg kiseonikovog atoma, amino ili sumporovog atoma. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -CH2-CH=NOCH3i -CH=CH-N(CH3)-CH3. Do dva uzastopna heteroatoma mogu biti prisutni , kao što je, -CH2-NH-OCH3.

[0053] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "ciklohidrokarbil", "heterociklohidrokarbil" ili njegovi hiponimi (kao što su aril, heteroaril, cikloalkil, heterocikloalkil, cikloalkenil, heterocikloalkenil, cikloalkinil, heterocikloalkinil, itd.) sami ili u kombinaciji sa drugim izrazima odnose se na ciklizovani "hidrokarbil" ili "heterohidrokarbil". Pored toga, za heterohidrokarbil ili heterociklohidrokarbil (npr.,

1

heteroalkil, i heterocikloalkil), jedan heteroatom može zauzimati položaj gde je heterocikl vezan za preostali položaj molekula. Primeri cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopentil, cikloheksil, 1-cikloheksenil, 3-cikloheksenil, cikloheptil i slično. Neograničavajući priemri heterocikloalkila uključuju 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridil), 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 4-morfolinil, 3-morfolinil, tetrahidrofuran-2-il, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidro-tiofen-2-il, tetrahidro-tiofen-3-il, 1-piperazinil i 2-piperazinil.

[0054] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "heterocikloalkil" sam ili u kombinaciji sa drugim izraziva iznačava ciklizovan "heteroalkil", i dodatno, u odnosu na "heterocikloalkil", heteroatom može zauzimati položaj vezivanja heterocikloalkil grupe za ostatak molekula. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil je 4-6 člani heterocikloalkil; u drugim izvođenjima, heterocikloalkil je 5-6 člani heterocikloalkan. Primeri heterocikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, pirazolidinil, imidazolidinil, tetrahidrotienil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, piperidinil, piperazinil, morfolinil, dioksanil, ditiianil, izoksazolidinil, izotiazolidinil, 1,2-oksazinil, 1,2-tiazinil, heksahidropiridazinil, homopiperazinil, homopiperidinil ili oksepanil.

[0055] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "alkil" odnosi se na linearni lanac ili razgranatu zasićenu ugljovodoničnu grupu, koja može biti (npr., -CH2F) ili polisupstituisana (npr., -CF3), može biti monovalenta (npr., metil), divalenta (npr., metilen) ili multivalentna (npr., metenil). Primeri alkila uključuju metil (Me), etil (Et), propil (kao što su n-propil i izopropil), butil (kao što su n-butil, izobutil, sbutil, t-butil), pentil (kao što su n-pentil, izopentil, neopentil) i slično.

[0056] Osim ako nije drugačije navedeno, cikloalkil uključuje bilo koji stabilan ciklični ili policiklični hidrokarbil, i bilo koji ugljenikov atom koji je zasićen, može može biti mono-supstituisan ili polisupstituisan, i može biti monovalentan, divalentan ili multivalentan. Primeri cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni samo na njih, ciklopropil, norbornanil, [2.2.2]biciklooktan, [4.4.0]biciklodekanil i slično.

[0057] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "halo" ili "halogen" sam ili kao deo drugog supstituenta odnosi se na atom fluora, hlora, broma ili joda. Pored toga, izraz "haloalkil" se smatra da uključuje monohaloalkil i polihaloalkil. Na primer, izraz "halo(C1-C4) alkil" se smatra da uključuje, ali bez ograničenja, trifluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, 4-hlorobutil, 3-bromopropil i slično. Primeri haloalkila uključuju, ali bez ograničenja trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil i pentahloroetil.

[0058] Izraz "alkoksi" predstavlja bilo koji gore definisani alkil koji ima određeni broj ugljenikovih atoma vezan za kiseonični most. Osim ako nije drugačije navedeno, C1-6alkoksi uključuje C1, C2, C3, C4, C5i C6alkoksi. Primeri alkoksi uklljučuju, ali nisu ograničeni na metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, nbutoksi, sec-butoksi, terc-butoksi, n-pentiloksi i S-pentoksi.

[0059] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "aril" odnosi se na polinezasićeni aromatični supstituent, koji može biti mono-, di-ili poli-supstituisan, može biti monovalentan, divalentan ili multivalentan, može biti jedan prsten ili višestruki prsten (npr., jedan do tri prstena; gde bar jedan prsten je aromatičan), koji su spojeni zajedno ili povezani kovalentno. Izraz "heteroaril" odnosi se na aril (ili prsten ) koji sadrži jedan do četiri heteroatoma. U ilustrativnom primeru, heteroatom je izabran između B, O, N i S, gde atomi azota i sumpora su opciono oksidovani i azotov atom je kvaternizovan. Heteroaril se može vezati za ostatak molekula preko heteroatoma. Neograničavajući primeri arila ili heteroarila uključuju fenil, naftil, bifenil, pirolil, pirazolil, imidazolil, pirazinil, oksazolil, fenil-oksazolil,

1

izoksazolil, tiazolil, furanil, tienil, piridil, pirimidinil benzotiazolil, purinil, benzimidazolil, indolil, izohinolil, hinoksalinil, hinolil, 1-naftil, 2-naftil, 4-bifenil, 1-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 3-pirazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, pirazinil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 2-fenil-4-oksazolil, 5-oksazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, 2-furil, 3-furil, 2-tienil, 3-tienil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidil, 4-pirimidil, 5-benzotiazolil, purinil, 2-benzimidazolil, 5-indolil, 1-izohinolil, 5-izohinolil, 2-hinoksalinil, 5-hinoksalinil, 3-hinolil i 6-hinolil. Supstituent bilo kog aril i heteroaril sistema prstena je izabran između dole opisanog prihvatljivog supstituenta.

[0060] Osim ako nije drugačije navedeno, kada se aril kombinuje sa ostalim izrazima (kao što su ariloksi, ariltio, arilalkil), aril uključuje aril i heteroaril prsten kako je gore definisano. Prema tome, izraz "aralkil" se smatra da uključuje grupu (npr., benzil, fenetil, piridilmetil, itd.) gde je aril vezan za alkil, uključuje alkil gde ugljenikov atom (npr., metilen) je zamenjen sa atomom koji je kiseonik, na primer, fenoksimetil, 2-piridiloksi, 3-(1-naftioksi)propil, i slično.

[0061] Izraz "odlazeća grupa" odnosi se na funkcionalnu grupu ili atom koji može biti zamenjen sa drugom funkcionalnom grupom ili atomom preko reakcije supstitucije (kao što je afinitetna supstituciona reakcija). Na primer, reprezentatvna odlazeća grupa uključuje triflat; hlor, brom i jod; sulfonatna grupa, kao što je mezilat, tozilat, p-bromobenzensulfonat, p-toluensulfonati i slično; aciloksi, kao što su acetoksi, trifluoroacetoksi i slično.

[0062] Izraz "zaštitna grupa" uključuje, ali nije ograničeno samo na "amino zaštitnu grupu", "hidroksi zaštitnu grupu" ili "tio zaštitnu grupu". Izraz "amino zaštitna grupa" odnosi se na zaštitnu grupu pogodnu za blokiranje sporednih reakcija na azotu amino grupe. Reprezentativne amino zaštitne grupe uključuju, ali nisu ograničeni na: formil; acil, kao što je alkanoil (npr., acetil, trihloroacetil ili trifluoroacetil); alkoksikarbonil, kao što je terc-butoksikarbonil (Boc); arilmetoksikarbonil kao što su benziloksikarbonil (Cbz) i 9-fluorenilmetoksikarbonil (Fmoc); arilmetil kao što su benzil (Bn), tritil (Tr), 1,1-bis-(4’-metoksifenil)metil; silil kao što su trimetilsilil (TMS) i tercbutildimetilsilil (TBS) i slično. Izraz "hidroksi zaštitna grupa" odnosi se na zaštitnu grupu pogodnu za blokiranje sporedne reakcije na hidroksi. Reprezentativne hidroksi zaštitne grupe uključuju, ali bez ograničenja: alkil kao što je metil, etil i terc-butil; acil kao što je alkanoil (npr., acetil); arilmetil kao što je benzil (Bn), p-metoksibenzil (PMB), 9-fluorenilmetil (Fm), i difenilmetil (benzhidril, DPM); silil kao što je trimetilsilil (TMS) i terc-butil dimetil silil (TBS) i slično.

[0063] Jedinjenje prema prikazanom opisu može biti pripremljeno različitim sintetskim postupcima dobro poznatim osobama iz struke, uključujući nabrojano izvođenje, izvođenje obrazovano sledećim nabrojanim izvođenjem u kombinaciji sa drugim hemijskim sintetskim postupcima i ekvivalenim zamenama dobro poznatim u stanju tehnike. Poželjno izvođenje uključuje, ali nije ograničeno na izvođenja prikazanog opisa.

[0064] Jedinjenja prema prikazanom pronalasku mogu imati različite upotrebe ili indikacije, uključujući ali bez ograničenja njegove specifične upotrebe ili indikacije navedene u prikazanom pronalasku.

[0065] Rastvarač korišćen u prikazanom opisu je komercijalno dostupan. U opisu su korišćene sledeće skraćenice: aq označava vodu; HATU označava O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat ; EDC označava N-(3-dimetilaminopropil)-N-etilkarbodiimid hidrohlorid; m-CPBA označava 3-hloroperoksibenzojevu kiselinu; eq označava ekvivalent, ekvivalent; CDI označava karbonildiimidazol; DCM označava dihlorometan; PE označava petroleum etar; DIAD

1

označava diizopropil azodikarboksilat; DMF označava N,N-dimetilformamid; DMSO označava dimetil sulfoksid; EtOAc označava estre sirćetne kiseline; EtOH označava etanol; MeOH za metanol; CBz označava benziloksikarbonil, koji je aminska zaštitna grupa; BOC označava terc-butoksikarbonil, koji je aminska zaštitna grupa; HOAc označava sirćetnu kiselinu; NaCNBH3označava natrijum cijanoborohidrid; St označava sobnu temperaturu; O/N označava preko n noći; THF označava tetrahidrofuran; Boc2O označava di-terc-butildikarbonat; TFA označava trifluorosirćetnu kiselinu; DIPEA označava diizopropiletilamin; SOCl2označava tionil hlorid; CS2označava ugljenik disulfid; TsOH označava p-toluensulfonsku kiselinu; NFSI označava N-fluoro-N-(fenilsulfonil) benzenisulfonamidi; NCS označava 1-hloropirolidin-2,5-dion; n-Bu4NF označava tetrabutilamonijum; iPrOH označava 2-propanol; tt označava tačku topljenja; LDA označava diizopropilamino litijum; DEA označava dietilamin; ACN označava acetonitril.

[0066] Jedinjenja su imenovana manualno ili sofverom ChemDraw<®>, komercijalno dostupna imena koriste imena iz imenika dobavljača.

[0067] Tehnički efekti: jedinjenja prema prikazanom pronalasku sva pokazuju veoma visoku antagonističku aktivnost naspram humanih ETAreceptora in vitro, i selektivnost za ETA/ETBje veća od 10000-puta; jedinjenja prema opisu su superiorna u odnosu na kontrolno jedinjenje macitentan u eksperimentima karakterizacije PXR posredovanom indukcijom ekspresije CYP3A. U eksperimentima karakterizacije inhibitorni efekat na 5 glavnih izoenzima humanog mikrozomalnog citohroma P450 jetre, jedinjenja prema prikazanom opisu su speriorna u odnosu na macitentan; inhibitorni efekat jedinjenja prema prikazanom opisu na eksportne pumpe za žučnih soli je mnogo sporiji od macitentana, tako je značajno smanjen rizik razvijanja hepatotoksičnosti. Jedinjenja prema prikazanom opisu imaju dobre farmakokinetičke osobine na oboje SD pacove i bigl pse.

Detailjan opis poželjnog izvođenja

[0068] Sledeći primeri dalje ilustruju prikazani opis pronalaska, ali prikazani opis pronalaska nije ograničen samo na njih. Priloženi opis pronalaska je detaljno opisan u tekstu i takođe su opisana njegova specifična izvođenja, a za stručnjaka iz ove oblasti tehnike, je jasno da su modifikacije i poboljšanja izvođenja prikazanog opisa pronalaska su u okiru prikazanog opisa pronalaska.

Referentno izvođenje 1: fragment BB-1

[0069]

Sintetički put:

[0070]

1

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-1-2

[0071] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-1-1 (30.00 g, 211.97 mmol, 18.40 mL) je rastvoreno u dihlorometanu (200 mL), zatim je smeša ohlađena na 0 °C, rastvor terc-butanola (15.71 g, 211.97 mmol, 20.40 mL) u dihlorometanu (100 mL) je polako dodat u kapima (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 1 sata. Ciljno jedinjenje BB-1-2 (sirovi proizvod) je zadržano u reakcionom rastvaraču dihlorometanu i korišćeno direktno u sledećoj reakciji.

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-1-3

[0072] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje 2,2,2-trifluoroetilamin (8.00 g, 80.77 mmol, 6.35 mL) i trietilamin (24.52 g, 242.30 mmol, 33.59 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100.00 mL), zatim je smeša ohlađena 0 °C., i rastvor jedinjenja BB-1-2 (80.77 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 14 sati. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, ostatak je dopunjen vodom (150 mL), ekstrahovan sa dihlorometanom (100 mL), i organska faza je odbačena. Vodena faza je podešena na pH 5-6 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-1-3 (bela čvrsta supstanca, 15.00 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 3.55 (q, J=9.8 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-1-4

[0073] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-1-3 (15.00 g, 53.91 mmol) je dodato u vodu (150.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-1-4 (žuta čvrsta supstanca, 7.50 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 7.51 (t, J=7.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 3.69-3.54 (m, 2H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO_d6) δ: -70.81 (s, 3F).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-1-5

2

[0074] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-1-4 (1.56 g, 8.78 mmol) i kalijum terc-butoksid (1.97 g, 17.55 mmol) su rastvoreni u dimetil sulfoksidu (80.00 mL), i reakciona smeša je mešana u toku 1 sat u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. Zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (2.00 g, 8.78 mmol) je dodat u reakcionu smešu, i reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi u toku 10 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL), pH je podešen na 5-6 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa vodom (50 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-4/1, odnos zapremini) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-1-5 (žuta čvrsta supstanca, 1.90 g, prinos: 58.56%).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 8.60 (s, 1H), 7.51 (t, J=7.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 3.84 (q, J=9.6 Hz, 2H).

