RS66554B1 - Nukleotid hemi-sulfat so za lečenje virusa hepatitisa c - Google Patents

Nukleotid hemi-sulfat so za lečenje virusa hepatitisa c

Info

Publication number
RS66554B1
RS66554B1 RS20250211A RSP20250211A RS66554B1 RS 66554 B1 RS66554 B1 RS 66554B1 RS 20250211 A RS20250211 A RS 20250211A RS P20250211 A RSP20250211 A RS P20250211A RS 66554 B1 RS66554 B1 RS 66554B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
hcv
measured
dosage form
metabolites
Prior art date
Application number
RS20250211A
Other languages
English (en)
Inventor
Adel Moussa
Jean-Pierre Sommadossi
Original Assignee
Atea Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=62977563&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS66554(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Atea Pharmaceuticals Inc filed Critical Atea Pharmaceuticals Inc
Publication of RS66554B1 publication Critical patent/RS66554B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A61K31/708—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid having oxo groups directly attached to the purine ring system, e.g. guanosine, guanylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Storage Device Security (AREA)

Description

Opis
UKRASNA REFERENCA NA SRODNE PRIJAVE
[0001] Ova prijava ima korist od privremenih U.S. prijava br. 62/453,437 koja je podneta 1. februara 2017.; 62/469,912 koja je podneta 10. marta 2017.; 62/488,366 koja je podneta 21. aprila 2017.; i, 62/575,248 koja je podneta 20. oktobra 2017.
OBLAST PRONALASKA
[0002] Ovaj pronalazak je hemisulfatna so odabranog nukleotidnog jedinjenja koje ima neočekivana terapeutska svojstva za lečenje domaćina inficiranog hepatitisom C, kao i njihove farmaceutske kompozicije i dozni oblici.
OBLAST PRONALASKA
[0003] Hepatitis C (HCV) je RNK jednolančani virus i član roda Hepacivirusa. Procenjuje se da je 75% svih slučajeva oboljenja jetre uzrokovano sa HCV. HCV infekcija može dovesti do ciroze i kancera jetre, a ako se ostavi da napreduje, otkazivanja jetre koje može zahtevati transplantaciju jetre. Približno 71 milion ljudi širom sveta živi sa hroničnim HCV infekcijama i oko 399 000 ljudi svake godine umre od HCV, uglavnom od ciroze i hepatocelularnog karcinoma.
[0004] RNK polimeraza je ključno ciljno mesto za razvoj lekova protiv RNK jednolančanih virusa. HCV nestrukturni protein NS5B RNK-zavisna RNK polimeraza je ključni enzim odgovoran za iniciranje i katalizu sinteze virusne RNK. Postoje dve glavne podklase NS5B inhibitora: nukleozidni analozi i nenukleozidni inhibitori (NNI). Nukleozidni analozi se anabolišu u aktivne trifosfate koji deluju kao alternativni supstrati za polimerazu, a nenukleozidni inhibitori (NNI) se vezuju za alosterične regione na proteinu. Nukleozidni ili nukleotidni inhibitori imitiraju prirodne supstrate polimeraze i deluju kao terminatori lanca. Oni inhibiraju inicijaciju transkripcije RNK i produžavanje lanca RNK u nastajanju.
[0005] Pored ciljnog delovanja na RNK polimeraze, drugi RNK virusni proteini takođe mogu ciljani u kombinovanim terapijama. Na primer, HCV proteini koji su dodatna ciljna mesta za terapijske pristupe su NS3/4A (serinska proteaza) i NS5A (nestrukturni protein koji je suštinska komponenta HCV replikaze i ima niz efekata na ćelijske puteve).
[0006] U decembru 2013., prvi nukleozidni inhibitor NS5B polimeraze sofosbuvir (Sovaldi<®>, Gilead Sciences) je odobren. Sovaldi<®>je uridin fosforamidatni prolek koji preuzimaju hepatociti i koji se podvrgava intracelularnoj aktivaciji da bi se dobio aktivni metabolit, 2'-deoksi-2'-α-fluoro-β-C-metiluridin-5'-trifosfat.
2'-deoksi-2'-α-fluoro-β-C-metiluridin-5'-trifosfat
[0007] Sovaldi<®>je prvi lek koji je pokazao bezbednost i efikasnost u lečenju određenih tipova HCV infekcije bez potrebe za istovremenom primenom interferona. Sovaldi<®>je treći lek sa oznakom revolucionarne terapije koji je dobio odobrenje FDA.
[0008] U 2014., američka FDA je odobrila Harvoni<®>(ledispasvir, inhibitor NS5A i sofosbuvir) za lečenje hronične infekcije virusom hepatitisa C genotipa 1. Harvoni<®>je prva kombinovana pilula odobrena za lečenje hronične infekcije HCV genotipa 1. To je takođe prvi odobreni režim koji ne zahteva primenu interferona ili ribavirina. Pored toga, FDA je odobrila simeprevir (Olysio<™>) u kombinaciji sa sofosbuvirom (Sovaldi<®>) kao jedno-dnevni, oralni tretman bez interferona i ribavirina za odrasle sa infekcijom genotipa 1 HCV.
[0009] Američka FDA je takođe odobrila VIEKIRA Pak<™>kompanije AbbVie 2014. pakovanje sa više pilula koje sadrži dasabuvir (nenukleozidni inhibitor NS5B polimeraze), ombitasvir (inhibitor NS5A), paritaprevir (inhibitor NS3/4A) i ritonavir. VIEKIRA Pak<™>može se koristiti sa ili bez ribavirina za lečenje pacijenata inficiranih genotipom 1 HCV, uključujući pacijente sa kompenzovanom cirozom. VIEKIRA Pak<™>ne zahteva ko-terapiju interferonom.
[0010] U julu 2015., američka FDA je odobrila Technivie<™>i Daklinza<™>za lečenje HCV genotipa 4 i HCV genotipa 3, respektivno. Technivie<™>(Ombitasvir/paritaprevir/ritonavir) je odobren za upotrebu u kombinaciji sa ribavirinom za lečenje HCV genotipa 4 kod pacijenata bez ožiljaka i ciroze i prva je opcija za pacijente inficirane HCV-4 kojima nije potrebna istovremena primena sa interferonom. Daklinza<™>je odobren za upotrebu sa Sovaldi<®>za lečenje infekcija HCV genotipa 3. Daklinza<™>je prvi lek koji je pokazao bezbednost i efikasnost u lečenju HCV genotipa 3 bez potrebe za istovremenom primenom interferona ili ribavirina.
[0011] U oktobru 2015., američka FDA je upozorila da tretmani HCV Viekira Pak i Technivie mogu izazvati ozbiljne povrede jetre prvenstveno kod pacijenata sa uznapredovalim oboljenjem jetre i zahtevala je da se na etiketi dodaju dodatne informacije o bezbednosti.
[0012] Druge trenutno odobrene terapije za HCV uključuju interferon alfa-2b ili pegilovani interferon alfa-2b (Pegintron<®>), koji se može primeniti sa ribavirinom (Rebetol*), NS3/4A telaprevirom (Incivek<®>, Vertex i Johnson & Johnson), boceprevirom (Victrelis<™>, Merck), simeprevirom (Olysio<™>, Johnson & Johnson), paritaprevirom (AbbVie), Ombitasvirom (AbbVie), NNI Dasabuvirom (ABT-333) i Merck-ovim Zepatier<™>(kombinacija jedne tablete dva leka grazoprevir i elbasvir).
[0013] Dodatni inhibitori NS5B polimeraze su trenutno u razvoju. Merck razvija uridin nukleotidni prolek MK-3682 (ranije Idenix IDX21437) i lek je trenutno u fazi II kombinovanih ispitivanja.
[0014] Patenti Sjedinjenih Država i WO prijave koje opisuju nukleozidne inhibitore polimeraze za lečenje Flaviviridae, uključujući HCV, uključuju one koje je podnela Idenix Pharmaceuticals (6,812,219; 6,914,054; 7,105,493; 7,138,376; 7,148,206; 7,157,441; 7,163,929; 7,169,766; 7,192,936; 7,365,057; 7,384,924; 7,456,155; 7,547,704; 7,582,618; 7,608,597; 7,608,600; 7,625,875; 7,635,689; 7,662,798; 7,824,851; 7,902,202; 7,932,240; 7,951,789; 8,193,372; 8,299,038; 8,343,937; 8,362,068; 8,507,460; 8,637,475; 8,674,085; 8,680,071; 8,691,788, 8,742,101, 8,951,985; 9,109,001; 9,243,025; US2016/0002281; US2013/0064794; WO/2015/095305; WO/2015/081133; WO/2015/061683; WO/2013/177219; WO/2013/039920; WO/2014/137930; WO/2014/052638; WO/2012/154321); Merck (6,777,395; 7,105,499; 7,125,855; 7,202,224; 7,323,449; 7,339,054; 7,534,767; 7,632,821; 7,879,815; 8,071,568; 8,148,349; 8,470,834; 8,481,712; 8,541,434; 8,697,694; 8,715,638, 9,061,041; 9,156,872 i WO/2013/009737); Emory University (6,348,587; 6,911,424; 7,307,065; 7,495,006; 7,662,938; 7,772,208; 8,114,994; 8,168,583; 8,609,627; US 2014/0212382; i WO2014/1244430); Gilead Sciences/ Pharmasset Inc. (7,842,672; 7,973,013; 8,008,264; 8,012,941; 8,012,942; 8,318,682; 8,324,179; 8,415,308; 8,455,451; 8,563,530; 8,841,275; 8,853,171; 8,871,785; 8,877,733; 8,889,159; 8,906,880; 8,912,321; 8,957,045; 8,957,046; 9,045,520; 9,085,573; 9,090,642; i 9,139,604) i (6,908,924; 6,949,522; 7,094,770; 7,211,570; 7,429,572; 7,601,820; 7,638,502; 7,718,790; 7,772,208; RE42,015; 7,919,247; 7,964,580; 8,093,380; 8,114,997; 8,173,621; 8,334,270; 8,415,322; 8,481,713; 8,492,539; 8,551,973; 8,580,765; 8,618,076; 8,629,263; 8,633,309; 8,642,756; 8,716,262; 8,716,263; 8,735,345; 8,735,372; 8,735,569; 8,759,510 i 8,765,710); Hoffman La-Roche (6,660,721), Roche (6,784,166; 7,608,599, 7,608,601 i 8,071,567); Alios BioPharma Inc. (8,895,723; 8,877,731; 8,871,737, 8,846,896, 8,772,474; 8,980,865; 9,012,427; US 2015/0105341; US 2015/0011497; US 2010/0249068; US2012/0070411; WO 2015/054465; WO 2014/209979; WO 2014/100505; WO 2014/100498; WO 2013/142159; WO 2013/142157; WO 2013/096680; WO 2013/088155; WO 2010/108135), Enanta Pharmaceuticals (US 8,575,119; 8,846,638; 9,085,599; WO 2013/044030; WO 2012/125900), Biota (7,268,119; 7,285,658; 7,713,941; 8,119,607; 8,415,309; 8,501,699 i 8,802,840), Biocryst Pharmaceuticals (7,388,002; 7,429,571; 7,514,410; 7,560,434; 7,994,139; 8,133,870; 8,163,703; 8,242,085 i 8,440,813), Alla Chem, LLC (8,889,701 i WO 2015/053662), Inhibitex (8,759,318 i WO/2012/092484), Janssen Products (8,399,429; 8,431,588, 8,481,510, 8,552,021, 8,933,052; 9,006,29 i 9,012,428) the University of Georgia Foundation (6,348,587; 7,307,065; 7,662,938; 8,168,583; 8,673,926, 8,816,074; 8,921,384 i 8,946,244), RFS Pharma, LLC (8,895,531; 8,859,595; 8,815,829; 8,609,627; 7,560,550; US 2014/0066395; US 2014/0235566; US 2010/0279969; WO/2010/091386 i WO 2012/158811) University College Cardiff Consultants Limited (WO/2014/076490, WO 2010/081082; WO/2008/062206), Achillion Pharmaceuticals, Inc. (WO/2014/169278 i WO 2014/169280), Cocrystal Pharma, Inc. (US 9,173,893), Katholieke Universiteit Leuven (WO 2015/158913), Catabasis (WO 2013/090420) i the Regents of the University of Minnesota (WO 2006/004637).
[0015] Atea Pharmaceuticals, Inc. je otkrila β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-βC-supstituisane-2-modifikovane-N<6>-(mono- i di-metil) purinske nukleotide za lečenje HCV u U.S. Patentu br.
9,828,410 i PCT prijavi br. WO 2016/144918. Atea je takođe otkrila β-D-2'-deoksi-2'-supstituisane-4'-supstituisane-2-N<6>-supstituisane-6-aminopurinske nukleotide za lečenje paramiksovirusnih i ortomiksovirusnih infekcija u US 2018/0009836 i WO 2018/009623.
[0016] Steven S Good et al. otkrivaju AT-337, AT-511 i njegov oblik soli, AT-527: Novi potentni i selektivni pan-genotipski purinski nukleotidni prolekovi inhibitori HCV polimeraze na posteru predstavljenom na 67. godišnjem sastanku Američkog udruženja za proučavanje bolesti jetre (AASLD); 11-15. novembra 2016., Boston, MA.
[0017] Ostaje jaka medicinska potreba za razvojem anti-HCV terapija koje su bezbedne, efikasne i koje se dobro tolerišu. Potreba je naglašena očekivanjem rezistencije na lekove. Jači antivirusni lekovi sa direktnim dejstvom mogli bi značajno da skrate trajanje lečenja i poboljšaju usklađenost i stope SVR (održivi virusni odgovor) za pacijente inficirane svim HCV genotipovima.
[0018] Stoga je cilj ovog pronalaska da obezbedi jedinjenja, farmaceutske kompozicije, postupke i dozne oblike za lečenje i/ili prevenciju infekcija sa HCV.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0019] Iznenađujuće je otkriveno da hemisulfatna so jedinjenja 1, koja je data u nastavku kao jedinjenje 2, pokazuje neočekivano povoljna terapeutska svojstva, uključujući poboljšanu bioraspoloživost i selektivnost ciljnog organa, u odnosu na svoju slobodnu bazu (jedinjenje 1).
Ove neočekivane prednosti nisu se mogle unapred predvideti. Jedinjenje 2 je stoga terapeutski bolja kompozicija materije za primenu u efikasnoj količini na domaćina kome je to potrebno, obično čoveka, za lečenje hepatitisa C. Jedinjenje 2 se pominje kao hemisulfatna so izopropil ((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata. Jedinjenje 1 je otkriveno u U.S. Patentu
[0020] Jedinjenje 2, kao jedinjenje 1, je konvertovano u svoj odgovarajući trifosfatni nukleotid (Jedinjenje 1-6) u ćeliji, koja je aktivni metabolit i inhibitor RNK polimeraze (videti šemu 1 ispod). Pošto se jedinjenje 1-6 proizvodi u ćeliji i ne napušta ćeliju, nije merljivo u plazmi. Međutim, 5'-OH metabolit jedinjenja 1-7 (videti šemu 1) se izvozi iz ćelije, pa je stoga merljiv u plazmi i deluje kao surogat koncentracije intracelularnog aktivnog metabolita jedinjenja 1-6.
[0021] Otkriveno je da je koncentracija u plazmi in vivo od surogat jedinjenja 1-7, a time i intracelularnog jedinjenja 1-6, značajno veća kada se jedinjenje 2 primenjuje in vivo nego kada se jedinjenje 1 primenjuje in vivo. U direktnom poređenju pasa koji su dozirani jedinjenjem 1 i jedinjenjem 2 (Primer 19, Tabela 28), doziranje jedinjenja 2 postiglo je AUC(0-4 h)krajnjeg metabolita nukleozida guanina 5'-OH (1-7) što je dvostruko veće od AUC posle doziranja jedinjenja 1. Neočekivano je da nekovalentna so ima takav efekat na koncentraciju matičnog leka u plazmi (jedinjenje 1).
[0022] Pored toga, jedinjenje 2 selektivno particioniše in vivo u jetru preko srca (Primer 19, Tabela 29), što je korisno jer je jetra bolesni organ kod domaćina inficiranih sa HCV. Psima je dozirano jedinjenje 1 ili jedinjenje 2 i koncentracija aktivnog trifosfata (1-6) merena je u jetri i srcu. Odnos koncentracije aktivnog trifosfata u jetri i srcu bio je veći nakon doziranja jedinjenja 2 u poređenju sa jedinjenjem 1 kao što je prikazano u tabeli 29. Konkretno, odnos jetra/srce za jedinjenje 2 je 20 u poređenju sa odnosom jetra/srce od 3.1 za jedinjenje 1. Ovi podaci ukazuju, neočekivano, da je primena jedinjenja 2 rezultira preferencijalnom raspodelom aktivnog guanin trifosfata (Jedinjenje 1-6) u jetri u odnosu na srca u poređenju sa jedinjenjem 1, što smanjuje potencijalne efekte van ciljnog mesta. Bilo je neočekivano da primena jedinjenja 2 značajno smanjuje neželjeno particionisanje van ciljnog mesta. Ovo omogućava primenu jedinjenja 2 u višoj dozi od jedinjenja 1, ako to želi zdravstveni radnik.
[0023] Pored toga, nivoi aktivnog guanin trifosfat derivata jedinjenja 2 (metabolit 1-6) u jetri i srčanom tkivu mereni su nakon oralnih doza jedinjenja 2 kod pacova i majmuna (Primer 20). Visok nivo aktivnog guanin trifosfata (1-6) meren je u jetri svih testiranih vrsta. Ono što je važno, nivoi guanin trifosfata koji se ne mogu izmeriti (1-6) mereni su u srcima majmuna, a ovo ukazuje na formiranje aktivnog trifosfata specifično za jetru. Tako je otkriveno da u poređenju sa doziranjem jedinjenja 1, doziranje jedinjenja 2 poboljšava raspodelu guanin trifosfata (1-6).
[0024] Kada se primenjuje na zdrave pacijente i pacijente zaražene hepatitisom C, jedinjenje 2 se dobro podnosilo nakon jedne oralne doze i Cmax, Tmaxi AUCukupnfarmakokinetički parametri su bili uporedivi u obe grupe (tabele 34 i 35). Kao što je opisano u Primeru 24, pojedinačna doza jedinjenja 2 kod pacijenata inficiranih sa HCV rezultirala je značajnom antivirusnom aktivnošću. Izlaganje metabolita 1-7 plazmi bilo je uglavnom proporcionalno dozi u ispitivanom opsegu.
[0025] Individualne farmakokinetičke/farmakodinamske analize pacijenata koji su dozirali jedinjenje 2 pokazalo je da je odgovor virusa u korelaciji sa izlaganjem metabolita 1-7 jedinjenja 2 (Primer 24, Sl.23A-23F) plazmi, što ukazuje da se izraženi odgovori bočice mogu postići uz snažne doze jedinjenja 2.
[0026] Primer 24 potvrđuje da, kao neograničavajući primeri izvođenja, pojedinačne oralne doze od 300 mg, 400 mg i 600 mg rezultiraju značajnom antivirusnom aktivnošću kod ljudi. C24minimalna koncentracija metabolita 1-7 u plazmi nakon doze od 600 mg jedinjenja 2 je udvostručena od C24minimalne koncentracije metabolita 1-7 u plazmi nakon doze od 300 mg jedinjenja 2.
[0027] Sl. 24 i Primer 25 ističu upečatljiv pronalazak koji obezbeđuje jedinjenje 2 za lečenje hepatitisa C. Kao što je prikazano na Sl.24, minimalni nivoi metabolita 1-7 (C24,ss) u plazmi u ravnotežnom stanju posle doziranja jedinjenja 2 kod ljudi (600 mg QD (ekvivalent 550 mg slobodne baze) i 450 mg QD (ekvivalent 400 mg slobodne baze)) su predviđeni i upoređeni sa EC95jedinjenja 1 in vitro u nizu kliničkih izolata HCV da bi se utvrdilo da li je koncentracija u plazmi u stabilnom stanju konstantno viša od EC95, što bi rezultiralo visokom efikasnošću protiv više kliničkih izolata in vivo. EC95za jedinjenje 1 je ista kao EC95jedinjenja 2. Da bi jedinjenje 2 bilo efikasno, minimalan nivo metabolita 1-7 (C24,ss) u plazmi u ravnotežnom stanju treba da premaši EC95.
[0028] Kao što je prikazano na Sl. 24, EC95jedinjenja 2 u odnosu na sve testirane kliničke izolate kretala se od približno 18 nM do 24 nM.
[0029] Kao što je prikazano na Sl.24, jedinjenje 2 u dozi od 450 mg QD (400 mg ekvivalenta slobodne baze) kod ljudi obezbeđuje predviđeni minimalan nivo metabolita 1-7 (C24,ss) u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) od približno 40 ng/mL. Jedinjenje 2 u dozi od 600 mg QD (550 mg ekvivalenta slobodne baze) kod ljudi obezbeđuje predviđeni minimalan nivo ostatka metabolita 1-7 (C24,ss) u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) od približno 50 ng/mL.
[0030] Stoga je predviđena koncentracija surogatnog metabolita u plazmi u stabilnom stanju 1-7 je skoro duplo veća od EC95protiv svih testiranih kliničkih izolata (čak i onih koji se teško leče GT3a), što ukazuje na bolje performanse.
[0031] Nasuprot tome, EC95standarda nege nukleotid sofosbuvira (Sovaldi) kreće se od 50 nM do 265 nM u svim testiranim kliničkim izolatima HCV, sa EC95manjom od predviđene koncentracije u stabilnom stanju pri komercijalnoj dozi od 400 mg za samo dva izolata, GT2a i GT2b. EC95za komercijalnu dozu od 400 mg sofosbuvira je veća od predviđene koncentracije u ravnotežnom stanju za druge kliničke izolate, GT1a, GTlb, GT3a, GT4a i GT4d.
[0032] Podaci koji upoređuju efikasnost i farmakokinetičke parametre ravnotežnog stanja na Sl. 24 jasno pokazuje neočekivani terapeutski značaj jedinjenja 2 za lečenje hepatitisa C. U stvari, predviđeni nivo u plazmi ravnotežnog stanja (C24,ss) posle primene jedinjenja 2 predviđa se da će biti najmanje 2 puta veći od EC95za sve testirane genotipove, i 3- do 5 puta je potentniji protiv GT2. Ovi podaci ukazuju na to da jedinjenje 2 ima snažno pan-genotipsko antivirusno dejstvo kod ljudi. Kao što je prikazano na Sl. 24, EC95sofosbuvira u odnosu na GT1, GT3 i GT4 je veći od 100 ng/mL. Tako iznenađujuće, jedinjenje 2 je aktivno protiv HCV u doznom obliku koji daje nižu minimalnu koncentraciju (40-50 ng/mL) od minimalne koncentracije u stanju mirovanja (približno 100 ng/mL) postignutu ekvivalentnim doznim oblikom sofosbuvira.
[0033] Prema tome, u jednom primeru izvođenja, pronalazak uključuje dozni oblik jedinjenja 2 koji obezbeđuje minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) između približno 15-75 ng/mL, na primer, 20-60 ng/mL, 25-50 ng/mL, 40-60 ng/mL, ili čak 40-50 ng/mL. Ovo je neočekivano u svetlu činjenice da je koncentracija ekvivalentnog metabolita sofosbuvira u stabilnom stanju približno 100 ng/mL.
[0034] Pored toga, otkriveno je da je jedinjenje 2 neobično stabilna, visoko rastvorljiva, nehigroskopna so sa aktivnošću protiv HCV. Ovo je iznenađujuće jer veliki broj soli jedinjenja 1 osim hemisulfatne soli (jedinjenje 2), uključujući monosulfatnu so (jedinjenje 3), nisu fizički stabilni, već se umesto toga tope ili postaju gumene čvrste supstance (Primer 4), i stoga nisu pogodne za stabilne čvrste farmaceutske dozne oblike. Iznenađujuće, dok jedinjenje 2 ne postaje gumeno, do 43 puta je rastvorljivije u vodi u poređenju sa jedinjenjem 1 i preko 6 puta je rastvorljivije od jedinjenja 1 pod uslovima simulirane želudačne tečnosti (SGF) (Primer 15).
[0035] Kao što je diskutovano u Primeru 16, jedinjenje 2 ostaje bela čvrsta supstanca sa IR koja odgovara referentnom standardu tokom 6 meseci pod uslovima ubrzane stabilnosti (40 °C/75% RH). Jedinjenje 2 je stabilno 9 meseci u uslovima okoline (25 °C/60% RH) i uslovima u frižideru (5 °C).
