TR201810773T4 - Onkostatin m?ye (osm) antijen bağlayıcı proteinler. - Google Patents

Onkostatin m?ye (osm) antijen bağlayıcı proteinler. Download PDF

Info

Publication number
TR201810773T4
TR201810773T4 TR2018/10773T TR201810773T TR201810773T4 TR 201810773 T4 TR201810773 T4 TR 201810773T4 TR 2018/10773 T TR2018/10773 T TR 2018/10773T TR 201810773 T TR201810773 T TR 201810773T TR 201810773 T4 TR201810773 T4 TR 201810773T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
human
osm
antibody
sequence
antigen
Prior art date
Application number
TR2018/10773T
Other languages
English (en)
Inventor
Peter Bembridge Gary
Chung Chun-Wa
Feeney Maria
Karen Ford Susannah
Kirby Ian
Mcadam Ruth
Original Assignee
Glaxo Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45001764&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TR201810773(T4) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Glaxo Group Ltd filed Critical Glaxo Group Ltd
Publication of TR201810773T4 publication Critical patent/TR201810773T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Measuring Volume Flow (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, spesifik olarak Onkostatin M'ye (OSM), özellikle insan OSM'ye (hOSM) bağlanan ve OSM'nin gp130 reseptörüne bağlantısını inhibe eden, fakat bölge II kalıntıları ile doğrudan etkileşime geçmeyen antijen bağlayıcı proteinler ve bunların fragmanları ile ilgilidir. Buluş ayrıca, antikorların insanlaştırılmasına yönelik bir yöntem ile ilgilidir. Farmasötik bileşimler, görüntüleme ve tıbbi tedavi yöntemleri de tarif edilmektedir.

Description

TARIFNAME ONKOSTATIN M,YE (OSM) ANTIJEN BAGLAYICI PROTEINLER Teknik Alan Mevcut bulus, spesifik olarak Onkostatin Mlye (OSM) ve özellikle Insan OSM"ye (hOSM) baglanan immünoglobulinlerle ilgilidir. Mevcut bulus ayrica söz konusu immünoglobulinler, söz konusu immünoglobulinleri içeren farmasötik bilesiinler ile hastaliklarin veya rahatsizliklarin tedavi edilmesine yönelik yöntemlerle ve üretim yöntemleriyle ilgilidir. Mevcut bulusun diger yapilandirmalari, asagidaki açiklamadan anlasilacaktir. Önceki Teknik Onkostatin M, gp130 transmembran sinyallesme reseptörünü paylasan (Bkz. Taga Inhibitör Faktörü (LIF), siliyer nörotrofik faktör (CNTF), kardiyotropin-l (CT-l) ve kardiyotofin-l benzeri sitokini (Bkz. Kishimoto T ve ark. (1995) Blood 86: glikoproteindir. OSM aslinda melanom hücre dizisinin (A375) büyümesini inhibe edebilme kabiliyeti ile kesfedilmistir (Bkz. Malik N (1989) ve ark. Mol Cell Biol diger elemanlarina benzer birçok islevli yönlendirici oldugu bulunmustur. OSM, makrofajlar, aktif halde T hücreleri (Bkz. Zarling JM ( 83: çesitli hücre türlerinde üretilmektedir. Ayrica pankreas, böbrek, testisler, dalak, mide ve beyinde (Bkz. Znoyko I ve ark. (2005) Anat Rec A Discov Mol Cell Evol 6162.109 Haematol 109: 68-75) eksprese edilmektedir. Prensip biyolojik etkileri, endotelyum aktivasyonunu (Bkz. J ve ark. (1993) Blood 82: 33-7), akut faz hücresel proliferasyon veya diferansiyasyon indüksiyonu, inflamatuvar yönlendirici saliniminin ve hematopoezin modülasyonu (Bkz. Tanaka M ve ark. iyilesmesini içermektedir. OSM reseptörleri (OSM reseptörü ß "OSMRß") epitelyal hücreleri, kondrositler, düz kas, lenf bezi, kemik, kalp, ince bagirsak, akciger ve böbrek (Bkz. Tamura S yelpazesinde eksprese edilmektedir. Çesitli kanitlar, endotelyal hücrelerin, OSM*ye yönelik bir primer hedef oldugunu göstermektedir. Bu hücreler, 10 ila 20 kat daha yüksek sayida hem yüksek hem de düsük afiniteli reseptörleri eksprese etmektedir ve PSM ile uyarim sonrasinda fenotipte yogun ve uzun degisimler olarak, OSM, endotelyal kaynakli oldugu düsünülen Kaposi sarkoma hücrelerin bir ana otokrin büyüme faktörüdür (Bkz. Murakami-Mori K ve ark. (1995) J Clin Diger IL-6 aile sitokinleri ile yaygin olarak, OSM, transmembran sinyal iletici glikoprotein gp130,a baglanmaktadir. gp130 sitokinlerin bir ana özelligi, gp130 ve liganda bagli olan bir veya birden fazla ko-reseptörü içeren oligomerik reseptör komplekslerinin olusumudur (Heinrich PC ve ark. (2003) Biochem J. 374: l-20 referansinda incelenmistir). Sonuç olarak, bu sitokinler, olusturulan reseptör kompleksinin bilesimine bagli olarak in vitro ve in vi'vo paylasilan ve benzersiz biyolojik aktiviteleri yönlendirebilmektedir. Insan OSM (hOSM), gp130 ile ve iki 6162.109 ko-reseptörlerinden birisi, LIFR veya onkostatin reseptör (OSMR) ile kompleksleri olusturabilmesi açisindan diger IL-6 sitokinlerden farklilik göstermektedir. Sekil 27, hOSM ve gp130, LIFR ve OSMR arasindaki etkilesimi göstermektedir. hOSM'nin kristal yapisi çözülmüstür ve iki potansiyel glikosilasyon bölge ile bir dört (x sarmal demeti içerdigi gösterilmistir. Iki ayri ligand baglayici bölge, hOSM molekülünde bölgeye yönelik mutagenez ile Ilk olarak, Bölge 11 (bazen "bölge 2"), gp130 ve ikinci bölge ile etkilesim halindedir, Bölge III (bazen "bölge 33"), molekülün ters ucunda, LIFR veya OSMR ile etkilesime geçmektedir. Mutagenez deneyler, LIFR ve OSMR,ye yönelik baglayici bölgelerin neredeysen özdes oldugu, fakat tek bir amino asit mutasyonunun, ikisi arasinda ayrim yapabildigini göstermistir. Modüle edici OSM-gp130 etkilesiminin, RA"mn ve diger hastaliklarin ve rahatsizliklarin, özellikle osteoartrit, idiopatik pulmoner fibrozis, agri, inflamatuar akciger hastaligi, kardiyovasküler hastalik ve sedef hastaligi gibi kronik inflamatuvar hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisinde faydali olabildigi varsayimini destekleyen kanitlar artmaktadir. OSM, Insan RA hastalarinin SF'sinde bulunmaktadir (Bkz. Hui W ve ark. (1997) seviyeleri ve kikirdak yikimina dair isaretleyicilerin sayisi ile iliskilidir hastalarindan sinoviyal doku, ex vivo OSM"yi spontane olarak salgilamaktadir OSManin, sinoviyal makrofajlarda mevcut oldugu (Cawston TE ve ark. (1998) reseptörlerinin ve gp130"un, endotelyal hücreleri, sinovyal fibroblastlar, konodrositler ve osteoblastlarda eksprese edildigi gösterilmistir. Normal farelerin eklemlerindeki mürin OSMsnin (mOSM) adenoviral ekspresyonu, siddetli inIlamatuvar ve erozif artrite yol açmaktadir (Bkz. Langdon C ve ark. (2000) Am 6162.109 sonra TNF, IL-l, IL-6 ve iNOS°den mahrum olan nakavt farelerde görülmektedir OSM'nin. tüm aitrit patoloji yapilandinnalarini yönlendirebildigini göstermektedir. Bir adenoviral olarak eksprese edilen mOSM vektörü kullanan fare OSM ekspresyonu, Juvenil Idiyopatik Artritin tipik büyüme plakasina hasara yol açinaktadir (Bkz. de Hooge ASK ve ark. (2003) Arthritis and Rheumatism terapötik olarak uygulanan bir anti-OSM antikoru, hastaligin tüm diger ilerleyisini önlemistir. Anti-OSM, Insan hastaliklarini animsatan bir nüksetme/yineleme modeli olan pristan ile indüklenmis artritle farelere profilaktik olarak uygulandiginda, benzer sonuçlar görülmüstür (Bkz. Plater-Zyberk C ve ark. (2001) Arthritis and Rheumatisin 44:). Osteoartrit, eklemleri etkileyen bir durumdur. Üç osteoartrit özelligi mevcuttur. Kemiklerin hatlarini olusturan güçlü, pürüzsüz yüzey olan ve eklemlerin kolayca ve sürtünmeden hareket etmesine olanak saglayan kikirdaga hasara neden olinaktadir. Eklemlerin kenari etrafinda gelisen kemik büyümesi ile sonuçlanmaktadir ve eklemlerin (sinovit) etrafinda hafif doku inflamasyonuna neden olmaktadir. OSMlnin, kikirdak kopmasi, inflamasyon ve kemik döngüsünde önemli bir rol oynadigi ve bu sekilde, bu sitokinin blokaji, hastalik patogenezinin anahtar yönlerinde bir rol oynayabildigi gösterilmistir. OSM, proteoglikan (PG) ve kolajen kaybi dahil Insan nazal kikirdaginda kolajenolizisi indükleyecek sekilde IL-l veya TNF ile sinerjik olarak hareket etmektedir, ikincisi, MMP-l ve MMF-13 indüksiyonu ile iliskilidir. lL-l içeren OSM, Insan artiküler kartusundan PG kaybini indükleyecektir, fakat kolajen kaybindaki artis önemli olmamistir. (Morgan ve ark. 2006). Eklem sitokin konsantrasyonlarini arttirmak sekilde adenoviral vektörlerini kullanan bir dizi çalisma, OSM"nin asiri ekspresyonunun, inflamasyonu, pannus olusumunu, kikirdak yikiinini ve kemik erozyonunu indükleyecegini göstermistir. (Langdon ve ark. 2000). 6162.109 Genel olarak literatür, OSM,nin, özellikle diger sitokinlerle birlestirildiginde, proteoglikan ve kolajen kopmasinda dahil olan proteazlari indükledigi açiklamaktadir, bu da kikirdak degradasyonuna ve kemik erozyonuna neden olmaktadir. Literatürden bilgilendirme, OSM molekülünün, sedef hastaligi ile iliskili inflamatuvar sürecinde bir miktarda rol oynayabildigini göstermektedir. Boifati ve arkadaslarina (1998) ait is, spontane OSM saliniminin, lezyonel olmayan psoriaktik cilde ve normal cilde kiyasla proriatik lezyonlarin ortan kültürlerinde arttirildigini göstermistir. (Kunsfeild ve ark. 2004) Keratinositler, bu moleküle yönelik reseptön'i eksprese etmektedir ve liganda karsilik olarak, bu, keratinosit migrasyonuna yol açmaktadir ve sulandirilmis epidermis kalinligini arttirmaktadir. OSM,nin gen modüle edici etkilerini, 33 farkli sitokin ile kiyaslayan mikro dizi analizi, bir önemli keratinosit aktivatörü oldugunu ve psoriatik cildin özelligi olan SlOOA7 ve ß-defensin 2 ekspresyonu gibi molekül indüksiyonunda pro-inflamatuvar sitokinlerle sinerjik olarak hareket edebildigini göstermektedir. (Gazel ve ark. 2006) Astim ve pulmoner fibroz gibi inflamatuvar akciger hastaligina dair bir OSM rolü de literatürden gösterilmektedir. Bu hastaliklar, alt epitelyal fibroblastlarin proliferasyonu ve aktivasyonu ile birlikte hücre disi matrisin (ECM) artan bir birikiini ile karakterize edilmektedir. OSM, akut akciger hasan esnasinda, özellikle pnömoni vakalarinda hastalarin bronkoalveoler lavaj sivisinda tespit edilmistir (Grenier ve ark. 200]). GSM, MS hastalarinin beyinlerinde tespit edilmistir, burada mikrogliayi, astrositleri ve filtre edici lökistlere lokalize olmaktadir (Ruprecht ve ark. 2001). Ek olarak, MS hastalarindan izole edilmis PBMCIer, OSM dahil olmak üzere, saglikli kontrollerden gelen hücrelerden daha fazla sitokin salinimi yapmaktadir ve MS hastalari, artan serumlara [OSM] dogru bir egilim göstermektedir (Ensoli ve ark. 2002). Beyinde inflamasyonun arttirilmasina ek olarak, OSM, bir Alzheimer hastaliginin, MS hastaliginin bir özelligi ve HIV hastalarinin bir alt kümesi olan nörodejenerasyona dogrudan katkida bulunabilmektedir. HIV 6162.109 hastalarindan monosit süpematantlar, siddetli nöroblast büyüme inhibisyonuna ve nöronal hücre ölümüne yol açmaktadir. Bu etkiler, kültür süpernatantinda Onkostatin M ile yönlendirilmistir (Ensoli ve ark. 1999). Bir çok HIV hastasi, nöronal hücre kaybinin yol açtigi beyin atrofisinden muzdarip oldugu için, OSM, mevcut patolojisinin bir yönlendiricisi olabilmektedir. Tamura ve arkadaslarina ait is, OSMsnin, nöropatik agrinin gelisimi ve korunmasinda dahil olabildigini göstermektedir. Bu çalismalar, OSMß reseptörünü eksprese eden nosiseptif sensör nöronlarimn bir alt kümesini ortaya çikarmistir. Tüm OSMßR+ ve nöronlar ayrica nöropatik ve intlamatuvar agri gelisimi için çok önemli oldugu gösterilen VRl ve P2X3 reseptörlerini eksprese etmistir (Jarvis ve ark. 2002, Walker ve ark. 2003). OSM -/- farenin, kimyasal, termal, Viseral ve mekanik agriya karsilik olarak azaltilmis zehir sergiledigi de gösterilmistir (Morikawa ve ark. 2004). Ilginç bir sekilde, bu hayvanlar, VRl+, P2X3+ küçük boyutlu nöronlarda bir eksiklige sahiptir, fakat baska bir sekilde hayvanlar normal görülmektedir. Kanser hücrelerinin biyolojisinin modülasyonunda OSMiyi destekleyen bir rol de literatürden gösterilmistir. OSMinin, tümör hücre dizilerini kullanan çalismalarda büyüme uyarici ve büyüme inhibitör özelliklerine sahip oldugu bildirilmistir (Grant and Begly 1999). Kaposi sarkoma türevi hücreler için (Miles ve ark. 1992) ve miyelom hücre dizileri için (Miles ve ark. 1992) önemli bir mitojendir. OSM, büyüme oranlarini azaltmaktadir ve gögüs (Douglas ve ark. 1998) ve akciger (McKormick ve ark. 2000) dahil olmak üzere bir dizi tümör hücresi dizisinde diferansiyasyonu arttirmaktadir. Fakat, OSM, büyümeyi inhibe edebilirken, en azindan bazi gögüs karsinoin hücre dizilerinde, hücre dekolmanini arttirmaktadir ve metastatik potansiyeli arttirmaktadir (Holzer ve ark. 2004, Jorcyk ve ark. bazi tümör hücre dizilerinde (Cichy ve ark. 2000) hiyalüronan reseptörünün (CD44) ekspresyon ve aktivasyon durumunu yukari regüle etmektedir. Ek olarak, 6162.109 OSM`nin anjiyojenik özellikleri ve bazi tümör hücrelerinde diger anjiyojenik faktörleri indükleyebilme kabiliyeti (Repovic ve ark. 2003), bu tümör eksprese edici OSM"de tümör anjiyogenezine katkida bulunabildigini göstermektedir. Bilimsel literatür, tümör biyolojisinde OSM tutulumunu göstermektedir, fakat karmasiklik göstermektedir. OSM nötralizasyonunun, bazi tümörlerin tedavisi için faydali olabilmesi mümkündür. Öte yandan, TNF ve IL-6 nötralizasyonuna benzer olarak, digerlerinde bazi potansiyel riskleri tasimaktadir. Literatürden elde edilen kanit, kardiyovasküler hastalikta önemli bir OSM rolü göstermektedir. OSM,nin, aterosklerotik lezyonlarda doku makrofajlarrinda bulunmaktadir (Modur ve ark. 1997) ve bir anjiyojenik faktör olarak (Vasse ve ark. 1999), damar çeperi kirilganhgina katkida bulundugu düsünülen as plaklarin neo-vaskülarizasyon özelligini arttirabilmektedir. Fakat, OSM ayrica, endotelyal hücrelerde diger anjiyojenik faktörleri eksprese etmektedir; VEGF (Wijelah ve ark. . Ilginç bir sekilde, Insan endotelyal hücreler, diger hücrelerden yaklasik 10 ila 20 kat daha büyük OSM reseptör yogunluguna sahiptir (Brown ve ark. 1991). Bu sekilde, RA ve diger hastaliklarin ve rahatsizliklarin, özellikle osteoartrit, idiopatik pulmoner fibrozis, kanser, astim, agri, kardiyovasküler ve sedef hastaligi gibi kronik inflamatuvar hastaliklarinin ve rahatsizliklarinin tedavisine terapötik bir yaklasim saglamak, mevcut bulusun bir amacidir. Özellikle, immünoglobulinleri, özellikle spesifik olarak OSMSye (örn. hOSM, özellikle bunun Bölge Ilasi) ve bu etkilesimin modülasyonuna yanit olarak hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisinde OSM ve gpl30 arasindaki etkilesimi modüle eden (örn. inhibe eden veya bloke eden) antikorlari saglamak, mevcut bulusun bir amacidir. WO99/48523 Sayili Patent Dokümaninda, inflamatuvar hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisinde OSM antagonistlerin kullanimini tarif etmektedir. Mevcut bulus, artritin bir mürin modelinde bir anti-fare OSM antikorunu 6162.109 olarak OSM°ye, özellikle hOSMiye baglanan ve OSM ve gp130 arasindaki etkilesimi modüle eden bir terapötik antikoru tarif etmektedir. Sekillerin Kisa Açiklamasi Insan gpl309a baglanmasinin inhibisyonu bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilinistir. Gösterilen veriler, dört deney tekrarindan birisinin temsilidir. Inhibisyonu Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (151310), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Serum mevcudiyetinden Insan OSM Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti- OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki deney tekrarindan birisinin temsilidir. antikorlari ile Insan gp130'a Baglanan Endojen Insan OSM Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (110), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki donörden birisinin temsilidir. Sekil 5: KB Hücre Deneyi- lOG8, 9G2, 3E3 & 2B7 ile Insan Inhibisyonunun Eksikligi. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir ticari anti-Insan LIF mAbssi (R&D Systems, MAB250), bir pozitif kontrol olarak kullanilmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. 6162.109 Inhibisyonu Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki deney tekrarindan birisinin temsilidir. kiyaslamasi Küçük kutulu kalinti, çogunluktan bir farki temsil etmektedir. Sekanslar boyunca büyük kutular, CDR'leri temsil etmektedir. kiyaslamasi Küçük kutulu kalinti, çogunluktan bir farki temsil etmektedir. Sekanslar boyunca büyük kutular, CDR,1eri temsil etmektedir. Sekil 9: Rekabetçi olmayan anti-OSM fare parental antikoru 15E10 ile kiyaslanan 10G8, 9G2, 3E3 ve 2B7"nin - Degisken Hafif Zincirlerin Sekans Analizi. Sekil 10: Rekabetçi olmayan anti-OSM fare parental antikoru 15E10 ile Analizi. Sekil 11: Dogrudan Insan OSM Baglayici ELISA - 10G8 ve 9G2,nin Insan OSM baglantisinin, 15E10 kimeralarla (15E100) ile kiyaslama. Kimeralarla Insan gp130,una baglanan Insan OSM Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 13: KB Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Kimeralari ile %25 Insan AB Serum Mevcudiyetinde Insan OSM 6162.109 Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. 9G2 Kimera antikorlari ile Insan gpl30,a Endojen Insan OSM Baglantisinin Inhibisyonu. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (lSElO), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki donörden birisinin temsilidir. 9G2 Kimeralarla Insan LIF`nin Herhangi Bir Inhibisyonu Yok. Bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikoru (15E10), kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir anti-Insan LIF antikoru MABZSO, R&D Systems), bir pozitif kontrol olarak kullanilmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 17: KB Hücre Deneyi- Insanlastirilmis 10G8 L1 ve L4 Varyantlari ile Insan OSM Inhibisyonu lSEth, kiyaslama için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. varyantlari ile Insan gp130"a Insan OSM Baglantisinin Inhibisyonu lSEth, kiyaslama için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 19: Insan OSM-10G8 mAh Baglama Kompleksi- 10G8 mAb hafif Zincir ve agir Zincirle Insan OSM baglantisi. OSM reseptörü baglayici bölgeler gösterilmektedir (Bölge Il ve Bölge lll). Reseptör baglayici bölgelerde önemli olan amino asit kalintilari, her bir bölge için listelenmektedir. Sekil 20: KB Hücre Deneyi- Insanlastirilmis lOG8 HOLl ve CDRL2 Varyantlari ile Insan OSM Inhibisyonu 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. 6162.109 Insanlastirilmis L1 ile Insan gp130,a Insan OSM Baglantisinin Inhibisyonu. 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 22: KB Hücre Deneyi - 10G8 fare parental, 10G8 Kimera, Insanlastirilmis L1 10G8 fare parental ile Insan OSM Inhibisyonu. 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 23: KB Hücre Deneyi - 10G8 fare parental, lOG8 Kimera, Insanlastirilmis Ll ile %25 Insan AB Serumu Mevcudiyetinde Insan OSM Inhibisyonu. 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, iki deney tekranndan birisinin temsilidir. Sekil 24: Endojen OSM Insan gpl30 Deneyi - lOG8 fare parental, 10G8 Kimera, Insanlastirilmis Ll ile Endojen Insan gpl30*a Insan OSM Baglantisinin Inhibisyonu. 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, dört donörüden birisinin temsilidir. Sekil 25: Insan LIF KB Hücre Deneyi - 1008 fare parental, 10G8 Kimera, Insanlastirilmis L1 ile Insan LIF°sinin Herhangi bir Inhibisyonu Yok. 15E10h, kiyaslama için eklenmistir. Bir anti-Insan LIF antikoru MAB250, R&D Systems), bir pozitif` kontrol olarak kullanilmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 26: Insan Primer Hepatosit Deneyi- (A) ?mg/ml ve (B) 10ng/ml Insan OSM ile uyarilan Insan hepatositlerinden HO(huCDRHl)Ll ile Serum Amiloid A (SAA) saliniminin inhibisyonu. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç hepatosit donöründen birisinin teinsilidir. Sekil 27: Insan Primer Hepatosit Deneyi- (A) ?mg/ml ve (B) 10ng/ml Insan 6162.109 OSM ile uyarilan Insan hepatositlerinden H0(huCDRH1)Ll ile C-Reaktif Proteinin (CRP) saliniminin inhibisyonu. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç hepatosit donöründen birisinin temsilidir. Sekil 28: Insan RA Fibroblast Benzeri Deney- (A) 0.3ng/m1 ve (B) ?mg/ml Insan OSM ile uyarilan Insan RA fibroblast benzeri sinoviyosit (HFLS-RA) hücrelerinden H0(huCDRHl)Ll ile IL-6 saliniminin inhibisyonu. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç HFLS-RA donöründen birisinin temsilidir. Sekil 29: Insan RA Fibroblast Benzeri Deney- (A) 0.3ng/m1 ve (B) 3ng/ml Insan OSM ile uyarilan Insan RA fibroblast benzeri sinoviyosit (HFLS-RA) hücrelerinden H0(huCDRH1)Ll ile MCP-1 saliniminin inhibisyonu. veriler, üç HFLS-RA donöründen birisinin temsilidir. Sekil 30: Insan Umbilikal Damar Endotelyal Hücre Deneyi- (A) 30ng/ml ve (B) lOOng/ml Insan OSM ile uyarilan Insan umbilikal damar endotelyal hücrelerinden H0(huCDRHl)Ll ile IL-6 saliniminin inhibisyonu. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veriler, üç deney tekrarindan birisinin temsilidir. Sekil 31: Insan Akciger Fibroblast Deney- Insan OSM ile uyarilan Insan akciger fibroblastindan H0(huCDRHl)L1 ile MCP-l salinimi inhibisyonu. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veri, (A) bir saglikli ve (B) bir IPF donörünün temsilidir. Sekil 32: Insan Akciger Fibroblast Deney- Insan OSM ile uyarilan Insan akciger fibroblastindan H0(huCDRH1)Ll ile IL-6 salinimi inhibisyonu. Insanlastirilmis , kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Gösterilen veri, (A) bir saglikli ve (B) bir IPF donörünün temsilidir. Sekil 33: CDRH3 varyant baglama verileri - CDRHTte bulunan kalintilarda Alanin taramasi uygulanmistir. Saglanan veriler, baglama afinitesinin, bu tarz bir kalinti gibi bir degisim ile nasil etkilendigini 6162.109 göstermektedir. Sekil 34: hOSM ve gp130, LIFR ve OSMR arasindaki etkilesimin açiklamasi. Antikorlarin terminolojisi - Süpheli 1515th ve insanlastirilmis lSElOldan kaçinilmasina yönelik olarak, ayni antikorla ilgilidir ve bazi sekillerde Antikor X ile isaretlenmektedir. Ayrica lOG8/A9 ve 10G8, ayni antikor ile ilgilidir. Bulusun Kisa Açiklamasi Örnegin spesifik olarak OSM°ye baglanan ve OSMlnin gpl30 reseptörüne baglantisini inhibe eden, fakat bölge II kalintilari ile dogrudan etkilesime geçmeyen antikorlar gibi OSM7ye baglanabilen antijen baglayici proteinler tarif edilmektedir. Mevcut bulusun OSM antikorlari, bir mürin mAb 10G8 ile iliskilidir ve bundan türetilmektedir. 10G8 mürin agir Zincirli degisken bölge amino asit sekansi, SEKAN S KIMLIK NUMARASI: 26 olarak saglanmaktadir ve 10G8 mürin hafif Zincirli degisken bölge amino asit sekansi, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 28 olarak saglanmaktadir. Mevcut bulusun agir Zincirli degisken bölgeleri (VH), asagidaki CDR"leri veya bunlarin CDRslerinin varyantlarini (Kabat (Kabat ve ark.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987) ile belirtildigi gibi) içerebilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: l,in veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77"nin CDRHI "i SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2`nin CDRH2"si SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3,ün CDRH3"ü Mevcut bulusun agir Zincirli degisken bölgeleri (VL), asagidaki CDR7leri veya 6162.109 bunlarin CDR`lerinin varyantlarini (Kabat (Kabat ve ark.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987) ile belirtildigi gibi) içerebilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4'ün CDRL1"i SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5,in veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78,in CDRL2"si SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6*nin CDRL39ü Bulus ayrica, burada açiklanan herhangi bir antikorunun bir agir zincirini kodlayan bir polinükleotid sekansini ve burada açiklanan herhangi bir antikorun bir hafif zincirini kodlayan bir polinükleotidi saglamaktadir. Bu polinükleotidler, esdeger polipeptit sekanslara tekabül eden kodlama sekansini temsil etmektedir, fakat bu polinükleotid sekanslarin, bir baslangiç kodonu, bir uygun sinyal sekansi ve bir Stop kodonu ile birlikte bir ekspresyon vektörüne klonlanabildigi anlasilacaktir. Bulus ayrica, burada açiklanan herhangi bir antijen baglayici proteinin bir agir zincirini veya bir hafif zincirini kodlayan bir veya birden fazla polinükleotidi içeren bir rekombinant dönüstürülmüs veya transfekte konak hücre saglamaktadir. Ayrica, burada açiklanan herhangi bir antijen baglayici proteinin üretimine yönelik bir yöntemdir, burada yöntem, bir birinci ve ikinci vektörü içeren bir konak hücrenin kültürlenmesi adimini içerrnektedir, söz konusu birinci vektör, burada açiklanan herhangi bir antijen baglayici proteinin bir agir zincirini kodlayan bir polinükleotidi içermektedir ve söz konusu ikinci vektör, örnegin serum içerineyen kültür ortami gibi uygun bir kültür ortaminda, burada açiklanan herhangi bir antijen baglayici proteinin bir hafif zincirini kodlayan bir polinükleotidi içermektedir. Bulus ayrica, burada açiklanan bir antikoru içeren bir farmasötik bilesimi ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyiciyi saglamaktadir. 