TARIFNAME BIR METABOLIK SENDROMU TEDAVI ETMEK içiN FARMASÖTIKAL BILESIM Mevcut bulus seker hastaliginin tedavisinde kullanim için en az bir FGF-21 (fibroblast büyüme faktörü 21) bilesigi, en az bir GLP-1 R (glukagon benzeri peptit-1 reseptörü) agonist ve tercihen en az bir diyabet önleyici ilaç ve/veya en az bir DPP-4 (dipeptidil peptidas-4) inhibitörü içeren bir farmasötikal bilesim ile ilgilidir. Seker hastaligi adli adinca insülin bagli olmayan veya eriskin baslangiçli biçim, ayni zamanda diyabet Türü 2 olarak bilinir ve insüline bagli veya ergenlik baslangiç biçimi, ayni zamanda diyabet Türü 1 olarak da bilinir, klinik görünümleri ile karakterize edilir. Diyabet Türü 2'nin klinik semptomlarinin görünümleri ve altinda yatan obezite genelde 40 yas üstünde ortaya çikar. Tam tersine diyabet Türü 1 ve genelde 30 yastan önce hastaligin hizli bir baslangicini gösterir. Hastalik dörtte biri diyabet Tür 1 ve dörtte üçü diyabet Tür 2 olmak kaydiyla genel nüfus içerisinde yaklasik yüzde 1'i olusturan bir kesim arasinda metabolik bir bozukluktur. Diyabet Tür 2 yüksek kan sekeri akisi, insülin ve kortikosteroid ile karakteriz edilen bir hastaliktir. Mevcut durumda, bireysel olarak veya kombinasyon halinde ve farkli eylem biçimleri araciligiyla kullanilabilecek olan diyabet Tür 2'nin tedavisine çesitli farmakolojik yaklasimlar vardir: 1) sülfonilüre uyarilmis insülin sekresyonu; 2) glükoz kullanimini tesvik ederek, hepatik glükozu azaltarak ve bagirsaklara ait glükoz üretimini azaltarak biguanid (metformin) eylemi; 3) oc-glukosidaz inhibitörleri (akarboz, miglitol) karbonhidrat sindirimini ve dolayisiyla bagirsaktan emilimini yavaslatir ve yemek sonrasi kan sekeri yüksekligini düsürür; 4) tiyazolidindiyonlar (troglitazon) insülin eylemini güçlendirir, böylece çevresel dokularda glükoz kullanimini tesvik eder; ve ) insülin doku glükoz kullanimini uyarir ve hepatik glükoz üretimini engeller. Ancak, ilaçlarin bir çogu sinirli etkiye sahiptir ve ß-hücre fonksiyonu ve bununla ilgili obezite gibi en önemli problemlere isaret etmez. Obezite modern toplumda hayli belirgin kronik bir hastaliktir ve seker hastaligi, insülin direnci, hipertansiyon, hiperkolestorolemi ve koroner kalp hastaligi gibi bir çok tibbi sorunla ilgilidir. Dahasi diyabet ve insülin direnci ile hayli alakalidir ki bu ikincisi genelde hiperinsülinemi veya hiperglisemi ile veya ikisiyle birden ilintilendirilir. Dahasi, diyabet Türü 2 koroner kalp hastaliginin iki ila dört kat riskiyle ilintilidir. Diyabetik Türü 1 karakteristik olarak yükseltilmis glükagona sahip çok düsük veya ölçülemez derecede plazma insülini gösterir. ß-hücrelerine yöneltilmis bir bagisiklik tepkisi özel olarak diyabet Tür 1`e yol açar zira ß-hücreleri insülin salgilar. Diyabet Türü 1 için mevcut tedavi rejimleri dogal insülinin yoklugundan kaynakli hiperglisemiyi en az indirmeye çalisirlar. Fibroblast büyüme faktörü 21 (FGF21) öncelikle obezitenin hayvan modellerinde ve seker hastaligi Türü 2'de etkili diyabetik önleyici ve Iipid düsürüsü etkiler ortaya çikaran cigeri tarafinda üretilen yeni bir metabolik düzenleyicidir. Bu hormon vücut agirligi düzenlemesine yardim eder ve farelerde beslenme yoksunluguna ve ketojenik duruma verilen tepkide içerilir. FGF21`in metabolik eylemlerinin esas yeri yag dokulari, Ciger ve pankreasdir. Deneysel çalismalar diyabetli fare ve primatlarda FGF21 kullanimindan sonra diyabet kompensasyon ve dislipidemide gelismeler göstermistir (Dostalova ve digerleri 2009). FGF21'nin insülin varligi ve yoklugunda fare 3T3-L1 adipositinde glükoz alimini uyardigi ve ob/ob ve db/db faresinde ve doza bagimli bir biçimde 8 haftalik ZDF farelerinin beslenme ve açlik kan sekerini, trigliseritleri ve glükagon seviyelerini düsürdügü ve böylece diyabetlerin ve obezitenin tedavisi için bir