RS64272B1

RS64272B1 - C40-, c28- i c-32-vezani analozi rapamicina kao inhibitori mtor

Info

Publication number: RS64272B1
Application number: RS20230386A
Authority: RS
Inventors: Jennifer Pitzen; Micah James Evans Gliedt; G Leslie Burnett; James Bradley Aggen; Gert Kiss; James Joseph Cregg; Christopher Michael Semko; Walter Won; Gang Wang; Julie Chu-Li Lee; Arun P Thottumkara; Adrian Liam Gill; Kevin T Mellem
Original assignee: Revolution Medicines Inc
Priority date: 2018-05-01
Filing date: 2019-04-29
Publication date: 2023-07-31
Also published as: EP3788049A1; SA520420458B1; CN112771054B; JP2021523112A; PT3788049T; SI3788049T1; CN118978535A; PE20252397A1; MX2020011565A; MX2023000081A; AU2023241345B2; TWI911762B; IL300091A; DK3788049T3; BR112020022201A2; CO2020013865A2; MX2023011282A; SG11202010559UA; CR20200578A; US12048749B2

Description

Opis

UNAKRSNA REFERENCA NA POVEZANE PRIJAVE

[0001] Ova prijava poziva se na prioritet od američke privremene prijave br. 62/665,435, podnete 1. maja 2018. i američke privremene prijave br.62/752,874, podnete 30. oktobra 2018. i američke privremene prijave br.62/836,036, podnete 18 aprila 2019.

REFERENCA NA LISTU SEKVENCI

[0002] Spisak sekvenci povezan sa ovom prijavom je obezbeđen u tekstualnom formatu umesto kopije na papiru. Ime tekstualne datoteke koja sadrži listu sekvenci je REME_008_01WO_SeqList_ST25.txt. Tekstualni fajl ima oko 40 kilobajtova, kreiran je 26. aprila 2019. i dostavlja se elektronski putem EFS–Web-a.

OBLAST PRONALASKA

[0003] Ovo otkriće se odnosi na inhibitore mTOR. Konkretno, realizacije su usmerene na jedinjenja i kompozicije koje inhibiraju mTOR, metode lečenja bolesti posredovanih sa mTOR, i metode sinteze ovih jedinjenja.

POZADINA PRONALASKA

[0004] Cilj rapamicina (mTOR) kod sisara je serin-treonin kinaza srodna lipidnim kinazama iz porodice fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K). mTOR postoji u dva kompleksa, mTORC1 i mTORC2, koji su različito regulisani, imaju različite specifičnosti supstrata i različito su osetljivi na rapamicin. mTORC1 integriše signale sa receptora faktora rasta sa ćelijskim nutritivnim statusom i kontroliše nivo translacije mRNK zavisne od kape modulacijom aktivnosti ključnih translacionih komponenti kao što su protein koji vezuje kapu i onkogen eIF4E.

[0005] mTOR signalizacija je dešifrovana u sve više detalja. Različita farmakologija inhibitora mTOR je bila posebno informativna. Prvi prijavljeni inhibitor mTOR, Rapamicin se sada razume kao nepotpuni inhibitor mTORC1. Rapamicin je selektivni inhibitor mTORC1 kroz vezivanje za FK506 vezujući protein 12 (FKBP12). FRB domen od mTOR dostupan je u kompleksu mTORC1, ali manje u mTORC2 kompleksu. Interesantno je da je poznato da je moć inhibitornih aktivnosti protiv nizvodnih supstrata mTORC1 tretmanom rapamicinom različita među supstratima os mTORC1. Na primer, rapamicin snažno inhibira fosforilaciju mTORC1 supstrata S6K i, indirektno, fosforilaciju nizvodnog ribozomalnog proteina S6 koji kontroliše ribozomalnu biogenezu. Sa druge strane, rapamicin pokazuje samo delimičnu inhibitornu aktivnost protiv fosforilacije 4E-BP 1, glavnog regulatora eIF4E koji kontroliše inicijaciju CAP zavisne translacije. Kao rezultat toga, od interesa su potpuniji inhibitori mTORC1 signalizacije.

[0006] Prijavljena je druga klasa inhibitora "ATP-mesta" mTOR kinaze. Ova klasa mTOR inhibitora će se nazivati TORi (ATP site TOR inhibitor). Molekuli se takmiče sa ATP-om, supstratom za reakciju kinaze, u aktivnom mestu mTOR kinaze (i stoga su takođe inhibitori mTOR aktivnog mesta). Kao rezultat, ovi molekuli inhibiraju nizvodnu fosforilaciju šireg spektra supstrata.

[0007] Iako inhibicija mTOR može imati efekat blokiranja fosforilacije 4E-BP1, ovi agensi mogu takođe inhibirati mTORC2, što dovodi do blokiranja aktivacije Akt usled inhibicije fosforilacije Akt S473.

[0008] Ovde su otkriveni, između ostalog, inhibitori mTOR. U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena su selektivniji inhibitori mTORC1 u odnosu na mTORC2. U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena su selektivniji inhibitori mTORC2 u odnosu na mTORC1. U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena ne pokazuju razliku u selektivnosti između mTORC1 i mTORC2.

[0009] Dokument US 2016/279108 A1 otkriva ciljane inhibitore mTOR. WO 2009/131631 A1 otkriva analoge rapamicina kao agense protiv raka. WO 2007/068462 A2 otkriva sredstvo za lečenje inflamatorne bolesti creva. US 5480 989 A otkriva karbamate rapamicina. Vanessa S. Rodrik-Outmezguine i dr. otkrivaju, u NATURE, (2016), vol.534, br.7606, stranice 272-276 "Prevazilaženje mutacija otpornosti na mTOR sa mTOR inhibitorom nove generacije ". WO 94/25072 A1 otkriva konjugate rapamicina i antitela. WO 94/11380 A1 otkriva estre rapamicin karbonata kao imunosupresivne agense. WO 95/14023 A1 otkriva polusintetičke analoge rapamicina (makrolidi) kao imunomodulatore. US 6 342 507 B1 otkriva jedinjenja deuterovanog rapamicina, metod i njihovu upotrebu. WO 2009/122176 A2 otkriva estre rapamicin karbonata.

REZIME PRONALASKA

[0010] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja koja mogu da inhibiraju aktivnost mTOR, i farmaceutske preparate koji sadrže takva jedinjenja. Jedinjenja iz ovog pronalaska su ona iz Primera 1-152 u nastavku, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, tautomeri ili stereoizomeri. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na takva jedinjenja za upotrebu u postupku lečenja, prevencije ili smanjenja rizika od bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR. Ovde je takođe otkriven postupak za dobijanje jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0011] Ovde je takođe otkriveno (ali nije deo pronalaska) jedinjenje Formule Ic:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O, -OR<3>, -N3, ili -O-C(=Z<1>)-R<32a>;

R<28>je -H, (C1-C6)alkil, ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu kada R<28>i R<40>su H, onda R<32>nije =O;

svaki Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>, R<32a>, i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<3>-A<2>-B; -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu aril u -O-(C6-C10)aril je nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

pri čemu je veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, vezana na -C(=Z<1>)- ili L<2>; i pri čemu veza na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, je vezana na B ili L<3>; svaki Q je nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki X je nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W je nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G je nezavisno odsutan ili prsten izabran od arilena, cikloalkilena, heteroarilena, i heterociklilena;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki B je nezavisno izabran od

svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-(C(R3)2)n-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-, heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-(C(R<3>)2)n-, pri čemu

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, je vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom; svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril svaki nezavisno opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogenom, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilenheteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroaril, ili -C(O)NR<3>-heterociklil; svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu alkil iz (C1-C6)alkil je svaki nezavisno opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<6>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu alkil iz (C1-C6)alkil je svaki nezavisno opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<7>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu alkil iz (C1-C6)alkil je svaki nezavisno opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<8>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu alkil iz (C1-C6)alkil je svaki nezavisno opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno -C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0012] Ovde je takođe otkriveno (ali nije deo pronalaska) jedinjenje Formule Ia:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O, -OR<3>, -N3, ili -O-C(=Z<1>)-R<32a>;

R<28>je -H, (C1-C6)alkil, ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu kada R<28>i R<40>su H, onda R<32>nije =O;

svaki Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>, R<32a>, i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<3>-A<2>-B; -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

pri čemu je veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, vezana na -C(=Z<1>)- ili L<2>; i pri čemu veza je na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, vezana na B ili L<3>; svaki Q je nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki X<1>nezavisno je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>nezavisno je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

1

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki B je nezavisno izabran od

svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

heterociklilen-arilen i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, je vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril svaki nezavisno opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogen, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilenheteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroaril, ili -C(O)NR<3>-heterociklil; svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu alkil iz (C1-C6)alkil je svaki nezavisno opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno -C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0013] Ovde je takođe otkriveno (ali nije deo pronalaska) jedinjenje Formule I:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

1

R<32>je -H, =O, ili -OR<3>;

R<28>je -H ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu najmanje jedan od R<28>i R<40>nije H;

Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<3>-A<2>-B; ―-L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

pri čemu je veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, vezana na -C(=Z<1>)-ili L<2>; i pri čemu je veza na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, vezana na B ili L<3>; svaki Q je nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>nezavisno je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

1

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1

svaki B je nezavisno izabran od

svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

1

heterociklilen-arilen

i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril svaki nezavisno opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogen, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilenheteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroaril, ili -C(O)NR<3>-heterociklil; svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<6>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<7>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<8>nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkil je opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno -C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0014] Ovde je takođe otkriveno (ali nije deo pronalaska) jedinjenje Formule II:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O ili -OR<3>;

R<28>je -H ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu najmanje jedan od R<28>i R<40>nije H;

Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<3>-A<2>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu aril iz -O-(C6-C10)aril je nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1

pri čemu veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, je vezana na -C(=Z<1>)-; i pri čemu veza na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, je vezana na B;

svaki Q je nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena;

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

2

svaki B je nezavisno izabran od

svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heterociklilen-arilen

i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu je

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<8>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0015] Jedinjenje Formule I ili II može biti predstavljeno sa strukturom Formule I-28:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0016] Jedinjenje Formule Ia, Ic, I, ili II može biti predstavljeno sa strukturom Formule I-28b:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

2

[0017] u nekim realizacijama, jedinjenje Formule I ili II je predstavljeno sa strukturom Formule I-40:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0018] Jedinjenje Formule Ia, Ic, I ili II može biti predstavljeno sa strukturom Formule I-40b:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0019] Jedinjenje Formule Ia, Ic, I ili II može biti predstavljeno sa strukturom Formule I-32b: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0020] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje iz ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja, prevencije ili smanjenja rizika od bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR. Postupak može da obuhvata davanje subjektu koji pati ili je podložan razvoju bolesti ili poremećaja posredovanih mTOR-om, terapeutski efikasne količine jednog ili više navedenih jedinjenja.

Drugi aspekt ovog pronalaska je usmeren na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje iz ovog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer ili stereoizomer, i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili razblaživača. Kompozicija može da sadrži surfaktant. Farmaceutska kompozicija može biti efikasna za lečenje, prevenciju ili smanjenje rizika od bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR-om kod subjekta kome je to potrebno.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021] Ova pronalazak se odnosi na inhibitore mTOR. Konkretno, realizacije su usmerene na jedinjenja i kompozicije koje inhibiraju mTOR, metode lečenja bolesti posredovanih sa mTOR, i metode sinteze ovih jedinjenja.

[0022] Detalji pronalaska su navedeni u pratećem opisu ispod. Iako se metode i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, sada su opisane ilustrativne metode i materijali. Ostale karakteristike, objekti i prednosti pronalaska biće očigledni iz opisa i iz patentnih zahteva. U specifikaciji i priloženim zahtevima, oblici jednine takođe mogu uključivati množinu osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije. Osim ako nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni termini imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada.

Termini

[0023] Oblici jednine se koriste u ovom otkriću i odnose se na jedan ili više od jednog (tj., na najmanje jedan) gramatičkog objekta predmeta, osim ako nije drugačije naznačeno. Na primer, "element" može značiti jedan element ili više od jednog elementa, osim ako nije drugačije naznačeno.

2

[0024] Termin "ili" znači "i/ili" osim ako nije drugačije naznačeno. Izraz "i/ili" znači ili "i" ili "ili", ili oboje, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0025] Termin "opciono supstituisan" osim ako nije drugačije naznačeno znači da grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana sa jednim ili više (npr. 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 ili više, ili bilo kojim opsegom koji se iz toga može izvesti) supstituenti navedeni za tu grupu u kojoj navedeni supstituenti mogu biti isti ili različiti. U jednoj realizaciji, opciono supstituisana grupa ima 1 supstituent. U drugoj realizaciji, opciono supstituisana grupa ima 2 supstituenta. U drugoj realizaciji, opciono supstituisana grupa ima 3 supstituenta. U narednoj realizaciji, opciono supstituisana grupa ima 4 supstituenta. U narednoj realizaciji, opciono supstituisana grupa ima 5 supstituenata.

[0026] Termin "alkil", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava, osim ako nije drugačije navedeno, potpuno zasićen ravan (tj. nerazgranati) ili razgranati neciklični ugljenični lanac (ili ugljenik), ili njihovu kombinaciju, koji može uključiti di- i multivalentne radikale, koji imaju označen broj atoma ugljenika (tj., C1-C10 jedan do deset ugljenika). Primeri zasićenih ugljovodoničnih radikala uključuju, ali nisu ograničeni na, grupe kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, t-butil, izobutil, sek-butil, (cikloheksil)metil, homolozi i izomeri, na primer, n-pentil, n-heksil, n-heptil, n-oktil i slično.

[0027] Termin "alkilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava, osim ako nije drugačije navedeno, dvovalentni radikal izveden iz alkila. Tipično, alkil (ili alkilen) grupa će imati od 1 do 24 atoma ugljenika, kao što su one grupe koje imaju 10 ili manje atoma ugljenika.

[0028] Termin "alkenil" označava alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži dvostruku vezu ugljenik-ugljenik i koja može biti ravna ili razgranata sa oko 2 do oko 6 atoma ugljenika u lancu. Određene alkenil grupe imaju 2 do oko 4 atoma ugljenika u lancu. Razgranati može značiti da je jedna ili više nižih alkil grupa kao što su metil, etil ili propil vezana za linearni alkenilni lanac. Primeri alkenil grupa uključuju etenil, propenil, n-butenil i i-butenil. Dalji primeri uključuju vinil, 2-propenil, krotil, 2-izopentenil, 2-(butadienil), 2,4-pentadienil i 3-(1,4-pentadienil). Grupa C2-C6 alkenil je alkenilna grupa koja sadrži između 2 i 6 atoma ugljenika.

2

[0029] Termin "alkenilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava, osim ako nije drugačije navedeno, dvovalentni radikal izveden iz alkena.

[0030] Termin "alkinil" označava alifatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži trostruku vezu ugljenik-ugljenik i koja može biti ravna ili razgranata sa oko 2 do oko 6 atoma ugljenika u lancu. Određene alkinilne grupe imaju 2 do oko 4 atoma ugljenika u lancu. Razgranata može značiti da su jedna ili više nižih alkil grupa kao što su metil, etil ili propil vezane za linearni alkinilni lanac. Primeri alkinilnih grupa uključuju etinil, propinil, n-butinil, 2-butinil, 3-metilbutinil i n-pentinil. Dalji primeri uključuju 1-propinil, 3-propinil i 3-butinil. Grupa C2-C6 alkinil je alkinilna grupa koja sadrži između 2 i 6 atoma ugljenika.

[0031] Termin "alkinilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava, osim ako nije drugačije navedeno, dvovalentni radikal izveden iz alkina.

[0032] Termin "cikloalkil" označava monociklični ili policiklični zasićeni ili delimično nezasićeni ugljenični prsten koji sadrži 3-18 atoma ugljenika. Primeri cikloalkilnih grupa uključuju, bez ograničenja, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptanil, ciklooktanil, norboranil, norborenil, biciklo[2.2.2]oktanil ili biciklo[2.2.2]oktenil. Grupa C3-C8 cikloalkil je cikloalkilna grupa koja sadrži između 3 i 8 atoma ugljenika. Cikloalkilna grupa može biti fuzionisana (npr. dekalin) ili premošćena (npr. norbornan).

[0033] "Cikloalkilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava dvovalentni radikal izveden iz cikloalkila.

[0034] Termini "heterociklil" ili "heterocikloalkil" ili "heterocikl" se odnose na monociklični ili policiklični 3 do 24-člani prsten koji sadrži ugljenik i najmanje jedan heteroatom izabran između kiseonika, fosfora, azota i sumpora i gde nema delokalizovanih π elektrona (aromatičnost) podeljenih između ugljenika ili heteroatoma u prstenu. Heterociklilni prstenovi uključuju, ali nisu ograničeni na, oksetanil, azetadinil, tetrahidrofuranil, pirolidinil, oksazolinil, oksazolidinil, tiazolinil, tiazolidinil, piranil, tiopiranil, tetrahidropiranil, tetrahidropiranil, dioksalinilhololinooksid, dioksalinilholiooksid, piperazinil, azepinil, oksepinil, diazepinil, tropanil i homotropanil. Heterociklilni ili heterocikloalkilni prsten takođe može biti fuzionisan ili premošćen, npr. može biti biciklični prsten.

2

[0035] "Heterociklilen" ili "heterocikloalkilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava dvovalentni radikal izveden iz "heterociklila" ili "heterocikloalkila" ili "heterocikla".

[0036] Termin "aril" označava, osim ako nije drugačije navedeno, polinezasićeni, aromatični, ugljovodonični supstituent, koji može biti jedan prsten ili više prstenova (poželjno od 1 do 3 prstena) koji su spojeni zajedno (tj. aril sa kondenzovanim prstenom) ili povezani kovalentno. Kondenzovani arilni prsten može se odnositi na više prstenova spojenih zajedno pri čemu je najmanje jedan od spojenih prstenova arilni prsten.

[0037] "Arilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava dvovalentni radikal izveden iz arila.

[0038] Termin "heteroaril" se odnosi na arilnu grupu (ili prstenove) koja sadrži najmanje jedan heteroatom kao što je N, O ili S, pri čemu su atom(i) azota i sumpora opciono oksidovani, a atom(i) azota su opciono kvaternizovani. Prema tome, izraz "heteroaril" obuhvata fuzionisane heteroarilne grupe (tj., višestruke prstenove fuzionisane zajedno pri čemu je najmanje jedan od fuzionisanih prstenova heteroaromatični prsten). Heteroarilen sa 5,6-fuzionisanim prstenom se odnosi na dva prstena fuzionisana zajedno, pri čemu jedan prsten ima 5 članova, a drugi prsten ima 6 članova, i pri čemu najmanje jedan prsten je a heteroaril ring. Slično, 6,6-fuzionisani prsten heteroarilen se odnosi na dva prstena fuzionisana zajedno, pri čemu jedan prsten ima 6 članova i drugi prsten ima 6 članova, i pri čemu najmanje jedan prsten je heteroarilni prsten. Heteroarilen sa 6,5-fuzionisanim prstenom se odnosi na dva prstena fuzionisana zajedno, pri čemu jedan prsten ima 6 članova, a drugi prsten ima 5 članova, te pri čemu najmanje jedan prsten je a heteroaril ring. Heteroarilna grupa može biti vezana za ostatak molekula preko ugljenika ili heteroatoma. Neograničavajući primeri arilnih i heteroarilnih grupa uključuju fenil, 1-naftil, 2-naftil, 4-bifenil, 1-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 3-pirazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, pirazinil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 2-fenil-4-oksazolil, 5-oksazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, 2-furil, 3-furil, 2-tienil, 3-tienil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidil, 4-pirimidil, 5-benzotiazolil, purinil, 2-benzimidazolil, 5-indolil, 1-izohinolil, 5-izohinolil, 2-hinoksalinil, 5-hinoksalinil, 3-hinolil, i 6-hinolil. Supstituenti za svaki od gore navedenih sistema arilnih i heteroarilnih prstenova su izabrani iz grupe ovde opisanih prihvatljivih supstituenata.

2

[0039] Termin "heteroaril" takođe može da obuhvata višestruke fuzionisane sisteme prstenova koji imaju najmanje jedan takav aromatični prsten, čiji su višestruki fuzionisani sistemi prstenova dalje opisani u nastavku. Termin takođe može obuhvatati višestruke fuzionisane sisteme prstenova (npr. sisteme prstenova koji sadrže 2, 3 ili 4 prstena) pri čemu heteroarilna grupa, kako je gore definisana, može biti fuzionisana sa jednim ili više prstenova izabranih od heteroarila (da formiraju na primer naftiridinil kao što je 1,8-naftiridinil), heterocikla, (da formiraju na primer 1, 2, 3, 4-tetrahidronaftiridinil kao što je 1, 2, 3, 4-tetrahidro-1,8-naftiridinil), karbocikla (da formiraju na primer 5,6,7, 8-tetrahidrohinolil) i arila (da formiraju na primer indazolil) da formiraju višestruki fuzionisani sistem prstenova. Prstenovi višestrukog fuzionisanog prstenastog sistema mogu biti povezani jedan sa drugim preko spojenih, spiro i premoštenih veza kada to dozvoljavaju zahtevi za valentnost. Treba razumeti da pojedinačni prstenovi višestrukog fuzionisanog prstenastog sistema mogu biti povezani u bilo kom redosledu jedan u odnosu na drugi. Takođe treba razumeti da tačka vezivanja višestrukog fuzionisanog sistema prstenova (kao što je gore definisano za heteroaril) može biti na bilo kojoj poziciji višestruko fuzionisanog sistema prstenova uključujući heteroaril, heterocikl, aril ili karbociklični deo višestruko fuzionisanog sistema prstenova i na bilo kom pogodnom atomu višestrukog fuzionisanog sistema prstenova uključujući atom ugljenika i heteroatom (npr. azot).

[0040] "Heteroarilen", sam ili kao deo drugog supstituenta, označava dvovalentni radikal izveden iz heteroarila.

[0041] Neograničavajući primeri arilnih i heteroarilnih grupa obuhvataju piridinil, pirimidinil, tiofenil, tienil, furanil, indolil, benzoksadiazolil, benzodioksolil, benzodioksanil, tianaftanil, pirolopiridinil, indazolil, hinolinil, hinoksalinil, piridopirazinil, hinazolinonil, benzoizoksazolil, imidazopiridinil, benzofuranil, benzotienil, benzotiofenil, fenil, naftil, bifenil, pirolil, pirazolil, imidazolil, pirazinil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, furiltienil, piridil, pirimidil, benzotiazolil, purinil, benzimidazolil, izohinolil, tiadiazolil, oksadiazolil, pirolil, diazolil, triazolil, tetrazolil, benzotiadiazolil, izotiazolil, pirazolopirimidinil, pirolopirimidinil, benzotriazolil, benzoksazolil, ili hinolil. Gore pomenuti primeri mogu biti supstituisani ili nesupstituisani i dvovalentni radikali svakog heteroarilnog primera iznad su neograničavajući primeri heteroarilena. Heteroarilni deo može obuhvatati one ring heteroatom (npr., O, N, ili S). Heteroarilni deo može obuhvatati dva opciono različita heteroatoma u prstenu (npr., O, N, ili

2

S). Heteroarilni deo može obuhvatati tri opciono različita heteroatoma u prstenu (npr., O, N, ili S). Heteroarilni deo može obuhvatati četiri opciono različita heteroatoma u prstenu (npr., O, N, ili S). Heteroarilni deo može obuhvatati pet opciono različitih heteroatoma u prstenu (npr., O, N, ili S). Arilna grupa može imati dva opciono različita prstena. Arilna grupa može imati tri opciono različita prstena. Arilna grupa može imati četiri opciono različita prstena. Heteroarilna grupa može imati jedan prsten. Heteroarilna grupa može imati dva opciono različita prstena. Heteroarilna grupa može imati tri opciono različita prstena. Heteroarilna grupa može imati četiri opciono različita prstena. Heteroarilna grupa može imati pet opciono različitih prstenova.

[0042] Termini "halo" ili "halogen", sami po sebi ili kao deo drugog supstituenta, označavaju, osim ako nije drugačije navedeno, atom fluora, hlora, broma ili joda. Dodatno, termini kao što je "haloalkil" mogu obuhvatati monohaloalkil i polihaloalkil. Na primer, termin "halo(C1-C4)alkil" može obuhvatati, ali nije ograničen na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, 4-hlorobutil, 3-bromopropil, 1-fluoro-2-bromoetil, i slično.

[0043] Termin "hidroksil", kako se ovde koristi, označava -OH.

[0044] Termin "hidroksialkil" kako se ovde koristi, označava alkilni deo kao što je ovde definisan, supstituisan sa jednom ili više, kao što su jedna, dve ili tri, hidroksi grupe. U određenim slučajevima, isti atom ugljenika ne nosi više od jedne hidroksi grupe. Reprezentativni primeri obuhvataju, ali nisu ograničeni na, hidroksimetil, 2-hidroksietil, 2-hidroksipropil, 3-hidroksipropil, 1-(hidroksimetil)-2-metilpropil, 2-hidroksibutil, 3-hidroksibutil, 4-hidroksibutil, 2,3-dihidroksipropil, 2-hidroksi-1-hidroksimetiletil, 2,3-dihidroksibutil, 3,4-dihidroksibutil i 2-(hidroksimetil)-3-hidroksipropil.

[0045] Termin "okso", kako se ovde koristi, označava kiseonik koji je dvostruko vezan za atom ugljenika.

[0046] Supstituentna grupa, kako se ovde koristi, može biti grupa izabrana od sledećih grupa:

(A) okso, halogen, -CF3, -CN, -OH, -OCH3, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, nesupstituisani alkil, nesupstituisani cikloalkil, nesupstituisani heterocikloalkil, nesupstituisani aril, nesupstituisani heteroaril, i

(B) alkil, cikloalkil, heterociklil, aril, heteroaril, supstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe koju čine:

(i) okso, halogen, -CF3, -CN, -OH, -OCH3, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, nesupstituisani alkil, nesupstituisani heteroalkil, nesupstituisani cikloalkil, nesupstituisani heterocikloalkil, nesupstituisani aril, nesupstituisani heteroaril, i (ii) alkil, heteroalkil, cikloalkil, heterocikloalkil, aril, heteroaril, supstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe koju čine:

(a) okso, halogen, -CF3, -CN, -OH, -OCH3, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, nesupstituisani alkil, nesupstituisani heteroalkil, nesupstituisani cikloalkil, nesupstituisani heterocikloalkil, nesupstituisani aril, nesupstituisani heteroaril, i

(b) alkil, heteroalkil, cikloalkil, heterocikloalkil, aril, heteroaril, supstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe koju čine: okso, halogen, -CF3, -CN, -OH, -OCH3, -NH2, -COOH, -CONH2, -NO2, -SH, -SO3H, -SO4H, -SO2NH2, -NHNH2, -ONH2, -NHC=(O)NHNH2, -NHC=(O)NH2, -NHSO2H, -NHC=(O)H, -NHC(O)-OH, -NHOH, -OCF3, -OCHF2, -OCH2F, nesupstituisani alkil, nesupstituisani heteroalkil, nesupstituisani cikloalkil, nesupstituisani heterocikloalkil, nesupstituisani aril, nesupstituisani heteroaril.

[0047] "Efikasna količina" kada se koristi u vezi sa jedinjenjem je količina efikasna za lečenje ili prevenciju bolesti kod subjekta kako je ovde opisano.

[0048] Termin "nosač", kako se koristi u ovom pronalasku, obuhvata nosače, ekscipijente i razblaživače i može značiti materijal, kompoziciju ili nosač, kao što je tečni ili čvrsti punilac, razblaživač, ekscipijens, rastvarač ili materijal za kapsuliranje, koji je uključen u prenošenju ili

1

transportu farmaceutskog agensa iz jednog organa, ili dela tela, do drugog organa ili dela tela subjekta.

[0049] Termin "lečenje" u odnosu na subjekta, odnosi se na poboljšanje najmanje jednog simptoma poremećaja kod subjekta. Lečenje može obuhvatati lečenje, poboljšanje ili bar delimično ublažavanje poremećaja.

[0050] Termin "sprečiti" ili "sprečavanje" u odnosu na subjekta odnosi se na sprečavanje bolesti ili poremećaja da zahvate subjekta. Prevencija može obuhvatati profilaktički tretman. Na primer, sprečavanje može uključiti davanje subjektu ovde otkrivenog jedinjenja pre nego što subjekt bude oboleo od neke bolesti i primena će sprečiti da subjekt bude oboleo od bolesti.

[0051] Termin "poremećaj" se koristi u ovom pronalasku i označava, i koristi se naizmenično sa terminima bolest, stanje ili oboljenje, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0052] Termin "primena", "davanje" ili "administriranje" kako se koristi u ovom pronalasku odnosi se ili na direktno davanje otkrivenog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli ili tautomera otkrivenog jedinjenja ili kompozicije subjektu, ili na davanje derivata proleka ili analoga jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli ili tautomera jedinjenja ili kompozicije subjektu, koji mogu da formiraju ekvivalentnu količinu aktivnog jedinjenja u telu subjekta.

[0053] "Pacijent" ili "subjekt" je sisar, npr. čovek, miš, pacov, zamorac, pas, mačka, konj, krava, svinja ili primat koji nije čovek, kao što je majmun, šimpanza, pavijan ili rezus.

Jedinjenja

[0054]Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

2

4

1

2

4

1

2

4

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, ili stereoizomer.

[0055] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

ili njegov stereoizomer.

[0056] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

ili njegov tautomer.

[0057] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

ili njegov izomer oksepana.

[0058] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

ili njegov stereoizomer.

[0059] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

ili njegov tautomer

[0060] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

[0061] U nekim realizacijama, jedinjenje ima formulu

[0062] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule Ic,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>, R<28>, i R<40>opisani kao gore.

[0063] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule Ia,

[0064] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule I,

[0065] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule Ib:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili tautomer, pri čemu su R<32>, R<28>, i R<40>opisani kao gore za Formulu I.

[0066] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule II,

[0067] Takođe je opisano jedinjenje koje ima strukturu Formule IIb:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>, R<28>, i R<40>opisani kao gore za Formulu II.

[0068] Takođe je opisano jedinjenje ima sledeću formulu:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0069] R<32>može biti =O. R<32>može biti -OR<3>. R<32>može biti H. R<32>može biti -N3.

[0070] Kao što je gore opisano, svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil. R<3>može biti H. R<3>može biti (C1-C6)alkil. R<3>može biti metil.

[0071] R<28>može biti H. R<28>može biti (C1-C6)alkil. R<40>može biti H.

[0072] Takođe je opisano jedinjenje predstavljeno strukturom Formule I-40b:

2

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>i R<40>opisani kao gore za Formulu Ia, Ic, I, ili II.

[0073] Takođe je opisano jedinjenje predstavljeno strukturom Formule I-40:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>i R<40>opisani kao gore.

[0074] R<40>može biti -C(=Z<1>)-R<40a>. Z<1>može biti O. Z<1>može biti S.

[0075] R<40a>može biti -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od NO2 i halogena.

[0076] R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<40a>može biti -A<1>-A<2>-B. R<40a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

[0077] R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni. R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan. R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan. R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<40a>može biti -A<1>A<2>-B. R<40a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni. R<40a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan. R<40a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0078] Takođe je opisano jedinjenje predstavljeno strukturom Formule I-28b:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>i R<28>opisani kao gore za Formulu Ia, Ic, I, ili II.

[0079] Takođe je opisano jedinjenje predstavljeno strukturom Formule I-28:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su R<32>i R<28>opisani kao gore.

[0080] R<28>može biti -C(=Z<1>)-R<28a>. Z<1>može biti O. Z<1>može biti S.

[0081] R<28a>može biti -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od NO2 i halogena.

[0082] R<28a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<28a>može biti-A<1>A<2>-B. R<28a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

4

[0083] R<28a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni. R<28a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan. R<28a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan. R<28a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<28a>je -A<1>-A<2>-B. R<28a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni. R<28a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan. R<28a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0084] Takođe je opisano jedinjenje predstavljeno strukturom Formule I-32b:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu je R<32>opisan kao gore za Formulu Ia, Ic, I, ili II.

[0085] R<32>može biti -O-C(=Z<1>)-R<32a>. Z<1>je O. Z<1>može biti S.

[0086] R<32a>može biti -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od NO2 i halogena.

[0087] R<32a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<32a>može biti -A<1>-A<2>-B. R<32a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

[0088] R<32a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni. R<32a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan. R<32a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan. R<32a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B. R<32a>može biti -A<1>-A<2>-B. R<32a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni. R<32a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan. R<32a>može biti -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0089] Kao što je gore opisano, svaki L<1>je nezavisno izabran od

[0090] Kao što je gore opisano za Formulu Ia, svaki L<1>je nezavisno izabran od

[0091] Kao što je gore opisano za Formulu Ic, svaki L<1>je nezavisno izabran od

[0094] L<1>može biti

L<1>može biti

[0096] L<1>može biti

L<1>može biti

[0097] Kao što je gore opisano, L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

[0098] Kao što je gore opisano za Formulu Ia i Ic, L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

[0099] L<2>može biti odsutan. L<2>može biti

L<2>može biti

[0102] L<2>može biti

1

[0104] L<3>može biti odsutan. L<3>može biti

L<3>može biti

[0105] L<3>može biti

2 L<2>može biti

[0106] L<3>može biti

[0109] Kao što je gore opisano, A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

4

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0110] Kao što je gore opisano za Formulu Ia, A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0111] Kao što je gore opisano za Formulu Ic, A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0112] Za Formulu I, veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, je vezana na -C(=Z<1>)- ili L<2>; i veza na desnoj strani je A<2>deo, kao što je nacrtano, vezana na B ili L<3>. Za Formulu II, veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, je vezana na -C(=Z<1>)-; i veza na desnoj strani A<2>deo, kao što je nacrtano, je vezana na B. Za Formulu Ia i Ic, veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, je vezana na -C(=Z<1>)- ili L<2>; i pri čemu je veza na desnoj strani A<2>deo, kao što je nacrtano, vezana na B ili L<3>.

[0113] A<1>može biti odsutan. A<1>može biti

A<1>može biti

[0114] A<1>može biti

pri čemu svaki Q je nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena.

[0115] A<1>može biti

[0116] A<1>može biti

pri čemu svaki X je nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena; i svaki X<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0117] A<1>može biti

pri čemu svaki W je nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena; i svaki W<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0118] A<1>može biti

[0119] A<1>može biti

pri čemu svaki G je nezavisno odsutan ili prsten izabran od arilena, cikloalkilena, heteroarilena, i heterociklilena.

[0120] A<1>može biti

pri čemu svaki G je nezavisno odsutan ili prsten izabran od arilena, cikloalkilena, heteroarilena, i heterociklilena; i svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0121] A<1>može biti

[0122] A<1>može biti

A<1>može biti

tan. A<2>može biti

A<2>može biti

pri čemu je svaki Q nezavisno 1 do 3 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena.

[0125] A<2>može biti

[0126] A<2>može biti

pri čemu je svaki X nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena; i svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0127] A<2>može biti

pri čemu je svaki W nezavisno odsutan ili 1 do 2 prstena izabrana od arilena, cikloalkilena, heteroarilena i heterociklilena; i svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten.

[0128] A<2>može biti

1

[0129] A<2>može biti

pri čemu je svaki G nezavisno odsutan ili prsten izabran od arilena, cikloalkilena, heteroarilena, i heterociklilena.

[0130] A<2>može biti

pri čemu je svaki G nezavisno odsutan ili prsten izabran od arilena, cikloalkilena, heteroarilena, i heterociklilena; i svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilen ili heterociklilenski prsten.

[0131] A<2>može biti

2

[0132] A<2>može biti

A<2>može biti

[0133] Kao što je gore opisano, svaki B je nezavisno izabran od

[0134] B može biti

[0137] Kao što je gore opisano, svaki B<1>je nezavisno izabran od NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

4

heteroarilen

heterociklilen-arilen

i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu je

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom.

[0138] Kao što je gore opisano za Formulu Ic, svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-(C(R<3>)2)n-,

(C6-C10 )arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-(C(R<3>)2)n -; pri čemu je

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom.

[0139] B<1>može biti

NR<3>-(C(R<3>)2)n-.

[0140] B<1>može biti

arilen-B<1>može biti

arilenpri čemu arilen je opciono supstituisan sa haloalkil.

[0141] B<1>može biti

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

NR<3>-(C(R<3>)2).-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-, ili

heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-. U određenim realizacijama, B<1>je

B<1>može biti

heterociklilen-arilen

B<1>može biti

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-.

[0143] B<1>može biti

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-(C(R<3>)2)n-. B<1>može biti

B<1>može biti

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-(C(R<3>)2)n -.

[0144] U B<1>, heteroaril, heterociklil, i arilen mogu biti opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom.

[0145] R<3>može biti H. R<3>može biti (C1-C6)alkil.

[0146] R<4>može biti H. R<4>može biti (C1-C6)alkil. R<4>može biti halogen. R<4>može biti 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, ili (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogenom, (C1-C6)alkil, - (C1-C6)alkilen-heteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, ili -C(O)NR<3>-heteroaril. R<4>može biti - C(O)NR<3>-heterociklil. R<4>može biti 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa - N(R<3>)2 ili -OR<3>.

[0147] Kao što je gore opisano, svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<5>je H. U određenim realizacijama, R<5>je (C1-C6)alkil, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<5>je -C(O)OR<3>. U određenim realizacijama, R<5>je -N(R<3>)2.

[0148] Kao što je gore opisano, svaki R<6>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<6>je H. U određenim realizacijama, R<6>je (C1-C6)alkil, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<6>je -C(O)OR<3>. U određenim realizacijama, R<6>je -N(R<3>)2.

[0149] Kao što je gore opisano, svaki R<7>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<7>je H. U određenim realizacijama, R<7>je (C1-C6)alkil, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<7>je -C(O)OR<3>. U određenim realizacijama, R<7>je -N(R<3>)2.

[0150] Kao što je gore opisano, svaki R<8>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<8>je H. U određenim realizacijama, R<8>je (C1-C6)alkil, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>. U određenim realizacijama, R<8>je -C(O)OR<3>. U određenim realizacijama, R<8>je -N(R<3>)2.

[0151] Kao što je gore opisano, svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza. U određenim realizacijama, Y je C(R<3>)2. U određenim realizacijama, Y je CH2. U određenim realizacijama, Y je veza.

n može biti 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, n može biti 1, 2, 3, ili 4. Alternativno, n može biti 5, 6, 7, ili 8. Alternativno, n može biti 9, 10, 11, ili 12.

o može biti ceo broj od nula do 10, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, o može biti 0, 1, 2, 3, 4, ili 5. Alternativno, o može biti 6, 7, 8, 9, ili 10. Alternativno, o može biti jedan do 7. Alternativno, o može biti jedan do 8. Alternativno, o može biti jedan do 9. Alternativno, o je 3 do 8.

o može biti ceo broj od nula do 30, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, o može biti ceo broj od nula do 30, 29, 28, 27, ili 26. Alternativno, o može biti ceo broj od nula do 25, 24, 23, 22, ili 21. Alternativno, o može biti ceo broj od nula do 20, 19, 18, 17, ili 16. Alternativno, o može biti ceo broj od nula do 15, 14, 13, 12, ili 11.

p može biti 0, 1, 2, 3, 4, 5, ili 6, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, p može biti 7, 8, 9, 10, 11, ili 12. Alternativno, p može biti 0, 1, 2, ili 3. Alternativno, p može biti 4, 5, ili 6.

q može biti ceo broj od nula do 10, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, q može biti 0, 1, 2, 3, 4, ili 5. Alternativno, q može biti 6, 7, 8, 9, ili 10. Alternativno, q može biti jedan do 7. Alternativno, q može biti jedan do 8. Alternativno, q može biti jedan do 9. Alternativno, q može biti 3 do 8.

q može biti ceo broj od nula do 30, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti. Na primer, q može biti ceo broj od nula do 30, 29, 28, 27, ili 26. Alternativno, q može biti ceo broj od nula do 25, 24, 23, 22, ili 21. Alternativno, q može biti ceo broj od nula do 20, 19, 18, 17, ili 16. Alternativno, q može biti ceo broj od nula do 15, 14, 13, 12, ili 11.

r može biti ceo broj od jedan do 6. Na primer, r može biti jedan. Alternativno, r može biti 2. Alternativno, r može biti 3. Alternativno, r može biti 4. Alternativno, r može biti 5. Alternativno, r može biti 6.

[0152] Kao što je gore opisano, kada R<28>i R<40>su H, onda R<32>nije =O. U određenim realizacijama, jedinjenje nije rapamicin, kao što je prikazano u nastavku:

U Formuli Ia ili Ic, R<32>može biti -O-C(=Z<1>)-R<32a>. R<32>može biti -O-C(=Z<1>)-R<32a>; pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B. U Formuli Ia ili Ic, R<28>može biti -C(=Z<1>)-R<28a>. R<28>može biti -C(=Z<1>)-R<28a>; pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>- A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B. U Formuli Ia ili Ic, R<40>može biti -C(=Z<1>)-R<40a>. R<40>može biti -C(=Z<1>)-R<40a>. pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

[0153] Ovde je takođe opisano jedinjenje Formule Ia ili Ic, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, koje ima jednu, dve ili tri od sledećih karakteristika:

a) R<32>je -O-C=(Z<1>-R<32a>;

b) R<28>je-C(=Z<1>)-R<28a>;

c) R<40>je-C(=Z<1>)-R<40a>.

[0154] Ovde je takođe opisano jedinjenje Formule Ia ili Ic, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, koje ima jednu, dve ili tri od sledećih karakteristika:

a) R<32>je -O-C(=Z<1>)-R<32a>; pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; b) R<28>je-C(=Z<1>)-R<28a>; pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili<_>L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; c) R<40>je-C(=Z<1>)-R<40a>. pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

[0155] Ovde je takođe opisano jedinjenje Formule Ia ili Ic, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, koje ima jednu, dve ili tri od sledećih karakteristika:

a) R<40>je -C(=Z<1>)-R<40a>;

b) R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B;

c) R<32>je -OR<3>, kao što je -OH.

[0156] Ovde je takođe opisano jedinjenje Formule Ia ili Ic, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, koje ima jednu, dve, tri, ili četiri od sledećih karakteristika:

a) jedan od R<28a>, R<32a>, i R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B;

1

b) A<1>je odsutan;

c) A<2>je odsutan;

g) R<4>je 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>.

[0157] Ovde je takođe opisano jedinjenje formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, koje ima jednu, dve, tri, ili četiri od sledećih karakteristika:

a) Z<1>je O;

b) A<1>je odsutan;

d) B je

1 1

f) R<4>je 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>; i

g) R<32>je =O.

U gore navedenom, R<40a>može biti -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; ili -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B.

[0158] Ovde je takođe opisano jedinjenje formule:

a) Z<1>je O;

b) A<1>je odsutan;

e) B<1>je

NR<3>-(C(R<3>)2)n- ili

1 2

g) R<32>je -OH.

[0159] Ovde je takođe opisano jedinjenje formule:

1

g) R<32>je =O.

[0160] Ovde je takođe opisano jedinjenje formule:

a) Z<1>je O;

b) A<1>je odsutan;

ili

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu je arilen opciono supstituisan sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

g) R<32>je -OH.

[0161] Ovde je takođe opisano jedinjenje formule:

1 4

ili

1

g) R<4>je 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>; i

h) R<32>je -OH.

[0162] U Formuli Ia ili Ic, R<40a>može biti bilo koji organski deo, koji može imati molekulsku težinu (npr. zbir atomskih masa atoma supstituenta) manju od 15 g/mol, 50 g/mol, 100 g/mol, 150 g/mol, 200 g/mol, 250 g/mol, 300 g/mol, 350 g/mol, 400 g/ mol, 450 g/mol, ili 500 g/mol.

[0163] Jedinjenja prema pronalasku mogu obuhvatati farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja koja su ovde otkrivena. Reprezentativne "farmaceutski prihvatljive soli" mogu obuhvatati, na primer, soli rastvorljive i nerastvorljive u vodi, kao što su acetat, amsonat (4,4-diaminostilben-2,2-disulfonat), benzensulfonat, benzonat, bikarbonat, bisulfat, bitartrat, borat, bromid, butirat, kalcijum, kalcijum edetat, kamzilat, karbonat, hlorid, citrat, klavularijat, dihidrohlorid, edetat, edizilat, estolat, ezilat, fiunarat, gluceptat, glukonat, glutamat, glikolilarzanilat, heksafluorofosfat, heksilresorcinat, hidrabamin, hidrobromid, hidrohlorid, hidroksinaftoat, jodid, setionat, laktat, laktobionat, laurat, magnezijum, malat, maleat, mandelat, mezilat, metilbromid, metilnitrat, metil sulfat, mukat, napzilat, nitrat, amonijumova so N-metilglukamina, 3-hidroksi-2-naftoat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, 1,1-meten-bis-2-hidroksi-3-naftoat, einbonat, pantotenat, fosfat/difosfat, pikrat, poligalakturonat, propionat, ptoluensulfonat, salicilat, stearat, subacetat, sukcinat, sulfat, sulfosalicilat, suramat, tanat, tartrat, teoklat, tozilat, trietijodid, i soli valerata.

[0164] "Farmaceutski prihvatljiva so" može takođe uključiti i kisele i bazne adicione soli. "Farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so" se može odnositi na one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i karakteristike slobodnih baza, koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne, i koje se mogu graditi sa neorganskim kiselinama kao što su, ali nisu ograničene na kiseline iz grupe koju čine hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina i slično, i organske kiseline kao što su, ali bez ograničenja, sirćetna kiselina, 2,2-dihlorosirćetna kiselina, adipinska kiselina, alginska kiselina, askorbinska kiselina, asparaginska kiselina, benzensulfonska kiselina, benzojeva kiselina, 4-acetamidobenzojeva kiselina, kamforna kiselina, kamfor-10-sulfonska kiselina, kaprinska kiselina, kapronska kiselina, kaprilna kiselina, karbonska kiselina, cimetna kiselina, limunska kiselina, ciklamska kiselina, dodecilsumporna kiselina, etan-1,2-disulfonska kiselina,

1

etansulfonska kiselina, 2-hidroksietansulfonska kiselina, mravlja kiselina, fumarna kiselina, galaktarna kiselina, gentizinska kiselina, glukoheptonska kiselina, glukonska kiselina, glukuronska kiselina, glutaminska kiselina, glutarna kiselina, 2-okso-glutarna kiselina, glicerofosforna kiselina, glikolna kiselina, hipurinska kiselina, izobuterna kiselina, mlečna kiselina, laktobionska kiselina, laurinska kiselina, maleinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina, bademova kiselina, metansulfonska kiselina, sluzna kiselina, naftalen-1,5-disulfonska kiselina, naftalen-2-sulfonska kiselina, 1-hidroksi-2-naftoična kiselina, nikotinska kiselina, oleinska kiselina, orotna kiselina, oksalna kiselina, palmitinska kiselina, pamoična kiselina, propionska kiselina, piroglutaminska kiselina, pirogrožđana kiselina, salicilna kiselina, 4-aminosalicilna kiselina, sebacinska kiselina, stearinska kiselina jantarna kiselina, vinska kiselina, tiocijanska kiselina, p-toluensulfonska kiselina, trifluorosirćetna kiselina, undecilenska kiselina i slično.

