RS64459B1 - Derivati indola i benzimidazola kao dvostruki antagonisti 5-ht2a i 5-ht6 receptora - Google Patents

Derivati indola i benzimidazola kao dvostruki antagonisti 5-ht2a i 5-ht6 receptora

Info

Publication number
RS64459B1
RS64459B1 RS20230676A RSP20230676A RS64459B1 RS 64459 B1 RS64459 B1 RS 64459B1 RS 20230676 A RS20230676 A RS 20230676A RS P20230676 A RSP20230676 A RS P20230676A RS 64459 B1 RS64459 B1 RS 64459B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
trifluoromethyl
indole
piperazin
mmol
Prior art date
Application number
RS20230676A
Other languages
English (en)
Inventor
Marcin Kolaczkowski
Adam Bucki
Joanna Sniecikowska
Monika Marcinkowska
Original Assignee
Adamed Pharma S A
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Adamed Pharma S A filed Critical Adamed Pharma S A
Publication of RS64459B1 publication Critical patent/RS64459B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/10—Radicals substituted by halogen atoms or nitro radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

Opis
Predmetni pronalazak se odnosi na nove 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indoli i 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol.
Predmetni pronalazak se odnosi i na farmaceutske sastave koji se sastoje od jedinjenja i na upotrebu tih jedinjenja i farmaceutskog sastava kao leka.
Demencija je skup progresivnih pogoršanja kognitivnih funkcija povezanih sa bihevioralnim i psihološkim poremećajima i poteškoćama
u svakodnevnom funkcionisanju (Hersch i Falzgraf, 2007). Najvažnija kategorija faktora oštećenja mozga u tolikoj meri da se javljaju simptomi demencije su neurodegenerativne bolesti koje dovode do progresivne degeneracije nervnog tkiva. ICD-10 klasifikacija razlikuje, između ostalog, demenciju Alchajmerovog tipa (DAT), kao i demenciju kod Pikove bolesti (frontemporalnu), demenciju kod Hantingtonove bolesti, demenciju kod Parkinsonove bolesti i vrlo sličnu demenciju sa Luijevim telima. Uzrok oštećenja mozga koja dovode do demencije mogu biti infektivne bolesti kao što su Krojcfeld-Jakobova bolest (uključujući konkurentno s neurodegenerativnim bolestima), infekcija virusom HIV/SIDA ili neuroborelioza. Pored neurodegenerativnih i infektivnih bolesti, simptomi demencije mogu da budu povezani i sa vaskularnim bolestima kao što je moždani udar, što može da izazove akutni početak demencije ili vaskularne demencije (nakon serije moždanih udara). Kod starijih osoba najčešći uzrok demencije je Alchajmerova bolest. Procenjuje se da je globalna prevalenca demencije oko 3,9% stanovništva starijeg od 60 godina (Ferri et al., 2005.), što znači da trenutno ima oko 35,6 miliona ljudi sa različitim oblicima demencije u svetu. U svetlu očekivanog povećanja očekivanog životnog veka, ovaj broj će se udvostručiti do 2030. godine, a utrostručiti do 2050. godine. Demencija je stoga veoma ozbiljan i rastući medicinski i socijalni problem.
Pored aksijalnih kognitivnih poremećaja, do 60% pacijenta sa demencijom takođe ima iskustva koja se nazivaju i bihevioralni i psihološki simptomi demencije (BPSD). Među njima se mogu razlikovati: psihotični poremećaji (deluzije i halucinacije), depresija, apatija, seksualna dishibicija, razdražljivost, verbalna i fizička agresija, psihomotorna agitacija i anksioznost (Carson et al., 2006; Jeste et al., 2008). Na primer, od 40 do 60% pacijenata sa demencijom doživi značajne depresivne poremećaje u nekoj fazi bolesti (Hersch i Falzgraf, 2007), dok prevalenca psihotičnih simptoma može biti do 63% pacijenata u slučaju sumanutih ideja i 41% u slučaju halucinacija (Jeste et al., 2008). BPSD se može javiti u svakoj fazi bolesti, neki simptomi su češći kod blage demencije (depresija, apatija, anksioznost, razdražljivost), dok su drugi česti u uznapredovalim stadijumima demencije (sumanute ideja, halucinacije, dezinhibicija) (Hersch and Falzgraf, 2007). Pokazalo se da su samo PSD veliki teret i za bolesnike sa demencijom i za njihove negovatelje i da mogu imati još akutnije iskustvo u odnosu na osnovno kognitivno oštećenje. Pojava PSD-a je takođe povezana sa lošim prognozama progresije bolesti, bržim gubitkom kognitivne funkcije i specifičnim ograničenjima u svakodnevnom životu. Psihoza, agitacija, agresija i depresija koja prati demenciju su vodeći indikatori institucionalizacije pacijenta i glavni su ciljevi u lečenju BPSD-a iz kliničkih i društvenih perspektiva (Amano et al., 2009; Gauthier et al., 2010; Hersch i Falzgraf, 2007).
Do sredine devedesetih godina, standardni lekovi za lečenje BPSD-a bili su antipsihotici prve generacije (tj. tipični neuroleptici), posebno u slučaju sumanutih ideja i halucinacija. Pokazalo se da glavni predstavnik ove klase lekova, haloperidol, ne utiče na ekscitaciju ili bihevioralne simptome ponašanja, smanjuje agresiju. Istovremeno, metaanaliza kliničkih ispitivanja pokazala je da nema razlika između antipsihotika prve generacije u njihovoj efikasnosti lečenja BPSD (Sink et al., 2005). U narednim godinama, tipični neuroleptici su delimično zamenjeni u lečenju BPSD-a lekovima druge generacije antipsihotika (tj. atipičnim neurolepticima) (De Deyn et al., 2005) koji su karakteristični po nižoj tendenciji indukovanja ekstrapiramidalnih poremećaja (ekstrapiramialdni simptomi – EPS) i većom efikasnošću u poređenju sa prvom generacijom lekova (Liperoti et al., 2008). Međutim, efikasnost i bezbednost lekova koji se trenutno koriste za lečenje BPSD-a nisu zadovoljavajući (Nobili et al., 2009). Pregled 16 kliničkih ispitivanja primene antipsihotika druge generacije u lečenju BPSD-a, sprovedenih u okviru aktivnosti Kokrejnove biblioteke (Cochrane Library) pokazao je da su risperidon i olanzapin bili efikasni u lečenju agresije i da je risperidon takođe bio efikasniji od placeba u lečenju psihoze povezane sa demencijom (Ballard i Waite, 2006). Međutim, oba leka izazvala su značajna neželjena dejstva ekstrapiramidalnih poremećaja i kardiovaskularnih događaja. U međuvremenu, aripiprazol nije pokazao prednost u odnosu na placebo u lečenju sumanutih ideja i halucinacija kod pacijenata sa psihozom povezanom s Alchajmerovom bolešću (De Deyn et al., 2005). Upotreba antipsihotika u lečenju BPSD-a dodatno je komplikovana činjenicom da ti lekovi pogoršavaju postojeće kognitivne smetnje, što je posebno nepovoljno kod pacijenata sa demencijom(Fasano et al., 2012; Jeste et al., 2008; Vigen et al., 2011).
U svetlu ovih činjenica, od 2005. godine, Administracija za hranu i lekove SAD (FDA) zahteva posebna upozorenja koja se stavljaju na uputstva o antipsihoticima druge generacije. Ova upozorenja (takozvana „uokvirena upozorenja”) povezana su sa pojavom ozbiljnih neželjenih dejstava i povećanim rizikom od smrti u slučaju upotrebe atipičnih neuroleptika kod pacijenata sa demencijom (U.S. Food and Drug Administration, 2005). Od 2008. godine, zahtev za slična upozorenja je takođe primenjen u slučaju prve generacije antipsihotika (U.S. Food and Drug Administration, 2008).
Uprkos tome, antipsihotici se i dalje široko koriste kod pacijenata sa BPSD-om (Schneider et al., 2006; Schulze et al., 2013b), uglavnom zato što ne postoji povoljnija alternativa (Schulze et al., 2013a). Trenutno ne postoje lekovi odobreni za lečenje psihoze povezane sa demencijom, kao ni antidepresivi, anksiolitici, posebno razvijeni da zadovolje terapijske potrebe starijih osoba.
Psihoza kod demencije može da ima drugačiji neurobiološki supstrat u odnosu na šizofreniju. Zaista, psihotični pacijenti koji boluju od Alchajmerove bolesti često imaju vizuelne halucinacije i pogrešne identifikacije negovatelja – simptome koji se obično ne mogu uočiti kod bolesnika sa šizofrenijom. Suprotno tome, bizarne ili kompleksne sumanute ideje koje se često javljaju kod bolesnika sa šizofrenijom se ne uočavaju često kod pacijenata sa demencijom (Jeste and Finkel, 2000). Posebna priroda psihotičnih simptoma kod demencije ukazuje na to da su u igri različiti neurotransmiteri. Serotoninergički sistemi naročito mogu da budu uključeni jer su halucinacije kod demencije slične halucinacijama koje izazivaju serotoninergički agonisti kao što su meskalin ili lisergična kiselina (Marsh, 1979). Snažne vizuelne halucinacije mogu da izazovu i antagonisti NMDA receptora kao što su ketamin ili fenciklidin (Siegel, 1978), ali su manje često evocirane dopamimetinima kao što su amfetamini ili kokain koji se široko koriste u pretkliničkim skrininzima novih lekova za šizofreniju (Jones et al., 2011).
Postoje značajni podaci koji podržavaju značaj serotonina u razvoju BPSD-a. Na primer, polimorfizmi gena serotonina povezuju se sa vizuelnim i zvučnim halucinacijama kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću (AD) (Holmes et al., 1998). Genetski polimorfizam regiona promotera serotonina (L/L genotip) povezan je sa agresivnim ponašanjem (Sukonick et al., 2001). Ostale studije pokazuju da su u patogenezi AD uključeni 5HT2A i 5HT6 receptori, (Lorke et al., 2006) kao i vezu 5-HT6 receptora sa psihotičnim simptomima kod pacijenata sa AD (Marcos et al., 2008).
Uočeno je da su halucinacije, uglavnom vizuelne, izazvane psihotomimetskim supstancama, kao što su LSD (D-lisergična kiselina dietilamid) ili DOI (2,5-dimetoksi-4-jodamfetamin), povezane sa aktivacijom 5-HT2A receptora u cerebralnom korteksu (Nichols, 2004). Imajući u vidu njihovu kliničku halucinogenu sličnost sa halucinacijama uočenim kod bolesnika sa demencijom, predloženo je uključivanje standardnih farmakoloških mehanizama, uključujući serotoninergičku disregulaciju. Učešće blokade 5-HT2A serotoninskih receptora u antipsihotičnoj aktivnosti je dodatno potvrđeno aktivnošću antagonista 5-HT2A receptora u glutamatergičnim modelima psihoze, što je povezano sa olakšavanjem glutamatergične transmisije u cerebralnom korteksu (Varty et al., 1999). U skladu sa gorenavedenim je činjenica da je pimavanserin, selektivni inverzni agonist 5-HT2A receptora, prvi antipsihotik koji je odobren 2016. godine za lečenje psihoze usled Parkinsonove bolesti. Međutim, važno je napomenuti da pimavanserin ima značajan afinitet za hERG kanale (oko 210 nm) koji može da izazove promene u EKG-u, što može da dovede do aritmija koje su potencijalno opasne po život. Pored toga, pimavanserin nema afinitet za receptore 5-HT6.
Konvergentne linije dokaza ukazuju na to da blokada serotonina 5 HT6 receptora (5 HT6R) može biti implicirana u: (i) prokognitivne efekte zbog olakšavanja holinergičke transmisije (Liu i Robichaud, 2009; Rimer et al., 2003), (ii) antidepresive zbog porasta noradrenergičkog i dopaminergičkog tonusa, kao i (III) anksiolitičke efekte, posredovane interakcijom sa GABA-ergičnim prenosom (Weso owska, 2010; Weso owska i Nikiforuk, 2007). Ovi nalazi su dodatno podržani ekskluzivnom lokalizacijom 5-HT6 receptora u centralnom nervnom sistemu (CNS), posebno u limbičkom i kortikalnom delu mozga koji je uključen u kontrolu raspoloženja i kognitivnih funkcija (Woolley et al., 2004).
Holinomimetička komponenta blokade 5-HT6 receptora, pored njenog značaja za prokognitivnu aktivnost, takođe se čini značajnom sa aspekta potencijalno korisnih antipsihotika. Zapravo, pokazalo se da antagonisti muskarinskih receptora imaju antipsihotička svojstva (Maehara et al., 2008).
Stoga, iako selektivna blokada receptora 5-HT6 ne indukuje samu antipsihotičku aktivnost, ona može da doprinese njenom pojačavanju. U skladu sa gorenavedenim, nedavne studije su pokazale da kombinacija antagonizma 5-HT2A i 5-HT6 receptora može da proizvede jači antipsihotički efekat od nezavisne upotrebe selektivnog antagonista svakog od tih receptora (Fija et al., 2014).
Povećana terapijska efikasnost dvostrukih 5-HT2A i 5-HT6 antagonista receptora kod pacijenata sa demencijom može biti izazvana ne samo povećanom antipsihotičnom aktivnošću koja je rezultat sinergističke modulacije glutamatergične i kolinergičke transmisije, već i zbog blokade prokognitivnih aktivnosti posredovanih 5-HT6 receptorima, uglavnom zbog holinomimetske prirode. Ova svojstva su ključna zato što je prisustvo psihoze kod demencije neraskidivo povezano sa kognitivnim oštećenjima (Murray et al., 2014).
Stoga, dvostruki antagonist 5-HT2A i 5-HT6 receptora, koji se pridružuje i antipsihoticima i prokognitivnoj aktivnosti u jednom molekulu, rešava najvažnije terapijske izazove kod psihoze povezane sa demencijom.
Međunarodna prijava WO2007/006677 otkriva određene derivate benzimidazolona i hidroindolona kao selektivne antagoniste 5-HT6, selektivne antagoniste 5-HT2A ili oba. Opis ne precizira koja su jedinjenja dvostruki antagonisti 5-HT2A i 5-HT6 receptora, međutim, u svom odgovoru na Pisano mišljenje, Podnosilac zahteva je otkrio aktivnosti za četiri jedinjenja za oba receptora. Ipak, sva otkrivena jedinjenja koja imaju derivate benzimidazolona kod kojih je 4-piperazin supstituiran imaju nesupstituirani piperazin azot kao donora vodoničke veze. Pored toga, prisustvo karbonilne grupe na poziciji 2 štetno utiče na metaboličku i hemijsku stabilnost takvih jedinjenja, a u slučaju jedinjenja benzimidazola postoji mogućnost formiranja laktam-laktim tautomera koji je nepovoljan zbog dodatne jonizacije u rasponima pH vrednosti keratina i formiranja dodatnog mesta donora vodoničke veze. Sve to negativno utiče na penetraciju kroz biološke membrane i time sprečava apsorpciju iz gastrointestinalnog trakta i penetraciju barijere krv-mozak.
Međunarodna prijava WO2008/055808 otkriva određena jedinjenja kao selektivne antagoniste 5-HT6, selektivne antagoniste 5-HT2A ili oba. Jedinjena otkrivena u ovoj međunarodnoj prijavi opciono menjaju grupu amida na poziciji 2. Jedinjena imaju nisku metaboličku i hemijsku stabilnost zbog hidrolize grupe amida sa karboksilatima. Pored toga, prisustvo amidne grupe ne dozvoljava dobijanje jedinjenja sa dvojnim afinitetom, odnosno ne samo sa 5-HT6, već i sa 5-HT2A.
Međunarodne prijave WO2010/056644 i WO2013/001499 otkrivaju jedinjenja koja imaju supstituciju u poziciji 2 sa alkilnom grupom ili uopšte nemaju supstituciju, tj. na poziciji 2 je atom vodonika. Ponovo, jedinjenja sa dvojnim afinitetom, odnosno ne samo 5-HT6, nego i 5-HT2A ne mogu se dobiti.
Do sada, nije utvrđeno nijedno jedinjenje koje bi moglo biti potencijalni lek koji bi se pridružio antipsihotičnoj i prokognitivnoj aktivnosti u jednom molekulu, delujući antagonizmom 5-HT2A i 5-HT6 receptora, i s druge strane, imalo povoljna svojstva kao što su, na primer, bioraspoloživost i lakoća penetracije barijere krvi-mozak.
Stoga, još uvek postoji potreba u tehnici za takvim jedinjenjima.
Zbog toga, predmetni pronalazak pruža nova jedinjenja sa jezgrom 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indola 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazola i kao dvostruki antagonist 5-HT2A i 5-HT6 receptora koji imaju povoljne in vivo i in vitro karakteristike, i stoga su obećavajući kandidati za klinička ispitivanja.
