SA96170351B1 - عملية لإعداد مزرعة خلية كائن ثديي - Google Patents

عملية لإعداد مزرعة خلية كائن ثديي Download PDF

Info

Publication number
SA96170351B1
SA96170351B1 SA96170351A SA96170351A SA96170351B1 SA 96170351 B1 SA96170351 B1 SA 96170351B1 SA 96170351 A SA96170351 A SA 96170351A SA 96170351 A SA96170351 A SA 96170351A SA 96170351 B1 SA96170351 B1 SA 96170351B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
cell
culture
phase
glycoprotein
cell culture
Prior art date
Application number
SA96170351A
Other languages
English (en)
Inventor
تينا اتشيفري
توماس رايل
ويرنر ليسلوي
توماس سكريتمولي
وولفجان ريتشي
Original Assignee
اف.هوفمان-ال ايه روتشي ايه جى
جينتيك انك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23863440&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SA96170351(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by اف.هوفمان-ال ايه روتشي ايه جى, جينتيك انك filed Critical اف.هوفمان-ال ايه روتشي ايه جى
Publication of SA96170351B1 publication Critical patent/SA96170351B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/36—Lipids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/60—Buffer, e.g. pH regulation, osmotic pressure

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

الملخص: يتعلق الاختراع الحالي بعملية جديدة لتحضير glycoproteins بواسطة مزرعة خلية كائن ثديي mammalian cell culture حيث يتم التحكم في محتوى حمض sialic من glycoprotein المنتج خلال نطاق واسع من القيم بواسطة تعديل بيئة مزرعة الخلية .cell culture يوفر الاختراع عملية فيها يعدل محتوى حمض sialic من glycoprotein بواسطة تغييرات في محددات مزرعة الخلية cell culture التي تؤثر في الإنتاجية النوعية specific productivity للخلية. تتضمن تطبيقات مفضلة للاختراع عمليات مزرعة خلية cell culture يتم فيها التحكم في أزموزية (التناضحية) osmolality مزرعة الخلية cell culture وكذلك تركيز مادة تحسين النسخ transcription enhancer أثناء طور بتاج مزرعة الخلية cell culture. يوفر الاختراعإضافيا مستحضرات جديدة من النوع ١ القابل للذوبان من Gl جلوبيولين مناعي عامل تحلل ورم tumor necrosis factor immunoglobulin Gl واستخداماتها في معالجة اضطرابات تتعلق بالالتهابات inflammatory أو المناعة .immune ،