[0165] "Farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so" se može odnositi na one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i karakteristike slobodnih kiselina, koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. Ove soli se mogu dobiti dodavanjem neorganske baze ili organske baze slobodnoj kiselini. Soli izvedene iz neorganskih baza mogu obuhvatati, ali nisu ograničene na, soli natrijuma, kalijuma, litijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, cinka, bakra, mangana, aluminijuma i slično. Na primer, neorganske soli mogu obuhvatati, ali nisu ograničene na, soli amonijuma, natrijuma, kalijuma, kalcijuma i magnezijuma. Soli izvedene iz organskih baza mogu obuhvatati, ali nisu ograničene na, soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisane amine obuhvatajući prirodno prisutne supstituisane amine, ciklične amine i bazične jonoizmenjivačke smole, kao što su amonijak, izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, dietanolamin, etanolamin, deanol, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kofein, prokain, hidrabamin, holin, betain, benetamin, benzatin, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, trietanolamin, trometamin, purini, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin, poliaminske smole i slično.

[0166] Osim ako nije drugačije navedeno, strukture prikazane ovde mogu takođe obuhvatati jedinjenja koja se razlikuju samo u prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju sadašnju strukturu osim zamene atoma vodonika deuterijumom ili tricijumom, ili zamene atoma ugljenika sa<13>C ili<14>C, ili zamene atoma azota sa<15>N, ili

1

zamene atoma kiseonika sa<17>O ili<18>O su unutar obima pronalaska. Takva izotopski obeležena jedinjenja su korisna kao istraživački ili dijagnostički alati.

[0167] U nekim realizacijama, jedan ili više atoma deuterijuma mogu biti uvedeni u PEG deo bilo kog jedinjenja iz ovog pronalaska. Mehanizmi za takve modifikacije su poznati u tehnici počevši od komercijalno dostupnih početnih materijala, kao što su izotopski obogaćeni gradivni blokovi hidroksilamina. U nekim realizacijama, tricijum ili deuterijum se mogu uvesti na poziciju C32 jedinjenja iz ovog pronalaska korišćenjem, na primer, komercijalno dostupnog izotopski čistog redukcionog sredstva i metoda poznatih stručnjacima. U nekim realizacijama,

<14>C se može uvesti u C40 karbamatnu grupu jedinjenja iz ovog pronalaska korišćenjem komercijalno dostupnih materijala i metoda poznatih stručnjacima u ovoj oblasti. U nekim realizacijama, izotop kao što je deuterijum ili tricijum može se uvesti u R<40a>supstituent jedinjenja Formule Ia, Ic, I ili II, korišćenjem komercijalno dostupnih početnih materijala i metoda poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

Metode sinteze otkrivenih jedinjenja

[0168] Jedinjenja ovog otkrića mogu biti dobijena različitim metodama, obuhvatajući standardnu hemiju. Pogodni sintetički putevi su prikazani na šemama datim u nastavku.

[0169] Jedinjenja bilo koje od ovde opisanih formula mogu se dobiti postupcima poznatim u oblasti organske sinteze kao što je delimično izloženo sledećim sintetičkim šemama i primerima. U dole opisanim šemama, dobro se razume da se zaštitne grupe za osetljive ili reaktivne grupe koriste tamo gde je to neophodno u skladu sa opštim principima ili hemijom. Zaštitnim grupama se manipuliše prema standardnim metodama organske sinteze (T. W. Greene & P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999). Ove grupe se uklanjaju u pogodnoj fazi sinteze jedinjenja korišćenjem metoda koje su lako očigledne stručnjacima u ovoj oblasti. Procesi selekcije, kao i reakcioni uslovi i redosled njihovog izvođenja, biće u skladu sa dobijanjem jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili tautomera.

[0170] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti pripremljena metodama koje izbegavaju upotrebu reakcija cikloadicije posredovane metalom koje zahtevaju upotrebu jedinjenja koja sadrže azide. Jedinjenja koja sadrže azide predstavljaju potencijalne bezbednosne opasnosti

1

povezane sa njihovom pripremom i skladištenjem (npr. eksplozija usled visokog energetskog razlaganja). Takođe, ovde pomenute reakcione šeme mogu da izbegnu upotrebu metala bakra ili rutenijuma u pretposlednjim ili krajnjim sintetičkim koracima, što može biti korisno. Izbegavanje upotrebe metala bakra ili rutenijuma u pretposlednjim ili krajnjim sintetičkim koracima smanjuje mogućnost kontaminacije konačnih jedinjenja nepoželjnim metalnim nečistoćama.

[0171] Rapamicin može biti skup polazni materijal, zato su poželjni dobri prinosi reakcija. Reakcione šeme ovde daju bolje prinose od drugih reakcionih šema. U reakcionim šemama ovde nema potrebe za alkilovanjem na C40-hidroksilu rapamicina, što je pogodno za obezbeđivanje čak 5 puta poboljšanog ukupnog prinosa u pripremanju dvovalentnih jedinjenja iz rapamicina u poređenju sa drugim reakcionim šemama.

[0172] Postoji dodatno sintetičko poboljšanje povezano sa boljim prinosima. Izbegavanje potrebe da se alkiluje na C40-hidroksilu daje čak 5 puta poboljšan ukupni prinos u pripremi dvovalentnih jedinjenja iz rapamicina.

[0173] Stručnjaci će prepoznati da li stereocentar postoji u bilo kom od jedinjenja ovog otkrića. Shodno tome, ovo otkriće može obuhvatati oba moguća stereoizomera (osim ako nije navedeno u sintezi) i može obuhvatati ne samo racemska jedinjenja već i pojedinačne enantiomere i/ili dijastereomere. Kada je jedinjenje poželjno kao pojedinačni enantiomer ili dijastereomer, ono se može dobiti stereospecifičnom sintezom ili razdvajanjem konačnog proizvoda ili bilo kog prikladnog intermedijera. Razdvajanje konačnog proizvoda, intermedijera ili polaznog materijala može se izvršiti bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u tehnici. Videti, na primer, "Stereochemistry of Organic Compounds" by E. L. Eliel, S. H. Wilen, i L. N. Mander (Wiley-lnterscience, 1994).

Priprema jedinjenja

[0174] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti dobivena od komercijalno dostupnih početnih materijala ili sintetizovana korišćenjem poznatih organskih, neorganskih i/ili enzimskih procesa.

1

[0175] Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu se dobiti na više načina koji su dobro poznati stručnjacima u oblasti organske sinteze. Primera radi, jedinjenja iz ovog otkrića mogu se sintetizovati korišćenjem metoda opisanih u nastavku, zajedno sa sintetičkim metodama poznatim u tehnici sintetičke organske hemije, ili njihovim varijacijama koje cene stručnjaci u ovoj oblasti. Ove metode mogu obuhvatati, ali nisu ograničene na one metode opisane u nastavku.

[0176] Termin "tautomeri" može se odnositi na skup jedinjenja koja imaju isti broj i tip atoma, ali se razlikuju po povezanosti veze i u ravnoteži su jedno sa drugim. "Tautomer" je jedan član ovog skupa jedinjenja. Obično se crta jedan tautomer, ali se može razumeti da ova jedinstvena struktura može predstavljati sve moguće tautomere koji mogu postojati. Primeri mogu obuhvatati tautomerizam enol-ketona. Kada se izvuče keton, može se razumeti da su i enolni i ketonski oblici deo pronalaska.

[0177] Pored tautomera koji mogu postojati u svim amidnim, karbonilnim i oksimskim grupama unutar jedinjenja iz ovog pronalaska, jedinjenja iz ove porodice lako se međusobno konvertuju preko vrsta sa otvorenim prstenom između dva glavna izomerna oblika, poznata kao piran i izomeri oksepana (prikazano ispod). Ova međukonverzija može biti podstaknuta jonima magnezijuma, blago kiselim uslovima ili solima alkilamina, kao što je opisano u sledećim referencama: i) Hughes, P. F.; Musser, J.; Conklin, M.; Russo, R.1992. Tetrahedron Lett. 33(33): 4739-32. ii) Zhu, T.2007. U.S. Patent 7,241,771; Wyeth. iii) Hughes, P.F. 1994. U.S. Patent 5,344,833; American Home Products Corp. Šema ispod pokazuje međukonverziju između izomera pirana i oksepana u jedinjenjima Formule I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb.

Izomer pirana

Izomer oksepana

vrste sa otvorenim prstenom

11

[0178] Kako se ova interkonverzija dešava u blagim uslovima, a termodinamička ravnotežna pozicija može da varira između različitih članova jedinjenja Formule I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb, oba izomera se razmatraju za jedinjenja Formule I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb. Radi kratkoće, prikazan je oblik izomera pirana svih intermedijera i jedinjenja Formule I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb.

Generalni pristupi dobivanja za bifunkcionalne rapaloge

[0179] Pozivajući se na donje šeme, rapamicin ima Formulu RAP,

gde R<16>je -OCH3; R<26>je =O; R<28>je -OH; R<32>je =O; i R<40>je -OH. "Rapalog" se odnosi na analog ili derivat rapamicina. Na primer, u vezi sa dole navedenim šemama, rapalog može biti rapamicin koji je supstituisan na bilo kojoj poziciji, kao što su R<16>, R<26>, R<28>, R<32>, ili R<40>. Inhibitor aktivnog mesta (AS inhibitor) je mTOR inhibitor aktivnog mesta. U određenim realizacijama, AS inhibitor je prikazan sa B, u Formuli I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb.

Bifunkcionalni rapalozi serije 1

[0180] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga Serije 1 je prikazana na šemi 1 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7, i r = 1 do 6. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Karbamatni deo, gde je Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 1. Bifunkcionalni rapalozi serije 1

Bifunkcionalni rapalozi serije 2

[0181] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 2 je prikazana na šemi 2 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Pred-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 2. Bifunkcionalni rapalozi serije 2

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 3

[0182] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 3 je prikazana na šemi 3 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 3. Bifunkcionalni rapalozi serije 3

Post-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 4

[0183] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 4 je prikazana na šemi 4 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Pred- i post-vezujući deo amina mogu svaki obuhvatati supstitucije, kao što je R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 4. Bifunkcionalni rapalozi serije 4

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin Post-vezujući deo koji

Bifunkcionalni rapalozi serije 5

[0184] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 5 je prikazana na šemi 5 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, pred-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor

11

aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 5. Bifunkcionalni rapalozi serije 5

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 6

[0185] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 6 je prikazana na šemi 6 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 6. Bifunkcionalni rapalozi serije 6

Post-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 7

[0186] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 7 je prikazana na šemi 7 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Svaki od pred- i post-vezujućih delova amina mogu obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 7. Bifunkcionalni rapalozi serije 7

Pred-vezujući deo

koji sadrži amin Post-vezujući deo

Bifunkcionalni rapalozi serije 8

[0187] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 8 je prikazana na šemi 8 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I, Ia, Ib, Ic, II, ili IIb), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 8. Bifunkcionalni rapalozi serije 8

Post-vezujući deo Post-vezujući deo

koji sadrži amin koji sadrži amin

Farmaceutske kompozicije

[0188] Drugi aspekt obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata jedinjenje iz ovog pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer ili stereoizomer, i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili ekscipijenta.

[0189] U realizacijama farmaceutskih kompozicija, jedinjenje iz ovog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, mogu biti uključeni u terapeutski efikasnu količinu.

11

[0190] U nekim realizacijama, kompozicija sadrži smešu

ili njihov stereoizomer ili tautomer i

ili njihov stereoizomer ili tautomer. U nekim takvim realizacijama, kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

[0191] U nekim realizacijama, kompozicija sadrži smešu

U nekim takvim realizacijama, kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

11

[0192] Primena otkrivenih jedinjenja ili kompozicija može se postići bilo kojim načinom primene terapeutskih sredstava. Ovi načini mogu obuhvatati sistemsku ili lokalnu primenu kao što su oralni, nazalni, parenteralni, transdermalni, potkožni, vaginalni, bukalni, rektalni, lokalni, intratekalni ili intrakranijalni načini primene.

[0193] U određenim realizacijama, primena može obuhvatati oralnu primenu, davanje kao supozitorija, lokalni kontakt, intravenozno, parenteralno, intraperitonealno, intramuskularno, intralezionalno, intratekalno, intrakranijalno, intranazalno ili subkutano davanje, ili implantaciju uređaja sa sporim oslobađanjem na primer, mini-osmotska pumpa, subjektu. Primena može biti na bilo koji način, obuhvatajući parenteralni i transmukozni (npr. bukalni, sublingvalni, palatalni, gingivalni, nazalni, vaginalni, rektalni ili transdermalni). Parenteralna primena obuhvata, npr., intravensku, intramuskularnu, intraarteriolnu, intradermalnu, subkutanu, intraperitonealnu, intraventrikularnu i intrakranijalnu. Drugi načini isporuke obuhvataju, ali nisu ograničeni na, upotrebu lipozomalnih formulacija, intravenskih infuzija, transdermalnih flastera, itd. Kompozicije iz ovog pronalaska mogu se davati transdermalno, lokalnim putem, formulisane kao štapići za aplikator, rastvori, suspenzije, emulzije, gelovi, kreme, masti, paste, želei, boje, praškovi i aerosoli. Oralni preparati obuhvataju tablete, pilule, prah, dražeje, kapsule, tečnosti, pastile, kapsule, gelove, sirupe, suspenzije, itd., pogodne za gutanje od strane pacijenta. Preparati u čvrstom obliku obuhvataju praškove, tablete, pilule, kapsule, kapsule, supozitorije i disperzibilne granule. Preparati u tečnom obliku obuhvataju rastvore, suspenzije i emulzije, na primer, vodu ili rastvore vode/propilen glikola. Kompozicije iz ovog pronalaska mogu dodatno obuhvatati komponente koje obezbeđuju produženo oslobađanje i/ili udobnost. Takve komponente obuhvataju visoku molekulsku težinu, anjonske mukomimetičke polimere, želirne polisaharide i fino podeljene supstrate nosača leka. Ove komponente su detaljnije razmotrene u U.S. patentima br.4,911,920; 5,403,841; 5,212,162; i 4,861,760. Kompozicije prema ovom pronalasku takođe mogu biti isporučene kao mikrosfere za sporo oslobađanje u telu. Na primer, mikrosfere se mogu davati intradermalnim ubrizgavanjem mikrosfera koje sadrže lek, koje se polako oslobađaju potkožno (videti Rao, J. Biomater Set Polym. Ed.7:623-645, 1995; kao formulacije biorazgradivog i injekcijskog gela (videti, npr., Gao Pharm. Res.12:857-863, 1995); ili, kao mikrosfere za oralnu primenu (videti, npr., Eiles, J. Pharm. Pharmacol. 49:669-674, 1997). U drugoj realizaciji, formulacije kompozicija iz ovog pronalaska mogu biti isporučene upotrebom lipozoma koji se spajaju sa

11

ćelijskom membranom ili su endocitozirani, tj., upotrebom receptorskih liganada vezanih za lipozom, koji se vezuju za receptore proteina površinske membrane ćelije, što dovodi do endocitoze. Korišćenjem lipozoma, posebno kada površina lipozoma nosi receptorske ligande specifične za ciljne ćelije, ili su na drugi način prvenstveno usmereni na određeni organ, može se fokusirati isporuka kompozicija iz ovog pronalaska u ciljne ćelije in vivo. (videti, npr., Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13:293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol.6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm.46: 1576-1587, 1989). Kompozicije prema ovom pronalasku takođe mogu biti isporučene kao nanočestice.

[0194] U zavisnosti od nameravanog načina primene, otkrivena jedinjenja ili farmaceutske kompozicije mogu biti u čvrstom, polučvrstom ili tečnom doznom obliku, kao što su, na primer, injekcije, tablete, supozitorije, pilule, kapsule sa vremenskim oslobađanjem, eliksiri, tinkture, emulzije, sirupi, praškovi, tečnosti, suspenzije ili slično, ponekad u jediničnim dozama i u skladu sa konvencionalnom farmaceutskom praksom. Na sličan način, oni se takođe mogu davati u intravenoznom (i bolusnom i infuzijskom), intraperitonealnom, intratekalnom, supkutanom ili intramuskularnom obliku, i sve koristeći oblike koji su dobro poznati stručnjacima u farmaceutskoj oblasti.

[0195] Ilustrativne farmaceutske kompozicije su tablete i želatinske kapsule koje sadrže jedinjenje prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač, kao što je a) razblaživač, npr., prečišćena voda, trigliceridna ulja, kao što je hidrogenizovano ili delimično hidrogenizovano biljno ulje, ili njihove smeše, kukuruzno ulje, maslinovo ulje, suncokretovo ulje, šafranovo ulje, riblje ulje, kao što su EPA ili DHA, ili njihovi estri ili trigliceridi ili njihove smeše, omega-3 masne kiseline ili njihovi derivati, laktoza, dekstroza, saharoza, manitol, sorbitol, celuloza, natrijum, saharin, glukoza i/ili glicin; b) lubrikant, npr. silicijum dioksid, talk, stearinska kiselina, njena magnezijumova ili kalcijumova so, natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i/ili polietilen glikol; za tablete takođe; c) vezivo, npr. magnezijum-aluminijum silikat, skrobna pasta, želatin, tragakant, metilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza, magnezijum karbonat, prirodni šećeri kao što su glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume kao što su bagrem tragakant ili natrijum alginat, voskovi i/ili polivinilpirolidon, po želji; d) dezintegrant, npr. skrob, agar, metil celuloza, bentonit, ksantan guma, alginska kiselina ili njena natrijumova so, ili šumeće smeše; e) absorbent, boja, aroma i zaslađivač; f) emulgator ili disperziono sredstvo, kao što je Tween

11

80, Labrasol, HPMC, DOSS, kaproil 909, labrafac, labrafil, peceol, transcutol, capmul MCM, capmul PG-12, captek 355, gelucire, vitamin E TGPS ili drugi prihvatljiv emulgator; i/ili g) sredstvo koje poboljšava apsorpciju jedinjenja kao što je ciklodekstrin, hidroksipropilciklodekstrin, PEG400, PEG200.

[0196] Tečne, posebno injekcione, kompozicije mogu se, na primer, pripremiti rastvaranjem, disperzijom, itd. Na primer, otkriveno jedinjenje je rastvoreno u ili pomešano sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračem kao što je, na primer, voda, fiziološki rastvor, vodeni rastvor dekstroza, glicerol, etanol i slično, da bi se na taj način formirao izotonični rastvor ili suspenzija za injekcije. Za solubilizaciju otkrivenih jedinjenja mogu se koristiti proteini kao što su albumin, hilomikronske čestice ili serumski proteini.

[0197] Otkrivena jedinjenja se takođe mogu formulisati kao supozitorije koje se mogu pripremiti od masnih emulzija ili suspenzija; korišćenjem polialkilen glikola kao što je propilen glikol, kao nosač.

[0198] Otkrivena jedinjenja se takođe mogu primenjivati u obliku sistema za isporuku lipozoma, kao što su male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule i multilamelarne vezikule. Lipozomi se mogu formirati od različitih fosfolipida, koji sadrže holesterol, stearilamin ili fosfatidilholine. U nekim realizacijama, film lipidnih komponenti je hidriran sa vodenim rastvorom leka da bi se formirao lipidni sloj koji inkapsulira lek, kao što je opisano na primer u U.S. Patentu br.5,262,564.

[0199] Otkrivena jedinjenja se takođe mogu isporučiti upotrebom monoklonskih antitela kao pojedinačnih nosača na koje su spojena otkrivena jedinjenja. Otkrivena jedinjenja takođe mogu biti spojena sa rastvorljivim polimerima kao nosači leka koji se mogu ciljati. Takvi polimeri mogu obuhvatati polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksipropilmetakrilamid-fenol, polihidroksietilaspanamidfenol ili polietilenoksidpolilizin supstituisan sa palmitoil ostacima. Štaviše, otkrivena jedinjenja mogu biti spojena sa klasom biorazgradivih polimera korisnih u postizanju kontrolisanog oslobađanja leka, na primer, polimlečna kiselina, poliepsilon kaprolakton, polihidroksi butirna kiselina, poliortoestri, poliacetali, polidihidropirani, policijanoakrilati i umreženi ili amfipatski blok kopolimeri hidrogelova. U jednoj realizaciji,

11

otkrivena jedinjenja nisu kovalentno vezana za polimer, na primer, polimer polikarboksilne kiseline ili poliakrilat.

[0200] Parenteralna injekcija se generalno koristi za supkutane, intramuskularne ili intravenske injekcije i infuzije. Injekcije se mogu pripremiti u konvencionalnim oblicima, bilo kao tečni rastvori ili suspenzije ili čvrsti oblici pogodni za rastvaranje u tečnosti pre injekcije.

[0201] Drugi aspekt pronalaska se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili tautomer, iz predmetnog pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač. Farmaceutski prihvatljivi nosač može dalje da obuhvata ekscipijent, razblaživač ili surfaktant.

[0202] Kompozicije se mogu pripremiti prema konvencionalnim postupcima mešanja, granulacije ili oblaganja, redom, a predmetne farmaceutske kompozicije mogu sadržati od oko 0,1% do oko 99%, od oko 5% do oko 90%, ili od oko 1% do oko 99% oko 20% otkrivenog jedinjenja po težini ili zapremini.

[0203] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu se koristiti u kombinaciji jedno sa drugim, sa drugim aktivnim sredstvima za koje se zna da su korisna u lečenju raka, autoimunih bolesti, inflamatornih bolesti, metaboličkih bolesti, neurodegenerativnih bolesti, gljivične infekcije ili odbacivanja transplantata, ili sa dodatnim sredstvima koja možda nisu efikasna sami, ali mogu doprineti efikasnosti aktivnog sredstva. Ovde opisana jedinjenja mogu da se koriste u kombinaciji sa drugim aktivnim sredstvima za koja je poznato da su sredstva za dugovečnost ili sredstva protiv starenja.

[0204] U realizacijama farmaceutskih kompozicija, farmaceutska kompozicija može obuhvatati drugo sredstvo (npr. terapeutsko sredstvo). U realizacijama farmaceutskih kompozicija, farmaceutska kompozicija može obuhvatati drugo sredstvo (npr. terapeutsko sredstvo) u terapeutski efikasnoj količini. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv raka. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je imunoterapeutsko sredstvo. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je imuno-onkološko sredstvo. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv autoimune bolesti. U realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv inflamatorne bolesti. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je

12

sredstvo protiv neurodegenerativne bolesti. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv metaboličke bolesti. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv kardiovaskularne bolesti. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo protiv starenja. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo za dugovečnost. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo za lečenje ili prevenciju odbacivanja transplantata. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je sredstvo za lečenje ili prevenciju gljivične infekcije. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je represor imunog sistema. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je modulator mTOR. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je inhibitor mTOR. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je inhibitor mTOR aktivnog mesta. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je rapamicin. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je analog rapamicina. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je inhibitor mTOR puta. U određenim realizacijama, drugo sredstvo je inhibitor CDK4/6; anti-PD1/PD-L1, inhibitor PI3K; ili inhibitor Ras.

[0205] Sredstvo protiv raka“ ili „lek protiv raka“ se koristi u skladu sa svojim jednostavnim uobičajenim značenjem i odnosi se na kompoziciju (npr. jedinjenje, lek, antagonist, inhibitor, modulator) koja ima antineoplastična svojstva ili sposobnost da inhibira rast ili proliferaciju ćelija. U nekim realizacijama, sredstvo protiv raka je hemoterapeutik. U nekim realizacijama, sredstvo protiv raka je sredstvo koje je odobrila FDA ili slična regulatorna agencija zemlje koja nije SAD, za lečenje raka. Primeri sredstava protiv raka obuhvataju, ali nisu ograničeni na, rapamicin, analog rapamicina, bevacizumab, PP242, ΓN 128, MLN0128, antiandrogene (npr., Casodex, Flutamid, MDV3100, ili ARN-509), inhibitore MEK (npr. MEK1, MEK2, ili MEK1 i MEK2) (npr. XL518, CI-1040, PD035901, selumetinib/ AZD6244, GSK1120212/ trametinib, GDC-0973, ARRY-162, ARRY-300, AZD8330, PD0325901, U0126, PD98059, TAK-733, PD318088, AS703026, BAY 869766), sredstva za alkilovanje (npr., ciklofosfamid, ifosfamid, hlorambucil, busulfan, melfalan, mehloretamin, uramustin, tiotepa, nitrozoureje, nitrogen mustard (npr., mehloroetamin, ciklofosfamid, hlorambucil, melfalan), etilenimine i metilmelamine (npr., heksametilmelamin, tiotepa), alkil sulfonate (npr., busulfan), nitrozoureje (npr., karmustin, lomustin, semustin, streptozocin), triazene (dekarbazin)), anti-metabolite (npr., 5- azatioprin, leukovorin, capecitabin, fludarabin, gemcitabin, pemetreksed, raltitreksed, analog folne kiseline (npr., metotreksat), analoge pirimidina (npr., fluorouracil, floksouridin, citarabin), analoge purina (npr., merkaptopurin, tiogvanin, pentostatin), itd.), biljne alkaloide (npr., vinkristin, vinblastin, vinorelbin, vindesin, podofilotoksin, paklitaksel, docetaksel, itd.), inhibitore topoizomeraze (npr., irinotekan, topotekan, amsakrin, etopozid (VP 16), etopozid fosfat, tenipozid, itd.), antitumorske antibiotike (npr., doksorubicin, adriamicin, daunorubicin, epirubicin, aktinomicin, bleomicin, mitomicin, mitoksantron, plikamicin, itd.), jedinjenja na bazi platine (npr. cisplatin, oksaloplatin, karboplatin), antracendion (npr. mitoksantron), supstituisana urea (npr., hidroksiurea), derivat metil hidrazina (npr., prokarbazin), adrenokortikalni supresor (npr., mitotan, aminoglutetimid), epipodofilotoksine (npr., etopozid), antibiotike (npr., daunorubicin, doksorubicin, bleomicin), enzime (npr., L-asparaginaza), inhibitore signalizacije protein kinaze aktivirane mitogenom (npr. U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, wortmanin, ili LY294002), inhibitore mTOR, antitela (npr., rituksan), 5-aza-2'-deoksicitidin, doksorubicin, vinkristin, etopozid, gemcitabin, imatinib (Gleevec.RTM.), geldanamicin, 17-N-Alilamino-17-Demetoksigeldanamicin (17-AAG), bortezomib, trastuzumab, anastrozol; inhibitore angiogeneze; antiandrogen, antiestrogen; antisens oligonukleotide; modulatore gena apoptoze; regulatore apoptoze; arginin deaminazu; antagoniste BCR/ABL; derivate beta laktama; inhibitor bFGF; bikalutamid; derivate kamptotecina; inhibitore kazein kinaze (ICOS); analoge klomifena; citarabin daclikimab; deksametazon; agoniste estrogena; antagoniste estrogen; etanidazol; etopozid fosfat; eksemestan; fadrozol; finasterid; fludarabin; fluoro daunorubicin hidrohlorid; gadolinijum teksafirin; galijum nitrat; inhibitore želatinaze; gemcitabin; inhibitore glutationa; hepsulfam; imunostimulatorne peptide; inhibitor receptora faktora rasta sličnog insulinu-1; agoniste interferona; interferone; interleukine; letrozol; faktor inhibicije leukemije; leukocitni alfa interferon; leuprolid+estrogen+progesteron; leuprorelin; inhibitore matrilizina; inhibitore matriks metaloproteinaze; inhibitor MIF; mifepriston; neusklađena dvolančana RNK; monoklonsko antitelo; ekstrakt mikobakterijskog ćelijskog zida; modulatore azotnog oksida; oksaliplatin; panomifen; pentrozol; inhibitore fosfataze; inhibitor aktivatora plazminogena; kompleks platine; jedinjenja platine; prednizon; inhibitore proteazoma; imunomodulator na bazi proteina A; inhibitor protein kinaze C; inhibitore protein tirozin fosfataze; inhibitore purin nukleozid fosforilaze; inhibitore ras farnezil protein transferaze; inhibitore ras; inhibitor ras-GAP; ribozime; inhibitore transdukcije signala; modulatore transdukcije signala; jednolančani protein koji vezuje antigen; inhibitor matičnih ćelija; inhibitore deobe matičnih ćelija; inhibitore stromelizina; sintetički glikozaminoglikani; tamoksifen metijodid; inhibitore telomeraze; tiroidni stimulišući hormon; inhibitore translacije; inhibitore tirozin kinaze; antagoniste receptora urokinaze; steroide (npr. deksametazon), finasterid, inhibitore aromataze, agoniste gonadotropin-oslobađajućeg hormona (GnRH) kao što su goserelin ili leuprolid, adrenokortikosteroide (npr. prednizon), progestine (npr., hidroksiprogesteron kaproat, megestrol acetat, medroksiprogesteron acetat), estrogene (npr., dietilstilbestrol, etinil estradiol), antiestrogen (npr., tamoksifen), androgene (npr., testosteron propionat, fluoksimesteron), antiandrogen (npr., flutamid), imunostimulanse (npr., Bacillus Calmette-Guerin (BCG), levamizol, interleukin-2, alfa-interferon, itd.), monoklonska antitela (npr., anti-CD20, anti-HER2, anti-CD52, anti-HLA-DR, i anti-VEGF monoklonska antitela), imunotoksine (npr., konjugat anti-CD22 monoklonsko antitelo-kalihemicin, anti-CD22 konjugat monoklonsko antitelo-pseudomonas egzotoksin, itd.), radioimunoterapiju (npr., anti-CD20 monoklonsko antitelo konjugovano sa<U 1>ln,<90>Y, ili<131>I, itd.), triptolid, homoharingtonin, daktinomicin, doksorubicin, epirubicin, topotekan, itrakonazol, vindezin, cerivastatin, vinkristin, deoksiadenozin, sertralin, klorid pitavastatin, irinotekan, klofazimin, 5-noniloksitrptamin, vemurafenib, dabrafenib, erlotinib, gefitinib, inhibitore EGFR, receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR)-ciljana terapija ili terapeutik (npr. gefitinib (Iressa<™>), erlotinib (Tarceva<™>), cetuksimab (Erbitux<™>), lapatinib (Tykerb<™>), panitumumab (Vectibix<™>), vandetanib (Caprelsa<™>), afatinib/BIBW2992, CI-1033/kanertinib, neratinib/HKI-272, CP-724714, TAK-285, AST-1306, ARRY334543, ARRY-380, AG-1478, dakomitinib/PF299804, OSI-420/dezmetil erlotinib, AZD8931, AEE788, pelitinib/EKB-569, CUDC-101, WZ8040, WZ4002, WZ3146, AG-490, XL647, PD153035, BMS-599626), sorafenib, imatinib, sunitinib, dasatinib, pirolo benzodiazepine (npr. tomajmicin), karboplatin, analoge CC-1065 i CC-1065 uključujući amino-CBI, nitrogen mustarde (kao što su hlorambucil i melfalan), dolastatin i analoge dolastatina (uključujući auristatine: npr. monometil auristatin E), antraciklinske antibiotike (kao što su doksorubicin, daunorubicin, itd.), duokarmicine i analoge duokarmicina, enediine (kao što su neokarzinostatin i kalihemicini), derivate leptomicina, majtanzinoide i analoge majtanzinoida (npr. mertanzin), metotreksat, mitomicin C, taksoidi, vinka alkaloidi (kao što su vinblastin i vinkristin), epotiloni (npr. epotilon B), kamptotecin i njegovi klinički analozi topotekan i irinotekan, ΓNK128, PP242, PP121, MLN0128, AZD8055, AZD2014, VP-BEZ235, BGT226, SF1126, Torin 1, Torin 2, WYE 687, so WYE 687 (npr., hidrohlorid), PF04691502, PI- 103, CC-223, OSI-027, XL388, KU-0063794, GDC-0349, PKI-587, rapamicin, deforolimus (AP23573, MK-8669, ridaforolimus), temsirolimus (CCI-779), ABT478, everolimus (RAD001) ili slično.

mTOR i metode lečenja

12

[0206] Termin "mTOR" se odnosi na protein "mehanička meta rapamicina (serin/treonin kinaza)" ili "meta rapamicina kod sisara". Termin "mTOR" može da se odnosi na nukleotidnu sekvencu ili sekvencu proteina humanog mTOR (npr., Entrez 2475, Uniprot P42345, RefSeq NM_004958, ili RefSeq NP_004949) (SEQ ID NO: 1). Termin "mTOR" može obuhvatati i divlji tip nukleotidnih sekvenci ili proteina, kao i bilo koje njihove mutante. U nekim realizacijama, "mTOR" je mTOR divljeg tipa. U nekim realizacijama, "mTOR" je jedan ili više mutantnih oblika. Termin "mTOR" XYZ može se odnositi na nukleotidnu sekvencu ili protein mutantnog mTOR pri čemu amino kiselina mTOR sa brojem Y mTOR koja normalno ima X aminokiselinu u divljem tipu, umesto toga ima Z aminokiselinu u mutantu. U realizacijama, mTOR je humani mTOR. U realizacijama, mTOR ima nukleotidnu sekvencu koja odgovara referentnom broju GL206725550 (SEQ ID NO:2). U realizacijama, mTOR ima nukleotidnu sekvencu koja odgovara RefSeq NM_004958.3 (SEQ ID NO:2). U realizacijama, mTOR ima proteinsku sekvencu koja odgovara referentnom broju GL4826730 (SEQ ID NO: 1). U realizacijama, mTOR ima proteinsku sekvencu koja odgovara RefSeq NP_004949.1 (SEQ ID NO: 1). U realizacijama, mTOR ima sledeću sekvencu aminokiselina:

[0207] U realizacijama, mTOR je mutantni mTOR. U realizacijama, mutantni mTOR je povezan sa bolešću koja nije povezana sa divljim tipom mTOR. U realizacijama, mTOR može obuhvatati najmanje jednu mutaciju amino kiseline (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ili 30 mutacija, ili bilo koji opseg koji se iz njih može izvesti) u poređenju sa gornjom sekvencom.

[0208] Termin "mTORC1" se odnosi na proteinski kompleks koji obuhvata mTOR i Raptor (protein povezan sa regulacijom mTOR). mTORC1 takođe može obuhvatati MLST8 (smrtonosan za sisare sa SEC 13 proteinom 8), PRAS40 i/ili DEPTOR. mTORC1 može da funkcioniše kao senzor nutrijenata/energije/redoks i regulator sinteze proteina. Termin "mTORC1 put" ili "mTORC1 put transdukcije signala" može se odnositi na ćelijski put koji obuhvata mTORC1. Put mTORC1 obuhvata komponente puta uzvodno i nizvodno od mTORC1. Put mTORC1 je signalni put koji je modulisan modulacijom aktivnosti mTORC1. U realizacijama, mTORC1 put je signalni put koji je modulisan modulacijom aktivnosti mTORC1, ali ne i modulacijom aktivnosti mTORC2. U realizacijama, mTORC1 put je signalni put koji je moduliran u većoj meri modulacijom aktivnosti mTORC1 nego modulacijom aktivnosti mTORC2.

12

[0209] Termin "mTORC2" se odnosi na proteinski kompleks koji obuhvata mTOR i RICTOR (pratilac mTOR-a neosetljiv na rapamicin). mTORC2 takođe može obuhvatati GβL, mSIN1 (protein 1 koji deluje na protein kinazu aktiviran stresom sisara), Protor 1/2, DEPTOR, TTI1 i/ili TEL2. mTORC2 može regulisati ćelijski metabolizam i citoskelet. Termin "mTORC2 put" ili "mTORC2 put transdukcije signala" može se odnositi na ćelijski put obuhvatajući mTORC2. Put mTORC2 obuhvata komponente puta uzvodno i nizvodno od mTORC2. Put mTORC2 je signalni put koji je modulisan modulacijom aktivnosti mTORC2. U realizacijama, mTORC2 put je signalni put koji je modulisan modulacijom aktivnosti mTORC2, ali ne i modulacijom aktivnosti mTORC1. U realizacijama, mTORC2 put je signalni put koji je moduliran u većoj meri modulacijom aktivnosti mTORC2 nego modulacijom aktivnosti mTORC1.

[0210] Termin "rapamicin" ili "sirolimus" se odnosi na makrolid koji proizvodi bakterija Streptomyces hygroscopicus. Rapamicin može sprečiti aktivaciju T ćelija i B ćelija. Rapamicin ima IUPAC naziv (3S,6R,7E,9R, 10A, 12R, 14S, 15E, 17E, 19E,21S,23S,26R,27R,34aS)- 9, 10, 12, 13, 14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-heksadecahidro-9,27-dihidroksi-3-[(1R)-2-[( 1 S,3 R,4R)-4-hidroksi-3-metoksicikloheksil]-1-metiletil]-10,21-dimetoksi-6,8,12, 14,20,26-heksametil-23,27-epoksi-3H-pirido[2,1-c][1,4]-oksaazaciklohentriakontin-1,5, 11,28,29(4H,6H,31H)-penton. Rapamicin ima CAS broj 53123-88-9. Rapamicin se može proizvesti sintetički (npr. hemijskom sintezom) ili korišćenjem proizvodnog postupka koji ne obuhvata upotrebu Streptomyces hygroscopicus.

[0211] „Analog“ se koristi u skladu sa svojim jednostavnim uobičajenim značenjem u okviru hemije i biologije i odnosi se na hemijsko jedinjenje koje je strukturno slično drugom jedinjenju (tj., tzv. "referentnom" jedinjenju), ali se razlikuje po sastavu, npr. u zameni jednog atoma atomom drugog elementa, ili u prisustvu određene funkcionalne grupe, ili zameni jedne funkcionalne grupe drugom funkcionalnom grupom, ili apsolutnoj stereohemiji jednog ili više hiralnih centara referentne jedinjenje, obuhvatajući njegove izomere.

[0212] Termin "analog rapamicina" ili "rapalog" odnosi se na analog ili derivativ (npr., prolek) rapamicina.

[0213] Termini "inhibitor aktivnog mesta mTOR" i "ATP mimetik" odnose se na jedinjenje koje inhibira aktivnost mTOR (npr. aktivnost kinaze) i vezuje se za aktivno mesto mTOR (npr.

12

ATP vezujuće mesto, preklapa se sa ATP vezujućim mestom, blokirajući pristup ATP mestu vezivanja za ATP mTOR). Primeri mTOR inhibitora aktivnog mesta obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ΓNK128, PP242, PP121, MLN0128, AZD8055, AZD2014, NVP-BEZ235, BGT226, SF1126, Torin 1, Torin 2, WYE 687, so WYE 687 (npr., hidrohlorid), PF04691502, PI-103, CC-223, OSI-027, XL388, KU-0063794, GDC-0349, i PKI-587. U realizacijama, inhibitor mTOR aktivnog mesta je asTORi. U nekim realizacijama, "inhibitor aktivnog mesta" se može odnositi na "inhibitor aktivnog mesta mTOR".

[0214] Termin "FKBP" se odnosi na protein peptidil-prolil cis-trans izomerazu. Za neograničavajuće primere FKBP-a, pogledajte Cell Mol Life Sci.2013 Sep;70(18):3243-75. U realizacijama, "FKBP" se može odnositi na "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP 1 A." U realizacijama, "FKBP" se može odnositi na ljudski protein. U termin "FKBP" uključeni su divlji tip i mutantni oblici proteina. U realizacijama, "FKBP" se može odnositi na ljudski protein divljeg tipa. U realizacijama, "FKBP" se može odnositi na ljudsku nukleinsku kiselinu divljeg tipa. U realizacijama, FKBP je mutant FKBP. U realizacijama, mutant FKBP je povezan sa bolešću koja nije povezana sa divljim tipom FKBP. U realizacijama, FKBP obuhvata bar jednu mutaciju amino kiseline (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ili 30 mutacija, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti) u poređenju sa divljim tipom FKBP.

[0215] Termin "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP1A" može se odnositi na protein "Peptidilprolil cis-trans izomerazu FKBP 1 A." U realizacijama, "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP 1 A" se mogu odnositi na ljudski protein. Uključeni u termin "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP 1 A" su divlji tip i mutantni oblici proteina. U realizacijama, "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP 1 A" se mogu odnositi na protein povezan sa Entrez genom 2280, OMIM 186945, UniProt P62942, i/ili RefSeq (protein) NP_000792 (SEQ ID NO:3). U realizacijama, referentni brojevi neposredno iznad mogu se odnositi na protein, i povezane nukleinske kiseline, poznate na datum podnošenja ove prijave. U realizacijama, "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP 1 A" se mogu odnositi na divlji tip humanog proteina. U realizacijama, "FKBP-12" ili "FKBP 12" ili "FKBP1A" se mogu odnositi na divlji tip ljudske nukleinske kiseline. U realizacijama, FKBP-12 je mutant FKBP-12. U realizacijama, mutant FKBP-12 je povezan sa bolešću koja nije povezana sa divljim tipom FKBP-12. U realizacijama, FKBP-12 može obuhvatati najmanje jednu mutaciju amino kiseline (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,

12

17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ili 30 mutacija, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti) u poređenju sa divljim tipom FKBP-12. U realizacijama, FKBP-12 ima proteinsku sekvencu koja odgovara referentnom broju GE206725550. U realizacijama, FKBP-12 ima proteinsku sekvencu koja odgovara RefSeq NP_000792.1 (SEQ ID NO:3).

[0216] Termin "4E-BP1" ili "4EBP1" ili "EIF4EBP1" se odnosi na protein "Eukariotski faktor inicijacije translacije 4E-vezujući protein 1." U realizacijama, "4E-BP1" ili "4EBP1" ili "EIF4EBP 1" se mogu odnositi na ljudski protein. Uključeni u termin "4E-BP 1" ili "4EBP 1" ili "EIF4EBP1" su divlji tip i mutantni oblici proteina. U realizacijama, "4E-BP1" ili "4EBP1" ili "EIF4EBP1" se mogu odnositi na protein povezan sa Entrez genom 1978, OMIM 602223, UniProt Q13541, i/ili RefSeq (protein) NP_004086 (SEQ ID NO:4). U realizacijama, referentni brojevi neposredno iznad mogu se odnositi na protein, i povezane nukleinske kiseline, poznate na datum podnošenja ove prijave. U realizacijama, "4E-BP 1" ili "4EBP1" ili "EIF4EBP1" se mogu odnositi na divlji tip humanog proteina. U realizacijama, "4E-BP1" ili "4EBP1" ili "EIF4EBP1" se mogu odnositi na divlji tip ljudske nukleinske kiseline. U realizacijama, 4EBP1 je mutant 4EBP1. U realizacijama, mutant 4EBP1 je povezan sa bolešću koja nije povezana sa divljim tipom 4EBP1. U realizacijama, 4EBP1 može obuhvatati najmanje jednu mutaciju amino kiseline (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ili 30 mutacija, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti) u poređenju sa divljim tipom 4EBP1. U realizacijama, 4EBP1 ima proteinsku sekvencu koja odgovara referentnom broju GL4758258. U realizacijama, 4EBP1 ima proteinsku sekvencu koja odgovara RefSeq NP_004086.1 (SEQ ID NO: 4).

[0217] Termin "Akt" se odnosi na serin/treonin specifičnu protein kinazu uključenu u ćelijske procese kao što su metabolizam glukoze, apoptoza, proliferacija i druge funkcije, takođe poznate kao "protein kinaza B" (PKB) ili "Akt1." U realizacijama, "Akt" ili "AM" ili "PKB" se mogu odnositi na ljudski protein. Uključeni u termin "Akt" ili "Akt1" ili "PKB" su divlji tip i mutantni oblici proteina. U realizacijama, "Akt" ili "Akt1" ili "PKB" se mogu odnositi na protein povezan sa Entrez genom 207, OMIM 164730, UniProt P31749, i/ili RefSeq (protein) NP_005154 (SEQ ID NO:5). U realizacijama, referentni brojevi neposredno iznad mogu se odnositi na protein, i povezane nukleinske kiseline, poznate na datum podnošenja ove prijave. U realizacijama, "Akt" ili "Akt1" ili "PKB" se mogu odnositi na divlji tip humanog proteina. U realizacijama, "Akt" ili "Akt1" ili "PKB" se mogu odnositi na divlji tip ljudske nukleinske

12

kiseline. U realizacijama, Akt je mutant Akt. U realizacijama, mutant Akt je povezan sa bolešću koja nije povezana sa divljim tipom Akt. U realizacijama, Akt može obuhvatati najmanje jednu mutaciju amino kiseline (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ili 30 mutacija, ili bilo koji opseg koji se iz njega može izvesti) u poređenju sa divljim tipom Akt. U realizacijama, Akt ima proteinsku sekvencu koja odgovara referentnom broju GI: 62241011. U realizacijama, Akt ima proteinsku sekvencu koja odgovara RefSeq NP_005154.2 (SEQ ID NO:5).

[0218] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz bilo kog od Primera 1-152 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer ili stereoizomer za upotrebu u postupku lečenja, prevencije ili smanjenja rizika od bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR. Postupak može da obuhvata davanje subjektu koji pati od ili je podložan razvoju bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR-om, terapeutski efikasne količine jednog ili više navedenih jedinjenja.

[0219] U nekim realizacijama, bolest je kancer ili imunitetom posredovana bolest. U nekim realizacijama, kancer se bira između tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, gastrointestinalnog kancera, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro karcinoma, karcinoma slezine, karcinoma pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekih tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuroendokrinih tumora. U nekim realizacijama, poremećaj je ciroza jetre. U nekim realizacijama, imunološki posredovana bolest se bira između rezistencije zbog transplantacije srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva, ili ćelije ostrvca pankreasa; bolesti "kalem protiv domaćina" izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa. U određenim realizacijama, bolest je kompleks tuberozne skleroze (TSC). U određenim realizacijama, bolest je neuroendokrini tumor pankreasa (PNET), limfom mantle

12

ćelija (MCL), kolorektalni kancer ili kancer creva (CRC), kancer materice, kancer jajnika, kancer bešike, kancer genitourinarnog trakta ili karcinom bubrežnih ćelija (RCC).

[0220] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje iz bilo kog od Primera 1-152 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer ili stereoizomer za upotrebu u postupku lečenja kancera. Postupak može da obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jednog ili više navedenih jedinjenja. U nekim realizacijama, kancer se bira između tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, gastrointestinalnog kancera, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro karcinoma, karcinoma slezine, karcinoma pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekih tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuroendokrinih tumora. U nekim realizacijama, poremećaj je ciroza jetre. U određenim realizacijama, bolest je kompleks tuberozne skleroze (TSC). U određenim realizacijama, bolest je neuroendokrini tumor pankreasa (PNET), limfom mantle ćelija (MCL), kolorektalni kancer ili kancer creva (CRC), kancer materice, kancer jajnika, kancer bešike, kancer genitourinarnog trakta ili karcinom bubrežnih ćelija (RCC).

