TW201014605A - Methods for treating progressive multiple sclerosis - Google Patents

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TW201014605A TW098131063A TW98131063A TW201014605A TW 201014605 A TW201014605 A TW 201014605A TW 098131063 A TW098131063 A TW 098131063A TW 98131063 A TW98131063 A TW 98131063A TW 201014605 A TW201014605 A TW 201014605A
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Peter Scott Chin
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201014605 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於治療患者之進展型多發性硬化症（MS)之方 法及用於該用途之附有說明書的製品。 本申請案主張於2008年9月16曰申請之美國臨時申請案 _ 第61/097,464號之優先權，該申請案以全文引用的方式併 , 入本文中。 【先前技術】 多發性硬化症
多發性硬化症（MS)為一種人類中樞神經系統（CNS)之發 炎性及脫髓鞘退化性疾病。其為一種在全世界範圍内存在 的疾病，在美國約有300,000人患病；其為年輕人常患之 疾病，其中70%至80%在20歲至40歲之間發病（Anderson等 尺 Ann Neurology 31(3):333-6 (1992) ； Noonan # K 58:136-8 (2002))。基於臨床病程、磁共振成像 (MRI)掃描評估及活組織檢查及屍體解剖材料之病理學分 ^ 析，MS為一種異質性病症（Lucchinetti等人iVewro/ 47:707-17 (2000))。該疾病本身表現出大量可能之缺陷組 - 合，包括脊髓、腦幹、腦神經、小腦、大腦及認知症候 、 群。尤其當進行為期25年之觀察時，大多數患MS之患者 最終發展為殘疾。一半MS患者在疾病發作15年之内需要 扶杖行走。MS為年輕人及中年人神經性殘疾之主要誘 因，且直至過去的十年裏對其無已知有效的治療。MS由 於非特異性臨床發現故難以診斷，致使發展高度結構化之 143333.doc 201014605 診斷準則，包括由MRI掃描、誘發電位及腦脊髓液（CSF) 研究組成之若干技術進展。所有診斷準則均依賴於以下一 般原理：中央白質中存在在不同時間出現且不能以其他病 因（諸如感染、血管病症或自艎免疫病症）解釋之分散病變 (McDonald等人 Wewri?/ 50:121-7 (2001))。MS具有四種 疾病型式：復發緩解型MS(RRMS ; 80%-85%發病病例）、 原發性進展型MS(PPMS，10%-15%發病病例）、進展復發 型MS(PRMS，5%發病病例）及繼發性進展型MS(SPMS) (Kremenchutzky 等人 122 (Pt 10):1941-50 (1999);
Confavreux等人iV ·/ Med 343(20):1430-8 (2000))。據 估計50%患RRMS之患者會在10年内發展為SPMS ;且高達 90%之RRMS患者最終會發展為SPMS(Weinshenker等人 •Srak 112(Pt 1):133-46 (1989))。 目前，在美國有四類六種藥物批准用於治療RRMS，而 無藥物批准用於治療PPMS。RRMS治療包括以下：干擾素 類，IFNj-la(REBIF®及AVONEX®)及IFN-p-lb(BETASERON®); 乙酸格拉替雷（glatiramer acetate)(COPAXONE®)( —種多 肽）；那他珠單抗（natalizumab)(TYSABRI®);及米托蒽醌 (mitoxantrone)(NOVANTRONE®)( — 種細胞毒性劑）。已使 用其他藥物獲得不同程度之成功，該等藥物包括皮質類固 醇、曱胺0票吟（methotrexate)、環破醯胺（cyclophosphamide)、 硫。坐嘌吟（azathioprine)及靜脈内（IV)免疫球蛋白。目前批 准之治療之益處為如兩個综合分析所表明，RRMS之復發 率相對不高（約30%)及防止殘疾（Filippini等人 143333.doc 201014605 361:545-52 (2003)) ° 其他臨床研究評估MS之其他免疫調節劑，包括腫瘤壞 死因子α抑制劑及經改造之肽配位體，其惡化MS而非改善 MS(來那西普多發性硬化症研究組及英屬哥倫比亞大學 MS/MRI(Lenercept Multiple Sclerosis Study Group and the University of British Columbia MS/MRI) Neurology 53 :457-65 (1999) ; Bielekova 等人 iWzi Med 2000; 6:1167-75 (2000) ，勘誤表於Merf 6:1412 (2000)中發表）。
A
胃 MS病理生理學之主要觀點支持炎症主要由CD4+ Thl T 細胞介導。治療方法係基於以下理論，諸如IFN-β及乙酸 格拉替雷減少（但未完全阻止）殘疾惡化或累積的發生。 如在MS之診斷準則中存在CSF寡選殖帶且鞘内IgG合成 增加所證明，數十年來默認人類MS中存在體液組份（Siden A. «/ 221:39-51(1979) ; McDonald 等人 50:121-7 (2001) ; Andersson 等人五wr «/ iVewro/ 9:243-51 • (2002) ; O’Connor, P. iVewro/ogj)/ 59:Sl-33 (2002)) 〇 寡選殖 帶之存在、游離輕鏈增加及鞘内IgM合成增加與MS疾病活 性相關且可為更為嚴重結果之預測因素（Rudick等人Mw/i <Sc/er 1:150-5 (1995) ; Zeman 等人 Jcia Qyio/ 45:51-9 (2001) ； Izquierdo 等人 Neurol Scand 105:158-63 (2002) ； Wolinsky J. J Neurol Sci 206:145-52 (2003)； Villar等人53:222-6 (2003))。 在患有進展型及復發型MS之患者的金清中偵測到抗髓 鞘抗體（髓鞘鹼性蛋白（MBP)及髓鞘募樹突神經膠質細胞醣 143333.doc 201014605 蛋白（MOG))(Reindl等人Brai” 122:2047-56 (1999); Egg等 人 Mw/ί Sc/er 7(5):285-9 (2001))。亦在MS 患者之 CSF 中偵 測到抗髓鞘抗體（Reindl等人 122:2047-56 (1999);
Egg等人7(5):285-9 (2001); Andersson等人五μ" «/ ATewro/ 9:243-51 (2002))。在患有MS之患者體内觀測到 其他類型之抗體，諸如抗神經結苷脂抗體或抗神經纖毛抗 體（Mata等人 Mw/ί Sc/er 5:379-88 (1999) ; Sadatipour 等人 乂⑽iVewro/ 44:980-3 (1998))。報導指示血清抗MOG及抗 MBP抗體之存在為自臨床孤立脫髓鞠事件進展為明確 RRMS的強有力預測因素（Berger等人#五《g/ ·/ Med 349:139-45 (2003))。對兩種抗體血清反應陽性之患者經歷 病情惡化之調整危險比率為76_5且僅對抗MOG血清反應陽 性之患者經歷病情惡化之調整危險比率為3 1.6。 國際病理學協會發現在大多數患有MS之患者體内存在 與聽鞘結合之抗體，亦在MS病變中發現血漿細胞及B細 胞，為MS中存在體液作用提供額外證據（prineas& Wright, Lab Invest 38:409-21 (1978) ί Esiri M. Neuropathol Appl iVewrofeio/ 6:9-21 (1980) ; Genain 等人 iVai Med 5:170-5 (1999) ; Lucchinetti 等人 47:7〇7_i7 (2000);
Wingerchuk等人/«veji 81:263-81 (2001))。在患有MS 之患者之CSF中可偵測到B細胞且存在相對較高比例之B細 胞可預測進展為更嚴重之殘疾（Cepok等人Bra/w 124(Pt 11):2169-76 (2001)) « 在患有RRMS或眼陣攣-肌陣攣症候群之患者體内，據報 143333.doc 201014605 導利妥昔單抗（Rituximab)消耗所有患者體内之外周B細胞 且使一些患者體内之CSF B細胞數量減少（Pranzatelli等人 Λ^ί/ro/o幻；60(增刊 1) P〇5.128:A395 (2003) ; Cross 等人 「Preliminary Results from a Phase II Trial of Rituximab in MS Δ i 摘要）Eighth Annual Meeting of the American Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis AC TRIMS 20-1 (2003 年 10 月）；Cross 等人 J. Neuroimmunol. 180:63-70 (2006))。亦參見 Cree 等人 「Tolerability and Effects of Rituximab「Anti_CD20 Antibody j in Neuromyelitis Optica and Rapidly Worsening Multiple Sclerosis」Meeting of the Am. Acad· Neurol. (2004年 4 月）；Cree 等人iVeMro/og；； 64:1270-2 (2005)。 CD20抗體及使用其之療法 淋巴細胞為在血細胞生成過程期間骨艟中所產生之許多 類型白血球中之一種。存在兩種主要淋巴細胞群體：B淋 巴細胞（B細胞）及T淋巴細胞（T細胞）p本文中特別關注之 淋巴細胞為B細胞。 B細胞在骨髓中熟化且離開骨髓，在其細胞表面上表現 抗原結合抗體。當原生B細胞首先遇到對其膜結合抗體具 有特異性的抗原時，細胞開始快速分裂，而其子代分化為 記憶B細胞及稱為「漿細胞」之效應細胞。記憶B細胞具 有較長壽命且會持續表現具有與原始母細胞相同之特異性 的膜結合抗體。漿細胞不會產生膜結合抗體而是替代產生 呈可分泌形式之抗體。所分泌抗體為體液免疫之主要效應 143333.doc 201014605 分子。 CD20抗原（亦稱為人類B '淋巴細胞限制性分化抗原， Bp35)為一種位於前B淋巴細胞及成熟B淋巴細胞上分子量 為約35 kD之疏水性跨膜蛋白（Valentine等人《/. jBz'o/· C/zem. 264(19):11282-11287 (1989);及 Einfeld 等人五/. 7(3):711-717 (198 8))。該抗原亦表現於超過90%之B細胞非 霍奇金氏淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphomas (NHL))上 (Anderson 等人 5/ood 63(6):1424-1433 (1984))，但未見於 造血幹細胞、祖B細胞、正常漿細胞或其他正常組織上 (Tedder等人乂 135(2):973-979 (1985))。CD20會 調控細胞週期起始及分化之活化過程之早期階段（Tedder等 人，同上文）且可能充當鈣離子通道（Tedder等人·/· CW/. 14D:195 (1990))。 鑒於CD20在B細胞淋巴瘤中表現，因此此抗原可作為 「乾向」該種淋巴瘤之候選物。本質上，該乾向概括而言 如下：向患者投與對B細胞之CD20表面抗原具特異性之抗 體。此等抗CD20抗體特異性結合正常B細胞及惡性B細胞 (表面上）之CD20抗原；與CD20表面抗原結合之抗體可導 致贅生性B細胞之破壞及消耗。此外，具有破壞腫瘤之潛 力之化學藥劑或放射性標記可與抗CD20抗體結合以使得 藥劑特異性「傳遞」至贅生性B細胞。無論採用何種方 法，主要目的均為破壞腫瘤；可由所利用之特定抗CD20 抗體來決定特定方法且因此可用以靶向CD20抗原之方法 可顯著不同。 143333.doc 201014605 利妥昔單抗（RITUXAN®)抗體為針對CD20抗原之經遺傳 工程改造之嵌合鼠類/人類單株抗體。利妥昔單抗為1998 年4月7曰頒予之美國專利第5,736,137號（Anderson等人）中 稱為「C2B8」之抗體。RITUXAN®指定用於治療患有復 發性或難治性低級或濾泡性CD20陽性B細胞非霍奇金氏淋 • 巴瘤之患者。作用機制之活體外研究表明RITUXAN®與人
^ 類補體結合且經由補體依賴性細胞毒性（CDC)溶解淋巴B 細胞株（Reff等人83(2):435-445 (1994))。此外，其在 ❹ 抗體依賴性細胞毒性（ADCC)檢定中具有顯著活性。最 近，已展示RITUXAN®在氚化胸苷併入檢定中具有抗增生 作用且直接誘導細胞凋亡，而其他抗CD19及CD20抗體則 不具有此作用（Maloney等人88(10):637a (1996))。亦 已在實驗中觀測到RITUXAN®與化學療法及毒素之間存在 協同作用。詳言之，RITUXAN®使抗藥性人類B細胞淋巴 瘤細胞株對小紅莓（doxorubicin)、CDDP、VP-16、白喉毒 素（diphtheria toxin)及蓖麻毒素（ricin)之細胞毒性作用敏感 (Demidem 等人 Cancer C/iemoi/zerapy ά 12(3):177-186 (1997))。活體内臨床前研究展示 • RITUXAN®可能經由補體及細胞介導之過程消耗獼猴外周 . 血、淋巴結及骨髓之B細胞（Reff等人β/ood 83(2):435-445 (1994))。 在美國於1997年11月批准利妥昔單抗以每週375 mg/m2 給藥四次之劑量用於治療患有復發性或難治性低級或濾泡 性CD20+ B細胞非霍奇金氏淋巴瘤（NHL)。在2001年4月， 143333.doc 201014605 食品與藥物管理局（Food and Drug Administration (FDA)) 批准其他治療低級NHL之主張：再治療（每週給藥四次）及 其他給藥方案（每週給藥八次）。已有超過300,000名患者進 行利妥昔單抗的單一療法或與免疫抑制藥物或化學治療藥 物之組合療法。患者亦經利妥昔單抗維持療法治療多達2 年（Hainsworth 等人·/ Clin Oncol 21:1746-51 (2003)；
Hainsworth等人·/ 20:4261-7 (2002))。 亦已在多種非惡性自體免疫病症中研究利妥昔單抗，在 該等病症中B細胞及自體抗體似乎在疾病病理生理中起作 用（Edwards等人5/oc/zem «Soc 30:824-8 (2002))。已報 導利妥昔單抗可能緩解以下疾病之徵兆及症狀：類風濕性 關節炎（RA)(Leandro 等人 Rheum Dis. 61:883-8 (2002) ; Emery 等人 Jri/znD 48(9):S439 (2003)); 狼瘡（Eisenberg R. Tie·? 772er 5:157-9 (2003);
Leandro等人46:2673-7 (2002));免疫血小 板減少症（D’Arena等人Z/gwA: Ly/njij/zoma 44:561-2 (2003)); 自體免疫貧血（Zaja 等人 87:189-95 (2002) (勘誤表在 87:336 (2002)中發表）；自 體免疫神經病（Pestronk等人《/ iVei/ro/ iVewroswrg 74485-9 (20〇3));副腫瘤眼陣攣-肌陣攣症候群 (Pranzatelli 等人 60(增刊 1) Ρ05·128:Α395 (2003) );及復發緩解型多發性硬化症（RRMS)(Cross等人 (摘要）美國多發性硬化症研究及治療委員會第8次年會 (Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for 143333.doc -10- 201014605
Research and Treatment in Multiple Sclerosis)20-1 (2003))。 對患有類風濕性關節炎（RA)之患者進行第II期研究 (WA16291)，提供關於利妥昔單抗之安全性及功效之48週 隨訪資料（Emery等人48(9):S439 (2003); Szczepanski 等人 Jri/zrfiz) ii/iew/w 48(9):S121 (2003))。將總 共161名患者平均隨機化至四個治療組：甲胺喋呤、僅利 妥昔單抗、利妥昔單抗加甲胺喋呤、利妥昔單抗加環磷醯 胺（CTX)。利妥昔單抗之治療方案為於第1天及第15天靜脈 内投與1 g。在大多數患有RA之患者中輸注利妥昔單抗為 大多數患者能良好耐受，其中36%之患者在其第一次輸液 期間經歷至少一次不良反應（相比之下接收安慰劑之患者 為30%)。總而言之，大多數不良反應之嚴重程度視為輕度 至中度且在所有治療組之間良好平衡。在48週内，在四組 中存在總共19次嚴重不良反應，在利妥昔單抗/CTX組中略 微更為頻繁。感染之發生率在所有組中良好平衡。在此 RA患者群體中嚴重感染之平均比率為每年每100名患者中 4.66例，低於社區性流行病學研究中所報導之RA患者中需 要住院之感染比率（每年每100名患者9.57例）(Doran等人 dri/zr/iis 46:2287-93 (2002)) ° 已報導利妥昔單抗在少數患有以下疾病之患者中之所報 導安全性概況：神經病症，包括自體免疫神經病（Pestronk 等人《/TVewro/iVewroiMrg· 74:485-9 (2003));眼陣 攣/肌陣攣症候群（Pranzatelli等人#/〇幻；60(增刊1) 143333.doc • 11 · 201014605 P05.128:A395 (2003));及 RRMS(Cross 等人 Preliminary results from a phase II trial of Rituximab in MS (摘要）美國 多發性硬化症研究及治療委員會第8次年會（Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis)20-1 (2003))。在正在進行 中之在患有RRMS之個體中對利妥昔單抗與干擾素p(IFN-β)或乙酸格拉替雷組合進行的由研究者發起之試驗（1ST)中 (Cross等人，同上文），10位經治療個體中有一位在首次輸 注利妥昔單抗後經歷中度發熱及寒戰後住院觀察隔夜，而 其他9位個體完成四次輸液療程而未報導有任何不良反 應。 關於CD20抗體、CD20結合分子及自體抗原疫苗之專利 及專利公開案包括：U.S. 5,776,456、5,736，137、 5,843,439、6,399,061 及 6,682,734 以及 US 2002/0197255、 US 2003/0021781、US 2003/0082172、US 2003/0095963、 US 2003/0147885、US 2005/0186205 及 WO 1994/11026 (Anderson等人）；U.S. 6,455,043 ' US 2003/0026804、US 2003/0206903 及 WO 2000/09160(Grillo-Lopez，A.) ; WO 2000/27428(Grillo-Lopez 及 White) ; US 2004/0213784 及 WO 2000/27433(Grillo-Lopez及 Leonard) ; WO 2000/44788 (Braslawsky 等人）；WO 2001/10462(Rastetter，W.) ； WO 2001/10461(Rastetter 及 White) ; WO 2001/10460(White 及 Grillo-Lopez) ; US 2001/0018041、US 2003/0180292、US 2002/0028178、WO 2001/34194及 WO 2002/22212(Hanna及 143333.doc -12- 201014605
Hariharan) ; US 2002/0006404及 WO 2002/04021(Hanna及 Hariharan) ； US 2002/0012665、US 2005/0180975、WO 2001/74388及 U.S. 6,896,885(Hanna, N.) ; US 2002/0058029 (Hanna, N.) ; US 2003/0103971(Hariharan 及 Hanna) ; US 2005/0123540(Hanna等人）；US 2002/0009444及 WO 2001/ 80884(Grillo-Lopez，A.) ; WO 2001/97858 ; US 2005/0112060、 US 2002/0039557 及 U.S. 6,846,476(White, C.) ； US
2002/0128448 及 WO 2002/34790(Reff，M.) ; WO 2002/ 060955(Braslawsky等人）；WO 2002/096948 (Braslawsky等 人）；WO 2002/079255(Reff及 Davies) ; U.S. 6，171，586及 6,991,790及 WO 1998/56418(Lam 等人）；US 2004/0191256 及 WO 1998/58964(Raju，S.) ; WO 1999/ 22764(Raju, S.); WO 1999/51642、U.S. 6,194,551、U.S. 6,242，195、 6,528,624及 6,538，124(Idusogie等人）；U.S. 7,122,637 ' US 2005/0118174、US 2005/0233382、US 2006/0194291 ' US 2006/0194290、US 2006/0194957及 WO 2000/42072(Presta， L.) ; WO 2000/67796(Curd等人）；WO 2001/03734(Grillo-Lopez 等人）；US 2002/0004587、US 2006/0025576 及 WO 2001/77342(Miller及 Presta) ; US 2002/0197256及 WO 2002/ 078766(Grewal, I.) ; US 2003/0157108及 WO 2003/035835 (Presta, L.) ; U.S. 5,648,267、5,733,779、6,017,733 及 6,159,730 及 WO 1994/11523(Reff等人，關於表現技術）； U.S. 6,565,827 ' 6,090,365 ' 6,287,537、6,015,542 ' 5,843,398 及 5,595,721(Kaminski 等人）；U.S. 5,500,362 ' 143333.doc -13- 201014605 5,677,180 ' 5,721,108 ' 6,120,767、6,652,852 A 6,893,625 以及 WO 1988/04936(Robinson 等人）；U.S. 6,410,391 (Zelsacher) ; U.S. 6,224,866 &W0 2000/20864(Barbera-Guillem, E.) ； WO 2001/13945(Barbera-Guillem, E.) ； WO 2000/67795(Goldenberg) ； U.S. 7,074,403(Goldenberg 及 Hansen) ; U.S. 7,151,164(Hansen等人）；US 2003/0133930 ; WO 2000/74718 及 US 2005/0191300Al(Goldenberg 及 Hansen) ; US 2003/0219433 及 WO 2003/68821(Hansen 等 人）；WO 2004/058298(Goldenberg及 Hansen) ; WO 2000/ 76542(Golay 等人）；WO 2001/72333(Wolin及 Rosenblatt); U.S. 6,368,596(Ghetie 等人）；U.S. 6,306,393 及 US 2002/ 0041847(Goldenberg，D.) ； US 2003/0026801(Weiner 及 Hartmann) ； WO 2002/102312(Engleman, E.) ； US 2003/ 0068664(Albitar等人）；WO 2003/002607(Leung, S.) ； WO 2003/049694 > US 2002/0009427及 US 2003/01 85796(Wolin 等人）；WO 2003/061694(Sing及 Siegall) ; US 2003/0219818 (Bohen等人）；US 2003/0219433及 WO 2003/068821(Hansen 等人）；US 2003/0219818(Bohen等人）；US 2002/0136719 (Shenoy等人）；WO 2004/032828及US 2005/0180972(Wahl 等人）；及 WO 2002/56910(Hayden-Ledbetter)。亦參見U.S. 5,849,898 及 EP 330,191(Seed 等人）；EP 332,865A2(Meyer 及 Weiss) ; U.S. 4,861，579(Meyer 等人）；US 2001/0056066 (Bugelski 等人）；WO 1 995/03770(Bhat 等人）；US 2003/ 0219433 Al(Hansen 等人）；WO 2004/035607 及 US 2004/ 143333.doc -14- 201014605 167319(Teeling等人）；WO 2005/103081(Teeling等人）；US 2006/0034835、US 2006/0024300 及 WO 2004/056312 (Lowman 等人）；US 2004/0093621(Shitara 等人）；WO 2004/103404(Watkins 等人）；WO 2005/000901(Tedder 等 人）；US 2005/0025764(Watkins 等人）；US 2006/0251652 • (Watkins 等人）；WO 2005/016969(Carr 等人）；US 2005/
. 0069545(Carr 等人）；WO 2005/014618(Chang 等人）；US 2005/0079174(Barbera-Guillem及 Nelson) ; US 2005/0106108 ❹ （Leung 及 Hansen) ; US 2005/0123546(Umana 等人）；US 2004/0072290(Umana 等人）；US 2003/0175884(Umana 等 人）；及 WO 2005/044859(Umana 等人）；WO 2005/070963 (Allan 等人）；US 2005/0186216(Ledbetter 及 Hayden-Ledbetter) ; US 2005/0202534(Hayden-Ledbetter及Ledbetter); US 2005/136049(Ledbetter 等人）；US 2003/118592 (Ledbetter 等人）；US 2003/133939(Ledbetter 及 Hayden-Ledbetter) ; US 2005/0202012(Ledbetter及 Hayden-Ledbetter); US 2005/0175614(Ledbetter 及 Hayden-Ledbetter) ; US 2005/0180970(Ledbetter 及 Hayden-Ledbetter) ; US 2005/ 0202028(Hayden-Ledbetter及 Ledbetter) ; US 2005/0202023 * (Hayden-Ledbetter 及 Ledbetter) ; WO 2005/017148 (Ledbetter等人）；WO 2005/037989(Ledbetter等人）；U.S. 6,1 83,744(Goldenberg) ; U.S. 6,897,044(Braslawski等人）； WO 2006/005477(Krause等人）；US 2006/0029543(Krause 等人）；US 2006/0018900(McCormick 等人）；US 2006/ 143333.doc -15- 201014605
0051349(Goldenberg 及 Hansen) ; WO 2006/042240(Iyer 及 Dunussi-Joannopoulos) ; US 2006/0121032(Dahiyat等人）； WO 2006/064121(Teillaud 等人）；US 2006/0153838 (Watkins)、CN 1718587(Chen 等人）；WO 2006/084264 (Adams 等人）’· US 2006/0188495(Barron 等人）；US 2004/0202658 及 WO 2004/091657(Benynes， K·) ; US 2005/0095243、US 2005/0163775 ' WO 2005/0035 1 及 WO 2006/068867(Chan, A.) ； US 2006/0135430 及 WO
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2004/060052(Chan等人）；WO 2004/060053(Chan等人）； US 2005/0186206 及 WO 2005/060999(Brunetta，P.) ; US 2005/0191297 及 WO 2005/061542(Brunetta， P.) ; US 2006/0002930 及 WO 2005/115453(Brunetta 等人）；US 2006/0099662及 WO 2005/108989(Chuntharapai 等人）；CN 1420129A(Zhongxin Guojian Pharmaceutical) ； US 2005/ 0276803 及 WO 2005/113003(Chan等人）；US 2005/0271658 及 WO 2005/117972(Brunetta 等人）；US 2005/0255527 及 WO 2005/11428(Yang，J.); US 2006/0024295及 WO 2005/ 120437(Brunetta，P.) ; US 2006/0051345及 WO 2005/117978 (Frohna, P.) ； US 2006/0062787 A WO 2006/012508(Hitraya, E·) ; US 2006/0067930及 WO 2006/31370(Lowman 等人）； WO 2006/29224(Ashkenazi，A.); US 2006/0110387 及 WO 143333.doc -16- 201014605 2006/41680(Brunetta, P.) ； US 2006/0134111 及 WO 2006/ 066086(Agarwal, S.) ; WO 2006/069403(Ernst及Yansura); US 2006/0188495 及 WO 2006/076651(Dummer, W.) ; WO 2006/084264(Lowman, H.) ; WO 2006/093923(Quan 及
Sewell) ; WO 2006/106959(Numazaki 等人）；WO 2006/ 126069(Morawala) ； WO 2006/130458(Gazit-Bornstein 等 人)；US 2006/0275284(Hanna，G.) ; US 2007/0014785 (Golay等人）；US 2007/0014720(Gazit-Bornstein等人）；及 US 2007/0020259(Hansen 等人）；US 2007/0020265 (Goldenberg 及 Hansen) ; US 2007/0014797(Hitraya) » US 2007/0224189(Lazar 等人）；WO 2007/014238(Bruge 及 Bruger);及 WO 2008/003319(Parren及 Baadsgaard)。其中 某些尤其包括多發性硬化症之治療。 關於使用利妥昔單抗之療法之公開案包括：Perotta及 Abuel「Response of chronic relapsing ITP of 10 years (11^1:1〇111〇1111；11父111131)」摘要編號3360 5/〇〇<^10(1)(第1-2部 分）：第 88B 頁（1998) ; Stashi 等人「Rituximab chimeric anti-CD20 monoclonal antibody treatment for adults with chronic idopathic thrombocytopenic purpura 」 Blood 98(4):952-957 (2001) ； Matthews, R. 「Medical Heretics」 New Scientist (2001 年 4 月 7 日）；Leandro 等人「Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion」61:833-888 (2002) ； Leandro 等人「Lymphocyte depletion in 143333.doc -17- 201014605 rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response. Arthritis and Rheumatism 44(9): S370 (2001) ； Leandro 等人「An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus」，Arthritis & Rheumatism 46(1):2673-2677 (2002) ； Edwards^ Cambridge 「Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes 」 Rhematology 40:205-211 (2001) ; Edwards 等人「 B- lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders 」 Biochem. Soc. Trans. 30(4):824-828 (2002) ; Edwards等人「Efficacy and safety of Rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46(9): S197 (2002) ; Levine 及 Pestronk「IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using Rituximab」JVewro/ogy 52: 1701-1704 (1999) ; DeVita等人 「Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis」& Rheum 46:2029-2033 (2002) ; Hidashida等人「Treatment of DMARD-Refractory rheumatoid arthritis with Rituximab.」於美國風濕病學會 科學年會Scientific Meeting of the American CoZ/ege 〇/ 及/zewmaio/ogy); 10 月 24-29 日；New Orleans, LA 2002 中發表；Tuscano, J· 「Successful treatment of 143333.doc • 18 · 201014605
Infliximab-refractory rheumatoid arthritis with Rituximab」 於美國風濕病學會科學年會Meei/wg 〇/ the American College of Rheumatology); 10 月 24-29 日； New Orleans，LA 2002 中發表；Specks等人「Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy」Arthritis & Rheumatism 44(12):2836-2840 (2001) ; Anolik 等人.「B lympocyte
Depletion in the Treatment of Systemic Lupus (SLE): Phase I/II Trial of Rituximab (RITUXAN®) in SLE」dwd Rheumatism, 46(9), S289-S289 摘要 7 17(2002 年 10 月）及 Albert等人「A Phase I Trial of Rituximab (Anti-CD20) for Treatment of Systemic Lupus Erythematosus」Arthritis And Rheumatism, 48(12): 3659-3659，摘要 LB9(2003 年 12 月)； Martin 及 Chan「Pathogenic Roles of B cells in Human Autoimmunity: Insights from the Clinic」/www«"少 20:517-527 (2004) ; Cree等人「An open label study of the effects of rituximab in neuromyelitis optica.」 Neurology 64(7): 1270-2 (2005) ; Cross 等人「Rituximab reduces B cells and T cells in cerebrospinal fluid of multiple sclerosis patients.」J iVeMroz’/wwMwo/，180(1-2):63-70 (2006) ; Bar-Or A.等人「Safety， pharmacodynamics, and activity of