tedavi olarak FGF-21'in kullanimina bir alan yarattigi gösterilmistir (örnek olarak bakiniz Fibroblast büyüme faktörleri (FGF'Ier) gelismekte olan ve yetiskin dokularda yaygin bir biçimde ifade edilen polipeptitlerdir. FGF ailesi mevcut durumda iki üyeden. FGF-1 ila FGF-23 olusur. FGF ailesinin üyeleri omurgali hayvan türleri arasinda hem gen yapisi hem de amino asit sekansinda hayli saklanir. Sekans homoloji ve filojenisinde farklara bagli olarak 6 alt familyaya gruplanan 18 memeli fibroblast büyüme faktörü vardir (FGF-1-FGF10 ve FGF16-FGF23). Alt familyalara tahsis edilmeyen numaralanmis birlikte yüksek sekans kimligine sahiptirler, ancak FGF reseptörlerini harekete geçirmezler ve bu anlamda FGF ailesinin üyeleri olarak genelde düsünülmezler. FGFlerin bir çogu hücre büyümesinin ve farklilasmasinin bölgesel düzenleyicileri olarak hareket ederken, son zamanlarda yapilan çalismalar FGF15/19, FGF21 ve FGF23"ü içeren FGF19 alt familya üyelerinin bir iç salgi bezleri tarziyla önemli metabolik etkiler yarattigini göstermistir. FGF19 alt familyasinin üyeleri klasik FGFlerden etkilenmeyen farkli fizyolojik islemleri düzenler. Bu gibi iç salgi bezleri faktörlerinin metabolik eylemlerinin yaygin bir çesidi fosfat, kalsiyum ve vitamin D homeostazl kadar safra asiti, karbonhidrat ve lipid metabolizmasinin düzenlenmesini de içerir (Tomlinson ve FGF21 ilk basta fare embriyolarindan yalitilmistir. FGF21 mRNA en bol olarak cigerde, ve daha az bir seviyede timusda bulunmustur (Nishimura ve digerleri 2000). Insan FGF21'I fare FGF21'I ile hayli özdestir (yaklasik %75 amino asit özdesligi). Insan FGF ailesi üyeleri arasinda FGF21 FGF 19'e en çok benzeyenidir (yaklasik %35 amino asit özdesligi) (Nishimura ve digerleri 2000). FGF 21 FGF ailesinin üyelerinin çogu için tipik proliferatif ve tümör Olusturucu etkilerden azadedir (Kharitonenkov ve digerleri 2005, Huang ve digerleri 2006, Wente ve digerleri 2006). FGF21'in obez leptin-yetersiz ob/ob ve leptin reseptör-yetersiz db/db faresine ve obez ZDF farelerine verilmesi kan glükozu ve trigliseridlerini önemli ölçüde azaltmis, açlik insülin seviyesini düsürmüs ve bir agizdan glükoz tolerans testi esnasinda glükoz temizlenmesini gelistirmistir. FGF21 verilisin 2 hafta süresi boyunca diyabetik veya yagsiz fare ve siçanlarin yiyecek alimlarini veya vücut agirlik/bilesimlerini etkilememistir. Önemli olarak, FGF21 diyabetik veya saglikli hayvanlarda test edilen herhangi bir dozda veya transgenik farelerde asiri üredigi zaman mitojenitiye, hipoglisemiye veya kilo alimina neden olmamistir (Kharitonenkov ve digerleri 2005). FGF21-asiri üreyen transgenik fareler diyetin neden oldugu obeziteye dirençlidirler. FGF21'in diyabetik al yanakli maymunlara 6 hafta boyunca verilmesi açlik plazma glükozunu, fruktozamini, trigliseridi, insülini ve glukagon seviyelerini düsürdü. Kayda deger biçimde, önemli glükoz düsürücü etkilerine karsin hipoglisemi çalisma esnasinda gözlemlenmedi. FGF21 verilisi ayrica LDL-kolestorolü önemli ölçüde düsürdü ve HDL- kolestorolü yükseltti ve farelerin aksine (Kharitonenkov ve digerleri 2005) vücut agirligini hafifçe ama önemli ölçüde azaltti (Kharitonenkov ve digerleri' 2005). Daha fazla bilgi asagidaki referanslardan elde edilebilir: 1. DOSTALOVA I. ve digerleri: Fibroblast Growth Factor 21: A Novel Metabolic Regulator With Potential Therapeutic Properties in Obesity/Type 2 Diabetes Mellitus. Physiol Res 58: 1-7, 2009. 2. ESWARAKUMAR V.P. ve digerleri: Cellular signaling by fibroblast growth 3. HOLT J.A. ve digerleri: Definition of a novel growth factor-dependent signal 2003. 4. HUANG X. ve digerleri: Forced expression of hepatocytespecific fibroblast growth factor 21 delays initiation of chemically induced hepatocarcinogenesis. . INAGAKI T. ve digerleri: Endocrine regulation of the fasting response by PPARa-mediated induction of fibroblast growth factor 21. Cell Metab 5: 415-425, 2007. 