[0036] Čvrsti dozni oblici (tablete od 50 mg i 100 mg) jedinjenja 2 takođe su hemijski stabilni pod ubrzanim (40 °C/75% RH) i uslovima hlađenja (5 °C) tokom 6 meseci (Primer 26). Jedinjenje 2 je stabilno u uslovima okoline (25 °C/60% RH) u čvrstom doznom obliku najmanje 9 meseci.
[0037] Šema 1 daje metabolički put jedinjenja 1 i jedinjenja 2, što uključuje početnu deeterifikaciju fosforamidata (metabolita 1-1) da formira metabolit 1-2. Metabolit 1-2 se zatim pretvara u N<6>-metil-2,6-diaminopurin-5'-monofosfatni derivat (metabolit 1-3), koji se zauzvrat metaboliše u slobodni 5'-hidroksil-N<6>-metil-2,6-diaminopurin nukleozid (metabolit 1-8) i ((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metil dihidrogen fosfat kao 5 '-monofosfat (metabolit 1-4). Metabolit 1-4 se anaboliše u odgovarajući difosfat (metabolit 1-5) a zatim aktivni derivat trifosfata (metabolit 1-6). 5'-trifosfat se može dalje metabolisati da bi se dobio 2-amino-9-((2R,3R,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroksi-5-(hidroksimetil)-3-metiltetrahidrofuran-2-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (1-7). Metabolit 1-7 je merljiv u plazmi i stoga je surogat za aktivni trifosfat (1-6), što nije merljivo u plazmi.
[0038] U jednom primeru izvođenja, pronalazak je jedinjenje 2 za upotrebu u lečenju hepatitisa C (HCV) kod domaćina kome je to potrebno, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U jednom aspektu, jedinjenje 2 se koristi kao amorfna čvrsta supstanca. U sledećem aspektu, jedinjenje 2 se koristi kao kristalna čvrsta supstanca.
[0039] Ovde je opisan, ali za njega nije tražena zaštita u patentnim zahtevima, postupak za pripremu jedinjenja 2 koji uključuje
(i) prvi korak rastvaranja jedinjenja 1 u organskom rastvaraču, na primer, acetonu, etil acetatu, metanolu, acetonitrilu, ili etru, ili slično, u bočici ili posudi;
(ii) punjenje druge bočice ili posude sa drugim organskim rastvaračem, koji može biti isti ili drugačiji od organskog rastvarača u koraku (i), izborno hlađenje drugog rastvarača na 0-10 stepeni C, i dodavanje ukapavanjem H2SO4u drugi organski rastvarač da bi se stvorila smeša H2SO4/organskog rastvarača; i pri čemu rastvarač, na primer, može biti metanol;
(iii) dodavanje ukapavanjem smeše H2SO4/rastvarača u molarnom odnosu 0.5/1.0 iz koraka (ii) u rastvor jedinjenja 1 koraka (i) na temperaturi sredine ili blago povišenoj ili sniženoj temperaturi (na primer 23-35 stepeni C);
(iv) mešanje reakcije iz koraka (iii) dok se ne formira talog jedinjenja 2, na primer, na sobnoj ili blago povišenoj ili sniženoj temperaturi;
(v) izborno filtriranje rezultujućeg taloga iz koraka (iv) i ispiranje organskim rastvaračem; i
(vi) izborno sušenje rezultujućeg jedinjenja 2 u vakuumu, izborno na povišenoj temperaturi, na primer, 55, 56, 57, 58, 59 ili 60 °C.
[0040] U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač u koraku (i) je 3-metil-2-pentanon. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač u koraku (i) je etil izopropil keton. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač u koraku (i) je metil propionat. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač u koraku (i) je etil butirat.
[0041] Uprkos obimu literature o antivirusnim nukleozidima i patentnih prijava, jedinjenje 2 nije posebno otkriveno. Shodno tome, ovaj pronalazak uključuje jedinjenje 2, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu kompoziciju ili dozni oblik, kao što je ovde opisano.
[0042] Jedinjenja, postupci, oblici doze i kompozicije su obezbeđeni za lečenje domaćina inficiranog HCV virusom putem primene efikasne količine jedinjenja 2. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u dozi od najmanje oko 100, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 ili 1000 mg. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje do 12 nedelja, do 10 nedelja, do 8 nedelja, do 6 nedelja ili do 4 nedelje. U alternativnim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje 4 nedelje, najmanje 6 nedelja, najmanje 8 nedelja, najmanje 10 nedelja ili najmanje 12 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno ili svaki drugi dan. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koji postiže minimalan nivo metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) između otprilike 15-75 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u doznom obliku koji postiže minimalan nivo metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) između približno 20-60 ng/mL. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koji postiže AUC metabolita 1-7 između približno 1200 ng*h/mL i 3 000 ng*h/mL. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u doznom obliku koji postiže AUC metabolita 1-7 između približno 1500 i 2100 ng*h/mL.
[0043] Jedinjenja, kompozicije i dozni oblici se takođe mogu koristiti za lečenje srodnih stanja kao što su pozitivna stanja na anti-HCV antitela i pozitivna stanja na antigen, hronična inflamacija jetre zasnovana na virusima, kancer jetre koji je rezultat uznapredovalog hepatitisa C (hepatocelularni karcinom (HCC)), ciroza, hronični ili akutni hepatitis C, fulminantni hepatitis C, hronični perzistentni hepatitis C i umor zasnovan na anti-HCV. Jedinjenje ili formulacije koje uključuju jedinjenja takođe se mogu koristiti profilaktički za sprečavanje ili ograničavanje napredovanja kliničke bolesti kod osoba koje su pozitivne na anti-HCV antitela ili antigene ili koje su bile izložene hepatitisu C.
[0044] Ovaj pronalazak stoga uključuje sledeće karakteristike:
(a) Jedinjenje 2 kao što je ovde opisano;
(b) Prolekove jedinjenja 2 (prolekovi nisu u skladu sa ovim pronalaskom)
(c) Upotrebu jedinjenja 2 u proizvodnji leka za lečenje infekcije virusom hepatitisa C; (d) Jedinjenje 2 za upotrebu u lečenju hepatitisa C, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču;
(e) Postupak za proizvodnju leka namenjenog za terapeutsku upotrebu za lečenje infekcije virusom hepatitisa C, koji je okarakterisan što se u proizvodnji koristi jedinjenje 2, ili farmaceutski prihvatljiva so, kao što je ovde opisano;
(e) Farmaceutsku formulaciju koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja 2 za lečenje domaćina sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili razblaživačem;
(f) Postupci za pripremu terapeutskih proizvoda koji sadrže efikasnu količinu jedinjenja 2;
(g) Čvrste oblike doze, uključujući one koji obezbeđuju povoljan farmakokinetički profil; i
(h) Postupke za proizvodnju jedinjenja 2, kako su ovde opisani, ali za koje nije tražena zaštita.
KRATAK OPIS SLIKA
[0045]
Sl. 1A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka 1-1 (amorfno jedinjenje 1), 1-2 (kristalno jedinjenje 1), i 1-3 (amorfno jedinjenje 2) pre studija stabilnosti u svrhu karakterizacije kao što je opisano u Primeru 2 i Primeru 5. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 1B je HPLC hromatograf amorfnog jedinjenja 1 (uzorak 1-1) za određivanje čistoće kao što je opisano u Primeru 2. Čistoća uzorka je bila 98.7%. X-osa je vreme mereno u minutima, a yosa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 2A je HPLC hromatograf kristalnog jedinjenja 1 (uzorak 1-2) za određivanje čistoće kao što je opisano u Primeru 2. Čistoća uzorka je bila 99.11%. X-osa je vreme mereno u minutima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 2B je DSC i TGA grafikon kristalnog jedinjenja 1 (uzorak 1-2) pre bilo kakvih studija stabilnosti u svrhu karakterizacije kao što je opisano u Primeru 2. X-osa je temperatura izmerena u °C, leva y-osa je protok toplote izmeren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima.
Sl. 3 je rendgenska kristalografska slika jedinjenja 1 pokazujući apsolutnu stereohemiju kao što je opisano u Primeru 2.
Sl. 4A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka 1-1 (amorfno jedinjenje 1), 1-2 (kristalno jedinjenje 1), i 1-3 (amorfno jedinjenje 2) nakon skladištenja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti tokom 14 dana, kao što je opisano u Primeru 2. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 4B je prikaz XRPD difraktograma uzoraka 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 i 1-9 posle skladištenja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti tokom 7 dana kao što je opisano u Primeru 4. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 5A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka 1-4, 1-6, 1-7 i 1-9 posle skladištenja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti tokom 14 dana kao što je opisano u Primeru 4. X-osa je 2Teta merena u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 5B je XRPD obrazac amorfnog jedinjenja 2 (uzorak 1-3) kao što je opisano u Primeru 5. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 6A je HPLC hromatograf amorfnog jedinjenja 2 (uzorak 1-3) za određivanje čistoće kao što je opisano u Primeru 5. Čistoća uzorka je bila 99.6%. X-osa je vreme mereno u minutima, a yosa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 6B je DSC i TGA grafikon za amorfno jedinjenje 2 (uzorak 1-3) pre bilo kakvih studija stabilnosti u svrhu karakterizacije kao što je opisano u Primeru 5. X-osa je temperatura izmerena u °C, leva y-osa protok toplote izmeren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima.
Sl. 7A je prikaz XRPD difraktograma kristalnih uzoraka (uzorci 2-2, 2-6 i 2-7) i slabo kristalnih uzoraka (uzorci 2-3, 2-4, 2-5 i 2-8) identifikovanih iz kristalizacije Jedinjenja 2 (Primer 6). X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 7B je prikaz XRPD difraktograma amorfnih uzoraka (uzorci 2-9, 2-10 i 2-11) identifikovanih iz kristalizacije jedinjenja 2 (Primer 6). X-osa je 2Teta meren u stepenima, a yosa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 8A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka (uzorci 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7 i 2-8) nakon 6 dana skladištenja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti (Primer 6). X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 8B je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-2 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa toplotni protok merena u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 9A je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-3 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 9B je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-4 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 10A je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-5 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 10B je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-6 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 11A je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-7 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 11B je DSC i TGA grafikon za uzorak 2-8 (Primer 6). X-osa je temperatura merena u °C, leva y-osa je toplotni protok meren u (W/g), a desna y-osa je težina merena u procentima. Eksperimentalni postupci za DSC i TGA prikupljanje su dati u Primeru 2.
Sl. 12A je XRPD obrazac amorfnog Jedinjenja 4 (uzorak 3-12) kao što je diskutovano u Primeru 7. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima. Nije primećena kristalizacija malonatne soli bez obzira na korišćeni rastvarač.
Sl. 12B je prikaz XRPD difraktograma amorfnih uzoraka (uzorci 3-6, 3-10, 3-11 i 3-12) identifikovanih iz pokušaja kristalizacije jedinjenja 1 sa malonatnom soli (Primer 7). X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 13A je HPLC hromatogram uzorka 3-12 iz pokušaja kristalizacije jedinjenja 1 sa malonatnom soli kao što je opisano u Primeru 7. Uzorak je bio 99.2% čistoće. X-osa je vreme mereno u minutima, a y-osa je intenzitet meren u mAu.
Sl. 13B je prikaz XRPD difraktograma čvrstih uzoraka dobijenih kristalizacijom upotrebom LAG (uzorci 4-13, 4-12, 4-9, 4-3 i 4-1) u poređenju sa jedinjenjem 1 (uzorak 1-2) kao što je opisano u Primeru 8. Svi XRDP se poklapaju sa obrascima kristalnog kiselinskog kontrajona bez dodatnih pikova. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima. Sl. 14A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka dobijenih upotrebom etil acetata kao rastvarača za kristalizaciju (uzorci 6-13, 6-12, 6-11, 6-10, 6-8, 6-7, 6-6, 6-5, 6-4 i 6-2) u poređenju sa kristalnim jedinjenjem 1 (uzorak 1-2) kako je opisano u Primeru 10. Utvrđeno je da se XRPD obrasci poklapaju sa uzorkom jedinjenja 1 sa izuzetkom uzoraka 6-2, 6-4 i 6-5 koji pokazuju male razlike. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima. Slika 14B je prikaz XRPD difraktograma uzorka 5-1 nakon drugog rastvaranja u MEK i dodavanja antirastvarača cikloheksana i pamoinske kiseline kao što je opisano u Primeru 9. Uzorak 5-1, kristalizovan u pamoinskoj kiselini, bio je čvrsta supstanca posle sazrevanja, ali XRPD obrazac odgovara uzorku pamoinske kiseline.
Sl. 15A je prikaz XRPD difraktograma uzoraka dobijenih upotrebom etil acetata kao rastvarača za kristalizaciju (uzorci 6-5, 6-4 i 6-2) u poređenju sa kristalnim jedinjenjem 1 (uzorak 1-2) kao što je opisano u Primeru 10. Uopšteno je utvrđeno da XRPD obrasci odgovaraju obrascu jedinjenja 1 sa izuzetkom uzoraka 6-2, 6-4 i 6-5 koji pokazuju male razlike. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet izmeren u brojevima i obeležen kiselinom koja se koristi u kristalizaciji.
Sl. 15B je XRPD obrazac za jedinjenje 2 kao što je opisan u Primeru 14. X-osa je 2Teta meren u stepenima, a y-osa je intenzitet meren u brojevima.
Sl. 16A je grafikon nivoa koncentracije aktivnog TP (metabolita 1-6) u jetri i srcima pacova, pasa i majmuna (Primer 18). X-osa je doza merena u mg/kg za svaku vrstu, a y-osa je aktivna koncentracija TP merena u ng/g.
Sl. 16B je grafikon nivoa koncentracije aktivnog TP (metabolita 1-6) u jetri i srcu pasa (n=2) mereni 4 sata nakon jedne oralne doze jedinjenja 1 ili jedinjenja 2 (Primer 19). X-osa je doza svakog jedinjenja merena u mg/kg, a y-osa je koncentracija aktivnog TP merena u ng/g.
Sl. 17 je profil plazme jedinjenja 1 i metabolita 1-7 kod pacova kojima je data jedna oralna doza jedinjenja 2 od 500 mg/kg (Primer 20) izmerena 72 sata posle doze. X-osa je vreme mereno u satima, a y-osa je koncentracija u plazmi merena u ng/mL.
Sl. 18 je profil jedinjenja 1 i metabolita 1-7 u plazmi kod majmuna date pojedinačne oralne doze od 30 mg, 100 mg ili 300 mg jedinjenja 2 (Primer 20) izmeren 72 sata posle doze. X-osa je vreme mereno u satima, a y-osa je koncentracija u plazmi merena u ng/mL.
Sl. 19 je grafikon EC95merena u nM sofosbuvira i jedinjenja 1 protiv kliničkih izolata HCV. EC95vrednosti za jedinjenje 1 su 7-33 puta niže od sofosbuvira (Primer 22). X-osa je označena genotipom, a y-osa je EC95mereno u nM.
Sl. 20 je grafikon EC50merena u nM sofosbuvira i jedinjenja 1 protiv laboratorijskih sojeva HCV genotipova 1a, 1b, 2a, 3a, 4a i 5a. Jedinjenje 1 je približno 6-11 puta potentnije od sofosbuvira u genotipovima 1-5 (Primer 22). X-osa je označena genotipom, a y-osa je EC50merena u nM.
Sl. 21 je grafikon profila srednje koncentracije u plazmi jedinjenja 1 u vremenu posle primene jedne doze jedinjenja 2 u svim kohortama dela B studije kao što je opisano u Primeru 24. Jedinjenje 1 se brzo apsorbuje i brzo metaboliše u roku od približno 8 sati u svim kohortama iz dela B. X-osa je vreme mereno u satima, a y-osa je geometrijska srednja koncentracija u plazmi merena u ng/mL.
Sl. 22 je grafikon profila srednje vrednosti koncentracije metabolita 1-7 u plazmi naspram vremena nakon primene jedne doze jedinjenja 2 u svim kohortama dela B studije kao što je opisano u Primeru 24. Metabolit 1-7 je pokazao trajnu koncentraciju u plazmi u svim kohortama iz Dela B. X-osa je vreme mereno u satima, a y-osa je geometrijska srednja koncentracija u plazmi merena u ng/mL.
Sl. 23A je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 1b kao što je opisano u Primeru 24. Grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GTlb. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je redukcija HCV RNK merena u log10IU/mL.
Sl. 23B je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 1b kao što je opisano u Primeru 24. Grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GT1b. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je smanjenje HCV RNK mereno u log10IU/mL.
Sl. 23C je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 1b kao što je opisano u Primeru 24. Grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GT1b. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je redukcija HCV RNK merena u log10IU/mL.
Sl. 23D je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 3b kao što je opisano u Primeru 24. Svaki grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GT1b. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je smanjenje HCV RNK mereno u log10IU/mL.
Sl. 23E je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 3b kao što je opisano u Primeru 24. Svaki grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GT1b. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je redukcija HCV RNK merena u log10IU/mL.
Sl. 23F je individualna farmakokinetička/farmakodinamska analiza subjekta upisanog u kohortu 3b kao što je opisano u Primeru 24. Svaki grafikon prikazuje izloženost metabolita 1-7 plazmi i nivoe smanjenja HCV RNK. Isprekidana linija predstavlja minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 potrebnu da bi se održao virusni odgovor veći od EC95vrednosti u odnosu na GT1b. X-osa je vreme mereno u satima. Leva y-osa je koncentracija metabolita 1-7 u plazmi merena u ng/mL i desna y-osa je smanjenje HCV RNK mereno u log10IU/mL.
Sl. 24 je grafikon EC95vrednosti jedinjenja 1 i sofosbuvira protiv kliničkih izolata pacijenata inficiranih sa GT1, GT2, GT3 i GT4 HCV. Isprekidana horizontalna linija (- - - - -) predstavlja minimalnu koncentraciju nukleozida sofosbuvira u ravnotežnom stanju (C24,ss) posle doze od 400 mg QD sofosbuvira. Puna horizontalna linija (-) predstavlja minimalnu koncentraciju u ravnotežnom stanju (C24,ss) metabolita 1-7 posle 600 mg jedinjenja 2 (ekvivalentno 550 mg jedinjenja 1). Tačkasta horizontalna linija (---------) predstavlja minimalnu koncentraciju u stanju mirovanja (C24,ss) metabolita 1-7 posle 450 mg jedinjenja 2 (ekvivalentno 400 mg jedinjenja 1). Kao što je objašnjeno u Primeru 25, predviđeni minimalan nivo u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) metabolita 1-7 posle 600 mg i 450 mg jedinjenja 2 prevazilazi in vitro EC95jedinjenja 1 protiv svih testiranih kliničkih izolata. Minimalan nivo u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) sofosbuvira samo premašuje EC95kod GT2 kliničkih izolata. X-osa je označena kliničkim izolatima, a tabela ispod x-ose navodi EC95vrednosti za jedinjenje 1 i sofosbuvir. Y-osa je EC95protiv kliničkih izolata izmerenih u ng/mL. EC95se izražava kao nukleozidni ekvivalent. Sofosbuvir i jedinjenje 2 primenjivani su svakodnevno (QD).
Sl. 25 je dijagram toka koji prikazuje postupak proizvodnje tableta od 50 mg i 100 mg jedinjenja 2 kao što je opisano u Primeru 26. U koraku 1, mikrokristalna celuloza, jedinjenje 2, laktoza monohidrat, i natrijum kroskarmeloza su filtrirani kroz sito od 600 uM. U koraku 2, sadržaj iz koraka 1 se stavlja u V-blender i meša 5 minuta na 25 rpm. U koraku 3, magnezijum stearat se filtrira kroz sito od 600 µM. U koraku 4, magnezijum stearat se stavlja u V-blender koji sadrži sadržaj iz koraka 2 (mikrokristalna celuloza, jedinjenje 2, laktoza monohidrat i natrijum kroskarmeloza) i mešan je 2 minuta na 25 rpm. Uobičajena mešavina se zatim deli za proizvodnju tableta od 50 mg i tableta od 100 mg. Da bi se proizvele tablete od 50 mg, mešavina iz koraka 4 se komprimuje sa 6 mm okruglim standardnim konkavnim alatom. Da bi se proizvele tablete od 100 mg, mešavina iz koraka 4 se komprimuje sa okruglim standardnim konkavnim alatom od 8 mm. Tablete se zatim pakuju u HOPE boce indukciono zapečaćene PP poklopcima sa sredstvom za sušenje.
Sl. 26 je hemisulfatna so koja pokazuje povoljna farmakološka svojstva u odnosu na odgovarajuću slobodnu bazu za lečenje HCV virusa.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0046] Pronalazak koji je ovde otkriven je jedinjenje, kompozicija i čvrsti dozni oblik za lečenje infekcija ili izloženosti ljudi i drugih životinja domaćina HCV virusu koji uključuje primenu efikasne količine hemi-sulfatne soli izopropil((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata (jedinjenje 2) kao što je ovde opisano, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 je amorfna čvrsta supstanca. U još jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 je kristalna čvrsta supstanca.
[0047] Jedinjenje, kompozicije i dozni oblici se takođe mogu koristiti za lečenje stanja povezanih sa ili koja se javljaju kao rezultat izloženosti HCV virusu. Na primer, aktivno jedinjenje se može koristiti za lečenje stanja pozitivnih na HCV antitela i pozitivnih na HCV antigen, hronične upale jetre na bazi virusa, kancera jetre koji je rezultat uznapredovalog hepatitisa C (npr. hepatocelularni karcinom), ciroze, akutnog hepatitisa C, fulminantnog hepatitisa C, hroničnog perzistentnog hepatitisa C i umora na bazi anti-HCV.
[0048] Aktivna jedinjenja i kompozicije se takođe mogu koristiti za lečenje niza HCV genotipova. Najmanje šest različitih genotipova HCV, od kojih svaki ima više podtipova, identifikovano je globalno. Genotipovi 1-3 su rasprostranjeni širom sveta, a genotipovi 4, 5 i 6 su geografski ograničeniji. Genotip 4 je uobičajen na Bliskom istoku i u Africi. Genotip 5 se uglavnom nalazi u Južnoj Africi. Genotip 6 pretežno postoji u jugoistočnoj Aziji. Iako je najčešći genotip u Sjedinjenim Državama Genotip 1, definisanje genotipa i podtipa može pomoći u tipu i trajanju lečenja. Na primer, različiti genotipovi različito reaguju na različite lekove i optimalno vreme lečenja varira u zavisnosti od infekcije genotipa. Unutar genotipova, podtipovi, kao što su Genotip 1a i Genotip 1b, takođe različito reaguju na tretman. Infekcija sa jednom vrstom genotipa ne isključuje kasniju infekciju drugim genotipom.
[0049] Kao što je opisano u Primeru 22, jedinjenje 2 je aktivno protiv niza HCV genotipova, uključujući genotipove 1-5. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 1, HCV genotipa 2, HCV genotipa 3, HCV genotipa 4, HCV genotipa 5 ili HCV genotipa 6. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 1a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 1b. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 2a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 2b. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 3a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 4a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 4d.
[0050] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 ili jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 5a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 ili jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 6a. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 ili jedinjenje 2 se koristi za lečenje HCV genotipa 6b, 6c, 6d, 6e, 6f, 6g, 6h, 6i, 6j, 6k, 6l, 6m, 6n, 6o, 6p, 6q, 6r, 6s, 6t, ili 6u.
[0051] Kao što je diskutovano u Primeru 25 i prikazano na Sl. 24, predviđena minimalna koncentracija u ravnotežnom stanju (C24,ss) metabolita 1-7 posle doze od 450 mg (400 mg slobodne baze) i doze od 600 mg (550 mg slobodne baze) jedinjenja 2 je približno 40 ng/mL do 50 ng/mL. Ovaj C24,ssnivo premašio je EC95jedinjenja 1 kod HCV genotipova 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 4a i 4d. Ovi podaci potvrđuju da jedinjenje 2 ima potentnu genotipsku aktivnost. Ovo je iznenađujuće jer jedinjenje 2 postiže manju minimalnu koncentraciju u ravnotežnom stanju (C24,ss) nego najniža minimalna koncentracija u ravnotežnom stanju (C24,ss) nukleozidnog metabolita sofosbuvira posle ekvivalentnog doziranja sofosbuvira. Minimalna koncentracija u ravnotežnom stanju (C24,ss) odgovarajućeg nukleozidnog metabolita sofosbuvira je približno 100 ng/mL, ali ovaj nivo samo premašuje EC95sofosbuvira protiv kliničkih izolata GT2 (Slika 24). Jedinjenje 2 je potentnije od sofosbuvira protiv GT1, GT2, GT3 i GT4, i stoga dozvoljava dozni oblik koji daje manju minimalnu koncentraciju njegovog metabolita u ravnotežnom stanju, koji je ipak efikasan protiv svih testiranih genotipova HCV. U jednom primeru izvođenja, isporučuje se dozni oblik jedinjenja 2 čime se postiže minimalna koncentracija u ravnotežnom stanju metabolita 1-7 (C24,ss) između približno 15-75 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, isporučuje se dozni oblik jedinjenja 2 čime se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) između približno 20-60 ng/mL, 20-50 ng/mL ili 20-40 ng/mL.