Predmetni pronalazak je definisan priloženim patentnim zahtevima.
U prvom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje opšte formule (I):
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
pri čemu:
G je CH ili N;
R<1>je H, C1-C4-alkil, HO-C1-C4-alkil ili C1-C4-alkil-O-C1-C4-alkil;
R<2>se bira iz grupe koja se sastoji od sledećeg:
- fenilna grupa nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom, ili
- heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom,
pri čemu je supstituent izabran iz F, Cl, Br, C1-C4-alkil-, ili C1-C4-alkil-O-.
U prvoj realizaciji, u jedinjenjima formule (I), G je CH.
U alternativnoj realizaciji, u jedinjenjima formule (I), G je N.
Poželjno, u jedinjenjima formule (I), R<1>je H, metil ili 2-hidroksietil.
U jednoj poželjnoj realizaciji jedinjenja formule (I), R<2>se biraju iz fenilne grupe, nezamenjene ili zamenjene najmanje jednim supstituentom.
U drugoj poželjnoj realizaciji jedinjenja formule (I), R<2>se biraju iz heteroarilne grupe od 5 ili 6 članova, nezamenjene ili zamenjene najmanje jednim supstituentom. U ovoj poželjnoj realizaciji, po mogućnosti, heteroaril od 5 ili 6 članova je izabran iz furila, tienila, tiazola ili piridila.
U drugoj, najpoželjnijoj realizaciji,
R<2>se bira iz grupe koja se sastoji od sledećeg:
- fenilna grupa nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom, ili
- heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom,
pri čemu je heteroaril od 5 ili 6 članova izabran iz furila, tienila, tiazola ili piridila,
pri čemu je supstituent izabran iz F, Cl, Br, C1-C4-alkil-, ili C1-C4-alkil-O-.
U svim realizacijama, kada je R<2>zamenjena grupa, nju menjaju jedan ili dva supstituenta. Poželjnije je menjanje jednim supstituentom.
Poželjno, u definicijama grupe R<2>, substituent se bira iz F, Cl, metil ili metoksi.
Alternativno, takođe je poželjno da grupa R<2>bude nezamenjena.
Mogu se pomenuti sledeća specifična jedinjenja formule (I) pronalaska:
1-benzil-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
2-{4-[1-benzil-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]piperazin-1-il}etanol,
1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
1-[(5-metilfuran-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol,
1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-(3-hlor-4-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol,
1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol,
1-(3,5-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-benzil-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(4-hloro-3-fluorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
4-(piperazin-1-il)-1-(1,3-tiazol-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(4-hloro-3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-metoksibenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(furan-2-ilmetil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3,4-difluorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-metoksibenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-fluorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
1-(3-hlorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-[(5-metilfuran-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
1
1-[(5-metiltiofen-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-3-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol,
4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-3-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-2-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol i 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-[(5-metil-1,3-tiazol-2-il)metil]-2-(trifluorometil)-1H-indol.
U jednoj naročito poželjnoj realizaciji,
G je N, R<2>je nezamenjena grupa, a R<1>je H,
a jedinjenje je
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
U drugoj naročito poželjnoj realizaciji,
G je CH, R<2>je nezamenjena grupa 2-furila, a R<1>je H,
a jedinjenje je
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
U drugoj naročito poželjnoj realizaciji,
G je CH, R<2>je nezamenjena grupa 2-furila, a R<1>je -CH3,
a jedinjenje je
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
I u drugoj naročito poželjnoj realizaciji,
G je CH, R<2>je 5-metil-2-furil grupa, a R<1>je H,
a jedinjenje je
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Mehanizam delovanja jedinjenja pronalaska zasniva se na selektivnoj blokadi i serotoninskih 5-HT2A i 5-HT6 čija je uloga u patomehanizmu
i farmakoterapiji psihotičnih i kognitivnih poremećaja dobro potvrđena
u pretkliničkim i kliničkim ispitivanjima.
Stoga, jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u medicini kao lekovi za lečenje i/ili prevenciju stanja osetljivih na kontrolu serotonina, posebno antagonizam 5-HT2A i 5-HT6 receptora, kao što su: kognitivni poremećaji različitih tipova, npr. Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, Levijeva demencija, psihoza povezana sa demencijom, šizofrenija, šizoafektivni poremećaji, šizofreniformni poremećaji, deluzioni poremećaji i druga psihotična stanja povezana s uzimanjem psihoaktivnih supstanci, afektivni poremećaj, bipolarni poremećaj, manija, depresija, anksiozni poremećaji različitih etiologija, stresne reakcije, poremećaji svesti, koma, alkoholni delirijum i različitih etiologija, agresivnosti, psihomotorna agitacija i drugi poremećaji ponašanja, poremećaji sna različitih etiologija, sindromi krize različitih etiologija, zavisnost, sindromi bola različitih etiologija, intoksikacija psihoaktivnim supstancama, cerebralni cirkulatorni poremećaji raznih etiologija, psihosomatski poremećaji različitih etiologija, konverzioni poremećaji, disocijativni poremećaji, poremećaji urinarnog trakta, autizam i drugi razvojni poremećaji, npr. nokturija, mucanje, tikovi, psihološki simptomi i neurološki poremećaji u toku drugih bolesti centralnog i perifernog nervnog sistema.
Stoga, u drugom aspektu, pronalazak se odnosi na jedinjenje predmetnog pronalaska za upotrebu u vidu leka.
Poželjno, jedinjenje predmetnog pronalaska može se koristiti u lečenju kognitivnih poremećaja različitih vrsta, tj. Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, Levijeva demencija, psihoza povezana sa demencijom, šizofrenija, sindrom deluzija i druge psihotične bolesti povezane sa uzimanjem psihoaktivnih supstanci, depresija, anksiozni poremećaji različitih etiologija, poremećaji sna različitih etiologija.
U lečenju poremećaja centralnog nervnog sistema, jedinjenja formule (I) mogu se dati u obliku farmaceutskog sastava ili formulacije koja ga sadrži.
Zbog toga, u trećem aspektu, pronalazak se odnosi na farmaceutski sastav koji se sastoji od jedinjenja formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja i najmanje jednog farmaceutski prihvatljivog ekscipijensa.
Detaljan opis
Izrazi koji se koriste u predmetnom pronalasku imaju sledeće značenje. Ostali pojmovi koji nisu definisani u nastavku imaju značenje jednako značenjima koja su poznata licima koja su stručna za tehniku.
Izraz je zasićeni, ravni ili razgranati lančani hidrougljenik sa 1 do 4 atoma ugljenika. Primeri C1-C4-alkila su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, tert-butil ili sek-butil. Poželjnije, C1-C4-alkil je C1-C3-alkil, C1-C2-alkil ili C1-alkil.
1
Oznaka C1-C3-alkil, C1-C2-alkil znači zasićeni, ravni ili razgranati lančani hidrougljenik sa 1 do 3 ili 2 atoma ugljenika. Najpoželjnije, C1-C4-alkil je C1-C2-alkil koji je metilna grupa (skraćeno kao CH3) ili etilna grupa.
Izraz „heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova” je grupa monocikličnog aromatskog prstena koja ima 1 do 4 heteroatoma izabranih iz atoma azota, sumpora i kiseonika i uključuje, na primer, furilnu grupu, tienilnu grupu, pirolilnu grupu, imidazolilnu grupu, pirazolilnu grupu, tiazolilnu grupu, izotiazolilnu grupu, oksazolilnu grupu, izoksazolilnu grupu, triazolilnu grupu, oksadiazolilnu grupu, tiadiazolilnu grupu, tetrazolilnu grupu, piridilnu grupu, pirimidilnu grupu, piridazinilnu grupu i pirazinilnu grupu. Poželjno, heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova se bira iz furilne grupe, tienilne grupe, triazolilne grupe ili piridilne grupe.
Budući da su jedinjenja pronalaska bazna, mogu formirati odgovarajuće kisele adicione soli.
Farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so se odnosi na one soli koje zadržavaju biološku efikasnost slobodnih baza i koje nisu biološki nepoželjne. Kisele adicione soli mogu se formirati sa neorganskim (mineralnim) kiselinama ili organskim kiselinama. Kao primeri kiselina mogu se navesti hlorovodonična, bromovodonična, jodovodonična, fosforna, sumporna, azotna, ugljena, sukcinska, maleinska, mravlja, sirćetna, propionska, fumarna, limunska, vinska, mlečna, benzojeva, salicilna, glutaminska, asparaginska, p- toluensulfonska, benzensulfonska, metansulfonska, etansulfonska, naftalensulfonska, kao što je 2-naftalensulfonska, pamoinska, ksinafoična, heksanska kiselina.
Jedinjenja formule (I) mogu se dobiti primenom sledećih metoda.
Jedinjenja formule (I), kada je g N, odnosno jedinjenja zasnovana na jezgru 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazola mogu se dobiti u skladu sa sledećom reakcionom šemom 1.
ra
jedinjenje formule (i), G=N
Reakciona šema 1.
U početku, 2,6-difluoronitrobenzen A-1 je tretiran derivatom piperazina (R<1>= Me, BOC) u prisustvu baze (tipično K2CO3). Dobijeni proizvod A-2 je potom reagovao sa benzilaminom (R<2>= aril, heteroaril) u prisustvu baze (tipično K2CO3) i dao jedinjenje A-3. Zatim je bisanilin A-4 pripremljen redukcijom nitro grupe u A-3 sa natrijum ditionitom na povišenoj temperaturi ili gvožđem u obliku metala. Na kraju, reakcija bisanilina A-4 sa TFA i kasnije formiranje soli HCl dalo je očekivane benzimidazole A-5.
Reakciona šema 2.
Reakciona šema 2 ilustruje reprezentativni primer kada je 1-(3-fluoro-2-nitrofenil)piperazin A-6 reagovao sa 2-bromoetil acetatom u prisustvu K2CO3 da bi se dobio derivat piperazina A-2C.
1
jedinjenje formule (I), G=N Reakciona šema 3.
Reakciona šema 3 ilustruje primere kada je R<2>= 2-furil ili 5-metil-2-firil. U ovom slučaju, bisanilin A-4 je reagovao sa TFAA da bi se dala mešavina jedinjenja A-7 i A-8. Jedinjenje A-7 je bilo kvantitativno konvertovano u A-8 koristeći AcOH, a tako dobijeno jedinjenje A-8 je tretirano rastvorom HCl od 36% nakon čega je usledila bazifikacija, što je rezultiralo željenim benzimidazolima A-5, jedinjenjem formule (I) u kojoj je G=N.
Alternativno, jedinjenja formule (I), kada g je CH, odnosno jedinjenja zasnovana na jezgru 4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazola mogu se dobiti u skladu sa sledećom reakcionom šemom 4.
jedinjenje formule (I), G=CH Reakciona šema 5.
1
U početku, 3-bromo-2-metilanilin B-1 je tretiran trifluorosirćetnim anhidridom da bi se dobio amid B-2. Proizvod koji je rezultat B-2 je kasnije reagovao s brominom u prisustvu benzoil peroksida i svetlosti, što je dalo jedinjenje B-3. Zatim, benzil bromid B-4 je konvertovan u derivat fosfonijuma i ciklizovan u vrućem DMF-u da bi se dobio indol B-4. Protekcija na indol azotu sa benzilnom grupom, nakon koje je usledila reakcija pripajanja sa derivatom piperazina (R<1>= Me, BOC) dala je jedinjenje B-6. Deprotekcija benzila u prisustvu kiseonika i kalijum tert-butoksida je dala blok B-7. Na kraju, reakcija indola B-7 sa benzil bromidom (R<2>= aril, heteroaril) i u nekim slučajevima naknadna formacija HCl soli dala je konačne trifluoroindole B-9, jedinjenje formule (I) u kom je G=CH. Opciono, HCI soli trifluoroindolea B-9 mogu se bazifikovati i transformisati u drugu farmaceutski prihvatljivu so ili se može koristiti kao slobodna baza.
TFA zatim
bazifikacija
ili
HCI zatim
bazifikacija
Reakciona šema 6.
Reakciona šema 6 ilustruje alternativni pristup jedinjenima B-9 u kojima se koriste uslovi reakcije Mitsunobu. Indol B-7 je reagovao sa odgovarajućim benzil alkoholom u prisustvu trifenilfospina i diizopropilazadikarboksilata. Proizvod B-8 reakcije tretiran je pomoću TFA ili HCl u izabranom rastvaraču, nakon čega sledi bazifikacija za proizvodnju jedinjenja B-9 kao slobodne baze.
Kisela adiciona so može se pripremiti na jednostavan način reakcijom jedinjenja formule (I) u slobodnoj bazi s odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom u količini koja je značajno ekvimolarna jedinjenju formule (I), opciono u odgovarajućem rastvaraču kao što je organski rastvarač za formiranje soli koja se obično izoluje, na primer kristalizacijom i filtracijom.
Na primer, slobodna baza jedinjenja formule (I) može se pretvoriti u odgovarajuću hidrohloridnu so tretiranjem rastvora jedinjenja, na primer, u metanolu, sa stoihiometrijskom količinom hlorovodonične kiseline ili hlorida
1
vodonika u metanolu, etanolu, dietiletru, ili drugim odgovarajućim rastvaračima, nakon čega sledi isparavanje rastvarača.
Alternativno, hidrohloridne soli se mogu dobiti tokom deprotekcije N-tbutoksikarbonil grupe na piperidin azotu korišćenjem vodonik hlorida u metanolu, etanola, dietiletra ili drugog odgovarajućeg rastvarača, nakon čega sledi isparavanje rastvarača, za šta je primer transformacija jedinjenja B-8 u jedinjenje B-9.
Kod lečenja gorenavedenih bolesti, jedinjenja formule (I) mogu se dati kao hemijsko jedinjenje, međutim, obično će se koristiti u obliku farmaceutskih sastava koji se sastoje od jedinjenja formule (I) ili farmaceutske prihvatljive soli tog jedinjenja, kako je gore definisano kao aktivnog sastojka, u kombinaciji sa farmaceutskim prihvatljivim nosačima i/ili ekscipijensima.
Kod lečenja gorenavedenih bolesti, jedinjenje formule (I) ili farmaceutski sastav predmetnog pronalaska može se dati bilo kojim načinom, poželjno oralno ili parenteralno, i imaće oblik formulacije predviđene za upotrebu u medicini, u zavisnosti od planiranog načina davanja.
Formulacije čvrstih supstanci mogu da budu u obliku, na primer, tableta ili kapsula pripremljenih na konvencionalan način sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima kao što su vezivna sredstva (npr. preželatinizovani kukuruzni skrob, polivinilpirolidon ili hidroksipropil metilceluloza); fileri (npr. laktoza, saharoza, karboksimetilceluloza, mikrokristalična celuloza ili kalcijum hidrogenfosfat); lubrikanti (npr. magnezijum stearat, talk ili silicijum); dezintegranti (npr. krospovidon, krompirov skrob ili natrijum skrob glikolat); sredstva za vlaženje (npr. natrijum lauril sulfat). Tablete mogu biti premazane metodama dobro poznatim u tehnici konvencionalnim premazima, premazima za odlaganje/kontrolu otpuštanja ili enteričkim premazima.
Tečne formulacije za oralnu primenu mogu da budu u obliku, na primer, rastvora, sirupa ili suspenzija, ili mogu da budu predstavljene kao suvi proizvod za rekonstituciju s vodom ili drugim odgovarajućim medijumom pre upotrebe. Takve tečne formulacije mogu se pripremiti konvencionalnim sredstvima sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima kao što su sredstva za suspenziju (npr. sorbitol sirup, derivati celuloze ili hidrogenizovane jestive masti); emulgirajući agensi (npr. lecitin
1
ili akacija); nevodeni medijumi (npr. ulje slatkog badema, masni estri, etil alkohol ili frakcionisana biljna ulja); i konzervansi (npr. metil p- ili propil hidroksibenzoat ili sorbinska kiselina). Formulacije mogu da sadrže i odgovarajuće pufere, arome, boje i zaslađivače.
Formulacije za oralnu primenu mogu se formulisati na način poznat licima stručnim u tehnici kako bi se dobilo kontrolisano ispuštanje aktivnog jedinjenja.
Parenteralna primena obuhvata primenu intramuskularnom
i intravenskom injekcijom ili infuzijom. Formulacije za parenteralnu primenu mogu biti u obliku jediničnog doziranja, na primer, u ampulama ili u posudama, s više doza sa dodatnim konzervansom. Sastavi mogu da budu u obliku suspenzija, rastvora ili emulzija u masnim ili vodenim medijumima, i mogu da sadrže formulacione agense kao što su agensi za suspenziju, stabilizaciju i/ili disperziju.
Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu biti u obliku praha za rekonstituciju sa odgovarajućim medijumom, npr. apirogenom sterilnom vodom.
Način lečenja pomoću jedinjenja predmetnog pronalaska će obuhvatiti davanje terapeutski efikasne količine jedinjena pronalaska, poželjno u obliku farmaceutskog sastava, pacijentu kom je potrebno takvo lečenje.
Predložena doza jedinjenja predmetnog pronalaska je od oko 0,1 do oko 1000 mg dnevno, u jednokratnoj ili podeljenoj dozi. Stručno lice će razumeti da će izbor potrebne doze za postizanje željenog biološkog učinka zavisiti od više faktora, na primer konkretnog jedinjenja, upotrebe, načina primene, starosti i stanja pacijenta i da će preciznu dozu na kraju odrediti nadležni lekar prema svojoj proceni.
1
Primeri
Skraćenice
AcOEt etil acetat
AcOH sirćetna kiselina
ACN acetonitril
br s široki singlet
CHCl3hloroform
d dublet
dd dublet dubleta
ddd dublet dubleta dupleta
dq dublet kvarteta
DCM dihlorometan
Et2O dietil etar
DIPEA N,N'-diizopropil-N"-etilamin
DMSO dimetilsulfoksid
EtOH etanol
eq ekvivalenti
ESI elektrosprej jonizacija
h sat/-i
HCl vodonik hlorid
HPLC tečna hromatografija visokih performansi
2
LiOH litijum hidroksid
L litar (litri)
m multiplet
MeOH metanol
MgSO4magnezijum sulfat
ml mililitar (mililitri)
NaHCO3natrijum bikarbonat
Na2S2O4natrijum ditionit
NaOH natrijum hidroksid
Na2SO4natrijum sulfat
NMR nuklearna magnetna rezonancija
K2CO3kalijum karbonat
i-PrOH 2-propanol, izo-propanol
q kvartet
RP-HPLC tečna hromatografija visokih performansi obrnute faze s singlet
sep septet
SQD MS maseni spektrometar s jednim kvadrupolnim detektorom t triplet
TFA trifluorosirćetna kiselina
TFAA trifluorosirćetni anhidrid
THF tetrahidrofuran
TLC tankoslojna hromatografija
UPLCMS tečna hromatografija i masena spektrometrija vrhunskih performansi TLC izveden sa silicijumskim gelom 60 F254 na aluminijumskim folijama (Sigma-Aldrich, Merck) uz upotrebu odgovarajućih sistema rastvarača. Vizuelizacija je generalno obavljana UV svetlom (254 nm).
UPLC-MS metoda
Metoda A
UPLCMS analize su izvršene na UPLC tečnom hromatografu sa PDA detektorom i SQD MS detektorom, koji radi u okviru ESI(+) ili ESI(-) upotrebom C18 kolone, 2,1 mm × 100 mm, 1,7 µm (AQUITY UPLC BEH ili ekvivalent).
Metanol HPLC ili LC/MS klase, voda HPLC klase, ili mravlja kiselina HPLC ili LC/MS klase, p.a. rastvor amonijaka klase od 25% i njihova mešavina su korišćeni kao mobilna faza. Radni uslovi bili su sledeći: protok mobilne faze 0,45 ml/min, talasna dužina 210 do 400 nm, zapremina ubrizgavanja 1 µl, temperatura kolone 60 °C, temperatura automatskog uzorkivača 5 °C.
Analiza je sprovedena 3,3 min 0,5 min za „odlaganje sledeće injekcije”. Gradijentno eluiranje s linearnim tokom:
Analiza je sprovedena 5,5 min 1,5 min za „odlaganje sledeće injekcije”. Gradijentno eluiranje s linearnim tokom:
2
Rastvori su pripremljeni kako sledi
Priprema mobilne faze A1 – bazni gradijent: 25 µl mravlje kiseline i 250 µl od 25%% rastvora amonijaka dodato je u 250 ml vode. Degas korišćenjem ultrazvučnog kupatila u periodu od 10 minuta.
Priprema mobilne faze A2 – kiseli gradijent: 50 µl mravlje kiseline dodato je u 250 ml vode. Degas korišćenjem ultrazvučnog kupatila u periodu od 10 minuta.
Mobilna faza B: Metanol Super Gradient.
Metoda B
Analize UPLC-MS ili UPLC-MS/MS su izvršene na UPLC-MS/MS sistemu koji se sastoji od Waters ACQUITY UPLC (Waters Corporation, Milford, MA, USA) u kombinaciji sa Waters TQD masenim spektrometrom (režim jonizacije elektro-sprejom ESI sa dvostrukim kvadrupolnim detektorom). Hromatografske separacije su izvršene pomoću Acquity UPLC BEH (hibrid povezan etilom) C18 kolone: Veličina čestica 2,1 mm × 100 mm i 1,7 µm. Kolona je održavana na 40 °C i eluirana pod uslovima gradijenta korišćenjem 95% do 0% eluenta A tokom
10 minuta, brzinom protoka od 0,3 ml/min Eluent A, voda/mravlja kiselina (0,1%, v/v); Eluent B, acetonitril/mravlja kiselina (0,1%, v/v). Ukupno 10 µL svakog uzorka je ubrizgano, a hromatogrami su zabeleženi uz pomoć Waters eλ PDA detektora. Spektri su analizirani u opsegu od 200 do 700 nm sa rezolucijom od 1,2 nm i brzinom uzorkovanja od 20 tačaka/s. Postavke detekcije MS masenog spektrometra Waters TQD su bile: temperatura izvora 150 °C, temperatura desolvacije 350 °C, brzina protoka desolvacionog gasa 600 l/h, konusni protok gasa 100 l/h, kapilarni potencijal 3,00 kV i potencijal konusa 20 V. Azot je korišćen za nebulizaciju i sušenje. Podaci su dobijeni u režimu skeniranja u opsegu od 50 do 1000 m/z u intervalima od 0,5 s; 8 skenova je sumirano da bi se dobio konačni spektar. Analize disocijacije aktivirane kolizijom (CAD) izvršene su sa energijom od 20 eV, a sve fragmentacije su primećene u izvoru. Stoga su jonski spektri dobijeni u opsegu od 50 do 500 m/z. Softver MassLynx V 4.1 (Waters) je korišćen za prikupljanje podataka. Standardni rastvori (1 mg/ml) svakog jedinjenja pripremljeni su u mešavini koja sadrži acetonitril/vodu analitičkog kvaliteta (1/1, v/v).
Sintetičke procedure
A. Jedinjenja zasnovana na jezgru benzimidazola:
Jedinjenje A-2A: tert-butil 4-(3-fluoro-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 1L opremljenu mehaničkom mešalicom, dodat je 2,6-difluoronitrobenzen (16,5 g, 104 mmol), a boca je napunjena DMSO (170 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (31,6 g, 229 mmol) i N-BOC-piperazin (21,2 g, 114 mmol). Reakciona mešavina je bila zagrejana na 40 °C i mešana na 2,5 sata na ovoj temperaturi. Reakcija je sipana u vodu (400 ml) i razređena pomoću DCM (500 ml). Faze su bile odvojene, a organska faza je isprana vodom (2 × 150 ml), slanim rastvorom (100 ml), osušena pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Čvrsti talog je otopljen u MeOH (120 ml) i zatim je voda (15 ml) dodata u vidu kapljica i cela mešavina je ohlađena na 5 °C i čuvana na ovoj temperaturi 2 sata. Nakon toga, čvrsti proizvod A-2A (21,9 g) je filtriran i opran mešavinom MeOH: voda (10:1, 20 ml). Filtrat je smanjen na pola svoje zapremine i uskladišten na 5 °C 16 sati. Dodatni deo jedinjenja A-2A (6,3 g) je filtriran i kombinovan sa prethodno dobijenom čvrstom supstancom. Kao rezultat toga, proizvod A-2A je dobijen kao žuta čvrsta materija (28,2 g, 83% prinosa) sa 95% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
Jedinjenje A-3A: tert-butil 4-[3-(benzilamino)-2-nitrofenil]piperazin-1-karboksilat
U bocu od 250 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (12 g, 45 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (100 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (9,31 g, 67,5 mmol) i benzilamin (5,82 g, 54 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 120 °C i mešana 2 sata na ovoj temperaturi. Nakon toga, analiza je
2
pokazala 1% vršne oblasti supstrata. Reakcija je sipana u led (oko 150 g) i razređena pomoću AcOEt (300 ml). Faze su bile odvojene, a voda je izdvojena pomoću AcOEt (2 × 300 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Kao rezultat toga, proizvod A-3A je dobijen kao žuta čvrsta supstanca (11,9 g, 84% prinosa) sa 95% čistoće prema UPLCMS analizi (Metoda A) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-4A: tert-butil 4-[2-amino-3-(benzilamino)fenil]piperazin-1-karboksilat
U bocu od 500 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3A (4 g, 9,7 mmol) i EtOH (200 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (5,06 g, 29,1 mmol) u vodi (50 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (30 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (30 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4A je dobijen kao tamnobraon ulje (3,01 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.
Jedinjenje A-5A, Jedinjenje 1: 1-benzil-4-(piperazin-1-il')-2-(trifluorometil')-1H-benzimidazol u obliku hidrohloridne soli
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4A (382 mg, 1 mmol) i TFA (2 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Reakciona mešavina je mešana 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS
2
pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (50 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica da bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je pročišćen kolonskom hromatografijom (10% do 20% MeOH u DCM). Frakcije s proizvodom su bile koncentirsane, ponovo rastvorene u 20 ml i-PrOH-a, a dodato je 0,5 ml rastvora HCI od 36%. Rastvarači su izvađeni in vacuo, a ostatak je otopljen u 5 ml i-PrOH, a zatim je dodato 20 ml EtzO. Čvrsti proizvod je filtriran i opran pomoću EtzO (5 ml). Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5A, Jedinjenje 1 u obliku hidrohloridne soli je dobijen kao bež čvrsta materija (141 mg, 39% prinosa) sa 99,24% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,53 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,37 – 7,25 (m, 4H), 7,19 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,11 – 7,03 (m, 2H), 6,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,67 (s, 2H), 3,80 (dd, J = 6,6, 3,8 Hz, 4H), 3,30 (m, J = 4,9 Hz, 4H).
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 143,20, 137,63, 137,46, 137,31 (q, J = 38,2 Hz), 132,61, 129,22, 128,20, 127,05, 126,51, 119,40 (q, J = 271,1 Hz), 108,98, 104,74, 48,12, 46,39, 42,92.
Jedinjenje A-3B: N-benzil-3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-nitroanilin
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, 2,6-difluoronitrobenzen A-1 (5 g, 31 mmol) je dodat pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (50 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (8,5 g, 62 mmol) i 1-metilpiperazin (3.3 g, 33 mmol). Reakciona mešavina je zagrejana na 30 °C i mešana je 16 sati. Nakon toga, analiza nije pokazala vršnu vrednost supstrata. Drugi deo K2CO3 (5,1 g, 37 mmol) je dodat u reakcionu mešavinu, a zatim benzilamin (3,96 g, 37 mmol). Reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana je 16 sati. Nakon toga, UPLCMS analiza pokazala je 70% konverzije jedinjenja A-2B. Dodat je još jedan deo K2CO3 (3 g, 22 mmol), a
2
mešanje je nastavljeno preko noći na temperaturi od 70 °C. Nakon toga, UPLCMS analiza nije pokazala jedinjenje A-2B u reakcionoj mešavini. Reakcija je sipana u led (oko 400 g) gde je proizvod počeo da se kristališe. Čvrsta materija je filtrirana i isprana vodom. Tako dobijeno, sirovo, vlažno jedinjenje A-3B je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-4B: N1-benzil-3-(4-metilpiperazin-1-il)benzen-1,2-diamin
U bocu od 1 l opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3B iz prethodnog koraka i EtOH (500 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od 5 minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (16,2 g, 93 mmol) u vodi (100 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen pod vakuumom i dodat je AcOEt (200 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (30 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4B je dobijen kao tamnobraon ulje (4,2 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.
Jedinjenje A-5B, Jedinjenje 2: 1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol u obliku hidrohloridne soli
U bocu od 90 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje jedinjenje A-4B (600 mg, 2 mmol) i TFA (5,8 g, 51 mmol) su dodati pod argonskom atmosferom, a reakciona mešavina je zagrejana na 80 °C u periodu od 2 sata. Višak kiseline je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je otopljen sa 15 ml suvog IPA i dodato je 5 ml rastvora HCl od 36%. Nakon 1 sata mešanja, mešavina
2
je isparila do suvog oblika. Ostaci su refluksirani sa 5 ml dioksana i nekoliko kapi IPA tokom 30 minuta. Rastvor je bilo ohlađen na 3 °C preko noći bez mešanja. Zatim je čvrsta supstanca filtrirana, oprana dioksanom i osušena u vakuumskom sušaču. Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5B, Jedinjenje 2 u obliku hidrohloridne soli je dobijen kao bež čvrsta materija (100 mg, 12% prinosa) sa 98,09% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,41 (s, 1H), 7,39 – 7,25 (m, 4H), 7,21 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,11 – 7,03 (m, 2H), 6,79 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,55 – 4,24 (m, 2H), 3,65 – 3,44 (m, 2H), 3,46 - 3,19 (m, 4H), 2,82 (s, 3H).
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 142,82, 137,61, 137,36 (q, J = 37,9 Hz), 136,38, 132,63, 129,49, 129,22, 128,20, 127,04, 126,52, 120,48, 118,32, 109,14, 104,83, 52,48, 48,13, 46,51, 42,49, 25,92.
Jedinjenje A-2C: 2-[4-(3-fluoro-2-nitrofenil)piperazin-1-il]etil aceta
U bocu od 250 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, 1-(3-fluoro-2-nitrofenil)piperazin A-6 (5 g, 22,5 mmol) je dodat pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena ACN (50 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (6,0 g, 45 mmol) i 2-bromoetil acetat (4,45 g, 26,6 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 60 °C i mešana 20 sata na ovoj temperaturi. Nakon toga, UPLCMS analiza nije pokazala vršnu vrednost supstrata. Reakcija je bila ohlađena na sobnu temperaturu i čvrsta supstanca je bila filtrirana. Kao rezultat toga, proizvod A-2C je dobijen kao žuta čvrsta materija (6,8 g, 99% prinosa) sa 99% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
Jedinjenje A-3C: 2-{4-[3-(benzilamino)-2-nitrofenil]piperazin-1-il}-etilacetat
2
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2C (6,6 g, 22 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (60 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (6,07 g, 44 mmol) i 3-benzilamin (2,59 g, 24,2 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 20 sati na ovoj temperaturi. Nakon toga, reakcija je sipana u led (oko 60 g) i razređena pomoću AcOEt (300 ml). Faze su bile odvojene, a voda je izdvojena pomoću AcOEt (2 × 300 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Kao rezultat toga, proizvod A-3C je dobijen kao žuta čvrsta supstanca (6,3 g, 72% prinosa) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5C, Jedinjenje 3: 2-{4-[1-benzil-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]piperazin-1-il}etanol u obliku hidrohloridne soli
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, dodat je TFA (10 ml) i mešavina je zagrejana na 70 °C. Zatim su dodati gvožđe u obliku metala (1,12 g, 20 mmol) i jedinjenje A-3C (2,0 g, 5 mmol). Reakciona mešavina je mešana 2 sata na ovoj temperaturi. Nakon toga je reakciona mešavina ohlađena na sobnu temperaturu i razređena pomoću DCM (100 ml).2 M rastvora NaHCO3 dodato je u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8, a potom su se faze razdvojile. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 100 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je otopljen u 50 ml THF-a i dodato je 5 ml vode i 1 g LiOH. Reakciona mešavina je mešana 20 sata na sobnoj temperaturi. Nakon toga, organski rastvarač je uklonjen in vacuo, a u mešavinu je dodato 100 ml AcOEt. Faze su bile odvojene, a voda je izdvojena pomoću AcOEt (2 × 100 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je pročišćen kolonskom hromatografijom (10% do 20% MeOH u DCM). Nakon uklanjanja rastvarača, ostaci su otopljeni u 20 ml i-PrOH, a dodato je 0,5 ml rastvora HCI od 36%. Rastvarači su izvađeni in vacuo, a ostaci su ponovo otopljeni u 5 ml i-PrOH, a zatim je dodato 20 ml EtzO. Čvrsti proizvod je filtriran i opran pomoću EtzO. Kao rezultat toga, konačno jedinjenje A-5C, Jedinjenje 3u obliku hidrohloridne soli je dobijeno kao bež čvrsta materija (81 mg, 3,7% prinosa) sa 97% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 7,37 – 7,25 (m, 4H), 7,20 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,10 – 7,04 (m, 2H), 6,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,67 (s, 2H), 4,39 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 3,85 (dd, J = 6,2, 4,3 Hz, 2H), 3,67 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,37 (m, 4H), 3,26 (q, J = 5,2 Hz, 2H).