6162.109 Bir diger yönünde, hOSM ve gp130 arasindaki etkilesim modülasyonuna karsilik olarak bir hastaligin veya rahatsizligin tedavisine veya profilaksisine yönelik bir yöntem tarif edilmektedir, burada yöntem, söz konusu hastaya, burada açiklanan antijen baglayici proteinin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içennektedir. Bu sekilde, RA ve diger hastaliklarin ve rahatsizliklarin, özellikle osteoartrit, idiopatik pulmoner fibrozis, agri, inflamatuvar akciger hastaligi, kardiyovasküler hastalik ve sedef hastaligi gibi kronik inflamatuvar hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisine terapötik bir yaklasim saglamak, mevcut bulusun bir amacidir. Özellikle, immünoglobulinleri, özellikle spesifik olarak OSM°ye (örn. hOSM, özellikle bunun Bölge II"si) ve bu etkilesimin modülasyonuna yanit olarak hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisinde GSM ve gp130 arasindaki etkilesimi modüle eden (örn. inhibe eden veya bloke eden) antikorlari saglamak, mevcut bulusun bir amacidir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, bir inflamatuvar hastaligi veya rahatsizligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasina yönelik adimi içermektedir. Bir diger yönünde, bir antikorun insanlastirilmasina yönelik bir yöntem tarif edilmektedir, burada yöntem sunlari içeimektedir: bir hedef antijene baglanan bir Insan antikorun elde edilmesi, antikor-antijen ko-kristalinin kristalografik yapisinin elde edilmesi, kristal yapisindan yaklasik 2 ila 5Ä°ya kadar, antijene baglanmada dogrudan dahil edilen Insan olmayan antikor kalintilarinin belirlenmesi, bir Insan sekansindan türetilen bir kalintiya baglantida dahil edilmeyen bir veya birden fazla kalintinin mutasyona ugratilinasi ve söz konusu antikorun geri kazanilmasi. Bulusun Ayrintili Açiklamasi OSM'ye spesifik olarak baglanan, örnegin spesifik olarak OSM`ye baglanan 6162.109 (hOSM) ve OSM,nin gp130 reseptörüne baglantisini inhibe eden, fakat dogrudan bölge II kalintisi ile etkilesime geçmeyen bir antijen baglama proteini tarif edilmektedir. Burada açiklanan bir diger yönünde, antijen baglayici protein, dogrudan Burada açiklandigi üzere bir diger yönünde, spesifik olarak OSM'ye baglanan, spesifik olarak Insan OSM,ye (hOSM) baglanan ve gpl30 reseptörüne OSM baglantisini inhibe eden ve bir veya birden fazla hu OSM kalintisi (82, 83, 84, 90, saglanmaktadir. Bu tarz bir yönde, spesifik olarak OSM°ye baglanan, spesifik olarak Insan OSM°ye (hOSM) baglanan ve gpl30 reseptörüne OSM baglantisini inhibe eden, fakat bölge ll kalintilari ile dogrudan etkilesime geçmeyen ve bir rekabet ELISA deneyinde SEKANS KIMLIK NUMARASI: 79"un bir agir zincirine ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 80"in bir hafif zincirine sahip olan bir antikorla rekabete girmeyen bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir. Bu tarz bir yönde, basvuru, burada açiklandigi üzere, OSM`nin örnegin, Insan OSMlye baglanmasina yönelik antijen baglayici protein ile rekabet eden bir antij en baglayici proteini tarif` etmektedir. Bir diger yönünde, bulusa göre antikor, örnegin Biacore tarafindan ölçüldügünde yüksek afiniteli Insan OSMiye baglanmaktadir, antijen baglayici protein, 500pM veya daha az afiniteli veya 400pM veya daha az afiniteli veya 300pM veya daha az afiniteli veya 250pM veya daha az afiniteli veya 200pM veya daha az afiniteli veya örnegin 140pM veya daha az afiniteli Insan OSMiye baglanmaktadir. Bir diger yapilandirmada, antijen baglayici protein, yaklasik 100 pM ila yaklasik 500 pM arasinda veya yaklasik 100 pM ila yaklasik 300 pM arasinda veya yaklasik 6162.109 arasinda Biacore ile ölçüldügünde Insan OSM°ye baglanmaktadir. Mevcut bulusun bir yapilandirmasinda, antijen baglayici protein, 250 pinsden daha az bir afinite ile OSM,ye baglanmaktadir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, antijen baglayici protein, 140pmiden daha az bir afinite ile OSM,ye baglanmaktadir. Bu tarz bir yapilandirmada, bu, Örnek 1.2.2,de belirlendigi gibi Biacore ile ölçülmektedir. Bir diger yönünde, mevcut bulusun antikorlari, örnegin çözelti bazli Kinexa yöntemi ile ölçüldügünde yüksek afiniteli Insan OSM°ye baglanmaktadir, antijen baglayici protein, 200pM veya daha az afiniteli veya 150pM veya daha az afiniteli veya IOOpM veya daha az atiniteli veya 50pM veya daha az afiniteli veya örnegin 40 pM veya daha az afiniteli Insan OSM°ye baglanmaktadir. Bir diger yapilandirmada, antijen baglayici protein, yaklasik 10 pM ve yaklasik 200 pM veya yaklasik 10 pM ila yaklasik 150 pM arasinda veya yaklasik 10 pM ve yaklasik 100 pM arasinda veya yaklasik 10 pM ila yaklasik 70 pM arasinda veya yaklasik 10 pM ve yaklasik 40 pM arasinda arasinda Kinexa ile ölçüldügünde Insan OSMiye baglanmaktadir. Mevcut bulusun bir yapilandirmasinda, Antijen baglayici protein, 70pm"den daha az bir afinite ile OSM"ye baglanmaktadir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, antijen baglayici protein, 40pm,den daha az bir afinite ile OSM,ye baglanmaktadir. Bu tarz bir yapilandirmada, bu, Örnek 1.2.2,de belirlendigi gibi Kinexa ile ölçülmektedir. Bir diger yönünde, bulusun antikorlari, Insan OSM"ye baglanmaktadir ve bir hücre nötralizasyon deneyinde OSM,yi nötralize etmektedir, burada antijen baglayici protein, yaklasik 10 pM ila yaklasik 200 pM arasinda veya yaklasik 10 pM ila yaklasik 150 pM arasinda veya yaklasik 10 pM ila yaklasik 100 pM arasinda veya yaklasik 20 pM ve yaklasik 100 pM arasinda veya yaklasik 20 pM ve yaklasik 100 pM arasinda bir IC50"ye sahiptir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, antijen baglayici protein OSMiye baglanmaktadir ve bir hücre 6162.109 nötralizasyon deneyinde OSM°yi nötralize etmektedir, burada antijen baglayici protein, 140 pm'den daha az bir afinite ile yaklasik 20pM bir IC50"ye sahiptir. Bu tarz bir yapilandirmada, bu, Örnek 2 bölüm 2.2.1 *de belirlendigi gibi bir hücre nötralize etme deneyi ile ölçülmektedir. SEKANS KIMLIK NUMARASI: 39ün CDRH3,ünü veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3,ün bir varyantini içeren antijen baglayici proteinler tarif edilmektedir, burada CDRH3, asagidaki bir veya birden fazla konumda (Kabat Numaralandirmasi kullanilarak) asagidaki belirlenen alternatif amino asitler ile ikame edilmektedir: 6162.109 Konum 95, Ala, Glu, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr veya Val için ikame edilmektedir Konum 96, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Ser, Thr, Trp veya Tyr için ikame edilmektedir Konum 97, Ala, Cys, Phe, Met veya Ser için ikame edilmektedir Konum 98, Ala, Asp, Phe, Gly, Leu, Pro, Gln veya Trp için ikame edilmektedir Konum 99, Ala, Cys, Pro, Ser, Val veya Tyr için ikame edilmektedir Konum 100B, Glu için ikame edilmektedir Konum lOOC, Ala, Glu, Phe, Gly, Val veya Trp için ikame edilmektedir Konum 100D, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Leu, Ser, Thr, Val, Trp veya Tyr için ikame edilmektedir Konum lOl , Glu, Gly, Ser, Thr veya Val için ikame edilmektedir Konum 102, Ala, Phe, Gly, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser Tyr, His, Ile, Asp veya Trp için ikame edilmektedir Asagidakileri içeren antij en bagalyici protein tarif edilmektedir: i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3"te belirtilen CDRH3 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3,ün bir varyanti, burada Val 102, Tyr, His, Ile, Ser, Asp veya Gly için ikame edilmektedir ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2"de belirtilen CDRH2 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2'nin bir varyanti, burada Thr50, Gly, Tyr, Phe, Ile, Glu veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Ile5l, Leu, Val, Thr, Ser veya Asn için ikame edilmektedir ve/Veya Ser52, Phe, Trp veya His için ikame edilmektedir ve/veya Gly53, Asp, Ser veya Asn için ikame edilmektedir ve/veya Gly54, Ser için ikame edilmektedir ve/veya Phe56, Ser, Tyr, Thr, Asn, Asp veya Arg için ikame edilmektedir ve/veya Tyr58, Gly, His, Phe, Asp veya Asn için ikame edilmektedir. iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 47te belirtilen CDLR] veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4`ün bir varyanti, burada Ser27A, Asn, Asp, Thr veya Glu için ikame edilmektedir ve/veya Ser27C, Asp, Leu, Tyr, Val, Ile, Asn, Phe, His, Gly veya Thr için ikame edilmektedir ve/veya Asn 31, Ser, Thr, Lys veya Gly için ikame edilmektedir ve/veya Phe32, Tyr, Asn, Ala, His, Ser veya Arg için ikame edilmektedir ve/Veya Met 33 Leu, Val, Ile veya Phe için ikame edilmektedir. iv) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6lda belirtilen CDRL3 veya SEKANS KIMLIK 6162.109 NUMARASI: 6"nin bir varyanti, burada Leu89, Gln, Ser, Gly veya Phe için ikame edilmektedir ve/veya His90, Gln veya Asn için ikame edilmektedir, Ser 91, Asn, Phe, Gly, Arg, Asp, His, Thr, Tyr veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Glu93, Asn, Gly, His, Thr, Ser, Ar veya Ala için ikame edilmektedir ve/Veya Phe96, Pro, Leu, Tyr, Arg, Ile veya Trp için ikame edilmektedir. Bir diger yönünde, antij en baglayici protein ayrica asagidakileri içennektedir: V) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5"te veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 783te belirtilen CDRL2 Bir diger yönünde, antijen baglayici protein ayrica asagidakileri içermektedir: vi) SEKANS KIMLIK NUMARASI: lide veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77"de belirtilen CDRH] veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 7"nin bir varyanti burada Tyr 32, Ile, His, Phe, Thr, Asn, Cys, Glu veya Asp için ikame edilmektedir ve/Veya Ala 33, Tyr, Trp, Gly, Thr, Leu veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Met 34, Ile, Val veya Trp için ikame edilmektedir ve/veya Ser 35, His, Glu, Asn, Gln, Tyr veya Thr için ikame edilmektedir. CDR'nin L1, L2, L3, HI ve H2,nin varyant CDR sekanslari, mutagenez ve/Veya kanonik teknolojisi kullanilarak belirlenmistir. Tamamlayicilik belirleyici bölgeler (CDRSler) L1, L2, L3, HI ve H2), yapisal olarak sinirli sayida ana zincir uyusumundan birini sergileme egilimindedir. Bir CDR"nin özel kanonik yapi sinifi, CDR uzunlugu ile ve döngü paketleme ile belirlenmektedir, CDR"lerde ve çerçeve bölgelerinde (yapisal olarak belirleyici kalintilar veya SDRller) ana konumlara yerlestirilen kalintilar ile belirlenmektedir. Martin ve Thomton otomatik yöntemi olustunnustur. Küme analizi, CDR'lerin kümelerinin kanonik siniflari belirleyecek kullanilmaktadir ve kanonik sablonlar daha sonrasinda gömülü hidrofobikler, hidrojen baglayici kalintilar ve korunmus glisinler ve prolinlerin analiz edilmesi ile tanimlanmaktadir. Antikor sekanslarinin CDR31eri, anahtar kalinti sablonlari ile sekanslarin kiyaslanmasi ve özdes veya benzer matrisler kullanilarak her bir sablonun skorlanmasi ile kanonik siniflara atanabilmektedir. 6162.109 Bir yönünde, bulus, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3°ün CDR H3"ünü içeren: CDRHZ: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2: CDRLl: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77°nin CDR Hl"ini içerebilen ve CDRL2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI 78, bir antikoru saglamaktadir. Bir yönünde, bulus, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 37ün CDR H37ünü içerrnektedir: CDRH2: SEKANS KIMLIK NUMARASI; 2: CDRLI: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4: CDRL2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3,ün CDR H3"ünü: CDRHZ: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: Isin CDR Hl7ini içermektedir: CDRLI: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4: CDRLZ: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6. Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3"ün CDR H3"ünü: CDRH2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2: SEKANS KIMLIK NUMARASI; Pin CDR Hl'ini içermektedir: CDRL1: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4; CDRL2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6. Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3,ün CDR H3,ünü: CDRH2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77Inin CDR Hl'ini içerinektedir: CDRLl: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4: CDRLZ: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6. Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3°ün CDR H3"ünü: CDRH2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77"nin CDR Hirini içermektedir: CDRLI: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4; CDRL2: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78 ve CDRL3: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6. Mevcut bulusun bir yönünde, antijen baglayici protein, OSM ile CDR HI vasitasiyla dogrudan etkilesime geçmemektedir. 6162.109 Bir yönünde, antijen baglayici protein, OSM ile CDR H] veya CDR L2 vasitasiyla dolayli Mevcut basvuruda açiklanan antijen baglayici proteinler, bir dogal antikorun yapisina veya islevsel fragmanina veya bunlarin esdegerine sekillendirilen agir Zincirli degisken bölgeleri ve hafif Zincirli degisken bölgeleri içerebilmektedir. Bir antijen baglayici protein bu sekilde bir uygun hafif zincir ile eslestirildiginde, bir tam uzunlukta antikora, bir (Fab")2 fragmanina, bir Fab fragmanina veya bunlarin esdegerine (örnegin scFv, bi-, tri- veya tetra-korlar, Tandablar ve benzeri) sekillendirilen VH bölgelerini içermektedir. Mevcut bulusun antikorlari, IgGl, varyanti olabilmektedir. Antikor agirlik zincirinin sabit alani bu sekilde seçilebilmektedir. Hafif Zincirli sabit alan, bir kappa veya lambda sabit alani olabilmektedir. Dahasi, antijen baglayici protein, örnegin artik Fc reseptörlerine baglanmayan veya Clq baglantisini yönlendiren Fc mutantlari olan lgG dimerleri gibi tüm siniflarin modifikasyonlarini içerebilmektedir. Antijen baglayici protein ayrica bir antijen baglayici bölgeyi ve bir immünoglobulin olmayan bölgeyi içeren W086/01533 Sayili Patent Dokümaninda açiklanan türde bir kimerik antikor olabilmektedir. Sabit bölge, gerekli herhangi bir islevsellige göre seçilmektedir. Bir IgGl, komplemana baglanti vasitasiyla litik kabiliyetini sergileyebilmektedir ve/veya ADCCiyi (antikora bagimli hücre sitotoksisitesi) yönlendirecektir. Bir IgG4, bir sitotoksik olmayan bloke edici antikorun gerekmesi halinde kullanilabilmektedir. Fakat, lgG4 antikorlari, üretimde instabilite sergileyebilmektedir ve bu sekilde, alternatif, genellikle daha stabil olan IgGl°i modifiye etmektir. Önerilen modifikasyonlar, EP0307434 Sayili Patent Dokümaninda açiklanmaktadir, Örnegin 235 ve 237 konumlarindaki mutasyonlar. Bu sekilde, örnegin bulusa göre bir antikor olan bir antijen baglayici proteinin bir litik veya bir litik olmayan formu tarif edilmektedir. Belirli formlarda, bulusun antikoru, burada açiklanan herhangi bir agir Zincirli degisken bölgeye sahip olan bir tam uzunlukta (örn. H2L2 tetramer) litik veya litik olmayan IgGl antikordur. Tarif edilen antijen baglayici proteinler, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 26'da ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 28"de açiklandigi gibi çesitli bölgelere sahip olan mürin antikorun veya bunlarin siçan, Insan, kimerik veya insanlastirilmis varyantlari gibi bunlarin esdegerlerinden türetilmektedir, örnegin SEKANS KIMLIK NUMARASI: 54 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 62ide açiklandigi gibi agir ve hafif zincirlere sahip olan 6162.109 insanlastirilmis antikordan türetilmektedir. Bir yönünde, asagidakilerden herhangi birisinden seçilen bir izole agir zincirli degisken alani içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 54, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 56, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 58 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 74. Bir diger yönünde, asagidakilerden herhangi birisinden seçilen bir izole hafif Zincirli degisken alani içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 62, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 64, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 66 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 68. Bir diger yönünde, asagidakilerden herhangi birisinden seçilen bir izole agir zincirli degisken alani içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 54, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 56, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 58 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 74 ve asagidakilerden herhangi birisinden seçilen bir izole hafif zincirli degisken alani içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 62, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 64, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 66 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 68. Basvurunun bir diger yapilandirmasinda, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 54`ün bir izole agir zincirli degisken alani ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 62,nin bir izole hafif zincirli degisken alanini içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir. Burada açiklanan bulusun bir diger yapilandirmasinda, antijen baglayici proteini, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 74,ün bir agir zincirli degisken bölgesini ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 62"nin bir hafif zincirli degisken bölgesini içermektedir. Ayrica SEKANS KIMLIK NUMARASI: 53 ile kodlanmis bir agir zincirli degisken bölgesini ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 61 ile kodlanmis bir hafif zincirli degisken bölgesini içeren bir antij en baglayici proteini tarif edilmektedir. Ayrica SEKANS KIMLIK NUMARASI: 73 ile kodlanmis bir agir zincirli degisken bölgesini ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 61 ile kodlanmis bir hafif zincirli degisken bölgesini içeren bir antij en baglayici proteini saglanmaktadir. Bir yönünde, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 53, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 55, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 57 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 73°ü içeren bir izole degisken agir zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid 6162.109 saglanmaktadir. Bir yönünde, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 61, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 63, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 65 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 67,yi içeren bir izole degisken hafif Zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid saglanmaktadir. Bir diger yönünde Bir yönünde, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 53 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 73,ü içeren bir izole degisken agir Zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: 61, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 63 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 65 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 673yi içeren bir izole degisken hafif zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid saglanmaktadir. Bir diger yönünde, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 53 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 73°ü içeren bir izole degisken agir Zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid ve SEKANS KIMLIK NUMARASI: ölii içeren bir izole degisken hafif zincirli söz konusu polinükleotidi kodlayan bir polinükleotid saglanmaktadir. Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, burada açiklandigi gibi herhangi bir hafif Zincirli kombinasyon halinde burada açiklanan herhangi bir degisken agir zinciri içerebilmektedir. Bir yönünde, antijen baglayici proteini, burada açiklanan bulusa göre bir veya birden fazla CDR"yi veya burada açiklanan bulusa göre bir agir veya hafif Zincirli degisken alani veya her ikisini içeren bir antikordur. Bir yapilandirmada, antikor, primat OSM°ye baglanmaktadir. Bu tarz bir yapilandirmada, antikor ilave olarak, örnegin sinomolgus makak fare OSM,si gibi Insan olmayan primat OSMIye baglanmaktadir. Bir diger yapilandirmada, antikor, marmoset OSM"ye baglanmaktadir. Bir yönde, Biacore veya Kinexa ile ölçüldügünde lnM'den daha güçlü bir afiniteli Marmoset ve Insan OSM'ye baglanan bir antikor saglanmaktadir. Bu antikorlarin, marmoset OSMayi nötralize edebilme kabiliyeti, MSinin EAE modeli gibi marmoset hastalik modellerinde, örnegin ilave endikasyonlarda OSM rolünü degerlendirmek için benzersiz bir araci saglamaktadir. Bir diger yönünde, antijen baglayici protein, bir dAb, Fab, Fab,, F(ab,)2, FV, diakor, triakor, tetrakor, miniantikor ve bir minikordan olusan gruptan seçilmektedir. Mevcut bulusun bir yönünde, antijen baglayici protein, bir insanlastirilmis veya kimerik antikordur. Bir diger yönünde, antikor insanlastirilmistir. Bir yönünde, antikor, bir monoklonal antikordur. 6162.109 Bulusun bir yönünde, bu sekilde spesifik olarak OSMiye baglanan ve gpl30 reseptörüne baglantisini inhibe eden, fakat bölge lliin kalintilari ile dogrudan etkilesime geçmeyen bir antikor saglanmaktadir ve burada antikor, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 33ün CDRH3,ü veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3iün bir varyantini içerrnektedir, burada Konum 98, Leu için ikame edilmektedir ve burada antikor asagidakileri içennektedir: i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2'de belirtilen CDRH2 ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4'te belirtilen CORL 1 ve iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6ida belirtilen CDRL3 ve burada antikor, Biacore veya kinexa ile ölçüldügünde l nMiden daha güçlü bir atiniteli Marmoset ve Insan OSMaye baglanmaktadir. Mevcut basvuru ayrica, bir yönünde antijen baglayici proteinin asagidakileri içerdigi tarif edilmektedir: i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3"te belirtilen CDRH3 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 39ün bir varyanti burada CDRH3, asagidaki bir veya birden fazla konumda (Kabat Numaralandirmasi kullanilarak) asagida belirlenen alternatif amino asitler ile ikame edilmektedir: Konum 95, Ala, Glu, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gin, Ser, Thr veya Val için ikame edilmektedir Konum 96, Ala, Cys, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Ser, Thr, Trp veya Tyr için ikame edilmektedir Konum 97, Ala, Cys, Phe, Met veya Ser için ikame edilmektedir Konum 98, Ala, Asp, Phe, Gly, Leu, Pro, Gin veya Trp için ikame edilmektedir Konum 99, Ala, Cys, Pro, Ser, Val veya Tyr için ikame edilmektedir Konum lOOB, Glu için ikame edilmektedir Konum lOOC, Ala, Glu, Phe, Gly, Val veya Trp için ikame edilmektedir Konum lOOD, Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Leu, Ser, Thr, Val, Trp veya Tyr için ikame edilmektedir 6162.109 Konum 101, Glu, Gly, Ser, Thr veya Val için ikame edilmektedir Konum 102, Ala, Phe, Gly, Leu, Pro, Gln, Arg, Ser Tyr, His, Ile, Asp veya Trp için ikame edilmektedir ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77'de belirtilen CDRHI veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77'nin bir varyanti, burada Tyr 32, Ile, His, Phe, Thr, Asn, Cys, Glu veya Asp için ikame edilmektedir ve/veya Ala 33, Tyr, Trp, Gly, Thr, Leu veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Met 34, Ile, VaI veya Trp için ikame edilmektedir ve Ser 35, His, Glu, Asn, Gln, Tyr veya Thr için ikame edilmektedir. iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2,de belirtilen CDRH2 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2'nin bir varyanti, burada Thr50, Gly, Tyr, Phe, Ile, Glu veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Ile51, Leu, Val, Thr, Ser veya Asn için ikame edilmektedir ve/veya Ser52, Phe, Trp veya His için ikame edilmektedir ve/veya Gly53, Asp, Ser veya Asn için ikame edilmektedir ve/veya Gly54, Ser için ikame edilmektedir ve/veya Phe 56, Ser, Tyr, Thr, Asn, Asp veya Arg için ikame edilmektedir ve/veya Tyr58, Gly, His, Phe, Asp veya Asn için ikame edilmektedir. iv) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 47te belirtilen CDRLI veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4,ün bir varyanti, burada Ser27A, Asn, Asp, Thr veya Glu için ikame edilmektedir ve/Veya Ser27C, Asp, Leu, Tyr, Val, Ile, Asn, Phe, His, Gly veya Thr için ikame edilmektedir ve/Veya Asn 31, Ser, Thr, Lys veya Gly için ikame edilmektedir ve/veya Phe32, Tyr, Asn, Ala, His, Ser veya Arg için ikame edilmektedir ve/veya Met 33, Leu, Val, Ile veya Phe için ikame edilmektedir. V) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5"te veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78"te belirtilen CDRL2 vi) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6,da belirtilen CDRL3 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6"nin bir varyanti, burada Leu89, Gln, Ser, Gly veya Phe için ikame edilmektedir ve/veya His90, Gln veya Asn için ikame edilmektedir, Ser 91, Asn, Phe, Gly, Arg, Asp, His, Thr, Tyr veya Val için ikame edilmektedir ve/veya Arg92, Asn, Tyr, Trp, Thr, Ser, Gln, His, ala veya Asp için ikame edilmektedir ve/veya Glu93, Asn, Gly, His, Thr, Ser, Ar veya Ala için ikame edilmektedir ve/Veya Phe96, Pro, Leu, Tyr, Arg, Ile veya Trp için ikame edilmektedir. vii) agir Zincirli çerçeve, asagidaki kalintilari içermektedir: 6162.109 Konum 2 Val, lle veya Gly, Konum 4 Leu veya Val Konum 20 Leu, Ile, Met veya Val Konum 22 Cys Konum 24 Thr, Ala, Val, Gly veya Ser Konum 26 Gly Konum 29 Ile, Phe, Leu veya Ser Konum 36 Trp Konum 47 Trp Konum 48 Ile, met, Val veya Leu Konum 69 Ile, Leu, Phe, Met veya Val Konum 71 Arg Konum 78 Ala, Leu, Val, Tyr veya Phe Konum 80 Leu, Met, Konum 90 Tyr veya Phe Konum 92 Cys Konum 94 Arg, Lys, Gly, Ser, His veya Asn Mevcut bulus ayrica, bir yönünde antijen baglayici proteinin asagidakileri içermesini saglamaktadirz i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 39te belirtilen CDRH3 ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: ?de veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77Ide belirtilen CDRHl iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 2"de belirtilen CDRH2 iv) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4,te belirtilen CDRLl v) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78Ide belirtilen CDRL2 vi) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6"da belirtilen CDRL3 Vii) agir Zincirli çerçeve, asagidaki kalintilari içermektedir: Konum 2 Val, Ile veya Gly, Konum 4 Leu veya Val Konum 20 Leu, Ile, Met veya Val 6162.109 Konum 22 Cys Konum 24 Thr, Ala, Val, Gly veya Ser Konum 26 Gly Konum 29 Ile, Phe, Leu veya Ser Konum 36 Trp Konum 47 Trp Konum 48 Ile, met, Val veya Leu Konum 69 Ile, Leu, Phe, Met veya Val Konum 71 Arg Konum 78 Ala, Leu, Val, Tyr veya Phe Konum 80 Leu, Met, Konum 90 Tyr veya Phe Konum 92 Cys Konum 94 Arg, Lys, Gly, Ser, His veya Asn Mevcut bulus ayrica, bir yönünde antijen baglayici proteinin asagidakileri içermesini saglamaktadir: i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 35te belirtilen CDRH3 ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1,de veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77'de belirtilen CDRHI iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 25de belirtilen CDRH2 iv) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4'te belirtilen CDRLl v) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78"de belirtilen CDRL2 vi) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6`da belirtilen CDRL3 vii) agir Zincirli çerçeve, asagidaki kalintilari içermektedir: KonumZVal Konum4Leu Konum 20 Leu Konum 22 Cys Konum 24 Ala Konum 26 Gly 6162.109 Konum 29 Phe Konum 36 Trp Konum 47 Trp Konum 48 Val Konum 69 Ile Konum 71 Arg Konum 78 Leu Konum 80 Leu Konum 90 Tyr Konum 92 Cys Konum 94 Arg Mevcut bulus ayrica, bir yönünde antijen baglayici proteinin asagidakileri içermesini saglamaktadir: i) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 33te belirtilen CDRH3 ii) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 1"de veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 77"de belirtilen CDRHl iii) SEKANS KIMLIK NUMARASI; 2"de belirtilen CDRH2 iv) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 