RS67412B1

RS67412B1 - Beta-d-2'-dezoksi-2'alfa-fluoro-2'-beta-c-supstituisani-2-modifikovani-n6-supstituisani purinski nukleotidi za lečenje hcv

Info

Publication number: RS67412B1
Application number: RS20251146A
Authority: RS
Inventors: Jean-Pierre Sommadossi; Adel Moussa
Original assignee: Atea Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2015-03-06
Filing date: 2016-03-07
Publication date: 2025-12-31
Also published as: EP3265102A4; CN107427530B; CO2017010162A2; US20200331955A1; GEP20217282B; US20200331956A1; SG11201706841PA; EP4667053A2; CN112209980B; US20210009628A1; LT3265102T; GEP20237502B; RU2017133011A3; HK1247829A1; EP3265102B1; JP2021008494A; HRP20251450T1; EA201791903A1; SI3265102T1; MY201444A

Description

[0001] Opis

[0003] OBLAST PRONALASKA

[0005] Predmetni pronalazak se odnosi na nukleotidna jedinjenja i kompozicije i njihovu upotrebu za lečenje virusa hepatitisa C ("HCV").

[0007] POZADINA PRONALASKA

[0009] Hepatitis C (HCV) je jednolančani RNK virus i član je roda Hepacivirus. Procenjuje se da je 75% svih slučajeva bolesti jetre uzrokovano HCV-om. HCV infekcija može dovesti do ciroze i kancera jetre, a ako se ostavi da napreduje, otkazivanja jetre što može zahtevati transplantaciju jetre. Približno 170-200 miliona ljudi širom sveta je inficirano, sa procenjenih 3-4 miliona infekcija u Sjedinjenim Državama.

[0010] RNK polimeraza je ključna komponenta u ciljanju jednolančanih RNK virusa. HCV nestrukturni protein NS5B, zavisan od RNK polimeraze, je ključni enzim odgovoran za pokretanje i katalizaciju sinteze virusne RNK. Kao rezultat toga, HCV NS5B je atraktivno ciljno mesto za trenutna otkrivanja lekova i razvoj anti-HCV agenasa. Postoje dve glavne podklase inhibitora NS5B: nukleozidni analozi, koji se anabolišu u svoje aktivne trifosfate -koji deluju kao alternativni supstrati za polimerazu - i nenukleozidni inhibitori (NNI), koji se vezuju za alosterne regione na proteinu. Nukleozidni ili nukleotidni inhibitori imitiraju prirodni polimerazni supstrat i deluju kao terminatori lanca. Oni inhibiraju pokretanje transkripcije RNK i elongaciju novonastalog RNK lanca.

[0011] Pored ciljanja RNK polimeraze, i drugi RNK virusni proteini mogu biti ciljani u kombinovanim terapijama. Na primer, HCV proteini koji su dodatna ciljna mesta za terapijske pristupe su NS3/4A (serinska proteaza) i NS5A (nestrukturni protein koji je esencijalna komponenta HCV replikaze i ima niz efekata na ćelijske puteve).

[0012] [0005] U decembru 2013. godine, prvi nukleozidni inhibitor NS5B polimeraze, sofosbuvir (Sovaldi<®>, Gilead Sciences) je odobren. Sovaldi<®>je prolek uridin fosforamidata koji hepatociti apsorbuju i podleže intracelularnoj aktivaciji da bi se dobio aktivni metabolit; 2'-deoksi-2'-αfluoro-β-C-metiluridin-5'-trifosfat; videti strukture ispod:

[0015]

[0017] Sovaldi<®>

[0020]

[0022] 2'-deoksi-2'-α-fluoro-β-C-metiluridin-5'-trifosfat

[0023] Sovaldi<®>je prvi lek koji je pokazao bezbednost i efikasnost u lečenju određenih vrsta HCV infekcije bez potrebe za istovremenom primenom interferona. Sovaldi<®>je treći lek sa oznakom revolucionarne terapije koji je dobio odobrenje FDA.

[0024] Američka Agencija za hranu i lekove (FDA) je 2014. godine odobrila Harvoni<®>(ledispasvir, inhibitor NS5A, i sofosbuvir) za lečenje hronične infekcije genotipa 1 virusa hepatitisa C. Harvoni<®>je prva kombinovana pilula odobrena za lečenje hronične HCV infekcije genotipa 1. Takođe je prvi odobreni režim koji ne zahteva primenu sa interferonom ili ribavirinom. Pored toga, simeprevir (Olysio<™>) je odobrila FDA) u kombinaciji sa sofosbuvirom (Sovaldi<®>) kao jednom dnevno, potpuno oralni tretman bez interferona i ribavirina za odrasle sa HCV infekcijom genotipa 1.

[0025] Američka FDA je takođe odobrila AbbVie-ov VIEKIRA Pak<™>2014. pakovanje sa više tableta koje sadrži dasabuvir (nenukleozidni inhibitor NS5B polimeraze), ombitasvir (inhibitor NS5A), paritaprevir (inhibitor NS3/4A) i ritonavir. VIEKIRA Pak<™>može se koristiti sa ili bez ribavirina za lečenje pacijenata inficiranih HCV genotipa 1, uključujući pacijente sa kompenzovanom cirozom. VIEKIRA Pak<™>ne zahteva koterapiju interferonom.

[0026] [0009] U julu 2015. godine, američka FDA je odobrila Technivie<™>i Daklinza<™>za lečenje HCV genotipa 4 i HCV genotipa 3 respektivno. Technivie<™>(Ombitasvir/paritaprevir/ritonavir) je odobren za upotrebu u kombinaciji sa ribavirinom za lečenje HCV genotipa 4 kod pacijenata bez ožiljaka i ciroze i predstavlja prvu opciju za pacijente inficirane HCV-4 kojima nije potrebna istovremena primena sa interferonom. Daklinza<™>je odobren za upotrebu sa Sovaldi<®>za lečenje infekcija genotipa 3 HCV-a. Daklinza<™>je prvi lek koji je pokazao bezbednost i efikasnost u lečenju HCV genotipa 3 bez potrebe za istovremenom primenom interferona ili ribavirina.

[0027] U oktobru 2015. godine, američka FDA je upozorila da tretmani za HCV, Viekira Pak i Technivie, mogu izazvati ozbiljno oštećenje jetre, prvenstveno kod pacijenata sa uznapredovalom bolešću jetre, i zahtevala je da se na etiketu dodaju dodatne informacije o bezbednosti.

[0028] Druge trenutno odobrene terapije za HCV uključuju interferon alfa-2b ili pegilovani interferon alfa-2b (Pegintron<®>), koji se može primenjivati sa ribavirinom (Rebetol<®>), NS3/4A telaprevir (Incivek<®>, Vertex i Johnson & Johnson), boceprevir (Victrelis<™>, Merck), simeprevir (Olysio<™>, Johnson & Johnson), paritaprevir (AbbVie), Ombitasvir (AbbVie), (NNI) Dasabuvir (ABT-333) i Merck-ov Zepatier<™>(kombinacija jedne tablete dva leka, grazoprevira i elbasvira).

[0029] Dodatni inhibitori NS5B polimeraze su trenutno u razvoju. Merck razvija prolek uridin nukleotida MK-3682 (ranije Idenix IDX21437). Lek je trenutno u fazi II kombinovanih ispitivanja.

[0030] [0013] Patenti SAD-a i WO prijave koji opisuju inhibitore nukleozid polimeraze za lečenje Flaviviridae, uključujući HCV, uključuju one podnete od strane Idenix Pharmaceuticals (6,812,219; 6,914,054; 7,105,493; 7,138,376; 7,148,206; 7,157,441; 7,163,929; 7,169,766; 7,192,936; 7,365,057; 7,384,924; 7,456,155; 7,547,704; 7,582,618; 7,608,597; 7,608,600; 7,625,875; 7,635,689; 7,662,798; 7,824,851; 7,902,202; 7,932,240; 7,951,789; 8,193,372; 8,299,038; 8,343,937; 8,362,068; 8,507,460; 8,637,475; 8,674,085; 8,680,071; 8,691,788, 8,742,101, 8,951,985; 9,109,001; 9,243,025; US2016/0002281; US2013/0064794; WO/2015/095305; WO/2015/081133; WO/2015/061683; WO/2013/177219; WO/2013/039920; WO/2014/137930; WO/2014/052638; WO/2012/154321); Merck (6,777,395; 7,105,499; 7,125,855; 7,202,224; 7,323,449; 7,339,054; 7,534,767; 7,632,821; 7,879,815; 8,071,568; 8,148,349; 8,470,834; 8,481,712; 8,541,434; 8,697,694; 8,715,638, 9,061,041; 9,156,872 i WO/2013/009737); Emory University (6,348,587; 6,911,424; 7,307,065; 7,495,006; 7,662,938; 7,772,208; 8,114,994; 8,168,583; 8,609,627; US 2014/0212382; i WO2014/1244430); Gilead Sciences/ Pharmasset Inc. (7,842,672; 7,973,013; 8,008,264; 8,012,941; 8,012,942; 8,318,682; 8,324,179; 8,415,308; 8,455,451; 8,563,530; 8,841,275; 8,853,171; 8,871,785; 8,877,733; 8,889,159; 8,906,880; 8,912,321; 8,957,045; 8,957,046; 9,045,520; 9,085,573; 9,090,642; i 9,139,604) i (6,908,924; 6,949,522; 7,094,770; 7,211,570; 7,429,572; 7,601,820; 7,638,502; 7,718,790; 7,772,208; RE42,015; 7,919,247; 7,964,580; 8,093,380; 8,114,997; 8,173,621; 8,334,270; 8,415,322; 8,481,713; 8,492,539; 8,551,973; 8,580,765; 8,618,076; 8,629,263; 8,633,309; 8,642,756; 8,716,262; 8,716,263; 8,735,345; 8,735,372; 8,735,569; 8,759,510 i 8,765,710); Hoffman La-Roche (6,660,721), Roche (6,784,166; 7,608,599, 7,608,601 i 8,071,567); Alios BioPharma Inc. (8,895,723; 8,877,731; 8,871,737, 8,846,896, 8,772,474; 8,980,865; 9,012,427; US 2015/0105341; US 2015/0011497; US 2010/0249068; US2012/0070411; WO 2015/054465; WO 2014/209979; WO 2014/100505; WO 2014/100498; WO 2013/142159; WO 2013/142157; WO 2013/096680; WO 2013/088155; WO 2010/108135), Enanta Pharmaceuticals (US 8,575,119; 8,846,638; 9,085,599; WO 2013/044030; WO 2012/125900), Biota (7,268,119; 7,285,658; 7,713,941; 8,119,607; 8,415,309; 8,501,699 i 8,802,840), Biocryst Pharmaceuticals (7,388,002; 7,429,571; 7,514,410; 7,560,434; 7,994,139; 8,133,870; 8,163,703; 8,242,085 i 8,440,813), Alla Chem, LLC (8,889,701 i WO 2015/053662), Inhibitex (8,759,318 i WO/2012/092484), Janssen Products (8,399,429; 8,431,588, 8,481,510, 8,552,021, 8,933,052; 9,006,29 i 9,012,428) the University of Georgia Foundation (6,348,587; 7,307,065; 7,662,938; 8,168,583; 8,673,926, 8,816,074; 8,921,384 i 8,946,244), RFS Pharma, LLC (8,895,531; 8,859,595; 8,815,829; 8,609,627; 7,560,550; US 2014/0066395; US 2014/0235566; US 2010/0279969; WO/2010/091386 i WO 2012/158811) University College Cardiff Consultants Limited (WO/2014/076490, WO 2010/081082; WO/2008/062206), Achillion Pharmaceuticals, Inc. (WO/2014/169278 i WO 2014/169280), Cocrystal Pharma, Inc. (US 9,173,893), Katholieke Universiteit Leuven (WO 2015/158913), Catabasis (WO 2013/090420) i the Regents of the University of Minnesota (WO 2006/004637).

[0031] CN 103 980 332 A odnosi se na 2'-fluoro-2'-(fluorometil)-2'-deoksinukleozidno jedinjenje i njegov lek sa potencijalom fosfata. US 2010/016251 A1 odnosi se na prolekove nukleozidnih fosforamidata. WO 2012/158811 A2 odnosi se na prolekove purin monofosfata za lečenje virusnih infekcija.

[0032] Ipak, i dalje postoji jaka medicinska potreba za razvojem anti-HCV terapija koje su bezbedne, efikasne i dobro podnošljive. Potreba je naglašena očekivanjem da će rezistencija na lekove biti otporna. Jači antivirusni lekovi direktnog dejstva mogli bi značajno skratiti trajanje lečenja i poboljšati pridržavanje terapije i stope SVR kod pacijenata inficiranih svim HCV genotipovima.

[0033] Stoga je cilj ovog pronalaska da obezbedi jedinjenja, farmaceutske kompozicije i jedinjenja za upotrebu u lečenju HCV infekcija.

[0034] KRATAK OPIS PRONALASKA

[0036] Otkriveno je da jedinjenja Formule I, Formule II, Formule III, Formule IV, Formule V, Formule VI, Formule VII, uključujući β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-N<6>-(mono- ili dimetil)purinske nukleotide, su veoma aktivni protiv HCV virusa kada se primene u efikasnoj količini domaćinu kome je to potrebno. Domaćin može biti čovek ili bilo koja životinja koja nosi virusnu infekciju.

[0037] Otkriveni nukleotidi uključuju one sa nanomolarnom aktivnošću protiv HCV in vitro i terapeutskim indeksima koji se kreću do 25000 ili više.

[0038] Iznenađujuće, nmatični N<6>-(metil)purinski nukleozidi otkrivenih jedinjenja nisu bili razvijeni niti posebno otkriveni kao kandidati za lekove pre ovog pronalaska. Na primer, 2010. godine je objavljeno da se 3'-azido-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurin ne deaminira značajno pomoću adenozin deaminaze tokom dužeg perioda (120 minuta) i zbog toga se smatralo da je neodgovarajuće jedinjenje za derivatizaciju kao lek (videti na primer, WO 2010/091386, strana 86 i odgovarajući US Patent 8,609,627).

[0039] Međutim, sada je otkriveno da se jedinjenja ovog pronalaska anabolišu u 5-monofosfat N<6>-supstituisani purin bez značajne N<6>-deaminacije, a zatim naknadno anabolišu na poziciji 6 da bi se generisala aktivna jedinjenja guanin trifosfata, na način koji pruža izuzetnu aktivnost i terapeutski indeks.

[0040] Posebno je otkriveno da su 5'-stabilizovani fosfatni prolek ili derivat β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleotida, kao i β-D-2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurinskog nukleotida i drugih β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida, kao što su opisani u nastavku, veoma aktivni protiv HCV. Ovo je iznenađujuće jer je aktivnost matičnog nukleozida β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurina u replikonskom testu (EC<50>= 15,7 mikromolarni) ukazuje da nije pogodan za upotrebu kao humani lek zbog nedovoljne aktivnosti (u kombinaciji sa referentnim WO 2010/091386, strana 86 i odgovarajući US Patent 8,609,627 što sugeriše da se N<6>-metil-2,6-diaminopurini ne deaminuju in vivo), međutim, stabilizovani racemski fosfatni prolek (fosforamidat) pokazuje EC<50>= 26 nanomolarni (nM), u replikonskom testu, što je povećanje aktivnosti od najmanje 600 puta. Odgovarajući (S)-fosforamidat pokazuje EC<50>= 4 nM, što je povećanje aktivnosti od najmanje 3 900 puta; videti strukturu ispod i jedinjenje 5-2 u Tabeli 7. Sa TC<50>većom od sto mikromola, jedinjenje stoga ima terapeutski indeks veći od 25 000. Poređenja radi, sofosbuvir ima EC<50>= 53 nM, TC<50>veću od sto mikromola i terapeutski indeks veći od 1920.

[0041]

[0044] Jedinjenje 5-2 (Tabela 7)

[0046] Slično tome, aktivnost matičnog nukleozida β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurina u replikonskom testu (EC<50>= 10,7 mikromola, „µM“) ukazuje da takođe nije pogodan za upotrebu kao lek za ljude zbog nedovoljne aktivnosti, međutim, stabilizovani racemski fosfatni prolek (fosforamidat) pokazuje EC<50>= 12 nM, u replikonskom testu, što je povećanje aktivnosti više od 890 puta. Odgovarajući (S)-fosforamidat (jedinjenje 25, Tabela 7) takođe pokazuje EC<50>= 4 nM, što je povećanje aktivnosti od najmanje 2600 puta; videti strukturu ispod. Pored toga, jedinjenje 25 takođe ima terapeutski indeks veći od 25000.

[0049]

[0052] U sledećem primeru, jedinjenje izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-N-ciklopropil-amino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat je pokazalo EC<50>= 7 nM i odgovarajući (S)-fosforamidat je pokazao EC<50>= 5 nM u replikonskom testu; videti jedinjenje 27 u Tabeli 7 i strukturu ispod.

[0053]

[0056] Kao što je gore navedeno, metabolizam β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleozida kao fosforamidata uključuje proizvodnju 5'-monofosfata i naknadni anabolizam N<6>-metil-2,6-diaminopurinske baze da bi se generisao β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin nukleozid kao 5'-monofosfat. Monofosfat se zatim dalje anaboliše u aktivnu vrstu; 5'-trifosfat. β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin trifosfat ima IC<50>= 0,15 µM protiv NS5B polimeraze HCV genotipa 1b.

[0057] Dakle, ovaj pronalazak je definisan ovde priloženim patentnim zahtevima. Jedan primer izvođenja opisan ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, je:

[0060]

[0062] pri čemu:

[0063] Y je NR<1>R<2>;

[0064] R<1>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>, CF<2>CH<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3C>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0065] R<2>je vodonik, C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sekbutil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), (C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -C(O)R<3C>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i -C(O)OC<5>H<11>), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril); i

[0066] pri čemu najmanje jedan od R<1>i R<2>je metil, CH<2>F, CHF<2>ili CF<3>;

[0067] R<3>je vodonik,

[0070]

[0072] , difosfat, trifosfat, opciono supstituisana karbonilom vezana aminokiselina ili -C(O)R<3C>; R<3A>može se izabrati od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila ili opciono supstituisanog heterociklila;

[0073] R<3B>može se izabrati od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline ili opciono supstituisanog N-vezanog estra aminokiseline;

[0074] R<3C>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril) ili -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0075] R<4>je monofosfat, difosfat, trifosfat ili stabilizovani fosfatni prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, fosforamidat, tiofosforamidat ili bilo koju drugu grupu koja se metaboliše u monofosfat, difosfat ili trifosfat in vivo u domaćinu, čoveku ili životinji; ili

[0076] R<3>i R<4>zajedno sa kiseonicima za koje su vezani mogu formirati 3',5'-ciklični prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, 3',5'-ciklični fosfatni prolek;

[0077] R<12>je CH<3>, CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, ili etinil.

[0079] Jedan primer izvođenja koji je ovde opisan, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita je:

[0082]

[0084] pri čemu:

[0085] Y je NR<1>R<2>;

[0086] R<1>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>, CF<2>CH<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3C>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0087] R<2>je vodonik, opciono supstituisani C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(aril), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>i

[0088] gde bar jedan od R<1>i R<2>je metil, CH<2>F, CHF<2>ili CF<3>;

[0089] R<3>je vodonik,

[0092]

[0094] difosfat, trifosfat, opciono supstituisana karbonilom vezana aminokiselina ili -C(O)R<3C>;

[0095] R<3A>može se izabrati od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila ili opciono supstituisanog heterociklila;

[0096] R<3B>može se izabrati od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline ili opciono supstituisanog N-vezanog estra aminokiseline;

[0097] R<3C>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril), -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), -S-alkil, -S-alkenil, -S-alkinil, -S-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -S-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -S-(C<0>-C<2>)(aril) ili -S-(C<0>-C<2>)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0098] R<3D>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril) ili -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0099] R<4>je monofosfat, difosfat, trifosfat ili stabilizovani fosfatni prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, fosforamidat, tiofosforamidat ili bilo koju drugu grupu koja se metaboliše u monofosfat, difosfat ili trifosfat in vivo kod domaćina, čoveka ili životinje; ili

[0102] 1

[0103] R<3>i R<4>zajedno sa kiseonicima za koje su vezani mogu formirati 3',5'-ciklični prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, 3',5'-ciklični fosfatni prolek;

[0104] R<5>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0105] R<6>je vodonik, opciono supstituisani C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(aril), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i - C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>ili

[0106] R<5>i R<6>zajedno sa azotom za koji su vezani mogu formirati heterociklični prsten;

[0107] R<12>je CH<3>, CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, ili etinil;

[0108] R<22>je Cl, Br, F, CN, N<3>, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril); -ONHC(=O)OR<23>, -NHOR<24>, -OR<25>, -SR<25>, -NH(CH<2>)<1-4>N(R<26>)<2>, -NHNHR<26>, -N=NR<27>, -NHC(O)NHNHR<27>, -NHC(S)NHNHR<27>, -C(O)NHNHR<27>, -NR<27>SO<2>R<28>, -SO<2>NR<27>R<29>, -C(O)NR<27>R<29>, -CO<2>R<29>, -SO<2>R<29>,

[0111]

[0113] -P(O)H(OR<29>), -P(O)(OR<29>)(OR<30>), -P(O)(OR<29>)(NR<29>R<30>) ili -NR<5>R<6>;

[0114] na primer, uključujući, ali ne ograničavajući se na sledeće primere izvođenja, hloro, bromo, fluoro, cijano, azido, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i n-pentil, 1,1-dimetilpropil, 2,2-dimetilpropil, 3-metilbutil, 1-metilbutil, 1-etilpropil, vinil, alil, 1-butinil, 2-butinil, acetilenil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, -(CH<2>)-ciklopropil, -(CH<2>)-ciklobutil, -(CH<2>)-ciklopentil, -(CH<2>)-cikloheksil, aziridin, oksiran, tiiran, azetidin, oksetan, tietan, pirolidin, tetrahidrofuran, tiolan, pirazolidin, piperidin, oksan, tian, -(CH<2>)-aziridin, -(CH<2>)-oksiran, -(CH<2>)-tiiran, -(CH<2>)-azetidin, -(CH<2>)-oksetan, -(CH<2>)-tietan, -(CH<2>)-pirolidin, -(CH<2>)-tetrahidrofuran, -(CH<2>)-tiolan, -(CH<2>)-pirazolidin, -(CH<2>)-piperidin, -(CH<2>)-oksan, -(CH<2>)-tian, fenil, piridil, -ONHC(=O)OCH<3>, -ONHC(=O)OCH<2>CH<3>, -NHOH, NHOCH<3>, OCH<3>, OC<2>H<5>, -OPh, OCH<2>Ph, -SCH<3>, -SC<2>H<5>, -SPh, SH<2>Ph, -NH(CH<2>)<2>NH<2>, -NH(CH<2>)<2>N(CH<3>)<2>, -NHNH<2>, -NNNHCH<3>, -N=NH, -N=NCH<3>, -N=NCH<2>CH<3>, -NHC(O)NHNH<2>, -NHC(S)NHNH<2>, -C(O)NHNH<2>, -NHSO<2>CH<3>, -NHSO<2>CH<2>CH<3>, -SO<2>NHCH<3>, -SO<2>N(CH<3>)<2>, -C(O)NH<2>, -C(O)NHCH<3>, -C(O)N(CH<3>)<2>, -CO<2>CH<3>, -CO<2>CH<2>CH<3>, -CO<2>Ph, -CO<2>CH<2>Ph, -SO<2>CH<3>, -SO<2>CH<2>CH<3>, -SO<2>Ph, -SO<2>CH<2>Ph,

[0117]

[0119] , -P(O)H(OH), - P(O)H(OCH<3>), -P(O)(OH)(OH), -P(O)(OH)(OCH<3>), -P(O)(OCN<3>)(OCH<3>), -P(O)(OH)(NH<2>), -P(O)(OH)(NHCH<3>), -P(O)(OH)N(CH<3>)<2>, -NHC(O)CH<3>, -NHC(O)CH<2>CH<3>, -NHC(O)CH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<3>i -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>; R<23>je C<1>-C<5>alkil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterocikl)-(C<0-2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0120] R<24>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl) -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0121] R<25>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) gde, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0122] R<26>je nezavisno izabran od vodonika, C<1>-C<6>alkila, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkila), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklusa), -(C<0>-C<2>alkil)(arila) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroarila) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0123] R<27>vodonik ili opciono supstituisani C<1>-C<6>alkil;

[0124] R<21>je C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0125] R<29>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan; ili

[0126] R<27>i R<29>zajedno sa azotom za koji su vezani mogu formirati heterociklični prsten;

[0127] R<30>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan; ili

[0128] R<29>i R<30>mogu se spojiti zajedno da bi formirali heterociklični prsten;

[0129] x je 1, 2 ili 3.

[0131] Metabolizam β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurin nukleotida uključuje i formiranje β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurin nukleozid trifosfata, kao i stvaranje odgovarajućeg guanin nukleozid trifosfata. Videti šemu 2 i 3.

[0132] 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-N<6>-supstituisani-2,6-diaminopurinski nukleotidi mogu biti dalje supstituisani na N<2>-poziciji alkilacijom ili acilirani, što može da modifikuje lipofilnost, farmakokinetiku i/ili usmeravanje nukleotida ka jetri. Otkriveno je da 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-N<6>-supstituisani-2,6-diaminopurinski nukleotidi modifikovani na 2-poziciji diaminopurina mogu biti dealkilovani ili deacilovani hepatičnim enzimima kako bi se dodatno povećala specifičnost nukleotidnih derivata i in vitro i in vivo, osim ako je N<2>-amino grupa potpuno zamenjena različitim ostatkom, kao što je ovde opisano, kao što je fluoro. Na primer, nukleozidni fosforamidat 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<2>-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinski nukleozidni fosforamidat je dealkilovan do 2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurin nukleozid fosforamidata kada se inkubira sa S9 frakcijom humane jetre in vitro, do 60 minuta, ovi uslovi oponašaju in vivo uslove. U jednom primeru izvođenja, N<2>modifikacije će povećati propustljivost ćelija i ciljanje hepatitisa.

[0133] Uprkos obimu antivirusne nukleozidne literature i patentnih prijava, 5'-stabilizovani fosfatni derivat 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleozida, 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurinskog nukleozida i drugog β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanog-2-modifikovanog-N<6>-supstituisanog derivata purinskih nukleozida kao što je ovde opisano nisu posebno otkriveni, niti su opisane njihove korisne aktivnosti.

[0134] Osim ako nije drugačije naznačeno, jedinjenja opisana ovde su data u β-D-konfiguraciji. Slično tome, kada su u obliku fosforamida ili tiofosforamidata, aminokiselinski deo može biti u L- ili D-konfiguraciji. U alternativnom primeru izvođenja, jedinjenja mogu biti data u β-L-konfiguraciji. Slično tome, bilo koja supstituentska grupa koja pokazuje hiralnost može biti data u racemskom, enantiomernom, dijastereomernom obliku ili bilo kojoj njihovoj smeši. Tamo gde se fosforamidat, tiofosforamidat ili drugi stabilizovani fosforni prolek u kome fosfor pokazuje hiralnost koristi kao R<4>stabilizovani fosfatni prolek, može se obezbediti kao R ili S hiralni derivat fosfora ili njihova smeša, uključujući racemsku smešu. Sve kombinacije ovih stereokonfiguracija su uključene u ovde opisani pronalazak.

