UA68366C2 - Synthetic opioid peptide, pharmaceutical composition and method of treatment - Google Patents

Description

Опис винаходу

Згідно з винаходом запропоновано синтетичні опіоїдні пептиди, зокрема, опіоїдні пептиди, які є 2 високоселективними агоністами капа-рецептору, а конкретніше - такі агоністи, що (а) не проникають у мозок та (Б) виявляють довготривалу обезболюючу активність іп мімо.

Капа-опіоїдні рецептори (КОК) наявні у головному та спинному мозку, центральних та периферійних закінченнях і клітинних тілах доцентрових чутливих нервів (соматичних та вісцеральних), а також на імунних клітинах. Активуючі КОК молекули звичайно позначають як капа-агоністи. 70 Буле показано, що активація розташованих у мозку КОК викликає обезболюючу дію. Це призвело до намагань розробки проникаючих у мозок непептидних капа-агоністів для використання в якості нових позбавлених небажаної побічної дії (запор, респіраторна депресія, залежність та звичка) аналогів морфіну, що діють на мю-опіоїдні рецептори (МОК), аналгетиків. Аналгетичну активність, а також відсутність подібної до мю-опіоїдної побічної дії встановлено як для тварин, так і для людин. Однак, розробку системних 12 капа-агоністів було перервано внаслідок того, що було показано наявність такої побічної дії, як діурез, седативний ефект та дисфорія, що опосередковано розташованими в мозку капа-рецепторами.

Крім супраспинальних КОК КОК, що розташовані на периферії чи в спинному мозку, також можуть викликати обезболювання. Однак, ні периферійні, ані спинномозкові КОК не асоційовані з будь-якою побічною дією системних капа-агоністів. Тому тільки після можливого створення агоністів капа-рецепторних опіоїдів, що не проникають у головний мозок, ймовірно буде отримати нові безпечні аналгетики.

Капа-агоністи, що виявляють периферійну антибольову дію на моделі кишечнику, а також гіпералгезії товстої кишки, індукованої помірним чи локальним запаленням, та синдрому подразненого кишечнику (ІВ5), що включає надмірний вісцеральний біль, що обумовлений ймовірністю вісцеральної гіперчутливості, яка пов'язана з локальним запаленням, також є ціллю для периферійного капа-агоністу. На додаток до шлунково-кишкового с тракту, інші внутрішні органи, що виявляють патологічний стан, який включає активацію та/або сенсибілізацію Ге) (тобто локальне запалення) первинних чутливих нервів, вважають прийнятними цілями для таких капа-рецепторних опіоїдів. Капа-агоністи також блокують нейрогенне запалення соматичних тканин інгібуванням вивільнення субстанції Р з первинних чутливих нервів і, як відомо, діють також на імунну систему та мають перш за все інгібувальну дію на імунні клітини. ее,

Особливо бажані пептиди, що не проникають у головний мозок, виявляють високу спорідненість до КОК і Ге) спрямовані проти МОК, мають високу ефективність та потужність і виявляють довготривалу дію іп мімо. В патенті 5610271 розкрито тетрапептиди, що мають 4 О-ізомери амінокислотних залишків, які приєднуються до КОК, о але такі пептиди не виявляють усіх потрібних визначених вище характеристик. Ге)

Винайдено вид пептидів, які виявляють високу селективність відносно КОК та довготривалу дію іп мімо і не 39 виявляють помітного проникнення у головний мозок. Ці пептиди містять послідовність з 4 ЮО-ізомерних ее, амінокислотних залишків, яка має С-закінчення, що є моно- чи дизаміщеним амідом. Ці сполуки мають таку загальну формулу: Н-Хаа/-Хаа»о-Хааз-Хаа,-заміщений амід, де Хаа/- (А)ДО-РНе, (СоМе)р-РНе, О-Туг, О-Тіс чи О-АІа(циклопентил чи тієніл), де А - Н, МО», Е, СІ чи СН», «

Хаа» - (А'0-Рпе, 0-1Маї, О-2Маї, О-Туг чи О-Тгр, де А" - А чи 3,4С15, Хааз-О-Міе, (В)О-Гец, О-НіІе, О-Меї, О-Маї, З7З 70 О-Рнечи О-АІа(циклопентил), де В - Н чи СоМе, Хаау -0-Аго, О-Наг, О-пАго, О-Г ув, О-Пу, О-Ага(ЕБ), О-НакЕБ), с 0Б-Ат!, О-сті, О-ЮОри, О0-Огп чи О-іог. Кращі аміди включають етиламід, морфолід, тіоморфолід, 4-піколіламід, :з» піперазид, пропіламід, циклопропіламід, діетиламід та заміщений бензиламід.

Згідно з одним аспектом винаходу запропоновано синтетичний амід опіоїдного пептиду чи його фармацевтично прийнятну сіль, що має спорідненість до капа-опіоїдного рецептору, яка щонайменше у 1000 б 15 разів більша за його спорідненість до мю-опіо'їдного рецептору, і виявляє довготривалу дію при застосуванні іп мімо, цей пептид має формулу: Н-ХааХаа»о-Хааз-Хаау-оО, (ее) де Хаа/- (А)ДО-РНе, (СаМе)Ор-РНе, О-Туг, О-Тіс чи О-АІа(циклопентил чи тієніл), де А - Н, МО», Е, СІ чи СНУ, сю Хаа» - (А'0-Рпе, 0-1Маї, О-2Маї, О-Туг чи О-Тгр, де А" - А чи 3,4С15, Хааз-О-Міе, (В)О-Геи, О-Ніє, О-Меї, О-Маї, р-РНе чи О-АІа(циклопентил), де В - Н чи СоМе, Хаау -0-Аго, О-Наг, О-пАго, О-Гув, О-Пу, О-Ага(ЕБ), О-НакЕБ), (о) 0Б-Аті, О-Ст!і, 0-ЮОри, О0-Огп чи О-іог, а 0 - МКК», морфолініл, тіоморфолініл, (С)піперидиніл, піперазиніл,

Ф 4-моно- чи 4,4-двічі заміщений піперазиніл, чи Е-лізил, де Ку - нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, бензил, заміщений бензил, аміноцикло-гексил, 2-тіазоліл, 2-піколіл, З-піколіл, д-піколіл, (со--(ациламіно)-поліметиленова чи по-лі(оксіегиленова) група, Ко - Н чи нижчий алкіл, а С - Н, 4-гідрокси- чи 4-оксогрупа.

Згідно з наступним аспектом винаходу запропоновано використання цих сполук при лікуванні страждаючої (Ф) від вісцерального і т.п. болю людини, нестабільності і т.п. сечового міхура, або ІВО чи автоімунних

ГІ захворювань, а також при аналогічному лікуванні інших ссавців.

Використана для позначення пептидів номенклатура визначена Зспгодег «І цЬКе, Те Реріідез, Асадетіс во Ргезв, 1965, де у згоді з загальноприйнятими уявленнями М-закінчення розташовують ліворуч, а С-закінчення - праворуч. Коли амінокислотний залишок має ізомери, він є І -ізомером, якщо не сказано інше.

Як сказано вище, згідно з винаходом запропоновано пептиди, які селективні відносно КОК, але не тільки виявляють високу спорідненість до КОК, але виявляють довготривалу біоактивність іп мімо. Ці капа-селективні опіоїдні пептиди мають спорідненість до КОК, яка щонайменше у 1000 разів більша за їх спорідненість до МОК, 65 деякі з них мають спорідненість до КОК, яка щонайменше у 10000 разів більша за їх спорідненість до МОК, а деякі - вищу у 20000 разів чи більше. Однак, для багатьох випадків важливо, щоб разом з високою селективністю капа-агоністи виявляли довготривалу обезболюючу активність при застосуванні іп мімо і не виявляли помітного проникнення у головний мозок. Тому на додаток до вищезгаданої селективності кращі сполуки не виявляють помітного проникнення у головний мозок, зберігаючи при цьому суттєву активність протягом щонайменше 1 години, ще кращі сполуки зберігають значну активність протягом щонайменше 2 годин, а найкращі сполуки зберігають значну активність протягом принаймні З годин чи більше.