4"te belirtilen CDRLl v) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 5 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 78de belirtilen CDRL2 vi) SEKANS KIMLIK NUMARASI: 6'da belirtilen CDRL3 Vii) agir Zincirli çerçeve, asagidaki kalintilari içermektedir: Konum 2 Val Konum 4 Leu Konum 20 Leu Konum 22 Cys Konum 24 Ala Konum 26 Gly Konum 29 Phe Konum 36 Trp Konum 47 Trp 6162.109 Konum 48 Leu Konum 69 Ile, Leu, Phe, Met veya Val Konum 71 Arg Konum 78 Ala Konum 80 Leu, Met, Konum 90 Tyr veya Phe Konum 92 Cys Konum 94 Arg, Lys, Gly, Ser, His veya Asn Mevcut bulusun antijen baglayici proteinleri, örnegin antikorlari, bulusun antijen baglayici proteinine yönelik kodlayici sekansi içeren bir ekspresyon vektörü ile bir konak hücrenin transfeksiyonu vasitasiyla üretilebilmektedir. Bir ekspresyon vektörü veya rekombinant plazmid, bir konak hücrede replikasyonu ve ekspresyonu ve/veya bir konak hücreden salgiyi kontrol edebilen geleneksel düzenleyici kontrol sekanslari ile islevsel bir iliskide antijen baglayici proteinin bu kodlayici sekanslarini yerlestirerek üretilmektedir. Düzenleyici sekanslar, örnegin CMV promoteri gibi promoter sekanslari ve diger bilinen antikorlardan türetilebilen sinyal sekanslarini içennektedir. Benzer bir sekilde, bir tamamlayici antijen baglayici protein hafif veya agir zinciri kodlayan bir DNA sekansina sahip olan bir ikinci ekspresyon vektörü üretilebilmektedir. Belirli yapilandirmalarda, bu ikinci ekspresyon vektörü, her bir polipeptit zincirin islevsel olarak eksprese edilmesini mümkün oldugunca temin edecek sekilde kodlama sekanslarin ve seçilebilir isaretleyicilerin söz konusu olmasi haricinde birinci ile özdestir. Alternatif olarak, antijen baglayici proteinin agir ve hafif Zincirli kodlama sekanslari, tek bir vektörde bulunabilmektedir. Bir seçilmis konak hücre, rekombinant veya sentetik hafif ve agir Zincirlerini içeren bulusun transfekte konak hücresini olusturinak üzere birinci ve ikinci vektörleri içeren geleneksel tekniklerle birlikte transfekte edilmektedir (veya basit bir sekilde tek bir vektör ile transfekte edilmektedir). Daha sonrasinda, transfekte hücre, bulusun tasarlanmis antikorlarini üretmek için geleneksel tekniklerle kültürlenmektedir. Rekombinant agir ve/veya hafif zincirin birlesimini içeren antikorlar, ELISA veya RIA gibi uygun deney ile kültürden görüntülenmektedir. Benzer geleneksel teknikler, diger antijen baglayici proteinleri olusturacak sekilde kullanilabilmektedir. Mevcut bulusun yöntemlerinde ve bilesimlerinin yapisinda kullanilan klonlama ve alt klonlama adimlari için uygun vektörler, teknikte uzman bir kisi tarafindan seçilebilmektedir. Örnegin, klonlama vektörlerinin geleneksel pUC serisi kullanilabilmektedir. Bir vektör, 6162.109 pUCl9, Amershain (Buckinghamshire, Birlesik Krallik) veya Pharrnacia (Uppsala, Isveç) gibi tedarikçi firmalardan ticari olarak temin edilebilmektedir. Ilave olarak, hali hazirda kopyalanabilen, çok sayida klonlama bölgesine ve seçilebilir genlere (öm. antibiyotik direnç) sahip olan ve kolayca manipüle edilen herhangi bir vektör, klonlama için kullanilabilmektedir. Bu sebepten ötürü, klonlama vektörünün seçimi, mevcut bulusta kisitlayici bir faktör degildir. Ekspresyon vektörleri ayrica, örnegin memeli dihidrofolat redüktaz gen (DHFR) gibi heterolog DNA sekanslarinin ekspresyonunun güçlendirilmesi için uygun genler ile karakterize edilebilmektedir. Diger vektör sekanslari, bovin büyüme hormonu (BGH) ve betaglobin proinoter sekansi (betaglopro) gibi bir poli A sinyal sekansini içermektedir. Burada kullanisli ekspresyon vektörleri, teknikte uzman kisiler tarafindan iyi bilinen teknikler ile sentezlenebilmektedir. Replikonlar, seçim genleri, gelistiriciler, promoterler, sinyal sekanslari ve benzeri gibi bu tarz vektörlerin bilesenleri, ticari veya dogal kaynaklardan elde edilebilmektedir veya bir seçilmis konakta rekombinant DNA ürününün ekspresyonunun ve/veya salgisinin yönlendirilmesinde kullanim için bilinen prosedürler ile sentezlenebilmektedir. Memeli, bakteri, böcek, maya ve mantar ekspresyonu için teknikte bilinen sayisiz türde diger uygun ekspresyon vektörleri de bu amaca yönelik olarak seçilebilmektedir. Mevcut bulus ayrica, mevcut bulusun antijen baglayici proteinlerin kodlama sekanslarini içeren bir rekoinbinant plazmid ile transfekte olan bir hücre dizisini kapsamaktadir. Bu klonlama vektörlerinin klonlama ve diger manipülasyonlari için kullanisli konak hücreleri de gelenekseldir. Fakat, E. coli,nin çesitli suslarindan hücreler, klonlama vektörlerinin replikasyonu ve mevcut bulusun antikorlarinin yapisinda diger adimlar için kullanilabilmektedir. Bulusun antijen baglayici proteinlerinin ekspresyonu için uygun konak hücreleri veya hücre dizileri, NSO, Sp2/O, CHO (eg. DG44), COS, HEK, bir fibroblast hücresi (örn. 3T3) ve miyeloin hücreleri gibi memeli hücreleri içermektedir, örnegin bir CHO veya bir miyelom hücrede eksprese edilebilmektedir. Insan hücreler kullanilabilmektedir, bu sekilde molekülün, Insan glikosilasyon modelleri ile modifiye edilmesini mümkün kilmaktadir. Alternatif olarak, diger ökaryotik hücre dizileri kullanilabilmektedir. Uygun memeli konak hücrelerin seçimi ve dönüsüm, kültür, amplifikasyon, görüntüleme ve ürün üretim ve saflastirma yöntemleri teknikte bilinmektedir. Bkz. örn. yukarida alinti yapilan Sambrook ve ark. Bakteriyel hücreler, mevcut bulusun rekombinant F ab"lerinin ekspresyonu veya diger yapilandirmalari için uygun konak hücreler olarak fayda saglayabilmektedir (bkz. öm. 6162.109 edilen proteinlerin bir katlanmamis veya uygunsuz bir sekilde katlanmis formda veya glikosile olinayan bir formda olmasi egiliminden dolayi, bakteriyel bir hücrede üretilen herhangi bir rekombinant Fab"nin antijen baglayici kabiliyetin tutulmasi için görüntülenmesi gerekecektir. Bakteriyel hücre ile eksprese edilen molekülün, uygun bir sekilde katlanmis formda üretilmesi halinde, bu bakteriyel hücre, bir arzu edilebilir konak olacaktir veya alternatif yapilandirmalarda, molekül, bakteriyel konakta eksprese edilebilinektedir ve daha sonrasinda yeniden katlanabilmektedir. Örnegin, ekspresyon için kullanilan çesitli E.coli suslari, biyoteknoloji alaninda konak hücreleri olarak iyi bilinmektedir. Çesitli B. subtilis, Streptomiçes, diger basil ve benzeri suslar da mevcut yöntemde kullanilabilmektedir. Arzu edildigi zaman, teknikte uzman kisiler tarafindan bilinen maya hücrelerinin suslari da konak hücreler ve ayrica Drozofila ve Lepidoptera gibi böcek hücreleri ve viral ekspresyon sistemler olarak mevcut olmaktadir. Bkz. örn. Miller ve ark., Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986) ve burada alinti yapilan referanslar. Vektörlerin olusturulabildigi genel yöntemler, bulusun konak hücrelerini üretmesi için gerekli olan transfeksiyon yöntemleri ve bu konak hücresinden bulusun antikorlarini üretmesi için gerekli kültür yöntemleri, tüm geleneksel teknikler olabilmektedir. Tipik olarak, mevcut bulusun kültür yöntemi, genel olarak süspansiyonda serum içermeyen hücrelerin kültürlenmesi ile bir serum içermeyen kültür yöntemidir. Benzer bir sekilde, üretildiginde, bulusun antikorlari, amonyum sülfat çökelmesi, afinite kolonlari, kolon kromatografisi, jel elektroforezi ve benzerleri dahil teknigin standart prosedürlerine göre hücre kültürü içeriklerinden saflastirilabilmektedir. Bu tarz teknikler, teknikte uzman kisi tarafindan bilinmektedir ve mevcut bulusu kisitlamamaktadir. Örnegin, degistirilmis antikorlarin Mevcut bulusun antikorlarin ekspresyonunun diger yöntemi, U.S. 4,873,316 Sayili Patent Doküinaninda açiklandigi gibi bir transjenik hayvanda ekspresyonu kullanabilmektedir. Bu, bir memeliye transjenik olarak verildiginde, disinin, sütünde arzu edilen rekoinbinant proteinini üretmesine izin veren hayvansal kazein promoterini kullanan bir ekspresyon sistemi ile ilgilidir. Bulusun bir diger yapilandirmasinda, bulusun bir antikorunun üretimine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem bulusun hafif ve/veya agir zincirini kodlayan bir vektörle dönüstürülen veya transfekte edilen bir konak hücresinin kültürlenmesi ve burada üretilen antikorun geri kazanilmasini içermektedir. Mevcut bulusun bir anti-OSM antikorunun üretimine yönelik olan, insan OSM aktivitesine 6162.109 baglanan ve bu aktiviteyi nötralize eden bir yöntein tarif edilmektedir, yöntem asagidaki adimlari içerrnektedir; (a) antikorun bir agir zincirini kodlayan bir birinci vektörün saglanmasi; (b) antikorun bir hafif zincirini kodlayan bir ikinci vektörün saglanmasi; (c) söz konusu birinci ve ikinci vektörlerle bir memeli konak hücrenin (örn. CHO) dönüstürülmesi; (d) söz konusu konak hücreden antikorun, söz konusu kültür ortamlarina salgisina neden olan kosullar altinda (0) adiminin konak hücresinin kültürlenmesi; (e) (d) adiminin salgilanan antikorunun geri kazanilmasi. Arzu edilen yöntem ile eksprese edildiginde, antikor, bir uygun deneyin kullaniini ile in vitro aktivite için incelenmektedir. Mevcut olarak geleneksel ELISA deneyi formatlari, antikorun OSM"ye kalitatif ve kantitatif baglantisini degerlendirecek sekilde kullanilmaktadir. Ilave olarak, diger in vitro deneyleri ayrica olagan temizleme mekanizmalara raginen vücutta antikor kaliciligini degerlendirmek için uygulanan sonraki Insan klinik çalismalardan önce nötralizasyon verimliliginin dogrulayacak sekilde kullanilabilmektedir. Tedavi dozu ve süreci, Insan dolasiminda mevcut bulusun moleküllerinin ilgili süreci ile ilgilidir ve tedavi edilen kosula ve hastanin genel sagligina bagli olarak teknikte uzman bir kisi tarafindan ayarlanabilmektedir. Kapsamli bir süreç (örn. dört ila alti ay) boyunca tekrar eden dozajin (örn. haftada bir veya her iki haftada bir) maksimum terapötik verimlilige ulasmasi için gerekli olabildigi öngörülmektedir. Ayrica en az bir ekspresyon kasetini içeren, bir rekombinanti dönüstürülmüs, transfekte edilmis veya kalitaktarmis konak hücre tarif edilmektedir, örnegin burada ekspresyon kaseti, burada açiklanan bulusa göre bir antijen baglayici proteinin bir agir zincirini kodlayan bir polinükleotidi içermektedir ve ayrica, burada açiklanan bir antijen baglayici proteinin bir hafif zincirini kodlayan bir polinükleotidi içennektedir veya burada iki ekspresyon kaseti mevcuttur ve 17incisi, hafif zinciri kodlamaktadir ve ikincisi, agir zinciri kodlamaktadir. Örnegin bir yapilandirmada, birinci ekspresyon kaseti, bir sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici proteinin veya burada tarif edilen bir sabit bölgeye baglanan, bunun antijen baglayici fragmaninin bir agir zincirini kodlayan bir polinükleotidi içermektedir ve ayrica, bir sabit bölgeyi içeren ve burada saglanan bir sabit bölgeye baglanan, bunun antijen baglayici fragmani içeren bir antijen baglayici proteinin bir hafif zincirini kodlayan bir polinükleotidi 6162.109 içeren bir ikinci kaseti içeimektedir, örnegin birinci ekspresyon kaseti, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 70 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI; 76,dan seçilen bir agir zinciri kodlayan bir polinükleotidi içerrnektedir ve bir ikinci kaset, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 72°den seçilen bir hafif zinciri kodlayan bir polinükleotidi içermektedir. özdes olan sekanslari, örnegin burada açiklanan sekanslara en az %90 özdes olan, örnegin en veya en az %97 veya en az %98 veya en az %99 özdes olan sekanslari içerdigi anlasilacaktir. Nükleik asitler için, "büyük ölçüde özdes" terimi, iki nükleik asidin veya bunlarin belirlenen sekanslarin, optimum olarak hizalandiginda ve kiyaslandiginda, en az yaklasik %80 nükleotidde, en az yaklasik %90 ila yaklasik %95 veya en az yaklasik %98 ila yaklasik %995 nükleotidde uygun nükleotid eklentileri veya delesyonlari ile özdestir. Alternatif olarak, segmentler, seçici hibridizasyon kosullari altinda hibridize olacagi zaman, sarrnalin komplemanina büyük ölçüde özdeslik mevcut olmaktadir. Nükleotid ve amino asit sekanslari için, "özdes" terimi, uygun eklentiler veya delesyonlar ile optimum olarak hizalandiginda ve kiyaslandiginda iki nükleik asit veya amino asit sekansi arasindaki özdeslik derecesini göstermektedir. Alternatif olarak, DNA segmentleri, seçici hibridizasyon kosullari altinda hibridize olacagi zaman, sarinalin komplemanina büyük ölçüde özdeslik mevcut olmaktadir. Bir sabit bölgeyi içeren bir antikorun veya burada açiklandigi gibi bir sabit bölgeye baglanan bunun antijen baglayici fragmaninin bir agir zincirini ve/veya bir hafif zincirini kodlayan bir veya birden fazla ekspresyon kaseti içeren bir vektörü içeren bir stabil olarak dönüstürülmüs konak hücre saglanmaktadir. Örnegin bu tarz konak hücreleri, hafif zinciri kodlayan bir birinci vektörü ve agir zinciri kodlayan bir ikinci vektörü içerebilmektedir, örnegin birinci vektör, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 70 veya SEKANS KIMLIK NUMARASI: 76 arasindan seçilen bir agir zinciri kodlamaktadir ve bir ikinci vektör, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 72°nin hafif zinciri gibi bir hafifi zinciri kodlamaktadir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, burada açiklanan bulusa göre bir konak hücre saglanmaktadir, burada hücre ökaryotiktir, örnegin burada hücre memelidir. Bu tarz hücre dizilerinin örnekleri, CHO veya NSOH içermektedir. 6162.109 Ayrica, bir sabit bölgeyi içeren bir antikorun veya burada açiklanan bulusa göre bir sabit bölgeye baglanan, bunun antijen baglayici fragmaninin üretimine yönelik bir yöntem tarif edilmektedir, burada yöntem, örnegin serum içermeyen kültür ortamlari gibi bir kültür ortaminda bir konak hücrenin kültürlenmesi adimini içermektedir. Söz konusu antikorun ayrica, serum içermeyen kültür ortamini içeren söz konusu antikora göre en az %95 veya daha fazlasina (öm. %98 veya daha fazla) saflastirildigi bir yöntem tarif edilmektedir. Bir diger yapilandirmada, bir antijen baglayici proteini içeren bir farmasötik bilesiin ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici saglanmaktadir. Mevcut basvuruda, burada kullanim talimatlari ile birlikte açiklanan bilesimi içeren kit parçalari tarif edilmektedir. Bulusun terapötik maddesinin uygulama modu, maddeyi konaga ileten herhangi bir uygun yol olabilmektedir. Bulusun antikorlari ve farmasötik bilesimleri, subkütanöz olarak (5.0.), intratekal olarak, intraperitonal olarak, intramüsküler olarak (i.m.) veya intravenöz olarak (i.v.) parenteral uygulama için özellikle kullanislidir. Bulusun terapötik maddeleri, bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicida bir aktif içerik olarak bulusun antikorlarinin etkili bir miktarini içeren farmasötik bilesimler olarak hazirlanabilmektedir. Tarif edilen protilaktik madde, enjeksiyon için hazir olan bir formda antikorlari içeren bir sulu süspansiyon veya çözeltidir. Bir yapilandirmada, süspansiyon veya çözelti, fizyolojik pH"ta tamponlanmaktadir. Bir yapilandirmada, parenteral uygulamaya yönelik bilesimler, bulusun antikorlarinin bir çözeltisini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyicida çözülen, bunun bir kokteylini içerecektir. Bir yapilandirmada, tasiyici, bir sulu tasiyicidir. %09 salin, %03 glisin ve benzeri gibi çesitli sulu tasiyicilar kullanilabilmektedir. Bu çözeltiler, steril olarak ve genel olarak partikül maddesini içenneyecek sekilde olusturulabilmektedir. Bu çözeltiler, geleneksel, iyi bilinen sterilizasyon teknikleri (örn. filtrasyon) ile sterilize edilebilmektedir. Bilesimler, pH düzenleyici ve tamponlayici maddeler ve benzeri gibi fizyolojik kosullara yaklasmak için gerektigi kadar farmasötik olarak kabul edilebilir yardimci maddeleri içerebilmektedir. Bu tarz farmasötik 6162.109 forinülasyonda bulusun antikorlarinin konsantrasyonu, örnegin agirlik cinsinden yaklasik degiskenlik gösterebilmektedir ve ilk olarak, seçilen özel uygulama moduna göre sivi hacimlerine, viskozitelere ve benzerine dayali olarak seçilecektir. Bu sebepten ötürü, intramüsküler enjeksiyona yönelik, bulusun bir farmasötik bilesimi, yaklasik mL steril tamponlu suyu ve yaklasik 1 ng ila yaklasik 100 mg, örnegin yaklasik 50 ng ila yaklasik 30 mg veya yaklasik 5 mg ila yaklasik 25 mg bir antijen baglayici proteini, örnegin bulusun bir antikorunu içerecek sekilde hazirlanabilmektedir. Benzer bir sekilde, intravenöz infîizyona yönelik, bulusun bir farmasötik bilesimi, yaklasik 250 ml steril Ringer çözeltisini ve Ringer çözeltisinin m1"si basina bulusun yaklasik 1 ila yaklasik 30 veya 5 mg ila yaklasik 25 mg antikorunu içerecek sekilde hazirlanabilmektedir. Parenteral olarak uygulanabilir bilesimlerin güncel yöntemleri iyi bilinmektedir veya teknikte uzman kisiler tarafindan anlasilacaktir ve örnegin Remington°s Pharmaceutical Science, 15. baski, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania referansinda daha kapsamli bir sekilde açiklanmaktadir. Bulusun intravenöz olarak uygulanabilen antikor formülasyonlarinin preparasyonu için, bkz. Lasmar U and Parkins D "The fonnulation of Biopharmaceutical 188; Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B ed Ahem TJ., Manning M.C., New York, NY: Plenum Press (1992); Akers,M.J. "Excipient-Drug interactions in Parenteral Kkojima, S. "Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect during freeze- Wang W, Wang Y.j. "Peroxide forrnation in polysorbate 80 and protein Stability", J. Pharm bulunulmaktadir. Bir yapilandirmada, bulusun terapötik maddesi, bir farmasötik preparasyonda oldugunda, birim doz formlarinda mevcut olmaktadir. Uygun terapötik olarak etkili doz, teknikte uzman kisiler tarafindan hali hazirda belirlenecektir. Uygun dozlar, hastalar için agirliklarina göre hesaplanabilmektedir, örnegin uygun dozlar, yaklasik 0.] ila yaklasik 20mg/kg, örnegin yaklasik 1 ila yaklasik 20mg/kg, örnegin yaklasik 10 ila yaklasik 20mg/kg veya örnegin yaklasik 1 ila yaklasik 15mg/kg, örnegin yaklasik 10 ila yaklasik 15mg/kg araliginda olabilmektedir. Bir insanda astim veya IPF gibi kosullari etkili bir sekilde 6162.109 tedavi etmek için, uygun dozlar, mevcut bulusa göre yaklasik 0.1 ila yaklasik 1000 mg araliginda, örnegin yaklasik 0.] ila yaklasik 500 mg, örnegin yaklasik 500mg, örnegin yaklasik 0.1 ila yaklasik lOOmg veya yaklasik 0.1 ila yaklasik 80mg veya yaklasik 0.1 ila mg veya yaklasik 1 ila yaklasik 50mg araliginda bir antikor olabilinektedir ve parenteral olarak, örnegin subkütanöz olarak, intravenöz olarak veya intramüsküler olarak uygulanabilmektedir. Bu doz, gerekli olmasi halinde, bir hekim tarafindan uygun bir sekilde seçilen uygun zaman araliklarinda tekrar edilebilmektedir. Burada açiklanan antikorlar, depolama için liyofilize edilebilmektedir ve kullanim öncesinde uygun bir tasiyicida sulandirilabilmektedir. Bu teknigin, geleneksel immünoglobulinlerle etkili olacagi gösterilmistir ve teknikte bilinen liyofilizasyon ve sulandirma teknikleri kullanilabilmektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, romatoid artrit, juvenil baslangiçli artrit, osteoartrit, psoriatik artrit ve ankilozan spondilit gibi bir inflamatuvar artropatisi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklanan antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin, söz konusu hastaya uygulanmasi adimini içermektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, tip 1 diyabet, sedef hastaligi, Crohn hastaligi ve ülseratif koliti (UC) içeren intlamatuvar bagirsak hastaligi (IBD), sistemik lupus eriteinatozus (SLE, Lupus), atopik dermatit, alerjik rinit, kronik obstrüktif akciger hastaligi (COPD), pnömoni, eozinofilik özofajit, Sistemik skleroz (SS) veya Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF), Sjögren sendromu, skleroderma, vaskülitler (Takayasu dahil) arterit, dev hücre (temporal) arterit, poliarteritis nodoza, Wegener granülomatozu, Kawasaki hastaligi, izole CNS vaskülit, ChurgStrauss arteriti, mikroskobik poliarterit/polianjit, hipersensitivite vaskülit (alerjik vaskülit), Henoch-Schonlein purpura ve esansiyel kriyo- globulinemik vaskülit), farklilasmamis spondiloartropati (USpA), ankilozan spondilit (AS), graft-versus-host hastaligi (GVHD), primer biliyer siroz (PBC), primer sklerozan kolanjit (PSC), idiyopatik trombositopenik purpura (ITP), multipl skleroz (MS) ve astim arasindan seçilen bir hastaliga veya rahatsizliga sahip olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada söz konusu yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içermektedir. 6162.109 Yukarida bahsi geçen herhangi bir veya birden fazla hastalik, bulusun bir tedavi yöntemine yönelik hedef hastalik olabilmektedir. Özel bir yönünde, hastalik veya rahatsizlik, Osteoartrit, (0A), Psöriyazis, Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF), Sistemik skleroz (SS), Sjögren sendromu, skleroderma veya Multipl Sklerozdan (MS) olusan gruptan seçilmektedir. Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmün hastalik, Osteoartrittir. Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmün hastalik, Sedef Hastaligidir. Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmün hastalik veya rahatsizlik, bir fibroik hastaliktir veya rahatsizliktir. Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmin hastalik, Idiopatik Pulmoner Fibrozistir (IPF). Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmün hastalik, Sistemik Sklerozdur (SS). Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmin hastalik, Sjögren sendromudur. Mevcut bulusun bir yönünde, otoimmün hastalik, Sklerodermadir. Bulusun bir diger yönünde, bu tarz bir degradasyondan etkilenen (veya duyarli olan) bir Insan hastada kikirdak degradasyonunun azaltilmasina veya önlenmesine yönelik bir yöntein saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içermektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, TNF alfa azaltimina yanitsal olan bir hastalik veya rahatsizliktan etkilenen bir hastada TNF alfa üretiminin azaltilmasina yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içermektedir. Bulusun bir diger yönünde, Felty sendromu gibi bir artritik hastaligin veya rahatsizligin ekstra 6162.109 eklem belirtilerinin tedavi edilmesine ve/veya aterosklerotik plak olusumunun tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin, bir artritik hastaligin veya rahatsizligin ekstra eklem belirtilerine sahip olan Insan hastaya uygulanmasini içermektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, endotelyal hücre kaynakli bir hastaligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içermektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, idiopatik pulmoner fibrozis, progresif sistemik skleroz (skleroderma), hepatik fibrozis, hepatik granülomlar, sistosomiyazis ve laysmanyaz gibi fibrotik hastaliklardan veya rahatsizliklardan etkilenen bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içermektedir. Mevcut bulusun bir diger yönünde, multipl skleroz (MS), Alzheimer hastaligi (AD) ve diger demanslar gibi merkezi sinir sistemi hastaligi veya rahatsizligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir ve dahasi, agri tedavisinde, özellikle nöropatik ve/veya inflamatuvar agri tedavisinde kullanimla ilgilidir, burada söz konusu yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içermektedir. Hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisine yönelik bir ilacin üretiminde burada açiklanan antikorlarin kullanimi da saglanmaktadir. Örnegin bir yönünde, hOSM ve gpl30 arasinda etkilesim modülasyonuna yanitsal olan hastaliklarin ve rahatsizliklarin tedavisinde veya protilaksisinde kullanima yönelik olan, burada açiklanan antikorlarin kullanimi açiklanmaktadir. Buluslun bir diger yönünde, romatoid artrit, juvenil baslangiçli artrit, osteoartrit, psoriatik artrit ve ankilozan spondilit gibi bir inflamatuvar artropatinin tedavisinde veya protîlaksisinde kullanima yönelik olan, burada açiklanan antikorlarin kullanimi saglanmaktadir. Bulusun bir diger yönünde, tip 1 diyabet, sedef hastaligi, Crohn hastaligi ve ülseratif koliti 6162.109 (UC) içeren inflamatuvar bagirsak hastaligi (IBD), sistemik lupus eritematozus (SLE, Lupus), atopik dermatit, alerjik rinit, kronik obstrüktif akciger hastaligi (COPD), pnömoni, eozinofilik Özofajit, Sistemik skleroz (SS) veya Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF), Sjögren sendromu, skleroderma, vaskülitler (Takayasu arterit dahil), dev hücre (temporal) arterit, poliarteritis nodoza, Wegener granülomatozu, Kawasaki hastaligi, izole CNS vaskülit, ChurgStrauss arteriti, mikroskobik poliarterit/polianjit, hipersensitivite vaskülit (alerjik vaskülit), Henoch- Schonlein purpura ve esansiyel kriyo- globulinemik vaskülit), farklilasmamis spondiloartropati (USpA), ankilozan spondilit (AS), graft-versus-host hastaligi (GVHD), primer biliyer siroz (PBC), primer sklerozan kolanjit (PSC), idiopatik trombositopenik purpura (ITP), multipl skleroz (MS) ve astim arasindan seçilen bir hastaligin veya rahatsizligin tedavisinde veya profilaksisinde kullanima yönelik olan, burada açiklanan antikorlarin kullanimi saglanmaktadir, burada söz konusu yöntem, burada açiklandigi üzere, söz konusu hastaya antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içermektedir. Örnegin özel bir yönde, Osteoartrit, (0A), Psöriyazis, Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF) veya Multipl Sklerozun (MS) tedavisinde veya profilaksisinde kullanima yönelik antikorlarin kullanimi saglanmaktadir. Mevcut bulusun diger yönleri ve avantajlari, kapsamli açiklamada ve bunlarin yapilandirmalarinda daha ayrintili olarak açiklanmaktadir. Bir yönünde, bulus, romatoid artrit, juvenil baslangiçli artrit, osteoartrit, psoriatik artrit ve ankilozan spondilit gibi inflamatuvar artropati benzeri olan veya tip 1 diyabet, sedef hastaligi, Crohn hastaligi ve ülseratif koliti (UC) içeren inflamatuvar bagirsak hastaligi (IBD), sistemik lupus eritematozus (SLE, Lupus), atopik dermatit, alerjik rinit, kronik obstrüktif akciger hastaligi (COPD), pnömoni, eozinofilik özofajit, Sistemik skleroz (SS) veya Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF), Sjögren sendromu, skleroderina, vaskülitler (Takayasu arterit dahil), dev hücre (temporal) arterit, poliarteritis nodoza, Wegener granülomatozu, Kawasaki hastaligi, izole CNS vaskülit, ChurgStrauss arteriti, mikroskobik poliarterit/polianjit, hipersensitivite vaskülit (alerjik vaskülit), Henoch-Schonlein purpura ve esansiyel kriyo- globulinemik