[0137] 1

[0138] Shodno tome, ovaj pronalazak je definisan ovde priloženim patentnim zahtevima.

[0141]

[0144] U jednom specifičnom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, matični nukleozid, tj. nukleozid u kome R<4>je vodonik i 5'-pozicija stoga ima hidroksilnu grupu, nije značajno deaminiran adenozin deaminazom pod uslovima koji imitiraju in vivo okruženje (npr. temperatura okoline i vodeni fiziološki pH), tokom perioda od 7 minuta, 10 minuta, 30 minuta, 60 minuta ili 120 minuta. Osim ako nije drugačije naznačeno, vremenski period je 30 minuta. U ovom primeru izvođenja, termin „nije značajno deaminisan“ znači da matično jedinjenje nije pretvoreno u odgovarajući derivat guanina ili 6-okso derivat, u količini dovoljnoj da obezbedi terapeutski efekat in vivo.

[0145] Jedinjenja i kompozicije su obezbeđeni za upotrebu u lečenju domaćina inficiranog HCV virusom putem primene efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0146] Jedinjenja i kompozicije se takođe mogu koristiti za lečenje srodnih stanja kao što su stanja pozitivna na anti-HCV antitela i antigen, hronična upala jetre izazvana virusom, kancer jetre nastao usled uznapredovalog hepatitisa C, ciroza, hronični ili akutni hepatitis C, fulminantni hepatitis C, hronični perzistentni hepatitis C i umor izazvan anti-HCV infekcijom. Jedinjenje ili formulacije koje uključuju jedinjenja mogu se takođe koristiti profilaktički za sprečavanje ili ograničavanje progresije kliničke bolesti kod osoba koje su pozitivne na anti-HCV antitela ili antigen ili koje su bile izložene hepatitisu C.

[0147] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule Ia:

[0148]

[0150] pri čemu:

[0151] Y, R<3>i R<4>su kao što su gore definisani.

[0152] U jednom primeru izvođenja Formule Ia, R<3>je vodonik.

[0153] U jednom primeru izvođenja Formule Ia, kada je Y jednako NR<1>R<2>, R<1>je metil i R<2>je vodonik.

[0154] U jednom primeru izvođenja Formule Ia, kada je Y jednako NR<1>R<2>, oba R<1>i R<2>su metil.

[0155] U jednom primeru izvođenja Formule Ia, kada je Y jednako NR<1>R<2>, R<1>je metil i R<2>je ciklopropil.

[0156] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji se ne traži zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule Ib:

[0159]

[0161] pri čemu:

[0162] Y, R<3>i R<4>su kao što su gore definisani.

[0163] U jednom primeru izvođenja Formule Ib, R<3>je vodonik.

[0164] U jednom primeru izvođenja Formule Ib, kada je Y jednako NR<1>R<2>, R<1>je metil i R<2>je vodonik.

[0165] U jednom primeru izvođenja Formule Ib, kada je Y jednako NR<1>R<2>, oba R<1>i R<2>su metil.

[0166] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule II:

[0169] 1

[0170]

[0172] pri čemu:

[0173] Y, R<3>, R<4>, R<12>i R<22>su kao što su gore definisani.

[0174] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koje nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule IIa:

[0177]

[0179] pri čemu:

[0180] Y, R<3>, R<4>i R<22>su kao što su gore definisani.

[0181] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koje nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule IIb:

[0184]

[0186] pri čemu:

[0187] Y, R<3>, R<4>i R<22>su kao što su gore definisani.

[0188] U jednom primeru izvođenja prema ovom pronalasku, otkrivena su jedinjenja Formule III:

[0191] 1

[0192]

[0195] pri čemu R<22>je NH<2>i promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>, R<10>i R<12>su prema patentnom zahtevu 1.

[0196] U jednom primeru izvođenja prema ovom pronalasku, otkrivena su jedinjenja Formule IV:

[0199]

[0202] Pri čemu R<22>je NH<2>i promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>i R<10>su prema patentnom zahtevu 1.

[0203] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule V:

[0206]

[0208] pri čemu, promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>, R<10>i R<22>su ovde opisane.

[0209] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule VI:

[0212] 1

[0213]

[0215] pri čemu:

[0216] R<41>je halogen (posebno F ili Cl), OR<3>, N<3>, NH<2>ili CN; i

[0217] promenljive Y, R<3>, R<4>i R<12>su ovde opisane.

[0219] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule VII:

[0222]

[0225] Pri čemu, promenljive Y, R<3>, R<4>, R<12>i R<41>su ovde opisane.

[0226] Fosfor u bilo kojoj od gore navedenih formula može biti hiralan i stoga se može pojaviti kao R ili S enantiomer ili njihova smeša, uključujući racemsku smešu.

[0227] Jedinjenje 5 je razdvojeno na enantiomerna jedinjenja 5-1 i 5-2. Jedinjenje 5-2 je takođe pripremljeno hiralnom sintezom i označeno je jedinjenjem 24.

[0228] U jednom primeru izvođenja, jedinjenja i kompozicije su obezbeđeni za upotrebu u lečenju domaćina inficiranog hepatitisom C opisanim ovde. Jedinjenja pronalaska mogu se primenjivati u efikasnoj količini sama ili u kombinaciji sa drugim anti-HCV lekom, za lečenje inficiranog domaćina. U određenim primerima izvođenja, korisno je primenjivati kombinaciju lekova koji moduliraju isti ili drugačiji put ili inhibiraju drugačije ciljno mesto u virusu. Kao što je opisano, β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotidi su inhibitori NS5B polimeraze, može biti korisno primeniti jedinjenje na

[0231] 1

[0232] domaćina u kombinaciji sa inhibitorom proteaze, kao što je inhibitor proteaze NS3/4A (na primer, telaprevir (Incivek<®>), boceprevir (Victrelis<™>), simeprevir (Olysio<™>), ili paritaprevir, ili inhibitor NS5A (na primer, Ombitasvir). Jedinjenja pronalaska se takođe mogu primenjivati u kombinaciji sa strukturno različitim inhibitorom NS5B polimeraze, kao što je drugo jedinjenje opisano ovde ili u nastavku, uključujući Gilead-ov Sovaldi<®>. Jedinjenja pronalaska se takođe mogu primenjivati u kombinaciji sa interferonom alfa-2a, koji može biti pegilovan ili na drugi način modifikovan, i/ili ribavirinom.

[0233] β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotidi pronalaska se tipično primenjuju oralno, na primer u obliku pilula ili tableta, ali se mogu primenjivati i drugim putem koji lekar smatra odgovarajućim, uključujući intravenski, transdermalni, subkutani, topikalni, parenteralni ili drugi pogodan put.

[0235] KRATAK OPIS SLIKA

[0237]

[0238] Slika 1 je primer hromatograma polupreparativnog ciklusa koji ilustruje razdvajanje stereoizomera jedinjenja 5 korišćenjem kolone Phenominex Luna kao što je opisano u Primeru 9. Y osa je prikazana u mAU, a x osa je merena u minutima.

[0239] Slika 2 je grafikon krivih inhibicije replikacije HCV za jedinjenje 5-2 (Tabela 7) i sofosbuvir. Jedinjenje 5-2 ima EC<50>= 4 nM, TC<50>veću od sto mikromola i terapeutski indeks veći od 25 000. Sofosbuvir ima EC<50>= 53 nM, TC<50>veću od sto mikromola i terapeutski indeks veći od 1 920. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM.

[0240] Slika 3 je grafikon krivih inhibicije replikacije HCV za Jedinjenje 25 (Tabela 7) i Sofosbuvir. Kao što je opisano u Primeru 27, Jedinjenje 25 ima EC50<50>= 4 nM, TC<50>veću od 100 µM i terapeutski indeks veći od 25000. Sofosbuvir ima EC<50>= 53 nM, TC<50>veću od sto mikromola i terapeutski indeks veći od 1920. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM.

[0241] Slika 4 je intra-testno poređenje anti-HCV aktivnosti za jedinjenja 5-2, 25, 27 (Tabela 7) i sofosbuvir. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM. Videti, Primer 27.

[0242] Slika 5 je grafikon koji prikazuje stabilnost jedinjenja 5-2; N<2>-acetat jedinjenja 5-2, N<2>-butirat jedinjenja 5-2; N<2>-metil derivat jedinjenja 5-2; i N<2>-n-pentilkarbamat jedinjenja 5-2 u ljudskoj krvi. X osa je vreme inkubacije mereno u minutima, a y osa je merenje procenta preostalog matičnog jedinjenja.

[0245] 1

[0246] Slika 6 je grafikon koji prikazuje vremenski tok dealkilacije 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metilmetil-N<2>-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleozidnog fosforamidata u 2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurin nukleozid fosforamidat u prisustvu S9 frakcije ljudske jetre. X osa je merena u minutima, a y osa je merenje koncentracije preostalog jedinjenja u nM.

[0247] Slika 7 je grafikon koji prikazuje stabilnost jedinjenja 5-2; N<2>-acetat jedinjenja 5-2, N<2>-butirat jedinjenja 5-2; N<2>-metil derivat jedinjenja 5-2; i N<2>-n-pentilkarbamat jedinjenja 5-2 u prisustvu S9 frakcije ljudske jetre. X osa je merena u minutima, a y osa je merenje procenta preostalog jedinjenja.

[0248] Slika 8 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 25 generisane u ljudskim hepatocitima. X osa je vreme inkubacije u satima. Y osa je intracelularna koncentracija u pmol/10<6>ćelija. Videti primer 33.

[0249] Slika 9 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 27 generisane u ljudskim hepatocitima. X osa je vreme inkubacije u satima. Y osa je intracelularna koncentracija u pmol/10<6>ćelija. Videti primer 33.

[0250] Slika 10 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 5-2 generisane u ljudskim hepatocitima. X osa je vreme inkubacije u satima. Y osa je intracelularna koncentracija u pmol/10<6>ćelija. Videti primer 33.

[0251] Slika 11 je grafikon koji prikazuje puteve aktivacije za jedinjenja 25, 27 i 5-2. Kao što se može videti, jedinjenja 25, 27 i 5-2 se pretvaraju u svoje odgovarajuće monofosfatne analoge koji se potom metabolišu u uobičajeni MP analog; (3-D-2'-deoksi-2'-a-fluoro-2'-β-metil-guanin monofosfat. Monofosfat se zatim postepeno fosforiluje u aktivni trifosfat: β-D-2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-guanin trifosfat. Videti primer 33.

[0253] DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0255] Pronalazak je definisan ovde priloženim patentnim zahtevima. Jedinjenja ovog pronalaska ili poseduju antivirusnu aktivnost ili se metabolišu u jedinjenje koje pokazuje takvu aktivnost.

[0256] Jedinjenja i kompozicije se takođe mogu koristiti za lečenje stanja povezanih sa ili koja se javljaju kao rezultat izloženosti HCV virusu. Na primer, aktivno jedinjenje se može koristiti za lečenje stanja pozitivnih na HCV antitela i pozitivnih na HCV antigen, hronične upale jetre uzrokovane virusom, kancera jetre koji je rezultat uznapredovalog hepatitisa C, ciroze, akutnog hepatitisa C, fulminantnog hepatitisa C, hroničnog perzistentnog hepatitisa C i umora

[0259] 2

[0260] uzrokovanog anti-HCV dejstvom. U jednom primeru izvođenja, jedinjenja ili formulacije koje uključuju jedinjenja mogu se takođe koristiti profilaktički za sprečavanje ili usporavanje progresije kliničke bolesti kod osoba koje su pozitivne na HCV antitela ili HCV antigen ili koje su bile izložene hepatitisu C.

[0261] Posebno je otkriveno da su 5'-stabilizovani fosfatni prolek ili derivat β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diamino purinskog nukleotida, kao i β-D-2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diamino purinskog nukleotida i drugih β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida, kao što je opisano u nastavku, veoma aktivni protiv HCV. Ovo je iznenađujuće jer aktivnost matičnog nukleozida β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diamino purina u replikonskom testu (EC<50>= 15,7 mikromola) ukazuje da nije pogodan za upotrebu kao lek za ljude zbog nedovoljne aktivnosti, međutim, stabilizovani fosfatni prolek (fosforamidat) pokazuje EC<50>= 26 nanomola, u replikonskom testu, što je povećanje aktivnosti od najmanje 870 puta. Slično tome, aktivnost matičnog nukleozida β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurina u replikonskom testu (EC<50>= 10,7 mikromola, „µM“) ukazuje da takođe nije pogodan za upotrebu kao lek za ljude zbog nedovoljne aktivnosti, međutim, stabilizovani fosfatni prolek (fosforamidat) pokazuje EC<50>= 12 nanomola, („nM“), u replikonskom testu, što je povećanje aktivnosti više od 1300 puta.

[0262] Uprkos obimu antivirusne nukleozidne literature i patentnih prijava, 5'-stabilizovani fosfatni derivat 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleotida, 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diamino purinskog nukleotida i drugih β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida nisu posebno otkriveni.

[0263] Osim ako nije drugačije naznačeno, jedinjenja opisana ovde su data u β-D-konfiguraciji. U alternativnom primeru izvođenja, jedinjenja mogu biti data u β-L-konfiguraciji. Slično tome, bilo koja supstituentska grupa koja pokazuje hiralnost može biti data u racemskom, enantiomernom, dijastereomernom obliku ili bilo kojoj njihovoj smeši. Tamo gde se fosforamidat, tiofosforamidat ili drugi stabilizovani fosforni prolek u kome fosfor pokazuje hiralnost koristi kao R<4>stabilizovani fosfatni prolek, može se obezbediti kao R ili S hiralni derivat fosfora ili njihova smeša, uključujući racemsku smešu. Aminokiselina fosforamidata ili tiofosforamidata može biti u D- ili L-konfiguraciji ili njihovoj smeši, uključujući racemsku smešu. Sve kombinacije ovih stereo konfiguracija su uključene u ovde opisani pronalazak.

[0264] Predmetni pronalazak uključuje sledeće karakteristike:

[0265] (a) jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 i njegove farmaceutski prihvatljive soli; (b) jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa C prema patentnom zahtevu 11.

[0267] Sledeće karakteristike su ovde opisane, ali nisu eksplicitno navedene:

[0269] (c) upotreba Formula I-VII i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli i prolekova u proizvodnji leka za lečenje infekcije virusom hepatitisa C;

[0270] (d) postupak za proizvodnju leka namenjenog za terapeutsku upotrebu za lečenje infekcije virusom hepatitisa C, koji se karakteriše time što se u proizvodnji koriste formule I-VII kako su ovde opisane;

[0272] Predmetni pronalazak uključuje sledeće karakteristike:

[0274] (e) farmaceutsku kompoziciju prema patentnom zahtevu 8;

[0275] Sledeće karakteristike su ovde opisane, ali nisu eksplicitno navedene:

[0277] (f) Formule I-VII kao što su ovde opisane, u suštini bez stereoizomera opisanog jedinjenja ili u suštini izolovane od drugih hemijskih entiteta; i,

[0278] (g) postupci za pripremu terapeutskih proizvoda koji sadrže efikasnu količinu Formula I-VII, kao što su ovde opisane.

[0280] I. 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotidi pronalaska

[0282] Aktivna jedinjenja opisana ovde, ali za koja nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nisu u skladu sa patentnim zahtevom 1, su ona prikazana, na primer, u Formuli I, koja mogu biti obezbeđena u farmaceutski prihvatljivoj kompoziciji, njegovoj soli ili proleku:

[0283]

[0285] pri čemu:

[0286] Y je NR<1>R<2>;

[0287] R<1>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CH<2>F, CH<2>F, CF<3>, CH<2>CF<3>, CF<2>CH<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(Co-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3C>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0288] R<2>je vodonik, opciono supstituisani C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CH<2>F, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(aril), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>i

[0289] pri čemu, najmanje jedan od R<1>i R<2>je metil, CH<2>F, CH<2>ili CF<3>;

[0290] R<3>je vodonik,

[0293]

[0295] difosfat, trifosfat, opciono supstituisana karbonilom vezana aminokiselina ili -C(O)R<3C>;

[0296] R<3A>može se izabrati od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila ili opciono supstituisanog heterociklila;

[0297] R<3B>može se izabrati od O-, OH, opciono supstituisanog N-vezane aminokiseline ili opciono supstituisanog N-vezanog estra aminokiseline;

[0298] R<3C>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-

[0301] 2

[0302] C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril) ili -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0303] R<4>je monofosfat, difosfat, trifosfat ili stabilizovani fosfatni prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, fosforamidat, tiofosforamidat ili bilo koju drugu grupu koja se metaboliše u monofosfat, difosfat ili trifosfat in vivo kod domaćina, čoveka ili životinje; ili

[0304] R<3>i R<4>zajedno sa kiseonicima za koje su vezani mogu formirati 3',5'-ciklični prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, 3',5'-ciklični fosfatni prolek;

[0305] R<12>je CH<3>, CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, ili etinil.

[0307] Stabilizovani fosfatni prolek je bilo koji ostatak koji može da isporuči mono, di ili trifosfat.

[0308] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule Ia:

[0311]

[0313] pri čemu:

[0314] Y, R<3>i R<4>su kao što su gore definisani.

[0315] U sledećem primeru izvođenja koje je ovde opisano, ali za koji nije tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule Ib:

[0318]

[0320] pri čemu:

[0321] Y, R<3>i R<4>su kao što su gore definisani.

[0322] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, jedinjenje je prema Formuli Ic:

[0325]

[0327] pri čemu:

[0328] R<7>je vodonik, C<1-6>alkil; C<3-7>cikloalkil; heteroaril, heterociklik ili aril, što uključuje, ali nije ograničeno na, fenil ili naftil, gde su fenil ili naftil opciono supstituisani sa C<1-6>alkilom, C<2->

[0329] <6>alkenilom, C<2-6>alkinilom, C<1-6>alkoksi, F, Cl, Br, I, nitro, cijano, C<1-6>haloalkilom, -N(R<7>)<2>, C<1->

[0330] <6>acilamino, NHSO<2>C<1-6>alkilom, -SO<2>N(R<7>)<2>, COR<7">, i -SO<2>C<1-6>alkilom; (R<7'>je nezavisno vodonik ili C<1-6>alkil; R<7">je -OR<11>ili-N(R<7>)<2>);

[0331] R<8>je vodonik, C<1-6>alkil, ili R<9a>ili R<9b>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C; pri čemu je n od 2 do 4;

[0332] R<9a>i R<9b>su (i) nezavisno izabrani od vodonika, C<1-6>alkila, cikloalkila, -(CH<2>)<c>(NR<9'>)<2>, C<1->

[0333] <6>hidroksialkila, --CH<2>SH, -(CH<2>)<2>S(O)(Me, -(CH<2>)<3>NHC(=NH)NH<2>, (1H-indol-3-il)metil, (1H-imidazol-4-il)metila, -(CH<2>)<c>COR<9">, arila i aril(C<1-3>alkila)-, aril grupe mogu biti opciono supstituisane grupom izabranom od hidroksila, C<1-6>alkila, C<1-6>alkoksi, halogena, nitro i cijano; (ii) R<9a>i R<9b>oba su C<1-6>alkil; (iii) R<9a>i R<9b>zajedno su (CH<2>)<r>tako da se formira spiro prsten; (iv) R<9a>je vodonik i R<9b>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C (v) R<9b>je vodonik i R<9a>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C, pri čemu, c je 1 do 6, n je 2 do 4, r je 2 do 5 i pri čemu, R<9'>je nezavisno vodonik ili C<1-6>alkil i R<9">je -OR<11>ili -N(R<11'>)<2>); (vi) R<9a>je vodonik i R<9b>je vodonik, CH<3>, CH<2>CH<3>, CH(CH<3>)<2>, CH<2>CH(CH<3>)<2>, CH(CH<3>)CH<2>CH<3>, CH<2>Ph, CH<2>-indol-3-il, -CH<2>CH<2>SCH<3>, CH<2>CO<2>H, CH<2>C(O)NH<2>, CH<2>CH<2>COOH, CH<2>CH<2>C(O)NH<2>, CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>NHC(NH)NH<2>, CH<2>-imidazol-4-il, CH<2>OH, CH(OH)CH<3>, CH<2>((4'-OH)-Ph), CH<2>SH, ili niži cikloalkil; ili (vii) R<9a>je CH<3>, CH<2>CH<3>, CH(CH<3>)<2>, CH<2>CH(CH<3>)<2>, CH(CH<3>)CH<2>CH<3>, CH<2>Ph, CH<2>-indol-3-il, -CH<2>CH<2>SCH<3>, CH<2>CO<2>H, CH<2>C(O)NH<2>, CH<2>CH<2>COOH, CH<2>CH<2>C(O)NH<2>, CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>NHC(NH)NH<2>, CH<2>-imidazol-4-il, CH<2>OH, CH(OH)CH<3>, CH<2>((4'-OH)-Ph), CH<2>SH, ili niži cikloalkil i R<9b>je vodonik;

[0336] 2

[0337] R<10>je vodonik, C<1-6>alkil opciono supstituisan sa alkoksi, di(nižim alkil)-amino ili halogenom, C<1-6>haloalkilom, C<3-7>cikloalkilom, heterocikloalkilom, aminoacilom, arilom, kao što je fenil, heteroaril, kao što je piridinil, supstituisani aril ili supstituisani heteroaril;

[0338] R<11>je opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani cikloalkil; opciono supstituisani C<2->

[0339] <6>alkinil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil ili opciono supstituisani acil, koji uključuje, ali nije ograničen na C(O)(C<1-6>alkil); i

[0340] Y, R<3>i R<12>su kao što su ovde definisani.

[0342] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule II:

[0345]

[0347] pri čemu:

[0348] Y je NR<1>R<2>;

[0349] R<1>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>, CF<2>CH<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0350] R<2>je vodonik, opciono supstituisani C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(aril), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>i

[0351] pri čemu najmanje jedan od R<1>i R<2>je metil, CH<2>F, CHF<2>ili CF<3>;

[0352] R<3>je vodonik,

[0355] 2

[0356]

[0358] difosfat, trifosfat, opciono supstituisana karbonilno povezana aminokiselina ili -C(O)R<3C>; R<3A>može se izabrati od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila ili opciono supstituisanog heterociklila;

[0359] R<3B>može se izabrati od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline ili opciono supstituisanog N-vezanog estra aminokiseline;

[0360] R<3C>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril), -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), -S-alkil, -S-alkenil, -S-alkinil, -S-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -S-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -S-(C<0>-C<2>)(aril) ili -S-(C<0>-C<2>)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0361] R<3D>je alkil, alkenil, alkinil, -(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -(C<0>-C<2>)(heterociklo), -(C<0>-C<2>)(aril), -(C<0>-C<2>)(heteroaril), -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril) ili -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0362] R<4>je monofosfat, difosfat, trifosfat ili stabilizovani fosfatni prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, fosforamidat, tiofosforamidat ili bilo koju drugu grupu koja se metaboliše u monofosfat, difosfat ili trifosfat in vivo kod domaćina, čoveka ili životinje; ili

[0363] R<3>i R<4>zajedno sa kiseonicima za koje su vezani mogu formirati 3',5'-ciklični prolek, uključujući, ali ne ograničavajući se na, 3',5'-ciklični fosfatni prolek;

[0364] R<5>je C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, tercbutil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CHF<2>, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -OR<25>, -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>i -C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0365] R<6>je vodonik, opciono supstituisani C<1>-C<5>alkil (uključujući metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i pentil), C<1>-C<5>haloalkil (uključujući CHF<2>, CH<2>N, CF<3>, CH<2>CF<3>i CF<2>CF<3>), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklus), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(aril), opciono supstituisani -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril), -C(O)R<3c>(uključujući -C(O)CH<3>, -C(O)CH<2>CH<3>-C(O)CH(CH<3>)<2>, -

[0368] 2

[0369] C(O)OCH<3>, -C(O)OC<2>H<5>, -C(O)OC<3>H<7>, -C(O)OC<4>H<9>i - C(O)OC<5>H<11>), -C(S)R<3D>, ili -SO<2>R<28>ili

[0370] R<5>i R<6>zajedno sa azotom za koji su vezani mogu formirati heterociklični prsten;

[0371] R<12>je CH<3>, CH<2>F, CHF<2>, CF<3>, ili etinil;

[0372] R<22>je Cl, Br, F, CN, N<3>, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril), -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril); -ONHC(=O)OR<23>, -NHOR<24>, -OR<25>, -SR<25>, -NH(CH<2>)<1-4>N(R<26>)<2>, -NHNHR<26>, -N=NR<27>, -NHC(O)NHNHR<27>, -NHC(S)NHNHR<27>, -C(O)NHNHR<27>, -NR<27>SO<2>R<28>, -SO<2>NR<27>R<29>, -C(O)NR<27>R<29>, -CO<2>R<29>, -SO<2>R<29>,

[0375]

[0377] , -P(O)H(OR<21>), -P(O)(OR<29>)(OR<30>), -P(O)(OR<21>)(NR<29>R<30>) ili -NR<5>R<6>;

[0378] na primer, uključujući, ali ne ograničavajući se na sledeće primere izvođenja, hloro, bromo, fluoro, cijano, azido, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i n-pentil, 1,1-dimetilpropil, 2,2-dimetilpropil, 3-metilbutil, 1-metilbutil, 1-etilpropil, vinil, alil, 1-butinil, 2-butinil, acetilenil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, -(CH<2>)-ciklopropil, -(CH<2>)-ciklobutil, -(CH<2>)-ciklopentil, -(CH<2>)-cikloheksil, aziridin, oksiran, tiiran, azetidin, oksetan, tietan, pirolidin, tetrahidrofuran, tiolan, pirazolidin, piperidin, oksan, tian, -(CH<2>)-aziridin, -(CH<2>)-oksiran, -(CH<2>)-tiiran, -(CH<2>)-azetidin, -(CH<2>)-oksetan, -(CH<2>)-tietan, -(CH<2>)-pirolidin, -(CH<2>)-tetrahidrofuran, -(CH<2>)-tiolan, -(CH<2>)-pirazolidin, -(CH<2>)-piperidin, -(CH<2>)-oksan, -(CH<2>)-tian, fenil, piridil, -ONHC(=O)OCH<3>, -ONHC(=O)OCH<2>CH<3>, -NHOH, NHOCH<3>, -OCH<3>, OC<2>H<5>, -OPh, OCH<2>Ph, -SCH<3>, -SC<2>H<5>, -SPh, SCH<2>Ph, -NH(CH<2>)<2>NH<2>, -NH(CH<2>)<2>N(CH<3>)<2>, -NHNH<2>, -NNNHCH<3>, -N=NH, -N=NCH<3>, -N=NCH<2>CH<3>, -NHC(O)NHNH<2>, -NHC(S)NHNH<2>, -C(O)NHNH<2>, -NHSO<2>CH<3>, -NHSO<2>CH<2>CH<3>, -SO<2>NHCH<3>, -SO<2>N(CH<3>)<2>, -C(O)NH<2>, -C(O)NHCH<3>, -C(O)N(CH<3>)<2>, -CO<2>CH<3>, -

[0380]

[0382] -P(O)H(OH), - P(O)H(OCH<3>), -P(O)(OH)(OH), -P(O)(OH)(OCH<3>), -P(O)(OCN<3>)(OCH<3>), -P(O)(OH)(NH<2>), -P(O)(OH)(NHCH<3>), -P(O)(OH)N(CH<3>)<2>, -NHC(O)CH<3>, -NHC(O)CH<2>CH<3>, -NHC(O)CH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<3>i -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>;

[0385] 2

[0386] R<23>je C<1>-C<5>alkil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0>-C<2>alkil)(heterocikl)-(C<0-2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0387] R<24>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<1>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl) -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0388] R<25>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0389] R<26>je nezavisno izabran od vodonika, C<1>-C<6>alkila, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkila), -(C<0>-C<2>alkil)(heterociklusa), -(C<0>-C<2>alkil)(arila) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroarila) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan;

[0390] R<27>vodonik ili opciono supstituisani C<1>-C<6>alkil;

[0391] R<28>je C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterocikl), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) od kojih svaki može biti opciono supstituisan;

[0392] R<29>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan; ili

[0393] R<27>i R<29>zajedno sa azotom za koji su vezani mogu formirati heterociklični prsten;

[0394] R<30>je vodonik, C<1>-C<6>alkil, C<2>-C<6>alkenil, C<2>-C<6>alkinil, -(C<0>-C<2>alkil)(C<3>C<6>cikloalkil), -(C<0->C<2>alkil)(C<3>-C<6>heterociklus), -(C<0>-C<2>alkil)(aril) ili -(C<0>-C<2>alkil)(heteroaril) pri čemu, osim vodonika, svaki od njih može biti opciono supstituisan; ili

[0395] R<29>i R<30>mogu se spojiti zajedno da bi formirali heterociklični prsten;

[0396] x je 1, 2 ili 3.