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 142,82, 137,62, 137,34 (q, J = 37,4), 136,39, 132,59, 129,23, 128,22, 127,05, 126,52, 119,40 (q, J = 270,7 Hz), 109,04, 104,82, 58,30, 55,45, 51,56, 48,12, 46,32.
Jedinjenje A-3D: tert-butil 4-(3-(furan-2-ilmetilamino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,63 g, 5 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (6 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (2,07 g, 15 mmol) i furfurilamin (6,5 mmol, 631 mg) a reakciona mešavina je zagrejana na 80 °C i mešana 16 sati na ovoj temperaturi. Nakon toga, analiza je pokazala 5% vršne oblasti supstrata A-2A. Reakcija je sipana u led (oko 50 g) i razređena pomoću AcOEt (30 ml). Faze su bile odvojene, a voda je izdvojena pomoću AcOEt (2 × 30 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak čvrste supstance je otopljen u maloj količini MeOH sa blagim grejanjem, a zatim je preko noći čuvan na temperaturi od 5 °C. Tako dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana hladnim MeOH (5 ml) i osušena pod visokim vakuumom. Filtrat je bio koncentrisan in vacuo, unapred apsorbovan na silicijumskom gelu i pročišćen pomoću
1
gravitacione kolonske hromatografije (10% AcOEt u n-heksanu). Nakon uklanjanja rastvarača, proizvod je kombinovan sa prethodno dobijenom čvrstom supstancom. Kao rezultat toga, proizvod A-3D je dobijen kao crveno-braon čvrsta materija (1,29 g, 64% prinosa) sa 98% čistoće, prema UPLCMS analizi.
Jedinjenje A-4D: tert-butil 4-(2-amino-3-(furan-2-ilmetilamino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3D (850 mg, 2,1 mmol) i EtOH (20 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,83 g, 10,5 mmol) u vodi (12 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (30 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (30 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4D je dobijen kao tamnobraon ulje (705 mg) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.
Jedinjenje A-8A: tert-butil 4-(1-(furan-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje jedinjenje A-4D ( 100 mg, 0,27 mmol) i suvi ACN su dodati pod argonskom atmosferom, a reakciona mešavina je ohlađena na 0 °C. Zatim je DIPEA (243 mg, 1,88 mmol) dodata, a nakon toga je u vidu kapljica (0,5 h) dodat i sveže
2
pripremljeni rastvor TFAA (216 mg, 1,03 mmol) u ACN (1 ml). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza je pokazala 15% vršnog područja proizvoda A-8A i 35% vršnog područja neciklizovanog proizvoda A-7A. Reakciona mešavina je bila razređena DCM-om i vodom, a faze su bile odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je bio unapred apsorbovan na silicijumskom gelu i pročišćen kolonskom hromatografijom (10% do 15% AcOEt u n-heksanu). Nakon uklanjanja rastvarača dobijene su dve frakcije. Prva frakcija, očekivani proizvod A-8A je dobijen kao bezbojno ulje (107 mg, 44% prinosa) sa 99% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A). Druga frakcija (100 mg) bila je mešavina (1:1) očekivanog proizvoda A-8A i neciklizovanog proizvoda A-7A. Moguće je kvantitativno konvertovati ovu mešavinu u čisto jedinjenje A-8A koristeći AcOH u refluktovanju EtOH.
Jedinjenje A-5D, Jedinjenje 4: 1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol
U bocu od 25 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-8A (100 mg, 0,22 mmol) i EtOH (2 ml), nakon čega je dodat rastvor HCl od 36% (0,5 ml), a reakciona mešavina je mešana 40 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS je pokazala punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je bila razređena rastvorom EtOH (5 ml), ohlađena na oko 5 °C, a rastvor NH4OH (0,5 ml) od 25% je dodat u vidu kapljica. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5D, Jedinjenje 4 je dobijen kao svetlobraon čvrsta supstanca (59 mg, 76% prinosa) sa 97,34% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda A).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,59 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,34 – 7,26 (m, 2H), 6,66 (ddd, J = 10,6, 5,6, 3,2 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 3,3, 1,8 Hz, 1H), 5,60 (s, 2H), 3,42 (m, 4H), 2,90 (m, 4H).
<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 149,34, 145,53, 144,41, 137,69, 136,82 (q, J = 38,2 Hz), 133,01, 127,36, 119,94 (q, J = 271,5 Hz), 111,59, 110,35, 108,70, 104,01, 51,13, 46,42, 41,97.
Jedinjenje A-3E: tert-butil 4-(3-((5-metilfuran-2-il)metilamino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (650 mg, 2 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (4 ml). Zatim su dodati osušeni
K2CO3 (691 mg, 5 mmol) i 5-metilfurfurilamin (2,6 mmol, 289 mg), a reakciona mešavina je bila zagrejana na 80 °C i mešana 16 sati. Nakon toga, reakciona mešavina je sipana u vodu (oko 50 ml) i razređena pomoću DCM (20 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml).
Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je bio unapred apsorbovan na silicijumskom gelu i pročišćen kolonskom hromatografijom (10% AcOEt u nheksanu). Kao rezultat toga, konačni proizvod A-3E je dobijen kao crvena-braon čvrsta supstanca (450 mg, 54% prinosa) sa 95% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda A).
Jedinjenje A-4E: tert-butil 4-(2-amino-3-((5-metilfuran-2-il)metilamino)fenil)piperazin-1-karboksilat
4
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3E (492 mg, 1,18 mmol) i EtOH (17 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u jedan deo dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,21 g, 5,9 mmol) u vodi (4,3 ml). Reakciona mešavina je mešana još 10 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. Voda (20 ml) i AcOEt (30 ml) su dodati, a faze su bile odvojene. Vodena faza je ekstrahovana AcOEt-om (2 × 30 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4E je dobijen kao tamnobraon ulje (402 mg) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja (Metoda A).
Jedinjenje A-8B: tert-butil 4-(1-((5-metilfuran-2-il)metil)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 25 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje jedinjenje A-4E (216 mg, 0,56 mmol) i suvi ACN su dodati pod argonskom atmosferom. Zatim je dodata DIPEA (145 mg, 1,12 mmol), a nakon toga je u vidu kapljica (20 min.) dodat TFAA (130 mg, 0,62 mmol). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza je pokazala 15% vršnog područja proizvoda A-8B i 35% vršnog područja necilklizovanog proizvoda A-7B. Reakciona mešavina je sipana u zasićeni rastvor
NaHCO3 (20 ml), razređena sa 30 ml DCM-a i faze su bile odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je otopljen u EtOH (6 ml) i dodato je 0,5 ml AcOH. Zatim, je mešavina bila zagrejana na 80 °C i mešana na ovoj temperaturi 2 sata. Nakon toga, svi rastvarači su uklonjeni i ostatak je otopljen u AcOEt (10 ml). Organska faza je oprana zasićenim rastvorom NaHCOs, sušena pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je bio unapred apsorbovan na silicijumskom gelu i pročišćen kolonskom hromatografijom (20% AcOEt u n-heksanu). Kao rezultat toga, proizvod A-8B je dobijen kao bezbojno ulje (115 mg, 45% prinosa) sa 99% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda A).
Jedinjenje A-5E, Jedinjenje 5: 1-((5-metilfuran-2-il)metil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol
U bocu od 25 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-8B (115 mg, 0,25 mmol) i EtOH (7 ml), nakon čega je dodat rastvor HCl od 36% (1,5 ml), a reakciona mešavina je mešana 24 sata. Nakon toga je dodat još jedan deo koncentrisanog HCl (0,7 ml), a reakciona mešavina je mešana još 24 sata. Reakciona mešavina je razređena vodom (10 ml), ohlađena na oko 5 °C i rastvor NH4OH od 25% (2 ml) je dodat u vidu kapljica. Zatim je dodat DCM (30 ml) i faze su bile odvojene. Faza vode je ekstrahovana još jednom pomoću DCM (30 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je bio unapred apsorbovan na silicijumskom gelu i pročišćen kolonskom hromatografijom (92:8:0,5 DCM:MeOH:NH4OH). Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5E, Jedinjenje 5 je dobijen kao svetlobraon čvrsta supstanca (60 mg, 66% prinosa) sa 96% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda A).
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7,29 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,16 (m, 1H), 5,87 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,55 (m, 4H), 3,15 (m, 4H), 2,21 (s, 3H).
<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 152,76, 146,23, 145,16, 137,33 (q, J = 38,9 Hz), 136,98, 133,23, 126,21, 119,17 (q, J = 271,1 Hz), 109,91, 108,16, 106,45, 103,11, 51,00, 46,08, 41,60, 13,47.
Jedinjenje A-3F: Tert-butil 4-(3-((3-hlorobenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,20 g, 3,69 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni
K2CO3 (0,97 g, 7,01 mmol) i 3-hlorobenzilamin (0,84 g, 5,91 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 48 sati na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3F kao žuta čvrsta materija (0,77 g, 47% prinosa) sa 100% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
Jedinjenje A-4F: Tert-butil 4-(2-amino-3-((3-hlorobenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3F (0,75 g, 1,68 mmol) i EtOH (28 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,31 g, 7,55 mmol) u vodi (9 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (20 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (20 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4F je dobijen kao belo ulje koje se kristališe (0,63 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5F, Jedinjenje 6: 1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol u obliku hidrohloridne soli
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4F (0,31 g, 0,74 mmol) i TFA (1,48 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (40 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 15 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u 37 ml i-PrOH-a, a dodato je 0,3 ml rastvora HCI od 36%. Rastvarači su izvađeni in vacuo, a ostaci su otopljeni u 5 ml i-PrOH, a zatim je dodato 20 ml EtzO. Čvrsti proizvod je filtriran i opran pomoću Et2O (5 ml). Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5F, Jedinjenje 6 u obliku hidrohloridne soli je dobijen kao bež čvrsta materija (104 mg, 33% prinosa) sa 100% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,41 (br s, 2H), 7,38 – 7,26 (m, 3H), 7,23 – 7,14 (m, 2H), 6,91 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,68 (s, 2H), 3,77 (br s, 4H), 3,28 (br s, 4H)
<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 143,2, 139,0, 137,6, 137,0 (q, J = 2 Hz), 133,8, 132,5, 131,2, 128,2, 127,2, 126,5, 125,0, 119,3 (q, J = 271 Hz), 109,1, 104,6, 47,4, 46,4, 43,0
Jedinjenje A-3G: tert-butil 4-(3-((3-fluorobenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,20 g, 3,69 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (0,97 g, 7,01 mmol) i 3-fluorobenzilamin (0,74 g, 5,91 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 48 sati na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3G kao žuta čvrsta materija (0,73 g, 46% prinosa) sa 100% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
Jedinjenje A-4G: tert-butil 4-(2-amino-3-((3-fluorobenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboskilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3G (0,70 g, 1,63 mmol) i EtOH (27 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,27 g, 7,32 mmol) u vodi (8 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (20 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (20 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4G je dobijen kao bledo bež ulje (0,60 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5G, Jedinjenje 7: 1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol u obliku hidrohlorne soli
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4G (0,30 g, 0,75 mmol) i TFA (1,5 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (40 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 15 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u 37 ml i-PrOH-a, a dodato je 0,3 ml rastvora HCI od 36%. Rastvarači su izvađeni in vacuo, a ostaci su otopljeni u 5 ml i-PrOH, a zatim je dodato 20 ml EtzO. Čvrsti proizvod je filtriran i opran pomoću EtzO (5 ml). Kao rezultat toga, konačni proizvod A-5G, Jedinjenje 7 u obliku hidrohloridne soli je dobijen kao bež čvrsta materija (100 mg, 32% prinosa) sa 98,84% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 9,42 (br, 2H), 7,39 – 7,27 (m, 2H), 7,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,10 (dt, J = 2,6, 8,3 Hz, 1H), 6,93 (D, J = 10,0 Hz, 1H), 6,82 – 6,74 (m, 2H), 5,68 (s, 2H), 3,81 – 3,74 (m, 4H), 3,28 (br, 4H)
<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 162,6 (d, J = 244 Hz), 143,2, 139,3 (d, J = 7,2 Hz), 137,6 (q, J = 2 Hz), 137,0, 132,6, 131,4 (d, J = 8,3 Hz), 127,2, 122,4 (d, J = 2,8 Hz), 119,3 (d, J = 271 Hz), 115,1 (d, J = 21 Hz), 113,6 (d, J = 22,5 Hz), 109,1, 104,6, 47,5, 46,4, 43,0
4
Jedinjenje A-3H: tert-butil 4-(3-((3,4-dihlorobenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,10 g, 3,38 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (0,7 g, 5,07 mmol) i 3,4-dihlorobenzilamin (0,65 g, 3,72 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 24 sata na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3H kao crvena čvrsta materija (0,7 g, 43% prinosa) sa 94,4% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
Jedinjenje A-4H: tert-butil 4-(2-amino-3-((3,4-dihlorobenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3H (0,7 g, 1,54 mmol) i EtOH (22 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,08 g, 6,2 mmol) u vodi (7 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (15 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (15 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4H je dobijen kao žućkasto ulje (0,285 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5H, Jedinjenje 8: 1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4H (0,14 g, 0,33 mmol) i TFA (0,7 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (20 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 10 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (n-heksan/DCM/metanol/NH3(aq) 4,0/5,0/1,0/0,02, v/v/v/v) koji daje finalni proizvod A-5H, Jedinjenje 8 kao bledožuto kristalizirajuće ulje (120 mg, 85% prinosa) sa 95,75% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,60 – 7,49 (m, 2 H), 7,44 – 7,23 (m, 4 H), 7,17 – 7,06 (m, 2 H), 6,97 – 6,84 (m, 2 H), 6,72 – 6,63 (m, 2 H), 5,66 (s, 2 H), 3,57 – 3,50 (m, 4 H), 3,08 – 2,99 (m, 4 H)
<13>C NMR (75 MHz, CD3OD) δ 166,1, 160,9, 145,1, 140,3, 136,5 (q, J = 1,7 Hz), 136,7, 132,6, 126,7, 124,3, 120,2, 116,9 (q, J = 271 Hz), 108,7, 108,1, 102,8, 50,1, 44,9, 43,8
Jedinjenje A-3I: Tert-butil 4-(3-((3-hlor-4-fluorbenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,1 g, 3,38 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (1,16 g, 8,45 mmol) i 3-hloro-4-fluorobenzilamin (0,85 g, 5,4 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 24 sata na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3I kao žućkasto čvrsta materija (0,5 g, 32% prinosa) sa 93% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
Jedinjenje A-4I: Tert-butil 4-(2-amino-3-((3-hloro-4-fluorbenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3I (0,5 g, 1,07 mmol) i EtOH (15 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (0,75 g, 4,37 mmol) u vodi (5 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (20 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (20 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4I je dobijen kao žućkasto ulje (0,452 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5I, Jedinjenje 9: 1-(3-hlor-4-fluorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol
4
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4I (0,240 g, 0,55 mmol) i TFA (1,2 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (20 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 10 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (n-heksan/DCM/metanol/NH3(aq) 4,0/5,0/1,0/0,02, v/v/v/v) koji daje finalni proizvod A-5I, Jedinjenje 9 kao žuto kristalizirajuće ulje (200 mg, 90% prinosa) sa 97,50% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,22 – 7,43 (m, 3H), 7,09 (d, J = 7,69 Hz, 1H), 6,97 (ddd, J = 2,18, 4,68, 8,53 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 7,69 Hz, 1H), 5,64 (s, 2H), 3,43 – 3,50 (m, 4H), 2,87 – 2,94 (m, 4H), NH proton nije detektovan.
