RS64524B1 - Na triazaciklododekansulfonamidu ("tcd") zasnovani inhibitori izlučivanja proteina - Google Patents

Description

Opis

STANJE TEHNIKE

Oblast pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na triazaciklododekansulfonamidu ("TCD") zasnovanim inhibitorima izlučivanja proteina,

Materijal je dostavljen elektronski

[0002] Ova prijava sadrži, kao odvojen deo opisa, spisak sekvenci u obliku čitljivom na računaru (naziv datoteke 40056_Seqlisting.txt; 20,275 bajta; izrađen 14. februara 2019).

Opis srodne tehnologije

[0003] Translokacija (prenos) proteina u endoplazmnoj membrani ("ER") čini prvi korak izlučivanja proteina. Uvoz ER proteina je ključan za sve eukariotske ćelije i posebno je važan u ćelijama tumora koje brzo rastu. Dakle, postupak izlučivanja proteina može da služi kao cilj i za potencijalne lekove protiv kancera i za bakterijski virulentne faktore. Videti Kalies i Römisch, Traffic, 16(10):1027-1038 (2015).

[0004] Transport proteina do endoplazmne membrane (ER) se pokreće u citozolu kada hidrofobni signalni peptidi na N završetku štrče iz ribozoma. Vezivanje čestice prepoznavanja signala ("SRP") na signalnu sekvencu dozvoljava rizobozomu prirodnog lanca SRP kompleksa na membranu endoplazmne membrane (ER membrane) pri čemu SRP kompleksa sa njegovim receptorom aktivira uručivanje signalnog peptida na Sec61. Sec61 je translokator (aka translokon)proteina endoplazmne membrane (ER membrane) koji je u obliku krofne sa 3 glavne podjedinice (heterotrimerno). To uključuje "utikač", koji blokira transport u ili izvan endoplazmne membrane (ER). Utikač se izmešta kada je hidrofobni region prirodnog polipeptida u interakciji sa "šavnim" regionom Sec61, omogućava translokaciju polipeptida u lumenu endoplazmne membrane (ER). Kod sisara, samo kratki proteini (<160 aminokiseline) mogu da uđu u endoplazmnu membranu (ER) posttranslaciono, i proteini manji od 120 aminokisleina su prinuđeni da koriste ovu putanju. Neki deo kompetentnosti translokacije se održava vezivanjem kalmodulina na signalnu sekvencu. Posle dolaska na Sec61 kanal, signalni peptid ili signalno sidro se umeće između transmembranskih domena ("TMD") 2 i 7 od Sec61α, koji čine bočni deo prolaza, što omogućava kanalu da se otvori za rastvorljive proteine lučenja. Kako se Sec61 kanal sastoji od 10 TMD (Sec61α) okružene hidrofobnom stegom formiranom pomoću Sec61γ, otvora kanala zavisi od konformacionih promena koje uključuju praktično sve TMD.

[0005] Inhibicija transporta proteina preko ER membrane ima potencijal za lečenje ili sprečavanje oboljenja, kao što je rast ćelija kancera i upale. Poznati inhibitori izlučivanja, koji se kreću u opsegu od širokog spektra do visokog supstratno specifičnog, mogu da ometaju bukvalno svaki stadijum ovog višestepenog postupka, i čak sa transportom endocitoznih antigena u citozol za unakrsno prezentovanje. Ovi inhibitori u interakciji sa signalnim peptidom, pratiocima, ili Sec61 kanalom za blokiranje izgradnje supstrata ili da se spreče konformacione promene potrebne za uvoz proteina u endoplazmnu membranu (ER). Primeri inhibitora izlučivanja proteina uključuju, inhibitor kalmodulina (npr., E6 Berbamin i Ophiobolin A), Lanthanum, steroli, ciklodepsipeptidi (npr., HUN-7293, CAM741, NFI028, Kotrainsin, Apratoksin A, Dekatransin, Valinomicin), CADA, Mikolakton, Eeyarestatin I ("ESI"), i Eksotoksin A. Međutim, gornji inhibitori izlučivanja imaju kao nedostatak iz jednog ili više od sledećeg: nedostatak selektivnosti za Sec61 kanal, zahtevna proizvodnja usled složenosti strukture, i molekularnom težinom otežana isporuka pacijentu, biodostupnosti i raspodele.

[0006] Dakle, postoji potreba za novim malim inhibitorima molekula izlučivanja proteina.

[0007] Rina Čaula i saradnici (REENA CHAWLA ET AL): "Tuning Side Arm Electronics in Unsymmetrical Cyclotriazadisulfonamide (CADA) Endoplasmic Reticulum (ER) Translocation inhibitors to Improve their Human Cluster of Differentiation 4 (CD4) Receptor Down-Modulating Potencies ((Podešavanje bočnog kraka elektronike inhibitora translokacije za nesimetrični ciklotriazadisulfonamid (CADA) endoplazmne membrane (ER) da bi se poboljšale njihove potencije grupisanja smanjene modulacije receptora diferencijacije 4 (CD4) kod ljudi)", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 59, no. 6, 14 March 2016 (2016-03-14), pages 2633-2647), opisuje nesimetrične analoge ciklotriazadisulfonamida koji nosi grupu benzil repa ili rep cikloheksilmetila i procenjuje njihovu sposobnost da smanjeno moduliše CD4.

[0008] WO 02/080856 A2 otkriva izvesna jedinjenja makrociklične triaze koji smanjeno modulišu CD4 eksprimovanje za upotrebu za lečenje autoimunih bolesti i upalnih bolesti ili stanja.

[0009] WO 96/25167 A1 opisuje postupak inhibicije virusa u kom se virus dovodi u kontakt sa antivirusnom količinom jedinjenja sintetičkog triamina.

[0010] Viktor Van Pujenbrok i saradnici (VICTOR VAN PUYENBROECK ET AL) ("A Proteomic Survey Indicates Sortilin as a Secondary Substrate of the ER Translocation inhibitor Cyclotriazadisulfonamide (CADA) (Pregledanje proteoma ukazuje na sortilin kao sekundarni supstrat iz ciklotriazadisulfonamidnog inhibitora translokacije endoplazmne membrane (ER)", MOLECULAR & CELLULAR PROTEOMICS, vol. 16, no. 2, 20 December 2016 (2016-12-20), pages 157-167), analizira proteom iz CADA tretiranim SUP-T1 humanim CD4+ T limfocitima i zaključuje da mali signalni lek vezivanja peptida može da smanjeno moduliše eksprimovanje humanog CD4 i sortilina, očigledno sa malim uticajem na ćelijski proteom.

[0011] Natalija Černičenko i saradnici (NATALIYA CHERNICHENKO ET AL): ("Synthesis of Dansyl-Substituted Cryptands Containing Triaza-cycloa kane Moieties and their Evaluation as Fluorescent Chemosensors (Sinteza danzilom supstituisanih kriptanda koji sadrže delove triaza-cikloalkana i njihova evaluacija kao fluorescentnih hemosenzora)", SYNLETT, vol.28, no.20, 21 September 2017 (2017-09-21), pages 2800-2806), opisuje postupak za sintezu nove familije kriptanda koji sadrže delove 1,4,7- triazaciklononana i 1,5,9-triazaciklododekana i grupe danzil fluorofora i procenjuje sintetisane makrobicikle kao moguće hemosenzore za detektovanje katjona metala.

[0012] Violeta G. Demilo, Florijan Guline-Mateo, i saradnici (Violeta G.Demillo, Florian Goulinet-Mateo, et al.): ("Unsymmetrical Cyclotriazadisulfonamide (CADA) Compounds as Human CD4 Receptor Down-Modulating Agents - Journal of Medicinal Chemistry (ACS Publications) (Jedinjenja nesimetričnog ciklotriazadisulfonamida (CADA) kao agensi smanjene modulacije humanog CD4 receptora)", vol.54,16, 29 July 2011 (2011-07-29), 29 July 2011 (2011-07-29), pages 5712-5721), opisuje sintezu 13 nesimetričnih CADA jedinjenja i jedan nesimetrični analog, procenjuje njihovu jačinu za smanjenu modulaciju CD4, i analizira odnose struktura-aktivnost.

KRATAK OPIS

[0013] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz formule (I), stereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

pri čemu: svaki od R<a>i R<b>je nezavisno H ili C1-3alkil; R<1>je H, OH, C1-3alkil, OC1-3alkil, =CH2, ili =NOR<5>; ili R<1>je C3-6cikloalkil ili C3-6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji je spojen, svaki od R<1a>i R<1b>je nezavisno H ili C1-3 alkil; R<2>je C3-9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil, i nije morfolinil; R<3>obuhvata C3-

8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, C3-7heterocikloalkil, C6-10aril, ili C2-6heteroaril; R<4>je C6-

10aril, ili C2-6heteroaril; svaki R<5>nezavisno je H, C1-3alkil, ili C0-2alkilen-C6-10aril; X je C1-3alkilen; Y je SO ili SO2; svaki heterocikloalkil, heterocikloalkenil, i heteroaril grupu nezavisno ima 1, 2, ili 3 prstena heteroatoma izabrana iz N, O, i S.

[0014] U nekim izvođenjima, svaki Y je SO. U nekim izvođenjima, svako Y je SO2.

[0015] U različitim slučajevima, R<a>je H. U nekim slučajevima, R<a>je C1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<a>je CH3. U nekim izvođenjima, R<b>je H. U različitim izvođenjima, R<b>je C1-3alkil. U različitim slučajevima, R<b>je CH3. U različitim, svaki od R<a>i R<b>je H.

[0016] U nekim slučajevima, R<1>je H, OH, ili =NOR<5>. Svako R<5>nezavisno je H, C1-

3alkil, ili C0-2alkilen-C6-10aril. U nekim slučajevima, R<5>je H ili CH3. U nekim izvođenjima, R<1>je C1-3alkil ili OC1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<1>je CH3 ili OCH3. U nekim slučajevima, R<1>je CH3 i ispoljava S stereohemiju. U različitim izvođenjima, R<1>je C3-6cikloalkil ili C3-6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji je spojena. U nekim slučajevima, R<1>zajedno sa atomom prstena na koji se spaja formira

or = ili

[0017] U nekim slučajevima, R<1>je =CH2.

[0018] U nekim slučajevima, svaka od R<1a>i R<1b>je H. U nekim slučajevima, barem jedna R<1a>i R<1b>je C1-3alkil. U različitim, svaka od R<1a>i R<1b>je CH3.

[0019] R<2>je C3-9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil i nije morfolinil. U različitim izvođenjima, R<2>obuhvata oksetanil, azetidinil, tetrahidrofuranil, pirolidinil, tetrahidropiranil, piranil, piperidinil, piperazinil, azepanil, ili tetrahidropiridinil. U različitim izvođenjima, C3-9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil obuhvata mostovnu ili spiro grupu. U nekim slučajevima, C3-9heterocikloalkil koja obuhvata most ili spiro grupu se bira iz grupe koja obuhvata

i R<6>jeste C1-6 alkil, C3-8cikloalkil, ili C6-10 aril. U nekim slučajevima, R<6>je fenil opciono supstituisan sa jednom do tri grupe nezavisno izabrane iz halo, C1-3alkil, C1-3alkoksi, i CN. U različitim slučajevima, R<2>je izabrano iz grupe koja obuhvata

and = i

U različitim slučajevima, R<2>je izabrano iz grupe koja obuhvata

[0020] X je C1-3alkilen. U nekim slučajevima, X je CH2, CH2CH2, ili CH(CH3). R<3>obuhvata C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, C3-7heterocikloalkil, C6-10aril, ili C2-

6heteroaril. U nekim izvođenjima, R<3>obuhvata ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, ciklopentenil, cikloheksenil, tetrahidropiranil, fenil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tetrazolil, furanil, tiofenil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, piridinil, pirazinil, ili pirimidinil. U različitim izvođenjima,X-R<3>je izabrano iz grupe koja obuhvata

and=i

U nekim izvođenjima, X- R<3>je

U nekim izvođenjima, X- R<3>je

ili

[0021] U nekim slučajevima, R<3>obuhvata C6-10 aril.

[0022] U jednom izvođenju, R<4>je

or = ili

R<4>obuhvata C6-10aril ili C2-9heteroaril, R<4>je opciono supstituisan sa jednom do tri grupe nezavisno izabrane iz halo, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C(O)N(R<N>)2, i N(R<N>)2, i svako R<N>je nezavisno H ili C1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<4>je izabrano iz grupe koja obuhvata

and = i

U različitim izvođenjima, R<4>je

[0023] U nekim izvođenjima, R<a>, R<b>, R<1a>, i R<1b>su svaka H; R<1>je =CH2 ili CH3; R<2>je

or = ili ; R<4>jeste

i svako Y je SO2.

[0024] U nekim izvođenjima, R<1>je u (S) konfiguraciji.

[0025] Takođe su ovde opisana jedinjenja data u Tabeli A, Tabeli B, i neka od jedinjenja data u Tabeli A se daju ovim pronalaskom, kao što je dato u patentnom zahtevu 14, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim izvođenjima, daje se ovde jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata:

and=i

[0026] Ovde je opisana farmaceutska supstanca koja obuhvata ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0027] Ovde je opisan i postupak inhibiranja izlučivanja proteina u ćeliji koji obuhvata dovođenje ćelije sa jedinjenjem ili solju opisanim ovde ili ovde opisanom farmaceutskom supstancom u količinu delotvornoj da suzbije izlučivanje. U nekim slučajevima, dovođenje u kontakt obuhvata isporuku jedinjenja ili supstance subjektu.

[0028] Još je ovde opisan postupak za lečenje upale kod subjekta i obuhvata isporuku subjektu terapijski delotvorne količine jedinjenja ili soli opisane ovde u tekstu ili ovde u tekstu opisane farmaceutske supstance.

[0029] Takođe je opisan postupak za lečenje ili sprečavanje kancera ili predkancernih stanja kod subjekta koji obuhvata isporuku subjektu terapijski delotvorne količine jedinjenja ili ovde opisane soli, ili ovde opisane farmaceutske supstance.

[0030] Još neki aspekti i prednosti će biti očigledni prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti iz pregleda u nastavku datog detaljnog opisa, uzeto u vezi sa slikama. Ovde dat opis uključuje specifična izvođenja sa razumevanjem da je opis ilustrativan, i nije predviđen da ograniči pronalazak na specifična ovde opisana izvođenja.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0031] SL. 1 prikazuje B16F10 podatke o efikasnosti za jedinjenje A87 u poređenju sa anti-PD-1 terapijom. Jedinjenje A87 je ispoljilo nenadmašnu efikasnost pri doziranju na bazi jednom nedeljno doziranje tokom anti-PD-1 terapije na refraktornom modelu u pogledu inhibicije rasta tumora i procenta telesne težine.

[0032] Još neki aspekti i prednosti će biti očigledni prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti pregledom u nastavku datog detaljnog opisa. Pri čemu su jedinjenja i postupci opisani ovde podložni izvođenjima u različitim izvođenjima u različitim oblicima, opis ovde u nastavku uključuje specifična izvođenjima uz razumevanje da je opis ilustrativan, i nije predviđeno da ograniči pronalazak na ovde opisana specifična izvođenja.

DETALJAN OPIS

[0033] Ovde su opisana jedinjenja koja inhibiraju izlučivanje proteina. Ovde opisana jedinjenja je moguće koristiti za lečenje ili sprečavanje bolesti povezanih sa prekomernim izlučivanjem proteina, kao što je upala i kancer, poboljšava kvalitet života za pojedince pogođene bolešću.

[0034] Ovde opisana jedinjenja imaju strukturu iz Formula (I)

pri čemu su supstituenti ovde detaljno opisani dole u tekstu. Jedinjenja iz ovog pronalaska se iznose u patentnim zahtevima.

[0035] Bez ograničavanja na bilo koju specifičnu teoriju, ovde opisana jedinjenja inhibiraju izlučivanje proteina vezivanjem na ili onemogućavanjem komponenata translokona, uključujući ali bez ograničavanja na Sec61, i u nekim slučajevima, ometanje redosledno specifičnih načina interakcije između prirodne signalne sekvence translatiranih proteina sa komponenata translokona uključujući ali bez ograničenja na Sec61. Ovde opisana jedinjenja mogu da se vežu specifično na signalnu sekvencu sa malom ili nikakvom interakcijom sa samim translokonom.

[0036] Ovde opisana jedinjenja mogu pogodno da inhibiraju izlučicanje TNFα sa IC50 u količini od do 5 µM, ili od do 3 µM, ili od do 1 µM. U različitim slučajevima, ovde opisana jedinjenja mogu da inhibiraju izlučivanje IL-2 sa IC50 od do 5 µM, ili od do 3µM, ili od do 1 µM. U nekim slučajevima, ovde opisana jedinjenja mogu da inhibiraju izlučivanje PD-1 sa IC50 od do 5 µM, ili od do 3 µM, ili od do 1 µM.

[0037] Ovde opisana jedinjenja su efikasna za smanjenje rasta tumora i telesne težine. Na primer, jedinjenje A87 je pokazalo nenadmašnu efikasnost za smanjenje rasta tumora sa jednom nedeljno doziranjem na refraktornom modelu u poređenju sa anti-PD-1 terapijom. Videti odeljak Primeri i SL.1.

Hemijske definicije

[0038] Kako je ovde korišćeno, pojam "alkil" se odnosi na pravolinijske lančane i razgranate zasićene grupe ugljovodonika koje sadrže jedan do tri atoma ugljenika, na primer, jedan do dvadeset atoma ugljenika, ili jedan do deset atoma ugljenika. Pojam Cn znači alkil grupu ima ''n'' atoma ugljenika. Na primer, C4 alkil se odnosi na alkil grupu koja ima 4 atoma ugljenika. C1-7alkil se odnosi na alkil grupu koja ima broj atoma ugljenika koji obuhvata ceo opseg (t.j., 1 do 7 atoma ugljenika), kao i podgrupe (npr., 1-6, 2-7, 1-5, 3-6, 1, 2, 3, 4, 5, 6, i 7 atoma ugljenika). Neograničavajući primeri alkil grupa uključuje, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil (2-metilpropil), t-butil (1,1-dimetiletil), 3,3-dimetilpentil, i 2-etilheksil. Osim ako nije drugačije naznačeno, alkil grupa može da bude nesupstituisana alkil grupa ili supstituisana alkil grupa.

[0039] Kako je ovde korišćeno, pojam "alkilen" se odnosi na dvovalentni zasićeni alifatni radikal. Pojam Cn znači alkilen grupu ima ''n'' atomi ugljenika. Na primer, C1-6alkilen se odnosi na alkilen grupu koja ima broj atoma ugljenika koji obuhvata ceo opseg, kao ceo opseg, kao i sve podgrupe, kako je prethodno opisano za "alkil" grupe.

[0040] Kako je ovde korišćeno, pojam "alkenil" je definisan identično kao "alkil" izuzev što sadrži najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, i ima dva do trideset atoma ugljenika, na primer, dva do dvadeset atoma ugljenika, ili dva do deset atoma ugljenika. Pojam Cn označava alkenil grupu koja ima ''n'' atoma ugljenika. Na primer, C4 alkenil se odnosi na alkenil grupu koja ima 4 atoma ugljenika. C2-7alkenil se odnosi na alkenil grupu koja ima izvestan broj atoma ugljenika koji obuhvata ceo opseg (t.j., 2 do 7 atoma ugljenika), kao i sve podgrupe (npr., 2-6, 2-5, 3-6, 2, 3, 4, 5, 6, i 7 atoma ugljenika). Specifično kontemplirane alkenil grupe uključuju etenil, 1-propenil, 2-propenil, i butenil. Osim ako nije drugačije naznačeno, alkenil grupa može da bude nesupstituisana alkenil grupa ili supstituisana alkenil grupa.

[0041] Kako je ovde korišćeno, pojam "cikloalkil" se odnosi nabalifatni ciklični ugljovodonik. Pojam Cn znači cikloalkil grupa ima ''n'' atoma ugljenika. Na primer, C5 cikloalkil se odnosi na alkil grupu koja ima 5 atoma ugljenika u svom prstenu.

C5-8 cikloalkil se odnosi na cikloalkil grupe koje imaju broj atoma ugljenika koji obuhvata ceo opseg (t.j., 5 do 8 atoma ugljenika), kao i sve podgrupe (npr., 5-6, 6-8, 7-8, 5-7, 5, 6, 7, i 8 atoma ugljenika). Neograničavajući primeri cikloalkil grupe uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, i ciklooktil. Osim ako nije drugačije naznačeno, cikloalkil grupa može da bude nesupstituisana cikloalkil grupa ili supstituisana cikloalkil grupa.

[0042] Kako je ovde korišćeno, pojam "cikloalkenil" je definisan slično "cikloalkilu" izuzev za sadržavanje najmanje jedne dvostruke veze ugljenik-ugljenik, ali nije aromatičan. Pojam Cn znači cikloalkenil grupa ima ''n'' atoma ugljenika. Na primer, C5 cikloalkenil se odnosi na cikloalkenil grupu koja ima 5 atoma ugljenika u svom prstenu. C5-8cikloalkenil se odnosi na cikloalkenil grupe koje imaju broj atoma ugljenika koji obuhvata ceo opseg (t.j., 5 do 8 atoma ugljenika), kao i podgrupe (npr., 5-6, 6-8, 7-8, 5-7, 5, 6, 7, i 8 atoma ugljenika). Neograničavajući primeri cikloalkenil grupa uključuju ciklopropenil, ciklobutenil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheptenil, i ciklooktenil. Osim ako nije drugačije naznačeno, cikloalkenil grupa može da bude nesupstituisana cikloalkenil grupa ili supstituisana cikloalkenil grupa.

[0043] Kako je ovde korišćeno, pojam "heterocikloalkil" je definisan slično "cikloalkilu", izuzev što prsten sadrži jedan do tri heteroatoma nezavisno izabran iz kiseonika, azota, ili sumpora. Neograničavajući primeri heterocikloalkil grupa uključuju piperdin, tetrahidrofuran, tetrahidropiran, dihidrofuran, morfolin, oksazepanil, i slično. Cikloalkil i heterocikloalkil grupe mogu biti zasićeni ili delimično nezasićeni sistemi prstena opciono supstituisani sa, na primer, jednom do tri grupe, nezavisno izabran alkil, alkilenOH, C(O)NH2, NH2, okso (=O), aril, haloalkil, halo, i OH. Heterocikloalkil grupe opciono mogu još da budu supstituisane azotom (N-supstituisane) kako je opisano ovde u tekstu.

[0044] Kako je ovde korišćeno, pojam "aril" se odnosi na monociklične ili policiklične (npr., spjene biciklične i fuzionisane trciklične) karbociklične aromatične sisteme prstena. Primeri aril grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na, fenil, naftil, tetrahidronaftil, fenantrenil, bifenilenil, indanil, indenil, antracenil, fluorenil, tetralinil. Osim ako nije drugačije naznačeno, aril grupa može da bude nesupstituisana aril grupa ili supstituisana aril grupa.

[0045] Kako je ovde korišćeno, pojam "heteroaril" se odnosi na monociklične ili policiklični (npr., fuzionisani biciklični i fuzionisani triciklični aromatični sistemi prstena, pri čemu jedan do četiri atoma u prstenu se bira iz kiseonika, azota, ili sumpora, i preostali atomi prstena su ugljenik, pomenuti sistem prstena se pridružuje na ostatak molekula jednim od atoma u prstenu. Neograničavajući primeri heteroarila grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na, piridil, piridazinil, pirazinil, pirimidinil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, tetrazolil, oksazolil, izooksazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, furanil, tienil, hinolinil, izohinolinil, benzoksazolil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiazolil, triazinil, triazolil, purinil, pirazinil, purinil, indolinil, ftalzinil, indazolil, hinolinil, izohinolinil, cinolinil, hinazolinil, naftiridinil, piridopiridinil, indolil, 3H-indolil, pteridinil, i hinooksalinil. Osim ako nije drugačije naznačeno, heteroaril grupa može da bude nesupstituisana heteroaril grupa ili supstituisana heteroaril grupa.

[0046] Kako je ovde korišćeno, pojam "hidroksi" ili "hidroksil" kako je ovde korišćeno se odnosi na "-OH" grupu.

[0047] Kako je ovde korišćeno, pojam "alkoksi" ili "alkoksil" se odnosi na "-O-alkil" grupu.

[0048] Kako je ovde korišćeno, pojam "halo" je definisan kao fluoro, hloro, bromo, i jodo.

[0049] Kako je ovde korišćeno, pojam "karboksi" ili "karboksil" se odnosi na "-COOH" grupu.

[0050] Kako je ovde korišćeno, pojam "amino" se odnosi na -NH2 ili -NH- grupu, pri čemu je moguće bilo koji vodonik zameniti sa alkil, cikloalkil, aril, heteroaril, ili heterocikloalkil grupom.