[0398] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule IIa:

[0401]

[0405] 2

[0406] pri čemu:

[0407] Y, R<3>, R<4>i R<22>su kao što su gore definisani.

[0408] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule IIb:

[0411]

[0413] pri čemu:

[0414] Y, R<3>, R<4>i R<22>su kao što su gore definisani.

[0415] U tipičnom primeru izvođenja, jedinjenje je β-D izomer u odnosu na odgovarajući nukleozid (tj. u prirodnoj konfiguraciji). U alternativnoj konfiguraciji, jedinjenje je obezbeđeno kao β-L izomer. Jedinjenje je tipično najmanje 90% slobodno od suprotnog enantiomera, i može biti najmanje 98%, 99% ili čak 100% slobodno od suprotnog enantiomera. Osim ako nije drugačije opisano, jedinjenje je najmanje 90% slobodno od suprotnog enantiomera.

[0416] U sledećem primeru izvođenja prema ovom pronalasku, jedinjenje je prema Formuli III:

[0419]

[0421] pri čemu:

[0422] R<22>je NH<2>i promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>, R<10>i R<12>su prema patentnom zahtevu 1.

[0423] U jednom primeru izvođenja prema ovom pronalasku, otkrivena su jedinjenja Formule IV:

[0424]

[0427] pri čemu R<22>je NH<2>i promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>i R<10>su prema patentnom zahtevu 1.

[0428] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije tražena zaštita, otkrivena su jedinjenja Formule V:

[0431]

[0433] pri čemu, promenljive Y, R<3>, R<7>, R<8>, R<9a>, R<9b>, R<10>i R<22>su ovde opisane.

[0434] U alternativnom primeru izvođenja prema ovom pronalasku, jedinjenja i kompozicije su obezbeđene za upotrebu u lečenju domaćina inficiranog hepatitisom C.

[0435] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule VI:

[0438]

[0440] pri čemu:

[0441] R<41>je halogen (posebno F ili Cl), OR<3>(uključujući OH), N<3>, NH<2>ili CN; i

[0442] promenljive Y, R<3>, R<4>i R<12>su ovde opisane.

[0445] 1

[0446] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita osim u skladu sa patentnim zahtevom 1, otkrivena su jedinjenja Formule VII:

[0449]

[0452] Pri čemu, promenljive Y, R<3>, R<4>, R<12>i R<41>su ovde opisane.

[0454] Metabolizam β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-N<6>-supstituisanih-2,6-diaminopurinskih nukleotida

[0456] Metabolizam (3-D-2'-deoksi-2'-a-fluoro-2'-(3-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurin nukleozid fosforamidata uključuje proizvodnju 5'-monofosfata i naknadni anabolizam N<6>-metil-2,6-diaminopurinske baze da bi se generisao β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin nukleozid kao 5'-monofosfat. Monofosfat se zatim dalje anaboliše u aktivnu vrstu; 5'-trifosfat. β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin trifosfat ima IC<50>= 0,15 µM protiv HCV genotipa 1b NS5B polimeraze. Metabolički put za (3-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurin nukleozid fosforamidat je ilustrovan na šemi 1 ispod.

[0459] 2

[0460]

[0463] Šema 1

[0465] Metabolizam β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurin nukleotida uključuje i formiranje β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-N<6>-dimetil-2,6-diaminopurin nukleozid trifosfata, kao i stvaranje odgovarajućeg guanin nukleozid trifosfata. Ovi metabolički putevi su ilustrovani na šemama 2 i 3 ispod.

[0466]

[0468] Šema 3

[0469] 4

[0470] Stabilizovani fosfatni prolekovi

[0472] Stabilizovani fosfatni prolekovi su ostaci koji mogu da isporuče mono, di ili trifosfat in vivo. Na primer, McGuigan je otkrio fosforamidate u US Patentima br.: 8,933,053; 8,759,318; 8,658,616; 8,263,575; 8,119,779; 7,951,787 i 7,115,590. Alios je otkrio tiofosforamidate u US 8,895,723 i 8,871,737. Alios je takođe otkrio ciklične nukleotide u US Patentu br. 8,772,474. Idenix je otkrio ciklične fosforamidate i derivate fosforamidata/SATE u WO 2013/177219. Idenix je takođe otkrio supstituisana karboniloksimetilfosforamidatna jedinjenja u WO 2013/039920. Hostetler je otkrio prolekove lipidno-fosfatnih grupa, videti, na primer, US 7,517,858. Hostetler je takođe otkrio lipidne konjugate fosfonatnih prolekova, videti, na primer, US 8,889,658; 8,846,643; 8,710,030; 8,309,565; 8,008,308 i 7,790,703. Univerzitet Emory je otkrio nukleotidne sfingoidne i lipidne derivate u WO 2014/124430. RFS Pharma je otkrila prolekove purin nukleozid monofosfata u WO 2010/091386. Cocrystal Pharma Inc. je takođe otkrila prolekove purin nukleozid monofosfata u US Patentu br.: 9,173,893. HepDirect<™>tehnologija je otkrivena u članku "Design, Synthesis, and Characterization of a Series of Cytochrome P(450) 3A-Activated Prodrugs (HepDirect Prodrugs) Useful for Targeting Phosph(on)ate-Based Drugs to the Liver," (J. Am. Chem. Soc.126, 5154-5163 (2004). Dodatni fosfatni prolekovi uključuju, ali nisu ograničeni na fosfatne estre, 3',5'-ciklične fosfate uključujući CycloSAL, SATE derivate (S-acil-2-tioestre) i DTE (ditiodietil) prolekove. Za preglede literature koji otkrivaju neograničavajuće primere pogledati: A A. Ray and K. Hostetler, "Application of kinase bypass strategies to nucleoside antivirals," Antiviral Research (2011) 277-291; M. Sofia, "Nucleotide prodrugs for HCV therapy," Antiviral Chemistry and Chemotherapy 2011; 22-23-49; and S. Peyrottes et al., "SATE Pronucleotide Approaches: An Overview," Mini Reviews in Medicinal Chemistry 2004, 4, 395. U jednom primeru izvođenja, 5'-prolek opisan u bilo kojoj od ovih patentnih prijava ili literature može se koristiti u R<4>položaju predstavljenih jedinjenja.

[0473] Stabilizovani fosfatni prolekovi uključuju, ali nisu ograničeni na one opisane u U.S. Patentu br. 9,173,893 i U.S. Patentu br. 8,609,627, uključujući i za postupke pripreme. Na primer, 5'-prolekovi Formule I-V mogu biti predstavljeni grupom:

[0476]

[0477] 3',5'-prolekovi Formule I-V mogu biti predstavljeni grupom:

[0480]

[0482] pri čemu:

[0483] kada hiralnost postoji u fosfornom centru, ona može biti potpuno ili delimično R<p>ili S<p>ili bilo koja njihova smeša.

[0484] Z je O ili S;

[0485] R<33>je izabran od OR<34>,

[0488]

[0491] i dobijeni masni alkoholi (na primer, ali ne ograničavajući se na:

[0494]

[0497] pri čemu, R<34>, R<35>i R<36>su kao što su definisani u nastavku;

[0498] R<31>i R<32>, kada se primenjuju in vivo, sposobni su da obezbede nukleozid monofosfat ili tiomonofosfat, koji mogu, ali i ne moraju biti delimično ili potpuno otporni na 6-NH<2>deaminaciju u biološkom sistemu. Reprezentativni R<31>i R<32>su nezavisno izabrani od:

[0500] (a) OR<34>pri čemu, R<34>je izabran od H, Li, Na, K, fenila i piridinila; fenil i piridinil su supstituisani sa jednim do tri supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od (CH<2>)<0->

[0501] <6>CO<2>R<37>i (CH<2>)<0-6>CON(R<37>)<2>;

[0502] R<37>je nezavisno H, C<1-20>alkil, ugljenični lanac izveden iz masnog alkohola (kao što su oleil alkohol, oktakozanol, triakontanol, linoleil alkohol itd.) ili C<1-20>alkil supstituisan nižim alkilom, alkoksi, di(niži alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkil, cikloalkil alkil, cikloheteroalkil, aril, kao što je fenil, heteroaril, kao što je piridinil, supstituisani aril ili supstituisani heteroaril; pri čemu, supstituenti su C<1-5>alkil, ili C<1-5>alkil supstituisani nižim alkilom, alkoksi, di(niži alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkil, ili cikloalkil;

[0503] (b)

[0504]

[0507] (c) estar D-aminokiseline ili L-aminokiseline

[0510]

[0512] pri čemu, R<36>je ograničen na one bočne lance koji se javljaju u prirodnim L-aminokiselinama, i

[0513] R<35>je H, C<1-20>alkil, ugljenični lanac izveden iz masnog alkohola (kao što su oleil alkohol, oktakozanol, triakontanol, linoleil alkohol itd.) ili C<1-20>alkil supstituisan nižim alkilom, alkoksi, di(niži alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkil, cikloalkil alkil, cikloheteroalkil, aril, kao što je fenil, heteroaril, kao što je piridinil, supstituisani aril ili supstituisani heteroaril; pri čemu su supstituenti C<1-5>alkil, ili C<1-5>alkil supstituisani nižim alkilom, alkoksi, di(nižim alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkilom, ili cikloalkilom;

[0514] (d) R<31>i R<32>mogu se spojiti i formirati prsten

[0517]

[0519] pri čemu, R<38>je H, C<1-20>alkil, C<1-20>alkenil, ugljenični lanac izveden iz masnog alkohola (kao što je oleil alkohol, oktakozanol, triakontanol, linoleil alkohol itd.) ili C<1-20>alkil supstituisan nižim alkilom, alkoksi, di(nižim alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkilom, cikloalkil alkilom, cikloheteroalkilom, arilom, kao što je fenil, heteroarilom, kao što je piridinil, supstituisani aril ili supstituisani heteroaril; pri čemu, supstituenti su C<1-5>alkil, ili C<1-5>alkil supstituisani nižim alkilom, alkoksi, di(nižim alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkilom, ili cikloalkilom;

[0520] (e) R<31>i R<32>mogu se spojiti i formirati prsten izabran od

[0521]

[0523] pri čemu, R<39>je O ili NH i

[0524] R<40>je izabran od H, C<1-20>alkila, C<1-20>alkenila, ugljeničnog lanca izvedenog iz masne kiseline (kao što je oleinska kiselina, linolna kiselina i slično), i C<1-20>alkila supstituisanog nižim alkilom, alkoksi, di(nižim alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkilom, cikloalkil alkilom, cikloheteroalkilom, arilom, kao što je fenil, heteroarilom, kao što je piridinil, supstituisanim arilom ili supstituisanim heteroarilom; pri čemu, supstituenti su C<1-5>alkil, ili C<1-5>alkil supstituisan nižim alkilom, alkoksi, di(nižim alkil)-amino, fluoro, C<3-10>cikloalkilom, ili cikloalkilom.

[0525] Jedinjenja se mogu pripremiti, na primer, pripremom 5'-OH analoga, a zatim njihovim pretvaranjem u monofosfatne analoge.

[0527] Primeri izvođenja

[0529] U posebnim ovde opisanim primerima izvođenja, ali za koje eksplicitno nije tražena zaštita, osim ako nisu u skladu sa patentnim zahtevom 1:

[0531] (i) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0532] (ii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0533] (iii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (iv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat: (v) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (vi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat;

[0534] (vii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat; (viii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0535] (ix) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0536] (x) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (xi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat: (xii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xiii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat;

[0537] (xiv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat;

[0538] (xv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0539] (xvi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0540] (xvii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat;

[0541] (xviii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat:

[0542] (xix) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xx) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je metil, a R<4>je difosfat; (xxi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat; (xxii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0543] (xxiii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0544] (xxiv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (xxv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat: (xxvi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xxvii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat; (xxviii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je propil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat;

[0545] (xxix) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0546] (xxx) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0547] (xxxi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (kkkii) u formuli Ia, I je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat: (xxxiii) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xxxiv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat;

[0548] (xxxv) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je etil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat;

[0549] (xxxvi) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0550] (xxxvii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0551] (xxxviii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (xxxix) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat: (xl) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xli) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat;

[0552] (xlii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je metil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat;

[0553] (xliii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0554] (xliv) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0555] (xlv) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (xlvi) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat:

[0556] (xlvii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (xlviii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je difosfat; (xlix) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je vodonik, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat; (l) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, R<4>je stabilizovani fosfatni prolek;

[0557] (li) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je stabilizovani tiofosfatni prolek;

[0558] (lii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je fosforamidat; (liii) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je tiofosforamidat:

[0559] (liv) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je monofosfat; (lv) u Formuli Ib, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je metil, a R<4>je difosfat;

[0560] (lvi) u Formuli Ia, Y je NR<1>R<2>, R<1>je metil, R<2>je ciklopropil, R<3>je vodonik, a R<4>je trifosfat.

[0563] 4

[0564] U alternativnim primerima izvođenja bilo kog od gore opisanih ovde, ali za koje eksplicitno nije tražena zaštita, osim ako nisu u skladu sa patentnim zahtevom 1, jedinjenje ima R<22>supstituent. U nekim od ovih specifičnih primera izvođenja opisanih ovde, ali za koja nije eksplicitno tražena zaštita, osim prema patentnom zahtevu 1, R<22>je F, amid ili karbamat. U drugim specifičnim aspektima ovde gore opisanih primera izvođenja, ali za koja nije tražena zaštita, R<22>je hloro, bromo, cijano, azido, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izo-butil, sek-butil, terc-butil i n-pentil, 1,1-dimetilpropil, 2,2-dimetilpropil, 3-metilbutil, 1-metilbutil, 1-etilpropil, vinil, alil, 1-butinil, 2-butinil, acetilenil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, -(CH<2>)-ciklopropil, -(CH<2>)-ciklobutil, - (CH<2>)-ciklopentil, -(CH<2>)-cikloheksil, aziridin, oksiran, tiiran, azetidin, oksetan, tietan, pirolidin, tetrahidrofuran, tiolan, pirazolidin, piperidin, oksan, tian, -(CH<2>)-aziridin, - (CH<2>)-oksiran, -(CH<2>)-tiiran, -(CH<2>)-azetidin, -(CH<2>)-oksetan, -(CH<2>)-tietan, -(CH<2>)-pirolidin, -(CH<2>)- tetrahidrofuran, -(CH<2>)-tiolan, -(CH<2>)-pirazolidin, -(CH<2>)-piperidin, - (CH<2>)-oksan, -(CH<2>)-tian, fenil, piridil, -ONHC(=O)OCH<3>, -ONHC(=O)OCH<2>CH<3>, - NHOH, NHOCH<3>, -OCH<3>, OC<2>H<5>, -OPh, OCH<2>Ph, -SCH<3>, -SC<2>H<5>, -SPh, SCH<2>Ph, - NH(CH<2>)<2>NH<2>, -NH(CH<2>)<2>N(CH<3>)<2>, -NHNH<2>, -NNNHCH<3>, -N=NH, -N=NCH<3>, -N=NCH<2>CH<3>, -NHC(O)NHNH<2>, -NHC(S)NHNH<2>, -C(O)NHNH<2>, -NHSO<2>CH<3>, -NHSO<2>CH<2>CH<3>, -SO<2>NHCH<3>, -SO<2>N(CH<3>)<2>, -C(O)NH<2>, -C(O)NHCH<3>, -C(O)N(CH<3>)<2>, -CO<2>CH<3>, -

[0566]

[0568] P(O)H(OH), -P(O)H(OCH<3>), -P(O)(OH)(OH), -P(O)(OH)(OCH<3>), -P(O)(OCN<3>)(OCH<3>), -P(O)(OH)(NH<2>), -P(O)(OH)(NHCH<3>), -P(O)(OH)N(CH<3>)<2>, -NHC(O)CH<3>, -NHC(O)CH<2>CH<3>, -NHC(O)CH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH(CH<3>)<2>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<3>, -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<3>i -NHC(O)OCH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>;

[0569] U alternativnim primerima izvođenja jedinjenja (i) do (lvi) opisanih ovde, ali za koja nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nisu u skladu sa patentnim zahtevom 1, u Formuli I-VII se koristi L-nukleozid.

[0570] U alternativnom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije tražena zaštita, R<12>promenljiva Formule I je CH<2>F.

[0571] U alternativnom primeru izvođenja opisanom ovde, ali nije zaštićeno, R<12>promenljiva Formule I je CHF<2>.

[0572] U alternativnom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije tražena zaštita, R<12>promenljiva Formule I je CF<3>.

[0573] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, dato je jedinjenje Formule Ia. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule Ia uključuju:

[0576]

[0577]

[0580] 

[0581]

[0582]

[0585] U jednom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji se ne traži zaštita, obezbeđen je tiofosforamidat Formule Ia. Neograničavajući primeri tiofosforamidata Formule Ia uključuju, ali nisu ograničeni na:

[0588]

[0592] 4

[0593]

[0596] 

[0597]

[0600] 

[0601]

[0604] U jednom primeru izvođenja koje je ovde opisano, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, obezbeđen je stabilizovani fosfatni prolek Formule Ia. Neograničavajući primeri stabilizovanih fosfatnih prolekova Formule Ia ilustrovani su u nastavku:

[0607]

[0609] i

[0612] 4

[0613]

[0615] U sledećem primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, dato je jedinjenje Formule Ia. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule Ia uključuju:

[0617]

[0620] 4

[0621]

[0622]

[0625] 

[0626]

[0629] U jednom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji se ne traži zaštita, obezbeđen je tiofosforamidat Formule Ia. Neograničavajući primeri tiofosforamidata Formule Ia uključuju, ali nisu ograničeni na:

[0632]

[0636] 2

[0637]

[0638]

[0641] 

[0642]

[0645] U jednom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, obezbeđen je stabilizovani fosfatni prolek Formule Ia. Neograničavajući primeri stabilizovanih fosfatnih prolekova Formule Ia ilustrovani su u nastavku:

[0648]

[0649]

[0651] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji eksplicitno nije tražena zaštita, obezbeđeno je jedinjenje Formule II. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule II uključuju:

[0653]

[0654]

[0655]

[0656]

[0657]

[0658]

[0661] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, osim ako nije u skladu sa patentnim zahtevom 1, obezbeđeno je jedinjenje Formule I. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule I uključuju:

[0664]

[0668] 1

[0669]

[0672] 

[0673]

[0675] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, obezbeđeno je jedinjenje Formule II. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule II uključuju:

[0677]

[0678]

[0680] U jednom primeru izvođenja,

[0681] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, obezbeđeno je jedinjenje Formule II. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule II uključuju:

[0683] 4

[0684]

[0685]

[0686]

[0687]

[0688] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H i R<4>je

[0690]

[0692] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H i R<4>je

[0694]

[0696] U nekim primerima izvođenja,

[0697] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, obezbeđeno je jedinjenje Formule II. Neograničavajući primeri jedinjenja Formule II uključuju:

[0698]

[0699]

[0702] 

[0703]

[0706] 

[0707]

[0708]

[0711] 

[0712]

[0713]

[0714]

[0715]

[0716]

[0718] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H i R<4>je

[0720]

[0722] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H i R<4>je

[0724]

[0726] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H i R<4>je

[0727]

[0729] U nekim primerima izvođenja, R<1>je CH<3>, R<2>je H, R<3>je H i R<4>je

[0731]

[0733] U nekim primerima izvođenja, R<1>je CH<3>, R<2>je H, R<3>je H i R<4>je

[0735]

[0737] U nekim primerima izvođenja,

[0739] U nekim primerima izvođenja, R<1>je CH<3>, R<2>je CH<3>, R<3>je H i R<4>je

[0741]

[0743] U nekim primerima izvođenja, R<1>je CH<3>, R<2>je CH<3>, R<3>je H i R<4>je

[0744]

[0746] U nekim primerima izvođenja,

[0747] U nekim primerima izvođenja, R<1>je ciklopropil, R<2>je CH<3>, R<3>je H i R<4>je

[0748]

[0750] U nekim primerima izvođenja, R<1>je ciklopropil, R<2>je CH<3>, R<3>je H i R<4>je

[0751]

[0753] U nekim primerima izvođenja, R<1>je ciklopropil, R<2>je CH<3>, R<3>je H i R<4>je

[0754]

[0757] 1

[0758] II. Definicije

[0760] Sledeći termini se koriste za opisivanje ovog pronalaska. U slučajevima kada termin nije ovde posebno definisan, tom terminu se daje značenje koje stručnjaci iz struke primenjuju u kontekstu njegove upotrebe u opisivanju ovog pronalaska.

[0761] Termin „alkil“ će u svom kontekstu značiti linearni ili razgranati lanac potpuno zasićenog ugljovodoničnog radikala ili alkil grupe koja može biti opciono supstituisana (na primer, halogenom, uključujući F). Na primer, alkil grupa može imati 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika (tj. C<1>-C<8>alkil), 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika (tj. C<1>-C<6>alkil) ili 1 do 4 atoma ugljenika (tj. C<1>-C<4>alkil). Primeri odgovarajućih alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, izopentil, terc-pentil, neopentil, heksil, 2-metilpentil, 3-metilpentil, 2,2-dimetilbutil i 2,3-dimetilbutil.

[0762] Termin „alkenil“ se odnosi na nearomatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu između susednih atoma ugljenika i sličnu strukturu kao alkil grupa, kako je ovde opisano. Na primer, alkenil grupa može imati 2 do 8 atoma ugljenika (tj. C<2>-C<8>alkenil), ili 2 do 4 atoma ugljenika (tj. C<2>-C<4>alkenil). Primeri odgovarajućih alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil ili vinil (-CH=CH<2>), alil (-CH<2>CH=CH<2>), 1-butenil (-C=CH-CH<2>CH<3>) i 2-butenil (-CH<2>CH=CHCH<2>). Alkenil grupa može biti opciono supstituisana kao što je ovde opisano.

[0763] Termin „alkinil“ se odnosi na nearomatičnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu između susednih atoma ugljenika i sličnu strukturu kao alkil grupa, kako je ovde opisana. Na primer, alkinil grupa može imati 2 do 8 atoma ugljenika (tj. C<2>-C<8>alkin), ili 2 do 4 atoma ugljenika (tj. C<2>-C<4>alkinil). Primeri alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, acetilensku ili etinil i propargil. Alkinil grupa može biti opciono supstituisana kao što su ovde opisane.

[0764] Termin „acil“ se odnosi na ostatak -C(O)R u kome je karbonil ostatak vezan za R, na primer, -C(O)alkil. R može biti izabran od alkoksi, alkila, cikloalkila, nižeg alkila (tj. C<1>-C<4>); alkoksialkila, uključujući metoksimetil; aralkila - uključujući benzil, ariloksialkil - kao što je fenoksimetil; arila uključujući fenil opciono supstituisani halogenom, C<1>do C<4>alkil ili C<1>do C<4>alkoksi. U jednom primeru izvođenja, termin „acil“ se odnosi na mono, di ili trifosfat.

[0765] Termin „niži acil“ odnosi se na acil grupu u kojoj je karbonil ostatak niži alkil (tj. C<1>-C<4>).

[0766] Termin „alkoksi“ se odnosi na grupu -OR' pri čemu, -OR' je -O-alkil, -O-alkenil, -O-alkinil, -O-(C<0>-C<2>)(cikloalkil), -O-(C<0>-C<2>)(heterociklo), -O-(C<0>-C<2>)(aril) ili -O-(C<0>-C<2>)(heteroaril), od kojih svaki može biti opciono supstituisan.

[0769] 2

[0770] Termin „amino“ se odnosi na grupu -NH<2>.

[0771] Termin „aminokiselina“ ili „ostatak aminokiseline“ odnosi se na D- ili L- prirodnu ili neprirodnu aminokiselinu. Reprezentativne aminokiseline uključuju, ali nisu ograničene na, alanin, β-alanin, arginin, asparagin, asparaginsku kiselinu, cistein, cistin, glutaminsku kiselinu, glutamin, glicin, fenilalanin, histidin, izoleucin, lizin, leucin, metionin, prolin, serin, treonin, valin, triptofan ili tirozin, između ostalih.

[0772] Termin „azido“ se odnosi na grupu -N<3>.

[0773] Termin „aril“ ili „aromatični“, u kontekstu, odnosi se na supstituisani (kako je ovde drugačije opisano) ili nesupstituisani monovalentni aromatični radikal koji ima jedan prsten (npr. fenil ili benzil) ili kondenzovane prstenove (npr. naftil, antracenil, fenantrenil, itd.) i može biti vezan za jedinjenje prema ovom pronalasku na bilo kojoj dostupnoj stabilnoj poziciji na prstenu(ovima) ili kako je drugačije naznačeno u predstavljenoj hemijskoj strukturi. Aril grupa može biti opciono supstituisana kao što je ovde opisana.