vaskülit), farklilasmamis spondiloaitropati (USpA), ankilozan spondilit (AS), graft-versus-host hastaligi (GVHD), primer biliyer siroz (PBC), primer sklerozan kolanjit (PSC), idiopatik trombositopenik purpura (ITP), multipl skleroz (MS) ve astim arasindan seçilen inflamatuvar hastaliklarin ve/veya rahatsizliklarin tedavisine veya profilaksisine 6162.109 yönelik mevcut bulusun bir antikorunu içeren bir farrnasötik bilesimi ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyiciyi saglamaktadir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, bir inflamatuvar rahatsizligi veya hastaligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada açiklandigi üzere, bulusa göre antikorlarin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içermektedir, Örnegin bir inflamatuvar rahatsizligi veya hastaligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem saglanmaktadir, burada yöntem, burada bulusa göre antikorlari içeren bir farmasötik bilesimin, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombinasyon halinde uygulanmasi adimini içermektedir. Bir diger yapilandirmada, roinatoid artrit, juvenil baslangiçli artrit, 0ste0artrit, psoriatik artrit ve ankilozan spondilit gibi inflamatuvar artropati arasindan seçilen veya tip 1 diyabet, sedef hastaligi, Crohn hastaligi ve ülseratif koliti (UC) içeren inflamatuvar bagirsak hastaligi (IBD), sistemik lupus eritematozus (SLE, Lupus), atopik derinatit, alerjik rinit, kronik obstrüktif akciger hastaligi (COPD), pnömoni, eozinofilik özofajit, Sistemik skleroz (SS) veya Idiopatik Pulmoner Fibrozis (IPF), Sjögren sendromu, skleroderma, vaskülitler (Takayasu arterit dahil), dev hücre (temporal) arterit, poliarteritis nodoza, Wegener granülomatozu, Kawasaki hastaligi, izole CNS vaskülit, Churg-Strauss arteriti, mikroskobik poliarterit/polianjit, hipersensitivite vaskülit (alerjik vaskülit), Henoch-Schonlein purpura ve esansiyel kriyoglobulinemik vaskülit), farklilasmamis spondiloartropati (USpA), ankilozan spondilit (AS), graft-versus-host hastaligi (GVHD), primer biliyer siroz (PBC), primer sklerozan kolanjit (PSC), idiopatik trombositopenik purpura (ITP), multipl skleroz (MS) ve astim arasindan seçilen bir intlamatuvar rahatsizligi veya hastaligi olan bir Insan hastanin tedavi edilmesine yönelik bir yapilandirma saglanmaktadir. Alternatif bir yönünde, bir Insan olmayan antikorun veya bunun antikor fragmaninin insanlastirilmasina yönelik bir yöntem açiklanmaktadir, burada yöntem asagidaki adimlari içeimektedir: a) bir veya birden fazla Insan olmayan CDRinin, bir kimerik veya insanlastirilmis antikoru üretmek için bir Insan kabul çerçevesine birlestirilmesi b) kiinerik veya insanlastirilmis antikorun, antijene baglanmasi c) antijene baglantida dogrudan dahil olan antikor kalintilarinin belirlenmesi d) (c) adiminda dahil olmayan bir veya birden fazla kalintinin, insan germ hatti sekansina 6162.109 mutasyona ugratilmasi; e) söz konusu antikorun geri kazanilmasi. Bir diger yönünde, antijene baglantida dahil edilen antikor kalintilari, kristalografi, homoloji modelleme, protein yerlestirme, mutagenez veya dogrusal peptit eslestirme ile belirlenebilmektedir. Örnegin burada açiklandigi üzere, bu tarz bir yönde, antikor-antijen ko- kristalinin kristalografik yapisi elde edilmektedir ve baglantida dahil olan kalintilar, yaklasik 2 ila 5Ä arasinda belirlenecektir. Insan olmayan terimi, bir Insan germ hatti sekansina daha yakin olarak getirildigi sekilde mutasyona ugratilabilen veya ikame edilebilen herhangi bir antikoru kapsamaktadir. Bu sekilde, immunojenesite benzerligini azaltmaktadir. Bir yönünde, en az bir CDR, germ hattina geri döndürülmektedir. Bir diger yönünde, en az iki CDR, germ hattina geri döndürülmektedir. Bir diger yönünde, en az 5 kalinti, genn hattina geri döndürülmektedir, örnegin en az 7 veya en az 8 veya en az 9 veya en az `10 kalinti, germ Insan olmayan monoklonal antikorlarinin veya bunun fragmanlarinin, bir insan alicisina aktarimi genel olarak uygun CDR bölge-antijen etkilesimlerini yeniden olusturmak için çerçeve içerisinde olan degisimlerin dahil edilmesine dayanmaktadir, bunlar genel olarak geriye mutasyonlar olarak ifade edilmektedir. Burada açiklanan bir yapilandirmada, uygun CDR-bölge-antijen etkilesimlerini yeniden olusturmak için geriye mutasyonlar gerekmektedir. Alternatif bir yapilandirmada, Insan alici çerçevesi, bir kimerik antikoru üretmek için bir veya birden fazla Insan olmayan CDR ile bir antikora dahil edilebilmektedir. Bir alternatif yapilandirmada, sekans, oligo-sentez ile üretilebilmektedir. Insan olmayan antikorun CDRlleri (veya hiper degisken bölge kalintilari), VL ve/veya VH insan alici çerçevelerine dahil edebilmektedir. Örnegin, bir kisi, Kabat CDR kalintilari, Chothia hiper degisken döngü kalintilari, Abm kalintilari ve/Veya temas kalintilarina tekabül eden kalintilari dahil edebilmektedir. Bir yapilandirmada, bir antikorun insanlastirilmasina yönelik bir yöntem açiklanmaktadir, 6162.109 burada yöntem asagidaki adimlari içermektedir: a) bir hedef antij ene baglanan bir Insan olmayan antikorun elde edilmesi b) antikor-antij en ko kristalin kristalografik yapinin elde edilmesi c) kristal yapidan yaklasik 2 ila SÄ antijene baglanmada dogrudan dahil olan Insan olmayan antikor kalintilarinin belirlenmesi e) (C) adiminda dahil olmayan bir veya birden fazla kalintinin, bir Insan sekansindan türetilen bir kalintiya mutasyona ugratilmasi; f) söz konusu antikorun geri kazanilmasi. Burada açiklanan yöntemlerin bir diger yapilandirmasinda, antikor veya antikor baglayici fragman, antijenine baglantisini tutmaktadir. Örnegin, antikor veya antikor baglayici fragman, Insan olmayan antikora kiyasla antijenine baglantisini tutmaktadir. Örnegin, I) adiminin antikoru, a) adiminin Insan olmayan antikorunun 10 kati içerisinde veya daha iyi biri bir baglama afinitesine (KD) sahiptir, Örnegin I) adiminin antikoru, a) adiminin Insan olmayan antikorunun 3-5 kati içerisinde veya bundan daha iyi bir baglama afinitesine (KD) sahiptir. Örnegin, antikor veya antikor baglayici fragman, Biacore ile ölçüldügünde lOOOnM insan olmayan antikor içerisinde veya Biacore ile ölçüldügünde 500nM Insan olmayan antikor içerisinde veya Biacore ile ölçüldügünde 100nM Insan olmayan antikor içerisinde antijenine baglantiyi tutmaktadir. Örnegin, antikor veya antikor baglayici fragman, Biacore ile ölçüldügünde 500pm Insan olmayan antikor içerisinde veya Biacore ile ölçüldügünde 300pM Insan olmayan antikor içerisinde veya Biacore ile ölçüldügünde lOOpM insan olmayan antikor içerisinde antijenine baglantiyi tutmaktadir. Örnegin I) adiminin antikoru, 400pM,ye esit veya ondan daha az olan veya 300pM"ye esit olan veya ondan daha az olan veya ZOOpM,ye esit olan veya ondan daha az olan veya l40pM"ye esit olan veya ondan daha az olan bir afinite (KD) ile antij enine baglanmaktadir. Burada açiklanan yöntemlerin bir diger yapilandirmasinda, antikor veya antikor baglayici fragman, insan olmayan antikor veya antikor fragmani olarak ayni kanonik yapilari tutmaktadir. Bir diger yapilandirmada, insan olmayan antikor veya bunun bir antikor fragmani, örnegin fare, siçan, tavsan, devegil veya köpekbaligi gibi bir Insan olmayan hayvandan gelmektedir. Bir diger yapilandirmada, insan olmayan antikor veya bunun antikor fragmani, bir fareden gelmektedir. 6162.109 Bir diger yapilandirmada, Insan olmayan antikor veya bunun antikor fragmani, bir monoklonal antikor, poliklonal antikor veya multispesifik antikordur veya bu, bir devegil veya köpekbaligi immünoglobulin tek degiskenli alan gibi bir immünoglobulin tek degiskenli alan olabilmektedir veya bir Insan olmayan antikor protein skafoldun bir türevi olan bir alan olabilmektedir. Bir diger yapilandirmada, Insan olmayan antikor, bir monoklonal antikordur. Burada açiklanan yöntemlerin bir yapilandirmasinda, en az 2 insan olmayan CDR, insan alici sekansina dahil edilmektedir veya en az 3 CDR veya en az 4 CDR veya en az 5' CDR veya tüin 6 CDR, insan alici sekansina dahil edilmektedir. Burada açiklanan yöntemlerin bir diger yapilandirmasinda, baglayici antij ende dogrudan dahil edilmeyen ve hali hazirda Insan olmayan bir Insan sekanstan türetilen bir kalintiya mutasyona ugratilacak olan kalintilar, CDR,lerde bulunan veya çerçeve bölgelerinde bulunan veya her ikisinde bulunan kalintilar olabilmektedir. Bir diger yapilandirmada, en az '1 CDR, Insan germ hatti sekansina mutasyona ugratilmaktadir veya en az 2 CDR mutasyona ugratilmaktadir veya en az 3 CDR mutasyona ugratilmaktadir veya en az 4 CDR mutasyona ugratilmaktadir. Bir diger yapilandirmada, en az 5 kalinti, insan germ hatti sekansina mutasyona ugratilmaktadir veya en az 7 kalinti veya en az 10 kalinti veya en az 15 kalinti veya en az 20 kalinti veya en az 40 kalinti veya en az 60 kalinti, Insan germ hatti sekansina inutasyona u gratilmaktadir. Burada açiklanan yöntemlerin bir diger yapilandirmasinda, antijene baglanti ile dogrudan dahil edilen antikor kalintilarinin, yaklasik 2-5Ä arasinda veya yaklasik 3-5Ä arasinda veya yaklasik 3-4Ä arasinda veya yaklasik 3.5Ä olacak sekilde belirlenmektedir. Burada açiklanan yöntemlerin bir diger yapilandirmasinda, bu tarz bir yöntem ile elde edilebilen bir antikor saglanmaktadir. Tanimlar Burada kullanilan "antijen baglayici protein" terimi, insan OSM°ye baglanabilen ve Insan OSM"yi nötralize edebilen antikorlari, antikor fragmanlarini ve diger protein yapilarini ifade 6162.109 etmektedir. Fv, Fc, Fd, Fab veya F(ab)2 terimleri, standart anlamlari ile kullanilmaktadir (bkz. örn. arlow ve ark., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)). antikorlari (tam uzunlukta monoklonal antikorlar dahil), poliklonal antikorlar, multispesifik antikorlari (örn. bispesifik antikorlari) kapsamaktadir. Burada kullanildigi üzere "monoklonal antikor" terimi, büyük ölçüde homojen antikorlarin bir popülasyonundan elde edilen bir antikoru ifade etmektedir, örnegin popülasyonu içeren bireysel antikorlar, ufak miktarlarda mevcut olabilen, dogal yollarla olusan muhtemel mutasyonlar haricinde özdestir. Monoklonal antikorlar, tek bir antijenik baglayici bölgeye dogru yönlendirilen yüksek derecede spesifiktir. Dahasi, tipik olarak farkli belirleyicilere (epitoplar) dogru yönlendirilen farkli antikorlari içeren poliklonal antikor preparasyonlarina karsi, her bir monoklonal antikor, antijende tek bir belirleyiciye dogru yönlendirilmektedir. zincirin bir bölümü, belirli bir donör antikor sinifindan veya alt sinifindan türetilen antikorlarda ilgili sekanslara özdes olurken veya ilgili sekanslara homolog olurken, zincirlerin geri kalaninin, bir diger türden türetilen veya bir diger antikor sinifina veya alt sinifina ait olan antikorlarda ve ayrica bu antikorlarin fraginanlarinda ilgili sekanslarla özdes oldugu veya ilgili sekanslara homolog oldugu tasarlanmis bir antikor türünü ifade etmektedir (US 4, 6855) (1984)). Bir "insanlastirilmis antikor", bir insan olmayan donör immünoglobulinden türetilen CDR°1ere sahip olan tasarlanmis bir antikor türünü ifade etmektedir, molekülün kalan immünoglobulin türevi bölümler, bir (veya birden fazla) insan immünoglobulinlerden türetilmektedir. Ek olarak, çerçeve destegi kalintilari, baglama afinitesinin korunmasi için örnegin donör antikorunun nükleotid ve amino asit sekanslarina homoloji ile KABAT® veri tabani, Los Alamos veri tabani ve Swiss Protein veri tabani gibi geleneksel bir veri tabanindan seçilen bir antikor olabilmektedir. Donör antikorunun çerçeve bölgelerine (bir 6162.109 amino asit temelinde) bir homoloji ile karakterize edilen bir Insan antikoru, donör CDR,lerin eklenmesine yönelik bir agir Zincirli sabit bölgeyi ve/veya bir agir Zincirli degisken çerçeve bölgesini saglamasi için uygun olabilmektedir. Hafif Zincirli sabit veya degisken çerçeve bölgelerini verebilen bir uygun alici antikor, benzer bir sekilde seçilebilmektedir. Alici antikor agir ve hafif zincirlerin, ayni alici antikordan kaynaklanmasina gerek olmadigi belirtilmelidir. Önceki teknik, bu insanlastirilinis antikorlarin çesitli üretim yöntemlerini saglanan bir algoritma kullanilarak hesaplanan bir kiyaslama olabildigi anlamina gelmektedir. (l) Polinükleotidlerin özdesligi, 100 ile ayrilan yüzde özdesligi belirleyen bir tam sayi ile, verilen bir sekansta toplam nükleotid sayisinin çarpilmasi ve daha sonrasinda bu ürünün, söz konusu sekansta söz konusu toplam nükleotid sayisindan çikarilmasi ile hesaplanmaktadir veya: burada nn, nükleotid degisim sayisidir, xn, verilen bir sekansta toplam nükleotid sayisidir, sembolüdür ve burada xn ve y,nin herhangi bir tam sayi olmayan ürünü, bunun xnsden çikarilmasindan önce en yakin tamsayiya yuvarlanmaktadir. Bir polipeptidi kodlayan bir polinükleotid sekansin degisimleri, bu kodlama sekansinda anlamsiz, yanlis anlamli veya çerçeve kaymasi mutasyonlarini olusturabilmektedir ve bu sekilde, bu degisimlerden sonra polinükleotid ile kodlanan polipeptidi degistirmektedir. (2) Polipeptitlerin özdesligi, 100 ile ayrilan yüzde özdesligi belirleyen bir tam sayi ile, amino asitlerin toplam sayisinin çarpilmasi ve daha sonrasinda bu ürünün, söz konusu toplam amino asit sayisindan çikarilmasi ile hesaplanmaktadir veya: burada na, amino asit degisimlerinin sayisidir, xa, verilen bir sekansta toplam ainino asit 6162.109 operatörünün sembolüdür ve burada xa ve y,nin herhangi bir tam sayi olmayan ürünü, bunun xa°dan çikarilmasindan önce en yakin tamsayiya yuvarlanmaktadir. çevresinden veya her ikisinden degistirilmis veya çikarilmis anlamina gelmektedir. Örnegin, bir canli organizmada dogal olarak mevcut olan bir polinükleotid veya bir polipeptit, "izole" degildir, fakat dogal halindeki birlesik malzemelerden ayrilan ayni polinükleotid veya polipeptit, kisitlayici olmayacak sekilde hücrenin, polinükleotid veya polipeptidn ayrildigi ile ayni türde veya tipte olmasi halinde bile, bu tarz polinükleotid veya polipeptidin, bir hücreye geri dahil edildigi zamani içerecek sekilde ""izoledir". Mevcut tarifname ve ekteki çizimler boyunca, "içeren" ve "içennektedir" terimi, "olusan" ve alinti yapilmayan diger elemanlarin veya tamsayilarin olasi olarak dahil edilmesini yönlendirmeyi amaçlamaktadir. Burada bulusun antikorlari ile iliskili olarak mevcut tarifname boyunca kullanilan "Spesifik olarak baglanmaktadir" terimi, antikorlarin, diger Insan proteinlere herhangi bir baglanti olmadan veya yetersiz baglanti ile Insan OSMlye (hOSM) baglanmasi anlamina gelmektedir. Fakat, terim, bulusun antikorlarinin da örnegin primat OSM gibi diger OSM formlari ile çapraz reaktif olabilmesi gerçegini hariç tutmamaktadir. Bulusun antikorlari ile iliskili olarak bu tarifname boyunca kullanilan "dogrudan etkilesime geçmektedir" terimi, antijen baglayici protein, Insan OSMiye (hOSM) baglandiginda, antijen baglayici proteinde bu spesifik kalintilarin, hOSM°de bulunan 3.5Ä spesifik kalinti içerisinde olmasi anlamina gelmektedir. Burada bulusun antikorlari ile iliskili olarak mevcut tarifname boyunca kullanilan "inhibe etmektedir" terimi, biyolojik OSM aktivitesinin, bu tarz antikorlarin yoksunlugunda OSM aktivitesine kiyasla mevcut bulusun antikorlarinin mevcudiyetinde azaltilmasi anlamina gelmektedir. Inhibisyon, kisitlayici olmayacak sekilde, bir veya birden fazla bloke edici ligand baglantisindan kaynaklanabilmektedir, bu da ligandin reseptörü aktif hale getirmesini önlemektedir, OSM'yi asagi düzenlemektedir veya efektör islevselligini etkilemektedir. Bulusun antikorlari, OSM"yi nötralize edebilmektedir. Nötralizasyon seviyeleri, Örnegin 6162.109 asagida, bir KB Hücre Nötralizasyon Deneyinde 2.2.1,de bulunan örneklerde belirtildigi gibi deneylerin kullanimi ile çesitli sekillerde ölçülebilmektedir. OSM, Gpl30/OSMR kompleksi boyunca sinyallesme vasitasiyla KB hücrelerinden Interlökin 6 salinimini indükleyebilmektedir. Bu deneyde OSM nötralizasyonu, anti-OSM monoklonal antikorlarin Bir antikorun veya bunun antijen baglayici fragmaninin, nötralizasyonu gerçeklestirebilmesi halinde, bu, insan OSM ve gp130 reseptörü arasindaki etkilesimin inhibisyonunun göstergesi olmaktadir. Insan OSM'ye karsi nötralize edici aktiviteye sahip oldugu düsünülen antikorlar, Örnek 2.2.1"de belirtildigi gibi KB hücre nötralizasyon deneyinde 10 mikrogram/mPden daha az veya 5 mikrogram/ml"den daha az veya 2 mikrogram/ml'den daha az veya 1 mikrogram/ml"den daha az veya 0.1 mikrogram/deen daha az bir [C50'ye sahip olacaktir. antikorun tainamlayicilik belirleyici bölge amino asit sekanslari olarak belirlenmektedir. Bir immünoglobulinin degisken bölümünde üç agir Zincirli ve üç hafif Zincirli CDR (veya CDR bölgeleri) mevcuttur. Bu sebepten ötürü, burada kullanilan "CDR"1er", tüm üç agir Zincirli CDRayi veya tüm üç hafif Zincirli CDR&i (veya uygun olmasi halinde, hem tüm agir ve tüm hafif Zincirli CDR"leri) ifade edebilmektedir. CDR'ler, antikorun antijene veya epitopa baglantisi için çogu temas kalintisini saglamaktadir. Mevcut bulusta bulunan ilgili CDRWer, donör antikoru degisken agir ve hafif Zincirli sekanslardan türetilmektedir ve dogal yollarla olusan CDR,lerin analoglarini içerinektedir, burada analoglar ayrica türetildikleri donör antikoiu ile ayni antijen baglayici özgüllügü ve/Veya nötralize etme kabiliyetini paylasmakta veya sahip olmaktadir. Antikorlarin CDR sekanslari, Kabat nuinaralandirrna sistemi (Kabat ve ark.; (Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987) ile belirlenebilmektedir, alternatif olarak Chothia numaralandinna sistemi (Al-Lazikani ve ark., (, temas tanimlama yöntemi (MacCallum RM., and Martin A.C.R. and Thornton J ,M, (1996), Journal ve teknikte uzman bir kisi tarafindan bilinen CDRslerin belirlenmesine yönelik olarak herhangi bir diger olusturulmus yöntem kullanilarak belirlenebilmektedir. Teknikte uzman kisilerin temin edebildigi CDR sekanslarinin diger numaralandirrna düzenleri, "AbM" (University of Bath) ve "temas" (University College London) yöntemlerini 6162.109 içermektedir. Kabat, Chotia, AbM ve temas yöntemleri arasindan en az ikisini kullanan minimum örtüsen bölge, "minimum baglayici birimi" saglayacak sekilde belirlenebilmektedir. Minimum baglayici birim, bir CDRinin bir alt bölümü olabilmektedir. Asagida bulunan Tablo 1, her bir CDR veya baglayici birim için her bir numaralandirma düzenini kullanan bir tanimi temsil Kabat numaralandirma semasi, degisken alan amino asit sekansini numaralandirmak için Tablo l,de kullanilmaktadir. Bazi CDR tanimlarinin, kullanilan bireysel yayina bagli olarak degiskenlik gösterebildigi belirtilmelidir. etmektedir. Kabat CDR Chothia CDR AbM CDR Temas CDR Minimum birlestirici Bu tarifname boyunca, antikor sekanslarinda bulunan amino asit kalintilari, Kabat seinasina göre numaralandirilmaktadir. Benzer bir sekilde, "CDR", "CDRLI", "CDRLZ", "CDRL3", sistemini takip etmektedir. Zincirli degisken alanini ifade edecek sekilde kullanilmaktadir. Burada kullanildigi üzere, "alan" terimi, proteinin geri kalanindan bagimsiz üçüncü] yapiya sahip olan bir katli protein yapisini ifade etmektedir. Genel olarak, alanlar, proteinlerin ayri islevsel özelliklerinden sorumludur ve birçok durumda, proteinin ve/veya alanin geri kalaninin islev kaybi olmadan diger proteinlere eklenebilmekte, çikarilabilmekte veya aktarilabilmektedir. Bir "antikoru tek degisken alan", antikoru degisken alanlarin karakteristigi olan sekanslari içeren bir katli polipeptit alandir. Bu sebepten ötürü, antikoru degisken alanlari ve modifiye edilmis degisken alanlari içermektedir, örnegin burada bir veya birden fazla döngü, antikoru degisken alanlarin veya tepesi kesilmis olan veya N- veya C- terminal uzantilanni ve ayrica en azindan baglama aktivitesini ve tam uzunlukta alan özgüllügünü tutan degisken alanlarin katli fragmanlarini içeren antikor degisken alanlarinin karakteristigi olmayan sekanslar ile degistirilmistir. 6162.109 olarak bir antijene veya epitopa spesifik olarak baglanan bir antikoru degisken alani (VH, VHH, VL) ifade etmektedir. Bir immünoglobulini tek degisken alan, diger, farkli degisken bölgelerle veya degisken alanlarla bir formatta (örn. homo- veya heter-multimer) mevcut olabilmektedir, burada diger bölgeler veya alanlar, tek immünoglobulini degisken alan ile antijen baglantisi için gerekli degildir (öm. burada immünoglobulini tek degisken alan, ek degisken alanlardan bagimsiz olarak antijene baglanmaktadir). Bir "alan antikoru" veya degisken alan" ile aynidir. Bir immünoglobulin tek degisken alani, bir Insan antikoru degisken alan olabilmektedir, fakat ayrica kemirgen (örnegin WO 00/29004 Sayili Patent Doküinaninda tarif edilen gibi), köpekbaligi ve Devegil VHH dAb°leri içermektedir. Devegil VHH, deve, lama, alpaka, tek hörgüçlü deve ve vahsi lamayi içeren, hafif zincirlerden mahrum olan agir Zincirli antikorlari dogal bir sekilde üreten türlerden türeyen immünoglobulini tek degisken alan polipeptitleridir. Bu tarz VHH alanlari, teknikte mevcut standart tekniklere göre insanlastirilabilmektedir ve bu alanlar hala bulusa göre "alan antikorlari" olarak düsünülmektedir. Burada kullanildigi üzere, "VH, devegil VHH alanlarini içeimektedir. NARV, nurse köpekbaligini içeren kikirdakli balikta tanimlanmis olan immünoglobulini tek degisken alanin bir diger türüdür. Bu alanlar ayrica Yeni Antijeni Reseptörü degisken bölge (genel olarak V(NAR) veya NARV) olarak bilinmektedir. Detaylar antijene veya epitopa spesifik olarak baglanan bir alani ifade edebilmektedir, bu, bir Insan, devegil veya köpekbaligi immünoglobulini tek degisken alani gibi bir alan antikoru (dAb) olabilinektedir veya CTLA-4 (Evibody); lipokalin; Protein A Protein A (Affibody, SpA), A- alani (Avimer/Maxibody) Z-alani gibi türetilmis moleküller; GroEI ve GroES gibi isi soku proteinleri; transferrin (trans-vücut); ankirin tekrar protein (DARPin); peptit aptamer; C-tipi lektin alani (Tetranektin); Insan y-kristallin ve Insan ubikuitin (affilinler), PDZ alanlari; Insan proteaz inhibitörlerinin akrep toksinkunitz tip alanlari; ve fîbronektinden (adnektin) olusan gruptan seçilen bir skafold türevi olan dogal li ganddan baska bir li ganda baglantiyi elde etmek için protein mühendisligine tabi tutulmus olan bir alan olabilmektedir. CTLA-4 (Sitotoksik T Lemfosite birlesik Antijen 4), ana olarak CD4+T hücrelerinde eksprese edilen bir CD28-aile reseptörüdür. Hücre disi alan, bir degisken alan benzeri lh katina sahip 6162.109 olabilinektedir. Antikorlarin CDRslerine tekabül eden döngüler, farkli baglama özelliklerini uyacak sekilde heterolog sekans ile ikame edilebilmektedir. Farkli baglama özgüllügüne sahip olacak sekilde tasarlanan CTLA-4 de Evikorlar olarak bilinmektedir. Diger detaylar için, bkz. Lipokalinler, steroidler, bilinler, retinoidler ve lipidler gibi küçük hidrofobik molekülleri tasiyan hücre disi proteinlerin bir ailesidir. Farkli hedef antijenlerine baglanacak sekilde tasarlanabilen konik yapinin açik ucunda bir dizi döngüye sahip olan bir kati ß-tabaka ikincil yapiya sahiptirler. Antikalinler, boyut olarak 160-180 arasindadir ve lipokalinlerden Bir affikor, antijene baglanacak sekilde tasarlanabilen Staphylococcus aureuslun bir Protein A"sindan türetilen bir skafolddur. Alan, yaklasik olarak 58 ainino asidin bir üç sarmal bagindan olusmaktadir. Kütüphaneler, yüzey kalintilarinin randomizasyonu ile üretilmistir. Avimerler, A-alani skafold ailesinden türetilen çok alanli proteinlerdir. Yaklasik olarak 35 amino asit natif alan, belirlenmis bir disülfüre bagli yapiyi benimseinektedir. Çesitlilik, A- alanlarinin ailesi tarafindan sergilenen dogal varyasyonun karistirilmasiyla üretilmektedir. Opinion on lnvestigational Drugs 16(6), Bir transferin, bir monoinerik serum tasiina glikoproteinidir. Transferinler, bir serbest yüzey döngüsüne peptit sekanslarinin eklenmesi ile farkli hedef antijenlerini baglayacak sekilde tasarlanabilinektedir. Tasarlanan transferin skafoldlarinin örnekleri, Trans-koru içermektedir. Tasarlanmis Ankirin Tekrari Proteinler (DARPinler), integral membran proteinlerinin, sitoskeletona baglantisini yönlendiren bir protein ailesi olan Ankirinden türetilmektedir. Tek bir ankirin tekrari, iki oc-sarmaldan ve bir ß-dönüsünden olusan bir 33 kalinti motifidir. Her tekrarin ilk a-sannalinda ve bir ß-dönüsünde kalintilari randomize ederek farkli hedef antijenlerini baglayacak sekilde tasarlanabilmektedirler. Baglama ara yüzleri, modül sayisini arttirarak (bir afinite matürasyon yönteini) yükseltilebilmektedir. Detaylar için bkz. J. Mol. 6162.109 Fibronektin, antijene baglanacak sekilde tasarlanabilen bir skafolddur. Adnektinler, Insan fibronektin türü llI"ün (FN3) 15 tekrar eden birimin 10. alanin dogal amino asit sekansinin bir oinurgasindan olusmaktadir. ß-sandviçin bir ucunda bulunan üç döngü, Adnektinin, ilgili bir terapötik hedefi spesifik olarak tanimasini mümkün kilacak sekilde tasarlanabilmektedir. Peptit aptainerler, sabit bir skafold proteininden, tipik olarak aktif bölgeye yerlestirilen bir kisitli degisken peptit döngüsünü içeren tioredoksinden (TrxA) olusan kombinasyonel tanima Mikrokorlar, 3-4 sistein köprüleri içeren 25-50 amino asit uzunlugunda, dogal yollarla olusan mikroproteinlerden türetilmektedir - mikroproteinlerin örnekleri, KalataBl ve konotoksin ve knottinleri içermektedir. Mikroproteinler, mikroproteinin genel katini etkilemeden 25"e kadar amino asidi içerecek sekilde tasarlanabilen bir döngüye sahiptir. Tasarlanan knottin alanlarin Diger epitop baglayici alanlar, insan y-kristalin ve insan ubikuitin (affilinler), insan proteaz inhibitörlerinin kunitz tipi alanlari, Ras-baglayici protein AF-6,nin PDZ bölgeleri, akrep toksinleri (charybdotoxin), C-tipi lektin alani (tetranektinler) içeren farkli hedef antijen baglama özellikleri tasarlayacak sekilde bir skafold olarak kullanilan proteinleri içermektedir, bunlar Bölüm 7- Non-Antibody Scaffolds from Handbook of Therapeutic Antibodies (2007, Mevcut bulusun epitop baglayici alanlan, bu alternatif protein alanlari arasindan herhangi birisinden türetilebilmektedir. Burada kullanildigi üzere, "antijen baglayici bölge" terimi, antijene spesifik olarak baglanabilen bir proteinde bir bölgeyi ifade etmektedir, bu, örnegin bir epitop baglayici alan gibi tek bir alan olabilmektedir veya bir standart antikorda bulunabildigi üzere ikili VH/VL alanlari olabilmektedir. Bulusun bazi yapilandirmalarinda, Fc (ScFv) alanlari, antijen baglayici bölgeleri saglayabilmektedir. 