RU2139092C1 - Фрагменты антител в терапии - Google Patents

Фрагменты антител в терапии Download PDF

Info

Publication number
RU2139092C1
RU2139092C1 RU96101193A RU96101193A RU2139092C1 RU 2139092 C1 RU2139092 C1 RU 2139092C1 RU 96101193 A RU96101193 A RU 96101193A RU 96101193 A RU96101193 A RU 96101193A RU 2139092 C1 RU2139092 C1 RU 2139092C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tnfα
igg
fab
septic shock
fragment
Prior art date
Application number
RU96101193A
Other languages
English (en)
Other versions
RU96101193A (ru
Inventor
Ландон Джон
Original Assignee
Терапьютик Антибодиз Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB939311507A external-priority patent/GB9311507D0/en
Priority claimed from GB9402593A external-priority patent/GB9402593D0/en
Application filed by Терапьютик Антибодиз Инк. filed Critical Терапьютик Антибодиз Инк.
Publication of RU96101193A publication Critical patent/RU96101193A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2139092C1 publication Critical patent/RU2139092C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pens And Brushes (AREA)
  • Memory System Of A Hierarchy Structure (AREA)
  • Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии, и может применяться для нейтрализации TNFα y пациента, нуждающегося в такой нейтрализации. Пациенту вводят IgG - Fab-фрагмент, обладающий реактивностью по отношению к TNFα.Указанный Fab-фрагмент происходит от поликлонального IgG. Причем пациент страдает септическим шоком или симптомами септического шока. Для нейтрализации TNFα также используют фармацевтическую композицию, которая содержит IgG - Fab-фрагмент, обладающий реактивностью по отношению к TNFα и физиологически приемлемый носитель, а Fab-фрагмент происходит от поликлонального IgG. Способ и композиция обеспечивают повышение эффективности лечения симптомов септического шока. 4 с. и 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 9 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к использованию Fab-фрагментов иммуноглобулина в терапии.
Антитела образуются как часть иммунного ответа организма на попадание в него микроорганизмов или чужеродных молекул. Эти антитела представляют собой иммуноглобулин (Ig) и широко используются в клинической практике для диагностики, наблюдения, и лечения все возрастающего числа заболеваний.
Основная единица, из которой образуются все молекулы антител, была обнаружена Портером (1959) Biochem J. 73, 119-126, с использованием протеолитических ферментов. Одним из наиболее важных классов иммуноглобулинов, а именно IgG, состоит из двух тяжелых и двух легких цепей, причем тяжелые цепи связаны в своей шарнирной области дисульфидными связями. Расщепление этих связей папаином приводит к образованию двух антиген-связывающих фрагментов (Fab), и и одного кристаллизующегося фрагмента (Fc), как показано на фиг. 1. Расщепление пепсином ниже шарнирной области приводит к образованию немного более мелкого Fc-фрагмента, и одного F(ab')2-фрагмента с двумя сайтами связывания, как показано на фиг. 1. Каждый Fab-фрагмент содержит легкую цепь и часть тяжелой цепи, и включает в себя последовательности, ответственные за специфическое связывание с микроорганизмом и чужеродной макромолекулой. Fc состоит из оставшихся частей двух тяжелых цепей, и представляет собой участок, с которым могут связываться комплемент, макрофаги, и полиморфно-ядерные лейкоциты. Две тяжелые цепи (но не легкие цепи) для каждого класса антител, т. е. IgG, IgM, IgA и IgE, являются различными. Из общего количества всех иммуноглобулинов, присутствующих в кровотоке, наибольшая доля приходится на IgG. Он состоит из одной основной иммуноглобулиновой единицы, и обладает характерной для него высокой степенью сродства к своему специфическому антигену. Структура антител и их функции более подробно раскрыты Roitt (1991) Essential Immunology,. 7th Edition, Blackwell Scientific Publications, Oxford.
Вредное действие микробных патогенов может быть обусловлено высвобождением растворимых токсинов. Такими токсинами являются нейрогенные экзотоксины, высвобождаемые дифтерийной и столбнячной палочками, и различные эндотоксины, такие как липополисахариды (LPS), выделяемые клеточными стенками грам-отрицательных бактерий, и пептидоглиганы, выделяемые грам-положительными микроорганизмами. В 1890 году, фон Беринг показал, что экзогенные антитела к растворимым антигенам обладают терапевтическим действием, так, например, смертность детей от дифтерии снижалась благодаря системному введению сыворотки, полученной от лошади, гипериммунизированной дифтерийным токсоидом. Аналогичный эффект был получен и для пациентов, страдающих столбняком. В 1894 году, Кальметт (Calmette) и др. применили пассивную иммунизацию к пациентам с интоксикацией, вызванной укусом змей.
В развитии синдрома септического шока принимают участие инициаторы (такие, как липополисахариды, LPS), медиаторы (включая, TNFα, 1L-1 и 1L-6), и эффекторы на клеточном уровне (например, (окись азота)-синтаза в эндотелиальных клетках). Все инициаторы и медиаторы являются потенциальными антигенами, и антитела против этих макромолекул могут быть использованы для предупреждения и лечения септического шока. Некоторыми исследователями, с различной степенью успеха, были использованы поликлональные (PcAb) или моноклонельные (McAb) антитела, направленные против TNFα. В то же самое время было показано, что PcAb против TNFα могут предупреждать летальное действие этого цитокина (Beutler et al., (1985) Science 229, 869-871) у BALB/C-мышей. Tracey и его коллеги ((1987) Nature 330, 662-664) показали, что McAb против TNFα, введенные за 1 час до контрольного заражения повианов, обеспечивают частичную защиту от поражения органов, а введение этих антител за два часа до контрольного заражения обеспечивает более полную защиту. Другими словами, моноклональные антитела (McAb) против TNFα были использованы профилактически. Несколько групп исследователей продуцировали, в основном, у кроликов поликлональные антитела (PcAb) к LPS и к TNF, и продемонстрировали их эффективность против септического шока на моделях животных. Кроме того, PcAb к LPS также индуцировались у добровольцев, а затем успешно использовались (Ziegler et al., 1982) New Engl. J. Med. 307, 1225-1230). Хотя использование человеческих антител позволяет избежать риска возникновения аллергических реакций, однако такое использование не получило широкого распространения из-за этических, материально-технических, и других соображений, включая риск возможного заражения вирусной инфекцией (ВИЧ и гепатит). Поэтому большинство исследователей сконцентрировало свои усилия на продуцирование McAb. McAb имеют много преимуществ, в числе которых являются, например, их гомогенность и относительная простота их окончательной обработки, в основном, с помощью аффинной хроматографии с использованием белка A или белка G для отделения антител от других белков.
Однако никто из исследователей, участвующих в разработке способов лечения септического шока, не получил и не использовал специфические Fab-фрагменты. Кроме того, никто из исследователей не продемонстрировал использование Fab-фрагментов против TNF для лечения людей, страдающих септическим шоком с явно выраженными клиническими симптомами, характерными для этого заболевания.
Краткое описание изобретения
Авторами настоящей заявки было продемонстрировано, что введение Fab-фрагмента, обладающего реактивностью против TNFα, оказывает положительное воздействие на пациентов, страдающих симптомами "септический шок".
Кроме того, авторами настоящей заявки было неожиданно обнаружено, что Fab-фрагменты, происходящие от поликлональных антител, направленных против TNFα, являются более эффективными для снижения действия TNFα, чем интактный иммуноглобулин IgG против TNFα, как подробно описано в примерах.
Таким образом, в одном из своих аспектов, настоящее изобретение относится к способу нейтрализации действия TNFα у пациентов, нуждающихся в такой нейтрализации, который предусматривает введение этому пациенту Fab-фрагмента, являющегося реакционноспособным по отношению к TNFα.
Указанные пациенты обычно страдают от септического шока или от симптомов септического шока. Таким образом, в другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу предупреждения или ослабления септического шока или его симптомов у пациента, предусматривающему введение пациенту IgG-Fab-фрагментов, являющихся реакционноспособными по отношению к TNFα.
Fab-фрагменты могут быть генерированы, в основном, из чистого IgG, реактивного по отношению к TNFα, хорошо известными методами, описанными в примерах.
В следующем своем аспекте, настоящее изобретение относится к IgG-Fab-фрагментам, являющимся реактивными по отношению к TNFα, и предназначенными для использования в медицине.
В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию IgG-Fab-фрагмента, обладающего реактивностью против TNFα, в изготовлении лекарственных средств для лечения пациентов, нуждающихся в нейтрализации действия TNFα в их организме.
Кроме того, предпочтительно, чтоб IgG-Fab-фрагменты происходили от поликлональной антисыворотки. Поликлональная антисыворотка (которая является поликлональным IgG) может быть продуцирована путем иммунизации овец, коз, лошадей, или других млекопитающих. Предпочтительным млекопитающим является овца, и животные, не подверженные заражению вирусом скрепи и зоонозным вирусом. Методы получения Fab-фрагментов, обладающих реактивностью против TNFα, и происходящих от поликлональных овечьих иммуноглобулинов IgG, описаны в примерах.
Fab-фрагменты, обладающие реактивность против TNFα, могут быть использованы для лечения состояний человека, характеризующихся повышенными уровнями TNFα в крови. Такими состояниями являются шок, например, септический шок, а также избыточное присутствие TNFα в кровотоке при опухолевой терапии. Септический шок может возникать в результате бактериальной инфекции, а, в частности, инфекции, вызываемой грам-отрицательными бактериями, а также в результате септицемии. Шок может также вызывать травма в результате несчастного случая или хирургической операции. Кроме того, указанные Fab-фрагменты могут быть использованы при антиопухолевой терапии в сочетании с антителами против лимфоцитов, как показано в WO 89/08460, а также в сочетании с противораковой химиотерапией, как описано в EP 355067.
Известно, что внутривенные вливания козьих или лошадиных поликлональных антител, направленных против лимфоцитов человека, являются очень эффективными при лечении острой реакции отторжения почечного аллотрансплантата. Эти продукты уже применяются на практике. После клинических испытаний Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов, и косметических средств США (FDA) была выдана лицензия (в 1986 г.) фирме Ortho Pharmaceutical Co на практическое использование мышиного моноклонального антитела ОКТЗ для предупреждения отторжения трансплантата после трансплантации почки. Этот продукт показал исключительно высокую эффективность при лечении острых реакций отторжения после трансплантации почек, печени, и сердца, причем ОКТЗ остается пока единственным терапевтическим продуктом на основе моноклонального антитела, на который была выдана лицензия.
ОКТЗ специфически связывается с комплексом CD-3, обнаруживаемом на поверхности всех зрелых T-лимфтоцитов. CD-3, в основном, участвует в распознавании антигена и стимуляции клетки, и помешать этому может пространственное затруднение, обусловленное присутствием мышиных антител.
Гибридома, продуцирующая моноклональное антитело ОКТЗ, может быть получена из Американской коллекции типовых культур (АТСС) 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA, под входящим номером ATCC CP2 8001. Это антитело представляет собой изотип IgG2, и является реактивным по отношению к субпопуляции хелперных T-клеток человека. Указанные гибридома и антитело описаны в патенте США 4381295, который вводится в настоящее описание посредством ссылки. Схема лечения с использованием ОКТЗ описана в Ortho Study Group (1985) J. Engl. J. Med. 313, 337-342, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Однако за неоспоримые положительные результаты, которые дает указанная терапия, направленная против T-лимфоцитов, пациентам приходится "платить" ценою возникновения различных побочных эффектов. Так, например, во время первого вливания поликлонального глобулина против лимфоцитов, и после первой инъекции ОКТЗ, практически у каждого пациента обнаруживаются серьезные нарушения и симптомы. Такими нарушениями по крайней мере у 90% пациентов являются головные боли, тошнота, рвота, понос, общее недомогание, чрезмерная усталость, одышка, миалгия, и тахикардия. У некоторых пациентов развивается острый отек легких. Во втором периоде терапии, побочные эффекты становятся минимальным, а во всех последующих периодах и вовсе отсутствуют.