Вищенаведені використані скорочення означають: О-Ме - О-норлейцин, О-НіІе означає О-гомолейцин, О-Наг означає О-гомоаргінін, а О-пАгд означає О-нораргінін, який скорочений на один атом карбону у порівнянні з р-Ага. О-Ма! означає О-ізомер аланіну, який заміщено нафтилом по В-атому карбону. Переважно застосовують /о0 0р-2Маї, тобто приєднаний до нафталіну в положенні 2 кільцевої системи, але можна також використовувати р-1Маї. О-Сра та О-Рра означають, відповідно, хлор-О-Рпе та флуор-О-Рпе, краще, О-4Сра, О-2Рра, О-ЗЕра та

Ор-4Ера. О-Мра означає нітро-О-Рпе, а О-Мра означає метил-О-Рпе. О-3,4Сра означає 3,4-дихлор-О-Ргіе. О-Аср означає О-АІа(циклопентил). Ю-Огп означає ЮО-орнітин, а О-ЮОри означає А,Г-діаміномасляну кислоту. СМІ. означає Сометиліеш, а СМР означає СоМеРпе. О-4Аті означає 0-4 (МНоСНо)Рпе, а О-ОСті означає 75 О-АтКамідиногрупа), що означає О-Рпе, який в положенні 4 заміщено СН 2МНС(МН)МН», О-Тіс означає 0-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-З3-карбонову кислоту. В Аїа(Тпї), Тпі означає тієніл, який переважно зв'язаний в своєму 2-положенні з аланіном, хоча З-тієніл Е еквівалентним. Ну та ог означають ізопропіл-Їув та

Ізопропіл-От, в яких бічний ланцюг аміногрупи алкіловано ізопропілом.

Під нижчим алкілом розуміють (С--Св)алкіл, включаючи циклоалкіл, а (Сі-С/)алкіл включає, переважно, циклопропіл та циклобутил. Ме, Еї, Рг, Ірг, Ви, Рп та В7! означають метил, етил, пропіл, ізопропіл, бутил, пентил та бензил. Сур означає циклопропіл, а СуЬ означає циклобутил. Хоча зв'язок переважно знаходиться з одного кінця алкільного ланцюга, він може знаходитися на ланцюгу будь-де, наприклад, З-пентил може також визначати етилпропіл. Айх означає б-аміно-гексил, наприклад, (СНо)6МН». 4Асх означає 4-аміноциклогексил, а

ПЕГг означає гідроксіетил, тобто -СНОСНоОН. Заміщений бензил включає 4Мр2 та 4АбБ2, що означає 4-нітробензил с та 4-амінобензил, а Аеб означає 4-(2-аміно-2-карбоксіетил)бензил, тобто сон о пули чи сне ррснян і І

Кн. 2-, 3- чи 4-піколіл (2Ріс, ЗРіс та 4Ріс) означають метилпіридинову групу, що з'єднана через метилен в 2-, «о

З- чи 4-положенні, Мог означає морфолініл, тобто їх а Тто означає тіоморфолініл, тобто Ка со ки І

Рір означає піперидиніл (піперидил), а 4-НуР та ХР означають 4-гідроксипіперидин-1і-іл та «95 4-оксопіперидин-1-іл. Рр; означає піперазиніл. Еср означає 4-етилкарбамоїл-піперазин-1-іл, Рер означає 4-фенілкарбамоїлпіперазин-1-іл. Такий четвертинний амоній, як 4,4-диметилпіперазин-1-іл (ЮОтр) чи з іншим 09 діалкільним заміщенням, можна використовувати також. (Се)

ТІ означає 2-тіазоліл, тобто їх ти нн о- сн

ЕІу означає Е-лізил, в якому бічний ланцюг аміногрупи І -лізину з'єднано амідним зв'язком з С-закінченням. «

Як сказано вище, Кі може бути щ(іациламіно)поліметиленовою чи полі(оксіегиленовою) групою, як-то Аао, шщ с Асо, Ной, сих чи баб. Аао означає 8-(ацетиламіно)-3,6-діоксаокт-1-іл, тобто й сньІсСнНн.-0-СНьСнНоО-0О-СНЬСНО-МН-Ас. Асо означає 8-аміно-3,6-діоксаокт-1-іл, тобто "» сньІсСнН.-0О-СНьСНо.-О-СНЬСНО-МН». Ноп означає 6-(І -гідрооротиламіно)-гекс-1-ил, тобто (СНо)в-МН-(І-гідрооротил), І -гідрооротова кислота - це САМонфе(О)»-СООН. сих означає 8(О-глюконіламіно)-гексил, тобто /(СНо)--МН-СО-(СНОН))-СНЬОН. бао означає 6-(О-глюконіламіно) б -3,6-діоксаокт-1-іл, тобто СНОСНЬ-О-СНЬСНо-О-СНЬСНо-МН-СО-(СНОН) -СНоОН. р-Рпе чи заміщений О-Рпе знаходяться переважно в позиції 1. Феніл може бути заміщеним у 2-, 3- та/або бо 4-положенні, а звичайно, Е кращим заміщення хлором чи флуором в 2- чи 4-положенні.

Ге) А-Карбоновий атом може бути метилованим Інші еквівалентні залишки, що походять від О-Рпе, можна

Використовувати також, вони включають О-АїПІа(тієніл), О-АІа(циклопентил), О-Туг та О-Тіс. Залишок в позиції 2

Фо також, Е переважно Ю-Рпе чи заміщеним ЮО-Рпе з такими заміщеннями, що переважно включають замісник на

Ф атомі карбону фенілу в положенні 4 або 3- та 4- положенні. Альтернативно можна використовувати заміщений нафтилом ЮО-аланін, а також Ю-Тгтр та О-Туг. З-позиція переважно зайнята таким залишком, як ЮО-Міе, О-І ец, 0-СМу, 0-Ніє, О-Меї чи О-Маї, однак, можна використовувати також О-АІа(циклопентил) чи ЮО-Рпе. О-Агд (що

Може бути двічі заміщеним етилом) та О-Огп (що може бути алкілованим по своїй дельта-аміногрупі, наприклад, ізоп-ропілом) звичайно кращі в позиції 4, однак, можна використовувати Ю-пАгоу та інші еквівалентні залишки, іФ) як-то О-Г уз (що може бути алкілованим по своїй епсилон-аміногрупі) та О-Наг (що може бути двічі заміщеним ко етилом). Можна використовувати також О-Сті, 0-ЮБри, О-4Аті та О-Нів.

Хоча можна було чекати появу гарної тривалості біологічної дії при застосуванні послідовності з 4 6о р-ізомерних амінокислот, несподівано було виявлено, що тривалість дії звичайно була більш-менш скороченою для незаміщеного аміду, і що довготривалу дію було отримано тільки внаслідок введення заміщеного аміду до

С-закінчення. Одиничні заміщення можуть бути здійснені етилом, метилом, пропілом, циклопропілом та піколілом, а також іншими еквівалентними залишками, як-то гідроксіетилом, тіазолілом, аміноциклогексилом, бензилом, та заміщеним бензилом. Взагалі, для однозаміщених амідів кращими замісниками є нижчий алкіл чи б5 піколіл. Альтернативою однозаміщеному аміду Е діалкільне заміщення, наприклад, діетиламінове, однак, звичайно таке двічі заміщене С-закінчення зайняте морфолінілом, тіоморфолінілом чи піперидинілом, причому останній незаміщено чи заміщено 4-гідрокси- чи 4-оксогрупою. Піперазиніл або 4-моно- чи двічі 4,4-заміщений можна використати також, як можна і Е-лізил.