[0051] Kako je ovde korišćeno, pojam "sulfonil" se odnosi na

grupu.

[0052] "Supstituisana" funkcionalna grupa (npr., supstituisan alkil, alkilenil, cikloalkil, aril, ili heteroaril) je funkcionalna grupa koja ima barem jedan radikal vodonika koji je supstituisan radikalom nevodonika (t.j., supstituent). Primeri radikala nevodonika (ili supstituenata) uključuju, ali se ne ograničavaju na, alkil, cikloalkil, alkenil, cikloalkenil, alkinil, etar, aril, heteroaril, heterocikloalkil, hidroksil, oksi (ili okso), alkoksil, estar, tioestar, acil, karboksil, cijano, nitro, amino, sulfhidril, i halo. Kada supstituisana alkil grupa uključuje više od jednog radikala nevodonika, supstituenti mogu da se vežu na isti ugljenik ili dva ili više različita atoma ugljenika.

Inhibitori izlučivanja proteina

[0053] Jedinjenja iz ovog opisa imaju strukturu iz Formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

pri čemu: svako R<a>i R<b>je nezavisno H ili C1-3alkil; R<1>je H, OH, C1-3alkil, OC1-3alkil, =CH2, ili =NOR<5>; ili R<1>je C3-6cikloalkil ili C3-6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji se spaja, svako R<1a>i R<1b>je nezavisno H ili C1-3 alkil; R<2>je C3-

9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil, i nije morfolinil; R<3>obuhvata C3-8cikloalkil, C3-

8cikloalkenil, C3-7heterocikloalkil, C6-10aril, ili C2-6heteroaril; R<4>je C6-10aril, ili C2-

6heteroaril; svako R<5>nezavisno je H, C1-3alkil, ili C0-2alkilen-C6-10aril; X je C1-3alkilen; Y je SO ili SO2; svaka heterocikloalkil, heterocikloalkenil, i heteroaril grupa nezavisno ima 1, 2, ili 3 prstena heteroatoma izabrana iz N, O, i S.

[0054] U nekim izvođenjima, svako Y je SO. U nekim izvođenjima, svako Y je SO2.

[0055] U različitim slučajevima, R<a>je H. U nekim slučajevima, R<a>je C1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<a>je CH3. U nekim izvođenjima, R<b>je H. U različitim izvođenjima, R<b>je C1-

3alkil. U različitim slučajevima, R<b>je CH3. U nekim slučajevima, i R<a>i R<b>su H.

[0056] U nekim slučajevima, R<1>je H, OH, ili =NOR<5>. U različitim slučajevima, R<5>je H ili CH3. Dakle, pogodne R<1>grupe mogu uključiti H, OH, =NOH, i =NORCH3. U nekim izvođenjima, R<1>je C1-3alkil ili OC1-3alkil. Na primer, R<1>može biti CH3 ili OCH3. U nekim slučajevima, R<1>je CH3 i ispoljava S stereohemiju. U različitim izvođenjima, R<1>je C3-

6cikloalkil ili C3-6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji je spojena. Pogodne R<1>spiro grupe mogu uključiti

U različitim slučajevima, R<1>je =CH2. U nekim izvođenjima, svaka od R<1a>i R<1b>je H. U nekim izvođenjima, barem jedna R<1a>i R<1b>je C1-3alkil. U nekim, svaka od R<1a>i R<1b>je CH3. U nekim izvođenjima, R<a>je H, R<b>je H, i R<1>je CH3. U različitim izvođenjima, R<a>je CH3, R<b>je H, i R<1>je H. U nekim slučajevima, R<a>je H, R<b>je CH3, i R<1>je H. U različitim slučajevima, R<a>je CH3, R<b>je H, i R<1>je CH3. U nekim izvođenjima, R<a>je H, R<b>je CH3, i R<1>je CH3. U različitim izvođenjima, R<a>je CH3, R<b>je CH3, i R<1>je H.

[0057] R<2>je C3-9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil i nije morfolinil. U različitim izvođenjima, R<2>obuhvata oksetanil, azetidinil, tetrahidrofuranil, pirolidinil, tetrahidropiranil, piranil, piperidinil, piperazinil, azepanil, ili tetrahidropiridinil. U različitim izvođenjima, C39heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil obuhvata mostovnu ili spiro grupu. U nekim slučajevima, C3-9heterocikloalkil koji obuhvata mostovnu ili spiro grupu je izabran iz grupe koja sadrži

and = i

i R<6>je C1-6alkil, C3-8cikloalkil, ili C6-10aril. U nekim slučajevima, R<6>je fenil opciono supstituisan sa jednom do tri grupe nezavisno izabrane iz halo, C1-3alkil, C1-3alkoksi, i CN. Primeri pogodnih R<2>grupa uključuju

and = i

U nekim slučajevima, R<2>je izabrano iz grupe koja obuhvata

[0058] X je C1-3alkilen. U nekim slučajevima, X je CH2, CH2CH2, ili CH(CH3). R<3>obuhvata C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, C3-7heterocikloalkil, C6-10aril, ili C2-6heteroaril. U nekim izvođenjima, R<3>obuhvata ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, ciklopentenil, cikloheksenil, tetrahidropiranil, fenil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tetrazolil, furanil, tiofenil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, piridinil, pirazinil, ili pirimidinil.

Primeri pogodnog X-R<3>uključuju

and = i

U nekim izvođenjima, X- R<3>je

or = ili

U nekim izvođenjima, X- R<3>je

or = ili

[0059] U različitim izvođenjima, R<4>obuhvata C6-10aril ili C2-9heteroaril, i R<4>je opciono supstituisan sa jednom do tri grupe nezavisno izabrane iz halo, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C(O)N(R<N>)2, i N(R<N>)2, i svako R<N>je nezavisno H ili C1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<4>je izabrano iz grupe koja obuhvata

i

U različitim izvođenjima, R<4>je

[0060] U nekim izvođenjima, R<a>, R<b>, R<1a>, i R<1b>su svaka H, R<1>je =CH2 ili CH3; R<2>je

or=ili

X-R<3>je izobutil,

i svako Y je SO2. U nekim izvođenjima, R<1>je u (S) konfiguraciji. U nekim slučajevma,

ovde su data jedinjenja koja obuhvataju strukturu

or=ili

pri čemu R<2>jeste

i R<3>jeste ciklobutil, ciklopentil, ili cikloheksil.

[0061] Primeri jedinjenja iz Formule (I) koji su ovde opisani su prikazani u Tabeli A, kao jedinjenja A1-A210, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Neka od jedinjenja iz Tabele A se dobijaju ovim pronalaskom, kao što je izneto u patentnom zahtevu 14.

Tabela A

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

[0062] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz ovog opisa uključuju

ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0063] Dodatna ovde opisana jedinjenja, su prikazana u Tabeli B kao jedinjenja B1-B22, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. U nekim slučajevima, jedinjenje je jedinjenje od B1-B20, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

Tabela B

[0064]Hemijske strukture koje imaju jedan ili više stereocentara prikazanih vezama sa povlakama i ćelavim vezama (t.j. ,i ) su predviđeni da ukažu na apsolutnu stereohemiju stereocentara prisutnih u toj hemijskoj strukturi. Veze simbolično prikazane jednostavnom linijom ne ukazuju na stereo-preferenciranje.

Osim ako nije drugačije naznačeno, hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereocentara koje su ovde ilustrovane bez naznačavanja apsolutne ili relativne stereohemije, obuhvata sve moguće stereoizomerne oblike jedinjenja (npr., diastereomere, enantiomere) i njihove mešavine. Strukture sa jednom punom ili isprekidanom linijom, i najmanje jedna dodatna jednostavna linija, obuhvataju pojedinačne enantiomerne serije svih mogućih diastereomera.

Sinteza inhibitora izlučivanja proteina

[0065] Ovde data jedinjenja mogu da se sintetišu korišćenjem uobičajenih tehnika lako dostupnih početnih materijala poznatih stručnjacima u ovoj oblasti. Generalno, ovde data jedinjenja su uobičajeno dobijena preko standardnih postupaka sinteze za organsku hemiju.

Sinteza krajnjih jedinjenja

[0066] U nekim slučajevima, ovde opisana jedinjenja moguće je sintetisati dovođenjem u reakciju sulfonil hlorida koji ima željenu R<2>grupu sa propan-1,3-diaminom, i dovođenjem u reakciju proizvoda dobijenog kao rezultat sa aldehidom koji ima željenu R<3>grupu da bi se formiralo jedinjenje N supstituisanog propil amina. Propil amino grupa može da bude uvedena u N supstituisan propil amin na R<4>poziciji preko reakcije sa 2-(3-bromopropil)izoindolin-1,3-dionom posle čega je usledio hidrazin, i željena R<4>grupa može da bude spojena na jedinjenje dovođenjem u reakciju sa sulfonil hloridom funkcionalizovanim sa željenom R<4>grupom. Najzad, jedinjenje može da bude ciklizovano preko agensa ciklizacije sa željenom R<1>grupom, kao što je 3-hloro-2-hlorometil-1-propen, 2-metilpropan-1,3-diildietansulfonat, ciklopropan-1,1-diilbis(metilen) dietansulfonat, 1,3-dihloropropan, ili 1,4-dihlorobutan.

[0067] U nekim slučajevima jedinjenja koja imaju metilen grupu na R<1>mogu da se sintetižu kuplovanjem (3-aminopropil) propan-1,3-diamin grupe derivatizovane sa željenim R<3>i R<4>grupama sa željenim R<2>sulfamoil hloridom ili R<2>sulfanil hlorid grupom, i zatim dovođenjem u reakciju jedinjenja dobijenog kao rezultat sa 3-hloro-2-hlorometil-1-propenom da bi se formiralo željeno jedinjenje triazaciklododekansulfonamida, kao što je prikazano primerom u Ruti 1 u odeljku Primeri.

[0068] U nekim slučajevima, jedinjenja koja imaju metilen grupu na R<1>mogu da se sintetižu kuplovanjem zaštićenog butana 1,3-diamina sa aldehidom koji ima željenu R<3>grupu da bi se formirao 3-(azaneil)-N-butan-1-amin, dovođenjem amino grupe na poziciji R<2>sa hloro grupom funkcionisanom sa željenom R<2>grupom, uvođenjem propil amino grupe u 3-(azaneil)-N-butan-1-amin na R<4>poziciju preko reakcije sa 2-(3-bromopropil)izoindolin-1,3-dionom posle čega je usledio hidrazin, dovođenjem amino grupe dobijene kao rezultat na R<4>poziciji sa hloro grupom funkcionalizovanom sa željenom R<4>grupom, i zatim dovođenjem reakcije jedinjenja dobijenog kao rezultat sa 3-hloro-2-hlorometil-1-propenom da bi se formiralo željeno triazaciklododekansulfonamid jedinjenje, kao što je prikazano primerom u Ruti 2 u odeljku Primeri.

[0069] U nekim slučajevima, jedinjenja imaju spiro grupu na R<1>mogu da budu sintetisana dovođenjem u reakciju N-(3-(azaneil)propil) propan-1,3-diamino grupe derivatizovane sa željenim R<2>, R<3>, i R<4>grupa sa 1,1-diilbis(metilen)dietansulfonata derivatizovanog sa željenom spiro grupom, kao što je prikazano u primerima u Rutama 3, 8, i 9 u odeljku Primeri.

[0070] U različitim slučajevima, ovde opisana jedinjenja mogu da budu sintetisana redukovanjem benzil grupe na R<2>na N-(3-(azaneil)propil)propan-1,3-diamino funkcionalizovan sa željenim R<3>i R<4>grupama, i zatim je ostvarena reakcija proizvoda dobijenog kao rezultat sa željenim aldehidom derivatizovanim sa željenom R<2>grupom (npr., dimetil cikloheksil), kao što je prikazano kao primer u Ruti 4 u odeljku Primeri.

[0071] U nekim slučajevima, jedinjenja koja imaju karboksilat grupu na R<2>mogu da budu dobijena dovođenjem u reakciju triazaciklododensulfonil grupom derivatizovanom sa željenim R<1>, R<3>, i R<4>grupama sa željenom alkil grupom i trifosgenom pri baznim uslovima, kao što je pri merom prikazano u Ruti 5 u odeljku Primeri.

[0072] U različitim slučajevima, jedinjenja koja imaju piperidinil grupu na R<2>mogu da se pripreme dovođenjem u reakciju sa DBU/merkaptoetanolom jedinjenje triazaciklododensulfonila sa željenim R<1>, R<3>, i R<4>grupama i funkcionalizovano na R<2>sa nitrofenil grupom, i zatim kuplovanjem proizvoda dobijenom kao rezultat sa piperidinil sulfonil hlorida, kao što je dato kao primer u Ruti 6 u odeljku Primeri.

[0073] U nekim slučajevima, jedinjenja imaju vodonik grupu na R<1>mogu da budu sintetisani kuplovanjem N-(3-(azaneil)propil) propan-1 ,3-diamino funkcionalizovanim sa željenim R<2>, R<3>, i R<4>grupama sa 1,3-dihloropropanom ili 1,4-dihlorobutanom, kako je prikazano kao primer u Ruti 7 i Ruti 17 u odeljku Primeri.

[0074] U nekim slučajevima, jedinjenja koja imaju hlorofenilmetanon grupu na R<2>mogu da budu sintetisana dovođenjem u reakciju triazaciklododensulfonila funkcionalizovanim sa željenim R<1>, R<3>, i R<4>grupama sa 4-hlorobenzoil hloridom pri baznim uslovima, kao što je dato primerom u Ruti 10 u odeljku Primeri.

[0075] U različitim slučajevima, jedinjenja koja imaju 4-(dimetilamino)-2-metilbenzil grupu na R<4>i spiro grupu na R<1>mogu da se pripreme dovođenjem u reakciju jedinjenja N-(3-(azaneil)propil)propan-1,3-diamina funkcionalizovanog sa željenim R<2>i R<3>grupama sa 4-(dimetilamino)-2-metilbenzensulfonil hloridom, i zatim ciklizovanjem jedinjenja preko kuplovanja sa 1,1-diilbis(metilen)dietansulfonata derivatizovanog sa željenom spiro grupom korišćenjem postupaka prethodno opisanih ovde, kao što je prikazano kao primer u Ruti 11 u odeljku Primeri.

[0076] U nekim slučajevima, ovde opisana jedinjenja moguće je pripremiti dovođenjem u reakciju sulfonil hlorida koji ima željenu R<2>grupu sa propan-1,3-diaminom, i dovođenjem u reakciju proizvoda dobijenog kao rezultat sa aldehidom koji ima željenu R<3>grupu da bi formiralo 3-(azaneil)- N-butan-1-amin jedinjenje. Propil amino grupa može da se uvede u 3-(azaneil)-N-butan-1-amin na R<4>poziciji preko reakcije sa 2-(3-bromopropil)izoindolin-1,3-diona posle čega je usledio hidrazin i željena R<4>grupa može da bude spojena na jedinjenje dovođenjem u reakciju jedinjenja sa željenim sulfonil hloridom (npr., 4-(dimetil-amino)-2-metilbenzensulfonil hlorid). Najzad, jedinjenje može da bude ciklizovano preko odgovarajućeg agensa ciklizacije, kao što je 3-hloro-2-hlorometil-1-propen, 2-metilpropan-1,3-diil dietansulfonata, ciklopropan-1,1-diil-bis(metilen) dietansulfonata, 1,3-dihloropropana, ili 1,4-dihlorobutana, kao što je ovde prethodno opisano, kao što je prikazano kao primer u Ruti 12 u odeljku Primeri.

[0077] U različitim slučajevima, jedinjenja koja imaju 4-fenilpiperidinil-1-il sulfonil grupu na R<2>mogu da budu sintetisana dovođenjem u reakciju triazaciklododensulfonil grupe funkcionalizovane sa željenim R<2>, R<3>, i R<4>grupama sa 3-metil-1-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonatom, kao što je kao primer prikazano u Ruti 14 u odeljku Primeri.

[0078] U nekim slučajevima, jedinjenja koja imaju 4-fenilpiperidinil-1-il sulfonil grupu na R<2>mogu da budu sintetisana dovođenjem u reakciju N-(3-(azaneil)propil)propan-1,3-diamino jedinjenja funkcionalizovanog sa željenim R<3>i R<4>grupama sa 3-metil- 1-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonatom, i zatim ciklizovanje jedinjenja sa odgovarajućim agensom ciklizacije, kao što je 2-metilpropan-1,3-diil dietansulfonat, 3-hloro-2-hlorometil-1-propen, ciklopropan-1,1-diilbis(metilen) dietansulfonat,1,3-dihloropropan ili 1,4-dihlorobutan, kao što je prethodno ovde opisano, kao što je prikazano kao primer u Ruti 15 u odeljku Primeri. Analogna jedinjenja sa metil grupom uz R<4>azot mogu slično da budu sintetisana korišćenjem 3-hloro-2-(hlorometil)prop-1-ena, kao što je dato kao primer u Ruti 18 u odeljku Primeri.

[0079] U nekim slučajevima, jedinjenja sa alkohol grupom za R<1>mogu da budu sintetisana ciklizovanjem N-(3-(azaneil)propil) propan-1,3-diamino jedinjenja sa zaštićenim 1,3-dihloropropan-2-ol jedinjenjem pri baznim uslovima, kao što je dato kao primer u Ruti 19 u odeljku Primeri. Alkohol grupa na R<1>može da bude metilisana preko reakcije sa Mel i NaH u toluenu, kao što je kao primer pokazano u Ruti 21 u odeljku Primeri. Alkohol grupa na R<1>može da bude oksidirana u karbonil preko reakcije sa Dess-Martin perjodinanom, kao što je kao primer pokazano u Ruti 22 u odeljku sa primerima. Karbonil grupa na R<1>može da bude u reakciji sa hidroksilamin hidrohloridom da bi se formiralo jedinjenje oksima, kao što je kao primer pokazano u Ruti 25 u odeljku Primeri.

[0080] U različitim slučajevima, jedinjenja koja imaju S-metil grupu na R<1>mogu da budu sintetisani dovođenjem u reakciju amino grupe funkcionalizovane sa željenom R<2>grupom sa 2,3-dimetil-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonata, posle čega je usledio CF3SO3Me, da bi se formirao 2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat funkcionalizovan sa željenom R<2>grupom. Proizvod može da bude doveden u reakciju sa (R)-N-(3-amino-2-metilpropil) jedinjenjem funkcionalizovanim sa željenom R<4>grupom da bi se formiralo (S)-N,N’-(2-metilpropan-1,3-diamino jedinjenje funkcionalizovano sa željenim R<2>i R<4>grupama. Proizvod dobijen kao rezultat može zatim da bude doveden u reakciju sa (azandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonatom funkcionalizovanim sa željenom R<3>grupom da bi se kao rezultat dobilo željeno jedinjenje, kao što je prikazano kao primer u Ruti 27 u odeljku Primeri.

Sinteza međuproizvoda

[0081] Međuproizvodi korišćeni da se dobiju ovde opisana jedinjenja mogu da se dobiju i standardnim postupcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, kao što je opisano u Primerima, odeljku dole u tekstu (npr., Ruta 13, Ruta 16, Ruta 20, Ruta 24, Ruta 26, Ruta 28, Ruta 30, Ruta 31, Ruta 32, Ruta 33).

Postupci za upotrebu

[0082] Ovde opisana jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da inhibiraju izlučivanje proteina koji je predmet interesovanja. Ovde opisana jedinjenja mogu da učestvuju u 'mašineriji' izlučivanja Sec61 proteina ćelije. U nekim slučajevima, jedinjenje kako je ovde opisano inhibira izlučivanje jednog ili više od TNFα, VCAM, PRL, IL-2, INFg, CD4, insulina,i PD-1 (mišjeg i/ili humanog), ili svakog od TNFα, VCAM, PRL, IL-2, INFg, CD4, insulina, i PD-1 (mišji i/ili humani). U nekim slučajevima, jedinjenje kako je ovde opisano može da inhibira izlučivanje proteina koji služi kao kontrolna tačka, ili inhibira izlučivanje proteina na površini ćelije, proteina povezanog sa endoplazmnom membranom, ili izlučenog proteina uključenog u regulaciju antitumorskih odgovora imunog sistema. U različitim slučajevima, ovde opisano jedinjenje može da inhibira izlučivanje jednog ili više PD-1, PD-L1, TIM-1, LAG-3, CTLA4, BTLA, OX-40, B7H1, B7H4, CD137, CD47, CD96, CD73, CD40, VISTA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, TGFRβ i njihovih kombinacija. Aktivnost izlučivanja proteina može da bude procenjena na način kako je opisano u odeljku Primeri dole u tekstu.

[0083] Kao što je ovde korišćeno, pojam "inhibitor" je predviđen da opiše jedinjenje koje blokira ili smanjuje aktivnost farmakološkog cilja (na primer, jedinjenja koje inhibira Sec61 funkciju na putanji izlučivanja proteina). Inhibitor može da deluje sa inhibicijom konkurentom, nekonkurentnom, ili bez konkurencije. Inhibitor može da se veže reverzibilno ili nepovratno, i samim tim, taj pojam uključuje jedinjenja koja su suicidni supstrati proteina ili enzima. Inhibitor može da modifikuje jedno ili više mesta na ili blizu aktivnog mesta proteina, ili može da prouzrokuje konformacione promene na nekom drugom mestu na enzimu. Pojam inhibitor se koristi mnogo šire ovde nego u naučnoj literaturi tako da može i da obuhvati druge klase farmakološki ili terapijski korisnih agenasa, kao što su agonisti, antagonisti, stimulansi, sekundarni faktor, i njima slični.

[0084] Dakle, ovde su oisani i postupci inhibiranja izlučivanja proteina u ćeliji. U ovim postupcima, ćelija se dovodi u kontakt sa ovde opisanim jedinjenjem (npr., jedinjenje iz Formule (I) ili jedinjenje dato u Tabeli A ili B, i farmaceutski prihvatljivih soli gore navedenih), ili njihove farmaceutske formulacije, u količini delotvornoj da se inhibira izlučivanje proteina od interesa. U nekim slučajevima, ćelija se dovodi u kontakt in vitro. U raznim slučajevima, ćelija se dovodi u kontakt in vivo. U različitim slučajevima, dovođenje obuhvata isporuku jedinjenja ili farmaceutske formulacije subjektu.

[0085] Biološke posledice Sec61 inhibicije su brojne. Na primer, Sec61 inhibicija se predlaže za lečenje ili sprečavanje upale i/ili kancera kod subjekta. Samim tim, farmaceutske formulacije za Sec61 specifična jedinjenja, obezbeđuju sredstva isporuke leka subjektu i lečenje ovih stanja. Kako je ovde korišćeno, pojmovi "lečiti," "lečenje," "tretiranje," i slično se odnose na eliminisanje, smanjenje, ili obradu oboljenja ili stanja, i/ili simptoma povezanih sa njim. Iako nije unapred isključeno, lečenje oboljenja ili stanja ne zahteva da se oboljenje, stanje, ili sa tim povezani simptomi potpuno eliminišu. Kako je ovde korišćeno, pojmovi "lečiti," "lečenje," "tretiranje," i slični mogu da uključe "profilaktičko tretiranje," koje se odnosi na smanjenje verovatnoće ponovnog razvoja bolesti ili stanja, ili ponovne pojave prethodno kontrolisane bolesti ili stanja, kod subjekta koji nema, ali je u riziku od ili je podložan, da razvije bolest ili stanje ili ponovnu pojavu bolesti ili stanja. Pojam "lečiti" i sinonimi predviđaju isporuku terapijski delotvorne količine jedinjenja iz ovog pronalaska pojedincu kom je potrebno takvo lečenje. U okviru značenja ovog pronalaska, "tretiranje" takođe uključuje relapse profilakse ili faze profilakse, kao i lečenje akutnih ili hroničnih znakova, simptoma i/ili loše funkcionisanje. Lečenje može da bude usmereno simptomatično, na primer, da potisne simptome. Može da bude efikasno tokom kratkog perioda, da se usmeri tokom srednjeg vremenskog perioda, ili da može da bude dugotrajno lečenje/tretiranje, na primer unutar konteksta terapije za održavanje. Kako je ovde korišćeno, pojmovi "sprečiti", "sprečavanje," "prevenciju," su poznati u ovoj oblasti, i kada je korišćeno u vezi sa stanjem, kao što je lokalna ponovna pojava (npr., bol), bolest kao što je kancer, kompleks sindroma kao što je srčana insuficijencija ili bilo koje drugo medicinsko stanje, se dobro razume u ovoj oblasti, i uključuje isporuku supstance koja smanjuje učestalost, odlaganja pojave, simptoma medicinskog stanja kod subjekta u odnosu na subjekta koji ne prima tu supstancu. Dakle, sprečavanje kancera uključuje, na primer, smanjenje broja detektabilnih kanceroznih izraslina u populaciji pacijenata koji primaju profilaktičko tretiranje u odnosu na netretiranu kontrolnu populaciju, i/ili odlaganje pojave detektibilnih kanceroznih izraslina za lečenje populacije naspram netretirane kontrolne populacije, npr., statistički i/ili klinički značajnu količinu. Sprečavanje infekcije uključuje, na primer, smanjenje broja dijagnoza infekcije kod lečene populacije naspram netretirane kontrolne populacije, i/ili odlaganje pojave simptoma infekcije kod lečene populacije naspram nelečene kontrolne populacije. Sprečavanje bola uključuje, na primer, smanjenje magnitude, ili alternativno odlaganje, bolne senzacije koje osećaju subjekti u lečenoj populaciji naspram netretirane kontrolne populacije. Kako je ovde korišćeno, pojmovi ''pacijent'' i ''subjekat'' mogu da se koriste ravnopravno i da se odnosi na životinje, kao što su psi, mačke, krave, konji, i ovce (t.j., nehumane životinje) i ljudi. Specifični pacijenti su sisari (npr., ljudi). Pojam pacijent uključuje muškarce i žene.