Description

v ‏عملية لإعداد مزرعة خلية كائن ثديي‎ mammalian cell culture ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏المنتج في‎ glycoproteins ‏من‎ sialic aes ‏يتعلق هذا الاختراع بعمليات للتحكم في محتوى‎ ‏يوفر الاختراع عمليات لزيادة ونقص‎ mammalian cell culture ‏مزرعة خلية كائن ثديي‎ ‏المتكون بواسطة مزرعة خلية كائن ثديي. يتعلق‎ glycoproteins ‏من‎ sialic ‏محتوى حمض‎ tumor necrosis factor receptor ‏الاختراع أيضا بعمليات لتكوين مستقبل عامل تحلل الوزم‎ oe 11417141-1861 ‏مُخلق بالإضافة لتحضيرات‎ immunoglobulin (Ig) ‏جلوبيولين مناعي‎ —(TNFR) inflammatory ‏وعلاج الاضطرابات الالتهابية‎ diagnosis ‏جديدة واستخدامها في التشخيص‎ ‏المتنوعة.‎ immune ‏والمناعة‎ ‏متكون تخليقيا أصسبحث‎ glycoprotein ‏من‎ glycosylation ‏إن الاختلاف في أشكال عملية‎ ‏مخلقة كطريق‎ proteins ‏حديثا موضوعا ذا اهتمام كبير في المجتمع العلمي نظرًا لإنتاج بروتينات‎ ٠ ‏من‎ oligosaccharide ‏للعلاج والوقاية المحتملة في الاستخدام الإكلينيكي. تؤثر السلاسل الجانبية‎ «protein ‏في وظيفة البروتين‎ glycoproteins (Wittwer A., and Howard, S.C. (1990) Biochem. 29:4175-4180) ‏تكوين وتقديم سطح ثلاثي الأبعاد‎ glycoprotein ‏وينتج عن التداخل داخل الجزيء بين أجزاء من‎ «glycoprotein ‏لأجل‎ three dimensional surface د١‎ (Hart,(1992) Currr.Op.Cell Biol, 4:1017-1023; Goochee,etal., (1991) Bio/Technology, -9:1347-1355; Parekh, R. B., (1991) Curr. Op. Struct. Biol., 1:750-754). ‏معين إلى تركيبات معينة اعتمادا‎ polypeptide ‏لتقود‎ oligosaccharides ‏يمكن أيضا أن تعمل‎ ‏معينة ا‎ cellular carbohydrate receptors ‏خلوية‎ carbohydrate ‏على مستقبلات‎ (Bevilacqua, M.P. and Nelson, R.M., (1993) J.Clin. Invest. 91:379-387; Nelson, ‏ىن‎ ‏.للا‎ etal, )1993( J. Clin. Invest. 91:1157-1166, Norgard, K.E. et al., (1993) Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 90:1068-1072; Imai, Y. et al, (1993) Nature 361:555-557). avi v ‏على‎ «oligosaccharide glycoprotein Ja¥ ‏الطرفي للسلسلة الجانبية‎ sialic ‏يؤثر مكون حمض‎ ‏والقدرة على الإزالة من المصل؛ بالإضافة إلى‎ serum half life ‏الامتصاص»؛ نصف حياة المصل‎ «glycoprotein ‏الخواص الطبيعية؛ الكيميائية والمولدة للمناعة لأجل‎ (Parekh, R.B., supra; Varki, A., (1993) Glycobiology 3:97-100; Paulson,J. (1989),
TIBS, 14:272-276; Goochee, et al., (1991) Biotechnology 9:1347-1355; Kobata, A, ° (1992) Eur. J. Biochem. 209:483-501). ‏خاصة لهذه‎ glycoproteins ‏لأجل‎ sialic ‏لذلك فمن المهم المحافظة على محتوى حمض‎ ‏المقصود استخدامها كأدوية معالجة.‎ proteins ‏البروتينات‎ ‏أثناء تكوين البروتين المخلق‎ glycosylation ‏أثير اهتمام كبير بالعوامل التي تؤثر على عملبة‎ ‏مصل بقري جنيني‎ «(suspension ‏أو معلق‎ adherent ‏(لاصق‎ growth mode ‏طريقة النمو‎ Jia 1. cculture density ‏كثافة مزرعة‎ «media formulation ‏في تركيبة وسط‎ fetal bovine serum ‏إلخ؛‎ «purification schemes ‏برامج تنقية‎ pH ‏أس هيدروجيني‎ coxygenation Asus
Werner, R. and Noe, W. (1993), Drug Res. 43:1134-1249; Hayter et al., (1992)
Biotech. and Bioeng. 39:327-335; Borys et al., (1994) Biotech and Bioeng. 43:505- 514; Borys et al., (1993) Bio/technology 11:720-724; Hearing et al., (1989) J. Cell Vo
Biol. 108:339-353; Goochee et al., in Frontiers in Bioprocessing II, Todd et al., eds (1992) American Chemical Society pp. 199-240; .(Chotigeat, W., (1994) Cytotech. 15:217-221) 4 + 4 TANT ‏الاختراع الأمريكية رقم‎ sel ‏بحثت مجموعات مختلفة محددات العملية التي تحيط إنتاج البروتينات المخلقة وخاصة تأثير تركيبة‎ ‏الوسط في إنتاج البروتينات المخلقة؛‎ © (Park et al., (1992) Biotech. Bioeng. Bioeng. 40:686-696; Cox and McClure, (1983)
In Vitro, 19:1-6; Mizutani et al., (1992) Biochem. Biophys. Res. Comm. 187:664- 669; Le Gros et al., (1985) Lymph. Res. 4(3):221-227). ‏معروف أنها تؤثر على الإظهار المؤقت‎ butyric ‏حمض‎ Jie alkanoic ‏إن إضافة أحماض‎ ‏الخارجي في مزرعة الخلية المخلقة‎ DNA ‏».في‎ ‎(Prasad, and Sinha,) (1976) In Vitro, 12:125-132); ‏و0440 56-16؛‎ IY=EAYO ‏طلب البراءة اليابانية رقم‎ v1
¢ ‎Klehr et al., (1992) Biochem. 31:3222-3229; Gorman, and Howard (1983) Nucleic‏ ‎acid Res. 11:7631-7648).‏ على أية حال؛ فإن ‎sodium butyrate‏ له مجال تأثير علي إظهار الجين ‎gene‏ عبر خطوط خلوية متعددة وتركيبات وسط؛ انظر: ‎D'Anna et al., (1980) Biochem. 19:2656-2671; Hagopian.
H.K., (1977) Cell 12:855-‏ ‎and protein production (Milhaud (1980) J.Cell.
Physiol. 104:163-170;‏ )860 تقترح براءة اختراع المملكة المتحدة رقم ‎71١777097‏ أن هذه ‎butyrate‏ يمكن أن تعدل إظهار الجين )3778-3783 ‎J.
Biol.
Chem.‏ )1985( ,.لة ‎(Yuan et‏ أو تثبط إظهار جبنات معينة ) ‎Yuan‏ ‎(Del cet al.‏ ‎١‏ تصف البراءة الأوروبية رقم 7797497 عملية لتحسين إنتاج البروتين ‎protein‏ في وجود حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه ‎Jie‏ حمض ‎butyric‏ على أي ‎(Js‏ فإن النشرة تعطي مساعدة ‎ALB‏ ‏في اختيار تركيزات مناسبة من المادة الإضافية ‎additive‏ وبالتالي لاتواجه تأثير المادة الإضافية على عملية ‎glycosylation‏ البروتين. وصف آخرون أن إضافة مستويات ‎ALTE‏ (صفر-*#,١‏ مللي جزيء جرامي) من ‎sodium butyrate‏ إلى وسط إنتاج مزرعة الخلية لزيادة إنتاج الخلية الخاص ‎1s‏ .مما يؤدي إلى زيادة متزامنة في ‎glycoforms‏ الحمضية ‎acidic‏ (مقابل لزيادة محتوى حمض ‎(sialic‏ للبروتين ‎protein‏ المخلق الناتج )15:217-221 ‎et al., (1994) Cytotech.‏ ,01018681)). اهتمت ‎Cle gana‏ مختلفة بتأثيرات الأزموزية ‎osmolality‏ على نمو الخلية وتكوين ‎«polypeptide‏ انظر: ‎Ozturk and Palsson (1991) Biotech. and Bioeng. 37:989-993; Stubblefield et al.,‏ ‎Cancer Research, 20:1646-1655; Garcia-Perez et al., (1989) Journal of YL‏ )1960( ‎Biological Chemistry, 264(28): 16815-16821; Miner et al., (1981) Invastion‏ ‎Metastasis, 1:158-174; GB 2,251,249; EP 481,791;‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 1010100 براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎HEVY EY eT‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 77474١©؛‏ والدولية رقم 4/517 ‎ua LAR‏ مجالات متعددة ‎ve‏ للأزموزية لنمو الخلبة أو تكوين ‎legac polypeptide‏ ترفع أزموزية وسط مزرعة الخلية عن طريق إضافة ‎NaCl‏ أو ‎acids‏ مصلصصة. تؤدي الضغوط البيئية ‎Jie‏ زيادة تركيزات الملح؛ في بعض الأحبان إلى زيادة تكوين ناتج الخلية. و قد سجلت الملاحظة أنه يمكن الحصول على زيادة ‎av‏
° في تواجد منتجات بروتين ‎GIS‏ ثديي في مزرعة خلية ‎GIS‏ ثديي خلال ضغط المحلول؛ مثلا؛ إضافة ‎(ple‏ حمض ‎ammonia dactic‏ إلى وسط المزرعة (النشرة الدولية رقم 44857 ‎AR‏ ‏تكون هذه الضغوط عامة ‎Gaile‏ للنمو ولكنها تساعد على الإنتاج النوعي للخلية. ناقش آخرون تأثير تركيز ‎glucose‏ على نمو الخلية و/أو تكوين ‎polypeptide‏ في مزرعة م الخلية المخلقة. انظرء؛ على سبيل المثال؛ ‎Park et al., (1992) Biotechnology and Bioengineering, 40:686-696; Huang et al.,‏ ‎Journal of Biotechnology, 18:161-162; EP 387,840; Reuveny et al., (1986)‏ )1991( ‎Journal of Immunological Methods, 86:53-59; Fine et al., (1976) In Vitro, 12(10):‏ ‎Dircks et al., (1987) Exp.
Eye Res., 44:951-958; Mizutani et al., (1992)‏ ;693-701 ‎Biochemical and Biophysical Research Communications, 187(2):664-669; Sugiura, ٠١‏ ‎Biotechnology and Bioengineering, 39:953-959; WO 88/01643 Grafet al.,‏ )1992( ‎DECHEMA Biotechno.l Conf, 3:615-618;‏ )1989( طلب البراءة اليابانية رقم ‎V0 YAAY‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎FAYTIVYY‏ ‏والدولية رقم 056 81؛ و ‎Fleischaker, Jr., Ph.D.
Thesis, Massachusetts Institute of Technology, pp. 196-229 Vo‏ ‎(June 1982).‏ على أية حال؛ فإن الدراسات السابقة لم تدرس تأثير محددات العملية المختلفة على محتوى حمض ‎sialic‏ للبروتين الناضج؛ وهو عامل هام للنجاح الإكلينيكي في تصنيع ‎-glycoprotein‏ ‏يوفر الاختراع الحالي عمليات للتحكم في محتوى حمض ‎glycoproteins (sialic‏ المنتجبة © بمزرعة خلية كائن ثدبي. الوصف العام للاختراع اكتشف المخترعون الحاليون أن محددات عملية مزرعة خلية كائن ثديي تؤثر في الإنتاجية النوعية للخلية وكذلك في مدى ونوع ‎glycosylation‏ للبروتينات المتكونة. بتحديد ‎AS‏ اكتشف المخترعون الحاليون أن العوامل المعينة التي تحسن الإنتاجية النوعية للخلية لها أثر عكسي على ‎Ye‏ محتوى حمض ‎sialic‏ للبروتين الناتج. لذلك استنبط المخترعون الحاليون عمليات مزرعة خلية متنوعة لإثراء ‎glycoforms‏ معبنة لأجل ‎glycoproteins‏ متكونة في مزرعة خلية كائن تدبي. ‎av‏
: تبعا لذلكء يوفر الاختراع عملية للتحكم في محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ منتج من مزرعة خلية كائن ثديي. تبعا لهذا الجانب من الاختراع؛ فإن تنوع معدل إنتاج ‎glycoprotein‏ في طور إنتاج مزرعة الخلية يؤدي إلى تغييرات في محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ ناضج. بتحديد ‎ST‏ ينتج عن الزيادة في الإنتاجية النوعية للخلية أثناء طور إنتاج ‎glycoprotein‏ نقصان ‎٠‏ في محتوى حمض ‎sialic‏ للبروتين الناضج. على العكس؛ ينتج عن النقصان في الإنتاجية النوعية للخلية زيادة في محتوى حمض ‎sialic‏ البروتين الناضج. يوفر الاختراع الحالي؛ في تجسيد خاص؛ لتنويع الإنتاجية النوعية للخلية لخلية عائل ثديي أثناء طور إنتاج البروتين لمزرعة خلية كائن ثديي بالتحكم في العوامل التي تؤثر في إنتاجية نوعية للخلية. تبعا لأحد جوانب الاختراع؛ يتم التحكم في تركيز العوامل التي تحسن نسخ ‎DNA‏ في ‎٠‏ تجسيد آخر يتم التحكم في إنتاجية نوعية للخلية بالمحافظة على أزموزية مزرعة الخلية داخل حدود معينة. طبقا للاختراع؛ يتم التحكم في أي من المحددات سالفة ‎SA‏ وحدها أو في توليفة؛ للتأثير في محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ الناضج. في تجسيد خاص للاختراع الحالي؛ يكون عامل تحسين نسخ ‎DNA‏ هو حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه ‎sodium butyrate (Jie‏ عند تركيز حوالي ‎١,١‏ مللي جزيئي جرامي إلى حوالي ‎٠١‏ مللي جزيئي جرامي. تبعا لجانب ثان من الاختراع؛ تُحفظ أزموزية مزرعة الخلية بين حوالي ‎“You‏ ‎٠‏ مللي أزمول ‎mOsm‏ في جانب آخرء؛ يتم التحكم في درجة حرارة مزرعة الخلية بين حوالي ‎٠‏ مئوية 5 ‎Age TY‏ في تجسيد مفضل؛ يوفر الاختراع عملية لزيادة محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ ‏الناضج المنتج من مزرعة خلية كائن ثديي تشمل المحافظة على إنتاجية نوعية للخلية منخفضة ‎٠‏ بالتحكم في أي من أو كل محددات العملية المحددة أعلاه؛ اختياريا مع محددات أخرى معروفة في هذا الفن. تبعا لهذا الجانب من الاختراع الحالي؛ فإن زراعة الخلية المضيفة عند تركيز من حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه حوالي ‎١‏ مللي جزيئي جرامي إلى حوالي ‎ia Ale ١‏ جرامي؛ و اختياريا مع المحافظة على أزموزية مزرعة الخلية عند حوالي ‎590-7٠0‏ مللي أزمول ‎mOsm‏ ‎pid‏ بروتينا مع محتوى حمض ‎sialic‏ زائد. ‎Yo‏ في تجسيد مفضل ‎AT‏ يوفر الاختراع عملية لإنقاص محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ ناضج منتج من مزرعة خلية كائن ثديِي تشمل زيادة إنتاجية نوعية لخلية مزرعة الخلية. تزداد الإنتاجية النوعية للخلية؛ في تجسيد مفضل؛ بتوفير عملية مزرعة خلبة تشمل أيا ‎(On‏ ‎avi‏
زراعة الخلية المضيفة عند تركيز حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه من حوالي ‎GT‏ جزيئي جرامي إلى حوالي ‎١١‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎cp‏ المحافظة على أزموزية مزرعة الخلية عند حوالي ‎٠٠0-٠6‏ مللي أزمول 1120870. يوفر الاختراع ‎(Lila)‏ في تجسيد ‎(ala‏ عملية مزرعة خلية مع ثلاثة أطوار من مزرعة ‎٠‏ الخلية. لذلك يوفر الاختراع عملية للتحكم في محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ منتج من مزرعة خلية كائن ثديي تشمل خطوات زراعة خلية مضيفة تظهر البروتين في طور نمو لفترة من الزمن و تحت الشروط التي تضخم نمو الخلية. تبعا لهذا الجانب من الاختراع الحالي؛ يلي طور النمو طور انتقالي فيه ثختار وتطبق محددات مزرعة الخلية لمحتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب من ‎glycoprotein‏ الناضج. يلي طور الانتقال طور إنتاج مزرعة الخلية حيث تظل المحددات ‎٠‏ المختارة في الطور الانتقالي وينتج ويحصد إنتاج ‎glycoprotein‏ يتم تتويع الإنتاجية النوعية للخلية في طور إنتاج مزرعة الخلية بإضافة حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه لمزرعة الخلية عند تركيز حوالي ‎١١‏ مللي جزيئي جرامي إلى حوالي ‎5١‏ مللي جزيئي جرامي وتطبيق أزموزية مزرعة الخلية عند حوالي بين ‎You‏ و ‎٠0١‏ مللي أزمول 0080 اختياريا باتحاد الواحد مع الآخر أثناء الطور الانتقالي لينتج بروتين مع كميات مختلفة من حمض ‎sialic‏ ‎Vo‏ في تجسيد مفضل آخر؛ يوفر الاختراع الحالي عملية للتحكم في كمية حمض ‎sialic‏ الموجود في مستقبل عامل تحلل الورم من نوع ‎١‏ قابل للذوبان ‎soluble type 1 tumor necrosis factor‏ ‎=(TNFR1) receptor‏ جلوبيولين مناعي ‎(IgG) immunoglobulin Gy‏ لبروتين تخليقي. اكتشف المخترعون الحاليون أنه؛ تحت شروط إنتاج معينة؛ يمكن الحصول على مستحضرات ‎glycoform‏ ‎TNFRI-IgG,‏ جديدة التي تظهر الخواص المرغوبة لإزالة ممتدة من الدم مع الاحتفاظ بنشاط ‎YL‏ وظيفي جوهري. يسمح نصف- عمر وظيفي طويل بتعاطي جرعة 8 ‎cpa‏ بسيطة؛ ويساهم في فعالية ‎glycoprotein‏ المنتج في الجسم ‎Lay‏ يسمح بأشكال جرعة ‎Ji‏ من ‎glycoprotein‏ ‏طبقا لهذا الجانب من الاختراع الحالي؛ ينتج جزيء ‎TNFR 1-1gG glycoprotein‏ يحتوي على متخلفات حمض ‎sialic‏ زائدة. يتم اختيار محددات مزرعة الخلية لطور إنتاج (1117141-186 للحصول على محتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب. في تجسيد مفضل؛ يوجد ‎sodium butyrate‏ في ‎ve‏ طور الإنتاج عند تركيز حوالي ‎١٠‏ إلى حوالي “ مللي جزيئي جرامي وتظل الأزموزية عند حوالي 00 ‎£00-F‏ مللي ‎mOsm Js Jf‏ في جانب أكثر تفضيلا يكون تركيز ‎sodium butyrate‏ حوالي ‎١‏ مللي جزيني جرامي وتظل الأزموزية عند حوالي 0-00 £4 مللي أزمول ‎mOsm‏ ‎av‏
A
‏منتج‎ TNFRI-IgG glycoprotein ‏مستحضر‎ Jal ‏في تجسيد آخر إضافي؛ يوفر الاختراع‎ 1141141-1801 ‏من عملية الاختراع الحالي. طبقا لهذا الجانب من الاختراع يتوفر مستحضر يشمل‎ ‏للمستحضر بين حوالي 0,0 و,. يتوفر إضافيا مستحضر ,7117181-180 له‎ pI ‏يكون فيه مدى‎ ‏وخصوصا من حوالي © إلى‎ ١ ‏إلى بروتين من حوالي ؛ إلى حوالي‎ sialic ‏نسبة جزيئية لحمض‎ ‏إلى حوالي ؟‎ ١ ‏أيضا؛ يكون مستحضر (11+1181-180 له من حوالي‎ Al ‏حوالي +. في جانب‎ © ‏جزيء جرامي من متخلفات ع14-206018[1000580010 مكشوفة لكل جزيء جرامي من البروتين. في‎ ‏من‎ N-acetylglucosamine ‏إلي‎ sialic ‏جانب إضافيء فإن المستحضر له نسبة جزيئية لحمض‎
ES ‏إلى حوالي‎ ١.4 ‏وأكثر تفضيلا من حوالي‎ ١,6 ‏إلى حوالي‎ Te ‏حوالي‎ ‏تركيبة علاجية تشمل المستحضر أعلاه نافعة في علاج حالات‎ Lad ‏يوفر الاختراع الحالي‎
INF ‏مرضية مصدرها‎ ٠ ‏شرح مختصر للرسومات‎ ‏شكل )1( وشكل (١ب): يظهر الشكلان (١أ) و(١ب) الطريقة المستخدمة في حساب إنتاجية‎ ‏نوعية لعملية مزرعة خلية نموذجية في طور الإنتاج. يعبر عن الإنتاجية النوعية كدالة على عد‎ ‏كما يظهر‎ (PCV) ‏خلية حية (أيام الخلية الحية) كما يظهر في شكل (١/)؛ أو حجم خلية متراصة‎ ‏في شكل (١ب). أعطي معدل الإنتاج النوعي مع مدى 790 فاصل ثقة.‎ ve ‏و(7؟ب) العلاقة التبادلية بين الإنتاجية النوعية على‎ (IY) ‏يظهر شكل‎ HY) ‏وشكل‎ (IY) ‏شكل‎ ‏طور الإنتاج‎ oll (QF ‏(شكل‎ (PCV) ‏و حجم خلية متراصة‎ (IY ‏أساس أيام الخلية الحية (شكل‎ ‏تمثل‎ (ACD) ‏للمنتج المحصود. تظهر قيم 4 عمليات مختلفة‎ (NANA) sialic ‏ومحتوى حمض‎ .١ ‏نقاط البيانات عمليات إنتاج مستقلة كما هو موصوف في جدول‎ gl ‏الوصف التفصبلي للاختر‎ Yo
Definitions ‏تعريفات‎ -١ ‏للاختراع الحالي بالإشارة إلى المصطلح الشائع الاستخدام‎ carbohydrate ‏توصف أجزاء‎ ‏التي تستخدم هذا المصطلح في‎ carbohydrate ‏لوصف 8ع0118053602:10. توجد مراجعة لكيمياء‎ loa oll ‏يتضمن هذا‎ Hubbard and Ivatt (1981) Ann., Rev. Biochem. 50:555-583 ¢2-N-acetylglucosamine ‏الذي يمثل‎ «GlcNAc ¢mannose Jia: ‏الذي‎ Man ‏على سبيل المثال؛‎ vo ‏بالإشارة إلى‎ sialic ‏توصف أحماض‎ glucose ‏الذي يمثل‎ «Gle sy galactose ‏الذي يمثل‎ «Gal avi q
J—=Y NeuNGc s «5-N-acetylneuraminic acid ‏لأجل‎ (NeuNAc ‏رموز الاختزال‎ «5-glycolylneuraminic acid ‎-(J.Biol. Chem, 1982 257:3347;J. Biol. Chem., 1982, 257:3352).‏ إن "الأزموزية (التناضحية) ‎"osmolality‏ هي قياس للضغط الأزموزي لجزيئثات محلول ‎٠‏ مذاب في محلول مائي. تتضمن جزيئات المحلول كلا الأيونات ‎ons‏ والجزيئات غير المؤينة ‎molecules‏ ل0126ه000-1. يعبر عن "الأزموزية ‎"osmolality‏ بتركيز الجزيئات النشطة أزموزيا (بمعنى؛ مللي أزمولات ‎(0smoles‏ المذابة في ‎١‏ كجم من محلول ‎١(‏ مللي أزمول ‎mOsm‏ كجم 0 عند 38”"مئوية يكافئ الضغط الأزموزي 19 ملليمتر زئبقي 118 ‎(mm‏ إن "الأزموزية ‎Cosmolality‏ بالمقارنة؛ تشير إلى عدد جزيئات المحلول المذابة في ‎١‏ لتر من المحلول. عند ‎٠‏ الاستخدام هناء يعني الاختصار "مللي أزمول ‎"mOsm‏ "محلول مللي أزمول ‎mOsm‏ / كجم". كما هو مستخدم ‎lis‏ يشير عموما "87000101610" إلى ‎peptides‏ وبروتينات لها أكثر من حوالي عشرة ‎amino acids‏ وعلى الأقل سلسلة جانبية ‎oligosaccharide‏ واحدة. قد تكون ‎glycoproteins‏ متماثئلة للخلية المضيفة؛ أو من الأفضل؛ تكون غير متماثلة؛. بمعنى» مختلفة عن الخلية المضيفة المستخدمة؛ ‎Jie‏ بروتين آدمي منتج من خلية مبيض جرذ صيني. من الأفضلء ‎Yo‏ استخدام ‎glycoproteins‏ من كائنات ‎glycoproteins) dud‏ مشتقة أصلا من أنسجة كائن ثديي)؛ يفضل أكثرء تلك المفرزة مباشرة في الوسط. تتضمن ‎tia‏ على ‎glycoproteins‏ من كائن ثدبي ‎Cli ja‏ مثل ‎cytokines‏ ومستقبلاتهاء وكذلك بروتينات تخليقية تشمل ‎cytokines‏ ‏ومستقبلاتها؛ تتضمن؛ على سبيل المثال عامل تحلل الورم ‎theta s alpha‏ مستقبلاتهما (111714-1؛ براءة الاختراع الأوروبي 17877؛ المنشور في ‎Yo‏ مارس ‎(TNFR-25 154١‏ براءة ‎x,‏ الاختراع الأوروبي ‎5٠70٠4‏ المنشور في ‎Yo‏ مارس ‎)١94١‏ ومشتقاتهما؛ 8010؟ هرمون نمو ‎growth hormone‏ يتضمن هرمون نمو أدمي ‎human growth hormone‏ وهرمون نمو بقري ‎¢bovine growth hormone‏ عامل إطلاق هرمون نمى ‎¢growth hormone releasing factor‏ هرمون ‎ ¢parathyroid hormone‏ « 5 استثارة ‎¢tthyroid stimulating hormone‏ ‎B-il. Ls insulin tinsulin A-chain A-iluls insulin ¢alpha-1-antitrypsin ¢lipoproteins‏ ‎tproinsulin ¢insulin B-chain +٠‏ هرمون استثارة الحويصلة ‎¢follicle stimulating hormone‏ ‎¢calcitonin‏ هرمون ‎¢glucagon ¢luteinzing hormone‏ عوامل ‎la 1x3‏ الدم ‎clotting factors‏ مثل العامل ‎VITIC‏ العامل ‎(IX‏ عامل نسيج ‎<tissue factor‏ روعامل ‎tVon Willebrands factor‏ ‎avi
١ ‏أذيني‎ natriuretic ‏مثل بروتين ©؛ عامل‎ anticlotting factors ‏عوامل مضادة للتجلط‎ «plasminogen activator ‏منشط‎ {lung surfactant ‏منشط سطح رئة‎ ¢atrial natriuretic factor ‏من نوع نسيج‎ plasminogen activator ‏أو منشط‎ human urine ‏أو بول أدمي‎ urokinase Jie tenkephalinase themopoietic growth factor s—i ‏عامل‎ thrombin ¢bombesin «(t-PA) ‏(منظم على نشاط خلية-1 ظاهرة ومفرزة بصورة طبيعية)؛ بروتين التهابي‎ RANTES» ¢(MIP-1-alpha) human macrophage inflammatory protein ‏أدمي‎ macrophage thuman serum albumin ‏أدمي‎ Jao ‏مثل زلال‎ serum albumin Joao JY relaxin ¢relaxin A-Chain A-il. Ls relaxin ¢mullerian-inhibiting —4 late 3a gonadotropin ‏مسصاحب-‎ peptide ¢prorelaxin ‘relaxin B-chain B-al. 1. «microbial protein — 5 Swe ‏بروتين‎ tmouse gonadotropin-associated peptide ‏فأر‎ 0٠ ‏عامل نمو الغشاء الداخلي الوريدي‎ activin ¢inhibin {DNase tbeta-lactamase Ji ‏مستقبلات هرمونات أو عوامل نمو؛‎ (VEGF) vascular endothelial growth factor ‏عامل تغذية عصبية‎ ¢theumatoid factors ‏أو 0؛ عوامل روماتويد‎ A ‏بروتين‎ tintegrin bone-derived neurotrophic ‏مثل عامل تغذية عصبية مشتق من العظم‎ neurotrophic factor ¢((NT-6 ‏كلل أر‎ (NT-4 (NT-3) T= ‏حى حى حفى أرى‎ neurotrophin {(BDNF) factor ‏مد‎ ‏مثل 11617-8؛ عامل نمو مشتق من الصفائح‎ nerve growth factor ‏أو عامل نمو عصب‎ fibroblast growth factor ‏((01761)؛ عامل نمو نسيج ليفي‎ platelet-derived growth factor ‏عامل نمو‎ (EGF) epidermal growth factor ‏عامل نمو للجلد‎ ¢bFGF 5 aFGF ‏مثل‎ ‏بما فقي‎ TGF-beta TGF-alpha ‏مثل‎ (TGF) transforming growth factor ‏للتحويل‎ ‎insulin ‏أر 1017-85 عامل نمو شبيه‎ 10-04 TGF-B3 ‏دقعو‎ TGF-p1 ‏للك‎ > «des (1-3)-IGF-I (brain IGF-I) ¢(IGF-II5 IGF-I) Y 5 ١ insulin-like growth factor ‘insulin-like growth factor binding proteins ‏نمو شبيه إنسولين‎ Jalal ‏بروتينات رابطة‎ ‏عوامل استثارة‎ terythropoietin ¢CD-19 5 <CD-8 «CD-4 (CD-3 ‏قل‎ CD ‏بررتينات‎ ‏عظم‎ morphogenetic ‏بروتين‎ dmmunotoxins Ac lia ‏سموم‎ tosteoinductive ‏للعظم‎ ‎«nterferon-alpha and beta ‏مقل‎ interferon (BMP) bone morphogenetic protein vo «(CSF) colony stimulating factors ‏عوامل اسستثارة مستعمرة‎ tinterferongamma