Эти клинические симптомы аналогичны симптомам, возникающим после вливания TNF или при септическом шоке. Было показано, что вливание глобулина, направленного против лимфоцитов, приводит к заметному увеличению TNF в крови от необнаружимых уровней до уровней порядка 111 - 731 нг/л, при этом заметного повышения уровней интерлейкина -1β(1L-1β) не наблюдается. Указанное увеличение уровней TNF почти сразу сопровождается повышением температуры (от 38,4 до 40,4oC).
Целью настоящего изобретения является уменьшение шокоподобных симптомов, возникающих после введения ОКТЗ или глобулина против лимфоцитов.
В соответствии с этим, в одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения, Ig-Fab-фрагменты, обладающие реактивностью против TNFα, используют для лечения пациентов, которым вводят моноклональное антитело ОКТЗ или функционально эквивалентную поликлональную антисыворотку, например, для ослабления острой реакции отторжения при трансплантации почки. Введение 1gG или Fab-фрагментов, обладающих активностью против TNFα, способствует снижению шокоподобных побочных эффектов, возникающих при введении ОКТЗ или функционально эквивалентных антител.
В течение этого столетия, страны Европы, Африки и Среднего востока были охвачены массивной пандемией эпидемического возвратного тифа (спирохетоза) (LBPF), вызываемого спирохетой Borrelia recurrentis, однако в настоящее время, эти эпидемии ограничиваются лишь горными районами Эфиопии. Во время эпидемий, смертность людей, не получающих лечения, может превышать 40%, тогда, как смертность людей, принимающих противомикробные средства, включая пенициллин, тетрациклин, хлорамфеникол, и эритромицин, снижается до менее чем 5%. Клиническое выздоровление может быть достигнуто лишь с использованием антибиотиков, которые индуцируют сильную, а иногда летальную реакцию Джарича-Херксхейме а (JHP). Внутривенное введение тетрациклина вызывает реакцию, которая начинается примерно в течение 1 часа, после введения антибиотика, и включает в себя три фазы: озноб, жар и снижение температуры, т.е. представляет собой классическую "эндотоксинную" или "шоковую" реакцию (Warrell et al. (1970) Clin. Sci. 39, 123-145). Течение реакции может привести к летальному исходу для пациента, либо в результате гиперпирексии с максимальной температурой тела на начальной стадии фазы повышения температуры, либо в результате шока или острой сердечной недостаточности во время фазы повышения температуры/снижения температуры. Negussie и его коллеги ((1992) J. Exp. Med. 175, 1203-1207) продемонстрировали эксплозивное высвобождение TNFL с последующим высвобождением 1L-6 и 1L-8 в процессе реакции JHP.
В соответствии с этим, в другом варианте осуществления изобретения, Fab-фрагменты IgG, являющиеся реакционноспособными по отношению к TNFL, используют для лечения пациентов с симптомами септического шока, проявляющимися в виде реакции Джарича-Херксхеймера.
Обычно JHP ассоциируется с лечением эпидемического возвратного тифа антибиотиками.
Хорошо известно, что JHP, или аналогичные реакции ассоциируются с лечением антибиотиками различных других заболеваний, вызываемых организмами-паразитами и инвазивными микроорганизмами, включая такие заболевания, как сифилис, эпидемический возвратный тиф, язвенно-пленчатая ангина, лихорадка от укуса крыс, лептоспироз, тропическая фрамбезия, бруцеллез, и африканский трипаносомоз.
При этом, следует отметить, что лечение симптомов, ассоциированных с лечением LBPF антиобиотиками, с применением Fab против TNF, как описано в примерах, может быть также проведено в целях лечения JHP или аналогичных реакций, ассоциированных с лечением антибиотиками вышеупомянутых заболеваний.
Кроме того, следует отметить, что JHP эпидемического возвратного тифа дает этическую модель для клинических испытаний терапевтического воздействия, направленного против TNFα, а также хорошо известно, что при JHP наблюдается повышение уровней TNFα.
В другом аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей IgG-Fab-фрагменты, являющиеся реактивными по отношению к TNFα, и физиологически приемлемый носитель.
В общих чертах, IgG-Fab-фрагменты могут быть использованы всякий раз, когда возникает необходимость в нейтрализации TNFα у пациентов. Водимую дозу определяют в зависимости от веса пациента и тяжести состояния, но, в основном, специфический Fab-фрагмент против TNFα может быть введен взрослым пациентам в количестве 200-2000 мг в течение 2-3 дней.
В основном, если Fab-фрагмент производит от поликлональной антисыворотки и не является аффинно-очищенным, то может быть введено 120 мг/кг суммарного Fab, который содержит 20 мг/кг специфического Fab против TNFα.
Предпочтительно, чтобы Fab-фрагмент был, в основном, чистым и апирогенным. Fab-фрагмент может быть, в основном, очищен с использованием хроматографической техники, такой как катионообменная хроматография, или аффинная хроматография. Предпочтительно, если Fab-фрагмент является аффинно очищенным.
IgG-Fab-фрагменты настоящего изобретения или их композиции могут быть введены любым стандартным системным методом, включая парентеральную (например, внутривенную, подкожную, или внутримышечную) инъекцию. Лечение может предусматривать введение разовой дозы или нескольких разделенных доз в течение определенного периода времени.
Хотя IgG-Fab-фрагмент настоящего изобретения может быть введен отдельно, однако, предпочтительно, чтобы этот фрагмент присутствовал в фармацевтической композиции в сочетании с одним или несколькими приемлемыми носителями. Носитель должен быть "приемлемым" в том смысле, что он должен быть совместимым с Fab-фрагментом, и не оказывать неблагоприятного воздействия на реципиента.
Композиции, содержащие IgG-Fab-фрагменты, могут быть изготовлены в виде унифицированной лекарственной формы с использованием любых методов, которые обычно используются в фармацевтической практике. Такие методы включают в себя стадия смешивания IgG-Fab-фрагмента с носителем, состоящим из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. В основном, указанные композиции получают путем равномерного и тщательного размешивания активного ингредиента с жидкими носителями.
Композиции, предназначенные для патентерального введения, изготавливают в виде водных или безводных стерильных растворов для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты, и растворенные вещества для придания композиции изотоничности с кровью реципиента, и в виде водных и безводных стерильных суспензий, которые могут содержать суспендирующие агенты и загустители. Эти композиции могут быть изготовлены в упаковках, рассчитанных на один прием, или в упаковках для многократного приема, например, в виде герметичных ампул и флаконов, и кроме того, они могут храниться в лиофилизированном состоянии, которое требует лишь добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, перед их непосредственным использованием. Таким образом могут быть приготовлены инъецируемые растворы для немедленного приема. Предпочтительными унифицированными лекарственными композициями являются композиции, содержащие суточную дозу или единицу, дневную субдозу или ее соответствующую фракцию, активного ингредиента.
Ниже приводится описание настоящего изобретения, проиллюстрированное соответствующими примерами и чертежами, где:
На фиг. 1 схематически представлена структура молекулы антитела.
На фиг. 2 показано воздействие антитела против TNFα на давление в легочной артерии и лимфоток у овцы.
На фиг. 3 показано воздействие Fab-фрагментов против TNFα на липополисахарид-индуцированную смертность у мышей.
На фиг. 4 показано влияние конкурентного введения IgG или Fab-фрагментов против TNFα и TNFα на клетки L929.
На фиг. 5 показан эффект введения IgG или Fab-фрагментов против TNFα через два часа после TNFα-обработки.
На фиг. 6. показан эффект введения IgG или Fab-фрагментов против TNFα через 4 часа после TNFα-обработки.
На фиг. 7 показано влияние Fab-фрагмента против TNFα, или физиологического раствора на температуру пациентов, которые имели до начала эксперимента нормальную температуру.
На фиг. 8 показано влияние Fab-фрагмента против TNFα, или физиологического раствора на температуру пациентов, которые имели до начала эксперимента повышенную температуру.
На фиг. 9 показаны максимальные уровни TNFα у пациентов, которым были введены физиологический раствор, контрольный Fab-фрагмент, или Fab-фрагмент против TNFα.
Пример 1. Получение TNFα-иммуногена для иммунизации овец
Процедура
Получение сосудов, содержащих активный TNFα-иммуноген
Сосуды должны быть новыми, не должны содержать пыли, и должны быть обработаны сиалинирующей жидкостью за 48 часов до эксперимента в целях предупреждения адгезии иммуногена к стенкам сосудов. Сиалинирующий раствор необходимо заменять свежим раствором каждые 24 часа.
Сиалинирование осуществляют следующим образом:
a) Сосуды ставят на металлический поднос в вытяжной шкаф
b) Сиалинизирующий раствор приготавливают в соответствии с инструкциями производителей. Затем раствор разводят до получения 0,1%-ного раствора. При этом 0,2%-ный раствор получают при использовании 99 частей воды на 1 часть AQUASIL (Торговая марка). Раствор постоянно размешивают. Сосуды должны быть наполнены раствором до краев. После этого проводят осушку воздухом по крайней мере в течение 24 часов.
После хранения при 4oC, TNFα удаляют, а раствор оставляют для уравновешивания при комнатной температуре в течение по крайней мере 30 минут.
Полное количество TNFα для разовой ежемесячной иммунизации все группы овец отвешивают в стерильной 150-миллиметровой колбе Sterilin (торговая марка) с использованием весов. Необходимые расчеты проводят как описано ниже в главе "Вычисления, необходимые для получения иммуногена". В этих расчетах, количество иммуногена обозначается E. Любой избыток полученного иммуногена может быть сохранен, а затем использован в последующих экспериментах.
Затем иммуноген растворяют в 0,9%-ном физиологическом растворе. После этого раствор размешивают при непрерывном вращении в течение по крайней мере 30 минут. Количество используемого физиологического раствора обозначали F (см. ниже).
Аликвоты полученного раствора иммуногена распределяли по сосудам с использованием стерильных пипеток и устройства Pipetteman (торговая марка).
Вычисления, проводимые при получении иммуногена
Каждый сосуд должен содержать количество иммуногена, достаточное для иммунизации 3 овец. Затем это полное количество иммуногена (A) делят на три и округляют до следующего значения целого числа.
A/3 = B, например, 49/3 = 16,33, а после округления 17
Следовательно, количество отвешиваемого TNFα составляет 3B, умноженное на количество иммуногена, требуемое для одной овцы (C).
(3•B)C = D, например, если иммунизирующая доза для одной овцы составляет 80 мкг, то (3•17)80 = 4080 мкг = 4,08 мг
Причем при взвешивании иммуногена необходимо учитывать содержание соли, которое может варьироваться от партии к партии.
(D/3 TNFα в используемом материале)100 = E
например, если используемый материал содержит 95% соли и соответственно 5% TNFα, то (4,08/5)100 = 81,6 мг
Затем отвешенный иммуноген растворяют в соответствующем количестве 0,9%-ного физиологического раствора, которое вычисляют путем умножения количества используемых сосудов на 4. Каждый сосуд должен содержать 4 мл физиологического раствора.
