RS98603A - Formulacije laktona i postupak za njihovo dobijanje - Google Patents

Abstract

Jedinjenja formule (Ia) i (Ic) imaju strukturu laktona i metilensku grupu na alfa-poziciji laktonske strukture, tako da su otkriveni postupci za njihovo korišćenje i pripremanje. Laktoni reaguju sa nukleofilnim agensima do otvaranja laktonskog prstena i dobijanja jedinjenja Formule (Ib). Laktoni Formule (Ia) i njihovi funkcionalni derivati izolovani su iz Securidaca virgata. Prečišćena jedinjenja pokazuju u esejima anti-bakterijsku i anti-gljivičnu aktivnost i koriste se u tretmanu proliferišućih bolesti, kao što je kancer.

Description

FORMULACIJE LAKTONA I POSTUPCI NJIHOVOG KORIŠĆENJA

Polje istraživanja

Ovaj pronalazak je iz oblasti farmaceutski aktivnih laktona, njihovih farmaceutskih formulacija i postupaka za korišćenje, kao i postupaka za sintetičku pripremu hemijski funkcionalnih laktona, koji se koriste kao antikancerski i antiinfektivni agensi,

Istorijat pronalaska

Uprkos razvoju različitih jedinjenja, koja se koriste kod infekcija, kancera i drugih bolesti, javlja se potreba za pronalaskom novih jedinjenja, koja mogu biti efikasna u niskim dozama, selektivnija, imati manje neželjenih efekata ili sposobnost u terapiji bolesti, u kojima su poznata jedinjenja razvila rezistenciju.

Hemoterapijski agensi koriste se u tretmanu infekcija, kancera, abnormalnih proliferativnih bolesti (endometrioze, restenoze, psoriaze) i drugih bolesti. Mnogi hemoterapijski agensi imaju sporedne efekte zbog nedostatka specifičnosti. Na primer, kancer je jedan od vodećih uzroka smrti. Jedan od primarnih načina u tretmanu kancera, hemoterapija, koristi se specifično da zaustavi rast ćelije i replikaciju. Mnogi hemoterapijski agensi, takođe, napadaju neoplastične i brzo proliferišuće ćelije u normalnom tkivu (koštane srži, folikule dlake, itd.), što dovodi do nekoliko sporednih efekata, uključujući gubitak kose, nauzeju, povraćanje i supresiju funkcije koštane srži. Međutim, efikasnost ovih agenasa se često smanjuje u toku vremena, zbog razvoja rezistencije.

Predmet ovog ogleda je da obezbedi novu klasu jedinjenja efikasnih kao anti-infektivni i/ili anti-proliferativni agensi.

Drugi predmet ovog pronalaska je da obezbedi efikasni antineoplastični agens sa specifičnim citotoksičnim i minimalnim neželjenim efektima.

Budući predmet ovog pronalaska je da omogući razvoj antiinfektivnih agenasa, koji su specifični i razlikuju se od drugih lekova u korišćenju, jer obezbeđuju alternativni postupak u tretmanu za organizme otporne na lekove.

Sažetak pronalaska

Jedinjenja Formule Ia i Ic imaju strukturu laktona i metilensku grupu na alfa-poziciji laktonske strukture. Laktoni reaguju sa nukleofilnim agensima do otvaranja laktonskog prstena i dobijanja jedinjenja Formule lb. Laktoni Formule Ia i njihovi funkcionalni derivati izolovani su izSecuridaca virgata.Ova jedinjenja su označena kao LMSV-6 ili Sekurolidi™. Prečišćena jedinjenja pokazuju u esejima anti-bakterijsku i anti-gljivičnu aktivnost i koriste se u tretmanu proliferišućih bolesti, kao što je kancer. Poredin vitroeseja, laktoni se koriste u tretmanu proliferišućih bolesti uključujući, na primer, kancer dojke, pluća, jetre, ovarijuma, ezofagusa i leukemija. Takođe su efikasni u tretmanu bakterijskih i gljivičnih infekcija, uključujući peptički ulkus, gingivitis i periodonitis.

Postupak za dobijanje jedinjenja Formule Ia i Ic generalno uključuje:

a) obezbeđenje prekursora koji ima strukturu laktona i

b) reakciju prekursora sa jednim ili više hemijskih reagenasa koji obezbeđuju proizvod sa metilenskom grupom na a-poziciji

laktonske strukture. Proizvod se može tretirati sa nukleofilnim agensima kao što su alkohol, alkoksid, amin ili bilo koji drugi neutralni ili anjonski nukleofil koji grade jedinjenje Formule lb.

Detaljni opis pronalaska

I. Preparati laktona

A. Laktoni izolovani izSecuridaca virgata.

Otkriveni su laktoni sa egzocikličom metilenskom grupom i njihovi odgovarajući derivati sa hidroksilnom grupom na gama poziciji. Laktoni i njihovi derivati mogu biti sintetisani ili izolovani iz prirodnih izvora. U jednom izvođenju, laktoni i njihovi derivati mogu biti izolovani hromatografskim metodama, iz biljaka sa taksonomskim nazivomSecuridaca virgata,koja pripada botničkoj familiji Polvgalaceae. Kao što je ranije pomenuto, "laktoni" obuhvataju organske hemikalije koje imaju laktonsku strukturu sa petočlanim prstenom, u kojoj atom kiseonika iz C=0 grupe može biti zamenjen atomom sumpora ili azotnom grupom. Termin "derivati"korišćen je za sva jedinjenja koja su napravljena od laktona, reakcijom laktona sa jednim ili više hemijskih reagenasa. Termin se, takođe, odnosi na produkte dobijene otvaranjem prstena laktona organskim ili neorganskim nukleofilnim agensima do formiranja, na primer, kiseline, estra, amida ili bilo kog drugog produkta.

