RS64889B1

RS64889B1 - Inhibitori lsd1 i njihova medicinska upotreba

Info

Publication number: RS64889B1
Application number: RS20231023A
Authority: RS
Inventors: Francois Brucelle; Victor S Gehling; Avinash Khanna
Original assignee: Constellation Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2016-10-26
Filing date: 2017-10-26
Publication date: 2023-12-29
Also published as: US11547695B2; EP3532459B1; SI3532459T1; HUE063848T2; US10517849B2; LT3532459T; CN109863137B; EP3532459A1; AU2017348100A1; TWI753037B; PT3532459T; HRP20231369T1; MD3532459T2; SMT202300381T1; JP7142633B2; US20200306223A1; US20190274998A1; CN109863137A; WO2018081343A1; JP2019537584A

Description

Opis

POVEZANE PRIJAVE PATENTA

[0001] Ova prijava patenta zahteva da ima prioritet u vezi sa Privremenom prijavom US No.

62/413,162, podnetom 26. oktobra 2016. godine i Privremenom prijavom US No.

62/413,166, podnetom 26. oktobra 2016. godine.

STANJE TEHNIKE

[0002] Demetilaza specifična za lizin (LSD1), takođe poznata kao demetilaza specifična za lizin (K) 1A (LSD1), je protein kod ljudi koji je kodiran genom KDM1A i specifično demetilira mono- ili dimetilirani histon H3 lizin4 (H3K4) i H3 lizin 9 (H3K9) putem redoks procesa. Biochimica et Biophysica Acta 1829 (2013) 981-986. Utvrđeno je da LSD1 poseduje onkogena svojstva kod nekoliko karcinoma u rasponu od prostate (Cancer Res., 66 (2006), pp.11341-11347), bešike (Mol. Carcinog., 50 (2011), pp.931-944) neuroblastoma, (Cancer Res., 69 (2009), pp.2065-2071) karcinoma pluća, (PLoS One, 7 (2012), p. e35065) sarkoma i hepato-karcinoma (Tumour Biol., 34 (2013), pp.173-180). Pokazano je da farmakološki inhibitori LSD1 leče npr. leukemije (Nat. Med., 18 (2012), pp.605-611) i takođe solidne tumore (Tumour Biol., 34 (2013), pp.173-180). WO 2013/057320A1 se odnosi na (hetero)aril ciklopropilaminska jedinjenja i njihovu upotrebu u terapiji, uključujući, npr. u lečenju ili prevenciji raka, neurološkog oboljenja ili stanja ili virusne infekcije. WO 2016/123387 je usmeren na inhibitore LSD1 i njihovu upotrebu u lečenju različitih poremećaja posredovanih LSD1-om. Stazi, G. et al., Expert Opinion on Therapeutic Patents, vol. 26, no.5 (2016-03-28), p.565-580 je pregled patenata usmeren na inhibitore LSD1 koji pokriva godine od 2010. do 2015. Przespolewski, A. et al Expert Opinion on Investigational Drugs, vol. 25, no.7 (2016-04-21), p.771-780 odnosi se na inhibitore LSD1 kao potencijalnu terapiju za akutnu mijeloidnu leukemiju. Lynch, J.T. et al., Expert Opinion on Therapeutic Tar., vol.16, no.12 (2012), p.1239-1249 usmereno je na strukturu i enzimsku aktivnost LSD1, njegovu ulogu u hromatinskim regulatornim kompleksima, njegove funkcionalne uloge u normalnom i malignom tkivu, farmakološke inhibitore njegove aktivnosti i njihove navodne terapijske uloge.

SUŠTINA PRONALASKA

[0003] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule:

pri čemu stereohemijska konfiguracija oko ciklopropilnog prstena je 1R,2S, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, pri čemu

n je 1 ili 2;

m je 1 ili 2;

o je 0 ili 1;

q je 0, 1, 2 ili 3;

R<1>je vodonik ili (C1-C6) alkil;

R<2>je vodonik ili (C1-C6) alkil opciono supstituisan sa OH ili (C1-C6) alkoksi;

R<3>i R<4>, ako su prisutni, svaki je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, OH i (C1-C6) alkil;

R<5>je izabran iz grupe koju čine NH2, -NH(SO2)(C1-C6)alkil, -NH(SO2)(C1-C6)alkilO(C1-C6)alkil, -NHC(O)(C1-C6)alkil, -NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, OH, -O(C1-C6)alkil, - SOzNHz, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6)alkil, -C(O)N[(C1-C6)alkil]2, -C(O)NH(SO2)(C1-C6)alkil, -C(O)NH(C1-C6)alkil(SO2)(C1-C6)alkil, -C(O)NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, - C(O)NH(C1-C6)alkilOH, -C(O)NH(C1-C6)alkilO(C1-C6)alkil, i (C1-C4)alkil supstituisan sa OH; i

R<6>, ako je prisutan, je izabran iz grupe koju čine (C1-C6)alkil, halo(C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halo(C1-C6)alkoksi, halo i cijano;

pod uslovom da jedinjenje nije formule:

ili njegove soli;

Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske sastave koji sadrže takva jedinjenja, kao i takva jedinjenja ili sastave za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja izabranih iz grupe koju čine HML (hronična mijeloidna leukemija), T-ALL (T akutna limfoblastna leukemija), neuroblastom, rak dojke, rak prostate, reaktivacija herpes simpleks virusa i HIV infekcija.

[0004] Sada je utvrđeno da jedinjenja strukturne formule:

pri čemu je stereohemijska konfiguracija oko ciklopropilnog prstena 1R,2S, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, i sastavi koji sadrže jedinjenja ove formule, pri čemu su svaki od R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, m, n, o i q ovde definisani i opisani, jesu efikasni inhibitori LSD1. Pogledajte Tabelu 6 u Odeljku za primere u nastavku. Uslovi tretirani obelodanjenim jedinjenjima opisani su ovde.

KRATAK OPIS SLIKA

[0005]

Slika 1 prikazuje rendgensku kristalnu strukturu za intermedijer (1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin (S)-2-hidroksi-2-fenilacetat.

Slika 2 prikazuje rendgensku kristalnu strukturu za monocitratnu so jedinjenja 2.

DETALJAN OPIS POJEDINIH OTELOTVORENJA

1. Opšti opis jedinjenja

[0006] Predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenja formule:

pri čemu je stereohemijska konfiguracija oko ciklopropilnog prstena 1R,2S, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu

n je 1 ili 2;

m je 1 ili 2;

o je 0 ili 1;

q je 0, 1, 2 ili 3;

R<1>je vodonik ili (C1-C6) alkil;

R<2>je vodonik ili (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa OH ili (C1-C6)alkoksi;

R<3>i R<4>, ako su prisutni, svaki je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, OH i (C1-C6)alkil;

R<6>, ako je prisutan, je izabran iz grupe koju čine (C1-C6)alkil, halo(C1-C6)alkil, (C1-C6) alkoksi, halo(C1-C6)alkoksi, halo i cijano;

2. Jedinjenja i definicije

[0007] Termini „halo“ i „halogen“ koji se ovde koriste odnose se na atom izabran iz grupe koju čine fluor (fluoro-, F), hlor (hloro-, Cl), brom (bromo-, Br) i jod (jodo-, I).

[0008] Termin „alkil“ koji se koristi sam ili kao deo većeg dela, kao što su „alkoksi“, „haloalkil“ i slično, označava zasićeni ravnolančani ili razgranati monovalentni ugljovodonični radikal. Osim ako nije drugačije navedeno, alkilna grupa obično ima 1-6 atoma ugljenika, tj. (C1-C6)alkil. Kao što se ovde koristi, "(C1-C6) alkilna" grupa je radikal koji ima od 1 do 6 atoma ugljenika u linearnom ili razgranatom rasporedu.

[0009] Termin „haloalkil“ uključuje mono, poli i perhaloalkilne grupe gde su halogeni nezavisno izabrani iz grupe koju čine fluor, hlor, brom i jod.

[0010] „Alkoksi“ označava alkilni radikal vezan preko povezujućeg atoma kiseonika, predstavljen sa -O-alkilom. Na primer, "(C1-C4)alkoksi" uključuje metoksi-, etoksi-, proproksi- i butoksi-.

[0011] Kada se koristi u vezi sa opisivanjem hemijske grupe koja može imati više tačaka vezivanja, crtica (-) označava tačku vezivanja te grupe za promenljivu za koju je definisana. Na primer, -NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil znači da je tačka vezivanja za ovu grupu na atomu azota.

[0012] Obelodanjena jedinjenja postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Stereoizomeri su jedinjenja koja se razlikuju samo po prostornom rasporedu svojih atoma. Različiti prostorni rasporedi u jedinjenju mogu rezultirati npr. orijentacijom četiri različita supstituenta oko hiralnog atoma ugljenika (tj. hiralnog centra), orijentacijom dva ili više supstituenata oko dvostruke veze ili orijentacijom dva ili više supstituenata na cikloalkilnom prstenu.