[0221] U određenim realizacijama, kancer obuhvata ljudske kancere i karcinome, sarkome, adenokarcinome, limfome, leukemiju, itd., obuhvatajući čvrste i limfoidne karcinome, bubrega, dojke, pluća, bešike, debelog creva, jajnika, prostate, pankreasa, želuca, mozga, karcinom glave i vrata, kože, materice, testisa, gliom, jednjaka, i rak jetre, obuhvatajući hepatokarcinom, limfom, obuhvatajući B-akutni limfoblastični limfom, ne-Hodžkinove limfome (npr., Burkittov, limfom malih ćelija, i limfom velikih ćelija), Hodžkinov limfom, leukemiju (obuhvatajući AML, ALL, i CML), ili multipli mijelom. U određenim realizacijama, bolest je multipli mijelom. U određenim realizacijama, bolest je kancer dojke. U određenim realizacijama, bolest je trostruko negativan kancer dojke.

[0222] U određenim realizacijama, kancer obuhvata kancer, neoplazme ili maligne tumore koji se nalaze kod sisara (npr. ljudi), obuhvatajući leukemiju, karcinome i sarkome. Primeri

1

karcinoma koji se mogu lečiti ovde navedenim jedinjenjem ili metodom obuhvataju kancer prostate, štitne žlezde, endokrinog sistema, mozga, dojke, grlića materice, debelog creva, glave i vrata, jetre, bubrega, pluća, kancer pluća nemalih ćelija, melanom, mezoteliom, kancer jajnika, sarkom, želuca, materice, meduloblastoma, kolorektalni karcinom, kancer pankreasa. Dodatni primeri mogu obuhvatati Hodžkinovu bolest, ne-Hodžkinov limfom, multipli mijelom, neuroblastom, gliom, multiformni glioblastom, kancer jajnika, rabdomiosarkom, primarnu trombocitozu, primarnu makroglobulinemiju, primarni tumor mozga, maligni inzulanom pankreasa, maligni karcinoid, kancer mokraćne bešike, predmaligne lezije kože, kancer testisa, limfome, kancer štitne žlezde, neuroblastom, kancer jednjaka, kancer genitourinarnog trakta, malignu hiperkalcemiju, kancer endometrijuma, kancer kore nadbubrežne žlezde, neoplazme endokrinog ili egzokrinog pankreasa, medularni karcinom štitaste žlezde, medularni karcinom štitne žlezde, melanom, kolorektalni kancer, papilarni kancer štitne žlezde, hepatocelularni karcinom ili kancer prostate.

[0223] U određenim realizacijama, bolest je leukemija. Termin "leukemija" se u širem smislu odnosi na progresivna, maligna oboljenja organa za formiranje krvi i generalno se karakteriše poremećenom proliferacijom i razvojem leukocita i njihovih prekursora u krvi i koštanoj srži. Leukemija se generalno klinički klasifikuje na osnovu (1) trajanja i karaktera bolesti - akutna ili hronična; (2) tipa ćelija; mijeloidna (mijelogena), limfoidna (limfogena) ili monocitna; i (3) povećanja ili ne povećanja broja aberantnih ćelija u krvnoj leukemiji ili aleukemiji (subleukemiji). Primeri leukemija koje se mogu lečiti ovde navedenim jedinjenjem ili metodom obuhvataju, na primer, akutnu nelimfocitnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, akutnu granulocitnu leukemiju, hroničnu granulocitnu leukemiju, akutnu promijelocitnu leukemiju, leukemiju T-ćelija odraslih, aleukemijsku leukemiju, leukocitemijsku leukemiju, bazofilnu leukemiju, leukemiju blastnih ćelija, leukemiju goveda, hroničnu mijelocitnu leukemiju, leukemiju kože, embrionalnu leukemiju, eozinofilnu leukemiju, Grossovu leukemiju, leukemiju vlasastih ćelija, hemoblastičnu leukemiju, hemocitoblastičnu leukemiju, histiocitnu leukemiju, leukemiju matičnih ćelija, akutnu monocitnu leukemiju, leukopeničnu leukemiju, limfatičnu leukemiju, limfoblastnu leukemiju, limfocitnu leukemiju, limfogenu leukemiju, limfoidnu leukemiju, leukemiju ćelija limfosarkoma, mastocitnu leukemiju, megakariocitnu leukemiju, mikromijeloblastičnu leukemiju, monocitnu leukemiju, mijeloblastičnu leukemiju, mijelocitnu leukemiju, mijeloidnu granulocitnu leukemiju, mijelomonocitnu leukemiju, Naegeli leukemiju, leukemiju plazma ćelija, multipli mijelom, plazmacitnu leukemiju,

1 1

promijelocitnu leukemiju, leukemiju Riderovih ćelija, Šilingovu leukemiju, leukemiju matičnih ćelija, subleukemijsku leukemiju, ili leukemiju nediferenciranih ćelija.

[0224] U određenim realizacijama, bolest je sarkom. Termin "sarkom" se generalno odnosi na tumor koji se sastoji od supstance poput embrionalnog vezivnog tkiva i generalno se sastoji od blisko zbijenih ćelija ugrađenih u fibrilarnu ili homogenu supstancu. Sarkomi koji se mogu lečiti ovde navedenim jedinjenjem ili metodom obuhvataju hondrosarkom, fibrosarkom, limfosarkom, melanosarkom, miksosarkom, osteosarkom, Abemetijev sarkom, adipozni sarkom, liposarkom, alveolarni sarkom mekog dela, ameloblastični sarkom, botrioidni sarkom, hloroma sarkom, horio karcinom, embrionalni sarkom, sarkom Vilmsovog tumora, sarkom endometrijuma, stromalni sarkom, Ewing-ov sarkom, fascijalni sarkom, fibroblastični sarkom, sarkom džinovskih ćelija, granulocitni sarkom, Hodžkinov sarkom, idiopatski višestruki pigmentirani hemoragični sarkom, imunoblastični sarkom B ćelija, limfom, imunoblastični sarkom T-ćelija, Jensenov sarkom, Kaposijev sarkom, sarkom Kupferovih ćelija, angiosarkom, leukosarkom, maligni sarkom mezenhimoma, parostealni sarkom, retikulocitni sarkom, Rousov sarkom, serocistični sarkom, sinovijalni sarkom, ili teleangiektaltički sarkom.

[0225] U određenim realizacijama, bolest je melanom. Termin "melanom" podrazumeva tumor koji nastaje iz melanocitnog sistema kože i drugih organa. Melanomi koji se mogu lečiti ovde navedenim jedinjenjem ili metodom obuhvataju, na primer, akralno-lentiginozni melanom, amelanotični melanom, benigni juvenilni melanom, Cloudmanov melanom, S91 melanom, Harding-Passey-ev melanom, juvenilni melanom, lentigo maligni melanom, maligni melanom, nodularni melanom, subungalni melanom ili melanom koji se površinski širi.

[0226] U određenim realizacijama, bolest je karcinom. Termin "karcinom" se odnosi na maligni novi rast koji se sastoji od epitelnih ćelija koje imaju tendenciju da se infiltriraju u okolna tkiva i daju metastaze. Primeri karcinoma koji se mogu lečiti ovde navedenim jedinjenjem ili metodom obuhvataju, na primer, medularni karcinom štitne žlezde, porodični medularni karcinom štitne žlezde, acinarni karcinom, acinozni karcinom, adenocistični karcinom, adenoidni cistični karcinom, adenomatozni karcinom, karcinom kore nadbubrežne žlezde, alveolarni karcinom, karcinom alveolarnih ćelija, karcinom bazalnih ćelija, bazocelularni karcinom, bazaloidni karcinom, karcinom bazoskvamoznih ćelija, bronhioalveolarni karcinom, bronhiolarni karcinom, bronhogeni karcinom, cerebriformni

1 2

karcinom, holangiocelularni karcinom, horionski karcinom, koloidni karcinom, comedo karcinom, corpus karcinom, kribriformni karcinom, karcinom en cuirasse, kožni karcinom, cilindrični karcinom, karcinom cilindričnih ćelija, duktalni karcinom, karcinom tvrde konsistencije, embrionalni karcinom, encefaloidni karcinom, epiermoidni karcinom, karcinom epitelni adenoidni, egzofitni karcinom, karcinom ex ulcere, fibrozni karcinom, želatiniformni karcinom, želatinozni karcinom, karcinom džinovskih ćelija, karcinom džinovskih ćelija, glandularni karcinom, granuloza ćelijski karcinom, karcinom matriksa kose, hematoidni karcinom, hepatocelularni karcinom, karcinom Hurthleovih ćelija, hijalinski karcinom, hipernefroidni karcinom, infantilni embrionalni karcinom, karcinom in situ, intraepidermalni karcinom, intraepitelni karcinom, Krompecherov karcinom, karcinom Kulchitzkyevih ćelija, karcinom velikih ćelija, lentikularni karcinom, lipomatozni karcinom, limfoepitelni karcinom, karcinom medullare, medularni karcinom, melanotski karcinom, meki karcinom, mukozni karcinom, karcinom muciparum, mukocelularni karcinom, mukoepidermoidni karcinom, mukozni karcinom, karcinom sluzokože, karcinom miksomatodes, nazofaringealni karcinom, mikrocelularni karcinom pluća, karcinom ossificans, osteoidni karcinom, papilarni karcinom, periportalni karcinom, predinvazivni karcinom, karcinom bodljikavih ćelija, pultaceoni karcinom, karcinom ćelija bubrega, karcinom rezervnih ćelija, sarkomatodni karcinom, schneiderian karcinom, karcinom submukoznog tipa, karcinom skrotuma, karcinom ćelija sa pečatnim prstenom, karcinom simpleks, karcinom malih ćelija, solanoidni karcinom, karcinom sferoidnih ćelija, karcinom vretenastih ćelija, karcinom spongiozum, skvamozni karcinom, karcinom skvamoznih ćelija, string karcinom, karcinom telangiectaticum, karcinom telangiectodes, karcinom prelaznih ćelija, karcinom tuberosum, tuberozni karcinom, verukozni karcinom, ili vilozni karcinom.

[0227] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje iz bilo kog od Primera 1-152 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer, ili stereoizomer za upotrebu u postupku lečenja bolesti posredovane imunitetom. Postupak može da obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jednog ili više navedenih jedinjenja. U nekim realizacijama, imunološki posredovana bolest je izabrana od rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa,

1

Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.

[0228] U određenim realizacijama, bolest je autoimuna bolest. Kako se ovde koristi, termin "autoimuna bolest" se odnosi na bolest ili stanje u kojem imuni sistem subjekta ima aberantni imuni odgovor na supstancu koja normalno ne izaziva imuni odgovor kod zdravog subjekta. Primeri autoimunih bolesti koje se mogu lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili postupkom uključuju akutni diseminovani encefalomijelitis (ADEM), akutni nekrotizirajući hemoragični leukoencefalitis, Addisonovu bolest, agamaglobulinemiju, alopeciju areata, amiloidozu, ankilozni spondilitis, Anti-GBM/Anti-TBM nefritis, antifosfolipidni sindrom (APS), autoimuni angioedem, autoimunu aplastičnu anemiju, autoimunu disautonomiju, autoimuni hepatitis, autoimunu hiperlipidemiju, autoimunu imunodeficijenciju, autoimunu bolest unutrašnjeg uha (AIED), autoimuni miokarditis, autoimuni ooforitis, autoimuni pankreatitis, autoimunu retinopatiju, autoimunu trombocitopeničnu purpuru (ATP), autoimunu bolest štitne žlezde, autoimunu urtikariju, aksonalne ili neuronske neuropatije, Baloovu bolest, Behčetovu bolest, bulozni pemfigoid, kardiomiopatiju, Castlemanovu bolest, celijakiju, Šagasovu bolest, sindrom hroničnog umora, hroničnu inflamatornu demijelinizirajuću polineuropatiju (CIDP), hronični rekurentni multifokalni osteomijelitis (CRMO), Churg-Straussov sindrom, cicatricijalni pemfigoid/benigni mukozni pemfigoid, Kronovu bolest, Cogansov sindrom, bolest hladnog aglutinina, urođeni srčani blok, koksaki miokarditis, CREST bolest, esencijalnu mešovitu krioglobulinemiju, demijelinizirajuće neuropatije, herpetiformni dermatitis, dermatomiozitis, Devicovu bolest (neuromijelitis optica), diskoidni lupus, Dressierov sindrom, endometriozu, eozinofilni ezofagitis, eozinofilni fasciitis, eritema nodozum, eksperimentalni alergijski encefalomijelitis, Evansov sindrom, fibromijalgiju, fibrozirajući alveolitis, arteritis džinovskih ćelija (temporalni arteritis), miokarditis džinovskih ćelija, glomerulonefritis, Gudpastureov sindrom, granulomatozu sa poliangiitisom (GPA) (ranije zvana Vegenerova granulomatoza), Gravesovu bolest, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, hemolitičku anemiju, Henoch-Schonlein purpuru, gestacijski herpes, hipogamaglobulinemiju, idiopatsku trombocitopeničnu purpuru (ITP), IgA nefropatiju, sklerozirajuću bolest povezanu sa IgG4, imunoregulatorne lipoproteine, miozitis inkluzijskog tela, intersticijski cistitis, juvenilni artritis, juvenilni dijabetes (dijabetes tipa 1), juvenilni miozitis, Kavasakijev sindrom, Lambert-Eatonov sindrom, leukocitoklastični vaskulitis, Lichen planus, Lihen sklerozu,

1 4

lignozni konjuktivitis, linearnu IgA bolest (LAD), Lupus (SLE), lajmsku bolest, hroničnu, Menierovu bolest, mikroskopski poliangiitis, mešovitu bolest vezivnog tkiva (MCTD), Murenov čir, Muha-Habermanovu bolest, multiplu sklerozu, mijasteniju gravis, miozitis, narkolepsiju, neuromijelitis optica (Devičev), neutropeniju, očni cikatricijalni pemfigoid, optički neuritis, palindromni reumatizam, PANDAS (Pedijatrijski autoimuni neuropsihijatrijski poremećaji povezani sa streptokokom), paraneoplastičnu cerebelarnu degeneraciju, paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju (PNH), Parry Rombergov sindrom, Parsonnage-Turnerov sindrom, pars planitis (periferni uveitis), pemfigus, perifernu neuropatiju, perivenozni encefalomijelitis, pernicioznu anemiju, POEMS sindrom, poliarteritis nodoza, autoimune poliglandularne sindrome tipa I, II i III, reumatsku polimijalgiju, polimiozitis, sindrom nakon infarkta miokarda, sindrom postperikardiotomije, progesteronski dermatitis, primarnu bilijarnu cirozu, primarni sklerozirajući holangitis, psorijazu, psorijazni artritis, idiopatsku plućnu fibrozu, piodermu gangrenozum, aplaziju čistih crvenih krvnih zrnaca, Rainaudov fenomen, reaktivni artritis, refleksnu simpatičku distrofiju, Reiterov sindrom, relapsni polihondritis, sindrom nemirnih nogu, retroperitonealnu fibrozu, reumatsku groznicu, reumatoidni artritis, sarkoidozu, Schmidtov sindrom, skleritis, sklerodermu, Sjögrenov sindrom, autoimunost sperme i testisa, sindrom ukočene osobe, subakutni bakterijski endokarditis (SBE), Susacov sindrom, simpatičku oftalmiju, Takaiasuov arteritis, temporalni arteritis/arteritis džinovskih ćelija, trombocitopeničnu purpuru (TTP), uključujući Tolosa-Huntov sindrom, transverzalni mijelitis, dijabetes tipa 1, ulcerozni kolitis, nediferencirane bolesti vezivnog tkiva (UCTD), uveitis, vaskulitis, vezikulobuloznu dermatozu, vitiligo, ili Vegenerovu granulomatozu (tj., granulomatozu sa poliangiitisom (GPA)).

[0229] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje iz bilo kog od Primera 1-152 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer, ili stereoizomer za upotrebu u postupku lečenja stanja povezanog sa starenjem. Postupak može da obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jednog ili više navedenih jedinjenja. U određenim realizacijama, stanje povezano sa starenjem izabrano je od sarkopenije, atrofije kože, gubitka mišića, atrofije mozga, ateroskleroze, arterioskleroze, emfizema pluća, osteoporoze, osteoartritisa, visokog krvnog pritiska, erektilne disfunkcije, demencije, Hantingtonove bolesti, Alchajmerove bolesti, katarakta, starosne degeneracije makule, raka prostate, moždanog udara, smanjenog očekivanog životnog veka, poremećene funkcije bubrega, gubitka sluha u vezi sa starenjem, onesposobljenosti kretanja u vezi sa starenjem (npr., slabost), kognitivnog pada, demencije

1

povezane sa starenjem, oštećenja pamćenja, ukočenosti tetiva, disfunkcije srca kao što su hipertrofija srca i sistolna i dijastolna disfunkcija, imunosenscencije, kancera, gojaznosti, i dijabetesa.

[0230] U određenim realizacijama, otkrivene kompozicije ili jedinjenja mogu se koristiti u pogledu imunosenescencije. Imunosenescencija se može odnositi na smanjenje imunološke funkcije što dovodi do oslabljenog imunološkog odgovora, npr., na kancer, vakcinaciju, infektivne patogene, između ostalog Ona uključuje i sposobnost domaćina da reaguje na infekcije i razvoj dugoročne imunološke memorije, posebno vakcinacijom. Ova imunodeficijencija je sveprisutna i pronađena kod obe dugovečnih i kratkovečnih vrsta kao funkcija njihove starosti u odnosu na očekivani životni vek, a ne hronološko vreme. Smatra se glavnim faktorom koji doprinosi povećanju učestalosti morbiditeta i mortaliteta među starijim osobama. Imunosenescencija nije slučajni deteriorativni fenomen, već se čini da se inverzno ponavlja evolucioni obrazac i čini se da je većina parametara na koje utiče imunosenescencija pod genetskom kontrolom. Imunosescencija se ponekad može zamisliti kao rezultat kontinuiranog izazova neizbežnog izlaganja raznim antigenima kao što su virusi i bakterije. Imunosenescencija je multifaktorsko stanje koje dovodi do mnogih patološki značajnih zdravstvenih problema, npr., kod starije populacije. Biološke promene zavisne od uzrasta kao što su iscrpljivanje hematopoetskih matičnih ćelija, povećanje PD1+ limfocita, pad ukupnog broja fagocita i NK ćelija i pad humoralnog imuniteta doprinose nastanku imunosenescencije. U jednom aspektu, imunosenscencija se može meriti kod pojedinca merenjem dužine telomera u imunim ćelijama (videti, npr., američki patent br. 5,741,677). Imunosescencija se takođe može odrediti dokumentovanjem kod pojedinca manjeg od normalnog broja naivnih CD4 i/ili CD8 T ćelija, repertoara T ćelija, broja T ćelija koje eksprimiraju PD1, npr., manjeg od normalnog broja PD-1 negativnih T ćelija, ili odgovora na vakcinaciju kod subjekta koji ima više od ili najmanje 65 godina starosti. U određenim realizacijama, selektivna modulacija mTOR određenih populacija T-ćelija može poboljšati efikasnost vakcine u starijoj populaciji i poboljšati efikasnost imunoterapije kancera. Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak lečenja imunosenescencije koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili više otkrivenih kompozicija ili jedinjenja.

[0231] U određenim realizacijama, bolest koja se može lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili postupkom je odbacivanje transplantata organa ili tkiva (npr.

1

transplantacija srca, pluća, kombinovana srce-pluća, jetre, bubrega, pankreasa, kože ili rožnjače; bolest transplantata protiv domaćina), restenoza, Hamartoma sindromi (npr. tuberozna skleroza ili Cowdenova bolest), limfangioleiomiomatoza, retinitis pigmentoza, encefalomijelitis, insulin-zavisni dijabetes melitus, lupus, dermatomiozitis, artritis, reumatske bolesti, limfoblastična leukemija otporna na steroide, fibroza, skleroderma, plućna fibroza, renalna fibroza, cistična fibroza, plućna hipertenzija, multipla skleroza, VHL sindrom, Carneyev kompleks, porodična adenonamtna polipoza, sindrom juvenilne polipoze, Birt-Hogg-Duke sindrom, porodična hipertrofična kardiomiopatija, Wolf-Parkinson-Whiteov sindrom, Parkinsonova bolest, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, demencije uzrokovane tau mutacijama, spinocerebelarna ataksija tip 3, bolest motornih neurona uzrokovana mutacijama SOD1, neuronske ceroidne lipofucinoze/Battenova bolest (pedijatrijska neurodegeneracija), vlažna makularna degeneracija, suva makularna degeneracija, gubitak mišića (atrofija, kaheksija), miopatije (npr., Danonova bolest), bakterijska infekcija, virusna infekcija, M. tuberculosis, streptokok grupe A, HSV tip I, HIV infekcija, neurofibromatoza (npr. neurofibromatoza tip 1) ili Peutz-Jeghersov sindrom.

[0232] U određenim realizacijama, bolest je neurodegenerativna bolest. Kako se ovde koristi, termin "neurodegenerativna bolest" odnosi se na bolest ili stanje u kojem funkcija nervnog sistema subjekta postaje oštećena. Primeri neurodegenerativnih bolesti koje se mogu lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili postupkom obuhvataju Aleksandrovu bolest, Alperovu bolest, Alchajmerovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, ataksiju teleangiektaziju, Batenovu bolest (takođe poznata kao Spielmeier-Vogt-Sjogren-Battenova bolest), goveđu spongiformnu encefalopatiju (BSE), Canavanovu bolest, Cockainov sindrom, kortikobazalnu degeneraciju, Krojcfeld-Jakobovu bolest, frontotemporalnu demenciju, Gerstman-Strausler-Šajnkerov sindrom, Hantingtonovu bolest, HlV-povezanu demencija, Kenedijevu bolest, Krabbeovu bolest, kuru, demenciju Levijevog tela, Machado-Josephovu bolest (spinocerebelarna ataksija tip 3), multiplu sklerozu, multiplu sistemsku atrofiju, narkolepsiju, neuroboreliozu, Parkinsonovu bolest, Pelizeus-Merzbaherovu bolest, Pickovu bolest, primarnu lateralnu sklerozu, prionske bolesti, Refsumovu bolest, Sandhoffovu bolest, Šilderovu bolest, subakutnu kombinovanu degeneraciju kičmene moždine koja je posledica perniciozne anemije, šizofreniju, spinocerebelarnu ataksiju (više tipova sa različitim karakteristikama), spinalnu mišićnu atrofiju, sindrom Steele‐Richardson‐Olszewskog, ili tabes dorzalis.

1

[0233] U određenim realizacijama, bolest je metabolička bolest. Kako se ovde koristi, termin "metabolička bolest" odnosi se na bolest ili stanje u kojem metabolizam ili metabolički sistem subjekta (npr. funkcija skladištenja ili korišćenja energije) postaju oštećeni. Primeri metaboličkih bolesti koje se mogu lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili metodom obuhvataju dijabetes (npr. tip I ili tip II), gojaznost, metabolički sindrom ili mitohondrijalnu bolest (npr. disfunkcija mitohondrija ili aberantna funkcija mitohondrija).

[0234] U određenim realizacijama, bolest je gljivična bolest. Kako se ovde koristi, termin "gljivična bolest" odnosi se na bolest ili stanje povezano sa gljivičnom infekcijom subjekta. Primeri gljivičnih oboljenja koja se mogu lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili metodom obuhvataju infekciju sa Mucor circinelloides, zygomycetes, Cryptococcus neoformans, Candida albicans, kvascem, i Saccharomyces cerevisiae između ostalih.

[0235] U određenim realizacijama, bolest je inflamatorna bolest. Kako se ovde koristi, termin "inflamatorna bolest" odnosi se na bolest ili stanje koje karakteriše aberantna inflamacija (npr. povećan nivo inflamacije u poređenju sa kontrolom kao što je zdrava osoba koja ne boluje od bolesti). Primeri inflamatornih bolesti obuhvataju traumatsku povredu mozga, artritis, reumatoidni artritis, psorijatični artritis, juvenilni idiopatski artritis, multiplu sklerozu, sistemski eritematozni lupus (SLE), mijasteniju gravis, juvenilni početak dijabetesa, dijabetes melitus tipa 1, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, ankilozni spondilitis, psorijazu, Sjogrenov sindrom, vaskulitis, glomerulonefritis, autoimuni tiroiditis, Behcetovu bolest, Kronovu bolest, ulcerozni kolitis, bulozni pemfigoid, sarkoidozu, ihtiozu, Gravesovu oftalmopatiju, inflamatornu bolest creva, Addisonovu bolest, vitiligo, astmu, alergijsku astmu, akne vulgaris, celijakiju, hronični prostatitis, inflamatornu bolest creva, inflamatornu bolest karlice, reperfuzionu povredu, sarkoidozu, odbacivanje transplantata, intersticijski cistitis, aterosklerozu, i atopijski dermatitis.

[0236] U određenim realizacijama, bolest je kardiovaskularna bolest. Kako se ovde koristi, termin "kardiovaskularna bolest" odnosi se na bolest ili stanje u kome dolazi do oštećenja funkcije kardiovaskularnog sistema subjekta. Primeri kardiovaskularnih bolesti koje se mogu

1

lečiti ovde opisanim jedinjenjem, farmaceutskom kompozicijom ili postupkom obuhvataju kongestivno zatajenje srca; aritmogene sindrome (npr., paroksizomalna tahikardija, odložena posle depolarizacije, ventrikularna tahikardija, iznenadna tahikardija, aritmije izazvane vežbanjem, sindromi produženog QT intervala, ili dvosmerna tahikardija); tromboembolijske poremećaje (npr. arterijski kardiovaskularni tromboembolijske poremećaje, venski kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, ili tromboembolijske poremećaje u komorama srca); aterosklerozu; restenozu; perifernu arterijsku bolest; uključuju koronarnu bajpas operaciju; bolest karotidne arterije; arteritis; miokarditis; kardiovaskularno zapaljenje; vaskularno zapaljenje; koronarnu bolest srca (CHD); nestabilnu anginu (UA); nestabilnu refraktornu anginu; stabilnu anginu (SA); hroničnu stabilnu anginu; akutni koronarni sindrom (ACS); infarkt miokarda (prvi ili rekurentni); akutni infarkt miokarda (AMI); infarkt miokarda; infarkt miokarda bez Q talasa; ne-STE infarkt miokarda; koronarnu arterijsku bolest; ishemijsku bolest srca; srčanu ishemiju; ishemiju; ishemijsku iznenadnu smrt; prolazni ishemijski napad; kap; perifernu okluzivnu arterijsku bolest; vensku trombozu; duboku vensku trombozu; tromboflebitis; arterijsku emboliju; trombozu koronarne arterije; trombozu cerebralne arterije, cerebralnu emboliju; emboliju bubrega; plućnu emboliju; trombozu (npr., povezanu sa protetskim zaliscima ili drugim implantatima, stalnim kateterima, stentovima, kardiopulmonalnim bajpasom, hemodijalizom); trombozu (npr., povezanu sa aterosklerozom, operacijom, produženom imobilizacijom, fibrilacijom arterija, urođenom trombofilijom, rakom, dijabetesom, hormonima, ili trudnoćom); ili srčane aritmije (npr., supraventrikularne aritmije, atrijalne aritmije, atrijalno treperenje, ili atrijalna fibrilacija).

[0237] Ovde je takođe opisan postupak lečenja bolesti povezane sa aberantnim nivoom mTOR aktivnosti kod subjekta kome je takav tretman potreban. Bolest može biti uzrokovana povećanjem mTOR-a. Postupak može uključiti davanje subjektu jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja. Postupak može uključiti davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja (npr. mTOR modulatora (npr., inhibitor) kao što je gore opisano).

[0238] Takođe je opisana jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano za upotrebu kao lek. U realizacijama, lek je koristan za lečenje bolesti izazvane povećanjem mTOR-a. Upotreba može uključiti davanje subjektu jedne ili više kompozicija ili jedinjenja opisanih ovde. Upotreba može uključiti davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili

1

više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja (npr. mTOR modulatora (npr. inhibitora) kao što je gore opisano).

[0239] Takođe je opisana jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano za upotrebu u lečenju bolesti izazvane aberantnim nivoima aktivnosti mTORC1 kod subjekta kom je potreban takav tretman. Bolest može biti uzrokovana povećanjem mTORC1. Upotreba može uključiti davanje subjektu jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja. Upotreba može uključiti davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja (npr. modulatora mTORC1 (npr. inhibitora) kao što je gore opisano).

[0240] Povećana regulacija mTOR može rezultirati povećanom količinom mTOR aktivnosti u poređenju sa normalnim nivoima mTOR aktivnosti kod određenog subjekta ili populacije zdravih subjekata. Povećana količina mTOR aktivnosti može dovesti do, na primer, prevelike količine ćelijske proliferacije i na taj način izazvati bolesno stanje.

[0241] Subjekt lečenja bolesti je tipično sisar. Sisar tretiran ovim jedinjenjem (npr. ovde opisano jedinjenje, modulator mTOR (npr. inhibitor)) može biti čovek, primat koji nije čovek, i/ili sisar koji nije čovek (npr. glodar, pas).

[0242] Lek može biti koristan za lečenje bolesti povezane sa aktivnošću mTORC1 kod subjekta kom je potreban takav tretman. Upotreba može uključiti davanje subjektu jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja.

[0243] U drugom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja za upotrebu u lečenju bolesti povezane sa mTOR aktivnošću kod subjekta kom je potreban takav tretman. U realizacijama, upotreba može obuhvatati davanje subjektu jedne ili više kompozicija ili jedinjenja kao što je ovde opisano, uključujući realizacije (npr. aspekt, izvođenje, primer, tabelu, sliku ili zahtev).

[0244] U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je kancer. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je autoimuna bolest. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa

14

aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je inflamatorna bolest. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je neurodegenerativna bolest. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je metabolička bolest. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je odbacivanje transplantata. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je gljivična infekcija. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je kardiovaskularna bolest.

[0245] U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je starenje. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je umiranje od bolesti povezane sa starenjem. U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je stanje iz grupe koju čine sarkopenija, atrofija kože, gubitak mišića, atrofija mozga, ateroskleroza, arterioskleroza, plućni emfizem, osteoporoza, osteoartritis, visok krvni pritisak, erektilna disfunkcija, demencija, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, katarakti, starosna makularna degeneracija, kancer prostate, kap, smanjen očekivani životni vek, oštećena funkcija bubrega, gubitak sluha u vezi sa starenjem, onesposobljenost kretanja u vezi sa starenjem (npr., slabost), kognitivni pad, demencija povezana sa starenjem, oštećenje pamćenja, ukočenost tetiva, srčana disfunkcija kao što je srčana hipertrofija i sistolna i dijastolna disfunkcija, imunosenscencija, kancer, gojaznost, i dijabetes. U određenim realizacijama, selektivna modulacija mTOR određenih populacija T-ćelija može poboljšati efikasnost vakcine u starijoj populaciji i poboljšati efikasnost imunoterapije kancera. Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak lečenja imunosenscencije koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jednog ili više otkrivenih jedinjenja.

[0246] U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je kancer (npr., karcinomi, sarkomi, adenokarcinomi, limfomi, leukemije, solidni kancer, limfoidni kancer; kancer bubrega, dojke, pluća, bešike, debelog creva, gastrointestinalni, jajnika, prostate, pankreasa, želuca, mozga, glave i vrata, kože, materice, jednjaka, jetre; kancer testisa, gliom, hepatokarcinom, limfom, uključujući B-akutni limfoblastični limfom, ne-Hodžkinovi limfomi (npr., Burkittov, sitnoćelijski, i krupnoćelijski limfom), Hodžkinov limfom, leukemija (uključujući AML, ALL, i CML), multipli mijelom, i kancer dojke (npr., trostruko negativan kancer dojke)).

[0247] U realizacijama, bolest povezana sa aktivnošću mTOR ili bolest povezana sa aberantnim nivoima mTOR aktivnosti je akutni diseminovani encefalomijelitis (ADEM), akutni nekrotizirajući hemoragični leukoencefalitis, Addisonova bolest, agamaglobulinemija, alopecija areata, amiloidoza, ankilozni spondilitis, anti-GBM/anti-TBM nefritis, Antifosfolipidni sindrom (APS), autoimunski angioedem, autoimuna aplastična anemija, autoimuna disautonomija, autoimuni hepatitis, autoimuna hiperlipidemija, autoimuna imunodeficijencija, autoimuna bolest unutrašnjeg uha (AIED), autoimuni miokarditis, autoimuni ooforitis, autoimuni pankreatitis, autoimuna retinopatija, autoimuna trombocitopenična purpura (ATP), autoimuna bolest štitne žlezde, autoimuna urtikarija, aksonalne ili neuronske neuropatije, Baloova bolest, Behcetova bolest, Bulozni pemfigoid, kardiomiopatija, Kaslmanova bolest, celijakija, Chagasova bolest, sindrom hroničnog umora, hronična inflamatorna demijelinizirajuća polineuropatija (CIDP), hronični rekurentni multifokalni osteomijelitis (CRMO), Churg-Straussov sindrom, cikatricijski pemfigoid/benigni mukozni pemfigoid, Kronova bolest, Cogansov sindrom, Bolest hladnih aglutinina, urođeni srčani blok, Coxackie miokarditis, CREST bolest, esencijalna mešovita krioglobulinemija, demijelinizirajuće neuropatije, dermatitis herpetiformis, dermatomiozitis, Devičeva bolest (optički neuromijelitis), diskoidni lupus, Dressierov sindrom, endometrioza, eozinofilni ezofagitis, eozinofilni fasciitis, eritema nodozum, eksperimentalni alergijski encefalomijelitis, Evansov sindrom, fibromijalgija, fibrozirajući alveolitis, arteritis džinovskih ćelija (temporalni arteritis), miokarditis džinovskih ćelija, glomerulonefritis, Goodpastureov sindrom, granulomatoza sa poliangiitisom (GPA) (ranije nazvana Vegenerova granulomatoza), Gravesova bolest, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, hemolitička anemija, Henoch-Schonleinova purpura, herpes gestationis, hipogamaglobulinemija, idiopatska trombocitopenična purpura (ITP), IgA nefropatija, sklerozirajuća bolest povezana sa IgG4, imunoregulatorni lipoproteini, miozitis inkluzijskog tela, intersticijski cistitis, juvenilni artritis, juvenilni dijabetes (dijabetes tipa 1), juvenilni miozitis, Kavasakijev sindrom, Lambert-Eatonov sindrom, leukocitoklastični vaskulitis, Lihen planus, Lihen skleroza, lignozni konjunktivitis, linearna IgA bolest (LAD), lupus (SLE), lajmska bolest, hronična, Menierova bolest, mikroskopski poliangiitis, mešovita bolest vezivnog tkiva (MCTD), Moorenov čir, Mucha-Habermanova bolest, multipla skleroza, miastenija gravis, miozitis, narkolepsija, neuromijelitis optica (Devičev), neutropenija, očni cicatricijalni pemfigoid, optički neuritis, palindromni reumatizam, PANDAS (pedijatrijski autoimuni neuropsihijatrijski poremećaji povezani sa streptokokom), paraneoplastična cerebelarna degeneracija, paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH), Parry Rombergov sindrom, Parsonnage-Turnerov sindrom, pars planitis (periferni uveitis), pemfigus, periferna neuropatija, perivenozni encefalomijelitis, perniciozna anemija, POEMS sindrom, poliarteritis nodosa, autoimunski poliglandularni sindromi tipa I, II i III, reumatska polimijalgija, polimiozitis, sindrom nakon infarkta miokarda, sindrom postperikardiotomije, progesteronski dermatitis, primarna bilijarna ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, psorijaza, psorijatični artritis, idiopatska plućna fibroza, pioderma gangrenozum, Čista aplazija crvenih krvnih zrnaca, Rainaudov fenomen, reaktivni artritis, refleksna simpatička distrofija, Reiterov sindrom, relapsirajući polihondritis, Sindrom nemirnih nogu, retroperitonealna fibroza, reumatska groznica, reumatoidni artritis, sarkoidoza, Schmidtov sindrom, skleritis, skleroderma, Sjögrenov sindrom, autoimunost sperme i testisa, sindrom ukočene osobe, Subakutni bakterijski endokarditis (SBE), Susacov sindrom, simpatička oftalmija, Takaiasuov arteritis, temporalni arteritis/arteritis gigantskih ćelija, trombocitopenična purpura (TTP), Tolosa-Huntov sindrom, transverzalni mijelitis, dijabetes tipa 1, ulcerozni kolitis, nediferencirana bolest vezivnog tkiva(UCTD), uveitis, vaskulitis, vezikulobulozna dermatoza, vitiligo, Vegenerova granulomatoza (tj., granulomatoza sa poliangiitisom (GPA), traumatska povreda mozga, artritis, reumatoidni artritis, psorijatični artritis, juvenilni idiopatski artritis, multipla skleroza, sistemski eritematozni lupus (SLE), mijastenija gravis, juvenilni dijabetes, dijabetes melitus tipa 1, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, ankilozantni spondilitis, psorijaza, Sjögrenov sindrom, vaskulitis, glomerulonefritis, autoimuni tiroiditis, Behcetova bolest, Kronova bolest, ulcerozni kolitis, bulozni pemfigoid, sarkoidoza, ihtioza, Gravesova oftalmopatija, inflamatorna bolest creva, Addisonova bolest, vitiligo, astma, alergijska astma, akne vulgaris, celijakija, hronični prostatitis, inflamatorna bolest creva, inflamatorna bolest karlice, reperfuziona povreda, sarkoidoza, odbacivanje transplantata, intersticijalni cistitis, ateroskleroza, atopijski dermatitis, Alexanderova bolest, Alperova bolest, Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza, ataksija telangiektazija, Battenova bolest (takođe poznata kao Spielmeier-Vogt-Sjogren-Battenova bolest), goveđa spongiformna encefalopatija (BSE), Canavanova bolest, Cockayneov sindrom, kortikobazalna degeneracija, Creutzfeldt-Jakobova bolest, frontotemporalna demencija, Gerstmann-Straussler-Scheinkerov sindrom, Hantingtonova bolest, HTV povezana demencija, Kenedijeva bolest, Krabbeova

14

bolest, kuru, demencija sa Levijevim telima, Machado-Josephova bolest (spinocerebelarna ataksija tip 3), multipla skleroza, multipla sistemska atrofija, narkolepsija, neuroborelioza, Parkinsonova bolest, Pelizaeus-Merzbaherova bolest, Pickova bolest, primarna lateralna skleroza, prionske bolesti, Refsumova bolest, Sandhoffova bolest, Schilderova bolest, subakutna kombinovana degeneracija kičmene moždine usled perniciozne anemije, šizofrenija, spinocerebelarna ataksija (više tipova sa različitim karakteristikama), spinalna mišićna atrofija, sindrom Steele‐Richardson‐Olszewskog, tabes dorsalis, dijabetes (npr. tip I ili tip II), gojaznost, metabolički sindrom, mitohondrijalna bolest (npr., disfunkcija mitohondrija ili aberantna funkcija mitohondrija), gljivična infekcija, odbacivanje transplantata ili kardiovaskularna bolest (npr. kongestivna srčana insuficijencija; aritmogeni sindromi (npr. paroksomalna tahikardija, odložena posle depolarizacija, ventrikularna tahikardija, iznenadna tahikardija, aritmije izazvane vežbanjem, sindromi dugog QT intervala ili dvosmerna tahikardija); tromboembolijski poremećaji (npr. arterijski kardiovaskularni tromboembolijski poremećaji, venski kardiovaskularni tromboembolijski poremećaji ili tromboembolijski poremećaji u komorama srca); ateroskleroza; restenoza; bolest perifernih arterija; operacija koronarne bajpasa; bolest karotidnih arterija; arteritis; miokarditis; kardiovaskularno zapaljenje; vaskularno zapaljenje; koronarna bolest srca (CHD); nestabilna angina (UA); nestabilna refraktorna angina; stabilna angina (SA); hronična stabilna angina; akutni koronarni sindrom (ACS); infarkt miokarda (prvi ili rekurentni); akutni infarkt miokarda (AMI); infarkt miokarda; infarkt miokarda bez Q talasa; ne-STE infarkt miokarda; koronarna arterijska bolest; ishemijska bolest srca; srčana ishemija; ishemija; ishemijska iznenadna smrt; prolazni ishemijski napad; kap; periferna okluzivna arterijska bolest; venska tromboza; duboka venska tromboza; tromboflebitis; arterijska embolija; tromboza koronarne arterije; tromboza cerebralne arterije, cerebralna embolija; embolija bubrega; plućna embolija; tromboza (npr. povezana sa protetskim zaliscima ili drugim implantatima, stalnim kateterima, stentovima, kardiopulmonalnim bajpasom, hemodijalizom); tromboza (npr. povezana sa aterosklerozom, operacijom, produženom imobilizacijom, arterijskom fibrilacijom, urođenom trombofilijom, rakom, dijabetesom, hormonima ili trudnoćom); ili srčane aritmije (npr. supraventrikularne aritmije, atrijalne aritmije, atrijalno treperenje ili atrijalna fibrilacija).

[0248] Takođe je opisan postupak lečenja bolesti uključujući primenu efikasne količine jedne ili više kompozicija ili jedinjenja kao što je ovde opisano. Takođe je opisana jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano za upotrebu kao lek (npr. za lečenje bolesti). U jednom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kao što je ovde opisano za upotrebu u lečenju bolesti (npr., uključujući primenu efikasne količine jedne ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano). U realizacijama, bolest je kancer. U realizacijama, bolest je autoimuna bolest. U realizacijama, bolest je inflamatorna bolest. U realizacijama, bolest je neurodegenerativna bolest. U realizacijama, bolest je metabolička bolest. U realizacijama, bolest je gljivična infekcija. U realizacijama, bolest je odbacivanje transplantata. U realizacijama, bolest je kardiovaskularna bolest.

[0249] U realizacijama, bolest je kancer (npr. karcinomi, sarkomi, adenokarcinomi, limfomi, leukemije, solidni karcinomi, limfoidni karcinomi; kancer bubrega, dojke, pluća, bešike, debelog creva, jajnika, prostate, pankreasa, želuca, mozga, glave i vrata, kože, materice, jednjaka, jetre; kancer testisa, gliom, hepatokarcinom, limfom, uključujući B-akutni limfoblastični limfom, ne-Hodžkinovi limfomi (npr., Burkittov, sitnoćelijski, i krupnoćelijski limfom), Hodžkinov limfom, leukemija (uključujući AML, ALL, i CML), multipli mijelom, i rak dojke (npr., trostruko negativan kancer dojke)).