Було виявлено, що зв'язування звичайно є властивістю амінокислотної послідовності тетрапептиду, і переважно селективні капа-рецепторних опіоїдні пептиди виявлятимуть спорідненість до приєднання з величиною Ку приблизно 2нНМ чи менше. Тривалість дії, яку можна вважати властивістю перш за все структури приєднаного до С-закінчення аміду, можна ефективно визначати описаним далі дослідженням обезболювання, і найкращі пептиди виявляють значну біоактивність протягом 2 чи З годин та не впливають помітно на головний

МОЗОК. 70 Кращий підтип родини розглянутих вище опіоїдних пептидів має формулу:

Н-Хаа;/-Хаа»-Хааз-Хаа/-О), де Хаа!- О-Рпе (заміщений чи ні СаМе, 2Е, 4Е чи 4СІ) чи О-АіІа(циклопентил чи тієніл), Хаа» - (А'О-Рпе, 0-1Маї, О-2Маї чи О-Тгр, де А" - АЕ, 4СІ, 4МО» чи 3,4СІ», Хааз-О-Міе, О-Геи, 0-СМІ, О-Меї чи О-Авгр, Хаа/-О-Аго, О-Ага(Еб), О-Гуз, О-ПУ, О-Наг, О-Нак(кЕБ), О-пАга, 0-Опт, О-іог, О-ЮОри, О-Аті та О-сті, а

ОА МКК», Мог, Тто, Рір, 4-НУР, ОХР чи Рра, де Ку - Ме, ЕЇ, Рг, Ви, НЕХ, Сур, Ві чи 4-піколіл, а К» - Н чи Еї.

Наступний кращий підтип родини розглянутих вище опіоїдних пептидів має формулу:

Н-Хаа/Хаа»о-Хааз-Хаау-О, де Хаа/- О-Рпе (заміщений чи ні СоМе, 2Е, 4Е чи 4СІ) чи О-АІа(циклопентил чи тієніл), Хаа» - (АЗО-РНе, 0-1Маї, О0-2Маї чи О-Тгр, де А" - 4Е, 4СІ, 4МО» чи 3,4С1», Хааз-О-Міе, О-еш, 0-СМГІ, О-Меї чи О-Авр, Хаа/-О-Агао, О-Г ув, О-Наг, О-пАга чи О-Огп, а ОО - МКК», Мог, Тто, Рір, 4-НуР чи Рра, де Ку - Ей, Рг,

Ви, Сур, ПЕХ, Вл! чи 4Ріс, а К» - Н чи Е..

Подальший кращий підтип родини розглянутих вище опіоїдних пептидів має формулу:

Н-Хаа;-Хаа»-Хааз-Хаа)-О, де Хааї О-Рпе, О-4ЕРра, О-2Ера, О-Аср чи О-Аїа(Тнпі), Хаа» - (АДО-Рпе, 0-1Маї, 0-2Маї чи О-Тгр, де А - 4Е чи 4СІ, Хааз- О-Міе, О-Меї чи О-ІГеи, Хаа/-О-Аго, О-Наг, О-пАго, О-Гуз, О-Огп чи О-Сті, а Є - МНЕ., Мог, Тто, Рір чи Рра, де К. - ЕК, Рг чи 4Ріс.

Інший кращий підтип родини розглянутих вище опіоїдних пептидів має формулу: Н-Хаа 4-Хаа»-Хааз-Хаа,-О), с ов де Хаа.- О-Рпе, О-4Рра, О-2Ера чи 0-АїІа(2ТПі), Хаа» - (АХДО-Рпе, 0-1Маї, 0-2Маї чи О-Тгр, де А - 3,4С15 чи 4СІ,

Хааз- О-Міе чи 0-ІГец, Хаа/-0О-Ага, О-Огп чи О-Сті, а ОО - МНК., Мог, Тто, Рер, Рр: чи М(ЕО», де К-, - Ей, Рг, (8)

Сур, 4Ріс, Аеб чи Ной.

Було виявлено, що вищенаведені типи та підтипи опіоїдних пептидів мають довготривалу активність іп мімо внаслідок уведення амінокислотного залишку в позиції 4 на С-закінченні заміщеного аміду. Ця особлива Ге зо Неочікувана властивість робить такі пептиди особливо цінними, оскільки деякі з них зберігають активність іп мімо протягом З годин і більше. Деякі пептиди, що мають вищенаведену послідовність, але мають простий со

С-кінцевий амід також виявляють високу селективність до КОК у порівнянні з МОК, але взагалі виявляють тільки с короткотривалу дію. Можна чекати, що такі опіоїдні пептиди виявлятимуть довготривалу активність, якщо вони синтезовані так, що мають на С-закінченні такий заміщений амід, як морфолід Було також виявлено, що со первинний тетрапептидний амід виявляє високе та селективне зв'язування КОК, відповідні заміщені аміди, як «о наприклад, етиламід та морфолід, будучи синтезованими, виявляють подовжену обезболюючу активність протягом годин, тобто щонайменше 1 години, без помітного проникнення у головний мозок.

Хоча у вищенаведених формулах представлено кращі амінокислотні послідовності, фахівці в області хімії пептидів повинні розуміти, що один чи більше з визначених амінокислотних залишків можна замінити « консервативними амінокислотними заміщеннями, наприклад, однієї основної амінокислоти на іншу, або однієї з с гідрофобної амінокислоти на іншу, наприклад, О-ІІе на О-І еи. Подібно, різні залишки можна модифікувати також введенням галогену чи нітрогрупи, звичайно, в позиції З та/"або 4, або можна метилувати А-атом карбону. ;» Вважають, що такі модифікації дають еквівалентні капа-рецепторним опіоїдним пептидам продукти.

Пептиди можна синтезувати будь-яким придатним способом, як-то ексклюзивними твердо-фазними способами чи класичними способами з доповнювальними розчинами, або альтернативно, частковими

Ге» твердофазними способами чи способами конденсації фрагментів. Наприклад, синтез ексклюзивними твердофазними способами (ЗРРУ) описано в довіднику ЗіемагаУоипо, Зоїїд-Рпазе Реріїде Зупійевзів, 279 Ед, со Ріегсї Спетіса! Сотрапу, Коскога, ПШіпоїв, 1984, а приклад розкрито в патенті 05 Мо4105603. Приклад синтезу оз способом конденсації фрагментів патенті ОБ Мо3972859, а приклади інших застосовних синтезів описано в патентах 05 Мо3842067 та Мо3862925. Класичні синтези з доповнювальними розчинами детально описані

Ф Водапзвкі еї а!., Рерііде 5упіпезвів, па Еєд, допп УМіеукБопв, Мем Хогк, 1976. 4) Звичайним для хімічних синтезів пептидів сполучального типу є протестування будь-яких лабільних бічних ланцюгів амінокислоти, яку приєднують, а також А-аміногрупи, так що доповнення відбувається по карбоксильній групі індивідуальної амінокислоти чи дипептиду або трипептиду, які додають. Такі групи добре відомі фахівцям, як кращі такі групи в 5РР5 та класичних синтезах з доповнювальними розчинами використовують трет- о бутилоксикарбоніл (Вос), бензилоксикарбоніл (7) та флуоренілметилоксикарбоніл (Ртос), хоча можна використовувати також велике число інших А-амінопротектувальних груп. іме) При використанні РР С-кінцевий амінокислотний залишок сполучають з такою твердою підкладкою з такої смоли, як -0-СН о /5-полістирольна, -0-СНо-бензилполіамідна, -МН-бензгідриламінна (ВНА) чи 60 -МН-пара-метилбензпдриламінна (МВНА). Використання смол ВНА чи МВНА часто є кращим, коли бажаний незаміщений амід, оскільки відщеплення дає безпосередньо С-кінцевий амід. Коли бажаний М-метиламід, його можна створити на смолі М-метилВНА. Інші однозаміщені аміди можна синтезувати наведеними МУ.Когпгеїсй еї аІ.,, Іпб).Реріїде Ргоїеіп Кев., 25:414-420, 1985, а також в патенті 5 Мо4701499 способами. Пептиди, що включають С-кінцеві двозаміщені аміди, як-то М-морфолініл чи М-піперидиніл, краще синтезувати класичними 65 способами з доповнювальними розчинами або конденсацією фрагментів у розчині.