[0013] Enantiomeri su jedna vrsta stereoizomera koji mogu nastati iz hiralnog centra ili hiralnih centara. Enantiomeri su parovi stereoizomera čije se slike u ogledalu ne mogu superponirati, najčešće zato što sadrže asimetrično supstituisani atom ugljenika ili atome ugljenika koji deluju kao hiralni centar. "R" i "S" predstavljaju apsolutnu konfiguraciju supstituenata oko jednog ili više hiralnih atoma ugljenika, pri čemu se svakom hiralnom centru dodeljuje prefiks "R" ili "S" prema tome da li je konfiguracija hiralnog centra desna (rotacija u smeru kazaljke na satu) ili leva (rotacija u smeru suprotnom od kazaljke na satu). Ako je kretanje u smeru kazaljke na satu ili nadesno oko hiralnog ugljenika, oznaka je "R" za ’rectus’ - desno. Ako je kretanje u smeru suprotnom od kazaljke na satu ili nalevo oko hiralnog ugljenika, oznaka je "S" za ’sinister’ - levo.

[0014] Enantiomerna čistoća odražava stepen u kojem je jedan enantiomer jedinjenja pretežno prisutan u odnosu na drugi enantiomer tog jedinjenja. Određuje se oduzimanjem procentualnog sastava manjeg enantiomera koji je prisutan od procentualnog sastava glavnog enantiomera. Na primer, racemska smeša ima enantiomernu čistoću od 0%, dok jedan potpuno čist enantiomer ima enantiomernu čistoću od 100%. Sastav sa 70% jednog enantiomera i 30% drugog ima enantiomernu čistoću od 40% (70% - 30%).

[0015] Dijastereomeri su stereoizomeri koji nisu povezani kao objekat i slika u ogledalu i nisu enantiomeri. Za razliku od enantiomera koji su međusobne slike u ogledalu i nesuperponirani, dijastereomeri nisu međusobne slike u ogledalu i ne-superponirani.

Dijastereomeri imaju dva ili više hiralnih centara.

[0016] Geometrijski izomeri nastaju kada dva ili više supstituenata na dvostrukoj vezi ili prstenu mogu imati različite prostorne orijentacije u međusobnom odnosu zbog prisustva dvostruke veze ili prstenaste strukture. Kada je orijentacija supstituenata geometrijskog izomera na suprotnim stranama dvostruke veze, za te supstituente se kaže da su "trans" jedni drugima ili označeni slovom "E." Kada je orijentacija supstituenata geometrijskog izomera na istoj strani dvostruke veze, za te supstituente se kaže da su "cis" jedni drugima ili označeni slovom "Z".

Kada je konfiguracija dva ili više supstituenata oko dvostruke veze označena strukturom; oznakama "E" ili "Z"; "cis" ili "trans"; ili kombinacijom gore navedenog, treba shvatiti da je prikazana stereohemijska čistoća u odnosu na tu dvostruku vezu najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 97%, najmanje 98% ili najmanje 99% težinskih.

Stereohemijska čistoća po težini u odnosu na dvostruku vezu označava težinski procenat jedinjenja u sastavu koji ima naznačenu stereohemiju oko dvostruke veze.

[0017] Kada je jedinjenje prikazano strukturom bez ukazivanja na stereohemiju u hiralnom centru, treba shvatiti da struktura uključuje ili konfiguraciju u hiralnom centru ili, alternativno, bilo koju mešavinu konfiguracija u tom hiralnom centru.

[0018] Položaji 1- i 2- ciklopropilnog prstena predstavljaju sledeće:

[0019] Ovde opisana jedinjenja mogu biti prisutna u obliku farmaceutski prihvatljivih soli. Za primenu u lekovima, soli jedinjenja pronalaska odnose se na netoksične "farmaceutski prihvatljive soli". Farmaceutski prihvatljivi oblici soli uključuju farmaceutski prihvatljive kisele/anjonske ili bazne/katjonske soli. Pogodne farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli ovde opisanih jedinjenja uključuju npr. soli neorganskih kiselina (kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična, fosforna, azotna i sumporna kiselina) i organskih kiselina (kao što su sirćetna kiselina, benzensulfonska, benzoeva, metansulfonska i ptoluensulfonska kiselina). Jedinjenja predmetne nauke sa kiselim grupama kao što su karboksilne kiseline mogu formirati farmaceutski prihvatljive soli sa farmaceutski prihvatljivom bazom (bazama). Odgovarajuće farmaceutski prihvatljive bazne soli uključuju npr. amonijumove soli, soli alkalnih metala (kao što su soli natrijuma i kalijuma) i soli zemnoalkalnih metala (kao što su soli magnezijuma i kalcijuma). Jedinjenja sa kvartarnom amonijum grupom takođe sadrže protiv kao što su hlorid, bromid, jodid, acetat, perhlorat i slično. Drugi primeri takvih soli uključuju hidrohloride, hidrobromide, sulfate, metansulfonate, nitrate, benzoate i soli sa aminokiselinama kao što je glutaminska kiselina.

[0020] Termini „ispitanik“ i „pacijent“ mogu se koristiti naizmenično i znače sisara kome je potrebno lečenje, npr. kućne životinje (npr. psi, mačke i slično), domaće životinje (npr. krave, svinje, konji, ovce, koze i slično) i laboratorijske životinje (npr. pacovi, miševi, zamorci i slično). Obično je ispitanik čovek kome je potrebno lečenje.

3. Opis primernih jedinjenja

[0021] U prvom otelotvorenju, ovo obelodanjivanje pruža jedinjenje formule Ia:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu su promenljive kao što je gore opisano.

[0022] U drugom otelotvorenju, R<6>u formuli Ia je izabran iz grupe koju čine metil, etil, halometil, haloetil, metoksi, halometoksi, halo i cijano, pri čemu su preostale varijable opisane u prvom otelotvorenju.

[0023] U trećem otelotvorenju, jedinjenje formule Ia je formule II:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0024] U četvrtom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia ili II je formule III:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U petom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia ili II je formule IV:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0025] U šestom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II ili III je formule V:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0026] U sedmom otelotvorenju, R<2>u jedinjenjima formule Ia, II, III, IV ili V je vodonik, metil ili hidroksi (C1-C4)alkil, pri čemu su preostale varijable kao one opisane u drugom otelotvorenju. Alternativno, R<2>u jedinjenju formule Ia, II, III, IV ili V je hidroksi(C1-C4) alkil, pri čemu su preostale varijable kao one opisane u drugom otelotvorenju. U drugoj alternativi, R<2>u jedinjenju formule Ia, II, iii, IV ili V je hidroksi(C1-C2) alkil, pri čemu su preostale varijable kao one opisane u drugom otelotvorenju.

[0027] U osmom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II ili III je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U devetom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II ili III je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U desetom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II ili III je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0028] U jedanaestom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II ili IV je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0029] U dvanaestom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II, IV ili IX je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0030] U trinaestom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II, IV ili IX je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0031] U četrnaestom otelotvorenju, jedinjenje formule Ia, II, IV ili IX je formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0032] U petnaestom otelotvorenju, R<5>u bilo kom od jedinjenja formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII je NH2, -NH(SO2)(C1-C4)alkil, -NH(SO2)(C1-C4)alkilO(C1-C4)alkil, -NHC(O)(C1-C4)alkil, -NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, OH, -SOzNHz, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C4)alkil, -C(O)NH(SO2)(C1-C4)alkil, -C(O)NH(C1-C4)alkil(SO2)(C1-C4)alkil, -C(O)NH(C1-C4)alkilOH, ili (C1-C2)alkil supstituisan sa OH, pri čemu su preostale varijable opisane kao drugo ili sedmo otelotvorenje. Alternativno, R<5>u bilo kom od jedinjenja formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII je NH2, -NH(SO2)CH3, -NH(SO2)(CH2)2OCH3, -NH(SO2)CH(CH3)2, -NH(SO2)CH2CH3, -NHC(O)CH3, -NH(SOz)ciklopropil, OH, -SOzNHz, -C(O)NH2, -C(O)NH(SO2)CH3, -C(O)NH(CH3)2, -C(O)NHCH(CH3)2, -C(O) NHCH2CH3, -C(O)NH(CH2)2(SO2)CH3, -C(O)NH(CH2)2OH, ili -CH2OH, pri čemu su preostale varijable kao što je opisano u drugom ili sedmom otelotvorenju. U drugoj alternativi, R<5>u bilo kom od jedinjenja formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII je -C(O)NH2,OH, -SOzNHz ili -NH(SO2)CH3, pri čemu su preostale varijable kao što je opisano u drugom ili sedmom otelotvorenju. U još jednoj alternativi, R<5>u bilo kom od jedinjenja formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII je OH, pri čemu su preostale varijable kao što je opisano u drugom ili sedmom otelotvorenju.

[0033] U šesnaestom otelotvorenju, jedinjenje je izabrano iz grupe koju čine

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0034] U sedamnaestom otelotvorenju, jedinjenje je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0035] U osamnaestom otelotvorenju, jedinjenje je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0036] U devetnaestom otelotvorenju, ovde opisana jedinjenja (npr. Formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII i ona u šesnaestom do osamnaestom otelotvorenju) su pojedinačni enantiomeri koji imaju enantiomernu čistoću od najmanje 95% (npr. najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, najmanje 99,5% ili najmanje 99,9%).