B•4 = F, например, 17•4 = 68 мл
Пример 2. Схема иммунизации, взятия образцов и крови для получения овец, иммунизированных против TNFα
В нижеприведенной Таблице I дана схема введения (в течение года, каждые две недели) иммунизирующей дозы, взятия крови, и обработки отдельных образцов или всех образцов для получения овец, иммунизированных против TNFα.
Образцы брали от каждого животного до первичной иммунизации.
Этот уровень определял фоновый уровень для каждой овцы.
При этом были использованы следующие обозначения:
1: первичная иммунизация
R#: номер повторной иммунизации, проводимой после первичной иммунизации
Образец: 5-10 мл пробы крови, взятой от каждого животного для определения титра
Кровь: 10 мл взятой крови на 1 кг веса тела
IS: Отдельный образец для оценки продуктивности отдельного животного
P: Сбор крови от всех животных
Пример 3. Получение Fab-фрагментов против TNFα из частично очищенных IgG
Овец иммунизировали в соответствии с вышеприведенной схемой иммунизации определенными количествами TNFα, выбранными исходя из проведенных исследований реакции "доза-ответ", как описано в примерах 1 и 2. После получения адекватных уровней специфических антител в крови (по крайней мере 3 г/л), у овец, в условиях стерильности, брали кровь, которую собирали в стерильные и апирогенные стеклянные флаконы, свертывание крови ускоряли путем использования роллер-флаконов; эти флаконы центрифугировали, после чего путем аспирации в ламинарном боксе собирали сыворотку, эту сыворотку подвергали 0,2 мкм-фильтрации и оставляли на хранение при -20oC. Для предупреждения бактериального и пирогенного загрязнения, продукт был подвергнут тщательному анализу.
От различных животных собирали антисыворотки, и их иммуноглобулины осаждали при 25oC сульфатом натрия в целях их отделения от многих других сывороточных белков, включая альбумин. Иммуноглобулины, которые представляют, в основном, антитела класса IgG, промывали стерильным сульфатом натрия, и ресуспендировали в физиологическом растворе.
Гидролиз папаином: Следующая стадия представляет собой расщепление антител на Fab и Fc-фрагменты с использованием папаина, активированного цистеином и EDTA. Эту стадию осуществляют в условиях, обеспечивающих полную деградацию интактного IgG. Кристаллизующийся фрагмент Fc удаляли путем центрифугирования. Супернатант после гидролиза папаином и центрифугирования содержит: (1) специфический Fab-фрагмент, направленный против нужного растворимого антигена, (2) неспецифический Fab-фрагмент, направленный против различных других эпитопов, и не представляющий интереса для рассматриваемой терапии, (3) небольшие количества белка (включая альбумин) и другие примеси, и (4) неактивированный папаин.
Аффинная хроматография
Аффинная очистка. Аффинную очистку Fab-фрагмента, направленного против фактора некроза опухоли человека (TNF), осуществляли с использованием среды, содержащей сшитую агарозу (Sepharose), с которой был связан rTNFα (рекомбинантный человеческий TNFα). Для связывания rTNFα со средой использовали изомочевинную связь.
Изготовление матриц для аффинной хроматографии на колонке с агарозой rTNFα
Материалы
Сефароза 4B, активированная бромцианом (Pharmacia, Uppsala Швеция)
rTNFα (R/D Systems Minneapoplis, USA)
Корпус для афинных колонок BPG (Pharmacia)
Большая воронка из спеченного стекла
Колба Бюхнера
Вакуумный насос
Стеклянный стержень
Колба Налгена (Nalgen)
Буферы и растворы:
Все буферы должны быть стерильными и апирогенными (см. SOP 0,2, получение стерильных апирогенных буферов для терапевтического применения).
Соляная кислота (1 мМ, 200 мг/г, охлажденная льдом)
Бикарбонат натрия (0,1 М, pH 8,3), содержащий хлорид натрия (0,5 М)
Этаноламин (1,0 М, pH 8,0)
Ацетат натрия (0,1 М, pH 4,0), содержащий хлорид натрия (0,5 М)
Процедура: При подготовке колонок, предназначеных для терапевтических целей, все процедуры должны проводиться в ламинарном потоке в условиях класса 100, а все оборудование должно быть стерильным и апирогенным.
Набухание и промывка геля: необходимое количесвто лиофилизированного порошка Сефарозы отвешивали в пластиковый флакон Налгена, и суспендировали в HCl (охлажденном льдом). Затем набухший сразу после этого гель промывали в течение 15 минут на фильтре из спеченного стекла тем же самым раствором (200 мл/г геля). Раствор добавляли в нескольких аликвотах, и после добавления последней аликвоты, гель осушали до тех пор, пока на его поверхности не появлялись трещины.
Связывание лиганда: TNF лиганд (5 мг/г используемого геля) растворяли в натрийбикарбонатном буфере (0,1 М, pH 8,3, 7 мг/г используемого геля) в пластиковых флаконах Налгена. После растворения брали аликвоты (0,25% от полного количества), и добавляли осушенный воздухом гель, при этом необходимо следить за тем, чтобы лигандный раствор не выплескивался из флакона. Затем полученную смесь подвергали непрерывному вращению в течение ночи при 4oC.
Блокирование активных групп на геле: после процедуры связывания, проводимой в течение ночи, гель переносили обратно на воронку из спеченного стекла, лигандный раствор отсасывали и собирали. Затем гель промывали 200 миллилитрами этаноламина. Все промывки собирали.
После этого гель переносили во флаконы Налгена, содержащего этаноламин (1,0 М, pH 8,0), и смесь вращали в течение ночи, как описано выше.
Промывка геля: блокированный гель переносили на воронку из спеченного стекла, после чего этаноломиновый раствор отсасывали и собирали. Затем гель промывали буфером для связывания (бикарбонатом), после этого ацетатным буфером, а затем снова буфером для связывания. Все промывки собирали.
Затем гель может быть перенесен и упакован внутри колонки, после чего он моет быть тщательно промыт физиологическим раствором (0,9%).
Эффективность связывания определяли путем измерения количества белка в промывках с последующим сравнением этого количества с аликвотой исходного лигандного раствора.
После получения каждой партии материала и до первого добавления раствора полного Fab-гидролизата, колонки подвергали санитарной обработке.
Fab-раствор вращали со скоростью потока 1 мл/мин в течение по крайней мере двух часов при 18oC.
Затем проводили десорбцию Fab против rTNFα-токсина от носителя.
Fab-фрагмент против овечьего rTNFα, связанный с носителем, удаляли путем промывания колонки глицином (10 мМ, pH 2,5). Элюент собирали в цитратный буфер (0,6 М, pH 8,0: 2,5%-ная конечная концентрация), и оставляли на хранение в 2-литровых сборниках Налгена для одноразового использования. Затем брали образцы для QC-испытаний (GF-FPLC, pH, концентрация белка, стерильность, и LAL-тест) (QC - тест на качество, GF-гель-фильтрация, LAL-тест = лимулюс-тест: проба с лизатом амебоцитов -Прим. пер.)
Аффинные колонки уравновешивали с использованием фосфатного буфера (10 мМ, pH 7,3) до тех пор, пока pH элюента не становился равным приблизительно pH 5,5. Затем колонку уравновешивали физиологическим раствором (0,9%) для подготовки следующего цикла.
Дополнительно или альтернативно может быть также использована катионообменная хроматография.
Катионообменная хроматография
Полный Fab-раствор (в аммонийацетатном буфере) наносили на катионообменную колонку (BioRad MacroPrepS, в настоящий момент, хотя, в будущем, она может быть заменена на колонку с более слабым связыванием), где связывается большая часть (> 80%) Fab. Затем эту колонку, а следовательно, и связанные Fab промывали буфером (аммонийацетатным, pH 4,0) в объеме, составляющим три объема колонки, в целях санации продукта и удаления возможного загрязнения прионом или вирусами.
После этой промывки, связанные полные Fab, элюировали путем промывания колонки буфером, содержащим хлорид натрия (0,5 М). Затем элюированные Fab подвергали ультрафильтрации, и промывали физиологическим раствором для удаления аммонийацетатного буфера, после чего, если это требовалось, концентрировали, и подавали насосом в стерильный полиэтиленовый мешок для переноса образцов. Этот мешок был непосредственно прикреплен к разливочной машине. Затем продукт окончательно фильтровали, разливали, окончательно расфасовывали, и лиофилизовали.
Ионообменную колонку подвергали санитарной обработке между циклами с использованием гидроксида натрия (1,0 М), а затем снова уравновешивали аммонийацетатным буфером, после чего колонка была готова для проведения следующего цикла.
Пример 4. Биологическое действие IgG против овечьих TNFα
Результаты исследований, проведенных с использованием интактных и очищенных не аффинным способом антител, а также овечьей модели септического шока, показаны на фиг. 2. Эти антитела частично предупреждают повышение давления в легочной артерии и повышение лимфотока в легких, которое наблюдается в контрольной группе, не обработанной иммуноглобулинами IgG против TNFα
Пример 5. Биологическое действие Fab-фрагментов против овечьих TNFα у мышей
Результаты исследований, проведенных с использованием специфических Fab-фрагментов против овечьих TNFα инъецированных мышам с летальной дозой эндотоксина, показаны на фиг. 3. 90% мышей, которым вводили эндотоксин, погибали на 4-й день. При введении мышам специфических Fab-фрагментов в концентрации 2 мг/кг и 20 мг/кг, этот процент снижался до 80% и 30%, соответственно.
Пример 6. Сравнение защитного действия анти TNFα-IgG и анти TNFα-Fab-фрагментов, направленного против цитотоксичного действия TNF
Авторами настоящей заявки было проведено исследование защитного действия анти- TNFα-IgG и анти-TNFα Fab-фрагментов, направленного против цитотоксичности TNFα , на клетках L929. При культивировании указанных выделенных клеток in vitro, добавление 10 нг/мл TNFα к культуральной среде приводило к лизису клеток (о чем свидетельствовало снижение оптической плотности, как показано на фиг. 4). Одновременное добавление 100 мкг/мл IgG или Fab оказывало значительное защитное действие на клетки путем связывания антител с TNF и его нейтрализации, при этом защитное действие IgG лишь незначительно превышало защитное действие Fab.
На фиг. 5, а особенно на фиг. 6 показаны совершенно неожиданные результаты. При добавлении антител через 2 или 4 часа после добавления TNF, защитное действие Fab-фрагментов значительно превышало защитное действие интактного IgG. Таким образом, совершенно очевидно, что усиление защитного действия обусловлено задержкой в добавлении специфических Fab-фрагментов.
На основании этих данных можно сделать вывод, что Fab-фрагменты могут быть также использованы in vivo (т.е., введены пациенту) через 2 или 4 часа после увеличения уровней TNF во время септического шока.