6162.109 proteinleri ifade edecek sekilde kullanilmaktadir. Iki terim birbirlerinin yerine kullanilabilmektedir ve burada kullanildigi gibi ayni anlamlara sahip olmasi amaçlanmaktadir. Burada kullanildigi üzere, "antijen baglayici protein" antikorlar, örnegin bir alan antikoru (dAb), ScFv, FAb, FAbZ gibi antikor fragmanlarini ve diger protein yapilari ifade etmektedir. Antijen baglayici moleküller, en az bir Ig degisken alani, örnegin antikorlari, alan antikorlari (dAb'ler), Fab, Fab", F(ab,)2, FV, ScFv, diakorlar, mAbdAb71er, affikorlar, heterokonjügat antikorlar veya bispesifik antikorlari içerebilmektedir. Bir yapilandirmada, antijen baglayici molekül, bir antikordur. Bir diger yapilandirmada, antijen baglayici molekül, bir dAbsdir, bir baska ifadeyle farkli bir V bölgesinden veya alanindan bagimsiz olarak bir antijene veya epitopa spesifik olarak baglanan VH, VHH veya VL gibi bir immünoglobulini tek degisken alandir. Antijen baglayici moleküller, iki hedefe baglanabilmektedir, bir baska ifadeyle çift hedefleyici proteinler olabilmektedirler. Antijen baglayici moleküller, antikorlarin bir kombinasyonunu ve örnegin bir veya birden fazla alan antikoru ve/veya bir monoklonal antikora baglanan bir veya birden fazla ScFv gibi antij en baglayici fragmanlar olabilmektedir. Antijen baglayici moleküller ayrica, CTLA-4 (Evibody); lipokalin; Protein A"nin (Affibody, SpA) Z alani, A-alani (Avimer/Maxibody) gibi türetilmis Protein A molekülleri; GroEl ve GroES gibi isi soku proteinleri; transferrin (trans-vücut); ankirin tekrar protein (DARPin); peptit aptamer; C-tipi lektin alani (Tetranektin); insan y-kristallin ve insan ubikuitin (affilinler); PDZ alanlari; insan proteaz inhibitörlerinin akrep toksinkunitz tip alanlari; ve fibronektinden (adnektin) olusan gruptan seçilen; OSM"ye baglantiyi elde etmek için protein mühendisligine tabi olan bir skafold türevi olan bir alan gibi bir Ig olmayan alani içerebilmektedir. Burada kullanildigi üzere, "antijen baglayici protein", insan OSM"yi antagonize edebilecek ve/veya nötralize edebilecektir. Ek olarak, bir antijen baglayici protein, OSM°ye baglanarak ve bir dogal ligandin, gpl30 reseptörüne baglanmasin ve/veya bu reseptörü aktif hale getirmesini önleyerek OSM aktivitesini inhibe edebilmekte ve/veya bloke edebilmektedir. Burada kullanildigi üzere "Efektör Islevi" terimi ile bir veya birden fazla Antikora bagimli hücre aracili sitotoksik aktivite (ADCC), Komplemana bagimli sitotoksik aktivite (CDC) aracili yanitlari, FC aracili fagositozu ve FcRn reseptörü vasitasiyla antikor geri dönüsümünün ifade edilmesi kast edilmektedir. lgG antikorlarina yönelik olarak, ADCC ve ADCP içeren efektör islevsellikleri, immün hücrelerinin yüzeyinde mevcut F cy reseptörlerinin bir ailesi ile 6162.109 agir Zincirli sabit bölgenin etkilesimi vasitasiyla yönlendirilmektedir. lnsanlarda, bunlar, FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) ve FcyRIII (CD16) içermektedir. Antijene baglanana ntijen baglayici protein ve Fc/Fcy kompleksi arasindaki etkilesim, sitotoksisite, iininün hücre aktivasyonu, fagositoz ve inflamatuvar sitokinlerin salinimi dahil bir etki araligini içermektedir. Bir antijen baglayici proteinin sabit bölgesi ve çesitli Fc reseptörleri (FcR) arasindaki etkilesimin, antijen baglayici proteinin efektör islevlerini yönlendirdigine inanilmaktadir. Önemli biyolojik etkiler, efektör islevselliginin, özellikle antikora bagimli hücresel sitotoksisitenin (ADCC), komplemanin sabitlenmesinin (komplemana bagimli sitotoksisite veya CDC) ve antijen baglayici proteinin yari ömrü/klerensinin bir sonucu olabilmektedir. Genel olarak, efektör islevi yönlendirebilme kabiliyeti, antijen baglayici proteinin bir antijene baglanmasina gerek yoktur ve tüm antijen baglayici proteinler, her bir efektör islevi yönlendirecektir. Efektör islev, ADCC efektör islevini ölçmek için Fclellaün Dogal Öldürücü hücrelere baglanmasi vasitasiyla veya FcyRI'nin monositlere/makrofajlarara baglantisi vasitasiyla dahil olmak üzere bir dizi yöntemle ölçülebilmektedir. Örnegin, burada tarif edilen bir antijen baglayici protein, bir Dogal Öldürücü hücre deneyinde ADCC efektör islev için degerlendirilebilmektedir. Bu deneylerin örnekleri, Shields ve ark., 2001 The Journal of bulunabilmektedir. Deneylerin, CDC islevini belirleme örnekleri, 1995 J lmm Meth 18429- 38 referansinda açiklananlari içermektedir. Insan sabit bölgelerinin bazi izotipleri, özellikle IgG4 ve IgG2 izotipleri, esasen a) klasik yol ile kompleman aktivasyonunun; ve b) antikora bagimli hücresel sitotoksisitenin islevlerinden mahrumdur. Antijen baglayici proteinlerin agir Zincirli sabit bölgesine çesitli modifikasyonlar, arzu edilen efektör özelligine bagli olarak uygulanabilmektedir. Spesifik mutasyonlari içeren lgGl sabit bölgeleri, Fc reseptörlerine baglantiyi azalttigi ve bu sekilde ADCC ve CDC,yi 6162.109 Burada bir yapilandirinada, bir sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici proteindir. bu sekilde antijen baglayici protein, ADCC ve/Veya kompleman aktivasyon veya efektör islevselligini azaltmistir. Bu tarz bir yapilandirmada, agir zincirli sabit bölge, IgG2 veya IgG4 izotipinin bir dogal olarak engelli bir sabit bölgeyi veya mutasyona ugratilmis bir lgGl sabit bölgesini içerebilmektedir. Uygun modifikasyonlarin örnekleri, EP0307434 Sayili Patent Dokümanlarinda açiklanmaktadir. Bir örnek, 235 ve 237 konumlarinda (EU endeks numaralandirrna) alanin kalintilarinin ikamelerini içermektedir. Asn297 kalintisinda spesifik mutasyonlari veya degistirilmis glikosilasyonu içeren insan IgGl sabit bölgelerinin, Fc reseptörlerine baglantiyi gelistirdigi açiklanmistir. Bazi durumlarda, bu inutasyonlar, ADCC ve CDCiyi gelistirdigi gösterilmistir (Lazar ve ark. PNAS 2006, 103; Burada tarif edildigi gibi bir yapilandirmada, bu tarz mutasyonlar, 239, 332 ve 330 (lgGl) arasindan seçilen bir veya birden fazla konumda veya diger IgG izotiplerinde esdeger konumlarda bulunmaktadir. Uygun inutasyonlann örnekleri, SZ39D ve I332E ve A330L"dir. 332 konumlarinda mutasyona ugratilmaktadir veya bir diger yapilandirrnada, S23 9D ve I332E ugratilmaktadir. (EU endeks numaralandirmasi). Alternatif bir yapilandirmada, bir degistirilmis glikosilasyon profiline sahip olan bir agir zincirli sabit bölgeyi içeren bir antij en baglayici protein tarif edilmektedir, bu sekilde antij en baglayici protein, gelismis efektör islevine sahiptir. Örnegin, burada antijen baglayici protein, gelismis ADCC veya gelismis CDCiye sahiptir veya burada gelismis ADCC ve CDC efektör islevine sahiptir. Bir degistirilmis glikosilasyon profiline sahip antijen baglayici proteinleri EP1229125 Sayili Patent Dokümanmda açiklanmaktadir, bunlarin tümü, tarif edilen antijen baglayici proteinlere uygulanabilmektedir. Mevcut bulus ayrica asagidaki adimlari içeren bir antijen baglayici proteinin üretimine yönelik bir yöntemi tarif etmektedir: 8) burada açiklandigi gibi izole nükleik asidi içeren bir ekspresyon vektörünü içeren bir 6162.109 rekombinant konak hücrenin kültürlenmesi, burada alfa-1,6-fukosi1transferazi kodlayan FUT8 geni, rekombinant konak hücrede etkisiz hale getirilmistir; ve b) antijen baglayici proteinin geri kazanilmasi. Antijen baglayici proteinlerin üretimine yönelik bu tarz yöntemler, örnegin BioWa, Inc."den (Princeton, NJ) temin edilebilen POTELLIGENTTM teknoloji sistemi kullanilarak uygulanabilmektedir, burada FUT8 geninin bir islevsel kopyasindan mahrum olan CHOKISV hücreleri, bir islevsel FUT8 genine sahip olan bir hücrede üretilen bir özdes monoklonal antikora göre artan gelismis antikora bagimli hücre aracili sitotoksisite (ADCC) aktivitesine sahip olan monoklonal antikorlari üretmektedir. POTELLIGENTTM teknoloji sisteminin Dokümanlarinda açiklanmaktadir. Teknikte uzman kisiler ayrica diger uygun sistemleri de anlayacaktir. Bir yapilandirmada, IgG3iten en az bir CH2 alanina sahip olan bir kimerik agir zincirli sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici protein gibi kimerik agir zincirli sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir, bu sekilde antijen baglayici protein, gelismis efektör islevine sahiptir, örnegin gelismis ADCCiye veya gelismis CDCiye veya gelismis ADCC ve CDC islevlerine sahiptir. Bu tarz bir yapilandirmada, antijen baglayici protein, Ayrica, asagidaki adimlari içeren bir antijen baglayici proteinin üretilmesine yönelik bir yöntem tarif edilmektedir: a) burada açiklanan bir izole nükleik asidi içeren bir ekspresyon vektörü içeren bir rekombinant konak hücrenin kültürlenmesi, burada ekspresyon vektörü, IgGl ve IgG3 Fc alani amino asit kalintilarina sahip olan bir PC alanini kodlayan bir nükleik asit sekansini içerrnektedir; ve b) antijen baglayici proteinin geri kazanilmasi. Antijen baglayici proteinlerin bu tarz yöntemleri, örnegin BioWa, Inc. (Princeton, NJ) and Kyowa Hakko Kogyo (simdi, Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.) C0., Ltd.'den temin edilebilen COMPLEGENTTM teknoloji sistemi kullanilarak uygulanabilmektedir, burada bir rekombinant konak hücresi, bir ekspresyon vektörünü içermektedir, burada IgGl ve IgG3 Fc 6162.109 alan amino asit kalintilarina sahip olan bir kimerik Fc alanini kodlayan bir nükleik asit sekansi, bu tarz bir kimerik Fc alanindan mahrum olan baska bir özdes antijen baglayici proteine göre artan gelismis komplemana bagimli sitotoksisite (CDC) aktivitesine sahip olan bir antijen baglayici proteini üretecek sekilde eksprese edilmektedir. COMPLEGENTTM yapilandirmada, CDC aktivitesi, bir IgG zincirinin FC bölgesine sekansa özgü mutasyonlari dahil ederek arttirilabilmektedir. Teknikte uzman kisiler ayrica diger uygun sistemleri de anlayacaktir. Bu tarz inodifikasyonlarin sadece tek basina kullanilmayacagi, ayni zamanda efektör islevini daha da gelistirmek için birbirleriyle kombinasyon halinde kullanilabildigi, teknikte uzman kisiler tarafindan anlasilacaktir. Mevcut basvuruda, bir mutasyona ugratilmis ve kimerik agir Zincirli sabit bölgeyi içeren bir agir Zincirli sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir, örnegin burada bir antijen baglayici protein, IgG3lten en az bir CH2 alanini ve IgGliden bir CH2 konumlarda bulunan bir veya birden fazla mutasyona sahiptir (örnegin mutasyonlar, S239D ve l332E ve A330L arasindan seçilebilmektedir) bu sekilde, antijen baglayici protein, gelismis efektör islevine sahiptir, örnegin burada asagidaki bir veya birden fazla isleve sahiptir, gelismis ADCC veya gelismis CDC, örnegin gelisinis ADCC ve gelismis CDCiye sahiptir. Bir yapilandirmada, lgGl CH2 alani S329D ve l332E mutasyonlarina sahiptir. Bir kiinerik agir Zincirli sabit bölgeyi içeren ve bir degistirilmis glikosilasyon profiline sahip olan bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir. Bu tarz bir yapilandirmada, agir Zincirli sabit bölge, IgG3'ten en az bir CH2 alanini ve IgGllden bir CH2 alanini içermektedir ve bir degistirilmis glikosilasyon profiline sahiptir, bu sekilde manoza fukoz orani, 0.8:3 veya daha azdir, örnegin antijen baglayici protein defukosile olmaktadir, böylelikle söz konusu antijen baglayici protein, söz konusu mutasyonlardan ve degistirilmis glikosilasyon profilinden mahrum olan bir immünoglubulin agir Zincirli sabit bölgeye sahip olan bir esdeger antijen baglayici protein ile kiyaslamada bir gelismis efektör isleve sahiptir, örnegin burada asagidaki bir veya birden fazla isleve sahiptir, gelismis ADCC veya gelismis CDC, örnegin burada ADCC ve gelismis CDC"ye sahiptir. Alternatif bir yapilandirmada, antijen baglayici protein, en az bir lgG3 CH2 alanina ve 6162.109 lgGl"den en az bir agir Zincirli sabit alana sahiptir, burada lgG CH2 alanlari, burada açiklanan kisitlamalarla uyumlu bir sekilde mutasyona ugratilmaktadir. Bir yönünde, asagidaki adimlari içeren, burada açiklanan bir antijen baglayici proteinin üretimine yönelik bir yöntem tarif edilmektedir: 3) burada açiklandigi üzere bir izole nükleik asidi içeren bir ekspresyon vektörü içeren bir rekombinant konak hücrenin kültürlenmesi, söz konusu ekspresyon vektörü ayrica IgGl ve lgG3 FC alani amino asit kalintilarina sahip olan bir kimerik FC alanini kodlayan bir PC nükleik asit sekansi içermektedir ve burada alfa-1,6-fukosiltransferazi kodlayan FUT8 geni, rekombinant konak hücrede etkisiz hale getirilmistir; ve b) antijen baglayici proteinin geri kazanilmasi. Antijen baglayici proteinlerin üretimine yönelik bu tarz yöntemler, örnegin bir kimerik Fc alanindan mahrum olan bir baska özdes monoklonal antikora göre artan ve oligosakkaritte fukoza sahip olan ADCC ve CDC gelismis aktivitesine sahip olan bir antijen baglayici proteini üretmek için POTELLIGENTTM ve COMPLEGENTTM teknoloji sistemleri birlestiren BioWa, Incfden (Princeton, NJ) temin edilebilen ACCRETAMABTM teknoloji sistemi kullanilarak uygulanabilmektedir. Mevcut bulusun bir diger yapilandirmasinda, bir mutasyona ugratilmis ve kimerik agir Zincirli sabit bölgeyi içeren bir antijen baglayici protein tarif edilmektedir, burada söz konusu antijen baglayici protein, bir degistirilmis glikosilasyon profile sahiptir, bu sekilde antijen baglayici protein, gelismis efektör islevine sahiptir, örnegin burada asagidaki bir veya birden fazla isleve sahiptir, gelismis ADCC veya gelismis CDC. Bir yapilandirmada, mutasyonlar, 239 ve arasindan seçilmektedir. Bir diger yapilandirmada, agir Zincirli sabit bölge, IgG3sten en az bir CH2 alanini ve IgG19den bir Ch2 alanini içermektedir. Bu tarz bir yapilandirmada, agir Zincirli sabit bölge, degistirilmis glikosilasyon profiline sahiptir, bu sekilde manoza fukoz orani, 0.8:3 veya daha azdir, örnegin antijen baglayici protein defukosile olmaktadir, böylelikle söz konusu antijen baglayici protein, söz konusu mutasyonlardan ve degistirilmis glikosilasyon profilinden mahrum olan bir esdeger kimerik olinayan antijen baglayici protein veya bir immünoglubulin agir Zincirli sabit bölge ile kiyaslamada gelismis bir efektör islevine sahiptir. 6162.109 Burada tarif edilen antijen baglayici proteinlerin modifiye edilmesine yönelik bir diger araç, immünoglobulini sabit alaninin veya FcRn (Fc reseptör neonat) baglayici alan ile bu tarz proteinlerin in-vivo yari ömrünün artirilmasini içermektedir. Yetiskin memelilerde, neonatal FC reseptörü olarak da bilinen F cRn, lgG izotipinin antikorlarini aglayan ve degradasyondan koruyan bir koruyucu reseptör olarak hareket ederek serum antikoru seviyelerinin sürdürülmesinde anahtar bir rol oynamaktadir. lgG molekülleri, endotelyal hücreler ile endositeze edilmektedir ve FcRn"ye baglanmalari halinde, dolasima geri dönüstürülmektedirler. Buna karsin, FcRniye bagli olmayan lgG molekülleri, hücrelere girrnektedir ve degrade olduklari lizozomal yola hedeflenmektedirler. Neonatal FcRn reseptörünün, antikor klerensinde ve dokular boyunca transistozda dahil His4353i içermektedir. Bu bölümde açiklanan bu konumlardan herhangi birisindeki degisimler, antijen baglayici proteinlerin artan serum yari ömrünü ve/veya degistirilmis efektör özelliklerini mümkün kilabilmektedir. Burada tarif edilen antijen baglayici proteinler, sabit alanin afinitesini veya FcRn için bunun fragmanini arttiran amino asit modifikasyonlarina sahip olabilmektedir. Terapötik ve tanisal lgGinin ve diger biyoaktif moleküllerin yari ömrünün arttirilmasi, bu moleküllerin doz miktarinin ve/veya doz sikliginin azaltilmasini içeren birçok faydaya sahiptir. Bir yapilandirmada, bir veya birden fazla bu amino asit modifikasyonlarina ve bu tarz modifiye edilmis bir lgG sabit alanina konjüge edilmis bir lgG olmayan proteine veya protein olmayan moleküle sahip olan bir IgG sabit alaninin tümünü veya bir bölümünü (bir FcRn baglayici bölüm) içeren bir antijen baglantisi veya bir füzyon proteini tarif edilmektedir, burada modifiye edilmis lgG sabit alaninin mevcudiyeti, antijen baglayici proteinin in Vivo yari ömrünü arttirmaktadir. PCT WO 00/42072 Sayili Yayin, degistirilmis Fchn baglama afinitesine sahip olan bir varyant Fc bölgesini içeren bir polipeptidi tarif etmektedir, burada polipeptit, FC bölgesinin Fc bölgesindeki kalintilarin numaralandirmasi, EU endeksinden (Kabat ve ark.) gelendir. PCT WO 02/060919 A2 Sayili Yayin, bir sokak türü lgG sabit alana göre bir veya birden fazla amino asit modifikasyonunu içeren bir lgG sabit alani içeren bir modifiye edilmis lgG"yi tarif 6162.109 etmektedir, burada modifiye edilmis lgG, sokak türü lgG sabit alanina sahip olan bir lgGinin yari ömrüne kiyasla artmis bir yan ömre sahiptir ve burada bir veya birden fazla amino asit 428-435) bulunmaktadir. olan kalintilari degistirmek için alanin tarama mutagenezini kullanmistir ve daha sonrasinda Insan FcRn"ye olan baglantiyi degerlendirmistir. Alanine degistirildiginde FCRn"ye baglantiyi konumlar, asagidaki gibi baglantida daha az telaffuz edilen bir azaltim sergilemistir: E233- degistirildiginde FcRn baglantisinda bir gelisme sergilemistir; bunlar arasinda P238, T256, sayilabilmektedir. Birçok diger amino asit konumu, FcRn baglantisinda hafif bir gelisme FcRnlye gelismis baglanti ile kombinasyon varyantlari için bulunmustur. pH 6.0,da, göre FcRniye 8 kat daha iyi bir baglanti sergilemistir. T307A,nin buna eklenmesi, natif lgG l "e göre baglantida 12 kat bir gelisimi etkilemistir. Bir yapilandirmada, tarif edilen antijen baglayici protein, E380A/N434A mutasyonlarini içermektedir ve FcRn'ye artan baglantiya sahiptir. karsi insan IgGl birlesim yeri-Fe fragmani faj görüntü kütüphanelerinin taranmasini 433, 434 ve 436) rastgele mutagenezini tarif etmektedirler. IgGl-Insan FcRn kompleks boyunca bir banda yerlestirilen kalintilarin ikame edilmesinde ve daha az bir ölçüde, V308, 6162.109 H433K/N434F/Y436H mutasyonlari birlestirilerek elde edilmistir ve sokak türü lgGl "e göre afinitede 57 kat bir artis sergilemistir. Bu tarz bir mutasyona ugratilmis Insan lgGl 'in in vivo hareketi, sokak türü IgGl"e kiyasla sinomolgus maymununda serumun yari ömründe neredeyse 4 kat bir artis sergilemistir. FcRn"ye optimize baglantiya sahip olan bir antijen baglayici proteinin bir varyanti tarif edilmektedir. Tercih edilen bir yapilandirmada, bir antijen baglayici proteinin söz konusu varyanti, söz konusu antijen baglayici proteinin FC bölgesinde en az bir amino asit modifikasyonunu içennektedir, burada söz konusu modifikasyon, söz konusu ana polipeptide asitlerin numaralandirilmasi, Kabatlta EU endeksinden gelmektedir. olarak, çesitli yayinlar, yari ömürlerinin, bir FcRn-baglayiei polipeptidin moleküllere dahil korundugu, fakat diger Fc reseptörlerinin afinitelerinin büyük ölçüde azaltildigi (WO 99/43713) antikorlarla moleküllerin kaynasik hale getirilmesi veya antikorlarin FcRn baglama vasitasiyla modifiye edildigi fizyolojik olarak aktif moleküllerin elde edilmesine yönelik yöntemleri açiklamaktadir. Ilave olarak, azalan bir biyolojik yari ömür ile bir antijen baglayici proteinin üretilmesine yönelik yöntemler de saglanmaktadir, His435"in, alanine mutasyona ugratildigi bir varyant Sayili Patent Dokümani, antijen baglayici proteini kodlayan DNA segmentine bir mutasyonu dahil ederek azalmis bir biyolojik yari ömür ile bir antijen baglayici proteinin üretilmesine veya 434 konumunda bir amino asit ikamesini içermektedir. 6162.109 Burada kullanilan "Insan olmayan antikor veya bunun antikor fragmani", insandan baska herhangi bir türden kaynaklanan antikorlari veya bunun fragmanlarini ifade etmesi kast edilmektedir, burada insan, kimerik antikorlari içermektedir. "Donör antikoru" terimi, antijenik özgüllüge ve donör antikorunun karakteristigi olan nötralize edici aktiviteye sahip olan degistirilmis immünoglobulin kodlama bölgesini ve elde edilen eksprese edilen degistirilmis antikoru saglayacak sekilde bir birinci immünoglobulin partnerine degisken alanlarin, CDR°lerin veya diger islev fragmanlarinin veya bunun analoglarinin amino asit sekanslarini destekleyen bir antikoru (monoklonal ve/veya rekombinant) ifade etmektedir. bölgelerini ve/veya agir ve/veya hafif Zincirli degisken bölgelerini kodlayan tüm ainino asit sekanslarini (veya herhangi bir bölümü, fakat tercihen tümü) birinci immünoglobulin partnere destekleyen bir antikoru (monoklonal ve/veya rekombinant) ifade etmektedir. Insan antikoru, alici antikorudur. Burada kullanildigi gibi "insan alici sekansi" terimi ile bir insan antikorundan veya bunun antikor fragmandan türetilen bir VH veya VL çerçevesinin veya bir insan olmayan türden CDR`lerin dahil edilebildigi bir insan konsensüs sekansi çerçevesinin amino asit sekansini içeren bir antikorun veya bunun antikor fragmaninin bir çerçevesini ifade etmektedir. Burada kullanildigi üzere CDR,lerin veya hiper degisken bölgelerin "dahil edilmesi" terimi, insan olmayan CDR,1erin, insan alici çerçevesi ile konumlandirildigi herhangi bir araci kapsainaktadir. Buna, çesitli yöntemlerle ulasilabildigi anlasilacaktir, örnegin arzu edilen amino asit sekansini kodlayan nükleik asitler, bunlarin çerçeve kalintilarinin, insan alici çerçeve kalintilarina degistirilmesi için insan olmayan degisken alan sekansini kodlayan nükleik asitlerin mutasyona ugratilmasi vasitasiyla veya CDR"lerin, insan olmayan kalintilara degistirilmesi için insan degisken alan sekansini kodlayan nükleik asidin mutasyona ugratilmasi vasitasiyla veya arzu edilen sekansi kodlayan nükleik asitlerin sentezlenmesi vasitasiyla üretilebilmektedir. Bir yapilandirmada, son sekans, bilgisayar ortaminda olusturulmaktadir. Mevcut bulus, sadece örneklendirme yoluyla açiklanmaktadir. Ekteki istemler, asagidaki bir veya birden fazla örnegin olusturulmasini içerebilmektedir. Örnekler 6162.109 Örnek 1 M0n0kl0nal Antikor Olusumu ve Seçimi 1.1 Immünizasyon stratejisi (K598) ile immünize edilmis farelerden türetilen hibridomlardan tanimlanmistir. Disi SJL olarak toplam lOiig protein kullanilarak geleneksel olarak immünize edilmistir. Güçlendirici immünizasyonlar, Sug protein ile yapilmistir. Kan testleri, her bir güçlendiriciden sonra seçilmistir. Dalak çikarilmis, parçalanmistir ve bir PEG1500 ile indükleninis hücre füzyonu, Nunc Oinnitrays seklinde kaplanmistir. Koloniler, yari kati ortamdan 5 x 96 hazneli plakalara toplanmistir. 1.2 Tarama stratejisi 1.2. 1 Birinci] tarama Anti-OSM yedekleme antikorlarinin birincil taramasi, insan OSMasini baglayabilen hibridom malzemesinin seçilmesine ve Anti-Bölge ll moleküllerinin seçilmesi için, insan ve sinomolgus OSM3nin gpl30 reseptörüne baglanmasinin inhibe edilmesine dayali olmustur. Bu görüntülerden pozitif hibridom süpernatantlari, üst baglayici hibridomlari seçmek için BIACore off-rate kinetikleri ile analiz edilmistir. 3000"in üzerinde klon, füzyonlardan geri kazanilmistir, bunlarin 86`si, baglayici ELISA ile insan OSM"ye kabul edilebilir bir baglanma sergilemistir. Anti-Bölge II aktivitesinin analizi, insan ve sinomolgus OSM ile gp130 ELISA vasitasiyla pozitif hibridomlarda uygulanmistira insan ve sinomolgus OSM"nin insan gp13°e baglanmasini inhibe eden Hibridom klonlar, vasitasiyla en üstteki dört insan OSM baglayici monoklonlanmistir ve yeniden görüntülenmistir. Her bir hibridomdan monoklonalar arasinda BIACore ve ELISA baglayici aktivitede veya gp130 inhibisyonunda herhangi bir fark olmamistir. Yavru klonlar: 10G8.A9, 9G2.C 1, 2B7.A6 ve 3E3.A1, serum içermeyen ölçeklendirme ve saflastirma için dondumlarak 6162.109 saklanmis ve kullanilmistir. Bunlar, ikincil görüntülemeye ilerletilmistir. 1.2.2 Ikinci! tarama insan/sinomolgus OSM; insan/sinomolgus OSM ile Insan gp130 ELISA; insan/sinomolgus OSM ile KB hücre nötralizasyon deneyine dogru BIACore kinetik analizini içermistir. Buna ek olarak, endojen, nötrofil türevi insan OSM°yi nötralize edebilme kabiliyeti, %25 insan AB serumunda nötralizasyon kabiliyetini bulundurmaktadir ve insan LIF'ye dogru reaktivite degerlendirilmistir. BlACore Analizi: BlACore analizi, lOG8, 9G2, 3E3 ve 2B7"nin, alternatif bir rekabetçi olmayan anti-OSM fare antikorundan (. 10G8, insan (~550pM) ve sinomolgus (~3`10pM) OSM için en büyük affiniteyi sergilemistir. sinomolgus OSM için 11 kat/ 1 log arttirilmis affiniteye sahip olmustur. 10G8 ve 9G2, OSM insan boyunca sinomolgus OSM için artmis bir affinite sergilemistir. mAh OSM ka (im rate) kd (af-rate) KD nM Insan gpl30 ELISA: , Insan gpl30 ELISA, nispeten yüksek OSM seviyelerini (25ng/ml) kullanmaktadir, bu da ligand fazla oldugunda yüksek affiniteyi, düsük affiniteli antikorlardan ayirabilme kabiliyetini 6162.109 azaltmaktadir. Bu deneyin dört tekrardan sonra, 10G89in, bu deneyde insan ve sinomolgus OSMinin, gpl30 reseptörüne baglanmasini engelleme hususunda en önemli antikor oldugu gösterilmistir (Sekil 1; Tablo 2). gpl30 ELISAîim tekrarlarinin özeti. Bir rekabetçi olmayan fare antikoru 151310 ve bir negatif kontrol cihazi antikoru, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Insan OSM Siralamasi Antikor Insan OSM Sinomolgus OSM Ortalamasi [C50 Ortalamasi [C50 ug/ml±SD (Sîno OSM Siralamasi) ug/ml±SD Insan gpl30 deneyi, %25 insan AB serumu mevcudiyetinde tekrar edilmistir. Bu deneyin iki sinomolgus OSMinin gp130,a (Veriler gösterilmemistir) baglanabilme kabiliyetini tuttuklarini göstermistir. OSM, IL-67n1n KB hücrelerinden salinimini indüklemektedir (gpl30 ve OSM reseptörleri için mRNA,y1 eksprese eden bir insan epitelyal hücre dizisi). Kisacasi KB hücreleri, 37°C°de 16-18 saatligine l ng/ml OSM +/- farkli antikor ile uyarilmaktadir ve lL-6 salinimi, ELISA ile takip edilmektedir. KB hücre nötralizasyon deneyi, gpl30 deneyi ile kiyaslanan bir azaltilmis OSM miktarini (1ng/ml`ye karsi 25ng/ml) kullanmaktadir. Bu, deneyi, yüksek affiniteli nötralize edicilerin, düsük affiniteli nötralize edicilerden ayrilmasina yönelik daha ayirt edici bir deney haline getirmektedir. Antikor 15E10 ile kiyaslandiginda, 10G8, KB hücre nötralizasyon deneyinde insan OSM,sine dogru 15 kat/ 1.2 log daha önemli olmustur. Deneylerin üç tekrarindan 10G8, tüm tekrarlarda ilk siralanan olmustur, bu da insan OSM°ye karsi 8ng/m1 ve sinomolgusa karsi 6ng/ml bir ortalama IC50 vermektedir (Sekil 2; Tablo 3). 9G2, bu deneyde ikinci olarak siralanmistir, bu da sirasiyla insan ve sinomolgus OSMiye karsi 18ng/ml ve 15ng/ml bir IC50 vermektedir. 