Після синтезу ці пептиди легко очистити добре відомими фахівцям способами очистки коротких пептидів,

наприклад, високоефективною рідинною хроматографією з оберненими фазами (ВЕРХ-ОФ) чи іншими прийнятними способами, які детально описано .).Кімег еї аї., У.Спготаїйоадгану., 288:303-328, 1984 та С.МіШег апа .Кімег, Реріїде Зсіепсе, Віороїйтеге, 40:265-317, 1996, а конкретні приклади такої очистки після твердофазного чи подібного синтезу описано в патенті 5 Мо5098995.

Для дослідження, чи виявляють тетрапептиди високу селективність відносно КОК, сильну обезболюючу біоактивність, довготривалу біоактивність іп мімо та відсутність проникнення у головний мозок, застосовують різні способи. Досліди на рецепторах добре відомі фахівцям, а нещодавно були клоновані КОК мишей, щурів, морських свинок та людини. За винятком КОК морських свинок клоновані КОК дуже подібні, усі включають 70 приблизно 380 амінокислотних залишків. Амінокислотна послідовність КОК людини має 93,9 та 93,495 гомології з

КОК щурів та мишей, відповідно. За контрастом, КОК людини значно відрізняється від МОК людини та дельта-опіоїдного рецептору (ОК) людини, маючи тільки 60,2 та 59,195 ідентичності амінокислотної послідовності. КОК та інші опіоїдні рецептори є класичними сполученими з ОС-протеїном рецепторами з семи-трансмембранним перекриттям (Сі). Ці клоновані рецептори дають змогу легко скринувати окремі /5 пептиди-кандидати, наприклад, для визначення селективності можна проводити скринінг відносно КОК та МОК.

КОК, МОК та РОК стабільно експресуються в ракових клітинах миші, що походять з лінії нейробластоми гіпокампу (НМ.9.10) і є придатними для скринінгу іп міо. Існує також ряд добре прийнятних загальних стандартних тестів іп мімо для визначення обезболюючої активності опіоїдної сполуки, в яких звичайно використовують мишей і які включають тест на висмикування хвоста, тест тиску на лапу, тест на корчі від го оцтової кислоти, тест на поскубування хвоста та тест на занурення хвоста. Р.Е.МопмоіднЦападег еї аї.,

У.Рпагт.Ехрег. Ппегареціісв, 224:7-12, 1983 описано ряд таких тестів для опіоїдних сполук.

Спорідненість до зв'язування означає силу взаємодії ліганду з рецептором. Для виявлення спорідненості до зв'язування опіоїдних рецепторів пептиди згідно з винаходом оцінювали за допомогою дослідження конкурентного зв'язування. Ці досліди проводили на експресованих в стабільній трансфектованій лінії клітин сч ов (НМ.9.10, що походять з нейробластоми гіпокампу миші) кло-нованих капа- (ИКОК) та мю-опіоїдних (ИМОК) рецепторах людини. У цих дослідах використовували тест-сполуки (немічені чи холодні ліганди) при збільшенні і) їх концентрації для заміщення специфічного зв'язування радіоміченого ліганду з високою спорідненістю та селективністю відносно досліджуваного рецептору. Для дослідження якОоКк та ямок використовували ЗН-0-69,593 та ЗН-ЮАМОО, відповідно. Обидва ліганди комерційно доступні (МЕМ-Оиропоб). (Те) зо рАМОСО - це скорочення для (О-Аіа 2, МеРне", біу-оІ"І-енкефаліну. Спорідненість радіоліганду визначали як концентрацію Кр, при якій специфічне зв'язування дорівнює половині від максимального у насиченому і розчині. Ко ЗН-0-69,593 для НКОВ. та ЗН-ОАМСОСО для ПИМОВ. приблизно 0,3 та 3,ОнНМ, відповідно. Спорідненість (зе) досліджуваної сполуки (немічений чи холодний ліганд) визначали конкурентним зв'язуванням і розрахунком со константи інгібування К; за формулою: к- ІСед (Се)

ТНЕЛю) де ІСво - концентрація холодного ліганду, що інгібує 5095 специфічного зв'язування, Е -концентрація вільного радіоліганду, а Ко - визначена тестом на насичення радіоліганду. «

При проведенні цього досліду в специфічних умовах при відносно низькій концентрації рецептору - 70 розрахована величина К; для досліджуваної сполуки є гарним наближенням до її константи дисоціації К р, яка с представляє необхідну для зайняття половини зв'язувальних ділянок концентрацію ліганду. Низька величинак ; з» в наномолярних чи субнаномолярних межах вважають свідоцтвом високої спорідненості ліганду в полі дії опіоїду. Кращі аналоги мають К; для КОК приблизно 2 наномоль (НМ) чи менше, а кращі аналоги мають К; приблизно їнНМ чи менше. Оскільки рецептори КОК широко розповсюджені в тілі, капа-рецепторні опіоїдні пептиди матимуть суттєву дію на модулювання багатьох периферійних впливів, а якщо вони високоселективні б відносно КОК, вони матимуть мінімальну побічну дію і будуть фізіологічно гарними ліками, Тате дослідження (ее) зв'язування із застосуванням КОК та МОК є простим у виконанні і його можна легко провести з ідентифікованими чи синтезованими пептидами для визначення, чи Е вони селективними відносно КОК і чи о мають високу спорідненість. Таке дослідження зв'язування можна провести різними добре відомими фахівцям

Ге») 20 способами, один детальний приклад досліду такого загального типу наведено М.Регїтіп ейа)., Епдосгіпоіоду, 118:1171-1179, 1986. с Далі винахід описано прикладами, що не обмежують розкритих у його формулі рамок.

Приклад 1 Пептид формули Н-0О-Рпе-0О-Рпе-0О-Ме-О-Аго-МНЕЇ годить синтезувати добре відомим фахівцям з синтезу пептидів способом. Наприклад, спочатку способом класичної хімії розчинення синтезують трипептид (А-амінопротектована група)-О-Рпе-0О-Рпе-О-Міе-(карбоксильна група). Наприклад, трипептид можна приготувати

ГФ) розчиненням. Н-О-Рпе-О-Міе-ОМе в диметил-формаміді та додаванням М-етилморфоліну (МЕМ) або подібної сполуки для доведення рН. Цей розчин далі поєднують з розчином Вос-протектованого ЮО-Рпе-ОН в о диметилформаміді з вмістом МЕМ. Далі до суміші додають активуючий чи сполучальний засіб, як-то гексафлуорфосфату бензотріазол-1-іл-окси-трис-(диметиламіно)фосфонію (ВОР) або суміш 60 М,М'-діізопропілкарбонілдіїміду (ОІС) та М-гідроксибензотріазолу (НОВІ). Після завершення реакції середовище випарюють досуха, а продукт прийнятним способом очищають та перекристалізовують. Далі трифлуороцтовою кислотою видаляють Вос-протектувальну групу та розчиняють дипептид в диметилформаміді і додають розчин

Вос-протектованого О-Рпе в диметилформаміді з вмістом МЕМ. Повторюють реакцію з участю ВОР, як описано вище, з одержанням трипептиду, який після випарювання розчиннику досуха очищають та перекристалізовують. бо Отриманий продукт - це Вос-0О-Рпе-0О-Рпе-0О-Міе-ОСНіз. Далі метиловий оестер придатним способом перетворюють у вільну кислоту, як-то розчиненням в суміші діоксану та диметилсульфоксиду та додаванням гідроксиду натрію. Після завершення реакції відділення, очистка та перекристалізація дають трипептид

Вос-0О-Рпе-0О-Рне-0О-Ме-ОН.