[0052] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje, formulacije ili čvrsti dozni oblici koji uključuju jedinjenje mogu se takođe koristiti profilaktički za sprečavanje ili usporavanje progresije kliničke bolesti kod pojedinaca koji su pozitivni na HCV antitelo ili HCV antigen ili koji su bili izloženi hepatitisu C.
[0053] Konkretno, otkriveno je da je jedinjenje 2 aktivno protiv HCV i pokazuje bolja svojstva slična lekovima i farmakološka svojstva u poređenju sa svojom slobodnom bazom (jedinjenje 1). Iznenađujuće, jedinjenje 2 je biodostupnije i postiže veću AUC od jedinjenja 1 (Primer 19) i jedinjenje 2 je selektivnije za ciljni organ, jetru, nego jedinjenje 1 (Primer 19).
[0054] Jedinjenje 2 je takođe povoljno u odnosu na jedinjenje 1 u pogledu rastvorljivosti i hemijske stabilnosti. Ovo je iznenađujuće jer monosulfatna so izopropil((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata (jedinjenje 3) je nestabilna i pokazuje izgled lepljive gume, dok jedinjenje 2, hemisulfatna so, je stabilna bela čvrsta supstanca. Hemisulfatna so, i kao čvrsta supstanca i u čvrstom doznom obliku, veoma je stabilna tokom 9 meseci i nije hidroskopna.
[0055] Uprkos obimu literature o antivirusnim nukleozidima i patentnih prijava, jedinjenje 2 nije posebno otkriveno.
[0056] Jedinjenje 2 ima S-stereohemiju na atomu fosfora što je potvrđeno rendgenskom kristalografijom (Slika 3, Primer 2). U alternativnim primerima izvođenja, jedinjenje 2 može se koristiti u obliku bilo kog željenog odnosa fosfornih R- i S-enantiomera, uključujući do čiste enantiomere. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se koristi u obliku koji je najmanje 90% bez suprotnog enantiomera, i može biti najmanje 98%, 99%, ili čak 100% bez suprotnog enantiomera. Osim ako nije drugačije opisano, enantiomerno obogaćeno jedinjenje 2 je najmanje 90% bez suprotnog enantiomera. Pored toga, u alternativnoj varijanti, aminokiselina fosforamidata može biti u D- ili L-konfiguraciji, ili u njihovoj smeši, uključujući racemsku smešu.
[0057] Osim ako nije drugačije naznačeno, ovde opisana jedinjenja su obezbeđena u β-D-konfiguraciji. U alternativnom primeru izvođenja, jedinjenja mogu biti obezbeđena u β-L-konfiguraciji. Slično, bilo koja supstituentska grupa koja pokazuje hiralnost može biti obezbeđena u racemskom, enantiomernom, dijastereomernom obliku ili bilo kojoj njihovoj smeši. Tamo gde fosforamidat pokazuje hiralnost, on se može obezbediti kao R ili S hiralni derivat fosfora ili njihova smeša, uključujući racemsku smešu. Ovde su opisane sve kombinacije ovih stereo konfiguracija. Pronalazak je definisan patentnim zahtevom 1. U sledećem primeru izvođenja, najmanje jedan od vodonika jedinjenja 2 (nukleotid ili hemisulfatna so) mogu se zameniti deuterijumom.
[0058] Ove alternativne konfiguracije ne čine deo pronalaska i namenjene su samo u ilustrativne svrhe, uključuju, ali nisu ograničene na,
I. Hemisulfatna so izopropil((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata (jedinjenje 2)
[0059] Aktivno jedinjenje pronalaska je jedinjenje 2, koji se može obezbediti u farmaceutski prihvatljivom preparatu ili njegovom čvrstom doznom obliku. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 je amorfna čvrsta supstanca. U još jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 je kristalna čvrsta supstanca.
Sinteza jedinjenja 2
[0060] Ovde je opisan, ali za njega nije tražena zaštita, postupak za pripremu jedinjenja 2 koji uključuje
(i) prvi korak rastvaranja jedinjenja 1 u organskom rastvaraču, na primer, acetonu, etil acetatu, metanolu, acetonitrilu, ili etru, ili slično, u bočici ili posudi;
(ii) punjenje druge bočice ili posude sa drugim organskim rastvaračem, koji može biti isti ili drugačiji od organskog rastvarača u koraku (i), izborno hlađenje drugog rastvarača na 0-10 stepeni C, i dodavanje ukapavanjem H2SO4u drugi organski rastvarač da bi se stvorila smeša H2SO4/organskih rastvarača; i pri čemu rastvarač, na primer, može biti metanol;
(iii) dodavanje ukapavanjem smeše H2SO4/rastvarača u molarnom odnosu 0.5/1.0 iz koraka (ii) u rastvor jedinjenja 1 koraka (i) na sobnoj ili blago povišenoj ili sniženoj temperaturi (na primer 23-35 stepeni C);
(iv) mešanje reakcije iz koraka (iii) dok se ne formira talog jedinjenja 2, na primer, na sobnoj ili blago povišenoj ili sniženoj temperaturi;
(v) izborno filtriranje rezultujućeg taloga iz koraka (iv) i ispiranje sa organskim rastvaračem; i
(vi) izborno sušenje rezultujućeg jedinjenja 2 u vakuumu, izborno na povišenoj temperaturi, na primer, 55, 56, 57, 58, 59 ili 60 °C.
[0061] U određenim primerima izvođenja, korak (i) iznad se izvodi u acetonu. Dalje, drugi organski rastvarač u koraku (ii) može biti na primer metanol, a smeša organskih rastvarača u koraku (v) je metanol/aceton.
[0062] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 je rastvoreno u etil acetatu u koraku (i). U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 je rastvoreno u tetrahidrofuranu u koraku (i). U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 1 je rastvoreno u acetonitrilu u koraku (i). U dodatnom primeru izvođenja, jedinjenje 1 je rastvoreno u dimetilformamidu u koraku (i).
[0063] U jednom primeru izvođenja, drugi organski rastvarač u koraku (ii) je etanol. U jednom primeru izvođenja, drugi organski rastvarač u koraku (ii) je izopropanol. U jednom primeru izvođenja, drugi organski rastvarač u koraku (ii) je n-butanol.
[0064] U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača se koristi za ispiranje u koraku (v), na primer, etanol/aceton. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je izopropanol/aceton. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je n-butanol/aceton. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je etanol/etil acetat. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je izopropanol/etil acetat. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je n-butanol/etil acetat. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je etanol/tetrahidrofuran. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je izopropanol/tetrahidrofuran. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je n-butanol/tetrahidrofuran. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je etanol/acetonitril. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je izopropanol/acetonitril. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je n-butanol/acetonitril. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je etanol/dimetilformamid. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je izopropanol/dimetilformamid. U jednom primeru izvođenja, smeša rastvarača za ispiranje u koraku (v) je n-butanol/dimetilformamid.
II. Metabolizam izopropil ((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata (jedinjenje 2)
[0065] Metabolizam jedinjenja 1 i jedinjenja 2 uključuje proizvodnju 5'-monofosfata i kasniji anabolizam N<6>-metil-2,6-diaminopurinske baze (1-3) da bi se generisao ((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metil dihidrogen fosfat (1-4) kao 5'-monofosfat. Monofosfat se zatim dalje anaboliše u aktivne vrste trifosfata: 5'-trifosfata (1-6). 5'-trifosfat se može dalje metabolisati da bi se dobio 2-amino-9-((2R,3R,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroksi-5-(hidroksimetil)-3-metiltetrahidrofuran-2-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (1-7). Alternativno, 5'-monofofat 1-2 se može metabolisati da bi se stvorila baza purina 1-8. Metabolički put za izopropil((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninat je ilustrovan na Šemi 1 (prikazana gore).
III. Dodatne soli jedinjenja 1 (nije prema predmetnom pronalasku)
[0066] U alternativnim primerima izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje 1 kao oksalatnu so (jedinjenje 4) ili HCl so (jedinjenje
[0067] I oksalatna so 1:1 i HCl so 1:1 formiraju čvrste supstance sa razumnim svojstvima za čvrste dozne oblike za lečenje domaćina kao što je čovek sa hepatitisom C. Međutim, oksalatna so može biti manje poželjna, a možda i ne pogodna, ako je pacijent podložan kamenu u bubregu. HCl so je hidroskopnija od hemisulfatne soli. Dakle, hemisulfatna so ostaje najpoželjniji oblik soli jedinjenja 1 sa neočekivanim svojstvima.
IV. Definicije
[0068] Termin "D-konfiguracija" kako se koristi u kontekstu ovog pronalaska odnosi se na principijelnu konfiguraciju koja imitira prirodnu konfiguraciju šećernih grupa suprotno neprirodnim nukleozidima ili "L" konfiguraciju. Termin "β" ili "β anomer" se koristi u odnosu na analoge nukleozida u kojima je nukleozidna baza konfigurisana (raspoređena) iznad ravni furanozne grupe u nukleozidnom analogu.
[0069] Termini "koprimenjivati" i "koprimena" ili kombinovana terapija se koriste da opišu primenu jedinjenja 2 prema predmetnom pronalasku u kombinaciji sa najmanje jednim drugim aktivnim sredstvom, na primer, gde je prikladno, najmanje jednim dodatnim anti-HCV sredstvom. Vreme koprimene najbolje određuje lekar specijalista koji leči pacijenta. Ponekad je poželjno da se sredstva primenjuju u isto vreme. Alternativno, lekovi odabrani za kombinovanu terapiju mogu se primenjivati na pacijenta u različito vreme. Naravno, kada je prisutno više od jedne virusne ili druge infekcije ili drugog stanja, ova jedinjenja se mogu kombinovati sa drugim sredstvima za lečenje te druge infekcije ili stanja prema potrebi.
[0070] Termin "domaćin", kako se ovde koristi, odnosi se na jednoćelijski ili višećelijski organizam u kome HCV virus može da se replicira, uključujući ćelijske linije i životinje, i tipično čoveka. Termin domaćin se posebno odnosi na inficirane ćelije, ćelije transfektovane celim ili delom HCV genoma i životinje, posebno primate (uključujući šimpanze) i ljude. U većini primena na životinjama ovog pronalaska, domaćin je čovek. Primene u veterini, u određenim indikacijama, su, međutim, jasno predviđene ovim pronalaskom (kao što su šimpanze). Domaćin može biti, na primer, govedo, konj, ptica, pas, mačka itd.
Izotopska supstitucija
[0071] Ovaj pronalazak uključuje jedinjenja i upotrebu jedinjenja 2 sa željenim izotopskim supstitucijama atoma u količinama iznad prirodne abundance izotopa, tj. obogaćenim. Izotopi su atomi koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve, odnosno isti broj protona, ali različit broj neutrona. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika, na primer, deuterijum (<2>H) i tricijum (<3>H) može se koristiti bilo gde u opisanim strukturama. Alternativno ili kao dodatak, mogu se koristiti izotopi ugljenika, npr.<13>C i<14>C. Poželjna izotopska supstitucija je deuterijum za vodonik na jednoj ili više lokacija na molekulu da bi se poboljšao učinak leka. Deuterijum može biti vezan na mestu kidanja veze tokom metabolizma (efekat kinetičkog izotopa α-deuterijuma) ili pored ili blizu mesta kidanja veze (efekat kinetičkog izotopa β-deuterijuma). Achillion Pharmaceuticals, Inc. (WO/2014/169278 i WO/2014/169280) opisuje deuteraciju nukleotida radi poboljšanja njihove farmakokinetike ili farmakodinamike, uključujući na poziciji 5 molekula.
[0072] Supstitucija sa izotopima kao što je deuterijum može da pruži određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, kao što je, na primer, produženi poluživot in vivo ili smanjeni zahtevi za dozom. Supstitucija deuterijuma vodonikom na mestu metaboličkog raspada može smanjiti brzinu ili eliminisati metabolizam na toj vezi. Na bilo kojoj poziciji jedinjenja na kojoj može biti prisutan atom vodonika, atom vodonika može biti bilo koji izotop vodonika, uključujući protijum (<1>H), deuterijum (<2>H) i tricijum (<3>H). Dakle, referenca ovde na jedinjenje obuhvata sve potencijalne izotopske oblike osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.
[0073] Termin "izotopski obeležen" analog odnosi se na analog koji je "deuterisani analog", "analog sa oznakom<13>C" ili "deuterisani/<13>C-obeleženi analog." Termin "deuterisani analog" označava jedinjenje opisano ovde, pri čemu je H-izotop, tj., vodonik/protijum (<1>H), supstituisan je sa H-izotopom, tj. deuterijumom (<2>H). Supstitucija deuterijuma može biti delimična ili potpuna. Delimična supstitucija deuterijumom znači da je najmanje jedan vodonik supstituisan sa najmanje jednim deuterijumom. U određenim primerima izvođenja, izotop je 90, 95 ili 99% ili više obogaćen izotopom na bilo kojoj lokaciji od interesa. U nekim primerima izvođenja to je deuterijum koji je 90, 95 ili 99% obogaćen na željenoj lokaciji. Osim ako nije navedeno suprotno, deuteracija je najmanje 80% na odabranoj lokaciji. Deuteracija nukleozida može se desiti na bilo kom zamenljivom vodoniku koji daje željene rezultate.
V. Postupci lečenja ili profilakse (nije u skladu sa ovim pronalaskom)
[0074] Lečenje/tretman, kako se ovde koristi, odnosi se na primenu jedinjenja 2 na domaćina, na primer čoveka koji je ili bi mogao biti inficiran HCV virusom.
[0075] Termin "profilaktički" ili preventivni, kada se koristi, odnosi se na primenu jedinjenja 2 da spreči ili smanji verovatnoću pojave virusnog poremećaja. Ovaj pronalazak obuhvata i tretman i profilaktičke ili preventivne terapije. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje na domaćina koji je bio izložen i samim tim je u opasnosti od infekcije virusom hepatitisa C.
[0076] Pronalazak je usmeren na postupak lečenja ili profilakse virusa hepatitisa C, uključujući oblike HCV rezistentne na lekove i na više lekova i srodna stanja bolesti, stanja ili komplikacije HCV infekcije, uključujući cirozu i srodne hepatotoksičnosti, kao i druga stanja koja su sekundarna u odnosu na HCV infekciju, kao što su slabost, gubitak apetita, gubitak težine, povećanje grudi (posebno kod muškaraca), osip (naročito na dlanovima), poteškoće sa zgrušavanjem krvi, krvni sudovi u obliku pauka na koži, konfuzija, koma (encefalopatija), nakupljanje tečnosti u trbušnoj duplji (ascites), varikoziteti jednjaka, portalna hipertenzija, otkazivanje bubrega, uvećanje slezine, smanjenje krvnih zrnaca, anemija, trombocitopenija, žutica i hepatocelularni kancer, između ostalog. Postupak sadrži primenu na domaćina kod koga postoji potreba za tim, tipično čoveka, efikasne količine jedinjenja 2 kao što je ovde opisano, izborno u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim bioaktivnim sredstvom, na primer, dodatnim anti-HCV sredstvom, dalje u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim aditivom nosačem i/ili ekscipijensom.
[0077] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak je postupak za prevenciju ili profilaksu HCV infekcije ili bolesnog stanja ili povezanog ili pratećeg bolesnog stanja, stanja ili komplikacija HCV infekcije, uključujući cirozu i srodne hepatotoksičnosti, slabost, gubitak apetita, gubitak težine, povećanje grudi (posebno kod muškaraca), osip (posebno na dlanovima), poteškoće sa zgrušavanjem krvi, krvne sudove na koži u obliku pauka, konfuziju, komu (encefalopatija), nakupljanje tečnosti u trbušnoj duplji (ascites), varikozitet jednjaka, portalnu hipertenziju, otkazivanje bubrega, uvećanu slezinu, smanjenje krvnih zrnaca, anemiju, trombocitopeniju, žuticu i hepatocelularni kancer (jetre), između ostalog, pomenuti postupak koji sadrži primenu na pacijenta sa rizikom efikasne količine jedinjenja 2 kao što je gore opisano u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, aditivom ili ekscipijensom, izborno u kombinaciji sa drugim anti-HCV sredstvom. U sledećem primeru izvođenja, aktivna jedinjenja pronalaska mogu da se primenjuju na pacijenta posle transplantacije jetre povezane sa hepatitisom da bi se zaštitio novi organ.
[0078] U alternativnom primeru izvođenja, jedinjenje 2 je obezbeđeno kao hemisulfatna so fosforamidata jedinjenja 1 osim specifičnog fosforamidata opisanog na ilustraciji jedinjenja. Stručnjacima je poznat širok spektar fosforamidata koji uključuju različite estre i fosfo-estre, čija se bilo koja kombinacija može koristiti za obezbeđivanje aktivnog jedinjenja kao što je ovde opisano u obliku hemisulfatne soli.
VI. Farmaceutske kompozicije i dozni oblici
[0079] U aspektu pronalaska, farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku sadrže efikasnu količinu jedinjenja 2 protiv HCV virusa kao što je ovde opisana, izborno u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, aditivom ili ekscipijensom, dalje izborno u kombinaciji ili naizmenično sa najmanje jednim drugim aktivnim jedinjenjem. U jednom primeru izvođenja, pronalazak uključuje čvrsti dozni oblik jedinjenja 2 u farmaceutski prihvatljivom nosaču.
[0080] U aspektu pronalaska, farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku sadrže anti-HCV efikasnu količinu jedinjenja 2 opisanu ovde, izborno u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, aditivom ili ekscipijensom, dalje izborno u kombinaciji sa najmanje jednim drugim antivirusnim sredstvom, kao što je anti-HCV sredstvo.
[0081] Pronalazak uključuje farmaceutske kompozicije koje uključuju efikasnu količinu za lečenje infekcije virusom hepatitisa C jedinjenjem 2 ovog pronalaska ili proleka, u farmaceutski prihvatljivom nosaču ili ekscipijensu. U alternativnom primeru izvođenja, pronalazak uključuje farmaceutske kompozicije koje uključuju efikasnu količinu za sprečavanje infekcije virusom hepatitisa C jedinjenjem 2 ovog pronalaska ili proleka, u farmaceutski prihvatljivom nosaču ili ekscipijensu.
[0082] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da će terapeutski efikasna količina varirati u zavisnosti od infekcije ili stanja koje treba lečiti, njene težine, režima lečenja koji će se primeniti, farmakokinetike sredstva koje se koristi, kao i pacijenta ili subjekta (životinja ili čovek) koje treba lečiti, a takvu terapeutsku količinu može odrediti lekar ili specijalista.
[0083] Jedinjenje 2 prema predmetnom pronalasku može biti formulisano u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Generalno, poželjno je da se farmaceutska kompozicija primenjuje u obliku za oralnu primenu, posebno u čvrstom doznom obliku kao što je pilula ili tableta. Određene formulacije se mogu primenjivati parenteralno, intravenski, intramuskularno, topikalno, transdermalno, bukalno, subkutano, preko supozitorija ili drugim putem, uključujući intranazalni sprej. Intravenske i intramuskularne formulacije se često primenjuju u sterilnom fiziološkom rastvoru. Stručnjak u ovoj oblasti može da modifikuje formulacije kako bi ih učinio rastvorljivijim u vodi ili drugom vehikulumu, na primer, to se može lako postići manjim modifikacijama (formulacija soli, esterifikacija, itd.) koje su u granicama uobičajene veštine u datoj oblasti tehnike. Takođe je u okviru veštine stručnjaka iz date oblasti tehnike da modifikuju put primene i režim doziranja jedinjenja 2 kako bi se upravljalo farmakokinetikom ovih jedinjenja radi maksimalnog blagotvornog efekta kod pacijenata, kao što je detaljnije opisano ovde.
[0084] U određenim farmaceutskim doznim oblicima, mogu se koristiti prolekovi jedinjenja, posebno uključujući acilirane (acetilirane ili druge) i etar (alkil i srodne) derivate, fosfatne estre, tiofosforamidate, fosforamidate i različite oblike soli ovih jedinjenja da bi se postigao željeni efekat. Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici će prepoznati kako lako modifikovati ova jedinjenja u oblike prolekova da bi se olakšala isporuka aktivnih jedinjenja na ciljno mesto unutar organizma domaćina ili pacijenta. Osoba sa uobičajenim iskustvom u ovoj oblasti tehnike će takođe iskoristiti prednosti povoljnih farmakokinetičkih parametara oblika prolekova, gde je primenljivo, u isporuci predmetnih jedinjenja na ciljno mesto unutar organizma domaćina ili pacijenta kako bi se maksimizirao nameravani efekat jedinjenja.
[0085] Količina jedinjenja 2 uključena u terapeutski aktivnu formulaciju prema ovom pronalasku je efikasna količina za postizanje željenog ishoda prema ovom pronalasku, na primer, za lečenje HCV infekcije, smanjenje verovatnoće HCV infekcije ili inhibiciju, smanjenje i/ili ukidanje HCV ili njegovih sekundarnih efekata, uključujući stanja bolesti, stanja i/ili komplikacije koje se javljaju sekundarno u odnosu na HCV. Generalno, terapeutski efikasna količina ovog jedinjenja u farmaceutskom doznom obliku može da se kreće od oko 0.001 mg/kg do oko 100 mg/kg dnevno ili više, češće, nešto manje od oko 0.1 mg/kg do više od oko 25 mg/kg dnevno za pacijenta ili znatno više, u zavisnosti od korišćenog jedinjenja, stanja ili infekcije koja se leči i načina primene. Jedinjenje 2 se često primenjuje u količinama u rasponu od oko 0.1 mg/kg do oko 15 mg/kg dnevno za pacijenta, u zavisnosti od farmakokinetike sredstva kod pacijenta. Ovaj opseg doziranja generalno proizvodi efikasne koncentracije aktivnog jedinjenja u krvi koje mogu biti u rasponu od oko 0.001 do oko 100, oko 0.05 do oko 100 mikrograma/cc krvi kod pacijenta.
[0086] Često, za lečenje, prevenciju ili odlaganje početka ovih infekcija i/ili za smanjenje verovatnoće infekcije HCV virusom, ili sekundarnog bolesnog stanja, stanja ili komplikacija HCV, jedinjenje 2 će se primenjivati u čvrstom doznom obliku u količini koja se kreće od oko 250 mikrograma do oko 800 miligrama ili više najmanje jednom dnevno, na primer, najmanje oko 5, 10, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750 ili 800 miligrama ili više, jednom, dva puta, tri ili do četiri puta dnevno prema uputstvu lekara. Jedinjenje 2 se često primenjuje oralno, ali se može primeniti parenteralno, topikalno ili u obliku supozitorija, kao i intranazalno, kao sprej za nos ili kako je drugačije opisano ovde. Uopštenije, jedinjenje 2 se može primeniti u obliku tableta, kapsula, injekcija, intravenskih formulacija, suspenzija, tečnosti, emulzije, implantata, čestica, sfere, kreme, masti, supozitorija, oblika za inhalaciju, transdermalnog oblika, bukalnog, sublingvalnog, topikalnog, gela, mukoznog i slično.
[0087] Kada se dozni oblik ovde odnosi na dozu težine u miligramima, to se odnosi na količinu jedinjenja 2 (tj. težinu hemisulfatne soli) osim ako nije drugačije naznačeno.
