SK9602000A3 - Synthetic opioid peptidic amide and pharmaceutical composition comprising the same - Google Patents

Synthetic opioid peptidic amide and pharmaceutical composition comprising the same Download PDF

Info

Publication number
SK9602000A3
SK9602000A3 SK960-2000A SK9602000A SK9602000A3 SK 9602000 A3 SK9602000 A3 SK 9602000A3 SK 9602000 A SK9602000 A SK 9602000A SK 9602000 A3 SK9602000 A3 SK 9602000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
phe
xaa
arg
nle
leu
Prior art date
Application number
SK960-2000A
Other languages
English (en)
Other versions
SK286135B6 (sk
Inventor
Jean-Louis Junien
Pierre J M Riviere
Claudio D Schteingart
Javier Sueiraz Diaz
Jerzy A Trojnar
Todd W Vanderah
Original Assignee
Ferring Bv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ferring Bv filed Critical Ferring Bv
Publication of SK9602000A3 publication Critical patent/SK9602000A3/sk
Publication of SK286135B6 publication Critical patent/SK286135B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1027—Tetrapeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa vo všeobecnosti týka syntetických opiátových peptidov, konkrétne opiátových peptidov, ktoré sú vysokoselektívnymi kapa receptorovými agonistami, konkrétnejšie agonistami, ktoré a) nepenetrujú do mozgu a b) vykazujú dlhotrvajúci analgetický účinok in vivo.
Doterajší stav techniky
Kapa opiátové receptory (KORs) sa nachádzajú v mozgu, mieche a v centrálnych a periférnych zakončeniach a v bunkových telieskach primárnych senzorických aferentných dráh (somatických alebo orgánových) alebo na imunitných bunkách. Molekuly, ktoré aktivujú KORs sa bežne označujú ako kapa agonisty.
Ukázalo sa, že aktivácia KORs, ktoré sa nachádzajú v mozgu vyvoláva analgetický účinok. Toto zistenie viedlo k pokusom vyvinúť nepeptidové kapa agonisty penetrujúce do mozgu, na použitie ako pôvodné analgetiká, ktoré by nemali nežiadúce vedľajšie účinky (zápcha, respiračná depresia, závislosť a toxikománia) morfínových analógov, ktoré fungujú na mu opiátových receptoroch (MORs). Tak u zvierat, ako aj u ľudí bol potvrdený analgetický účinok, ako aj chýbanie vedľajších účinkov podobných vedľajším účinkom mu-opiátov pre túto triedu zlúčenín. Avšak vývoj systémových kapa agonistov bol prerušený, pretože sa ukázalo, že tiež indukujú špecifické vedľajšie účinky, ako diuréza, účinky podobné sedatívam a stav úzkosti, ktoré sú sprostredkované kapa receptormi umiestnenými v mozgu.
Okrem supraspinálnych KORs, majú analgetický účinok aj KORs lokalizované buď v periférnych nervoch, alebo v mieche. Avšak ani periférne, ani miechové KORs nie sú spojené so žiadnymi vedľajšími účinkami systémových kapa agonistov. Preto, za predpokladu, že je možné vytvoriť kapa receptorové opiátové
-2agonisty, ktoré nevstupujú do mozgu (po ich periférnom alebo miechovom podaní), malo by byť možné získať bezpečné a originálne analgetická.
Kapa agonisty vytvárajú periférnu analgéziu v modeloch hyperplázie tenkého, ako aj hrubého čreva, ktorá je indukovaná miernym a lokálnym zápalom, a v modeli iritabilného vnútornostného syndrómu (IBS), ktorý zahŕňa zveličenú bolesť útrob spôsobenú hypersenzitivitou vnútorností, ktorá je možno spojená s lokálnym zápalom, pričom tieto sú tiež cieľmi pre periférne kapa agonisty. Okrem gastrointestinálneho traktu, sú aj iné vnútornosti, ktoré vykazujú patologický stav zahŕňajúci aktiváciu a/alebo senzitizáciu (tzn. lokálny zápal) primárnych senzorických aferentných dráh, považované za vhodné ciele pre takýto kapa receptorový opiát. Kapa agonisty blokujú aj neurogénny zápal vsomatických tkanivách inhibíciou vylučovania látky P z primárnych senzorických aferentných dráh, a vie sa o nich tiež, že vplývajú na imunitný systém a majú primárne inhibičnú úlohu v imunitných bunkách.
Žiadúce sú najmä peptidy, ktoré nevstupujú do mozgu, ktoré vykazujú vysokú afinitu voči KOR v porovnaní s afinitou voči MOR, ktoré majú vysoký potenciál a účinnosť, a ktoré vykazujú dlhotrvajúci účinok in vivo. US patent č. 5 610 271 opisuje tetrapeptidy, ktoré obsahujú štyri D-izomérne aminokyselinové zvyšky, ktoré sa viažu na KORs, ale takéto peptidy nevykazujú všetky vyššie uvedené vlastnosti.
Bola nájdená trieda peptidov, ktorá vykazuje vysokú selektivitu voči KOR a dlhotrvajúci účinok in vivo, a ktorá nevykazuje žiadnu signifikantnú penetráciu do mozgu.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ, ktorý má afinitu voči kapa opiátovému receptoru najmenej 1000 krát vyššiu ako je jeho afinita voči opiátovému receptoru, ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, a ktorý má vzorec:
-3H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-substituovaný amid, kde Xaa1 je (A)D-Phe, (C“Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, Cl alebo CH3; Xaa2 je (A')D-Phe, D-1Nal, D-2Nal, D-Tyr alebo D-Trp, kde A' je A alebo 3,4CI2; Xaa3 je D-NIe, (B)D-Leu, D-Hle, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C“Me; Xaa4 je D-Arg, D-Har, DnArg, D-Lys, D-lly, D-Arg(Et2), D-Har(Et2), D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Orn alebo D-lor. Výhodné amidy zahŕňajú etylamid, morfolid, tiomorfolid, 4-pikolylamid, piperazid, propylamid, cyklopropylamid, dietylamid a substituovaný benzylamid.
Tieto peptidy obsahujú sekvenciu štyroch D-izomérnych aminokyselín, ktoré majú C-koniec, ktorý je buď mono, alebo disubstitovaný amid.
Iné konkrétne uskutočnenie vynálezu poskytuje syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ, ktorý má afinitu voči kapa opiátovému receptoru, ktorá je najmenej 1 000 krát vyššia ako jeho afinita voči mu opiátovému receptoru, a ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, pričom peptid má nasledujúci vzorec: Η-Xaa1 -Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, kde Xaa1 je (A)D-Phe, (C“Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, Cl alebo CH3; Xaa2 je (A')D-Phe, D-1Nal, D-2Nal, D-Tyr alebo D-Trp, kde A' je A alebo 3,4CI2; Xaa3 je D-NIe, (B)D-Leu, D-Hle, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C“Me; Xaa4 je D-Arg, D-Har, DnArg, D-Lys, D-lly, D-Arg(Et2), D-Har(Et2), D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Orn alebo D-lor; a Q je NR1R2, morfolinyl, tiomorfolinyl, (C)piperidinyl, piperazinyl, 4-mono- alebo 4,4-di-substituovaný piperazinyl, alebo ε-lyzyl, kde R1 je nižší alkyl, substituovaný nižší alkyl, benzyl, substituovaný benzyl, aminocyklohexyl, 2-tiazolyl, 2-pikolyl, 3pikolyl, 4-pikolyl, <o-(acylamino)-polymetylén alebo poly(oxyetylén)-ová skupina; a R2 je H alebo nižší alkyl; a C je H, 4-hydroxyskupina alebo 4-oxoskupina.
V ďalšom uskutočnení vynález zahŕňa použitie týchto zlúčenín na liečbu ľudských pacientov, ktorý trpia bolesťami vnútorností a podobne, nestabilitou močového mechúra alebo podobne, alebo IBD alebo autoimunitnými ochoreniami, ako aj na podobnú liečbu iných ako humánnych cicavcov.
-4Tu použité názvoslovie pre peptidy je rovnaké ako je uvedené v Schroder & Lubke, The Peptides, Academic Press, 1965, kde, v súlade s bežným zobrazovaním, sú N-konce naľavo a C-konce napravo. Tam, kde má amino-kyselinový zvyšok izomérne formy, je zobrazená L-izomérna forma aminokyseliny, ak nie je uvedené inak.
Ako je uvedené vyššie, vynález poskytuje peptidy, ktoré sú selektívne voči KOR a nie len, že vykazujú silnú afinitu voči KOR, ale vykazujú aj dlhotrvajúcu in vivo biologickú aktivitu. Tieto kapa selektívne opiátové peptidy majú najmenej 1 000 krát vyššiu väzobnú afinitu voči KOR ako voči MOR, pričom veľa zlúčenín má najmenej 10 000 krát vyššiu afinitu a niektoré zlúčeniny vykazujú afinitu 20 000 krát alebo viac krát vyššiu. Avšak na základe mnohých indikácii je dôležité, aby zároveň s takouto vysokou selektivitiou vykazovali kapa agonisty nedostatok signifikantnej penetrácie do mozgu a predĺžené trvanie in vivo analgetického účinku. Preto, okrem vyššie uvedenej selektivity, výhodné zlúčeniny neprenikajú významne do mozgu, pričom si zachovávajú podstatný účinok najmenej približne jednu hodinu, pričom výhodnejšie zlúčeniny vykazujú takýto významný účinok tri hodiny alebo dlhšie.
Tu vysvetlené skratky sú používané v celom tomto dokumente. D-NIe znamená D-norleucín, a D-Hle znamená D-homoleucín. D-Har znamená Dhomoarginín, a D-nArg znamená D-norarginín, ktorý je o jeden uhlík kratší ako DArg. D-Nal znamená D-izomér alanínu, ktorý je substituovaný naftylom na β-uhlíku. Výhodne je použitý D-2Nal, tzn., že naftalén je pripojený v polohe 2 kruhovej štruktúry; avšak môže byť použitý aj D-1Nal. D-Cpa a D-Fpa sú použité na označenie chlór-D-Phe, respektíve fluór-D-Phe, pričom výhodné sú D-4Cpa, D2Fpa, D-3Fpa a D-4Fpa. D-Npa znamená nitro-D-Phe, a D-Mpa je používaný na označenie metyl-D-Phe. D-3,4Cpa znamená 3,4-dichlór-D-Phe. D-Acp znamená DAla(cyklopentyl). D-Orn znamená D-ornitín, a D-Dbu znamená kyselinu alfa.gamadiaminobutyrovú. CML znamená C“metyl Leu, a CMP znamená C“Me Phe. D-4Amf znamená D-4(NH2CH2)Phe, a D-Gmf znamená D-Amf(amidino), ktorý predstavuje D-Phe, kde je poloha 4 substituovaná s CH2NHC(NH)NH2· D-Tic znamená kyselinu D-1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylovú. V Ala(Thi) Thi znamená tienylovú
-5skupinu, ktorá je výhodne v polohe 2 spojená s alanínom, hoci 3-tienyl je ekvivalent. Ily a lor znamenajú izopropyl Lys, respektíve izopropyl Orn, kde bočné reťazce aminoskupiny sú alkylované s izopropylom.