Пример 7. Клинические испытания использования анти TNFα-Fab-фрагментов для предупреждения или ослабления реакции Джарича-Херксхеймера (JHP) после противомикробного лечения эпидемического возвратного тифа
После пандемии, охватившей страны Африки, Среднего востока и Европы в начале века, Эфиопия остается единственным регионом, где до сих пор имеют место вспышки эпидемий эпидемического возвратного тифа (LBRF). При некоторых эпидемиях, смертность людей, не получавших лечения, превышала 50%, однако, хотя противомикробное лечение является эффективным против спирохетоза, вызываемого Borrelia recurrentis и способствует предупреждению рецидивов заболевания, оно, тем не менее, ассоциируется с опасной для жизни реакцией Джарича-Херксхеймера (JHP), которая по своему проявлению напоминает классическую эндотоксиновую лихорадку. JHP связана с эксплозивным выбросом фактора некроза опухоли (TNF), 1L-6 и 1L-8. Было проведено испытание рандомизированным двойным слепым методом нового овечьего поликлонального Fab-антитела против TNF, которое было осуществлено в Аддис-Абебе с участием 49 пациентов, страдающих LBRF. За 30 минут до введения пенициллина, пациентам делали внутривенные вливания либо специфического анти-TNF-Fab (20 пациентам), либо контрольных Fab (19 пациентам), либо изотонического физиологического раствора (10 пациентам). JHP-реакции (которые клинически проявлялись в виде озноба) наблюдались у 10/20 пациентов, которым вводили специфические Fab, по сравнению с 26/29 пациентами группы контроля (p < 0,01). По сравнению с контрольными группами, у группы, получившей анти-TNF-Fаb, максимальное повышение температуры, частоты пульса, и систолического кровяного давления во время JHP был значительно более низкими (p < 0,01, < 0,0001, < 0,01, соответственно).
Были проведены эксперименты, в которых участвовали пациенты, находящиеся в клинике Black Lion Hospital или в близлежащих клиниках, в том случае, если в их мазках крови обнаружили спирохету Borrelia
Критерии исключения из эксперимента
1. Дети моложе 12 лет
2. Беременные женщины
3. Пожилые люди (в возрасте более 60 лет) или сильно ослабленные с тяжелыми клиническими симптомами других острых заболеваний, например, таких как гипотензия, заметная желтуха, сильное истощение, и другие признаки недостаточного питания, склонность к сильному кровотечению, наличие сыпи при тифе, признаки активного туберкулеза легких, или легочной консолидации, состояние комы, менингит, сердечные респираторные заболевания или кома и "порхающий" тремор, эпилептические приступы, зафиксированные в истории болезни, и очаговые неврологические симптомы.
4. Пациенты с продолжительным сильным ознобом, гипотензией, или гипертермией, и другими симптомами спонтанной реакции ("кризис").
5. Пациенты, принимающие другие антибиотики.
К исследованиям и лечению допускались только те пациенты, которые давали свое информированное согласие на данные исследования и лечение.
Исходная информация
История болезни, включая продолжительность и спектр симптомов, а также предварительное обследование физического состояния организма были зарегистрированы в соответствии со стандартной pro forma.
Исследования
Пациенту в переднюю локтевую вену вводили политетрафтороэтиленовую канюлю, снабженную трехходовым вентилем, и пациента выдерживали на гепаринизированном физиологическом растворе. Брали пробы крови для анализа на микрогематоциты, на полное число лейкоцитов (WBC), число спирохет, уровни билирубина, ферментов печени, креатинин, или мочевины. Гемокультуру исследовали для обнаружения ассоциированных бактериальных инфекций (особенно тифозных).
Как минимум 30 пациентов и как максимум 50 пациентов было произвольно отобрано для введения им внутривенно либо Fab-фрагментов овечьего поликлонального иммуноглобулина против TNF (ATNF-Fab), или идентичного на вид плацебо (контрольные Fab). 10 пациентов получали лишь изотонический физиологический раствор.
Рано утром в день исследований, пациенты комфортно лежали в постели. Температуру измеряли с помощью электронного ректального термометра. Регистрировали также давление крови, частоту пульса и частоту дыхания.
Обработка
Пациентам, чьи первоначальные ректальные температуры не изменялись более чем на 0,5oC в течение 30 минут, вводили путем медленного (в течение 30 минут) внутривенного вливания 100 мл ATNF-Fab или контрольных Fab (содержимое сосудов, а именно 4 • 1,5 г лиофилизованного суммарных Fab, растворенных в 10 мл воды для инъекций, и разведенных до 100 мл изотоническим физиологическим раствором) или 100 мл изотонического физиологического раствора. Эта доза суммарных Fab-фрагментов иммуноглобулина соответствует дозе приблизительно 120 мг/кг, которая содержит около 20 мг специфических анти-TNF Fab.
После завершения 30-минутного вливания, пациентам вводили внутримышечно (в переднюю мышцу бедра, разделенного на два участка, если это необходимо) стандартное противомикробное средство, а именно 600 000 ед. прокаинпенициллина.
Oценка
Ректальные температуры, кровяное давление, частота пульса, частота дыхания и симптомы регистрировали в следующие интервалы времени (O = введение пенициллина): -60, -45, -30, 0, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 150, 180 мин; 4,8 и 24 ч. Венозную кровь для подсчета числа спирохет, числа WBC (лейкоцитов), и числа цитокинов ( TNFα , 1L - 1β ; 1L - 8 и 1L - 6) брали в следующие интервалы времени: -30, 0, 60, 90 мин; 2, 4, 8 и 24 час.
На протяжении всего эксперимента, пациентам разрешали пить.
Сильная реакция JHP ожидалась через 60-90 минут после введения пенициллина.
Материалы и методы
TNF-специфические овечьи полные Fab-фрагменты, используемые в клинических испытаниях, получали в соответствии со следующими процедурами:
Иммуноген
Антитоксин к TNFα представлял собой Fab-фрагмент, продуцированный путем иммунизации овцы рекомбинантным чел. TNF (hr TNFα),Hr TNFα, продуцировали в E. coli путем экспрессии синтетического гена, сконструированного на основе известной кДНК, кодирующей чел. TNF (коммерчески доступный продукт, поставляемый Britich Biotechnology). Рекомбинантный белок, который имел молекулярную массу приблизительно 17,5 кДа, очищали до чистоты более чем 97%. Каждый пул иммуногена анализировали на чистоту, молекулярную массу, и цитотоксическую активность, а затем инъецировали овцам. Последний тест проводили путем анализа с использованием клеток L929 мышиной соединительной ткани.
(i) Иммунизация
Группу из 10 овец иммунизировали путем подкожной инъекции на 6 участках. Иммунизацию проводили с убывающими дозами hr TNFα, смешанного либо с полным, либо с неполным адъювантом Фрейнда, с последующими процедурами, осуществляемыми в соответствии со схемой иммунизации, описанной в примерах 1 и 2. Овец иммунизировали с интервалами времени в один месяц.
(ii) Взятие образцов и проб крови
Через две недели после каждой иммунизации, у овец либо брали образцы для анализа (5 мл), либо брали пробы крови (500-700 мл) из яремной вены. Пробы крови переносили в стерильные апирогенные сосуды, оставляли для свертывания (в случае 5 - мл образца), или слегка вращали для стимуляции и более быстрого свертывания (в случае проб крови). Сгусток крови центрифугировали, а сыворотку (в виде супернатанта) отсасывали через стерилизующие (0,22 мкм) фильтры в гамма-облученные полиэтиленовые пакеты.
(iii) Оценка образцов/проб крови
Через 6 и 22 недели после первичной иммунизации, для каждой овцы из группы оценивали титр антител с использованием простого твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
TNFα связывали при высоком pH (9,6) с 96-луночным планшетом для твердофазного иммуноферментного анализа, и инкубировали с возрастающими разведениями сыворотки. hr TNFα-специфические антитела в сыворотке связывались с планшетом, а несвязанные антитела затем удаляли путем промывания. Затем добавляли "второе" антитело, продуцированное в ослах и направленное против овечьих иммуноглобулинов, которое было конъюгировано с ферментом (пероксидазой хрена, HRP). В присутствии подходящего субстрата, HRP катализирует хромогенную реакцию, продукт которой является пропорциональным концентрации антитела в овечьей сыворотке. Затем образцы крови с титром более чем 1/30 000, объединяли с получением сывороточного пула от 10 овец. Овцы, которые не давали такого титра, были удалены из эксперимента.
Отдельных овец не подвергали оценке после взятия образцов через 22 недели.
(iv) Оценка сывороточного пула
Тесты на стерильность и содержание эндотоксинов осуществляли для каждого сывороточного пула, который, для использования его в изготовлении лекарственного средства, должен быть стерильным и содержать менее чем 1,25 э.ед/мл (э.ед. - эндотоксиновая единица - прим. пер.).
Сбор пулов, и все последующие стадии осуществляли в чистом помещении в условиях класса 100.
Каждый месяц пулы оценивали на титры с помощью ELISA, а также на концентрацию специфических антител с использованием мелкомасштабной аффинной очистки. Этот метод предусматривает пропускание иммунной сыворотки через аффинную колонку с небольшим количеством (1 г) hr TNFL-Сефарозы при селективной концентрации hr TNFL-специфических IgG. Эти IgG могут быть затем элюированы, и определена их концентрация.
Для использования в изготовлении лекарственного средства, пулы должны содержать по крайней мере 2 г/л специфического антитела.
(vi) Очистка иммуноглобулинов
Сывороточные фракции иммуноглобулина отделяли от других сывороточных белков, не представляющих терапевтической ценности, путем осаждения солью.
Короче говоря, сульфат натрия (сорт USP 36%, 25oC апирогенный и стерильный) в течение 15 минут при температуре 25oC смешивали с объединенной сывороткой. Преципитат, полученный в результате этой процедуры, осаждали путем центрифугирования, а супернатант отсасывали. Затем осадок два раза промывали стерильным отфильтрованным раствором сульфата натрия (18%), концентрируя осадок после каждой промывки путем центрифугирования. Конечный осадок ресуспендировали в стерильном изотоническом (0,9%) солевом растворе, а затем фильтровали через стерильный фильтр (0,2 мкм).
Анализ на стерильность и отсутствие эндотоксинов, а также титров проводили на данной стадии с использованием:
(I) теста на стерильность, USP (отсутствие 7-дневного роста)
(II) LAL-тест на эндотоксины
(III) Жидкостной экспресс-хроматографии белков методом гель-фильтрации (GF) (GF-FPLC)
(IV) Сравнения с необработанной сывороткой методом ELISA.
Образцы, имеющие чистоту на 85% и титр на 85% больше, чем необработанная сыворотка, были использованы для продуцирования Fab. Концентрация иммуноглобулина на этой стадии составляла приблизительно 25 г/л, как показало измерение оптической плотности при 280 нм (с использованием коэффициента экстинкции 15,1% 280 нм для IgG).
(V) Ферментный гидролиз
Fab-фрагменты иммуноглобулина получали путем инкубирования очищенного иммуноглобулина с растительным ферментом папаином, который сам по себе связывается с твердофазным носителем, что позволяет, после гидролиза, удалить фермент из гидролизной смеси.
К IgG-препарату в присутствии восстановителя цистеина и EDTA (для сохранения ферментной активности) добавляли ферментную матрицу, и смесь оставляли на 24 часа при 37oC для прохождения реакции гидролиза. По истечении этого времени, реакцию завершали путем центрифугирования смеси, в результате чего достигали две цели, а именно, удаляли из раствора иммобилизованный фермент, и избегали необходимости добавлять большие количества йодоацетамидного блокирующего агента. Затем раствор подвергали ультрафильтрации через 10 кДа-полисульфоновой ультрафильтр (содержащий предварительный фильтр из 0,45 мкм-стекловолокна), и промывали 10 объемами физиологического раствора (0,9%, стерильного и апирогенного) для удаления всех следовых количеств цистеина, EDTA, и любых Fc-фрагментов. Процедуры промывки обеспечивали уровни солевых примесей менее чем 2 млн.д.