<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 158,7,– 155,3 (d, J = 271 Hz), 145,1, 136,5 (q, J = 1,7 Hz), 134,5 (d, J = 3,6 Hz) 132,6, 128,9, 127,2 (d, J = 7,6 Hz), 121,2, 120,6 (q, J = 271 Hz),117,9, 117,6, 108,4, 103,1, 50,5, 46,9, 45,9
Jedinjenje A-3J: tert-butil 4-(3-((3,4-difluorobenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (1,10 g, 3,38 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (0,7 g, 5,07 mmol) i 3,4-difluorobenzilamin (0,64 g, 3,72 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 24 sata na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3J kao žućkasta čvrsta materija (0,8 g, 53% prinosa) sa 94,4% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
Jedinjenje A-4J: tert-butil 4-(2-amino-3-((3,4-difluorobenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3J (0,8 g, 1,78 mmol) i EtOH (25 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,24 g, 7,14 mmol) u vodi (8 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (15 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (15 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4J je dobijen kao žućkasto ulje (0,400 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5J, Jedinjenje 10: 1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4J (0,396 g, 1,0 mmol) i TFA (2,0 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (30 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 20 ml), a kombinovane
4
organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (n-heksan/DCM/metanol/NH3(aq) 4,0/5,0/1,0/0,02, v/v/v/v) koji daje finalni proizvod A-5J, Jedinjenje 10 kao žuto kristalizirajuće ulje (350 mg, 88% prinosa) sa 95,01% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,44 – 7,17 (m, 3 H), 7,17 – 7,09 (m, 1 H), 6,88 – 6,77 (m, 1 H), 6,71 (d, J = 7,7 Hz, 1 H), 5,64 (s, 2 H), 3,65 – 3,51 (m, 4 H), 3,16 – 3,03 (m, 4 H), NH protoni nisu detektovani
<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ 151,43 (dd, J = 248 Hz i 12,7 Hz), 148,16 (dd, J = 248 Hz i 12.8 Hz), 144,30, 137,4, 136,8 (q, J = 38,2 Hz), 134,19 (dd, J = 5,7, 3,6 Hz), 132,5, 127,2, 123,33 (q, J = 3,4 Hz), 119,7 (q, J = 271 Hz), 118,38 (d, J = 17,5 Hz), 116,10 (d, J = 18,0 Hz), 108,7, 103,8, 79,6, 48,8, 47,0, 44,7
Jedinjenje A-3K: tert-butil 4-(3-((3,5-dihlorobenzil)amino)-2-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 50 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje, jedinjenje A-2A (0,9 g, 2,76 mmol) je dodato pod argonskom atmosferom, a boca je bila napunjena suvim jedinjenjem DMSO (5 ml). Zatim su dodati osušeni K2CO3 (0,95 g, 6,9 mmol) i 3,5-dihlorofluorobenzilamin (0,78 g, 4,43 mmol), a reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C i mešana 24 sata na ovoj temperaturi. Posle tog vremena, reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu, sipana u hladni slani rastvor (75 ml) i razređena vodom (75 ml). Dobijeni precipitat je filtriran, opran vodom, osušen na vazduhu ii kristalizovan iz EtOH (99,9%, 10 ml) i dobijen je proizvod A-3K kao žućkasta čvrsta materija (0,97 g, 78% prinosa) sa 95% čistoće, prema UPLCMS analizi (metoda B).
4
Jedinjenje A-4K: tert-butil 4-(2-amino-3-((3,5-dihlorobenzil)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
U bocu od 100 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-3K (0,97 g, 2,16 mmol) i EtOH (30 ml), a reakciona smeša je zagrejana na 80 °C. Zatim je u roku od jednog minuta dodat sveže pripremljeni rastvor natrijum ditionita (1,5 g, 8,66 mmol) u vodi (8 ml). Reakciona mešavina je mešana još 15 minuta na 80 °C, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. EtOH je uklonjen i dodat je AcOEt (20 ml). Faze su bile odvojene, a faza vode je ponovo izdvojena pomoću AcOEt (20 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod A-4K je dobijen kao žućkasto ulje (0,890 g) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje A-5K, Jedinjenje 11: 1-(3,5-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol
U bocu od 10 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje dodato je jedinjenje A-4K (0,225 g, 0,538 mmol) i TFA (1,0 ml), a reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Nakon toga, analiza UPLCMS pokazala je punu potrošnju supstrata. Reakciona mešavina je ohlađena na sobnu temperaturu i razređena uz DCM (20 ml), a zasićeni rastvor NaHCO3 je dodat u vidu kapljica kako bi se postigla vrednost pH ~ 8. Zatim su dodati voda i DCM, a faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 10 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pod MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je pročišćen kolonskom
4
hromatografijom (n-heksan/DCM/metanol/NH3(aq) 4,0/5,0/1,0/0,02, v/v/v/v) koji daje finalni proizvod A-5K, Jedinjenje 11 kao žuto kristalizirajuće ulje (180 mg, 78% prinosa) sa 95% čistoće prema UPLCMS analizi (metoda B).
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7,33 – 7,25 (m, 1 H), 6,97 (dd, J = 0,6, 8,3 Hz, 1 H), 6.89 - 6.80 (m, 1 H), 6.77 - 6.72 (m, 1 H), 6,62 (dd, J = 2,2, 8,1 Hz, 2 H), 5,60 (s, 2 H), 3,56 – 3,49 (m, 5 H), 3,08 (dd, J = 4,1, 5,9 Hz, 5 H), NH protoni nisu detektovani
<13>C NMR (75 MHz, CD3OD) δ 145,4, 137,3, 136,0 (q, J = 1,7 Hz), 133,6, 132,4, 131,1, 129,1, 129,0, 127,1, 126,6, 126,3, 119,0 (q, J = 271 Hz), 108,2, 102,1, 51,7, 46,3, 45,1
B. Jedinjenja zasnovana na jezgru indola:
Jedinjenje B-2: N-(3-bromo-2-metilfenil)-2,2,2-trifluoroacetamid
U bocu od 250 ml opremljenu magnetnom šipkom za mešanje i napunjenu sa 150 ml DCM dodato je 12,1 g (65 mmol) 3-brom 2-metilantina. Reakciona mešavina je ohlađena na 0 °C i 16 ml (200 mmol) piridina je dodato, a potom je na ovoj temperaturi dodato i 23 ml (165 mmol) trifluorosirćetnog anhidrida. Nakon dodavanja, reakcija je bila 0,5 h na temperaturi < 5 °C, a 2,5 h na RT. Nakon toga, reakcija je bila ugašena sa 50 ml NH4Cli razređena sa 50 ml vode. Faze su bile odvojene, a faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 100 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Kao rezultat toga, proizvod je dobijen kao bela čvrsta supstanca (14,7 g, 80% prinosa) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje B-3: N-[3-bromo-2-(bromometil)fenil]-2,2,2-trifluoroacetamid
4
Boca od 250 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje, kondenzatorom i pod reflektorom od 100 W je napunjena sa 120 ml CCl4; 8,1 g (29 mmol) B-2 i 0,38 g benzoil peroksida. Reakciona mešavina je bila zagrejana do refluktiranja, a 2,1 ml bromina u 10 ml CCl4 je dodata u nekoliko delova špricom. Nakon dodavanja, Reakciona mešavina je refluktovana preko noći.
Sledećeg dana TLC je pokazao nedostatak supstrata. Reakcija je bila ohlađena, razređena sa 120 ml DCM-a i sipana u 100 ml 2 M rastvora natrijum tiosulfata. Faze su bile odvojene, a faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (2 × 60 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, a rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je razređen mešavinom DCM : heksan 1:3, a proizvod je precipitiran kao bela čvrsta supstanca, 9,1 g, 88% prinosa.
Jedinjenje B-4: 4-bromo-2-(trifluorometil)-1H-indol
Boca od 500 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje bila je napunjena sa 200 ml suvog toluena i 20,1 g (56 mmol) supstrata B-3. Zatim je dodato 15,9 g (61 mmol) PPH3. Zatim je reakciona mešavina bila zagrejana na 60 °C i mešana 2 sata. Nakon toga, reakcija je ohlađena na <5<0>C, a bela čvrsta supstanca je bila filtrirana, oprana pomoću EtzO i brzo osušena pod protokom vazduha. Zatim, čvrsta supstanca je refluktovana sa 250 ml DMF preko noći i UPLC analiza pokazala je kraj reakcije. Rastvarač je ispario, ostatak razređen sa 50 ml NaHCO3 aq i ekstrahovan 3 puta sa 50 ml etil acetata. Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene pomoću MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Sirovi proizvod je hromatografiran mešavinom etil acetat : heksin 3 : 7 da bi se dobilo 13,5 g masnog proizvoda, prinos je 92%.
Jedinjenje B-5: 1-benzil-4-bromo-2-(trifluorometil)-1H-indol
4
Boca od 250 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje bila je napunjena sa 80 ml suvog DMF i 13,1 g (0,05 mol) supstrata B-4. Zatim je reakciona mešavina bila ohlađena na 0 °C i 2,4 g (0,06 mol) natrijum-hidrida (60% u ulju) je pažljivo dodato. 10 minuta nakon dodavanja 5,95 ml (0,05 mol) benzil bromida je spuštena na ovu temperaturu (0<0>C). Posle dodavanja svih reagenasa, reakcija je bila mešana 0,5 sata na temperaturi <5<0>C, i 2,5 sata na sobnoj temperaturi. Nakon toga, reakcija je bila ugašena sa 5 ml vode i isparila. Ostatak je razređen vodom (100 ml) i ekstrahovan pomoću DCM (3 × 70 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanom vodom, sušene MgSO4 i isparile.
Proizvod je dobijen kao bela čvrsta supstanca (17,5 g, ~ 100% prinosa) i korišćen je u sledećem koraku bez daljeg pročišćenja.
Jedinjenje B-6A: 1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Suva boca od 250 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje, CaCl2 epruveta i kondenzator punjeni su sa 150 ml suvog dioksana, 17,9 g (50 mmol, 1 eq) supstrata B-5, 5,64 ml (1 eq) metilpiperazina, 1,4 g (0,03 eq) Pd2(dba)3 i 33,6 g (2 eq) Cs2CO3. Boca je temeljno očišćena argonom. Zatim je dodato 2,24 g (0,07 eq) BINAP-a, a reakciona smeša je bila zagrejana na 100 °C i mešana preko noći. Sledećeg dana, reakciona mešavina je bila ohlađena, sipana na 200 ml vode, filtrirana kroz celit i ekstrahovana pomoću DCM (3 × 100 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene preko MgSO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostatak je hromatografiran mešavinom DCM:MeOH:NH3 (500:19 :1) da bi se dobilo 14 g masnog proizvoda B-6A, 75% prinosa.
Jedinjenje B-6B: tert-butil 4-[1-benzil-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Jedinjenje B-6B je bilo pripremljeno, počevši od B-5 (7,1 g, 20 mmol), prema istom postupku kao i za jedinjenje B-6A, upotrebom N-BOC-piperazina umesto metilpiperazina. Nakon pročišćavanja, 8,7 g jedinjenja B-6B je dobijeno u vidu svetlobraon čvste supstance (66% prinosa).
Jedinjenje B-7A: 4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Boca od 500 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje bila je napunjena sa 70 ml suvog DMSO i 14 g (37,5 mmol) supstrata B-6A. Zatim je reakciona mešavina ohlađena na 10 °C i 160 ml (160 mmol, 4,6 eq) od 1M t-BuOK u THF dodata u obliku kapljica. Reakciona mešavina je bila ohlađena na oko 2 °C, a kiseonik je kroz reakcionu mešavinu puštan u vidu mehurića putem staklene cevi dok nije uočena potpuna potrošnja supstrata (oko 5 sati, temperatura reakcije je održavana na oko 5 °C). Nakon toga, reakciona mešavina je sipana na vodu sa ledom (200 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene preko MgSO4, a rastvarač je ispario. Ostatak je hromatografiran mešavinom DCM:MeOH (95:5), da bi se dobilo 6,5 g proizvoda B-7A, 61% prinosa.
1
Jedinjenje B-7B: tert-butil 4-[2-(trifluorometil)-1H-indol-4-ol]piperazin-1-karboksilat
Boca od 250 ml opremljena magnetnom šipkom za mešanje bila je napunjena sa 120 ml suvog THF, 45 ml suvog DMSO i 5,3 g (11,5 mmol) supstrata B-6B. Zatim je reakciona mešavina ohlađena na 0 °C i dodato je 12 g (107 mmol, 10 eq) T-BuOK. Nakon toga kiseonik je kroz reakcionu mešavinu puštan u vidu mehurića putem staklene cevi dok nije uočena potpuna potrošnja supstrata (obično od 2 do 4 sata, temperatura reakcije je održavana na oko 5 °C). Nakon toga, reakciona mešavina je sipana na vodu sa ledom (200 ml)
i ekstrahovana etil acetatom (3 × 70 ml). Kombinovane organske faze su oprane vodom, slanim rastvorom, sušene preko MgSO4, a rastvarač je ispario. Ostatak je hromatografiran mešavinom AcOEt : heksan(1:9), da bi se dobilo 3,8 g proizvoda B-7B, 90% prinosa.
Opšti postupak A za pripremu jedinjenja B-8
U osušenu bocu napunjenu inertnim gasom, dodat je indol B-7 (1 eq) i suvi DMF (0,1 M), a reakciona mešavina je ohlađena na 0 °C. Dodat je natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju) (1,5 eq), a reakciona mešavina je mešana 10 min na 0 do 5 °C i 1 sat na sobnoj temperaturi. Nakon toga je reakcija bila ohlađena na 0 °C, a derivat benzila (1.2 eq) je dodat u vidu kapljica. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi do pune potrošnje materijala. Dodati su voda i DCM i faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (3 × 10 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, sušene preko Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostaci su pročišćeni kolonskom hromatografijom.
2
Jedinjenje B-8B, Jedinjenje 13: 1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8B, Jedinjenje 13 je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (50 mg, 0,17 mmol), kao svetlobraon ulje (29 mg, 37% prinosa, 97,72% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8C, Jedinjenje 14: 1-(4-hloro-3-fluorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8C, Jedinjenje 14 je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (50 mg, 0,17 mmol), kao svetlobraon ulje (37 mg, 49% prinosa, 96,5% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8D: tert-butil 4-[1-(tiazol-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Proizvod B-8D je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B
(63 mg, 0,17 mmol), kao svetlobraon ulje (36 mg, 45% prinosa).
Jedinjenje B-8E: tert-butil 4-[1-[(4-hloro-3-fluoro-fenol)metil]-2-(trifluorometil)indol-4-yl]piperazin-1-karboksilat
Proizvod B-8E je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (63 mg, 0,17 mmol), kao svetlobraon ulje (46 mg, 53% prinosa).
Jedinjenje B-8F: tert-butil 4-[1-(furan-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Natrijum-hidrid (22 mg, 60% u mineralnom ulju, 0,54 mmol) je dodat u rastvor B-7B (200 mg, 0,54 mmol) u suvi DMF pod argonom na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina je mešana 30 minuta, a zatim je dodat 2-(bromometil)furan (105 mg, 0,65 mmol). Posle 1 sata dodati su sledeći delovi natrijum hidrida (22 mg, 60% u mineralnom ulju, 0,54 mmol) i 2-(bromometil)furan (31 mg, 0,19 mmol), a reakcija je nastavljena 2 sata. Reakciona mešavina je sipana u vodu (20 ml) i ekstrahovana pomoću DCM-a (2 × 20 ml). Kombinovani ekstrakti su oprani slanim rastvorom, sušeni preko MgSO4 i isparili pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (AcOEt/heksan, 7/93 v/v). Kao rezultat toga, konačni proizvod B-8F je dobijen kao siva čvrsta supstanca (170 mg, 70% prinosa).
4
Jedinjenje B-8G: 1-(3-metoksibenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8G je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (100 mg, 0,35 mmol), kao svetlobraon ulje (89 mg, 63% prinosa, 96% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8H, jedinjenje 19: 1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8H, Jedinjenje 19 je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (100 mg, 0,27 mmol), nakon čega je sledila deprotekcija BOC-grupe sa 200 µl TFA u 1 ml DCM na RT kako bi se dalo 58 mg čvrste supstance, 57% prinosa, 99% čistoće prema analizi UPLCMS.
Jedinjenje B-8I: tert-butil 4-[1-(3-hlorobenzil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Proizvod B-8I je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (150 mg, 0,41 mmol), kao žuto ulje (190 mg, 94% prinosa, 98,5% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8J, Jedinjenje 21: 1-(furan-2-ilmetil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Natrijum-hidrid (16 mg, 60% u mineralnom ulju, 0,40 mmol) je dodat u rastvor B-7A (100 mg, 0,37 mmol) u suvi DMF pod argonom na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina je mešana 30 minuta, a zatim je dodat 2-(bromometil)furan (64 mg, 0,40 mmol). Posle 18 sati dodati su sledeći delovi natrijum hidrida (16 mg, 60% u mineralnom ulju, 0,40 mmol) i 2-(bromometil)furan (64 mg, 0,40 mmol), a reakcija je nastavljena 2 sata. Reakciona mešavina je sipana u vodu (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 × 20 ml). Kombinovani ekstrakti su oprani slanim rastvorom, sušeni preko MgSO4 i isparili pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (DCM/MeOH/NH3aq., 98/2/0.5 v/v/v) i zatim pripremnim HPLC. Kao rezultat toga, konačni proizvod B-8J, jedinjenje 21 je dobijen kao svetložuto ulje (22 mg, 16%, 99,7% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,55 (m, 1H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 8,2, 7,8 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6.61 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,38 (m, 2H), 5,46 (s, 2H), 3,12 (m, 4H), 2,54 (m, 4H), 2,25 (s, 3H).