Nižší alkyl znamená C^alkyl a zahŕňa cykloalkyl a výhodný je C1-C4alkyl, ktorý zahŕňa cyklopropyl a cyklobutyl. Tu použité skratky Me, Et, Pr, Ipr, Bu, Pn a Bzl znamenajú postupne metyl, etyl, propyl, izopropyl, butyl, pentyl a benzyl. Cyp znamená cyklopropyl a Cyb znamená cyklobutyl. Hoci sa väzba výhodne nachádza na jednom konci alkylového reťazca, môže byť hocikde v reťazci, napr. 3-pentyl, ktorý môže byť označený aj ako etylpropyl. Ahx znamená 6-amino-hexyl, tzn. (CH2)6-NH2- 4Acx znamená 4-aminocyklohexyl a hEt znamená hydroxyetyl, tzn. -CH2CH2OH. Substituovaný benzyl zahŕňa 4Nbz a 4Abz, ktoré znamenajú 4nitrobenzyl, respektíve 4-aminobenzyl, a Aeb znamená 4-(2-amino-2-karboxyetyl)benzyl, tzn.
2-, 3- a 4-pikolyl (2Pic, 3Pic a 4Pic) znamenajú metylpyridínové skupiny, ktoré sú pripojené cez metylén v polohe 2, 3, respektíve 4. Mor znamená morfolinyl, tzn.
/---\
a Tmo znamená tiomorfolinyl
Pip znamená piperidinyl (piperidyl) a 4-HyP a OxP znamenajú 4-hydroxypiperidín-1yl, respektíve 4-oxo-piperidín-1-yl. Ppz znamená piperazinyl. Ecp znamená 4etylkarbamoyl-piperazín-1-yl; Pcp znamená 4-fenylkarbamoylpiperazín-1-yl. Použité
-6môžu byť aj kvartérne amónne substituenty, ako napríklad 4,4-dimetylpiperazín-l-yl (Dmp) alebo iné di-nižší alkyl substitúcie.
2Tzl znamená 2-tiazolyl, napríklad s
/ \
-C CH
II II
N - CH
Ely znamená ε-lyzyl, v ktorom je bočný reťazec aminoskupiny L-lyzínu spojený amidovou väzbou s C-koncom.
Ako bolo uvedené vyššie, R1 môže byť co(acylamino)polymetylénová skupina alebo poly(oxyetylén)ová skupina, ako Aao, Aoo, Hoh, Ghx alebo Gao. Aao znamená 8-(acetylamino)-3,6-dioxaokt-1-yl, tzn. CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NHAc. Aoo znamená 8-amino-3,6-dioxaokt-1-yl, tzn. CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2NH2. Hoh znamená 6-(L-hydroorotylamino)-hex-1-yl, tzn. (CH2)6-NH-(L-hydroorotyl); kyselina L-hydroorotová je C4N2H5(O)2-COOH. Ghx znamená 6-(D-glukonylamino)hexyl, tzn. (CH2)6-NH-CO-(CHOH)4-CH2OH. Gao znamená 6-(D-glukonylamino)-3,6dioxaokt-1-yl, tzn. CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-CO(CHOH)4-CH2OH.
D-Phe alebo substituovaný D-Phe sú výhodné v polohe 1. Fenylový kruh môže byť substituovaný v polohách 1, 3 a/alebo 4, a výhodné sú bežné substitúcie s chlórom alebo fluórom v polohe 2 alebo 4. α-uhlíkový atóm môže byť aj metylovaný. Použité môžu byť aj iné ekvivalentné zvyšky, ktoré sa podobajú s DPhe, a ktoré zahŕňajú D-Ala(tienyl), D-Ala(cyklopentyl), D-Tyr a D-Tic. Zvyškami s polohou 2 sú výhodne tiež D-Phe alebo substituovaný D-Phe, pričom takéto substitúcie výhodne zahŕňajú substituent v polohe 4 fenylového kruhu alebo v polohách 3 a 4. Alternatívne môže byť použitý D-alanín substituovaný naftylom, ako aj D-Trp a D-Tyr. V polohe 3 sú výhodne umiestnené zvyšky D-NIe, D-Leu, DCML, D-Hle, D-Met alebo D-Val; avšak môže byť použitý aj D-Ala(cyklopentyl) alebo D-Phe. Pre polohu 4 je vo všeobecnosti výhodný D-Arg (ktorý môže byť substituovaný dietylom) a D-Orn (ktorý môže byť alkylovaný na svojej delta aminoskupine, akou je izopropyl); avšak môže byť použitý aj D-nArg a iné
-7ekvivalentné zvyšky, ako D-Lys (ktorý môže byť aj alkylovaný na svojej epsilonaminoskupine) a D-Har (ktorý môže byť substituovaný dietylom). Navyše môžu byť použité aj D-Gmf, D-Dbu, D-4Amf a D-His.
Hoci by sa dalo očakávať, že trvanie biologického účinku sa bude zvyšovať použitím sekvencie 4 D-izomérnych aminokyselín, prekvapujúco sa zistilo, že trvanie účinku je vo všeobecnosti dosť krátke pri nesubstituovanom amide, a že dlhé trvanie účinku sa získalo len prostredníctvom zavedenia substituovaného amidu na C-koniec. Jednoduché substitúcie môžu byť vo forme etylu, metylu, propylu, cyklopropylu a pikolylu, ako aj vo forme iných ekvivalentných zvyškov, ako sú hydroxyetyl, tiazolyl, aminocyklohexyl, benzyl a substituovaný benzyl. Vo všeobecnosti sú výhodné substituenty nižší alkyl a pikolyl pre jednoducho substituované amidy. Alternatívou namiesto jednoducho substituovaného amidu je substitúcia dialkylom, napr. dietylamino; avšak výhodne je na takto disubstituovanom C-konci umiestnený morfolinyl, tiomorfolinyl alebo piperidinyl, pričom piperidinyl je nesubstituovaný alebo substituovaný so 4-hydroxy alebo 4-oxo. Použitý môže byť aj piperazinyl alebo 4-mono- alebo 4,4-disubstitutovaný piperazinyl, ako ε-lyzyl.
Zistilo sa, že viazanie sa je vo všeobecnosti charakteristickou vlastnosťou aminokyselinovej sekvencie tetrapeptidu, a že selektívne kapa receptorové opiátové peptidy by mali vykazovať väzobnú afinitu ku kapa receptoru, ktorá je taká, že Kj sa rovná približne 2 nM alebo je nižšia. Dlhotrvajúci účinok, ktorý je považovaný v prvom rade za závislý na štruktúre amidu pripojeného na C-koniec, sa môže účinne testovať analgetickým testom, opísaným nižšie, a najvýhodnejšie peptidy vykazujú podstatný biologický účinok dve alebo tri hodiny a nemajú žiadny významný vplyv na mozog.
Výhodná podtrieda triedy opiátových peptidov uvedených vyššie má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q kde Xaa1 je D-Phe (nesubstituovaný alebo substituovaný s CaMe, 2F, 4F alebo 4CI) alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl); Xaa2 znamená (A')D-Phe, D-1Nal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A'je H, 4F, 4CI, 4NO2 alebo 3,4CI2; Xaa3 je D-NIe, D-Leu, D-CML,
-8D-Met alebo D-Acp; Xaa4 je D-Arg, D-Arg(Et2), D-Lys, D-lly, D-Har, D-Har(Et2), DnArg, D-Orn, D-Ior, D-Dbu, D-Amf, a D-Gmf; a Q je NR1R2, Mor, Tmo, Pip, 4-HyP, OxP alebo Ppz, kde R1 znamená Me, Et, Pr, Bu, hEt, Cyp, Bzl alebo 4-pikolyl, a R2 znamená H alebo Et.
Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec:
Η-Xaa1 -Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, kde Xaa1 je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa, D-4Cpa, D-Acp alebo D-Ala(Thi); Xaa2 je DPhe, D-4Fpa, D-4Cpa, D-3,4Cpa, D-1Nal, D-2Nal alebo D-Trp; Xaa3 je D-NIe, DMet, D-CML alebo D-Leu; Xaa4 je D-Arg, D-Lys, D-Har, D-nArg alebo D-Orn; a Q znamená NR1R2, Mor, Tmo, Pip, 4-HyP alebo Ppz, kde R1 znamená Et, Pr, Bu, Cyp, hEt, Bzl alebo 4Pic, a R2 je H alebo Et.
Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, kde Xaa1 je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa, D-Acp alebo D-Ala(2Thi); Xaa2 je (A)D-Phe, D1 Nal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A znamená 4F alebo 4CI; Xaa3 znamená D-NIe, DMet alebo D-Leu; Xaa4 znamená D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Orn alebo D-Gmf; a Q je NHR1, Mor, Tmo, Pip alebo Ppz, kde R1 znamená Et, Pr alebo 4Pic.
Ďalšia výhodná podtrieda kapa opiátových peptidov má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3- Xaa4-Q, kde Xaa1 je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa alebo D-Ala(2Thi); Xaa2 znamená (A)D-Phe, D1 Nal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A znamená 3,4CI2 alebo 4CI; Xaa3 znamená D-NIe alebo D-Leu; Xaa4 je D-Arg, D-Orn alebo D-Gmf; a Q je NHR1, Mor, Tmo, Pcp, Ppz alebo N(Et)2, kde R1 znamená Et, Pr, Cyp, 4Pic, Aeb alebo Hoh.