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中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 143333.doc -20· 201014605 在一些實施例中’樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中 炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中’患者之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中’患者之EDSS小於或等於約5.〇持續 少於約10年。在一些實施例中’開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS辦加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1 ·5分。在_此實 施例中，開始治療前兩年内EDSS增加至少約15分不可歸 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間》 在一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在 一些實施例中，確診之疾病進展為持讀十二週之£1)88增 加。在一些實施例中’確診之疾病進展為持續二十四週之 EDSS增加》 在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以 提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露， 隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴 露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及，或第二抗 CD20抗體暴露在約〇,3公克至約1.5公克之間。在一些實施 例中’該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。 在一些實施例中’以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體 143333.doc •21 - 201014605 形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID ]^〇:10、8£()1〇]^〇:11及8£()1〇>1〇:12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單抗 (ocrelizumab)。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗 (ofatumumab)。在一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015 或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在 一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。 本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，限 制條件為發現患者具有一或多種選自由以下組成之群之特 徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色病變，（c)在 開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一 分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分，該 治療包含向該患者投與有效量之抗CD20抗體。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 143333.doc •22· 201014605 中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續 少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實 施例中，開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分不可歸 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在 一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增 加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之 EDSS增力口。 在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以 提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露， 隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴 露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗 CD20抗體暴露在約0.3公克至約1_5公克之間。在一些實施 例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。 在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體 形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。 -23- 143333.doc 201014605 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ id 1^〇:10、8£(^1〇]^〇:11及8£(^1〇]^〇:12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鍵 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD2〇抗 體為hA20。 本發明提供治療進展型多發性硬化症之方法，其包含： (a)選擇具有進展型多發性硬化症之患者，其中該患者具有 一或多種選自由以下組成之群之特徵：（i)年齡小於約55 歲；（ii) 一或多個釓染色病變，（iii)在開始治療前兩年内擴 展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發性硬 化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分；及（b)向如此選擇之患 者投與有效量之抗CD20抗體。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中’進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中’在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 143333.doc •24- 201014605 中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續 少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實 施例中，開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分不可歸 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在 一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之EDSS增 加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二十四週之 EDSS增加。 在一些實施例中，向患者投與有效量之抗CD20抗體以 提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗CD20抗體暴露， 隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的第二抗CD20抗體暴 露。在一些實施例中，初始抗CD20抗體暴露及/或第二抗 CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。在一些實施 例中，該第二暴露直至初始暴露後約16週至60週才提供。 在一些實施例中，以一個劑量或兩個劑量之抗CD20抗體 形式向患者提供各次抗CD20抗體暴露。 143333.doc •25· 201014605 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID >^〇:10、8丑(）1〇]^〇:11及8£(5 1〇]^〇:12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗 體為hA20。 本發明亦提供評估患有進展型多發性硬化症之患者是否 對用抗CD20抗體治療有反應的方法，其包含評估一或多 種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) 一或多個釓染色病變，（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀 態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重 度評分（MSSS)高於約5分，其中患者之一或多種該等特徵 指示患者會對治療有反應。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 143333.doc -26- 201014605 中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續 少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實 施例中，開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分不可歸 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在一些實施例中，該方法進一步包含給患者提供建議。 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID 1^0:10、8丑〇10 1^0:11及8£(5 10>^0:12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗 體為hA20。 本發明亦提供鑑別可能對抗CD20抗體治療有反應的患 有進展型多發性硬化症之患者的方法，其包含：（a)評估一 143333.doc -27- 201014605 或多種選自由以下組成之群之特徵：（i)年齡小於約55歲， (ii) 一或多個乳染色病變’（iii)在開始治療前兩年内擴展殘 疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發性硬化症 嚴重度評分（MSSS)尚於約5分；及（b)鑑別具有一或多種選 自由以下組成之群之特徵之患者：⑴年齡小於約55歲， (Π)—或多個亂染色病變，（iii)在開始抗CD20治療前兩年 内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發 性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中’在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中’樣本為腦脊魏液樣本。在一些實施例 中’炎症跡象由IgG指數升尚指不。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續 少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS増加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實 施例中’開始治療前兩年内EDSS增加至少約1 ·5分不可歸 143333.doc -28· 201014605 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在一些實施例中，該方法進一步包含給患者提供建議。 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11及 SEQ ID NO: 12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗 體為hA20。 本發明進一步提供銷售用於進展型多發性硬化症患者子 群之抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物的方法， 該方法包含告知目標聽眾抗CD20抗體用於治療患者子群 的用途，該患者子群之特徵在於該子群之患者具有一或多 種選自由以下組成之群的特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) 一或多個釓染色病變，（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀 態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重 度評分（MSSS)高於約5分。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 143333.doc -29- 201014605 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中，在開始治療時患者子群未診斷患有復發緩解型多發性 硬化症。 在一些實施例中，患者子群之樣本中進一步具有炎症跡 象。在一些實施例中，樣本為膘脊髓液樣本。在一些實施 例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中， 炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在一些實施例中，患者子群之EDSS高於約5 〇持續少於 約15年。在一些實施例中，患者子群之EDSS小於或等於 約5.0持績少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩 年内之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中， EDSS增加為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。 在一些實施例中，開始治療前兩年内EDSS増加至少約i 5 分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者子群在開始治 療前兩年内進一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施 例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中’患者子群年齡小於約51歲。 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ m Ν〇·1〇、SEQ ID ΝΟ:11 及 SEQ ID NO:12 之重鍵可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 可變區。在一些實施例中，抗CD2〇抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中’抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中’抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 143333.doc -30· 201014605 例中’抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中’抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗 體為hA20。 本發明提供製品，其包含包裝在一起之包含抗CD20抗 體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物及指示（亦即說 明）抗CD20抗體或醫藥組合物指定用於治療患有多發性硬 化症之患者的標蕺，該患者具有一或多種選自由以下組成 參 之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色病 變’（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增 加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高 於約5分》 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症.在一些實施例 ❹ 中’在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，患者之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 中’炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG募選殖帶指示。 在一些實施例中，患者之EDSS高於約5.〇持續少於約Μ 年。在一些實施例中，患者之EDSS小於或等於約5.〇持續 少於約1〇年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 143333.doc •31· 201014605 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實 施例中，開始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分不可歸 因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中，在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，患者年齡小於約51歲。 在一些實施例中，包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受 之載劑的醫藥組合物係處於容器中。在一些實施例中，容 器包含約0.3公克至約4.0公克之間的抗CD20抗體。在一些 實施例中容器包含約0.3公克至約1.5公克之間的抗CD20抗 體。 在一些實施例中，標籤提供說明，其中說明指示向患者 投與有效量之抗CD20抗體以提供約0.3公克至約4.0公克之 間的初始抗CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至約4.0公 克之間的第二抗CD20抗體暴露。在一些實施例中，初始 抗CD20抗體暴露及/或第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至 約1.5公克之間。在一些實施例中，該第二暴露直至初始 暴露後約16週至60週才提供。在一些實施例中，以一個劑 量或兩個劑量之抗CD20抗體形式向患者提供各次抗CD20 抗體暴露。 在一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含SEQ ID >1〇:10、8£(^1〇^[〇:11及8£(5 1〇]^〇:12之重鏈可變區，及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6 之輕鏈 143333.doc -32- 201014605 可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥克利珠單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一 些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一些實施例 中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗CD20抗 體為hA20。 本發明亦提供預測患有進展型多發性硬化症之個體是否 會對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應的方 法’該方法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特 徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色病變，（c)在 開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一 分’及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分，藉 此年齡、釓染色病變、開始治療前兩年内之EDDS增加、 MSSS或其組合指示個體會對治療有反應。 在一些實施例中’進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中’在開始治療時個體未診斷患有復發緩解型多發性硬化 症。 在一些實施例中，個體之樣本中進一步具有炎症跡象。 在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一些實施例 中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施例中，炎 症跡象由以等電聚焦偵測之IgG募選殖帶指示。 143333.doc •33· 201014605 在一些實施例中’個體之EDSS高於約5.0持續少於約15 年。在一些實施例中’個體之EDSS小於或等於約5 〇持續 少於約10年。在一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，EDSS增加 為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約ι·5分。在一此實 施例中’開始治療前兩年内EDSS增加至少約15分不可歸 因於復發。在一些實施例中，個體在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。在一些實施例中在開始 治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中’個體年齡小於約51歲。 在本文中所述之任何方法或製品之一些實施例中，患者 具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約 55歲，（b)—或多個釓染色病變，及（c)在開始治療前兩年 内擴展殘疾狀態量表（EDSS)増加至少約一分。 本發明另外提供治療患者之多發性硬化症之方法，其包 含向患者投與有效量之奥克利珠單抗以提供約〇 3公克至 約0.6公克之間的初始奥克利珠單抗暴露，隨後提供約 公克至約0.6公克之間的第二奥克利珠單抗暴露，該第二 暴露直至初始暴露後約16週至6〇週才提供’且以一個劑量 或兩個劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供纟次奥克利珠 單抗暴露。 在一些實施例中，初始奥克利珠單抗暴露為約〇 6公 克°在-些實施例中’第二奥克利珠單抗暴露為約〇6公 克在。實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投 143333.doc • 34 - 201014605 *。在—些實施例中，以—個劑量之奥克利珠單抗形式向 患者提供一或多次奥克利珠單抗暴露。在-些實施例中， 以兩:劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供一或多次奥克 =單&暴露。在―些實施例中’初始奥克利珠單抗暴露 ”包含第-劑量及第二劑量之奥克利珠單抗，其中奥克利珠 單抗之第劑量及第二劑量為約〇·3公克。在一些實施例 中第一奥克利珠單抗暴露包含單一劑量之奥克利珠單 ❹ 抗’其中奥克利珠單抗之單-劑量為〇.6公克。在一些實 施例中，該等方法進—步包含提供第三奥克利珠單抗暴 露在一些實施例中，該等方法進一步包含提供第四奥克 利珠單抗暴露n實施例中，該等方法進—步包含提 供第五奥克利珠單抗暴露。在任何該等方法之一些實施例 中，該等方法進一步包含提供約一次至約三次之間的後續 奥克利珠單抗暴露。 本發明亦提供包含以下之製品：（a)包含奧克利珠單抗之 ❹ 谷器，及（b)具有關於治療患者之多發性硬化症之說明的藥 說明書，其中該等說明指示向患者投與有效提供約0.3 公克至約0.6公克之間的初始奥克利珠單抗暴露，隨後提 供約〇.3公克至約0.6公克之間的第二奥克利珠單抗暴露之 量的奥克利珠單抗’該第二暴露直至初始暴露後約16至6〇 週才投與，且以一個劑量或兩個劑量之奥克利珠單抗形式 向患者提供各次奥克利珠單抗暴露。 在一些實施例中，初始奥克利珠單抗暴露為約0.6公 克。在一些實施例中，第二奥克利珠單抗暴露為約0.6公 143333.doc -35· 201014605 克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投 與。在一些實施例中，以一個劑量之奥克利珠单抗形式向 患者提供一或多次奥克利珠單抗暴露。在一些實施例中， 以兩個劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供一或多次奥克 利珠單抗暴露。在一些實施例中，初始奥克利珠單抗暴露 包含第一劑量及第二劑量之奥克利珠單抗，其中奥克利珠 單抗之第一劑量及第二劑量為約0.3公克。在一些實施例 中，該等說明進一步包含提供第三奥克利珠單抗暴露。在 一些實施例中，該等說明進一步包含提供第四奥克利珠單 抗暴露。在一些實施例中，該等說明進一步包含提供第五 奥克利珠單抗暴露。在任何該等方法之一些實施例中，該 等說明進一步包含提供約一次至約三次之間的後續奥克利 珠单抗暴露。 【實施方式】 1·定義 「B細胞」為在骨髓内成熟之淋巴細胞，且包括原生B 細胞、記憶B細胞或效應B細胞（漿細胞）。本文中之B細胞 可為正常B細胞或非惡性B細胞。 本文之「B細胞表面標誌、」或「B細胞表面抗原」為表 現於可由與其結合之抗體靶向之B細胞表面上的抗原。例 示性B細胞表面標誌包括CD10、CD19、CD20、CD21、 CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、 CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、 CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、 143333.doc -36- 201014605 CD8 5及CD86白細胞表面標諸（關於描述參見The Leukocyte Antigen Facts Book，第 2版 1997，Barclay等人編 Academic Press，Harcourt Brace & Co.，New York)。其他B細胞表面 標誌包括 RP105、FcRH2、B 細胞 CR2、CCR6、P2X5、 HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、 SLGC16270、FcRHl、IRTA2、ATWD5 78、FcRH3、 IRTA1、FcRH6、BCMA及239287 »本文中特別關注之B細 胞表面標誌較佳表現於哺乳動物之B細胞上而非其他非B 細胞組織上，且於前驅B細胞及成熟B細胞上皆可表現。 本文中之較佳B細胞表面標誌為CD20。 「CD20」抗原或「CD20」為可見於外周血液或淋巴器 官之超過90% B細胞之表面上的約35 kDa非糖基化磷蛋 白。CD20存在於正常B細胞以及惡性B細胞上，但不表現 於幹細胞上。文獻中CD20之其他名稱包括「B-淋巴細胞 限制性抗原」及「Bp35」。CD20抗原係描述於例如Clark等 人Proc. iVai/. JcW. (USA) 82:1766 (1985)中。 本文之「抗體拮抗劑」為在與B細胞上之B細胞表面標 誌結合時破壞或消耗哺乳動物體内的B細胞及/或例如藉由 減輕或阻止由B細胞引起之體液反應來干擾一或多種B細 胞功能的抗體。抗體拮抗劑較佳能消耗用其治療之哺乳動 物體内之B細胞（亦即減少循環B細胞含量）。該消耗可藉由 各種機制達成，諸如抗體依賴性細胞介導之細胞毒性作用 (ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性作用（CDC)、對B細胞增 殖之抑制及/或誘導B細胞死亡（例如藉由細胞凋亡）。 143333.doc -37- 201014605 「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」及「ADCC」係指 細胞介導之反應，其中表現Fc受體（FcR)之非特異性細胞 毒性細胞（例如天然殺手（NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬 細胞）識別目標細胞上之結合抗體且隨後引起目標細胞溶 解。介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcyRIII，而單核 細胞表現FcyRI、FcyRII及FcyRIII。FcR在造金細胞上之表 現概述於 Ravetch 及 Kinet，Rev. Immunol 9:457-92 (1991)第464頁上的表3中。為了評估所關注分子的ADCC 活性，可進行活體外ADCC檢定，諸如美國專利第 5,500,362號或第5,821，337號中所述的檢定。該等檢定之適 用效應細胞包括外周血液單核細胞（PBMC)及天然殺手 (NK)細胞。另外或其他，所關注分子的ADCC活性可於活 體内，例如在動物模型（諸如Clynes等人iWdS 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型）中評估。 「人類效應細胞」為表現一或多種FcR且執行效應功能 之白細胞。在一些實施例中，細胞至少表現FcyRIII且執行 ADCC效應功能。介導ADCC之人類白細胞之實例包括外 周血液單核細胞（PBMC)、天然殺手（NK)細胞、單核細 胞、細胞毒性.T細胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細 胞較佳。 術語「Fc受體」或「FcR」用以描述與抗體之Fc區結合 的受體。在一些實施例中，FcR為天然序列人類FcR。此 外，較佳FcR為結合IgG抗體者（γ受體）且包括FcyRI、 FcyRII及FcyRIII子類之受體，包括對偶基因變異體及此等 143333.doc -38- 201014605 受體之替代剪接形式。FcyRII受體包括FcyRIIA(「活化受 體」）及FcyRIIB(「抑制受體」），其具有相似但主要在細 胞質域方面不同之胺基酸序列。活化受體FcyRIIA在其細 胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元（ITAM)。抑 制受體FcyRIIB之細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之 抑制基元（ITIM)(參見DaSron，Tmmwwo厂 15:203-234 (1 997))。FcR 回顧於 Ravetch 及 Kinet, 及ev.
Immunol 9:457-92 (1991) ; Capel 等人，Immunomethods 4:25-34 (1994)^de Haas^ A » J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)中。其他FcR(包括有待將來鑑別之彼等FcR)皆涵 蓋於本文中之術語「FcR」中。該術語亦包括新生兒受體 FcRn，其負責將母親IgG轉移至胎兒（Guyer等人，·/. Immunol. 117:587 (1976)及 Kim 等人，Immunol. 24:249 (1994))。 「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指分子在補體存 在下溶解目標之能力。補體活化路徑係藉由補體系統之第 一組份（Clq)同與同源抗原複合之分子（例如抗體）結合啟 始。為評估補體活化，可進行例如如Gazzano-Santoro等 A 5 J. Immunol. Methods 202:163(1996)中所述之 CDC 檢 定。 「生長抑制性」抗體為彼等阻止或減少表現與該抗體結 合之抗原的細胞之增殖的抗體。舉例而言，該抗體可活體 外及/或活體内阻止或減少B細胞之增殖。 「誘導細胞凋亡」之抗體為例如如由標準細胞凋亡檢定 143333.doc -39- 201014605 (諸如磷脂結合蛋白V(annexin V)之結合、DNA碎裂、細胞 收縮、内質網擴張、細胞碎裂及/或膜囊形成（稱作細胞凋 亡體））所確定，誘導漸進式細胞死亡（例如B細胞死亡）之彼 等抗體。 本文中之術語「抗體」以最廣泛含義使用且特別涵蓋單 株抗體、多株抗體、由至少兩種完整抗體形成之多特異性 抗體（例如雙特異性抗體）及抗體片段，只要其展現所要生 物活性即可。 「抗體片段」包含完整抗體之一部分，該部分較佳包含 其抗原結合區。抗體片段之實例包括Fab、Fab，、F(ab，）2及 Fv片段；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗 體片段形成之多特異性抗體。 出於本文之目的，「完整抗體」為包含重鏈可變域及輕 鏈可變域以及Fc區之抗體。 「天然抗體」通常為包含兩條相同輕（L)鍵及兩條相同 重（H)鏈的約150,〇〇〇道爾頓（dalton)之異質四聚體醣蛋白。 各輕鏈由一個共價雙硫鍵與重鏈連接，而雙硫鍵之數目隨 不同免疫球蛋白同型之重鏈而不同。各重鏈及輕鏈亦具有 規則間隔之鏈内雙硫橋。各重鏈在一末端具有可變域 (Vh) ’其後為多個恆定域。各輕鍵在一端具有可變域（v〇 且在另一端具有恆定域；輕鏈之恆定域與重鍵之第一恆定 域對準，且輕鏈可變域與重鏈之可變域對準。咸信特定胺 基酸殘基在fe鍵可變域與重鏈可變域之間形成界面。 術語「可變」係指抗體可變域之某些部分的序列大不相 143333.doc -40- 201014605 同且該等部分用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異 性。然而，可變性在抗體之整個可變域中並非均勻分布。 其集中於輕鏈可變域與重鏈可變域中三個稱作高變區之區 段中。可變域之更高度保守部分稱作構架區（FR)。天然重 鏈及輕鏈之可變域各包含4個FR，大部分採用β摺疊片構 型，經形成環連接且在一些情況下形成β摺疊片結構之一 部分的三個高變區連接。各鏈中之高變區經FR與其他鏈之 高變區緊密接近保持在一起，促進抗體之抗原結合位點之 形成（參見 Kabat 等人，/Segwewce·? 〇/ /Voie/ws Immunological Interest 5 第五版公共衛生署（Public Health Service)，國立健康研究院（National Institutes of Health)， Bethesda，MD. (1991))。雖然恆定域並不直接參與抗體與 抗原之結合中，但其展現各種效應功能，諸如抗體參與抗 體依賴性細胞毒性（ADCC)。 抗體之木瓜蛋白酶消化產生兩個稱為「Fab」片段之各 自具有單一抗原結合位點的相同抗原結合片段及殘餘 「Fc」片段，該名稱「Fc」片段反映其能容易地結晶。胃 蛋白酶處理產生F(ab’）2片段，其具有兩個抗原結合位點且 仍能夠交聯抗原。 「Fv」為含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體 片段。此區由一個重鏈可變域與一個輕鏈可變域緊密、非 共價締合之二聚體組成。在此構型中，各可變域之三個高 變區相互作用以界定VH-VL二聚體表面上之抗原結合位 點。六個高變區共同使抗體具有抗原結合特異性。然而， 143333.doc -41 - 201014605 即使單一可變域（或僅包含三個對抗原具特異性之高變區 之一半Fv)亦具有識別及結合抗原之能力，但親和力比完 整結合位點之親和力低。
Fab片段亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域 (CHI)» Fab’片段因在重鏈CH1域之羧基末端添加幾個殘基 (包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸）而與Fab片段不 同。Fab'-SH為本文中對恆定域之半胱胺酸殘基帶有至少 一個游離硫醇基之Fab•的名稱。F(ab，）2抗體片段最初以中 間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab，片段對形式產生。亦已知抗體 片段之其他化學偶合。 來自任何脊椎動物物種之抗鱧（免疫球蛋白）的「輕鏈」 基於其怪定域之胺基酸序列可歸類為兩種明顯不同類型 (稱作κ及λ)之一。 根據重鏈恆定域之胺基酸序列，抗體可歸入不同類別。 存在5種主要完整抗體類別：igA、igD、igE、igG及 IgM，且此等類別中之數種可進一步分成子類（同型），例 如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 及 IgA2。對應於抗體之 不同類別的重鏈恆定域分別稱作α、δ、ε、γ及μ ^不同類 別免疫球蛋白之次單位結構及三維構型為眾所周知。 「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之Vh域及％ 域，其中此等結構域存在於單一多肽鍵中。在一些實施例 中，Fv多肽在VH域與Vl域之間進一步包含多肽連接子， 其使scFv能夠形成抗原結合所需之結構。關於scFv之回顧 參見 PItickthun 之 77^ P/mr/waco/o幻；〇/ 143333.doc 201014605 ’ 第 113 卷 ’ Rosenburg 及 Moore 編，8卩1^11§61·-Verlag，New York，第 269-315 頁（1994)。 術§#·「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗 體片段，該等片段包含在同一多狀鍵（Vh-Vl)中與輕鍵可 變域（VL)連接之重鏈可變域（VH)。藉由使用過短以致同一 鏈上之兩個結構域之間無法配對的連接子，迫使該等結構 域與另一鏈之互補結構域配對且產生兩個抗原結合位點。 雙功能抗體更充分描述於（例如）EP 404,097 ; WO 93/ 11161 ;及 Hollinger 等人，/Voc. iVa". Jcad. 90:6444-6448 (1993)中 〇 如本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上同源 之抗體獲得的抗體，亦即除在單株抗趙產生期間可能出現 之可能變異體（該等變異體一般以較少量存在）外，構成該 群體之個別抗體均相同及/或結合相同抗原決定基。與通 常包括針對不同決定子（抗原決定基）之不同抗體的多株抗 體製劑相比’各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。除 其特異性外’早株抗體亦因未受其他免疫球蛋白污染而為 適宜的。修飾語「單株」指示抗體特徵為獲自實質上同源 之抗體群體且不應將其視為要求藉由任何特定方法產生抗 體。舉例而言，可藉由Kohler等人，256:495 (1975)首先描述之融合瘤方法或可藉由重組dNA方法（參見 例如美國專利第4,816,567號）製造待根據本發明使用之單 株抗體。亦可使用例如Clackson等人，352:624- 628 (1991)及 Marks等人，《/. Μο/. 5ζ·ο/·, 222:581-597 (1991) 143333.doc ·43· 201014605 中描述之技術自噬菌體抗體文庫分離「單株抗體」。 本文之單株抗鱧尤其包括「嵌合」抗體（免疫球蛋白）， =中重鍵及/或輕鏈之—部分與來源於特定物種或屬於特 定抗趙類別或子類之抗體的相應序列相同或同源，而鍵之 其餘部分與來源於另—物種或屬於另—抗體類別或子類之 抗體的相應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要 其展現所需生物活性即可（美國專利第4 816 567號； M〇rrison等人，户陳黯,ϋ 〜·㈣，8ι:685ι·6855 (1984))。本文中關注之嵌合抗體包括「靈長類化」抗體， 其包含來源於非人類靈長類動物（例如舊大陸猴 Monkey)，諸如狒狒、恆河猴或镧猴）之可變域抗原結合序 列及人類恆定區序列（美國專利第5,693,78〇號）。 非人類（例如鼠類）抗體之「人類化」形式為含有來源於 非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。人類化抗體主 要為人類免疫球蛋白（受體抗體），其中來自受體之高變區 的殘基經來自諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之 非人類物種（供體抗體）之高變區且具有所需特異性、親和 力及能力的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之 構架區（FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人類化抗 體可包含受體抗體或供體抗體中不存在之殘基。進行此等 修飾以進一步改進抗體效能。一般而言，人類化抗體包含 至少一個及通常兩個可變域中的實質上全部，其中所有或 實質上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之彼等高變環 且所有或實質上所有FR為人類免疫球蛋白序列之彼等 143333.doc -44 - 201014605 FR，但存在上文所述之FR取代。人類化抗體視情況亦包 含免疫球蛋白恆定區之至少一部分，通常為人類免疫球蛋 白之恆定區。欲知詳情，請參見Jones等人，iVaiMre 321:522-525 (1986) ； Riechmann# Λ » Nature 332:323-329 (1988);及 Presta，Cwrr. Op. 2:593-596 (1992)。 術語「高變區」當在本文中使用時係指負責抗原結合之 抗體胺基酸殘基。高變區包含「互補決定區」或「CDR」 之胺基酸殘基（例如輕鏈可變域中之殘基24-34(Ll)、50-56(L2)及 89-97(L3)，及重鏈可變域中之 3 1-35(H1)、50-65(H2)及 95-102(H3) ; Kabat 等人，《SegMewcej o/'/Voieiwi 〇/ /«iereii，第五版，公共衛生署（Public
Health Service)，國立健康研究院（National Institutes of Health)，Bethesda, MD. (1991))及/或「高變環」之彼等殘 基（例如輕鏈可變域之殘基26-32(Ll)、50-52(L2)及91-96(L3)，及重鏈可變域之 26·32(Η1)、53-55(H2)及 96-101(H3) ; Chothia 及 Lesk 乂 Mo/·价〇/. 196:901-917 (1987))。「構架」或「FR」殘基為除如本文所定義之高變 區殘基以外的彼等可變域殘基。 「裸抗體」為未與諸如細胞毒性部分或放射性標記之異 源分子結合之（如本文所定義之）抗體。 抗CD20抗體之實例包括：「C2B8」，現稱為「利妥昔單 抗（rituximab)」（「RITUXAN®/MABTHERA®」）（U.S. 5,736,137);稱為「Y2B8」或「替伊莫單抗（Ibritumomab 143333.doc • 45- 201014605
Tiuxetan)」（ZEVALIN®)之經釔[90]標記之2B8鼠類抗體， 其可購自 Biogen Idee, Inc.(例如U.S. 5,736，137; 1993 年 6 月22曰以寄存編號HB1 1388寄存之2B8);鼠類IgG2a 「B1」，亦稱為「托西莫單抗（Tositumomab)」，視情況經 1311標記以產生「131I-B1」或「碘1131托西莫單抗」抗體 (BEXXAR™)，可講自 Corixa(亦參見例如U.S. 5,595,721); 鼠類單株抗體「1F5」（例如Press等人5/ood 69(2):584-591 (1987))及其變異體，包括「經修補構架」或人類化1F5(例 如 WO 2003/002607，Leung, S. ; ATCC 寄存 HB-96450);鼠 類2H7及嵌合2H7抗體（例如U.S· 5,677，180) ; 2H7抗體（例 如WO 2004/056312(Lowman等人）及如上所闡明）； HUMAX-CD20tm(奥法土莫單抗）完全人類高親和力抗體， 其把向B細胞細胞膜中之CD20分子（Genmab, Denmark;參 見例如 Glennie 及 van de Winkel, Γοί/αγ 8: 503-510 (2003)及 Cragg 等人，β/ood 101: 1045-1052 (2003)) ; WO 2004/035607 及 WO 2005/103081(Teeling 等 人，GenMab/Medarex)中闡明之人類單株抗體；US 2004/0093621 (Shitara等人）中所描述具有與Fc區結合之複 合NSt苷連接型糖鍵之抗體；WO 2006/106959(Numazaki 等人，Biomedics Inc.)中所描述對CD20抗原之胞外抗原決 定基具有高結合親和力之嵌合或人類化單株抗體；與 CD20結合之單株抗體及抗原結合片段（例如WO 2005/ 000901，Tedder等人），諸如HB20-3、HB20-4、HB20-25及 MB20-11 ;與CD20結合之單鏈蛋白，包括（但不限於）TRU- 143333.doc -46- 201014605 015(例如 US 2005./0186216(Ledbetter 及 Hayden-Ledbetter); US 2005/0202534(Hayden-Ledbetter 及 Ledbetter) ; US 2005/0202028(Hayden-Ledbetter 及 Ledbetter) ; US 2005/ 136049(Ledbetter等人）；US 2005/0202023(Hayden-Ledbetter 及 Ledbetter)-Trubion Pharm Inc.);如例如 WO 2004/ 103404 ； US 2005/0025764及 US 2006/025 1652(Watkins 等 人，Applied Molecular Evolution, Inc.)中所闞明之CD20結 合分子，諸如ΑΜΕ系列抗體，例如AME-133tm抗體及如例 如 WO 2005/070963(Allan 等人，Applied Molecular Evolution, Inc.)中所闡明具有Fc突變之抗CD20抗艎； CD20結合分子，諸如彼等描述於WO 2005/016969及US 2005/0069545(Carr等人）中之分子；如例如WO 2005/ 014618(Chang等人）中所闡明之雙特異性抗體；如以下所 闡明之人類化LL2單株抗體及其他抗CD20抗體：例如U.S. 7,15 1,164(Hansen等人，Immunomedics ; US 2005/0106108 (Leung 及 Hansen; Immunomedics);如例如 WO 2006/ 130458 ; Gazit等人，Amgen/AstraZeneca中所述針對CD20 之完全人類抗體）；如例如WO 2006/126069(Morawala， Avestha Gengraine Technologies Pvt Ltd.)中所述針對 CD20 之抗體；如例如 WO 2005/044859、US 2005/0123546、US 2004/0072290 及 US 2003/0175884(Umana 等人；GlycArt Biotechnology AG)中所述針對CD20之嵌合或人類化B-Lyl 抗體；A20抗體或其變異體，諸如嵌合或人類化A20抗體 (分別為 cA20、hA20)及 IMMUN-106(例如 US 2003/0219433, 143333.doc -47- 201014605