[0250] U realizacijama, bolest je akutni diseminovani encefalomijelitis (ADEM), akutni nekrotizirajući hemoragični leukoencefalitis, Addisonova bolest, agamaglobulinemija, alopecija areata, amiloidoza, ankilozni spondilitis, anti-GBM/anti-TBM nefritis, antifosfolipidni sindrom (APS), autoimunski angioedem, autoimuna aplastična anemija, autoimuna disautonomija, autoimuni hepatitis, autoimuna hiperlipidemija, autoimuna imunodeficijencija, autoimuna bolest unutrašnjeg uha (AIED), autoimuni miokarditis, autoimuni ooforitis, autoimuni pankreatitis, autoimuna retinopatija, autoimuna trombocitopenična purpura (ATP), autoimuna bolest štitne žlezde, autoimuna urtikarija, aksonalne ili neuronske neuropatije, Baloova bolest, Behcetova bolest, Bulozni pemfigoid, kardiomiopatija, Kaslmanova bolest, celijakija, Chagasova bolest, sindrom hroničnog umora, hronična inflamatorna demijelinizirajuća polineuropatija (CIDP), Hronični rekurentni multifokalni osteomijelitis (CRMO), Churg-Straussov sindrom, cikatricijski pemfigoid/benigni mukozni pemfigoid, Kronova bolest, Cogansov sindrom, Bolest hladnih aglutinina, urođeni srčani blok, Coxackie miokarditis, CREST bolest, esencijalna mešovita krioglobulinemija, demijelinizirajuće neuropatije, dermatitis herpetiformis, dermatomiozitis, Devičeva bolest (optički neuromijelitis), diskoidni lupus, Dressierov sindrom, endometrioza, eozinofilni ezofagitis, eozinofilni fasciitis, eritema nodozum, eksperimentalni alergijski

14

encefalomijelitis, Evansov sindrom, fibromijalgija, fibrozirajući alveolitis, arteritis džinovskih ćelija (temporalni arteritis), miokarditis džinovskih ćelija, glomerulonefritis, Goodpastureov sindrom, granulomatoza sa poliangiitisom (GPA) (ranije nazvana Vegenerova granulomatoza), Gravesova bolest, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, hemolitička anemija, Henoch-Schonleinova purpura, herpes gestationis, hipogamaglobulinemija, idiopatska trombocitopenična purpura (ITP), IgA nefropatija, sklerozirajuća bolest povezana sa IgG4, imunoregulatorni lipoproteini, miozitis inkluzijskog tela, intersticijski cistitis, juvenilni artritis, juvenilni dijabetes (dijabetes tipa 1), juvenilni miozitis, Kavasakijev sindrom, Lambert-Eatonov sindrom, leukocitoklastični vaskulitis, Lichen planus, Lihen skleroza, lignozni konjunktivitis, linearna IgA bolest (LAD), Lupus (SLE), lajmska bolest, Menierova bolest, mikroskopski poliangiitis, mešovita bolest vezivnog tkiva (MCTD), Moorenov čir, Mucha-Habermanova bolest, multipla skleroza, miastenija gravis, miozitis, narkolepsija, neuromijelitis optica (Devičev), neutropenija, očni cicatricijalni pemfigoid, optički neuritis, palindromni reumatizam, PANDAS (pedijatrijski autoimuni neuropsihijatrijski poremećaji povezani sa streptokokom), paraneoplastična cerebelarna degeneracija, paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH), Parry Rombergov sindrom, Parsonnage-Turnerov sindrom, pars planitis (periferni uveitis), pemfigus, periferna neuropatija, perivenozni encefalomijelitis, perniciozna anemija, POEMS sindrom, poliarteritis nodosa, autoimunski poliglandularni sindromi tipa I, II i III, reumatska polimijalgija, polimiozitis, sindrom nakon infarkta miokarda, sindrom postperikardiotomije, progesteronski dermatitis, primarna bilijarna ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, psorijaza, psorijatični artritis, idiopatska plućna fibroza, pioderma gangrenozum, Čista aplazija crvenih krvnih zrnaca, Rainaudov fenomen, reaktivni artritis, refleksna simpatička distrofija, Reiterov sindrom, relapsirajući polihondritis, Sindrom nemirnih nogu, retroperitonealna fibroza, reumatska groznica, reumatoidni artritis, sarkoidoza, Schmidtov sindrom, skleritis, skleroderma, Sjögrenov sindrom, autoimunost sperme i testisa, sindrom ukočene osobe, Subakutni bakterijski endokarditis (SBE), Susacov sindrom, simpatička oftalmija, Takaiasuov arteritis, temporalni arteritis/arteritis gigantskih ćelija, trombocitopenična purpura (TTP), Tolosa-Huntov sindrom, transverzalni mijelitis, dijabetes tipa 1, ulcerozni kolitis, nediferencirana bolest vezivnog tkiva(UCTD), uveitis, vaskulitis, vezikulobulozna dermatoza, vitiligo, Vegenerova granulomatoza (tj., granulomatoza sa poliangiitisom (GPA), traumatska povreda mozga, artritis, reumatoidni artritis, psorijatični artritis, juvenilni idiopatski artritis, multipla skleroza, sistemski eritematozni lupus(SLE), mijastenija gravis, juvenilni dijabetes, dijabetes

14

melitus tipa 1, Guillain-Barreov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, ankilozantni spondilitis, psorijaza, Sjögrenov sindrom, vaskulitis, glomerulonefritis, autoimuni tiroiditis, Behcetova bolest, Kronova bolest, ulcerozni kolitis, bulozni pemfigoid, sarkoidoza, ihtioza, Gravesova oftalmopatija, inflamatorna bolest creva, Addisonova bolest, vitiligo, astma, alergijska astma, akne vulgaris, celijakija, hronični prostatitis, inflamatorna bolest creva, inflamatorna bolest karlice, reperfuziona povreda, sarkoidoza, odbacivanje transplantata, intersticijalni cistitis, ateroskleroza, atopijski dermatitis, Alexanderova bolest, Alperova bolest, Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza, ataksija telangiektazija, Battenova bolest (takođe poznata kao Spielmeier-Vogt-Sjogren-Battenova bolest), goveđa spongiformna encefalopatija (BSE), Canavanova bolest, Cockayne-ov sindrom, kortikobazalna degeneracija, Creutzfeldt-Jakobova bolest, frontotemporalna demencija, Gerstmann-Straussler-Scheinkerov sindrom, Hantingtonova bolest, HTV povezana demencija, Kenedijeva bolest, Krabbeova bolest, kuru, demencija sa Levijevim telima, Machado-Josephova bolest (spinocerebelarna ataksija tip 3), multipla skleroza, multipla sistemska atrofija, narkolepsija, neuroborelioza, Parkinsonova bolest, Pelizaeus-Merzbaherova bolest, Pickova bolest, primarna lateralna skleroza, prionske bolesti, Refsumova bolest, Sandhoffova bolest, Schilderova bolest, subakutna kombinovana degeneracija kičmene moždine usled perniciozne anemije, šizofrenija, spinocerebelarna ataksija (više tipova sa različitim karakteristikama), spinalna mišićna atrofija, sindrom Steele‐Richardson‐Olszewskog, tabes dorsalis, dijabetes (npr. tip I ili tip II), gojaznost, metabolički sindrom, mitohondrijalna bolest (npr., disfunkcija mitohondrija ili aberantna funkcija mitohondrija), gljivična infekcija, odbacivanje transplantata ili kardiovaskularna bolest (npr. kongestivna srčana insuficijencija; aritmogeni sindromi (npr. paroksomalna tahikardija, odložena posle depolarizacija, ventrikularna tahikardija, iznenadna tahikardija, aritmije izazvane vežbanjem, sindromi dugog QT intervala ili dvosmerna tahikardija); tromboembolijski poremećaji (npr. arterijski kardiovaskularni tromboembolijski poremećaji, venski kardiovaskularni tromboembolijski poremećaji ili tromboembolijski poremećaji u komorama srca); ateroskleroza; restenoza; bolest perifernih arterija; operacija koronarne bajpasa; bolest karotidnih arterija; arteritis; miokarditis; kardiovaskularno zapaljenje; vaskularno zapaljenje; koronarna bolest srca (CHD); nestabilna angina (UA); nestabilna refraktorna angina; stabilna angina (SA); hronična stabilna angina; akutni koronarni sindrom (ACS); infarkt miokarda (prvi ili rekurentni); akutni infarkt miokarda (AMI); infarkt miokarda; infarkt miokarda bez Q talasa; ne-STE infarkt miokarda; koronarna arterijska bolest; ishemijska bolest srca; srčana ishemija; ishemija; ishemijska iznenadna smrt; prolazni

14

ishemijski napad; kap; periferna okluzivna arterijska bolest; venska tromboza; duboka venska tromboza; tromboflebitis; arterijska embolija; tromboza koronarne arterije; tromboza cerebralne arterije, cerebralna embolija; embolija bubrega; plućna embolija; tromboza (npr. povezana sa protetskim zaliscima ili drugim implantatima, stalnim kateterima, stentovima, kardiopulmonalnim bajpasom, hemodijalizom); tromboza (npr. povezana sa aterosklerozom, operacijom, produženom imobilizacijom, arterijskom fibrilacijom, urođenom trombofilijom, rakom, dijabetesom, hormonima ili trudnoćom); ili srčane aritmije (npr. supraventrikularne aritmije, atrijalne aritmije, atrijalno treperenje ili atrijalna fibrilacija). U realizacijama, bolest je policistična bolest. U realizacijama, bolest je policistična bolest bubrega. U realizacijama, bolest je stenoza. U realizacijama, bolest je restenoza. U realizacijama, bolest je neointimalna proliferacija. U realizacijama, bolest je neointimalna hiperplazija.

[0251] U drugom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja koja su ovde otkrivena za upotrebu u lečenju starenja kod subjekta kome je potreban takav tretman. U realizacijama, upotreba može obuhvatati davanje subjektu jedne ili više kompozicija ili jedinjenja kao što je ovde opisano, uključujući realizacije (npr. aspekt, izvođenje, primer, tabelu, sliku ili zahtev).

[0252] U drugom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja za upotrebu u produžavanju životnog veka ili indukovanju dugovečnosti kod subjekta kome je potreban takav tretman. U realizacijama, upotreba može obuhvatati davanje subjektu jedne ili više kompozicija ili jedinjenja kao što je ovde opisano, uključujući realizacije (npr. aspekt, izvođenje, primer, tabelu, sliku ili zahtev).

[0253] U jednom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano za upotrebu u lečenju policistične bolesti kod subjekta kome je potreban takav tretman. Policistična bolest može biti policistična bolest bubrega. Upotreba može obuhvatati davanje subjektu jedne ili više kompozicija ili jedinjenja opisanih ovde. Upotreba može obuhvatati davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja (npr., modulatora mTOR (npr. inhibitora) kao što je gore opisano).

[0254] U jednom aspektu je obezbeđena jedna ili više kompozicija ili jedinjenja kako je ovde opisano za upotrebu u lečenju kod subjekta kome je potreban takav tretman. Stenoza može biti

14

restenoza. Upotreba može uključiti davanje subjektu ovde opisanih jedne ili više kompozicija ili jedinjenja. U realizacijama, jedna ili više kompozicija ili jedinjenja se primenjuju u stentu koji eluira lek. Upotreba može obuhvatati davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedne ili više ovde opisanih kompozicija ili jedinjenja (npr. modulatora mTOR (npr. inhibitora) kao što je gore opisano).

[0255] U realizacijama, bolest je ovde opisana bolest i jedinjenje je ovde opisano jedinjenje, a kompozicija je kompozicija koja je ovde opisana.

Metode modulacije mTOR

[0256] U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena su selektivniji inhibitori mTORC1 u odnosu na mTORC2. U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena su selektivniji inhibitori mTORC2 u odnosu na mTORC1. U nekim realizacijama, jedinjenja koja su ovde otkrivena ne pokazuju razliku u selektivnosti između mTORC1 i mTORC2.

[0257] Ovde je takođe otkriven metod modulacije aktivnosti mTORC1 kod subjekta kome je to potrebno, obuhvatajući davanje subjektu efikasne količine jedinjenja kao što je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Metoda može obuhvatati inhibiciju aktivnosti mTORC1. Metoda može obuhvatati inhibiciju aktivnosti mTORC1 i ne inhibiranje aktivnosti mTORC2.

[0258] Metoda može obuhvatati inhibiranje aktivnosti mTORC1 više nego inhibiranje aktivnosti mTORC2. Metoda može obuhvatati inhibiciju aktivnosti mTORC1 najmanje 1,1 puta više od inhibicije aktivnosti mTORC2 (npr. najmanje 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 10000, 20000, 30000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000, 100000, 100000, 200000, 300000, 400000, 500000, 600000, 700000, 800000, 900000, ili 1000000 puta).

[0259] Takođe je opisana metoda modulacije aktivnosti mTORC2 kod subjekta kome je to potrebno, obuhvatajući davanje subjektu efikasne količine jedinjenja kao što je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Metoda može obuhvatati inhibiranje aktivnosti

14

mTORC2. Metoda može obuhvatati inhibiciju aktivnosti mTORC2 i ne inhibiranje aktivnosti mTORC1.

[0260] Metoda može obuhvatati inhibiranje aktivnosti mTORC2 više nego inhibiranje aktivnosti mTORC1. Metoda može uključiti inhibiciju aktivnosti mTORC2 najmanje 1,1 puta više od inhibicije aktivnosti mTORC1 (npr., najmanje 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 10000, 20000, 30000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000, 100000, 100000, 200000, 300000, 400000, 500000, 600000, 700000, 800000, 900000, ili 1000000 puta).

[0261] U nekim realizacijama, mTOR je u ćeliji. U nekim realizacijama, ćelija je ćelija sisara, kao što je ljudska ćelija. Ćelija može biti izolovana in vitro, graditi deo tkiva in vitro, ili može biti deo organizma.

Dalja obelodanjivanja

[0262] Ovde su takođe otkrivena jedinjenja I-1 do I-59, varijante I-60 do I-71, jedinjenja II-1 do II-71 i realizacije II-72 do II-83, kao što sledi:

Jedinjenje I-1. Jedinjenje Formule I:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O ili -OR<3>;

R<28>je -H ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu najmanje jedan od R<28>i R<40>nije H;

Z<1>je O ili S;

1

R<28a>i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

pri čemu je veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, vezana na -C(=Z<1>)- ili L<2>; i pri čemu je veza na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, vezana na B ili L<3>;

1 1

svaki X<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten; L<1>je izabran od

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1 2

1

B<1>je izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heterociklilen-arilen

i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O) -, pri čemu je

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogenom, (C1-C6)alkilom, -(C1-C6)alkilen-

1 4

heteroarilom, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroarilom; ili -C(O)NR<3>-heterociklilom;

svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<6>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<7>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<8>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno broj od jedan do 6.

Jedinjenje I-2. Jedinjenje Formule II:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O ili -OR<3>;

R<28>je -H ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu najmanje jedan od R<28>i R<40>nije H;

Z<1>je O ili S;

1

R<28a>i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

pri čemu je veza na levoj strani A<1>, kao što je nacrtano, vezana na -C(=Z<1>)-; i pri čemu je veza na desnoj strani dela A<2>, kao što je nacrtano, vezana na B;

1

svaki X<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

B je izabran od

1

B<1>je izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-,

(C6-C10)arilen-,

NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-,

1

heterociklilen-arilen i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O) -, pri čemu je

veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogenom, (C1-C6)alkilom, -(C1-C6)alkilenheteroarilom, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroarilom; ili -C(O)NR<3>-heterociklilom;

svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno broj od jedan do 6.

Jedinjenje I-3. Jedinjenje I-1 ili I-2, pri čemu R<32>je =O.

Jedinjenje I-4. Jedinjenje I-1 ili I-2, pri čemu R<32>je -OR<3>.

Jedinjenje I-5. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-4, pri čemu su jedinjenja predstavljena strukturom Formule I-40:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

Jedinjenje I-6. Jedinjenje I-5, pri čemu Z<1>je O.

Jedinjenje I-7. Jedinjenje I-5, pri čemu Z<1>je S.

Jedinjenje I-8. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni.

Jedinjenje I-9. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan.

Jedinjenje I-10. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan.

Jedinjenje I-11. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B. Jedinjenje I-12. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -A<1>-A<2>-B.

Jedinjenje I-13. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni.

Jedinjenje I-14. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan.

Jedinjenje I-15. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

Jedinjenje I-16. Bilo koje od jedinjenja I-5 do I-7, pri čemu R<40a>je -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena.

Jedinjenje I-17. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-4, pri čemu su jedinjenja predstavljena strukturom Formule I-28:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

Jedinjenje I-18. Jedinjenje I-17, pri čemu Z<1>je O.

Jedinjenje I-19. Jedinjenje I-17, pri čemu Z<1>je S.

Jedinjenje I-20. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni.

Jedinjenje I-21. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan.

Jedinjenje I-22. Bilo koje od jedinjenja 1-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan.

Jedinjenje I-23. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B. Jedinjenje I-24. Bilo koje od jedinjenja 1-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -A<1>-A<2>-B.

Jedinjenje I-25. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni.

Jedinjenje I-26. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan.

Jedinjenje I-27. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je --L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

Jedinjenje I-28. Bilo koje od jedinjenja I-17 do I-19, pri čemu R<28a>je -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena.

Jedinjenje I-29. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-11, I-13 do I-15, I-17 do I-23, i I-25 do I-27, pri čemu L<1>je

1 1

Jedinjenje I-30. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-11, I-13 do I-15, I-17 do I-23, i I-25 do I-27, pri čemu L<1>je

Jedinjenje I-31. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-11, I-13 do I-15, I-17 do I-23, i I-25 do I-27, pri čemu L<1>je

Jedinjenje I-32. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-11, I-13 do I-15, I-17 do I-23, i I-25 do I-27, pri čemu L<1>je

Jedinjenje I-33. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-11, I-13 do I-15, I-17 do I-23, i I-25 do I-27, pri čemu L<1>je

Jedinjenje I-35. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-13 do I-14, I-17 do I-19, i I-25 do I-26, pri čemu L<3>je

Jedinjenje I-36. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-8, I-10, I-13, I-17 do I-19, I-20, I-22, I-25 i I-29 do I-35, pri čemu A<1>je odsutan.

Jedinjenje I-37. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-9, I-11 do I-12, I-14 do I-15, 1-17 do I-19, I-21, I-23 do I-24, I-26 do I-27, i I-29 do 1-35, pri čemu A<1>je

Jedinjenje I-38. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-9, I-11 do I-12, I-14 do I-15, 1-17 do I-19, I-21, I-23 do I-24, I-26 do I-27, i I-29 do 1-35, pri čemu A<1>je

1 2

Jedinjenje I-44. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-9, I-11 do I-12, I-14 do I-15, 1-17 do I-19, I-21, I-23 do I-24, I-26 do I-27, i I-29 do 1-35, pri čemu A<1>je

1

Jedinjenje I-45. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-9, I-17 do I-21, i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je odsutan.

Jedinjenje I-46. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je

Jedinjenje I-47. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je

Jedinjenje I-48. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je

koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do i čemu A<2>je

koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do

i čemu A<2>je.

1 4

Jedinjenje I-51. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je

Jedinjenje I-52. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je.

Jedinjenje I-53. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-7, I-10 do I-15, I-17 do I-19, I-22 do I-27 i I-29 do I-44, pri čemu A<2>je

Jedinjenje I-55. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-53, pri čemu B je

Jedinjenje I-56. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-53, pri čemu B<1>je

NR<3>-(C(R<3>)2)n-.

Jedinjenje I-57. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-53, pri čemu B<1>je

Jedinjenje I-58. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-57, pri čemu R<4>je 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogen, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilen-heteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, ili -C(O)NR<3>-heteroaril.

Jedinjenje I-59. Bilo koje od jedinjenja I-1 do I-58, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu jedinjenje ima sledeću formulu:

1

[0263] Realizacija I-60. Jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

1

11

12

1

14

1

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili izomer.

[0264] Realizacija I-61. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz realizacije I-60, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili ekscipijensa.

[0265] Realizacija I-62. Jedinjenje iz realizacije I-60, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju, prevenciji ili smanjenju rizika od bolesti ili stanja posredovanih sa mTOR.

[0266] Realizacija I-63. Jedinjenje za upotrebu u bilo kojoj od Realizacija I-62, pri čemu je

bolest kancer ili bolest posredovana imunitetom.

[0267] Realizacija I-64. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji I-63, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, jajnika kancer, endometrioze jajnika, kancera testisa, kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastom, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma,

1 1

leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.

[0268] Realizacija I-65. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji I-63, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana iz rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa

[0269] Realizacija I-66. Jedinjenje iz realizacije I-60, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera.

[0270] Realizacija I-67. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji I-66, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.

[0271] Realizacija I-68. Jedinjenje iz realizacije I-60, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti posredovane imunitetom.

[0272] Realizacija I-69. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji I-68, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana iz rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva ,

1 2

tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.

[0273] Ostvarenje I-70. Jedinjenje Ostvarenja I-60, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju stanja vezanog za uzrast.

[0273] Realizacija I-70. Jedinjenje iz realizacije I-60, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju stanja povezanih sa starenjem.

[0274] Realizacija I-71. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji I-70, pri čemu je stanje povezano sa starenjem izabrano od sarkopenije, atrofije kože, gubitka mišića, atrofije mozga, ateroskleroze, arterioskleroze, plućnog emfizema, osteoporoze, osteoartritisa, visokog krvnog pritiska, erektilne disfunkcije, demencije, Hantingtonove bolesti, Alchajmerove bolesti, katarakte, starosne makularne degeneracije, kancera prostate, moždanog udara, smanjenog životnog veka, oštećene funkcije bubrega i gubitka sluha u vezi sa starenjem, invaliditeta kretanja u vezi sa starenjem (npr. slabost), kognitivnog opadanja, starenja demencija, oštećenje pamćenja, ukočenost tetiva, srčana disfunkcija kao što je hipertrofija srca i sistolna i dijastolna disfunkcija, imunosenscencija, kancer, gojaznost i dijabetes.

[0275] Jedinjenje II-1. Jedinjenje Formule Ic:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O, -OR<3>, -N3, ili -O-C(=Z<1>)-R<32a>;

R<28>je -H, (C1-C6)alkil, ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

1

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu kada R<28>i R<40>su H, onda R<32>nije =O;

svaki Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>, R<32a>, i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1 4

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1

svaki B je nezavisno izabran od

svaki B<1>je nezavisno izabran od

NR<3>-(C(R<3>)2)n-, NR<3>-(C(R<3>)2)n-(C6-C10)arilen-(C(R<3>)2)n-, NR<3>-(C(R<3>)2)nheteroarilen-, NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-(C(R<3>)2)n-, (C6-C10)arilen-, -NR<3>-(C(R<3>)2)n-NR<3>C(O)-, NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-, heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heterociklilen-arilen

1

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, i NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-(C(R<3>)2)n -, pri čemu je veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen svaki nezavisno opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril opciono supstituisani sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogen, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilen-heteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroaril, ili -C(O)NR<3>-heterociklil;

svaki R<5>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<6>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<7>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki R<8>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, -C(O)OR<3>, ili -N(R<3>)2, pri čemu je alkil iz (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa -N(R<3>)2 ili -OR<3>;

svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0276] Jedinjenje II-1A. Jedinjenje Formule Ia:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu:

R<32>je -H, =O, -OR<3>, -N3, ili -O-C(=Z<1>)-R<32a>;

R<28>je -H, (C1-C6)alkil, ili -C(=Z<1>)-R<28a>;

R<40>je -H ili -C(=Z<1>)-R<40a>;

pri čemu kada R<28>i R<40>su H, onda R<32>nije =O;

svaki Z<1>je nezavisno O ili S;

R<28a>, R<32a>, i R<40a>su nezavisno -A<1>-L<1>-A<2>-B; -A<1>-A<2>-B; -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B; -O-(C1-C6)alkil; ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)arila nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena;

A<1>i A<2>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

1

svaki X<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki W<1>je nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki G<1>i G<2>su nezavisno heteroarilenski ili heterociklilenski prsten;

svaki L<1>je nezavisno izabran od

1

L<2>i L<3>su nezavisno odsutni ili su nezavisno izabrani od

svaki B je nezavisno izabran od

1

<3>)2)n-,

-NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-, -(C6-C10)arilen-, NR<3>-(C(R3)2)n-NR<3>C(O)-, NR<3>-(C(R<3>)2)n-heteroarilen-heterociklilen-(C6-C10)arilen-, heteroarilenheterociklilen-(C6-C10)arilen-,

heterociklilen-arilen

i

NR<3>-(C(R<3>)2)n-S(O)2-arilen-C(O)-, pri čemu je veza na levoj strani B<1>, kao što je nacrtano, vezana na A<2>, L<3>, ili L<1>; i pri čemu su heteroarilen, heterociklilen, i arilen opciono supstituisani sa alkilom, hidroksialkilom, haloalkilom, alkoksi, halogenom, ili hidroksilom;

svaki R<3>je nezavisno H ili (C1-C6)alkil;

svaki R<4>je nezavisno H, (C1-C6)alkil, halogen, 5-12 člani heteroaril, 5-12 člani heterociklil, (C6-C10)aril, pri čemu su heteroaril, heterociklil, i aril opciono supstituisani

1 1

sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogenom, (C1-C6)alkilom, -(C1-C6)alkilen-heteroarilom, -(C1-C6)alkilen-CN, -C(O)NR<3>-heteroarilom, ili -C(O)NR<3>-heterociklilom;

svaki Y je nezavisno C(R<3>)2 ili veza;

svaki n je nezavisno ceo broj od jedan do 12;

svaki o je nezavisno ceo broj od nula do 30;

svaki p je nezavisno ceo broj od nula do 12;

svaki q je nezavisno ceo broj od nula do 30; i

svaki r je nezavisno ceo broj od jedan do 6.

[0277] Jedinjenje II-2. Jedinjenje II-1, pri čemu R<32>je =O.

[0278] Jedinjenje II-3. Jedinjenje II-1, pri čemu R<32>je -OR<3>.

[0279] Jedinjenje II-4. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu jedinjenje je predstavljeno sa strukturom Formule (I-40b):

pri čemu R<40>je -C(=Z<1>)-R<40a>.

1 2

[0280] Jedinjenje II-5. Jedinjenje II-4, pri čemu Z<1>je O.

[0281] Jedinjenje II-6. Jedinjenje II-4, pri čemu Z<1>je S.

[0282] Jedinjenje II-7. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni.

[0283] Jedinjenje II-8. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan.

[0284] Jedinjenje II-9. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan.

[0285] Jedinjenje II-10. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B.

[0286] Jedinjenje II-11. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -A<1>-A<2>-B.

[0287] Jedinjenje II-12. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni.

[0288] Jedinjenje II-13. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan.

[0289] Jedinjenje II-14. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0290] Jedinjenje II-15. Bilo koje od jedinjenja II-4 do II-6, pri čemu R<40a>je -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu aril iz -O-(C6-C10)arila je nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena.

[0291] Jedinjenje II-16. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu su jedinjenja predstavljena strukturom Formule (I-28b):

1

pri čemu R<28>je -C(=Z<1>)-R<28a>.

[0292] Jedinjenje II-17. Jedinjenje II-16, pri čemu Z<1>je O.

[0293] Jedinjenje II-18. Jedinjenje II-16, pri čemu Z<1>je S.

[0294] Jedinjenje II-19. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni.

[0295] Jedinjenje II-20. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan.

[0296] Jedinjenje II-21. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan.

[0297] Jedinjenje II-22. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B.

[0298] Jedinjenje II-23. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -A<1>-A<2>-B.

[0299] Jedinjenje II-24. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni.

[0300] Jedinjenje II-25. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan.

1 4

[0301] Jedinjenje II-26. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0302] Jedinjenje II-27. Bilo koje od jedinjenja II-16 do II-18, pri čemu R<28a>je -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena.

[0303] Jedinjenje II-28. Jedinjenje II-1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu jedinjenje je predstavljeno sa strukturom Formule (I-32b):

pri čemu R<32>je -O-C(=Z<1>)-R<32a>.

[0304] Jedinjenje II-29. Jedinjenje II-28, pri čemu Z<1>je O.

[0305] Jedinjenje II-30. Jedinjenje II-28, pri čemu Z<1>je S.

[0306] Jedinjenje II-31. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>i A<2>su odsutni.

[0307] Jedinjenje II-32. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<2>je odsutan.

[0308] Jedinjenje II-33. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B, pri čemu A<1>je odsutan.

[0309] Jedinjenje II-34. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -A<1>-L<1>-A<2>-B.

1

[0310] Jedinjenje II-35. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -A<1>-A<2>-B.

[0311] Jedinjenje II-36. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>i A<1>su odsutni.

[0312] Jedinjenje II-37. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je --<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<2>je odsutan.

[0313] Jedinjenje II-38. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -L<2>-A<1>-L<1>-A<2>-L<3>-B, pri čemu L<3>je odsutan.

[0314] Jedinjenje II-39. Bilo koje od jedinjenja II-28 do II-30, pri čemu R<32a>je -O-(C1-C6)alkil ili -O-(C6-C10)aril; pri čemu je aril iz -O-(C6-C10)aril nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata izabranih od -NO2 i halogena.

[0315] Jedinjenje II-40. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-10, II-12 do II-22, II-24 do II-35, i II-36 do II-39, pri čemu L<1>je

[0317] Jedinjenje II-42. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-10, II-12 do II-22, 24-35, i 36-39, pri čemu L<1>je

1

[0318] Jedinjenje II-43. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-10, II-12 do II-22, II-24 do II-35, i II-36 do II-39, pri čemu L<1>je

[0323] Jedinjenje II-48. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-7, II-9, II-12, II-16 do II-19, II-21, II-24, II-28 do II-31, II-33, II-36, i II-39 do II-45, pri čemu A<1>je odsutan.

[0324] Jedinjenje II-49. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-8, II-10 do II-11, II-13 do II-18, II-20, II-22 do II-23, II-25 do II-30, II-32, II-34 do II-35,i II-37 do II-45, pri čemu A<1>je

1

[0325] Jedinjenje II-50. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-8, II-10 do II-11, II-13 do II-18, II-20, II-22 do II-23, II-25 do II-30, II-32, II-34 t o II-35,i II-37 do II-45, pri čemu A<1>je

1

[0330] Jedinjenje II-55. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-8, II-10 do II-11, II-13 do II-18, II-20, II-22 do II-23, II-25 do II-30, II-32, II-34 do II-35, i II-37 do II-45, pri čemu A<1>je.

[0331] Jedinjenje II-56. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-8, II-10 do II-11, II-13 do II-18, II-20, II-22 do II-23, II-25 do II-30, II-32, II-34 do II-35, i II-37 do II-45, pri čemu A<1>je

[0332] Jedinjenje II-57. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-8, II-15 do II-20, II-27 do II-32, i II-39 do II-45, pri čemu A<2>je odsutan.

[0333] Jedinjenje II-58. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je

[0335] Jedinjenje II-60. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je

1

[0336] Jedinjenje II-61. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je

2. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II- A<2>je.

[0338] Jedinjenje II-63. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je

[0339] Jedinjenje II-64. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je.

[0340] Jedinjenje II-65. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-6, II-9 do II-18, II-21 do II-30, i II-33 do II-45, pri čemu A<2>je

2

[0343] Jedinjenje II-68. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-65, pri čemu B<1>je

NR<3>-(C(R<3>)2)n-.

[0344] Jedinjenje II-69. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-65, pri čemu B<1>je

[0345] Jedinjenje II-70. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-69, pri čemu R<4>je 5-12 člani heteroaril, opciono supstituisan sa -N(R<3>)2, -OR<3>, halogen, (C1-C6)alkil, -(C1-C6)alkilenheteroaril, -(C1-C6)alkilen-CN, ili -C(O)NR<3>-heteroaril.

[0346] Jedinjenje II-71. Bilo koje od jedinjenja II-1 do II-70, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer, pri čemu jedinjenje ima sledeću formulu:

2 1

[0347] Realizacija II-72. Jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

2 2

2

24

2

21

22

2

21

22

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili tautomer.

[0348] Realizacija II-73. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz realizacije II-72, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili ekscipijensa.

2

[0349] Realizacija II-74. Jedinjenje iz realizacije II-72, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju, prevenciji ili smanjenju rizika od bolesti ili stanja posredovanih sa mTOR.

[0350] Realizacija II-75. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-74, pri čemu je bolest kancer ili bolest posredovana imunitetom.

[0351] Realizacija II-76. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-75, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.

[0352] Realizacija II-77. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-75, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana od rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.

[0353] Realizacija II-78. Jedinjenje iz realizacije II-72, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju imunološki posredovane bolesti.

[0354] Realizacija II-79. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-78, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa,

2 4

kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.

[0355] Realizacija II-80. Jedinjenje iz realizacije II-72, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju imunološki posredovane bolesti.

[0356] Realizacija II-81. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-80, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana od rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.

[0357] Realizacija II-82. Jedinjenje iz realizacije II-72, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju stanja povezanih sa starenjem.

[0358] Realizacija II-83. Jedinjenje za upotrebu prema Realizaciji II-82, pri čemu je stanje povezano sa starenjem izabrano od sarkopenije, atrofije kože, gubitka mišića, atrofije mozga, ateroskleroze, arterioskleroze, plućnog emfizema, osteoporoze, osteoartritisa, visokog krvnog pritiska, erektilne disfunkcije, demencije, Hantingtonove bolesti, Alchajmerove bolesti, katarakta, starosne makularna degeneracije, kancera prostate, moždanog udara, smanjenog očekivanog životnog veka, oštećene funkcije bubrega i gubitka sluha u vezi sa starenjem, onesposobljenosti kretanja u vezi sa starenjem (npr. slabost), kognitivnog pada, demencije povezane sa starenjem, oštećenja pamćenja, ukočenosti tetiva, srčane disfunkcije kao što je hipertrofija srca i sistolna i dijastolna disfunkcija, imunosenscencije, kancera, gojaznosti i dijabetesa.

Primeri

2

[0359] Pronalazak je dalje ilustrovan sledećim primerima i primerima sinteze, koji ne treba da se tumače kao ograničavanje ovog pronalaska po obimu ili duhu na ovde opisane specifične procedure. Podrazumeva se da su primeri dati da ilustruju određene realizacije i da se time ne nameće nikakvo ograničenje obima otkrivanja. Dalje treba razumeti da se može pribeći raznim drugim realizacijama, modifikacijama i njihovim ekvivalentima koji se mogu predložiti stručnjacima u ovoj oblasti bez odstupanja od duha ovog pronalaska i/ili obima priloženih zahteva.

[0360] Definicije koje se koriste u sledećim primerima i drugde u opisu su:

CH2Cl2, DCM metilen hlorid, dihlorometan

CH3CN, MeCN acetonitril

DIPEA diizopropiletil amin ili Hunigova baza

DMA dimetilacetamid

DME dimetoksietan

DMF N,N-Dimetilformamid

EDCI 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid

EtOAc etil acetat

h sat

H2O voda

HCl hlorovodonična kiselina

HOBt hidroksibenzotriazol

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

LCMS tečna hromatografija-masena spektrometrija

MeOH metanol

MTBE metil terc-butil etar

Na2SO4 natrijum sulfat

PEG polietilen glikol

TBDMS terc-butildimetilsilil

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TMS tetrametilsilan

Bifunkcionalni rapalozi serije 1

2

[0361] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 1 je prikazana na šemi 1 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7, i r = 1 do 6. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Karbamatni deo, gde je Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima. Šema 1. Bifunkcionalni rapalozi serije 1

Bifunkcionalni rapalozi serije 2

[0362] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 2 je prikazana na šemi 2 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkil grupe. Pred-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 2. Bifunkcionalni rapalozi serije 2

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 3

2

[0363] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 3 je prikazana na šemi 3 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 3. Bifunkcionalni rapalozi serije 3

Post-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 4

[0364] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 4 je prikazana na šemi 4 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Pred- i post-vezujući deo amina mogu svaki obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde je Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 4. Bifunkcionalni rapalozi serije 4

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin Post-vezujući deo koji

2

Bifunkcionalni rapalozi serije 5

[0365] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 5 je prikazana na šemi 5 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, pred-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde je Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 5. Bifunkcionalni rapalozi serije 5

Pred-vezujući deo koji

sadrži amin

Bifunkcionalni rapalozi serije 6

[0366] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 6 je prikazana na šemi 6 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I i II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 6. Bifunkcionalni rapalozi serije 6

Post-vezujući deo koji

sadrži amin

2

Bifunkcionalni rapalozi serije 7

[0367] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 7 je prikazana na šemi 7 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Svaki od pred- i post-vezujućih delova amina mogu obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I ili II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 7. Bifunkcionalni rapalozi serije 7

Pred-vezujući deo

koji sadrži amin Post-vezujući deo

Bifunkcionalni rapalozi serije 8

[0368] Opšta struktura bifunkcionalnih rapaloga serije 8 je prikazana na šemi 8 ispod. Za ove tipove bifunkcionalnih rapaloga, vezujući deo može obuhvatati varijacije gde je q = 0 do 30, kao što je q = 1 do 7. Vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R = H i C1-C6 alkilne grupe. Post-vezujući deo amina može obuhvatati supstitucije, kao što su R<2>= H, C1-C6 alkilne grupe, i cikloalkil koji obuhvata 4 do 8-člane prstenove. Karbamatni deo, gde Z<1>= O ili S, može biti vezan za rapalog na R<40>ili R<28>(Formula I ili II), obuhvatajući varijacije koje se nalaze u tabeli 1 u delu sa primerima. Inhibitor aktivnog mesta mTOR može se vezati za vezujući deo preko primarnog ili sekundarnog amina, i može obuhvatati varijacije koje se nalaze u tabeli 2 u delu sa primerima.

Šema 8. Bifunkcionalni rapalozi serije 8

Post-vezujući deo Post-vezujući deo

koji sadrži amin koji sadrži amin

24

Tabela 1. Rapalog monomeri koji sadrže karbonat i tiokarbonat.

Tabela 2. Monomeri inhibitora aktivnog mesta.

24

��

Tabela 3. Monomeri inhibitora aktivnog mesta

24

Tabela 4. Pred- i post-vezujući delovi koji sadrže amin.

24

2

21

22

2

Priprema monomera inhibitora aktivnog mesta

2 4 Monomer A. 5-(4-amino-1-(4-(aminometil)benzil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0369]

Korak 1: Sinteza terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamata

[0370] U rastvor 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (3.8 g, 14.56 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (20 mL) dodat je NaH (582.27 mg, 14.56 mmol, 60 tež.%, 1.0 ekviv.) na 0 °C i reakcioni rastvor je mešan na ovoj temperaturi tokom 30 min, zatim je u reakciju dodat tercbutil 4-(bromometil)benzilkarbamat (4.59 g, 15.29 mmol, 1.05 ekviv.) na 0 °C i reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvor je sipan u H2O (80 mL) i čvrsta supstanca koja je istaložena je filtrirana. Čvrsti kolač je ispran sa H2O (2 x 10 mL) i zatim osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamat (5 g, 53% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C18H21IN6O2: 503.07; pronađeno 503.2.

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamata

[0371] U dvofaznu suspenziju terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamata (5 g, 7.68 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (2.40 g, 9.22 mmol, 1.2 ekviv.) i Pd(PPh3)4 (887.66 mg, 768.16 µmol, 0.1 ekviv.) u DME (100 mL) i H2O (50 mL) dodat je Na2CO3 (1.91 g, 23.04 mmol, 3.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana, filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL). Organske faze su kombinovane i isprane sa fiziološkim rastvorom(10 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamat (4.5 g, 82% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C25H26N8O3: 487.22; pronađeno 487.2.

2

Korak 3: Sinteza 5-(4-amino-1-(4-(aminometil)benzil)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0372] U rastvor terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)benzilkarbamata (4.5 g, 6.29 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (50 mL) dodata je TFA (30.80 g, 270.12 mmol, 20 mL, 42.95 ekviv.) na 0 °C. Reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je rastvoren u 10 mL MeCN, a zatim sipan u MTBE (100 mL). Čvrsta supstanca koja se istaložila je zatim filtrirana i čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 5-[4-amino-1-[[4-(aminometil)fenil]metil]pirazolo[3,4-d]pirimidin- 3-il]-1,3-benzoksazol-2-amin (2.22 g, 71% prinosa, TFA) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H18N8O: 387.16; pronađeno 387.1.

Monomer B. 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-6-ol so trifluorosirćetne kiseline.

[0373]

Korak 1: Sinteza terc-butil N-(4-{4-amino-3-[6-(benziloksi)-1H-indol-2-il]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il }butil)karbamata

[0374] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (300 mg, 694 µmol, 1.0 ekviv.) i (6-(benziloksi)-1-(terc-butoksikarbonil)-1H-indol-2-il)boronske kiseline (763 mg, 2.08 mmol, 3.0 ekviv.) u DMF (2.6 mL), EtOH (525 µL), i H2O (350 µL) su dodati Pd(OAc)2 (15.5 mg, 69 µmol, 0.1 ekviv.), trifenilfosfin (36.1 mg, 138 µmol, 0.2 ekviv.), i natrijum karbonat (440 mg, 4.16 mmol, 6.0 ekviv.). Reakcija je zagrevana na 80 °C tokom 20 h, ohlađena do sobne temperature i ugašena sa H2O (10 mL) i

2

EtOAc (10 mL). Smeša je prebačena u levak za odvajanje i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa zas. vodenim rastvorom NaCl (1 x 20 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen silika gel hromatografijom (20→85% EtOAc/heptan) da bi se dobio proizvod (201 mg, 46% prinosa) u vidu narandžaste čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C29H33N7O3: 528.27; pronađeno 528.2.

Korak 2: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(6-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0375] U rastvor terc-butil N-(4-{4-amino-3-[6-(benziloksi)-1H-indol-2-il]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il}butil)karbamata (1.0 ekviv.) u EtOH je dodat Pd/C (10 mol%). Reakcija je prečišćena sa H2 i reakcija je ostavljena da se meša u atmosferi H2 dok se ne potroši početni materijal, kao što je određeno pomoću LCMS. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc, filtrirana preko Celita i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da bi se dobio željeni proizvod.

Korak 3: Sinteza 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-6-ola

[0376] U rastvor terc-butil (4-(4-amino-3-(6-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 ekviv.) u anhidrovanom DCM je dodata TFA (50 ekviv.) u kapima na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C i zagrejana do sobne temperature. Kada se reakcija završi, kao što je određeno pomoću LCMS, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MeCN, zatim ukapan u MTBE tokom 10 min. Supernatant je uklonjen i talog je sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-6-ol.

Monomer C. 5-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0377]

2

Korak 1: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0378] U suspenziju 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (5 g, 19.16 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (50.0 mL) dodat je NaH (766.22 mg, 19.16 mmol, 60 tež.%, 1.0 ekviv.) na 4 °C. Smeša je mešana na 4 °C tokom 30 min. U reakcionu smešu je dodat terc-butil 6-(bromometil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (6.87 g, 21.07 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF (30 mL) na 4 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je zatim ohlađena na 4 °C i dodata je H2O (400 mL) i smeša je mešana tokom 30 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio sirovi terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (9.7 g, 76% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. Sirovi proizvod je direktno korišćen za sledeći korak.

Korak 2: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0379] U dvofaznu suspenziju terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (9.7 g, 14.63 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (4.57 g, 17.55 mmol, 1.2 ekviv.), i Na2CO3 (7.75 g, 73.14 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (120.0 mL) i H2O (60 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.69 g, 1.46 mmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 60 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (80 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1→100% EtOAc/petrol etar, zatim 20-50% MeOH/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (4.5 g, 58% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza 5-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]piramidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0380] U čistu TFA (32.5 mL, 438.97 mmol, 50.0 ekviv.) dodat je terc-butil 6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-

2

2(1H)-karboksilat (4.5 g, 8.78 mmol, 1.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 30 min i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (8 mL), zatim ukapan u MTBE (350 mL) tokom 10 min. Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 5-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (5.72 g, preko 100% prinosa, TFA) u vidu svetloružičaste čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C22H20N8O: 413.18; pronađeno 413.2.

Monomer D. 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-7-ol so trifluorosirćetne kiseline.

[0381]

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-amino-1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-7-metoksi-1H-indol-1-karboksilata

[0382] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 ekviv.) i (1-(terc-butoksikarbonil)-7-metoksi-1H-indol-2-il)boronske kiseline (3.0 ekviv.) u DME i H2O je dodat Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.) i natrijum karbonat (6.0 ekviv.). Reakcija je zagrevana na 80 °C do završetka, kao što je određeno sa LCMS i TLC analizom. Reakcija je zatim ugašena sa H2O i EtOAc. Smeša je prebačena u levak za odvajanje i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je izolovan posle hromatografije na silika gelu.

Korak 2: Sinteza terc-butil 2-(4-amino-1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-7-hidroksi-1H-indol-1-karboksilata

[0383] U rastvor terc-butil 2-(4-amino-1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-7-metoksi-1H-indol-1-karboksilata (1.0 ekviv.) u DCM na -10 °C je dodat BBr3 (2.0 ekviv.). Reakcija je ostavljena da se meša dok se ne potroši početni materijal, kao što je određeno pomoću LCMS. Reakcija je ugašena sporim dodavanjem

2

zasićenog vodenog rastvora NaHCO3, prebačena u levak za odvajanje i smeša je ekstrahovana sa DCM. Organska faza je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je izolovan posle hromatografije na silika gelu.

Korak 3: Sinteza 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-7-ola

[0384] U rastvor terc-butil 2-(4-amino-1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-7-hidroksi-1H-indol-1-karboksilata (1.0 ekviv.) u DCM na 0 °C je dodata TFA u kapima. Reakcija je mešana na 0 °C i zagrejana do sobne temperature. Kada se reakcija završi, kao što je određeno pomoću LCMS, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MeCN, zatim ukapan u MTBE tokom 10 min. Supernatant je uklonjen i talog je sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-7-ol.

Monomer E. 5-(4-amino-1-(piperidin-4-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0385]

Korak 1: Sinteza terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata

[0386] U rastvor 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (3 g, 11.49 mmol, 1.0 ekviv.) u DMA (30 mL) je dodat terc-butil 4-(bromometil)piperidin-1-karboksilat (3.36 g, 12.07 mmol, 1.05 ekviv.) i K2CO3 (4.77 g, 34.48 mmol, 3.0 ekviv.), zatim je reakcija mešana na 80 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana da bi se uklonio K2CO3 i filtrat je sipan u H2O (200 mL). Precipitirana čvrsta supstanca je zatim filtrirana da bi se dobio terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (3 g, 57% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C16H23IN6O2: 459.10; pronađeno 459.1.

2

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata

[0387] U dvofaznu suspenziju terc-butil 4-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (3 g, 6.55 mmol, 1.0 ekviv.) i 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (2.04 g, 7.86 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (3.47 g, 32.73 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (60 mL) i H2O (30 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (756.43 mg, 654.60 µmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h i dve serije su kombinovane zajedno. Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (500 mL) i H2O (500 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 300 mL). Svi organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (4.5 g, 74% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C23H28N8O3: 465.24; pronađeno 465.2.

Korak 3: Sinteza 5-(4-amino-1-(piperidin-4-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0388] Rastvor terc-butil 4-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (2.5 g, 5.38 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (25 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonila TFA. Ostatak je dodat u MTBE (400 mL) i istaložena je čvrsta supstanca, koja je zatim filtrirana da bi se dobio 5-(4-amino-1-(piperidin-4-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (2.7 g, preko 100 % prinosa, TFA) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C18H20N8O: 365.18; pronađeno 365.1.

Monomer F. 2-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-5-ol so trifluorosirćetne kiseline.

[0389]

2 1

Korak 1: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0390] U rastvor terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 g, 2.31 mmol, 1.0 ekviv.) u dioksanu (10.5 mL) i H2O (3.5 mL) je dodata (1-(terc-butoksikarbonil)-5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)boronska kiselina (1.54 g, 2.78 mmol, 1.2 ekviv.), K3PO4 (1.47 g, 6.94 mmol, 3.0 ekviv.), Pd2(dba)3 (211.84 mg, 231.34 µmol, 0.1 ekviv.), i SPhos (189.95 mg, 462.69 µmol, 0.2 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Zatvorena epruveta je zagrevana na 150 °C tokom 20 minuta u mikrotalasnoj pećnici. Ovo je ponovljeno za 9 dodatnih serija. 10 serija je kombinovano i reakciona smeša je ohlađena i podeljena između EtOAc (60 mL) i H2O (80 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (60 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Suspenzija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen silika gel hromatografijom (1→75% EtOAc/petrol etar). Željene frakcije su kombinovane i uparene pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil (4-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamat (10 g, 60% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0391] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (10 g, 18.12 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (100 mL) je dodat TBAF•3H2O (1 M, 54.37 mL, 3.0 ekviv.) u jednom delu na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana tokom 1 h i zatim je u reakcionu smešu dodata H2O (100 mL). Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 80 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (100 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1→67% EtOAc/ petrol etar) da bi se dobio terc-butil (4-(4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-

2 2

pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamat (7 g, 87% prinosa) u vidu svetloružičaste čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza 2-[4-amino-1-(4-aminobutil)pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il]-1H-indol-5-ola

[0392] U TFA (50.0 mL, 675.26 mmol, 38.9 ekviv.) je dodat terc-butil (4-(4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamat (7.6 g, 17.37 mmol, 1.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 40 min i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (20 mL), zatim dodat u kapima u MTBE (300 mL) tokom 10 min. Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 2-[4-amino-1-(4-aminobutil)pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il]-1H-indol-5-ol (7.79 g, 91% prinosa, TFA) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H19N7O: 338.17; pronađeno 338.2.

Monomer G. 5-(4-amino-1-(azetidin-3-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

Korak 1: Sinteza terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)azetidin-1-karboksilata

[0393] U rastvor 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (4 g, 15.32 mmol, 1.0 ekviv.), terc-butil 3-(hidroksimetil)azetidin-1-karboksilata (3.01 g, 16.09 mmol, 1.05 ekviv.) i PPh3 (6.03 g, 22.99 mmol, 1.5 ekviv.) u THF (80 mL) ohlađen na 0 °C je dodat DIAD (4.47 mL, 22.99 mmol, 1.5 ekviv.), u kapima. Nakon što je dodavanje završeno, reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 14 h. Reakcija je sipana u H2O (200 mL) i zatim ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom (2 x 50 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) da bi se dobio terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-

2

d]pirimidin-1-il)metil) azetidin-1-karboksilat (4.2 g, 64% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C14H19IN6O2: 431.07; pronađeno 431.0.

Korak 2: Sinteza terc-butil 3-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)metil)azetidin-1-karboksilata

[0394] U dvofaznu suspenziju terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)azetidin-1-karboksilat a(4 g, 9.30 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2 -dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (2.90 g, 11.16 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (4.93 g, 46.49 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (100 mL) i H2O (50 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.07 g, 929.71 µmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana, i filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa fiziološkim rastvorom (10 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 3-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)azetidin-1-karboksilat (3.5 g, 80% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C21H24N8O3: 437.20; pronađeno 437.2.

Korak 3: Sinteza 5-(4-amino-1-(azetidin-3-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0395] U rastvor terc-butil 3-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)metil)azetidin-1-karboksilata (3.29 g, 6.87 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (20 mL) dodata je TFA (7.50 mL, 101.30 mmol, 14.7 ekviv.) na 0 °C. Reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je rastvoren u MeCN (6 mL) i zatim sipan u MTBE (80 mL). Istaložena je čvrsta supstanca, koja je filtrirana i čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 5-[4-amino-1-(azetidin-3-ilmetil)pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il]-1,3-benzoksazol-2-amin (4.34 g, preko 100% prinosa, TFA) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C16H16N8O: 337.15; pronađeno 337.1.