Zistilo sa, že vyššie uvedená trieda a podtriedy opiátových peptidov predĺžili trvanie analgetického účinku in vivo, ako výsledok zavedenia substituovaného amidu na C-koniec v polohe 4 aminokyselinového zvyšku. Táto veľmi neočakávaná vlastnosť dáva takýmto peptidom výnimočnú hodnotu, keďže niektoré z nich ostávajú in vivo aktívne počas troch hodín a dlhšie. Určité tetrapeptidy, ktoré majú vyššie uvedenú sekvenciu, a ktoré ale majú jednoduchý C-koncový amid, tiež vykazujú vysokú selektivitu voči KOR, v porovnaní so selektivitou voči MOR; avšak majú vo všeobecnosti len krátkotrvajúci účinok. Jednoznačne sa očakáva, že takéto
-9opiátové peptidy budú vykazovať predĺžený účinok, keď sa budú syntetizovať tak, aby mali substituovaný amid, ako napríklad morfolid, na svojom C-konci. Systematicky sa zistilo, že keď sa tetrapeptidový primárny amid silno a selektívne viaže na KOR, budú, keď sa nasyntetizujú, zodpovedajúce substituované amidy, ako napríklad etylamid a morfolid, vykazovať analgetický účinok dlhšiu dobu meranú v hodinách, tzn. najmenej 1 hodinu, bez toho, aby významne prenikali do mozgu.
Hoci sú výhodné aminokyselinové sekvencie opísané vo vyššie uvedených vzorcoch, je potrebné zobrať do úvahy, že pre priemerného odborníka v oblasti peptidovej chémie je zrejmé, že jeden alebo viaceré aminokyselinové zvyšky by mohli byť nahradené prostredníctvom konzervatívnej aminokyselinovej substitúcie, napr. náhradou jednej zásaditej aminokyseliny inou, alebo náhradou jednej hydrofóbnej aminokyseliny inou, napr. náhradou D-lle za D-Leu. Podobne môžu byť rôzne zvyšky modifikované spôsobom všeobecne známym v oblasti; napríklad DPhe (ako je uvedené vyššie) môže byť modifikovaný zavedením halogénu alebo nitroskupiny, zvyčajne v polohe 3, 5 alebo 4 alebo môžu byť metylované oba auhlíky. Takéto modifikácie sú považované za modifikácie, ktoré vytvárajú rovnaké kapa receptorové opiátové peptidy.
Peptidy môžu byť syntetizované akýmkoľvek vhodným spôsobom, ako napríklad výlučnými technikami na pevnej fáze alebo klasickou adíciou v roztoku alebo alternatívne čiastočnými technikami na pevnej fáze alebo technikami fragmentovej kondenzácie. Techniky výlučnej peptidovej syntézy na pevnej fáze (SPPS) sú uvedené napríklad v učebnici Stewart & Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2, vyd., Pierce Chemical Company, Rockford, lllinois, 1984, a príklady sú uvedené v opise US patentu č. 4 105 603. Príklad spôsobu syntézy fragmentovou kondenzáciou je uvedený v US patente č. 3 972 859, a príklady iných vhodných syntéz sú uvedené v US patentoch č. 3 842 067 a 3 862 925. Klasická syntéza adíciou v roztoku je podrobne opísaná v publikácii Bodanzsky a ďalší, Peptide Synthesis, 2. vyd., John Wiley & Sons, New York, 1976.
Bežnou pri chemickej syntéze peptidov párovacieho typu je ochrana akéhokoľvek nestabilného bočného reťazca aminokyseliny prostredníctvom párovania, a
-10zvyčajne aj ochrana α-aminoskupiny, takže adícia sa uskutočňuje na karboxylovej skupine jednotlivých aminokyselín alebo dipeptidov alebo tripeptidov, ktoré sa pridávajú. Takéto ochranné skupiny sú v oblasti dobre známe a ako výhodné aamino ochranné skupiny pri SPPS alebo na klasickú syntézu v roztoku sú často použité terc-butyloxykarbonyl(Boc), benzyloxykarbonyl(Z) a fluorenyl-metoxykarbonyl(Fmoc), hoci existuje veľké množstvo iných α-amino ochranných skupín, ktoré môžu byť alternatívne použité.
Ak sa použije SPPS, C-koncový aminokyselinový zvyšok sa pripája na pevný živicový podklad, akým je napríklad O-CH2-polystyrénový podklad, O-CH2-benzylpolyamidový živicový podklad -NH-benzhydrylamínový (BHA) živicový podklad alebo -NH-para-metylbenzhydrylamínový (MBHA) živicový podklad. Použitie BHA alebo MBHA živíc je výhodné často vtedy, keď je želateľný nesubstituovaný amid, pretože výsledkom štiepenia je priamo C-koncový amid. Ak je želateľný Nmetylamid, je možné ho vytvoriť z N-metyl BHA živice. Iné jednoducho substituované amidy môžu byť syntetizované postupom uvedeným v W. Komreich a ďalší , Int. J. Peptide Protein Res., 25:414-420, 1985, a aj v U.S. patente č. 4 701 499. Peptidy, ktoré majú na C-konci di-substituované amidy, ako napríklad Nmorfolinyl alebo N-piperidinyl, sa výhodne pripravujú klasickou syntézou v roztoku alebo fragmentovou kondenzáciou v roztoku.
Keď sa tieto tetrapeptidy nasyntetizujú, je možné ich jednoducho purifikovať použitím metód na purifikáciu krátkych peptidov, ktoré sú v oblasti dobre známe, ako napríklad reverzná fázová kvapalná chromatografia s vysokou rozlišovacou schopnosťou (RP-HPLC), alebo iné vhodné spôsoby. Takáto purifikácia je podrobne opísaná v J. Riviér a ďalší , J. Chromatography, 288:303-328,1984, a C. Miller a J. Riviér, Peptide Science, Biopolymers, 40:265-317 (1996), a špecifické príklady purifikácie, ktorá nasleduje po syntéze na pevnej fáze sú uvedené v U.S. patent č. 5 098 995.
Na otestovanie toho, či tetrapetidy vykazujú vysokú selektivitu voči KOR, silný analgetický biologický účinok, dlhotrvajúci in vivo biologický účinok, a či nepenetrujú do mozgu, je možné použiť rôzne testy. V oblasti sú dobre známe
-11 receptorové testy, a v súčasnosti boli klonované myšie, potkanie, morčacie a ľudské KORs. Okrem morčacieho KOR (gpKOR), sú klonované KORs veľmi podobné, a všetky obsahujú približne 380 aminokyselín. Aminokyselinová sekvencia ľudského KOR (hKOR) je na 93,9% homologická so sekvenciou potkanieho KOR (rKOR) a na 93,4% homologická so sekvenciou myšacieho KOR (mKOR). Na druhej strane sa hKOR významne líši od hMOR a od ľudského opiátového receptora (hDOR), s ktorými má len 60,2%, respektíve 59,1% zhodu v aminokyselinovej sekvencií. KORs ako aj iné opiátové receptory sú klasickými receptormi spojenými s Gproteínom, ktoré obsahujú sedem transmembránových premostení (Gi). Tieto klonované receptory jednoducho umožňujú vyhľadávanie konkrétnych kandidátových peptidov; môže sa napríklad uskutočňovať vyhľadávanie tak KOR, ako aj MOR, aby sa stanovila selektivita. Ľudský KOR, MOR a DOR sa stabilne exprimovali v myšacej nádorovej bunkovej línii odvodenej od hypokampálneho neuroblastu (HN.9.10) a sú prístupné na použitie na in vitro vyhľadávanie. Existuje aj množstvo dobre prijateľných in vivo testov, ktoré sa vo všeobecnosti stali štandardnými na stanovenie analgetického účinku opiátovej zlúčeniny. Tieto testy sa vo všeobecnosti používajú na myšiach a zahŕňajú test švihania chvostom, labkový stláčací test, zvíjací test s kyselinou octovou, test prištipávania chvosta a chvostový imerzný test. Vonvoigtlander, P. F. a ďalší, J. Pharm. Exper. Therapeutics, 224: 7-12 (1983) opisuje množstvo takýchto testov pre opiátové zlúčeniny.
Väzobná afinita predstavuje silu interakcie medi ligandom a receptorom. Aby sa stanovila väzobná afinity opiátových receptorov, zhodnotili sa peptidy podľa vynálezu použitím kompetičných väzobných štúdií. Tieto štúdie sa uskutočňovali použitím klonovaného ľudského kapa receptora (hKOR) a mu opiátového receptora (hMOR), ktoré sa exprimovali v stabilných transfekovaných bunkových líniách (HN.9.10, odvodených od myšieho hipokampálneho neuroblastómu). V týchto testoch boli použité testovacie zlúčeniny (neznačený alebo studený ligand) vo vzrastajúcich koncentráciách na vytesnenie špecifického viazania sa rádioaktívne značeného ligandu, ktorý má vysokú afinitu a selektivitu voči študovanému receptoru. Ako ligandy boli použité 3H-U-69,593 v hKOR testoch a 3H-DAMGO v
- 12hMOR testoch. Oba ligandy sú komerčne dostupné (NEN-Dupont). DAMGO je akronym pre [D-Ala2,MePhe4,Gly-ol5]-enkefalín. Afinita rádioaktívnych ligandov je definovaná koncentráciou rádioaktívneho ligandu, ktorej výsledkom je polovica maximálneho špecifického naviazania (Ka) v saturačných testoch. Ka pre 3H-U69,593 pri hKOR je približne 0,3 nM a pre 3H-DAMGO pri hMOR je približne 3,0 nM. Afinita testovanej zlúčeniny (neznačený alebo studený ligand) je stanovená v kompetičných väzobných testoch vypočítaním inhibičnej konštanty (K.) podľa nasledujúceho vzorca:
IC50
Ki=----------1 + (F/Kp) kde
IC50 = koncentrácia studeného ligandu, ktorý inhibuje 50 % špecifického viazania sa rádioaktívneho ligandu,
F = koncentrácia voľného rádioaktívneho ligandu, Ka = afinita rádioaktívneho ligandu stanovená v saturačných testoch.