6. KHARITONENKOV A. ve digerleri: FGF-21 as a novel metabolic regulator. J 7. KHARITONENKOV A. ve digerleri: The metabolic state of diabetic monkeys is 8. LUNDÄSEN T. ve digerleri: Circulating Intestinal fibroblast growth factor 19 has a pronounced diurnal variation and modulates hepatic bile acid synthesis in man. 9. NICHOLES K. ve digerleri: A mouse model of hepatocellular carcinoma: ectopic expression of fibroblast growth factor 19 in skeletal muscle of transgenic . NISHIMURA T. ve digerleri: ldentification of a novel FGF, FGF-21, 11. ORNITZ DM. ve digerleri: Fibroblast growth factors. Genome Biol 2: 12. SHIMADA T. ve digerleri: FGF-23 is a potent regulator of vitamin D 13. TOMLINSON E. ve digerleri: Transgenic mice expressing human fibroblast growth factor-19 display increased metabolic rate and decreased adiposity. 14. WENTE W. ve digerleri: Fibroblast growth factor-21 improves pancreatic beta-cell function and survival by activation of extracellular signal-regulated Gut peptit glukagon benzeri peptit-1 (GLP-i) bir Inkretin hormonudur ve bir besin maddesine bagli sekilde salgilanir. Bu glükoza bagli insülin salgilanmasini tetikler. GLP-1 ayrica ß-hücre çogalmasini tesvik eder ve glükoz sensörleri, midesel bosalmanin engellenmesi, yiyecek alimi ve glukagon salgilanmasi üzerinde ek eylemler araciligiyla glisemiyi kontrol eder. Dahasi, GLP-1 insülin salgilanmasini uyarir ve diyabet Türü 2'ye sahip insan öznelerde kan glükozunu düsürür. Plazma yogunluklarini yaklasik 3-4 kat fizyolojik yemek sonrasi seviyelere yükselten dozlarda biyoaktif GLP-i, GLP-i ('in disaridan yönetimi diyabetik Türü 2 hastalarinda açlik hiperglisemiyi tamamen normallestirir (Nauck, M. A. ve (GLP-iR) pankreas isleti, böbrek, ciger, kalp ve çevresel ve merkezi sinir sisteminin çesitli bölgelerinde yaygin sekilde disa vurulan bir 463 amino asit heptahelikal G proteini-eslenmis reseptörüdür. Isletler içerisinde, GLP-1 R büyük bir çogunlukla islet ß- hücrelerine lokalize edilir. GLP-1R sinyallemesinin harekete geçirilmesi ziyadesiyle endokrin benzeri fenotipe dogru bir farklilik programinin, özellikle insan isletlerinden türetilen isleyen ß-hücrelerine öncüllerin farkliligini tetikler (Drucker, D. J. (2006) Cell Metabolism, 3, 153-165). Maalesef diger bilinen ilaçlar kadar hem FGF-21 hem de biyoaktif GLP-1 kendilerinde diyabet Türü 2 ve diger metabolik bozukluklarda gözlemlenebilen karmasik ve çok faktörlü metabolik fonksiyon bozukluklarina sinirli bir etkisi vardir. Bu ayni zamanda bahsi geçen bilesiklerin kendileri tarafindan kan glükozunu düsürmek için olan etkinlikte de geçerlidir. Mevcut bulusa göre, FGF-21 ve bir GLP-1R agonistinin kombinasyonunun kan glükoz seviyelerini bir sinerjik biçimde normo-glisemik seviyelere önemli derecede düsürdügü Bu anlamda mevcut bulusun bir uygulamasi, istem 1'de tanimlandigi üzere seker hastaliginin tedavisinde kullanim için en az bir FGF-21 (fibroblast büyüme faktörü) bilesigi ve en az bir GLP-1R (glukagon benzeri peptit-1 reseptörü) agonisti içeren bir farmasötikal bilesim ile ilgilidir. Bir "FGF-21 bilesigi" FGF-21 aktivitesi gösteren, Özellikle (i) dogustan FGF-21, özellikle insan FGF-21'i, özellikle SEQ ID NO:1'de gösterildigi gibi insan FGF-21'i veya (ii) FGF- 21 aktivitesini taklit eden bir FGF-21 içeren bir bilesik olarak tarif edilir. aktivitesi ayarlamasinda genelde ölçülür. Bir FGF-21 aktivitesi ayarlamasi örnek olarak alim ayarlamasidir." Glükoz alim ayarlamasinin bir örnegi olarak adipositler DMEM/0.1% BSA'da üç saat boyunca aç birakilir, 24 saat boyunca FGF-21 ile uyarilir, ile iki kere yikanir ve 2-deoksi-D- iyice eklenir. Kontrol hazneleri belirsizlik için gözlenmek üzere 2-DOG ( sahip 100 pl