RS65202B1 - Supstituisani diaminokarboksamid i diaminokarbonitril pirimidini, njihove kompozicije i postupci za lečenje njima - Google Patents

Supstituisani diaminokarboksamid i diaminokarbonitril pirimidini, njihove kompozicije i postupci za lečenje njima

Info

Publication number
RS65202B1
RS65202B1 RS20240075A RSP20240075A RS65202B1 RS 65202 B1 RS65202 B1 RS 65202B1 RS 20240075 A RS20240075 A RS 20240075A RS P20240075 A RSP20240075 A RS P20240075A RS 65202 B1 RS65202 B1 RS 65202B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
pyrimidine
compound
carboxamide
substituted
Prior art date
Application number
RS20240075A
Other languages
English (en)
Inventor
Brydon L Bennett
Jan Elsner
Paul Erdman
Robert Hilgraf
Laurie Ann Lebrun
Meg Mccarrick
Mehran F Moghaddam
Mark A Nagy
Stephen Norris
David A Paisner
Marianne Sloss
William J Romanow
Yoshitaka Satoh
Jayashree Tikhe
Won Hyung Yoon
Maria Mercedes Delgado
Original Assignee
Signal Pharm Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Signal Pharm Llc filed Critical Signal Pharm Llc
Publication of RS65202B1 publication Critical patent/RS65202B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/38—One sulfur atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovde su obezbeđena određena jedinjenja diaminokarboksamid pirimidina, farmaceutske kompozicije koje sadrže delotvornu količinu takvih jedinjenja kao što je definisano u zahtevima i njihove upotrebe u postupcima za lečenje ili prevenciju fibrotičnih poremećaja jetre ili stanja koje može da se leči ili spreči inhibicijom puta JNK. Nadalje, ovde je obezbeđen in vitro postupak za inhibiciju kinaze u ćeliji koja eksprimira pomenutu kinazu, pri čemu postupak obuhvata dovođenje u kontakt pomenute ćelije sa delotvornom količinom jedinjenja iz zahteva i pri čemu je kinaza jedno ili više od JNK1 ili JNK2.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Povezanost između abnormalne fosforilacije proteina i uzroka ili posledice bolesti je poznata duže od 20 godina. Shodno tome, proteinske kinaze su postale veoma značajna grupa meta za lekove. [Vidite Cohen, Nature, 1:309-315 (2002), Gaestel et al. Curr.Med. Chem. 14: 2214-223 (2007); Grimminger et al. Nat. Rev. Drug Disc. 9(12):956-970 (2010)]. Različiti inhibitori proteinske kinaze su klinički korišćeni u lečenju velikog dijapazona bolesti, kao što su kancer i hronične inflamatorne bolesti, uključujući reumatoidni artritis i psorijazu. [Vidite Cohen, Eur. J. Biochem., 268:5001-5010 (2001); Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease: The Promise and the Problems, Handbook of Experimental Pharmacology, Springer Berlin Heidelberg, 167 (2005)].
[0003] JNK je sveprisutno eksprimirana serinska/treoninska kinaza koja, zajedno sa ERK (ekstracelularno regulisana kinaza) i p38, spada u porodicu mitogenom aktiviranih proteinskih kinaza (MAPK). [Kyriakis JM, Sci. STKE (48):pe1 (2000); Whitmarsh AJ, et al. Sci. STKE (1):pe1 (1999); Schramek H, News Physiol. Sci.17:62-7 (2002); Ichijo H, Oncogene 18(45):6087-93 (1999)]. MAPK su važni posrednici transdukcije signala sa ćelijske površine do jedra, koji koriste kaskade fosforilacije za stvaranje koordinisanog odgovora ćelije na eksterni stimulus putem fosforilacije odabranih intracelularnih proteina, uključujući faktore transkripcije. Pored toga, JNK takođe fosforiluje nenuklearne proteine, na primer, IRS-1, i članove porodice Bcl-2.
[Davis RJ, Trends Biochem. Sci. 9(11):470-473 (1994); Seger R et al., FASEB J.; 9(9):726-35 (1995); Fanger GR et al., Curr. Opin. Genet. Dev.; 7(1):67-74 (1997)].
[0004] Mitogenom aktivirane proteinske (MAP) kinaze učestvuju u transdukciji signala u jedro ćelije kao odgovor na ekstracelularne stimuluse. Primeri za MAP kinaze ERK p38 i JNK izooblika uključuju, ali nisu ograničeni na, mitogenom aktiviranu proteinsku kinazu 1 (ERK2), mitogenom aktiviranu proteinsku kinazu 8 (JNK1), mitogenom aktiviranu proteinsku kinazu 9 (MAPK9 ili JNK2), mitogenom aktiviranu proteinsku kinazu 10 (MAPK10 ili JNK3) i mitogenom aktiviranu proteinsku kinazu 14 (MAPK14 ili p38alfa). MAP kinaze su porodica prolinski usmerenih serinskih/treoninskih kinaza koje posreduju u transdukciji signala ekstracelularnih receptora ili toplotnog šoka, osmotskog stresa, reaktivnih oksidativnih vrsta (ROS) ili UV zračenja. [Vidite Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)]. MAP kinaze se aktiviraju putem fosforilacije treonina i tirozina od strane ushodnih dvojno specifičnih proteinskih kinaza, uključujući MKK i MEKK kinaze. Pokazalo se da je ćelijska proliferacija i diferencijacija pod regulatornom kontrolom višestrukih kaskada MAP kinaze. [Vidite Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)]. Usled toga, put MAP kinaze ima ključnu ulogu kod brojnih oboljenja. Na primer, pokazalo se da defekti u aktivnosti MAP kinaza dovode do nenormalne ćelijske proliferacije i karcinogeneze. [Vidite Hu et al., Cell Growth Differ. 11:191-200 (2000); i Das et al., Breast Cancer Res. Treat.40:141 (1996)]. Štaviše, aktivnost MAP kinaze takođe ima ulogu u insulinskoj rezistenciji povezanoj sa dijabetesom tipa 2 [Vidite Virkamaki et al., J. Clin. Invest. 103:931-943 (1999)] i gojaznošću. Promene insulinske rezistencije mogu imati direktan uticaj na metabolizam glukoze i lipida u jetri koji doprinosi nastanku steatoze koja može napredovati do fibroze jetre [Vallerie et al. Science Translational Medicine 2(60):1-7 (2010)].
[0005] Steatoza može nastati u prisustvu zasićenih ili nezasićenih slobodnih masnih kiselina (FFA). FFA promovišu robusnu aktivaciju JNK u jetri i prekomerne koncentracije FFA mogu dovesti do apoptoze hepatocita. Objavljeno je da su JNK2-/- miševi delimično zaštićeni od steatoze i apoptoze putem zasićenih FFA (npr. stearinske kiseline) ali ne i putem nezasićenih FFA [Malhi et al. J.Biol. Chem. 281:12093-12101 (2006)]. JNK1-/- miševi nisu bili zaštićeni od povrede indukovane putem FFA. Uloga JNK1 i JNK2 je proučavana kod miševa sa CDAA ishranom koji su napredovali od steatoze do steatohepatitisa ili fibroze jetre [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)]. Mada su JNK1-/- kao i JNK2-/- miševi razvili steatozu, JNK1-/- miševi, ali ne i JNK2-/- miševi, bili su izuzetno otporni na progresiju do hepatitisa i fibroze. Himerni miševi sa JNK1-/- delecijom ograničenom na ćelije koštane srži bili su slično otporni na hepatitis i fibrozu, što ukazuje na aktivirane Kupferove ćelije kao ključni okidač za progresiju bolesti više od steatoze. Zaista, JNK1-/- makrofagi ne eksprimiraju IL-1, IL-6, TNF i NO kao odgovor na LPS [Sanchez-Tillo et al., J Biol Chem. 282(17):12566-73 (2007)], i Kupferove ćelije dobijene od JNK1-/- miševa ili od divljeg tipa miševa i tretirane inhibitorom JNK SP600125 pokazuju smanjenu ekspresiju TNF, IL-6, i IL-1 kao odgovor na LPS [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)].
[0006] Razjašnjenje zamršenosti puteva proteinske kinaze i složenosti odnosa i interakcije između različitih proteinskih kinaza i puteva kinaze ističe značaj razvoja farmaceutskih agensa koji mogu da deluju kao modulatori, regulatori ili inhibitori proteinske kinaze koji imaju korisnu aktivnost za brojne kinaze ili brojne puteve kinaze. Shodno tome, i dalje postoji potreba za novim modulatorima kinaze, naročito modulatorima JNK.
[0007] WO 2009/136995 A2 se odnosi na pirimidin-5-karboksamide koji deluju kao inhibitori tirozinske kinaze slezine (syk kinaze).
[0008] WO 2010/13453 A1 se odnosi na jedinjenja 2,4-diaminopirimidina sa aminocikloheksil alkil grupom koja se koriste kao inhibitori PKCθ koji sprečavaju pojavu akutnog odbacivanja transplantata.
[0009] Takođe, US 2006/025433 A1 se odnosi na supstituisane derivate pirimidina koji se koriste kao inhibitori PKCθ za lečenje bolesti, kao što su imunološki poremećaji i dijabetes tipa II.
[0010] Citat ili navođenje bilo kakve reference u 2. odeljku ovog patentnog zahteva ne treba tumačiti kao priznanje da referenca predstavlja prethodnuo stanje tehnike za ovaj patentni zahtev.
REZIME
[0011] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska su kao što je definisano u zahtevima. Jedinjenja, primeri i/ili otelotvorenja koja su ovde pomenuta, koja nisu obuhvaćena zahtevima, ovde su otkrivena ali nisu deo zahteva. Ovde su otkrivena jedinjenja koja imaju sledeću formulu (I):
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, tautomeri, izotopolozi, stereoizomeri i prolekovi, pri čemu su R<1>i R<2>kao što je ovde definisano.
[0012] Ovde su otkrivena jedinjenja koja imaju sledeću formulu (IB):
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, tautomeri, izotopolozi, stereoizomeri i prolekovi, pri čemu su R<3>i R<4>kao što je ovde definisano.
[0013] Jedinjenje formule (I) ili formule (IB) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, izotopolog, stereoizomer ili prolek (svi se ovde nazivaju „jedinjenje diaminopirimidina“) korisno je za lečenje ili prevenciju fibrotičnih poremećaja jetre, ili dijabetesa i/ili metaboličkog sindroma koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je ovde opisano. U drugom aspektu, jedinjenje diaminopirimidina iz pronalaska je korisno za lečenje ili prevenciju stanja koje može da se leči ili spreči inhibicijom puta JNK, kao što je ovde opisano.
[0014] U jednom aspektu, ovde su obezbeđena jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska kao što je dato u tabeli 1. Jedinjenja iz tabele 2 i 3 si otkrivena ali nisu obuhvaćena zahtevom.
[0015] U jednom aspektu, ovde su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže delotvornu količinu jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijens ili vehikulum. U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija je pogodna za oralnu, parenteralnu, mukoznu, transdermalnu ili topikalnu primenu.
[0016] U jednom aspektu, ovde su obezbeđena jedinjenja ili kompozicije iz pronalaska za upotrebu u postupcima za lečenje ili prevenciju fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza, ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, primarna bilijarna ciroza, hepatitis, hepatocelularni karcinom i fibroza jetre koji se podudaraju sa hroničnim ili čestim unosom alkohola, sa infekcijom, sa transplantacijom jetre, ili sa povredom jetre indukovanom lekom, pri čemu postupak obuhvata primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska i farmaceutski prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vehikuluma. U drugom aspektu, ovde su obezbeđena jedinjenja ili kompozicije iz pronalaska za upotrebu u postupcima za lečenje ili prevenciju dijabetesa ili metaboličkog sindroma koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza, hepatitis ili ciroza, pri čemu postupci obuhvataju primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska. Ovde su takođe obezbeđena jedinjenja ili kompozicije iz pronalaska za upotrebu u postupcima za lečenje ili prevenciju stanja koje može da se leči ili spreči inhibicijom puta JNK, pri čemu postupak obuhvata primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska i farmaceutski prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vehikuluma.
[0017] U jednom aspektu, ovde su obezbeđeni in vitro postupci za inhibiciju kinaze, na primer JNK1, JNK2 ili obe, u ćeliji koja eksprimira pomenutu kinazu, koji obuhvataju dovođenje u kontakt pomenute ćelije sa delotvornom količinom jedinjenja diaminopirimidina iz pronalaska. U jednom otelotvorenju, jedinjenje iz zahteva pri koncentraciji od 10 µM inhibira JNK1 za najmanje oko 50%. U jednom aspektu, jedinjenje iz zahteva je 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilciklo-heksilamino)-pirimidin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili enantiomer. U jednom aspektu, jedinjenje iz zahteva je 2-(tercbutilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilciklo-heksilamino)-pirimindin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0018] Nadalje, ovde su opisani postupci za pripremu jedinjenja diaminopirimidina.
[0019] Predmetna otelotvorenja se bolje mogu razumeti uz ukazivanje na detaljan opis i primere, koji treba da predstavljaju neograničavajuća otelotvorenja.
DETALJAN OPIS
DEFINICIJE
[0020] „Alkil“ grupa je zasićeni nerazgranati ili razgranati neciklični ugljovodonik koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, tipično od 1 do 8 ugljenika ili, u nekim otelotvorenjima, od 1 do 6, od 1 do 4, ili od 2 do 6 atoma ugljenika. Reprezentativne alkil grupe uključuju -metil, -etil, -n-propil, -n-butil, -n-pentil i -n-heksil; dok zasićeni razgranati alkili uključuju -izopropil, -sek-butil, -izobutil, -terc-butil, -izopentil, -neopentil, terc-pentil, -2-metilpentil, -3-metilpentil, -4-metilpentil, -2,3-dimetilbutil, i slično. Ovde su takođe, između ostalog, otkrivene vinil, alil, -CH=CH(CH3), -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH(CH3), -C(CH2CH3)=CH2, -C=CH, -C=C(CH3), -C=C(CH2CH3), -CH2C=CH, -CH2C=C(CH3) i -CH2C=C(CH7CH3) grupe. Alkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Kada se za alkil grupe koje su ovde opisane kaže da su „supstituisane“, one mogu biti supstituisane bilo kojim supstituentom ili supstituentima kao što su oni koji se mogu naći u reprezentativnim jedinjenjima i otelotvorenjima koja su ovde otkrivena, kao i halogen (hlor, jod, brom, ili fluor); alkil; hidroksil; alkoksi; alkoksialkil; amino; alkilamino; karboksi; nitro; cijano; tiol; tioetar; imin; imid; amidin; guanidin; enamin; aminokarbonil; acilamino; fosfonato; fosfin; tiokarbonil; sulfonil; sulfon; sulfonamid; keton; aldehid; estar; urea; uretan; oksim; hidroksil amin; alkoksiamin; aralkoksiamin; N-oksid; hidrazin; hidrazid; hidrazon; azid; izocijanat; izotiocijanat; cijanat; tiocijanat; B(OH)2, ili O(alkil)aminokarbonil.
[0021] „Cikloalkil“ grupa je zasićena, delimično zasićena ili nezasićena ciklična alkil grupa sa 3 do 10 atoma ugljenika koja ima jedan ciklični prsten ili više kondenzovanih ili premošćenih prstenova koji mogu biti opciono supstituisani sa 1 do 3 alkil grupe. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima od 3 do 8 članova prstena, dok je u drugim otelotvorenjima broj atoma ugljenika u prstenu u rasponu od 3 do 5, od 3 do 6 ili od 3 do 7. Takve cikloalkil grupe uključuju, na primer, strukture sa jednim prstenom kao što su ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, 1-metil ciklopropil, 2-metil ciklopentil, 2-metil ciklooktil, i slično, ili strukture sa višestrukim ili premošćenim prstenovima kao što su 1-biciklo[1.1.1]pentil, biciklo[2.1.1]heksil, biciklo[2.2.1]heptil, biciklo[2.2.2]oktil, adamantil, i slično. Primeri za nezasićene cikloalkil grupe, između ostalog, uključuju cikloheksenil, ciklopentenil, cikloheksadienil, butadienil, pentadienil, heksadienil. Cikloalkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Takve supstituisane cikloalkil grupe uključuju, na primer, cikloheksanol, i slično.
[0022] „Aril“ grupa je aromatična karbociklična grupa koja ima od 6 do 14 atoma ugljenika sa jednim prstenom (npr. fenil) ili više kondenzovanih prstenova (npr. naftil ili antril). U nekim otelotvorenjima, aril grupe sadrže 6-14 ugljenika, a u drugima od 6 do 12 ili čak od 6 do 10 atoma ugljenika u prstenastim delovima grupa. Konkretni arili uključuju fenil, bifenil, naftil, i slično. Aril grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Fraza „aril grupe“ takođe obuhvata grupe koje sadrže kondenzovane prstenove, kao što je kondenzovani sistem aromatičnih-alifatičnih prstenova (npr. indanil, tetrahidronaftil i slično).
[0023] „Heteroaril“ grupa je sistem arilnih prstenova koji ima jedan do četiri heteroatoma kao atome prstena u heteroaromatičnom sistemu prstenova, pri čemu, preostali atomi su atomi ugljenika. U nekim otelotvorenjima, heteroaril grupe sadrže od 3 do 6 atoma prstena, a u drugima od 6 do 9 ili čak od 6 do 10 atoma u prstenastim delovima grupa. Pogodni heteroatomi uključuju kiseonik, sumpor i azot. U određenim otelotvorenjima, heteroaril sistem prstenova je monocikličan ili bicikličan. Neograničavajući primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, grupe kao što su pirolil, pirazolil, imidazolil, triazolil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, benzizoksazolil (npr. benzo[d]izoksazolil), tiazolil, pirolil, piridazinil, pirimidil, pirazinil, tiofenil, benzotiofenil, furanil, benzofuranil, indolil (npr. indolil-2-onil ili izoindolin-1-onil), azaindolil (pirolopiridil ili 1H-pirolo[2,3-b]piridil), indazolil, benzimidazolil (npr. 1H-benzo[d]imidazolil), imidazopiridil (npr. azabenzimidazolil ili 1H-imidazo[4,5-b]piridil), pirazolopiridil, triazolopiridil, benzotriazolil (npr.
1H-benzo[d][1,2,3]triazolil), benzoksazolil (npr. benzo[d]oksazolil), benzotiazolil, benzotiadiazolil, izoksazolopiridil, tianaftalenil, purinil, ksantinil, adeninil, guaninil, hinolinil, izohinolinil (npr. 3,4-dihidroizohinolin-1(2H)-onil), tetrahidrohinolinil, hinoksalinil i hinazolinil grupe.
[0024] „Heterociklil“ je aromatični (takođe se naziva heteroaril) ili nearomatični cikloalkil u kome je jedan do četiri atoma ugljenika prstena nezavisno zamenjeno heteroatomom iz grupe koja se sastoji od O, S i N. U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupe imaju od 3 do 10 članova prstena, dok druge takve grupe imaju od 3 do 5, od 3 do 6 ili od 3 do 8 članova prstena. Heterociklili takođe mogu biti vezani sa drugim grupama na bilo kom atomu prstena (tj. na bilo kom atomu ugljenika ili heteroatomu heterocikličnog prstena). Heterocikloalkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Heterociklil grupe obuhvataju nezasićene, delimično zasićene i zasićene sisteme prstenova, kao što su, na primer, imidazolil, imidazolinil i imidazolidinil (npr. imidazolidin-4-on ili imidazolidin-2,4-dionil) grupe. Fraza heterociklil uključuje vrste sa kondenzovanim prstenovima, uključujući one koji sadrže kondenzovane aromatične i nearomatične grupe, kao što su, na primer, 1- i 2-aminotetralin, benzotriazolil (npr. 1H-benzo[d][1,2,3]triazolil), benzimidazolil (npr. 1H-benzo[d]imidazolil), 2,3-dihidrobenzo[1,4]dioksinil i benzo[1,3]dioksolil. Fraza takođe uključuje premošćene policiklične sisteme prstenova koji sadrže heteroatom, kao što je, bez ograničenja, hinuklidil. Reprezentativni primeri za heterociklil grupu uključuju, ali nisu ograničeni na, aziridinil, azetidinil, azepanil, oksetanil, pirolidil, imidazolidinil (npr. imidazolidin-4-onil ili imidazolidin-2,4-dionil), pirazolidinil, tiazolidinil, tetrahidrotiofenil, tetrahidrofuranil, dioksolil, furanil, tiofenil, pirolil, pirolinil, imidazolil, imidazolinil, pirazolil, pirazolinil, triazolil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, benzizoksazolil (npr. benzo[d]izoksazolil), tiazolil, tiazolinil, izotiazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, piperidil, piperazinil (npr. piperazin-2-onil), morfolinil, tiomorfolinil, tetrahidropiranil (npr. tetrahidro-2H-piranil), tetrahidrotiopiranil, oksatianil, dioksil, ditianil, piranil, piridil, pirimidil, piridazinil, pirazinil, triazinil, dihidropiridil, dihidroditiinil, dihidroditionil, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil, homopiperazinil, hinuklidid, indolil (npr. indolil-2-onil ili izoindolin-1-onil), indolinil, izoindolil, izoindolinil, azaindolil (pirolopiridil ili 1H-pirolo[2,3-b]piridil), indazolil, indolizinil, benzotriazolil (npr.1H-benzo[d][1,2,3]triazolil), benzimidazolil (npr. 1H-benzo[d]imidazolil ili 1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-onil), benzofuranil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoksadiazolil, benzoksazinil, benzoditiinil, benzoksatiinil, benzotiazinil, benzoksazolil (tj. benzo[d]oksazolil), benzotiazolil, benzotiadiazolil, benzo[1,3]dioksolil, pirazolopiridil (na primer, 1H-pirazolo[3,4-b]piridil, 1H-pirazolo[4,3-b]piridil), imidazopiridil (npr. azabenzimidazolil ili 1H-imidazo[4,5-b]piridil), triazolopiridil, izoksazolopiridil, purinil, ksantinil, adeninil, guaninil, hinolinil, izohinolinil (npr. 3,4-dihidroizohinolin-1(2H)-onil), hinolizinil, hinoksalinil, hinazolinil, cinolinil, ftalazinil, naftiridinil, pteridinil, tianaftalenil, dihidrobenzotiazinil, dihidrobenzofuranil, dihidroindolil, dihidrobenzodioksinil, tetrahidroindolil, tetrahidroindazolil, tetrahidrobenzimidazolil, tetrahidrobenzotriazolil, tetrahidropirolopiridil, tetrahidropirazolopiridil, tetrahidroimidazopiridil, tetrahidrotriazolopiridil, tetrahidropirimidin-2(1H)-on i tetrahidrohinolinil grupe. Reprezentativne nearomatične heterociklil grupe ne uključuju vrste kondenzovanog prstena koje sadrže kondenzovanu aromatičnu grupu. Primeri za nearomatične heterociklil grupe uključuju aziridinil, azetidinil, azepanil, pirolidil, imidazolidinil (npr. imidazolidin-4-onil ili imidazolidin-2,4-dionil), pirazolidinil, tiazolidinil, tetrahidrotiofenil, tetrahidrofuranil, piperidil, piperazinil (npr. piperazin-2-onil), morfolinil, tiomorfolinil, tetrahidropiranil (npr. tetrahidro-2H-piranil), tetrahidrotiopiranil, oksatianil, ditianil, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil, homopiperazinil, hinuklidil, ili tetrahidropirimidin-2(1H)-on. Reprezentativne supstituisane heterociklil grupe mogu biti monosupstituisane ili supstituisane više od jednom, kao što su, bez ograničenja, piridil ili morfolinil grupe koje su 2-, 3-, 4-, 5- ili 6-supstituisane, ili disupstituisane sa različitim supstituensima koji su navedeni ispod.
[0025] „Cikloalkilalkil“ grupa je radikal sa formulom: -alkil-cikloalkil, pri čemu su alkil i cikloalkil kao što je prethodno definisano. Supstituisane cikloalkilalkil grupe mogu biti supstituisane na alkil, cikloalkil, ili na alkil i cikloalkil delovima grupe. Reprezentativne cikloalkilalkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, metilciklopropil, metilciklobutil, metilciklopentil, metilcikloheksil, etilciklopropil, etilciklobutil, etilciklopentil, etilcikloheksil, propilciklopentil, propilcikloheksil i slično.
[0026] „Aralkil“ grupa je radikal sa formulom: -alkil-aril, pri čemu su alkil i aril prethodno definisani. Supstituisane aralkil grupe mogu biti supstituisane na alkil, aril, ili na alkil i aril delovima grupe. Reprezentativne aralkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, benzil i fenetil grupe i fuzionisane (cikloalkilaril)alkil grupe kao što je 4-etil-indanil.
[0027] „Heterociklilalkil“ grupa je radikal formule: -alkilheterociklil, pri čemu su alkil i heterociklil prethodno definisani. Supstituisane heterocikloalkil grupe mogu biti supstituisane na alkil, heterociklil, ili na alkil i heterociklil delovima grupe. Reprezentativne heterocililalkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, 4-etil-morfolinil, 4-propilmorfolinil, furan-2-il metil, furan-3-il metil, piridin-3-il metil, tetrahidrofuran-2-il etil i indol-2-il propil.
[0028] „Halogen“ je fluor, hlor, brom ili jod.
[0029] „Hidroksialkil“ grupa je alkil grupa kao što je prethodno opisano supstituisana sa jednom ili više hidroksi grupa.
[0030] „Alkoksi“ grupa je -O-(alkil), pri čemu je alkil prethodno definisan.
[0031] „Alkoksialkil“ grupa je -(alkil)-O-(alkil), pri čemu je alkil prethodno definisan.
[0032] „Amino“ grupa je radikal formule: -NH2.
[0033] „Alkilamino“ grupa je radikal formule: -NH-alkil ili -N(alkil)2, pri čemu, svaki alkil je nezavisno kao što je definisan iznad.
[0034] „Karboksi“ grupa je radikal formule: -C(O)OH.
[0035] „Aminokarbonil“ grupa je radikal formule: -C(O)N(R<#>)2, -C(O)NH(R<#>) ili -C(O)NH2, pri čemu, svaki R<#>je nezavisno supstituisana ili nesupstituisana alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklil ili heterociklil grupa kao što je ovde definisano.
[0036] „Acilamino“ grupa je radikal formule: -NHC(O)(R<#>) ili -N(alkil)C(O)(R<#>), pri čemu, svaki alkil i R<#>su nezavisno kao što je prethodno definisano.
[0037] „Sulfonilamino“ grupa je radikal formule: -NHSO2(R<#>) ili -N(alkil)SO2(R<#>), pri čemu, svaki alkil i R<#>je prethodno definisan.
[0038] „Urea“ grupa je radikal formule: -N(alkil)C(O)N(R<#>)2, -N(alkil)C(O)NH(R<#>), -N(alkil)C(O)NH2, -NHC(O)N(R<#>)2, -NHC(O)NH(R<#>), ili -NH(CO)NHR<#>, pri čemu, svaki alkil i R<#>je nezavisno kao što je prethodno definisano.
[0039] Kada se za grupe koje su ovde opisane, sa izuzetkom alkil grupe, kaže da su „supstituisane“, one mogu biti supstituisane bilo kojim pogodnim supstituentom ili supstituensima. Ilustrativni primeri za supstituente su oni koji se mogu naći u reprezentativnim jedinjenjima i otelotvorenjima koja su otkrivena ovde, kao i halogen (hlor, jod, brom ili fluor); alkil; hidroksil; alkoksi; alkoksialkil; amino; alkilamino; karboksi; nitro; cijano; tiol; tioetar; imin; imid; amidin; guanidin; enamin; aminokarbonil; acilamino; fosfonato; fosfin; tiokarbonil; sulfonil; sulfon; sulfonamid; keton; aldehid; estar; urea; uretan; oksim; hidroksil amin; alkoksiamin; aralkoksiamin; N-oksid; hidrazin; hidrazid; hidrazon; azid; izocijanat; izotiocijanat; cijanat; tiocijanat; kiseonik (=O); B(OH)2, O(alkil)aminokarbonil; cikloalkil, koji može biti monocikličan ili fuzionisan ili nefuzionisan policikličan (npr. ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ili cikloheksil), ili heterociklil, koji može biti monocikličan ili fuzionisan ili nefuzionisan policikličan (npr. pirolidil, piperidil, piperazinil, morfolinil, ili tiazinil); monocikličan ili fuzionisan ili nefuzionisan policikličan aril ili heteroaril (npr. fenil, naftil, pirolil, indolil, furanil, tiofenil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, piridil, hinolinil, izohinolinil, akridinil, pirazinil, piridazinil, pirimidil, benzimidazolil, benzotiofenil, ili benzofuranil) ariloksi; aralkiloksi; heterocikliloksi; i heterociklil alkoksi.
[0040] Kao što se ovde koristi, termin „jedinjenje diaminopirimidina“ odnosi se na jedinjenja formule (I) i formule (IB) kao i na dalja otelotvorenja koja su ovde data. U jednom otelotvorenju, „jedinjenje diaminopirimidina“ je jedinjenje dato u tabeli 1. Termin „jedinjenje diaminopirimidina“ uključuje farmaceutski prihvatljive soli, tautomere, izotopologe, stereoizomere i prolekove jedinjenja koja su ovde data.
[0041] Kao što se ovde koristi, termin „farmaceutski prihvatljiva so (farmaceutski prihvatljive soli)“ odnosi se na so pripremljenu od farmaceutski prihvatljive netoksične kiseline ili baze, uključujući neorgansku kiselinu i bazu i organsku kiselinu i bazu. Pogodne farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli jedinjenja formule (I) uključuju, ali nisu ograničene na, soli metala dobijene od aluminijuma, kalcijuma, litijuma, magnezijuma, kalijuma, natrijuma i cinka ili organske soli dobijene od lizina, N,N'-dibenzil etilendiamina, hlorprokaina, holina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglukamina) i prokaina. Pogodne netoksične kiseline uključuju, ali nisu ograničene na, neorganske i organske kiseline kao što je sirćetna, algininska, antranilna, benzensulfonska, benzojeva, kamforsulfonska, limunska, etensulfonska, mravlja, fumarna, furoinska, galakturonska, glukonska, glukuronska, glutaminska, glikolna, bromovodonična, hlorovodonična, izetionska, mlečna, maleinska, jabučna, mandelinska, metansulfonska, galaktarinska, azotna, pamoinska, pantotenska, fenilsirćetna, fosforna, propionska, salicilna, stearinska, sukcinatna, sulfanilna, sumporna, vinska kiselina, i p-toluensulfonska kiselina. Specifične netoksične kiseline uključuju hlorovodoničnu, bromovodoničnu, maleinsku, fosfornu, sumpornu i metansulfonsku kiselinu. Primeri za specifične soli tako uključuju hidrohloride i mezilatne soli. Druge su dobro poznate u struci, vidite, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izd., Mack Publishing, Easton PA (1990) ili Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. izd., Mack Publishing, Easton PA (1995).
[0042] Kao što se ovde koristi i osim ako nije drugačije naznačeno, termin „prolek“ (nije deo pronalaska) označava jedinjenje diaminopirimidina koje može da se hidrolizuje, oksidiše ili na drugi način reaguje u biološkim uslovima (in vitro ili in vivo) da bi se dobilo aktivno jedinjenje, naročito jedinjenje diaminopirimidina ili jedinjenje formule (I). Primeri za prolekove uključuju, bez ograničenja, derivate i metabolite jedinjenja diaminopirimidina koji uključuju ostatke koji se
1
mogu biohidrolizovati, kao što su biohidrolizabilni amidi, biohidrolizabilni estri, biohidrolizabilni karbamati, biohidrolizabilni karbonati, biohidrolizabilni ureidi i biohidrolizabilni fosfatni analozi. Kao što je ovde opisano, prolekovi jedinjenja sa karboksilnim funkcionalnim grupama su niži alkil estri karboksilne kiseline. Estri karboksilata pogodno nastaju esterifikacijom bilo kojih ostataka karboksilne kiseline koji su prisutni na molekulu. Prolekovi tipično mogu da se pripreme koristeći dobro poznate postupke, kao što su oni opisani u Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6. izd. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) i u Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).
[0043] Kao što se ovde koristi i osim ako nije drugačije naznačeno, termin „stereoizomer“ ili „stereomerno čist“ označava jedan stereoizomer jedinjenja diaminopirimidina koji je suštinski bez drugih stereoizomera tog jedinjenja. Na primer, stereomerno čisto jedinjenje koje ima jedan hiralni centar biće suštinski bez suprotnog enantiomera jedinjenja. Stereomerno čisto jedinjenje koje ima dva hiralna centra će biti suštinski bez drugih dijastereomera jedinjenja. Tipično stereomerno čisto jedinjenje sadrži više od oko 80% masenih procenata jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 20% masenih procenata drugih stereoizomera jedinjenja, više od oko 90% masenih procenata jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 10% masenih procenata drugih stereoizomera jedinjenja, više od oko 95% masenih procenata jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 5% masenih procenata drugih stereoizomera jedinjenja i više od oko 97% masenih procenata jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 3% masenih procenata drugih stereoizomera jedinjenja. Jedinjenja diaminopirimidina mogu imati hiralne centre i mogu se javljati kao racemati, pojedinačni enantiomeri ili dijastereomeri, i kao njihove smeše. Svi takvi izomerni oblici su obuhvaćeni otelotvorenjima koja su ovde otkrivena, uključujući i njihove smeše.
[0044] Upotreba stereomerno čistih oblika takvih jedinjenja diaminopirimidina, kao i upotreba smeša tih oblika, obuhvaćeni su otelotvorenjima koja su ovde otkrivena. Na primer, smeše koje sadrže jednake ili nejednake količine enantiomera određenog jedinjenja diaminopirimidina mogu da se koriste u postupcima i kompozicijama koje su ovde otkrivene. Ti izomeri mogu biti asimetrično sintetisani ili razloženi koristeći standardne tehnike kao što su hiralne koloni ili hiralni agensi za razlaganje. Vidite, npr. Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); i Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions str. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).
[0045] Treba napomenuti da jedinjenja diaminopirimidina mogu uključivati E i Z izomere, ili njihovu smešu, i cis i trans izomere, ili njihovu smešu. U određenim otelotvorenjima, jedinjenja diaminopirimidina su izolovana kao E ili Z izomer. U drugim otelotvorenjima, jedinjenja diaminopirimidina su smeša E i Z izomera.
[0046] „Tautomeri“ se odnose na izomerne oblike jedinjenja koji su u međusobnoj ravnoteži. Koncentracije izomernih oblika će zavisiti od okruženja u kome se jedinjenje nalazi i mogu da se razlikuju u zavisnosti, na primer, od toga da li je jedinjenje čvrsta supstanca ili je u organskom ili vodenom rastvoru. Na primer, u vodenom rastvoru, pirazoli mogu imati sledeće izomerne oblike, koji su tautomeri jedan drugog:
[0047] Kao što će biti jasno stručnjaku za ovu oblast, širok raspon funkcionalnih grupa i drugih struktura može ispoljiti tautomeriju i svi tautomeri jedinjenja formule (I) su obuhvaćeni predmetnim pronalaskom.
[0048] Takođe treba napomenuti da jedinjenja diaminopirimidina mogu da sadrže neprirodan udeo atomskih izotopa na jednom ili više atoma. Na primer, jedinjenje može biti radioaktivno obeleženo radioaktivnim izotopima, kao što su, na primer, tricijum (<3>H), jod-125 (<125>I), sumpor-35 (<35>S), ili ugljenik-14 (<14>C), ili mogu biti izotopski obogaćena, na primer deuterijumom (<2>H), ugljenikom-13 (<13>C), ili azotom-15 (<15>N). Kao što se ovde koristi, „izotopolog“ je izotopski obogaćeno jedinjenje. Termin „izotopski obogaćen“ se odnosi na atom koji ima izotopski sastav različit od prirodnog izotopskog sastava tog atoma. Termin „izotopski obogaćen“ se takođe može odnositi na jedinjenje koje sadrži najmanje jedan atom koji ima izotopski sastav različit od prirodnog izotopskog sastava tog atoma. Termin „izotopski sastav“ se odnosi na količinu svakog izotopa prisutnog za dati atom. Radioaktivno obeležena i izotopski obogaćena jedinjenja su korisna kao terapijski agensi, npr. terapijski agensi za karcinom i inflamaciju, reagensi za istraživanje, npr. reagensi za test vezivanja, i dijagnostički agensi, npr. in vivo agensi za snimanje. Predviđeno je da sve izotopske varijacije jedinjenja diaminopirimidina koje su ovde opisane, bilo da su radioaktivne ili ne, budu obuhvaćene obimom otelotvorenja datih ovde. U nekim otelotvorenjima, dati su izotopolozi jedinjenja diaminopirimidina, na primer, izotopolozi su jedinjenja diaminopirimidina obogaćena deuterijumom, ugljenikom-13 ili azotom-15.
[0049] „JNK“ označava protein ili njegov izooblik koji eksprimira gen JNK1, JNK2, ili JNK3 (Gupta, S., Barrett, T., Whitmarsh, A.J., Cavanagh, J., Sluss, H.K., Derijard, B. i Davis, R.J. The EMBO J.15:2760-2770 (1996)).
[0050] „Lečenje“, kao što se ovde koristi, znači ublažavanje, u potpunosti ili delimično, poremećaja, bolesti ili stanja, ili jednog ili više simptoma povezanih sa poremećajem, bolešću ili stanjem, ili usporavanje ili zaustavljanje daljeg napredovanja ili pogoršanja tih simptoma, ili ublažavanje ili otklanjanje uzroka samog poremećaja, bolesti ili stanja. U jednom otelotvorenju, poremećaj je fibrotični poremećaj jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza (tj. masna jetra), ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, primarna bilijarna ciroza, hepatitis, hepatocelularni karcinom ili fibroza jetre koja se podudara sa hroničnim ili čestim unosom alkohola (alkoholni hepatitis), sa infekcijom (npr. virusna infekcija kao što je HCV), sa transplantacijom jetre ili sa povredom jetre indukovanom lekom (npr. toksičnost acetaminofena). U nekim otelotvorenjima, „lečenje“ znači ublažavanje, u potpunosti ili delimično, poremećaja, bolesti ili stanja, ili simptoma povezanih sa dijabetesom ili metaboličkim sindromom koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza (tj. masna jetra), hepatitis ili ciroza, ili usporavanje ili zaustavljanje daljeg napredovanja ili pogoršanja tih simptoma. U jednom otelotvorenju, simptom je žutica. U drugom otelotvorenju, „lečenje“ znači ublažavanje, u potpunosti ili delimično, poremećaja, bolesti ili stanja, ili simptoma povezanih sa stanjem, koji mogu da se leče ili spreče inhibicijom puta JNK.
[0051] „Prevencija“, kao što se ovde koristi, znači postupak za odlaganje i/ili sprečavanje javljanja, rekurencije ili širenja, u potpunosti ili delimično, poremećaja, bolesti ili stanja; sprečavanje da ispitanik dobije poremećaj, bolest ili stanje; ili smanjivanje rizika da ispitanik dobije poremećaj, bolest ili stanje. U jednom otelotvorenju, poremećaj je fibrotični poremećaj jetre, ili dijabetes ili metabolički sindrom koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je ovde opisano, ili do njihovih simptoma. U drugom otelotvorenju, poremećaj je stanje koje može da se leči ili spreči inhibicijom puta JNK.
[0052] Termin „delotvorna količina“, kada se koristi u vezi sa jedinjenjem diaminopirimidina, znači količina koja može da izleči ili spreči poremećaj, bolest ili stanje, ili simptome prethodnog, otkrivene ovde.
[0053] Termin „ispitanik“ uključuje životinju, uključujući, bez ograničenja, životinju kao što je krava, majmun, konj, ovca, svinja, kokoška, ćurka, prepelica, mačka, pas, miš, pacov, zec ili zamorac, u jednom otelotvorenju sisara, u drugom otelotvorenju čoveka. U jednom otelotvorenju, ispitanik je čovek koji boluje, ili postoji rizik da oboli, od fibrotičnih poremećaja jetre ili dijabetesa ili metaboličkog sindroma koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, ili stanja, koja mogu da se leče ili spreče inhibicijom puta JNK, ili simptoma prethodnog.
JEDINJENJA DIAMINOPIRIMIDINA
[0054] Jedinjenja diaminopirimidrina prema pronalasku definisana su u patentnim zahtevima. Otelotvorenja i/ili primeri koji se odnose na jedinjenja koja nisu definisana u zahtevima ne predstavljaju otelotvorenja ovog pronalaska. Ovde su otkrivena jedinjenja koja imaju sledeću formulu (I):
1
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, tautomeri, stereoizomeri, enantiomeri, izotopolozi i prolekovi,
pri čemu:
R<1>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkilheterociklil, pod uslovom da R<1>nije 1-aminocikloheksil; i
R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani zasićeni cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0055] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) nije:
2-(2-aminoetilamino)-4-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid
4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
2-(2-amino-2-oksoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
(S)-2-(2-aminopropilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid
(R)-2-(1-amino-3-metil-1-oksobutan-2-ilamino)-4-(ciklobutilamino)-pirimidin-5-karboksamid
metilamino)pirimidin-5-karboksamid
ili 2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-4-(ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
na primer,
[0057] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (I), R<1>je razgranati C1-8alkil, na primer, R1 je izopropil, sek-butil, izobutil, terc-butil, izopentil, 2-metilpentil, ili terc-pentil. U drugim otelotvorenjima, R<1>je izopropil, sek-butil, izobutil, terc-butil, 2,3-dimetilbutil, izopentil, 2-metilpentil, neopentil, terc-pentil, ili 3-metilpentil. U drugim otelotvorenjima, R<1>je supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, ili biciklo[2.2.2]oktil. U drugim otelotvorenjima, cikloalkil je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, biciklo[2.2.1]heptil ili biciklo[2.2.2]oktil. U nekim takvim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više halogena, -(C1-4alkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -NRC(O)R', -C(O)R',
1
-C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. Na primer, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više metil, etil, t-butil, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3. U drugim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više halogena, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, i svaki R" nezavisno predstavlja C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan. Na primer, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više metila, etila, t-butila, ciklopropila, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(ciklopropil), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<1>je supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, na primer, pirolidinil, tetrahidropiranil, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil, ili piperidil. U drugim otelotvorenjima, nearomatični heterociklil je oksetanil, pirolidinil, tetrahidropiranil, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil, ili piperidil. U nekim takvim otelotvorenjima, piperidil je supstituisan sa -C(O)R', ili -C(O)OR', pri čemu R' predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. U još nekim otelotvorenjima, R<1>je supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, na primer, (C1-3alkil)ciklopropil, (C1-3alkil)ciklobutil, (C1-3alkil)ciklopentil, ili (C1-3alkil)cikloheksil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<1>je -(CH2)ciklopropil, -(CH2)ciklobutil, -(CH2)ciklopentil, -(CH2)cikloheksil, -CH(CH3)ciklopropil, -CH(CH3)ciklobutil, -CH(CH3)ciklopentil, ili -CH(CH3)cikloheksil. U drugim otelotvorenjima, R<1>je -(CH2)ciklopropil, -CH(CH3)ciklopropil, -CH(CH3)ciklobutil, -CH(CH3)cikloheksil, ili -C(CH3)2ciklopropil. U još nekim otelotvorenjima, R<1>je supstituisani ili nesupstituisani alkil heterociklil, na primer, -(C1-4alkil)tetrahidrofuranil, -(C1-4alkil)dioksolanil, (C1-4alkil)furanil, (C1-3alkil)tiofenil, ili -(C1-3alkil)piridil.
[0058] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (I), R<1>je izabran od razgranatog C1-8alkila,
pri čemu
1
R<3'>je halogen, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R';
R<4>je -C(O)R', ili -C(O)OR';
svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R" je nezavisno C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan; i n je 0-2.
[0059] U nekim takvim otelotvorenjima, R<3'>je metil, etil, t-butil, ciklopropil, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(ciklopropil), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3.
[0060] U nekim otelotvorenjima, R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, na primer, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, terc-pentil, izopentil, ili 2-metilpentil. U drugim otelotvorenjima, R<2>je metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, tercbutil, 3-metilbutil, 2,3-dimetilbutil, 3,3-dimetilbutil, 2,3,3-trimetilbutil, terc-pentil, izopentil, 3-pentil, 3-metilpentil, 2-metilpentil, ili 2,4-dimetilpentil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, -C(O)NR2ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. Na primer, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -OH, ili -CH3. U drugim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -OH, -OCH3, ili -CH3. U nekim otelotvorenjima, R<2>je supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, na primer, R<2>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil ili ciklooktil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. U drugim otelotvorenjima, R<2>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, biciklo[2.1.1]heksil, ili biciklo[2.2.1]heptil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan. U nekim takvim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više metila, etila, izopropila, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U drugim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više metila, etila, izopropila, -ciklopropila, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R2
1
je supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, na primer, supstituisani ili nesupstituisani (C1-3alkil)ciklopropil, (C1-3alkil)ciklobutil, (C1-3alkil)ciklopentil, ili (C1-3alkil)cikloheksil. Na primer, R<2>je -(CH2)ciklopropil, -(CH2)ciklobutil, -CH(CH3)ciklopropil, -CH(CH3)ciklobutil, -CH(CH2CH3)ciklopropil, -C(CH3)2ciklopropil, ili -CH2CH2ciklobutil. U nekim otelotvorenjima, R<2>je supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, na primer, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, piperidil, piperidinonil ili 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil. U drugim otelotvorenjima, R<2>je oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, piperidil, piperidinonil ili 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<2>je supstituisan sa jednim ili više -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, ili -C(O)R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan.
[0061] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (I), R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil,
pri čemu
R<5'>je -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan;
R<6'>je H, ili -C(O)R';
svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan; i
n je 0-2.
[0062] U nekim takvim otelotvorenjima, R<5'>je metil, etil, izopropil, -ciklopropil, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<6'>je H ili -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, ili -C(O)CH2CH(CH3)2.
[0063] U nekim takvim otelotvorenjima R<2>, R<1>je cikloalkil, opciono supstituisan sa jednim ili više halogena, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, i svaki R" nezavisno predstavlja C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan.
1
[0064] Dalja jedinjenja koja su ovde obezbeđena uključuju kombinacije jednog ili više od prethodno datih konkretnih otelotvorenja.
[0065] Reprezentativna jedinjenja formule (I) koja su data u tabeli 1 predstavljaju jedinjenja iz pronalaska.
[0066] Otkriveno je jedinjenje izabrano iz referentne tabele 2.
[0067] Ovde su takođe otkrivena jedinjenja koja imaju sledeću formulu (IB):
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, tautomeri, stereoizomeri, enantiomeri, izotopolozi i prolekovi,
pri čemu:
R<3>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil-(nearomatični heterociklil); i R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0068] U jednom otelotvorenju, jedinjenje nije
4-(izopentilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril
(2S,2'S)-dietil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)-bis(3-metilbutanoat)
4-(cikloheptilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)-pirimidin-5-karbonitril
1
4-(4-metilcikloheksilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)-pirimidin-5-karbonitril
ili
2-(3-(dietilamino)propilamino)-4-(4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0069] U jednom otelotvorenju jedinjenja formule (IB), R<3>je razgranati C1-8alkil, na primer, R3 je izopropil, sek-butil, izobutil, terc-butil, izopentil, 2-metilpentil, ili terc-pentil. U drugim otelotvorenjima, R<3>je izopropil, sek-butil, izobutil, terc-butil, 2,3-dimetilbutil, izopentil, 2-metilpentil, neopentil, terc-pentil, ili 3-metilpentil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je terc-butil. U drugim otelotvorenjima, R<3>je supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, ili biciklo[2.2.2]oktil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<3>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, biciklo[2.2.1]heptil, ili biciklo[2.2.2]oktil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je ciklobutil ili cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više halogena, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3alkil)C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R" nezavisno predstavlja C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više metila, etila, t-butila, ciklopropila, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(ciklopropil), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3. U drugim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više halogena, -(C1-4alkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3alkil)C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, a svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. Na primer, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više metila, etila, t-butila, -F, -OH, -OCH3, -
2
OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(ciklopropil), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil je supstituisan sa jednim ili više metila, -F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2, ili -C(CH3)2C(O)N(CH3)2. U još nekim otelotvorenjima, R<3>je supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, na primer, pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil, ili piperidil. U nekim otelotvorenjima, nearomatični heterociklil je oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, piperidil, piperidinonil ili 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je tetrahidropiranil. U nekim otelotvorenjima, piperidil je supstituisan sa -C(O)R', ili -C(O)OR', pri čemu R' predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. U nekim otelotvorenjima, R<3>je supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, na primer, (C1-3alkil)ciklopropil, (C1-3alkil)ciklobutil, (C1-3alkil)ciklopentil, ili (C1-3alkil)cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je -(CH2)ciklopropil, -(CH2)ciklobutil, -(CH2)ciklopentil, -(CH2)cikloheksil, -CH(CH3)ciklopropil, -CH(CH3)ciklobutil, -CH(CH3)ciklopentil, ili -CH(CH3)cikloheksil. U drugim otelotvorenjima, R<3>je -(CH2)ciklopropil, -CH(CH3)ciklopropil, -CH(CH3)ciklobutil, -CH(CH3)cikloheksil, ili -C(CH3)2ciklopropil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je supstituisani ili nesupstituisani alkil-(nearomatični heterociklil), na primer, -(C1-4alkil)tetrahidrofuranil, ili -(C1-4alkil)dioksolanil.
[0070] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (IB), R<3>je izabran od razgranatog C1-8alkil,
pri čemu
R<3'>je halogen, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R';
R<4'>je -C(O)R', ili -C(O)OR';
svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R" je nezavisno C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan; i n je 0-2.
[0071] U nekim otelotvorenjima, R<3'>je metil, etil, t-butil, ciklopropil -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(ciklopropil), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3.
[0072] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (IB), R<3>je izabran od razgranatog C1-8alkil,
pri čemu
R<3'>je halogen, -(C1-4alkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3alkil)C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R';
svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
i
n je 0-2.
[0073] U nekim takvim otelotvorenjima, R<3'>je metil, etil, t-butil, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, ili -NHSO2CH3.
[0074] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (IB), R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-
8alkil, na primer, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, izopentil, 2-metilpentil, ili terc-pentil. U nekim otelotvorenjima, R<4>je metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, terc-butil, 3-metilbutil, 2,3-dimetilbutil, 3,3-dimetilbutil, 2,3,3-trimetilbutil, terc-pentil, izopentil, 3-pentil, 3-metilpentil, 2-metilpentil, ili 2,4-dimetilpentil. U nekim otelotvorenjima, R<4>je izopropil, izobutil, izopentil, terc-butil, ili terc-pentil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, -C(O)NR2ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. Na primer, R<4>je supstituisan sa jednim ili više -OH, ili -CH3. U nekim drugim otelotvorenjima, R<4>je supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[1.1.1]pentil, biciklo[2.1.1]heksil, ili biciklo[2.2.1]heptil. U nekim otelotvorenjima, R<4>je ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ili biciklo[1.1.1]pentil. U nekim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više halogena, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan. Na primer, R<4>je supstituisan sa jednim ili više metil, etil, izopropil, -ciklopropil, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više halogena, -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan. U nekim takvim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više F, metil, etil, izopropil, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više metil, etil, -F, -CH2OH, ili -OH. U nekim otelotvorenjima, R<4>je supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, na primer, oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, piperidil, piperidinonil ili 1,4-dioksaspiro[4.5]dekanil. U nekim otelotvorenjima, R<4>je tetrahidrofuranil ili tetrahidropiranil. U nekim takvim otelotvorenjima, R<4>je supstituisan sa jednim ili više -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, ili -C(O)R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan, i svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan.
[0075] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (IB), R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-
8alkil,
pri čemu
R<5'>je -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR', pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan;
R<6'>je H, ili -C(O)R';
svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan; i
n je 0-2.
[0076] U nekim takvim otelotvorenjima, R<5'>je metil, etil, izopropil, -ciklopropil, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<6'>je H ili -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, ili -C(O)CH2CH(CH3)2.
[0077] U nekim otelotvorenjima jedinjenja formule (IB), R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-
8alkil,
2
pri čemu
R<5'>je halogen, -(C1-4alkil), -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)C(O)NR2, -NR2, ili -NRCOR'; svaki R je nezavisno H ili C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan;
svaki R' je nezavisno C1-4alkil, pri čemu je alkil opciono fluorovan; i
n je 0-2.
[0078] U nekim takvim otelotvorenjima, R<5'>je F, metil, etil, izopropil, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, ili -NHC(O)CH2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<5'>je F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2.
[0079] U nekim otelotvorenjima, kada je R<4>supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, R<3>je cikloalkil, opciono supstituisan sa jednim ili više halogena, -CF3, -(C1-4alkil), -(C1-6cikloalkil), -NR2, -(C0-3alkil)OR, -(C0-3alkil)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR', ili -NRS(O)2R', pri čemu svaki R nezavisno predstavlja H, ili C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, svaki R' nezavisno predstavlja C1-4alkil, pri čemu je svaki alkil opciono fluorovan, i svaki R" nezavisno predstavlja C1-6cikloalkil, pri čemu je cikloalkil opciono fluorovan.
[0080] Dalja jedinjenja koja su ovde obezbeđena uključuju kombinacije jednog ili više od prethodno datih konkretnih otelotvorenja.
[0081] Reprezentativna jedinjenja formule (IB) su prikazana u referentnoj tabeli 3.
[0082] Jedinjenja diaminopirimidina data u tabeli 1, tabeli 2 i tabeli 3 testirana su u testovima inhibitora JNK koji su ovde opisani i otkriveno je da imaju aktivnost inhibitora JNK. U jednom otelotvorenju, jedinjenje diaminopirimidina iz pronalaska pri koncentraciji 10 µM inhibira JNK1 za najmanje oko 50% ili više.
POSTUPCI ZA PROIZVODNJU JEDINJENJA DIAMINOPIRIMIDINA
[0083] Odeljak „POSTUPCI ZA PROIZVODNJU JEDINJENJA DIAMINOPIRIMIDINA“ je otkriven ali nije obuhvaćen zahtevom.
[0084] Jedinjenja diaminopirimidina mogu da se naprave koristeći konvencionalne organske sinteze i komercijalno dostupne polazne supstance. Na primer, i bez ograničenja, jedinjenja diaminopirimidina formule (I) mogu da se pripreme kao što je prikazano u šemama 1-9 ispod, kao i u primerima koji su ovde dati. Treba napomenuti da bi stručnjak za ovu oblast znao kako da modifikuje postupke navedene u ilustrativnim šemama i primerima kako bi dobio željene proizvode.
Šema 1
[0085] Kao što je prikazano na šemi 1, jedinjenja formule (I), pri čemu su R<1>i R<2>kao što je ovde definisano, mogu da se pripreme polazeći od odgovarajuće derivatizovanog estra 4-hlor-2-alkiltiopirimidin karboksilata (pri čemu svaki R<x>nezavisno predstavlja C1-2alkil), tretiranjem sa R<2>NH2na povišenoj temperaturi (na primer 60-80 °C) u organskom rastvaraču (na primer, etanol, metanol, izopropanol, THF, NMP, DMF, DMSO ili dioksan), u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, cezijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat ili kalijum fosfat). Hidroliza estra se postiže tretiranjem vodenim rastvorom baze, kao što je, na primer, vodeni rastvor natrijum hidroksida, kalijum hidroksida ili litijum hidroksida, u korastvaraču, kao što je etanol, metanol, izopropanol, THF ili dioksan. Formiranje amida se postiže reakcijom sa NH4Cl u prisustvu agensa za kuplovanje (kao što je, na primer, HATU, CDI, HBTU, EDC opciono u kombinaciji sa HOBt, ili etil hlorformat), u organskom rastvaraču, kao što je NMP, DMF, DMSO, dioksan, THF, DCM ili hloroform, u prisustvu baze (kao što je DIEA, TEA ili kalijum karbonat). Oksidacija alkiltiol ostatka se postiže tretiranjem u organskom rastvaraču (kao što je, na primer, aceton, DCM, NMP, DMF ili hloroform) oksidansom kao što je mCPBA, okson, vodonik peroksid ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin. Dobijena smeša sulfona (m = 1) i sulfoksida (m = 2) tretirana je na povišenoj temperaturi (na primer, 80-100 °C) sa R<1>NH2u rastvaraču (kao što je, na primer, dioksan, DMSO, NMP, DMF, THF ili voda) u prisustvu organske baze, kao što je DIEA, TEA, N-metil morfolin, ili 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, dajući jedinjenja formule (I).