Korak 5: Sinteza jedinjenja BB-1

[0075] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.73 g, 15.42 mmol) je dodat u etilen glikol (52.68 g, 848.46 mmol, 47.46 mL) i etilen glikol dimetil etar (10 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 40 °C u atmosferi azota i mešana u toku 0.5 sati, rastvor jedinjenja BB-1-5 (1.90 g, 5.14 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, dodata je voda (100 mL) , pH je podešen na 5-6 sa 2M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, zatim je smeša ekstrahovana sa etil acetatom (60 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 8/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-1 (žuta čvrsta supstanca, 1.55 g, prinos: 76.31%). MS-ESI m/z: 394.7 [M+H]<+>, 396.7 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.33 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.53 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.93 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.67 (q, J=8.6 Hz, 2H).<19>F NMR (400 MHz, CDCl3) δ: -71.87 (s, 3F).

Referentno izvođenje 2: fragment BB-2

[0076]

Sintetički put:

[0077]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-2-1

[0078] Na sobnoj temperaturi, etilamin hidrohlorid (5.00 g, 61.32 mmol) i trietilamin (18.61 g, 183.96 mmol, 25.49 mL) su dodati u dihlorometan (100.00 mL), zatim reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, i rastvor jedinjenja BB-1-2 (61.32 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 16 sati. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dopunjen vodom (150 mL), ekstrahovan sa dihlorometanom (100 mL), i organska faza je odbačena. Vodena faza je podešena na pH 5-6 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-2-1 (bela čvrsta supstanca, 6.00 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.07 (t, J=5.6 Hz, 1H), 3.13-3.01 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.16 (t, J=7.3 Hz, 3H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-2-2

[0079] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-2-1 (7.02 g, 31.30 mmol) je dodato u vodu (200.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-2-2 (žuto ulje, 2.87 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 4.80 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 3.23-3.14 (m, 2H), 1.24 (t, J=7.3 Hz, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-2-3

[0080] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-2-2 (2.87 g, 23.12 mmol) i kalijum terc-butoksid (5.19 g, 46.24 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (80.00 mL), zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (5.27 g, 23.12 mmol) je dodat u reakcionu smešu, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 10 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (150 mL) , pH je podešen na 5-6 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i rastvor je ekstrahovan sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa vodom (50 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-4/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-2-3 (žuta čvrsta supstanca, 2.40 g, prinos: 32.89%).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 8.59 (s, 1H), 2.96 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.02 (t, J=7.0 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-2

[0081] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.50 g, 13.41 mmol) je dodat u rastvor smeše etilen glikola (33.30 g, 536.49 mmol, 30.00 mL) i etilen glikol dimetil etra (10 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-2-3 (1.41 g, 4.47 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20 mL) je dodat u rastvor u jednoj porciji, i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 16 sati. Pošto je reakcija završena, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dodata je voda (100 mL), pH je podešen na 5-6 sa 2M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, zatim je smeša ekstrahovana sa etil acetatom (60 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetate = 8/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-2 (žuta čvrsta supstanca, 1.36 g, prinos: 87.21%). MS-ESI m/z: 340.7 [M+H]<+>, 342.7 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.38 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 5.54 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.60 (t, J=4.8 Hz, 2H), 4.00 (t, J=4.0 Hz, 2H), 3.19-3.03 (m, 2H), 2.45 (br s, 1H), 1.21 (t, J=7.2 Hz, 3H).

Referentno izvođenje 3: fragment BB-3

[0082]

Sintetički put:

[0083]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-3-1

[0084] Na sobnoj temperaturi, n-propilamin (7.61 g, 128.70 mmol, 10.57 mL) i trietilamin (14.21 g, 140.40 mmol, 19.47 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100.00 mL), zatim je smeša ohlađena 0 °C,

2

zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (117.00 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u reakcioni rastvor (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 18 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (200 mL) , i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (200 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-3-1 (bela čvrsta supstanca, 21.00 g, prinos: 75.32%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.93 (t, J=7.0 Hz, 2H), 1.58-1.48 (m, 2H), 1.46-1.37 (s, 9H), 0.88 (t, J=7.4 Hz, 3H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-3-2

[0085] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-3-1 (20.00 g, 83.93 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sat u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu i ekstrahovan sa etil acetatom (100 mL33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-3-2 (bezbojno ulje, 10.00 g, prinos: 86.22%).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 6.44 (s, 2H), 2.88-2.78 (m, 2H), 1.52-1.43 (m, 2H), 0.87 (t, J=7.5 Hz, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-3-3

[0086] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-3-2 (18.19 g, 131.66 mmol) je rastvoreno u dimetil sulfoksidu (300.00 mL), zatim je dodat kalijum terc-butoksid (19.70 g, 175.54 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati. Zatim, 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (20.00 g, 87.77 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi u toku 48 sati. Pošto je reakcija završena, dodat je zasićeni rastvor soli (1000 mL), pH je podešen na 4-5 sa 10% razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (500 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-3-3 (bela čvrsta supstanca, 15.00 g, prinos: 51.85%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.58 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 5.52-5.54 (m, 1H), 3.07 (q, J=6.8 Hz, 2H), 1.59-1.64 (m, 2H), 0.96 (t, J=7.2 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-3

[0087] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (10.21 g, 91.02 mmol) je dodat u etilen glikol (56.50 g, 910.19 mmol), i reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota. Zatim rastvor jedinjenja BB-3-3 (15.00 g, 45.51 mmol) u etilen glikol dimetil etru (50.00 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 48 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dodata je voda (200 mL), pH je podešen na 4 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (200 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, i proceđene, rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-3 (žuta čvrsta supstanca, 7.10 g, prinos: 40.13%). MS-ESI m/z: 354.8 [M+H]<+>, 356.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.39 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 5.595.62 (m, 1H), 4.83-4.75 (m, 2H), 4.02-4.00 (m, 2H), 3.04 (q, J=6.8 Hz, 2H), 2.05 (br s, 1H) 1.63-1.57 (m, 2H), 0.95 (t, J=7.2 Hz, 3H).

Referentno izvođenje 4: fragment BB-4

[0088]

Sintetički put:

[0089]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-4-1

[0090] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje 2-metoksietilamin (2.00 g, 26.63 mmol, 2.33 mL) i trietilamin (5.39 g, 53.26 mmol, 7.38 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100.00 mL), i zatim reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (26.63 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u reakcioni rastvor (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 15 sati. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dopunjen vodom (100 mL), pH je podešen na 5 sa 1M hlorovodoničom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-4-1 (bela čvrsta supstanca, 6.00 g, prinos: 88.59%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.37 (s, 1H), 5.50 (br s, 1H), 3.53 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.26 (d, J=4.8 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-4-2

[0091] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-4-1 (6.00 g, 23.59 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, smeša je

2

ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-4-2 (žuta čvrsta supstanca, 2.00 g, prinos: 54.99%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.52 (br s, 2H), 3.58-3.48 (m, 2H), 3.41-3.19 (m, 5H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-4-3

[0092] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-4-2 (1.12 g, 7.24 mmol) i kalijum terc-butoksid (2.22 g, 19.75 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (20.00 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati, zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.50 g, 6.58 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi u toku 6 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL), pH je podešen na 6 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: dihlorometan /metanol = 30/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-4-3 (žuta čvrsta supstanca, 1.40 g, prinos: 61.56%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.57 (s, 1H), 7.89 (br s, 1H), 5.99 (br s, 1H), 3.36 (br d, J=2.3 Hz, 2H), 3.32-3.20 (m, 5H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-4

[0093] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.36 g, 12.15 mmol) je dodat u etilen glikol (22.20 g, 357.66 mmol, 20.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati, i zatim rastvor jedinjenja BB-43 (1.40 g, 4.05 mmol) u etilen glikol dimetil etru (10.00 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dodata je voda (50 mL), pH je podešen na 3 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: metilen hlorid/metanol = 20/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-4 (žuta čvrsta supstanca, 1.20 g, prinos: 76.63%). MS-ESI m/z: 370.8 [M+H]<+>, 372.8 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.39 (s, 1H), 7.64 (br s, 1H), 6.03-5.94 (m, 1H), 4.65-4.54 (m, 2H), 3.99 (d, J=3.0 Hz, 2H), 3.49 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.33-3.19 (m, 5H), 2.39 (t, J=5.3 Hz, 1H).

Referentno izvođenje 5: fragment BB-5

[0094]

Sintetički put:

2

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-5-1

[0096] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje 2-etoksietilamin (5.00 g, 56.09 mmol) i trietilamin (11.35 g, 112.18 mmol, 15.55 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (50.00 mL) u atmosferi azota, smeša je ohlađena na 0 °C, i zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (56.09 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je dodat u kapima u reakcionu smešu, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (80 mL), i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (80 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-5-1 (bela čvrsta supstanca, 11.00 g, prinos: 73.09%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.41 (s, 1H), 5.43 (t, J=5.7 Hz, 1H), 3.50 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.19 (q, J=5.5 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.14 (t, J=7.0 Hz, 3H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-5-2

[0097] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-5-1 (10.00 g, 37.27 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (80 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-5-2 (bela čvrsta supstanca, 5.20 g, prinos: 82.95%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.02 (t, J=5.8 Hz, 1H), 5.00-4.88 (m, 2H),3.63-3.57 (m, 2H), 3.55 (d, J=7.0 Hz, 2H), 3.33 (d, J=5.0 Hz, 2H), 1.22 (t, J=6.2 Hz, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-5-3

[0098] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-5-2 (5.00 g, 29.72 mmol) i kalijum terc-butoksid (10.01 g, 89.17 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (50.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 35 °C i mešana u toku 0.5 sati, zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (6.77 g, 29.72 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana na 35 °C u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, hlorovodonična kiselina (0.5 M, 50 mL) je dodata, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum

2

sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-5-3 (light žuta čvrsta supstanca, 2.10 g, prinos: 16.76%). MS-ESI m/z: 358.9 [M+H]<+>, 360.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 5.99 (t, J=5.5 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 2H), 3.34 (d, J=7.0 Hz, 2H), 3.18 (d, J=4.7 Hz, 2H), 1.05 (t, J=6.9 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-5

[0099] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.87 g, 16.68 mmol) je dodat u etilen glikol (33.30 g, 536.49 mmol, 30.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-5-3 (2.00 g, 5.56 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20.00 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, hlorovodonična kiselina (0.5M, 50 mL) je dodata, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-5 (svetlo žuta čvrsta supstanca, 1.30 g, prinos: 60.69%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.38 (s, 1H), 7.67 (br s, 1H), 6.09 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.72-4.52 (m, 2H), 4.00 (br s, 2H), 3.62-3.50 (m, 2H), 3.47-3.36 (m, 2H), 3.31-3.20 (m, 2H), 2.46 (br s, 1H), 1.21-1.05 (m, 3H).

Referentno izvođenje 6: fragment BB-6

[0100]

Sintetički put:

[0101]

2

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-6-1

[0102] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje 2-n-propoksietilamin (5.00 g, 48.47 mmol) i trietilamin (9.81 g, 96.94 mmol, 13.44 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (50.00 mL), reakciona smeša je ohlađena na 0 °C u atmosferi azota, i zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (48.47 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (80 mL), i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (80 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-6-1 (bela čvrsta supstanca, 11.00 g, prinos: 80.37%).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-6-2

[0103] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-6-1 (11.00 g, 38.96 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 2 sata. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (80 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-6-2 (bela čvrsta supstanca, 5.60 g, prinos: 78.87%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.01-4.96 (m, 1H), 4.90 (br s, 2H), 3.58-3.66 (m, 2H), 3.41-3.47 (m, 2H), 3.34 (d, J=4.5 Hz, 2H), 1.55-1.68 (m, 2H), 0.90-0.96 (m, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-6-3

[0104] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-6-2 (5.00 g, 27.44 mmol) i kalijum terc-butoksid (9.24 g, 82.32 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (50.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 35 °C i mešana u toku 0.5 sati, zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (6.25 g, 27.44 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana na 35 °C u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, hlorovodonična kiselina (0.5 M, 50 mL) je dodata, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-6-3 (svetlo žuta čvrsta supstanca, 2.00 g, prinos: 18.15%). MS-ESI m/z: 372.8 [M+H]<+>, 374.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.48 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 5.96 (t, J=5.6 Hz, 1H),

2

3.43-3.47 (m, 2H), 3.24 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.18 (d, J=4.7 Hz, 2H), 1.43 (d, J=7.2 Hz, 2H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-6

[0105] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.80 g, 16.06 mmol) je dodat u etilen glikol (33.30 g, 536.49 mmol, 30.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-6-3 (2.00 g, 5.35 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20.00 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, hlorovodonična kiselina (0.5 M, 30 mL) je dodata, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-6 (light žuta čvrsta supstanca, 1.20 g, prinos: 56.18%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.39 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.08 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.56-4.65 (m, 2H), 3.97-4.03 (m, 2H), 3.52-3.57 (m, 2H), 3.33 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.24 (q, J=5.5 Hz, 2H), 2.44 (br s, 1H), 1.44-1.59 (m, 2H), 0.90 (t, J=7.4Hz, 3H).