[0037] U dvadesetom otelotvorenju, stereohemijska konfiguracija oko ciklopropilnog prstena u jedinjenjima opisanim u ovom dokumentu (npr. Formule Ia, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI ili XII i onima u šesnaestom do osamnaestom otelotvorenju) je 1R,2S i jedinjenja su pojedinačni enantiomeri koji imaju enantiomernu čistoću od najmanje 95% (npr., najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, najmanje 99,5% ili najmanje 99,9%).

[0038] U jednom aspektu, ovde opisana jedinjenja nisu

ili njihove soli;

[0039] U jednom aspektu, kada je q 0, m je 1, n je 1, o je 0 , a R<1>i R<2>su oba vodonik u jedinjenjima opisanim ovde, onda R<5>nije -CONH2. U drugom aspektu, kada je q 0, m je 2, n je 2, o je 0, a R<1>i R<2>su oba vodonik u jedinjenjima opisanim ovde, onda R<5>nije -CONH2.

[0040] Specifični primeri jedinjenja dati su u ODELJKU ZA PRIMERE i uključeni su kao deo trinaestog otelotvorenja ovde. Uključene su i farmaceutski prihvatljive soli, kao i neutralni oblici jedinjenja u primerima.

4. Formulacija i primena

[0041] U jednom aspektu, ovde su predviđeni sastavi koji se sastoje od ovde opisanih jedinjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.

[0042] U drugom aspektu, sastavi dalje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum. Količina jedinjenja u sastavu je takva da je efikasna za merljivo modulisanje LSD1, ili njegovog mutanta u biološkom uzorku ili kod pacijenta, tj. „efikasne količine“ ili „terapijski efikasne količine“.

[0043] U određenim aspektima, ovde opisani sastav je formulisan za primenu kod pacijenta kome je potreban takav sastav. U nekim aspektima, ovde opisani sastav je formulisan za oralnu primenu kod pacijenta.

[0044] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum“ ili „farmaceutski prihvatljiv nosač“ odnosi se na netoksični nosač, adjuvans ili vehikulum koji ne uništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisan. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi ili vehikulumi koji se mogu koristiti u ovde opisanim sastavima uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, aluminijum oksid, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što su ljudski serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, parcijalne gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što su protamin sulfat, dinatrijum fosfat, dikalijum fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetil celuloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol i lanolin.

[0045] Farmaceutski prihvatljivi sastavi opisani u ovom dokumentu mogu se primenjivati oralno u bilo kom oralno prihvatljivom obliku doziranja, uključujući, ali ne ograničavajući se na kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se obično koriste uključuju laktozu i kukuruzni skrob. Obično se dodaju i lubrikanti, kao što je magnezijum stearat. Za oralnu primenu u obliku kapsula, korisni razblaživači uključuju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada su potrebne vodene suspenzije za oralnu upotrebu, aktivni sastojak se kombinuje sa emulgatorima i suspenzivnim agensima. Po želji se mogu dodati i određena sredstva za zaslađivanje, aromatizaciju ili bojenje.

[0046] Farmaceutski prihvatljivi sastavi opisani u ovom dokumentu takođe se mogu pripremiti u obliku injekcije. Preparati za ubrizgavanje, na primer, sterilne vodene ili uljne suspenzije za ubrizgavanje mogu se formulisati u skladu sa poznatom tehnikom koristeći odgovarajuće agense za dispergovanje ili vlaženje i agense za suspendovanje. Sterilni preparat za injekcije takođe može biti sterilni rastvor ili suspenzija za injekcije u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor, USP (US Pharmacopeia) i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, neisparljiva ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili suspenzioni medijum. U tu svrhu može se koristiti bilo koje blago neisparljivo ulje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Pored toga, u pripremi injekcija koriste se masne kiseline kao što je oleinska kiselina.

[0047] Farmaceutski prihvatljivi sastavi opisani u ovom dokumentu takođe se mogu primenjivati lokalno, posebno kada cilj lečenja uključuje područja ili organe koji su lako dostupni lokalnom primenom, uključujući bolesti oka, kože ili donjeg intestinalnog trakta. Za svaku od ovih oblasti ili organa lako se pripremaju odgovarajuće topikalne formulacije. Topikalna primena za donji intestinalni trakt može se izvršiti u formulaciji rektalnog supozitorija (vidi gore) ili u odgovarajućoj formulaciji klistira. Mogu se koristiti i topikalnotransdermalni flasteri.

[0048] Količina jedinjenja opisanog u ovom dokumentu koja se može kombinovati sa materijalima nosačima za proizvodnju sastava u jednom obliku doziranja variraće u zavisnosti od lečenog domaćina i određenog načina primene. U nekim otelotvorenjima, pod uslovom da sastavi treba da budu formulisani tako da se doza inhibitora između 0,01 - 100 mg/kg telesne težine/dan, kao što je npr.0,1 - 100 mg/kg telesne težine/dan, može dati pacijentu koji prima ove sastave.

[0049] Takođe treba shvatiti da će specifična doza i režim lečenja za svakog određenog pacijenta zavisiti od različitih faktora, uključujući aktivnost određenog korišćenog jedinjenja, starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol, ishranu, vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova i procenu lekara koji leči i težinu određene bolesti koja se leči. Količina jedinjenja opisanog ovde u sastavu će takođe zavisiti od određenog jedinjenja u sastavu.

5. Upotreba jedinjenja i farmaceutski prihvatljivih sastava

[0050] Ovde opisana jedinjenja i sastavi su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa prekomernom ekspresijom LSD1 i/ili ekspresijom mutiranog oblika LSD1, kao što su oni mutirani oblici koji menjaju aktivnost supstrata LSD1.

[0051] Ovde opisana jedinjenja i sastavi su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa ćelijskom proliferacijom. U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja i sastavi su korisni u lečenju bolesti i/ili poremećaja povezanih sa deregulacijom ćelijskog ciklusa ili korekcijom DNK. U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja i sastavi su korisni u lečenju raka. Primeri vrsta raka uključuju rak dojke, rak prostate, rak debelog creva, rak bubrežnih ćelija, multiformni rak glioblastoma, rak bešike, melanom, bronhijalni rak, limfom i rak jetre.

[0052] Predmetno obelodanjivanje obezbeđuje jedinjenja i sastave za upotrebu u smanjenju aktivnosti LSD1 kod ispitanika, koje obuhvata korak primene jedinjenja opisanog u ovom dokumentu, ili sastava koji se sastoji od bilo kog od ovde navedenih jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, ovo obelodanjivanje pruža jedinjenja i sastave za upotrebu u smanjenju aktivnosti LSD1 širokog tipa kod ispitanika koji se sastoji od koraka primene jedinjenja opisanog u ovom dokumentu, ili sastava koji se sastoji od bilo čega od gore navedenog. U nekim otelotvorenjima, predmetno obelodanjivanje predviđa jedinjenja i sastave za upotrebu postupka smanjenja aktivnosti mutiranog oblika LSD1 kod ispitanika, koji se sastoji od koraka primene jedinjenja opisanog u ovom dokumentu, ili sastava koji se sastoji od bilo čega od gore navedenog.

[0053] U nekim otelotvorenjima, ovo obelodanjivanje pruža jedinjenja i sastave za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa rakom, uključujući npr. tumore kao što su kancer kože, dojke, mozga, kancer grlića materice, kancer testisa itd. U jednom aspektu, karcinomi koji se mogu lečiti ovde opisanim sastavima i postupcima uključuju, ali nisu ograničeni na tipove tumora kao što su astrocitni karcinom, karcinom dojke, grlića materice, kolorektalni karcinom, karcinom endometrijuma, karcinom jednjaka, karcinom želuca, karcinomi glave i vrata, hepatocelularni karcinom, karcinom larinksa, karcinom pluća, oralni karcinomi, karcinom jajnika, karcinom prostate i karcinomi tiroidee i sarkomi.

