RS67509B1 - Kristalna fumaratna so (s)-(3,4-difluor-2-(2-fluor-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] - metanona - Google Patents

Description

[0001] Oblast Tehnike

[0003] Ovo otkriće se odnosi na kristalnu fumaratnu so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona. Ovo otkriće se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže kristalnu fumaratnu so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenil amino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona. Pronalazak se takođe odnosi na kristalnu fumaratnu so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona za upotrebu u lečenju raka. Ovo otkriće se takođe odnosi na postupak za pripremu kristalnog oblika fumaratne soli (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil]

[0004] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona.

[0006] Stanje Tehnike

[0008] [0002] Tradicionalno, dramatična poboljšanja u lečenju raka povezana su sa identifikacijom terapijskih agenasa koja deluju putem novih mehanizama. Jedan mehanizam koji se može iskoristiti u lečenju raka je modulacija MEK (MAPK/ERK kinaze). Inhibicija MEK predstavlja obećavajuću strategiju za lečenje karcinoma uzrokovanih abnormalnom signalizacijom ERK/MAPK puta (Solit et al., 2006; Wellbrock et al., 2004). Kaskada prenosa signala MEK-ERK je konzervirani put koji reguliše rast, proliferaciju, diferencijaciju i apoptozu ćelija kao odgovor na faktore rasta, citokine i hormone. Ovaj put deluje nizvodno od Ras, koji je često pojačan ili mutiran u ljudskim tumorima. MEK je kritični efektor Ras funkcije. ERK/MAPK put je pojačan kod 30 % svih tumora, a onkogeno aktivirajuće mutacije u K-Ras i B-Raf su identifikovane kod 22 % i 18 % svih karcinoma, respektivno (Allen et al., 2003; Bamford S, 2004; Davies et al., 2002; Malumbres and Barbacid, 2003). Veliki deo ljudskih karcinoma, uključujući 66 % (B-Raf) malignih melanoma, 60 % (K-Ras) i 4 % (B-Raf) karcinoma pankreasa, 50 % kolorektalnih karcinoma (posebno debelog creva, K-Ras: 30 %, B-Raf: 15 %), 20 % (K-Ras) karcinoma pluća, 27 % (B-Raf) papilarnog i anaplastičnog karcinoma štitne žlezde i 10-20 % (B-Raf) endometrioidnih karcinoma jajnika, sadrži aktivirajuće Ras i Raf mutacije. Inhibicija ERK puta, a posebno inhibicija aktivnosti MEK kinaze, rezultira antimetastatskim i antiangiogenim efektima uglavnom zbog smanjenja ćelijsko-ćelijskog kontakta i pokretljivosti, kao i smanjenja ekspresije vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF). Štaviše, ekspresija dominantno negativnog MEK ili ERK smanjila je transformacionu sposobnost mutantnog Ras kao što se vidi u ćelijskoj kulturi i u primarnom i metastatskom rastu ksenografta ljudskog tumora in vivo. Stoga je put prenosa signala MEK-ERK odgovarajući put za ciljanje terapijske intervencije, a jedinjenja koja ciljaju MEK predstavljaju značajan terapeutski potencijal.

[0010] Jedno jedinjenje koje specifično inhibira MEK je (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanon (Jedinjenje I), koje ima hemijsku strukturu:

[0013]

[0016] Jedinjenje I

[0018] WO 2007/044515 opisuje sintezu (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona (Primer 22b, strana 231) i takođe otkriva terapeutsku aktivnost ovog molekula da inhibira, reguliše i/ili modulira MEK (Biohemijski test, strana 268). WO 2008/076415 A1 takođe opisuje sintezu (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona (Primer 22b, strana 402). Jedinjenje I je odobreno u Sjedinjenim Državama, Evropi i drugde za lečenje melanoma u kombinaciji sa vemurafenibom (Zelboraf®).

[0020] Pored terapeutske efikasnosti, proizvođač lekova nastoji da obezbedi odgovarajući oblik terapeutskog agensa koji ima svojstva pogodna za obradu, proizvodnju, stabilnost pri čuvanju i/ili korisnost kao lek. Shodno tome, otkriće oblika koji poseduje neka ili sva ova željena svojstva je važno za razvoj lekova.

[0022] Podnosioci zahteva su otkrili kristalni oblik soli Jedinjenja I koji ima pogodna svojstva za upotrebu u farmaceutskoj kompoziciji za lečenje proliferativnih bolesti kao što je rak.

[0024] Kratak Opis Pronalaska

[0026] Ovo otkriće se odnosi na kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I kao što je ovde opisano. Fumaratna so Jedinjenja I ima sledeću strukturu i identifikovana je kao hemifumarat:

[0027]

[0030] Stoga, u jednom aspektu, pronalazak se odnosi na kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, gde Jedinjenje I je (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanon, i gde kristalna fumaratna so Jedinjenja I ima strukturu:

[0033]

[0036] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0038] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I za upotrebu u lečenju raka. Reference na postupke lečenja u narednim pasusima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).

[0040] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu kristalne fumarat soli jedinjenja I označene kao Oblik A, kako je definisano u priloženim zahtevima.

[0042] Kratak Opis Slika

[0044]

[0045] Slika 1 prikazuje infracrveni spektar kristalne fumarat soli jedinjenja I, označene kao Oblik A.

[0046] Slika 2 prikazuje 1H NMR spektar u DMSO-d<6>kristalne fumarat soli Jedinjenja I, označene kao Oblik A. Slika 3 prikazuje 13C NMR spektar u DMSO-d<6>kristalne fumarat soli Jedinjenja I, označene kao Oblik A. Slika 4 prikazuje 13C NMR spektar čvrstog stanja kristalne fumaratne soli Jedinjenja I, označene kao Oblik A.

[0047] Slika 5 prikazuje pozitivni elektrosprej maseni spektar za kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao Oblik A.

[0048] Slika 6 prikazuje negativni elektrosprej maseni spektar za kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao Oblik A.

[0049] Slika 7 prikazuje ultraljubičasti spektar kristalne fumaratne soli Jedinjenja I, označene kao Oblik A, u metanolu.

[0050] Slika 8 prikazuje trag diferencijalne skenirajuće kalorimetrije za kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao Oblik A.

[0051] Slika 9 prikazuje trag diferencijalne skenirajuće kalorimetrije za fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao amorfni oblik.

[0052] Slika 10 prikazuje XRPD difaktogram kristalne fumaratne soli Jedinjenja I, označene kao Oblik A. Slika 11 prikazuje XRPD difaktogram za fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao amorfni oblik.

[0053] Slika 12 prikazuje dinamičku izotermu sorpcije/desorpcije vlage za kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao Oblik A, na 25°C.

[0054] Slika 13 prikazuje dinamičku izotermu sorpcije/desorpcije vlage za fumaratnu so Jedinjenja I, označenu kao amorfni oblik, na 25°C.

[0056] Detaljan Opis

[0058] Ovo otkriće se odnosi na kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I. Pronalazak se takođe odnosi na nove kompozicije koje sadrže otkrivenu kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I. Terapeutska upotreba kristalne fumaratne soli Jedinjenja I kao što je opisano, kao i terapeutske kompozicije koje ih sadrže, predstavljaju odvojene aspekte otkrića. Tehnike koje se koriste za karakterizaciju kristalne fumaratne soli Jedinjenja I opisane su u primerima ispod. Ove tehnike, same ili u kombinaciji, mogu se koristiti za karakterizaciju kristalne fumaratne soli Jedinjenja I. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I može se takođe okarakterisati pozivanjem na prikazane slike.

[0060] [0014] Utvrđeno je da je kristalna fumaratna so Jedinjenja I termodinamički stabilna, da je jedini kristalni oblik identifikovan nakon opsežnog eksperimentisanja, da je nehigroskopna i da se konstantno formira tokom proizvodnje. Nasuprot tome, amorfni oblik je nekristalni, higroskopan i pretvara se u kristalni Oblik A. Pored toga, prilikom pokušaja pravljenja soli Jedinjenja I, samo je fumarat obezbedio jedan kristalni oblik. Druge soli koje su se mogle napraviti bile su amorfne ili mešavina kristalnih i amorfnih materijala.

[0062] Kristalna Fumaratna So Jedinjenja I

[0064] Ovo otkriće se odnosi na kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I. Ovo otkriće se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije kristalne fumaratne soli Jedinjenja I. Fumaratna so se može napraviti kombinovanjem (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona (Jedinjenje I) sa fumarnom kiselinom, koja formira so koja ima stehiometriju 2:1 Jedinjenje I:fumarna kiselina. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I može se takođe nazvati hemifumaratom.

[0066] Fumarna kiselina ima sledeću strukturu:

[0069]

[0072] Postoje različita imena za Jedinjenje I, uključujući XL518, GDC-0973, [3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodo anilino) fenil] {3-hidroksi-3-[(25)-piperidin-2-il] azetidin-1-il} metanon, kobimetinib i Cotellic™.

[0074] Jedinjenje I može se pripremiti prema bilo kojoj od nekoliko različitih metodologija, bilo na gramskoj skali (<1 kg) ili kilogramskoj skali (>1 kg). Metoda gramske skale je opisana u WO 2007/044515, koja opisuje sintezu Jedinjenja I (Primeri 22b). Alternativno, Jedinjenje I može se pripremiti na kilogramskoj skali korišćenjem postupka navedenog u WO 2014/059422 i kao što je dato u Primerima ispod.

[0076] Oblik A ima rastvorljivost u vodi od 1.6 mg/ml na 25 °C. Pod uslovima 25 °C/0 % relativne vlažnosti (RH) i 25 °C/90 % RH, Oblik A nije pokazao nikakve promene u analizi, čistoći, vlažnosti i rastvaranju. DSC je pokazala da je Oblik A stabilan do tačke topljenja od 239°C. Nisu primećeni gubici rastvarača.

[0078] [0020] Oblik A, kao što je ovde opisan, može biti okarakterisan najmanje jednim od sledećih: (i) 1H NMR spektar u d<6>DMSO u suštini kao što je prikazano na Slici 2;

[0079] (ii) 13C NMR spektar u d<6>DMSO u suštini kao što je prikazano na Slici 3;

[0080] (iii) 13C NMR spektar u čvrstom stanju sa tri ili više vrhova izabranih od 175.3, 173.6, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm;

[0081] (iv) 13C NMR spektar u čvrstom stanju, uglavnom onakav kakav je prikazan na Slici 4;

[0082] (v) difraktogram X-zraka praha (CuKα λ = 1.5418 Ä) koji obuhvata tri ili više vrednosti 2Θ izabranih od 4.6, 12.1, 13.2, 13.6 i 14.5 ±0.2 °2Θ, pri čemu se merenje kristalnog oblika vrši na sobnoj temperaturi;

[0083] (vi) rendgenski difraktogram praha (XRPD) koji je u suštini u skladu sa dijagramom prikazanim na Slici 10; i

[0084] (vii) termogram diferencijalne skenirajuće kalorimetrije u suštini u skladu sa Slici 8.

[0086] U jednom izvođenju, Oblik A karakterišu najmanje dva od (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0088] U drugom izvođenju, Oblik A karakterišu najmanje tri od (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0090] U drugom izvođenju, oblik A karakterišu najmanje četiri od (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0092] U drugom izvođenju, Oblik A karakteriše najmanje pet od (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0094] U drugom izvođenju, Oblik A karakteriše najmanje šest od (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0096] U drugom izvođenju, Oblik A je okarakterisan svim (i), (ii), (iii), (iv), (v), (vi) ili (vii).

[0098] U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri, četiri ili pet pikova izabranih od 175.3, 173.6, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm u 13C NMR spektru čvrstog stanja.

[0100] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim ili više pikova izabranih od 173.6, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm 13C NMR spektra čvrstog stanja.

[0102] [0029] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 175.3, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm 13C NMR spektra čvrstog stanja.

[0104] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 175.3, 173.6, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm NMR spektra čvrstog stanja 13C.

[0105] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 175.3, 173.6, 117.5 i 153.5, ± 0.2 ppm 13C NMR spektra čvrstog stanja.

[0107] U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 175.3, 173.6, 117.5 i 155.5, ± 0.2 ppm 13C NMR spektra čvrstog stanja.

[0109] U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri, četiri ili pet pikova izabranih od 4.6, 12.1, 13.2, 13.6 i 14.5 ± 0.2 °2Θ u difraktogramu X-zraka (CuKα λ = 1.5418 Ä).

[0111] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 12.1, 13.2, 13.6 i 14.5 ± 0.2 °2Θ u rendgenskom difraktogramu (CuKα λ = 1.5418 Ä).

[0113] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 4.6, 12.1, 13.6 i 14.,5 ± 0.2 °2Θ u rendgenskom difraktogramu (CuKα λ = 1.5418 Ä).

[0115] U drugom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 4.6, 13.6 i 14.5 ± 0.2 °2Θ u rendgenskom difraktogramu (CuKα λ = 1.5418 Ä).

[0117] U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se jednim, dva, tri ili četiri pika izabrana od 4.6, 12.1, 13.2 i 13.6 ± 0.2 °2Θ u difraktogramu X-zraka (CuKα λ = 1.5418 Ä).