JL-10 (— IL-1 25 (IL) interleukins ¢G-CSF 5 «GM-CSF (M-CSF ‏مكلا‎ ‎av
١١ ‏خلايا 1؛ بروتينات غفشاء سطح‎ receptors ‏مستتقبلات‎ ¢superoxide dismutase ‏مضاد‎ tdecay accelerating factor ‏عامل تسارع تسوس‎ ¢surface membrane proteins ‏بروتينات ناقلة‎ ¢AIDS ‏مثل؛ على سبيل المثال»؛ بروتين لاحتواء الإيدز‎ viral antigen ‏فيروسي‎ ‏بروتينات منظمة‎ ¢addressins ‘homing receptors ‏011مقصة؛ مستقبلات متلقية‎ proteins ‏مثل‎ «chimeric proteins ‏بروتينات تخليقية‎ ¢antibodies ‏أجسام مضادة‎ ‘regulatory proteins ه٠‎ ‏المذكور بعاليه.‎ polypeptides ‏وأجزاء من أي من‎ dimmunoadhesins ‏مناعية‎ adhesins
يشير المصطلح ‎dang‏ مزرعة خلية ‎"cell culture medium‏ واوسط مزرعة ‎culture‏ ‎"medium‏ إلى محلول ‎die‏ مستخدم لإنماء خلايا كائن ‎of‏ يوفر على الأقل مكونا واحدا من واحد أو أكثر من المجموعات التالية:
¢glucose ‏مثل‎ carbohydrate ‏عادة في شكل‎ energy source ‏مصدر طاقة‎ -١ ١ ‏زائد‎ amino acid ‏الأساسية؛ وعادة المجموعة الأساسية من عشرين‎ amino acids ‏كل‎ -" tcysteine
؟- فيتامينات ‎vitamins‏ و/أو مركبات عضوية ‎organic compounds‏ أخرى مطلوبة عند تركيزات منخفضة؛
‎vo‏ ؛- أحماض دهنية حرة ‎fatty acids‏ 166؟؛ و
‏0— عوامل ضئيلة ‎Cua trace elements‏ تعرف العوامل الضئيلة كمركبات غير عضوية أو عوامل ‎Lin‏ طبيعيا مطلوبة نموذجيا عند تركيزات منخفضة جداء عادة في حدود الميكروجزيئي جرامي.
‏يمكن تزويد المحلول المغذي اختياريا بواحد أو أكثر من مكونات من المجموعات التالية:
‎dransferrin «insulin ‏على سبيل المثال‎ Jie ‏وعوامل نمو أخرى‎ hormones ‏هرمونات‎ -١ Y. ‘epidermal grwoth factor ‏نمو جلدي‎ Jule
‏*- أملاح ‎salts‏ ومواد لضبط الأس الهيدروجيني ‎«Jie buffers‏ على سبيل المثال؛ ‎«calcium‏ ‎cmagnesium‏ وع1قطم0105؟؛
‎«thymidine «adenosine ‏مثلء على سيل المثالء‎ bases ‏وقواعد‎ nucleosides =v
‎thypoxanthines ve‏ و
‏؛- محللات نسيج ‎tissue hydrolysates‏ وبروتين ‎.protein‏
VY
«host cell ‏مضيفة‎ 408" ‘mammalian host cell ‏إن المصطلح "خلية مضيفة من كائن ثديي‎ ‏إلخ؛ يشير إلى خطوط خلية مشتقة من كائنات ثديية قادرة‎ mammalian cell ‏"خلية كائن ثديي‎ ‏على النمو والبقاء عند وضعها سواء في مزرعة أحادية الطبقة أو في مزرعة معلق في وسط‎ ‏يحتوي على المواد المغذية وعوامل النمو المناسبة. عوامل النمو الضرورية لخط خلية معين تتحدد‎ ‏بسهولة تجريبيا بدون تجارب غير ضرورية؛ كما هو موصوف على سبيل المثال في:‎ ©
Mammalian Cell Culture (Mather, J.P.ed., Plenum Press. N.Y. [1984]), and Barnes and Sato. (1980) Cell, 22:649. glycoprotein ‏نموذجياء تكون الخلايا قادرة على إظهار وإفراز كميات كبيرة من‎ ‏معين مهم في وسط المزرعة. أمثلة على خلايا مضيفة من كائن نديي‎
DHFR ‏مناسبة داخل مفهوم الاختراع الحالي تتضمن خلايا مبيض جرذ صيني/‎ ‏خلايا‎ ¢(CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 [1980]) (VIA ‏مارس‎ ١١ ‏(براءة الاختراع الأوروبية 207757 المنشورة في‎ dpl2. CHO ‏,005-7)؛‎ ATCC CRL 1651) SV 40 ‏خط 071 كلية قرد متحولة بواسطة‎ (trade jie ‏خلايا منسوخة فرعيا للنمو في‎ YAY ‏أو‎ YAY) ‏خط كلية نامية آدمية‎ ‏)؛‎ 100 CCL 10:BHK) ‏صتقطة:6؛ خلايا كلية جرذ رضيع‎ et al.,J.Gen Virol., 36:59[1977] ‏مد‎ ‏.1114)؛ خلايا كلية‎ Mather, Biol, Repord., 23:243-251[1980]) ‏لفأر‎ sertoli ‏خلايا‎ ‎«VERO-76) ‏خلايا كلية قرد أخضر أفريقي‎ ¢(CVI ATCC CCL 70) ‏فرد‎ ‏100م)؛‎ CCL2 HELA) ‏100)؛ خلايا سرطان عنق الرحم أدمية‎ CRL-1587 «(BRL 3A) buffalo ‏خلايا كبد فأر‎ ¢((ATCC 0134 (MDCK) ‏خلايا كلية كلب‎ ‏خلايا كبد أدمي‎ (ATCC CCL 75 «W138) dad ‏خلايا رئة‎ (ATCC CRL 1442 >»
TRI ‏خلايا‎ (ATCC CCL 51 «MMT 060562) ‏ورم ندي فأر‎ ¢(HB 8065 Hep G2) ‏خلايا 154؛‎ «MRCS WIA ¢(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68 [1982]) (Hep G2) ‏أدمي‎ hepatoma ‏وخط‎ ‎DHFR ‏مبيض جرذ صيني/‎ UIA ‏تتضمن خلايا مضيفة مفضلة‎ (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 ]980(( Yo (VIA سرام١*# ‏(براءة الاختراع الأوروبي 707741 المنشور في‎ 0012. CHO ‏خلايا‎
VY
‏داخل مفهوم الاختراع الحالي إلى تكملة وسط يكون أساسا بروتين‎ "peptone ‏يشير المصطلح‎ gelatin «dd all ‏حيواني متحلل مائيا. قد يكون مصدر هذا البروتين منتجات ثانوية حيوانية من‎ ‏منقى» أو مادة نباتية. نموذجيا يتحلل مائيا البروتين باستخدام حمض؛ حرارة أو مستحضرات‎ "Primatone RL" ‏المثال؛‎ Ju ‏مفضلة هيء على‎ peptone ‏متنوعة. خلطات‎ enzyme pa A) -(Sheffield, England) ‏كلاهما متاح تجاريا‎ 'Primatone MS's ‏للخلية‎ ego 5dr 2d" cell specific productivity ‏إن "الإنتاجية النوعية للخلية‎ ‏بمعنى ؛ لكل خلية؛ أو لكل قياس لكتلة أو‎ (de gill ‏الع" إلخ؛ يستخدم هنا ليشير إلى‎ speific rate ‏معدل إظهار المنتج. تقاس الإنتاجية النوعية للخلية؛ على سبيل المثال بالجرام من‎ cals ‏حجم‎ ‏البروتين المنتج لكل خلية في اليوم. يمكن قياس الإنتاجية النوعية للخلية بصورة مناسبة طبقا‎ ‏للطريقة المكملة:‎ ٠ dp/dt=gq,X,or !
P=gq, | Xa 0 ‏هو عدد الخلايا أو حجم الخلية أو مكاففات كتلة‎ X ‏حيث مو هو ثابت الإنتاجية النوعية للخلية؛‎ ‏من رسم بياني لتركيز‎ Gp ‏الخلية؛ و 00/04 هو معدل إنتاج البروتين. لذلك؛ يمكن الحصول على‎ : | xe ‏طبقا لهذه‎ ("viable cell days ‏المنتج مقابل تكامل زمن الخلايا الحية ( م "أيام الخلية الحلية‎ ‏الناتجة ضد أيام الخلية الحية يكون‎ glycoprotein ‏الصيغة؛ عند عمل رسم بياني لكمية منتج‎ vo ‏المنحنى مكافئا للمعدل النوعي للخلية. يمكن تحديد الخلايا الحية بقياسات عديدة؛ على سبيل المثال؛‎ ‏أو‎ turbidity ‏التعكينر‎ (LDH) lactase dehydrogenase ‏إزالة‎ {Oy ‏الكتلة الحيوية؛ معدل رفع‎ -packed cell volume ‏حجم الخلية المتراصة‎ ‏مزرعة الخلية إلى فترة نمو الخلية الأسية (طور اللوغاريتم)‎ "growth phase ‏يشير "طور نمو‎ — ‏الخلايا لفترة من الزمنء عادة بين‎ gor ‏حيث تتنقسم عموما الخلايا بسرعة. أثناء هذه المرحلة‎ 7 ‏وتحت الظروف التي تضخم نمو الخلية. يمكن تحديد دورة النمو للخلية المضيفة من أجل‎ Gl ‏؛‎ ‎period of time ‏الخلية المضيفة المعينة المحتملة بدون تجارب غير ضرورية. إن 'فترة زمنية‎ ‏نمو الخلية"»؛ إلخ؛ يشير إلى ظروف المزرعة المحددة؛ لخط‎ maximized ‏ظروف تضخم‎ cal ‏لنمو وانقسام الخلية. أثناء طور النموء تزرع الخلايا في وسط مغذي‎ JT ‏خلية معين؛ لتكون‎ ‏متحكم‎ cab ‏في جو‎ A gle? 2 ‏*منوية-‎ va ‏يحتوي على الإضافات الضرورية عموما عند حوالي‎ Yo avi
AR
‏فيه؛ بحيث يتحقق أمثل نمو لخط الخلية المعين. تظل الخلايا في طور النمو لفترة حوالي بين واحد‎ ‏وأربعة أيام؛ عادة بين يومين إلى ثلاثة أيام.‎ ‏لمزرعة الخلية إلى الفترة الزمنبة التي خلالها تطبق‎ "transition phase ‏يشير "الطور الانتقالي‎ ‏شروط المزرعة لمرحلة الإنتاج. أثناء الطور الانتقالي تتحول العوامل البيئية مثل درجة حرارة‎ ‏مزرعة الخلية؛ أزموزية الوسط إلخ؛ من ظروف النمو إلى ظروف الإنتاج.‎ ٠ ‏مزرعة الخلية إلى الفترة الزمنية التي أثناءها يتسع‎ "production phase ‏يشير "طور الإنتاج‎ ‏نمو الخلية. أثناء طور الإنتاج؛ ينتهي نمو الخلية اللوغاريتمي و يبدأ إنتاج البروتين. أثناء هذه‎ glycoprotein ‏الفترة الزمنية يستكمل الوسط عموما ليدعم إنتاج مستمر للبروتين وليحقق منتج‎ ‏المرغوب.‎ ‏ليشير إلى النسخ والتحول‎ "expresses ‏و 'يظهر‎ "expression ‏يستخدم هنا المصطلح "إظهار‎ Ve ‏الناشئ في الخلية المضيفة. يتحدد مستوى إظهار جين منتج في خلية مضيفة على أساس سواء‎ ‏المقابل الموجود في الخلية أو كمية البروتين المشفر بواسطة جين المنتج الذي تنتجه‎ mRNA ‏كمية‎ ‏بالتهجين الشمالي.‎ mile ‏منسوخ من جين‎ MRNA ‏كمية‎ ld ‏الخلية. على سبيل المثال‎
Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, pp. 7.3-7.57(Cold
Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Vo ‏يمكن قياس كمية بروتين مشفر بجين منتج سواء باختبار النشاط الحيوي للبروتين أو باستعمال‎ ‏أو اختبار المناعة الإشعاعي باستخدام‎ "western blotting” Jie ‏اختبارات مستقلة عن هذا النشاط؛‎ ‏أجسام مضادة قادرة على التفاعل مع البروتين.‎
Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, pp. 18.1-18.88 (Cold
Spring Harbor Laboratory Press, 1989). 9 ‏سلسلة مستقيمة أو متفرعة؛ مشبع‎ alkanoic ‏أو ملح منه يقصد به حمض‎ alkanoic ‏إن حمض‎ ‏عموما من ذرة واحدة إلى عشرة ذرات كربون‎ alkanoic ‏أو غير مشبع؛ أو ملح منه. كون حمض‎ ‏تمثيلي هو حمض‎ alkanoic ‏ويفضل من ثلاث إلى ست ذرات كربون. إن حمض‎ carbon atoms .sodium butyrate ‏والملح المقابل هو‎ butyric
Cell Culture Procedures ‏؟- إجراءات مزرعة الخلية‎ vo ‏اكتشف المخترعون الحاليون أن العوامل التي تزيد من الإنتاجية النوعية للخلية أثناء إنتاج‎
Sialic ‏منتج من مزرعة خلية كائن ثدبي يكون لها أثر عكسي على محتوى حمض‎ glycoprotein yo ‏المنتج. نظرا لأن البروتينات التي تظهر واحدا أو أكثر من متخلفات حمض‎ glycoprotein ‏من‎ ‏معقد يكون لها معدلات إزالة أطول في الجسم؛ يمكن تغيير‎ oligosaccharide ‏لكل بناء‎ sialic sialylation ‏المنتج داخل حدود واسعة بواسطة الدرجة الكلية‎ glycoprotein ‏معدل إزالة‎ glycoprotein ‏لأجل‎ sialylation ‏للمستحضر. يوفر الاختراع الحالي عملبات للتحكم في مدى‎ ‏منتج من مزرعة خلية كائن ثديي. بعد الطريقة المذكورة هناء يمكننا تحديد المحددات الدقيقة للعملية‎ ٠ ‏منتج من مزرعة خلية كائن ثديي.‎ glycoprotein ‏المرغوب من‎ sialic ‏التي توفر محتوى حمض‎ ‏يمكن‎ glycoprotein ‏نديي لإنتاج مننج‎ SS ‏طبقا للاختراع الحالي تزرع خلية مضيفة‎ ‏بالتحكم في محددات‎ glycoprotein ‏في‎ sialic ‏استعادته. يتم التحكم في المحتوى الكلي لحمض‎ ‏مزرعة الخلية التي تؤثر في الإنتاجية النوعية للخلية. تكون العوامل المؤثرة في الإنتاجية النوعية‎ ‏للخلية معروفة جيدا في هذا الفن وتتضمن؛ لكن لاتقتصر على؛ عوامل تؤثر في عدد نسخة‎ ٠ ‏مواد مغذية للوسط‎ RNA ‏مثل عوامل تعمل على استقرار‎ (RNA ‏عوامل تؤثر في‎ (RNA/DNA ‏أزموزية بيئة المزرعة؛ درجة الحرارة والأس‎ call ‏ومواد مكملة أخرى؛ تركيز مواد تحسين‎ ‏وحدها أو في‎ eel sal ‏الهيدروجيني لمزرعة الخلية؛ إلخ. طبقا للاختراع الحالي فإن ضبط هذه‎ ‏توليفة لزيادة الإنتاجية النوعية للخلية؛ يولد بروتين مع محتوى حمض 8816 متناقص. إن ضبط‎ ‏ناضج‎ glycoprotein ‏للخلية؛ يولد‎ Le gill ‏هذه العوامل؛ وحدها أو في توليفة؛ لإنقاص الإنتاجية‎ ١ ‏متزايد.‎ sialic ‏مع محتوى حمض‎ ‏يوصف الاختراع الآن بالإشارة إلى مبادئ وتقنيات مزرعة خلية متتوعة؛ بما في ذلك‎ ‏المعروف جيدا منها.‎ ‏مرغوب. عند اختيار‎ glycoprotein ‏طبقا للاختراع الحالي تزرع خلايا كائن ثديي لإنتاج منتج‎ ‏من المهم إدراك أن الخلايا‎ Jal ‏داخل مفهوم الاختراع‎ glycoprotein ‏الخلية المضيفة لإنتاج‎ v. ‏المضيفة المختلفة لها خصائص وطرق عمل معينة للعملية التحويلية واللاحقة للتحويلية وتعديل‎ ‏يجب اختيار خطوط خلية ملائمة‎ (cleavage ‏انشقاق‎ «glycosylation ‏للبروتينات الظاهرة (مثلاء‎ ‏يمكن تعديل الخلايا المضيفة‎ edly ‏لضمان إمكانية التعديلات المرغوبة اللاحقة للتحويلية. بطريقة‎ ‏لإظهار منتج جين مرغوب مطلوب للتعديل اللاحق على التحويل النوعي.‎ ‏فإن خلايا الكائن الثديي التي تظهر البروتين المرغوب يجب أن تظهر‎ als ‏بوجه‎ Yo ‏أو تعدل لتظهر الإنزيمات الخاصة بحيلث إنه تحت الشروط الملائمة؛ الموصوفة هناء‎ ‏بحدث التعديل اللاحق على التحويل الملائم في الجسم. تتضمن الإنزيمات تلك الإنزيمات‎
الضرورية لإضافة واكتمال ‎carbohydrates‏ مرتبطة مع ‎N‏ و0 ‎Jie‏ الإنزيمات الموصوفة في ‎«Hubbard and Ivan‏ سالف ‎«Sal‏ لأجل ‎oligosaccharides‏ مرتبطة ‎Nae‏ تتضمن الإنزيمات اختياريا ‎«alpha-glucosidase II «alpha-glucosidase 1 :oligosaccharyltransferase‏ ‎N-acetylglucosaminyl- «Golgi alpha-mannodase I «ER alpha(1,2) mannosidase‏ ‎alpha «N-acetylglucosaminyltransferase II «Golgi alpha-mannodase II «transferase I ~~ »‏ ‎Lf(1,4)galactosyltransferase 5 «(1,6)fucosyltransferase‏ إضافة إلى ذلك»؛ تظهر الخلية المضيفة ‎sialyl transferase‏ الملائم المتوقع ارتباطه بحمض ‎sialic‏ الطرفي ‎terminal‏ في موقع معين ورابطة كجزء من ‎genome‏ الخلية المضيفة. اختياريا؛ يمكن تحضير الخلية المضيفة لتظهر ‎sialyl transferases‏ الملائمة بواسطة؛ على سبيل ‎(JB)‏ تطعيم ‎transfection‏ الخلية المضيفة مع ‎DNA).‏ الذي يحمل شفرة ‎sialyl transferase‏ يتوقع من ‎sialyl transferase‏ الموصوف أعلاه أن يضيف متخلف حمض ‎sialic‏ الطرفي إلى بناء قلب ‎oligosaccharide‏ الملائم ‎BI-4GleNAc Jie‏ [028. يتضمن ‎sialyl transferase‏ ملائم ضمن مفهوم الاختراع الحالي؛ لكن لا يقتصر ‎sialyl transferases ¢ Je‏ الذي يحفز ‎sialylation‏ ‏المعقدة وتفريع ‎oligosaccharides‏ مرتبطة مع ‎N‏ و0. ‎ve‏ من أجل مزرعة خلايا كائن ثديي تظهر البروتين المرغوب وتكون قادرة على إضافة ‎carbohydrates‏ المرغوبة في رابطة وموضع معين؛ يمكن استخدام ظروف مزرعة متنوعة مع اهتمام خاص بالخلية المضيفة المزروعة. تكون ظروف مزرعة مناسبة لخلايا كائن ثديي معروفة جيدا في الفن )1983)56:221-234( ‎(J.
Immunol.
Methods‏ أو يحددها بسهولة الفنيون الماهرون انظر؛ على سبيل المثال؛ ‎Animal Cell Culture: A Practical Approach 2nd Ed., Rickwood, D. and Hames, B.
Y.‏ ‎D., eds, Oxford University Press, New York (1992),‏ ‎٠‏ وتتنوع طبقا للخلية المضيفة المعينة المختارة. تحضر مزرعة خلية الكائن الثديي في الاختراع الحالي في وسط مناسب للخلية الخاصة المزروعة. إن وسطا متاحا تجاريا مثل: ‎Ham's F10 (Sigma), Minimal Essential Medium (Sigma, [MEM]), RPMI-1640 9‏ ‎(Sigma), and Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Sigma) [DMEM],‏ عبارة عن محاليل مغذية تمثيلية. إضافة لهذاء يمكن استخدام كوسط مزرعة أي وسط موصوف في
ل ‎Ham and Wallace,(1979) Meth.
Enz., 58:44; Barnes and Sato,(1980) Anal.;‏ ‎Biochem., 102:255‏ براءات الاختراع الأمريكية أرقا 139/64 ‎ETA CERYVVIY (£TOVATT‏ 177 أو ‎fo oo‏ المنشورات الدولية أرقام 90/03430 1/0؟؛ 5 87/00195 ‎tWO‏ جميع محتوياتها م مندمجة هنا كمرجع. يمكن استكمال أي وسط حسب الضرورة مع هرمونات و/ أو عوامل نمو أخرى ‎of ctransferrin «insulin Jie)‏ عامل ‎(sats sai‏ أملاح ‎«sodium chloride Je)‏ ‎(phosphate 5 «magnesium «calcium‏ مواد لضبط الأس الهيدروجيني (مثل ‎(HEPES‏ ‎(thymidine 5 adenosine Jis) nucleosides‏ مضادات حيوية (مثل ‎«(gentamycin‏ عوامل ضئيلة (تعرف كمركبات غير عضوية ‎inorganic‏ توجد ‎sale‏ عند تركيزات نهائية في نطاق ‎٠‏ الميكروجزيئي جرامي)؛ دهون ‎linoleic die)‏ أو أحماض دهنية ‎fatty acids‏ أخرى) ومواد حاملة مناسبة منهاء ‎glucose s‏ أو مصدر طاقة ممائل. يمكن أيضا إدخال أي مواد تكميلية ‎supplements‏ ‏ضرورية أخرى عند تركيزات ملائمة معروفة للماهرين في الفن. في تجسيد ‎(ald‏ تكون الخلية المضيفة هي خلية ‎(CHO‏ تفضل خلية ‎CHO‏ .0012 ووسط مناسب يحتوي على مكون وسط قاعدي مثل مستحضر قاعدته 7-12 ,01/21/11 (من أجل ‎ve‏ تركيبة وسط ‎DMEM‏ و11/11212؛ انظر مستحضرات وسط مزرعة في ‎American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas, Sixth‏ ‎Edition, 1988, pages 346-349)‏ (تحضير وسط كماهو موصوف في براءة الاختراع الأمريكية 4564 ‎©٠١77‏ ملائم بوجه خاص) مع تركيزات معدلة لبعض المكونات ‎camino acids Jie‏ أملاح والوى سكر ‎csugar‏ وفيتامينات ‎vitamins | ٠‏ واختياريا تحتوي على ‎insulin ¢thymidine 5 hypoxanthine «glycine‏ آدمي تخليقي؛ ‎peptone‏ منحل ‎<hydrolyzed peptone Lite‏ مقثل ‎Primatone RL | Primatone HS‏ ‎(Sheffield, England)‏ أو ما يماثله؛ عامل وقاية خلية؛ ‎pluronic polyol si pluronic F68 Jie‏ المكافئ؛ ‎gentamycin‏ وعوامل ضئيلة. يمكن إنتاج ‎glycoproteins‏ الاختراع الحالي بإنماء خلايا تظهر البروتين المرغوب تحت ‎ve‏ تشكيلة من ظروف مزرعة خلية. على سبيل المثال؛ عمليات مزرعة خلية لمستوى الإنتاج الكبير أو الصغير من البروتينات نافعة بفعالية داخل مفهوم الاختراع الحالي. يمكن استخدام إجراءات تتضمن؛ لكن لاتقتصر على؛ مفاعل حيوي ‎bioreactor‏ قاع متميع ‎fluidized bed‏ مفاعل حيوي ‎ava‏
ا ألياف مفرغة ‎hollow fiber‏ مزرعة زجاجة دوارة ‎«roller bottle‏ أو نظام مفاعل حيوي خزان مقلب ‎«stirred tank bioreactor system‏ في النظامين الأخيرين؛ مع أو بدون مواد حاملة دقيقة ‎Jey cmicrocarriers‏ كبديل في طريقة دفعة واحدة؛ دفعة تغذية واحدة ‎fedbatch‏ أو طريقة مستمرة.
° في تجسيد مفضل تعد مزرعة الخلية من الاختراع الحالي في نظام مفاعل حيوي خزان مقلب ويستعمل إجراء مزرعة تغذية دفعة واحدة. في مزرعة تغذية الدفعة الواحدة المفضلة؛ تقدم الخلايا المضيفة لكائن ثديي و وسط المزرعة في وعاء زراعة أولي وتتم تغذية مواد تغذية لمزرعة إضافية؛ باستمرار أو في أجزاء منفصلة؛ إلى المزرعة أثناء الزراعة؛ مع أو بدون خلية دورية و/أو حصاد منتج قبل إنهاء الزراعة. تتضمن مزرعة تغذية الدفعة الواحدة؛ على سبيل المثال؛ مزرعة
‎٠‏ تغذية دفعة واحدة شبه مستمرة؛ حيث تزال مزرعة إجمالية دورية (تتضمن خلايا و وسط) وتستبدل بوسط طازج. تتميز مزرعة تغذية دفعة واحدة عن مزرعة الدفعة الواحدة البسيطة التي فيها تقدم كل مكونات زراعة الخلية (بما في ذلك الخلايا والمواد المغذية للمزرعة) إلى وعاء الزراعة عند بداية عملية الزراعة. يمكن تمييز مزرعة تغذية دفعة واحدة ‎Lal ial‏ عن الزراعة المتغلغلة ‎perfusion culturing‏ نظرا لعدم إزالة ‎sala)‏ الطافية 5010620818 من وعاء الزراعة أثناء العملية
‎ve‏ (في الزراعة المتغلغلة؛ تقيد الخلايا في المزرعة بواسطة؛ مثلا؛ الترشيح ‎filtration‏ الكبسلة ‎encapsulation‏ الاستقرار على مواد حاملة دقيقة؛ إلخ؛ ويضاف ويزال وسط المزرعة باستمرار أو في تقطع من وعاء الزراعة).
‏إضافة إلى ذلك؛ يمكن تكاثر خلايا المزرعة طبقا لأي برنامج أو نظام يكون مناسبا للخلية
‏المضيفة المعينة وخطة الإنتاج المعين المتوقعة. ‎colli‏ يتقبل الاختراع الحالي إجراء زراعة من
‏© خطوة واحدة أو متعددة الخطوات. في مزرعة من خطوة واحدة تلفح الخلايا المضيفة في بيئة
‏الزراعة وتستعمل عمليات الاختراع الحالي أثناء طور الإنتاج الفردي لمزرعة الخلية. بطريقة
‎Aly‏ تستعمل مزرعة متعددة المراحل. في مزرعة متعددة المراحل يمكن تحضين خلايا في عدد
‏من الخطوات أو المراحل. على سبيل المثال؛ يمكن إنماء الخلايا في مزرعة خطوة أولى أو طور
‏نمو حيث تلقح الخلاياء من الممكن إزالتها من التخزين؛ في وسط مناسب لتحسين النمو والحيوية
‎ve‏ العالية. يمكن الحفاظ على الخلايا في طور النمو لفترة زمنية مناسبة بإضافة وسط طازج إلى مزرعة الخلية المضيفة.
‎avi
طبقا لجانب مفضل من الاختراع؛ تجهز مزرعة تغذية دفعة واحدة أو مزرعة ‎Ala‏ مستمرة لتحسين نمو خلايا الكائن الثديي في طور نمو مزرعة الخلية. في طور النمو تنمو الخلايا تحت ظروف و لفترة زمنية تضخم النمو. ظروف المزرعة؛ مثل درجة الحرارة؛ الأس الهيدروجيني؛ الأكسجين المذاب ‎oxygen )0202( (Oj)‏ 0158017©0؛ إلخ؛ هي تلك المستخدمة مع المضيف المعين ‎٠‏ وهي واضحة للفنيين الماهرين العاديين. عموماء يضبط الأس الهيدروجيني إلى مستوى بين حوالي ‎V,0 5 1,0‏ باستخدام سواء حمض ‎(CO, Die)‏ أو قاعدة (مثلاء ‎NayCO3‏ أو 218011). يكون مدى درجة الحرارة المناسب لزراعة خلايا كائن ثديي مثل خلايا ‎CHO‏ بين حوالي ‎Fe‏ إلى ‎Asie’ TA‏ وو0ل مناسب بين 7950-8 من تشبع الهواء. عند مرحلة معينة يمكن استخدام الخلايا لتلقيح خطوة أو طور الإنتاج لمزرعة الخلية. بطريقة ‎٠‏ . بديلة؛ كما هو موصوف أعلاه قد يكون طور أو خطوة الإنتاج مستمرة مع طور أو خطوة النمو أو التلقيح. طبقا للاختراع الحالي؛ يتم التحكم في بيئة مزرعة الخلية أثناء طور الإنتاج لمزرعة الخلية. طبقا لعملية الاختراع الحالي؛ تعدل العوامل المؤثرة في الإنتاجية النوعية للخلية لخلية مضيفة لكائن ثديي بحيث يتحقق محتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب في ‎glycoprotein‏ الناتج. بوجه خاص؛ يتم ‎١‏ _التحكم في العوامل التي تزيد من الإنتاجية النوعية للخلية أثناء طور الإنتاج لعملية مزرعة الخلية بحيث يحتوي منتج ‎glycoprotein‏ الناتج على محتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب. في جانب مفضل؛ يسبق طور الإنتاج لعملية مزرعة الخلية طور انتقالي لمزرعة الخلية فيها يطبق حدود طور الإنتاج لمزرعة الخلية. طبقا لأحد جوانب الاختراع الحالي يعدل تركيز مادة تحسين النسخ مثل حمض ‎alkanoic‏ ‏© لاللتأثير في الإنتاجية النوعية للخلية و بذلك في محتوى حمض ‎sialic‏ الناتج لمنتج ‎glycoprotein‏ ‏خلية الكائن الثديي. قد يكون حمض ‎alkanoic‏ أي واحد من عدد من أحماض ‎alkanoic‏ سلسلة منفردة أو متفرعة تحسن من نسخ بروتينات كائن ثديي. في تجسيد مفضل يكون حمض ‎alkanoic‏ ‏هو حمض 51115116 وخصوصا الملح منه؛ ‎-sodium butyrate‏ طبقا للاختراع الحالي يتم التحكم في تركيز ‎sodium butyrate‏ للتحكم في الإنتاجية ‎Ae sill‏ ‎ve‏ للخلية. تستخدم تركيزات ‎sodium butyrate‏ بين ‎١٠‏ و١7‏ مللي جزيئي جرامي وتعدل طبقا للخلية المضيفة المعينة المزروعة و محتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب من ‎glycoprotein‏ المنتج. من أجل توليد بروتين مع محتوى حمض ‎sialic‏ المرغوب يُختار تركيز ‎sodium butyrate‏ الذي ‎avi‏