[0054] U nekim otelotvorenjima, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenja i sastave za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja izabranih između jednog ili više od sledećih, Kardiološki: sarkom (angiosarkom, fibrosarkom, rabdomiosarkom, liposarkom), miksom, rabdomiom, fibrom, lipom i teratom; Pluća: bronhogeni karcinom (skvamoznih ćelija, nediferenciranih sitnih ćelija, nediferenciranih krupnih ćelija, adenokarcinom), alveolarni (bronhiolarni) karcinom, bronhijalni adenom, sarkom, limfom, hondromatozni hamartom, mezoteliom; Gastrointestinalni: ezofagus (karcinom skvamoznih ćelija, adenokarcinom, leiomiosarkom, limfom), želudac (karcinom, limfom, leiomiosarkom), pankreas (duktalni adenokarcinom, insulinom, glukagonom, gastrinom, karcinoidni tumori, vipom), tanko crevo (adenokarcinom, limfom, karcinoidni tumori, Kapošijev sarkom, leiomiom, hemangiom, lipom, neurofibroma, fibrom), debelo crevo (adenokarcinom, tubularni adenom, venski adenom, hamartom, leiomiom); Genitourinarni trakt: bubreg (adenokarcinom, Vilmov tumor (nefroblastom), limfom, leukemija), bešika i ureter (karcinom skvamoznih ćelija, karcinom prelaznih ćelija, adenokarcinom), prostata ( adenokarcinom, sarkom), testis (seminom, teratom, embrionalni karcinom, teratokarcinom, horiokarcinom, sarkom, intersticijalni ćelijski karcinom, fibrom, fibroadenom, adenomatoidni tumori, lipom); Jetra: hepatom (hepatocelularni karcinom), holangiokarcinom, hepatoblastom, angiosarkom, hepatocelularni adenom, hemangiom; Kosti: osteogeni sarkom (osteosarkom), fibrosarkom, maligni fibrozni histiocitom, hondrosarkom, Ewing-ov sarkom, maligni limfom (sarkom retikularnih ćelija), multipli mijelom, maligni tumor gigantskih ćelija hordom, osteohrondrom (osteokartilaginozne egzostoze), benigni hondrom, hondroblastom, hondromiksofibrom, osteoidni osteom i tumori gigantskih ćelija; Nervni sistem: lobanja (osteom, hemangiom, granulom, ksantom, osteitis deformans), moždane opne (meningiom, meningiosarkom, gliomatoza), mozak (astrocitom, meduloblastom, gliom, ependimom, germinom (pinealom, multipli glioblastom, oligodendrogliom, švanom, retinoblastom, kongenitalni tumori), neurofibrom kičmene moždine, meningiom, gliom, sarkom); Ginekološki: materica (karcinom endometrijuma), grlić materice (karcinom grlića materice, pre-tumorska cervikalna displazija), jajnici (karcinom jajnika (serozni cistadenokarcinom, mucinozni cistadenokarcinom, neklasifikovani karcinom), granuloza teka ćelijski tumori, tumori Sertoli-Leydigovih ćelija, vulva (karcinom skvamoznih ćelija, intraepitelni karcinom, adenokarcinom, fibrosarkom, melanom), vagina (karcinom bistrih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, botrioidni sarkom (embrionalni rabdomiosarkom) karcinom jajovoda; Hematološki: krv (mijeloidna leukemija (akutna i hronična)), akutna limfoblastna leukemija, hronična limfocitna leukemija, mijeloproliferativne bolesti, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom), Hodžkinova bolest, ne-Hodžkinov limfom (maligni limfom); Koža: maligni melanom, karcinom bazalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija, Kapošijev sarkom, displastični mladeži, lipom, angiom, dermatofibrom, keloidi, psorijaza; i Nadbubrežne žlezde: neuroblastom.

[0055] U jednom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenja i sastave za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja izabranih iz grupe koju čine CML, T-ALL, neuroblastom, karcinom dojke, karcinom prostate, reaktivacija herpes simpleks virusa i HIV infekcija, koje obuhvata korak primene na ispitaniku kome je to potrebno jedinjenja opisanog u ovom dokumentu, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U jednoj alternativi, bolest ili stanje je izabrano između HML, T-ALL i neuroblastoma.

PRIMERI

[0056] Reprezentativni primeri koji slede imaju za cilj da pomognu u ilustrovanju predmetnog obelodanjivanja i nemaju za cilj, niti bi trebalo da se tumače da ograničavaju obim onoga što je opisano. Modifikacije i dalja otelotvorenja, pored onih prikazanih i opisanih u ovom dokumentu, postaće očigledna stručnjacima u ovoj oblasti.

[0057] Dalje će se ceniti da ovo obelodanjivanje (uključujući Primere) razmatra pojedinačna jedinjenja opisana u ovom dokumentu. Kada su pojedinačna jedinjenja koja su prikazana kao primer izolovana i/ili okarakterisana kao so, na primer, kao so trifluorosirćetne kiseline, ovo obelodanjivanje razmatra slobodnu bazu soli, kao i druge farmaceutski prihvatljive soli slobodne baze.

[0058] Osim ako nije drugačije navedeno, svi rastvarači, hemikalije i reagensi su dobijeni komercijalno i korišćeni bez prečišćavanja.<1>H NMR spektri su dobijeni u D2O, CDCl3, d6-DMSO, CD3OD ili d6-acetonu na 25°C na 400 MHz na OXFORD (Varian) sa prijavljenim hemijskim pomeranjem (δ, ppm) u odnosu na TMS kao internim standardom. HPLC-MS hromatogrami i spektri dobijeni su sistemom Shimadzu LC-MS-2020. Hiralna analiza i prečišćavanje dobijeni su sa Yilite P270.

(1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin (S)-2-hidroksi-2-fenilacetat

Korak 1:

[0059]

(E)-2-benzilidenbutanal

[0060] Rastvoru benzaldehida (130,0 kg; 1226,4 mol) u MeOH (1100,0 kg) dodat je NaOH (vod.) (10%, 500,0kg). Zatim je butanal (92,7 kg; 1287,5 mol) dodat kap po kap na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 10°C 10 sati. Rastvarač je uklonjen i ostatak je zakišeljen sa HCl (vod., 4N) do pH = 5. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (500kg 200kg) i isprana slanim rastvorom (100kg*2). Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je destilisan u vakuumu (85-95°C, 2-10 mm Hg) da bi se dobio (E)-2-benzilidenbutanal (130,0kg, GC>95%) u vidu žućkastog ulja.

Korak 2:

[0061]

etil (E)-4-((E)-benziliden)heks-2-enoat

[0062] Etil 2-(dietoksifosforil)acetat (182,0 kg; 812,5 mol) je rastvoren u THF (2200 kg) i ohlađen na 0°C. Kalijum terc-butanolat (105,0kg; 937,5mol) je dodat u jednoj porciji i reakciona smeša je snažno mešana na 0°C 15 minuta. (E)-2-benzilidenbutanal (130,0 kg; 812,5mol 1,0eq) je dodat u reakcionu smešu i reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ugašena sa H2O (320,0kg) i ekstrahovana sa EtOAc (360,0 kg). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata i filtriran. Rastvarač je uparen pod smanjenim pritiskom kako bi se dobio sirovi proizvod kao ulje. Ulje je rastvoreno u petroletru (560,0kg), filtrirano kroz podlogu od silikagela (30,0kg), a filter kolač je ispran petroletrom.

Kombinovani filtrat je koncentrovan da bi se dobilo etil (E)-4-((E)-benziliden)heks-2-enoat kao ulje (170,0 kg). Materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3:

[0063]

etil (trans)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-karboksilat

[0064] Kalijum terc-butanolat (103,5 kg; 924,1 mol) je rastvoren u DMSO (1900 kg) pod inertnom atmosferom. Smeša je mešana 15 minuta na 25°C pre dodavanja trimetilsulfoksonijum jodida (210,0kg; 959,0 mol). Ova smeša je mešana 45 minuta na 25°C pre dodavanja etil (E)-4-((E) -benziliden) heks-2-enoata (170,0kg; 738,0mol). Reakcija je zagrejana na 50-55°C i mešana 16 sati. Reakcija je ugašena vodom (600kg). Smeša je ekstrahovana petroletrom (800kg). Petroletarska faza je uparena pod smanjenim pritiskom da bi se dobio etil (trans)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropan-1-karboksilat (76,5 kg) u vidu smeđe tečnosti. Materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 4:

[0065]

(trans)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-karboksilna kiselina

[0066] Etil (trans)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-karboksilat (76,5 kg; 313,1mol) je rastvoren u vodi (320 kg) i metanolu (360 kg). Ovom rastvoru je dodat natrijum hidroksid (41,0kg; 1025mol) i rastvor je mešan 3 sata na 50°C. Smeša je koncentrovana na oko 300L i zakišeljena na pH = 4 korišćenjem HCl (vod., 4N). Ovaj rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (520kg) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanom vodom, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan da bi se dobila (trans)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropan-1-karboksilna kiselina (62,5 kg). Materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 5:

[0067]

(trans)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin hidrohlorid

[0068] Rastvoru (trans)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-karboksilne kiseline (26,0kg; 120,4mol) u toluenu (270kg) dodati su trietilamin (36,3kg; 359mol) i difenilfosforil azid (38,0kg; 138,1mol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0-10 °C tokom 3 sata.

Dodata je voda (100 kg) i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (80,0 kg) i organski sloj je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo sirovo ulje. Sirovo ulje je rastvoreno u petroletru (50 kg). Suspenzija je filtrirana kroz podlogu od silikagela i filter kolač je ispran petroletrom. Kombinovani filtrati su koncentrisani kako bi se dobio sirovi acilazid. Sirovi acil azid je preuzet u toluenu (100 kg) i rastvor je zagrevan na 85°C tokom 2 sata. Organski sloj je koncentrovan na -60L. Kalijum trimetilsilanolat (23,0kg; 177,9mol) je dodat u smešu toluena na sobnoj temperaturi i mešan 1,5 h. Reakcija je zatim tretirana sa HCl (2N vod., 120kg) i promešana. Slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ekstrahovan dva puta sa HCl (2N vod., 20kg) i vodeni ekstrakti su sjedinjeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (30 kg) jednom, a zatim zaalkalisan na pH = 10-11 natrijum hidroksidom (47 kg, 30% vodeni). Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa MTBE (150kg). Organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom, osušeni natrijum sulfatom i filtrirani. Ovom MTBE rastvoru je dodat HCl (23,5 kg; 12% u dietil etru) i bela čvrsta supstanca istaložena iz rastvora. Čvrsta supstanca je sakupljena da bi se dobio (trans)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin hidrohlorid (16,5 kg; 73,8 mol).