6162.109 için KB hücre nötralizasyon deneyiniri üç tekrarinin kisa açiklamasi. Antikor lSElO, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Cihaz antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Insan OSM Siralamasi Antikor Insan OSM Ortalamasi Sinomolgus OSM Ortalamasi IC50 hesaplamak için yeterli miktarda bagli egrilerini üretememistir. Insan olmayan serum KB hücresi deneyi ile oldugu gibi, en önemli antikor, siralama testinde ikinci olan 9G2 ile 10G8 olmustur. Aktivitede olan bazi düsüler, %25 AB serumu mevcudiyetinde görülmüstür. Belirli bir ölçüye kadar, bu, mevcut deney okumasina müdahale eden AB serumundan kaynaklanabilinektedir. Insan olmayan serumunda bu deneyde daha yüksek IL-6 arka plan seviyeleri gözlemlenmistir. Endojen Insan OSM (gp130 Deneyi): endojen insan OSMsyi inhibe etmistir (Sekil 4). Bu natif OSM, saglikli insan nötrofillerinin GM-CSF uyarimindan olusturulmustur. Insan LIF Reaktivitesi (KB Hücre Nötralizasyon Deneyi) Insan LIF, insan OSM"sine IL-6 ailesinin en yakin iliskili elemanidir. Ilk çalismalar, 10G8, 9G2, 3E3 ve 2B7 ve insan LIF arasinda herhangi bir reaktivite olmadigini göstermistir, bu da bu antikorlarin, OSM"ye özgü oldugunu (Sekil 5) göstermektedir. Marmoset OSM Reaktivitesi (KB Hücre Nötralizasyon Deneyi): marmoset OSM,yi nötralize ettigi gösterilmistir (Sekil 5). 15E10 ve üç ilave anti-insan OSM 6162.109 etmemistir. Iki deney tekrarindan, 10G8, siralamada ikinci olan 9G2 ile marmoset OSManin en önemli nötralize edicisi olmustur. 1.2.3 Ilerleme için seçilmis monoklonlar Dört antikordan, 10G8, yukarida listelenen tüm deneylerde birinci siralamaya dayanarak kimerizasyona yönelik öncü antikor olarak seçilmistir. 9G2 ayrica insanlastirma isleminde zorluk çekilmesi halinde, kimerizasyon için bir yedek molekül olarak seçilmistir. 1.3 Antikor Mühendisligi ve Öncü Antikor Serisi Seçimi 1.3.2 Degisken bölge sekanslari Dört seçilmis monoklonalin 2B7, 3E3, 9G2 ve 10G8 degisken genleri, ilgili kimerik antikorlarin olusumuna olanak saglayacak sekilde paralel olarak izole edilmis ve sekanslanmistir. Toplam RNA, hibridom hücre topaklarindan çikarilmistir. Agir ve hafif Zincirli V-gen kodlama sekanslari, RT-PCR veya ?MGE ile güçlendirilmistir ve daha sonrasinda, TA, sekans analizi için klonlanmistir. V-gen amplifikasyonu, iki bagimsiz reaksiyondan dogru sekanslarin dogrulanmasma imkan saglamak için her bir antikorda iki kopya halinde uygulanmistir. Degisken agir ve degisken hafif zincirlerin sekansi, tüm 4 hibridom klonlari için elde edilmistir. Protein sekanslarinin hizalanmasi, antikorlarin, degisken agir ve hafif Zincirli bölgelerde yüksek bir sekans özdesligine sahip oldugunu göstermistir (Sekil 7 & 8). Bu antikorlarin agir ve hafif Zincirli degisken bölgelerinin sekanslari, SEKANS KIMLIK NUMARASI: 26-48 arasinda belirtilmektedir. Bkz. Tablo A. Dört öncü monoklonal ve Antikor lSElO arasindaki sekans kiyaslamasi, hafif (Sekil 9) veya agir (Sekil 10) zincirlerle sadece %50-60 özdeslik göstermektedir. Bu, bu antikorlarin, Antikor 15E10 ile tanimlananlardan ayri epitoplara baglandigini göstermektedir. 1.3.3 Antikor Klonlama 6162.109 1.3.3.1 Kimeralarin olusturulmasi 10G8 ve 9G2, yukarida açiklanan fare VH ve VL bölgelerini, sirasiyla kodonu optimize insan gama 1 FC sokak türü ve insan kappa sabit bölgelere greftleyerek kimerik antikorlar olarak olusturulmustur. Kimerik antikorlar, klonlanmis fare V bölgelerinin islevselligini onaylamasi için kullanilmaktadir ve saflastirilmis ve insanlastirilmis yapilar test edildigin bir referans olarak kullanilmistir. PCR primerleri, Rlx ve pTT5 memeli ekspresyon vektörlerine klonlanmasi için gerekli kisitlama bölgelerini içerecek sekilde 2.3.1"de belirlenen 5" ve 3' DNA sekanslarina bagli olarak tasarlanmistir. Primerler ayrica natif sinyal sekansini, Campath sinyal sekansi ile degistirecek sekilde tasarlanmistir. Hind III ve Spe I bölgeleri, VH alaninin çerçevelenecegi ve insan 71 C bölgesini içeren bir modifiye edilmis Rld veya pTT5 vektörüne klonlamaya olanak saglayacak sekilde tasarlanmistir. Bir Spe I bölgesinin, çerçeve 4 sekansina dahil edilmesi, 108 konumunda bulunan FR4Ste tek bir amino asit degisimine yol açinistir. 9G2 VH bölgesine yönelik olarak, bir iç Spel bölgesi, DNA sekansinin 5"-ucunda mevcut olmustur, 9G2 kimeranin PCR primeri, bu iç Spel bölgesini çikaracak sekilde tasarlanmistir. Hind III ve BsiWI bölgeleri, VL alanini çerçeveleyecek ve insan K C bölgesini içeren bir modifiye edilmis Rln veya pTT5 vektörüne klonlamaya izin verecek sekilde tasarlanmistir. Dogru Vi-i ve VL sekanslarina sahip klonlar tanimlanmistir ve plazmidler, CHO veya HEK hücrelerinde ekspresyon için hazirlanmistir. 1.3.3.2 Kimeralarin ekspresyonu Kimerik 10G8ve 902 VH ve VL alanlarini kodlayan Rld ve Rln plazmidleri, elektroporasyon ile CHOElA hücrelerine sirasiyla birlikte transfekte edilmistir ve bir poliklonal hücre kültüründe eksprese edilmistir. Kimerik 10G8 ve 9G2 VH ve VL alanlarini kodlayan pTT plazmidleri, geçici epizomal ekspresyonuna olanak saglamak için lipid transfeksiyon metodolojisini kullanarak HEK293 hücrelere birlikte transfekte edilmistir, epizomal ekspresyon sisteminde transfeksiyon, potansiyel olarak mg cinsinden antikor miktarlarini saglayabilmektedir. Üretilmis kimerik antikorlar (lOGSc ve 9G2c), Protein A Sefarozda afifnite kromatografisi ile hücre kültürü süpernatantlarindan saflastirilmistir. SaIlastirilmis antikorlar, SDS-PAGE analizi ve büyüklük dislanimli kromatografisi ile QCed olmustur. 1.3.3.3 Baglanma deneyi verileri 6162.109 Insan OSM Baglayici ELISA: basarili bir sekilde baglanmistir (Sekil 11). Bu, insan OSMinin, lpg/m1 miktarda kaplandigi ve anti-insan IgG kullanilarak tespit edilen antikorlari bagladigi bir dogrudan ELISA olmustur. BIACore Analizi: BIACore analizi, fare parental antikorlarla kiyaslanan kimen'k 10G8 ve 9G2 moleküllerinde insan veya sinomolgus OSM baglantisinda az kayip yasandigini veya herhangi bir kayip yasamadigini göstermistir (Tablo 4). 10G8 kimeralari, 9G2 kimeradan (1.33nM) önce ilk olarak (654pM) siralanmaktadir. Tüm antikorlar, insan OSM üzerinde sinomolgus OSM için artan bir affiniteyi sergilemistir. Sino OSM Insan OSM 1.3.3.4 Islevsel deney verileri Insan gp130 ELISA: ligand fazla oldugunda yüksek affiniteyi, düsük affiniteli antikorlardan ayirabilme kabiliyetini azaltmaktadir. Bu deneyin üç tekrarindan sonra, 10G8 kimera, insan ve sinomolgus OSM"nin, gpl30 reseptörüne baglanmasinin inhibe edilmesinde en etkili antikor olmustur. 10G8 fare parental ve 10G8 kimeranin degerleri, bu deneyde oldukça benzer olmustur (Sekil 12;Tablo ). 9G2 ve kimerasi arasinda herhangi bir önemli fark olmamistir. 6162.109 siralamak için insan gpl30 ELISA`nin üç tekrarinin özeti. Antikor l5ElO, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir kontrol antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Insan OSM Siralamasi Antikor Insan OSM Ortalamasi Sinomolgus OSM Ortalamasi IC50 Siralamasi) Insan gpl30 deneyi, insan ve sinomolgus OSM için insan AB serumu mevcudiyetinde tekrar edilmistir. Tüm moleküller, aktivitelerini %25 serumda tutmustur. Insan ve sinomolgus OSM"ye karsi, lOG8 kimera ve 10G8 fare parental sirasiyla birinci ve ikinci olarak siralanmistir. Bu iki antikorun IC50 degerleri oldukça benzer olmustur. Üçüncü olarak siralanmis 9G2 kimera ve fare parentali arasinda herhangi bir önemli fark olmamistir (Veriler gösterilmemistir). KB Hücre Nötralizasyon Deneyi:10G8 fare parentali, kimeraya benzer bir sekilde hareket etmistir (Sekil 13; Tablo 6). 9G2 fare parentali ve kimera, bu deneyde sirasiyla üçüncü ve dördüncü olarak siralanmistir. Tablo 6: KB Hücre Nötralizasyon Deneyi- lOGS, 1008 Kimera, 9G2 & 9G2 Kimera aktivitesini, insan ve sinomolgus OSM`ye karsi siralamak için insan KB hücre nötralizayon deneyinin üç tekrarinin özeti. Antikor I5E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Bir cihaz antikoru, bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Insan OSM Siralamasi Antikor Insan OSM Ortalamasi Sinomolgus OSM Ortalamasi IC50 lC50 ug/ml±SD pg/ml±SD (Sino OSM Siralamasi) sinomolgus OSM7yi nötralize edebilme kabiliyetlerini tutmustur (Sekil 14). Aktivitede olan bazi düsüsler, %25 AB serumu mevcudiyetinde görülmüstür. IC15 degerleri, 6162.109 konsantrasyondan baslayarak bir 1 tig/ml antikoru ile hesaplanamazken, bir net titrasyon nötralizasyon etkisi, iliskili olmayan negatif kontrol haricinde tüm antikcrlar için görülmüstür. Aktivitede bu düsüs, bu deney okumasina belirli bir ölçüde müdahale eden AB serumundan kaynaklanabilinektedir. Insan olmayan serumunda bu deneyde daha yüksek lL-6 arka plan seviyeleri gözlemlenmistir. Endojen Insan OSM (gp130 Deneyi): ve kimerasi, sirasiyla üçüncü ve dördüncü olarak siralanmistir (Tablo 7). Bu natif OSM, saglikli insan nötrofillerinin GM-CSF uyarimindan olusturulmustur. karsi degerlendirmek için gpl30 ELISA`da iki nötrofi] donörünün özeti. Bir cihaz antikor, bir negatifkontrol olarak kullanilmistir. Siralama mAb lC50 ug/ml±SD Insan LIF Reaktivitesi (KB Hücre Nötralizasyon Deneyi) Insan LIF, insan OSM°sine lL-6 ailesinin en yakin iliskili elemanidir. lnsan LIF KB hücre etmedigini göstermistir. Ticari olarak temin edilebilen anti-insan LlF antikoru, bu deneyde LIFiyi nötralize etmemistir (Sekil 16). Bu, bu antikorlarin OSM,ye özgü oldugunu kanitlamaktadir. Örnek 2: Insanlastirma islemi 2.1.1 Agir Zincirli Insanlastirma Stratejisi Insan V geni germ hatti veri tabanlarinin bir BLAST analizinden sonra, fare 10G8 degisken agir Zincirli sekanslarla %74 özdeslige (CDR,ler dahil) sahip olan insan germ hatti 6162.109 (IGHV3_7), insanlastirma islemi için tercih edilen alici çerçevesi olarak seçilmistir. Germ hatti V bölgesi, bir uygun FR4 ile, bu durumda sekans benzerligine dayali olarak JH2 minigeni (Kabat V01.II) ile bilgisayar ortaminda birlestirilmistir. JH2 minigen kalintilarinm birinci alti kalintisi, donör antikorundan gelen CDR ile degistirilen CDR3 bölgesi içerisinde kalmaktadir. Üç insanlastirilmis agir zincir varyantlari, antikor islevinde sekans kiyaslamasinin ve olasi etkinin temelinde olusturulmustur. Yapi HO, lOG8,den fare CDR°lerinin (Kabat tanimi kullanilarak), yukarida seçilmis insan alici çerçeveye bir düz grefti olmustur. Yapilar Hl ve HZ, HO olmustur, her ikisi, her bir yapida farkli olan bir ilave çerçeve mutasyonunu içermektedir; sirasiyla konum 2 ve 105. 2.1.2 Hafif Zincirli lnsanlastirma Islemi Insan V geni gerrn hatti veri tabanlarinin bir BLAST analizinden sonra, fare 10G8 degisken hafif Zincirli sekanslarla %64 özdeslige (CDR"ler dahil) sahip olan insan germ hatti V bölgesi, bir uygun FR4 ile, bu durumda sekans benzerligine dayali olarak J bölgesi kappa 4 minigeni (Kabat Vol.II) ile bilgisayar ortaminda birlestirilmistir. JK-4 minigen kalintilarinin ilk iki kalintisi, CDR3 bölgesi içerisinde kalmaktadir ve fare 10G8 hafif Zincirli CDR3"te son iki kalintiya özdestir. Bes insanlastirilmis agir zincir varyantlari, antikor islevinde sekans kiyaslamasinin ve olasi etkinin temelinde olusturulmustur. Yapi L0, 10G83den fare CDR'lerinin (Kabat tanimi kullanilarak), yukarida seçilmis insan alici çerçeveye bir düz grefti olmustur. Yapilar Ll , L2 ve L3, L0°a dayali olmustur, her ikisi, her bir yapida farkli olan bir ilave çerçeve mutasyonunu içennektedir; sirasiyla konum 46, 84 ve 103. Yapi L4, yukarida bahsi geçen tüm üç geriye mutasyonu içermektedir. 2.1.3 Insanlastirilmis vektörlerin olusturulmasi Insanlastirilmis degisken bölgelerin DNA sekanslari, LETO 1.0 yazilimi (Entelechon GmbH) kullanilarak sekansi optimize edilmistir ve örtüsen oligonükleotidin olusumu ve PCR amplifikasyonu ile de novo sentezlenmistir. Primerler, salgi için memeli ekspresyon vektörlerine ve insan immünoglobulin sinyal sekanslarina klonlama için kisitlama bölgelerini içermistir. Insanlastirilmis degisken agir bölgeleri HO-H2, Hindlll ve Spel kullanilarak insan gama 1 sabit bölgesini içeren memeli ekspresyon vektörlerine klonlanmistir. Paralel olarak, insanlastirilmis degisken hafif bölgeler (L0-L4), Hindlll ve BsiWl kullanilarak insan kappa 6162.109 sabit bölgesini içeren meineli ekspresyon vektörlerine klonlanmistir. 2.1.4 Insanlastirilmis varyantlarin panelin ilk taramasi Insanlastirilmis varyantlarin (3 agir zincir x 5 hafif zincir =15) panelini görüntülemek ve daraltmak için, antikorlar, HEK hücrelerde eksprese edilmistir ve BIACore, ELISA,lar ve islevsel deneyler ile degerlendirilmistir. 2.2 Insanlastirilmis 10G8 Antikorlari Biyo deneyleri: Insanlastirilmis mAb,lere kimera 2.2.1 Ikincil tarama Tablo 9`da listelenen insanlastirilmis 10G8 antikorlarini siralamak için ikincil görüntüleme, insan OSM; insan/sinomolgus GSM ile gpl30 ELISA; insan/sinomolgus GSM ile KB hücre nötralizasyon deneyine dogru BIACore kinetik analizini içermistir. Buna ek olarak, %25 insan AB serumunda gp130 baglantisini bloke edebilme kabiliyeti degerlendirilmistir. BIACore Analizi: Transfeksiyon süpematantlarinda ilk BIACore analizi, L1 ve L4 insanlastirilmis varyantlarin, L0, L2 ve L3 insanlastirilmis varyantlardan insan OSM için daha yüksek affinitelere sahip oldugunu göstermistir (Tablo 8). Bu hafif Zincirli mutasyonlar, tek basina düz greft (HOLO) ve 10G8 kimera ile kiyaslandiginda affîniteyi gelistirmistir. Agir Zincirli varyantlar Hl ve H2, antikorlarin affinitesinde, düz greft üzerinde, HO, az etkiye sahip olmustur. Ölçekli saflastirilmis Ll ve L4 analizi, bu mAb,lerin, insan ve sino OSM'ye affiniteler arasinda oldukça az fark oldugunu göstermistir (Tablo 9). 6162.109 Tablo 8: BIA Core Kineti'cs- 10G8 Kime/*a ile kiyaslandiginda on bes anti-OSMyedck i`n.s'anlasui'ilmis 1' 0G8 antikorlarmm transfeksi'yon süpernatantlarinin insan OSM baglama kinetikleri. H1L0 3.5.iF r. 0:-: 0.425 H1L2 BIZ-.EF 5 c3=-: 0.445 H1L3 ':?IL-E'i .; _-- 0.344 mu' 37:5»5 i'eaF-i 0.344 H2L3 .4 :ne-r. Eîlî- 0.398 1008 Kimcra _'FiZE'f'i !:55- II 'JT süpernatanti 1008 Kimera 3 ;wc u cu: ~ iii :o: saflastirilmis arztikoi'larmin saflastirilmis ki'i'meleri'ni'n Sinomolgus ve Insan OSM baglama kinetik/eri Sino OSM Insan OSM 6162.109 KB hücre nötralizasyon deneyi, gpl30 deneyi ile kiyaslanan bir azaltilmis OSM miktarini (lng/mliye karsi 25ng/ml) kullaninaktadir. Bu. deneyi, yüksek aftiniteli nötralize edicilerin, düsük affiniteli nötralize edicilerden ayrilmasina yönelik daha ayirt edici bir deney haline getirmektedir. Ilk HO, Hl, HZ, L0, L1, L2, L3 ve L4 varyanti yapilarinin bir KB hücre deneyi görüntüsü, L1 yapilarinda üstünlük göstermistir (Veriler gösterilmemistir). Bunlar, BIACore analizinde iyi uygulanan L4 varyantlari ile birlikte, diger deneyler için daha büyük kümeler halinde üretilmistir. Deneyin üç tekrarindan, Insanlastirilmis 10G8 Ll varyantlari ilk olarak siralanmistir, bu da insan OSMaye karsi l4ng/ml ve sinomolgusa karsi 10ng/ml bir ortalama Tablo 10: KB Hücre Nötralizasyon Deneyi - Insanlastirilmzs 1068 LI ve L4 Vaiyantlarimn akti'vitesi'ni', insan ve .yinomolgus OSM 'ye karsi siralamak için KB hücre nötrali'zasyon deneyiniiz üç tekrarmm özeti. Insan OSM Antikor Insan OSM Ortalamasi Sinomolgus OSM Ortalamasi 1C50 Siralamasi lCSO ug/ml±SD ug/ml±SD (Sino OSM Siralamasi) Insanlastirilmis 10G8 Ll varyantlari, L4 varyantlarina kiyasla KB hücre deneyinde daha büyük biyolojik aktivite sergiledikleri için diger testlere yönelik olarak seçilmistir. L4 varyantlari, CHO-El a sisteminde oldukça düsük bir üretim verimliligine sahip olmustur ve bu ayrica, diger ilerleineler için bunlari yönlendirmistir. ligand fazla oldugunda yüksek affiniteyi, düsük affiniteli antikorlardan ayirabilme kabiliyetini azaltmaktadir. lnsanlastirilmis lOG8 Ll varyantlari ile bu deneyin iki tekrarindan sonra, tüm üç varyantin, insan ve sinomolgus OSMsnin, bu deneyde gpl30 reseptörüne baglanmasinin engellenmesinde esdeger oldugu gösterilmistir (Sekil 18). 6162.109 Insan gpl30 deneyi, %25 insan AB serumu mevcudiyetinde uygulanmistir. Bu deneyin iki tekrari, tüm antikorlarin, Insanlastirilmis 10G8 HOLI, H] L] ve H2Ll varyantlarinin, insan ve sinomolgus OSM,nin gpl30`a baglanabilme kabiliyetlerini korumustur (Veriler gösterilmemistir). 2.3 Fab Fragmanlarinin Izolasyonu ve 10G8 mAb-OSM Kompleksinin Kristalizasyonu 2.3.2 Fab Fragmanlannin Olusumu 10G8 parental antikorundan Fab fragmanlari, 20mM fosfat tampon pH 7, IOmM EDTA ve lOmM L-sisteini içeren bir tamponda 37Clde 20 saatligine tanecigi immobilize papain (Pierce 20341) ile sindirim vasitasiyla olusturulmustur. Sindirimden sonra, tanecikler, tek kullanimlik bir plastik kolon kullanilarak çikarilmistir, Kontamine edici Fc fragmanlari ve sindirilmemis antikor, Protein A türü kromatografi kullanilarak Fab fragmanlarindan çikarilmistir (MabSelect, GE Healthcare 17-5438-03). Fab fragmanlarini içeren baglanmamis fraksiyon, Büyüklük Dislanimli Kromatografisi (SEC) (GE Healthcare 17-1069-01) kullanilarak daha da saflastirilmistir. 4C'de, 1.5 saatligine molar orani l:1 olan, 5.75mg rekombinant OSM (GRITSZ karistirilarak kompleks olusturulmustur. Kompleks daha sonrasinda, Superdex 200pg SEC kullanilarak komplekslenmemis malzemeden saIlastirilmistir. Çözünmüs kompleks, bir lOkmwco membran (Vivaspin VSZOOZ) ile bagli bir santritîjjel konsantrasyon cihazi kullanilarak 44mg/ml toplam proteine (9.2 mg verim) konsantre edilmistir. Kompleks bilesenler, N- terminal sekanslamasi, kütle spektrometrisi ve SDS-PAGE kullanilarak dogmlanmistir. Fab fragmanlarinin OSM islevsel baglama aktivitesi, gp130 inhibisyon deneyi (veri gösterilmemistir) kullanilarak onaylanmistir. 2.3.2 lOG8-OSM Kompleks Kristalizasyonu 10G8 OSM Fab fragmanlari, OSM ile komplekslenmistir ve bu, bir çökelti olarak PEG3500 kullanilarak 20°C"de kristallenmistir. Kristalizasyon optimize edilmistir, Avrupa Sinkrotron Radyasyon Tesisine (ESRF) analiz için gönderilmistir ve yapi, 3.5 Ä"da çözülmüstür. lOG8 mAb, OSM`nin B ve C sarmallarini iyi yüzey tamamlayiciligi ile baglamaktadir ve Bölge 6162.109 ile saf bir sekilde baglanmasini engellemistir. 3.5 Â,da çözüldügünde baglantida dogrudan dahil edilen tek kalintilar (5 Ä,dan daha az mesafede), Tablo 11 ve Sekil 19,da gösterilmektedir. Hafif zincir, bu bloke edici etkinin çogundan sorumludur. Dört CDR, dogrudan veya su yönlendirme etkilesimleri vasitasiyla OSM, CDRH2, H3 ve CDRLl ve L3,ün B ve C sarmallarini baglamaktadir. 10G8 mAb,nin baglanmasinda, OSM molekülünde öneinli bir bozulma olmamistir. Iki CDR (CDRHl ve L2) baglayici olmazken, antikorun varyantlari, bir veya bunlardan her ikisinin, bir insan sekansina geri dönüstürüldügü yerde olusturulmustur. Bu, düz insanlastirilmis greftten daha az bir immünojenik moleküle yol açabilmektedir. OSM Resno Atom Antikor kalintilari (L=hafifzincir, Resno Atom Angstrom`daki kalintilari (Tür) H=agir zincir) (Tür) mesafe A 82(LEU) (3 H CG2 3.45 82(LEU) 0 H CGZ 3.47 A 83(HIS). CB H 59(TYR) OH 3.37 A 83(HIS). CEI H . CG2 3.43 A 83(HIS). NE2 H I06(TRP). CH2 3.44 A 83(HIS). (. 011 3.30 A 90(GLN). . 0 3.30 2.3.3 2.3.4 Insanlastirilmis 10G8 Antikoru: Insan CDR Ikameleri 6162.109 GSM ile komplekslenmis anti-OSM lOG8 mAb,nin kurum içerisinde çözülmüs kristal yapisi, CDRHl ve CDRL2"nin, antijen baglantisinda dogrudan dahil edilmedigini tanimlamistir. Uygun insan germ hatti CDRiler, bu fare germ hatti CDRileri degistirecek sekilde seçilmistir. Iki CDRH] ve iki CDRL2 insan germ hatti sekansi, antijen baglantisinda etkileri için test edilmistir. Agir ve hafif zincirli CDR,ler için, orijinal insan germ hatti alici çerçevesinden sekanslar (sirasiyla IGHV ve ayrica CDR ve komsu çerçeve homolojsine (IGHV dayali olarak seçilmis diger iki insan germ hatti sekanslari test edilmistir. Insan germ hatti CDRHl ve CDRL2 sekanslari, insanlastirilmis HO ve Ll V bölgelerinde ilgili fare CDR,1er için degistirilmistir. Yeni V bölgeleri, 1.1.4 bölümünde oldugu gibi örtüsen oligonükleotidin ve PCR amplifikasyonunun olusumu ile yeniden sentezlenmistir. 2.4 Insanlastirilmis 1008 Antikorlarinin Biyo Deneyleri: Insanlastirilmis Baglayici Olmayan CDR ile Insanlastirilmis 1008 mAb*ye insanlastiirlmis 1008 HOLl mAb 2.4.1 Ikincil tarama BIACore Analizi: Çesitli insanlastirilmis 10G8 HOLl CDRHl ve CDRLZ yapilarindan transfeksiyon süpernatantlarinda BIACore analizi, ön aday mAb"nin insan OSM affînitesini tamamen yapi, sonraki en iyi KD degerleri ile diger iki molekül ile birlikte, HOL1(IGKV4_1) ve HO(IGHV bir diger çalisma için ölçeklendirilmis ve saflastirilmistir. 6162.109 Tablo 12: BIACore Kinetikleri- 1068 Kime/'a ile kiyaslandiginda anil-OSM yedek i'nsanlaslirilmis 10G8 HOLI CDRHI ve CDRL2 van/'ant antikorlarmin transfeksiyon süperriatantlarinin Sinomolgus ve Insan OSM baglanma kinetik/eri. Cyno OSM +L1 IGKV4_1 düsük yakalama seviyesi +L1 IGKV1_5 +L1 IGKV4_1 +L1 IGKV1_5 6162.109 KB hücre nötralizasyon deneyi, insanlastirilmis Ll yapisi, HO('CDRH1)L1 olarak isaretlenmektedir), ana Insanlastirilmis 10G8 HOLl (HOLl olarak isaretlenmistir) mAb,ye oldukça benzer bir potansiyel sergilemistir. Baglayici olmayan CDRL2°nin, insan sekansina herhangi bir dönüsümü, HOL1(IGKV olarak isaretlenmistir) ve H0(IGHV olarak isaretlenmistir) antikorlarina yönelik verilerden görüldügü üzere nötralizasyon aktivitesinde bir azalma sergilemistir (Sekil 20, Tablo 13). Tablo 13: KB Hücre Nötralizasyon Deneyi - Insiinlaslirilmis /0G8 HOLI CDRH/ ve CDRL2 Vai'yanl/arinm aktivitesini, insan ve si'nomolgus OSM 'ye karsi siralamak için KB hücre nölralt'zasyon deneyim): üç tekrari/un özeti. Insan OSM Antikor Insan OSM Ortalamasi Sinomolgus OSM Ortalamasi ICSÜ Siralamasi IC50 pg/ml±SD ug/mI±SD (Sîno OSM Siralamasi) (huCDRLZ) Bu verilerden, insanlastirilmis L1, tam karakterizasyon için öncü ön aday mAb olarak seçilmistir. 2.5 Insanlastirilmis 10G8 Antikorlarmm Biyo Deneyleri: lnsanlastirilmistir 10G8 H0(IGHV3_23)L1 mAb 2.5.1 Ikincil tarama BIACore Analizi: BIACore analizi, saflastirilmis H0(lGHV3_23)L1 mAbsde uygulanmistir ve 10G8 kimeraya ve Insanlastirilmis 10G8 HOLl ana mAb,ye karsi siralanmistir. Insan ve siyano OSMSye yönelik affinitede H0(IGHV3_23)L1 mAb ve ana HOL] mAb arasinda az fark mevcut olmustur veya herhangi bir fark olmamistir (Tablo 6). HO(IGHV3_23)L1 mAb, bir alternatif rekabetçi olmayan anti-OSM insanlastirilmis antikoruna 15E10h kiyasla insan OSM için bir 6.5 kat (0.8 log) artmis affiniteye sahip olmustur. Bu çalisma için bir yeni OSM kümesi 6162.109 kullanilmistir, bu da düsük KD degerlerine yol açmistir, fakat insanlastirilmis varyantlar ve rekabetçi olmayan antikor arasindaki farklar ayni kalmistir. kiyaslandiginda ve bir' alternatif rekabetçi olmayan anti-OSM iiisanlasîirilmis antikor 15510 ile kiyaslandiginda saflasririlmzs HO(1CIHV3_23)L1 mAb 'nin Sinomolgus ve .Insan OSM baglama kiiietikleri, Sino OSM Insan OSM Kinexa Analizi Kinexa (Sapidyne Instruments 3200) çözelti fazi affinitesi, insan, sinomolgus makak, resus makagi ve marmoset OSMiye anti-OSM antikorunun (HO(huCDRH1)Ll) ve Insanlastirilmis genel affinitesini belirleyecek sekilde kullanilmistir (Tablo 15). Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. OSM tanecikleri, adsorpsiyon (polimetilmetakrilat tanecikleri-PMMA) veya amin baglantisi (NHS ile aktif hale getirilmis sefaroz tanecikleri) ile hazirlanmistir. Incelenen OSM moleküllerinin araligi, farkli OSM konsantrasyonlari ile kapli taneciklerin olusumuna gerektirmistir. Deneyin çözelti fazi bölümü için, antikorun bir sabit konsantrasyonu, OSM konsantrasyonlarinin genis bir araligi ile inkube edilmistir ve analize devam etmeden önce en az 2 saatligine oda sicakliginda inkubasyon ile dengeye ulasmasina izin verilmistir. OSM tanecikleri daha sonrasinda, bir floresan boya ile isaretlenen bir uygun ikincil antikoru (test edilen yapiya bagli olarak anti-insan veya anti-fare) kullanilarak tespit edilen OSM tanecik matrisine serbest antikor baglantisinin vasitasiyla çözelti fazi numunelerinde mevcut serbest antikor miktarini belirleyecek sekilde kullanilmistir. Baglama egrileri, makineye özgü Kinexa Pro analiz yazilimi kullanilarak baglanmistir. Antikorun çesitli baslangiç konsantrasyonlarini kullanan çok sayida çalisma derlenmistir ve daha dogru bir affinite saptamasi saglamak için n-egri analiz yazilimi kullanilarak analiz edilmistir. H0(huCDRl-I1)L1, öncesinde Biacore analizi ile degerlendirildigi üzere insan OSM için daha yüksek bir affinite sergilemektedir. Antikorun, çip yüzeyine bagli oldugu yerde Biacore°un 6162.109 aksine, Kinexa, affiniteyi degerlendirmek için bir sivi fazda serbest antikoru ve ligandi kullanmaktadir, bu da dogal duruma daha benzerdir. Tablo 15: Kinexa Kinetikleri- Saflastirilmis anti~OSM yedek antikor H0(IiuCDRH 1)LI ve Insanlastzirlniis l 5 E I 0 `un insan, sinomolgus, resiis ve marmoset OSM baglama kinetikleri. Yapi Antijen KD (pM) %95 yüksek (pM) %95 düsük (pM) H0(huCDRH1)Ll Insan OSM 38 62 22 ** Affmite, marmoset OSM için oldukça zayiftir, bu da bir reseptör için, 40 nM antikordan daha fazla yürütülen deneyin, uM OSM miktarlarini kullanmaya ihtiyaç duyacagi anlamina gelmektedir. Genel sonuç, marrnoset OSM7ye insanlastirilmis 15E10,un baglanmasi, insan OSMiye oldugundan önemli ölçüde daha zayif olmasidir. Insan gp kullanmaktadir, bu sekilde yüksek affiniteli antikorlari, düsük affiniteli antikorlara ayirabilme kabiliyetini azaltmaktadir. gp130 deneyinin üç tekrarindan sonra, 10G8 fare parental, 10G8 Kimera, Insanlastirilmis 10G8 HOLl parentinin HOLl ve H0(huCDRHl)Ll "in, bu deneyde insan ve sinomolgus OSM'nin gp130 reseptörüne baglanmasinin engellenmesinde tümüyle önemli olmustur (Sekil 21). Bu deneyde yüksek antijen seviyelerinden dolayi, net bir siralama ayirt edilememistir. Insan gpl30 deneyi, %25 insan AB serumu ve %25 insan havuza alinmis eklem sivisi mevcudiyetinde tekrar edilmistir. Her bir matrisin bu deneyinin üç tekrari, tüin antikorlarin, H0(huCDRHl)Ll,in, 15E10h ile birlikte, insan ve sinomolgus OSMlnin, gp1309a baglanmasini engelleyebilme kabiliyetlerini korumustur (Veri gösterilmemistir). 6162.109 KB hücre nötralizasyon deneyi, kullanilan düsük OSM seviyelerinden (lng/ml) dolayi, yüksek affîniteli nötralize edicileri, düsük affîniteli nötralize edicilerden ayrilmasina yönelik olarak gpl30 deneyinden daha ayirt edici bir deneydir. Deneyin üç tekrarindan, (HO(huCDRHl)Ll, insan OSMiye karsi 30ng/ml, sinomolgus OSM,ye karsi 41ng/ml ve marmoset OSM"ye karsi 36ng/ml bir ortalama IC50 degeri vermistir (Sekil 22; Tablo 17). Tablo L1 aktivitesini, insan, sinomolgiis ve marmoset OSM 'ye karsi siralamak için KB hücre nötralizasvon denqii'i'ni'n [iç tekrarinm özeti. 