RU2012146368A - Выделение нерастворимых искомых белков - Google Patents

Выделение нерастворимых искомых белков Download PDF

Info

Publication number
RU2012146368A
RU2012146368A RU2012146368/10A RU2012146368A RU2012146368A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A RU 2012146368/10 A RU2012146368/10 A RU 2012146368/10A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
insoluble
host cells
seq
desired protein
module
Prior art date
Application number
RU2012146368/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2570625C2 (ru
Inventor
Мартин Шмидт
Аксель ЛАЙМЕР
Лин РЁМЕР
Original Assignee
Амсилк Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Амсилк Гмбх filed Critical Амсилк Гмбх
Publication of RU2012146368A publication Critical patent/RU2012146368A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2570625C2 publication Critical patent/RU2570625C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

1. Способ выделения нерастворимого искомого белка из суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, включающий стадии:a) получение суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, содержащих нерастворимый искомый белок и нерастворимые части клеток хозяев,b) добавление водного раствора по меньшей мере одного основания к данной суспензии в количестве, достаточном для разрушения данных клеток хозяев и/или солюбилизации нерастворимых частей клеток хозяев, иc) отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев,причем на стадии b) искомый белок остается нерастворимым, а по меньшей мере 80% нерастворимых частей клеток хозяев подвергаются солюбилизации.2. Способ по п.1, в котором клетками хозяевами являются бактериальные, дрожжевые, растительные клетки хозяева или клетки-хозяева насекомых.3. Способ по п.1, в котором выделенный нерастворимый искомый белок имеет чистоту по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% и более предпочтительно по меньшей мере 95%.4. Способ по п.1, в котором основанием является гидроокись металла и/или аммония.5. Способ по п.4, в котором гидроокись металла выбрана из группы, состоящей из гидроокиси натрия (NaOH), гидроокиси калия (KOH) и гидроокиси кальция (СаОН) или их комбинаций.6. Способ по п.1, в котором конечная концентрация основания на стадии (b) составляет от 0,005 М до 1 М, предпочтительно от 0,01 М до 0,6 М, более предпочтительно от 0,02 М до 0,2 М и наиболее предпочтительно от 0,04 М до 0,06 М.7. Способ по п.1, в котором способ дополнительно включает добавление по меньшей мере одного реагента (i) перед стадией b), (ii) на стадии b) и/или (iii) после стадии b).8. Способ по п.7, в к�

Claims (25)

1. Способ выделения нерастворимого искомого белка из суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, включающий стадии:
a) получение суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, содержащих нерастворимый искомый белок и нерастворимые части клеток хозяев,
b) добавление водного раствора по меньшей мере одного основания к данной суспензии в количестве, достаточном для разрушения данных клеток хозяев и/или солюбилизации нерастворимых частей клеток хозяев, и
c) отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев,
причем на стадии b) искомый белок остается нерастворимым, а по меньшей мере 80% нерастворимых частей клеток хозяев подвергаются солюбилизации.
2. Способ по п.1, в котором клетками хозяевами являются бактериальные, дрожжевые, растительные клетки хозяева или клетки-хозяева насекомых.
3. Способ по п.1, в котором выделенный нерастворимый искомый белок имеет чистоту по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% и более предпочтительно по меньшей мере 95%.
4. Способ по п.1, в котором основанием является гидроокись металла и/или аммония.
5. Способ по п.4, в котором гидроокись металла выбрана из группы, состоящей из гидроокиси натрия (NaOH), гидроокиси калия (KOH) и гидроокиси кальция (СаОН) или их комбинаций.
6. Способ по п.1, в котором конечная концентрация основания на стадии (b) составляет от 0,005 М до 1 М, предпочтительно от 0,01 М до 0,6 М, более предпочтительно от 0,02 М до 0,2 М и наиболее предпочтительно от 0,04 М до 0,06 М.
7. Способ по п.1, в котором способ дополнительно включает добавление по меньшей мере одного реагента (i) перед стадией b), (ii) на стадии b) и/или (iii) после стадии b).
8. Способ по п.7, в котором реагент выбран из группы, состоящей из денатурирующего средства, космотропного средства и детергента или их комбинаций.
9. Способ по п.8, в котором:
(i) денатурирующим средством является мочевина (CH4N2O) или гуанидиний гидрохлорид (CH5N3·HCl),
(ii) космотропным средством является соль фосфата или соль сульфата, а
(iii) детергентом является Tween 20, Triton X-100, SDS или Brij.
10. Способ по п.9, в котором конечная концентрация:
(i) мочевины составляет от 0,1 М до 10 М, предпочтительно от 1 М до 5 М, а
(ii) гуанидиния гидрохлорида составляет от 0,01 М до 3 М, предпочтительно от 0,1 М до 2 М.
11. Способ по п.1, в котором отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев на стадии с) осуществляется центрифугированием, седиментацией и/или фильтрацией.
12. Способ по п.1, в котором способ после стадии b) и перед стадией с) дополнительно включает стадию b') гомогенизации данной суспензии.
13. Способ по п.1, в котором способ после стадии с) дополнительно включает стадию d) промывки отделенного нерастворимого искомого белка, предпочтительно центрифугата, выпавшего осадка или ретентата, водным раствором, органическим раствором и/или мочевиной.
14. Способ по п.1, в котором искомый белок остается нерастворимым по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% после добавления на стадии b) водного раствора, содержащего по меньшей мере одно основание, в течение периода времени от 10 до 40 мин при температуре от 15°С до 25°С.
15. Способ по п.1, в котором нерастворимый искомый белок образует белковый агрегат, который включает по меньшей мере 85% данного искомого белка.
16. Способ по п.1, в котором нерастворимый искомый белок выбран из группы, состоящей из белка шелка, содержащего по меньшей мере два идентичных повторяющихся звена, коллагена и кератина.
17. Способ по п.16, в котором белок шелка включает по меньшей мере два идентичных повторяющихся звена, каждое из которых содержит по меньшей мере одну консенсусную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
i) GPGXX (SEQ ID NO:3), где X - любая аминокислота, предпочтительно в каждом случае выбранная независимо из числа A, S, G, Y, Р и Q;
ii) GGX, где Х - любая аминокислота, предпочтительно в каждом случае выбранная независимо из числа Y, Р, R, S, А, Т, N и Q; и
iii) Ax, где x - целое число от 5 до 10.
18. Способ по п.17, в котором повторяющиеся звенья выбраны независимо из модуля A (SEQ ID NO:20), модуля С (SEQ ID NO:21), модуля Q (SEQ ID NO:22), модуля K (SEQ ID NO:23), модуля sp (SEQ ID NO:24), модуля S (SEQ ID NO:25), модуля R (SEQ ID NO:26), модуля X (SEQ ID NO:27) или модуля Y (SEQ ID NO:28) либо их вариантов.
19. Способ по п.16, в котором белок шелка дополнительно содержит по меньшей мере одно неповторяющееся (NR) звено.
20. Способ по п.19, в котором NR-звеном является NR3 (SEQ ID NO:41) или его варианты либо NR4 (SEQ ID NO:42) или его варианты.
21. Способ по п.16, в котором белок шелка выбран из группы, состоящей из ADF-3 (SEQ ID NO:1) или его вариантов, ADF-4 (SEQ ID NO:2) или его вариантов, MaSp I (SEQ ID NO:43) или его вариантов, MaSp II (SEQ ID NO:44) или его вариантов, (С)m, (C)mNRz, NRz(C)m, NRz(C)mNRz, (AQ)n, (AQ)nNRz, NRz(AQ)n, NRz(AQ)nNRz, (QAQ)o, NRz(QAQ)o, (QAQ)oNRz, Yp, Xp и Kp, где m - целое число от 2 до 64, n - целое число от 6 до 24, o - целое число от 8 до 16, p - целое число от 8 до 16 и z - целое число от 1 до 3, а NR означает неповторяющееся звено.
22. Способ по п.21, в котором белок шелка представляет собой C16NR4, C32NR4, (AQ)12NR3, (AQ)24NR3, (AQ)12, (AQ)24, C16, C32, NR4C16NR4, NR4C32NR4, NR3C16NR3, NR3C32NR3, NR4(AQ)12NR4, NR4(AQ)24NR4, NR3(AQ)12NR3, NR3(AQ)24NR3, (QAQ)8 или (QAQ)16.
23. Способ по п.1, в котором способ выполняется при температуре от 4°С до 60°С, предпочтительно от 15°С до 40°С.
24. Способ по п.1, в котором способ выполняется при давлении от 10 кПа до 1000 кПа, предпочтительно от 50 кПа до 150 кПа.
25. Нерастворимый искомый белок, получаемый способом по пп.1-24.
RU2012146368/10A 2010-03-31 2011-03-30 Выделение нерастворимых искомых белков RU2570625C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31954210P 2010-03-31 2010-03-31
US61/319,542 2010-03-31
PCT/EP2011/001605 WO2011120690A2 (en) 2010-03-31 2011-03-30 Separation of insoluble target proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012146368A true RU2012146368A (ru) 2014-05-10
RU2570625C2 RU2570625C2 (ru) 2015-12-10

Family

ID=44581814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012146368/10A RU2570625C2 (ru) 2010-03-31 2011-03-30 Выделение нерастворимых искомых белков

Country Status (8)

Country Link
US (1) US8877903B2 (ru)
EP (1) EP2552935B1 (ru)
JP (1) JP6081908B2 (ru)
CN (1) CN102844326B (ru)
CA (1) CA2790186C (ru)
ES (1) ES2799431T3 (ru)
RU (1) RU2570625C2 (ru)
WO (1) WO2011120690A2 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2631004C2 (ru) * 2015-09-16 2017-09-15 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича" (ИБМХ) Способ получения рекомбинантного эластомерного домена Trib-2mut, генно-инженерная конструкция pGDTrib2mut, определяющая биосинтез Trib-2mut в клетках E.coli, штамм-продуцент E.coli M15/pGDTrib2mut и способ получения полимерного материала на основе данного белка
RU2823655C1 (ru) * 2019-10-28 2024-07-26 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-10, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014027042A2 (en) 2012-08-17 2014-02-20 Amsilk Gmbh Use of self-assembling polypeptides as tissue adhesives
CN104918950B (zh) * 2012-12-27 2018-10-12 丝芭博株式会社 亲水性重组蛋白的部分精制方法
CN103265615B (zh) * 2013-05-09 2015-05-13 广州天赐福音生物科技有限公司 一种人发中生物活性肽提取物及提取方法和应用
CA3028523A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 Amsilk Gmbh Articles comprising a silk polypeptide for antigen delivery
JP6842720B2 (ja) * 2016-08-10 2021-03-17 Spiber株式会社 不溶性組換えタンパク質凝集体の製造方法
EP3521299A4 (en) 2016-10-03 2020-06-24 Spiber Inc. METHOD FOR PURIFYING RECOMBINANT PROTEINS
WO2019092073A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Amsilk Gmbh Silk alcohol formulations
CA3109325A1 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Amsilk Gmbh Use of a structural polypeptide for plant coating
JP7737142B2 (ja) * 2018-11-28 2025-09-10 ボルト スレッズ インコーポレイテッド クモ糸タンパク質のアルカリ精製法
CN113512574A (zh) * 2021-07-15 2021-10-19 海默斯(重庆)医学生物技术有限公司 一种重组角蛋白生产方法
EP4444950A1 (en) 2021-12-07 2024-10-16 AMSilk GmbH Use of a structural polypeptide for treating or finishing textiles
US20250153421A1 (en) 2022-02-10 2025-05-15 Amsilk Gmbh Gradient printing reservoir and printing method
EP4410938A1 (en) 2023-02-02 2024-08-07 AMSilk GmbH Automatic dishwashing composition comprising a structural polypeptide
EP4701675A1 (en) 2023-04-25 2026-03-04 AMSilk GmbH Method for producing a collagen and silk polypeptide composite structure
WO2025119779A1 (en) 2023-12-07 2025-06-12 Amsilk Gmbh Disinfectant formulation with prolonged and residual biocidal properties
WO2025153700A1 (en) 2024-01-18 2025-07-24 Amsilk Gmbh Silk polypeptides with improved properties

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5332805A (en) * 1984-02-03 1994-07-26 Celltech Limited Process for the recovery of recombinantly produced chymosin from insoluble aggregate
US5523215A (en) * 1985-03-28 1996-06-04 Chiron Corporation Enhanced purification and expression of insoluble recombinant proteins
ATE76435T1 (de) * 1985-06-26 1992-06-15 Upjohn Co Solubilisation und oxidation von somatotropin aus transformierten mikroorganismen.
CN1156481A (zh) * 1994-06-22 1997-08-06 先灵公司 从细菌中提取异源不溶性蛋白质
US5437986A (en) * 1994-06-22 1995-08-01 Schering Corporation Extraction of heterologous insoluble proteins from bacteria
US6068993A (en) * 1997-07-02 2000-05-30 Biobras Sa Vector for expression of heterologous protein and methods for extracting recombinant protein and for purifying isolated recombinant insulin
US6121421A (en) * 1998-08-21 2000-09-19 Abbott Laboratories Methods for isolating recombinant β-casein
WO2003102013A2 (en) 2001-02-23 2003-12-11 Gonzalez-Villasenor Lucia Iren Methods and compositions for production of recombinant peptides
JP2005502347A (ja) * 2001-08-29 2005-01-27 ユニバーシティ オブ ワイオミング クモ糸タンパク質をコードする核酸、ポリペプチド、抗体とそれらの使用方法
AU2003202330A1 (en) * 2002-01-11 2003-07-24 Nexia Biotechnologies, Inc. Recovery of biofilament proteins from biological fluids
AU2003201513A1 (en) 2002-01-11 2003-07-24 Nexia Biotechnologies, Inc. Methods of producing silk polypeptides and products thereof
CN1259333C (zh) 2003-05-08 2006-06-14 福建师范大学 制备性基因重组蜘蛛拖丝蛋白的分离纯化方法
CN101018806B (zh) 2004-07-22 2014-05-07 Am丝绸有限责任公司 重组蜘蛛丝蛋白
AU2006286753B2 (en) * 2005-08-29 2011-08-18 Amsilk Gmbh Modified spider silk proteins
CA2690658C (en) 2007-06-20 2016-08-09 Basf Se Synthetic repetitive proteins, their production and use thereof
EP2285823B2 (en) * 2008-06-09 2024-03-06 Danisco US Inc. Recovery of insoluble enzyme from fermentation broth and formulation of insoluble enzyme

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2631004C2 (ru) * 2015-09-16 2017-09-15 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича" (ИБМХ) Способ получения рекомбинантного эластомерного домена Trib-2mut, генно-инженерная конструкция pGDTrib2mut, определяющая биосинтез Trib-2mut в клетках E.coli, штамм-продуцент E.coli M15/pGDTrib2mut и способ получения полимерного материала на основе данного белка
RU2823655C1 (ru) * 2019-10-28 2024-07-26 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-10, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение
RU2824893C1 (ru) * 2019-10-28 2024-08-15 Инститьют Оф Матириа Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин BD-4, его получение, и фармацевтические композиции, и применение
RU2825992C1 (ru) * 2019-10-28 2024-09-02 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-11, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение
RU2825993C1 (ru) * 2019-10-28 2024-09-02 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-6, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение
RU2825994C1 (ru) * 2019-10-28 2024-09-02 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-1, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение
RU2825991C1 (ru) * 2019-10-28 2024-09-02 Инститьют Оф Материя Медика, Чайниз Академи Оф Медикал Сайенсиз Кератин bd-13, способ его получения и его фармацевтическая композиция и применение

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011120690A2 (en) 2011-10-06
CA2790186A1 (en) 2011-10-06
JP6081908B2 (ja) 2017-02-15
CN102844326A (zh) 2012-12-26
EP2552935B1 (en) 2020-05-27
JP2013523665A (ja) 2013-06-17
US8877903B2 (en) 2014-11-04
RU2570625C2 (ru) 2015-12-10
WO2011120690A3 (en) 2012-04-05
EP2552935A2 (en) 2013-02-06
ES2799431T3 (es) 2020-12-17
CN102844326B (zh) 2017-09-29
US20130338346A1 (en) 2013-12-19
CA2790186C (en) 2016-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2012146368A (ru) Выделение нерастворимых искомых белков
Seidl-Seiboth et al. Novel hydrophobins from Trichoderma define a new hydrophobin subclass: protein properties, evolution, regulation and processing
EA200970263A1 (ru) Полностью человеческая высокопродуктивная система получения усовершенствованных антител и белков
RU2011151877A (ru) Пептиды, проникающие в клетку
DK215685A (da) Sulfoadenosyl-l-methioninsalt, fremgangsmaade til fremstilling derafsamt farmaceutisk praeparat indeholdende et eller flere saadanne salte
RU2004114218A (ru) Белковый изолят из семян льна и способ его получения
EA201000646A1 (ru) Способ получения биопрепарата (варианты)
BRPI0514741A (pt) derivados de hexahidro-pirazino[1, 2-a]pirimidina-4, 7-diona substituìdos por aminoácidos
JP2001172296A (ja) 軟骨型プロテオグリカンの精製方法
ES2187483T3 (es) Procedimiento para la preparacion de acido a-lipoico esento de disolvente.
CN113061173A (zh) 一种分离αs1-酪蛋白的方法
CN117288881A (zh) 燕窝肽特征性肽段溯源数据库及其在燕窝肽鉴定中的应用
CN112979674A (zh) 一种多功能交联剂及其制备方法和应用
CN114032271A (zh) 具有降尿酸功效的牡蛎多肽、多肽粉及制备方法和应用
CN104472848A (zh) 一种基于模拟消化制备海洋低值贝类低聚肽的方法
CN119285734A (zh) 一种贻贝黏蛋白的提取纯化方法
CN102993290B (zh) 反胶团法分离萃取鱼精蛋白
CN111575250A (zh) Butelase1酶的提取方法及其环化多肽的环化方法
CN115043899B (zh) 双胺或胺与硫醇偶联的化合物及其制备方法和应用
CN116804046A (zh) 一种环状阳离子抗菌肽及其应用
CN102660516B (zh) 一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法
CN103509081B (zh) 一种可保持活性的蛋白质顺序提取方法
CN108314726B (zh) 一种大鲵皮胶原蛋白提取方法和由该方法提取得到的胶原蛋白产品
US2657232A (en) Process for preparing amino acids
CN110204593A (zh) 一种生物制药用多肽化合物的制备工艺