Yo ‏قبولا. لذلك؛ طبقا للاختراع الحالي‎ SY) sialic ‏يوفر أعلى إنتاجية نوعية للخلية مع هيئة حمض‎ sialic (aes ‏للحصول على محتوى‎ sodium butyrate Jie ‏تُختار تركيزات لمادة تحسين نسخ‎ ‏المرغوب.‎ ‏تستخدم تركيزات دنيا من‎ (be see ‏الناضج:؛‎ glycoprotein ‏من‎ sialic ‏لزيادة محتوى حمض‎ ‏مع‎ J ‏تحسين النسخ. يوفر التركيز الأقل للنسخ المحسن؛ لكنه يحفظ إنتاجية نوعبة للخلية‎ sles ‏الحفاظ على حيوية مزرعة الخلية المضيفة. عموما تستخدم تركيزات لمادة تحسين النسخ مثل‎ ‏مللي جزيئثي جرامي.‎ A ‏مللي جزيئي جرامي إلى حوالي‎ ١.١ ‏بين حوالي‎ sodium butyrate ‏مللي جزيئي جرامي. في تجسيد مفضل يستخدم‎ ١و‎ ١ ‏يفضل أكثر استخدام تركيزات بين حوالي‎ ‏مللي جزيئي‎ ١ ‏في تجسيد آخر يستخدم حوالي‎ sodium butyrate ‏مللي جزيئي جرامي‎ ١ ‏حوالي‎ ‎.sodium butyrate ‏جرامي‎ ٠ ‏طبقا لهذا الجانب‎ sialic ‏مع مستوى متناقص من حمض‎ glycoprotein ‏في تجسيد آخر ينتج‎ ‏للخلية.‎ de gill ‏ثديي تحت ظروف بحيث تزداد الإنتاجية‎ AS ‏من الاختراع الحالي؛ تزرع خلايا‎ ‏تحسين نسخ ملائمة‎ Bale ‏أو‎ alkanoic ‏تركيز حمض‎ ad ‏طبقا لهذا الجانب من الاختراع الحالي‎ ‏المرغوبة. في‎ sialic ‏أخرى بحيث تزداد إنتاجية نوعية للخلية المولدة لبروتين مع هيئة حمض‎ ‏أو ملح منه بين حوالي 0 و١7 مللي جزيئي جرامي‎ alkanoic ‏تجسيد مفضل يكون تركيز حمض‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي و7١ مللي جزيئي جرامي. في تجسيد خاص؛‎ ١ ‏ويفضل أكثر بين حوالي‎ ‏مللي جزيئي جرامي.‎ ١١ ‏حوالي‎ sodium butyrate ‏يكون تركيز‎ ‏أو ملح منه؛ يشار إلى شكل‎ alkanoic ‏حمض‎ Jie ‏لتحديد التركيز الملائم لمادة تحسين النسخ‎ ‏عن تركيزات‎ Lage ‏طبقا للاختراع الحالي تنتج‎ .١ ‏فيما بعد في مثال‎ ١ ‏وكذلك الجدول‎ ¥ ‏مع‎ sodium butyrate ‏تركيزات‎ liad ‏للاختراع‎ Gls . ‏أقل إنتاجية نوعية للخلية أقل‎ butyrate ve ‏ملاحظة حدود العملية الأخرى مثل أزموزية مرحلة الإنتاج. كما هو مناقش أدناء يمكن أن تؤثر‎ ‏مع ملاحظة الأزموزية الخاصة‎ butyrate ‏الأزموزية في الإنتاجية النوعية للخلية. ثختار تركيزات‎
ZY ‏المطلوب حفظها أثناء طور‎ ‏أخرى؛ يمكن‎ glycoproteins 5 ‏بطريقة بديلة. من أجل خلايا مضيفة لكائن ثديي أخرى‎ ‏بمعنى؛ الإنتاجية‎ glycoprotein ‏تحضير مزارع اختبار صغيرة ويمكن تحديد معدل إنتاج منتج‎ |» ‏النوعية للخلبة و يمكن استخدام محتوى حمض 598016 الناتج في تحضير جدول مماثل وشكل ملاثم‎ ‏للخلية يؤدي إلى‎ de gill ‏للخلية المضيفة الخاصة المزروعة؛ مع ملاحظة أن النقص في الإنتاجية‎
الزيادة في محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ المنتج. يضاف حمض ‎alkanoic‏ أو ملح ‎(die‏ ‎sodium butyrate Jie‏ مادة محسنة للنسخ ملائمة أخرى إلى مزرعة الخلية المضيفة عند أو حوالي زمن بدء طور الإنتاج لمزرعة الخلية. بصورة مناسبة؛ يستخدم طور انتقالي أثشاء عملية مزرعة الخلية سابق لطور الإنتاج الذي فيه يطبق ظروف مزرعة الخلية كما هو مناقش هنا من ‎٠‏ أجل الإنتاجية النوعية للخلية المرغوبة ومن ثم هيئة ‎glycoform‏ المرغوبة. يضاف حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه بأي وسيلة معروفة في الفن. في تجسيد مفضل يضاف ‎sodium butyrate‏ في دفعة واحدة إلى نظام مزرعة تغذية الدفعة الواحدة مع أو بدون مواد مغذية ملائمة أخرى كما هو موصوف هنا أو معروف للماهرين في فن مزرعة خلية كائن ثديي. ‎i‏ للاختراع الحالي يتم التحكم في أزموزية بيئة مزرعة الخلية بالإضافة إلى العوامل ‎٠‏ - المدونة أعلاه لتنظيم ‎sialylation (sae‏ في ‎glycoprotein‏ الناضج. في أحد التجسيدات؛ يتم التحكم في الأزموزية للتحكم في محتوى حمض ‎sialic‏ للبروتين الناضج مستقلا عن العوامل الأخرى التي تؤثر في الإنتاجية النوعية للخلية. في تجسيد آخر يتم التحكم في الأزموزية بالإضافة إلى التحكم في العوامل الأخرى التي تؤثر في الإنتاجية النوعية للخلية. في تجسيد مفضل يتم التحكم في كل من الأزموزية و تركيز حمض ‎.alkanoic‏ ‎vo‏ يتم التحكم في أزموزية بيئة مزرعة الخلية لإنتاج التوازن المرغوب بين الإنتاجية النوعية للخلية وهيئة حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ الناتج. عموماء؛ تزداد الإنتاجية النوعية للخلية عند زيادة الأزموزية. ُختار الأزموزية التي تنتج بروتين مع حمض ‎sialic‏ المرغوب مع مراعاة أن زيادة الأزموزية عموما تؤدي إلى زيادة معدل إنتاج البروتين المعين. من أجل إنقاص معدل الإنتاج و زيادة محتوى حمض ‎sialic‏ من ‎glycoprotein‏ الناضج تظل الأزموزية عموما عند © مستوى أقل لنوع الخلية المعينة المزروعة. من أجل مزرعة خلية كائن ثديي تكون أزموزية وسط المزرعة عموما حوالي ‎FEY‏ ‎Je‏ أزمول ‎mOsm‏ مع ‎cell‏ تؤدي زيادة الأزموزية عموما إلى زيادة معدل إنتاج البروتينات. ‎aS‏ الأزموزية بحيث ‎JIE‏ معدل الإنتاج هيئة المنتج المرغوب. لزيادة محتوى حمض ‎sialic‏ ‏ينقص معدل الإنتاج وتظل الأزموزية عموما داخل حدود أقل مع مراعاة الخلية المضيفة المعينة ‎vo‏ المزروعة. إن أزموزية في حدود من حوالي ‎You‏ مللي أزمول إلى حوالي £00 ‎Ale‏ أزمول تعد ملائمة لمحتوى حمض ‎sialic‏ متزايد. يفضل ‎«AST‏ أن تظل الأزموزية عند حوالي بين 00 و4590
YY
‏مللي أزمول؛ طبقا لهذا الجانب من الاختراع؛ ويفضل أكثر بين حوالي +38 و00 مللي أزمول؛‎ ‏والأفضل حوالي 400 مللي أزمول.‎ ‏أزموزية توفر معدل إنتاج متزايد. طبقا لهذا الجانب‎ iad (JB sialic ‏من أجل محتوى حمض‎ ‏مللي أزمول؛ ويفضل بين حوالي‎ 00-*”*٠ ‏من الاختراع؛ تظل الأزموزية عند حوالي بين‎ ‏مللي أزمول؛ طبقا لهذا الجانب من الاختراع.‎ oto 0 ‏يدرك الممارس الماهر أن أزموزية الوسط تعتمد على تركيز الجزيئات النشطة أزموزيا في‎ ‏سائل المزرعة و أن عدد من المتغيرات التي تصنع وسط مزرعة خلية كائن ثديي معقد تفرض‎ ‏الأزموزية. تتحدد الأزموزية الابتدائية لوسط المزرعة بواسطة تركيبة وسط المزرعة. يمكن قياس‎
Fisher Scientific, Pittsburgh, Pa. ‏المباع من شركة‎ Jia ‏الأزموزية باستخدام مقياس أزموزية‎
Precision Systems, ‏المتاح من‎ «Ye ov ‏طراز‎ Osmette ‏(أو‎ OSMETTE ‏تحت الاسم التجاري‎ ٠ ‏.106)؛ على سبيل المثال. من أجل تحقيق أزموزية في المدى المرغوب؛ يمكن‎ Natick Mass ‏ضبط تركيز مكونات متنوعة في وسط المزرعة.‎ ‏تتضمن‎ osmolality ‏إن المحاليل الممكن إضافتها إلى وسط المزرعة لزيادة أزموزيتهيات‎ polymers «peptones ‏مل‎ Lila ‏بروتينات حبوانية تتحل‎ camino acids «peptides «ling salts ‏أملاح‎ dons ‏أبيونات‎ vitamins ‏فيتامينات‎ 101-0068020 polymers ‏غير أيضية‎ he ‏عتصقعته؛ دهون فلتمثل‎ acids ‏أحماض عضوية‎ metabolites ‏مواد أيضية‎ sugars ‏سكريات‎ ‏إلى مزرعة الخلية مع مكونات‎ peptone ‏إلخ. في أحد التجسيدات؛ يتم التحكم في الأزموزية بإضافة‎ ‏أخرى لوسط المزرعة أثناء عملية مزرعة تغذية دفعة واحدة.‎ ‏طبقا للاختراع الحالي تظل الأزموزية أو تضبط إلى المدى المرغوب بواسطة إضافة؛‎ «(NaCl ‏أملاح متنوعة (إمثلا؛‎ camino acids ‏على سبيل المثال؛ مستحضر وسط قاعدي يتضمن‎ - © ‏وسط‎ Jol ‏في تجسيد مفضل؛ يستكمل وسط المزرعة مع؛ على سبيل‎ peptone ‏بالإضافة إلى‎ ‏من براءة‎ "Super" ‏زائدة (انظرء مثلا؛ الوسط‎ amino acids ‏مزرعة قاعدي يحتوي على‎ peptone 5 «glucose ‏الاختراع الأمريكية رقم 4314 ؟؟دد)‎ ‏مع ذلك يجب تقدير إمكانية تعديل تركيز (تركيزات) مكونات أخرى في وسط المزرعة من‎ ‏أجل تحقيق مدى أزموزية كما هو مذكورأعلاه. سواء بالتحكم المتقطع أوالمستمر في تركيز‎ ve ‏(مصدر الطاقة الأولي)؛ على سبيل المثال؛ في وسط المزرعة خلال الزراعة؛ يمكن‎ glucose ‏الحفاظ على أزموزية الوسط عند حوالي المدى المحدد المرغوب. يعمل التحكم في تركيز‎ avi vy ‏على توفير مصدر كربون مناسب للخلايا و في نفس الوقت على التحكم في إنتاج حمض‎ glucose ‏بواسطة الخلايا المضيفة. يعتبر هذا مفضلا للحد من نقصان الأس الهيدروجيني في وسط‎ lactic ‏يتسبب في‎ Lay (NaOH ‏أو‎ NapCO3 ‏المزرعة الذي يتطلب إضافة مادة تعادل (مثلا؛ قاعدة مثل‎ ‏ارتفاع الأزموزية.‎
و يمكن استكمال الوسط للحفاظ على الأزموزية داخل الحدود الملائمة طبقا لأي برنامج مستخدم للحفاظ على مزرعة الخلية. في تجسيد مفضلء يكون نظام المزرعة هو نظام مزرعة تغذية ‎Ais‏ ‏واحدة ويستكمل الوسط في دفعة تغذية واحدة أثناء طور إنتاج مزرعة الخلية. إضافة لذلك يمكن استكمال الوسط أثناء طور الإنتاج كما هو موصوف فيما بعد.
بطريقة ‎cy‏ يمكن إجراء أخذ عينة متقطع من العملية لوسط المزرعة. عندئذ يمكن تعديل ‎٠‏ أزموزية وسط المزرعة بواسطة تعديل محلول التغذية حسب الطلب. من المفهوم للفني الماهر أن إجراءات مزرعة الخلية للاختراع الحالي مختارة لتحقيق المستوى المرغوب من ‎sialylation‏ للبروتين المنتج. حدود العملية بالإضافة إلى تلك الموصوفة هنا التي تؤثر في درجة ‎sialylation‏ تتضمن مستوى الأكسجين؛ ومستوى ‎glucose‏ كثافة المزرعة؛ زمن وظروف التخزين ‎Jie‏ درجة الحرارة يؤثرون أيضا في ‎sialylation‏ يقصد أن يتضمن الاختراع ‎ve‏ الحالي تلك المحددات للعملية الأنسب أيضا من أجل ‎sialylation‏ محسنة. ‎—V‏ استعادة الجليكوبروتين ‎Recovery of the Glycoprotein‏ بعد طور إنتاج ‎polypeptide‏ يسترجع ‎polypeptide‏ المهم من وسط المزرعة باستخدام تقنيات متعارف عليها جيدا في الفن. يفضل استرجاع ‎polypeptide‏ المهم من وسط المزرعة ‎«Ske polypeptide Jie‏ على الرغم ‎Y.‏ من إمكانية استرجاعه من مادة تحلل الخلية المضيفة. كخطوة أولى؛ تطرد مركزيا وسط المزرعة أو ‎sale‏ التحلل لإزالة متخلفات الخلية الدقيقة. بعد ذلك ينفقى ‎(so polypeptide‏ البروتينات 5 ‎polypeptides‏ القابلة للذوبان الملوثة؛ مع كون الإجراءات التالية مثالا على إجراءات تنقية مناسبة: بواسطة التقطير على عواميد ألفة مناعية ‎immunoaffinity‏ أو تبادل أيون ‎tion-exchange‏ ترسيب ‎ethanol‏ تحليل ‎HPLC‏ حالة معكوسة؛ ‎vo‏ التحليل الكروماتوجرافي على ‎silica‏ أو على راتنج تبادل كاتيون ‎Ji cation-exchange resine‏ ‎(DEAE‏ التركيز الصبغي؛ ‎¢SDS-PAGE‏ ترسيب ‎cammonium sulfate‏ ترشيح هلام باستخدام؛ على سبيل المثال؛ 6-75 ‎(Sephadex‏ وعواميد بروتين ‎A Sepharose‏ لإزالة المواد الملوثئة ‎Jie‏ ‎ava‏
A
‏نافها‎ (PMSF) phenyl methyl sulfonyl fluoride ‏مقثل‎ protease ‏أيضا قد يكون مقط‎ IgG ‏في تثبيط انحلال التحلل البروتيني أثناء التنقية. يدرك الماهر في هذا الفن أن طرق التنقية المناسبة‎ ‏عند‎ polypeptide ‏قد تتطلب تعديلا لتتلاءم مع تغييرات في طبيعة‎ gall polypeptide ‏لأجل‎ ‏الظهور في مزرعة خلية تخليقية.‎ ° يفضل بوجه خاص ضمن مفهوم الاختراع الحالي تقنيات وعمليات تنقية مختارة لأجل ‎(Say pg) ia) carbohydrates‏ توفير ‎glycoforms‏ المرغوبة للاختراع الحالي لجزيئات تحتوي على حمض ‎sialic‏ بواسطة؛ على سبيل ‎(Jal)‏ التحليل الكروماتوجرافي هلام لين تبادل- أيون ‎ion-exchange‏ أو تحليل ‎HPLC‏ باستخدام راتنجات تبادل كاتيون ‎cation‏ أو أنيون ‎Cua anion‏ يجمع الجزء الأكثر حمضية.
Analysis of the Glycoprotein ‏؛- تحليل الجليكوبروتين‎ ١ ‏المنتج‎ glycoprotein ‏المعقد من‎ carbohydrates ‏بسهولة عند الرغبة تحليل قسم‎ (Say ‏على سبيل‎ «lly carbohydrates ‏من عمليات الاختراع الحالي بواسطة تقنيات تقليدية لتحليل‎ ‏طرفي‎ mannose ‏كشف أقسام من‎ (Gill ‏المعروفة جيدا في هذا‎ dectin ‏تبقيع‎ Jie ‏المثال؛ تقنيات‎ ‏يمكن تأكيد إنهاء أحادي؛ ثنائي؛ ثلاثي أو رباعي- لاقط‎ galactose Jie ‏أو سكريات أخرى‎ ‏بواسطة إطلاق‎ sialic ‏بأحماض‎ mono-, bi-tri-, or tetra-antennary oligosaccharide ‏مد‎ ‎oligosaccharides ‏لامائي أو طرق إنزيمية وتقطير‎ hydrazine ‏سكريات من البروتين باستخدام‎ ‏أو التحليل الكروماتوجرافي بإستبعاد المقاس أو طرق أخرى‎ ion-exchange ‏بواسطة تبادل- أيون‎ ‏قبل وبعد المعالجة مع‎ cglycoprotein ‏في‎ pl ‏قباس‎ Lad ‏معروفة جيدا في الفن. يمكن‎ ‏إلى‎ neuraminidase ‏بعد معالجة‎ pl ‏تشير الزيادة في‎ sialic ‏لإزالة أحماض‎ neuraminidase .glycoprotein ‏على‎ sialic ‏وجود أحماض‎ ٠ تظهر أبنية ‎carbohydrates‏ للاختراع الحالي الناشئة على البروتين في هيئة ‎carbohydrates‏ مرتبطة مع ‎-N‏ أو ©0-. تختلف ‎carbohydrates‏ المرتبطة مع ‎-N‏ والمرتبطة مع 0- أساسا في أبنية قلبها. تشير ‎glycosylation‏ مرتبطة مع ‎-N‏ إلى ارتباط جزء ‎carbohydrates‏ عبر ‎GlcNAc‏ مع متخلف ‎asparagine‏ في سلسلة ‎peptide‏ تحتوي ‎carbohydrates JS‏ مرتبطة مع ‎-N‏ على بناء ‎vo‏ القلب الشائع ‎«ll .Manl-6(Man 1-3) Manf1-4 GlcNAcB1-4 GleNacB-R‏ في بناء القلب الموصوف» ‎R‏ يمثل متخلف ‎asparagine‏ للبروتين المنتج. سوف يحتوي ترتيب ‎peptide‏ للبروتبن ‏المنتج على ع26-56:10 مالع 202 ‎«asparagine-X-cysteine 5 «asparagine-X-threonine‏
Yo ‏مرتبطة مع 0-. بالمقابل‎ carbohydrates ‏إن‎ -proline ‏ماعدا‎ amino acid ‏هو أي‎ X ‏حيث يكون‎ threonine ‏لأجل‎ hydroxyl ‏مرتبط مع مجموعة‎ GalNAC ‏تتميز ببناء قلب شائع؛ الذي يكون هو‎ carbohydrates ¢ ‏والمرتبطة مع 0-؛ الأهم‎ -N ‏المرتبطة مع‎ carbohydrates ‏أو عصاع8. من‎ ‏المعقدة على أبنية لاقطة عديدة. إن‎ carbohydrates ‏و0- معقدة. تحتوي هذه‎ -N ‏مرتبطة مع‎ ‏طرفية.‎ sialic ‏الأبنية الخارجية الأحادية؛ الثنائية؛ الثلاثية؛ والرباعية؛ تكون هامة لإضافة أحماض‎ ٠ ‏تتوافر أبنية السلسلة الخارجية لأجل مواقع إضافية للروابط والسكريات المعينة التي تشمل‎ ‏من الاختراع الحالي.‎ 98 ‏في ذلك تلك الطرق‎ Lay ‏الناتجة بأي طريقة معروفة في الفن‎ carbohydrates ‏يمكن تحليل‎ ‏الموصوفة هنا. تكون هناك طرق عديدة معروفة في الفن لتحليل الجليكوسيلية وهي نافعة في مفهوم‎ ‏المرتبط‎ oligosaccharide ‏الاختراع الحالي. توفر هذه الطرق معلومات متعلقة بتصريف وتركيبة‎ ٠ ‏نافعة في الاختراع الحالي» لكن لاتققصر‎ carbohydrates ‏تنضمن طرق لتحليل‎ peptide ‏مع‎ ‏الذي يستخدم تحليل كروماتوجرافي تبادل‎ (HPAEC-PAD tlectin ‏على؛ التحليل الكروماتوجرافي‎ ‏القياس الطيفي‎ (NMR ‏على أساس الشحن؛‎ oligosaccharides ‏أنيون أس هيدروجيني عالٍ لفصل‎ ‏تحليل تركيبي 11101105806081106؟؛ هضم‎ «GPC ‏1855؛ تحليل 1101.0؛ تحليل‎ spectrometry ‏للكتلة‎ ‏إنزيمي متتال.‎ ٠ )١( ‏تكون معروفة. تتضمن هذه الطرق‎ oligosaccharides ‏طرق لإطلاق‎ lls ‏إضافة إلى‎ peptide-N-glycosidase F/endo-p- ‏التي تجرى عموما باستخدام‎ cenzumalic ‏الإنزيمية‎ ‎-0 ‏خشنة لإطلاق أبنية مرتبطة مع‎ alkaline ‏إزالة 8 باستخدام بيئة قلوية‎ (Y) ‏120051056؛‎ ‎oligosaccharides ‏لامائي لإطلاق كلا من‎ hydrazine ‏طرق كيميائبة باستخدام‎ (Y) 5 ‏تحديدا؛‎ ‏و0-.‎ -N ‏مرتبطة مع‎ 1. ‏يمكن إجراء التحليل باستخدام الخطوات التالية:‎ ‏لإزالة أملاح مثبت الأس‎ deionized ‏غير مؤين‎ ele ‏العينة في‎ dialysis ‏ديلزة‎ -١ ‏الهيدروجبني بأكملهاء يليه التجميد بالتبريد.‎ ‏لامائي.‎ hydrazine ‏الصحيحة مع‎ oligosaccharide ‏إطلاق سلاسل‎ -" ‏لامائي لتحرير‎ methanolic HCl ‏الصحيحة مع‎ oligosaccharide ‏سلاسل‎ dallas -* Yo .O-methyl ‏الفردي كمشتق‎ monosaccharides
Ad J amino Cle gana ‏لأي من‎ N-acetylation ‏؛- عملية‎ avi
‎—o‏ عملية الاشتقاق لإعطاء ‎.per-O-trimethylsilyl methyl glycosides‏ 1— عملية انفصال هذه المشتقات؛ بواسطة ‎GLC‏ شعري (تحليل كروماتوجرافي سائل- غاز) على عمود ‎.CP-SIL8‏ ‎-١‏ عملية تعريف مشتقات ‎glycoside‏ الفردية بواسطة زمن احتجاز من ‎GLC‏ والفحعص ‎٠‏ المجهري الطيفي للكتلة؛ بالمقارنة مع مستويات معروفة. ‎—A‏ عملية تحديد كمي للمشتقات الفردية بواسطة ‎FID‏ مع مستوى قياسي داخلي ‎.(13-O-methyl-D-glucose)‏ ‏يمكن تحديد سكريات متعادلة وأمينية بواسطة التحليل الكروماتوجرافي تبادل- أنيون عال الأدا « ‎high performance anion-exchange chromatography‏ المتحد مع فحص أمبيرومتري نابض ‎.(HPAE-PAD Carbohydrate System, Dionex Corp.) pulsed amperometric detection ٠٠‏ على سبيل المثالء يمكن إطلاق السكريات بالتحلل المائي في ‎27١‏ (حجم/ حجم) حمض ‎trifluoroacetic‏ عند ١٠٠#مئوية‏ لمدة 1 ساعات. عندئذ تجفف المواد المتحللة بعدئذ بواسطة التجفيف بالتبريد أو مع ‎(Savant Instruments) "Speed-Vac"‏ عندئذ تذاب المواد المتخلفة في ).7 محلول ‎sodium acetate trihydrate‏ وتحلل على عمود ‎HPLC-AS6‏ كما هو موصوف في د )1991( 195:269-280 ‎.Anumula et al (Anal.
Biochem.‏ يمكن تحديد حمض ‎sialic‏ منفصلا بواسطة طريقة القياس اللوني المباشر من ‎Yao et al. (Anal Biochem. 179:332-335 )1989((‏ في عينات ثلاثية. في تجسيد مفضل يستخدم حمض ‎(TBA) thiobarbaturic‏ من )1959( )238:(8 ‎-Warren, L.J.
Biol Chem‏ بطريقة بديلة؛ يمكن إجراء تحليل ‎carbohydrate‏ بقع مناعية. طبقا لهذا الإجراء يكشف عن ‎carbohydrates v.‏ مرتبط ببروتين باستخدام نظام كشف ‎glycan‏ تجاري ‎(Boehringer)‏ المعتمد على إجراء البقع المناعية الأكسيدية ‎Oxidative immunoblot‏ الموصوف في: ‎Haselbeck and Hosel [Haselbeck et al.
Glycoconjugate 1., 7:63 (1990)].‏ تتبع تعليمات التبقيع الموصى بها من الصائع ما عدا نقل البروتين إلى غشاء ‎polyvinylidene difluoride‏ بدلا من غشاء ‎nitrocellulose‏ والمواد المثبتة للأس الهيدروجيني ‎vo‏ المتكتلة المحتوية على 75 زلال مصل بقري في ‎٠١‏ مللي جزيئشي جرامي ‎tris‏ مادة مثبتة : للأس الهيدروجيني؛ أس هيدروجيني ‎VE‏ مع 7,4 ‎sodium chloride‏ يجرى الكشف مع أجسام مضادة ‎anti-digoxigenin‏ مرتبطة مع ‎phosphate‏ قلوي مقترن ‎«(Bochringer)‏
فأ «phosphatase ‏محلول ملحي ثابت الأس الهيدروجيني باستخدام‎ tris ‏تخفيف في‎ ٠٠١
S-bromo-4 chloro-3-indoyl- 5 ‏(وزن/ حجم)‎ 7+, ¥ d-nitrobule tetrazolium chloride ‏مادة مثبتة للأس‎ tris ‏جرامي‎ 0a ‏مالي‎ ٠٠١ ‏(وزن/ حجم) في‎ 7.07 phosphate sodium chloride ‏مللي جزيئي جرامي‎ ٠٠١ ‏الهيدروجيني؛ أس هيدروجيني 5,5؛ تحتوي على‎ ‏البروتين المحتوية على‎ bands ‏تصبح حزم‎ .018808651000 chloride ‏مللي جزيئي جرامي‎ ory 0 006 مرئية عادة من حوالي ‎٠١‏ إلى ‎١5‏ دقيقة. يمكن أيضا تحليل ‎carbohydrate‏ بالهضم مع ‎.peptide-N-glycosidase F‏ طبقا لهذا الإجراء تعلق المادة المتخلفة في ‎VE‏ ميكرولتر مادة مثبتة للأس الهيدروجيني تحتوي على 018 7 ‎YA SDS‏ مللي جزيئي جرامي ‎«beta-mercaptoethanol‏ +4 مللي جزيئي جرامي ‎«phosphate‏ ‎Je TU‏ جزيئي جرامي ‎(EDTA‏ عند أس هيدروجيني ‎AT‏ وتسخن عند ‎٠٠١‏ مئوبية لمدة ؟ دقائق. بعد التبريد إلى درجة حرارة الغرفة؛ تنقسم العينة إلى جزئين متساويين. لا بيعالج أحد القواسم التامة إضافيا ويستخدم كمادة مقارنة. يضبط الجزء الثاني إلى حوالي 100-4071 ‎Cilia‏ ‏يليه ‎٠,7‏ وحدة ‎(Boehringer) peptide-N-glycosidase F‏ تدفا العينتان عند ١؟"مئوية‏ لمدة ساعتين ثم تحلل بواسطة هجرة الجزيئات المعلقة في مجال كهربي لهلام ‎.SDS-polyacrylamide‏ ole ‏مستقبل عامل تحلل ورم- خليط جيني جلوبولين‎ -#© ve
Tumor Necrosis Factor Receptor-Immunoglobulin Chimeras ~(TNER) ‏في تجسيد مفضل تستخدم عمليات الاختراع الحالي لإنتاج مستقبل عامل تحلل ورم‎ ‏يفضل بوجه خاص ضمن هذا الصنف من‎ .)18( immunoglobulin elie ‏خليط جيني جلوبولين‎ ‏المنتجة‎ TNFR1-IgGy ‏القابل للذوبان. الخلطات الجينية‎ TNFR1-IgGy ‏البروتينات المخلقة النوع‎ ‏أو المتعلقة‎ TNF ‏نافعة في معالجة أو تشخيص العديد من الاضطرابات و الأمراض الموجهة من‎ © ‏هذا المفهوم يتضمن كلا الوقاية (المنع)؛ الكبح‎ "treatment ‏المصطلح "معالجة‎ TNF ‏مع‎ ‏المصاحبة‎ pathologic ‏أحد الأعراض) ومعالجة حالة قائمة. تتضمن الحالات الباثولوجية‎ (Oli) (pane ‏صدمة‎ con se ‏جرام سالب وجرام‎ bacteremia ‏لاتقتصر على؛ بكتريميا‎ STINE ‏مع‎ ‎Crohn ‏ظاهرة رفض الزرع؛ التهاب المفاصل الروماتويدي» مرض الذئبة الحمراء؛ مرض‎
INF ‏وأمراض أخرى للمناعة الذاتية و الالتهابات مصاحبة مع‎ vo ‏مستحضرات (120781-180 من الاختراع الحالي نافعة عموما في هذه الحالات حيث‎ ‏في نماذج الحيوان»؛ وجد‎ (Jha) ‏على سبيل‎ TNF ‏نافعة أجسام مضادة أحادية النسخ إلى‎ Cian
YA
‏لها أثر وقائي عند استعمالها وقائبا‎ TNF-alpha ‏أن أجسام مضادة أحادية النسخ إلى‎ ‏سجلت دراسة إكلينيكية من‎ ١ ‏في الطور‎ (Tracey, ‏.1.كا‎ et al, (1987) Nature 330:662) ‏وجد أمنا جسم مضاد أحادي النسخ من جرذ‎ Exley, AR. et ‏لد‎ (1990) Lancet 5 ‏له مصابين بصدمة تسمم دموي حادة.‎ ued ‏آدمي تخليقي عند تعاطي مرضى‎ TNF-alpha ‏إلى‎ ‏من المناسب استخدام (1201781-180 في معالجة التهاب المفاصل الروماتويدي وكذلك صدمة‎ ٠ ‏التسمم الدموي.‎ ‏يتعاطى شخص محتاج لهذا العلاج‎ TNF ‏في طريقة لعلاج مرض أو اضطراب مصاحب إلى‎ ‏من مستحضر (6ع11417141-1. إن الكائن المفضل هو الإنسان.‎ Ladle ‏كمية نشطة‎ ‏من الاختراع الحالي لعلاج مرض أو‎ TNFR1-IgG glycoform ‏كمية فعالة من مستحضر‎ ‏مللي جرام/‎ Yoo ‏مللي جرام/ مريض؛ يفضل‎ ٠٠١-٠١١١ ‏اضطراب تكون جرعة في حدود‎ ٠ ‏مللي جرام/ مريض.‎ ٠ ‏وحوالي‎ ٠١ ‏مريض والأفضل بين حوالي‎ ‏من أجل التعاطي؛ يجب تحضير مستحضر ,(1141181-180 في تركيبة دوائية أو علاجية‎