Keď sa tieto testy uskutočňujú v špecifických podmienkach s relatívne nízkymi koncentráciami receptora, je vypočítané Kj testovanej zlúčeniny dobrou aproximáciou jej disociačnej konštanty Ka, ktorá predstavuje koncentráciu ligandu nevyhnutnú na zaujatie polovice (50 %) väzobných miest. Nízka Kj hodnota v nanomolárnom a subnanomolárnom rozsahu je považovaná za takú, ktorá identifikuje ligand s vysokou afinitou v oblasti opiátov. Výhodné analógy majú Kj pre KOR približne 2 nanomoly (nM) alebo nižšie, pričom výhodné analógy majú Kj približne 1 nM alebo nižšie. Pretože sú KOR receptory distribuované po celom tele, budú mať kapa receptorové opiátové peptidy podstatný účinok pri modulovaní mnohých periférnych dejov, a keď sú vysoko KOR-selektívne, budú mať minimálne vedľajšie účinky a mali by byť dobrými fyziologickými liečivami.
Tieto väzobné testy, ktoré používajú KORs a MORs nie sú komplikované a môžu sa jednoducho uskutočňovať s počiatočné identifikovanými alebo
-13syntetizovanými peptidmi, aby sa stanovilo, či sú takéto peptidy KOR selektívne a či majú vysokú afinitu. Takéto väzobné testy sa môžu uskutočňovať rôznymi spôsobmi, ktoré sú pre priemerného odborníka v oblasti dobre známe a jeden podrobný príklad testu tohto všeobecného typu je uvedený v Perrin, M., a ďalší, Endocrinology, 118:1171-1179, 1986.
Vynález bude ďalej opísaný prostredníctvom nasledujúcich príkladov. Tieto príklady, však žiadnym spôsobom neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý je opísaný nárokmi na konci prihlášky.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Peptid vzorca: H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-NHEt sa vhodne syntetizuje technikami peptidovej syntézy dobre známymi v danej oblasti. Napríklad tripeptid: (α-amino ochranná skupina)D-Phe-D-Phe-D-Nle(karboxylová ochranná skupina), sa najprv syntetizuje použitím klasickej chemickej techniky v roztoku. Tripeptid môže byť pripravený napríklad rozpustením H-D-NIe-OMe v DMF a pridaním /V-etylmorfolínu (NEM) alebo podobnej látky na nastavenie pH. Tento roztok sa potom spojí s roztokom Boc-chráneného D-Phe-OH v DMF, ktorý obsahuje NEM. K tejto reakčnej zmesi sa potom pridá aktivačné alebo párovacie činidlo, ako benzotriazol1-yl-oxy-tris-(dimetylamino)-fosfónium-hexafluórfosfát (BOP) alebo zmes N,N'diizopropylkarbodiimidu (DIC) a /V-hydroxybenzotriazolu (HOBt). Po ukončení reakcie sa médium dosucha evaporuje a produkt sa potom príslušným spôsobom purifikuje a rekryštalizuje. Boc-ochranná skupina sa potom odstráni kyselinou trifluóroctovou, a dipeptid sa znovu rozpustí v DMF. Roztok Boc-chráneného D-Phe sa rozpusti v DMF a pridá sa NEM. Reakcia sa opakuje použitím BOP, ako je uvedené vyššie, čím sa vytvorí tripeptid, ktorý, po evaporovaní roztoku dosucha, sa purifikuje a rekryštalizuje. Výsledným produktom je Boc-D-Phe-D-Phe-D-Nle-OCH3. Metylester sa potom vhodne konvertuje na voľnú kyselinu, rozpustením zmesi v dioxáne alebo v DMSO a vode a pridaním hydroxidu sodného. Po ukončení reakcie je výsledkom separácie, purifikácie a rekryštalizácie tripeptid Boc-D-Phe-DPhe-D-NIe-OH.
Tripeptid sa rozpustí v DMF s obsahom NEM a reaguje s D-Arg(Tos)-NHEt, opäť použitím BOP ako párovacieho činidla. Alternatívne sa tripeptid-metylester môže konvertovať na azid, ak je to želateľné, ošetrením s 80% roztokom hydrazínového hydrátu, čím sa vytvorí hydrazid, ktorý sa izoluje a potom sa ošetrí s dusitanom sodným a anorganickou kyselinou v DMF. Azid okamžite reaguje s DArg(Tos)-NHEt v DMF roztoku s obsahom trietylamínu. Po ukončení reakcie sa zmes dosucha evaporuje a potom sa vhodne purifikuje a rekryštalizuje. Z N-konca a bočného reťazca D-Arg sa odstráni ochranná skupina a znovu sa uskutoční purifikácia a rekryštalizácia, čím sa vytvorí požadovaný tetrapeptidetylamid (peptid Č.1).
Homogénnosť peptidu sa zhodnotí reverznou fázovou HPLC použitím rozdielnych mobilných fáz: gradient acetonitrilu vo vode obsahujúcej 0,1% kyselinu trifluóroctovú a gradient acetonitrilu v trietylamínfosfátovom tlmivom roztoku s pH 7, a aj fúzovaným kremičitanom, kapilárnou elektroforézou použitím fosfátového tlmivého roztoku s pH 2,5. Týmito metódami je stanovená čistota peptidu na >98 %. Prostredníctvom hmotnostnej spektrometrie použitím elektrosprejovej ionizácie a analýzy zachytávania iónov sa dokázal pseudomolekulový ión [MH]' s hodnotou m/z 609,4, ktorá je v súlade s vypočítanou hmotnosťou pre tento tetrapeptid m/z 609,5. Fragmentačná analýza pseudomolekulového iónu dokázala sériu iónov s m/z pomermi, ktoré sú v súlade so sekvenciou očakávanou pre pripravenú štruktúru.
Väzobné testy s bunkami exprimujúcimi ľudský KOR a MOR sa uskutočňujú nasledovne. Afinity testovaného peptidu voči hKOR a hMOR, ktoré sú stabilne exprimované v myších hipokampálnych neuroblastómových (HN.9.10) bunkách, sa stanoví kompetitívnym vytesnením 3H-U-69,593 za hKOR alebo 3H-DAMGO za hMOR ako je opísané. Zozbierané sú údaje z najmenej 3 experimentov a hodnoty inhibičnej disociačnej konštanty (Kj) (95% hranice dôveryhodnosti) sa vypočítajú použitím vhodného programu, ako napríklad LIGAND programu od Munson a Rodbard, Anál. Biochem, 107:220-239, 1980. Klonovaný KOR sa viaže na peptid č.
s vysokou afinitou, ako bolo stanovené kompetitívnym vytesnením naviazaného rádioaktívneho ligandu, a Kj hodnota je stanovená na približne 0,05 ± 0,02 nM. Rozdiely v afinite sú dramatické v porovnaní s podobne stabilne transfekovanými nádorovými bunkami, ktoré exprimujú ľudský MOR, kde Ki je 1890 ± 990 nM. Takže peptid č. 1 sa viaže silnejšie na hKOR ako na hMOR s faktorom približne 38 000.
Testovanie peptidu v myšacom teste zvíjania sa s kyselinou octovou (ako bol opísaný vyššie) dokazuje ED50 s hodnotou približne 0,09 mg/kg a tiež to, že peptid vykazuje pokračujúci analgetický účinok vyšší ako 50 % po troch hodinách. Takže peptid č. 1 je považovaný za peptid, ktorý má dlhotrvajúci účinok.
Príklad 2
Opiátové peptidy všeobecného vzorca: H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-Q, uvedené v tabuľke A, sa syntetizujú a testujú ako je opísané v príklade 1.
Tabuľka A
č. Q Ki KOR (nM) Ki MOR (nM) μ/κ pomer Hmotn. spektroskopia wt-ed50 mg/kg
Vypočítané Zmerané
2 NHMe 0,06 3 620 60 000 595,4 595,5 0,14
3 NHPr 0,09 1 640 18 000 623,4 623,5 0,078
4 NHBu 0,19 1 370 7 200 637,4 637,5 0,30
5 NH(Cyp) 0,18 3 520 10 000 611,4 621,5 0,04
6 Mor 0,06 1 510 41 000 651,4 651,4 0,014
7 N(Et2) 0,11 1 900 17 000 637,4 637,5 0,02
8 NH(4Pic) 0,14 3 640 26 000 672,4 672,4 0,01
9 NHhEt 0,40 1 010 2 500 625,4 625,5 0,03
10 Tmo 0,09 2 260 25 000 667,4 667,3 0,067
11 4-HyP 0,06 3 700 62 000 665,4 665,4 0,073
12 Pip 0,15 1 050 7 000 649,4 649,5 0,07
13 NH(2Tzl) 0,59 1 590 1 700 664,3 664,4 0,44
14 NHBzl 0,44 890 2 000 671,4 671,4 0,14
15 Ppz 0,16 9 100 57 000 650,4 650,5 0,017
Peptidy 2 až 15 sú považované za peptidy, ktoré vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
Príklad 3
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, ako sú uvedené v tabuľke B, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
Tabuľka B
č. Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Q
16 D-4Fpa D-Phe D-NIe D-Arg NHEt
17 D-Acp D-Phe D-NIe D-Arg NHEt
18 D-Ala(2Thi) D-Phe D-NIe D-Arg NHEt
19 D-Tyr D-Phe D-NIe D-Arg Mor
20 D-Phe D-Trp D-NIe D-Arg Mor
21 D-Phe D-4Npa D-NIe D-Arg Mor
22 D-Phe D-4Cpa D-NIe D-Arg Mor
23 D-Phe D-1Nal D-NIe D-Arg NH(4Pic)
24 D-Phe D-2Nal D-NIe D-Arg NH(4Pic)
25 D-Phe D-Tyr D-NIe D-Arg NH(4Pic)
26 D-Phe D-Phe D-Leu D-Arg Mor
27 D-Phe D-Phe D-Val D-Arg Mor
28 D-Phe D-Phe D-Acp D-Arg Mor
29 D-Phe D-Phe D-NIe D-Lys Mor
30 D-Phe D-Phe D-NIe D-Har NHEt
31 D-Phe D-Phe D-NIe D-Har(Et2) NHEt
32 D-Phe D-Phe D-NIe D-Orn NHEt
33 D-Phe D-Phe D-NIe D-Amf NH(4Pic)
34 D-Phe D-Phe D-NIe D-Dbu NH(4Pic)
35 D-Phe D-Phe D-Leu D-Orn Ppz
36 D-Phe D-Phe D-Phe D-Arg NH(4Pic)
37 D-Phe D-Phe D-NIe D-lly NH(4Pic)
38 D-Phe D-Phe D-NIe D-Ior NH(4Pic)
39 D-Phe D-4Mpa D-NIe D-nArg Mor
Peptidy 16 až 39 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
Príklad 4
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, ako sú uvedené v tabuľke C, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
Tabuľka C Hmotn. spektrosk Väzba
č. Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Q Vyp. Zmer. (μ/κ pomer)
40 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Nbz) 716,4 716,5 3 800
41 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Abz) 686,4 686,4 12 000
42 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg Ecp 721,4 721,5 27 000
43 D-CMP D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Pic) 686,4 686,5 2 500
44 D-Phe D-Phe D-Acp D-Arg NH(4Pic) 698,4 698,5 8 300
45 D-Phe D-Phe D-Hle D-Arg NH(4Pic) 686,4 686,5 11 000
46 D-Phe D-Phe D-CML D-Orn Mor 623,4 623,4 14 000
47 D-Phe D-Phe D-Leu D-Lys NH(4Pic) 644,4 644,3 30 000
48 D-Phe D-Phe D-Leu D-Lys NHPr 595,4 595,3 18 000
49 D-Phe D-Phe D-Leu D-Lys Mor 623,4 623,3 92 000
50 D-Phe D-Phe D-NIe D-Har NH(4Pic) 686,4 686,5 9 300
51 D-Phe D-Phe D-NIe D-Har Mor 665,4 665,5 12 000
52 D-Phe D-Phe D-Leu D-Dbu NH(4Pic) 616,4 616,3 92 000
53 D-Phe D-Phe D-Leu D-Dbu Mor 595,4 595,3 85 000
Peptidy 40 až 53 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
Príklad 5
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-D-Phe-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, ako sú uvedené v tabuľke D, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
Tabuľka D
K, K, μ/κ Hmotn. spekt. WTed50
č. Xaa2 Xaa3 Xaa4 Q KOR (nM) MOR (nM) pomer Vyp. Mer. mg/kg
54 D-Phe D-NIe D-Arg NH(3Pic) 0,39 1 220 3 100 672,4 672,3
55 D-Phe D-NIe D-Amf NHEt 0,14 1 750 12 500 629,4 629,3 0,083
56 D-Phe D-Leu D-Orn NHEt 0,31 4 150 13 000 567,4 567,4 0,057
57 D-Phe D-Leu D-Om Mor 0,19 5 260 28 000 609,4 609,3 0,026
Peptidy 54 až 58 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
Príklad 6
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-D-Arg-Q, ako sú uvedené v tabuľke E, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
- 19Tabuľka E
č. Xaa1 Xaa2 Xaa3 Q K, KOR (nM) K| MOR (nM) μ/κ pomer Hmotn. spekt. WTed50 mg/kg
Vyp. Mer.