U jednom izvođenju, laktoni imaju sledeću hemijsku strukturu:

gde su

Ri-R.6 uzeti nezavisno ili R3-R.6 uzeti zajedno, atom vodonika, atom halogena, hidroksilna grupa ili druge organske grupe koje sadrže određeni broj ugljenikovih atoma, prvenstveno 1-8 atoma ugljenika i po potrebi sadrže heteroatom kao što je kiseonik, sumpor ili azot, grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i čineći R1-R6grupacije postaju alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinska, peptidna ili polipeptidna grupa;

Z je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture i

X je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

U drugom izvođenju, jedinjenje ima sledeću hemijsku strukturu:

gde

R1-R7uzeti nezavisno ili R3-R6uzeti zajedno mogu biti atom vodonika, atom halogena, hidroksilna grupa ili druge organske grupe koje sadrže određeni broj ugljenikovih atoma, prvenstveno 1-8 atoma ugljenika i po potrebi sadrže heteroatom kao što je kiseonik, sumpor ili azot, grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i čineći R1-R6grupacije postaju alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil,amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisanisulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisanifosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinska, peptidna ili polipeptidna grupa;

X je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture;

Z je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture i

Z'može biti atom vodonika, halogena, hidroksilna grupa ili bilo koje organsko jedinjenje, koje sadrži od 1-8 atoma ugljenika i po potrebi uključuje heteroatom kao što je kiseonik, sumpor ili azot, grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

U jednom drugom izvođenju, laktoni imaju alfa-metilensku grupu, koja ima strukturu kao što je prikazano niže:

gde

R1-R9uzeti nezavisno ili R5i R6uzeti zajedno mogu biti atom vodonika, atom halogena, hidroksilna grupa ili druge organske grupe koje sadrže određeni broj ugljenikovih atoma, prvenstveno 1-8 atoma ugljenika i po potrebi sadrže heteroatom kao što je kiseonik, sumpor ili azot, grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture i čineći Ri-R6grupacije postaju alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinska, peptidna ili polipeptidna grupa;

Yi, Y2i Y3uzeti nezavisno ili Yii Y2uzeti zajedno mogu biti atom vodonika, atom halogena, hidroksilna grupa ili druge organske grupe koje sadrže određeni broj atoma ugljenika, prvenstveno 1-8 atoma ugljenika i po potrebi uključuju heteroatom kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture, čineći Ri-R6grupacije koje postaju alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinska, peptidna ili polipeptidna grupa;

Z je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture i

X je heteroatom, kao što je kiseonik, sumpor ili azot grupisani u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

U jednom izvođenju, lakton je sekurolid, koji je alfa-metilen-lakton (1) sa sledećom strukturom:

U drugom izvođenju, estar je metila-metilen-y-hidroksi-butanoat (2) kao što je prikazano strukturom:

U drugom izvođenju, lakton je biciklično jedinjenje koje ima sledeću strukturu:

B. Ekscipijensi

Laktoni i funkcionalni derivati mogu biti formulisani korišćenjem standardnih tehnika za enteralnu, parenteralnu ili lokalnu primenu. Efektivne doze mogu biti određene na osnovuin vitropoznatih eseja, kao što su eseji opisani u ovim primerima.

U pogodna farmaceutski prihvatljiva sredstva za parenteralnu primenu spadaju sterilni rastvori, fosfatni puferi i standardne mikropartikularne formulacije za injekcije, uključujući polimerne mikrosfere, mikrokapsule, lipozome i emulzije. Ovo može da obuhvati i rastvorljive polimere, kao što su polilaktatna kiselina i poliglikolna kiselina i njihovi kopolimeri, polianhidridi, poliortoestri, polihidroksialkanoati. Za injekciju, laktoni će biti tipično formulisani kao rastvori ili suspenzije u tečnom nosaču.

Za lokalnu primenu, laktoni mogu biti formulisani kao mast, losion, gel, sprej ili formulacije sa kontrolisanim oslobađanjem aktivne supstance (kao što su transdermalni flasteri).

Za enteralnu primenu, laktoni mogu biti formulisani kao tablete, kapsule, suspenzije ili rastvori, rastvoreni ili enkapsulirani u ekscipijensu, kao što je laktoza, inertno jedinjenje kao što je magnezijum stearat, derivati parafina, glikoli ili gumi arabika. Formulacije mogu uključivati boje, dodatke, konzervanse, disperzione ili emulzione agense ili materijale koji modifikuju oslobađanje ili stabilnost formulacija.

Aktivna jedinjenja mogu biti korišćena u kombinaciji sa drugim farmaceutski prihvatljivim pogodnim antimikrobnim agensom, kao što su nitroimidazol antibiotici, na primer, timidazol i metronidazol; tetraciklini, na primer tetraciklin, doksiciklin i minociklin; penicilini, na primer amoksicilin i meziocilin, cefalosporini, na primer cefahlor, cefadroksil, cefadrin, cefuroksim, cefuroksim aksetil, cefaleksin, cefpodoksim proksetil, ceftazidim i cefatriakson; karbapenemi, na primer imipenem i meropenem; aminoglikozidi, na primer paromomicin, makrolidni antibiotici, na primer eritromicin, klaritromicin i azitromicin; linkozamidni antibiotici, na primer klindamicin; rifamicini, na primer rifampicin i nitrofurantoin.

Kombinacije jedinjenja sa slabo kiselim agensima mogu se koristiti u tretmanu bolesti, gde dolazi do poremećaja aciditeta, kao što su inhibitori kiselinske pumpe, na primer omeprazol i lansoprazol ili H2antagonisti, na primer ranitidin, cimetidin i famotidin.

II. Sinteza laktona

Sinteza laktona i njihovih derivata uključuje korak formiranja alfa-metilenske grupe. Generalno, postupak za dobijanje jedinjenja Formule Ia i Ic obuhvata:

a) obezbeđenje prekursora koji ima strukturu laktona i

b) reakciju prekursora sa jednim ili više hemijskih reagenasa koji obezbeđuju proizvod sa metilenskom grupom na a-poziciji

laktonske strukture. Proizvod se može tretirati sa nukleofilnim agensom kao što je alkohol, alkoksid, amin ili bilo koji drugi neutralni ili anjonski nukleofii koji grade jedinjenje Formule lb.

Postupci za dobijanje metilenske grupe su standardne tehnike dobro poznate u organskoj herniji (videti, na primer, March,"Advanced Organic Chemistrv,"4<th>Edition, 1992, Wiley-Interscience Publication, New York). Laktoni se mogu sintetisati, na primer, počevši od petočlanog laktona, nakon čega se alfa pozicija derivatizuje, da bi se metilenska grupa dodala molekulu.

Na primer, kao što je prikazano na Shemi 1, reaktivno jedinjenje koje ima strukturu (1) sa bazom, alkoholom i estrom produkuje enolat, koji je prekursorlaktona strukture(4) (Videti Shemu 1).

Lakton (4) može biti izveden korišćenjem standardnih tehnika (videti, na primer, March,Supra).Na primer, karboksilna grupa funkcionalnog laktona (4) može se dobiti reakcijom jedinjenja strukture (1) sa agensom za alfa karboksilaciju laktona (MMC, metil-Mg-karbonat), i aldehidom u prisustvu baze, kao što je trietilamin, do dobijanjalaktonastrukture (4), koji je prirodno izolovan iz laktona (Shema 2).

Na shemi 2, funkcionalna metilenska grupa laktona (4) je dobijena reakcijom jedinjenja strukture (1) sa metil-Mg-karbonatom (MMC), aldehidom u puferu sa baznim NN-Dimetilformamidom [DMF-HCON(CH3)2], do dobijanja laktona karbonske kiseline (1B) i laktona (1B), koji je onda tretiran aldehidom i dietilaminom, natrijum acetatom, sirćetnom kiselinom do dobijanja laktona (4).