[0086] Inhibicija sa Sec61 posredovanim izlučivanjem upalnih proteina (npr., TNFα) može ometati signaliziranje upale. Dakle, ovde je opisan postupak lečenja upale kod subjekta isporukom subjektu terapijski delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja, (t.j., jedinjenje iz Formule (I) ili jedinjenje dato u Tabeli A ili B, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodnih).

[0087] Pored toga, održivost ćelija kancera se oslanja na povećano izlučivanje proteina u membranu endoplazme (ER) za opstanak. Dakle, neselektivna ili delimično selektivna inhibicija sa Sec61 posredovanim izlučivanjem proteina može inhibirati rast tumora. Alternativno, za postavku onkologije imunog sistema, selektivne inhibitore izlučivanja poznatih izlučenih i transmembranskih proteina kontrolnih tačaka imunog sistema (npr., PD-1, TIM-3, LAG3, itd.) može da ima kao rezultat aktivaciju imunog sistema naspram različitih kancera.

[0088] Prema tome, ovde je opisan i postupak lečenja kancera kod subjekta isporučivanjem subjektu terapijski delotvorene količine jedinjenje opisanog ovde, (npr., jedinjenje iz Formule (I), jedinjenje dato u Tabeli A ili B, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno pomenutog). Specifično razmatrani kanceri koje je moguće lečiti korišćenjem jedinjenja i supstanci opisanih ovde uključuju, ali se ne ograničavaju na melanom, multipli mijelom, prostatu, pluća, nesitnoćelijski karcinom pluća, karcinome sunđeraste ćelije, leukemiju, akutnu mijelognu leukemiju, hroničnu mijelognu leukemiju, limfom, NPM/ALK transformisan anaplastični limfom velike ćelije, difuzni limfom velike B ćelije, neuroendokrine tumore, dojku, limfom ovojnice ćelije, karcinom ćelije bubrega, rabdomiosarkom, kancer jajnika, kancer endometrijuma, karcinom male ćelije, adenokarcinom, karcinom želuca, hepatoćelijski karcinom, pankreasni kancer, karcinom tiroide, anaplastični limfom velike ćelije, hemangiom, kancer glave i vrata, bešku, i kolorektalne kancere. U nekim slučajevima, kancer je čvrsti tumor. U različitim slučajevima, kancer je kancer glave i vrata, karcinom sunđeraste ćelije, karcinom želuca, ili kancer pankreasa.

[0089] Ovde opisana jedinjenja se takođe razmatraju za upotrebu za sprečavanje i/ili lečenje više oboljenja uključujući, ali bez ograničenja na, proliferativna oboljenja, neurotoksična / degenerativna oboljenja, ishemijska stanja, autoimih i autoupalnih poremećaja, upala, sa imunim sistemom povezanih oboljenja, HIV, kancere, odbacivanje transplantiranog organa, septički šok, virusne i parazitske infekcije, stanja povezana sa acidozama, degneraciju makule, promene na plućima, oboljenja bolesti gubljenja mišića, fibrozne bolesti, i oboljenja.

[0090] Primeri proliferativnih oboljenja ili stanja uključuju dijabetesnu retinopatiju, makularnu degeneraciju, dijabetesnu nefropatiju, glomeruloskleroza, IgA nefropatija, ciroza, bilijarna atrezija, kongestivna insuficijencija srca, skleroderm, zračenjem indukovana fibroza, i fibroza pluća (idiopatska plućna fibroza, vaskularna bolest kolagena, sarkoidoza, intersticijalna oboljenja pluća i spoljnja oboljenja pluća).

[0091] Upalna oboljenja uključuju akutne (npr., bronhitis, konjuktivitis, miokarditis, pankreatitis) i hronična stanja (npr., hronična holestaza, bronhiektazije, stenoza zaliska aorte, restenoza, psorijaza i artritis), zajedno sa stanjima povezanim sa upalom kao što je fibroza, infekcija i ishemija.

[0092] Poremećaji imunodeficijencije nastaju kada deo imunog sistema ne radi propisno ili nije prisutan. Oni mogu da utiču na B limfocite, T limfocite, ili fagocite i može da se bilo nasledi (npr., IgA deficijencija, teška kombinovana imunodeficijencija (SCID), timna displazija grudne žlezde i hronična granulomatoza) ili stečena (npr., sindrom stečene imunodeficijencije (AIDS), virus humane imunodeficijencije (HIV) i imunodeficijencije indukovane lekom). Stanja povezana sa imunim sistemom uključuju alergijske poremećaje kao što su alergije, astma i atopični dermatitis kao što je ekcem. Drugi primeri takvih sa imunim sistemom povezanih stanja uključuju lupus, reumatoidni artritis, skleroderm, ankilozirajući spondilitis, dermatomiozitis, psorijazu, multipla sklerozu i upalnu bolest creva (kao što je ulcerozni kolitis i Kronova bolest).

[0093] Odbacivanje tkiva/organa nastaje kada imuni sistem greškom napadne ćelije koje su uvedene u telo domaćina. Oboljenje kalema protiv domaćina (presatka protiv primaoca) (GVHD), nastaje kao rezultat alogene transplantacije, nastaje kada T ćelije iz tkiva donora postanu neprijateljske i napadnu tkiva domaćina. U sva tri slučaja, oboljenja autoimunog sistema, odbijanja transplantata i presatka protiv primaoca (GVHD), modulacija imunog sistema lečenjem subjekta sa jedinjenjem ili supstanca opisa može biti korisno.

[0094] Ovde je takođe opisan postupak lečenja autoimune bolesti kod pacijenta koji obuhvata isporuku terapijski delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja. "Bolest autoimunog sistema" kao što je ovde korišćeno je oboljenje ili poremećaj koji nastaje iz i usmeren je naspram tkiva samih pojedinaca. Primeri autoimunih oboljenja uključuju, ali se ne ograničavaju na, odgovore upalnog sistema kao što su upalna oboljenja kože uključujući psorijazu i dermatitis (npr., atopični dermatitis); sistemski skleroderm i skleroza; odgovori povezani sa upalnom bolešću creva (kao što je Kronova bolest i ulcerozni kolitis); sindrom respiratornog distresa (uključujući sindrom respiratornog distresa kod odraslih (ARDS)); dermatitis; meningitis; encefalitis; uveitis (upala ovojnice oka); kolitis; glomerulonefritis; alergijska stanja kao što je ekcem i astma i druga stanja koja uključuju infiltraciju T ćelija i hronične odgovore upalnog sistema; aterosklerozu; (deficijencija) slaba adhezija leukocita; reumatoidni artritis; sistemski lupus eritematozus (SLE); dijabetes melitus (npr., dijabetes melitus tip I ili od insulina zavisan dijabetes melitus); multipla skleroza; Rejnodov (Reynaud’s) sindrom; autoimi tiroiditis; alergijski encefalomijelitis; Sjorgenov (Sjorgen’s) sindrom; pojava dijabetesa u mladosti, i odgovori imunog sistema povezani sa akutnom i odloženom hipersenzitivnošću posredovanom citokinima i T limfociti koji se najčešće sreću kod tuberkuloze, sarkoidoze, polimiozitis, granulomatoza i vaskulitis, perniciozna (vrlo škodljiva ) anemija (Adisonovo oboljenje), oboljenja koja uključuju leukocitnu dijapedezu; upalno oboljenje centralnog nervnog sistema (CNS); sindrom povrede više organa; hemolitička anemija (uključujući, ali ne i ograničeno na krioglobinemiju ili Kumsovu (Coombs) pozitivnu anemiju); mijastenija gravis (mišićna slabost); oboljenja posredovana kompleksom antigen-antitelo; oboljenje antiglomerularnog temelja membrane (oboljenje membrane koja je deo bubrega koji pomaže filtiranje otpada i suvišne tečnosti iz krvi); antifosfolipidni sindrom; alergijski neuritis; oboljenje Grejvsovih (Graves’); Lamber-Itonov miastenični sindrom (Lambert-Eaton); bulozni pemfigoid; pemfigus; poliendokrinopatije autoimunog sistema; Rajterovo (Reiter’s) oboljenje; sindrom krute osobe; Behčetova (Behcet) oboljenje; arteritis gigantske ćelije; nefritis imunog kompleksa; IgA nefropatija; IgM polineuropatije; immune trombocitopenijska purpura imunog sistema (ITP) ili trombocitopenija autoimunog sistema. Ovde opisana jedinjenja mogu biti korisna za lečenje stanja povezanih sa upalom, uključujući, ali bez ograničenja na COPD, psorijaze, astme, bronhitisa, emfizema; i cistične fibroze.

[0095] Kao što je ovde opisano je upotreba jedinjenja kako je ovde opisano za lečenje neurodegenerativnih oboljenja. Neurodegenerativna oboljenja i stanja uključuju, ali bez ograničavanja na, moždani udar, ishemijsko oštećenje na nervni sistem, neuralna trauma (npr., perkuzivno oštećenje mozga, povreda kičmenog stuba, i traumatsko oštećenje na nervni sistem), multipla sklerozu i druge imunim sistemom posredovane neuropatije (npr., Glen-Barov (Guillain-Barre sindrom i njegove varijante, akutna motorna aksonalna neuropatija, akutna upalna demijelinaciona polineuropatija, i Fišerov Sindrom), kompleks HIV/AIDS demencije, aksonomija, dijabetesna neuropatija, Parkinsonova bolest, Hantingtonovo (Huntington’s) oboljenje, multipla skleroza, bakterijski, parazitski, gljivični, i virusni meningitis, encefalitis, vaskularna demencija, demencija višestrukog infarkta, Demencija Levijevih (Lewy) tela, demencija prednjeg režnja kao što je Pikovo (Pick’s) oboljenje, podkortikalne demencije (kao što je Hantingtonova bolest ili progresivna supranuklearna paraliza), sindromi žarišne (fokusne) kortikalne atrofije (kao što je primarna afazija), metabolično-toksične demencije (kao što je hronični hipotiroidizam ili deficijencija B12), i demencije prouzrokovane infekcijama (kao što je sifilis ili hronični meningitis).

[0096] Više smernica za korišćenje ovde opisanih jedinjenja i supstanci (npr., jedinjenje iz Formule (I), jedinjenje dato u Tabeli A ili B, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenih) za inhibiranje izlučivanja proteina moguće je naći u odeljku Primeri, dole u tekstu.

Farmaceutske formulacije i isporuka pacijentu

[0097] Ovde opisani postupci uključuju proizvodnju i upotrebu farmaceutskih supstanci, koji uključuju jedno ili više ovde opisanih jedinjenja. Takođe su uključene same farmaceutske supstance. Farmaceutske supstance najčešće uključuju farmaceutski prihvatljiv nosač. Dakle, ovde su opisane farmaceutske formulacije koje uključuju ovde opisano jedinjenje (npr., jedinjenja iz Formule (I), jedinjenje dato u Tabeli A ili B, ili farmaceutski prihvatljiva so pomenutih), kao što je prethodno opisano, i jedan ili više farmaceutskih prihvatljivih nosača.

[0098] Fraza "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na one ligande, materijale, supstance, i/ili oblike doze koji su, u okviru dobrog medicinskog suda, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugi problem ili komplikaciju, primeren razumnom odnosu koristi/rizika.

[0099] Fraza "farmaceutski prihvatljiv nosač" kako je ovde korišćeno znači farmaceutski prihvatljiv materijal, supstancu, ili pomoćno sredstvo, kao što je tečnost ili čvrsti punilac, razblaživač, ekscipijens, rastvarač ili materijal za inkapsuliranje. Kako je ovde korišćeno formulacija "farmaceutski prihvatljiv nosač" uključuje pufersko sredstvo, sterilnu vodu za injekciju, rastvarače, disperzione podloge, obloge, antibakterijske i antigljivične agense, izotonične i agense odlaganja apsorpcije, i slične, kompatibilne sa farmaceutskom isporukom subjektu. Svaki nosač mora da bude "prihvatljiv" u smislu kompatibilnosti sa drugim sastojcima iz te formulacije i nije škodljiv za pacijenta. Neki primeri materijala koji mogu da služe kao farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju: (1) šećere, kao što je laktoza, glukoza, i saharoza; (2) skrobovi, kao što je kukuruzni skrob, krompirov skrob, i supstituisani ili nesupstituisani β-ciklodekstrin; (3) celuloza, i njihove derivate, kao što je natrijum karboksimetil celuloze, etil celuloze, i acetat celuloze; (4) praškasti tragakant; (5) slad; (6) želatin; (7) talk; (8) ekscipijense, kao što je kakao puter i supozitorni voskovi; (9) ulja, kao što je ulje kikirikija, ulje semena pamuka, ulje šafrana, ulje susama, ulje masline, ulje kukuruza, ulje sojinog zrna; (10) glikole, kao što je propilen glikol; (11) poliole, kao što je glicerin, sorbitol, manitol, i polietilen glikol; (12) estre, kao što je etil oleat i etil laurat; (13) agar; (14) puferske agense, kao što je magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; (15) algininska kiselina; (16) voda bez pirogena; (17) izotonična slana voda; (18) Ringerov (Ringer’s) rastvor; (19) etil alkohol; (20) fosfat puferski rastvori; i (21) druge netoksične kompatibilne supstance korišćene u farmaceutskim formulacijama. U izvesnim slučajevima, ovde opisane farmaceutske supstance su nepirogene, t.j., nemojte indukovati značajna podizanja temperature kada se isporučuje pacijentu.

[0100] Pojam "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na relativno netoksične, neorganske i organske soli dodate kiseline ovde opisanih jedinjenja. Ove soli je moguće pripremiti in situ tokom krajnje izolacije i prečišćavanja ovde datog jedinjenja, ili odvojenim reagovanjem jedinjenja u svom obliku slobodne baze sa pogodnom organskom ili neorganskom kiselinom, i izolovanje soli formiranih na taj način. Reprezentativne soli uključuju hidrobromid, hidrohlorid, sulfat, bisulfat, fosfat, nitrat, acetat, valerat, oleat, palmitat, stearat, laurat, benzoat, laktat, fosfat, tozilat, citrat, maleate, fumarat, sukcinat, tartrat, naftilat, mezilat, glukoheptonat, laktobionat, laurilsulfonat soli, i soli aminokiseline, i slične. (Videti, na primer, Berge et al. (Berge i saradnici) (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci.66: 1-19.)

[0101] U nekim slučajevima, ovde dato jedinjenje može da sadrži jednu ili više kiselinskih funkcionalnih grupa i, zato, ima mogućnost da formira farmaceutski prihvatljive baze. Pojam "farmaceutski prihvatljive soli" u ovim primerima se odnose na relativno netoksične neorganske i organske soli dodate baze iz ovde datog jedinjenja. Ove soli mogu isto tako da budu pripremljene in situ tokom krajnje izolacije i prečišćavanja jedinjenja, ili odvojenim dovođenjem u reakciju prečišćenog jedinjenja u svom obliku slobodne kiseline sa pogodnom bazom, kao što je hidroksid, karbonat, ili bikarbonat farmaceutski prihvatljivog katjona metala, sa amonijakom, ili sa farmaceutski prihvatljivim organskim primarnim, sekundarnim, ili tercijarnim aminom. Predstavnici alkala ili alkalnih zemnih soli uključuju litijum, natrijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, i soli aluminijuma, i slične. Predstavnici organskih amina korisnih za formiranje soli dodate baze uključuju etilamin, dietilamin, etilendiamin, etanolamin, dietanolamin, piperazin, i slične (videti, na primer, Berge et al. (Berge i saradnici, supra).

[0102] Agensi ovlaživanja, emulzifikatori, i lubrikansi, kao što je natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i agensi bojenja, agensi otpuštanja, agensi oblaganja, zaslađivanja, aromatizacije, i agensi parfimisanja, konzervansi i antioksidansi mogu takođe da budu prisutni u tim supstancama.

[0103] Supstance pripremljene kako je ovde opisano moguće je isporučiti u različitim oblicima, zavisno od poremećaja koji treba lečiti i starosti, stanja, i telesne težine pacijenta, kao što je dobro poznato u ovoj oblasti. Na primer, kada se supstance isporučuju oralno, one mogu da se formulišu kao tablete, kapsule, granule, prahovi, ili sirupi; za parenteralnu isporuku, moguće ih je formulisati kao injekcije (intravenozno, intramuskulatorno, ili potkožno), preparati za kapljičnu infuziju, ili supozitorije. Za primenu rutom oftalmičke membrane sluzokože, ona mogu biti formulisana kao kapi za oko ili masti za oko. Ove formulacije je moguće pripremiti uobičajenim sredstvima u vezi sa ovde opisanim postupcima, i ako se želi, aktivni sastojak može da se umeša sa bilo kojim uobičajenim aditivom ili ekscipijensom, kao što je vezivno sredstvo, agens razgradnje, lubrikans, korigens, agens rastvaranja, suspenziono pomoćno sredstvo, agens emulzifikacije, ili agens oblaganja.

[0104] Stvarni nivoi doziranja aktivnih sastojaka u ovde opisanim farmaceutskim supstancama mogu da se menjaju da bi se dobila "terapijski delotvorna količina," što je količina aktivnog sastojka delotvornog da se postigne željeni terapijski odgovor za specifičnog pacijenta, supstancu, i režim isporuke, a da nije toksična za pacijenta.

[0105] Koncentracija ovde datog jedinjenja u farmaceutski prihvatljivoj mešavini će varirati zavisno od nekoliko faktora, uključujući doziranje jedinjenja koje treba isporučiti, farmakokinetičke karakteristike korišćenog(ih) jedinjenja, i ruta isporuke. U nekim slučajevima, ovde opisane supstance mogu da budu povezane u vodenom rastvoru koji sadrži oko 0,1-10% w/v (tež./zap.) ovde opisanog jedinjenja, od drugih supstanci za parenteralnu isporuku. Uobičajeni opsezi doze mogu uključiti od oko 0,01 do oko 50 mg/kg telesne težine na dan, date u 1-4 podeljene doze. Svaka podeljena doza može sadržati ista ili različita jedinjenja. Doza će biti terapijski delotvorna količina zavisno od nekoliko činilaca uključujući celokupno zdravlje pacijenta, i formulaciju i rutu isporuke izabranih jedinjenja.

[0106] Oblici doze ili supstance koje obuhvataju jedinjenje kako je ovde opisano u opsegu od 0,005% do 100% sa ravnotežom napravljenom od netoksičnog nosača mogu biti pripremljeni. Postupci za dobijanje ovih supstanci su poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Razmatrane supstance mogu obuhvatiti 0,001%-100% aktivnog sastojka, u jednom izvođenju 0,1-95%, u drugom izvođenju 75-85%. Iako će doza varirati zavisno od simptoma, starosti i telesne težine pacijenta, prirode i ozbiljnosti poremećaja koji treba lečiti ili sprečiti, ruta isporuke i oblik leka, generalno, dnevna doza od 0,01 do 2000 mg jedinjenja je preporučena odraslom ljudskom pacijentu, i moguće ju je isporučiti u pojedinačnoj dozi u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Količina aktivnog sastojka koju je moguće kombinovati sa materijalom nosača da bi se proizveo pojedinačni oblik doze će generalno biti količina jedinjenja koja proizvodi terapijsko dejstvo.

[0107] U pravosudnim sistemima koji zabranjuju patentiranje postupaka koji se praktikuju na telu čoveka, značenje "isporučivanje" supstance humanom subjektu će biti ograničiti propisivanju kontrolisane supstance koju će humani subjekat samoisporučiti bilo kojom tehnikom (npr., oralno, inhalacijom, topikalnom primenom, injekcijom, umetanjem, itd.). Odnosi se na najšira prihvatljivo tumačenje koje je dosledno zakonima ili propisima koji definišu predmet koji je moguće zaštititi patentom. U pravosudnim sistemima koji ne zabranjuju patentnu zaštitu postupaka koji se praktikuju na ljudskom telu, "isporučivanje" supstanci uključuje i postupke koji se praktikuju na ljudskom telu i gore navedene aktivnosti.

Druga izvođenja pronalaska

[0108] Treba razumeti da dok se opis čita u vezi sa detaljnim opisom, gore dat opis je predviđen da ilustruje a ne da ograniči obim pronalaska, koji se definiše obimom priloženih patentnih zahteva. Druga varijantna rešenja, prednosti, i modifikacije su obuhvaćene obimom patentnih zahteva u nastavku.

PRIMERI

[0109] Primeri u nastavku su dati ilustracije radi nisu predviđeni da ograniče obim ovog pronalaska.

Route – Ruta

[0110] Početni materijal je sintetisan korišćenjem postupka opisanog J. Med. Chem.

2016, 59, 2633-2647. U N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-metilbenzensulfonamid (0,200 g, 0,523 mmol) u DCM (2,0 mL) je dodat DIEA (2 ekv., 1,05 mmol, 179 uL) a posle toga piperidin-1-sulfonil hlorid (0,096 g, 0,523 mmol). Posle 16 sati reakcija je brzo ohlađena natrijum bikarbonatom (zas.), ekstrahovana sa DCM, osušena sa natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana.

[0111] U sirovi N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-metilfenil)sulfonamido)propil)amino)propil)piperidin-1-sulfonamid u DMF (10 mL) je dodat NaH (2,5 ekv, 1,31 mmol, 0,052 g od 60% disperzije u mineralnom ulju).

Mešavina je mešana tokom 1 sat zatim je zagrejna do 85 °C i 3-hloro-2-hlorometil-1-propen (0,9 ekv, 0,471 mmol, 55 uL rastvoreno u 0,5 mL DMF) je dodato tokom 4 sata. Posle zagrevanja tokom 16 sati mešavina je ohlađena do temperature okoline, razređena slanim rastvorom i vodom, ekstrahovana sa etil acetatom (3X), oprana slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana.

Hromatografija sa svetlećim stubom (0-60% heksana/etil acetata 1% DEA) je dala proizvod slobodne baze.

[0112] U slobodnu bazu je dodat dietil etar (1,0 mL) da bi se rastvorio i HCl (4 N u dioksanu, 1,046 mmol, 262 uL). HCl so je filtrirana i osušena pod visokim vakuumom da bi se obezbedilo jedinjenje A5. MS (EI) za C29H48N4O4S2, nađeno 581 [M+H]<+>.

[0113] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

[0114] U tert-butil (3-aminobutil)karbamat (2,5 g, 13,3 mmol) u DCM (12,5 mL), zas. Na2CO3 (12,5 mL), i zas. NaCl (12,5 mL) je dodata TsCI (13,3 mmol, 2,54 g). Posle 1 sat organski sloj je opran slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan da bi se obezbedio tert-butil (3-((4-metilfenil)sulfonamido)butil)karbamat koji je u nastavku izvođen bez daljeg prečišćavanja.

[0115] U tozilat (13,3 mmol) je dodat TFA (66,5 mmol, 5,09 mL) i DCM (5,09 mL). Posle 2 sata reakcija je koncentrovana, razblažena sa NaOH (1N, 30 mL), ekstrahovana sa DCM (3X30 mL), osušena sa natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana da bi dala amin.

[0116] U amin (10,94 mmol) je dodat toluen (49 mL) i cikloheksankarboksaldehid (1,34 g, 12,0 mmol). Mešavina je refluksovana sa dean stark-ovim aparatom tokom noći (spoljna temperatura od 185 °C) zatim je koncentrovana, razblažena sa etanolom (apsolut, 19 mL) i NaBH4 (0,827 g, 21,8 mmol) je dodato u delovima dok je unutrašnja temperatura održavana na <20 °C. Posle mešanja tokom 2 sata mešavina je razblažena vodom (10 mL), mešana tokom 20 min, ekstrahovana sa DCM (3X), oprana sa slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana da bi se dobio amin. Amin je razblažen dietil etrom (20 mL) i HCl (konc., ~0,3 mL) je dodata ukapavanjem. HCl so je smrvljena u roku od 5 min i filtrirana korišćenjem dietil etra za pranje. Proizvod je osušen pod vakuumom tokom noći da bi se dobio N-(4-((cikloheksilmetil)amino)butan-2-il)-4-metilbenzensulfonamid hidrohlorid.