Monomer H. 5-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]-oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0396]

2 4

[0397] Ovaj monomer je sintetizovan prema procedurama opisanim u publikaciji Nature 2015, 534, 272-276.

Monomer I. 5-(4-amino-1-(pirolidin-3-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0398]

Korak 1: Sinteza terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)pirolidin-1-karboksilata

[0399] Suspenzija 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (4.5 g, 17.24 mmol, 1.0 ekviv.), terc-butil 3-(bromometil)pirolidin-1-karboksilata (4.78 g, 18.10 mmol, 1.05 ekviv.) i K2CO3 (7.15 g, 51.72 mmol, 3.0 ekviv.) u DMA (40 mL) je zagrevana na 85 °C. Reakcija je mešana na 85 °C tokom 3 h, u kom trenutku je rastvor ohlađen na sobnu temperaturu. Zatim je u reakciju dodata voda, H2O (80 mL), i istaložena je čvrsta supstanca. Smeša je filtrirana, i čvrsti kolač je ispran sa H2O (2 x 40 mL), i zatim osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)pirolidin-1-karboksilat (6 g, 78% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H21IN6O2: 445.08; pronađeno 445.1.

Korak 2: Sinteza terc-butil 3-[[4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il]metil]pirolidin-1-karboksilata

[0400] U dvofaznu suspenziju terc-butil 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)pirolidin-1-karboksilata (4 g, 9.00 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-

2

dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (2.81 g, 10.80 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (4.77 g, 45.02 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (120 mL) i H2O (60 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.04 g, 900.35 µmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana i filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL). Organske faze su kombinovane i isprane sa fiziološkim rastvorom(50 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/EtOAc) da bi se dobio tercbutil 3-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)pirolidin-1-karboksilat (3 g, 64% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C22H26N8O3: 451.21, pronađeno 451.2.

Korak 3: Sinteza 5-(4-amino-1-(pirolidin-3-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0401] U rastvor terc-butil 3-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirolidin-1-karboksilata (3 g, 6.66 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (40 mL) dodata je TFA (20 mL) na 0 °C, u kapima. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Reakcioni rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je rastvoren u MeCN (4 mL), zatim sipan u MTBE (100 mL), i istaložena je čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 5-(4-amino-1-(pirolidin-3-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (4.00 g, preko 100% prinosa, TFA) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H18N8O: 351.17; pronađeno 351.2.

Monomer J. 1-(4-aminobutil)-3-(7-metoksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0402]

2

[0403] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 ekviv.) i (1-(terc-butoksikarbonil)-7-metoksi-1H-indol-2-il)boronske kiseline (3.0 ekviv.) u DME i H2O je dodat Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.) i natrijum karbonat (6.0 ekviv.). Reakcija je zagrevana na 80 °C do završetka, kao što je određeno pomoću LCMS i TLC analize. Reakcija je zatim ugašena sa H2O i EtOAc. Smeša je prebačena u levak za odvajanje i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je izolovan posle hromatografije na silika gelu.

Korak 2: Sinteza 1-(4-aminobutil)-3-(7-metoksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0404] U rastvor terc-butil 2-(4-amino-1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-7-hidroksi-1H-indol-1-karboksilata (1.0 ekviv.) u DCM na 0 °C je dodata TFA u kapima. Reakcija je mešana na 0 °C i zagrejana do sobne temperature. Kada se reakcija završi, kao što je određeno pomoću LCMS, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MeCN, zatim ukapan u MTBE tokom 10 min. Supernatant je uklonjen i talog je sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 1-(4-aminobutil)-3-(7-metoksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin.

Monomer K. Sinteza soli trifluorosirćetne kiseline 1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina.

[0405]

Korak 1: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0406] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (300 mg, 694 µmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (14 mL) na 0 °C dodat je prah cinka (226 mg, 3.46 mmol, 5.0 ekviv.). U reakcionu smešu dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (14 mL) i reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 18 h. Reakcija je ugašena sa EtOAc (40 mL) i H2O (10 mL) i smeša je prebačena u levak za odvajanje. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa zasićeni

2

vodenim rastvorom NaHCO3 (15 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (210 mg, 99% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C14H22N6O2: 307.19; pronađeno 307.1.

Korak 2: Sinteza 1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0407] U rastvor terc-butil (4-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (210 mg, 691 µmol) u DCM (3.5 mL) na 0 °C dodata je TFA (3.5 mL), u kapima. Posle 3 h, reakcija je zagrejana do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila trifluoroacetatna so proizvoda (220 mg, 99% prinosa) kao smeđe ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C9H14N6: 207.13; pronađeno 207.1.

Monomer L. 1-[4-(piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil]-9-(hinolin-3-il)-1H,2H-benzo [h] 1,6-naftiridin-2-on

[0408]

[0409] Priprema ovog monomera je ranije opisana u literaturi. Videti sledeće reference: i) Liu, Qingsong; Chang, Jae Won; Wang, Jinhua; Kang, Seong A.; Thoreen, Carson C.; Markhard, Andrew; Hur, Wooyoung; Zhang, Jianming; Sim, Taebo; Sabatini, David M.; i dr. iz Journal of Medicinal Chemistry (2010), 53(19), 7146-7155. ii) Gray, Nathanael; Chang, Jae Won; Zhang, Jianming; Thoreen, Carson C.; Kang, Seong Woo Anthony; Sabatini, David M.; Liu, Qingsong iz PCT međunarodne prijave (2010), WO 2010044885A2.

Monomer M. 5-(1-(4-aminobutil)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0410]

2

Korak 1: Sinteza 3-jodo-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0411] Suspenzija 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10.5 g, 40.23 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (170.0 mL) je tretirana sa Cs2CO3 (19.7 g, 60.34 mmol, 1.5 ekviv.) i [hloro(difenil)metil]benzenom (13.5 g, 48.27 mmol, 1.2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 4 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je dodata u H2O (1200 mL). Talog je filtriran i ispran sa H2O. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→60% EtOAc/ petrol etar) da bi se dobio 3-jodo-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (15.40 g, 73.5% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 3-jodo-N,N-dimetil-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirirnidin-4-amina [0412] U suspenziju NaH (2.98 g, 74.50 mmol, 60 tež.%, 2.5 ekviv.) u DMF (150 mL) je dodat rastvor 3-jodo-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminq (15.0 g, 29.80 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (50 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. U reakcionu smešu je zatim dodat jodometan (16.92 g, 119.20 mmol, 7.42 mL, 4.0 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, pri čemu je dodata H2O (1400 mL) na 0 °C. Smeša je mešana dodatnih 10 min na 0 °C. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen silika gel hromatografijom (1%→25% EtOAc/petrol etar) dva puta da bi se dobio 3-jodo-N,N-dimetil-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (9.0 g, 89% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza 3-jodo-N,N-dimetil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0413] U ohlađeni rastvor TFA (19.1 mL, 258.1 mmol, 15.0 ekviv.) u DCM (100.0 mL) je dodat 3-jodo-N,N-dimetil-1-tritil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (9.10 g, 17.12 mmol, 1.0 ekviv.) na 4 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Ostatak je sipan u H2O (100 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). U vodenu fazu je zatim dodat

2

zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 dok rastvor nije bio pH 8. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio 3-jodo-N,N-dimetil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (3.40 g, 68.7% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 4: Sinteza terc-butil (4-(4-(dimetilamino)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0414] U suspenziju 3-jodo-N,N-dimetil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1.7 g, 5.88 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (20 mL) dodat je NaH (247 mg, 6.17 mmol, 60 tež.%, 1.05 ekviv.) na 4 °C. Smeša je mešana na 4 °C tokom 30 min. U reakcionu smešu je zatim dodat terc-butil N-(4-bromobutil)karbamat (2.22 g, 8.82 mmol, 1.81 mL, 1.5 ekviv.) u DMF (10 mL) na 4 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. U smešu je zatim dodata H2O (100 mL) na 4 °C. Smeša je mešana tokom dodatnih 30 min na 4 °C i Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→75% EtOAc/petrol etar) da bi se dobio terc-butil(4-(4-(dimetilamino)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamat (2.0 g, 56% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 5: Sinteza terc-butil (4-(3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0415] U dvofaznu suspenziju terc-butil (4-(4-(dimetilamino)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (4.0 g, 8.69 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (3.4 g, 13.03 mmol, 1.5 ekviv.), i Na2CO3 (4.6 g, 43.45 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (80.0 mL) i H2O (40.0 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.0 g, 868.98 µmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena i podeljena između EtOAc (300 mL) i H2O (600 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (2 x 60 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (50% EtOAc/heksani praćeno sa 20% MeOH/EtOAc). Željene frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio tercbutil (4-(3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]piramidin-1-il)butil)karbamat (3.2 g, 78.9% prinosa) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance.

2

Korak 6: Sinteza 5-(1-(4-aminobutil)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0416] U TFA (20.82 mL, 281.27 mmol, 36.5 ekviv.) je dodat terc-butil (4-(3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamat (3.6 g, 7.72 mmol, 1.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 30 min, nakon čega je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (8 mL) i MTBE (60 mL) tokom 10 min. Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 5-(1-(4-aminobutil)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (4.0 g, sirov, TFA) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance.

[0417] U 1 M NaOH (107.2 mL, 14.7 ekviv.) je dodat 5-(1-(4-aminobutil)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (3.5 g, sirov, TFA) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 10 min i zatim je vodena faza ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (50 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodata je TFA (539.37 µL, 7.28 mmol, 1.0 ekviv.) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je dodat MeCN (10 mL), praćeno sa MTBE (150 mL). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio 5-(1-(4-aminobutil)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d] oksazol-2-amin (1.3 g, 36.6% prinosa, TFA) kao svetlosmeđi proizvod. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C18H22N8O: 367.19; pronađeno 367.1.

Monomer N. 6-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo-[d]izoksazol-3-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0418]

2 1

Korak 1: Sinteza terc-butil (6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]izoksazol-3-il)karbamata

[0419] U rastvor terc-butil (6-bromobenzo[d]izoksazol-3-il)karbamata (1.0 ekviv.) u dioksanu je dodat Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.), natrijum karbonat (6.0 ekviv.), i bis(pinakolato)diboron (3.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana i zagrevana do završetka, kao što je određeno pomoću LCMS i TLC analize. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, i smeša je prebačena u levak za odvajanje. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc, a organska faza je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je izolovan nakon prečišćavanja silika gel hromatografijom.

Korak 2: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(3-((tercbutoksikarbonil)amino)benzo[d]izoksazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0420] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 ekviv.) i terc-butil (6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]izoksazol-3-il)karbamata (3.0 ekviv.) u DME i H2O je dodat Pd(PPh3)4 (0.1 ekviv.) i natrijum karbonat (6.0 ekviv.). Reakcija je zagrevana na 80 °C do završetka, kao što je određeno pomoću LCMS i TLC analize. Reakcija je zatim ugašena sa H2O i EtOAc. Smeša je prebačena u levak za odvajanje i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je izolovan posle hromatografije na silika gelu.

Korak 3: Sinteza 6-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo-[d]izoksazol-3-amina

[0421] U rastvor terc-butil (4-(4-amino-3-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)benzo[d]izoksazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (1.0 ekviv.) u DCM na 0 °C je dodata TFA, u kapima. Reakcija je mešana na 0 °C i zagrejana do sobne temperature. Kada se reakcija završi, kao što je određeno pomoću LCMS, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MeCN, zatim je dodat u kapima u MTBE tokom 10 min. Supernatant je uklonjen i talog je sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 6-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo-[d]izoksazol-3-amin.

2 2

Monomer O. 4-(5-(4-morfolino-1-(1-(piridin-3-ilmetil)piperidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)-1H-indol-1-il)butan-1-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0422]

[0423] Sinteza ovog monomera se odvija alkilacijom WAY-600 (CAS# 1062159-35-6) sa terc-butil (4-bromobutil)karbamatom pod baznim uslovima, nakon čega sledi Boc-deprotekcija korišćenjem TFA za proizvodnju soli TFA.

[0424] Referenca za pripremu WAY-600: Discovery of Potent and Selective Inhibitors of the Mammalian Target of Rapamicin (mTOR) Kinase: Nowak, P.; Cole, D.C.; Brooijmans, N.; Bursavich, M.G.; Curran, K.J.; Ellingboe, J.W.; Gibbons, J.J.; Hollander, I.; Hu, Y.; Kaplan, J.; Malwitz, D.J.; Toral-Barza, L.; Verheijen, J.C.; Zask, A.; Zhang, W.-G.; Yu, K. 2009; Journal of Medicinal Chemistry Volume 52, izdanje 22, 7081-89.

Monomer P. 2-(4-(8-(6-(aminometil)hinolin-3-il)-3-metil-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-1-il)fenil)-2-metilpropannitril so trifluorosirćetne kiseline.

[0425]

2

[0426] Sinteza ovog monomera se prvo odvija sintezom Suzuki-jevog partnera za kuplovanje (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan)hinolin-6-il)-N-boc-metanamin počevši od metil 3-bromohinolin-6-karboksilata. Redukcijom metil estra sa litijum aluminijum hidridom praćenom Mitsunobu reakcijom sa ftalimidom i cepanjem hidrazinom dobija se benzil amin. Zaštita benzilnog amina sa di-terc-butil dikarbonatom praćena Mijaura reakcijom borilacije daje (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan)hinolin-6-il)-N-boc-metanamin.

[0427] Reakcija SNAr za 2-(4-aminofenil)-2-metilpropannitril sa 6-bromo-4-hloro-3-nitrohinolinom daje supstituisani amino-nitro-piridin. Redukcija nitro grupe sa Raney-Ni u atmosferi vodonika praćena ciklizacijom sa trihlorometil hloroformatom daje ureu supstituisanu arilom. Supstitucija slobodnog N-H od ureje sa metil jodidom posredovana tetrabutilamonijum bromidom i natrijum hidroksidom praćena Suzuki kuplovanjem daje (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan)hinolin-6-il)-N-boc-metanamin i zatim Bocdeprotekcija korišćenjem TFA proizvodi TFA so.

[0428] Referenca za pripremu 2-[4-(8-bromo-3-metil-2-okso-2,3-dihidro-imidazo [4,5-c]hinolin-1-il)-fenil] -2-metil-propionitrila: Vannucchi, A.M.; Bogani, C.; Bartalucci, N.2016. Kombinovana terapija sa JAK PI3K/mTOR. US9358229. Novartis Pharma AG, Incyte Corporation.

Monomer Q. 8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-1-[4-(piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil]-1H,2H,3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

2 4

[0430] Ovaj monomer je komercijalno dostupna hemikalija poznata kao BGT226(CAS# 1245537-68-1). U vreme kada je ova prijava pripremljena, bila je dostupna za kupovinu od nekoliko dobavljača kao slobodni amin.

Monomer R. 3-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-N-(4,5-dihidrotiazol-2-il)benzamid so trifluorosirćetne kiseline.

[0431]

Korak 1: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(3-((4,5-dihidrotiazol-2-il)karbamoil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata

[0432] U rastvor (3-((4,5-dihidrotiazol-2-il)karbamoil)fenil)boronske kiseline (500 mg, 1.15 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (575 mg, 2.30 mmol, 2.0 ekviv.) u dioksanu (19.1 mL), EtOH (3.8 mL), i H2O (2.3 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (265 mg, 230 µmol, 0.2 ekviv.) i natrijum karbonat (730 mg, 6.89 mmol, 6.0 ekviv.). Reakciona smeša je sonicirana do formiranja bistrog, žutog rastvora, koji je zatim zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Reakcija je zatim razblažena sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (30 mL) i smeša je prebačena u levak za odvajanje. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 25 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Željeni proizvod je posle hromatografije na silika gelu izolovan u vidu žute čvrste supstance (324 mg, 53% prinosa) (0→15% MeOH/DCM). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H30N8O3S: 511.22; pronađeno 511.2.

2

Korak 2: Sinteza 3-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-N-(4,5-dihidrotiazol-2-il)benzamida

[0433] U rastvor terc-butil (4-(4-amino-3-(3-((4,5-dihidrotiazol-2-il)karbamoil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (324 mg, 614 µmol) u DCM (4.1 mL) na 0 °C dodata je TFA (1.5 mL), u kapima. Posle 1 h, reakcija je zagrejana do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila trifluoroacetatna so proizvoda u vidu žute čvrste supstance (320 mg, 99% prinosa). Koristi se bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H22N8OS: 411.16; pronađeno 411.1

Monomer S.2-(5-(4-morfolino-1-(1-(piridin-3-ilmetil)piperidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)-1H-indol-3-il)etan-1-amin.

[0434]

[0435] Sinteza ovog monomera se odvija kondenzacijom 2,4,6-trikloropirimidin-5-karbaldehida sa 3-((4-hidrazineilpiperidin-1-il)metil)piridin hidrohloridom. Reakcija proizvoda sa morfolinom praćena Suzuki reakcijom sa estrom bora daje Boc-zaštićen amin. Konačno uklanjanje zaštite sa TFA daje monomer. Ovaj put sinteze blisko prati opisanu pripremu visoko povezanih struktura u sledećim referencama: i) Nowak, Pawel; Cole, Derek C.; Brooijmans, Natasja; Curran, Kevin J.; Ellingboe, John W.; Gibbons, James J.; Hollander, Irwin; Hu, Yong Bo; Kaplan, Joshua; Malwitz, David J.; i dr. iz Journal of Medicinal Chemistry (2009), 52(22), 7081-7089. ii) Zask, Arie; Nowak, Pawel Wojciech; Verheijen, Jeroen; Curran, Kevin J.; Kaplan, Joshua; Malwitz, David; Bursavich, Matthew Gregory; Cole, Derek Cecil; Ayral-Kaloustian, Semiramis; Yu, Ker; i dr. iz međunarodne PCT prijave patenta (2008), WO 2008115974 A220080925.

2

Monomer T. 1-(4-aminobutil)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0436]

[0437] U smešu terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)karbamata (496 mg, 1.14 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (5.7 mL) na 0 °C dodata je TFA (1.5 mL) u kapima. Reakcija je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 1 h, za koje vreme je reakcija koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (505 mg, 99% prinosa) koja je uzeta bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C9H13IN6: 333.02; pronađeno 332.9.

Monomer U. 5-(4-amino-1-(4-(metilamino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0438]

Korak 1: Sinteza terc-butil (4-hidroksibutil)(metil)karbamata

[0439] U rastvor 4-(metilamino)butan-1-ola (0.5 g, 4.85 mmol, 104.2 mL, 1.0 ekviv.) u DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi je dodat BoczO (1.06 g, 4.85 mmol, 1.11 mL, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana tokom 3 h na sobnoj temperaturi i zatim je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom na 30 °C. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (100/1 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil (4-hidroksibutil)(metil)karbamat (0.9 g, 91.4% prinosa) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Sinteza terc-butil (4-bromobutil)(metil)karbamata

2

[0440] U rastvor terc-butil (4-hidroksibutil)(metil)karbamata (0.9 g, 4.43 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (20 mL) na sobnoj temperaturi je dodat PPh3 (2.21 g, 8.41 mmol, 1.9 ekviv.) i CBr4 (2.79 g, 8.41 mmol, 1.9 ekviv.). Smeša je mešana tokom 1 h i zatim je reakciona smeša filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 4/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil (4-bromobutil)(metil) karbamat (1.1 g, 93.3% prinosa) kao bezbojno ulje.

Korak 3: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) butil) (metil)karbamata

[0441] U suspenziju 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.9 g, 3.45 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (10 mL) na 4 °C dodat je NaH (137.92 mg, 3.45 mmol, 60 tež.%, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 4 °C tokom 30 min i zatim je dodat rastvor terc-butil (4-bromobutil)(metil)karbamata (1.01 g, 3.79 mmol, 25.92 mL, 1.1 ekviv.) u DMF (3 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, pri čemu je dodata H2O (100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušene sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil) (metil) karbamat (1.2 g, 78% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H23IN6O2: 447.10; pronađeno 447.1.

Korak 4: Sinteza terc-butil (4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)butil)(metil)karbamata

[0442] U dvofaznu suspenziju terc-butil (4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)butil)(metil)karbamata (1.2 g, 2.69 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (1.19 g, 3.23 mmol, 1.2 ekviv.), i Na2CO3 (1.42 g, 13.44 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (20 mL) i H2O (10 mL) na sobnoj temperaturi je dodat Pd(PPh3)4 (310.71 mg, 268.89 µmol, 0.1 ekviv.) pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h i zatim je reakciona smeša ohlađena i podeljena između EtOAc (20 mL) i H2O (15 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (2 x 20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 4/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio terc-butil (4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-

2

5-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)butil)(metil) karbamat (0.78 g, 62.5% prinosa) u vidu narandžaste čvrste supstance.

Korak 5: Sinteza 5-(4-amino-1-(4-(metilamino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-3-il) benzo[d]oksazol-2-amina

[0443] Rastvor terc-butil(4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)(metil)karbamata (0.78 g, 1.72 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (5 mL) na sobnoj temperaturi je mešan tokom 30 min. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (1 mL) i zatim dodat u MTBE (100 mL). Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 5-(4-amino-1-(4-(metilamino)butil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin bistrifluorosulfonat (0.959 g, 93% prinosa) u vidu narandžaste čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C17H20N8O: 353.18; pronađeno 353.1.

Monomer V. 1-(4-(4-(5-(aminometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil)-8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-1,3-dihidro-2H-imidazo [4,5-c] hinolin-2-on.

[0444]

Korak 1: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-hloropirimidin-5-il)metil] karbamata

[0445] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonilkarbamata (7.33 g, 33.74 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (80 mL) dodat je NaH (1.62 g, 40.49 mmol, 60 tež.%, 1.2 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim je dodat 5-(bromometil)-2-hloropirimidin (7 g, 33.74 mmol, 1 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h i zatim je

2

smeša sipana u zasićeni NH4Cl (300 mL) i mešana tokom 5 min. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 80 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (50 mL), osušene preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (20:1 do 1:1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-hloro pirimidin-5-il)metil]karbamat (7.0 g, 60.3% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H22ClN3O4: 344.14; pronađeno 344.2.

Korak 2: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[[2-[4-[4-[8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-2-okso-imidazo[4, 5-c] hinolin-1-il]-2-(trifluorometil)fenil]piperazin-1-il]pirimidin-5-il]metil]karbamata

[0446] U rastvor 8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-1-[4-piperazin-1-il-3-(trifluorometil)fenil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (0.4 g, 748.32 µmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (7 mL) je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-hloropirimidin-5-il)metil]karbamat (514.55 mg, 1.50 mmol, 2.0 ekviv.) i K2CO3 (413.69 mg, 2.99 mmol, 4 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 14 h i zatim je smeša ohlađena do sobne temperature, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen ispiranjem sa MTBE (5 mL) da bi se dobio terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[[2-[4-[4-[8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-2-okso-imidazo[4,5-c]hinolin-1-il]-2-(trifluorometil)fenil] piperazin-1-il]pirimidin-5-il]metil]karbamat (0.57 g, 90.5% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C43H46F3N9O6: 842.36; pronađeno 842.7

Korak 3: Sinteza 1-[4-[4-[5-(aminometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]-3-(trifluorometil) fenil]-8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona

[0447] Rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[[2-[4-[4-[8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-2-okso-imidazo[4, 5-c] hinolin-1-il]-2-(trifluorometil)fenil]piperazin-1-il]pirimidin-5-il]metil]karbamata (0.95 g, 1.13 mmol, 1 ekviv.) u TFA (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je rastvarač koncentrovan. Ostatak je rastvoren u MeCN (10 mL) i zatim je rastvor dodat u MTBE (150 mL), u kapima. Talog je sakupljen da bi se dobio 1-[4-[4-[5-(aminometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]-3-(trifluorometil)fenil]-8-(6-metoksi-3-piridil)-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on trifluorometansulfonat (0.778 g, 84.8% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C33H30F3N9O2: 642.26; pronađeno 642.4

2

Monomer W. 1-(4-aminobutil)-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin.

[0448]

Korak 1: Sinteza terc-butil N-[4-[4-amino-3-(1H-indol-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]butil]karbamata

[0449] U dvofaznu suspenziju terc-butil N-[4-(4-amino-3-jodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil]karbamata (8 g, 18.51 mmol, 1 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridina (5.42 g, 22.21 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (9.81 g, 92.54 mmol, 5 ekviv.) u diglimu (160 mL) i H2O (80 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (2.14 g, 1.85 mmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i filtrat je podeljen između EtOAc (500 mL) i H2O (500 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 × 300 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (20 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, zatim filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc zatim 4/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio tercbutil N-[4-[4-amino-3-(1H-indol-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]butil]karbamat (6.6 g, 84.6% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C22H27N7O2: 422.22; pronađeno 423.3.

Korak 2: Sinteza 1-(4-aminobutil)-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0450] U terc-butil N-[4-[4-amino-3-(1H-indol-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]butil]karbamat (6.6 g, 15.66 mmol, 1 ekviv.) dodata je TFA (66 mL), koji je zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonila TFA i zatim je u ostatak dodat MTBE (400 mL). Suspenzija je mešana 15 minuta, nakon čega je žuta čvrsta supstanca filtrirana, a čvrsti kolač osušen pod sniženim

2 1

pritiskom da bi se dobio 1-(4-aminobutil)-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (10.2 g, 97.1% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C16H18N8: 323.17; pronađeno 323.1.

Monomer X. 2-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-5-ol 2,2,2-trifluoroacetat.

[0451]

Korak 1: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata [0452] U rastvor terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (1 g, 1.97 mmol, 1.0 ekviv.) u dioksanu (10.5 mL) i H2O (3.5 mL) je dodata (1-(terc-butoksikarbonil)-5-((tertbutildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)boronska kiselina (1.16 g, 2.96 mmol, 1.5 ekviv.), K3PO4 (1.26 g, 5.92 mmol, 3.0 ekviv.), Pd2(dba)3 (180.85 mg, 197.50 µmol, 0.1 ekviv.), i SPhos (162.16 mg, 394.99 µmol, 0.2 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Zatvorena epruveta je zagrevana na 150 °C tokom 20 min u mikrotalasnoj pećnici. Reakciona smeša je zatim ohlađena i 6 odvojenih serija je kombinovano zajedno. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 × 80 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani sa fiziološkim rastvorom (100 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (100/1 do 1/4 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 6-((4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (6.17 g, 82.9% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

2 2

[0453] U smešu terc-butil 6-((4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (6.17 g, 9.86 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (100 mL) je dodat tetrabutilamonijum fluorid trihidrat (1 M, 10.84 mL, 1.1 ekviv.) u jednoj porciji na 0 °C pod N2. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i zatim je dodata u H2O (100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 80 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 × 80 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/1 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 6-((4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (4 g, 79.3% prinosa) u vidu svetloružičaste čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H29N7O3: 512.24; pronađeno 512.3.

Korak 3: Sinteza 2-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-5-ol 2,2,2-trifluoroacetat

[0454] U rastvor terc-butil 6-((4-amino-3-(5-hidroksi-1H-indol-2-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (4.5 g, 8.80 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (50 mL) je dodata HCl u MeOH (4 M, 50 mL, 22.7 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovom proizvodu je dodat EtOAc (100 mL) i dobijeni talog je sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio 2-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1H-indol-5-0l 2,2,2-trifluoroacetat (4.1 g, 85.0% prinosa, 3HCl) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C23H21N7O: 412.19; pronađeno 412.1.

Monomer Y. 3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-((1,2,3,4-tetrahidroisohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin 2,2,2-trifluoroacetat.

[0455]

2

Korak 1: Sinteza terc-butil 6-(bromometil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)- karboksilata [0456] Rastvor NBS (34.07 g, 191.39 mmol, 4 ekviv.) u THF (200 mL) je dodat u porcijama u rastvor terc-butil 6-(hidroksimetil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (12.6 g, 47.85 mmol, 1.0 ekviv.) i trifenilfosfina (37.65 g, 143.55 mmol, 3.0 ekviv.) u THF (200 mL) na 0 °C. Nakon što je dodavanje završeno, smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dodat je EtOAc (150 mL) i smeša je isprana sa H2O (200 mL) i fiziološkim rastvorom (150 mL), osušena preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (100/1 do 10/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio tercbutil 6-(bromometil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (8.56 g, 54.8% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0457] U suspenziju 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (9.5 g, 36.40 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (110 mL) dodat je NaH (1.46 g, 36.40 mmol, 60 tež.%, 1.0 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min u kom trenutku je dodat rastvor terc-butil 6-(bromometil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (12.47 g, 38.22 mmol, 1.05 ekviv.) u DMF (40 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i zatim je dodata H2O (1000 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim je dobijeni talog sakupljen filtracijom da bi se dobio terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (17.8 g, 76.3% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance, koja je direktno upotrebljena u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C20H23IN6O2: 507.10; pronađeno 507.1.

2 4

Korak 3: Sinteza terc-butil 6-((4-amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0458] U dvofaznu suspenziju terc-butil 6-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (6.5 g, 10.14 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo [2,3-b] piridina (2.97 g, 12.16 mmol, 1.2 ekviv.), i Na2CO3 (5.37 g, 50.68 mmol, 5.0 ekviv.) u diglimu (100 mL) i H2O (50 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.17 g, 1.01 mmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena i podeljena između EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 100 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (100 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0/1 do 1/4 MeOH/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 6-((4-amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]piramid in-1-il) metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (3.77 g, 72.1% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C27H28N8O2: 497.24; pronađeno 497.3.

Korak 4: Sinteza 3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin 2,2,2-trifluoroacetat

[0459] terc-Butil 6-((4-amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilat (3.77 g, 7.59 mmol, 1.0 ekviv.) je dodat u TFA (85.36 mL, 1.15 mol, 151.8 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom i uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (3 mL), zatim ukapan u MTBE (200 mL) tokom 5 min. Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio proizvod, koji je rastvoren u MeCN (20 mL), i konačno koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin 2,2,2-trifluoroacetat (4.84 g, 85.0% prinosa, 3TFA) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C22H20N8: 397.19; pronađeno 397.2.

Monomer Z. (4-((2-aminoetil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilfenil)(7- (6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat.

[0460]

2

Korak 1: Sinteza metil 3,4-difluoro-2-metilbenzoata

[0461] U rastvor 3,4-difluoro-2-metilbenzojeve kiseline (2 g, 11.62 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (20 mL) je dodat K2CO3 (4.82g, 34.86 mmol, 3.0 ekviv.) i jodometan (3.26 mL, 52.29 mmol, 4.5 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Rastvor metil 3,4-difluoro-2-metilbenzoata u DMF (20 mL) je korišćen direktno u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)tio)-3-fluoro-2-metilbenzoata

[0462] U rastvor metil 3,4-difluoro-2-metilbenzoata (2.16 g, 11.28 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (20 mL) je dodat terc-butil (2-mercaptoetil)karbamat (2.0 g, 11.28 mmol, 1 ekviv.) i K2CO3 (3.12 g, 22.56 mmol, 2.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na 110 °C tokom 12 h, nakon čega je smeša dodata u H2O (50 mL). Vodeni rastvor je zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 × 30 mL) i organska faza je kombinovana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)tio)-3-fluoro-2-metilbenzoat (3.0 g, 76% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

2

Korak 3: Sinteza metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3- fluoro-2-metilbenzoata

[0463] U rastvor metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)tio)-3-fluoro-2-metilbenzoata (3.3 g, 9.61 mmol, 1.0 ekviv.), NaOH (2 M, 4.80 mL, 1.0 ekviv.), i NaHCO3 (2.42 g, 28.83 mmol, 3.0 ekviv.) u acetonu (30 mL) je dodat kalijum peroksimonosulfat (12.35 g, 20.08 mmol, 2.1 ekviv.). Smeša je mešana tokom 12 h na sobnoj temperaturi i zatim je smeša zakiseljena do pH 5 dodavanjem 1N HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 30 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio metil 4-((2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilbenzoat (2.1 g, 58.2% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M-56 H] izračunato za C16H22FNO6S: 320.12; pronađeno 320.1

Korak 4: Sinteza 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3-fluoro- 2-metilbenzojeve kiseline

[0464] U rastvor metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilbenzoata (2.1 g, 5.59 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (20 mL), MeOH (10 mL) i H2O (10 mL) je dodat LiOH•H2O (704.16 mg, 16.78 mmol, 3.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i MeOH. Vodena faza je neutralizovana sa 0.5N HCl i zatim je ekstrahovana sa EtOAc (5 × 20 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 × 20 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilbenzojeva kiselina (2.01 g, 97.1% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M-100 H] izračunato za C15H20FNO6S: 262.11; pronađeno 262.1.

Korak 5: Sinteza (4-(terc-butoksikarbonil)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4] oksazepin-7-il)boronske kiseline

[0465] U rastvor terc-butil 7-bromo-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-karboksilata (4 g, 12.19 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (80 mL) na -60 °C je dodat B(OiPr)3 (4.58 g, 24.38 mmol, 5.60 mL, 2.0 ekviv.) praćeno da dodavanjem u kapima n-BuLi (2.5 M, 12.19 mL, 2.5 ekviv.) u n-heksanu. Reakcija je mešana na -65 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena sa 1N HCl

2

(12.25 mL) i ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 30 mL), osušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila (4-(terc-butoksikarbonil)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-7-il)boronska kiselina (3.5 g, sirov) kao svetlo žuto ulje, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z: [M-100 H] izračunato za C14H20BNO5: 194.15; pronađeno 194.2.

Korak 6: Sinteza of terc-butil 7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4] oksazepin-4(5H)-karboksilata

[0466] U rastvor (4-(terc-butoksikarbonil)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin- 7-il)boronske kiseline (4.2 g, 14.33 mmol, 1.0 ekviv.) u H2O (20 mL) i dioksanu (60 mL) je dodat 5-bromopiridin-2-amin (2.48 g, 14.33 mmol, 1.0 ekviv.), Pd(dppf)Cl2•DCM (1.17 g, 1.43 mmol, 0.1 ekviv.) i Et3N (4.35 g, 42.99 mmol, 5.98 mL, 3.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na 85 °C tokom 12 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i ostatak je sipan u H2O (15 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 40 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 × 40 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 1/8 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio terc-butil 7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-karboksilat (3.3 g, 65.0% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H23N3O3: 342.18; pronađeno 342.2.

Korak 7: Sinteza 5-(2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-7-il)piridin-2-amina [0467] U rastvor terc-butil 7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4] oksazepin-4(5H)-karboksilata (3.3 g, 9.67 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (40 mL) je dodata HCl u EtOAc (4 M, 100 mL, 41.38 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 × 15 mL) i zatim osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 5-(2,3,4,5-tetrahidrobenzo [f][1,4]oksazepin-7-il)piridin-2-amin (3 g, 95.1% prinosa, 2HCl) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 8: Sinteza terc-butil (2-((4-(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4-karbonil)-2-fluoro-3-metilfenil)sulfonil)etil)karbamata

2

[0468] U rastvor 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilbenzojeve kiseline (690.08 mg, 1.91 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (10 mL) je dodat HATU (1.09 g, 2.86 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (1.66 mL, 9.55 mmol, 5 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim je dodat 5-(2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-7-il)piridin-2-amin (0.6 g, 1.91 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl). Smeša je mešana tokom 2 h, nakon čega je dodata H2O (40 mL). Smeša je mešana tokom 5 min i dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio the sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 10/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio terc-butil (2-((4-(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4] oksazepin-4-karbonil)-2-fluoro-3-metilfenil)sulfonil)etil)karbamat (0.538 g, 47.4% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C29H33FN4O6S: 585.22; pronađeno 585.3.

Korak 9: Sinteza (4-((2-aminoetil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilfenil)(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(SH)-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetata

[0469] Rastvor terc-butil (2-((4-(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4] oksazepin-4-karbonil)-2-fluoro-3-metilfenil)sulfonil)etil)karbamata (0.538 g, 920.20 µmol, 1.0 ekviv.) u TFA (10.35 mL, 139.74 mmol, 151.85 ekviv.) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Uljasti ostatak je triturisan sa MeCN (1 mL) i zatim ukapan u MTBE (30 mL) tokom 10 min. Supernatant je uklonjen, a zatim je talog sakupljen filtracijom pod N2 da bi se dobio (4-((2-aminoetil)sulfonil)-3-fluoro-2-metilfenil)(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat (0.50 g, 87.4% prinosa) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H25FN4O4S: 485.17; pronađeno 485.1.

Monomer AA. 5-(4-amino-1-(6-(piperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0470]

2

Korak 1: Sinteza 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina [0471] U suspenziju 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (5 g, 19.16 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (60 mL) dodat je NaH (804.53 mg, 20.11 mmol, 60 tež.%, 1.05 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. U reakcionu smešu je zatim dodat 4,6-dihloropirimidin (3.42 g, 22.99 mmol, 1.2 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 h, nakon čega je reakciona smeša dodata u H2O (600 mL). Suspenzija je zatim filtrirana da bi se dobio proizvod (7.1 g, 99.2% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C9H5ClIN7: 373.94; pronađeno 373.9.

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-(6-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata

[0472] U rastvor 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (5 g, 13.39 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil piperazin-1-karboksilata (2.99 g, 16.06 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF (50 mL) je dodat K2CO3 (3.70 g, 26.77 mmol, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h, nakon čega je dodata u H2O (500 mL). Suspenzija je zatim filtrirana da bi se dobio proizvod (6.2 g, 88.5% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C18H22IN9O2: 524.09; pronađeno 524.2.

Korak 3: Sinteza terc-butil 4-(6-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata

[0473] U dvofaznu suspenziju 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (3.08 g, 11.85 mmol, 1.0 ekviv.), terc-butil 4-(6-(4-amino-3-jodo-

2

1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (6.2 g, 11.85 mmol, 1.0 ekviv.) i Na2CO3 (6.28 g, 59.24 mmol, 5.0 ekviv.) u H2O (100 mL) i DME (200 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.37 g, 1.18 mmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 24 h i zatim je smeša filtrirana da bi se dobio čvrsti kolač. Čvrsta supstanca je dodata dioksanu (20 mL) i mešana na 110 °C tokom 60 min, zatim filtrirana da bi se dobio proizvod (3.5 g, 55.8% prinosa) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C25H27N11O3: 530.24; pronađeno 530.3.

Korak 4: Sinteza 5-(4-amino-1-(6-(piperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline

[0474] Rastvor terc-butil 4-(6-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3.5 g, 6.61 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (35 mL) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni sirovi materijal je rastvoren u MeCN (20 mL) i dodat u kapima u MTBE (500 mL). Dobijena čvrsta supstanca je zatim filtrirana da bi se dobio proizvod (5.5 g, 91.9% prinosa) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H19N11O: 430.19; pronađeno 430.1.

Monomer AB. 8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-1-(4-(4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil)-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-2(3H)-on so trifluorosirćetne kiseline.

[0475]

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-(4-(8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4, 5-c] hinolin-1-il)-2-(trifluorometil)fenil)piperazin-1-il)-7, 8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0476] U smešu 8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-1-(4-(piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil)-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-2(3H)-ona (0.3 g, 561.24 µmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (151.38 mg, 561.24

2 1

µmol, 1.0 ekviv.) u DMF (5 mL) je dodat K2CO3 (193.92 mg, 1.40 mmol, 2.5 ekviv.). Smeša je mešana na 100 °C tokom 14 h, nakon čega je dodata H2O (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 40 mL) i kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni (30/1 do 15/1 DCM/MeOH) da bi se dobio proizvod (0.30 g, 69.6% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C40H40F3N9O4: 768.33; pronađeno 768.5.

Korak 2: Sinteza 8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-1-(4-(4-(5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(trifluorometil)fenil)-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-2(3H)-ona

[0477] Rastvor terc-butil 2-(4-(4-(8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-1-il)-2-(trifluorometil)fenil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (0.8 g, 1.04 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (8 mL) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je koncentrovan i ostatak je rastvoren u MeCN (5 mL), zatim je rastvor dodat u kapima u MTBE (150 mL). Precipitat je filtriran i čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (600 mg, 70.6% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C35H32F3N9O2: 668.27; pronađeno 668.3.

Monomer AC. 5-(4-amino-1-(piperidin-4-ilmetil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0478]

Korak 1: Sinteza terc-butil 4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1-karboksilata

2 2

[0479] U rastvor terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata (4 g, 19.87 mmol, 1.0 ekviv.) i Et3N (3.87 mL, 27.82 mmol, 1.4 ekviv.) u DCM (40 mL) je dodat MsCl (2.15 mL, 27.82 mmol, 1.4 ekviv.) na 0 °C. Zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodata je H2O (50 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 × 50 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (5.62 g, 101% sirovog prinosa) u vidu žute čvrste supstance koja je direktno korišćena u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata

[0480] U suspenziju 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (5 g, 19.16 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil 4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1-karboksilata (5.62 g, 20.11 mmol, 1.05 ekviv.) u DMF (100 mL) je dodat K2CO3 (5.29 g, 38.31 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim dodata u H2O (400 mL) na 0 °C. Dobijeni talog je filtriran da bi se dobio proizvod (5.0 g, 58.8% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H21IN6O2: 445.09; pronađeno 445.1.

Korak 3: Sinteza terc-butil 4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata

[0481] U suspenziju terc-butil 4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata (5 g, 11.25 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (3.51 g, 13.51 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (5.96 g, 56.27 mmol, 5.0 ekviv.) u H2O (50 mL) i DME (100 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.30 g, 1.13 mmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL) i zatim je vodeni sloj odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 × 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (20 mL) i osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa EtOAc (30 mL) i filtriran da bi se dobio proizvod (3.6 g, 71% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C22H26N8O3: 451.22; pronađeno 451.3.

Korak 4: Sinteza 5-(4-amino-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline

2

[0482] Rastvor terc-butil 4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata (1.4 g, 3.11 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i sirova čvrsta supstanca je rastvorena u MeCN (20 mL). Rastvor je dodat u kapima u MTBE (100 mL) i dobijena čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobio proizvod (1.6 g, 85.8% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H18N8O3: 351.17; pronađeno 351.1.

Monomer AD. 1-(piperidin-4-il)-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0483]

Korak 1: Sinteza terc-butil 4-(4-amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata

[0484] U suspenziju 5-(4,4,5-trimetil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridina (857.12 mg, 3.51 mmol, 1.2 ekviv.), terc-butil 4-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata (1.3 g, 2.93 mmol, 1.0 ekviv.) i Na2CO3 (1.55 g, 14.63 mmol, 5.0 ekviv.) u DME (20 mL) i H2O (10 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (338.13 mg, 292.62 µmol, 0.1 ekviv.) na sobnoj temperaturi pod N2. Smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između EtOAc (50 mL) i H2O (50 mL) i vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (3 × 50 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa EtOAc (10 mL), filtriran, čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (1.0 g, 78.7% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 1-(piperidin-4-il)-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin so trifluorosirćetne kiseline

2 4

[0485] Rastvor terc-butil 4-(4-amino-3-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-karboksilata (1.5 g, 3.45 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i sirovi ostatak je rastvoren u MeCN (20 mL). Rastvor je dodat u kapima u MTBE (100 mL) i dobijena čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobio proizvod (1.19 g, 74.2% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H18N8: 335.18; pronađeno 335.1.

Monomer AE. (4-((2-aminoetil)sulfonil)-2-metilfenil)(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-il)metanon.

[0486]

Korak 1: Sinteza metil 4-fluoro-2-metilbenzoata

[0487] U rastvor 4-fluoro-2-metilbenzojeve kiseline (86 g, 557.94 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (900 mL) je dodat K2CO3 (231.33 g, 1.67 mol, 3.0 ekviv.) i jodometan (79.19 g, 557.94 mmol, 34.73 mL, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvor metil 4-fluoro-2-metilbenzoata u DMF (900 mL) je korišćen direktno u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)tio)-2-metilbenzoat [0488] U rastvor metil 4-fluoro-2-metilbenzoata (93.8 g, 557.94 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (900 mL) je dodat terc-butil (2-mercaptoetil)karbamat (98.91 g, 557.97 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (154.23 g, 1.12 mol, 2.0 ekviv.). Reakcija je mešana na 110 °C tokom 12 h, nakon čega je

2

smeša ohlađena do sobne temperature i dodata u H2O (1000 mL). Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa EtOAc (3 × 600 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje silika gel hromatografijom (0→25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (144 g, 79% prinosa).

Korak 3: Sinteza metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-2-metilbenzoat [0489] U dve odvojene serije koje sadrže rastvor metil 4-((2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)tio)-2-metilbenzoata (72 g, 221.25 mmol, 1.0 ekviv.), NaOH (2 M, 110.6 mL, 1.0 ekviv.), i NaHCO3 (55.76 g, 663.75 mmol, 3.0 ekviv.) u acetonu (750 mL) je dodat kalijum peroksimonosulfat (284.28 g, 462.41 mmol, 2.1 ekviv.). Smeša je mešana tokom 12 h na sobnoj temperaturi, u kom trenutku su dve serije kombinovane, a zatim je smeša zakiseljena do pH 5 dodavanjem 1N HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 × 1500 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 × 500 mL), osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje silika gel hromatografijom (0→25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (120 g, 76% prinosa).

Korak 4: Sinteza 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-2-metilbenzojeve kiseline

[0490] U rastvor metil 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-2-metilbenzoata (35 g, 97.92 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (200 mL), MeOH (100 mL) i H2O (100 mL) je dodat LiOH•H2O (12.33 g, 293.77 mmol, 3.0 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 1 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i MeOH. Vodena faza je neutralizovana sa 0.5N HCl i nastali talog je izolovan filtracijom. Čvrsti kolač je ispran sa H2O (3 × 20 mL) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (25 g, 74% prinosa).

Korak 5: Sinteza terc-butil (2-((4-(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4-karbonil)-3-metilfenil)sulfonil)etil)karbamata [0491] U rastvor 4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)sulfonil)-2-metilbenzojeve kiseline (9.7 g, 28.25 mmol, 1.0 ekviv.) i 5-(2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4]oksazepin-7-il)piridin-2-amina (8.88 g, 28.25 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl) u DMF (120 mL) je dodat HATU (16.11 g, 42.37 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (18.25 g, 141.24 mmol, 24.60 mL, 5.0 ekviv.). Reakcija je mešana

2

na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je reakciona smeša sipana u H2O (1000 mL). Smeša je mešana tokom 5 min i Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je triturisan sa EtOAc (100 mL), filtriran, i čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (14 g, 87% prinosa).

Korak 6: Sinteza (4-((2-aminoetil)sulfonil)-2-metilfenil)(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-4(5H)-il)metanon

[0492] Rastvor terc-butil (2-((4-(7-(6-aminopiridin-3-il)-2,3,4,5-tetrahidrobenzo[f][1,4] oksazepin-4-karbonil)-3-metilfenil)sulfonil)etil)karbamata (19 g, 33.53 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (100 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MeCN (30 mL) i zatim ukapan u MTBE (600 mL) i mešan tokom 20 min. Suspenzija je filtrirana i dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u MeCN (30 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu svetlo žute čvrste supstance (24 g, so TFA). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H26N4O4S:467.18; pronađeno 467.1.