Трипептид розчиняють в диметилформаміді з вмістом МЕМ та обробляють О-Аго(То5)-МНЕЇ, знов використовуючи ВОР як сполучальний засіб. Інакше метиловий естер трипептиду можна при потребі перетворити в азид обробкою 8095 розчином гідразин-гідрату з утворенням гідразиду, який виділяють, а потім обробляють нітритом натрію та мінеральною кислотою в диметилформаміді. Азид негайно обробляють

ОБ-Ага(То8в)-МНЕЇ в розчині диметилформаміду з вмістом тріетиламіну. Після завершення реакції суміш 7/0 Ввипарюють досуха, та прийнятним способом очищають і лерекристалізовують. Потім депротектують

М-закінчення та бічний ланцюг О-Агд і знов проводять очистку та перекристалізацію, отримуючи потрібний етиламід тетрапептиду (пептид Мо1).

Пептид оцінюють на гомогенність ВЕРХ-ОФ, використовуючи дві різні рухомі фази: градієнт ацетонітрилу у воді з вмістом 0,195 трифлуороцтової кислоти та градієнт ацетонітрилу у тріети-ламіно-фосфатному буфері з рН 7/5 7, а також з плавленим діоксидом силіцію капілярним електрофорезом, використовуючи фосфатний буфер з рн 2,5. Чистоту пептиду цими способами оцінюють як 29895, Мас-спектрометрія з іонізацією електророзпиленням та іонною пасткою виявила псевдомолекулярний іон |МНІ при т/2 609,4, що збігається з розрахованою масою цього тетрапептиду 609,5. Фрагментаційний аналіз псевдомолекулярного іону виявив серію іонів при т/7, що відповідають очікуваній для отриманої структури послідовності амінокислот.

Аналіз зв'язування з експресованими клітинами КОК та МОК людини виконали як зазначено вище.

Спорідненість досліджуваного пептиду до КОК та МОК, що стабільно екпресуються у клітинах нейробластоми гіпокампу миші (НМ.9.10), визначали конкурентним заміщенням ЗН-О-69,593 для НКОВ або ЗН-АМОО для

ЯМОК як описано. Результати щонайменше 3 дослідів об'єднували та розраховували величину константи дисоціації для інгібітору (К;) (довірчий інтервал 9595), використовуючи придатну програму, як-то програму Ге

САМО від Мипзгоп та Кодврага, Апа/!.Віоспет., 107:220-239, 1980. Кпонований КОК зв'язує пептид Мої з високою (5) спорідненістю, що визначено конкурентним заміщенням зв'язаного радіоліганду, а величина К ; приблизно дорівнює 0,05:20,02нНМ. Різниця в спорідненості порівняно з подібно стабільно екпресуючимся у трансфектованих ракових клітинах НИМОК, для якого К ; дорівнює 1890ж4990НМ, є дуже великою. Отже, пептид Мої сильніше приєднується до КОК, ніж до МОК приблизно у 38000 разів. Дослідження пептиду аналізом на корчі мишей від (се) оцтової кислоти (як зазначено вище) виявило ЕО 5о приблизно 0,09мг/кг і що пептид виявляє більше за 5090 обезболюючої дії через З години. Тому вважають, що пептид Мо1 виявляє дуже довготривалу дію. ї-о

Приклад 2 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0О-Рпе-0О-Міе-0О-Аг9-О, що показані в таблиці А, с синтезували та проаналізували як в прикладі 1. со зв Ф

Мо кі ков |кі мов Співвідношення) Мас-спектрометрія / ЛУТ-ЕОво мг/кг їм) нм) о мнме обов зв | вобоо 0 веви веб 04 « зн ою лбю вого 0бозя 06235000 и з с . вімог | 006 сво 42000 вія | в'я | 004 г» вокнаю ля збю вого | 624 06240001 4 жнив смолою ою | вва 0 во

Ф полю 0009 2250 овооо вт 06730007 со птжнуво боб злою | блого 0 бвБИ веб 000075 лавр олволоюю| тою 0вави 0 веє от

Фо

Ге, 42)

Приклад З Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Міе-0О-Агд-О, що показані в таблиці В, о синтезували та проаналізували як в прикладі 1. ю зр охян аа ха ха 9 во б5 22 0-Рпе |0-4Сра 0-Ме р-Ага Мог ї і

Пептиди 16-39 виявляють довготривалу обезболюючу біоактивність Приклад 4 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-О-Рпе-О-Міе-О-Агд-О, що показані в таблиці С, синтезували та проаналізували як в прикладі 1, сч

Мо| Хааї / Хаазо | Хааз | Хаад | Мас-сспектрометрія |Співвідношення зв'язування М/К мій нки шкі КД нини о

Ф зо о

Фо со зв Ф « -7 2 - я

Приклад 5 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Ме-О-Аг9-О, що показані в таблиці 0, синтезували та проаналізували як в прикладі 1. (22) со Мо Хаа» | Хааз | Хаад кі КОВ (нм) |К; МОВ (НМ) |Співвідношення| Мас-спектрометрія / М/Т-ЕОво. мг/кг с шо шкі і КО пас пік нон с ЗМ я. Біт ме зл МОР 03912000 3000 | вт о с з

ГФ) Приклад 6 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0-Рпе-0О-Міе-0О-Агд-О, що показані в таблиці Е з синтезували та проаналізували як в прикладі 1. 60 Ме| Хааї | Хаво |Хааз Кі КО (НМ) Кі МОВ (НМ) Співвідношення) Мас-спектрометрія М/Т-ЕОБо мг/кг

Мн божі шкі НБН бін пік нон с ЗНИ во лети) зара ів МНИРє 040769000090000мезо мезо обов 65 62| 0-Рпе О-Рпе |0-Ме / охрР 01 2970 27000 663, 663,5 018

:

Пептиди 59-65 виявляють довготривалу обезболюючу біоактивність.

Приклад 7 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Ме-О-Аг9-О, що показані в таблиці ЕК, синтезували та проаналізували як в прикладі 1. т зх | ха |хаю| ха | 9 55 баса (лора ів був МНРг вв паса | ол бл оАТ РР во блле | реле пма бот сор ю сч о во бсмРО|птле оМе бг Мо

Ф зо о

Фо ве, Огте | Оле оме| Олю оте со (Се)

Опіоїдні пептиди з таблиці Е виявляють високу селективність відносно КОК у порівнянні з МОК та виявляють обезболюючу біоактивність іп мімо.