[0118] Ostala svojstva čvrstog stanja koja se mogu koristiti za karakterizaciju kristalne fumaratne soli (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označenog kao Oblik A su prikazana na slikama i razmotrena u primerima ispod. U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona označena kao Oblik A karakteriše se parametrima jedinične ćelije približno jednako sledećem:

[0120] Kristalni Sistem: Tetragonalni

[0121] Prostorna Grupa: P43212

[0122] Kristalna Navika: Tanjiri

[0123] Dimenzije Jedinične Ćelije

[0124] a = 7.8825 Ä

[0125] b = 7.8825 Ä

[0126] c = 76.846 Ä

[0127] α = 90°

[0128] β = 90°

[0129] γ = 90°

[0130] Temperatura: 293 K

[0131] Zapremina ćelije: 4774.7 A3

[0132] Molekuli u jediničnoj ćeliji: 8

[0133] Gustina: 1.637 g/cm3

[0135] Parametri jedinične ćelije Oblika A mereni su na temperaturi od približno 25 °C, npr. sobnoj temperaturi ili temperaturi okoline.

[0137] U drugom izvođenju, otkriće se odnosi na Oblik A kao što je ovde opisano u bilo kom od aspekata i/ili izvođenja, u suštinski čistom obliku.

[0139] Opis se takođe odnosi na postupak za pripremu kristalne fumarat soli Jedinjenja I označene kao Oblik A. Priprema, svojstva čvrstog stanja i karakteristike kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A opisane su u primerima ispod.

[0140] Farmaceutske Kompozicije

[0142] Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa. Količina kristalne fumaratne soli Jedinjenja I može biti terapeutski efikasna količina. Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na čvrstu ili disperzionu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I, ili njihove kombinacije, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0144] U jednom izvođenju, formulacija je tableta. Tablete se generalno formiraju od aktivne supstance leka, punila, dezintegranta i maziva mešanjem, granulacijom i tabletiranjem.

[0146] Punila su poznata u struci i uključuju, na primer, i bez ograničenja, šećere i šećerne alkohole, celulozu i druga punila. Neograničavajući primeri odgovarajućih šećera i šećernih alkohola uključuju dekstrate, dekstrin, dekstrozu, laktozu, maltodekstrin, manitol, izomalt, sorbitol, saharozu, šećerne sfere, ksilitol, fruktozu, laktitol, eritritol, maltitol, ksilozu, glukozu, manozu, galaktozu, maltozu, celobiozu, trehalozu i rafinozu. Neograničavajući primeri celuloznih vlakana uključuju mikrokristalnu celulozu ("MCC") i silicikovani MCC. Neograničavajući primeri drugih punila uključuju kalcijum karbonat, kalcijum sulfat, kalcijum silikat, hitin, hitozan, dibazni kalcijum fosfat dihidrat, gliceril palmitostearat, hidrogenizovano biljno ulje, kaolin, magnezijum aluminijum silikat, magnezijum karbonat, magnezijum oksid, polimetakrilate, kalijum hlorid, celulozni prah, preželatinizovani skrob, natrijum hlorid, skrob, talk i di- i tribazni kalcijum fosfat. U nekim aspektima ovog otkrića, punilo je laktoza, MCC, silicikovani MCC, di-bazni kalcijum-fosfat, manitol, izomalt, preželatinizovani skrob i njihove kombinacije.

[0148] Dezintegranti su poznati u tehnici. Neograničavajući primeri uključuju: modifikovane skrobove kao što je natrijum karboksimetil skrob (natrijum skrob glikolat); umrežene polivinilpirolidone kao što je krospovidon; modifikovane celuloze kao što je natrijum kroskarmeloza; umrežena alginska kiselina; gume kao što su gelan guma i ksantan guma; kalcijum silikat. U nekim aspektima ovog otkrića, dezintegrant je natrijum kroskarmeloza, krospovidon, natrijum skrob glikolat i njihove kombinacije. U nekim aspektima ovog otkrića, dezintegrant je natrijum kroskarmeloza, natrijum skrob glikolat i njihove kombinacije.

[0150] [0045] Lubrikanti su poznati u tehnici. Neograničavajući primeri uključuju magnezijum stearat, kalcijum stearat, stearinsku kiselinu, natrijum stearil fumarat, hidrogenizovana biljna ulja, polietilen glikol (4000-6000) i natrijum lauril sulfat. U nekim aspektima ovog otkrića, lubrikant je magnezijum stearat, natrijum stearil fumarat i njihove kombinacije.

[0152] U jednom aspektu proizvodnje tableta ovog otkrića, punilo, dezintegrator i lubrikant se razdvajaju propuštanjem kroz sito kako bi se formirao razblaženi prethodno mešani materijal.

[0153] Razblaženi materijal za prethodnu mešavinu se kombinuje sa aktivnim lekom u aparatu za mešanje i meša kako bi se formirala prethodna mešavina. Prethodna mešavina se granulira u aparatu za suvu granulaciju (npr. granulacijom, mlevenjem i prosejavanjem) kako bi se formirale granule. Punilo, dezintegrant i lubrikant prisutni su u granulama kao intragranularne komponente. Dodatni dezintegrant i lubrikant se razdvajaju propuštanjem kroz sito kako bi se formirao razblaženi materijal koji se kombinuje sa granulama u aparatu za mešanje i meša kako bi se formirala konačna smesa. Konačna smeša se tabletira u aparatu za tabletiranje kako bi se formirale jezgro tableta. Jezgro tableta se oblaže smešom za oblaganje u aparatu za filmsko oblaganje kako bi se formirale obložene tablete.

[0154] Kao što je ovde korišćeno, intragranulirano se odnosi na komponentu koja se dodaje pre granulacije tako da je komponenta ugrađena u granule. Kao što je ovde dalje korišćeno, ekstragranulirani se odnosi na komponentu koja se kombinuje sa granulama pre kompresije, kao što je u presi za tablete.

[0156] U drugom postupku proizvodnje tableta prema ovom otkriću, intragranularno punilo i intragranularni dezintegrant se odvajaju od grudvica prosejavanjem i kombinuju sa aktivnim lekom u aparatu za mešanje. Komponente se zatim mešaju kako bi se formirala primarna prethodna mešavina. Intragranularni lubrikant se razdvaja prosejavanjem i kombinuje sa primarnom prethodnom mešavinom u aparatu za mešanje. Komponente se zatim mešaju kako bi se formirala prethodna mešavina.

[0157] Prethodna mešavina se suvo granulira u granulatoru granulacijom, mlevenjem i prosejavanjem kako bi se formirale granule. Ekstragranularni dezintegrant se odvaja od grudvica prosejavanjem i kombinuje sa granulama u aparatu za mešanje. Komponente se zatim mešaju kako bi se formirala primarna finalna smesa. Ekstragranularni lubrikant se odvaja od grudvica prosejavanjem i kombinuje sa primarnom finalnom smešom u aparatu za mešanje. Komponente se zatim mešaju kako bi se dobila konačna smesa. Konačna smeša se tabletira u aparatu za tabletiranje kako bi se formirale jezgro tableta. Čvrsta smeša za filmski premaz se kombinuje sa vodom i suspenduje u aparatu za suspendovanje kako bi se formirala smeša za filmski premaz. Jezgro tableta se oblaže smešom za oblaganje u aparatu za filmsko oblaganje kako bi se formirale obložene tablete.

[0159] [0049] Jedan poseban proizvodni aspekt ovog otkrića obuhvata sledeće korake prethodnog mešanja, granulacije/mlevenja i sejanja, konačnog mešanja, tabletiranja i oblaganja. Prethodna mešavina se formira u dva koraka. U prvom koraku, intragranularna laktoza monohidrat, intragranularna kroskarmeloza natrijum i intragranularna mikrokristalna celuloza se prosejavaju radi odvajanja grudvica i stavljaju u blender. Uklanjanje grudvica može se obaviti metodama poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, kao što je propuštanje materijala kroz sito sa otvorima od 1.0 mm, korišćenjem vibracionog sita ili linijskog sita. Kobimetinib hemifumarat Oblika A se zatim stavlja u blender, a sadržaj blendera se meša brzinom blendiranja od 6 o/min tokom 30 minuta. U drugom koraku, intragranularni magnezijum stearat se prosejava kroz sito od 0.5 mm radi razdvajanja grudvica i stavlja u blender, a sadržaj se meša brzinom blendiranja od 6 o/min tokom 8 minuta kako bi se dobila prethodna mešavina. U nekim takvim aspektima, proizvodi se prethodna mešavina pogodna za proizvodnju 420.000 tableta, pri čemu prethodna mešavina sadrži 22.982 kg mikrokristalne celuloze, 15.322 kg laktoza monohidrata, 1.008 kg kroskarmeloze natrijuma i 0.126 kg magnezijum stearata. Prethodna mešavina se suvo granulira valjkastim sabijanjem, melje i prosejava kroz sito od 1 mm. U nekim takvim aspektima, za aktivni lek koji ima veličinu čestica D [v, 0.5] manju od 38 µm, sila sabijanja valjka je podešena na 2 kN/cm, a veličina razmaka je 5 mm. U nekim drugim takvim aspektima, za aktivni lek koji ima veličinu čestica D [v, 0.5] od najmanje 38 µm, sabijanje valjkom je podešeno na od 2 kN/cm do 4 kN/cm, a veličina razmaka je od 4 mm do 5 mm. Konačna mešavina se formira u dva koraka. U prvom koraku, ekstragranularni kroskarmeloza natrijum se prosejava kroz sito od 1.0 mm radi uklanjanja grudvica kao što je gore opisano i kombinuje se sa granulatom u blenderu. Sadržaj blendera se meša brzinom od 6 o/min tokom 10 minuta. U drugom koraku, ekstragranularni magnezijum stearat se prosejava kroz sito od 0.5 mm radi razdvajanja grudvica i stavlja se u blender, a sadržaj se meša pri 6 o/min tokom 8 minuta kako bi se formirala konačna smesa. U aspektima u kojima se proizvodi finalna mešavina pogodna za proizvodnju 420.000 tableta, količina ekstragranulirane kroskarmeloze natrijum je 1.008 kg, a količina ekstragranulirane magnezijum stearata 0.63 kg. Konačna smeša se komprimuje u presi, kao što je rotaciona presa za tabletiranje, glavnom silom kompresije od 14 kN do 19 kN da bi se formirala jezgra tableta. Jezgra tableta se oblažu prskanjem suspenzije za oblaganje korišćenjem aparata za oblaganje u tiganju poznatog u struci. U nekim takvim aspektima, gde se proizvodi konačna mešavina pogodna za proizvodnju 420.000 tableta, suspenzija za premaz sadrži 0.806 kg polivinil alkohola, 0.504 kg titanijum dioksida, 0.407 kg makrogola/PEG 3350, 0.298 kg talka i odgovarajuću količinu prečišćene vode za formiranje suspenzije za premaz. U nekim drugim takvim aspektima, sastav premaza je Opadry II White 85F18422. Veličine serija koje nisu pogodne za pripremu 420.000 tableta mogu se pripremiti sa istim odnosima sastojaka.

[0161] [0050] Pogodni blenderi su poznati u struci i uključuju bilo koji aparat koji se tipično koristi u farmaceutskoj industriji za ravnomerno mešanje dve ili više komponenti, uključujući blendere u obliku slova V, blendere sa dvostrukim konusom, blendere sa kantom (kontejnerima) i rotacione blendere sa bubnjem. Zapreminu kombinovanog blendera, punjenje blendera, brzinu rotacije i vreme rotacije mogu odgovarajuće odrediti stručnjaci u ovoj oblasti, na osnovu rutinskog eksperimentisanja, kako bi se postigla u suštini homogena mešavina komponenti. Zapremina blendera je odgovarajuće 50 l, 100 l, 200 l, 250 l ili veća. Izbor punjenja blendera omogućava konvekciju i trodimenzionalno kretanje materijala i pogodno je oko 25 %, oko 30 %, oko 35 %, oko 40 %, oko 50 %, oko 60 % ili oko 70 %, a rasponi su od oko 30 % do oko 60 %, od oko 45 % do oko 65 %, od 32 % do 53 % ili od 32 % do 40 %. Vreme mešanja je odgovarajuće 5 min, 10 min, 15 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min, 60 min ili više. Brzina rotacije je pogodno, na primer, 2 obrtaja u minuti, 3 obrtaja u minuti, 4 obrtaja u minuti, 5 obrtaja u minuti, 6 obrtaja u minuti, 7 obrtaja u minuti, 8 obrtaja u minuti, 9 obrtaja u minuti ili 10 obrtaja u minuti.