[0774] „Cikloalkil“, „karbocikl“ ili „karbociklil“ se odnosi na zasićeni (tj. cikloalkil) ili delimično nezasićeni (npr. cikloakenil, cikloalkadienil, itd.) prsten koji ima 3 do 7 atoma ugljenika kao monociklus. Monociklični karbocikli imaju 3 do 7 atoma u prstenu, još tipičnije 5 ili 6 atoma u prstenu. Neograničavajući primeri cikloalkil grupa uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, 1-ciklopent-1-enil, 1-ciklopent-2-enil, 1-ciklopent-3-enil, cikloheksil, 1-cikloheks-1-enil, 1-cikloheks-2-enil i 1-ciklo-heks-3-enil.

[0775] Termin „cijano“ se odnosi na grupu -CN.

[0776] Termin „halogen“ ili „halo“ odnosi se na hloro, bromo, fluoro ili jodo.

[0777] [0138] Heteroaril sistem prstena je zasićeni ili nezasićeni prsten sa jednim ili više atoma azota, kiseonika ili sumpora u prstenu (monociklični), uključujući, ali ne ograničavajući se na, imidazol, furil, pirol, furanil, tien, tiazol, piridin, pirimidin, purin, pirazin, triazol, oksazol ili kondenzovane sisteme prstena kao što su indol, hinolin itd., između ostalog, koji mogu biti opciono supstituisani kao što je gore opisano. Heteroaril grupe obuhvataju heteroaril grupe koje sadrže azot, kao što su pirol, piridin, piridon, piridazin, pirimidin, pirazin, pirazol, imidazol, triazol, triazin, tetrazol, indol, izoindol, indolizin, purin, indazol, hinolin, izohinolin, hinolizin, ftalazin, naftiridin, hinoksalin, kinazolin, cinolin, pteridin, imidazopiridin, imidazotriazin, pirazinopiridazin, akridin, fenantridin, karbazol, karbazolin, perimidin, fenantrolin, fenacen, oksadiazol, benzimidazol, pirolopiridin, pirolopirimidin i piridopirimidin; aromatične heterocikluse koji sadrže sumpor, kao što su tiofen i benzotiofen; aromatični heterociklusi koji sadrže kiseonik, kao što su furan, piran, ciklopentapiran, benzofuran i izobenzofuran; i aromatični heterociklusi koji sadrže dva ili više hetero atoma izabranih od azota, sumpora i kiseonika, kao što su tiazol, tiadizol, izotiazol, benzoksazol, benzotiazol, benzotiadiazol, fenotiazin, izoksazol, furazan, fenoksazin, pirazoloksazol, imidazotiazol, tienofuran, furopirol, piridoksazin, furopiridin, furopirimidin, tienopirimidin i oksazol, između ostalih, od kojih svi mogu biti opciono supstituisani.

[0778] Termin „heterociklus“ ili „heterociklo“ odnosi se na cikličnu grupu koja sadrži najmanje jedan heteroatom, tj. O, N ili S, i može biti aromatična (heteroaril) ili nearomatična. Primeri nearomatičnih heterocikličnih grupa za upotrebu u ovom pronalasku uključuju, na primer, pirolidinil, piperidinil, piperazinil, N-metilpiperazinil, imidazolinil, pirazolidinil, imidazolidinil, morfolinil, tetrahidropiranil, azetidinil, oksetanil, oksatiolanil, piridon, 2-pirolidon, etilenurea, 1,3-dioksolan, 1,3-dioksan, 1,4-dioksan, ftalimid i sukcinimid, između ostalih, a sve one mogu biti opciono supstituisane.

[0779] Termin „hidroksil“ se odnosi na grupu -OH.

[0780] Termin „nitro“ se odnosi na grupu -NO<2>.

[0781] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ ili prolek“ se koristi u celoj specifikaciji da bi se opisao bilo koji farmaceutski prihvatljiv oblik (kao što je estar, fosforamidat, tiofosforamidat, fosfatni estar, so estra ili srodna grupa) β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanog-2-modifikovanog-N<6>-supstituisanog purinskog nukleotida koji, nakon primene na pacijenta, obezbeđuje željeno aktivno jedinjenje. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli su organske kisele adicione soli formirane sa kiselinama, koje formiraju fiziološki prihvatljiv anjon, na primer, tozilat, metansulfonat, acetat, citrat, malonat, tartarat, sukcinat, benzoat, askorbat, αketoglutarat i α-glicerofosfat. Takođe se mogu formirati odgovarajuće neorganske soli, uključujući sulfatne, nitratne, bikarbonatne i karbonatne soli. Farmaceutski prihvatljive soli mogu se dobiti korišćenjem standardnih postupaka dobro poznatih u struci, na primer reakcijom dovoljno baznog jedinjenja kao što je amin sa odgovarajućom kiselinom, što daje fiziološki prihvatljiv anjon. Takođe se mogu napraviti soli karboksilnih kiselina sa alkalnim metalima (na primer, natrijum, kalijum ili litijum) ili zemnoalkalnim metalima (na primer kalcijum).

[0782] „Farmaceutski prihvatljiv prolek“ odnosi se na jedinjenje koje se metaboliše, na primer hidrolizuje ili oksiduje, u domaćinu da bi se formiralo jedinjenje ovog pronalaska. Tipični primeri prolekova uključuju jedinjenja koja imaju biološki labilne zaštitne grupe na funkcionalnom delu aktivnog jedinjenja. Prolekovi uključuju jedinjenja koja se mogu oksidovati, redukovati, aminirati, deaminovati, hidroksilovati, dehidroksilovati, hidrolizovati, dehidrolizirati, alkilirati, dealkilirati, acilovati, deacilovati, fosforilisati, defosforilisati, tiofosforamidirati, detiofosforamidirati, fosforamidirati ili defosforamidirati da bi se proizvelo aktivno jedinjenje. Jedinjenja ovog pronalaska poseduju antivirusnu aktivnost protiv HCV ili

[0785] 4

[0786] se metabolišu u jedinjenje koje pokazuje takvu aktivnost. β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleozid se takođe može primenjivati kao 5'-fosfoetar lipid, bisfosforamidat, 3',5'-ciklični fosforamidat, 3',5'-ciklični tiofosforamidat, DTE konjugat, mešoviti fosforamidat-SATE derivat ili "SATE" derivat.

[0787] Termin „fosfonska kiselina“ odnosi se na grupu -P(O)(OH)<2>.

[0788] U jednom primeru izvođenja, termin purinska ili pirimidinska baza obuhvata, ali bez ograničenja na, adenin, N<6>-alkilpurine, N<6>-acilpurine (pri čemu, acil je -C(O)alkil, -C(O)(aril)C<0>-C<4>alkil, ili -C(O)(C<0>-C<4>alkil)aril), N<6>-benzilpurin, N<6>-halopurin, N<6>-vinilpurin, N<6>-acetilenski purin, N<6>-acil purin, N<6>-hidroksialkil purin, N<6>-tioalkil purin, N<2>-alkilpurine, N<2>-alkil-6-tiopurine, timin, citozin, 5-fluorocitozin, 5-metilcitozin, 6-azapirimidin, uključujući 6-azacitozin, 2- i/ili 4-merkaptopirmidin, uracil, 5-halouracil, uključujući 5-fluorouracil, C<5>-alkilpirimidine, C<5>-benzilpirimidine, C<5>-halopirimidine, C<5>-vinilpirimidin, C<5>-acetilenski pirimidin, C<5>-acil pirimidin, C<5>-hidroksialkil purin, C<5>-amidopirimidin, C<5>-cijanopirimidin, C<5>-nitropirimidin, C<5>-aminopirimidin, N<2>-alkilpurine, N<2>-alkil-6-tiopurine, 5-azacitidinil, 5-azauracilil, triazolopiridinil, imidazolopiridinil, pirolopirimidinil i pirazolo-pirimidinil. Purinske baze uključuju, ali nisu ograničene na, guanin, adenin, hipoksantin, 2,6-diaminopurin i 6-hlorpurin. Funkcionalne kiseonično-azotične grupe na bazi mogu biti zaštićene po potrebi ili želji. Pogodne zaštitne grupe su dobro poznate stručnjacima u ovoj oblasti i uključuju benzil, trimetilsilil, dimetilheksilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenilsilil, tritil, alkil grupe i acil grupe kao što su acetil i propionil; metansulfonil i p-toluensulfonil. Alternativno, purinska ili pirimidinska baza može opciono biti supstituisana tako da formira održivi prolek, koji se može cepati in vivo. Primeri odgovarajućih supstituenata uključuju acil ostatak.

[0789] [0146] Termin „supstituisan“ ili „opciono supstituisan“ označava da ostatak može imati najmanje jedan dodatni supstituent, uključujući, ali ne ograničavajući se na, halogen (F, Cl, Br, I), OH, fenil, benzil, N<3>, CN, acil, alkil, uključujući metil; alkenil, alkinil, alkoksi, haloalkil; uključujući CHF<2>, CH<2>F i CF<3>; itd. U jednom primeru izvođenja, termin „supstituisan“ ili „opciono supstituisan“ označava da ostatak može imati najmanje jedan dodatni supstituent, uključujući, ali ne ograničavajući se na, azido, cijano, halogen (fluoro, hloro, bromo ili jodo), alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, heterocikl, aril, heteroaril, haloalkil, hidroksil, alkoksi, amino, -NH(C<1>-C<6>nesupstituisani alkil), -NH(C<1>-C<6>supstituisani alkil), -NH-(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<8>cikloalkil), -NH-(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<8>heterocikl), -NH-(C<0>-C<2>alkil)(aril), -N(C<1>-C<6>nesupstituisani alkil)<2>, -N(C<1>-C<6>nesupstituisani alkil)(C<1>-C<6>supstituisani alkil), -N(C<1>-C<6>supstituisani alkil)<2>,-NH-(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<8>cikloalkil), -NH-(C<0>-C<2>alkil)(C<3>-C<8>heterocikl), NH-(C<0>-C<2>alkil)(aril), acil, nitro, sulfonska kiselina, sulfat, fosfonska kiselina, fosfat, fosfonat ili tiol.

[0790] Termin „sulfonatni estri“, predstavljen formulom R<14>S(O)<2>OR<15>, obuhvataju R<14>, pri čemu, R<14>je alkil, haloalkil, aralkil ili aril. R<15>je alkil, aril ili aralkil.

[0791] Termin „sulfonska kiselina“ odnosi se na grupu -SO<2>OH.

[0792] Termin „tiol“ se odnosi na grupu -SH.

[0793] Termin „grupa koja štiti azot“, kako se ovde koristi, odnosi se na ostatak koji je kovalentno vezan za azot i koji se može ukloniti, i obično zameniti vodonikom, kada je to prikladno. Na primer, grupa koja štiti azot može biti grupa koja se uklanja in vivo nakon primene na domaćina, in vitro ćelijom, ili se može ukloniti tokom proizvodnog postupka. Pogodne zaštitne grupe azota korisne u ovom pronalasku opisane su od strane Greene and Wuts in Protective Groups in Organic Synthesis (1991) New York, John Wiley and Sons, Inc.

[0794] Termin „grupa koja štiti kiseonik“, kako se ovde koristi, odnosi se na ostatak koji je kovalentno vezan za kiseonik i koji se može ukloniti, i obično zameniti vodonikom, kada je to prikladno. Na primer, grupa koja štiti kiseonik može biti grupa koja se uklanja in vivo nakon primene na domaćina, in vitro ćelijom, ili se može ukloniti tokom proizvodnog postupka. Pogodne grupe za zaštitu kiseonika korisne u ovom pronalasku opisane su od strane Greene and Wuts in Protective Groups in Organic Synthesis (1991) New York, John Wiley and Sons, Inc.

[0795] „Fosfat“ se odnosi na grupu -OP(O)(OH)<2>.

[0796] „Fosfatni estar“ se odnosi na mono, di i trifosfate, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0797] Termin „fosfoamidat“, „fosforamidat“ ili „fosforoamidat“ je ostatak koji ima fosfor vezan za tri kiseonične grupe i amin (koji opciono može biti supstituisan). Pogodni fosforamidati korisni u ovom pronalasku opisani su od strane Madela, Karolina and McGuigan in 2012, "Progress in the development of anti-hepatitis C virus nucleoside and nucleotide prodrugs", Future Medicinal Chemistry 4(5), pages 625-650 10:1021/jm300074y and Dominique, McGuigan and Balzarini in 2004, "Aryloxy Phosphoramidate Triesters as Pro-Tides", Mini Reviews in Medicinal Chemistry 4(4), pages 371-381. Dodatni fosforamidati korisni u ovom pronalasku opisani su u U.S. Patentima br. 5,233,031, 7,115,590, 7,547,704, 7,879,815, 7,888,330, 7,902,202, 7,951,789, 7,964,580, 8,071,568; 8,148,349, 8,263,575, 8,324,179, 8,334,270, 8,552,021, 8,563,530, 8,580,765, 8,735,372, 8,759,318; EP 2120565; EP 1143995; 6,455,513; i 8,334,270. Drugi fosforamidati su opisani u nukleozidnim patentima opisanim u odeljku „Pozadina pronalaska“.

[0798] Fosforamidatne grupe za upotrebu u ovom pronalasku su definisane u patentnom zahtevu 1. Fosforamidatne grupe uključuju one struktura:

[0799]

[0802] Ostali fosforamidati uključuju one strukture:

[0805]

[0807] pri čemu:

[0809] R<P1>je opciono supstituisana linearna, razgranata ili ciklična alkil grupa, ili opciono supstituisana aril, heteroaril ili heterociklična grupa ili njihova povezana kombinacija; i R<P2>je -NR<N1>R<N2>grupa ili B' grupa;

[0810] pri čemu:

[0811] R<N1>i R<N2>su svaki nezavisno H, C<1 g>alkil, (C<3>-C<7>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, ili (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-; koji može biti opciono supstituisan; ili R<N1>i R<N2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani, spajaju se da bi formirali heterociklični prsten od 3 do 7 članova;

[0812] B' je

[0815]

[0817] grupa;

[0818] pri čemu:

[0819] R<16>je vodonik, (C<1>-C<8>)alkil, (C<2>-C<8>)alkenil, (C<2>-C<8>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)Co-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-, ili bočni lanac aminokiseline, na primer bočni lanac aminokiseline (kako je ovde drugačije opisano) često izabran iz grupe koja se sastoji od alanina, β-alanina, arginina, asparagina, asparaginske kiseline, cisteina, cistina, glutaminske kiseline, glutamina, glicina, fenilalanina, histidina, izoleucina, lizina, leucina, metionina, prolina, serina, treonina, valina, triptofana ili tirozina (često R<16>je vodonik, metil, izopropil ili izobutil);

[0820] R<17>je vodonik, (C<1>-C<8>)alkil, (C<2>-C<8>)alkenil, (C<2>-C<8>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)Co-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-, ili bočni lanac aminokiseline, na primer bočni lanac aminokiseline (kako je ovde drugačije opisano) često izabran iz grupe koja se sastoji od alanina, β-alanina, arginina, asparagina, asparaginske kiseline, cisteina, cistina, glutaminske kiseline, glutamina, glicina, fenilalanina, histidina, izoleucina, lizina, leucina, metionina, prolina, serina, treonina, valina, triptofana ili tirozina (često R<17>je vodonik, metil, izopropil ili izobutil);

[0821] R<18>je vodonik ili C<1>-C<3>alkil; ili

[0822] R<16>i R<17>može formirati (C<3>-C<7>)cikloalkil ili (C<3>-C<7>)heterocikličnu grupu; ili

[0823] R<18>i R<16>ili R<17>može da formira (C<3>-C<6>)heterocikličnu grupu; i

[0824] R<19>je vodonik, (C<1>-C<6>)alkil, (C<3>-C<6>)alkenil, (C<3>-C<6>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)Co-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-; ili

[0825] B' je

[0826]

[0828] grupa;

[0829] pri čemu:

[0830] R<20>je vodonik, (C<1>-C<3>)alkil, (C<3>-C<8>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, ili (heteroaril)C<0>-C<4>alki-;

[0831] R<21>je vodonik, (C<1>-C<3>)alkil, (C<3>-C<8>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, ili (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-; i

[0832] R<18>i R<19>su kao što su gore definisani.

[0834] Poželjne R<P1>grupe uključuju opciono supstituisane fenil, naftil i monociklične heteroaril grupe, posebno one grupe (naročito lipofilne grupe) koje poboljšavaju biodostupnost jedinjenja u ćelijama pacijenta i koje pokazuju smanjenu toksičnost, poboljšani terapeutski indeks i poboljšanu farmakokinetiku (jedinjenja se sporije metabolišu i izlučuju).

[0835] Termin fosforamidat se koristi u celoj specifikaciji da opiše grupu koja se nalazi na 5' ili 3' poziciji furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja i formira prolek oblik nukleozidnog jedinjenja. U jednom primeru izvođenja, fosforamidati se mogu naći i na 5' i na 3' poziciji furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja i formirati prolek oblik nukleozidnog jedinjenja. U sledećem primeru izvođenja, fosforamidat koji se nalazi na 5' poziciji furanoznog prstena nukleozida može formirati ciklično fosforamidatno jedinjenje formiranjem veze sa 3'-hidroksilnim supstituentom na 3' poziciji furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja i formirati prolek oblik nukleozidnog jedinjenja.

[0836] Termin „tiofosfoamidat“, „tiofosforamidat“ ili „tiofosforoamidat“ je ostatak koji ima fosfor vezan za sumpor, dve kiseoničničke grupe i amin (koji opciono može biti supstituisan). Tiofosforamidati korisni u ovom pronalasku su opisani u US Patentu br. 8,772,474 i WO 2012/040124.

[0837] Tiofosforamidatne grupe uključuju one struktura:

[0838]

[0841] Ostali tiofosforamidati uključuju one strukture:

[0844]

[0846] pri čemu:

[0847] R<P1>je opciono supstituisana linearna, razgranata ili ciklična alkil grupa, ili opciono supstituisana aril, heteroaril ili heterociklična grupa ili njihova vezana kombinacija; i R<P2>je -NR<N1>R<N2>grupa ili B' grupa;

[0848] pri čemu:

[0849] R<N1>i R<N2>su svaki nezavisno H, C<1>-C<8>alkil, (C<3>-C<7>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, ili (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-; ili

[0850] R<N1>i R<N2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani, spajaju se da bi formirali heterociklični prsten od 3 do 7 članova;

[0851] B' je

[0854]

[0856] grupa;

[0857] pri čemu:

[0858] R<16>je vodonik, (C<1>-C<8>)alkil, (C<2>-C<8>)alkenil, (C<2>-C<8>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-, ili bočni lanac aminokiseline, na primer bočni lanac aminokiseline (kako je ovde drugačije opisano) često izabran iz grupe koja se sastoji od alanina, β-alanina, arginina, asparagina, asparaginske kiseline, cisteina, cistina, glutaminske kiseline, glutamina, glicina, fenilalanina, histidina, izoleucina, lizina, leucina, metionina, prolina, serina, treonina, valina, triptofana ili tirozina (često R<16>je vodonik, metil, izopropil ili izobutil);

[0859] R<17>je vodonik, (C<1>-C<8>)alkil, (C<2>-C<8>)alkenil, (C<2>-C<8>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-, ili bočni lanac aminokiseline, na primer bočni lanac aminokiseline (kako je ovde drugačije opisano) često izabran iz grupe koja se sastoji od alanina, β-alanina, arginina, asparagina, asparaginske kiseline, cisteina, cistina, glutaminske kiseline, glutamina, glicina, fenilalanina, histidina, izoleucina, lizina, leucina, metionina, prolina, serina, treonina, valina, triptofana ili tirozina (često R<17>je vodonik, metil, izopropil ili izobutil);

[0860] R<18>je vodonik ili C<1>-C<3>alkil; ili

[0861] R<16>i R<17>može formirati (C<3>-C<7>)cikloalkil ili (C<3>-C<7>)heterociklična grupa; ili

[0862] R<18>i R<16>ili R<17>može da formira (C<3>-C<6>) heterociklična grupa; i

[0863] R<19>je vodonik, (C<1>-C<6>)alkil, (C<3>-C<6>)alkenil, (C<3>-C<6>)alkinil, (C<3>-C<8>cikloalkil)C<0>-C<4>alkil-, (aril)C<0>-C<4>alkil-, (C<3>-C<6>heterociklo)C<0>-C<4>alkil-, (heteroaril)C<0>-C<4>alkil-; ili

[0864] B' je

[0867] 1

[0868]

[0870] grupa; i

[0871] R<18>, R<19>, R<20>i R<21>su kao što su gore definisani.

[0873] Poželjne R<P1>grupe uključuju opciono supstituisane fenil, naftil i monociklične heteroaril grupe, posebno one grupe (naročito lipofilne grupe) koje poboljšavaju biodostupnost jedinjenja u ćelijama pacijenta i koje pokazuju smanjenu toksičnost, poboljšani terapeutski indeks i poboljšanu farmakokinetiku (jedinjenja se sporije metabolišu i izlučuju).

[0874] Tiofosforamidat može biti na poziciji 5' ili 3' furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja da bi se formirao prolek nukleozidnog jedinjenja. U jednom primeru izvođenja, tiofosforamidati se mogu naći i na poziciji 5' i na poziciji 3' furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja i formirati prolek nukleozidnog jedinjenja. U sledećem primeru izvođenja, tiofosforamidat koji se nalazi na poziciji 5' furanoznog prstena nukleozida može formirati ciklično tiofosforamidatno jedinjenje formiranjem veze sa 3'-hidroksilnim supstituentom na poziciji 3' furanoznog prstena nukleozidnog jedinjenja i formirati prolek nukleozidnog jedinjenja.

[0875] Termin „D-konfiguracija“, kako se koristi u kontekstu ovog pronalaska, odnosi se na glavnu konfiguraciju koja imitira prirodnu konfiguraciju šećernih jedinica, za razliku od neprirodno prisutnih nukleozida ili „L“ konfiguracije. Termin „β“ ili „β anomer“ se koristi u vezi sa nukleozidnim analozima u kojima je nukleozidna baza konfigurisana (raspoređena) iznad ravni furanoze u nukleozidnom analogu.

[0876] Termini „ko-primeniti“ i „ko-primena“ ili kombinovana terapija koriste se za opisivanje primene najmanje jednog od 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-C-nukleozidnih jedinjenja prema ovom pronalasku u kombinaciji sa najmanje jednim drugim aktivnim sredstvom, na primer, gde je to prikladno, najmanje jednim dodatnim anti-HCV sredstvom, uključujući i druga 2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-C-nukleozidna sredstva koja su ovde opisana. Vreme ko-primene najbolje određuje medicinski specijalista koji leči pacijenta. Ponekad je poželjno da se sredstva primenjuju istovremeno. Alternativno, lekovi odabrani za kombinovanu terapiju mogu se primenjivati na pacijenta u različito vreme. Naravno, kada je prisutno više od jedne virusne ili druge infekcije

[0879] 2

[0880] ili drugog stanja, ova jedinjenja se mogu kombinovati sa drugim sredstvima za lečenje te druge infekcije ili stanja po potrebi.

[0881] Termin „domaćin“, kako se ovde koristi, odnosi se na jednoćelijski ili višećelijski organizam u kome se HCV virus može replicirati, uključujući ćelijske linije i životinje, a tipično i čoveka. Termin domaćin se posebno odnosi na inficirane ćelije, ćelije transfektovane celim ili delom HCV genoma i životinje, posebno primate (uključujući šimpanze) i ljude. U većini primena ovog pronalaska kod životinja, domaćin je ljudski pacijent. Međutim, veterinarske primene, u određenim indikacijama, su jasno predviđene ovim pronalaskom (kao što su šimpanze). Domaćin može biti, na primer, govedo, konj, ptica, pas, mačka itd.

[0883] Izotopska supstitucija

[0885] Predmetni pronalazak obuhvata jedinjenja i upotrebu jedinjenja sa željenim izotopskim supstitucijama atoma, u količinama iznad prirodne zastupljenosti izotopa, tj. obogaćena. Izotopi su atomi koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve, tj. isti broj protona, ali različit broj neutrona. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika, na primer, deuterijum (<2>H) i tricijum (<3>H) se može koristiti bilo gde u opisanim strukturama. Alternativno ili pored toga, mogu se koristiti izotopi ugljenika, npr.<13>C i<14>C. Poželjna izotopska supstitucija je deuterijum za vodonik na jednoj ili više lokacija u molekulu radi poboljšanja delovanja leka. Deuterijum može biti vezan na mestu prekida veze tokom metabolizma (kinetički izotopski efekat αdeuterijuma) ili pored ili blizu mesta prekida veze (kinetički izotopski efekat β-deuterijuma). Achillion Pharmaceuticals, Inc. (WO/2014/169278 i WO/2014/169280) opisuje deuteraciju nukleotida radi poboljšanja njihove farmakokinetike ili farmakodinamike, uključujući i na poziciji 5 molekula.

[0886] Supstitucija izotopima kao što je deuterijum može pružiti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, kao što su, na primer, povećano vreme poluraspada in vivo ili smanjene potrebne doze. Supstitucija vodonika deuterijumom na mestu metaboličkog razlaganja može smanjiti brzinu ili eliminisati metabolizam na toj vezi. Na bilo kojoj poziciji jedinjenja gde može biti prisutan atom vodonika, atom vodonika može biti bilo koji izotop vodonika, uključujući protium (<1>H), deuterijum (<2>H) i tricijum (<3>H). Stoga, ovde se navođenje jedinjenja odnosi na sve potencijalne izotopske oblike, osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.

[0887] [0169] Termin „izotopski obeležen“ analog odnosi se na analog koji je „deuterisani analog“,<13>C-obeleženi analog" ili "deuterisani/<13>C-obeleženi analog." Termin „deuterisani analog“ označava jedinjenje opisano ovde, gde H-izotop, tj. vodonik/protijum (<1>H), je zamenjen H-izotopom, tj. deuterijumom (<2>H). Supstitucija deuterijumom može biti delimična ili potpuna. Delimična supstitucija deuterijumom znači da je najmanje jedan vodonik supstituisan sa najmanje jednim deuterijumom. U određenim primerima izvođenja, izotop je 90, 95 ili 99% ili više obogaćen izotopom na bilo kojoj lokaciji od interesa. U nekim primerima izvođenja, to je deuterijum koji je 90, 95 ili 99% obogaćen na željenoj lokaciji. Osim ako nije drugačije naznačeno, deuteracija je najmanje 80% na odabranoj lokaciji. Deuteracija nukleozida može se desiti na bilo kom zamenljivom vodoniku koji daje željene rezultate.

[0889] III. Postupci lečenja ili profilakse

[0891] Lečenje, kako se ovde koristi, odnosi se na primenu aktivnog jedinjenja na domaćina koji je inficiran HCV virusom.

[0892] Termin „profilaktički“ ili preventivni, kada se koristi, odnosi se na primenu aktivnog jedinjenja radi sprečavanja ili smanjenja verovatnoće pojave virusnog poremećaja. Predmetni pronalazak obuhvata i lečenje i profilaktičke ili preventivne terapije. U jednom primeru izvođenja, aktivno jedinjenje se primenjuje na domaćina koji je bio izložen i stoga u riziku od infekcije virusom hepatitisa C.