И наконец, стерильные апирогенные Fab-фрагменты фильтровали через стерилизующий 0,22 мкм-фильтр. На этой стадии брали образцы для оценки качества, а затем снова пропускали на GF-FPLC для контроля за эффективностью гидролиза, и после этого проводили также мелкомасштабную аффинную очистку для того, чтобы убедиться, что во время стадии гидролиза hr TNFα-связывающая активность сохранилась на прежнем уровне. На этой стадии также осуществляли тест на стерильность и LAL-тест, и кроме того, проводили спектрофотометрическое определение концентрации. Концентрация Fab на этой стадии составляла приблизительно 60 г/л.
В результате проведенных процедур, стерильные апирогенные (< 10 э.ед. /мл) образцы, которые указывали на полный гидролиз с образованием Fab (т.е. отсутствие интактного IgG), и которые по крайней мере на 85% по сравнению с исходной сывороткой сохраняли свою связующую способность, были готовы для заполнения флаконов.
(vi) Заполнение флаконов
30-миллилитровые флаконы из нейтрального боросиликатного стекла наполняли 6,0 граммами Fab-раствора, и закрывали пробками из бутилкаучука. Затем сосуды замораживали при -70oC в течение по крайней мере 30 минут, и переносили в стерильную сублимационную сушилку. В этой сушилке, сосуды выдерживали по крайней мере 48 часов, а затем герметично запаивали под вакуумом.
Для инъекций, содержимое флаконов разводили водой (10 мл). На осушенных Fab проводили следующие тесты:
(a) тест на полную USP-стерильность, LAL-тест, и тест на пирогенный кроличий эндотоксин.
(b) тест на концентрацию белка в восстановленном содержимом флакона с использованием метода Кьельдаля для определения азота.
(c) тест на остаточную влагу,
(d) тест на чистоту с использованием FPLC путем гель-фильтрации,
(e) тест на определение hr TNFα-нейтрализующей способности посредством анализа на цитотоксичность с использованием клеток L929.
QC-тест (тест на качество)
Осуществляли следующие тесты:
In vitro
Тест для оценки чистоты с помощью жидкостной экспресс-хроматографии (FPLC).
Тест на стерильность.
Лимулюс-тест (проба с лизатом амебоцитов) (LAL) на пироген.
In vivo
Испытание кроликов на пироген
Испытания на острую токсичность, проводимые на мышах и морских свинках.
Все партии были рандомизированы для использования в испытаниях двойным слепым методом.
Подсчет лейкоцитов
Общее количество WBC подсчитывали с использованием гемоцитомера для подсчета клеток крови
Спирохеты
Мазки крови окрашивали по методу Райта, и исследовали с использованием оптического микроскопа.
Цитокины
TNFα,1L-1β, 1L - 8 и 1L - 6 определяли с помощью иммуноанализа.
Наборы для иммунорадиометрического анализа в целях подсчета цитокинов закупали у фирмы Medgenix Diagnostics SA, B -6220
Результаты:
1. Тяжелая клиническая реакция наблюдалась после введения пациенту физиологического раствора в качестве контроля. После того, как количество спирохет упало сразу после введения пенициллина (время = 0), дыхание пациента участилось, а температура повышалась, достигая иногда около 107oF. На этой фазе пациент становился особенно уязвимым и может умереть от очень высокой температуры.
2. В эксперименте участвовали два пациента, которые имели нормальную температуру до начала эксперимента. Затем, у пациента, получившего физиологический раствор, наблюдалось повышение температуры, тогда, как у пациента, получившего анти-TNFα-Fab, температура оставалась постоянной (фиг. 7).
3. В эксперименте участвовали также два пациента, которые имели высокие температуры к началу эксперимента. У пациента, получившего физиологический раствор, наблюдалось повышение температуры, тогда, как у пациента, получившего анти-TNFα-Fab-температура вообще не повышалась и резко снижалась до нормальной (фиг. 8).
4. Исследование 59. Уровень цитокинов (1L-6, TNFα, 1L-8 и 1L-1β ) у пациентов, получивших физиологический раствор, не изменялся в интервалы времени между - 30 час. и 0 (0 = введение пенициллина). У большинства пациентов, уровни цитокинов достигали максимума через 4 часа.
Исследование 027. Уровни цитокинов у пациентов, получивших конт. Fab, не показали изменения в интервалы времени между - 30 и 0 (0 = введение пенициллина). Максимальный уровень наблюдался через 4 часа.
Исследование 004. Уровни цитокинов у пациентов, получивших анти-TNFα-Fab, резко снижались, по сравнению с контролем, в интервалы времени между - 30 час. и O (0 = введение пенициллина). Уровень других цитокинов оставался на приемлемом уровне, либо показывал значительно более низкий пик.
На фиг. 9 показаны средние максимальные уровни TNFα для пациентов, которым были введены анти-TNFα-Fab или контрольные Fab, и для пациентов, которым был введен физиологический раствор. Кроме того, в Таблице 2 показаны эквивалентные данные для 1L - 8 и 1L - 6.
В Таблице 3 показаны приступы реакции Джарича-Херксхеймера у пациентов, которым были введены контроль в виде физиологического раствора, либо Fab-контроль, либо анти-TNFα-Fab. После введения анти-TNFα-Fab не наблюдалось умеренных (2+) и сильных (3+) реакций. Клинические проявления JHR в виде озноба наблюдались у 10/20 пациентов, получавших анти-TNF-Fab по сравнению с 26/29 пациентами, которые получали контроль (p < 0,01) У анти-TNF-группы наблюдались значительно более низкие уровни повышения температуры, частоты пульса, и систолического кровяного давления во время JHR, чем у пациентов контрольной группы (p < 0,01, p < 0,0001, и p < 0,01, соответственно).
Пример 8: Введение пациентам, получившим ОКТЗ-лечение, анти-TNFα-Fab-фрагментов
ОКТЗ продуцировали из посевного материала родительский гибридомы (ATCC CP 8001 (Американская коллекция типовых культур, 12301, Parklawn Drive, Rockvilles, MD 20852-1776, США). Иммуноглобулин очищали из асцита, и приготавливали препараты. Схема лечения с использованием ОКТЗ описана в Ortho Study Group (1985) N. Engl. J. Med. 313, 337 - 342.
Схема лечения с использованием ОКТЗ заключалась в следующем: пациенту, страдающему от реакции отторжения трупного трансплантата почки, инъецировали 5 мг ОКТЗ в течение 2 - 4 мин (i. v.) и эти инъекции повторяли ежедневно в течение 10 или 14 дней (всего вводили 50 или 70 мг мышиного моноклонального антитела). (Поликлональная антисыворотка против T-лимфоцитов (которая не является аффинно-очищенной) может быть также введена путем внутривенного вливания, но в гораздо более высокой дозе (100 - 300 мг) и в течение более длительного периода (а именно, около 6 час.). Такие вливания также должны проводиться ежедневно в течение 10-15 дней).
Во время первой инъекции ОКТЗ, практически каждый пациент страдал от тяжелых признаков и симптомов, включая повышение температуры (по крайней мере у 90% пациентов), головные боли, тошноту и рвоту.
Fab-фрагменты получали как описано в примерах 3 или 7. Эндогенные уровни TNF составляли 1 мкг/л или менее, и ограничивались областью внеклеточной жидкости (около 15 л). Для ослабления действия возрастающих уровней TNF и шоковых симптомов, индуцированных ОКТЗ, дозу 5 мг или 10 мг анти-TNFα-Fab-фрагментов вводили в то же самое время, что и первую дозу ОКТЗ. Перед введением ОКТЗ и анти-TNFα-Fab-фрагментов, пациентам вводили иммунодепрессанты, а именно, суточные дозы 1,0 мг/кг преднизолона и 142 мг/кг азатиоприна. После начала введения ОКТЗ и анти-TNFα-Fab-фрагментов, пациентам вводили суточные дозы 0,6 мг/кг преднизолона и 30 мг/кг азатиоприна.

Claims (8)

1. Способ нейтрализации TNFα у пациента, нуждающегося в такой нейтрализации, отличающийся тем, что указанному пациенту вводят IgG - Fab-фрагмент, обладающий реактивностью по отношению к TNFα, а указанный Fab-фрагмент происходит от поликлонального IgG.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный пациент страдает септическим шоком или имеет симптомы септического шока.
3. Способ предупреждения или частичного ослабления септического шока или симптомов септического шока у пациента, отличающийся тем, что указанному пациенту вводят IgG - Fab-фрагмент, обладающий реактивностью по отношению к TNFα, а указанный фрагмент происходит от поликлонального IgG.
4. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что симптомы септического шока вызваны введением моноклонального антитела ОКТЗ или функционального эквивалентного антитела.
5. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что симптомы септического шока вызваны реакцией Джарича-Херксхеймера.
6. IgG - Fab-фрагмент, являющийся реактивным по отношению к TNFα и предназначенный для использования его в медицине, происходит от поликлонального IgG.
7. IgG - Fab-фрагмент по п.6, отличающийся тем, что его применяют в изготовлении лекарственного средства для лечения пациентов, нуждающихся в нейтрализации TNFα.
8. IgG - Fab-фрагмент по п.7, отличающийся тем, что указанный пациент страдает септическим шоком или имеет симптомы септического шока.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая IgG - Fab-фрагмент, облладающий реактивностью по отношению к TNFα, и физиологически приемлемый носитель, где указанный Fab-фрагмент происходит от поликлонального IgG.
Приоритет по пунктам:
03.06.93 - по пп.1 - 3, 6 - 9;
10.02.94 - по пп.4 и 5.
RU96101193A 1993-06-03 1994-06-03 Фрагменты антител в терапии RU2139092C1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB939311507A GB9311507D0 (en) 1993-06-03 1993-06-03 Antibody fragments
GB9311507.9 1993-06-03
GB9402593.9 1994-02-10
GB9402593A GB9402593D0 (en) 1994-02-10 1994-02-10 Antibody fragments
PCT/GB1994/001209 WO1994029347A1 (en) 1993-06-03 1994-06-03 Antibody fragments in therapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU96101193A RU96101193A (ru) 1998-05-10
RU2139092C1 true RU2139092C1 (ru) 1999-10-10

Family

ID=26303001

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU96101193A RU2139092C1 (ru) 1993-06-03 1994-06-03 Фрагменты антител в терапии

Country Status (16)

Country Link
US (2) US5733742A (ru)
EP (3) EP0703925B1 (ru)
JP (1) JP2953782B2 (ru)
AT (2) ATE183513T1 (ru)
AU (2) AU678483B2 (ru)
CA (1) CA2163032C (ru)
DE (2) DE69420137T2 (ru)
DK (2) DK0701571T3 (ru)
ES (2) ES2108460T3 (ru)
FI (1) FI955798L (ru)
GB (1) GB2294267B (ru)
GR (2) GR3025133T3 (ru)
NO (1) NO954643L (ru)
NZ (1) NZ266838A (ru)
RU (1) RU2139092C1 (ru)
WO (2) WO1994029347A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2303604C2 (ru) * 2000-06-06 2007-07-27 Селлтек Р Энд Д Лимитед Молекулы антител, обладающие специфичностью в отношении фактора некроза альфа опухоли человека, и их применение
RU2377253C2 (ru) * 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение

Families Citing this family (208)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE183513T1 (de) 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten
GB9501683D0 (en) 1995-01-27 1995-03-15 Glaxo Group Ltd Substances and their uses
US5646036A (en) * 1995-06-02 1997-07-08 Genentech, Inc. Nucleic acids encoding hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies
US5686292A (en) 1995-06-02 1997-11-11 Genentech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies and uses thereof
US6214344B1 (en) 1995-06-02 2001-04-10 Genetech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonists and uses thereof
GB9517538D0 (en) * 1995-08-26 1995-10-25 Therapeutic Antibodies Inc Production and therapeutic combinations, of antibodies
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US6998116B1 (en) 1996-01-09 2006-02-14 Genentech, Inc. Apo-2 ligand
US6030945A (en) * 1996-01-09 2000-02-29 Genentech, Inc. Apo-2 ligand
MX336813B (es) 1996-02-09 2016-02-02 Abbvie Biotechnology Ltd Anticuerpos humanos que ligan el tnfa humano.