Šema 2
2
[0086] Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu da se pripreme kao što je prikazano na šemi 2 (pri čemu, R<1>, R<2>i R<x>su kao što je prethodno definisano). Tretiranje 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat alkil estra sa NaSR<x>u organskom rastvaraču (na primer, THF, DCM ili dioksan) u prisustvu katalizatora (na primer, trietil benzil amonijum hlorid, tetrabutil amonijum hlorid, ili tetrabutil amonijum bromid), uz hlađenje (na primer, na -10 °C) dalo je smešu tioalkil derivata. Dalje tretiranje sa R<1>NH2na povišenoj temperaturi (npr.80 °C) u organskom rastvaraču (na primer, dioksan, THF, NMP, DMF, DMSO, etanol, metanol ili izopropanol), u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, cezijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat ili kalijum fosfat) uključuje bočni lanac R<1>. Hidroliza alkil estra, kuplovanje sa NH4Cl i oksidacija kao što je prethodno prikazano, obezbeđuje smešu derivata sulfona (m = 1) i sulfoksida (m = 2), koja nakon tretiranja sa R<2>NH2u rastvaraču (kao što je dioksan, NMP, DMF, DMSO, THF, voda), u prisustvu organske baze (kao što je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en ili N-metil morfolin), na povišenoj temperaturi (npr.80-110 °C) daje jedinjenja formule (I).
Šema 3
[0087] Jedinjenja formule (I) takođe mogu da se pripreme kao što je prikazano na šemi 3. Tretiranje 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilat alkil estra sa R<2>NH2u rastvaraču (na primer, etil etar, THF, DCM, toluen ili metil terc-butil etar) u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat) na niskoj temperaturi (na primer, -70 °C) obezbeđuje uvođenje bočnog lanca R<2>. Razdvajanje smeše regioizomera i hidrogenovanje preostalog hlora u uzorku omogućava regioizomerno dodeljivanje ugradnje bočnog lanca R<2>. Željeno regioizomerno jedinjenje se zatim dalje derivatizuje. Dalje tretiranje sa R<1>NH2u organskom rastvaraču (na primer, THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol) u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat) na povišenoj temperaturi (na primer, 70 °C) obezbeđuje uvođenje bočnog lanca R<1>. Hidroliza alkil estra i kuplovanje sa NH4Cl, kao i u prethodnom slučaju, obezbeđuje jedinjenja formule (I).
2
Šema 4
[0088] Alternativni postupak za sintezu jedinjenja formule (I) prikazan je na šemi 4. Tretiranje 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitrila sa R<2>NH2u organskom rastvaraču (na primer, etanol, metanol, izopropanol ili THF) u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat) na niskoj temperaturi (na primer, -60 °C) obezbeđuje uvođenje bočnog lanca R<2>. Kao i u prethodnom slučaju, hidrogenovanje preostalog hlora omogućava regioizomerno dodeljivanje ugrađivanja R<2>. Dalje tretiranje sa R<1>NH2u organskom rastvaraču (na primer, 1-butanol, THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol) u prisustvu baze (na primer, cezijum karbonat, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, DIEA, ili TEA) na povišenoj temperaturi (na primer, 120 °C) obezbeđuje uvođenje bočnog lanca R<1>(dajući, u nekim slučajevima kada je R<1>= R<3>i R<2>= R<4>, jedinjenja formule (IB)). Konverzija ostatka nitrila, na primer, sa katalitičkom količinom peroksida, u prisustvu vodenog rastvora jake baze, kao što je natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid, u rastvaraču, kao što je, na primer, DMSO, NMP, DMF, etanol ili metanol, daje jedinjenja formule (I).
ema 5
[0089] Još jedan postupak za sintezu jedinjenja formule (I) prikazan je na šemi 5. Tretiranjem 4-hlor-2-(alkiltio)pirimidin-5-karbonitrila sa R<1>NH2u organskom rastvaraču (na primer, n-butanol, NMP, DMF, DMSO, dioksan ili etanol) u prisustvu baze (kao što je, na primer, DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat), na temperaturi od 50 °C do 90 °C, uvodi se bočni lanac R<1>. Konverzija karbonitrila u amid, na primer, tretiranjem sa peroksidom (H2O2), u rastvaraču (kao što je, na primer, DMSO, NMP, DMF, etanol ili metanol), u prisustvu baze (kao što je natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid), i oksidacija (na primer, koristeći mCPBA, okson, vodonik peroksid ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin, u rastvaraču kao što je DCM, NMP, DMF ili DMA), kao i u prethodnom slučaju obezbeđuje smešu sulfona (m=1) i sulfoksida (m = 2), koja može da se tretira sa R<2>NH2u rastvaraču kao što je (dioksane, DMSO, NMP, DMF, THF
2
ili n-butanol) u prisustvu baze (kao što je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en ili N-metil morfolin), opciono na povišenoj temperaturi (na primer, od sobne temperature do 130 °C), dajući jedinjenja formule (I).
Šema 6
[0090] Jedinjenja formule (I) takođe mogu da se dobiju kao što je prikazano na šemi 6. Tretiranjem 5-brom-2-hlor-4-(alkiltio)pirimidina sa R<1>NH2u organskom rastvaraču (na primer, n-butanol, NMP, DMF, DMSO, dioksan ili etanol) u prisustvu baze (kao što je, na primer, DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat), na temperaturi od 80 °C do 100 °C, uvodi se bočni lanac R<1>. Uvođenje ostatka karbonitrila postiže se tretiranjem cinkom i dicijanocinkom u rastvaraču (kao što je DMF, DMSO, NMP ili DMA) u prisustvu katalizatora kao što je Pd(O), na povišenoj temperaturi (na primer, od 80 °C - 100 °C). Kao i ranije, konverzija u amidni ostatak putem tretiranja peroksidom, nakon čega sledi oksidacija u sulfon/sulfoksid, i tretiranje sa R<2>NH2daje jedinjenja formule (I). Alternativno, prvo je oksidisan alkiltio ostatak, nakon čega sledi uvođenje bočnog lanca R<2>(koje u nekim slučajevima, kada je R<1>= R<3>i R<2>= R<4>, obezbeđuje jedinjenja formule (IB)), i konverzija u amidni ostatak, dajući jedinjenja formule (I).
[0091] Alternativno, jedinjenja diaminopirimidina formule (IB), pri čemu su R<3>i R<4>kao što je ovde definisano, mogu da se dobiju kao što je prikazano na šemi 7, 8 i 9 prikazanim ispod, kao i u primerima koji su ovde dati. Treba napomenuti da bi stručnjak za ovu oblast znao kako da modifikuje postupke navedene u ilustrativnim šemama i primerima kako bi dobio željeni proizvod.
Šema 7
2
[0092] Kao što je prikazano na šemi 7, tretiranje 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitrila sa R<4>NH2u organskom rastvaraču (na primer, etanol, metanol, izopropanol ili THF) u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat) obezbeđuje uvođenje bočnog lanca R<4>. Dalje tretiranje sa R<3>NH2u organskom rastvaraču (na primer, 1-butanol, THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol) u prisustvu baze (na primer, cezijum karbonat, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, DIEA, ili TEA) na povišenoj temperaturi (na primer, 50 °C do 90 °C) daje jedinjenja formule (IB).
Šema 8
[0093] Alternativno, supstituent R<3>se uvodi prvi, nakon čega se uvodi supstituent R<4>suštinski istim postupcima, kao što je prikazano na šemi 8. U nekim otelotvorenjima, kuplovanje sa R<4>NH2se vrši na temperaturi od sobne temperature do 110 °C.
ema 9
[0094] U trećem pristupu, jedinjenja formule (IB) mogu da se pripreme polazeći od odgovarajuće derivatizovanog 4-hlor-2-alkiltio pirimidin-karbonitrila (pri čemu svaki R<x>nezavisno predstavlja C1-2alkil), tretiranjem sa R<4>NH2na povišenoj temperaturi (na primer 50 °C - 90 °C) u organskom rastvaraču (na primer, n-butanol, NMP, DMF, DMSO ili dioksan), u prisustvu baze (na primer, DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat). Oksidacija alkiltiol ostatka se postiže tretiranjem u organskom rastvaraču (kao što je, na primer, DCM, NMP, DMF ili DMA) oksidansom kao što je mCPBA, okson, vodonik peroksid ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin. Dobijena smeša sulfona (m = 1) i sulfoksida (m = 2) tretirana je na sobnoj temperaturi ili povišenoj temperaturi (na primer, 25 °C - 110 °C) sa R<3>NH2u rastvaraču (kao što je, na primer, dioksan, DMSO, NMP, DMF, THF ili n-butanol) u prisustvu organske baze, kao što je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, dajući jedinjenja formule (IB).
[0095] U jednom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (I):
2
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Ia)
sa R<1>NH2u rastvaraču, u prisustvu organske baze,
pri čemu:
R<1>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil heterociklil, pod uslovom da R<1>nije 1-amino cikloheksil;
R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani zasićeni cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil;
R<x>je C1-2alkil; i
m je 1 ili 2.
[0096] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) nije 2-(2-aminoetil-amino)-4-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminopropilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-amino-2-oksoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; (S)-2-(2-aminopropilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; (R)-2-(1-amino-3-metil-1-oksobutan-2-ilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-(ciklopentilamino)-2-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; ili 2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-4-(ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0097] U jednom otelotvorenju, rastvarač je dioksan, DMSO, NMP, DMF, THF ili voda. U drugom otelotvorenju, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en ili N-metil morfolin. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 80 °C do oko 100 °C.
[0098] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Ia):
pri čemu postupci obuhvataju oksidaciju jedinjenja formule (Ib)
u rastvaraču putem tretiranja oksidansom koji je izabran od mCPBA, oksona, vodonik peroksida ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridina.
[0099] U jednom otelotvorenju, rastvarač je aceton, DCM, NMP, DMF ili hloroform. U nekim otelotvorenjima, postupak se izvodi na temperaturi od oko 0 °C do oko 20 °C.
[0100] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Ib):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Ic)
sa NH4Cl, u prisustvu agensa za kuplovanje i baze, u rastvaraču.
[0101] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je NMP, DMF, DMSO, dioksan, THF, DCM ili hloroform. U drugim otelotvorenjima, agens za kuplovanje je HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt ili etil hlorformat, a baza je DIEA, TEA ili kalijum karbonat.
[0102] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Ic)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Id)
1
sa vodenim rastvorom baze, u korastvaraču.
[0103] U nekim otelotvorenjima, vodeni rastvor baze je vodeni rastvor natrijum hidroksida, kalijum hidroksida ili litijum hidroksida. U drugim otelotvorenjima, korastvarač je etanol, metanol, izopropanol, THF ili dioksan.
[0104] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Id)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Ie)
sa R<2>NH2u organskom rastvaraču, u prisustvu baze.
[0105] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je etanol, metanol, izopropanol, THF, NMP, DMF, DMSO ili dioksan. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, cezijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 60 °C do oko 80 °C.
[0106] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Ib)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (If)
sa peroksidom, u prisustvu baze, u rastvaraču.
2
[0107] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je DMSO, NMP, DMF, etanol ili metanol. U drugim otelotvorenjima, baza je natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid.
[0108] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (If)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Ig)
sa R<2>NH2u organskom rastvaraču, u prisustvu baze.
[0109] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je n-butanol, NMP, DMF, DMSO, dioksan ili etanol. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 50 °C do oko 90 °C.
[0110] Dalje su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (I):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIa)
sa R<2>NH2u rastvaraču, u prisustvu organske baze, pri čemu:
R<1>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil heterociklil, pod uslovom da R<1>nije 1-amino cikloheksil;
R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani zasićeni cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil;
R<x>je C1-2alkil; i
m je 1 ili 2.
[0111] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) nije 2-(2-aminoetilamino)-4-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminopropilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-amino-2-oksoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; (S)-2-(2-aminopropilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; (R)-2-(1-amino-3-metil-1-oksobutan-2-ilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-(ciklopentilamino)-2-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; ili 2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-4-(ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0112] U jednom otelotvorenju, rastvarač je dioksan, DMSO, NMP, DMF, THF ili voda. U drugom otelotvorenju, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en ili N-metil morfolin. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 80 °C do oko 110 °C.
[0113] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIa):
pri čemu postupci obuhvataju oksidaciju jedinjenja formule (IIb)
u rastvaraču putem tretiranja oksidansom koji je izabran od mCPBA, oksona, vodonik peroksida ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridina.
[0114] U jednom otelotvorenju, rastvarač je aceton, DCM, NMP, DMF ili hloroform. U nekim otelotvorenjima, oksidacija se vrši na niskoj temperaturi, na primer, na oko 0 °C.
[0115] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIb):
4
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIc)
sa NH4Cl u prisustvu agensa za kuplovanje i baze, u rastvaraču.
[0116] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je NMP, DMF, DMSO, dioksan, THF, DCM ili hloroform. U drugim otelotvorenjima, agens za kuplovanje je HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt ili etil hlorformat, a baza je DIEA, TEA ili kalijum karbonat.
[0117] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIc)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IId)
sa vodenim rastvorom baze, u korastvaraču.
[0118] U nekim otelotvorenjima, vodeni rastvor baze je vodeni rastvor natrijum hidroksida, kalijum hidroksida ili litijum hidroksida. U drugim otelotvorenjima, korastvarač je etanol, metanol, izopropanol, THF ili dioksan.
[0119] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IId)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIe)
sa R<1>NH2u organskom rastvaraču, u prisustvu organske baze.
[0120] U jednom otelotvorenju, organski rastvarač je dioksan, THF, NMP, DMF, DMSO, etanol, metanol ili izopropanol. U drugom otelotvorenju, baza je DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, cezijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 80 °C do oko 100 °C.
[0121] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIe)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIf)
sa NaSR<x>u organskom rastvaraču u prisustvu katalizatora.
[0122] U jednom otelotvorenju, rastvarač je THF, DCM ili dioksan. U jednom otelotvorenju, katalizator je trietil benzil amonijum hlorid, tetrabutil amonijum hlorid ili tetrabutil amonijum bromid. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši uz hlađenje, na primer, na oko -10 °C.
[0123] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIb):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIg)
sa peroksidom, u prisustvu baze, u rastvaraču.
[0124] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je DMSO, NMP, DMF, etanol ili metanol. U drugim otelotvorenjima, baza je natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid.
[0125] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIg)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIh)
sa cinkom i dicijano cinkom, u prisustvu katalizatora, u rastvaraču.
[0126] U nekim otelotvorenjima, katalizator je Pd(0). U nekim otelotvorenjima, rastvarač je DMF, DMSO, NMP ili DMA. U drugim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, na temperaturi od oko 80 °C do oko 100 °C.
[0127] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIh)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIi)
sa R<1>NH2, u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0128] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je n-butanol, NMP, DMF, DMSO, dioksan ili etanol. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo-[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, na temperaturi od oko 80 °C do oko 100 °C.
[0129] Takođe su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (I):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIa)
sa NH4Cl u prisustvu agensa za kuplovanje i baze, u rastvaraču, pri čemu:
R<1>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkilheterociklil, pod uslovom da R<1>nije 1-aminocikloheksil; i
R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani zasićeni cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0130] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) nije 2-(2-aminoetilamino)-4-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminopropilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-amino-2-oksoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; (S)-2-(2-aminopropilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; (R)-2-(1-amino-3-metil-1-oksobutan-2-ilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-(ciklopentilamino)-2-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; ili 2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-4-(ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0131] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je NMP, DMF, DMSO, dioksan, THF, DCM ili hloroform. U drugim otelotvorenjima, agens za kuplovanje je HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt ili etil hlorformat, a baza je DIEA, TEA ili kalijum karbonat.
[0132] U nekim takvim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIIa):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIb)
sa vodenom bazom, u korastvaraču, pri čemu, R<x>je C1-2alkil.
[0133] U nekim otelotvorenjima, vodeni rastvor baze je vodeni rastvor natrijum hidroksida, kalijum hidroksida ili litijum hidroksida. U drugim otelotvorenjima, korastvarač je etanol, metanol, izopropanol, THF ili dioksan.
[0134] U nekim otelotvorenjima, postupak dalje obuhvata pripremu jedinjenja formule (IIIb):
pri čemu postupak obuhvata dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIIc)
sa R<1>NH2u prisustvu organske baze, u organskom rastvaraču.
[0135] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol. U drugim otelotvorenjima, organska baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, oko 70 °C.
[0136] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IIIc)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IIId)
sa R<2>NH2u prisustvu organske baze u rastvaraču.
[0137] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je etil etar, THF, DCM, toluen ili metil terc-butil etar. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na niskoj temperaturi, na primer, oko -70 °C.
[0138] Takođe su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (I):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IVa)
sa katalitičkom količinom peroksida, u prisustvu jake vodene baze, u rastvaraču, pri čemu:
R<1>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkilcikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkilheterociklil, pod uslovom da R<1>nije 1-aminocikloheksil; i
R<2>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani zasićeni cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0139] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) nije 2-(2-aminoetilamino)-4-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminopropilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-amino-2-oksoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 2-(2-aminoetilamino)-4-(cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; (S)-2-(2-aminopropilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid, (R)-2-(1-amino-3-metil-1-oksobutan-2-ilamino)-4-(ciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-(ciklopentilamino)-2-(metilamino)pirimidin-5-karboksamid; ili 2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-4-(ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0140] U nekim otelotvorenjima, rastvarač je DMSO, NMP, DMF, etanol ili metanol. U drugim otelotvorenjima, jaka vodena baza je, na primer, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid.
[0141] U nekim takvim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IVa):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IVb)
4
sa R<1>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0142] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je 1-butanol, THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol. U drugim otelotvorenjima, baza je cezijum karbonat, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, DIEA ili TEA. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, oko 120 °C.
[0143] U nekim takvim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IVc)
sa R<2>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0144] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je etanol, metanol, izopropanol ili THF. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na niskoj temperaturi, na primer, oko -60 °C.
[0145] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IVa):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (IVd)
sa R<2>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0146] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je DCM, NMP, DMF ili DMA. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en ili N-metil morfolin. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na temperaturi od sobne temperature do oko 130 °C.
[0147] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (IVd):
pri čemu postupci obuhvataju oksidaciju jedinjenja formule (IIg)
u rastvaraču putem tretiranja oksidansom koji je izabran od mCPBA, oksona, vodonik peroksida ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridina.
[0148] U jednom otelotvorenju, rastvarač je DCM, NMP, DMF ili DMA. U nekim otelotvorenjima, oksidacija se vrši na temperaturi od oko 0 °C do oko sobne temperature.
[0149] Takođe su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (IB)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Va)
sa R<3>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču, pri čemu
R<3>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil-(nearomatični heterociklil); i R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0150] U jednom otelotvorenju, jedinjenje nije 4-(izopentilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; (2S,2'S)-dimetil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(4-metilpentanoat); (2S,2'S)-dietil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(3-metilbutanoat); 4-(cikloheptilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; 4-(4-metilcikloheksilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; ili 2-(3-(dietilamino)propilamino)-4-(4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril.
[0151] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je 1-butanol, THF, NMP, DMF, DMSO, dioksan, etanol, metanol ili izopropanol. U drugim otelotvorenjima, baza je cezijum karbonat, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, DIEA ili TEA. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 50 °C do oko 90 °C.
[0152] U nekim takvim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (Va):
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Vb)
sa R<4>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0153] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je etanol, metanol, izopropanol ili THF. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na niskoj temperaturi, na primer, od oko -70 °C do oko 20 °C.
[0154] Takođe su obezbeđeni postupci za pripremu jedinjenja formule (IB)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (VIa)
4
sa R<4>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču, pri čemu
R<3>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil-(nearomatični heterociklil); i R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil.
[0155] U jednom otelotvorenju, jedinjenje nije 4-(izopentilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; (2S,2'S)-dimetil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(4-metilpentanoat); (2S,2'S)-dietil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(3-metilbutanoat); 4-(cikloheptilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; 4-(4-metilcikloheksilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; ili 2-(3-(dietilamino)propilamino)-4-(4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril.
[0156] U nekim otelotvorenjima, organski rastvarač je 1-butanol, NMP, DMF, DMSO ili dioksan. U drugim otelotvorenjima, baza je cezijum karbonat, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalijum fosfat, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, DIEA ili TEA. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 25 °C do oko 110 °C.
[0157] U nekim takvim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (Vb)
sa R<3>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču.
[0158] U nekim takvim otelotvorenjima, organski rastvarač je etanol, metanol, izopropanol ili THF. U drugim otelotvorenjima, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na niskoj temperaturi, na primer, od oko -70 °C do oko 20 °C.
[0159] Obezbeđeni su postupci za pripremu jedinjenja formule (IB)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (VIIa)
sa R<3>NH2u prisustvu baze, u organskom rastvaraču, pri čemu
R<3>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil, supstituisani ili nesupstituisani alkil cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani alkil-(nearomatični heterociklil);
R<4>je supstituisani ili nesupstituisani C1-8alkil, supstituisani ili nesupstituisani cikloalkil, ili supstituisani ili nesupstituisani nearomatični heterociklil;
R<x>je C1-2alkil i
m je 1 ili 2.
[0160] U jednom otelotvorenju, jedinjenje nije 4-(izopentilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; (2S,2'S)-dimetil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(4-metilpentanoat); (2S,2'S)-dietil 2,2'-(5-cijanopirimidin-2,4-diil)bis(azandiil)bis(3-metilbutanoat); 4-(cikloheptilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; 4-(4-metilcikloheksilamino)-2-(3-(2-metilpiperidin-1-il)propilamino)pirimidin-5-karbonitril; ili 2-(3-(dietilamino)propilamino)-4-(4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril.
[0161] U jednom otelotvorenju, rastvarač je dioksan, DMSO, NMP, DMF, THF ili n-butanol. U drugom otelotvorenju, baza je DIEA, TEA, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, N-metil morfolin. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 25 °C do oko 110 °C.
[0162] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (VIIa):
4
pri čemu postupci obuhvataju oksidaciju jedinjenja formule (VIIb)
u rastvaraču putem tretiranja oksidansom koji je izabran od mCPBA, oksona, vodonik peroksida ili 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridina.
[0163] U jednom otelotvorenju, rastvarač je DCM, NMP, DMF ili DMA. U nekim otelotvorenjima, oksidacija se vrši na niskoj temperaturi, na primer, oko 0 °C.
[0164] U nekim otelotvorenjima, postupci dalje obuhvataju pripremu jedinjenja formule (VIIb)
pri čemu postupci obuhvataju dovođenje u kontakt jedinjenja formule (VIIc)
sa R<4>NH2u organskom rastvaraču, u prisustvu baze.
[0165] U jednom otelotvorenju, organski rastvarač je n-butanol, NMP, DMF, DMSO ili dioksan. U drugom otelotvorenju, baza je DIEA, TEA, N-metil morfolin, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, kalijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum bikarbonat, cezijum karbonat ili kalijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, dovođenje u kontakt se vrši na povišenoj temperaturi, na primer, od oko 50 °C do 90 °C.
POSTUPCI UPOTREBE
[0166] Pozivanje u sledećim paragrafima ovog opisa na postupke lečenja odnosi se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili lekove iz predmetnog pronalaska koji se koriste u postupku za lečenje ljudi (ili životinja) pomoću terapije (ili za dijagnozu). Jedinjenja diaminopirimidina su korisna kao farmaceutski agensi za lečenje, prevenciju ili poboljšanje stanja životinja ili ljudi. Nadalje, jedinjenja diaminopirimidina su aktivna protiv proteinskih kinaza, naročito JNK1 i/ili JNK2. Shodno tome, ovde su obezbeđene brojne primene jedinjenja diaminopirimidina,
4
uključujući lečenje ili prevenciju bolesti koje su prikazane u nastavku. Postupci koji su ovde obezbeđeni obuhvataju primenu delotvorne količine jednog ili više jedinjenja diaminopirimidina na ispitaniku kome je to potrebno.
[0167] U jednom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za inhibiciju kinaze u ćeliji koja eksprimira pomenutu kinazu, koji obuhvataju dovođenje u kontakt pomenute ćelije sa delotvornom količinom jedinjenja diaminopirimidina. U jednom otelotvorenju, kinaza je JNK1, JNK2, ili njihovi mutanti ili izooblici, ili njihova kombinacija. Na primer, jedinjenje diaminopirimidina je jedinjenje iz tabele 1.
[0168] U drugom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza (tj. masna jetra), ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, primarna bilijarna ciroza, hepatitis, hepatocelularni karcinom ili fibroza jetre koja se podudara sa hroničnim ili čestim unosom alkohola (alkoholni hepatitis), sa infekcijom (npr. virusna infekcija kao što je HCV), sa transplantacijom jetre ili sa povredom jetre indukovanom lekom (npr. toksičnost acetaminofena), koji obuhvataju primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina. U nekim takvim aspektima, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju dijabetesa ili metaboličkog sindroma koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, kao što je nealkoholni steatohepatitis, steatoza (tj. masna jetra), ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, primarna bilijarna ciroza i hepatitis, koji obuhvataju primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina.
[0169] U drugom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju jednog ili više poremećaja izabranih od intersticijalne fibroze pluća, sistemske skleroze, skleroderme, hronične nefropatije alografta, odbacivanja posredovanog antitelom ili lupusa, koji obuhvataju primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina. U nekim takvim otelotvorenjima, lupus je eritemski lupus (kao što je diskoidni eritemski lupus ili kutani eritemski lupus) ili sistemski lupus.
[0170] U drugom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju stanja koja mogu da se leče ili spreče inhibicijom JNK1 i/ili JNK2, pri čemu postupak obuhvata primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja diaminopirimidina. Primeri za takva stanja uključuju reumatoidni artritis; reumatoidni spondilitis; osteoartritis; astmu, bronhitis; alergijski rinitis; hroničnu opstruktivnu bolest pluća; cističnu fibrozu; inflamatornu bolest creva; sindrom iritabilnih creva; mukozni kolitis; ulcerativni kolitis; Kronovu bolest; Hantingtonovu bolest; hepatitis; pankreatitis; nefritis; multiplu sklerozu; eritemski lupus; dijabetes tipa II; gojaznost; aterosklerozu; restenozu nakon angioplastike; levu ventrikularnu hipertrofiju; infarkt miokarda; moždani udar; ishemijsko oštećenje srca, pluća, creva, bubrega, jetre, pankreasa, slezine i mozga; akutno ili hronično odbacivanje transplantiranog organa; očuvanje organa za
4
transplantaciju; zatajenje organa ili gubitak uda (npr. uključujući, bez ograničenja, gubitak koji je posledica ishemijske-reperfuzione povrede, traume, velike telesne povrede, automobilskog udesa, povrede usled udara ili neuspešne transplantacije); bolest kalem protiv domaćina; endotoksični šok; zatajenje više organa; psorijazu; opekotine usled izloženosti vatri, hemikalijama ili zračenju; ekcem; dermatitis; presađivanje kože; ishemiju; ishemijska stanja povezana sa operacijom ili traumatskom povredom (npr. udes sa motornim vozilom, prostrelna rana ili smrskani ud); epilepsiju; Alchajmerovu bolest; Parkinsonovu bolest; imunološki odgovor na bakterijsku ili virusnu infekciju; kaheksiju; angiogene i proliferativne bolesti; čvrste tumore; i kancere različitih tkiva kao što je kancer debelog creva, rektuma, prostate, jetre, pluća, bronhija, pankreasa, mozga, glave, vrata, želuca, kože, bubrega, cerviksa, krvi, larinksa, jednjaka, usta, ždrela, mokraćne bešike, jajnika ili materice.
FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I NAČINI PRIMENE
[0171] Jedinjenja diaminopirimidina na ispitaniku mogu da se primenjuju oralno, topikalno ili parenteralno u odgovarajućem obliku preparata, kao što su kapsule, mikrokapsule, tablete, granule, prašak, tablete za sisanje, pilule, supozitorije, injekcije, suspenzije, sirupi, flasteri, kremovi, losioni, melemi, gelovi, sprejevi, rastvori i emulzije. Pogodne formulacije mogu da se pripreme postupcima koji se uobičajeno primenjuju koristeći konvencionalne, organske ili neorganske aditive, kao što je ekscipijens (npr. saharoza, skrob, manitol, sorbitol, laktoza, glukoza, celuloza, talk, kalcijum fosfat ili kalcijum karbonat), vezivač (npr. celuloza, metilceluloza, hidroksimetil celuloza, polipropil pirolidon, polivinil pirolidon, želatin, guma arabika, polietilen glikol, saharoza ili skrob), dezintegrans (npr. skrob, karboksimetil celuloza, hidroksipropil skrob, niskosupstituisana hidroksipropil celuloza, natrijum bikarbonat, kalcijum fosfat ili kalcijum citrat), lubrikans (npr. magnezijum stearat, laka anhidrovana silicijumova kiselina, talk ili natrijum lauril sulfat), sredstvo za poboljšanje ukusa (npr. limunska kiselina, mentol, glicin ili pomorandža u prahu), konzervans (npr. natrijum benzoat, natrijum bisulfit, metil paraben ili propil paraben), stabilizator (npr. limunska kiselina, natrijum citrat ili sirćetna kiselina), suspendujući agens (npr. metil celuloza, polivinil pirolidon ili aluminijum stearat), dispergujući agens (npr. hidroksipropil metilceluloza), razblaživač (npr. voda) i bazni vosak (npr. kakao puter, vazelin ili polietilen glikol). Delotvorna količina jedinjenja diaminopirimidina u farmaceutskoj kompoziciji može biti na nivou koji će vršiti željeno dejstvo, na primer, od oko 0,005 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 10 mg/kg ispitanikove telesne težine u jediničnoj dozi za oralnu i parenteralnu primenu.
[0172] Doza jedinjenja diaminopirimidina koje se primenjuje na ispitaniku u velikoj meri varira i može biti podložna proceni medicinskog stručnjaka. Uopšteno, jedinjenja diaminopirimidina kod ispitanika mogu da se primenjuju od jedan do četiri puta na dan u dozi od oko 0,005 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 10 mg/kg ispitanikove telesne težine, ali prethodna doza može
4
prikladno da se razlikuje u zavisnosti od starosti, telesne težine i zdravstvenog stanja ispitanika i od vrste primene. U jednom otelotvorenju, doza je od oko 0,01 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 5 mg/kg ispitanikove telesne težine, od oko 0,05 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 1 mg/kg ispitanikove telesne težine, od oko 0,1 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 0,75 mg/kg ispitanikove telesne težine ili od oko 0,25 mg/kg ispitanikove telesne težine do oko 0,5 mg/kg ispitanikove telesne težine. U jednom otelotvorenju, doza se primenjuje po danu. U svakom slučaju, količina jedinjenja diaminopirimidina koja se primenjuje zavisiće od faktora kao što je rastvorljivost aktivne komponente, formulacija koja se koristi i način primene. U jednom otelotvorenju, primena topikalne koncentracije obezbeđuje intracelularnu izloženost ili koncentraciju od oko 0,01-10 µM.
[0173] U drugom otelotvorenju, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja koji obuhvataju primenu od oko 0,375 mg/dan do oko 750 mg/dan, oko 0,75 mg/dan do oko 375 mg/dan, oko 3,75 mg/dan do oko 75 mg/dan, oko 7,5 mg/dan do oko 55 mg/dan ili oko 18 mg/dan do oko 37 mg/dan jedinjenja diaminopirimidina na ispitaniku kome je to potrebno.
[0174] U drugom otelotvorenju, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja koji obuhvataju primenu od oko 1 mg/dan do oko 1200 mg/dan, oko 10 mg/dan do oko 1200 mg/dan, oko 100 mg/dan do oko 1200 mg/dan, oko 400 mg/dan do oko 1200 mg/dan, oko 600 mg/dan do oko 1200 mg/dan, oko 400 mg/dan do oko 800 mg/dan ili oko 600 mg/dan do oko 800 mg/dan jedinjenja diaminopirimidina na ispitaniku kome je to potrebno. U konkretnom otelotvorenju, postupci koji su ovde otkriveni obuhvataju primenu 400 mg/dan, 600 mg/dan ili 800 mg/dan jedinjenja diaminopirimidina na ispitaniku kome je to potrebno.
[0175] U drugom otelotvorenju, ovde su obezbeđene jedinične dozne formulacije koje sadrže od oko 1 mg do 200 mg, od oko 35 mg do oko 1400 mg, od oko 125 mg do oko 1000 mg, od oko 250 mg do oko 1000 mg, ili od oko 500 mg do oko 1000 mg jedinjenja diaminopirimidina.
[0176] U konkretnom otelotvorenju, ovde su obezbeđene jedinične dozne formulacije koje sadrže od oko 100 mg ili 400 mg jedinjenja diaminopirimidina.
[0177] U drugom otelotvorenju, ovde su obezbeđene jedinične dozne formulacije koje sadrže 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 30 mg, 35 mg, 50 mg, 70 mg, 100 mg, 125 mg, 140 mg, 175 mg, 200 mg, 250 mg, 280 mg, 350 mg, 500 mg, 560 mg, 700 mg, 750 mg, 1000 mg ili 1400 mg jedinjenja diaminopirimidina.
[0178] Jedinjenje diaminopirimidina može da se primenjuje jednom, dva, tri, četiri ili više puta na dan. U jednom konkretnom otelotvorenju, doze od 600 mg ili manje primenjuju se kao doza jednom dnevno, a doze veće od 600 mg se primenjuju dva puta dnevno u količini koja je jednaka jednoj polovini ukupne dnevne doze.
4
[0179] Jedinjenje diaminopirimidina zarad pogodnosti može da se primenjuje oralno. U jednom otelotvorenju, kada se primenjuje oralno, jedinjenje diaminopirimidina se primenjuje uz hranu i vodu. U drugom otelotvorenju, jedinjenje diaminopirimidina se disperguje u vodi ili soku (npr. sok od jabuke ili sok od pomorandže) i primenjuje se oralno kao suspenzija.
[0180] Jedinjenje diaminopirimidina takođe može da se primenjuje intradermalno, intramuskularno, intraperitonealno, perkutano, intravenski, supkutano, intranazalno, epiduralno, sublingvalno, intracerebralno, intravaginalno, transdermalno, rektalno, mukozno, inhalacijom, ili topikalno u uši, nos, oči ili na kožu. Način primene se prepušta odluci medicinskog stručnjaka, i može u određenoj meri da zavisi od lokacije medicinskog stanja.
[0181] U jednom otelotvorenju, ovde su obezbeđene kapsule koje sadrže jedinjenje diaminopirimidina bez dodatnog nosača, ekscipijensa ili vehikuluma.
[0182] U drugom otelotvorenju, ovde su obezbeđene kompozicije koje sadrže delotvornu količinu jedinjenja diaminopirimidina i farmaceutski prihvatljiv nosač ili vehikulum, pri čemu farmaceutski prihvatljiv nosač ili vehikulum može da sadrži ekscipijens, razblaživač ili njihovu smešu. U jednom otelotvorenju, kompozicija je farmaceutska kompozicija.
[0183] Kompozicije mogu biti u obliku tableta, tableta za žvakanje, kapsula, rastvora, parenteralnih rastvora, tableta za sisanje, supozitorija i suspenzija, i slično. Kompozicije mogu da se formulišu da sadrže dnevnu dozu, ili odgovarajući deo dnevno doze, u doznoj jedinici, što može biti jedna tableta ili kapsula ili odgovarajuća zapremina tečnosti. U jednom otelotvorenju, rastvori se pripremaju od soli koje su rastvorljive u vodi, kao što su soli hidrohlorida. U načelu, sve kompozicije se pripremaju u skladu sa poznatim postupcima u oblasti farmaceutske hemije. Kapsule mogu da se pripreme mešanjem jedinjenja diaminopirimidina sa odgovarajućim nosačem ili razblaživačem i punjenjem odgovarajuće količine smeše u kapsule. Uobičajeni nosači i razblaživači uključuju, ali nisu ograničeni na, inertne praškaste supstance kao što su skrobovi različitih vrsta, celuloza u prahu, naročito kristalna i mikrokristalna celuloza, šećere kao što je fruktoza, manitol i saharoza, brašno žitarica, i slične jestive praškove.
[0184] Tablete mogu da se pripreme direktnom kompresijom, vlažnom granulacijom ili suvom granulacijom. Njihove formulacije obično sadrže razblaživače, vezivače, lubrikanse i dezintegranse, kao i jedinjenje. Uobičajeni razblaživači uključuju, na primer, različite vrste skroba, laktozu, manitol, kaolin, kalcijum fosfat ili sulfat, neorganske soli kao što je natrijum hlorid i šećer u prahu. Takođe su korisni derivati celuloze u prahu. Uobičajeni vezivači za tablete su supstance poput skroba, želatina i šećera kao što su laktoza, fruktoza, glukoza, i slično. Takođe su korisne prirodne i sintetičke gume, uključujući akaciju, alginate, metilcelulozu, polivinil pirolidon, i slično. Polietilen glikol, etilceluloza i voskovi takođe mogu da se koriste kao vezivači.
[0185] Lubrikans može biti neophodan u formulaciji tablete da bi se sprečilo da se tableta i kalupi zalepe u boji. Lubrikans može da se izabere od klizavih čvrstih supstanci kao što je talk, magnezijum i kalcijum stearat, stearinska kiselina i hidrogenovana biljna ulja. Dezintegransi za tablete su supstance koje bubre kada se nakvase, i lome tabletu i oslobađaju jedinjenje. Oni uključuju skrobove, gline, celuloze, algine i gume. Konkretnije, mogu da se koriste, na primer, kukuruzni i krompirov skrob, metilceluloza, agar, bentonit, celuloza drveta, sprašeni prirodni sunđer, katjonske izmenjivačke smole, alginska kiselina, guar guma, pulpa citrusa i karboksimetil celuloza, kao i natrijum lauril sulfat. Tablete mogu da se oblože šećerom radi ukusa i zaptivanja, ili zaštitnim agensima koji formiraju film za modifikaciju svojstava disolucije tablete. Kompozicije takođe mogu biti formulisane kao tablete za žvakanje, na primer, koristeći u formulaciji supstance kao što je manitol.
[0186] Kada je poželjno da se jedinjenje diaminopirimidina primeni kao supozitorija, mogu da se koriste uobičajene baze. Kakao puter je tradicionalna baza za supozitorije, koja može da se modifikuje dodatkom voskova kako bi se blago povećala njegova tačka topljenja. Rasprostranjeno se koriste baze za supozitorije koje mogu da se mešaju sa vodom koje sadrže, naročito, polietilen glikole različite molekulske mase.
[0187] Dejstvo jedinjenja diaminopirimidina može da se odloži ili produži putem odgovarajuće formulacije. Na primer, pelet jedinjenja diaminopirimidina koji se sporo rastvara može da se pripremi i ubaci u tabletu ili kapsulu, ili kao implantibilno sredstvo sa sporim oslobađanjem. Ova tehnika takođe uključuje pravljenje peleta sa nekoliko različitih brzina disolucije i punjenje kapsula smešom peleta. Tablete ili kapsule mogu biti obložene filmom koji sprečava rastvaranje u predvidljivom vremenskom periodu. Može se izvesti da čak i parenteralne kompozicije imaju duže dejstvo, rastvaranjem ili suspendovanjem jedinjenja diaminopirimidina u uljanim ili emulgovanim vehikulumima koji omogućavaju da se one sporo disperguju u serumu.
PRIMERI
[0188] Sledeći primeri su prikazani samo kao ilustracija, a ne kao ograničenje. Jedinjenja su imenovana koristeći alat za automatsko generisanje imena koji je obezbeđen u Chemdraw Ultra 9.0 (Cambridgesoft), koji generiše sistematske nazive za hemijske strukture, uz podršku Kan-Ingold-Prelogovih pravila za stereohemiju. Stručnjak u ovoj oblasti može da modifikuje postupke navedene u ilustrativnim primerima kako bi dobio željene proizvode.
Korišćene skraćenice:
[0189]
1
SINTEZA JEDINJENJA Primeri 19-24, 36 i 43-45 ne predstavljaju deo pronalaska.
Primer 1: 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0190]
2
[0191] 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitril (1,2 g, 6,93 mmol) u anhidrovanom etanolu (10 ml) i (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamin (893 mg, 6,93 mmol) u anhidrovanom etanolu (10 ml) mešani su na -60 °C, zatim je ukapavanjem dodat DIEA (1,34 g, 10,4 mmol). Smeša je mešana na -60 °C tokom 1,5 h, zatim na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive frakcije su uklonjene i ostatak je prečišćen na silika gelu (elucija sa 9,1%-25% etil acetata u petrol etru i 3,2%-4,7% metanola u DCM-u), dajući 2 izomera (identifikovana kao što je opisano ispod), poimence 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril (560 mg, 2,10 mmol, prinos 30%) kao belu čvrstu supstancu i 2-hlor-4-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (227 mg, 0,85 mmol, prinos 12%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI): m/z 266,9 [M+1]<+>.
[0192] Identifikacija dva izomera je postignuta karakterizacijom dehalogenovanog intermedijera. Dehalogenovanje je za dve frakcije ostvareno na sledeći način. 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (50 mg, 0,18 mmol) i Reni nikl u korastvaraču sačinjenom od THF-a (10 ml) i vodenog rastvora amonijaka (1 ml) mešan je na sobnoj temperaturi pod balonom sa vodonikom preko noći. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan i prečišćen pomoću reversno fazne preparativne HPLC (10% do 40% acetonitrila 0,005% rastvor amonijaka), dajući 5-(aminometil)-N-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirimidin-2-amin (25 mg, 0,10 mmol, prinos 58%).<1>H NMR (CDCl3300 MHz): δ ppm 8.23 (s, 2H), 4.96 (d, J=10.0 Hz, 1H), 3.85-3.73 (m, 1H), 3.69 (s, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.22-3.11 (m, 1H), 2.15-2.04 (m, 4H), 1.44-1.34 (m, 4H); MS(ESI): m/z 236.9 [M+1]<+>.
[0193] Slično tome, 2-hlor-4-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (50 mg, 0,18 mmol) i Reni nikl u korastvaraču sačinjenom od THF-a (10 ml) i vodenog rastvora amonijaka (1 ml) mešan je na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika preko noći. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan i prečišćen pomoću reversno fazne preparativne HPLC (10% do 40% acetonitrila 0,005% rastvor amonijaka), dajući 5-(aminometil)-N-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirimidin-4-amin (30 mg, 0,12 mmol, prinos 66%).<1>H NMR (CDCl3300 MHz): δ ppm 8.46 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.00-3.93 (m, 1H), 3.79 (s, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.23-3.14 (m, 1H), 2.14-2.02 (m, 4H), 1.48-1.22 (m, 4H); MS(ESI): m/z 236.9 [M+1]<+>.
[0194] B. 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. Smeša 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (236 mg, 0,88 mmol), (1R,3R)-3aminocikloheksanola (151 mg, 1,32 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) i cezijum karbonata (573 mg, 1,76 mmol) u anhidrovanom nbutanolu (20 ml) mešana je na 120 °C u atmosferi azota tokom 3 h. Smeša je razdeljena između vode i DCM-a. Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (elucija sa 16%-50% etil acetata u petrol etru i 3,2%-4,7% metanola u DCM-u), dajući 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril (140 mg, 0,40 mmol, prinos 46%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI): m/z 346,0 [M+1]<+>.
[0195] C. 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (140 mg, 0,40 mmol) rastvoren je u DMSO-u (10 ml) i dodato je deset kapi zasićenog vodenog rastvora natrijum hidroksida i deset kapi vodenog rastvora vodonik peroksida (30%) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je razdeljena između vode i DCM-izopropanola (5:1). Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (elucija sa 50%-75% etil acetata u petrol etru i 4,76%-9,1% metanola u DCM-u), dajući 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid (103 mg, 0,28 mmol, prinos 70%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6400 MHz): δ ppm 9.00 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.54 (brs, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.47 (s, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.63 (s, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.08 (s, 1H), 1.98-1.54 (m, 8H), 1.41-1.14 (m, 7H); MS(ESI): m/z 363.9 [M+1]<+>.
Primer 2: 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0196]
1. A. 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. Smeša 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (236 mg, 0,88 mmol, sinteza opisana ovde), (1S,3S)-3-aminocikloheksanola (209 mg, 1,33 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)) i cezijum karbonata (573 mg, 1,76 mmol) u anhidrovanom n-butanolu (20 ml) mešana je na 120 °C u atmosferi azota tokom 3 h. Smeša je razdeljena između vode i DCM-a. Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (elucija sa 16%-50% etil acetata u petrol etru i
4
3,2%-4,7% metanola u DCM-u), dajući 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (140 mg, 0,40 mmol, prinos 46%) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI): m/z 346,1 [M+1]<+>.
2. B. 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (140 mg, 0,40 mmol) rastvoren je u DMSO-u (10 ml) i dodato je deset kapi zasićenog vodenog rastvora natrijum hidroksida i deset kapi vodenog rastvora vodonik peroksida (30%) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je razdeljena između vode i DCM-izopropanola (5:1). Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (elucija sa 50%-75% etil acetata u petrol etru i 4,76%-9,1% metanola u DCM-u), dajući 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (102 mg, 0,28 mmol, prinos 70%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6400 MHz): δ ppm 9.01 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.56 (brs, 1H), 7.02 (d, J=4.8 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.08 (s, 1H), 2.01-1.55 (m, 8H), 1.41-1.15 (m, 7H); MS(ESI): m/z 363.9 [M+1]<+>. Primer 3: 2-((1r,4S)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0197]
1. A. Terc-butil (1r,4r)-4-hidroksicikloheksilkarbamat. U suspenziju (1r,4r)-4-aminocikloheksanol hidrohlorida (25 g, 217 mmol) u dioksanu (200 ml) dodat je rastvor natrijum hidroksida (8,7 g, 217 mmol) u vodi (150 ml) na sobnoj temperaturi, nakon čega je dodat di-terc-butil-dikarbonat (47 g, 270 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 h. Kada je polazna supstanca potrošena, isparljive supstance su uklonjene i ostatak je razblažen vodom. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena, dajući terc-butil (1r,4r)-4-hidroksicikloheksilkarbamat kao belu čvrstu supstancu (33 g, 0,15 mol, prinos 92%).<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ ppm 6.65 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.48 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.14 (s, 1H), 1.77 (m, 4H), 1.37 (s, 9H), 1.14 (m, 4H).
2. B. Terc-butil (1r,4r)-4-etoksicikloheksilkarbamat. U rastvor terc-butil (1r,4r)-4-hidroksicikloheksilkarbamata (20 g, 93 mmol) u anhidrovanom THF-u (100 ml) dodat je natrijum hidrid (4 g, 100 mmol, 60% u mineralnom ulju) u porcijama u atmosferi azota na 0 °C. Smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana tokom 30 min. Rastvor jodetana (16 g, 102 mmol) u anhidrovanom THF-u (50 ml) ukapavanjem je dodat u smešu na 0 °C i dobijena smeša je zagrevana na 60 °C tokom 15 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je sipana u ledenu vodu (100 ml). Vodena smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (100 ml × 3), i organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (elucija sa 5% do 30% etil acetata u petrol etru), dajući terc-butil (1r,4r)-4-etoksicikloheksilkarbamat (3,7 g, 15 mmol, prinos 16%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ ppm 6.70 (d, J=7.6 Hz, 1H), 3.42 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.11-3.17 (m, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.21 (m, 4H), 1.07 (t, J=7.2 Hz, 3H).
C. (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamin hidrohlorid. Rastvor terc-butil (1r,4r)-4-etoksicikloheksilkarbamata (3,7 g, 15 mmol) u metanolnom rastvoru hlorovodonika (2 M, 20 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, dajući (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamin hidrohlorid (2,7 g, prinos 100%).
D. (1S,2S)-2-aminociklopentanol hidrohlorid. U rastvor (1S,2S)-2-(benziloksi)ciklopentanamina (4,5 g, 22 mmol) i hlorovodonične kiseline (0,5 ml) u metanolu (100 ml) dodat je 10 mas.% paladijum na aktivnom uglju (500 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika (40 psi) tokom 24 h. Katalizator je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući (1S,2S)-2-aminociklopentanol hidrohlorid kao belu čvrstu supstancu (2,14 g, 15 mmol, prinos 93%).
E. Etil 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
Smeša etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (1,4 g, 6,0 mmol), (1S,2S)-2-aminociklopentanol hidrohlorida (0,7 g, 6,9 mmol) i DIEA (1,0 g) u etanolu (20 ml) zagrevana je na 60 °C tokom 15 h. Nakon što je ohlađen na sobnu temperaturu, reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (elucija sa 0-10% etil acetata u petrol etru), dajući etil 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (1,3 g, 4,37 mmol, prinos 73%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI): m/z 298.5 [M+1]<+>.
F. 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. U rastvor etil 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (1,3 g, 4,37 mmol) u etanolu (15 ml) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (15 ml, 2 N), i smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Kada je polazna supstanca potrošena, reakciona smeša je neutralisana pomoću zasićenog vodenog rastvora limunske kiseline. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom i osušene, dajući 4((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (1,0 g, 3,7 mmol, prinos 85%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI): m/z 270.6 [M+1]<+>.
G. 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid.
Smeša 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilne kiseline (1,0 g, 3,7 mmol), amonijum hlorida (0,989 g, 18,5 mmol), HATU (2,25 g, 5,92 mmol), DIEA (2,39 g, 18,5 mmol) i 1-HOBt (0,80 g, 5,92 mmol) u DMF-u (10 ml) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (15 ml) i vodena smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (elucija sa 30-50% etil acetata u petrol etru), dajući 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)piramidin-5-karboksamid (800 mg, 2,98 mmol, prinos 81%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI): m/z 269.4 [M+1]<+>.
H. 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (800 mg, 2,98 mmol) u acetonu (10 ml) dodat je rastvor kalijum peroksimonosulfata (4,66 g, 7,45 mmol) u vodi (10 ml), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Nakon što je polazna supstanca potrošena, reakciona smeša je razdeljena između etil acetata (20 ml) i vode (15 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (20 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakuumom, dajući 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (700 mg, 2,3 mmol, prinos 78%) kao čvrstu supstancu. MS (ESI): m/z 301.2 [M+1]<+>. I. 2-((1r,4S)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)pirimidin-5-karboksamid. Rastvor 4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (700 mg, 2,3 mmol), (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamin hidrohlorida (668 mg, 4,66 mmol) i DIEA (600 mg, 4,66 mmol) u dioksanu (10 ml) zagrevan je na 80 °C tokom 15 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u etil acetatu (20 ml). Organski rastvor je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom preparativnom HPLC (40-75% acetonitril 0,05% amonijum hidroksid u vodi, 7,5 min.), dajući 2-((1r,4S)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1S,2S)-2-hidroksiciklopentilamino)pirimidin-5-karboksamid (320 mg, 0,88 mmol, prinos 38%, Tt 126,0-126,6 °C) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ ppm 9.02-8.93 (m, 1H), 8.32 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.60-7.51 (m, 1H), 7.04 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.88 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 3.99-3.89 (m, 3H), 3.42 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.15 (s, J=6.0 Hz, 1H), 2.10-2.06 (m, 1H), 1.97-1.77 (m, 5H), 1.66-1.60 (m, 2H), 1.46 (s, 1H), 1.28-1.18 (m, 5H), 1.06 (t, J=7.2 Hz, 3H); MS (ESI): m/z 364.3 [M+1]<+>.
Primer 4: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1R,4R)-4-(metilkarbamoil)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0198]
1. A. Etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
Etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (4,38 g, 18,82 mmol) i (1S,3R)-3-aminocikloheksanol (2,276 g, 19,76 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) rastvoreni su u etanolu (75 ml) pre dodavanja DIEA (4,93 ml, 28,2 mmol) i zagrevanja na 60 °C. Nakon 2 h, LCMS je pokazala da je masa željenog proizvoda bila dominantni pik koji je nastao. Reakcija je sklonjena od izvora toplote i koncentrovana. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (20-100% etil acetat u heksanu), dajući etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (5 g, 16,06 mmol, prinos 85%) kao belu penu; MS (ESI) m/z 312.1 [M+1]<+>
2. B. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. Etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat (5 g, 16,06 mmol) rastvoren je u etanolu (50 ml) pre dodavanja rastvora natrijum hidroksida (2 M u vodi, 20 ml, 40,0 mmol) i mešanja na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, LCMS pokazuje prvenstveno masu željenog proizvoda. Reakciona smeša je neutralisana dodatkom zasićenog vodenog rastvora limunske kiseline. Dobijeni talog je filtriran i osušen, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (4,5 g, 15,88 mmol, prinos 99%) kao belu čvrstu supstancu;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.21 (br. s., 1H), 8.44 - 8.54 (m, 2H), 4.74 (d, J=3.90 Hz, 1H), 3.97 - 4.12 (m, 1H), 3.56 (d, J=3.12 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.05 - 2.16 (m, 1H), 1.84 (d, J=10.15 Hz, 1H), 1.65 - 1.80 (m, 2H), 1.11 - 1.36 (m, 4H); MS (ESI) m/z 284.1 [M+1]+ 3. C. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (4,5 g, 15,88 mmol) i HATU (9,06 g, 23,82 mmol) rastvoreni su u DMF-u (75 ml) i ostavljeni da se mešaju 5 min na sobnoj temperaturi pre dodavanja amonijum hlorida (4,25 g, 79 mmol) i DIEA (13,87 ml, 79 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon što je LCMS pokazala masu željenog proizvoda kao dominantni pik, reakcija je razdeljena između vode i etil acetata. Organski sloj je jednom ispran zasićenim vodenim rastvorom soli pa je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i kondenzovan. Nakon sušenja, 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamid (4,19 g, 14,84 mmol, prinos 93%) dobijen je kao beličasta čvrsta supstanca; MS (ESI) m/z 283.2 [M+1]+
D. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamid (302 mg, 1,070 mmol) suspendovan je u DCM-u (10 ml) i acetonu (10 ml). Zatim je dodat mCPBA (479 mg, 2,139 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 90 min, LCMS je pokazala masu željenog proizvoda kao dominantni pik. Reakcija je deaktivirana dodatkom 10 ml 10% vodenog rastvora natrijum tiosulfata. Nakon mešanja tokom 5 minuta, reakcija je razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je zatim ispran zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani vodeni slojevi su tri puta isprani etil acetatom pre kombinovanja organskih slojeva, sušenja iznad natrijum sulfata, filtracije i kondenzovanja. Nakon sušenja, 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid (259 mg, 0,824 mmol, prinos 77%) dobijen je kao bela čvrsta supstanca; MS (ESI) m/z 315.2 [M+1]+
E. (1R,4R)-4-amino-N-metilcikloheksankarboksamid. terc-butil (1R,4R)-4-(metilkarbamoil)cikloheksilkarbamat (0,411 g, 1,603 mmol) rastvoren je u DCM-u (5 ml), tretiran sa TFA (5,56 ml, 72,1 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon toga, rastvarač je redukovan pod vakuumom, ostatak je rastvoren u acetonitrilu i nanet na kolonu za ekstrahovanje čvrste faze Phenomenex Strada-X-C i ispran sa 300 ml acetonitrila. Željeno jedinjenje je oslobođeno sa kolone koristeći 2 M amonijak u metanolu. Rastvor koji sadrži željeno jedinjenje je redukovan pod vakuumom, dajući (1R,4R)-4-amino-N-metilcikloheksankarboksamid (0,230 g, 1,475 mmol, prinos 92%); MS (ESI) m/z 157.0 [M+1]<+>.
F. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1R,4R)-4-(metilkarbamoil)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,231 g, 0,736 mmol), (1R,4R)-4-amino-N-metilcikloheksankarboksamid (0,230 g, 1,472 mmol), DIEA (0,514 ml, 2,94 mmol) i DMSO (4 ml) kombinovani su i zagrevani na 100 °C tokom 2 h.
Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom, ostatak je rastvoren u minimalnoj količini metanola, nanet na kolonu silika gela i prečišćen (0-15% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u), dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1R,4R)-4-(metilkarbamoil)-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,106 g, 0,271 mmol, prinos 36,9%) kao beli prašak; MS (ESI) m/z 391.2 [M+1]<+>;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.10 (br. s., 1H), 8.33 (s, 1H), 7.68 (br. s., 1H), 6.92 - 7.29 (m, 3H), 4.67 (br. s., 1H), 3.87 (br. s., 1H), 3.41 - 3.71 (m, 2H), 2.55 (d, J = 4.30 Hz, 3H), 1.66 - 2.16 (m, 9H), 1.00 - 1.47 (m, 8H).
Primer 5: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(metilamino)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid hidrohlorid
[0199]
1. A. Terc-butil (1R,4R)-4-(5-karbamoil-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-2-ilamino)cikloheksil(metil)karbamat. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,397 g, 1,264 mmol; sinteza opisana ovde), terc-butil (1R,4R)-4-aminocikloheksil-(metil)karbamat (0,577 g, 2,53 mmol), DIEA (0,883 ml, 5,05 mmol) i DMSO (4 ml) kombinovani su i zagrevani na 100 °C tokom 2 h. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom, ostatak rastvoren u minimalnoj količini metanola, nanet na kolonu silika gela i prečišćen (0-15% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u), dajući terc-butil (1R,4r)-4-(5-karbamoil-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-2-ilamino)cikloheksil-(metil)karbamat (0,210 g, 0,455 mmol, prinos 36%) kao beli prašak; MS (ESI) m/z 463.3 [M+1]<+>.