Drugi funkcionalni derivati laktona mogu se lako pripremiti. Na primer, funkcionalni derivat laktona (9) može se pripremiti reakcijom jedinjenja koje ima strukturu (5) sa neorganskom kiselinom i alkoholom, zagrevanjem na refluksu do dobijanja enol-laktona, koji se zatim redukuje sa bazom do dobijanja proizvoda strukture (7). Reakcija (7) sa bazom, alkoholom i estrom proizvodi enolat, koji je prekursor za dobijanje funkcionalnog laktona jedinjenja (9) (Shema 3).

Mnogo funkcionalniji laktoni mogu se dobiti lako dostupnim postupkom (videti, na primer, March,"Advanced Organic Chemistrv," 4<th>Edition, 1992, Wiley-Interscience Publication, New York). Na primer, funkcionalni laktoni (4) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja koje ima strukturu (1) sa bazom, alkoholom ili estrom do dobijanja enolata, koji je prekursorlaktonastrukture (4) (Shema 4).

Farmaceutski prihvatljive soli laktonskih jedinjenja Formule Ia-c, ako formiraju kiselinu ili bazu, kao što je amin, mogu se dobiti na konvencionalni način, tretiranjem rastvora ili suspenzije jedinjenja Formule Ia-c sa oko jednim hemijskim ekvivalentom farmaceutski prihvatljive baze ili kiseline. Konvencionalna koncentracija i rekristalizacione tehnike su upotrebljene za izolaciju soli.

III. Postupci tretmana

A. Bolesti koje će biti tretirane

Zasnovano na aktivnosti određene kao što je opisano u primerima, laktoni se koriste kao anti-infektivni i anti-proliferativni agensi. Laktoni se mogu primeniti u efektivnoj količini da inhibiraju bakterijski ili gljivični rast, virusne bolesti ili u tretmanu bakterijskih ili gljivičnih bolesti. Primeri prioritetnih bakterijskih oboljenja koja se tretiraju uključuju peptički ulkus, gastritis, dispepsiju, periodontalnu bolest i gingivitis. Gljivični preparati sadrže efektivnu količinu jedinjenja formule 1 ili njegove soli i inertni farmaceutski nosač. Primeri farmaceutskih jedinjenja mogu biti obične ili obložene tablete, želatinske kapsule, granule, supozitorije, injekcioni preparati, masti, kreme ili gelovi.

Gljivični preparati se naročito koriste zaSaccharomyces cerevisiae, Candida albicansi druge Kandide, kao što suCandida glabrata, krusei, tropicalis,pseudotropicalisipara psilosis,zaAspergillus fumigatus, Aspergillus flavus,

Aspergillus niger, Cryptococcus neoformans, Microsporum canis, Trichophyton

rubrun, Trichophyton mentagrophyte,kao i za digestivnu, urinarnu, vaginalnu ili kožnu kandidiozu, kriptokokozu, na primer, neuromeningealnu, pulmonalnu ili kutanu kriptokokozu, bronhopulmonarnu i pulmonarnu aspergilozu i invazivnu aspergilozu imunodepresivnog sistema. Preparati mogu takođe biti korišćeni u prevenciji mikoza u kongenitalnim ili stečenim imunološkim infekcijama.

Laktoni se takođe mogu primeniti u tretmanu proliferativnih bolesti, uključujući i kancere. Reprezentativni primeri kancera, koji pokazuju inhibiciju ćelijskog rasta ili proliferacije su tumor dojke, pluća, ovarijuma, ezofagusa i leukemija. Ostali tipovi abnormalnih proliferativnih bolesti u kojima se laktoni uspešno koriste su endometrioza i restenoza, uzrokovane abnormalnom proliferacijom endotelnog tkiva.

Funkcionalni lakton (9) je korišćen kao aspartatni proteazni inhibitor, koji inhibira aspartatnu proteazu HIV-1 i zaustavlja napredovanje virusa, kao i post-translaciono procesovanje viralnih genskih produkata (gag/gag-pol).

Ovi laktoni se takođe koriste za modulaciju bola preko neurotransmiterske aktivnosti.

B. Doze

Efektivna količina može biti određena na osnovu tipa bolesti, načina primene i formulacije. Efektivne doze mogu biti rutinski određene, zasnivajući se na efektivnim dozama korišćenim uin vitroesejima, kao što je opisano u primerima.

Prednost Sekurolida (LMSV-6) zaEscherichia coli, Klebsiela pneumoniae, Pseudomona aeroginosa, Staphilococcus aureus,je njihova visoka aktivnost i mala molekulska težina. Prednost Sekurolida uključuje njihovu sposobnost i brzinu da pokrenu farmakološki odgovor; njihovu sposobnost da prođu barijeru ćelijske membrane, gde je visoka molekulska težina glavni hidrant i njihova jaka aktivnost naPseudomonas,koji je jedan od najrezistentnijih mikroorganizama na lekove.

Postupci za uklanjanje gljivičnih infekcija sadrže primenu efektivne količine jedinjenja Formule I ili so dobijenu adicijom kiseline, bukalnim, rektalnim ili parenteralnim putem, ili lokalno davanjem na kožu i mukozne membrane, ali je najbolji put bukalne primene. Najčešća dnevna doza je 1 do 5 mg/kg u zavisnosti od metoda primene, uslova tretiranja i specifičnosti jedinjenja.

Jedinjenja se mogu primenjivati sama, ali se obično daju u smeši sa farmaceutskim nosačem, pažljivo izabranim u zavisnosti od načina primene i standardne farmaceutske prakse. Na primer, mogu se primenjivati oralno ili u formi tableta, koje sadrže ekscipijens kao što su škrob ili laktoza, ili u kapsulama pojedinačno ili u smeši sa ekscipijensima, ili u formi eliksira ili suspenzija, koje sadrže mirišljave i obojene agense. U slučaju životinja, one se stavljaju u hranu ili vodu za piće, u koncentraciji od oko 5 do 5000 ppm, najčešće oko 25 do 500 ppm. Mogu se dati parenteralno, na primer, intramuskularno, intravenski ili supkutano. Za parenteralnu primenu, najbolje ih je koristiti u formi sterilnih vodenih rastvora, koji sadrže i druge rastvore, na primer, dovoljno soli ili glukoze da bi rastvor bio izotoničan. U slučaju životinja, jedinjenja se mogu primeniti i intramuskularno ili supkutano u dozi od oko 0.1 do 5 mg/kg dnevno, najčešće od oko 0.2 do 10 mg/kg dnevno, kao pojedinačna dnevna doza ili podeljena u 4 doze.