CA2249206A1 (en) 1996-04-01 1997-10-09 Genentech, Inc. Apo-2li and apo-3 apoptosis polypeptides
JP2000515735A (ja) * 1996-07-03 2000-11-28 ジェネンテック インコーポレーテッド 肝細胞成長因子レセプターアゴニスト
US6462176B1 (en) 1996-09-23 2002-10-08 Genentech, Inc. Apo-3 polypeptide
US6136958A (en) * 1996-09-30 2000-10-24 Genentech, Inc. Antibodies to vertebrate smoothened proteins
US5990281A (en) 1996-09-30 1999-11-23 Genentech, Inc. Vertebrate smoothened proteins
US6342369B1 (en) 1997-05-15 2002-01-29 Genentech, Inc. Apo-2-receptor
US6291643B1 (en) 1997-06-05 2001-09-18 Board Of Reports, The University Of Texas System Apaf-1 an activator of caspase-3
IL133122A0 (en) 1997-06-18 2001-03-19 Genentech Inc Apo-2dcr polypeptides
JP2002508962A (ja) 1998-01-15 2002-03-26 ジェネンテク・インコーポレイテッド Ａｐｏ−２リガンド
ATE443723T1 (de) 1998-06-12 2009-10-15 Genentech Inc Monoklonale antikörper, kreuz-reaktive antikörper und deren produktionsverfahren
US7192698B1 (en) 1999-08-17 2007-03-20 Purdue Research Foundation EphA2 as a diagnostic target for metastatic cancer
US6927203B1 (en) 1999-08-17 2005-08-09 Purdue Research Foundation Treatment of metastatic disease
DE60136816D1 (de) 2000-07-27 2009-01-15 Genentech Inc Sequentielle verabreichung von cpt-11 und apo-2l polypeptid
US7101976B1 (en) 2000-09-12 2006-09-05 Purdue Research Foundation EphA2 monoclonal antibodies and methods of making and using same
EP1326892A2 (en) 2000-10-12 2003-07-16 University of Rochester Compositions that inhibit proliferation of cancer cells
US6709655B2 (en) 2001-02-28 2004-03-23 Instituto Bioclon, S.A. De C.V. Pharmaceutical composition of F(ab1)2 antibody fragments and a process for the preparation thereof
CA2817619A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20050069549A1 (en) 2002-01-14 2005-03-31 William Herman Targeted ligands
WO2003065997A2 (en) 2002-02-06 2003-08-14 Vicor Technologies, Inc. Anti-infarction molecules
JP2005521429A (ja) 2002-03-25 2005-07-21 ユーエービー リサーチ ファウンデーション Ｆｃレセプターホモログ、試薬およびこれらの使用
ES2365210T3 (es) 2002-06-14 2011-09-26 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health Procedimientos de tratamiento y prevención de colitis en la que se implican la il-13 y los linfocitos t citolíticos naturales.
EP1575992A4 (en) 2002-08-05 2007-02-21 Univ Rochester CHEMICAL PROTEINS FROM PROTEIN TRANSDUCATING DOMAIN / DEAMINASE, RELATED COMPOUNDS AND THEIR USES
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
EP1576351A4 (en) 2002-11-26 2010-06-23 Univ Utah Res Found MICROPOROUS MATERIALS; METHODS AND ARTICLES FOR LOCALIZING AND QUANTIFYING ANALYTES
US7597936B2 (en) 2002-11-26 2009-10-06 University Of Utah Research Foundation Method of producing a pigmented composite microporous material
US7335759B2 (en) * 2002-12-02 2008-02-26 Universidad Nacional Autónoma de Méxica (UNAM) Recombinant immunogens for the generation of antivenoms to the venom of scorpions of the genus Centruroides
US7141015B2 (en) * 2003-05-09 2006-11-28 Bernard Joseph Ruane Expandable and pivotally adjustable surgical retractor
EP1651266B1 (en) * 2003-07-25 2010-03-03 Laboratorios Silanes, S.A. de C.V. Administration of anti-tnf-alpha f(ab')2 antibody fragments
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
EP1711517A4 (en) 2004-01-21 2008-02-13 Univ Utah Res Found MUTANT NAv1.7 SODIUM CHANNEL AND ASSOCIATED METHODS
PT1730191E (pt) 2004-03-30 2011-10-04 Glaxo Group Ltd Imunoglobulina que se liga a hosm
TW201705980A (zh) 2004-04-09 2017-02-16 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
CA2575402A1 (en) 2004-08-05 2006-02-09 Genentech, Inc. Humanized anti-cmet antagonists
US8029783B2 (en) 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
US7381802B2 (en) * 2005-04-15 2008-06-03 Universidad Nacional Autónoma De México (UNAM) Human antibodies that specifically recognize the toxin Cn2 from Centruroides noxius scorpion venom
CN101193910A (zh) 2005-04-15 2008-06-04 健泰科生物技术公司 HGFβ链变体
NZ595225A (en) 2005-05-16 2013-05-31 Abbott Biotech Ltd Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
AU2005332058B2 (en) 2005-05-19 2011-12-01 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Functional epitopes of Streptococcus pneumoniae PsaA antigen and uses thereof
EP1806365A1 (en) 2006-01-05 2007-07-11 Boehringer Ingelheim International GmbH Antibody molecules specific for fibroblast activation protein and immunoconjugates containing them
US8470965B2 (en) 2006-03-01 2013-06-25 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to cyclic peptide synthesis
CA2644952A1 (en) 2006-03-01 2007-09-13 The University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to cyclic peptide synthesis
CN102887955A (zh) 2006-04-05 2013-01-23 艾博特生物技术有限公司 抗体纯化
US9399061B2 (en) 2006-04-10 2016-07-26 Abbvie Biotechnology Ltd Methods for determining efficacy of TNF-α inhibitors for treatment of rheumatoid arthritis
WO2008063213A2 (en) 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
CA2656347A1 (en) 2006-07-03 2008-01-10 Charles David Adair Composition for modulating the expression of cell adhesion molecules
US8999317B2 (en) 2006-11-01 2015-04-07 University Of Rochester Methods and compositions related to the structure and function of APOBEC3G
JP2010514839A (ja) 2007-01-03 2010-05-06 バーナム インスティテュート フォー メディカル リサーチ クロット結合化合物に関連する方法および組成物
US10094836B2 (en) 2007-01-08 2018-10-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services SLCO1B3 genotype
US9896511B2 (en) 2007-01-10 2018-02-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies
US8097588B2 (en) 2007-02-08 2012-01-17 Sanford-Burnham Medical Research Institute Trophinin-binding peptides and uses thereof
EP2478766A3 (en) 2007-05-09 2012-08-15 Burnham Institute for Medical Research Targeting host proteinases as a therapeutic strategy against viral and bacterial pathogens
CN101688194B (zh) 2007-05-23 2013-09-11 Uab研究基金会 去毒的肺炎球菌神经氨酸酶及其用途
US20100303813A1 (en) 2007-06-08 2010-12-02 Biogen Idec Ma Inc. Biomarkers for predicting anti-tnf responsiveness or non-responsiveness
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
PE20090368A1 (es) 2007-06-19 2009-04-28 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-igf
PE20140196A1 (es) 2007-08-09 2014-03-19 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
WO2010070380A2 (en) 2007-12-03 2010-06-24 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health Of Human Services, National Institutes Of Health Doc1 compositions and methods for treating cancer
CA2711984A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co. Kg Powdered protein compositions and methods of making same
ES2532896T5 (es) 2008-05-14 2018-03-20 Immatics Biotechnologies Gmbh Péptidos del MHC de clase II novedosos y potentes derivados de survivina y neurocan
AU2008360658B2 (en) 2008-08-15 2015-02-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services S0X9, prostaglandin D2 and retinoic acid for treating pigmentary conditions and melanoma
EP4071169A2 (en) 2008-08-25 2022-10-12 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Conserved influenza hemagglutinin epitope and antibodies thereto
RS53782B1 (sr) 2008-10-01 2015-06-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Preparati tumor-asociranih peptida i odgovarajuća antikancerska vakcina za tretman glioblastoma (gbm) i drugih kancera
US20120070443A1 (en) 2008-12-02 2012-03-22 University Of Utah Research Foundation Pde1 as a target therapeutic in heart disease
NZ597692A (en) 2008-12-12 2013-08-30 Boehringer Ingelheim Int Anti-IGF antibodies
UY32341A (es) 2008-12-19 2010-07-30 Glaxo Group Ltd Proteínas de unión antígeno novedosas
WO2011020107A2 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Georgetown University Compositions and methods for detection and treatment of breast cancer
JP2013507365A (ja) 2009-10-07 2013-03-04 サンフォード−バーナム メディカル リサーチ インスティテュート 血餅結合脂質化合物に関する方法および組成物
US20110110942A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Genentech, Inc. Method of promoting dendritic spine density
WO2011080050A2 (en) 2009-12-11 2011-07-07 Novartis Ag Binding molecules
CA2784145A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Sanford-Burnham Medical Research Institute Methods and compositions related to clot-binding compounds
AR079944A1 (es) 2010-01-20 2012-02-29 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpo neutralizante de la actividad de un anticoagulante
PE20170687A1 (es) 2010-01-28 2017-06-13 Glaxo Group Ltd Proteinas de enlace a cd127
US20110207789A1 (en) 2010-02-19 2011-08-25 Ye Fang Methods related to casein kinase ii (ck2) inhibitors and the use of purinosome-disrupting ck2 inhibitors for anti-cancer therapy agents
UA108227C2 (xx) 2010-03-03 2015-04-10 Антигензв'язуючий білок
GB201004551D0 (en) 2010-03-19 2010-05-05 Immatics Biotechnologies Gmbh NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer
US20110293629A1 (en) 2010-05-14 2011-12-01 Bastid Jeremy Methods of Treating and/or Preventing Cell Proliferation Disorders with IL-17 Antagonists
AR081556A1 (es) 2010-06-03 2012-10-03 Glaxo Group Ltd Proteinas de union al antigeno humanizadas
CN103201290B (zh) 2010-06-14 2016-09-28 莱克拉生物医学股份公司 S100a4抗体及其治疗用途
WO2012023938A1 (en) 2010-08-19 2012-02-23 West Pharmaceutical Services, Inc. Rigid needle shield
US9051619B2 (en) 2011-03-25 2015-06-09 Florida Agricultural and Mechanical University (FAMU) Methods and compositions for prostate cancer metastasis
PE20140964A1 (es) 2011-03-30 2014-08-17 Boehringer Ingelheim Int Antidotos anticoagulantes
PL221015B1 (pl) * 2011-04-11 2016-02-29 Akademia Medyczna Im Piastów Śląskich Sposób otrzymywania inhibitorów cysteinowych peptydaz o czystości elektroforetycznej z materiałów biologicznych
US9062106B2 (en) 2011-04-27 2015-06-23 Abbvie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
WO2012161856A1 (en) 2011-05-20 2012-11-29 Government Of The United States, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Blockade of tl1a-dr3 interactions to ameliorate t cell mediated disease pathology and antibodies thereof
AR086823A1 (es) 2011-06-30 2014-01-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met, metodos
US9846159B2 (en) 2011-09-30 2017-12-19 Sarcotein Diagnostics, Llc BIN1 expression as a marker of cancer
US20130122005A1 (en) 2011-10-27 2013-05-16 Paul Adam Anticancer combination therapy
US9177997B2 (en) 2011-12-13 2015-11-03 Sony Corporation Memory device
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
IN2015MN00001A (ru) 2012-06-08 2015-10-16 Univ Kinki
EP2870238A4 (en) 2012-07-05 2016-03-09 Ohio State Innovation Foundation COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO VIRAL VACCINES
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9376489B2 (en) 2012-09-07 2016-06-28 Novartis Ag IL-18 binding molecules
US20140094383A1 (en) 2012-10-02 2014-04-03 Ohio State Innovation Foundation Tethered Lipoplex nanoparticle Biochips And Methods Of Use
MX367136B (es) 2012-10-18 2019-08-06 Inosan Biopharma S A Star Proceso para purificar fragmentos de anticuerpos polivalentes derivados de plasma hiperinmune.
WO2014085821A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 The Regents Of The University Of California Fully human antibodies and fragments recognizing human c-met
US20140255413A1 (en) 2013-03-07 2014-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for neoplasia treatment
HK1207960A1 (en) 2013-03-12 2016-02-19 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014201118A2 (en) 2013-06-11 2014-12-18 Sanford-Burnham Medical Research Institute Compositions and methods for targeted endometriosis treatment
TWI636065B (zh) 2013-08-05 2018-09-21 伊瑪提克斯生物科技有限公司 新穎肽類，細胞及其用於治療多種腫瘤的用途，其製造方法及包含其等之醫藥組成物
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
GB201319446D0 (en) 2013-11-04 2013-12-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Personalized immunotherapy against several neuronal and brain tumors
WO2015069459A1 (en) 2013-11-05 2015-05-14 Novartis Ag Organic compounds
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
RU2016141385A (ru) 2014-03-24 2018-04-28 Дженентек, Инк. Лечение рака антагонистами с-мет и их корреляция с экспрессией hgf
US10247729B2 (en) 2014-05-05 2019-04-02 Microbplex, Inc. Media elaborated with newly synthesized antibodies (MENSA) and uses thereof
GB201408255D0 (en) 2014-05-09 2014-06-25 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel immunotherapy against several tumours of the blood, such as acute myeloid leukemia (AML)
GB201411037D0 (en) 2014-06-20 2014-08-06 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel immunotherapy against several tumors of the blood, in particular chronic lymphoid leukemai (CLL)
WO2016059602A2 (en) 2014-10-16 2016-04-21 Glaxo Group Limited Methods of treating cancer and related compositions
GB201501017D0 (en) 2014-12-23 2015-03-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against hepatocellular carcinoma (HCC) and other cancers
MA49156A (fr) 2014-12-23 2020-03-25 Immatics Biotechnologies Gmbh Nouveaux peptides et combinaison de peptides à utiliser dans l'immunothérapie contre le carcinome hépatocellulaire (hcc) et d'autres cancers
WO2016141088A1 (en) 2015-03-02 2016-09-09 Sarcotein Diagnostics, Llc 13+/17+ bin1 expression as a marker of cardiac disorders
LT3388075T (lt) 2015-03-27 2023-11-10 Immatics Biotechnologies Gmbh Nauji peptidai ir peptidų deriniai, skirti naudoti imunoterapijai prieš įvairius navikus (seq id 25 - mrax5-003)
GB201505585D0 (en) 2015-03-31 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapy against renal cell carinoma (RCC) and other cancers
GB201507030D0 (en) 2015-04-24 2015-06-10 Immatics Biotechnologies Gmbh Immunotherapy against lung cancers, in particular NSCLC
GB201507719D0 (en) 2015-05-06 2015-06-17 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides and scaffolds thereof for use in immunotherapy against colorectal carcinoma (CRC) and other cancers
MA54884A (fr) 2015-07-01 2022-01-12 Immatics Biotechnologies Gmbh Neuartige peptide und kombination aus peptiden zur verwendung in der immuntherapie gegen ovarialkarzinom und andere karzinome
GB201511546D0 (en) 2015-07-01 2015-08-12 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
CR20230563A (es) 2015-07-06 2024-01-22 Immatics Biotechnologies Gmbh NUEVOS PÉPTIDOS Y COMBINACIÓN DE PÉPTIDOS PARA USAR EN INMUNOTERAPIA CONTRA EL CÁNCER ESOFÁGICO Y OTROS CÁNCERES (Divisional Exp. 2017-0579)
GB201513921D0 (en) 2015-08-05 2015-09-23 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against prostate cancer and other cancers
GB201522667D0 (en) 2015-12-22 2016-02-03 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against breast cancer and other cancers
GB201602918D0 (en) 2016-02-19 2016-04-06 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against NHL and other cancers
IL302705A (en) 2016-03-01 2023-07-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides, combinations of peptides, cell-based drugs for use in immunotherapy against bladder cancer and other types of cancer
GB201603987D0 (en) 2016-03-08 2016-04-20 Immatics Biotechnologies Gmbh Uterine cancer treatments
WO2017160587A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Abeome Corporation Neutralizing monoclonal antibodies to il-25 and uses thereof
CN109071605A (zh) 2016-04-06 2018-12-21 伊玛提克斯生物技术有限公司 用于aml和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物
RS61510B1 (sr) 2016-05-18 2021-03-31 Boehringer Ingelheim Int Anti pd-1 i anti-lag3 antitela za lečenje kancera
TWI796299B (zh) 2016-08-26 2023-03-21 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於頭頸鱗狀細胞癌和其他癌症免疫治療的新型肽和支架
DK3523416T3 (da) 2016-10-05 2025-03-03 Univ Central Florida Res Found Inc Fremgangsmåder og sammensætninger relateret til nk-celle- og anti-pdl1-kræftbehandlinger
EP3360898A1 (en) 2017-02-14 2018-08-15 Boehringer Ingelheim International GmbH Bispecific anti-tnf-related apoptosis-inducing ligand receptor 2 and anti-cadherin 17 binding molecules for the treatment of cancer
WO2018118887A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Wake Forest University Health Sciences Sirp-gamma targeted agents for use in the treatment of cancer
WO2018138257A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
GB201701404D0 (en) * 2017-01-27 2017-03-15 Micropharm Ltd Therapies for treating inflammatory disorders
KR20230166145A (ko) 2017-03-15 2023-12-06 옥스포드 바이오메디카(유케이) 리미티드 방법
ES2963046T3 (es) 2017-03-20 2024-03-25 Vaccinex Inc Tratamiento del cáncer con un anticuerpo contra la semaforina-4d combinado con un agente modulador epigenético
ES2963635T3 (es) 2017-03-28 2024-04-01 Ohio State Innovation Foundation Vacunas de péptido PD1 humano y usos de las mismas
EP3385699A1 (en) 2017-04-07 2018-10-10 Universitat Rovira i Virgili Optofluidic device and method for detecting circulating tumour cells
BR112019020959A2 (pt) 2017-04-10 2020-05-05 Immatics Biotechnologies Gmbh peptídeos e combinações dos mesmos para uso na imunoterapia contra câncer
EA201992416A1 (ru) 2017-04-10 2020-02-25 Имматикс Байотекнолоджиз Гмбх Пептиды и комбинации пептидов для применения в иммунотерапии лейкозов и других видов рака
WO2018189148A1 (en) 2017-04-10 2018-10-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides and combination thereof for use in the immunotherapy against cancers
MX2019015879A (es) 2017-07-07 2020-02-07 Immatics Biotechnologies Gmbh Nuevos peptidos y nuevas combinacones de peptidos para el uso en la inmunoterapia contra el cancer de pulmon, incluyendo el nsclc, el sclc y otros canceres.
US10800823B2 (en) 2017-07-07 2020-10-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against lung cancer, including NSCLC, SCLC and other cancers
AU2018298971B2 (en) 2017-07-14 2025-01-23 Cancer Research Technology Limited Analysis of HLA alleles in tumours and the uses thereof
US12025615B2 (en) 2017-09-15 2024-07-02 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Methods of classifying response to immunotherapy for cancer
WO2019070108A1 (es) 2017-10-02 2019-04-11 Laboratorios Silanes S.A. De C.V. Proceso de alto rendimiento para la producción de antivenenos de fragmentos f (ab') 2 de anticuerpos
US12053523B2 (en) 2017-12-13 2024-08-06 North Carolina State University Compositions comprising chemotherapeutic agents and checkpoint inhibitors and methods of use
DE102018107224A1 (de) 2018-02-21 2019-08-22 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptide und Kombinationen von Peptiden nicht-kanonischen Ursprungs zur Verwendung in der Immuntherapie gegen verschiedene Krebsarten
TW202016131A (zh) 2018-05-16 2020-05-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於抗癌免疫治療的肽
EP3569618A1 (en) 2018-05-19 2019-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Antagonizing cd73 antibody
WO2019236590A1 (en) 2018-06-04 2019-12-12 University Of Maryland, Baltimore Methods for preventing acute kidney injury
US10925947B2 (en) 2018-06-29 2021-02-23 Immatics Biotechnologies Gmbh A*03 restricted peptides for use in immunotherapy against cancers and related methods
CA3104664A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 North Carolina State University In situ sprayed bioresponsive immunotherapeutic gel for post-surgical treatment
TW202019955A (zh) 2018-07-31 2020-06-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 B*07 限制肽和肽組合的抗癌免疫治療和相關方法
TW202028224A (zh) 2018-09-17 2020-08-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 B*44限制肽在抗癌免疫治療的用途和相關方法
TW202024121A (zh) 2018-09-18 2020-07-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 A*01 限制肽和肽組合物在抗癌免疫治療中的用途和相關方法
EP4588483A3 (en) 2018-10-03 2025-09-24 University of Pittsburgh- Of the Commonwealth System of Higher Education Covalent adaptor synnotch and chimeric antigen receptors (cars) for programmable antigen-targeting
GB201818477D0 (en) 2018-11-13 2018-12-26 Emstopa Ltd Tissue plasminogen activator antibodies and method of use thereof
WO2020115223A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Katholieke Universiteit Leuven S100a4 as a marker of treatment with spironolactone, pioglitazone and metformin
TW202039535A (zh) 2018-12-18 2020-11-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 B*08限制肽和肽組合物抗癌免疫治療和相關方法
WO2020139782A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods useful in detecting and treating multiple sclerosis and other demyelinating diseases
WO2020206233A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Vanderbilt University Therapeutic antibodies for treating lung cancer
WO2020225549A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 The Francis Crick Institute Limited Method for preventing inflammation
CA3135592A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Xiaochao Ma Therapeutic agents for erythropoietic protoporphyria (epp) and x-linked protoporphyria (xlp)
IL288779B2 (en) 2019-06-21 2025-11-01 Vaccinex Inc Combination therapy with semaphorin-4d blockade (sema4d) and dc1 therapy
US12594278B2 (en) 2019-07-16 2026-04-07 Children's National Medical Center Method for treatment of muscular dystrophy
BR112022005044A2 (pt) 2019-09-17 2022-07-05 Ohio State Innovation Foundation Peptídeo quimérico, peptídeo sintético, composição farmacêutica, anticorpo, método de tratamento
MX2022003195A (es) 2019-09-18 2022-04-11 Molecular Templates Inc Moleculas de union a pd-l1 que comprenden andamios de la subunidad a de la toxina shiga.
WO2021055816A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding molecules comprising shiga toxin a subunit scaffolds
TWI878355B (zh) 2019-10-02 2025-04-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 用於癌症治療之多重專一性結合蛋白
WO2021067550A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Methods and compositions for identifying neoantigens for use in treating and preventing cancer
EP4093884A4 (en) 2020-01-24 2024-05-15 Vanderbilt University Methods for identification of ligand-blocking antibodies and for determining antibody potency
JP7785693B2 (ja) 2020-05-08 2025-12-15 ノボキュア ゲーエムベーハー 多能性幹細胞に交流電場を印加する組成物及び方法
WO2021236658A1 (en) 2020-05-19 2021-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Binding molecules for the treatment of cancer
WO2021237055A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Ohio State Innovation Foundation Functional lipid derivatives and uses thereof
DE102020125465A1 (de) 2020-09-29 2022-03-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Amidierte Peptide und ihre deamidierten Gegenstücke, die durch nicht-HLA-A*02-Moleküle präsentiert werden, zur Verwendung in der Immuntherapie gegen verschiedene Krebsarten
DE102020125457A1 (de) 2020-09-29 2022-03-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Amidierte Peptide und ihre deamidierten Gegenstücke, die durch HLA-A*02-Moleküle präsentiert werden, zur Verwendung in der Immuntherapie gegen verschiedene Krebsarten
TW202229312A (zh) 2020-09-29 2022-08-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 由非ｈｌａ－ａ*０２顯露以用於不同類型癌症之免疫治療的醯胺化肽及其脫醯胺化對應物
EP4232474A1 (en) 2020-10-21 2023-08-30 Boehringer Ingelheim International GmbH Bispecific anti-vegf and anti-trkb binding molecules for the treatment of eye diseases
EP4262858A1 (en) 2020-12-16 2023-10-25 Molecular Templates, Inc. Clinical methods for use of a pd-l1-binding molecule comprising a shiga toxin effector
TW202241925A (zh) 2021-01-15 2022-11-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於不同類型癌症免疫治療的ｈｌａ展示肽
JP2024523033A (ja) 2021-06-17 2024-06-25 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 新規の三重特異的結合分子
US20250011405A1 (en) 2021-11-19 2025-01-09 Lykera Biomed, S.A. Treatment and diagnosis of diseases associated to pathogenic fibrosis
CN114132883B (zh) * 2021-11-29 2023-12-22 义乌市奥飞创意设计有限公司 一种可降低气溶胶污染的血清蛋白抑制剂注射装载设备
IL317689A (en) 2022-07-15 2025-02-01 Boehringer Ingelheim Int Binding molecules for cancer treatment
EP4615874A1 (en) 2022-11-10 2025-09-17 Immuvia Inc Cytotoxic bispecific antibodies binding to dr5 and muc16 and uses thereof
WO2025040598A2 (en) 2023-08-18 2025-02-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Peptides displayed by mhc for use in immunotherapy against different types of cancer

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL186239B (nl) * 1975-06-05 Hoechst Ag Werkwijze voor de bereiding van een geneesmiddel met antiflogistische en/of analgetische werking, alsmede werkwijze voor de bereiding van een 2-hydroxyethylideencyaanazijnzuuranilide geschikt voor toepassing bij deze werkwijze.
US4381295A (en) * 1979-04-26 1983-04-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody to human helper T cells and methods of preparing same
US4822776A (en) 1981-09-08 1989-04-18 The Rockefeller University Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US4603106A (en) * 1982-02-22 1986-07-29 The Rockefeller University Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
JPS58501544A (ja) 1981-09-08 1983-09-16 ザ　ロツクフエラ−　ユニヴア−シテイ エンドトキシン誘発メディエ−タ−（ショック検定）によるリポプロティンリパ−ゼの抑圧
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
CA1260828A (en) 1983-07-04 1989-09-26 Masakazu Iwai Therapeutic and prophylactic agent for gastrointestinal ulcers
DE3342870A1 (de) 1983-11-26 1985-06-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Digitalis-antikoerper, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur therapie von digitalis-intoxikationen
US4879226A (en) 1984-04-06 1989-11-07 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Novel human physiologically active polypeptide
US5672347A (en) * 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
US4849352A (en) * 1984-10-09 1989-07-18 Sullivan John B Antibody purification process
US4684623A (en) 1985-05-02 1987-08-04 The Board Of Trustees Of The Cetus Corporation Use of tumor necrosis factor as a weight regulator
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
US4870163A (en) 1985-08-29 1989-09-26 New York Blood Center, Inc. Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor
US4918163A (en) * 1985-09-27 1990-04-17 Pfizer Inc. Monoclonal antibodies specific for lipid-A determinants of gram negative bacteria
US4731244A (en) * 1985-11-13 1988-03-15 Ortho Pharmaceutical Corporation Monoclonal antibody therapy
AU616161B2 (en) 1986-10-09 1991-10-24 Neorx Corporation Methods for improved targeting of antibody, antibody fragments, hormones and other targeting agents, and conjugates thereof
US5183657A (en) * 1988-03-11 1993-02-02 Celltech Limited Antibodies for use in antilymphocyte antibody therapy
GB8805792D0 (en) * 1988-03-11 1988-04-13 Celltech Ltd Medicaments
DE3823804A1 (de) * 1988-07-14 1990-01-18 Basf Ag Neutralisation der in vitro und in vivo toxischen eigenschaften von tnf-(alpha) durch monoklonale antikoerper und den davon abgeleiteten fragmenten
NZ229922A (en) * 1988-07-18 1992-04-28 Chiron Corp Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions
WO1990001950A1 (en) 1988-08-19 1990-03-08 Celltech Limited Pharmaceutical products for anti-neoplastic therapy
ATE147634T1 (de) 1988-12-19 1997-02-15 American Cyanamid Co Produkte zur behandlung des endotoxin -schocks bei einem säugetier
GB8905400D0 (en) 1989-03-09 1989-04-19 Jonker Margreet Medicaments
JP3443119B2 (ja) * 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
GB8918232D0 (en) * 1989-08-10 1989-09-20 Opal Stephen M Pharmaceutical product for the treatment of septic shock
WO1991007986A1 (en) * 1989-12-04 1991-06-13 Schering Corporation Method of treating septic shock
US5110913A (en) * 1990-05-25 1992-05-05 Miles Inc. Antibody purification method
GB9023783D0 (en) * 1990-11-01 1990-12-12 Celltech Ltd Pharmaceutical product
GB9028123D0 (en) * 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
EP1857553A1 (en) * 1991-03-18 2007-11-21 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
ES2196002T3 (es) 1991-07-25 2003-12-16 Idec Pharma Corp Anticuerpos recombinantes para terapia humana.
WO1993011793A1 (en) * 1991-12-17 1993-06-24 Schering Corporation Use of the combination of anti-tumor necrosis factor plus interleukin-6 to treat septic shock
CA2146647C (en) 1992-10-08 2009-05-05 Marc Feldmann Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
WO1994010980A1 (en) 1992-11-16 1994-05-26 Corporation Of Mercer University Compositions using microencapsulated neutralizing antibodies
ATE183513T1 (de) 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
3. Beutler B., Milsark I.W., Gerami A. Science, 1985, 229, pp.869-871. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2303604C2 (ru) * 2000-06-06 2007-07-27 Селлтек Р Энд Д Лимитед Молекулы антител, обладающие специфичностью в отношении фактора некроза альфа опухоли человека, и их применение
RU2377253C2 (ru) * 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение

Also Published As

Publication number Publication date
DK0703925T3 (da) 1999-12-06
NZ266838A (en) 1997-02-24
ATE183513T1 (de) 1999-09-15
EP0916678A3 (en) 1999-05-26
FI955798A7 (fi) 1996-02-01
JP2953782B2 (ja) 1999-09-27
DE69405102D1 (en) 1997-09-25
GB2294267A (en) 1996-04-24
JPH08511015A (ja) 1996-11-19
EP0701571B1 (en) 1997-08-20
ES2138662T3 (es) 2000-01-16
CA2163032A1 (en) 1994-12-22
EP0703925B1 (en) 1999-08-18
US5733742A (en) 1998-03-31
GB9524064D0 (en) 1996-02-21
DE69405102T2 (de) 1998-01-15
NO954643D0 (no) 1995-11-17
CA2163032C (en) 2001-02-06
WO1994029348A2 (en) 1994-12-22
WO1994029347A1 (en) 1994-12-22
FI955798L (fi) 1996-02-01
DK0701571T3 (da) 1997-09-15
DE69420137D1 (de) 1999-09-23
GR3025133T3 (en) 1998-02-27
GB2294267B (en) 1996-11-20
ATE157100T1 (de) 1997-09-15
EP0701571A1 (en) 1996-03-20
US6193969B1 (en) 2001-02-27
DE69420137T2 (de) 1999-12-23
EP0703925A1 (en) 1996-04-03
AU6852594A (en) 1995-01-03
GR3031415T3 (en) 2000-01-31
FI955798A0 (fi) 1995-12-01
AU678483B2 (en) 1997-05-29
NO954643L (no) 1995-11-17
AU6852494A (en) 1995-01-03
EP0916678A2 (en) 1999-05-19
ES2108460T3 (es) 1997-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2139092C1 (ru) Фрагменты антител в терапии
Ammann et al. Use of intravenous γ-globulin in antibody immunodeficiency: results of a multicenter controlled trial
Looney et al. Use of intravenous immunoglobulin G (IVIG)
IE913071A1 (en) Homoconjugated immunoglobulins
JP2013532182A (ja) 組み合わせ医薬組成物及び神経変性疾患に関連する疾患又は状態を治療する方法
JP2022512967A (ja) 抗ＦｃＲｎ抗体を用いたグレーブス眼症の治療方法
CA2174501A1 (en) Method of binding material to the .beta.-amyloid peptide
CN103119061A (zh) 治疗注意力不足过动症的方法
Poynton et al. Use of IgM enriched intravenous mmmMMlLLL (Pentaglobin) in bone marrow transplantation
JP2013535483A (ja) Ｐ２４タンパク質の産生を阻害するか又は排出を促進する医薬組成物及び方法
JPH0213371A (ja) ハイブリドーマ細胞系、モノクローナル抗体およびそのキメラ
EP0486609B1 (en) Pharmaceutical product for the treatment of sepsis
US6315999B1 (en) Pharmaceutical product for the treatment of sepsis
KR20240100493A (ko) 항-cd22 항체의 수성 제제 및 이의 용도
EP0973549A2 (en) Intravenous immune globulin formulation containing a non-ionic surface active agent with improved pharmacokinetic properties
Ramesh et al. Therapeutic uses of intravenous immunoglobulin (IVIG) in children
EP0539584B1 (en) Reagent for diagnosing mycoplasma pneumoniae
EP0761688A2 (en) Production, and therapeutic combinations, of antibodies
RU2500427C2 (ru) Лекарственное средство для лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта и способ лечения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта
CA2563024C (en) Method for treating autoimmune diseases with antibodies
JP2025521231A (ja) Ｃｄ７３抗体カクテル療法
Sicherer et al. Serum sickness
Patra 6 Intravenous
WO2006080867A1 (fr) Produit de stimulation de la secretion du facteur viii de coagulation sanguine