Korak 6:

[0069]

[0070] (trans)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin hidrohlorid (16,5 kg; 73,8 mol) je napunjen u reaktor i K3PO3(46L;37tež %) je dodat, nakon čega je usledio EtOAc (150 kg). Reakciona smeša je mešana na 0-10 °C tokom 3 sata. Organski sloj je odvojen i koncentrovan do suva kako bi se dobilo ulje. S-bademova kiselina (8,4 kg; 55,35mol) i 95% EtOH (165 kg) su dodati u reaktor i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 72 sata (do ee>99%). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobio (1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin (S) -2-hidroksi-2-fenilacetat (5,8 kg; 17,1 mol). LCMS m/z 188 [M+H]<+>. Apsolutna stereohemija određena je kristalografijom X-zraka. Vidite Sl.1.

N-(2,2-dimetoksietil)metansulfonamid

[0071] Rastvoru 2,2-dimetoksietanamina (518 µL; 4,75 mmol) u dihlorometanu (4,75 ml) na 0°C dodat je trietilamin (1,32 ml; 9,50 mmol), a zatim metansulfonil hlorid (550 µL; 7,12 mmol). Smeša je mešana na 0°C 30 minuta. Reakcija je razblažena dihlorometanom i isprana zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta dihlorometanom. Sjedinjeni organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, a zatim koncentrovani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 1,18 g sirovog jedinjenja u vidu svetlo žutog ulja. Sirova smeša je zatim razblažena u aceton:vodi (1:1, 4 ml) i tretirana sa vodoničnim oblikom amberlyst-15 (1,2 g). Dobijena smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Suspenzija je filtrirana kroz celit i koncentrovana pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi N-(2,2-dimetoksietil)metansulfonamid (900 mg) u vidu žutog ulja. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, dmso) δ 7,13 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,36 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,28 (s, 6H), 3,02 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,90 (s, 3H).

N-(2-oksoetil)etansulfonamid

1. korak:

N-(2,2-dimetoksietil)etansulfonamid

[0073] Rastvoru 2,2-dimetoksietanamina (247 µL; 2,28 mmol) u DCM (1,9 ml) na 0°C dodat je trietilamin (634 µL; 4,56 mmol), a zatim etansulfonil hlorid (212 µL; 2,28 mmol) . Smeša je mešana 30 minuta. Reakcija je razblažena sa DCM i isprana sa zasić. NaHCOs. Vodeni sloj je dva puta povratno ekstrahovan sa DCM. Sjedinjeni organski slojevi su osušeni sa Na2SO4, a zatim koncentrovani pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi N-(2,2-dimetoksietil)etansulfonamid u vidu smeđeg ulja.

2. korak:

[0074]

N-(2-oksoetil)etansulfonamid

[0075] Rastvoru sirovog N-(2,2-dimetoksietil)etansulfonamida u aceton:voda (1:1, 4 ml) dodata je vodonična forma Amberlyst-15 (1,0 g). Dobijena smeša je mešana tokom dva dana na sobnoj temperaturi. Suspenzija je filtrirana kroz celit i koncentrovana pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi N-(2-oksoetil)etansulfonamid (614 mg) u vidu žutog ulja. Korišćen je bez daljeg prečišćavanja.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,68 (s, J = 1,1 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,07 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,40 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

[0076] Koristeći odgovarajući polazni materijal i modifikacije, sledeći intermedijeri u Tabeli 1 su sintetizovani korišćenjem postupaka sinteze opisanih za N-(2-oksoetil)etansulfonamid.

Tabela 1

2,2-dimetil-1-(metilsulfonil)aziridin

[0077] Rastvoru 2-amino-2-metilpropan-1-ola (1,0 g; 11,2 mmol) u DCM (22,4 ml) na 0°C dodat je trietilamin (7,79 ml; 56,0 mmol), a zatim metansulfonil hlorid (2,16 ml; 28,0 mmol). Smeša je mešana na 0°C 30 minuta, a zatim je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu preko noći. Reakcija je razblažena sa DCM i isprana sa zasić. NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan jedanput sa DCM. Sjedinjeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, a zatim koncentrovani pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje 2,2-dimetil-1-(metilsulfonil)aziridin (1,95 g) u vidu smeđeg ulja.

2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil) -N- (7-azaspiro[3.5]nonan-2-il)acetamid hidrohlorid

1. korak:

[0078]

terc-butil2- (((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-karboksilat

[0079] Suspenziji (1R,2S)-2- ((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropanamin (S) -2-hidroksi-2-fenilacetata (3,5 g; 10,3 mmol) u 1,2-dihloroetanu (75 ml) na 0°C dodat je terc-butil 2-okso-7-azaspiro [3,5] nonan-7-karboksilat (2,58 g; 10,8 mmol), a zatim natrijum triacetoksiborohidrid (4,78 g; 22,6 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 23°C i mešana 4 sata. Zatim su dodati dodatni terc-butil 2-okso-7-azaspiro [3.5] nonan-7-karboksilat (123 mg; 0,51 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (328 mg; 1,55 mmol) i reakciona smeša je mešana na 23°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom K2CO3(50 ml) i ekstrahovana sa DCM (3 × 20 ml). Sjedinjeni organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (20 ml), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen preko Biotage (gradijent 0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio terc-butil 2-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -7-azaspiro [3.5]nonan-7-karboksilat (3.235 g). LCMS (ESI) m/z 411.3 [M+H]<+>.

2. korak:

[0080]

terc-butil 2- (2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S) -2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-karboksilat

[0081] Rastvoru terc-butil 2-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) amino) -7-azaspiro [3,5] nonan-7-karboksilata (3,26 g; 7,84 mmol) u DCM (50 ml) na 0°C dodat je N, N-diizopropiletilamin (2,03 ml; 11,7 mmol), a zatim anhidrid trifluorosirćetne kiseline (1,40 ml; 10,1 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 23°C i mešana 4 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs (30 ml) i dva sloja su razdvojena. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvoromNH4Cl (2 × 20 ml), osušen prekoNa2SO4, filtriran i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen preko Biotage (gradijent 0 do 50% EtOAc u heksanima) da bi se dobio terc-butil 2-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido) -7-azaspiro [3.5]nonan-7-karboksilat (3.258 g). LCMS (ESI) m/z: 529.2 [M+Na]<+>.

3. korak:

[0082]

2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E)-I-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil) -N- (7-azaspiro[3.5]nonan-2-il)acetamid hidrohlorid

[0083] Rastvoru terc-butil 2-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) acetamido)-7-azaspiro [3,5] nonan-7-karboksilata (3,254 g; 6,41 mmol) u dioksanu (32 ml) na 23°C dodat je 4,0 M rastvor HCl u dioksanu (12,8 ml; 51,2 mmol) kap po kap. Reakciona smeša je mešana na 23°C 2 sata. Zatim je dodat dodatni HCl (12,8 ml; 51,2 mmol; 4,0 M rastvor u dioksanu) i reakciona smeša je mešana na 23°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom da bi se dobio 2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(7-azaspiro [3,5] nonan-2-il)acetamid hidrohlorid u vidu sirove žute pene (3,185 g). LCMS (ESI) m/z: 407.2 [M+H]<+>.

2,2,2-trifluoro-N-((1R, 2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetat

1. korak:

[0084]

terc-butil 6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat

[0085] U (1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropanamin (S) -2-hidroksi-2-fenilacetat (8,65 g; 25,5 mmol) i terc-butil 6-okso-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat (5,15 g; 24,3 mmol) u 1,2-DCE (100 ml) dodat je natrijum triacetoksiborhidrid (10,8 g; 51 mmol). Nakon 30 min. reakcija je ugašena sa K2CO3(vod.) i ekstrahovana sa DCM (2 x 150 ml). Organska faza je koncentrovana i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (kolona od 50g, 5% do 100% EtOAc:heksani) da bi se dobio terc-butil 6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat (4.61 g). LCMS m/z: 383.7 [M+H]<+>.

2. korak:

[0086]

terc-butil 6-(2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat

[0087] U terc-butil 6- (((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-karboksilat (4.61 g; 12 mmol) rastvoren u DCM je dodat diizopropiletilamin (2.81 ml; 16.2 mmol). Rastvor je ohlađen na 0°C pre dodavanja anhidrida trifluorosirćetne kiseline (2,08 ml; 15 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata, uz zagrevanje na sobnu temperaturu. Isparljive materije su uparene pod smanjenim pritiskom da bi se dobio sirovi terc-butil 6-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat. LCMS m/z 479 [M+H]<+>.