Jedinjenja mogu biti primenjena kod ljudi u tretmanuH. Pyioriinfekcije oralnim ili parenteralnim davanjem, mogu biti primenjeni oralno u dozi od oko 0.1 do 50 mg/kg, najčešće od oko 0.5 do 50 mg/kg dnevno, kao pojedinačna dnevna doza ili podeljena u 4 doze. Za intramuskularnu ili intravensku primenu, doza je od oko 0.1 do 100 mg/kg dnevno, najčešće od oko 0.5 do 50 mg/kg dnevno. Dok je intramuskularna primena pojedinačna ili podeljena u 4 doze, intravenska primena uključuje kontinuirano davanje. Varijacije se obavezno dešavaju u zavisnosti od težine i uslova u kojima se subjekat nalazi i izabranog načina primene.

Drugi antimikrobni agens i slabo-kiseli agens mogu se primeniti na isti način kao što je opisano za jedinjenja ovog pronalaska. U zavisnosti od specifičnog agensa, primena može biti oralna od oko 0.1 do oko 500 mg/kg, na primer oko 1 do 3 g dnevno drugog antimikrobnog agensa, i oko 40 do 80 mg dnevno slabo-kiselog agensa ili od oko 0.1 do oko 200 mg/kg/dnevno injekciono.

Ovaj ogled objašnjavaju sledeći primeri.

Primer 1: Izolacija laktona izSecuridaca virgata

KorenSecuridaca virgatasakuplja se u San Cristobal Dominikanskoj Republici. Uzorak je poslat na identifikaciju u Nacionalnu Botaničku baštu. Osušen na vazduhu, isečen i samleven koren (253 g) je ekstrahovan u Soxhlet aparatu. Hladni ekstrakt je filtriran i koncentrovanna vakuumu(55 °C) do dobijanja tečnog sirupa (29.76 g) što čini 11.76 % proizvoda. Ovaj sirup (28 g, testiran mikrobiološki) tretiran je sa 300 ml 0.5 M Sulfonske kiseline, mešan 4 h i zatim ekstrahovan hloroformom pomoću tečno-tečne ekstrakcije, sukcesivno dok se sirup ne razdvoji od kisele materije rastvorljive u hloroformu. Zatim se hidrosolubilna faza zaalkališe sa 20 % Amonijum hidroksidom (pH=8-9) i hidrosolubilna faza ponovo ekstrahuje hloroformom. Ekstrakti hloroforma se koncentrujuna vakuumu (55°C), do dobijanja 5.92 g ekstrakta (proizvod=21.14% sirovog ekstrakta i 2.33 % ekstrakta korena). 5.92 g je imalo čistoću 95.34 % LMSV-6 (Sekurolid™). Finalni ekstrakt hloroforma (5.92 g) se propušta kroz hromatografsku kolonu (63-150 (.im) i eluira sa smešom petrolej etar-etilacetat (30:70).

Skupljene frakcije su koncentrovane do dobijanja čiste tečne supstance (Sekurolid™) (1). Izolovane hromatografske frakcije 72-97 (674 mg) iz tečne hromatografske kolone (1) su ponovo propuštene kroz hromatografsku kolonu do dobijanja tečnosti boje ćilibara (2). Jedinjenja (1) i (2) su zatim testirana bioesejima.

Spektroskopskom analizom dobijeni su sledeći podaci za jedinjenje (1):

FIZIČKI PODACI:

RELATIVNA GUSTINA: 1.070 g/mL pH = 5.853

INDEKS REFRAKCIJE: = 1.471

SPEKTRALNI PODACI

Masena spektrometrija:MS m/z (rel. Int,): molekularni jon 98.0[M<+>], (54), 68

(100), molekulska formula C5H602.

Infracrvena Spektroskopija ( IR) :1761.6 cm"<1>(lakton), 1667 cm"<1>(C=C) 810cm"<1>(C=CH2).

Protonska Nuklearna Magnetna Rezonanca(NMR<1>H, 200 MHz, CDCI3: 5 2.98 ppm (2 H multiplet), 4.37 ppm (1 H triplet, J = 7.4 Hz), 5.65 (IH triplet, J=2.6 Hz), 6.22 (1 H triplet, J = 2.6).

Ugljenik 13 Nuklearna Magnetna Rezonanca(NMR<13>C 200 MHz, CDCI3: 8 170.7 (C-l), 133.3 (C-2), 27.4 (C-3), 65.5 (C-4), 122.2 (C-5).

Dvostruka Nuklearna Magnetna Rezonanca protonski Eksperimenti ( Iradijacija)

Ovi eksperimenti pokazuju vezu između svih postojećih protona. Metilenski egzociklični protoni 5 (5.65 i 6.22), iradijacija C-3 pokazuje vezu sa C-4 i na ovaj način su određena sva povezivanja protona (1).

Spektroskopskom analizom dobijeni su sledeći podaci za jedinjenje (2):Masena spektrometrija: 130.0(M+, 3), 113 (M+-OH, 12), C6H10O3.

Infracrvena Rezonanca ( IR) :3614.6 cm"<1>(OH), 1629 cm"<1>(C=C) 1150.9 (-CO-OCH3), 810 cm"<1>(C=CH2).

Protonska Nuklearna Magnetna Rezonantna Spektrometrija(200 MHz, CDCI3): 5 2.54 ppm (2 H td J=6.26Hz), 3.73 (s), 3.72 (2H, t J=6.26Hz), 5.65 (IH t, J=1.2 Hz), 6.21 (1 H t, J = 1.2 Hz).

Ugljenik 13 Nuklearna Magnetna Rezonantna Spektrometrija(200 MHz, CDCI3): 5 167.8 (C-l), 137.2 (C-2), 35.4 (C-3), 61.3 (C-4), 127.3 (C-5), 51.93 (C-6).

Ampule se sastoje od farmaceutskih preparata koji sadrše jedinjenje formule 1 (Sekurolid) sastavljeno iz sastojaka:

Primer 2: Eseji za antibakterijsku aktivnost.

Materijal opisan u Primeru 1 je ispitan za antibiotsku aktivnost na

Staphylococcus a ure us, Pseudomonas a e rog i nosa, Escherichia col iiKlebsiella

pneumoniae.

Materijal i metode:

Rastvarač: Fosfatni pufer 0.1 N, pH=8.0

Antibiotik: LMSV-6 (Čist, Sekurolid)

Mediium za oblaganje: 2 mL/100 mL

Ubrizgavanje: 4 mL/Petri Dish

Priprema medijuma za kulturu:

Korišćeni mikroorganizmi su standardizovani preko American Type Culture Collection (ATCC), korišćenog u prvoj generaciji:E coli ATCC352 18, Lot 202602, Exp. 05/2000 (19-258) <*>Kleb.Klebsiela pneumoniae,ATCC 13882, Lot 202 174, Exp 02/2000 (19-152)<*>Ps. APseudomonas aeroginosa,ATCC 27853, Lot 202 992, Exp 08/2000 (19-060) <*>St. AStaphyloccus aureus,ATCC 12598, Lot 202 564, Exp 05/2000 (19-137)<**>Str. PStreptoccus Pyogenes,ATCC 2 1547, Lot 202 691, Exp 06/2000 (19-190)

<*>=Atmosferski kiseonik, Temp=35± 2°C

<**>=Atmosferski C02, Temp=35 ± 2 °C.