59 D-Ala(2Thi) D-4Cpa D-Leu Mor 0,25 3 360 13 000 691,3 691,1 0,052
60 D-Ala(2Thi) D-3,4Cpa D-Leu NH(4Pic) 0,4 769 1 900 746,3 746,3 0,083
61 D-Ala(2Thi) D-3,4Cpa D-Leu Mor 0,15 1 560 10 400 725,3 725,4 0,019
62 D-Phe D-Phe D-NIe OxP 0,11 2 970 27 000 663,4 663,5 0,18
63 D-Ala(2Thi) D-2Nal D-Leu Mor 0,2 3 170 16 000 707,4 707,4 0,04
64 D-Phe D-Phe D-NIe Dmp 0,21 7 680 37 000 678,4 678,5 0,032
65 D-4Fpa D-4Cpa D-Leu Mor 0,17 1 900 11 000 703,4 703,4 0,15
Peptidy 59 až 65 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
Príklad 7
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, ako sú uvedené v tabuľke F, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
Tabuľka F
Č. Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Q
66 D-4Cpa D-4Cpa D-Leu D-Lys NHPr
67 D-4Fpa D-2Nal D-Met D-Amf NHBu
68 D-4Cpa D-Trp D-Acp D-Amf Pip
69 D-Phe D-Phe D-Val D-Orn Ecp
70 D-Ala(2Ti) D-4Fpa D-NIe D-Dbu NH(4Abz)
71 D-Acp D-Phe D-Leu D-Har 4-HyP
72 D-CMP D-Trp D-Phe D-Arg(Et2) NHBzl
73 D-4Cpa D-3,4Cpa D-Met D-Orn Tmo
74 D-Acp D-1Nal D-NIe D-Har(Et2) NH(3Pic)
75 D-4Fpa D-4Cpa D-Leu D-Gmf NHhEt
76 D-CMP D-Tyr D-Acp D-Dbu NHlpr
77 D-Phe D-2Nal D-Acp D-lly NHPn
78 D-Tic D-4Fpa D-Phe D-Lys NH(4Pic)
79 D-4Npa D-Trp D-CML D-Ior N(Et)2
80 D-CMP D-Phe D-Met D-Ior Mor
81 D-Ala(3Thi) D-1Nal D-NIe D-Lys NH(2Tzl)
82 D-Phe D-4Npa D-NIe D-Arg NHCyp
83 D-Acp D-2Nal D-Hle D-Har NHCyb
84 D-Tyr D-2Nal D-Phe D-Lys Ppz
85 D-Phe D-1Nal D-Met D-Ior OxP
86 D-Phe D-Trp D-Met D-Arg Dmp
87 D-Phe D-Trp D-NIe D-Orn Mor
Opiátové peptidy v tabuľke F vykazujú vysokú selektivitu voči KOR, v porovnaní so selektivitiou voči MOR, a vykazujú analgetický biologický účinok in vivo.
Príklad 8
Opiátové peptidy, ktoré majú všeobecný vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, ako sú uvedené v tabuľke G, sa syntetizovali a testovali ako je opísané v príklade 1.
-21 Tabuľka G
č. Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Q μ/κ pomer wt-ed50 mg/kg
88 D-4Fpa D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Pic) 16 000 0,04
89 D-3Fpa D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Pic) 24 000 0,11
90 D-2Fpa D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Pic) 38 000 0,14
91 D-4Fpa D-Phe D-NIe D-Har NH(4Pic)
92 D-4Cpa D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Pic) 2 900
93 D-4Fpa D-4Npa D-NIe D-Arg NH(4Pic) 1 200
94 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg Eiy 70 000 0,02
95 D-Phe D-Phe D-NIe D-nArg NH(4Pic) 16 000 0,08
96 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg Pcp 12 000 0,098
97 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(4Acx) 6 400
98 D-Phe D-Phe D-Leu D-Orn NH(Aeb) 24 000 0,014
99 D-Ala(2Thi) D-3,4Cpa D-Leu D-Orn Mor 19 000 0,083
100 D-Ala(2Thi) D-2Nal D-Leu D-Orn Mor 31 000 0,079
101 D-Ala(2Thi) D-4Cpa D-Leu D-Orn Mor 38 000 0,112
102 D-Ala(2Thi) D-4Cpa D-Leu D-Orn NH(4Pic) 24 000 0,032
103 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Aao) 140 000 0,101
104 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Aoo) 6 300
105 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Hoh) 66 000 0,015
106 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Ahx) 10 000 0,055
107 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Ghx) 22 000 0,032
108 D-Phe D-Phe D-NIe D-Arg NH(Gao) 67 000 0,034
Peptidy 88 až 108 vykazujú dlhotrvajúci analgetický biologický účinok.
-22Príklad 9
Vybrané peptidy, ktoré boli uvedené v tabuľkách A až G sa ďalej podrobili špecifickému in vivo testovaniu na stanovenie trvania účinku ich opiátových vlastností a výsledky sú uvedené v tabuľke H, nižšie. Čísla peptidov zodpovedajú číslam uvedeným v tabuľkách vyššie a hodnoty μ/κ pomeru sú uvedené z referenčných dôvodov. In vivo testovanie sa uskutočňovalo použitím myšieho zvíjacieho testu (WT), ktorý sa dobre hodí na stanovenie dĺžky trvania analgetického biologického účinku. Tento test je podrobne opísaný v článku G. A. Bentley a ďalší, Br.J. Pharmac., 73:325-332, 1981, a používa samčeky ICR myší, ktoré sú pri vedomí, dodávané firmou Harlan, s hmotnosťou medzi 20 a 30 gramov. Myšiam nie je podávaná potrava 12 až 16 hodín pred začiatkom testu. Monitorované bolestivé správanie, tzn. zvíjanie sa, sa indukuje intraperitoneálnym (i. p.) podaním nariedenej kyseliny octovej. Na jeden kg telesnej hmotnosti je použitých 10 ml 0,6% vodnej kyseliny octovej. Zvíjanie sa hodnotí počas 15 minút po podaní kyseliny octovej. Ako prvý krok sú zlúčeniny testované v 3 až 4 zvyšujúcich sa dávkach podávaných intravenóznym spôsobom a v jednom časovom bode pred ošetrením (5 minút pred podaním injekcie s kyselinou octovou). Tento krok je použitý na stanovenie účinnej (WT-EDS0), ako aj submaximálnej účinnej dávky (približne 80 až 90% analgetický účinok). V druhom kroku sa táto submaximálna účinná dávka pre každý konkrétny peptid podáva v rôznych časoch pred ošetrením (tzn. -5 minút, -60 minút, -120 minút a -180 minút) pred podaním kyseliny octovej, aby sa stanovilo trvanie účinku. Počas testu sa používa kontrolná skupina myší, ktorým sa podáva len vehikulum, bez kandidátskeho peptidu. Počet zvíjaní sa počíta počas 15 minút so začiatkom od podania injekcie s kyselinou octovou, a biologický účinok, tzn. analgézia, je vyjadrená v percentách, a vypočíta sa nasledovne:
((počet zvíjaní sa v kontrolnej skupine) - (počet zvíjaní sa v testovanej skupine)) 100 x------------------------------------------------------------------------počet zvíjaní sa v kontrolnej skupine
-23Pretože každá submaximálna dávka bude pravdepodobne kolísať, nie sú priamo porovnateľné, takže výsledky sa matematicky normalizujú, ako je známe v tejto oblasti, aby sa získali porovnateľné hodnoty, ktoré sú uvedené v tabuľke H. V tabuľke H je analgetický účinok pretrvávajúci po 1, 2 a 3 hodinách vyjadrený ako percento účinku zisteného v -5 minúte. Hodnoty vyššie ako 100 % indikujú väčší analgetický účinok ako účinok na začiatku experimentu. Opiátové peptidy, ktoré redukujú zvíjanie sa na najmenej približne 25 % po 1 hodine, sú považované za peptidy, ktoré majú dlhotrvajúci in vivo účinok.