3. korak:

[0088]

[0089] Terc-butil 6-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R, 2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro [3.3] heptan-2-karboksilat (5.74 g; 12 mmol) je rastvoren u DCM (80 ml) i ohlađen na 10°C pre dodavanja trifluorosirćetne kiseline (20 ml; 240 mmol). Rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i mešan 3 sata. Reakcija je koncentrovana da bi se dobio sirovi 2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetat. LCMS m/z 379.2 [M+H]<+>.

Jedinjenje 1: 2-(6-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)etanol

1. korak:

[0090]

2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksietil)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid

[0091] Rastvor 2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil)-N-(2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetata (7,57 g; 15,3 mmol) i dimera glikoaldehida (5,51 g; 45,9 mmol) u metanolu tretiran je sirćetnom kiselinom (2,0 ml) i natrijum cijanoborohidridom (2,88 g; 45,9 mmol). Reakcija je zagrejana na 60°C i praćena putem LCMS. Nakon 1 sata, reakcija je ugašena sa 10%-nim vodenim kalijum karbonatom do pH 8. Isparljive materije su zatim uklonjene pod vakuumom. Sirova smeša je ekstrahovana dva puta sa 2-metiltetrahidrofuranom. Organski sloj je zatim osušen sa natrijum sulfatom, filtriran i isparljive materije su uklonjene pod vakuumom. Željeni proizvod 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksietil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: 423.1 [M+H]<+>.

2. korak:

[0092]

2-(6-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)etanol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0093] U tikvicu sa okruglim dnom, 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksietil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid (6,46 g; 15,3 mmol) je rastvoren u metanolu (75 ml), ohlađen na 0°C i tretiran sa 10 ml 10% vodenog natrijum hidroksida. Reakcija je mešana pod azotnom atmosferom 30 minuta i ugašena sa 2,2,2-trifluorosirćetnom kiselinom do pH od 2,0. Isparljive materije su zatim uklonjene pod vakuumom. Željeni proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni sa reverznom fazom korišćenjem 10-30% CH3CN/ 0,1% vodene 2,2,2-trifluorosirćetne kiseline. Čiste frakcije su sjedinjene, zamrznute i liofilizovane da bi se dobila 2-(6- (((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)etanol bis-(2,2,2-trifluorosirćetna kiselina) (2.90 g). LCMS (ESI) m/z: 327.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.87 (br s, 1H), 9.21 (br s, 2H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.21 (s, 1H), 5.23 (br s, 1H), 4.25 -4.11 (m, 2H), 4.11 - 4.06 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.85 - 3.69 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.25 - 3.11 (m, 2H), 2.80 - 2.72 (m, 1H), 2.72 - 2.65 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.48 - 2.35 (m, 2H), 2.30 - 21.8 (m, 2H), 2.02 - 1.90 (m, 1H), 1.22 - 1.14 (m, 2H), 1.12 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

Jedinjenje 2: 2-(6-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-1,3-diol

[0094] Korak 1:

N-(2-(1,3-dihidroksipropan-2-il)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid:

[0095] U tikvicu sa okruglim dnom, 2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetat (2,75 g; 5,58 mmol) rastvoren u metanolu (18.6 ml) je dodat 1,3-dihidroksipropan-2-on (3.0 g; 33.4 mmol) i sirćetna kiselina (10 kapi). Rastvor je zatim tretiran natrijum cijanoborohidridom (2,09 g; 33,4 mmol) i mešan 1 sat. Reakcija je zatim ugašena do pH 8 korišćenjem 10% vodenog kalijum karbonata i isparljive materije su uklonjene pod vakuumom. Sirova smeša je ekstrahovana dva puta sa 2-metiltetrahidrofuranom. Sjedinjeni organski slojevi su jednom isprani slanom vodom, zatim osušeni natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi N-(2-(1,3-dihidroksipropan-2-il) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il) -2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: 453.4 [M+H]<+>.

2. korak:

[0096]

2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-1,3-diol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0097] N-(2-(1,3-dihidroksipropan-2-il) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il) -2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid (2,52 g; 5,58 mmol) je rastvoren u metanolu, ohlađen u ledenom kupatilu i tretiran sa 10% vodenim NaOH i ostavljen da dostigne sobnu temperaturu. Nakon 30 minuta, reakcija je ugašena do pH 2 korišćenjem TFA, a isparljive materije su uklonjene pod smanjenim pritiskom. Sirova smeša je prečišćena reverznofaznom hromatografijom u koloni (60 g) korišćenjem 10 - 30% MeCN / 0,1% TFA aq. kao eluenta. Frakcije su sjedinjene, zamrznute i liofilizovane da bi se dobio 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)propan-1,3-diol bis(2,2,2-trifluoroacetat) u vidu bele amorfne čvrste supstance (740 mg). LCMS (ESI) m/z: 357.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s br, 1H), 9.33 (s br, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 6.20 (s, 1H), 5.28 (s br, 2H), 4.30 (t, J = 15.6 Hz, 2H), 4.14 (s, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.86 - 3.68 (m, 1H), 3.58 (dd, J = 12.7, 9.6 Hz, 4H), 3.29 (s, 2H), 2.72 (s, 2H), 2.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 2.31 - 2.15 (m, 2H), 1.97 (s, 1H), 1.15 (dt, J = 15.1, 5.9 Hz, 5H).

Postupno povećanje i formiranje monocitratne soli 2-(6- (((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-1,3-diola

1. korak:

[0098]

[0099] Napunite (1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropan-1-amin (S)-2-hidroksi-2-fenilacetat (160 g; 1,0 ekv.) u balon od 3 L i rastvorite u DCM (1000 ml). U ovaj balon je dodat rastvor od 10% K2CO3 (500 ml) i voda (500 ml). Rastvor je mešan 10 min. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x, 300 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4(100 g), filtriran i koncentrovan da bi se dobio (1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropan-1-amin u vidu svetlo žutog ulja. Ovaj materijal je rastvoren u 2-MeTHF (500 ml) i koncentrovan. Ovaj materijal je zatim rastvoren u 2-MeTHF (1000 ml) i prebačen u posudu od 10 L. U posudu od 10 L je dodat 2-MeTHF (1000 ml) da bi se potpuno rastvorila slobodna baza i ovom rastvoru je dodat terc-butil 6-okso-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat (100 g). Reakcija je mešana 10 minuta pre dodavanja NaBH(OAc)3(200 g; 2,0 ekv). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Dodat je dodatni NaBH(OAc)3(8g; 0,08 eq) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 2h. Ovaj rastvor je zaalkalisan na pH = 8 dodavanjem 10%-nog rastvora K2CO3(950 ml) i reakcija je mešana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (1X, 500 mL).

Sjedinjeni organski sloj je koncentrovan (temperatura kupatila < 45 ºC ) da bi se dobio sirovi terc-butil 6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro [3.3]heptan-2-karboksilat (220 g).

2. korak:

[0100]

[0101] U balon napunjen sirovim terc-butil 6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-karboksilatom (200g) dodat je DCM (2000 ml) i Hunigova baza (100 ml). Reakcija je ohlađena na 0 ºC pre dodavanja anhidrida trifluorosirćetne kiseline (120 g) kap po kap tokom 30 minuta. Reakcija je mešana na 0°C pre zagrevanja na 10-20°C i mešana 16 h. Ovoj reakciji je dodata voda (2000 ml) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je koncentrovan kako bi se dobio sirovi proizvod (264 g). Sirovo ulje je rastvoreno u heptanu (500 ml) i mešano 30 minuta da bi se dobila suspenzija. Ovaj materijal je zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu (1,5 kg, 100-200 meš silika gel; gradijent: 1:20 etil acetat:heptan; 1:10 etil acetat heptan; 1:5 etil acetat:heptan) da bi se dobio terc-butil 6-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-karboksilat (frakcija A: 114 g, 96% čistoće; frakcija B: 72 g, 86% čistoće).

3. korak:

[0103] U balon napunjen sa terc-butil 6-(2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilatom (104 g) dodat je DCM (1050 ml) i rastvor je ohlađen na 0°C. Ovom rastvoru je dodata TFA (240 g; 10 ekv.) i rastvor je zagrejan na sobnu temperaturu. Reakcija je mešana 2 sata pre dodavanja dodatne TFA (40 g; 2,0 ekv.). Reakcija je mešana 1 sat pre nego što je koncentrovana da bi se dobilo smeđe ulje. Smeđe ulje je rastvoreno u MeOH (500 ml) i koncentrovano. Ovaj korak je ponovljen (3X) da bi se dobio sirovi 2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(2-azaspiro [3.3]heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetat (365.7 g).

4. korak:

[0104]

[0105] U balon napunjen sirovim 2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropilom)-N-(2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetatom (365,7 g; 1,0 ekv.) dodat je MeOH (1500 ml). Ovom rastvoru je dodat 1,3-dihidroksipropan-2-on (120 g; 1,33 ekv.) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 20 minuta pre dodavanja AcOH (20 ml; 1,41 ekv.). Reakcija je mešana 10 minuta pre dodavanja NaBH3CN (84 g; 6,01 ekv.).