Rezultati:

5 mikrolitara LMSV-6 (Sekurolida) inhibira rastEscherichia coli, Klebsiela

pneumoniae, Pseudomonas aeroginosaiStaphyloccus aureus.

Rastvori:

10 mikrolitara/10 mL, (0.001 mikrolitara/mL)

20 mikrolitara/10 mL, (0.002 mikrolitara/mL)

30 mikrolitara/10 mL, (0.003 mikrolitara/mL)

i 40 mikrolitara/10 mL, (0.004 mikrolitara/mL)

LMSV-6 u 10 mL 2 % Tvveen 60 nije pokazao inhibiciju bakterijskog rasta, što ukazuje da te koncentracije pripadaju Minimalnim Inhibitornim koncentracijama

(MCI).

Primer 3: Određivanje minimalne bakterijske (Sarcina lutea) i

inhibitorne koncentracije, MIC, LMSV-6 (Sekurolida).

Materijal i metode:

Metodologija: Sipati u ploču, medijum Mueler Hinton pH=8 pufer pH=8 za ceftriakson uzorak razblažen sa Tvveen 20 u 2 % za LMSV-6 (Sekurolid) rastvor Mikroorganizam:Sarcina lutea

Uzorci (s): LMSV-6 (16.0 mikrolitara/100 mL i 10 mikrolitara primenjeno na osetljivi disk).

Metodolo<g>ija:Sipati u ploču, medijum Mueler Hinton p&8 pufer pH=8 za uzorak ceftriaksona razblažen Tvveen 20 u 2 % za LMSV-6 (Sekurolid) rastvor Korišćeni mikroorganizam:Sarcina lutea

Uzorci (S): LMSV-6 (10 mikrolitara/mL i 20 mikrolitara primenjeno na osetljivi disk).

Kontrolni uzorak (P): Ceftriakson (disk sa 10 mcg)

Rezultati:

Nema značajne zone inhibicije, tako da je Minimalna Inhibitorna Koncentracija blizu 0.2 mikrolitra LMSV-6. Približna MIC je 0.2 mikrolitra LMSV-6

3.3 mm inhibicije.

Primer 4:In vivo tretmanbakterijske infekcije.

Pacovi su inficirani i uspešno tretirani Sekurolidom korišćenjem izračunatih doza, zasnovanih na poređenju sa ceftriaksonom.

Primer 5: Eseji za antineoplatičnu aktivnost

Materijal i metode:

Postoji veliki broj bioloških eseja koji zahtevaju merenje preživljavanja ili proliferacije sisarskih ćelija. Ovo se može postići različitim metodama, brojanjem obojenih ili neobojenih ćelija; merenjem oslobođenog<51>Cr obeleženog proteina nakon lize ćelije; merenjem inkorporacije radioaktivnih nukleotida radioaktivnim [<3>H]timidinom) ili[<125>I]jododeoksiuridinom) u toku proliferacije ćelija. Vijabilne ćelije se mogu meriti korišćenjem bilo koje od nekoliko metoda bojenja, ali je mnogo preciznija metoda spektrofotometrije (ELISA čitači), koji mogu meriti veliki broj uzoraka sa visokim stepenom preciznosti.

Kolorimetrijski esej za detekciju ćelija koje preživljavaju, koristi bezbojne supstrate, koji se pretvaraju u obojeni produkt u bilo kojoj ćeliji koja preživi, ali ne i u umirućim ćelijama ili medijumu kulture tkiva koja su korišćena. Esej koristi soli Tetrazolijum MTT[3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5 difenil tetrazolijum bromid]za merenje aktivnosti različitih dehidrogenaza (Slater et al. 1963). Tetrazolijumski prsten je otvoren u aktiviranoj mitohondriji, što se dešava samo u živoj ćeliji. Otvaranje MTT u Formazanu uz pomoć mitohondrijalnog enzima sukcinat dehidrogenaze, proizvodi tamno plavo jedinjenje (Formazan) čija je količina proporcionalna broju prisutnih ćelija. Koncentracija Formazana u gradijentu koncentracije Sekurolida merena je spektrofotometrijski (ELISA čitač). Podaci su zatim korišćeni za određivanje srednje Inhibitorne koncentracije (IC50), koja je kvantitativni parametar antineoplastične aktivnosti. Testirane su različite ćelijske linije kancera za merenje indirektne citotoksične ili antineoplastične aktivnosti (ćelije koje preživljavaju) LMSV-6 Sekurolida. Testirane su različite ćelijske linije kancera , uključujući HEP 2 (karcinom laringsa) i HELA (karcinom cerviksa).

MATERIJALI:

Medijum za kultivisanje (DMEN+sve komponente)

EDTA

Tripsin-EDTA

DMEM + SVE i 10 % TERNERO RECENTAL SERUM.

Dimetil sulfoksid

MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazolijum bromid]

Spektrofotometri (ELISA čitači)

POSTUPCI:

Ćelije su uzgajane u kulturi korišćenjem standardnih tehnika. Videti, na primer, R. lan Freshney"Culture of Animal Cells" A Manual of Basic Technique (Alan R Liss, Inc., New York, Second Edition) p. 245-256.

Procena inhibicije ćelijskog rasta određena je po metodi Skehan et al, J. Nat.CancerInst. 82, 1107 (1990). Ćelije su obložene između 400 i 1200 ćelija/bunarčiću u 96 mesta na ploči i inkubirane na 37°C 15-18 h pre dodavanja leka. Testirana jedinjenja su rastvorena u 100 % DMSO i kasnije razblažena u RPMI-1640 koji sadrži 10 mM HEPES. Sve ćelijske linije su tretirane sa 10 različitih koncentracija jedinjenja (5 opsega). Nakon 72 h inkubacije, 100 ml na ledu ohlađenog 50 % TCA dodato je u svaki bunarčić i inkubirano 1 h na 4°C. Ploče su zatim isprane 5 puta vodom zbog uklanjanja TCA, metabolita niske molekulske težine i serumskih proteina. Sulforodamin B (SRB) (0.4 %, 50 mL) dodat je u svaki bunarčić. Nakon 5 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, ploče su isprane 5 puta 0.1 % sirćetnom kiselinom i osušene na vazduhu. Pramena boje nastala je dodavanjem 10 mM Tris baze (pH 10.5) nakon 5 minuta na mešalici. Optička gustina je merena na 570 nm.