[0117] U HCl so (3,5 mmol) je dodat acetonitril (9 mL), natrijum karbonat (0,99 g, 9,2 mmol), Lil (0,114 g), i 3-bromopropilftalimid (2,30 g). Mešavina je zagrejana do 70 °C tokom 5 sati i u tom trenutku je filtrirana i koncentrovana. Sirovi ftalamid je procesiran u nastavku bez daljeg prečišćavanja.

[0118] U ftalimid (3,5 mmol) je dodat hidrazin monohidrat (4,2 mL) i etanol (15 mL). Posle zagrevanja do 80 °C tokom 30 min reakcija je završena i istaloženi sadržaj je filtriran pranjem sa etanolom. Filtrat je koncentrovan i razblažen sa HCl (2 N, 30 mL) zatim je ostavljen da stoji tokom 1 sat. U vodenu mešavinu je dodat NaOH (1 N) da bi se bazifikovala pH vrednost na 10. Mešavina je zatim ekstrahovana sa DCM (3X), osušena natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana da bi se dobio sirovi N-(4-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)butan-2-il)-4-metilbenzensulfonamid.

[0119] U amin (695 mg, 1,76 mmol) je dodat DCM (9 mL), zas. Na2CO3 (9 mL), i zas. NaCl (9 mL), TsCI (1,76 mmol, 336 mg). Posle mešanja tokom 1 sat, mešavina je ekstrahovana sa DCM (3X mL), osušena sa natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana da bi dala slobodnu bazu. HCl so je napravljena razblaživanjem slobodne baze u dietil etru (50 mL) i dodavanjem HCl (konc., 300 uL). Posle stavljanja pod visoki vakuum tokom 2 sata HCl so (1,02 g) je prikupljena.

[0120] U HCl so (0,400 g, 0,683 mmol) u DMF (14 mL) je dodat NaH (3,5 ekv, 2,39 mmol, 60% disperzija u mineralnom ulju, (80,3 mg). Posle mešanja tokom 1 sat 3-hloro-2-hlorometil-1-propen (0,9 ekv, 0,615 mmol, 71 uL u 7 mL DMF) je dodato tokom 3 sata. Posle zagrevanja tokom 2 sata mešavina je ohlađena do temperature okoline, razređena slanim rastvorom, vodom, i etil acetatom. Mešavina je ekstrahovana sa etil acetatom (2X), oprana slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-90% heksana/etil acetata 1% DEA) je dala proizvod. HCl so je napravljena razblaživanjem slobodne baze u dietil etru (20 vol.) i dodavanjem HCl (4N u dioksanu, 4 ekv) da bi se dobio 5-(cikloheksilmetil)-2-metil-11-metilen-1,9-ditozil-1,5,9-triazaciklododekan hidrohlorid, jedinjenje B1. MS (EI) za C32H47N3O4S2, nađeno 602 [M+H]<+>.

[0121] Sledeća jedinjenja su sintetisana na sličan način:

Route - Ruta

in dioxane - dioksanu; diethyl ether – dietil etar

[0122] U N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-metilfenil)sulfonamido)butil)amino)propil)-4-metilbenzen sulfonamid (0,099 mmol) u DMF (10,0 mL) je dodat u natrijum hidrid (0,350 mmol od 60% disperzije u mineralnom ulju). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 30 min zatim je zagrejana do 80 °C pre ciklopropan-1,1-diilbis(metilen) dietansulfonata (0,099 mmol rastvorenog u 1,0 mL DMF) tokom 2 sata. Posle mešanja još dodatna 4 sata na 80 °C mešavina je ohlađena do temperature okoline, brzo ohlađena slanim rastvorom, ekstrahovana sa etil acetatom (3X). Kombinovane organske materije su oprane sa slanim rastvorom (2X), osušene sa natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Svetleća hromatografija u stubu (0-60% heksana (1% DEA)/etil acetata) je obezbedilo proizvod slobodne baze koji je rastvoren u dietil etru (2 mL) i HCl (0,1 mL od 4 N rastvora u 1,4-dioksanu) je dodato. Mešavina je koncentrovana da obezbedi 4-{[9-(cikloheksilmetil)-13-(4-metilbenzensulfonil)5,9,13-triazaspiro[2.1 1]tetradekan-5-il]sulfonil}-N,N-dimetilanilin hidrohlorid, jedinjenje A11. MS (EI) za C33H50N4O4S2, nađeno 631 [M+H]<+>.

methanol – metanol; toluene – toluen; in dioxane – u dioksanu; diethyl ether – dietil etar [0123] Početni materijal je sintetisan korišćenjem postupka opisanog J. Med. Chem.

2016, 59, 2633-2647. U početni materijal (0,327 mmol) u metanolu (2,0 mL) pod argonom je dodat Pd/C (20 mg). Atmosfera vodonika je uspostavljena i mešavina je mešana na temperaturi okoline. Posle 3 sata reakcija je filtrirana i prečišćena hromatografijom sa svetlećim stubom (0-80% heksana (1% DEA)/etil acetata) da bi se dobio proizvod.

[0124] U početni material (0,028 mmol) je dodat toluen (5 mL) posle čega je usledio aldehid (0,028 mmol). Mešavina je mešana tokom 3 sata na refluksu i koncentrovana. U imin je dodat etanol posle čega i natrijum borohidrid. Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 30 min zatim je razblažena sa vodom (1 mL), ekstrahovana, sa DCM (3X1mL), osušena sa natrijum sulfatom, filtriranim, i koncentrovanim. Proizvod je prečišćen hromatografski sa svetlećim stubom (0- 60% heksani (1% DEA)/etil acetat). Slobodna baza je razblažena sa etil etrom (1 mL) i dodat je HCl (7 µL, 4 N u dioksanu). Mešavina je fltrirana da bi se omogućilo da se dobije 4-((9-((4,4dimetilcikloheksil)metil)-3-metilen-5-tozil-1,5,9-triazaciklodekan -1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin hidrohlorid (jedinjenje A10). MS (EI) za C34H62N4O4S2, nađeno 645 [M+H]<+>.

[0125] U trifosgen (0,0316 mmol, 9,4 mg) u DCM (100 uL) je dodat 1-propanol (0,190 mmol 14 uL). Posle mešanja tokom 45 min ovaj rastvor je dodat u amin (0,0158 mmol, 8,2 mg), DIEA (0,126 mmol, 22 uL), i DCM (100 uL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 1 sat zatim je prečišćeno direktno hromatografijom sa svetlećim stubom (0-70% heksani/etil acetat) da bi se obezbedio propil 5-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-7-metilen-9-tozil-1,5,9-triazaciklododekan-1-karboksilat (jedinjenje A12). MS (EI) za C29H42N4O6S2, nađeno 607 [M+H]<+>.

HCl (4N in dioxane - HCl (4N u dioksanu; diethyl ether – dietil etar

[0126] Početni materijal, 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-5-((2-nitrofenil)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il) sulfonil)-N,N-dimetilanilin, je sintetisan korišćenjem postupka sličnog opisanom u Ruti 2 supstituisanjem sa pogodnim hloridima sulfonila.

[0127] U početni materijal (1,09 g, 1,68 mmol) u ACN (12,3 mL) je dodat DBU (0,780 mL, 5,22 mmol) posle čega je usledio 2-merkaptoetanol (0,135 mL, 1,92 mmol). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata zatim je dodat dodatni alikvot 2-merkaptoetanol (1,14 ekv). Posle mešanja dodatna 2 sata mešavina je koncentrovana i prečišćena direktno pomoću FCC (0-100% heksani (1% DEA)/etil acetat). 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin.

[0128] U amin (70 mg, 0,152 mmol) u DCM (2 mL) je dodat DIEA (0,303 mmol, 52 uL) usledio piperidin-1-sulfonil hlorida (0,152 mmol, 28 mg). Posle ostavljanja da odstoji tokom noći reakcija je prečišćena direktno hromatografijom sa svetlećim stubom (heksani (1% DEA)/etil acetat 0-60%). HCl so proizvoda je napravljena razblaživanjem slobodne baze u dietil etru (1 mL) i dodavanjem HCl (4 N u dioksanu, 38 uL). Filtrat je prikupljen da obezbedi 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-5-(piperidin-1-ilsulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetil-anilin hidrohlorid (jedinjenje A15). MS (EI) za C30H51N5O4S2, nađeno 610 [M+H]<+>.

[0129] Sledeća jedinjenja su sintetisana na sličan način:

[0130] Početni materijal, N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)propil)amino)propil)-4-metilbenzensulfonamid, je sintetisan korišćenjem istog postupka opisanog u Ruti 1 supstituisanjem sa odgovarajućim sulfonil hloridom.

[0131] U diamin (49 mg, 0,087 mmol) u DMF (2,5 mL) je dodat NaH (0,22 mmol, 9 mg). Posle mešanja tokom 30 minuta na temperaturi okoline, 1,3-dihloropropan (0,087 mmol, 8,3 uL u 0,5 mL DMF) je lagano dodavan tokom 1 sat zagrevanjem na 80 °C. Posle zagrevanja tokom 3 sata mešavina je ohlađena do temperature okoline, razređena slanim rastvorom (10 mL), vodom (5 mL), i etil acetatom (10 mL). Vodenasti sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (3X5 mL), organske materije su kombinovane i oprane sa slanim rastvorom (1X5mL) osušene sa natrijum sulfatom i koncentrovane. Hromatografija sa svetlećim stubom (0- 50% heksana 1% DEA/etil acetata) je dala proizvod slobodne baze koji je pretvoren u HCl so uz dodavanje etra (1 mL) zatim HCl (20 uL, 4 N u dioksanu). Filtrat je prikupljen i koncentrovan da obezbedi 4-((5-(cikloheksilmetil)-9-tozil-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (jedinjenje A14). MS (EI) za C31H48N4O4S2, nađeno 605 [M+H]<+>.

[0132] Sledeće jedinjenje je sintetisano na sličan način:

HCl (4N in dioxane - HCl (4N u dioksanu); diethyl ether – dietil etar

[0133] Početni materijal je sintetisan korišćenjem postupka opisanog J. Med. Chem.

2006, 49, 1291-1312. U N1-(3-aminopropil)-N1-benzilpropan-1 ,3-diamin (363 mg, 1,64 mmol) u DCM (2 mL) je dodato DIEA (1,14 mL, 6,56 mL) zatim sulfonil hlorid (345 µL, 2,46 mmol). Rastvor je ostavljen preko noći da odstoji na temperaturi okoline. Koncentracija i prečišćavanje hromatografijom sa svetlećim stubom (0-80% heksana (1% DEA)/etil acetata) je dalo proizvod.

[0134] U početni materijal (260 mg, 504 µL) u DMF (20 mL) je dodat NaH (50 mg od 60% disperzije u mineralnom ulju, 1,26 mmol). Mešavina je mešana na 80 °C tokom 20 min zatim bis-sulfonat (144 mg, 504 µL) je dodat tokom 1 sat. Posle zagrevanja tokom 4 sata reakcija je završena i bila je razblažena sa etil acetatom (40 mL) i slanim rastvorom (40 mL), ekstrahovana sa etil acetatom (2X20 mL). Kombinovane organske materije su oprane sa slanim rastvorom (20 mL), osušene sa natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Hromatografija sa svetlećim stubom (heksani (1% DEA)/etil acetat 0-50%) dala je proizvod koji je razblažen sa etil etrom (5 mL) i HCl (4 N u dioksanu, 100 uL) je dodata. Mešavina je koncentrovana, oprana sa dietil etrom, i osušena da bi dala 9-benzil-5,13-bis(piperidin-1-ilsulfonil)-5,9,13-triazaspiro[2.11]tetradekan hidrohlorid (jedinjenje A18). MS(EI) za C28H47N5O4S2, nađeno 581 [M+H]<+>.

HCl (4N in dioxane - HCl (4N u dioksanu), diethyl ether – dietil etar

[0135] Početni materijal, N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid, je sintetisan korišćenjem sličnog postupka kako je opisano u Ruti 2.

[0136] U N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (559 mg, 1,36 mmol) u DCM (2 mL) je dodato DIEA (0,71 mL, 4,08 mmol) zatim sulfonil hlorid (250 mg, 1,36 mmol). Rastvor je ostavljen preko noći da odstoji na temperaturi okoline. Koncentracija i prečišćavanje hromatografijom sa svetlećim stubom (0-80% heksana (1% DEA)/etil acetata) je dalo proizvod.

[0137] Ciklizacija N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)propil)amino)propil)piperidin-1-sulfonamida i formiranje soli je izvedena na sličan način u Ruti 8 da bi se obezbedio 4-((9-(cikloheksilmetil)-13-(piperidin-1-ilsulfonil)-5,9,13-triazaspiro[2.11]tetradekan-5-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin hidrohlorid (jedinjenje A19). MS (EI) za C31H53N5O4S2, nađeno 624 [M+H]<+>.

[0138] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način. Ciklizacija jedinjenja A25, A26, A27, A28, i A29 je izvedena korišćenjem NMP kao rastvarača.

(nastavak)

[0139] U amin (67 mg, 0,14 mmol) u DCM (12 mL) je dodat DIEA (35 mg, 0,27 mmol) posle čega je usledio 4-hlorobenzoil hlorid (24 mg, 0,14 mmol). Pošto je odstajalo na temperaturi okoline 30 min reakcija je brzo ohlađena natrijum bikarbonatom (zas.), ekstrahovana sa DCM (3X), osušena sa natrijum sulfatom, i filtrirana. Hromatografijom sa svetlećim stubom (0-60% heksani (1% DEA)/etil acetat) je dobijen (5,13-bis(piperidin-1-ilsulfonil)-5,9,13-triazaspiro[2.11]tetradekan-9-il)(4-hlorofenil)metanon (jedinjenje A24). MS(EI) za C28H44ClN5O5S2, nađeno 630 [M+H]<+>.

[0140] U rastvor N,N-3-trimetilanilin (1,35 g, 10,0 mmol) u CHCl3 (4 mL) je dodata hlorosulfonska kiselina (4 mL). Reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom 18 sati. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i razblažena sa DCM (20 mL). Mešavina dobijena kao rezultat je sipana u ledenu vodu (30 mL) i zatim je podešena na pH=7-8 sa zasićenom vodenastom Na2CO3. Organski sloj je odvojen, opran sa zasićenom vodenastom Na2CO3, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovan. Ostatak je rekristalisan iz petrolej etra/EtOAc (10:1, 10 mL) da bi omogućio 4-(dimetilamino)-2-metilbenzensulfonil hlorid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.88 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.53 (m, 2H), 3.09 (s, 6H), 2.70 (s, 3H).

[0141] 4-{[9-(cikloheksilmetil)-13-(piperidin-1-sulfonil)-5,9,13-triazaspiro[2.11]tetradekan-5-il]sulfonil}-N,N,3-trimetilanilin je pripremljen prema proceduri opisanoj u Route 12 da bi se dobilo jedinjenje A30.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.57 (br s, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.85 (m, 2H), 3.95 (br s, 1H), 2.89-3.55 (m, 24H), 1.45-1.90 (m, 15H), 1.28 (m, 4H), 0.95 (m, 2H), 0.66 (br s, 4H). MS (EI) za C32H55N5O4S2, nađeno 638 [M+H]<+>.

[0142] Sledeće jedinjenje je sintetisano na sličan način:

[0143] U rastvor piperidin-1-sulfonil hlorida (68,3 g, 0,37 mol) u toluenu (350 mL) je dodat ukapavanjem rastvor propan-1,3-diamina (83,4 g, 1,12 mol) u toluenu (150 mL). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Emulzija dobijena kao rezultat je filtrirana i taj filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (DCM/MeOH = 50:1 do 20:1) da bi se dobilo N-(3-aminopropil)piperidin-1-sulfonamid.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.17 (m, 6H), 2.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.65 (m, 6H), 1.54 (m, 2H).

[0144] Mešavina N-(3-aminopropil)piperidin-1-sulfonamida (22,62 mmol) i cikloheksankarbaldehid (2,8 g, 24,89 mmol) u toluenu (90,0 mL) je zagrejana pod refluksom tokom noći sa uklanjanjem vode pomoću Din-Štarkovog (Dean-Stark) aparata. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i koncentrovana pod vakuumom. Proizvod dobijen kao rezultat je rastvoren u etanolu (35 mL) i NaBH4 (1,66 g, 43,7 mmol) je dodat. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Reaktor je ohlađen sa 2N vodenastim HCl (30 mL) i zatim je podešena na pH=10 sa vodenastim NaOH. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL) i organski sloj je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (DCM/MeOH= 50:1 do 40:1) da bi se dobio N-(3-(cikloheksilmetilamino)propil)piperidin-1-sulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.17 (m, 6H), 2.78 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.45 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 1.75 (m, 12H), 1.44 (m, 1H), 1.23 (m, 3H), 0.96 (m, 2H). MS (EI) za C15H31N3O2S, nađeno 318 [M+H]<+>.

[0145] U rastvor A/-(3-(cikloheksilmetilamino)propil)piperidin-1 -sulfonamida (2,8 g, 8,83 mmol) u CH3CN (50 mL) su dodati Na2CO3 (0,97 g, 9,19 mmol), Lil (0,28 g, 2,12 mmol) i 3-bromopropilftalimid (5,66 g, 21,19 mmol). Reakcina mešavina je zagrejana do refluksa tokom noći. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i filtrirana. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:3) da bi se dobio N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)propil)amino)propil) piperidin-1-sulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.85 (m, 2H), 7.73 (m, 2H), 5.82 (br s, 1 H), 3.68 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.17 (m, 6H), 2.46 (m, 4H), 2.14 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.67 (m 12H), 1.45 (m, 3H), 1.18 (m, 2H), 0.87 (m, 2H).

[0146] U rastvor N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)propil)amino)propil) piperidin-1-sulfonamida (500 mg, 0,10 mmol) u EtOH (5 mL) je dodato NH2NH2 (1,5 mL, 2,55 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom, i ostatak je razblažen sa etil acetaom (20 mL). Reakciona mešavina je oprana vodom (2 X 10 mL). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se obezbedio N (3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)piperidin- 1- sulfonamid (380 mg, kvantitativno).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.17 (m, 6H), 2.78 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.45 (m, 4H), 2.14 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.67 (m 12H), 1.45 (m, 3H), 1.18 (m, 2H), 0.87 (m, 2H). MS(EI) za C18H38N4O2S, 375 [M+H]<+>.

[0147] U rastvor N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)piperidin-1-sulfonamida (2,42 g, 6,49 mmol) i DIEA (1,31 g, 10,3 mmol) u DCM (50 mL) je dodat sulfonil hlorid (1,69 g, 7,13 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Mešavina je oprana vodom (50 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovane Na2SO4 i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (MeOH/DCM/= 1:80 do 1:30) da bi se dobio N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)-2-fluorofenilsulfonamido) propil)amino)propil)piperidin-1-sulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.66 (m, 1H), 6.43 (m, 2H), 5.58 (br s, 2H), 3.15 (m, 6H), 3.03 (s, 6H), 2.99 (br s, 2H) 2.46 (br s, 4H), 2.12 (br s, 2H), 1.30-1.70 (m, 18H), 1.21 (m, 4H), 0.82 (m, 2H). MS (EI) za C26H46FN5O4S2, nađeno 575 [M+H]<+>.

[0148] U rastvor N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)-2-fluorofenilsulfonamido) propil)amino)propil)piperidin-1-sulfonamida (2,28 g, 3,97 mmol) u DMF (20 mL) je dodat natrijum hidrid (400 mg, 3,97 mmol). Mešavina je mešana tokom 30 min na temperaturi okoline. Ciklopropan-1,1-diilbis(metilen) dietansulfonat (1,3 g, 3,97 mmol) je dodat i reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom 2 sata. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i sipana u vodu (150 mL). Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (100 mL). Organski sloj je opran vodom (50 mL X 2), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/petrolej etar = 1:15 do 1:8) da bi se dobila slobodna baza koja je rastvorena u etru (5 mL). Hlorovodonična kiselina (1,5 mL ili 3 N rastvor u 1,4-dioksanu) je dodat i mešavina je mešana tokom 0,5 sata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom i ostatak je triturisan sa etrom tri puta da bi se dobilo jedinjenje A40.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.89 (br s, 1H), 7.54 (m, 1H), 6.63 (m, 2H), 3.67 (br s, 1H), 3.55-2.89 (m, 23H), 1.90-1.45 (m, 15H), 1.28 (m, 4H), 0.95 (m, 2H), 0.69 (m, 4H). MS(EI) za C31H52FN5O4S2, nađeno 643 [M+H]<+>.

[0149] Sledeća jedinjenja su sintetisana na sličan način:

Route - Ruta

[0150] U 1-((1H-imidazol-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorosulfonat (1,69 g, 4,65 mmol, referenca: J. Org. Chem.2002, 68, 115-119.) i 4-fenilpiperidin (750 mg, 4,65 mmol) je dodat ACN (16 mL) i rastvor je ostavljen da stoji tokom 2 sata zatim je koncentrovan i prečišćen direktno hromatografijom sa svetlećim stubom (0-80% heksani/etil acetat) da bi se obezbedio proizvod.

[0151] U 1-((1H-imidazol-1-il)sulfonil)-4-fenilpiperidin (600 mg, 2,06 mmol) u DCM na 0 °C je dodat metil triflat (0,23 mL, 2,06 mmol) tokom 5 min. Posle ostavljanja da sotji tokom 30 min mešavina je koncentrovana da bi se dobio 3- metil-1-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. MS(EI) za C15H20N3O2S2, nađeno 307 [M]<+>.

[0152] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

1-((8-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A51).

1-((7-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A52).

1-((6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A53).

1-((5-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A54).

1-((6-fluoro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A59).

1-((6-bromo-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A60).

1-((4-izopropoksipiperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat hidrohlorid (Međuproizvod za jedinjenje A66).

1-((4-(ciklopent-1-en-1-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A67).

1-((4-(cikloheks-1-en-1-il)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A68).

1-((4-(3-hlorofenil)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A69).

1-((4-(2-hlorofenil)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A73).

1-((4-(4-hlorofenil)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A74).

1-((4-(1H-pirazol-1-il)piperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A79).

1-((4-(benzo[d]oksazol-2-il)piperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A80).

3-metil-1-((4-(pirimidin-2-il)piperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A81).

1-((2-hloro-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-6(5H)-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A82).

1-((5-hloroizoindolin-2-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A89).

[0153] U 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (97 mg, 0,21 mmol) u ACN (0,8 mL) je dodat 3-metil-1-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (95 mg, 0,21 mmol) i mešavina je zagrejana do 80 °C tokom 8 sati koncentrovana i prečišćena direktno hromatografijom sa svetlećim stubom (0-70% heksani (1% DEA)/etil acetat) da bi se dobila slobodna baza. U ovo je dodat dietil etar (5 mL) i HCl (52 µL 4 N HCl u 1,4-dioksanu) i mešavina je ostavljena da stoji tokom 10 min zatim je koncentrovana da bi se dobio 4-{[9-(cikloheksilmetil)-3-metiliden-5-[(4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil]-1,5,9-triazaciklododecan--1-il)sulfonil}-N,N-dimetilanilin hidrohlorid (jedinjenje A35). MS(EI) za C36H55N5O4S2, nađeno 686 [M+H]<+>.

[0154] Sledeća jedinjenja su sintetisana na sličan način:

Route - Ruta

[0155] U N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (838 mg, 1,84 mmol) u ACN (5 mL) je dodat 3-metil-1-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (838 mg, 1,84 mmol) i mešavina je zagrejana do 80 °C tokom 8 sati koncentrovana i prečišćena direktno hromatografijom sa svetlećim stubom (0-70% heksani (1% DEA)/etil acetat) da bi se dobio proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.33 (m, 5H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.75 (br s, 2H), 3.84 (m, 2H), 3.18 (m, 2H), 3.05 (s, 6H), 2.91 (m, 4H), 2.65 (m, 1H), 2.43 (m, 4H), 2.08 (m, 2H), 1.73 (m, 12H), 1.40 (m, 1H), 1.15 (m, 4H), 0.85 (m, 2H).