[0163] Oprema za suvu granulaciju, mlevenje i prosejavanje je poznata u struci i komercijalno je dostupna od brojnih proizvođača, uključujući Gertis, Fitzpatrick® i Fruend-Vector. Takva oprema uopšteno omogućava kontrolu sile sabijanja valjka, širine razmaka, brzine valjka i brzine dodavanja. Površine valjaka mogu biti glatke, nazubljene, ili jedna površina valjka može biti glatka, a druga površina valjka može biti nazubljena. U bilo kom od različitih aspekata, prethodna mešavina se puni u bunker za dovod valjkastog kompaktora. Zbijanje valjkom se vrši pri određenoj sili i veličini razmaka, a proces se poželjno odvija pod kontrolom razmaka. Formirane trake se melju kroz sito kako bi se dobile granule. U nekim aspektima ovog otkrića, sito je sastavni deo mlina. Veličina zazora je pogodno oko 2 mm, oko 3 mm, oko 4 mm ili oko 5 mm, a rasponi su joj od oko 2 mm do oko 5 mm, od oko 2 mm do oko 4 mm, od oko 3 mm do oko 5 mm ili od oko 4 mm do oko 5 mm. Sila sabijanja valjkom je pogodno oko 1 kN/cm, oko 2 kN/cm, oko 3 kN/cm, oko 4 kN/cm, oko 5 kN/cm, oko 6 kN/cm, oko 7 kN/cm ili oko 8 kN/cm, i njihovi opsezi, kao što su od oko 1 kN/cm do oko 8 kN/cm, od oko 2 kN/cm do oko 5 kN/cm ili od oko 2 kN/cm do oko 4 kN/cm. Veličina sita za glodanje je pogodno 0.5 mm, 0.75 mm, 1.0 mm, 1.25 mm, 1.5 mm, 1.75 mm, 2.0 mm, 2,25 mm ili 2.5 mm, i njihovi opsezi, kao što su od oko 0.5 mm do oko 2.5 mm, od oko 0.5 mm do oko 2.0 mm, od oko 0.5 mm do oko 1.5 mm, od oko 0.5 mm do oko 1.25 mm, od oko 0.75 mm do oko 2.5 mm, od oko 0.75 mm do oko 2.0 mm, od oko 0.75 mm do oko 1.5 mm, od oko 0.75 mm do oko 1.25 mm. U nekim posebnim aspektima ovog otkrića, koristi se sito za glodanje od 1.0 mm.

[0165] Pogodne prese za tablete su poznate u struci i komercijalno su dostupne od, na primer, Riva-Piccola, Fette, Bosch Packaging Technology, GEA i Natoli Engineering Company. Generalno, svaka tableta se pravi presovanjem granula unutar matrice, napravljene od kaljenog čelika. Matrica je u obliku diska sa rupom prorezanim kroz sredinu. Prah se komprimuje u sredini matrice pomoću dva očvrsnuta čelična udarca koji se uklapaju u gornji i donji deo matrice, čime se formira tableta.

[0166] Kompresija tableta može se obaviti u dve faze, pri čemu prva, faza pre kompresije, uključuje sabijanje praha i blago sabijanje smeše pre primene glavne sile kompresije za formiranje tablete. Tablet se izbacuje iz matrice nakon kompresije. U nekim aspektima ovog otkrića, sila kompresije je oko 5 kN, oko 6 kN, oko 7 kN, oko 8 kN, oko 9 kN, oko 10 kN, oko 11 kN, oko 12 kN, oko 13 kN, oko 14 kN, oko 15 kN, oko 16 kN, oko 17 kN, oko 18 kN, oko 19 kN ili oko 20 kN, i njihovi opsezi, kao što su od oko 5 kN do oko 20 kN, od oko 14 kN do oko 19 kN, od oko 14 kN do oko 18 kN, ili od oko 8 kN do oko 13 kN. U nekim aspektima ovog otkrića, tablete koje sadrže oko 60 mg aktivnog leka mogu se formirati pri sili kompresije od oko 14 kN do oko 18 kN. U drugim aspektima ovog otkrića, tablete koje sadrže oko 20 mg aktivnog leka mogu se formirati pri sili kompresije od oko 8 kN do oko 13 kN.

[0168] U nekim aspektima, jezgro tablete sadrži komponente i opsege koncentracija u težinskim procentima kao što je naznačeno u Tabeli A.

[0170] Tabela A

[0173]

[0176] U nekim aspektima ovog otkrića, jezgro tablete sadrži komponente i opsege koncentracija u težinskim procentima kao što je naznačeno u Tabeli B na osnovu tablete koja sadrži 20 mg aktivnog leka. Za tablete koje sadrže nešto više od 20 mg aktivnog leka, npr.40 mg ili 60 mg, odnosi različitih komponenti opisanih u nastavku za tablete od 20 mg se održavaju.

[0178] Tabela B

[0181]

[0184] [0055] U nekim aspektima ovog otkrića, jezgro tablete sadrži komponente i opsege koncentracija u težinskim procentima kao što je naznačeno u Tabeli C na osnovu tablete koja sadrži 20 mg aktivnog leka.

[0186] Tabela C

[0189]

[0192] U nekim drugim aspektima ovog otkrića, jezgra tableta sadrže komponente i koncentracije u težinskim procentima kao što je naznačeno u Tabeli D na osnovu tablete koja sadrži 20 mg aktivnog leka.

[0194] Tabela D

[0197]

[0200] U nekim drugim aspektima ovog otkrića, obložena jezgra tableta sadrže komponente i koncentracije u težinskim procentima kao što je naznačeno u Tabeli E na osnovu tablete koja sadrži 20 mg aktivnog leka. Komponente i koncentracije u težinskim procentima sastava filmskog premaza navedene su u Tabeli F.

[0201] Tabela E

[0204]

[0207] Tabela F

[0210]

[0213] Postupci Lečenja

[0215] Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na postupke lečenja karcinoma koje obuhvataju davanje subjektu kome je to potrebno kristalne fumaratne soli Jedinjenja I. U posebnom izvođenju, kristalna fumaratna so Jedinjenja I je Oblik A. Količina kristalne fumaratne soli Jedinjenja I koja se primenjuje može biti terapeutski efikasna količina.

[0217] U drugom aspektu ovog otkrića, postupak lečenja može se primeniti davanjem pacijentu kome je to potrebno farmaceutske kompozicije koja sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I kao što je gore diskutovano i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na postupak lečenja karcinoma, kao što je gore diskutovano, gde je tretirani karcinom melanom (uključujući melanom mutantnog BRAF V600), rak dojke (uključujući trostruko negativni rak dojke), kolorektalni karcinom (uključujući kolorektalni karcinom mutantnog KRAS), nesitnoćelijski karcinom pluća, akutna mijeloidna leukemija i rak pankreasa.

[0219] [0060] BRAF inhibitori su korišćeni za lečenje melanoma, a vemurafenib je BRAF inhibitor koji se trenutno koristi za lečenje melanoma. Dakle, drugi aspekt ovog otkrića se odnosi na postupak lečenja melanoma kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu kome je potrebno lečenje terapeutski efikasne količine kristalne fumaratne soli Jedinjenja I same ili u kombinaciji sa vemurafenibom. U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje pre ili posle, ili istovremeno sa vemurafenibom. U drugom izvođenju, melanom je melanom mutantnog BRAF V600 gena. U posebnom izvođenju, kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje kod pacijenta koji ima neoperabilni ili metastatski melanom sa BRAF V600 mutacijom. Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na postupak lečenja melanoma mutantnog BRAF V600 kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu kome je potrebno lečenje terapeutski efikasne količine kristalne fumaratne soli Jedinjenja I same ili u kombinaciji sa vemurafenibom. U jednom izvođenju, kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje pre ili posle, ili istovremeno sa vemurafenibom. U posebnom izvođenju, kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje u kombinaciji sa Zelboraf® (vemurafenib) za lečenje pacijenata sa neoperabilnim ili metastatskim melanomom sa BRAF V600 mutacijom.

[0221] Inhibitori tirozin kinaze su korišćeni za lečenje nesitnoćelijskog karcinoma pluća (NSCLC). Gefitinib i erlotinib su inhibitori angiogeneze koji ciljaju receptore epidermalnog faktora rasta nazvanog tirozin kinaza, koji se trenutno koriste za lečenje nesitnoćelijskog karcinoma pluća (NSCLC). Druga jedinjenja su u kliničkom razvoju za lečenje nesitnoćelijskog karcinoma pluća, kao što je MEHD7945A. Dakle, drugi aspekt ovog otkrića se odnosi na postupak lečenja nesitnoćelijskog karcinoma pluća (NSCLC) kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu kome je potrebno lečenje terapeutski efikasne količine kristalne fumaratne soli Jedinjenja I, opciono u kombinaciji sa erlotinibom ili gefitinibom. U drugom izvođenju, kombinacija je sa erlotinibom. U drugom izvođenju, kombinacija je sa MEHD7945A.

[0223] Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na postupak lečenja bolesti ili poremećaja povezanih sa nekontrolisanim, abnormalnim i/ili neželjenim ćelijskim aktivnostima, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A. Ovaj postupak lečenja može se primeniti davanjem farmaceutske kompozicije kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A.

[0225] [0063] Još jedan aspekt ovog otkrića odnosi se na upotrebu kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A prema bilo kom od gore navedenih izvođenja za proizvodnju leka za lečenje bolesti ili poremećaja o kojima je gore bilo reči. Farmaceutski sastav može biti bilo koji farmaceutski oblik koji sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I. Farmaceutska kompozicija može biti, na primer, tableta, kapsula, lokalna ili transdermalna primena. Farmaceutske kompozicije uopšteno sadrže oko 1 % do oko 99 % težinski aktivnog jedinjenja ili kristalnog oblika aktivnog jedinjenja i 99 % do 1 % težinski jednog ili više odgovarajućih farmaceutskih ekscipijenasa. U jednom primeru, kompozicija će biti između oko 5 % i oko 75 % po težini aktivnog jedinjenja, dok će ostatak biti odgovarajući farmaceutski ekscipijensi, kao što je objašnjeno u nastavku.

[0227] "Terapeutski efikasna" količina kristalne fumaratne soli Jedinjenja I odnosi se na količinu dovoljnu za lečenje pacijenta koji boluje od raka. Terapeutski efikasna količina prema ovom otkriću je količina terapeutski korisna za lečenje ili prevenciju bolesnih stanja i poremećaja o kojima se ovde govori. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I opisana ovde poseduje terapeutsku aktivnost da inhibira, reguliše i/ili modulira signalnu transdukciju kinaza, posebno MEK 1/2, kao što je opisano u WO 2007/044515. Stvarna količina potrebna za lečenje bilo kog određenog pacijenta zavisiće od različitih faktora, uključujući bolest koja se leči i njenu težinu; specifičan farmaceutski sastav koji se koristi; starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i ishranu pacijenta; način primene; vreme primene; put primene; i brzinu izlučivanja aktivnog jedinjenja ili kristalnog oblika aktivnog jedinjenja, prema ovom otkriću; trajanje lečenja; bilo koje lekove koji se koriste u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se koristi; i druge takve faktore dobro poznate u medicinskoj struci. Ovi faktori su razmotreni u knjizi Gudmana i Gilmana „Farmakološka osnova terapije", deseto izdanje, A. Gilman, J. Hardman i L. Limbird, ur., McGraw-Hill Press, 155¬173, 2001. Aktivno(a) jedinjenje(a), ili kristalni oblik aktivnog(ih) jedinjenja(a), prema ovom otkriću i farmaceutskim kompozicijama koje ih sadrže, mogu se koristiti u kombinaciji sa antikancerogenim ili drugim agensima koja se uopšteno primenjuju kod pacijenta koji se leči od raka. Takođe mogu biti koformulisani sa jednim ili više takvih agenasa u jednoj farmaceutskoj kompoziciji.

[0229] [0066] U zavisnosti od vrste farmaceutske kompozicije, farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi mogu biti izabrani iz bilo kog ili kombinacije ekscipijenasa poznatih u struci. Izbor farmaceutski ekscipijenasa delimično zavisi od željenog načina primene koji će se koristiti. Za farmaceutsku kompoziciju ovog otkrića, odnosno jedno od aktivnih jedinjenja ili kristalni oblik aktivnog jedinjenja ovog otkrića, ekscipijens treba izabrati tako da u suštini zadrži određeni oblik aktivnog jedinjenja, bez obzira da li je kristalno ili ne. Drugim rečima, bilo koji ekscipijensi ne bi trebalo značajno da menjaju oblik aktivnog jedinjenja. Takođe, nosač ne bi trebalo da bude na drugi način nekompatibilan sa oblikom aktivnog jedinjenja (jedinjenja), kao što je izazivanje bilo kakvog neželjenog biološkog efekta ili na drugi način štetno interaguje sa bilo kojom drugom komponentom (komponentama) farmaceutske kompozicije. Farmaceutske kompozicije ovog otkrića mogu se pripremiti postupcima poznatim u oblasti farmaceutskih formulacija, na primer, videti Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izdanje, (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). U čvrstim doznim oblicima, Jedinjenje I se pomeša sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat ili (a) drugim ekscipijensima kao što su punila ili ekstenderi, kao na primer, skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol i silicijumska kiselina; (b) vezivne supstance, kao na primer, derivati celuloze, skrob, alginati, želatin, polivinilpirolidon, saharoza i guma akacija; (c) humektanti, kao na primer, glicerol; (d) sredstva za dezintegraciju, kao na primer, agar-agar, kalcijum karbonat, skrob od krompira ili tapioke, alginska kiselina, natrijum kroskarmeloza, kompleksni silikati i natrijum karbonat; (e) usporivači rastvaranja, kao na primer parafin; (f) ubrzivači apsorpcije, kao na primer, kvaternarna amonijumova jedinjenja; (g) sredstva za kvašenje, kao na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, magnezijum stearat i slično; (h) adsorbenti, kao na primer, kaolin i bentonit; i (i) lubrikanti, kao na primer, talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat ili njihove smeše. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici mogu takođe da sadrže puferujuće agense.