Monomer AF. 5-(4-amino-1-((5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)metil)-1H-pirazolo [3,4-d] pirimidin-3-il)benzo [d]oksazol-2-amin.

[0493]

Korak 1: Sinteza (Z)-terc-butil 3-((dimetilamino)metilen)-4-oksopiperidin-1-karboksilata

[0494] Rastvor terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (15 g, 75.28 mmol, 1.0 ekviv.) i 1,1-dimetoksi-N,N-dimetilmetanamina (11.00 mL, 82.81 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF (105 mL) je

2

mešan na 95 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (30 mL) i ispran sa fiziološkim rastvorom (3 × 30 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (50 mL), i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (10.1 g, 53% prinosa).

Korak 2: Sinteza terc-butil 2-(hidroksimetil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0495] U rastvor NaOEt (1.98 g, 29.10 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOH (70 mL) je dodat (Z)-tercbutil 3-((dimetilamino)metilen)-4-oksopiperidin-1-karboksilata (7.4 g, 29.10 mmol, 1.0 ekviv.) i 2-hidroksiacetimidamid hidrohlorida (3.54 g, 32.01 mmol, 1.1 ekviv.). Reakciona smeša je zagrevana na 90 °C tokom 12 h, nakon čega je smeša ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen sa EtOAc (40 mL) i ispran sa zasićenim NaHCO3 (40 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 20 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 × 50 mL), osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (7.24 g, 94% prinosa).

Korak 3: Sinteza terc-butil 2-(bromometil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0496] U rastvor terc-butil 2-(hidroksimetil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (6.24 g, 23.52 mmol, 1.0 ekviv.) i PPh3 (12.34 g, 47.04 mmol, 2.0 ekviv.) u DCM (140 mL) je dodat CBr4 (14.82 g, 44.69 mmol, 1.9 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, u kom trenutku je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc (20 mL) i H2O (20 mL), vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 20 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 × 50 mL), osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (14% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (3.6 g, 47% prinosa).

Korak 4: Sinteza terc-butil 2-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

2

[0497] U rastvor 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1.59 g, 6.09 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (15 mL) dodat je NaH (243.73 mg, 6.09 mmol, 60 tež.%, 1.0 ekviv.) na 0 °C. Suspenzija je mešana tokom 30 min i zatim je dodat terc-butil 2-(bromometil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (2.2 g, 6.70 mmol, 1.1 ekviv.). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 3 h. Smeša je sipana u H2O na 0 °C i talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio željeni proizvod u vidu smeđe čvrste supstance (2.5 g, 66% prinosa).

Korak 5: Sinteza terc-butil 2-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0498] U rastvor terc-butil 2-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (4.55 g, 8.95 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (2.79 g, 10.74 mmol, 1.2 ekviv.) i Na2CO3 (4.74 g, 44.76 mmol, 5.0 ekviv.) u dioksanu (70 mL) i H2O (35 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (1.03 g, 895.11 µmol, 0.1 ekviv.). Reakciona smeša je zagrevana na 110 °C tokom 3 h, nakon čega je smeša ohlađena do sobne temperature i sipana u H2O na 0 °C. Talog je filtriran, a čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je ispran sa EtOAc (50 mL) da bi se dobio željeni proizvod u vidu svetlo žute čvrste supstance (3.14 g, 68% prinosa).

Korak 6: Sinteza 5-(4-amino-1-((5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0499] Rastvor terc-butil 2-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (3.14 g, 6.10 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je dodat rastvoren u MeCN (7 mL) i dodat u MTBE (700 mL). Talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio željeni proizvod u vidu smeđe čvrste supstance (4.25 g, 92% prinosa, 3 TFA). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H18N10O: 415.18; pronađeno 415.1.

Monomer AG. 5-(4-amino-1-((2-((2-aminoetil)sulfonil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin.

[0500]

2

Korak 1: Sinteza tetrabutilamonijum soli N-Boc taurina

[0501] U rastvor 2-aminoetansulfonske kiseline (10.00 mL, 79.91 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (60 mL) i vodenom NaOH (2 M, 40 mL, 1.0 ekviv.) je dodat Boc2O (18.31 g, 83.90 mmol, 1.05 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 h, u kom trenutku je smeša ekstrahovana sa EtOAc (10 mL). Vodena faza je razblažena sa H2O (450 mL), tretirana sa LiOH•H2O (3.35 g, 79.83 mmol, 1.0 ekviv.) i nBu4NHSO4 (27.13 g 79.90 mmol, 1.0 ekviv.) i mešana tokom 30 min. Ova smeša je ekstrahovana sa DCM (3 × 80 mL), i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod kao bezbojno ulje (34.26 g, 91% prinosa).

Korak 2: Sinteza terc-butil (2-(hlorosulfonil)etil)karbamata

[0502] U rastvor tetrabutilamonijum soli N-Boc taurina (4.7 g, 10.05 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (42 mL) je dodat DMF (77.32 µL, 1.00 mmol, 0.1 ekviv.) praćeno sa rastvorom trifozgena (0.5 M, 8.04 mL, 0.4 ekviv.) u DCM na 0 °C. Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 30 min. Rastvor terc-butil (2-(hlorosulfonil)etil)karbamata (2.45 g, sirov) u DCM je direktno korišćen u sledećem koraku.

Korak 3: Sinteza terc-butil (2-((6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)etil)karbamata

[0503] U rastvor 5-(4-amino-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina (6.04 g, 9.44 mmol, 1.0 ekviv, 2TFA) u DMF (40 mL) je dodat Et3N (7.88 mL, 56.63 mmol, 6.0 ekviv.). Dodat je rastvor terc-butil (2(hlorosulfonil)etil)karbamata u DCM (42 mL) na 0 °C. Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio DCM i dobijeni rastvor je prečišćen hromatografijom reverzne faze (15→45% MeCN/H2O) da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (5.8 g, 83% prinosa, TFA). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C29H33N9O5S: 620.24; pronađeno 620.3.

Korak 4: Sinteza 5-(4-amino-1-((2-((2-aminoetil)sulfonil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0504] Rastvor terc-butil (2-((6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)etil)karbamata (5.8 g, 9.36 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (48 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h, u kom trenutku je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je rastvoren u MeCN (30 mL) i dodat je u kapima u MTBE (200 mL). Smeša je mešana tokom 5 min i filtrirana, filterski kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (3.6 g, 62% prinosa, 2.2TFA). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H25N9O3S: 520.19; pronađeno 520.1.

Monomer AH. terc-butil ((5-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirimidin-2-il)metil)karbamat.

[0505]

Korak 1: Sinteza (2-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-5-il)metil

metansulfonata

1

[0506] U rastvor terc-butil ((5-(hidroksimetil)pirimidin-2-il)metil)karbamata (4.2 g, 17.55 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (42 mL) na 0 °C je dodat Et3N (7.33 mL, 52.66 mmol, 3.0 ekviv.) praćeno sa MsCl (2.41 g, 21.06 mmol, 1.63 mL, 1.2 ekviv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min, i zatim je dodata H2O (15 mL). Reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM (5 × 10 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (5 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (5.5 g, 98.7% prinosa) u vidu bezbojne čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil ((5-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirimidin-2-il)metil)karbamata

[0507] U rastvor (2-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-5-il)metil metansulfonata (5.47 g, 17.24 mmol, 1.2 ekviv.) i 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4-amina (3.75 g, 14.37 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (55 mL) na sobnoj temperaturi je dodat K2CO3 (5.96 g, 43.10 mmol, 3 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 5 h, u kom trenutku se u reakcionu smešu sipaju H2O (100 mL) i fiziološki rastvor (20 mL). Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (10 × 30 mL) i kombinovane organske faze su osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→30% EtOAc/MeOH) dalo je željeni proizvod (2 g, 28.9% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza terc-butil ((5-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirimidin-2-il)metil)karbamata

[0508] U rastvor terc-butil ((5-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirimidin-2-il)metil)karbamata (2 g, 4.15 mmol, 1.0 ekviv.), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3-benzoksazol-2-amina (1.13 g, 4.35 mmol, 1.05 ekviv.) i Na2CO3 (688.39 mg, 8.29 mmol, 2.0 ekviv.) u dioksanu (20 mL) i H2O (10 mL) je dodat Pd(PPh3)4 (479.21 mg, 414.70 µmol, 0.1 ekviv.). Smeša je mešana na 110 °C tokom 1 h, nakon čega je smeša ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana, i čvrsti kolač ispran sa MeOH (3 × 10 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeOH i zatim je dodata u kapima u H2O (50 mL). Dobijena suspenzija je filtrirana, a filterski kolač je ispran sa H2O (3 × 10 mL). Čvrsti kolač je mešan u MeOH (20 mL) tokom 30 min. Dobijena suspenzija je filtrirana, i filterski kolač je ispran sa MeOH (3 × 8 mL). Filterski kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (1.03 g, 48.9% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C23H24N10O3: 489.21; pronađeno 489.2.

2

Korak 4: Sinteza 5-(4-amino-1-{[2-(aminometil)pirimidin-5-il]metil}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1,3-benzoksazol-2-amina

[0509] U terc-butil ((5-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirimidin-2-il)metil)karbamat (100 mg, 0.205 mmol, 1.0 ekviv.) je dodata konc. HCl (850 µL, 10.2 mmol, 50 ekviv.). Reakcija je mešana tokom 1 h i zatim je sipana u aceton (3 mL). Dobijeni talog je filtriran, ispran sa acetonom i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (80 mg, 92% prinosa) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C18H16N10O: 389.16; pronađeno 389.0.

Monomer Al. 5-(4-(dimetilamino)-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin so trifluorosirćetne kiseline.

[0510]

Korak 1: Sinteza terc-butil 6-((4-(dimetilamino)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0511] U rastvor 3-jodo-N,N-dimetil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (3.6 g, 12.45 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (36 mL) na 0 °C dodat je NaH (523.00 mg, 13.08 mmol, 60 tež.%, 1.05 ekviv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. U reakcionu smešu je zatim dodat rastvor terc-butil 6-(bromometil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (4.47 g, 13.70 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF (18 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim dodata u hladnu H2O (200 mL) i mešana tokom 30 min. Dobijeni precipitat je sakupljen filtracijom da bi se dobio željeni proizvod (6 g, 71.9% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil 6-((3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata

[0512] U rastvor terc-butil 6-((4-(dimetilamino)-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (2 g, 2.96 mmol, 1.0 ekviv.) i 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzo[d]oksazol-2-amina (922.81 mg, 3.55 mmol, 1.2 ekviv.) u dioksanu (24 mL) i H2O (12 mL) dodat je Na2CO3 (1.57 g, 14.78 mmol, 5.0 ekviv.) i Pd(PPh3)4 (341.66 mg, 295.66 µmol, 0.1 ekviv.). Smeša je mešana na 110 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim sipana u hladnu H2O (200 mL) i mešana tokom 30 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (5→100% petrol etar/EtOAc) dalo je željeni proizvod (1.2 g, 72.3% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza 5-(4-(dimetilamino)-1-((1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amina

[0513] Rastvor terc-butil 6-((3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-4-(dimetilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-karboksilata (1.7 g, 3.14 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je dodat u MeCN (10 mL) i rastvor je dodat u kapima u MTBE (200 mL). Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u MeCN (30 mL) i rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (1.67 g, 92.9% prinosa,) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H24N8O: 441.22; pronađeno 441.2.

Monomer AJ. 4-amino-5-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-5H-pirimido[5,4-b]indol-7-karboksilna kiselina.

[0514]

[0515] Ovaj monomer se može dobiti iz 7-metil-5H-pirimido[5,4-b]indol-4-ola benzilnom oksidacijom u karboksilnu kiselinu, konverzijom u etil estar, nakon čega sledi O-etilovanje sa

4

trietiloksonijum tetrafluoroboroatom. Arilacija posredovana paladijumom praćena hidrolizom estra i konačnom olizom amonijaka daje monomer.

Monomer AK. 4-amino-5-(2-aminobenzo[d]oksazo-5-il)-5H-pirimido[5,4-b]indol-8-karboksilna kiselina.

[0516]

[0517] Ovaj monomer se može pripremiti na sličan način kao i za pripremu prethodnog monomera, ali korišćenjem izomernog početnog materijala iz 8-metil-5H-pirimido[5,4-b]indol-4-ola. Oksidacija benzila u karboksilnu kiselinu, konverzija u etil estar, praćena O-etilacijom sa trietiloksonijum tetrafluoroboroatom i arilacijom posredovanom paladijumom, praćenom hidrolizom estra i konačnom olizom amonijaka, dobija se monomer.

Monomer AL. 3-(2,4-bis((S)-3-metilmorfolino)-4a,8a-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-7-il)benzojeva kiselina.

[0518]

Korak 1: Sinteza (3S)-4-[7-hloro-2-[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d] pirimidin-4-il] 3-metil-morfolina

[0519] U rastvor 2,4,7-trihloropirido[2,3-d]pirimidina (4.0 g, 17.06 mmol, 1.0 ekviv.) u DMA (10 mL) je dodat (3S)-3-metilmorfolin (4.31 g, 42.65 mmol, 2.5 ekviv.) i DIPEA (5.51 g, 42.65 mmol, 7.43 mL, 2.5 ekviv.). Reakcioni rastvor je zagrevan na 70 °C tokom 48 h. Reakciona suspenzija je ohlađena do sobne temperature, sipana u hladnu H2O (50 mL) da bi se istaložila čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana i filterski kolač je ispran sa H2O, i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen kolonskom silika gel hromatografijom (0→100% petrol etar/EtOAc) da bi se dobio (3S)-4-[7-hloro-2-[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d] pirimidin-4-il] 3-metil-morfolin (3.5 g, 56.4% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H22ClN5O2: 364.15; pronađeno 364.2

Korak 2: Sinteza 3-[2,4-bis[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d]pirimidin-7-il]benzojeve kiseline

[0520] U rastvor (3S)-4-[7-hloro-2-[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d]pirimidin-4-il] -3-metil-morfolina (2 g, 5.50 mmol, 1.0 ekviv.) i 3-boronobenzojeve kiseline (1.09 g, 6.60 mmol, 1.2 ekviv.) u 1,4-dioksanu (40 mL) je dodat rastvor K2CO3 (911.65 mg, 6.60 mmol, 1.2 ekviv.) u H2O (4 mL), praćeno sa Pd(PPh3)4 (317.60 mg, 274.85 µmol, 0.05 ekviv.). Rastvor je degaziran tokom 10 min i ponovo napunjen sa N2, zatim je reakciona smeša zagrevana do 100 °C pod N2 tokom 5 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je zakiseljen sa HCl (2N) do pH 3, i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 × 20 mL). Vodena faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen kolonskom silika gel hromatografijom (50%→100% petrol etar/EtOAc) da bi se dobilo hidrohlorid 3-[2,4-bis[(3S)-3-metilmorfolin-4-il]pirido[2,3-d]pirimidin-7-il]benzojeve kiseline (2.5 g, 89.9% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H27N5O4: 450.21; pronađeno 450.2.

[0521] Referenca za pripremu ovog monomera: Menear, K.; Smith, G.C.M.; Malagu, K.; Duggan, H.M.E.; Martin, N.M.B.; Leroux, F.G.M.2012. Derivati pirido-, pirazo- i pirimidopirimidina kao inhibitori mTOR. US8101602. Kudos Pharmaceuticals, Ltd.

Monomer AM. (1r,4r)-4-[4-amino-5-(7-metoksi-1H-indol-2-il)imidazo[4,3-f][1,2,4]triazin-7-il]cikloheksan-1-karboksilna kiselina

[0522]

[0523] Ovaj monomer, takođe poznat kao OSI-027 (CAS# = 936890-98-1), je komercijalno dostupno jedinjenje. U vreme kada je ova prijava pripremljena, bio je dostupan za kupovinu od nekoliko dobavljača.

Monomer AN. 2-(4-(4-(8-(6-metoksipiridin-3-il)-3-metil-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]hinolin-1-il)-2-(trifluorometil)fenil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0524]

[0525] Priprema ovog monomera se odvija reakcijom BGT226 sa metil 2-hloropirimidin-5-karboksilatom, nakon čega sledi hidroliza estra, da bi se dobio naslovni monomer.

Monomer AO. 4-amino-5-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-SH-pirimido[5,4-b]indol-8-karboksilna kiselina.

[0526]

[0527] Ovaj monomer se može dobiti od 7-metil-5H-pirimido[5,4-b]indol-4-ola benzilnom oksidacijom u karboksilnu kiselinu, konverzijom u etil estar, nakon čega sledi O-etilovanje sa trietiloksonijum tetrafluoroboroatom. Arilacija posredovana paladijumom praćena hidrolizom estra i konačnom olizom amonijaka daje monomer.

Priprema pred- i post-vezujućih delova

Gradivni blok A. terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-{[2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il]metil}karbamata.

[0528]

Korak 1: Sinteza 5-(bromometil)-2-hloropirimidina

[0529] U rastvor 2-hloro-5-metilpirimidina (92 g, 715.62 mmol, 1.0 ekviv.) u CCl4 (1000 mL) je dodat NBS (178.31 g, 1.00 mol, 1.4 ekviv.) i benzoil peroksid (3.47 g, 14.31 mmol, 0.02 ekviv.). Smeša je mešana na 76 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je filtrirana i čvrsti kolač je ispran sa DCM (150 mL). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (70.8 g, 47.7% sirovog prinosa) u vidu žutog ulja, koje je korišćeno direktno za sledeći korak. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C5H4BrClN2: 206.93; pronađeno 206.9.

Korak 2: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil)karbamata

[0530] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonilkarbamata (36.89 g, 169.79 mmol, 0.74 ekviv.) u DMF (750 mL) dodat je NaH (6.88 g, 172.09 mmol, 60 tež.%, 0.75 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Zatim je dodat, 5-(bromometil)-2-hloropirimidin (47.6 g, 229.45 mmol, 1.0 ekviv.) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15.5 h. Smeša je zatim sipana u H2O (1600 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 300 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 × 200 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (70 g, sirov) u vidu žute čvrste supstance, koja je direktno korišćena u sledećem koraku.

Korak 3: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil]karbamata

[0531] U rastvor 1-benzilpiperazina (30.44 g, 122.16 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl) u MeCN (550 mL) je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamat (42 g, 122.16 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (84.42 g, 610.81 mmol, 5.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 61 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc (150 mL) i smeša je filtrirana. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (45 g, 74% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 4: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil]karbamata

[0532] U rastvor terc-butil N-[[2-(4-benzilpiperazin-1-il)pirimidin-5-il]metil]-N-tercbutoksikarbonil-karbamata (24 g, 49.63 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (600 mL) je dodat Pd/C (24 g, 47.56 mmol, 10 tež.%, 1.0 ekviv.) pod argonom. Smeša je degazirana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 50 °C tokom 19 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana, a filterski kolač je ispran sa MeOH (500 mL). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio proizvod (25.5 g, 68% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Gradivni blok B.2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0533]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0534] U rastvor etil 2-hloropirimidin-5-karboksilata (2.37 g, 12.71 mmol, 1.0 ekviv.) i tercbutil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil)karbamata (5 g, 12.71 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (80 mL) je dodat K2CO3 (5.27 g, 38.12 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim sipana u H2O (200 mL) i suspenzija je filtrirana. Filtrat je ispran sa H2O (80 mL) i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (6.1 g, 87% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0535] U rastvor etil 2-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (5 g, 9.20 mmol, 1.0 ekviv.) u H2O (50 mL), EtOH (15 mL) i THF (50 mL) je dodat LiOH•H2O (1.54 g, 36.79 mmol, 4.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 16 h. Smeša je zatim koncentrovana da bi se uklonili THF i EtOH i zatim je smeša razblažena sa H2O (55 mL) i zakiseljena (pH=3) sa vodenim rastvorom HCl (1 N). Smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa H2O (36 mL). Filterski kolač je osušen pod

1

sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (2.7 g, 69.3%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H25N7O4: 416.21; pronađeno 416.1.

Gradivni blok C. terc-butil 2-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat.

[0536]

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-benzilpiperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0537] U rastvor terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (15 g, 55.61 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (150 mL) je dodat 1-benzilpiperazin (11.76 g, 66.73 mmol, 1.2 ekviv.) i K2CO3 (46.12 g, 333.67 mmol, 6.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 27 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (200 mL), filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (20.2 g, 80% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C23H31N5O2: 410.26; pronađeno 410.1.

Korak 2: Sinteza terc-butil 2-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0538] U rastvor terc-butil 2-(4-benzilpiperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (8 g, 19.53 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (200 mL) je dodat Pd/C (8 g, 19.53 mmol, 10 tež.%, 1.0 ekviv.) pod argonom. Smeša je degazirana i prečišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (50 psi) na 50 °C tokom 19 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz celit i filterski kolač je ispran sa MeOH (150 mL). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je ispran sa petrol etrom (60 mL) da bi se dobio proizvod (9.25 g, 72% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C16H25N5O2: 320.21; pronađeno 320.2.

Gradivni blok D.2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin- 2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0539]

11

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0540] U rastvor etil 2-hloropirimidin-5-karboksilata (4.09 g, 21.92 mmol, 1.0 ekviv.) u dioksanu (80 mL) je dodat terc-butil 2-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (7 g, 21.92 mmol, 1.0 ekviv.) i Et3N (9.15 mL, 65.75 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 90 °C tokom 64 h. Rastvor je sipan u H2O (200 mL) i zatim je smeša filtrirana i filterski kolač je ispran sa H2O (100 mL) zatim sa petrol etrom (60 mL). Filterski kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (10.1 g, 92% prinosa) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C23H31N7O4: 470.25; pronađeno 470.4.

Korak 2: Sinteza 2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0541] U rastvor terc-butil 2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (6.0 g, 12.78 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (40 mL), EtOH (20 mL) i H2O (40 mL) je dodat LiOH•H2O (1.07 g, 25.56 mmol, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 35 °C tokom 15 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Smeša je zatim razblažena sa H2O (500 mL) i podešena je na pH 3 sa vodenim rastvorom HCl (1 N). Smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa H2O (80 mL) zatim sa petrol etrom (80 mL). Filterski kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (3.8 g, 65% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C21H27N7O4: 442.22; pronađeno 442.3.

Gradivni blok E. terc-butil metil((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamat.

[0542]

12

Korak 1: Sinteza (2-hloropirimidin-5-il)metanamina

[0543] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata (28 g, 81.44 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (30 mL) je dodata HCl u EtOAc (260 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (100 mL). Čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (14.3 g, 96.6% prinosa, HCl) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza terc-butil ((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata

[0544] U rastvor (2-hloropirimidin-5-il)metanamina (13 g, 72.21 mmol, 1.0 ekviv, HCl) u DCM (130 mL) je dodat DIPEA (20.41 mL, 144.42 mmol, 1.8 ekviv.) i Boc2O (16.59 mL, 72.21 mmol, 1.0 ekviv.), zatim je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je dodata u H2O (100 mL) i zatim je vodeni sloj odvojen i ekstrahovan sa DCM (2 × 100 mL). Zatim je kombinovana organska faza isprana sa zasićenim NH4C1 (2 × 200 mL) i fiziološkim rastvorom (2 × 200 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 1/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (12 g, 68.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 3: Sinteza terc-butil ((2-hloropirimidin-5-il)metil)(metil)karbamata

[0545] U rastvor terc-butil ((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata (11 g, 45.14 mmol, 1.0 ekviv.) i MeI (14.05 mL, 225.70 mmol, 5.0 ekviv.) u THF (150 mL) dodat je NaH (1.99 g, 49.65 mmol, 60 tež.%, 1.1 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 3 h i zatim je reakcija ugašena sa H2O (100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 150 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (50 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (9 g, 77.4% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

1

Korak 4: Sinteza terc-butil ((2-(4-benzilpiperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)(metil)karbamata

[0546] U rastvor terc-butil ((2-hloropirimidin-5-il)metil)(metil)karbamata (9 g, 34.92 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (90 mL) je dodat 1-benzilpiperazin (8.70 g, 34.92 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl), i K2CO3 (24.13 g, 174.61 mmol, 5.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 20 h. Smeša je zatim filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 1/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (12 g, 86.4% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 5: Sinteza terc-butil metil((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata [0547] U rastvor terc-butil ((2-(4-benzilpiperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)(metil)karbamata (12 g, 30.19 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (120 mL) je dodat Pd/C (2 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana i prečišćena sa H2 i zatim je smeša mešana pod H2 (15 psi) na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom 1/0 do 1/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio polučist materijal (9 g) u vidu žutog ulja. Ostatku je dodat petrol etar i rastvor je mešan na -60 °C dok se nije pojavila čvrsta supstanca. Suspenzija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (4.07 g, 55.6% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H25N5O2: 308.21; pronađeno 308.1.

Gradivni blok F.2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)metil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0548]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)metil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0549] U smešu terc-butil metil((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (4.3 g, 13.99 mmol, 1.0 ekviv.) i etil 2-hloropirimidin-5-karboksilata (2.87 g, 15.39 mmol, 1.1 ekviv.) u MeCN (20 mL) je dodat K2CO3 (3.87 g, 27.98 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je

14

koncentrovan pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 1/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (4.7 g, 71.3% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)metil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0550] U rastvor etil 2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (6 g, 13.11 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (100 mL), EtOH (30 mL), i H2O (30 mL) je dodat LiOH•H2O (1.10 g, 26.23 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH i zatim neutralizovana dodavanjem 1N HCl. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio proizvod (5.11 g, 90.1% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H27N7O4: 430.22; pronađeno 430.2.

Gradivni blok G. terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(2-((tercbutil(difenil)silil)oksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamat.

[0551]

Korak 1: Sinteza terc-butil N-((2-(4-benzil-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)-N-terc-butoksikarbonil-karbamata

[0552] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata (18.33 g, 53.32 mmol, 1.1 ekviv.) i (4-benzilpiperazin-2-il)metanola (10 g, 48.48 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (100 mL) je dodat K2CO3 (13.40 g, 96.95 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na 100 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i dodata je H2O (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 150 mL) i kombinovani organski sloj

1

je ispran sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen sa Na2SO4, filtriran i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (7.3 g, 29.3% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C27H39N5O5: 514.31; pronađeno 514.5

Korak 2: Sinteza terc-butil N-((2-(4-benzil-2-((terc-butil(difenil)silil)oksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)-N-terc-butoksikarbonil-karbamata

[0553] U rastvor terc-butil N-((2-(4-benzil-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)-N-terc-butoksikarbonil-karbamata (2.3 g, 4.48 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (30 mL) je dodat imidazol (609.69 mg, 8.96 mmol, 2.0 ekviv.) i TBDPSCl (1.73 mL, 6.72 mmol, 1.5 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je zatim isprana sa H2O (100mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 60 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušena sa Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (20/1 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (4 g, 59.4% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C43H57N5O5Si: 752.42; pronađeno 752.4.

Korak 3: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(2-((tercbutil(difenil)silil)oksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata

[0554] U rastvor terc-butil N-((2-(4-benzil-2-((terc-butil(difenil)silil)oksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)-N-terc-butoksikarbonil-karbamata (3.3 g, 4.39 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOH (10 mL) je dodat Pd(OH)2/C (1 g, 10 tež.%). Smeša je zagrevana na 50 °C pod H2 (30 psi) tokom 30 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (20/1 do 3/1 EtOAc/EtOH) da bi se dobio proizvod (1.44 g, 45.6% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C36H51N5O5Si: 662.38; pronađeno 662.3.

Gradivni blok H.2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0555]

1

Korak 1: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(2-(hidroksimetil)piperazin-1-il) pirimidin-5-il)metil)karbamata

[0556] U rastvor terc-butil N-((2-(4-benzil-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)-N-terc-butoksikarbonil-karbamata (3 g, 5.84 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOH (40 mL) je dodat Pd/C (2 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana i prečišćena sa H2, zatim mešana pod H2 (50 psi) na 30 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz celit i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (1.6 g, sirov) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H33N5O5: 424.26; pronađeno 424.3.

Korak 2: Sinteza etil 2-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0557] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (1.4 g, 3.31 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (20 mL) je dodat K2CO3 (2.28 g, 16.53 mmol, 5.0 ekviv.) i etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (616.84 mg, 3.31 mmol, 1.0 ekviv.). Rastvor je mešan na 80 °C tokom 4 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u H2O (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 30 mL) i kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Smeša je prečišćena silika gel hromatografijom (20/1 do 3/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (1.6 g, 66.7% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C27H39N7O7: 574.30; pronađeno 574.4.

1

Korak 3: Sinteza 2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pilimidin-2-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0558] U rastvor etil 2-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (1.4 g, 2.44 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (6 mL) i EtOH (6 mL) na 0 °C je dodat rastvor LiOH•H2O (512.07 mg, 12.20 mmol, 5.0 ekviv.) u H2O (3 mL). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Vodena faza je podešena na pH 3 sa 0.1 M HCl i dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (613.14 mg, 55.6% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H27N7O5: 446.22; pronađeno 446.2.

Gradivni blok I. terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-({2-[(3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il] pirimidin-5-il}metil)karbamat.

[0559]

Korak 1: Sinteza (R)-terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-((2-(3-(((terc-butildifenilsilil)-oksi)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata

[0560] U rastvor terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata (24.24 g, 70.51 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (300 mL) je dodat (R)-2-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)piperazin (25 g, 70.51 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (29.24 g, 211.53 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc (200 mL), filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (46.5 g, 94% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

[0561]

Korak 2: Sinteza terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-({2-[(3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-il}metil)karbamata

1

[0562] U rastvor (R)-terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-((2-(3-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (12 g, 18.13 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (120 mL) je dodat TBAF (1 M, 23.93 mL, 1.3 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim sipana u H2O (300 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 80 mL). Kombinovane organske faze su kombinovane, isprane sa fiziološkim rastvorom (80 mL), osušene, filtrirane i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod (5 g, 64% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Gradivni blok J.2-{4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino)metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il}pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0563]

Korak 1: Sinteza (R)-etil 2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-2-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0564] U rastvor (R)-terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(3-(((terc-butildifenilsilil)oksi) metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (31.5 g, 45.21 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (350 mL) je dodat etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (8.44 g, 45.21 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (18.75 g, 135.63 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc (150 mL), i filtrirana da bi se uklonile neorganske soli. Filtrat je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (33.5 g, 89% prinosa).

[0565] Korak 2: Sinteza (R)-etil 2-(4-(5-(((di-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

1

[0566] U rastvor (R)-etil 2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-2-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (36.5 g, 44.95 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (300 mL) je dodat TBAF (1 M, 59.33 mL, 1.32 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h, u kom trenutku je reakciona smeša sipana u H2O (500 mL). Vodena faza je odvojena i ekstrahovana sa EtOAc (3 × 150 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (150 mL), osušeni, filtrirani, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (17 g, 64% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 3: Sinteza (R)-2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0567] U rastvor (R)-etil 2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (17 g, 29.64 mmol, 1.0 ekviv.) u H2O (160 mL), EtOH (80 mL) i THF (160 mL) je dodat LiOH•H2O (4.97 g, 118.54 mmol, 4.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 16 h. U smešu je zatim dodat LiOH•H2O (1.01 g, 24.00 mmol, 0.81 ekviv.) i reakciona smeša je mešana na 55 °C dodatnih 9 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa H2O (150 mL), i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Smeša je zakiseljena (pH = 5) sa 1 N HCl, filtrirana, i filterski kolač je ispran sa H2O (2 × 30 mL). Filterski kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (9.2 g, 67% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C20H27N7O5: 446.22; pronađeno 446.1.

Gradivni blok K. terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-(12-[(3S)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-il}metil)karbamat.

[0568]

[0569] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok I korišćenjem [(2S)-piperazin-2-il]metanola.

2

Gradivni blok L.2-[(2S)-4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il]-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0570]

[0571] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka K postupkom sličnim onom za gradivni blok J.

Gradivni blok M. terc-butil 2-[(3R)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-SH,6H,7H,8H-pirido [4,3-d] pirimidin-6-karboksilat.

[0572]

Korak 1: Sinteza (R)-terc-butil 2-(3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)-metil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0573] U rastvor (R)-2-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)piperazina (25 g, 70.51 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (250 mL) je dodat K2CO3 (29.24 g, 211.53 mmol, 3.0 ekviv.) i terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (17.12 g, 63.46 mmol, 0.9 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 17 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filtrirana je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (31 g, 73.5% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C33H45N5O3Si: 588.34; pronađeno 588.2.

Korak 2: Sinteza (R)-terc-butil 2-(3-(hidroksimetil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

21

[0574] U smešu (R)-terc-butil 2-(3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (12 g, 20.41 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (120 mL) je dodat TBAF (1.0 M, 24.50 mL, 1.2 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Smeša je sipana u H2O (100 mL), i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 100 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (100 mL), osušene, filtrirane, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→10% MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod (6 g, 84.1% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H27N5O3: 350.22; pronađeno 350.2.

Gradivni blok N.2-[(2R)-4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0575]

[0576] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka M postupkom sličnim onom za gradivni blok J.

Gradivni blok O. terc-butil 2-[(3S)-3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]-5H,6H,7H,8H-pirido [4,3-d] pirimidin-6-karboksilat.

[0577]

[0578] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok I korišćenjem terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat i [(2S)-piperazin-2-il]metanola.

22

Gradivni blok P. 2-[(2S)-4-16-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0579]

[0580] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka O postupkom sličnim onom za gradivni blok J.

Gradivni blok Q. terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-({2-[(3S)-3-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-il}metil)karbamat.

[0581]

Korak 1: Sinteza (R)-dibenzil 2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1,4-dikarboksilata [0582] U rastvor CDI (12.21 g, 75.30 mmol, 1.2 ekviv.) u DCM (300 mL) na 0 °C je dodata (R)-1,4-bis((benziloksi)karbonil)piperazin-2-karboksilna kiselina (25 g, 62.75 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 0 °C tokom 0.5 h, u kom trenutku je dodat dimetilamin (8.51 mL, 92.87 mmol, 1.5 ekviv, HCl). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana je tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim dodata u H2O (200 mL), i vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (2 × 200 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 × 50 mL), osušene, filtrirane, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (50→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (23.5 g, 88.0% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 2: Sinteza (S)-dibenzil 2-((dimetilamino)metil)piperazin-1,4-dikarboksilata

2

[0583] U rastvor (R)-dibenzil 2-(dimetilkarbamoil)piperazin-1,4-dikarboksilata (28 g, 65.81 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (300 mL) na 0 °C je dodat BH3•Me2S (10 M, 13.16 mL, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je zatim mešana na 80 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i zatim je dodat MeOH (50 mL). Posle mešanja još 1 h smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (50→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (18 g, 66.5% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 3: Sinteza (R)-N,N-dimetil-1-(piperazin-2-il)metanamina

[0584] U rastvor (S)-dibenzil 2-((dimetilamino)metil)piperazin-1,4-dikarboksilata (18 g, 43.74 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (200 mL) je dodat Pd/C (1.5 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa H2 tri puta. Suspenzija je mešana pod H2 (30 psi) na 30 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (6 g, 95.8% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Korak 4: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-((3S)-3-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata

[0585] U rastvor (R)-N,N-dimetil-1-(piperazin-2-il)metanamin (2.8 g, 19.55 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (40 mL) je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamat (6.72 g, 19.55 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (5.40 g, 39.10 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 24 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 × 10 mL). Filtrat je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (5.3 g, 57.8% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C22H38N6O4: 451.31; pronađeno 451.2.

Gradivni blok R.2-[(2S)-4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il]-2-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0586]

24

Korak 1: Sinteza (S)-etil 2-(4-(5-(((bi-terc-butoksikarbonil)amino)metil) pirimidin-2-il)-2-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0587] U rastvor (S)-terc-butil-N-terc-butoksikarbonil ((2-(3-((dimetilamino)metil) piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (3.26 g, 7.24 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (30 mL) je dodat Et3N (3.02 mL, 21.71 mmol, 3.0 ekviv.) i etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (1.47 g, 7.86 mmol, 1.1 ekviv.). Smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (4.35 g, sirov) kao rastvor u DMF (30 mL), koji je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C29H44N8O6: 601.35; pronađeno 601.5.

Korak 2: Sinteza (S)-2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)-pirimidin-2-il)-2-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0588] U rastvor (S)-etil 2-(4-(5-(((bi-terc-butoksikarbonil)amino)metil)-pirimidin-2-il)-2-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (4.35 g, 7.24 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (30 mL) je dodat DMF (50 mL), EtOH (30 mL), i H2O (30 mL). U rastvor je zatim dodat LiOH•H2O (3 g, 71.50 mmol, 9.9 ekviv.) na 50 °C. Reakcija je mešana na 50 °C tokom 36 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, neutralizovana sa 0.5 N HCl, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (2→30% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod (1.15 g, 34% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C22H32N8O4: 473.26; pronađeno 473.3.

Gradivni blok S. terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-({2-[(3R)-3-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-il}metil)karbamat.

[0589]

[0590] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok I korišćenjem dimetil({[(2S)-piperazin-2-il]metil})amina.

Gradivni blok T.2-[(2R)-4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il]-2-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0591]

2

[0592] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka S postupkom sličnim onom za gradivni blok J.

Gradivni blok U. terc-butil 2-[(3S)-3-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]-SH,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboksilat.

[0593]

[0594] U rastvor terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (4.80 g, 17.80 mmol, 1.4 ekviv.) u MeCN (45 mL) je dodat K2CO3 (10.42 g, 75.40 mmol, 3.0 ekviv.) i (R)-N,N-dimetil-1-(piperazin-2-il)metanamin (3.6 g, 25.13 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 8 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filterski kolač je ispran sa EtOAc (50 mL). Organskoj fazi je dodata H2O (50 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 50 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (5 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (8→67% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (6.5 g, 63.5% prinosa) u vidu žutog ulja.

Gradivni blok V.2-[(2S)-4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}-2-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0595]

2

Korak 1: Sinteza (S)-terc-butil 2-(3-((dimetilamino)metil)-4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0596] U rastvor (S)-terc-butil 2-(3-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (3 g, 7.97 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (70 mL) na 0 °C dodat je NaH (382.44 mg, 9.56 mmol, 60 tež.%, 1.2 ekviv.). Suspenzija je mešana na 0 °C tokom 0.5 h, zatim je dodat u kapima etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (1.49 g, 7.97 mmol, 1 ekviv.) u DMF (50 mL). Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 5 h. Smeša je zatim ohlađena na 0 °C i sipana u H2O (360 mL). Suspenzija je filtrirana, i filterski kolač je ispran sa H2O (30 mL) i osušen pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (6%→33% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (1.8 g, 39.6% prinosa) u vidu smeđeg ulja.

Korak 2: Sinteza (S)-2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)-2-((dimetilamino)metil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline [0597] U rastvor (S)-terc-butil 2-(3-((dimetilamino)metil)-4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (1.1 g, 2.09 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (5 mL), EtOH (2.5 mL), i H2O (2.5 mL) je dodat LiOH•H2O (175.30 mg, 4.18 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, u kom trenutku je pH podešen na 7 dodavanjem 1 N HCl na 0 °C. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i MeOH. Dobijena suspenzija je filtrirana, a filterski kolač je ispran sa H2O (5 mL) i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (680 mg, 65.3% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H34N8O4: 499.28; pronađeno 499.2.

Gradivni blok W. terc-butil 2-[(3R)-3-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]-SH,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboksilat.

[0598]

2

[0599] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok I korišćenjem terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat i dimetil({[(2S)-piperazin-2-il]metil})amina.

Gradivni blok X.2-[(2R)-4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}-2-[(dimetilamino)metil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0600]

[0601] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka W postupkom sličnim onom za gradivni blok J.

Gradivni blok Y. terc-butil (2R)-4-16-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-2-karboksilat.

[0602]

Korak 1: Sinteza (R)-1,4-bis((benziloksi)karbonil)piperazin-2-karboksilne kiseline [0603] U rastvor (R)-piperazin-2-karboksilne kiseline (70 g, 344.71 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl) u dioksanu (1120 mL) i H2O (700 mL) je dodat 50% vodeni rastvor NaOH dok rastvor nije bio

2

pH=11. Dodat je benzil hloroformat (156.82 mL, 1.10 mol, 3.2 ekviv.) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. U rastvor je zatim dodata H2O (1200 mL) i vodeni sloj je ispran sa MTBE (3 × 800 mL). Vodeni sloj je podešen na pH=2 sa koncentrisanom HCl (12N) i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 1000 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (137 g, 99.8% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C21H22N2O6: 399.16; pronađeno 399.2.

Korak 2: Sinteza (R)-1,4-dibenzil 2-terc-butil piperazin-1,2,4-trikarboksilata

[0604] U rastvor (R)-1,4-bis((benziloksi)karbonil)piperazin-2-karboksilne kiseline (50 g, 125.50 mmol, 1.0 ekviv.) u toluenu (500 mL) na 80 °C je dodat 1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetilmetanamin (57.17 mL, 238.45 mmol, 1.9 ekviv.). Rastvor je mešan na 80 °C tokom 2 h, u kom trenutku je reakciona smeša ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (300 mL) i H2O (500 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 × 500 mL) i kombinovani organski slojevi su osušeni, filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (35 g, 61.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C25H30N2O6: 477.20; pronađeno 477.1.

Korak 3: Sinteza (R)-terc-butil piperazin-2-karboksilata

[0605] U rastvor (R)-1,4-dibenzil 2-terc-butil piperazin-1,2,4-trikarboksilata (35 g, 77.01 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (350 mL) je dodat Pd/C (10 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (30 psi) na 30 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz celit, ostatak je ispran sa MeOH (5 × 200 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (14 g, 79.6% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C9H19N2O2: 187.15; pronađeno 187.1.

Korak 4: Sinteza (R)-terc-butil 2-(3-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0606] U rastvor terc-butil (2R)-piperazin-2-karboksilata (12 g, 64.43 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (200 mL) je dodat K2CO3 (17.81 g, 128.86 mmol, 2.0 ekviv.) i terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (17.38 g, 64.43 mmol, 1.0 ekviv.). Reakciona

2

smeša je zagrevana na 80 °C i mešana tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana, ostatak je ispran sa EtOAc (3 × 150 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (19 g, 69.2% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C21H33N5O4: 420.26; pronađeno 420.2.

Gradivni blok Z.4-amino-2-[(2R)-2-[(terc-butoksi)karbonil]-4-{6-[(tercbutoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0607]

Korak 1: Sinteza (R)-terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)-3-(tercbutoksikarbonil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata [0608] U mešani rastvor (R)-terc-butil 2-(3-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (12 g, 28.60 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (150 mL) je dodat K2CO3 (7.91 g, 57.20 mmol, 2.0 ekviv.) i etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilat (6.92 g, 34.32 mmol, 1.2 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h, u kom trenutku reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→17% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (16 g, 91.6% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H40N8O6: 585.32; pronađeno 585.1.

Korak 2: Sinteza (R)-4-amino-2-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0609] U dve odvojene serije koje se rade paralelno, svaka sadrži rastvor (R)-terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)-3-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (7 g, 11.97 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (70 mL), EtOH (35 mL) i H2O (35 mL) je dodat LiOH•H2O (2.01 g, 47.89 mmol, 4.0 ekviv.). Smeše su mešane na 60 °C tokom 3 h, u kom trenutku su dve reakcione smeše kombinovane, i podešene na pH=7 sa 1 N HCl. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH, filtrirana, a ostatak je osušen pod sniženim pritiskom. Ostatak je mešan u MTBE (100 mL) 10 min, filtriran i ostatak je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (8.02 g, 55.1% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C26H36N8O6:557.29; pronađeno 557.3.

Gradivni blok AA. terc-butil (2S)-4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-2-karboksilat.

[0610]

[0611] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok I korišćenjem terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat i terc-butil (2S)-piperazin-2-karboksilata.

Gradivni blok AB.4-amino-2-[(2S)-2-[(terc-butoksi)karbonil]-4-16-[(tercbutoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0612]

[0613] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka AA postupkom sličnim onom za gradivni blok J korišćenjem etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilata.

Gradivni blok AC. 4-amino-2-(4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0614]

1

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0615] U rastvor terc-butil 2-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (8.3 g, 25.99 mmol, 1.0 ekviv.) i etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilata (5.24 g, 25.99 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat K2CO3 (7.18 g, 51.97 mmol, 2.0 ekviv.). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 12 h. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature, dodat je DCM (100 mL), i reakciona smeša je mešana tokom 30 min. Suspenzija je filtrirana, i filterski kolač je ispran sa DCM (6 × 100 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je triturisan sa EtOAc (30 mL), filtriran i zatim je filterski kolač osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (8.7 g, 65.9% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 4-amino-2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0616] U rastvor terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (8.7 g, 17.95 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (120 mL), EtOH (60 mL), i H2O (60 mL) je dodat LiOH•H2O (1.51 g, 35.91 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na 55 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili EtOH i THF, i reakciona smeša je podešena na pH=6 dodavanjem 1 N HCl. Talog je filtriran, i filterski kolač je ispran sa H2O (3 x 50 mL) i zatim osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (7.3 g, 89.1% prinosa) u vidu svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C21H28N8O4: 457.23; pronađeno 457.2.

Gradivni blok AD.4-amino-2-{4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il] piperazin-1-il} pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0617]

2

Korak 1: Sinteza etil 4-amino-2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0618] U rastvor terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (8.3 g, 21.09 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilat (4.04 g, 20.04 mmol, 0.95 ekviv.) i K2CO3 (8.75 g, 63.28 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 3 h. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature, dodat je DCM (150 mL), i reakciona smeša je mešana tokom 30 min. Suspenzija je filtrirana, filterski kolač je ispran sa DCM (3 x 100 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (8.35 g, 67% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 4-amino-2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0619] U rastvor etil 4-amino-2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (8.3 g, 14.86 mmol, 1.0 ekviv.) u H2O (70 mL), EtOH (36 mL) i THF (80 mL) je dodat LiOH•H2O (2.49 g, 59.43 mmol, 4.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 16 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Smeša je razblažena sa H2O (55 mL) i podešena na pH=6 dodavanjem 1 N HCl. Smeša je filtrirana, i filterski kolač je ispran sa H2O (2 x 20 mL). Čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (5.5 g, 84% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H26N8O4: 431.22; pronađeno 431.4.

Gradivni blok AE.4-amino-2-[(2R)-4-16-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ill-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0620]

Korak 1: Sinteza (R)-terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)-3-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)-7, 8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0621] U rastvor (R)-terc-butil 2-(3-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil) piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (17.2 g, 29.26 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (200 mL) je dodat K2CO3 (12.13 g, 87.78 mmol, 3.0 ekviv.) i etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilat (6.37 g, 31.60 mmol, 1.08 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→33% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (20.3 g, 90.6% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C40H52N8O5Si: 753.39; pronađeno 753.4.

Korak 2: Sinteza (R)-4-amino-2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0622] U rastvor (R)-terc-butil 2-(4-(4-amino-5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)-3-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (20.3 g, 26.96 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (200 mL) je dodat TBAF (1.0 M, 50.75 mL, 1.9 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Smeša je zatim sipana u H2O (200 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 150 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 x 100 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→20% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (12 g, 85.7% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H34N8O5: 515.28; pronađeno 515.4.