[0088] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija je u doznom obliku koji sadrži od oko 1 mg do oko 2000 mg, od oko 10 mg do oko 1000 mg, od oko 100 mg do oko 800 mg, od oko 200 mg do oko 600 mg, od oko 300 mg do oko 500 mg, ili od oko 400 mg do oko 450 mg jedinjenja 2 u jediničnom doznom obliku. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija je u doznom obliku, na primer u čvrstom doznom obliku, koji sadrži do oko 10, oko 50, oko 100, oko 125, oko 150, oko 175, oko 200, oko 225, oko 250, oko 275, oko 300, oko 325, oko 350, oko 375, oko 400, oko 425, oko 450, oko 475, oko 500, oko 525, oko 550, oko 575, oko 600, oko 625, oko 650, oko 675, oko 700, oko 725, oko 750, oko 775, oko 800, oko 825, oko 850, oko 875, oko 900, oko 925, oko 950, oko 975, ili oko 1000 mg ili više jedinjenja 2 u jediničnom doznom obliku. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 300 mg. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 400 mg. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 500 mg. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 600 mg. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 700 mg. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje u obliku doze koja isporučuje najmanje oko 800 mg. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 12 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 10 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 8 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 4 nedelje. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno tokom najmanje 4 nedelje. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno tokom najmanje 6 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno tokom najmanje 8 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno tokom najmanje 10 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje jednom dnevno tokom najmanje 12 nedelja. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje svaki drugi dan do 12 nedelja, do 10 nedelja, do 8 nedelja, do 6 nedelja ili do 4 nedelje. U određenim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se primenjuje najmanje svaki drugi dan tokom najmanje 4 nedelje, najmanje 6 nedelja, najmanje 8 nedelja, najmanje 10 nedelja ili najmanje 12 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje oko 600 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje oko 500 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje oko 400 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje 300 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje 200 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja. U jednom primeru izvođenja, najmanje 100 mg jedinjenja 2 primenjuje se najmanje jednom dnevno do 6 nedelja.
[0089] Metabolit 1-6 je aktivni trifosfat jedinjenja 2, ali metabolit 1-6 nije merljiv u plazmi. Surogat za metabolit 1-6 je metabolit 1-7. Metabolit 1-7 je nukleozidni metabolit merljiv u plazmi i stoga je indikacija intracelularne koncentracije metabolita 1-6. Za maksimalnu HCV antivirusnu aktivnost, dozni oblik jedinjenja 2 mora postići minimalnu koncentraciju metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja premašuje EC95vrednost jedinjenja 2. Kao što je prikazano na Sl.24, EC95jedinjenja 1 protiv kliničkih izolata GT1, GT2, GT3 i GT4 je manji od 25 ng/mL (vrednosti EC95jedinjenja 1 i EC95jedinjenja 2 su iste). U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 15 do 75 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 60 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 30 do 60 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 50 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže stabilna minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 30 do 50 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 45 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 30 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 35 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, dozni oblik jedinjenja 2 isporučuje se tako da se postiže minimalna koncentracija metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju (C24,ss) koja je između približno 20 do 25 ng/mL. Približne dozne forme su 10% najniže koncentracije u ravnotežnom stanju.
[0090] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se dozira u količini koja postiže AUC (površinu ispod krive) metabolita 1-7 između približno 1200 i 3000 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se dozira u količini koja postiže AUC metabolita 1-7 između približno 1 500 i 3000 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se dozira u količini koja postiže AUC metabolita 1-7 između približno 1 800 i 3 000 ng/mL. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se dozira u količini koja postiže AUC metabolita 1-7 između približno 2100 i 3 000 ng/mL. U poželjnom primeru izvođenja, jedinjenje 2 se dozira u količini koja postiže AUC metabolita 1-7 od približno 2200 ng*h/mL. Približni oblici doze su 10% AUC.
[0091] U slučaju koprimene jedinjenja 2 u kombinaciji sa drugim anti-HCV jedinjenjem kako je drugačije opisano ovde, količina jedinjenja 2 u skladu sa ovim pronalaskom koja se primenjuje u opsegu od oko 0.01 mg/kg pacijenta do oko 800 mg/kg ili više pacijenta ili znatno više, u zavisnosti od drugog sredstva koji se koprimenjuje i njegove potencije protiv virusa, stanja pacijenta i ozbiljnosti bolesti ili infekcije koja se leči i načina primene. Drugo anti-HCV sredstvo može se, na primer, primeniti u količinama u rasponu od oko 0.01 mg/kg do oko 800 mg/kg. Primeri doznih količina drugog aktivnog sredstva su količine u rasponu od oko 250 mikrograma do oko 750 mg ili više najmanje jednom dnevno, na primer, najmanje oko 5, 10, 20, 25, 50, 75, 100, 150 , 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700 ili 800 miligrama ili više, do četiri puta dnevno. U određenim poželjnim primerima izvođenja, jedinjenje 2 se može često primeniti u količini u rasponu od oko 0.5 mg/kg do oko 50 mg/kg ili više (obično do oko 100 mg/kg), generalno u zavisnosti od farmakokinetike dva sredstva kod pacijenta. Ovi rasponi doza generalno proizvode efikasne koncentracije aktivnog jedinjenja u krvi kod pacijenta.
[0092] Za potrebe ovog pronalaska, profilaktički ili preventivno efikasna količina kompozicija prema ovom pronalasku spada u isti opseg koncentracija kao što je gore navedeno za terapeutski efikasnu količinu i obično je ista kao i terapeutski efikasna količina.
[0093] Primena jedinjenja 2 može se kretati od kontinuirane (intravensko ukapavanje) do nekoliko oralnih ili intranazalnih primena dnevno (na primer, Q.I.D.) ili transdermalne primene i može uključivati oralnu, topikalnu, parenteralnu, intramuskularnu, intravensku, subkutanu, transdermalnu (što može uključivati poboljšanje prodiranja sredstva), bukalnu primenu i primenu supozitorija, između ostalih puteva primene. Oralne tablete obložene enteričnim omotačem se takođe mogu koristiti za povećanje bioraspoloživosti jedinjenja za oralni put primene. Najefikasniji oblik doze zavisiće od bioraspoloživosti/farmakokinetike odabranog sredstva, kao i od težine bolesti kod pacijenta. Oralni dozni oblici su posebno poželjni, zbog lakoće primene i mogućeg povoljnog komplajansa pacijenata.
[0094] Za pripremu farmaceutskih kompozicija prema ovom pronalasku, terapeutski efikasna količina jedinjenja 2 prema predmetnom pronalasku se često intimno meša sa farmaceutski prihvatljivim nosačem u skladu sa konvencionalnim tehnikama farmaceutskog mešanja da bi se proizvela doza. Nosač može imati širok spektar oblika u zavisnosti od željenog oblika preparata za primenu, npr. oralni ili parenteralni. U pripremi farmaceutskih kompozicija u oralnim doznim oblicima, može se koristiti bilo koji od uobičajenih farmaceutskih medijuma. Prema tome, za tečne oralne preparate kao što su suspenzije, eliksiri i rastvori, mogu se koristiti pogodni nosači i aditivi uključujući vodu, glikole, ulja, alkohole, arome, konzervanse, boje i slično. Za čvrste oralne preparate kao što su praškovi, tablete, kapsule i za čvrste preparate kao što su supozitorije, mogu se koristiti pogodni nosači i aditivi uključujući skrobove, šećerne nosače, kao što su dekstroza, manifold, laktoza i srodni nosači, razblaživači, sredstva za granulaciju, lubrikanti, vezujuća sredstva, sredstva za raspadanje i slično. Ako se želi, tablete ili kapsule mogu biti obložene enteričnim slojem ili sa produženim oslobađanjem standardnim tehnikama. Upotreba ovih doznih oblika može značajno povećati bioraspoloživost jedinjenja kod pacijenta.
[0095] Za parenteralne formulacije, nosač će obično sadržati sterilnu vodu ili vodeni rastvor natrijum hlorida, mada mogu biti uključeni i drugi sastojci, uključujući one koji pomažu u disperziji. Naravno, tamo gde se sterilna voda koristi i održava kao sterilna, kompozicije i nosači takođe moraju biti sterilizovani. Suspenzije za injekcije se takođe mogu pripremiti, u kom slučaju se mogu koristiti odgovarajući tečni nosači, sredstva za suspendovanje i slično.
[0096] Lipozomske suspenzije (uključujući lipozome ciljane na virusne antigene) se takođe mogu pripremiti konvencionalnim postupcima za proizvodnju farmaceutski prihvatljivih nosača. Ovo može biti prikladno za isporuku slobodnih nukleozida, acil/alkil nukleozida ili fosfatnih estarskih oblika prolekova nukleozidnih jedinjenja prema ovom pronalasku.
[0097] U tipičnim primerima izvođenja prema ovom pronalasku, jedinjenje 2 i opisane kompozicije se koriste za lečenje, prevenciju ili odlaganje HCV infekcije ili sekundarnog bolesnog stanja, stanja ili komplikacija HCV.
VIL kombinovana i alternativna terapija
[0098] Dobro je poznato da se varijante virusa otporne na lekove mogu pojaviti nakon dužeg lečenja antivirusnim sredstvom. Otpornost na lekove ponekad nastaje mutacijom gena koji kodira enzim koji se koristi u replikaciji virusa. Efikasnost leka protiv HCV infekcije može se produžiti, povećati ili obnoviti primenom jedinjenja u kombinaciji ili naizmenično sa drugim, a možda čak i sa dva ili tri druga antivirusna jedinjenja koja indukuju različite mutacije ili deluju preko različitog puta, u odnosu na ono glavnog leka. Alternativno, farmakokinetika, biodistribucija, poluživot ili drugi parametar leka mogu biti promenjeni takvom kombinovanom terapijom (koja može uključivati alternativnu terapiju ako se smatra usklađenom). Pošto je otkriveno jedinjenje 2 inhibitor NS5B polimeraze, može biti korisno da se jedinjenje primenjuje na domaćina u kombinaciji sa, na primer,
(1) inhibitorom proteaze, kao što je inhibitor NS3/4A proteaze;
(2) inhibitorom NS5A;
(3) još jednim inhibitorom NS5B polimeraze;
(4) nesupstratnim inhibitorom NS5B;
(5) Interferonom alfa-2a, koji može biti pegiliran ili na drugi način modifikovan, i/ili ribavirinom;
(6) Inhibitorom koji nije zasnovan na supstratu;
(7) inhibitorom helikaze;
(8) Antisens oligodeoksinukleotidom (S-ODN);
(9) Aptamerom;
(10) ribozimom otpornim na nukleazu;
(11) iRNK, uključujući mikroRNK i SiRNK;
(12) Antitelom, delimičnim antitelom ili domenskim antitelom na virus, ili
(13) Virusnim antigenom ili parcijalnim antigenom koji indukuje odgovor antitela domaćina. Neograničavajući primeri anti-HCV sredstava koji se mogu primenjivati u kombinaciji sa jedinjenjem 2 pronalaska, pojedinačno ili sa više lekova sa ove liste, su
(i) inhibitori proteaze kao što su telaprevir (Incivek<®>), boceprevir (Victrelis<™>), simeprevir (Olysio<™>), paritaprevir (ABT-450), glekaprevir (ABT-493), ritonavir (Norvir), ACH-2684, AZD-7295, BMS-791325, danoprevir, Filibuvir, GS-9256, GS-9451, MK-5172, Setrobuvir, Sovaprevir, Tegobuvir, VX-135, VX-222 i ALS-220;
(ii) inhibitor NS5A kao što je ACH-2928, ACH-3102, IDX-719, daklatasvir, ledispasvir, velpatasvir (Epclusa), elbasvir (MK-8742), grazoprevir (MK-5172) i Ombitasvir (ABT-267);
(iii) inhibitori NS5B kao što su AZD-7295, klemizol, dasabuvir (Exviera), ITX-5061, PPI-461, PPI-688, sofosbuvir (Sovaldi<®)>, MK-3682 i mericitabin;
(iv) inhibitori NS5B kao što su ABT-333 i MBX-700;
(v) antitelo kao što je GS-6624;
(vi) kombinovani lekovi kao što je Harvoni (ledipasvir/sofosbuvir); Viekira Pak (ombitasvir/paritaprevir/ritonavir/dasabuvir); Viekirax (ombitasvir/paritaprevir/ ritonavir); G/P (paritaprevir i glekaprevir); Technivie (ombitasvir/paritaprevir/ ritonavir) i Epclusa (sofosbuvir/velpatasvir) i Zepatier (elbasvir i grazoprevir).
[0099] Ako se jedinjenje 2 primenjuje za lečenje uznapredovalog virusa hepatitisa C koji dovodi do kancera ili ciroze jetre, u jednom primeru izvođenja, jedinjenje se može primeniti u kombinaciji ili naizmenično sa drugim lekom koji se tipično koristi za lečenje hepatocelularnog karcinoma (HCC), na primer, kao što je opisano od strane Andrew Zhu u " New Agents on the Horizon in Hepatocellular Carcinoma" Therapeutic Advances in Medical Oncology, V 5(1), January 2013, 41-50. Primeri pogodnih jedinjenja za kombinovanu terapiju gde domaćin ima ili je u opasnosti od HCC uključuju anti-angiogena sredstva, sunitinib, brivanib, linifanib, ramucirumab, bevacizumab, cediranib, pazopanib, TSU-68, lenvatinib, antitela protiv EGFR, inhibitore mTor, inhibitore MEK i inhibitore histonske decetilacije.
PRIMERI
Opšti postupci
[0100]<1>H,<19>F i<31>P NMR spektri su snimljeni na 400 MHz Fourier transformacionom Brücker spektrometru. Dobijeni su spektri DMSO-d6osim ako nije drugačije navedeno. Multipliciteti spinova su označeni simbolima s (singlet), d (dublet), t (triplet), m (multiplet) i br (široko). Kuplujuće konstante (J) su prikazane u Hz. Reakcije su generalno izvedene u suvoj atmosferi azota upotrebom Sigma-Aldrich anhidrovanih rastvarača. Sve uobičajene hemikalije su kupljene iz komercijalnih izvora.
[0101] Sledeće skraćenice se koriste u primerima:
AUC: Površina ispod krive
C24: Koncentracija leka u plazmi posle 24 sata
C24,ss: Koncentracija 24 sata posle doziranja u stabilnom stanju
Cmax: Maksimalna koncentracija leka postignuta u plazmi
DCM: Dihlorometan
EtOAc: Etil acetat
EtOH: Etanol
HPLC: tečna hromatografija visokog pritiska
NaOH: Natrijum hidroksid
Na2SO4: Natrijum sulfat (anhidrovani) MeCN: acetonitril
MeNH2: metilamin
MeOH: Metanol
Na2SO4: Natrijum sulfat
NaHCO3: Natrijum bikarbonat NH4Cl: Amonijum hlorid
NH4OH: Amonijum hidroksid
PE: Petrol etar
Ph3P: trifenilfosfin
RH: relativna vlažnost
Silika gel (230 do 400 mreža, sorbent) t-BuMgCl: t-Butil magnezijum hlorid Tmax: Vreme kada se postiže CmaxTHF: tetrahidrofuran (THF), anhidrovani TP: Trifosfat
Primer 1. Sinteza jedinjenja 1
[0102]
Korak 1: Sinteza (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (2-2)
[0103] Balon od 50 L je napunjen metanolom (30 L) i mešan na 10 5 °C. NH2CH3(3.95 Kg) je polako ventiliran u reaktor na 10 ± 5 °C. Jedinjenje 2-1 (3.77 kg) je dodavano u serijama na 20 5 °C i mešano 1 sat da bi se dobio bistar rastvor. Reakcija je mešana dodatnih 6-8 sati, pri čemu je HPLC pokazala da je intermedijer bio manje od 0.1% rastvora. Reaktor je napunjen čvrstim NaOH (254 g), mešan je 30 minuta i koncentrovan na 50 ± 5 °C (stepen vakuuma: -0.095). Dobijeni ostatak je napunjen sa EtOH (40 L) i ponovo suspendovan tokom 1 sata na 60 °C. Smeša je zatim filtrirana kroz celit i filter kolač je ponovo suspendovan sa EtOH (15 L) tokom 1 sata na 60 °C. Filtrat je još jednom filtriran, kombinovan sa filtratom iz prethodne filtracije, a zatim koncentrovan na 50 5 °C (stepen vakuuma: -0.095). Istaložena je velika količina čvrste supstance. EtOAc (6 L) je dodat čvrstom ostatku i smeša je koncentrovana na 50 ± 5 °C (stepen vakuuma: -0.095). DCM je zatim dodat u ostatak i smeša je resuspendovana na refluksu 1 sat, ohlađena do sobne temperature, filtrirana i osušena na 50 5 °C u vakuum pećnici da bi se dobilo jedinjenje 2-2 kao prljavo bela čvrsta supstanca (1.89 kg, 95.3%, čistoća 99.2%).
[0104] Analitički postupak za jedinjenje 2-2: Čistoća jedinjenja 2-2 (15 mg) je dobijena upotrebom Agilent 1100 HPLC sistema sa Agilent Poroshell 120 EC-C18 4.6*150 mm 4-mikronske kolone sa sledećim uslovima: brzina protoka od 1 mL/min, očitana na 254 nm, temperatura kolone 30 °C, 15 µL zapreminu ubrizgavanja i vreme rada od 31 minut. Uzorak je rastvoren u acetonitrilu-vodi (20:80) (v/v). Postupak gradijenta je prikazan ispod.
Korak 2: Sinteza izopropil((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninata (jedinjenje 1)
[0105] Jedinjenje 2-2 i jedinjenje 2-3 (izopropil ((perfluorofenoksi)(fenoksi)fosforil)-L-alaninat) su rastvoreni u THF (1 L) i mešani pod azotom. Suspenzija je zatim ohlađena do temperature ispod -5 °C i 1.7 M rastvor t-BuMgCl (384 mL) je polako dodat tokom 1.5 sata dok je održavana temperatura od 5-10 °C. Rastvor NH4Cl (2 L) i vode (8 L) je dodat u suspenziju na sobnoj temperaturi, a zatim DCM. Smeša je mešana 5 minuta pre nego što je dodat 5% vodeni rastvor K2CO3(10 L) i smeša je mešana dodatnih 5 minuta pre filtriranja kroz dijatomit (500 g). Dijatomit je ispran sa DCM i filtrat je odvojen. Organska faza je isprana sa 5% vodenim rastvorom K2CO3(10 L x 2), fiziološkim rastvorom (10 L x 3), i osušena preko Na2SO4(500 g) približno 1 sat. U međuvremenu, ceo ovaj postupak je ponovljen 7 puta paralelno i 8 serija je kombinovano. Organske faze su filtrirane i koncentrovane na 45 5 °C (stepen vakuuma od 0.09 Mpa). Dodat je EtOAc i smeša je mešana 1 sat na 60 °C, a zatim na sobnoj temperaturi 18 sati. Smeša je zatim filtrirana i isprana sa EtOAc (2 L) da bi se dobilo sirovo jedinjenje 1. Sirovi materijal je rastvoren u DCM (12 L), dodat je heptan (18 L) na 10-20 °C, i smeša je ostavljena da se meša 30 minuta na ovoj temperaturi. Smeša je filtrirana, isprana heptanom (5 L) i osušena na 50 5 °C da bi se dobilo čisto jedinjenje 1 (1650 g, 60%).
[0106] Analitički postupak za jedinjenje 1: Čistoća jedinjenja 1 (25 mg) je dobijena upotrebom Agilent 1100 HPLC sistema sa Waters XTerra Phenyl 5 µm 4.6 x 250 mm kolonom sa sledećim uslovima: 1 mL/min brzina protoka, očitana na 254 nm, temperatura kolone 30 °C, 15 µL zapremine injekcije i 25 minuta rada. Uzorak je rastvoren u acetonitrilu-vodi (50:50) (v/v). Postupak gradijenta je prikazan ispod.
Primer 2. Karakterizacija amorfnog i kristalnog jedinjenja 1
[0107] Amorfno jedinjenje 1 i kristalno jedinjenje 1 prvobitno je analizirano pomoću XRPD,<1>HNMR i HPLC. XRPD obrasci za oba jedinjenja su prikazani na Sl. 1A i HPLC tragovi za određivanje čistoće su prikazani na Sl.1B i 2A, respektivno. Tabela 1 je lista pikova iz XRPD kristalnog jedinjenja 1 i Tabela 2 je lista relativnih vremena zadržavanja (RTT) iz HPLC tragova. Amorfno jedinjenje 1 je bilo 98.61% čistoće, a kristalno jedinjenje 1 je bilo 99.11% čistoće. Oba jedinjenja su bila bela čvrsta supstanca. Sl.2B je TGA i DSC grafikon kristalnog jedinjenja 1. Za kristalno jedinjenje 1, primećena je endoterma na 88.6 °C i došlo je do gubitka mase od 7.8% od 80 - 110 °C.
[0108] Uzorak jedinjenja 1 je rekristalizovan iz EtOAc/heksana i nacrtan sa ORTEP. Apsolutna struktura jedinjenja 1 je potvrđeno rekristalizacijom jednog kristala. Sl. 3 je ORTEP crtež jedinjenja 1. Podaci o kristalima i podaci merenja prikazani su u tabeli 3. Apsolutna stereohemija jedinjenja 1 zasnovana na rendgenskoj kristalografiji je prikazana u nastavku:
[0109] DSC podaci su prikupljeni na TA Instruments Q2000 opremljenom autosemplerom od 50 pozicija. Kalibracija toplotnog kapaciteta je izvršena korišćenjem safira, a kalibracija energije i temperature je izvršena upotrebom sertifikovanog indijuma. Obično je približno 3 mg svakog uzorka, u aluminijumskoj posudi sa iglama, zagrejano na 10 °C/min od 25 °C do 200 °C. Preko uzorka je održavano prečišćavanje suvim azotom pri 50 ml/min. Softver za kontrolu instrumenta je bio Advantage za Q Series v2.8.0.394 i Thermal Advantage v5.5.3, a podaci su analizirani upotrebom Universal Analysis v4.5A.
[0110] TGA podaci su prikupljeni na TA Instruments Q500 TGA, opremljenim sa 16-pozicionim auto-samplerom. Instrument je temperaturno kalibrisan korišćenjem sertifikovanog alumela i nikla. Obično je 5 - 10 mg svakog uzorka stavljeno na prethodno tariranu aluminijumsku DSC posudu i zagrevano na 10 °C/min od temperature okoline do 350 °C. Preko uzorka je održavano pročišćavanje azotom pri 60 ml/min. Softver za kontrolu instrumenta je bio Advantage za Q Series v2.5.0.256 i Thermal Advantage v5.5.3, a podaci su analizirani korišćenjem Universal Analysis v4.5.
Amorfno jedinjenje 1 (1-1):
[0111]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.01 - 1.15 (m, 9 H), 1.21 (d, J=7.20 Hz, 3 H), 2.75 - 3.08 (m, 3 H), 3.71 - 3.87 (m, 1 H), 4.02 - 4.13 (m, 1 H), 4.22 - 4.53 (m, 3 H), 4.81 (s, 1 H), 5.69 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H)
Kristalno jedinjenje 1 (1-2):
[0112]<1>H NMR (400 MΣiz, DMSO-d6) δ ppm 0.97 - 1.16 (m, 16 H), 1.21 (d, J=7.07 Hz, 3 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.08 (s, 2 H), 3.79 (br d, J=7.07 Hz, 1 H), 4.08 (br d, J=7.58 Hz, 1 H), 4.17 -4.55 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.78 (br s, 1 H), 5.91 - 6.15 (m, 4 H), 7.10 - 7.26 (m, 3 H), 7.26 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H)
Tabela 1. Lista pikova za kristalno jedinjenje 1
Tabela 2. Relativna vremena zadržavanja iz HPLC hromatografa amorfnog jedinjenja 1 i kristalnog jedinjenja 1
Tabela 3. Merenje kristala i podataka jedinjenja 1
[0113] Ova početna karakterizacija je praćena skladištenjem na 25 °C / 60% relativne vlažnosti (RH) tokom 14 dana uz analizu pomoću HPLC i XRPD nakon 7 i 14 dana. Sl. 4A je XRPD nakon 14 dana na 25 °C / 60% (RH). Amorfno jedinjenje 1 (uzorak 1-1) je ostalo slabo kristalno, dok je kristalno jedinjenje 1 (uzorak 1-2) zadržalo kristalnost, ali su oba jedinjenja bila stabilna posle 14 dana na 25 °C / 60% (RH).
Primer 3. Formiranje jedinjenja oksalatne soli 4
[0114] U početku, oksalatna so jedinjenja 1, jedinjenje 4, je formirano mešanjem oksalne soli sa rastvaračem (5 vol, 100 µL) i ostavljanjem rastvora da ispari na sobnoj temperaturi. Bilo koja suspenzija je sazrevala (sobna temperatura - 50 °C) tokom 3 sata i procenja je kristalnost.
[0115] Tabela 4 prikazuje različite rastvarače koji se koriste u proizvodnji jedinjenja 4. Svi rastvarači osim dva (cikloheksan i n-heptan) dali su kristalne proizvode. Uprkos visokoj kristalnosti i rastvorljivosti jedinjenja 4, oksalatne soli nisu prihvatljive za klinički razvoj zbog potencijalnog stvaranja kamena u bubregu i istraživane su druge soli jedinjenja 1.