[0231] Farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi, obično nazvani adjuvansi, poznati u struci farmaceutskih formulacija, takođe se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama ovog otkrića. To uključuje, ali nije ograničeno na, agense za konzerviranje, vlaženje, suspendovanje, zaslađivanje, aromatizaciju, parfimisanje, emulgiranje i disperziju. Sprečavanje delovanja mikroorganizama može se obezbediti različitim antibakterijskim i antifungalnim agensima, na primer, parabenima, hlorobutanolom, fenolom, sorbinskom kiselinom i slično. Takođe može biti poželjno uključiti izotonične agense, na primer šećere, natrijum hlorid i slično. Po želji, farmaceutska kompozicija ovog otkrića može takođe da sadrži manje količine pomoćnih supstanci kao što su agensi za kvašenje ili emulgatori, agensi za puferovanje pH vrednosti i antioksidansi, kao što su, na primer, limunska kiselina, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i butilovani hidroksitoluen.

[0233] Čvrsti dozni oblici kao što je gore opisano mogu se pripremiti sa premazima i ljuskama, kao što su enterički premazi i drugi dobro poznati u struci. Mogu da sadrže agense za smirivanje, a mogu biti i takvog sastava da oslobađaju aktivno jedinjenje ili jedinjenja u određenom delu crevnog trakta na odložen način. Primeri ugrađenih kompozicija koje se mogu koristiti su polimerne supstance i voskovi. Aktivna jedinjenja mogu takođe biti u mikrokapsuliranom obliku, ako je potrebno, sa jednim ili više gore navedenih pomoćnih agenasa.

[0235] Suspenzije, pored aktivnih jedinjenja, mogu da sadrže agense za suspendovanje, kao na primer, etoksilovane izostearil alkohole, polioksietilen sorbitol i sorbitan estre, mikrokristalnu celulozu, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, ili smeše ovih supstanci i slično.

[0237] [0071] Kompozicije za rektalnu primenu su, na primer, supozitorije koje se mogu pripremiti mešanjem aktivnog jedinjenja (jedinjenja) ili kristalnog oblika aktivnog jedinjenja (jedinjenja), sa, na primer, odgovarajućim neiritativnim ekscipijensima ili nosačima kao što su kakao puter, polietilenglikol ili vosak za supozitorije, koji su čvrsti na običnim temperaturama, ali tečni na telesnoj temperaturi i stoga se tope u odgovarajućoj telesnoj šupljini i oslobađaju aktivnu komponentu u njoj.

[0239] Pošto se aktivno(a) jedinjenje(a), ili kristalni oblik aktivnog(ih) jedinjenja(a), održava tokom njihove pripreme, čvrsti dozni oblici su poželjni za farmaceutsku kompoziciju ovog otkrića. Posebno su poželjni čvrsti dozni oblici za oralnu primenu, koji uključuju kapsule, tablete, pilule, praškove i granule. U takvim čvrstim doznim oblicima, aktivno(a) jedinjenje(a) je pomešano sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom. Primena aktivnog jedinjenja (jedinjenja), ili kristalnog oblika aktivnog jedinjenja (jedinjenja), u čistom obliku ili u odgovarajućoj farmaceutskoj kompoziciji, može se izvršiti putem bilo kog od prihvaćenih načina primene ili agenasa za slične svrhe. Dakle, primena može biti, na primer, oralna, nazalna, parenteralna (intravenska, intramuskularna ili potkožna), lokalna, transdermalna, intravaginalna, intravezikalna, intracistemalna ili rektalna, u obliku čvrstih, polučvrstih, liofilizovanih praškastih ili tečnih doznih oblika, kao što su, na primer, tablete, supozitorije, pilule, meke elastične i tvrde želatinske kapsule, praškovi, rastvori, suspenzije ili aerosoli, ili slično, poželjno u jediničnim doznim oblicima pogodnim za jednostavno davanje preciznih doza. Jedan poželjan način primene je oralna primena, koristeći pogodan režim doziranja koji se može prilagoditi stepenu težine bolesti koja se leči.

[0241] Priprema (S)-[3,4-Difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona (Jedinjenje I)

[0243] Jedinjenje I može se pripremiti kao što je opisano u WO 2014/059422 i kao što je generalno prikazano u Šemi 1. Reakcija komercijalno dostupnog (3S,5R,8aS)-3-fenil-heksahidro-oksazolo [3,2-a] piridin-karbonitrila VII sa komercijalno dostupnim terc-butil-3-okso-1-azetidinkarboksilatom VIIa u prisustvu baze daje Jedinjenje VI. Jedinjenje VI se tretira redukcionim agensom hidrida kao što je natrijum cijanoborohidrid u prisustvu kiseline, nakon čega sledi tretman sa vodenim rastvorom natrijum hidroksida, kako bi se dobilo Jedinjenje V. Uklanjanje zaštite sa V korišćenjem kiseline daje Jedinjenje IV, koje se spaja sa hloridom kiseline IVa u prisustvu katalitičke količine piridina kako bi se dobilo III. Hidrogenacija III daje derivat piperidina II. Konačno, spajanje II sa 2-fluoro-4-jodoanilinom IIa daje željeno jedinjenje.

[0244]

[0247] Opšti Postupci Pripreme Kristalnih Oblika

[0249] Kristalni oblici mogu se pripremiti različitim postupcima, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, kristalizaciju ili rekristalizaciju iz odgovarajuće smeše rastvarača; sublimaciju; rastvaranje iz rastopa; transformaciju čvrstog stanja iz druge faze; kristalizaciju iz superkritične tečnosti; i mlazno prskanje. Tehnike za kristalizaciju ili rekristalizaciju kristalnih oblika smeše rastvarača uključuju, ali nisu ograničene na, na primer, isparavanje rastvarača; smanjenje temperature smeše rastvarača; kristalizaciju prezasićene smeše rastvarača jedinjenja i/ili njegove soli; kristalizaciju prezasićene smeše rastvarača jedinjenja i/ili njegove soli; liofilizaciju smeše rastvarača; i dodavanje antirastvarača (kontrarastvarača) u smešu rastvarača. Tehnike kristalizacije visokog protoka mogu se koristiti za pripremu kristalnih oblika, uključujući polimorfe.

[0251] [0075] Kristali lekova, uključujući polimorfe, postupke pripreme i karakterizaciju kristala lekova, razmatrani su u knjizi „Solid-State Chemistry of Drugs", S.R. Birn, R.R. Fajfer i Dž. G. Stouel, 2. izdanje, SSCI, West Lafajet, Indijana (1999).

[0253] U tehnici kristalizacije u kojoj se koristi rastvarač, rastvarač(i) se obično biraju na osnovu jednog ili više faktora, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, rastvorljivost jedinjenja; korišćenu tehniku kristalizacije; i pritisak pare rastvarača. Mogu se koristiti kombinacije rastvarača. Na primer, jedinjenje može biti rastvoreno u prvom rastvaraču kako bi se dobio rastvor u koji se zatim dodaje antirastvarač kako bi se smanjila rastvorljivost jedinjenja u rastvoru i ubrzalo stvaranje kristala.

[0254] Antisolvent je rastvarač u kome jedinjenje ima malu rastvorljivost.

[0256] U jednom postupku koja se može koristiti u pripremi kristala, fumaratna so Jedinjenja I može se suspendovati i/ili mešati u odgovarajućem rastvaraču kako bi se dobila suspenzija, koja se može zagrejati kako bi se podstaklo rastvaranje. Termin "suspenzija", kao što je ovde korišćeno, označava zasićeni rastvor jedinjenja, pri čemu takav rastvor može da sadrži dodatnu količinu jedinjenja kako bi se dobila heterogena smeša jedinjenja i rastvarača na datoj temperaturi.

[0258] Kristali za zasejavanje mogu se dodati bilo kojoj smeši za kristalizaciju kako bi se podstakla kristalizacija. Zasejavanje se može koristiti za kontrolu rasta određenog polimorfa i/ili za kontrolu raspodele veličine čestica kristalnog proizvoda. Shodno tome, izračunavanje količine potrebnih kristala zavisi od veličine raspoloživog kristala i željene veličine prosečne čestice proizvoda, kao što je opisano, na primer, u „Programirani kristalizatori šaržnog hlađenja", J.V. Mulin i J. Nivlt, Chemical Engineering Science, 1971, 26, 3690377. Uopšteno, potrebni su kristali male veličine kako bi se efikasno kontrolisao rast kristala u seriji. Kristal male veličine može se generisati prosejavanjem, mlevenjem ili mikronizacijom velikih kristala, ili mikrokristalizacijom rastvora. Prilikom mlevenja ili mikronizacije kristala, treba voditi računa da se izbegne promena kristalnosti željenog kristalnog oblika (tj. prelazak u amorfni ili drugi polimorfni oblik).

[0260] [0079] Ohlađena smeša za kristalizaciju može se filtrirati pod vakuumom, a izolovani čvrsti proizvod isprati odgovarajućim rastvaračem, kao što je, na primer, rastvarač za hladnu rekristalizaciju. Nakon pranja, proizvod se može osušiti pod strujom azota da bi se dobio željeni kristalni oblik. Proizvod se može analizirati odgovarajućom spektroskopskom ili analitičkom tehnikom, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC); rendgensku difrakciju praha (XRPD); i termogravimetrijsku analizu (TGA) kako bi se osiguralo da je formiran kristalni oblik jedinjenja. Dobijeni kristalni oblik može se proizvesti u količini većoj od oko 70 tež.% izolovanog prinosa, na osnovu težine jedinjenja prvobitno korišćenog u postupku kristalizacije, a poželjno većoj od oko 90 tež.% izolovanog prinosa. Opciono, proizvod se može razdvojiti mlevenjem ili propuštanjem kroz mrežasto sito.

[0262] Karakteristike i prednosti ovog otkrića mogu biti lakše razumljive onima koji su stručnjaci u ovoj oblasti nakon čitanja sledećeg detaljnog opisa. Treba razumeti da se određene karakteristike pronalaska koje su, radi jasnoće, opisane gore i u nastavku u kontekstu odvojenih otelotvorenja, takođe mogu kombinovati da bi se formiralo jedno otelotvorenje. Nasuprot tome, različite karakteristike ovog otkrića koje su, iz razloga kratkoće, opisane u kontekstu jednog otelotvorenja, mogu se takođe kombinovati tako da formiraju njegove podkombinacije. Otkrivanje je dalje ilustrovano sledećim primerima, koji se ne smeju tumačiti kao ograničavanje obima otkrivanja na specifične postupke opisane u njima.

[0264] Definicije navedene ovde imaju prednost nad definicijama navedenim u bilo kom patentu, prijavi patenta i/ili objavi prijave patenta na koju se ovde poziva. Sva merenja su podložna eksperimentalnim greškama.

[0266] Kao što je ovde korišćeno, "amorfan" se odnosi na čvrsti oblik molekula i/ili jona koji nije kristalni. Amorfna čvrsta supstanca ne pokazuje definitivan rendgenski difraktogram sa oštrim maksimumima.

[0268] Kao što je ovde korišćeno, termin "suštinski čist" označava Oblik A koji sadrži najmanje oko 90 težinskih% na osnovu težine takvog kristalnog oblika. Termin "najmanje oko 90 tež.%", iako ne namerava da ograniči primenljivost doktrine ekvivalenata na obim zahteva, obuhvata, ali nije ograničen na, na primer, oko 90, oko 91, oko 92, oko 93, oko 94, oko 95, oko 96, oko 97, oko 98, oko 99 i oko 100 tež.%, na osnovu težine kristalnog oblika na koji se odnosi. Ostatak Oblika A može da sadrži drugi(e) oblik(e) fumaratne soli Jedinjenja I i/ili reakcione nečistoće i/ili nečistoće iz procesa koje nastaju, na primer, kada se kristalni oblik priprema. Prisustvo reakcionih nečistoća i/ili procesnih nečistoća može se utvrditi analitičkim tehnikama poznatim u struci, kao što su, na primer, hromatografija, nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija, masena spektroskopija i/ili infracrvena spektroskopija.

[0270] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu kristalne fumarat soli Jedinjenja I označene kao Oblik A, koji obuhvata:

[0272] dodavanje fumarne kiseline rastvorene u rastvaraču u smešu Jedinjenja I rastvorenog u rastvaraču kako bi se formirala kristalna fumaratna so Jedinjenja I označena kao Oblik A; i sakupljanje dobijenih kristala kristalne fumarat soli Jedinjenja I označenih kao Oblik A.

[0274] U ovom izvođenju, korišćeni rastvarači su polarni rastvarači. U zavisnosti od rastvorljivosti fumarne kiseline i/ili jedinjenja I u određenom rastvaraču, može biti potrebno blago zagrevanje (40-80 °C) da bi se osiguralo potpuno rastvaranje. Na primer, fumarna kiselina može biti rastvorena u polarnom protičnom rastvaraču kao što je alkohol (na primer, metanol, etanol, n-propanol ili izopropanol ili slično), sama ili kao smeša sa jednim ili više drugih rastvarača ili sa vodom. Alternativno, fumarna kiselina se može rastvoriti u aprotičnom rastvaraču kao što je tetrahidrofuran, dihlorometan ili slično. Slično tome, Jedinjenje I može biti rastvoreno u dihlorometanu ili polarnom rastvaraču kao što je alkohol (na primer, metanol, etanol, n-propanol ili izopropanol ili slično), samo ili kao smeša sa jednim ili više drugih rastvarača ili sa vodom. Rastvor fumarne kiseline se zatim dodaje rastvoru Jedinjenja I i dobijena smeša se ostavi da odstoji dok se ne formira talog. U nekim slučajevima, da bi se ubrzalo formiranje kristala, dobijena smeša se hladi ili se dodaje kristalna semena. U drugim slučajevima, anti-rastvarač kao što je nepolarni ugljovodonični rastvarač kao što je heptan ili slično se koristi da bi se ubrzalo formiranje kristala.

[0276] Dakle, u drugom aspektu, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu kristalne fumarat soli Jedinjenja I označene kao Oblik A, koji obuhvata:

[0278] rastvaranje Jedinjenja I u prvom rastvaraču kako bi se formirala prva smeša;

[0279] rastvaranje fumarne kiseline u drugom rastvaraču kako bi se formirala druga smeša; dodavanje prve smeše drugoj smeši uz hlađenje kako bi se formirali kristali kao talog; i sakupljanje kristala kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A.

[0281] Kao i u prethodnom aspektu, korišćeni rastvarači su polarni rastvarači. U posebnom izvođenju, prvi i drugi rastvarač su isti i predstavljaju smešu izopropanola i vode. U jednom izvođenju, odnos izopropanola i vode je 9:1. U drugom izvođenju, odnos izopropanola i vode je 4:1. U drugom izvođenju, odnos izopropanola i vode je 85:15. Obično, približno 7 do 11 težinskih ekvivalenata prvog rastvarača se koristi za svaki jedan težinski ekvivalent Jedinjenja I, a 2.0 do 3.0 težinski ekvivalenta drugog rastvarača se koriste za svaki jedan težinski ekvivalent fumarne kiseline. Konkretnije, približno 8 do 10 težinskih ekvivalenata prvog rastvarača se koristi za svaki jedan težinski ekvivalent Jedinjenja I, a 2.4 do 2,7 težinskih ekvivalenata drugog rastvarača se koristi za svaki jedan težinski ekvivalent fumarne kiseline.

[0283] [0088] Jedan molekul fumarne kiseline formira so sa dva molekula Jedinjenja I kako bi se formirala hemifumaratna so Jedinjenja I. Dakle, oko 0.5 ekvivalenta fumarne kiseline se koristi za svaki jedan ekvivalent Jedinjenja I. Tipično, 0.51 do 0.53 ekvivalenta se koristi za svaki jedan ekvivalent Jedinjenja I.

[0285] U običnom primeru, pre dodavanja fumarne kiseline, Jedinjenje I rastvoreno u prvom rastvaraču se filtrira, na primer, kroz aktivni ugalj. Fumarna kiselina rastvorena u drugom rastvaraču se zatim polako dodaje rastvoru Jedinjenja I u prvom rastvoru uz blago zagrevanje na temperaturi od približno 40-90 ° C; poželjnije 60-85 °C; i još poželjnije 75-80 °C. U nekim slučajevima, kristali za sejanje mogu se dodati smeši Jedinjenja I i fumarne kiseline u rastvaraču propanol /voda. Kako bi se završio proces kristalizacije, smeša se može ohladiti na približno 20 °C. Dobijeni kristali se izoluju filtracijom.

[0287] U daljem aspektu, otkriće se odnosi na postupak za pripremu kristalne fumarat soli Jedinjenja I označene kao Oblik A, koji obuhvata: dodavanje fumarne kiseline rastvorene u rastvaraču u smešu Jedinjenja I rastvorenog u rastvaraču kako bi se formirala kristalna fumaratna so Jedinjenja I označena kao Oblik A kao talog.

[0289] U jednom izvođenju ovog aspekta, postupak dalje obuhvata dodavanje kristala za zasejavanje fumaratne soli Jedinjenja I označenog kao Oblik A u smešu.

[0291] U dodatnom izvođenju, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A, koji obuhvata rastvaranje amorfnog oblika Jedinjenja I u rastvaraču uz blago zagrevanje na 65-80 °C, a zatim ostavljanje dobijene smeše da se ohladi dok se ne formiraju kristali. U jednom izvođenju, u smešu se mogu dodati kristali za zasejavanje. U drugom izvođenju, smeša se može ohladiti na približno 20 °C. Dobijeni kristali se zatim izoluju filtracijom.

[0293] Primeri i pripreme koje slede dati su da bi omogućili stručnjacima u ovoj oblasti da jasnije razumeju i primene ovaj pronalazak. Ne treba ih smatrati ograničavajućim obimom pronalaska, već samo ilustrativnim i reprezentativnim za njega.

[0295] Primer 1

[0297] Sinteza terc-butil estra 3-((3B,5R,8aB)-5-cijano-3-fenil-heksahidro-oksazolo [3,2-a]

[0298] piridin-5-il)-3-hidroksi-azetidin-1-karboksilne kiseline

[0300]

[0301]

[0304] Smeša (3B,5R,8aS)-3-fenil-heksahidro-oksazolo[3,2-a] piridin-karbonitrila (20.0 g, 87.6 mmol, 1.0 ekv.) i dimetiltetrahidropirimidona (DMPU, 11.3 g, 87.6 mmol, 1.0 ekv.) u THF (95.1 mL) je mešana 10 minuta dok se nije primetio bistri rastvor. Smeša je zatim ohlađena na -70 do -80 °C i dodat je litijum diizopropilamid (28 % rastvor u heptanu, THF i etilbenzenu) (35.2 g, 92 mmol, 1.05 ekvivalenta) tokom 30 minuta uz održavanje unutrašnje temperature između -70 i -80 °C. Nakon završenog dodavanja, smeša je mešana na -70 do -80 °C još 2 sata, nakon čega je dodat rastvor terc-butil estra

[0305] 3-okso-azetidin-1-karboksilne kiseline (16.2 g, 94.6 mmol, 1.08 ekvivalenta) u THF (16.4 g) tokom 30 minuta uz održavanje unutrašnje temperature između -70 i -80 °C. Nakon završenog doziranja, reakciona smeša je mešana na -70 do -80 °C tokom 1 sata.

[0307] U posebnoj posudi je pripremljen rastvor natrijum hlorida (10.3 g), dejonizovane vode (103.0 g) i sirćetne kiseline (5.29 g, 87.6 mmol, 1.0 ekvivalent) i ohlađen na 0 °C. Reakciona smeša je dozirana u smešu za gašenje tokom 30 minuta, uz održavanje unutrašnje temperature na manje od 10 °C. Posuda sa reakcionom smešom je isprana sa THF (26.7 g) i ispiranje je spojeno sa smešom za gašenje. Nakon energičnog mešanja tokom 20 minuta na 5 °C, mešanje je zaustavljeno i slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Donja vodena faza je odbačena. Etil acetat (61.8 g) i dejonizovana voda (68.5 g) su dodati organskoj fazi. Nakon energičnog mešanja na 5 °C tokom 10 minuta, mešanje je zaustavljeno, slojevi su ostavljeni da se razdvoje, a donja vodena faza je odbačena. Postupak pranja je ponovljen jednom sa dejonizovanom vodom (68.5 g).

[0309] [0097] Organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom (temperatura omotača približno 40-45 °C, pritisak = 200-180 mbar) dok se ne sakupi ukupna zapremina od približno 120 mL destilata, što je rezultiralo žućkastim rastvorom. Vakuum je otpušten i dodat je heptan (102.0 g) tokom 10 minuta. Destilacija pod smanjenim pritiskom je nastavljena (temperatura omotača približno 35-40 °C, pritisak približno 250-110 mbar) dodavanjem heptana (177 g) brzinom tako da se preostala zapremina održava konstantnom. Posle 10 minuta destilacije, dobijena je gusta, mešavajuća suspenzija. Vakuum je otpušten i dodat je izopropanol (10.2 g) tokom 15 minuta na 35 °C. Suspenzija je zagrejana na 45 °C i mešana 30 minuta. Nakon toga, suspenzija je ohlađena na 0 °C tokom 2 sata i držana na 0 °C tokom 1 sata. Suspenzija je filtrirana preko staklenog filtera. Boca i fitraciona pogača su isprani prethodno ohlađenim (približno 5 °C) heptanom (46.6 g), a vlažna pogača je sušena preko noći na 40 °C pod sniženim pritiskom do konstantne težine kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao blago bež kristali. HPLC čistoća: 91.9 % površine. Tačka topljenja (DSC): ekstrapolirani vrh: 151,80°C.1H-NMR (600 MHz, CDCl<3>): δ 7.30 - 7.50 (m, 5 H), 4.17 - 4.27 (m, 3 H), 3.94 - 4.01 (m, 2 H), 4.11 - 4.1 (m, 2 H), 4.09 (d, 1 H), 3.95 (d, 1 H), 3.87 (dd, 1 H), 3.76 (dd, 1 H), 3.54 - 3.70 (br, 1 H), 2.85 - 3.03 (br, 1 H), 2.18 -2.25 (m, 1 H), 2.12 (br, 1 H), 1,97 - 2.04 (m, 1 H), 1.85 - 1.94 (m, 1 H), 1.61 - 1.79 (m, 3 H), 1.41 (s, 9 H). MS (EI): m/z = 400.48 ([M+H]+ , 100%).

[0311] Primer 2

[0313] Sinteza terc-butil estra 3-hidroksi-3-[(S)- 1-((S)-2-hidroksi-1-fetil-etil)-piperidin-2-il] azetidin-1-karboksilne kiseline

[0315]

[0318]

[0321] Smeša terc-butil estra 3-((3S, 5R, 8aS)-5-cijano-3-fenil-heksahidro-oksazolo [3,2-a] piridin-5-il)-3-hidroksi-azetidin-1-karboksilne kiseline (12.0 g, 30.0 mmol, 1.0 ekv.) i natrijum cijanoborohidrida (3.18 g, 50.6 mmol, 1.68 ekv.) u EtOH (70 mL) je zagrejana na 30 °C i polako dodata u roku od 2 sata u toplu smešu (70 °C) sirćetne kiseline (3.63 ml, 63.5 mmol, 2.1 ekv.) u EtOH (20 mL). Dobijena smeša je potom mešana još 3 sata na 70 do 75 °C. Nakon završetka reakcije, smeša je ohlađena na 23 °C i polako dozirana u roku od 30 minuta u smešu toluena (100 mL) i vodenog NaOH (60 g, 10%-w/w) i mešana 15 minuta. Reakciona boca je isprana ugašenom smešom. Slojevi su razdvojeni, a organska faza je isprana sa toluenom (30 ml). Spojene organske faze su koncentrovane pod vakuumom (200 do 85 mbar na temperaturi omotača od 35 do 40°C) dok se ne dobije 80 mL (70.82 g) žućkastog rastvora proizvoda. HPLC čistoća: 97.6 % površine.

[0323] [0100] Za analitičke svrhe, rastvor proizvoda je potpuno koncentrovan u rotacionom isparivaču, tretiran sa EtOH i ponovo potpuno koncentrovan, što je rezultiralo sa 19.2 g penastog proizvoda. Ostatak je rastvoren u smeši etil acetata (30 ml) i MeOH (15 ml) i prečišćen brzom hromatografijom preko 120 g silika gela koristeći etil acetat kao eluent. Frakcije od 3 do 5 od 6 frakcija od po 100 ml su spojene i potpuno koncentrovane pod vakuumom u rotacionom isparivaču, što je rezultiralo sa 14.6 g bezbojne pene. Ovaj ostatak je ponovo rastvoren u minimalnoj količini smeše heptan/etil acetat 2:1 (v/v) i prečišćen brzom hromatografijom preko 190 g silika gela koristeći heptan /etil acetat 2:1 (v/v) kao eluent. Nakon prethodnog ciklusa od 700 ml, deset narednih frakcija (ukupno 800 ml) je spojeno, potpuno ispareno u rotacionom isparivaču pod vakuumom (temperatura kupatila 35 °C, pritisak 20 mbar) i ostatak je sušen preko noći na 35 °C i pod vakuumom do konstantne težine kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca. Mp. (DSC): ekstrapolirani pik: 220.9 °C (topljenje praćeno egzotermnim raspadanjem).1H-NMR (600 MHz, CDCl<3>): δ 7.38 - 7.41 (m, 2 H), 7.34 - 7.38 (m, 2 H), 7.27 - 7.30 (m, 1 H), 4.28 - 4.50 (br, 1 H), 4.19 (dd, 1 H), 4.11 - 4.1 (m, 2 H), 4.09 (d, 1 H), 3.95 (d, 1 H), 3.87 (dd, 1 H), 3.83 (t, 1 H), 3.08 - 3.16 (m, 1 H), 2.85 (ddd, 1 H), 2.57 (ddd, 1 H), 1.76 - 1.84 (m, 1 H), 1.68 - 1.75 (m, 1 H), 1.53 - 1.58 (m, 1 H), 1.41 - 1.48 (bs, 9 H), 1.31 - 1.41 (m, 2 H), 1.21 - 1.31 (m, 2 H). MS (EI): m/z = 377.24 ([M+H]+ , 100%). EA za C<21>H<32>N<2>O<4>: izračunato: C 66.99, H 8.57, N 7.44; pronađeno C 67.38, H 8.50, N 7.29.

[0325] Primer 3

[0327] Sinteza 3-[(S)- 1-((S)-2-hidroksi-1-fenil-etil)- piperidin-2-il]- azetidin-3-ol di hidrohlorida

[0329]

[0332]

[0335] Rastvor terc-butil estra 3-hidroksi-3-[^)-1-(^)-2-hidroksi-1-fenil-etil)-piperidin-2-il]

[0336] azetidin-1-karboksilne kiseline (69.8 g, 29.6 mmol, 1.0 ekvivalent) u toluenu je tretiran na 23-27 °C u roku od 12 minuta smešom vode (30.1 g) i HCl (37 %, 7.22 g, 73.3 mmol, 2.5 ekvivalenta) i mešan 10 minuta. Dobijena dvofazna smeša je zagrejana na 50 °C u roku od 30 minuta i mešana je 4 sata na 50 °C. Nakon potpune konverzije, smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i faze su ostavljene da se razdvoje. Vodena faza je isprana sa toluenom (36 ml) i faze su ostavljene da se razdvoje, što je rezultiralo sa 44.2 g žućkastog vodenog rastvora proizvoda. HPLC čistoća: 96.3 % površine. Za analitičke svrhe, rastvor proizvoda je potpuno koncentrovan u rotacionom isparivaču (temperatura kupatila 45 °C). Žuti uljasti ostatak je rastvoren u MeOH (190 mL) i ponovo potpuno koncentrovan u rotacionom isparivaču i pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini smeše MeOH/etil acetata 1:1 (v/v) i prečišćen brzom hromatografijom preko silika gela (150 g) koristeći smešu MeOH /etil acetata 1:1 (v/v) kao eluent. Uzeta je i odbačena prethodna frakcija od 400 ml, a sledeće frakcije (1.5 l) su spojene i potpuno koncentrovane u rotacionom isparivaču pod vakuumom (temperatura kupatila 40°C, pritisak 20 mbar), što je rezultiralo žutim uljem koje je rastvoreno u MeOH (20 ml). Ulje je dodato kap po kap na sobnoj temperaturi u etil acetat (80 ml), nakon čega se proizvod istaložio. Čvrste materije su filtrirane i isprane sa etil acetatom (30 ml). Sušenjem preko noći na 30 °C pod vakuumom do konstantne težine dobijeno je jedinjenje iz naslova (22.0 g) kao bezbojna čvrsta supstanca.

[0337] T.p. (DSC): T<onset>114.2 °C, ekstrapolirani pik: 123.4 °C.1H NMR (600 MHz, DMSO-d<6>): δ 9.50 - 9.64 (br, 1 H), 8.91 - 9.03 (br, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.62 - 7.56 (m, 2 H), 7.41 - 7.52 (m, 3 H), 6.03 (bs, 1 H), 4.56 - 4.67 (m, 1 H), 4.45 (dd, 1 H), 4.25 - 4.33 (m, 2 H), 4.23 (dd, 1 H), 4.18 (dd, 1 H), 3.95 - 4.05 (m, 1 H), 3.83 (dd, 1 H), 3.45 - 3.54 (m, 1 H), 3.26 - 3.40 (m, 1 H), 1.67 - 1.86 (m, 4 H), 1.55 - 1.65 (m, 1 H), 1.37 - 1.51 (m, 1 H). MS (EI): m/z = 277 ([M+H]+ slobodne baze' 100%). EA za C<16>H<26>N<2>O<2>Cl<2>, korigovano za vodu (9.2 %-w/w) i HCl (2.1 ekv. umesto 2.0 ekv.): izračunato: C 49.44, H 7.80, N 7.21, O 16.40, Cl 19.15; pronađeno C 48.76, H 7.48, N 7.36, O 16.44, Cl 19.11.

[0339] Primer 4

[0341] {3-Hidroksi-3-[(S) -1-((S)-2-hidroksi- 1-fenil-etil)- piperidin-2-il]- azetidin-1-il}-(2,3,4-trifluoro-fenil)- metanon

[0343]

[0346]

[0349] 2,3,4-Trifluoro-benzoil hlorid:

[0351] [0105] 2,3,4-Trifluorobenzoeva kiselina (100 g, 568 mmol, 1.0 ekvivalent) je suspendovana u toluenu (1000 ml) i tretirana piridinom (0.254 ml, 3.15 mmol, 0.0055 ekvivalenta). Dobijena suspenzija je zagrejana na 60 do 70 °C, nakon čega je smeša postala bistar žućkasti rastvor. Na ovoj temperaturi, oksalil hlorid (94.4 g, 729 mmol, 1.3 ekvivalenta) je polako dodat tokom 156 minuta. Nakon završetka dodavanja, smeša je mešana još 10 minuta dok se ne završi. Toluen (360 mL) je delimično uklonjen destilacijom pod vakuumom (temperatura omotača: 60 do 70 °C, pritisak: 200 do 100 mbar). Rastvor je ohlađen do sobne temperature, što je rezultiralo sa 636 g žućkastog i blago mutnog rastvora koji je čuvan u atmosferi N<2>i korišćen u sledećem koraku bez daljeg tretmana. HPLC čistoća: 99.2 % površine.

[0353] {3-Hidroksi-3-[(S)-1-((S)-2-hidroksi-1-fenil-etil)-piperidin-2-il]-azetidin-1-il}-(2,3,4-trifluoro-fenil) metanon:

[0355] Vodeni rastvor 3-[(S)-1-((S)-2-hidroksi-1-fenil-etil)-piperidin-2-il]-azetidin-3-ol dihidrohlorida (43.5 g) je tretiran sa EtOH (24 ml) i mešan 10 minuta na sobnoj temperaturi. Ovoj smeši je dodat rastvor trikalijum fosfata (28.8 g, 136 mmol, 4.7 ekvivalenta) u 261 ml vode u roku od 14 minuta na temperaturi smese od 10 do 20 °C i smeša je mešana 15 minuta na 15 °C (pH 11.9). Ovom rastvoru je dodato preko levka za kapanje 34 g gore opisanog rastvora 2,3,4-trifluoro-benzoil hlorida (34.0 g, 29.8 mmol, 1.0 ekvivalent) tokom 32 minuta na temperaturi šarže od 10 do 20 °C, uz snažno mešanje. Levak za kapanje je ispran toluenom (1.2 ml) i dvofazna smeša je mešana na sobnoj temperaturi 60 minuta. Slojevi su ostavljeni da se razdvoje, a vodena faza je odbačena. Organska faza je isprana sa rastvorom natrijum karbonata (3.36 g, 31.5 mmol, 1.09 ekvivalenta) u vodi (42 g) i mešana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Slojevi su ostavljeni da se razdvoje, a organska faza je isprana sa vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 g, 10 %-w/w). U rotacionom isparivaču (temperatura kupatila 50 °C, pritisak < 200 mbar), organska faza je koncentrovana do zapremine od približno 30%. Ostatak je rastvoren u EtOH (23 mL) i mešan 5 minuta na 40 do 50 °C. Rastvor je ponovo koncentrovan u rotacionom isparivaču (temperatura kupatila 50 °C, pritisak manji od 200 mbar, 17 ml destilata), što je rezultiralo veoma viskoznim uljem. Ostatak je ponovo rastvoren u EtOH (23 mL) i mešan 10 minuta, a zatim ponovo dodatno razblažen sa EtOH (12 mL) kako bi se dostigla ciljana zapremina (53 mL, 46,06 g). HPLC čistoća: 85.0 % površine.

[0357] [0107] Za analitičke svrhe, rastvor proizvoda (90 ml) je filtriran, a ostatak filtera je ispran sa EtOH (15 ml). U rotacionom isparivaču (temperatura kupatila 40°C, pritisak < 150 mbar), rastvor je potpuno koncentrovan, a ostatak je rastvoren u MTBE (40 mL), zatim ponovo potpuno koncentrovan, zatim rastvoren u smeši etil acetata (29 mL) i heptana (40 mL), zatim potpuno koncentrovan, zatim ponovo rastvoren u smeši MTBE (20 mL) i heptana (50 mL) i ponovo potpuno koncentrovan, što je konačno rezultiralo penastom čvrstom supstancom (32.5 g). Čvrsti ostatak (32.0 g) je rastvoren u etil acetatu (20 ml) i prečišćen brzom hromatografijom preko silika gela (150 g) koristeći etil acetat kao eluent. Nakon pretakanja od 200 ml, 6 frakcija (800 ml) je spojeno i potpuno koncentrovano u rotacionom isparivaču (temperatura kupatila: 40 °C, pritisak 20 mbar), što je rezultiralo sa 28.0 g blago žućkastog ulja. Na sobnoj temperaturi, uljani ostatak je rastvoren u dihlorometanu (20 ml), razblažen sa heptanom (150 ml) i ponovo potpuno koncentrovan u rotacionom isparivaču, nakon čega je ostatak rastvoren u MTBE (20 ml) i ponovo potpuno uklonjen rastvarač u rotacionom isparivaču, što je rezultiralo penom sličnom gumi. Ova pena je rastvorena u toluenu (30 ml, sobna temperatura) i dozirana tokom 20 minuta, dodavana kap po kap kroz levak na sobnoj temperaturi u heptanu (400 ml), nakon čega je proizvod počeo da se taloži. Levak za kapanje je ispran toluenom (4 ml) i suspenzija je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su isfiltrirane, a reaktor i filtraciona pogača su dva puta isprani sa filtratom, a zatim heptanom (15 ml). Sušenjem pod vakuumom na 35°C do konstantne težine dobijeno je 17.88 g bezbojne čvrste supstance. HPLC čistoća: 97.0 % površine, rezidualni rastvarači: toluen (1.2 % w/w) i heptan (2.3 % w/w). Mp (vizuelno): T<onset>: 55 - 73°C (topljenje praćeno egzotermnim raspadanjem).1H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>, 120°C): δ 7.41 - 7.47 (m, 2 H), 7.27 - 7.32 (m, 2 H), 7.21 - 7.26 (m, 2 H), 7.12 - 7.19 (m, 1 H), 5.21 (bs, 1 H), 4.35 (bd, 1 H), 4.22 (bs, 1 H), 4.05 (dd, 1 H), 3.91 - 4.01 (m, 1 H), 3.74 -3.90 (m, 4 H), 3.01 (dd, 1 H), 2.75 - 2.84 (m, 1 H), 2.49 - 2.59 (m, 1 H), 1.68 - 1.81 (m, 1 H), 1.51 - 1.65 (m, 1 H), 1.23 - 1.50 (m, 3 H), 1.09 - 1.22 (m, 1 H). MS (EI): m/z = 435 ([M+H]+ , 100%). EA za C<23>H<25>F3N<2>O<3>, korigovano za rezidualni toluen (1.2 %-w/w) i heptan (2.3 %-w/w): izračunato: C 64.38, H 6.07, F 12.66, N 6.22; pronađeno C 64.01, H 6.04, F 12.63, N 6.35.

[0359] Primer 5

[0361] Sinteza ((S)-3-hidroksi-3-piperidin-2-il-azetidin-1-il)-(2,3,4-trifluoro-fenil) metanon hidrohlorida

[0363]

[0366]

[0369] Stakleni autoklav od 185 ml pod argonom je napunjen sa Pd/C (3.37 g, 1.3 mmol, 0.04 ekvivalenta, 60.2 % ww vode, 10 % ww Pd na C), vodom (0.22 g) i rastvorom {3-hidroksi-3-[(S)-1-((S)2-hidroksi-1-fenil-etil)-piperidin-2-il]-azetidin-1-il}-(2,3,4-trifluoro-fenil) metanona u EtOH (53 ml, 46 g, 29 mmol, 1.0 ekvivalent). Smeša je tretirana sa EtOH (13 mL), sirćetnom kiselinom (4.15 mL, 72 mmol, 2.5 ekv.) i vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (2.5 ml, 37 %-w/w, 30 mmol, 1.0 ekv.). Autoklav je učinjen inertnim, pod pritiskom od 2 bara H<2>, a reakcija je izvedena pod pritiskom od 2 bara H<2>na 25 °C tokom 12 sati. Pritisak je oslobođen iz autoklava, a suspenzija je tretirana sa MeOH (25 mL) i mešana 30 minuta i filtrirana pod zaštitom argona preko filter papira. Autoklav i ostaci filtera su isprani sa MeOH (4 mL). Kombinovani filtrati su ispareni pod sniženim pritiskom na približno 20-30 procenata početne zapremine. Ostatak je tretiran sa izopropanolom (38.5 mL) na 30 do 35 °C, mešan 1 h, ohlađen na 20 do 25 °C i tretiran sa vodom (0,58 g) i vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (2.5 mL, 37 %-ww, 30 mmol, 1.0 ekv.). Dobijena suspenzija je koncentrovana pod vakuumom na 25 do 35 °C dok se nije dostigla zapremina od približno 22 mL, a zatim je dodat MTBE (31 mL) na 25 do 35 °C. Konačna suspenzija je ohlađena na 5 do 10 °C, mešana 1 sat, a zatim filtrirana. Filter kolač je ispran sa hladnim MTBE (12 ml) i osušen pod vakuumom na 35 °C do konstantne težine, dajući jedinjenje iz naslova (5,08 g) kao bezbojnu čvrstu supstancu. HPLC čistoća: 99,6% površine. T.p. (DSC): T<onset>: 246.3°C, ekstrapolirani pik: 248,8°C (topljenje praćeno egzotermnim raspadanjem).1H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>, 120°C): δ 8.59 (bs, 2 H), 7.14 - 7.48 (m, 2 H), 6.54 (bs, 1 H), 4.39 (dd, 1 H), 4.23 (dd, 1 H), 3.85 - 3.97 (m, 2 H), 3.27 - 3.35 (m, 1H), 3.20 - 3.27 (m, 1 H), 2.80 - 2.95 (m, 1 H), 1.78 - 1.88 (m, 2 H), 1.64 - 1.78 (m, 2 H), 1.40 - 1.64 (m, 2H). MS (EI): m/z = 315 ([M+H]+ slobodne baze, 100%). EA za C<15>H<17>F<3>N<2>O<2>x HCl: izračunato: C 51.36, H 5.17, N 7.99, F 16.25; pronađeno C 51.19, H 4.89, N 7.91, F 16.06.

[0371] Primer 6

[0373] Sinteza (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanona (Jedinjenje I)

[0375]

[0376] U rastvor ((S)-3-hidroksi-3-piperidin-2-il-azetidin-1-il)-(2,3,4-trifluorofenil)-metanon hidrohlorida (15.0 g, 42.8 mmol, 1.0 ekv.) i 2-fluoro-4-jodo-anilina (11.1 g, 47 mmol, 1.1 ekv.) u THF-u (90 ml), dodat je rastvor LiHMDS u THF-u (149 g, 20.7 % w/w, 184 mmol, 4.3 ekv.) tokom 88 minuta na 20 do 30 °C. Mešanje je nastavljeno 2 sata. Nakon potpune konverzije, smeša je dozirana u smešu sumporne kiseline (12.0 g, 96 %-w /w, 118 mmol, 2.75 ekv.) u vodi (75 mL) tokom 25 minuta i mešana je tokom 1 sata. Slojevi su ostavljeni da se razdvoje, a organska faza je isprana smešom vode (60 ml) i toluena (96 ml). Organska faza je koncentrovana pod vakuumom do zapremine od približno 150 mL. Dodat je toluen (250 mL) i preostali THF je uklonjen destilacijom na temperaturi obloge od 55 °C i pod pritiskom od 84 mbar, dok je zapremina šarže održavana konstantnom kontinuiranim doziranjem toluena (400 mL), što je rezultiralo sporim taloženjem proizvoda. Temperatura šarže je zatim snižena na 10 °C u roku od 2 sata, a suspenzija je mešana preko noći na 10 °C. Proizvod je filtriran, a pogača je ispran sa hladnim toluenom (150 mL). Sušenjem preko noći pod vakuumom na 35 °C do konstantne težine dobijeno je jedinjenje iz naslova (20.66 g) kao bezbojni proizvod. HPLC čistoća: 99.7 % površine. T.t. (DSC): T<onset>: 166.7°C, ekstrapolirani pik: 168.2°C (91.5 J/g).1H NMR (600 MHz, CDCl<3>): δ 8.28 - 8.48 (br, 1 H), 7.39 (dd, 1 H), 7.32 (ddd, 1 H), 7.09 - 7.14 (m, 1 H), 6.75 - 6.86 (br, 1 H), 6.60 (ddd, 1 H), 4.10 (d, 2 H), 4.05 - 4.20 (br, 1 H), 3.93 - 4.04 (br, 1 H), 3.09 (d, 1 H), 2.70 (d, 1 H), 2.56 - 2.67 (br, 1 H), 1.68 - 1.87 (m, 1 H), 1.50 - 1.64 (m, 2 H), 1.25 - 1.38 (m, 2 H), 1.07 - 1.24 (m, 1 H). MS (EI): m/z = 532 ([M+H]+ , 100 %). EA za C<21>H<21>F<3>IN<2>O<3>: izračunato: C 47.47, H 3.98, N 7.91, F 10.73; pronađeno C 47.68, H 4.00, N 7.66, F 10.80.

[0378] Primer 7

[0380] Priprema kristalne fumaratne soli (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil]

[0381] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona (Jedinjenje I) označeno kao Oblik A

[0383] (S)-[3,4-Difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il)

[0384] azetidin-1-il]-metanon (80 kg) je rastvoren u smeši 2-propanola/vode 88:12 w/w (9 težinskih ekvivalenata (weq)) na 77°C i filtriran preko aktivnog uglja. Fumarna kiselina (0.52 ekv.) je rastvorena u smeši 2-propanola/vode 88:12 w/w (2,6 weq). Početna količina rastvora fumarne kiseline (8% od ukupne količine) dodata je filtriranom rastvoru (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanona na 77°C. Kristali za zasejavanje (0.023 weq) su dodati kao suspenzija u smeši 2-propanol/voda 88:12 w/w (0.2 weq) na 77°C. Preostala količina rastvora fumarne kiseline je dodata u roku od 6 sati na istoj temperaturi. Da bi se kristalizacija završila, suspenzija je ohlađena na 20°C u roku od 7 sati. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I Oblika A je izolovana centrifugiranjem, isprana sa 2-propanolom (npr., 0.6 teških ekvivalenta), osušena pod sniženim pritiskom na maks.55°C i razblaženo.

[0386] Primeri Karakterizacije Kristalne Fumaratne Soli od (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il] metanon označen kao Oblik A

[0388]

[0391]

[0394] Elementarna analiza

[0396] Rezultati elementarne analize izračunati su iz relativne molekulske mase od 1178.71 g/mol i sastava C<46>H<46>F<6>I<2>N<6>O<8>i prikazani su u Tabeli 1. Rezultati su u skladu sa strukturom prikazanom gore.

[0398] Tabela 1: Elementarna analiza C46H46F6I2N6O8

[0401]

[0404] Infracrvena spektroskopija

[0406] [0115] Korišćen je ThermoScientific iS5 Furijeov transformacioni infracrveni (FTIR) spektrofotometar sa iD5 ATR dodatkom. Infracrveni (IC) spektar je snimljen kao refleksivno IC merenje u opsegu od 4000-650 cm-1 i dat je na Slici 1. IR spektar je u skladu sa strukturom prikazanom gore. Rezime karakterističnih IR istezanja je dat u Tabeli 2.

[0408] Tabela 2: IR Zadaci za Fumaratnu So Jedinjenja I

[0411]

[0414] NMR Spektri u Rastvoru Dimetil Sulfoksida

[0416] Merenja nuklearne magnetne rezonance (NMR) su sprovedena na spektrometrima Bruker Avance 600 i 400 MHz. Mašina od 600 MHz je bila jopremljena sa kriosondom od 5 mm, TCI, z-gradijent, a mašina od 400 MHz je bila opremljena sa BBFO sondom od 5 mm, z-gradijent. Uzorak je pripremljen rastvaranjem 6 mg kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A u 0.75 ml DMSO-d6 (D, 99.8%) za sve eksperimente detekcije protona. Za 13C-NMR i 19F-NMR, 62 mg je rastvoreno u 0.75 mL DMSO-d6.

[0418] 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6 na 25°C): 1H-NMR spektar na 600 MHz na 25°C je pokazao odnos 2:1 slobodne baze i fumarata uzimajući integral signala na 6.62 i 6.42 ppm, što dokazuje postojanje hemifumarata. Bilo je osam protonskih signala za azetidinski prsten, dok su se očekivala samo četiri, što ukazuje na postojanje dva signalna seta u odnosu 1:1.

[0420] 1H NMR (d6 DMSO) je prikazan na Slici 2. δ 8.54 (s, 1H) 8.50 (s, 1H), 7.57 (dd, 2H), 7.37 (dd, 2H), 7.31 (m, 2H), 7.18 (m, 2H), 6.67 (t, 2H), 6.42 (s, 2H), 4.25 (d, IH), 4.15 d, 1H), 4.09 (d, 1H) 4.01 (d, 1H), 3.92 (d, 1H), 3.86 (d, 1H), 3.71 (t, 2H) 3.03 (d, 2H), 2.79 (m, 2H) 8, 38 (t, 2H), 1.62 (m, 6H) 1.24 (m, 6H) (2,50 kvinti 1,9 DMSO).

[0421] 13C NMR (d6 DMSO) je prikazan na Slici 3. δ 168.0, 167.5, 152.3, 151.4, 143.6, 135.2, 133.2, 131.3, 130.5, 124.6, 123.7, 123.0, 122.7, 119.8, 119.6, 110.7, 81.6, 81.5, 70.3, 70.3, 63.0, 61.8, 60.7, 60.6, 59.0, 58.1, 45.5, 45.4, 24.1, 23.7, 23.1, 39.5 (DMSO-d6).

[0423] Da bi se potkrepili rezultati NMR spektroskopije u tečnom stanju, izvršena je i NMR spektroskopija u čvrstom stanju radi razjašnjenja strukture. U NMR spektroskopiji u tečnom stanju, neki od signala se udvostručuju zbog uočenih ograničenja u slobodnoj rotaciji što dovodi do rotamerne smeše, dok rezultat NMR spektroskopije u čvrstom stanju nije pod uticajem ove sterne prepreke. Stoga je moguće nedvosmislenije raspoređivanje pikova za fumaratnu so Jedinjenja I korišćenjem NMR spektroskopije čvrstog stanja.

[0425] 13C NMR čvrstog stanja oblika A je prikazan na Slici 4. δ 175.3, 173.6, 168.9, 155.5, 153.5, 144.4, 142.5, 137.0, 136.0135.5, 132.0, 130.5, 127.2, 125.0, 124.0, 117.9m 108.0, 82.2, 71.7, 64.0, 59.3, 56.2, 45.0, 25.3, 24.0, 22.2.

[0427] 13C NMR čvrstog stanja Oblika A potvrđuje rezultate drugih analitičkih tehnologija koje se koriste za razjašnjavanje strukture (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanona. Svi ugljenici prisutni u strukturi slobodne baze, kao i u strukturi kontrajona, detektovani su u spektrima.

[0429] 19F-NMR (600 MHz, DMSO-d6 na 25°C): 19F NMR je pokazao tri različita atoma fluora.

[0431] Masena spektrometrija

[0433] Za ESI pozitivnu CID MSMS i ESI negativnu MS korišćen je Agilent 6520 QTOF spektrometar. Pozitivni elektrosprej maseni spektar dobijen za fumaratnu so Jedinjenja I je prikazan na Slici 5.

[0434] Vrednost [M H]+ pri m/z od 562.0714 je u skladu sa formulom za Jedinjenje I (slobodna baza).

[0435] Fragmentaciono ponašanje M H je proučavano pomoću disocijacije indukovane kolizijom (CID). Azot je korišćen kao gas za sudar. Svi fragmenti su bili u dobroj korelaciji sa strukturom jedinjenja I.

[0437] Negativni elektrosprej maseni spektar (Slika 6) dobijen za fumaratnu so Jedinjenje I

[0438] [M-H]- je pronađen na m/z = 115.0045 (izračunato: m/z = 115,0037; razlika m/z = 0,0008), što ukazuje na prisustvo fumaratnog kontrajona.

[0439] Analiza Kristalne Strukture Fumaratne Soli (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenil amino) fenil]

[0440] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanona Oblika A pomoću Rendgenske Difrakcije

[0442] Studije Rendgenske Difrakcije Praha (XRPD)

[0444] Monokristal je montiran u petlju i meren na sobnoj temperaturi. Podaci su prikupljeni na Swiss Light Source snopu X10SA opremljenom sa DECTRIS Pilatus 6M detektorom sa sinhrotronskim zračenjem, a podaci su obrađeni sa programom XDS. Kristalna struktura je rešena i usavršena pomoću ShelXTL (Bruker AXS, Karlsrue).

[0446] Struktura fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A uključuje jedan hiralni centar sa (S)-konfiguracijom prema Cahn-Ingold-Prelogovoj konvenciji. Da bi se dokazala struktura, izvršeno je određivanje monokristala. Monokristali su kristalizovani iz razblaženog rastvora u acetonitrilu/vodi 1:1 sporim isparavanjem rastvarača. Da bi se dokazalo da se konformacija nije promenila kristalizacijom, dodatno je izvršena hiralna tečna hromatografija visokih performansi (HPLC). Podaci o kristalima su sumirani u Tabeli 3.

[0448] Tabela 3: Podaci o Kristalu Oblika A

[0451]

[0454] Molekularna konformacija i parametri kristalne strukture za Oblik A dati su u Tabeli 3. U kristalnoj strukturi Oblika A, piperidinski azot je protoniran, a fumarna kiselina je deprotonirana. Fumarat je koordinisan sa dva piperidina i dve OH-grupe iz različitih molekula aktivne supstance. Kristalno pakovanje karakterišu beskonačni intermolekularni lanci vodoničnih veza. Potvrđeno je da je konfiguracija (S) za hiralni atom ugljenika u piperidinskom prstenu, što je pokazano parametrom apsolutne strukture (Flakov parametar: 0.048, esd 0.013).

[0456] Ultraljubičasti Spektar za Fumaratnu So (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanon

[0458] Maksimumi UV-Vis apsorpcije oko 200 nm, 239 nm, 276 nm i 310 nm ukazuju na p-p* prelaze aromatičnih prstenastih delova i n-p* usamljenih elektronskih para, respektivno. Spektar na Slici 7 je u skladu sa strukturom fumaratne soli Jedinjenja I i pokazuje karakteristike koje se očekuju od hromofora prisutnih u strukturi.

[0460] Objašnjenje strukture fumaratne soli (S)-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino) fenil]

[0461] [3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanon: Polimorfizam

[0463] Više od 15 oblika soli Jedinjenja I je procenjeno na njihovu pogodnost za klinički razvoj, uključujući, na primer, soli pripremljene od benzojeve kiseline, malonske kiseline, fumarne kiseline, bademove kiseline, sirćetne kiseline i orotske kiseline. Tamo gde benzoeva kiselina, malonska kiselina, bademova kiselina, sirćetna kiselina i orotska kiselina formiraju amorfne soli, kristalne soli ili smeše amorfnih i kristalnih soli u zavisnosti od rastvarača i uslova, utvrđeno je da je so pripremljena od fumarne kiseline najpoželjnija, kao što je opisano u nastavku.

[0465] Sveobuhvatnim skriningom za kristalne čvrste oblike fumaratne soli Jedinjenja I otkriven je jedan kristalni oblik (Oblik A) i jedan amorfni oblik (amorfni oblik). Oblik A, koji ne sadrži rastvarače i nije higroskopan, je termodinamički stabilan oblik i oblik koji se konstantno proizvodi tokom proizvodnog procesa. Amorfni oblik je nekristalni i higroskopan. Primećeno je da se amorfni oblik pretvara u oblik A zagrevanjem i faznim prelazom posredovanim rastvaračem u vodi. U približno 3000 eksperimenata kristalizacije izvedenih tokom skrininga polimorfizma, nije primećen nijedan dodatni polimorfni oblik. Na osnovu DSC merenja, kao i temperaturno kontrolisane XRPD, nije primetna konverzija polimorfnog oblika pri zagrevanju sve dok ne dođe do topljenja. U eksperimentu sa suspenzijom koristeći uslove procesa (rastvorac 2-propanol/voda 88:12, temperatura: 20°C), amorfni oblik se brzo pretvorio u Oblik A. Zagrevanjem, amorfni oblik počinje da se pretvara u Oblik A između 90°C i 200°C.

[0467] [0131] Oblik A i amorfni oblik mogu se razlikovati diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC) i rendgenskom difrakcijom praha (XRPD). Štaviše, razlike između Oblika A i amorfnog oblika su takođe demonstrirane korišćenjem Ramanove spektroskopije i 13C spektroskopije nuklearne magnetne rezonance (NMR) u čvrstom stanju.

[0469] Diferencijalna Skenirajuća Kalorimetrija (DSC)

[0471] DSC termogrami su snimljeni pomoću Mettler-Toledo instrumenta (DSC820/821e/1; FRS05 senzor). Približno 2-6 mg uzorka je stavljeno u aluminijumske posude i zatvoreno aluminijumskim poklopcima. Poklopci su automatski probušeni pre zagrevanja. Uopšteno, uzorci pod azotom su zagrevani brzinom od 10 K/min do maksimalno 250°C.

[0473] Kristalni oblik A se topio na 239,6°C (TOnset). Pošto se topljenje i razlaganje preklapaju, toplota topljenja i T<extra.pol.>nisu određeni (Slika 8).

[0475] Amorfni oblik je pokazao prelazak u staklasto stanje na 116.2°C (od mlevenja) i na 120.6°C (od liofilizacije), nakon čega je usledio egzotermni događaj usled kristalizacije između 150°C i 200°C do Oblika A. Iznad približno 225°C, materijal počinje da se topi (Slika 9).

[0477] Rendgenska Difrakcija Praha Oblika A i Amorfnog Oblika

[0479] Rendgenski difraktogrami su snimljeni pod ambijentalnim uslovima u transmisionoj geometriji pomoću STOE STADI P difraktometra (Cu K α zračenje [1.54 Å], primarni monohromator, silicijumski trakasti detektor, ugaoni opseg od 3° do 42° 2-9, ukupno vreme merenja približno 30 minuta). Uzorci su pripremljeni i analizirani bez dalje obrade (npr. mlevenja ili prosejavanja) supstance.

[0481] Kao što je prikazano u Tabeli 4, kristalni Oblik A je selektivno identifikovan skupom karakterističnih položaja difrakcionih pikova izraženih u 2-9 vrednosti. XRPD difraktogrami karakteristični za pojedinačne oblike prikazani su na Slici 10 i Slici 11.

[0483] Tabela 4

[0486]

[0487]

[0490] Intrinzična Brzina Rastvaranja Kristalnog Oblika A i Amorfnog Oblika

[0492] Za svako merenje intrinzičnog rastvaranja, pelet je proizveden iz kristalnog Oblika A ili amorfnog oblika uzorka korišćenjem primenjenog opterećenja od približno 15 kN na ravni disk (površina = 0.5 cm2). Nakon sabijanja, svaka peleta je proverena XRPD-om kako bi se potvrdilo da nije došlo do polimorfne transformacije tokom procesa peletiranja. Eksperimentalni uslovi koji su korišćeni sumirani su u Tabeli 5.

[0494] Tabela 5

[0497]

[0500] Serije Oblika A i amorfnog oblika (iz liofilizacije) korišćene su za određivanje intrinzične brzine rastvaranja oba čvrsta oblika. Intrinzično rastvaranje omogućava karakterizaciju različitih kristalnih oblika izlaganjem konstantne površine medijumu za rastvaranje. Rezultati su sumirani u Tabeli 6.

[0502] Tabela 6

[0505]

[0508] [0139] Unutrašnja brzina rastvaranja oba oblika je veoma različita. Na osnovu podataka, amorfni oblik poseduje približno 35 puta bržu intrinzičnu brzinu rastvaranja od kristalnog Oblika A.

[0510] Higroskopnost Kristalnog Oblika A i Amorfnog Oblika

[0512] Podaci o sorpciji/desorpciji vlage prikupljeni su na sistemu za bilans vlage

[0513] DVS-1/DVS-HT/DVS-intrinsic (SMS Surface Measurements Systems). Izoterme sorpcije/desorpcije merene su postepeno u opsegu od 0% relativne vlažnosti (relativne vlažnosti) do 90% relativne vlažnosti na 25°C. Promena težine < 0,002 mg/min izabrana je kao kriterijum za prelazak na sledeći nivo relativne vlažnosti (sa maksimalnim vremenom uravnoteženja od 24 sata, ako kriterijum težine nije ispunjen). Podaci su korigovani za početni sadržaj vlage u uzorima; to jest, težina nakon sušenja uzorka na 0% relativne vlažnosti uzeta je kao nulta tačka. Higroskopnost date supstance karakteriše se povećanjem mase kada se relativna vlažnost poveća sa 0% na 90% kao što je dato u Tabeli 7.

[0515] Tabela 7

[0518]

[0521] Podaci o adsorpciji/desorpciji vlage za kristalni Oblik A dati su na Slici 12. Tokom vremenskog perioda standardnih eksperimenata dinamičke sorpcije pare, nije primećena konverzija. Između 0 % relativne vlažnosti i 90 % relativne vlažnosti, Oblik A pokazuje minimalno i reverzibilno povećanje ili gubitak težine od ± 0.1% i stoga je klasifikovan kao nehigroskopan.

[0523] Podaci o sorpciji/desorpciji vlage amorfnog oblika dati su na Slici 13 (iz liofilizacije). Tokom vremenskog perioda standardnih eksperimenata dinamičke sorpcije pare, nije primećena konverzija. Između 0 % relativne vlažnosti i 90 % relativne vlažnosti, amorfni oblik pokazuje reverzibilno povećanje ili gubitak težine od ± 12.1% i stoga se klasifikuje kao higroskopan.

Claims (14)

1. Patentni zahtevi

1. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I, pri čemu Jedinjenje I je (S)-(3,4-difluoro-(2-fluoro-4-jodofenil amino) fenil]-[3-hidroksi-3-(piperidin-2-il) azetidin-1-il]-metanon, i pri čemu kristalna fumaratna so Jedinjenja I ima strukturu:

2. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I prema zahtevu 1, označena kao Oblik A, pri čemu kristalna fumaratna so Jedinjenja I je okarakterisana sa najmanje jednim od sledećih:

(i) 13C NMR spektar u d<6>DMSO sa sledećim pikovima: δ 168.0, 167.5, 152.3, 151.4, 143.6, 135.2, 133.2, 131.3, 130.5, 124.6, 123.7, 123.0, 122.7, 119.8, 119.6, 110.7, 81.6, 81.5, 70.3, 70.3, 63.0, 61.8, 60.7, 60.6, 59.0, 58.1, 45.5, 45.4, 24.1, 23.7, 23.1, 39.5 (DMSO-d6);

(ii) 13C NMR spektar čvrstog stanja sa tri ili više pikova izabranih između 175.3, 173.6, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm;

(iii) difraktogram X-zraka praha (CuKα λ = 1.5418 Å) koji sadrži tri ili više 2Θ vrednosti izabranih između 4.6, 12.1, 13.2, 13.6 i 14.5 ± 0.2 °2Θ, pri čemu merenje kristalnog oblika je na sobnoj temperaturi; i

(iv) termogram diferencijalne skenirajuće kalorimetrije koji pokazuje topljenje na 239.6 °C (T<Onset>).

3. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I prema zahtevu 2, označena kao Oblik A, pri čemu navedena so je okarakterisana sa 13C NMR spektrom čvrstog stanja sa tri ili više pikova izabranih između 175.3, 173.6, 117.5, 155.5 i 153.5, ± 0.2 ppm.

4. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I prema zahtevu 2, označena kao Oblik A, pri čemu navedena so je okarakterisana sa difraktogramom X-zraka praha (CuKα λ = 1.5418 Å) koji obuhvata tri ili više vrednosti 2Θ izabranih između 4.6, 12.1, 13.2, 13.6 i 14.5 ± 0.2 °2Θ, pri čemu merenje kristalnog oblika je na sobnoj temperaturi.

5. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I prema zahtevu 2, označena kao Oblik A, pri čemu navedena so je okarakterisana sa difraktogramom X-zraka praha kao što je prikazano u Tabeli 4:

Tabela 4

6. Kristalna fumarat so Jedinjenja I prema bilo kom od zahteva 2-5, pri čemu navedena so je najmanje 90 težinskih % Oblik A, na osnovu težine navedene soli.

7. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kristalnu fumaratnu so Jedinjenja I prema bilo kom od zahteva 1-5; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

8. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I kao što je definisano u bilo kom od zahteva 1-5 za upotrebu u lečenju raka.

9. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I za upotrebu prema zahtevu 8, pri čemu rak je izabran iz grupe koja se sastoji od melanoma (uključujući BRAF V600 mutantni melanom), raka dojke (uključujući trostruko negativni rak dojke), kolorektalnog karcinoma (uključujući KRAS mutantni kolorektalni karcinom), nesitnoćelijskog karcinoma pluća, akutne mijeloidne leukemije i raka pankreasa.

10. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I za upotrebu prema zahtevu 9, pri čemu rak je melanom.

11. Kristalna fumaratna so jedinjenja I za upotrebu prema zahtevu 10, pri čemu rak je melanom mutantnog BRAF V600.

12. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I za upotrebu prema zahtevu 10 ili zahtevu 11, pri čemu kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje u kombinaciji sa vemurafenibom.

13. Kristalna fumaratna so Jedinjenja I za upotrebu prema zahtevu 12, pri čemu kristalna fumaratna so Jedinjenja I se primenjuje pre ili posle, ili istovremeno sa vemurafenibom.

14. Postupak za pripremu kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A, kao što je

definisano u bilo kom od zahteva 2-5, koji obuhvata:

dodavanje fumarne kiseline rastvorene u rastvaraču u smešu Jedinjenja I rastvorena u rastvaraču kako bi se formirala kristalna fumaratna so Jedinjenja I označena kao Oblik A; i

sakupljanje dobijenih kristala kristalne fumaratne soli Jedinjenja I označene kao Oblik A.