Referentno izvođenje 7: fragment BB-7

[0106]

Sintetički put:

[0107]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-7-1

[0108] Na sobnoj temperaturi, n-butilamin (2.83 g, 38.64 mmol, 3.82 mL) i trietilamin (3.91 g, 38.64 mmol, 5.36 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100 mL), i reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (46.37 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima u reakcioni rastvor (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 16 sati. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat sa dihlorometanom (200 mL), i ispran sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (80 mL) i vodom (100 mL32), tim redom. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-7-1 (bela čvrsta supstanca, 3.00 g, prinos: 30.77%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.98 (q, J=8.0 Hz, 2H), 1.47 (t, J=4.0 Hz 2H), 1.24-1.38 (m, 11H), 0.86 (t, J=4.0 Hz, 3H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-7-2

[0109] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-7-1 (3.00 g, 11.89 mmol) je dodato u vodu (150.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 0.5 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa dihlorometanom (50 mL). Organska faza je odbačena, i vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Zatim organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-7-2 (bezbojno ulje, 1.10 g, prinos: 60.78%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.06 (q, J=8.0 Hz, 2H), 1.46-1.54 (m, 2H), 1.32 (s, 2H), 0.87 (t, J=8.0 Hz, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-7-3

[0110] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-7-2 (1.10 g, 7.23 mmol) je rastvoreno u dimetil sulfoksidu (50.00 mL), zatim je dodat kalijum terc-butoksid (1.22 g, 10.85 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota. Zatim, 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.98 g, 8.68 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana u toku 3 sata na sobnoj temperaturi pod zaštitom azota. Pošto je reakcija završena, dodat je zasićeni rastvor soli (50 mL) , pH je podešen na 4-5 sa 10% razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (80 mL). Organske faze su spojene, isprane sa vodom (50 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-7-3 (bela čvrsta supstanca, 350.00 mg, prinos: 9.58%). MS-ESI m/z: 342.7 [M+H]<+>, 344.7 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 5.41 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.00 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.47 (q, J=7.6 Hz, 2H), 1.28 -1.32 (m, 2H), 0.84 (t, J=7.2 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-7

[0111] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (343.36 mg, 3.06 mmol) je dodat u etilen glikol (3.17 g, 51.00 mmol, 2.85 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-7-3 (350.00 mg, 1.02 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20.00 mL) je dodat u rastvor u jednoj porciji, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dodata je ledena voda (50 mL), podešen pH na 4 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen

1

pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: dihlorometan/metanol = 20/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-7 (žuta čvrsta supstanca, 300.00 mg, prinos: 79.66%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.30 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.44 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.52 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.92 (q, J=3.2 Hz, 2H), 2.98 (q, J=6.8 Hz, 2H), 2.31 (t, J=6.0 Hz, 1H), 1.45 (q, J=8.0 Hz, 2H), 1.26-1.32 (m, 2H), 0.83 (t, J=7.2 Hz, 3H).

Referentno izvođenje 8: fragment BB-8

[0112]

Sintetički put:

[0113]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-8-1

[0114] Na sobnoj temperaturi, ciklobutilamin (5.00 g, 70.30 mmol, 6.02 mL) i trietilamin (8.54 g, 84.36 mmol, 11.70 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100.00 mL), i reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (84.36 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je dodat u kapima u reakcioni rastvor (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 15 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ekstrahovana sa vodom (100 mLx3). Vodene faze su spojene, podešen pH na 5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovane sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-8-1 (bela čvrsta supstanca, 12.00 g, prinos: 68.19%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.35 (d, J=9.8 Hz, 1H), 3.94-3.84 (m, 1H), 3.15 (d, J=7.3 Hz, 1H), 2.38-2.30 (m, 2H), 2.03-1.90 (m, 2H), 1.77-1.61 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-8-2

2

[0115] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-8-1 (5.00 g, 19.98 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-8-2 (bela čvrsta supstanca, 2.90 g, prinos: 96.63%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 4.72-4.48 (m, 2H), 4.07-3.81 (m, 1H), 2.47-2.25 (m, 2H), 2.04-1.90 (m, 2H), 1.83-1.65 (m, 2H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-8-3

[0116] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-8-2 (2.90 g, 19.31 mmol) i kalijum terc-butoksid (4.33 g, 38.62 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (80.00 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati, zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (3.52 g, 15.45 mmol) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (150 mL), pH je podešen na 6 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (200 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-8-3 (žuta čvrsta supstanca, 2.50 g, prinos: 37.90%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.59 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 5.71 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.10-3.74 (m, 1H), 2.30-2.17 (m, 2H), 1.94-1.79 (m, 2H), 1.74-1.58 (m, 2H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-8

[0117] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (2.46 g, 21.96 mmol) je dodat u etilen glikol (22.20 g, 357.66 mmol, 20.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-8-3 (2.50 g, 7.32 mmol) u etilen glikol dimetil etru (80.00 mL) je dodat u rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (200 mL), podešen pH na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (200 mL33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 5/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-8 (žuta čvrsta supstanca, 1.1 g, prinos: 40.92%).

<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.41 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 5.72 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 4.81-4.42 (m, 2H), 4.03-3.96 (m, 2H), 3.96-3.87 (m, 1H), 2.31-2.16 (m, 2H), 1.93-1.79 (m, 2H), 1.73-1.61 (m, 2H).

Referentno izvođenje 9: fragment BB-9

[0118]

Sintetički put:

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-9-1

[0120] Na sobnoj temperaturi, ciklopropilmetilamin (5.00 g, 70.30 mmol) i trietilamin (14.23 g, 140.60 mmol, 19.49 mL) su rastvoreni u dihlorometanu (100.00 mL), reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, i zatim rastvor jedinjenja BB-1-2 (70.30 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je dodat (vreme ukapavanja oko 0.5 sati), reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa vodom (100 mL), podešen pH na 5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-9-1 (bela čvrsta supstanca, 11.00 g, prinos: 62.51%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 2.94 (dd, J=4.0, 6.8 Hz, 2H), 1.53-1.44 (m, 9H), 1.11-0.94 (m, 1H), 0.64-0.52 (m, 2H), 0.30-0.12 (m, 2H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-9-2

[0121] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-9-1 (10.00 g, 39.95 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sata. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-9-2 (bela čvrsta supstanca, 5.00 g, prinos: 83.33%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 4.64-4.54 (m, 2H), 3.64 (br s, 1H), 3.03-2.86 (m, 2H), 1.16-0.98 (m, 1H), 0.63-0.42 (m, 2H), 0.29-0.10 (m, 2H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-9-3

[0122] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-9-2 (4.94 g, 32.91 mmol) i kalijum terc-butoksid (4.92 g, 43.88 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (80.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sata u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (5.00 g, 21.94 mmol) , i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL), pH je podešen na 6 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (200 mlx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen

4

hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-3/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-9-3 (bela čvrsta supstanca, 5.00 g, prinos: 66.71%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.57 (s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 5.63 (t, J=5.4 Hz, 1H), 2.96 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.09-0.86 (m, 1H), 0.62-0.39 (m, 2H), 0.26-0.03 (m, 2H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-9

[0123] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (4.93 g, 43.91 mmol) je dodat u etilen glikol (22.20 g, 357.66 mmol, 20.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati, i zatim je dodat rastvor jedinjenja BB-9-3 (5.00 g, 14.64 mmol) u etilen glikol dimetil etru (80.00 mL) u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 15 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (200 mL), podešen pH na 3 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (200 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 5/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-9 (žuto ulje, 3.50 g, prinos: 65.10%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3): 8.45-8.29 (m, 1H), 7.68 (br s, 1H), 5.74 (t, J=5.5 Hz, 1H), 4.73-4.52 (m, 2H), 4.04-3.93 (m, 2H), 2.93 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.04 (s, 1H), 1.11-0.78 (m, 1H), 0.62-0.41 (m, 2H), 0.14 (q, J=5.0 Hz, 2H).

Referentno izvođenje 10: fragment BB-10

[0124]

Sintetički put:

[0125]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-10-1

[0126] Na 0 °C, ciklobutilmetilamin hidrohlorid (5.00 g, 41.12 mmol), trietilamin (10.40 g, 102.80 mmol, 14.25 mL) i dihlorometan (50.00 mL) su dodati u rastvor jedinjenja BB-1-2 (41.12 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu, i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 18 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (60 mL), i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (60 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-10-1 (žuta čvrsta supstanca, 7.20 g, prinos: 66.24%).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-10-2

[0127] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-10-1 (7.00 g, 26.48 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 2 sata. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-10-2 (bezbojno ulje, 3.80 g, prinos: 87.38%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.10-4.92 (m, 2H), 3.15-3.10 (m, 2H), 2.54-2.50 (m, 1H), 2.07-2.04 (m,2H), 1.90-1.88 (m, 2H), 1.88-1.69 (m, 2H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-10-3

[0128] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (3.14 g, 28.00 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja BB10-2 (2.30 g, 14.00 mmol) u dimetil sulfoksidu (40.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (3.19 g, 14.00 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (80 mL), pH je podešen na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (40 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (40 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-10-3 (žuta čvrsta supstanca, 3.10 g, prinos: 62.29%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 5.45 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.03-2.98 (m, 2H), 2.53-2.33 (m, 1H), 2.04-1.98 (m, 2H), 1.84-1.78 (m, 2H), 1.63-1.57 (m, 2H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-10

[0129] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.89 g, 16.88 mmol) je dodat u etilen glikol (15.79 g, 254.55 mmol, 14.23 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-10-3 (3.00 g, 8.44 mmol) u etilen glikol dimetil etru (30.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 120 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (60 mL), pH je podešen na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-10 (žuto ulje, 2.50 g, prinos: 77.73%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.39 (s, 1H), 7.65 (br s, 1H), 5.52 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.71-4.49 (m, 2H), 4.02 (br d, J=3.8 Hz, 2H), 3.12-3.01 (m, 2H), 2.60-2.47 (m, 1H), 2.43 (br s, 1H), 2.09-2.01 (m, 2H), 1.98-1.77 (m, 2H), 1.74-1.64 (m, 2H).

Referentno izvođenje 11: fragment BB-11

[0130]

Sintetički put:

[0131]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-11-1

[0132] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (78.00 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima u rastvor 3-metoksipropilamina (6.95 g, 78.00 mmol, 7.99 mL) i trietilamina (15.79 g, 156.00 mmol, 21.63 mL) u dihlorometanu (50.00 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 18 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (200 mL), i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (150 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL) tim redom, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-11-1 (bela čvrsta supstanca, 16.00g, prinos: 76.45%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 3.42 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.15-3.04 (m, 2H), 1.91-1.64 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-11-2

[0133] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-11-1 (16.00 g, 59.63 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-11-2 (bezbojno ulje, 8.50 g, prinos: 84.74%).<1>H NMR (400MHz, DMSO _d6) δ: 6.49-6.38 (m, 3H), 3.37-3.32 (m, 2H), 3.23-3.19 (m, 3H), 2.96-2.82 (m, 2H), 1.73-1.63 (m, 2H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-11-3

[0134] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (2.67 g, 23.78 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja BB-11-2 (2.00 g, 11.89 mmol) u dimetil sulfoksidu (10.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (2.71 g, 11.89 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (60 mL), pH je podešen na 4 sa 0.5 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-11-3 (bela čvrsta supstanca, 3.30 g, prinos: 77.21%).<1>H NMR (400MHz, DMSO _d6) δ: 8.59 (s, 1H), 3.29-3.25 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.96 (t, J=6.9 Hz, 2H), 1.70-1.62 (m, 2H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-11

[0135] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (2.06 g, 18.35 mmol) je dodat u etilen glikol (30.24 g, 487.25 mmol, 27.25 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-11-3 (3.30 g, 9.18 mmol) u etilen glikol dimetil etru (10.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 24 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa vodom (60 mL), podešen pH na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-11 (žuto ulje, 2.20 g, prinos: 61.34%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.51-8.08 (m, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.67-4.45 (m, 2H), 4.01 (d, J=3.8 Hz, 2H), 3.53-3.39 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.26-3.13 (m, 2H), 2.46 (br s, 1H), 1.85 (q, J=6.0 Hz, 2H).

Referentno izvođenje 12: fragment BB-12

[0136]

Sintetički put:

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-12-1

[0138] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (74.19 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u rastvor 3-etoksipropil-1-amina (7.65 g, 74.19 mmol, 8.90 mL) i trietilamina (22.52 g, 222.58 mmol, 30.85 mL) u dihlorometanu (40.00 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 14 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa vodom (200 mL) i ekstrahovan sa dihlorometanom (100 mL). Organska faza je odbačena, i vodena faza je podešena na pH od 5-6 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, zatim vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-12-1 (žuta čvrsta supstanca, 17.00 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 10.80 (s, 1H), 7.51 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.40-3.37 (m, 2H), 2.93 (q, J=6.4 Hz, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.74-1.61 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.10 (t, J=6.8 Hz, 3H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-12-2

[0139] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-12-1 (17.00 g, 60.21 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, i proceđene, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-12-2 (žuto ulje, 9.00 g, sirovi proizvod).<1>H NMR (400MHz, DMSO _d6) δ: 6.46 (s, 2H), 6.41 (t, J=6.2 Hz, 1H), 3.43-3.37 (m, 4H), 2.90 (q, J=6.4 Hz, 2H), 1.75-1.60 (m, 2H), 1.10 (t, J=7.0 Hz, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-12-3

[0140] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-12-2 (1.60 g, 8.78 mmol) i kalijum terc-butoksid (1.97 g, 17.55 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (20.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sata u atmosferi azota, 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (2.00 g, 8.78 mmol) je dodat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 11 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL), pH je podešen na 5-6 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa vodom (50 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1 -4/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB12-3 (žuta čvrsta supstanca, 1.30 g, prinos: 39.64%).<1>H NMR (400MHz, DMSO _d6) δ: 8.59 (s, 1H), 3.34-3.29 (m, 4H), 2.98 (t, J=6.8 Hz, 2H), 1.69-1.61 (m, 2H), 1.06 (t, J=6.8 Hz, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-12

[0141] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.17 g, 10.44 mmol) je dodat u smešu rastvora etilen glikola (35.63 g, 574.20 mmol, 32.10 mL) i etilen glikol dimetil etra (10.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-12-3 (1.30 g, 3.48 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20.00 mL) je dodat u smešu u jednoj porciji, i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (100 mL), podešen pH na 5-6 sa 2 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (60 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 3/1-1/3, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-12 (bela čvrsta supstanca, 1.10 g, prinos: 79.17%). MS-ESI m/z: 398.9 [M+H]<+>, 400.9 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.29 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.02 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.52 (t, J=4.6 Hz, 2H), 3.99-3.87 (m, 2H), 3.46-3.31 (m, 4H), 3.11 (q, J=6.4 Hz, 2H), 2.38 (t, J=6.0 Hz, 1H), 1.80-1.71 (m, 2H), 1.14 (t, J=7.0 Hz, 3H).