4

Korak 3: Sinteza (R)-4-amino-2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8 -tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0623] U rastvor (R)-4-amino-2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline (12 g, 23.32 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (100 mL), EtOH (30 mL), i H2O (30 mL) je dodat LiOH•H2O (5.87 g, 139.92 mmol, 6.0 ekviv.). Smeša je mešana na 50 °C tokom 22 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Vodena faza je neutralizovana sa 1 N HCl i dobijeni talog je filtriran. Filterski kolač je ispran sa H2O (50 mL) i osušen pod sniženim pritiskom. Filtrat je ekstrahovan sa DCM (8 x 60 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (2 x 50 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je kombinovan sa početnim filter kolačem i čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (150 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (9.76 g, 85.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C22H30N8O5: 487.24; pronađeno 487.2.

Gradivni blok AF.4-amino-2-[(2S)-4-{6-[(terc-butoksi)karbonil]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}-2-(hidroksimetil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0624]

[0625] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka O postupkom sličnim onom za gradivni blok J korišćenjem etil 4-amino-2-hloropirimidin-5-karboksilat.

Gradivni blok AG.2-((2-(4-(5-((di-(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil)(metil)amino)sirćetna kiselina.

[0626]

[0627] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil)karbamata (4.88 g, 12.39 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (40 mL) je dodat 4-metilmorfolin-2,6-dion (1.6 g, 12.39 mmol, 1.0 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h zatim je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je triturisan sa EtOAc (15 mL) i filtriran da bi se dobio proizvod (5.65 g, 87.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H39N6O7: 523.28; pronađeno 523.3.

Gradivni blok AH. terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(4-(3-(2-piperazin-1-iletoksi)propanoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamat.

[0628]

Korak 1: Sinteza benzil 4-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-karboksilata

[0629] U rastvor terc-butil 3-(2-bromoetoksi)propanoata (35 g, 138.27 mmol, 1.0 ekviv.) i benzil piperazin-1-karboksilata (31.14 mL, 138.27 mmol, 1.0 ekviv, HCl) u MeCN (420 mL) je dodat K2CO3 (57.33 g, 414.80 mmol, 3.0 ekviv.). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i suspenzija je filtrirana. Filterski kolač je ispran sa EtOAc (3 x 50 mL) i kombinovani filtrati su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (5/1 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (46 g, 84.8% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 2: Sinteza 3-(2-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)etoksi)propanske kiseline [0630] Rastvor benzil 4-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-karboksilata (21 g, 53.50 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (160 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 4/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio proizvod (20.4 g, 84.7% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C17H24N2O5: 337.18; pronađeno 337.1.

Korak 3: Sinteza benzil 4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-karboksilata

[0631] U rastvor 3-(2-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)etoksi)propanske kiseline (20.2 g, 44.85 mmol, 1.0 ekviv, TFA) u DCM (500 mL) je dodat HATU (25.58 g, 67.27 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (17.39 g, 134.55 mmol, 23.44 mL, 3.0 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i zatim je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil)karbamat (14.12 g, 35.88 mmol, 0.8 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na tokom 2 h i zatim ugašena sa zas. NH4Cl (500 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 300 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (30 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0/1 petrol etar/EtOAc do 10/1 DCM/MeOH) da bi se dobio proizvod (29 g, 90.8% prinosa) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C36H53N7O8: 712.41; pronađeno 712.4.

Korak 4: Sinteza terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(4-(3-(2-piperazin-1-iletoksi)propanoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata

[0632] U rastvor 4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-karboksilata (5 g, 7.02 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (150 mL) je dodat Pd/C (2 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana i prečišćena sa H2 i zatim mešana pod H2 (30 psi) na 30 °C tokom 3 h. Suspenzija je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz celit. Filterski kolač je ispran sa MeOH (15 x 100 mL) i kombinovani filtrati su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (12 g, 89.9% prinosa) u vidu svetlo žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H47N7O6: 578.37; pronađeno 578.5.

Gradivni blok AI. etil 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilat.

[0633]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata [0634] U rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (11.94 g, 53.59 mmol, 1.0 ekviv, HCl) i etil 2-hloropirimidin-5-karboksilata (10 g, 53.59 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat K2CO3 (7.41 g, 53.59 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 17 h i zatim sipana u H2O (200 mL). Smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa H2O (80 mL) i osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (15.76 g, 82% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza etil 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0635] U rastvor etil 2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (15.7 g, 46.67 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (150 mL) je dodat HCl/EtOAc (150 mL) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 9 h. Reakciona smeša je filtrirana i filterski kolač je ispran sa EtOAc (100 mL). Čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (12.55 g, 96% prinosa, HCl) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C11H16N4O2: 237.14; pronađeno 237.3.

Gradivni blok AJ. 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0636]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0637] U rastvor etil 2-piperazin-1-ilpirimidin-5-karboksilata (17.92 g, 75.85 mmol, 1.2 ekviv.) i terc-butil 3-(2-bromoetoksi)propanoata (16 g, 63.21 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (200 mL) je dodat K2CO3 (17.47 g, 126.42 mmol, 2.0 ekviv.). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 12 h i zatim je reakciona smeša filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je suspendovan u petrol etru (200 mL) i mešan tokom 20 min na 0 °C i zatim filtriran. Čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (19.4 g, 75.1% prinosa) u vidu žute čvrste supstance.

Korak 2: Sinteza 3-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)propanske kiseline

[0638] Rastvor etil 2-(4-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (19.4 g, 47.49 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (200 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (50/1 do 1/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio proizvod (18 g, 81.3% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 3: Sinteza etil 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0639] U rastvor 3-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)propanske kiseline (13 g, 27.87 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (200 mL) je dodat HATU (15.90 g, 41.81 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (19.42 mL, 111.49 mmol, 4.0 ekviv.). Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil]karbamat (10.97 g, 27.87 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na tokom 2 h i zatim sipana u zasićeni rastvor NH4Cl (200 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 200 mL) i kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (2 x 20 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (100/1 do 9/1 EtOAc/MeOH) da bi se dobio proizvod (17 g, 79.0% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 4: Sinteza 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0640] U rastvor etil 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (11 g, 15.11 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (40 mL), EtOH (10 mL), i H2O (20 mL) je dodat LiOH●H2O (1.27 g, 30.23 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je zatim mešana na 35 °C tokom 1.5 h. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL) i vodena faza je podešena na pH = 7 dodavanjem HCl (1 N). Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom reverzne faze (20/1 do 3/1 H2O/MeCN) da bi se dobio proizvod (6.1 g, 67.3% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C33H49N9O8: 700.38; pronađeno 700.4.

Gradivni blok AK. 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0641]

[0642] Rastvoru etil 2-(4-(2-(3-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (5.4 g, 7.42 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (40 mL), EtOH (10 mL), i H2O (10 mL) je dodat LiOH●H2O (933.92 mg, 22.26 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je zatim mešana na 30 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL) i vodena faza je podešena na pH = 7 dodavanjem HCl (1 N). Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom reverzne faze (20/1 do 3/1 H2O/MeCN) da bi se dobio proizvod (1.01 g, 22.5% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H41N9O6: 600.33; pronađeno 600.2.

Gradivni blok AL. 4-{4-[2-(3-{4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il}-3-oksopropoksi)etil]piperazin-1-il}-4-oksobutanska kiselina.

[0643]

4

[0644] U rastvor terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-(4-(3-(2-piperazin-1-iletoksi)propanoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (1.0 ekviv.) u DCM je dodat anhidrid jantarne kiseline (1.2 ekviv.) i Et3N (2.0 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi dok se ne potroši početni materijal, kao što je određeno pomoću LCMS analize. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da bi se dobio proizvod.

Gradivni blok AM.2-(4-(4-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-4-oksobutil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0645]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(4-(terc-butoksi)-4-oksobutil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0646] U rastvor etil 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilat hidrohlorida (10 g, 36.67 mmol, 1.0 ekviv, HCl) i terc-butil 4-bromobutanoata (8.18 g, 36.67 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (100 mL) je dodat Et3N (15.31 mL, 110.00 mmol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 130 °C tokom 14 h. Smeša je zatim sipana u H2O (400 mL) i rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 150 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (200 mL), osušen preko Na2SO4 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (5/1 do 1/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod (9.5 g, 68.5% prinosa) u vidu žute čvrste

41

supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H30N4O4: 379.24; pronađeno 379.2, 380.2.

Korak 2: Sinteza hidrohlorida 4-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) butanske kiseline

[0647] U rastvor etil 2-(4-(4-(terc-butoksi)-4-oksobutil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (9.5 g, 25.10 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (100 mL) je dodat HCl/EtOAc (500 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 h i rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (9.6 g, 96.8% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C15H22N4O4: 323.17; pronađeno 323.2.

Korak 3: Sinteza etil 2-(4-(4-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-4-oksobutil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0648] U rastvor hidrohlorida 4-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)butanske kiseline (5 g, 15.51 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-1-ilpirimidin-5-il)metil)karbamata (6.10 g, 15.51 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (150 mL) je dodata DIPEA (8.11 mL, 46.53 mmol, 3.0 ekviv.) i HATU (7.08 g, 18.61 mmol, 1.2 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i zatim je rastvor sipan u H2O (600 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 200 mL) i zatim je kombinovani organski sloj ispran sa fiziološkim rastvorom (100 mL), osušen sa Na2SO4 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (50/1 do 15/1 DCM/MeOH) da bi se dobio proizvod (6.3 g, 58.2% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C34H51N9O7: 698.40; pronađeno 698.6.

Korak 4: Sinteza 2-(4-(4-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-4-oksobutil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0649] U rastvor etil 2-(4-(4-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-4-okso-butil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (4.5 g, 6.45 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOH (7 mL) i THF (28 mL) je dodat rastvor LiOH•H2O (541.17 mg, 12.90 mmol, 2.0 ekviv.) u H2O (7 mL). Smeša je mešana na 30 °C tokom 8 h, zatim je dodato još LiOH•H2O (541 mg, 12.90 mmol, 2.0 ekviv.). Posle mešanja dodatnih 8 h na 30 °C, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom pod sniženim pritiskom. H2O (20 mL) je dodat i rastvor je podešen na pH 3 sa 1N HCl. Suspenzija je filtrirana i čvrsta supstanca osušena pod sniženim

42

pritiskom da bi se dobio proizvod (3.2 g, 79.1% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C27H39N9O5: 570.32; pronađeno 570.3.

Gradivni blok AN.2-(4-(2-(2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0650]

Korak 1: Sinteza benzil 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-karboksilata

[0651] U rastvor benzil piperazin-1-karboksilat hidrohlorida (41.09 g, 160.04 mmol, 1.0 ekviv, HCl) u MeCN (200 mL) je dodat K2CO3 (66.36 g, 480.13 mmol, 3.0 ekviv.) i 2-bromoetanol (20 g, 160.04 mmol, 1.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h, u kom trenutku je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filterski kolač je ispran sa EtOAc (100 mL) i filtrat je zatim ispran sa H2O (100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (50 mL), osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (5→25% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (20 g, 47% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C14H20N2O3: 265.16; pronađeno 264.9.

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-karboksilata

4

[0652] U rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (198.72 g, 1.07 mol, 1.0 ekviv.) u MeCN (1500 mL) je dodat 2-bromoetanol (240 g, 1.92 mol, 1.8 ekviv.) i K2CO3 (221.19 g, 1.60 mol, 1.5 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h, u kom trenutku smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→714% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (146 g, 59% prinosa).

Korak 3: Sinteza terc-butil 4-(2-bromoetil)piperazin-1-karboksilata

[0653] U rastvor terc-butil 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-karboksilata (45 g, 195.39 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (600 mL) je dodat trifenilfosfin (97.38 g, 371.25 mmol, 1.9 ekviv.) i CBr4 (116.64 g, 351.71 mmol, 1.8 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dve odvojene serije su kombinovane, i reakciona smeša je filtrirana, a filtrat koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (1→25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu svetlo žute čvrste supstance (31 g, 27% prinosa).

Korak 4: Sinteza benzil 4-(2-(2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-karboksilata

[0654] U rastvor benzil 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-karboksilata (18 g, 68.10 mmol, 1.0 ekviv.) u toluenu (200 mL) dodat je NaNH2 (26.57 g, 680.99 mmol, 10.0 ekviv.). Dodat je tercbutil 4-(2-bromoetil)piperazin-1-karboksilat (25 g, 85.27 mmol, 1.25 ekviv.) i smeša je zagrevana na 90 °C tokom 18 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u H2O (700 mL) na 0 °C. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 240 mL) i kombinovane organske faze su isprane sukcesivno sa H2O (350 mL) i zasićenim fiziološkim rastvorom (2 x 200 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→12% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu svetlo žutog ulja (20 g, 62% prinosa).

Korak 5: Sinteza terc-butil 4-(2-(2-(piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-karboksilata [0655] U rastvor benzil 4-(2-(2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-karboksilata (20 g, 41.96 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (180 mL) je dodat Pd/C (8 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa H2 tri puta. Smeša je mešana pod H2 (30 psi) na 35 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je

44

koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod kao bezbojno ulje (10.8 g, 75% prinosa).

Korak 6: Sinteza etil 2-(4-(2-(2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etoksi)-etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0656] U rastvor terc-butil 4-(2-(2-(piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-karboksilata (10.8 g, 31.54 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat K2CO3 (13.08 g, 94.61 mmol, 3.0 ekviv.) i etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (5.88 g, 31.54 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h, u kom trenutku reakcija je ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→9% MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (13.6 g, 85% prinosa).

Korak 7: Sinteza 2-(4-(2-(2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido-[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline [0657] U rastvor etil 2-(4-(2-(2-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (13.6 g, 27.61 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (50 mL) je dodat rastvor HCl u MeOH (4 M, 150 mL, 21.7 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, nakon čega je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio the sirovi željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (13.8 g, 4HCl) koja je uzeta direktno u sledeći korak. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H32N6O3: 393.26; pronađeno 393.3.

Korak 8: Sinteza terc-butil 2-(4-(2-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)-piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata [0658] U mešani rastvor 2-(4-(2-(2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline (10.2 g, 18.95 mmol, 1.0 ekviv, 4HCl) i DIPEA (16.50 mL, 94.74 mmol, 5.0 ekviv.) u DMF (100 mL) je dodat terc-butil 2-hloro-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (5.11 g, 18.95 mmol, 1.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i dodata u EtOAc (200 mL) i H2O (400 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa vodenim NH4Cl (4 x 100 mL), fiziološkim rastvorom (2 x 100 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→9%

4

MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (5.4 g, 45% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C31H47N9O5: 626.38; pronađeno 626.3.

Korak 9: Sinteza 2-(4-(2-(2-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline [0659] U rastvor terc-butil 2-(4-(2-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (5.4 g, 8.63 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (50 mL), EtOH (20 mL), i H2O (20 mL) je dodat LiOH•H2O (1.09 g, 25.89 mmol, 3.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 35 °C tokom 12 h, nakon čega je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Vodena faza je neutralizovana do pH = 7 sa 0.5N HCl i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (4.72 g, 92% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C29H43N9O5: 598.35; pronađeno 598.3.

Gradivni blok AO.1'-[(terc-butoksi)karbonil]-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilna kiselina.

[0660]

[0661] U vreme ove prijave ovaj gradivni blok je bio komercijalno dostupan (CAS # 201810-59-5).

Gradivni blok AP. 2-((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)izoindolin-1,3-dion hidrohloridna so.

[0662]

4

Korak 1: Sinteza 2-hloro-5-(dibromometil)pirimidina

[0663] U rastvor 2-hloro-5-metilpirimidina (100 g, 777.85 mmol, 1.0 ekviv.) u CCl4 (1200 mL) je dodat NBS (304.58 g, 1.71 mol, 2.2 ekviv.) i AIBN (51.09 g, 311.14 mmol, 0.4 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h. Reakcioni rastvor je zatim ohlađen do sobne temperature, filtriran, i filtrat je sipan u H2O (1500 mL). Rastvor je razblažen sa DCM (3 x 250 mL) i organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom (300 mL), osušen sa anhidrovanim Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod u vidu smeđeg ulja, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza 5-(bromometil)-2-hloropirimidina

[0664] U rastvor 2-hloro-5-(dibromometil)pirimidina (229 g, 799.72 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (600 mL) je dodata DIPEA (111.44 mL, 639.77 mmol, 0.8 ekviv.) i 1-etoksifosfonoiloksietan (82.57 mL, 639.77 mmol, 0.8 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 19 h. Smeša je zatim sipana u H2O (1200 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 300 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom (300 mL), osušena sa anhidrovanim Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (1/0 do 0/1 petrol etar/EtOAc) da bi se dobio proizvod u vidu smeđeg ulja, koje je korišćeno direktno za sledeći korak.

Korak 3: Sinteza 2-((2-hloropirimidin-5-il)metil)izoindolin-1,3-diona

[0665] U smešu izoindolin-1,3-diona (15 g, 101.95 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (126 mL) dodat je NaH (4.89 g, 122.34 mmol, 60 tež.%, 1.2 ekviv.) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min, zatim je dodat u gornju smešu u kapima rastvor 5-(bromometil)-2-hloro-pirimidin (30.21 g, 101.95 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (24 mL) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h i zatim je ohlađena na 0 °C i ugašena sa zas. NH4Cl (600 mL). Suspenzija je filtrirana i čvrsta supstanca osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (27.4 g, 98.2% prinosa) kao siva čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C13H8ClN3O2: 274.04; pronađeno 274.0.

Korak 4: Sinteza terc-butil 4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata

4

[0666] U rastvor 2-((2-hloropirimidin-5-il)metil)izoindolin-1,3-diona (27 g, 98.66 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil piperazin-1-karboksilata (20.21 g, 108.52 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF (270 mL) je dodat K2CO3 (34.09 g, 246.64 mmol, 2.5 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 3 h i zatim je reakcija ohlađena do sobne temperature i sipana u H2O (1200 mL). Suspenzija je filtrirana i čvrsta supstanca je osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (35.58 g, 85.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance, koja je direktno korišćena u sledećem koraku.

Korak 5: Sinteza 2-((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)izoindolin-1,3-dion

[0667] Rastvor terc-butil 4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilat (15 g, 35.42 mmol, 1 ekviv.) u HCl/EtOAc (150 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je filtrirana i zatim je filterski kolač ispran sa EtOAc (20 mL) i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (42.53 g, 92.5% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.

Gradivni blok AQ.2-[(2-{4-[2-(3-{4-[5-({bis[(tercbutoksi)karbonil]amino}metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il}-3-oksopropoksi)etil]piperazin-1-il}-2-oksoetil)(metil)amino]sirćetna kiselina.

[0668]

[0669] U rastvor terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-{[2-(4-{3-[2-(piperazin-1-il)etoksi]propanoil}piperazin-1-il)pirimidin-5-il]metil}karbamata (300 mg, 519 µmol, 1.0 ekviv.) u piridinu (8 mL) na 0 °C je dodat 4-metilmorfolin-2,6-dion (80.3 mg, 622 µmol, 1.2 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h i zatim zagrejana do sobne temperature i mešana tokom još 12 h. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i čvrsta supstanca je podeljena između DCM i H2O. Organski sloj je odvojen, osušen preko MgSO4 i rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (23.0 mg, 6.28% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C33H54N8O9: 707.41; pronađeno 707.4.

4

Gradivni blok AR.2-(4-(2-(3-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0670]

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-(4-(3-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)propanoil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata [0671] U rastvor 3-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi) propanske kiseline (6 g, 12.86 mmol, 1.0 ekviv, TFA) u DMF (55 mL) je dodat HATU (6.36 g, 16.72 mmol, 1.3 ekviv.) i DIPEA (11.20 mL, 64.32 mmol, 5.0 ekviv.). Posle 0.5 h, dodat je terc-butil 2-(piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilat (4.11 g, 12.86 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana tokom 3 h, u kom trenutku je filtrirana i čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (7.5 g, 89% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C32H47N9O6: 654.37; pronađeno 654.4.

Korak 2: Sinteza 2-(4-(2-(3-(4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0672] U rastvor terc-butil 2-(4-(3-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)propanoil)piperazin-1-il)-7, 8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (7.2 g, 11.01 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (72 mL), EtOH (36 mL) i H2O (36 mL) je dodat LiOH•H2O (1.85 g, 44.05 mmol, 4.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 h, u kom trenutku smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Vodena faza je neutralizovana do pH = 7 sa 1N HCl, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (30%

4

MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (3.85 g, 54% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C30H43N9O6: 626.34; pronađeno 626.3.

Gradivni blok AS. 2-(4-(2-(2-(3-(4-(5-((di-terc-butoksikarbonilamino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-okso-propoksi)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0673]

Korak 1: Sinteza 3-(2-(2-(4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1il)etoksi)etoksi)propanske kiseline

[0674] Rastvor etil 2-(4-(2-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (4 g, 8.84 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (12.29 mL, 166.00 mmol, 18.8 ekviv.) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→720% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu smeđeg ulja (4.35 g, 95% prinosa, so TFA).

Korak 2: Sinteza etil 2-(4-(2-(2-(3-(4-(5-((bis(tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0675] U rastvor 3-(2-(2-(4-(5-etoksikarbonilpirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etoksi) propanske kiseline (3.8 g, 7.44 mmol, 1.0 ekviv, TFA) u DCM (30 mL) je dodat HATU (4.25 g, 11.17 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (6.48 mL, 37.22 mmol, 5.0 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i zatim je dodat terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-((2-piperazin-lilpirimidin-5-il)metil)karbamat (2.93 g, 7.44 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3.5 h, u kom trenutku je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu smeđeg ulja (4.14 g, 70% prinosa).

Korak 3: Sinteza 2-(4-(2-(2-(3-(4-(5-((di-terc-butoksikarbonilamino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-okso-propoksi)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0676] U rastvor etil 2-(4-(2-(2-(3-(4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-okso-propoksi)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (1.4 g, 1.81 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (28 mL), EtOH (14 mL) i H2O (14 mL) je dodat LiOH•H2O (304.44 mg, 7.25 mmol, 4.0 ekviv.). Smeša je mešana na 40 °C tokom 30 min, u kom trenutku je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (10→40% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (500 mg, 43% prinosa).

Gradivni blok AT.2-{4-[2-(2-{4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil]amino)metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il}etoksi)etil]piperazin-1-il}pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0677]

Korak 1: Sinteza etil 2-(4-(2-(2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0678] U rastvor etil 2-(4-(2-(2-(piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilat hidrohlorida (7.3 g, 13.56 mmol, 1.0 ekviv, 4HCl) u DMF (75 mL) je dodat DIPEA (14.17 mL, 81.36 mmol, 6.0 ekviv.) i terc-butil-N-terc-butoksikarbonil-N-[(2-hloropirimidin-5-il)metil]karbamat (5.59 g, 16.27 mmol, 1.2 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i sipana u H2O (300 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 80 mL). Kombinovane organske faze su isprane sa zas. NH4Cl (4 x 80 mL) i fiziološkim rastvorom (150 mL), osušene, filtrirane i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→17% MeOH/EtOAc)

1

dalo je željeni proizvod (7.7 g, 81.1% prinosa) u vidu svetlo žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C34H53N9O7: 722.40; pronađeno 722.4.

Korak 2: Sinteza 2-(4-(2-(2-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0679] U rastvor etil 2-(4-(2-(2-(4-(5-(((di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (7.7 g, 11.00 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (80 mL), EtOH (20 mL), i H2O (40 mL) je dodat LiOH•H2O (2.31 g, 55.01 mmol, 5.0 ekviv.). Smeša je mešana na 50 °C tokom 26 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Vodena faza je neutralizovana sa 0.5 N HCl, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze dalo je željeni proizvod (4.67 g, 74.3% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M -H] izračunato za C27H41N9O5: 570.31; pronađeno 570.3.

Gradivni blok AU. (R)-terc-butil 4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-2-karboksilat.

[0680]

Korak 1: Sinteza (R)-1,4-bis((benziloksi)karbonil)piperazin-2-karboksilne kiseline [0681] U dve odvojene šarže koje sadrže rastvor (2R)-piperazin-2-karboksilne kiseline (70 g, 344.71 mmol, 1 ekviv, 2HCl) u H2O (700 mL) i dioksanu (1120 mL) je dodat 50% vod. NaOH do pH = 11. Dodat je benzil hloroformat (156.82 mL, 1.10 mol, 3.2 ekviv.) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Dve reakcione smeše su kombinovane i dodata je H2O (1200 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (3 x 1000 mL), podešen na pH = 2 sa konc. HCl, i zatim ekstrahovan sa EtOAc (2 x 1000 mL). Kombinovane organske faze su osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (280 g, 86% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C21H22N2O6: 399.16; pronađeno 399.0.

2

Korak 2: Sinteza (R)-1,4-dibenzil 2-terc-butil piperazin-1,2,4-trikarboksilata

[0682] U rastvor (R)-1,4-bis((benziloksi)karbonil)piperazin-2-karboksilne kiseline (70 g, 175.70 mmol, 1.0 ekviv.) u toluenu (700 mL) na 80 °C je dodat 1,1-di-terc-butoksi-N,N-dimetil-metanamin (80.04 mL, 333.83 mmol, 1.9 ekviv.). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 2 h, u kom trenutku je ohlađena do sobne temperature i podeljena između EtOAc (300 mL) i H2O (500 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 500 mL) i kombinovani organski slojevi su osušeni, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→25 EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (50 g, 57% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C25H30N2O6: 477.20; pronađeno 476.9.

Korak 3: Sinteza (R)-terc-butil piperazin-2-karboksilata

[0683] U rastvor (R)-1,4-dibenzil 2-terc-butil piperazin-1,2,4-trikarboksilata (50 g, 110.01 mmol, 1 ekviv.) u EtOAc (20 mL) je dodat Pd/C (15 g, 10 tež.%). Suspenzija je degazirana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa H2 tri puta. Suspenzija je mešana pod H2 (30 psi) na 30 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, ostatak je ispran sa MeOH (5 x 200 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu žutog ulja (17 g, 81% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C9H18N2O2: 187.15; pronađeno 187.1.

Korak 4: Sinteza (R)-terc-butil 4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-2-karboksilata

[0684] U suspenziju (A)-terc-butil piperazin-2-karboksilata (8 g, 23.27 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil-N-terc-butoksikarbonil ((2-hloropirimidin-5-il)metil)karbamata (5.20 g, 27.92 mmol, 1.2 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat K2CO3 (6.43 g, 46.54 mmol, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je zagrevana na 80 °C tokom 12 h, u kom trenutku je reakcija ohlađena do sobne temperature, filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→100% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (9.2 g, 73% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H39N5O6:494.30; pronađeno 494.1.

Gradivni blok AV. (S)-terc-butil 4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-2-karboksilat.

[0685]

[0686] Ovaj gradivni blok se priprema postupkom koji je sličan onom za gradivni blok AU korišćenjem (2S)-piperazin-2-karboksilne kiseline.

Gradivni blok AW. (R)-2-(4-(2-(3-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0687]

Korak 1: Sinteza (R)-etil 2-(4-(2-(3-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata

[0688] U rastvor (R)-terc-butil 4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-2-karboksilata (5.3 g, 11.36 mmol, 1.0 ekviv, TFA) u DCM (80 mL) je dodat HATU (6.48 g, 17.05 mmol, 1.5 ekviv.) i DIPEA (7.92 mL, 45.45 mmol, 4.0 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim je dodat terc-butil (2R)-4-(5-((bis(terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-2-karboksilat (5.61 g, 11.36 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana tokom 1 h, u kom trenutku je

4

dodat zas. NH4Cl (80 mL). Organska faza je isprana sa zasićenim. NH4Cl (5 x 80 mL), osušena, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→9% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (8.4 g, 85% prinosa).

Korak 2: Sinteza (R)-2-(4-(2-(3-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline

[0689] U dve odvojene šarže koje sadrže rastvor rastvora (R)-etil 2-(4-(2-(3-(2-(tercbutoksikarbonil)-4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilata (3.4 g, 4.11 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (16 mL), EtOH (8 mL) i H2O (8 mL) je dodat LiOH•H2O (344.61 mg, 8.21 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Dve reakcione smeše su zatim kombinovane i podešene na pH = 7 sa 1N HCl. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonili THF i EtOH. Rastvor je zatim filtriran, a dobijena čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom reverzne faze da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (4 g, 59% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C38H57N9O10: 800.43; pronađeno 800.3.

Gradivni blok AX. (S)-2-(4-(2-(3-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(((terc-butoksikarbonil-N-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0690]

[0691] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka AV postupkom sličnim onom za gradivni blok AW.

Gradivni blok AY. 1'-(2-(3-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilna kiselina.

[0692]

Korak 1: Sinteza 1'-terc-butil 4-etil [1,4'-bipiperidin]-1',4-dikarboksilata

[0693] U rastvor etil piperidin-4-karboksilata (30 g, 150.57 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (23.67 g, 150.57 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (300 mL) je dodat HOAc (6.00 mL, 104.95 mmol, 0.7 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim je dodat NaBH(OAc)3 (63.82 g, 301.13 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana tokom 16 h, u kom trenutku je dodata H2O (50 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 15 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (10 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (8→100 MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu žutog ulja (30 g, 59% prinosa).

Korak 2: Sinteza etil [1,4'-bipiperidin]-4-karboksilata

[0694] U rastvor HCl u EtOAc (200 mL) je dodat 1'-terc-butil 4-etil [1,4'-bipiperidin]-1',4-dikarboksilat (20 g, 58.74 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni sirovi proizvod u vidu bele čvrste supstance (15 g, so HCl).

Korak 3: Sinteza etil 1'-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi)etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilata

[0695] U rastvor terc-butil 3-(2-bromoetoksi)propanoata (6.46 g, 25.54 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (240 mL) je dodat K2CO3 (10.59 g, 76.61 mmol, 3.0 ekviv.) i etil [1,4'-bipiperidin]-4-karboksilat (8 g, 25.54 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl). Smeša je mešana na 120 °C tokom 12 h, u kom trenutku reakcija je ohlađena do sobne temperature, filtrirana, filterski kolač je ispran sa H2O (20 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→11% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod u vidu žutog ulja (6.6 g, 63% prinosa).

Korak 4: Sinteza 3-(2-(4-(etoksikarbonil)-[1,4'-bipiperidin]-1'-il)etoksi)propanske kiseline

[0696] U rastvor HCl u EtOAc (70 mL) je dodat etil 1'-(2-(3-(terc-butoksi)-3-oksopropoksi) etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilat (6.6 g, 16.00 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, u kom trenutku reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (6.5 g, 95% prinosa, 2HCl).

Korak 5: Sinteza etil 1'-(2-(3-(4-(5-(((N,N-di-tercbutoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilata

[0697] U rastvor terc-butil-terc-butoksikarbonil((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)karbamata (2.49 g, 6.33 mmol, 1.5 ekviv.) u DMF (40 mL) je dodata DIPEA (9.74 mL, 55.89 mmol, 6.0 ekviv.) i HATU (5.31 g, 13.97 mmol, 1.5 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i zatim je dodata 3-(2-(4-(etoksikarbonil)-[1,4'-bipiperidin]-1'-il)etoksi) propanska kiselina (4 g, 9.32 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl). Smeša je mešana na tokom 1.5 h, u kom trenutku su dodati H2O (5 mL) i EtOAc (20 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL) i kombinovane organske faze su isprane sa fiziološkim rastvorom (5 mL), osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze dalo je željeni proizvod u vidu smeđeg ulja (1.6 g, 23% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C37H61N7O8: 732.47; pronađeno 732.6.

Korak 6: Sinteza 1'-(2-(3-(4-(5-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilne kiseline [0698] U rastvor etil 1'-(2-(3-(4-(5-(((N,N-di-terc-butoksikarbonil)amino)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)etil)-[1,4'-bipiperidin]-4-karboksilata (1.4 g, 1.91 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (7.5 mL), EtOH (3.8 mL), i H2O (3.8 mL) je dodat LiOH•H2O (321.07 mg, 7.65 mmol, 4.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, nakon čega je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (5→38% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu žute čvrste supstance (325 mg, 22% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C30H49N7O6: 604.38; pronađeno 604.3.

Gradivni blok AZ.1-(4-{2-[2-(2-{[(benziloksi)karbonil]amino}etoksi)etoksi]etil}piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeva kiselina.

[0699]

Korak 1: Sinteza benzil (2-(2-(2-bromoetoksi)etoksi)etil)karbamata

[0700] U rastvor benzil (2-(2-(2-hidroksietoksi)etoksi)etil)karbamata (10 g, 35.30 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (300 mL) na 0 °C je dodat PPh3 (13.79 g, 52.59 mmol, 1.49 ekviv.) i CBr4 (17.44 g, 52.59 mmol, 1.49 ekviv.). Zatim je smeša zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (1%→25% EtOAc/petrol etar) dalo je željeni proizvod (10.8 g, 88.4% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 2: Sinteza terc-butil 4-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)piperazin-1-karboksilata

[0701] U rastvor benzil (2-(2-(2-bromoetoksi)etoksi)etil)karbamata (10.8 g, 31.19 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-butil piperazin-1-karboksilata (5.81 g, 31.19 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (100 mL) je dodat K2CO3 (4.31 g, 31.19 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→50% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (13.1 g, 93.0% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 3: Sinteza benzil (2-(2-(2-(piperazin-1-il)etoksi)etoksi)etil)karbamata

[0702] Rastvor terc-butil 4-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)piperazin-1-karboksilata (5.64 g, 12.49 mmol, 1.0 ekviv.) u HCl/EtOAc (50 mL, 4 M) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (5.23 g, sirov, so HCl) u vidu žutog ulja.

Korak 4: Sinteza terc-butil 1-(4-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata

[0703] U rastvor benzil (2-(2-(2-(piperazin-1-il)etoksi)etoksi)etil)karbamata (13.3 g, 31.34 mmol, 1.0 ekviv, 2HCl) i terc-butil 1-bromo-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata u MeCN (150 mL) je dodat K2CO3 (21.66 g, 156.71 mmol, 5.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (1%→17% MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod (5.4 g, 26.3% prinosa) u vidu žutog ulja.

Korak 5: Sinteza 1-(4-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeva kiselina

[0704] Rastvor terc-butil 1-(4-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata (2.4 g, 3.66 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (3.03 g, so TFA) u vidu žutog ulja.

Gradivni blok BA. (R)-2-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0705]

Korak 1: Sinteza (R)-terc-butil 2-(3-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata

[0706] U dve odvojene šarže koje se rade paralelno i svaka sadrži rastvor (R)-terc-butil 2-(3-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (6 g, 14.30 mmol, 1.0 ekviv.) i K2CO3 (3.95 g, 28.60 mmol, 2.0 ekviv.) u MeCN (80 mL) je dodat etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (3.20 g, 17.16 mmol, 1.2 ekviv.). Reakcione smeše su mešane na 80 °C tokom 12 h. Dve reakcione smeše su kombinovane i filtrirane, ostatak je ispran sa EtOAc (3 x 50 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0%→17% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (15 g, 91.5% prinosa) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H39N7O6: 570.31; pronađeno 570.1.

Korak 2: Sinteza (R)-2-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilne kiseline [0707] U rastvor (R)-terc-butil 2-(3-(terc-butoksikarbonil)-4-(5-(etoksikarbonil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-7,8-dihidropirido[4,3-d]pirimidin-6(5H)-karboksilata (15 g, 26.33 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (80 mL), EtOH (40 mL) i H2O (40 mL) je dodat LiOH●H2O (2.21 g, 52.66 mmol, 2.0 ekviv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim podešena na pH=6 sa 1 N HCl. Dobijena suspenzija je filtrirana, i čvrsti kolač je osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (10.87 g, 75.9% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C26H35N7O6: 542.27; pronađeno 542.1.

Gradivni blok BB. (S)-2-(2-(terc-butoksikarbonil)-4-(6-(terc-butoksikarbonil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-2-il)piperazin-1-il)pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0708]

[0709] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka AA postupkom sličnim onom za gradivni blok BA.

Gradivni blok BC. 2-[(2R)-2-[(terc-butoksi)karbonil]-4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil] amino}metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0710]

[0711] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka AU postupkom sličnim onom za gradivni blok BA.

Gradivni blok BD.2-[(2S)-2-[(terc-butoksi)karbonil]-4-[5-({[(terc-butoksi)karbonil] amino}metil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]pirimidin-5-karboksilna kiselina.

[0712]

[0713] Ovaj gradivni blok je pripremljen od gradivnog bloka AV postupkom sličnim onom za gradivni blok BA.

Gradivni blok BE. 15-(6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-1-((1S,4S)-5-(2-(2-(2-aminoetoksi) etoksi)etil)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-on.

[0714]

Korak 1: Sinteza (1S,4S)-terc-butil 5-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata

[0715] U rastvor (1S,4S)-terc-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (2.85 g, 14.37 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (50 mL) je dodat K2CO3 (3.97 g, 28.75 mmol, 2.0 ekviv.) i benzil (2-(2-(2-bromoetoksi)etoksi)etil)karbamat (4.98 g, 14.37 mmol, 1.0 ekviv.). Smeša je mešana na 80 °C tokom 24 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim

1

pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→710% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (6.2 g, 93.0% prinosa) u vidu bezbojnog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C24H37N3O6: 464.27; pronađeno 464.2.

Korak 2: Sinteza benzil (2-(2-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)etoksi)etoksi)etil)karbamata

[0716] U rastvor (1S,4S)-terc-butil 5-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (6.2 g, 13.37 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (60 mL) dodata je TFA (20.7 mL, 279.12 mmol, 20.9 ekviv.). Reakcija je mešana tokom 2 h, nakon čega je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom na 45 °C da bi se dobio željeni sirovi proizvod (10.5 g, 4TFA) u vidu svetlo smeđeg ulja, koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C19H29N3O4: 364.22; pronađeno 364.2.

Korak 3: Sinteza terc-butil 1-((1S,4S)-5-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata

[0717] U rastvor benzil (2-(2-(2-((1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)etoksi) etoksi)etil)karbamata (5 g, 6.10 mmol, 1.0 ekviv, 4TFA) u MeCN (80 mL) je dodat K2CO3 (5.06 g, 36.61 mmol, 6.0 ekviv.) i terc-butil 1-bromo-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oat (2.35 g, 6.10 mmol, 1.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→15% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (5.2 g, 92.8% prinosa) u vidu svetlo žutog ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C34H57N3O10: 668.4; pronađeno 668.4.

Korak 4: Sinteza 1-((1S,4S)-5-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeve kiseline [0718] Rastvor terc-butil 1-((1S,4S)-5-(3-okso-1-fenil-2,7,10-trioksa-4-azadodekan-12-il)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata (5.2 g, 5.66 mmol, 1.0 ekviv.) u TFA (47.3 mL, 638.27 mmol, 112.75 ekviv.) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom na 45 °C. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (2→35% MeCN/H2O(0.05% NH4OH)) dalo je željeni proizvod (1.88 g, 54.3% prinosa) u vidu svetlo smeđeg ulja. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C30H49N3O10: 612.34; pronađeno 612.3.

2

Gradivni blok BF.21-(6-((4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1-il)metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-1-(piperazin-1-il)-3,6,9,12,15,18-heksaoksahenikozan-21-on.

[0719]

Korak 1: Sinteza benzil 4-(23,23-dimetil-21-okso-3,6,9,12,15,18,22-heptaoksatetrakozil) piperazin-1-karboksilata

[0720] U rastvor terc-butil 1-bromo-3,6,9,12,15,18-heksaoksahenikozan-21-oata (5 g, 10.56 mmol, 1.0 ekviv.) i benzil piperazin-1-karboksilata (2.62 mL, 11.62 mmol, 1.1 ekviv, HCl) u MeCN (50 mL) je dodat K2CO3 (4.38 g, 31.69 mmol, 3.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 10 h. Smeša je zatim filtrirana, čvrsti kolač je ispran sa EtOAc (3 x 3 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→10% MeOH/EtOAc) dalo je željeni proizvod (4 g, 61.8% prinosa) u vidu crvene tečnosti.

Korak 2: Sinteza 1-(4-((benziloksi)karbonil)piperazin-1-il)-3,6,9,12,15,18-heksaoksahenikozan-1-ojeve kiseline

[0721] U rastvor benzil 4-(23,23-dimetil-21-okso-3,6,9,12,15,18,22-heptaoksatetrakozil) piperazin-1-karboksilata (1.8 g, 2.94 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (10 mL) dodata je TFA (10 mL). Rastvor je mešan tokom 0.5 h. Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat DCM (30 mL) i rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (1.6 g, 2.87 mmol, TFA) u vidu crvene tečnosti.

Priprema monomera rapamicina.

Monomer 1.40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0722]

[0723] U rastvor rapamicina (30.10 g, 32.92 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (148.9 mL) je dodat piridin (29.6 mL, 367 mmol, 11.1 ekviv.). Rastvor je ohlađen na -78 °C i zatim je dodat pnitrofenil hloroformat (12.48 g, 61.92 mmol, 1.9 ekviv.). Reakcija je mešana na -78 °C tokom 2 h. U reakcionu smešu je zatim dodat DCM i rastvor je zatim sipan u H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM i kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen silika gel hromatografijom (0→50% EtOAc/heksani) da bi se dobio proizvod (23.1 g, 59.2% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H82N2O17: 1101.55; pronađeno 1101.6.

Monomer 2.32(R)-hidroksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0724]

Korak 1: Sinteza 32(R)-hidroksi rapamicina

[0725] Rastvor 32(R)-hidroksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina (3.64 g, 3.18 mmol, 1 ekviv.) u THF (41.8 mL) tretiran je sa piridinom (20.8 mL, 258 mmol, 81 ekviv.) i reakciona smeša je

4

ohlađena na 0 °C. Rastvor je tretiran u kapima sa 70% HF-piridinom (4.60 mL, 159 mmol, 50 ekviv.) i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom20 minuta, a zatim je zagrevana do sobne temperature. Posle 5 h, reakciona smeša je ponovo ohlađena na 0 °C i pažljivo dodata u ledeno hladan zas. rastvor NaHCO3 (400 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL) i organske faze su isprane sa 75 mL porcijama H2O, zasićenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom. Organski rastvor je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo svetlo žuto ulje koje je proizvodilo čvrstu penu pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen silika gel hromatografijom (20→40% aceton/heksani) da bi se dobio željeni proizvod kao bela amorfna čvrsta supstanca (1.66 g, 57% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C51H81NO13: 938.56; pronađeno 938.7; m/z: [M - H] izračunato za C51H81NO13: 914.56; pronađeno 914.7.

Korak 2: Sinteza 32(R)-hidroksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina

[0726] U suspenziju praškastih 4Å molekulskih sita (6.0 g) u DCM (130 mL) je dodat 32(R)-hidroksi rapamicin (6.00 g, 6.55 mmol, 1.0 ekviv.). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta, dodat je piridin (5.99 mL, 74.0 mmol, 11.3 ekviv.). Suspenzija je ohlađena na -15 °C i zatim je dodat 4-nitrofenilhloroformat (1.78 g, 8.84 mmol, 1.4 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na -10 °C tokom 2 h i zatim filtrirana, i filter jastučić je ispran sa DCM (140 mL). Filtrat je ispran sa zasićenim NaHCO3 (130 mL), H2O (130 mL) i fiziološkim rastvorom (130 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen silika gel hromatografijom (20→50% EtOAc/heksani) da bi se dobio proizvod (4.44 g, 63% prinosa) u vidu prljavo-bele čvrste pene. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H84N2O17: 1103.57; pronađeno 1103.5.

Monomer 3.32(R)-metoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0727]

Korak 1: Sinteza 32(R)-metoksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina

[0728] U mešani rastvor 32(R)-hidroksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina (3.83 g, 3.34 mmol, 1.0 ekviv.) u hloroformu (95.8 mL) je dodata protonska spužva<®>(7.17 g, 33.5 mmol, 10.0 ekviv.) zajedno sa sveže osušenim 4 Å molekulskim sitom (4 g). Rastvor je mešan tokom 1 h pre dodavanja trimetiloksonijum tetrafluoroborata (4.95 g, 33.5 mmol, 10.0 ekviv, osušen zagrevanjem pod sniženim pritiskom na 50 °C tokom 1 h pre upotrebe) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 18 h, i zatim je reakciona smeša razblažena sa DCM i filtrirana kroz celit. Filtrat je ispran uzastopno sa vodenim rastvorom 1 M HCl (2x), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, zatim osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (10→20% EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu žutog ulja koje je kontaminirano sa 3 tež.% Protonska spužva<®>. Ostatak je stavljen u MTBE i ispran sa 1 M vodenim rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, osušen, i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila žuta pena (3.15 g, 81.2% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M - TES H2O] izračunato za C64H111NO13Si2: 1061.68; pronađeno 1061.9.

Korak 2: Sinteza 32(R)-metoksi rapamicina

[0729] U mešani rastvor 32(R)-metoksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina (1.11 g, 0.958 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (12.6 mL) i piridinu (6.30 mL) u plastičnoj epruveti je dodat 70% HF-piridin (2.22 mL, 76.6 mmol, 80.0 ekviv.) u kapima na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 20 minuta pre nego što je zagrejana na sobnu temperaturu tokom 3 h, kada je HPLC pokazala potpunu potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i polako sipana u ledeno hladan zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (50 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, fiziološkim rastvorom, osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Žuti ostatak je rastvoren u MeOH (5 mL) i dodat u kapima u H2O (50 mL) da bi se dobio beli talog. Posle mešanja od 15 minuta, suspenzija je filtrirana koz levak srednje poroznosti i kolač je ispran sa H2O (2x). Čvrste supstance su zatim rastvorene u MeCN (50 mL) i liofilizovane preko noći da bi se dobio proizvod u vidu bele čvrste supstance (780 mg, 87% prinosa). LCMS (ESI) m/z:

[M Na] izračunato za C52H83NO13: 952.58; pronađeno 952.4.

Korak 3: Sinteza 32(R)-metoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina

[0730] U rastvor 32(R)-metoksi rapamicina (4.50 g, 4.84 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (180 mL) je dodata su 4Å molekulska sita u prahu (6.0 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i zatim je dodat piridin (3.91 mL, 48.4 mmol, 10 ekviv.). Smeša je ohlađena na -10 °C i dodat je 4-nitrofenilhloroformat (0.990 g, 4.91 mmol, 1.0 ekviv.) u jednoj porciji. Reakcija je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i posle 3 h reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je 4-nitrofenilhloroformat (250 mg, 1.24 mmol, 0.3 ekviv.). Smeša je zagrejana do sobne temperature i posle 1 h reakciona smeša je filtrirana kroz podlogu od celita i podloga je isprana sa DCM (140 mL). Filtrat je ispran sa H2O (120 mL) i zasićenim NaHCO3 (2 x 120 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (20→50% EtOAc/heksan) da bi se dobila bela čvrsta pena. Materijal je prebačen u MeCN tokom čega se formira bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa dodatnim MeCN i ostavljena da se osuši na vazduhu da bi se dobio proizvod (4.51 g, 85% prinosa). LCMS (ESI) m/z [M Na] izračunato za C59H86N2O17: 1117.58; pronađeno 1117.6.