KRP tamponu içerirler. Alim tepkimesi 37°C'de 1 saat boyunca yerine getirilir, sitokalazin B (20 pM) eklenerek sonlandirilir ve Wallac 1450 MicroBeta sayaç (PerkinElmer, ABD) kullanarak ölçülür. FGF-21 taklitlerinin örnekleri (a) SEO ID NO:1"de gösterilen amino asit sekansina en az yaklasik %96, özellikle %99 amino asit sekansi özdesligi içeren ve FGF-21 aktivitesine sahip olan proteinler, (b) bir FGF-21 füzyon proteini veya bir (C) FG-21 çifti, örnek olarak bir FGF-21 muteini, bir FGF-21-Fc füzyon proteini, bir FGF-21-HAS füzyon proteini veya bir PEGlestirilmis FGF-21'dir. muteinler örnek olarak pozisyon 167'de (serin) bir ikame ile birlikte insan FGF-21'i, asagidaki ikamelerden birine sahip örnek olarak insan FGF-21`i, gibi vahsi-tür insan FGF-21'i ile karsilastirilinca örnek olarak levürde açiga çiktigi zaman O-glikosilasyon için bir düsürülmüs kapasiteye sahip muteinlerdir: Ser167Ala, Ser167Glu, Ser167Asp, Ser167Tyr. Bir diger örnek olarak pozisyon 121'de (asparajin) bir ikame ile birlikte bir gibi vahsi-tür insan FGF-21 'ile karsilastirilinca örnek olarak Ievürde açiga çiktigi zaman azaltilmis deamidasyon gösteren bir muteindir. Bir alternatif mutein örnek olarak dogal olmayan sekilde kodlanmis amino asitlere sahip insan FGF-21"idir. Diger muteinler bir doldurulmus (örnek olarak aspartat, glutamat) veya polar ancak doldurulmamis amino asitin (örnek olarak serin, treonin, asparajin, glutamin), örnek olarak sirasiyla polar ancak doldurulmamis veya doldurulmus amino asit için, bir insan FGF-21 ile karsilastirinca, özellikle Gly, Ala, Val, Pro, Phe, Tyr, Trp, Ser, Thr, Asn, Asp, Gln, Glu, Cys veya Met'ten seçilen bir amino asitle Leu153'ün ikamesine sahip insan FGF-21'inde, örnek olarak Ievürde açiga çiktigi zaman proteolitik alçalma için bir azaltilmis duyarlilik gösteren bir muteindir. Tercih edilen bir FGF-21 muteini insan FGF- tasiyan ve N- terminalinde bir ek glisin ihtiva eden SEO ID NO:2'ye göre dönüsmüs FGF-21'dir. FGF-21-HSA füzyon proteinidir. "Fc" bir immunoglübolinin Fc kismi, örnek olarak gibi glikol baglantili FGF-21 bilesikleri genelde örnek olarak bir sistein veya bir Iisin amino asit artiginda veya bir baslatilmis N-baglantili veya O-baglantili glikosilasyon bölgesinde (burada "GEPlestiriImis FGF-21" olarak göndermede bulunulan) bir polietilen glikol (PEG) tasir. Bu gibi PEGlestirilmis FGF-21 bilesikleri genelde insan FGF-21 ile karsilastirilinca bir eylemin uzatilmis zamanini gösterir. Uygun PEGler Bir "GLP-iR agonist" GLP-1 gibi (glukagon benzeri peptit 1) GLP-1 reseptörünü baglayan ve harekete geçiren bir bilesik olarak tanimlanir. GLP-1 ve/veya GLP-1R agonistinin fizyolojik eylemlilikleri örnek olarak Nauck, M. A. ve digerleri (1997) Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes, 105, 187-195'nde tanimlanir. Normal öznelerde, özellikle insanlarda, bu fizyolojik eylemlilikler örnek olarak glükoza bagimli insülin salgilanmasinin uyarilmasini, glukagon salgilanmasinin bastirilmasini, (pro)insülin biyosentezinin uyarilmasini, yiyecek aliminin azaltilmasini, mide bosalmasinin yavaslamasini ve/veya belirsiz insülin duyarliligini içerir. GLP-1R agonistlerini kesfetmek için uygun ayarlamalar örnek olarak Thorkildsen, Chr. bakiniz Örnek 8)'de tanimlanir. Kisacasi, bir "resseptör baglayici ayarlamada" örnek olarak insan rekombinant GLP-1 reseptörü, örnek olarak CHO, BHK, veya HEK293 hücrelerini barindiran ökaryotik hücrelerin bir temizlenmis zar sürtünmesi örnek olarak insan GLP-1'in, örnek olarak 125I (örnek olarak 80 kBq/pmol). Ile isaretlenen GLP-1 (7- 36) amidin varliginda test bilesigi ya da bilesikleri ile üretilir. Test bilesiginin veya bilesiklerinin genelde farkli yogunluklari kullanilir ve ICso degerleri yogunluklar insan GLP-1lin özel baglayicilarini azalttikça belirlenir. Bir "reseptör