Immunomedics);及可講自 International Leukocyte Typing Workshop(例如 Valentine 等人，III (McMichael 編’第 440 頁，Oxford University Press (1987)))之單株抗體 L27、G28-2、93-1B3、B-Cl 或 NU-B2。在一些實施例中，本文中之抗CD20抗體為嵌合人類 化或人類抗CD20抗體（更佳為利妥昔單抗）、2H7抗體、嵌 合或人類化 A20 抗體（Immunomedics)及 HUMAX-CD20tmA 類抗 CD20抗體（Genmab)。 本文之術語「利妥昔單抗」或「RITUXAN®」係指經遺 傳工程改造之針對CD20抗原且在美國專利第5,736,137號 中命名為「C2B8」的嵌合鼠類/人類單株抗體，包括其保 留結合CD20之能力的片段。利妥昔單抗可購自 Genentech ° 純粹出於本文之目的且除非另外指明，否則「人類化 2H7」係指結合人類CD20之人類化抗體或其抗原結合片 段，其中該抗體在活體内有效消耗靈長類動物B細胞，該 抗體在其Η鏈可變區（VH)中包含至少一個來自抗人類CD20 抗體之SEQ ID NO:12之CDR H3序列（圖1B)及實質上人類 重鏈子群III(VHIII)的人類共同構架（FR)殘基。在一些實施 例中，此抗體進一步包含SEQIDNO:10之Η鏈CDRH1序列 及SEQ ID ΝΟ:11之CDR Η2序列，且在一些實施例中，進 一步包含SEQ ID ΝΟ:4之L鏈CDR L1序列、SEQ ID ΝΟ:5之 CDR L2序列、SEQ ID ΝΟ:6之CDR L3序列及實質上人類 輕鏈子群I(vi)的人類共同構架（FR)殘基，其中Vh區可與人 143333.doc -48- 201014605 類IgG鏈恆定區聯接，其中該區可為例如IgGl或IgG3。在 一些實施例中，該抗體包含SEQ ID NO:8之VH序列〇16， 如圖1B中所示），視情況亦包含SEQ ID NO:2之VL序列 (v 16，如圖1A中所示），其可在Η鏈中具有胺基酸取代 D56A及Ν100Α及在L鏈（ν96)中具有胺基酸取代S92A。在 一些實施例中，抗體為完整抗體，其分別包含如圖2及3中 所示之SEQ ID ΝΟ:13及14之輕鏈及重鏈胺基酸序列。在一 些實施例中，抗體為2H7.V31，其分別包含如圖2及4中所 示之SEQ ID NO:13及15之輕鏈及重鏈胺基酸序列。本文之 抗體可進一步在Fc區中包含至少一個改良ADCC及/或CDC 活性的胺基酸取代，諸如其中胺基睃取代為S298A/ £33 3八/〖33 4八者，且在一些實施例中為具有8丑(）10 1^0:15 之重鏈胺基酸序列之2Η7·ν31(如圖4中所示）。此等任何抗 體可進一步在Fc區中包含至少一個降低CDC活性的胺基酸 取代，例如至少包含K322A取代。參見美國專利第 6,528,624Bm(Idusogie# A) ° 本文中之術語「奥克利珠單抗」係指經遣傳工程改造之 針對CD20抗原且包含（a)包含SEQ ID NO: 13胺基酸序列之 輕鍵及（b)包含SEQ ID NO: 14胺基酸序列之重鏈的人類化 單株抗體，包括其保留結合CD20之能力的片段。奥克利 珠單抗可自Genentech獲得0 「經分離」抗體為已經鑑別且自其天然環境之組份分離 及/或回收之抗體。其天然環境之污染組份為干擾抗體之 診斷或治療用途之物質’且可包括酶、激素及其他蛋白質 143333.doc •49- 201014605 或非蛋白質溶質。在一些實施例中，抗體將純化：（〗）至如 藉由勞立法（Lowry method)所測定大於95重量❶抗體且在 一些實施例中大於99重量％ ; (2)至足以藉由使用轉杯式定 序儀獲得Ν端或内部胺基酸序列之至少15個殘基之程度； 或（3)至藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用庫馬斯 藍（Coomassie blue)或在一些實施例中使用銀染色測定為均 質。由於抗體之天然環境之至少一種組份將不存在，所以 經分離抗體包括重組細胞内之原位抗體。然而，經分離抗 體通常將藉由至少一個純化步驟來製備。 本文中之「個體」或「患者」為人類個體或患者。一般 而舌’該個體或患者符合多發性硬化症之治療條件。出於 本文中之目的’該符合條件之個體或患者為經歷、已經歷 或可能經歷多發性硬化症之一或多種徵兆、症狀或其他指 標之患者；已診斷患有多發性硬化症（例如最近診斷（患有 「新發」MS);先前診斷且最近復發或惡化；先前診斷且 正在緩解等）及/或具有發展多發性硬化症之危險的患者。 患有多發性硬化症或具有患多發性硬化症危險之患者可視 情況鑑別為經篩選血清、腦脊髓液（CSF)及/或MS病變中 CD20陽性β細胞之含量升高及/或使用偵測自體抗體（定性 評估且較佳定量評估）之檢定篩選的患者。與多發性硬化 症相關之該等例示性自體抗髏包括抗髓鞘鹼性蛋白 (ΜΒΡ)、抗髓勒寡樹突神經膠質細胞醣蛋白（M〇G)、抗神 經節聽脂及/或抗神經纖毛抗體。該等自體抗體可在個體 血清、腦脊髓液（CSF)及/或MS病變中偵測到。本文中自體 143333.doc • 50· 201014605 抗體或B細胞含量「 含量顯著超過無]VIS個 之 升高」意謂該等自體抗體或B細胞 體之含量。 如本文所用之「治痒我媒尸古y + ^ ^ , 縻」為獲侍有益或所需結果（包括臨 手段。出於本發明之目的，有益或所需臨床結 一：仁不限於)一或多種以下結果：減輕由疾病產生之 延^種症狀，降低疾病程度；使疾病穩定（例如預防或 :卜::病惡化)’延緩或減慢疾病進展；改善疾病病況；
’ ^ ^療疾病所需之_或多種其他藥物之劑量及/或提高 生/舌品質。 如本文所用之「延緩」多發性硬化症之進展意謂拖延、 P礙減1^、延遲、穩定及/或推遲疾病發展。視病史及/ 或所治療之個體而定，此延緩可具有不同時間長度。 如本文制之「開始㈣時」係指首:欠暴露於多發性硬 化症藥物（諸如抗CD2〇抗體）時或之前的時期。在一些實施 例中，「開始治療時」大致為使用多發性硬化症藥物（諸如 抗CD20抗體）前—年、九個月、六個月、三個月、兩個月 或個月中之任何時間。在一些實施例中，「開始治療 時」為首次暴露於多發性硬化症藥物（諸如抗CD2〇抗體）前 即刻至同時。 如本文所用之「基於」包括〇)評估、測定或量測如本 文所述之患者特徵且較佳選擇適合接受治療之患者，及（2) 投與如本文所述之治療。 MS之「症狀」為個體所經歷且指示ms之結構、功能或 感覺之任何病態現象或非正常現象。 143333.doc -51· 201014605 「多發性硬化症」係指以進展型髓鞘受損為特徵之中柩 神經系統之慢性且通常致殘的疾病。存在四種國際上公認 之MS形式，亦即原發性進展型多發性硬化症（PPMS)、復 發緩解型多發性硬化症（RRMS)、繼發性進展型多發性硬 化症（SPMS)及進展復發型多發性硬化症（PRMS)。 如本文所用之「進展型多發性硬化症」係指原發性進展 型多發性硬化症（PPMS)、繼發性進展型多發性硬化症 (SPMS)及進展復發型多發性硬化症（PRMS)。在一些實施 例中，進展型多發性硬化症特徵為不可歸因於臨床復發的 有記錄證明之不可逆神經功能損失持續26個月。 「原發性進展型多發性硬化症」或「PPMS」特徵為疾 病自發作起逐漸進展，完全無疊加復發及緩解。可能存在 疾病活動性穩定之時期且可能存在數天或數週之好轉期及 惡化期。PPMS因通常在將近四十或四十出頭時發作，男 女發展該疾病之可能性相同且初始疾病活動性通常在脊趙 中而非腦中而不同於RRMS及SPMS。PPMS通常轉移至腦 中，但損傷腦區的可能性比RRMS或SPMS小。舉例而言， 患有PPMS的人產生認知問題之可能性小於患有RRMS或 SPMS的人° PPMS為最不可能在MRI掃描上顯示發炎性（釓 增強）病變之MS子型。原發性進展型疾病形式所影響之個 體在所有患多發性硬化症之個體中的10%至15%之間。 PPMS 可根據 McDonald 等人 TV^wro/ 50:121-7 (2001)之 準則來定義。本文中所治療之患有PPMS之個體通常為具 有可能或明確PPMS診斷的個體。 143333.doc -52- 201014605 「復發缓解型多發性硬化症」或「RRMS」特徵為期間 可出現新症狀且舊症狀重新顯現或惡化之復發（亦稱為惡 化）。復發之後為緩解期’期間個體自復發期間獲得之缺 損完全或部分恢復.。復發可持續數天、數週或數月且恢復 可為緩慢且逐漸恢復或幾乎瞬時恢復。絕大多數表現出 MS的人首先診斷為RRMS。此診斷通常在其二十多歲或= 十多歲時，儘管早得多或晚得多的診斷為已知的。表現出 此MS子型之女性為男性的兩倍。在復發期間，髓鞘（中樞 神經系統（CNS)白質區甲神經纖維（神經元）周圍的保護性 隔離鞘）可能在身體自體免疫系統之發炎性反應中受損。 此引起多種神經症狀，視CNS受損之區域而顯著不同。復 發後即刻，發炎性反應逐漸消失且CNS中特定類型之神經 膠質細胞（稱為募樹突神經膠質細胞）促使髓鞘再生（軸突周 圍之髓鞘可藉以修復之過程）。可能此趙鞘再生即為緩解 之原因。約50%患RRMS之患者在疾病發作1〇年内轉變為 SPMS。30年後’此數字升至90%。在任一時刻，復發緩解 型疾病佔所有患MS個體中的約55%。 「繼發性進展型多發性硬化症」或r SP]V[S」特徵為臨 床神經損傷穩步進展，伴有或不伴有疊加復發及較少緩解 及平穩期。發展SPMS的個體先前會經歷可能已持續兩年 至四十年或更長時間之RRMS期。所存在之任何疊加復發 及緩解傾向於隨時間逐漸減弱。自疾病之繼發性進展型階 段開始’殘疾開始以比RRMS期間快得多的速度進展，儘 管在一些個體中該過程可仍相當緩慢。1〇年後，5〇%患 143333.doc -53- 201014605 RRMS之患者會發展SPMS。25至30年後，彼數字會升至 90%。SPMS傾向於以發炎性病變形成程度低於rRMS，但 總疾病負擔持續進展為特徵。在任一時刻，SPMS佔所有 患多發性硬化症個體中的約3 0%。 「進展復發型多發性硬化症」係指以臨床神經損傷穩步 進展，伴有疊加復發及緩解為特徵之「PRMS」。復發後即 刻即存在明顯恢復，但在復發之間存在症狀的逐漸惡化。 PRMS影響所有患多發性硬化症之個體中的約5〇/〇。一些神 經學家相信PRMS為PPMS之變體。 表述「有效量」係指有效改善或治療多發性硬化症之抗 體（或其他藥物）的量。該有效量一般使得MS之徵兆、症狀 或其他指標改良，諸如降低復發率、防止殘疾、降低腦 MRI病變數量及/或體積、改善定時25步行走、減慢或延緩 疾病進展’諸如延長至疾病進展之時間（例如使用擴展殘 疾狀態量表，EDSS)等。 「抗體暴露」係指在約1 -20天之時期内接觸或暴露於所 投與之一或多個劑量的本文抗鱧。該等劑量可一次性給予 或在此暴露時期内以固定時間間隔或無規時間間隔給予。 如本文中所詳細描述，初始及稍後（例如第二或第三）抗體 暴露彼此間隔一定時間。 如本文所用之術語用於輔助治療之「免疫抑制劑」係指 用於抑制或遮蔽本文中所治療哺乳動物之免疫系統的物 質。其將包括抑制細胞激素產生、下調或抑制自體抗原表 現或遮蔽MHC抗原之物質。該等藥劑之實例包括2_胺基_6_ 143333.doc • 54· 201014605 芳基-5-取代之嘧啶（參見美國專利第4,665,077號）；非類固 醇消炎藥（NSAID);更昔洛韋（ganciclovir)、他克莫司 (tacrolimus)、諸如皮質醇或路固酮之糖皮質激素、諸如環 加氧酶抑制劑、5-脂肪加氧酶抑制劑或白三烯受體拮抗劑 之消炎劑；嘌呤拮抗劑，諸如硫唑嘌呤或黴酚酸酯 (mycophenolate mofetil，MMF);烧化劑，諸如環填醯 胺；溴隱定（bromocryptine);達那》坐（danazol);氨苯颯 (dapsone);戊二醛（如美國專利第4，120,649號中所述，其 遮蔽MHC抗原）；MHC抗原及MHC片段之抗遺傳型抗體； 環抱素A(cyclosporin A);類固醇，諸如皮質類固醇或糖皮 質類固醇或糖皮質激素類似物（例如強的松（prednisone)、 曱 潑尼龍 （methylprednisolone) 及地塞米松 (dexamethasone));二氳葉酸還原酶抑制劑，諸如甲胺嗓 吟（methotrexate)(口服或皮下）；經基氣啥 (hydroxycloroquine);柳氣項胺 °比咬（sulfasalazine);來氟 米特（leflunomide);細胞激素或細胞激素受體枯抗劑，包 括抗干擾素α、β或γ抗體、抗腫瘤壞死因子α抗體（英利昔 單抗（infliximab)或阿達木單抗（adalimumab))、抗TNFa免 疫黏附素（依那西普（etanercept))、抗腫瘤壞死因子β抗 體、抗介白素2抗體及抗IL-2受體抗體；抗LFA-1抗體，包 括抗CDlla及抗CD18抗體；抗L3T4抗體；異源抗淋巴細胞 球蛋白；泛T抗體（pan-T antibody)，較佳抗CD3或抗 CD4/CD4a抗體；含有LFA-3結合域之可溶性肽（7/26/90公 開之WO 90/08187);鏈球菌激酶；TGFP ;鏈球菌去氧核 143333.doc -55- 201014605 糖核酸酶（streptodornase);來自宿主之RNA或DNA ; FK506 ； RS-61443 ;去氧史帕脈淋（deoxyspergualin);雷 帕黴素（rapamycin) ; T細胞受體（Cohen等人之美國專利第 5，114,721號）；T細胞受體片段（Offner 等人，Science, 251: 430-432 (1991) ； WO 90/11294 ； Ianeway, Nature, 341: 482 (1989);及WO 91/01133);及T細胞受體抗體（EP 340,109)，諸如 T10B9 ° 如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻遏細胞 功能及/或引起細胞破壞之物質。該術語意欲包括放射性 同位素（例如 At21 丨、I131、I125、Y90、Re186、Re188、 Sm153、Bi212、P32及Lu之放射性同位素）、化學治療劑及毒 素，諸如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物來源之酶 促活性毒素或其片段。 「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療 劑之實例包括烧基化劑，諸如嘆替略（thiotepa)及 CYTOXAN®環填醯胺（cyclosphosphamide);確酸烧基醋， 諸如白消胺（busulfan)、英丙舒凡（improsulfan)及娘泊舒凡 (piposulfan);氮丙咬，諸如苯并多巴（benzodopa)、卡巴酿 (carboquone)、麥曲多巴（meturedopa)及尤利多巴 (uredopa);伸乙基亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺 (altretamine)、三伸乙基三聚氰胺（triethylenemelamine)、 三伸乙基鱗酿胺（triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫 代破醯胺（triethiylenethiophosphoramide)及三經甲基三聚 氣胺（trimethylolomelamine);多聚乙酿（acetogenin)(尤其 143333.doc -56- 201014605
布拉他辛（bullatacin)及布拉他辛銅（bullatacinone));喜樹 驗（camptothecin)(包括合成類似物拓朴替康（topotecan)); 苔蘚抑素（bryostatin);卡利他 ir(callystatin); CC-1065(包 括其阿多來新（adozelesin)、卡折來新（carzelesin)及比折來 新（bizelesin)合成類似物）；念珠藻環肽（cryptophycin)(尤 其念珠藻環肽1及念珠藻環肽8);海兔毒素（dolastatin);多 卡黴素（duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1);艾權塞洛素（eleutherobin);潘卡替他汀 (pancratistatin);沙科地辛（sarcodictyin);海韩素 (spongistatin);氮芥（nitrogen mustard)，諸如苯丁 酸氣芥 (chlorambucil)、萘氮芥（chlornaphazine)、膽構酿胺 (cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、異環構醯 胺（ifosfamide)、二氣甲二乙胺（mechlorethamine)、鹽酸甲 氧氮芬（mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法余 (melphalan)、新恩比興（novembichin)、苯芬膽甾醇 (phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、曲鱗胺 (trofosfamide)、尿喊咬氮芥（uracil mustard);亞确基脲 (nitrosurea)，諸如卡莫司汀（carmustine)、氯腺菌素 (chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀 (lomustine)、尼莫司；丁（nimustine)及拉努司汀 (ranimnustine);抗生素，諸如烯二炔抗生素（例如刺孢黴 素（calicheamicin)，尤其刺孢黴素γΐΐ及刺孢黴素ωιι(參見 例如 Agnew，C/zem 五丨 £«尽/_，33: 183-186 (1994));達 内黴素（dynemicin)，包括達内黴素A;雙膦酸鹽，諸如氣 143333.doc -57- 201014605 屈膦酸鹽（clodronate);埃斯培拉黴素（esperamicin);以及 新制癌菌素發色團（neocarzinostatin chromophore)及相關色 蛋白烯二炔抗生素發色團）、阿克萊諾黴素 (aclacinomysin)、放線菌素（actinomycin)、奥瑟黴素 (authramycin)、偶氣絲胺酸（azaserine)、博萊徽素 (bleomycin)、放線菌素 C(cactinomycin)、卡洛比星 (carabicin)、洋紅黴素（carminomycin)、嗜癌黴素 (carzinophilin)、色黴素（chromomycinis)、放線菌素 D(dactinomycin)、道諾徽素（daunorubicin)、地托比星 (detorubicin)、6-重氣基-5-側氧基-L-正白胺酸、 ADRIAMYCIN®小紅莓（包括嗎啉基-小紅莓、氰基嗎啉基· 小紅莓、2 -11比n各琳基-小紅莓及去氧小紅莓）、表柔比星 (epirubicin)、依索比星（esorubicin)、伊達比星 (idarubicin)、麻西羅黴素（marcellomycin)、絲裂黴素（諸如 絲裂黴素C)、黴盼酸（mycophenolic acid)、諾拉黴素 (nogalamycin)、橄欖黴素（olivomycin)、培洛黴素 (peplomycin)、博替羅黴素（potHromycin)、嗓呤黴素 (puromycin)、三鐵阿黴素（quelamycin)、羅多比星 (rodorubicin)、鍵黑黴素（streptonigrin)、鏈脲佐菌素 (streptozocin)、殺結核菌素（tubercidin)、烏苯美司 (ubenimex)、淨司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin); 抗代謝物，諸如曱胺喋呤及5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil)(5· FU);葉酸類似物，諸如迪諾特寧（denopterin)、甲胺碟 呤、蝶羅呤（pteropterin)、三曱曲沙（trimetrexate);嗓吟類 143333.doc -58 · 201014605
似物，諸如氟達拉賓（fludarabine)、6-疏嗓吟、硫咪嘌吟 (thiamiprine)、硫鳥嗓吟（thioguanine);嘴咬類似物，諸如 安西他濱（ancitabine)、阿紮胞普（azacitidine)、6-敗尿普 (6-azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷 (cytarabine)、雙去氧尿普（dideoxyuridine)、去氧氟尿普 (doxifluridine)、依諾他濱（enocitabine)、氟尿普 (floxuridine);雄激素，諸如卡普睾輞（calusterone)、丙酸 屈他雄嗣（dromostanolone propionate)、環硫雄醇 (epitiostanol)、美雄烧(mepitiostane)、睾内醋 (testolactone)； 抗腎上腺劑，諸如胺魯米特 (aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦 (trilostane);葉酸補充劑，諸如亞葉酸（folinic acid);醋 葡链内0旨（aceglatone);路填醯胺糖苦（aldophosphamide glycoside);胺基乙醯丙酸（aminolevulinic acid);乙块尿 嘴咬（eniluracil);安0丫咬（amsacrine);貝曲布辛 (bestrabucil);比生群（bisantrene);伊達曲仙 (edatraxate);德弗法明（defofamine);秋水仙胺 (demecolcine);地 0丫 酿（diaziquone):伊弗尼辛 (elfornithine);依利醋銨（elliptinium acetate);艾普塞隆 (epothilone);依託格魯（etoglucid);頌酸鎵；經基脲；磨 兹多糖（lentinan);洛尼達寧（lonidainine);類美登素 (maytansinoid)，諸如美登素（maytansine)及安絲菌素 (ansamitocin);米托胍腙（mitoguazone);米托蒽酿；莫0比 丹莫（mopidanmol);尼曲伊寧（nitraerine);喷司他丁 143333.doc -59- 201014605 (pentostatin)；蛋胺氮芥（phenamet) ； 0比柔比星 (pirarubicin);洛索蒽醒（losoxantrone);足葉草酸 (podophyllinic acid) ; 2-乙基醯肼；丙卡巴肼 (procarbazine) ; PSK® 多膽複合物（JHS Natural Products, Eugene, OR);雷佐生（razoxane);根瘤菌素（rhizoxin);西 佐味（sizoHran);鍺螺胺（spirogermanium);細交鏈孢菌酮 酸（tenuazonic acid);三亞胺酿（triaziquone) ; 2,2'，2’’-三氣 三乙胺；新月毒素（trichothecene)(尤其T-2毒素 '費羅菌素 A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)及蛇形菌素 (anguidine));烏拉坦（urethan);長春地辛（vindesine);達 卡巴嗓（dacarbazine);甘露莫司汀（mannomustine);二漠 甘露醇（mitobronitol);二溪衛矛醇（mitolactol);娘泊漠烧 (pipobroman);瓜西托辛（gacytosine);阿拉伯糖苷 (arabinoside)(「Ara-C」）；環雄酿胺；嘆替旅；紫杉醇 (taxoid)，例如 TAXOL® 太平洋紫杉醇（？3〇1^&乂61)(81431;〇1-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) ' ABRAXANE™ 不含十六醇聚氧乙烯醚之太平洋紫杉醇之白蛋白工程改造 奈米顆粒調配物（American Pharmaceutical Partners， Schaumberg, Illinois)及 TAXOTERE® 多 西他赛 (doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France)；氣萊布 辛（chloranbucil); GEMZAR®吉西他濱（gemcitabine); 6-硫 鳥嘌呤；酼基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑 (cisplatin)及卡始（carboplatin);長春驗；銘；依託泊苷 (etoposide)(VP-16);異環破醢胺（ifosfamide);米托蒽酿； 143333.doc -60- 201014605 長春新驗；NAVELBINE®長春瑞賓（vinorelbine);諾凡特 龍（novantrone); 替尼泊戒（teniposide); 依達曲沙 (edatrexate);道諾黴素（daunomycin)；胺基嗓呤 (aminopterin); 希羅達（xeloda); 伊班膦酸鹽 (ibandronate) ; CPT-11 ;拓撲異構酶抑制劑 RFS 2000 ;二 氟甲基鳥胺酸（DMFO);類視黃素，諸如視黃酸；卡西他 賓（capecitabine);及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、 酸或衍生物。 此定義亦包括抗激素劑，其用以調節或抑制激素對腫瘤 之作用，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑 (SERM)， 包括例如他莫昔芬（tamoxifen)(包括 NOLVADEX®他莫昔芬）、雷諾昔酚（raloxifene)、屈洛昔芬 (droloxifene)、4-經基他莫昔芬、曲沃昔芬（trioxifene)、雷 洛昔芬鹽酸鹽（keoxifene)、LY117018、奥那司酮 (onapristone)及 FARESTON-托瑞米芬(FARESTON-toremifene);芳香酶抑制劑，其抑制調控腎上腺中雌激素 產生之芳香酶，諸如4(5)-咪唑、胺基格魯米特 (aminoglutethimide)、MEGASE® 乙酸曱地孕酮（m.egestrol acetate)、AROMASIN⑧依西美坦（exemestane)、弗米斯坦 (formestanie)、法屈唾（fadrozole)、RIVISOR® 伏羅0坐 (vorozole)、FEMARA® 來曲唑（letrozole)及 ARIMIDEX® 安 美達錠（anastrozole);及抗雄激素，諸如氟他胺 (flutamide)、尼魯胺（nilutamide)、比卡魯胺 (bicalutamide)、亮丙瑞林（leuprolide)及戈舍瑞林 143333.doc -61 - 201014605 (goserelin);以及曲沙他濱（troxacitabine)(l，3-二氧戊環核 苷胞嘧啶類似物）；反義募核苷酸，尤其抑制異常細胞增 殖中所涉及之信號傳導路徑中的基因表現之彼等反義寡核 苷酸，諸如PKC-α、Ralf及H-Ras ;疫苗，諸如基因療法疫 苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗及 VAXID® 疫苗；PROLEUKIN® rIL-2 ; LURTOTECAN® 拓 撲異構酶1抑制劑；ABARELIX® rmRH ;及上述任一者之 醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。 術語「細胞激素」為關於由一個細胞群體所釋放並作為 細胞間介體作用於另一細胞之蛋白質的通用術語。該等細 胞激素之實例為淋巴因子；單核球激素；介白素（IL)，諸 如 IL-1、IL-Ια、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、 IL-8、IL-9、IL-11、IL-12 及 IL-15 ;腫瘤壞死因子，諸如 TNF-a或TNF-β ;及其他多肽因子，包括LIF及kit配位體 (KL)。如本文所用之術語細胞激素包括來自天然來源或來 自重組細胞培養物之蛋白質及天然序列細胞激素之生物活 性等效物，包括合成產生之小分子實體及其醫藥學上可接 受之衍生物及鹽。 術語「激素」係指一般由具有管道之腺器官分泌之多肽 激素。激素包括例如生長激素，諸如人類生長激素、N-甲 硫胺醯基人類生長激素及牛生長激素；副曱狀腺激素；曱 狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；鬆弛素原；醣蛋白 激素，諸如促濾泡激素（FSH)、促甲狀腺激素（TSH)及促黃 體生成激素（LH);促乳素、胎盤催乳激素、小鼠促性腺激 143333.doc -62- 201014605 素相關肽；抑制素（inhibin);活化素（activin);苗勒氏管 抑制物質（mullerian-inhibiting substance);及血小板生成 素（thrombopoietin)。如本文所用之術語激素包括來自天然 來源或來自重組細胞培養物之蛋白質，及天然序列激素之 生物活性等效物，其包括合成產生之小分子實體及其醫藥 學上可接受之衍生物及鹽。 術語「生長因子」係指促進生長之蛋白質，且包括（例 如）肝細胞生長因子；纖維母細胞生長因子；血管内皮生 長因子；神經生長因子，諸如NGF-β ;血小板衍生生長因 子；轉變生長因子（TGF)，諸如TGF-α及TGF-β ;類胰島素 生長因子I及II ;紅血球生成素（EPO);骨誘導因子；干擾 素，諸如干擾素α、β及γ;及群落刺激因子（CSF)，諸如巨 噬細胞-CSF(M-CSF);粒細胞-巨噬細胞-CSF(GM-CSF); 及粒細胞-CSF(G-CSF)。如本文所用之術語生長因子包括 來自天然來源或來自重組細胞培養物之蛋白質，及天然序 列生長因子之生物活性等效物，包括合成產生之小分子實 體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。 術語「整合素」係指允許細胞結合及回應胞外基質之受 體蛋白，且其參與多種細胞功能，諸如傷口癒合、細胞分 化、腫瘤細胞之歸巢及細胞凋亡。其為細胞-胞外基質及 細胞-細胞相互作用中所涉及之細胞黏附受體大家族的一 部分。功能性整合素係由兩個非共價結合之跨膜醣蛋白次 單位（稱為a及β)組成。a次單位彼此皆共有一些同源性，β 次單位亦如此。受體始終含有一個a鏈及一個β鏈。實例包 143333.doc •63· 201014605 括α6β1、α3β1、α7β1、LFA-l、α4整合素等。如本文所用 之術語整合素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物之 蛋白質，及天然序列整合素之生物活性等效物，包括合成 產生之小分子實體及其醫藥學上可接受之衍生物及鹽。 本文中之「整合素拮抗劑或抗體」之實例包括LFA-1抗 體，諸如可購自Genentech之依法利珠單抗（efalizumab) (RAPTIVA®) ; α4整合素抗艎，諸如可購自Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals, Inc.之那他珠單抗 (TYSABRI®);二氮雜環苯丙胺酸衍生物（WO 2003/89410);苯丙胺酸衍生物（WO 2003/70709、WO 2002/28830、WO 2002/16329 及 WO 2003/53926);苯基丙 酸衍生物（WO 2003/10135);烯胺衍生物（WO 2001/ 79173);丙酸衍生物（WO 2000/37444);烷酸衍生物（WO 2000/3 25 75);經取代苯基衍生物（美國專利第6,677,339號 及第6,348,463號）；芳族胺衍生物（美國專利第6,369,229 號）；及ADAM解整合素域多肽（US 2002/0042368)、針對 ανβ3整合素之抗體（EP 633945);氮雜橋聯雙環胺基酸衍生 物（WO 2002/02556)等。 出於本文之目的，「腫瘤壞死因子a(TNF-a)」係指人類 TNF-a分子，其包含描述於Pennica等人，iVaiMre，312:721 (1984)或 Aggarwal等人，260:2345 (1985)中之胺基酸 序列。 本文之「TNF-α抑制劑」為通常藉由與TNF-α結合且中 和其活性而在某種程度上抑制TNF-α之生物功能之藥劑。 143333.doc 201014605 本文中特別涵蓋之TNF抑制劑之實例為依那西普 (ENBREL®)、英利昔單抗（REMICADE®)及阿達木單抗 (HUMIRATM)。 「疾病改善性抗風濕藥」或「DMARD」之實例包括羥 基氣喹、柳氮磺胺吡啶、甲胺喋呤、來氟米特、依那西 普、英利昔單抗（加口服及皮下曱胺喋呤）、硫唑嘌呤、D-青黴胺（D-penicillamine)、金製劑（口服）、金製劑（肌肉 内）、二甲胺四環素（minocycline)、環抱菌素 (cyclosporine)、葡萄球菌蛋白A免疫吸附，包括其鹽及衍 生物等。 「非類固醇消炎藥」或「NSAID」之實例為乙醯基水楊 酸、布洛芬（ibuprofen)、萘普生（naproxen)、0弓丨嘴美辛 (indomethacin)、舒林酸（sulindac)、托美·汀（tolmetin)，包 括其鹽及衍生物。 「皮質類固醇」係指模擬或強化天然存在之皮質類固醇 之作用的具有類固醇之一般化學結構的若干合成或天然存 在之物質中的任一者。合成皮質類固醇之實例包括強的松 (prednisone)、潑尼松龍（prednisolone)(包括甲潑尼龍）、地 塞米松、糖皮質激素及倍他米松（betamethasone)。 「藥品說明書」係用於指通常包括於治療產品之商業包 裝中含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌症、待與 包裝產品組合之其他治療產品及/或關於該等治療產品之 使用之警告等之資訊的說明書。 本文中使用「標籤」指通常連同商業醫藥調配物包裝 143333.doc -65- 201014605 (包括諸如小瓶之容器及藥品說明書以及其他類型之包裝） 一起包括之資訊。 本文中提及「約」某值或某參數包括（及描述）針對彼值 或參數本身之變化。舉例而言’關於「約X」之描述包括 對「X」之描述。 除非上下文另外明確規定，否則如在本文中及在隨附申 請專利範圍中所用，單數形式「一」、「或J及「該」包括 複數個指示物。應暸解本文中描述之本發明之態樣及變型 包括「由態樣及變型組成」及/或「基本上由態樣及變型 組成」。 本發明提供治療患者之進展型多發性硬化症之方法，其 包含向患者投與有效量之抗CD20抗體。 在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性 硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗€1)2〇抗 體其中/σ療係基於患者具有一或多種選自由以下組成之 群之特徵：⑷年齡小於約55歲，（b)一或多個釓染色病 變’⑷在開始；;台療前兩年内擴展殘疾狀態量表㈣叫增 加至v約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 於約5分。 在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性 硬化症之方法，限制條件為發現患者具有—或乡種選自由 之群之特徵：⑷年齡小於㈣歲，⑻―或多個 亂染色病變， )在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 143333.doc 201014605 (EDSS)增加至少約—分，及⑷多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)网於約5分’治療包含向該患者投與有效量之抗 CD20抗體。 在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性 硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗抗 體，其中該患者在開始治療時具有一或多種選自由以下組 成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色 病變，在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS) 增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（Msss) 高於約5分，藉此年齡、釓染色病變、開始治療前兩年内 之EDDS增加、MSSS或其組合之證據指示個體會對用抗 CD20抗體治療有反應。 在一些實施例中，本發明提供治療進展型多發性硬化症 之方法’其包含：（a)選擇具有一或多種選自由以下組成之 群之特徵之患者：⑴年齡小於約55歲；（ii)一或多個此染 φ 色病變，（ϋ〇在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分’及（iv)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分；及（b)向如此選擇之患者投與有效量之 抗CD20抗體。 ' 在一些實施例中’本發明提供治療患者之進展型多發性 硬化症之方法，其包含向患者投與有效量之抗CD20抗 體，且其中使用一或多種選自由以下組成之群之特徵作為 選擇接受治療之患者的基礎：（a)年齡小於約55歲，（b) — 或多個釓染色病變，（0在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態 143333.doc •67· 201014605 量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度 評分（MSSS)高於約5分，且其中該治療包含向患者投與有 效量之抗CD20抗體。 本發明另外提供治療患者之多發性硬化症之方法，其包 含向患者投與有效量之奥克利珠單抗以提供約〇 3公克至 約0.6么克之間的初始奥克利珠單抗暴露，隨後提供約〇 3 公克至約0.6公克之間的第二奥克利珠單抗暴露，該第二 暴露直至初始暴露後約16週至6〇週才提供且以一個劑量 ，兩個劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供各次奥克利珠馨 單抗暴露。在-些實施例中，初始奥克利珠單抗暴露為約 0.6公克。在一些實施例中，第二奧克利珠單抗暴露為約 0.6公克。在一些實施例中，該第二暴露在初始暴露後約 24週奴與。在一些實施例中，以一個劑量之奥克利珠單抗 形式向患者提供一或多次奥克利珠單抗暴露。在一些實施 例中，以兩個劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供一或多 次奥克利珠單抗暴露。在一些實施例中，兩個劑量之奥克 利珠單抗包含約0.3公克奥克利珠單抗。 © 本發明亦提供評估及/或預測患有進展型多發性硬化症 之患者對抗CD20抗體治療之反應性的方法。 在一些實施例中，本發明提供評估患有進展型多發性硬 化症之患者是否對用抗CD20抗體治療有反應的方法，其 包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小 於約55歲，（b)一或多個亂染色病變，（c)在開始治療前兩 年内擴展殘疾狀態量表（£1)88)增加至少約一分，及（d)多 143333.doc -68- 201014605 發性硬化症嚴重度評分（Msss)高於約5分，其中患者之一 或夕種特徵指示患者會對治療有反應。 在—些實施例中’本發明提供評估患有進展型多發性硬 化症之患者是否對用抗Cd20抗體治療有反應的方法，其 包含.（a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：⑴年 齡小於約55歲；（Π)—或多個釓染色病變，（iH)在開始治療 前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及 (iv)多發性硬化症嚴重度評分（Msss)高於約$分；及⑻實 施廣算法來確定患者是否對該治療有反應，及（c)記錄所測 試患者之特異性結果。 在一些實施例中，本發明提供治療患者之進展型多發性 硬化症之方法，其包含：（a)評估一或多種選自由以下組成 之群之特徵：⑴年齡小於約55歲，（ii)一或多個釓染色病 變’（U1)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增 加至）約—分’及（iv)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高 於約5刀，其中基於患者一或多種具有選自由以下組成之 群之特徵來選擇供治療的患者：⑴年齡小於約55歲，（⑴ 或夕個釓染色病變，（Hi)在開始治療前兩年内擴展殘疾 狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發性硬化症嚴 重度評刀（MSSS)尚於約5分；及（b)藉由向該所選患者投與 有效量之抗CD20抗體治療該所選患者。 在一些實施例中，本發明提供為患有進展型多發性硬化 症之患者及/或患者群體選擇療法之方法，其包含：（&)評 估一或多種選自由以下組成之群之特徵：⑴年齡小於約55 143333.doc -69- 201014605 歲，（ii) 一或多個釓染色病變，（iii)在開始治療前兩年内擴 展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發性硬 化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分；及（b)在患者或患者群 體具有一或多種選自由以下組成之群之特徵的情況下選擇 抗CD20抗體來治療：⑴年齡小於約55歲，（Η)一或多個釓 染色病變，（iii)在開始抗CD20治療前兩年内擴展殘疾狀態 量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv)多發性硬化症嚴重度 評分（MSSS)高於約5分。 