2. B. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1R,4R)-4-(metilamino)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid hidrohlorid. Terc-butil (1R,4r)-4-(5-karbamoil-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-2-ilamino)-cikloheksil(metil)karbamat (0,150 g, 0,324 mmol) rastvoren je u DCM-u (2 ml) i ukapavanjem je dodata TFA (2 ml, 26,9 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC (5-40% acetonitril/voda, 20 ml/min), dajući naslovno jedinjenje kao odgovarajuću so TFA. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom, ostatak je rastvoren u metanolu i dodat je hlorovodonik (4 N u dioksanu; 3 ml). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ova procedura je dva puta ponovljena, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(metilamino)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid hidrohlorid (0,063 g, 0,158 mmol, prinos 48,7%). MS (ESI) m/z 363.5 [M+1]<+>;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.94 (br. s., 1H), 8.83 - 9.01 (m, 1H), 8.38 - 8.49 (m, 2H), 8.15 (br. s., 1H), 7.64 (br. s., 1H), 3.96 (br. s., 1H), 3.69 (d, J = 13.67 Hz, 2H), 3.49 (d, J = 11.32 Hz, 3H), 1.97 (br. s., 1H), 2.52 (br. s., 2H), 1.69 - 2.17 (m, 7H), 1.09 - 1.53 (m, 8H).
Primer 6: 2-(4,4-difluorcikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0200]
[0201] 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (478 mg, 1,521 mmol; sinteza opisana ovde), 4,4-difluorcikloheksanamin hidrohlorid (522 mg, 3,04 mmol), DIEA (1,062 ml, 6,08 mmol) i DMSO (8 ml) kombinovani su u balonu sa okruglim dnom i zagrevani na 100 °C tokom 1 h. Reakcija je sklonjena od izvora toplote i koncentrovana pod vakuumom. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 100G SNAP Biotage (2-12% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u). Frakcije pika su kombinovane i uparene. Nakon sušenja pod visokim vakuumom, 2-(4,4-difluorcikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (325 mg, 0,880 mmol, 58%) dobijen je kao žućkasti prašak;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.93 (d, J=7.42 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.22 (br. s., 1H), 2.94 - 3.05 (m, 1H), 1.64 - 2.21 (m, 14H), 1.36 - 1.62 (m, 4H), 0.92 - 1.33 (m, 3H); MS (ESI) m/z 370.2 [M+1]<+>.
Primer 7: 4-((3S,5R)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3R,5S)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3S,5S)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3R,5R)-5-hidroksi-tetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0202]
1
A. 6-hidroksi-2H-piran-3(6H)-on. Furan-2-ilmetanol (17,67 ml, 204 mmol) rastvoren je u DCM-u (500 ml) i ohlađen na 0 °C pre dodavanja 3-hlorperoksibenzojeve kiseline (68,5 g, 306 mmol) u porcijama. Reakcija je ostavljena da se polako zagreje na sobnu temperaturu tokom 6 h, i u tom periodu se čvrsta m-hlorbenzojeva kiselina taloži iz rastvora. Rastvor je ohlađen na -78 °C tokom 15 min i čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Filtrat je kondenzovan, dajući žutu čvrstu supstancu. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (20-100% etil acetat u heksanu). Frakcije pika su kombinovane i uparene, dajući 6-hidroksi-2H-piran-3(6H)-on (15,8 g, 138 mmol, prinos 67,9%) kao bledožuto ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.94 - 7.01 (m, 1H), 6.18 (d, J=10.93 Hz, 1H), 5.61 - 5.68 (m, 1H), 4.56 (s, 1H), 4.17 (s, 1H), 3.61 (br. s., 1H). B. 6-(terc-butildimetilsililoksi)-2H-piran-3(6H)-on. 6-hidroksi-2H-piran-3(6H)-on (9 g, 79 mmol) rastvoren je u DCM-u (250 ml), stavljen u atmosferu azota i ohlađen na -78 °C. Nakon toga, 2,6-lutidin (13,78 ml, 118 mmol) dodat je u jednoj porciji, nakon čega je usledilo sporo dodavanje t-butil dimetilsilil trifluormetansulfonata (21,74 ml, 95 mmol). Reakcija je ostavljena da se polako zagreje na 0 °C tokom 4 h. Reakcija je prekinuta dodatkom ~20 ml vode. Rastvor je postao bledožut nakon deaktivacije. Nakon prebacivanja u levak za razdvajanje, organska faza je redom isprana 10% limunskom kiselinom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je zatim osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i kondenzovan, dajući žuto ulje. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (0-20% etil acetat u heksanu), dajući 6-(tercbutildimetilsililoksi)-2H-piran-3(6H)-on (9,90 g, 43,4 mmol, prinos 55,0%) kao žuto ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.87 (dd, J=10.54, 3.12 Hz, 1H), 6.08 (d, J=10.15 Hz, 1H), 5.53 (d, J=3.12 Hz, 1H), 4.51 (d, J=16.79 Hz, 1H), 4.08 (d, J=16.79 Hz, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.17 (s, 6H).
C. 6-(terc-butildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-ol. U ohlađeni rastvor (-20 °C) 6-(terc-butildimetilsililoksi)-2H-piran-3(6H)-ona (9,9 g, 43,4 mmol) i cerijum(III) hlorid heptahidrata (16,15 g, 43,4 mmol) u metanolu (173 ml) u porcijama je dodat natrijum borhidrid (1,640 g, 43,4 mmol). Uočen je intenzivni nastanak mehurića prilikom dodavanja. Nakon što je smeša mešana tokom 30 min na -20 °C, reakcija je prekinuta acetonom (~20 ml) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Većina isparljivih rastvarača je zatim uparena. Dodat je zasićeni vodeni rastvor soli i suspenzija je prebačena u levak za razdvajanje. Smeša je tri puta ekstrahovana pomoću DCM-a (nastaje gusta emulzija). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i kondenzovani, dajući sirovi 6-(terc-butildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-ol (5,6 g, 24,31 mmol, prinos 56,1%) kao mrko ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.95 (dd, J=10.15, 2.34
2
Hz, 1H), 5.75 (d, J=10.15 Hz, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.15 (d, J=9.37 Hz, 1H), 3.72 - 3.82 (m, 2H), 1.74 (d, J=8.98 Hz, 1H), 0.86 - 0.95 (m, 9H), 0.13 (s, 6H).
D. 6-(terc-butildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetat. U rastvor 6-(tercbutildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-ola (13,3 g, 57,7 mmol) i TEA (16,09 ml, 115 mmol) u DCM-u (200 ml) dodat je anhidrid sirćetne kiseline (27,2 ml, 289 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je metanol (~3 ml) i smeša je mešana tokom 30 min na sobnoj temperaturi pre dodavanja vode i prebacivanja u levak za razdvajanje. Organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i kondenzovan. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (0-50% etil acetat u heksanu), dajući 6-(terc-butildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetat (13,6 g, 49,9 mmol, prinos 86%) kao bledožuto ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.84 - 5.88 (m, 2H), 5.26 - 5.28 (m, 1H), 5.20 - 5.25 (m, 1H), 3.84 (dd, J=6.25, 1.95 Hz, 2H), 2.08 (s, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.13 (d, J=1.17 Hz, 6H).
E. 3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetat. 6-(terc-butildimetilsililoksi)-3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetat (13,6 g, 49,9 mmol) rastvoren je u DCM-u (250 ml), stavljen u atmosferu azota, i ohlađen na -30 °C (suvi led/aceton, do dostizanja temperature). Zatim je trietilsilan (15,95 ml, 100 mmol) polako dodat putem šprica, nakon čega je sledilo ukapavanje bor trifluorid eterata (7,59 ml, 59,9 mmol). Reakcija je držana u atmosferi azota i ostavljena da se polako zagreje. Nakon 1 h, reakciona smeša je deaktivirana dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata. Nakon prebacivanja u levak za razdvajanje, organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i kondenzovan. Sirova supstanca je prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (0-80% etil acetat u heksanu). Uparavanje čistih frakcija je dalo 3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetat (5,5 g, 38,7 mmol, prinos 77%) kao bezbojno ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.09 (dtt, J=5.73, 2.21, 2.21, 1.17, 1.17 Hz, 1H), 4.19 - 4.28 (m, 1H), 4.04 - 4.15 (m, 1H), 3.89 - 3.98 (m, 1H), 3.76 - 3.84 (m, 1H), 2.10 (s, 3H).
F. 3,6-dihidro-2H-piran-3-ol. U rastvor 3,6-dihidro-2H-piran-3-il acetata (5,5 g, 38,7 mmol) u metanolu (130 ml) dodato je 10 kapi 25% natrijum metoksida u metanolu. Rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, TLC (10% etil acetat u heksanu; bojenje permanganatom) pokazuje odnos polazne supstance i proizvoda ~1:1. Dodato je još 10 kapi 25% natrijum metoksida u metanolu. Nakon 30 min, TLC pokazuje odnos proizvoda i polazne supstance ~3:1. Dodato je još 10 kapi 25% natrijum metoksida u metanolu. Nakon još 30 min, TLC je pokazao potpunu konverziju u proizvod. Dodat je Amberlist 15 i mešanje je nastavljeno još 15 minuta pre filtracije. Uparavanje rastvarača je dalo 3,6-dihidro-2H-piran-3-ol (3,8 g, 38,0 mmol, prinos 98%) kao bezbojno ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.90 - 6.02 (m, 2H), 4.19 (dt, J=2.83, 1.51 Hz, 1H), 4.15 (dt, J=2.83, 1.51 Hz, 1H), 4.09 (q, J=1.95 Hz, 1H), 4.05 (q, J=1.95 Hz, 1H), 3.96 - 4.00 (m, 1H), 1.92 (br. s., 1H).
G. 2H-piran-3(6H)-on. 3,6-dihidro-2H-piran-3-ol (2,44 g, 24,37 mmol) rastvoren je u DCM-u (100 ml) i ohlađen na 0 °C pa je polako dodat Des-Martinov perjodinan (10,34 g, 24,37 mmol). Reakcija je ostavljena da se polako zagreje na sobnu temperaturu tokom 5 h. Reakcija je zatim filtrirana kroz celit. Nakon koncentrovanja filtrata, sirova supstanca je prečišćena na koloni 100G SNAP Biotage (0-80% etil acetat u heksanu), dajući 2H-piran-3(6H)-on (2,33 g, 23,75 mmol, prinos 97%) kao bezbojno ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.07 - 7.17 (m, 1H), 6.15 - 6.25 (m, 1H), 4.39 (t, J=2.54 Hz, 2H), 4.19 (s, 2H).
H. Benzil 5-oksotetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat. 2H-piran-3(6H)-on (2,33 g, 23,75 mmol), benzil karbamat (4,31 g, 28,5 mmol) i DCM (2,375 ml) dodati su u malu bočicu i žustro mešani. U gusti sirup je dodat bizmut(III) nitrat pentahidrat (1,728 g, 3,56 mmol). Bočica je zatvorena i reakcija je žustro mešana preko noći. Reakcija je razblažena DCM-om i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je kondenzovan i prečišćen na koloni 100G SNAP Biotage (10-100% etil acetat u heksanu), dajući benzil 5-oksotetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat (4,35 g, 17,45 mmol, prinos 73,5%) kao bledožuto ulje;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.28 - 7.41 (m, 5H), 5.20 - 5.28 (m, 1H), 5.05 - 5.15 (m, 2H), 4.24 - 4.35 (m, 1H), 4.01 - 4.06 (m, 1H), 3.89 - 3.95 (m, 1H), 3.80 - 3.87 (m, 1H), 2.73 (d, J=5.47 Hz, 1H), 2.64 - 2.71 (m, 1H).
I. Benzil 5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat. Benzil 5-oksotetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat (4,35 g, 17,45 mmol) i cerijum(III) hlorid heptahidrat (6,50 g, 17,45 mmol) rastvoreni su u metanolu (100 ml) pre hlađenja na 0 °C. Zatim je polako dodat natrijum borhidrid (0,660 g, 17,45 mmol). Uočen je intenzivan nastanak mehurića. Reakcija je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 30 min pa je prekinuta dodatkom acetona (~3 ml) i mešana na sobnoj temperaturi još 30 min. Reakcija je zatim uparena do suva. Supstanca je razdeljena između DCM-a i vode i vodeni sloj je ispran DCM-om (5x). Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i kondenzovani, dajući nečisti benzil 5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat (2,5 g, 9,95 mmol, prinos 57,0%) kao belu čvrstu supstancu;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.28 - 7.39 (m, 5H), 5.90 - 6.06 (m, 1H), 5.10 (d, J=4.29 Hz, 2H), 3.59 - 3.97 (m, 6H), 1.77 - 2.06 (m, 3H); MS (ESI) m/z 252.1 [M+1]<+>.
J. 5-aminotetrahidro-2H-piran-3-ol. Benzil 5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilkarbamat (2,5 g, 9,95 mmol) rastvoren je u DCM-u (20 ml) i metanolu (20,00 ml) pre dodavanja
4
katalizatora (10% paladijum na ugljeniku) i zatvaranja t-ventilom. Balon je ispražnjen i ispran vodonikom (3x), uz održavanje atmosfere vodonika pomoću balona. Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon što je supstanca u potpunosti konvertovana u proizvod (utvrđeno pomoću LCMS), reakcija je filtrirana kroz sloj celita, uz temeljno ispiranje DCM-om i metanolom. Filtrat je kondenzovan, dajući sirovi 5-aminotetrahidro-2H-piran-3-ol (1,13 g, 9,65 mmol, prinos 97%) kao mrku gumu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.28 - 4.66 (m, 2H), 3.66 (ddd, J=10.93, 3.90, 1.56 Hz, 2H), 3.44 - 3.55 (m, 1H), 2.89 - 3.01 (m, 2H), 2.81 (s, 1H), 2.01 - 2.13 (m, 1H), 1.22 (d, J=12.10 Hz, 1H).
K. Etil 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
(1r,4r)-4-metoksicikloheksanamin (4,39 g, 34,0 mmol), etil 2-hlor-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (3,95 g, 16,98 mmol), DIEA (5,93 ml, 34,0 mmol) i 1,4-dioksan (100 ml) kombinovani su i zagrevani na 80 °C preko noći. Reakcija je sklonjena od izvora toplote i kondenzovana. Sirova supstanca je prečišćena na sistemu Biotage (20-80% etil acetat u heksanu), dajući etil 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (3,1 g, 9,53 mmol, prinos 56%) kao bledožutu čvrstu supstancu;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 8.60 (s, 0.35H), 8.54 (s, 0.65H), 8.05 (d, J=7.4 Hz, 0.64H), 7.87 (d, J=8.2 Hz, 0.36H), 4.22 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.69 - 3.90 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.00 - 3.20 (m, 1H), 2.40 (s, 2H), 2.38 (s, 1H), 1.79 - 2.12 (m, 4H), 1.09 - 1.44 ppm (m, 7H); MS (ESI) m/z 326.3 [M+1]<+>.
L. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. Etil 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (3,1 g, 9,53 mmol) rastvoren je u etanolu (60 ml) pa je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (2 M, 23,81 ml, 47,62 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, LCMS uglavnom pokazuje masu željenog proizvoda. Reakciona smeša je neutralisana dodatkom zasićenog vodenog rastvora limunske kiseline. Dobijeni talog je filtriran i osušen, dajući 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (2,76 g, 9,28 mmol, prinos 97%) kao belu čvrstu supstancu;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 12.59 (s, 1H), 8.57 (s, 0.38H), 8.50 (s, 0.62H), 7.94 (d, J=7.4 Hz, 0.62H), 7.77 (d, J=7.8 Hz, 0.38H), 3.70 - 3.90 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.02 - 3.18 (m, 1H), 2.37 (s, 2H), 1.36 (s., 1H), 1.83 - 2.09 (m, 4H), 1.11 - 1.46 ppm (m, 4H); MS (ESI) m/z 298.2 [M+1]<+>
M. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (2,66 g, 8,94 mmol) i HATU (5,10 g, 13,42 mmol) rastvoreni su u DMF-u (35 ml) i ostavljeni da se mešaju 5 minuta na sobnoj temperaturi, pa je dodat amonijum hlorid (2,392 g, 44,7 mmol) i DIEA (7,81 ml, 44,7 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min. LCMS pokazuje da je masa željenog proizvoda dominantna, i reakcija je razdeljena između vode i etil acetata. Organski sloj je jednom ispran zasićenim vodenim rastvorom soli pa je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i kondenzovan. Nakon sušenja, 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio) pirimidin-5-karboksamid (2,54 g, 8,57 mmol, prinos 96%) dobijen je kao bela čvrsta supstanca;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 8.41 (s, 1H), 7.63 (d, J=7.0 Hz, 0.76H), 7.45 (d, J=7.0 Hz, 0.24H), 7.08 (br. s., 1H), 3.66 - 3.85 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.11 (br. s., 1H), 2.32 (s, 3H), 1.81 -2.11 (m, 4H), 1.10 - 1.44 ppm (m, 4H); MS (ESI) m/z 283.2 [M+1]<+>
N. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karboksamid.
2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (3 g, 10,12 mmol) rastvoren je u NMP-u (30 ml). Zatim je mCPBA (2,268 g, 10,12 mmol) u porcijama dodat na 0 °C i reakcija je mešana uz sporo podizanje temperature reakcije na sobnu temperaturu. Nakon 30 min, reakciona smeša je razblažena vodom (200 ml), mešana tokom 10 min i dobijena čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, dajući 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid kao providni, bledožuti rastvor u NMP-u (~25 ml). Ovaj sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 313.3 [M+1]<+>.
O. 4-((3S,5R)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3R,5S)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3S,5S)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((3R,5R)-5-hidroksitetrahidro-2H-piran-3-ilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karboksamid (3,1 g, 9,92 mmol) u NMP-u (25 ml) dodat je sirovi 5-aminotetrahidro-2H-piran-3-ol (1,15 g, 9,82 mmol) kao rastvor u NMP-u (20 ml). U suspenziju je dodat DIEA (8,57 ml, 49,1 mmol) i reakcija je zagrevana na 100 °C preko noći. Veći deo NMP je uklonjen uparavanjem na 70 °C, ostatak je razblažen DCM-om i prečišćen na koloni 340G SNAP Biotage (0-15% metanola u DCM-u za 2000 ml). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2,8 g (78%) supstance koja je bila ~85% čista. Supstanca je rastvorena u DCM-u i ponovo prečišćena na koloni 340G SNAP Biotage (2-15% amonijakom zasićeni metanol u dihlormetanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući smešu četiri proizvoda (dva dijastereomera i njima odgovarajući enantiomeri; 1,95 g), >99% čista. Sirova supstanca je prečišćena pomoću hiralne SFC koristeći kolonu AD-H, dajući 4 jedinjenja obeležena kao PIK 1 do PIK 4, gde je PIK 1 prvo eluirajuće jedinjenje, a PIK 4 je jedinjenje koje se poslednje eluira.
[0203] PIK 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.41 (s, 1H), 4.38 (br. s., 1H), 3.53 - 3.79 (m, 4H), 3.24 (s, 3H), 2.87 - 2.98 (m, 3H), 1.89 - 2.07 (m, 4H), 1.65 - 1.78 (m, 1H), 1.19 - 1.43 (m, 4H); MS (ESI) m/z 366.3 [M+1]<+>.
[0204] PIK 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.86 - 9.01 (m, 1H), 8.35 (br. s., 1H), 6.91 - 7.18 (m, 1H), 4.91 - 4.99 (m, 1H), 3.49 - 4.13 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.85 - 3.15 (m, 3H), 1.79 -2.28 (m, 5H), 1.08 - 1.41 (m, 5H), 1.04 (d, J=6.25 Hz, 1H); MS (ESI) m/z 366.3 [M+1]<+>.
[0205] PIK 3:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.86 - 9.02 (m, 1H), 8.32 - 8.40 (m, 1H), 6.88 - 7.20 (m, 1H), 4.91 - 5.00 (m, 1H), 3.49 - 4.15 (m, 5H), 3.22 (s, 3H), 2.79 - 3.14 (m, 3H), 1.82 (s, 5H), 1.12 (t, J=7.22 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 366.3 [M+1]<+>.
[0206] PIK 4:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.99 - 9.24 (m, 1H), 8.36 (br. s., 1H), 6.79 - 7.20 (m, 2H), 4.72 - 4.94 (m, 1H), 4.17 - 4.46 (m, 1H), 3.43 - 3.77 (m, 4H), 3.23 (s, 4H), 3.03 -3.13 (m, 1H), 2.73 (s, 1H), 1.98 (br. s., 6H), 1.03 - 1.35 (m, 5H); MS (ESI) m/z 366.3 [M+1]<+>.
Primer 8: 4-(3-hidroksi-3-metilbutilamino)-2-((lr,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0207]
1. A. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karboksamid.
U bezbojni rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (0,200 g, 0,675 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (2 ml) uz mešanje je u porcijama dodat mCPBA (0,151 g, 0,675 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h do završetka reakcije, kao što pokazuje LCMS. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan, dajući 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (0,211 g, prinos 100%) kao belu lepljivu čvrstu supstancu koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 313.1 [M+1]<+>.
2. B. 4-(3-hidroksi-3-metilbutilamino)-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (0,211 g, 0,675 mmol) i DIEA (0,236 ml, 1,351 mmol) u NMP-u (2 ml) dodat je 4-amino-2-metilbutan-2-ol (0,105 g, 1,013 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h na 70 °C. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0% - 15% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 4-(3-hidroksi-3-metilbutilamino)-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid (0,143 g, prinos 60,2%, 95,8% čist) kao bledožutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.81 - 9.03 (m, 1H), 8.32 (s, 1H), 6.75 - 7.06 (m, 2H), 4.28 (s, 1H), 3.63 - 3.77 (m, 1H), 3.39 - 3.52 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.02 - 3.11 (m, 1H), 1.81 - 2.06 (m, 4H), 1.57 -1.67 (m, 2H), 1.21 - 1.34 (m, 2H), 1.16 (br. s., 1H), 1.13 (s, 8H). MS (ESI) m/z 352.4 [M+1]<+>.
Primer 9: 4-((1R,2S)-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,2R)-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0208]
1. A. Etil 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
U rastvor etil 4-hlor-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilata (5,00 g, 21,49 mmol) i cis-(2-aminociklopentil)-metanola (2,60 g, 22,56 mmol) u etanolu (85 ml) uz mešanje je dodat DIEA (5,61 ml, 32,2 mmol) i zagrevan je na 60 °C tokom 2,5 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakcija je sklonjena od izvora toplote i koncentrovana, zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-80% etil acetat/heksan). Frakcije željenog proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući etil 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (6,4 g, prinos 96%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 312.4 [M+1]<+>.
2. B. 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilna kiselina. U rastvor etil 4-(cis-2-(hidroksilmetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (6,4 g, 20,55 mmol) u etanolu (100 ml) uz mešanje je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M, 51,4 ml, 51,4 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je koncentrovana, razblažena vodom (100 ml), zatim neutralisana uz mešanje sa vodenim rastvorom limunske kiseline (2 M, 51,4 ml, 103 mmol). Dobijeni talog je filtriran, ispran vodom (2 × 50 ml) i osušen, dajući 4-(cis-2-(hidroksimetil)-ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (5,6 g, prinos 96%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm δ 13.17 (br. s., 1H), 8.71 (d, J = 7.42 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 4.49 - 4.60 (m, 2H), 3.40 - 3.46 (m, 1H), 3.32 - 3.39 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.22 (sxt, J = 6.87 Hz, 1H), 1.95 - 2.04 (m, 1H), 1.78 (qd, J = 4.49, 8.00 Hz, 1H), 1.66 - 1.72 (m, 1H), 1.49 - 1.61 (m, 2H). MS (ESI) m/z 284.3 [M+1]<+>.
C. 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamid.
Bela suspenzija 4-(cis-2-(hidroksimetil)-ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilne kiseline (5,6 g, 19,76 mmol) i HATU (11,27 g, 29,60 mmol) rastvorena je u DMF-u (79 ml) i mešana tokom 5 min na sobnoj temperaturi, pa je dodat amonijum hlorid (5,29 g, 99 mmol) i DIEA (17,26 ml, 99 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i zatim razblažena vodom (200 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (2 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani. Rezidualni DMF je uklonjen suspendovanjem bele suspenzije u 200 ml vode i 200 ml heksana. Dvofazna smeša je žustro mešana tokom 30 min, filtrirana i isprana heksanom, dajući 4-(cis-2-(hidroksilmetil)ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (4,50 g, prinos 81%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 283.4 [M+1]<+>.
D. 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 4-(cis-2-(hidroksimetil)-ciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (3,5 g, 12,40 mmol) u DCM-u (62 ml) i acetonu (62 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (5,56 g, 24,79 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Sirova reakciona smeša je deaktivirana dodatkom 75 ml 10% vodenog rastvora natrijum tiosulfata, mešana tokom 5 min, pre uparavanja većine isparljivih rastvarača. Supstanca je razdeljena između etil acetata (200 ml) i vode (200 ml) i kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i zatim zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani vodeni slojevi su zatim isprani etil acetatom (3x), organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i kondenzovani. Nakon sušenja pod visokim vakuumom, 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (1,2 g, 3,82 mmol, prinos 30,8%) dobijen je kao bela čvrsta supstanca. MS (ESI) m/z 315.2 [M+1]<+>.
E. 4-((1R,2S)-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,2R)-2-(hidroksimetil)-ciklopentilamino)-2-((lr,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 4-(cis-2-(hidroksimetil)ciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (1,2 g, 3,82 mmol) i (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamin hidrohlorida (1,90 g, 11,46 mmol) u dioksanu (40 ml) uz mešanje je dodat DIEA (4 ml, 22,92 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na 100 °C tokom 48 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana, i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0% - 15% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u). Frakcije proizvoda su bile nečiste i željeni proizvod je istaložen i filtriran iz kombinovanih frakcija koristeći DCM, metanol i vodu, što daje naslovno jedinjenje kao smešu dva enantiomera (0,420 g, prinos 30,3%) kao belu čvrstu supstancu. Sirova supstanca je prečišćena pomoću hiralne SFC koristeći kolonu AD-H, dajući 2 jedinjenja obeležena kao PIK 1 i PIK 2, gde je PIK 1 prvo eluirajuće jedinjenje, a PIK 2 je jedinjenje koje se drugo eluira.
[0209] PIK 1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.04 - 9.21 (m, 1H), 8.31 - 8.39 (m, 1H), 6.87 - 7.12 (m, 2H), 4.33 - 4.46 (m, 2H), 3.57 - 3.80 (m, 1H), 3.35 - 3.44 (m, 1H), 3.25 - 3.31 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.08 (t, J = 8.20 Hz, 1H), 2.09 - 2.23 (m, 1H), 2.00 (d, J = 11.71 Hz, 2H), 1.80 - 1.94 (m, 3H), 1.63 - 1.78 (m, 2H), 1.50 - 1.61 (m, 2H), 1.44 (br. s., 1H), 1.09 - 1.33 (m, 5H); MS (ESI) m/z 364.5 [M+1]<+>.
[0210] PIK 2.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.03 - 9.18 (m, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 6.87 - 7.11 (m, 2H), 4.32 - 4.48 (m, 2H), 3.58 - 3.77 (m, 1H), 3.35 - 3.45 (m, 1H), 3.28 (dd, J = 7.03, 10.15 Hz, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.03 - 3.13 (m, 1H), 2.09 - 2.25 (m, 1H), 2.00 (d, J = 8.59 Hz, 2H), 1.81 - 1.95 (m, 3H), 1.63 - 1.77 (m, 2H), 1.51 - 1.60 (m, 2H), 1.37 - 1.47 (m, 1H), 1.09 - 1.33 (m, 5H); MS (ESI) m/z 364.5 [M+1]<+>.
Primer 10: 4-((1R,3R)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid [0211]
1. A. (1S,3R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanol. U suspenziju (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (5 g, 43,4 mmol; pripremljena kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)) i natrijum bikarbonata (12,03 g, 143 mmol) u etanolu (100 ml) dodat je (hlormetil)benzen (15,01 ml, 130 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 75 °C preko noći. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je zatim rastvoren u DCM-u (250 ml) i ispran vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 N, 2 × 100 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (1× 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela (0% - 80% etil acetat u heksanu), dajući (1S,3R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanol (11,70 g, 91%) kao gusto žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.37 (m, 8H), 7.17 - 7.22 (m, 2H), 4.56 (d, J = 4.30 Hz, 1H), 3.57 (s, 4H), 3.16 - 3.26 (m, 1H), 2.41 (tt, J = 3.17, 11.86 Hz, 1H), 1.99 - 2.06 (m, 1H), 1.72 (d, J = 8.20 Hz, 2H), 1.63 - 1.69 (m, 1H), 1.18 - 1.28 (m, 2H), 0.98 (t, 2H); MS (ESI) m/z 296.4 [M+1]<+>.
B. (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanon. Oksalil hlorid (2,70 ml, 30,9 mmol) rastvoren je u suvom DCM-u (150 ml) i ohlađen na -78 °C. DMSO (4,78 ml, 67,3 mmol) u suvom DCM-u (20 ml) ukapavanjem je dodat u reakcionu smešu i reakcija je mešana tokom 15 min na -78 °C. Zatim je (1S,3R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanol (8,287 g, 28,1 mmol) u suvom DCM-u (100 ml) dodat ukapavanjem koristeći levak za ukapavanje i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 15 min. Zatim je dodat TEA (19,55 ml, 140 mmol) i reakcija je mešana na -78 °C tokom 1 h. Kupatilo sa suvim ledom je uklonjeno i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana preko noći. Reakciona smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml), organski sloj je odvojen, osušen iznad magnezijum sulfata i koncentrovan. Nakon sporog dodavanja dietil etra u ostatak, nečistoće su istaložene i odvojene filtracijom. Dodavanje dietil etra u filtrat je dalo (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanon (6,05 g, 74%) kao belu čvrstu supstancu koja je sakupljena filtracijom i osušena.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.39 (m, 8H), 7.17 - 7.25 (m, 2H), 3.56 - 3.70 (m, 4H), 2.71 - 2.81 (m, 1H), 2.60 - 2.69 (m, 1H), 2.25 - 2.42 (m, 2H), 2.04 - 2.11 (m, 1H), 1.88 - 1.99 (m, 2H), 1.69 - 1.82 (m, 1H), 1.18 -1.33 (m, 1H); MS (ESI) m/z 294.4 [M+1]<+>.
C. (3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol. U providni bezbojni rastvor (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanona (5,697 g, 19,42 mmol) u suvom dietil etru (300 ml) sporim ukapavanjem je dodat rastvor 3 M metilmagnezijum bromida (8,09 ml, 24,27 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 15 min i ledeno kupatilo je zatim uklonjeno. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, zamućeni rastvor je polako sipan u zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (250 ml). Sloj etra je odvojen i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan etrom (250 ml). Kombinovani slojevi etra su osušeni iznad magnezijum sulfata, koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela (0% - 80% etil acetat u heksanu), dajući
1
dva dijastereomerna izomera (3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanola (izomer 1 i izomer 2). Izomer 1 (2,704 g, 45%) dobijen je kao bela čvrsta supstanca, a izomer 2 (1,866 g, 31%) kao bezbojno ulje koje i dalje sadrži malu količinu nečistoća. Izomer 2 je u sledećem koraku korišćen bez daljeg prečišćavanja.
Izomer 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.25 - 7.36 (m, 8H), 7.15 - 7.21 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.55 (s, 4H), 2.86 (tt, J = 3.37, 12.06 Hz, 1H), 1.70 - 1.81 (m, 2H), 1.38 - 1.49 (m, 3H), 1.32 (t, J = 12.30 Hz, 1H), 1.15 - 1.27 (m, 2H), 1.12 (s, 3H); MS (ESI) m/z 310.4 [M+1]<+>.
Izomer 2: MS (ESI) m/z 310.4 [M+1]<+>.
D. (3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol. Rastvor izomera 1 (2,704 g, 8,74 mmol) u etanolu (50 ml) tretiran je paladijum hidroksidom na ugljeniku i mešan u balonu koji je napunjen vodonikom preko noći. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan, dajući jedan dijastereomerni izomer (3R)-3-amino-1-metilcikloheksanola (izomer 3, 0,856 g, 76%) kao gusto žuto ulje.
Izomer 3:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.91 (br. s., 1H), 2.73 - 2.84 (m, 1H), 1.61 - 1.72 (m, 2H), 1.54 (tt, J = 3.66, 13.13 Hz, 1H), 1.34 - 1.47 (m, 2H), 1.01 - 1.13 (m, 4H), 0.86 - 0.93 (m, 1H), 0.74 - 0.85 (m, 1H); MS (ESI) m/z 130.2 [M+1]<+>.
Ista procedura koja je prethodno opisana koristeći izomer 2 (1,823 g, 5,89 mmol) u etanolu (25 ml) korišćena je za dobijanje drugog dijastereomernog izomera (3R)-3-amino-1-metilcikloheksanola (izomer 4, 0,162 g, 21%) koji sadrži malu količinu nečistoća. Izomer 4 je u sledećem koraku korišćen bez daljeg prečišćavanja.
E. 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karboksamid.
U bezbojni rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (0,250 g, 0,843 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (2 ml) uz mešanje je u porcijama dodat mCPBA (0,189 g, 0,843 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h do završetka reakcije, kao što pokazuje LCMS. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i filtrirana. Filtrat je koncentrovan, dajući 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (0,263 g, prinos 100%) kao belu lepljivu čvrstu supstancu koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 313.1 [M+1]<+>.
F. 4-((1R,3R)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (0,263 g, 0,842 mmol) i DIEA (0,294 ml, 1,684
2
mmol) u NMP-u (3 ml) dodat je izomer 3 (0,163 g, 1,263 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h na 70 °C. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0% - 20% amonijakom zasićeni metanol u DCM-u). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući jedan dijastereomerni izomer 4-((1R)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida (izomer 5, 0,265 g, prinos 83%) kao belu čvrstu supstancu. Izomer 5:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.79 (d, J = 7.42 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 6.76 - 7.05 (m, 2H), 4.12 - 4.32 (m, 1H), 4.07 (s, 1H), 3.57 - 3.82 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.04 - 3.16 (m, 1H), 1.81 - 2.05 (m, 6H), 1.60 - 1.74 (m, 2H), 1.42 - 1.54 (m, 2H), 1.15 - 1.35 (m, 6H), 1.12 (s, 4H); MS (ESI) m/z 378.5 [M+1]<+>.
[0212] Ista procedura koja je prethodno opisana koristeći izomer 4 (0,163 g, 1,263 mmol), 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (0,263 g, 0,842 mmol) i DIEA (0,294 ml, 1,684 mmol) u NMP-u (3 ml) korišćena je za dobijanje drugog dijastereomernog izomera 4-((1R)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida (izomer 6, 0,043 g, prinos 14%) kao belu čvrstu supstancu. Izomer 6:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.99 (d, J = 4.69 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 6.69 - 7.08 (m, 2H), 4.45 (s, 1H), 3.95 - 4.13 (m, 1H), 3.59 - 3.71 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.04 - 3.16 (m, 1H), 1.86 - 2.05 (m, 5H), 1.62 - 1.83 (m, 2H), 1.43 - 1.57 (m, 1H), 1.23 - 1.40 (m, 5H), 1.09 - 1.21 (m, 7H); MS (ESI) m/z 378.5 [M+1]<+>.
[0213] Stereohemija pojedinačnih izomera može da se odredi nakon ponavljanja sinteze koristeći (1S,3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol (pripremljen kao što je ovde opisano), dajući izomer 6, naime 4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Tako, izomer 5 je 4-((1R,3R)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
Primer 11: 2-((1r,4R)-4-acetamidocikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0214]
1. A. Terc-butil (1r,4r)-4-acetamidocikloheksilkarbamat. U rastvor terc-butil (1r,4r)-4-aminocikloheksilkarbamata (1,0 g, 4,67 mmol) u etil acetatu (30 ml) uz mešanje je u jednoj porciji dodat anhidrid sirćetne kiseline (0,485 ml, 5,13 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša preko noći na sobnoj temperaturi. U smešu je dodato još anhidrida sirćetne kiseline (0,162 ml, 1,71 mmol) i smeša je mešana još sat vremena na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim razblažena sa još 50 ml etil acetata i isprana je sa po 50 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida. Vodeni slojevi su kombinovani i ekstrahovani sa 50 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući terc-butil (1r,4r)-4-acetamidocikloheksilkarbamat (1,04 g, 4,06 mmol, prinos 87%) kao čvrstu supstancu koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.66 - 7.74 (m, 1H), 6.67 - 6.77 (m, 1H), 3.40 (d, J=7.42 Hz, 1H), 3.11 - 3.22 (m, 1H), 1.65 - 1.82 (m, 7H), 1.37 (s, 9H), 1.16 (d, J=8.20 Hz, 4H). MS (ESI) m/z 201.2 [M-tBu]<+>.
B. N-((1r,4r)-4-aminocikloheksil)acetamid 2,2,2-trifluoracetat. U rastvor terc-butil (1r,4r)-4-acetamidocikloheksilkarbamata (1,04 g, 4,06 mmol) u DCM-u (25 ml) uz mešanje je u jednoj porciji dodat TFA (25 ml). Dobijena smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 90 min. Reakciona smeša je koncentrovana do suva. Dobijeno ulje je triturirano dietil etrom, dajući čvrste supstance koje su filtrirane, isprane sa još dietil etra i zatim osušene pod vakuumom, dajući N-((1r,4r)-4-aminocikloheksil)acetamid 2,2,2-trifluoracetat (1,07 g, 3,96 mmol, prinos 98%), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.82 (br. s., 3H), 3.42 (ddd, J=15.42, 7.61, 3.90 Hz, 1H), 2.89 - 3.04 (m, 1H), 1.87 - 1.95 (m, 2H), 1.78 -1.85 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.29 - 1.42 (m, 2H), 1.11 - 1.25 (m, 2H). MS (ESI) m/z 157.0 [M+1]<+>.
C. 2-((1r,4R)-4-acetamidocikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (190 mg, 0,604 mmol; sinteza opisana ovde) i N-((1r,4r)-4-aminocikloheksil)-acetamid 2,2,2-trifluoracetata (245 mg, 0,907 mmol) u DMSO-u (3 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,317 ml, 1,813 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-15% metanol u DCM-u). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-((1r,4R)-4-acetamidocikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksi-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (102 mg, 0,261 mmol, prinos 43,2%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.29 (s, 1H), 7.69 (d, J=7.81 Hz, 1H), 4.60 (br. s., 1H), 3.36 - 3.62 (m, 2H), 2.00 - 2.17 (m, 1H), 1.60 - 1.97 (m, 10H), 0.93 - 1.35 (m, 10H). MS (ESI) m/z 391.2 [M+1]<+>.
4
Primer 12A: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid [0215]
1. A. Terc-butil 3-oksocikloheptilkarbamat. U smešu ciklohept-2-enona (26,96 g, 245,0 mmol) i terc-butil karbamata (28,7 g, 245 mmol) u DCM-u (245 ml) uz mešanje je dodat bizmut nitrat pentahidrat (22,79 g, 47,0 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je reakcija razblažena etil acetatom (500 ml) i vodom (300 ml) i dvofazna smeša je filtrirana kroz sloj celita. Sloj celita je dobro ispran etil acetatom i vodom, i slojevi filtrata su odvojeni. Organski sloj je koncentrovan do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-40% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane, dajući naslovno jedinjenje (31,09 g, 137 mmol, prinos 55,9%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.92 (d, J=7.03 Hz, 1 H), 3.60 (d, J=8.59 Hz, 1 H), 2.55 - 2.69 (m, 1 H), 2.26 - 2.45 (m, 2 H), 1.69 - 1.93 (m, 3 H), 1.44 -1.61 (m, 2 H), 1.37 (d, J=5.08 Hz, 11 H). MS (ESI) m/z 228.5 [M+H]<+>.
2. B. Terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheptilkarbamat, terc-butil (1R,3R)-3-hidroksicikloheptilkarbamat, terc-butil (1S,3S)-3-hidroksicikloheptilkarbamat, tercbutil (1S,3R)-3-hidroksicikloheptilkarbamat. U rastvor terc-butil 3-oksocikloheptilkarbamata (31,09 g, 137 mmol) u metanolu (454 ml) uz mešanje je u porcijama dodat natrijum borhidrid (15,52 g, 410 mmol) tokom ~ 10 minuta. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je razblažen vodom (200 ml). Metanol je uklonjen pod vakuumom i dobijena vodena smeša je dalje razblažena sa 500 ml etil acetata i 100 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa 2 × 1000 ml etil acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-50% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane, dajući terc-butil 3-hidroksicikloheptilkarbamat (21,1 g, 92 mmol, prinos 67,3%). MS (ESI) m/z 230,3 [M+H]<+>. Prethodne dve reakcije su ponovljene polazeći od 9,52 g ciklohept-2-enona i dale su 9,27 g terc-butil 3-hidroksicikloheptilkarbamata. Dve šarže terc-butil 3-hidroksicikloheptilkarbamata su zatim kombinovane. 29,2 g kombinovane supstance je razdvojeno na 4 sastavna stereoizomera (dva dijastereomera i njima odgovarajući enantiomeri) pomoću preparativne hiralne SFC koristeći više injektovanja u nizu od 3 zasebne kolone. Prva kolona: ChiralPak IC-H, 250×30 mm I.D., izokratski 15% etanol u CO2, 38 °C. Druga kolona: ChiralCel OJ-H, 250×30 mm I.D., izokratski 10% izopropanol u CO2, 38 °C. Treća kolona: ChiralPak AD-H, 250×50 mm I.D., izokratski 20% izopropanol u CO2, 38 °C. Razdvojeni izomeri su okarakterisani na analitičkoj koloni Phenomenex Lux Amylose-2, 250×4,6 mm I.D., izokratski 15% etanol u CO2(vreme ciklusa 10 min) i obeleženi kao intermedijer 1 do intermedijera 4.
Intermedijer 1: 5,4 g (23,55 mmol, prinos 18,5% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 4,065 minuta.
Intermedijer 2: 5,5 g (23,98 mmol, prinos 18,8% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 3,019 minuta.
Intermedijer 3: 7,2 g (31,34 mmol, prinos 24,6% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 3,675 minuta.
Intermedijer 4: 4,7 g (20,50 mmol, prinos 16,1% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 3,263 minuta.
C. (1S,3R)-3-aminocikloheptanol, (1R,3R)-3-aminocikloheptanol, (1S,3S)-3-aminocikloheptanol, (1R,3S)-3-aminocikloheptanol. 75 mg (0,327 mmol) svake supstance koja odgovara intermedijeru 1 do intermedijera 4 iz koraka B je posebno rastvoreno u DCM-u (11,25 ml) i TFA (3,75 ml). Svaka reakcija je ostavljena da se meša preko noći na ambijentalnoj temperaturi. Rastvarač iz svake reakcije je uklonjen pod vakuumom i svaki je zatim rastvoren u smeši 4 N hlorovodonične kiseline u dioksanu (5 ml) i metanolu (5 ml). Svaka reakcija je mešana preko noći na ambijentalnoj temperaturi. Svaka od 4 reakcione smeše (svaka sadrži pojedinačni izomer 3-aminocikloheptanola) koncentrovana je pod sniženim pritiskom i korišćena bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 130,2 [M+H]<+>za svaku. Nomenklatura intermedijera 1 do intermedijera 4 je zadržana u svrhe praćenja.
4. D. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U svaki od koncentrata (intermedijer 1 do intermedijera 4) iz koraka C dodat je 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (53,7 mg, .1635 mmol), NMP (2 ml) i DIEA (0,286 ml, 1,635 mmol). Dobijene 4 smeše su mešane na 80 °C preko noći. Reakcioni rastvori su zasebno kondenzovani pod sniženim pritiskom i proizvodi su prečišćeni pomoću reversno fazne preparativne HPLC (5-80% acetonitrila 0,1% trifluorsirćetna kiselina u vodi 0,1% trifluorsirćetna kiselina, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostaci su zasebno ponovo rastvoreni u metanolu (5 ml), propušteni kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata), a zatim koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući naslovna jedinjenja kao pik 1 do pika 4. Zasebni izomeri (pik 1 do pika 4) okarakterisani su na analitičkoj koloni ChiralPak AD-H, 250 × 4,6 mm I.D., izokratski 40% metanol 0,1% dietilamin u CO2(vreme rada 10 minuta).
[0216] PIK 1: 10,3 mg (0,027 mmol);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.02 (d, J=6.64 Hz, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 7.04 (d, J=7.42 Hz, 1 H), 4.44 (br. s., 1 H), 4.19 (br. s., 1 H), 3.56 - 3.90 (m, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.09 (br. s., 1 H), 1.04 - 2.11 (m, 18 H). MS (ESI) m/z 378.3 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2,534 minuta.
[0217] PIK 2: 30,0 mg (0,079 mmol);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.95 (d, J=6.25 Hz, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 7.06 (d, J=7.03 Hz, 1 H), 4.46 (d, J=3.12 Hz, 1 H), 3.86 - 4.18 (m, 1 H), 3.48 - 3.81 (m, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.09 (br. s., 1 H), 1.06 - 2.16 (m, 18 H). MS (ESI) m/z 378.5 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 3,848 minuta.
[0218] PIK 3: 22,0 mg (0,058 mmol);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.02 (d, J=7.03 Hz, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 7.04 (d, J=7.03 Hz, 1 H), 4.45 (d, J=3.12 Hz, 1 H), 4.20 (br. s., 1 H), 3.56 -3.91 (m, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.09 (br. s., 1 H), 1.06 - 2.12 (m, 18 H). MS (ESI) m/z 378.5 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 4,557 minuta.
[0219] PIK 4: 22,5 mg (0,060 mmol);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.95 (d, J=6.64 Hz, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 6.47 - 7.21 (m, 1 H), 4.46 (d, J=3.12 Hz, 1 H), 3.94 (br. s., 1 H), 3.73 (br. s., 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.09 (br. s., 1 H), 1.04 - 2.18 (m, 18 H). MS (ESI) m/z 378.3 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2,607 minuta.
[0220] Na osnovu hemijskog pomaka protona na ~ 4,2 ppm kod pika 1 i pika 3 u odnosu na ~ 3,94 ppm kod pikova 2 i 4, a takođe i protona na ~ 9,02 ppm kod pika 1 i pika 3 u odnosu na ~ 8,95 ppm kod pikova 2 i 4 u prethodno datim podacima 1H NMR, izvršena je sledeća raspodela: Pik 1 i pik 3 su enantiomeri. Pik 2 i pik 4 su enantiomeri.
[0221] Alternativno je korišćen postupak hiralne sinteze, koji je opisan ispod.
Primer 12B: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0222]
A. Ciklohept-2-enol. U rastvor ciklohept-2-enona (10 g, 91 mmol) i cerijum(III) hlorida heptahidrata (33,8 g, 91 mmol) u metanolu (45,5 ml) u porcijama je dodat natrijum borhidrid (3,43 g, 91 mmol) tokom 10 minuta uz hlađenje u vodenom kupatilu. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 2,5 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodatkom vode (45 ml) i zatim je ekstrahovana pentanom (4 × 100 ml). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje (8,30 g, 74,0 mmol, prinos 82%) kao ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.49 -5.71 (m, 2 H), 4.66 (d, J=4.29 Hz, 1 H), 4.05 - 4.20 (m, 1 H), 1.07 - 2.14 (m, 8 H).
B. Ciklohept-2-enil metil karbonat. U rastvor ciklohept-2-enola (8,3 g, 74,0 mmol) u DCM-u (227 ml) i piridinu (35,9 ml, 444 mmol) dodat je metil hlorformat (14,24 ml, 185 mmol) uz hlađenje u ledenom kupatilu takvom brzinom da je T < 10 °C. Kada je dodavanje završeno, reakcija je ostavljena da se meša i zagreje na ambijentalnu temperaturu preko noći. Reakciona smeša je isprana sa 2 × 150 ml 1 N vodenog rastvora hlorovodonične kiseline. Kombinovani ispirci su ponovo ekstrahovani sa 100 ml DCM-a. Kombinovani slojevi DCM-a su zatim isprani sa 150 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje (11,95 g, 70,2 mmol, prinos 95%) kao ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.83 (dddd, J=11.81, 7.03, 5.17, 2.15 Hz, 1 H), 5.65 (d, J=11.71 Hz, 1 H), 5.17 (d, J=6.64 Hz, 1 H), 4.71 (d, J=4.30 Hz, 1 H), 3.69 (s, 2 H), 1.99 - 2.23 (m, 2 H), 1.79 - 1.94 (m, 2 H), 1.56 - 1.72 (m, 3 H), 1.34 (d, J=3.51 Hz, 1 H).
C. (R)-2-(ciklohept-2-enil)izoindolin-1,3-dion. So ftalimid kalijuma (19,59 g, 106 mmol), dimer alil paladijum hlorida (0,477 g, 1,322 mmol), (1S,2S)-(-)-1,2-diaminocikloheksane-N,N'-bis(2'-difenilfosfinobenzoil) (2,74 g, 3,97 mmol), tetraheksilamonijum bromid (50,6 g, 116 mmol) i DCM (212 ml) kombinovani su u balonu sa okruglim dnom. Balon je pročišćen azotom i zatim ubačen u kupatilo za sonifikaciju tokom 10 minuta. Zatim je ciklohept-2-enil metil karbonat (9,00 g, 52,9 mmol) dodat u balon u jednoj porciji i dobijena smeša je mešana u atmosferi azota na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Reakcija je deaktivirana dodatkom 50 ml vode i zatim je ekstrahovana sa 3 × 100 ml dietil etra. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje se polako stvrdnulo preko noći. Čvrste supstance su triturirane sa metanolom (50 ml) i filtrirane, dajući 7,6 g sirovog proizvoda. Sirovi čvrsti proizvod je prekristalisan iz metanola i osušen pod vakuumom, dajući naslovno jedinjenje (6,70 g, 27,8 mmol, prinos 52,5%) kao čvrstu supstancu za koju je utvrđeno da ima % e.e.
97,2 (S izomer je pripremljen analogno standardu koristeći (1R,2R)-(-)-1,2-diaminocikloheksan-N,N'-bis(2'-difenilfosfinobenzoil) ligand) putem analitičke hiralne SFC hromatografije (Phenomenex Lux Cellulose-4, 250 × 4,6 mm I.D., 5-50% izopropanola u CO2, gradijent 13 minuta).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.41 -8.22 (m, 4 H), 5.62 - 5.97 (m, 2 H), 4.77 (d, J=11.32 Hz, 1 H), 2.01 - 2.29 (m, 3 H), 1.87 -2.00 (m, 1 H), 1.62 - 1.78 (m, 2 H), 1.45 - 1.61 (m, 1 H), 1.17 - 1.32 (m, 1 H). MS (ESI) m/z 242.3 [M+1]<+>.
D. 2-((1R,2S,3S)-2-brom-3-hidroksicikloheptil)izoindolin-1,3-dion. U rastvor (R)-2-(ciklohept-2-enil)izoindolin-1,3-diona (4,00 g, 16,58 mmol) u hloroformu (40,0 ml) i etanolu (1,400 ml) dodat je N-bromsukcinimid (3,78 g, 21,22 mmol) kao čvrsta supstanca tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota. Zatim je dodata još jedna porcija N-bromsukcinimida (1,9 g) i 1,4 ml etanola i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota. Treća porcija N-bromsukcinimida (1,0 g) i 1,4 ml dodatnog etanola dodati su u smešu i ona je ponovo mešana na sobnoj temperaturi treću noć u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je trituriran sa 25 ml svežeg hloroforma. Čvrste supstance su filtrirane, isprane hloroformom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom do suva. THF (40 ml) i 1N hlorovodonična kiselina (vod.) (10 ml) dodati su u koncentrovani filtrat i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio THF. Koncentrat je razblažen sa 125 ml etil acetata i 75 ml smeše voda:zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata 1:1. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa 75 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući ulje koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom do naslovnog jedinjenja (3,9 g, 11,53 mmol, prinos 69,6%) kao čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.88 (d, J=7.42 Hz, 4 H), 5.48 (d, J=5.47 Hz, 1 H), 4.73 (dd, J=10.54, 6.25 Hz, 1 H), 4.24 - 4.38 (m, 1 H), 3.91 - 3.99 (m, 1 H), 2.32 (br. s., 1 H), 1.67 - 1.96 (m, 5 H), 1.40 - 1.60 (m, 2 H). MS (ESI) m/z 320.1 [M-18]<+>. COSY NMR eksperiment i podaci<1>H NMR koji su prethodno objavljeni su korišćeni da se potvrdi regiohemija bromhidrina. NOE (pomoću NOESY eksperimenta) uočen je između protona na ugljeniku amino grupe i ugljeniku hidroksilne grupe. To potvrđuje cis odnos između ove dve funkcionalne grupe (trans odnos, koji nema prostornu bliskost, ne bi pokazao takvo dejstvo).
E. 2-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptil)izoindolin-1,3-dion. U rastvor 2-((1R,2S,3S)-2-brom-3-hidroksicikloheptil)izoindolin-1,3-diona (4,2 g, 12,42 mmol) u toluenu (69 ml) i metanolu (6,9 ml) pomoću šprica je dodat tributil kalaj hidrid (4,34 ml, 16,14 mmol) tokom 10 minuta u atmosferi azota, a zatim 2,2'-azobis(2-metilpropannitril) (0,204 g, 1,242 mmol) u jednoj porciji. Reakcija je zatim zagrevana do refluksa preko noći u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom, dajući ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-50% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje (2,6 g, 10,03 mmol, prinos 81%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.72 - 7.98 (m, 4 H), 4.58 (d, J=4.29 Hz, 1 H), 4.14 (br. s., 1 H), 3.67 (dt, J=6.25, 3.90 Hz, 1 H), 2.24 - 2.40 (m, 1 H), 2.04 -2.19 (m, 1 H), 1.81 - 1.95 (m, 2 H), 1.39 - 1.80 (m, 6 H). MS (ESI) m/z 259.9 [M+H]<+>.
E. (1S,3R)-3-aminocikloheptanol. 2-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptil)-izoindolin-1,3-dion (1800 mg, 6,94 mmol) rastvoren je u metanolu (86,80 ml). U rastvor je dodat hidrazin monohidrat (0,354 ml, 7,29 mmol) i dobijena smeša je mešana preko noći uz refluks. Dodato je još 0,2 ekv. (0,067 ml) i smeša je refluktovana drugu noć. Reakciona smeša je koncentrovana do zapremine od nekoliko mililitara i filtrirana. Čvrste supstance su isprane sa po 50 ml DCM-a i hloroforma i dobijeni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje (174 mg, 1,347 mmol, prinos 19,40%) kao ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 130.2 [M+H]<+>.
F. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. (1S,3R)-3-aminocikloheptanol (87 mg, 0,672 mmol) i DIEA (0,235 ml, 1,344 mmol) dodati su u rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (105 mg, 0,336 mmol) u NMP-u (1 ml). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C tokom 4 h i zatim je ostavljena da se ohladi na ambijentalnu temperaturu preko noći. Reakciona smeša je kondenzovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen reversno faznom preparativnom HPLC (5-80% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je trituriran sa acetonitrilom i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje (67 mg, 0,177 mmol, prinos 52,8%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.96 (d, J=5.86 Hz, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 7.00 - 7.16 (m, 1 H), 4.46 (d, J=3.90 Hz, 1 H), 3.85 - 4.09 (m, 1 H), 3.56 -3.81 (m, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 2.97 - 3.15 (m, 1 H), 1.71 - 2.14 (m, 7 H), 1.51 (d, J=10.15 Hz, 11 H). MS (ESI) m/z 378.3 [M+H]<+>.
[0223] Analitička hiralna SFC koristeći kolonu ChiralPak AD-H (250 × 4,6 mm I.D., izokratski 40% metanol 0,1% dietilamin u CO2, vreme ciklusa 10 minuta) korišćena je da se utvrdi odnos između pojedinačnog izomera koji je dobijen u ovom hiralnom postupku sa onim iz prethodne pripreme za sva četiri stereoizomera. Otkriveno je da supstanca koja je pripremljena u ovom hiralnom postupku ima identično retenciono vreme (3,848 minuta) kao pik 2 u primeru 12A te stoga:
[0224] PIK 2 = 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0225] Na osnovu<1>H NMR, otkriveno je da su pik 2 i pik 4 enantiomerni par u primeru 12A, te stoga:
[0226] PIK 4 = 4-((1S,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0227] Pored toga, sledi da intermedijer 2 koji se koristi za dobijanje pika 2 u primeru 12A zatim može da se odredi kao terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheptilkarbamat, a intermedijer 4 koji se koristi za dobijanje pika 4 u primeru 12A zatim može da se odredi kao terc-butil (1S,3R)-3-hidroksicikloheptilkarbamat.