[0156] U 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metil-5-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (123 mg, 0,194 mmol) u NMP (10 mL) je dodat natrijum hidrid (19 mg od 60% disperzije u mineralnom ulju, 0,485 mmol) tokom 20 min. Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 30 min zatim 80 °C još dodatnih 20 min. Bis-sulfonat je zatim dodat tokom 1 sat. Posle 8 sati na 80 °C mešavina je ohlađena do temperature okoline, razblažena slanim rastvorom i etil acetatom (3X), kombinovane organske materije su oprane slanim rastvorom (3X), osušene natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-50% heksani (1% DEA)/etil acetat) je dao slobodnu bazu. Slobodna baza je pretvorena u HCl so sa dodatkom etil etra (5 mL) i HCl (4N u dioksanu, 50 uL). Koncentracija posle 10 min je obezbedila 4-{[9-(cikloheksilmetil)-3-metil-5-[(4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil]-1,5,9-triazaciklododekan-1-il]sulfonil}-N,N-dimetilanilin hidrohlorid (jedinjenje A44). MS(EI) za C36H57N5O4S2, nađeno 688 [M+H]<+>.

[0157] Sledeće jedinjenje je sintetisano na sličan način:

[0158] U 1,1-bis(hidroksimetil)ciklopropan (5,00, 49,0 mmol) u acetonu (20 mL) je dodat TEA (2,2 ekv, 108 mmol) i mešavina je ohlađena do 0-5 °C. Etansulfonil hlorid je dodat nekom brzinom da bi se održala unutrašnja temperatura ispod 10 °C (~1 sat). Posle mešanja dodatna 2 sata na temperaturi okoline mešavina je razblažena sa 150 mL vode, ekstrahovana sa etil acetatom (2X50 mL), oprana slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana da bi se obezbedio proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.16 (s, 4H), 3.20 (m, 4H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 6H), 0.83 (s, 4H). MS(EI) za C9H18O6S2, nađeno 287 [M+H]<+>.

[0159] Jedinjenje u nastavku je sintetisano na sličan način 2-metilpropan-1,3-diil dietansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A44).

[0160] U N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)propil)amino)propil)-4-fenilpiperidin-1-sulfonamid (89 mg, 0,14 mmol) u NMP (7 mL) je dodat NaH (14 mg od 60% disperzije u mineralnom ulju, 0,35 mmol) u porcijama tokom 20 min. Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 30 min zatim na 80 °C tokom 20 min. Dihlorid je zatim dodat tokom 1 sat i mešavina je zagrejana na 80 °C. Posle 8 sati mešavina je ohlađena do temperature okoline, razblažena slanim rastvorom i etil acetatom, ekstrahovana sa etil acetatom (3X), kombinovane organske materije su oprane slanim rastvorom (3X), osušene natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-50% heksana (1% DEA)/etil acetata) je dala proizvod. Proizvod je pretvoren u HCl so sa dodatkom etil etra (5 mL) i HCl (4N u dioksanu, 35 uL). Mešavina je koncentrovana da obezbedi 4-{[5-(cikloheksilmetil) -9-[(4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil]-1,5,9-triazaciklotridekan-1-il]sulfonil}-N,N-dimetilanilin-hidrohlorid (jedinjenje B5).

MS(EI) za C36H57N5O4S2, nađeno 688 [M+H]<+>.

[0161] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

[0162] N-(4-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)butan-2-il)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid je sintetisan prema Ruti 2 sa supstitucijom odgovarajućeg sulfonil hlorida.

[0163] 4-((5-(cikloheksilmetil)-2-metil-11-metilen-9-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin je sintetisan prema postupku opisanom u Ruti 15 supstituisanjem sa 3-hloro-2-(hlorometil)prop-1-enom da se dobije 4-((5-(cikloheksilmetil)-2-metil-11-metilen-9-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (jedinjenje B6). MS(EI) za C37H57N5O4S2, nađeno 700 [M+H]<+>.

[0164] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

[0165] U N-(3-((cikloheksilmetil)(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)propil)amino)propil)-4-fenilpiperidin-1-sulfonamid (33 mg, 0,052 mmol) u NMP (3 mL) je dodat natrijum hidrid (4,6 mg sa 60% disperzijom u mineralnom ulju, 0,11 mmol). Zatim je mešavina mešana na temperaturi okoline tokom 30 min zatim 80 °C tokom dodatnih 20 min. Zatim je dodat dihlorid (19 mg, 0,052 mmol) je zatim dodato. Posle 2 sata na 80 °C mešavina je ohlađena do temperature okoline, razblažena je slanom vodom i etil acetatom, ekstrahovana sa etil acetatom (3X), kombinovane organske materije su oprane slanim rastvorom (3X), i osušene sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-50% heksani (1% DEA)/etil acetat) je dalo 9-(cikloheksilmetil)-1-[4-(dimetilamino)benzensulfonil]-5-[(4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil]-1,5,9-triazaciklododekan-3-ol (jedinjenje A55). MS(EI) za C35H55N5O5S2, nađeno 690 [M+H]<+>.

[0166] U rastvor 3-fluoro-4-jodoanilina (1,11 g, 4,68 mmol) u acetonitrilu (15 mL) su dodati 37% vodenasti formaldehid (8,0 mL, 99,9 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (1,88 g, 29,97 mmol). Zatim je sirćetna kiselina (1 mL) dodata ukapavanjem tokom 10 min i reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Vodenasti NaOH (1N, 30 mL) je dodat i mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL). Organske materije su oprane sa slanim rastvorom, osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da obezbede 3-fluoro-4-jodo-N,N-dimetilanilin.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.47 (m, 1H), 6.43 (m, 1H), 6.28 (m, 1H), 2.94 (s, 6H).

[0167] U rastvor 3-fluoro-4-jodo-N,N-dimetilanilina (500 mg, 1,89 mmol) u etru (5 mL) je dodat n-BuLi (0,8 mL, 1,89 mmol) na -78 °C. Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na ovoj temperaturi. Sumpor dihlorid (405 mg, 3 mmol) je dodat ireakciona mešavina je mešana još 1 sat. Reakciona mešavina je brzo ohlađena vodom (10 mL) i zatim je podešena do vrednosti pH=8 sa zasićenim vodenastim NaHCO3. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (10 mL). Organska faza je odvojena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da bi se dobio 4-(dimetilamino)-2-fluorobenzen-1-sulfonil hlorid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73 (m, 1H), 6.43 (m, 2H), 3.15 (s, 3H).

Route - Ruta

Mel, NaH, toluene - Mel, NaH, toluen

[0168] U 9-(cikloheksilmetil)-1-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-5-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-3-ol (30 mg, 0,043 mmol) u toluenu (0,5 mL) je dodat NaH (1,6 mg od 60% disperzije u mineralnom ulju, 0,065 mmol) posle čega je usledilo dodavanje jodometana (14 µL, 0,22 mmol). Posle mešanja tokom 1 sat mešavina je brzo ohlađena sa vodom, ekstrahovana sa DCM (2X), organske materije su kombinovane i osušene natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-50% heksani/etil acetat 1% DEA) je odato 4-{[9-(cikloheksilmetil)-3-metoksi-5-[(4- fenilpiperidin-1-il)sulfonil]-1,5,9-triazaciklododekan-1-il]sulfonil}-N,N-dimetilanilin (jedinjenje A61). MS(EI) za C36H57N5O5S2, nađeno 704 [M+H]<+>.

[0169] U 9-(cikloheksilmetil)-1-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-5-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-3-ol (171 mg, 0,248 mmol) je dodat DCM (10 mL) posle čega je usledilo dodavanje Dess-Martin perjodinana (126 mg, 0,297 mmol). Mešavina je ostavljena da stoji tokom 2 sata na sobnoj temperaturi zatim je koncentrovana i prečišćena direktno FCC (0-60% heksana (1% DEA)/etil acetat) da bi se dobio 9-(cikloheksilmetil)-1-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-5-((4-fenil- piperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-3-on (jedinjenje B20). MS(EI) za C35H53N5O5S2, nađeno 688 [M+H]<+>.

phenylboronic acid – fenilboronska kiselina

[0170] U 4-((5-((6-bromo-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (70 mg, 0,095 mmol) u DMF (0,7 mL) je dodata voda (0,1 mL), fenilboronska kiselina (13 mg, 0,10 mmol), Pd(dppf)Cl2-DCM (7,8 mg, 0,001 mmol), i natrijum karbonat (30 mg, 0,29 mmol). Mešavina je zagrejana do 80 °C tokom 1 sat zatim je razblažena slanim rastvorom, ekstrahovana sa etil acetatom (2X), osušena sa natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana. Hromatografija sa svetlećim stubom (0-50% heksana (1% DEA)/etil acetata) je dala 4-((9-(cikloheksilmetil)-3-metilen-5-((6-fenil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-1-il)sulfonil)-N,N-dimetilanilin (jedinjenje A63). MS(EI) za C46H63N6O4S2, nađeno 734 [M+H]<+>.

1, 4-dioxane – 1,4-dioksan, water – voda; methanol - metanol

[0171] U mešavinu ciklopentanona (5,50 g, 65,5 mmol) i Na2CO3 (10,4 g, 98,2 mmol) u DCM (130 mL) je dodat Tf2O (18,6 g, 72,0 mmol) na -20 °C. Reakciona mešavina je ostavljena da se zagreje na temperaturi okoline i mešana tokom noći. Čvrsta supstanca je filtrirana i taj filtrat je koncentrovan da bi se dobio ciklopentnil trifluorometansulfonat.

[0172] Rastvor ciklopentenil trifluorometansulfonata (7,7 g, 35,6 mmol) u 1,4-dioksanu (105 mL) i vodi (50 mL) je degaziran i zatim napunjen sa argonom. tert-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3-dioksolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (6,0 g, 19,4 mmol), Pd(PPh3)4 (1,02 g, 0,88 mmol) i natrijum karbonat (10,3 g, 97,1 mmol) su dodati. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na 90 °C i zatim ohlađena do temperature okoline. Mešavina je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su oprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje svetlećom hromatografijom u stubu na silika gelu (etil acetat/heksani = 1:99 do 5:95) je dalo tert-Butil 4-ciklopentenil-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.73 (br s, 1H), 5.56 (br s, 1H), 4.00 (br s, 2H), 3.45 (br s, 2H), 2.47 (m, 4H), 2.33 (br s, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).

[0173] U rastvor tert-Butil 4-ciklopentenil-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (3,3 g, 15,3 mmol) u metanolu (30 mL) je dodat Pd/C (0,6 g). Mešavina je hidrogenisana pod 15 psi pritiska tokom 5 sati. Mešavina je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio tert-butil 4- ciklopentipiperidin-1-karboksilat.

[0174] U rastvor tert-butil 4-ciklopentilpiperidin-1-karboksilat (2,9 g, 11,5 mmol) u etil acetatu (15 mL) je dodat EtOA/HCl (4 N, 20 mL). Mešavina je mešana tokom 2 sata i čvrsta supstanca je uklonjena. Proizvod dobijen kao rezultat je opran etrom da bi se dobio 4-ciklopentilpiperidin hidrohlorid.1H NMR (400 MHz, D2O): δ 3.25 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.45 (m, 8H), 0.96 (m, 2H).

[0175] Ciklopentilpiperidin hidrohlorid (1,4 g, 9,5 mmol) i 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-3- metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (3,45 g, 9,5 mmol) su pomešani u CH3CN (20 mL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/petrolej etar = 1:9 do 1:3) da bi se dobio 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-4-ciklopentilpiperidin.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.91 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 3.87 (m, 2H), 2.51 (m, 2H), 1.83 (m, 4H), 1.54 (m, 5H), 1.33 (m, 2H), 1.08 (m, 3H).

[0176] U rastvor 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)2-hlorofenil)piperidin (500 mg, 1,8 mmol) u DCM (5 mL) je dodat MeOTf (0,3 g, 1,8 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen i proizvod dobijen kao rezultat je opran sa etrom da bi se dobio 1-((4-ciklopentilpiperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.59 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.95 (m, 2H), 2.87 (m, 2H), 1.81 (m, 4H), 1.54 (m, 6H), 1.23 (m, 4H).

[0177] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

1-((4-cikloheksilpiperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A65).

3-metil-1-((4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperidin-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A78).

methanol – metanol; hydroxylamine HCl - hidroksilamin HCl; DCM -DCM; sodium acetate – natrijum acetat

119

[0178] U 9-(cikloheksilmetil)-1-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-5-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-3-on (19 mg, 0,028 mmol) u DCM (0,5 mL) i metanolu (0,05 mL) je dodat hidroksilamin hidrohlorid (5,8 mg, 0,083 mmol) i natrijum acetat (6,8 mg, 0,083 mmol). Mešavina je mešana tokom 6 sati na temperaturi okoline i zatim koncentrovana i prečišćena hromatografijom sa svetlećim stubom (0-60% heksana (1% DEA)/etil acetata) da bi se dobio 9-(cikloheksilmetil)-1-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-5-((4-fenilpiperidin-1-il)sulfonil)-1,5,9-triazaciklododekan-3-on oksim (jedinjenje A75). MS(EI) za C35H54N6O5S2, nađeno 703 [M+H]<+>.

[0179] Rastvor 1-hloro-2-jodobenzena (5,0 g, 21,1 mmol) u DMF (150 mL) je dagaziran i zatim je dopunjen argonom. tert-Butil 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3-dioksolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (7,13 g, 23,0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1,7 g, 2,1 mmol) i kalijum karbonat (8,69 g, 63,0 mmol) su dodati. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na 110 °C i zatim ohlađena do temperature okoline. Mešavina je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su oprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje svetlećom hromatografijom u stubu na silika gelu (etil acetat/heksani = 1:9 do 1:4) je dalo tert-Butil 4-(2-hlorofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.37 (m, 1H), 7.18 (m, 3H), 5.67 (m, 1H), 4.06 (m, 2H), 3.64 (m, 2H), 2.46 (br s, 2H), 1.51 (s,9H).

[0180] U rastvor tert-Butil 4-(2-hlorofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (2,0 g, 6,8 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat HCl/MeOH (3M, 20 mL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Rastvor dobijen kao rezultat iz 4-(2-hlorofenil)1,2,3,6-tetrahidropiridin hidrohlorida je korišćen direktno u sledećem koraku.

[0181] U rastvor 4-(2-hlorofenil)piperidin hidrohlorida u MeOH/HCI je dodat PtO2 (0,1 g). Mešavina je hidrogenisana na temperaturi okoline pod 15 psi tokom 3 sata. Katalizator je isfiltriran i filtrat je koncentrovan da bi se obezbedio proizvod.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.19 (br s, 2H), 7.37 (m, 1H), 7.36 (m, 4H), 3.44 (m, 1H), 3.33 (m, 2H), 3.08 (m, 2H), 1.95 (m, 4H).

[0182] Slobodna baza (0,95 g, 4,8 mmol) i 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-3- metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (1,76 g, 4,8 mmol) su pomešani u CH3CN (10 mL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen, i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da bi se dobio 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-4-(2-hlorofenil)piperidin.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.01 (s, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.18 (m, 4H), 4.07 (m, 2H), 3.06 (m, 1H), 2.74 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.81 (m, 2H).

[0183] U rastvor 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-4-(2-hlorofenil)piperidin (501 mg, 1,5 mmol) u DCM (5 mL) je dodat MeOTf (0,27 g, 1,63 mmol). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen. Proizvod dobijen kao rezultat je opran sa etrom da bi se dobio 1-((4-(2-hlorofenil)piperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A57). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 9.65 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.39 (m, 4H), 4.16 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.31 (m, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.85 (m, 2H).

[0184] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

1-((4-(3-hlorofenil)piperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A58).

1-((4-(4-hlorofenil)piperidin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A72).

[0185] U rastvor 2-(3-hlorofenil)etanamina (149 g, 0,95 mol) i TEA (144 g, 1,42 mol) u DCM (1,5 L) je dodat ukapavanjem etil karbonohloridata (107 g, 1,14 mol) na 0°C. Reakciona mešavina je mešana tokom 3 sata i zatim je oprana sa 1N vodenastog HCl (1 L) i zasićenog vodenastog NaHCO3 (600 mL). Taj DCM sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da obezbedi metil 3-hlorofenetilkarbamata.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.27 (m, 3H), 7.08 (m, 1H), 4.77 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.44 (m, 2H), 2.80 (m, 2H).

[0186] Metil 3-hlorofenetilkarbamat (193 g, 0,9 mol) je rastvoren u CF3SO3H (1,36 kg). Mešavina je zagrejana na 120 °C tokom noći. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i zatim sipana u ledenu vodu (4 L). Proizvod dobijen kao rezultat je prikupljen filtracijom i opran etrom da bi se dobio 6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-1(2H)-on.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.01 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.25 (m, 2H), 6.21 (br s, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.01 (m, 2H).

[0187] U 6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-1(2H)-on (33 g, 182 mmol) u THF (330 mL) je dodat ukapavanjem BH3-Me2S (73 mL, 729 mmol). Reakciona mešavina je refluksovana tokom noći. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i zatim je brzo ohlađena sa 6 N vodenaste HCL (300 L). THF je uklonjen pod smanjenim pritiskom, i preostali rastvor je refluksovan tokom noći. Mešavina je koncentrovana do izvesne zapremine i zatim je bazifikovana sa 2N vodenastog NaOH. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa DCM. Taj DCM sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da obezbedi 6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina.

[0188] U rastvor 6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina (18,5 g, 0,11 mol) u CH3CN (180 mL) je dodato jedinjenje 2,3-dimetil-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (43,5 g, 0,11 mol, Literatura: J. Org. Chem. 2002, 68, 115-119.). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na 30 °C. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:1) da bi se dobio 6-hloro-2-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.21 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.94 (m, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.62 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.67 (s, 3H).

[0189] U rastvor 6-hloro-2-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina (25,5 g, 82 mmol) u DCM (260 mL) je dodat CF3SO3Me (13,45 g, 82 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen i ostatak je opran sa etrom da bi se dobio 1-(6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.

[0190] U rastvor 1-(6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (8,7 g, 18,4 mmol) u CH3CN (100 mL) je dodat (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (5,0 g, 18,4 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na 30 °C. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:3 do 1:1) da bi se dobio (S)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid (jedinjenje B10).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.85 (m, 2H), 7.43 (m, 2H), 7.18 (m, 2H), 7.03 (m, 1H), 4.35 (s,

2H), 3.48 (m, 2H), 3.18 (s, 6H), 3.15 (m, 1H), 2.95 (m, 6H), 2.85 (m, 1H), 1.89 (m, 1H), 0.89 (m, 3H).

[0191] (S)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid (300 mg, 0,6 mmol) je rastvoren u NMP (3 mL) i NaH (60%, 96 mg, 2,4 mmol) je dodato. Mešavina je mešana tokom 30 min na temperaturi okoline i zatim zagrejana na 80 °C tokom 20 min. Mešavina je ohlađena do temperature okoline. Dodat je rastvor ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonata (231 mg, 0,6 mmol) u NMP (1 mL). Reakciona mešavina je zagrejana na 80 °C tokom 1 sat zatim je ohlađena do temperature okoline i brzo je ohlađeno vodom (10 mL). Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (15 mL). Ekstrakt je opran sa slanim rastvorom i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/petrolej etar = 1:8 do 1:3) da bi se dobilo jedinjenje A87. MS(EI) za C34H52ClN5O4S2, nađeno 695 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz,CDCl3): δ 7.59 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.15 (m, 2H), 7.00 (m, 1H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.34 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.17 (m, 3H), 3.05 (s, 6H), 2.88 (m, 4H), 2.25 (m, 2H), 2.15 (m, 6H), 1.95 (m, 2H), 1.65 (m, 8H), 1.23 (m, 6H), 0.95 (m, 5H).

[0192] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

(nastavak)

[0193] U rastvor benzilamina (37,7 g, 0,350 mol) u CH3CN (1 L) su dodati 3-hloropropan-1-ol (100 g, 1,06 mol) i Na2CO3 (131 g, 1,24 mol). Reakciona mešavina je refluksovana tokom 50 sati i zatim ohlađena do temperature okoline. Mešavina je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (MeOH/ DCM = 1:99 do 3:97) da bi se dobilo 3,3’-(benzilazandiil)dipropan-1-ol.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (m, 5H), 3.70 (m, 4H), 3.61 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.68 (m, 4H), 1.78 (m, 4H).

[0194] U rastvor 3,3’-(benzilazandiil)dipropan-1-ol (55 g) u MeOH (500 mL) je dodat Pd/C (10 g). Mešavina je hidrogenisana na temperaturi okoline pod 15 kg pritiska tokom 6 sati. Mešavina je filtrirana i taj filtrat je koncentrovan da bi se dobio 3,3’-azandiildipropan-1-ol.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.78 (m, 4H), 3.46 (s, 2H), 2.84 (m, 4H), 1.75 (m, 4H).

[0195] U rastvor 3,3’-azandiildipropan-1-ola (15 g, 113 mmol) u DCM (300 mL) su dodati cikloheksankarbaldehid (18,8 g, 141 mmol) i NaBH(OAc)3 (72,5 g, 0,34 mol). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata i dodat je HOAc (20, 4 g, 0,34 mol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je brzo ohlađena sa vodom (150 mL) i zatim je pdoešena na pH=12 sa NaOH. Organski sloj je odvojen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (MeOH/ DCM = 3:97 do 1:9) da bi se dobio 3,3’-((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-1-ol).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.75 (m, 4H), 2.64 (m, 4H), 2.18 (m, 2H), 1.75 (m, 9H), 1.55 (m, 1H), 1.21 (m, 3H), 0.89 (m, 1H).

[0196] U rastvor jedinjenja 3,3’-((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-1-ola) (1,2 g, 5,2 mmol) i TEA (1,0 g, 10,4 mmol) u DCM (15 mL) je dodat MsCI (1,18 g, 10,4 mmol) na 0 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 4 sata i zatim je brzo ohlađena sa vodom (15 mL). DCM sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se obezbedilo jedinjenje ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonata. Dimesilat je korišćen odmah bez daljeg prečišćavanja.

[0197] U rastvor propan-1,3-diamina (100 g, 1,35 mol) u THF (800 mL) je dodat rastvor Boc2O (73,6 g, 0,34 mol) u THF (200 mL) na 0~10 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 3 sata i dodata je voda (1 L). Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (500 mL X 2). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani do zapremine od 400 mL. Heksan (300 mL) je dodat i u rastvor dobijen kao rezultat je dodato 15% vodenaste oksalne kiseline (1 L). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata. Organski sloj je preliven i vodenasti sloj je podešen na pH=10 sa 3N vodenastog NaOH. Reakciona mešavina je ekstrahovana sa (600 mL X 2). Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio tert-Butil 3-aminopropilkarbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.03 (br s, 1H), 3.23 (br s, 2H), 2.69 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

[0198] Trietilamin (4,70 g, 46,5 mmol) je dodat ukapavanjem u mešanu mešavinu benzil 3-bromopropilkarbamata (4,2 g, 15,5 mmol) da bi se obezbedio tert-Butil 3-aminopropilkarbamat (2,7 g, 15,5 mmol) u DMF (50 mL) na temperaturi okoline. Reakciona mešavina je zagrejana na 70 °C tokom 1 sat. Većina DMF je uklonjena pod vakuumom i preostala mešavina je razblažena sa vodom (120 mL) i oprana sa etrom (150 mL X 4) da bi se uklonila većina dialkilisanog nusproizvoda. Vodenasti sloj je podešen na pH=11 sa 1N vodenastim NaOH i ekstrahovana sa etrom (200 mL). Ekstrakt je oran vodom (150 mLX3) da bi se uklonio nereagovani tert-Butil 3-aminopropilkarbamat, osušen sa anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovan da obezbedi tert-butil (3-((3-(((benziloksi)karbonil)amino)propil)amino)propil)karbamat.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.36 (m, 5H), 5.60 (br s, 1H), 5.11 (m, 3H), 3.30 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 2.68 (m, 4H), 1.70 (m, 5H), 1.44 (s, 9H).

[0199] U rastvor tert-butil (3-((3-(((benziloksi)karbonil)amino)propil)amino)propil)karbamata (100 mg, 0,27 mmol) u DCM (5 mL) je dodat cikloheksankarbaldehid (31 mg, 0,27 mmol) i HOAc (30 mg, 1,1 mmol). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata i NaBH(OAc)3 (235 g, 1,1 mmol) je dodat u vidu jedne porcije. Reakciona mešavina je mešana tokom 4 sata. TLC analiza je pokazala 50% konverzije i još jedna porcija cikloheksan karbaldehida (15 mg, 0,13 mmol) je dodata. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Voda (10 mL) je dodata da bi se brzo ohladila reakcija i mešavina je podešena na pH=2 dodavanjem HOAc. Mešavina je mešana još 0,5 sata i zatim je podešena na pH=12 sa vodenastim NaOH (1N). Organski sloj je odvojen i koncentrovan da bi se obezbedio tert-butil (3-((3 (((benziloksi)karbonil)amino)propil)(cikloheksilmetil)amino)propil)karbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.27 (m, 5H), 6.12 (br s, 1H), 5.55 (br s, 1H), 5.01 (s, 3H), 3.34 (m, 2H), 3.18 (m, 2H), 3.08 (m, 2H), 2.80 (m, 4H), 1.65 (m, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.12 (m, 6H).