Referentno izvođenje 13: fragment BB-13

[0142]

Sintetički put:

[0143]

4

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-13-1

[0144] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (49.43 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u rastvor 2-tetrahidrofurfurilamina (5.00 g, 49.43 mmol, 5.10 mL) i trietilamina (10.00 g, 98.86 mmol, 13.70 mL) u dihlorometanu (50.00 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 18 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL), i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (90 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL) tim redom, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-13-1 (bela čvrsta supstanca, 8.30 g, prinos: 59.90%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.75 (d, J=4.8Hz, 1H), 4.02 (dd, J=3.9, 6.7 Hz, 1H), 3.88-3.64 (m, 2H), 3.30-2.83 (m, 2H), 2.06-1.76 (m, 3H), 1.71-1.18 (m, 10H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-13-2

[0145] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-13-1 (8.00 g, 28.54 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-13-2 (bezbojno ulje, 4.90 g, prinos: 95.27%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.18-5.01 (m, 1H), 4.07-3.91 (m, 1H), 3.86-3.61 (m, 2H), 3.27-2.90 (m, 2H), 1.96-1.74 (m, 3H), 1.62-1.41 (m, 1H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-13-3

[0146] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (3.86 g, 34.40 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja BB-13-2 (3.10 g, 17.20 mmol) u dimetil sulfoksidu (20.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (3.92 g, 17.20 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (60 mL), pH je podešen na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-13-3 (žuta čvrsta supstanca, 2.10 g, prinos: 32.85%).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.65-8.36 (m, 1H), 8.08-7.70 (m, 1H), 5.99-5.80 (m, 1H), 4.08-3.90 (m, 1H), 3.82-3.55 (m, 2H), 3.25-3.13 (m, 1H), 3.04-2.89 (m, 1H), 1.98-1.72 (m, 3H), 1.60-1.44 (m, 1H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-13

[0147] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.27 g, 11.30 mmol) je dodat u etilen glikol (10.58 g, 170.40 mmol, 9.53 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-13-3 (2.10 g, 5.65 mmol) u etilen glikol dimetil etru (30.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 120 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (60 mL), podešena pH na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-13 (žuto ulje, 1.80 g, prinos: 78.35%). MS-ESI m/z: 396.8 [M+H]<+>, 398.8 [M+H+2]<+>.

Referentno izvođenje 14: fragment BB-14

[0148]

Sintetički put:

[0149]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-14-1

[0150] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (43.41 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je dodat u rastvor 4-(aminometil)tetrahidro-2H-piran (5.00 g, 43.41 mmol) i trietilamin (8.79 g, 86.82 mmol, 12.04 mL) u dihlorometanu (50.00 mL), reakciona smeša je zagrejana na sobnoj temperaturi i mešana u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (80 mL) i smeša je ekstrahovan sa dihlorometanom (80 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (200 mL) tim redom, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-14-1 (beličasto ulje, 5.20 g, prinos: 40.69%).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-14-2

[0151] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-14-1 (5.00 g, 16.99 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (80 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-14-2 (light žuto ulje, 1.70 g, prinos: 51.51%).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-14-3

[0152] Na 35 °C, smeša jedinjenja BB-14-2 (1.70 g, 8.75 mmol) i kalijum terc-butoksida (2.95 g, 26.25 mmol) u dimetil sulfoksidu (50.00 mL) je mešana u toku 0.5 sati, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.99 g, 8.75 mmol), reakciona smeša je mešana na 35 °C u toku 12 sati. Pošto je reakcija završena, smeša je dopunjena sa 0.5 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL33). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL32), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-14-3 (žuta čvrsta supstanca, 1.20 g, prinos: 12.80%). MS-ESI m/z: 384.8 [M+H]<+>, 386.8 [M+H+2]<+>.

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-14

[0153] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.05 g, 9.33 mmol) je dodat u etilen glikol (33.30 g, 536.49 mmol, 30.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-14-3 (1.20 g, 3.11 mmol) u etilen glikol dimetil etru (20.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa 0.5 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (30 mL), i ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mLx2), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-0/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-14 (light žuta čvrsta supstanca, 200.00 mg, prinos: 14.59%). MS-ESI m/z: 410.9 [M+H]<+>, 412.9 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ: 8.38 (s, 1H), 7.62 (br s, 1H), 5.65 (t, J=6.5 Hz, 1H), 4.60 (t, J=4.8 Hz, 2H), 4.05-3.89 (m, 4H), 3.38 (t, J=10.8 Hz, 2H), 2.93 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.86-1.75 (m, 1H), 1.71-1.61 (m, 2H), 1.31-1.22 (m, 2H).

Referentno izvođenje 15: fragment BB-15

4

Sintetički put:

[0155]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-15-1

[0156] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (31.32 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima u mešoviti rastvor 2-aminoetilmetilsulfon hidrohlorida (5.00 g, 31.32 mmol) i trietilamina (6.34 g , 62.64 mmol, 8.68 mL) u dihlorometanu (50.00 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 18 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (100 mL) , i smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (100 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (50 mL) i zasićenim rastvorom soli (80 mL) tim redom, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-15-1 (bela čvrsta supstanca 5.00 g, prinos: 52.81%).<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 11.04 (s, 1H), 7.83 (br s, 1H), 3.44 (br s, 2H), 3.35-3.30 (m, 2H), 3.02 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-15-2

[0157] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-15-1 (4.80 g, 15.87 mmol) je dodato u vodu (100.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL), organska faza je odbačena, i vodena faza koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-15-2 (bezbojno ulje, 2.10 g, prinos: 65.43% ).<1>H NMR (400MHz, MeOD)δ: 3.55-3.47 (m, 2H), 3.41-3.35 (m, 2H), 3.06-3.02 (s, 3H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-15-3

[0158] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (2.22 g, 19.78 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja BB-15-2 (2.00 g, 9.89 mmol) u dimetil sulfoksidu (20.00 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (2.25 g, 9.89 mmol), i reakciona smeša je mešana u toku 15 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je voda (60 mL), pH je podešen na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-15-3 (žuta čvrsta supstanca, 1.80 g, prinos: 43.98%). MS-ESI m/z: 392.8 [M+H]<+>, 394.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.60 (s, 1H), 6.36 (br s, 1H), 3.66 (q, J=6.0 Hz, 2H), 3.46-3.25 (m, 2H), 3.09-2.82 (m, 3H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-15

[0159] U atmosferi azota i na 40 °C, smeša etilen glikola (4.28 g, 68.95 mmol, 3.86 mL) i kalijum tercbutoksida (513.07 mg, 4.57 mmol) je mešana u toku 0.5 sati, i zatim rastvor jedinjenja BB-15-3 (0.9 g, 2.29 mmol) u etilen glikol dimetil etru (30.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 60 °C i mešana u toku 3 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (60 mL), podešen pH na 4 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojem hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-15 (svetlo žuto ulje, 327.27 mg, prinos: 33.40%). MS-ESI m/z: 440.9 [M+Na]<+>, 442.9 [M+Na+2]<+>.

Referentno izvođenje 16: fragment BB-16

[0160]

Sintetički put:

[0161]

4

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-16-1

[0162] Na 0-5 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (9.19 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je polako dodat u kapima u rastvor 3-azabiciklo[3.1.0]heksana u hidrohloridu (900.00 mg, 7.53 mmol) i trietilamina (2.28 g, 22.58 mmol) u dihlorometanu (10 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa vodom (20 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (25 mLx4). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-16-1 (bela čvrsta supstanca, 1.90 g, prinos: 96.19%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.56-3.68 (m, 4H), 1.55-1.59 (m, 2H), 1.51 (s, 9H), 0.69-0.74 (m, 1H), 0.41-0.45 (m, 1H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-16-2

[0163] Na sobnoj temperaturi, trifluorosirćetna kiselina (3.30 g, 28.96 mmol) je dodata u rastvor jedinjenja BB-16-1 (1.90 g, 7.24 mmol) u dihlorometanu (10.00 mL) u jednoj porciji, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač reakcione smeše je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje BB-16-2 (beličasta čvrsta supstanca, 1.44 g, prinos: 72.00%, trifluoroacetatna so).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.28-3.36 (m, 4H), 1.54-1.59 (m, 2H), 0.61-0.69 (m, 1H), 0.44-0.58 (m, 1H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-16-3

[0164] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.75 g, 15.63 mmol) je dodat u smešu trifluoroacetatne soli jedinjenja BB-16-2 (1.44 g, 5.21 mmol) u dimetil sulfoksidu (30.00 mL) u jednoj porciji, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim je dodat 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.42 g, 6.25 mmol) u smešu, reakciona smeša je mešana u toku 16 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, ledena voda (60 mL) je dodata, pH je podešen na 4-5 sa 4 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (200 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, i proceđene, rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-16-3 (braon čvrsta susptanca, 1.40 g,

4

prinos: 74.14%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.59 (s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 3.73-3.79 (m, 2H), 3.66-3.72 (m, 2H), 1.58-1.62 (m, 2H), 0.69-0.76 (m, 1H), 0.33 (q, J=4.3 Hz, 1H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-16

[0165] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (760.78 mg, 6.78 mmol) je dodat u etilen glikol (22.20 g, 357.67 mmol), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, i zatim rastvor jedinjenja BB-16-3 (799.18 mg, 2.26 mmol) u etilen glikol dimetil etru (10.00 mL) je dodat u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 39 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dopunjen sa ledenom vodom (60 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (60 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (120 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-16 (žuta čvrsta supstanca, 520.00 mg, prinos: 59.45%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.38 (s, 1H), 7.63 (br s, 1H), 4.55-4.61 (m, 2H), 3.94-4.02 (m, 2H), 3.69-3.74 (m, 2H), 3.64-3.69 (m, 2H), 2.48 (br s, 1H), 1.49-1.58 (m, 2H), 0.62-0.71 (m, 1H), 0.30-0.37 (m, 1H).

Referentno izvođenje 17: fragment BB-17

[0166]

Sintetički put:

[0167]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-17-1

4

[0168] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-1-2 (12.39 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu je dodat u kapima u rastvor 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptana (1.17 g, 11.80 mmol) i trietilamina (3.58 g, 35.40 mmol) u dihlorometanu (10 mL) (vreme ukapavanja oko 1 sat), reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 16 sati. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, ostatak je dodat sa vodom (20 mL), pH je podešen na 4-5 sa 5 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (25 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-17-1 (bela čvrsta supstanca, 1.70 g, prinos: 51.76%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.07 (br s, 1H), 4.79 (s, 4H); 4.34 (s, 4H), 1.52 (s, 9H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-17-2

[0169] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-17-1 (1.70 g, 6.11 mmol) je dodato u vodu (10.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 1 sat. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i ekstrahovana sa etil acetatom (10 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (30 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-17-2 (bela čvrsta supstanca, 920.00 mg, prinos: 84.49%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.78 (s, 4H), 4.39 (br s, 2H), 4.04 (s, 4H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-17-3

[0170] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-17-2 (920.00 mg, 5.16 mmol) i kalijum terc-butoksid (1.50 g, 13.37 mmol) su dodati u dimetil sulfoksid (15.00 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati. Zatim, 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.41 g, 6.19 mmol) je dodat u smešu, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 18 sati. Pošto je reakcija završena, dodata je ledena voda (40 mL) , pH je podešen na 4-5 sa 4 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (40 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (120 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom na ploči (eluent: dihlorometan/metanol = 10/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje BB-17-3 (braon čvrsta susptanca, 430.00 mg, prinos: 16.43%). MS-ESI m/z: 368.8 [M+H]<+>, 370.8 [M+H+2]<+>.

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-17

[0171] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (390.49 mg, 3.48 mmol) je dodat u etilen glikol (15.23 g, 245.36 mmol), reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, i zatim rastvor jedinjenja BB-17-3 (430.00 mg, 1.16 mmol) u etilen glikol dimetil etru (10.00 mL) je polako dodat u kapima u smešu, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 48 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dopunjen sa ledenom vodom (30 mL), podešen na pH od 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx4). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (120 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: dihlorometan/metanol = 10/1. zapreminski odnos) da bi se

4

dobilo ciljno jedinjenje BB-17 (žuta čvrsta supstanca, 150.00 mg, prinos: 30.86%). MS-ESI m/z: 417.0 [M+Na]<+>, 417.0 [M+Na+2]<+>.