Monomeri 4. 32(R)-etoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0731]

Korak 1: Sinteza 32(R)-etoksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina

[0732]Rastvor 32(R)-hidroksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina (773 mg, 0.675 mmol, 1.0 ekviv.) u hloroformu (19 mL) tretiran je sa N,N,N',N'-tetrametil-1,8-naftalenediaminom (1.85 g, 8.63 mmol, 12.8 ekviv.) zajedno sa sveže osušenim 4Å molekulskim sitom. Smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi i tretirana sa trietiloksonijum tetrafluoroboratom (1.51 g, 7.95 mmol, 11.8 ekviv.) u jednoj porciji na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 3 h, u kom trenutku je reakciona smeša razblažena sa DCM i filtrirana kroz celit, ispiranjem filterske ploče sa dodatnim DCM. Kombinovani filtrati su dva puta isprani sa 1 M HCl, jednom sa zasićenim rastvorom NaHCO3, i osušeni preko Na2SO4. Rastvor je filtriran i koncentrovan do ostatka. Sirovi ostatak je tretiran sa MTBE i filtriran da bi se uklonio polarni nerastvorljivi materijal. Filtrat je koncentrovan i prečišćen silika gel hromatografijom (5→25% EtOAc/heksan) da bi se dobio proizvod u vidu pene (516 mg, 65% prinosa). LCMS (ESI) m/z:

[M Na] izračunato za C65H113NO13Si21194.77; pronađeno 1194.6.

Korak 2: Sinteza 32(R)-etoksi rapamicina

[0733] U rastvor 32(R)-etoksietoksi-28,40-bistrietilsilil rapamicina (131 mg, 0.112 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (1.3 mL) na 0 °C je dodat piridin (271 µL, 3.35 mmol, 3.4 ekviv.) praćeno sa 70% HF-piridinom (51 µL, 1.8 mmol, 1.8 ekviv.). Reakciona boca je zatvorena i čuvana u frižideru 3 dana, u kom trenutku je reakciona smeša sipana u hladni zasićeni NaHCO3 (20 mL).

Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 M HCl (2 x 20 mL), zasićenim rastvorom NaHCO3 (20 mL), i fiziološkim rastvorom. Rastvor je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prebačen u MeOH (1.5 mL) i dodat u kapima u H2O (20 mL). Čvrste supstance su filtrirane i isprane sa dodatnom H2O da bi se dobio proizvod (53 mg, 51% prinosa) kao beli prah. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C53H85NO13: 966.59; pronađeno 966.5.

Korak 3: Sinteza 32(R)-etoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina

[0734] U 0.03 M rastvor 32(R)-etoksi rapamicina (1.0 ekviv.) u DCM se dodaju praškasta 4Å molekulska sita. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i zatim je dodat piridin (10 ekviv.). Smeša je ohlađena na -10 °C i dodat je 4-nitrofenilhloroformat (1.0 ekviv.) u jednoj porciji. Reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana do potrošnj32(R)-etoksi rapamicina, kao što je određeno LCMS analizom. Smeša je filtrirana kroz podlogu od celita i podloga je isprana sa DCM. Filtrat je ispran sa H2O i zasićenim NaHCO3. Organska faza je zatim osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (20→50% EtOAc/heksan) da bi se dobio proizvod.

Monomer 5. 40(R)-O-(4-nitrofenil)tiokarbonat rapamicin.

[0735]

[0736] U rastvor rapamicina (4.00 g, 4.38 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (20 mL) na -78 °C je dodat piridin (4.0 mL, 49 mmol, 11.2 ekviv.), praćeno sa rastvorom O-(4-nitrofenil)hlorotiokarbonata (1.19 g, 5.47 mmol, 1.3 ekviv.) u DCM (8.0 mL). Reakciona smeša je zagrejana do -20 °C i mešana tokom 48 h. Zatim je dodat heksan (40 mL) i dobijena suspenzija je prečišćena silika gel hromatografijom (15/25/60 EtOAc/DCM/heksan zatim 20/25/55 EtOAc/DCM/heksan) da bi se dobio proizvod (3.09 g, 64.4% prinosa) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H82N2O16S: 1117.53; pronađeno 1117.5.

Monomer 6.28-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0737]

Korak 1: Sinteza 40-O-terc-butildimetilsilil rapamicina

[0738] U rastvor rapamicina (1.00 g, 1.09 mmol, 1.0 ekviv.) u DMF (4 mL) na sobnoj temperaturi je dodat imidazol (0.22 g, 3.2 mmol, 2.9 ekviv.) praćeno sa terc-butildimetilsilil hloridom (0.176 g, 1.17 mmol, 1.07 ekviv.). Reakciona smeša je mešana tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM (100 mL) i isprana sa 20% vodenim rastvorom LiCl (3 x 20 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (20→40% EtOAc/heksani) da bi se dobio proizvod (950 mg, 75% prinosa) u vidu slabo žutog stakla. LCMS (ESI) m/z: [M H2O] izračunato za C57H93NO13Si: 1045.65; pronađeno 1045.9.

Korak 2: Sinteza 28-O-(4-nitrofenoksikarbonil)-40-O-(terc-butildimetilsilil) rapamicina [0739] U rastvor 40-O-terc-butildimetilsilil rapamicina (0.845 g, 0.822 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi je dodat piridin (0.9 mL, 10 mmol, 12.1 ekviv.) praćeno sa 4-nitrofenil hloroformatom (0.373 g, 1.85 mmol, 2.25 ekviv.). Reakciona smeša je mešana tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM (150 mL) i rastvor je uzastopno ispran sa zasićenim NaHCO3 (20 mL), 10% limunskom kiselinom (2 x 20 mL), i fiziološkim rastvorom (20 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze (30--7100% MeCN/H2O) da bi se dobio proizvod (930 mg, 95% prinosa) kao bledo žuta pena. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C64H96N2O17Si: 1193.66; pronađeno 1193.7.

Korak 3: Sinteza 28-O-(4-nitrofenoksikarbonil) rapamicina

[0740] U rastvor 28-O-(4-nitrofenoksikarbonil)-40-O-(terc-butildimetilsilil)rapamicina (0.930 g, 0.779 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (10.7 mL) je dodat piridin (3.78 mL, 46.8 mmol, 60.1 ekviv.) praćeno sa dodavanje u kapima 70% HF-piridina (0.91 mL, 31.2 mmol, 40.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 48 h. Smeša je zatim polako sipana u ledeno hladan zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 20 mL) i kombinovani organski sloj je ispran sa zasićenim NaHCO3 (10 mL) i fiziološkim rastvorom (10 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze (30→100% MeCN/H2O) da bi se dobio proizvod (200 mg, 24% prinosa) u vidu slabo žutog praha. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H82N2O17: 1101.55; pronađeno 1101.3.

Monomer 7. 32(R)-hidroksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)tiokarbonat rapamicin.

[0741]

[0742] U rastvor 32(R)-hidroksi rapamicina (2.80 g, 3.06 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (28 mL) je dodat piridin (27.6 mL, 34 mmol, 11 ekviv.) i osušena 4Å molekulska sita (2.8 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je smeša ohlađena na -25 °C i dodat je rastvor O-(4-nitrofenil)hlorotioformata (0.798 g, 3.67 mmol, 1.2 ekviv.) u DCM (6 mL). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i posle 21 h je filtrirana kroz celit. Filtrat je podeljen između DCM i H2O i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (2.15 g, 64% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H84N2O16S: 1119.54; pronađeno 1120.0.

1

Monomer 8.32(R)-metoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)tiokarbonat rapamicin.

[0743]

[0744] U rastvor 32(R)-metoksi rapamicina (6.69 g, 7.19 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (67 mL) je dodat piridin (6.6 mL, 81 mmol, 11 ekviv.) i osušena 4Å molekulska sita (6.7 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je smeša ohlađena na -25 °C i dodat je rastvor O-(4-nitrofenil)hlorotioformata (1.88 g, 8.63 mmol, 1.20 ekviv.) u DCM (13 mL). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i posle 21 h je filtrirana kroz celit. Filtrat je podeljen između DCM i H2O i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (5.1 g, 64% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C59H86N2O16S: 1133.56; pronađeno 1134.1.

Monomer 9.32-deoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0745]

[0746] U rastvor 32-deoksi rapamicina (0.623 g, 0.692 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (24.7 mL) su dodata 4 Å molekulska sita (600 mg). Suspenzija je mešana tokom 1 h i zatim je dodat piridin (557 µL, 6.92 mmol, 10 ekviv.). Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i zatim je dodat O-(4-nitrofenil)hloroformat (175 mg, 1.03 mmol, 1.7 ekviv.). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 2 h, u kom trenutku je reakciona smeša koncentrovana pod

2

sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (0→10% MeOH/DCM) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (0.61 g, 82% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H84N2O16: 1087.57; pronađeno 1087.6.

Monomer 10.32-deoksi 40(R)-O-(4-nitrofenil)tiokarbonat rapamicin.

[0747]

[0748] U 0.2 M rastvor 32-deoksi rapamicina (1.0 ekviv.) u DCM na -78 °C je dodat piridin (11.2 ekviv.), praćeno sa 0.7 M rastvorom f O-(4-nitrofenil)hlorotiokarbonata (1.3 ekviv.) u DCM. Reakciona smeša je zagrejana na -20 °C i mešana do utroška početnog materijala, kao što je određeno LCMS analizom. Zatim je dodat heksan i dobijena suspenzija je prečišćena silika gel hromatografijom da bi se dobio proizvod.

Monomer 11.28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0749]

Korak 1: Sinteza 28(R)-metoksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina

[0750] U rastvor 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina (4.00 g, 4.89 mmol, 1.0 ekviv.) u hloroformu (67 mL) je dodata protonska spužva (11.2 mL, 52.3 mmol, 13 ekviv.) i osušena 4 Å molekulska sita (5.8 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je dodat trimetiloksonijum tetrafluoroborat (7.21 g, 48.8 mmol, 12.5 ekviv.). Posle 4 h suspenzija je filtrirana kroz celit. Filtrat je ispran uzastopno sa 2N vodenim rastvorom HCl, H2O, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, zatim osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksan) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (2.1 g, 52% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H95NO13Si: 1064.65; pronađeno 1065.26.

Korak 2: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina [0751] U rastvor 28(R)-metoksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina (2.13 g, 2.04 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (31 mL) na -20 °C je dodat u kapima rastvor litijum tri-tercbutoksialuminijum hidrid u THF (1 M, 4.09 mL, 4.09 mmol, 2.0 ekviv.). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i posle 3 h je dodat u rastvor H2O (4 mL), EtOAc (31 mL), i

4

2M vodenog rastvora limunske kiseline (4 mL) na 0 °C. Posle 5 min smeša je podeljena, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su sipani u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (60 mL) na 0 °C. Slojevi su podeljeni, a organski sloj je osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova bela čvrsta supstanca (2.32 g). Sirova čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (12 mL) i zatim su dodati piridin (241 µL, 2.98 mmol, 1.5 ekviv.), osušena 4Å molekulska sita (2.1 g), i bakar acetat (0.27 g, 1.49 mmol, 0.7 ekviv.). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Suspenzija je prskana sa O2 i zatim držana u atmosferi O2 tokom 30 min. Posle 2 h smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksan) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (307 mg, 14% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H97NO13Si: 1066.66; pronađeno 1067.0.

Korak 3: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi rapamicina

[0752] U rastvor 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina (0.307 g, 0.294 mmol, 1.0 ekviv.) u THF (4 mL) u polipropilenskoj epruveti na 0 °C je dodat piridin (1.42 mL, 17.6 mmol, 60.0 ekviv.) praćeno sa 70% HF-piridinom (0.34 mL, 11.7 mmol, 40 ekviv.). Rastvor je zagrejan do sobne temperature i mešan tokom 21 h, u kom trenutku rastvor je sipan u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 na 0 °C. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom, zatim su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksan) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (146 mg, 53% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C52H83NO13: 952.58; pronađeno 952.8.

Korak 4: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina [0753] U rastvor 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi rapamicina (0.66 g, 0.71 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (3 mL) je dodat piridin (0.64 mL, 7.9 mmol, 11 ekviv.) i osušena 4 Å molekulska sita (0.66 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je smeša ohlađena na -35 °C i dodat je O-(4-nitrofenil)hloroformat (0.17 g, 0.85 mmol, 1.2 ekviv.). Posle 3 h, dodat je DCM (5 mL) i suspenzija je filtrirana kroz celit. Filtrat je ispran sa H2O, osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (0.44 g, 57% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C59H86N2O17: 1117.58; pronađeno 1118.0.

Monomer 12.28(R)-metoksi 32(R)-metoksi 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0754]

Korak 1: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-metoksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina [0755] U rastvor 28(R)-metoksi 32(R)-hidroksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina (1.15 g, 1.10 mmol, 1.0 ekviv.) u hloroformu (19 mL) je dodata protonska spužva (3.22 mL, 15.0 mmol, 14 ekviv.) i osušena 4Å molekulska sita (2.3 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je dodat trimetiloksonijum tetrafluoroborat (2.07 g, 14.0 mmol, 12.7 ekviv.). Posle 4 h suspenzija je filtrirana kroz celit i filtrat je ispran sa 1N HCl, H2O, i zasićenim vodeni rastvorom NaHCO3, osušena i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksan) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C59H99NO13Si: 1080.68; pronađeno 1081.2.

Korak 2: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-metoksi rapamicina

[0756] U rastvor 28(R)-metoksi 32(R)-metoksi 40(R)-O-terc-butildimetilsilil rapamicina u THF (4 mL) u polipropilenskoj epruveti na 0 °C je dodat piridin (1.13 mL, 14.2 mmol, 12.9 ekviv.) praćeno sa 70% HF-piridinom (0.27 mL, 9.42 mmol, 8.6 ekviv.). Rastvor je zagrejan do sobne temperature i mešan tokom 41 h, u kom trenutku rastvor je sipan u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 na 0 °C. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom, zatim su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksan) dalo je željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (516 mg, 49% prinosa 2-steps). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C53H85NO13: 966.59; pronađeno 967.0.

Korak 3: Sinteza 28(R)-metoksi 32(R)-metoksi 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina [0757] U rastvor 28(R)-metoksi 32(R)-metoksi rapamicina (0.30 g, 0.32 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (1.4 mL) je dodat piridin (0.29 mL, 3.5 mmol, 11 ekviv.) i osušena 4 Å molekulska sita (0.30 g). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, u kom trenutku je ohlađena na -35 °C i dodat je O-(4-nitrofenil)hloroformat (0.08 g, 0.38 mmol, 1.2 ekviv.). Posle 3 h, dodat je DCM (2 mL) i suspenzija je filtrirana kroz celit. Filtrat je ispran sa H2O, osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu prljavo bele čvrste supstance (0.20 g, 57% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C60H88N2O17: 1131.60; pronađeno 1132.1.

Monomer 13.32(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0758]

Korak 1: Sinteza 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina [0759] U rastvor 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-hidroksi rapamicina (0.602 g, 0.526 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (16 mL) na -20 °C je dodat piridin (0.82 mL, 10 mmol, 19 ekviv.) praćeno sa O-(4-nitrofenil)hloroformatom (0.36 g, 1.8 mmol, 3.4 ekviv.). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 1 h, u kom trenutku rastvor je razblažen sa DCM (50 mL) i sipan u H2O (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (50 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobila bledo žuta pena koja je korišćena direktno u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza 32(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina

[0760] U rastvor 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina u THF (10 mL) u polipropilenskoj epruveti na 0 °C je dodat piridin (1.70 mL, 21.0 mmol, 40.0 ekviv.) praćeno sa 70% HF-piridinom (0.46 mL, 15.8 mmol, 30.0 ekviv.). Rastvor je zagrejan do sobne temperature i mešan preko noći, u kom trenutku rastvor je sipan u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 na 0 °C. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom, zatim su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (20→100% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu beličastog praha (420 mg, 74% prinosa 2-steps). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H84N2O17: 1103.57; pronađeno 1104.0.

Monomer 14.32(S)-azido 40-(4-nitrofenil)karbonat rapamicin.

[0761]

Korak 1: Sinteza 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-O-metansulfonil rapamicina

[0762] U rastvor 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-hidroksi rapamicina (2.50 g, 2.18 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (25 mL) na 0 °C je dodat Et3N (0.912 mL, 6.54 mmol, 3.0 ekviv.) praćeno sa metansulfonil hloridom (0.338 mL, 4.36 mmol, 2.0 ekviv.). Rastvor je mešan na 0 °C tokom 3 h, u kom trenutku je dodat EtOAc i rastvor je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.

Korak 2: Sinteza 28-O-trietilsilil 32(S)-azido rapamicina

[0763] U rastvor 28,40-O-bis(trietilsilil) 32(R)-O-metansulfonil rapamicina u THF (40 mL) je dodat DIPEA (0.761 mL, 4.37 mmol, 2.0 ekviv.) i tetrabutilamonijum azid (3.72 g, 13.1 mmol, 6.0 ekviv.). Reakcioni rastvor je zagrevan do refluksa tokom 5.5 h i zatim ohlađen do sobne temperature. Rastvor je razblažen sa EtOAc i ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (30→100% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod kao prozirno staklo (746 mg, 33% prinosa u 2 koraka). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C57H94N4O12Si: 1077.65; pronađeno 1077.8.

Korak 3: Sinteza 28-O-trietilsilil 32(S)-azido 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina [0764] U rastvor 28-O-trietilsilil 32(S)-azido rapamicina (0.505 g, 0.478 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (15 mL) je dodat piridin (0.75 mL, 9.3 mmol, 19 ekviv.) i 4 Å molekulska sita. Suspenzija je ohlađena na -20 °C i dodat je O-(4-nitrofenil)hloroformat (0.32 g, 1.6 mmol, 3.4 ekviv.). Suspenzija je mešana na -20 °C tokom 2 h, u kom trenutku je razblažena sa DCM (50 mL), filtrirana i sipana u H2O (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (50 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (20 mL), osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobila bledožuta pena koja je direktno korišćena u sledećem koraku.

Korak 4: Sinteza 32(S)-azido 40-O-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina

[0765] U rastvor 28-O-trietilsilil 32(S)-azido 40(R)-(4-nitrofenil)karbonat rapamicina u THF (10 mL) u polipropilenskoj epruveti na 0 °C je dodat piridin (1.55 mL, 19.1 mmol, 40.0 ekviv.) praćeno sa 70% HF-piridinom (0.42 mL, 14.4 mmol; 30.0 ekviv.). Rastvor je zagrejan do sobne temperature i mešan preko noći, u kom trenutku rastvor je sipan u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 na 0 °C. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom, zatim su osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (30→7100% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu beličastog praha (410 mg, 77% prinosa u 2 koraka). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C58H83N5O16: 1128.57; pronađeno 1129.0.

Monomer 15. 28-metoksi-40-O-(4-nitrofenoksi)karbonil rapamicin.

[0766]

Korak 1: Sinteza 28-metoksi rapamicina

[0767] U rastvor 28-metoksi-40-O-(terc-butildimetil)silil rapamicina (0.500 g, 0.480 mmol, 1.0 ekviv.) u MeOH (1.6 mL) na -20 °C je dodata H2SO4 (1.28 µL, 0.024 mmol, 0.05 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na -20 °C tokom 48 h. Reakciona smeša je zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3 (4 mL)/H2O (4 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (2 x 6 mL), i kombinovane organske faze su osušene, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (30--7100% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod u vidu žutog praha (270 mg, 61% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C52H81NO13: 950.5; pronađeno 950.7.

Korak 2: Sinteza 28-metoksi-40-O-(4-nitrofenoksi)karbonil rapamicina

[0768] U rastvor 28-metoksi rapamicina (0.210 g, 0.226 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (7.1 mL) na -20 °C je dodat piridin (0.35 mL, 4.4 mmol, 19 ekviv.) i zatim je dodat p-nitrofenil hloroformat (0.15 g, 0.76 mmol, 3.4 ekviv.). Reakciona smeša je mešana na -20 °C tokom 30 min i zatim zagrejana do sobne temperature. Posle mešanja preko noći, dodat je p-nitrofenil hloroformat (0.15 g, 0.76 mmol, 3.4 ekviv.) i reakcija je mešana tokom još 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (20 mL) i sipana u H2O (10 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (20 mL), i kombinovani organski slojevi su isprani sa fiziološkim rastvorom (9 mL), osušeni, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje hromatografijom reverzne faze (50→100% MeCN/H2O) dalo je željeni proizvod kao bledo žuti prah (200 mg,

1

81% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C59H84N2O17: 1115.6; pronađeno 1115.8.

Monomer 16.32(R),40-O,O-bis[(4-nitrofenoksi)karbonil] rapamicin.

[0769]

[0770] U rastvor 32(R)-O-[(4-nitrofenoksi)karbonil] rapamicina (675 mg, 0.624 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (13 mL) su dodata praškasta 4Å molekulska sita (675 mg). Suspenzija je mešana tokom 1 h, u kom trenutku je dodat piridin (0.56 mL, 6.90 mmol, 11.1 ekviv.). Smeša je ohlađena na -15 °C i zatim je dodat p-nitrofenil hloroformat (132 mg, 0.655 mmol, 1.05 ekviv.) u jednoj porciji. Smeša je zagrejana do 0 °C, mešana 4 h, a zatim zagrejana do sobne temperature. Reakciona smeša je filtrirana i isprana sa DCM (25 mL). Filtrat je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (15 mL), H2O (15 mL), i fiziološkim rastvorom (10 mL), osušen, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (25→45% EtOAc/heksani) dalo je željeni proizvod u vidu bledo žute čvrste supstance (566 mg, 73% prinosa). LC-MS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C65H87N3O21: 1268.57; pronađeno 1269.3.

Monomer 17.28(R),32(R),40(R)-O,O,O-tris[(4-nitrofenoksi)karbonil] rapamicin.

[0771]

2

[0772] U rastvor 32(R)-hidroksi rapamicina (1.00 g, 1.09 mmol, 1.0 ekviv.) u DCM (22 mL) su dodata praškasta 4Å molekulska sita (1.0 g). Suspenzija je mešana tokom 45 min, u kom trenutku je dodat piridin (0.97 mL, 12.0 mmol, 11.0 ekviv.). Smeša je ohlađena na -15 °C i zatim je dodat p-nitrofenil hloroformat (550 mg, 2.73 mmol, 2.5 ekviv.) u jednoj porciji. Smeša je zagrejana do sobne temperature tokom 4 h i mešana je preko noći. Smeša je ohlađena na 0 °C i dodato je još p-nitrofenil hloroformata (220 mg, 1.09 mmol, 1.0 ekviv.) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h, zagrejana do sobne temperature, i zatim je mešana tokom 2 h. Smeša je još jednom ohlađena na 0 °C i dodato je još p-nitrofenil hloroformata (660 mg, 3.27 mmol, 3.0 ekviv.). Reakciona smeša je mešana tokom 15 min i zatim na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je filtrirana i isprana sa DCM (25 mL). Filtrat je ispran sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (20 mL), H2O (20 mL), i fiziološkim rastvorom (15 mL), osušen, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa silika gel hromatografijom (5→15% EtOAc/DCM) dalo je željeni proizvod u vidu bledo žute čvrste supstance (550 mg, 36% prinosa). LC-MS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C72H90N4O25: 1433.58; pronađeno 1434.3.

Opšte procedure i specifični primeri.

Opšta procedura 1: Kuplovanje karboksilne kiseline i amina praćeno sa uklanjanjem zaštite N-Boc.

[0773]

dioksan

Korak 1:

[0774] U 0.1 M rastvor karboksilne kiseline (1.0 ekviv.) u DMA je dodat amin (1.2 ekviv.), DIPEA (4.0 ekviv.) i PyBOP (1.3 ekviv.). Reakcija je ostavljena da se meša do potrošnje karboksilne kiseline, kao što je naznačeno sa LCMS. Reakciona smeša je zatim prečišćena silika gel hromatografijom da bi se dobio proizvod.

Korak 2:

[0775] U 0.07 M rastvor N-Boc zaštićenog amina (1.0 ekviv.) u dioksanu je dodata HCl (4 M u dioksanu) (50 ekviv.). Reakcija je ostavljena da se meša do konzumiranja N- Boc zaštićenog amina, kao što je naznačeno pomoću LCMS. Zatim je reakcija koncentrovana do ulja, koje je zatim rastvoreno u H2O i liofilizovano da bi se dobio proizvod.

Intermedijer A1-7. 1-amino-27-(6-{[4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]metil}-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il)-3,6,9,12,15,18,21,24-oktaoksaheptakozan-27-on

[0776]

Korak 1: Sinteza terc-butil N-[27-(6-{[4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]metil}-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il)-27-okso-3,6,9,12,15,18,21,24-oktaoksaheptakozan-1-il]karbamatakarbamata

[0777] U rastvor 1-{[(terc-butoksi)karbonil]amino }-3,6,9, 12, 15, 18,21,24-oktaoksaheptakozan-27-ojeve kiseline (102 mg, 189 µmol, 1.0 ekviv.) i 6-{[4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]metil}-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-ijuma (120 mg, 227 µmol, 1.2 ekviv.) u DMA (1.88 mL) je dodat DIPEA (131 µL, 756 µmol, 4.0 ekviv.) praćeno sa PyBOP (127 mg, 245 µmol, 1.3 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Posle 2 h, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i sirovi ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/DCM) da bi se dobio proizvod (161.5 mg, 91% prinosa) kao bledo žuto ulje. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C46H65N9O12: 936.49; pronađeno 936.3.

Korak 2: Sinteza 1-amino-27-(6-{[4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]metil}-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il)-3,6,9,12,15,18,21,24-oktaoksaheptakozan-27-ona

[0778] U rastvor terc-butil N-[27-(6-{ [4-amino-3-(2-amino-1,3-benzoksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]metil}-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il)-27-okso-3,6,9,12,15,18,21,24-oktaoksaheptakozan-1-il]karbamata (0.9 g, 0.9614 mmol, 1.0 ekviv.) u dioksanu (3.20 mL) je dodata HCl (4 M u dioksanu, 2.40 mL, 9.61 mmol, 10.0 ekviv.). Reakcija je mešana tokom 2 h i zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije ulje. Ulje je azeotropovano sa DCM (3 × 15 mL) da bi se dobio proizvod (881 mg, 105% prinosa, HCl)

4

kao smeđa čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena u sledećem koraku. LCMS (ESI) m/z:

[M H] izračunato za C41H57N9O10: 836.43; pronađeno 836.3.

[0779] Prateći opštu proceduru 1, ali korišćenjem odgovarajućeg inhibitora aktivnog mesta koji sadrži amin u tabeli 2 i PEG karboksilne kiseline, pripremljeni su intermedijeri A1 u tabeli 5:

Tabela 5. Pripremljeni dodatni amini

1

[0780] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajući intermedijer A1 u tabeli 5 i PEG karboksilnu kiselinu, pripremljeni su intermedijeri A2 u tabeli 6:

Tabela 6. Pripremljeni dodatni amini

2

Opšta procedura 2: Kuplovanje 4-nitrofenil karbonata koji sadrži rapamicin monomer i inhibitor aktivnog mesta koji sadrži intermedijer koji ima primarni ili sekundarni amin.

[0781]

[0782] U 0.02 M rastvor 4-nitrofenil karbonata koji sadrži monomer rapamicina (1.0 ekviv.) i inhibitor aktivnog mesta koji sadrži intermedijer (2.0 ekviv.) u DMA je dodat DIPEA (4.0 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi pod azotom. Po završetku kako je utvrđeno sa LCMS analizom, sirova reakciona smeša je prečišćena sa preparativnom HPLC da bi se dobio proizvod.

Primer 2: Sinteza dvovalentnog jedinjenja rapamicina Serije 1.

[0783]

[0784] U rastvor 40(R)-O-(4-nitrofenil karbonat) rapamicina (25 mg, 23.16 µmol, 1.0 ekviv.) i Intermedijera A1-7 (42.0 mg, 46.32 µmol, 2.0 ekviv.) u DMA (1.15 mL) je dodat DIPEA (16.0 µL, 92.64 µmol, 4.0 ekviv.). Reakcija je mešana tokom 18 h, u kom trenutku reakciona smeša je prečišćena hromatografijom reverzne faze (10→40→95% MeCN 0.1% mravlja kiselina /H2O 0.1% mravlja kiselina) da bi se dobio proizvod (9.92 mg, 24% prinosa) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C93H134N10O24: 1775.97; pronađeno 1775.7.

[0785] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijera A1 i A2 iz tabela 5 i 6, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 1 u tabeli 7:

Tabela 7. Dvovalentna jedinjenja serije 1:

4

41

42

4

44

4

Opšta procedura 3: Spajanje halogenida koji sadrži PEG estar i pred-vezujući deo koji sadrži amin praćeno sa deprotekcijom estra.

[0786]

pred-vezujući deo koji

Korak 1:

[0787] U 0.1 M rastvor amina koji sadrži pred-vezujući deo (1.0 ekviv.) u MeCN je dodat K2CO3 (2.0 ekviv.) praćeno sa halogenidom koji sadrži PEG estar (1.0 ekviv.). Reakcija je mešana na 80 °C do potrošnje amina koji sadrži pred-vezujući deo, kao što je naznačeno LCMS analizom. Reakcija je zatim prečišćena silika gel hromatografijom da bi se dobio proizvod.

Korak 2:

[0788] U 0.1 M rastvor PEG terc-butil estra (1.0 ekviv.) u EtOAc je dodat rastvor HCl u EtOAc. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi do potrošnje PEG estra, kao što je naznačeno LCMS analizom. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod.

4

Intermedijer B1-1. 1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeva kiselina

[0789]

Korak 1: Sinteza terc-butil 1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata

[0790] U smešu 2-((2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)metil)izoindolin-1,3-diona (7.97 g, 24.66 mmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (200 mL) je dodat K2CO3 (6.82 g, 49.31 mmol, 2.0 ekviv.) praćeno sa terc-butil 1-bromo-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oatom (9.5 g, 24.66 mmol, 1.0 ekviv.). Reakciona smeša je zagrevana na 85 °C i mešan tokom 15 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0→20% EtOAc/MeOH) da bi se dobio proizvod (11.5 g, 74.3% prinosa) kao svetlo žuta tečnost.

Korak 2: Sinteza 1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeve kiseline

[0791] U rastvor terc-butil 1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-oata (3.5 g, 5.58 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOAc (50 mL) je dodat rastvor HCl u EtOAc (500 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod (5.3 g, 78.2% prinosa, HCl) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C28H37N5O8: 572.27; pronađeno 572.4.

[0792] Prateći opštu proceduru 3, ali koristeći odgovarajući halogenid koji sadrži PEG i amin koji sadrži pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijeri B1 u tabeli 8:

4

Tabela 8. Pripremljeni dodatni zaštićeni amini

Opšta procedura 4: Kuplovanje PEG karboksilne kiseline i inhibitora aktivnog mesta koji sadrži amin, nakon čega sledi uklanjanje zaštite amina.

[0793]

Korak 1:

[0794] U 0.15 M rastvor PEG karboksilne kiseline (1.0 ekviv.) u DMF je dodat HATU (1.3 ekviv.) i DIPEA (5.0 ekviv.). Posle mešanja tokom 30 min, dodat je inhibitor aktivnog mesta koji sadrži amin (1.2 ekviv.). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi do potrošnje PEG karboksilne kiseline, kao što je naznačeno sa LCMS. Reakcija je zatim prečišćena hromatografijom reverzne faze da bi se dobio proizvod.

Korak 2:

[0795] U 0.1 M rastvor ftalimidom zaštićenog amina (1.0 ekviv.) u MeOH na 0 °C je dodat NH2NH2•H2O (4.0 ekviv.). Dobijena smeša je mešana na 60 °C do utroška amina zaštićenog ftalimidom, kao što je naznačeno sa LCMS analizom. Reakcija je zatim prečišćena hromatografijom reverzne faze da bi se dobio proizvod.

4

Intermedijer B2-1. N-(4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)-1-(4-(5-(aminometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-amid

[0796]

Korak 1: Sinteza N-(4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)-1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-amida

[0797] U smešu 1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-ojeve kiseline (3 g, 4.93 mmol, 1.0 ekviv, HCl) u DMF (30 mL) je dodat HATU (12.11 µL, 6.41 mmol, 1.3 ekviv.) i DIPEA (4.30 mL, 24.67 mmol, 5.0 ekviv.). Posle 30 min, je dodat 5-(4-amino-1-(4-aminobutil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[d]oksazol-2-amin (4.03 g, 5.92 mmol, 1.2 ekviv, 3TFA). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim prečišćena sa preparativnom-HPLC (MeCN/H2O) da bi se dobio proizvod (5.4 g, 81.2% prinosa, 4TFA) kao svetlocrvena čvrsta supstanca. LCMS (ESI) m/z: [M 2H]/2 izračunato za C44H53N13O8: 446.71; pronađeno 447.0.

Korak 2: Sinteza N-(4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)-1 -(4-(5 -(aminometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15 -amida

[0798] U smešu N-(4-(4-amino-3-(2-aminobenzo[d]oksazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butil)-1-(4-(5-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-amida (4 g, 2.97 mmol, 1.0 ekviv, 4TFA) u MeOH (25 mL) na 0 °C je dodat NH2NH2•H2O (588.63 µL, 11.87 mmol, 4.0 ekviv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana, i filterski kolač je ispran sa MeOH (5 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen sa preparativnom-HPLC (MeCN/H2O) da bi se dobio proizvod (700 mg, 24.5% prinosa, TFA) u

4

vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI) m/z: [M 2H]/2 izračunato za C36H51N13O6: 381.71; pronađeno 381.8.

[0799] Prateći opštu proceduru 4, ali koristeći odgovarajući intermedijer B1 u tabeli 8 i inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2, pripremljeni su intermedijeri B2 u tabeli 9:

Tabela 9. Pripremljeni dodatni amini

Opšta procedura 5: Kuplovanje halogenida koji sadrži PEG karboksilnu kiselinu i inhibitora aktivnog mesta koji sadrži amin.

[0800]

[0801] U 0.1 M rastvor inhibitora aktivnog mesta koji sadrži amin (1.0 ekviv.) i PEG-a koji sadrži karboksilnu kiselinu (1.2 ekviv.) u DMA je dodat DIPEA (4.0 ekviv.) praćeno sa PyBOP (1.3 ekviv.). Reakcija je mešana do konzumiranja inhibitora aktivnog mesta koji sadrži amin,

41

kao što je naznačeno sa LCMS. Reakcija je zatim prečišćena pomoću HPLC reverzne faze da bi se dobio proizvod.

Intermedijer B3-1. 18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-1-bromo-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-18-on

[0802]

[0803] U rastvor 1-bromo-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-18-ojeve kiseline (105 mg, 282 µmol, 1.2 ekviv.) i 3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1-[(1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-6-il)metil]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (120 mg, 235 µmol, 1.0 ekviv.) u DMA (2.34 mL) je dodat DIPEA (163 µL, 940 µmol, 4.0 ekviv.) praćeno sa PyBOP (158 mg, 305 µmol, 1.3 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h, a zatim prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (10→98% MeCN 0.1% mravlja kiselina /H2O 0.1% mravlja kiselina) da bi se dobio proizvod (82.7 mg, 47% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C35H43BrN8O6: 751.26; pronađeno 751.2.

[0804] Prateći opštu proceduru 5, ali korišćenjem odgovarajućeg halogenida koji sadrži PEG karboksilnu kiselinu i inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2, pripremljeni su intermedijeri B3 u tabeli 10:

Tabela 10. Pripremljeni dodatni PEG halogenidi

Opšta procedura 6: Zamena PEG halogenida sa aminom koji sadrži post vezujući deo i uklanjanje zaštite amina.

[0805]

post-vezujući deo koji

Korak 1:

[0806] U 0.1 M rastvor halogenida koji sadrži PEG (1.0 ekviv.) u MeCN je dodat K2CO3 (3.0 ekviv.) praćeno sa aminom koji sadrži post-vezujući deo (1.2 ekviv.). Dobijena suspenzija je zagrejana na 80 °C i mešana do potrošnje PEG halogenida, kao što je naznačeno sa LCMS. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim prečišćena silika gel hromatografijom da bi se dobio proizvod.

Korak 2:

[0807] U 0.07 M rastvor N -Boc zaštićenog amina (1.0 ekviv.) u dioksanu je dodata HCl (4 M u dioksanu, 10.0 ekviv.). Reakcija je mešana do potrošnje N -Boc zaštićenog amina, kao što je naznačeno LCMS analizom. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod.

Intermedijer B2-4. 18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-1-(4-{5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-1-il)-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-18-on

[0808]

Korak 1: Sinteza terc-butil 2-[4-(18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-18-okso-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-1-il)piperazin-1-il]-SH,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboksilata

[0809] U suspenziju 18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-1-bromo-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-18-ona (82.7 mg, 110 µmol, 1.0 ekviv.) u MeCN (1.09 mL) je dodat K2CO3 (45.6 mg, 330 µmol, 3.0 ekviv.) praćeno sa terc-butil 2-(piperazin-1-il)-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboksilatom (42.1 mg, 132 µmol, 1.2 ekviv.). Dobijena suspenzija je zagrevana na 80 °C tokom 8 h, zatim prečišćena silika gel hromatografijom (0→20% MeOH/DCM) da bi se dobio proizvod (75.1 mg, 70% prinosa). LCMS (ESI) m/z: [M H] izračunato za C51H67N13O8: 990.53; pronađeno 990.5.

Korak 2: Sinteza 18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-1-(4-{5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il}piperazin-1-il)-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-18-ona

[0810] U rastvor terc-butil 2-[4-(18-{6-[(4-amino-3-{1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil]-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-il}-18-okso-3,6,9,12,15-pentaoksaoktadekan-1-il)piperazin-1-il]-5H,6H,7H,8H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-karboksilata (75.1 mg, 75.8 µmol, 1.0 ekviv.) u dioksanu (1 mL) je dodata HCl (4 M u dioksanu, 472 µL, 1.89 mmol, 10.0 ekviv.). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 45 min, zatim je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod. LCMS (ESI) m/z: [M Na] izračunato za C46H59N13O6: 912.46; pronađeno 912.5.

41

[0811] Prateći opštu proceduru 6, ali koristeći odgovarajuće intermedijere PEG karboksilne kiseline i inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2, pripremljeni su intermedijeri B2 u tabeli 11:

Tabela 11. Pripremljeni dodatni amini

[0812] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajući PEG terc-butil estar karboksilne kiseline i inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2, pripremljeni su Intermedijeri B4 u tabeli 12:

Tabela 12. Pripremljeni dodatni amini

[0813] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere B4 u tabeli 12 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su Intermedijeri B2 u tabeli 13: Tabela 13. Pripremljeni dodatni amini

[0814] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere A1 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su Intermedijeri B2 u tabeli 14:

Tabela 14. Pripremljeni dodatni amini

41

[0815] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i Intermedijere B2 iz tabela 9, 11, i 13 i 14, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 2 u tabeli 15:

Tabela 15. Dvovalentna jedinjenja serije 2:

42

[0816] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijari C1 u tabeli 16:

Tabela 16. Pripremljeni dodatni amini

42

[0817] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći PEG karboksilne kiseline i intermedijere C1 u tabeli 16, pripremljeni su intermedijari C2 u tabeli:

Tabela 17. Pripremljeni dodatni amini

42

[0818] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijera C2 iz tabele 17, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 3 u tabeli 18:

42

Tabela 18. Dvovalentna jedinjenja serije 3

4

[0819] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere C2 u tabeli 17 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijeri D1 u tabeli 19:

Tabela 19. Pripremljeni dodatni amini

[0820] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće inhibitore aktivnog mesta koji sadrže amin u tabeli 2 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijari D1 u tabeli:

Tabela 20. Pripremljeni dodatni amini

4 1

42

4

[0821] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijara D1 iz tabela 19 i 20, sintetizovani su bivalentni analozi serije 4 u tabeli 21:

Tabela 21. Dvovalentna jedinjenja serije 4

4 4

4

[0822] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere C1 u tabeli 16 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijari E1 u tabeli:

4

Tabela 22. Pripremljeni dodatni amini

44

[0823] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijara E1 iz tabele 22, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 5 u tabeli 23:

Tabela 23. Dvovalentna jedinjenja serije 5

Tabela 24. Pripremljeni dodatni amini

[0824] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijara F1 iz tabele 24, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 6 u tabeli 25:

Tabela 25. Dvovalentna jedinjenja serije 6

[0825] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere A1 u tabeli 5 i predvezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijari G1 u tabeli:

Tabela 26. Pripremljeni dodatni amini

44

[0826] Prateći opštu proceduru 6, ali koristeći odgovarajuće intermedijere B3 u tabeli 10 i pred-vezujuće delove koji sadrže amin u tabeli 4, pripremljeni su intermedijeri G1 u tabeli 27:

Tabela 27. Pripremljeni dodatni amini

[0827] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijera G1 iz tabela 26 i 27, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 7 u tabeli:

Tabela 28. Dvovalentna jedinjenja serije 7

[0828] Prateći opštu proceduru 1, ali koristeći odgovarajuće intermedijere D1 u tabelama 19 i 20 i PEG karboksilne kiseline, pripremljeni su intermedijeri H1 u tabeli:

Tabela 29. Pripremljeni dodatni amini

[0829] Prateći opštu proceduru 2, ali korišćenjem odgovarajućeg monomera rapamicina koji sadrži 4-nitrofenil karbonat u tabeli 1 i intermedijera H1 iz tabele 29, sintetizovani su dvovalentni analozi serije 8 u tabeli 30:

44

Tabela 30. Dvovalentna jedinjenja serije 8:

Biološki primeri

AlfaLISA testovi zasnovani na ćelijama za određivanje IC50 za inhibiciju P-Akt (S473), P-4E-BP1 (T37/46), i P-P70S6K (T389) u MDA-MB-468 ćelijama

Ćelijski test mTOR kinaze

[0830] Da bi se izmerila funkcionalna aktivnost mTORC1 i mTORC2 u ćelijama, praćena je fosforilacija 4EBP1 (Thr37/46) i P70S6K (Thr389), i AKT1/2/3 (Ser473) korišćenjem AlphaLisa SureFire Ultra kompleta (Perkin Elmer). Ćelije MDA-MB-468 (ATCC<®>HTB-132) su kultivisane u pločama za kulturu tkiva sa 96 bunarića i tretirane jedinjenjima iz pronalaska u koncentracijama koje variraju od 0.017 – 1.000 nM tokom dva do četiri sata na 37 °C. Inkubacije su prekinute uklanjanjem pufera za ispitivanje i dodatkom pufera za lizu koji je obezbeđen sa kompletom za analizu. Uzorci su obrađeni prema uputstvima proizvođača. Alfa signal iz odgovarajućih fosfoproteina je meren u duplikatu korišćenjem čitača mikroploče

44

(Envision, Perkin-Elmer ili Spectramax M5, Molecular Devices). Krive odgovora koncentracije inhibitora su analizirane korišćenjem normalizovane IC50 regresione krive sa normalizacijom zasnovanom na kontroli.

[0831] Kao primer, izmerene su vrednosti IC50 za odabrana jedinjenja su prikazane u nastavku:

[0832] Kao primer, izmerene su vrednosti pIC50 za odabrana jedinjenja su prikazane ispod:

44

4

41

42

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

4

44

4

4

4

4

4

41

42

4

44

4

4

4

4

4

4

41

42

4

44

4

4

4

4

4

4

41

42

4

44

4

4

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, ili stereoizomer.
2. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu 4

ili njegov stereoizomer.
3. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu

ili njegov tautomer.
4. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu

ili njegov izomer oksepana.
5. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu

ili njegov stereoizomer. 4
6. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu

ili njegov tautomer.
7. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu
8. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje ima formulu
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-8, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, tautomer ili stereoizomer, i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili ekscipijensa.
10. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 9, koja sadrži smešu 4

ili njihov stereoizomer ili tautomer i

ili njihov stereoizomer ili tautomer.
11. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 10, koja sadrži farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
12. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 9, koja sadrži smešu
13. Kompozicija prema zahtevu 12, koja sadrži farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. 4
14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-8, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, ili stereoizomer, za upotrebu u lečenju, prevenciji ili smanjenju rizika od bolesti ili poremećaja posredovanih sa mTOR.
15. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 14, pri čemu je bolest kancer ili imunološki posredovana bolest.
16. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.
17. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana iz rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.
18. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-8, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, ili stereoizomer, za upotrebu u lečenju kancera.
19. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 18, pri čemu je kancer izabran od tumora mozga i neurovaskularnih tumora, kancera glave i vrata, kancera dojke, kancera pluća, mezotelioma, limfoidnog karcinoma, kancera želuca, kancera bubrega, karcinoma 4 1 bubrega, kancera jetre, kancera jajnika, endometrioze jajnika, kancera testisa, kancera gastrointestinalnog trakta, kancera prostate, glioblastoma, kancera kože, melanoma, neuro kancera, kancera slezine, kancera pankreasa, proliferativnih poremećaja krvi, limfoma, leukemije, kancera endometrijuma, kancera grlića materice, kancera vulve, kancera prostate, kancera penisa, kancera kostiju, kancera mišića, kancera mekog tkiva, kancera creva ili rektuma, analnog kancera, kancera mokraćne bešike, kancera žučnih kanala, kancera oka, gastrointestinalnih stromalnih tumora i neuro-endokrinih tumora.
20. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-8, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, ili stereoizomer, za upotrebu u lečenju imunološki posredovane bolesti.
21. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 20, pri čemu je imunološki posredovana bolest izabrana iz rezistencije transplantacijom srca, bubrega, jetre, koštane srži, kože, rožnjače, pluća, pankreasa, creva, ekstremiteta, mišića, nerava, dvanaestopalačnog creva, tankog creva ili ćelija ostrvaca pankreasa; bolesti kalema protiv domaćina izazvane transplantacijom koštane srži; reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, Hašimotovog tiroiditisa, multiple skleroze, mijastenije gravis, dijabetesa tipa I, uveitisa, alergijskog encefalomijelitisa i glomerulonefritisa.
22. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer, za upotrebu u lečenju stanja povezanih sa starenjem.
23. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 22, pri čemu je stanje povezano sa starenjem izabrano od sarkopenije, atrofije kože, gubitka mišića, atrofije mozga, ateroskleroze, arterioskleroze, plućnog emfizema, osteoporoze, osteoartritisa, visokog krvnog pritiska, erektilne disfunkcije, demencije, Hantingtonove bolesti, Alchajmerove bolesti, katarakta, starosne makularna degeneracije, kancera prostate, moždanog udara, smanjenog očekivanog životnog veka, oštećene funkcije bubrega i gubitka sluha u vezi sa starenjem, onesposobljenosti kretanja u vezi sa starenjem (npr. slabost), kognitivnog pada, demencije povezane sa starenjem, oštećenja pamćenja, ukočenosti tetiva, srčane disfunkcije kao što je hipertrofija srca i sistolna i dijastolna disfunkcija, imunosenscencije, kancera, gojaznosti i dijabetesa. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4 2