Tabela 4. Formiranje oksalatnog jedinjenja 4
Primer 4. Jedinjenja soli amorfnog jedinjenja 1
[0116] Pošto jedinjenje 4 oksalatne soli (Primer 3) nije moglo da se dalje koristi u kliničkim ispitivanjima zbog njegovog potencijala da formira kamenje u bubregu, amorfne soli jedinjenja 1 su formirane sa kontrajonima navedenim u tabeli 5. Jedinjenje 1 je rastvoreno u t-butanolu (20 vol, 6 ml) i rastvor je tretiran kiselinskim kontrajonima (1 ekvivalent za svaki uzorak osim uzorka 1-9 koji je imao 0.5 ekvivalenta sulfata). Uzorci su zatim zamrznuti sa rastvaračem uklonjenim liofilizacijom. Preostala čvrsta supstanca u uzorcima 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8 i 1-9 je prvobitno analizirana pomoću XRPD i HPLC.
Tabela 5. Detalji formiranja amorfne soli
Uzorak 1-4, HCl (1:1) so:
[0117]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.93 - 1.39 (m, 16 H), 2.97 (br s, 2 H), 3.70 -3.88 (m, 1 H), 4.10 (br s, 1 H), 4.18 - 4.49 (m, 3 H), 4.70 - 4.88 (m, 1 H), 5.71 - 5.94 (m, 1 H), 6.07 (br d, J=19.07 Hz, 2 H), 7.14 - 7.27 (m, 3 H), 7.29 - 7.44 (m, 2 H), 7.83 - 8.19 (m, 1 H)
Uzorak 1-5, sumporna (1:1) so:
[0118]<1>H NMR (400 MHz, DMS-d6) δ ppm 0.97 - 1.38 (m, 15 H), 2.96 (br s, 2 H), 4.06 - 4.18 (m, 1 H), 4.19 - 4.49 (m, 3 H), 4.66 - 4.91 (m, 1 H), 5.70 - 5.95 (m, 1 H), 5.96 - 6.16 (m, 2 H), 7.10 - 7.27 (m, 3 H), 7.30 - 7.43 (m, 2 H), 7.88 - 8.19 (m, 1 H)
Uzorak 1-6, Fumarna (1:1) so:
[0119]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.95 - 1.31 (m, 21 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.20 Hz, 1 H), 4.01 - 4.13 (m, 1 H), 4.16 - 4.23 (m, 1 H), 4.16 - 4.24 (m, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.18 - 4.23 (m, 1 H), 4.24 - 4.52 (m, 1 H), 4.24 - 4.52 (m, 1 H), 4.24 - 4.49 (m, 1 H), 4.72 -4.88 (m, 1 H), 5.68 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 6.63 (s, 1 H), 6.61 - 6.66 (m, 1 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.45 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H), 13.16 (br s, 2 H)
Uzorak 1-7, benzojeva (1:1) so:
[0120]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.96 - 1.30 (m, 15 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.07 Hz, 1 H), 4.07 (br s, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.25 - 4.52 (m, 3 H), 4.81 (s, 1 H), 5.71 - 5.85 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.08 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.43 (m, 3 H), 7.45 - 7.57 (m, 2 H), 7.63 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.95 (dd, J=8.27, 1.33 Hz, 2 H), 12.98 (br s, 1 H)
Uzorak 1-8, ćilibarna (1:1) so:
[0121]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 - 1.28 (m, 15 H), 2.42 (s, 5 H), 2.87 (br s, 3 H), 3.57 - 3.62 (m, 1 H), 3.70 - 3.86 (m, 1 H), 4.02 - 4.14 (m, 1 H), 4.20 (s, 1 H), 4.24 - 4.51 (m, 3 H), 4.70 - 4.88 (m, 1 H), 5.69 - 5.86 (m, 1 H), 6.04 (br d, J=19.33 Hz, 4 H), 7.12 - 7.27 (m, 3 H), 7.27 - 7.44 (m, 3 H), 7.81 (s, 1 H), 11.95 - 12.58 (m, 2 H)
Uzorak 1-9, sumporna (0,5:1) so:
[0122]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.02 - 1.31 (m, 15 H), 2.94 (br s, 3 H), 3.79 (br d, J=7.20 Hz, 2 H), 4.09 (br s, 1 H), 4.22 - 4.48 (m, 3 H), 4.72 - 4.90 (m, 1 H), 5.71 - 5.92 (m, 1 H), 6.07 (br d, J=19.07 Hz, 2 H), 7.12 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.44 (m, 2 H), 7.75 - 8.19 (m, 1 H).
[0123] Uzorci su zatim podvrgnuti skladištenju na 25 °C / 60% relativne vlažnosti (RH) tokom 14 dana uz analizu pomoću HPLC i XRPD nakon 7 (Slika 4B) i 14 dana (Slika 5A). Sve pripremljene soli su ostale amorfne i zapažanja su prikazana u tabeli 6. Utvrđeno je da su monosulfatne (uzorak 1-5) i sukcinatne soli (uzorak 1-8) fizički nestabilne i rastopljene ili su postale guma tokom ispitivanja. Utvrđeno je da su i fumarat (uzorak 1-6) i benzoatne soli (uzorak 1-7) staklaste čvrste materije. Utvrđeno je da HCl so (uzorak 1-4) zadržava svoj fizički izgled. Iznenađujuće, hemisulfatna so (uzorak 1-9) je takođe zadržala svoj fizički izgled kao bela čvrsta supstanca za razliku od monosulfatnog jedinjenja (uzorak 1-5), koje je bilo lepljiva guma. Rezultati su prikazani u tabeli 6. Utvrđeno je da su mono HCl so (uzorak 1-4) i hemisulfatna so (uzorak 1-9) fizički i hemijski stabilne nakon 2 nedelje skladištenja na 25 °C / 60% relativne vlažnosti (RH). Iako su obe soli bile stabilne tokom dve nedelje, hemisulfatna so je bila bolja od HCl soli jer je HCl so bila higroskopna, što je čini manje korisnom u poređenju sa hemisulfatnom soli za dugotrajno skladištenje ili upotrebu.
Tabela 6. Stabilnost uzoraka posle 7 i 14 dana na 25 °C / 60% RH
Primer 5. Karakterizacija amorfnog jedinjenja 2
[0124] Amorfno jedinjenje 2 je prvobitno analizirano pomoću XRPD,<1>HNMR, DSC, TGA i HPLC. XRPD obrazac za amorfno jedinjenje 2 prekriven amorfnim Jedinjenjem 1 i kristalnim jedinjenjem 1 je prikazan na Sl.1A i XRPD obrazac amorfnog jedinjenja 2 sam je prikazan na Sl. 5B. Tabela 7 je lista pikova iz XRPD obrasca prikazanog na Sl. 5B. HPLC trag za određivanje čistoće je prikazan na Sl. 6A. Tabela 8 je lista relativnih vremena zadržavanja (RTT) iz HPLC traga prikazanog na Sl.6A. Amorfno jedinjenje 2 bilo je 99.68% čisto. Sl.6B je TGA i DSC grafikon amorfnog jedinjenja 2. Eksperimentalni detalji za TGA i DSC eksperimente dati su u Primeru 2.
Tabela 7. Lista pikova za amorfno jedinjenje 2
Tabela 8. HPLC hromatogram amorfnog jedinjenja 2
Amorfno jedinjenje 2:
[0125]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.93 - 1.29 (m, 13 H), 2.94 (br s, 3 H), 3.79 (td, J=10.04, 7.07 Hz, 2 H), 4.05 - 4.19 (m, 1 H), 4.19 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.71 - 5.94 (m, 1 H), 5.97 - 6.16 (m, 2 H), 7.14 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.44 (m, 2 H), 7.82 - 8.09 (m, 1 H)
Primer 6. Kristalizacija amorfnog jedinjenja 2
[0126] Pošto je otkriveno da hemisulfatna so ostaje čvrsta nakon 14-dnevne studije stabilnosti, kao što je prikazano u tabeli 6, sprovedeni su preliminarni testovi koji su proučavali uslove kristalizacije upotrebom 11 različitih rastvarača. Amorfno jedinjenje 2 suspendovano u 5 zapremina rastvarača na 25 °C (uzorak 2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2 -10 i 2-11). U one uzorke koji nisu bili slobodno protočni (2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8 i 2-10), dodato je 5 dodatnih zapremina rastvarača. Uzorci su zatim sazrevali na 25 - 50 °C (1 °C/min između temperatura i 4 sata na svakoj temperaturi) tokom 6 dana osim za uzorak 2-1, za koji je primećeno da je bistar rastvor nakon 1 dana i koji je dozvoljen da ispari pod uslovima okoline. Rezultati su prikazani u tabeli 9. Kristalni obrasci nastali su kristalizacijom sa izobutanolom (uzorak 2-1), acetonom (uzorak 2-2), EtOAc (uzorak 2-6) i iPrOAc (uzorak 2-7). Dva slabo kristalna uzorka su takođe identifikovana iz kristalizacije sa MEK (uzorak 2-4) i MIBK (uzorak 2-5). XRPD obrasci su prikazani na Sl.7A.
Tabela 9. Uslovi kristalizacije jedinjenja 2
[0127] Sedam uzoraka (uzorci 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7 i 2-8) analizirani su pomoću DSC, TGA,<1>H-NMR i IC (tabela 10, sl.8A, sl.8B, sl. 9A, sl.9B, sl.10A, sl.10B, sl. 11A i sl.11B) kao i pomoću XRPD nakon 6 dana skladištenje na 25 °C / 60% relativne vlažnosti (RH) (svi uzorci su ostali kristalni / slabo kristalni posle stabilnosti). Svi uzorci su zadržali otprilike polovinu ekvivalenta sulfata, ali su sadržali relativno veliku količinu zaostalog rastvarača. Preklapanje rendgenskih difraktograma amorfnih uzoraka 2-9, 2-10 i 2-11 je prikazano na Sl.
7B.
Tabela 10. Karakterizacija uzoraka kristalnog Jedinjenja 2
Primer 2-2:
[0128]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.83 (d, J=6.69 Hz, 7 H), 0.99 - 1.26 (m, 14 H), 1.61 (dt, J=13.26, 6.63 Hz, 1 H), 3.73 - 3.87 (m, 2 H), 4.03 - 4.18 (m, 1 H), 4.18 - 4.51 (m, 4 H), 4.66 - 4.92 (m, 1 H), 4.70 - 4.90 (m, 1 H), 4.72 - 4.88 (m, 1 H), 5.81 (br s, 1 H), 5.93 - 6.11 (m, 2 H), 7.10 - 7.26 (m, 3 H), 7.14 - 7.26 (m, 1 H), 7.30 - 7.41 (m, 2 H), 7.94 (br s, 1 H)
Uzorak 2-3:
[0129]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.00 - 1.26 (m, 13 H), 2.09 (s, 3 H), 3.74 - 3.87 (m, 2 H), 4.10 (br d, J=7.70 Hz, 1 H), 4.22 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.28 Hz, 1 H), 5.71 -5.90 (m, 1 H), 5.96 - 6.15 (m, 2 H), 7.12 - 7.26 (m, 3 H), 7.31 - 7.41 (m, 2 H), 7.79 - 8.07 (m, 1 H)
Uzorak 2-4:
[0130]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.91 (t, J=7.33 Hz, 3 H), 1.01 - 1.28 (m, 13 H), 2.08 (s, 2 H), 3.72 - 3.89 (m, 2 H), 4.10 (br d, J=8.08 Hz, 1 H), 4.23 - 4.47 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.69 - 5.89 (m, 1 H), 5.94 - 6.13 (m, 2 H), 7.14 - 7.25 (m, 3 H), 7.32 - 7.41 (m, 2 H), 7.79 - 8.11 (m, 1 H)
Uzorak 2-5:
[0131]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.86 (d, J=6.69 Hz, 1 H), 0.98 - 1.33 (m, 13 H), 2.02 - 2.09 (m, 1 H), 4.03 - 4.17 (m, 1 H), 4.22 - 4.50 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.81 (br s, 1 H), 5.93 - 6.15 (m, 2 H), 7.11 - 7.27 (m, 3 H), 7.31 - 7.41 (m, 2 H), 7.77 - 8.21 (m, 1 H)
Uzorak 2-6:
[0132]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.98 - 1.28 (m, 15 H), 2.00 (s, 3 H), 3.99 - 4.14 (m, 3 H), 4.21 - 4.49 (m, 3 H), 4.81 (kvin., J=6.22 Hz, 1 H), 5.82 (br s, 1 H), 5.93 - 6.14 (m, 2 H), 7.11 - 7.26 (m, 3 H), 7.29 - 7.42 (m, 2 H), 7.79 - 8.17 (m, 1 H)
Uzorak 2-7:
[0133]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.92 - 1.28 (m, 17 H), 1.97 (s, 2 H), 4.04 - 4.16 (m, 1 H), 4.20 - 4.51 (m, 3 H), 4.71 - 4.93 (m, 2 H), 5.82 (br s, 1 H), 5.95 - 6.14 (m, 2 H), 7.11 - 7.28 (m, 3 H), 7.31 - 7.43 (m, 2 H), 7.75 - 8.21 (m, 1 H)
Uzorak 2-8:
[0134]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.81 - 1.11 (m, 13 H), 1.19 (s, 1 H), 1.53 - 1.66 (m, 1 H), 3.87 - 4.01 (m, 1 H), 4.06 - 4.32 (m, 3 H), 4.64 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.55 - 5.75 (m, 1 H), 5.77 - 5.97 (m, 2 H), 6.94 - 7.10 (m, 3 H), 7.13 - 7.26 (m, 2 H), 7.66 - 7.96 (m, 1 H)
Primer 7. Neuspeh da se kristalizuje amorfna malonatna so (jedinjenje 4)
[0135] Kao što je prikazano u Primeru 3, kristalna oksalatna so je identifikovana prilikom određivanja odgovarajućih soli za jedinjenje 1, ali oksalatna so jedinjenje 4 nije moglo da se dalje koristi u kliničkim ispitivanjima zbog njegovog potencijala da izazove kamen u bubregu. Zbog toga je pokušana kristalizacija hemijski srodne malonatne soli (jedinjenje 5) upotrebom istih 11 rastvarača kao i za hemisulfatnu so. Jedinjenje 1 (12 × 50 mg, uzorci 3-1, 3-2, 3-3, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10, 3 -11, i 3-12) je rastvoreno u t-butanolu (20 vol) i rastvori su zatim tretirani sa 1 ekvivalentom osnovnog rastvora malonske kiseline (1 M u THF). Uzorci su zatim zamrznuti sa rastvaračem uklonjenim liofilizacijom. Za uzorke 3-1, 3-2, 3-3, 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10 i 3-11, relevantni rastvarač (5 zapremina) je dodat na sobnoj temperaturi. Svi dobijeni rastvori su ostavljeni da ispare pod uslovima okoline, dok su gume ili čvrste supstance sazrevale na 25 - 50 °C (1 °C/min između temperatura i 4 sata na svakoj temperaturi) tokom 5 dana. Čvrste supstance su analizirane pomoću XRPD (Sl. 12B), ali je nađeno da svi uzorci ili formiraju gumu ili su amorfni (Sl.12B). Rezultati su prikazani u tabeli 11. Jedan čvrsti (amorfni) uzorak (3-12) analiziran je pomoću<1>H-NMR i HPLC, a nađeno je da sadrži oko 1 ekvivalent malonske kiseline (pikovi se preklapaju) kao i 0.6 ekv. t-BuOH. Jedinjenje je bilo 99.2% čistoće (Sl.13A). Sl..12A je XRDP uzorka 3-12 i Sl.13A je HPLC hromatograf uzorka 3-12.
Uzorak 3-12:
[0136]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.81 - 1.11 (m, 13 H), 1.19 (s, 1 H), 1.53 - 1.66 (m, 1 H), 3.87 - 4.01 (m, 1 H), 4.06 - 4.32 (m, 3 H), 4.64 (kvin., J=6.25 Hz, 1 H), 5.55 - 5.75 (m, 1 H), 5.77 - 5.97 (m, 2 H), 6.94 - 7.10 (m, 3 H), 7.13 - 7.26 (m, 2 H), 7.66 - 7.96 (m, 1 H)
Tabela 11. Uslovi kristalizacije jedinjenja 4 amorfne malonatne soli
Primer 8. Neuspeh odgovarajućeg formiranja soli upotrebom mlevenja uz pomoć tečnosti (LAG)
[0137] Ispitivanje mlevenja uz pomoć tečnosti (LAG) za određivanje odgovarajućih soli osim hemisulfata je izvedeno upotrebom 14 kiselih kontrajona u Tabeli 12.
Tabela 12. Matični rastvori kontra-jona koji se koriste u LAG kristalizaciji
[0138] Jedinjenje 1 (30 mg) je stavljeno u HPLC bočice sa dva kuglična ležaja od 3 mm. Materijali su navlaženi rastvaračem (15 µl etanola, uzorak 4-1, 4-2, 4-3, 4-4, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4- 10, 4-11, 4-12, 4-13 i 4-14) i dodat je 1 ekvivalent kiselinskog kontra-jona. Uzorci su zatim mleveni 2 sata pri 650 rpm upotrebom Fritsch sistema za mlevenje sa Automaxion adapterom. Za većinu uzoraka nakon mlevenja utvrđeno je da su čiste gume i nisu dalje analizirani (Tabela 13). Oni za koje je primećeno da sadrže čvrstu supstancu su analizirani pomoću XRPD i, u svim slučajevima, nađeno je da se dobijeni uzorci poklapaju sa kristalnim kiselinskim kontrajonom bez dodatnih pikova (Slika 13B).
Tabela 13. Zapažanja i rezultati XRPD iz LAG jedinjenja 1
Primer 9. Neuspeh da se dobije adekvatno formiranje soli upotrebom metil etil ketona (MEK)
[0139] Metil etil keton (MEK) je zatim korišćen kao rastvarač za proučavanje odgovarajućih soli osim hemisulfatne soli. Upotrebom 14 kiselih kontrajona u Tabeli 12, studija je izvedena rastvaranjem jedinjenja 1 (50 mg) u MEK (20 vol) na sobnoj temperaturi. Rastvori su tretirani sa 1 ekvivalentom odabranih kontrajona (Tabela 12). Uzorci su zatim ohlađeni na 5 °C pri 0.1 °C/min i mešani na ovoj temperaturi preko noći. Svi uzorci su ostavljeni da ispare pod uslovima sredine i sve uočene čvrste materije su analizirane pomoću XRPD. Ovo isparavanje je uglavnom proizvodilo gume, sa izuzetkom uzoraka sa sterinskom kiselinom (uzorak 4-12) i palmitinskom kiselinom (uzorak 5-13), koje su dale staklaste rastvarače. Ove čvrste materije su bile amorfne pomoću XRPD, ali nisu dobijeni kristalni oblici soli. Rezultati su prikazani u tabeli 14. (Slika 13A).
Tabela 14. Rezultati rastvaranja jedinjenja 1 u MEK (20 zapremina)
[0140] Pošto su svi uzorci bili amorfni, svi uzorci su ponovo rastvoreni u MEK (5 vol) i dodat je cikloheksan (20 vol antirastvarača) na sobnoj temperaturi, a zatim 1 sat mešani na 25 °C.
Uzorci su zatim sazrevali između 50 - 5 °C (1 °C/min između temperatura, 4 sata na svakoj temperaturi) tokom 2 dana pre nego što je ciklus promenjen na 50 - 25 °C u naredna 4 dana. Uzorci su posmatrani okom nakon sazrevanja. Rezultati su prikazani u tabeli 15. Nakon sazrevanja, za sve uzorke osim 5-1 (sa pamoinskom kiselinom) utvrđeno je da su gume. Uzorak 5-1, žuta čvrsta supstanca, analiziran je pomoću XRPD, i nađeno je da uzorak odgovara poznatom obliku pamoinske kiseline (Slika 14B), te stoga nisu dobijeni kristalni oblici soli.
Tabela 15. Rezultati ponovnog rastvaranja jedinjenja 1 u MEK (5 zapremina) i antirastvaraču
Primer 10. Neuspeh da se dobije adekvatno formiranje soli upotrebom etil acetata
[0141] Etil acetat je zatim korišćen za proučavanje odgovarajućih soli osim hemisulfatne soli. Upotrebom 14 kiselih kontrajona u Tabeli 12, studija je izvedena rastvaranjem Jedinjenja 1 (50 mg) u etil acetatu (20 vol) na 50 °C. Rastvori su tretirani sa 1 ekvivalentom odabranih kontrajona (Tabela 12). Uzorci su zatim ohlađeni na 5 °C pri 0.1 °C/min i mešani na ovoj temperaturi 4 dana. Rastvori su ostavljeni da ispare pod uslovima sredine, dok su sve čvrste materije analizirane pomoću XRPD. Rezultati kristalizacije upotrebom etil acetata su u Tabeli 16. Za razliku od Primera 8 gde je MEK bio rastvarač, primećeno je da je većina uzoraka suspenzija nakon hlađenja smeše kiseline:jedinjenja (oni koji su bili rastvori su ostavljeni da ispare pod uslovima sredine). Međutim, nađeno je da se XRPD difraktogrami generalno poklapaju sa kristalnim jedinjenjem 1. Uzorci 6-2, 6-4 i 6-5 imaju neke male razlike (Sl. 14A i Sl. 15A). Nisu dobijeni kristalni oblici soli.
Tabela 16. Rezultati rastvaranja jedinjenja 1 u EtOAc (20 zapremina)
Primer 11. Određivanje hemijske čistoće pomoću HPLC
[0142] Analiza čistoće u Primeru 2 i Primeru 4 izvedena je na sistemu serije Agilent HP1100 opremljenom detektorom sa diodnim nizom i korišćenjem ChemStation softvera vB.04.03 korišćenjem metode prikazane u tabeli 17.
Tabela 17. HPLC metoda za određivanje hemijske čistoće
Primer 12. Tehnike rendgenske difrakcije praha (XRPD).
[0143] XRPD obrasci u Primerima 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 i 9 su sakupljeni na PANalitical Empyrean difraktometru upotrebom Cu K□ zračenja (45 kV, 40 mA) u transmisionoj geometriji. Na upadnom snopu korišćeni su prorez od 0.5°, maska od 4 mm i Soller-ovi prorezi od 0.4 rad sa ogledalom za fokusiranje. PIXcel<3D>detektor, postavljen na difraktovani snop, opremljen je prijemnim prorezom i Soller-ovim prorezima od 0.04 rad. Rad instrumenta se proverava upotrebom silikonskog praha na nedeljnoj bazi. Softver korišćen za prikupljanje podataka je X'Pert Data Collector v.5.3 i podaci su analizirani i predstavljeni korišćenjem Difrac Plus EVA v. 15.0.0.0 ili Highscore Plus v.4.5. Uzorci su pripremljeni i analizirani u metalnoj ili Millipore 96 pločici u transmisijskom režimu. Rendgen providni film je korišćen između metalnih limova na metalnoj ploči i praškovi (približno 1-2 mg) su korišćeni kako su primljeni. Millipore ploča je korišćena za izolovanje i analizu čvrstih supstanci iz suspenzija dodavanjem male količine suspenzije direktno na ploču pre filtracije u laganom vakuumu.
[0144] Režim skeniranja za metalnu ploču koristio je gonio osu skeniranja, dok je 2θ skeniranje korišćeno za Millipore ploču. Provera performansi je izvršena upotrebom silikonskog praha (metalna ploča sa bunarčićima). Detalji prikupljanja podataka bili su ugaoni opseg od 2.5 do 32.0° 2θ, veličina koraka od 0.0130° 2θ i ukupno vreme prikupljanja od 2.07 minuta.
[0145] Uzorci su takođe sakupljeni na Bruker D8 difraktometru upotrebom Cu K□ zračenja (40 kV, 40 mA), θ - 2θ goniometra i divergencije V4 i prijemnih proreza, Ge monohromatora i Lynxeye detektora. Performanse instrumenta su proverene upotrebom sertifikovanog Corundum standarda (NIST 1976). Softver korišćen za prikupljanje podataka je DiffracPlus XRD Commander v2.6.1, a podaci su analizirani i predstavljeni pomoću Diffrac Plus EVA v15.0.0.0.
[0146] Uzorci su analizirani u uslovima sredine kao uzorci ravnih ploča koristeći prah kako je primljen. Uzorak je nežno upakovan u šupljinu isečenu u poliranu silikonsku pločicu bez pozadine (510). Uzorak je tokom analize rotiran u sopstvenoj ravni. Detalji prikupljanja podataka bili su ugaoni opseg od 2 do 42° 2θ, veličina koraka od 0.05° 2θ i vreme prikupljanja od 0.5 s/koraku.