Referentno izvođenje 18: fragment BB-18

[0172]

Sintetički put:

[0173]

Korak 1: Sinteza jedinjenja BB-18-2

[0174] Na 0 °C, rastvor kalijum terc-butoksida (7.22 g, 64.31 mmol) u tetrahidrofuranu (50 mL) je dodat u kapima u suspenziju metiltrifenilfosfonijum bromida (22.97 g, 64.31 mmol) u tetrahidrofuranu (100 mL), reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 1 sata u atmosferi azota, zatim reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, i rastvor jedinjenja BB-18-1 (10.00 g, 42.87 mmol) u tetrahidrofuranu (50 mL) je dodat u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 64 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodati su voda (50 mLi petrol etar (50 mL) uzastopno, i tečnost je odvojena. Vodena faza je ekstrahovana sa petroleum etrom (50 mLx2). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (150 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/0-10/1, zapreminski odnos) da bi se

4

dobilo jedinjenje BB-18-2 (bezbojno ulje, 5.20 g, prinos: 48.56%). MS-ESI m/z: 232.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.40-7.29 (m, 5H), 5.15 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 3.51 (t, J=5.8 Hz, 4H), 2.19 (t, J=5.8 Hz, 4H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja BB-18-3

[0175] Na -40 °C, rastvor trifluorosirćetna kiseline (10.25 g, 89.92 mmol) u dihlorometanu (10 mL) je dodat u kapima u rastvor dietilcinka (1 M, 89.92 mL) u dihlorometanu (50 mL) , reakciona smeša je mešana na -40 °C u toku 0.5 sati u atmosferi azota, i zatim je dodat rastvor dijodometana (24.08 g, 89.92 mmol) u dihlorometanu (10 mL) u smešu, reakciona smeša je mešana na -40 °C u toku 0.5 sati u atmosferi azota. Zatim je dodat rastvor jedinjenja BB-18-2 (5.20 g, 22.48 mmol) u dihlorometanu (10 mL), reakciona smeša je zagrejana na sobnoj temperaturi i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodat je dihlorometan (30 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (80 mL) i mešani su u toku 5 minuta, praćeno taloženjem, ceđenjem i odvajanjem tečnosti. Organska faza je isprana sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđena, rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 100/1-10/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo žuto ulje, koje je odvojeno preparativnom HPLC ponovo da bi se dobilo jedinjenje BB-18-3 (light žuto ulje, 4.00 g, prinos: 47.46%). MS-ESI m/z: 246.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.40-7.29 (m, 5H), 5.15 (s, 2H), 3.57-3.47 (m, 4H), 1.35 (br s, 4H), 0.34 (s, 4H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja BB-18-4

[0176] Na sobnoj temperaturi, vlažni paladijum ugljenik (150.00 mg, čistoće: 10%) je dodat u rastvoru jedinjenja BB-18-3 (1.50 g, 6.11 mmol) u tetrahidrofuranu (15.00 mL), i reakcina smeša je reagovala u atmosferi vodonika (3.5 MPa) i mešana na sobnoj temperaturi u toku 40 sati. Pošto je reakcija završena, reakciona smeša je proceđena, praćeno dodavanjem hlorovodonične kiseline/etil acetata (4 M, 10 mL), mešana u toku 15 minuta, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje BB-18-4 (žuta čvrsta supstanca, 900.00 mg, prinos: 99.76%, hidrohlorid).<1>H NMR (400 MHz, DMSO_d6) δ: 9.13 (br s, 2H), 3.02 (br s, 4H), 1.54 (t, J=5.0 Hz, 4H), 0.37 (s, 4H).

Korak 4: Sinteza jedinjenja BB-18-5

[0177] Na 0 °C, rastvor jedinjenja BB-18-4 (1.20 g, 8.13 mmol, hidrohlorid) u dihlorometanu (20 mL) je dodat u kapima u rastvor jedinjenja BB-1-2 (8.54 mmol, sirovi proizvod) u dihlorometanu i smeša dihlorometana (10 mL) i trietilamina (3.29 g, 32.52 mmol) (vreme ukapavanja je bilo oko 1 sat. Reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa vodom (20 mL), podešen pH na 4-5 sa 4 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (10 mL), i ekstrahovana sa etil acetatom (25 mLx4). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje BB-18-5 (svetlo žuta čvrsta supstanca, 1.32 g, prinos: 55.91%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.05 (br s, 1H), 3.47-3.40 (m, 4H), 1.52 (s, 9H), 1.50-1.47 (m, 4H), 0.38 (s, 4H).

Korak 5: Sinteza jedinjenja BB-18-6

[0178] Na sobnoj temperaturi, trifluorosirćetna kiselina (1.53 g, 13.42 mmol) je dodata u rastvor jedinjenje BB-19-5 (580.00 mg, 2.00 mmol) u dihlorometanu (3.00 mL) u jednoj porciji, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje BB-18-6 (svetlo žuta čvrsta supstanca, 600.00 mg, prinos: 98.50%, trifluoroacetat).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.23 (t, J=5.5 Hz, 4H), 1.50 (t, J=5.5 Hz, 4H), 0.36 (s, 4H).

Korak 6: Sinteza jedinjenja BB-18-7

[0179] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (1.39 g, 12.42 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja BB-18-6 (1.26 g, 4.14 mmol, trifluoroacetat) u dimetil sulfoksidu (10.00 mL) u jednoj porciji, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim 5-bromo-4,6-dihloropirimidin (1.04 g, 4.55 mmol) je dodat u reakcionu smešu, reakciona smeša je mešana u toku 20 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je ledena voda (20 mL), pH je podešen na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (120 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen hromatografijom na ploči (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo jedinjenje BB-18-7 (žuto ulje, 600.00 mg, prinos: 35.86%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.53 (s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 3.20-3.28 (m, 4H), 1.49-1.55 (m, 4H), 0.35 (s, 4H).

Korak 7: Sinteza jedinjenja BB-18

[0180] Na sobnoj temperaturi, kalijum terc-butoksid (353.46 mg, 3.15 mmol) je dodat u rastvor etilen glikola (16.03 g, 258.27 mmol) u etilen glikol dimetil etru (3.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 0.5 sati u atmosferi azota, zatim rastvor jedinjenja BB-18-7 (400.00 mg, 1.05 mmol) u etilen glikol dimetil etru (5.00 mL) je dodat u reakcioni rastvor, i reakciona smeša je zagrejana do 110 °C i mešana u toku 40 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dopunjen sa ledenom vodom (30 mL), podešen pH na 5-6 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom (eluent: etil acetat/petroleum etar = 1/1. zapreminski odnos) da bi se dobio jedinjenje BB-18 (žuto ulje, 180.00 mg, prinos: 42.09%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.37 (s, 1H), 4.61-4.56 (m, 2H), 4.01-3.97 (m, 2H), 3.54-3.47 (m, 4H), 1.52-1.45 (m, 4H), 0.36-0.31 (m, 4H).

Izvođenje 1: WX001

[0181]

Sintetički put:

[0182]

1

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX001-2

[0183] Na 0 °C, dihlorosulfoksid (58.11 g, 488.46 mmol, 35.43 mL) je polako dodat u kapima u rastvor jedinjenja WX001-1 (80 g, 444.06 mmol) u metanolu (400 mL) (vreme ukapavanja je bilo oko 0.5 sati), i reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana u toku 10 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dopunjen sa vodom (300 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (300 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (300 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, i proceđene, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio jedinjenje WX001-2.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 6.80-6.71 (m, 3H), 5.94 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.55 (s, 2H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX001-3

[0184] Na 0 °C, rastvor jedinjenja WX001-2 (35 g, 180.24 mmol) u dimetil karbonatu (118.51 g, 1.32 mol, 110.76 mL) je polako dodat u kapima u mešoviti rastvor natrijum hidrida (10.81 g, 270.36 mmol, čistoća: 60%) u dimetil karbonatu (118.51 g, 1.32 mol, 110.76 mL) (vreme ukapavanje u toku 1 sata), reakcina smeša je zagrejana na sobnoj temperaturi i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, ledena voda (500 mL) je dodata i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (300 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (300 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-5/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo jedinjenje WX001-3.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.00-6.93 (m, 1H), 6.85-6.77 (m, 2H), 5.98 (s, 2H), 4.58 (s, 1H), 3.78 (s, 6H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX001-4

[0185] Na 0 °C, kocka natrijuma (10.94 g, 475.78 mmol) je dodata u poricijama u anhidorvani metanol (150 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati u atmosferi azota, i zatim rastvor jedinjenja WX001-3 (40 g , 158.59 mmol) u metanolu (100 mL) je dodat u reakcioni rastvor. Reakciona smeša je zagrejana na sobnoj temperaturi i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota, zatim je dodat formamidin acetat (19.81 g, 190.31 mmol) u reakcioni rastvor u jednoj porciji, i reakciona smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa 2 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (200 mL), i mešan na sobnoj temperaturi u toku 30 minuta, tokom čega je

2

velika količina bele čvrste supstance istaložena. Reakciona smeša je proceđena, filter kolač je ispran sa metanolom (50 mLx2), i filter kolač je sakupljen i osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje WX001-4.

Korak 4: Sinteza jedinjenja WX001-5

[0186] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX001-4 (24 g, 103.36 mmol) je dodato fosfor oksihlorid (594.00 g, 3.87 mol, 360.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 90 °C i mešana u toku 5 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, reakcioni rastvor je polako sipan u ledenu vodu (1000 mL), i mešan na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sati, i zatim ekstrahovan sa etil acetatom (1000 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (1000 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetate = 10/1. zapreminski odnos) da bi se dobilo jedinjenje WX001-5.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.78 (s, 1H), 6.96 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.78 (dd, J=2.5, 4.0 Hz, 2H), 6.09 (s, 2H).

Korak 5: Sinteza jedinjenja WX001-6

[0187] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje 2-(5-bromopirimidin-2-il) oksietanol (8.06 g, 36.79 mmol) i jedinjenje WX001-5 (11 g, 40.88 mmol) su rastvoreni u toluenu (100 mL), zatim je smeša ohlađena na 0 °C, dodat je kalijum terc-butoksid (9.17 g, 81.76 mmol) u porcijama, i reakciona smeša je mešana na 0 °C u toku 0.5 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, dodata je 0.5 M razblažena hlorovodonična kiselina (100 mL) u reakcioni rastvor i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 5/1. zapreminski odnos) da bi se dobilo jedinjenje WX001-6.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.54-8.48 (m, 3H), 6.86-6.74 (m, 3H), 6.02 (s, 2H), 4.80-4.74 (m, 2H), 4.73-4.64 (m, 2H).

Korak 6: Sinteza jedinjenja WX001

[0188] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje sulfamid (1.52 g, 15.83 mmol) i jedinjenje WX001-6 (6.5 g, 14.39 mmol) su rastvoreni u dimetil sulfoksidu (100 mL), i zatim kalijum karbonat (5.97 g, 43.17 mmol) i tetrabutilamonijum fluorid trihidrat (9.08 g, 28.78 mmol) su dodati u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana u toku 5 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa 0.5 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (100 mL) i vodom (500 mL), i ekstrahovana sa etil acetatom (400 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (500 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 3/1, zatim dihlorometan/etil acetat = 5/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX001. MS-ESI m/z: 510.8 [M+H]<+>, 512.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO_d6) δ: 9.29 (s, 1H), 8.72 (s, 2H), 8.46 (s, 1H), 7.21 (s, 2H), 6.91 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.76-6.61 (m, 2H), 6.05 (s, 2H), 4.69-4.62 (m, 2H), 4.62-4.54 (m, 2H).

Izvođenje 2: WX002

[0189]

Sintetički put:

[0190]

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX002-2

[0191] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX002-1 (8.00 g, 37.37 mmol), bis(pinakolato) dibor (11.39 g, 44.84 mmol) i kalijum acetat (7.33 g, 74.74 mmol) su dodati u 1,4-dioksan (100.00 mL), zatim je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino) ferocen] dihloro-paladijum(II) (5.47 g, 7.47 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 10 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, proceđena, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat sa vodom (100 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 20/1. zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX002-2.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.92 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.89 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.0 Hz, 1H), 1.30 (s, 12H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX002-3

[0192] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-2 (250.00 mg, 732.75 mmol) i jedinjenje WX002-2 (287.04 mg, 1.10 mmol) su dodati u 1,4-dioksan (15.00 mL), zatim je dodat rastvor kalijum karbonata (303.82 mg, 2.20 mmol) u vodi (5.00 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 0.5 sata u atmosferi azota, i zatim [1,1’-bis(difenilfosfino) ferocen] dihloro-palladium(II) (160.85 mg, 219.83 mmol) je dodat u smešu. Reakciona smeša je zagrejana do 80 °C i mešana u toku 11 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (100 mL), ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx1), i organska faza je odbačena. Vodena faza je podešena na pH 5-6 sa 3 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3).

4

Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 10/1-1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljano jedinjenje WX002-3.

MS-ESI m/z: 395.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 9.01 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.31 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.52 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.44 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.08-2.98 (m, 2H), 2.58 (br s, 1H), 1.15 (t, J=7.2 Hz, 3 H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX002

[0193] Na sobnoj temperaturi, natrijum hidrid (194.20 mg, 4.86 mmol, čistoća: 60%) je dodat u anhidrovanom tetrahidrofuranu (20.00 mL), zatim su dodati rastvor jedinjenja WX002-3 (240.00 mg, 606.89 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (1 mL) i rastvor 5-bromo-2-hloropirimidina (234.78 mg, 1.21 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (1 mL), reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (30 mL), podešena pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen pomoću preparativne HPLC (mobilna faza: acetonitril/voda; bazni sistem: NH4HCO3i NH3·H2O) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX002. MS-ESI m/z: 552.0 [M+H]<+>, 554.0 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 9.08 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.43 (s, 2H), 8.04 (d, J=2.0 Hz, 2H), 7.34 (dd, J=8.5, 1.3 Hz, 1H), 6.87 (br s, 1H), 5.58 (s, 1H), 4.74 (t, J=4.4 Hz, 2H), 4.62 (t, J=4.4 Hz, 2H), 3.15-3.02 (m, 2H), 1.21 (t, J=7.3 Hz, 3H).