Приклад 8 Опіоїдні пептиди загальної формули: Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Міе-О-Аг9-О, що показані в таблиці о, « синтезували та проаналізували як в прикладі 1. - с

І Ме хаві | Хааз Хааз Хава 0 Співвідношення М/КЛУТ-ЄОво мг г» вата | оте оме ол кнатю бо 000 оо 5 зкра блле (ОМме Олю МаИРЄ ою 0001 4 зо ботра | оте Ме ол МниРю зво 0004

Ф 1 бавра беле ме лаб хнике 00000 со 82 Осра | Оле Ме Олю |МниРЮ! 260011 з бара | Ома Ме ол книтю 000 о

Фо 6 птле блле (ОМхе бл гер 12000005

Ф ст оРе | ою оМме ол милою, 5 в птле бле (рівш от Мне; ою 00004 зе дерті озасра рів рот Моб 9000000 0083 зв о з

Ло4, Отне | Оле Ме Олю |МнАЄЮ! 63011 во 5

Приклад 9 Вибрані пептиди, що наведені в таблицях А-С, піддавали, зокрема, дослідженню іп мімо для визначення тривалості дії їх опіоїдних властивостей, результати представлено в таблиці Н. Номер пептиду відповідає попереднім таблицям, а величини співвідношення М/К надані для посилання. Дослідження іп мімо проводили тестом за корчами (М/УТ) мишей, що добре підходить для визначення тривалості обезболюючої біоактивності. Детально цей тест описано С.А.Вепіеу еї аї., Вг.О.Рпаптас, 73:325-332, 1981, в ньому використовують придбаних у Напап притомних самців мишей ІСК масою 20-30 г. Миші голодували 12-16 годин до початку досліду. Больову поведінку, тобто корчі, викликали інтраперитональним уведенням розбавленої оцтової кислоти (використовували 10 мл 0,695 водної оцтової кислоти на кг маси тіла). Корчі підраховували 7/0 протягом 15 хвилин після уведення оцтової кислоти. На першому етапі сполуку досліджували в 3-4 внутрішньовенних зростаючих дозах при одному часі поперехіньої обробки (за 5 хвилин до уведення оцтової кислоти). Цей етап використовували для визначення потужності (М/Т-ЕЮОво), а також субмаксимальної ефективної дози (приблизно 80-9095 обезболювання). На другому етапі цю субмаксимальну ефективну дозу для кожного конкретного пептиду застосовують при різному часі попереднього введення (тобто, при -5, -60, -120 та -180 7/5 Хвилин) відносно уведення оцтової кислоти для визначення тривалості дії. При дослідженні використовували контрольну групу, яка отримувала тільки середовище без пептиду. Число корчів підраховували протягом 15 хвилин, починаючи від моменту введення оцтової кислоти, а біоактивність, тобто обезболювання, виражали в процентах, розраховуючи за формулою: 100 х (число корчів в контрольній групі - число корчів в обробленій групі) число корчів в контрольній групі

Оскільки кожна субмаксимальна доза, дуже ймовірно, відрізняється, і пряме порівняння неможливе, результати нормалізували математично відомими фахівцям способами з отриманням наведених в таблиці Н порівняльних величин, в якій обезболюючу активність, що залишається Через 1, 2 та З години, виражали в процентах від активності, визначеної при -5 хвилин. Вищі 10095 величини означають вищу обезболюючу С активність, ніж на початку досліду. Можна вважати, що опіоїдний пептид, що послаблює корчі щонайменше на о 25905 через 1 годину, має дію іп мімо.

На додаток до використання цього досліду для визначення тривалості обезболюючої активності, його також використовували для визначення біопотужності пептиду іп мімо (короткотермінової). Цю величину представлено в таблиці під заголовком М/Т-ЕЮОво в мг/кг маси тіла, -'вона є виміром необхідної для зменшення числа корчів у (се) мишей протягом 15 хвилин на 50595 (у порівнянні з контрольною групою) дози. с не

Пептид Мо) Співвідношення М/КМ/Т-ЕОБо мокг| 96 Обезболювання со зв вв 11000093 Б вів Ф 2 171воово | омя0 тоб ев 81 вою 00оотв | лює зв аю 11033301 « в | ою оо | во зм 2 яю 010о0яовт в 2 с 1 юю 000 | вт зв . аю 11110о010вва яви г» 81 юю 01000005 тв зв пев 000000оої | вв я 5 1 вюю 11110 о070 вія зв

Ф 2юю0010000ої | вов в со юю мі 2овю 1 |7омязво 1111

Фо 50 вюю 00000оо | во

Фу 2 00000006 | вза іяю011023101

Щи мі вою 10211111 ямою | обов 1711111 т воюю1бю 111 95 яв лвовю обов БМ 17

Ф. юю во езю|оо 3561111 славою 1ботв ває вагою | оо 03061111 60 51ввюю00000оож я 35 вявю0000оовт | плов ввввю 000000 заяві р. 81 00000о0вб в ви во 1900 0,083 83,8 35,5 леюю 0101 009 | вів | з 1 юю1111вивз81 зво 000 | вв зи вв 000000оою м 50ню00000оом | ює0 вв лвюют0000ооя0ввя 0 ва в тювю оба вв! в50явю000000оов | явв о 61 лю 000.1 вв0юю00000оомо | вв я 61 000000о0в30воз0 вв бо. злою | бо вав тв позою 00000ол» | вою яв і поз) юю 00001002 0вз801 позою 00000 змо пов) ово о050 8201

ЕС У ННЯ НИХ ЛП НОЯ НАННЯ пот) юю 00000ооа 05001 ові влоюю 17 оо) ваз 1 32

Опіоїдні пептиди корисні як аналгетики та для інших фармакологічних застосувань при лікуванні асоційованих з КОК-системою патологій. Вони виявляють переваги перед М-агоністичними обезболювачами, наприклад, морфіном, який має небажані наслідки, як-то запор, респіраторна депресія та свербіж. Дуже бажано, с щоб ці опіоїдні пептиди не перетинали помітно бар'єр кров/мозок для позбавлення від можливої небезпеки таких о побічних ефектів. Безпечність цих сполук з огляду на проникнення у мозок аналізують порівнянням їх потужності при пом'якшенні периферійних виявів та потужності при пом'якшенні центральних виявів. Периферійну дію вимірюють описаним вище тестом за корчами (М/УТ) мишей. Обумовлену впливом на розташовані у мозку капа-рецептори центральну дію вимірюють тестом на висмикування хвоста (ТЕ). Тест нависмикування хвостає «(о дослідом гострого соматичного болю для оцінки потужності та тривалості впливу центрально діючих аналгетиків.

Викликаний зануренням хвоста у гарячу воду (52"С) біль призводить до швидкого висмикування хвоста. ї-о

Центрально діючі аналгетики, можна чекати, підвищуватимуть залежну від дози латентність відносно с висмикування хвоста. Тест описано Т.МУ.Мапаеганй ег(а/!., 9У.Рпагт. Ехрег. Ппегареціїсв, 262:190-197, 1992.

Безпечність оцінювали використанням індексу проникнення у мозок (ВРІ): со дуття Ф де величина ЕЮбо - це внутрішньовенна доза, що викликає половину максимальної дії в тесті за корчами (М/УТ) мишей та в тесті на висмикування хвоста (ТЕ), відповідно. Висока величина ВРІ свідчить про низьке проникнення у мозок і ймовірність існування у сполуки великого запасу безпечності (відсутність побічного « дю впливу на мозок) при використанні для описаних тут застосувань. Кращі опіоїдні пептиди мають ВРІ, що з дорівнює 100 або вище, а найкращі опіоїдні пептиди мають ВРІ більше 300. Системні непептидні капа-агоністи, с наприклад, енадолін та О-69,593, мають ВРІ менше 5, що свідчить про значне проникнення у мозок, а також :з» виявляють при клінічному використанні побічну дію (діурез, дисфорію, седативну дію). Величини ВРІ для деяких представницьких опіоїдних пептидів наведені в таблиці І. що

Ф Пептид пери вбво ик ТЕ Єрвомик ВР, со 0 050в, тов, с

Фо плисти с во вв вв, св о ю во 60 осв 0мо ов, вв | ом зв ов в оо 16198, б5

Оскільки ці пептиди сильно зв'язують КОК, вони також корисні при аналізі іп міго для дослідження рецепторів визначення, які рецептори присутні в окремих зразках тканин. Тому вони корисні для діагностики в цьому плані, а можливо також для діагностики іп мімо.

Взагалі, ці опіоїдні пептиди можна використовувати для обезболювання при лікуванні вісцерального болю, а також ревматоїдного артриту. Вони особливо корисні при лікуванні таких абдомінальних післяопераційних симптомів, як розлади травлення та біль. їх також вважають ефективними при лікуванні ІВ5, нестабільності сечового міхура, невтримання сечі та інших станів, при яких локальне запалення призводить до болю у кишечнику чи інших внутрішніх органах, наприклад, запальній хворобі кишечнику (ІВО) та дисменореї. Здатність 7/0 опіоїдних пептидів зменшувати імунну реакцію може мати переваги при боротьбі з ІВО та іншими такими станами, як автоїмунні захворювання. Призначення пептидів можна використовувати для отримання локальної аналгетичної дії з огляду на гострі та хронічні стани запалення. їх можна використовувати для лікування кишкової непрохідності з такими симптомами, як здуття, нудота та поєднаного з болем інгібування кишкової прохідності, наприклад, можливої викликаної больовим скороченням непрохідності кишечнику. Опіоїдні пептиди /5 ефективні також при місцевому обезболюванні і їх можна застосовувати для послаблення післяопераційного болю, а також хронічного болю, як--о викликаного запаленням шлунково-кишкових тканин та тканин інших внутрішніх органів, крім того вони дають послаблення при позбавленні від залежності до лікувального засобу.

Сполуки згідно з винаходом можна призначати у формі фармацевтично прийнятних неток-сичних солей, як-то кислотно-адитивних солей, прикладами яких є хлориди, броміди, сульфати, фосфати, нітрати, оксалати, фумарати, глюконати, танати, памоати, малеати, ацетати, бензоати, цитрати, сукцинати, алгінати, малонати, аскорбати, тартрати тощо. Якщо активний інгредієнт призначено у формі таблеток, таблетки можуть включати фармацевтично прийнятний нетоксичний розріджувач, що включає таке зв'язуюче, як трагакант, кукурудзяний крохмаль чи желатин. Ефективним може також бути внутрішньовенне призначення у фізіологічному розчинах з сіллю, фосфатним буфером, глюкозою чи манітом. сч

Фармацевтичні композиції звичайно містять ефективну кількість пептиду у сполученні зі звичайним фармацевтично прийнятним носієм чи розріджувачем. Взагалі, композиції включають обезболюючу, тобто і) ефективно блокуючу біль кількість. Звичайно доза може дорівнювати приблизно від мкг до 10мг пептиду на кг маси тіла хазяїна при внутрішньовенному призначення. Композиції можна застосовувати за необхідністю, наприклад, кількаразово з інтервалами 3-6 годин. Природа цих сполук може дозволяти ефективне пероральне (й зо призначення, однак, пероральні дози можуть бути вищими. За бажанням, для отримання опіоїдного пептиду протягом тривалого часу, наприклад, тижня чи більше, при одиночному вживанні можна використовувати форми ікс, з повільним вивільненням, депо чи імплантати. Наприклад, придатні композиції з повільним вивільненням для с ін'єкцій можуть містити пептид чи його сіль диспергованими чи капсульованими у нетоксичному чи неантигенному полімері, що повільно розкладається, як-то полімер полімолоч-ної/полігліколевої кислот, що со

Зв описано в патенті 5 Мо3773919. Відомо також, що повільне вивільнення може відбуватися з силіконового Ге імплантату.

Такі композиції можна для обезболювання призначати ссавцям, включаючи людину, внутрішньовенно, підшкірно, внутрішньом'язово, крізьшкірно, інтраназально, внутрішньолегенево, перо-рально, місцево, інтраректально, інтравагінально та спінально, як-то для позбавлення від викликаного перитональним « подразненням інгібування шлунково-кишкової прохідності. їх можна використати для полегшення з с післяопераційного болю. Ефективне дозування залежить від призначеної форми та виду лікуємої тварини. . Прикладом одної типової дозованої форми є бактеріостатичний водний розчин з РН приблизно 3-8, наприклад, а приблизно 6, що містить пептид, який безперервно вводять парентерально для забезпечення дози в межах приблизно 0,Змкг/кг - З мг/кг маси тіла на добу. Ці сполуки вважають добре толерантними іп мімо, а особливо

Корисними при застосуванні підшкірними ін'єкціями в бактеріостатичному водному розчині чи подібно.

Ге» Хоча винахід описано з огляду на його краще втілення, треба розуміти, що ясні пересічним фахівцям зміни та модифікації можна зробити без виходу за рамки винаходу, які наведено у формулі винаходу. Наприклад, інші бо відомі фахівцям замісники, що не послаблюють ефективності пептидів, можна застосовувати у пептидах згідно з 2) винаходом. Такі інші заміщені залишки О-РНе, як (48Д30-РнНе чи (2,4С12)0-Рпе, можна використовувати в позиції 5о 2. 0-Гув(Ви) та О-Гук(Еб) вважають еквівалентними О-Пу та О-Агу(Еф2). М-закінчення тетрапептиду може бути ме) перметилованим, як це оіїдомо в області техніки, за бажанням. Для створення димерів тетрапептидних амідів

Ф можна використовувати в якості з'єднувальних діаміносполуки. З'єднувальними сполуками можуть бути 1,6-діаміногексан, 1,5-діаміно-З-оксапентан та 1,8-діаміно-3,б-діоксаоктан. Утворені димери вважають еквівалентними відповідним мономерам.

Ф!

Claims (23)

Формула винаходу іме)

1. Синтетичний амід опіоїдного пептиду чи його фармацевтично прийнятна сіль, що має спорідненість до во капа-опіоїдного рецептора, яка щонайменше у 1000 разів більша за спорідненість до мю-опіоїдного рецептора, який виявляє при застосуванні довготривалу дію іп мімо і має формулу: Н-Хаа;-Хаа»-Хааз-Хаау-О, де Хааз - (АХ)О-Рпе, (С Ме)р-РНе, О-Туг, О-Тіс чи О-Аїйа (циклопентил чи тієніл), де А - Н, МО», Е, СІ чи СН»з, а Хаа» - (А)О-Рпе, 0-1Маї, 0-2Маї, О-Туг чи О-Ттр, де А" - А чи 34С1І5, Хааз - О-Мієе, (В)О-Гем, О-Ніє, О-Меї, бо р-маї, О-Рне чи О-Аїа (циклопентил), де В - Н чи Со о Ме, Хаа, - О0-Аго, О-Наг, О-пАго, О-Г ув, О-ПуУ, О-Аг9(Еб), а р-НакЕб), 0-Аті, О-Зті, 0-Ори, 0-Огп чи О-іог, а 0 - МКК», морфолініл, тіоморфолініл, (С)піперидиніл, піперазиніл, 4-моно- чи 4,4-двічі заміщений піперазиніл, чи 52 -лізил, де К; - нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, бензил, заміщений бензил, аміноциклогексил, 2-тіазоліл, 2-піколіл, З-піколіл, 4-піколіл, 59 -(ациламіно)-поліметиленова чи полі(оксіетиленова) група, Ко - Н чи нижчий алкіл, а С - Н, 4-гідрокси- чи 4-оксогрупа.