在一些實施例中，本發明提供預測患有進展型多發性硬 化症之個體疋否會對抗CD20抗體有反應之方法，該方法 包含s平估一或多種選自由以下組成之群之特徵·（a)年齡小 於約55歲，（b)—或多個釓染色病變，（勹在開始治療前兩 年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多 發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分，藉此年齡、亂 染色病變、開始治療前兩年内之EDDS增加、MSSS或其組 合指示患者會對抗CD20抗體有反應。 在一些實施例中，本發明提供鑑別可能對抗CD20抗體 治療有反應的患有進展型多發性硬化症之患者的方法，其 包含：（a)評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：（丨）年 齡小於約55歲，（ii)一或多個釓染色病變，（Hi)在開始治療 前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及 (iv)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分；及（b)幾 別具有一或多種選自由以下組成之群之特徵之患者：（丨）年 齡小於約55歲’（ii)一或多個釓染色病變，（iii)在開始治療 143333.doc -70^ 201014605 前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及 (iv)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 在本文中所述之治療、評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，患者具有一或多種選自由以下組成之 群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) —或多個釓染色病 變’及（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS) • 增加至少約一分。 ❹ 在本文中所述之評估及/或預測反應性之任何方法的一 些實施例中，該等方法進一步包含給患者提供建議。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中’患者具有一種以上選自由以下組成之 群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)一或多個釓染色病 變（e)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增 加至少約—分’及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高 於、力5分。在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之 〇 任何方法的一些實施例中，患者具有兩種選自由以下組成 之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) —或多個釓染色病 變（C)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增 加至^約—分’及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高 於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自由以下組 成群之特徵.（a)年齡小於約55歲，（b) —或多個此染色 病變’及（c)在開始治療前兩年内EDSS增加至少約一分。 在一些實施例中，患者具有（a)年齡小於約55歲，（b)—或 多個釓染色病變’（匀在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量 143333.doc -71 - 201014605 表（EDSS)增加至少約一分’及（d)多發性硬化症嚴重度評 分（MSSS)高於約5分。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中’進展型多發性硬化症為原發性進展型 多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發性硬化症為 繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多 發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在一些實施例 中’在開始治療時患者及/或患者群體未診斷患有復發緩 解型多發性硬化症。 ⑮ 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，患者及/或患者群體之樣本中進一步 具有炎症跡象。炎症跡象藉由評估一或多個炎症指標來指 示樣本可為用以評估炎症之任何合適樣本。在一些實施 例中’樣本為組織或流體。在一些實施例中，流體樣本為 腦脊髓液樣本。在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升 尚指不。在一些實施例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之 IgG券選殖帶指示。在一些實施例中，炎症跡象由MRi偵 〇 測。在一些實施例中’炎症跡象由存在G(1增強病變或T2 病變摘測。評估炎症跡象之其他方法在此項技術中已知。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為在一段 時間内EDSS改變。在一些實施例中，患者及/或患者群體 之特徵為開始抗CD20抗體治療前兩年内EDSS增加至少約i 分、1.25 分、1·5 分、1.75 分、2 分、2.25 分、2.5 分、2.75 143333.doc •72· 201014605 分或3分中之任一者。在一些實施例中，EDSS增加為在開 始治療前兩年内EDSS增加至少約1.5分。在一些實施例 中’開始治療前兩年内之EDSS增加不可歸因於復發。在 一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高於約 5.0之EDS S持續少於約5年、6年、7年、8年、9年、10年、 11 年、12 年、13 年、14 年、15 年、16 年、17 年、18 年、19 ’ 年或2〇年中之任一者。在一些實施例中，患者及/或患者 ❹ 群體之特徵為具有高於約5.0之EDSS持續少於約15年。在 一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有小於或 等於約5.0之EDSS持續少於約5年、6年、7年、8年、9年、 10年、11年、12年、13年、14年或15年中之任一者。在一 些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有小於或等 於約5.0之EDSS持續少於約1〇年。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有約 〇 為I.5刀至7分，〗.5分至6.5分，2分至6.5分或3分至6.5分中 任一者之間的EDSS。在一些實施例中，患者及/或患者群 體之特徵為在開始治療時具有約3 〇與約6 5之間的edss。 在本文中所述之治療、評估及/或預測反應性之任何方 法的些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為具有高 於約6、7、8或9中任一者之MSSS。在本文中所述之治療 及評估及/或預測反應性之任何方法的一些實施例中，患 者及/或患者群體之特徵為具有高於約9iMSSS。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 143333.doc -73- 201014605 法的一些實施例中’患者及/或患者群體之其他特徵為在 開始治療前兩年内具有兩次或兩次以上復發。在一些實施 例中’患者及/或患者群體之其他特徵為在開始治療前兩 年内具有2次復發、3次復發、4次復發或5次復發中之任一 者0 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，患者及/或患者群體以年齡為特徵。 在一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為年齡小於 約55歲、54歲、53歲、52歲、51歲或50歲中之任一者。在 一些實施例中，患者及/或患者群體之特徵為年齡小於約 51歲。 在本文中所述之治療及評估及/或預測反應性之任何方 法的一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展之時間。在 一些實施例中，確診之疾病進展為持續約4週、8週、Η 週、16週、20週、24週、28週或32週中任一者之£〇“增 加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週之 EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續二 十四週之EDSS增加。 在本文中所述之治療及評估及/或㈣反應性之任何方 法的一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含_⑴ N〇:H>、SEQIDNO:11wEQlDN〇:1k重鍵可變區及 b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID N〇:5 及 seq ι〇 n㈣之輕鍵 可變區。在本文中所述之任何方法之—些實施例中，抗 CD20抗體為奥克利珠單f在本文中所述之任何方法之 143333.doc •74· 201014605 一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單抗。在本文中所 述之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫 單抗。在本文中所述之任何方法之一些實施例中抗 CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在本文中所述之任何方 法之一些實施例中，抗CD2〇抗體為GA101。在本文中所述 之任何方法之一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。 本文中所述之方法可涵蓋本文中所述之實施例之任何組 合。舉例而言’該等方法包括治療及評估及/或預測之方 法’其中患者（a)年齡小於約55歲且（b)具有一或多個染 色病變。 hi. m # 根據本文中所述之任何方法或製品之一些實施例，方法 或說明書包含向多發性硬化症患者投與有效量之抗CD20 抗體以提供約0.3公克至約4公克（較佳約0.3公克至約1.5公 克，諸如約0.6公克至約1.〇公克）之初始抗體暴露，隨後約 〇·3公克至約4公克（較佳約〇.3公克至約1.5公克，諸如約0.6 公克或約1.0公克）之第二抗體暴露，該第二抗體暴露直至 初始抗體暴露後約16週至約60週後才提供。出於本發明之 目的，第二抗體暴露為下一次在初始抗體暴露後以抗 CD20抗體治療患者’在初始暴露與第二暴露之間不存在 插入抗CD20抗體治療或暴露。在一些實施例中，初始抗 體暴露及/或第二抗體暴露大致為0.3公克、0·4公克、〇·5公 克、0.6公克、0.7公克、0.8公克、〇.9公克或1.0公克中之 任—者0 143333.doc -75· 201014605 初始抗體暴露與第二或後續抗體暴露之間的時間間隔可 自第一劑量或第二劑量之初始抗體暴露起計算，但在一些 實施例中’自第一劑量之初始抗體暴露起計算。 在一些實施例中，抗體暴露大約間隔24週或6個月或大 約間隔4 8週或12個月。 在一實施例中’第二抗體暴露直至初始暴露後約2〇週至 約30週才提供’視情況隨後為約〇3公克至約4公克（較佳約 0.3公克至約1.5公克）之第三抗體暴露，該第三暴露直至初 始暴露後約46週至60週（較佳約46週至54週）才投與，且接 著在一些實施例中，其他抗體暴露直至初始暴露後至少約 70週至75週才提供。在一些實施例中，第三抗體暴露大致 為0.3公克、0.4公克、0.5公克、〇.6公克、〇.7公克、〇.8公 克、0.9公克或1.0公克中之任一者。 在替代實施例中，第二抗體暴露直至初始暴露後約46週 至60週才提供，且後續抗體暴露（若存在）直至先前抗體暴 露後約46週至60週才提供。 可以單一劑量抗體或兩次分開劑量抗體（亦即構成第一 劑量及第一劑量）形式向患者提供本文之任一或多次抗體 暴露。各抗體暴露所採用之特定劑量數（一個或兩個）視例 如所治療MS之類型、所採用抗體之類型、是否採用及採 用何種類型之第二藥劑及投藥方法及頻率而定。當投與兩 次單獨劑量時，第二劑量較佳在投與第一劑量時間之後約 3天至17天，更佳約6天至16天且最佳約I〗天至16天投與。 在一些實施例中，當投與兩次單獨劑量時，第二劑量為約 143333.doc -76- 201014605 14天。當投與兩次單獨劑量時，抗體之第一劑量及第二劑 量較佳為約0.3公克至15公克，更佳為約g 3公克至約1〇公 克。在一些實施例中，當投與兩次單獨劑量時，抗體之第 一劑量及第二劑量大致為0.3公克、Q 4公克、g 5公克或〇 6 公克中之任-者。在__些實施例中，初始奥克利珠單抗暴 露包含第一劑量及第二劑量之奥克利珠單抗其中奥克利 珠單抗之第一劑量及第二劑量為約〇3公克◦在一些實施 例中第一奥克利珠單抗暴露包含單一劑量之奥克利珠單 抗其中奥克利珠早抗之單一劑量為〇·6公克。 在一實施例中’向患者提供至少約三次、至少約四次或 至少約五次抗體暴露，例如約3次至6〇次暴露及更特定言 之約3次至40次暴露，最特定言之約3次至2〇次暴露。在任 何該等方法中之一些實施例中，該等方法進一步包含提供 約一次至約三次之間的後續奥克利珠單抗暴露。在一些實 施例中’以各自約24週或6個月或48週或12個月之時間間 隔投與該等暴露。在一實施例中，以單一劑量抗體形式提 供各次抗體暴露。在一替代實施例中，以兩次單獨劑量抗 體形式提供各次抗體暴露。然而，並非每次抗體暴露均需 要以單一劑量或兩個單獨劑量形式提供。 抗體可為裸抗體或可與另一分子結合，諸如細胞毒性 劑’諸如放射性化合物。在一些實施例中，抗體為利妥昔 單抗、人類化2H7(例如包含SEQ ID NO 2及8之可變域序 列）或包含SEQ ID NO 23及24之可變域序列之人類化2H7或 huMax-CD20(Genmab)。在一些實施例中，抗體為奥克利 143333.doc •77· 201014605 珠單抗（例如包含（a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13之輕鏈 及（b)包含胺基酸序列SEQ ID NChl4之重鏈）。 在一實施例中，患者先前從未經諸如免疫抑制劑之用以 治療多發性硬化症的藥物治療及/或先前從未經針對B細胞 表面標誌之抗體治療（例如先前從未經CD20抗體治療）。 抗體藉由任何合適方式投與，包括非經腸、局部、皮 下、腹膜内、肺内、鼻内及/或病變内投藥。非經腸輸注 包括肌肉内、靜脈内、動脈内、腹膜内或皮下投藥。亦涵 蓋鞘内投藥（例如參見美國專利申請案第2002/0009444號， Grillo-Lopez, A，關於CD20抗體之鞘内傳遞）。此外，可 適當藉由脈衝輸注例如以遞減抗體劑量投與抗體。在一些 實施例中，劑量係以靜脈内、皮下或鞘内方式給予。在一 些實施例中，劑量係藉由靜脈内輸液給予。 當CD20抗體可能為向患者投與來治療多發性硬化症之 唯一藥物時，可視情況連同結合B細胞表面標誌之抗體（例 如連同CD20抗體）一起投與第二藥物，諸如細胞毒性劑、 化學治療劑、免疫抑制劑、細胞激素、細胞激素拮抗劑或 抗體、生長因子、激素、整合素、整合素拮抗劑或抗體 (例如LFA-1抗體，諸如可購自Genentech之依法利珠單抗 (RAPTIVA®)，或α4整合素抗體，諸如可購自Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals, Inc之那他珠單抗（TYSABRI®)) 等。 在組合療法之一些實施例中，抗體與以下組合：干擾素 類藥物，諸如 IFNj-la(REBIF® 及 AVONEX®)或 IFN-β- 143333.doc -78- 201014605 lb(BETASERON®)； 寡肽，諸如乙酸格拉替雷 (COPAXONE®)；細胞毒性劑，諸如米托蒽醌 (NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、笨丁酸氮芥、 硫唑嘌呤；靜脈内免疫球蛋白（γ球蛋白）；淋巴細胞消耗療 法（例如米托蒽酿、環填酿胺、坎帕斯（Campath)、抗 CD4、克拉屈濱（cladribine)、全身照射、骨髓移植）；皮質 類固醇（例如甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激 素），包括全身皮質類固醇療法；非淋巴細胞消耗免疫抑 制療法（例如黴酚酸酯（MMF)或環孢素）；「斯達汀」類降膽 固醇藥，包括西立伐他汀（cerivastatin)(BAYCOL®)、氟伐 他汀（fluvastatin)(LESCOL®)、阿托伐他汀（atorvastatin) (LIPITOR®)、洛伐他汀（lovastatin)(MEVACOR®)、普伐他 汀（pravastatin)(PRAVACHOL®)、辛伐他汀（Simvastatin) (ZOCOR®);雖二醇；睪固嗣（testosterone)(視情況以高劑 量使用，Stuve 等人 8:290-301 (2002));激素替 代療法；MS之繼發性或相關性症狀（例如痙攣、失禁、疼 痛、疲勞）之治療；TNF抑制劑；疾病改善性抗風濕藥 (DMARD);非類固醇消炎藥（NSAID);血漿清除術；左旋 曱狀腺素；環孢素A ;生長抑素類似物；細胞激素或細胞 激素受體括抗劑；抗代謝物；免疫抑制劑；康復手術；放 射性碘；甲狀腺摘除術；另一 B細胞表面拮抗劑/抗體等。 第二藥劑係與CD20抗體之初始暴露及/或稍後暴露一起 投與，該組合投藥包括使用單獨調配物或單一醫藥調配物 共同投藥，及以任一順序連續投藥，其中較佳存在兩種 143333.doc -79· 201014605 (或所有）活性劑同時發揮其生物活性的一段時間。 除向患者投與抗體外，本申請案涵蓋以基因療法投與抗 體。表述投與「有效量」之抗體涵蓋該投與編碼抗體之核 酸。參見例如1996年3月14日公開之WO 96/07321，其係關 於使用基因療法來產生胞内抗體。 存在兩種使核酸（視情況含於載趙内）進入患者細胞中之 主要方法；活體内及離體。對於活體内傳遞，通常在需要 抗體之部位將核酸直接注射至患者體内。為進行離體治 療，移除患者細胞，將核酸引入此等經分離細胞中且將經 修飾細胞直接投與患者’或例如囊封於植入患者鱧内之多 孔膜内（參見例如美國專利第4,892,538號及第5,283,187 號）。存在多種可用於將核酸引入活細胞中之技術。視將 核酸活體外轉移至培養細胞中或活體内轉移至預定宿主之 細胞中而定，該等技術可不同。適於將核酸活體外轉移至 哺乳動物細胞中之技術包括使用脂質體、電穿孔、顯微注 射、細胞融合、DEAE-葡聚糖、磷酸鈣沈澱方法等。常用 於離體傳遞基因之載體為反轉錄病毒。 在一些實施例中，活體内核酸轉移技術包括以病毒載體 (諸如腺病毒、單純疱療〗病毒或腺相關病毒）及基於脂質之 系統（適用於脂質介導之基因轉移的脂質為例如DOTMA、 DOPE及DC_Chol)轉染。在某些情況下，需要向核酸來源 提供乾向目標細胞之藥劑，諸如對細胞表面膜蛋白或目標 細胞具特異性之抗體、目標細胞上之受體的配位體等。若 採用脂質體’則可使用結合與内飲作用相關之細胞表面膜 143333.doc -80- 201014605 蛋白之蛋白質以靶向及/或促進吸收例如對特定細胞類型 具有向性之衣殼蛋白或其片段、在循環中經歷内化之蛋白 質的抗體，及乾向胞内定位且增強胞内半衰期之蛋白質。 受體介導之内飲作用之技術由例如Wu等人，乂別〇/ 所· 262:4429-4432 (1987);及 Wagner等人，
Jcat/· C/M 87:3410-3414 (1990)描述。關於目前已知 之基因標誌及基因療法方案的回顧，參見Anderson等人， 256:808-813 (1992)。亦參見 W〇 93/25673 及其中 引用的參考文獻。 ιν·抗體及其產生 本發明之方法及製品使用或併有與Β細胞表面標誌結合 之抗體，尤其為與CD20結合之抗體。因此，產生該等抗 體之方法將在本文中描述。 用於產生或篩選抗體之Β細胞表面標誌可為（例如）含有 所需抗原決定基之標誌或其一部分之可溶形式。或者或另 讓外’在細胞表面表現標誌之細胞可用於產生或篩選抗體。 適用於產生抗體之Β細胞表面標誌之其他形式為熟習此項 技術者所明瞭。 以下描述關於產生根據本發明使用之抗體之例示性技 術。 (i)多株抗體 多株抗體較佳藉由多次皮下（sc)或腹膜内（ip)注射相關抗 原及佐劑而在動物體内產生。其可適用於使用雙功能劑或 衍生劑將相關抗原結合至在待免疫物種中具免疫原性之蛋 143333.doc -81 - 201014605 白質，例如匙孔螺血氰蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋 白或大豆胰蛋白梅抑制劑，該雙功能劑或衍生劑為例如順 丁稀二酿亞胺苯甲酿續基丁二酿亞胺醋（經由半胱胺酸殘 基結合）、N-羥基丁二醯亞胺（經由離胺酸殘基卜戊二醛、 丁一酸酐、SOCh或RiN=C=NR，其中為不同烷基。 藉由將例如100 gg或5 μ蛋白質或結合物（分別用於兔或 小鼠）與3艎積之弗氏完全佐劑（Freund,s⑶mplete adjuvant) 組合且在多個部位皮内注射該溶液以抗原、免疫原性結合 物或衍生物免疫動物。一個月後，藉由在多個部位皮下注 射以弗氏完全佐劑中1/5至1/1〇原始量之肽或結合物來強化 動物。7至14天後對動物進行放血且檢定血清之抗體力 價。強化動物直至力價平穩。在一些實施例中，以相同抗 原（但該抗原與不同蛋白質結合及/或經由不同交聯劑結合） 之結合物強化動物。結合物亦可在重組細胞培養物中以蛋 白融合體形式產生。又，諸如礬之凝聚劑適用於增強免疫 反應。 (U)單株抗體 單株抗體係獲自實質上均質抗體之群體，亦即構成群體 之個別抗體除在單株抗體產生期間產生之可能變異體（該 等變異體一般以較少量存在）外相同及/或結合相同抗原決 定基。因此’修飾語「單株」表明該抗體不為分立抗體或 多株抗體之混合物的特徵。 舉例而言’單株抗體可使用Kohler等人， 256:495 (1975)首先描述之融合瘤方法製備或可藉由重組 143333.doc •82· 201014605 DNA方法（美國專利第4,816,567號）製備。 在融合瘤方法中，如本文中所述免疫小鼠或諸如倉鼠之 其他適當宿主動物以誘出產生或能夠產生將與免疫所用之 蛋白質特異性結合之抗體的淋巴細胞。或者，可活體外免 疫淋巴細胞。接著使用諸如聚乙二醇之合適融合劑使淋巴 細胞與骨髓瘤細胞融合以形成融合瘤細胞（Coding, ' Monoclonal Antibodies: Principles and Practice > 第 59-103 頁（Academic Press, 1986))。 ® 接種如此製備之融合瘤細胞且使其生長於較佳含有一或 多種抑制未融合親本骨髓瘤細胞生長或存活之物質的合適 培養基中。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤烏 嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之培 養基通常將包括次黃嘌呤、胺基喋呤及胸苷（HAT培養 基），該等物質防止HGPRT缺陷型細胞生長。 在一些實施例中，骨髓瘤細胞為有效融合、支持所選抗 A 鱧產生細胞穩定且高含量產生抗體且對諸如HAT培養基之 〇 培養基敏感的彼等骨髓瘤細胞。其中，在一些實施例中， 骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤細胞株，諸如來源於可獲自索 爾克研究所細胞銷售中心（Salk Institute Cell Distribution • Center)(San Diego, California USA)之 MOPC-21 及 MPC-11 小鼠腫瘤的彼等細胞株及可獲自美國菌種保存中心 (American Type Culture Col lection) (Rockville, Maryland USA)之SP-2或X63-Ag8-653細胞。亦描述人類骨髓瘤及小 鼠-人類異源骨髓瘤細胞株用於製備人類單株抗體（Kozbor， 143333.doc -83- 201014605 J. Immunol., 133:3001 (1984) ； Brodeur# A » Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications > 第 51-63 頁（Marcel Dekker, Inc.，New York, 1987))。 檢定融合瘤細胞生長之培養基中針對抗原之單株抗體的 產生。在一些實施例中，藉由免疫沈澱法或藉由活體外結 合檢定，諸如放射免疫檢定（RIA)或酶聯免疫吸附檢定 (ELISA)來測定融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異 性。 單株抗體之結合親和力可例如藉由Munson等人， 5z’oc/2ew.，107:220 (1980)之史卡查分析（Scatchard analysis) 來測定。 鑑別產生具有所需特異性、親和力及/或活性之抗體之 融合瘤細胞後，可藉由限制稀釋程序次選殖純系且藉由標 準方法培養（Goding, Mo»oc/o«a/ 山Pr/wci/j/es
Pracizce，第 59-103 頁（Academic Press, 1986))。用於 此目的之合適培養基包括例如D-MEM或RPMI-164〇培養 基。此外，融合瘤細胞可在動物體内以腹水腫瘤形式活體 内生長。 藉由諸如蛋白質A-瓊脂糖、羥磷灰石層析法、凝膠電 泳、透析或親和力層析法之習知免疫球蛋白純化程序’將 由次純系分泌之單株抗體自培養基、腹水液或血清中適當 分離。 編碼單株抗體之DNA易於使用習知程序（例如藉由使用 能夠與編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡 143333.doc -84- 201014605 核苷酸探針）分離及定序。在一些實施例中，將融合瘤細 胞用作該DNA之來源。分離後，可將DNA置於表現載體 中，隨後將該等表現載體轉染至不另外產生免疫球蛋白之 宿主細胞（諸如大腸桿菌（五· co/z·)細胞、猿猴COS細胞、中 國倉鼠卵巢（CH0)細胞或骨髓瘤細胞）中以獲得在重組宿主 細胞中合成單株抗體。關於編碼抗體之DNA在細菌中之重 組表現的回顧文章包括Skerra等人，Cwrr.
Immunol., 5:256-262 (1993)及 Pltickthun, Immunol. Revs·, 130:151-188 (1992)。 在另一實施例中，可自使用描述於McCafferty等人， 348:552-554 (1990)中之技術產生之抗體噬菌體文 庫分離抗體或抗體片段。Clarkson等人，352:624-628 (1991)及 Marks等人，J. Mo/. 5ζ·ο/·，222:581-597 (1991) 分別描述使用噬菌體文庫分離鼠類及人類抗體。後續公開 案描述藉由鍵改組（Marks等人，10:779-783 (1992))以及組合感染及活體内重組作為構築極大噬菌 體文庫之策略（Waterhouse等人，iVwc. 及以·，21:2265- 2266 (1993))來產生高親和力（nM範圍）人類抗體。因此， 此等技術為用於分離單株抗體之傳統單株抗體融合瘤技術 之可行替代方法。 DNA亦可藉由例如用人類重鏈及輕鏈恆定域的編碼序列 替代同源鼠類序列（美國專利第4,816,567號；Morrison等 人，Proc. iVai/Jcai 心z_. 81:6851 (1984))或藉由將非 免疫球蛋白多肽之編碼序列的全部或部分與免疫球蛋白編 143333.doc -85 - 201014605 碼序列共價聯接來修飾。 通常該等非免疫球蛋白多肽取代抗體恆定域，或其取代 抗體之一個抗原組合位點之可變域以產生包含一個對抗原 具有特異性之抗原組合位點及另一個對不同抗原具有特異 性之抗原組合位點的嵌合二價抗體。 (Hi)人類化抗體 已於此項技術中描述使非人類抗體人類化之方法。在一 些實施例中，人類化抗體具有一或多個自非人類來源引入 其中之胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸 入」殘基，其通常係取自「輸入」可變域。可基本上根據
Winter及其同事（Jones等人，321:522-525 (1986); Riechmann等人，332:323-327 (1988) ; Verhoeyen 等人 ’ Sdwce，239:1534-1536 (1988))之方法，藉由以高 變區序列取代人類抗體之相應序列進行人類化。因此，該 等「人類化」抗體為嵌合抗體（美國專利第4,816567號）， 其中實質上小於完整人類可變域之部分經來自非人類物種 之相應序列取代。實務上’人類化抗體通常為一些高變區 殘基及可能一些FR殘基經來自齧齒動物抗體中之類似位點 之殘基取代的人類抗體。
待用於製備人類化抗體之人類可變域（輕鏈及重鏈）之選 擇對降低抗原性而言極為重要。根據所謂的「最佳匹配」 法，針對整個已知人類可變域序列文庫篩選齧齒動物抗體 之可變域序列。接著，接受最接近於齧齒動物序列之人類 序列作為人類化抗體之人類構架區（FR)(Sims等人，J 143333.doc • 86 - 201014605
Immunol., 151:2296 (1993) ; Chothia 等人，·/· Mol. Biol., 196··901 (1987))。另一方法使用來源於特定子群輕鏈或重 鏈可變區之所有人類抗體之共同序列的特定構架區。相同 構架可用於數種不同人類化抗體（Carter等人，Proc. iVfli/. Acad. Sci. t/5^，89:4285 (1992) ; Presta等人，乂 151:2623 (1993))。 另外，經人類化抗體保留對抗原之高親和力及其他有利 生物性質係重要的。為達成此目的，在該等方法之一些實 施例中，藉由使用親本序列及人類化序列之三維模型來分 析親本序列及各種概念性人類化產物的方法來製備人類化 抗體。三維免疫球蛋白模型通常可用且為熟習此項技術者 所熟知。可利用說明及呈現所選候選免疫球蛋白序列之可 能三維構形結構的電腦程式。對此等呈現進行檢驗允許分 析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中的可能作用， 亦即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。 以此方式，可自接受及輸入序列選擇FR殘基並將其組合， 以便達成所需抗體特徵，諸如對目標抗原之親和力增加。 一般而言，高變區殘基直接且大部分實質上參與影響抗原 結合。 在一些實施例中，人類化抗CD20抗體為人類化2H7抗 體。在一些實施例中，人類化2H7抗體較佳包含一個、兩 個、三個、四個、五個或六個以下CDR序列： CDR L1 序列 RASSSVSYXH，其中 X 為 Μ 或 L(SEQ ID NO 18)，例如 SEQ ID NO:4(圖 ΙΑ)， 143333.doc -87- 201014605 CDR L2 序列 SEQ ID NO:5(圖 ΙΑ)， CDR L3 序列 QQWXFNPPT，其中 X 為 S 或 A(SEQ ID NO 19)，例如 SEQ ID NO:6(圖 1A)， CDR HI 序列 SEQ ID NO:10(圖 IB)， CDR H2 序列 AIYPGNGXTSYNQKFKG，其中 X 為 D 或 A(SEQ ID NO 20)，例如 SEQ ID NO: 11(圖 IB)，及 CDR H3序列VVYYSXXYWYFDV，其中位置6之X為N、 A、Y、W或D且位置7之X為S或R(SEQ ID NO 21)，例如 SEQ ID NO:12(圖 IB)。 上述CDR序列一般存在於人類可變輕鏈及可變重鏈構架 序列内，諸如實質上人類輕鏈κ子群I(VL6I)之人類共同FR 殘基，及實質上人類重鏈子群ΠΙ(νΗΙΙΙ)之人類共同FR殘 基。亦參見 WO 2004/0563 12(Lowman等人）。 在一些實施例中，可將可變重鏈區與人類IgG鏈恆定區 聯接，其中該區域可為例如IgGl或IgG3，包括天然序列及 變異型恆定區。 在一些實施例中，該抗體包含可變重鏈域序列SEQ ID NO:8(vl6，如圖1B所示），視情況亦包含可變輕鏈域序列 SEQ ID ΝΟ:2(ν16，如圖1Α所示），其視情況在可變重鏈域 中在位置56、100及/或100a包含一或多個胺基酸取代，例 如D56A、N100A或N100Y及/或SlOOaR，且在可變輕鏈域 中在位置32及/或92包含一或多個胺基酸取代，例如M32L 及/或S92A。在一些實施例中，抗體為包含輕鏈胺基酸序 列SEQ ID NO 13或16及重鏈胺基酸序列SEQ ID NO 14、 143333.doc -88- 201014605 15、17、22或25之完整抗體。在一些實施例中，人類化 2H7抗體為奥克利珠單抗（Genentech)。 在該等實施例中，人類化2H7為包含以下可變輕鏈序 列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPG KAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDF ATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:2)； 及以下可變重鏈序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQ APGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTL VTVSS(SEQ ID NO:8)之完整抗體或抗體片段。 在一些實施例中，人類化2H7抗體為完整抗體，在一些 實施例中，其包含輕鏈胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPG KAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDF ATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS PVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:13)； 及重鏈胺基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQ
APGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTL 143333.doc •89- 201014605
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG
TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF
NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDW
LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT
PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:14) ❿ 或重鏈胺基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQ
APGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTL
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG
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LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF
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REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT
PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:15)。 在一些實施例中，人類化2H7抗體包含2H7.V511可變輕 鏈域序列： 143333.doc •90· 201014605 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPG KAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDF ATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:23) 及2H7.V511可變重鏈域序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQ APGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO. 24) 〇 ® 在一些實施例中，人類化2H7.V511抗體為完整抗體，其 可包含輕鏈胺基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASYGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPG
KAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDF
ATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ
LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV
TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS BPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 16) 及重鏈胺基酸序列SEQ ID NO 17或：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQ
APGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTL
YLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTL
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG
TQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL
LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF 143333.doc -91 - 201014605 NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPS REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO. 25)。 在一些實施例中，本文中之抗體可進一步在Fc區中包含 改良ADCC活性之至少一個胺基酸取代，諸如胺基酸取代 在位置298、333及334之胺基酸取代，較佳S298A、E333A 及K334A(使用重鏈殘基之Eu編號）。亦參見Presta之美國專 利第6,737,056B1號。任何此等抗體可在Fc區中包含改良 FcRn結合或血清半衰期之至少一個取代，例如重鏈位置 434之取代，諸如N434W。亦參見Presta之美國專利第 6,73 7,05631號。任何此等抗體可進一步在卩(：區中包含增加 CDC活性之至少一個胺基酸取代，例如在位置326包含至 少一個取代，較佳K326A或K326W。亦參見美國專利第 6,528,624B1號（Idusogie 等人）。 在一些實施例中，人類化2H7變異艎為包含SEQ ID NO:2之可變輕鏈域及SEQ ID NO:8之可變重鏈域的彼等變 異體，包括在Fc區（若存在）中具有或不具有取代之彼等變 異體，及包含具有改變N100A ;或D56A及N100A ;或 D56A、N100Y及SlOOaR之SEQ ID NO:8的可變重鏈域，及 具有改變 M32L;或 S92A;或 M32L及 S92A之 SEQ ID ΝΟ··2 的可變輕鏈域的彼等變異體。2H7.vl 6之可變重鏈域中之 Μ34經鑑別為可能的抗體穩定性來源且為另一可能取代候 143333.doc -92- 201014605 選者。 在本發明之一些實施例中，基於2H7.V16之變異體之可 變區在除下表所指出之胺基酸取代位置以外之處包含vl6 胺基酸序列。除非另外指出，否則2H7變異體將具有與vl6 相同的輕鏈。 表1 :例示性人類化2H7抗體變異體
2H7 形式 重鏈 (VH)改變 輕鏈 (VL)改變 Fc改變 16，用作參照 31 . S298A、E333A、K334A 73 N100A M32L 75 N100A M32L S298A、E333A、K334A 96 D56A > N100A S92A 114 D56A、N100A M32L、S92A S298A、E333A、K334A 115 D56A、N100A M32L、S92A S298A ' E333A ' K334A > E356D ' M358L 116 D56A、N100A M32L、S92A S298A、K334A、K322A 138 D56A、N100A M32L、S92A S298A、E333A、K334A、K326A 477 D56A、N100A M32L、S92A S298A 、E333A 、K334A 、 K326A ' N434W 375 - - K334L 588 - S298A、E333A、K334A、K326A 511 D56A、N100Y、 SlOOaR M32L ' S92A S298A、E333A、K334A、K326A (iv)人類抗體
作為人類化之替代選擇，可產生人類抗體。舉例而言， 現有可能產生免疫後能在不產生内源免疫球蛋白之情況下 產生全套人類抗體譜系之轉殖基因動物（例如小鼠）。舉例 而言，已描述在嵌合及生殖系突變型小鼠中同型接合缺失 抗體重鏈接合區（JH)基因導致内源性抗體產生之完全抑 制。將人類生殖系免疫球蛋白基因陣列轉移至該生殖系突 變型小鼠體内將會在抗原激發後導致人類抗體產生。例如 143333.doc •93- 201014605 參見 Jakobovits 等人，Proc. iVai/· »Scz· |[/5Ά 90: 2551 (1993) ； Jakobovits# A > Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann等人，year /wmw«o·, 7: 33 (1993)及美國專 利第 5,591,669號、第 5,589,369號及第 5,545,807號。 或者，可使用嗤菌體呈現技術（McCafferty等人， 348:552-553 (1990))自未免疫供體之免疫球蛋白可變（V)域 基因譜系活體外產生人類抗體及抗體片段。根據此技術， 將抗體V域基因同框選殖入絲狀噬菌體之主要或次要鞘蛋 白基因（諸如M13或fd)中，且以功能性抗體片段形式呈現 於噬菌體粒子之表面上。由於絲狀粒子含有噬菌體基因組 之單鏈DNA複本，因此基於抗體之功能性質進行選擇亦引 起對編碼展現彼等性質之抗體之基因的選擇。因此，噬菌 體模擬B細胞之一些性質。噬菌體呈現可以多種形式進 行；關於其回顧參見例如Johnson, Kevin S.及Chiswell， David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)。可使用數種V基因區段來源進行噬菌體呈現。 Clackson等人，iVaiwre，352:624-628 (1991)自來源於經免 疫小鼠脾臟之V基因之小隨機組合文庫分離抗噁唑酮抗體 之不同陣列。可構築來自未經免疫人類供體之V基因譜 系，且可基本上按照Marks等人，J. Μο/.別〇/. 222:581-597 (1991)或 Griffith等人，五Μδ(9 «/· 12:725-734 (1993)所 述之技術分離針對不同抗原陣列（包括自體抗原）之抗體。 亦參見美國專利第5,565,332號及第5,573,905號。 人類抗體亦可藉由活體外活化Β細胞產生（參見美國專利 143333.doc -94· 201014605 第 5,567,610號及第 5,229,275號）。 (v)抗體片段 已研發出各種技術用於產生抗體片段。傳統上，此等片 段係藉由完整抗體之蛋白水解消化而產生（參見例如
Morimoto 專尺，Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)及 Brennan 等人， 229:81(1985))。然而，現可直接藉由重組宿主細胞產生此 等片段。舉例而言，抗體片段可自以上論述之抗體噬菌體 文庫分離。或者，可直接自大腸桿菌回收Fab，_SH片段且 使其化學偶合以形成F(ab，）2片段（Carter等人， Bio/Technology 1〇:163-167(1992))。根據另一方法， F(ab’）2片段可自重組宿主細胞培養物直接分離。產生抗體 片段之其他技術將為熟練從業者所明瞭。在其他實施例 中’所選抗體為單鍵Fv片段（scFv)。參見WO 93/16185 ; 美國專利第5,571,894號及美國專利第5,587,458號。抗體片 段亦可為「線抗體」’例如美國專利5,641，870中所述。該 等線抗體片段可為單特異性或雙特異性抗體。 (vi)雙特異性抗體 雙特異性抗體為對至少兩種不同抗原決定基具有結合特 異性之抗體。例示性雙特異性抗體可與B細胞表面標誌之 兩個不同抗原決定基結合。其他該等抗體可結合B細胞表 面標誌且進一步結合第二不同B細胞表面標誌。或者，抗 B細胞表面標諸結合臂可與結合白血球上之觸發分子（諸如 τ細胞受體分子（例如CD2或CD3))或1§(}之Fc受體（F^R)(諸 143333.doc -95- 201014605 如 FcyRI(CD64)、FcyRII(CD3 2)及 FcyRIII(CD16))的臂組合 以便使細胞防禦機制集中於B細胞。亦可使用雙特異性抗 艎使細胞毒性劑定位於B細胞。此等抗體具有B細胞表面 標諸結合臂及結合細胞毒性劑（例如沙伯甯（saporin)、抗干 擾素-α、長春花生物驗（vinca alkaloid)、蓖麻毒素A鏈、甲 胺喋呤或放射性同位素半抗原）之臂。雙特異性抗體可以 全長抗體或抗體片段（例如F(ab')2雙特異性抗體）形式製 備。 用於製造雙特異性抗體之方法在此項技術中已知。全長 雙特異性抗體之傳統製備係基於兩個免疫球蛋白重鏈/輕 鏈對之共同表現，其中兩條鏈具有不同特異性（Millstein等 人，Λ^ίι/re，305:537-539 (1983))。由於免疫球蛋白重鏈及 輕鏈隨機搭配，所以此等融合瘤（四重融合瘤（quadromas)) 產生10種不同抗體分子之潛在混合物，其中僅一種分子具 有正確的雙特異性結構。通常藉由親和力層析步驟進行之 正確分子之純化相當繁瑣，且產物產量較低。類似程序揭 示於 WO 93/08829 及 Traunecker等人，五M50 «/·，10:3655-3659 (1991)中。 根據不同方法，將具有所需結合特異性（抗體-抗原組合 位點）之抗體可變域與免疫球蛋白恆定域序列融合。在一 些實施例中，與免疫球蛋白重鏈恆定域（包含鉸鏈、CH2及 CH3區之至少一部分）融合。在一些實施例中，含有為輕鏈 結合所必需之位點的第一重鏈恆定區（CH1)存在於至少一 個該等融合體中。將編碼免疫球蛋白重鏈融合體及必要時 143333.doc •96· 201014605 編碼免疫球蛋自輕鏈之DNA插人獨立表職體中且共轉染 至合適宿主生物體卜在該構築中所使用之三個多狀鍵之 不等比率提供最佳產量的實施例中，此舉提供調節三個多 肽片段之相互比例的高靈活性。豸而，當等比率之至少兩 個多肽鏈之表現產生高產量時或當比率不具有特別重要性 時可月b在個表現載體中插入兩個或所有三個多肽鏈之 編瑪序列。
在此方法之一些實施例中，雙特異性抗體在一臂中包含 具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈及在另一臂中 包含雜交免疫球蛋白重鏈輕鏈對（提供第二結合特異性）。 發現此不對稱結構促進自不需要的免疫球蛋白鏈組合中分 離所需雙特異性化合物，此係因為僅一半雙特異性分子中 存在免疫球蛋白輕鏈提供容易的分離方式。此方法揭示於 WO 94/04690中。關於產生雙特異性抗體之其他詳情，參 見例如 Suresh 等人，从五”121:21〇 (1986)。 根據在美國專利第5,731，168中描述之另一方法，一對抗 體分子間之界面可經工程改造以使自重組細胞培養物回收 之雜二聚體之百分比最大。在一些實施例中，該界面包含 抗體值定域之CH3域之至少一部分。在此方法中，用較大 側鏈（例如酪胺酸或色胺酸）置換第一抗艎分子之界面之一 或多個小胺基酸側鏈。藉由用較小側鏈（例如丙胺酸或蘇 胺酸）置換大胺基酸側鏈，在第二抗體分子之界面上產生 與大侧鏈具有相同或相似大小之補償「空穴」。此提供使 143333.doc -97- 201014605 雜二聚體之產量增加超過其他不需要之最終產物（諸如均 二聚體）的機制。 雙特異性抗體包括交聯或「異源結合」抗體。舉例而 言，一個呈異源結合物形式之抗體可與抗生物素蛋白偶 σ另者與生物素偶合。已提出該等抗體例如使免疫系 統細胞乾向不需要之細胞（美國專利第4,676 98〇號），且用 於治療 HIV 感染（WO 91/00360、WO 92/200373 及 ΕΡ 03089)。可使用任何適宜交聯方法製備異源結合抗體^合 適交聯劑以及許多交聯技術在此項技術中熟知且揭示於美 國專利第4,676,980號中。 由抗體片段產生雙特異性抗體之技術亦已描述於文獻 中。舉例而言，可使用化學鍵聯製備雙特異性抗體。 Brennan等人，Scz’eMce，229:81 (1985)描述一種蛋白水解裂 解完整抗體以產生F(ab')2片段的程序。在二硫醇錯合劑亞 砷酸鈉存在下，此等片段被還原以使鄰二硫醇穩定且阻止 形成分子間二硫化物。接著將所產生之Fab，片段轉化成硫 代硝基苯甲酸酯（TNB)衍生物。接著藉由用疏基乙胺還原 使一種Fab'-TNB衍生物再轉化成Fab'-硫醇，且將其與等莫 耳量之另一 Fab'-TNB衍生物混合以形成雙特異性抗體。所 產生之雙特異性抗體可用作選擇性固定酶之試劑。 亦已描述多種直接自重組細胞培養物製備及分離雙特異 性抗體片段之技術。舉例而言，已使用白胺酸拉鏈來產生 雙特異性抗體。Kostelny等人，《/./»1»2««〇/.,148 (5):1547-1553 (1992)。藉由基因融合將來自Fos及Jun蛋白之白胺酸 143333.doc -98- 201014605 拉鏈肽與兩種不同抗體之Fab，部分連接。使抗體均二聚體 在鉸鏈區還原以形成單體，且接著將其再氧化以形成抗體 雜二聚體。亦可利用此方法產生抗體均二聚體。H〇ninger 等人，/Voc. iVa". Jcai Scz·· C/以，90:6444-6448 (1993)所 述之「雙功能抗體」技術已提供用於製備雙特異性抗體片 段之替代機制。該等片段包含藉由過短而使同一鍵上之兩 個結構域之間無法配對的連接子與輕鍵可變域（Vl)連接之 重鏈可變域（Vh)。因此，迫使一個片段之VH域及VL域與另 一片段之互補VL域及νΗ域配對，藉此形成兩個抗原結合位 點。亦已報導利用單鏈Fv(sFv)二聚體製備雙特異性抗體片 段之另一策略。參見Gruber等人，152:5368 (1994)。 涵蓋具有兩價以上價數之抗體。舉例而言，可製備三特 異性抗體。Tutt等人/wwtmo/. 147: 60 (1991) 〇 抗艎之結合及其他修飾 本文中之方法中所用或製品中所包括之抗體視情況與細 胞毒性劑結合。舉例而言，可如WO 2004/032828中所述使 抗體與藥物結合。 適用於產生該等抗體-細胞毒性劑結合物之化學治療劑 已於上文中描述。 本文中亦涵蓋抗體與一或多種小分子毒素（諸如卡奇黴 素（calicheamicin)、美登素（maytansine)(美國專利第 5,208,020號）、曲考新（trichothene)及CC1065)之結合物。 在本發明之一實施例中，使抗體與一或多個美登素分子 143333.doc •99- 201014605 (例如每抗體分子約1至約10個美登素分子）結合。美登素可 例如轉化為May-SS-Me，其可經還原為May-SH3且與經修 飾抗體反應（Chari 等人 Cancer 52: 127-131 (1992))產生美登素-抗體結合物。 或者，使抗體與一或多個卡奇黴素分子結合。抗生素之 卡奇黴素家族能夠產生次皮莫耳（sub-picomolar)濃度的雙 股DNA斷裂。可使用之卡奇黴素之結構類似物包括（但不 限於）γι1、（X21、a?、N-乙醯基-γι1、PSAG及 GSCHinman 等 /^Cancer 53: 3336-3342 (1993)及 Lode 等人
Cancer Research 58: 2925-2928 (1998)) ° 可使用之酶促活性毒素及其片段包括白喉毒素A鏈、白 喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈（來自綠膿桿菌 萬麻毒素 A鍵、相思子驗 A鍵 (abrin A chain)、莫迪素入鏈（modeccin A chain)、帚麴菌素 (alpha-sarcin)、油桐蛋白（J/eMhies protein)、康乃 馨蛋白（dianthin protein)、洋商陸蛋白（·Ρ/ι;νίο/αί；α awericawa protein)(PAPI、ΡΑΡΙΙ 及 PAP-S)、苦瓜抑制劑 (momordica charantia inhibitor)、麻瘋樹毒蛋白（curcin)、 巴豆毒素（crotin)、肥息草抑制劑（sapaonaria officinalis inhibitor)、白樹毒素（gelonin)、有絲分裂素（mitogellin)、 偶限魏菌素（restrictocin)、紛黴素（phenomycin)、依諾黴素 (enomycin)及黴菌毒素（tricothecene)。參見例如 1993 年 10 月28日公開之WO 93/21232。 本發明進一步涵蓋與具有核分解活性之化合物（例如核 143333.doc 201014605 糖核酸酶或DNA核酸内切酶，諸如去氧核糖核酸酶； DNase)結合之抗體。 多種放射性同位素可用於產生放射性結合之抗體。實例 包括 At211、I131、I125、γ9〇、Re186、Re]88、Sm153、Bi212、 P32及Lu之放射性同位素。 抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙官能蛋白偶合 劑來製備’該等雙官能蛋白偶合劑諸如為N_ 丁二醯亞胺 ©基-3-(2-"比咬基二硫醇）丙酸酯（SPDP)、丁二醯亞胺基·4· (Ν-順丁烯二醯亞胺基甲基）環己烷4曱酸酯、亞胺基硫雜 環戊烷（IT)、醯亞胺酯之雙官能衍生物（諸如己二醯亞胺酸 一甲酯HCL)、活性酯（諸如辛二酸二丁二醯亞胺酯）、醛 (諸如戊二醛）、雙疊氮基化合物（諸如雙（對疊氮基苯甲醯 基）己二胺）、雙重氮鹽衍生物（諸如雙（對重氮苯甲醯基）乙 一胺）、二異氰酸酯（諸如2,6-二異氰酸甲苯酯）及雙活性氟 化合物（諸如1，5-二氟-2,4-二硝基苯）。舉例而言，萬麻毒 ❹ 素免疫毒素可如Vitetta等人，《Science, 238:1098 (1987)中 所述來製備。碳14標記之1-異硫氰基苄基_3_甲基二伸乙基 二胺五乙酸（MX-DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合 之例示性螯合劑。參見W0 94/11026。連接子可為促進細 • 胞中細胞毒性藥物釋放之「可裂解連接子」。舉例而言， 可使用酸不穩定性連接子、肽酶敏感性連接子、二曱基連 接子或含二硫化物之連接子（Chari等人 52: 127-131 (1992)) ° 或者，可（例如）由重組技術或肽合成製備包含抗體及細 143333.doc -101 - 201014605 胞毒性劑之融合蛋白。 在另-實施例中’可使抗體與「受體」（諸如抗生蛋白 鏈菌素)結合以用於預靶向腫瘤，其中將抗體受體結 投與患者，接著使料除劑將未結合之結合物自循^移 除，且接著投與與細胞毒性劑（例如放射性核苷酸）結合之 「配位體」（例如抗生物素蛋白）。 亦可使本發明抗體與使前藥(例如肽基化學治療劑，參 見WO 81/G1145)轉化為活性抗癌藥之前藥活化酶結合。參 見例如WO 88/07378及美國專利第4 975 278號。。口 該等結合物之酶組份包括能夠作用於前藥以使其轉化為 更具活性之細胞毒性形式的任何酶。 適用於本發明方法之酶包括（但不限於）：適用於將含碟 酸酯基前藥轉化成游離藥物的鹼性磷酸酶；適用於將含硫 酸酯基前藥轉化成游離藥物的芳基硫酸酯酶；適用於將無 毒5-氟胞嘧啶轉化成抗癌藥物5_氟尿嘧啶的胞嘧啶脫胺 酶；蛋白酶，諸如沙雷氏菌屬（serratia)蛋白酶 '嗜熱菌蛋 白酶（thermolysin)、枯草桿菌蛋白酶（subtiHsin)、羧基肽 酶及組織蛋白酶（諸如組織蛋白酶B&L)，其適用於將含肽 前藥轉化成游離藥物·，適用於轉化含D_胺基酸取代基之前 藥的D-丙胺醯基羧基肽酶；碳水化合物裂解酶，諸如適用 於將糖基化前藥轉化成游離藥物的p半乳糖苷酶及神經胺 糖酸酶（neuraminidase);適用於將經β_内醯胺衍生之藥物 轉化成游離藥物的β-内醯胺酶；及青黴素醯胺酶，諸如青 黴素V醯胺酶或青黴素G醯胺酶，其適用於將分別由苯氧 143333.doc •102- 201014605 基乙醯基或苯基乙醯基在胺氮處衍生的藥物轉化成游離藥 物。或者，可使用具有酶促活性之抗體（此項技術中亦稱 作「抗體酶」）以將本發明之前藥轉化成游離活性藥物（參 見例如 Massey, iVfliwre 328: 457-458 (1987))。可如本文所 述來製備抗體-抗體酶結合物以將抗體酶傳遞至腫瘤細胞 群體。 可藉由此項技術中熟知之技術，諸如使用上述異基雙官 能交聯試劑使本發明之酶與抗體共價結合。或者，可使用 此項技術中熟知之重組DNA技術來建構包含至少本發明抗 體之抗原結合區與至少本發明酶之官能活性部分連接的融 合蛋白（參見例如 Neuberger 等人，iVa/wre, 3 12: 604-608 (1984))。 本文涵蓋其他抗體修飾。舉例而言，可將抗體連接至多 種非蛋白聚合物之一，例如聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇、 聚環氧烷或聚乙二醇與聚丙二醇之共聚物。在一些實施例 中，將抗體片段（諸如Fab')與一或多個PEG分子連接。 本文揭示之抗體亦可調配為脂質體。含抗體之脂質體由 此項技術中已知之方法製備，諸如Epstein等人，iVoc. Natl. Acad. Sci. t/SJ, 82:3688 (1985) ; Hwang等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980);美國專利第 4,485,045號及第4,5 44,545號及1997年10月23日公開之WO 97/3 8731中所述之方法。具有增強之循環時間之脂質體揭 示於美國專利第5,013,556號中。 尤其適用之脂質體可藉由逆相蒸發法用包含磷脂醯膽 143333.doc -103 - 201014605 鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺（PEG-PE)之脂質組 合物來產生。脂質體經由具有指定孔徑之過濾器擠出以產 生具有所要直徑之脂質體。可如Martin等人乂 5沁/. 257: 286-288 (1982)中所述經由雙硫鍵互換反應使本發明 抗體之Fab·片段與脂質體結合。在該脂質體中視情況含有 化學治療劑。參見Gabizon等人，*/· Caweer /«仏 - 81(19) 1484 (1989)。 涵蓋抗體之胺基酸序列修飾。舉例而言，可能需要改良 抗趙之結合親和力及/或其他生物特性。抗體之胺基酸序 ❹ 列變異趙係藉由將適當核苷酸改變引入抗體核酸中或藉由 狀合成來製備。該等修飾包括例如抗體之胺基酸序列内殘 基之缺失及/或插入及/或取代。進行缺失、插入及取代之 任何組合以獲得最終構築體，限制條件為該最終構築體具 有所需特徵。胺基酸改變亦可改變抗體之轉譯後過程，諸 如改變糖基化位點之編號或位置。 適用於锻別抗體之某些殘基或區域為突變誘發之較佳位 置的方法稱作「丙胺酸掃描突變」，如Cunningham及Wells ❿ 244:1081-1085 (1989)所述。在此，鑑別殘基或目 標殘基群（例如帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且 將其用中性或帶負電胺基酸（最佳為丙胺酸或聚丙胺酸）置 換以實現胺基酸與抗原之相互作用。接著藉由在取代位點 或針對取代位點引入另外或其他變異體來改進彼等對取代 展不出功能敏感性之胺基酸位置。因此，雖然引入胺基酸 歹J變異之位點預先轉定，但突變之性質自身無需預先確 143333.doc -104- 201014605 定。舉例而言，為分析給定位點之突變效能，在目標密碼 子或區域進行ala掃描或隨機突變誘發且篩選所表現抗體變 異體之所需活性。 胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或更 多殘基之多肽範圍内的胺基端及/或羧基端融合以及單一 或多個胺基酸殘基之序列内插入。末端插入之實例包括具 有N端甲硫胺醯基殘基之抗體或與細胞毒性多肽融合之抗 體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N-末端或C-末 ® 端與酶或多肽的融合，其增加抗體之血清半衰期。 另一類型變異體為胺基酸取代變異體。此等變異體之抗 體分子中至少一個胺基酸殘基經不同殘基置換。用於抗體 之取代突變誘發之最關注位點包括高變區，但亦涵蓋FR改 變。保守性取代展示於表2中之「較佳取代」之標題下。 若該等取代致使生物活性改變，則可引入在表2中命名為 「例示性取代」之更多實質改變，且篩選產物。 原始殘基 例示性取代 較佳取代 Ala(A) Val ; Leu ; lie Val Arg(R) Lys ; Gin ; Asn Lys Asn (N) Gin ; His ; Asp、Lys ; Arg Gin Asp (D) Glu ； Asn Glu Cys(C) Ser ; Ala Ser Gln(Q) Asn ； Glu Asn Glu (E) Asp ; Gin Asp Gly(G) Ala Ala His (H) Asn ； Gin ； Lys ； Arg Arg He (I) Leu ; Val ; Met; Ala ; Phe ;正白胺酸 Leu Leu (L) 正白胺酸；lie ; Val ; Met ; Ala ; Phe lie 143333.doc -105- 201014605
Lys(K) Arg ； Gin ； Asn Arg Met (M) Leu ; Phe ; lie Leu Phe (F) Trp ; Leu ; Val ; lie ; Ala ; Tyr Tyr Pro(P) Ala Ala Ser⑸ Thr Thr Thr(T) Val ; Ser Ser Trp(W) Tyr ; Phe Tyr Tyr⑺ Trp ； Phe ； Thr ； Ser Phe Val(V) lie ; Leu ; Met ; Phe ; Ala ;正白胺酸 Leu 對抗體生物特性之實質性修飾係藉由選擇對維持以下之 影響顯著不同的取代來實現：（a)取代區域中多肽主鏈之結 構，例如呈摺疊片或螺旋構形；（b)目標位點處分子之電荷 或疏水性；或（c)側鏈體積。可根據側鏈性質之類似性將胺 基酸分組（在 A. L· Lehninger，Sioc/zem/siry，第二版，第 73-75 頁，Worth Publishers, New York (1975)中）。 (1) 非極性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、 Phe(F)、Trp(W)、Met(M) (2) 不帶電極性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、 Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q) (3) 酸性：Asp(D)、Glu(E) (4) 鹼性：Lys(K)、Arg(R)、His(H) 或者，天然存在殘基可基於共同的側鏈性質分組： (1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、lie ; (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gin ; (3) 酸性：Asp、Glu ; (4) 驗性：His、Lys、Arg ; (5) 影響鏈定向之殘基：Gly、Pro ; 143333.doc -106- 201014605 (6)芳族：Trp、Tyr、Phe 〇 非保守取代將需要將一個此等類別t成員#成另—類 別。 亦可取代（一般以絲胺酸）不參與保持抗體適當構形之任 • 何半胱胺酸殘基以改良分子之氧化穩定性且防止異常交 聯。反之，可在抗體中添加半胱胺酸鍵以改良其穩定性 (尤其在抗體為諸如Fv片段之抗體片段的情況下）。 φ 取代變異體之尤其較佳類型涉及取代親本抗艎之一或多 個高變區殘基。一般而言，為進一步發展所選擇之所得變 異體通常具有相對於產生其之親本抗體經改良之生物學性 質。用於產生該等取代變異鱧之適宜方式為使用噬菌體呈 現的親和力成熟。簡言之，使若干高變區位點（例如6_7個 位點）突變以在每一位點產生所有可能之胺基取代。如此 產生之抗體變異體以單價方式自絲狀噬菌體粒子呈現為與 封裝於各粒子内之M13之基因in產物的融合鱧。隨後如本 ❹ 文中所揭示篩選噬菌體呈現變異體之生物活性（例如結合 親和力）。為鑑別用於修飾之候選高變區位點，可進行丙 胺酸掃描突變誘發以鑑別顯著有助於抗原結合之高變區殘 基。或者或另外’分析抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑 * 別抗體與抗原間之接觸點可為有益的。該等接觸殘基及相 鄰殘基為根據本文詳述之技術進行取代之候選殘基。產生 該等變異體後’則使變異體組經受如本文所述之篩選，且 可在一或多個相關檢定中選擇具有優良性質之抗體用於進 一步發展。 143333.doc •107- 201014605 另一類型之抗體胺基酸變異體改變抗體之原始糖基化模 式。該改變包括使一或多個存在於抗體中之碳水化合物部 分缺失及/或添加一或多個不存在於抗體中之糖基化位 點。 多肽之糖基化通常為N連接型或〇連接型。N連接型係指 碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈連接。三肽序列天 冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺_χ_蘇胺酸（其中χ為除脯胺酸 以外之任何胺基酸）為碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈之 酶促連接的識別序列。因此，多肽中任一此等三肽序列之 存在產生潛在糖基化位點。〇連接型糖基化係指糖Ν_乙醯 基半乳胺糖、半乳糖或木糖之一連接至羥基胺基酸，最通 常為絲胺酸或蘇胺酸，但亦可使用5_羥基脯胺酸或5經基 離胺酸。 在抗體中添加糖基化位點適宜藉由改變胺基酸序列，以 使其含有上述三肽序列中之一或多者來實現（對於Ν連接型 糖基化位點而言）。該改變亦可藉由在原始抗體之序列中 添加一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基或用一或多個絲胺酸或 蘇胺酸殘基進行取代來進行（對於〇連接型糖基化位點而 言）。 當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。舉 例而言’具有缺乏與抗體Fc區連接之海藻糖之成熟碳水化 合物結構的抗體描述於美國專利申請案第2003/0157108 A1 號（Presta，L·)中；亦參見US 2004/0093621 Al(Kyowa
Hakko Kogyo Co.，Ltd)，其係關於CD20抗體組合物。連接 143333.doc -108- 201014605 至抗體Fc區之碳水化合物中具有平分型乙醯葡糖胺 (GlcNAc)之抗體在 WO 03/011878、Jean-Mairet 等人及 Umana等人之美國專利第6,602,684號中有所提及。連接至 抗體Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體報導於 W0 97/30087(Patel等人）中；亦參見W0 98/58964(Raju，S·) 及WO 99/22764(Raju，S.)，其係關於與其Fc區連接之碳水 化合物改變之抗體。 在一些實施例中，本文中之糖基化變異體包含Fc區，其 # 中與Fc區連接之碳水化合物結構缺乏海藻糖。該等變異體 具有改良之ADCC功能。視情況，Fc區進一步在其中包含 一或多個進一步改良ADCC之胺基酸取代，例如在Fc區之 位置298、333及/或334(殘基之Eu編號）之取代。與「去海 藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體相關之公開案的實例包 括：Presta，L之美國專利申請案第US 2003/0157108 A1 號；WO 00/61739A1 ； WO 01/29246A1 ； US 2003/ 0115614A1 ; US 2002/0164328A1 ； US 2004/0093621A1 ； US 2004/0132140A1 ； US 2004/0110704A1 ； US 2004/ 0110282A1 ； US 2004/0109865A1 ； WO 03/085119A1 ； WO 03/084570A1 ; WO 2005/035778 ; WO 2005/035586(描述海 藻糖化之RNA抑制（RNAi)) ; Okazaki等人《/.从〇/.扪〇/· 336:1239-1249 (2004) ; Yamane-Ohnuki 等人 jBioewg. 87:614 (2004)。產生去海藻糖基化抗艎之細胞株 之實例包括蛋白質海藻糖基化缺陷型Lecl3 CHO細胞 (Ripka 等人，Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 143333.doc 201014605 (1986) ; Presta，L之美國專利申請案第 US 2003/0157108 A1號及Adams等人之WO 2004/056312 A1，尤其實例11)及 基因剔除細胞株，諸如α· 1,6-海藻糖基轉移酶基因、 FC/TS、基因剔除 CHO 細胞（Yamane-Ohnuki 等人，价oiec/z. 87:614 (2004))。 編碼抗體之胺基酸序列變異體之核酸分子由多種此項技 術中已知之方法製備。此等方法包括（但不限於）自天然來 源分離（在天然存在之胺基酸序列變異體之情況下），或由 抗體之早期製備之變異體或非變異體型式的募核苷酸介導 (或定點）之突變誘發、PCR突變誘發及序列盒突變誘發製 備。 可能需要關於效應功能來修飾本發明抗體以便例如增強 抗體之抗原依賴性細胞介導之細胞毒性（ADCC)及/或補體 依賴性細胞毒性（CDC)。此可藉由在抗體Fc區引入一或多 個胺基酸取代來達成。或者或另外，可將半胱胺酸殘基引 入Fc區中，藉此允許在此區域中形成鏈間雙硫鍵。由此產 生之均二聚抗體可具有改良之内化能力及/或增強之補體 介導之細胞殺傷及抗體依賴性細胞毒性（ADCC)。參見 Caron 等人，·/· Med. 176:1191-1195 (1992)及 Shopes， B. ·/. 148:2918-2922 (1992)。如 Wolff等人 Cancer 及aearc/z 53:2560-2565 (1993)中所述具有增強之抗腫瘤活 性之均二聚抗體亦可使用異雙官能交聯劑製備。或者，抗 體可經工程改造，使其具有雙Fc區且可進而具有增強之補 體溶解及ADCC能力。參見Stevenson等人Jwz-CancerDrMg 143333.doc -110- 201014605
Design 3:219-230 (1989) ° WO 00/42072(Presta，L.)描述在人類效應細胞存在下具 有改良之ADCC功能之抗體，其中該等抗體在其Fc區中包 含胺基酸取代。在一些實施例中，具有改良之ADCC之抗 體在Fc區之位置298、333及/或334包含取代。在一些實施 • 例中，改變之Fc區為包含一個、二個或三個此等位置之取 • 代或由該等取代組成之人類IgGl Fc區。 具有改變之C 1 q結合及/或補體依賴性細胞毒性（CDC)之 ® 抗鱧描述於WO 99/51642、美國專利第6，194,551B1號、美 國專利第6,242，195B1號、美國專利第6,528,624B1號及美 國專利第6,538,124號（Idusogie等人）中。該等抗體在其Fc 區之一或多個胺基酸位置270、322、326、327、329、 313、333及/或334包含胺基酸取代。 為了增加抗體之血清半衰期，可將救助受體結合抗原決 定基併入抗體（尤其為抗體片段）中，例如如美國專利 5,739,277所述。如本文所用，術語「救助受體結合抗原決 定基」係指IgG分子（例如IgG!、IgG2、IgG3或IgG4)之Fc區 中負責增加IgG分子之活體内血清半衰期的抗原決定基。 在Fc區中具有取代且具有增加之血清半衰期之抗體亦描述 . 於 WO 00/42072(Presta，L.)中。 亦涵蓋具有三個或三個以上（較佳四個）功能性抗原結合 位點之經工程改造之抗體（美國專利案第US 2002/0004587 A1號，Mmer等人）。 VI.瞽藥調配物 143333.doc •111 - 201014605 根據本發明所使用之抗體之治療調配物係藉由將具有所 要純度之抗體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦 形劑或穩定劑混合以凍乾調配物或水溶液形式製備以供儲 存Science·?第 16版，Osol, A· 編（1980))。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及 濃度下對接受者無毒且包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬 酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺 酸；防腐劑（諸如十八烷基二曱基苄基氣化銨；氣化六羥 季銨；氣苄烷銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基 苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙 酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間曱酚）；低 分子量（少於約10個殘基）多肽；蛋白質，諸如血清白蛋 白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶 酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺 酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包 括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA ;糠，諸 如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子， 諸如鈉；金屬錯合物（例如Zn-蛋白質錯合物）；及/或非離 子型界面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICSTM或聚乙 二醇（PEG)。 例示性抗CD20抗體調配物描述於WO 98/56418中。此公 開案描述液態多次劑量調配物，其包含40 mg/mL利妥昔單 抗（Rituximab)、25 mM 乙酸鹽、1 50 mM海藻糖、0.9% 节 醇、pH值為5.0之0.02%聚山梨醇酯20，其在2-8BC下最小 143333.doc •112· 201014605 存放期為儲存兩年《所關注之另一抗CD20調配物包含於 9.0 mg/mL氣化鈉、7.35 mg/mL二水合檸檬酸鈉、0.7 mg/mL聚山梨醇酯80及無菌注射用水（pH 6.5)中之10 mg/mL利妥昔單抗（Rhuximab)。 適於皮下投藥之凍乾調配物描述於美國專利第6,267,958 號（Andya等人）中。該等凍乾調配物可以合適稀釋劑復原 為高蛋白質濃度，且該經復原調配物可皮下投與本文欲治 療之哺乳動物。 亦涵蓋結晶形式之抗體。參見例如US 2002/0136719A1 (Shenoy 等人）。 本文中之調配物亦可含有一種以上所治療之特定適應症 所必需的活性化合物，在一些實施例中具有彼此並無不利 影響之互補活性之活性化合物。舉例而言，可能需要進一 步於調配物中提供細胞毒性劑；化學治療劑；免疫抑制 劑；細胞激素；細胞激素拮抗劑或抗體；生長因子；激 素；整合素；整合素拮抗劑或抗體（例如LFA-1抗體，諸如 可購自Genentech之依法利珠單抗/RAPTIVA，或α4整合素 抗體’諸如可講自 Biogen Idec/Elan Pharmaceuticals，Inc. 之那他珠單抗/TYSABRI®);干擾素類藥物，諸如IFN-β-la(REBIF® 及 AV0NEX®)或 IFN-P-lb(BETASERON®);募 肽’諸如乙酸格拉替雷（COPAXONE®);細胞毒性劑，諸 如米托蒽醌（NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、苯 丁酸氮芥或硫唑嘌呤；靜脈内免疫球蛋白（γ球蛋白）；淋巴 細胞消耗藥物（例如米托蒽醌、環磷醯胺、坎帕斯、抗CD4 143333.doc -113- 201014605 或克拉屈濱）；非淋巴細胞消耗免疫抑制藥物（例如黴酚酸 知（MMF)或環孢素）；「抑制素」類降膽固醇藥；雌二醇； 睪固酮，激素替代療法；治療Ms繼發性或相關性症狀（例 如痙攣、失禁、疼痛、疲勞）之藥物；TNF抑制劑；疾病改 善性抗風濕性藥（DMARD);非類固醇消炎藥（NSAID);皮 質類固醇（例如甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激 素）’左旋曱狀腺素；環孢素A;生長抑素類似物；細胞激 素括心劑’·抗代謝物；免疫抑制劑；整合素拮抗劑或抗體 (例如LFA-1抗體，諸如依法利珠單抗或以整合素抗體，諸 如那他珠單抗）；或另一 B細胞表面拮抗劑/抗體等。該等 其他藥劑之類型及有效量視例如存在於調配物中之抗體 量、所治療多發性硬化症之類型及患者之臨床參數而定。 此等量一般以與上文所用相同之劑量及投藥途徑來使用或 約為迄今所用劑量之1 %至99%。 亦可將活性成份夾裹於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚 5所製備之微囊中（分別為例如羥基甲基纖維素或明膠微 囊及聚（甲基丙烯酸甲酯）微囊）、膠狀藥物傳遞系統（例如 月Θ質體白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊） 或巨乳液_。該等技術揭示於心 •SWewces 第 16版，〇s〇i，a.編（1980)中。 可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含 有抗體之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成 形物品之形式，例如膜或微囊。持續釋放基質之實例包括 聚酯、水凝膠（例如聚（2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯）或聚（乙 143333.doc -114- 201014605 烯醇））、聚乳酸交酯（美國專利第3,773,919號）、L-麩胺酸 與γ乙基-L-麩胺酸酯之共聚物、不可降解乙浠-乙酸乙烯 酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物（諸如LUPRON DEPOT™(由 乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林構成之可注射微球體）) 及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。 待用於活體内投藥之調配物必須無菌。此可藉由經無菌 濾膜過濾而容易地實現。 在一些實施例中，調配物包含由以下組成之群中之一或 多者：組胺酸緩衝劑、海藻糖、蔗糖及聚山梨醇酯20。在 一些實施例中，組胺酸緩衝劑為組胺酸-乙酸鹽緩衝劑（pH 6.0)。適用於投與抗CD20抗體之調配物之實例見於關於調 配物之全文以引用的方式併入本文中之Andya等人之US 2006/0088523中。 例示性抗CD20抗體調配物描述於以全文引用的方式併 入本文中之 Andya 等人之 US 2006/0088523及 WO 98/56418 中。在一些實施例中，調配物為包含以下之液體多次劑量 調配物：40 mg/mL之抗CD20抗體、25 mM乙酸鹽、150 mM海藻糖、0.9%苄醇、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.0)，其 在2-8°C下最小存放期為儲存兩年。在一些實施例中，所 關注之抗CD20調配物包含於9.0 mg/mL氣化鈉、7.35 mg/mL二水合檸檬酸納、0.7 mg/mL聚山梨醇醋80及無菌 注射用水（pH 6.5)中之10 mg/mL抗體。在一些實施例中， 抗CD20抗體在包含pH值為約4.8至約5.5，較佳pH值為5.5 之10-30 mM乙酸鈉；量為約0.01-0.1% v/v之作為界面活性 143333.doc • 115 - 201014605 劑之聚山梨醇酯；量為約2-10% w/v之海藻糖及用作防腐 劑之苄醇之含水醫藥調配物中（U.S. 6,171，586，全文以引 用的方式併入本文中）。適用於皮下投藥之凍乾調配物描 述於全文以引用的方式併入本文中之WO 97/04801中。該 等凍乾調配物可以合適稀釋劑復原為高蛋白質濃度，且該 經復原調配物可皮下投與本文欲治療之哺乳動物。 在一些實施例中，人類化2H7變異體調配物為於10 mM 組胺酸、6%蔗糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.8)中之12-14 mg/mL抗體。在一特定實施例中，2H7變異體及尤其 2H7.V16係調配為於10 mM組胺酸硫酸鹽、60 mg/ml蔗糖、 0.2 mg/ml聚山梨醇醋20及無菌注射_用水（pH 5.8)中之20 mg/mL抗體。在一特定實施例中，一種人類化2H7 vl6之 IV調配物為：20 mM乙酸鈉、4%二水合海藻糖、0.02%聚 山梨醇酯 20(Tween 20TM)(pH 5.3 中）之 30 mg/ml 抗體。在一 些實施例中，人類化2H7.V511變異體調配物為於10 mM組 胺酸硫酸鹽、60 mg/ml嚴糖（6%)、0.2 mg/ml聚山梨醇6旨 20(0.02%)及無菌注射用水（pH 5.8)中之15-30 mg/ml抗體， 較佳20 mg/ml抗體。在另一實施例中，2H7變異體且尤其 2H7.V511之調配物為用於靜脈内投藥之20 mg/ml 2H7、20 mM乙酸鈉、4%二水合海藻糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.5)。在一些實施例中，21175114調配物為於2〇1111^乙酸 鈉、240 mM(8%)二水合海藻糖、0.02%聚山梨醇酯20(pH 5.3)中之 15-25 mg/ml，較佳 20 mg/ml抗體。 VII.製品及製造方法 143333.doc •116· 201014605 本發明提供包含以下之製品：（幻包含奥克利珠單抗之容 器；及（b)具有關於治療患者之多發性硬化症之說明的藥品 說明書’其中該等說明指示（例如說明）向患者投與有效提 供約〇·3公克至約〇.6公克之間的初始奥克利珠單抗暴露， 隨後提供約0.3公克至約〇.6公克之間的第二奥克利珠單抗 暴露之量的奥克利珠單抗，該第二暴露直至初始暴露後約 16週至60週才投與，且以一個劑量或兩個劑量之奥克利珠 單抗形式向患者提供各次奥克利珠單抗暴露。在一些實施 例中’初始奥克利珠單抗暴露為約〇.6公克。在一些實施 例中，第二奥克利珠單抗暴露為約〇.6公克。在一些實施 例中，該第二暴露在初始暴露後約24週投與。在一些實施 例中，以一個劑量之奥克利珠單抗形式向患者提供一或多 次奥克利珠單抗暴露。在一些實施例中，以兩個劑量之奥 克利珠單抗形式向患者提供一或多次奥克利珠單抗暴露。 在一些實施例中，兩個劑量之奥克利珠單抗包含約〇 3公 克奥克利珠單抗。 本發明進一步提供含有適用於治療本文中所述之進展型 多發性硬化症之物質的製品。在一些實施例中，提供一種 製时，其包含包裝在一起之包含抗（:1)20抗體及醫藥學上 可接受之載劑的醫藥組合物及指示抗CD20抗體或醫藥組 合物指定用於治療具有一或多種選自由以下組成之群之特 徵的患多發性硬化症之患者的標籤：（a)年齡小於約55歲， (b)-或多個釓染色病變，⑷在開始治療前兩年内擴展殘 疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分’及（d)多發性硬化症 143333.doc -117- 201014605 嚴重度評分（MSSS)高於約5分》 在一些實施例中，提供一種製品，其包含包裝在一起之 包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物 及指示投與抗CD20抗體或醫藥組合物係基於患者具有一 或多種選自由以下組成之群之特徵的標籤：（a)年齡小於約 55歲’（b) —或多個此染色病變，（c)在開始治療前兩年内 擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性 硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 在一些實施例中，提供一種製品，其包含包裝在一起之 包含抗CD20抗體及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物 及指示將醫藥組合物投與所選患者之標籤，其中所選患者 具有一或多種選自由以下組成之群之特徵··（a)年齡小於約 55歲，（b)—或多個釓染色病變，（c)在開始治療前兩年内 擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（句多發性 硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者具有一 或多種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約歲， (b)—或多個釓染色病變’及（c)在開始治療前兩年内擴展 殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分。 在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者具有一 種以上選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約5 5歲， (b)—或多個釓染色病變’（c)在開始治療前兩年内擴展殘 疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症 嚴重度評分（MSSS)高於約5分。在本文中所述之任何製品 143333.doc -118- 201014605 之些實施例中’患者具有兩種選自由以下組成之群之特 徵·⑷年齡小於約55歲，⑻一或多個釓染色病變，及⑷ 在開始治療前兩年内EDSS增加至少約一分。在_些實施 例中，患者具有三種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡 . 小於約55歲’（b) 一或多個釓染色病變，（c)在開始治療前 兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（句 ’ 多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。在一些實施 ❹ 例中，患者具有（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色 病變’（C)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS) 增加至少約—分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS) 南於約5分。 在任何製品之一些實施例中，進展型多發性硬化症為原 發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型多發 性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施例 中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。在 ❹ 一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解型 多發性硬化症。 在任何製品之一些實施例中，患者之樣本中進一步具有 炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣本。在一 . 些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些實施 例中，炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指示。 在任何製品之一些實施例中，開始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例中，患者之 EDSS高於約5,〇持續少於約15年。在一些實施例中，患者 143333.doc -119- 201014605 之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在一些實施例 中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。在一些實施 例中，EDSS增加為在開始治療前兩年内EDSS增加至少約 1.5分。在一些實施例中，開始治療前兩年内EDSS增加1.5 分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前 兩年内進一步具有兩次或兩次以上復發。 在本文中所述之任何製品之一些實施例中，患者及/或 患者群體之特徵為具有高於約6、7、8或9中任一者之 MSSS。在任何製品之一些實施例中，患者及/或患者群體 之特徵為具有高於約9之MSSS。 在任何製品之一些實施例中，患者年齡小於約5 1歲。 在任何製品之一些實施例中，治療縮短確診之疾病進展 之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十二週 之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續 二十四週之EDSS增加。 在任何製品之一些實施例中，抗CD20抗體包含：a)包含 SEQ ID NO:10、SEQ ID ΝΟ:11 及 SEQ ID NO:12 之重鏈可 變區，及b)包含 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 及 SEQ ID NO:6之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥 克利珠單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為利妥昔單 抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為奥法土莫單抗。在 一些實施例中，抗CD20抗體為TRU-015或SBI-087。在一 些實施例中，抗CD20抗體為GA101。在一些實施例中，抗 CD20抗體為hA20。 143333.doc -120- 201014605 該製品包含容器及在該容器上或與該容器相結合之標籤 或藥品說明書。合適容器包括例如瓶子、小瓶、注射器 等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納 或含有有效治療多發性硬化症之組合物，且可具有無菌出 入孔（例如容器可為靜脈内溶液袋或具有可由皮下注射針 刺穿之塞子的小瓶）。組合物中之至少一種活性劑為抗 體。在一些實施例中，容器包含約0.3公克至約4.0公克之 間的抗CD20抗體。在一些實施例中，容器包含約0.3公克 至約1.5公克之間的抗CD20抗體。 標籤或藥品說明書指示組合物用於治療患多發性硬化症 之患者之多發性硬化症，其中提供關於抗體及任何其他所 提供藥物之給藥量及給藥時間間隔的特定準則。製品可進 一步包含第二容器，該第二容器包含醫藥學上可接受之緩 衝液，諸如抑菌性注射用水（BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽 水、林格氏溶液（Ringer's solution)及右旋糖溶液。製品可 進一步包括就商業及使用者之角度而言合乎需要之其他物 質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。 視情況本文中之製品進一步包含含有除用於治療之抗體 以外之藥劑且進一步包含關於使用該藥劑治療患者之說明 的容器，該藥劑較佳為化學治療劑或免疫抑制劑；干擾素 類藥物，諸如 IFN-P-la(REBIF® 及 AVONEX®)或 IFN-β-lb(BETASERON®)； 募肽，諸如乙酸格拉替雷 (COPAXONE®);細胞毒性劑，諸如米托蒽醌 (NOVANTRONE®)、甲胺喋呤、環磷醯胺、苯丁酸氮芥或 143333.doc -121 - 201014605 硫唑嘌呤；靜脈内免疫球蛋白（γ球蛋白）；淋巴細胞消耗藥 物（例如米托蒽醌、環磷醯胺、坎帕斯、抗CD4或克拉屈 濱），非淋巴細胞消耗免疫抑制藥物（例如黴酚酸酯（ΜΜρι) 或環孢素）；「抑制素」類降膽固醇藥；雌二醇；激素替代 療法；治療MS繼發性或相關性症狀（例如痙攣、失禁、疼 痛、疲勞）之藥物；TNF抑制劑；疾病改善性抗風濕性藥 — (DMARD);非類固醇消炎藥（NSAID);皮質類固醇（例如 甲潑尼龍、強的松、地塞米松或糖皮質激素）；左旋曱狀 腺素；環孢素A ;生長抑素類似物；細胞激素或細胞激素 ❹ 受體拮抗劑；抗代謝物；免疫抑制劑；整合素拮抗劑或抗 體（例如LFA-1抗體，諸如依法利珠單抗，或以整合素抗 體，諸如那他珠單抗）；或另一B細胞表面標誌抗體等。 在一些實施例中，標籤可進一步指示本文中所述之任何 實施例。舉例而言’標藏可指示患者具有（a)小於約55歲之 年齡，及（b)—或多個釓染色病變。 在本發明之另一實施例中，提供製造含有適用於治療本 文中所述之進展型多發性硬化症之物質的方法。在一些實 © 施例中’提供製造抗CD20抗體或其醫藥組合物之方法， 其包含在包裝内組合抗CD20抗體或醫藥組合物及指示抗 - CD20抗體或醫藥組合物指定用於治療患進展型多發性硬 化症之患者的標籤’其中該等患者具有一或多種選自由以 下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)一或多個釓 染色病變’（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 143333.doc -122· 201014605 (MSSS)向於約5分。 在本文中所述之任何製造方法之—些實施例中，患者具 有一或多種選自由以下組成之群之特徵：⑷年齡小於約55 歲’（b卜或多個此染色病變’及⑷在開始治療前兩年内 擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分。 V1U.推廣及銷售之方法 本發明亦提供推廣抗CD2〇抗體或其醫藥學上可接受之 ❹ 、°物之方法’該方法包含向目標聽S宣傳抗CD20抗趙 或其醫藥組合物用於治療患進展型多發性硬化症之患者或 患者群體的用途，其中該患者或患者群體具有一或多種選 自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) 一或 多個此染色病變，⑷在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量 表（EDSS)增加至少約一分’及（句多發性硬化症嚴重度評 分（MSSS)高於約5分。 本文中亦提供銷售用於進展型多發性硬化症患者子群之 ❹ 抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物的方法，該方 法包含告知目標聽眾抗CD20抗體用於治療患者子群的用 途’該患者子群之特徵為該子群之患者具有一或多種選自 由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b) 一或多 . 個釓染色病變，（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。 此外，本發明提供詳細說明抗CD20抗體用於進展型多 發性硬化症患者子群之方法，該方法包含提供向患者子群 143333.doc •123- 201014605 :與抗CD20抗體或其醫藥學上可接受之組合物之說明’ 該患者子群之特徵為該子群具有一或多種選自由以下組成 之群之特徵：(a)年齡小於約55歲⑻一或多個釓染色病 變（〇)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增 加至夕約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高 於約5分。 . 么本發明* 一步提供向患進展型多#性硬化症之患者提供 . β療選擇之方法’該方法包含將抗抗體與含有治療 患進展型多發性硬化症之患者之說明的藥品說明書一起&碜 裝於小瓶中’其中該等患者具有-或多種選自由以下組成 之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b卜或多個亂染色病 變’⑷在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（edss)增 加至夕約一分，及多發性硬化症嚴重度評分高 於約5分。 在任何該等方法之一些實施例中患者具有一或多種選 自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，(b)一或 多個亂染色病變，及⑷在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態 量表（EDSS)增加至少約一分。 在任何該等方法之一些實施例中患者具有兩種選自纟 以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，一或多個 此染色病變，（C)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一 及⑷多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自 由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)一或多 143333.doc .124· 201014605 個釓染色病變，（C)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有（a)年齡小 於約55歲’（b)—或多個釓染色病變，（(〇在開始治療前兩 年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（❼多 發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 • 在任何該等方法之一些實施例中，進展型多發性硬化症 ❹ 為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例中，進展型 多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。在一些實施 例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發性硬化症。 在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷患有復發緩解 型多發性硬化症。 在任何該等方法之一些實施例中，患者之樣本中進一步 具有炎症跡象。在-些實施例中，樣本為腦脊競液樣本。 在一些實施例中，炎症跡象由IgG指數升高指示。在一些 φ 實施例中’炎症跡象由以等電聚焦偵測之IgG寡選殖帶指 示0 在任何該等方法之-些實施例中1始治療前兩年内之 EDSS增加不可歸因於復發。在―些實施例_，患者之 刪8高於約5.G持續少於約15年。在-些實施例中，患者 之EDSS小於或等於約5.〇持續少於約科。在一些實施例 中’在開始治療時EDSS在約3 〇與約6 5之間。在一些實施 例中EDSSif加為在開始治療前兩年内edss增加至少約 1·5刀在些實施例中，開始治療前兩年内EDSS增加j 5 I43333.doc -125· 201014605 分不可歸因於復發。在一些實施例中，患者在開始治療前 兩年内進一步具有兩次或兩次以上復發。 在任何該等方法之一些實施例中，患者年齡小於約5 i 歲。 在任何該等方法之一些實施例中，治療縮短確診之疾病 進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進展為持續十 二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之疾病進展為 持續二十四週之EDSS增加。 在任何該等方法之一些實施例中，抗CD20抗體為奥克 利珠單抗。在任何該等方法之一些實施例中，抗CD2〇抗 體為利妥昔單抗。在任何該等方法之一些實施例中，抗 CD20抗體為奥法土莫單抗。在任何該等方法之一些實施 例中，抗CD20抗體為TRU_0154sBI_087。在任何該等方 法之一些實施例中，抗CD2〇抗體為GA1〇1。在任何該等方 法之一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。 本文中所述之方法可涵蓋本文中所述之實施例之任何組 合。舉例而言，該等方法包括患者具有（a)小於約55歲之年 齡及（b) —或多個此染色病變之方法。 IX·預測對多發性硬化症治療之反應性之系统及方法 本發明亦提供分析患進展型多發性硬化症之個體及/或 患者疋否對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應 的系統及方法。本發明提供用於分析患進展型多發性硬化 症之患者對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療之反應 性的系統，其包含：⑷評估一或多種選自由以下組成之群 143333.doc •126- 201014605 之特徵：⑴年齡小於約55歲；（ii)一或多個釓染色病變， (ni)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至 少約一分’及（iv)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5 分；（b)執行（a)之評估之硬體；及（c)執行演算法來確定患 者是否易受該治療影響或對該治療有反應的計算構件。 本發明進一步提供預測患有進展型多發性硬化症之個體 是否會對使用用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應之 φ 方法，該方法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特 徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色病變，（幻在 開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一 分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分，據 此病患年齡 '此染色病變、開始治療前兩年内之EDSS增 加、MSSS或其組合會顯示個體會對治療有反應。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中患者具有 一種以上選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55 ❹ 歲，（b) 一或多個釓染色病變，及（c)在開始治療前兩年内 擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分。 在本文中所述之任何該等系統及/或方法之一些實施例 中，患者具有一種以上選自由以下組成之群之特徵：（勾年 齡小於約55歲，（b)—或多個此染色病變，⑷在開始治療 前兩年内擴展殘疾狀態量表^〇88)增加至少約一分，及 (d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。在任何該 等系統及/或方法之一些實施例中，患者具有兩種選自由 以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約5S歲，或多個 143333.doc -127- 201014605 釓染色病變，（C)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有三種選自 由以下組成之群之特徵：⑷年齡小於約55歲，（b)—或多 個釓染色病變，（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表 (EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。在一些實施例中，患者具有（a)年齡小 於約55歲’（b)—或多個釓染色病變，（勾在開始治療前兩 年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及多 發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，進展型多 發性硬化症為原發性進展型多發性硬化症。在一些實施例 中，進展型多發性硬化症為繼發性進展型多發性硬化症。 在一些實施例中，進展型多發性硬化症為進展復發型多發 性硬化症。在一些實施例中，在開始治療時患者未診斷出 患有復發緩解型多發性硬化症。 在任何該等系統或方法之一些實施例中，患者樣本中進 一步具有炎症跡象。在一些實施例中，樣本為腦脊髓液樣 本。在一些實施例中，炎症跡象係由於IgG指數升高顯示 的。在一些實施例中，炎症跡象係由於藉由等電聚焦法偵 測之IgG寡選殖條紋所顯示的。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，開始治療 前兩年内之EDSS增加不可歸因於復發。在一些實施例 中’患者之EDSS高於約5.0持續少於約15年。在一些實施 143333.doc •128· 201014605 例中，患者之EDSS小於或等於約5.0持續少於約10年。在 一些實施例中，在開始治療時EDSS在約3.0與約6.5之間。 在一些實施例中，EDSS增加為在開始治療前兩年内EDSS 增加至少約1 ·5分。在一些實施例中，開始治療前兩年内 EDSS增加1 ·5分不可歸因於復發。在一些實施例中’患者 在開始治療前兩年内進一步具有兩次或兩次以上復發。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，患者年齡 小於約51歲。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，系統或方 法進一步包含給患者提供建議。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，治療縮短 確診之疾病進展之時間。在一些實施例中，確診之疾病進 展為持續十二週之EDSS增加。在一些實施例中，確診之 疾病進展為持續二十四週之EDSS增加。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，藥物為干 擾素β-lb(例如Betaseron®)、干擾素β-la(例如Avonex®或 Rebif®)、格拉替雷（Glatiramer)(例如 Copaxone®)、米托蒽 酿（例如諾肖林（Novantrone))、皮質類固醇（例如乙基潑尼 龍、強的松、地塞米松）、3-4二胺基吡啶、ABT-874、阿 倫單抗（Alemtuzumab)、沙 丁胺醇（Albuterol) (Proventil®)、ATL1102、阿托伐他、;丁（Lipitor®)、硫 °坐嗓 呤、BG00012(反丁烯二酸二曱酯）、BHT-3009、肉毒桿菌 毒素 A(Botulinum toxin A)(Botox®)、C-105、卡納多 (cannador)、屈大麻紛（dronabinol)、四氫大麻盼 143333.doc -129- 201014605 (tetrahydrocannabinol)、 大麻二醇(cannabidiol)、 CDP3 23、克拉屈濱、CNTO 1275、環磷醯胺、達利珠單抗 (Daclizumab)、右曱嗎味（Dextromethorphan)/ 奎尼丁 (quinidine)(AVP-923、ZenviaTM)、多奈 0辰齊（Donepezil) (Aricept®)、多西環素（Doxycycline)、雌二醇、雌三醇、 雌孕激素（Estroprogestins)、氨0比咬-SR(Fampridine-SR)(4-胺基哎啶，持續釋放）、芬戈莫德（Fingolimod)(FTY720)、 干擾素σ、拉莫三嗓（Lamotrigine)(Lamictal®)、拉啥莫德 (Laquinimod)、利多卡因（Lidocaine)+ 丙胺卡因 (prilocaine)(EMLA)、MBP8298(合成髄鞘鹼性蛋白肽）、金 剛烧胺（Memantine)(Namenda®)、甲潑尼龍、MN-166、莫 達非尼（Modafinil)(Provigil®)、黴酚酸酯（Cellcept®)、納 曲酮（naltrexone)、那他珠單抗（Tysabri®)、帕羅西汀 (Paroxetine)(Paxil®)、PI-2301(共聚物）、°比格列明 (Pioglitazone)(Actos®)、D比仙酮（Pixantrone)(BBR 2778)、 普伐他汀（Pravastatin)(Pravachol®)、普瑞巴林 (Pregabalin)(Lyrica®)、孕酮（Progesterone)、RG2077、利 魯0坐（Riluzole)(Rilutek®)、洛利普蘭（Rolipram)(峨酸二醋 酶-4抑制劑）、RTL1000、SB-683699、辛伐他汀 (Simvastatin)(Zocor®)、T細胞受體肽疫苗（NeuroVaxTM)、 特立氣•胺（Teriflunomide)、睪固酮凝膠（Androgel®)或甲氧 节咬（Trimethoprim)。 在任何該等系統及/或方法之一些實施例中，用以治療 多發性硬化症之藥物為抗CD20抗體。在一些實施例中， 143333.doc -130- 201014605 抗 CD20 抗體包含：a)包含 SEQ ID NO:10、SEQ ID ΝΟ:11 及SEQ ID NO:12之重鏈可變區，及b)包含SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6之輕鏈可變區。在一些實施 例中，抗CD20抗體為奥克利珠單抗。在一些實施例中， 抗CD20抗體為利妥昔單抗。在一些實施例中，抗CD20抗 體為奥法土莫單抗。在一些實施例中，抗CD20抗體為 TRU-015或SBI-087。在一些實施例中，抗CD20抗體為 GA101。在一些實施例中，抗CD20抗體為hA20。 本文中所述之系統及/或方法可涵蓋本文中所述之實施 例之任何組合。舉例而言，該等方法包括患者具有（a)小於 約55歲之年齡及（b)—或多個釓染色病變之方法。 本發明之其他詳情由以下非限制性實例說明。本說明書 中之所有引用文獻之揭示内容以引用的方式明確併入本文 中〇 實例 意欲僅用於例示本發明且因此不應視為以任何方式限制 本發明之實例亦描述及詳述上文論述之本發明之態樣及實 施例。上述實例及詳細描述以說明方式而非限制方式提 供。 實例1 :復發緩解型多發性硬化症（RRMS)中奥克利珠單抗 之第U期研究 進行第II期多中心隨機化平行組部分盲法安慰劑及 Avonex對照劑量發現研究來評估兩種奥克利珠單抗劑量方 案在患復發緩解型多發性硬化症（RRMS)之患者中之功效 143333.doc -131 - 201014605 (如藉由腦磁共振成像（MRI)病變所量測）及安全性β 所研究之兩種奥克利珠單抗劑量方案如下：1}奥克利珠 單抗1000 mg劑量方案：由在第一治療週期兩次輪注ι〇〇〇 mg接著在隨後治療週期單次輸注1〇〇〇 mg組成，及2)奥克 利珠單抗600 mg劑量方案：由在第一治療週期兩次輸注 3〇〇 mg接著在隨後治療週期單次輸注6〇〇 mg組成。 如圖7中所述將符合條件之患者隨機（1:1:1:1)分入四個治 療組A、B、C或D之一。研究設計概述說明於圖7中。
組A(奥克利珠單抗1〇〇〇 mg):在第i治療週期兩次靜脈 内（ι.ν.)輸注奥克利珠單抗，各次1〇〇〇瓜呂，間隔“天。接 著使患者接受維持劑量方案，亦即隨後每24週治療週期單 次輸注1000 mg。隨後，為在第2治療週期期間維持研究雙 盲’使患者接受間隔14天之兩次輸注，第_次輸注為奥克 矛J珠單抗1000 mg且第二次輸注為安慰劑。在第3及第4治 療週期中’以冑盲方式在無第二次安慰劑輸注的情況下用 單次1000 mg輸注治療患者直至基於初始分析選出較佳劑
組B(奥克利珠單抗6〇〇 mg):在第i治療週期兩次靜脈内 輸注奥克利珠單抗，各次3〇〇 mg，間隔14天。接著使患者 接又維持劑量方案，亦即隨後每24週治療週期單次輸注 6〇〇 mg ^隨後，為在第2治療週期期間維持研究雙盲使 患者接受間隔14天之兩次輸注，第—次輸注城克利珠翠 抗600 mg且第二次輸注為安慰劑。在第3及第4治療週期 乂雙盲方式在無第二次安慰劑輸注的情況下用單次 143333.doc -132- 201014605 600 mg輸注治療患者直至基於初始分析選出較佳劑量。
組C(安慰劑）：在第1治療週期兩次靜脈内輸注安慰劑， 間隔14天。其後，使患者接受6〇〇 mg奥克利珠單抗劑量方 案，該方案由在第2治療週期開始時間隔14天兩次雙盲靜 脈内輸注奥克利珠單抗3⑼mg開始。接著使患者接受維持 劑里方案亦即在第3及第4治療週期中以雙盲方式投與 600 mg之單次輸注直至基於初始分析選出較佳劑量。” 組D(AV〇nex):在第！治療週期每週肌肉内（丨❿）投與3〇 gg Av〇nex。其後，基於自願及開放標籤向患者提供 mg奥克利珠單抗劑量方案，該方案由在第2治療週期開始 時間隔14天兩次靜脈内輸注奥克利珠單抗_叫開始。用 單次600 mg輸注來治療第3及第4治療週期之患者直至基於 初始分析選出較佳劑量。 對於所有組而言’在將該較佳#丨量告一究者與偷理委 員會後’患者在其下-連續治療週期時以單次輸注形式接 受該較佳劑量（600 mg或1000 mg)。 首次投與研究藥物（靜脈内輪注（奥克利珠單抗或安慰劑） 或百次肌肉内注射Av(mex)界定治療期之開始（第K)。所 有患者亦在研究第1天接受靜脈内輸注甲潑尼龍1()〇叫且 隨後各自接受奥克利珠單抗或安慰劑輸注或根據奥克利珠 單抗輸注所需之時間點使患者接受Αν_χ(㈣卜 亦即週期1 =基線至第24週；週期2 = 第24週至第48週；週期3 =第48週至第72週；週期㈣ 至第96週。第1週期輸注訪問後（分別為第1天及第2週之訪 143333.doc •133· 201014605 問2及3)，訪問在第4週進行且其後每4週進行一次持續頭 24週。在第2週期輸注訪問後（分別為第24週及第26週之訪 問9及10)，在第36週進行訪問且其後每12週進行訪問直至 治療及隨訪期結束。應努力將訪問安排在所提供期限内。 評估潛在復發、新神經學症狀或安全性事件之額外未安排 訪問可在任何時間進行。 研究群體及選擇準則 根據修訂McDonald準則（2005)診斷為復發緩解型多發性 硬化症（RRMS)及滿足以下所提供之包涵/排除準則的年齡 為18至55歲（包涵端點）之男性及女性符合參加研究之條 件。 包涵準則： 患者必須滿足以下準則才符合參加研究之條件： 1.根據修訂McDonald準則（2005)診斷為RRMS ; 2_年齡18-55歲（包涵端點）； 3. 在篩選前最後3年内至少兩次有記錄證明之復發，其中 至少一次在篩選前一年内發生； 4. 基線擴展殘疾狀態量表（EDSS)為1.0分至6.0分； 5. 如下所定義負擔多發性硬化症（MS)疾病之跡象： a. 基於本地讀數，在篩選前一年進行之MRI掃描中至少 六個T2病變。若在上一年内未使用MRI掃描或MRI掃 描顯示少於六個T2病變，則符合條件患者之篩選MRI 掃描需要具有至少六個T2病變，或 b. 患者在篩選前一年内有2次有記錄證明之復發。 143333.doc •134- 201014605 排除準則： 排除滿足以下準則之患者參加研究： 1 ·篩選時具有繼發性或原發性進展型多發性硬化症（訪門 1) ; ° 2. EDSSS2.0之患者的疾病持續時間超過15年。 功效分析 ' 此研究之主要目標為研究在第12週、第16週、第2〇週及 ❹ 第24週，以靜脈内600 mg或1000 mg之兩個劑量方案給予 奥克利珠單抗（參見圖7 )與安慰劑相比對腦M R〗掃描所觀測 到之釓增強T1病變之總數的影響。 此研究之次要目標為評估如以下所反映之奥克利珠單抗 與安慰劑相比之功效及安全性：至第24週年度協定所定義 之復發率；至第24週保持無復發之患者的比例（協定定義 之復發）；第4週、第8週、第12週、第16週、第2〇週及第 24週腦MRI掃描所觀測到的釓增強τ丨病變之總數；第4 ❿ 週、第8週、第12週、第16週、第20週及第24遇腦MRI掃 描中新及/或持續釓增強τι病變之總數；自基線至第24週 腦MRI掃描之T2病變總體積的改變，以評估第24週在患 RRMS之患者中兩種奥克利珠單抗劑量方案與安慰劑及 Avonex相比之安全性及耐受性及投與奥克利珠單抗持續多 達96週之總體安全性’及研究奥克利珠單抗之藥物動力學 及其他藥效學研究終點。 在此實例中’復發係定義為發生可歸因於MS之新神經 症狀或惡化神經症狀且緊接著為至少3〇天之相對穩定或改 143333.doc 135- 201014605 善之神經狀態。症狀必須持續超過24小時且不應歸因於混 雜臨床因素（例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用之藥物 治療的不良反應）。新神經症狀或惡化神經症狀必須伴有 與EDSS增加至少半級或一種適當功能系統評分（FSS)增加2 分或兩種或兩種以上適當FSS增加i分一致之客觀神經惡 化。改變必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦 幹、感覺或視覺）。感覺改變、間歇性痙攣、疲勞、情緒 改變或膀胱或腸急迫或失禁不足以破立為復發。檢查研究 者確認符合以上準則之彼等復發。 此研究之探索目標包括（但不可限於）：自基線掃描至第 12週腦MRI掃描中腦體積之改變；接受奥克利珠單抗之患 者子群中第12週至第96週腦MRI掃描腦鱧積之改變；第4 週、第8週、第12週、第16週、第20週及第24週腦MRI掃 描所觀測之新T2病變及/或擴大T2病變之總數；至第24週 保持無新亂增強T1病變之患者的比例；在24週内產生第一 批新釓増強T1病變之時間；藉助於在患者子群中接受高達 4個治療週期之奥克利珠單抗後48週釓增強T1病變之總數 評估停止治療的效應；在各治療週期期間及第48週及第96 週保持無復發（臨床及協定定義之復發）之患者的比例；在 各治療週期期間及第48週及第96週需要甲潑尼龍全身性治 療之MS復發患者的比例；在各治療週期期間及第48週及 第96週年度臨床及協定定義之復發率；在24週内至第一次 協定定義之復發的時間；在96週内至第一次協定定義之復 發的時間；持續殘疾進展發作之時間，該持續殘疾進展定 143333.doc -136- 201014605 義為至第96週1.0分或高於1.0分之持續EDSS惡化持續12 週；持續殘疾進展發作之時間，該持續殘疾進展定義為至 第96週1.0分或高於1.0分之EDSS持續惡化持續24週；研究 奥克利珠單抗與Avonex相比對主要及次要研究終點之作 用；研究與RRMS易感性相關之基因多態變異體及奥克利 ’ 珠單抗活性及RRMS患者對奥克利珠單抗之治療反應性的 ' 相關性；研究與RRMS易感性相關之循環生物標誌及奥克 利珠單抗活性及RRMS患者對奥克利珠單抗治療之治療反 應性之間的關係；自基線至第24週及第48週之修正疲勞強 度量表（MFIS)之改變；自基線至第24週及第48週之運動及 認知功能之疲勞量表（FSMC)之改變；將基線與第24週及 第48週相比，自「重度」疲勞轉為「中度」疲勞及自「中 等」疲勞轉為「輕度」疲勞之患者比例的改變；自基線至 第24週及第48週之流行病研究中心-憂鬱症量表（CES-D)的 改變；及將基線與第24週及第48週相比，CES-D自較多抑 _ 鬱症症狀之狀態轉為較少抑鬱症症狀之狀態的患者比例之 改變。
腦MRI MRI為適用於監測MS中中樞神經系統（CNS)病變之工 • 具。僅獲得一些患者在篩選時之腦MRI掃描（參見次要終 點）及所有患者在基線時及在基線與第24週之間以四週時 間間隔之腦MRI掃描。此外，在患者子群中（組A及組B)， 在第96週（訪問16)及之後48週（亦即第144週）進行腦MRI掃 描。 143333.doc -137- 201014605 MRI包括在各時間點獲得以下掃描：T2加權MRI掃描、 T1加權MRI掃描（無釓增強）及T1加權MRI掃描（具有釓增 強）。 殘疾評估 由獨立檢查研究者在篩選時及在整個研究中每12週評估 所有患者之由EDSS所量測的殘疾進展直至觀測期（24週後 評估殘疾進展之時）。 殘疾進展係定義為當基線評分為5.0或低於5.0時，不可 歸因於其他病因（例如發熱、同時併發疾病或伴隨使用之 藥物治療）之自基線EDSS評分增加21.0分及當基線評分為 5.5或高於5.5時20.5。當在初始記錄進展後至少12週以定 期安排訪問確認EDSS增加時，認為疾病進展為持續的。 持續殘疾進展之替代性定義要求在初始記錄進展後至少24 週確認EDSS增加。 EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統（錐體、 小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力， 加「其他」）之七種EDSS分級且評分（總稱為為功能系統評 分或FSS)。各FSS評分為0至5或6範圍内之依序臨床分級量 表。接著與關於行走及輔具使用之觀測結果及資訊聯合使 用此等分級來確定EDSS評分。EDSS為0.5分一級範圍為 0(正常）至10(死亡）之殘疾量表。 實例2 :原發性進展型多發性硬化症（PPMS)中利妥昔單抗 之第U/U1期研究 進行隨機化雙盲平行組安慰劑對照多中心第II/III期研究 143333.doc -138- 201014605 (U2786g)來評估利妥昔單抗在如McDonald等人（Ann Neurol 50:121-7(2001))所定義之患原發性進展型多發性硬 化症（PPMS)之成人中的安全性及功效。
使個體以2:1比率隨機化以接受利妥昔單抗或安慰劑。 將可購自Genentech之利妥昔單抗調配為於9.0 mg/ml氣化 納、0.7 mg/ml聚山梨醇醋80、7.35 mg/ml二水合擦檬酸納 及無菌注射用水（pH 6.5)中之無菌產物以供靜脈内投藥。 研究藥物之各時程由兩次靜脈内輸注（間隔14天）1000 mg 利妥昔單抗或安慰劑組成。個體在第1天及第15天接受第 一治療時程且在第24週、第48週及第72週接受額外時程。 個體在開始各次輸注前30分鐘至60分鐘口服接受乙醯胺苯 紛（acetaminophen)( 1 g)及苯海拉明 HCl(diphenhydramine HC1)(50 mg)或等效物。在輸注前不投與糖皮質激素。在 96週之試驗持續時間中，在定期安排訪問中查看個體進行 物理檢驗、神經學及MRI評估來收集不良反應及生命徵象 且完成常規血液學、血清化學及尿分析實驗室測試。 意向治療（ITT)個體之基線人口統計學呈現於表3中。 表3 :人口統計學及基線特徵：意向治療個體。 特徵 安慰劑 (η= 147) 利妥昔單抗 (η = 292) 所有個體 (η = 439) 年齡(歲） η 147 292 439 平均值(SD) 49.6 (8.69) 50.1 (9.02) 49.9 (8.90) 中值 51.0 51.0 51.0 最小值至最大值 20-66 18-66 18-66 18 - <40 20 (13.6%) 40 (13.7%) 60(13.7%) 40 - <55 80 (54.4%) 145 (49.7%) 225 (51.3%) >55 47 (32.0%) 107 (36.6%) 154(35.1%) 143333.doc -139- 201014605 兩個治療組中MS疾病持續時間類似。基線MRI結果概述 於表4中。安慰劑組與利妥昔單抗組中之基線MRI特徵類 似0 表4 :基線MRI結果：意向治療個體。 MRI端點 安慰劑 (N = 147) 利妥昔單抗 (N = 292) 所有個體 (N = 439) 釓增強病變總數 2 N 147 290 437 平均值(SD) 0.5(1.26) 0.7(2.96) 0.7(2.52) 中值 0.0 0.0 0.0 最小值至最大值 0-8 0-32 0-32 0 110 (74.8%) 220 (75.9%) 330 (75.5%) 1 23 (15.6%) 44(15.2%) 67(15.3%) 2 5 (3.4%) 10 (3.4%) 15 (3.4%) 3 5 (3.4%) 5(1.7%) 10 (2.3%) >4 4 (2.7%) 11 (3.8%) 15 (3.4%) 總釓增強病變體積 (mm3) N 147 290 437 平均值(SD) 27.56 (81.86) 49.50 (220.32) 42.12(185.82) 中值 0.00 0.00 0.00 最小值至最大值 0.00 - 556.40 0.00 - 2660.00 0.00 - 2660.00 T2病變體積(mm3) N 147 290 437 平均值(SD) 8850.86(11808.95) 9336.66 9173.25 (13113.98) (13744.94) 中值 5199.50 5240.50 5220.70 最小值至最大值 73.83 - 74534.0 174.00 - 155303.0 73.83 -155303.0 腦體積(CC) N 130 237 367 平均值(SD) 1210.91 (128.89) 1202.92 (120.23) 1205.75 (123.25) 中值 1209.5 1204.0 1207.0 最小值至最大值 642.0- 1522.0 712.60- 1508.0 642.0- 1522.0 MRI=磁共振成像 根據研究部位、由EDSS(S 4.0，> 4.0)定義之基線疾病 嚴重度對隨機化進行分級。基線EDSS概述於表5中。由於 動態隨機化，因此各治療組中之個體百分比之所有分級因 素位準類似。 143333.doc -140- 201014605 表5 :基線分級因素，疾病嚴重度：意向治療個體 分級因素 安慰劑 (η =147) 利妥昔單抗 (η = 292) 所有個體 (η =439) EDSS N 147 292 439 2 6(4.1%) 8 (2.7%) 14 (3.2%) 2.5 5 (3.4%) 11 (3.8%) 16 (3.6%) 3 11 (7.5%) 22 (7.5%) 33 (7.5%) 3.5 21 (14.3%) 36 (12.3%) 57 (13.0%) 4 25 (17.0%) 47 (16.1%) 72 (16.4%) 4.5 8 (5.4%) 19(6.5%) 27 (6.2%) 5 6(4.1%) 10 (3.4%) 16 (3.6%) 5.5 10(6.8%) 10(3.4%) 20 (4.6%) 6 28 (19.0%) 81 (27.7%) 109 (24.8%) 6.5 27(18.4%) 48 (16.4%) 75 (17.1%) 平均值(SD) 4.73 (1.395) 4.84(1.369) 4.80 (1.377) 中值 4.50 5.00 5.00 最小值至最大值 2.0 - 6.5 2.0 - 6.5 2.0 - 6.5 EDSS=擴展殘疾狀態量表
此外，兩個治療組之其他基線疾病嚴重度指標類似： EDSS、Kurtzke功能系統評分、多發性硬化症功能綜合量 表（MSFCS)評分及MSFCS組份（定時25步行走、九孔圓柱 測驗及PASAT-3)。 功效結果 此試驗之初始功效分析在利妥昔單抗與安慰劑之間比較 在96週治療期期間確診之疾病進展的時間。疾病進展係定 義為若基線EDSS在2.0分與5.5分之間（包涵端點），則自基 線 EDSS 增加 21.0 分（Kurtzke J. Neurology 33(11):1444-52 (1983))，或若基線EDSS>5.5分則增加之0.5分，其改變不可 歸因於其他病因（例如發熱、同時發生之疾病、MS復發或 惡化或伴隨使用之藥物治療）。 分級分析展示利妥昔單抗與安慰劑相比不顯著延緩確診 143333.doc -141 - 201014605 之疾病進展（P=0.1442,分級對數等級卜據估算安慰劑組 及利妥昔單抗組之96週内患者進展之百分比分別為38 5% 及30.2%(表6)。確診之疾病進展之時間的卡本-麥爾曲線 (Kaplan-Meierplot)展示於圖 8 中。 表0:在治療期期間確診之疾病進展之時間：意向治療個 體。 文慰劑 (η = 147^ 利妥昔單抗 (η = 292) 具有CDP之個艘數(％) 經檢查之個體數(％) 分級Ρ值 53 (36J%T~ 83 (28.4%) 209 (71.6%) 94(63.9%) 對數等級檢驗 分級危險比率(相對於安慰劑） 0.1442 0.773 95% CI 具有CDP之個體比例 (0.546- 1.093) 第24週 6.9% 9 1% 第48週 19.3% 20 2% 第72週 30.3% 28 0% 第96週 38.5% 30.2% 次要功效終點包括自基線至第96週之總η病變體積的改 變及自基線至第96週之腦體積的改變。在測試此兩個次要 終點中使用Hochberg-Bonferroni程序來控制第工型誤差率。 兩個治療組中自基線至第96週之腦體積改變無顯著不同 (ρ=0·6237) 〇 參見表 7。 表7:自基線至第96週之腦體積的改變 安慰劑 (N = 130) 利妥昔單抗 (N = 237) P值 基線艘積(cm3) 平均值(SD) 1211(129) 1203 (120) 中值 1209.5 1204.0 自基線至第96週之體積改變(LOCF) 平均值(SD) -9.9 (37.0) -10.8 (40.3) 0.62 中值 -14.0 -13.1 143333.doc -142· 201014605 觀測到兩種治療之間自基線至第96週T2病變體積的改變 具有顯著差異（ρ=〇.〇〇〇8；^安慰劑組與利妥昔單抗組中Τ2 病變體積之中值增加分別為809.50 mm3及301.95 mm3。（參 見表8及圖9)。 表8 :腦MRI掃描中總T2病變體積自基線至第％週之改 變：意向治療個體
安慰劑 (η = 147) 利妥昔單抗 in =5 P值 腦MRI掃描之總T2病變體積(mm3〕 基線 N 147 290 平均值(SD) 8850.86 (11808.95) 9336.66 (13744.94) 中值 5199.50 5240.50 範圍 73.83 -74534.00 174.00- 155303.0 SE 973.99 807.13 95% CI 第96週 (6925.93 -10775.79) (7748.06 -10925.26) N 147 290 平均值(SD) 11055.55 (14536.29) 10843.80 (15827.44) 中值 5526.60 5569.35 範圍 94.92 - 86232.00 179.30- 170464.0 SE 1198.93 929.42 95% CI (8686.04 - 13425.05) (9014.51 - 12673.09) 自基線至第96週之改變 N 147 290 平均值(SD) 2204.69 (4306.24) 1507.14(3739.45) 中值 809.50 301.95 範圍 -8557.00 - 26367.00 -4031.00 - 24076.00 SE 355.17 219.59 95% CI (1502.74 - 2906.63) (1074.94- 1939.33) 以LS平均值表示之治療差異(與 -718.24 安慰劑相比） 以LS平均值表示之差異之95% (-1504.48,68.00) CI ANOVA t檢驗(分級） 0.0733 Friedman等級ANOVA檢驗 0.0008 自基線至第96週之百分比改變 0.0006 ANOVA t檢驗(分級） 自基線至第96週之百分比改變 0.0005 之Friedman等級ANOVA檢驗 143333.doc -143- 201014605 分析所有研究終點（除T2病變體積改變、擴大之仞病變 及新Τ2病變以外)展示安慰劑組與利妥昔單抗組之間的差 異在統計上不顯著。與安慰劑相比，利妥昔單抗組在第48 週及第122週經歷顯著較小之Τ2病變體積增加（分別為 ㈣.005】及0.0222);在第48週及第％週具有較少新τ2病變 (Ρ<〇.〇〇υ;在第48週及第96週具有較少擴大之Τ2病變數 (分別為 ρ=0.008及 0.072)。 子群分析 主要終點之子群分析包括根據以下人口統計學及基線疾 病特徵，確診之疾病進展的時間：部位、年齡、性別、種 族、先前MS療法、基線EDSS、自Ms症狀發作及基線釓 (Gd)病變起之持續時間及基線多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)(患者進展快速程度之指標，參見“幼财帥等人 iVewro/ogj； 64; 1144-1151 (2005))。 子群分析結果表日請較年輕、進展較快速（較高顧8)或 具有基線Gd病變之患者的潛在治療作用（圖丨〇)。此外治 療作用之年齡、基線Gd病變及MSSS之相加預測作用已使 用多變量分析法驗證（圖U及圖12)。亦參見表9。基於此等 MSSS之結果，使用修正之包涵/排除準則選擇排除疾病持 續時間長且進展緩慢之較年老患者的研究群體子群（年舻 切’ 3$基線EDSSS6.5 ’若患者基線EDSS<5，貝,】排除疾病 持續時間>10之患者，或若患者基線£088^5，則排除疾病 持續時間>15患者）。亦展示此子群之顯著治療作用（分級 對數等級檢驗P值=0.01 ;圖13)。 143333.doc •144· 201014605 表9:確診之疾病進展之時間的子群結果概述 子群 總計 N 第96週之 CDP 安慰劑 第96週之 CDP 利妥昔單抗 HR HR 95% Cl P值 (對數 等級） 所有患者 (初始分析） 439 38.5% 30.2% n/a n/a 0.1442 年齡<51 215 44.9% 27.5% 0.52 (0.32,0.86) 0.0101 Gd+ 107 52.8% 27.4% 0.41 (0.21, 0.80) 0.0069 Gd+且年齡<51 72 51.6% 24.6% 0.33 (0.14, 0.79) 0.0088 Gd+且年齡< 55 93 49.5% 29.1% 0.40 (0.19, 0.84) 0.0126 MSSS >= 5 且年 齡<55 251 46.8% 29.6% 0.59 (0.38, 0.91) •0163 子群分析表明具有活動性疾病跡象之PPMS患者展示如 藉由確診之疾病進展之時間以及EDSS、MSFC自基線的改 變及腦MRI中的T2病變所量測治療相關益處之顯著臨床徵 兆（資料未展示）。在安慰劑組中表現疾病進展預後且在利 妥昔單抗組中可能預測治療反應之獨立因素包括以下：較 年輕，尤其年齡小於5 1歲；腦MRI中存在基線對比度增強 病變；及較高MS嚴重度評分。此等觀測結果用以產生假 設，支持B細胞消耗對適當選擇之進展型發作MS患者之確 診之疾病進展的潛在治療益處。 儘管此研究未能在總體PPMS群體中展現主要功效，但 子群功效分析指示具有基線對比度增強之腦MRI病變的患 者可能對利妥昔單抗治療有反應，其中治療組與安慰劑組 相比具有57%之確診之疾病進展危險（1-HR)相對降低，其 主要但並非完全由第96週中52.8%之極高安慰劑確診之疾 病進展（CDP)率所促成（圖10)。年齡小於51歲之PPMS患者 亦可受益，具有43%之確診之疾病進展危險相對降低及 44.9%之安慰劑進展率。儘管與存在對比度增強病變及年 143333.doc -145· 201014605 齡<5 1歲相關，但對展現兩種特徵之72名患者的事後分析 揭示更顯著之明顯作用，其中確診之疾病進展危險相對降 低77% (表9)。在此子群中，51.6%之安慰劑進展率不高於 具有基線增強MRI病變之所有患者的比率，而利妥昔單抗 組之較低進展比率（24.6%)說明治療可能較大程度降低危 險。此等OLYMPUS安慰劑資料確認對PPMS患者臨床及 MRI異質性之天然歷史觀測（Sastre-Garriga等人iVewro/ogy 65(4):633-5 (2005)，Ingle 等人126(第 11 部分）:2528-36 (2003)，Tremlett等人Mw/ί 14(3):314-24 (2008)，
Tremlett 等人 Neurology 65(12):1919-23 (2005)，
Kremenchutzky 等人Bra/” 129(第 3 部分）：584-94. (2006))。 此外’ MAGNIMS臨床及MRI定群研究描述在疾病病程早 期具有更多發炎性MRI活性且殘疾進展預後較差之PPMS 患者子集（Ingle 等人 Neurol Neurosurg Psychiatry 76(9):1255-8 (2005)) ; OLYMPUS安慰劑資料似乎首次確 認此等觀測結果。 實例3 :進展型多發性硬化症中奥克利珠單抗之第1Π期研究 進行第111期隨機化雙盲平行組多中心研究來評估600 mg 奥克利珠單抗與安慰劑相比在患進展型Ms之成人中的安 全性及功效。 總共630名進展型Ms患者（3 15名為進展型發作的Ms且 315名為復發型發作的MS)參加且分配（2:1隨機）至按多發 性硬化症之部位及類型分級的奥克利珠單抗組或安慰劑 組。此研究由應用於所有患者之以下三個時期組成：篩選 143333.doc -146- 201014605 期、治療期及無治療隨訪期。在第一研究時程中，在第1 天及第15天投與藥物治療（3〇〇 111§奥克利珠單抗或安慰劑 輸注x2)。在後續治療時程中，每24週對患者給藥（單次輸 注600 mg奥克利珠單抗）直至最後參加之患者接受在第％ 週投與之其最後的治療時程。 在各研究藥物輸注前，患者接受使用鎮痛藥/退熱藥（諸 如乙醯胺笨酚/撲熱息痛（paracdamoDG公克））及靜脈内或 ❹ 口服抗組織胺（諸如苯海拉明50 mg)及100 mg靜脈内甲潑 尼龍或等效物治療以降低可能輸液反應之發生率。在不良 反應常用術語標準（CTCAE)3級或更高級（嚴重）輸液反應伴 有相關呼吸症狀（喘鳴、哮喘或支氣管痙攣）之患者中，可 指定使用支氣管擴張藥之額外治療。 在整個研究中獲得常規實驗室研究，其中在研究藥物治 療時程後進行其他測試。亦進行免疫組、企清人類抗人類 抗體（HAHA)及甲狀腺測試。收集所有患者之血清樣本用 ❹ 於藥物動力學分析且收集血液樣本用於B細胞計數測定。 監測B細胞數作為奥克利珠單抗之藥物動力學標諸、。 患者群體及選擇準則 此研究之目標群艘包括有或無疊加復發史之患進展型 MS的患者。符合此研究條件之患進展型ms的患者之特徵 為根據修訂McDonald準則（2005)之診斷及在不存在復發下 有記錄證明之不可逆神經功能損失持續6個月或更長時 期。使用在對進展型MS患者進行之先前臨床試驗中鐘別 為潛在危險因素之準則，選擇具有活動性疾病及較快速殘 143333.doc •147· 201014605 疾進展之較高危險之跡象的患者。此等因素包括較年輕、 腦脊錄液（CSF)中具有炎症跡象（募選殖帶或IgG指數升 高）、腦MRI中對比度增強病變、與非復發性相關進展疊加 之高復發活動性及較快速之殘疾累積史。 篩選符合以下包涵及排除準則之自願且符合條件參加研 究之所有患者。 包涵準則包括： 1. 根據修訂McDonald準則（2005)診斷出多發性硬化症； 2. 進展型MS’其特徵為有記錄證明、不可歸因於臨床復 發、持續26個月之不可逆神經功能損失； 3. 年齡18-55歲（包涵端點）； 4. 篩選時EDSS為3.0分至6.5分。 5. 由於下肢結果，致使錐體系統或步態之功能系統㈣量 表評分22.0。 6·存在在師選期期間所獲得或在先前六個月記錄之試 中至乂種以下實驗室發現結果如（例如）1扣指數升 高及/或由等電聚集所偵測之IgG寡選殖帶所指示。 7.存在至少一種以下準則·· •年齡<50 •篩選時或篩選6個月内賴RI中具有他病變 •在過去2年内不可歸因於復發之EDSS增加至少1>5分 •過去兩年内兩次復發 排除準則包括： 1.篩選時具有復發緩解型多發性硬化症（訪問^ I43333.doc 201014605 2.自MS症狀發作起之疾病持續時間：對於在筛選時 EDS S>5.0之患者而&為超過15年，或對於在薛選時 EDSSS5.0之患者而言為超過10年。 功效分析 主要功效終點為確診之疾病進展的時間。疾病進展係定 義為若基線EDSS在2.0分與5.5分之間（包涵端點），則自基 線EDSS增加21.0分’或若基線EDSS>55*則增加$ 〇5 分，其改變不可歸因於其他病因（例如發熱、同時發生之 疾病、MS復發或惡化或伴隨使用之藥物治療）。 EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統（錐體、 小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力， 加「其他」）之七種EDSS分級且評分（總稱為功能系統評分 或FSS)。各FSS評分為〇至5或ό範圍内之依序臨床分級量 表。接著與關於行走及辅具使用之觀測結果及資訊聯合使 用此等分級來確定EDSS評分。EDSS為〇.5分一級範圍在〇 (正常）至10(死亡）内之殘疾量表。 支持主要功效終點之次要功效終點包括：在腦MRI掃描 中總T2病變體積自基線至第12〇週之改變；25步定時行走 自基線至第120週之改變；確診之疾病進展的時間，其中 確認在初始疾病進展後至少24週〇 168天）進行。 評估復發 在整個研究中之各次訪問時由治療研究者評估患者之復 發且必要時以不定時訪問來確認訪問之間所發生之復發。 為滿足協定定義之復發準則，將復發定義為發生可歸因於 143333.doc •149- 201014605 MS之新或惡化之神經症狀且緊接著為至少3〇天之相對穩 定或改善之神經狀態。症狀必須持續超過24小時且不應歸 因於混雜臨床因素（例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用 之藥物治療的不良反應）。新神經症狀或惡化神經症狀必 須伴有與EDSS增加至少半級或一種適當FSS增加2分或兩 種或兩種以上適當FSS增加1分一致之客觀神經惡化。改變 必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦幹、感覺或 視覺）。間歇性痙攣、性功能障礙、疲勞、情緒改變或膀 胱或腸急迫或失禁不足以確立為復發。 腦MR1成像 在此研究期間之多個時間點（包括基線）獲得腦及頸部脊 髓之磁共振成像。腦MRI包括在各時間點獲得以下掃描： T2加權MRI掃描及T1加權MRI掃描（無此增強）。 使用變異數分級分析比較奥克利珠單抗與安慰劑之間T2 病變總體積及定時25步行走自基線至第120週的改變。模 型包括初始分析中所記錄之兩個分級因素。 實例4:原發性進展型多發性硬化症中奥克利珠單抗之第 U1期研究 進行第III期隨機化雙盲平行組多中心研究來評估兩種奥 克利珠單抗劑量方案之一與安慰劑相比在患原發性進展型 MS之成人中的安全性及功效。 所研究之兩種奥克利珠單抗劑量方案如下：”奥克利珠 單抗1000 mg劑量方案：由第一治療週期兩次輸注1〇〇〇 接著在隨後治療週期單次輸注1〇〇〇 mg組成，及2)奥克利 143333.doc -150· 201014605 珠單抗600 mg劑量方案：由第一治療週期兩次輸注300 mg 接著在隨後治療週期單次輸注600 mg組成。 總共630個原發性進展型MS患者參加且分配（2:1隨機化） 至由多發性硬化症之部位及類型分級之奥克利珠單抗組或 安慰劑組中。此研究由應用於所有患者之以下三個時期組 成：篩選期、治療期及安全性隨訪期。在第一研究時程 中’在第1天及第15天投與藥物治療（奥克利珠單抗或安慰 劑輸注X2)。在後續治療時程中，每24週對患者給藥（單次 輸注奥克利珠單抗或安慰劑）直至最後參加之患者接受在 第96週投與之其最後的治療時程。 在各研究藥物輸注前，患者接受使用鎮痛藥/退熱藥（諸 如乙醯胺苯酚/撲熱息痛（1公克））及靜脈内或口服抗組織胺 (諸如苯海拉明50 mg)及100 mg靜脈内甲潑尼龍或等效物 治療以降低可能輸液反應之發生率。在不良反應常用術語 標準（CTCAE)3級或更高級（嚴重）輸液反應伴有相關呼吸症 狀（喘鳴、哮喘或支氣管痙攣）之患者中，可指定使用支氣 管擴張藥之額外治療。 在整個研究中獲得常規實驗室研究，其中在研究藥物治 療時程後進行其他測試。亦進行免疫組、血清人類抗人^ 抗體（HAHA)及曱狀腺測試。收集所有患者之血清樣本用 於藥物動力學分析且收集血液樣本用於8細胞計數測定。 監測B細胞數作為奥克利珠單抗之藥物動力學標誌。 患者群體及選擇準則 此研究之目標群體包括患原發性進展型Ms之患者。符 143333.doc -151 - 201014605 合此研究條件之患原發性進展型MS之患者特徵為根據修 訂McDonald準則（2005)之診斷。使用在對進展型ms患者 進行之先前臨床試驗中鑑別為潛在危險因素之準則，選擇 具有活動性疾病及較快速殘疾進展之較高危險之跡象的患 者。此等因素包括較年輕、腦脊髓液（CSF)中具有炎症跡 象（寡選殖帶或IgG指數升高）及更快速之殘疾累積史。 篩選符合以下包涵及排除準則之自願且符合條件參加研 究之所有患者： 包涵準則包括： 1·根據修訂McDonald準則（2005)診斷出原發性進展型多發 性硬化症； 2. 年齡18-55歲（包涵端點）； 3. 篩選時EDSS為3.0分至6.5分； 4·由於下肢結果’致使錐體系統之功能系統（FS)量表評分 >2.0 ； 5. 篩選時CSF試樣中具有至少一種以下實驗室發現結果之 有記錄證明史或CSF試樣中存在至少一種以下實驗室發現 結果’如由IgG指數升高及/或由等電聚焦所偵測之IgG寡 選殖帶所指示； 6. 自MS症狀發作起之疾病持續時間··對於在篩選時 EDSS>5.0之患者而言為少於15年，或對於在篩選時 EDSSS5.0之患者而言為少於1〇年。 排除準則包括： 1.篩選時具有復發緩解型、繼發性進展型或進展復發型多 143333.doc -152- 201014605 發性硬化症的歷史（訪問丨）。 功效分析 主要功效終點為確診之疾病進展的時間❶疾病進展係定 義為若基線EDSS在2.0分與5·5分之間（包涵端點），則自基 線EDSS增加>1.0分’或若基線EDSS>5 5分則增加a $分， 其改變不可歸因於其他病因（例如發熱、同時發生之疾 病、MS復發或惡化或伴隨使用之藥物治療）。 EDSS係基於標準神經學檢查；對代表功能系統（雜體、 小腦、腦幹、感覺、腸及膀胱、視覺及大腦及/或智力， 加「其他」）之七種EDSS分級且評分（總稱為功能系統評分 或FSS)。各FSS評分為〇至5或6範圍内之順序臨床分級量 表。接著與關於行走及輔具使用之觀測結果及資訊聯合使 用此等分級來破定EDSS評分。则8為〇5分一級範圍在〇 (正常）至10(死亡）内之殘疾量表。 支持主要功效終點之次要功效終點包括：在腦MRI掃描 中總ΤΓ2病變體積自基線至第120週之改變；25步定時行走 自基線至第12〇週之改變；確診之疾病進展的時間，其中 確認在初始疾病進展後至少24週〇 168天）進行。 評估復發 在整個研究中之各次訪問時由治療研究者評估患者之復 發且必要時以不定時訪問來確認訪問之間所發生之復發。 為滿足協定確認之復發準則，將復發定義為發生可歸因於 MS之新或惡化之神經症狀且緊接著為至少％天之相對穩 定或改善之神經狀態。纟狀必須持續超過24小時且不應歸 143333.doc 153- 201014605 因於混雜臨床因素（例如發熱、感染、損傷、對伴隨使用 之藥物治療的不良反應）。新神經症狀或惡化神經症狀必 須伴有與EDSS增加至少半級或一種適當FSS增加2分或兩 種或兩種以上適當FSS增加1分一致之客觀神經惡化。改變 必須影響所選FSS(亦即錐體、步態、小腦、腦幹、感覺或 視覺）。間歇性痙攣、性功能障礙、疲勞、情緒改變或膀 胱或腸急迫或失禁不足以確立為復發。 腦MRI成像 在此研究期間之多個時間點（包括基線）獲得腦及頸部脊 髓之磁共振成像。腦MRI包括在各時間點獲得以下掃描： T2加權MRI掃描及T1加權MRI掃描（無釓增強）。 使用變異數分級分析比較奥克利珠單抗與安慰劑之間T2 病變總體積及定時25步行走自基線至第120週的改變。模 型包括初始分析中所記錄之兩個分級因素。 【圖式簡單說明】 圖1A為比較各鼠類2H7(SEQ ID ΝΟ·_1)、人類化2H7_vl6 變異體（SEQ ID NO:2)及人類κ輕鏈子群I(SEQ ID NO:3)之 輕鏈可變域（VL)之胺基酸序列的序列比對。2H7及 hu2H7_vl6 之 VL 的 CDR 如下：CDR1(SEQ ID NO:4)、 CDR2(SEQ ID NO:5)及 CDR3(SEQ ID NO:6);
圖IB為比較各鼠類2H7(SEQ ID NO:7)、人類化2H7.vl6 變異體（SEQ ID NO:8)及重鏈子群III之人類共同序列（SEQ ID NO:9)之重鏈可變域（VH)之胺基酸序列的序列比對。 2H7 及 hu2H7.vl6 之 VH 的 CDR 如下：CDR1(SEQ ID 143333.doc -154- 201014605 NO:10)、CDR2(SEQ ID ΝΟ:11)及 CDR3(SEQ ID NO:12); 在圖1A及圖IB中，如所示，各鏈之CDR1、CDR2及 CDR3框在括號内，兩側為構架區FR1-FR4。2H7係指鼠類 2H7抗體。兩列序列間之星號表明兩個序列之間不同的位 置。殘基編號係根據Kabat等人 /«iereji，第 5版公共衛生署（Public Health Service)，國立 健康研究院（National Institutes of Health)，Bethesda，Md. (1991)，其中插入展示為a、b、c、d及e; 圖2展示成熟2H7.V16輕鏈之胺基酸序列（SEQ ID NO:13)； 圖3展示成熟2H7.V16重鏈之胺基酸序列（SEQ ID NO:14)； 圖4展示成熟2H7.V31重鏈之胺基酸序列（SEQ ID NO:15)。2H7.V31 之L鏈與2H7.V16之L鏈相同； 圖5展示成熟2H7.V16與2H7.V511輕鏈之比對（分別為SEQ ID NO 13及16)，使用Kabat可變域殘基編號及Eu恆定域殘 基編號； 圖6展示成熟2Η7·ν 16與2Η7·ν5 11重鏈之比對（分別為SEQ ID NO 14及17)，使用Kabat可變域殘基編號及Eu恆定域殘 基編號； 圖7展示使用奥克利珠單抗治療復發緩解型多發性硬化 症之研究設計的概述； 圖8展示安慰劑組及利妥昔單抗組中個體之確診之疾病 進展之時間的卡本-麥爾（Kaplan Meier)曲線； 143333.doc -155- 201014605 中值改變。Y軸 體之基線特徵及 圖9展示T2病變體積自基線至第96週之 展示Τ2病變體積mm3 ; 圖10展示安慰劑組及利妥昔單抗組中個 危險比卑之概述； 圖11展示對安慰劑組及利妥昔單抗組中治療作 π <平齡 及基線釓（Gd)病變之相加預測作用的多變量分析。圖 展示年齡小於51歲且基線Gd病變等於〇之多變量分析 11B展示年齡>51歲且基線Gd病變等於〇之多變量分析。圖 11C展示年齡小於51歲且基線Gd病變>1之多變量分析 圖 11D展示年齡之51歲且基線Gd病變21之多變量分析. 圖12展示對安慰劑組及利妥昔單抗組中治療作用之年齡 及多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)之相加預測作用的多變 量分析。圖12A展示年齡$5 5歲且MSSS小於5之多變量八 析。圖12B展示年齡大於55歲且MSSS小於5之多變量分 析。圖12C展示年齡S55歲且MSSS25之多變量分析。圖 12D展示年齡大於55歲且MSSS25之多變量分析；及 圖13展示安慰劑組及利妥昔單抗組中具有以下特徵之個 體之確診之疾病進展之時間的卡本_麥爾曲線：年齡25 ; 3S基線EDSSS6.5 ;排除疾病持續時間超過1〇年且基線 EDSS小於5或疾病持續時間超過15年且基線EDssy之患 者0 143333.doc •156· 201014605 序列表 <110>美商建南德克公司 <120>治療進展型多發性硬化症之方法 <140> 098131063 <141> 2009-09-15 <150〉61/097,464 <151〉2008-09-16 <160> 25 ❷ <210> 1 <211> 107 <212> PRT U13>小家鼠 <400> 1
Gin lie Val Leu Ser Gin Ser Pro Ala He Leu Ser Ala Ser Pro 15 10 15
Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cye Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser 20 25 30
Tyr Met Hie Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lye Pro 35 40 45
Trp lie Tyr Ala Pro Ser Aen Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg 50 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr He Ser 65 70 75
Arg Val Glu Ala Qlu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr eye ain Qln Trp 80 85 90
Ser Phe Asn Pro Pro Tbr Phe Gly Ala Gly Thr Lye Leu Glu Leu 95 100 105
Lys Arg <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <2W>序列係經合成 <400> 2
Asp lie Gin Met Thr Qln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser V«l1 15 10 15 143333-序列表.doc 201014605
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cye Arg Ala Ser Ser Sex Val Ser 20 25 30 Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin I#ys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro 35 40 45 Leu lie Tyr Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 50 Phe Ser Gly Ser Oly BS Ser Leu βΐη Pro Qlueo Ser Pbe Aen Pro Pro 95 Lya Arg
Ser Gly Thr Asp Phe Ala 55 60
Asp Phe 70 Kir Tyr 85
Leu lie Ser 75
Cye Gin Gin 90 ^he Gly Gin Gly 100
Lye Val GXu He 105 <210> 3 <211> 108 <212^ PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 3
Asp lie Gin Met Thr Oln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala &er Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cye Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser 20 25 30
Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lye Ala Pro Lye 35 40 45
Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Qlu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60
Arg Phe Ber Oly Ser Gly Set: Gly Thr ti&g Phe Thr Leu Thr lie €S 70 75
Ser Ser Leu Gin Pro Glu Aep Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin β0 Θ5 90
Tyr Aari Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gin Oly Thr Lya Val Glu 95 100 X05 lie Lye Arg <210> 4 <211> 10 143333-序列表.doc -2·
201014605 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 4
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyi: Hie 15 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 5
Ala Pro Ser Asn Leu Ala 8er 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213>小家鼠 <40O> 6
Gin Gin Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr τ 5 <210> 7 <211> 122 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 7
Gin Ala Tyr lieu Gin Gin. Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 15 10
Ala Ser Val Lye Met Ser Cys hyn Ala Ser Gly Tyr Tlir 20 25
Ser Tyr Λβη Met His Trp Va]. Lye 61n Thr Pro Arg 61n 35 40
Glu Trp lie Gly Ala lie Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr 50 55
Asn Gin Lys Phe liys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp 65 70
Ser Ser Hhr Ala Tyr Met Gin i«eu Ser Ser Leu Thr ser 80 85
Ser Ala Val Tyr Phe Cy'e Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser 95 100
Tyr Trp Tyr Phe Aap Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val 110 115
Ser Ser 143333-序列表.doc
Pro Gly 15 Phe Thr 30 Gly Leu 45 Ser Tyr 60 Lye Ser 75 Glu Aep 90 Aen Ser 105 Thr Val 120 201014605 <210> 8 <211> 122 <212> PRT <213:>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 8 GXu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly leu Val Qln Pro Gly 1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser C2ys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30
Ser Tyr Abu Met Hi曰 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45
Glu Trp Val Gly Ala lie Tyr Pro Gly Asn Oly Asp Thr Ser Tyr 50 55 60
Aan Gin Lye Phe Lys Qly Arg Phe Thr lie Ser Val Asp Lys Ser 65 7D 75
Lye Aen Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn 8er Leu Arg Ala Glu Asp 80 β5 90
Thr Ala Val Tyr Tyx Cye Ala Arg Val val Tyr Tyr Ser Asn Ser 95 100 105
Tyr Ttp Tyr Phe Aap Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser <210> 9 <211> 119 <212> PAT <213>人工序列 <22D> <223>序列係經合成 <400> 9
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Oly Qly Leu Val Gin Pro Gly 1 B 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu fier Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30
Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Qly Lye Gly Leu 35 40 45
Glu Trp Val Ala Val He S^r Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 143333-序列表.doc -4- 201014605
Ala Λθρ Ser Val Xiys .Gly Arg Phe Thr lie Se;r AT3 ΑβΡ Asn Ser 65 70 75
Lys Asn Thr l#eu Thr Leu Gin Met Aen Ser lieu Arg Ala Glu Asp 80 85 90
Thr Ala Val Tyx Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val 6Jy Tyr Ser Leu 95 100 105
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213>小家鼠 <400> 10
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met Hie 15 10 <210> II <211> 17 <212> PRT <213>小家鼠 <4D0> 11
Ala He Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Aro Gin Lys Phe IS X0 15
Lys Gly <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213:>小家鼠 <400> 12
Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 13 <211> 213 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <22S>序列係經合成 <400> 13 Αβρ He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ber Ser Val Ser 20 25 30 143333-序列表.doc 201014605
Tyr Met Hia Trp Tyr Gin Qlrx Lye Pro Gly Lye Ala Pro Lys Pro 35 40 45
Leu He Tyr Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro fier Arg 50 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Oly Thr Άβρ Phe Thr Leu Thr He Ser 65 70 75
Ser Leu Gin Pro 6lu Asp Phe Ala Thr Tyt Tyr Cys Gin Gin Trp 80 Θ5 90
Ser Phe Asn Pro Pro Thr phe Gly 6ln Gly Thr Lye Val Glu lie 95 100 105
Lye Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser 110 115 120
Aep Glu.Oln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val V&l Cya Leu Leu 125 130 135
Aan Άδη Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lya Val Gin Trp Lye Val Asp
140 U5 ISO
Asn Ala lieu Gin Ser Gly Άβη Ser Qln Glu Ser VaX Thr Glu Gin 155 160 165
Aep Ser Lya Λβρ Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu 170 175 180 fier Lye Ala Asp Tyr Glu liys His Lye Val Tyr Ala Cys Glu Val 185 190 195
Thr His Gin Cly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lye Ser Phe Asn Arg 200 205 210
Gly Glu Cys <210> 14 <211> 452 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 14
Qlu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly l*eu Val Ola Pro Gly 1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser CyB Ala Ala Ser Oly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30
Ser Tyr Asn Met Hie Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 3S 40 45 -6 ·
143333-序列表.doc 201014605
Glu Trp Val Gly Ala lie Tyr Pro Qly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr 50 55 60
Asn Gin Lys Phe Lye Gly Arg Phe Thr lie Ser Val Asp Lye Ser 65 70 75
Lys Asn Thr Leu Tyt Leu ΰΐη Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90
Thr Ala Val .Tyr Tyr Cye Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Aen Ser 95 100 105
Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser Ala Ser Thr Lye Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 125 130 135
Ser Ser Lye 8er Thr Ser Gly Qly Thr Ala Ala Leu Gly Cye Leu 140 145 150
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Α3Π Ser 155 160 165
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Hie Tbr Phe Pro Ala Val Leu Gin 170 175 180
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu S&v Ser Val Val Thr Val Pro Ser. 185 ΙθΟ 195
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn H文β tys 200 205 210
Pro Ser Aen Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Ly曰 Ser Cys 21E 220 225
Aep Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Pbe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys K&p Vbx 245 250 255
Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cya Val Val Val Aep 260 265 270
Val Ser Hie Glu Asp Pro Glu Val Lye Phe Asn Trp Tyr Val Aep 275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Mir Lys Pro Arg Glu Glu Gin 290 295 300
Tyr A抑 ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 寸al Leu Thr Val Leu His 305 310 315
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tjrr Lys Cye Lys Val Ser Asn. 320 325 330 143333·序列表.doc 201014605 hya Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser I*ys Ala Lye 335 340 345
Gly Gin Pro Arg Qlu Pro Oln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 350 355 3β0
Glu Glu Met Ίΐιτ Lys Άβη Gin val Ser Leu Thr Cye Leu Val Xiys 365 370 37S
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Qlu Trp Glu Ser Άβη Gly 380 385 390
Gin Pro Qlu λβη Αβη Tyr Lye Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 395 400 405
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lye Leu Thr Val Asp Lys Ser 410 415' 420
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cye Ser Val Met Hie Glu 42S 430 435
G
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin hys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 440 445 450
Gly Lys <210> 15 <211> 452 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 15
Glu Val Oln Leu Val Glu Ser Qly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 15 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30
Ser Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Qly Lys Gly l^eu 35 40 45 alu Trp Val Qly Ala He Tyr Pro Gly Asn Oly Asp Thr Ser Tyr 50 55 €0
Asn Gin Lys Phe Lya Gly Arg Phe Thr 2le Ser Val Asp Lys Ser 65 70 75
Lys Asn Thr Ldu Tyr Leu Gin Met Aen fier Leu Arg Ala Glu Asp Θ0 85 90
Thr Ala Val
Tyr Cye Ala Arg Val Val Tyr Tyr ser Aen 95 100
Ser 105 143333-序列表,doc 201014605
Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ola Oly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser Ala Ser Tbr Lye Sly Pro Ser Val Pbe Pro Leu Ala ^ro 125 130 135
Ser Ser Lye Ser Thr Ser Gly Oly Thr Ala Ala Leu Oly Cys Leu 140 145 150
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Olu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 155 160 165
Gly Ala Leu T^xr Ser Gly Val His Tbr Phe Pro Ala Val Leu Gin 270 175 1Θ0
Ser Ser Gly Ijeu Tyr Sex Ijeu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 185 190 195
Ser Ser Leu Gly Thr Qln Tbr Tyr lie Cya Aen Val Asn His Lye 200 205. 210
Pfo Ser Aen Thr Lye Val Asp Lys liys Val Glu Pro Lys Ser Cy& 215 220 225
Asp Lys Thr His Thr Cye Pro Pro Cye Pro Ala Pro Glu Leu Leu 230 235 240
Oly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lye Pco Lyd Aep Tbr 245 250 25&
Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Tbr Cye Val Val Val Aep 260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 260 2βΒ
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lye Pro Arg Glu Glu Gin 290 295 300
Tyr Aen Ala Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr VaX Leu His 310 315
Lys Cys Lys Val Ser Asn 325 330 305
Gin Λβρ Txp Leu Asn Gly Lys Glu 320
Lye Ala Leu Gly Gin Pro
Ma Pro He Ala Ala Thr He Sex Ly9 Ala Lye 335 340 345
Glu Pro Gin Val 350
Thr l«eu Pro Pro Ser Arg 355 360
Glu Glu Met Thr Lys han Gin Val Ser Leu Thr Cy^s Leu Val Lye 365 370 375
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Aen Gly 380 385 390 9- 143333·序列表.doc 201014605
Oln Pro Glu Aen Aen Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu -Άβρ Ger 395 400 405
Asp Gly 8er Phet Phe Leu Tyr Ser Lya Leu Thr Val Asp Lys Ser 410 415 420
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe, Ser bye Ser Val Met Hie Glu 42S 430 435
Ala Leu Hie Aen Hie Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser lieu Ser Pro 440 445 450
Gly Lys <210> 16 <211> 213 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 16
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Se^r Val 1 5 10 IS
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser 20 2S 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin I>ys Pro Gly Lye Ala Pro Lys Pro 35 40 45
Leu lie Tyr Ala Pro Ser Abu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg SO 55 6〇
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He fier 65 70 75
Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Oln Trp 80 85 9〇
Ala Phe Asn Pro Pro Thr Phe Oly Qln Gly Thr Lys Val Glu 11^ 95 100 105
Lye Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser 110 115 120
Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val val Cya Leu Leu
125 130 13S
Aen Aen Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Qln Tarp Lys Val Asp 140 145 ISO
Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 〇iu Ser Val Thr Glu Gin 155 160 10· ❹ 143333-序列表.doc 201014605
Asp Ser Lye Asp. Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Tbr Leu Thr l.eu 170 175 180
Ser Lye Ala Asp Tyr Glu fcyB His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 18S X90 195
Thr His Gin QXy Leu Ser Ser Pro Val Thr I«ys Set Phe Asn Arg 200 205 210
Gly Glu Cys <210> 17 <211> 452 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>序列係經合成 0 <400> 17
Glu Val Qln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly I»eu Val Gin Pro Gly 15 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30
Ser Tyx Asn Mat His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Ly曰 Gly Leu 35 40 45 <31u Trp Val Gly Ala lie Tyr Pro Gly Aen C51y Ala Thr Ser Tyr 50 55 60
Asn Gin !<ys Pbe .Lys Gly Arg Phe Thr 2le Ser Val Aep Lys Ser €5 70 75
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Aen Ser Leu Arg Ala Qlu Asp 80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cye Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Tyr Arg 95 100 105
Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Qln Gly Λμγ Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser SeTr Ala eer Tbi: Xjys Gly Pro Sex* Phe Pro !>eu Ala Pro 125 130 135
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Oxt Ala Ala Leu Gly Cys Leu 140 14S 150
Val Lye Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 155 160 165
Gly Ala Leu Tbr 5er Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Qln 170 175 180 143333-序列表.doc 11 201014605
Sdr 8er Gly Leu Ίγτ 8er Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 185 190 195
Ser Ser Leu Gly Gin Thr Tyr lie Cye Λβη Val Άβη Hie Lye 200 205 2X0
Pro Ser Asn Thr Lye Val Asp Lys Lys Val Qlu Pro Lys Ser Cys 21S 220 225
Asp Lye Thr Hie Thr Cys Pro Pro Cye Pro Ala Pro Glu Leu Leu 230 235 240
Oly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lye Pro Lye Aep Thr 245 250 255
Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cye Val Val Val Asp 260 265 270
Val Ser Hie Glu Asp Pro Glu Val Lye Phe Λβη Trp Tyr Val Aep 275 2Θ0 285
Gly Val Glu Val His λβη Ala Lye Thr Lye Pro Arg Glu <31u Oln 290 295 300
Tyr Asn Ala Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val I»eu His 305 310 315
Oln Aep Trp Leu λβη Oly Lys Glu Tyr Lye CyB Lys Val Ser Aan 320 325 330
Ala Ala Leu Pro Ala Pro lie Ala Ala Thr lie Ser Lys Ala Lye 335 340 345
Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 350 355 360
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys l*eti Val Lya 365 370 375
Giy Plxe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Txp Glu Ser Aen Gly 3β0 38B 390
Oln Pro Qlu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 6er 395 400 405
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lye Ser 410 415 420
Arg Trp Oln Gin Gly Aan Val Phe 8er Cys Ser Val Met His Glu 425 430 435
Ala Leu Hie Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 440 445 450
Gly Lye 12- ❹
143333-序列表.doc 201014605 <210> IB <211s. 10 <212> PRT c213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <220> <221> Xaa <222> 9 <223> Xaa為M或L <400> 16
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Xda Hie 1 5 10
<210> 19 <211> 9 <212> PRT c213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <220> <22i> Xaa <222> 4
<223> Xaa為S或A <400> 19
Gin Gin -Trp Xaa Phe Aen Pro Pro Thr 1 5 C210> 20 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <22〇> <221> Xaa <222> 8 <223> Xaa為D或A <400> 20
Ala He Tyr Pro Gly Asn Gly Xaa Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 1 5 10 15
Lys Gly <210> 21 ic211> 13 143333-序列表.doc 201014605 <212> PRT <213:►人工序列 <320> <223>序列係經合成 <220^ <221> Xaa <222> 6
<223> Xaa為N、A、Y、W或D <220> <221> Xaa <222> 7 <223>Xaa 為 S 或R <400> 21
Val Val Tyr Tyr ser Xaa Xaa Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 22 <211> 451 <212> PRT <213:►人工序列 <220> <2·23>序列係經合成 <400> 22
Qlu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 1 S 10 15
Gly Ser lieu Arg Leu fi^r Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30
Ser Tyr Asn Met His Trp V在 1 Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45
Glu Trp Val Gly Ala lie Tyr Pro Gly Aen Qly *Aep Thr Ser Tyr 50 55 60
Asn Gin Lys Phe Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Val Asp Lys Ser
65 70 7S
Lye Aen Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn. Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cye Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Aen Ser 95 100 105
Tyr Trp Tyr Phe Aep Val Trp Qly Gin Qly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser Ala ser Thr Lye Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 125 130 135
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Qly Cye Leu 14- 143333·序列表.doc 201014605 140 145 150
Val Lye Αβρ Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Abu Ser 155 160 165
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 170 175 180
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 1Θ5 190 195
Ser Sar Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Aen Val Aen His Lye 200 205 2X0
Pro Bex Asn Thr Lye Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Iiys Ser Cys 2X5 220 225
Asp Lys Thr Hist Thr Cys Pro Pro Cy日 Pro Ala Pro Glu Leu Leu 230 235 240 ❹ ❹
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255
Leu Met lie Ser Arg Thr Fro Glu Val Thr Cys Val Val Val λβρ 260 265 270
Val Ser Hie Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Aen Trp Tyr Val Asp 275 280 2Θ5
Gly Val Glu Val Hia Λβη Ala Lys Thr Lye Pro Arg Glu Glu Gin 290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val S曰r Val Leu Thr Val Leu His 305 310 315
Gin Asp Trp Leu Aen Gly Lye Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Aen 320 325 330
Iiys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Iiys 335 340 345
Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pxo Pro Ser Arg 350 355 360
Glu Glu Met Thr hye Aen Gin Val Ser Leu Thr Cye X^eu Val Lye 365 370 375
Gly Phe Tyr Pro Sef Asp He Ala Val Glu Trp Οΐυ Ser Aen Gly 380 385 390
Gin Pro Glu Aan Aen Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 395 400 405 λβρ Gly Ser Phe Phe lieu Tyr Ser I»ys Leu Τϊη: Val Asp Lye Ser 4X0 415 420
Arg Tip Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Vel Met Hie Glu 15- 143333·序列表.doc 201014605 425 430 435
Ala Leu Hie Asn His Tyr Thr Oln Lys 8er Leu Ser Leu Ser Pro 440 445 450
Gly c210> 23 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>序列係經合成 <400> 23
Asp lie Gin Het Xbr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val IS 10 15
Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser 26 25 30
Tyr lieu Hie Trp Tyr Gin Glin Lye Pro Gly !>ys Ala Pro Lys Pro 35 40 45
Leu lie Tyr Ala Pro Ser Aan Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr I-eu Trtir He Ser 65 70 75
Ser Leu Gin Pro Glu Aep Phe Ala Thr Tyr Tyr eye Gin Gin Trp 80 8S 90
Ala Phe A曰n Pro Pro Thr Phe Gly Gin Gly Tlir Lys Val Glu lie 9S 10D 105
Lys Arg <210> 24 <211» 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> 序列係經合成 <400> 24
Olu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly 15 10 IS
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Qyu J\la Ala Ser Gly Tyr Thr Ph.e Thr 20 25 30
Ser Tyx A&n Met His Trp Val Arg Qln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 16- 143333-序列表-doc 201014605 35 40 45
Glu Trp Val Gly Ala lie Tyr Pro Gly Asxt Gly Ala Thr Ser Tyr 50 55 60
Asn Gin Lye Phe Lys Gly Arg Phe Thx He Ser Val Asp Lys Ser 65 70 75
Lys Aen Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Lev Arg Ala Glu Aep 80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyx Cys Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Tyr Arg
95 100 XOS
Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser
c21〇> 25 <211> 451 <212> PRT <213>人工序列 <220> <：223>序列係經合成 <4Q〇> 25
Glu Val Gin Leu Val Qlu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Qly 1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Gly Tyr Thr Pbe Thr 20 25 30 ❷
Ser Tyr Asn Met His Trp Val Arg Qln Ala Pro Gly Lye Gly Leu 35 Glu Trp Val Gly Ala He Ί 50
Asn Gin Lye Phe Lye Gly 65 40 Pro Gly Abu Gly Ala 55 Phe Ttir lie Ser Val 70 45 60
Lye Ser 75
Lys Asn Thr Leu Tyr Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Val Tyx Tyr Ser Tyr Arg 95 100 105
Tyr Trp Tyr Pbe Asp Val Trp Sly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 110 115 120
Ser Ser Λ1& Ser τάτ Lye Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 125 130 135
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 143333-序列表.doc -17- 201014605 140 14S 150
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 155 160 165
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Hie Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin. 170 175 ia〇
Ser Ser Qly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 185 190 195
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Aen Val Aen Hib Lys 200 205 210
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lye Lys Val Glu Pro Lya Ser Cys 215 220 22s
Asp Lye Thr Hie Thr Cye Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 230 235 240 GXy Gly Pro Ser Val Phe I*eu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255
Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cye Val Val Val Αβρ 260 265 270
Val Ser His Gin Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Aap 275 2B0 265 GXy Val Glu Val His Asn Ala Lys rtlir I*ye Pro Arg Glu Glu Gin 290 295 300
Tyr Asn Ala Thr Tyx Arg Val Val Ser Val l*eu Thr Val Leu Hie 305 310 315
Gin Aep Trp Leu Aan Oly Lye Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Aan 320 325 330
Ala Ala Leu Pro Ala Pro lie Ala Ala Thr lie Ser Lye Ala Lys 340 345
Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 350 355 360
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser I*eu Thr Cys Leu Val by曰 365 370 375
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 曰er Asxx Gly 360 3S5 390
Gin Pro Glu Aan Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
39S 400 40S
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys I»eu Thr Val Asp Lys Ser 410 415 420
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cye Ser Val Met His 01μ IS- 參 143333-序列表.doc 201014605 425 430 435
Ala Le*u His Asn
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 440 445
Pro 450
Gly
143333·序列表.doc -19-

Claims (1)

  1. 201014605 七、申請專利範園： 1. 一種治療患者進展型多發性硬化症之方法，其包含投與 患者有效量之抗CD20抗體，其中該治療係基於該患者具 有一或多種選自由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約 Μ歲，（b)—或多個釓染色病變，（c)開始治療前兩年内擴 展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬 化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 2. 如請求項丨之方法，其中該進展型多發性硬化症為原發 性進展型多發性硬化症。 3·如請求項1之方法，其中該進展型多發性硬化症為繼發 性進展型多發性硬化症。 4. 如請求項丨之方法，其中該進展型多發性硬化症為進展 復發型多發性硬化症。 5. 如請求項1之方法，其中該患者在開始治療時未診斷出 患有復發緩解型多發性硬化症。 如叫求項1之方法’其中該患者之樣本中進一步具有炎 症跡象。 7.如4求項6之方法，其中該樣本為腦脊髓液樣本。 8·如印求項7之方法，其中炎症跡象係由於上升IgG指數所 顯示的。 9·如&求項7之方法’其中炎症跡象係由於藉由等電聚焦 法所備測之IgG募選殖條紋所顯示的。 1〇.如°青求項1之方法’其中該患者在少於約15年内具有高 於約5,〇之EDSS。 143333.doc 201014605 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 求項1之方法，其中該患者在少於約10年内具有小 於或等於約5.0之EDSS。 求項1之方法，其中開始治療前兩年内所增加之 EDSS不是因為復發的緣故。 如請求項1之方法’其中該所增加的EDSS是開始治療前 兩年内EDSS至少増加約15分。 求項13之方法，其中開始治療前兩年内所增加之 EDSS不是因為復發的緣故。 如請求項1之方法’其中該患者年齡小於約51歲。 如請求項1之方法’其中該患者在開始治療前兩年内進 一步具有兩次或兩次以上復發。 如請求項1之方法，其中該EDSS在開始治療時約3 〇與約 6.5之間。 如印求項1之方法，其中該治療可以縮短經確診疾病進 展之時間。 如叫求項18之方法，其中經確診疾病進展是持續十二週 之EDSS增加。 如4求項18之方法，其中經確診疾病進展為持續二十四 週之EDSS增加。 如清求項1之方法，其中該抗CD20抗體包含：a)包含含 有SEQIDNO:10、SEQIDNO:11及SEQIDNO_·12之三個 CDR區之重鏈可變區，及b)包含含有SEQ ID NO:4、SEQ IDN〇:5及SEQIDN0:6之三個CDR區之輕鏈可變區。 如請求項1之方法，其中該抗CD2〇抗體為奥克利珠單抗 143333.doc 201014605 (ocrelizumab) 〇 23. 如請求項1之方法，其中該抗CD20抗體為利妥昔單抗 (rituximab)。 24. 如請求項1之方法，其中該抗CD20抗體為奥法土莫單抗 (ofatumumab)。 25. 如請求項1之方法，其中該抗CD20抗體為TRU-015或 SBI-087 ° 26. 如請求項1之方法，其中該抗CD20抗體為GA101。 @ 27.如請求項1之方法，其中該抗CD20抗體為hA20。 28. 如請求項1之方法，其中該有效量之抗CD20抗體係投與 該患者，以提供約0.3公克至約4.0公克之間的初始抗 CD20抗體暴露，隨後提供約0.3公克至約4.0公克之間的 第二抗CD20抗體暴露。 29. 如請求項28之方法，其中該初始抗CD20抗體暴露及/或 第二抗CD20抗體暴露在約0.3公克至約1.5公克之間。 g 30.如請求項29之方法，其中第二暴露直至該初始暴露後約 16週至60週才提供。 31. 如請求項30之方法，其中每一該等抗CD20抗體暴露係以 一或兩個劑量之抗CD20抗體投與該患者。 32. —種用以治療患者進展型多發性硬化症之方法，其限制 條件為發現該患者具有一或多種選自由以下組成之群之 特徵：（a)年齡小於約55歲，（b)—或多個釓染色病變， (c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至 少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約 143333.doc 201014605 5分，該治療包含向該患者投與有效量之抗CD20抗體。 33. —種治療進展型多發性硬化症之方法，其包含： (a) 選擇患有進展型多發性硬化症之患者，其中該患者 具有一或多種選自由以下組成之群之特徵：（i)年齡小於 約55歲；（ii)一或多個乳染色病變，（Hi)在開始治療前兩 年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（iv) 多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分；及 (b) 投與經此選擇之患者有效量之抗CD20抗體。 34· —種評估患有進展型多發性硬化症之患者是否會對用抗 CD20抗體治療有反應的方法，其包含評估一或多種選自 由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，一或多 個亂染色病變’（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀態量 表（EDSS)增加至少約一分，及（句多發性硬化症嚴重度評 分（MS SS)咼於約5分，其中該患者一或多種該等特徵表 示該患者會對該治療有反應。 35· —種鑑別可能對抗cD2〇抗體治療有反應的患有進展型多 發性硬化症之患者的方法，其包含： (a) 評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：⑴年齡 小於約55歲；（ii)一或多個釓染色病變，（iii)在開始治療 前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及 (iv)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分；及 (b) 鑑別具有一或多種選自由以下組成之群之特徵的患 者··⑴年齡小於約55歲，（ii)一或多個釓染色病變，（iii) 在開始該抗CD20治療前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS) 143333.doc -4- 201014605 增加至少約一分，及（iv)多發性硬化症嚴重度評分 (MSSS)高於約5分。 36. —種銷售用於進展型多發性硬化症患者子群之抗cd2〇抗 體或其醫藥學上可接受之組合物的方法，該方法包含告 知目標聽眾·該抗CD20抗體用於治療該患者子群的用途， 該患者子群之特徵在於該子群之患者具有一或多種選自 由以下組成之群之特徵：（a)年齡小於約55歲，一或多 個此染色病變，（c)在開始治療前兩年内擴展殘疾狀皞量 ’表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多發性硬化症嚴重度評 分（MSSS)高於約5分。 37. —種製品’其包含包裝在一起之包含抗CD20抗體及醫藥 學上可接受之載劑的醫藥組合物及顯示該抗CD20抗鱧或 醫藥組合物指定用於治療患多發性硬化症的具有一或多 種選自由以下組成之群之特徵之患者的標籤：（a)年齡小 於約55歲，（b)—或多個釓染色病變，（£:)在開始治療前兩 _ 年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及（d)多 發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分。 38· —種預測患有進屐型多發性硬化症之個體是否會對使用 用以治療多發性硬化症之藥物治療有反應的方法，該方 法包含評估一或多種選自由以下組成之群之特徵：（a)年 齡小於約55歲’（b)—或多個此染色病變，（c)在開始治療 前兩年内擴展殘疾狀態量表（EDSS)增加至少約一分，及 (d)多發性硬化症嚴重度評分（MSSS)高於約5分，據此病 患年齡、該等亂染色病變、開始治療前兩年内之該Edds 143333.doc 201014605 增加或其組合顯示該個體會對該治療有反應。 39. -種治療患者多發性硬化症之方法，其包含投與該患者 有效量之奥克利珠單抗，以提供約〇 3公克至約〇6公克 之間的初始奥克利珠單抗暴露，隨後提供狀3公克至約 0.6公克之間的第二奥克利珠單抗暴露，該第二暴露直至 該初始暴露後約16週至60週才提供，且每—該等奥克利 珠單抗暴露係以-或兩個劑量之奥克利珠單抗提供與該 患者。 40.如請求項39之方法，其中該初始奥克利珠單抗暴露包含 第-劑量及第二劑量之奥克利珠單抗，其中奥克利珠單 抗之第一劑量及第二劑量為約〇 3公克。 •如請求項40之方法，以第二奥克利珠單抗暴露包含單 劑量之奥克利珠單抗，其中奥克利珠單抗之單一劑量 為0·6公克。
    42·如請求項41之方法，其中第 初始奥克利珠單抗暴露後約24週提供。 43.如請求項42之方法，其進_步包含提供第 抗暴露。 係在 奥克利珠單
    44·如請求項43之方法 抗暴露。 其進一步包含提供第四奥克利珠單 45_如請求項44之方法 抗暴露。 其進一步包含提供第五奥克利珠單 46. 如請求項42之方法，其進—步包含提供約-之間的後續奥克利珠單抗暴露。 次至約三次 143333.doc -6 - 201014605 47. —種製品，其包含·· (a) 包含奥克利珠單抗之容器；及 (b) 具有關於治療患者多發性硬化症之說明的藥品說明 書’其中該等說明顯示向該患者投與有效提供約0.3公克 約〇.6 a克之間的初始奥克利珠單抗暴露，隨後提供約 〇·3 a克至約G.6公克之間的第二奥克利珠單抗暴露之量 的奥克利珠單抗’第二暴露直至該初始暴露後約16週至 才投與’且每一該等克奥利珠單抗暴露係以一或兩 個劑量之奥克利珠單抗提供與該患者。 143333.doc
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