[0893] Obezbeđena su jedinjenja za upotrebu u lečenju virusa hepatitisa C prema patentnim zahtevima, uključujući oblike HCV otporne na lekove i multirezistentne oblike i srodna bolesna stanja, stanja ili komplikacije HCV infekcije, uključujući cirozu i srodne hepatotoksičnosti, kao i druga stanja koja su sekundarna HCV infekciji, kao što su slabost, gubitak apetita, gubitak težine, uvećanje grudi (posebno kod muškaraca), osip (posebno na dlanovima), teškoće sa zgrušavanjem krvi, krvni sudovi poput pauka na koži, konfuzija, koma (encefalopatija), nakupljanje tečnosti u trbušnoj duplji (ascite), varice jednjaka, portalnu hipertenziju, insuficijenciju bubrega, uvećanu slezina, smanjenje broja krvnih zrnaca, anemiju, trombocitopeniju, žuticu i hepatocelularni karcinom, između ostalog. Postupak sadrži primenu na domaćina kome je to potrebno efikasne količine najmanje jednog β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanog-2-modifikovanog-N<6>-supstituisanog purinskog nukleotida kao što je ovde opisan, opciono u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim bioaktivnim sredstvom, na primer, dodatnim anti-HCV sredstvom, dalje u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačemaditivom i/ili ekscipijensom.

[0894] U još jednom aspektu opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, obezbeđen je postupak za prevenciju ili profilaksu HCV infekcije ili bolesnog stanja ili

[0897] 4

[0898] povezanog ili naknadnog bolesnog stanja, stanja ili komplikacije HCV infekcije, uključujući cirozu i povezane hepatotoksičnosti, slabost, gubitak apetita, gubitak težine, uvećanje grudi (posebno kod muškaraca), osip (posebno na dlanovima), teškoće sa zgrušavanjem krvi, krvne sudove na koži u obliku pauka, konfuziju, komu (encefalopatiju), nakupljanje tečnosti u trbušnoj duplji (ascites), varice jednjaka, portalnu hipertenziju, otkazivanje bubrega, uvećanu slezinu, smanjenje broja krvnih zrnaca, anemiju, trombocitopeniju, žuticu i hepatocelularni kancer (jetre), između ostalog, pri čemu navedeni postupak sadrži primenu na pacijenta sa rizikom efikasne količine najmanje jednog jedinjenja prema ovom pronalasku, kao što je gore opisano, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, aditivom ili ekscipijensom, opciono u kombinaciji sa drugim anti-HCV agensom. U sledećem primeru izvođenja, aktivna jedinjenja pronalaska mogu se primenjivati na pacijenta nakon transplantacije jetre povezane sa hepatitisom radi zaštite novog organa.

[0899] 5'-stabilizovani β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotid može se primenjivati po želji kao bilo koja so ili prolek koji je nakon primene na primaoca sposoban da direktno ili indirektno obezbedi matično jedinjenje ili koji sam pokazuje aktivnost. Neograničavajući primeri su farmaceutski prihvatljive soli i jedinjenje koje je modifikovano na funkcionalnoj grupi, kao što je hidroksilna ili aminska funkcionalna grupa, da bi se modifikovala biološka aktivnost, farmakokinetika, vreme poluraspada, kontrolisana isporuka, lipofilnost, kinetika apsorpcije, lakoća fosforilacije do aktivnog 5'-trifosfata ili efikasnost isporuke korišćenjem željenog načina primene jedinjenja. Postupci za modifikovanje svojstava aktivnog jedinjenja radi postizanja ciljnih svojstava poznate su stručnjacima u ovoj oblasti ili se mogu lako proceniti standardnim postupcima, na primer, acilacijom, fosforilacijom, tiofosforamidacijom, fosforamidacijom, fosfonacijom, alkilacijom ili pegilacijom.

[0901] IV. Farmaceutske kompozicije

[0903] U jednom aspektu ovog pronalaska, farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku su prema patentnim zahtevima, opciono u kombinaciji sa najmanje jednim drugim aktivnim jedinjenjem.

[0904] U jednom aspektu ovog pronalaska, farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku su prema patentnim zahtevima, opciono u kombinaciji sa najmanje jednim drugim antivirusnim sredstvom, kao što je anti-HCV sredstvo.

[0905] Pronalazak obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu za lečenje infekcije virusom hepatitisa C, jednog od jedinjenja β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida ovog pronalaska ili njihove soli, u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U alternativnom primeru izvođenja opisanom ovde, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, pronalazak uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže efikasnu količinu za sprečavanje infekcije virusom hepatitisa C, jednog od jedinjenja β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida ovog pronalaska ili njihove soli ili proleka, u farmaceutski prihvatljivom nosaču ili ekscipijensu.

[0906] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da će terapeutski efikasna količina varirati u zavisnosti od infekcije ili stanja koje se leči, njegove težine, režima lečenja koji se primenjuje, farmakokinetike korišćenog sredstva, kao i od pacijenta ili subjekta (životinje ili čoveka) koji se leči, a takvu terapeutsku količinu može odrediti lekar ili specijalista.

[0907] 5'-stabilizovana jedinjenja β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida prema ovom pronalasku mogu se formulisati u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Generalno, poželjno je primenjivati farmaceutsku kompoziciju u obliku za oralnu primenu, ali određene formulacije se mogu primenjivati parenteralno, intravenski, intramuskularno, topikalno, transdermalno, bukalno, potkožno, supozitorijumski ili drugim putem, uključujući intranazalni sprej. Intravenske i intramuskularne formulacije se često primenjuju u sterilnom fiziološkom rastvoru. Osoba koja je stručnjak u ovoj oblasti može modifikovati formulacije kako bi ih učinila rastvorljivijim u vodi ili drugom nosaču, na primer, ovo se može lako postići manjim modifikacijama (formulacija soli, esterifikacija, itd.) koje su u okviru prosečne veštine u ovoj oblasti. Takođe je u okviru veštine stručnjaka da modifikuju način primene i režim doziranja određenog jedinjenja kako bi se upravljalo farmakokinetičkim svojstvima ovih jedinjenja za maksimalan koristan efekat kod pacijenata.

[0908] [0179] U određenim farmaceutskim doznim oblicima, poželjan je oblik proleka jedinjenja opisanih ovde, ali za koja nije eksplicitno tražena zaštita, posebno uključujući acilisane (acetilovane ili druge) i etarske (alkil i srodne) derivate, fosfatne estre, tiofosforamidate, fosforamidate i različite oblike soli ovih jedinjenja. Osoba sa prosečnom stručnošću u ovoj oblasti će prepoznati kako da lako modifikuje ova jedinjenja u oblike prolekova kako bi se olakšala isporuka aktivnih jedinjenja na ciljano mesto unutar organizma domaćina ili pacijenta. Rutinski stručnjak će takođe iskoristiti povoljne farmakokinetske parametre oblika prolekova, gde je to primenljivo, prilikom isporuke ovih jedinjenja na ciljano mesto unutar organizma domaćina ili pacijenta kako bi se maksimizirao željeni efekat jedinjenja.

[0909] Količina jedinjenja uključena u terapeutski aktivne formulacije prema ovom pronalasku je efikasna količina za lečenje HCV infekcije. Generalno, terapeutski efikasna količina ovog jedinjenja u farmaceutskom doznom obliku obično se kreće od oko 0,001 mg/kg do oko 100 mg/kg dnevno ili više, češće, nešto manje od oko 0,1 mg/kg do više od oko 25 mg/kg dnevno pacijenta ili znatno više, u zavisnosti od korišćenog jedinjenja, stanja ili infekcije koja se leči i načina primene. Aktivno nukleozidno jedinjenje prema ovom pronalasku se često primenjuje u količinama u rasponu od oko 0,1 mg/kg do oko 15 mg/kg dnevno pacijenta, u zavisnosti od farmakokinetike sredstva kod pacijenta. Ovaj raspon doza generalno proizvodi efikasne koncentracije aktivnog jedinjenja u krvi koje mogu biti u rasponu od oko 0,001 do oko 100, oko 0,05 do oko 100 mikrograma/cc krvi kod pacijenta.

[0910] Često, da bi se lečila, sprečila ili odložila pojava ovih infekcija i/ili da bi se smanjila verovatnoća infekcije virusom HCV, ili sekundarnog bolesnog stanja, stanja ili komplikacije HCV, kompozicije će se primenjivati u oralnom obliku doziranja u količinama u rasponu od oko 250 mikrograma do oko 500 mg ili više najmanje jednom dnevno, na primer, najmanje 25, 50, 100, 150, 250 ili 500 miligrama, do četiri puta dnevno. Predstavljena jedinjenja se često primenjuju oralno, ali se mogu primenjivati parenteralno, lokalno ili u obliku supozitorija, kao i intranazalno, kao nazalni sprej ili kako je ovde drugačije opisano.

[0911] U slučaju istovremene primene ovih jedinjenja u kombinaciji sa drugim anti-HCV jedinjenjem, kako je ovde drugačije opisano, količina jedinjenja prema ovom pronalasku koja se primenjuje kreće se od oko 0,01 mg/kg pacijenta do oko 500 mg/kg ili više pacijenta ili znatno više, u zavisnosti od drugog sredstva koje se primenjuje istovremeno i njegove potencije protiv virusa, stanja pacijenta i težine bolesti ili infekcije koja se leči i načina primene. Drugo anti-HCV sredstvo može se, na primer, primenjivati u količinama u rasponu od oko 0,01 mg/kg do oko 500 mg/kg. U određenim poželjnim primerima izvođenja, ova jedinjenja se često mogu primenjivati u količini u rasponu od oko 0,5 mg/kg do oko 50 mg/kg ili više (obično do oko 100 mg/kg), generalno u zavisnosti od farmakokinetike dva sredstva kod pacijenta. Ovi rasponi doza generalno proizvode efikasne koncentracije aktivnog jedinjenja u krvi kod pacijenta.

[0912] U jednom ovde opisanom primeru izvođenja, ali za koji nije eksplicitno tražena zaštita, profilaktički ili preventivna efikasna količina kompozicija prema ovom pronalasku spada u isti opseg koncentracija kao što je gore navedeno za terapeutski efikasnu količinu i obično je ista kao terapeutski efikasna količina.

[0913] Primena aktivnog jedinjenja može se kretati od kontinuirane (intravenski kap po kap) do nekoliko oralnih ili intranazalnih primena dnevno (na primer, Q.I.D.) ili transdermalne primene i može uključivati oralnu, topikalnu, parenteralnu, intramuskularnu, intravensku, subkutanu, transdermalnu (što može da sadrži sredstvo za poboljšanje prodiranja), bukalnu i supozitorijsku primenu, između ostalih puteva primene. Enterično obložene oralne tablete takođe se mogu koristiti za poboljšanje biodostupnosti jedinjenja za oralni put primene. Najefikasniji oblik doziranja zavisiće od biodostupnosti/farmakokinetike određenog izabranog sredstva, kao i od težine bolesti kod pacijenta. Oralni oblici doziranja su posebno poželjni zbog lakoće primene i potencijalno povoljne saradnje pacijenata.

[0914] Da bi se pripremile farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku, terapeutski efikasna količina jednog ili više jedinjenja prema ovom pronalasku se često temeljno pomeša sa farmaceutski prihvatljivim nosačem prema konvencionalnim tehnikama farmaceutskog mešanja da bi se dobila doza. Nosač može imati širok spektar oblika u zavisnosti od oblika preparata koji se želi za primenu, npr. oralnu ili parenteralnu. Prilikom pripreme farmaceutskih kompozicija u oralnom doznom obliku, može se koristiti bilo koji od uobičajenih farmaceutskih medijuma. Stoga, za tečne oralne preparate kao što su suspenzije, eliksiri i rastvori, mogu se koristiti odgovarajući nosači i aditivi, uključujući vodu, glikole, ulja, alkohole, sredstva za poboljšanje ukusa, konzervanse, sredstva za bojenje i slično. Za čvrste oralne preparate kao što su praškovi, tablete, kapsule, i za čvrste preparate kao što su supozitorije, mogu se koristiti odgovarajući nosači i aditivi, uključujući skrobove, nosače šećera, kao što su dekstroza, manifold, laktoza i srodni nosači, razblaživači, sredstva za granulaciju, lubrikanti, vezujuća sredstva, sredstva za raspadanje i slično. Po želji, tablete ili kapsule mogu biti enterično obložene ili sa produženim oslobađanjem standardnim tehnikama. Upotreba ovih doznih oblika može značajno povećati bioraspoloživost jedinjenja kod pacijenta.

[0915] Za parenteralne formulacije, nosač će obično sadržati sterilnu vodu ili vodeni rastvor natrijum hlorida, mada se mogu uključiti i drugi sastojci, uključujući one koji pomažu disperziju. Naravno, tamo gde se koristi i održava sterilna sterilna voda, kompozicije i nosači takođe moraju biti sterilisani. Takođe se mogu pripremiti injekcione suspenzije, u kom slučaju se mogu koristiti odgovarajući tečni nosači, sredstva za suspendovanje i slično.

[0916] Lipozomalne suspenzije (uključujući lipozome usmerene na virusne antigene) mogu se takođe pripremiti konvencionalnim postupcima za proizvodnju farmaceutski prihvatljivih nosača. Ovo može biti pogodno za isporuku slobodnih nukleozida, acil/alkil nukleozida ili fosfatnih estarskih prolekova nukleozidnih jedinjenja prema ovom pronalasku.

[0917] U tipičnim primerima izvođenja prema ovom pronalasku, jedinjenja i kompozicije se koriste za lečenje HCV infekcije.

[0919] V. Kombinovana i alternativna terapija

[0921] Dobro je poznato da se varijante virusa otporne na lekove mogu pojaviti nakon dužeg lečenja antivirusnim sredstvom. Otpornost na lekove najčešće nastaje mutacijom gena koji kodira enzim koji se koristi u replikaciji virusa. Efikasnost leka protiv HCV infekcije može se produžiti, povećati ili obnoviti primenom jedinjenja u kombinaciji ili naizmenično sa drugim, a možda čak i sa dva ili tri druga, antivirusna jedinjenja koja indukuju drugačiju mutaciju ili deluju drugačijim putem od onog kod glavnog leka. Alternativno, farmakokinetika, biodistribucija, vreme poluraspada ili drugi parametri leka mogu se promeniti takvom kombinovanom terapijom (koja može uključivati naizmenično lečenje ako se smatra usklađenim). Pošto su otkriveni β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotidi inhibitori NS5B polimeraze, može biti korisno primeniti jedinjenje na domaćina u kombinaciji sa, na primer:

[0923] (1) Inhibitorom proteaze, kao što je inhibitor proteaze NS3/4A;

[0924] (2) inhibitorom NS5A;

[0925] (3) Još jednim inhibitorom NS5B polimeraze;

[0926] (4) nesupstratnim inhibitorom NS5B;

[0927] (5) Interferonom alfa-2a, koji može biti pegilovan ili na drugi način modifikovan, i/ili ribavirinom;

[0928] (6) Inhibitorom koji nije na bazi supstrata;

[0929] (7) Inhibitorom helikaze;

[0930] (8) Antisens oligodezoksinukleotidom (S-ODN);

[0931] (9) Aptamerom;

[0932] (10) Ribozimom otpornim na nukleaze;

[0933] (11) iRNK, uključujući mikroRNK i SiRNK;

[0934] (12) Antitelom, delimičnim antitelom ili domenskim antitelom na virus, ili

[0935] (13) Virusnim antigenom ili parcijalnim antigenom koji indukuje antitela domaćina.

[0936] Neograničavajući primeri anti-HCV sredstava koja se mogu primenjivati u kombinaciji sa β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanim-2-modifikovanim-N<6>-supstituisanim purinskim nukleotidima pronalaska su:

[0938] (i) inhibitori proteaze kao što je telaprevir (Incivek<®>), boceprevir (Victrelis<™>), simeprevir (Olysio<™>), paritaprevir (ABT-450), ACH-2684; AZD-7295; BMS-791325; danoprevir; Filibuvir; GS-9256; GS-9451; MK-5172; Setrobuvir; Sovaprevir; Tegobuvir; VX-135; VX-222 i ALS-220;

[0939] (ii) inhibitor NS5A kao što su ACH-2928, ACH-3102, IDX-719, daklatasvir, ledispasvir i ombitasvir (ABT-267);

[0940] (iii) inhibitori NS5B kao što su ACH-3422; AZD-7295; klemizol; ITX-5061; PPI-461; PPI-688, Sovaldi<®>, MK-3682 i mericitabin;

[0941] (iv) inhibitori NS5B kao što su ABT-333, MBX-700; i,

[0942] (v) Antitelo kao što je GS-6624.

[0944] Ako se β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotid primenjuje za lečenje uznapredovalog virusa hepatitisa C koji dovodi do kancera ili ciroze jetre, u jednom primeru izvođenja, jedinjenje se može primenjivati u kombinaciji ili naizmenično sa drugim lekom koji se tipično koristi za lečenje hepatocelularnog karcinoma (HCC), na primer, kao što je opisano od strane Andrew Zhu in "New Agents on the Horizon in Hepatocellular Carcinoma" Therapeutic Advances in Medical Oncology, V 5(1), January 2013, 41-50. Primeri pogodnih jedinjenja za kombinovanu terapiju gde domaćin ima ili je u riziku od HCC uključuju antiangiogene agense, sunitinib, brivanib, linifanib, ramucirumab, bevacizumab, cediranib, pazopanib, TSU-68, lenvatinib, antitela protiv EGFR, inhibitore mTor, inhibitore MEK i inhibitore histonske decetilacije.

[0945] Lekovi koji su trenutno odobreni za grip su amantadin, rimantadin i oseltamivir. Bilo koji od ovih lekova može se koristiti u kombinaciji ili naizmenično sa aktivnim jedinjenjem koje je ovde dato za lečenje virusne infekcije podložne takvim infekcijama. Ribavirin se koristi za lečenje malih boginja, gripa A, gripa B, parainfluence, teškog RSV bronhiolitisa i SARS, kao i drugih virusnih infekcija, i stoga je posebno koristan u kombinaciji sa ovim jedinjenjem za lečenje domaćina inficiranog jednolančanim RNK virusom. Palivizumab je odobren za upotrebu kod odojčadi sa visokim rizikom od RSV infekcije.

[0946] Trenutno ne postoje odobreni lekovi za virus Zapadnog Nila. Lekarima se preporučuje da obezbede intenzivnu terapiju podrške, koja može uključivati hospitalizaciju, intravenske

[0949] 1

[0950] tečnosti, upotrebu ventilatora za pomoć pri disanju, lekove za kontrolu napada, otoka mozga, mučnine i povraćanja, i upotrebu antibiotika kako bi se sprečilo da bakterijske infekcije pogoršaju bolest. Ovo ističe važnost ovih jedinjenja za virusnu medicinsku terapiju.

[0952] VI. Postupak pripreme β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisanih-2-modifikovanih-N<6>-supstituisanih purinskih nukleotida pronalaska

[0954] Opšti postupci za dobijanje jedinjenja ovog pronalaska su poznati u struci ili su ovde opisani. Sinteza 2'-hloro nukleotida je opisana u US 20150366888, WO 2014058801; WO 2015/066370 i WO 2015200219.

[0955] U sintetičkim šemama se koriste sledeće skraćenice.

[0957] CBr<4>: Ugljen-tetrabromid

[0958] DBU: 1,8-Diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

[0959] DCM: Dihlorometan

[0960] THF: Tetrahidrofuran (THF), anhidrovani

[0961] EtOAc: etil acetat

[0962] EtOH: Etanol

[0963] Li(OtBu)<3>AlH: Litijum tri-terc-butoksialuminijum hidrid

[0964] Na<2>SO<4>: Natrijum sulfat (anhidrovani)

[0965] MeCN: Acetonitril

[0966] MeNH<2>; Metilamin

[0967] MeOH: Metanol

[0968] Na<2>SO<4>; Natrijum sulfat

[0969] NaHCO<3>: Natrijum bikarbonat

[0970] NH<4>Cl: Amonijum hlorid

[0971] NH<4>OH: Amonijum hidroksid

[0972] PE: Petrol etar

[0973] Ph<3>P: Trifenilfosfin

[0974] Silika gel (230 do 400 meša, sorbent)

[0975] t-BuMgCl: t-Butil magnezijum hlorid

[0976] t-BuOK: Natrijum terc-butoksid

[0977] t-BuOH: Terc-butanol

[0980] 1 1

[0981] PRIMERI

[0983] Opšti postupci

[0985] <1>H,<19>F i<31>P NMR spektri su snimljeni na 300 MHz Furijeovom transformacionom Brikerovom spektrometru. Spektri su dobijeni iz uzoraka pripremljenih u epruvetama prečnika 5 mm u CDCl<3>, CD<3>OD ili DMSO-d<6>. Spin multipliciteti su označeni simbolima s (singlet), d (dublet), t (triplet), m (multiplet) i br (široki). Kuplujuće konstante (J) su prikazane u Hz. MS spektri su dobijeni korišćenjem elektrosprej jonizacije (ESI) na Agilent Technologies 6120 kvadrupolnom MS aparatu. Reakcije su generalno izvedene u atmosferi suvog azota korišćenjem anhidrovanih rastvarača Sigma-Aldrich. Sve uobičajene hemikalije su kupljene iz komercijalnih izvora.

[0987]

[0990] i) Li(OtBu)<3>AIH, THF, -30 °C<-->>-15 °C; ii) PPh<3>, CBr<4>, DCM, -20 °C<-->>0 °C; iii) 2-amino-6-hloropurin, tBuOK, tBuOH/MeCN 9:1, 65 °C; iv) MeNH<2>(33%), MeOH, 85 °C; v) izopropil ((R,S)-pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C<-->> sobna temperatura

[0992] Primer 1. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata

[0994] Korak 1. Priprema ((2R,3R,4R,5R)-3-(benzoiloksi)-5-bromo-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metil benzoata (2).

[0997] 1 2

[0998] U rastvor (2R)-3,5-di-O-benzoil-2-fluoro-2-C-metil-D-ribono-γ-laktona (24,8 g, 66,6 mmol) u suvom THF (333 ml), pod atmosferom azota i ohlađen na -30 °C, dodat je litijum triterc-butoksialuminijum hidrid (1,0 M u THF, 22,6 mL, 22,6 mmol) ukapavanjem. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je polako zagrejana do -15 °C tokom 90 minuta, zatim je dodat EtOAc (300 mL) i smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (200 mL). Dobijeni rastvor je filtriran preko Celite<®>i filtrat je dva puta ekstrahovan sa EtOAc. Spojene organske faze su osušene (Na<2>SO<4>), filtrirane i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u suvom DCM (225 mL) pod atmosferom azota, ohlađen na -20 °C, zatim je dodat PPh<3>(19,1 g, 72,8 mmol). Nakon 10 minuta mešanja na -20 °C, dodat je CBr<4>(26,0 g, 78,4 mmol) i reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do 0 °C tokom 2 sata. Dobijena smeša je sipana na kolonu sa silika gelom i eluirana sa PE/EtOAc (gradijent 100:0 do 80:20). Frakcije koje sadrže α-bromofuranozid su sakupljene i koncentrovane da bi se dobio proizvod 2 (18,1 g, 41,3 mmol, 62% u dva koraka) kao gusto bezbojno ulje.

[0999] <1>H NMR (300 MHz, CDCl<3>) δ 8,15-8,11 (m, 2H), 8,04-8,01 (m, 2H), 7,64-7,55 (m, 2H), 7,51-7,41 (m, 4H), 6,34 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,29 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 1H), 4,89-4,85 (m, 1H), 4,78 (dd, J = 12,5, 3,2 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 12,5, 4,5 Hz, 1H), 1,72 (d, J = 21,6 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CDCl<3>) δ -150,0.

[1001] Korak 2. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(benzoiloksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-il benzoata (3).

[1003] 2-Amino-6-hloropurin (2,63 g, 15,5 mmol) je suspendovan u t-BuOH (54 mL) pod atmosferom azota. Reakciona smeša je zagrejana na 30 °C, a zatim je dodat kalijum tercbutoksid (1,69 g, 15,1 mmol). Posle 45 minuta dodat je rastvor bromofuranozida 2 (2,24 g, 5,12 mmol) rastvoren u anhidrovanom MeCN (6 ml), reakciona smeša je zagrejana na 65 °C tokom 16 sati, a zatim ohlađena na sobnu temperaturu. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl (70 mL) i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 60 mL). Spojene organske faze su osušene (Na<2>SO<4>), filtrirane i koncentrovane. Ostatak je dva puta prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent PE/EtOAc 80:20 do 0:100, zatim 60:40 do 20:80) da bi se dobio proizvod 3 (1,56 g, 2,96 mmol, 57%) kao bela čvrsta supstanca.

[1004] <1>H NMR (300 MHz, CDCl<3>) δ 8,05-8,02 (m, 2H), 7,95-7,92 (m, 2H), 7,88 (s, 1H), 7,63-7,57 (m, 1H), 7,53-7,41 (m, 3H), 7,35-7,30 (m, 2H), 6,43 (dd, J = 22,6, 9,1 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 5,34 (br s, 2H), 5,00 (dd, J = 11,9, 4,5 Hz, 1H), 4,79-4,73 (m, 1H), 4,60 (dd, J =

[1007] 1

[1008] 11,9, 5,3 Hz, 1H), 1,34 (d, J = 22,6 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CDCl<3>) δ -157,0. MS (ESI) m/z izračunato za C<25>H<22>FN<5>O<5>[M+H]<+>526,9; pronađeno 527,0.

[1010] Korak 3. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (4).

[1012] U rastvor jedinjenja 3 (575 mg, 1,09 mmol) u MeON (9 ml) dodat je metilamin (33% u apsolutnom EtOH, 1,7 ml, 1,81 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C u zatvorenoj epruveti tokom 16 sati, ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeON 100:0 do 85:15), a zatim reverzno-faznom hromatografijom na koloni (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 4 (286 mg, 0,91 mmol, 84%) kao bela čvrsta supstanca.

[1013] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,06 (s, 1H), 6,11 (d, J = 18,1 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 24,4, 9,1 Hz, 1H), 4,07-4,01 (m, 2H), 3,86 (dd, J = 12,9, 3,3 Hz, 1H), 3,04 (br s, 3H), 1,16 (d, J = 22,3 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,7. MS (ESI) m/z izračunato za C<12>H<19>FN<6>O<3>[M+H]<+>313,1; pronađeno 313,2.

[1015] Korak 4. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (5).

[1017] U rastvor jedinjenja 4 (114 mg, 365 µmol) u suvom THF (4 mL), pod atmosferom azota i ohlađen na 0 °C dodat je t-butil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 0,66 mL, 660 µmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, a zatim je dodat rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata, Ross, B.S., Reddy, P.G., Zhang, H.R., Rachakonda, S., and Sofia, M.J., J. Org, Chem., (2011), (253 mg, 558 µmol) rastvoren u suvom THF (1 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, a zatim 18 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene, filtrirane (Na<2>SO<4>) i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10), zatim hromatografijom na koloni sa obrnutom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 5 (smeša dijastereomera, 101 mg, 174 µmol, 48%) kao bela čvrsta supstanca.