[0194] Pozivajući se na sitestski postupak u izvođenju 2 (BB-2 u koraku 2 je zamenjen sa odgovarajućom strukturom u fragmentu 2), sintetizovana su izvođenja iz tabele 1.

Tabela 1: Strukturnih formula izvođenja 3-7

[0195] LCMS i HNMR podaci svakog izvođenja su prikazani u tabeli 2.

Tabela 2: NMR i LCMS podaci izvođenja 3-7

Izvođenje 8: WX008

[0196]

Sintetički put:

[0197]

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX008-2

[0198] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX008-1 (3.00 g, 14.92 mmol), bis(pinakolato)dibor (7.58 g, 29.84 mmol) i kalijum acetat (4.39 g, 44.76 mmol) su dodati u 1,4-dioksan ( 30.00 mL), zatim je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum (II) (3.28 g, 4.48 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 80 °C i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, proceđena, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat sa vodom (30 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene, rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/0-100/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX008-2.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ:7.38 (dd, J=7.8, 0.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.85 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 1.35 (s, 12H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX008-3

[0199] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-3 (300.00 mg, 844.57 mmol), jedinjenje WX008-2 (419.04 mg, 1.69 mmol) i kalijum fosfat (537.83 mg, 2.53 mmol) su dodati u N,N-dimetilformamid (20.00 mL), zatim je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloro-paladijum (II) (185.39 mg, 253.37 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 80 °C i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (100 mL), ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx1), i organska faza je odbačena. Vodena faza je podešena na pH od 5-6 sa 3 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom na ploči (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX008-3. MS-ESI m/z: 397.0 [M+H]<+>.

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX008

[0200] Na sobnoj temperaturi, natrijum hidrid (145.30 mg, 3.63 mmol, čistoća: 60%) je dodat u anhidrovani tetrahidrofuran (20 mL), zatim su u to dodati rastvor jedinjenja WX008-3 (180.00 mg, 454.06 mmol) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (1 mL) i rastvor 5-bromo-2-hloropirimidina (175.66 mg, 908.13 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (1 mL). Reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa zasićenim rastvorom amonijum hloridom (30 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen pomoću preparativne HPLC (mobilna faza: acetonitril/voda; neutralni sistem) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX008. MS-ESI m/z: 552.8 [M+H]<+>, 554.8 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.49 (s, 2H), 8.43 (s, 1H), 6.87 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.73-6.68 (m, 2H), 6.03 (s, 2H), 5.61 (t, J=6.2 Hz, 1H), 4.73 (q, J=5.0 Hz, 2H), 4.64 (t, J=4.8 Hz, 2H), 2.96 (q, J=6.8 Hz, 2H), 1.64-1.57 (m, 2H), 0.94 (t, J=7.4 Hz, 3H).

[0201] Pozivajući se na sintetski postupak u izvođenju 8 (BB-3 u koraku 2 je zamenjen sa odgovarajućom strukturom u fragmentu 2), sintetizovana su izvođenja iz tabele 3.

22 9-nja đevoiz e ul

form ne uruktStr3:leTab

[0202] LCMS i HNMR podaci svakog od izvođenja su prikazani u tabeli 4.

Tabela 4: NMR i LCMS podaci izvođenja 9-22

(nastavak)

4

Izvođenje 23 i Izvođenje 24: WX023 i WX024

[0203]

Sintetički put:

[0204]

[0205] Jedinjenje WX021 (500.00 mg, 839.74 μmol) je razdvojeno hromatografijom sa superkritičnim fluidom (uslovi odvajanja, kolona: chiralpak AD-350<∗>4.6mm ID, 3 μm; mobilna faza: A: ugljen dioksid; B: izopropanol (0.05% dietilamin), 40%; temperatura kolone: 40 °C; talasna dužina: 220 nm) da bi se dobio uzorak sa retencionim vremenom od 1.149 min kao WX023 (ee%: 100%) i uzorak sa retencionim vremenom od 3.199 min kao WX024 (ee%: 100%).

Izvođenje 25: WX025

[0206]

Sintetički put:

[0207]

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX025-2

[0208] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX025-1 (400.00 mg, 2.03 mmol), bis(pinakolato) dibor (618.60 mg, 2.44 mmol), kalijum acetat (597.72 mg, 6.09 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (297.09 mg, 406.03 mmol) su dodati u dioksan (20.00 mL), reakciona smeša je zagrejana do 100 °C i mešana u toku 15 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat sa vodom (100 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1. zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX025-2.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.70 (s, 1H), 7.99-7.98 (m, 1H), 7.51 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 1.36 (s, 12H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX025-3

[0209] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-3 (300.00 mg, 844.57 mmol), jedinjenje WX025-2 (309.24 mg, 1.27 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferrocene] dihloropaladijum(II) (123.59 mg, 168.91 mmol) i kalijum karbonat (350.18 mg, 2.53 mmol) su dodati u smešu dioksana (20.00 mL) i vode (2.00 mL), i reakciona smeša je zagrejana do 80 °C i mešana u toku 10 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (100 mL), podešen pH na 5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj hromatografiji (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/2, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX025-3. MS-ESI m/z: 393.0 [M+H]<+>.

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX025

[0210] Na sobnoj temperaturi, rastvor jedinjenja WX025-3 (180.00 mg, 346.76 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 mL) i rastvor 5-bromo-2-hloropirimidina (67.07 mg, 346.76 mmol) u tetrahidrofuranu (1 mL) su dodati u smešu natrijum hidrida (83.08 mg, 2.08 mmol, čistoća: 60%) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (20 mL) u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen pomoću preparative HPLC (mobilna faza: acetonitril/voda; bazni sistem: NH4HCO3i NH3H2O) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX025. MS-ESI m/z: 549.0 [M+H]<+>, 551.0 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.53 (s, 1H), 8.46-8.44 (m, 3H), 8.03 (s, 1H), 7.62 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.98 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 4.78-4.76 (m, 2H), 4.67-4.65 (m, 2H), 3.02-3.00 (m, 2H), 1.65-1.63 ( m, 2H), 0.99 (t,J=7.2 Hz, 3H).

[0211] Pozivajući se na sintetski postupak u izvođenju 25 (BB-3 u koraku 2 je zamenjen sa odgovarajućom strukturom u fragmentu 2), sintetizovana su izvođenja iz tabele 5.

Tabela 5: Strukturne formule izvođenja 26-27

[0212] LCMS i HNMR podaci svakog od izvođenja prikazanih u tabeli 6.

Tabela 6: NMR i LCMS podaci izvođenja 26-27

Izvođenje 28: WX028

[0213]

Sintetički put:

[0214]

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX028-2

[0215] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX028-1 (2.00 g, 10.15 mmol), bis(pinakolato)dibor (3.87 g, 15.23 mmol) i kalijum acetat (2.99 g, 30.45 mmol) su dodati u acetonitril (30.00 mL), zatim je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum (II) (1.11 g, 1.52 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 60 °C i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat sa vodom (20 mL), i ekstrahovan sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (80 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX028-2.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.99 (s, 1H), 7.72-7.69 (m, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.64-7.61 (m, 1H), 6.80 (d, J=1.2 Hz, 1H), 1.39 (s, 12H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX028-3

[0216] Na sobnoj temperaturi, vlažni paladijum ugljenik (50.00 mg, čistoća: 10%) je dodat u rastvor jedinjenja WX028-2 (1.50 g, 6.15 mmol) u metanolu (30.00 mL), i reakciona smeša je mešana u toku 16 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika (15 psi). Pošto je reakcija završena, reakciona smeša je proceđena, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX028-3.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.32 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.21 (m, 2H), 4.55 (t, J=8.5 Hz, 2H), 3.22 (t, J=8.5 Hz, 2H), 1.34 (s, 12H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX028-4

[0217] Na sobnoj temperaturi, dodati su rastvor kalijum karbonata (254.51 mg, 1.84 mmol) u vodi (2.00 mL) i [(bis(1-adamantil)-N-n-butilfosfin]-2-(2-aminobifenil)]dihloropaladijum (40.00 mg) u rastvor jedinjenja BB-18 (250.00 mg, 613.83 mmol) i jedinjenje WX028-3 (226.60 mg, 920.74 mmol) u dioksanu (20.00 mL). Reakciona smeša je zagrejana do 60 °C i mešana u toku 16 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Zatim je smeša dopunjena vodom (15 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (20 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (60 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX028-4. MS-ESI m/z: 447.2 [M+H]<+>.

Korak 4: Sinteza jedinjenja WX028

[0218] Na sobnoj temperaturi, dodati su rastvor jedinjenja WX028-4 (220.00 mg, 492.70 mmol) u N,N-dimetilformamidu i 5-bromo-2-hloropirimidin (190.61 mg, 985.40 mmol) u smešu natrijum hidrida (300.00 mg, 7.50 mmol, čistoća: 60%) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (15.00 mL) u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana do 75 °C i mešana u toku 1.5 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, dopunjen sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (20 mL), podešen pH na 4-5 sa 1 M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovana sa etil acetatom (30 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX028. MS-ESI m/z: 603.1 [M+H]<+>, 605.1 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.48 (s, 2H), 8.46 (s, 1H), 7.23 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.69 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.74-4.70 (m, 2H), 4.66-4.64 (m, 2H), 4.63-4.59 (m, 2H), 3.49-3.44 (m, 4H), 3.25 (t, J=8.5 Hz, 2H), 1.48-1.44 (m, 4H), 0.34 (s, 4H).

[0219] Pozivajući se na sintetski postupak u izvođenju 28 (BB-18 u koraku 3 je zamenjen sa odgovarajućom strukturom u fragmentu 2), sintetizovana su izvođenja iz tabele 7.

23-29ja en ođizvulermfo ne urukttr 7:S a belTa

[0220] LCMS i HNMR podaci svakog od izvođenja su prikazana u tabeli 8.

Table 8:NMR i LCMS podaci izvođenja 29-32

Izvođenje 33: WX033

[0221]

Sintetički put:

[0222]

1

Korak 1: Sinteza jedinjenja WX033-2

[0223] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX033-1 (2.50 g, 12.69 mmol), bis(pinakolato) dibor (6.44 g, 25.38 mmol) i kalijum acetat (3.74 g, 38.07 mmol) su dodati u N,N-dimetilformamid (20.00 mL), zatim [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II) (1.86 g, 2.54 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 90 °C i mešana u toku 12 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena vodom (100 mL), i ekstrahovana sa etil acetatom (100 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (100 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razdvojen hromatografijom na koloni (eluent: petroleum etar/etil acetat = 30/1-20/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX033-2.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ:8.14 (s, 1H), 7.79 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.64 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.53 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.79 (d, J=1.5 Hz, 1H), 1.39 (s, 12H).

Korak 2: Sinteza jedinjenja WX033-3

[0224] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje WX033-2 (500.00 mg, 2.05 mmol) je rastvoreno u metanolu (30.00 mL), zatim je dodat vlažni paladijum ugljenik (200.00 mg, čistoća: 10%), i reakciona smeša je zagrejana do 40 °C i mešana u toku 48 sati u atmosferi vodonika (15 psi). Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, proceđena kroz diatomit, i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX033-3.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 7.62 (s, 1H), 7.60-7.50 (m, 1H), 6.78-6.77 (m,1H), 4.60-4.56 (t, J=8.8 Hz, 2H), 3.22-3.17 (t, J=8.8 Hz, 2H), 1.33(s, 12H).

Korak 3: Sinteza jedinjenja WX033-4

[0225] Na sobnoj temperaturi, jedinjenje BB-3 (500.00 mg, 703.81 mmol), jedinjenje WX033-3 (259.82 mg, sirovi proizvod), kalijum karbonat (291.82 mg, 2.11 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) (103.00 mg, 140.76 mmol) su dodati u smešu dioksana (20.00 mL) i vode (2.00 mL). Reakciona smeša je zagrejana do 80 °C i mešana u toku 10 sati u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat sa vodom (100 mL), podešen pH na 5 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX033-4. MS-ESI m/z: 395.0 [M+H]<+>.

Korak 4: Sinteza jedinjenja WX033

[0226] Na sobnoj temperaturi, rastvor jedinjenja WX033-4 (140.00 mg, 314.28 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2.00 mL) i rastvor 5-bromo-2-hloropirimidina (121.58 mg, 628.56 mmol) u tetrahidrofuranu (1 mL) su uzastopno dodati u rastvor natrijum hidrida (75.43 mg, 1.89 mmol, čistoća: 60%) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (20.00 mL) u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana do 70 °C i mešana u toku 2 sata u atmosferi azota. Pošto je reakcija završena, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, dopunjena sa zasićenim vodneim rastvorom amonijum hlorida (50 mL), podešen pH na 4-5 sa 1M razblaženom hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan sa etil acetatom (50 mLx3). Organske faze su spojene, isprane sa zasićenim rastvorom soli (50 mL), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđene i rastvarač filtrata je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je odvojen

2

preparativnom hromatografijom (eluent: petroleum etar/etil acetat = 1/1, zapreminski odnos) da bi se dobilo ciljno jedinjenje WX033. MSESI m/z: 551.1 [M+H]<+>, 553.1 [M+H+2]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.50 (s, 2H), 8.43 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.01-6.97 (m, 2H), 6.83-6.78 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 4.73-4.71 (m, 2H), 4.65-4.61 (m, 4H), 3.25-3.20 (m, 2H), 2.98-2.93 (m, 2H), 1.60-1.56 (m, 2H), 0.96 (t, J=7.6Hz, 3H).

[0227] Pozivanjem na sintetski postupak iz izvođenja 33 (BB-3 u koraku 3 je zamenjen sa fragmentom 2), sintetizovana su izvođenja iz tabele 9.