[0228] Sledeći eksperiment je obavljen kako bi se odredila apsolutna stereohemija intermedijera 1 i intermedijera 3 (a tako i apsolutna stereohemija pika 1 i pika 3) u primeru 12A.
Micunobuova reakcija terc-butil (1R,3R)-3-hidroksicikloheptil-karbamata za dobijanje terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheptil karbamata.
1
[0230] A. Terc-butil (lR,3S)-3-hidroksicikloheptil karbamat. Intermedijer 3 iz koraka B u primeru 12A rastvoren je u THF-u (31,700 ml). Smeša je ohlađena na 0 °C u ledenom kupatilu u atmosferi azota i hlorsirćetna kiselina (261 mg, 2,76 mmol) a zatim trifenilfosfin (723 mg, 2,76 mmol) dodati su u jednoj porciji. Ukapavanjem je dodat rastvor dietil azodikarboksilata (0,437 ml, 2,76 mmol), čekajući da žuta boja nestane pre dodavanja sledeće kapi. Nakon što je dodavanje završeno, rastvor je mešan na 0 °C u atmosferi azota tokom 3 h. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-40% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže čisti proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom, a zatim ponovo rastvorene u metanolu (16 ml). U rastvor je dodat natrijum karbonat (186 mg, 1,755 mmol) i dobijena smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. Ostatak je razblažen sa 50 ml smeše voda:zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata 1:1 i 75 ml DCM-a. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa 50 ml DCM-a. Kombinovani slojevi DCM-a su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući supstancu koja je imala identično retenciono vreme na osnovu analitičke SFC kao intermedijer 2 iz koraka B u primeru 12A, ili terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheptil karbamat (417 mg, 1,818 mmol, prinos 72,5%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.63 - 6.87 (m, 1 H), 4.44 (d, J=3.90 Hz, 1 H), 3.47 - 3.71 (m, 1 H), 0.99 - 1.98 (m, 19 H). MS (ESI) m/z 260.1 [M+1]<+>.
[0231] Intermedijer 3 iz koraka B u primeru 12A je stoga određen kao terc-butil (1R,3R)-3-hidroksicikloheptil karbamat. Pik 3 iz koraka D dobijen od intermedijera 3 u primeru 12A je stoga određen kao 4-((1R,3R)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
[0232] Pošto su pik 1 i pik 3 enantiomeri na osnovu 1H NMR kao što je opisano u primeru 12A, pik 1 može da se odredi kao 4-((1S,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Sledi da intermedijer 1 iz koraka B u primeru 12A koji je korišćen za pripremu pika 1 u koraku D primera 12A može da se odredi kao terc-butil (1S,3S)-3-hidroksicikloheptil karbamat.
2
Primer 13: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi) cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((ls,4S)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0233]
[0234] A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid i 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil-amino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (440 mg, 1,400 mmol; sinteza opisana ovde) i bis-4-(2,2,2-trifluoretoksi)-cikloheksanamin trihidrohlorida (529 mg, 2,099 mmol) u DMSO-u (6,964 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,978 ml, 5,60 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša preko noći na 100 °C. Sirova reakciona smeša je koncentrovana, prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanol/dihlor metan) i zatim prečišćena reversno faznom hromatografijom na koloni silika gela (metanol/voda sa 0,1% modifikatora mravlje kiseline). Frakcije koje sadrže proizvod su neutralisane i koncentrovane, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (135 mg, 0,313 mmol, prinos 22,36%) kao smešu 2 stereoizomera. MS (ESI) m/z 432,2 [M+H]<+>. Ova smeša je razdvojena koristeći hiralnu supertečnu hromatografiju (kolona AD-H) dajući 87,8 mg (0,203 mmol) jednog stereoizomera sa bržom elucijom (PIK 1) i 24,2 mg (0,056 mmol) drugog pojedinačnog stereoizomera sa sporijom elucijom (PIK 2).
[0235] Ista reakciona sekvenca je kasnije ponovljena koristeći (1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksanamin koji je pripremljen na sledeći način.
[0236] (1r,4r)-4-(benzilamino)cikloheksanol. Smeša (1r,4r)-4-aminocikloheksanola (230 g, 2 mol), benzaldehida (212 g, 2 mol) i molekulskih sita od 4Å u metanolu (2 l) refluktovana je u atmosferi azota tokom 3 h. Smeša je ohlađena koristeći kupatilo sa ledenom vodom, pa je natrijum borhidrid (72 g, 2 mol) pažljivo dodat u malim porcijama. Nakon završetka dodavanja, reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uparen i ostatak je razdeljen između dihlormetana (2 l) i vode (1 l). Sloj dihlormetana je odvojen, ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, i neposredno je korišćen u sledećem koraku.
[0237] Benzil benzil((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)karbamat. U rastvor (1r,4r)-4-(benzilamino)cikloheksanola u dihlor metanu koji je dobijen u prethodnom koraku dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (1,5 l), i u ovaj dvofazni sistem je polako dodat benzil hlorformat (358,2 g, 2,1 mol) na 0 °C. Nakon završetka dodavanja, reakcija je mešana na sobnoj temperaturi još 1 h. Organska faza je zatim odvojena i uparena. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat u heksanu), dajući naslovno jedinjenje kao bezbojnu tečnost (400 g, 1,18 mol, prinos 59% u dva koraka). Oba koraka su ponovljena, dajući ukupno 800 g benzil benzil((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)karbamata.
[0238] Benzil benzil((lr,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksil)karbamat. U rastvor benzil benzil((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)karbamata (400 g, 1,18 mol) u hloroformu (2 l) dodat je 50% vodeni rastvor fluorborne kiseline (20 ml) i mlaz diazotrifluoretana (sveže pripremljen mešanjem trifluoretanamin hidrohlorida (1,6 kg, 11,8 mol) i NaNO2(814 g, 11,8 mol) u vodi (3 l) i zatim barbotiran u prethodni reakcioni rastvor). Reakcija je praćena pomoću TLC, i nakon završetka je dodat zasićeni vodeni rastvor kalijum karbonata (300 ml). Sloj hloroforma je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% etil acetat u heksanu), dajući benzil benzil ((1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksil)karbamat (192 g, 0,456 mol, prinos 38%). Ova reakcija je ponovljena, i dobijena je još jedna šarža benzil benzil ((1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksil)karbamata (185 g, 0,439 mol).
[0239] (1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksanamin. U rastvor benzil benzil((1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksil)karbamata (377 g, 0,89 mol) u etil acetatu (2 l) dodat je 20% paladijum hidroksid na ugljeniku (50 g), i smeša je mešana u atmosferi azota pod 55 psi tokom 24 h na sobnoj temperaturi. Katalizator je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u 2N hlorovodoničnoj kiselini (1,5 l) i rastvor je ispran metil t-butil etrom (300 ml × 5). Dodat je čvrsti kalijum karbonat da bi se pH podesio na vrednost iznad 10. Proizvod je ekstrahovan dihlormetanom (500 ml × 5). Kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10-30% metanola u dihlormetanu), dajući (1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksanamin (115 g, 0,584 mol, prinos 66%):<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.01 (q, J = 8.8 Hz, 2H), 3.40-3.33 (m, 1H), 2.56 - 2.53 (m, 1H), 1.94-1.92 (m, 2H), 1.75-1.72 (m, 2H), 1.24-1.15 (m, 2H), 1.08 - 0.97 (m, 2H); MS (ESI) m/z 198.2 [M+1]+.
[0240] Koristeći prethodni intermedijer, pokazano je da supstanca koja je dobijena kao PIK 1 odgovara 4-((1R,3S)-3-hidroksicikoheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamidu, dok supstanca koja je dobijena kao PIK 2 odgovara 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamidu.
[0241] PIK 1: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ
4
ppm 8.90 (d, J=6.25 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.46 - 7.52 (m, 1H), 7.07 - 7.17 (m, 1H), 6.91 (dd, J=8.59, 2.73 Hz, 1H), 4.60 - 4.76 (m, 1H), 4.02 (q, J=9.63 Hz, 2H), 3.39 - 3.96 (m, 4H), 0.92 -2.24 (m, 16H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -76.47 - 72.01 (m, 3 F). MS (ESI) m/z 432.0 [M+H]<+>.
[0242] PIK 2: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.90 (d, J=6.64 Hz, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 6.79 - 7.50 (m, 2H), 4.64 (br. s., 1H), 4.00 - 4.12 (m, 2H), 3.42 (d, J=4.69 Hz, 4H), 0.91 - 2.25 (m, 16H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -73.63 (t, J=9.47 Hz, 3 F). MS (ESI) m/z 432.0 [M+H]<+>.
Primer 14: 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0243]
1. A. Metil 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat. U rastvor metil 2,4-dihlorpirimidin-5-karboksilata (4,00 g, 19,32 mmol) u THF-u (85 ml) uz mešanje je dodat DIEA (3,37 ml, 19,32 mmol). Dobijena smeša je ohlađena na -78 °C u kupatilu sa suvim ledom/acetonom. Rastvor (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (2,448 g, 21,25 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056(2004)) u 40 ml THF-a dodat je takvom brzinom da se održi temperatura od -78 °C. Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva i razblažena sa 200 ml etil acetata i 75 ml smeše vode i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata 1:1. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa 100 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani sa 50 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje je očvrsnulo tokom stajanja. Čvrsta supstanca je triturirana sa dietil etrom (5 ml), filtrirana, isprana dietil etrom (5 ml) i osušena pod vakuumom, dajući metil 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat (3,7 g, 12,95 mmol, prinos 67%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 286.0 [M+1]<+>.
2. B. (1r,4r)-4-(dibenzilamino)cikloheksanol. Trans-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (25 g, 217 mmol) suspendovan je u acetonitrilu (500 ml). U suspenziju su dodati benzil bromid (54,2 ml, 456 mmol) i kalijum karbonat (120 g, 868 mmol) i dobijena smeša je žustro mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i taj sloj je temeljno ispran acetonitrilom. Filtrat je kondenzovan, dajući belu čvrstu supstancu. Sirove čvrste supstance su prečišćene hromatografijom na koloni silika gela (0-60% etil acetat u heksanu). Čiste frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane, dajući (1r,4r)-4-(dibenzilamino)cikloheksanol (25 g, 85 mmol, prinos 39,0%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.36 (m, 8H), 7.16 - 7.22 (m, 2H), 4.43 (d, J=4.69 Hz, 1H), 3.55 (s, 4H), 3.27 - 3.33 (m, 1H), 2.28 - 2.40 (m, 1H), 1.69 - 1.88 (m, 4H), 1.40 (qd, J=12.56, 2.93 Hz, 2H), 0.89 - 1.05 (m, 2H); MS (ESI) m/z 296.3 [M+1]<+>.
C. (1r,4r)-N,N-dibenzil-4-(difluormetoksi)cikloheksanamin. (1r,4r)-4-(dibenzilamino)cikloheksanol (5 g, 16,93 mmol) i bakar(I) jodid (0,645 g, 3,39 mmol) rastvoreni su u 170 ml acetonitrila i zagrejani na 45 °C u atmosferi azota. U ovu smešu je dodat rastvor 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)sirćetne kiseline (3,50 ml, 33,9 mmol) u 30 ml acetonitrila tokom 10 min. Kada je dodavanje završeno, smeša je mešana na 45 °C u atmosferi azota tokom 1 h. Zatim je dodata još jedna porcija reagensa 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)sirćetne kiseline (2,86 ml, 27,7 mmol) u 30 ml acetonitrila tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana još 1 h na 45 °C u atmosferi azota. Isparljive komponente su zatim uklonjene uparavanjem i ostatak je razblažen sa 175 ml etil acetata i 75 ml smeše vode i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata 1:1. Dobijena dvofazna smeša koja sadrži čvrste supstance je filtrirana kroz sinterovani stakleni Bihnerov levak. Slojevi filtrata su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa 50 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani sa 50 ml smeše zasićenog rastvora natrijum hlorida i vode 1:1, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja. Sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane, dajući (1r,4r)-N,N-dibenzil-4-(difluormetoksi)cikloheksanamin (3,12 g, 9,03 mmol, prinos 53,4%) kao ulje koje je očvrsnulo u beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.38 (m, 8H), 7.17 - 7.23 (m, 2H), 6.66 (s, 1H), 3.97 (t, J=4.49 Hz, 1H), 3.57 (s, 4H), 2.36 - 2.47 (m, 1H), 1.98 (d, J=10.54 Hz, 2H), 1.83 (d, J=12.10 Hz, 2H), 1.49 (d, J=12.89 Hz, 2H), 1.22 (d, J=12.49 Hz, 2H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) d ppm -79.28 (d, J=73.00 Hz, 2 P). MS(ESI) m/z 346.1 [M+1]<+>.
D. (1r,4r)-4-(difluormetoksi)cikloheksanamin. (1r,4r)-N,N-dibenzil-4-(difluormetoksi)cikloheksanamin (1,6 g, 4,63 mmol) rastvoren je u etanolu (23 ml) u Parovom balonu za tresenje i dodato je 20 mas.% paladijum hidroksida na ugljeniku (0,650 g, 0,926 mmol). Balon je ispražnjen, stavljen na Parovu tresilicu i preko noći tresen u atmosferi vodonika od 50 psi. Paladijum hidroksid je uklonjen filtracijom kroz prethodno (etanolom) nakvašeni sloj celita. Filter pogača je temeljno isprana etanolom. Filtrat je koncentrovan do ulja koje je rastvoreno u 100 ml etil acetata, osušeno iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirano i koncentrovano do ulja koje je očvrsnulo, dajući (1r,4r)-4-(difluormetoksi)cikloheksanamin (0,621 g, 3,76 mmol, prinos 81%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.46 -6.93 (m, 1H), 3.96 (s, 1H), 2.52 - 2.59 (m, 1H), 1.84 - 1.95 (m, 2H), 1.68 - 1.79 (m, 2H), 1.29 - 1.43 (m, 2H), 1.01 - 1.14 (m, 2H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -78.93 (d, J=91.00 Hz, 2 F). MS(ESI) m/z 166.2 [M+1]<+>.
E. Metil 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3 hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat. U smešu metil 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilata (300 mg, 1,050 mmol) i (1r,4r)-4-(difluormetoksi)cikloheksanamina (260 mg, 1,575 mmol) u DMSO-u (5ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,550 ml, 3,15 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 1 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-60% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane, dajući metil 2-((1r,4R)-4-(difluor-metoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilat (165 mg, 0,398 mmol, prinos 37,9%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.37 - 8.49 (m, 1H), 8.06 (d, J=7.42 Hz, 1H), 7.22 - 7.55 (m, 1H), 6.49 - 6.94 (m, 1H), 4.67 - 4.76 (m, 1H), 3.75 - 4.10 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.43 - 3.69 (m, 2H), 1.63 - 2.24 (m, 8H), 1.08 - 1.54 (m, 8H). MS(ESI) m/z 415.5 [M+1]<+>.
F. 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3 hidroksicikloheksilamino) pirimidin-5-karboksilna kiselina. U rastvor metil 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksilata (170 mg, 0,410 mmol) u metanolu (10 ml) uz mešanje je u jednoj porciji dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M, 3,075 ml, 3,075 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša na 50 °C tokom 2 dana. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio metanol, razblažena sa još vode (10 ml) i polako je dodat vodeni rastvor limunske kiseline (2 M, 4,10 ml, 8,20 mmol). Dobijeni talog je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min, filtriran, i čvrste supstance su zatim temeljno isprane vodom. Čvrste supstance su osušene pod vakuumom, dajući 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (117 mg, 0,292 mmol, prinos 71,2%) kao čvrstu supstancu koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 401.5 [M+1]<+>.
G. 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5karboksilne kiseline (117 mg, 0,292 mmol) i HATU (167 mg, 0,438 mmol) u DMF-u (2 ml) uz mešanje je dodat amonijum hlorid (78 mg, 1,461 mmol) i DIEA (0,255 ml, 1,461 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana za uklanjanje isparljivih komponenata i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (10-90% etil acetat (koji sadrži 10% metanola zasićenog amonijakom) u heksanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (35,3 mg, 0,088 mmol, prinos 30,2%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.90 (d, J=6.64 Hz, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 6.50 - 7.14 (m, 2H), 4.64 (br. s., 1H), 3.42 - 4.11 (m, 4H), 0.87 - 2.23 (m, 16H).
<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -78.98 (d, J=110.82 Hz, 2 F). MS (ESI) m/z 400.5 [M+1]<+>.
Primer 15: 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0244]
1. A. Terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheksilkarbamat. U rastvor (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (1,0 g, 8,68 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) u dioksanu (8,04 ml) uz mešanje je dodat di-terc-butildikarbonat (2,369 g, 10,85 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana, dodat je natrijum hlorid (0,507 g, 8,68 mmol) i dobijeni rastvor je razblažen vodom (20 ml) i heksanom (20 ml). Suspenzija je žustro mešana tokom 20 min, zatim filtrirana i čvrste supstance su isprane heksanom i osušene pod vakuumom, dajući terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheksil karbamat (1,7836 g, 8,28 mmol, prinos 95%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.74 (d, J=8.20 Hz, 1H), 4.58 (d, J=4.29 Hz, 1H), 3.35 - 3.43 (m, 1H), 3.11 - 3.27 (m, 1H), 1.90 (d, J=11.32 Hz, 1H), 1.68 - 1.78 (m, 1H), 1.63 (d, J=3.12 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H), 0.87 - 1.23 (m, 4H); MS (ESI) m/z 216.3 [M+1]<+>.
2. B. terc-butil (lR,3S)-3-metoksicikloheksil karbamat. U rastvor terc-butil (1R,3S)-3-hidroksicikloheksil karbamata (1,78 g, 8,27 mmol) u anhidrovanom THF-u (8 ml) u porcijama je dodat natrijum hidrid (0,230 g, 9,09 mmol) u atmosferi azota na 0 °C. Smeša je zagrevana na sobnu temperaturu i mešana tokom 30 min. U smešu je ukapavanjem dodat rastvor jodmetana (0,824 ml, 13,23 mmol) u anhidrovanom THF-u (4 ml) na 0 °C i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Sirova smeša je deaktivirana vodom (50 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i zatim prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0 - 50% etil acetat u heksanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući terc-butil (1R,3S)-3-metoksicikloheksil karbamat (1,0686 g, 4,66 mmol, prinos 56,4%) kao belu čvrstu supstancu; MS (ESI) m/z 230.5 [M+1]<+>.
C. (1R,3S)-3-metoksicikloheksanamin trifluoracetat. U rastvor terc-butil (1R,3S)-3-metoksicikloheksil karbamata (1,0686 g, 4,66 mmol) u anhidrovanom DCM-u (18,64 ml) dodata je TFA (3,59 ml, 46,6 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon toga, rastvarači su uklonjeni pod vakuumom i dobijeni ostatak je trituriran etil etrom (2 × 50 ml), dajući (1R,3S)-3-metoksicikloheksanamin trifluoracetat (1,133 g, 4,66 mmol, prinos 100%) kao belu čvrstu supstancu. Sirovi proizvod je u sledećem koraku korišćen bez daljeg prečišćavanja.
D. Etil 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
U rastvor etil 4-hlor-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilata (1,084 g, 4,66 mmol) i (1R,3S)-3-metoksicikloheksanamin trifluoracetata (1,133 g, 4,66 mmol) u etanolu (18,63 ml) uz mešanje je dodat DIEA (2,434 ml, 13,97 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 60 °C tokom 17 h. Reakcija je sklonjena od izvora toplote, ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana. Sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-25% etil acetat u heksanu), dajući etil 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (1,4284 g, 4,39 mmol, prinos 94%) kao bistro ulje. MS (ESI) m/z 326.2 [M+1]<+>.
E. 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. U rastvor etil 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (1,4284 g, 4,39 mmol) u etanolu (12,54 ml) uz mešanje je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 N, 8,78 ml, 8,78 mmol) i smeša je mešana tokom 2 h. Reakcija je koncentrovana, razblažena vodom (50 ml) i zatim uz mešanje neutralisana vodenim rastvorom limunske kiseline (2 M, 5,49 ml, 10,97 mmol). Talog je filtriran, zatim je ispran vodom (2 × 50 ml) i osušen, dajući 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (1,1679 g, 3,93 mmol, prinos 89%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.22 (s, 1H), 8.65 (d, J=7.03 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 4.07 - 4.24 (m, 1H), 3.29 - 3.33 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (d, J=12.10 Hz, 1H), 1.63 - 1.88 (m, 3H), 1.21 - 1.48 (m, 4H); MS (ESI) m/z 298.1 [M+1]<+>.
F. 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (1,1662 g, 3,92 mmol) i HATU (2,237 g, 5,88 mmol) mešani su u DMF-u (7,84 ml) tokom 5 min na sobnoj temperaturi, zatim je uz mešanje dodat amonijum hlorid (1,049 g, 19,61 mmol) i DIEA (3,42 ml, 19,61 mmol). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (100 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (25 ml), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani. Rezidualni DMF je uklonjen suspendovanjem uljanog ostatka u 100 ml vode i 100 ml heksana. Dvofazna suspenzija je žustro mešana tokom 30 min, filtrirana i isprana heksanom, dajući 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (1,1081 g, 3,74 mmol, prinos 95%) kao beličastu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 397.2 [M+1]<+>.
G. 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (1,1081 g, 3,74 mmol) u DCM-u (18,69 ml) i acetonu (18,69 ml) na sobnoj temperaturi dodat je mCPBA (1,676 g, 7,48 mmol) u pet šarži tokom 2 minuta i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 16 h. U sirovu reakcionu smešu je dodat 10% vodeni rastvor natrijum tiosulfata (35 ml) i smeša je mešana 5 minuta pa su upareni isparljivi rastvarači. Supstanca je razdeljena između etil acetata i vode, i organski sloj je zatim ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, a zatim zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani vodeni slojevi su zatim isprani etil acetatom (3x), organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i kondenzovani. Nakon sušenja pod visokim vakuumom, 4-((1R,3S)-3-metoksi-cikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,9887 g, 3,01 mmol, prinos 81%) dobijen je kao bela čvrsta supstanca. MS (ESI) m/z 329.3 [M+1]<+>.
H. 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (0,3 g, 0,914 mmol) i (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamina (0,236 g, 1,827 mmol) u DMSO-u (0,914 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,637 ml, 3,65 mmol) i reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 17 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u etil acetatu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 4-((1R,3S)-3-metoksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid (0,155 g, 0,411 mmol, prinos 44,9%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.95 (d, J=7.42 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.01 - 7.17 (m, 1H), 6.76 - 6.88 (m, 1H), 3.51 - 4.07 (m, 2H), 2.97 - 3.29 (m, 8H), 1.63 - 2.42 (m, 8H), 0.98 - 1.39 (m, 9H); MS (ESI) m/z 378.4 [M+1]<+>.
Primer 16: 2-((1r,4R)-4-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0245]
1. A. (1r,4r)-4-amino-1-metilcikloheksanol hidrohlorid. Rastvor (1r,4r)-4-(dibenzilamino)-l-metilcikloheksanola (15,3 g, 49,4 mmol; pripremljen kao što je opisano u PCT Međunarodnoj publikaciji pat. prijave WO2010/027500) u metanolu (137 ml) i etil acetatu (137 ml) u Parovom sudu od 500 ml degasiran je barbotiranjem azota kroz rastvor tokom 5 min. U rastvor je dodat paladijum hidroksid na ugljeniku (6,94 g, 4,94 mmol) i posuda je stavljena na Parovu tresilicu tokom 6 dana pod vodonikom na 3 atmosfere. Sud je uklonjen sa Parove tresilice i suspenzija je zatim filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan, ostatak je rastvoren u 50 ml metanola, zakiseljen pomoću vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (6 M, 9,06 ml, 54,4 mmol) i koncentrovan, dajući (1r,4r)-4-amino-1-metilcikloheksanol hidrohlorid (8,31 g, 50,2 mmol, prinos 101%) kao beličastu čvrstu supstancu, koja je u sledećem koraku korišćena bez daljeg prečišćavanja.
2. B. Terc-butil (lr,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksilkarbamat. U rastvor (1r,4r)-4-amino-1-metilcikloheksanol hidrohlorida (8,31 g, 50,2 mmol) u vodenom rastvoru natrijum hidroksida (1 N, 100 ml, 100 mmol) uz mešanje je dodat di-terc-butil-dikarbonat (13,68 g, 62,7 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je koncentrovana i zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-100% etil acetat u heksanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane. LCMS je pokazala da ova supstanca sadrži -50% željenog proizvoda, tako da je supstanca dva puta ponovo prečišćena na silika gelu, koristeći 0-50% etil acetat u heksanu kao mobilnu fazu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući terc-butil (1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat (2,2 g, 9,59 mmol, prinos 19,13%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 230.5 [M+1]<+>.
3. C. (1r,4r)-4-amino-l-metilcikloheksanol trifluoracetat. U rastvor terc-butil (1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata (2,04 g, 8,90 mmol) u DCM-u (44 ml) uz mešanje je dodat TFA (13,71 ml, 178 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 22 h.
1
Reakcija je koncentrovana, ostatak je dva puta trituriran etil etrom, dajući (1r,4r)-4-amino-1-metilcikloheksanol trifluoracetat (2,106 g, 8,66 mmol, prinos 97%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.73 (br. s., 3H), 4.39 (br. s., 1H), 3.05 (d, J=3.51 Hz, 1H), 1.27 - 1.97 (m, 8H), 1.11 (s, 3H); MS (ESI) m/z 130.2 [M+1]<+>.
4. D. 2-((1r,4R)-4-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (0,432 g, 1,374 mmol; sinteza opisana ovde) i (1r,4r)-4-amino-1-metilciklo-heksanol trifluoracetata (0,435 g, 1,786 mmol) u dioksanu (2,75 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,718 ml, 4.12 mmol) i dobijeni rastvor je mešan na 110 °C tokom 23 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću HPLC (20-100% metanola u vodi). Frakcije proizvoda su kombinovane, koncentrovane, i ostatak je trituriran sa acetonitrilom. Dobijeni talog je sakupljen, dajući 2-((1r,4R)-4-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,0483 g, 0,133 mmol, prinos 9,67%) kao beličastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.91 (d, J=6.64 Hz, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 6.56 - 7.26 (m, 1H), 3.39 - 4.78 (m, 4H), 2.54 (s, 3H), 0.66 - 2.25 (m, 19H); MS (ESI) m/z 364.5 [M+1]<+>
Primer 17: 4-((1S,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksi-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-((1S,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid; 4-((1R,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksi-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid [0246]
1. A. 2-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)izoindolin-1,3-dion. U rastvor (1s,4s)-4-amino-1-metilcikloheksanola (10 g, 77 mmol; pripremljen kao što je opisano u PCT Međunarodnoj publikaciji pat. prijave WO2010/027500) i kalijum karbonata (18,72 g, 135 mmol) u vodi (155 ml) na 0 °C uz mešanje je dodat N-karbetoksiftalimid (18,66 g, 85 mmol) i rastvor je mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Fina suspenzija je filtrirana, ponovo suspendovana u 100 ml vode, i ponovo filtrirana, dajući 2-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)izoindolin-1,3-dion (11,413 g, 44,0 mmol, prinos 56,9%) kao beli prah.
2
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.79 - 7.88 (m, 4H), 4.11 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 2.51 - 2.56 (m, 1H), 2.44 - 2.49 (m, 1H), 1.56 - 1.70 (m, 2H), 1.33 - 1.47 (m, 4H), 1.13 (s, 3H); MS (ESI) m/z 260.5 [M+1]<+>.
B. 2-(4-metilcikloheks-3-enil)izoindolin-1,3-dion. 2-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)izoindolin-1,3-dion (4,6568 g, 17,96 mmol) i kalijum hidrogen sulfat (4,89 g, 35,9 mmol) kombinovani su i zagrevani na 140 °C tokom 20 min. Nije uočena reakcija, tako da je dodata voda (11,22 ml) i sumporna kiselina (7,66 ml, 144 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 2 h. Sirova suspenzija je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana u 200 ml izmrvljenog leda/vode, žustro mešana tokom 30 min, zatim filtrirana, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Bela čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-10% etil acetat u heksanu), a frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-(4-metilcikloheks-3-enil)izoindolin-1,3-dion (3,33 g, 13,80 mmol, prinos 77%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 242.0 [M+1]<+>.
C. 4-metilcikloheks-3-enamin. U suspenziju 2-(4-metilcikloheks-3-enil)izoindolin-1,3-diona (5,24 g, 21,72 mmol) u metanolu (163 ml) i DCM-u (54,3 ml) uz mešanje je dodat hidrazin hidrat (3,69 ml, 76 mmol) i reakcija je mešana tokom 15 h. U sirovu suspenziju je dodato 400 ml vode i smeša je mešana tokom 10 min, zatim esktrahovana pomoću DCM-a (4 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, zatim koncentrovani, dajući 4-metil-cikloheks-3-enamin (2,415 g, 21,72 mmol, prinos 100%) kao svetložuto ulje. MS (ESI) m/z 112.2 [M+1]<+>.
D. Terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamat. U rastvor 4-metilcikloheks-3-enamina (2,415 g, 21,72 mmol) i TEA (3,33 ml, 23,89 mmol) u DCM-u (43,4 ml) na 0 °C uz mešanje je dodat di-terc-butil-dikarbonat (7,11 g, 32,6 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 3 dana na sobnoj temperaturi. Sirova reakciona smeša je koncentrovana, zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-10% etil acetat u heksanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamat (1,65 g, 7,81 mmol, prinos 36,0%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.72 (d, J=7.42 Hz, 1H), 5.26 (br. s., 1H), 3.35 - 3.49 (m, 1H), 1.66 - 2.22 (m, 5H), 1.60 (s, 3H), 1.38 (s, 10H); MS (ESI) m/z 212.4 [M+1]<+>.
E. Terc-butil 3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat. U rastvor terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamata (1,5844 g, 7,50 mmol) u THF-u (94 ml) na 0 °C uz mešanje je dodat 1 M kompleks boran THF (33,7 ml, 33,7 mmol). Rastvor je mešan na 0 °C tokom 1 h, a zatim na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je polako deaktivirana vodom (40,5 ml, 2249 mmol), razblažena etanolom (39,8 ml, 682 mmol) i zalužena vodenim rastvorom natrijum hidroksida (5 N, 37,5 ml, 187 mmol). U dvofaznu smešu je uz mešanje polako dodat vodonik peroksid (38,3 ml, 375 mmol) i dobijena smeša je zagrevana na 45 °C tokom 20 h. Sirova reakcija je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum sulfita (70 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-100% etil acetat u heksanu). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući smešu četiri izomera terc-butil 3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata (trans odnos između 3-hidroksi i 4-metil ostataka) (0,9608 g, 4,19 mmol, prinos 55,9%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.60 - 6.85 (m, 1H), 4.29 - 4.58 (m, 1H), 3.35 - 3.80 (m, 1H), 2.81 - 3.28 (m, 1H), 1.20 - 1.96 (m, 14H), 0.79 - 1.14 (m, 5H); MS (ESI) m/z 230.5 [M+1]<+>.
F. 5-amino-(trans)-2-metilcikloheksanol hidrohlorid. U metanol (10,47 ml) koji je žustro mešan na 0 °C dodat je acetil hlorid (0,893 ml, 12,57 mmol). Rastvor je mešan tokom 30 min, zatim je dodat terc-butil 3-hidroksi-4-metilcikloheksil-karbamat (0,9608 g, 4,19 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom 22 h na sobnoj temperaturi. Sirova reakciona smeša je koncentrovana, i ostatak je trituriran sa etil etrom (2 × 50 ml), dajući 5-amino-(trans)-2-metilcikloheksanol hidrohlorid (0,694 g, 4,19 mmol, prinos 100%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 112.2 [M+1]<+>.
G. 2-(trans-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamida (1,24 g, 4,18 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (12,30 ml) na 0 °C u porcijama je dodat mCPBA (0,938 g, 4,18 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 1 h, pri čemu je ostavljena da polako dostigne sobnu temperaturu. Reakciona smeša je razblažena vodom (120 ml), mešana tokom 10 min i dobijene čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom na manje od 30 °C, dajući 2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (1,307 g, 4,18 mmol, prinos 100%) kao belu suspenziju u NMP-u (~10 ml). Ova sirova suspenzija je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 313.5 [M+1]<+>.
H. 4-((1S,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1S,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid, 4-((1R,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-
4
karboksamid. U sirovu reakcionu smešu (2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (1,31 g, 4,19 mmol) u NMP-u (10 ml) dodat je sirovi 5-amino-(trans)-2-metilcikloheksanol hidrohlorid (0,695 g, 4,19 mmol) kao rastvor u NMP-u (15,00 ml). U suspenziju je dodat DIEA (3,65 ml, 20,97 mmol) i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 46 h. NMP je uklonjen uparavanjem na 70 °C, ostatak je razblažen DCM-om i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-15% metanola u DCM-u). Frakcije proizvoda su kombinovane, koncentrovane, a zatim ponovo prečišćene hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u DCM-u). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući smešu četiri proizvoda (dva dijastereomera i njima odgovarajući enantiomeri (1,665 g)). NMR smeše:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.35 (d, J=5.45 Hz, 1H), 4.50 - 4.71 (m, 1H), 4.34 (br. s., 1H), 3.53 - 3.69 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.03 - 3.19 (m, 2H), 1.77 - 2.09 (m, 5H), 1.65 (br. s., 1H), 1.07 - 1.39 (m, 13H), 0.94 (d, J=6.49 Hz, 3H); MS (ESI) m/z 378.0 [M+1]<+>. Sirova supstanca je razdvojena pomoću hiralne SFC koristeći kolonu AD-H, dajući 4 jedinjenja obeležena kao PIK 1 do PIKA 4, gde je PIK 1 jedinjenje koje se prvo eluira, a PIK 4 je jedinjenje koje se poslednje eluira. Stereohemija pikova 1 do 4 je određena postupcima koji su poznati stručnjaku za oblast.
[0247] PIK 1: 4-((1S,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4S)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 0,3482 g, 0,922 mmol, prinos 22%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.88 (d, J=6.64 Hz, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 7.07 (d, J=7.03 Hz, 1H), 4.58 (d, J=5.08 Hz, 1H), 4.10 (q, J=5.08 Hz, 1H), 3.51 - 3.92 (m, 1H), 3.44 (dd, J=7.03, 5.08 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.17 (d, J=5.47 Hz, 3H), 3.09 (br. s., 1H), 2.98 (br. s., 1H), 2.55 (d, J=7.03 Hz, 1H), 1.77 - 2.23 (m, 5H), 1.66 (d, J=12.49 Hz, 1H), 1.04 - 1.35 (m, 6H), 0.94 (d, J=5.86 Hz, 3H).
[0248] PIK 2: 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 0,4146 g, 1,098 mmol, prinos 26,2%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.88 (d, J=6.25 Hz, 1H), 8.34 (br. s., 1H), 7.07 (d, J=7.03 Hz, 1H), 4.57 (br. s., 1H), 4.11 (br. s., 1H), 3.50 - 3.67 (m, 1H), 3.23 (s, 2H), 3.17 (br. s., 2H), 3.03 -3.13 (m, 1H), 2.94 - 3.02 (m, 1H), 2.89 (q, J=7.16 Hz, 4H), 1.60 - 2.22 (m, 4H), 0.87 - 1.37 (m, 13H).
[0249] PIK 3: 4-((1S,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 0,3145 g, 0,833 mmol, prinos 19,9%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.25 (d, J=7.42 Hz, 1H), 8.35 (br. s., 1H), 7.05 (d, J=6.64 Hz, 1H), 6.76 - 6.92 (m, 1H), 4.53 (d, J=3.90 Hz, 1H), 4.32 (br. s., 1H), 4.03 - 4.17 (m, 1H), 3.52 3.84 (m, 1H), 3.40 - 3.50 (m, 1H), 3.13 - 3.26 (m, 4H), 3.00 - 3.12 (m, 1H), 1.77 - 2.12 (m, 5H), 1.10 - 1.69 (m, 9H), 0.94 (d, J=6.64 Hz, 3H).
[0250] PIK 4: 4-((1R,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 0,4715 g, 1,249 mmol, prinos 29,8%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.46 - 9.75 (m, 1H), 8.35 (s, 1H), 4.57 (br. s., 1H), 4.35 (br. s., 1H), 3.60 - 3.79 (m, 1H), 3.23 (s, 4H), 3.00 - 3.15 (m, 1H), 2.87 - 2.99 (m, 1H), 1.75 - 2.06 (m, 5H), 1.06 - 1.73 (m, 11H), 0.94 (d, J=6.25 Hz, 3H).
Primer 18: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0251]
1. A. 2-cikloheks-2-enil-izoindol-1,3-dion. U rastvor 3-brom-cikcloheksena (500 g, 3,12 mmol) u DMF-u (2000 ml) dodat je kalijum ftalimid (580 g, 3,12 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (1000 ml), ekstrahovana pomoću etil acetata (3 puta), i kombinovani organski slojevi su koncentrovani, dajući 2-cikloheks-2-enilizoindol-1,3-dion (520 g, 2,30 mol) kao sivu čvrstu supstancu.
2. B. 2-(2-brom-3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-dion. 2-cikloheks-2-enil-izoindol-1,3-dion (520 g, 2,30 mol) i N-bromsukcinimid (416 g, 2,35 mol) pomešani su u korastvaraču sačinjenom od hloroforma (3000 ml) i etanola (120 ml) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Kada je HPLC pokazala da je polazna supstanca potrošena, reakciona smeša je koncentrovana, dajući ostatak koji je razblažen rastvorom hlorovodonika (450 ml, 2,0 mol) i THF-om (2000 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je ispran etanolom (2 puta), dajući 2-(2-brom-3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-dion (400 g, 1,23 mol) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 7.87 (m, 4H), 4.70 (m, 1H), 4.33 (m, 1H),3.70 (m, 1H), 2.15 (m, 2H),1.88 (m, 2H), 1.53 (m, 2H).
3. C. 2-(3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-dion. Tri-n-butil kalaj hidrid (430 g, 1,48 mol) uz mešanje je dodat u rastvor 2-(2-brom-3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-diona (400 g, 1,23 mol) i 2,2'-azobis(2-metilpropionitrila) (20 g) u toluenu (4000 ml) i metanolu (400 ml) i reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 64 h. Reakciona smeša je koncentrovana, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je ispran petrol etrom i etil acetatom (1:1), dajući 2-(3-hidroksicikloheksil)-izoindol-1,3-dion (240 g, 0,98 mol) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 7.82 (m, 4H), 4.16 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 2.13 (m, 2H), 1.98 (d, 2H), 1.89 (m, 1H),1.68 (t, 1H), 1.46 (m, 1H),1.31(m, 1H).
D. (1S,3R)-2-(3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-dion i (1R,3S) sirćetna kiselina 3-(1,3-diokso-1,3-dihidro-izoindol-2-il)-cikloheksil estar. Rastvor 2-(3-hidroksicikloheksil)-izoindol-1,3-diona (240 g, 0,98 mol) i lipaze B (87 g) u THF-u (3000 ml) mešan je na sobnoj temperaturi u atmosferi azota tokom 1~2 h. U rastvor je zatim dodat vinil estar sirćetne kiseline (252 g, 2,88 mol) i reakciona smeša je mešana na rt tokom 3-5 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gelu (elucija sa petrol etrom/etil acetatom =10:1), dajući (1S,3R)-2-(3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-dion (Rf=0,6, petrol etar/etil acetat = 3/1, 90 g, 0,37 mol, prinos: 39%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 7.82 (m, 4H), 4.16 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 2.13 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.46 (m, 1H), 1.31(m, 1H).
(1R,3S)sirćetna kiselina 3-(1,3-diokso-1,3-dihidro-izoindol-2-il)-cikloheksil estar (Rf=0,2, petrol etar/etil acetat = 3/1, 110 g, 0,38 mol, prinos: 39%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 7,83 (m, 4H), 4,78 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 2,33 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 2,07 (m, 5H), 1,95 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 1,46 (m, 1H).
E. (1S,3R)-3-amino-cikloheksanol. U rastvor (1S,3R)-2-(3-hidroksi-cikloheksil)-izoindol-1,3-diona (90 g, 0,37 mol) u etanolu (1500 ml) dodat je hidrazin (90 g, 1,8 mol), i reakcioni rastvor je mešan na 100 °C tokom 3 h. Reakcioni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan, dajući (1S,3R)-3-amino-cikloheksanol (25 g, 0,21 mmol) kao žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ ppm 3.54 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.92 (m, 1H), 1.89 (m, 2H), 1.32 (m, 1H), 1.06 (m, 2H).
F. Etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilat.
U rastvor etil 4-hlor-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksilata (4,38 g, 18,82 mmol) i (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (2,276 g, 19,76 mmol) u etanolu (75 ml) uz mešanje je dodat DIEA (4,93 ml, 28,2 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 60 °C tokom 2 h, sklonjena je od izvora toplote i koncentrovana, zatim prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (20-100% etil acetat/heksan). Frakcije željenog proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (5 g, 16,06 mmol, prinos 85%) kao belu penu. MS (ESI) m/z 312.1 [M+1]<+>.
G. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. U rastvor etil 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil-amino)-2-(metiltio)pirimidin-5karboksilata (5 g, 16,06 mmol) u etanolu (50 ml) uz mešanje je dodat 2 M natrijum hidroksid (20 ml, 40,0 mmol). Mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je neutralisana dodatkom zasićenog rastvora limunske kiseline. Dobijeni talog je filtriran i osušen, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (4,5 g, 15,88 mmol, prinos 99%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.21 (br. s., 1 H), 8.44 - 8.54 (m, 2 H), 4.74 (d, J=3.90 Hz, 1 H), 3.97 - 4.12 (m, 1 H), 3.56 (d, J=3.12 Hz, 1 H), 2.46 (s, 3 H), 2.05 - 2.16 (m, 1 H), 1.84 (d, J=10.15 Hz, 1 H), 1.65 - 1.80 (m, 2 H), 1.11 - 1.36 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 284.1 [M+1]<+>.
H. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (4,5 g, 15,88 mmol) i HATU (9,06 g, 23,82 mmol) rastvoreni su u DMF-u (75 ml) i ostavljeni da se mešaju tokom 5 min na sobnoj temperaturi pre dodavanja amonijum hlorida (4,25 g, 79 mmol) i DIEA (13,87 ml, 79 mmol). Reakcija je požutela nakon dodatka baze. Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim je razdeljena između vode i etil acetata. Organski sloj je jednom ispran zasićenim vodenim rastvorom soli pa je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (4,19 g, 14,84 mmol, prinos 93%) kao beličastu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 283.2 [M+1]<+>.
.4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamid.
U suspenziju 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (302 mg, 1,070 mmol) u DCM-u (10 ml) i acetonu (10 ml) uz mešanje je dodata 3-hloroperoksibenzojeva kiselina (479 mg, 2,139 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Sirova reakciona smeša je deaktivirana dodatkom 10 ml 10% rastvora natrijum tiosulfata, mešana tokom 5 minuta, zatim razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je ispran zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani pomoću etil acetata (3x50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (259 mg, 0,824 mmol, prinos 77%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 315.2 [M+1]<+>.
J. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (0,178 g, 0,566 mmol) i (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamina (0,146 g, 1,132 mmol) u DMSO-u (1,132 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,395 ml, 2,265 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 17 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-15% metanol/etil acetat). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid (0,08 g, 0,220 mmol, prinos 38,9%) kao svetlomrku čvrstu supstancu.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 8.29 (s, 1H), 3.99-4.04 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.50 - 3.63 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.24 (m, 1H), 3.23 (m, 1H), 1.92-2.12 (m, 6H), 1.83-1.87 (m, 1H), 1.19-1.41(m, 8H). MS (ESI) m/z 364.6 [M+1]<+>.
Primer 19: 4-((lR,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((lr,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0252]
[0253] A. 4-hlor-2-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril. (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamin (6,37 g, 49,3 mmol), 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitril (6 g, 34,5 mmol) i DIEA (9,03 ml, 51,7 mmol) pomešani su u THF-u (180 ml) na -10 °C (ledeno kupatilo sa solju) i mešani na istoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je još mešana preko noći dok je temperatura polako rasla do sobne temperature. Analiza reakcione smeše pomoću LC/MS je pokazala nastanak proizvoda u odnosu oko 3:7. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli i osušeni iznad magnezijum sulfata. Agens za sušenje je uklonjen filtracijom i rastvor je koncentrovan. Dobijena sirova smeša je prečišćena fleš hromatografijom (0-20% etil acetat u heksanu), dajući 4-hlor-2-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (5,79 g, 21,71 mmol, prinos 62,9%;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz): δ ppm 8.74 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 8.60 - 8.72 (m, 1 H), 3.58 - 3.80 (m, 1 H), 3.18 (d, J=2.0 Hz, 3 H), 2.97 - 3.12 (m, 1 H), 1.96 (d, J=10.9 Hz, 2 H), 1.83 (d, J=10.5 Hz, 2 H), 1.21 - 1.39 (m, 2 H), 1.06 - 1.22 (m, 2 H); MS (ES) m/z 267.2 [M+1]<+>) kao belu čvrstu supstancu i 2-hlor-4-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (2,5 g, 9,37 mmol, prinos 27,2%;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz): δ ppm 8.50 (s, 1 H), 8.31 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 3.90 (dtd, J=11.6, 7.6, 4.1 Hz, 1 H), 3.19 (s, 3 H), 2.98 - 3.10 (m, 1 H), 1.98 (d, J=10.5 Hz, 2 H), 1.77 (d, J=11.3 Hz, 2 H), 1.36 - 1.54 (m, 2 H), 1.05 - 1.22 (m, 2 H). MS (ES) m/z 267.1 [M+1]<+>) kao belu čvrstu supstancu.
[0254] Regiohemija razdvojenih izomera potvrđena je u sledećim eksperimentima: 4-hlor-2-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (50 mg, 0,187 mmol), diacetoksipaladijum (42,1 mg, 0,187 mmol) i amonijum format (59,1 mg, 0,937 mmol) u metanolu (1 ml) mešani su na 70 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana je kroz sloj celita. Dobijeni rastvor je koncentrovan i podvrgnut fleš hromatografiji (0-15% metanola u DCM-u), dajući 2-((1R,4R)-4-metoksicikloheksil-amino)pirimidin-5-karbonitril kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz; izmereno na sobnoj temperaturi): δ ppm 8.66 (d, J=2.7 Hz, 1 H), 8.59 (d, J=3.1 Hz, 1 H), 8.22 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 3.62 - 3.77 (m, 1 H), 3.18 (s, 3 H), 2.99 - 3.12 (m, 1 H), 1.90 - 2.02 (m, 2 H), 1.84 (d, J=10.5 Hz, 2 H), 1.21 - 1.37 (m, 2 H), 1.06 - 1.21 (m, 2 H).
[0255]<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz; izmereno na 80 °C): δ ppm 8.57 (br. s., 1 H), 7.91 (d, J=7.0 Hz, 1 H), 3.68 - 3.85 (m, 1 H), 3.05 - 3.16 (m, 1 H), 3.02 (s, 3 H), 1.92 - 2.05 (m, 2H), 1.87 (d, J=10.2 Hz, 2 H), 1.26 - 1.41 (m, 2 H), 1.11 - 1.26 (m, 2 H).
[0256] Isti postupak koji je prethodno opisan je primenjen na 2-hlor-4-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril, dajući 4-((1R,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz; izmereno na sobnoj temperaturi): δ ppm 8.56 (d, J= 15.2 Hz, 1 H), 7.74 - 7.91 (m, 1 H), 3.86 - 4.11 (m, 2 H), 3.19 (s, 3 H), 3.12 (d, J=5.1 Hz, 1 H), 1.92 - 2.04 (m, 2 H), 1.78 (d, J=10.5 Hz, 2H), 1.35 - 1.52 (m, 2 H), 1.05 - 1.18 (m, 2 H).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz; izmereno na 80 °C): δ ppm 8.53 (d, J=28.1 Hz, 1 H), 7.47 (br. s., 1 H), 3.93 - 4.08 (m, 1 H), 3.16 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 1.91 - 2.07 (m, 2 H), 1.84 (d, J=10.5 Hz, 2 H), 1.37 - 1.54 (m, 2 H), 1.10 - 1.21 (m, 2 H).
[0257] B. (1S,3R)-3-aminocikloheptanol hidrohlorid. U metanol (60 ml) koji je žustro mešan na 0 °C dodat je acetil hlorid (5,11 ml, 72,0 mmol) i dobijena smeša je ostavljena da se meša tokom 30 min. Dodat je terc-butil (1R,3S)-3-hidroksi-cikloheptil karbamat (5500 mg, 23,98 mmol; sinteza opisana ovde) i dobijena smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do ulja koje je triturirano sa etil etrom (100 ml) preko noći. Čvrste supstance su filtrirane, isprane dietil etrom, i osušene pod sniženim pritiskom tokom nekoliko sati, dajući (1S,3R)-3-aminocikloheptanol hidrohlorid (3780 mg, 22,82 mmol, prinos 95%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.85 (br. s., 3 H), 4.69 (d, J=7.42 Hz, 1 H), 3.64 (t, J=8.79 Hz, 1 H), 3.07 - 3.21 (m, 1 H), 2.05 (d, J=12.89 Hz, 1 H), 1.69 - 1.94 (m, 2 H), 1.28 - 1.68 (m, 7 H). MS (ESI) m/z 130.1 [M+1]<+>.
[0258] C. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (200 mg, 0,750 mmol) i (1S,3R)-3-aminocikloheptanol hidrohlorida (186 mg, 1,125 mmol) u DMF-u (4 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,458 ml, 2,62 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 4 h i zatim je ostavljena
1
da se ohladi na ambijentalnu temperaturu preko noći. DMF je uklonjen pod sniženim pritiskom i preostali ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (0-50% etil acetat 10% 7 N amonijak u metanolu u heksanu), dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (210 mg, 0,584 mmol, prinos 78%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.07 - 8.23 (m, 1 H), 7.06 - 7.61 (m, 2 H), 4.49 - 4.63 (m, 1 H), 4.00 - 4.27 (m, 1 H), 3.55 - 3.82 (m, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.00 - 3.16 (m, 1 H), 1.07 - 2.08 (m, 18 H). MS (ESI) m/z 360.5 [M+1]<+>.
Primer 20: 2-((lr,4R)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0259]
1. A. (1r, 4r)-4-(tritilamino)cikloheksanol. U ohlađeni (0 °C) rastvor (1r, 4r)-4-aminocikloheksanola (10 g, 87 mmol) u DCM-u (250 ml) i TEA (11,2 g, 112 mmol) dodat je tritil hlorid (24,2 g, 87 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat radi deaktivacije reakcije, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata. Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtracija i koncentrovanje pod vakuumom dali su sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (50% etil acetat u DCM-u), dajući naslovno jedinjenje (24,8 g, 70 mmol, prinos 80%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 243,2 [M - 4-aminocikloheksanol]<+>.
2. B. (1r,4r)-4-etoksi-N-tritilcikloheksanamin. U ohlađeni (0 °C) rastvor (1r,4r)-4-(tritilamino)cikloheksanola (15,0 g, 42 mmol) u DMF-u (100 ml) dodat je natrijum hidrid (3,4 g, 84 mmol, 60% u mineralnom ulju) i etil jodid (7,2 g, 46 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota. Zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida je dodat za deaktivaciju reakcije i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata. Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtracija i koncentrovanje pod vakuumom dali su sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (11,9 g, 31 mmol, prinos 79%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.56-7.54 (m, 6H), 7.27-7.20 (m, 6H), 7.18-7.14 (m, 3H), 3.42-3.38 (q, 2H), 3.09 - 3.04 (m, 1H), 2.25-2.21 (m, 1H), 1.80-
1 1
1.78 (m, 2H), 1.38 (s, 1H), 1.27-1.25 (m, 2H), 1.10 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01-0.88 (m, 4H); MS (ESI) m/z 243.2 [M - 4-etoksicikloheksanamin]<+>.
C. (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamin. U ohlađeni (0 °C) rastvor (1r, 4r)-4-etoksi-N-tritilcikloheksanamina (13,1 g, 34 mmol) u DCM-u (10 ml) dodata je trifluorsirćetna kiselina (18 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je bila tamnocrvena. Dodavan je trietilsilan (5 ml) dok dobijena smeša nije obezbojena. Reakcija je mešana na 0 °C još 15 minuta. Nakon uklanjanja isparljivih supstanci pod vakuumom, ostatak je dalje osušen pod visokim vakuumom tokom 2 h, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Sirovi proizvod je rastvoren u etil acetatu i vodenom rastvoru hlorovodonika (150 ml, 0,25 mol/l). Organski sloj je uklonjen i vodeni sloj je dva puta ispran etil acetatom. Koncentrovanje vodenog sloja pod visokim vakuumom dalo je sirovu hidrohloridnu so željenog amina (6,1 g, 34 mmol, prinos 100%) kao belu čvrstu supstancu, koja je korišćene u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 144.0 [M+H]<+>.
D. 4-hlor-2-((lr,4r)-4-etoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U ohlađeni (-60 °C) rastvor (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamina (6,82 g, 37,9 mmol) i 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitrila (6 g, 34,5 mmol) u THF-u (115 ml) ukapavanjem je dodat DIEA (15,02 ml, 86 mmol). Dobijena smeša je mešana na -60 °C tokom 1 h i zatim je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (14% etil acetat u petrol etru). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-hlor-4-((1r,4r)-4-etoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril (3,33 g, 11,86 mmol, prinos 34,4%) i 4-hlor-2-((1r,4r)-4-etoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (5,5 g, 19,59 mmol, prinos 56,8%;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.62 - 8.87 (m, 2 H), 3.61 - 3.86 (m, 1 H), 3.44 (dd, J=7.03, 2.34 Hz, 2 H), 3.12 - 3.26 (m, 1 H), 1.75 - 2.15 (m, 4 H), 1.13 -1.44 (m, 4 H), 1.08 (td, J=6.93, 1.76 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 281.1 [M+1]<+>) kao bele čvrste supstance. Regiohemija dva glavna izomera potvrđena je poređenjem sa protonskim spektrom 4-hlor-2-((1r,4r)-4-metoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (sinteza opisana ovde).
E. (1S,3R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanol. U suspenziju (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (5 g, 43,4 mmol; pripremljena kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056) i natrijum bikarbonata (12,03 g, 143 mmol) u etanolu (100 ml) dodat je (hlormetil)benzen (15,01 ml, 130 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 75 °C preko noći. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je zatim rastvoren u DCM-u (250 ml) i ispran vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 N, 2 ×
1 2
100 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (2× 100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, koncentrovani i prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela (0%-80% etil acetat u heksanu), dajući (1S,3R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanol (11,70 g, 91%) kao gusto žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.37 (m, 8H), 7.17 - 7.22 (m, 2H), 4.56 (d, J = 4.30 Hz, 1H), 3.57 (s, 4H), 3.16 - 3.26 (m, 1H), 2.41 (tt, J = 3.17, 11.86 Hz, 1H), 1.99 - 2.06 (m, 1H), 1.72 (d, J = 8.20 Hz, 2H), 1.63 - 1.69 (m, 1H), 1.18 - 1.28 (m, 2H), 0.98 (t, 2H); MS (ESI) m/z 296.4 [M+1]<+>.
F. (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanon. Oksalil hlorid (3,81 ml, 43,6 mmol) rastvoren je u suvom DCM-u (150 ml) i ohlađen na -78 °C. DMSO (6,75 ml, 95,0 mmol) u suvom DCM-u (20 ml) ukapavanjem je dodat u reakcionu smešu i reakcija je mešana tokom 15 minuta na -78 °C. Zatim je ukapavanjem dodat (1S,3R)-3-(dibenzilamino)-cikloheksanol (11,7 g, 39,6 mmol) u suvom DCM-u (100 ml) koristeći levak za ukapavanje i reakcija je mešana na -78 °C tokom 15 minuta. Zatim je dodat TEA (27,6 ml, 198 mmol) i reakcija je mešana na -78 °C tokom 1 h. Kupatilo sa suvim ledom je uklonjeno i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana je preko noći. Reakciona smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (5 × 500 ml), organski sloj je odvojen, osušen iznad magnezijum sulfata i koncentrovan, dajući (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanon (10,2 g, 88%) kao mrku čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 -7.39 (m, 8H), 7.17 - 7.25 (m, 2H), 3.56 - 3.70 (m, 4H), 2.71 - 2.81 (m, 1H), 2.60 - 2.69 (m, 1H), 2.25 - 2.42 (m, 2H), 2.04 - 2.11 (m, 1H), 1.88 - 1.99 (m, 2H), 1.69 - 1.82 (m, 1H), 1.18 - 1.33 (m, 1H); MS (ESI) m/z 294.4 [M+1]<+>.