Primer 13. Sinteza amorfnog jedinjenja 2
[0147]
[0148] Balon od 250 mL je napunjen sa MeOH (151 mL) i rastvor je ohlađen na 0-5 °C. Koncentrovani rastvor H2SO4je dodavan ukapavanjem tokom 10 minuta. Posebna boca je napunjena jedinjenjem 1 (151 g) i acetonom (910 mL), i H2SO4/MeOH rastvor je dodat ukapavanjem na 25-30 °C tokom 2.5 sata. Taložena je velika količina čvrste supstance. Nakon što je rastvor mešan 12-15 sati na 25-30 °C, smeša je filtrirana, isprana sa MeOH/acetonom (25 mL/150 mL) i osušena na 55-60 °C u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje 2 (121 g, 74%). Analitički postupak za jedinjenje 2: Čistoća jedinjenja 2 je dobijena upotrebom Agilent 1100 HPLC sistema sa kolonom Waters XTerra Phenyl 5µm 4.6*250 mm sa sledećim uslovima: brzina protoka od 1 mL/min, očitana na 254 nm, temperatura kolone 30 °C, zapremina injekcije od 10 µL i 30 minuta vreme rada. Uzorak je rastvoren u ACN:vodi (90:10, v/v). Metoda gradijenta za razdvajanje je prikazan u nastavku. Rt(min) jedinjenja 2 je bilo oko 12.0 minuta.
[0149]<1>HNMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (br, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H ), 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.73 (s, 2H), 6.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.00 (dd, J = 12.0, 8.0 Hz, 1H), 5.81(br, 1H), 4.84-4.73 (m, 1H), 4.44-4.28 (m, 3H), 4.10 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.85-3.74 (m, 1H), 2.95 (s, 3H), 1.21 (s, J = 4.0 Hz, 3H), 1.15-1.10 (m, 9H).
Primer 14. Karakterizacija jedinjenja 2
[0150] Jedinjenje 2 dalje okarakterisano posmatranjem golim okom,<1>HNMR,<13>CNMR,<19>FNMR, MS, HPLC i XRPD (Sl.15B). Preostali rastvarač je meren pomoću GC. Sadržaj vode je meren pomoću Karl Fischer-ove titracije, a sadržaj vode je bio samo 0.70%. Podaci su sažeti u tabeli 18.
Tabela 18. Rezime dodatnih podataka o karakterizaciji jedinjenja 2
Primer 15. Rastvorljivost jedinjenja 1 i jedinjenja 2
[0151] Jedinjenje 1 i jedinjenje 2 oba su testirana na rastvorljivost u biorelevantnim test medijumima, uključujući simuliranu želudačnu tečnost (SGF), simuliranu želudačnu tečnost u stanju gladovanja (FaSSIF) i želudačnu tečnost u stanju sa ishranom (FeSSIF). Rezultati za jedinjenje 1 prikazani su u tabeli 19 i rezultati za jedinjenje 2 prikazani su u tabeli 20. Uzorci su mešani na sobnoj temperaturi (20 - 25 °C). Jedinjenje 2 je bilo više od 40 puta rastvorljivije od jedinjenja 1 u vodi posle 2 sata i više od 25 puta rastvorljivije posle 24 sata. U SGF uslovima, jedinjenje 2 je imalo rastvorljivost od 84.2 mg/mL posle 24 sata u poređenju sa rastvorljivošću od 15.6 mg/mL jedinjenja 1 u isto vreme. Jedinjenje 2 je takođe rastvorljivije posle 2 sata u SGF uslovima od jedinjenja 1, i dovoljno rastvorljivo da omogući testiranje čak i nakon 48 sati, dok testiranje posle 48 sati nije obavljeno sa jedinjenjem 1.
Tabela 19. Rezultati ispitivanja rastvorljivosti jedinjenja 1
Tabela 20. Rezultati ispitivanja rastvorljivosti jedinjenja 2
Primer 16. Hemijska stabilnost jedinjenja 2
[0152] Jedinjenje 2 je testirano na hemijsku stabilnost na 25 i 40 °C tokom perioda od 6 meseci praćenjem organske čistoće, sadržaja vode,<1>HNMR, DSC i Ramen IR. Sistem zatvaranja kontejnera za studiju bio je kombinovana vrećica sa medicinskim ventilima sa farmaceutskim laminiranim filmom preko vrećice i silika gelom za sušenje između dva sloja. Jedinjenje 2 (1 g) je izmereno u svaki kontejner. Kese su zatim čuvane na 25°C/60% RH (relativna vlažnost) i 40°C/75% RH (relativna vlažnost). Organska čistoća, sadržaj vode,<1>HNMR, DSC i Raman su mereni u vreme 0, mesec 1, mesec 2, mesec 3 i mesec 6.
[0153] Čistoća jedinjenja 2 je dobijena upotrebom Shimadzu LC-20AD sistema sa Waters XTerra Phenyl, 5µm, 4.6x250mm kolonom sa sledećim uslovima: 1 mL/min brzina protoka, očitana na 254 nm, 35 °C temperatura kolone i 10 µL injekcione zapremine. Uzorak je rastvoren u acetonitrilu-vodi (90:10) (v/v). Metoda gradijenta je prikazana ispod.
[0154] Sadržaj vode u jedinjenju 2 (250 mg) je određen aparatom za titraciju vode primenom Karl Fischer-ove metode titracije.
[0155] Rezultati su prikazani u tabeli 21 i tabeli 22. Kada je jedinjenje 2 čuvano 6 meseci na 25 i 40 °C, brzina razgradnje je bila minimalna. Posle 3 meseca, jedinjenje 2 je bilo 99.75% procenta čisto u uslovima od 25 °C i 99.58% pri uslovima od 40 °C. Posle 6 meseci, jedinjenje 2 je bilo i dalje 99.74% čisto pri uslovima od 25 °C i 99.30% čisto pri uslovima od 40 °C. Na 25 °C, procenat proizvoda razgradnje se povećao sa 0.03% na dan 0 na 0.08% nakon 6 meseci. Na 40 °C, procenat proizvoda razgradnje se povećao sa 0.03% na 0.39%. Tokom 6 meseci, procenat vode se povećao za približno 0.6% na 25 °C i povećao se za približno 0.7% na 40 °C.
[0156] Karakterizacija po<1>HNMR, Raman i DSC jedinjenja 2 posle 1, 2, 3 i 6 meseci bila je ista kao i karakterizacija jedinjenja 2 dana 0 pri oba temperaturna uslova (tabela 22), naglašavajući dugoročnu stabilnost jedinjenja 2.
Tabela 21. Brzina razgradnje jedinjenja 2 tokom 6 meseci na 25 i 40 °C
Tabela 22. Karakterizacija jedinjenja 2 tokom studije razgradnje
[0157] Dodatne studije hemijske stabilnosti jedinjenja 2 merene su da bi se utvrdila nečistoća i nivoi vode. Testirana su tri uslova: ubrzana stabilnost (40 2°C / 75 5% RH) tokom perioda od 6 meseci, stabilnost sredine (25 2°C / 60 5% RH) tokom perioda od 9 meseci, i stabilnost u uslovima frižidera (5 3°C) tokom perioda od 9 meseci. Rezultati za ubrzanu stabilnost, stabilnost sredine i uslove u frižideru prikazani su u tabeli 23, tabeli 24 i tabeli 25, respektivno. Na osnovu rezultata ovih studija, Jedinjenje 2 je veoma hemijski stabilno.
[0158] U studiji ubrzane stabilnosti (Tabela 23), u svakoj vremenskoj tački (1. mesec, 3. mesec i 6. mesec) gde je mereno jedinjenje 2, izgled jedinjenja 2 je uvek bio kao bela čvrsta supstanca i IR je odgovarao referentnom standardu. Posle šest meseci, ukupne nečistoće srodne supstance 1 bile su samo 0.08% i nije bilo detekcije srodne supstance 2 i izomera.
Tabela 23. Ubrzana stabilnost (40 ± 2°C / 75 ± 5% RH) jedinjenja 2
[0159] U studiji stabilnosti sredine u kojoj su tokom devet meseci mereni izgled, IR, nivoi vode i nečistoća, izgled jedinjenja 2 je uvek bio bela čvrsta supstanca i IR je uvek odgovarao referentnom uzorku. Rezultati (Tabela 24) naglašavaju koliko je jedinjenje hemijski stabilno 2. Posle 9 meseci, procenat vode u uzorku je bio samo 0.20%, a ukupna nečistoća srodne supstance 1 je bila samo 0.02%. Slično ubrzanim studijama stabilnosti, nisu otkriveni srodna supstanca 2 niti koji izomeri Jedinjenja 2.
Tabela 24. Stabilnost u sredini (25 ± 2°C / 60 ± 5% RH) jedinjenja 2
[0160] Rezultati merenja stabilnosti u uslovima frižidera prikazani su u tabeli 25. Jedine nečistoće koje su otkrivene i posle 9 meseci bile su one od srodne supstance 1 i vode. Sadržaj vode nakon 9 meseci iznosio je 0.32%, a ukupne nečistoće srodne supstance 1 samo 0.01% uzorka. Jedinjenje 2 je veoma hemijski stabilno u uslovima frižidera.
Tabela 25. Stabilnost jedinjenja 2 u uslovima frižidera (5 ± 3°C).
Primer 17. Nivoi metabolita u plazmi nakon pojedinačnih oralnih doza jedinjenja 2
[0161] Pojedinačna oralna doza jedinjenja 2 je primenjivana na pacove, pse i majmune i izmereni su nivoi određenih metabolita u plazmi prikazani na Šemi 1.
[0162] Konverzija jedinjenja 2 u jedinjenje 1 i metabolit 1-7 su prikazani u tabeli 26, a rezultati za metabolit 1-8 i metabolit 1-2 su prikazani u tabeli 27. Kod pacova, primećena je niska izloženost jedinjenju 1, ali su primećeni visoki nivoi metabolita 1-7, nukleozidnog metabolita aktivnog trifosfata (metabolit 1-6). Kod majmuna je izmerena izloženost jedinjenju 1 skoro proporcionalna dozi. Kod pasa, merena je supraproporcionalna izloženost jedinjenju 1, koja ukazuje na metabolički klirens prvog prolaska kroz jetru. Tokom studije, primećeno je značajno više povraćanja kod pasa (5/5 u grupi sa visokim dozama) nego kod majmuna (1/5 u grupi sa visokim dozama).
Tabela 26. Nivoi jedinjenja 1 i metabolita 1-7 u plazmi posle pojedinačnih oralnih doza jedinjenja 2
Tabela 27. Nivoi metabolita 1-8 i 1-2 u plazmi nakon pojedinačne oralne doze jedinjenja
2
Primer 18. Izlaganje aktivnom trifosfatu u tkivu nakon oralne doze jedinjenja 2
[0163] Nivoi aktivnog trifosfata (TP) jedinjenja 2 (metabolit 1-6) u tkivu srca i jetre mereni su 4 sata nakon oralnih doza jedinjenja 2. Uzorci jetre i srca su dobijeni 4 sata nakon pojedinačne doze jedinjenja 2, brzo zamrznuti, homogenizovani i analizirani pomoću LC-MS/MS za intracelularne nivoe aktivnog TP. Nivoi u tkivu su mereni kod pacova, pasa i majmuna kao što je prikazano na Sl. 16A. Visoki nivoi aktivnog TP mereni su u jetri svih testiranih vrsta. Relativno niski nivoi aktivnog TP su izmereni u srcima pasa zbog zasićenja metabolizma jetre prvog prolaza, a nemerljivi nivoi TP mereni su u srcima pacova i majmuna, što ukazuje na formiranje aktivnog TP specifično za jetru. Iako nije prikazano, u poređenju sa doziranjem jedinjenja 1, doziranje jedinjenja 2 je poboljšalo raspodelu TP.
Primer 19. Farmakološko poređenje jedinjenja 1 i jedinjenja 2 kod pasa
[0164] Sprovedeno je neposredno poređenje pasa koji su dozirani jedinjenjem 1 i jedinjenjem 2. Studija je merila nivoe jedinjenja 1 i metabolita 1-7 u plazmi (iz Šeme 1) do 4 sata nakon doziranja jedinjenja 1 (25 mg/kg) i jedinjenja 2 (30 mg/kg) (Tabela 28), i AUC(0-4 h)metabolita 1-7 je bila dupla veća sa jedinjenjem 2 u poređenju sa jedinjenjem 1. Izloženosti normalizovanoj dozi jedinjenja 1 i metabolita 1-7 prikazane su u tabeli 28. Vrednosti za AUC(0-4 h)za jedinjenje 1, metabolit 1-7, i zbir jedinjenja 1 metabolit 1-7 bile su veće nakon doziranja jedinjenja 2.
Tabela 28. Poređenje nivoa u plazmi nakon doziranja jedinjenja 1 i jedinjenja 2
[0165] Koncentracije trifosfata u odnosu jetra/srce ukazuju na to da doziranje jedinjenja 2, u poređenju sa jedinjenjem 1, povećava selektivnu isporuku trifosfata u jetru, kao što je prikazano u tabeli 29. AUC(0-4 h)aktivnog metabolita guanina (1-6) nakon primene jedinjenja 1 izmerena u srcu bila je 174 pM*h, dok je AUC(0-4 h)aktivnog metabolita guanina (1-6) nakon primene jedinjenja 2 izmerena u srcu bila 28 pM*h. Odnos jetra/srce za jedinjenje 2 bio je 20 u poređenju sa odnosom jetra/srce od 3.1 za jedinjenje 1.
Tabela 29. Poređenje izloženosti jetri i srcu nakon doziranja jedinjenja 1 i jedinjenja 2
[0166] Efekat povećane selektivnosti za jetru u odnosu na srce kada je jedinjenje 2 primenjeno u poređenju sa jedinjenjem 1 je takođe prikazan na Sl. 16B. Nivoi aktivnog trifosfata u tkivu srca i jetre nakon doze jedinjenja 2 (30 mg/kg) su upoređivani sa nivoima aktivnog trifosfata nakon doze jedinjenja 1 (25 mg/kg) u tkivu. Koncentracija aktivnog TP je bila viša u jetri nego u srcu za oba, jedinjenje 1 i jedinjenje 2, ali aktivni TP je bio selektivniji za jetru u odnosu na srce kada je jedinjenje 2 dozirano u poređenju sa jedinjenjem 1.
Primer 20. Profili plazme metabolita jedinjenja 2 kod pacova i majmuna
[0167] Mužjacima Sprague-Dawley pacova i makaki majmuna (3 životinje po grupi doziranja) date su pojedinačne oralne doze jedinjenja 2. Alikvoti plazme pripremljeni iz uzoraka krvi tretiranih dihlorvosom analizirani su pomoću LC-MS/MS za koncentracije jedinjenja 1 i metabolita 1-7 (nukleozidni metabolit aktivnog trifosfata jedinjenja 2 prikazan na šemi 1), a farmakokinetički parametri su određeni upotrebom WinNonlin. Rezultati za jednu dozu od 500 mg/kg kod pacova prikazani su na Sl. 17, a rezultati za pojedinačnu dozu od 30, 100 ili 300 mg/kg kod majmuna su prikazani na Sl.18. Rezultati su takođe sumirani u tabeli 30.
[0168] Visok nivo metabolita u plazmi 1-7, nukleozidnog metabolita aktivnog trifosfata (TP) jedinjenja 2, ukazuju na formiranje visokih nivoa TP, čak i kod pacova kod kojih su primećeni veoma niski nivoi matičnog nukleotidnog proleka u plazmi zbog kratkog poluživota jedinjenja 1 u krvi pacova (<2 min). Stalni nivoi metabolita u plazmi 1-7 odražavaju dug polu-život TP.
[0169] Kod majmuna, izloženost plazmi (AUC) jedinjenja 1 bili su otprilike proporcionalni dozi, dok su izloženosti metabolita 1-7 bile nešto manje od proporcionalne dozi, iako vrednosti AUC za roditeljski lek i nukleozidni metabolit aktivnog TP nastavljaju da rastu do najveće testirane doze (300 mg/kg).
[0170] Oralna primena jedinjenja 2 kod pacova i majmuna proizvela je visoku i i zavisnu od doze izloženost metabolitu 1-7 u plazmi (nukleozidni metabolit intracelularnog aktivnog trifosfata jedinjenja 2); izloženosti metabolita 1-7 su nastavile da se povećavaju do najveće testirane doze, što odražava značajno formiranje aktivne supstance TP kod ovih vrsta.
Tabela 30. Nivoi jedinjenja 1 i 1-7 u plazmi nakon pojedinačne oralne doze jedinjenja 2
Primer 21. Efekat aktivnog trifosfata jedinjenja 1 i jedinjenja 2 na integritet mitohondrija
[0171] Relativna efikasnost inkorporacije aktivnog trifosfata (TP) jedinjenja 1 i jedinjenja 2, metabolita 1-6 (Šema 1), pomoću humane mitohondrijalne RNK polimeraze upoređena je sa relativnom efikasnošću aktivnog TP sofosbuvira i aktivnog TP INX-189. Jedinjenje 1 i jedinjenje 2 verovatno neće uticati na integritet mitohondrija pošto je njihov aktivni trifosfat slabo inkorporiran humanom mitohondrijalnom RNK polimerazom sa efikasnošću sličnom onoj trifosfata sofosbuvira; relativna efikasnost inkorporacije trifosfata INX-189 bila je do 55 puta veća. Rezultati su prikazani u tabeli 31. Inkorporacija ovih analoga pomoću humane mitohondrijalne RNK-zavisne RNK polimeraze (POLRMT) određena je prema Arnold et al. (Sensitivity of Mitochondrial Transcription and Resistance of RNA Polymerase II Dependent Nuclear Transcription to Antiviral Ribonucleotides. PLoS Pathog., 2012, 8, e1003030).
Tabela 31. Kinetički parametri za analoge nukleotida procenjene humanom mitohondrijalnom RNK polimerazom
Primer 22. Aktivnost jedinjenja 1 protiv replikona koji sadrže NS5B sekvencu
[0172] Panel replikona koji sadrži NS5B sekvence iz različitih HCV genotipova dobijenih iz 6 laboratorijskih referentnih sojeva (GT1a, 1b, 2a, 3a, 4a i 5a) (slika 19) i iz 8 uzoraka plazme pacijenata sa HCV (GT1a, 1b, 2a 2b, 3a-1, 3a-2, 4a i 4d) (Slika 20) korišćeni su za određivanje potencije jedinjenja 1 i sofosbuvira.
[0173] Jedinjenje 1 je bilo potentnije od sofosbuvira protiv kliničkih i laboratorijskih sojeva HCV. Jedinjenje 1 je pokazalo potentnu pan-genotipsku antivirusnu aktivnost in vitro protiv kliničkih izolata divljeg tipa sa EC95< 80 nM, što je 4 do 14 puta potentnije od sofosbuvira. Kao što je prikazano na Sl. 20, EC95vrednosti za jedinjenje 1 bile su 7-33 puta niže od sofosbuvira u odnosu na kliničke izolate svih testiranih HCV genotipova. EC50vrednosti za jedinjenje 1 bile su 6-11 puta niže od sofosbuvira u odnosu na laboratorijske sojeve HCV genotipova 1-5 (Slika 19).
Primer 23. Studija pojedinačne rastuće doze (SAD) jedinjenja 2 kod zdravih dobrovoljaca (Deo A) i pacijenata inficiranih sa GT1-HCV (Deo B)
[0174] Jedinjenje 2 je testirano u studiji sa jednom rastućom dozom (SAD) kako bi se izmerila njena bezbednost, podnošljivost i farmakokinetika kod zdravih subjekata (Deo A). Deo A je bio randomizovana, dvostruko slepa, placebom kontrolisana SAD studija. Zdravi subjekti u delu A su primili jednu dozu jedinjenja 2 ili placebo u stanju gladovanja. Subjekti su bili ograničeni na kliniku od dana -1 do dana 6.
[0175] Doziranje u svakoj kohorti je bilo raspoređeno tako da su 2 subjekta (1 aktivan: 1 placebo) procenjena 48 sati nakon doziranja pre nego što je ostatak kohorte doziran. Svaka kohorta je dobila jedinjenje 2 u rastućem redosledu. Doziranje uzastopnih kohorti je izvršeno na osnovu pregleda dostupnih podataka o bezbednosti (do 5. dana) i farmakokinetičkih podataka u plazmi (do 24 h) prethodne kohorte.
[0176] Eskalacija doze je nastavljena nakon zadovoljavajućeg pregleda ovih podataka. Kako su farmakokinetički i bezbednosni podaci proizašli iz prethodnih kohorti, doze procenjene u kohortama 3a-4a su prilagođene u koracima ne većim od 100 mg. Ukupna maksimalna doza procenjena u delu A nije prelazila 800 mg. Režim doziranja za deo A prikazan je u tabeli 32.
Tabela 32. Režim doziranja za primenu jedinjenja 2, deo A studije
[0177] Zdravi volonteri u delu A studije bili su muškarci i žene starosti između 18 i 65 godina. Aktivni i placebo primaoci su objedinjeni u svakoj kohorti Dela A da bi se sačuvala slepa studija.
[0178] Jedinjenje 2 je takođe testirano u studiji sa pojedinačnom rastućom dozom (SAD) kako bi se izmerila njena bezbednost, podnošljivost, farmakokinetička i antivirusna aktivnost kod pacijenata inficiranih GT1-HCV (Deo B). Subjekti u Delu B su primili jednu dozu jedinjenja 2 u stanju posta. Pacijenti su bili zatvoreni u klinici od dana -1 do dana 6.
[0179] Deo B je započet nakon pregleda podataka o bezbednosti (do 5. dana) i farmakokinetičkih podataka u plazmi (kroz 24 h) iz kohorte 3a u delu A. Dostupni podaci o bezbednosti (do 5. dana) i farmakokinetički podaci (do 24 h) su pregledani za prvu kohortu u delu B (kohorta 1b) pre upisa sledećih kohorti Dela B. Naredne kohorte dela B su dozirane samo nakon pregleda dostupnih bezbednosnih i farmakokinetičkih podataka iz odgovarajućih doza u Delu A, kao i raspoložive bezbednosti (do 5. dana) iz prethodnih kohorti Dela B.
[0180] Povećanje doze do 600 mg kod pacijenata inficiranih HCV-om je nastavljeno nakon zadovoljavajućeg pregleda ovih podataka. Režim doziranja za deo B prikazan je u tabeli 33.
Tabela 33. Režim doziranja jedinjenja 2 u delu B studije
[0181] Pacijenti inficirani sa HCV bili su subjekti koji nisu bili na terapiji, necirozni inficirani sa GT1 sa virusnim opterećenjem od ≥ 5 log10IU/mL.
[0182] Nisu zabeleženi nikakvi ozbiljni neželjeni događaji i nisu bili potrebni prevremeni prekidi ni u delu A ni u delu B. Svi neželjeni efekti su bili blagi do umereni po intenzitetu i obrasci vezani za dozu, uključujući laboratorijske parametre, vitalne znake i EKG nisu bili očigledni.
Primer 24. Rezultati studije pojedinačne rastuće doze (SAD) jedinjenja 2
[0183] Farmakokinetika jedinjenja 1 i nukleozidnog metabolita 1-7 mereni su nakon pojedinačne doze jedinjenja 2. C24minimalna koncentracije u plazmi (C24h) metabolita 1-7 kod pacijenata inficiranih HCV nakon doze od 600 mg jedinjenja 2 bile su 25.8 ng/mL, što je više nego dvostruko od doze koncentracije u plazmi nakon doze od 300 mg jedinjenja 2. Metabolit 1-7 (prikazan na šemi 1) može da se generiše samo defosforilacijom intracelularnog fosfatnog metabolita 1-4, metabolita 1-5, i metabolita 1-6, koja je aktivna vrsta. Prema tome, metabolit 1-7 može se smatrati surogatom aktivne vrste. Farmakokinetički podaci za sve kohorte prikazani su u tabeli 34 i tabeli 35. Vrednosti su prikazane kao srednja vrednost ± SD, osim tor Tmaxgde je prikazana medijana (opseg). Farmakokinetički parametri su bili uporedivi kod zdravih i pacijenata inficiranih sa HCV.
Tabela 34. Farmakokinetika jedinjenja 1 i metabolita 1-7 kod ljudi posle primene pojedinačne doze jedinjenja 2 kod zdravih dobrovoljaca
Tabela 35. Farmakokinetika jedinjenja 1 i metabolita 1-7 kod ljudi posle primene jedinjenja 2 kod pacijenata inficiranih GT1-HCV
[0184] Profili srednje koncentracije u plazmi-vremena jedinjenja 1 i metabolita 1-7 takođe su izračunati za sve grupe dela A i dela B studije. Sl. 21 je srednja vrednost koncentracije jedinjenja 1 u plazmi posle jedne doze jedinjenja 2 i Sl. 22 je srednja vrednost koncentracije metabolita u plazmi 1-7 posle jedne doze jedinjenja 2. Kao što je prikazano na Sl.21, jedinjenje 1 se brzo apsorbuje i brzo/ekstenzivno metaboliše u svim kohortama iz dela B. Kao što je prikazano na Sl.22, metabolit 1-7 je bio glavni metabolit i pokazivao je stalne koncentracije u plazmi. Izlaganje jedinjenja 1 plazmi bilo je povezano sa dozom, dok je izlaganje metabolita 1-7 bilo proporcionalno dozi.
[0185] Za subjekte inficirane sa HCV iz dela B, merenja kvantitativnog određivanja HCV RNK su vršena pre, tokom i posle primene jedinjenja 2. Određivanje HCV RNK u plazmi je izvršeno upotrebom validiranog komercijalnog testa. Osnovna linija je definisana kao srednja vrednost za dan -1 i dan 1 (pre doze). Jedna doza jedinjenja od 300 mg jedinjenja 2 (ekvivalentno 270 mg jedinjenja 1) rezultirala je značajnom antivirusnom aktivnošću kod GT1b-HCV inficiranih subjekata. Prosečno maksimalno smanjenje HCV RNK 24 sata posle doze i to posle pojedinačne doze od 300 mg bilo je 1.7 log10IU/mL i ovo se poredi sa smanjenjem od -2 log10 IU/mL posle 1 dana monoterapije od 400 mg sofosbuvira kod GT1a HCV inficiranih subjekata. Prosečno maksimalno smanjenje HCV RNK 24 sata posle doze i to posle pojedinačne doze od 100 mg bilo je 0.8 log10IU/mL. Prosečno maksimalno smanjenje HCV RNK bilo je 2.2 log10IU/mL posle jedne doze od 400 mg. Individualne farmakokinetičke/farmakodinamske analize za pojedinačne subjekte iz dela B studije su prikazane na Sl.23A-23F. Koncentracija metabolita 1-7 je prikazana na grafikonu u odnosu na koncentraciju redukcije HCV RNK, i kao što je prikazano na Sl. 23A-23F, redukcija HCV RNK u plazmi je u korelaciji sa izlaganjem metabolita 1-7 u plazmi. Virusni odgovor se održava koncentracijama metabolita 1-7 u plazmi koje su veće od EC95vrednost u odnosu na GT1b. Korelacija između koncentracije u plazmi i nivoa redukcije HCV RNK ukazuje na to da će izraženiji odgovor biti postignut sa većim dozama jedinjenja 2.
Primer 25. Predviđeni minimalni nivoi metabolita 1-7 u ravnotežnom stanju premašuju EC95vrednosti jedinjenja 1 protiv kliničkih izolata HCV GT 1-4
[0186] Kao što je prikazano na Sl.24, minimalni nivoi metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) nakon doziranja jedinjenja 2 kod ljudi (600 mg QD (550 mg ekvivalenta slobodne baze) i 450 mg QD (400 mg slobodne baze ekvivalenta)) je predviđeno i upoređeno sa EC95jedinjenja 1 in vitro u svim testiranim kliničkim izolatima kako bi se utvrdilo da li je koncentracija u plazmi u ravnotežnom stanju konstantno viša od EC95, što bi rezultiralo visokom efikasnošću protiv bilo kog ili svih testiranih kliničkih izolata in vivo. EC95za jedinjenje 1 je ista kao EC95jedinjenja 2. Da bi jedinjenje 2 bilo efikasno, minimalan nivo metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju treba da premaši EC95.
[0187] Kao što je prikazano na Sl. 24, EC95jedinjenja 2 u odnosu na sve testirane kliničke izolate kretala se od približno 18 do 24 nM.
[0188] Kao što je prikazano na Sl.24, jedinjenje 2 u dozi od 450 mg QD (400 mg ekvivalenta slobodne baze) kod ljudi obezbeđuje predviđenu minimalnu koncentraciju u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) od približno 40 ng/mL. Jedinjenje 2 u dozi od 600 mg QD (550 mg ekvivalenta slobodne baze) kod ljudi obezbeđuje predviđenu minimalnu koncentraciju u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) od približno 50 ng/mL.
[0189] Stoga je predviđena koncentracija surogatnog metabolita 1-7 u plazmi u ravnotežnom stanju skoro duplo veća od EC95protiv svih testiranih kliničkih izolata (čak i onih koji se teško leče GT3a), što ukazuje na bolje performanse.
[0190] Nasuprot tome, EC95standarda za negu nukleotida sofosbuvira kreće se od 50 do 265 nM u svim testiranim kliničkim izolatima HCV, sa EC95manjom od predviđene koncentracije u ravnotežnom stanju pri komercijalnoj dozi od 400 mg za samo dva izolata, GT2a i GT2b. EC95za komercijalnu dozu od 400 mg sofosbuvira veća je od predviđene koncentracije u ravnotežnom stanju za druge kliničke izolate, GT1a, GT1b, GT3a, GT4a i GT4d.
[0191] Minimalna koncentracija jedinjenja 2 od 450 mg u ravnotežnom stanju u plazmi (C24,ss) je predviđena upotrebom minimalne koncentracije u plazmi u ravnotežnom stanju od 300 mg (C24,ss). Srednja minimalna koncentracija u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss) na 300 mg iznosila je 26.4 ng/mL, i stoga je proračun bio 26.4*450/300=39.6 ng/mL.
[0192] Minimalna koncentracija u plazmi u ravnotežnom stanju od 600 mg (C24,ss) je predviđena upotrebom tri pristupa: 1) 600 mg dan 1 C24srednja vrednost je bila 25.8 ng/mL i pretpostavljeno je povećanje od 60% za postizanje ravnotežnog stanja. Prema tome, proračun je bio 25.8*1.6=41.3 ng/mL; 2) 400 mg na dan 1 C24srednja vrednost je bila 22.5 ng/mL i pretpostavljeno je povećanje od 60% za postizanje ravnotežnog stanja. Uzimajući u obzir PK proporcionalnu dozi, proračun je bio 22.5*1.6*600/400=54 ng/mL; i 3) najniža koncentracija u plazmi u stabilnom stanju od 300 mg (C24,ss) je 26.4 ng/mL i pretpostavljena je proporcionalna PK. Stoga je proračun bio 26.4*2=52.8 ng/mL. Minimalna koncentracija u plazmi u ravnotežnom stanju od 600 mg (C24,ss) je prosek 3 tačke podataka ((41.3+54+52.8)/3=49.3 ng/mL). Generalno postoji oko 60% povećanja C24u ravnotežnom stanju u poređenju sa C24posle jedne doze.
[0193] Podaci koji upoređuju efikasnost i farmakokinetičke parametre stabilnog stanja na Sl.
24 jasno pokazuje neočekivani terapeutski značaj jedinjenja 2 za lečenje hepatitisa C. U stvari, predviđeni nivo stabilnog stanja u plazmi nakon primene jedinjenja 2 predviđa se da će biti najmanje 2 puta veći od EC95za sve testirane genotipove, i 3- do 5 puta je potentniji protiv GT2. Ovi podaci ukazuju na to da jedinjenje 2 ima snažno pan-genotipsko antivirusno dejstvo kod ljudi. Kao što je prikazano na Sl.24, EC95sofosbuvira na GT1, GT3 i GT4 je veći od 100 ng/mL. Tako iznenađujuće, jedinjenje 2 je aktivan protiv HCV u doznom obliku koji daje nižu minimalnu koncentraciju u ravnotežnom stanju (40-50 ng/mL) od minimalne koncentracije u ravnotežnom stanju (približno 100 ng/mL) postignutu sličnim doznim oblikom sofosbuvira.
Primer 26. Opis formulacije i proizvodnja jedinjenja 2
[0194] Reprezentativna neograničavajuća formula serije za tablete jedinjenja 2 tablete (50 mg i 100 mg) su predstavljene u Tabeli 36. Tablete su proizvedene od uobičajene mešavine upotrebom postupka direktne kompresije kao što je prikazano na Sl.25. Aktivni farmaceutski sastojak (API) se prilagođava na osnovu analize u datom stanju, sa podešavanjem u procentu mikrokristalne celuloze. API i ekscipijensi (mikrokristalna celuloza, laktoza monohidrat i natrijum kroskarmeloza) su prosejani, stavljeni u V-blender (PK Blendmaster, 0.5L posuda) i mešani 5 minuta na 25 rpm. Magnezijum stearat je zatim prosejan, dodat i smeša je mešana dodatna 2 minuta. Uobičajena mešavina je podeljena za upotrebu u proizvodnji tableta od 50 mg i 100 mg. Podmazana mešavina je zatim komprimovana brzinom od 10 tableta/minuti upotrebom jedne prese za istraživanje tableta (Korsch XP1) i gravitacionog dodavača praha.50 tableta je proizvedeno upotrebom okruglog standardnog konkavnog alata od 6 mm i sila od 3.5 kN. Tablete od 100 mg su proizvedene upotrebom 8 mm okruglog standardnog konkavnog alata i sila od 3.9-4.2 kN.
Tabela 36. Formulacija tableta od 50 mg i 100 mg jedinjenja 2
[0195] Jedinjenje 2 je prilagođeno na osnovu analize u datom stanju, sa podešavanjem u procentu mikrokristalne celuloze. Jedinjenje 2 i ekscipijensi (mikrokristalna celuloza, laktoza monohidrat i natrijum kroskarmeloza) su prosejani, stavljeni u V-blender (PK Blendmaster, posuda od 0.5L) i mešani 5 minuta na 25 rpm. Magnezijum stearat je zatim prosejan, dodat i smeša je mešana dodatna 2 minuta. Uobičajena mešavina je podeljena za upotrebu u proizvodnji tableta od 50 mg i 100 mg. Podmazana mešavina je zatim komprimovana brzinom od 10 tableta/minuti upotrebom jedne prese za istraživanje tableta (Korsch XP1) i gravitacionog dodavača praha. Tablete od 50 mg su proizvedene upotrebom okruglog standardnog konkavnog alata od 6 mm i sila od 3.5 kN. Tablete od 100 mg su proizvedene upotrebom 8 mm okruglog standardnog konkavnog alata i sila od 3.9-4.2 kN. Specifikacije tableta od 50 mg i 100 mg su prikazane u tabeli 37.
Tabela 37. Specifikacije tableta od 50 mg i 100 mg jedinjenja 2
[0196] Tablete od 50 mg i 100 mg proizvedene kao što je gore opisano su podvrgnute šestomesečnim studijama stabilnosti pod tri uslova: 5°C (hlađenje), 25°C/60% relativne vlažnosti (sredina) i 40°C/75% relativne vlažnosti (ubrzano). I tablete od 50 mg i 100 mg su bile hemijski stabilne pod sva tri testirana uslova.
[0197] U uslovima hlađenja (5 °C), i tablete od 50 mg i 100 mg su ostale bele čvrste supstance koje nisu promenile izgled od T=0 do T=6 meseci. Tokom 6-mesečne studije, nisu prijavljene nečistoće koje su bile veće od 0.05% niti za tablete od 50 mg niti za tablete od 100 mg. Sadržaj vode nakon 6 meseci je takođe bio manji od 3.0 % tež./tež. za obe tablete. Slični rezultati su prijavljeni kada su tablete podvrgnute uslovima okoline (25 °C/60% RH); tokom 6 meseci nisu prijavljene nečistoće koje su bile veće od 0.05% za obe tablete i sadržaj vode nije prelazio 3.0% tež./tež. posle 6 meseci. Kada su tablete podvrgnute ubrzanim uslovima (40 °C/75% relativne vlažnosti), izgled tableta od 50 mg i 100 mg se nije promenio od bele, okrugle tablete. Jedna nečistoća je prijavljena nakon 3 meseca, ali je nečistoća bila samo 0.09%. Druga nečistoća je prijavljena nakon 6 meseci, ali ukupan procenat nečistoće je bio samo 0.21% za tablete od 50 mg i 100 mg. Sadržaj vode je bio 3.4 % tež./tež. za 6 meseci za tablete od 50 mg i 3.2 % tež./tež. za tablete od 100 mg.
[0198] U odvojenoj studiji, stabilnost tableta od 50 mg i 100 mg jedinjenja 2 u uslovima okoline (25 °C/60% relativne vlažnosti) merena je tokom 9 meseci. Izgled tableta od 50 mg i 100 mg nije se promenio u odnosu na belu okruglu tabletu tokom 9 meseci. Nečistoće u tableti od 50 mg bile su manje od 0.10% posle 9 meseci, a nečistoće u tableti od 100 mg bile su manje od 0.05%. Sadržaj vode u tableti od 50 mg i tableti od 100 mg posle 9 meseci bio je samo 2.7 % tež./tež. i 2.6 % tež./tež., respektivno.
[0199] Ova specifikacija je opisana u vezi sa primerima izvođenja pronalaska. Međutim, stručnjak iz date oblasti tehnike razume da se razne modifikacije i promene mogu napraviti bez odstupanja od obima pronalaska kako je naveden u patentnim zahtevima ispod. Shodno tome, specifikaciju treba posmatrati u ilustrativnom, a ne u restriktivnom smislu, a sve takve modifikacije treba da budu uključene u obim pronalaska.

Claims (19)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje najmanje 90% bez suprotnog R-enantiomera fosfora.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje najmanje 98% bez suprotnog R-enantiomera fosfora.
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje najmanje 99% bez suprotnog R-enantiomera fosfora.
  5. 5. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču.
  6. 6. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 5, u oralnom doznom obliku.
  7. 7. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, naznačena time što, oralni dozni oblik je čvrst dozni oblik.
  8. 8. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time što, čvrsti dozni oblik je tableta ili kapsula.
  9. 9. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, naznačena time što, oralni dozni oblik je tečni dozni oblik.
  10. 10. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, naznačena time što, tečni dozni oblik je suspenzija ili rastvor.
  11. 11. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 5-10 koja obezbeđuje minimalan nivo metabolita u plazmi u ravnotežnom stanju (C24,ss)
    između približno 20-60 ng/mL.
  12. 12. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 11, naznačena time što, površina ispod krive metabolita
    je između približno 1500 ng*h/mL i 3000 ng*h/mL.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, izborno u farmaceutski prihvatljivom nosaču, za upotrebu u lečenju infekcije hepatitisom C kod ljudi kojima je to potrebno.
  14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što se jedinjenje primenjuje oralno.
  15. 15. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time što se jedinjenje primenjuje intravenski.
  16. 16. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 13-15, naznačeno time što se primenjuje dozni oblik koji isporučuje najmanje 500 mg hemisulfatnog oblika soli.
  17. 17. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 13-15, naznačeno time što se primenjuje dozni oblik koji isporučuje najmanje 600 mg hemisulfatnog oblika soli.
  18. 18. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 5, u intravenskoj formulaciji.
  19. 19. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 5, u parenteralnoj formulaciji.
RS20250211A 2017-02-01 2018-01-31 Nukleotid hemi-sulfat so za lečenje virusa hepatitisa c RS66554B1 (sr)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762453437P 2017-02-01 2017-02-01
US201762469912P 2017-03-10 2017-03-10
US201762488366P 2017-04-21 2017-04-21
US201762575248P 2017-10-20 2017-10-20
PCT/US2018/016301 WO2018144640A1 (en) 2017-02-01 2018-01-31 Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
EP18747587.6A EP3577124B1 (en) 2017-02-01 2018-01-31 Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66554B1 true RS66554B1 (sr) 2025-03-31

Family

ID=62977563

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250211A RS66554B1 (sr) 2017-02-01 2018-01-31 Nukleotid hemi-sulfat so za lečenje virusa hepatitisa c

Country Status (30)

Country Link
US (6) US10519186B2 (sr)
EP (2) EP3577124B1 (sr)
JP (3) JP7066728B2 (sr)
KR (3) KR102335193B1 (sr)
CN (2) CN110248951B (sr)
AU (3) AU2018215203B2 (sr)
CA (2) CA3048033C (sr)
CO (1) CO2019009215A2 (sr)
DK (1) DK3577124T3 (sr)
ES (1) ES3009733T3 (sr)
FI (1) FI3577124T3 (sr)
GE (2) GEP20227457B (sr)
HR (1) HRP20250266T1 (sr)
HU (1) HUE070331T2 (sr)
IL (3) IL288737B (sr)
LT (1) LT3577124T (sr)
MX (2) MX394394B (sr)
MY (1) MY201105A (sr)
NZ (1) NZ780244A (sr)
PH (1) PH12019550113A1 (sr)
PL (1) PL3577124T3 (sr)
PT (1) PT3577124T (sr)
RS (1) RS66554B1 (sr)
SG (2) SG11201906163TA (sr)
SI (1) SI3577124T1 (sr)
SM (1) SMT202500048T1 (sr)
TW (2) TWI866273B (sr)
UA (1) UA127407C2 (sr)
WO (1) WO2018144640A1 (sr)
ZA (3) ZA201904336B (sr)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3182565A1 (en) 2015-03-06 2016-09-15 Atea Pharmaceuticals, Inc. .beta.-d-2'-deoxy-2'-.alpha.-fluoro-2'-.beta.-c-substituted-2-modified-n6-substituted purine nucleotides for hcv treatment
IL288737B (en) 2017-02-01 2022-09-01 Atea Pharmaceuticals Inc Hemisulfate nucleotide salt for treatment of hepatitis c virus
US20250109163A1 (en) * 2017-02-01 2025-04-03 Atea Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
EP3773753A4 (en) * 2018-04-10 2021-12-22 ATEA Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT OF PATIENTS INFECTED WITH THE HEPATITIS C VIRUS WITH CIRRHOSIS
CN119264211A (zh) 2018-08-27 2025-01-07 瑞泽恩制药公司 拉曼光谱在下游纯化中的应用
JP2022510014A (ja) * 2018-12-05 2022-01-25 アテア ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスの治療のための高活性な合剤
EP4103231A4 (en) 2020-02-14 2024-03-27 Geovax, Inc. VACCINES AND THEIR USES TO INDUCE AN IMMUNE RESPONSE AGAINST SARS-COV2
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
WO2021173713A1 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against covid-19
WO2021216722A1 (en) * 2020-04-23 2021-10-28 Atea Pharmaceuticals, Inc. Stereoselective process of manufacture of purine phosphoramidates
CN112782311B (zh) * 2020-12-30 2022-12-27 南京百泽医药科技有限公司 一种富马酸丙酚替诺福韦中l-丙氨酸异丙酯的hplc测定方法
AU2022213335A1 (en) * 2021-01-26 2023-07-27 Atea Pharmaceuticals, Inc. Advantageous morphic form of at-527 hemi-sulfate salt
CN112940053B (zh) * 2021-02-26 2022-08-12 江苏阿尔法药业股份有限公司 一种抗hcv药物的制备方法
IL308921A (en) 2021-06-17 2024-01-01 Atea Pharmaceuticals Inc Combination anti-HCV therapy is beneficial
TW202317145A (zh) * 2021-06-17 2023-05-01 美商亞堤製藥公司 有利之抗hcv組合療法
WO2025014360A1 (en) 2023-07-07 2025-01-16 Erasmus University Medical Center Rotterdam Guanosine nucleotide analogs for use in preventing and/or treating hepatitis e virus infection

Family Cites Families (221)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2297294C (en) 1989-05-15 2005-11-08 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Phosphonomethoxymethylpurine/pyrimidine derivatives
IT1249732B (it) 1991-11-26 1995-03-09 Angeletti P Ist Richerche Bio Oligonucleotidi antisenso.
US5977061A (en) 1995-04-21 1999-11-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic N6 - substituted nucleotide analagues and their use
BR9714349A (pt) 1996-10-16 2000-11-14 Icn Pharmaceuticals L-nucleosìdeos purina, seus análogos e utilizacões dos mesmos
ZA986614B (en) * 1997-07-25 1999-01-27 Gilead Sciences Nucleotide analog composition
WO1999043691A1 (en) 1998-02-25 1999-09-02 Emory University 2'-fluoronucleosides
IN191496B (sr) 1999-07-30 2003-12-06 Ranbaxy Lab Ltd
EP1964569A3 (en) 2000-04-13 2009-07-22 Pharmasset, Inc. 3'-or 2'-hydroxymethyl substituted nucleoside derivatives for treatment of viral infections
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
EP1736478B1 (en) 2000-05-26 2015-07-22 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses
WO2002032920A2 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
EP2180064A3 (en) 2000-10-18 2010-08-11 Pharmasset, Inc. Multiplex quantification of nucleic acids in diseased cells
US7105499B2 (en) 2001-01-22 2006-09-12 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
SK286630B6 (sk) 2001-01-22 2009-02-05 Merck & Co., Inc. Nukleozidové deriváty, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
US8481712B2 (en) 2001-01-22 2013-07-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
EP1478322A4 (en) 2001-06-22 2007-08-08 Pharmasset Ltd Beta 2'-OR 3'-HALONUCLEOSIDE
EP1435974A4 (en) 2001-09-28 2006-09-06 Idenix Cayman Ltd METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS C VIRUS USING 4 'MODIFIED NUCLEOSIDES
GB2383042A (en) * 2001-10-18 2003-06-18 Cipla Ltd Amorphous alendronate sodium
WO2003039523A2 (en) 2001-11-05 2003-05-15 Exiqon A/S OLIGONUCLEOTIDES MODIFIED WITH NOVEL α-L-RNA ANALOGUES
US7388002B2 (en) 2001-11-14 2008-06-17 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
AU2002365234B2 (en) 2001-12-14 2009-01-29 Pharmasset Inc N4-acylcytosine nucleosides for treatment of viral infections
CA2470938A1 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Beth Israel Deaconess Medical Center Treatment of ebv and khsv infection and associated abnormal cellular proliferation
WO2003062256A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
WO2003072757A2 (en) 2002-02-28 2003-09-04 Biota, Inc. Nucleotide mimics and their prodrugs
US20040063658A1 (en) 2002-05-06 2004-04-01 Roberts Christopher Don Nucleoside derivatives for treating hepatitis C virus infection
CN1678326A (zh) 2002-06-28 2005-10-05 埃迪尼克斯(开曼)有限公司 用于治疗黄病毒感染的2'－c－甲基－3'－o－l－缬氨酸酯核糖呋喃基胞苷
TW200500375A (en) 2002-06-28 2005-01-01 Idenix Cayman Ltd Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviviridae
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
PL374792A1 (en) 2002-06-28 2005-10-31 Idenix (Cayman) Limited 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviviridae infections
NZ537662A (en) 2002-06-28 2007-10-26 Idenix Cayman Ltd 2'-C-methyl-3'-O-L-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
WO2004009020A2 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Merck & Co., Inc. Pyrrolopyrimidine thionucleoside analogs as antivirals
WO2004013300A2 (en) 2002-08-01 2004-02-12 Pharmasset Inc. Compounds with the bicyclo[4.2.1]nonane system for the treatment of flaviviridae infections
US20040067877A1 (en) 2002-08-01 2004-04-08 Schinazi Raymond F. 2', 3'-Dideoxynucleoside analogues for the treatment or prevention of Flaviviridae infections
WO2004014312A2 (en) 2002-08-08 2004-02-19 Sirna Therapeutics, Inc. Small-mer compositions and methods of use
LT1576138T (lt) 2002-11-15 2017-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 2`-šakoti nukleozidai derinyje su interferonu ir flaviviridae mutacija
TWI294882B (en) 2002-12-09 2008-03-21 Hoffmann La Roche Anhydrous crystalline azido cytosine hemisulfate derivative
ES2625429T3 (es) 2003-01-23 2017-07-19 Esperion Therapeutics Inc. Compuestos de hidroxilo y composiciones para el control del colesterol y utilizaciones correspondientes
AR043006A1 (es) 2003-02-12 2005-07-13 Merck & Co Inc Proceso para preparar ribonucleosidos ramificados
AU2003209667A1 (en) * 2003-02-21 2004-09-09 Hetero Drugs Limited Bicalutamide polymorphs
EP1613261A4 (en) 2003-04-09 2011-01-26 Novo Nordisk As INTRA-CELLULAR FORMATION OF PEPTIDE CONJUGATES
EA014685B1 (ru) 2003-04-25 2010-12-30 Джилид Сайэнс, Инк. Фосфонатсодержащие антивирусные соединения (варианты) и фармацевтическая композиция на их основе
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
EP1656093A2 (en) 2003-05-14 2006-05-17 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
HUE029877T2 (en) 2003-05-30 2017-04-28 Gilead Pharmasset Llc Modified fluorinated nucleoside analogues
JP2006527719A (ja) 2003-06-19 2006-12-07 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー ４’−アジドヌクレオシド誘導体の調製方法
US20050075309A1 (en) 2003-07-25 2005-04-07 Richard Storer Purine nucleoside analogues for treating Flaviviridae including hepatitis C
DE10335061B4 (de) 2003-07-31 2005-11-17 Wacker-Chemie Gmbh Verfahren zur Herstellung von OH-geschützten [4-(2,6-damino-9H-purin-9-yl)-1,3-dioxolan-2-yl]methanol-Derivaten
NZ546055A (en) 2003-08-27 2010-05-28 Biota Scient Management Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
WO2005090370A1 (en) 2004-02-05 2005-09-29 The Regents Of The University Of California Pharmacologically active agents containing esterified phosphonates and methods for use thereof
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
CA2568379A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
US7560434B2 (en) 2004-06-22 2009-07-14 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. AZA nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
CA2571079A1 (en) 2004-06-24 2006-02-02 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
CA2572583A1 (en) 2004-06-29 2006-01-12 Avery Dennison Corporation Nonwoven-elastomeric laminate with improved bonding between elastomer and nonwoven web
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US8492539B2 (en) 2004-09-14 2013-07-23 Gilead Pharmasset Llc Preparation of 2′-fluoro-2′-alkyl-substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
AU2005302448B2 (en) 2004-10-29 2012-07-19 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic furopyrimidines and thienopyrimidines
WO2006063149A1 (en) 2004-12-09 2006-06-15 Regents Of The University Of Minnesota Nucleosides with antiviral and anticancer activity
MX2007006961A (es) 2004-12-10 2007-10-04 Univ Emory Analogos nucleosidos de ciclobutilo 2' y 3'-sustituidos para el tratamiento de infeccciones virales y proliferacion celular anormal.
WO2006063717A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Febit Biotech Gmbh Polymerase-independent analysis of the sequence of polynucleotides
CA2600886A1 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Biota Scientific Management Pty Ltd. Bicyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
WO2006102533A2 (en) 2005-03-23 2006-09-28 Neopharm, Inc. Pharmaceutically active lipid-based formulation of nucleoside-lipid conjugates
WO2006104945A2 (en) 2005-03-29 2006-10-05 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c therapies
US20090156545A1 (en) 2005-04-01 2009-06-18 Hostetler Karl Y Substituted Phosphate Esters of Nucleoside Phosphonates
WO2006121820A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
CA2618560A1 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection
WO2007022073A2 (en) 2005-08-12 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Novel 2'-c-methyl and 4'-c-methyl nucleoside derivatives
WO2007020193A2 (en) 2005-08-15 2007-02-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral phosphoramidates of 4 ' -substituted pronucleotides
EP1987050A2 (en) 2006-02-14 2008-11-05 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US8895531B2 (en) 2006-03-23 2014-11-25 Rfs Pharma Llc 2′-fluoronucleoside phosphonates as antiviral agents
WO2007130783A2 (en) 2006-05-03 2007-11-15 Chimerix, Inc. Metabolically stable alkoxyalkyl esters of antiviral or antiproliferative phosphonates, nucleoside phosphonates and nucleoside phosphates
US7842672B2 (en) 2006-07-07 2010-11-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate inhibitors of HCV
GB0614947D0 (en) 2006-07-27 2006-09-06 Isis Innovation Epitope reduction therapy
KR101057239B1 (ko) 2006-10-10 2011-08-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 뉴클레오사이드 리보푸라노실 피리미딘의 제조
PL216525B1 (pl) 2006-10-17 2014-04-30 Ct Badań Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano] nukleozydy oraz sposób wytwarzania 5'-O-[(N-acylo)amidofosforano]-,5'-O-[(N-acylo)amidotiofosforano]-, 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano]nukleozydów
GB0623493D0 (en) 2006-11-24 2007-01-03 Univ Cardiff Chemical compounds
AU2007338899A1 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Nucleoside cyclic phosphoramidates for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
JP2010515680A (ja) 2007-01-05 2010-05-13 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルス感染症の治療用としてのヌクレオシドアリールホスホロアミデート
MX2009007333A (es) 2007-01-12 2009-08-31 Biocryst Pharm Inc Analogos de nucleosidos antivirales.
CA2676822A1 (en) 2007-01-31 2008-08-07 Alios Biopharma, Inc. 2-5a analogs and their methods of use
WO2008100447A2 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside analogs for antiviral treatment
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
HRP20120914T1 (hr) 2007-05-10 2012-12-31 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Spojevi tetrahidrofuro[3,4-d]dioksolana, namijenjeni upotrebi u lijeäśenju virusnih infekcija i raka
US20100279969A1 (en) 2007-05-14 2010-11-04 Rfs Pharma, Llc Azido purine nucleosides for treatment of viral infections
DK2014771T3 (en) 2007-06-25 2015-03-09 Anadys Pharmaceuticals Inc Continuous process for the enzymatic hydrolysis
GB0712494D0 (en) 2007-06-27 2007-08-08 Isis Innovation Substrate reduction therapy
US20090060866A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Phosphadiazine hcv polymerase inhibitors i and ii
US20090318380A1 (en) 2007-11-20 2009-12-24 Pharmasset, Inc. 2',4'-substituted nucleosides as antiviral agents
US20090176732A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma Inc. Protected nucleotide analogs
WO2009086201A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma, Inc. 2-5a analogs and their use as anti-cancer, anti-viral and anti- paras iti c agents
TW200942243A (en) 2008-03-05 2009-10-16 Biocryst Pharm Inc Antiviral therapeutic agents
WO2009129120A2 (en) 2008-04-15 2009-10-22 Rfs Pharma, Llc Nucleoside derivatives for treatment of caliciviridae infections, including norovirus infections
HUE025528T2 (en) 2008-04-23 2016-05-30 Gilead Sciences Inc 1'-substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
AR072428A1 (es) 2008-07-01 2010-08-25 Medivir Ab Derivados de pirimidin nucleotidos inhibidores de polimerasas del virus de la hepatitis c (vhc), composiciones farmaceuticas que los contienen y metodo para prepararlos.
WO2010002877A2 (en) 2008-07-03 2010-01-07 Biota Scientific Management Bycyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
US8470834B2 (en) 2008-08-20 2013-06-25 Merck Sharp & Dohme Corp. AZO-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
TW201020245A (en) 2008-08-20 2010-06-01 Schering Corp Ethynyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
EP2326627A1 (en) 2008-08-20 2011-06-01 Schering Corporation Substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections
ES2439009T3 (es) 2008-08-20 2014-01-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Derivados de piridina y pirimidina sustituidos con etenilo y su uso en el tratamiento de infecciones virales
PA8852101A1 (es) 2008-12-08 2010-07-27 Medivir Ab Nucleótidos uracil ciclopropílicos
WO2010068708A2 (en) 2008-12-09 2010-06-17 Rfs Pharma, Llc 3'-azido purine nucleotide prodrugs for treatment of viral infections
AU2009329872B2 (en) 2008-12-23 2016-07-07 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
PA8855601A1 (es) 2008-12-23 2010-07-27 Forformidatos de nucleósidos
NZ593649A (en) * 2008-12-23 2013-11-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
US8759318B2 (en) 2009-01-09 2014-06-24 Inhibitex, Inc. Phosphoramidate derivatives of guanosine nucleoside compounds for treatment of viral infections
EP2393815A4 (en) 2009-02-06 2012-11-21 Rfs Pharma Llc PURIN NUCLEOSIDE MONOPHOSPHATE PRODRUGS FOR THE TREATMENT OF CANCER AND VIRUS INFECTIONS
MX2011008409A (es) 2009-02-10 2011-10-21 Gilead Sciences Inc Análogos de carba-nucléosido para tratamiento antiviral.
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
WO2010108135A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Alios Biopharma, Inc. Protected nucleotide analogs
JP2012521359A (ja) 2009-03-20 2012-09-13 アリオス バイオファーマ インク． 置換されたヌクレオシドアナログおよびヌクレオチドアナログ
JO3027B1 (ar) 2009-05-14 2016-09-05 Janssen Products Lp نيوكليوسيدات يوراسيل سبيرواوكسيتان
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI583692B (zh) 2009-05-20 2017-05-21 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
EP2264169A1 (en) 2009-06-15 2010-12-22 Qiagen GmbH Modified siNA
WO2011005595A2 (en) 2009-06-24 2011-01-13 Alios Biopharma, Inc. 2-5a analogs and their methods of use
WO2011005860A2 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5' phosphate mimics
US7973013B2 (en) 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8455451B2 (en) 2009-09-21 2013-06-04 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
ES2614932T3 (es) 2009-09-29 2017-06-02 Janssen Products, L.P. Derivados de fosforoamidatos de nucleósidos
KR101961601B1 (ko) 2009-11-16 2019-03-25 유니버시티 오브 조지아 리서치 파운데이션, 인코포레이티드 바이러스 감염 치료를 위한 ２＇―플루오로―６＇―메틸렌 카보사이클릭 뉴클레오사이드 및 방법
US8816074B2 (en) 2009-11-16 2014-08-26 University of Georgia Foundation, Inc. 2′-fluoro-6′-methylene carbocyclic nucleosides and methods of treating viral infections
MX2012006877A (es) 2009-12-18 2012-08-31 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores de virus de hepatitis c de arileno o heteroarileno 5, 5 - fusionado.
US8563530B2 (en) * 2010-03-31 2013-10-22 Gilead Pharmassel LLC Purine nucleoside phosphoramidate
SG184324A1 (en) 2010-03-31 2012-11-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
EP2552203B1 (en) 2010-04-01 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
AU2011282241B2 (en) 2010-07-19 2015-07-30 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of diasteromerically pure phosphoramidate prodrugs
US8859595B2 (en) 2010-08-26 2014-10-14 Rfs Pharma, Llc Potent and selective inhibitors of hepatitis C virus
NZ607996A (en) 2010-09-22 2014-07-25 Alios Biopharma Inc Substituted nucleotide analogs
EP2619215B1 (en) 2010-09-22 2018-09-05 Alios Biopharma, Inc. Azido nucleosides and nucleotide analogs
WO2012040126A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
AR083221A1 (es) 2010-09-29 2013-02-06 Univ Nac Quilmes Proceso para producir dialquilfosfotriesteres de nucleosidos mediante transesterificacion enzimatica y desproteccion de los mismos para producir nucleosidos monofosfato
WO2012048013A2 (en) 2010-10-06 2012-04-12 Inhibitex, Inc. Phosphorodiamidate derivatives of guanosine nucleoside compounds for treatment of viral injections
PT2638054E (pt) 2010-11-10 2015-03-02 Medivir Ab Fosforamidatos de nucleósidos de uracilo espirooxetano
CA2818853A1 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Gilead Pharmasset Llc 2'-spirocyclo-nucleosides for use in therapy of hcv or dengue virus
US20130273005A1 (en) * 2010-12-20 2013-10-17 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating hcv
CA2819041A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Alios Biopharma, Inc. Cyclic nucleotide analogs
EP2658857B1 (en) 2010-12-29 2016-11-02 Inhibitex, Inc. Substituted purine nucleosides, phosphoroamidate and phosphorodiamidate derivatives for treatment of viral infections
US9095599B2 (en) 2011-01-03 2015-08-04 Nanjing Molecular Research, Inc. O-(substituted benzyl) phosphoramidate compounds and therapeutic use
US9085599B2 (en) 2011-03-16 2015-07-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. 2′allene-substituted nucleoside derivatives
US9243025B2 (en) 2011-03-31 2016-01-26 Idenix Pharmaceuticals, Llc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2697242B1 (en) 2011-04-13 2018-10-03 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
BR112013026345A2 (pt) 2011-04-13 2019-04-24 Merck Sharp & Dohe Corp. composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, método para tratar um paciente infectado com hcv
US8877733B2 (en) 2011-04-13 2014-11-04 Gilead Sciences, Inc. 1′-substituted pyrimidine N-nucleoside analogs for antiviral treatment
CA2836579A1 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Rfs Pharma, Llc Purine monophosphate prodrugs for treatment of viral infections
US9408863B2 (en) 2011-07-13 2016-08-09 Merck Sharp & Dohme Corp. 5′-substituted nucleoside analogs and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2013019874A1 (en) 2011-08-01 2013-02-07 Mbc Pharma, Inc. Vitamin b6 derivatives of nucleotides, acyclonucleotides and acyclonucleoside phosphonates
CA2847892A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
AR088441A1 (es) 2011-09-12 2014-06-11 Idenix Pharmaceuticals Inc Compuestos de carboniloximetilfosforamidato sustituido y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales
WO2013044030A1 (en) 2011-09-23 2013-03-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. 2'-chloroacetylenyl substituted nucleoside derivatives
US8507460B2 (en) 2011-10-14 2013-08-13 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3′,5′-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
AU2012325801B2 (en) * 2011-10-19 2016-05-12 Mercator Medsystems, Inc. Localized modulation of tissues and cells to enhance therapeutic effects including renal denervation
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
WO2013090420A2 (en) 2011-12-12 2013-06-20 Catabasis Pharmaceuticals, Inc. Fatty acid antiviral conjugates and their uses
GB2497580A (en) 2011-12-16 2013-06-19 Intercede Ltd Data transmission using a plurality of barcodes displayed in a loop
CA2860234A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Alios Biopharma, Inc. Substituted phosphorothioate nucleotide analogs
US8673926B2 (en) 2012-02-14 2014-03-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Spiro[2.4]heptanes for treatment of flaviviridae infections
HUE047050T2 (hu) * 2012-02-27 2020-04-28 Bristol Myers Squibb Co N-(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorfenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[B]piridin-9 -yl-4-(2-oxo-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-B]piridin-1-il)piperidin-1-karboxilát só
WO2013142159A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
US8846896B2 (en) 2012-03-21 2014-09-30 Alios Biopharma, Inc. Methods of preparing substituted nucleotide analogs
WO2013142157A1 (en) 2012-03-22 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
WO2013151975A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Northeastern University Compositions and methods for the inhibition of methyltransferases
WO2013173759A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic nucleoside phosphoramidate derivatives
JP6165848B2 (ja) 2012-05-22 2017-07-19 イデニク ファーマシューティカルズ エルエルシー 肝疾患のためのｄ−アミノ酸化合物
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
CN104640444B (zh) 2012-06-16 2016-12-14 河南美泰宝生物制药有限公司 双肝脏靶向氨基磷酸酯和氨基膦酸酯前药
EP2870169A1 (en) 2012-07-03 2015-05-13 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing diastereomerically enriched phosphoramidate derivatives of nucleoside compounds for treatment of viral infections
WO2014047117A1 (en) 2012-09-18 2014-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing phosphoramidate derivatives of nucleoside compounds for treatment of viral infections
WO2014052638A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Esters and malonates of sate prodrugs
EP2909223B1 (en) 2012-10-19 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC Dinucleotide compounds for hcv infection
HK1214270A1 (zh) 2012-10-29 2016-07-22 共晶制药股份有限公司 用於治療病毒感染和癌症的嘧啶核苷及其單磷酸酯前藥
SI3150616T1 (sl) 2012-11-16 2017-08-31 University College Cardiff Consultants Limited Mešanica rp/sp gemcitabin-(fenil-(benziloksi-l-alaninil))-fosfata
GB201220843D0 (en) 2012-11-20 2013-01-02 Univ College Cork Nat Univ Ie Compound
US20140205566A1 (en) 2012-11-30 2014-07-24 Novartis Ag Cyclic nucleuoside derivatives and uses thereof
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
US9598457B2 (en) 2012-12-21 2017-03-21 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
BR112015014457A2 (pt) 2012-12-21 2017-11-21 Alios Biopharma Inc composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e composição farmacêutica e respectivos usos e processos para melhorar ou tratar infecção de hcv, para inibir a atividade da ns5b polimerase do vírus da hepatite c e a replicação de vírus da hepatite c
EP2950786B1 (en) 2013-01-31 2019-11-27 Gilead Pharmasset LLC Combination formulation of two antiviral compounds
WO2014124430A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
US9447132B2 (en) 2013-04-12 2016-09-20 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Highly active nucleoside derivative for the treatment of HCV
CN103435672A (zh) 2013-04-25 2013-12-11 刘沛 含有取代苄基的新型核苷磷酸酯前药的结构与合成
AU2014302711A1 (en) 2013-06-26 2015-12-10 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US20150011481A1 (en) 2013-07-02 2015-01-08 Abbvie Inc. Methods for Treating HCV
LT3043803T (lt) 2013-09-11 2022-08-10 Emory University Nukleotidų ir nukleozidų kompozicijos ir jų panaudojimas
WO2015054465A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US8889701B1 (en) 2013-10-11 2014-11-18 Alla Chem, Llc Substituted (S)-(2R,3R,5R)-3-hydroxy-(5-pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-2-ylmethyl aryl phosphoramidate
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
US20160271162A1 (en) * 2013-11-01 2016-09-22 Idenix Pharmacueticals, Llc D-alanine phosphoramide pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
CN105934438A (zh) 2013-11-27 2016-09-07 艾登尼克斯药业有限公司 用于治疗肝癌的核苷酸
WO2015084741A2 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Gilead Pharmasset Llc Methods of treating hepatitis c virus infection in subjects with cirrhosis
WO2015095305A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Production of cyclic phosphate, phosphoramidate, thiophosphate, and phosphonate nucleoside compounds
WO2015158913A1 (en) 2014-04-17 2015-10-22 Katholieke Universiteit Leuven Novel antiviral and antitumoral compounds
MA40031A (fr) 2014-06-24 2015-12-30 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
HUE051986T2 (hu) 2014-06-24 2021-04-28 Janssen Biopharma Inc Helyettesített nukleozidok, nukleotidek és analógjaik virális fertõzés kezelésére való alkalmazásra
CN107108676A (zh) 2014-09-15 2017-08-29 美迪维尔公司 用于制备非对映异构纯的磷酰胺酯前药的方法
CN105646629A (zh) 2014-11-25 2016-06-08 广州市恒诺康医药科技有限公司 L-核苷类化合物及其应用
MA41441A (fr) 2014-12-19 2017-12-12 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
MA41213A (fr) 2014-12-19 2017-10-24 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
CA3182565A1 (en) 2015-03-06 2016-09-15 Atea Pharmaceuticals, Inc. .beta.-d-2'-deoxy-2'-.alpha.-fluoro-2'-.beta.-c-substituted-2-modified-n6-substituted purine nucleotides for hcv treatment
WO2016145142A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutics compositions and uses related thereto
CN106188192B (zh) 2015-04-29 2019-09-10 刘沛 含d-氨基酸酯的核苷氨基磷酸/膦酸酯衍生物及其医药用途
WO2018009623A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2'-DEOXY-2'-SUBSTITUTED-4'-SUBSTITUTED-2-SUBSTITUTED-N6-SUBSTITUTED-6-AMINOPURINE NUCLEOTIDES FOR THE TREATMENT OF PARAMYXOVIRUS AND ORTHOMYXOVIRUS INFECTIONS
US10202412B2 (en) 2016-07-08 2019-02-12 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2′-deoxy-2′-substituted-4′-substituted-2-substituted-N6-substituted-6-aminopurinenucleotides for the treatment of paramyxovirus and orthomyxovirus infections
WO2018013937A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Atea Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
WO2018048937A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Atea Pharmaceuticals, Inc. 2'-substituted-n6-substituted purine nucleotides for rna virus treatment
IL288737B (en) * 2017-02-01 2022-09-01 Atea Pharmaceuticals Inc Hemisulfate nucleotide salt for treatment of hepatitis c virus
EP3773753A4 (en) 2018-04-10 2021-12-22 ATEA Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT OF PATIENTS INFECTED WITH THE HEPATITIS C VIRUS WITH CIRRHOSIS
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
WO2021216722A1 (en) 2020-04-23 2021-10-28 Atea Pharmaceuticals, Inc. Stereoselective process of manufacture of purine phosphoramidates
JP7851034B2 (ja) 2020-08-19 2026-04-24 アテア ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 選択されたプリンホスホルアミデートの立体選択的製造
EP4225282A4 (en) 2020-10-09 2024-10-16 ATEA Pharmaceuticals, Inc. DRUGS INTERFERING WITH NIRAN FOR MUTANT THERAPY AGAINST SARS-COV-2
AU2022213335A1 (en) 2021-01-26 2023-07-27 Atea Pharmaceuticals, Inc. Advantageous morphic form of at-527 hemi-sulfate salt

Also Published As

Publication number Publication date
SMT202500048T1 (it) 2025-03-12
US12006340B2 (en) 2024-06-11
US20180215776A1 (en) 2018-08-02
CO2019009215A2 (es) 2019-08-30
KR102592899B1 (ko) 2023-10-24
EP4450129A2 (en) 2024-10-23
US20210277045A1 (en) 2021-09-09
BR112019014738A8 (pt) 2022-10-11
ZA202104494B (en) 2023-01-25
HRP20250266T1 (hr) 2025-04-25
LT3577124T (lt) 2025-02-10
MX2022009352A (es) 2022-09-02
JP2024102245A (ja) 2024-07-30
KR20190113864A (ko) 2019-10-08
NZ780244A (en) 2026-02-27
CN110248951B (zh) 2022-10-28
DK3577124T3 (da) 2025-02-24
ZA201904336B (en) 2020-12-23
EP3577124B1 (en) 2024-12-11
EP3577124A1 (en) 2019-12-11
ZA202207262B (en) 2023-11-29
CN110248951A (zh) 2019-09-17
AU2018215203A1 (en) 2019-07-18
RU2019127284A3 (sr) 2021-08-04
SI3577124T1 (sl) 2025-03-31
GEP20227457B (en) 2023-01-10
GEAP202215124A (en) 2022-07-11
IL295609B2 (en) 2023-11-01
JP2022078216A (ja) 2022-05-24
GEP20237457B (en) 2023-01-10
IL295609A (en) 2022-10-01
CA3048033C (en) 2023-06-20
CA3197567A1 (en) 2018-08-09
IL295609B1 (en) 2023-07-01
IL288737A (en) 2022-02-01
PT3577124T (pt) 2025-02-14
KR20210151247A (ko) 2021-12-13
PH12019550113A1 (en) 2019-12-02
US10894804B2 (en) 2021-01-19
EP4450129A3 (en) 2025-03-19
ES3009733T3 (en) 2025-03-31
US20200087339A1 (en) 2020-03-19
WO2018144640A1 (en) 2018-08-09
PL3577124T3 (pl) 2025-04-22
JP2020505423A (ja) 2020-02-20
AU2022271421A1 (en) 2022-12-22
JP7066728B2 (ja) 2022-05-13
TWI808072B (zh) 2023-07-11
KR102693011B1 (ko) 2024-08-08
TW201832770A (zh) 2018-09-16
US20240018179A1 (en) 2024-01-18
SG11201906163TA (en) 2019-08-27
IL268077B (en) 2022-01-01
IL288737B (en) 2022-09-01
SG10202012214WA (en) 2021-01-28
AU2025201543A1 (en) 2025-03-20
MX2019009114A (es) 2019-10-09
KR102335193B1 (ko) 2021-12-03
MY201105A (en) 2024-02-06
US10519186B2 (en) 2019-12-31
RU2019127284A (ru) 2021-03-02
UA127407C2 (uk) 2023-08-16
BR112019014738A2 (pt) 2020-03-10
NZ754996A (en) 2022-03-25
US20200331954A1 (en) 2020-10-22
IL268077A (en) 2019-09-26
US20210087217A1 (en) 2021-03-25
US10906928B2 (en) 2021-02-02
CA3048033A1 (en) 2018-08-09
AU2018215203B2 (en) 2022-12-08
MX394394B (es) 2025-03-24
KR20230151050A (ko) 2023-10-31
TW202337472A (zh) 2023-10-01
HUE070331T2 (hu) 2025-05-28
EP3577124A4 (en) 2021-01-06
FI3577124T3 (fi) 2025-02-13
CN115477679A (zh) 2022-12-16
TWI866273B (zh) 2024-12-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12006340B2 (en) Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
US20250109163A1 (en) Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
RU2787616C2 (ru) Гемисульфатная соль нуклеотида для лечения вируса гепатита с
HK40014208B (en) Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
HK40014208A (en) Nucleotide hemi-sulfate salt for the treatment of hepatitis c virus
BR112019014738B1 (pt) Compostos, seus usos e composição os compreendendo
EA043542B1 (ru) Гемисульфатная соль нуклеотида для лечения вируса гепатита с