Jedinjenje B-8K, Jedinjenje 22: 1-(3,4-difluorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8K, Jedinjenje 22 je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (100 mg, 0.37 mmol). Sirovi proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (DCM/MeOH/NH3aq., 98/2/0.5 v/v/v) i zatim pripremnim TLC. Kao rezultat toga, konačni proizvod je dobijen kao svetložuto ulje (40 mg, 13% prinosa, 94,7% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (m, 1H), 7,21 (dd, J = 8,5, 7,6 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,66 (m, 1H), 6,62 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,54 (s, 2H), 3,17 (m, 4H), 2,56 (m, 4H), 2,26 (s, 3H).
Jedinjenje B-8L: tert-butil 4-[1-(3-metoksibenzil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Proizvod B-8L je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (150 mg, 0,41 mmol), kao žuto ulje (180 mg, 90% prinosa, 99,5% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8M: 1-(3-fluorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8M je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (100 mg, 0,35 mmol), kao svetlobraon ulje (97 mg, 71% prinosa, 96% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8N: tert-butil 4-[1-(3,4-difluorobenzil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Proizvod B-8N je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (200 mg, 0,54 mmol), kao bezbojno ulje (210 mg, 78% prinosa).
Jedinjenje B-8P: 1-(3-hlorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Proizvod B-8P je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7A (100 mg, 0,35 mmol), kao žuto ulje (74 mg, 52% prinosa, 98% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8S: tert-butil 4-[1-(tiofen-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Jedinjenje B-8S je dobijeno opštim postupkom A (mesilat je korišćen umesto bromida, 1,5 eq, 16 sati na 60 °C), počevši od B-7B (507 mg, 1,37 mmol), kao svetlobraon čvrsta supstanca (420 mg, 65% prinosa, 95% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8T: tert-butil 4-[1-(tiofen-3-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol-4-il]piperazin-1-karboksilat
Jedinjenje B-8T je dobijeno opštim postupkom A (mesilat je korišćen umesto bromida, 3 eq, 16 sati na 60 °C), počevši od B-7B (500 mg, 1,35 mmol), kao svetlobraon čvrsta supstanca (250 mg, 40% prinosa, 95% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-8V, Jedinjenje 34: 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-[(5-metil-1,3-tiazol-2-il)metil]-2-(trifluorometil)-1H-indol
Jedinjenje B-8V, Jedinjenje 34 je dobijen opštim postupkom A, počevši od B-7B (142 mg, 0,5 mmol), kao amorfna čvrsta supstanca (120 mg, 61% prinosa, 99,7% čistoće prema UPLCMS analizi.
Opšti postupak B za pripremu jedinjenja B-8 i B-9
U osušenu bocu napunjenu inertnim gason, dodat je indol B-7 (1 eq) i suvi THF (0,1 M), a reakciona mešavina je ohlađena na 0 °C. Dodati su (5-metil-2-furil)metanol (2 eq), trifenilfosfin (1,5 eq) i DIAD (1,5 eq) i reakciona mešavina je mešana 10 min na 0 do 5 °C i 1 sat na sobnoj temperaturi. Dodati su voda i DCM i faze su odvojene. Faza vode je ekstrahovana pomoću DCM (3 × 10 ml), a kombinovane organske faze su oprane vodom, sušene preko Na2SO4, a rastvarač je izvađen in vacuo. Ostaci su pročišćeni kolonskom hromatografijom i pripremnim HPLC.
Jedinjenje B-9Q, jedinjenje 28: 1-[(5-metilfuran-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Jedinjenje B-9Q, Jedinjenje 28 je dobijen opštim postupkom B, počevši od B-7B (184 mg, 0,5 mmol), nakon čega je sledila deprotekcija BOC-grupe sa 200 µl TFA u 1 ml DCM na RT kao amorfna čvrsta supstanca (16 mg, 9% prinosa, 99% čistoće prema analizi UPLCMS).
Jedinjenje B-9R, Jedinjenje 29: 1-[(5-metiltiofen-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Jedinjenje B-9R, Jedinjenje 29 je dobijen opštim postupkom B, počevši od B-7B (184 mg, 0,5 mmol), nakon čega je sledila deprotekcija BOC-grupe sa 400 µl TFA u 4 ml DCM na RT kao svetlobraon čvrsta supstanca (22 mg, 12% prinosa, 96,6% čistoće prema analizi UPLCMS).
Jedinjene B-9F, jedinjene 17: 1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
Trifluorosirćetna kiselina (2 ml) dodata je u promešani rastvor jedinjenja B-8F (170 mg, 0,38 mmol) u 5 ml DCM na 0 °C. Dobijena mešavina je mešana 2 sata, a zatim je koncentrisana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je otopljen u 30 ml DCM, opran zasićenim NaHCO3 (2 × 20 ml), slanim rastvorom (20 ml) i sušen preko MgSO4. Rastvarač je izvađen in vacuo, a sirov proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (DCM/MeOH/NH3aq., 95/5/0,5 v/v/v). Kao rezultat toga, konačni proizvod B-9F, Jedinjenje 17 je dobijen kao svetložuto ulje (41 mg, 31% prinosa, 98,9% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,58 (m, 1H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 8,2, 7,8 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,63 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,41 (m, 2H), 5,50 (s, 2H), 3,07 (m, 4H), 2,95 (m, 4H).
Jedinjenje B-9N, Jedinjenje 25: 1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol
1
4 M rastvora HCl u dioksanu (1,0 ml) je dodato u vidu kapi u promešani rastvor B-8N (105 mg, 0,26 mmol) u 3 ml THF. Reakciona mešavina je bila mešana na sobnoj temperaturi 2 sata, zatim je dodato 2 ml EtzO, a reakcija je dodatno mešana 0,5 sata. Bela čvrsta supstanca je filtrirana, oprana pomoću EtzO (2 × 5 ml) i osušena pod vakuumom. Čvrsta supstanca je suspendovano u 20 ml AcOEt, 1 M NaOH (10 ml) je dodato i mešavina je bila energično mešana 10 min. Organska faza je bila odvojena, oprana slanim rastvorom i sušena preko MgSO4. Rastvarač je izvađen in vacuo, a sirov proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom (DCM/MeOH/NH3aq., 93/7/0,5 v/v/v). Kao rezultat toga, konačni proizvod B-9N, Jedinjenje 25 je dobijen kao svetložuto ulje (40 mg, 39% prinosa, 96,7% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7,21 (m, 1H), 7,09 – 7,04 (m, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,81 – 6,73 (m, 2H), 6,67 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,39 (s, 2H), 3,31 (m, 4H), 3,23 (m, 4H).
Opšti postupak C za pripremu jedinjenja B-9
U bocu od 25 ml je dodato jedinjenje B-8, zatim THF (5 ml) i 4 M HCl u dioksanu (0,5 ml). Reakciona mešavina je bila mešana na sobnoj temperaturi do pune potrošnje materijala, zatim je dodato 10 ml EtzO, a reakcija je dodatno mešana 0,5 sata. Bela čvrsta supstanca je filtrirana, oprana pomoću EtzO (2 × 10 ml) i osušena pod vakuumom.
Jedinjenje B-9D, Jedinjenje 15: 4-(piperazin-1-il)-1-(1,3-tiazol-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohlorne soli
Proizvod B-9D, Jedinjenje 15 je u obliku hidrohloridne soli dobijeno opštim postupkom C, počevši od B-8D (36 mg, 0,08 mmol), kao bela čvrsta supstanca (19 mg, 61% prinosa, 99% čistoće prema UPLCMS analizi).
2
Jedinjenje B-9E, Jedinjenje 16: 1-(4-hloro-3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidroholrne soli
Proizvod B-9E, Jedinjenje 16 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C, počevši od B-8E (46 mg, 0,09 mmol), kao bela čvrsta supstanca (9 mg, 22% prinosa, 98% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-9G, Jedinjenje 18: 1-(3-metoksibenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohlorida
Proizvod B-9G, Jedinjenje 18 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C, počevši od B-8G (89 mg, 0,22 mmol), kao bela čvrsta supstanca (92 mg, 92% prinosa, 99,5% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,22 (br s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,26 – 7,11 (m, 3H), 6,81 (dd, J = 8,1, 2,5 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,54 (m, 1H), 6,45 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 3,71 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 3,51 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 3,38 – 3,27 (m, 2H), 3,7 – 3,17 (m, 2H), 2,84 (d, J = 4,7 Hz, 3H).
Jedinjenje B-9I, Jedinjenje 20: 1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
Proizvod B-9I, Jedinjenje 20 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C (2,5 ml 4 M HCl u periodu od 24 sata), počevši od B-8I (190 mg, 0,39 mmol), kao bela čvrsta supstanca (137 mg, 82% prinosa, 97,8% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,55 (br s, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,34 – 7,29 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,82 (ddd, J = 5,8, 3,0, 1,9 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,59 (s, 2H), 3,46 – 3,25 (m, 8H).
Jedinjenje B-9L, Jedinjenje 23: 1-(3-metoksibenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
Proizvod B-9L, Jedinjenje 23 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C (2,5 ml 4 M HCl u periodu od 24 sata), počevši od B-8L (180 mg, 0,37 mmol), kao bela čvrsta supstanca (126 mg, 81% prinosa, 98,7% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,53 (br s, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,25 -7,12 (m, 3H), 6,81 (dd, J = 8,0, 2,5 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,54 (br s, 1H), 6,45 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 3.67 (s, 3H), 3,40 (m, 4H), 3,32 (m, 4H).
4
Jedinjenje B-9M, Jedinjenje 24: 1-[(3-fluorometil)metil]-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohlorne sole
Proizvod B-9M, Jedinjenje 24 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C, počevši od B-8M (97 mg, 0,25 mmol), kao bela čvrsta supstanca (102 mg, 92% prinosa, 99,2% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,30 (br s, 1H), 7,37 – 7,28 (m, 2H), 7,28 – 7,21 (m, 1H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,08 (td, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H), 6,77 (dt, J = 10,1, 2,0 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 7,9, 5,8 Hz, 2H), 5,59 (s, 2H), 3,72 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 3,52 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 3,39 – 3,19 (m, 4H), 2,84 (d, J = 4,7 Hz, 3H).
Jedinjenje B-9P, Jedinjenje 27: 1-(3-hlorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohlorne soli
Proizvod B-9P, Jedinjenje 27 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom C, počevši od B-8P (74 mg, 0,18 mmol), kao bela čvrsta supstanca (80 mg, 99% prinosa, 97,95% čistoće prema UPLCMS analizi).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,39 (br s, 1H), 7,35 – 7,29 (m, 3H), 7,28 – 7,23 (m, 1H), 7,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,04 (q, J = 1,3 Hz, 1H), 6,82 (ddd, J = 5,6, 3,5, 1,7 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,59 (s, 2H), 3,76 – 3,68 (m, 2H), 3,52 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 3,39 – 3,19 (m, 4H), 2,84 (d, J = 4,7 Hz, 3H).
Opšti postupak D za pripremu jedinjenja B-9
U bocu od 25 ml je dodato jedinjenje B-8, zatim je dodat dioksan (10 ml) i koncentrisani HCl (1 ml). Reakciona mešavina je mešana na 60 °C u trajanju od 10 minuta. Rastvarač je ispario, a ostatak je ponovo kristalizovan iz i-PrOH. Čvrsta supstanca je filtrirana, oprana pomoću i-PrOH (2 × 5 ml) i osušena pod vakuumom.
Jedinjenje B-9S, Jedinjenje 30: 4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
Proizvod B-9S, Jedinjenje 30 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom D, počevši od B-8S (420 mg, 0,90 mmol), kao svetlobraon čvrsta supstanca (180 mg, 40% prinosa, 95% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-9T, Jedinjenje 31: 4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-3-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
Proizvod B-9T, Jedinjenje 31 u obliku hidrohloridne soli dobijeno je opštim postupkom D, počevši od B-8T (250 mg, 0,54 mmol), kao svetlobraon čvrsta supstanca (130 mg, 48% prinosa, 96,7% čistoće prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-9U, jedinjenje 32: 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-3-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
U bocu s okruglim dnom je dodato jedinjenje B-9T (250 mg, 0,62 mmol), a zatim MeOH (5,5 ml), AcOH (40 µl) i formaldehid (600 µL, 37% vodenog rastvora). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi od 40 °C tokom 0,5 sati, a nakon toga su svi rastvarači isparili. Ostatak je rastvoren u dioksanu (10 ml) i koncentrisanom HCl (1 ml). Reakciona mešavina je mešana na 60 °C u trajanju od 10 minuta. Rastvarač je ispario, a ostatak je ponovo kristalizovan iz i-PrOH. Čvrsta supstanca je filtrirana, oprana pomoću i-PrOH (2 × 5 ml) i osušena pod vakuumom. Kao rezultat toga, jedinjenje B-9U, Jedinjenje 32u obliku hidrohloridne soli je dobijeno kao svetlobraon čvrsta materija (48 mg, 19% prinosa sa 95% čistoće, prema UPLCMS analizi).
Jedinjenje B-9W, Jedinjenje 33: 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-2-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol u obliku hidrohloridne soli
Proizvod B-9W, jedinjenje 33 u obliku hidrohloridne soli dobijen je istom količinom reagensa kao i jedinjenje B-9U. Kao rezultat toga, proizvod B-9W, Jedinjenje 33 je dobijen, počevši od B-9S (65 mg, 0.16 mmol), kao svetlobraon čvrsta supstanca (39 mg, 59% prinosa, 99% čistoće prema UPLCMS analizi).
Sledeći primeri su sintetizovani u skladu sa procedurama koje su opisane u ovom dokumentu ili poznatim metodama iz literature, korišćenjem odgovarajućih početnih materijala i metoda koje su poznate stručnom licu za tehniku:
1
2
Biološki primeri
Biološki primer 1. Test vezivanja receptora
Priprema rastvora za test i referentna jedinjenja. 1 mM koncentrovanih rastvora testiranih jedinjenja je pripremljeno u DMSO. Serijske dilucije jedinjenja su pripremljene na mikrotitar ploči sa 96 čašica u puferima analize pomoću automatskog sistema za pipetiranje epMotion 5070 (Eppendorf). Svako jedinjenje je testirano u 10 koncentracija od 1,0E-6 do 1,0E-11 M (konačna koncentracija).
5-HT2A test vezivanja receptora Ispitivanje vezivanja radioliganda je obavljeno upotrebom membrana iz CHO K1 ćelija koje su fiksno transfektovane humanim 5-HT2A receptorom (PerkinElmer). Sve analize su izvršene
u duplikatima.50 µl radnog rastvora testiranih jedinjenja, 50 µl [3H]-ketanserin (konačna koncentracija 1 nM) i 150 µl razređenih membrana (7 µg proteina po čašici) pripremljeno u puferima analize (50 mm Tris, pH 7,4, 4 mM CaCl2, 0,1% askorbinske kiseline) prebačeno je na polipropilensku mikrotitar ploču sa 96 čašica pomoću stanice za pipetiranje sa 96 čašica Rainin Liquidator (MettlerToledo). Mianserin (10 µm) je korišćen za definisanje nespecifičnog vezivanja. Mikrotitar ploča je bila prekrivena zaptivnom trakom, pomešana i inkubanirana 60 minuta na 27 °C. Reakcija je okončana brzom filtracijom kroz GF/B filter prethodno natopljen polietileneiminom od 0,5% u trajanju od 30 minuta. Deset brzih pranja Tris puferom od 200 µl 50 mM (4 °C, pH 7,4) izvršeno je uz pomoć automatizovanog sistema za prikupljanje ćelija Harvester-96 MACH III FM (Tomtec). Filteri su osušeni na 37 °C u inkubatoru s ventilatorom za prinudni vazduh, a zatim je čvrsti scintilator MeltiLex topljen na filterima na temperaturi od 90 °C 5 minuta.
Radioaktivnost je računata na MicroBeta2 brojaču scintilacije (PerkinElmer).
Podaci su uklopljeni u jednačinu za uklapanje pomoću krive na jednom mestu softverom Prism 6 (GraphPad Software) i Ki vrednosti su procenjene na osnovu Čeng-Prusofove jednačine.
5-HT6 test vezivanja receptora. Ispitivanje vezivanja radioliganda je obavljeno upotrebom membrana iz CHO - K1 ćelija koje su fiksno transfektovane humanim 5-HT6 receptorom (PerkinElmer). Sve analize su izvršene u duplikatima.