Reakcija je stavljena u hladno kupatilo kako bi se temperatura održala ispod 40 ºC. Reakcija je mešana 1 sat i tokom reakcije smeša je postala svetlo žuta. Ovaj rastvor je zaalkalisan na pH = 8 dodavanjem 10%-nog rastvora K2CO3(400 ml). Smeša je koncentrovana da bi se uklonio MeOH (temperatura kupatila <45 ºC). Dobijeni rastvor je rastvoren u DCM (500 ml) i dodata je voda (200 ml). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2X). Sjedinjeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi N-(2-(1,3-dihidroksipropan-2-il)-2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid (110.6 g).

Korak 5:

[0106]

2-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-1,3-diol

[0107] U balon napunjen sirovim N-(2-(1,3-dihidroksipropan-2-il)-2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil) acetamidom (110,6 g) dodat je 2-MeTHF (1100 ml). Ovoj smeši je polako dodat rastvor NaOH (20 g NaOH rastvoreno u 500 ml vode). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2X). Sjedinjeni organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo žuto ulje (190 g). Žuto ulje je rastvoreno u etil acetatu i isprano slanim rastvorom. Organski sloj je koncentrisan (temperatura kupatila <45 ºC) da bi se dobio 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)propan-1,3-diol (76.4 g) u vidu svetlo žute čvrste supstance.

6. korak

[0108]

2-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il) propan-1,3-diol 2-hidroksipropan-1,2,3-trikarboksilat

[0109] U posudu napunjenu sa 2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il) propan-1,3-diolom (50 g; 1,0 ekv.) dodata je smeša DCM:MeOH (500 ml:40 ml). Ovaj rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 10 minuta pre dodavanja limunske kiseline kap po kap (40 g; 1,43 ekv) rastvorene u MeOH (90 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat pre nego što je talog sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je isprana smešom MeOH:DCM (3:20, 200 ml). Filter kolač je sušen pod vakuumom na 40°C tokom 16 sati da bi se dobio 2-(6- (((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)propan-1,3-diol 2-hidroksipropan-1,2,3-trikarboksilat (77.4 g) kao kristalni proizvod.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ = 7.46 - 7.33 (m, 2 H), 7.31 - 7.25 (m, 3 H), 6.23 (s, 1 H), 4.40 (s, 2 H), 4.32 (br s, 2 H), 3.93 (quin, J = 8.1 Hz, 1 H), 3.84 - 3.71 (m, 4 H), 3.40 (quin, J = 4.6 Hz, 1 H), 2.90 - 2.52 (m, 9 H), 2.36 - 2.19 (m, 2 H), 2.09 - 2.00 (m, 1 H), 1.30 -1.19 (m, 2 H), 1.11 (t, J = 7.8 Hz, 3 H). Struktura je potvrđena rendgenskom kristalografijom. Pogledajte Sl.2.

[0110] Koristeći odgovarajući polazni materijal i modifikacije, sledeća jedinjenja u Tabeli 2 su sintetizovana korišćenjem postupaka sinteze opisanih za Jedinjenje 1.

Tabela 2

Jedinjenje 12: 2-metil-1-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-2-ol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

1. korak:

[0111]

2,2,2-trifluoro-N-(2-(2-hidroksi-2-metilpropil)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid

[0112] U zaptivenu epruvetu je dodat 2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S )-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)-N-(2-azaspiro [3.3]heptan-6-il)acetamid 2,2,2-trifluoroacetat (200 mg; 406 µmol), 2,2-dimetiloksiran (54,0 µL; 609 µmol), diizopropiletilamin (210 µL; 1,21 mmol) i EtOH (4,1 ml). Reakciona smeša je mešana na 50°C tokom 18h. Smeša je koncentrisana pod smanjenim pritiskom, razblažena etil acetatom, a zatim ugašena sa 1N HCl. Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom. Sjedinjeni organski sloj je jednom ispran slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom i uparen pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksi-2-metilpropil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamida (296 mg). LCMS m/z 451.3 [M+H]<+>.

2. korak:

[0113]

2-metil-1-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)propan-2-ol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0114] Rastvoru 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksi-2-metilpropil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil)acetamida (250 mg; 554 µmol) u MeOH (2,8 ml) na sobnoj temperaturi dodat je NaOH (1M; 2,77 ml; 2,77 mmol). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 60 min. Smeša je ugašena sa TFA, a zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen na koloni od 30 g C-18 korišćenjem MeCN /0,1% TFA H2O kao eluenta sa sledećim gradijentom (2CV 0%, 20 CV 0-30%, 3 CV 30%) da bi se dobio 2-metil-1-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)propan-2-ol bis(2,2,2-trifluoroacetat) (22,0 mg) nakon liofilizacije. LCMS m/z 355.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.59 (br s, 1H), 9.27 (br s, 2H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.29 - 7.14 (m, 3H), 6.20 (s, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 1H), 4.25 - 4.07 (m, 3H), 3.83 - 3.64 (m, 1H), 3.18 - 3.09 (m, 2H), 2.79 -2.65 (m, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.47 - 2.33 (m, 1H), 2.30 - 2.13 (m, 2H), 2.03 - 1.89 (m, 1H), 1.23 - 1.15 (m, 2H), 1.13 (s, 6H), 1.11 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

[0115] Koristeći odgovarajući polazni materijal i modifikacije, sledeća jedinjenja u Tabeli 3 su sintetizovana korišćenjem postupaka sinteze opisanih za Jedinjenje 12.

Tabela 3

Jedinjenje 21: 2-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)etansulfonamid

1. korak:

[0116]

2-(6-(((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)etansulfonamid

[0117] U zaptivenu ampulu napunjenu sa 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksi-2-metilpropil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) acetamidom (0,1610 g; 326 pmol), N, N-dimetilformamidom i natrijum karbonatom (100 mg; 943 pmol) dodat je etensulfonamid (80.1 mg; 748 pmol) na sobnoj temperaturi. Ampula je zatim zaptivena i zagrejana na 60°C u uljnom kupatilu preko noći. Sirova smeša je podeljena između 2-metiltetrahidrofurana i vode. Organska faza je dva puta isprana vodom/slanim rastvorom (1:1 v/v), osušena preko natrijum sulfata i uparena pod vakuumom da bi se dobio sirovi 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il) etansulfonamid. Sirovi proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS (ESI) m/z: 485.9 [M+H]<+>.

2. korak:

[0118]

Jedinjenje 32: 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)etansulfonamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0119] Sirovi 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il) etansulfonamid je rastvoren u metanolu (2.0 ml) i tretiran sa 10%-nim vodenim rastvorom NaOH (0.5 ml) na 0°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na koloni sa reverznom fazom 10 - 30% MeCN / 0,1% vodene TFA kao eluenta. Čiste frakcije su sjedinjene, zamrznute i liofilizovane tokom tri dana. Željeni proizvod 2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il) etansulfonamid bis(2,2,2 trifluoroacetat) je dobijen kao bela amorfna čvrsta supstanca (49,6 mg). LCMS (ESI) m/z: 390.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ7.34 -7.28 (m, 2H), 7.23 - 7.15 (m, 3H), 6.26 (s, 1H), 4.36 (s, 2H), 4.27 (s, 2H), 3.92 (p, J = 8.1 Hz, 1H), 3.67 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.40 - 2.25 (m, 2H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.40 (s, 2H), 1.33 - 1.20 (m, 3H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

[0120] Koristeći odgovarajući polazni materijal i modifikacije, sledeća jedinjenja u Tabeli 4 su sintetizovana korišćenjem postupaka sinteze opisanih za Jedinjenje 21.

Tabela 4

Jedinjenje 25: N-etil-2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)acetamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

1. korak:

[0121]

2-(6-(2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)sirćetna kiselina

[0122] Rastvor 2,2,2-trifluoro-N- (2-(2-hidroksi-2-metilpropil)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamida (800 mg; 1,62 mmol), hidrata 2-oksosirćetne kiseline (298 mg; 3,24 mmol) i 5 kapi AcOH u MeOH (16,2 ml) tretiran je sa natrijum cijanoborhidridom (305 mg; 4,86 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Nakon 1h, dodat je dodatni hidrat 2-oksosirćetne kiseline (298 mg; 3,24 mmol) i reakcija je mešana na 45°C tokom 1,5 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je razblažen sa DCM, a zatim ugašen sa zas. NaHCO3. Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Sjedinjeni organski sloj je jednom ispran slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom i uparen pod smanjenim pritiskom da bi se dobila sirova 2-(6-(2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamido)-2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)sirćetna kiselina (522 mg). LCMS m/z 437.2 [M+H]<+>.

2. korak:

[0123]

N-(2-(2-(etilamino)-2-oksoetil)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid

[0124] Rastvoru 2-(6- (2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2- ((E)-1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil) acetamido)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)sirćetne kiseline (175 mg; 400 µmol), etilamonijum hlorida (40.4 mg; 496 pmol) i diizopropiletilamina (215 µL; 1.24 mmol) u DMF (2.8 ml) na 0°C dodat je HATU (236 mg; 621 pmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje i mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 15 ml). Sjedinjena organska faza je jednom isprana slanim rastvorom, osušena preko bezvodnog Na2SO4, a zatim koncentrovana da bi se dobio sirovi N-(2-(2-(etilamino)-2-oksoetil)-2-azaspiro[3.3]heptan-6-il)-2,2,2-trifluoro-N- ((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)acetamid (199 mg; 430 µmol) u vidu žutog ulja sa rezidualnim DMF. LCMS m/z 464.2 [M+H]<+>.