islevsel ayarlamada", örnek olarak yukarida tanimlanan, örnek olarak insan GLP-1 reseptöründe açiga çikan ökaryotik hücrelerden ayristirilmis plazma zarlari bir test bilesigi ile hazirlandi ve üretildi. islevsel ayarlama test bilesigi tarafindan yapilan uyarmaya bir cevap olarak cAMP ölçülerek yerine getirildi. Bir "haberci gen ayarlamasinda", örnek olarak yukarida tanimlandigi gibi, örnek olarak insan GLP-1 reseptöründe açiga çikan ve örnek olarak bir çoklu tepki ögesi/cAMP ögesi tarafindan çalistirilmis lusiferaz haberci plazmiti içeren ökaryotik hücreler bir test bilesiginin mevcudiyetinde üretilir. cAMP tepki ögesi tarafindan çalistirilmis lusiferaz etkinlikleri test bilesigi tarafindan yapilan uyarmaya bir tepki olarak ölçülür. Uygun GL1R agonistleri örnek olarak Drucker, D. J. (2006) Cell Metabolism, 3, 153- Knudsen, L. B. ve digerleri (2007; yukarida); Liu, J. ve digerleri (2007) Neurochem Int., tanimlandigi gibi bir biyoaktif GLP-1, bir GLP-1 analogu veya bir GLP-1 ikamesinden seçilir. Örnek bilesikler GLP-1 (amid, eksendin-4, liraglutide, CJC- 1131, albugo, albiglutide, eksenatit, eksenatit-LAR, oksintomodulin, lixisenatide, geniposide, AVE-0010, GLP-1R agonistik aktiviteye sahip bir kisa peptit ve/veya GLP- 1R agonistik aktiviteye sahip bir küçük organik bilesiktir. Detayli olarak, insan GLP-1 (7-37) SEQ ID NO: 3'ün amino asit sekansina sahiptir. Insan GLP-1 (7-36)amid SEO ID NO: 4'ün amino asit sekansina sahiptir. Eksendin-4 SEQ ID NO: 5'ün amino asit sekansina sahiptir. Eksenatid SEQ ID NO: 6'ün amino asit sekansina sahiptir ve oksinotomodulin SEQ ID NO: Tün amino asit sekansina sahiptir. Lixisenatideinin amino asit sekansi SEQ ID NO: 8'da gösterilir. Lixisenatideinin yapisi DPP-4 (dipeptidil peptidaz-4) tarafindan ani fizyolojik alçaltmaya karsi direnmek için alti ilave Iizin artigi ile C-son olarak uyarlanmis eksendin-4(1-39)'a dayanir. AVEOO10jün amino asit sekansi SEQ ID NO: 9'de gösterilir. Liraglutidenin kimyasal yapisi Sekil 1'de gösterilir. Lireglutide GLP-1(7-37)`nin LYS 34'ününü Arg ile degismesi, ve bir v-glutamik asit aralayici kullanarak konum 26'da bir C16 ekleyerek elde edildi. Kimyasal adi [N-epsilon(gamma-L-glutamoyl(N-alpha- hexadecanoyI)-Ly]'dir. CJC-1131'in kimyasal yapisi Sekil 2ide gösterilir. Albumin konum 8'de bir d-alanin ikamesi ile GLP-1'in C-terminalinde tutturulur. CJC-1131 kararlilik ve biyoaktivitenin hayli iyi bir kombinasyonunu gösterir. gösterilir ve GLP-1R agonistik aktivite ile birlikte küçük organik bilesik örnek olarak PNAS, 104, 937-942lnde gösterilir. Mevcut bulusun bir diger uygulamasinda farmasötikal bilesim ek olarak en az bir diyabetik önleyici ilaç ve/veya en az bir DPP-4 inhibitörü içerir. Örnek diyabetik önleyici ilaçlar sunlardir a) insülin, b) tiazolidinedion, örnek olarak roziglitazon veya pioglitazon (örnek olarak bakiniz 0) sülfonilüre, örnek olarak klorpropamid (4-klor-N-(propilkarbamoil)- benzensülfonamid), tolaza mid (N-[(azepan-1-ilamin0)karbonil]-4-metil- benzensülfonamid), gliklazid (N-(hekaahidrosiklolopenta[c]pirol-2(1H)-iI- karbamoil)-4-metilbenzensüIfonamid), veya glimepirid (3-etil-4-metiI-N-(4-[N- ((1r,4r)-4-metilsikloheksilkarbamoiI)-süIfamoiI]fenetiI)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol- 1-karboksamid). Mevcut bulusa göre "insülin" dogal olarak meydana gelen insülin, degistirilmis insülin veya bir insülin analogu anlamina gelir ki içerisinde buradan tuzlar veya buranin kombinasyonlarini, örnek olarak asilasyon veya diger kimyasal degisimler gibi daha baska degisimler kadar amino asit degisimleri/silinmeleri/eklemelerine sahip olan insülinler gibi, içerir. Bu bilesik çesidinin bir örnegi insülin detemir, bir baska deyisle LysB29-tetradekanoiI/des (B30) insan insülinidir. Bir diger örnek içerisinde dogal olmayan amino asitlerin