TNFRI-IgG| ‏ملائمة. تحتوي هذه التركيبة نموذجيا على كمية نشطة علاجيا من مستحضر‎ ‏مقبولة دوائيا مثل محلول ملحي ع5:10؛ محلول ملحي‎ excipient ‏أو مسوغة‎ carrier alls ‏ومادة‎ ‎Jie ‏أو ماء. قد تشمل التركيبات أيضا عوامل استقرار معبنة‎ cdextrose ‏ثابت الأس الهيدروجيني؛‎ ١ ‏والتخدير الموضعي لتركيبات الحقن؛ بما في ذلك على‎ cmannitol 5 mannose ‏سكريات؛ تتضمن‎
Jidocaine ‏سبيل المثال؟؛‎ ‏يوفر الاختراع الحالي تركيبات تشمل إضافة كمية نشطة علاجيا من مقوم نشط إضافي‎ ‏(مثلاء‎ monoclonal antibodies ‏أجسام مضادة أحادية النسخ‎ Jie additional active amount ‏أو مستقبلات أخرى مصاحبة‎ (LFAL ‏أو‎ Macl ‏أجسام مضادة مضاد-1117, أجسام مضادة إلى‎ x. ‏إلخ.‎ IL-2 ‏مستقبلات 11-1 أو‎ Sa (TNF ‏لإنتاج‎ ‎1145181-180( ‏أعلاه؛ تشمل مستحضر‎ sla ‏تركيبة علاجية مفضلة لعلاج منفرد أو متحد؛ كما‎ ‏جديد من هذا الاختراع الذي يظهر خلوا ممتدا من الدم مع استبقاء نشاط وظيفي جوهري. يبسمح‎ ‏وظيفي ممتد بتعاطي جرعة قرص بسيطة؛ ويساهم في فعالية في الجسم. خلطات‎ jee ‏نصف-‎ ‏مفضلة في التركيبة العلاجية تتضمن (110181-180 ومستحضرات‎ TNFRI-IgG ‏جينية‎ vo ‏موصوفة هناء على سبيل المثال:‎ ava
‎)١‏ مستحضرات (1741711-186 ‎oligosaccharide Jedi‏ معقد منتهي بواحد أو أكثر من متخلفات حمض ع518116؟ ") مستحضرات (1101181-180 ‎Cus‏ أن مدى نقطة تساوي الجهد الكهربي؛ ‎pl‏ للمستحضر يكون بين 5,5 و*, كما تحدد من تحليل التمركز اللوني؛ الذي يكون فيه 1م حساسا لمعالجة ‎‘neuraminidase | ٠‏ ؟) مستحضرات ‏ 1111141-186 لها حوالي ١-؟‏ جزيء جرامي من متخلفات ‎N-acetylglucosamine‏ مكشوفة لكل جزيء جرامي من البروتين. 0 مستحضرات ‎TNFRI-IZG)‏ لها نسبة جزيئية من حمض ‎sialic‏ بروتين حوالي ‎Vt‏ خصوصا حوالي ‎=o‏ ‎Ve‏ ©( مستحضرات ‎TNFRI-IgG)‏ لها نسبة جزيئية من حمض ‎sialic‏ إلى ‎N-acetylglucosamine‏ من حوالي ‎١7#‏ إلى حوالي ‎٠,5‏ و يفضل أكثر حوالي ‎٠.4‏ إلى حوالي ‎Lh, 80‏ تتضمن طرق التعاطي للتركيبات العلاجية الفردية أو المتحدة من الاختراع الحالي الطرق القياسية؛ ‎Jie‏ الحقن في الوريد أو حقن في القص. ‎yo‏ يتوفر أيضا استخدام مستحضر ,11217141-180 من هذا الاختراع في تصنيع دواء لعلاج إنسان أو حيوان. بعد أن وصفنا عموما الاختراع؛ يتم فهم الاختراع بسهولة أكثر من خلال الإشارة إلى الأمثلة التالية المقدمة على سبيل الإيضاح؛ و غير مقصود منها الحد من الاختراع الحالي؛ مالم ينص على ذلك. ‎Y.‏ مثال ‎١‏ ‏تحدث التأثيرات الحيوية من ‎TNF-betas TNF-alpha‏ من خلال مستقبلات معينة ‎Cia af (Dembic et al, (1990) Cytokines, 2:231)‏ المستعمرة الجزيئيسة وجود نوعين محددين من مستقبلات ‎JOS (TNFR)TNE‏ جزيئية واضحة من ‎KD‏ 55 (النوع ‎75KD 5 (Schall et al, (1990) Cell 61-361) )١‏ (النوع ‎(Y‏ ‎JS «(Smith etal., (1990) Science 248:1019) ٠‏ منهم يتصل طبيعيا بكل من ‎TNF-alpha‏ ‎.TNF-beta s‏ ‎av‏
Ys (Loetscher et al., (1990) Cell, 61:351; Shall et al. (1990) Cell, 61:361; Kohno etal, (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8331). ‏للذوبان في الماء‎ ALG ‏تتواجد طبيعيا الأجزاء خارج الخلية لكلا المستقبلين كبروتينات مرتبطة‎ ‏في‎ TNF ‏التي تعوق التأثير الضار على‎ TNF ‏أعلاه) وقد خلقت معضدات‎ (Kohno et al.) ‏مختلف الأحداث المناعية والالتهابية‎ 6 (Peppel ‏لق اك‎ (1991) J. Exp. Med., 174:1483-1489; Ulich (1993) Am. J. Path., 142:1335-1338; Howard, O.M.Z., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2335- 2339; Wooley, P.H., (1993) J. Immunol. 151:6602-6607). ‏أحد هذه المعضدات‎ (Werner et al., (1991) J. Cell. Biochem. Abstracts, 20th annual meeting, p.115). ٠١
Fe ‏الأدمي مع جزء من المفصل و أجزاء‎ ١ ‏النوع‎ 55 KD TNFR ‏يدمج الجزء خارج الخلية من‎ ‏الثقيلة الآدمية.‎ 61 immunoglobulin elie ‏من سلسلة جلوبيولين‎ ‏الذي يشفر‎ ODNA ‏في هذا المثال؛ تزرع خلايا كائن ثديي المصابة بناقل يحتوي على‎ ‏المخلق.‎ 1141141-66
Methods ‏الطرق‎ ‎Cell Line ‏أ- خط الخلية‎ ‏المستخدم كخط خلية‎ (CHO) Chinese hamster overy ‏إن خط خلية بويضة جرذ صيني‎ ‏ثم‎ .CHO-K1(ATCC NO. 00161 CHO-K1) ‏المضيف من كائن ثديي يشتق من‎ ‏الذي يفتقد خط خلية يسمى‎ (DHFR-) ‏المختزل بطفره‎ dihydrofolate CHO-KI ‏يستخدم‎ ‏الناتج من‎ (DHFR-YCHO-K1 DUX-B11 ‏ىن‎ ‎Dr. L. Chasin of Columbia University; Simonsen, C.C., and Levinson, A. D., (1983)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2495-2499; Urlaub G., and Chasin, L., (1980) Proc.
Natl. Acad. Sci USA 77:4216-4220 ‏الخاص‎ cDNA ‏بالإصابة بناقل يحتوي على‎ insulin ‏للحصول على خط خلية بإحتياج متناقص من‎ ‏المستعمرة المختارة‎ .)5765 et al., (1980) Science, 208:57-59) ‏التمهيدي‎ insulin ‏بما قبل‎ vo ‏للنمو؛ وبالتالي تؤكد‎ thymidine 5 hypoxanthine «glycine ‏تحتاج إلى‎ 0012. CHO ‏المسماة‎ ‎.1011114- ‏نوعهم الجيني‎
AA
اصن ب- تصميم 111714-1801 المخلق من النوع ‎١‏ القابل للذوبان في الماء ‎Construction of Soluble Type 1 TNFR-1gG.
Chimera‏ يصمم ‎TNFRAIGG‏ المخلق من النوع ‎١‏ القابل للذوبان في الماء بالاتحاد الجيني للجزء خارج الخلية من ‎TNFR‏ من النوع ‎١‏ الأدمي مع منطقة المفصل و أجزاء 02 و ‎Cp‏ من السلسلة الثقيلة ,156 (المشار ‎Led)‏ فيما بعد (6ع1171141-18). ينتج ‎TNFR‏ من النوع ‎١‏ الأدمي الذي يشفر ترتيب ‎DNA‏ (انظر ‎Loetscher et al‏ أعلاه) من ‎[Schall et al., Cell 61, 1 (1990)] pRK-TNF-R plasmid‏ لتصميم ‎«tsa plasmid‏ تدخل مستعمرة مشيمة ‎(Schall et al) kb 201 cDNA‏ أعلاه) في ناقل التعبير لكائن ثديي ‎(pRKS‏ وقد وصف تصميمه في النشرة الأوربية رقم ‎(FOV EY‏ المنشورة في ‎VO‏ مارس ‎١8500 0٠‏ . يبدأ ‎cDNA‏ هذا على موقع ‎nucleotide‏ 14 من الترتيب المذكور من ‎Loetscher‏ ‏وآخرين ؛ مع ‎methionine‏ البادئ ‎Pb ١١8‏ إلى أسفل. أما مصدر الترتيب المشفر مع ‎IgG‏ يكون 004-186 ‎plasmid‏ إظهار ‎pRKCD4,F,|‏ ‎Nature 337, 525 (1989); By et al., Nature 344, 667 (1990)],‏ ملة ‎[Capon, D.
J. ct‏ يحتوي على ترتيب ‎cDNA‏ يشفر ‎peptide‏ الهجين متكون من المتخلفات ‎1850-١‏ من بروتين ‎١‏ .004 الآدمي الناضج (نوعين مختلفين ‎-N‏ طرفي ‎(CD4‏ الملتحم مع ترتيبات 1801 الآدمي بدءا من حمض ‎YT aspartic‏ (مع أخذ حمض ‎١١ amino‏ كمتخلف أول من منطقة السلسلة الثقيلة الثابتة ‎[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 4th edition (1987)]‏ الذي هو المتخلف الأول من ‎[9G‏ المتصل بعد متخلف ‎cysteine‏ المتداخل في ترابط السلسلة ‎vy.‏ الثقيلة- الخفيفة) و تنتهي بمتخلف ‎44١‏ ليشمل الأجزاء 2ب ردب ‎Fe‏ من ‎IgG‏ ‏يصمم ‎TNFRI-IgG‏ بتوليد قطع تحديد ‎pRK-TNF-R plasmids‏ ون 010421 6ل010 وربطهم معاء باستخدام ‎alga‏ طفرة حاذف»؛ بحيث يتجاوز المتخلف ‎VV) threonine‏ من ‎TNFR‏ ناضج مع متخلف حمض ‎Y1 1 aspartic‏ من السلسلة الثقيلة ‎(Kabat et al] IgG‏ أعلاء]. يحتوي ‎plasmid‏ ‏الناتج ‎(pRKTNFR-1gG‏ الطول الكلي لترتبب الشفري إلي (180-,1171. ‎Yo‏ ج- زراعة الخلية ‎Cell Culture‏ يدخل الجين المشفر من النوع ‎TNFR-IgGy ١‏ القابل للذوبان في الماء إلى خلايا ‎dpl2. CHO‏ عن طريق الانتقال بالإصابة. ويتم ذلك باستخدام تقنية ‎calcium phosphate‏ لإدخال ‎DNA‏ إلى ٍّ 75 vy ‏وتضاف إلى‎ trypsinized ‏الخلايا الثديية. بعد يومين من الانتقال بالإصابة تتعرض الخلايا إلى‎ ٠:١ «Ham's 1-12 DMEM ‏من‎ Ja thymidine 5 hypoxanthine —glycine) ‏وسط انتقائي‎ ‏تكبر‎ TNFRI-IgGy ‏حجم/ حجم مع 77 مصل منقى). تمسح الأجزاء المعزولة التالية بإفراز‎ ‏مما ينتج مستعمرات مظهرة للغاية ثم‎ methotrexate ‏في‎ TNFRI1-IgGy ‏المستعمرات التي تظهر‎ ‏إلى وسط خال من المصل. تتعرض هذه الخلايا إلى ضغط انتقائي مستمر حتى ينتقل إلى‎ lilo ‏وسط غير انتقائي للنمو و تمدد اللقاح.‎ ‏لتوافر خلايا لمزارع إنتاج (1107181-180؛ توسع مجموعات الخلايا الموصوفة‎ ‏بالزراعة الفرعية المتوالية في أوعية ذات‎ methotrexate ‏سابقا من الوسط الذي يحتوي‎ ‏لإتمام هذه الخطوات من العملية‎ methotrexate ‏أحجام متزايدة إلى وسط نمو لايحتوي على‎ ‏براءة‎ Lal) DMEM/HAM F-12 ‏فإن وسط النمو غير الانتقائي يكون مستحضرا يعتمد على‎ ٠ ‏الاختراع الأمريكية رقم 21775415؛ على سبيل المثال) مع تركيزات معدلة من بعض المكونات؛‎ «glycine «vitamins ‏فيتامينات‎ (sugar Su «salts ‏أملاح‎ camino ‏أحماض‎ (glucose ‏مثل‎ ‎| Primatone HS) ‏محلل ماثيا‎ peptone ‏أدمي مخلقء‎ insulin thymidine 5 hypoxanthine ‏أو المكافئ؛‎ (pluronic polyol) Pluronic F68 ‏عامل حام للخلبية مقثل‎ «(Primatone RL ‏دهون 11011 وعناصر ضئيلة.‎ cgentamycin ‏باستخدام غاز و00 (حمض)‎ .,4 -/+ VY ‏يتم التحكم في المزرعة عند أس هيدروجيني‎ ‏(قاعدة). يتم التحكم في درجة الحرارة قرب 77”مئوية أثناء فترة النمو. يحافظ‎ Nay CO5 ‏و/أو‎ ‏على الأوكسجين المذاب أعلى من 78 من التشبع بالهواء بالرش المباشر بالهواء و/أو غاز‎ ‏الأوكسجين.‎ ‎You ‏ا‎ Jy ‏مللي‎ You ‏يحافظ على الأزموزية أثناء مرحلة تمدد اللقاح بين حوالي‎ 7 .mOsm ‏مللي أزمول‎ ‏يتبع طور النمو لكل مزرعة طور ثاني أو طور انتقالي حيث تتغير قياسات المزرعة من النمو‎ ‏الأمتل إلى ظروف الإنتاج. أثناء الطور الانتقالي تتناقص درجة حرارة نظام المزرعة؛ عموما إلى‎ ‏ويحدد مجال أزموزية محدد. تحلل الناتج المتراكم‎ butyrate ‏و75 "مئوية. يضاف‎ ١0 ‏حوالي بين‎ sialic ‏أثناء طور الإنتاج لمحتوى حمض‎ vo ‏من الخلايا المشتقة من تمدد اللقاح من‎ ١١٠,7 ‏ينمو حوالي‎ (edged ‏في برنامج إنتاج‎ ‏يدعم وسط النمو‎ mOsm ‏الطور الانتقائي في طور نمو مع أزموزية بادئة 050 مللي أزمول‎ avi
بعناصر ضطثئيلة ‎insulin‏ )= مخلق 5 ‎peptone‏ محلل مائيا. تنمو الخلايا تحت هذه الظطروف لمدة يومين. عند بدء اليوم الثالث؛ تخفض درجة حرارة مزرعة الخلية. تزامنا مع أو بعد درجة الحرارة»؛ يضاف ‎sodium butyrate‏ إلى مزرعة الخلية ونصل إلى أزموزية الإنتاج المطلوبة بإضافة مكونات وسط متعددة. تنمو الخلايا تحت هذه الظروف مع الإمداد لمدة ‎٠١-9‏ أيام. تمد ‎٠‏ الخلايا عند الضرورة بمكونات وسط متعددة. يصف جدول ‎١‏ ظروف الإنتاج لعمليات الإنتاج المختلفة. جدول ‎١‏ ‏نوع تركيز الأزموزية .| إنتاج الخلية محتوى حمض العملية ‎butyrate‏ في طور النوعي بين ‎sialic‏ من (مللي ‎asin‏ الإنتاج ‏ اليوم الخامس ‏ 1201-1801 في جرامي/ ‎/mOsmol) (LA‏ واليوم العاشر ‏ اليوم العاشر (جزيء كجم) (بيكوجم ‎fdr pg‏ جزيء ٍ يوم) جرامي) ‎١-٠ ١ |‏ حا ‎V,Y-1,¢‏ يا جح ب \ ‎¥=N LT YY, oY =f AL‏ ج 1 6 ب 1 زجحا د 1 ‎١-7٠‏ حار 0 5,1-0 ‎v=N‏ ‏ه 1 ‎¥v.-Yo.‏ د ره ‎r=N‏ ‏و ‎\=N 9 va.
VY‏ ‎VY |‏ 6ه 51-4 87-4 ب ‎1—-0,A YAY EY v= VY z‏ زد ‎١ Lh‏ ا ا 7-ارا 0,4-0,0 ‎Y=N‏ ‏د-استعادة ‎TNFR-IgG‏ ‏ينقى ‎TNFRI-IgGy‏ المخلق إلى أكثر من 2458 تجانسا بالتحليل الصبغي للألفة على ‎٠‏ له ‎Staphylococcus aureus Protein‏ غير المتحرك كما وصف ‎ou Aly Capon‏ أعلاه. »—— تحليل ‎carbohydrate‏ ‏يتحلل محتوى حمض ‎sialic‏ بطريقة 234:1971-1975 ‎.Warren, L. (1959) J.Biol.
Chem.‏ ‎Sly‏ نج يرسم بيانيا ناتج الخلية النوعي لكل من مزارع الإنتاج الموصوفة في جدول ‎١‏ مقابل محتوى ‎te‏ حمض ‎sialic‏ للمنتج المجمع. وقدمت النتائج في شكل ‎.١‏ يلاحظ أعلى محتوى لحمض ‎sialic‏ حين ظلت قياسات العملية عند أزموزية إنتاج بين حوالي 7780 و0٠7؛‏ مللي أزمول 10100500 وتركيز ‎butyrate‏ حوالي ‎١‏ مللي جزيثي جرامي ‎٠‏ يتم | لتحكم في محتوى حمض ‎sialic‏ عند مجال واسع من القيم بضبط قباسات العملية. ‎ava‏
Ye ‏يحدد نصف حياة الحركية الدوائية بالبلازما و/أو معدلات الإزالة للتحضيرات المختلفة.‎ ‏مرتفع عموما لها نصف حياة في البلازما‎ sialic ‏التحضيرات التي تحتوي على محتوى حمض‎ ‏أعلى و/أو معدلات إزالة كلية أقل بالمقارنة مع التحضيرات التي تحتوي على محتوى حمض‎ ‏قليل.‎ sialic e ‏الطرق‎ ‏يزن 19-7777 جم‎ Sprague-Dawley ‏يتعرض عشوائيا سبعة عشر فأرا ذكرا مشتقا من‎ ‏لكل مجموعة).‎ ١ ‏أو‎ © = N) ‏الثلاثة‎ TNFRI-IgG ‏الواحد من مجموعات علاج التحام البروتين‎ ‏تحقن الحيوانات في الوريد بجرعة مسماه © مجم/ كجم من مادة الاختبار خلال حاقن بالوريد‎ ‏الفخذي. تشمل مواد الاختبار المختارة مستحضرين 111711-1801 من عملية يكون فيها حيث‎ - ٠ ‏أثناء مرحلة الإنتاج 6 مللي جزيئي جرامي ويحافظ على الأزموزية أثناء مرحلة‎ butyrate ‏تركيز‎ ‏ثالث من‎ TNFRI-IgG ‏ومستحضر‎ ١١ ‏الإنتاج عند حوالي 500 مللي أزمول 0050 العملية‎ ‏مللي جزيئي جرامي والأزموزية عند مرحلة الإنتاج حوالي‎ VY butyrate ‏تركيز‎ Led ‏عملية يكون‎ ‏قبل‎ )748,50( EDTA ‏العملية 7. تجمع عينات دم ¥ ملليلتر على‎ mOsm ‏مللي أزمول‎ ٠ ‏الجرعة؛ وعند 0 دقائق و40740100007 :177/7014 و١7 ١ساعة بعد الجرعة. تتعرض‎ vo ‏وتحلل العينات لتركيزات التحام البروتين‎ plasma ‏عينات الدم لقوة طاردة مركزية؛ تجمع‎ . 111711-16 ‏في‎ TNFR1-IgG| ‏لتحديد كمية‎ (ELIBA) ‏يستخدم تقييم التحام مناعي وحبوي متصل بإنزيم‎ ‏المستخلص من الفجل‎ peroxidase ‏المقترن مع‎ TNF-alpha ‏بلازما فأر. يعتمد هذا التقييم على قدرة‎ ‏للالتحام بجزء المستقبل من بروتين الالتحام,0ع1717181-18. في هذا التقييم؛‎ (THF-alpha-HRP) ‏من 18010 المضاد للآدمي من الماعز المبطن على عيون في أطباق معبارية‎ Fab ‏فإن أجزاء‎
TNF-alha-HRP ‏من الجزيء. يضاف‎ Fe ‏بالتفاعل مع جزء‎ TNFRI1-IgG) ‏دقيقة تستخدم لصيد‎ ‏المصطاد. تحدد الكمية بقياس لون‎ TNFRI-IEG) ‏إلى العيون وتترك لترتبط بجزء المستقبل من‎ .(OPD) ortho-phenylenediamine ‏ومادة تفاعل‎ peroxide ‏مع‎ peroxidase ‏ناتج من تفاعل‎ plasma ‏في عبنات‎ EDTA ‏مللي جرام/ ملليلتر. إن وجود‎ ١507 ‏إلى‎ ١009 ‏ويقع مجال التقييم‎ Yo ‏ببين أنه ليس له تأثير على أداء الاختبار.‎
Yo ‏تضبط الجرعة إلى المستوى الطبيعي لتفسير فروق تركيز محلول الجرعة. كل الحسابات‎ ‏ساعة نقطة زمن. تحسب المساحة المبتورة تحت‎ ١7١ ‏تعتمد على التركيز أمام بيانات الزمن خلال‎ ‏باستخدام مقياس شبه منحرف وتحسب الإزالة المبتورة للوزن المعاد‎ (AUC. 120) ‏المنحنى‎ ‏كجرعة/ وورو0ناه.‎ (CL_120/W) ‏للطبيعي‎ ‏النثا تج‎ 2 ( ١ ‏بالمقارنة بالعملية‎ ١ ‏معدلات الإزالة اعتمادا على مرحلة العملية المستخدمة )1 لعملية‎ JHA ‏الموجودة في المنتج. قدمت معدلات الإزالة للحيوانات كل على حدة والمتوسط‎ sialic ‏وكمية حمض‎
Lb ‏معدل إزالة‎ ١ ‏الناتج والانحراف القياسي في هذه الدراسة في جدول ؟ أدناه. تظهر العملية‎ ‏وأكثر تفضيلا.‎
Y ‏جدول‎ ٠١ ‏إزالة صفر-١٠١ (ملليلتر/ ساعة/ كجم)‎ ‏العملية ؟‎ ١ ‏العملية‎ ١ ‏العملبة‎ ‎vis Y, A YAY
Y,a4 YE Your
Yu YY. 1 ٍ ‏خا اص كا‎
YAY ‏م ير‎
Y, AA Y oA 151 ‏المتوسط‎ ‎"5 YY CY ‏الانحراف القياسي‎ ‏مثال ؟‎
TNFR1-IgG; (se monosaccharide ‏تركيبة‎ ‏المحضر كما‎ (TNFRI1-IgGy ‏وبناء‎ oligosaccharide carbohydrate ‏إن تحديد مكونات‎ ‏المختلفة.‎ Gl lea) ‏هو موصوف في مثال يبين أن محتوى حمض 51811 يختلف مع مراحل‎ yo ‏أقل على سلاسل‎ sialic ‏حمض‎ das ‏مكشوف‎ GleNAc ‏السريعة يصاحبها‎ plasma ‏الإزالة من‎ ‏أو‎ mannose ‏على وصول البروتين (بالاستدلال) إلى مستقبلات‎ 538 5 oligosaccharide ‏طرفية أكثر.‎ sialic ‏متخلفات حمض‎ plasma ‏1201056ع. يصاحب الإزالة البطيئة من‎
Sources of Test Material ‏أ-_مصادر مادة الاختبار‎ ‏أعلاه. نحصل‎ ١ ‏تبعا للطرق المحددة كما هو موصوف في مثال‎ TNFRI-IgGy ‏يتم إنتاج‎ 7 ‏وأزموزية من‎ butyrate ‏جزيئي جرامي‎ lle > ‏من مزرعة خلية باستخدام‎ ١ ‏على مادة العملية‎ ‏أثناء طور الإنتاج. نحصل على مادة العملية ¥ من مزرعة خلية‎ mOsm ‏حوالي 50860 مللي أزمول‎ avi v1 mOsm ‏وأزموزية من حوالي 500 مللي أزمول‎ butyrate ‏مللي جزيئي جرامي‎ VY ‏باستخدام‎ ‏أثناء طور الإنتاج.‎ ‏ب- الطرق‎ ‏بواسطة التحليل الكروماتوجرافي تبادل أنيوني‎ amino 5 ‏يحدد إطلاق السكريات المتعادلة‎ sad) ‏الأس الهيدروجيني متحد مع كشف أمبيري نبضي . يثم التحليل باستخدام الخطوات‎ a ° ‏(حوالي 00 ميكروجرام/ مللبلتر)‎ TNFRI-IEG) ‏يتم تبادل مثبت الأس الهيدروجيني مع‎ -١ acetic ‏والعينات المرجعية المناسبة بحيث تتواجد العينة النهائية في 71 من حمض‎ ‏يجمد حوالي 90 ميكروجرام (1247181-180 بالإضافة إلى عينات من المواد المرجعية‎ -" ‏في تلج جاف وحمام كحول وتجفف بالتبريد العينة المبردة طوال اللبل.‎ ‏وتحضن‎ trifluoroacetic ‏ميكرولتر حمض‎ 95٠0 ‏يعاد تكوين العينات المجمدة الجافة في‎ = ١ ‏عند ١"٠"مئوية لمدة ساعة واحدة.‎ ‏العينات المرجعية وتتبخر حتى‎ TNFRI-IGG ‏؛- بعد التحليل المائي للحمض يبرد‎ ‏الجفاف.‎ ‎Ale ‏مللي جرام/‎ ١57 ‏يعاد تكوين العينات بالماء إلى تركيز نهائي حوالي‎ =o ‏عند درجة الحرارة المحيطة بالتحليل الكروماتوجرافي‎ monosaccharides ‏يتم فصل‎ -١ vo ‏تبادل الأنيبون مرتفقع | لأس الهميدروجيني مع كشف أمبيري نبضي بامستخد ام عمود‎ .(Dionex Corp., Sunnyvale, Calif) ‏مم)‎ ٠٠١» 4( Dionex CarboPac PA1 ‏مرجعية.‎ monosaccharides ‏بالمقارنة مع‎ monosaccharides ‏تحدد كمية‎ = ‏ج- النتائج‎ ‏في المستحضرين في جدول ؟ أدناه.‎ monosaccharide ‏يبين المحتوى الجزيئي النسبي لكل‎ 9. © ‏جدول‎ ‏في مستحضرين_(6ع11111+1-1‎ monosaccharides ‏المحتوى الجزيئي النسبي من‎ ‏العملية ؟‎ ١ ‏العملية‎ monosaccharide 8 GY + EY Fucose 2 ‏صفر‎ + 5 Galactose ١0 ‏حل‎ 7 Mannose
EA ‏ا‎ + 1 N-acetylglucosamine
GY + ‏أ لاا‎ + 4 sialic ‏حمض‎ ‎oY ١ + ‏8ه‎ N-acetylgalactosamine "1 Vo GleNAc/sialic ‏نسبة حمض‎ avi
بال توضح النتائج السابقة أن قياسات العملبة المختارة لطور إنتاج ‎glycoprotein‏ تؤثر على تركيبة ‎carbohydrate‏ من ‎glycoprotein‏ الناضج. التحضيرات التي لها محتوى حمض ‎sialic‏ ‏مرتفع عموما لها نصف حياة مصل طويلة. يوضح الجدولان ؛ و © المقدمان أدناه تركيبة ‎carbohydrate‏ للسلاسل الجانبية من ‎oligosaccharide ٠‏ من تحضيرات ‎TNFRI-IgGy‏ المخلق المكون تحت ظروف العملية ‎١‏ ‏والعملية ؟. يقدم الجدول © بيانات لأجل ‎carbohydrate‏ على الجزء المستقبل من الجزيثشي المخلق؛ بطرح مكان ‎glycosylation‏ 16. جدول ؛ عملية ‎١‏ عملية ‎١‏ عملية ‎١‏ عملية ‎١‏ عملية ؟ عملية ‎Y‏ ‏حمض ‎o,A sialic‏ مره لا ا لا ,9 ‎Fucose‏ 2 2 71 ف ¢,¢ ‎ey‏ ‎ft RY ft oY oY AY Gal NAc‏ ‎VELA Yo ٠ Gle NAc‏ ا ا ا ‎gv 7 YN Vv, VY, Gal‏ 71 ‎Yo, VY, VY,» Man‏ حر ‎١٠١5‏ قبا نسبة 6" 4" ‎LYE LY EY mE‏ ‎SA/GIeNAc‏ ‏جدول © ‎dle‏ ؟ عملية ؟ عملية ‎١‏ عملية ‎١‏ ‏جزيئات معرضة م6161 لكل جزيء ل 8 ‎١‏ 7 جزيئات معرضة ‎GAl‏ لكل جزيء ‎NY‏ حر 5 را ‎oY‏ ‏هوائي ‎Gal‏ و ثلا 1,¢0 ري حمض 818016 لكل جزيء م9 ا 84 8,1
‎٠١‏ توضح النتائج ‎Aoi‏ في جدول ؛ 05 أن تركيبة ‎TNFR1-IgGy‏ ممائلة لمعقد ‎(sal oligosaccharide‏ ثنائي وثلاثي التفرع وينتهي بحمض ‎sialic‏ يمكن استخلاص أن ‎TNFRI-IgGy‏ المحضر بالعملية ‎١‏ يحتوي على نسبة ‎Alle‏ بدرجة كافية من حمض ‎sialic‏ ونسبة قليلة بدرجة كافية من 0161/0 المكشوف. يشير بروتين حمض ‎sialic‏ لكل جزيء جرامي أن هذه المادة لها نقطة توازن كهربائي منخفض عن المادة المكونة بالعملية ‎CY‏
‎١ ‏الأبطاً لمادة العملية‎ plasma ‏تشير هذه النتائج أن الإزالة من‎ oF ‏بالمقارنة بنتائج جدول‎ vo ‏أعلى.‎ sialic ‏تتوافق مع التعريض الأقل إلى 0127186 وعموما مع محتوى حمض‎
‏يوضح الجدولان ؛ 05 تحضيرات (1147181-180 تحتوي على معقد ‎oligosaccharide‏ ‏ينتهي بمتخلف واحد أو أكثر من حمض ‎sialic‏ تحتوي تحضيرات ‎TNFRI-IgG)‏ المفضلة على ‎avi‏
YA
N-acetylglucosamine ‏من متخلفات‎ lida ؟-١ ‏لها حوالي‎ TNFRI-IgGy ‏جزيئات‎ ‏إلى البروتين حوالي ؛-7. إن‎ sialic ‏المعرض لكل جزيء بروتين. تكون النسبة الجزيئية لحمض‎ ‏من‎ N-acetylglucosamine ‏إلى‎ sialic ‏لها نسبة جزيئية من حمض‎ TNFRI-[gG) ‏تحضيرات‎ ‎cote ‏إلى حوالي‎ ١.4 ‏حوالي‎ ‎Jb ° silylated ‏ثقيلة أقل من 1م المستحضر الذي له‎ sialylation ‏المستحضر الذي له‎ pl ‏يكون‎ ‏الطرق‎ ‏يجرى تحديد بؤرة كهربائية متوازنة للتحضيرات المختلفة الموصوفة في مثال ؟. إن الهلام‎ ‏التحضير تبعا لنقطة التوازن الكهربائي‎ glycoproteins ‏المحدد للبؤرة المتوازنة كهربائيا يفصل‎ ٠ ‏باستخدام مستوى أس هيدروجيني متدرج مكون بأيون حمضي وقلوي له أس‎ pl ‏الخاصة بهم؛‎ ‏هيدروجيني مختلف. في هذه الدراسة؛ يتم تحليل التحضيرات باستخدام أس هيدروجيني متدرج من‎ .4 ‏إلى‎ ٠ ‏تظهر تحضيرات 1141141-1861 مجال نقطة توازن كهربائي؛ من حوالي 5,5 إلى حوالي‎ Vo neuraminidase ‏حساس بالنسبة لعلاج‎ pl ‏كما تحدد بواسطة البؤرية الصيغية؛ حبث‎ V0 ‏جميع المراجع المذكورة سابقا مندمجة هنا بالإشارة؛ سواء أشير إلى إندماجها أو لم يشار.‎ ‏بينما وصف هذا الاختراع مع تجسيدات خاصة له؛ سيكون مفهوما أنه قابلا لتعديلات أخرى.‎ ‏يقصد بهذا التطبيق أن يغطي أي اختلافات؛ استخدامات أو تعديلات للاختراعات التي تتبع؛ عموماء‎ ‏فواعد الاختراع و تشمل الاختلافات عن الكشف الحالي بما يدخل في الممارسة المعروفة أو‎ - ٠ ‏المستخدمة في الفن الذي ينتمي إليه الاختراع ويمكن تطبيقها على الجوانب الأساسية هنا في‎ ‏عناصر الحماية الملحقة.‎ avi