G. (3R,SR)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amin i (3S,SR)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amin. U žuti rastvor (R)-3-(dibenzilamino)cikloheksanona (10,2 g, 34,8 mmol) i trimetilsulfonijum jodida (14,90 g, 73,0 mmol) u suvom DMSO-u (260 ml) u porcijama je dodat natrijum terc-butoksid (6,68 g, 69,5 mmol) na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakcija je deaktivirana sa 1 l vode i ekstrahovana pomoću etil acetata (2 × 800 ml). Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, koncentrovana i osušena, dajući smešu (3R,SR)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amina i (3S,SR)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amina (10,6 g, 99%) kao žutu čvrstu supstancu. Smeša je u datom stanju korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 308.4 [M+1]<+>.
H. (1R,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol i (1S,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol. U smešu čvrstog litijum aluminijum hidrida (95% LAH, 3,47 g, 87
1
mmol) u THF-u (230 ml) veoma polako je dodat bistri bledožuti rastvor prethodno opisane smeše (3R,5R)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amina i (3S,SR)-N,N-dibenzil-1-oksaspiro[2.5]oktan-5-amina (10,69 g, 34,8 mmol) u THF-u (230 ml) na 0 °C u atmosferi azota. Reakciona smeša je dovedena do sobne temperature, a zatim je zagrevana na 65 °C preko noći u atmosferi azota. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je preneta u balon sa okruglim dnom i zatim razblažena THF-om (100 ml), ohlađena na 0 °C i uz mešanje je ukapavanjem dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum sulfata sve dok reakcija nije prestala da proizvodi mehuriće. Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, a zatim je filtrirana kroz celit u grubom poroznom levku u balon sa okruglim dnom. Filter pogača je temeljno isprana THF-om i bezbojni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova smeša je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0%-60% etil acetat u heksanu), dajući brže eluirajući izomer (1R,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol (5,5 g, 50%;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.25 - 7.36 (m, 8H), 7.15 - 7.21 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.55 (s, 4H), 2.86 (tt, J = 3.37, 12.06 Hz, 1H), 1.70 - 1.81 (m, 2H), 1.38 - 1.49 (m, 3H), 1.32 (t, J = 12.30 Hz, 1H), 1.15 - 1.27 (m, 2H), 1.12 (s, 3H); MS (ESI) m/z 310.4 [M+1]<+>) kao belu čvrstu supstancu, a zatim sporije eluirajući izomer (1S,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol (5.1 g, 47%;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 - 7.36 (m, 8H), 7.16 - 7.23 (m, 2H), 4.38 (s, 1H), 3.49 - 3.63 (m, 4H), 2.46 (d, J = 8.98 Hz, 1H), 1.67 - 1.80 (m, 2H), 1.59 (d, J = 9.76 Hz, 1H), 1.33 - 1.47 (m, 2H), 1.17 - 1.30 (m, 2H), 0.98 - 1.13 (m, 1H), 0.89 (s, 3H); MS (ESI) m/z 310.4 [M+1]<+>) kao gusto žuto ulje. COSY NMR eksperiment i prethodno objavljeni<1>H NMR podaci su korišćeni da se potvrdi regiohemija amino alkohola. Za sporije eluirajući izomer, NOE (pomoću NOESY eksperimenta) uočen je između protona na cikloheksil ugljeniku amino grupe i ugljeniku metil grupe. To potvrđuje cis odnos između ove dve funkcionalne grupe (trans odnos, koji nema prostornu bliskost, ne bi pokazao takvo dejstvo), što pak potvrđuje da je ovaj izomer (1S,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanol.
I. (1S,3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol. Rastvor (1S,3R)-3-(dibenzilamino)-1-metilcikloheksanola (5,0 g, 16,16 mmol) u etanolu (150 ml) tretiran je paladijum hidroksidom na ugljeniku i mešan u balonu koji je napunjen vodonikom preko noći. Nakon što je reakcija završena prema LCMS, reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan, dajući (1R,3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol (1,3 g, 62%) kao gusto žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.87 (br. s., 1H), 1.64 - 1.74 (m, 1H), 1.47 - 1.59 (m, 2H), 1.21 - 1.40 (m, 4H), 1.11 - 1.20 (m, 1H), 1.02 (s, 3H); MS (ESI) m/z 130.2 [M+1]<+>.
1 4
10. J. 2-((1r,4R)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. 4-hlor-2-((1r,4r)-4-etoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (350 mg, 1,247 mmol), (1S,3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol (242 mg, 1,870 mmol), i DIEA (0,327 ml, 1,870 mmol) rastvoreni su u DMF-u (3,5 ml) u bočici sa zatvaračem koji se zavrće. Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 4 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je kondenzovana i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela, koristeći gradijent 0-100% etil acetata u heksanu. Frakcije željenih proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-((1r,4R)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,356 g, prinos 76%, 98,0% čist) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.09 - 8.24 (m, 1H), 7.28 - 7.63 (m, 2H), 4.71 - 4.90 (m, 1H), 4.21 (d, J = 3.51 Hz, 1H), 3.57 - 3.78 (m, 1H), 3.43 (q, J = 7.03 Hz, 2H), 3.11 - 3.23 (m, 1H), 1.78 - 2.02 (m, 4H), 1.48 - 1.74 (m, 5H), 1.16 - 1.47 (m, 6H), 1.11 - 1.16 (m, 4H), 1.08 (t, 3H); MS (ESI) m/z 374.5 [M+1]<+>.
Primer 21: 2-((1r,4R)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0260]
1. A. 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril i 4-hlor-2-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. 2,4-dihlorpirimidin-5-karbonitril (900 mg, 5,17 mmol) u anhidrovanom etanolu (5 ml) i (1R,3S)-3-aminocikloheksanol (624 mg, 5,43 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056) u anhidrovanom etanolu (5 ml) pomešani su na -60 °C i zatim je ukapavanjem dodat DIEA (1,0 g, 7,75 mmol). Smeša je mešana na -60 °C tokom 1 h, a zatim na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive frakcije su uklonjene i ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranje sa 9,1%-33% etil acetata u petrol etru), dajući 4-hlor-2-((1R,3S)-3-hidroksicikcloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril (600 mg, 2,38 mmol, prinos 46%) kao belu čvrstu supstancu i 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (270 mg, 1,07 mmol, prinos 20%;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.55 (s, 1 H), 8.46 (d, J=7.81 Hz, 1 H), 4.83 (d, J=3.90 Hz, 1 H), 3.95 - 4.11 (m, 1 H), 3.45 - 3.61 (m, 1 H), 1.93 (d, J=11.71 Hz, 1 H), 1.60 - 1.84
1
(m, 3 H), 1.03 - 1.50 (m, 4 H); MS (ESI) m/z 253.2 [M+1]<+>) kao belu čvrstu supstancu. Regiohemija manjeg regioizomera je potvrđena u koraku B ispod.
2. B. (1S3R))-3-(5-(aminometil)pirimidin-4-ilamino)cikloheksanol. U smešu 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil-amino)pirimidin-5-karbonitrila (70 mg, 0,277 mmol) i amonijum hidroksida (500 µl, 12,84 mmol) u etanolu (4 ml) dodat je Reni nikl (16,26 mg, 0,277 mmol). Dobijena smeša je evakuisana, a zatim mešana u balonu sa vodonikom na atmosferskom pritisku i ambijentalnoj temperaturi preko noći. Etanol je uklonjen pod vakuumom i preostali ostatak je prečišćen koristeći reversno faznu preparativnu HPLC (5-80% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući naslovno jedinjenje kao ulje koje je korišćeno samo u svrhe NMR. Regiohemija je potvrđena na osnovu prisustva dva uočljiva aromatična pika u<1>H NMR spektru i primećenog NOE signala između C5 metil vodonika i samo jednog od ovih aromatičnih pikova u NOESY spektru.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.32 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.32 (d, J=7.48 Hz, 1 H), 4.67 (d, J=3.87 Hz, 1 H), 3.88 - 4.01 (m, 1 H), 3.59 (s, 2 H), 3.49 (d, J=3.61 Hz, 1 H), 2.06 - 2.16 (m, 1 H), 1.99 (br. s., 2 H), 1.81 (t, J=13.28 Hz, 2 H), 1.69 (dt, J=13.35, 3.51 Hz, 1 H), 1.01 - 1.35 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 223.5 [M+1]<+>.
3. C. 2-((1r,4R)-4-etoksicikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. Smeša 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (270 mg, 1,07 mmol), (1r,4r)-4-etoksicikloheksanamin hidrohlorida (289 mg, 1,60 mmol; sinteza opisana ovde) i cezijum karbonata (698 mg, 2,14 mmol) u anhidrovanom n-butanolu (10 ml) mešana je na 80 °C tokom 1 dana, a zatim na 120 °C tokom 5 h. Smeša je ekstrahovana između vode i DCM-a. Organski sloj je kombinovan, koncentrovan i prečišćen na silika gelu (elucija sa 9,1%-33% etil acetata u petrol etru), dajući 2-((1r,4R)-4-etoksicikloheksil-amino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (202 mg, 0,56 mmol, prinos 52%) kao prah bele boje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.11 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.51 (d, J=3.6, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.67 (s, 1H), 3.58-3.55 (m,1H), 3.47 (q, J=6.8, 2H), 3.24-3.19 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 5H), 1.73 (s, 3H), 1.47-1.25 (m, 8H), 1.10 (t, J=7.2, 3H); MS(ESI): m/z 359.9 [M+1]<+>.
Primer 22: 2-(cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril
1
[0262] A. 2-(cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. Rastvor cikloheksanamina (0,181 ml, 1,583 mmol) u DMSO-u (5 ml), 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitrila (0,200 g, 0,791 mmol; sinteza opisana ovde) i DIEA (0,276 ml, 1,583 mmol) zagrevan je na 70 °C preko noći. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i koncentrovana je. Dobijena sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent 0% - 70% etil acetata (sadrži 10% metanola zasićenog amonijakom) u heksanu. Frakcije željenog proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-(cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karbonitril (0,220 g, prinos 88%, 98,1% čist) kao bledožutu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.08 - 8.21 (m, 1H), 7.08 - 7.56 (m, 2H), 4.74 (d, J = 3.90 Hz, 1H), 3.93 - 4.13 (m, 1H), 3.44 - 3.77 (m, 2H), 1.83 - 2.02 (m, 2H), 1.65 - 1.82 (m, 6H), 1.58 (d, J = 14.84 Hz, 1H), 1.32 - 1.45 (m, 2H), 1.08 - 1.30 (m, 7H); MS (ESI) m/z 316.4 [M+1]<+>.
Primer 23: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0263]
1. A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (0,4 g, 2,155 mmol) i (1S,3R)-3-aminocikloheptanol hidrohlorida (0,428 g, 2,59 mmol; sinteza opisana ovde) u DMF-u (3 ml) uz mešanje je dodat DIEA (1,126 ml, 6,46 mmol) i mešan je na 60 °C tokom 1 h. LCMS pokazuje da je reakcija završena. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana u vodu (50 ml). Suspenzija je mešana tokom pet minuta, zatim je filtrirana, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (0,404 g, 1,451 mmol, prinos 67,4%) kao beličastu čvrstu supstancu;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz): δ ppm 8.39 (s, 1 H), 8.00 (d, J=7.4 Hz, 1 H), 4.63 (d, J=3.9 Hz, 1 H), 4.21 (br. s., 1 H), 3.74 (td, J=8.5, 4.1 Hz, 1 H), 2.47 (s, 3 H), 1.66 - 1.97 (m, 5 H), 1.35 - 1.66 ppm (m, 5 H); MS (ESI) m/z 138.1 [M+1]<+>.
1
2. B. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (381 mg, 1,369 mmol) rastvoren je u NMP-u (7 ml). Na 0 °C, mCPBA (675 mg, 3,01 mmol) zatim je dodat u porcijama i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 min. U reakcionu smešu je dodat (1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksanamin (0,405 g, 2,054 mmol) (pripremljen kao što je opisano ovde) i DIEA (0,956 ml, 5,48 mmol), i mešana je tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je dalje mešana na 80 °C tokom 30 min, nakon čega LCMS pokazuje završetak reakcije. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i razblažena vodom (30 ml). Smeša je ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 4 h, dok se željeni proizvod taložio. Proizvod je filtriran i sakupljena čvrsta supstanca je isprana vodom i zatim heksanom i osušena pod vakuumom, dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)-cikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,444 g, 1,039 mmol, prinos 76%) kao mrku čvrstu supstancu;<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz): δ ppm 8.08 - 8.22 (m, 1 H), 7.06 - 7.59 (m, 2 H), 4.51 - 4.60 (m, 1 H), 4.01 - 4.24 (m, 1 H), 3.54 - 3.78 (m, 2 H), 3.44 (q, J--7.0 Hz, 2 H), 3.11 - 3.24 (m, 1 H), 1.88 - 2.05 (m, 4 H), 1.12 - 1.88 (m, 14 H), 1.08 ppm (t, J=7.0 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 374.2 [M+1]<+>.
Primer 24: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0264]
1. A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karbonitril.
4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (457 mg, 1,642 mmol; sinteza opisana ovde) rastvoren je u NMP-u (10 ml). Zatim je na 0 °C u porcijama dodat mCPBA (736 mg, 3,28 mmol) i reakcija je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. LCMS pokazuje da su polazne supstance potrošene i da je nastao sulfonski intermedijer. Ova reakcija je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 311.1 [M+1]<+>.
2. B. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U reakcionu smešu iz prethodnog koraka dodati su (1r,4r)-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (0,374 g, 2,465 mmol) i DIEA
1
(1,435 ml, 8,22 mmol). Reakciona smeša je mešana na 80 °C još 1 h i reakciona smeša je zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (0-10% metanol zasićen amonijakom u DCM-u), dajući 4-((1R,3S)-3-hidroskicikloheptilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,250 g, 0,724 mmol, prinos 44,0%) kao mrku čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.07 - 8.21 (m, 1H), 7.05 -7.55 (m, 2H), 4.52 - 4.59 (m, 2H), 4.02 - 4.25 (m, 1H), 3.51 - 3.79 (m, 2H), 3.35 - 3.42 (m, 1H), 1.75 - 1.97 (m, 8H), 1.39 - 1.70 (m, 6H), 1.14 - 1.31 (m, 4H); MS (ESI) m/z 346.1 [M+1]<+>.
Primer 25: 2-(4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-ilamino)-4-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0265]
1. A. Dimetil cikloheksan-1,4-dikarboksilat. U rastvor cikloheksan-1,4-dikarboksilne kiseline (100 g, 0,58 mol) u anhidrovanom metanolu (800 ml) dodat je sumpor dihlorid (208 g, 1,75 mol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvor je zatim koncentrovan i ostatak je sipan u vodu. Smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je dimetil cikloheksan-1,4-dikarboksilat (105 g, 0,53 mol, prinos 90,5%), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
2. B. Dimetil 1-(2-hloretil)cikloheksan-1,4-dikarboksilat. U rastvor diizopropilamina (88 ml, 0,62 mol) u anhidrovanom THF-u (500 ml) tokom 20 minuta dodavan je n-butil litijum (240 ml, 0,6 mol, 2,5 M rastvor u heksanu) na -78 °C. Smeša je mešana na 0 °C u atmosferi azota tokom 30 min. U smešu dimetil cikloheksan-1,4-dikarboksilata (100 g, 0,5 mol) i heksametil fosforamida (360 ml, 2 mol) u anhidrovanom THF-u (800 ml) dodat je litijum diizopropilamin (prethodno sveže pripremljen) tokom 30 min na -40 °C. Nakon mešanja tokom 1 h na ovoj temperaturi dodavan je 1-brom-2-hloretan (42 ml, 0,5 mol) tokom 1 h. Smeša je mešana tokom 3 h na -78 °C, zatim je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana preko noći. U reakcionu smešu je dodat vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (3 N, 420 ml) i smeša je mešana tokom 10 min. Rastvarač je uklonjen uparavanjem pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata (3 × 200 ml), i kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 300 ml) i osušeni iznad natrijum
1
sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je dimetil 1-(2-hloretil)cikloheksan-1,4-dikarboksilat (116 g, prinos 88%), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.72 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.46-3.42 (m, 2H), 2.33-2.21 (m, 3H), 2.05-1.85 (m, 4H), 1.58-1.42 (m, 2H), 1.25-1.15 (m, 2H).
C. Dimetil biciklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboksilat. U rastvor diizopropilamina (77 ml, 0,54 mol) u anhidrovanom THF-u (500 ml) tokom 20 minuta dodavan je n-butil litijum (210 ml, 0,53 mol, 2,5 M rastvor u heksanu) na -78 °C. Smeša je zatim mešana na 0 °C u atmosferi azota tokom 30 min. U smešu dimetil 1-(2-hloretil)cikloheksan-1,4-dikarboksilata (116 g, 0,44 mol) i heksametil fosforamida (317 ml, 1,7 mol) u anhidrovanom THF-u (800 ml) dodavan je litijum diizopropilamin (prethodno sveže pripremljen) tokom 30 min na -40 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na -78 °C, zatim je mešana preko noći i ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. U reakcionu smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (200 ml) i smeša je mešana tokom 10 min. Rastvarač je uklonjen uparavanjem pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3 × 200 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 300 ml) i osušeni iznad natrijum sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (58 g, 0,25 mol, prinos 50% u dva koraka).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.65 (s, 6H), 1.81 (s, 12H).
D. 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina. Rastvor dimetil biciklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboksilata (58,0 g, 0,25 mol) u metanolu (600 ml) zagrevan je pod refluksom. U ovaj rastvor dodavan je rastvor kalijum hidroksida (9,8 g, 0,175 mol) u metanolu (100 ml) i vodi (12 ml) tokom 30 minuta. Reakciona smeša je refluktovana tokom 24 h. Rastvarač je zatim uklonjen i ostatak je razblažen vodom. Vodeni rastvor je ekstrahovan pomoću etil acetata (2 x 200 ml) da bi se regenerisala polazna supstanca (22,0 g) i vodeni sloj je zakiseljen na pH 3 dodavanjem hlorovodonične kiseline. Nastao je talog i ekstrahovan je pomoću etil acetata (3 × 300 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani, dajući naslovni proizvod (30,0 g, 0,14 mol, prinos 55%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.65 (s, 3H), 1.81 (s.12H); MS (ESI) m/z 211.3 [M-H]-.
E. Metil 4-brombiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilat. U suspenziju 4-(metoksikarbonil) biciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilne kiseline (11,0 g, 51,8 mmol) u acetonu (80 ml) dodat je 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (51,8 ml, 51,8 mmol). Zatim je dodat rastvor srebro nitrata (8,8 g, 51,9 mol) u vodi (10 ml). Nastali talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom,
11
acetonom i dietil etrom i osušen pod vakuumom na 115 °C tokom 4 h. Dobijeno (4-(metoksikarbonil)-biciklo[2.2.2]oktan-1-karboniloksi)srebro (15,3 g, 47,9 mmol) suspendovano je u heksanu (125 ml), zatim je brom (7,7 g, 48,1 mmol) dodavan u reakcionu smešu tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi još 30 minuta. Reakciona smeša je filtrirana da bi se uklonila čvrsta supstanca i filter pogača je isprana heksanom (4 × 150 ml). Kombinovani organski filtrati su isprani zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 × 150 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml) i zatim osušeni iznad magnezijum sulfata. Koncentrovanjem pod vakuumom dobijen je sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (4,2 g, 0,17 mol, prinos 33% u dva koraka).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.64 (s, 3H), 2.27-2.20 (m, 6H), 1.98-1.94 (m. 6H).
F. 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina. Metil 4-brombiciklo [2.2.2]oktan-1-karboksilat (17,0 g, 69,0 mol) refluktovan je u vodenom rastvoru natrijum hidroksida (1500 ml, 1%) tokom 24 h. Nakon hlađenja, reakcioni rastvor je zakiseljen hlorovodoničnom kiselinom (6 N, 100 ml) i ekstrahovan pomoću dietil etra (6 × 500 ml). Kombinovani slojevi etra su osušeni iznad magnezijum sulfata i koncentrovani, dajući naslovno jedinjenje (10,4 g, 61,1 mmol, prinos 89%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 169.2 [M-H]-.
G. Benzil 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-ilkarbamat. U rastvor 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilne kiseline (10,4 g, 61,1 mmol) u dioksanu (150 ml) dodat je DIEA (11,8 g, 91,5 mmol), difenil fosforil azid (25 g, 91,5 mmol) i benzil alkohol (131 g, 1,22 mol). Smeša je mešana na 80 °C preko noći. Reakcija je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio dioksan i benzil alkohol (100 °C, 2 mm Hg). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% metanola u DCM-u), dajući naslovni proizvod (15,4 g, 54 mmol, prinos 91%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.35-7.30 (m, 5H), 5.03 (s.2H), 4.55 (br s, 1H), 2.01-1.95 (m, 6H), 1.77-1.72 (m, 6H); MS (ESI) m/z 276.3 [M+H]<+>.
H. 4-Aminobiciklo[2.2.2]oktan-1-ol hidrohlorid. U rastvor benzil 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-ilkarbamata (14,8 g, 53 mmol) u metanolu (200 ml) dodat je paladijum na ugljeniku (0,5 g, 10%). Reakciona smeša je mešana na 50 °C u atmosferi vodonika (50 psi) preko noći i filtrirana je kroz celit. Filtrat je koncentrovan i ostatak je dodat u hlorovodoničnu kiselinu u metanolu (10%, 50 ml). Smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim ponovo koncentrovana i dodat je THF (20 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i talog je sakupljen i osušen, dajući naslovni proizvod (6,7 g, 36 mmol, prinos 70%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.00 (s, 3H), 4.48 (br s,1H) ,1.76-1.80 (m, 6H), 1.58-1.61 (m, 6H). MS (ESI) m/z 142.1[M+1]<+>.
I. Etil 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat. Smeša etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (10 g, 43,0 mmol), propan-2-amina (4,21 ml, 49,4 mmol) i DIEA (9,76 ml, 55,9 mmol) u etanolu (140 ml) zagrevana je na 60 °C preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodata je voda. Vodena faza je tri puta ekstrahovana pomoću etil acetata, i kombinovane organske faze su osušene iznad magnezijum sulfata, filtrirane i uparene, dajući etil 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (10,10 g, 39,5 mmol, prinos 92%) kao bezbojno ulje. MS (ESI) m/z 256.1 [M+1]<+>.
J. 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. U balonu sa okruglim dnom, etil 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (10,97 g, 43,0 mmol) rastvoren je u etanolu (150 ml), nakon čega je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M, 129 ml, 129 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi i rastvarač je zatim uparen pod sniženim pritiskom. Polako je dodat vodeni rastvor limunske kiseline (2 M, 129 ml, 258 mmol) i dobijena smeša je mešana tokom 0,5 h na sobnoj temperaturi. Suspenzija je filtrirana i čvrste supstance su dva puta isprane vodom (2 × 50 ml), a zatim preko noći osušene u vakuum sušnici na 45 °C, dajući 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (8,38 g, 36,9 mmol, prinos 86%); MS (ESI) m/z 228.4 [M+1]<+>.
K. 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (8,38 g, 36,9 mmol) i HATU (21,03 g, 55,3 mmol) kombinovani su u balonu sa okruglim dnom od 250 ml, nakon čega je dodat DMF (92 ml). Nakon toga su dodati amonijum hidrohlorid (9,86 g, 184 mmol) i DIEA (32 ml, 184 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodata je voda (150 ml). Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana vodom i osušena preko noći pod visokim vakuumom, dajući 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (8 g, 35,4 mmol, prinos 96%); MS (ESI) m/z 227.4 [M+1]<+>.
L. 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (641 mg, 2,8 mmol) u NMP-u (6 ml) dodat je mCPBA (852 mg, 4,2 mmol, čistoća 85%) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Zatim je dodata voda (25 ml) koja je kratkotrajno rastvorila suspenziju i nastao je još jedan gusti talog koji je uklonjen filtracijom. Dobijeni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući naslovnu smešu u NMP-u, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 243.3, 259.2 [M+1]<+>.
13. M. 2-(4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-ilamino)-4-(izopropilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karboksamida i 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida u NMP-u (iz prethodnog koraka, 2,8 mmol) dodati su 4-aminobiciklo[2.2.2]oktan-1-ol hidrohlorid (500 mg, 2,8 mmol), DIEA (1,1 g, 8,4 mmol), i zagrevani na 100 °C tokom 3 d. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću preparativne tankoslojne hromatografije, dajući finalni proizvod (74,1 mg, prinos 8,2%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.88 (br s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.5-6.5 (br s, 2H), 5.76 (s, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.11 (brs, 1H), 2.05-1.97 (m, 6H), 1.61-1.54 (m, 6H), 1.24-1.12(m, 6H); MS (ESI) m/z 320.2 [M+H]<+>; Čistoća = 96,5% na 214 nm, Čistoća = 97,7% na 254 nm.
Primer 26: 4-(terc-butilamino)-2-((lr,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0266]
1. A. Etil 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat. Smeša etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (3 g, 12,89 mmol), 2-metilpropan-2-amina (1,565 ml, 14,83 mmol) i DIEA (2,93 ml, 16,76 mmol) u etanolu (20 ml) zagrevana je na 60 °C preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodata je voda. Vodena faza je tri puta ekstrahovana pomoću etil acetata, i kombinovane organske faze su osušene iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirane i uparene, dajući etil 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (3,20 g, 11,86 mmol, prinos 92%) kao bezbojno ulje. MS (ESI) m/z 269.5 [M+1]<+>.
2. B. 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina. U balonu sa okruglim dnom, etil 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (3,2 g, 11,88 mmol) rastvoren je u etanolu (40 ml), nakon čega je dodat 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (35,6 ml, 35,6 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi i rastvarač je zatim uparen pod sniženim pritiskom. Nakon toga je polako dodat 2 M vodeni rastvor limunske kiseline (35,6 ml, 71,3 mmol) i dobijena smeša je mešana tokom 0,5 h na sobnoj temperaturi. Suspenzija je filtrirana i čvrste supstance su dva puta isprane vodom (2 × 50 ml), a zatim preko noći osušene u vakuum sušnici na 45 °C, dajući
11
4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (2,83 g, 11,73 mmol, prinos 99%). MS (ESI) m/z 242.3 [M+1]+.
3. C. 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina (2,83 g, 11,73 mmol) i 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum heksafluorfosfat(V) (6,69 g, 17,59 mmol) kombinovani su u balonu sa okruglim dnom od 250 ml, nakon čega je dodat DMF (29 ml). Nakon toga su dodati amonijum hidrohlorid (3,14 g, 58,6 mmol) i DIEA (10,21 ml, 58,6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodata je voda (150 ml). Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana vodom i osušena preko noći pod visokim vakuumom, dajući 4-(terc-butilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamid (2,54 g, 10,57 mmol, prinos 90%). MS (ESI) m/z 241.2 [M+1]<+>.
4. D. 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(tercbutilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (0,6 g, 2,497 mmol) u NMP-u (5 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (0,839 g, 3,74 mmol) na 0 °C i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 1 h. LCMS pokazuje potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je preneta u sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 273.2 [M+1]<+>.
5. E. 4-(terc-butilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamida iz prethodnog koraka dodati su DIEA (2,181 ml, 12,49 mmol) i (1r,4r)-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (0,568 g, 3,75 mmol), i reakcija je mešana na 90 °C tokom 16 h. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen koristeći reversno faznu preparativnu HPLC (0-50% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 4-(terc-butilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,350 g, 1,139 mmol, prinos 45,6%).
<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 0.82 - 0.88 (m, 1 H) 1.14 - 1.30 (m, 5 H) 1.42 (s, 9 H) 1.85 (d, J=4.30 Hz, 4 H) 3.38 (br. s, 1 H) 3.59 (d, J=7.42 Hz, 1 H) 4.54 (s, 1 H) 7.02 (d, J=7.81 Hz, 1 H) 8.32 (s, 1 H) 9.18 (s, 1 H); MS(ESI): m/z 308.1 [M+1]<+>.
Primer 27: 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0267]
A. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)-pirimidin-5-karbonitrila (310 mg, 1,670 mmol) i (1R,2R,SR)-5-amino-2-metilciklo-heksanol hidrohlorida (304 mg, 1,837 mmol; sinteza opisana ovde) u DMF-u (2,4 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,873 ml, 5,01 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. LCMS pokazuje da je reakcija završena. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa 150 ml etil acetata i 50 ml vode. Slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa 75 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 50 ml), osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje je očvrsnulo nakon stajanja, dajući 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (418 mg, 1,503 mmol, prinos 90%). MS (ESI) m/z 279.3 [M+1]<+>.
B. 4-((lR,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (400 mg, 1,437 mmol) u NMP-u (5 ml) na 0 °C dodat je mCPBA (805 mg, 3,59 mmol) i reakcija je mešana tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 311.4 [M+1]<+>
C. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila (446 mg, 1,437 mmol) iz prethodnog koraka dodat je propan-2-amin (0,367 ml, 4,31 mmol) i DIEA (1,004 ml, 5,75 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 4 h i zatim je ostavljena da se ohladi na ambijentalnu temperaturu. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-90% etil acetat u heksanu), dajući 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (381 mg, 1,317 mmol, prinos 92%). MS (ESI) m/z 290.2 [M+1]<+>
D. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metil-cikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,38 g, 1,313 mmol) rastvoren je u DMSO-u (5
11
ml). U ovaj rastvor je dodat 50% vodeni rastvor natrijum hidroksida (0,103 ml, 1,970 mmol) i 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (0,101 ml, 0,985 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim mešana na 50 °C tokom 1 h. Nakon toga, reakciona smeša je sipana u ledenu vodu (15 ml) i dobijena smeša je mešana tokom 1 h. Dobijeni talog je filtriran i ispran vodom, dajući 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,210 g, 0,683 mmol, prinos 52%).<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 0.94 (d, J=6.40 Hz, 4 H) 1.12 (d, J=5.91 Hz, 9 H) 1.65 (dd, J=13.29, 2.95 Hz, 1 H) 1.92 (br. s., 1 H) 2.15 (br. s., 1 H) 2.97 (br. s., 1 H) 3.81 - 4.14 (m, 2 H) 4.55 (d, J=5.41 Hz, 1 H) 6.70 - 7.02 (m, 1 H) 8.34 (br. s., 1 H) 8.92 (br. s., 1 H); MS (ESI) m/z 308.0 [M+1]<+>.
Primer 28: 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0268]
1. A. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila (446 mg, 1,437 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (5 ml) dodat je biciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid (258 mg, 2,155 mmol; pripremljen u skladu sa Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) i DIEA (1,255 ml, 7,18 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 4 h i zatim je ostavljena da se ohladi na ambijentalnu temperaturu. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (0-90% etil acetat u heksanu), dajući 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (381 mg, 1,216 mmol, prinos 85%). MS(ESI): m/z 314,0 [M+1]<+>.
2. B. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,38 g, 1,213 mmol) rastvoren je u DMSO-u (26,9 ml) i u ovaj rastvor je dodat 50% vodeni rastvor natrijum hidroksida (0,097 ml, 1,213 mmol) i 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (0,137 ml, 1,213 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim mešana na 50 °C
11
tokom 1 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana je u 50 ml ledene vode. Beli talog je sakupljen na filter papir i dva puta je ispran vodom. Talog je osušen, dajući 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid (0,269 g, 0,812 mmol, prinos 67%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ ppm 0.94 (d, J=6.25 Hz, 3 H) 1.10 - 1.26 (m, 3 H) 1.68 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 1.92 (d, J=10.93 Hz, 1 H) 2.06 (s, 6 H) 2.17 (d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.46 (s, 1 H) 2.98 (br. s., 1 H) 3.82 - 3.95 (m, 1 H) 4.63 (br. s., 1 H) 7.16 (br. s., 1 H) 7.77 (br. s., 1 H) 8.11 (br. s., 1 H) 8.33 (s, 1 H) 9.24 (br. s., 1 H); MS(ESI): m/z 332.3 [M+1]<+>.
Primer 29: 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0269]
1. A. 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (750 mg, 4,0 mmol) u DMF-u (8 ml) dodat je 2-ciklopropilpropan-2-amin (400 mg, 4,0 mmol) i DIEA (1560 mg, 12,0 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (665 mg, 2,68 mmol, prinos 66%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z = 249.2 [M+H]<+>.
2. B. 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (665 mg, 2,68 mmol) u DMSO-u (4 ml) uz mešanje je dodat vodeni rastvor vodonik peroksida (0,162 ml, 30%) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (2,2 ml, 6 mol/l). Dobijena smeša je mešana na 50 °C tokom 12 min, a zatim je dodata voda. Željeni proizvod je filtriran i osušen pod vakuumom, dajući sirovi proizvod (392 mg, 1,47 mmol, prinos 55%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 267.3 [M+H]<+>.
3. C. 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U ohlađeni (0 °C) rastvor 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (390 mg, 1,46 mmol) u THF-u (6 ml) u porcijama je dodat mCPBA (447
11
mg, 2,2 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 0,5 h na 0 °C. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (2,5%-10% DCM-a u metanolu), dajući smešu 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (382 mg, 1,32 mmol, prinos 90%). MS (ESI) m/z 299.1 [M+H]<+>i 283.1 [M+H]<+>.
4. D. 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)-amino)pirimidin-5-karboksamid. Smeša 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida, 4-((2-ciklopropilpropan-2-il)amino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (191 mg, 0,66 mmol), (1r,4r)-4-aminocikloheksanol (114 mg, 0,99 mmol), DIEA (256 g, 1,98 mmol) i NMP (5 ml) kombinovana je i zagrevana na 100 °C preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću HPLC-a (5-95% acetonitrila u vodi), dajući naslovno jedinjenje (129,5 mg, 0,39 mmol, prinos 59%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.96 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.98-4.96 (m, 1H), 3.79-3.77 (m, 1H), 3.69-3.67 (m, 1H), 2.14-2.11 (d, J=11.6Hz, 2H), 2.04-2.01 (m, 2H), 1.48-1.41 (m, 4H), 1.38 (s, 6H), 1.32-1.22 (m, 2H), 0.48-0.39 (m, 4H); MS (ESI) m/z 334.3 [M+H]<+>.
Primer 30: 4-ciklobutilamino-2-(((lr,4r)-4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0270]
1. A. 4-(ciklobutilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (2 g, 10,8 mmol) u DMF-u (10 ml) uz mešanje je dodat DIEA (4,2 g, 32,4 mmol) i ciklobutanamin (2,3 g, 32,4 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor natrijum hlorida, i tri puta ekstrahovana pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (1,7 g, 7,7 mmol, prinos 71%). MS (ESI) m/z = 221.2[M+H]<+>.
2. B. 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitril i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitril. 4-(ciklobutilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-
11
karbonitril (1,7 g, 7,7 mmol) rastvoren je u DCM-u (30 ml) i ohlađen na 0 °C. U ovu smešu je u porcijama dodat mCPBA (4,6 g, 23 mmol) i reakcija je mešana tokom 1 h. Dobijena smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je tri puta ekstrahovan pomoću DCM-a. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući smešu 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitrila i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila kao žuto gusto ulje (1,6 g sirovo), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z =237.2/253.2 [M+H]<+>.
3. C. 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karbonitril. U smešu 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitrila i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila (1,6 g, sirovo) iz prethodnog koraka dodat je (1r,4r)-4-metoksicikloheksanamin (0,96 g, 7,4 mmol), 1,4-dioksan (100 ml) i DIEA (4,3 g, 33,4 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Nakon uklanjanja svih isparljivih rastvarača pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (33,3% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (1,3 g, prinos 57%). MS (ESI) m/z =302.1 [M+H]<+>.
4. D. 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)-amino)pirimidin-5-karbonitrila (700 mg, 2,3 mmol) u DMSO-u (8 ml) dodat je vodeni rastvor vodonik peroksida (1,3 g, 30%, 11,5 mmol), a zatim vodeni rastvor natrijum hidroksida (2 ml, 6 mol/l, 11,5 mmol). Smeša je mešana na 50 °C tokom 0,5 h, zatim je voda (30 ml) dodata u reakcionu smešu, proizvod je sakupljen i osušen, dajući željeno jedinjenje (400 mg, 1,25 mmol, prinos 54%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.76 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.01 (s, 1H), 4.51-4.45 (m, 1H), 3.83-3.81 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.21-3.16 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 2H), 2.15-1.96 (m, 6H), 1.78 (s, 2H), 1.43-1.20 (m, 4H); MS (ESI) m/z = 319.9 [M+H]<+>).
Primer 31: 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)-pirimidin-5-karboksamid
[0271]
11
1. A. 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitril i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitril. 4-(ciklobutilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (889 mg, 4,04 mmol; sinteza opisana ovde) rastvoren je u DCM-u (20 ml) i ohlađen na 0 °C. U ovu smešu je u porcijama dodat mCPBA (2,1 g, 12,1 mmol) i reakcija je mešana tokom 1 h. Dobijena smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je tri puta ekstrahovan pomoću DCM-a. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući smešu 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitrila i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila kao žuto gusto ulje (893 mg sirovo), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z =237.2/253.2 [M+H]<+>.
2. B. 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karbonitril. U smešu 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitrila i 4-(ciklobutilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila (424 mg, oko 1,93 mmol) iz prethodnog koraka dodat je (1r,4r)-4-aminocikloheksanol (244 mg, 2,12 mmol), 1,4-dioksan (50 ml) i DIEA (1,2 g, 9,65 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Nakon uklanjanja svih isparljivih rastvarača pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (50% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (305 mg, 1,06 mmol, prinos 55,4%). MS (ESI) m/z =288.2 [M+H]<+>.
3. C. 4-(ciklobutilamino)-2-(((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(ciklobutilamino)-2-(((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-amino)pirimidin-5-karbonitrila (305 mg, 1,06 mmol) u DMSO-u (6 ml) dodat je vodeni rastvor vodonik peroksida (600,1 mg, 30%, 5,3 mmol), a zatim vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 ml, 6 mol/l, 5,3 mmol). Smeša je mešana na 50 °C tokom 0,5 h, a zatim je dodata voda i smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u DCM-u), dajući naslovno jedinjenje (248,2 mg, 0,81 mmol, prinos 76,6%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.74 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 5.46 (brs, 2H), 5.07-4.96 (m, 1H), 4.53-4.43 (m, 1H), 3.80-3.79 (m, 1H), 3.70-3.65 (m, 1H), 2.40-2.34 (m, 2H), 2.15-1.97 (m, 6H), 1.91-1.88 (s, 2H), 1.55-1.19 (m, 4H); MS (ESI) m/z = 306.0 [M+H]<+>.
Primer 32: 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid
12
1. A. (R)-terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamat i (S)-terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamat. U rastvor smeše (R)-4-metilcikloheks-3-enamina i (S)-4-metilcikloheks-3-enamina (40,2973 g, 359 mmol; pripremljena kao što je opisano u J. Org. Chem.1992, 57, 3454 - 3462) u etil etru (498 ml) na 0 °C ukapavanjem uz mešanje dodat je rastvor diterc-butil-dikarbonata (81 g, 362 mmol) u etil etru (100 ml) tokom 30 min. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 1 h, ostavljena je da polako dostigne sobnu temperaturu tokom 4 h, a zatim je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi ostatak. Sirovi ostatak je trituriran sa heksanom (500 ml), mešan tokom 5 min na 0 °C, zatim filtriran i ispran heksanom (50 ml), dajući prvi prinos proizvoda (~55 g). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, trituriran sa heksanom i talog je filtriran, dajući drugi prinos proizvoda (~15 g). Ovo je ponovljeno za dobijanje trećeg prinosa proizvoda (4,25 g). Tri prinosa su kombinovana, dajući smešu (R)-terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamata i (S)-terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamata (74,25 g, 351 mmol, prinos 98%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.72 (d, J=7.42 Hz, 1 H), 5.26 (br. s., 1 H), 3.35 - 3.47 (m, 1 H), 1.93 (br. s., 5 H), 1.60 (s, 3 H), 1.32 - 1.44 (m, 10 H).
2. B. Terc-butil (1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat, terc-butil (1R,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat, terc-butil (1S,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat, terc-butil (lS,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat. U rastvor smeše (R)-terc-butil 4-metilcikloheks-3-enil karbamata i (S)-tercbutil 4-metilcikloheks-3-enil karbamata (13 g, 61,6 mmol) u THF-u (780 ml) na 0 °C uz mešanje je dodat 1 M kompleks boran THF (277 ml, 277 mmol). Rastvor je mešan na 0 °C, ostavljen da dostigne sobnu temperaturu tokom 1 h, a zatim mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Reakcija je veoma polako deaktivirana vodom (330 ml), razblažena etanolom (326 ml) i zalužena 5 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (308 ml, 1,54 mol). U dvofaznu smešu uz mešanje je polako dodat 30% vodonik peroksid (316 ml, 3,08 mol) i dobijena smeša je zagrevana na 45 °C tokom 20 h. Sirova reakcija je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum sulfita (573 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (4 × 1 l). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod. Prethodna reakcija je ponovljena 5 puta (koristeći 3 × 13 g i 2 × 11 g polazne supstance). Kombinovani sirovi proizvodi iz svih 6 reakcija su prečišćeni hromatografijom na koloni silika gela (0-100% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom, dajući smešu terc-butil (1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata, terc-butil (1R,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil-karbamata, terc-butil (1S,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata i terc-butil (1S,3S,4S)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata (55 g, 242 mmol, prinos 72%) kao čvrstu supstancu. 4 gradivna stereoizomera su razdvojena putem preparativne hiralne SFC koristeći više injektovanja u nizu od 3 zasebne kolone. Prva kolona: ChiralPak AD-H, 250×50 mm I.D., izokratski 35% metanol u CO2. Druga kolona: ChiralPak AD-H, 250×50 mm I.D., izokratski 25% metanol u CO2. Treća kolona: ChiralPak AD-H, 250×50 mm I.D., izokratski 15% etanol u CO2. Razdvojeni izomeri su okarakterisani na analitičkoj koloni ChiralPak AD-3, 150×4,6 mm I.D., 5-40% metanol (sa 0,05% dietilamina) u CO2(vreme ciklusa 15 min) i obeleženi kao intermedijer 1 do intermedijera 4.
[0273] Intermedijer 1: 2,0 g (8,72 mmol, prinos 3,6% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 4,77 min. MS (ESI) m/z 252.1 [M 23]<+>.
[0274] Intermedijer 2: 1,5 g (6,54 mmol, prinos 2,7% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 5,08 min. MS (ESI) m/z 252.1 [M 23]<+>.
[0275] Intermedijer 3: 16,0 g (69,78 mmol, prinos 29,1% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 5,48 min.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.64 - 6.86 (m, 1 H), 4.43 -4.60 (m, 1 H), 3.10 - 3.29 (m, 1 H), 2.81 - 2.96 (m, 1 H), 1.84 - 2.01 (m, 1 H), 1.49 - 1.72 (m, 2 H), 1.37 (s, 9 H), 0.98 - 1.14 (m, 3 H), 0.76 - 0.96 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 252.1 [M 23]<+>.
[0276] Intermedijer 4: 18,5 g (80,68 mmol, prinos 33,6% pomoću SFC prečišćavanja). Retenciono vreme: 7,79 min. MS (ESI) m/z 252.1 [M 23]<+>.
[0277] Rendgenska kristalna struktura malog molekula je dobijena za intermedijer 3 i pokazano je da je struktura terc-butil (1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat. Rendgenska struktura je dobijena na sledeći način. Pojedinačne studije kristalne rendgenske difrakcije su obavljene na difraktometru Bruker Kappa APEX CCD koji je opremljen Cu Kαzračenjem (λ = 1,5478). Kristali predmetnog jedinjenja su uzgajani difuzijom pare heksana u rastvor heksana/THF-a. Bezbojna igla od 0,21 × 0,05 × 0,03 mm je montirana na Cryoloop sa Paratone uljem. Podaci su sakupljeni u mlazu azota na 120(2) K koristeći φ i skeniranje. Udaljenost od kristala do detektora je bila 60 mm koristeći varijabilno vreme izlaganja (2 s-20 s) u zavisnosti od θ sa širinom skeniranja od 1,0°. Prikupljanje podataka je bilo 97,0% završeno do 68,00° u θ.
Zabeleženo je ukupno 9000 refleksija koje pokrivaju indekse, -33<=h<=32, -31<=k<=30, -6<=1<=5. Za 2554 refleksija je otkriveno da ne zavise od simetrije, sa Rint0,0602. Indeksiranje i jedinično prečišćavanje ćelija pokazuju romboedarsku, heksagonalnu rešetku. Otkriveno je da je prostorna grupa R3. Podaci su integrisani koristeći softverski program Bruker SAINT i skalirani koristeći softverski program SADABS. Određivanje direktnim postupcima (SHELXS) dalo je kompletni fazni model koji je konzistentan sa strukturom terc-butil (1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamata.
[0278] Svi atomi koji nisu vodonik prečišćeni su anizotropski pomoću kompletne matrice najmanjih kvadrata (SHELXL-97). Svi atomi vodonika su pozicionirani koristeći model jašućeg atoma. Njihove pozicije su određene u odnosu na njihov matični atom koristeći odgovarajuću HFIX komandu u SHELXL-97.
[0279] C. (1R,2R,5R)-5-amino-2-metilcikloheksanol hidrohlorid. U metanol (149 ml) koji je žustro mešan na 0 °C dodat je acetil hlorid (15,87 ml, 223 mmol) i dobijena smeša je mešana tokom 10 min. U ovaj rastvor je dodat terc-butil (1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil karbamat (17,08 g, 74,5 mmol) i smeša je mešana tokom 22 h na sobnoj temperaturi. Sirova reakcija je koncentrovana i zatim triturirana sa etil etrom (2 × 300 ml), dajući (1R,2R,SR)-5-amino-2-metilcikloheksanol hidrohlorid (12,2 g, 73,6 mmol, prinos 99%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.02 (br. s., 3 H), 4.77 (d, J=5.86 Hz, 1 H), 2.85 - 3.10 (m, 2 H), 2.03 - 2.21 (m, 1 H), 1.83 (d, J=11.71 Hz, 1 H), 1.65 (dd, J=13.47, 3.32 Hz, 1 H), 1.24 (q, J=11.58 Hz, 2 H), 1.12 (dd, J=6.05, 3.32 Hz, 1 H), 0.82 - 1.03 (m, 4 H).
[0280] D. 5-brom-N-terc-butil-4-(metiltio)pirimidin-2-amin. U 5-brom-2-hlor-4-(metiltio)pirimidin (3 g, 12,53 mmol) u dioksanu (12,53 ml) dodat je 2-metilpropan-2-amin (7,93 ml, 75 mmol). Smeša je mešana na 100 °C preko noći u zaptivenoj posudi. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je rastvoren u 100 ml etil acetata i ispran sa 50 ml 1 M vodenog rastvora natrijum hidrogen fosfata. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan pomoću 50 ml etil acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući 5-brom-N-terc-butil-4-(metiltio)pirimidin-2-amin (3,4 g, 12,31 mmol, prinos 98%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.61 - 8.72 (m, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 6.95 - 7.17 (m, 1 H), 2.48 (s, 2 H), 1.38 (s, 9 H). MS (ESI) m/z 276.0 [M+1]<+>i 278.2 [M+1]<+>.
[0281] E. 2-(terc-butilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. 5-brom-N-terc-butil-4-(metiltio)pirimidin-2-amin (3400 mg, 12,31 mmol), cink u prahu (201 mg, 3,08 mmol), cink cijanid (940 mg, 8,00 mmol), 1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferocen (552 mg, 0,985 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (564 mg, 0,616 mmol) i DMF (20,5 ml) kombinovani su i zagrevani na 90 °C preko noći u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena sa 125 ml etil
12
acetata i 50 ml vode i zatim je filtrirana kroz sloj celita. Slojevi filtrata su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa 75 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani sa 2×50 ml zasićenog vodenog rastvora soli, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja pod sniženim pritiskom. Sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat/heksan), dajući 2-(terc-butilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (2,26 g, 10,17 mmol, prinos 83%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.37 - 8.51 (m, 1 H), 7.85 - 8.10 (m, 1 H), 2.53 - 2.62 (m, 3 H), 1.41 (s, 9 H). MS (ESI) m/z 223.1 [M+1]<+>.
[0282] F. 2-(terc-butilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(tercbutilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (0,6 g, 2,70 mmol) u DMSO-u (7 ml) uz mešanje je dodat 6 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (2,249 ml, 13,49 mmol) i 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (1,530 ml, 13,49 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim mešana na 50 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je sipana u vodu (40 ml) i ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem filtrata pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% metanola u DCM-u), dajući 2-(terc-butilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (0,462 g, 1,922 mmol, prinos 71,2%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 241.0 [M+1]<+>.
[0283] G. 2-(terc-butilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(tercbutilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (0,1 g, 0,416 mmol) u hloroformu (12 ml) u porcijama je uz mešanje dodat 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin (0,130 g, 0,499 mmol). Dobijeni bledožuti rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Dodat je etil acetat (1 ml) i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Čvrste supstance su filtrirane, isprane etil acetatom i osušene pod vakuumom, dajući 2-(terc-butilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (0,092 g, 0,359 mmol, prinos 86%). MS (ESI) m/z 257.3 [M+1]<+>.
[0284] H. 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-(terc-butilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (0,092 g, 0,359 mmol) i (1R,2R,SR)-5-amino-2-metilcikloheksanol hidrohlorida (0,065 g, 0,395 mmol) u DMF-u (2 ml) uz mešanje je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0,157 ml, 0,897 mmol) i reakcija je zagrevana na 90 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i u ostatak je zatim dodata ledeno hladna voda (20 ml). Dobijena smeša je žustro mešana tokom 1 h i proizvod je zatim filtriran, ispran vodom i osušen pod vakuumom, dajući 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,074 g, 0,230 mmol, prinos 64,1%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.94 (br. s., 1 H), 8.34 (s, 1 H), 6.69 (br. s., 1 H), 4.59 (d, J=5.47 Hz, 1 H), 3.87 (br. s., 1 H), 2.92 - 3.01 (m, 1 H), 2.14 (d, J=10.15 Hz, 1 H), 1.91 (d, J=11.71 Hz, 1 H), 1.67 (dd, J=13.28, 3.12 Hz, 1H), 1.07 - 1.24 (m, 3 H), 0.91 - 0.99 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 322.3 [M+1]<+>.
Primer 33: 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0285]
1. A. 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila (362 mg, 1,166 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (5,832 ml) dodat je ciklopropanamin (0,485 ml, 7,00 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 5 h u zaptivenoj posudi i zatim je ostavljena da se ohladi na ambijentalnu temperaturu preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-60% etil acetat/heksan), dajući 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (265 mg, 0,922 mmol, prinos 79%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.99 - 8.32 (m, 3 H), 4.54 (d, J=5.08 Hz, 1 H), 3.85 - 4.13 (m, 1 H), 2.80 - 3.03 (m, 1 H), 2.58 - 2.75 (m, 1 H), 1.50 -2.08 (m, 3 H), 1.03 - 1.42 (m, 3 H), 0.88 (d, J=6.25 Hz, 4 H), 0.29 - 0.68 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 288.1 [M 1]<+>.
2. B. 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (265 mg, 0,922 mmol) rastvoren je u DMSO-u (9,222 ml). U rastvor je dodato 10 kapi 50% vodenog rastvora natrijum hidroksida, zatim 10 kapi 30% vodenog rastvora vodonik peroksida na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h i zatim je polako dodata u 60 ml ledene vode. Dobijeni talog je mešan tokom 30 min, filtriran, i ispran vodom. Čvrste supstance su osušene u vakuum sušnici preko noći na 45 °C, dajući 2-(ciklopropilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil-amino)pirimidin-5-karboksamid (229 mg, 0,750 mmol, prinos 81%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.73 - 8.95 (m, 1 H),
12
8.18 - 8.42 (m, 1 H), 7.17 - 7.37 (m, 1 H), 4.39 - 4.62 (m, 1 H), 3.75 - 3.99 (m, 1 H), 2.81 - 3.06 (m, 1 H), 2.53 - 2.74 (m, 1 H), 2.09 - 2.34 (m, 1 H), 1.82 - 2.05 (m, 1 H), 1.50 - 1.69 (m, 1 H), 0.99 - 1.24 (m, 3 H), 0.81 - 0.98 (m, 4 H), 0.50 - 0.67 (m, 2 H), 0.26 - 0.47 (m, 2 H). MS (ESI) m/z 306.3 [M 1]<+>.
Primer 34: 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0286]
1. A. 4,4-dimetilcikloheks-2-enol. Natrijum borhidrid (5,03 g, 133 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor 4,4-dimetilcikloheks-2-enona (15,0 g, 121 mmol) u metanolu (403 ml) u vodenom kupatilu. Nakon završetka dodavanja, rastvor je ostavljen da se meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena vodom (150 ml) i veći deo metanola je uklonjen pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 × 200 ml). Kombinovani ekstrakti etil acetata su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja pod sniženim pritiskom, dajući 4,4-dimetilcikloheks-2-enol (13,4 g, 106 mmol, prinos 88%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.41 - 5.57 (m, 1 H), 5.24 - 5.42 (m, 1 H), 4.61 (d, J=5.47 Hz, 1 H), 3.82 - 3.99 (m, 1 H), 1.65 - 1.83 (m, 1 H), 1.21 - 1.59 (m, 3 H), 0.93 (d, J=15.23 Hz, 6 H).
2. B. 2-(4,4-dimetilcikloheks-2-enil)izoindolin-1,3-dion. Kombinovani su trifenilfosfin na smoli (32,7 g, 106 mmol), izoindolin-1,3-dion (17,19 g, 117 mmol), i 4,4-dimetilcikloheks-2-enol (13,4 g, 106 mmol) i dodat je THF (197 ml). Smeša je mešana i ohlađena na 0 °C, zatim je ukapavanjem dodat diizopropil azodikarboksilat (21,09 ml, 107 mmol) tokom 2 min. Reakcija je mešana i ostavljena da se polako zagreje na ambijentalnu temperaturu preko noći. Reakciona smeša je filtrirana i zatim koncentrovana do žute čvrste supstance pod sniženim pritiskom. Dodat je etil acetat (200 ml) i dobijene čvrste supstance su ponovo uklonjene filtracijom. Filtrat etil acetata je ispran vodom (100 ml), vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (100 ml), kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-20% etil acetat/heksan), dajući 2-(4,4-dimetilcikloheks-2-enil)izoindolin-1,3-dion (11,59 g, 45,4 mmol, prinos 42,8%) kao ulje.
12
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.84 (s, 4 H), 5.51 - 5.62 (m, 1 H), 5.43 (d, J=10.15 Hz, 1 H), 4.59 - 4.74 (m, 1H), 2.14 - 2.30 (m, 1 H), 1.67 - 1.81 (m, 1 H), 1.44 - 1.68 (m, 2 H), 1.09 (s, 3 H), 1.01 (s, 3 H); MS (ESI) m/z 256.2 [M 1]<+>.
C. Smeša 2-((1R,2S,3S)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1S,2R,3R)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1R,2R,3R)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1S,2S,3S)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona. U rastvor 2-(4,4-dimetilcikloheks-2-enil)izoindolin-1,3-diona (11,59 g, 45,4 mmol) u hloroformu (110 ml) i etanolu (3,83 ml) dodat je N-bromsukcinimid (10,34 g, 58,1 mmol) kao čvrsta supstanca tokom nekoliko minuta na ambijentalnoj temperaturi. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota. Reakciona smeša je isprana 1 M vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (100 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan hloroformom (100 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja. U ovo ulje je dodato 150 ml THF-a (150 ml) i 1 N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (30 ml). Dobijena smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 2 h. THF je uklonjen pod sniženim pritiskom i preostali vodeni sloj je razblažen etil acetatom (150 ml) i sa 75 ml smeše voda:zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata 1:1. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan pomoću etil acetata (75 ml). Kombinovani slojevi etil acetata isprani su zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-25% etil acetat/heksan), dajući smešu 2-((1R,2S,3S)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1S,2R,3R)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1R,2R,3R)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,2S,3S)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona (11,4 g, 32,4 mmol, prinos 71,3%). MS (ESI) m/z 374.5 [M 1]<+>i 376.5 [M 1]<+>.