3. korak:

[0125]

N-etil-2-(6-(((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il)ciklopropil)amino)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)acetamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0126] Rastvoru N-(2- (2-(etilamino) -2-oksoetil) -2-azaspiro [3.3] heptan-6-il) -2,2,2-trifluoro-N-((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil)acetamida (190 mg; 409 µmol) u MeOH (2,0 ml) na sobnoj temperaturi dodat je NaOH (1M; 2,04 ml; 2,04 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Smeša je koncentrisana pod smanjenim pritiskom i sirovi proizvod je rastvoren u TFA/vodi i prečišćen na koloni C-18 od 12 g koristeći MeCN /0,1% TFA H2O kao eluente sa sledećim gradijentom (2CV 0%, 20 CV 0-30%, 5 CV 30%) da bi se dobio N-etil-2- (6- (((1R,2S)-2-((E) -1-fenilbut-1-en-2-il) ciklopropil) amino) -2-azaspiro [3.3] heptan-2-il)acetamid bis(2,2,2-trifluoroacetat) (86,7 mg) u vidu čvrste supstance bele boje nakon liofilizacije. LCMS m/z 368.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.23 (br s, 1H), 9.23 (br s, 2H), 8.45 - 8.33 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.19 (s, 1H), 4.27 - 4.10 (m, 1H), 4.10 - 3.99 (m, 2H), 3.98 - 3.87 (m, 2H), 3.80 - 3.63 (m, 1H), 3.16 - 3.04 (m, 2H), 2.77 - 2.57 (m, 2H), 2.57 - 2.52 (m, 2H), 2.48 -2.35 (m, 2H), 2.30 - 2.17 (m, 2H), 2.01 - 1.85 (m, 1H), 1.20 - 1.14 (m, 2H), 1.12 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

[0127] Koristeći odgovarajući polazni materijal i modifikacije, sledeći primeri u Tabeli 5 su sintetizovani korišćenjem postupaka sinteze opisanih za Jedinjenje 25.

Tabela 5

Ogled LSD1 TR-FRET

[0128] Reakcije LSD1 demetilaze izvedene su u 50 mM HEPES pH 7,4, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,01% Tween-20 i 0,1 mg/ml BSA. Sve enzimske reakcije su izvođene 50 minuta na sobnoj temperaturi u zapremini od 10 µL. Pet mikrolitara 8 µM rastvora biotinilisanog peptida H3K4me1 dodato je u svaki bunar crne ogledne mikroploče sa 384 bunara sa prozirnim dnom koja sadrži 80 nL jedinjenja (finalna koncentracija 0,8% DMSO i 4 µM supstrata). Reakcije su inicirane dodavanjem smeše koja sadrži 20 nM LSD1 i 80 nM FAD (5 µL). Finalne koncentracije LSD1 i FAD bile su 10, odnosno 40 nM. Aktivnost enzima je zaustavljena dodavanjem 90 µL pufera sa visokim sadržajem soli koji se sastoji od 50 mM HEPES pH 7,4, 500 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,01% Tween-20 i 0,1 mg/ml BSA. Deset mikrolitara ugašenih reakcionih smeša prebačeno je u crnu ProxiPlate sa 384 bunara.

ProxiPlate ploči je dodato deset mikrolitara smeše za detekciju, korišćeno je antitelo označeno evropijumom i Streptavidin APC u finalnim koncentracijama od 0,3 nM, odnosno 200 nM (ukupna zapremina testa 20 µL). Dozvoljeno je hvatanje peptidnog proizvoda od strane anti-H3K4me0 antitela i streptavidin APC tokom 60 minuta na sobnoj temperaturi pre merenja TR-FRET signala. Ploče su očitane na Perkin Elmer EnVision. Procenat inhibicije je izračunat korišćenjem kontrola Max (bez inhibitora) i Min (ugašeno sa zaustavnim puferom) i krive inhibicije su nacrtane radi određivanja vrednosti IC50.

Ogled LSD1 LY96 Quantigene

[0129] MV4-11 ćelije su kultivisane pri gustini od 4 × 104 ćelije po bunaru u pločama sa 96 bunara i tretirane različitim dozama inhibitora počevši od 10 µM do 0,0005 µM tokom 16h. Indukcija LY-96 mRNK je kvantifikovana pomoću sistema Quantigene 2.0 (Affymetrix). Ćelije su lizirane mešavinom za lizu koja sadrži proteinazu K. Radni reagens za hvatanje RNK pripremljen je u skladu sa koracima detaljno opisanim u "Capturing Target RNA from Cultured Cell or Blood Lysates" u Priručniku za Quantigene. Naknadna hibridizacija sa sondom LY-96, koraci pojačavanja i detekcije signala izvršeni su kako je opisano u uputstvu. Hemiluminiscencija je očitana pomoću Envision (PerkinElmer) i Abase (IDBS softver) je korišćen za iscrtavanje krivih odgovora na dozu i izračunavanje IC50.

Ogled Kasumi-1 GI50

[0130] Ćelije su zasejane sa 5.000 ćelija po bunaru u posudama za kulturu tkiva sa 96 bunara, koje su sadržale jedinjenja alata raspoređena u krivoj doze od 10 tačaka, u rasponu od 0 do 10 mM sa 4-strukim razblaženjem, i razdvojene svakog četvrtog dana u fiksnom odnosu kako bi se ponovo uspostavila gustina od 5.000 ćelija/bunaru za kontrole tretirane sa DMSO.

Tretmani ćelija su sprovedeni ukupno 12 dana. Prilikom svakog 4-dnevnog razdvajanja, broj vijabilnih ćelija određen je pomoću testa luminiscencije vijabilnih ćelija Cell Titer-Glo (Promega, Madison, WI USA) koristeći EnVision<®>Multilabel Plate Reader (Perkin Elmer, Waltham, MA USA). GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA USA) je korišćen za fitovanje krive i određivanje vrednosti GI50.

Tabela 6

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:

pri čemu stereohemijska konfiguracija oko ciklopropilnog prstena je 1R,2S, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu n je 1 ili 2; m je 1 ili 2; o je 0 ili 1; q je 0, 1, 2 ili 3; R<1>je vodonik ili (C1-C6)alkil; R<2>je vodonik ili (C1-C6)alkil opciono supstituisan sa OH ili (C1-C6)alkoksi; R<3>i R<4>, ako su prisutni, svaki je nezavisno izabran između vodonika, halo, OH i (C1-C6)alkil; R<5>je izabran iz grupe koju čine NH2, -NH(SO2)(C1-C6)alkil, -NH(SO2)(C1-C6)alkilO(C1-C6)alkil, -NHC(O)(C1-C6)alkil, -NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, OH, -O(C1-C6)alkil, - SO2NH2, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6)alkil, -C(O)N[(C1-C6)alkil]2, -C(O)NH(SO2)(C1-C6)alkil, -C(O)NH(C1-C6)alkil(SO2)(C1-C6)alkil, -C(O)NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, - C(O)NH(C1-C6)alkilOH, -C(O)NH(C1-C6)alkilO(C1-C6)alkil, i (C1-C4)alkil supstituisan sa OH; i R<6>, ako je prisutan, izabran je iz grupe koju čine (C1-C6)alkil, halo(C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halo(C1-C6)alkoksi, halo i cijano; pod uslovom da jedinjenje nije formule:

ili njegova so; 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje formule:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. 3. Jedinjenje prema bilo kom od patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje formule:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R2vodonik, metil ili hidroksi (C1-C4)alkil. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje formule:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R<5>je NH2, -NH(SO2)(C1-C4)alkil, -NH(SO2)(C1-C4)alkilO(C1-C4)alkil, - NHC(O)(C1-C4)alkil, -NH(SO2)(C3-C6)cikloalkil, OH, -SO2NH2, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C4)alkil, -C(O)NH(SO2)(C1-C4)alkil, -C(O)NH(C1-C4)alkil(SO2)(C1-C4)alkil, -C(O)NH(C1-C4)alkilOH, ili (C1-C2)alkil supstituisan sa OH. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R<5> je -NH(SO2)CH3, -NH(SO2)(CH2)2OCH3, -NH(SO2)CH(CH3)2, -NH(SO2)CH2CH3, -NHC(O)CH3, -NH(SO2)ciklopropil,-C(O)NH(SO2)CH3, - C(O)NH(CH3)2, -C(O)NHCH(CH3)2, -C(O)NHCH2CH3, -C(O)NH(CH2)2(SO2)CH3, - C(O)NH(CH2)2OH, ili -CH2OH. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu izabranu od

ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima formulu:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. 11. Farmaceutski sastav koji sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i farmaceutski prihvatljivog nosača. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili sastav prema patentnom zahtevu 11 za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja izabranog iz grupe koju čine CML (hronična mijeloidna leukemija), T-ALL (T akutna limfoblastna leukemija), neuroblastom, rak dojke, rak prostate, reaktiviranje virusa herpes simpleks i HIV infekcija.