Tabela 9: Strukturna formula izvođenja 34

[0228] LCMS i HNMR podaci izvođenja su prikazani u tabeli 10.

Table 10: NMR i LCMS podaci izvođenja 34

Eksperimentalno izvođenje 1: In vitro test antagonističkog dejstva naspram humanog human ETAreceptora

Eksperimentalna svrha:

[0229] Antagonistička aktivnost jedinjenja naspram endogeno eksprimovanih humanih ETAreceptora u SK-N-MC ćelijama je procenjivana merenjem efekta jedinjenja na promene u citoplazmatičnom signalu Ca<2+>jona indukovanom antagonistima humanog ETAreceptora pomoću postupaka detekcije fluorescencije. Funkcionalna aktivnost antagonističkog efekta na ETAreceptor je testirana u Eurofins-Cerep SA prema trenutnim standarnim postupcima.

Eksperimentalni protokol:

[0230]

1. Ćelije su supsendovane u rastvoru Dulbekovog modifikovanog Eagle medijuma (Dulbecco ’s modified Eagle medium DMEM, Invitrogen) obogaćenom sa 1% FCSd, zatim raspoređene na ploču 384-bunarčića (100 μL/bunarčića) pri gustini od 5x10<4>ćelija/bunarčiću;

2. Probenecid u Hank-ovom izbalansiranom rastvoru soli (HBSS, Invitrogen) obogaćenom sa 20 mM 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-etansulfonske kiseline (Hepes, Invitrogen) (pH 7.4) je pomešan sa fluorescentom probom (Fluo4 NW, Invitrogen), smeša je dodata u svaki bunarčić, zatim uravnotežena sa ćelijama na 37°C u toku 60 minuta, i zatim uravnotežena sa ćelijama na 22°C u toku 15 minuta;

3. Ploča za testiranje je smeštena u čitač za testiranje mikroploča (CellLux, PerkinElmer), dodati su rastvor DMSO ili HBSS pufer sa odgovarajućom koncentracijom testiranog jedinjenja i pozitivna kontrola, i 1 nM endotelin-1 ili HBSS pufer (bazna kontrola) je dodat posle 5 minuta, i zatim je merena promena u intenzitetu fluorescencije proporcionalna koncentraciji Ca<2+>jonima slobodnih ćelijskih lizozoma;

4. Rezultati su pokazali kao procentnu inhibiciju kontrolnog odgovora na 1 nM endotelin-1;

5. Standardna pozitivna kontrola je bila BQ-123, nekoliko koncentracija je testirano u svakom od eksperimenata. Podaci su analizirani pomoću Prism da se stvori kriva koncentracija-odgovor, i izračunate su IC50vrednosti jedinjenja.

Eksperimentalno izvođenje 2: In vitro test antagonističkih dejstava naspram humanog ETAreceptora

Eksperimentalna svrha:

[0231] Antagonistička aktivnost jedinjenja naspram humanih ETBreceptora eksprimovana u transfektovanim CHO ćelijama je procenjivana merenjem dejstva jedinjenja na promene u citoplazmatičnoj signalizaciji Ca<2+>jona izazvanoj sa humanim antagonistima ETBreceptora. Funkcionalna aktivnost efekta antagonista ETB receptora je testirana u Eurofins-Cerep SA prema trenutnim standardnim postupcima.

Eksperimentalni protokol:

[0232]

1. Ćelije su suspendovane u DMEM puferu (Invitrogen) i zatim raspoređene na ploču sa 384 bunarčića (100 μmL/bunarčiću) pri gustini od 3x10<4>ćelija/bunarčiću;

2. Probenecid u HBSS puferu (Invitrogen) obogaćenom sa 20 mM Hepes (Invitrogen) (pH 7.4) je pomešan zajedno sa fluorescentnom probom (Fluo4 NW, Invitrogen), smeša je dodata u svaki bunarčić, zatim uravnotežena sa ćelijima na 37°C u toku 60 minuta, i zatim izbalasirana sa ćelijama na 22°C u toku 15 minuta;

3. Ploča za testiranje je stavljena u čitač mikroploče (CellLux, PerkinElmer), DMSO rastvor ili HBSS pufer odgovarajuće koncentracije testiranog jedinjenja i dodata je pozitivna kontrola, i 0.3 nM endotelin-1 ili HBSS pufer (osnovna kontrola) je dodat posle 5 minuta, i zatim je merena promena u intenzitetu fluorescencije koja je proporcionalana koncentraciji Ca<2+>jona slobodnih ćelijskih lizozima;

4. Rezultati su prikazani kao procentna inhibicija odgovora kontrole na 0.3 nM endotelin-1;

5. Standardna pozitivna kontrola je bila BQ-788, nekoliko koncentracija je testirano u svakom od eksperimenata. Podaci su analizirani pomoću Prism da se obrazuje kriva koncentracija-odgovor, i izračunate su IC50vrednosti jedinjenja.

4

Tabela 11: In vitro antagonistička aktivnost jedinjenja prema prikazanom opisu pronalaska naspram humanih ETAi ETBreceptora i njihova selektivnost na ETB

Zaključak:

[0233] Jedinjenja prema prikazanom opisu pronalaska sva prikazuju veoma visoku antagonističku aktivnost napram humanih receptora ETAin vitro. Selektivnost jedinjenja prema prikazanom opisu za ETAi ETBje viša nego 10000-puta.

Experimentalno izvođenje 3: Eksperimentalna svrha testa na humani pregnan X Receptor (PXR):

[0234] Procenjivan je efekat jedinjenja na indukciju PXR-posredovane CYP3A ekspresije.

Eksperimentalni materijali i uređaji:

[0235]

Eksperimentalni protokol:

[0236]

1. DPX2 ćelije su otopljene pod sterilnim uslovima.

2. DPX2 ćelijski rastvor je raspoređen na ploču sa 96-bunarčića (100 μL/bunarčiću), i ploča je smeštena u inkubator sa 5% CO2/37°C u toku noći.

3. Kvantitatinom medijum za hranjenje je otopljen u vodenom kupatilu na 37°C. Pozitivna kontrola rifampina je otopljena na sobnoj temperaturi. Serija testiranih jedinjenja i razblaženja pozitivne kontrole su pripremljena u kvantitativnom medijumu za hranjenje. Ćelije su pažljivo aspirirane iz svakog od bunarčića bez remećenja ćelija u toku aspiracije i medijum je odbačen. 100 μL svake koncentracije testiranog jedinjenja je premeštno u prethodno obeležen bunarčić. Postupak za grupu pozitivne kontrole i grupu slepe probe su bili isti. Ploča je smeštena nazad u inkubator 24-časovno izlaganje.

4. Test enzimske aktivnosti:

(1) 7 μL Luciferina-IPA je dodato u 7 μL kvantitativnog medijuma za hranjenje, smeša je promešana prevrtanjem i sipana u rezervoar za Luciferin-IPA reagens.

(2) Ploča sa 96-bunarčića je izvađena iz inkubatora, i medijum je pažljivo aspiriran iz svakog bunarčića. 50 μL Luciferin-IPA reagensa je dodato u svaki od bunarčića, i ćelijska ploča je smeštena nazad u inkubator u toku 60 minuta.

(3) U toku inkubacije, P450-Glo pufer je sipan u Luciferin reagens za detekciju, i smeša je promešana prevrtanjem.

(4) Ploča sa 96-bunarčića je izvađena iz inkubatora, i 40 μL rastvora iz svakog bunarčića je premešteno u odgovarajuću belu ploču sa 96-bunarčića, i odgovarajuči položaj svakog od bunarčića je bio konzistentan sa prvobitnom pločom sa ćelijama.

(5) Posle premeštanja P450-Glo<™>rastvora na ploču kopiju, 10 mL titracionog pufera (CTF pufer) je premešteno u sterilne konične epruvete od 15 mL, praćeno dodavanjem 5 μL CellTiter-Fluor<™>reagensa, i smeša je je promešana prevrtanjem.

(6) Korišćena je višekanalna pipeta za tečnost, 100 μL CellTiter-Fluor<™>reagensa je polako dodato na ploču od 96-bunarčića gde su ćelije prvobitno kultivisane, i zatim ćelijska ploča je smeštena nazad u inkubator u toku 60 minuta.

(7) Svaki od bunarčića ploče kopije dopunjen je sa 40 μL Luciferinskog detekcionog reagensa/P450-Glo pufera, mešan, i inkubiran u toku 20 minuta na sobnoj temperaturi.

(8) Posle inkubacije sa Luciferinskim detekcionim reagensom u toku 20 minuta, fotometar (podešen na 1-5 sekundi. Vreme očitavanja) je korišćeno za merenje luminiscencije svakog bunarčića bele ploče sa 96-bunarčića. Treba da se koristi postavka za visoko pojačanje.

(9) ONE-Glo<™>luciferazni detekcioni pufer je dodat u ONE-Glo<™>detekcioni reagens, i smeša je promešana prevrtanjem.

(10) Posle inkubiranja u toku 60 minuta na 37 °C, prvobitna ploča sa 96-bunarčića je izneta iz inkubatora. Čitač je podešen na fluorescentni mod, talasna dužina ekscitacije je podešena na 380-400 nm, talasna dužina emisije je podešena na 505 nm, i meren je intenzitet fluorescencije svakog bunarčića .

(11) Ploča sa ćelijama je izneta iz enzimskog čitača, i 100 μL ONE-Glo<™>detekcionog reagensa je dodato u svaki od bunarčića. Smeša je promešana mućkanjem ploča i inkubirana na sobnoj temperaturi u toku 5 minuta.

(12) Enzimski čitač je podešen na 5 sekundi pre mućkanja i 5 sekundi za očitavanja bunarčića, i intenzitet fluorescencije u svakom otvoru merenja. Visoko pojačanje instrumenta (osetljivost).

5. Efekat aktivacije leka na PXR se odražva na broj puta povećane indukcije, to jest, broj puta povećane indukcije svake grupe = vrednost luciferazne aktivnost grupe tretirane lekom /vrednost luiferazne aktivnosti kontrolne grupe rastvarača, i broj puta povećane indukcije je bio korišćen da se predvidi efekat na CYP3A4.

[0237] Pozitivna kontrola je rifampicin, šest koncentracija je testirano u svakom eksperimetnu. Podaci su analizirani korišćenjem Prism-e da bi se obrazovala kriva koncentracija-odgovor i EC50vrednost jedinjenja bila izračunata.

Eksperimentalni rezultati:

[0238] Rezultati testa su prikazani u tabeli 12.

Tabela 12: Rezultati indukcionog dejstva jedinjenja prema prikazanom opisu patenta na PXR-posredovanu CYP3A ekspresiju

Zaključak:

[0239] Jedinjenje WX013 prema prikazanom opisu pronalaska ima relativno slab indukcioni efekat na PXR-posredovanu CYP3A ekspresiju, i jedinjenje macitentan ima relativno jak indukcioni efekat na PXR-posredovanu CYP3A ekspresiju. Prema tome, u eksperimentu karakterizaicije PXR-posredovane indukcija CYP3A ekspresije, WX013 je superiorni u odnosu na macitentan.

Eksperimentalno izvođenje 4: Inhibicioni test izozima mikrozomalnog citohroma P450 humane jetre

Eksperimentalna svrha:

[0240] Svrha testa je bila da se proceni inhibiciona aktivnost uzorka naspram izozima citohroma P450 humane jetre (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 i CYP3A4) pomoću 5-u-1 testiranog supstrata CYP izozima.

Eksperimentalni protokol:

[0241] Mešoviti mikrozomi humane jetre (HLM) su nabavljeni od Corning Inc. (Steuben, New York, USA) i čuvani ispod -80°C pre upotrebe. Radni rastvor testiranog jedinjanja koji je bilo razblažen u serijskim koncentracijama je dodat u inkubacioni sistem koji sadrži mikrozome humane jetre, probne supstrate i kofaktore cirkulacionih sistema, i korišćene su kontrole koje sadrže rastvarače bez testiranog jedinjenja kao kontrole enzimske aktivnosti (100%). Koncentracija dobijenog metabolita od strane probnog supstrata u primeru je određena pomoću tandemskog postupka tečne hromatografije i masene spektorometrije (LC-MS/MS). Analiza nelinearne regresije je izvedena na srednjoj vrednosti procentne aktivnosti naspram koncentracije subjekata pomoću SigmaPlot (V.11). IC50vrednost je izračunata sa inverznom logaritamskom jednačinom sa tri parametra ili četiri parametra .

Eksperimentalni rezultati:

[0242] Rezultati testa su prikazani u tabeli 13.

Tabela 13: Rezultati inhibicije jedinjenja prema prikazanom opisu pronalaska na izozim citohroma P450 mikrozoma humane jetre

Zaključak:

[0243] Jedinjenja WX005, WX013 i WX025 prema prikazanom opisu imaju veoma slab inhibitorini efekat na pet glavnih izozima CYP. Macitentan ima slab inhibitori efekat na četiri glavna izozima CYP, i mereni su inhibitorni efekti na izozime CYP2C9. Prema tome, WX005, WX013, i WX025 su superiorni u odnosu na macitentan u eksperimentu karakterizacije na inhibiciju pet glavnih izozima humanog mikrozomalnog citokina P450.

Ekserimentalno izvođenje 5: Test inhibicije jedinjenja na pumpu za transfer žučne soli (bile salt transfer pump-BSEP)

Eksperimentalna svrha:

[0244] Ovaj eksperiment procenjuje da li testirano jedinjenje ima inhibitornu aktivnost u toku postupka transporta žučnih kiselina (BSEP) korišćenjem LC/MS/MS da se detektuje kapacitet apsorpcije na pumpu transfera žučne kiseline (BSEP) prema supstratu taurina TCA.

Eksperimentalni materijali:

[0245]

Pripremanje rastvora:

1. Pufer A:

[0246] 50 mM HEPES pH 7.4, 100 mM KNO3, 10 mM Mg (NO3)2, 50 mM saharoza.