veya D-amino asitler gibi ökaryotlarda normalde sifreli olmayan ve amino asitlerim içerildigi insülinler olabilir (Geiger, R. ve digerleri, Hoppe Seylers Z. zinciri veya B-zincirinin veya her ikisinin C-terminal karboksilik asitinin bir amid ile ikame edildigi insülin analoglaridir. içerisinde özellikle insülin A ve/veya B zincirinde bir veya daha fazla amino asit asillemistir, tercihen insan insülini konum B29'da asillemistir. (Tsai, Y. J. ve digerleri insülinler desBSO insan insülini veya 801 bovin insülindir (Tsai, Y. J. ve digerleri, yukarida). Asillemis insülinin diger örnekleri örnek olarak ABD 5,750,497'de ve ABD 6,011,007'de gösterilir. Degistirilmis insülinler için yapi-aktivite iliskilerinin bir saglanir. Degistirilmis insülinler tipik olarak insülinin kimyasal ve/veya enzimatik kullanimi veya preproinsülin, proinsülin, veya bunlarin kesilmis analoglari ile hazirlanir. Bir "insülin analogu" tercihen bir veya daha fazla mutasyon(lar), ikame(ler), silinme(ler) ve/veya eklere sahip insülin aktivitesi ile birlikte insülinden, özellikle A ve/veya B zincirinde bir C- ve/veya N-terminal kesik veya eklentiyle birlikte insülinden, tercihen des/B30)insülin, PheB1 insülin, B1-4 insülin, AspB28 insan insülini (insülin aspart), insülini (insülin glargin)den seçilir. Bir insülin analogunun tek sarti yeterli insülin aktivitesine sahip olmasidir. Amino asit degisimleri, silinmeleri ve/veya eklemelerinin tolere edilmesinin tartisilmasi ile birlikte yapi-aktivite iliskilerinin bir degerlendirmesi Mayer, J. P. ve digerleri (2007; yukarida)'de saglanmistir. Insülin analoglarinin içerisinde tercihen dogal olarak meydana gelen bir veya daha fazla amino asit artigi, tercihen bunlarin bir, iki ya da üç tanesi, bir diger amino asit artigi ile ikame edilir. türevleri; des PheB1 insülini veya des B1-4 insülini gibi B-zinciri N-terminal kesilmis insülin analoglari; içerisinde A-zinciri ve/veya B-zincirinin bir N-terminal eklentisine sahip oldugu yerde -pre-insülinler" olarak adlandirilanlari içeren N-terminal eklentisine sahip insülin analoglari; ve içerisinde A-zinciri ve/veya B-zincirinin C-terminal eklentisine sahip oldugu insülin analoglaridir. Örnek olarak bir veya iki Arg konum B1'e eklenebilir. Insülin analoglarinin örnekleri asagidaki patentler ve bunlarin muadillerinde insülin analoglarinin bir degerlendirmesi Mayer J. P. ve digerleri (2007, yukarida) saglanir. Insülin analoglari ve bunlarin öncüleri tipik olarak teknikte uzman kisiler tarafindan iyi bilinen gen teknoloji teknikleriyle, tipik olarak bakteri veya mayada, gerekli oldugu takdirde müteakip enzimatik veya sentetik kullanim ile birlikte hazirlanir. Alternatif olarak, insülin analoglari kimyasal olarak hazirlanabilir (Cao, Q. P. ve digerleri örnekleri insülin aspartidir (bir baska deyisle AspB28 insan insülini): insülin Iispro (bir baska degisle LysB28, Pr0829 insan insülini): insülin glulisin (bir baska deyisle LysBOS, GIuB29 insan insülini) ve insülin glargin (bir baska deyisle GlyA21, ArgBB1, ArgB32 insan insülinidir). Örnek DPP-4 Inhibitörleri sunlardir 7(8H)-iI]-1-(2,4,5-triflüörfenil)butan-2-amin, vildagliptin: (S)-1-[N-(3-hidroksi-1-adamantiI)glisil]pirolidin-2-karbonitril, azabisiklo[3.1.0]heksan-3-karbonitril, aminopiperidin-1-iI]-3-metiI-2,4-diokso-3,4-dihidr0pirimidin-1(2H)-il}metil)- benzonitril, ve kökler, kök saplari, gövdeler ve Diken, altin mühür (Kanada Hidrastisi), ve Asya copti'si' gibi bitki derilerinde bulunan azokinolin alkaloidleri grubundan bir kuaterner amonyum tuzu olan berberindir. Mevcut bulusun farmasötikal bilesimlerinin tekil bilesikleri bir formülasyonda bir araya getirilebilir veya örnek olarak ayni anda ortaya çikan veya birbirini müteakip bir baska deyisle buradan ardisik yönetim(ler) veya kombinasyonlar halinde bir çok formülasyonda