Claims (1)

  1. عناصر الحماية ‎١‏ ١-عملية‏ للتحكم في كمية حمض ‎sialic‏ الموجود على سلسلة جانبية ‎oligosaccharide‏ من ‎glycoprotein Y‏ منتج من زراعته في خلية كائن ثديي تشمل: » - زراعة خلية مضيفة ‎host cell‏ من كائن ثديي في طور إنتاج المزرعة وتثميز الزراعة: ‎)١(‏ إضافة حمض ‎alkanoic‏ أو ملح منه إلى المزرعة عند تركيز حوالي ‎0.١‏ مللي جزيئفي ° جرامي إلى حوالي ‎٠١‏ مللي جزيئي جرامي؛ ‎(Y) 1‏ المحافظة على أزموزية ‎osmolality‏ المزرعة عند ‎Yoo Jigs‏ إلى حوالي 00 مللي ‎v‏ أزمول ‎mOsm‏ و ‎(T) A‏ الحفاظ على درجة حرارة المزرعة عند درجة حرارة بين ‎Ag 5 ASOT‏ ‎١‏ ؟- العملية من عنصر الحماية ‎١‏ حيث يكون طور الإنتاج هو طور زراعة دفعة تغذية أو دفعة ‎v‏ واحدة ‎.batch or fed batch culture phase‏ ‎Alea =F‏ من عنصر الحماية ¥ حيث يسبق طور الإنتاج طور انتقال تنخفض خلاله درجة الحرارة إلى بين حوالي ‎٠‏ ؟"مئوية و# ؟"مئوية قبل بدء طور الإنتاج. ‎١‏ ؛- العملية طبقا لعنصر الحماية ‎١‏ حيث تزداد كمية حمض ‎sialic‏ الموجود على سلسلة جانبية ‎oligosaccaride Y‏ من ‎glycoprotein‏ وحيث: ‎v‏ تتقص الإنتاجية النوعية للخلية لمزرعة الخلية بواسطة زراعة الخلية المضيفة ‎host cell‏ عند تركيز من حمض ‎alkanoie‏ أو ملح منه حوالي ‎١‏ إلى حوالي ‎١‏ مللي جزيئي جرامي والحفاظ > على الأزموزية ‎osmolality‏ عند حوالي ‎590<-*٠٠١‏ مللي أزمول ‎mOsm‏ ‎١‏ #- العملية من عنصر الحماية ؛ فيها طور الإنتاج هو طور زراعة دفعة تغذية أو دفحة واحدة
    ‎.batch or fed batch culture phase Y‏ ‎٠‏ +- العملية من عنصر الحماية © حيث يسبق طور الإنتاج طور انتقال تنخفض درجة الحرارة "> خلاله بين حوالي ‎ATO BOT‏ قبل بدء طور الإنتاج. ‎١‏ 7- العملية من عنصر الحماية + فيها الخلية المضيفة ‎host cell‏ هي خلبة ‎CHO‏ ‎١‏ #- العملبة من عنصر الحماية ‎V‏ فيها الخلية المضيفة ‎host cell‏ هي خلية ‎.dhfr-CHO‏ ‎١‏ 9- العملية طبقا لعنصر الحماية / ‎din‏ حمض ‎ad Sex le alkanoic‏
    ‎.sodium butyrate Y‏ ‎avi
    ‎-٠١ ١‏ العملية طبقا لعنصر الحماية 4 حيث يكون ‎glycoprotein‏ المنتج هو ‎glycoprotein‏ كائن 7 دبي . ‎-١١ ١‏ العملية طبقا لعنصر الحماية ‎٠١‏ حيث يكون ‎glycoprotein‏ هو مستقبل عامل تحلل ورم- ‎v‏ خليط تخليقي جلوبولين مناعي ‎tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin‏
    ‎.chimera 1‏ ‎AY ١‏ العملية من عنصر الحماية ‎١١‏ فيها الخلية المضيفة ‎cell‏ 10088 هي خط خلية ‎Y‏ مطعمة بناقل ‎cDNA dala‏ المشفر من النوع ‎١‏ القابل للذوبان من خنيط تخليفي ‎chimera‏ ‎Gp 1147121-65 7‏ جلوبولين مناعي مستقبل عامل تحلل ورم ‎tumor necrosis factor‏
    ‎.receptor-immunoglobulin G; TNFR1-IgG; chimera ¢‏ ‎Wh ةيلمعلا-١9 ١‏ لعنصر الحماية ‎١‏ حيث تنقص كمية حمض ‎sialic‏ الموجود على سلسلة جانبية ‎oligosaccaride 7‏ من ‎glycoprotein‏ وحيث: ‎v‏ تزداد الإنتاجية النوعية للخلية لمزرعة الخلية بواسطة مزرعة الخلية المضيفة ‎host cell‏ عند 1 تركيز حوالي ‎١‏ مللي جزيئي جرامي إلى حوالي ‎١١‏ مللي جزيئي جرامي من حمض ‎alkanoic °‏ أو ملح منه والمحافظة على الأزموزية ‎osmolality‏ عند حوالي + ‎٠00-49‏ مللي 1 أزمول ‎mOsm‏ ‎١‏ 40؟١-‏ العملية من عنصر الحماية ‎١١‏ فيها طور الإنتاج هو طور زراعة دفعة تغذية أو دفعة واحدة
    ‎.batch or fed batch culture phase Y‏ ‎Yo ١‏ العملية من عنصر الحماية ‎VE‏ حيث يسبق طور الإنتاج طور انثقال تنخفض درجة الحرارة ‎Y‏ خلاله بين حوالي ‎٠‏ 7*مئوية و*؟*مئوية قبل بدء طور الإنتاج. ‎-١١‏ العملية من عنصر الحماية ‎١5‏ تكون فيها الخلية المضيفة ‎host cell‏ هي خلية ‎CHO‏ ‎-١١7‏ العملية من عنصر الحماية ‎١١‏ فيها الخلية المضيفة ‎cell‏ 10531 هي خلبة
    ‎.dhfr-CHO Y‏ ‎-١8# ١‏ العملية طبقا لعنصر الحماية ‎١‏ حيث يكون حمض ‎alkanoic‏ أو ملح ‎salt‏ منه هو ‎sodium‏ ‎butyrate Y‏ ‎-١١ ١‏ العملية طبقا لعنصر الحماية ‎VA‏ حيث يكون ‎glycoprotein‏ المنتج هو ‎glycoprotein‏ كائن 7 تدبي. ‎av
    ف ‎-”١ ١‏ العملية طبقا لعنصر الحماية ‎١‏ حيث يكون ‎glycoprotein‏ هو خليط تخليقي جلوبولين 7 مناعي- مستقبل عامل تحلل ورم ‎tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin‏
    ‎.chimera v‏ ‎١‏ ١؟-العملية‏ من عنصر الحماية ‎Ve‏ فيها الخلبة المضيفة ‎host cell‏ هي خلية مطعمة بناقل حامل ‎cDNA Y‏ من النوع ‎١‏ القابل للذوبان من خليط تخليقي 1717141-1801 ,6 جلوبولين مناعي 1و مستقبل عامل تحلل ورم ‎tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G; TNFR1-‏ ‎IgG, chimera $‏ ‎avi
SA96170351A 1995-06-06 1996-10-07 عملية لإعداد مزرعة خلية كائن ثديي SA96170351B1 (ar)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/469,348 US5705364A (en) 1995-06-06 1995-06-06 Mammalian cell culture process