50 µl radnog rastvora testiranih jedinjenja, 50 µl [3H]-LSD (konačna koncentracija 1 nM) i 150 µl razređenih membrana (8 µg proteina po čašici) pripremljeno u puferima analize (50 mM Tris, pH 7,4, 10 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA) prebačeno je na polipropilensku mikrotitar ploču sa 96 čašica pomoću stanice za pipetiranje sa 96 čašica Rainin Liquidator (MettlerToledo). Metiotepin (10 µm) je korišćen za definisanje nespecifičnog vezivanja. Mikrotitar ploča je bila prekrivena zaptivnom trakom, pomešana i inkubanirana 60 minuta na 37 °C. Reakcija je okončana
4
brzom filtracijom kroz GF/A filter prethodno natopljen polietileneiminom od 0,5% u trajanju od 30 minuta. Deset brzih pranja Tris puferom od 200 µl 50 mM (4 °C, pH 7,4) izvršeno je uz pomoć automatizovanog sistema za prikupljanje ćelija Harvester-96 MACH III FM (Tomtec). Filteri su osušeni na 37 °C u inkubatoru s ventilatorom za prinudni vazduh, a zatim je čvrsti scintilator MeltiLex topljen na filterima na temperaturi od 90 °C 5 minuta. Radioaktivnost je računata na MicroBeta2 brojaču scintilacije (PerkinElmer). Podaci su uklopljeni u jednačinu za uklapanje pomoću krive na jednom mestu softverom Prism 6 (GraphPad Software) i Ki vrednosti su procenjene na osnovu Čeng-Prusofove jednačine.
Gorenavedeni rezultati potvrđuju da sva testirana jedinjenja imaju visoki afinitet za 5-HT2A i 5-HT6 receptorima, što potvrđuje njihova svojstva dvojnih receptora liganda.
Biološki primer 2. Analize funkcionalne aktivnosti
Priprema rastvora za test i referentna jedinjenja. 1 mM koncentrovanih rastvora testiranih jedinjenja je pripremljeno u DMSO. Serijske dilucije su pripremljene na mikrotitar ploči sa 96 čašica u puferima analize pomoću automatskog sistema za pipetiranje epMotion 5070 (Eppendorf). Izvršena su dva nezavisna eksperimenta u duplikatima i testirano je 6 do 10 koncentracija.
Analize funkcionalne aktivnosti 5-HT2A i 5-HT6. Analize funkcija zasnovane na ćelijskom ekuorinu su obavljene γ-ozračenim rekombinantnim CHO-K1 ćelijama koje eksprimiraju mitohondrijalno ciljani aekuorin, humani GPCR (5-HT2A ili 5-HT6) i promiskuitetni g protein α16 (PerkinElemer). Analize su izvršene prema standardnom protokolu proizvođača. Nakon odmrzavanja, ćelije su prenete u pufer za analizu (DMEM/HAM F12 sa 0,1% BSA bez proteaze) i centrifugirane. Talog ćelija je ponovo suspendovan u puferu za analizu, a koelenterazin je dodat u konačnim koncentracijama od 5 µm. Ćelijska suspenzija je inkubirana na 21 °C, zaštićena od svetlosti konstantnom agitacijom, 4 sata i potom razređena puferom za analizu do koncentracije od 250.000 ćelija/ml. Nakon 1 sata inkubacije, 50 µl ćelijske suspenzije je distribuirano pomoću automatskih injektora ugrađenih u brojač radiometrijskih i luminiscentnih ploča MicroBeta2 LumiJET (PerkinElmer, SAD) u belu neprozirnu mikrotitar ploču sa 96 čašica u koju su prethodno ubačena testirana jedinjenja. Emisija svetlosti odmah posle mobilizacije kalcijuma zabeležena je u trajanju od 30 do 60 sekundi. U režimu antagonista, nakon 15 do 30 minuta, u gorenavedenu mešavinu je dodat referentni agonist inkubacije i ponovo je zabeležena emisija svetlosti. Konačna koncentracija referentnog agonista bila je jednaka EC80: serotonin 40 nm za 5-HT6 receptor i α-metilserotonin 30 nm za 5-HT2A receptor. Testovi su izvršeni u režimu agonista (5-HT6 AGO and 5-HT2A AGO) i u režimu antagonista (5-HT6 ANT i 5-HT2A ANT).
IC50 i EC50 su određeni nelinearnom regresijskom analizom pomoću softvera GraphPad Prism 6.0 LogIC50 je korišćen za dobijanje Kb primenom Čeng-Prusofove aproksimacije.
bilo nemoguće zato što jedinjenja nisu imala nikakav agonistički efekat) Gorenavedeni rezultati potvrđuju da sva testirana jedinjenja imaju visoka antagonistička svojstva na 5-HT2A i 5-HT6 receptorima, što potvrđuje njihova svojstva antagonista dvojnih receptora.
Biološki primer 3. Dejstva Jedinjenja 1 i 17 na trzaje glave koje izaziva agonist receptora 5-HT2A/C, 1-(2,5-dimetoksi-4-iodofenil)-2-aminopropan hidrohlorid (DOI) kod Vistar pacova
A. subjekti
Korišćeni su nelečeni mužjaci Vistar pacova (Charles River, Sulcfeld, Nemačka). Pacovi su bili smešteni po četiri u standardnom plastičnom kavezu i držani u prostoriji sa konstantnim uslovima okoline (22±1 °C, relativna vlažnost 60%, ciklus svetlosti/mraka od 12:12, sa uključivanjem svetla u 7.00 časova). Životinje su dobijene od uzgajivača 2 nedelje pre početka bihevioralnih procedura. Tokom tog perioda, subjekti su bili mereni i nekoliko puta je njima rukovano.
Pacovi su takođe naviknuti na oralno uzimanje testiranih jedinjenja u obliku hidrohloridne soli kljukanjem dozirane destilovane vode (1 do 2 ml). Voda sa česme i standardna laboratorijska hrana (Labofeed H, WPIK, Kcinja, Poljska) bila je dostupna ad libitum.
Tretman pacova u predmetnoj studiji bio je u potpunosti u skladu s etičkim standardima utvrđenim u odgovarajućim poljskim i evropskim propisima (Uredba br.2010/63/EU) Sve procedure su pregledane i odobrene od strane etičkog komiteta.
B. Trzaji glave koje izaziva DOI
Svi testovi su obavljani u eksperimentalnoj prostoriji između 10.00 i 16.00. Trzaji glave koje je izazvao DOI su računati na način koji su opisali Millan i drugi (2000). Pacovima je ubrizgana doza DOI (2,5 mg/kg, i.p.) i stavljeni su u staklene kaveze za posmatranje (25x25x40 cm, ŠxVxD) sa podlogom od piljevine. Pet minuta kasnije, trzaje glave je brojao 5 min. (300 s) obučeni posmatrač. Testirana jedinjenja u obliku hidrohloridne soli su davana oralno 180 min. pre početka perioda posmatranja različitim grupama nelečenih subjekata.
C. Lekovi
DOI je otopljen u sterilnom fiziološkom rastvoru (Baxter, Varšava, Poljska) i dat intraperitonealnom injekcijom u zapremini od 1,0 ml/kg. Testirana jedinjenja u obliku hidrohloridne soli otopljena su u 0,5% Tween rastvoru i data oralno u zapremini od 2,0 ml/kg. Svi rastvori su pripremljeni neposredno pre korišćenja i zaštićeni od svetlosti.
D. Analiza podataka
Ukupni brojevi trzaja glave (n/5 min) su analizirani uz pomoć Kruskal-Valisove analize varijanse (ANOVA). Mann-Whitney U test je korišćen za individualna post hoc poređenja (Tabela 1). P vrednosti niže od 0,05 se smatraju značajnim. Softverski paket Statistica 12.0 za Windows (StatSoft, Tulsa, OK, SAD) je korišćen za analizu svih podataka.
Rezultati
Oba testirana jedinjenja, trzaji glave izazvani DOI smanjeni u zavisnosti od doze (2,5 mg/kg) uz minimalnu efektivnu dozu (MED) od 3,0 mg/kg za Jedinjenje 1 i 1,0 mg/kg za Jedinjenje 17.
Biološki primer 4. Dejstva Jedinjenja 1 i 17 na deficite u učenju i pamćenju izazvane skopolaminom u testu pasivnog izbegavanja na Vistar pacovima
A. subjekti
Korišćeni su nelečeni mužjaci Vistar pacova (Charles River, Sulcfeld, Nemačka). Pacovi su bili smešteni po četiri u standardnom plastičnom kavezu i držani u prostoriji sa konstantnim uslovima okoline (22±1 °C, relativna vlažnost 60%, ciklus svetlosti/mraka od 12:12, sa uključivanjem svetla u 7.00 časova).
Životinje su dobijene od uzgajivača 2-3 nedelje pre početka bihevioralnih procedura. Tokom tog perioda, subjekti su bili mereni i nekoliko puta je njima rukovano. Pacovi su takođe naviknuti na oralno uzimanje testiranih jedinjenja u obliku hidrohloridne soli kljukanjem dozirane destilovane vode (1 do 2 ml). Voda sa česme i standardna laboratorijska hrana (Labofeed H, WPIK, Kcinja, Poljska) bila je dostupna ad libitum.
Tretman pacova u predmetnoj studiji bio je u potpunosti u skladu s etičkim standardima utvrđenim u odgovarajućim poljskim i evropskim propisima (Uredba br.2010/63/EU) Sve procedure su pregledane i odobrene od strane lokalnog etičkog komiteta.
B. Postepeni test pasivnog izbegavanja
Dejstva testiranih jedinjenja na funkciju učenja i pamćenja ocenjeni su postepenim testovima pasivnog izbegavanja (Ishiyama et al., 2007). Aparat za pasivno izbegavanje (PACS-30, Columbus Instruments, Columbus, OH, SAD) sastojao se od četiri identična kaveza od nerđajućeg čelika sa crnim poklopcima od pleksiglasa. Svaki kavez sastojao se od osvetljenog i tamnog dela (23×23×23 cm) i od rešetkastog poda od nerđajućeg čelika. Dva dela su bila odvojena automatskim kliznim vratima (PACS-30, Columbus).
Tokom sesija obuke (usvajanja) životinje su bile pojedinačno postavljene u osvetljeno odeljenje i bilo im je dozvoljeno da slobodno istražuju 10 s. Klizna vrata su tada otvorena, a postepena latencija za životinje da uđu u tamni odeljak je bila merena s vremenom preseka od 300 s. Čim su životinje ušle u tamni deo, vrata su bila zatvorena. Jedan nezaobilazna strujni udar u stopalo (0,5 mA u 3 s) je dat 3 s kasnije kroz rešetkasti pod agregatom konstantnog strujnog udara (Columbus). Skopolamin (0,3 mg/kg) je bio dat intraperitonealnom injekcijom. 30 min. pre sesije obuke. Testirana jedinjenja u obliku soli hidrohlorida ili njihovog medijuma, bila su data oralno 180 minuta pre početka sesije obuke.
Sesija (ekspresija) je obavljena 24 sata nakon obuke primenom iste paradigme, ali bez strujnog udara u stopalo ili injektiranja leka. Postepene latencije za ulazak životinja u tamni odeljak izmerene su sa vremenom preseka od 300 s. Promene u postepenim latencijama izazvane jedinjenjima za ulazak u tamni odeljak tokom sesije testa tretirane su kao mera svojstava promnezije ili amnezije (Ishiyama et al., 2007).
C. Lekovi
Skopolamin (koji je obezbedila kompanija) je otopljen u sterilnom fiziološkom rastvoru (0,9% NaCl; Baxter, Varšava, Poljska) i intraperitonealnom injekcijom u zapremini od 2,0 ml/kg. Testirana jedinjenja u obliku hidrohloridne soli otopljena su u 0,5% Tween rastvoru i data oralno u zapremini od 2,0 ml/kg. Svi rastvori su pripremljeni neposredno pre korišćenja i zaštićeni od svetlosti.
D. prezentacija i analiza podataka
Telesna težina (g) i latencije za obuku/test (s) analizirane su uz pomoć jednosmerne analize varijansi (ANOVA). Kako podaci o pasivnom izbegavanju obično nisu distribuirani, postepene latencije su analizirane i uz pomoć Kruskal-Wallis ANOVA i Mann-Whitney U testa. P vrednosti niže od 0,05 se smatraju značajnim. Softverski paket Statistica 12.0 za Windows (StatSoft, Tulsa, OK, SAD) je korišćen za analizu svih podataka.
Rezultati
Oba testirana jedinjenja, data u kombinaciji sa skopolaminom (0.3 mg/kg), značajno su produžila postepene latencije za ulazak u tamni odeljak u sesijama testa. Minimalna efektivna doza (MED) bila je 3,0 mg/kg za Jedinjenje 1 i 1,0 mg/kg za Jedinjenje 17.
Reference
Amano, N., Inuzuka, S., Ogihara, T., 2009. Behavioral and psychological symptoms of dementia and medical treatment. Psychogeriatr. Off. J. Jpn.
Psychogeriatr. Soc.9, 45-49. https://doi.org/10.1111/j.1479-8301.2009.00284.x
Ballard, C., Waite, J., 2006. The effectiveness of atypical antipsychotics for the treatment of aggression and psychosis in Alzheimer's disease. Cochrane Database Syst. Rev. CD003476. https://doi.org/10.1002/14651858.CD003476.pub2
Carson, S., McDonagh, M.S., Peterson, K., 2006. A systematic review of the efficacy and safety of atypical antipsychotics in patients with psychological
1
and behavioral symptoms of dementia. J. Am. Geriatr. Soc.54, 354-361. https://doi.org/10.1111/j.1532-5415.2005.00566.x
De Deyn, P., Jeste, D.V., Swanink, R., Kostic, D., Breder, C., Carson, W.H., Iwamoto, T., 2005. Aripiprazole for the treatment of psychosis in patients with Alzheimer's disease: a randomized, placebo-controlled study. J. Clin.
Psychopharmacol. 25, 463-467.
Fasano, A., Plotnik, M., Bove, F., Berardelli, A., 2012. The neurobiology of falls. Neurol. Sci. Off. J. Ital. Neurol. Soc. Ital. Soc. Clin. Neurophysiol.33, 1215-1223. https://doi.org/10.1007/s10072-012-1126-6
Ferri, C.P., Prince, M., Brayne, C., Brodaty, H., Fratiglioni, L., Ganguli, M., Hall, K., Hasegawa, K., Hendrie, H., Huang, Y., Jorm, A., Mathers, C., Menezes, P.R., Rimmer, E., Scazufca, M., Alzheimer's Disease International, 2005. Global prevalence of dementia: a Delphi consensus study. Lancet Lond. Engl. 366, 2112-2117. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(05)67889-0
Fija , K., Popik, P., Nikiforuk, A., 2014. Co-administration of 5-HT6 receptor antagonists with clozapine, risperidone, and a 5-HT2A receptor antagonist: effects on prepulse inhibition in rats. Psychopharmacology (Berl.) 231, 269-281. https://doi.org/10.1007/s00213-013-3234-2
Gauthier, S., Cummings, J., Ballard, C., Brodaty, H., Grossberg, G., Robert, P., Lyketsos, C., 2010. Management of behavioral problems in Alzheimer's disease. Int. Psychogeriatr. 22, 346-372. https://doi.org/10.1017/S1041610209991505
Hersch, E.C., Falzgraf, S., 2007. Management of the behavioral and psychological symptoms of dementia. Clin. Interv. Aging 2, 611-621.
Holmes, C., Arranz, M.J., Powell, J.F., Collier, D.A., Lovestone, S., 1998. 5-HT2A and 5-HT2C receptor polymorphisms and psychopathology in late onset Alzheimer's disease. Hum. Mol. Genet.7, 1507-1509.
Home | Cochrane Library [WWW Document], n.d. URL http://www.cochranelibrary.com/ (accessed 2.7.18).
2
Jeste, D.V., Blazer, D., Casey, D., Meeks, T., Salzman, C., Schneider, L., Tariot, P., Yaffe, K., 2008. ACNP White Paper: update on use of antipsychotic drugs in elderly persons with dementia. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 33, 957-970. https://doi.org/10.1038/sj.npp.1301492
Jeste, D.V., Finkel, S.I., 2000. Psychosis of Alzheimer's disease and related dementias. Diagnostic criteria for a distinct syndrome. Am. J. Geriatr.
Psychiatry Off. J. Am. Assoc. Geriatr. Psychiatry 8, 29-34.