Okrem toho, že sa tento test používa na stavovanie trvania analgetického účinku, používa sa aj na meranie in vivo biologického potenciálu peptidu. Táto hodnota je uvedené v tabuľke pod hlavičkou WT-EDS0 v miligramoch na kg telesnej hmotnosti. Hodnota je meradlom dávky nevyhnutnej na redukciu počtu zvíjaní sa testovanej myši na 50 % (v porovnaní s kontrolnou myšou) počas 15 minút.
Tabuľka H
Číslo peptidu μ/κ pomer wt-ed50 mg/kg Analgetický účinok (%)
1 h 2 h 3h
1 38 000 0,09 83,9 75,5 61,3
2 60 000 0,14 70,5 29,8
3 18 000 0,078 48,6 39,8
4 7 200 0,3 49,3
5 20 000 0,04 66,0 34,5
6 42 000 0,014 105,7 52,7
7 17 000 0,02 67,5 36,8
8 26 000 0,01 66,9 45,1
9 2 500 0,03 72,5 39,5
10 25 000 0,07 81,6 47,5
11 62 000 0,07 61,8 36,9
12 7 000 0,07 60,5 53,6
13 2 700 0,44 30,7
14 2 000 0,14 36,0
15 57 000 0,017 60,0
42 27 000 0,06 45,3 29,4
43 2 500 0,2
44 8 300 0,2
46 14 000 0,083
47 30 000 0,09
48 18 000 0,065 53,7
49 92 000 0,02 65,5 69,2 38,3
50 9 300 0,077 35,6
51 12 000 0,018 32,5
52 92 000 0,019 30,6
53 85 000 0,026 47,7 32,6
56 13 000 0,057 77,4 59,3
57 28 000 0,026 100 67,2 58,2
58 6 500 0,04 93,4 45,7
59 13 000 0,052 83,3 59,7
60 1 900 0,083 83,8 35,5
61 10 400 0,019 57,5 60,3
62 27 000 0,18 38
63 16 000 0,04 51,8 36,1
64 37 000 0,032 74,7
65 11 000 0,031 39,5
88 16 000 0,04 56,6 28,9
94 70 000 0,02 58,8
95 16 000 0,08 45,8
96 12 000 0,098 56,7
98 24 000 0,014 85,5 40,8
99 19 000 0,083 50,3 69,3
100 31 000 0,079 82,8 27,6
101 38 000 0,112 89,9 45,6
102 24 000 0,032 63,9
103 140 000 0,101 37,1
105 66 000 0,015 48,2
106 0 055 46,7
107 22 000 0,032 29,0
108 67 000 0,034 84,3 32,9
Opiátové peptidy sú užitočné ako analgetiká a na iné farmakologické aplikácie na ošetrovanie patologických stavov spojených s KOR systémom. Sú výhodné v porovnaní s μ agonistickými potláčateľmi bolesti, napr. morfín, ktoré majú nežiaduce účinky, ako zápcha, respiračná depresia a svrbenie. Je veľmi želateľné, aby tieto opiátové peptidy významne neprekračovali krvno/mozgovú bariéru, aby sa zabránilo potenciálnym vedľajším účinkom, ktoré môžu vzniknúť. Bezpečnosť týchto zlúčenín z hľadiska vstupu do mozgu sa stanovuje porovnaním ich schopnosť vyvolať periférne účinky a ich schopnosť vyvolať centrálne účinky. Periférne účinky sa merajú použitím myšieho testu zvíjania sa (WT), ktorý bol opísaný vyššie. Centrálne účinky zapríčinené pôsobením na kapa receptory umiestnené v mozgu sa merajú použitím testu švihania chvostom (TF).
Test švihania chvostom je test akútnej somatickej bolesti, zostavený na stanovenie potenciálu a trvania účinku analgetík pôsobiacich centrálne. Bolesť vyvolaná ponorením chvosta do horúcej vody (52 °C) spôsobuje rýchle vybratie . chvosta, tiež známe ako švihnutie chvostom. Očakáva sa, že centrálne účinkujúce ** analgetické zlúčeniny predlžujú na dávke závislým spôsobom čas do vytiahnutia chvosta. Test je opísaný vo Vanderah, T.W, a ďalší, J. Pharm. Exper. Therapeutics, 262:190-197, 1992.
Bezpečnosť sa stanovuje použitím mozgového penetračného indexu (BPI), ktorý je definovaný ako
-26ΒΡΙ = (TF-ED50)/(WT-ED50) kde EDS0 hodnoty sú hodnoty, ktoré zabezpečujú polovicu maximálneho účinku v myšom zvíjacom teste (WT-ED50) alebo v myšom teste švihania chvostom (TFED50), keď je látka podávaná i.v. spôsobom. Vysoká BPI hodnota signalizuje nízku mozgovú penetráciu, a indikuje, že zlúčenina je pravdepodobne vo veľkom rozsahu bezpečná (nemá mozgové vedľajšie účinky), keď sa použije na účely opísané v tejto prihláške. Výhodné opiátové zlúčeniny majú BPI hodnoty rovné alebo vyššie ako 100, pričom výhodnejšie sú opiátové peptidy, ktoré majú BPI vyššie ako 300. Systémové nepeptidové kapa agonisty (napr. Enadolín a U-69 593) majú BPI hodnoty nižšie ako 5, z čoho vyplýva významné prenikanie do mozgu, čo je zrejmé aj na základe vedľajších účinkov (diuréza, stav úzkosti a útlm), ktoré spôsobujú pri ich klinickom použití. BPI hodnoty pre niektoré reprezentatívne opiátové peptidy sú uvedené v tabuľke I, ktorá nasleduje:
Tabuľka I
Č. peptidu WT-ED5o mg/kg TF-ED50 Mg/kg BPI
1 0,09 9,7 108
3 0,078 13,82 177
5 0,04 4,4 110
6 0,014 6,4 457
7 0,020 3,1 155
8 0,01 9,84 984
15 0,017 2,86 168
49 0,020 1,62 81
53 0,026 2,1 81
57 0,026 5,6 215
58 0,034 4,34 128
61 0,019 >10 >526
88 0,040 12 300
96 0,098 >10 >102
98 0,014 3,5 250
99 0,083 16 193
102 0,032 >10 >313
105 0,015 12,6 840
Pretože sa tieto peptidy viažu silno na KOR, sú užitočné aj v in vitro testoch na štúdium receptorov a na stanovenie toho, aké receptory môžu byť prítomné v konkrétnej tkanivovej vzorke. Takže sú v tomto smere užitočné na diagnostiku a potenciálne aj na in vivo diagnostiku.
Vo všeobecnosti je možné použiť tieto opiátové peptidy na dosiahnutie analgetického účinku na liečbu bolesti vnútorností a aj na liečbu reumatoidnej artritídy. Užitočné sú najmä na liečbu abdominálnych postchirurgických symptómov, ako napríklad porúch trávenia a bolesti. Sú tiež považované za látky, ktoré sú účinné na liečbu IBS, nestálosti močového mechúra, inkontinencie a iných indikácií, kde lokálny zápal spôsobuje bolestivé stavy v črevách alebo v iných vnútornostiach, napr. zápalovú chorobu vnútorností (IBD) a bolestivú menštruáciu. Schopnosť opiátových peptidov znižovať imunitnú odpoveď môže byť výhodná na potláčanie IBD a iných indikácií, ako autoimunitných ochorení. Podávanie peptidov môže byť použité na vytvorenie lokálneho analgetického účinku pri akútnych, ako aj chronických zápalových stavoch. Môžu byť použité na liečbu digestívneho ileusu, so symptómami ako opuchy, nausea alebo na liečbu črevných nepriechodností, z v ktoré sú spojené s bolesťou, napr. črevná obštrukcia, ktorá môže byť spôsobená spastickými kontrakciami. Opiátové peptidy sú užitočné aj na vytvorenie periférnej analgézie a môžu byť nasmerované na odstránenie pooperačnej bolesti, ako aj chronickej bolesti, ako je napríklad bolesť spôsobená zápalom gastrointestinálnych a vnútornostných tkanív a môžu tiež priniesť úľavu počas odvykania od drogovej závislosti.
-28Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť podávané vo forme farmaceutický prijateľných, netoxických solí, ako napríklad kyslých adičných solí, ako je dobre známe v tejto oblasti. Príkladmi takýchto kyslých adičných solí sú hydrochlorid, hydrobromid, síran, fosfát, dusičnan, oxalát, fumarát, glukonát, tanát, pamoát, maleát, octan, citrát, benzoát, sukcinát, alginát, malát, askorbát, tartrát a podobne. Ak sa má účinná zložka podávať vo forme tabliet, môže tableta obsahovať farmaceutický prijateľné, netoxické riedidlo, ktoré zahŕňa spojovník, ako tragant, pšeničný škrob alebo želatínu. Môže sa uskutočniť aj intravenózne podanie v izotonickom fyziologickom roztoku, fosfátovom tlmivom roztoku, v roztokoch manitolu alebo glukózy.
Farmaceutické prostriedky budú zvyčajne obsahovať účinné množstvo peptidu spolu s bežným, farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Vo všeobecnosti bude prostriedok obsahovať analgetické množstvo, tzn. množstvo, ktoré spôsobí blokovanie bolesti. Zvyčajne bude dávka v rozmedzí od približne 1 pg do približne 10 mg peptidu na kg telesnej hmotnosti hostiteľa, keď sa bude podávať intravenózne. Prostriedky môžu byť podávané ako je potrebné; napríklad môžu byť podávané opakovane v 3 až 6 hodinových intervaloch. Povaha týchto zlúčenín môže umožniť účinné orálne podanie; avšak orálna dávka môže byť vyššia. Ak je to želateľné môže byť použité podávanie opiátového peptidu počas predĺženej doby, napríklad počas jedného týždňa alebo dlhšie, pričom môže byť použitá forma jednotkového podania, pomalé uvoľňovanie, deponovacie alebo implantátové dávkové formy. Napríklad, vhodný pomaly uvoľňujúci deponovací prostriedok na injekčné podanie môže obsahovať peptid alebo jeho soľ dispergovanú v neantigénnom polyméri, akým je polymér tvorený kyselinou polymliečnou a kyselinou polyglykolovou, ako je opísané v US. patente č. 3 773 919. Je tiež známe, že podávanie pomalým uvoľňovaním sa môže uskutočňovať prostredníctvom silastického implantátu.