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA96170351B1 true SA96170351B1 (ar) 2006-07-04

Family

ID=23863440

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA96170351A SA96170351B1 (ar) 1995-06-06 1996-10-07 عملية لإعداد مزرعة خلية كائن ثديي

Country Status (35)

Country Link
US (1) US5705364A (ar)
EP (2) EP0832189B2 (ar)
JP (2) JPH11507523A (ar)
KR (1) KR100496356B1 (ar)
CN (1) CN1166772C (ar)
AR (2) AR004940A1 (ar)
AT (2) ATE425245T2 (ar)
AU (1) AU717847B2 (ar)
BG (1) BG63213B1 (ar)
BR (1) BR9609150A (ar)
CA (1) CA2220684C (ar)
CZ (1) CZ293719B6 (ar)
DE (2) DE69637867D1 (ar)
DK (2) DK1609853T4 (ar)
EA (1) EA001215B1 (ar)
ES (2) ES2248812T5 (ar)
GE (1) GEP20012519B (ar)
HU (1) HU226420B1 (ar)
IL (1) IL122398A (ar)
IS (1) IS2614B (ar)
MY (1) MY113496A (ar)
NO (1) NO322276B1 (ar)
NZ (1) NZ310202A (ar)
OA (1) OA10753A (ar)
PL (1) PL185484B1 (ar)
PT (1) PT1609853E (ar)
RO (1) RO120267B1 (ar)
SA (1) SA96170351B1 (ar)
SI (2) SI0832189T2 (ar)
SK (1) SK282658B6 (ar)
TR (1) TR199701543T1 (ar)
TW (2) TW426734B (ar)
UA (1) UA47428C2 (ar)
WO (1) WO1996039488A1 (ar)
ZA (1) ZA964776B (ar)