2. Синтетичний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що Хаа» - О-РНе, Хааз - О-Геи чи О-Міе, а Хаа; - р-Ага чи О-Опт.

З. Синтетичний пептид за п. 1 чи 2, який відрізняється тим, що С) - МНК, а К/ - етил, пропіл, бутил, 7/0 Чиклопропіл чи циклобутил.

4. Синтетичний пептид за п. 1 чи 2, який відрізняється тим, що С - морфолініл чи тіоморфолініл.

5. Синтетичний пептид за п. 1 чи 2, який відрізняється тим, що О - МНК, а Ку - 4-піколіл.

6. Синтетичний пептид за п. 1 чи 2, який відрізняється тим, що 0 - МЕО», МН(Аеб), Рр2 чи Рер.

7. Синтетичний пептид за п. 1 чи 2, який відрізняється тим, що О - МНЕ, а Ку - Аао, Асо, Ной, Сйх чи баб.

8. Синтетичний пептид за будь-яким з пп. 1-7, який відрізняється тим, що Хаа)з - О-РНе, О-АїІа(2-тієніл) чи О-4Ера.

9. Синтетичний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що Хаа,х - О-Оті.

10. Синтетичний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що Хаа» - О-4Сра чи О-3,4Сра.

11. Фармацевтична композиція, яка включає достатню для знеболювання кількість синтетичного пептиду за будь-яким з пп. 1-10 та фрармацевтично прийнятний рідкий чи твердий носій.

12. Спосіб лікування, який включає призначення фармацевтичної композиції за п. 11 у кількості, яка ефективна (а) при знеболюванні, коли наявні вісцеральний біль, ревматоїдний артрит, абдомінальні післяопераційні симптоми або гострий чи хронічний біль, або (Б) при протидії нестабільності сечового міхура, невтриманні сечі чи кишковій непрохідності, або (с) при боротьбі з запальною хворобою кишечника (ІВО) чи сч ов автоїмунними захворюваннями.

13. Синтетичний опіоїдний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що має М/Т-ЕЮбо приблизно 0,5мг/кг чи (8) менше, цей пептид має формулу: Н-Хаа/-Хаа»-Хааз-Хаад-О, де Хаа/ - О-Рпе (заміщений чи ні на Со Ме, 2Е, 4Е чи 4СІ) або О-Аіа (циклопентил чи тієніл), Хав» - (А)ЗО-Рпе, 0-1Маї, О-2Ма!ї чи О-Тгтр, де А" - Н, 4Е, 4СІ, 4МО» чи 3,4СіІ», Хааз- Ю-Міе, О-еш, 0-СМІ, О-Меї чи ее, Ор-Аср, Хаахд - О-Аго, О-Агу(Еб), О-Гуз, О-Пу, О-Наг, О-Нак(кЕБ), О-пАгу, О-От, О-Іог, 0-ЮОБи, О-Аті та О-оті а со О - МКУ», Мог, Тто, Рір, 4-НУР, ОХР чи Рра, де К.у - Ме, ЕК, Рг, Ви, НЕК, Сур, Вл! чи 4-піколіл, а К» - Н чи Еї.

14. Синтетичний пептид за п. 13, який відрізняється тим, що Хаа» - О-Рпе, О-4Сра чи 0-3 ,4Сра, Хааз - О-Г ей і. чи О-Міе, а Хаа; - О-Аго, О-Огт чи 0-Оті. с

15. Синтетичний пептид за п. 13 чи 14, який відрізняється тим, що С - МНЕ. а Ку - ЕК, НЕ, Рг чи 4-піколіл. Зо

16. Синтетичний пептид за п. 13 чи 14, який відрізняється тим, що С) - МЕБ) чи МН(Аеб). о

17. Синтетичний пептид за п. 13 чи 14, який відрізняється тим, що 0 - морфолініл чи тіоморфолініл.

18. Синтетичний пептид за п. 13 чи 14, який відрізняється тим, що С) - МНЕ, а Ку - етил чи 4-піколіл.

19. Синтетичний пептид за п. 13 чи 14, який відрізняється тим, що С - Рр7, Рер чи МН(НОМ). «

20. Синтетичний пептид за будь-яким з пп. 13-19, який відрізняється тим, що Хаа:ї - О-Рпе, О-АїІа(2-тієніл) - ци О-Рра. с

21. Синтетичний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що має одну з нижченаведених формул: и » Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Міе-0О-Ага-МНЕ;, Н-О-Рпе-0-Рпе-О-Міе-О-Агд-морфолініл, Н-0-Рпе-О-Рпе-О-Міе-О-Агд-МН-4-піколіл, Н-О-Рпе-О-Рпе-О-Міе-О-Аго-МНРГг, б Н-О-Рпе-0-Рпе-О-Міе-О-Агд-тіоморфолініл, Ге | Н-О-Рпе-О-Ріпе-О-Міе-О-Аго-МЕЇ », Н-О-Рпе-О-Рпе-0О-Міе-0-Ага-МНМе, о Н-О-Рпе-О-Рпе-О-І ен-О-Огп-морфонілін, бу 70 Н-0О-4Ера-О-Рпе-О-МІв-О-Аго-МН-4-піколіл, Н-О-Рпе-0-Рпе-О-Міе-О-Агд-МН-ціклопропіл, с Н-О-АІа(2ТпІ)-0-3,4Сра-0-І ен-ЮО-Агд-морфолініл, Н-О-Рпе-0-Рпе-О-Міе-О-Сті-морфолініл, Н-О-Рпе-0-Ріпе-О-І ен-О-Огп-МН(Аевб), Н-О-Рпе-О-Рпе-О-І еш-О-І уз-морфолініл, ГФ) Н-О-Рпе-0О-Ріпе-О-Міе-О-Агд-піперазиніл та Н-О-Рпе-0О-Рпе-О-Міе-0О-Ага-МН(Ной). о

22. Синтетичний опіої, Й 1 й відрі ЕВ б О,5мг/ . дний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що має ЕОсо приблизно 0,5мг/кг чи менше і має формулу: Н-Хаа;-Хаа»-Хааз-Хаау-О, бо де Хаа/; - О-Рпе, О-4ЕРра, О-2Ера, О-Аср чи 0-АїІа(2ТПі), Хаа» - (АХДО-Ріе, 0-1Маї, О-2Маї! чи О-Тгр, де А - 4Е чи 4СІ, Хааз - О-Міе, О-Меї чи 0-І ем, Хаах - О-Аго, О-Наг, О-пАго, О-Г ув, О-Огп чи О-Стії, а О- МНК, Мог, Тто, Рір чи Рра, де К. - Еї, Рг чи 4Ріс.

23. Синтетичний опіоїдний пептид за п. 1, який відрізняється тим, що має ЕО5о приблизно 0,5мг/кг чи менше і має формулу: Н-Хаа;-Хаао-Хааз-Хаау-оО, бо де Хаа; - О-Рпе, О-4ЕРра, О-2Ера чи О-АЇІа(2Ті), Хаа» - (АДО-Рпе, 0-1Маї, О0-2Маї чи О-Тгр, де А - 3,4СіІ5 чи

4СІ, Хааз - О-Міе чи 0-ІГ ем, Хаа/-0-Ага, О-Огп чи О-Сті, а О - МНЕК., Мог, Тто, Рер, Рра чи МЩ(ЕО», де К. - ЕЕ, Рг, Сур, 4Ріс, Аеб чи Ной.

Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2004, М 8, 15.08.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України.

с о

(Се) «со со с (Се) ші с ;»

(22) (ее) (95) б 50 42)

Ф) іме) 60 б5