Tieto zlúčeniny môžu byť podávané cicavcom, vrátane ľudí, intravenózne, subkutánne, intramuskulárne, perkutánne, intranazálne, intrapulmonálne, orálne topicky, intrarektálne, intravaginálne alebo spinálnym dávkovaním, aby sa dosiahol analgetický účinok, akým je napríklad zvrátenie gastrointestinálnej nepriechodnosti
-29indukovanej peritoneálnym podráždením. Môžu byť takto použité na zmiernenie pooperačnej bolesti. Účinné dávky budú kolísať v závislosti od formy podania a od konkrétneho druhu cicavca, ktorý sa lieči. Príkladom jednej typickej dávkovej formy je bakteriostatický vodný roztok s pH približne 3 až 8, napríklad približne 6, ktorý obsahuje peptid, a ktorý je podávaný kontinuálne parenterálne, aby poskytol dávku v rozsahu od približne 0,3 pg do 3 mg/kg telesnej hmotnosti za deň. Tieto zlúčeniny sa považujú za dobre tolerované in vivo, a za vhodné najmä na podávanie subkutánnou injekciou v roztoku bakteriostatickej vody alebo podobne.
Hoci bol tento vynález opísaný s ohľadom na jeho výhodné uskutočnenia, treba tomu rozumieť tak, že zmeny a modifikácie, ktoré sú zrejmé priemernému odborníkovi v tejto oblasti, neprekračujú rámec predloženého vynálezu, ktorý je uvedený v patentových nárokoch, nižšie. V peptidoch podľa vynálezu môžu byť napríklad použité iné substitúcie známe v oblasti, ktoré významne neuberajú z účinnosti peptidov. V polohe 2 môžu byť použité iné substitúcie ako D-Phe zvyšky, ako napríklad (4Br)D-Phe alebo (2,4CI2)D-Phe. Tak D-Lys(Bu), ako aj DLys(Et2) môžu byť považované za ekvivalenty D-lly a D-Arg(Et2). N-koniec tetrapetidu môže byť, ak je to želateľné, permetylovaný, ako je známe v oblasti. Diamino zlúčeniny môžu byť použité ako spojovníky na vytvorenie dimérov 2 tetrapeptidových amidov. Spojovníky, ktoré môžu byť úspešne použité zahŕňajú 1,6diaminohexán, 1,5-diamino-3-oxapentán a 1,8-diamino-3,6-dioxaoctan. Výsledné diméry sú považované za ekvivalenty príslušných monomérov.
pi/ %0 -200t)

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Syntetický opiátový peptidový amid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ, ktorý má afinitu voči kapa opiátovému receptoru najmenej 1000 krát vyššiu ako je jeho afinita voči mu opiátovému receptoru, ktorý vykazuje dlhotrvajúci účinok, keď sa podáva in vivo, a ktorý má vzorec:
    H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, kde Xaa1 je (A)D-Phe, (C“Me)D-Phe, D-Tyr, D-Tic alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl), kde A je H, NO2, F, Cl alebo CH3; Xaa2 je (A')D-Phe, D-1Nal, D-2Nal, D-Tyr alebo D-Trp, kde A'je A alebo 3,4CI2; Xaa3 je D-NIe, (B)D-Leu, D-Hle, D-Met, D-Val, D-Phe alebo D-Ala(cyklopentyl), kde B je H alebo C“Me; Xaa4 je D-Arg, D-Har, DnArg, D-Lys, D-lly, D-Arg(Et2), D-Har(Et2), D-Amf, D-Gmf, D-Dbu, D-Orn alebo D-lor; a Q je NR1R2, morfolinyl, tiomorfolinyl, (C)piperidinyl, piperazinyl, 4-mono- alebo 4,4-di-substituovaný piperazinyl, alebo ε-lyzyl, kde R1 je nižší alkyl, substituovaný nižší alkyl, benzyl, substituovaný benzyl, aminocyklohexyl, 2-tiazolyl, 2-pikolyl, 3pikolyl, 4-pikolyl, (o-(acylamino)-polymetylén alebo poly(oxyetylén)-ová skupina; a R2 je H alebo nižší alkyl; a C je H, 4-hydroxyskupina alebo 4-oxoskupina.
  2. 2. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Xaa2 je D-Phe, Xaa3 je D-Leu alebo D-NIe, Xaa4 je D-Arg alebo D-Orn, Q je NHR1 a R1 je etyl, propyl, butyl, cyklopropyl alebo cyklobutyl.
  3. 3. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Q je morfolinyl alebo tiomorfolinyl alebo NH(4-pikolyl).
  4. 4. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde Q je N(Et)2, NH(Aeb), Ppz, Pcp alebo NHR1, kde R1 je Aao, Aoo, Hoh, Ghx alebo Gao.
  5. 5. Syntetický peptid podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, kde Xaa1 je DPhe, D-Ala(2-tienyl) alebo D-4Fpa.
  6. 6. Syntetický peptid podľa nároku 1, kde buď Xaa2 je D-4Cpa alebo D3,4Cpa, alebo Xaa4 je D-Gmf.
  7. 7. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má WT-ED50 približne 0,5 mg/kg alebo nižší, ktorý má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, \ kde Xaa1 je D-Phe (nesubstituovaný alebo substituovaný s C“Me, 2F, 4F alebo 4CI) alebo D-Ala(cyklopentyl alebo tienyl); Xaa2 znamená (A')D-Phe, D-1Nal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A' je H, 4F, 4CI, 4NO2 alebo 3,4CI2; Xaa3 je D-NIe, D-Leu, D-CML, D-Met alebo D-Acp; Xaa4 je D-Arg, D-Arg(Et2), D-Lys, D-lly, D-Har, D-Har(Et2), DnArg, D-Om, D-Ior, D-Dbu, D-Amf, a D-Gmf; a Q je NR1R2, Mor, Tmo, Pip, 4-HyP, OxP, Pcp alebo Ppz, kde R1 znamená Me, Et, Pr, Bu, hEt, Aeb, Cyp, Bzl, Hoh alebo 4-pikolyl, a R2 znamená H alebo Et.
  8. 8. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má ED50 približne 0,5 mg/kg alebo nižší, a ktorý má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, kde Xaa1 je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa, D-Acp alebo D-Ala(2Thi); Xaa2 je (A)D-Phe, D1Nal, D-2Nal alebo D-Trp, kde A je 4F alebo 4CI; Xaa3 je D-NIe, D-Met alebo DLeu; Xaa4 je D-Arg, D-Har, D-nArg, D-Lys, D-Orn alebo D-Gmf; a Q je NHR1, Mor, Tmo, Pip alebo Ppz, kde R1 je Et, Pr alebo 4Pic.
  9. 9. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má ED50 približne 0,5 mg/kg alebo nižší, a ktorý má vzorec: H-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Q, 1 kde Xaa1 je D-Phe, D-4Fpa, D-2Fpa alebo D-Ala(2Thi); Xaa2 je (A)D-Phe, D-1Nal, * D-2Nal alebo D-Trp, kde A je 3,4CI2 alebo 4CI; Xaa3 je D-NIe alebo D-Leu; Xaa4 je f D-Arg, D-Orn alebo D-Gmf; a Q je NHR1, Mor, Tmo, Pcp, Ppz alebo N(Et)2, kde R1 je Et, Pr, Cyp, 4Pic, Aeb alebo Hoh.
  10. 10. Syntetický opiátový peptid podľa nároku 1, ktorý má jeden z nasledujúcich vzorcov:
    H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-NHEt, H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-morfolinyl,
    -32H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl,
    H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-NHPr,
    H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-tiomorfolinyl,
    H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NEt2,
    H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-NHMe,
    H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn-morfolinyl,
    H-D-4Fpa-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH-4-pikolyl,
    H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-NH-cyklopropyl,
    H-D-Ala(2Thi)-D-3,4Cpa-D-Leu-D-Arg-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Gmf-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Orn-NH(Aeb), H-D-Phe-D-Phe-D-Leu-D-Lys-morfolinyl, H-D-Phe-D-Phe-D-NIe-D-Arg-piperazinyl, a H-D-Phe-D-Phe-D-Nle-D-Arg-NH(Hoh).
  11. 11. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje analgeticky účinné množstvo syntetického peptidu podľa ktoréhokoľvek nárokov 1 až 10 a farmaceutický prijateľný kvapalný alebo tuhý nosič.