D. Smeša 2-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona. Smeša 2-((1R,2S,3S)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1S,2R,3R)-2-brom-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona, 2-((1R,2R,3R)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,2S,3S)-3-brom-2-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona (5,7 g, 16,18 mmol) rastvorena je u toluenu (90 ml) i metanolu (9 ml). U rastvor je dodat tributil kalaj hidrid (5,66 ml, 21,04 mmol) tokom 10 minuta pomoću šprica u atmosferi azota, zatim azobisizobutironitril (0,266 g, 1,618 mmol)
12
u jednoj porciji. Smeša je ostavljena da se meša preko noći uz refluks u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-50% etil acetat/heksan), dajući smešu 2-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona (0,9 g, 3,29 mmol, prinos 20,35%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.82 (s, 4 H), 4.51 - 4.80 (m, 1 H), 3.80 - 4.03 (m, 2 H), 2.84 - 3.11 (m, 1 H), 1.49 - 1.67 (m, 3 H), 1.37 - 1.47 (m, 1 H), 1.22 - 1.35 (m, 1 H), 1.13 (s, 3 H), 0.80 - 0.93 (m, 3 H). MS (ESI) m/z 274.0 [M 1]<+>. Regiohemija smeše proizvoda je potvrđena mikromolekulskom rendgenskom difrakcijom kristala. Rendgenska struktura je dobijena na sledeći način. Pojedinačne studije kristalne rendgenske difrakcije su obavljene na difraktometru Bruker Kappa APEX-II CCD koji je opremljen Mo Kαzračenjem (λ = 0,71073 Å). Kristali su uzgajani difuzijom pare pentana u rastvor DCM-a. Bezbojna ploča od 0,25 × 0,20 × 0,05 mm montirana je na Cryoloop sa Paratone uljem. Podaci su sakupljeni u mlazu azota na 90(2) K koristeći φ i skeniranje. Udaljenost od kristala do detektora je bila 60 mm a vreme izlaganja je bilo 20 sekundi po okviru sa širinom snimka 0,5°. Prikupljanje podataka je bilo 100% završeno do 25,00° u θ. Zabeleženo je ukupno 10827 refleksija koje pokrivaju indekse, -21<=h<=12, -7<=k<=8, -28<=1<=29. Za 2892 refleksija je otkriveno da ne zavise od simetrije, sa Rint0,0821. Indeksiranje i jedinično prečišćavanje ćelija pokazuju primitivnu, ortorombičnu rešetku. Otkriveno je da je prostorna grupa Pbcn. Podaci su integrisani koristeći softverski program Bruker SAINT i skalirani koristeći softverski program SADABS. Određivanje direktnim postupcima (SHELXS) dalo je kompletni fazni model koji je konzistentan sa predloženom strukturom smeše enantiomernog para 2-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona.
Svi atomi koji nisu vodonik prečišćeni su anizotropski pomoću najmanjih kvadrata kompletne matrice (SHELXL-97). Svi atomi vodonika su pozicionirani koristeći model jašućeg atoma. Njihove pozicije su određene u odnosu na njihov matični atom koristeći odgovarajuću HFIX komandu u SHELXL-97.
E. Smeša (1R,5R)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida i (1S,5S)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida. U smešu 2-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona i 2-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksil)izoindolin-1,3-diona (1,1 g, 4,02 mmol) u etanolu (50 ml) dodat je hidrazin hidrat (0,195 ml, 4,02 mmol). Dobijeni rastvor je ostavljen da se meša preko noći uz refluks u atmosferi azota. Reakcija je ohlađena na ambijentalnu temperaturu i pH vrednost je zatim podešena na < 2 dodatkom koncentrovanog vodenog rastvora
12
hlorovodonične kiseline. Talog je uklonjen filtracijom, ispran etanolom, a dobijeni filtrat je zatim koncentrovan do 20 ml pod sniženim pritiskom. Dodata je jednaka zapremina vode, i ova smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 15 min. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom, isprane vodom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući čvrstu supstancu koja je osušena u vakuum sušnici tokom nekoliko sati, dajući smešu (1R,5R)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida i (1S,5S)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida (835 mg, 4,65 mmol, prinos 115%) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.87 - 8.21 (m, 3 H), 2.98 - 3.23 (m, 1 H), 2.75 - 3.02 (m, 1 H), 1.49 - 1.92 (m, 2H), 1.26 - 1.47 (m, 3 H), 0.96 - 1.16 (m, 1 H), 0.48 - 0.93 (m, 6 H)
F. 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid i 2-(terc-butilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-(terc-butilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (375 mg, 1,46 mmol) i smeše (1R,5R)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida i (1S,5S)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida (342 mg, 1,902 mmol) u DMF-u (4,877 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,767 ml, 4,39 mmol) i reakcija je zagrevana na 90 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i zatim prečišćena reversno faznom semipreparativnom HPLC (5-80% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom i ponovo rastvorene u smeši etil acetata (125 ml) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (50 ml). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata (75 ml). Kombinovani slojevi etil acetata su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući ulje koje je triturirano sa dietil etrom i ponovo koncentrovano, što je dalo čvrste supstance. Čvrste supstance su sušene tokom nekoliko sati u vakuum sušnici na 45 °C, dajući smešu 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida i 2-(terc-butilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida (373 mg, 1,112 mmol, prinos 76%).
G. SFC razdvajanje smeše 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida i 2-(terc-butilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida. Smeša
12
enantiomera 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida i 2-(terc-butilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida (373 mg) razdvojena je pomoću preparativne hiralne SFC koristeći kolonu ChiralPak AD-H, 250×30mm I.D. sa izokratskim 32% etanolom 0,1% amonijum hidroksid u gradijentu CO2sa protokom od 50 ml/min. Brže eluirajući izomer je označen kao pik 1 i dobijeno je 155 mg (0,462 mmol). Sporije eluirajući izomer je označen kao pik 2 i dobijeno je 170,0 mg (0,502 mmol). Pik 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.82 - 9.11 (m, 1 H), 8.34 (s, 1 H), 6.50 - 6.82 (m, 1 H), 4.40 - 4.72 (m, 1 H), 3.72 - 4.01 (m, 1 H), 3.01 - 3.25 (m, 1 H), 1.83 - 1.99 (m, 1 H), 1.65 - 1.81 (m, 1 H), 1.37 (s, 13 H), 0.89 - 0.95 (m, 3 H), 0.72 - 0.88 (m, 3 H). MS (ESI) m/z 336.2 [M+1]<+>. Peak 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.52 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.15 (dt, J= 11.3, 4.6 Hz, 1H), 1.90 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.72 (s, 1H), 1.40 (s, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.34 - 1.05 (m, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.82 (s, 3H). MS (ESI) m/z 336.2 [M+1]<+>. Putem SAR poređenja potencije sa sličnim jedinjenjima sa poznatom apsolutnom stereohemijom koja su ovde data, pik 1 je određen kao 2-(terc-butilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Pik 2 je određen kao 2-(tercbutilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid.
Primer 35: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0287]
1. A. Etil 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat. Etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (900 g, 3,87 mol) etanol (12 l), DIEA (876 ml, 5,05 mol) i izopropilamin (379 ml, 4,45 mol) kombinovani su i mešani na ambijentalnoj temperaturi tokom 4 h. Dodato je još izopropilamina (50 ml, 0,59 mol) i smeša je mešana preko noći na ambijentalnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je razblažen vodom (2 l). Vodeni sloj je ekstrahovan hloroformom (2 × 3 l). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (1042 g, 4,08 mol, prinos >100%, kontaminiran
1
tragovima DIEA) kao bledosmeđe ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 256.4 [M+1]<+>.
B. 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidine-5-karboksilna kiselina. Etil 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (1042 g, 4,08 mol, >100%, kontaminiran tragovima DIEA) rastvoren je u etanolu (10 l) i u dobijeni rastvor je dodat 2 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (3,87 l, 7,74 mol). Dobijena smeša je mešana preko noći na ambijentalnoj temperaturi i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa 2 l vode i zatim ispran sa metil t-butil etrom (2 × 1,2 l). pH vrednost vodenog sloja je podešena na pH 4,2-4,5 pomoću 2 N vodenog rastvora hlorovodonične kiseline. Dobijene čvrste supstance su sakupljene filtracijom, isprane vodom (2 l) i heksanom (2 l), a zatim osušene preko noći u vakuum sušnici na 45 °C, dajući 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilnu kiselinu (848 g, prinos 96,5% u 2 koraka) kao beličastu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 228.1 [M+1]<+>.
C. 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilne kiseline (180 g, 0,792 mol) i HOBt (123 g, 0,911 mol) u anhidrovanom THF-u (6,9 l) ukapavanjem je dodata smeša EDC (174,6 g, 0,911 mol) u acetonitrilu (3,7 l) na ambijentalnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 1 h na ambijentalnoj temperaturi, a zatim je ukapavanjem dodat vodeni rastvor amonijum hidroksida (989 ml, 28-30% koncentrovan, 10 ekv.) tokom 30 min. Dobijena smeša je zagrevana uz blagi refluks tokom 3 h, a zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (5 l) i zatim dva puta ekstrahovan pomoću etil acetata (9 l, odnosno 2 l). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (4 l), vodom (4 l), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamid (171,2 g, prinos 95,5%) kao čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 227.4 [M+1]<+>.
D. 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(izopropilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (170 g, 0,751 mol) u hloroformu (22 l) u porcijama je uz mešanje dodat 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin (235,6 g, 0,902 mol) i dobijeni rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Dodato je još 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridina (19,6 g, 0,075 mol) i smeša je zatim mešana preko noći na ambijentalnoj temperaturi. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Čvrste supstance su triturirane sa etil acetatom (1,5 l) na ambijentalnoj temperaturi tokom 1 h, filtrirane, isprane etil acetatom (250 ml) i osušene u vakuum sušnici preko noći na 45 °C, dajući 4-
1 1
(izopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (167,7 g, prinos 92%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 243.2 [M+1]<+>.
5. E. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(izopropilamino)-pirimidin-5-karboksamid. Smeša (1r,4r)-4-aminocikloheksanola (262,4 g, 2,278 mol) i anhidrovanog DMF-a (79 ml) zagrejana je na 100 °C. U ovu smešu je u porcijama dodat 4-(izopropilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (157,7 g, 0,651 mol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša u atmosferi azota na 110 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio DMF. U ostatak je dodata voda (2 l) i smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 × 2 l). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (2 × 2 l), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom sve dok preostala zapremina nije dostigla 500 ml. Dobijena supstanca je filtrirana i isprana etil acetatom (800 ml). Proizvod je osušen na 45 °C u vakuum sušnici preko noći. Proizvod je trituriran sa vodom (2,1 l) tokom 4,5 h na 50 °C, filtriran i zatim osušen na 45 °C u vakuum sušnici preko noći, dajući 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(izopropilamino)pirimidin-5-karboksamid (134 g, prinos 70%);<1>H NMR (499 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.71 - 9.01 (m, 1 H), 8.33 (br. s., 1 H), 7.42 - 7.70 (m, 1 H), 6.67 - 7.12 (m, 2 H), 4.51 (d, J=3.94 Hz, 1 H), 3.98 - 4.25 (m, 1 H), 3.51 - 3.77 (m, 1 H), 3.34 - 3.41 (m, 1 H), 1.82 (br. s., 4 H), 1.06 - 1.33 (m, 10 H). MS (ESI) m/z 294.1 [M+1]<+>.
Primer 36: (1R,4r)-4-(5-cijano-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikiloheksilamino)-pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid
[0288]
1. A. Terc-butil (1r,4r)-4-(dimetilkarbamoil)cikloheksil karbamat. Smeša (1r,4r)-4-(tercbutoksikarbonilamino)cikloheksan karboksilne kiseline (7,5 g, 30,8 mmol), EDC (20,09 g, 105 mmol), HOBt (16,05 g, 105 mmol) u NMP-u (60 ml) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Dodat je rastvor dimetilamina (46,2 ml, 92 mmol) (2,0 M u THF-u) i reakciona smeša je mešana tokom 2 dana. Dodati su voda i etil acetat i faze su razdvojene. Organska faza je dva puta isprana zasićenim vodenim rastvorom kalijum karbonata, zatim 1 M vodenim rastvorom hlorovodonika i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je
1 2
osušena iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirana i rastvarač je uparen, dajući željeni proizvod (5,8 g, 19,3 mmol, prinos 96%). MS (ESI) m/z 271.4 [M+1]<+>.
B. (1r,4r)-4-amino-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid hidrohlorid. Terc-butil (1r,4r)-4-(dimetilkarbamoil)cikloheksil karbamat (8,27 g, 30,6 mmol) rastvoren je u dioksanu (110 ml) i dodata je hlorovodonična kiselina (38,5 ml, 1267 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, dodat je toluen i rastvarač je uparen, dajući proizvod (6,0 g, 29,0 mmol, prinos 95%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.22 (br. S., 3 H), 3.01 (s, 3 H), 2.86 - 2.98 (m, 1 H), 2.79 (s, 3 H), 1.93 - 2.04 (m, 2 H), 1.72 (d, J=7.81 Hz, 2 H), 1.31 - 1.48 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 171.4 [M+1]<+>
C. (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid. U suspenziju 5-brom-2-hlor-4-(metiltio)pirimidina (1,5 g, 6,26 mmol) u etanolu (7,5 ml) uz mešanje je dodat (1r,4r)-4-amino-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid hidrohlorid (1,618 g, 7,83 mmol) i DIEA (3,28 ml, 18,79 mmol). Dobijena smeša je mešana na 80 °C preko noći. Etanol je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (0-90% etil acetat u heksanu), dajući (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid (1085 mg, 2,91 mmol, prinos 46,4%). MS (ESI) m/z 373.0 [M+1]<+>, 375.2 [M+1]<+>.
D. (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid. Kombinovani su (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid (500 mg, 1,339 mmol), cink u prahu (21,90 mg, 0,335 mmol), cink cijanid (102 mg, 0,871 mmol), 1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferocen (60,0 mg, 0,107 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (61,3 mg, 0,067 mmol) i N,N-dimetilacetamid (2,178 ml), i dobijena smeša je zagrevana na 90 °C preko noći. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (125 ml) i vodom (50 ml) i filtrirana kroz sloj celita. Slojevi filtrata su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata (75 ml). Kombinovani slojevi etil acetata su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom do ulja. Ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u DCM-u), dajući (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid (400 mg, 1,252 mmol, prinos 93%) kao čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 320.2 [M+1]<+>.
E. (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metilsulfonil)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid. U rastvor (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metiltio)-pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamida (400 mg, 1,252 mmol) u NMP-u (6,261 ml) na 0 °C
1
dodat je mCPBA (702 mg, 3,13 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na 0 °C, a zatim na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Rastvor je zatim korišćen neposredno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja uz pretpostavku teorijskog prinosa (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metilsulfonil)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksankarboksamida (440 mg, 1,25 mmol, prinos 100%). MS (ESI) m/z 352.3 [M+1]<+>.
6. F. (1R,4r)-4-(5-cijano-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)-pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamid. U rastvor (1r,4r)-4-(5-cijano-4-(metilsulfonil)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetilcikloheksan karboksamida (440 mg, 1,252 mmol) u NMP-u (6,261 ml) dodat je (1S,3R)-3-amino-1-metilcikloheksanol hidrohlorid (259 mg, 1,565 mmol) i DIEA (1,312 ml, 7,51 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 4 h i zatim je ostavljena da se ohladi na ambijentalnu temperaturu. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena reversno faznom semipreparativnom HPLC (5-60% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostaci su ponovo rastvoreni u metanolu (5 ml), propušteni kroz kolone za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata po epruveti), koncentrovani pod sniženim pritiskom i osušeni preko noći u vakuum sušnici na 45 °C, dajući (1R,4r)-4-(5-cijano-4-((1R,3S)-3-hidroksi-3-metilcikloheksilamino)pirimidin-2-ilamino)-N,N-dimetil-cikloheksan karboksamid (138 mg, 0,345 mmol, prinos 27,5%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.11 (s, 1 H), 7.58 (d, J=7.81 Hz, 2 H), 4.70 - 5.01 (m, 1 H), 4.12 - 4.42 (m, 2 H), 3.52 - 3.79 (m, 1 H), 3.00 (s, 3 H), 2.79 (s, 3 H), 1.21 - 2.07 (m, 16 H), 1.03 - 1.20 (m, 3 H). MS (ESI) m/z 401.5 [M+1]<+>.
Primer 37: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0289]
1. A. 2-(metiltio)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril. 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (500 mg, 2,69 mmol) rastvoren je u DMF-u (5 ml), dodati su 2-metilbutan-2-amin (0,378 ml, 3,24 mmol) i DIEA (1,411 ml, 8,08 mmol) i reakcija je zagrevana na 70 °C preko noći. LCMS pokazuje masu željenog proizvoda kao dominantni pik i da nema više polazne supstance. Reakcija je sklonjena od izvora toplote i razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je jednom ispran zasićenim vodenim rastvorom
1 4
soli pa je osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i kondenzovan. Sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-80% etil acetat u heksanu za 1650 ml, 40 ml/min). Frakcije proizvoda su kombinovane, uparene i osušene pod visokim vakuumom, dajući 2-(metiltio)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril (359 mg, 1,519 mmol, prinos 56,4%) kao belu čvrstu supstancu; MS (ESI) m/z 236.9 [M+1]<+>B. 2-(metilsulfonil)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril. 2-(metiltio)-4-(tercpentilamino)pirimidin-5-karbonitril (350 mg, 1,481 mmol) rastvoren je u NMP-u (5 ml), i ohlađen na 0 °C pa je u porcijama dodat mCPBA (664 mg, 2,96 mmol). Reakcija je držana na 0 °C i ostavljena da se polako zagreva na sobnu temperaturu. Nakon 2 h, LCMS pokazuje željeni proizvod kao dominantni pik i da nema polazne supstance. Sirova reakciona smeša je korišćena neposredno u sledećem koraku uz pretpostavku teorijskog prinosa sulfona; MS (ESI) m/z 269.2 [M+1]<+>
C. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril. U sirovu reakcionu smešu iz prethodnog koraka dodat je (1r,4r)-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (269 mg, 1,775 mmol) i DIEA (1,034 ml, 5,92 mmol). Reakcija je zatim zagrevana na 70 °C preko noći. LCMS pokazuje željeni proizvod kao dominantni pik i da nema više polazne supstance. Reakcija je sklonjena od izvora toplote i zatim razdeljena između etil acetata i vode. Organski sloj je jednom ispran zasićenim vodenim rastvorom soli pa je osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Supstanca je prečišćena semipreparativnom HPLC (5-80% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA). Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom do zapremine <5 ml. Supstanca je zatim neutralisana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana pomoću etil acetata (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u metanolu i isprana na koloni sa smolom StratoSpheres SPE PL-HCO3 MP, uz eluiranje metanolom. Uparavanje rastvarača pod sniženim pritiskom dalo je 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril (200 mg, 0,659 mmol, prinos 45%) kao belu čvrstu supstancu;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.07 - 8.24 (m, 1 H), 7.24 - 7.63 (m, 1 H), 5.67 - 5.95 (m, 1 H), 4.56 (d, J=4.69 Hz, 1 H), 3.35 - 3.60 (m, 2 H), 1.74 - 1.96 (m, 6 H), 1.09 - 1.43 (m, 10 H), 0.72 - 0.86 (m, 3 H); MS (ESI) m/z 304.1 [M+1]<+>
D. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karboksamid. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(terc-pentilamino)pirimidin-5-karbonitril (141 mg, 0,465 mmol) rastvoren je u DMSO-u (3 ml) i na sobnoj temperaturi
1
je dodato 10 kapi 50% vodenog rastvora natrijum hidroksida i 10 kapi 30% vodenog rastvora vodonik peroksida. Reakcija je zatim zagrejana na 50 °C. Nakon 30 min, LCMS pokazuje željeni proizvod kao dominantni pik i da nema više polazne supstance. Reakcija je uklonjena od izvora toplote i polako je dodata u ~50 ml ledene vode. Dobijena supstanca je ostavljena da se meša tokom 3 h pre filtracije i sušenja pod visokim vakuumom na 60 °C preko noći. Dobijen je 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(tercpentilamino)pirimidin-5-karboksamid (125 mg, 0,389 mmol, prinos 84%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.14 (s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 7.00 (d, J=7.81 Hz, 1 H), 4.53 (d, J=4.29 Hz, 1 H), 3.38 (d, J=3.51 Hz, 2 H), 1.74 - 1.92 (m, 6 H), 1.36 (s, 7 H), 1.13 - 1.31 (m, 4 H), 0.80 (t, J=7.42 Hz, 3 H); MS (ESI) m/z 322.0 [M+1]<+>.
Primer 38: 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-((1R,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0290]
1. A. Etil 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat. Smeša etil 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilata (200 g, 0,86 mol), biciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorida (171 g, 1,11 mol; pripremljen prema Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) i DIEA (278 g, 2,15 mol) u etanolu (2,4 l) mešana je preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon završetka reakcije, rastvarači su koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod, koji je razblažen vodom (1 l). Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću hloroforma (2 × 1 l), i kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Uparavanje rastvarača je dalo željeno jedinjenje (231 g, 0,83 mol, prinos 96%) kao bledosmeđe ulje koje je bilo kontaminirano tragovima DIEA. Ovaj proizvod je korišćen u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.61 (s, 2H), 4.30 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.51 (s, 1H), 2.20 (s, 6H), 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
2. B. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilna kiselina.
Etil 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilat (120 g, 0,43 mol) rastvoren je u etanolu (1,5 l) nakon čega je dodat vodeni rastvor natrijum hidroksida (530 ml, 1,06 mol, 2 M) i dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je nakon toga uparen pod sniženim pritiskom (temperatura kupatila <42 °C). Smeša je razblažena sa 500 ml vode i isprana terc-butil metil etrom (2 × 500 ml). Vodeni
1
sloj je tretiran vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (2 N) do pH 4,2-4,5. Dobijene čvrste supstance su sakupljene filtracijom, nakon čega su isprane vodom (500 ml) i heksanom (500 ml). Vlažna pogača je osušena pod sniženim pritiskom preko noći na 45 °C, dajući željeno jedinjenje (108 g, 0,43 mol, prinos 100%) kao beličastu čvrstu supstancu (116 mg, 0,365 mmol, prinos 54,7%);<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.52 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.52 (s, 1H), 2.24 (s, 6H)
C. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksilne kiseline (108 g, 0,43 mol) i HOBt (67 g, 0,49 mol) u anhidrovanom THF-u (4 l) uz mešanje je ukapavanjem dodata smeša EDC (94 g, 0,49 mol) u acetonitrilu (2 l) na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakciona smeša mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi, ukapavanjem je dodat vodeni rastvor amonijum hidroksida (600 ml, 28-30% koncentrovan, 10 ekv.) tokom 30 min i smeša je zatim zagrevana do blagog refluksa tokom 3 h (60±5 °C). Nakon toga, svi rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom, rezidualna pasta/čvrsta supstanca je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 l) i dobijena suspenzija je filtrirana, dajući željeno jedinjenje (100 g, 0,4 mol, prinos 93%) kao beličastu paperjastu čvrstu supstancu; MS(ESI): m/z 251,1 [M+1]<+>.
D. 4-(biciklo[1.1.1] pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (76 g, 0,304 mol) u hloroformu (7 l) uz mešanje je dodat 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin (143 g, 0,547 mol, 1,8 ekv.) i dobijeni bledožuti rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu koja je razblažena etil acetatom (1,5 l) i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana etil acetatom, i osušena pod vakuumom, dajući željeno jedinjenje (73 g, 0,274 mol, prinos 90%) kao belu čvrstu supstancu; MS(ESI): m/z 267,0 [M+1]<+>.
E. 4-(biciklo[1.1.1] pentan-1-ilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Smeša (1r,4r)-4-aminocikloheksanola (151,4 g, 1,314 mol) i anhidrovanog DMF-a (500 ml) zagrejana je na ~100 °C. U ovu smešu je u porcijama dodat 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (100 g, 0,376 mol) u atmosferi azota i reakciona smeša je mešana na 110 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena na ~45 °C i DMF je uklonjen pod sniženim pritiskom, nakon čega je usledilo dodavanje vode (500 ml) i etil acetata (500 ml). Dobijena bela suspenzija je filtrirana i isprana etil acetatom (50 ml). Čvrsta supstanca je osušena na 55 °C pod vakuumom tokom 48 h, dajući 100 g sirovog proizvoda. Kako bi se uklonili tragovi
1
organskog rastvarača, sirovi proizvod je suspendovan u vodi (1 l) i mešan tokom 4,5 h, uz održavanje interne temperature na 50±1 °C. Suspenzija je filtrirana na 45-50 °C i isprana vodom (50 ml). Vlažna pogača je osušena pod vakuumom na 45-50 °C tokom 48 h, dajući željeno jedinjenje (92 g, 0,289 mol, prinos 77%);<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ ppm 8.26 (s, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.56-3.58 (m, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.18 (s, 6H), 1.98-2.06 (m, 4H), 1.32-1.39 (m, 4H); MS(ESI): m/z 318.1 [M+1]<+>.
Primer 39: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0291]
1. A. (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)-cikloheksanol. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 3 l montiran je J-KEM kontroler temperature, mehanička mešalica i ulaz za azot. Balon je napunjen 5-brom-2-hlor-4-(metiltio)pirimidinom (100 g, 417,5 mmol), (1r,4r)-4-aminocikloheksanolom (76,4 g, 663,4 mmol), i etanolom (1 l). Dodat je DIEA (109 ml, 626,3 mmol) i smeša je zagrevana do refluksa preko noći. TLC analiza (1:1 heksan/etil acetat) nakon 20 h pokazala je završetak reakcije. Reakcija je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu. Dodata je voda (300 ml) i polako je formiran talog. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana vodom, dajući 111,7 g bele čvrste supstance. Filtrat je ekstrahovan pomoću etil acetata (3 × 300 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do polučvrste supstance. Polučvrsta supstanca je suspendovana u smeši heksan/etil acetat 1:1 i filtrirana, dajući još 12,1 g bele čvrste supstance. Dve šarže su kombinovane, dajući 123,8 g (93%) (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)cikloheksanola kao bele čvrste supstance. MS (ESI) m/z 318, 320 [M+1]<+>.
2. B. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 2 l montiran je J-KEM kontroler temperature, mehanička mešalica i ulaz za azot. Balon je u atmosferi azota napunjen (1r,4r)-4-(5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-ilamino)cikloheksanolom (123,8 g, 389 mmol), cink cijanidom (29,2 g, 249 mmol), cinkom u prahu (6,36 g, 97 mmol) i N,N-dimetilacetamidom (478 ml). Dodati su tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (17,8 g, 0,05 ekv.) i 1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferocen (17,25 g, 0,08 ekv.) i smeša je pročišćena azotom. Reakcija je zagrevana do 100 °C preko noći. TLC analiza (2:1 etil acetat/heksan) nakon 17 h pokazala
1
je završetak reakcije. Reakcija je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i razblažena je etil acetatom (2 l). Smeša je filtrirana kroz tanak sloj celita i taj sloj je ispran etil acetatom (3 × 400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (1 l) i zasićenim vodenim rastvorom soli (400 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan da se ukloni veći deo rastvarača, i formiran je talog bež boje. Čvrste supstance su filtrirane i isprane etil acetatom (2 × 50 ml), dajući 55 g (54%) 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila kao čvrste supstance bež boje. MS (ESI) m/z 265 [M 1]<+>.
C. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)-pirimidin-5-karbonitril i 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitril. U bezbojni rastvor 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (0,700 g, 2,65 mmol) u NMP-u (10 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (1,306 g, 5,83 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h do završetka reakcije prema LCMS analizi. Reakciona smeša je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 281.4 [M+1]<+>i 297.2 [M+1]<+>.
D. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropil-amino)pirimidin-5-karbonitril. U reakcionu smešu 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karbonitrila i 2-((lr,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila iz prethodnog koraka dodat je DIEA (2,78 ml, 15,89 mmol) i 1-metilciklopropanamin hidrohlorid (0,627 g, 5,83 mmol). Reakcija je mešana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela, koristeći gradijent 0% - 80% etil acetata u heksanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,147 g, prinos 19%) kao bledožutu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 288.2 [M+1]<+>.
E. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropil-amino)pirimidin-5-karboksamid. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,225 g, 0,783 mmol) rastvoren je u DMSO-u (15 ml). U reakcionu smešu su na sobnoj temperaturi dodati natrijum hidroksid (50 mas.%, 175 µl, 0,783 mmol) i 30% vodonik peroksid (175 µl, 1,543 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 1 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana je u 300 ml ledene vode. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću 20% izopropanola u hloroformu (x3) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovani.
1
Sirova smeša je prečišćena reversno faznom hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent 0% - 90% metanola u vodi. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-((1r,4r)-4-hidroksi cikloheksilamino)-4-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,181 g, prinos 76%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.10 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.06 (d, J= 7.42 Hz, 1H), 4.53 (d, J= 4.30 Hz, 1H), 3.59 - 3.70 (m, 1H), 3.35 - 3.46 (m, 1H), 1.96 (d, J= 9.76 Hz, 1H), 1.85 (d, J = 9.76 Hz, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.20 - 1.34 (m, 4H), 0.81 - 0.89 (m, 1H), 0.58 - 0.71 (m, 4H); MS (ESI) m/z 306.4 [M+1]<+>
Primer 40: 4-((R)-1-ciklopropiletilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0292]
1. A. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 2 l montiran je J-KEM kontroler temperature, mehanička mešalica i ulaz za azot. U balon su dodati 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (54 g, 204,3 mmol; sinteza opisana ovde) i DMSO (270 ml), i rastvor je ohlađen na 0 °C. U reakcionu smešu su polako dodati rastvor natrijum hidroksida (170 ml, 1021 mmol, 6 M u vodi) i rastvor vodonik peroksida (99 ml, 1021 mmol, 35% u vodi). Uočena je egzotermna reakcija do 30 °C. Reakcija je zagrevana na 50 °C tokom 15 min. TLC analiza (10% metanol/etil acetat) je pokazala da je reakcija završena. Smeša je ohlađena na 10 °C, razblažena vodom (800 ml) i mešana tokom 10 min. Smeša je filtrirana, dajući 18 g sirove čvrste supstance. Da bi se izolovala dodatna količina proizvoda, filtrat je ekstrahovan pomoću etil acetata (18 × 250 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (75 ml), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući 33 g sirove čvrste supstance. Sirove čvrste supstance su kombinovane i prečišćene na silika gelu uz eluiranje 0-15% metanolom/etil acetat, dajući 26 g beličaste čvrste supstance. Čvrsta supstanca je suspendovana u acetonitrilu i filtrirana, dajući 19,5 g (33%) 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida kao beličaste čvrste supstance; MS (ESI) m/z 283.3 [M+1]<+>
2. B. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U žuti rastvor 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida
14
(0,400 g, 1,42 mmol) u NMP-u (5 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (0,635 g, 2,83 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h do završetka reakcije prema LCMS analizi. Reakciona smeša je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 298.0 [M+1]<+>i 315.1 [M+1]<+>
3. C. 4-((R)-1-ciklopropiletilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U reakcionu smešu 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida iz prethodne reakcije dodat je DIEA (1,56 ml, 8,95 mmol) i (R)-1-ciklopropiletanamin (0,254 g, 2,98 mmol). Reakcija je mešana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena reversno faznom hromatografijom na koloni silika gela, koristeći gradijent 0% - 90% metanola u vodi. Željene frakcije su ponovo prečišćene hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent 0% - 15% metanola zasićenog amonijakom u DCM-u, nakon čega je sledila reversno fazna semipreparativna HPLC (0-50% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata po epruveti), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 4-((R)-1-ciklopropiletilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,104 g, prinos 22%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.87 - 9.10 (m, 1H), 8.32 (br. s., 1H), 6.68 - 7.02 (m, 1H), 4.51 (d, J = 3.94 Hz, 1H), 3.52 - 3.72 (m, 2H), 3.36 (br. s., 1H), 1.82 (br. s., 4H), 1.12 - 1.32 (m, 8H), 0.95 (d, J= 6.89 Hz, 1H), 0.25 - 0.50 (m, 3H), 0.10 - 0.23 (m, 1H); MS (ESI) m/z 320.1 [M+1]<+>.
Primer 41: 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0293]
1. A. 5-brom-N-(1-metilciklopropil)-4-(metiltio)pirimidin-2-amin. U suspenziju 5-brom-2-hlor-4-(metiltio)pirimidina (1,0 g, 4,18 mmol) u etanolu (6,0 ml) uz mešanje je dodat 1-metilciklopropanamin hidrohlorid (0,674 g, 6,26 mmol) i DIEA (2,188 ml, 12,53 mmol).
Smeša je mešana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela, koristeći gradijent 0% - 20% etil acetata u heksanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 5-brom-N-(1-metilciklopropil)-4-(metiltio)pirimidin-2-amin (0,665 g, prinos 58%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 276.2 [M+1]<+>.
B. 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. Crna suspenzija 5-brom-N-(1-metilciklopropil)-4-(metiltio)pirimidin-2-amina (0,665 g, 2,425 mmol), cinka (0,040 g, 0,606 mmol), cink cijanida (0,185 g, 1,577 mmol), 1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferocena (0,109 g, 0,194 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (0,111 g, 0,121 mmol) i N, N'-dimetilacetamida (6 ml) pročišćena je azotom i zagrevana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je razblažena sa 125 ml etil acetata i 50 ml vode i filtrirana kroz sloj celita. Slojevi filtrata su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa 75 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani sa 2×50 ml zasićenog vodenog rastvora soli, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do ulja. Sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent 0% - 30% etil acetat u heksanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (0,449 g, prinos 84%) kao bledožutu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 221.2 [M+1]<+>.
C. 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitril. U bezbojni rastvor 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)-pirimidin-5-karbonitrila (0,449 g, 2,04 mmol) u NMP-u (6 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (1,142 g, 5,10 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h do završetka reakcije prema LCMS. Reakciona smeša je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 253.3 [M+1]<+>.
D. 4-((3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karbonitril. U reakcionu smešu 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karbonitrila iz prethodnog koraka dodat je DIEA (2,14 ml, 12,22 mmol) i (1R,2R,SR)-5-amino-2-metilcikloheksanol hidrohlorid (0,371 g, 2,241 mmol; sinteza opisana ovde). Reakcija je mešana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela, koristeći gradijent 0% - 60% etil acetata u heksanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane, dajući 4-((3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,185 g, prinos 30%) kao bledožutu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 302.1 [M+1]<+>
5. E. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karbonitril (0,181 g, 0,601 mmol) rastvoren je u DMSO-u (6 ml). Na sobnoj temperaturi je dodato deset kapi 50% vodenog rastvora natrijum hidroksida (0,047 ml, 0,901 mmol) i deset kapi 30% vodenog rastvora vodonik peroksida. Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 1 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana je u 300 ml ledene vode. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću 20% iPrOH/hloroform (x3) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovani. Sirova smeša je prečišćena reversno fazno semipreparativnom HPLC analizi (0-50% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA, tokom 30 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolone za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom da se ukloni TFA (0,9 mmol ekviv. bikarbonata po epruveti), a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,069 g, prinos 36%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.79 - 8.92 (m, 1H), 8.28 - 8.39 (m, 1H), 7.32 - 7.48 (m, 1H), 4.56 (s, 1H), 3.83 - 3.97 (m, 1H), 2.89 - 3.08 (m, 1H), 2.18 - 2.31 (m, 1H), 1.97 - 2.08 (m, 1H), 1.61 - 1.74 (m, 1H), 1.35 (s, 4H), 1.05 - 1.26 (m, 1H), 0.94 (d, J= 6.64 Hz, 5H), 0.66 (s, 3H), 0.54 (br. s., 3H); MS (ESI) m/z 320.2 [M+1]<+>.
Primer 42: 4-(terc-butilamino)-2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid
[0294]
1. A. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)izoindolin-1,3-dion. Rastvor izobenzofuran-1, 3-diona (90 g, 0,6 mol) i (1r,4r)-4-aminocikloheksanola (70 g, 0,6 mol) u toluenu (250 ml) i DMF-u (250 ml) mešan je na 130 °C preko noći. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu, dodata je voda i proizvod je filtriran, ispran vodom i osušen pod vakuumom, dajući željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja (119 g, 0,48 mol, prinos: 81%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.84-7.79 (m, 2H), 7.72-7.68 (m, 2H), 4.18-4.10 (m, 1H), 3.80-3.73 (m, 1H), 2.40-2.29
14
(qd, J1=3.4Hz, J2=130Hz, 2H), 2.12-2.09 (dd, J=6.2Hz, 2H), 1.78-1.74 (dd, J=6.6Hz, 2H), 1.49-1.39 (qd, J1=3.3Hz, J2=125Hz, 2H).
B. 2-((1r,4r)-4-(viniloksi)cikloheksil)izoindolin-1,3-dion. Paladijum acetat (11 g, 0,048 mol) u etoksietenu (500 ml) mešan je na 0 °C tokom 15 min, zatim je dodat rastvor 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)izoindolin-1,3-diona (118 g, 0,48 mol) u etoksietenu (1000 ml). Smeša je mešana na 60 °C tokom 3 dana. Nakon toga, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana i isprana etil acetatom. Dobijeni filtrat je koncentrovan, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (16,7-25% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje kao belu čvrstu supstancu (80 g, 0,29 mol, prinos: 61%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.84-7.80 (m, 2H), 7.72-7.68 (m, 1H), 6.37-6.32 (dd,J=6.4Hz, 1H), 4.34-4.30 (dd,J=1.2Hz, 1H), 4.20-4.12 (m, 1H),4.04-4.02 (dd, J=2.0Hz, 1H), 3.89-3.81 (m, 1H), 2.40-2.29 (qd, J1=3.4Hz, J2=130.6Hz, 2H), 2.21-2.17 (dd, J=64Hz, 2H), 1.82-1.78 (dd, J=64Hz, 2H), 1.53-1.43 (qd,J1=33Hz, J2=126.6Hz, 2H).
C. 2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksil)izoindolin-1,3-dion. U smešu dietil etra (100 ml) i kalijum hidroksida (2,5 N, 50 ml) uz mešanje je dodata 1-nitrozourea (38 g, 0,37 mol) na 0 °C. Nakon 15 min, etarska faza je sakupljena i pažljivo dodata u smešu 2-((1r,4r)-4-(viniloksi)cikloheksil)izoindolin-1,3-diona (10 g, 36,9 mmol) i paladijum acetata (826 mg, 3,69 mmol) u dietil etru (100 ml) i DCM-u (100 ml). Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C tokom 0,5 h. Postupak dobijanja i dodavanja etarskog rastvora diazometana je zatim ponovljen tri puta. Nakon što je reakcija završena, čvrsta supstanca u reakcionoj smeši je uklonjena filtracijom, filtrat je sakupljen i koncentrovan, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (25% etil acetat u petrol etru, zatim 33% etil acetat u petrol etru), dajući 2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksil)izoindolin-1,3-dion (9,3 g, 32,6 mmol, prinos: 88%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.84-7.79 (m, 2H), 7.72-7.67 (m, 1H), 4.18-4.09 (m, 1H), 3.56-3.48 (m, 1H),3.37-3.33 (m, 1H),2.38-2.27 (qd, J1=3.6Hz, J2=130.6Hz, 2H),2.21-2.18 (dd, J=6.4Hz, 1H), 1.79-1.76 (dd, J=6.4Hz, 2H), 1.50-1.33(qd, J1=35Hz, J2=126Hz, 2H), 0.60-0.56 (m, 2H), 0.50-0.46 (m, 2H).
D. (1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksanamin. Smeša 2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksil)izoindolin-1,3-diona (30 g, 0,10 mol) i hidrazin hidrata (18,9 g, 0,31 mol) u metanolu (600 ml) zagrevana je na 80°C tokom 2 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je sakupljen i koncentrovan, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (3,33% metanola u DCM-u), dajući (1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksanamin kao žuto ulje (10 g, 64,5 mmol, prinos: 61%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.40-3.28 (m, 2H), 2.72-2.65 (m, 1H), 2.06-2.03 (dd, J=3.8Hz, 2H), 1.88-1.85 (dd, J=6.2Hz, 2H), 1.34-1.24 (qd, 11=28Hz, J2=123.3Hz, 2H), 1.19-1.09 (qd, J1=28Hz, J2=123.3Hz, 2H), 0.56-0.51(m, 2H), 0.49-0.44(m, 2H); MS(ESI) m/z = 156.1 [M+1]<+>.
5. E. 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(tercbutilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (0,500 g, 2,081 mmol; sinteza opisana ovde) u NMP-u (6 ml) uz mešanje je dodat mCPBA (0,933 g, 4,16 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h do završetka reakcije prema LCMS analizi. Reakciona smeša je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 273.2 [M+1]<+>.
6. F. 4-(terc-butilamino)-2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U reakcionu smešu 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)-pirimidin-5-karboksamida iz prethodnog koraka dodat je DIEA (1,5 ml, 8,33 mmol) i (1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksanamin (0,485 g, 3,12 mmol). Reakcija je mešana na 90 °C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije prema LCMS i TLC analizi, reakciona smeša je polako dodata u ~ 70 ml ledene vode. Ovaj proizvod je filtriran, ispran vodom, zatim minimalnom količinom etanola i dietil etra, a zatim je osušen, dajući naslovno jedinjenje 4-(tercbutilamino)-2-((1r,4r)-4-ciklopropoksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,214 g, prinos 30%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.18 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.02 - 7.08 (m, 1H), 3.57 - 3.67 (m, 1H), 3.30 (t, J= 2.93 Hz, 1H), 1.99 - 2.09 (m, 2H), 1.85 - 1.94 (m, 2H), 1.41 (s, 11H), 1.28 (br. s., 5H), 0.37 - 0.46 (m, 4H); MS (ESI) m/z 348.3 [M+1]<+>. Primer 43: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0295]
[0296] A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril (240 mg, 0,950 mmol; sinteza opisana ovde), (1R,4R)-4-aminocikloheksanol hidrohlorid (216 mg, 1,425 mmol), i cezijum karbonat (619 mg, 1,899 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu (10 ml) i zagrevani na 80 °C tokom 3 h. LCMS analiza pokazuje masu željenog proizvoda kao dominantni pik i nema više polazne supstance. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (10-100% etil acetat u heksanu, zatim 0-15% metanol u DCM-u), dajući naslovno jedinjenje (159 mg, 0,480 mmol, prinos 50,5%);<1>H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ ppm 8.06 - 8.24 (m, 1 H), 7.09 - 7.57 (m,
14
2 H), 4.74 (d, J=4.3 Hz, 1 H), 4.48 - 4.63 (m, 1 H), 3.89 - 4.16 (m, 1 H), 3.34 - 3.74 (m, 3 H), 1.53 - 2.09 (m, 8 H), 0.99 - 1.51 ppm (m, 8 H); MS (ESI) m/z 332.1 [M+1]<+>.
Primer 44: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0297]
[0298] A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (113 mg, 0,447 mmol; sinteza opisana ovde) i (1r,4r)-4-(2,2,2-trifluoretoksi)cikloheksanamina (150 mg, 0,761 mmol; sinteza opisana ovde) u DMSO-u (6,0 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,156 ml, 0,895 mmol). Dobijena smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 3 d. DMSO je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (0-40% etil acetat 10% 7 N amonijak u metanolu u heksanu), dajući naslovno jedinjenje (156 mg, 0,378 mmol, prinos 84,6%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.03 - 8.29 (m, 1 H), 7.10 - 7.62 (m, 2 H), 4.74 (d, J=3.90 Hz, 1 H), 4.05 (q, J=9.37 Hz, 3 H), 3.36 - 3.82 (m, 3 H), 1.55 - 2.13 (m, 8 H), 1.00 - 1.50 (m, 8 H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -73.64 (t, J=9.19 Hz, 3 F). MS (ESI) m/z 414.2 [M+1]<+>.
Primer 45: 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0299]
[0300] A. 2-((1r,4R)-4-(difluormetoksi)cikloheksilamino)-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 2-hlor-4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karbonitrila (100 mg, 0,396 mmol; sinteza opisana ovde) i (1r,4r)-4-(difluormetoksi)cikloheksanamina (131 mg, 0,791 mmol; sinteza opisana ovde) u DMSO-u (4,0 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,138 ml, 0,791 mmol). Dobijena smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi preko noći. DMSO je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (5-40% etil acetat 10% metanol zasićen amonijakom u heksanu), dajući naslovno jedinjenje (130 mg, 0,340 mmol, prinos 86,0%).<1>H
14
NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.08 - 8.25 (m, 1 H), 7.12 - 7.62 (m, 2 H), 6.47 - 6.94 (m, 1 H), 4.74 (d, J=4.29 Hz, 1 H), 3.88 - 4.18 (m, 2 H), 3.41 - 3.85 (m, 2 H), 1.01 - 2.11 (m, 16 H).<19>F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -79.21 - -78.76 (m, 2 F). MS (ESI) m/z 382.3 [M+1]<+>.
Primer 46: 4-(terc-butilamino)-2-(4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0301]
1. A. Ciklopentan-1,3-dikarboksilna kiselina. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 22 l montirana je mehanička mešalica, J-KEM kontroler temperature i ulaz za azot. Balon je napunjen norbornenom (200 g, 2,123 mol), etil acetatom (1,95 l) i acetonitrilom (1,95 l). Reakciona smeša je ohlađena na 5 °C koristeći kupatilo sa acetonom/suvim ledom. U jednoj porciji je dodat rutenijum trihlorid (9,69 g, 46,72 mmol) nakon čega je polako dodata suspenzija natrijum perjodata (1,816 kg, 8,707 mol) u vodi (2,925 l) tokom 30 min. Reakcija je polako postajala egzotermna i praćena je kako bi se temperatura održala između 10 °C i 15 °C. Nakon 90 min, reakciona smeša se iznenada zgusnula toliko da je mešanje postalo teško i brzo je temperatura egzotermno porasla do 39 °C (velika količina suvog leda je dodata u kupatilo za hlađenje kako bi se kontrolisala egzotermna reakcija). Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na 20 °C, kupatilo sa suvim ledom/acetonom je uklonjeno i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan do čvrste supstance koja je triturirana sa heksanom (2 l), filtrirana i isprana heksanom (2 × 500 ml), dajući 195 g (58%) ciklopentan-1,3-dikarboksilne kiseline.<1>H NMR (500 Hz, DMSO-d6) δ ppm 12.07 (s, 2H), 2.66-2.73 (m, 2H), 2.06-2.12 (m, 1H), 1.85-1.89 (m, 1H), 1.72-1.85 (m, 4H).
2. B. Dimetil ciklopentan-1,3-dikarboksilat. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 5 l montirana je mehanička mešalica, J-KEM kontroler temperature i refluksni kondenzator. Balon je napunjen ciklopentan-1,3-dikarboksilnom kiselinom (357 g, 2,262 mol) i metanolom (1,75 l). Rastvor je ohlađen na 7 °C koristeći ledeno/vodeno kupatilo. Koncentrovana sumporna kiselina (70 ml) ukapavanjem je dodata tokom 30 min što je dovelo do egzotermne reakcije do 12 °C. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa i mešana tokom 16 h kada je TLC analiza (10% metanol/etil acetat) pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana, ponovo rastvorena u metil terc-butil etru, i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 × 150 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 150 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata,
14
filtriran i koncentrovan. Dobijeno bistro ulje je rastvoreno u heksanu (2 l) i tretirano 2 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (950 ml) do pH ~ 10. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću heksana (4 × 1 l). Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući 360 g (100%) dimetil ciklopentan-1,3-dikarboksilata kao bistrog ulja.<1>H NMR (500 Hz, CDCl3) δ ppm 3.67 (s, 6H), 2.75-2.83 (m, 2H), 2.20-2.26 (m, 1H), 2.05-2.12 (m, 1H), 1.90-2.0 (m, 4H).
C. Dimetil biciklo[2.2.1]heptan-1,4-dikarboksilat. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 22 l montiran je J-KEM kontroler temperature, mehanička mešalica, ulaz za azot i dodatni levak. Balon je pročišćen azotom, zatim napunjen anhidrovanim THF-om (5 l) i diizopropilaminom (731 ml, 5,219 mol). Rastvor je ohlađen na -20 °C koristeći kupatilo sa suvim ledom/acetonom. Smeša je uz mešanje polako tretirana 1,6 M n-butillitijumom u heksanu (3,02 l, 4,833 mol) putem kanile tokom 1 h uz održavanje temperature od -20 °C do -27 °C. Reakciona smeša je ohlađena na -40 °C i polako je dodat heksametil fosforamid (2,7 l, 16,317 mol) pomoću levka za ukapavanje tokom 40 min. Reakciona smeša je ohlađena na -73 °C i polako je dodat dimetil ciklopentan-1,3-dikarboksilat (360 g, 1,933 mol) rastvoren u anhidrovanom THF-u (2 l) pomoću levka za ukapavanje tokom 2 h. Reakciona smeša je zagrejana na -10 °C i mešana na toj temperaturi tokom 30 min, zatim ohlađena na -70 °C i tretirana 1-brom-2-hloretanom (267 ml, 3,209 mol) pomoću levka za ukapavanje tokom 4 h. Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreva na sobnu temperaturu tokom 12 h i zatim je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (2 l) tokom 90 min. Reakciona smeša je razblažena heksanom (2 l), slojevi su odvojeni i vodeni sloj je dalje ekstrahovan pomoću heksana (3 × 2 l). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 1 l), osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do smeđeg ulja. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-10% etil acetat/heksan). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane skoro do suva i razblažene heksanom. Dobijene kristalne čvrste supstance su filtrirane i isprane heksanom (200 ml), dajući čisti proizvod kao providnu kristalnu čvrstu supstancu. Dodatne šarže proizvoda su dobijene iz filtrata na sličan način. Sve šarže proizvoda su kombinovane, dajući 208 g (51%) dimetil biciklo[2.2.1]heptan-1,4-dikarboksilata kao providne kristalne čvrste supstance.<1>H NMR (500 Hz, CDCl3) δ ppm 3.68 (s, 6H), 2.03 (d, J= 6.4 Hz, 4H), 1.90 (s, 2H), 1.67 (d, J= 7.0, 4H).
D. 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 12 l montirana je mehanička mešalica, J-KEM kontroler temperature i levak za ukapavanje od 250 ml. Balon je napunjen dimetil biciklo[2.2.1]heptan-1,4-dikarboksilatom (208 g, 980 mmol) i THF-om (6,7 l). Dobijeni rastvor je ohlađen na 15 °C
14
koristeći ledeno/vodeno kupatilo. Peleti natrijum hidroksida (39,2 g, 980 mmol) rastvoreni su u metanolu (400 ml) i polako uz mešanje dodavani u rastvor tokom 30 min. Nakon završetka dodavanja, počele su da se talože bele čvrste supstance. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h nakon čega je TLC analiza (100% etil acetat) pokazala oko 90% konverzije. Reakciona smeša je koncentrovana do suva, suspendovana u heksanu (2 l), filtrirana i isprana heksanom (2 × 400 ml). Dobijena so natrijum karboksilata je prenete u 3-grli balon sa okruglim dnom od 3 l opremljen mehaničkom mešalicom, rastvorena u vodi (1 l) i polako tretirana 2 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (430 ml) na 10 °C do pH ~ 4. Gusta suspenzija je razblažena etil acetatom (1 l) i preneta u levak za razdvajanje. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je dalje ekstrahovan pomoću etil acetata (2 × 500 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan, dajući 170 g (87%) 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilne kiseline.<1>HNMR (500 Hz, DMSO-d6) δ ppm 12,21 (s, 1H), 3,60 (s, 3H), 1,91 (d, J = 6,7 Hz, 4H), 1,75 (s, 2H), 1,56-1,62 (m, 4H).
E. 4-(benziloksikarbonilamino)biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 2 l montirana je mehanička mešalica, J-KEM kontroler temperature, refluksni kondenzator i ulaz za azot. U balon je dodata 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina (100 g, 0,504 mol) i anhidrovani toluen (500 ml). Balon je ohlađen na 10 °C i tokom 5 min je polako dodat DIEA (175 ml, 1,008 mol) što je dovelo do blage egzotermne reakcije i zagrevanja do 14 °C. U reakcionu smešu je polako dodat difenilfosforil azid (130 ml, 0,605 mol). Smeša je zagrejana na oko 60 °C kada je počelo oslobađanje gasova. Reakcija je brzo stvorila veliku količinu gasa i egzotermne reakcije i zagrevanja do refluksa. Reakcija je mešana na refluksu (110 °C) tokom 2 h, zatim je ohlađena na 50 °C i polako tretirana benzil alkoholom (104 ml, 1,008 mol) tokom 5 min. Reakcija je ponovo zagrejana na 110 °C i mešana tokom 40 h. Reakciona smeša je pod vakuumom koncentrovana do ulja, rastvorena u etil acetatu (2 l), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (500 ml) i sloj zasićenog vodenog rastvora soli je ekstrahovan pomoću etil acetata (2 × 400 ml). Kombinovane organske supstance su osušene iznad natrijum sulfata, filtrirane i koncentrovane do sirovog ulja koje je preneto u 3-grli balon sa okruglim dnom od 5 l opremljen mehaničkom mešalicom, J-KEM kontrolerom temperature i ulazom za azot. Balon je napunjen metanolom (2 l). Smeša je ohlađena na 10 °C i tretirana 2 N natrijum hidroksidom (500 ml) tokom 5 min, što dovodi do egzotermne reakcije i zagrevanja na 16 °C. Reakcija je mešana na 60 °C tokom 20 h, nakon čega je TLC analiza (20% metanol/etil acetat)
14
pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i metanol je uklonjen pod vakuumom. Reakciona smeša je uz hlađenje zakiseljena do pH 2-3 koristeći 2 N hlorovodoničnu kiselinu (480 ml). Vodena smeša je ekstrahovana koristeći etil acetat (2 l, zatim 500 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (400 ml), osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani, dajući sirovi proizvod kao smeđe ulje. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20-100% etil acetat/heksan), dajući 132 g (91%) 4-(benziloksikarbonilamino)-biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilne kiseline.<1>H NMR (500 Hz, DMSO- d6) δ ppm 12.12 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.34-7.38 (m, 4H), 7.28-7.32 (m, 1H), 4.98 (s, 2H), 1.80-1.93 (m, 4H), 1.79 (s, 2H), 1.64 (t, J= 9.1 Hz, 2H), 1.57 (t, J= 8.8 Hz, 2H).