Videti takođe, Gerlier, et al. J. Immunol. Meth. 94, 57-63 (1986); Slater, et al., Biochim. Biophvs. Acta, 77, 383-393 (1963); Kasugai, et al., Japan J: Pharmacol. 52, 95-100 (1990); Mosmann J. Immunol. Methods, 65, 55-63

(1983); Denizot, et al., J. Immunol. Methods, 89, 271-277 (1986).

Podaci su podešeni sa modelom Sigmoid-Emax ostvarene-koncentracije (videti Holford, N. H. G.: Scheiner, L. B.,"Understanding the dose-effect relationship: Clinical applications of pharmaco-kinetic-pharmacodvnamic models.", Clin. Pharimiacokin. 1981, 6, 429-453) sa ne-linearnom regresijom da su dobijene recipročne vrednosti očekivanog odgovora. Pogodan softver je razvijen preko Rosvvell Park Institute sa Microsoft FORTRAN i korišćenjem Marquardt algoritma (videti Marquardt, D. W., "An algorithm for least squares estimation of nonlinear parameters", J. Soc. Ind. Appl. Math. 1963, 11, 431-441) usvojenog od Nash (videti Nash J. C,"Compact numerical method for computers: Linear algebra and function minimization". John VVilev & Sons, New York, 1979) za nelinearnu regresiju. Izračunata je koncentracija leka koja uzrokuje 50 % inhibicije rasta (IC50).

Rezultati:

LMSV-6 CITOTOKSIČNI ESEJ U HEP-2 ĆELIJSKIM POPULACIJAMA IO<5>

ćelija/mL (KARCINOM LARINGSA)

r=0.9878

IC50= 10.38 ,u<g>/ml<_>

LMSV-6 CITOTOKSIČNI ESEJ U HEP-2 ĆELIJSKIM POPULACIJAMA IO<6>

ćelija/mL (KARCINOM LARINGSA)

r=0.9941

IC50-37.37 ug/mL

LMSV-6 CITOTOKSIČNI ESEJ U HELA ĆELIJSKIM POPULACIJAMA IO<5>

ćelija/mL (KARCINOM CERVIKSA)

r=0.9950

ICso=7.37 ug/mL

LMSV-6 CITOTOKSIČNI ESEJ U HELA ĆELIJSKIM POPULACIJAMA IO<6>

ćelija/mL (KARCINOM CERVIKSA)

r=0.9941

IC50 = 27.30 ug/mL

Primer 6: Testiranje inhibicijeH. Pylori

Materijal i Metode:

Agar rastvora antimikrobnog jedinjenja: 6 mg procenjenog jedinjenja je rastvoreno u 0.6 ml 100 % dimetilsulfoksida (DMSO) i zatim ubačeno u 6 ml sterilnog rastvora brucele. Finalna koncentracija DMSO je 10 % ukupne zapremine. Serijsko dvostruko razblaživanje (3 ml Sekurolida + 3 ml rastvora brucele) je zatim napravljeno u sterilnom rastvoru brucele. 2 ml alikvote svakog razblaženja rastvora unutar serija je postavljeno u odvojene sterilne petri šolje, u kojima je 18 ml rastopljeno i ohlađeno (oko 50 °C) brucela agara dopunjeno sa 7 % dodate konjske krvi. Ovaj proizvod ima finalno razblaženje Sekurolida u agaru 1:10 i finalnu koncentraciju DMSO 1 %. Na primer, visoka koncentracija leka u agaru je 100 jj.g/ml. Ploče sa agarom mogu se napraviti jedan dan pre ubrizgavanja i držati u frižideru preko noći.

Ubrizgavanje preparata: Kulture saHelicobacter pyloryčuvaju seuagarnim pločama sa triptikaza soj 5 % ovčijom krvi i prenose se svakih 48 sati. Kulture saHelicobacter mustelae držanesu u istom agaru i prenošene svakih48-60 sati, zavisno od stepena rasta pre prenošenja. Ploče se inkubiraju na 37°C u GasPak sudu sa aktiviranim (10 ml) CampvPak Plus (BBL Microbio. Svstems) obuhvaćenim sa paladijumskim katalizatorom.

Kulture saHelicobactermogurasti u rastvorubrucelladopunjenom sa 10 % fetalnim telećim serumom u dubokoj petri šolji zapremine 10 ml. Ploče su inkubirane 18-20 sati na 37 °C u GasPak sudu sa aktiviranim (10 ml) CampvPak Plus (BBL Microbio. Svstems) obuhvaćenim sa paladijumskim katalizatorom u mešalici na 50 rpm.

Prekonoćne kulture (približno IO<8>CFU/ml) su razblažene 10-puta u rastvoru brucele (ne FCS) u tubi i koriste se kao standardni rastvor za ubrizgavanje. Bunarčići Steer replikatora su napunjeni sa 0.8 ml razblaženog organizma i približno je 2 x 10<4>ćelija u 0.002 ml na površini agara. Napunjene ploče su stavljene u GasPak sud, u koji je dodat aktivirani (10 ml) CampvPak Plus (BBL Microbio. Svstems) obuhvaćen paladijumskim katalizatorom i inkubiran na 37 °C 48 sati.

Rezultati:

Nakon inkubacije sve testirane ploče su upoređene sa kontrolnom pločom na kojoj je omogućen slobodan rast Sekurolida. MIC je koncentracija koja inhibira rast u poređenju sa kontrolnom pločom. Tanak film može se videti u većim koncentracijama, ali je to propušteno i nije razmatran pravi MIC. Kontrolni organizmi su, takođe, ubrizgani u svaku ploču i razblaženi 1000-puta za ubrizgavanje. Kontrolni organizmi uključujuCampylobacter jejuni,i skrining kulture£ Coli[ATCC 35218, Lot 202602, Exp 05/2000 (19-258)],Pseudomona aeroginosa[ATCC 27853, Lot 202992, Exp 08/2000 (19-060)],£ Cloacae, Providencia stuartiil P. rettgeri.Ploče i/ili transferi za ubrizgavanje ne mogu biti van mikroaerofilnog okruženja duže od 2 sata. Sve manipulacije koje obuhvatajuHelicobacter kulturesu izvršene u laminaru za smanjenje slučajne kontaminacije kulture.

Mišji model Lee et al., Gastroenterologv, 99, 1315-23 (1990) je korišćen da predvidiin vivo aktivnost jedinjenjaprotivH. Py/ orykoćljudi.

Helicobacter felisraste u rastvoru brucele sa 10 % fetalnim goveđim serumom. Zamrznuta kultura je brzo odmrznuta i proveren je motilitet; 0.5 mL uzorka je ubrizgano u posudu sa kulturom tkiva, koja sadrži 9.5 mL smeše brucela/serum. Sud je stavljen u Capv Pak (BBL) da bi se obezbedila mikroaerofilna atmosfera. Sud je stavljen na rotirajuću mešalicu na 60 RPM u inkubatoru na 37 °C. Nakon 18 h moguće je videti turbiditet. Provereni su čistoća i motilitet kulture na faznom mikroskopu i zatim pulovani u boci. Swiss-Webster miševima (ženke) (18-20 g) je ukinuta hrana 18 h pre infekcije. Miševi su inficirani 3 puta naizmenično tokom jedne nedelje. Doziranje počinje dve nedelje nakon poslednje doze organizma. Tretmani su dati jednom dnevno 14 dana uzastopno. Žrtvovanje je oko 3 nedelje nakon kompletne terapije. Svakom mišu je rasečen i otvoren stomak. Komad 3 mm preseka tkiva uzet je iz stomaka, ispran, iseckan i ubačen u epruvetu sa 100 mikrolitara ureaze. Reagens ureaze (pH 6.3-6.5) sadrži ureu i fenol red. Ako jeHelicobacterprisutan, ureaza će sprečiti ureu da promeni pH. Purpurna boja (alkalna), pokazuje da jeHelicobacterprisutan; crvena/žuta (nema promene), što znači daHelicobacternije prisutan. Bilo koja pramena boje registruje se nakon 18 h. Koristi se oko 20 miševa u tretmanu; procenat pozitivnih se zabeleži za svaku grupu.

Postoji nekoliko metoda, koje se koriste za određivanje da li jeHelicobacter pyloryprisutan kod ljudi. Ovo je moguće iskoristiti za početnu dijagnozu infekcije pre tretmana, kao i za određivanje uspešnosti tretmana u uklanjanju organizma iz pacijenta.

Detekcija uree iz daha uključuje ingestiju radioobeležene uree.H. Pyloryprodukuje urinazu, koja degraduje ureu; gastrične ćelije sisara ne sadrže ovaj enzim. Izdisanje obeleženog ugljen dioksida (analizirano masenom spektrometrijom ili radioaktivnošću, zavisno od upotrebljenog izotopa) pokazuje da jeH. Pylory prisutan.

Seroiogija se takođe može koristiti za procenu infekcije saH. Pylory.Detekcija serumskih antitela naH. Pylory,kao što su IgG i IgA, urađena je korišćenjem enzimski vezanog imuno eseja (ELISA). Brojni različitiH. Pyioryproteini mogu biti upotrebljeni kao antigeni.

Endoskopijom pacijenata dobijaju se uzorci tkiva, koji se mogu iskoristiti za kulturu u mikroaerofilnom okruženju za dijagnozuH. Pyloryinfekcije. Alternativno, uzorci se mogu pregledati histološki korišćenjem jednog od brojnih bojenja, kao što je Gimza ili hematoksilin-eozin. Test uree, koji ima prednost u produkciji ureaze prekoH. Pylorymože takođe biti primenjen. Ovaj se test oslanja na formiranje amonijaka hidrolizom uree, što dovodi do primentne promene pH, koja je indikacija uklanjanjaH. Pilory.

Rezultati:

Poređenje stanja pacijenta pre i nakon endoskopije sa jedinjenjem 1, pokazalo je smanjenje ili odsustvoH. Pilory.

Primer 7: Određivanje gljivične aktivnosti

Materijal i Metode:

POSTUPCI

Anti-gljivična aktivnost produkta može biti određena na sledeći način. Korišćene su ženke miševa, težine 18 do 22 g i primenjena je određena količinaCandida Albicans 44858u repnu venu brzinom IO<6>CFU po mišu (CFU: jedinica koja formira koloniju). Miševi su izdvojeni u 5 grupa od po 5 miševa i tretirani na sledeći način:

Jedan sat nakon infekcije

grupa 1: miševi su tretirani sa 25 mg/kg oralno

grupa 2: miševi su tretirani intraperitonealno dozom od 25 mg/kg grupa 3: miševi su tretirani oralno Ketokonazolom sa 25 mg/kg

grupa 4: miševi su tretirani intraperitonealno Ketokonazolom u dozi od 25 mg/kg

grupa 5: miševi nisu primili nijedan antigljivični tretman.

Izbrojani su miševi koji su uginuli u periodu od 22 dana.

Rezultati:

Aktivnost produkta je izvrsna sa dozom korišćenom u dva primenjena postupka. Isti tretmani su takođe efikasni u "lokalnom modelu" kod kožnih gljivičnih oboljenja, na primer trihofiton, kao i u subletalnom modelu.

Minimalna Inhibitorna Koncentracija ( MIC)

ĆelijeCandida albicanssu pripremljene kao što je opisano u J. Antimicrobial Chemotherapv 38, 579-587, isprane 3 puta sa 0.1 M fosfatnim rastvorom i korišćene odmah za određivanje minimalne inhibitorne koncentracije (MIC). MIC je određivan modifikacijom mikrotitra ploče po standardnoj metodi laboratorijsko kliničkih standarda Nacionalnog Komiteta.

RPMI-1640 i L-glutamin puferovani su na pH 7 sa 0.15 M rastvorom MOPS (3-[N-morfolino]propan sulfonska kiselina). ĆelijeCandida albicans(1.5 x IO<3>ćelija/ml) dodate su u bunarčić ploče sa 96 mesta, koja sadrži RPMI-1640 i rastvore antigljivičnih agenasa. Rezultati su čitani 48 h nakon inkubacije na 35 °C i određeni su MIC ili minimalna inhibitorna koncentracija koja inhibira rast ćelija

Candida albicans.

Minimalna fungicidalna koncentracija

Nakon čitanja MIC posle 48 h, ploče se protresu i 10\ x\alikvote se ukloni iz bunarčića, koji se nalaze na pravougaonim diskovima koji sadrže dekstrozu. Ploče su inkubirane 48 h na 35°C i minimalna fungicidalna koncentracija i koncentracija antifljivičnog agensa na kojoj nema formiranih kolonija.

Prateći eseji su napravljeni tako da LMSV-6 pokazuje visoku aktivnost protivCandida albicans.

Primer 8: Tretman periodontalne bolesti

Pronađeno je da je Sekurolid selektivno efikasan prema specifičnim anaerobnim gram negativnim organizmima udruženim sa gingivitisom, kada se lokalno primenjuje na gingivu.

Minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) potrebna da ubijeBacteroides assaccharolyticus(rod Forsvth), određena prema proceduri VValker et al

(Antimicrobial and Chemotherapv, Vol. 16, p. 452-457, (1979), je između 6 i 60 mikrograma po ml. Vrednost MIC zaB. Gingivalisje 6 mikrograma po ml. Vrednost MIC zaB. GracilisiFusobacterium,ostale gram negativne organizme je oko 25 za svaki; i vrednost MIC za gram pozitivne organizme Actinomvces viscosus je 60 za aerobne i 60 za anaerobne vrste.

Claims (31)

1. Izolovano jedinjenje definisano je jednom od sledećih struktura: gde R1-R6uzeti nezavisno ili R3-R6uzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinsku, peptidnu ili polipeptidnu grupu; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture; Z'je atom vodonika, halogena, hidroksilna grupa ili bilo koja organska grupa koja sadrži 1-8 atoma ugljenika, koji uključuju heteroatom izabran od grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot, grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture ili izolovanog laktona definisanog sledećom strukturom: gde R1-R9uzeti nezavisno ili Rsi Rćuzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Yi, Y2 i Y3uzeti nezavisno ili Yi i Y2uzeti zajedno mogu biti atom vodonika ili bilo koje druge grupe izdvojene od grupa koje sadrže alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 cikli;ni, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je definisano Formulom Ia.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time što je X kiseonik.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time što je R5egzociklični metilen.

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je definisano Formulom lb.

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što ima jednu od prikazanih struktura.

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, Formule Ia, naznačeno time što je lakton izolovan izSecuridaca virgata.

8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, Formule Ia, naznačeno time što uključuje farmaceutski prihvatljiv nosač za parenteralnu, enteralnu ili lokalnu primenu.

9. Postupak lečenja pacijenta, naznačen time što sadrži efektivnu količinu jedinjenja definisanog jednom od sledećih struktura: gde R1-R7uzeti nezavisno ili R3-R6uzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture; Z' je atom vodonika, halogena, hidroksilna grupa ili bilo koja organska grupa koja sadrži 1-8 atoma ugljenika, koji uključuju heteroatom izabran od grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot, grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture ili izolovanog laktona definisanog sledećom strukturom: gde RrR9 uzeti nezavisno ili R5i R6uzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Yi, Y2i Y3uzeti nezavisno ili Yii Yiuzeti zajedno mogu biti atom vodonika ili bilo koje grupe izdvojene iz grupa koje sadrže alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

10. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde X predstavlja kiseonik.

11. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde R5predstavlja egzociklični metilen.

12. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde jedinjenje ima jednu od sledećih struktura:

13. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde je jedinjenje Formule Ia primenjeno oralno, parenteralno, lokalno ili transdermalno.

14. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde pacijent ima proliferativno oboljenje.

15. Upotreba prema patentnom zahtevu 14, gde je proliferativna bolest kancer.

16. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde pacijent ima infekciju.

17. Upotreba prema patentnom zahtevu 16, gde je infekcija bakterijska.

18. Upotreba prema patentnom zahtevu 16, gde je infekcija gljivična.

19. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde pacijent ima peptički ulkus.

20. Upotreba prema patentnom zahtevu 19, gde je peptički ulkus povezan sa prisustvomHelicobacterpylory.

21. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde pacijent ima bolove.

22. Upotreba prema patentnom zahtevu 9, gde je jedinjenje Formule Ia na farmaceutski prihvatljivom nosaču.

23. Upotreba prema patentnom zahtevu 22, gde je nosač za oralnu primenu tečnost za osvežavanje, pastila, tableta, kapsula, rastvor, suspenzija, granula ili neka njihova kombinacija.

24. Upotreba prema patentnom zahtevu 22, gde je nosač za lokalnu primenu supozitorija, mast, krema, gel, pasta, kolodijum, gliceroželatin, linimenta, losion, gips, puder, traka, aerosol, rastvor, tinktura ili neka njihova kombinacija.

25. Postupak izolovanja laktona iz biljke, gde je pomenuti lakton definisan sledećom strukturom: 25. Postupak izolovanja laktona iz biljke, gde je pomenuti lakton definisan sledećom strukturom: gde R1-R7uzeti nezavisno ili R3-R6uzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture, uključujući ekstrakciju laktona iz biljnog materijala.

26. Postupak prema patentnom zahtevu 25, naznačen time što je biljkaSecuridaca virgata.

27. Postupak prema patentnom zahtevu 25, naznačen time što je postupak izolovanja vršen ekstrakcijom pomoću hromatografije.

28.Sintetičko jedinjenje definisano je jednom od sledećih struktura: gde R1-R7uzeti nezavisno ili R3-R6uzeti zajedno su atom vodonika ili grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture; Z' je atom vodonika, halogena, hidroksilna grupa ili bilo koja organska grupa koja sadrži 1-8 atoma ugljenika, koji uključuju heteroatom izabran od grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot, grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture ili izolovanog laktona definisanog sledećom strukturom: gde RrR9uzeti nezavisno ili R5i R6uzeti zajedno su atom vodonika iii grupa izabrana od grupe koja sadrži alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Yi, Y2i Y3uzeti nezavisno ili Yii Y2uzeti zajedno mogu biti atom vodonika ili bilo koje grupe izdvojene iz grupa koje sadrže alkil, supstituisani alkil, alkenil, supstituisani alkenil, alkinil, supstituisani alkinil, fenil, supstituisani fenil, aril, supstituisani aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, halo, hidroksil, alkoksi, supstituisani alkoksi, fenoksi, supstituisani fenoksi, aroksi, supstituisani aroksi, alkiltio, supstituisani alkiltio, feniltio, supstituisani feniltio, ariltio, supstituisani ariltio, cijano, izocijano, supstituisani izocijano, karbonil, supstituisani karbonil, karboksil, supstituisani karboksil, amino, supstituisani amino, amido, supstituisani amido, sulfonil, supstituisani sulfonil, sulfonska kiselina, fosforil, supstituisani fosforil, fosfonil, supstituisani fosfonil, poliaril, supstituisani poliaril, C1-C20 ciklični, supstituisani C1-C20 ciklični, heterociklični, supstituisani heterociklični, aminokiselinske, peptidne ili polipeptidne grupe; Z je heteroatom, izabran iz grupe koja sadrži kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture i X je heteroatom izdvojen iz grupa koje sadrže kiseonik, sumpor ili azot grupisane u linearne, razgranate ili ciklične strukture.

29. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 28, naznačeno time što je definisano bilo kojom od sledećih struktura:

30. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule Ia i Ic uključuje: a) obezbeđnje prekursora koji ima strukturu laktona i b) reakciju prekursora sa jednim ili više hemijskih reagenasa za dobijanje proizvoda sa metilenskom grupom na a-poziciji laktonske strukture.

31. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule lb uključuje: a) obezbeđenje prekursora koji ima strukturu laktona i b) reakciju prekursora sa jednim ili više hemijskih reagenasa za dobijanje proizvoda sa metilenskom grupom na a-poziciji laktonske strukture i c) reakciju proizvoda sa nukleofilom.