[1020] 1 4

[1021] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,83 (s, 0,55H), 7,82 (s, 0,45H), 7,38-7,16 (m, 5H), 6,15 (d, J = 18,5 Hz, 0,45 H), (d, J = 18,8 Hz, 0,55 H), 4,99-4,88 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,65-4,36 (m, 3H), 4,25-4,17 (m, 1H), 3,97-3,85 (m, 1H), 3,05 (brz s, 3H), 1,32-1,28 (m, 3H), 1,25-1,15 (m, 9H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -162,8 (s), -163,3 (s).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,10 (s), 3,99 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<24>H<34>FN<70>O<7>P [M+H]<+>582,2; pronađeno 582,2.

[1024]

[1027] i) Me<2>NH·HCl, DBU, MeOH, 85 °C; v) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C.

[1029] Primer 2 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-Amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (7).

[1031] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (6).

[1033] U rastvor jedinjenja 3, iz Primera 1, (500 mg, 0,95 mmol) u MeOH (6 ml) dodat je dimetilamin hidrohlorid (783 mg, 9,6 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (1,43 ml, 9,6 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C u zatvorenoj epruveti tokom 6 sati, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 85:15), a zatim reverzno-faznom hromatografijom na koloni (gradijent

[1036] 1

[1037] H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 6 (200 mg, 0,61 mmol, 64%) kao bela čvrsta supstanca.

[1038] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,07 (s, 1H), 6,14 (d, J = 18,1 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 24,4, 9,2 Hz, 1H), 4,08-4,02 (m, 2H), 3,87 (dd, J = 12,8, 2,9 Hz, 1H), 3,42 (br s, 6H), 1,16 (d, J = 22,0 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,8. MS (ESI) m/z izračunato za C<13>H<20>FN<6>O<3>[M+H]<+>327,2; pronađeno 327,2.

[1040] Korak 2. Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (7).

[1042] U rastvor jedinjenja 6 (80 mg, 245 µmol) u suvom THF (4 mL), pod atmosferom azota i ohlađen na 0 °C dodat je terc-butil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 0,64 mL, 640 µmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C, a zatim je dodat rastvor izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (167 mg, 367 µmol) rastvoren u suvom THF (4 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene, filtrirane (Na<2>SO<4>) i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10), a zatim hromatografijom na koloni sa reverznom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 7 (smeša dijastereomera, 35 mg, 58 µmol, 24%) kao bela čvrsta supstanca.

[1043] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,83 (s, 0,5H), 7,82 (s, 0,5H), 7,34-7,16 (m, 5H), 6,15 (d, J = 18,7 Hz, 0,5 H), 6,13 (d, J = 18,8 Hz, 0,5 H), 4,99-4,85 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,65-4,26 (m, 3H), 4,27-4,12 (m, 1H), 3,99-3,81 (m, 1H), 3,42, 3,41 (2br s, 6H), 1,36-1,25 (m, 3H), 1,24-1,11 (m, 9H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -162,7 (s), -163,2 (s).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,08 (s), 4,00 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<25>H<36>FN<7>O<7>P [M+H]<+>596,5; pronađeno 596,2.

[1046] 1

[1047]

[1049] i) a) N-Metilciklopropilamin hidrohlorid, Et<3>N, MeOH, 100 °C; b) NH<4>OH, MeOH, 100 °C; ii) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C.

[1051] Primer 3 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-ciklopropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (9).

[1053] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-Amino-6-(N-metil-ciklopropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (8).

[1055] U rastvor jedinjenja 3 (600 mg, 1,14 mmol) u MeON (10 ml) dodat je N-metilciklopropilamin hidrohlorid (366 mg, 3,40 mmol) i trietilamin (470 µL, 3,40 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 100°C u zatvorenoj epruveti tokom 15 sati, a zatim ohlađena do sobne temperature. Dodat je vodeni rastvor koji sadrži 30% NH<4>OH (4 mL) i reakciona smeša je zagrejana na 100°C u zatvorenoj epruveti tokom 2 h, ohlađena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod 8 (351 mg, 0,99 mmol, 87%) kao bela čvrsta supstanca.

[1056] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,13 (s, 1H), 6,15 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 24,3, 9,0 Hz, 1H), 4,06-4,02 (m, 2H), 3,89-3,83 (m, 1H), 3,32 (m, 3H), 3,18-3,11 (m, 1H), 1,16 (d, J = 22,2 Hz, 3H), 0,96-0,89 (m, 2H), 0,74-0,69 (m, 2H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,8. MS (ESI) m/z izračunato za C<15>H<22>FN<6>O<3>[M+H]<+>353,2; pronađeno 353,2.

[1059] 1

[1060] Korak 2. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metilciklopropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (9).

[1062] U rastvor jedinjenja 8 (200 mg, 0,57 mmol) u suvom THF (15 ml) na 0°C dodat je tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 680 µL, 0,68 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0°C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (283 mg, 0,62 mmol) rastvoren u suvom THF (4 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10), a zatim hromatografijom na koloni sa reverznom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 9 (smeša 2 dijastereomera, 160 mg, 0,26 mmol, 45%) kao bela čvrsta supstanca.

[1063] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,85 (m, 1H), 7,38-7,16 (m, 5H), 6,18 (d, J = 18.6 Hz) i 6,16 (d, J = 18,9 Hz, 1H), 4,95-4,90 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,58-4,47 (m, 3H), 4,22-4,19 (m, 1H), 3,95-3,87 (m, 1H), 3,36-3,34 (preklapa se sa MeOH, m, 3H), 3,19-3,12 (m, 1H), 1,32-1,22 (m, 12H), 0,96-0,89 (m, 2H), 0,74-0,69 (m, 2H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,11 (s), 4,02 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<27>H<38>FN<7>O<7>P [M+H]<+>622,2; pronađeno 622,2.

[1066]

[1069] i) 2,6-dihloropurin, tBuOk, tBuOH/MeCN, 65 °C; ii) MeNH<2>, MeOH, 130 °C; iii) izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C do sobne temperature

[1072] 1

[1073] Primer 4 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2,6-bismetilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (12).

[1075] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2,6-dihloro-9H-purin-9-il)-2-(benzoiloksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-il benzoata (10).

[1077] Jedinjenje 2,6-dihloropurina (1,30 g, 6,86 mmol) je suspendovano u t-BuOH (25 ml) pod atmosferom azota. Kalijum terc-butoksid (778 mg, 6,92 mmol) je dodat u porcijama, a zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata, dodat je rastvor bromofuranozida 2 (1,0 g, 2,29 mmol) rastvoren u anhidrovanom MeCN (20 ml) i reakciona smeša je zagrejana na 65 °C preko noći, a zatim ohlađena do sobne temperature. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 puta). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent PE/EtOAc 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 10 (148 mg, 0,27 mmol, 12%) kao lepljiva čvrsta supstanca.

[1078] <1>H NMR (300 MHz, CDCl<3>) δ 8,31 (s, 1H), 8,12-8,09 (m, 2H), 8,02-7,99 (m, 2H), 7,64-7,39 (m, 6H), 6,38 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 6,02 (dd, J = 21,2, 8,9 Hz, 1H), 4,90-4,68 (m, 3H), 1,33 (d, J = 22,4 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CDCl<3>) δ -158,0. MS (ESI) m/z izračunato za C<25>H<20>Cl<2>FN<4>O<5>[M+H]<+>546,4; pronađeno 546,3.

[1080] Korak 2. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2,6-bis-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (11).

[1082] Rastvor jedinjenja 10 (148 mg, 0,27 mmol) u metilaminu (33% u EtOH, 30 ml) je zagrejan na 130 °C u zatvorenoj epruveti tokom 4 dana, ohlađen do sobne temperature i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 50:50), a zatim reverzno-faznom hromatografijom na koloni (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 11 (33 mg, 0,10 mmol, 37%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,00 (s, 1H), 6,12 (d, J = 18,5 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 24,4, 9,5 Hz, 1H), 4,06-3,85 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 1,20 (d, J = 22,4 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ – 163,2. MS (ESI) m/z izračunato za C<13>H<20>FN<6>O<3>[M+H]<+>327,2; pronađeno 327,2.

[1085] 1

[1086] Korak 3. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2,6-bis-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (12).

[1088] U rastvor jedinjenja 11 (55 mg, 0,17 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C je dodat tercbutil magnezijum hlorid (1 M u THF, 304 □L, 0,30 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim 15 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor je ohlađen na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksifosforil)-L-alaninata (115 mg, 0,25 mmol) rastvoren u suvom THF (1 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana 4 dana. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovan sa EtOAc (3 puta). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 50:50) da bi se dobio proizvod 12 (smeša dijastereomera, 13 mg, 0,02 mmol, 13%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,78 (s, 1H), 7,35-7,12 (m, 5H), 6,13 (d, J = 19,1 Hz, 0,53H), 6,10 (d, J = 19,2 Hz, 0,47H), 4,99-4,78 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,72-4,46 (m, 3H), 4,24-4,15 (m, 1H), 3,79-3,92 (m, 1H), 3,02 (br s, 3H), 2,92 (s+s, 3H), 1,29-1,11 (m, 12H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -162,0 (s), - 162,3 (s).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 3,97 (s), 3,89 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<25>H<36>FN<7>O<7>P [M+H]<+>596,6; pronađeno 596,2.

[1091]

[1095] 11

[1096] i) TIPDSCl<2>, imidazol, DMF; ii) izobutiril hlorid, piridin; iii) TBAF, THF; iv) izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C.

[1098] Primer 5 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-izobutiramido-6-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (16).

[1100] Korak 1. Priprema jedinjenja 13.

[1102] U rastvor jedinjenja 4 (286 mg, 0,92 mmol) i imidazola (370 mg, 5,43 mmol) u suvom DMF (6 ml) na 0 °C dodat je 1,3-dihloro-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksan (300 µL, 0,94 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi, razblažena sa EtOAc (50 ml) i suspenzija je isprana zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i fiziološkim rastvorom (po 40 ml). Organski slojevi su osušeni preko Na<2>SO<4>i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent PE/EtOAc 7:3 do 3:7) da bi se dobio proizvod 13 (283 mg, 0,51 mmol, 56%) kao bela čvrsta supstanca. MS (ESI) m/z izračunato za C<24>H<44>FN<6>O<4>Si<2>[M+H]<+>555,8; pronađeno 555,2.

[1104] Korak 2. Priprema jedinjenja 14.

[1106] U rastvor jedinjenja 13 (200 mg, 0,36 mmol) u suvom piridinu (3 ml) na 0 °C dodat je izobutiril hlorid (38 µL, 0,36 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodavanjem vode (500 µL). Smeša je koncentrovana i ko-isparena sa toluenom (3 x 10 ml). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent PE/EtOAc 1:0 do 1:1) da bi se dobio proizvod 14 (99 mg, 0,16 mmol, 44%) kao bela čvrsta supstanca. MS (ESI) m/z izračunato za C<28>H<50>FN<6>O<5>Si<2>[M+H]<+>625,9; pronađeno 625,3.

[1108] Korak 3. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-izobutiramido-6-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (15).

[1110] [0210] U rastvor jedinjenja 14 (90 mg, 0,14 mmol) u suvom THF (2 ml) dodat je tetrabutilamonijum fluorid (1 M u THF, 38 µL, 0,38 mmol). Smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 10:0 do 9:1), a zatim reverzno-faznom hromatografijom na koloni (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 15 (42 mg, 0,11 mmol, 77%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,31 (s, 1H), 6,29 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 4,70-4,60 (m, 1H), 4,07-3,98 (m, 2H), 3,89 (dd, J = 12,5, 3,4 Hz, 1H), 3,10 (br s, 3H), 2,87 (br s, 1H), 1,23-1,16 (m, 9H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,8. MS (ESI) m/z izračunato za C<16>H<24>FN<6>O<4>[M+H]<+>383,4; pronađeno 383,2.

[1112] Korak 4. Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-izobutiramido-6-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (16).

[1114] U rastvor jedinjenja 15 (27 mg, 0,07 mmol) u suvom THF (1 ml) na 0 °C dodat je t-butil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 130 µL, 0,13 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (50 mg, 0,11 mmol) rastvoren u suvom THF (1 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, a zatim 18 sati na sobnoj temperaturi, a zatim je reakcija ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (2 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 95:5), zatim hromatografijom na koloni sa obrnutom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 16 (smeša 2 dijastereomera, 25 mg, 0,04 mmol, 54%) kao bela čvrsta supstanca.

[1115] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,05 (s, 1H), 7,33-7,13 (m, 5H), 6,27 (d, J = 18,6 Hz) i 6,21 (d, J = 19,1 Hz, 1H), 5,10-4,95 (m, 1H), 4,93-4,78 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,60-4,42 (m, 2H), 4,26-4,18 (m, 1H), 3,90-3,80 (m, 1H), 3,09 (brz s, 3H), 2,84-2,80 (m, 1H), 1,33-1,15 (m, 18H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 3,69 (s).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,11 (s), 3,99 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<28>H<40>FN<7>O<8>P [M+H]<+>652,6; pronađeno 652,3.

[1116]

[1119] i) N-Metiletilamin, MeOH, 100 °C; ii) izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksifosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C.

[1121] Primer 6 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-etilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (18).

[1123] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-etilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (17).

[1125] U rastvor jedinjenja 3 (150 mg, 0,29 mmol) u MeON (4 ml) dodat je N-metiletilamin (245 µL, 2,90 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 100 °C u zatvorenoj epruveti tokom 15 sati, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod 31 (89 mg, 0,26 mmol, 89%) kao bela čvrsta supstanca.

[1126] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,06 (s, 1H), 6,13 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 24,9, 8,7 Hz, 1H), 4,11-4,01 (m, 4H), 3,98-3,83 (m, 1H), 3,34 (br. s, 3H), 1,24-1,11 (m, 6H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,7. MS (ESI) m/z izračunato za C<14>H<22>FN<6>O<3>[M+H]<+>341,2; pronađeno 341,2.

[1129] 11

[1130] Korak 2. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-etilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (18).

[1132] U rastvor jedinjenja 17 (30 mg, 0,09 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C dodat je tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 110 µL, 0,11 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (48 mg, 0,11 mmol) rastvoren u suvom THF (1 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod. 18 (smeša 2 dijastereomera, 22 mg, 0,04 mmol, 40%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,69 (m, 1H), 7,26-7,04 (m, 5H), 6,05 (d, J = 18,6 Hz) i 6,03 (d, J = 18,9 Hz, 1H), 4,86-4,79 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,50-4,32 (m, 3H), 4,12-4,06 (m, 1H), 3,96-3,79 (m, 3H), 3,25 (br. s, 3H), 1,24-1,02 (m, 15H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4.07 (s), 4,00 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<26>H<38>FN<7>O<7>P [M+H]<+>609,3; pronađeno 609,2.

[1135]

[1138] i) N-Metilpropilamin, MeOH, 100 °C; ii) izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C.

[1139] Primer 7 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-propilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (20).

[1141] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-propilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (19).

[1143] U rastvor jedinjenja 3 (150 mg, 0,29 mmol) u MeOH (4 ml) dodat je N-metilpropilamin (295 µL, 2,90 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 100 °C u zatvorenoj epruveti tokom 15 sati, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10), a zatim hromatografijom na koloni sa reverznom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 19 (80 mg, 0,23 mmol, 78%) kao bela čvrsta supstanca.

[1144] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,04 (s, 1H), 6,13 (d, J = 18,3, 1H), 4,40 (dd, J = 24,2, 9,2 Hz, 1H), m, 4,06-3,84 (m, 5H), 1,68 (sept, J = 7,5 Hz, 2H), 1,15 (d, J = 22,2 Hz, 3H), 0,93 (t, J = 7,5 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,8. MS (ESI) m/z izračunato za C<15>H<24>FN<6>O<3>[M+H]<+>355,2; pronađeno 355,2.

[1146] Korak 2. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metilpropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (20).

[1148] U rastvor jedinjenja 19 (30 mg, 0,09 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C dodat je tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 110 µL, 0,11 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (46 mg, 0,11 mmol) rastvoren u suvom THF (1 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod 20 (smeša 2 dijastereomera, 22 mg, 0,03 mmol, 33%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,78, 7,77 (s+s, 1H), 7,37-7,13 (m, 5H), 6,15 (d, J = 18,6 Hz) i 6,13 (d, J = 18,9 Hz, 1H), 4,97-4,89 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,63-4,30 (m, 3H), 4,22-

[1151] 11

[1152] 4,14 (m, 1H), 4,02-3,84 (m, 2H), 1,74-1,63 (3H, m), 1,32-1,27 (m, 3H), 1,23-1,13 (m, 9H), 0,94 (t, J = 7,4 Hz) i 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,05 (s), 4,00 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<27>H<40>FN<7>O<7>P [M+H]<+>623,3; pronađeno 623,2.

[1155]

[1158] i) a) N-Metilciklobutilamin hidrohlorid, Et<3>N, MeOH, 100 °C; b) NH<4>OH, MeOH, 100 °C; ii) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl, THF, 0 °C

[1160] Primer 8 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-ciklobutilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (22).

[1162] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metil-ciklobutilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (21).

[1164] U rastvor jedinjenja 3 (150 mg, 0,29 mmol) u MeOH (4 ml) dodat je N-metilciklobutilamin hidrohlorid (105 mg, 0,90 mmol) i trietilamin (190 µL, 1,00 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 100 °C u zatvorenoj epruveti tokom 15 sati, a zatim ohlađena do sobne temperature. Dodat je vodeni rastvor koji sadrži 30% NH<4>OH (1 mL) i reakciona smeša je zagrejana na 100 °C u zatvorenoj epruveti tokom 2 sata, ohlađena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod 21 (90 mg, 0,25 mmol, 86%) kao bledožuta čvrsta supstanca.

[1167] 11

[1168] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 8,09 (s, 1H), 6,14 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 5,80-5,70 (m, 1H), 4,44-4,33 (m, 1H), 4,06-4,02 (m, 2H), 3,88-3,84 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 2,38-2,19 (m, 4H), 1,79-1,71 (m, 2H), 1,17 (d, J = 22,2 Hz, 3H).<19>F NMR (282 MHz, CD<3>OD) δ -163,8. MS (ESI) m/z izračunato za C<16>H<24>FN<6>O<3>[M+H]<+>367,2; pronađeno 367,2.

[1170] Korak 2. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metilciklobutilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (22).

[1172] U rastvor jedinjenja 21 (50 mg, 0,14 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C je dodat tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 210 µL, 0,21 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (74 mg, 0,16 mmol) rastvoren u suvom THF (2 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10), a zatim hromatografijom na koloni sa reverznom fazom (gradijent H<2>O/MeOH 100:0 do 0:100) da bi se dobio proizvod 22 (smeša 2 dijastereomera, 24 mg, 0,04 mmol, 28%) kao bela čvrsta supstanca.

[1173] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,79 (s, 0,2H), 7,77 (s, 0,8H), 7,38-7,12 (m, 5H), 6,18 (d, J = 17,6 Hz) i 6,16 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 4,95-4,81 (m, 2H), 4,62-4,43 (m, 3H), 4,25-4,18 (m, 1H), 3,96-3,83 (m, 1H), 3,38 (s) i 3,36 (s, 3H), 2,38-2,21 (m, 4H), 1,75-1,63 (m, 2H), 1,32-1,16 (m, 12H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,04 (s), 3,97 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<28>H<40>FN<7>O<7>P [M+H]<+>636,3; pronađeno 636,2.

[1175] Modifikacija 2-amino ostatka u aktivnim jedinjenjima

[1177] Stručnjak u ovoj oblasti može dodati supstituent na 2-amino purinski ostatak postupcima koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Ovde je dat jedan neograničavajući postupak, a drugi se mogu lako prilagoditi. ((2R,3R,4R,5R)-3-(benzoiloksi)-5-bromo-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metil benzoat, tretira se komercijalno dostupnim 2,6-dihloropurinom, bazom i smešom organskih rastvarača na povišenoj temperaturi da bi se dobio (2R,3R,4R,5R)-

[1180] 11

[1181] 5-(2,6-dihloro-9H-purin-9-il)-2-(benzoiloksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-il benzoat. U jednom primeru izvođenja, baza je kalijum terc-butoksid. U jednom primeru izvođenja, smeša organskih rastvarača sadrži terc-butanol i acetonitril. Jedinjenje, (2R,3R,4R,5R)-5-(2,6-dihloro-9H-purin-9-il)-2-(benzoiloksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-il benzoat se tretira aminom, bazom i organskim rastvaračem na sobnoj temperaturi da bi se dobili 2-hloro-N<6>-supstituisani purini. U jednom primeru izvođenja, amin je metilamin. U jednom primeru izvođenja, baza je trietilamin. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač je etanol. Stručnjak u ovoj oblasti će takođe prepoznati da će se, nakon tretmana sa aminom i bazom, benzoatne grupe na nukleozidu istovremeno ukloniti da bi se generisao deprotektovani furanozni ostatak. 2-Hloro-N<6>-supstituisani purini se zatim mogu tretirati aminom i organskim rastvaračem u zatvorenoj epruveti na povišenoj temperaturi od oko 100 °C da bi se dobili N<2>N<6>-disupstituisani purinski nukleozidi ovog pronalaska. U jednom primeru izvođenja, amin je metilamin. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač je etanol. N<2>N<6>-Disupstituisani purinski nukleozidi ovog pronalaska mogu se tretirati bazom, izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninatom i organskim rastvaračem na sniženoj temperaturi da bi se dobila jedinjenja Formule I-V. U jednom primeru izvođenja, baza je terc-butil magnezijum hlorid. U jednom primeru izvođenja, organski rastvarač je tetrahidrofuran.

[1183] Priprema stereospecifičnih fosfornih enantiomera

[1185] Određena od ovde opisanih aktivnih jedinjenja imaju hiralni fosforni ostatak. Bilo koje od ovde opisanih aktivnih jedinjenja može se obezbediti kao izolovani enantiomerni oblik fosfora, na primer, najmanje 80, 90, 95 ili 98% R ili S enantiomera, korišćenjem postupaka poznatih stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, postoji niz publikacija koje opisuju kako se dobijaju takva jedinjenja, uključujući, ali ne ograničavajući se na, hromatografiju na koloni, na primer kao što je opisano u Primeru 17 ispod i U.S. Patentima br. 8,859,756; 8,642,756 i 8,333,309 za Ross, et al.

[1187] Primer 9. Razdvajanje stereoizomera jedinjenja 5.

[1189] Stereoizomeri jedinjenja 5 su razdvojeni na koloni Phenominex Luna koristeći sledeće uslove:

[1192] 11

[1193] Kolona: Phenominex Luna 5 mikrona C18 (2) 250 x 10 mm, broj dela OOG-4252-BO Koncentracija uzorka: Približno 50 mg/ml u acetonitrilu

[1194] Zapremina injekcije: 50 µl

[1195] Mobilna faza A: Voda HPLC kvaliteta

[1196] Mobilna faza B: acetonitril HPLC kvaliteta.

[1197] Protok: 5 ml/min

[1198] UV: 283 nm

[1199] Gradijent:

[1202]

[1205] Vreme trajanja: 45 minuta

[1206] Temperatura kolone: 40 °C

[1207] Uzorak hromatograma polupreparativne analize je prikazan na slici 1.

[1208] Kombinovane frakcije su procenjene korišćenjem analitičke kolone pod sledećim uslovima:

[1210] Kolona: Phenominex Luna 5 mikrona C18 (2) 250 x 2 mm, broj dela OOG-4252-BO Zapremina injekcije: 10 µl

[1211] Mobilna faza A: Voda HPLC kvaliteta

[1212] Mobilna faza B: acetonitril HPLC kvaliteta.

[1213] Protok: 0,2 ml/min

[1214] UV: 283 nm

[1215] Gradijent:

[1218]

[1222] 11

[1223]

[1226] Vreme trajanja: 45 minuta

[1227] Temperatura kolone: 40 °C

[1228] Spojene frakcije za svaki stereoizomer su isparavane do sušenja pomoću rotacionog isparivača sa temperaturom kupatila od 30 °C. Dobijene čvrste materije su rastvorene u 1 ml acetonitrila, prebačene u mikrocentrifužne epruvete od 1,7 ml, a rastvarač je isparen na vakuumskoj centrifugi na temperaturi od 30 °C.

[1229] Podaci o konačnim uzorcima su sledeći:

[1231] 1. Prvi eluirajući pik: Jedinjenje 5 #1 (5-1) (21,7 mg - 97,8% ee).

[1232] 2. Drugi eluirajući pik: Jedinjenje 5 #2 (5-2) (13,2 mg - 95,9% ee).

[1234] Konačne težine 1. i 2. pika dobro odgovaraju njihovim procentima u originalnoj smeši (62,2% i 37,8%).

[1236] Stereospecifične sinteze jedinjenja formule I-VII

[1238]

[1241]

[1244] Primer 10 (referentni primer). Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (23).

[1246] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (23).

[1249] 12

[1250] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(benzoiloksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-il benzoat, 3, (80 g, 140 mmol) je dodato u rastvor trimetilamina u metanolu (7 M, 800 ml) i mešano na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana, a zatim prečišćena hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 100:1) da bi se dobio (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (23) (40 g, 90%).

[1253]

[1256] Primer 11. Priprema ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1258]

[1261]

[1264] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (4).

[1266] [0229] U rastvor (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metil-tetrahidrofuran-3-ola (2,0 g, 1,0 ekv.) u dioksanu (15 ml) dodat je vodeni rastvor MeNH<2>(5,0 ekv.). Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 40:1-30:1) da bi se dobio (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol kao beli prah (1,6 g, 81,6%).

[1267] [M+H]<+>= 313,5

[1270]

[1273] Korak 2. Priprema ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1275] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (1,47 g, 1,0 ekv.) i PPAL-S (2,35 g, 1,1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (29 mL). Nakon hlađenja smeše na -10 °C, t-BuMgCl (5,8 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) je polako dodat pod slojem N<2>. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl, i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 50:1-20:1) da bi se dobio ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat kao beli prah (1,1 g, 40,3%).

[1276] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,81 (s, 1H), 7,33-7,16 (m, 5H), 6,10 (d, J= 18,4 Hz, 1H), 4,90-4,84 (m, 5H), 4,55-4,46 (m, 3H), 4,20-4,16 (m, 1H), 3,91-3,87 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,03 (s, 3H), 1,30-1,20 (m, 12H). [M+H]<+>= 582,8.

[1278]

[1279] Primer 12 (referentni primer). Priprema izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (25).

[1281]

[1284]

[1287] Korak 1. Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ola.

[1289] U rastvor (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metil-tetrahidrofuran-3-ol (2,8 g, 8 mmol) u dioksanu (20 ml) dodat je vodeni rastvor dimetilamina (5 ml). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 60:1) da bi se dobio (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (2,2 g).

[1290] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 8,08 (s, 1H), 6,13 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,06 (d, J= 10,8 Hz, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 1,18 (d, J = 22 Hz, 3H).