içerilebilir. Mevcut bulusa göre, en az bir FGF-21 bilesigi ve en az bir GLP-tR agonistinin bir araya gelmesi sasirtici sekilde Örneklerde hayvan modelleri ile gösterildigi gibi plasma glükoz seviyelerini düsürmekte bir sinerjistik etki ile sonuçlanmistir. Hayvan modeller bir ob/ob veya obez fare ve bir db/db faredir. Ob/ob fare istahi düzenleyen hormen çogunlukla obez olur. Hiperglisemi, insülin direnci ve obezite için standard bir hayvan modelidir. Diyabetler için bir diger standard hayvan modeli yetersiz bir leptin reseptör aktivitesine sahip db/db faresidir. Bu fare ayrica obezite, hiperglisemi ve insülin direnci ila karakterize edilir. Mevcut bulusun farmasötikal bilesimi tekil bilesiklerin terapötik olarak etkili miktarlarini ve genellikle steril su, bakteriyostatik tuz, bir baska deyisle yaklasik %0.9 mg/ml benzil alkol içeren tuz, Hank çözeltisi, Ringer laktati, laktoz, dekstroz, sakaroz, trehaloz, sorbitol ve Mannitolden olusan gruptan seçilen farmasötikal olarak kabul edilebilir tasiyici, sulandirici veya yardimci madde içerir. Bilesim genelde bir çözelti veya süspansiyondur. Oral, deri altindan, kas içinden, nefes yoluyla akcigerden ve/veya sürekli salim yöntemleri ile verilebilir. Tercihen, bilesim deri altindan verilir. istenen tedavisel ve/veya önleyici etkiyle sonuçlanan bir bilesigin niceligi anlamina gelir. Tipik bir doz araligi gün basina yaklasik 0.01 mg ile gün basina yaklasik 1000 mg arasinda degisir. Her bir tedavisel olarak etkili bilesik için tercih edilen bir doz araligi gün basina yaklasik 0.1 mg ila gün basina yaklasik 100 mg arasinda degisir ve en tercih edilen bir doz araligi yaklasik 1.0 mg/bir gün ila yaklasik 10 mg/bir gün, özellikle 1 ila 5mg/bir gün arasinda degisir. Müteakip uygulama(lar) durumunda, farmasötikal bilesiminin tekil bilesikleri FGF-21 bilesiginin sinerjistik etkisinin ve GLP-1R agonistinin Örneklerde gösterildigi gibi bir tolerans testi glükozun uygulanmasindan sonra kandan ne kadar çabuk temizlenecegini belirlemeye yönelik bir testtir. Glükoz en siklikla agizdan verilir ("oral glükoz tolerans test" veya "OGTT"). Tekil bilesiklerin müteakip uygulamasi için zaman araligi, özellikle FGF-21 bilesigi ve GLP-1R agonisti için, genelde bir saat içerisinde, tercihen yarim saat içerisinde, en tercihen 15 dakika içerisinde, özellikle 5 dakika içerisindedir. Genelde farmasötikal bilesimini bir hastaya uygulanmasi gün basina bir veya çesitli defalar, veya bir haftada bir veya çesitli defalar, veya hatta durumun gösterdigi gibi daha uzun süreler bile gerçeklestirilebilir. Mevcut bulusun farmasötikal bilesiminin en tercihe edilen uygulamasi bir araya getirilmis bir dozda gün basina bir ila üç defa arasinda degisen bir aralikta deri altindan yapilan bir uygulamadir. Mevcut bulusun farmasötikal bilesimi kan glükoz seviyesini normal-glisemik seviyelere düsürür ve enerji harcanmasini daha hizli bir sekilde arttirir ve daha etkili glükoz kullanimi saglar ve dolayisiyla, diyabet Türü 1 veya Türü 2'yi, özellikle diyabet Türü 2'yi tedavide kullanislidir. Dolayisiyla, mevcut bulus ayni zamanda yukarida bahsedilen hastaliklar veya bozukluklarin en az birini tedavi etmek için bir tibbi ilacini hazirlanmasi adina tarif edilen farmasötikal bilesimlerin kullanimi ile ilgilidir. Ayrica burada bir hastada yukarida bahsedilen hastaliklarin en az birini tedavi etmek için bir yöntem açiklanir. Hasta özellikle bir diyabet Türü 1 hastasi, bir diyabet Türü 2 hastasi, özellikle bir diyetle tedavi edilen diyabet Türü 2 hastasi, bir sülfonilüre ile tedavi edilen diyabet Türü 2 hastasi, çok daha ilerlemis bir asamada bulunan bir diyabet Türü 2 hastasi ve/veya insülinle uzun dönemdir tedavi edilen bir diyabet Türü 2 hastasindan seçilir. Tibbi ilaç teknikte uzman kisiler tarafindan bilinen yöntemlerle, örnek olarak