SK960-2000A 1997-12-23 1998-12-22 Syntetický opiátový peptidový amid a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom SK286135B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/997,208 US5965701A (en) 1997-12-23 1997-12-23 Kappa receptor opioid peptides
PCT/US1998/027282 WO1999032510A1 (en) 1997-12-23 1998-12-22 Kappa receptor opioid peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK9602000A3 true SK9602000A3 (en) 2001-01-18
SK286135B6 SK286135B6 (sk) 2008-04-07

Family

ID=25543752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK960-2000A SK286135B6 (sk) 1997-12-23 1998-12-22 Syntetický opiátový peptidový amid a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom

Country Status (32)

Country Link
US (1) US5965701A (sk)
EP (1) EP1042359B1 (sk)
JP (1) JP4275852B2 (sk)
KR (1) KR100629548B1 (sk)
CN (1) CN1154655C (sk)
AR (1) AR014167A1 (sk)
AT (1) ATE301670T1 (sk)
AU (1) AU747806B2 (sk)
BR (2) BR9814499B1 (sk)
CA (1) CA2315878C (sk)
CR (1) CR5936A (sk)
CZ (1) CZ297281B6 (sk)
DE (1) DE69831176T2 (sk)
DK (1) DK1042359T3 (sk)
EE (1) EE04440B1 (sk)
ES (1) ES2247735T3 (sk)
HR (1) HRP20000415B1 (sk)
HU (1) HU227640B1 (sk)
IL (3) IL136742A0 (sk)
MY (1) MY117542A (sk)
NO (1) NO327080B1 (sk)
NZ (1) NZ505183A (sk)
PL (1) PL195842B1 (sk)
PT (1) PT1042359E (sk)
RU (1) RU2217437C2 (sk)
SK (1) SK286135B6 (sk)
TR (1) TR200001985T2 (sk)
TW (1) TW580502B (sk)
UA (1) UA68366C2 (sk)
UY (1) UY25327A1 (sk)
WO (1) WO1999032510A1 (sk)
ZA (1) ZA9811801B (sk)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9006175B2 (en) 1999-06-29 2015-04-14 Mannkind Corporation Potentiation of glucose elimination
AU1623801A (en) * 1999-11-19 2001-05-30 Palatin Technologies, Inc. Opioid metallopeptide compositions and methods
DE10116978A1 (de) 2001-04-05 2002-10-10 Merck Patent Gmbh Kappa-Opiatagonisten für die Behandlung von Erkrankungen der Blase
JP4239592B2 (ja) * 2001-05-08 2009-03-18 東レ株式会社 敗血症治療剤
WO2003080149A2 (en) 2002-03-20 2003-10-02 Mannkind Corporation Inhalation apparatus
PL1786784T3 (pl) 2004-08-20 2011-04-29 Mannkind Corp Kataliza syntezy diketopiperazyn
KR101644250B1 (ko) 2004-08-23 2016-07-29 맨카인드 코포레이션 약물 전달용 디케토피페라진염, 디케토모르포린염 또는 디케토디옥산염
CN104324362B (zh) 2005-09-14 2018-04-24 曼金德公司 以提高活性试剂对结晶微粒表面的亲和力为基础的药物配制方法
IN2015DN00888A (sk) 2006-02-22 2015-07-10 Mannkind Corp
EP2040733A2 (en) * 2006-05-26 2009-04-01 Cara Therapeutics, Inc. Method for elevating prolactin in mammals
CA2653077A1 (en) * 2006-05-26 2007-12-06 Cara Therapeutics, Inc. N-oxides of kappa opioid receptor peptides
US8906859B2 (en) * 2006-11-10 2014-12-09 Cera Therapeutics, Inc. Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US8236766B2 (en) * 2006-11-10 2012-08-07 Cara Therapeutics, Inc. Uses of synthetic peptide amides
US7713937B2 (en) * 2006-11-10 2010-05-11 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amides and dimeric forms thereof
US7842662B2 (en) 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
RU2500685C2 (ru) 2006-11-10 2013-12-10 Кара Терапеутикс, Инк Синтетические пептидные амиды
WO2008077194A1 (en) * 2006-12-22 2008-07-03 Xenome Ltd Receptor agonists
US8485180B2 (en) 2008-06-13 2013-07-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system
ES2929343T3 (es) 2008-06-13 2022-11-28 Mannkind Corp Inhalador de polvo seco accionado por aspiración para la administración de fármacos
KR101628410B1 (ko) 2008-06-20 2016-06-08 맨카인드 코포레이션 흡입 활동에 관한 실시간 프로파일링을 위한 대화형 장치 및 방법
TWI614024B (zh) 2008-08-11 2018-02-11 曼凱公司 超快起作用胰島素之用途
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
DK2405963T3 (da) 2009-03-11 2013-12-16 Mannkind Corp Apparat, system og fremgangsmåde til at måle modstand i en inhalator
CN104721825B (zh) 2009-06-12 2019-04-12 曼金德公司 具有确定比表面积的二酮哌嗪颗粒
WO2011056889A1 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Mannkind Corporation An apparatus and method for simulating inhalation efforts
IL223742A (en) 2010-06-21 2016-06-30 Mannkind Corp A dry powder inhaler and preparation for it
AU2012236150B2 (en) 2011-04-01 2016-03-31 Mannkind Corporation Blister package for pharmaceutical cartridges
WO2012174472A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation High capacity diketopiperazine microparticles
BR112014009686A2 (pt) 2011-10-24 2018-08-07 Mannkind Corp composição analgésica inalável, pó seco e método para tratar dor
CN104619369B (zh) 2012-07-12 2018-01-30 曼金德公司 干粉药物输送系统和方法
US10159644B2 (en) 2012-10-26 2018-12-25 Mannkind Corporation Inhalable vaccine compositions and methods
AU2014228415B2 (en) 2013-03-15 2018-08-09 Mannkind Corporation Microcrystalline diketopiperazine compositions and methods
MX375448B (es) 2013-07-18 2025-03-06 Mannkind Corp Composiciones farmacéuticas en polvo seco estables al calor y métodos.
US11446127B2 (en) 2013-08-05 2022-09-20 Mannkind Corporation Insufflation apparatus and methods
US10307464B2 (en) 2014-03-28 2019-06-04 Mannkind Corporation Use of ultrarapid acting insulin
JP5807140B1 (ja) * 2014-06-26 2015-11-10 積水メディカル株式会社 合成ペンタペプチドの製造法
US10561806B2 (en) 2014-10-02 2020-02-18 Mannkind Corporation Mouthpiece cover for an inhaler
EP3294315A2 (en) * 2015-05-11 2018-03-21 Cadila Healthcare Limited Novel short-chain peptides as kappa opioid receptors (kor) agonist
CN107098876B (zh) * 2016-02-23 2021-04-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 苯基丙酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN109563133B (zh) * 2016-09-27 2020-09-11 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 多酰胺化合物及其用途
CA3069820C (en) * 2017-07-21 2022-12-06 Sichuan Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide amide compounds, preparation method thereof and use in medicine
MX2020005932A (es) 2017-12-06 2020-08-24 Jiangsu Hengrui Medicine Co Sal de derivado de fenilpropionamida y su metodo de preparacion.
CN111148526B (zh) 2018-05-16 2023-03-10 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种kor受体激动剂药物组合物
WO2021013085A1 (zh) * 2019-07-25 2021-01-28 四川海思科制药有限公司 一种肽酰胺盐及其制备方法和在医药上的用途
CN114127086B (zh) * 2019-07-25 2023-10-20 四川海思科制药有限公司 氘代肽酰胺类化合物及其制备方法和在医药上的用途
WO2021026492A1 (en) * 2019-08-07 2021-02-11 Humanwell Pharmaceutical US Kappa opioid receptor peptide amide agonists
EP4175944A4 (en) 2020-06-25 2024-03-06 Humanwell Pharmaceutical US PEPTIDES FOR THE TREATMENT OF MEDICAL DISORDERS
US20240336565A1 (en) 2021-07-02 2024-10-10 Acer Therapeutics, Inc. Solid forms of osanetant

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2013689B (en) * 1977-12-15 1982-03-24 Reckitt & Colmann Prod Ltd Compounds
GB8801304D0 (en) * 1988-01-21 1988-02-17 Ici Plc Diamine compounds
US5367053A (en) * 1993-05-19 1994-11-22 Houghten Pharmaceuticals, Inc. Opioid peptide inhibitors
RU2067000C1 (ru) * 1994-06-29 1996-09-27 Владислав Исакович Дейгин Пептид и способ его получения
US5610271A (en) * 1995-06-07 1997-03-11 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Kappa receptor selective opioid peptides

Also Published As

Publication number Publication date
CZ297281B6 (cs) 2006-10-11
HUP0100626A2 (hu) 2001-08-28
DK1042359T3 (da) 2005-11-28
CA2315878C (en) 2010-11-16
TW580502B (en) 2004-03-21
HRP20000415A2 (en) 2000-12-31
EE200000370A (et) 2001-10-15
NO20003245D0 (no) 2000-06-21
IL136742A0 (en) 2001-06-14
HUP0100626A3 (en) 2001-12-28
UA68366C2 (en) 2004-08-16
JP4275852B2 (ja) 2009-06-10
NO20003245L (no) 2000-08-23
AU1940299A (en) 1999-07-12
TR200001985T2 (tr) 2000-11-21
CN1154655C (zh) 2004-06-23
PT1042359E (pt) 2005-11-30
KR20010033450A (ko) 2001-04-25
PL195842B1 (pl) 2007-10-31
NO327080B1 (no) 2009-04-20
BRPI9814499B8 (pt) 2021-11-09
KR100629548B1 (ko) 2006-09-27
IL178471A0 (en) 2007-02-11
HU227640B1 (en) 2011-10-28
EE04440B1 (et) 2005-02-15
WO1999032510A9 (en) 1999-09-23
NZ505183A (en) 2001-09-28
HK1029349A1 (en) 2001-03-30
EP1042359B1 (en) 2005-08-10
JP2001526295A (ja) 2001-12-18
UY25327A1 (es) 2000-12-29
AR014167A1 (es) 2001-02-07
DE69831176T2 (de) 2006-04-20
BRPI9814499B1 (pt) 2014-10-21
US5965701A (en) 1999-10-12
WO1999032510A1 (en) 1999-07-01
BR9814499B1 (pt) 2014-10-21
ATE301670T1 (de) 2005-08-15
ES2247735T3 (es) 2006-03-01
IL136742A (en) 2006-12-31
MY117542A (en) 2004-07-31
ZA9811801B (en) 1999-06-22
RU2217437C2 (ru) 2003-11-27
CN1283201A (zh) 2001-02-07
HRP20000415B1 (en) 2004-06-30
CA2315878A1 (en) 1999-07-01
SK286135B6 (sk) 2008-04-07
CR5936A (es) 2006-08-18
PL341308A1 (en) 2001-04-09
EP1042359A1 (en) 2000-10-11
BR9814499A (pt) 2000-10-10
AU747806B2 (en) 2002-05-23
CZ20002382A3 (cs) 2000-12-13
BRPI9814499A (pt) 2000-10-10
DE69831176D1 (de) 2005-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1042359B1 (en) Kappa receptor opioid peptides
US9321810B2 (en) Uses of kappa opioid synthetic peptide amides
US20100029575A1 (en) N-Oxides of Kappa Receptor Peptides
JPH11507374A (ja) Ｌｈｒｈ拮抗物質ペプチド
HK1029349B (en) Kappa receptor opioid peptides
MXPA00006270A (en) Kappa receptor opioid peptides
JP2019508419A (ja) 新規アルファコノトキシンペプチド
WO2019170919A1 (en) Hybrid mu opioid receptor and neuropeptide ff receptor binding molecules, their methods of preparation and applications in therapeutic treatment
JPH0234960B2 (sk)
JPH10182697A (ja) Ｎｋ−１受容体アンタゴニスト
AU3130100A (en) LHRH antagonist peptides
PL226256B1 (pl) N-podstawione amidy cyklicznych ureidowych analogów dermorfiny, sposoby ich wytwarzania, zastosowanie i środek farmaceutyczny do leczenia i/lub łagodzenia stanów bólowych

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20121222