[1293]

[1296] Korak 2. Priprema izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (25).

[1299] 12

[1300] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (8 g, 1,0 ekv.) i PPAL-S (11,1 g, 1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (100 mL). Smeša je ohlađena na -5-0 °C i lagano je dodat t-BuMgCl (30,5 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod atmosferom N<2>. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (70 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 50:1) da bi se dobio izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat kao beli prah (9,5 g, 65%).

[1301] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,81 (s, 1H), 7,35-7,19 (m, 5H), 6,15 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 4,90 (m, 1H), 4,54-4,49 (m, 3H), 4,22-4,19 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,43 (s, 3H), 1,32 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,24-1,17 (m, 9H).<31>P NMR (160 MHz, CD<3>OD) δ 3,89.

[1304]

[1307] Primer 13 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (26).

[1309] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (3 g, 1,0 ekv.) i PPAL-R (4,17 g, 1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (60 mL). Smeša je ohlađena na -5-0 °C i polako je dodat t-BuMgCl (11,4 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod atmosferom N<2>. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 16 sati, smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim soli (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 50:1) da bi se dobio izopropil ((((R)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(dimetilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat kao beli prah (2,2 g, 41%).

[1310] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,8 (s, 1H), 7,35-7,29 (m, 5H), 6,18 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 4,92 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,51-4,23 (m, 3H), 3,90 (m, 1H), 3,44 (s, 6H), 1,29 (d, J = 6 Hz, 3H), 1,22-1,16 (m, 10H).<31>P NMR (160 MHz, CD<3>OD) δ 3,98.

[1313]

[1316] Primer 14 (referentni primer). Priprema izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1318]

[1321]

[1324] Korak 1: Priprema (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ola (8).

[1326] K<2>CO<3>(53 g, 500 mmol) je dodat u N-metilciklopropanamin hidrohlorid u vodenom rastvoru (100 ml). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, dobijen je rastvor (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-hloro-9HDodat je rastvor (purin-9-il)-2-(hidroksimetil)-4-fluoro-4-metil-tetrahidrofuran-3-ola (35 g, 109 mmol) u dioksanu (300 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati, a HPLC je pokazao da je reakcija završena. Smeša je koncentrovana

[1329] 12

[1330] i prečišćena hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 60:1) da bi se dobio (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (30 g, 82%).

[1331] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 8,16 (s, 1H), 6,17 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,06 (m, 2H), 3,90 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,16 (m, 1H), 1,18 (d, J = 22,4 Hz, 3H), 0,94 (m, 2H), 0,74 (m, 2H). [M+H]<+>= 353,2.

[1334]

[1337] Korak 2: Priprema izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1339] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (8 g, 1,0 ekv.) i PPAL-S (10,3 g, 1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (100 mL). Nakon hlađenja smeše na -5-0 °C, polako je dodat t-BuMgCl (28 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod atmosferom N<2>. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (70 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 100:1 do 50:1) da bi se dobio izopropil ((((S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat kao beli prah (9,5 g, 65%).

[1340] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,35-7,19 (m, 5H), 6,17 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,91 (m, 1H), 4,52 (m, 3H), 4,21 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,16 (m, 1H), 2,0 (s, 1H), 1,26-1,16 (m, 12H), 0,93 (m, 2H), 0,73 (m, 2H).<31>P NMR (160 MHz, CD<3>OD) δ 3,90

[1343]

[1347] 12

[1348] Primer 15 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1350] Jedinjenje (2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(metilciklopropanamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-metiltetrahidrofuran-3-ol (3 g, 1,0 ekv.) i PPAL-R (2.8 g, 1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (60 mL). Nakon hlađenja smeše na -5-0 °C, polako je dodat t-BuMgCl (7,6 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod N<2>. Zatim je smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat i ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovanim sa EtOAc (50 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 100:1 do 50:1) da bi se dobio proizvod kao beli prah (3 g, 55%).

[1351] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,81 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 5H), 6,16 (d, J = 24.8 Hz, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,84-4,50 (m, 3H), 4,22-4,19 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,33 (s, 3H), 3,14 (m, 1H), 2,0 (s, 1H), 1,

[1353] Primer 16 (referentni primer). Priprema jedinjenja 32.

[1355]

[1358]

[1362] 12

[1363] Korak 1. Priprema jedinjenja 29.

[1365] U rastvor 6 (3.0 g, 1,0 ekv.) u piridinu (30 ml) je dodat TIPDSCl<2>(4,35 g, 1,5 ekv.) na 0 °C. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sa 1M vodenim rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>, fiziološkim rastvorom, sušen preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovan da bi se dobio 29 kao žuto ulje (6,3 g, 100%).

[1368]

[1371] Korak 2. Priprema jedinjenja 30.

[1373] U smešu jedinjenja 29 (800 mg, 1,0 ekv.), DMAP (16 mg, 0,1 ekv.), piridina (1,6 ml) i DCM (10 ml) je dodat izobutiril hlorid (209 mg, 1,5 ekv.) na 0 °C. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je ugašena vodom, isprana vodenim 1M rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>, fiziološkim rastvorom, sušena preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobio proizvod, 30, kao belo ulje (563 mg, 62,3%).

[1374] <1>H NMR (400 MHz, CDCl<3>) δ 7,98 (s, 1H), 787 (s, 1H), 6,20 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,32-4,07 (m, 4H), 3,50 (s, 6H), 2,3 (m, 1H), 1,29-1,05 (m, 45H).

[1377]

[1380] Korak 3. Priprema jedinjenja 31.

[1382] U smešu 30 (560 mg, 1,0 ekv.) u THF (10 ml) je dodat Et<3>N·3HF (706 mg, 5 ekv.) i Et<3>N (890 mg, 10 ekv.) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobilo 31 kao beli prah (288 mg, 83%).

[1385] 12

[1386] <1>H NMR (400 MHz, CDCl<3>) δ 7,72 (s, 1H), 5,96 (d, J = 44,0 Hz, 1H), 5,22 (m, 1H), 4,13-3,99 (m, 4H), 3,42 (s, 6H), 2,83-2,63 (m, 2H), 1,29-1,17 (m, 9H).

[1389]

[1392] Korak 4. Priprema jedinjenja 32.

[1394] Jedinjenje 31 (280 mg, 1,0 ekv.) i PPAL-S (320 mg, 1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (10 ml). Nakon hlađenja smeše na -5 °C, polako je dodat t-BuMgCl (0,87 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod atmosferom N<2>. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (10 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobio proizvod kao beli prah (260 mg, 50%).

[1395] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,98 (s, 1H), 7,25 (m, 5H), 6,23 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 4,52 (m, 3H), 4,38 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,48 (s, 6H), 2,81 (m, 1H), 1,32 (m, 18H).

[1396] [M+H]<+>= 666,9.

[1399]

[1402] Primer 17 (referentni primer). Priprema jedinjenja 35.

[1404]

[1407] 12

[1408]

[1411] Korak 1. Priprema jedinjenja 33.

[1413] U smešu 29 (2.0 g, 1,0 ekv.), DMAP (0,04 g, 0,1 ekv.), piridina (4 ml) i DCM (20 ml) je dodat AcCl (0,414 g, 1,5 ekv.) na 0 °C. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je ugašena vodom, isprana vodenim 1M rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>, zatim fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobio proizvod, 33, kao belo ulje (1,73 g, 80,8%).

[1414] <1>H NMR (400 MHz, CDCl<3>) δ 7,99 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,20 (d, J = 20,0 Hz, 1H), 4,33-4,11 (m, 4H), 3,50 (s, 6H), 2,63 (s, 3H), 2,3 (m, 1H), 1,26-1,05 (m, 29H). [M+H]<+>= 611,9.

[1417]

[1420] Korak 2. Priprema jedinjenja 34.

[1422] U smešu 33 (1.58 g, 1,0 ekv.) u THF (20 mL) je dodat Et<3>N·3HF (2,1 g, 5 ekv.) i Et<3>N (2,6 g, 10 ekv.) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobio 34 kao beli prah (782 mg, 82%).

[1423] [M+H]+ = 369,6.

[1426]

[1430] 1

[1431] Korak 3. Priprema jedinjenja 35.

[1433] Jedinjenje 34 (136 mg, 1,0 ekv.) i PPAL-S (184 mg, 1,1 ekv.) su rastvoreni u anhidrovanom THF (3 ml). Nakon hlađenja smeše na -5 °C, polako je dodat t-BuMgCl (0,5 mL, 1,7 M, 2,1 ekv.) pod atmosferom N<2>. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl i ekstrahovana sa EtOAc (10 mL × 3). Spojeni organski slojevi su isprani vodom, fiziološkim rastvorom (20 mL), osušeni preko anhidrovanog rastvora i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (DCM:MeOH = 50:1-20:1) da bi se dobio fosforamidat 35 kao beli prah (150 mg, 63,8%).

[1434] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,81 (s, 1H), 7,35-7,16 (m, 5H), 6,10 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,52-4,46 (m, 3H), 4,21 (m, 1H), 3,91-3,87 (m, 1H), 3,03 (s, 3H), 1,30-1,13 (m, 12H).

[1435] <31>P NMR (160 MHz, CD<3>OD) δ 3,84.<19>F NMR (376 MHz, CD<3>OD) δ -162,79.

[1437] Sinteza β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-etinil-N<6>-supstituisanih-2,6-diaminopurinskih nukleotida

[1439]

[1442]

[1445] Primer 18 (referentni primer). Opšti put do β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-etinil-N<6>-supstituisanih-2,6-diaminopurinskih nukleotida

[1447]

[1450] 1 1

[1451]

[1454] Korak 1. Priprema jedinjenja 36.

[1456] U rastvor 6-hloroguanozina (100 g, 332 mmol) u piridinu (400 ml) dodat je TPDSCl<2>(110 ml, 1,05 ekv.) ukapavanjem na -5~5 °C pod atmosferom N<2>. Nakon mešanja na toj temperaturi tokom 2 sata, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Dodat je DCM (600 mL), a zatim je ukapavanjem dodat TMSCl (85 mL, 2 ekv.) na 0-5 °C. Nakon mešanja na toj temperaturi tokom 2 sata, TLC je pokazala da je intermedijer potrošen.

[1457] Izobutiril hlorid je dodat ukapavanjem na 0-5 °C. Nakon mešanja na toj temperaturi tokom 2 sata, TLC je pokazala da je intermedijer potrošen. Dodata je voda, a sadržaj je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je zatim isprana sa 0,5 N HCl da bi se uklonio piridin. Nakon što je pH sadržaja isprano do 5~6, dodat je pTSA·H<2>O (9,2 g, 484,5 mmol) na 0-5 °C. Nakon mešanja na toj temperaturi tokom 1 sata, TLC je pokazala da je intermedijer potrošen. Zatim je dodata voda, a organska faza je isprana vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaHCO<3>i fiziološkim rastvorom. Nakon sušenja iznad Na<2>SO<4>, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je zatim prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA = 100-10/1) da bi se dobio proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca (82 g, 40%).

[1458] <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 10,88 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 5,91 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,53 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,72 - 4,58 (m, 2H), 4,16 (dd, J = 12,4, 4,8 Hz, 1H), 4,00 (ddd, J = 7,7, 4,8, 2,6 Hz, 1H), 3,93 (dd, J = 12,4, 2,7 Hz, 1H), 2,78 (h, J = 6,9 Hz, 1H), 1,26 - 1,12 (m, 3H), 1,10 (d, J = 6,7 Hz, 6H), 1,09 - 0,88 (m, 24H).

[1461]

[1465] 1 2

[1466] Korak 2. Priprema jedinjenja 37.

[1468] U rastvor 36 (10,0 g, 16,3 mmol) u DCM (100 ml) dodat je Des-Martinov periodinan na sobnoj temperaturi i reakcija je mešana 12 sati. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM (200 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom Na<2>S<2>O<3>i fiziološkim rastvorom. Organska faza je zatim osušena preko Na<2>SO<4>i koncentrovana da bi se dobio sirovi 37 kao svetlo žuta čvrsta supstanca (12 g). Sirovi 53 može se direktno koristiti u sledećem koraku bez prečišćavanja.

[1471]

[1474] Korak 3. Priprema jedinjenja 38.

[1476] U rastvor etiniltrimetilsilana (18,6 mL, 142,7 mmol) u THF (240 mL) dodat je n-BuLi (46 mL, 2,5 M, 115,0 mmol) ukapavanjem na -15~-20 °C pod atmosferom N<2>. Nakon mešanja tokom 30 minuta, reakcija je ohlađena na -70 °C i dodat je 37 (sirovi, 16,3 mmol) u THF (60 mL) na toj temperaturi. Sadržaj je zatim zagrejan do 0 °C. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH<4>Cl i reakcija je ekstrahovana sa EA (100 mL) tri puta. Organska faza je spojena, a zatim isprana fiziološkim rastvorom, a zatim dodatno osušena preko Na<2>SO<4>. Nakon koncentrovanja u vakuumu, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA = 100->10/1) da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca

[1478]

[1481] Korak 4. Priprema jedinjenja 39.

[1483] U rastvor 38 (6,0 g, 8,4 mmol) u DCM (240 ml) dodat je piridin (4,2 ml, 52,9 mmol) pod atmosferom N<2>. Reakcija je ohlađena na -70 °C, i dodat je DAST (12 mL, 90,4 mmol).

[1486] 1

[1487] Sadržaj je zatim zagrejan na -30 °C. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Reakcija je sipana u zasićeni vodeni rastvor NaHCO<3>, a zatim ekstrahovana sa DCM (200 mL). Organska faza je isprana fiziološkim rastvorom i osušena preko Na<2>SO<4>. Nakon koncentrovanja u vakuumu, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA = 100->10/1) da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca (3,8 g, 63%).

[1490]

[1493] Korak 5. Priprema jedinjenja 40.

[1495] U rastvor 39 (3,8 g, 5,3 mmol) u THF (120 ml) dodat je AcOH (1,3 g, 22 mmol) i TBAF (4,2 g, 15,9 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Nakon koncentrovanja u vakuumu, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EA) da bi se dobio proizvod kao bela čvrsta supstanca (2,0 g, 95%).

[1498]

[1501] Opšti postupak za zamenu aminokiselina i uklanjanje zaštite:

[1503] U rastvor 40 (350 mg, 0,88 mmol) u dioksanu (20 ml) dodat je metanolni ili vodeni rastvor odgovarajućeg amina (slobodna baza ili so kao hidrohlorid plus DIEA) na sobnoj temperaturi. Sadržaj je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1-12 sati. TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. Nakon koncentrovanja u vakuumu, ostatak je direktno korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. Gore pomenuti ostatak je rastvoren u metanolu (10 ml). Dodat je vodeni rastvor NaOH (2,5 N, 10 ml). Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, TLC je pokazala da je početni materijal potrošen. pH sadržaja je podešen na 7-8 pomoću 1 N

[1506] 1 4

[1507] HCl. Rastvor je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH = 100->20/1) da bi se dobio proizvod kao beličasta čvrsta supstanca (prinos: 40-80% u dva koraka). Tabela 1 ilustruje strukture jedinjenja. 57-63 i odgovarajući masene spektre i<1>H NMR za odgovarajuća jedinjenja.

[1509] Tabela 1.

[1512]

[1514] *nije prema ovom pronalasku

[1517] 1

[1518] Primer 19 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-dimetilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata

[1520]

[1523]

[1526] i) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl3, THF, 0 °C.

[1528] Korak 1. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-dimetilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1530] U rastvor jedinjenja 41 (30 mg, 0,09 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C je dodat tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 125 µL, 0,13 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R, S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (49 mg, 0,11 mmol) rastvoren u suvom THF (2 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod (smeša 2 dijastereomera, 12 mg, 0,02 mmol, 24%) kao bela čvrsta supstanca.

[1531] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7.79 (s, 0,45H), 7,77 (s, 0,55H), 7,36-7,14 (m, 5H), 6,28 (d, J = 17,4 Hz) i 6,26 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 5,00-4,44 (m, 5H), 4,23-4,16 (m, 1H), 3,69-3,81 (m, 1H), 3,42 (bs, 3H), 3,40 (bs, 3H), 1,32-1,26 (m, 3H), 1,20-1,15 (m, 6H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4.04 (s), 3,98 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<26>H<34>FN<7>O<7>P [M+H]<+>606,2; pronađeno 606,2.

[1534] 1

[1535] Primer 20 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1537]

[1540]

[1543] i) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl3, THF, 0 °C.

[1545] Korak 1. Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-metilamino-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1547] U rastvor jedinjenja 42 (30 mg, 0,09 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C dodat je tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 125 µL, 0,13 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (49 mg, 0,11 mmol) rastvoren u suvom THF (2 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod (smeša 2 dijastereomera, 9 mg, 0,02 mmol, 18%) kao bela čvrsta supstanca.

[1548] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,81, 7,79 (0,9 s 0,1 s, 1H), 7,36-7,14 (m, 5H), 6,26 (d, J = 17,4 Hz, 0,1H) i 6,24 (d, J = 17,4 Hz, 0,9H), 4,93-4,89 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,80-4,78 (m, 1H), 4,53-4,49 (m, 2H), 4,21-4,18 (m, 1H), 3,95-3,84 (m, 1H), 3,23-3,20 (m, 1H), 3,04 (bs, 1H), 1,31-1,14 (m, 9H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,06 (s), 3,97 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<25>H<32>FN<7>O<7>P [M+H]<+>592,2; pronađeno 592,2.

[1551] 1

[1552] Primer 21 (referentni primer). Priprema izopropil ((((R, S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metilciklopropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-(2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata

[1554]

[1557]

[1560] i) Izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninat, tBuMgCl3, THF, 0 °C.

[1562] Korak 1. Priprema izopropil ((((R,S)-(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-(N-metilciklopropilamino)-9H-purin-9-il)-4-fluoro-3-hidroksi-4-etiniltetrahidrofuran-2-il)metoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata.

[1564] U rastvor jedinjenja 43 (40 mg, 0,11 mmol) u suvom THF (2 ml) na 0 °C dodat je tercbutil magnezijum hlorid (1,0 M u THF, 160 µL, 0,16 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana 15 minuta na 0 °C, a zatim još 15 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor izopropil ((R,S)-(pentafluorofenoksi)-fenoksi-fosforil)-L-alaninata (55 mg, 0,12 mmol) rastvoren u suvom THF (2 ml) ukapavanjem tokom 10 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i 18 sati na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl (4 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 5 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na<2>SO<4>i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent DCM/MeOH 100:0 do 90:10) da bi se dobio proizvod (smeša 2 dijastereomera, 18 mg, 0,03 mmol, 26%) kao bela čvrsta supstanca.

[1565] <1>H NMR (300 MHz, CD<3>OD) δ 7,84, 7,82 (s+s, 1H), 7,35-7,14 (m, 5H), 6,30 (d, J = 17,4 Hz) i 6,26 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 4,99-4,89 (preklapa se sa H<2>O, m, 1H), 4,82-4,69 (m, 1H), 4,59-4,46 (m, 2H), 4,21 (m, 1H), 3,96-3,82 (m, 1H), 3,24-3,22 (m, 1H), 3,17-3,11 (m, 1H) 1,31-1,26 (m, 3H), 1,20-1,15 (m, 6H), 0,93-0,89 (m, 2H), 0,75-0,68 (m, 2H).<31>P NMR (121 MHz, CD<3>OD) δ 4,06 (s), 3,98 (s). MS (ESI) m/z izračunato za C<28>H<36>FN<7>O<7>P [M+H]<+>632,2; pronađeno 632,2.

[1568] 1

[1569] Primer 22 (referentni primer). Priprema PPAL-S

[1571]

[1574]

[1577] Korak 1. Priprema racemskog PPAL

[1579] U mešani rastvor fenil dihlorofosfata (250 g) u EtOAc (800 ml) dodat je izopropil L-alaninat (200 g) u trietilaminu (120 g) na -10 °C. Reakcija je mešana na -10 °C tokom 1 sata. Dodato je jedinjenje 2,3,4,5,6-pentafluorofenol (220 g) u trietilaminu (120 g) i EtOAc (400 ml) na -5 °C i mešano na toj temperaturi tokom 0,5 sati. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana na toj temperaturi tokom 2 sata. Rastvor je filtriran i ispran sa EtOAc (2 × 200 ml), a spojene organske faze su isparene pod vakuumom da bi se dobila čvrsta supstanca.

[1580] PPAL-RS (racemat).

[1582] Korak 2. Priprema PPAL-RS

[1584] U mešani rastvor PPAL-RS u EtOAc (200 mL) i n-heptanu (1,4 L) dodat je 2,3,4,5,6-pentafluorofenol (10,1 g) u trietilaminu (6 g), a mešanje je nastavljeno oko 4-8 h. Nakon što je R-izomer čvrste supstance bio manji od 0,5%, čvrsta supstanca je filtrirana. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc (4 L), isprana vodom (2 × 100 mL), fiziološkim rastvorom (1 L), osušena preko anhidrovanog Na<2>SO<4>i filtrirana. Rastvor je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio PPAL-S (350 g).

[1585] <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,42 - 7,40 (m, 2H), 7,24 - 7,22 (m, 3H), 6,87 (dd, J = 14,1, 9,9 Hz, 1H), 4,90 - 4,84 (m, 1H), 3,94 - 3,88 (m, 1H), 1,27 (dd, J = 7,1, 1,1 Hz, 3H), 1,15 (dd, J = 6,2, 1,2 Hz, 6H) ppm.<13>P NMR (160 MHz, DMSO-d6) δ = 0,37 ppm.

[1587] Primer 23 (referentni primer). Priprema PPAL-R

[1589]

[1592] 1

[1593]

[1596] U bocu sa okruglim dnom i tri grlića opremljenu mehaničkom mešalicom dodat je fenil dihlorofosfat (189,6 g, 0,90 mol) i anhidrovani EtOAc (750 ml). Rastvor je ohlađen na -10 °C u atmosferi azota. U gornji rastvor su dodati izo-propil L-alaninat (118 g, 0,90 mmol) i trietilamin (100 g, 1,1 ekv.). Prethodno ohlađena (ispod 10 °C) smeša 2,3,4,5,6-pentafluorofenola (165 g, 1 ekv.) i trietilamina (90,5 g, 1 ekv.) u EtOAc (300 ml) je dodata u smešu preko levka za dodavanje na -5 °C i dobijena smeša je mešana između 20-25 °C tokom 1 sata. Beli talog (TEA·HCl) je filtriran i ispran sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom da bi se dobio PPAL-RS oko 280 g (S/R=1/1) kao bela čvrsta supstanca.

[1597] PPAL-RS (280 g) je triturisan u 300 ml heptana/EtOAc (20:1) na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta. Bela suspenzija je filtrirana, a čvrsta masa je isprana smešom heptana/EtOAc (20:1). Filtrat je ohlađen na 8 °C, a čvrsta masa je sakupljena filtracijom. Sirovi proizvod PPAL-R (10 g) je dobijen sa 95% hiralne čistoće. Sirovi proizvod je prečišćen prateći gore navedeni korak.

[1598] PPAL-R (5 g) je dobijen u NLT 98% hiralne čistoće.

[1599] <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ = 7,43 - 7,39 (m, 2H), 7,27 - 7,22 (m, 3H), 6,87 (dd, J = 14,1, 9,9 Hz, 1H), 4,89 - 4,85 (m, 1H), 3,95 - 3,90 (m, 1H), 1,27 (dd, J = 7,1, 1,1 Hz, 3H), 1,14 (dd, J = 6,2, 1,2 Hz, 6H).<13>P NMR (160 MHz, DMSO-d<6>) δ = 0,35.

[1601] Primer 24 (referentni primer): Priprema jedinjenja 52.

[1603]

[1606] 14

[1607]

[1610] Korak 1. Priprema jedinjenja 49.

[1612] U rastvor 48 (1,81 g, 3,23 mmol) u dioksanu (18 ml) dodat je 40% vodeni rastvor CH<3>NH<2>(16,2 mmol). Reakcija je mešana na 40 °C tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana, razblažena sa EtOAc (50 mL), isprana vodom i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na<2>SO<4>, filtriran i koncentrovan da bi se dobila bela čvrsta supstanca 49 (1,66 g, 92%).

[1615]

[1618] Korak 2. Priprema jedinjenja 50.

[1620] U rastvor 49 (1,34 g, 2,42 mmol) i 1-metilimidazola (794 mg, 9,68 mmol) u DCM (14 ml) polako je dodat pentil hloroformat (547 mg, 3,63 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni (PE: EtOAc = 5:1 - 2:1) da bi se dobio 50 (1,01 g, 62%) kao bela čvrsta supstanca.

[1621] <1>HNMR (400 MHz, DMSO) δ 7,96 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 6,06-6,10 (d, J= 16,0 Hz, 1H), 4,09-4,30 (m, 2H), 3,97-4,09 (m, 4H), 3,28 (s, 3H), 1,39-1,46 (m, 2H), 1,0-1,2 (m, 35H), 0,73-0,76 (t, J= 8,0 Hz, 3H).

[1624]

[1627] Korak 3. Priprema jedinjenja 51.

[1629] U rastvor 50 (1,00 g, 1,5 mmol) u THF (11 ml) je dodat Et<3>N (2,0 mL, 15 mmol) i Et<3>N.3HF (1,21 g, 7,5 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni (MeOH: CH<2>Cl<2>= 50:1) da bi se dobio 75 (460 mg, 72,2%) kao beli prah.

[1632]

[1635] Korak 4. Priprema jedinjenja 52.

[1637] U rastvor 51 (460 mg, 1,08 mmol) i PPAL-S (538 mg, 1,19 mmol) u anhidrovanom THF (9 ml) je polako dodat t-BuMgCl (2,27 mmol) na 5-10 °C pod N<2>. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl, ekstrahovana sa EtOAc, isprana sa 5% vodenim rastvorom K<2>CO<3>i fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog Na<2>SO<4>, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (CH<2>Cl<2>: MeOH = 15:1) da bi se dobilo jedinjenje 52 (280 mg, 37,3%) kao bela čvrsta supstanca.

[1638] <1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,12 (s, 1H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,18-7,23 (m, 3H), 6,74 (s, 2H), 6,11-6,16 (d, J= 16,0 Hz, 1H), 5,99-6,05 (m, 1H), 5,84 (m, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 4,30-4,41 (m, 3H), 4,03-4,11 (m, 3H), 3,78-3,80 (m, 1H), 3,3 (s, 3H), 1,44-1,51 (m, 2H), 1,00-1,21 (m, 16H), 0,76-0,80 (t, J = 8,0 Hz, 3H). [M+H]<+>= 696,6.

[1639] Primer 25 (referentni primer): Priprema jedinjenja 56.

[1641]

[1644]

[1647] Korak 1. Priprema jedinjenja 48.

[1649] U rastvor 23 (600 mg, 1 ekv.) u piridinu (30 ml) je dodat TIPDSCl<2>(1,5 ekv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je ostavljen da stoji na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa 1M vodenim rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom (MeOH: CH<2>Cl<2>= 1:50) da bi se dobio 48 (998 mg, 94,4%) kao bela čvrsta pena.