[0200] U rastvor tert-butil (3-((3-(((benziloksi)karbonil)amino)propil)(cikloheksilmetil)amino)propil)karbamat (0,50 g, 1,1 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat (Pd/C (0,1 g). Mešavina je hidrogenisana pod 15 psi pritiska tokom 3 sata. Mešavina je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio tert-butil (3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)karbamat.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.78 (br s, 1H), 3.19 (br s, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.40 (m, 4H), 2.13 (m, 2H), 1.98 (br s, 2H), 1.67 (m, 9H), 1.44 (s, 9 H), 1.12 (m, 4H), 0.89 (m, 2H).

[0201] U rastvor tert-butil (3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil) karbamata (1,2 g, 3,7 mmol) u CH3CN (10 mL) je dodat 3-metil-1-(4-fenilpiperidin-1-ilsulfonil)-1H-imidazol-3-iljum (1,47 g, 3,7 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da bi se dobio tert-butil 3-((cikloheksilmetil)(3-(4-fenilpiperidin-1-sulfonamido)propil) amino)propilkarbamat.

[0202] U rastvor tert-butil (3-((cikloheksilmetil)(3-(4-fenilpiperidin-1-sulfonamido)propil)amino)propilkarbamata (0,85 g, 1,5 mmol) u DCM 15 mL) je dodat TFA (10 mL). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Rastvarač je uklonjen i ostatak je rastvoren u DCM (50 mL). Rastvor je bazifikovan sa 1N vodenaste NaOH. DCM sloj je osušen iznad anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan da bi se obezbedio N (3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-fenilpiperidin-1- sulfonamid.

[0203] U rastvor N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)piperidin-4-sulfonamida (90 mg, 0,20 mmol) u DCM (5 mL) je dodat TEA (40 mg, 0,4 mmol). Mešavina je ohlađena do 0°C i rastvor 4-(dimetilamino)-2,6-difluorobenzen-1-sulfonil hlorida (60 mg, 0,24 mmol) u DCM (1 mL) je dodat. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Mešavina je razblažena sa DCM (30 mL) i zatim je oprana vodom (20 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da bi se dobio N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)-fenilsulfonamido)propil)amino)propil)-4-fenilpiperidin-1-sulfonamid.

[0204] U rastvor N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)propil)amino)propil)-4-fenilpiperidin-1-sulfonamid (80 mg, 0,123 mmol) u NMP (2 mL) je dodat NaH (12 mg, 0,29 mmoL). Mešavina je zagrejana na 80 °C tokom 0,5 sata. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i rastvor 3-hloro-2-(hlorometil)prop-1-ena (15 mg, 0,12 mmol) u NMP (0,1 mL) je dodat. Reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom 2 sata. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i dodata je voda (20 mL). Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (15 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatograijom u stubu na silika gelu (etil acetat/heksan = 10:30 do 20:10) da bi se dobilo jedinjenje A86. MS(EI) za C36H53F2N5O4S2, nađeno 733 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.31 (m, 5H), 6.18 (m, 2H), 5.25 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.87 (m, 4H), 3.20 (m, 4H), 3.05 (s, 6H), 2.88 (m, 2H), 2.41 (m, 4H), 2.05 (m, 5H), 1.75 (m, 9H), 1.27 (m, 6H), 0.85 (m, 2H).

[0205] U rastvor 3,5-difluoro-4-jodo-N,N-dimetilanilin (500 mg, 1,77 mmol) u etru (5 mL) je dodat ukapavanjem n-BuLi (0,71 mL, 1,77 mmol) na -78 °C. Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na -78 °C. Sulfuril dihlorid (358 mg, 1,5 mmol) je dodat. Reakciona mešavina je mešana još 0,5 sata. Mešavina je zatim razblažena vodom (10 mL) i zatim je ekstrahovana sa etil acetatom (15 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da bi se dobio sirovi proizvod, koji je dalje rekristalizovan iz heksana/EtOAc (10:1) da bi se dobio 4-(dimetilamino)-2,6-difluorobenzen-1-sulfonil hlorid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.21 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 3.09 (s, 6H).

[0206] U suspenziju 1, 3-dihloropropan-2-ona (5,0 g, 39,5 mmol) u H2O (50 mL) je dodat O-metilhidroksilamin hidrohlorid (3,5 g, 41,5 mmol) i reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 1 sat. Organski sloj je odvojen, razblažen etrom i koncentrovan pod vakuumom (<30 °C) da bi se dobio 1,3-dihloropropan-2-on O-metil oksim.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.33 (s, 2H), 4.27 (s, 2H), 3.94 (s, 3H).

[0207] U (S)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3,4-dihidroizohinolin- 2(1H)-sulfonamid (100,0 mg, 0,200 mmol) u suvom NMP (3 mL) na 0 °C je dodat NaH (24,0 mg, 0,600 mmol) i mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 20 minuta i iz magličaste mešavine se pretvorila u skoro providnu tokom ovog vremena. Jodometan (27 µL, 0,440 mmol) je dodat i mešavina je ostavljena da vri na temperaturi okoline tokom 1 sat i nije napredovala preko -50% završetka, tako da je ista količina NaH i metil jodida dodata ponovo i reakcija je završena posle dodatnog sata na temperaturi okoline Slani rastvor (10 mL) i EA (10 mL) su dodati. Vodenasti sloj je ekstrahovan sa EA (1X5 mL) i organske materije su kombinovane, oprane slanim rastvorom (3X10 mL), osušene sa natrijum sulfatom, filtrirane i koncentrovane. FCC (heksani/EA 0-70%) je dalo jedinjenje B12. MS(EI) za C23H33ClN4O4S2, nađeno 529 [M+H]<+>.

[0208] U rastvor metil metakrilata (300 g, 3,0 mol) u MeOH (1,5 L) je dodat (S)-1-feniletanamin (363 g, 3 mol). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 dana. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:9 do 1:1) da bi se dobio metil 2-metil-3-((S)-1-feniletilamino)propanoat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.25 (m, 5H), 3.75 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.75 (m, 3H), 1.39 (m, 1H), 1.28 (m, 3H), 1.09 (m, 3H).

[0209] U rastvor 2-metil-3-((S)-1-feniletilamino)propanoata (440 g, 1,99 mol) u acetonu (6 L) je dodat TsOH-H2O (378 g, 1,99 mol). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 1 sat. Istaložena čvrsta supstanca je prikupljena filtracijom i osušena da bi se dobila so (300 g) koja je držana u suspenziji u acetonu (2 L) i refluksovana tokom 1 sat. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i istaloženi sadržaj dobijen kao rezultat je prikupljen filtracijom da bi se dobila so što je bilo držana u suspenziji u DCM (2 L) i zasićenom vodenastom K2CO3 (1,5 L). Mešavina je mešana tokom 0,5 sati i čvrsta supstanca je rastvorena. DCM sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan da bi obezbedio (R)-metil 2- metil-3-((S)-1-feniletilamino)propanoat.

[0210] U rastvor (R)-metil 2-metil-3-((S)-1-feniletilamino)propanoata (140 g, 0,630 mol) u MeOH (1,4 L) su dodati HOAc (30 mL) i Pd/C (15 g). Mešavina je hidrogenisana pod pritiskom od 20 kg na 60 °C tokom 6 sati. Katalizator je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan da obezbedi (R)-metil 3-amino-2-metilpropanoat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.09 (br, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.05 (m, 1H), 2.93 (m, 1H), 2.75 (m, 1H), 1.23 (d, J= 7.2 Hz, 3H).

[0211] U rastvor (R)-metil 3-amino-2-metilpropanoata (112 g, 0,63 mol) u dihlorometanu (1 L) su dodati TEA (160 g, 1,58 mol) i Boc2O (152 g, 0,69 mol) na 0~5 °C. Reakciona mešavina je ostavljena da se zagreje na temperaturi okoline i mešana tokom noći. Mešavina je oprana sa vodom (1 L), 2N vodenastim HCl (1 L) i zasićena vodenastim NaHCO3 (1 L), prema opisanom redosledu. Organski sloj je osušen preko anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu da se dobije (R)-metil 3-(tert-butoksikarbonilamino)-2-metilpropanoata.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.94 (br s, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.31 (m, 2H), 2.70 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.18 (d, J= 7.2 Hz, 3H).

[0212] U rastvor (R)-metil 3-(tert-butoksikarbonilamino)-2- metilpropanoata (6 g, 51,3 mmol) u THF (60 mL) je dodat LiBH4 (1,12 g, 102 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je brzo ohlađena vodom (30 mL) posle čega je usledilo dodavanje 1N vodenastog HCl da bi se podesila vrednost pH=2-3. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom i ekstrakt je opran sa zasićenim vodenastim NaHCO3, i osušen iznad anhidrovane Na2SO4 i koncentrovan da obezbedi (R)-tert-Butil 3-hidroksi-2-metilpropilkarbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.57 (m, 1H), 3.37 (m, 2H), 3.05 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 0.88 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

[0213] U rastvor (R)-tert-butil 3-hidroksi-2-metilpropilkarbamata (2,5 g, 13,2 mmol) u toluenu (25 mL) su dodati PPh3 (4,15 g, 15,8 mmol) i izoindolin-1,3-diona (2,72 g, 18,5 mmol). Mešavina je ohlađena do 0~5°C i DIAD (3,2 g, 15,8 mmol) je dodato ukapavanjem. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:9 do 1:1) da bi se dobio (R)-tert-butil 3-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-2-metilpropil- karbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.85 (m, 2H), 7.47 (m, 2H), 5.23 (br s, 1H), 3.64 (m, 2H), 3.03 (br s, 2H), 2.13 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.96 (d, J= 6.4 Hz, 3H).

[0214] U rastvor (R)-tert-butil 3-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-2-metilpropilkarbamata (40 g, 8,83 mmol) u MeOH (200 mL) je dodat rastvor metilamina (7,8 g, 30% u MeOH). Reakciona mešavina je zagrejana na 60 °C tokom 6 sati. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Ostatak je držan u suspenziji u etru (300 mL) i zatim je mešan tokom 0,5 sata. Čvrsta supstanca je isfiltrirana i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio (S)-tert-Butil 3- amino-2-metilpropilkarbamat.

[0215] U rastvor (S)-tert-butil 3-amino-2-metilpropilkarbamata (12,5 g, 66,5 mmol) u DCM (250 mL) je dodat TEA (10,3 g, 101,7 mmol). Mešavina je ohlađena do 0~5°C i dodat je 4-(dimetilamino) benzen-1-sulfonil hlorid (16 g, 72 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Mešavina je oprana vodom i organska faza je koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na silika gelu (EtOAc/Petrolej etar = 1:9 do 3:7) da bi se dobio (R)-tert-butil 3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)-2-metilpropilkarbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.70 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.45 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 3.18 (m, 1H), 3.04 (s, 6H), 2.98 (m, 2H), 2.75 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 0.87 (m, J = 6.8 Hz, 3H).

[0216] U rastvor (R)-tert-butil 3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)-2-metilpropilkarbamata (21 g, 59,3 mmol) u MeOH (150 mL) je dodat 4N HCl/MeOH (150 mL). Mešavina je mešana tokom 3 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Čvrsta supstanca dobijena kao rezultat je držana u suspenziji u DCM (200 mL) i zasićeni vodenasti K2CO3 (150 L) je dodat. Mešavina je mešana tokom 5 min i organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan da bi se obezbedilo jedinjenje (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.04 (s, 6H), 2.98 (m, 1H), 2.75 (m, 2H), 2.58 (m, 1H), 1.78 (m, 2H), 0.87 (m, J = 7.2 Hz, 3H).

[0217] Korišćenje sličnog postupka (S)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid je sintetisan (Međuproizvod za jedinjenje A76).

[0218] U 6-hloro-N-((R)-3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-sulfonamid (100 mg, 200 µM) u suvom NMP (4 mL) na 0 °C je dodato NaH (24 mg, 600 pmol) i mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 20 min tokom kog vremena je od maglovite mešavine postala skoro transparentna. Dihlorid (21,3 µL, 200 pmol) je dodat i mešavina je zagrejana do 80 °C. Posle 40 min reakcija je brzo ohlađena sa slanim rastvorom i vodenasti sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2X), kombinovani organski slojevi su oprani slanim rastvorom (3X), osušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Hromatografija u stubu (0-50% heksani 1% dietilamina)/etil acetata) je dalo proizvod (jedinjenje B21). MS(EI) za C25H35ClN4O4S2, nađeno 555 [M+H]<+>.

[0219] U rastvor 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazina (1,4 g, 6,8 mmol) u CH3CN (15 mL) je dodat 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (2,7 g, 6,8 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je zatim koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se obezbedio 1-((1H-imidazol-1-il)sulfonil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin.

[0220] U rastvor 1-((1H-imidazol-1-il)sulfonil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazina (0,92 g, 2,7 mmol) u DCM (10 mL) je dodat CF3SO3Me (0,45 g, 2,7 mmol) na 0 °C. Reakciona mešavina mešana na temperaturi okoline tokom 5 sati je zatim koncentrovana i proizvod dobijen kao rezultat je opran sa etrom da bi se dobio 1-((4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.

[0221] U rastvor (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamida (0,6 g, 2,2 mmol) u CH3CN (6 mL) je dodat 1-((4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-il)sulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (1,1 g, 2,2 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (S)-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamid.

[0222] U rastvor (S)-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamida (771 mg, 1,42 mmol) u NMP (7 mL) je dodat NaH (140 mg, 3,48 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan 3,1-diil) dimetansulfonat (820 mg, 2,1 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C zatim je ohlađena i sipana u vodu. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje A137.

MS (EI) za C36H57FN6O5S2, found 737 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.62 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 6.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.35 (m, 2H), 3.62 (m, 4H), 3.19 (m, 2H), 3.04 (s, 6H), 2.87 (m 4H), 2.46 (m, 5H), 1.92 (m, 1H), 1.79 (m, 2H), 1.66 (m, 4H).

[0223] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

[0224] U (rastvor (R)-metil 2-((tert-butoksikarbonilamino)metil)butanoat (4,8 g, 20,8 mmol) u THF (50 mL) je dodat LiBH4 (0,7 g, 33 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je brzo ohlađena vodom (30 mL) posle čega je usledilo dodavanje 1N vodenastog HCl ukapavanjem da bi se podesila vrednost pH=2-3. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom i ekstrakt je opran sa zasićenim vodenastim NaHCO3, i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan da obezbedi (R)-tert-butil 2-(hidroksimetil)butilkarbamat.

[0225] U rastvor (R)-tert-butil 2-(hidroksimetil)butilkarbamata (3,4 g, 16,7 mmol) u toluenu (40 mL) su dodati PPh3 (6,2 g, 17,4 mmol) i izoindolin-1,3-diona (3,7 g, 25 mmol). Mešavina je ohlađena do 0-5 °C i DIAD (4,3 g 22 mmol) je dodat ukapavanjem. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Istaloženi materijal dobijen kao rezultat je filtriran i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej:etru/EtOAc = 9:1 do 1:1) da bi se obezbedilo 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-4-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperazin. [0226] U rastvor 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-4-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperazin (3,8 g, 11,4 mmol) u DCM (70 mL) je dodat MeOTf (1,1 g, 1,63 mmol). Reakciona mešavina je refluksovana tokom 6 sati. Proizvod dobijen kao rezultat je filtriran i filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 1N vodenastom NaOH (20 mL) zatim je ekstrahovan sa DCM (50 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da obezbedi (S)-tert-butil 2-(aminometil)butilkarbamat.

[0227] U rastvor (S)-tert-butil 2-(aminometil)butilkarbamata (1,87 g, 9,2 mmol) u DCM (20 mL) je dodat TEA (1,01 g, 10,1 mol). Mešavina je ohlađena do 0-5°C i dodat je 4-(dimetilamino) benzen-1-sulfonil hlorid (2,0 g, 9,2 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Mešavina je oprana vodom zatim je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografjiom u stubu (petrolej etar/EtOAc, 9:1 do 7:3) da bi se dobio (R)-tert-butil 2-((4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)metil) butilkarbamat.

[0228] U rastvor (R)-tert-butil 2-((4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)metil)butilkarbamat (2,9 g, 7,5 mmol) u MeOH (10 mL) je dodato 4N HCl/MeOH (15 mL). Mešavina je mešana tokom 3 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen pod smanjenim pritiskom. Proizvod dobijen kao rezultat je držan u suspenziji u DCM (100 mL) i zasićeni vodenasti K2CO3 (450 L) je dodat. Mešavina je mešana tokom 5 min. DCM sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio (R)-N-(2-(aminometil)butil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid.

[0229] U rastvor (R)-N-(2-aminometil)butil)-4-(dimetilamino) benzensulfonamida (0,9 g, 3,2 mmol) u CH3CN (9 mL) je dodat 1-((6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (0,59 g, 3,2 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 8:1 do 2:1) da bi se obezbedio (S)-6-hloro-N-(2-((4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)metil)butil)-3,4- dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid.

[0230] U rastvor (S)-6-hloro-N-(2-((4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)metil)butil)-3,4-dihidroizohinolin -2(1H)-sulfonamida (0,8 g, 1,5 mmol) u NMP (3mL) je dodat NaH (159 mg, 3,9 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je ciklopropan-1,1-diilbis(betilen) dimetansulfonat (510 mg, 2,0 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar / EtOAc = 15:1) da bi se dobilo jedinjenje A182. LC-MS: m/z 708.2 [M+H]+.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.59 (m, 2H), 7.15 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 6.68 (m, 2H), 4.34 (m, 2H), 3.55 (m, 4H), 3.19 (m, 6H), 3.04 (s, 6H), 2.87 (m, 4H), 2.15 (m, 4H), 1.89 (m, 10H), 1.32 (m, 8H), 0.88 (m, 3H).

[0231] U benzil (S)-5-((6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-9-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonil)-7- metil-1,5,9-triazaciklododekan-1-karboksilat (25 mg) je dodat HBr (33% u sirćetnoj kiselini, 0,5 mL). Posle 30 minuta na temperaturi okoline mešavina je razblažena sa dietil etrom i vodom (1:1 mešavine, 10 mL) i organski sloj je uklonjen. Vodenasti sloj je opran sa dietil etrom (1X5 mL), bazifikovan sa NaOH (4 N) do pH ~12, i zatim ekstrahovan sa DCM (3X2 mL). Organske materije su osušene sa natrijum sulfatom, filtrirane, i koncentrovane. Dodavanje heksana (~2 mL) je usledilo posle koncentrovanja da bi se pojednostavilo istaloživanje proizvoda. Sušenje pod vakuumom je dalo jedinjenje A183. MS(EI) za C27H40ClN5O4S2, nađeno 598 [M+H]<+>.

[0232] U rastvor 3,3’-azandiildipropan-1-ola (1,0 g, 7,5 mmol) u DCM (20mL) je dodat izobutiraldehid (1,22 g ,11,3 mmol). Mešavina je mešana tokom 30 min na temperaturi okoline. Sirćetna kiselina (1,8 g, 30,1 mmol) je dodata i mešavina je mešana još 30 minuta. Dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (6,40 g, 30,1 mmol) i reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je podešena na pH=1-2 sa 3N vodenastim HCl i zatim je mešana tokom 1 sat. U mešavinu je dodato 20% vodenastog NaOH (da bi se podesila pH na 10-11) zatim je ekstrahovana sa DCM (50 mL). ekstrahovano sa DCM (50 mL). Ekstrakt je opran sa slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan da bi se obezbedio 3,3'-(izobutilazandiil)bis(propan-1-ol).

[0233] U taj rastvor 3,3’-(izobutilazandiil)bis(propan-1-ol) (780 mg, 4,1 mmol) u DCM (10 mL) je dodat TEA (820 mg, 8,2 mmol). MsCI (935 mg, 8,2 mmol) je zatim dodato polako na 0 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 3 sata na temperaturi okoline. Mešavina je razblažena sa DCM (20 mL) i oprana vodom (25 mL). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se obezbedilo 3,3’-(izobutilazandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonat.

[0234] U rastvor (S)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamida (0,515 g, 1,03 mmol) u suvom N-metil pirolidonu je dodat NaH (0,25 g, 2,26 mmol) na temperaturi okoline. Mešavina je zagrejana na 80 °C uz mešanje tokom 30 minuta i zatim je ohlađena do temperature okoline.3,3’-(izobutilazandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonat (0,5 g, 1,5 mmol) je dodat i reakciona mešavina je zagrejana na 80 °C tokom 2 sata. Reakcija je brzo ohlađena vodom i zatim je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakt je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobilo jedinjenje A152. MS (El) za C31H48ClN5O4S2, nađeno 654.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.59 (d, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.04 (m, 1H), 6.69 (d, 2H), 4.32 (m, 2H), 3.60 (m, 4H), 3.31 (m, 3H), 3.04 (s, 6H), 2.90 (m, 4H), 2.27 (m, 4H), 1.93 (m, 2H), 1.79 (m, 1H), 0.87 (m, 9H).

[0235] Sledeća jedinjenja su sintetisana na sličan način:

[0236] U mešavinu 4-fluoro-2-metoksianilina (25,0 g, 177 mmol), K2CO3 (36,7 g, 266 mmol) i Nal (10,6 g, 0,07 mmol) u i-PrOH (250 mL) je dodat bis(2-hloroetil)amin hidrohlorid (47 g, 177 mmol). Reakciona mešavina je refluksovana tokom noći. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 10:1) da bi se dobilo 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin). MS: m/z 212.36 [M+H]+.

[0237] Rastvor 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazina (4,0 g, 19 mmol) u MeCN (40 mL) je dodat 2,3-dimetil- 1-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)-1H-imidazol-3-ijum (7,5 g, 19 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 20:1) da bi se dobilo 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-4-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperazin). MS: m/z 355.36 [M+H]<+>.

[0238] U rastvor 1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-4-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperazina (6,0 g, 17 mmol) u DCM (60 mL) je dodat CF3SO3Me (2,78 g, 1,63 mmol). Reakcija je mešana tokom 2 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen i ostatak je opran sa etrom da bi se dobio 1-(4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.

[0239] U rastvor 1-(4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (740 mg, 2,3 mmol) u CH3CN (8 mL) je dodat tertbutil 3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propilkarbamat (1,17 g, 2,3 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Ta mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc, 8:1 do 2:1) da bi se dobio tert-butil-3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamido)propil)amino)propilkarbamat.

[0240] U rastvor tert-butil-3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamido)propil)amino)propilkarbamata (600 mg, 1 mmol) u DCM (30 mL) je dodat TFA (30 mL). Mešavina je mešana tokom 2 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen i ostatak je rastvoren u etil acetatu i zatim je opran sa zasićenim vodenastim NaHCO3. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se obezbedio N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1- sulfonamid.

[0241] U rastvor N-(3-((3-aminopropil)(cikloheksilmetil)amino)propil)-4-(4-fluoro-2-metoksi fenil)piperazin-1-sulfonamid (416 mg, 0,83 mmol) u DCM (5 mL) je dodat Et3N (170 mg, 1,66 mmol) i 4-(dimetilamino)benzensulfonil hlorid (365 mg, 1,66 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je koncentrovana i prečišćena hromatografjiom u stubu (petrolej etar/EtOAc, 8:1 do 2:1) da bi se dobio N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)propil) amino)propil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamid.

[0242] U rastvor N-(3-((cikloheksilmetil)(3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)propil) amino)propil)-4-(4- fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamid (320 mg, 0,45 mmol) u NMP (3 mL) je dodat NaH (53 mg, 1,32 mmol, 60% disperzija). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C zatim je ohlađena do 70 °C i ciklopropan-1,1-diil-bis(metilen) dimetansulfonat (170 mg, 0,66 mmol) je dodat. Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar / EtOAc = 15:1) da bi se dobilo jedinjenje A193. MS (EI) za C37H57FN6O5S2, nađeno 745.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): d 7.57 (t, 2H), 6.64 (t, 1H), 6.63 (br s, 4H), 3.86 (s, 3H), 3.19 (m, 4H), 3.04 (m, 8H), 2.87 (m, 12H), 2.36 (m, 2H), 1.56 (m, 15H), 0.43 (m, 4H).

[0243] U rastvor (S)-tert-butil 3-amino-2-metilpropilkarbamata (4,0 g, 21,3 mmol) u THF (20 mL) i vode (20 mL) je dodat CbzOSu (5,83 g, 23,5 mmol). Vodenasti NaOH (4N) je dodat da bi se podesilo do pH=11. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Mešavina je zatim razblažena vodom (15 mL) i zatim je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL). Organska faza je oprana sa 1N vodenastim HCl, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio benzil tert-butil (2-metilpropan-1,3-diil)(S)-dikarbamat.

[0244] U rastvor benzil tert-butil (2-metilpropan-1,3-diil)(S)-dikarbamata (4,5 g, 14,0 mmol) u DCM (25 mL) je dodat TFA (20 mL). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 3 sata. Mešavina je koncentrovana i ostatak je rastvoren u DCM (50 mL). Mešavina dobijena kao rezutlat je oprana zasićenim vodenastim K2CO3 i DCM sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da obezbedi (R)-benzil 3-amino-2-metilpropilkarbamat.