15E1 0/1, kiyaslama amaç/ari için eklenmistir. Insan OSM Antikor Insan OSM Sinomolgus OSM Ortalamasi Marmoset OSM Ortalamasi Siralamasi Ortalamasi IC50 ug/ml±SD (Sino IC50 ug/mI±SD (Marm (17PM) (19PM) Ll (ZOpM) (35pM) (181pM) (`26lpM) (H0(huCDRH1)L1 ve 15E10h, OSM"yi kabiliyetlerini korumustur (Sekil 23). %25 AB serumunun veya %25 havuza alinmis eklem insan ve sinomolgus nötralize edebilme sivisi mevcudiyetinde aktivitede belirli bir düsüs görülmüstür. Bunun, bu deneyin okunmasina müdahale eden bu matrislerden kaynaklaninasi oldukça muhtemeldir. Bu deneyde, normal deneyde olandan daha yüksek IL-6 arka plan seviyeleri gözlemlenmistir. Ll ,in, KB hücresi nötralizasyon deneyinde marmoset OSM,sini nötralize ettigi gösterilmistir. Üç ilave anti-insan OSM antikorlarinin 10D3DLE, Endoien Insan OSM gp130 Deneyi: HO(huCDRl-Il)Ll ve ayrica lSEth, endojen insan OSMiyI, dört ayri donörden inhibe etmistir (Sekil 24). Bu dört donörün sonuçlarindan, HOLl parent ve H0(huCDRHl)Ll 6162.109 mAbller arasinda oldukça az bir fark mevcut olmustur; bunlar, 10G8 fare parentalden ve kimerasindan daha yüksek sirada olmustur (Tablo 18). H0(huCDRHl)Ll, 15E10h ile kiyaslandiginda potansiyelde yaklasik olarak 12 kat (1.09 log) artisa sahip olmustur. Bu natif OSM, saglikli insan nötrofillerinin GM-CSF uyarimindan olusturulmustur. Tablo 18: Endqien OSM Insan gp ve H()(hiiCDRH1)L1 aktivitesi'izi', endqjen insan OSM'ye karsi degerlendirmek için gp130 ELISA 'da dört iiöirqfil donöriiniin özeti. Siralamasi mAh ICSÜ pg/ml±SD Insan LIF Reaktivitesi (KB Hücre Nötralizasvon Deneyi): Insan LIF, insan OSM9ye lL-6 ailesinin en yakin iliskili elemanidir. Insan LIF KB hücre deneyinin üç tekrari, 10G8 fare parental, 10G8 Kimera, Insanlastirilinis 10G8 HOLl parent (HOLl) ve H0(huCDRH1)Ll veya 15E10h"nin, insan LIFSyi nötralize etmedigini göstermistir. 15E10h, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Ticari olarak temin edilebilen anti- insan LIF antikoru, bu deneyde LIFsyi nötralize etmemistir (Sekil 25). Bu, bu antikorlarin OSM"ye özgü oldugunu kanitlamaktadir. Birincil Insan Hepatosit Deneyi: Insan birincil hepatositler, OSM"ye duyarlidir ve OSM uyarimina yanitsal olarak, SAA ve CRP gibi akut faz proteinleri salmaktadir. H0(huCDRH1)Ll, üç ayri donörden bir doza bagimli sekilde hepatositlerde insan OSM ile indükleninis SAA (Sekil 26) ve CRP (Sekil 27) salinimini inhibc etmistir. Insanlastirilmis 15E10, kiyaslama amaçlari için eklenmistir. Esdeger deneyler, diger birincil insan hücre türlerini kullanarak uygulanmistir. Bunlar, umbilikal damar endotelyal hücrelerini; romatoid artrit hastalarindan sinoviositlere benzer insan fibroblasti; saglikli ve idiyopatik akciger fibroz hastaliklarindan inan akciger fibrobastlarini içermistir (veriler gösterilmemistir). Önceki deneylerle oldugu gibi, H0(huCDRHl)Ll, insanlastirilmis 15E10 üzerinde üstün OSM nötralizasyonu 6162.109 sergilemektedir. H0(huCDRH1)Ll ve insanlastirilmis 15E10 arasindaki potansiyele dair kat farki, hücre dizisi OSM konsantrasyonuna bagli olarak degiskenlik göstermektedir. 2.6 Biyofiziksel Karakterizasyon HO(huCDRH`l)L1,in bir temel biyofiziksel profili, Insanlastirilmis 10G8 HOLl ana mAb ile birlikte uygulanmistir. Antikorlar, asagidaki gibi çevresel streslere tabi tutulmustur: 4°C veya 37°C°de 14 günlügüne inkubasyon ile sicaklik; - Bes donma-çözülme döngüsü; - 48 saatligine 37°C"de %I amonyum bikarbonat ile inkubasyon vasitasiyla zorla deamidasyon. Ne antikor, biyofiziksel degisimde kayip ne de yukarida bahsi geçen streslerden sonraki aktivitede kayip sergilemistir. 2.6 CDRH3 Varvant Insanlastirilmis Antikorlar 2. 6.1 CDRH3 varyant insanlastirilmis antikorlarin olusturulmasi Her bir CDRH3 kalintisini (SEKANS KIMLIK NUMARASI: 3), bir alternatif amino asit kalintisina ikamesi, bir taban molekülü olarak bir pTT plazmidinde (Ulusal Arastirma Konseyi Kanada, degistirilmis Çoklu Klonlama Bölgesi (MCS) ile) agir Zincirli HO (IGHV (degisken sekans: SEKANS KIMLIK NUMARASI: 74) kullanilarak tamamlanmistir. Bölgeye yönelik mutagenez teknigi (SDM) kullanilmistir, bu vesileyle oligonükleotidlerin, amino asit ikame konumunda NNK sekansini (N = A/T/G/C; K = G veya T) tasiyacak sekilde tasarlanmistir. Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR), degisimi içeren yeni plazmidleri olusturacak sekilde kullanilmistir ve DNA sekanslamasi, amino asit degisimleri ile klonlari tanimlayacak sekilde kullanilmistir. Bu sekilde, her bir 12 CDRH3 konumunda 10 ve 17 arasinda farkli amino aside sahip varyantlar izole edilmistir. CDRH3 varyant antikorlari, L] hafif zincir (SEKANS KIMLIK NUMARASI: 72) ve baglantiya yönelik süpematantlari ile bir HO (IGHV3_23) varyantini içeren pTT vektörlerinin birlikte transfekte edilmesi ile üretilmistir. 6162.109 2.6.2 HEK 293 6E hücrelerinde CDRH3 varyant ekspresyonu Agir zincirli (HO (IGHV3_23)) CDRH3 varyantlari ve hafif Zincirli Ll'i kodlayan pTT plazmidleri, HEK 293 6E hücrelerine geçici olarak birlikte transfekte edilmistir ve antikoru üretmek üzere küçük ölçekte eksprese edilmistir. Antikorlar, dogrudan doku kültürü süpernatantindan degerlendirilmistir. 2.6.3 CDRH3-varyant doku Kültürü Süpematantlarinin Kinetik analizi CDRH3 görüntüsünün ilk kinetik analizleri, ProteOn XPR36°da (Biorad Laboratories) uygulanmistir ve belirli süpernatantlar, BiaCore T100,de daha dogru kinetik analiz için seçilmistir. ProteOn analizi için, anti-insan IgG (GE Healthcare/Biacore BR-1008-39), birincil amin baglantisi ile bir GLM çipine (Biorad Laboratories 176-5012) baglanmistir. CDRH3 varyantlari, bu yüzeyde dogrudan yakalanmistir ve rekombinant insan OSM, baglama egrilerine çift referans vermek için kullanilan tek bir bir tampon enjeksiyonu (yani onM) ile 256, 64, 16, 4 ve lnMlde, yakalanmis antikor yüzeyi üzerinden geçirilmistir. OSMinin baglanma eyleminden sonra, yakalama yüzeyleri yeniden olusturulmustur: 3M MgC12 ile, rejenerasyon, yakalama ve baglama analizinin bir diger döngüsü için hazir olan öncesinde yakalanmis antikoru çikarmistir. Veri daha sonrasinda ProteOn analiz yazilimina özgü lzl modeline (kütle tasimasi ile) birlestirilmistir. Çalisma, HBS-EP (Biacore/GE-Healthcare BR- 1006-69) kullanilarak uygulanmistir ve analiz sicakligi, 25°C olmustur. Biacore T100 kullanilarak yapilarin analizi için benzer bir yöntem kullanilmistir, anti-insan Healthcare/Biacore BR-1006-68) baglanmistir, antikorlar, bu yüzeyde yakalanmistir ve rekombinant insan OSM, baglama egrilerine çift referans vermek için kullanilan tek basina bir tampon enjeksiyonu (yani OnM) ile 256, 64, 16, 4 ve 1nM°de yakalanmis antikor yüzeyi üzerinden geçirilmistir. Rejenerasyon, 3M 3M MgClz veya lOOmM fosforik asidin darbeleri kullanilarak veya her iki reaktif kullanilarak gerçeklestirilmistir. Veri, Biacore T100 analiz yazilimina özgü lzl modeline birlestirilmistir. Çalisma, HBS-EP (Biacore/GE-Healthcare BR- 6162.109 1006-69) kullanilarak uygulanmistir ve analiz sicakligi, 25°C olmustur. Baglanma verisi sonuçlari için bkz. Sekil 33. Sekans Özeti :Tablo A! Açiklama Amino asit sekansi Polinükleotit sekansi lOGS CDRHl SEKANS KIMLIK No:1 n/a 1008 CDRHZ SEKANS KIMLIK No:2 n/a 10G8 CDRLl SEKANS KIMLIK No:4 n/a 1008 CDRL2 SEKANS KIMLIK No:5 n/a 10G8 CDRL3 SEKANS KIMLIK No:6 n/a 3153 CDRHl SEKANS KIMLIK No:7 n/a 3E3 CDRL2 SEKANS KIMLIK NO:11 n/a 333 CDRL3 SEKANS KIMLIK NO: 12 n/a 237 CDRH] SEKANS KIMLIK NO:13 n/a 237 CDRLI SEKANS KIMLIK NO:16 n/a 2B7 CDRL2 SEKANS KIMLIK NO: 17 n/a 237 CDRL3 SEKANS KIMLIK NO: 18 n/a 902 CDRH] SEKANS KIMLIK NO: 19 n/a 902 CDRLI SEKANS KIMLIK NO:22 n/a 10G8 Vii alan (faregiller) SEKANS KIMLIK NO:26 SEKANS KIMLIK NO:25 SEKANS KIMLIK NO:28 SEKANS KIMLIK NO:27 SEKANS KIMLIK NO:30 SEKANS KIMLIK NO:29 SEKANS KIMLIK NO:32 SEKANS KIMLIK NO:31 SEKANS KIMLIK NO:34 SEKANS KIMLIK NO:33 2B7 V1_ alan (faregiller) SEKANS KIMLIK NO:36 SEKANS KIMLIK NO:35 902 Vii alan (faregiller) SEKANS KIMLIK NO:38 SEKANS KIMLIK NO:37 SEKANS KIMLIK NO:40 SEKANS KIMLIK NO:39 SEKANS KIMLIK NO:42 SEKANS KIMLIK NO:41 SEKANS KIMLIK NO:44 SEKANS KIMLIK NO:43 6162.109 902 Vi-i alan (kimera) SEKANS KIMLIK NO:46 SEKANS KIMLIK NO:45 902 W alan (kimera) SEKANS KIMLIK NO:48 SEKANS KIMLIK NO:47 hatti alici nükleotit sekansi IGKV4_I Insan degisken liafîfzincir germ hatti alici nükleotit sekansi SEKANS KIMLIK NO:52 SEKANS KIMLIK NO:51 10G8 Insanlastirilmis Vu HO (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:54 SEKANS KIMLIK NO:53 10G8 Insanlastirilmis VH Hl (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:56 SEKANS KIMLIK NO:55 10G8 Insanlastirilmis Vi-i 1-12 (nükleotit sekansi leto kodon optiinizedir) SEKANS KIMLIK NO:58 SEKANS KIMLIK NO:57 1068 Insanlastirilmis Vi_ L0 (nüklcotit sckansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:60 SEKANS KIMLIK NO:59 1068 Insanlastirilmis Vi_ LI (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:62 SEKANS KIMLIK NO:61 1068 Insanlastirilmis VL L2 (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:64 SEKANS KIMLIK NO:63 10G8 Insanlastirilmis Vi_ L3 (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:66 SEKANS KIMLIK NO:65 1008 Insanlastirilmis Vi_ L4 (nükleotit sekansi leto kodon optiinizedir) SEKANS KIMLIK NO:68 SEKANS KIMLIK NO:67 Matürc HO agir Zincir (nüklcotit sckansi loto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:70 SEKANS KIMLIK NO:69 Matüre L] hafif zincir (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:72 SEKANS KIMLIK NO:71 Insanlastirilmis VH variant HO ([GHV (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:74 SEKANS KIMLIK NO:73 Matüre HO (IGHV agir zincir (nükleotit sekansi leto kodon optimizedir) SEKANS KIMLIK NO:76 SEKANS KIMLIK NO:75 Insan agir zincir germ hatti IGHV3_23 CDR1-11 SEKANS KIMLIK NO:77 n/a Insan hafif zincir germ hatti 1GKV1_5 CDRL2 SEKANS KIMLIK NO:78 n/a 15E10h Agir zincir SEKANS KIMLIK NO:79 n/a 15E10h Hafif zincir SEKANS KIMLIK NO:80 n/a 15E10 Insanlastirilmis VH B3 SEKANS KIMLIK NO:81 n/a 151510 Insanlastirilmis VL L2 SEKANS KIMLIK NO:82 n/a Insan OSM SEKANS KIMLIK NO:84 SEKANS KIMLIK NO:83 6162.109 Sekans Listesi TISDGGSFIYYLDNVRG SEKANS KIMLIK NO:310G8 CDRH3 DVGHTTFWYFDV RASKSVSAAGYNFMH YASNLES . . LHSREFPFI . SEKANS KIMLIK NO: 7 3E3 CDRH] SEKANS KIMLIK NO: 8 3E3 CDRH2 TISDGGSFIYYEANIOG SEKANS KIMLIK NO: 9 3E3 CDRH3 DVGL TTFWYFDV RASKSVSPSGYDFMH OHSREFPFT . TISDGGGYIYYLDNGOG DVGL TTF WYF DV RASKSVSPSSYNFMH YASNLES _ . OHSREFPFI _ TISDGGSFIYYLDNVKG DVGHTTFWYFDV RASKSVSASGYNFMH YASNLES _ _ OHSREFPFT _ SEKANS KIMLIK NO: 25 10G8 VH nükleotit sekansi 6162.109 GAAATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGAAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC TGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGCCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAA GGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTG AAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACCTTTTGGTACTT CGATGTCTGGGGCTCAGGGACCGCGGTCACCGTCTCCTCA SEKANS KIMLIK NO: 26 10G8 VH amino asit sekansi EMQLVESGEGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKSLEWVATISDGGSFTYYLDNVRG RFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTFWYFDVWGSGTAVTVSS SEKANS KIMLIK NO: 27 10G8 VL nükleotit sekansi GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGTAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCAGCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAA CCAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCA GGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGG ATGCTGTAACATATTACTGTCTGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAA SEKANS KIMLIK NO: 28 10G8 Vi_. amino asit sekansi DlVLTQSPVF LVVSLGQRATISCRASKSVSAAGYNF MHWYQQKPGQPPKVLIKYASNLESGVPARF S GSGSGTDFTLNIHPVEEEDAVTYYCLHSREFPFTFGGGTNLEIK SEKANS KIMLIK NO:29 3E3 vu nükleotit sekansi GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAAACCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC TGTGTACCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGTTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATTTTGCCAATATAC AGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATACCAAGAACAACCTATACCTGCAAATGAACCATCTG AAGTCTGAGGACGCAGGCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGCCTTACTACGTTTTGGTATTT CGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA SEKANS KIMLIK NO: 30 3E3 vu amino asit sekansi EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCVPSGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDGGSFTYYFANIQG RFTISRDNTKNNLYLQMNHLKSEDAGMYYCARDVGLTTFWYFDVWGTGTTVTVSS SEKANS KIMLIK NO: 31 3E3 VL nükleotit sekansi 6162.109 GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAACTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTCCATCTGGCTATGATTTCATGCACTGGTATCAACAGAAG CCAGGACAGCCGCCCAAACTCCTCATCAAGTATGCATCCGAACTAGAATCTGGGGTCCCTGGCA GGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAAGAAGA TGCTGCAACATATTTCTGTCAGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAG SEKANS KIMLIK NO: 32 3E3 VL amino asit sekansi DIVLTQSPASLTISLGQRATI SC RASKSVSPSGYDFM H WYQQKPGQPPKLLI KYASELESGVPG RFSG SG SGTDFTLNIHPVEEEDAATYFCQHSREFPFTFGGGTKLEIK SEKANS KIMLIK NO:33 237 V" nükleotit sekansi GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAACCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC TGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGGCTGGAGTGGGTCGCGACCATTAGTGATGGTGGTGGTTACACCTACTATTTAGACAATGGA CAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTACCTGCAGATGAGCCATC TGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACTTACTACGTTTTGGTAC TTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA SEKANS KIMLIK NO:34 287 Vu amino asit sekansi EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDGGGYTYYLDNGQ GRFTISRDNAKNNLYLQMSHLK SEDTAMYYCARDVGLTTFWYFDVWGTGTTVTVSS SEKANS KIMLIK NO: 35 ZB7 VL nükleotit sekansi GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTCCTTAGTTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTCCATCTAGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAGAC CAGGACAGCCGCCCAAACTCCTCATCACGTATGCTTCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAG GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAAGAGGAT GCTGCAACATATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAGGC SEKANS KIMLIK NO:36 ZB7 VL amino asit sekansi DIVLTQSPVSLVISLGQRATISCRASKSVSPSSYNFMHWYQQRPGQPPKLLITYASNLESGVPARFSG SG SGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREFPF TFGGGTRLEIK SEKANS KIMLIK NO: 37 902 V" nükleotit sekansi 6162.109 GAAGTACAACTAGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC TGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAA AGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTG AAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACGTTTTGGTACTT CGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA SEKANS KIMLIK NO: 38 9G2 VH amino asit sekansi EVQLVESGGGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDGGSFTYYLDNVKG RFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTFWYFDVWGTGTTVTVS S SEKANS KIMLIK NO: 39 902 VL nükleotit sekansi GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCATCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAAC CAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAG GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGAT GCTGTAACATATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGC SEKANS KIMLIK NO: 40 9G2 Vb amino asit sekansi DIVLTQSPVFLVISLGQRATISCRASKSVSASGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIKYASNLESGVPARFSG SGSGTDFTLNIHPVEEEDAVTYYCQHSREFPFTFGGGTKLEIK SEKANS KIMLIK NO:41 10G8 VH kimera nükleotit sekansi GAAATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGAAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC TGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGCCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAA GGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTG AAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACCTTTTGGTACTT CGATGTCTGGGGCTCAGGGACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGT GTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGG TGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCG TGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACAC CAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCC TGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCT GATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGA GGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGA 6162.109 GGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACC ATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATC GCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTG GACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAG GGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCC SEKANS KIMLIK NO: 42 10G8 VH kimera amino asit sekansi EMQLVESGEGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKSLEWVATISDGGSFTYYLDNVRG RFTßRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTFWYFDVWTßGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTXTCNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLBUSRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKHWWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWINGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEKANS KIMLIK NO: 43 iocs VL kimera nükleotit sekansi GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGTAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCAGCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAA CCAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCA GGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGG ATGCTGTAACATATTACTGTCTGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAA CCTGGAAATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAG CTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAG GTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCA GGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGA GAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAG SEKANS KIMLIK NO: 44 10G8 VL kimera amino asit sekansi DIVLTQSPVFLVVSLGQRATISCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIKYASNLESGVPARFS GSGSGTDFTLNIHPVEEEDAVTYYCLH SREFPFTFGGGTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC SEKANS KIMLIK NO: 45 9G2 VH kimera nükleotit sekansi GAAGTACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCC 6162.109 TGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAA GAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAA AGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTG AAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACGTTTTGGTACTT CGATGTCTGGGGCACAGGGACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGT GTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGG TGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCG TGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACAC CAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCC TGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCT GATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGA GGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGA GGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACC ATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATC GCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTG GACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAG GGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCC SEKANS KIMLIK NO: 46 9G2 VH kimera amino asit sekansi EVQLVESGGGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDGGSFTYYLDNVKG RFTlSRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTF WYF DVWGTGTLVTVSSASTKGPSVF PL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTXTCNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLNHSRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD"îNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEKANS KIMLIK NO: 47 902 VL kimera nükleotit sekansi GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTC CTGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCATCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAAC CAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAG GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGAT GCTGTAACATATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGC TGGAAATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCT GAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGT GCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGG 6162.109 ACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGA AGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCT SEKANS KIMLIK NO: 48 9G2 vL kimera amino asit sekansi 6162.109 DIVLTQSPVFLVISLGQRATISCRASKSVSASGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIKYA SNLESGVPARFSG SGSGTDFTLN 1 H PVEEEDAVTYYCQH SREFPFTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC SEKANS KIMLIK NO:49 IGHV3_7 insan VH germ hatti alici nükleotit sekansi GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTC CTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGG AAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTG TGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGA SEKANS KIMLIK NO:50 IGHV3_7 insan Vi-i germ hatti alici amino asit sekansi EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGF TF SSYWMSWVRQAPGKGLEWVAN[KQDGSEKYYVDSVK GRFTISRDNAKNSLYL-QMN SLRAEDTAVYYCAR SEKANS KIMLIK NO:51 lGKV4_1 insan vL germ hatti alici nükleotit sekansi GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCA ACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAG CTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGC TGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACT SEKANS KIMLIK NO:52 lGKV4_l insan VL germ hatti alici amino asit sekansi DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDR FSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYST SEKANS KIMLIK NO:53 10G8 Insanlastirilmis Vi-i HO nükleotit sekansi -leto k0d0n optimize GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC SEKANS KIMLIK NO:54 iocs Insanlastirilmis VH HO amino asit sekansi EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRFTISRDNAKN SLY LQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS GAGATGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC SEKANS KIMLIK NO:56 10G8 Insanlastirilmis vu 111 amino asit sekansi EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS SEKANS KIMLIK NO:57 10G8 Insanlastirilmis VH HZ nükleotit sekansi -leto k0d0n optimize GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCTCCGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC SEKAN S KIMLIK NO:58 10G8 Insanlastirilmis VH HZ amino asit sekansi EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGSGTLVTVSS SEKAN S KIMLIK NO:59 10G8 Insanlastirilmis VL L0 nükleotit sekansi -Ieto kodon optimize GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC SEKANS KIMLIK NO:60 10G8 Insanlastirilmis VL L0 amino asit sekansi DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASNLESGVPDRFS GSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIK SEKANS KIMLIK NO:61 10G8 Insanlastirilmis VL L] nükleotit sekansi -leto kodon optimize 6162.109 GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC SEKANS KIMLIK NO:62 10G8 Insanlastirilmis VL L] amino asit sekansi DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFS GSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIK SEKANS KIMLIK NO:63 10G8 Insanlastirilmis VL LZ nükleotit sekaiisi- let0 k0d0n optimize GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGTGGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC SEKANS KIMLIK NO:64 10G8 Insanlastirilmis VL LZ amino asit sekansi DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASNLESGVPDRFS GSGSGTDFTLTISSLQAEDVVVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEI K SEKANS KIMLIK NO:65 10G8 Insanlastirilmis VL L3 nükleotit sekansi - leto k0d0n optimize GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC SEKANS KIMLIK NO:66 1008 Insanlastirilmis VL L3 amino asit sekansi DlVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASN LESGVPDRFS GSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTNVEIK SEKANS KIMLIK NO:67 10G8 Insanlastirilmis VL L4 nükleotit sekansi -leto kodon optimize 6162.109 GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGTGGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC SEKANS KIMLIK NO:68 10G8 Insanlastirilmis VL L4 amino asit sekansi DlVMTQSPDSLAVSLGERATlNCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFS GSGSGTDFTLTBSLQAEDVVVYYCLHSREHWWFGGGTNVEH( SEKANS KIMLIK NO:69 Matüre HO agir zincir nükleotit sekansi -leto k0d0n optimize GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGG CCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGG GCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGA CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAG CCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGC CCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCT AAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCAC GAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACC AAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCAC CAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTA TCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCC CTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCC CCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACC CAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG SEKANS KIMLIK NO:70 Matüre Ho agir zincir amino asit sekansi 6162.109 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRFTISRDNAKNSLYL-QMN SLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPS SK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSSLG TQTNÄCNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTIAMSRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEKANS KIMLIK NO:71 Matüre L] hafif zincir nükleotit sekansi - leto k0d0n optimize GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATC AACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAG AAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCA GACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCC GAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGC ACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGAT GAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAG GCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGAC CGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGA CTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGAC SEKANS KIMLIK NO:72 Matüre Ll hatif zincir amino asit sekansi DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFS GSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC SEKANS KIMLIK NO:73 Insanlastirilmis V.. varyant H0 (IGHV nükleotit sekansi- lem kodon optimize GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC SEKANS KIMLIK NO:74 Insanlastirilmis Vu varyant HO (IGHV amino asit sekansi EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRPTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS SEKANS KIMLIK NO:75 Matüre HO (IGHV agir zincir nükleotit sekansi - [eto k0d0n 6162.109 optimize 6162.109 GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTC TTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGG CAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAA CGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAA CAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTT CTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGG CCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGG GCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGA CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAG CCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGC CCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCT AAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCAC GAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACC AAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCAC CAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTA TCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCC CTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCC CCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACC CAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG SEKAN S KIMLIK NO:76 Matüre HO (IGHV agir zincir amino asit sekansi EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVR GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEKANS KIMLIK NO:77 Insan agir zincir germ hatti IGHV3_23 CDRHI SEKANS KIMLIK NO:78 insan iiaiif zincir germ hatti 1GKv1_5 CDRLZ SEKANS KIMLIK NO: 79 15E10 Insanlastirilmis Agir Zincir Amino Asit Sekansi: QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTNYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWRGG STDYNAAFM SRFHSKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPNSNFYWWTTHÜNGRGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTNTCNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLNHSRTPEVTCVV 6162.109 VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPI EKT]SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEKANS KIMLIK NO: 80 15E10Insanlastirilmis Hafif Zincir Amino Asit Sekansi: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSGSSSVSYMYWYQQKPGQAPRLLIEDTSNLAS GIPARFSGSGSGT DYTLTISNLEPEDF AVYYCQQWSSYPPTF GQGTKLEIKRTVAAPSVF IF PPSDEQLKSGTASWCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFN RG EC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGF SLTNYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWRGGSTDYNAAF M SRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPNSNFYWYFDVWGRGTLV(TVS S) SEKANS KIMLIK NO; 82 151310 Insanlastirilmis VL L2 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSGSSSVSYMYWYQQKPGQAPRLLIEDTSNLASGIPARFSGSGSGT DYTLTISNLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGQGTKLEIK SEKANS KIMLIK NO: 83 Insan OSM polinükleotît sequence ATGGGGGTACTGCTCACACAGAGGACGCTGCTCAGTCTGGTCCTTGCACTC CTGTTTCCAAGCATGGCGAGCATGGCGGCTATAGGCAGCTGCTCGAAAGAG TACCGCGTGCTCCTTGGCCAGCTCCAGAAGCAGACAGATCTCATGCAGGAC ACCAGCAGACTCCTGGACCCCTATATACGTATCCAAGGCCTGGATGTTCCT AAACTGAGAGAGCACTGCAGGGAGCGCCCCGGGGCCTTCCCCAGTGAGGAG ACCCTGAGGGGGCTGGGCAGGCGGGGCTTCCTGCAGACCCTCAATGCCACA CTGGGCTGCGTCCTGCACAGACTGGCCGACTTAGAGCAGCGCCTCCCCAAG GCCCAGGATTTGGAGAGGTCTGGGCTGAACATCGAGGACTTGGAGAAGCTG CAGATGGCGAGGCCGAACATCCTCGGGCTCAGGAACAACATCTACTGCATG GCCCAGCTGCTGGACAACTCAGACACGGCTGAGCCCACGAAGGCTGGCCGG GGGGCCTCTCAGCCGCCCACCCCCACCCCTGCCTCGGATGCTTTTCAGCGC AAGCTGGAGGGCTGCAGGTTCCTGCATGGCTACCATCGCTTCATGCACTCA GTGGGGCGGGTCTTCAGCAAGTGGGGGGAGAGCCCGAACCGGAGCCGGAGA CACAGCCCCCACCAGGCCCTGAGGAAGGGGGTGCGCAGGACCAGACCCTCC AGGAAAGGCAAGAGACTCATGACCAGGGGACAGCTGCCCCGGTAG SEKANS KIMLIK NO: 84 Insan OSM amino asit sekaiisi MGVLLTQRTLLS LVLALLFPSMASMAAIGSCSKEYRVLLGQLQKQTDLMQD TSRLLDPYIRIQGLDVPKLREHCRERPGAFPSEETLRGLGRRGFLQTLNAT 6162.109 LGCVLHRLADLEQRLPKAQDLERSGLNIEDLEKLQMARPNILQLRNEIYCM AQLLDNSDTAEPTKAGRGASQPPTPTPASDAFQRKLEGCRFLHGYHRFMHS VGRVFSKWGESPNRSRRHSPHQALRKGVRRTRPSRKGKRLMTRGQLPR. 6162.109 SEKANS LISTESI Glaxo Group Limited <120 ANTIJ EN BAGLAYICI PROTEINLER <130 PB63694 <160 84 <170 Windows Versiyon 4.0 için F astSEQ <210 l <211 5 <212 PRT <213 Faregiller <400 1 <210 2 <211 17 <212 PRT <213 Faregiller <400 2 <210 3 <211 12 <212 PRT <213 Faregiller Phc Thi' Tyi' Tyi' Lcu Asp Asn Val Arg 6162.109 <400 3 <210 4 <211 15 <212 PRT <213 Faregiller <400 4 <210 5 <211 7 <212 PRT <213 Faregiller <400 5 <210 6 <211 9 <212 PRT <213 Faregiller <400 6 <210 7 <21 1 5 <212 PRT <213 Faregiller Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Lys Ser Val Ser Ala Ala Gly Tyi' Asn Phe Met His 10 15 Leu His Ser Arg Glu Phe Pro Phe Thr 6162.109 <400 7 <210 8 <211 17 <212 PRT <213 Faregiller <400 8 Thr He Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Phe Ala Asn 11t- Gln 1 5 10 15 <210 9 <211 12 <212 PRT <213 Faregiller <400 9 Asp Val Gly Leu Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val <210 10 <21 1 15 <212 PRT <213 Faregiller <400 10 Arg Ala Scr Lys Scr Val Scr Pro Sor Gly Tyr Asp Phc Mct His l 5 10 15 <210 11 <21 1 7 <212 PRT <213 Faregiller 6162.109 <400 1 1 <210 12 <211 9 <212 PRT <213 Faregiller <400 12 <210 13 <211 5 <212 PRT <213 Faregiller <400 1 3 <210 14 <211 17 <212 PRT <213 Faregiller <400 14 <210 15 <211 12 <212 PRT <213 Faregiller Glii Leu Glii Ser Tyr Thi' Tyr Tyr Leu Asp Asn Gly Gln 6162.109 <400 15 Asp Val GIy Leu Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val <210 16 <211 15 <212 PRT <213 Faregiller <400 16 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Pro Ser Ser Tyr Asn Phe Met His l 5 10 15 <210 17 <211 7 <212 PRT <213 Faregiller <400 17 Tyr Ala Ser Asn Leu Glii Ser <210 18 <211 9 <212 PRT <213 Faregiller <400 18 Gln His Ser Arg Glu Phe Pro Phe Thr <210 19 <211 5 <212 PRT <213 Faregiller <400 19 6162.109 <210 20 <211 17 <212 PRT <213 Faregiller <400 20 Thi' Ile Ser Asp Gly Gly Ser Plie Thr Tyr Tyr Leii Asp Asn Val Lys l 5 10 l 5 <210 21 <21 1 12 <212 PRT <213 Faregiller <400 21 Asp Va] Gly His Thi' Thi' Ph:: Ti'p Tyr PhC Asp Val <210 22 <211 15 <212 PRT <213 Faregiller <400 22 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Met His l 5 10 15 <210 23 <211 7 <212 PRT <213 Faregiller 6162.109 <400 2 3 <210 24 <211 9 <212 PRT <213 Faregiller <400 24 Gln His Sei' Arg <210 25 <211 363 <212 DNA <213 Faregiller <400 2 5 <210 26 <211 121 <212 PRT <213 Faregiller <400 26 Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Asn Leu Glii Ser Gly GlyAsii Tyr 6162.109 Ala Thr Ile SerArg Gly Arg PheLeu Gln Met Ser <210 27 <211 333 <212 DNA <213 Faregiller <400 27 <210 28 <211111 <212 PRT <213 Faregiller <400 28 Gln Arg Ala ThrGly Tyr Asn PheLys Val Leu IleArg Phe Ser GlyPro Val Glu Glu HisGly Gly GlyIle SerLeu Lys Gly SerAsp Ala Ai'g AlaTyr 0111Ser Asn Tyr TyrAla LysThr Ala Tyi' Phc atgczitccaa 0111 SerPhe ThrTyr Cys Asn Lcii Tyr TyrVal Trp Ser LeuSer Ala His SerIle Lys 6162.109 <210 29 <211 363 <212 DNA <213 Faregiller <400 29 gazi gtgca gc <210 30 <211121 <212PRT <213 Faregiller <400 30 <210 31 <211 333 <212 DNA <213 Faregiller <400 31 tacilgggecg Lys LeuSer TrpIlc ScrArg Phe Glu Sei' Gly GlyHe SerLcu Lys tcczigagaca Gly AspSer GlyPro Glu Glu AspPhc 'Fm Lys Ar::i Tyr TyrThr LysAla Gly Pro GlySei' Sel'Glu Trp Tyr TyrVal Trp 6162.109 <210 32 <211 111 <212 PRT <213 Faregiller <400 32 <210 33 <211 364 <212 DNA <213 Faregiller <400 33 <210 34 Ala Thr IleAsp Phe MetLeu Ile Lys Glu Glu GluPro Phc Thr cgitltggta Ser Glii 0111 Ser 6162.109 <211 121 <212 PRT <213 Faregiller <400 34 <210 35 <211 333 <212 DNA <213 Faregiller <400 35 <210 36 <211111 <212 PRT <213 Faregiller <400 36 Lys LeuSer Trp110 Scr HisGly GlySer Gly Gly GlyAla Ser Gly Thi' Pro Glu Gly Tyr Thi' Thi' Phc Trp Lys Ai'g Tyi' TyrAla LysThi' Ala Tyi' Phc.` Pro GlySer AsnGlu Trp Tyr TyrVal Trp 6162.109 Gln Arg Ala Thr Ile Ser CysScr Tyr Asn Phc Met His Trp <210 37 <211 363 <212 DNA <213 Faregiller <400 37 <210 38 <211 121 <212 PRT <213 Faregiller <400 38 Ala Met Ser Trp Val Ai'g Gln Pro Va] SerArg Ala SerTyr Gln GlnSer Asn Leu Ala Thr TyrGly Gly Thr Gly Gly GlyAla Ser GlyThr Pro GluSer Phe Thr Ai'g Pro G lu SerPhe ThrTyr Cys Tyr TyrA la Lys Ser LeuSer ProGln Pro His ScrIle Lys Pro GlySer AsnGlu Trp Asii Lou 6162.109 <210 39 <211 333 <212 DNA <213 Faregiller <400 39 EltCtCCth'cl <2104O <211111 <212 PRT <213 Faregiller <400 40 (3111 <21041 <211 1353 <212 DNA tgaceicagtc Ala ThrAsn PhcLeu Ile HisGly G ly SerAsp Ala atgcatccazi 6111 SerPhe ThrTyr Cys Tyr TyrVa] Trp Scr LouSer AlaGin Pro His ScrHe Lys 6162.109 <213 Kimera <400 41 <21042 <211 451 <212 PRT <213 Kimera <400 42 Lys LeuSci' TrpIle Ser Thr Ile SerHis` Leu Lys Thr Plie Ser Thi' Pro GlySer Asn 6162.109 <210 43 <211 654 <212 DNA <213 Kimera <400 43 Gly Scr Phc Plic Asn His Tyr Tlir G ly Tlir Var] Tlir Lcii Thr 6162.109 <21044 <211218 <212PRT <213 Kimera <400 44 Gly Tyr AsnLys Val LcuArg Phe SerPro Val Glu <210 45 <211 1353 <212 DNA <213 Kimera Ser G lyGlu AspThr Phc Trp TyrAla ScrSer Gly Val Thi' Phe LeuSer Lys Asp PheTyr TyrThr Asn Val SerGly GlnGly Val 1 leLys 6162.109 <400 45 <21046 <211 451 <212 PRT <213 Kimera <400 46 Lys GlyLeu Gln 1838583 ggc S01' Thr Ser 6162.109 Ai'g Val <210 47 <21 1 654 <212 DNA <213 Kimera <400 47 G 1y Lou Leu Plie 6162.109 <21048 <211218 <212 PRT <213 Kimera <400 48 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Va] Phe Leu Val Ile Ser Leu Gly 1 S 10 15 Gln Arg Ala Thr He Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Ala Ser 25 30 Gly Tyr Asn Phe Met His Trp Tyr (3111 Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 40 45 Lys Val Lou 110 Lys Tyr Ala Ser Asn Lcu Glu Sor Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn [Ir: His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Val Thr Tyi' Tyi' Cys 0111 His Ser Arg 85 90 95 Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Tlii' Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Ghi Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Va] Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp A511 Ala Leu Glii Ser Gly Asn Ser (3111 Glii Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Tlir 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyi' Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe A511 Arg Gly Glu Cys 210 215 <210 49 <211 294 <212 DNA <213 Homo Sapiyen <400 49 6162.109 <210 50 <211 98 <212 PRT <213 Insan <400 50 Sci' Leu Arg Leu Trp Met Ser TrpAla Asn llc LysLys Gly Arg Phe <210 51 <21 1 300 <212 DNA <213 Homo Sapiyen <400 5 l <210 52 <211 100 <212 PRT <213 Homo Sapiyen <400 52 861' 861'Glu Trp Tyr Tyrgagggccacc 6162.109 Glu Arg Ala ThrSci' Asn Asn LysPro Pro Lys LeuPro Asp Arg Plie110 Scr Scr Lcu <210 53 <211 363 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 Asri Cys <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 53 <210 54 <211 121 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 54 Gln Lcii Lys Ser SerAla Trp Tyr Thr Asp Plie Ser LcuLeu TyrPro Gly Cys Glncctgagactc 6162.109 Ala Met Ser Trp Val Arg GlnAla Thr Ile Ser Asp Gly Gly Arg Gly Arg Plie Thr Ile Ser Leu Gln Met Asn Ser Leu ArgAla Ai'g Asp Val Gly His Thr <210 55 <21 1 363 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 55 <210 56 <211 121 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 56 Ala Ser GlyAla Pro GlySei' Phe Thr Arg Asp Asii Ala Glu AspThr Plie Trp 6162.109 Sci' Lcu Arg LcuAla Met Ser TrpAla Thr Ile SerArg Gly Arg PhcLeu Gln Met Asn Arg Gly Thr Lcii <210 57 <211 363 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 57 <210 58 <211 121 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 58 Ala Scr GlyA121 Pro Gly Plic Thr Tyr TyrVal Trp 6162.109 Ser Lou Arg LcuAla Met Ser TrpAla Thr [le SerArg Gly Arg PhcLeu Gln Met Asn <210 59 <211 333 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 SerGly 110 Scr <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 59 <210 60 <211 111 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 60 Gly Gly GlyAla Scr Gly Ser Phe Thi' Thr Plie Trp Tyr TyrAla LysThr Ala Pro GlyScr AsnGlu Trp Tyr TyrVal Trp 6162.109 Glu Arg Ala ThrGly Tyr Asn PheLys Leu Leu IleArg Phe Ser GlySer Leu Glii Ala <210 61 <211 333 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 61 <210 62 <211 111 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 62 Asp SerAla SerG111 G111 Va] TyrGly Thr Phe Thr LcuTyr Cys Leu Leu GlyAla Ala 6162.109 Glu Ar),r Ala ThrGly Tyr Asn PheLys Va] Leu lleArg Phe Ser GlySer Leu Gln Ala <210 63 <211 333 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 63 atcazictgca gggccagcaa <210 64 <211 111 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 64 Ari,r Ala SerTyr G111 G111Ser Asn Leu Ala Va] TyrGly Gly Thr Pro Asp SerArg Ala Ser Ser AlaGln Pro His Ser[le Lys Ser LeuSer Ala 6162.109 Gly Tyr Asn PhcLys Leu Leu IleArg Phe Ser GlySer Leu Gln Ala <210 65 <21 1 333 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musoulus <400 65 <210 66 <21 1 111 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 66 Val TyrGly Thr Asp SerAla SerGln Gln 0111 SerPhe ThrTyr Cys His SerIle Lys Ser LeuSer AlaGln Pro 6162.109 Arg Phc Ser GlySer Gln Ala <210 67 <21 l 333 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 Gly SerAsp Va] Ala <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 67 <210 68 <211 lll <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 68 Phc Thr LeuTyr Cys Leu 6162.109 Glu Ai'g Ala ThrGly Tyr Asn PheLys Val Leu IleArg Phe Ser GlySer Leu Gln Ala <210 69 <211 1353 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 69 <210 70 <211451 Ai'g AlaTyr 0 In His SerIle Lys 6162.109 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 70 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 l 0 1 5 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu G lu Trp Val 3 5 40 45 Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Tyr Tyr Leu Asp Asn Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asri Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Va] Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Val Gly His Thr Thr Phe Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 1 00 1 05 l 1 0 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Sci' Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 1 15 120 125 Va] Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser G ly G ly Thr Ala 1 30 l 35 l 40 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro G lu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Sci' Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 1 75 Va] Lcu Gln Scr Scr Gly Lcu Tyr Ser Lcu Ser Scr Va] Va] Thr Val 1 80 l 85 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asii Val Asn His 1 95 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 2 10 2 15 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro A la Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asii Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asii Ser Thr Tyr 290 295 300 Ai'g Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asii Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Va] Ser Asn Lys Ala Leu Pro A la Pro Ile 3 25 3 3 0 33 5 Glii Lys Thr Ilc Scr Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 6162.109 <210 71 <21 1 654 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 71 <210 72 <211 218 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 72 Plie Leu Tyr Sei' 6162.109 Glu Arg Ala Thr Ile AsnGly Tyr Asn Phc Met HisLys Val Leu Ile Tyr TyrArg Phc Sor Gly Scr Gly Ser Leu Gln Ala Glu AspGlu Phe Pro Phe Thr Phe Thi' Val Ala Ala Pro Sor 145 150 Gly Asn Scr Glii Glu Scr His Lys Val Tyi' Ala Cys <210 73 <211 360 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 Trp TyrAla SerSor Gly Glii Trp Val Thi' <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 73 <210 74 <211 121 <212 PRT gectsagggc Glri Lys Asp PhcTyr TyrThr Lys His Glii Val SerGly GlnGly Va] 6162.109 <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 74 Ser Leu Arg LeuAla Mct Scr TrpAla Thr Ile Sel'Arg Gly Arg PheLcu Gln Met Asn Ala Ai'g Asp Val <210 75 <211 1353 <212 DNA <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 75 cacctlcagu A121 Ser 6162.109 <210 76 <21 1 451 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 76 Arg LeuSer Trp SerGly Gly GlyIlc ScrLeu Arg Ala SerAla ProSer Phe Tyr TyrAla LysThr Ala Scr Thi' Val GILi Pro GlySer SerGlu Trp Tyr TyrVa1 Trp 6162.109 Leu Tlir Cys Ti'p Glu Scr <210 77 <211 5 <212 PRT <213 Homo Sapiyen <400 77 <210 78 <2117 <212 PRT <213 Homo Sapiyen <400 78 <21079 <211450 Val Lcu Tlir Ti'p Gln Gln Tlir Cys Ai'g Glu 6162.109 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 79 Ser LysArg Ala Pro Ai'g AlaSer LysAla GlyAsn 6162.109 <210 80 <211 213 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 80 6162.109 <210 81 <21 1 120 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 81 Ser Lcu Ai'g Lcu Scr Cys AlaGly Va] His Trp Val Arg Glii Scr Ai'g Phc Thr llc Scr Lys Gin Mel Asn Ser Leu Arg AlaLys Ser Pro Asn Ser Asn Phe <210 82 <21 1 106 <212 PRT <213 Yapay Sekans <220 <223 Homo Sapiyen ve Mus musculus <400 82 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys ProAsp Thr Ser Asn Leu Ala Ser LcuAla 6162.109 <210 83 <21 l 759 <212 DNA <213 Homo Sapiyen <400 83 <2 10 84 <21 1 252 <212 PRT <213 Homo Sapiyen <400 84 Leu Leu Phe ProLys Glu Tyr Ai'gMet Gln Asp ThrLeu Asp Val ProPhe Pro Ser Glu Glri Thr Leu Asn SECIggCCEL-K Leu Tlir Ile EgggthSca Ser Asii Lcii Ser Arg GluGly Arg G InAi'g Val Leii TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2018/10773T 2010-11-23 2011-11-21 Onkostatin m?ye (osm) antijen bağlayıcı proteinler. TR201810773T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41649510P 2010-11-23 2010-11-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201810773T4 true TR201810773T4 (tr) 2018-08-27

Family

ID=45001764

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/10773T TR201810773T4 (tr) 2010-11-23 2011-11-21 Onkostatin m?ye (osm) antijen bağlayıcı proteinler.

Country Status (40)

Country Link
US (4) US8916695B2 (tr)
EP (3) EP3369744A1 (tr)
JP (2) JP6351973B2 (tr)
KR (2) KR101947356B1 (tr)
CN (1) CN103328508B (tr)
AR (1) AR083937A1 (tr)
AU (1) AU2011333878B2 (tr)
BR (1) BR112013012627A2 (tr)
CA (1) CA2818534A1 (tr)
CL (1) CL2013001466A1 (tr)
CO (1) CO6801627A2 (tr)
CY (1) CY1120448T1 (tr)
DK (1) DK2643352T3 (tr)
DO (1) DOP2013000113A (tr)
EA (1) EA027256B1 (tr)
ES (1) ES2681949T3 (tr)
HR (1) HRP20181092T1 (tr)
HU (1) HUE039412T2 (tr)
IL (1) IL226157B (tr)
JO (1) JO3455B1 (tr)
LT (1) LT2643352T (tr)
MA (1) MA34742B1 (tr)
ME (1) ME03069B (tr)
MX (1) MX351887B (tr)
MY (1) MY170404A (tr)
NZ (1) NZ610464A (tr)
PE (1) PE20140519A1 (tr)
PH (1) PH12013501036B1 (tr)
PL (1) PL2643352T3 (tr)
PT (1) PT2643352T (tr)
RS (1) RS57502B1 (tr)
SG (2) SG10201500388PA (tr)
SI (1) SI2643352T1 (tr)
SM (1) SMT201800397T1 (tr)
TR (1) TR201810773T4 (tr)
TW (1) TWI504609B (tr)
UA (1) UA111954C2 (tr)
UY (1) UY33743A (tr)
WO (1) WO2012069433A2 (tr)
ZA (1) ZA201303541B (tr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH12013500703A1 (en) 2010-10-13 2013-05-20 Janssen Biotech Inc Human oncostatin m antibodies and methods of use
AR083937A1 (es) 2010-11-23 2013-04-10 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigenos
US9550828B2 (en) 2013-09-05 2017-01-24 Boise State University Oncostatin M (OSM) antagonists for preventing cancer metastasis and IL-6 related disorders
US20170327573A1 (en) 2014-09-24 2017-11-16 Universitá Degli Studi Di Padova Composition to induce bone marrow stem cell mobilization
KR20170132143A (ko) * 2015-01-29 2017-12-01 옥스포드 유니버시티 이노베이션 리미티드 바이오마커
GB201614627D0 (en) * 2016-08-30 2016-10-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Antigen binding proteins
FR3090637A1 (fr) * 2018-12-21 2020-06-26 Universite De Poitiers Protéine de liaison spécifique capable de se lier spécifiquement à l’oncostatine M humaine (hOSM) et ses utilisations.
US11633457B2 (en) 2019-04-11 2023-04-25 Boise State University Pharmaceutical compositions comprising oncostatin m (OSM) antagonist derivatives and methods of use
TWI904261B (zh) 2020-10-19 2025-11-11 美商碩騰服務公司 犬及貓抑瘤素Ｍ受體β之抗體及其用途

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57106673A (en) 1980-12-24 1982-07-02 Chugai Pharmaceut Co Ltd Dibenzo(b,f)(1,4)oxazepin derivative
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4666884A (en) 1984-04-10 1987-05-19 New England Deaconess Hospital Method of inhibiting binding of von Willebrand factor to human platelets and inducing interaction of platelets with vessel walls
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
AU654811B2 (en) 1990-03-20 1994-11-24 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5783672A (en) * 1994-05-26 1998-07-21 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M
GB9424449D0 (en) 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5747035A (en) 1995-04-14 1998-05-05 Genentech, Inc. Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor
WO1997043316A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Physiologically active molecules with extended half-lives and methods of using same
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
US5958442A (en) * 1997-10-24 1999-09-28 Bristol-Myers Squibb Company Oncostatin M for treating inflammation
CZ20003099A3 (cs) 1998-02-25 2002-04-17 Lexigen Pharmaceuticals Corporation Zvýąení doby poloviční ľivotnosti cirkulujících fúzních proteinů odvozených od protilátek
GB9806530D0 (en) * 1998-03-26 1998-05-27 Glaxo Group Ltd Inflammatory mediator
GB9809839D0 (en) 1998-05-09 1998-07-08 Glaxo Group Ltd Antibody
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
HU230769B1 (hu) 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
EP1176195B1 (en) 1999-04-09 2013-05-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Kyowa Kirin Co., Ltd. The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
EP1148065B1 (en) * 2000-04-21 2008-01-02 CONARIS research institute AG Fusion proteins comprising two soluble gp130 molecules
DE60140474D1 (de) 2000-09-08 2009-12-24 Univ Zuerich Sammlung von proteinen mit sich wiederholenden sequenzen (repeat proteins), die repetitive sequenzmodule enthalten
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6374470B1 (en) 2000-10-06 2002-04-23 Milliken & Company Face plate for spun-like textured yarn
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
MXPA05000511A (es) * 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
EP2180044A1 (en) 2001-08-03 2010-04-28 GlycArt Biotechnology AG Antibody glycosylation variants having increased anti-body-dependent cellular cytotoxicity
CA2763913C (en) 2001-08-10 2014-10-28 Aberdeen University Antigen binding domains
US7993650B2 (en) 2003-07-04 2011-08-09 Affibody Ab Polypeptides having binding affinity for HER2
WO2005019255A1 (en) 2003-08-25 2005-03-03 Pieris Proteolab Ag Muteins of tear lipocalin
PE20050925A1 (es) * 2003-11-10 2005-11-29 Schering Corp Anticuerpo recombinante humanizado anti-interleuquina 10
CN1946417A (zh) 2003-12-05 2007-04-11 阿德内克休斯治疗公司 2型血管内皮生长因子受体的抑制剂
HRP20110657T1 (hr) * 2004-03-30 2011-10-31 Glaxo Group Limited Imunoglobulin koji se veže na osm
GB0407197D0 (en) * 2004-03-30 2004-05-05 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
JP2008512353A (ja) 2004-07-21 2008-04-24 グライコフィ， インコーポレイテッド 主にＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２グリコフォームを含むイムノグロブリン
JP4997108B2 (ja) 2005-07-22 2012-08-08 協和発酵キリン株式会社 遺伝子組換え抗体組成物
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
CA2652733C (en) * 2006-05-25 2016-06-21 Glaxo Group Limited Modified humanised anti-interleukin-18 antibodies
EP1958957A1 (en) 2007-02-16 2008-08-20 NascaCell Technologies AG Polypeptide comprising a knottin protein moiety
WO2010056893A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-20 Imclone Llc Humanization and affinity-optimization of antibodies
PH12013500703A1 (en) * 2010-10-13 2013-05-20 Janssen Biotech Inc Human oncostatin m antibodies and methods of use
AR083937A1 (es) 2010-11-23 2013-04-10 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigenos

Also Published As

Publication number Publication date
EA201390537A1 (ru) 2014-01-30
ME03069B (me) 2019-01-20
MY170404A (en) 2019-07-27
EP3369744A1 (en) 2018-09-05
US10808029B2 (en) 2020-10-20
KR101947356B1 (ko) 2019-02-12
MX351887B (es) 2017-11-01
PE20140519A1 (es) 2014-04-30
WO2012069433A2 (en) 2012-05-31
UY33743A (es) 2012-06-29
EP2643352B1 (en) 2018-05-02
KR20130119948A (ko) 2013-11-01
EP3211009A1 (en) 2017-08-30
US20210017270A1 (en) 2021-01-21
PH12013501036B1 (en) 2019-05-10
CA2818534A1 (en) 2012-05-31
LT2643352T (lt) 2018-08-10
CO6801627A2 (es) 2013-11-29
UA111954C2 (uk) 2016-07-11
TWI504609B (zh) 2015-10-21
JP2014507373A (ja) 2014-03-27
EA027256B1 (ru) 2017-07-31
BR112013012627A2 (pt) 2016-10-04
ES2681949T3 (es) 2018-09-17
HRP20181092T1 (hr) 2018-09-21
US20150064201A1 (en) 2015-03-05
IL226157A0 (en) 2013-06-27
HUE039412T2 (hu) 2018-12-28
US20130251724A1 (en) 2013-09-26
US20170152312A1 (en) 2017-06-01
MA34742B1 (fr) 2013-12-03
NZ610464A (en) 2015-02-27
US8916695B2 (en) 2014-12-23
PT2643352T (pt) 2018-08-01
SMT201800397T1 (it) 2018-09-13
SG10201500388PA (en) 2015-03-30
MX2013005843A (es) 2013-07-05
DK2643352T3 (en) 2018-07-30
SG190232A1 (en) 2013-06-28
CL2013001466A1 (es) 2014-06-27
CN103328508B (zh) 2015-12-16
RS57502B1 (sr) 2018-10-31
KR20180110199A (ko) 2018-10-08
TW201235358A (en) 2012-09-01
JO3455B1 (ar) 2020-07-05
PH12013501036A1 (en) 2013-07-15
EP2643352A2 (en) 2013-10-02
WO2012069433A3 (en) 2012-08-09
PL2643352T3 (pl) 2018-10-31
ZA201303541B (en) 2014-11-26
US9605063B2 (en) 2017-03-28
AU2011333878B2 (en) 2016-01-14
DOP2013000113A (es) 2013-12-15
CY1120448T1 (el) 2019-07-10
SI2643352T1 (sl) 2018-12-31
JP6351973B2 (ja) 2018-07-04
AR083937A1 (es) 2013-04-10
CN103328508A (zh) 2013-09-25
AU2011333878A1 (en) 2013-05-09
IL226157B (en) 2020-10-29
JP2017078072A (ja) 2017-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230295295A1 (en) Antigen binding proteins
TR201810773T4 (tr) Onkostatin m?ye (osm) antijen bağlayıcı proteinler.
JP7163275B2 (ja) 抗－ｉｌ－２２ｒ抗体
HK1189239A (en) Antigen binding proteins to oncostatin m (osm)
HK1189239B (en) Antigen binding proteins to oncostatin m (osm)
HK1238657A1 (en) Antigen binding proteins to oncostatin m (osm)