Jones, C.A., Watson, D.J.G., Fone, K.C.F., 2011. Animal models of schizophrenia. Br. J. Pharmacol.164, 1162-1194. https://doi.org/10.1111/j.1476-5381.2011.01386.x
Liperoti, R., Pedone, C., Corsonello, A., 2008. Antipsychotics for the treatment of behavioral and psychological symptoms of dementia (BPSD). Curr. Neuropharmacol. 6, 117-124. https://doi.org/10.2174/157015908784533860
Liu, K.G., Robichaud, A.J., 2009.5-HT6 antagonists as potential treatment for cognitive dysfunction. Drug Dev. Res.70, 145-168. https://doi.org/10.1002/ddr.20293
Lorke, D.E., Lu, G., Cho, E., Yew, D.T., 2006. Serotonin 5-HT2A and 5-HT6 receptors in the prefrontal cortex of Alzheimer and normal aging patients. BMC Neurosci.7, 36. https://doi.org/10.1186/1471-2202-7-36
Maehara, S., Hikichi, H., Satow, A., Okuda, S., Ohta, H., 2008. Antipsychotic property of a muscarinic receptor agonist in animal models for schizophrenia. Pharmacol. Biochem. Behav.91, 140-149. https://doi.org/10.1016/j.pbb.2008.06.023
Marcos, B., Garcia-Alloza, M., Gil-Bea, F.J., Chuang, T.T., Francis, P.T., Chen, C.P., Tsang, S.W.T.Y., Lai, M.K.P., Ramirez, M.J., 2008. Involvement of an altered 5-HT -{6} receptor function in behavioral symptoms of Alzheimer's disease. J. Alzheimers Dis. JAD 14, 43-50.
Marsh, A., 1979. Visual hallucinations during hallucinogenic experience and schizophrenia. Schizophr. Bull.5, 627-630.
Murray, P.S., Kirkwood, C.M., Gray, M.C., Fish, K.N., Ikonomovic, M.D., Hamilton, R.L., Kofler, J.K., Klunk, W.E., Lopez, O.L., Sweet, R.A., 2014.
Hyperphosphorylated tau is elevated in Alzheimer's disease with psychosis. J. Alzheimers Dis. JAD 39, 759-773. https://doi.org/10.3233/JAD-131166
Nichols, D.E., 2004. Hallucinogens. Pharmacol. Ther.101, 131-181. https://doi.org/10.1016/j.pharmthera.2003.11.002
Nobili, A., Pasina, L., Trevisan, S., Riva, E., Lucca, U., Tettamanti, M., Matucci, M., Tarantola, M., 2009. Use and misuse of antipsychotic drugs in patients with dementia in Alzheimer special care units. Int. Clin. Psychopharmacol.
24, 97-104.
Riemer, C., Borroni, E., Levet-Trafit, B., Martin, J.R., Poli, S., Porter, R.H.P., Bös, M., 2003. Influence of the 5-HT6 receptor on acetylcholine release in the cortex: pharmacological characterization of 4-(2-bromo-6-pyrrolidin-1-ylpyridine-4-sulfonyl)phenylamine, a potent and selective 5-HT6 receptor antagonist. J. Med. Chem.46, 1273-1276. https://doi.org/10.1021/jm021085c
Schneider, L.S., Tariot, P.N., Dagerman, K.S., Davis, S.M., Hsiao, J.K., Ismail, M.S., Lebowitz, B.D., Lyketsos, C.G., Ryan, J.M., Stroup, T.S., Sultzer, D.L., Weintraub, D., Lieberman, J.A., CATIE-AD Study Group, 2006. Effectiveness of atypical antipsychotic drugs in patients with Alzheimer's disease. N. Engl. J. Med. 355, 1525-1538. https://doi.org/10.1056/NEJMoa061240
Schulze, J., Glaeske, G., van den Bussche, H., Kaduszkiewicz, H., Koller, D., Wiese, B., Hoffmann, F., 2013a. Prescribing of antipsychotic drugs in patients with dementia: a comparison with age-matched and sex-matched nondemented controls. Pharmacoepidemiol. Drug Saf.22, 1308-1316. https://doi.org/10.1002/pds.3527
Schulze, J., van den Bussche, H., Glaeske, G., Kaduszkiewicz, H., Wiese, B., Hoffmann, F., 2013b. Impact of safety warnings on antipsychotic prescriptions in dementia: nothing has changed but the years and the substances. Eur. Neuropsychopharmacol. J. Eur. Coll. Neuropsychopharmacol.23, 1034-1042. https://doi.org/10.1016/j.euroneuro.2013.02.001
4
Siegel, R.K., 1978. Phencyclidine and ketamine intoxication: a study of four populations of recreational users. NIDA Res. Monogr.119-147.
Sink, K.M., Holden, K.F., Yaffe, K., 2005. Pharmacological treatment of neuropsychiatric symptoms of dementia: a review of the evidence. JAMA 293, 596-608. https://doi.org/10.1001/jama.293.5.596
Sukonick, D.L., Pollock, B.G., Sweet, R.A., Mulsant, B.H., Rosen, J., Klunk, W.E., Kastango, K.B., DeKosky, S.T., Ferrell, R.E., 2001. The 5-HTTPR*S/*L polymorphism and aggressive behavior in Alzheimer disease. Arch. Neurol. 58, 1425-1428.
Varty, G.B., Bakshi, V.P., Geyer, M.A., 1999. M100907, a serotonin 5-HT2A receptor antagonist and putative antipsychotic, blocks dizocilpine-induced prepulse inhibition deficits in Sprague-Dawley and Wistar rats.
Neuropsychopharmacol. Off. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 20, 311-321. https://doi.org/10.1016/S0893-133X(98)00072-4
Vigen, C.L.P., Mack, W.J., Keefe, R.S.E., Sano, M., Sultzer, D.L., Stroup, T.S., Dagerman, K.S., Hsiao, J.K., Lebowitz, B.D., Lyketsos, C.G., Tariot, P.N., Zheng, L., Schneider, L.S., 2011. Cognitive effects of atypical antipsychotic medications in patients with Alzheimer's disease: outcomes from CATIE-AD. Am. J. Psychiatry 168, 831-839. https://doi.org/10.1176/appi.ajp.2011.08121844
Weso owska, A., 2010. Potential role of the 5-HT6 receptor in depression and anxiety: an overview of preclinical data. Pharmacol. Rep. PR 62, 564-577.
Weso owska, A., Nikiforuk, A., 2007. Effects of the brain-penetrant and selective 5-HT6 receptor antagonist SB-399885 in animal models of anxiety and depression. Neuropharmacology 52, 1274-1283. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2007.01.007
Woolley, M.L., Marsden, C.A., Fone, K.C.F., 2004.5-ht6 receptors. Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord.3, 59-79.

Claims (15)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje opšte formule
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je: G je CH ili N; R<1>je H, C1-C4-alkil, HO-C1-C4-alkil ili C1-C4-alkil-O-C1-C4-alkil; R<2>se bira iz grupe koja se sastoji od sledećeg: - fenilna grupa nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom, i - heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom, pri čemu je supstituent izabran iz F, Cl, Br, C1-C4-alkil-, ili C1-C4-alkil-O-.
  2. 2. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu G je CH.
  3. 3. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu G je N.
  4. 4. Jedinjenje bilo kog patentnog zahteva od 1 do 3, kod kog je R<1>H, metil ili 2-hidroksietil.
  5. 5. Jedinjenje bilo kog zahteva od 1 do 4, kod kog je R<2>fenilna grupa, nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim substituentom.
  6. 6. Jedinjenje bilo kog zahteva od 1 do 4, kod kog je R<2>heteroarilna grupa od 5 ili 6 članova nezamenjena ili zamenjena najmanje jednim supstituentom, kod kog je heteroaril od 5 ili 6 članova poželjno izabran iz furila, tienila, tiazolila ili piridila.
  7. 7. Jedinjenje bilo kog od zahteva od 5 do 6, kod kog je substituent izabran iz F, Cl, metil ili metoksi.
  8. 8. Jedinjenje bilo kog od zahteva od 1 do 7 kod kog je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od: 1-benzil-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 2-{4-[1-benzil-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]piperazin-1-il}etanol, 1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 1-[(5-metilfuran-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol, 1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-(3-hlor-4-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-(3,5-dihlorbenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol, 1-benzil-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3,4-dihlorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(4-hloro-3-fluorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(piperazin-1-il)-1-(1,3-tiazol-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(4-hloro-3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(furan-2-ilmetil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-metoksibenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-fluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-hlorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(furan-2-ilmetil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3,4-difluorbenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-metoksibenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-fluorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3,4-difluorobenzil)-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-benzil-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-(3-hlorobenzil)-4-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-[(5-metilfuran-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 1-[(5-metiltiofen-2-il)metil]-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-2-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(piperazin-1-il)-1-(tiofen-3-ilmetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-3-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol, 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-(tiopfen-2-imetil)-2-(trifluorometil)-1H-indol i 4-(4-metilpiperazin-1-il)-1-[(5-metil-1,3-tiazol-2-il)metil]-2-(trifluorometil)-1H-indol.
  9. 9. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  10. 10. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  12. 12. Jedinjenje patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  13. 13. Jedinjenje bilo kog od zahteva od 1 do 12 za upotrebu kao lek.
  14. 14. Farmaceutski sastav koji se sastoji od jedinjenja iz bilo kog zahteva od 1 do 12 i najmanje jednog farmaceutskih prihvatljivog ekscipijensa.
  15. 15. Jedinjenje bilo kog od zahteva od 1 do 12 za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti, Parkinsonove bolesti, Levijeve demencije, psihoze povezane sa demencijom, šizofrenije, sindroma deluzija i drugih psihotičnih bolesti povezanih sa uzimanjem psihoaktivnih supstanci, depresije, anksioznih poremećaja različitih etiologija, poremećaja sna različitih etiologija. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20230676A 2018-02-21 2019-02-20 Derivati indola i benzimidazola kao dvostruki antagonisti 5-ht2a i 5-ht6 receptora RS64459B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18461519.3A EP3530651A1 (en) 2018-02-21 2018-02-21 Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists
PCT/EP2019/054171 WO2019162306A1 (en) 2018-02-21 2019-02-20 Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists
EP19706271.4A EP3755688B1 (en) 2018-02-21 2019-02-20 Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64459B1 true RS64459B1 (sr) 2023-09-29

Family

ID=61256878

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230676A RS64459B1 (sr) 2018-02-21 2019-02-20 Derivati indola i benzimidazola kao dvostruki antagonisti 5-ht2a i 5-ht6 receptora

Country Status (25)

Country Link
US (3) US11034688B2 (sr)
EP (2) EP3530651A1 (sr)
JP (1) JP7200258B2 (sr)
KR (1) KR102688938B1 (sr)
CN (1) CN112041300B (sr)
AU (1) AU2019223036B2 (sr)
BR (1) BR112020016972B1 (sr)
CA (1) CA3088827A1 (sr)
DK (1) DK3755688T3 (sr)
EA (1) EA202091737A1 (sr)
ES (1) ES2953815T3 (sr)
FI (1) FI3755688T3 (sr)
HR (1) HRP20230793T1 (sr)
HU (1) HUE063564T2 (sr)
IL (1) IL276762B2 (sr)
LT (1) LT3755688T (sr)
MX (1) MX2020008745A (sr)
PL (1) PL3755688T3 (sr)
PT (1) PT3755688T (sr)
RS (1) RS64459B1 (sr)
SG (1) SG11202007091XA (sr)
SI (1) SI3755688T1 (sr)
UA (1) UA126252C2 (sr)
WO (1) WO2019162306A1 (sr)
ZA (1) ZA202005747B (sr)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3530651A1 (en) 2018-02-21 2019-08-28 Adamed sp. z o.o. Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists
CN115850204B (zh) * 2022-11-26 2024-01-19 烟台大学 四氢苯并噻吩衍生物及其制备方法和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0613430A2 (pt) * 2005-07-13 2011-01-11 Hoffmann La Roche compostos derivados de benzimidazol, uso dos mesmos, método para a preparação destes e composição farmacêutica
CA2668959A1 (en) * 2006-11-09 2008-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Indole and benzofuran 2-carboxamide derivatives
US20100041669A1 (en) * 2007-01-08 2010-02-18 Venkata Satya Nirogi Ramakrishna 4-(heterocyclyl)alkyl-n-(arylsulfonyl)indole compounds and their use as 5-ht6 ligands
UA100192C2 (en) * 2008-11-11 2012-11-26 УАЙТ ЭлЭлСи 1-(arylsulfonyl)-4-(piperazin-1-yl)-1h-benzimidazoles as 5-hydroxytryptamine-6 ligands
PL395469A1 (pl) * 2011-06-29 2013-01-07 Adamed Spólka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia Pochodne indoloamin do leczenia chorób osrodkowego ukladu nerwowego
RU2014153672A (ru) * 2012-06-22 2016-08-10 Мап Фармасьютикалс, Инк. Новые каберголиновые производные
EP3530651A1 (en) * 2018-02-21 2019-08-28 Adamed sp. z o.o. Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
CA3088827A1 (en) 2019-08-29
US11981668B2 (en) 2024-05-14
PT3755688T (pt) 2023-08-28
IL276762B1 (en) 2023-12-01
BR112020016972B1 (pt) 2023-04-18
AU2019223036A1 (en) 2020-08-06
LT3755688T (lt) 2023-08-10
MX2020008745A (es) 2020-09-28
CN112041300B (zh) 2023-07-28
SG11202007091XA (en) 2020-09-29
KR20200123416A (ko) 2020-10-29
WO2019162306A1 (en) 2019-08-29
JP7200258B2 (ja) 2023-01-06
HUE063564T2 (hu) 2024-01-28
IL276762A (en) 2020-10-29
US20240287056A1 (en) 2024-08-29
FI3755688T3 (fi) 2023-08-02
UA126252C2 (uk) 2022-09-07
EP3530651A1 (en) 2019-08-28
KR102688938B1 (ko) 2024-07-29
PL3755688T3 (pl) 2023-09-04
JP2021514372A (ja) 2021-06-10
US20210276995A1 (en) 2021-09-09
EA202091737A1 (ru) 2020-10-12
CN112041300A (zh) 2020-12-04
BR112020016972A2 (pt) 2020-12-15
SI3755688T1 (sl) 2023-10-30
US11034688B2 (en) 2021-06-15
AU2019223036B2 (en) 2023-09-21
IL276762B2 (en) 2024-04-01
DK3755688T3 (da) 2023-07-31
ES2953815T3 (es) 2023-11-16
ZA202005747B (en) 2021-09-29
US12319682B2 (en) 2025-06-03
US20200377496A1 (en) 2020-12-03
EP3755688A1 (en) 2020-12-30
EP3755688B1 (en) 2023-06-14
HRP20230793T1 (hr) 2023-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20220156535A (ko) 헤테로사이클릭 glp-1 작용제
DK2491045T3 (en) 2-oxo-1-pyrrolidinylimidazothiadiazolderivativer
EA018113B1 (ru) Индолы в качестве модуляторов никотинового рецептора ацетилхолина подтипа альфа-71
US12319682B2 (en) Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-HT2A and 5-HT6 receptor antagonists
WO2001032649A1 (de) Arylalkane, arylalkene und aryl-azaalkane, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
EP1487821A1 (de) Benzodiazepin-substituierte piperdine zur verwendung in der behandlung von cardiovaskulären erkrankungen
AU2016255510A1 (en) 1-heteroaryl-indoline-4-carboxamides as modulators of GPR52 useful for the treatment or prevention of disorders related thereto
JP7617134B2 (ja) Ｇｐｒ５２アゴニスト活性を有する置換３－フェノキシアゼチジン－１－イル－ピラジン
KR20230026418A (ko) 아릴설포닐 유도체 및 무스카린성 아세틸콜린 수용체 m5 억제제로서의 이의 용도
CN115477626B (zh) N-取代苯基磺酰胺类化合物及其用途
HRP20000297A2 (en) 5-ht1f agonists
JP5137816B2 (ja) カンナビノイド受容体アンタゴニストとしてのベンゾトリアゾール誘導体
WO2004041809A2 (en) Substituted imidazolylmethyl pyridine and pyrazine derivatives and their use as gabaa receptor ligands
HK40033115A (en) Indole and benzimidazole derivatives as dual 5-ht2a and 5-ht6 receptor antagonists
HK40033115B (zh) 作为双重5-ht2a和5-ht6受体拮抗剂的吲哚和苯并咪唑衍生物
EA040709B1 (ru) Производные индола и бензимидазола в качестве двойных антагонистов рецепторов 5-ht2a и 5-ht6
CA2567483A1 (en) Pyrazinylmethyl lactam derivatives
WO2023150526A1 (en) Competitive and noncompetitive octahydrocyclopenta[c]pyrrole inhibitors of the muscarinic acetylcholine receptor m5
WO2023150525A1 (en) Competitive and noncompetitive piperidine sulfonyl inhibitors of the muscarinic acetylcholine receptor m5
CN101103019A (zh) 2-（环状氨基羰基）二氢吲哚衍生物及含有其的药物组合物