bilesik veya yukarida tarif edildigi gibi bir kabul edilebilir farmasötikal tasiyici, seyreltici ya da yardimci maddeye sahip bilesiklerin farmasötikal olarak etkili miktarini karistirarak, hazirlanabilir. Asagidaki sekiller ve örnekler sadece gösterim amaçlidir ve mevcut bulusu sinirlamak amacini gütmemektedir. Sekiller Sekil 1 Liraglutidenin kimyasal yapisini gösterir. Sekil 2 CJC-1131'in kimyasal yapisini gösterir. Sekil 3 FGF-21`in ob/ob faresinde AVEOO10 ile birlikte on gün deri altindan enjekte edilmesinden sonra bir oral glükoz tolerans testinin (OGTT) sonuçlarini gösterir. Sekil 4 FGF-21`in ob/ob faresinde AVEOO10 ile birlikte deri altindan enjekte edilmesinden sonra zamanla olusan plazma glükoz seviyelerini gösterir. Sekil 5 FGF-21`in db/db faresinde AVEOO10 ile birlikte yirmi bir gün deri altindan enjekte edilmesinden sonra OGTT'nin sonuçlarini gösterir. Sekil 6 FGF-21'in db/db faresinde AVE0010 ile birlikte deri altindan enjekte edilmesinden sonra zamanla olusan plasma glükoz seviyelerini gösterir. Örnekler 1. ob/ob faresinin tedavisi Disi ob/ob fareleri (Bö.V-LEP OB/J, alti haftalik) Charles Rivers Laboratuarlarindan (Sulzfeld, Almanya) alindi. Fareler tedavi veya tasiyici gruplara gelisigüzel dagitildi ve dagitma vücut agirligi ve beslenmis kan glükoz seviyeleri ile katmanlastirildi. Hayvanlar 6 grup halinde 23°C'de ve bir 12 saatlik hafif karanlik döngüsünde tutuldu. Tüm deneysel prosedürler Almanya Hayvan Koruma Kanunu'na uygun olarak yerine getirildi. Ob/ob fareleri tasiyici (PBS), , 0.75 mg - kg'1 -gün`1 rekombinant insan FGF-21 (SEO ID NO: 2) veya bir FGF-21 (SEO ID NO: 2) günde bir defa deri altindan verme yöntemiyle tedavi edildi. Fareler ilaç tedavisi süresi boyunca standard kemirgen yemegi ile arzu edildigi zaman beslendi. Vücut agirligi her bir diger gün kaydedildi ve yemek alimi çalisma boyunca haftada bir defa ölçüldü. Ilk tedavi ve 10. çalisma gününden bir gün önce kan glükozu beslenme kosullari altinda kuyruk ucu kanamasi ile ölçüldü. Sekil 4'de gösterildigi gibi tedavi edilen farelerin kari glükoz seviyeleri normal-glisemik hale geldi. 8. çalisma gününde, bir glükoz tolerans testi (OGTT) gerçeklestirildi. Perhiz yaptirilmis fareler 2 g - kg'1 glükoz ile agiz yoluyla dürtüklendi. Kan glükozu anestezi olmadan kuyruk ucu kanamasi ile gösterilen zaman noktalarina ölçüldü. OGTT'nin sonuçlari Sekil 3'de gösterilmistir. Yalnizca FGF-21 veya yalnizca AVEOO10 uygulanmasi ile karsilastirinca bir araya getirilmis tedavide glükoz toleransinin kayda deger ölçüde daha güçlü bir sekilde gelistigi görüldü. Bir araya getirilmis tedavi ile tedavi edilen obez hayvanlar bile zayif kontrol hayvanlarindan daha fazla glükoz toleransli oldular. 2. db/db faresinin tedavisi Disi db/db fareleri (BKS.Cg-m +/+ Leprdb /J, alti haftalik) tasiyici (PBS), 0.05 mg 'kg'1 -gün'1 AVEOO10, veya bir araya gelmis dozda günde bir defa deri altindan verme yöntemiyle tedavi edildi. Fareler arzu edildigi zaman beslendi. Ilk tedaviden önce ve bir hafta ve 4 hafta sonrasinda kan glükozu ve HbA1c beslenme kosullari altinda ölçüldü. Tedavinin yirmi birinci günü sonrasinda bir oral glükoz tolerans testi (OGTT) baslatildi. Perhiz yaptirilmis fareler 2 g - kg`1 glükoz çözeltisi ile agiz yoluyla dürtüklendi ve kan glükozu gösterilen zaman noktalarina ölçüldü. Sonuçlar Sekil 6 ve 7'de gösterilmistir. FGF21 ile AVEOO10 kombinasyonunun birlikte verilmesi kari glükozunun normallesmesine yol açmis ve tasiyici ile tedavi edilmis obez kontrolü ile karsilastirildiginda glükoz toleransini radikal bir biçimde gelistirmistir. Bununla birlikte FGF21 veya AVEOO10iun tek baslarina tedavisi bir arada yapilan tedavi ile karsilastirildiginda kan glükozu artisinin sadece engellenmesine ve glükoz toleransinda az bir gelismeye yol açmistir. TR TR TR TR TR TR TR TR