[1652]

[1656] 14

[1657] Korak 2. Priprema jedinjenja 53.

[1659] Smeša 48 (800 mg, 1 ekv.), piridina (3,2 ml), DMAP (34,9 mg, 0,2 ekv.) u DCM (20 ml) je mešana na sobnoj temperaturi. N-amil hloroformat (3,2 ml) je dodat ukapavanjem na 0 °C, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 dana. Organski sloj je ispran sa 1M vodenim rastvorom HCl, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i isparen u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH: CH<2>Cl<2>= 1:50) da bi se dobio 53 (255 mg, 26%) kao bela čvrsta pena.

[1662]

[1665] Korak 3. Priprema jedinjenja 54.

[1667] U rastvor 53 (270 mg, 1 ekv.) u 1,4-dioksanu (10 ml), ukapavanjem je dodat 40% vodeni rastvor CH<3>NH<2>(225,7 mg, 5 ekv.). Smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je hromatografisan na silika gelu (metanol: dihlorometan = 1:40) da bi se dobio 54 (220 mg, 81,7%) kao bela čvrsta pena.

[1670]

[1673] Korak 4. Priprema jedinjenja 55.

[1675] Trietilamin (1011,9 mg, 10 ekv.) i Et<3>N·3HF (806,05 mg, 5 ekv.) je dodato u ledom ohlađeni rastvor 54 (668 mg, 1 ekv.) u THF (10 ml), smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i hromatografisana na silika gelu (MeOH: CH<2>Cl<2>= 1:30) da bi se dobio 55 (492 mg, 84%) kao bela čvrsta pena.

[1676]

[1679] Korak 5. Priprema jedinjenja 56.

[1681] U smešu 55 (113 mg, 1 ekv.) i PPAL-S (120 mg, 1 ekv.) u THF (4 ml) je ukapavanjem dodat 1,7 M t-BuMgCl u THF (0,327 ml, 2,1 ekv.) na -10 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, a zatim je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc, a organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji da bi se dobio 56 (126 mg, 68,5%) kao bela čvrsta supstanca.

[1682] <1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,00 (s, 1H), 7,10-7,45 (m, 5H), 6,15-6,20 (d, J= 20,0 Hz, 1H), 5,00-5,25 (s, 1H), 4,80-4,86 (m, 1H), 4,45-4,70 (m, 2H), 4,12-4,19 (m, 3H), 3,80-3,85 (m, 1H), 3,04 (s, 3H), 1,60-1,75 (m, 2H), 1,10-1,40 (m, 16H), 0,76-0,80 (t, J= 8,0 Hz, 3H).

[1683] <31>P NMR (160 MHz, DMSO) δ 3,57. [M+H]<+>= 696,5.

[1685] Primer 26 (referentni primer): Priprema jedinjenja 60.

[1687]

[1690]

[1694] 14

[1695]

[1698] Korak 1. Priprema jedinjenja 57.

[1700] U rastvor 6 (20 g, 1 ekv.) u CH<3>CN (100 mL) dodat je imidazol (16,6 g), TIPDSCl<2>(28,9 g, 1,5 ekv.) u nizu na 5±5 °C. Dobijeni rastvor je ostavljen da stoji na sobnoj temperaturi 4 sata. Smeša je ugašena ledenom vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio sirovi ostatak

[1702] Korak 2. Priprema jedinjenja 58.

[1704] U rastvor 57 (9.8 g, 1 ekv.) u THF (4 mL) je ukapavanjem dodat 1,7 M t-BuMgCl u THF (50 mL, 4,8 ekv.) na 0-5 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 0,5 sati, a zatim je polako dodat n-amil hloroformat (2,7 g, 1,05 ekv.). Smeša je mešana na 0-5 °C tokom 3-4 sata. Smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (200 mL) i organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, osušena i koncentrovana da bi se dobilo 58 (10,7 g) kao ulje.

[1707]

[1711] 14

[1712] Korak 3. Priprema jedinjenja 59.

[1714] Trietilamin (10,119 g) i Et<3>N·3HF (8,6 g, 5 ekv.) su dodati u ledom ohlađeni rastvor 58 (7.3 g, 1 ekv.) u THF (100 mL) i smeša je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i hromatografisana na silika gelu (MeOH: CH<2>Cl<2>= 1:30) da bi se dobio 59 (4,3 g, 91%) kao bela čvrsta supstanca.

[1717]

[1720] Korak 4. Priprema jedinjenja 60.

[1722] U smešu 59 (2 g, 1 ekv.) i PPAL-S (2,3 g, 1,1 ekv.) u THF (40 mL) je ukapavanjem dodat 1,7 M t-BuMgCl u THF (5,6 mL, 2,1 ekv.) na -5 °C. Smeša je mešana na -20±5 °C tokom 1 sata, a zatim je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH<4>Cl. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc, a organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji da bi se dobio 60 (1.5 g, 47%) kao bela čvrsta supstanca.

[1723] <1>H NMR (400 MHz, CD<3>OD) δ 7,9 (s, 1H), 7,1~7,2 (m, 5H), 6,2 (d, J = 20 Hz, 1H), 5,1 (br, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,49 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 4,13 (m, 2H), 3,86 (m, 1H), 3,45 (br, 6H), 1,70 (m, 2H), 1,26 (m, 4H), 1,20 (m, 6H), 1,14 (m, 6H), 0,93 (m, 3H). [M+H]<+>=710,5.

[1725] Biološki podaci

[1727] Primer 27. Metodologija ispitivanja i dodatni biološki podaci

[1729] Huh-7 luc/neo ET ćelije koje nose diskistronski HCV genotip 1b luciferazni reporterski replikon su posejane u količini od 7,5 x 10<3>ćelija/ml u duplikatima ploča sa 96 bunarića za paralelno određivanje antivirusne efikasnosti (EC<50>) i citotoksičnosti (TC<50>). Ploče su kultivisane 24 sata pre dodavanja jedinjenja. Šest serijskih polulogaritamskih razblaženja testiranih artikala (visoka test koncentracija od 100,0 µM ili visoka test koncentracija od 1,0 µM) i humanog interferona-alfa2b (visoka test koncentracija od 10,0 U/ml) pripremljena je u

[1732] 14

[1733] medijumu za ćelijsku kulturu i dodato u kultivisane ćelije u tri bunarića za svako razblaženje. Šest bunarića na test pločama primilo je samo medijum kao netretiranu kontrolu. Nakon 72 sata kulture u prisustvu jedinjenja, jedna od ploča je korišćena za određivanje citotoksičnosti bojenjem sa XTT, a druga za antivirusnu efikasnost određivanjem aktivnosti luciferaznog reportera. Podaci o citotoksičnosti i efikasnosti su prikupljeni i uvezeni u prilagođenu Excel radnu svesku za određivanje TC<50>i EC<50>vrednosti. Podaci za jedinjenja Formule I-VII su ilustrovani u Tabeli 7 ispod. Pored toga, Slika 2 ilustruje krive inhibicije replikacije HCV za Jedinjenje 5-2 i Sofosbuvir. Kao što se može videti na Slici 2, Jedinjenje 5-2 ima EC<50>= 4 nM, dok Sofosbuvir ima EC<50>= 53 nM. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM. Slika 3 ilustruje krive inhibicije replikacije HCV za Jedinjenje 25 i Sofosbuvir. Jedinjenje 25 ima EC<50>= 4 nM i Sofosbuvir ima EC<50>= 53 nM. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM. Slika 4 ilustruje poređenje anti-HCV aktivnosti za jedinjenja 5-2, 25, 27 i sofosbuvir unutar analize. Y-osa je procenat kontrole virusa, a x-osa je koncentracija leka u µM.

[1734] Različiti genotipovi HCV izvedeni od pacijenata, koji sadrže varijante divljeg tipa i varijante povezane sa rezistencijom, korišćeni su da bi se odredila njihova relativna osetljivost na replikaciju na test jedinjenja. Vektori za testiranje rezistencije na replikone (RTV) koji sadrže genomske regione NS5B pripremljeni su korišćenjem virusne RNK izolovane iz plazme pacijenata sa HCV. Svaki NS5B region je amplifikovan pomoću polimerazne lančane reakcije reverzne transkripcije i kloniran u HCV replikon RTV, koji je zatim prenet elektroporacijom u Huh-7 ćelije. Nakon inkubacije u odsustvu i prisustvu serijski razblaženih test jedinjenja tokom 72-96 sati, replikacija virusa je merena luciferaznom aktivnošću i određene su 50% inhibitorne koncentracije (IC<50>vrednosti).

[1735] Tabela 2 prikazuje IC<50>i IC<95>vrednosti za jedinjenje 25, 27, 5-2 i Sofosbuvir u odnosu na različite kliničke izolate koji sadrže divlji tip i varijante povezane sa rezistencijom.

[1736] Sva jedinjenja su bila značajno efikasnija protiv replikacije HCV od sofosbuvira i ni jedinjenje 25, 27 niti 5-2 nisu pokazala nikakve dokaze unakrsne rezistencije na L159F, L159F i S282T, i C316N mutante.

[1738] Tabela 2: Antivirusna aktivnost test jedinjenja kod HCV genotipova izvedenih od pacijenta

[1741]

[1745] 14

[1746]

[1748] 14

[1749]

[1752] Test prolazne transfekcije je sproveden da bi se utvrdila osetljivost divljeg tipa S282T mutanta HCV na testirana jedinjenja. Huh-7 ćelije su elektroporisane u prisustvu RNK transkribovane iz divljeg tipa ili S282T HCV replikonskih plazmida iz T7 promotora. Transfektovane ćelije su posejane na ploče sa 96 bunarića u količini od 7,5 x 10<3>ćelija po bunariću u Dulbekovom modifikovanom Iglovom medijumu. Nakon 24 sata inkubacije, medijum je uklonjen i zamenjen svežim medijumom koji nije sadržao ili je sadržao različite koncentracije test jedinjenja. Nakon dodatnih 96 sati inkubacije, anti-HCV aktivnost je merena luciferaznom krajnjom tačkom pomoću Britelite<™>Plus kompleta za luminescentni reporterski gen (Perkin Elmer, Shelton, CT). Duplikati ploča su tretirani i inkubirani paralelno radi procene ćelijske toksičnosti bojenjem tetrazolijumskom bojom XTT.

[1753] Tabela 3 prikazuje IC<50>i IC<95>vrednosti za jedinjenja 25, 27, 5-2 i Sofosbuvir protiv divljeg tipa HCV i S282T replikona.

[1754] Sva jedinjenja su bila značajno efikasnija protiv replikacije HCV od sofosbuvira i ni jedinjenja 25, 27 niti 5-2 nisu pokazala nikakve dokaze unakrsne rezistencije na S282T varijantu.

[1757] 1

[1758] Tabela 3: Antivirusna aktivnost test jedinjenja u testu prolazne HCV infekcije

[1761]

[1764] Stabilnost odabranih jedinjenja u svežoj ljudskoj krvi i u S9 frakciji ljudske jetre određena je u inkubacijama koje su sadržale 10 µM test jedinjenja. Nakon inkubacija od 0, 30, 60 minuta i do 120 minuta, alikvoti su uklonjeni i odmah ekstrahovani sa 3 zapremine ledeno hladnog metanola/acetonitrila (1:1, v/v). Ekstrakti su centrifugirani, a supernatanti su analizirani pomoću LC-MS/MS na koncentracije nepromenjenog test jedinjenja i potencijalnih metabolita.

[1765] Slika 5 ilustruje odličnu stabilnost jedinjenja 5-2 i svih 2-amino derivata u ljudskoj krvi.

[1766] Zanimljivo je da slika 6 ilustruje vremenski tok dealkilacije 2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-βmetil-N<2>-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskog nukleozidnog fosforamidata u 2'-deoksi-2'-αfluoro-2'-β-metil-N<6>-metil-2,6-diaminopurinskom nukleozid fosforamidatu sa S9 frakcijom ljudske jetre. Pored toga, primećena je neočekivana, brža i veća brzina razlaganja karbamatnog dela S9 frakcijom ljudske jetre u poređenju sa jedinjenjem 5-2 i njegovim drugim 2-amino derivatima (Slika 7).

[1768] Primer 28. Test HCV (gtlb) NS5B polimeraze

[1770] Inhibicija HCV (gt1b) NS5B polimeraze određena je u tri primerka merenjem de novo polimerizacije u reakcionim smešama koje sadrže serijska razblaženja TA, in vitro transkribovane virusne RNK komplementarne 3'UTR regionu HCV (-) lanca, polimerazu, radioaktivno obeleženi ribonukleotid, 250 µM nekompetentnih rNTP i 1 µM konkurentnog

[1773] 1 1

[1774] rNTP. Koncentracije TA koje su proizvele 50% inhibiciju (IC<50>) su određene iz rezultujućih krivih inhibicije.

[1776] Primer 29. Test ćelija progenitora ljudske koštane srži

[1778] Sveže ćelije progenitora ljudske koštane srži (Invitrogen) suspendovane u BFU-E ili GM-CSF specifičnoj podlozi za kultivaciju su dodate, u 10<5>ćelija/bunarčiću, da bi se utrostručila serijska razblaženja TA u pločama sa 6 bunarčića. Nakon 14-dnevne inkubacije, broj kolonija je korišćen za određivanje CC<50>vrednosti. Kolonije BFU-E su potvrđene korišćenjem benzidenske tehnike.

[1779] Jedinjenja 25, 27 i 5-2 ne pokazuju citotoksičnost prema matičnim ćelijama koštane srži in vitro.

[1781] Primer 30. iPS kardiomiocitni test

[1783] iPS kardiomiociti (Cellular Dynamics) su posejani u mikrolitarske ploče u količini od 1,5 x 10<4>ćelija po bunariću. Nakon 48 sati inkubacije, ćelije su isprane i dodat je medijum za održavanje koji sadrži serijski razblaženi TA u tri primerka. Nakon inkubacije tokom dodatna 3 dana, vijabilnost ćelija je merena bojenjem sa XTT i CC<50>vrednosti su izračunate.

[1784] Jedinjenja 25, 27 i 5-2 ne pokazuju citotoksičnost prema iPS kardiomiocitima in vitro.

[1786] Primer 31. Testovi humane DNK polimeraze

[1788] Inhibicija humanih DNK polimeraza α, β i γ (CHIMERx) je određena u tri primerka u reakcionim smešama serijski razblaženih TA, 0,05 mM dCTP, dTTP i dATP, 10 µCi [<32>P]-αdGTP (800 Ci/mmol), 20 µg aktivirane DNK telećeg timusa i dodatni reagensi specifični za svaku polimerazu. Nakon 30-minutne inkubacije, inkorporacija [α-<32>P]-GTP je izmerena i dobijene inkubacione krive su korišćene za izračunavanje vrednosti IC<50>.

[1789] Trifosfat, β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin trifosfat, kao i trifosfatni analozi jedinjenja 25, 27 i 5-2 ne inhibiraju humane DNK polimeraze α, β ili γ.

[1792] 1 2

[1793] Primer 32. Ko-kulture humanih hepatocita

[1795] Citotoksičnost i zdravlje hepatocita procenjeni su u tri primerka merenjem curenja ALT, proizvodnje uree, sekrecije albumina i ćelijskog sadržaja ATP-a u mikro-uzorkovanim kokulturama humanih hepatocita (HepatoPac<®>, Hepregen Corporation) pripremljena zasejavanjem kriokonzerviranih ženskih humanih hepatocita (jedan donor) i 3T3 J2 mišjih fibroblasta u mikrotitarske ploče prema procedurama koje je utvrdio Hepregen. Podloga za kultivaciju je zamenjena svežom podlogom koja sadrži TA, testirani artikal, (0, 1, 10 ili 30 µM) svaka 2 ili 3 dana do 16. dana. Iskorišćena podloga za kultivaciju je testirana na sadržaj ALT i uree 2., 5., 7., 9., 12., 16. i 21. dana i na sadržaj albumina 2., 5., 7. i 9. dana. Nivoi ćelijskog ATP-a su mereni 9. i 21. dana. ATP signali u kontrolnim kulturama samo sa stromalom (mišji 3T3 fibroblasti) su oduzeti od signala humanih HepatoPac ko-kultura da bi se dobili efekti specifični za hepatocite. Videti Tabelu 4, 5 i 6 ispod.

[1796] Jedinjenje 5-2 u koncentracijama do 30 µM nije pokazalo znake citotoksičnosti mereno curenjem ALT, sekrecijom albumina, proizvodnjom uree i ćelijskim sadržajem ATP-a kada je inkubirano do 12 dana sa mikro-šablonskim kokultivisanim humanim hepatocitima. Manje indikacije citotoksičnosti otkrivene pri produženom izlaganju (do 21 dan kulture) bile su značajno manje od onih primećenih sa sofosbuvirom. Videti tabelu 4, 5 i 6 ispod.

[1797] INX-189 je bio veoma citotoksičan za humane kokultivisane hepatocite, pokazujući smanjenu sekreciju albumina već drugog dana i citotoksičnost po svim merama. Sofosbuvir je pokazao veću citotoksičnost od AT-511 pod istim uslovima.

[1799] Tabela 4. Uticaj testiranog artikla na ćelijske koncentracije ATP-a

[1802]

[1805] Tabela 5. Uticaj testiranih artikala na sekreciju albumina

[1808]

[1812] 1

[1813] Tabela 6. Uticaj testiranih artikala na sekreciju albumina

[1816]

[1819] Primer 33. Metaboličke studije

[1821] Metabolizam jedinjenja 25, 27 i 5-2, u koncentraciji od 10 µM, ispitivan je u svežim primarnim kulturama humanih, psećih i mišjih hepatocita. Hepatociti ljudi (XenoTech, oba pola, sakupljeni od 10 donora), mužjaka psa rase Bigl (BioreclamationIVT) i mužjaka ICR/CD-1 miševa (BioreclamationIVT, 8 donora) na pločama sa 6 bunarića sa matrigel prekrivačem inkubirani su u singletu sa 10 µM TA. Nakon 2, 4, 6, 8 ili 24 sata, intracelularni nivoi nukleotidnih prolekova i njihovih potencijalnih metabolita (prolekovi, monofosfati, trifosfati i nukleozidi) kvantitativno su određeni pomoću LC-MS/MS. Koncentracije ispod donje granice kvantitativnog određivanja (1,5 pmol/10<6>ćelija za prolekove, monofosfate i nukleozide i 12 pmol/10<6>ćelija za trifosfate) su ekstrapolirane iz standardnih krivih.

[1822] Jedinjenje β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin trifosfat je pretežni metabolit jedinjenja 25, 27 i 5-2 primećen u kultivisanim humanim hepatocitima i snažan je inhibitor HCV (gtlb) NS5B polimeraze, sa IC<50>od 0,15 µM.

[1823] Slika 8 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 25 u humanim hepatocitima.

[1824] Slika 9 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 27 u humanim hepatocitima.

[1825] Slika 10 prikazuje preovlađujuće metabolite Jedinjenja 5-2 u humanim hepatocitima.

[1826] Slika 11 ilustruje puteve aktivacije za jedinjenja 25, 27 i 5-2. Kao što se može videti, jedinjenja 25, 27 i 5-2 se pretvaraju u svoje odgovarajuće monofosfatne analoge koji se potom metabolišu do uobičajenog MP analoga; β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin monofosfat (Jedinjenje 61). Monofosfat se zatim postepeno fosforiluje do aktivnog trifosfata: β-D-2'-deoksi-2'-α-fluoro-2'-β-metil-guanin trifosfata (Jedinjenje 62).

[1829] 1 4

[1830] Primer 34. Kontrole

[1832] INX-189 (INX-08189/BMS-986094) i sofosbuvir su korišćeni kao kontrole u gornjim primerima.

[1833] Dva najpotentnija nukleotidna proleka, jedinjenja 25 i 27, pokazala su odličnu selektivnost, sa CC<50>vrednosti veće od 100 µM u Huh-7 ćelijama, matičnim ćelijama humane koštane srži i humanim kardiomiocitima. Nije primećena inhibicija humane DNK polimeraze α, β ili γ, nije primećena aktivnost protiv drugih RNK ili DNK virusa, niti toksičnost u svim ćelijskim linijama domaćina pri koncentracijama do 100 µM.

[1834] Tabela 7 je tabela koja ilustruje jedinjenja testirana u HCV replikonskom testu zajedno sa EC<50>/EC<95>(µM) i CC<50>(µM) rezultatima.

[1837] 1

[1838] . n<j>a<i>n<j>e d<j>e a<a>n<i>r<t>e<s>t za<t>a t<e>s og<s>k

[1839] kon ep<l>i<a>ti<r>u<l>t

[1841] 7. R<e>z

[1842] la

[1843] T<a>b<e>

[1846]

[1847]

[1848]

[1849]

[1850]

[1851]

[1852]

[1853]

[1854]

[1855]

[1856]

[1857] β-D-2'-D-2'-α-fluoro-2'-β-C-supstituisani-2-modifikovani-N<6>-supstituisani purinski nukleotidi opisani ovde pokazuju značajnu aktivnost protiv HCV virusa. Jedinjenja prema ovom pronalasku su testirana na željenu relativnu aktivnost korišćenjem dobro poznatih i konvencionalnih testova koji se nalaze u literaturi.

[1858] Na primer, anti-HCV aktivnost i citotoksičnost jedinjenja mogu se meriti u sistemu za analizu replikona HCV subgenomske RNK u Huh7 ET ćelijama. (Videti, Korba, et al., Antiviral Research 2008, 77, 56). Rezultati se mogu sumirati u poređenju sa pozitivnom kontrolom, 2'-C-Me-citozin {2'-C-Me-C}(Pierra, et al., Journal of Medicinal Chemistry 2006, 49, 6614.

[1859] Još jedan in vitro test za anti-hepatitis C virusnu aktivnost je opisan u U.S. Patentu br.

[1860] 7,718,790 od Stuyver, et al. i prenet na kompaniju Pharmasset, Inc.

[1863] 1

Claims

1. Patentni zahtevi

1. Jedinjenje formule:

pri čemu:

R<7>je vodonik, C<1-6>alkil, C<3-7>cikloalkil, heteroaril, heterociklik, fenil ili naftil, pri čemu, fenil ili naftil su opciono supstituisani sa C<1-6>alkilom, C<2-6>alkenilom, C<2-6>alkinilom, C<1-6>alkoksi, F, Cl, Br, I, nitro, cijano, C<1-6>haloalkilom, -(CH<2>)<1-6>COOH, -(CH<2>)<1-6>COOC<1-6>alkilom, -N(R<7'>)<2>, C<1->

<6>acilamino, NHSO<2>C<1-6>alkilom, -SO<2>N(R<7'>)<2>, COR<7">i -SO<2>C<1-6>alkilom;

R<7'>je nezavisno vodonik ili C<1-6>alkil;

R<7">je -OR<11>;

R<8>je vodonik, C<1-6>alkil, ili R<9a>ili R<9b>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C; pri čemu, n je 2 do 4;

R<9a>i R<9b>su (i) nezavisno izabrani od vodonika, C<1-6>alkila, cikloalkila, -(CH<2>)<c>(NR<9'>)<2>, C<1->

<6>hidroksialkila, -CH<2>SH, -(CH<2>)<2>S(O)(Me), -(CH<2>)<3>NHC(=NH)NH<2>, (1H-indol-3-il)metila, (1H-imidazol-4-il)metila, -(CH<2>)<c>COR<9">, arila i aril(C<1-3>alkila)-, pri čemu aril grupe mogu biti opciono supstituisane grupom izabranom od hidroksila, C<1-6>alkila, C<1-6>alkoksi, halogena, nitro i cijano; (ii) R<9a>i R<9b>oba su C<1-6>alkil; (iii) R<9a>i R<9b>zajedno su (CH<2>)<r>tako da se formira spiro prsten; (iv) R<9a>je vodonik i R<9b>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C (v) R<9b>je vodonik i R<9a>i R<8>zajedno su (CH<2>)<n>tako da se formira ciklični prsten koji uključuje susedne atome N i C, pri čemu, c je 1 do 6, n je 2 do 4, r je 2 do 5 i pri čemu, R<9'>je nezavisno vodonik ili C<1-6>alkil i R<9">je -OR<11>ili -N(R<11>)<2>; (vi) R<9a>je vodonik i R<9b>je vodonik, -CH<3>, -CH<2>CH<3>, -CH(CH<3>)<2>, -CH<2>CH(CH<3>)<2>, - CH(CH<3>)CH<2>CH<3>, -CH<2>Ph, -CH<2>-indol-3-il, -CH<2>CH<2>SCH<3>, -CH<2>CO<2>H, -CH<2>C(O)NH<2>, -CH<2>CH<2>COOH, -CH<2>CH<2>C(O)NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>NHC(NH)NH<2>, -CH<2>-imidazol-4-il, -CH<2>OH, -CH(OH)CH<3>, -CH<2>((4'-OH)-Ph), ili -CH<2>SH; ili (vii) R<9a>je -CH<3>, -CH<2>CH<3>,

CH(CH<3>)<2>, -CH<2>CH(CH<3>)<2>, -CH(CH<3>)CH<2>CH<3>, -CH<2>Ph, -CH<2>-indol-3-il, -CH<2>CH<2>SCH<3>, -CH<2>CO<2>H, -CH<2>C(O)NH<2>, -CH<2>CH<2>COOH, -CH<2>CH<2>C(O)NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>NH<2>, -CH<2>CH<2>CH<2>NHC(NH)NH<2>, -CH<2>-imidazol-4-il, -CH<2>OH, -CH(OH)CH<3>, -CH<2>((4'-OH)-Ph), ili -CH<2>SH i R<9b>je vodonik;

R<10>je vodonik, C<1-6>alkil opciono supstituisani sa alkoksi, di(C<1>-C<4>alkil)-amino ili halogen, C<1->

<6>haloalkil, C<3-7>cikloalkil, heterocikloalkil, aminoacil, aril, heteroaril, supstituisani aril ili supstituisani heteroaril;

R<11>je opciono supstituisani C<1-6>alkil, opciono supstituisani cikloalkil; opciono supstituisani C<2->

<6>alkinil, opciono supstituisani C<2-6>alkenil ili opciono supstituisani acil;

Y je NR<1>R<2>, pri čemu, R<1>je metil i R<2>je vodonik;

R<12>je CH<3>;

R<3>je vodonik,

, difosfat, trifosfat, opciono supstituisana karbonilom vezana aminokiselina ili -C(O)R<3C>; R<3A>je izabran od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila ili opciono supstituisanog heterociklila;

R<3B>je izabran od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline ili opciono supstituisanog N-vezanog estra aminokiseline;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

1

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

8. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za lečenje HCV kod domaćina u farmaceutski prihvatljivom nosaču.

9. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 8, u oralnom doznom obliku.

10. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, u tableti ili kapsuli.

11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 i njegove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa C.

12. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 11, pri čemu, HCV je genotip 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 4a ili 4d.

13. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, pri čemu, HCV je genotip 1a ili 1b.

14. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, pri čemu, HCV je genotip 3a.

15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 14, pri čemu, domaćin je čovek.

1 1