2. Pufer B:

[0247] 10 mM TRIS pH 7.4, 100 mM KNO3, 10 mM Mg (NO3)2, 50 mM saharoza.

3. ATP pufer:

[0248] Pripremljen sa puferom A, 8.16 mM ATP i 4.08 μM tauroholne kiseline se nalazi u 12 mL pufera A.

4. AMP pufer:

[0249] Pripremljen sa puferom A, 8.16 mM AMP, 4.08 μM tauroholne kiseline 12 mL pufera A se nalazi u puferu A.

5. BSEP-Hi5-VT Vesicle rastvor:

[0250] Rastvor koji sadrži BSEP-Hi5-VT 5 μg/ μL je pripremljen sa puferom A.

Pripremanje uzorka:

[0251]

1. Jedinjenje je razblaženo do 100 mM sa DMSO; zatim serijski razblaženo 3-struko za 11-tačaka razblaženja ; minimalna koncentracija je bila 0.169 μM.

2. Pozitivna referenca Glyburide je razblaženo do 20 mM sa DMSO; zatim serijski razblažena 2-puta za 11-tačaka razblaženja; minimalna koncentracija je bila 19.5 μM.

Eksperimentalni protokol:

[0252]

1. 0,3 μL rastvora jedinjenja u DMSO ili razblaženi rastvor DMSO je premešten u odgovarajuće bunarčiće ploče sa jedinjenjima pomoću ECHO, tim redom.

2. 14.7 μL ATP pufera je dodato u jedinjenje i odgovarajući bunarčići sa dejstvom nula procenata (ZPE-zero percent effect), tim redom.

3. 14.7 μL AMP pufera je dodato u odgovarajuće bunarčiće 100% (dejstva HPE), tim redom. 4. Ploča je mućkana u toku 10 minuta na 25 °C.

5. 15 μL BSEP-Hl5-VT rastvora vezikula je dodato u sve buanarčiće, tim redom, i ploča je mućkana u toku još 40 minuta na 25 °C.

6. 5 μL 0.5 M rastvora etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) je dodato u sve bunarčiće odmah, praćeno dodavanjem 65 μL pufera B, i cela reakcija je završena .

7. 95 μL tečnosti je premešteno na filter ploču iz ploče sa jedinjenjima na kraju reakcije pomoću instrumenta.

8. Posle smeštanja ploče za prijem tečnosti ispod filter ploče, tečnost je uklonjena pomoću centrifuge i odbačena je tečnost iz ploče za prijem tečnosti.

9. 90 μL pufera B je dodato u filter ploču. Posle postavljanja ploče za prijem tečnosti ispod filter ploče, tečnost je uklonjena pomoću centrifuge, i tečnost ploče za prijem je odbačena, i filter ploča je isprana ukupno tri puta.

10. Filter ploča je osušena preko noći.

11. Sledećeg dana, 80 μL rastvora metanol/voda (80/20, zapreminski odnos) je dodato na filter ploču.

12. Ploča je mućkana u toku 15 minuta pošto je filter ploča pričvršćena na membranu .

13. Nova ploča za prijem tečnost je smeštena ispod filter ploče, i filter ploča je centrifugirana u toku 5 minuta, i sve tečnosti su proceđene u ploču za prijem.

14. 15 μL rastvora unutrašnjeg standarda je dodato u svaki bunarčić ploče za prijem tečnosti i ploča je zatvorena membranom.

15. Sadržaj tauroholne kiseline u ploči za prijem je detektovan pomoću LC/MS/MS.

[0253] Nekoliko koncentracija je testirano u svakom od eksperimenata. Podaci su analizirani pomoću Prism-e da bi se stvorila kriva koncentracija-odgovor, i izračunate su IC50vrednosti jedinjenja.

Eksperimentalni rezultati:

[0254] Eksperimentalni rezultati su prikazani u tabeli 14.

Tabela 14: Inhibitorno dejstvo jedinjenja prema prikazanom opisu pronalaska na transportnu pumpu za žučne kiseline (BSEP)

Zaključak:

[0255] Inhibitorni efekat jedinjenja WX013 prema prikazanom opisu pronalaska na transportnu pumpu žučne soli (BSEP) je bio ekstremno slab, ali inhibitorni efekat macitentana je bio jak. Prema tome, inhibitorni efekat WX013 na transportnu pumpu žučnih soli je bio mnogo slabiji od onog macitentana, tako značajno smanjujući rizik od razvoja hepatotoksičnosti.

Eksperimentalno izvođenje 6: Procena farmakokinetike jedinjenja kod pacova

Eksperimentalna svrha:

[0256] SD muški pacovi su izabrani kao životinje za testiranje pri ispitivanju, i koncentracija leka u plazmi pavova u različitim vremenskim tačkama preko venske injekcije ili oralnim gastričnim davanjem testiranog jedinejnja je kvantitativno mereno pomoću LC/MS/MS postupka radi procene farmakokinetičkih karakteristika kod pacova.

Eksperimentalni materijali:

[0257] Sprague Dawley (SD) pacovi (muški, 200-300g, 7-10 nedelja stari, Beijing Viton Lihua ili Shanghai Slake).

Eksperimentalni protokol:

[0258] Bistar rastvor testiranog jedinjenja je injektovan u SD pacove preko repne vene (gladovanje u toku noći), ili davan oralno gavažom (gladovanje u toku noći). Za intravensko davanje, 200 μL krvi je sakupljeno punkturom iz jungularne vene pri 0 sati (pre-doziranje) i na 0.0833, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 i 24 sati posle doziranja, koja je zatim smeštena u antikoagulacione epruvete obogaćene sa EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Smeša u antikoaulacionoj epruveti je vorteksovana da bi se potpuno izmešala na 4 °C, i zatim centrifugirana na 13000 oum u toku 10 minuta da bi se sakupila plazma. Za davanje oralnom gavažom, 200 μL jungularne krvi je sakupljeno pomoću punkcije vene na 0 sati (predoziranje) i na 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 i 24 sata posle doziranja, koje je zatim smešteno u antikoagulacione epruvete obogaćene sa EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Smeša u antikoagulacionoj epruveti je vorteksovana da bi se potpuno izmešala , i zatim centrifugirana na 13000 oum u toku 10 minuta da bi se sakupila plazma. Koncentracija leka u plazmi je merena pomoću LC/MS/MS postupka, i farmakokinetički parametri sa njim u vezi su izračunati pomoću WinNonlin<™>Version 6.3 (Pharsight, Paul View, CA) farmakokinetičkim softverom na neprostornom modelu linearnim logaritamskim trapezoidnim postupkom.

Eksperimentalni rezultati:

[0259] Eksperimentalni rezultati su prikazani u tabeli 15.

Taela 15: Farmakokinetički paramateri jedinjenja prema opisu pronalaska na pacovima

Zaključak:

[0260] Jedinjenja WX001 i WX013 prema prikazanom opisu pronalaska ima nisku brzinu kliransa u plazmi (<5mL/min/kg) i visoku oralnu biodostupnost (> 70%) kod pacova.

Eksperimentalno izvođenje 7: Procena farmakokinetiče jedinjenja na biglovima

1

Eksperimentalna svrha:

[0261] Muški bigl psi su odabrani kao životinje za testiranje u ovoj ispitivanju, i koncentracija leka u plazmi bigl pasa pri različitim vremenskim tačkama preko intravenske injekcije ili oralnom perfuzionom gastričkim davanjem testiranih jedinjenja je kvantitativno merena pomoću LC/MS/MS postupka da bi se procenile farmakokinetičke karakteristike testiranih jedinjenja kod bigl pasa.

Eksperimentalni materijali:

[0262] Bigl psi (muški, 6-15kg, više od 6 nedelja stari, Beijing Marshall Biotechnology Co., Ltd.).

Eksperimentalni protokol:

[0263] Bistar rastvor testiranih jedinjenja je injektovan intravenski u bigl pse (gladovanje preko noći), ili davano oralno bigl psima gavažom (gladovanje preko noći). Za intravensko davanje, 500 μL krvi je skupljeno iz perifernih sudova na 0 sati (pre-doziranje) i na 0.0833, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 i 24 sata posle doziranja, koje je zatim smešteno u antikoagulacione epruvete obogaćene sa EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Za oralno gastričko davanje, 500 μL krvi je sakupljeno iz perifernih sudova na 0 sati (predoziranje) i na 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 i 24 sati posle doziranja, koje je zatim smešteno u antikoagulacione epruvete obogaćene sa EDTA-K2. Smeša u antikoagulacionoj epruveti je vorteksovana da se potpuno izmeša, i zatim je centrifugirana na 13000 oum u toku 10 minuta da bi se sakupila plazma. Koncentracijaleka u plazmi je merena pomoću LC/MS/MS postupka, i sa njima u vezi farmakokinetički parametri su izračunati pomoću WinNonlin<™>Version 6.3 (Pharsight, Paul View, CA) farmakokinetičkog softvera neprostornom modelu linearnim logaritamskim trapezoidnim postupkom.

Eksperimentalni rezultati:

[0264] Eksperimentalni rezultati su prikazani u tabeli 16.

Tabela 16: Farmakokinetički parametri jedinjenja prema prikazanom opisu pronalaska na bigl psima

2

Zaključak:

[0265] Jedinjenja WX001 i WX013 prema prikazanom opisu imaju nisku brzinu kliransa u plazmi (<5mL/min/kg) i visoku oralnu biodostupnost (> 50%) kod big pasa.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I), njegov geometrijski ili steroizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,

   gde, R1je izabran između H, F, Cl, Br, I, OH i NH2; R2je izabran između H i C1-3alkila, gde C1-3alkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R; R3je izabran između H, C1-6alkila, C1-6heteroalkila, -C1-3alkil-C3-6cikloalkila, C3-6cikloalkila i -C1-3alkil-3-7 članog heterocikloalkila, gde C1-6alkil, C1-6heteroalkil, -C1-3alkil-C3-6cikloalkil, C3-6cikloalkil ili -C1-3alkil-3-7-člani heterocikloalkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R; ili, R2i R3povezani da obrazuju 3-8 člani prsten opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R; prsten B je izabran između 3-7 članog heterocikloalkila i 5-6 članog heteroarila, gde 3-7 člani heterocikloalkil ili 5-6 člani heteroaril je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R; R je nezavisno izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-6alkila i C1-6heteroalkila, gde C1-6alkil ili C1-6heteroalkil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R’; R’ je nezavisno izabran između F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2, CF3i Et; svaki od C1-6heteroalkila, 3-7 članog heterocikloalkila i 5-6 članog heteroarila sadrži jednu, dve, tri ili četiri grupe heteroatoma nezavisno izabrane između N, -O-, -S-, -NH-, -S(=O)2-i -S(=O) .
2. 2. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u zahtevu 1, gde je, R izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3alkila, C1-3alkil-S(=O)2-i C1-3alkil-O-, gde C1-3alkil, C1-3alkil-S(=O)2- ili C1-3alkil-O-je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R’; opciono, R2je izabran između H i Me; opciono, R3je izabran između H, C1-4alkil, C1-4alkil-O-C1-4alkil, ciklobutil, -C1-3alkil-ciklobutil, -C1-3alkilciklopropil, -C1-3alkil-tetrahidrofuranil i -C1-3alkil-tetrahidropiranil, gde C1-4alkil, C1-4alkil-O-C1-4alkil, ciklobutil, -C1-3alkil-ciklobutil, -C1-3alkil-ciklopropil, -C1-3alkil-tetrahidrofuranil ili -C1-3alkil-tetrahidropiranil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R.
3. 3. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u zahtevu 2, gde je R izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, Et,

   4 gde Me, Et,

   je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R’; opciono, R3je izabran između H, Me, Et,

   gde Me, Et,

   je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R.
4. 4. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano prema zahtevu 3, gde je R izabran između H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2, CF3, Et,

   opciono, R3je izabran između H, Me, Et,

   i
5. 5. Jedinjenje, njegov geometrijski ili steroizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u bilo kom od zahteva 1-4, gde su R2i R3povezani da obrazuju 6-8 člani heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R.
6. 6. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano prema zahtevu 5, gde strukturna jedinica

   je izabrana između

   gde

   je opciono supstituisana sa jednim, dva ili tri R.
7. 7. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u zahtevu 6, gde, strukturna jedinica

   je izabrana između
8. 8. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-4, gde je prsten B izabran između tetrahidrofuranila, tetrahidrotienila, 1,3-dioksolanila, pirolidinila, tiazolila, pirazolila i imidazolila, gde tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, 1,3-dioksolanil, pirolidinil, tiazolil, pirazolil ili imidazolil je opciono supstituisan sa jednim, dva ili tri R. 9. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so definisan prema zahtevu 8, gde strukturna jedinica
9. je izabrana između
10. 10. Jedinjenje, njegov geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, koje je izabrano između
11. gde, R, R1ili R2je kako je definisano u bilo kom od zahteva 1-7. 11. Jedinjenje prema zahtevu 1, njegovi geometrijski ili stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje izabrano između
12. 12. Jedinjenje, njegov geometrijski ili steroizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u zahtevu 11, koje je izabrano između
13. 13. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli kako je definisano prema bilo kom od zahteva 1-12 kao aktivno sredstvo i farmaceutski prihvatljiv nosač. 1
14. 14. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano prema bilo kom od zahteva 1-12 ili kompozicija kako je definisano u zahtevu 13 za upotrebu kao antagonist ETAreceptora.
15. 15. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so kako je definisano u bilo kom od zahteva 1-12 ili kompozicija kako je defisnisano u zahtevu 13 za upotrebu u lečenju plućne arterijske hipertenzije, primarne hipertenzije, refraktorne hipertenzije, dijabetičke nefropatije i intrakranijalnog vazospazma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 2