F. 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina. Parova boca od 2 l je napunjena 4-(benziloksikarbonilamino)biciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilnom kiselinom (105 g, 363 mmol), metanolom (500 ml), 0,8 N hlorovodoničnom kiselinom (500 ml) i 10% paladijumom na ugljeniku (38,6 g, 18,15 mmol, 50% navlažen vodom). Reakciona smeša je reagovala u Parovoj tresilici u atmosferi vodonika na 30 gpsi tokom 10 h, nakon čega je TLC analiza (10% metanol/etil acetat) pokazala da je reakcija završena. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz tanak sloj celita i taj sloj je temeljno ispran vodom (4 × 100 ml). Filtrat je koncentrovan, dajući 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilnu kiselinu (56,3 g, 100%) kao vlažnu belu čvrstu supstancu koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja; MS (ESI) m/z 156.2 [M+1]<+>
G. 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 2 l montirana je mehanička mešalica, refluksni kondenzator, J-KEM kontroler temperature i ulaz za azot. Balon je napunjen 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilnom kiselinom (56,3 g, 363 mmol) i 10% vodenim rastvorom sirćetne kiseline (340 ml). Reakciona smeša je ohlađena na 10 °C i polako je tokom 45 minuta tretirana natrijum nitritom (75,0 g, 1,088 mol) u vodi (125 ml) putem levka za ukapavanje. Uočen je razvoj značajne količine gasa i reakciona smeša je mešana na 65 °C preko noći. Reakcija je ohlađena na 5 °C i polako je tokom 30 minuta tretirana kalijum hidroksidom (183 g, 3,265 mol) u metanolu (400 ml) putem levka za ukapavanje. Reakcija je mešana na 65 °C tokom 5 h, nakon čega TLC analiza (10% metanol/etil acetat) pokazuje završenu reakciju. Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol i preostala vodena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 × 400 ml). Vodeni sloj je zakiseljen do pH 3 koristeći koncentrovanu hlorovodoničnu kiselinu (210 ml) uz hlađenje u ledenom/vodenom kupatilu. Dobijene čvrste supstance (nečistoće) filtrirane su i isprane vodom (2 × 30 ml). Filtrat je ekstrahovan pomoću etil acetata (10 × 400 ml), osušen iznad natrijum sulfata i
1
koncentrovan do suva, dajući 53 g (94%) 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilne kiseline; MS (ESI) m/z 155.2 [M-1]-H. Benzil 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-ilkarbamat. Na 3-grli balon sa okruglim dnom od 3 l montirana je mehanička mešalica, J-KEM kontroler temperature, ulaz za azot i levak za ukapavanje od 125 ml. Balon je pročišćen azotom i dodata je 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-karboksilna kiselina (53 g, 339 mmol) i anhidrovani toluen (350 ml). Reakciona smeša je ohlađena na 10 °C i tretirana je benzil alkoholom (175 ml, 1,695 mol). Reakciona smeša je zatim polako tretirana sa DIEA (118 ml, 678 mmol) i difenilfosforil azidom (87,7 ml, 407 mmol). Reakciona smeša je polako zagrevana do 50 °C kada je počelo oslobađanje gasova. Plašt za zagrevanje je uklonjen i reakciona smeša je polako zagrevana putem egzotermne reakcije do 75 °C uz značajno oslobađanje gasova. Reakcija je zagrevana na 110 °C i mešana tokom 20 h, nakon čega je TLC analiza (10% metanol/etil acetat) pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni rastvarač i razdeljena između etil acetata (1,2 l) i zasićenog vodenog rastvora soli (700 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20-60% etil acetat/heksan) dajući 61 g (69%) benzil 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-ilkarbamata; MS (ESI) m/z 260.1 [M-1]-I. 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-ol hidrohlorid. U Parovu bocu od 2 l dodat je benzil 4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-ilkarbamat (61 g, 233 mmol), metanol (400 ml) i voda (200 ml). Parova boca je pročišćena azotom i dodat je 10% paladijum na ugljeniku (25 g, 11,65 mmol, 50% navlažen vodom). Reakcija je obavljena u atmosferi vodonika na 30 gpsi na Parovoj tresilici tokom 3 h, nakon čega je TLC analiza (15% metanol/DCM sa 2% amonijum hidroksida) pokazala završetak reakcije. Reakcija je filtrirana kroz sloj celita i koncentrovana da se ukloni metanol. Dobijena vodena smeša je tretirana 2 N hlorovodoničnom kiselinom (115 ml) dok nije dostigla pH 1-2. Vodena smeša je ekstrahovana koristeći etil acetat (5 × 400 ml) za uklanjanje nečistoće. Vodena smeša je koncentrovana do suva i osušena u vakuum sušnici na 40 °C preko noći, dajući 36,91 g (97%) 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-ol hidrohlorida; MS (ESI) m/z 128.1 [M+1]<+>J. 4-(terc-butilamino)-2-(4-hidroksibiciklo[2.2.1]heptan-1-ilamino)-pirimidin-5-karboksamid. 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,165 g, 0,606 mmol; sinteza opisana ovde), 4-aminobiciklo[2.2.1]heptan-1-ol hidrohlorid (0,105 g, 0,644 mmol) i DIEA (0,337 ml, 1,931 mmol) pomešani su u DMF-u (8 ml) i zagrevani na 90°C preko noći. Rastvarač je uparen i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u etil acetatu), dajući željeni proizvod. (41 mg, 0,127 mmol, 21%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.43 (br. s., 0 H) 8.32 (s, 1 H) 7.07 (br. s., 1
1 1
H) 4.88 (br. s., 1 H) 1.94 - 2.14 (m, 2 H) 1.61 - 1.87 (m, 6 H) 1.49 - 1.60 (m, 2 H) 1.42 (s, 9 H). MS (ESI) m/z 320.0 [M+1]<+>
Primer 47: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0302]
1. A. 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-karboksilna kiselina. U rastvor 1-jod-3-metilbiciklo[1.1.1]pentana (1,62 g, 7,79 mmol; pripremljen prema Eur. J. Org. Chem.
1137-1155 (2000)) u dietil etru (26 ml) dodat je rastvor terc-butil litijuma (9,16 ml, 15,57 mmol, 1,7 M u pentanu) tokom 40 min na -78 °C. Nakon mešanja reakcione smeše tokom 1 h na ovoj temperaturi, gas ugljen dioksid je barbotiran kroz reakcionu smešu tokom 5 min i smeša je zatim ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je dva puta ekstrahovana pomoću 5% vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Kombinovane vodene faze su zakiseljene do pH 2-3 pomoću koncentrovane hlorovodonične kiseline na 0 °C, zasićene su natrijum hloridom i ekstrahovane pomoću dietil etra. Kombinovane organske faze su osušene i, nakon uparavanja rastvarača pod sniženim pritiskom, prečišćene hromatografijom na koloni (0-20% etil acetata u heksanu), dajući 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-karboksilnu kiselinu (0,5 g, 3,96 mmol, prinos 50,9%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.21 (s, 1 H), 1.82 (s, 6 H), 1.14 (s, 3 H).
2. B. Terc-butil 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilkarbamat. Difenilfosforil azid (0,340 ml, 1,577 mmol) ukapavanjem je dodat u rastvor 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-karboksilne kiseline (0,199 g, 1,577 mmol) i TEA (0,220 ml, 1,577 mmol) u suvom terc-butanolu (6 ml). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h i zatim zagrevan do refluksa tokom 24 h. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je tri puta ekstrahovan tercbutil metil etrom. Kombinovana organska faza isprana je zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i osušena iznad anhidrovanog magnezijum sulfata. Nakon filtracije i uparavanja rastvarača pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-5% etil acetat u heksanu), dajući terc-butil 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilkarbamat (0,111 g, 0,563 mmol, prinos 35,7%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.74 (s, 6 H), 1.36 (s, 9 H), 1.17 (s, 3 H).
3. C. 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid. U rastvor terc-butil 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilkarbamata (0,1 g, 0,507 mmol) u etil acetatu (10 ml) dodata
1 2
je hlorovodonična kiselina (0,760 ml, 3,04 mmol, 4 M u dioksanu) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana, dobijene čvrste supstance su isprane dietil etrom i dobijena suspenzija je filtrirana, dajući 3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid (0,04 g, 0,299 mmol, prinos 59,1%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.59 (br. s., 3H), 1.84 (s, 6H), 1.22 (s, 3 H).
4. D. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (0,25 g, 0,838 mmol; sinteza opisana ovde) i 3-metilbiciklo-[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorida (0,123 g, 0,922 mmol) u DMF-u (3 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,366 ml, 2,095 mmol) i reakcija je zagrevana na 80 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i u ostatak je zatim dodata ledeno hladna voda (20 ml). Dobijena smeša je žustro mešana tokom 1 h i nastali talog je zatim filtriran, ispran vodom i osušen pod vakuumom, dajući 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-metilbiciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,222 g, 0,670 mmol, prinos 80%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.15 - 1.31 (m, 7 H), 1.81 - 1.93 (m, 4 H), 1.98 (s, 6 H), 3.35 - 3.44 (m, 1 H), 3.54 - 3.63 (m, 1 H), 4.56 (d, J=4.29 Hz, 1 H), 7.12 (d, J=7.81 Hz, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 9.35 (s, 1 H); MS (ESI) m/z 332.4 [M+1]<+>.
Primer 48: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0303]
[0304] A. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilamino)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,740 g, 2,354 mmol; sinteza opisana ovde), 4-metiltetrahidro-2H-piran-4-amin hidrohlorid (0,892 g, 5,88 mmol), DIEA (1,645 ml, 9,42 mmol) i NMP (20 ml) kombinovani su i zagrevani tokom 1 h na 180 °C u mikrotalasnoj pećnici. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% metanol u DCM-u), dajući 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilamino)pirimidin-5-karboksamid (88 mg, 0,252 mmol, prinos 10,70%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.96 (br. s., 1H), 8.35 (s, 1H), 6.76 (br. s., 1H), 4.65 (d, J= 4.69 Hz, 1H), 3.56 (dd, J= 3.32, 6.83 Hz, 4H), 3.40 - 3.47 (m, 1H), 2.20 - 2.29 (m, 2H), 2.10 (d, J= 10.93 Hz,
1
1H), 1.76 - 1.89 (m, 2H), 1.66 - 1.73 (m, 1H), 1.50 - 1.59 (m, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.16 - 1.26 (m, 1H), 1.03 - 1.12 (m, 3H). MS (ESI) m/z 350.4 [M+1]<+>.
Primer 49: 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]-cikloheksilamino) pirimidin-5-karboksamid
[0305]
1. A. (1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]-N-tritil cikloheksanamin. U rastvor (1r,4r)-4-(tritilamino)cikloheksanola (2,34 g, 6,55 mmol) u suvom THF-u (15 ml) dodat je natrijum hidrid (524 mg, 13,1 mmol, 60% u mineralnom ulju) na 0 °C. Nakon što je dobijena smeša mešana tokom 30 minuta na 0 °C u atmosferi azota, ukapavanjem je dodat rastvor jod(<2>H3)metana (1,0 g, 6,89 mmol) u THF-u (5 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći u atmosferi azota, zatim je sipana u ledenu vodu i ekstrahovana pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakuumom, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (2,0 g, 5,35 mmol, prinos 83%) kao belu čvrstu supstancu. MS (ESI) m/z 375.0 [M+1]<+>.
2. B. (1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]cikloheksanamin. U ohlađeni (0 °C) rastvor (1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]-N-tritilcikloheksanamina (2,0 g, 5,35 mmol) u DCM-u (10 ml) dodat je TFA (3 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je bila tamnocrvena. Dodat je trietilsilan (0,4 ml) dok dobijena smeša nije postala bezbojna. Reakcija je mešana na 0 °C još 15 min. Nakon uklanjanja svih isparljivih rastvarača pod vakuumom, ostatak je dalje osušen pod visokim vakuumom tokom 2 h, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Sirovi proizvod je rastvoren u etil acetatu i dodat je vodeni rastvor hlorovodonika (20 ml, 0,25 mol/l). Organski sloj je uklonjen i neorganski sloj je dva puta ispran etil acetatom. Vodeni rastvor amonijaka (2 ml) dodat je u neorganski sloj i vodena smeša je mešana tokom 15 min. Koncentrovanje pod vakuumom je dalo sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu (706 mg, 5,35 mmol, prinos 100%). MS (ESI) m/z 133.0 [M+1]
3. C. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-((1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]cikloheksanamino)pirimidin-5-karboksamid. Smeša 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (160 mg, 0,5 mmol; sinteza opisana ovde), (1r,4r)-4-[(<2>H3)metiloksi]-cikloheksanamina (132 mg, 1,0 mmol),
1 4
DIEA (194 mg, 1,5 mmol) i NMP-a (1 ml) kombinovana je i zagrevana na 80 °C preko noći. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-15% metanol u DCM-u), dajući željeni proizvod kao beli prašak (120 mg, 0,33 mmol, prinos 63%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.17 (s, 1H), 3.93-3.87 (m, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.50 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 3.13 (s, 1H), 2.22 (s, 1H), 2.06-1.72 (m, 7H), 1.29-0.99 (m, 8H); MS (ESI) m/z 367.3 [M+1]<+>.
Primer 50: 4-(terc-butilamino)-2-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0306]
[0307] A. 4--(terc-butilamino)-2-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil-amino)pirimidin-5-karboksamid. 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid (0,110 g, 0,404 mmol; sinteza opisana ovde), (1s,4s)-4-amino-1-metilcikloheksanol (0,055 g, 0,429 mmol; pripremljen prema PCT Međunarodnoj publikaciji pat. prijave br. WO 2010027500) i DIEA (0,225 ml, 1,287 mmol) pomešani su u DMF-u (5 ml) i zagrevani na 90 °C preko noći. Rastvarač je uparen i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u etil acetatu), dajući željeni proizvod. (37 mg, 0,115 mmol, 27%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.08 - 9.23 (m, 1 H) 8.25 - 8.37 (m, 1 H) 6.89 - 7.06 (m, 1 H) 3.97 - 4.04 (m, 1 H) 3.46 - 3.62 (m, 1 H) 1.48 - 1.71 (m, 6 H) 1.40 (s, 9 H) 1.19 - 1.36 (m, 2 H) 1.10 (s, 4 H). MS (ESI) m/z 322.4 [M+1]<+>
Primer 51: 4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0308]
1. A. 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (0,653 g, 2,96 mmol, sinteza opisana ovde) u DMSO-u (8 ml) uz mešanje je dodat 6 N vodeni rastvor natrijum hidroksida (2,470 ml, 14,82 mmol) i 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (1,873 ml, 16,52 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim mešana na 50 °C tokom 20 minuta i zatim je
1
razblažena sa 100 ml etil acetata i 30 ml vode. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa 50 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do čvrstih supstanci koje su osušene u vakuum sušnici na 45 °C, dajući 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (305 mg, 1,280 mmol, prinos 43,2%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.31 - 8.54 (m, 1 H), 7.80 - 8.07 (m, 1 H), 6.97 - 7.77 (m, 1 H), 2.39 (br. s., 3 H), 1.37 (s, 3 H), 0.52 - 0.79 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 239.0 [M+1]<+>.
B. 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamida (305 mg, 1,280 mmol) u hloroformu (25,6 ml) uz mešanje je u porcijama dodat 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin (502 mg, 1,920 mmol). Dobijeni bledožuti rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. Dodat je etil acetat (10 ml) i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, filtrirana, isprana etil acetatom i osušena u vakuum sušnici tokom nekoliko sati, dajući 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (242 mg, 0,952 mmol, prinos 74,4%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.35 - 8.90 (m, 2 H), 7.88 - 8.14 (m, 1 H), 7.28 - 7.59 (m, 1 H), 2.74 (s, 3 H), 1.32 - 1.46 (m, 3 H), 0.68 - 0.84 (m, 2 H), 0.50 - 0.70 (m, 2 H). MS (ESI) m/z 255.0 [M+1]<+>.
C. 4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-(1-metilciklopropilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (242 mg, 0,952 mmol) i smeše (1R,5R)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida i (1S,5S)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida (222 mg, 1,237 mmol, sinteza opisana ovde) u DMF-u (4,543 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,499 ml, 2,85 mmol) i reakcija je zagrevana na 90 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je sipana u 50 ml ledene vode. Dobijene čvrste supstance su suspendovane tokom ~ 1 h, filtrirane, isprane vodom i osušene tokom nekoliko sati u vakuum sušnici na 45 °C, dajući smešu 4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)-pirimidin-5-karboksamida i 4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamida (169 mg, 0,507 mmol, prinos 53,3%). Ova supstanca je razdvojena pomoću preparativne hiralne SFC koristeći kolonu ChiralPak AD-H, 250×30 mm I.D. sa izokratskim 40% etanolom 0,1% amonijum hidroksida u gradijentu CO2sa protokom 60 ml/min i na 38 °C. Brže eluirajući izomer je označen kao pik 1 i dobijeno je 49 mg (0,147 mmol). Sporije eluirajući izomer je označen kao pik 2 i dobijeno je 51 mg (0,153 mmol).
1
Pik 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.71 - 9.02 (m, 1 H), 8.21 - 8.43 (m, 1 H), 7.03 - 7.54 (m, 1 H), 4.44 - 4.58 (m, 1 H), 3.81 - 3.99 (m, 1 H), 3.07 - 3.25 (m, 1 H), 1.74 - 2.08 (m, 1 H), 1.35 (s, 8 H), 0.87 - 0.97 (m, 3 H), 0.77 - 0.86 (m, 3 H), 0.62 - 0.70 (m, 2 H), 0.47 - 0.59 (m, 2H). MS (ESI) m/z 334.2 [M+1]<+>. Peak 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.72 - 9.00 (m, 1 H), 8.18 - 8.46 (m, 1 H), 7.12 - 7.60 (m, 1 H), 4.38 - 4.61 (m, 1 H), 3.76 - 3.98 (m, 1 H), 3.04 - 3.26 (m, 1 H), 1.75 - 2.10 (m, 1 H), 1.35 (s, 8 H), 0.92 (s, 3 H), 0.82 (s, 3 H), 0.61 - 0.72 (m, 2 H), 0.47 - 0.60 (m, 2 H). MS (ESI) m/z 334.2 [M+1]<+>. Putem SAR poređenja potentnosti sa sličnim jedinjenjima sa poznatom apsolutnom stereohemijom, pik 1 je određen kao 4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metil-ciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid. Pik 2 je određen kao 4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)-2-(1-metilciklopropilamino)pirimidin-5-karboksamid.
Primer 52: 4-(biciklo[1.1.1]pentan-2-ilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0309]
1. A.2-fenilbiciklo[1.1.1]pentan-2-ol. Rastvor ciklobutil(fenil)metanona (3,0 g, 18,8 mmol) u 800 ml benzena uz mešanje je ozračen živinom lampom od 1000 W tokom 48 h na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Rastvor je koncentrovan i ostatak (3,1 g) prečišćen je hromatografijom na koloni (10%-25% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod kao belu čvrstu supstancu (0,9 g, 5,6 mmol, prinos: 30%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 7.41-7.28 (m, 5 H), 3.04 (s, 2 H), 2.82 (dd, J1= 10.2 Hz, J2= 2.4 Hz, 1 H), 2.09 (s, 1 H), 1.78 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 1.50 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 1.33 (dd, J1= 9.9, J2= 3.3 Hz, 1 H).
2. B. 2-fenilbiciklo[1.1.1]pentan-2-il acetat. U rastvor 2,7 g (16,8 mmol) 2-fenilbiciklo[1.1.1]pentan-2-ola u piridinu (15 ml) na 0 °C ukapavanjem je uz mešanje dodat acetil hlorid (1,5 ml, 21,0 mmol) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana tokom 0,5 h na 0 °C i tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvor je sipan u led i dva puta ekstrahovan pomoću 50 ml dietil etra. Kombinovani rastvor dietil etra je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom bakar sulfata. Nakon sušenja iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, rastvor je koncentrovan i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (0-5% etil acetata u petrol etru), dajući željeni proizvod (2,7 g, 13,4 mmol, prinos: 80%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.47-
1
7.26 (m, 5 H), 3.31 (s, 2 H), 2.43 (dd, J1= 10.4 Hz, J2= 2.8 Hz, 1 H), 1.95 (s, 3 H), 1.80 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 1.66 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 1.49 (dd, J1= 10.4, J2= 3.2 Hz, 1 H).
C. 2-fenilbiciklo[1.1.1]pentan. Rastvor 2-fenil-biciklo[1.1.1]pentan-2-il acetata (2,7 g, 13,4 mol) u 50 ml anhidrovanog etra ubačen je u trogrli balon. Balon je ohlađen na -78 °C i dodato je 150 ml tečnog amonijaka. U smešu je uz mešanje dodat natrijum (0,62 g, 27,0 mmol) u malim komadima tokom 10 minuta. Mešanje je nastavljeno sve do nestanka plave boje. Reakcija je deaktivirana dodatkom zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (5 ml) i rastvarač je ostavljen da se upari preko noći. U ostatak je dodat pentan (40 ml) i rastvor je ispran sa 30 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida, osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, a zatim koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (100% pentan), dajući željeno jedinjenje kao bezbojnu tečnost (1,8 g, 12,5 mmol, prinos: 93%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 7.40-7.21 (m, 5 H), 3.48 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.81 (s, 2 H), 2.20 (dd, J1= 9.9Hz, J2= 2.7 Hz, 1 H), 2.00 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 1.94-1.85 (m, 2 H).
D. Biciklo[1.1.1]pentan-2-karboksilna kiselina. Smeša 2-fenilbiciklo[1.1.1]pentana (2,8 g, 19,4 mmol), rutenijum(IV) oksida (0,1 g, 0,75 mmol), natrijum perjodata (41,5 g, 194 mmol), vode (155 ml), perhlormetana (110 ml) i acetonitrila (110 ml) mešana je tokom 4 d. U smešu je dodat DCM (200 ml) i čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Matična tečnost je zaalkalisana pomoću vodenog rastvora natrijum hidroksida (1 M) i organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Preostali neorganski sloj je ekstrahovan pomoću dietil etra (100 ml × 2) i vodena faza je zakiseljena vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (2 M) do pH < 3, zatim je ekstrahovana pomoću dietil etra (100 ml × 5). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani, dajući sirovu kiselinu kao žutu tečnost. Sirovi proizvod je zatim prečišćen hromatografijom na koloni (10% etil acetata u petrol etru), dajući 400 mg (3,57 mmol, prinos: 18%) željenog proizvoda.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 2.97 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 2.82 (s, 2 H), 2.49 (dd, J1= 7.2 Hz, J2= 3.3 Hz, 1 H), 1.92 (dd, J1= 7.2Hz, J2= 3.3 Hz, 1 H), 1.79-1.76 (m, 2 H).
E. Biciklo[1.1.1]pentan-2-amin hidrohlorid. U rastvor biciklo[1.1.1]pentan-2-karboksilne kiseline (1,0 g, 8,9 mmol) u anhidrovanom toluenu (25 ml) i 2-metilpropan-2-olu (5 ml) uz mešanje je dodat DIEA (2,3 g, 17,8 mmol) i difenil fosforazidat (2,9 g, 10,7 mmol). Smeša je zagrevana na 90 °C tokom 16 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (10% etil acetata u petrol etru), dajući sirovi terc-butil biciklo[1.1.1]pentan-2-ilkarbamat. Sirovi proizvod je rastvoren u 15 ml rastvora hlorovodonične kiseline (1 M u metanolu) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Rastvor je koncentrovan i ostatak je suspendovan u 50 ml
1
dietil etra. Smeša je mešana tokom 15 min i talozi su sakupljeni i osušeni, dajući naslovno jedinjenje (350 mg, prinos: 33%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.58 (brs, 3H), 3.35 (s, 1H), 2.62 (s, 2H), 2.60-2.57 (m, 1H), 1.90 (t, J= 5.0 Hz, 1H), 1.79 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 1.50 (dd, J1= 10.0 Hz, J1= 2.8 Hz, 1H).
6. F. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-2-ilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Smeša 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (300 mg, 0,95 mmol; sinteza opisana ovde), biciklo[1.1.1]pentan-2-amin hidrohlorida (220 mg, 1,84 mmol) i DIEA (300 mg, 2,33 mmol) u NMP-u (3 ml) zagrevana je na 100 °C tokom 16 h. Dobijena smeša je dva puta prečišćena preparativnom tečnom hromatografijom visokih performansi (5-80% acetonitril u vodi), dajući sirovi proizvod (105 mg) koji je prekristalisan iz hloroforma, dajući željeno jedinjenje (85,2 mg, 0,27 mmol, prinos: 28%).
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8.33 (s, 1H), 4.19 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.77-3.74 (m, 1H), 3.60-3.57 (m, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.54 (dd, J1 = 9.6Hz, J2 = 3.2 Hz, 1H), 2.07-1.88 (m, 6H), 1.66 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.39-1.34 (m, 4H); MS (ESI) m/z 318.1 [M+H]<+>.
Primer 53: 2-((S)-sek-butilamino)-4-(((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0310]
1. A. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (0,335 g, 1,203 mmol; sinteza opisana ovde) rastvoren je u DMSO-u (3 ml). Na sobnoj temperaturi su dodati vodeni rastvor natrijum hidroksida (1,003 ml, 6 M, 6,02 mmol) i vodeni rastvor vodonik peroksida (0,682 ml, 6,02 mmol, 30%). Reakciona smeša je zatim mešana na 50 °C tokom 2 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i sipana je u 100 ml ledene vode. Beli talog je sakupljen i dva puta je ispran vodom. Čvrsta supstanca je osušena, dajući 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metil-cikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (0,260 g, 0,877 mmol, prinos 72,9%); MS (ESI) m/z 297.7 [M+1]<+>.
2. B. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metiltio)pirimidin-
1
5-karboksamid (315 mg, 1,063 mmol) rastvoren je u NMP-u (4 ml) i ohlađen na 0 °C pre dodavanja mCPBA (476 mg, 2,126 mmol) u porcijama. Nakon 1 h, 75 ml ledeno hladne vode je dodato direktno u reakcionu smešu i suspenzija je ostavljena da se meša tokom 2 h pre uklanjanja belog taloga filtracijom. Filtrat je zatim kondenzovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonila voda. NMP rastvor je neposredno korišćen u sledećem koraku uz pretpostavku kvantitativne konverzije u željeni proizvod; MS (ESI) m/z 329.4 [M+1]<+>.
3. C. 2-((S)-sek-butilamino)-4-(((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (0,2 g, 0,609 mmol) u DMF-u (3 ml) uz mešanje je dodat (S)-(+)-sek-butilamin (0,305 ml, 3,05 mmol) i reakcija je zagrevana na 90 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i zatim prečišćena reversno faznom semipreparativnom HPLC tehnikom (5-75% metanola 0,1% mravlje kiseline u vodi 0,1% mravlje kiseline, tokom 26 min). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (5 ml), propušten kroz kolonu za SPE sa Varian StratoSpheres HCO3 smolom za uklanjanje mravlje kiseline (0,9 mmol ekviv. bikarbonata) i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 2-((S)-sek-butilamino)-4-(((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid (0,129 g, 0,402 mmol, prinos 66%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.80 - 1.24 (m, 15 H) 1.35 - 1.45 (m, 1 H) 1.54 (br. s., 1 H) 1.66 (d, J=12.89 Hz, 1 H) 1.92 (br. s., 1 H) 2.14 (br. s., 1 H) 2.97 (br. s., 1 H) 3.71 - 3.99 (m, 1 H) 4.55 (d, J=5.86 Hz, 1 H) 6.96 (br. s., 1 H) 8.34 (s, 1 H) 8.90 (br. s., 1 H); MS (ESI) m/z 322.5 [M+1]<+>.
Primer 54: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0311]
[0312] A. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklobutil-amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil-amino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil-amino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (1,414 mmol ukupno; sinteza opisana ovde) u NMP-u (18 ml) dodat je 1-metilciklobutanamin hidrohlorid (0,189 g, 1,556 mmol) i DIEA (0,988 ml, 5,66 mmol). Dobijeni rastvor je zagrevan na 100 °C preko noći. U reakcionu smešu je dodat etil acetat i voda i dobijeni
1
slojevi su razdvojeni. Sloj etil acetata je osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0-20% metanola u DCM-u), dajući 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(1-metilciklobutilamino)pirimidin-5-karboksamid (0,193 g, 0,604 mmol, prinos 42,7%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.13 (s, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 7.57 (br. s., 1 H) 7.01 (d, J=7.81 Hz, 2 H) 4.53 (d, J=4.69 Hz, 1 H) 3.58 (br. s., 1 H) 2.32 (d, J=10.54 Hz, 2 H) 1.94 - 2.11 (m, 2 H) 1.84 (d, J=5.08 Hz, 6 H) 1.52 (s, 3 H) 1.05 - 1.36 (m, 4 H). MS (ESI) m/z 320.1 [M+1]<+>.
Primer 55: 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0313]
1. A. 2-metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-ol. U rastvor biciklo[2.2.1]heptan-2-ona (25 g, 0,23 mol) u dietil etru (250 ml) dodavan je rastvor metilmagnezijum bromida u THF-u (3 mol/l, 90 ml, 0,27 mol) tokom 1 h na 0 °C. Reakciona smeša je mešana još 30 min dok je zagrevana na sobnu temperaturu. Reakcija je zatim deaktivirana sa 40 ml zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću dietil etra (3 × 80 ml). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani, dajući željeni proizvod (26 g, 0,205 mol, prinos: 90%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.20 (s, 1 H), 2.01 (s, 1H), 1.94 (s, 1 H), 1.61-1.49 (m, 3 H), 1.34-1.20 (m, 7H).
2. B. 1-metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-ol. U rastvor 2-metil-biciklo[2.2.1]heptan-2-ola (26 g, 0,20 mol) u sirćetnoj kiselini (50 g, 0,83 mol) dodat je 1 ml sumporne kiseline. Smeša je refluktovana tokom 3 h i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je sipan u 100 ml vode. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 50 ml), i kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml) i zatim osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača je dalo 1-metil-biciklo[2.2.1]heptan-2-il acetat (31 g, 0,173 mol, prinos: 89%) kao bezbojno ulje koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
3. Smeša 1-metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-il acetata (31 g, 0,17 mol) i vodenog rastvora natrijum hidroksida (5%, 250 ml) refluktovana je tokom 2 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je ekstrahovana pomoću dietil etra (3 × 100 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata i koncentrovani, dajući željeno jedinjenje (21 g, 0,167 mol, prinos: 82%), koje je korišćeno u sledećem koraku bez
1 1
daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.47-3.46 (m, 1H), 2.16-2.14 (m, 1H), 1.81-1.75(m, 1H), 1.57-1.52(m, 1H), 1.43-1.30(m, 3H), 1.15(brs, 3H), 1.01-0.97(m, 2H).
C. Metilenbiciklo[2.2.1]heptan-1-il trifluormetansulfonat. U rastvor oksalil dihlorida (31,75 g, 0,25 mol) u DCM-u (300 ml) na -78 °C redom su dodati DMSO (19,5 g, 0,25 mol), rastvor 1-metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-ola (21 g, 0,167 mol) u DCM-u (50 ml) i zatim trietilamin (50 g, 0,5 mol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim je sipana u 200 ml vode. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a (2 × 100 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml) i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-on, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući 12,4 g (0,10 mol, prinos: 60%) ovog jedinjenja.
U rastvor metilbiciklo[2.2.1]heptan-2-ona (26 g, 0,209 mol) i 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina (64 g, 0,315 mol) u DCM-u (300 ml) ukapavanjem je dodat anhidrid trifluormetansulfonske kiseline (88 g, 0,315 mol) u DCM-u (50 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana pomoću DCM-a (2 × 100 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani 10% rastvorom hlorovodonične kiseline (3 × 100 ml), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml) zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml) i osušeni iznad natrijum sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (100% n-pentana), dajući željeni proizvod (7,6 g, 0,03 mol, 14%).<1>HNMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 5,15 (brs, 1H), 4,89 (brs, 1H), 2,51-2,39 (m, 2H), 2,26-2,17 (m, 2H), 2,12-2,05 (m, 2H), 1,99-1,85 (m, 2H), 1,53-1,50 (m, 1H).
D. 2-oksobiciklo[2.2.1]heptan-1-il trifluormetansulfonat. Rastvor metilenbiciklo[2.2.1]heptan-1-il trifluormetansulfonata (7,6 g, 0,03 mol) u metanolu (100 ml) ohlađen je na -40°C i mlaz ozona je propušten kroz reakcionu smešu. Kada je smeša poplavela, ozon je uklonjen propuštanjem mlaza argona kroz rastvor tokom 10 min. U smešu je dodat dimetil sulfid (5 ml) i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena smeša je sipana u vodu i ekstrahovana pomoću DCM-a (2 × 40 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml) i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom što je dalo sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod (4,6 g, 18,1 mmol, prinos: 60%) kao žućkasto
1 2
ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.73(brs, 1H), 2.44-2.34 (m, 2H), 2.26-2.13 (m, 4H), 2.06-2.02(m, 1H), 1.70-1.66 (m, 1H).
E. Biciklo[2.1.1]heksan-1-karboksilna kiselina. Smeša 2-oksobiciklo[2.2.1]heptan-1-il trifluormetansulfonata (4,6 g, 18,1 mmol) u 600 ml etanola/vode (60% m/m) i TEA (3,7 g, 36,2 mmol) zagrevana je na 130 °C tokom 100 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je sipan u vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (1 mol/l, 150 ml) i ekstrahovan pomoću dietil etra (3 × 100 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml) i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom što je dalo sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod (1,00 g, 8,09 mmol, prinos: 45%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.47-2.45(m, 1H), 1.94-1.90 (m, 4H),1.79-1.74 (m, 2H), 1.37-1.35 (m, 2H).
F. Benzil biciklo[2.1.1]heksan-1-ilkarbamat. U rastvor biciklo[2.1.1]heksan-1-karboksilne kiseline (1,0 g, 8,09 mmol) u dioksanu (20 ml) dodat je DIEA (2,5 g, 12,4 mmol), difenilfosforil azid (3,1 g, 11,2 mmol) i fenilmetanol (1,5 g, 14,2 mmol). Smeša je mešana na 80 °C preko noći u atmosferi azota i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod (1,2 g, 5,2 mmol, prinos: 65%). MS (ESI) m/z = 231.2[M+H]<+>.
G. Biciklo[2.1.1]heksan-1-amin hidrohlorid. U rastvor benzil biciklo[2.1.1]heksan-1-ilkarbamata (1,2 g, 5,2 mmol) u metanolu (30 ml) dodat je paladijum na ugljeniku (10%, 0,1 g). Reakciona smeša je mešana na 50 °C u atmosferi vodonika (50 psi) preko noći i filtrirana je kroz celit. U filtrat je dodat rastvor hlorovodonične kiseline (10% u metanolu, 20 ml). Smeša je koncentrovana i ostatak je suspendovan u THF-u (20 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Talog je sakupljen i osušen, dajući željeni proizvod (550 mg, 4,13 mmol, prinos: 79%).<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.73 (br. s, 3H), 2.4 (br. s, 1H), 1.71-1.69 (m, 6H), 1.32-1.31 (m, 2H). MS (ESI) m/z = 98.2 [M+H]<+>.
H. 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (427 mg, 2,3 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) uz mešanje je dodat DIEA (890 mg, 6,9 mmol) i biciklo[2.1.1]heksan-1-amin hidrohlorid (320 mg, 2,4 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor soli i zatim tri puta ekstrahovana pomoću etil acetata (20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na
1
koloni silika gela (15% etil acetata u petrol etru), dajući željeni proizvod (502 mg, 2,0 mmol, prinos 89%). MS (ESI) m/z =247.2 [M+1]<+>.
11. I. 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (502,0 mg, 2,0 mmol) u DMSO-u (5 ml) dodat je vodeni rastvor vodonik peroksida (1,2 g, 30%, 10,2 mmol) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (1,7 ml, 6 mol/l, 10,2 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 15 min i zatim je deaktivirana dodatkom vode (30 ml). Nastala čvrsta supstanca je sakupljena i osušena pod vakuumom, dajući željeni proizvod (500 mg, 1,9 mmol, prinos 93%). MS (ESI) m/z =265.3 [M+1]<+>.
12. J. 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karboksamida (500 mg, 1,9 mmol) u THF-u (10 ml) na 0 °C u porcijama je dodat mCPBA (490 mg, 2,8 mmol). Nakon 1 h, reakciona smeša je koncentrovana. Dobijena sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (5-10% metanola u DCM-u), dajući 510 mg željene smeše. MS (ESI) m/z =281.3, 297.3 [M+1]<+>.
13. K. 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 4-(biciklo[2.1.1]heksan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (200 mg, oko 0,71 mmol) i (1r,4r)-4-aminocikloheksanola (123,3 mg, 1,02 mmol) u NMP-u (10 ml) dodat je DIEA (183,0 mg, 1,42 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC, dajući željeni proizvod (187,3 mg, 0,56 mmol, prinos 72%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.29(s, 1H), 3.77(m, 1H), 3.60(m, 1H), 2.43(s, 1H), 2.07-1.93(m, 8H), 1.79-1.77(m, 2H), 1.60(s, 2H), 1.41-1.35(m, 4H). MS (ESI) m/z =332.2 [M+H]<+>.
Primer 56: 4-(1-etilciklopentilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0314]
1. A. Etil ciklopent-3-enkarboksilat. U rastvor ciklopent-3-enkarboksilne kiseline (10 g, 89,3 mmol) u anhidrovanom etanolu (30 ml) uz mešanje je dodat sumpor dihlorid (15,9 g,
1 4
134 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim koncentrovana. Ostatak je sipan u vodu. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (2,5% etil acetata u petrol etru), dajući željeni proizvod (6,7 g, 47,9 mmol, prinos = 54%) kao žuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.66 (s, 2H), 4.18-4.10 (m, 2H), 3.16-3.05(m, 1H), 2.66 (s, 2H), 2.63 (s, 2H), 1.29-1.24 (t, J=9.4, 3H).
B. Etil 1-etilciklopent-3-en karboksilat. U rastvor diizopropilamina (10 ml, 72 mmol) u anhidrovanom THF-u (50 ml) dodat je n-butil litijum (29 ml, 72 mmol, 2,5 M rastvor u heksanu) tokom 20 min na -78 °C. Smeša je mešana na 0 °C u atmosferi azota tokom 1 h. Sveže pripremljeni litijum diizopropilamid je dodat u smešu etil ciklopent-3-enkarboksilata (6,7 g, 47,9 mmol) u anhidrovanom THF-u (50 ml) tokom 20 minuta na -78 °C. Nakon još 1 sata na ovoj temperaturi, dodat je jodetan (11,2 g, 72 mmol) tokom 20 minuta. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h i deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida. Vodeni sloj je ekstrahovan etrom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani razblaženom hlorovodoničnom kiselinom (1 N), zatim isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem je dobijeno naslovno jedinjenje (7 g sirovo) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.60 (s, 2H), 4.21-4.12 (m, 2H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.31-2.25 (m, 2H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.29-1.24 (m, 3H), 0.88-0.82 (m, 3H).
C. 1-etilciklopent-3-en karboksilna kiselina. Rastvor etil 1-etilciklopent-3-en karboksilata (3,5 g, 20,8 mmol) i vodenog rastvora natrijum hidroksida (20,8 ml, 2 mol/l) u metanolu (30 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h i zatim je koncentrovan. Ostatak je sipan u vodu i ekstrahovan etrom (3 × 100 ml). Vodeni sloj je zakiseljen pomoću 4 mol/l vodenog rastvora hlorovodonične kiseline do pH < 3, i ekstrahovan je etil acetatom (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetata u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (1,9 g, 13,6 mmol, prinos 65,5%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.61 (s, 2H), 2.91 (d, J=14.8, 2H), 2.32 (d, J=14.4, 2H), 1.78-1.72 (m, 2H), 0.92-0.88 (t, J=7.4, 3H).
1
D. Benzil (1-etilciklopent-3-en-1-il)karbamat. U rastvor 1-etilciklopent-3-en karboksilne kiseline (1,9 g, 13,6 mmol) u dioksanu (30 ml) dodat je DIEA (5,3 g, 41 mmol), difenil fosforil azid (4,5 g, 16,3 mmol) i benzilalkohol (2,2 g, 20,4 mmol). Smeša je mešana na 80 °C preko noći i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (2,5% etil acetata u petrol etru), dajući naslovni proizvod. (1,3 g, 5,3 mmol, prinos: 39%). MS (ESI) m/z = 246.2 [M+1]<+>.
E. 1-etilciklopentanamin hidrohlorid. U rastvor benzil (1-etilciklopent-3-en-1-il)karbamata (1,3 g, 5,3 mmol) u metanolu (20 ml) dodat je paladijum na ugljeniku (130 mg, 10%). Reakciona smeša je mešana na 50 °C u atmosferi vodonika preko noći. U reakciju je dodat rastvor hlorovodonične kiseline (20 ml, 1 mol/l u metanolu) i reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod (900 mg), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z = 114.2 [M+H]<+>
F. 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (984 mg, 5,3 mmol) u DMSO-u (10 ml) uz mešanje je dodat DIEA (2,1 g, 15,9 mmol) i 1-etilciklopentanamin hidrohlorid (900 mg sirov). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod kao žuto ulje (830 mg, 3,2 mmol, prinos 53,5%). MS (ESI) m/z = 263.2 [M+H]<+>.
G. 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karbonitrila (830 mg, 3,2 mmol) u DMSO-u (10 ml) uz mešanje je dodat vodeni rastvor vodonik peroksida (1,8 g, 30%, 16 mmol) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (2,7 ml, 6 mol/l, 16 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 15 min i razblažena vodom. Smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (3 × 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% metanol u DCM-u), dajući željeno jedinjenje kao belu čvrstu supstancu (800 mg, 2,9 mmol, prinos 90%). MS (ESI) m/z = 281.2 [M+1]
H. 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. Na 0 °C, mCPBA (873 mg, 4,3 mmol) u porcijama je dodat u rastvor 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (800 mg, 2,9 mmol) u THF-u (30 ml). Nakon 1 h,
1
reakciona smeša je koncentrovana i dobijena sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (5% metanol u DCM-u), dajući željeni proizvod (800 mg, 2,56 mmol, prinos 90%). MS (ESI) m/z = 313.2 [M+1]<+>.
9. I. 4-(1-etilciklopentilamino)-2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(1-etilciklopentilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (200 mg, 0,64 mmol) i (1r,4r)-4-amino-cikloheksanola (115 mg, 1 mmol) u NMP-u (10 ml) dodat je DIEA (255 mg, 1,98 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC, dajući željeni proizvod (117,0 mg, 0,34 mmol, prinos 51%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.17 (s, 1H), 3.66 (s, 1H), 3.46 (s, 1H), 2.06-2.04 (m, 2H), 1.98-1.89 (m, 6H), 1.66-1.58 (m, 6H), 1.26-1.24 (m, 4H), 1.77-0.73 (t, J=7.2 Hz, 3H); MS (ESI) m/z = 348.2 [M+1]<+>.
Primer 57: 4-(((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)amino)-2-((4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-il)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0315]
[0316] A. Dimetil 1-(2-hloretil)cikloheksan-1,4-dikarboksilat. U rastvor cikloheksan-1,4-dikarboksilne kiseline (100 g, 0,58 mol) u anhidrovanom metanolu (800 ml) uz mešanje je dodat sumpor dihlorid (208 g, 1,75 mol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je sipan u vodu. Dobijena smeša je ekstrahovana pomoću etil acetata (200 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Koncentrovanjem je dobijen sirovi dimetil cikloheksan-1,4-dikarboksilat (105 g, 0,53 mol, prinos 90,5%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
[0317] U rastvor diizopropilamina (88 ml, 0,62 mol) u anhidrovanom THF-u (500 ml) dodat je nbutil litijum (240 ml, 0,6 mol, 2,5 M rastvor u heksanu) tokom 20 min na -78 °C. Smeša je mešana na 0 °C u atmosferi azota tokom 30 min.
[0318]U prethodno opisanu smešu sirovog dimetil cikloheksan-1,4-dikarboksilata (100 g, 0,5 mol) i heksametilfosforamida (360 ml, 2 mol) u anhidrovanom THF-u (800 ml) dodat je sveže pripremljeni rastvor litijum diizopropilamida (priprema opisana iznad) tokom 30 min na -40 °C. Nakon mešanja tokom 1 h na ovoj temperaturi, dodat je 1-brom-2-hloretan (42 ml, 0,5 mol) tokom 1. Smeša je mešana tokom 3 h na -78 °C i zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je deaktivirana dodatkom vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (3 N, 420 ml). Rastvarač je
1
uklonjen pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (200 ml × 3). Kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (2 × 300 ml) i osušeni iznad natrijum sulfata. Koncentrovanjem je dobijeno naslovno jedinjenje (116 g, prinos 88%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.72 (s, 3H), 3.65 (s.3H), 3.46-3.42 (m, 2H), 2.33-2.21 (m, 3H), 2.05-1.85(m, 4H), 1.58-1.42 (m, 2H), 1.25-1.15(m, 2H).
[0319] B. Dimetil biciklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboksilat. U rastvor diizopropilamina (77 ml, 0,54 mol) u anhidrovanom THF-u (500 ml) dodat je n-butil litijum (210 ml, 0,53 mol, 2,5 M rastvor u heksanu) tokom 20 min na -78 °C. Smeša je mešana na 0 °C u atmosferi azota tokom 30 min.
[0320] U smešu dimetil 1-(2-hloretil)cikloheksan-1,4-dikarboksilata (116 g, 0,44 mol) i heksametilfosforamida (317 ml, 1,7 mol) u anhidrovanom THF-u (800 ml) dodat je sveže pripremljeni litijum diizopropilamid (priprema opisana iznad) tokom 30 min na -40 °C. Smeša je mešana tokom 2 h na -78 °C i zatim je mešana preko noći dok se zagrevala na sobnu temperaturu. U reakcionu smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (200 ml) i smeša je mešana tokom 10 min. Isparljivi rastvarači su uklonjeni uparavanjem pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata (3 × 200 ml), i kombinovani ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (300 ml × 2) i osušeni iznad natrijum sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetata u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (58,0 g, 0,25 mol, prinos 50% u dva koraka).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 3.65 (s, 6H), 1.81 (s.12H).
[0321] C. 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina. Rastvor dimetil biciklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboksilata (58,0 g, 0,25 mol) u metanolu (600 ml) zagrevan je do refluksa i zatim je dodat rastvor kalijum hidroksida (9,8 g, 0,175 mol) u metanolu (100 ml) i vodi (12 ml) tokom 30 min. Reakciona smeša je refluktovana tokom 24 h i koncentrovana. Ostatak je razblažen vodom i ekstrahovan etil acetatom (200 ml × 2) da bi se izolovao deo polazne supstance (22,0 g). Dobijeni vodeni sloj je zakiseljen do pH = 3 dodatkom hlorovodonične kiseline i ekstrahovan je etil acetatom (300 ml × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani, dajući naslovni proizvod (30,0 g, 0,14 mol, prinos 55%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.65 (s, 3H), 1.81 (s.12H); MS (ESI) m/z = 211.3 [M-H]-.
[0322] D. Metil 4-brombiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilat. U suspenziju 4-(metoksikarbonil)biciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilne kiseline (11,0 g, 51,8 mmol) u acetonu (80 ml) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M, 51,8 ml, 51,8 mmol) i rastvor srebro nitrata (8,8 g, 51,9 mol) u vodi (10 ml). Nastali talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom, acetonom i dietil
1
etrom i osušen pod vakuumom na 115 °C tokom 4 h. Dobijeno ((4-(metoksikarbonil)-biciklo[2.2.2]oktan-1-karbonil)oksi)srebro (15,3 g, 47,9 mmol) suspendovano je u heksanu (125 ml), zatim je brom (7,7 g, 48,1 mmol) dodat tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi još 30 min. Reakciona smeša je filtrirana da se ukloni čvrsta supstanca, a filter pogača je isprana heksanom (150 ml × 4). Kombinovani organski filtrati su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (150 ml × 2) i zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml), zatim osušeni iznad magnezijum sulfata. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobijen je sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% etil acetat u petrol etru), dajući naslovno jedinjenje (4,2 g, 0,17 mol, prinos 33% u dva koraka).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 3.64 (s, 3H), 2.27-2.20 (m, 6H), 1.98-1.94 (m.6H).
[0323] E. 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina. Metil 4-brombiciklo [2.2.2]oktan-1-karboksilat (17,0 g, 69,0 mmol) refluktovan je u 1,5 l 1% vodenog rastvora natrijum hidroksida tokom 24 h. Nakon hlađenja, reakcioni rastvor je zakiseljen hlorovodoničnom kiselinom (6 N, 100 ml) i ekstrahovan dietil etrom (6 × 500 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata i koncentrovani, dajući naslovno jedinjenje (10,4 g, 61,1 mmol, prinos: 89%), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja; MS (ESI) m/z = 169.2 [M-H]-.
[0324] F. Metil 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilat. U rastvor 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilne kiseline (14 g, 82,4 mmol) u metanolu (300 ml) dodata je koncentrovana sumporna kiselina (1 ml). Smeša je refluktovana tokom 10 h i zatim koncentrovana. Ostatak je rastvoren u vodi (100 ml) i smeša je ekstrahovana etil acetatom (200 ml × 2). Kombinovane organske faze su isprane zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (100 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml) i osušene iznad natrijum sulfata. Koncentrovanjem je dobijeno naslovno jedinjenje (14,5 g, prinos 96%).<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3,64 (s, 3H), 1,96-1,89 (m, 6H), 1,69-1,64 (m.6H).
[0325] G. Metil 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilat. U rastvor metil 4-hidroksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilata (8,9 g, 48 mmol) u anhidrovanom THF-u (150 ml) na -78 °C dodat je n-butil litijum (23 ml, 57,5 mmol, 2,5 M rastvor u heksanu) tokom 30 min, nakon čega je usledilo sporo dodavanje jodmetana (14 g, 98 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 3 h i deaktivirana je dodatkom zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (50 ml). Dobijeni rastvor je koncentrovan i ostatak je ekstrahovan pomoću etil acetata (150 ml × 2). Organski slojevi su kombinovani i isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad magnezijum sulfata i zatim koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat
1
u petrol etru), dajući naslovni proizvod (6,5 g, 67%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm3.64 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 1.95-1.89 (m, 6H), 1.70-1.65 (m. 6H).
[0326] H. 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina. Metil 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilat (6,5 g, 33 mmol) refluktovan je u vodenom rastvoru natrijum hidroksida (5%, 150 ml) tokom 2 h. Nakon hlađenja, reakcioni rastvor je zakiseljen rastvorom hlorovodonične kiseline (6 N, 50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (100 ml × 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata i koncentrovani, dajući naslovno jedinjenje (5.9 g, 32 mmol, prinos 97%), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z = 183.2 [M-H]-.
[0327] I. Benzil (4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-il)karbamat. U rastvor 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilne kiseline (5,9 g, 32 mmol) u dioksanu (80 ml) dodat je DIEA (8,3 g, 64,2 mmol), difenil fosforil azid (13,2 g, 48 mmol) i fenilmetanol (17,3 g, 160 mmol). Smeša je mešana na 80 °C preko noći i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% metanola u DCM-u), dajući željeni proizvod. (9 g, 31 mmol, prinos 96%). MS (ESI) m/z = 290.2 [M+H]<+>.
[0328] J. 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-amin hidrohlorid. U rastvor benzil (4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-il)karbamata (9 g, 31 mmol) u metanolu (150 ml) dodat je paladijum na ugljeniku (0,5 g, 10%). Reakciona smeša je mešana na 50 °C u atmosferi vodonika (50 psi) preko noći i zatim je filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u rastvoru hlorovodonične kiseline (10% u metanolu, 50 ml) i mešan tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i dobijeni ostatak je suspendovan u THF-u (20 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i talog je sakupljen i osušen, dajući željeni proizvod (3,8 g, 20 mmol, prinos: 68%).<1>H-NMR (400MHz, DMS-d6) δ ppm 8.14 (brs, 3H), 3.04 (s, 3H), 1.83-1.80 (m, 6H), 1.68-1.64 (m, 6H); MS (ESI) m/z = 156.1[M+1]<+>.
[0329] K. 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(4-metoksi-biciklo[2.2.2]oktan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (1,2 g, 3,8 mmol; sinteza opisana ovde) i 4-metoksibiciklo[2.2.2]oktan-1-amin hidrohlorida (600 mg, 3,1 mmol) u NMP-u (12 ml) dodat je DIEA (1,03 g, 8 mmol). Dobijena smeša je mešana na 130 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 3 h. Dobijena smeša je prečišćena reversno faznom hromatografijom na koloni, dajući željeni proizvod (230 mg, 0,6 mmol, prinos 15,5%).<1>H-NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.70 (brs, 1H), 8.08 (s, 1H), 5.40 (brs, 2H), 5.01 (br. s, 1H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.75-3.70 (m, 1H), 3.19 (s, 3H), 2.37-2.34 (m, 1H), 2.15-2.11 (m, 6H), 1.99-1.97 (m, 2H), 1.90-1.86 (m, 1H), 1.80-1.76 (m, 6H), 1.38-1.22 (m, 4H). MS (ESI) m/z = 390.2[M+1]<+>.
1
Primer 58: 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-(trifluormetil)biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0330]
[0331] A. 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-(trifluormetil)-biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid. U 5 ml NMP rastvora (2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (445 mg, 1,416 mmol)) dodat je 3-(trifluormetil)biciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid (266 mg, 1,416 mmol) i DIEA (0,494 ml, 2,83 mmol). Reakcija je zatim zagrevana na 90 °C preko noći. LCMS pokazuje masu željenog proizvoda kao dominantni pik. Sirova reakcija je direktno prečišćena pomoću semipreparativne HPLC (postupak: 5-80% acetonitrila 0,1% TFA u vodi 0,1% TFA). Frakcije proizvoda su kombinovane i uparene pod sniženim pritiskom do zapremine <5 ml. Supstanca je zatim neutralisana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana pomoću etil acetata (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani. Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u metanolu i isprana na koloni sa smolom StratoSpheres SPE PL-HCO3 MP, uz eluiranje metanolom. Uparavanje rastvarača pod sniženim pritiskom je dalo 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksilamino)-4-(3-(trifluormetil)biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid. Supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-10% metanola u DCM-u za 1650 ml, 40 ml/min). Frakcije proizvoda su kombinovane i uparene do suva, dajući 2-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil-amino[1.1.1]pentan-1-ilamino)pirimidin-5-karboksamid (135 mg, 0,35 mmol, prinos 24,8%);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.54 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.57 - 7.86 (m, 1H), 7.26 - 7.32 (m, 1H), 6.91 - 7.17 (m, 1H), 4.60 (d, J=4.29 Hz, 1H), 3.49 - 3.73 (m, 1H), 3.35 - 3.46 (m, 1H), 2.38 (s, 6H), 1.86 (d, J=11.32 Hz, 4H), 1.26 (br. s., 4H); MS (ESI) m/z 386.0 [M+1]<+>.
Primer 59: 4-(terc-butilamino)-2-(((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0332]
1 1
[0333] A. 4-(terc-butilamino)-2-(((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)-amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(terc-butilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (250 mg, 0,918 mmol; sinteza opisana ovde) i (1S,3R)-3-aminocikloheksanola (138 mg, 1,2 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) u NMP-u (10 ml) dodat je DIEA (374 mg, 2,9 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC, dajući željeni proizvod (212,2 mg, 0,69 mmol, prinos 75%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.86 (brs, 1H), 8.12 (s, 1H), 5.53 (brs, 3H), 3.93-3.91 (m, 1H), 3.88-3.82 (m, 1H), 2.27-2.25 (m, 1H), 1.92-1.85 (m, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.42-1.25 (m, 4H); MS (ESI) m/z = 308.2 [M+1]<+>,
Primer 60: 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0334]
1. A. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. U rastvor 4-hlor-2-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (3,0 g, 16 mmol) u DMSO-u (20 ml) uz mešanje je dodat DIEA (6,2 g, 48 mmol) i biciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid (1,9 g, 16 mmol; pripremljen prema Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)). Dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h, a zatim sipana u vodu. Smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani, dajući sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% etil acetat u petrol etru), dajući željeni proizvod (3,5 g, 14,9 mmol, prinos 93%). MS (ESI) m/z = 233.2 [M+1]<+>.
2. B. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)-pirimidin-5-karbonitrila (3,45 g, 14,9 mmol) u DMSO-u (15 ml) dodat je vodeni rastvor vodonik peroksida (8,4 g, 30%, 74,5 mmol) i vodeni rastvor natrijum hidroksida (12,4 ml, 6 mol/l, 74,5 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 15 min i zatim je deaktivirana dodatkom vode (30 ml). Nastala čvrsta supstanca je sakupljena i osušena pod vakuumom, dajući željeni proizvod (3,5 g, 14,0 mmol, prinos 94%). MS (ESI) m/z =251.2 [M+1]<+>.
3. C. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. mCPBA (4,3 g, 21 mmol) u porcijama je dodat u rastvor 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-
1 2
(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (3,5 g, 14 mmol) u THF-u (40 ml) na 0 °C. Reakcija je praćena putem tankoslojne hromatografije. Nakon 1 h, reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% metanol u DCM-u), dajući 3,1 g naslovne smeše. MS (ESI) m/z =267.2 [M+1]<+>/283.2 [M+1]<+>.
4. D. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida, 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (300 mg) i tetrahidro-2H-piran-4-amin hidrohlorida (181,5 mg, 1,32 mmol) u NMP-u (10 ml) dodat je DIEA (426 mg, 3,3 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je zatim prečišćena preparativnom HPLC, dajući željeni proizvod (221,3 mg, 0,73 mmol, prinos 67%) kao žuti prašak.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (s, 1H), 3.95-3.88 (m, 3H), 3.44-3.38 (m, 2H), 2.40 (s, 1H), 2.09 (s, 6H), 1.88-1.85 (m, 2H), 1.55-1.45 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 304.2 [M+1]<+>.
Primer 61: 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid
[0335]
1. A. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid i 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamid. 3-hlorbenzoperoksidna kiselina (4,27 g, 21 mmol) u porcijama je dodata u rastvor 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (3,50 mg, 14 mmol, sinteza opisana ovde) u THF-u (40 ml) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C tokom 1 h i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom do ulja koje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (5% metanola u DCM-u), dajući 310 mg smeše 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida kao žute čvrste supstance. MS (ESI) m/z =267.2 [M+1]<+>/283.2 [M+1]<+>.
2. B. 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)amino)pirimidin-5-karboksamid. U smešu 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida i 4-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-2-(metilsulfonil)pirimidin-5-karboksamida (300 mg) i
1
(1S,3R)-3-aminocikloheksanola (152 mg, 1,32 mmol; pripremljen kao što je opisano u Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)) u NMP-u (10 ml) dodat je DIEA (426 mg, 3,3 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći. Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC, dajući željeni proizvod (230,2 mg, 0,73 mmol, prinos 66%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.29 (s, 1H), 3.91-3.89 (m, 1H), 3.69-3.62 (m, 1H), 2.50 (s, 1H), 2.29-2.25 (m, 1H), 2.20 (s, 6H), 1.97-1.83 (m, 3H), 1.41-1.21 (m, 4H); MS (ESI) m/z = 318.2 [M+1]<+>.