[0245] U rastvor (R)-benzil 3-amino-2-metilpropilkarbamata (2,7 g, 12,2 mmol) u CH3CN (25 mL) je dodat 1-(6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3- ijum (5,7 g, 12,2 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (S)-benzil 3-(6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-sulfonamido)-2-metil propilkarbamat.

[0246] (S)-Benzil 3-(6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-sulfonamido)-2-metil propilkarbamat (2,7 g, 6,0 mmol) je rastvoren u HBr (48%)/HOAc (20 mL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 1 sata. Mešavina je zatim razblažena vodom (100 mL) i zatim je oprana sa etrom (50 mL). Vodenasti sloj je bazifikovan sa NaOH do pH=10. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa DCM (100 mL). DCM sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se obezbedio (S)-N-(3-amino-2-metilpropil)-6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid.

[0247] U rastvor (S)-N-(3-amino-2-metilpropil)-6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamida (0,6 g, 1,9 mmol) i TEA (270 mg, 2,7 mmol) u DCM (6 mL) je dodat benzo[d]izoksazol-5-sulfonil hlorid (420 mg, 1,9 mmol) na 0 °C. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Mešavina je oprana vodom i zatim je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se obezbedio (S)-N-(3-(6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-sulfonamido)-2-metilpropil)benzo[d]izoksazol-5-sulfonamid.

[0248] U rastvor (S)-N-(3-(6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-sulfonamido)-2-metilpropil)benzo[d]izoksazol-5-sulfonamida (0,61 g, 1,22 mmol) u NMP (6 mL) je dodat NaH (122 mg, 3,05 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i 3,3’-(cikloheksilmetilazandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonat (0,74 g, 1,83 mmol) je dodat. Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C. Mešavina je ohlađena i sipana u vodu. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 12:1) da bi se dobilo jedinjenje A180. LC-MS (ESI): m/z 692.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.84 (S, 1H), 7.61 (m, 1H), 7.13 (m, 3H), 6.69 (m, 2H), 4.32 (m, 2H), 3.66 (m, 5H), 3.21 (m, 5H), 2.91 (m, 4H), 2.77 (m, 4H), 1.91 (m, 4H), 1.57 (m, 6H), 1.13 (m, 6H), 0.89 (m, 3H).

[0249] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

[0250] U suspenziju Mg (4,4 g, 181 mmol) u metanolu u THF (200 mL) je dodat 1-bromo-2-metoksibenzen (40 g, 214 mmol). Mešavina je mešana na 80 °C tokom 0,5 sata. Mešavina je ohlađena do 0 °C i dodat je rastvor tert-butil 3-oksopiperidin-1karboksilata (35,5 g, 181 mmol) u THF. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline tokom 2 sata. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio tertbutil 3-hidroksi-3-(2-metoksifenil)piperidin-1-karboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.48 (m, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.98 (m, 2H), 4.08 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.82 (m, 1H), 3.31 (s, 1H), 2.98 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 1.99 (m, 2H), 1.62 (m, 2H), 1.63 (m, 9H).

[0251] Rastvor tert-butil 3-hidroksi-3-(2-metoksifenil)piperidin-1-karboksilata (23,0 g, 75 mmol) i trietilsilan (44 ml) u DCM (230 mL) je ohlađen do -30 °C i TFA (27 mL) je dodat. Reakciona mešavina je mešana na -30 °C tokom 2,5 sata i zatim je ostavljena da se zagreje na temperaturi okoline i mešana je još 3,5 sata. Mešavina je sipana u ledenu vodu i rastvor je podešen na pH=9 sa zasićenim vodenastim natrijum hidroksidom. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana tri puta sa DCM. Kombinovane organske faze su osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se obezbedio 3-(2-metoksifenil)piperidin.

[0252] Rastvor 3-(2-metoksifenil)piperidin (6,5 g, 34 mmol) i D-tartarne kiseline (5,1 g, 34 mmol) u MeOH (25 mL) je refluksovan tokom 2 sata. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i filtrirana da bi se obezbedila so tartrata. Ova so tartrata je rekristalisana dva puta iz MeOH i zatim je tretirana sa vodenastim NaOH. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa DCM. DCM sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio (S)-3-(2-metoksifenil)piperidin.

[0253] U rastvor (S)-3-(2-metoksifenil)piperidina (500 mg, 2,6 mmol) i 2,3-dimetil-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum triflurometansulfonata (1,1 g, 2,7 mmol) u MeCN (15 ml) je mešan tokom noći na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 20:1) da bi se dobio (S)-3-(2-metoksifenil)-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)piperidin. LC-MS (ESI): m/z 336.06 [M+H]<+>.

[0254] U rastvor (S)-3-(2-metoksifenil)-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)piperidina (800 g, 2,4 mmol) u DCM (10 ml) je dodat CF3SO3Me (398 mg, 2,4 mmol). Reakcija je mešana tokom 2 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen i ostatak je opran sa etrom da bi se dobio (S)-1-(3-(2-metoksifenil)piperidin-1-il)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.

[0255] U rastvor (S)-1-(3-(2-metoksifenil)piperidin-1-il)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (1 g, 2 mmol) in CH3CN (24 ml) je dodat (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (0,55 g, 2 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 8:1 do 2:1) da bi se dobio (S)-N-((S)- 3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3-(2- metoksifenil)piperidin-1-sulfonamid.

[0256] U rastvor (S)-N-((S)-3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-3-(2-metoksifenil) piperidin-1-sulfonamida (454 mg, 0,86 mmol) u NMP (14 mL) je dodat NaH (104 mg, 2,6 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan- 3,1-diil) dimetansulfonat (500 mg, 1,3 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C. Mešavina je ohlađena do 0-5 °C i sipana u vodu. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pripremnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje A210. LC-MS (ESI): m/z 718.17 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.60 (m, 2H), 7.23 (m, 2H), 6.95(m, 2H), 6.68 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (m, 5H), 3.26 (m, 4H), 3.12 (s, 6H), 2.76 (m, 5H), 2.36 (m, 4H), 1.76 (m, 9H), 1.33 (m, 10H), 0.86 (m, 6H).

[0257] Sledeće jedinjenje je sintetisano na sličan način:

[0258] U rastvor tert-butil 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6 -dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (10,92 g, 35 mmol), 1-bromo-3-metoksibenzen (6,6 g, 35 mmol) i Cs2CO3 (3,44 g, 106 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) i H2O (10 mL) je dodat Pd(dppf)Cl2 (1,32 g, 1,75 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na 80°C. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 10:1) da bi se dobio tert-butil 3-(3-metoksifenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat. LC-MS (ESI): m/z 290.12 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.26 (m, 1H), 6.96 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.81(m, 1H), 6.19 (s, 1H), 4.25 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.54 (m, 2H), 2.30 (s, 2H), 1.49 (s, 9H).

[0259] U rastvor tert-butil 3-(3-metoksifenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (9,46 g, 32 mmol) u MeOH (75 mL) i EtOAc (25 mL) je dodat Pd/C (2 g). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 4 sata pod atmosferom H2. Mešavina je filtrirana i taj filtrat je koncentrovan da bi se dobio tert-butil 3-(3-metoksifenil)piperidin-1-karboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.25 (m, 1H), 6.81 (m, 3H), 3.99 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.65 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.50 (m, 2H), 1.98 (m,1H), 1.65 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

[0260] Rastvor tert-butil 3-(3-metoksifenil)piperidin-1-karboksilata (7,85 g, 27 mmol) u HCl/MeOH (80 mL) je mešan na temperaturi okoline tokom 4 sata. Mešavina je tretirana vodom i zatim je podešena vrednost na pH=12 sa 3N vodnestim NaOH. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa EtOAc(100 mL X 2). Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio 3-(3-metoksifenil). LC-MS (ESI): m/z 192.09 [M+H]+.

[0261] U rastvor D-(-)-tartarne kiseline (2,5 g, 16,7 mmol) u MeOH (12,5 mL) je dodat 3-(3-metoksifenil)piperidin (3,2 g, 16,7 mmol). Mešavina je mešana na 80 °C tokom 24 sata zatim je ohlađena do temperature okoline. Istaloženi sadržaj dobijen kao rezultat je prikupljen filtracijom i zatim je rekristalizovan tri puta iz MeOH da bi se dobilo (S)-3-(3-metoksifenil)piperidin.

[0262] U rastvor (S)-3-(3-metoksifenil)piperidina (1,28 g, 6,7 mmol) u CH3CN (10 mL) je dodat 1-(1H-imidazol-1-ilsulfonil)-3-metil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (2,87 g, 7,3 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 9:1 do 8:2) da bi se dobio (S)-3-(2-metoksifenil)-1-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperidin.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.27 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.79 (m, 2H), 6.72 (s, 1H), 3.93 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.68 (m, 1H), 2.65 (m, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.06 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.62 (m, 1H).

[0263] U rastvor (S)-3-(3-metoksifenil)-1-(2-metil-1H-imidazol-1-ilsulfonil)piperidina (1,6 mg, 4,7 mmol) u DCM (20 mL) je dodat CF3CO3Me (782 mg, 4,7 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen. Proizvod dobijen kao rezultat je opran sa etrom da bi se dobio (S)-1-(3-(3-metoksifenil) piperidin-1-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol- 3-ijum trifluorometansulfonat.

[0264] U rastvor (S)-1-(3-(3-metoksifenil)piperidin-1-ilsulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol- 3-ijum trifluorometansulfonat (1,1 g, 2,2 mmol) u CH3CN (11 mL) je dodat (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (896 mg, 33 mmol). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se obezbedio (S)-N-((S)-3-(4-(dimetilamino)fenil-sulfonamido)-2-metilpropil)-3-(3- metoksifenil)piperidin-1-sulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.68 (m, 2H), 7.28 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.80 (m, 2H), 6.68 (m, 2H), 4.81 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.12 (m, 1H),3.07(s, 6H), 2.82 (m, 4H), 2.11 (m, 1H), 1.93 (m, 2H), 1.77 (m, 1H), 1.29 (m, 3H), 0.91 (m, 3H).

[0265] U rastvor (S)-N-((S)-3-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)-2-metilpropil)-3-(3-metoksifenil)piperidin-1-sulfonamid (550 mg, 1,05 mmol) u NMP (6 mL) je dodat natrijum hidrid (75,6 mg, 3,15 mmol). Mešavina je mešana tokom 30 minuta na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je rastvor ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonata (606 mg, 1,57 mmol) u NMP (3 mL). Reakciona mešavina je mešana na 70 °C tokom 1 sat. Mešavina je ohlađena do temperature okoline i sipana u vodu (10 mL). Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom (20 mL). Organski sloj je opran vodom (15 mL X 2), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na (EtOAc/petrolej etar = 1:15 do 1:5) da bi se dobilo jedinjenje A209. LC-MS (ESI): m/z 719.2 [M+H]+.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.61 (m, 2H), 7.28 (m, 2H), 6.84 (m, 3H), 6.70 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.70 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.30 (m, 1H), 3.11 (s, 9H), 2.79 (m, 5H), 2.41 (m, 1H), 2.33 (m, 3H), 2.05 (m, 8H), 1.67 (m, 4H), 1.27 (m, 7H), 0.94 (m, 3H), 0.85 (m, 2H).

[0266] U rastvor (S)-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin-1-sulfonamida (900 mg, 1,65 mmol) u NMP (5 mL) je dodat NaH (198 mg, 4,92 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je (S)-3,3’-(cikloheksiletilazandiil)bis(propan- -3,1-diil) dimetansulfonat (844 mg, 2,49 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C zatim je ohlađena do 0-5 °C i sipana u vodu. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakt je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu na (petrolej etar/EtOAc = 15:1) da bi se dobilo jedinjenje A203. LC-MS (ESI): m/z 751.33 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.68 (m, 2H), 6.92 (m, 1H), 6.78 (m, 4H), 3.92 (s, 4H), 3.86 (m, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.19 (m, 3H), 3.04 (s, 9H), 2.87 (m 2H), 2.26 (m, 3H), 1.92 (m, 3H), 1.79 (m, 4H), 1.66 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.38 (m, 4H), 1.26 (m, 5H), 0.98 (m, 3H), 0.83 (m, 4H).

[0267] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

[0268] U rastvor 1-bromo-4-fluoro-2-metoksibenzena (910 mg, 4,4 mmol) i 1M KHMDS (18 mL, 18 mmol) u 1,4-dioksanu (9 mL) je dodat tert-butil (3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat (950 mg, 4,4 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 100 °C tokom 3 sata. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 20:1) da bi se dobio tert-butil (3R,5R)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-3,5-dimetilpiperazin-1- karboksilat. LC-MS (ESI): m/z 339.0 [M+H]<+>.

[0269] U rastvor tert-butil (3R,5R)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-3,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (800 mg, 2,4 mmol) u DCM (4 mL) je dodat TFA (4 mL). Mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 1 sata. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je rastvoren u DCM (50 mL) i zatim je opran sa zasićenim vodenastim K2CO3. Taj organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio (2R,6R)-1-(3-metoksi-5-metilfenil)-2,6-dimetilpiperazin.

[0270] U rastvor (2R,6R)-1-(3-metoksi-5-metilfenil)-2,6-dimetilpiperazin (500 mg, 2,1 mmol) u MeCN (5mL) je dodat 2,3-dimetil-1-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (825 mg, 2,1 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar/EtOAc = 20:1) da bi se dobio (2R,6R)-1-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2,6-dimetil-4-((2-metil-1H-imidazol-1-il)sulfonil)piperazin. LC-MS (ESI): m/z 383.53 [M+H]<+>.

[0271] U rastvor (2R,6R)-1-(3-metoksi-5-metilfenil)-2,6-dimetilpiperazin (450 mg, 1,2 mmol) u DCM (5 mL) je dodat CF3SO3Me (193 mg, 1,2 mmol). Reakcija je mešana tokom 2 sata na temperaturi okoline. Rastvarač je uklonjen i ostatak je opran sa etrom da bi se dobio 1-(((3R,5R)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)sulfonil)- 2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat.

[0272] U rastvor 1-(((3R,5R)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)sulfonil)- 2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (500 mg, 0,91 mmol) u CH3CN (5mL) je dodat (R)-N-(3-amino-2-metilpropil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (248 mg, 0,91 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej:etar/EtOAc = 8:1 do 2:1) da bi se obezbedilo (2S,6S)-N-((S)-3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2,6-dimetilpiperazin-1-sulfonamid. LC-MS (ESI): m/z 572.4 [M+H]<+>.

[0273] U rastvor (2S,6S)-N-((S)-3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)-2-metilpropil)-4-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2,6-dimetilpiperazin-1-sulfonamida (430 mg, 0,75 mmol) u NMP (4 mL) je dodat NaH (91 mg, 2,3 mmol, 60%). Mešavina je mešana tokom 0,5 sata na 80 °C. Mešavina je ohlađena do 70 °C i dodat je ((cikloheksilmetil)azandiil)bis(propan-3,1-diil) dimetansulfonat (435 mg, 1,1 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata na 70 °C. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (petrolej etar / EtOAc = 15:1) da bi se dobilo jedinjenje A200. LC-MS (ESI): m/z 764.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.60 (d, 2H), 6.69 (d, 2H), 6.32 (d, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.06 (q, 2H), 3.04 (s, 8H), 3.00 (s, 2H), 2.87 (d, 2H), 2.76 (s, 2H), 2.34 (br s, 4H), 2.09 (br s, 2H), 1.33 (s, 17H), 1.04 (d, 7H), 0.93 (d, 3H).

(S)-3,3’-(1-Cikloheksiletilazandiil)dipropan-1-ol (Međuproizvod za jedinjenja A203, A190, A207)

[0274]

[0275] U rastvor (S)-1-cikloheksiletanamina (4,0 g, 31,46 mmol) u metanolu (50 mL) je dodat metil akrilat (8,1 g, 94,38 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 72 sata na 45 °C. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu (EtOAc/petrolej etar = 30:1) da bi se dobio (S)-dimetil 3,3’-(1-cikloheksiletilazandiil)dipropanoat.

[0276] U rastvor (S)-dimetil 3,3’-(1-cikloheksiletilazandiil)dipropanoata (4,0 g, 13,37 mmol) u THF (50 mL) je dodat LiBH4 (1,45 g, 66,84 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 60 °C tokom 2 sata. Mešavina je ohlađena do 0-5 °C i brzo ohlađena vodom (30 mL). Mešavina je podešena na pH=3 sa 1N vodenastom hlorovodoničnom kiselinom i mešana tokom 30 minuta. Mešavina dobijena kao rezultat je oprana dihlorometanom. Vodenasti sloj je podešen na pH = 9-10 sa zasićenim vodenastim natrijum karbonatom i zatim je ekstrahovan sa DCM (3X). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobio (S)-3,3'-(1-cikloheksiletilazandiil)propan-1-ol.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.66 (s, 1H), 2.82 (m, 2H), 2.42 (m, 2H), 2.21 (m, 1H), 1.96 (m, 2H), 1.67 (m, 4H), 1.22 (m, 4H), 0.91 (m, 3H), 0.81 (m, 1H), 0.72 (m, 1H).

[0277] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način: (R)-3,3’-(1-Cikloheksiletilazandiil)dipropan-1-ol (Međuproizvod za jedinjenje A191) i (S)-3,3’-((1-feniletil)azandiil)bis(propan-1-ol) (Međuproizvod za jedinjenje A205)

6-hloro-N-(((1R,2S)-2-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)ciklobutil) metil)-3,4-dihidroizohinolin- 2(1H)-sulfonamid (Međuproizvod za jedinjenje B22)

[0278]

[0279] U suspenziju cis-3-oksabiciklo[3.2.0]heptan-2,4-diona (32,8 g, 200 mmol) i kinina (71,4 g, 220 mmol) u toluenu (1 L) je dodat benzil alkohol (64,9 g, 600 mmol) ukapavanjem tokom perioda od 0,5 sata na -55 °C. Reakciona mešavina je mešana na -55 °C tokom 96 sati. Bistar rastvor dobijen kao rezultat je koncentrovan do suvoće i ostatak je rastvoren u dietil etru (1,2 L). Rastvor je opran sa 2N vodenastim HCl (1 L), organski sloj je ekstrahovan sa zasićenim vodenastim natrijum bikarbonatom (500 X 5 mL), i rezultat koji je dobijen kao kombinovane vodenaste faze su oprane dietil etrom (500 mL) da bi se uklonili tragovi benzil alkohola. Vodenasta faza je acidifikovana sa 8N vodenastim HCl zatim je ekstrahovana sa DCM (1,0 L X 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobila (1S,2R)-2 (benziloksikarbonil)ciklobutankarboksilna kiselina.

[0280] U rastvor (1S,2R)-2-(benziloksikarbonil)ciklobutankarboksilna kiseline (40,1 g, 171,4 mmol) i trietilamina (26,0 g, 257 mmol) u dihloroetanu (400 mL) je dodat ukapavanjem DPPA (51,8 g, 188,5 mmol) na 0 °C. Mešavina je mešana tokom 2 sata na temperaturi okoline zatim je oprana vodom i osušena iznad anhidrovanog NaSO4. U organski rastvor je dodat BnOH (18,5 g, 171 mmol) i trietilamin (34,6 g, 342 mmol). Reakciona mešavina je mešana refluksovano tokom noći i zatim je razblaženo sa DCM (500 mL). Mešavina je oprana sa 1N vodenastim HCl (1 L) i zasićena vodenastim NaHCO3 Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, koncentrovana, i prečišćena hromatografijom u stubu da bi se dobio (1R,2S)-benzil 2-(benziloksikarbonilamino) ciklobutankarboksilat.

[0281] U rastvor (1R,2S)-benzil 2-(benziloksikarbonilamino)ciklobutankarboksilata (20 g, 59 mmol) u THF (100 mL) je dodat 4N vodenasti NaOH (50 mL) na 0 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je razblažena vodom (30 mL) i oprana etrom (50 mL X 2). Vodenasti sloj je acidifikovan sa 3N vodenastim HCl i ekstrahovan sa etil acetatom. Ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani da bi se dobila (1R,2S)-2 (benziloksikarbonilamino)ciklobutankarboksilna kiselina.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (m, 5H), 5.12 (m, 2H), 4.62 (m, 1H), 3.58 (m, 1H), 2.28 (m, 2H), 1.89 (m, 2H).

[0282] U rastvor (1R,2S)-2 (benziloksikarbonilamino)ciklobutankarboksilne kiseline (4,0 g, 16,1 mmol) i K2CO3 u (4,4 g, 32 mmol) u DMF (40 mL) je dodat Mel (2,96 g, 20,8 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je sipana u vodu (150 mL) zatim je ekstrahovana sa etrom (200 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ovaj ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (1R,2S)-metil 2-(benziloksikarbonilamino)ciklobutankarboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (m, 5H), 5.69 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.62 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.38 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 1.99 (m, 2H).

[0283] U rastvor (1R,2S)-metil 2-(benziloksikarbonilamino) ciklobutankarboksilata (8,9 g, 33,8 mmol) u MeOH (250 mL) je dodat NaOMe (9,1 g, 169 mmol). Mešavina je zagrejana na 45 °C tokom 4 sata i zatim je ohlađena do 0 °C i HOAc (10,2 g 169 mmol) je dodat ukapavanjem. Mešavina je zatim sipana u vodu (500 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (300 mL). Ekstrakt je opran zasićenim vodenastim NaHCO3, i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Organski rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (1S,2S)-metil 2-(benziloksikarbonilamino)ciklobutankarboksilat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (m, 5H), 5.08 (m, 3H), 4.38 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.38 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 1.89 (m, 2H).

[0284] U rastvor (1S,2S)-metil 2-(benziloksikarbonilamino) ciklobutankarboksilat (1,3 g, 4,9 mmol) u THF (10 mL) je dodato LiBH4 (0,38 g, 9,8 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 3 sata na temperaturi okoline zatim je sipana u vodu (15 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio benzil (1S,2S)-2-(hidroksimetil)ciklobutilkarbamat.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34 (m, 5H), 5.08 (m, 3H), 3.72 (m, 1H), 3.57 (m, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.45 (m, 1H).

[0285] U rastvor benzil (1S,2S)-2-(hidroksimetil)ciklobutilkarbamata (1,1 g, 4,94 mmol), PPh3 (1,5 g, 5,9 mmol) i izoindolin-1,3-diona (1,0 g, 6,9 mmol) u toluenu (10 mL) je dodat DIAD (1,2 g, 5,9 mmol) na 0 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 3 sata. Istaloženi sadržaj je isfiltriran i filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio benzil (1S,2R)-2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)ciklobutilkarbamat.

[0286] U rastvor benzil (1S,2R)-2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil) ciklobutilkarbamata (2,0 g, 5,5 mmol) u EtOH (40 mL) je dodat hidrazin hidrat (0,64 g). Reakciona mešavina je refluksovana tokom 3 sata. Mešavina je ohlađena filtrirana, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u 1N vodenastom HCl (30 mL) i zatim je opran sa etrom (20 mL). Vodenasti sloj je podešen na pH=10. Reakciona mešavina je ekstrahovana sa (50 mL X 2). Kombinovane organske materije su osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio benzil (1S,2R)-2-(aminometil)ciklobutilkarbamat.

[0287] U rastvor benzil (1S,2R)-2-(aminometil)ciklobutilkarbamata (0,8 g, 3,4 mmol) u CH3CN (10 mL) je dodat 1-((6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)sulfonil)-2,3-dimetil-1H-imidazol-3-ijum trifluorometansulfonat (2,4 g, 5,12 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (1S,2R)-2-(6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-2-sulfonamido)metil)ciklobutilkarbamat.

[0288] U 40% HBr rastvora u HOAc (10 mL) je dodat benzil (1S,2R)-2-((6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin- 2-sulfonamido)metil) ciklobutilkarbamat (1,2 g, 2,6 mmol). Mešavina je mešana tokom 3 sata zatim je sipana u vodu (50 mL) i oprana sa etrom. Vodenasti sloj je podešen na pH=10 sa 8N vodenastim NaOH. Ta mešavina je ekstrahovana sa DCM (50 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio N-(((1R,2S)-2-aminociklobutil)metil)-6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)- sulfonamid.

[0289] U rastvor N-(((1R,2S)-2-aminociklobutil)metil)-6-hloro-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)- sulfonamida (0,66 g, 2,0 mmol) i NEt3 (350 mg, 3,5 mmol) u DCM (5 mL) je dodat 4-(dimetilamino)benzensulfonil hlorid (426 mg, 2,0 mmol) at 0 °C. Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata i zatim je koncentrovana. Ostatak je rastvoren u DCM i opran vodom. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio 6-hloro-N-(((1R,2S)-2-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)ciklobutil) metil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.77 (m, 2H), 7.18 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 6.75 (m, 2H), 5.28 (m, 1H), 5.05 (m, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.35 (m, 1H), 3.15 (m, 1H), 3.09 (s, 6H), 2.92 (m, 3H), 2.42 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.25 (m, 1H).

(S)-3-((Cikloheksilmetil)((R)-2-metil-3-(metilsulfoniloksi)propil)amino)-2-metilpropil metansulfonat

(Međuproizvod za jedinjenje A178)

[0290]

[0291] U rastvor (S)-metil 3-hidroksi-2-metilpropanoata (4,0 g, 25,42 mmol) i trietilamina (5,3 g, 50,84 mmol) u DCM (60 mL) je dodat lagano rastvor metansulfonil hlorida (5,6 g, 10,20 mmol) na 0-5 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 1 sat na temperaturi okoline. Mešavina je zatim razblažena sa DCM (100 mL) i oprana vodom (50 mL). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio (S)-metil 2-metil-3-(metilsulfoniloksi)propanoat.

[0292] U rastvor (R)-metil 2-aminopropanoat hidrohlorida (1,60 g, 10,20 mmol) u acetonitrilu (200 mL) je dodat (S)-metil 2-metil-3-(metilsulfoniloksi)propanoat (4,2 g, 21,43 mmol) i kalijum karbonat (4,20 g, 30,60 mmol). Reakciona mešavina je refluksovana tokom 16 sati i zatim je filtrirana i taj filtrat je koncentrovan da bi se dobio (2R,2’S)-dimetil 2,2’-azandiilbis(metilen)dipropanoat.

[0293] U rastvor (2R,2’S)-dimetil 2,2’-azandiilbis(metilen)dipropanoata (650 mg, 3,0 mmol) u DCM (10 mL) je dodat cikloheksankarbaldehid (336 mg, 3,0 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (954 mg, 4,50 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom noći na temperaturi okoline. Mešavina je brzo ohlađena vodom i podešena na pH=10. Mešavina dobijena kao rezultat je ekstrahovana sa DCM. Ekstrakt je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (2R,2’S)’-dimetil 2,2'-(cikloheksilmetilazandiil)bis(metilen)dipropanoat.

[0294] U rastvor (2R,2’S)-dimetil 2,2’-(cikloheksilmetilazandiil)bis(metilen) dipropanoata (350 mg, 1,28 u THF (10 mL) je dodat LiBH4 (486 mg, 12,80 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom noći. Mešavina je prohlađena i brzo ohlađena vodom. Mešavina dobijena kao rezultat je podešena na pH=5 sa 1N vodenastom hlorovodoničnom kiselinom i mešana tokom 0,5 sata zatim je podešena na pH=10 i ekstrahovana sa etil acetatom tri puta. Kombinovane organske materije su osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio (2R, 2’S)-2,2'-(1-cikloheksiletilazandiil)bis(metilen)dipropan-1-ol.

[0295] U rastvor (2R,2’S) -2,2’-(cikloheksilmetilazandiil)bis(metilen)dipropan-1-ola (153 mg, 0,59 mmol) i trietilamina (0,12 g, 1,2 mmol) u DCM (5 mL) je dodat MsCI (135 mg, 1,18 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 3 sata na temperaturi okoline. Mešavina je razblažena sa DCM (15 mL) i zatim oprana vodom (20 mLX2). Organske materije su osušene iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio (S)-3-((cikloheksilmetil)((R)-2-metil-3-(metilsulfoniloksi)propil)amino)-2-metilpropil metansulfonat. MS(EI) C17H35NO6S2, nađeno 414 [M+H]<+>.

[0296] Sledeće jedinjenje je sintetisano na sličan način: (2S,2’S)-((cikloheksilmetil)azandiil)bis(2- metilpropan-3,1-diyl) dimetansulfonat (Međuproizvod za jedinjenje A160)

(R)-6-hloro-N-(4-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)butan-2-il)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid (Međuproizvod za jedinjenje A148)

[0297]

[0298] Rastvor (R)-tert-butil 1-cijanopropan-2-ilkarbamata (13,0 g, 71 mmol) u etanolu (250 mL) zasićen anhidrovanim amonijakom je tretiran Raney-ev Ni (24 g) pod 55 psi H2 tokom noći. Mešavina je filtrirana kroz podlogu od celita i filtrat je koncentrovan. Ovaj ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (R)-tert-Butil 4-aminobutan-2-ilkarbamat.

[0299] U rastvor (R)-tert-butil 4-aminobutan-2-ilkarbamata (2,5 g, 13,3 mmol) i trietilamina (1,33 g, 13,3mmol) u DCM (25 mL) je dodat lagano rastvor 4-(dimetilamino)benzen-1- sulfonil hlorida (2,93 g, 13,3 mmol) u DCM (15 mL) na 0-5 °C. Reakciona mešavina je mešana tokom 1 sat na temperaturi okoline. Mešavina je razblažena sa DCM (50 mL) i oprana vodom (30 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom u stubu da bi se dobio (R)-tert-butil 4-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)butan-2-ilkarbamat.

[0300] U rastvor (R)-tert-butil 4-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)butan-2-ilkarbamata (1,2 g, 3,2 mmol) u DCM (15 mL) je dodato TFA (7 mL). Mešavina je mešana tokom 2 sata i rastvarač je uklonjen. Ostatak je rastvoren u DCM (30 mL) i zatim je opran sa zasićenim vodenastim NaHCO3. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana da bi se dobio (R)-N-(3-aminobutil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamid (0,88 g, kvantitativno).

[0301] U rastvor (R)-N-(3-aminobutil)-4-(dimetilamino)benzensulfonamida (0,88 g, 4,0 mmol) u CH3CN (10 mL) je dodat 6-hloro-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (1,98 g, 4,0 mmol). Reakciona mešavina je mešana na temperaturi okoline tokom noći. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom sa stubom da bi se obezbedio (R)-6-hloro-N-(4-(4-(dimetilamino)fenilsulfonamido)butan-2-il)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid.

[0302] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način: (S)-6-hloro-N-(4-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)butan-2-il)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid (Međuproizvod za jedinjenje A147); (S)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)butil)-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-sulfonamid (Međuproizvod za jedinjenje A150); i (R)-6-hloro-N-(3-((4-(dimetilamino)fenil)sulfonamido)butil)-3,4-dihidroizohinolin- 2(1H)-sulfonamid (Međuproizvod za jedinjenje A149)

(R)-1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-metilpiperazin (Međuproizvod za jedinjenje A177)

[0303]

[0304] U tert-butil (R)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (5,37 g, 26,8 mmol) i 1-bromo-4-fluoro-2-metoksibenzen (5,00 g, 24,4 mmol) u toluenu (50 mL) je dodat natrijum tertbutoksid (4,69 g, 48,8 mmol) posle čega sledi BretFos (BrettPhos) paladacikl G3 (66,4 mg, 0,0732 mmol). Mešavina je zaptivno zatvorena pod azotom i mešana na 100 °C i posle 1 sat mešavina je ohlađena do temperature okoline, razblažena etil acetatom i vodom. Organski sloj je osušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom u stubu (0-40%, etil acetat/heksani) da bi se dobio proizvod. MS(EI) za C17H25FN2O3, nađeno 325 [M+H]<+>.

[0305] U tert-butil (R)-4-(4-fluoro-2-metoksifenil)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (0,51 g, 1,6 mmol) je dodat HCl (1,6 mL, 4 N u dioksanu) i mešavina je ostavljena da stoji na temperaturi okoline tokom 16 sati zatim je razblažena vodom (5 mL) i etil acetatom (5 mL). Organski sloj je uklonjen i opran vodom (1X5 mL). Kombinovani vodenasti slojevi sa etil acetatom (1X5 mL), bazifikovani sa NaOH (5 N do pH ~12), ekstrahovani sa DCM (3X5 mL), osušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani da bi se dobio (R)-1-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-metilpiperazin sa kojim je nastavlja bez daljeg prečišćavanja. MS(EI) za C12H17FN2O, pronađeno 225 [M+H]<+>.

[0306] Jedinjenja u nastavku su sintetisana na sličan način:

1-(4-fluoro-2-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod A137)

1-(2-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod A154)

2-(piperazin-1-il)benzonitril (Međuproizvod za A118)

1-(2,6-dimetilfenil)piperazin (Međuproizvod za A119)

2-(4-fluoro-2-metil)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan (Međuproizvod za A161)

(S)-1-(4-fluoro-2-metilfenil)-3-metilpiperazin (Međuproizvod za A162)

(R)-1-(4-fluoro-2-metilfenil)-3-metilpiperazin (Međuproizvod za A163)

1-(2-(trifluorometoksi)fenil)piperazin (Međuproizvod za A173)

1-(3,4-difluoro-2-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod zaA174)

1-(3-fluoro-2-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod za A175)

1-(5-fluoro-2-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod za A176)

1-(2-hlorofenil)piperazin (Međuproizvod za A198)

1-(4-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod za A199)

1-(3-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod za A201)

1-(3-fluoro-4-metoksifenil)piperazin (Međuproizvod za A202)

1-(2-hloro-4-fluorofenil)piperazin (Međuproizvod za A206)

(S)-1-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2-metilpiperazin (Međuproizvod za A194)

(R)-1-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2-metilpiperazin (Međuproizvod za A195) (2S,6R)-1-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2,6-dimetilpiperazin (Međuproizvod za A197) (2R,6R)-1-(3-fluoro-5-metoksifenil)-2,6-dimetilpiperazin (Međuproizvod za A200)

Ogledi

Ogled doksorubicinom indukovane jednolančane PD1-ss-Gluc

[0307] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa pcDNA™5/FRT/TO plazmidom umetnutim sa cDNK koji kodira Gaussia luciferazu fuziono spojen na 3’ kraj cDNK koja kodira PD1 sekvencu signala plus 10 aminokiselina (N-MQIPQAPWPV-VWAVLQLGWRPGWFLDSPDR-C) (SEK ID BR:1). 1). Transfektovane ćelije su izabrane zbog rezistentnosti na selektibilne markere Higromicin (Hygromycin) i Blasticidin (Blasticidin) da bi stvorile stabilnu liniju ćelije koja se sadržala umetak PD1-ss+10aa/ Gaussia luciferazu cDNK čije je eksprimovanje regulisano u okviru T-REx™ sistema. Dan pre ogleda, ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene na ploče za kulturu tkiva u 384 pregrade. Sledećeg dana, razređena jedinjenja u DMSO/podlogama koja sa doksiciklinom su dodati u pregrade i inkubirani na 37°C, 5% CO2. Posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje potentnosti ćelije.

[0308] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled doksorubicinom indukovane PD1-FL-Gluc

[0309] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa pcDNK™5/FRT/TO plazmidom umetnutim sa cDNK koji kodira luciferazu svica fuzijom spojenu na 3’ kraj cDNK koja kodira PD1 pune dužine (Aminokiseline 1-288). Transfektovane ćelije su izabrane zbog otpornosti na selektibilne markere Higromicin (Hygromycin) i Blasticidin (Blasticidin) da bi stvorile stabilnu liniju ćelije koja se sadržala umetak PD1- FL/cDNK luciferazu svica čije je eksprimovanje regulisano u okviru T-REx™ sistema. Dan pre ogleda, ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene na ploče za kulturu tkiva u 384 pregrade. Sledećeg dana, razređena jedinjenja u DMSO/podlogama koja su sadržala doksiciklin su dodata u pregrade i inkubirana na 37°C, 5% CO2, posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje potentnosti ćelije.

[0310] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled doksorubicinom indukovane TNFα-FL-Gluc

[0311] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa pcDNK™5/FRT/TO plazmidom umetnutim sa cDNK koja kodira Gaussia luciferazu fuzijom spojenu na 3’ kraj cDNK koja kodira TNF pune dužine (Aminokiseline 1-233). Transfektovane ćelije su izabrane zbog otpornosti na selektibilne markere Higromicin (Hygromycin) i Blasticidin (Blasticidin) da bi stvorile stabilnu liniju ćelije koja se sadržala umetak TNF- FL/ Gaussia luciferazu cDNK čije je eksprimovanje regulisano u okviru T-REx™ sistema. Dan pre ogleda, ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene na ploče za kulturu tkiva u 384 pregrade. Sledećeg dana, razblaženja jedinjenja u DMSO/podlogama koja sadrže doksiciklin su dodata u pregrade i inkubirana na 37°C, 5% CO2. Posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje potentnosti ćelije.

[0312] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled doksorubicinom indukovane IL2- FL-Gluc

[0313] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa pcDNK™5/FRT/TO plazmidom umetnutim sa cDNK koji kodira Gaussia luciferazu fuzijom spojenu na 3’ kraj cDNK koja kodira IL-2 pune dužine (Aminokiseline 1-153). Transfektovane ćelije su izabrane zbog otpornosti na selektibilne markere Higromicin (Hygromycin) i Blasticidin (Blasticidin) da bi stvorile stabilnu liniju ćelije koja se sadržala umetak IL-2- FL/ Gaussia luciferazu cDNK čije je eksprimovanje regulisano u okviru T-REx™ sistema. Dan pre ogleda, ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene na ploče za kulturu tkiva u 384 pregrade. Sledećeg dana, razblaženja jedinjenja u DMSO/podlogama koje su sadržale doksiciklin su dodata u pregrade i inkubirana na 37°C, 5% CO2, posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje potentnosti ćelije.

[0314] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled doksorubicinom indukovane HER3-ss-Gluc

[0315] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa pcDNK™5/FRT/TO plazmidom umetnutim sa cDNK koji kodira Gaussia luciferazu fuziono spojen na 3’ kraj cDNK koja kodira HER3 signalnu sekvencu plus 4 aminokiseline (N- MRANDALQVLGLL-FSLARGSEVG-C) (SEK ID BR: 2). Transfektovane ćelije su izabrane zbog otpornosti na selektibilne markere Higromicin (Hygromycin) i Blasticidin (Blasticidin) da bi stvorile stabilnu liniju ćelije koja se sadržala umetak HER3-ss+4aa/ Gaussia luciferaze cDNK čija je ekspresija regulisana T-REx™ sistemom. Dan pre ogleda, ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene na ploče za kulturu tkiva u 384 pregrade. Sledećeg dana, razređena jedinjenja u DMSO/podlogama koja su sadržala doksiciklin su dodata u te pregrade i inkubirana na 37°C, 5% CO2. Posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje odživosti ćelije.

[0316] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u tabeli u nastavku. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Tabela za aktivnost HER3

Ogled sa održivosti H929 ćelije

[0317] Linija ćelije multiplog mijeloma ljudi NCI-H929 je kultivisana u Advanced RPMI 1640 podlozi iz kompanije Gipko (Gibco®) je suplementira sa 6% seruma goveđeg fetusa, 2mM Glutamin, i 1x Penicilin/Streptomicin. Na dan ogleda, ćelije su držane u suspenziji u RPMI 1640 podlogama suplementiranim sa 10% seruma goveđeg fetusa, 2mM Glutamina, i 1x Penicilin/Streptmicin i raspoređene na ploče za kulturu ćelija sa 384-pregrade i tretirane sa razblaženjima jedinjenja u DMSO/podlogama. Ploče su inkubirane na 37°C, 5% CO2 tokom 48 sati. Posle 48 sati, ćelijski titar-Glo (Celltiter-Glo® (Promega) je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje odživosti ćelije.

[0318] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazana u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled sa održivosti U266 ćelije

[0319] Linija ćelije čovečjeg multiplog mijeloma U266B1 je kultivisana u RPMI 1640 podlozi je suplementirana sa 10% seruma goveđeg fetusa, 2mM Glutamin, i 1x Penicilin/Streptomicin. Ćelije su raspoređene na ploče sa 384 pregrade za kulturu ćelija i tretirane sa razblaženjima jedinjenja u DMSO/podloge. Ploče su inkubirane na 37°C, 5% CO2 tokom 48 sati. Posle 48 sati ćelijski titar (Celltiter-Glo® (Promega)) je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje održivosti ćelije.

[0320] Rezultati za ovde opisana jedinjenja izabrana su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu

In vitro ogledi stabilnosti mikrozoma

[0321] Kalijum fosfat (423 µL od 0,1 M rastvora) je dodat u epruvete pregrada duboke 8 traka posle čega su dodati čovečji, mišji, pacovski, ili majmunski mikrozomi (25 µL od 20 mg/mL rastvora). Cevi su zatim postavljene na led i dodat je artikl za testiranje (2 µL od 0,25 mM rastvoru u DMSO). Mešavina je preinkubirana na 37<0>C tokom 3 do 5 minuta (vibraciono na 150 ob./min) zatim je reakcija započeta dodavanjem 50 µL NADPH. Alikvot uzoraka (100 µL) se prikuplja na 0 i 30 min i 200 µL mešavine acetonitrila koja sadrži IS (jedinjenje 914) je dodato da se brzo ohladi reakcija. Posle centrifugiranja tokom 10 min na 4000 ob./min, mešoviti rastvor 20 µL supernatanta (20 µL) plus 100 µL ACN/H2O (1:1) su ubrizgrani za LC-MS/MS analizu. Stabilnost mikrozoma jetre je procenjena putem %preostatka od jedinjenja na 30 min što je izračunato korišćenjem sledeće jednačine:

[(AUkanalitT = 30/AUCIS)/(AUkanalitT = 0/AUCIS)]*100

[0322] Rezultati za izabrana ovde opisana jedinjenja su prikazani u Tabeli 1, dole u tekstu. Za hemijske strukture koje uključuju jedan ili više stereoizomera, ali su ilustrovani bez naznačavanja stereohemije, podaci ogleda se odnose na mešavinu stereoizomera.

Ogled tranzijentno eksprimovanim doksorubicinom indukovane signalne sekvence-Gluc

[0323] Flp-In 293 T-REx™ ćelije su transfektovane sa 500ng pcDNK™5/FRT/TO plazmidima umetnutim sa cDNK koji kodiraju Gaussia luciferazu spojenu fuzijom na 3’ kraj cDNK koja kodira ciljne signalne sekvence plus 10 aminokiselina. Transfektovane ćelije su inkubirane tokom noći zatim su ćelije su tripsinom razdružene i raspoređene u 384 pregrade na pločama za kulturu tkiva. Sledećeg dana, razređena jedinjenja u DMSO/podlogama koja su sadržala doksiciklin su dodata u pregrade i inkubirana na 37°C, 5% CO2. Posle 24 sata, supstrat koelenterazina je dodat u svaku pregradu i signal luciferaze je kvantifikovan korišćenjem Tecan Infinite M1000 Pro za određivanje potentnosti ćelije.

(nastavak)

(nastavak)

(nastavak)

Ogled sa citokinom za mononuklearnu ćeliju iz čovečje periferne krvi (PBMC)

[0324] Čovečje PBMC su sveže izolovane iz zbirki cele krvi 3 normalna davaoca korišćenjem centrifugiranja gradijentom gustine posle čega je usledila liza crvene krvne ćelije. PBMC od svakog davaoca su ispitivane odvojeno. Ćelije su držane u suspenziji u RPMI 1640 podlozi suplementiranoj sa 5% seruma goveđeg fetusa, 2 mM L-glutamina, 10 mM HEPES, i 1X penicilina/streptomicina. PBMC su zasejana u količini od 200.000 ćelija po pregradi u ploče sa 96 pregrada okruglog dna bilo bez stimulacije ili uz stimulaciju lipopolisaharida (LPS, 1 µg/mL) ili antitela naspram čovečje CD3 (za ploču vezane, 2 µg/mL) i čovečje CD28 (rastvorljive, 2 µg/mL). Serijska razblaženja jedinjenja u DMSO/podlogama su istovremeno dodata i PBMC su inkubirane na 37°C, 5% CO2 tokom 24 sata. Posle 24 sata, ploče su centrifugirane i polovina zapremine supernatanta je uklonjena za analizu citkona pomoću elektrohemiluminescentnog ogleda imunizacije (U-PLEX® Biomarker Multiplex, Meso Scale Discovery).

Studija efikasnosti: Dejstvo Jedinjenja A87 na rast tumora i telesnu težinu na B16F10 modelu je odvojeno u odnosu na anti-PD-1 terapiju.

[0325] Ženke C57BL/6 miševa (7-8 nedelja starosti) su ubrizgani u slabinu potkožno (nastavak)

sa 5X10<6>B16F10 ćelija u 0,1 ml na dan 0. Na dan 3, jedinjenje A87 je formulisano u 10% ETOH/10% Kolifor EL-a (Kolliphor EL) je isporučeno IV 30 mg/kg QW, IV 10 mg/kg D1D2, ili IP 15 mg/kg QOD. Anti-PD1 terapija antitelom (RMP1-14 iz Bioxcell, 200 µg) je isporučena i.p. prema rasporedu doze QODx3. Veličina tumora je nadgledana digitalnim (Fowler) svaka 2-3 dana dok nije dostigla veličinu od 1,5-2,0 cm i izražen kao zapremina (dužina X širina X visina). B16F10, linija ćelije melanoma, je dobijena iz ATCC. C57/BL6 miševi su kupljeni iz laboratorija Charles rivers (Čarls rivers).

T l 1. Akivn i in n

Claims (18)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje iz Formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:

   pri čemu: svako od R<a>i R<b>je nezavisno H ili C1-3alkil; R<1>je H, OH, C1-3alkil, OC1-3alkil, =CH2, ili =NOR<5>; ili R<1>jeste C3-6cikloalkil ili C3- 6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji je spojena; svako od R<1a>i R<1b>je nezavisno H ili C1-3alkil; R<2>je C3-9heterocikloalkil ili C3-9heterocikloalkenil, i nije morfolinil; R<3>obuhvata C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, C3-7heterocikloalkil, C6-10aril, ili C2- 6heteroaril; R<4>jeste C6-10aril, ili C2-6heteroaril; svako R<5>nezavisno je H, C1-3alkil, ili C0-2alkilen-C6-10aril; X jeste C1-3alkilen; Y jeste SO ili SO2; svaka heterocikloalkil, heterocikloalkenil, i heteroaril grupa nezavisno ima 1, 2, ili 3 prstena heteroatoma izabrana iz N, O, i S.
2. 2. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 1, pri čemu svako Y jeste SO2.
3. 3. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 1 ili 2, pri čemu R<1>jeste (1) CH3 ili OCH3 ili (2) C3-6cikloalkil ili C3-6heterocikloalkil i formira spiro grupu sa prstenom ugljenika na koji je spojeno.
4. 4. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 3, pri čemu R<1>jeste CH3 i ispoljava S stereohemiju.
5. 5. Jedinjenje ili so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-4, pri čemu R<2>obuhvata oksetanil, azetidinil, tetrahidrofuranil, pirolidinil, tetrahidropiranil, piranil, piperidinil, piperazinil, azepanil, ili tetrahidropiridinil.
6. 6. Jedinjenje ili so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-4, pri čemu C3-7heterocikloalkil ili C3-7heterocikloalkenil iz R<2>obuhvata most ili spiro grupu.
7. 7. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 5, pri čemu R<2>jeste izabrano iz grupe koja obuhvata
8. 8. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 7, pri čemu R<2>jeste izabrano iz grupe koja obuhvata
9. 9. Jedinjenje ili so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-8, pri čemu R<3>obuhvata ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, ciklopentenil, cikloheksenil, tetrahidropiranil, fenil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tetrazolil, furanil, tiofenil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, piridinil, pirazinil, ili pirimidinil.
10. 10. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 9, pri čemu X-R<3>jeste izabrano iz grupe koja obuhvata

    and-i
11. 11. Jedinjenje ili so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-10, pri čemu je R<4>opciono supstituisano sa jednom do tri grupe nezavisno izabrane iz halo, C1-3alkil, C1-3alkoksi, C(O)N(R<N>)2, i N(R<N>)2, i svako R<N>je nezavisno H ili C1-3alkil.
12. 12. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 11, pri čemu R<4>je izabrano iz grupe koja obuhvata
13. 13. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 1, pri čemu: R<a>, R<b>, R<1a>, i R<1b>jeste svako H; R<1>jeste =CH2 ili CH3; R<2>jeste

    X-R<3>jeste

    R<4>jeste

    i i svako Y jeste SO2.
14. 14. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima strukturu izabranu iz grupe koja obuhvata:

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)

    (nastavak)
15. 15. Jedinjenje ili so iz patentnog zahteva 14, pri čemu to jedinjenje ima strukturu izabranu iz grupe koja obuhvata:

    Ċ
16. 16. Jedinjenje ili so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-15 za upotrebu u lečenju kancera.
17. 17. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 16, pri čemu je kancer melanom, multipli mijelom, kancer prostate, kancer pluća, kancer pankreasa, karcinom skvamozne ćelije, leukemija, limfom, neuroendokrini tumor, kancer bešike, ili kancer debelog creva i rektuma.
18. 18. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 16, pri čemu je kancer čvrsti tumor.