Families Citing this family (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE59010908D1 (de) 1989-09-12 2000-08-10 Hoffmann La Roche TNF-bindende Proteine
US6656466B1 (en) * 1995-06-06 2003-12-02 Genetech, Inc. Human tumor necrosis factor—immunoglobulin(TNFR1-IgG1) chimera composition
US5705364A (en) † 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
JP4306813B2 (ja) 1995-09-19 2009-08-05 アスビオファーマ株式会社 動物細胞の新規培養方法
WO1997041895A2 (en) * 1996-05-08 1997-11-13 F. Hoffmann-La Roche Ag TREATMENT OF ASTHMA WITH TNFR-Ig
WO1999028455A1 (de) * 1997-12-03 1999-06-10 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur herstellung von polypeptiden mit geeigneter glykosilierung
US6140445A (en) * 1998-04-17 2000-10-31 Crompton Corporation Silane functional oligomer
DE69929198T2 (de) * 1998-05-29 2006-08-10 Genentech, Inc., South San Francisco Zellkulturverfahren für die produktion von glycoproteinen
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
TR200504220T2 (tr) * 1998-12-17 2007-04-24 Biogen Idec Ma Inc. Aktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimeAktif limfotoksin-beta reseptör imunoglobülin şimerik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştrik proteinlerinin yüksek düzey ifadesi ve saflaştırılması için bir yöntem.ırılması için bir yöntem.
GB9828624D0 (en) * 1998-12-23 1999-02-17 Glaxo Group Ltd Production of proteins
KR100475417B1 (ko) * 1998-12-30 2005-07-18 씨제이 주식회사 시알산 함량이 높은 재조합 당단백질의 제조방법
US7294481B1 (en) * 1999-01-05 2007-11-13 Immunex Corporation Method for producing recombinant proteins
CA2368797C (en) 1999-04-26 2010-08-17 Genentech, Inc. Cell culture process
US6261805B1 (en) * 1999-07-15 2001-07-17 Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. Sialyiation of N-linked glycoproteins in the baculovirus expression vector system
KR100394474B1 (ko) * 1999-12-18 2003-08-09 동아제약 주식회사 동물세포에서 재조합 당단백질의 연속식 대량생산 방법
AU2001258536A1 (en) * 2000-05-16 2001-11-26 Lipoxen Technologies Limited Derivatisation of proteins in aqueous solution
EP1298217A4 (en) * 2000-07-05 2004-09-08 Mitsubishi Pharma Corp Process for the production of a glycoprotein
US20030040095A1 (en) * 2001-03-16 2003-02-27 Achille Arini Method for the production of pharmaceutically active recombinant proteins
US20030087372A1 (en) * 2001-06-13 2003-05-08 Genentech, Inc. Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells
ES2557741T3 (es) * 2002-03-27 2016-01-28 Immunex Corporation Procedimientos para incrementar la producción de polipéptidos
US20030190710A1 (en) * 2002-03-28 2003-10-09 Devries Ruth L. Control of glycoforms in IgG
US7067279B1 (en) * 2002-08-23 2006-06-27 Immunex Corporation Cell culture performance with betaine
US6924124B1 (en) * 2002-08-23 2005-08-02 Immunex Corporation Feeding strategies for cell culture
US6974681B1 (en) 2002-08-23 2005-12-13 Immunex Corporation Cell culture performance with vanadate
JP4754219B2 (ja) * 2002-12-02 2011-08-24 アムジエン・フレモント・インコーポレイテツド 腫瘍壊死因子を対象とする抗体、およびそれらの使用
TWI328614B (en) * 2002-12-23 2010-08-11 Bristol Myers Squibb Co Product quality enhancement in mammalian cell culture processes for protein production
EP1575998A4 (en) * 2002-12-23 2007-07-25 Bristol Myers Squibb Co PROCESS FOR CULTIVATING MAMMALIAN CELLS FOR PROTEIN PRODUCTION
MXPA05011486A (es) * 2003-04-25 2006-04-18 Immunex Corp Inductores de expresion de proteina recombinante.
KR101269656B1 (ko) 2003-10-24 2013-05-30 셀렉시스 에스. 에이. Ｍａｒ 서열의 복합 트랜스펙션 방법에 의한 포유동물 세포에서의 고효율 유전자 전달 및 발현
WO2005063813A2 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Process for the production of tumor necrosis factor-binding proteins
WO2005064002A1 (en) * 2003-12-31 2005-07-14 Samyang Genex Corporation Method for mass production of secondary metabolites in plant cell culture by treatment of an alkanoic acid or salt thereof
CA2557725C (en) * 2004-02-13 2015-06-30 Glycotope Gmbh Highly active glycoproteins-process conditions and an efficient method for their production
US7300773B2 (en) * 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
US7294484B2 (en) * 2004-08-27 2007-11-13 Wyeth Research Ireland Limited Production of polypeptides
US7335491B2 (en) * 2004-08-27 2008-02-26 Wyeth Research Ireland Limited Production of anti-abeta
AU2006247039B2 (en) * 2005-05-19 2011-03-03 Amgen Inc. Compositions and methods for increasing the stability of antibodies
EP1891207A2 (en) * 2005-06-03 2008-02-27 Biovitrum AB Process for cultivating animal cells comprising the feeding of plant-derived peptones
KR100670105B1 (ko) 2005-06-29 2007-01-17 주식회사 셀트리온 콩가수분해물의 저분자량 분획을 이용하여 시알산 함량이증가된 에리스로포이에틴을 생산하는 방법 및 그에 의하여생산된 시알산 함량이 증가된 에리스로포이에틴
US8470318B2 (en) 2005-11-07 2013-06-25 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
WO2008057634A2 (en) * 2006-10-26 2008-05-15 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
PT2253644E (pt) 2005-12-20 2014-01-23 Bristol Myers Squibb Co Composições e métodos para a produção de uma composição
US20070190057A1 (en) 2006-01-23 2007-08-16 Jian Wu Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
WO2007132355A2 (en) * 2006-01-26 2007-11-22 Recopharma Ab Compositions and methods for inhibiting viral adhesion
AU2007235413B2 (en) 2006-04-05 2012-08-02 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
DK2041270T3 (da) * 2006-07-13 2014-01-27 Wyeth Llc Fremstilling af glycoproteiner
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
TW201516149A (zh) 2006-09-13 2015-05-01 Abbvie Inc 細胞培養改良
US20080145893A1 (en) * 2006-09-17 2008-06-19 Excellegene Sa Method for producing a recombinant protein at high specific productivity, high batch yield and high volumetric yield by means of transient transfection
WO2008069244A1 (ja) * 2006-12-05 2008-06-12 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 糖蛋白質組成物の製造方法
CA2682744C (en) * 2007-04-16 2015-10-06 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to cell surface glyosylation
TW200902708A (en) 2007-04-23 2009-01-16 Wyeth Corp Methods of protein production using anti-senescence compounds
US20090023186A1 (en) * 2007-07-22 2009-01-22 Excellgene Sa Use of valproic acid for enhancing production of recombinant proteins in mammalian cells
WO2009023562A2 (en) * 2007-08-09 2009-02-19 Wyeth Use of perfusion to enhance production of fed-batch cell culture in bioreactors
CN101970650B (zh) 2008-03-06 2017-07-25 哈洛齐梅公司 可溶性透明质酸酶的大规模生产
TWI395593B (zh) * 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
EP2283043B1 (en) * 2008-04-07 2014-08-13 Bayer HealthCare, LLC Methods of recombinant production of glycoproteins
JP2011517960A (ja) 2008-04-22 2011-06-23 ザ ロックフェラー ユニバーシティー 抗炎症化合物の識別方法
AU2009290563A1 (en) 2008-09-15 2010-03-18 Genentech, Inc. Compositions and methods for regulating cell osmolarity
CA2932207A1 (en) * 2008-10-20 2010-12-09 Abbvie Inc. Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
CN104974251A (zh) 2008-10-20 2015-10-14 Abbvie公司 在抗体纯化过程中的病毒灭活
CN102307993B (zh) * 2008-12-09 2014-06-25 哈洛齐梅公司 延长的可溶性ph20多肽及其用途
JP5649589B2 (ja) * 2009-03-06 2015-01-07 ハロザイム インコーポレイテッド マトリックスメタロプロテアーゼ１の温度感受性突然変異体およびその使用
US9540426B2 (en) 2009-10-06 2017-01-10 Bristol-Myers Squibb Company Mammalian cell culture processes for protein production
US20110117087A1 (en) 2009-10-26 2011-05-19 Reinhard Franze Method for the production of a glycosylated immunoglobulin
DK2501822T3 (da) 2009-11-17 2017-11-27 Squibb & Sons Llc Fremgangsmåder til forbedret proteinproduktion
EP2507267B1 (en) * 2009-12-02 2016-09-14 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life of fc fusion proteins
CA2790786C (en) * 2010-02-24 2019-09-24 Zymenex A/S Process for production and purification of recombinant lysosomal alpha-mannosidase
WO2012017925A1 (ja) 2010-08-02 2012-02-09 協和発酵キリン株式会社 物質の製造方法
EP2686423A4 (en) 2011-03-14 2015-01-28 Nat Res Council Canada Method of viral production in cells
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
US9631216B2 (en) 2011-04-29 2017-04-25 Biocon Research Limited Method for reducing heterogeneity of antibodies and a process of producing the antibodies thereof
US8883982B2 (en) 2011-06-08 2014-11-11 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
CN102839157A (zh) * 2012-07-12 2012-12-26 扬州大学 稳定共表达hST3GalIV和β1-4GalT1的MDCK细胞系及构建方法和应用
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
NO2760138T3 (ar) 2012-10-01 2018-08-04
EP2906683B1 (en) 2012-10-15 2017-05-31 Bristol-Myers Squibb Company Mammalian cell culture processes for protein production
US20140106405A1 (en) * 2012-10-15 2014-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Mammalian cell culture processes for protein production
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
JP6563910B2 (ja) 2013-07-04 2019-08-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 血清サンプル中の抗薬物抗体を検出するための干渉抑制イムノアッセイ
NZ715246A (en) 2013-07-06 2017-07-28 Cadila Healthcare Ltd Improved process for production of monoclonal antibodies
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
RS59881B1 (sr) * 2014-02-27 2020-03-31 Hoffmann La Roche Modulacija ćelijskog rasta i glikozilacije u rekombinantnoj proizvodnji glikoproteina
JP6652334B2 (ja) 2014-05-31 2020-02-19 Ｊｃｒファーマ株式会社 ウリジンとｎ−アセチル−ｄ−マンノサミンとを含有する培地
MA40021A (fr) * 2014-06-03 2015-12-10 Lupin Ltd Processus de culture cellulaire destiné à produire une protéine
US20160130324A1 (en) 2014-10-31 2016-05-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. C1 Inhibitor Fusion Proteins and Uses Thereof
KR102007930B1 (ko) 2014-12-31 2019-08-06 주식회사 엘지화학 재조합 당단백질의 글리코실화 조절 방법
TW202440903A (zh) 2015-08-04 2024-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法（一）
CN108463243B (zh) 2015-11-19 2022-06-14 夏尔人类遗传性治疗公司 重组人c1酯酶抑制剂及其用途
BR112018013501B1 (pt) * 2015-12-29 2022-12-20 N.V. Nutricia Uso de um ingrediente fermentado e oligossacarídeo não digerível
CN111406112A (zh) * 2017-11-30 2020-07-10 豪夫迈·罗氏有限公司 用于培养哺乳动物细胞的工艺
CN113015805B (zh) 2018-11-13 2024-12-03 詹森生物科技公司 抗cd38抗体产生期间的痕量金属的控制
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
IL309560B2 (en) 2019-12-06 2025-05-01 Regeneron Pharma Anti-VEGF protein preparations and methods for their production
MX2022013812A (es) 2020-05-08 2022-12-15 Regeneron Pharma Trampas y mini-trampas de vegf y metodos para el tratamiento de trastornos oculares y cancer.
KR20230058094A (ko) 2020-08-31 2023-05-02 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 세포 배양 성능을 개선하고 아스파라긴 서열 변이체를 완화하기 위한 아스파라긴 공급 전략
MX2023008527A (es) 2021-01-20 2023-07-28 Regeneron Pharma Metodos para mejorar el valor proteico en cultivo celular.
EP4413364A2 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods of ph modeling and control
EP4413359A1 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ph meter calibration and correction
EP4486778A1 (en) 2022-03-02 2025-01-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Manufacturing process for high titer antibody
WO2025219232A1 (en) 2024-04-15 2025-10-23 Evonik Operations Gmbh Application of small peptides supplemented cell culture media for improved cell performance

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3926723A (en) 1974-08-08 1975-12-16 Massachusetts Inst Technology Method of controllably releasing glucose to a cell culture medium
JPS5938488B2 (ja) 1979-05-07 1984-09-17 株式会社東芝 空気調和機
EP0097353B1 (en) * 1982-06-21 1990-08-16 The Wellcome Foundation Limited Improved process for interferon production
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4724206A (en) * 1984-02-13 1988-02-09 Damon Biotech, Inc. Protein production using hypertonic media
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
JPH0639919B2 (ja) 1985-08-29 1994-05-25 トヨタ自動車株式会社 過給機付き内燃機関の異常判別装置
GB8606386D0 (en) * 1986-03-14 1986-04-23 Celltech Ltd Production of protein
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
WO1988001643A1 (en) 1986-08-29 1988-03-10 Endotronics, Inc. Method of culturing cells
JPH01257492A (ja) * 1987-03-05 1989-10-13 Green Cross Corp:The 異種蛋白質の生産増強方法
IL87737A (en) * 1987-09-11 1993-08-18 Genentech Inc Method for culturing polypeptide factor dependent vertebrate recombinant cells
JPH066054B2 (ja) 1987-10-15 1994-01-26 帝人株式会社 動物細胞の培養方法
CA1312030C (en) * 1987-11-18 1992-12-29 Brian Maiorella Method to increase antibody titer
US5151359A (en) * 1988-05-19 1992-09-29 Mitsui Toatsu Chemicals Incorporated Method for producing of human tissue type plasminogen activator
WO1990003430A1 (en) 1988-09-23 1990-04-05 Cetus Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
KR0132666B1 (en) * 1989-03-14 1998-04-14 Hitachi Kk Method for controlling cultivation conditions for animal cells
JPH0396383A (ja) 1989-09-08 1991-04-22 Riso Kagaku Corp 画像形成装置
DE59010908D1 (de) 1989-09-12 2000-08-10 Hoffmann La Roche TNF-bindende Proteine
US5096816A (en) * 1990-06-05 1992-03-17 Cetus Corporation In vitro management of ammonia's effect on glycosylation of cell products through pH control
US5122469A (en) * 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
GB2251249B (en) * 1990-12-28 1995-06-21 Mogam Biotech Res Inst High-density medium for animal cell culture
WO1993010260A1 (en) * 1991-11-21 1993-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
US5447851B1 (en) * 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
NZ256293A (en) * 1992-09-15 1997-06-24 Immunex Corp Method of treating tumour necrosis factor - mediated inflammation by use of tnf antagonist
JP3523293B2 (ja) † 1993-07-19 2004-04-26 住友製薬株式会社 インターフェロンの産生増強法
US5705364A (en) † 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
JP5515221B2 (ja) † 2008-01-28 2014-06-11 日油株式会社 ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE69637867D1 (de) 2009-04-23
AR004940A1 (es) 1999-04-07
GEP20012519B (en) 2001-08-27
US5705364A (en) 1998-01-06
UA47428C2 (uk) 2002-07-15
IL122398A0 (en) 1998-06-15
DE69635076T2 (de) 2006-06-01
AU717847B2 (en) 2000-04-06
HK1087151A1 (en) 2006-10-06
WO1996039488A1 (en) 1996-12-12
DK1609853T4 (da) 2020-04-06
EP0832189B1 (en) 2005-08-17
JPH11507523A (ja) 1999-07-06
PL323737A1 (en) 1998-04-14
CN1166772C (zh) 2004-09-15
CA2220684A1 (en) 1996-12-12
CA2220684C (en) 2002-11-12
ES2248812T5 (es) 2008-12-16
RO120267B1 (ro) 2005-11-30
DK0832189T4 (da) 2008-10-27
EP0832189B2 (en) 2008-07-09
HK1017903A1 (en) 1999-12-03
KR19990022473A (ko) 1999-03-25
SI1609853T1 (sl) 2009-08-31
KR100496356B1 (ko) 2005-11-25
MX9709452A (es) 1998-06-30
TR199701543T1 (xx) 1998-05-21
BG102101A (en) 1998-07-31
SI0832189T1 (sl) 2006-02-28
AR011439A2 (es) 2000-08-16
JP4348376B2 (ja) 2009-10-21
HU226420B1 (en) 2008-12-29
PT1609853E (pt) 2009-06-09
DK0832189T3 (da) 2005-11-21
DK1609853T3 (da) 2009-06-02
ES2324046T5 (es) 2020-09-14
TW426734B (en) 2001-03-21
EP0832189A1 (en) 1998-04-01
CZ293719B6 (cs) 2004-07-14
NO322276B1 (no) 2006-09-04
MY113496A (en) 2002-03-30
EA001215B1 (ru) 2000-12-25
CN1186514A (zh) 1998-07-01
SI1609853T2 (sl) 2020-07-31
HUP9900920A2 (hu) 1999-07-28
SK282658B6 (sk) 2002-11-06
DE69635076D1 (de) 2005-09-22
ATE302266T1 (de) 2005-09-15
EP1609853B1 (en) 2009-03-11
PL185484B1 (pl) 2003-05-30
NO975674L (no) 1998-02-06
NO975674D0 (no) 1997-12-05
BR9609150A (pt) 1999-02-23
EA199700364A1 (ru) 1998-04-30
AU6095296A (en) 1996-12-24
ZA964776B (en) 1997-12-08
HUP9900920A3 (en) 2001-06-28
ES2248812T3 (es) 2006-03-16
EP1609853A1 (en) 2005-12-28
NZ310202A (en) 1999-10-28
SI0832189T2 (sl) 2008-12-31
IS2614B (is) 2010-04-15
CZ390997A3 (cs) 1998-06-17
SK167097A3 (en) 1998-07-08
BG63213B1 (bg) 2001-06-29
OA10753A (en) 2002-12-11
ES2324046T3 (es) 2009-07-29
JP2007190024A (ja) 2007-08-02
ATE425245T2 (de) 2009-03-15
TW516962B (en) 2003-01-11
DE69635076T3 (de) 2009-01-15
IL122398A (en) 2001-12-23
EP1609853B2 (en) 2020-01-22
IS4626A (is) 1997-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100496356B1 (ko) 포유동물세포배양으로생산되는단백질의시알릴화조절방법
US6656466B1 (en) Human tumor necrosis factor—immunoglobulin(TNFR1-IgG1) chimera composition
US5721121A (en) Mammalian cell culture process for producing a tumor necrosis factor receptor immunoglobulin chimeric protein
EP1984517B2 (en) Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
Schmidt et al. Production of biologically active complement factor H in therapeutically useful quantities
CN108463243A (zh) 重组人c1酯酶抑制剂及其用途
JP7093087B2 (ja) 遺伝子組み換えヒト甲状腺刺激ホルモンを含む組成物および遺伝子組み換えヒト甲状腺刺激ホルモンを生産する方法
MXPA97009452A (en) Process to control the sialilation of proteins produced by cultivation of mamife cells
HK1087151B (en) Process for controlling sialylation of proteins produced by mammalian cell culture
WO2004092218A1 (ja) 組換えアンチトロンビンの製造方法
US20170342392A1 (en) A method for controlling glycosylation of recombinant glycoprotein