Primer 62: 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid
[0336]
1. A. N-(biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-amin. U rastvor 5-brom-2-hlor-4-(metiltio)pirimidina (1,0 g, 4,18 mmol) u NMP-u (10,0 ml) uz mešanje je dodat biciklo[1.1.1]pentan-1-amin hidrohlorid (749 mg, 6,26 mmol, pripremljen prema Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)) i DIEA (2,19 ml, 12,53 mmol). Smeša je mešana na 100 °C tokom 16 h i rastvarač je zatim uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen u 100 ml etil acetata i 50 ml 1 M vodenog rastvora natrijum hidrogen fosfata. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa 50 ml etil acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući N-(biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-amin (1250 mg, 4,37 mmol, prinos 105%) kao čvrstu supstancu koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) m/z 286.0 [M+1]<+>i 288.0 [M+H]<+>.
2. B. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril. N-(biciklo[1.1.1]pentan-1-il)-5-brom-4-(metiltio)pirimidin-2-amin (1250 mg, 4,37 mmol), cink u prahu (71,4 mg, 1,092 mmol), cink cijanid (333 mg, 2,84 mmol), 1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferocen (196 mg, 0,349 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (200 mg, 0,218 mmol) i DMA (8,35 ml) kombinovani su i zagrevani preko noći na 90 °C u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena sa 125 ml etil acetata i 50 ml vode i filtrirana kroz sloj celita. Slojevi filtrata su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa 75 ml etil acetata. Kombinovani slojevi etil acetata su isprani sa 2 × 50 ml zasićenog vodenog rastvora soli, osušeni iznad anhidrovanog magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do
1 4
ulja. Sirovo ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela (0% - 30% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i koncentrovane, dajući 2-(biciklo [1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitril (566 mg, 2,436 mmol, prinos 55,8%) kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.81 -9.08 (m, 1 H), 8.31 - 8.57 (m, 1 H), 2.55 - 2.63 (m, 3 H), 2.11 (s, 7 H). MS (ESI) m/z 233.3 [M+1]<+>.
C. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karbonitrila (566 mg, 2,436 mmol) u DMSO-u (7 ml) uz mešanje je dodat 6 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (2,030 ml, 12,18 mmol) i 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (1,381 ml, 12,18 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim mešana na 50 °C tokom 30 min i zatim je sipana u ledenu vodu (50 ml). Nastale čvrste supstance su mešane u ledenom kupatilu tokom 30 min, filtrirane, isprane vodom i zatim osušene u vakuum sušnici preko noći na 45 °C, dajući 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamid (410 mg, 1,638 mmol, prinos 67,2%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.41 (s, 1 H), 7.03 - 8.34 (m, 2 H), 2.43 - 2.48 (m, 1 H), 2.35 (br. s., 3 H), 2.09 (s, 6 H). MS (ESI) m/z 251.3 [M+1]<+>.
D. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid. U rastvor 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metiltio)pirimidin-5-karboksamida (410 mg, 1,638 mmol) u hloroformu (39,0 ml) uz mešanje je u porcijama dodat 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oksaziridin (514 mg, 1,965 mmol). Dobijeni bledožuti rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi tokom dve noći u atmosferi azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovi proizvod kao belu čvrstu supstancu. U ove čvrste supstance je dodat etil acetat (15 ml) i suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, filtrirana, isprana etil acetatom i osušena u vakuum sušnici tokom nekoliko sati, dajući 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamid (397 mg, 1,491 mmol, prinos 91%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.67 - 9.14 (m, 2 H), 7.93 - 8.11 (m, 1 H), 7.41 - 7.54 (m, 1 H), 2.68 - 2.79 (m, 3 H), 2.43 - 2.48 (m, 1 H), 2.02 - 2.21 (m, 6 H). MS (ESI) m/z 267.0 [M+1]<+>.
E. 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. U suspenziju 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-(metilsulfinil)pirimidin-5-karboksamida (397 mg, 1,491 mmol) i smeše (1R,5R)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida i (1S,SS)-5-amino-2,2-dimetilcikloheksanol hidrohlorida (348 mg, 1,938 mmol, sinteza opisana ovde) u DMF-u (4,88 ml) uz mešanje je dodat DIEA (0,78 ml, 4,47 mmol) i reakcija je zagrevana na 90 °C preko noći. Sirova reakciona smeša je sipana u 60 ml ledene vode. Dobijene
1
čvrste supstance su suspendovane tokom ~ 1 h, filtrirane, isprane vodom i osušene tokom nekoliko sati u vakuum sušnici na 45 °C, dajući smešu 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetil-cikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida i 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamida (481 mg, 1,392 mmol, prinos 93%). Ova supstanca je razdvojena pomoću preparativne hiralne SFC koristeći kolonu ChiralPak AD-H, 250×30 mm I.D. sa izokratskim 40% etanolom 0,1% amonijum hidroksida u gradijentu CO2sa protokom 120 ml/min i na 38 °C. Brže eluirajući izomer je označen kao pik 1 i dobijeno je 132 mg (0,382 mmol). Sporije eluirajući izomer je označen kao pik 2 i dobijeno je 120 mg (0,349 mmol).
[0337] Pik 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.85 - 9.12 (m, 1H), 8.14 - 8.44 (m, 1H), 7.63 - 7.90 (m, 1H), 4.47 - 4.63 (m, 1H), 3.76 - 3.96 (m, 1H), 3.08 - 3.23 (m, 1H), 2.43 (s, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.87 - 1.99 (m, 1H), 1.66 - 1.83 (m, 1H), 1.04 - 1.47 (m, 4H), 0.92 (s, 3H), 0.82 (s, 3H) MS (ESI) m/z 346.3 [M+1]<+>.
[0338] Pik 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.88 - 9.07 (m, 1H), 8.25 - 8.45 (m, 1H), 7.57 - 7.90 (m, 1H), 4.46 - 4.59 (m, 1H), 3.78 - 3.96 (m, 1H), 3.09 - 3.22 (m, 1H), 2.35 - 2.47 (m, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.87 - 1.99 (m, 1H), 1.66 - 1.80 (m, 1H), 1.37 - 1.48 (m, 1H), 1.12 - 1.34 (m, 3H), 0.88 - 0.94 (m, 3H), 0.71 - 0.86 (m, 3H). MS (ESI) m/z 346.3 [M+1]<+>. Putem SAR poređenja potencije sa sličnim jedinjenjima sa poznatom apsolutnom stereohemijom koja su opisana ovde, pik 1 je određen kao 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1S,3S)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid. Pik 2 je određen kao 2-(biciklo[1.1.1]pentan-1-ilamino)-4-((1R,3R)-3-hidroksi-4,4-dimetilcikloheksilamino)pirimidin-5-karboksamid.
TESTOVI BIOHEMIJSKI TESTOVI
A. Testovi vremenski razložene fluorescencije
[0339] Test JNK1. Test vremenski razložene fluorescencije sa 384 bunarčića je korišćen za praćenje aktivnosti JNK1. Test JNK1 je obavljen u sledećem test puferu: 50 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, i 0,01% Tween 20. Za pokretanje reakcije, 100 nM ULight™ obeleženi 4EBP1 peptid (Perkin-Elmer) i 5 µM ATP su pomešani sa 500 pM JNK1 (Carna Biosciences), za ukupnu testiranu zapreminu od 20 µl u svakom bunarčiću. Test je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 1 h i prekinut koristeći smešu 30 mM EDTA i 4 nM Eu-anti-4EBP1, dodavanjem 20 µl rastvora za zaustavljanje u svaki bunarčić. Ploče su očitane na čitaču Perkin-Elmer Envision.
1
[0340] Test JNK2. Test vremenski razložene fluorescencije sa 384 bunarčića je korišćen za praćenje aktivnosti JNK2. Test JNK2 je obavljen u sledećem test puferu: 50 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, i 0,01% Tween 20. Za pokretanje reakcije, 100 nM ULight™ obeleženi 4EBP1 peptid (Perkin-Elmer) i 5 µM ATP su pomešani sa 500 pM JNK2 (Carna Biosciences), za ukupnu testiranu zapreminu od 20 µl u svakom bunarčiću. Test je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 1 h i prekinut koristeći smešu 30 mM EDTA i 4 nM Eu-anti-4EBP1, dodavanjem 20 µl rastvora za zaustavljanje u svaki bunarčić. Ploče su očitane na čitaču Perkin-Elmer Envision.
B. Testovi Z'-LYTE<®>kaskade
[0341] Test JNK1. Test kaskade JNK1 Z'-LYTE<®>je obavljen u sledećem puferu: 50 mM HEPES na pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, i 1 mM DTT. Pripremljeno je 10 µl reakcione smeše kinaze koja sadrži 1,81 - 7,25 ng JNK1, 25 ng neaktivnog MAPKAPK2, 100 µM ATP i 2 µM Ser/Thr 04 peptida. Test je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim je 5 µl 1:512 razblaženja razvojnog reagensa A (Invitrogen, PV3295) dodato u reakcionu smešu i inkubirano na sobnoj temperaturi još sat vremena. Podaci su zatim očitanu na čitaču fluorescencije ploča i analizirani.
[0342] Test JNK2. Test kaskade JNK2 Z'-LYTE<®>je obavljen u sledećem puferu: 50 mM HEPES pH 7,5, 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT. Pripremljeno je 10 µl reakcione smeše kinaze koja sadrži 0,38 - 1,5 ng JNK2, 100 ng neaktivnog MAPKAPK2, 100 µM ATP i 2 µM Ser/Thr 04 peptida. Test je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim je 5 µl 1:512 razblaženja razvojnog reagensa A (Invitrogen, PV3295) dodato u reakcionu smešu i inkubirano na sobnoj temperaturi još sat vremena. Podaci su zatim očitanu na čitaču fluorescencije ploča i analizirani.
C. Radioaktivni testovi
[0343] Test JNK1. Test radioaktivne JNK kinaze je obavljen u formatu ploče sa 96 bunarčića sa finalnom zapreminom 100 µl. Finalna testirana koncentracija je bila 6,6 µM ATP (3-struki ATP Km), 2,64 do 5 µg/ml JNK1 i 100 µg/ml cJUN. JNK1 je razblažen u sledećem dilucionom puferu (20 mM HEPES pH 7,6, 0,1 mM EDTA, 2,5 mM MgCl2, 0,004%(m/V) Triton X100, 2 µg/ml leupeptin, 20 mM B-glicerol fosfat, 0,1 mM Na3VO4ditiotreitol) i zatim pomešan sa cJun koji je razblažen u puferu za rastvaranje supstrata (20 mM HEPES pH 7,6, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 2,5 mM MgCl2, 0,05%(m/V) Triton X100). Smeša JNK1/cJun (85pl) dodata je u inhibitor (5 µl) razblažen u 100% DMSO-u, dajući finalnu koncentraciju testirane supstance u DMSO-u 5% (V/V). Smeša enzima, supstrata i inhibitora je ostavljena da se uravnoteži na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Reakcija je započeta dodatkom 10 µl 10X ATP u puferu za kinazu (130 mM MgCl2, 6 mM ditiotreitol, 150 mM para-nitrofenil fosfat, 100 µCi/ml γ-[<33>P]-ATP). Pušteno je da se reakcije
1
nastave tokom 60 minuta, pre taloženja proteina putem trihlorsirćetne kiseline (finalno 7,2% TCA). Nakon 30 minuta inkubacije sa TCA, reakcioni proizvodi su sakupljeni na staklene mikrofilterske ploče sa 96 bunarčića (Millipore MAHF CIH60) koristeći Packard Filtermate. Talog je ispran fiziološkim rastvorom puferovanim fosfatom i količina fosfata koji je inkorporisan u cJun je kvantifikovana scintilacionim prebrojavanjem koristeći Packard Topcount-NXT. Svi testovi su obavljeni u uslovima u kojima je inkorporacija fosfata bila linearna u odnosu na vreme i koncentraciju enzima. Vrednosti IC50su izračunate kao koncentracija inhibitora pri kojoj je forforilacija c-Jun smanjena na 50% kontrolne vrednosti.
[0344] Test JNK2. Test je obavljen u formatu ploče sa 96 bunarčića sa finalnom zapreminom 100 µl. Finalne testirane koncentracije su bile 6,6 µM ATP (3-struki ATP Km), 0,2 do 0,53 µg/ml JNK2 i 100 µg/ml cJUN. JNK2 je razblažen u sledećem dilucionom puferu (20 mM HEPES pH 7,6, 0,1 mM EDTA, 2,5 mM MgCl2, 0,004%(m/V) Triton X100, 2 µg/ml leupeptin, 20 mM B-glicerol fosfat, 0,1 mM Na3VO4ditiotreitol) i zatim pomešan sa cJun koji je razblažen u puferu za rastvaranje supstrata (20 mM HEPES pH 7,6, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 2,5 mM MgCl2, 0,05% (m/V) Triton X100). Smeša JNK2/cJun (85 µl) dodata je u inhibitor (5 µl) razblažen u 100% DMSO-u, dajući finalnu koncentraciju testirane supstance u DMSO-u 5% (V/V). Smeša enzima, supstrata i inhibitora je ostavljena da se uravnoteži na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Reakcija je započeta dodatkom 10 µl 10X ATP u puferu za kinazu (130 mM MgCl2, 6 mM ditiotreitol, 150 mM para-nitrofenil fosfat, 100 µCi/ml γ-[<33>P]-ATP). Pušteno je da se reakcije nastave tokom 60 minuta, pre taloženja proteina putem trihlorsirćetne kiseline (finalno 7,2% TCA). Nakon 30 minuta inkubacije sa TCA, reakcioni proizvodi su sakupljeni na staklene mikrofilterske ploče sa 96 bunarčića (Millipore MAHF CIH60) koristeći Packard Filtermate. Talog je ispran fiziološkim rastvorom puferovanim fosfatom i količina fosfata koji je inkorporisan u cJun je kvantifikovana scintilacionim prebrojavanjem koristeći Packard Topcount-NXT. Svi testovi su obavljeni u uslovima u kojima je inkorporacija fosfata bila linearna u odnosu na vreme i koncentraciju enzima. Vrednosti IC50su izračunate kao koncentracija inhibitora pri kojoj je forforilacija c-Jun smanjena na 50% kontrolne vrednosti.
ĆELIJSKI TESTOVI
[0345] Test RAW264.7 fosfo-cJun kompletnih ćelija. RAW264.7 ćelije su kupljene od American Tissue Culture Collection i držane su u medijumu za rast koji se sastojao od 90% Dulbekovog modifikovanog Iglovog medijuma sa velikim sadržajem glukoze (Invitrogen), 10% fetalnog goveđeg seruma (Hyclone) i 2 mM L-glutamina (Invitrogen). Sve ćelije su uzgajane na 37 °C u 95% vazduha i 5% CO2. Ćelije su zasejane sa gustinom 1,0 × 10<5>ćelija po bunarčiću u ploču sa 96 bunarčića u 120 µl medijuma za rast. Osnovni rastvor jedinjenja diaminopirimidina (30 mM) serijski je razblažen u DMSO-u, dalje razblažen u medijumu za rast i dodat je u svaki bunarčić
1
kao 10x koncentrovani rastvor sa zapreminom 15 µl, pomešan je i ostavljen da se inkubira sa ćelijama. Jedinjenje vehikulum (DMSO) održavano je u finalnoj koncentraciji od 0,2% u svim bunarčićima. Nakon 30 minuta, ćelije su aktivirane lipopolisaharidom (ALEXIS Biochemicals) sa finalnom koncentracijom od 25 ng/ml. Lipopolisaharid je dodat kao 10x koncentrovani rastvor u medijumu za rast i dodat je u zapremini od 15 µl po bunarčiću. Ploče sa ćelijama su uzgajane tokom 1 h, nakon čega je uklonjen ćelijski medijum. Nivo c-Jun proteina koji je fosforilovan na serinu 63 je izmeren u skladu sa uputstvom proizvođača za test Whole Cell Lysate Kit-Phosphoc-Jun (Ser 63) (Meso Scale Discovery), uz izuzetak da je koncentracija NaCl u puferu za lizu povećana na finalnu koncentraciju 350 mM. Vrednosti IC50su izračunate kao koncentracija jedinjenja diaminopirimidina pri kojoj je nivo fosforilovanog c-Jun proteina smanjen na 50% signalnog okvira. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 na ovom testu imaju vrednost IC50u rasponu od 0,01 - 30 µM.
[0346] Test proizvodnje IL-2 Jurkatovih T-ćelija. Jurkatove T-ćelije (klon E6-1) kupljene su od American Tissue Culture Collection i držane u medijumu za rast koji se sastoji od RPMI 1640 medijuma koji sadrži 2 mM L-glutamin (Mediatech), sa 10% fetalnog goveđeg seruma (Hyclone) i penicilin/streptomicin. Sve ćelije su uzgajane na 37 °C u 95% vazduha i 5% CO2. Ćelije su zasejane sa gustinom 1 × 10<5>ćelija po bunarčiću u 120 µl medijuma u ploču sa 96 bunarčića. Osnovni rastvor jedinjenja diaminopirimidina (20 mM) razblažen je u medijumu za rast i dodat u svaki bunarčić kao 10 × koncentrovani rastvor sa zapreminom 15 µE, pomešan i ostavljen da se prethodno inkubira sa ćelijama tokom 30 min. Jedinjenje vehikulum (dimetilsulfoksid) održavano je u svim uzorcima na finalnoj koncentraciji od 0,2%. Nakon 30 min, ćelije su aktivirane sa PMA (forbol miristat acetat; finalna koncentracija 50 ng/ml) i PHA (fitohemaglutinin; finalna koncentracija 1 µg/ml). PMA i PHA su dodati kao 10 × koncentrovani rastvor načinjen u medijumu za rast i dodati su u zapremini 15 µl po bunarčiću. Ploče sa ćelijama su uzgajane tokom 6 h. Ćelije su peletirane centrifugiranjem i medijum je uklonjen i skladišten na -20 °C. Alikvoti medijuma su analizirani u skladu sa uputstvom proizvođača za Human IL-2 Tissue Culture Kit (Meso Scale Discovery). Vrednosti IC50su izračunate kao koncentracija jedinjenja diaminopirimidina pri kojoj je proizvodnja IL-2 smanjena na 50% signalnog okvira. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 na ovom testu imaju vrednost IC50u rasponu od 0,01 - 10 µM.
ŽIVOTINJSKI MODELI
[0347] Test pcJun i LPS indukovane proizvodnje THF-α kod pacova ili miša in vivo. Mužjaci CD pacova ili C57B1/6 miševi nabavljeni od Charles River Laboratories, stari 7 nedelja, odnosno teški 20 g, pušteni su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre upotrebe. Kod pacova, lateralna repna vena je perkutano kanulirana kateterom preko igle veličine 22 uz kratku anesteziju izofluranom i 20 µg LPS (E. Coli 055:BS) i kateteri su pročišćeni sa 2,5 ml/kg normalnog injektabilnog
1
fiziološkog rastvora. Kod miševa, 1 mg/kg LPS (E. Coli 055:BS) u fiziološkom rastvoru primenjeno je intraperitonealno u zapremini od 200 µl. Na životinjama je primenjeno jedinjenje diaminopirimidina putem oralne gavaže 15 do 180 min pre injekcije LPS-a. Krv je sakupljena kardijalnom pukcijom 90 minuta ili 2 h nakon LPS izazova za pacove, odnosno miševe, a jetra i epidermalne masne naslage su izolovani za analizu pcJun koristeći platformu Mesoscale Discovery. Plazma je pripremljena koristeći litijum heparinske separacione epruvete i zamrznuta je na -80 °C do analize. Nivoi TNF-α su određeni koristeći ELISA komplet specifičan za TNF-α pacova ili miša (Mesoscale Discovery). Jetra i epidermalne masne naslage su homogenizovani i sonifikovani u puferu za lizu Mesoscale, utvrđen je sadržaj proteina (BCA komplet za određivanje proteina) i izmereni su nivoi pcJun (Mesoscale Discovery). Vrednosti ED50su izračunate kao doza jedinjenja diaminopirimidina pri kojoj su nivoi TNF-α ili pcJun smanjeni na 50% kontrolne vrednosti. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 na ovom testu su pokazala, ili će pokazati da imaju vrednost ED50u rasponu od 30 - 100 mg/kg.
[0348] Model nealkoholnog steatohepatitisa (NASH) indukovanog aminokiselinskim suplementom sa nedostatkom holina kod pacova. Mužjaci Vistar pacova nabavljeni od Charles River Laboratories stari 7 nedelja su pušteni da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre upotrebe. Pacovi su do 12 nedelja hranjeni ishranom sa dodatkom L aminokiselina i nedostatkom holina (CDAA) (Dyets Inc). Na pacovima je jedinjenje diaminopirimidina primenjeno oralnom gavažom jednom ili dva puta dnevno počevši od trenutka uvođenja do ishrane između 2 i 12 nedelja. Na kraju studije, krv je sakupljena kardijalnom punkcijom i izolovani su jetra i epidermalne masne naslage. Tkivo jetre je obrađeno za histologiju i obim steatoze ili fibroze je kvantifikovan nakon bojenja sa H&E (hematoksilin i eozin) ili pikro Sirius crvenom bojom. Funkcija jetre je procenjena analizom enzima jetre, na primer, ALT i AST u plazmi ili serumu. Pored toga, nivoi fosfo-cJun u jetri su kvantifikovani putem IHC, kao što su opisali Ma F. et. al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009). Vrednosti ED50su izračunate kao doza jedinjenja diaminopirimidina pri kojoj su nivoi fibroze, steatoze, enzima jetre i/ili p-cJun smanjeni na 50% kontrolne vrednosti. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 na ovom testu su pokazala, ili će se pokazati da imaju vrednost ED50u rasponu od 10 - 100 mg/kg.
[0349] Model ligacije žučnih kanala kod fibroze. Mužjaci BALB/c miševa (22-24 g) nabavljeni su od Charles River Laboratories, i pušteni su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre operacije. Anestetički ketamin (80-100 mg/kg)/ksilazin (8 mg/kg) primenjen i.p. korišćen je za hirurški zahvat ligacije žučnih kanala. Rez na abdomenu je omogućio pristup žučnim kanalima koji su ligirani sa dva svilena 6,0 šava koja su rostralno načinjena na mestu spajanja žučnih kanala sa crevima. 3-0 vicryl šav je korišćen za zatvaranje zida abdomena i kože. Nakon operacije, na miševima je supkutano svaki dan primenjivan 1 ml Ringerovog rastvora sa laktatom kao i vlažna
1
hrana tokom trajanja studije. Ispitivana jedinjenja su primenjivana oralnom gavažom, počevši jedan dan nakon operacije. Studije su završene 14 dana nakon ligacije žučnih kanala. Krv je sakupljena kardijalnom punkcijom i serum je izolovan za kliničke hemijske analize funkcije jetre (ALT, AST i bilirubin). Tkivo jetre je sakupljeno i histološki obrađeno, obojeno sa H&E (hematoksilin i eozin) ili Picro Sirius crvenom bojom, i korišćeno za procenu obima inflamacije, periportalne hiperplazije, nekroze i fibroze indukovane hirurškim zahvatom ligacije žučnih kanala. Pored toga, nivoi fosfo-cJun u jetri su kvantifikovani putem IHC, kao što su opisali Ma F. et. al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009). Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 su pokazala, ili će pokazati, statistički značajnu inhibiciju inflamacije, periferne hiperplazije, nekroze, fibroze i/ili nivoa fosfor-cJun pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
[0350] Model fibroze sa ugljen tetrahloridom. Mužjaci C57Bl/6 miševa nabavljeni od kompanije Harlan teški 22-24 g po dolasku pušteni su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre upotrebe. Fibroza je uspostavljena putem intraperitonealne injekcije CCl4(0,75 ml/kg) u mineralnom ulju (15% V/V CCl4u mineralnom ulju) 3 puta nedeljno. Na životinjama je primenjeno jedinjenje diaminopirimidina putem oralne gavaže 1 h pre inicijalne injekcije CCl4a zatim jednom ili dva puta dnevno do kraja studije, 28 dana kasnije. Na kraju studije, krv je sakupljena kardijalnom punkcijom i jetra je izolovana. Tkivo jetre je obrađeno za histologiju i obim steatoze ili fibroze je kvantifikovan nakon bojenja sa H&E (hematoksilin i eozin) ili pikro Sirius crvenom bojom. Funkcija jetre je procenjena analizom enzima jetre, na primer, ALT i AST u plazmi ili serumu. Pored toga, nivoi fosfo-cJun u jetri su kvantifikovani putem IHC, kao što su opisali Ma F. et. al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009). Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 su pokazala, ili će pokazati, statistički značajnu inhibiciju inflamacije, periferne hiperplazije, nekroze, fibroze i/ili nivoa fosfor-cJun pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
[0351] Model kože sa bleomicinom: Mužjaci ili ženke DBA/2 miševa po dolasku teški 22-24 g nabavljeni su od kompanije Harlan i pušteni su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre upotrebe. Fibroza kože je indukovana intradermalnim injekcijama bleomicina (0,5 mg/ml sa ukupnom zapreminom 100 µl) svakog drugog dana tokom 6 nedelja u utvrđenim područjima na gornjim leđima. Na životinjama je primenjeno jedinjenje diaminopirimidina putem oralne gavaže 1 h pre inicijalne injekcije bleomicina a zatim jednom ili dva puta dnevno do kraja studije, 3 ili 6 nedelja kasnije. Na kraju studije, krv je sakupljena kardijalnom punkcijom i koža je izolovana. Koža je obrađena za histologiju i debljina dermisa je kvantifikovana nakon H&E (hematoksilin i eozin) bojenja. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 će pokazati statistički značajnu inhibiciju debljine kože pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
[0352] Model pluća sa bleomicinom: Mužjaci C57B1/6 miševa su nabavljeni od Charles River Laboratories i životinje su puštene da se aklimatizuju tokom najmanje 5 dana. Životinje su čuvane
1 1
sa 12-časovnim ciklusom svetlosti/mraka i bile su stare približno 8 nedelja na početku studije. Miševi su blago anestezirani izofluranom i traheje su otkrivene. 0. dana u traheje je injektovan bleomicin (30 µl; 0,05 U). Nakon injekcije bleomicina, rana je zatvorena koristeći kopče za rane i životinje su puštene da se oporave. Prednizolon (pozitivna kontrola, doziran intraperitonealno), vehikulum (doziran oralno) ili jedinjenje diaminopirimidina (dozirano oralno) primenjeni su 30 min do 2 h pre primene bleomicina (profilaktički model) ili 4 dana nakon bleomicina (terapeutski model). Doziranje vehikulumom ili jedinjenjem diaminopirimidina je vršeno dva puta dnevno tokom svih studija, doziranje prednizolonom je vršeno jednom dnevno. Miševi su svakodnevno praćeni na pojavu neželjenih dejstava usled primene testiranog proizvoda, uključujući i dejstvo na telesnu težinu. Miševi su eutanazirani 13. dana. Obavljena je bronhoalveolarna lavaža koristeći 1 ml fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS) i procenjen je ukupan broj belih krvnih zrnaca. Rezultati su izraženi kao ukupne izolovane ćelije. Makrofagi, eozinofili, neutrofili i limfociti su kvantifikovani u uzorcima BALF. Režnjevi pluća su obrađeni za histologiju koristeći bojenje sa H&E (hematoksilin i eozin), trihromno ili TUNEL bojenje. Trihromni odeljci su ocenjeni na težinu fibroze kao što je prethodno opisano (Ashcroft et al. J. Clin. Pathol. 41:467-470 (1988)). Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 će pokazati statistički značajnu inhibiciju fibroze pluća pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
[0353] Model lupusa: Ženke NZB/NZW F1 miševa po dolasku stare od 4-12 nedelja su nabavljene od Jackson Laboratories i puštene su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre upotrebe i da razviju spontano oboljenje nalik SLE. Na životinjama je primenjeno jedinjenje diaminopirimidina putem oralne gavaže prilikom započinjanja studije a zatim jednom ili dva puta dnevno do kraja studije, do 6 meseci kasnije. Krv je sakupljana tokom studije i serum je izolovan da bi se izmerilo javljanja dsDNK putem standardnog ELISA postupka, i proteinurea je merena u urinu. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 će pokazati statistički značajnu inhibiciju proteinuree ili dsDNK pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
[0354] UUO model fibroze bubrega: Mužjaci CD-IGS pacova teški približno 150 - 160 g su nabavljeni od Charles River Laboratories i pušteni su da se aklimatizuju tokom jedne nedelje pre započinjanja studije. Pacovi su anestezirani koristeći ketamin/ksilazin i oblast operacije je sterilisana 70% etanolom i betadinom. Mokraćovod je otkriven nakon što je načinjen sidreni rez i dva puta je ligiran koristeći 5,0 svileni šav postavljen sa 1 cm razmaka i načinjen je rez između ligacija. Rez je zatvoren koristeći 3,0 svileni šav i životinja je puštena da se oporavi. Na životinjama je primenjeno jedinjenje diaminopirimidina putem oralne gavaže 1 h pre ligacije mokraćovoda a zatim jednom ili dva puta dnevno do kraja studije, 7 dana kasnije. Na kraju studije, krv je sakupljena kardijalnom punkcijom i bubreg je izolovan. Bubreg je obrađen za histologiju i morfologiju i obim fibroze je kvantifikovan nakon bojenja H&E (hematoksilin i eozin), picro
1 2
sirius crvenom bojom ili bojenja alfa-glatkih mišića aktinom. Određena jedinjenja iz tabele 1, 2 i 3 će pokazati statistički značajnu inhibiciju fibroze ili bojenja alfa-glatkih mišića aktinom pri doznim nivoima 10-300 mg/kg QD ili BID.
TABELE AKTIVNOSTI
[0355] Svako od jedinjenja u tabeli 1, 2 ili 3 je testirano u jednom ili više biohemijskih testova JNK1 i u njima je otkriveno da ima aktivnost, pri čemu sva jedinjenja imaju IC50ispod 10 µM na testu, gde neka jedinjenja imaju IC50ispod 200 nM (nivo aktivnosti D), neka IC50od 200 nM do 800 nM (nivo aktivnosti C), neka IC50od 800 nM do 1 µM (nivo aktivnosti B), a druga imaju IC50od 1 µM do 10 µM (nivo aktivnosti A).
Tabela 1.
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
14
vo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo 13 Mogući izomeri: Pik 4 366.3 D
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
11
vo
12
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
14
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
1
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
vo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
vo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
vo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
vo
21
vo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
vo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
vo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
21
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
22
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
24
Jed. A- Struktura NAZIV MH<+>Akt. Nivo
2
Referentna tabela 2
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 1
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 4
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
vo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
vo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
vo
2
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 1
Jedinjenje B- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 2
Referentna tabela 3.
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 4
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 1
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2
Jed. C- Struktura Naziv jedinjenja MH<+>Akt. Nivo
2 4

Claims (7)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, pri čemu, jedinjenje je
    2
    �
    �
    �
    �
    �
    �
    �
    11
    ��
    �
    ��
    �
    �
    �
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, stereoizomer ili enantiomer.
  2. 2. Farmaceutska kompozicija koja sadrži delotvornu količinu jedinjenja iz zahteva 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijens ili vehikulum.
  3. 3. In vitro postupak za inhibiciju kinaze u ćeliji koja eksprimira pomenutu kinazu, pri čemu postupak obuhvata dovođenje u kontakt pomenute ćelije sa delotvornom količinom jedinjenja iz zahteva 1, pri čemu, kinaza je jedno ili više od JNK1 ili JNK2.
  4. 4. Jedinjenje iz zahteva 1 ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 2 za upotrebu u postupku za lečenje ili prevenciju fibrotičnih poremećaja jetre, ili dijabetesa ili metaboličkog sindroma koji dovodi do fibrotičnih poremećaja jetre, pri čemu postupak obuhvata primenu na ispitaniku kome je to potrebno delotvorne količine jedinjenja, opciono pri čemu je fibrotični poremećaj 1 jetre nealkoholni steatohepatitis, steatoza, ciroza, primarni sklerozirajući holangitis, primarna bilijarna ciroza, hepatitis, hepatocelularni karcinom ili fibroza jetre koja se podudara sa hroničnim ili čestim unosom alkohola, sa infekcijom, sa transplantacijom jetre ili sa povredom jetre indukovanom lekom, ili opciono pri čemu je fibrotični poremećaj jetre nealkoholni steatohepatitis, steatoza, hepatitis ili ciroza.
  5. 5. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu jedinjenje pri koncentraciji od 10 µM inhibira JNK1 za najmanje oko 50%.
  6. 6. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer, stereoizomer ili enantiomer.
  7. 7. Jedinjenje iz zahteva 6, pri čemu, jedinjenje je 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroksi-4-metilcikloheksilamino)-pirimidin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1
RS20240075A 2011-04-22 2012-04-20 Supstituisani diaminokarboksamid i diaminokarbonitril pirimidini, njihove kompozicije i postupci za lečenje njima RS65202B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161478076P 2011-04-22 2011-04-22
US201161555339P 2011-11-03 2011-11-03
PCT/US2012/034349 WO2012145569A1 (en) 2011-04-22 2012-04-20 Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
EP12718524.7A EP2699553B1 (en) 2011-04-22 2012-04-20 Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65202B1 true RS65202B1 (sr) 2024-03-29

Family

ID=46025954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240075A RS65202B1 (sr) 2011-04-22 2012-04-20 Supstituisani diaminokarboksamid i diaminokarbonitril pirimidini, njihove kompozicije i postupci za lečenje njima

Country Status (35)

Country Link
US (7) US9139534B2 (sr)
EP (2) EP2699553B1 (sr)
JP (5) JP6027095B2 (sr)
KR (2) KR102055532B1 (sr)
CN (5) CN103492370B (sr)
AR (1) AR087151A1 (sr)
AU (1) AU2012245387C1 (sr)
BR (1) BR112013022813B1 (sr)
CA (1) CA2829264C (sr)
CL (1) CL2013003025A1 (sr)
CO (1) CO6821941A2 (sr)
CR (1) CR20130490A (sr)
DK (1) DK2699553T3 (sr)
EC (1) ECSP13012985A (sr)
ES (1) ES2968700T3 (sr)
FI (1) FI2699553T3 (sr)
HR (1) HRP20240097T1 (sr)
HU (1) HUE064883T2 (sr)
IL (3) IL228721A (sr)
LT (1) LT2699553T (sr)
MX (1) MX351754B (sr)
NI (1) NI201300113A (sr)
PE (1) PE20140502A1 (sr)
PH (2) PH12013501921A1 (sr)
PL (1) PL2699553T3 (sr)
PT (1) PT2699553T (sr)
RS (1) RS65202B1 (sr)
RU (2) RU2625309C2 (sr)
SG (2) SG194086A1 (sr)
SI (1) SI2699553T1 (sr)
SM (1) SMT202400031T1 (sr)
TW (3) TWI599563B (sr)
UA (1) UA120740C2 (sr)
WO (1) WO2012145569A1 (sr)
ZA (1) ZA201306471B (sr)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012245387C1 (en) 2011-04-22 2016-05-05 Signal Pharmaceuticals, Llc Substituted Diaminocarboxamide and Diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
SG11201503395TA (en) * 2012-11-08 2015-05-28 Bristol Myers Squibb Co ALKYL AMIDE-SUBSTITUTED PYRIMIDINE COMPOUNDS USEFUL IN THE MODULATION OF IL-12, IL-23 AND/OR IFNα
KR102243637B1 (ko) 2013-03-14 2021-04-26 리커리엄 아이피 홀딩스, 엘엘씨 바이사이클릭 진통 화합물
WO2015039613A1 (zh) * 2013-09-18 2015-03-26 北京韩美药品有限公司 抑制btk和/或jak3激酶活性的化合物
JP6345786B2 (ja) 2013-12-05 2018-06-20 ファーマサイクリックス エルエルシー ブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤
EP3080072A4 (en) 2013-12-12 2017-07-19 Kalyra Pharmaceuticals, inc. Bicyclic alkyl compounds and synthesis
RU2016129380A (ru) * 2013-12-20 2018-01-25 СИГНАЛ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи Замещенные диаминопиримидильные соединения, их композиции и способы лечения с их участием
NZ715903A (en) * 2014-01-30 2017-06-30 Signal Pharm Llc Solid forms of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide, compositions thereof and methods of their use
WO2015134710A1 (en) 2014-03-07 2015-09-11 Kalyra Pharmaceuticals, Inc. Propellane derivates and synthesis
WO2016044331A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Kalyra Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic compounds
ES2877642T3 (es) * 2014-12-16 2021-11-17 Signal Pharm Llc Formulaciones de 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroxi-4-metilciclohexilamino)-pirimidin-5-carboxamida
WO2016100308A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Signal Pharmaceuticals, Llc Methods for measurement of inhibition of c-jun n-terminal kinase in skin
US20180022710A1 (en) 2015-01-29 2018-01-25 Signal Pharmaceuticals, Llc Isotopologues of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide
EP3795553B1 (en) 2015-07-24 2024-05-15 Celgene Corporation Methods of synthesis of (1r,2r,5r)-5-amino-2-methylcyclohexanol hydrochloride and intermediates useful therein
WO2018019244A1 (zh) * 2016-07-27 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 2,6-二甲基嘧啶酮衍生物的盐及其用途
WO2018029336A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for determining whether a subject was administered with an activator of the ppar beta/delta pathway.
EP3509586A4 (en) * 2016-09-12 2020-05-06 Imago Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT OF FIBROTIC DISORDERS WITH JUN N-TERMINAL KINASE INHIBITORS
WO2018104916A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Cadila Healthcare Limited Treatment for primary biliary cholangitis
MX389668B (es) 2017-05-15 2025-03-20 Recurium Ip Holdings Llc Compuestos biciclo[1.1.1]pentilo sustituidos y uso de los mismos para el tratamiento del dolor y fiebre.
MA49858A (fr) * 2017-08-09 2021-04-28 Denali Therapeutics Inc Composés, compositions et procédés
DK3676297T3 (da) 2017-09-01 2023-08-14 Denali Therapeutics Inc Forbindelser, sammensætninger og fremgangsmåder
CN107573249B (zh) * 2017-09-25 2018-12-25 上海馨远医药科技有限公司 一种反式4-烷氧基环己胺的制备方法
SG11202003827YA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Bristol Myers Squibb Co Bridged bicyclic compounds as farnesoid x receptor modulators
MA54959A (fr) 2019-02-13 2021-12-22 Denali Therapeutics Inc Composés, compositions et procédés
SG11202108552QA (en) 2019-02-13 2021-09-29 Denali Therapeutics Inc Compounds, compositions and methods
CN111718332B (zh) * 2019-03-19 2021-08-17 北京赛特明强医药科技有限公司 2-取代吡唑氨基-4-取代氨基-5-嘧啶甲酰胺类化合物、组合物及其应用
CN114302878A (zh) 2019-07-03 2022-04-08 大日本住友制药肿瘤公司 酪氨酸激酶非受体1(tnk1)抑制剂及其用途
MX2022001413A (es) * 2019-08-06 2022-03-29 Lilly Co Eli Compuesto de pirimidina-5-carboxamida.
CN112574123B (zh) * 2019-09-30 2024-06-11 武汉朗来科技发展有限公司 Jnk抑制剂、其药物组合物和用途
WO2021178485A1 (en) * 2020-03-06 2021-09-10 National Health Research Institutes Pyrimidine compounds and their pharmaceutical uses
CN113698408B (zh) * 2020-05-22 2025-07-25 武汉朗来科技发展有限公司 Jnk抑制剂、其药物组合物和用途
WO2022048684A1 (zh) * 2020-09-07 2022-03-10 武汉朗来科技发展有限公司 Jnk抑制剂、其药物组合物和用途
WO2022098809A1 (en) * 2020-11-09 2022-05-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Diaminopyrimidine carboxamide inhibitors of hpk1
CN117500778A (zh) * 2021-02-22 2024-02-02 普林斯顿大学保管委员会 2-取代的双环[1.1.1]戊烷
AU2022412835A1 (en) 2021-12-16 2024-06-20 Lynk Pharmaceuticals Co. Ltd. Tyk2 inhibitors and compositions and methods thereof
WO2023108536A1 (en) * 2021-12-16 2023-06-22 Lynk Pharmaceuticals Co. Ltd. Tyk2 inhibitors and compositions and methods thereof
CN114315738B (zh) * 2022-01-15 2023-08-18 重庆东寰科技开发有限公司 一种2,4-二氨基嘧啶-3-氧化物的制备方法
WO2024097940A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Bristol-Myers Squibb Company Therapy for the treatment of cancer
CN120457121A (zh) * 2022-12-30 2025-08-08 杭州矩阵生物药业有限公司 具有jnk抑制活性的嘧啶类衍生物及其应用

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH549339A (de) 1971-05-12 1974-05-31 Ciba Geigy Ag Herbizides mittel.
US4301281A (en) * 1979-04-18 1981-11-17 American Home Products Corporation 7,8-Dihydro-2,5,8-trisubstituted-7-oxo-pyrido[2,3-d]-pyrimidine-6-carboxylic acid amides
DE3338859A1 (de) * 1983-10-26 1985-05-09 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Substituierte pyrimidine
DE69839338T2 (de) * 1997-02-05 2008-07-10 Warner-Lambert Company Llc Pyrido (2,3-d) pyrimidine und 4-amino-pyrimidine als inhibitoren der zellulären proliferation
DE69839735D1 (de) * 1997-12-15 2008-08-28 Astellas Pharma Inc Pyrimidin-5-carboxamid-derivate
EE200000706A (et) 1998-05-26 2002-06-17 Warner-Lambert Company Bitsüklilised pürimidiinid ja bitsüklilised 3,4-dihüdropürimidiinid kui rakkude proliferatsiooni inhibiitorid
DE69933680T2 (de) 1998-08-29 2007-08-23 Astrazeneca Ab Pyrimidine verbindungen
JP4622047B2 (ja) 1999-06-09 2011-02-02 アステラス製薬株式会社 新規なヘテロ環カルボキサミド誘導体
US6797706B1 (en) * 1999-06-09 2004-09-28 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Heterocyclecarboxamide derivative
WO2000076980A1 (en) 1999-06-10 2000-12-21 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Novel nitrogen-contaiing heterocyclic derivatives or salts thereof
DE60006541D1 (de) 1999-06-30 2003-12-18 Merck & Co Inc Src-kinase hemmende verbindungen
GB0016877D0 (en) * 2000-07-11 2000-08-30 Astrazeneca Ab Chemical compounds
JP4329290B2 (ja) * 2000-10-06 2009-09-09 田辺三菱製薬株式会社 脂肪族含窒素五員環化合物
TWI329105B (en) 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
GB0206215D0 (en) 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
AU2003220968A1 (en) * 2002-03-28 2003-10-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anti-inflammatory agent
KR20050008849A (ko) 2002-06-25 2005-01-21 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤 2 환성 복소환 화합물
JP4529685B2 (ja) * 2002-06-28 2010-08-25 アステラス製薬株式会社 ジアミノピリミジンカルボキサミド誘導体
HRP20050089B1 (hr) * 2002-07-29 2015-06-19 Rigel Pharmaceuticals Upotreba 2,4 pirimidindiaminskog spoja za proizvodnju lijeka za lijeäśenje ili sprjeäśavanje autoimunosne bolesti
PL376823A1 (pl) * 2002-11-01 2006-01-09 Abbott Laboratories Środki przeciwzakaźne
US7902203B2 (en) 2002-11-01 2011-03-08 Abbott Laboratories, Inc. Anti-infective agents
JPWO2004054617A1 (ja) 2002-12-13 2006-04-20 協和醗酵工業株式会社 中枢疾患の予防および／または治療剤
JP2006516561A (ja) 2003-01-17 2006-07-06 ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー 細胞増殖の阻害剤としての２−アミノピリジン置換ヘテロ環類
DE602004022633D1 (de) * 2003-01-30 2009-10-01 Boehringer Ingelheim Pharma 2,4-diaminopyrimidinderivate, die sich als inhibitoren von pkc-theta eignen
CN100497339C (zh) * 2003-04-10 2009-06-10 霍夫曼-拉罗奇有限公司 嘧啶并化合物
EP1518655A1 (en) * 2003-07-24 2005-03-30 John Palmer Corp. Apparatus for and process of gas-assisted injection molding of plastics material
BR122019017579B8 (pt) 2003-08-15 2021-07-27 Novartis Ag 2,4-pirimidinadiaminas, seus usos, combinação e composição farmacêutica
CN1871009A (zh) 2003-09-24 2006-11-29 惠氏控股公司 作为抗癌剂的5－芳基嘧啶
US7253204B2 (en) * 2004-03-26 2007-08-07 Methylgene Inc. Inhibitors of histone deacetylase
WO2005095382A1 (ja) 2004-03-30 2005-10-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗腫瘍剤
CA2571937A1 (en) * 2004-07-08 2006-02-09 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine derivatives useful as inhibitors of pkc-theta
AU2005281736A1 (en) 2004-09-10 2006-03-16 Altana Pharma Ag Roflumilast and syk inhibitor combination and methods of use thereof
US20080027034A1 (en) 2004-09-10 2008-01-31 Shah Tushar P Ciclesonide and Syk Inhibitor Combination and Method of Use Thereof
JP2006124387A (ja) 2004-09-30 2006-05-18 Taisho Pharmaceut Co Ltd 新規なキノリン、テトラヒドロキナゾリン、及びピリミジン誘導体と、これらを使用することに関連した治療方法
ES2380631T3 (es) 2004-09-30 2012-05-17 Tibotec Pharmaceuticals Pirimidinas sustituidas en posición 5 inhibidoras de VIH
WO2006091737A1 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Kemia, Inc. Modulators of gsk-3 activity
GT200600105A (es) 2005-03-10 2007-02-14 Derivados de pirimidina para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos.
AU2006283940A1 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag P38 MAP kinase inhibitors and methods for using the same
WO2007032445A1 (ja) 2005-09-16 2007-03-22 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. タンパク質キナーゼ阻害剤
WO2007036791A1 (en) * 2005-09-28 2007-04-05 Ranbaxy Laboratories Limited Pyrido-pyridimidine derivatives useful as antiinflammatory agents
WO2007076247A1 (en) * 2005-12-21 2007-07-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pyrimidine derivatives useful as inhibitors of pkc-theta
WO2008009458A1 (en) * 2006-07-21 2008-01-24 Novartis Ag 2, 4 -di (arylaminio) -pyrimidine-5-carboxamide compounds as jak kinases inhibitors
US8188113B2 (en) 2006-09-14 2012-05-29 Deciphera Pharmaceuticals, Inc. Dihydropyridopyrimidinyl, dihydronaphthyidinyl and related compounds useful as kinase inhibitors for the treatment of proliferative diseases
US20080139531A1 (en) 2006-12-04 2008-06-12 Alcon Manufacturing Ltd. Use of connective tissue mast cell stabilizers to facilitate ocular surface re-epithelization and wound repair
DK2146779T3 (en) 2007-04-18 2016-11-28 Pfizer Prod Inc Sulfonylamid derivatives to treat abnormal cell growth.
KR20100017441A (ko) 2007-04-27 2010-02-16 아스트라제네카 아베 증식성 병태를 치료하기 위한 ＥｐｈＢ4 키나제 억제제로서의 Ｎ'-(페닐)-Ｎ-(모르폴린-4-일-피리딘-2-일)-피리미딘-2,4-디아민 유도체
WO2009010789A2 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Astrazeneca Ab Pyrimidine derivatives 934
AU2008275918B2 (en) 2007-07-17 2014-01-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Cyclic amine substituted pyrimidinediamines as PKC inhibitors
EP2321283B1 (en) * 2008-04-16 2016-07-13 Portola Pharmaceuticals, Inc. 2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as syk or jak kinases inhibitors
MX2010011463A (es) * 2008-04-16 2011-06-03 Portola Pharm Inc 2,6-diamino-pirimidin-5-il-carboxamidas como inhibidores de syk o jak quinasas.
CA2728893C (en) * 2008-04-16 2017-03-14 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of syk protein kinase
JP2011518219A (ja) 2008-04-22 2011-06-23 ポートラ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド タンパク質キナーゼの阻害剤
JP2011518216A (ja) 2008-04-22 2011-06-23 アストラゼネカ アクチボラグ 置換ピリミジン−５−カルボキサミド
CN102015704A (zh) * 2008-04-29 2011-04-13 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Jnk的嘧啶基吡啶酮抑制剂
MX2010012703A (es) 2008-05-21 2010-12-21 Ariad Pharma Inc Derivados fosforosos como inhibidores de cinasa.
PE20100087A1 (es) 2008-06-25 2010-02-08 Irm Llc Compuestos y composiciones como inhibidores de cinasa
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
SG10201510696RA (en) 2008-06-27 2016-01-28 Celgene Avilomics Res Inc Heteroaryl compounds and uses thereof
BRPI0918472A2 (pt) * 2008-09-01 2015-12-01 Astellas Pharma Inc composto 2,4-diaminopirimidina
TWI453207B (zh) 2008-09-08 2014-09-21 Signal Pharm Llc 胺基三唑并吡啶，其組合物及使用其之治療方法
CN102159547A (zh) 2008-09-18 2011-08-17 安斯泰来制药株式会社 杂环甲酰胺化合物
UY32158A (es) 2008-10-03 2010-04-30 Astrazeneca Ab Derivados heterociclicos y metodos de uso de los mismos
JP2012505927A (ja) * 2008-10-22 2012-03-08 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー Ｊｎｋのピリミジニルピリドン阻害剤
BRPI0919885A2 (pt) 2008-10-31 2015-08-11 Centocor Ortho Biotech Inc Diferenciação de células-tronco embrionárias humanas para a linhagem endócrina pancreática
WO2010067886A1 (en) * 2008-12-12 2010-06-17 Banyu Pharmaceutical Co.,Ltd. Dihydropyrimidopyrimidine derivative
WO2010080864A1 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Array Biopharma Inc. Piperidine-containing compounds and use thereof
ES2433109T3 (es) 2009-01-13 2013-12-09 Glaxo Group Limited Derivados de pirimidin-carboxamida como inhibidores de la Syk cinasa
US8377924B2 (en) * 2009-01-21 2013-02-19 Rigel Pharmaceuticals Inc. Protein kinase C inhibitors and uses thereof
AR076550A1 (es) * 2009-05-06 2011-06-22 Portola Pharm Inc Inhibidores de la janus tirosina kinasa (jak)
JP2012148977A (ja) * 2009-05-20 2012-08-09 Astellas Pharma Inc アミノシクロヘキシルアルキル基を有する２，４−ジアミノピリミジン化合物
AU2010258937A1 (en) * 2009-06-08 2012-01-19 Reduction Technologies Inc. Systems, methods and devices for correcting spinal deformities
CA2764983A1 (en) 2009-06-10 2010-12-16 Abbott Laboratories 2- ( lh-pyrazol-4 -ylamino ) -pyrimidine as kinase inhibitors
JP2012197231A (ja) 2009-08-06 2012-10-18 Oncotherapy Science Ltd Ｔｔｋ阻害作用を有するピリジンおよびピリミジン誘導体
WO2011065800A2 (ko) 2009-11-30 2011-06-03 주식회사 오스코텍 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약학적 조성물
US20110130415A1 (en) 2009-12-01 2011-06-02 Rajinder Singh Protein kinase c inhibitors and uses thereof
JP2011173853A (ja) * 2010-02-26 2011-09-08 Astellas Pharma Inc 置換アミノアダマンチルアルキル基を有する２，４−ジアミノピリミジン化合物
JP6035238B2 (ja) 2010-07-21 2016-11-30 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド プロテインキナーゼｃ阻害剤およびその使用
WO2012044936A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Portola Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with 4-(3-(2h-1,2,3-triazol-2-yl)phenylamino)-2-((1r,2s)-2-aminocyclohexylamino)pyrimidine-5-carboxamide
WO2012045020A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Portola Pharmaceuticals, Inc. Combinations of 4-(cyclopropylamino)-2-(4-(4-(ethylsulfonyl)piperazin-1-yl)phenylamino)pyrimidine-5-carboxamide and fludarabine
AU2012245387C1 (en) * 2011-04-22 2016-05-05 Signal Pharmaceuticals, Llc Substituted Diaminocarboxamide and Diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
RU2016129380A (ru) * 2013-12-20 2018-01-25 СИГНАЛ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи Замещенные диаминопиримидильные соединения, их композиции и способы лечения с их участием
NZ715903A (en) * 2014-01-30 2017-06-30 Signal Pharm Llc Solid forms of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide, compositions thereof and methods of their use
WO2016100308A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Signal Pharmaceuticals, Llc Methods for measurement of inhibition of c-jun n-terminal kinase in skin
ES2877642T3 (es) * 2014-12-16 2021-11-17 Signal Pharm Llc Formulaciones de 2-(terc-butilamino)-4-((1R,3R,4R)-3-hidroxi-4-metilciclohexilamino)-pirimidin-5-carboxamida

Also Published As

Publication number Publication date
LT2699553T (lt) 2024-02-12
JP2017002091A (ja) 2017-01-05
RU2625309C2 (ru) 2017-07-13
PH12015501677A1 (en) 2015-10-05
HUE064883T2 (hu) 2024-04-28
CN103492370A (zh) 2014-01-01
IL245792A0 (en) 2016-06-30
US20210114992A1 (en) 2021-04-22
JP2023179797A (ja) 2023-12-19
JP2019112457A (ja) 2019-07-11
JP6898961B2 (ja) 2021-07-07
TW201311651A (zh) 2013-03-16
CL2013003025A1 (es) 2014-05-30
US9701643B2 (en) 2017-07-11
CN106946795A (zh) 2017-07-14
EP2699553B1 (en) 2023-11-08
JP6502302B2 (ja) 2019-04-17
RU2017121958A3 (sr) 2019-01-29
CR20130490A (es) 2014-01-14
US20150336901A1 (en) 2015-11-26
SG194086A1 (en) 2013-11-29
KR20140027160A (ko) 2014-03-06
MX2013010946A (es) 2013-12-16
IL252952B (en) 2020-02-27
HRP20240097T1 (hr) 2024-03-29
PH12013501921A1 (en) 2013-11-25
CN111499580A (zh) 2020-08-07
CN103492370B (zh) 2016-10-26
JP2021138755A (ja) 2021-09-16
SMT202400031T1 (it) 2024-03-13
US20170267647A1 (en) 2017-09-21
SI2699553T1 (sl) 2024-03-29
TWI548621B (zh) 2016-09-11
DK2699553T3 (da) 2024-01-29
PT2699553T (pt) 2024-01-24
TW201736348A (zh) 2017-10-16
SG10201702654VA (en) 2017-06-29
NI201300113A (es) 2014-02-25
JP2014514322A (ja) 2014-06-19
PL2699553T3 (pl) 2024-03-25
ES2968700T3 (es) 2024-05-13
JP6027095B2 (ja) 2016-11-16
CO6821941A2 (es) 2013-12-31
BR112013022813B1 (pt) 2022-04-19
CN111471021B (zh) 2024-04-02
JP7374955B2 (ja) 2023-11-07
US20190194144A1 (en) 2019-06-27
IL252952A0 (en) 2017-08-31
EP2699553A1 (en) 2014-02-26
BR112013022813A2 (pt) 2016-08-02
CN105001165B (zh) 2020-06-23
RU2017121958A (ru) 2019-01-29
TW201627291A (zh) 2016-08-01
US20130029987A1 (en) 2013-01-31
CA2829264C (en) 2020-04-07
CN106946795B (zh) 2020-06-02
UA120740C2 (uk) 2020-02-10
CN111471021A (zh) 2020-07-31
EP4328223A3 (en) 2024-11-06
TWI599563B (zh) 2017-09-21
FI2699553T3 (fi) 2024-01-24
AU2012245387B2 (en) 2015-07-09
AU2012245387A1 (en) 2013-03-28
CN105001165A (zh) 2015-10-28
PH12015501677B1 (en) 2015-10-05
US20230116093A1 (en) 2023-04-13
RU2013152021A (ru) 2015-05-27
US9139534B2 (en) 2015-09-22
US10266500B2 (en) 2019-04-23
MX351754B (es) 2017-10-27
CA2829264A1 (en) 2012-10-26
IL245792B (en) 2018-03-29
ZA201306471B (en) 2014-12-23
KR102055532B1 (ko) 2019-12-12
IL228721A (en) 2016-06-30
US10919865B2 (en) 2021-02-16
TWI681952B (zh) 2020-01-11
IL228721A0 (en) 2013-12-31
AR087151A1 (es) 2014-02-26
US12129237B2 (en) 2024-10-29
US10040770B2 (en) 2018-08-07
WO2012145569A1 (en) 2012-10-26
NZ614776A (en) 2015-06-26
KR20190029772A (ko) 2019-03-20
RU2697712C2 (ru) 2019-08-19
US11325890B2 (en) 2022-05-10
PE20140502A1 (es) 2014-05-02
EP4328223A2 (en) 2024-02-28
AU2012245387C1 (en) 2016-05-05
KR101962488B1 (ko) 2019-03-26
US20180305322A1 (en) 2018-10-25
ECSP13012985A (es) 2013-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12129237B2 (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
HK40108423A (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
AU2015201030B2 (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
AU2016244228B2 (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
NZ614776B2 (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith