TW201326193A

TW201326193A - 抗－ｃ－ｍｅｔ抗體之純化

Info

Publication number: TW201326193A
Application number: TW101143324A
Authority: TW
Inventors: Marc Wong; Jerome Joseph Bill; Arick Michael Brown; Glen Scott Giese; Judy Fay-Chen Hsii; Amy Lim; Josefine Persson; Asha Nandini Radhamohan; Maricel Rodriguez
Original assignee: Genentech Inc
Priority date: 2011-11-21
Filing date: 2012-11-20
Publication date: 2013-07-01
Also published as: CA2854477A1; EP2782932A1; NZ624650A; IL232329A0; WO2013078170A1; CN104066748A; WO2013078170A8; AR088920A1; ZA201403108B; US20150050275A1; AU2012340826A1; RU2014124842A; JP2014533700A; KR20140095096A; SG11201402485UA; US20190202919A1; MX2014005885A; US20130129718A1; BR112014012005A2

Abstract

本文提供純化抗-c-met抗體之方法、包含經純化抗-c-met抗體之組合物及醫藥調配物以及其使用方法。

Description

抗-C-MET抗體之純化

本申請案根據35 USC 119(e)主張對2011年11月21日提出申請之美國臨時專利申請案第61/562,429號及2011年11月22日提出申請之美國臨時專利申請案第61/562,925號之優先權，該等案件之內容以整體引用方式併入本文中。

諸如治療抗體等生物製劑係自包含複雜的濃縮組份混合物之重組系統產生，且因此可受到用於製造治療抗體之宿主細胞系統之組份污染。通常，即使在多個純化步驟後，亦可存在大量該等污染物。患者安全性使得必需消除污染物或將其降至實際最低程度以防止安全性及功效問題。未能鑑別並充分去除污染物可導致藥物功效降低或不良患者反應，例如不良免疫反應。例如，大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)之外膜包含脂多糖(LPS)，其可用作內毒素且若不去除可誘發強免疫反應、高熱。在藥物研發及製造方法中，污染物之去除可牽涉到顯著成本。

對於大腸桿菌培養之治療抗體而言，污染物可為用於繁殖之生長培養基及/或宿主細胞之組份、DNA或RNA載體、大腸桿菌蛋白質(ECP)、脂質及/或LPS。除了可能直接影響藥物功效及/或安全性外，諸多污染物(包括ECP、磷脂、內毒素及DNA/RNA(包括載體序列))亦可因疏水相互作用、金屬橋聯及/或電荷複合而與治療抗體形成複合物，此可導致治療抗體之聚集。此外，在大腸桿菌中產生之治療抗體在內部於周質中累積，且需要破裂細胞以分離治療抗體。宿主蛋白酶活性通常在細胞破壞期間出現且可實質上降低產率並導致治療抗體之蛋白質水解而無有效純化。需要多輪層析及純化步驟來分離生長培養基及/或宿主細胞污染物與治療抗體。

除生長培養基及/或宿主細胞污染物外，回收及純化過程本身亦可引入污染物，此端視用於層析方法中之吸附劑之類型而定。例如，在蛋白質A親和力層析期間，蛋白質A配體可與治療抗體共溶析。此外，在蛋白質A之情形下，存在表明蛋白質A可引起不良生理學事件之一定證據。M.Gomez等人Nat.Med.10：842(2004)。去除污染物之方法可能眾多，且每一回收及純化步驟亦可導致產量顯著損失及其他污染物之潛在引入。

儘管去除污染物較為重要，但不存在可對於所有多肽皆有效之通用純化方案。多肽性質(例如分子量、等電點(pI)、疏水性、蛋白酶敏感性、電荷性質及分佈、轉譯後修飾及/或溶解度)在多肽之間可顯著不同。該等性質可顯著影響去除污染物之純化方案及能力。

已報導靶向HGF/c-met途徑之諸多分子。該等分子包括c-met及抗-c-met抗體之一部分細胞外結構域，例如彼等闡述於以下文獻中者：US 5,686,292；Martens,T.等人，Clin.Cancer Res.12(20 Pt.1)：6144(2006)；US 6,468,529； WO 2006/015371；WO 2007/063816及WO 2010/045345中者。已顯示抗-c-met抗體之二價形式促進二聚化並導致c-met(激動功能)活化，而相反，已顯示單價抗體抑制c-met活性(拮抗功能)。對於需要拮抗功能之病理學病況之治療而言，抗-c-met抗體之二價性可導致不合意之激動效應，且因此，需要單價特性以確保在抗-c-met抗體結合至用於治療病理學病況之靶後之拮抗活性。Fab片段及單臂抗體係單價抗體之實例。單臂抗體之半衰期通常比Fab長。然而，利用包含單一輕鏈及單一重鏈(以及另一Fc區)之單臂抗體之擔憂係可能不能維持單臂抗體結構。在產生及純化期間聚集單價抗體(形成多聚物及寡聚物)及/或不能維持單價結構，而非具有兩條重鏈及兩條輕鏈之二價抗體，可導致不合意之激動效應。因此，抗-c-met抗體聚集之最小化及單價結構在純化期間及在純化產物中之穩定尤其重要。

昂拉妥珠單抗(Onartuzumab)係抗-c-met抗體且係欲在大腸桿菌中產生之第一單臂抗體。昂拉妥珠單抗與宿主細胞雜質/污染物之極類似靜電性質進一步使昂拉妥珠單抗之純化過程複雜化，此乃因許多習用抗體純化方法依賴於抗體與宿主細胞雜質/污染物間之靜電性質差異以促進分離。因此，儘管通常生物製劑之產生及純化及靶向HGF/c-met途徑之分子之研發已取得顯著進展，但仍需要使污染物及雜質最小化同時保留抗-c-met抗體(尤其單臂形式)之拮抗活性之有效純化方法。

本文引用之所有參考文獻(包含專利申請案及公開案)皆以整體引用方式併入本文中。

本文提供純化抗-c-met抗體之方法及包含經純化抗-c-met抗體之組合物。本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中宿主細胞蛋白質(HCP)之含量小於或等於約50 ng/mg。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中HCP之含量小於或等於約50 ng/mg。

本文提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時。在一些實施例中，該方法進一步包含離心包含抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在包含瓊脂糖基質之蛋白質A樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

本文提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含在包含瓊脂糖基質之蛋白質A樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含在弱陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收抗-c-met抗體。在一些實施例中，弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。

本文提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含在弱陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收抗-c-met抗體。在一些實施例中，弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。

在任一純化方法之一些實施例中，該方法進一步包含在強陽離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

在任一純化方法之一些實施例中，該方法進一步包含在強陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

在任一純化方法之一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾包含抗-c-met抗體之組合物。

本文進一步提供包含藉由任一上述純化方法純化或可藉由該方法獲得之抗-c-met抗體之組合物。另外，本文提供包含藉由任何上述純化方法純化或可藉由該方法獲得之抗-c-met抗體之組合物的批次(例如，整批)。

亦提供包含上述組合物或包含該等組合物中之任一者之批次之醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥調配物係液體醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥調配物適於投與個體(例如，人類)。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係大腸桿菌細胞蛋白質(例如，ECP)及/或平均ECP。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量小於或等於以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係介於以下中之任一者之間：約0.001 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.2 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.1 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.2 pg/mg或約0.01 pg/mg與約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之浸出蛋白質A(即，LpA)小於或等於約2 ng/mg。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LpA小於或等於約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係介於以下中之任一者之間：約0.001 ng/mg與約2 ng/mg、約0.01 ng/mg與約2 ng/mg、約0.1 ng/mg與約2 ng/mg或約1 ng/mg與約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係以下中之任一者：約1 ng/mg、約1.25 ng/mg、約1.5 ng/mg、約1.75 ng/mg或約2 ng/mg。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate，即，LAL)小於或等於約0.01 EU/mg。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LAL小於或等於約0.01 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL小於或等於以下中之任一者：約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.002 EU/mg或約0.001 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係介於以下中之任一者之間：約0.0001 EU/mg與約0.01 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.007 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.006 EU/mg或約0.0001 EU/mg與約0.005 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係以下中之任一者：約0.01 EU/mg、約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.004 EU/mg、約0.003 EU/mg或約0.002 EU/mg。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之聚集物的平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%或約0.1%中之任一者。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之單體的平均百分比大於或等於約99.5%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比大於或等於約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%中之任一者。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約99.5%與約99.999%、約99.5%與約99.99%、約99.6%與約99.999%、約99.6%與約99.99%、約99.7%與約99.999%、約99.7%與約99.99%、約99.8%與約99.999%、約99.8%與約99.99%或約99.9%與約99.999%、約99.9%與約99.99%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係以下中之任一者：約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之片段的平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係以下中之任一者：約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%、約0.1%或約0%。在一些實施例中，片段不可檢測。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之酸性變體的平均百分比小於或等於約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%、約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約1%與約20%、約5%與約20%或約10%與約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%或約12.5%。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之主峰的平均百分比大於或等於約75%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比大於或等於約77.5%、約80%、約82.5%或約85%中之任一者。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約75%與約95%、約77.5%與約95%、約80%與約95%、約82.5%與約95%或約85%與約95%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係以下中之任一者：約75%、約77.5%、約80%、約82.5%或約85%。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之鹼性變體的平均百分比小於或等於約2.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係介於以下中任一者之間：約0.001%與約2%、約0.01%與約2%、約0.001%與約1.5%或約0.01%與約1.5%、約0.001%與約1.0%或約0.01%與約1.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係以下中之任一者：約2%、約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。

例如，提供組合物及/或包含組合物之批次(例如，整批)，該組合物包含抗-c-met抗體，其中HCP之含量小於或等於約50 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%，且包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。另外，本文提供組合物及/或包含組合物之批次(例如，整批)，該組合物包含抗-c-met抗體，其中HCP之含量小於或等於約15 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約 75%，且包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體係闡述於第三IV部分中之抗體。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體之pI為約8.2、約8.3及/或約8.4。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體包含能夠結合c-met之單一抗原結合臂。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體係單價。在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法、組合物及/或醫藥調配物之一些實施例中，抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含(a)包含以下序列之重鏈可變結構域：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVY YCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及(b)包含以下序列之輕鏈可變結構域：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價。在一些實施例中，抗-c-met抗體係抗-c-met抗體片段。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，第一及第二Fc多肽形成比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性的Fc區。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19、CH1序列及第一Fc多肽之第一多肽，以及(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20及CL1序列之第二多肽。在一些實施例中，抗-c-met抗體進一步包含(c)包含第二Fc多肽之第三多肽。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)且第二Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。在一些實施例中，抗-c-met抗體與昂拉妥珠單抗結合相同表位。

本文進一步提供抑制c-met活化之細胞增生之方法，該方法包含使細胞或組織與有效量之上述組合物、批次及/或醫藥調配物接觸。

本文提供調節與HGF/c-met信號傳導軸失調相關之疾病之方法，該方法包含向個體投與有效量之本文所述組合物、批次及/或醫藥調配物。

本文亦提供治療患有增生性病症之個體之方法，該方法包含向個體投與有效量之上述組合物、批次及/或醫藥調配物。

在任一方法之一些實施例中，增生性病症係癌症。在一些實施例中，癌症係肺癌(例如非小細胞肺癌(NSCLC))、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌及/或乳癌。在任一方法之一些實施例中，該方法進一步包含投與第二治療劑。在任一方法之一些實施例中，與HGF/c-met信號傳導軸失調相關之細胞、組織、疾病、增生性病症及/或癌症之特徵在於c-met表現或活性。在一些實施例中，c-met表現係c-met過表現。

另外，本文提供包含容器之製造物件，該容器中含有上述組合物、批次或醫藥調配物。本文進一步提供製備製造物件之方法。

本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中宿主細胞蛋白質(HCP)之含量小於或等於約50 ng/mg，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。

本文亦提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中HCP之含量小於或等於約50 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%，且包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。

本文亦提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中HCP之含量小於或等於約15 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%，且包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。

本文亦提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，該方法進一步包含離心包含抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，該方法進一步包含在MabSelect SuRe樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

本文亦提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含在MabSelect SuRe樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。

在一些實施例中，該方法進一步包含在弱陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收抗-c-met抗體。在一些實施例中，弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。

本文亦提供純化抗-c-met抗體之方法，其包含在弱陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。

在一些實施例中，該方法進一步包含在強陽離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含在強陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾包含抗-c-met抗體之組合物。

本文亦提供包含藉由如技術方案4至14之方法中之任一者純化或可藉由該方法獲得之抗-c-met抗體之組合物，其中抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。

在本發明組合物之一些實施例中，宿主細胞蛋白質(HCP)之含量小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP之含量介於約1 ng/mg與15 ng/mg之間。在一些實施例中，HCP係大腸桿菌蛋白質(ECP)。

在本發明組合物及方法之一些實施例中，抗-c-met抗體包含(a)包含以下序列之重鏈可變結構域：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及(b)包含以下序列之輕鏈可變結構域：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAW YQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。在一些實施例中，Fc區比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)且第二Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。在一些實施例中，抗-c-met抗體與昂拉妥珠單抗結合相同表位。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係介於約8.0與約8.5之間。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價。在一些實施例中，抗-c-met抗體係抗-c-met抗體片段。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體。

本文提供純化抗-c-met抗體之方法及包含經純化抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價抗-c-met抗體(例如，單臂抗體)。另外，提供包含經純化抗-c-met抗體之製造物件及包含經純化抗-c-met抗體之組合物之用途。

I.定義

本文所用術語「污染物」或「雜質」可互換使用且係指不同於期望抗體單體產物之材料。雜質包括(但不限於)抗體變體(例如，酸性或鹼性抗體變體)、抗體片段、聚伸乙基亞胺(即，PEI)、期望抗體單體之聚集物或衍生物、浸出蛋白質A、宿主細胞雜質(例如，ECP)、脂質、核酸及/或內毒素。

本文所用術語「宿主細胞雜質」或「宿主細胞污染物」係指由宿主細胞系、細胞培養流體及/或細胞培養物引入之任何蛋白質性污染物或副產物。實例包括(但不限於)中國倉鼠卵巢蛋白質(CHOP)、大腸桿菌蛋白質(ECP)、酵母蛋白質、類人猿COS蛋白質或骨髓瘤細胞蛋白質(例如，NS0蛋白質(源自BALB/c小鼠之小鼠漿細胞瘤細胞))。在一些實施例中，宿主細胞雜質係ECP。

「宿主細胞」包括可為或已為載體受體之個別細胞或細胞培養物，該(等)載體用於納入多核苷酸插入物以產生抗體。宿主細胞包括單一宿主細胞之子代，且子代可因天然、偶然或特意突變而未必與初始親代細胞完全相同(在形態上或在基因組DNA互補上)。在一些實施例中，宿主細胞係大腸桿菌。

本文所用術語「單體」係指單一抗體單元。例如，在單臂抗體之情形下，單體係由a)包含重鏈及第一Fc區之多肽、b)包含輕鏈之多肽及c)包含第二Fc區之多肽組成。

本文所用術語「聚集物」係指抗體或其片段之任何多聚物。例如，聚集物可為二聚物、三聚物、四聚物或大於四聚物之多聚物等。

「緩衝液」係藉由其酸-鹼偶聯組份之作用抵抗pH變化之緩衝溶液。可端視(例如)緩衝液之期望pH採用之不同緩衝液闡述於Buffers.A Guide for the Preparation and Use of Buffers in Biological Systems,Mohan,C.,Calbiochem公司(2007)中。

溶液之「pH」量測相對於水試樣之離子化之酸度或鹼度。

諸如抗體等分子之「pI」或」等電點」係指分子含有等數目之正電荷及負電荷時之pH。pI可自分子(例如，抗體)之胺基酸殘基之淨電荷計算或可藉由等電聚焦測定。

術語「導電率」係指溶液傳導兩個電極間之電流之能力。導電率之基本單位係西門子(S)，舊稱歐姆。導電率通常以單位mS/cm表示。由於溶液中之離子上之電荷促進電流傳導，因此溶液之導電率與其離子濃度成比例。

「流動速率」通常描述為樹脂體積/小時(CV/h)。

「負載密度」通常表示為經處理組合物之克數/升樹脂。

將分子(例如，抗體或污染物)「結合」至樹脂意指在適當條件(例如，pH及/或導電率)下使分子(例如，抗體或污染物)暴露於樹脂，以使得分子(例如，抗體或污染物)可逆地固定於樹脂之中或之上。

「洗滌」樹脂意指使適當緩衝液穿過樹脂或在樹脂上經過。

「溶析」來自樹脂之分子(抗體或污染物)意指去除來自其之分子。

「穿流」係指第一分子(例如，抗體或污染物)結合至樹脂，而第二分子(例如，抗體或污染物)不保留。

「平衡緩衝液」在本文中用於製備用於加載包含所關注分子(例如，抗體)之組合物之樹脂。

「洗滌緩衝液」在本文中用於指在加載之後且在溶析所關注分子(例如，抗體)之前在樹脂上經過之緩衝液。

術語「負載密度」或」加載密度」係所關注分子(例如，抗體)(g)/升層析樹脂之密度或所關注分子(例如，抗體)/升膜/過濾體積(L)之密度。在一些實施例中，加載密度係以g/L量測。

片語「離子交換層析」係指基於淨電荷分離化合物之分離技術。

自包含抗體及一或多種污染物之組合物「純化」該抗體意指藉由自該組合物去除(完全或部分)至少一種污染物來增加該抗體在該組合物中之純度。

「抗-c-met抗體」及「結合c-met之抗體」係指能夠以足夠親和力結合c-met從而使得該抗體可用作診斷劑及/或治療劑靶向c-met的抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體與不相關非-c-met蛋白質之結合程度小於該抗體與c-met之結合的約10%，如藉由(例如)放射免疫分析(RIA)所量測。在一些實施例中，結合c-met之抗體之解離常數(Kd)係1 μM、100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM、0.01 nM或0.001 nM(例如，10^-8 M或更小，例如10^-8 M至10^-13 M，例如，10^-9 M至10^-13 M)。在一些實施例中，抗-c-met抗體結合在來自不同物種之c-met間保守的c-met表位。

術語「抗體」係在最廣泛意義上使用且明確涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、單價抗體、多價抗體及抗體片段(只要其展現期望生物學活性)(例如，Fab及/或單臂抗體)。

抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定結構域或恆定區之類型。存在5大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且該等類別中之若干可進一步分成子類(同種型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。

「抗體片段」係指除完整抗體外之分子，其包含完整抗體中結合完整抗體所結合之抗原的一部分。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂、雙鏈抗體、直鏈抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及自抗體片段形成之多特異性抗體。

術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，其係指具有實質上與天然抗體結構相似之結構或具有含有如本文所定義Fc區域之重鏈的抗體。

「阻斷」抗體或「拮抗性」抗體係顯著抑制(部分或完全)其所結合抗原之生物學活性者。

「結合相同表位之抗體」(作為參考抗體)係指在競爭分析中將參考抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高的抗體，且反之，參考抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高。本文提供實例性競爭分析。

出於本文目的，「受體人類框架」係包含源自人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之輕鏈可變結構域(VL)框架或重鏈可變結構域(VH)框架之胺基酸序列的框架，如下文所定義。「源自」人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之受體人類框架可包含其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些實施例中，VL受體人類框架之序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列一致。

術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與使抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中每一結構域皆包含4個保守框架區(FR)及三個超變區(HVR)。(例如，參見，Kindt等人Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91頁(2007)。)單一VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL結構域分離以分別篩選互補VL或VH結構域文庫。例如，參見Portolano等人，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。

本文所用術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域區中序列具有超變性及/或形成結構上經界定之環(「超變環」)中的每一者。通常，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個位於VH中(H1、H2、H3)，且三個位於VL中 (L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基，後者具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。實例性超變環出現於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。實例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)出現於L1之胺基酸殘基24-34、L2之50-56、L3之89-97、H1之31-35B、H2之50-65及H3之95-102處(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))。除VH中之CDR1外，CDR通常包含形成超變環之胺基酸殘基。CDR亦包含「特異性決定殘基」或「SDR」，其係接觸抗原之殘基。SDR含於CDR中稱為縮短-CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR之區域內。實例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)出現於L1之胺基酸殘基31-34、L2之50-55、L3之89-96、H1之31-35B、H2之50-58及H3之95-102處(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))。除非另有指示，否則可變結構域中之HVR殘基及其他殘基(例如，FR殘基)在本文中係根據Kabat等人所述編號(見上文)。

「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常由4個FR結構域FR1、 FR2、FR3及FR4組成。因此，HVR及FR序列通常出現於VH(或VL)中之下列序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

本文所用片語「N端截短重鏈」係指包含全長免疫球蛋白重鏈之部分而非全部之多肽，其中缺失部分係彼等通常位於重鏈之N端區上者。缺失部分可包括(但不限於)可變結構域、CH1及鉸鏈序列之部分或全部。通常，若不存在野生型鉸鏈序列，則N端截短重鏈中之其餘恆定結構域將包含能連接至另一Fc序列(即，本文所述「第一」Fc多肽)之組份。例如，該組份可係能形成二硫連接之經修飾殘基或經添加半胱胺酸殘基。

本文所用術語「Fc區」通常係指包含免疫球蛋白重鏈之C端多肽序列之二聚物複合物，其中C端多肽序列係可藉由木瓜蛋白酶消化完整抗體獲得者。Fc區可包含天然或變體Fc序列。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc序列之界限可有所不同，但人類IgG重鏈Fc序列通常界定為自約位置Cys226處之胺基酸殘基，或自約位置Pro230處伸延至Fc序列之羧基端。然而，可存在或可不存在Fc區之C端離胺酸(Lys447)。免疫球蛋白之Fc序列通常包含兩個恆定結構域、CH2結構域及CH3結構域且視情況包含CH4結構域。

「Fc多肽」在本文中意指構成Fc區之多肽中之一者。可自任何適宜免疫球蛋白(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亞型、IgA、IgE、IgD或IgM)獲得Fc多肽。在一些實施例中，Fc多肽包含野生型鉸鏈序列之部分或全部(通常於其N 端)。在一些實施例中，Fc多肽不包含功能或野生型鉸鏈序列。

「Fc受體」或「FcR」描述結合抗體之Fc區之受體。在一些實施例中，FcR係天然人類FcR。在一些實施例中，FcR係結合IgG抗體者(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII亞類之受體，包括彼等受體之等位基因變體及選擇性剪接形式。FcγRII受體包括具有類似胺基酸序列之FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，該等胺基酸序列主要在其細胞質結構域方面不同。活化受體FcγRIIA在其胞質結構域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基序(ITAM)。抑制受體FcγRIIB在其胞質結構域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基序(ITIM)。(例如，參見Daëron,Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。FcR綜述於(例如)以下文獻中：Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods 4：25-34(1994)；及de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。在本文中，術語「FcR」涵蓋其他FcR，包括彼等欲在將來鑑別者。

術語「Fc受體」或「FcR」亦包括負責將母體IgG轉移至胎中FcRn(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))及調節免疫球蛋白穩態之新生受體。量測與FcRn之結合之方法為業內已知(例如，參見Ghetie and Ward.,Immunol.Today 18(12)：592-598(1997)；Ghetie等人，Nature Biotechnology,15(7)：637-640 (1997)；Hinton等人，J.Biol.Chem.279(8)：6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton等人)。

可(例如)在表現人類FcRn之轉基因小鼠或經轉染人類細胞系中或在投與具有變體Fc區之多肽之靈長類動物中分析活體內與人類FcRn之結合及人類FcRn高親和力結合多肽之血清半衰期。WO 2000/42072(Presta)闡述具有經改良或減少之與FcR之結合之抗體變體。例如，亦參見Shields等人J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。

本文所用「鉸鏈區」、「鉸鏈序列」及其變化形式包括業內已知之含義，其闡釋於(例如)以下文獻中：Janeway等人，Immuno Biology：the immune system in health and disease,(Elsevier Science有限公司，NY)(第4版，1999)；Bloom等人，Protein Science(1997),6：407-415；Humphreys等人，J.Immunol.Methods(1997),209：193-202。

除非另有說明，否則表達「多價抗體」在本說明書中用於表示包含3個或更多個抗原結合位點之抗體。多價抗體較佳經改造以具有3個或更多個抗原結合位點且通常不為天然序列IgM或IgA抗體。

「Fv」片段係含有完全抗原識別及結合位點之抗體片段。此區係由一個重鏈可變結構域與一個輕鏈可變結構域緊密締合之二聚物，其在自然界中可為共價，例如呈scFv。在此構型中，每一可變結構域之3個HVR相互作用以界定V_H-V_L二聚物之表面上之抗原結合位點。6個HVR或其亞群共同賦予抗體以抗原結合特異性。然而，即使單一可變結構域(或Fv之一半，其僅包含3個對抗原具有特異性之HVR)亦具有識別並結合抗原之能力，但其親和力通常低於完整結合位點。

「Fab」片段含有輕鏈之可變及恆定結構域以及重鏈之可變結構域及第一恆定結構域(CH1)。F(ab')₂抗體片段包含Fab片段對，其通常在其羧基端附近藉由介於其間之鉸鏈半胱胺酸共價連接。抗體片段之其他化學偶合亦為已知已知。

本文所用片語「抗原結合臂」係指抗體片段之具有特異性結合所關注靶分子之能力的組成部分。通常且較佳地，抗原結合臂係免疫球蛋白多肽序列(例如，免疫球蛋白輕鏈及重鏈之HVR及/或可變結構域序列)之複合物。

「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之V_H及V_L結構域，其中該等結構域係以單一多肽鏈存在。通常，Fv多肽進一步在V_H結構域與V_L結構域之間包含多肽連接體，其使scFv能形成用於抗原結合之期望結構。關於scFv之綜述，參見Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編輯Springer-Verlag,New York，第269-315頁(1994)。

術語「雙鏈抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，該等片段包含連接至相同多肽鏈(V_H及V_L)中之輕鏈可變結構域(V_L)之重鏈可變結構域(V_H)。藉由使用過短而不會允許在相同鏈上兩個結構域之間配對之連接體，迫使該等結構域與另一鏈之互補結構域配對並形成兩個抗原結合位點。雙鏈抗體更全面地闡述於(例如)EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993)中。

表達「線性抗體」係指闡述於Zapata等人，Protein Eng.,8(10)：1057-1062(1995)中之抗體。簡言之，該等抗體包含隨機Fd區段對(VH-CH1-VH-CH1)，其與互補輕鏈多肽一起形成抗原結合區對。線性抗體可具有雙特異性或單特異性。

本文所用術語「單株抗體」係指自實質上同源抗體群體獲得的抗體，亦即，包含該群體之個別抗體相同及/或結合相同表位，可能之變體抗體除外，例如，含有天然突變或在產生單株抗體製劑期間產生之變體，此等變體通常以少量存在。與通常包括針對不同決定簇(表位)之不同抗體的多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每一單株抗體針對抗原上之單個決定簇。因此，修飾語「單株」指示自抗體之實質上同源群體獲得之抗體之特徵，且不應理解為需要藉由任一特定方法產生該抗體。例如，單株抗體可藉由各種技術製得，包括(但不限於)雜交瘤方法、重組DNA法、噬菌體展示法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物之方法，本文闡述此等方法及製備單株抗體之其他實例性方法。

術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定源或物種、而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同源或物種的抗體。

「人類共有框架」係代表在選擇人類免疫球蛋白VL或VH框架序列中最普遍存在之胺基酸殘基之框架。通常，人類免疫球蛋白VL或VH序列之選擇係來自可變結構域序列亞組。通常，序列亞組係如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH公開案91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之亞組。在一個實施例中，對於VL而言，亞組係如Kabat等人所述之亞組κI(見上文)。在一個實施例中，對於VH而言，該亞組係如Kabat等人所述之III亞組(見上文)。

「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上全部之至少一個且通常兩個可變結構域，其中全部或實質上全部之HVR(例如，CDR)對應於非人類之彼等HVR，且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包含源自人類抗體之抗體恆定區域的至少一部分。抗體之「人類化形式」(例如，非人類抗體)係指已經受人類化之抗體。

「人類抗體」係具有對應於如下抗體之胺基酸序列的胺基酸序列者：其由人類或人類細胞產生或源自利用人類抗體譜或其他編碼人類抗體之序列之非人類來源。此人類抗體之定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。

「裸抗體」係指不與異源部分(例如，細胞毒性部分)或放射性標記偶聯之抗體。裸抗體可存於醫藥調配物中。

「天然抗體」係指具有不同結構之天然免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體係約150,000道爾頓(Dalton)之異源四聚體糖蛋白，其係由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈構成。自N-至C端，每一重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域，隨後為三個恆定結構域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N-至C端，每一輕鏈依次具有可變區(VL)(亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域)及恆定輕鏈(CL)結構域。基於抗體恆定結構域之胺基酸序列，可將該抗體之輕鏈分配為兩種類型中之一者，稱為卡帕型(κ)及拉姆達(λ)。

「親和力」係指分子(例如，抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如，抗原)間之非共價相互作用之總和強度。除非另有說明，否則本文所用「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如，抗體及抗原)間之1：1相互作用的固有結合親和力。分子X對於其配偶體Y之親和力通常可由解離常數(Kd)表示。可藉由業內已知之常用方法(包括彼等本文所述者)來量測親和力。用於量測結合親和力之具體闡釋性及實例性實施例闡述於下文中。

「親和力成熟」抗體係指與不具有變化之親代抗體相比在一或多個HVR中具有一或多個變化的抗體，此等變化使得可改良抗體對於抗原之親和力。

具有指定抗體之「生物學特性」之抗體係具有區別抗體與結合至相同抗原之其他抗體之該抗體之生物學特性的一或多者的抗體。

抗體之「功能抗原結合位點」係能結合靶抗原者。抗原結合位點之抗原結合親和力不必與獲得抗原結合位點之親代抗體一樣強，但結合抗原之能力必須可使用已知用於評估抗體與抗原之結合之多種方法中之任一者量測。此外，本文中之多價抗體之每一抗原結合位點之抗原結合親和力無需定量相同。對於本文中之多聚抗體而言，功能抗原結合位點之數目可使用超速離心分析來評估，如美國專利申請公開案第20050186208號之實例2中所述。根據此分析方法，組合不同比率之靶抗原與多聚抗體並假設功能結合位點之不同數目來計算複合物之平均分子量。比較該等理論值與所得實際實驗值來評估功能結合位點之數目。

「物種依賴性抗體」係與第一哺乳動物物種之抗原之結合親和力比其與第二哺乳動物物種之該抗原之同源物之結合親和力強者。通常，物種依賴性抗體「特異性結合」至人類抗原(即結合親和力(K_d)值不超過約1×10^-7 M、較佳不超過約1×10^-8 M且最佳不超過約1×10^-9 M)，但與第二非人類哺乳動物物種之抗原之同源物的結合親和力係其與該人類抗原之結合親和力的至少約1/50或至少約1/500或至少約1/1000。物種依賴性抗體可為如上文所定義各種類型抗體中之任一者。在一些實施例中，物種依賴性抗體係人類化或人類抗體。

本文所用術語「實質上類似」或「實質上相同」係指兩個數值(例如，一個值與抗體相關且另一者與參考/比較抗體相關)之間之足夠高相似度使得熟習此項技術者會認為該兩個值間之差異在藉由該等值(例如，Kd值)所量測生物學特性之背景下具有較少或不具有生物學及/或統計學顯著性。

本文所用片語「實質上減少」或「實質上不同」係指兩個數值(通常一個值與分子相關且另一值與參考/比較分子相關)之間之足夠高差異度使得熟習此項技術者會認為該兩個值間之差異在藉由該等值(例如，Kd值)所量測生物學特性之背景下具有統計學顯著性。

「效應子功能」係指彼等可歸因於抗體之Fc區之生物學活性，其可隨抗體同種型而有所變化。抗體效應子功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。

術語「醫藥調配物」係指呈使得活性化合物之生物學活性有效之此形式且不含有對投與該調配物之個體有毒之其他組份的製劑。「醫藥上可接受之」賦形劑(媒劑、添加劑)係彼等可合理地投與個體以提供有效劑量之活性化合物者。

「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成份外對個體無毒之成份。醫藥上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝液、賦形劑、穩定劑或防腐劑。

「病症」係自用本文所述物質/分子或方法治療受益之任何病況。此包括慢性及急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所討論病症之彼等病理學病況。本文欲治療病症之非限制性實例包括惡性及良性腫瘤；非白血病及惡性腫瘤；神經元病症、神經膠質病症、星狀細胞病症、下丘腦及其他腺體病症、巨噬細胞病症、上皮病症、間質病症及囊胚腔病症；及發炎病症、免疫學病症及其他血管生成相關病症。

術語「細胞增生性病症」及「增生性病症」係指與一定程度之異常細胞增生相關之病症。在一個實施例中，細胞增生性病症係癌症。

本文所用「腫瘤」係指所有贅瘤性細胞生長及增生(無論惡性抑或良性)以及所有癌前期及癌性細胞及組織。本文所提及之術語「癌症」、「癌性」、「細胞增生性病症」、「增生性病症」及「腫瘤」並不相互排斥。

術語「癌症」及「癌性」係指或闡述哺乳動物之通常特徵在於細胞生長/增生失調之生理學病況。癌症之實例包括(但不限於)癌、淋巴瘤(例如，何傑金氏(Hodgkin's)及非何傑金氏淋巴瘤)、胚細胞瘤、肉瘤及白血病。此等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、神經膠質瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、白血病及其他淋巴組織增生性病症及各種類型之頭頸癌。在一些實施例中，癌症係三陰性(ER-、PR-、 HER2-)癌症。在一些實施例中，癌症係三陰性轉移性乳癌，包括任何經組織學確認之患有局部復發性或轉移性疾病之乳房三陰性(ER-、PR-、HER2-)腺癌，例如，其中局部復發性疾病不適於具有治療性目的之切除。

「轉移」意指癌症癌症自其原發位點擴散至機體中之其他位置。癌細胞可脫離原發性腫瘤，滲透至淋巴管及血管中，經過血流循環，且在機體別處之正常組織中之遠端病灶(轉移)中生長。轉移可為局部或遠端轉移。轉移係依序過程，其視腫瘤細胞而定，該等細胞自原發性腫瘤脫離，在血流中行進，且停在遠端位點處。在新位點，細胞建立血液供應且可生長而形成危及生命之團塊。腫瘤細胞內之刺激性與抑制性分子途徑二者調節此性質，且腫瘤細胞與遠端位點中宿主細胞間之相互作用亦顯著。

本文所用「治療(treatment)」(及其語法變化形式，例如「treat」或「treating」)係指試圖改變所治療個體之自然病程的臨床幹預，且可出於預防性目的或在臨床病理學過程期間實施。治療之合意效應包括(但不限於)預防疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理結果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態及緩解或改良預後。在一些實施例中，使用抗體來延遲疾病發生或減緩疾病進展。

藥劑(例如，醫藥調配物)之「有效量」係指在所需時間段內以所需劑量有效達成期望治療或預防結果之量。

「治療有效量」係指治療劑治療或預防哺乳動物之疾病或病症之量。在癌症之情形下，治療劑之治療有效量可達成以下目的：減少癌細胞數目；減小原發性腫瘤大小；抑制(即，在一定程度上減緩且較佳終止)癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制(即，在一定程度上減緩且較佳終止)腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上減輕一或多種與病症相關之症狀。在藥物可預防生長及/或殺傷現有癌細胞之程度上，其可具有細胞生長抑制性及/或細胞毒性。對於癌症療法而言，可(例如)藉由評價存活持續時間、疾病進展時間(TTP)、反應速率(RR)、反應持續時間及/或生命品質來量測活體內功效。

「個體(individual或subject)」係哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)馴養動物(例如，牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物，例如猴)、兔及齧齒類動物(例如，小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體係人類。

術語「抗癌療法」係指用於治療癌症之療法。抗癌治療劑之實例包括(但不限於)(例如)化學治療劑、生長抑制劑、細胞毒性劑、用於輻射療法中之藥劑、抗血管生成劑、細胞凋亡劑、抗微管蛋白劑及用於治療癌症之其他藥劑、抗-CD20抗體、血小板源生長因子抑制劑(例如，格列衛^TM(Gleevec^TM)(甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)))、COX-2抑制劑(例如，塞來考昔(celecoxib))、干擾素、細胞介素、結合至以下靶PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA受體中一或多者之拮抗劑(例如，中和抗體)、TRAIL/Apo2 以及其他生物活性及有機化學劑等。亦包括其組合。

「免疫偶聯物」係偶聯至一或多個異源分子(包括但不限於細胞毒性劑)之抗體。

本文所用術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素(例如，At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²、Pb²¹²及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如胺甲蝶呤、阿黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)(長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、瘤克寧錠(chlorambucil)、唐黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，例如溶核酶；抗生素；毒素，例如來自細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶促活性毒素，包括其片段及/或變體；及下文所揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。

「化學治療劑」係指用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑，例如噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®)；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基密胺，包括六甲密胺(altretamine)、三伸乙基密胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基密胺；多聚乙醯(尤其為布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL®)；β-拉帕醌(β-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼(colchicine)；白樺脂酸(betulinic acid)；喜樹鹼(camptothecin)(包含合成類似物托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR®)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪素(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼(9-aminocamptothecin))；苔蘚蟲素(bryostatin)；卡利斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻素(cryptophycin)(尤其為念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物：KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，例如瘤克寧錠、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥、美法侖、新恩比興(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素 (chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)，尤其為卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωI1(例如，參見，Nicolaou等人，Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；CDP323，其係口服α-4整合素抑制劑；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯波黴素(esperamicin)；以及新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉黴素(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、唐黴素、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸；多柔比星(包括ADRIAMYCIN®、嗎啉基-多柔比星、氰嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體注射物(DOXIL®)、多柔比星脂質體TLC D-99(MYOCET®)、聚乙二醇化多柔比星脂質體(CAELYX®)及脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(例如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素 (peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，例如胺甲蝶呤、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®)、替加氟(tegafur)(UFTORAL®)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA®)、埃坡黴素(epothilone)及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，例如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸；乙醯葡醛酸內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；雌二醇-瘤克甯錠複合物(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利乙銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoid)，例如美登素(maytansine)及柄型菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼群克林(nitraerine)；噴托他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多糖複合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細格孢氮雜酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2'-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecene)(尤其為T-2毒素、疣皰菌素A(verrucarin A)、桿孢菌素(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethane)；長春地辛(vindesine)(ELDISINE®、FILDESIN®)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；噶薩托辛(gacytosine)；阿糖胞苷 (arabinoside)(「Ara-C」)；噻替哌；紫杉烷類，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL®)、太平洋紫杉醇之經白蛋白改造之奈米粒子調配物(ABRAXANE^TM)及多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE®)；瘤克寧錠；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲蝶呤；鉑藥劑，例如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)(例如，ELOXATIN®)及卡鉑(carboplatin)；長春花胺(vincas)，其可防止微管蛋白聚合形成微管，包括長春鹼(VELBAN®)、長春新鹼(ONCOVIN®)、長春地辛(ELDISINE®、FILDESIN®)及長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE®)；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；菊白葉酸(leucovorin)；諾肖林(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，例如視黃酸，包括貝沙羅汀(bexarotene)(TARGRETIN®)；雙膦酸鹽，例如氯膦酸(clodronate)(例如，BONEFOS®或OSTAC®)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL®)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/(唑來膦酸鹽)(ZOMETA®)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX®)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA®)、替魯膦酸鹽(tiludronate)(SKELID®)或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL®)；曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其為彼等抑制信號傳導路徑中與異常細胞增生有關之基因表現者；例如，PKC-α、Raf、H-Ras及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，例如THERATOPE®疫苗及基因療法疫苗，例如，ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗及VAXID®疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如，LURTOTECAN®)；rmRH(例如，ABARELIX®)；BAY439006(索拉非尼(sorafenib)；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼(sunitinib)，SUTENT®，Pfizer)；哌立福辛(perifosine)、COX-2抑制劑(例如塞來考昔或艾托考昔(etoricoxib))、蛋白體抑制劑(例如PS341)；硼替佐米(bortezomib)(VELCADE®)；CCI-779；替吡法尼(tipifarnib)(R11577)；索拉非尼(orafenib)、ABT510；Bcl-2抑制劑，例如奧利默森納(oblimersen sodium)(GENASENSE®)；匹善重(pixantrone)；EGFR抑制劑(參見下文定義)；酪胺酸激酶抑制劑(參見下文定義)；絲胺酸-蘇胺酸激酶抑制劑，例如雷帕黴素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus)，RAPAMUNE®)；法呢醯基轉移酶抑制劑，例如洛那法尼(lonafarnib)(SCH 6636,SARASAR^TM)；及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物；以及兩種或兩種以上上述藥劑之組合，例如CHOP，其係環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼及潑尼松龍(prednisolone)之組合療法的縮寫；及FOLFOX，其係奧沙利鉑(ELOXATIN^TM)與5-FU及菊白葉酸之組合治療方案的縮寫。

本文所定義化學治療劑包括用於調節、減小、阻斷或抑制可促進癌症生長之激素之效應的「抗激素藥劑」或「內分泌治療劑」。其可為激素本身，包括(但不限於)：具有混合之激動劑/拮抗劑特性之抗雌激素，包括他莫昔芬(tamoxifen)(NOLVADEX®)、4-羥基他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene)(FARESTON®)、艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene)(EVISTA®)、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)；及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，例如SERM3；無激動劑性質之純抗雌激素，例如氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®)及EM800(此等藥劑可阻斷雌激素受體(ER)之二聚作用，抑制DNA結合，增加ER更新，及/或阻抑ER含量)；芳香酶抑制劑，包括類固醇芳香酶抑制劑(例如福美坦(formestane)及依西美坦(exemestane)(AROMASIN®))及非類固醇芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrazole)(ARIMIDEX®)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®)及胺魯米特)及其他芳香酶抑制劑(包括伏氯唑(vorozole)(RIVISOR®)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASE®)、法倔唑(fadrozole)及4(5)-咪唑)；黃體化激素-釋放激素激動劑，包括亮丙瑞林(leuprolide)(LUPRON®及ELIGARD®)、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)及曲普瑞林(tripterelin)；性類固醇，包括妊娠素(例如乙酸甲地孕酮及乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate))、雌激素(例如已烯雌酚(diethylstilbestrol)及普雷馬林(premarin))及雄激素/類視色素(例如氟甲睪酮(fluoxymesterone)、全反式視黃酸及芬維A胺(fenretinide))；奧那司酮(onapristone)；抗孕酮；雌激素受體下調劑(ERD)；抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide)；及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物；以及兩種或兩種以上上述藥劑之組合。

本申請案中所用術語「前藥」係指醫藥活性物質之前體或衍生物形式，其與母體藥物相比對腫瘤細胞之毒性更低且能酶促活化或轉化成活性更強之母體形式。例如，參見Wilman，「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」Biochemical Society Transactions,14，第375-382頁，第615次會議Belfast(1986)；及Stella等人，「Prodrugs：A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,」Directed Drug Delivery,Borchardt等人(編輯)，第247-267頁，Humana Press(1985)。前藥包括(但不限於)含磷酸鹽前藥、含硫代硫酸鹽前藥、含硫酸鹽前藥、含肽前藥、D-胺基酸修飾前藥、糖基化前藥、含β-內醯胺前藥、含視情況經取代之苯氧乙醯胺前藥或含視情況經取代之苯乙醯胺前藥、5-氟胞嘧啶及其他5-氟尿嘧啶前藥，其可轉化成活性更強之無細胞毒性之藥物。可衍生化成所用前藥形式之細胞毒性藥物之實例包括(但不限於)彼等上述化學治療劑。

本文所用「生長抑制劑」係指抑制細胞(例如，生長依賴於HGF/c-met之活體外或活體內活化之細胞)生長之化合物或組合物。因此，生長抑制劑可係顯著降低S期中之HGF/c-met依賴性細胞之百分比者。生長抑制劑之實例包括阻斷細胞週期進展(在除S期以外之位置處)之藥劑，例如誘導G1阻滯及M-期阻滯之藥劑。典型M期阻斷劑包括長春花提取物(長春新鹼及長春鹼)、紫杉烷及拓撲異構酶II抑制劑，例如多柔比星、表柔比星、唐黴素、依託泊苷及博來黴素。彼等阻滯G1之藥劑亦滲透至S-期阻滯，例如，DNA烷基化劑，例如他莫昔芬、普賴松(prednisone)、達卡巴嗪、雙氯乙基甲胺、順鉑、胺甲蝶呤、5-氟尿嘧啶及ara-C。其他資訊可參見The Molecular Basis of Cancer,Mendelsohn及Israel編輯，第1章，標題為「細胞cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs」,Murakami等人(WB Saunders：Philadelphia,1995)，尤其第13頁。紫杉烷(太平洋紫杉醇及多西他賽)係皆源自紫杉樹之抗癌症藥物。源自歐洲紫杉之多西他賽(TAXOTERE®,Rhone-Poulenc Rorer)係太平洋紫杉醇(TAXOL®,Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多西他賽促進微管自微管蛋白二聚物之組裝並藉由防止解聚而使微管穩定，此可抑制細胞有絲分裂。

「輻射療法」意指使用經定向γ射線或β射線誘導對細胞之足夠損害以限制其正常發揮作用之能力或完全破壞該細胞。應瞭解，存在許多業內已知方式來測定治療劑量及持續時間。典型治療係作為一次性投與給予且典型劑量在每天10單位至200單位(Grays)範圍內。

本文所用術語「同時」係指兩種或更多種治療劑之投與，其中至少一部分投與適時重疊。因此，同時投與包括在中斷一或多種其他藥劑之投與後持續投與一或多種藥劑之給藥方案。

「降低或抑制」意指引起總體降低20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更大之能力。降低或抑制可指所治療病症之症狀、轉移之存在或大小或原發性腫瘤之大小。

術語「包裝插頁」用於指通常包括於治療產品之商業包裝內之說明書，其含有有關適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或關於治療產品之使用之警告的資訊。

應理解，本文所述本發明之態樣及實施例包括「由態樣及實施例組成」及/或「基本上由態樣及實施例組成」。

除非另有說明，否則本文所用單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個提及物。

如熟習此項技術者所理解，在提及「約」時，本文中之值或參數包括(及闡述)指該值或參數本身之實施例。例如，關於「約X」之說明包括對「X」之說明。

II.純化方法及經純化組合物

本文提供純化抗-c-met抗體之方法及包含經純化抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

特定而言，本文提供純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法，其包含使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時。使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH6與約pH 8間之pH下保持超過6小時在本文中稱作「絮凝步驟」。在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物進一步包含陽離子聚合物。在一些實施例中，陽離子聚合物係PEI。在一些實施例中，PEI濃度(在組合物中)係0.1%(v/v)、0.1%(v/v)、0.2%(v/v)、0.25%(v/v)、0.3%(v/v)、0.35%(v/v)、0.4%(v/v)、0.45%(v/v)或0.5%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.1%(v/v)至約0.4%(v/v)、約0.2%(v/v)至0.6%(v/v)、約0.2%(v/v)至0.4%(v/v)中之任一者。在一些實施例中，PEI濃度係約0.2%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.4%(v/v)。例如，本文提供純化包含抗-c-met抗體及PEI之組合物之方法，其包含使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時。在一些實施例中，該方法進一步包含a)離心及/或b)稀釋及離心及/或c)稀釋、離心及過濾。

在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物保持在介於以下中之任一者之間之溫度下：約28℃至約32℃、約28℃至約31℃、約28℃至約30℃、約29℃至約32℃、約29℃至約31℃、約28℃至約34℃、約28℃至約35℃、約30℃至約34℃、約30℃至約35℃。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物保持在以下中之任一者之溫度下：約28℃、約29℃、約30℃、約31℃、約32℃、約33℃、約34℃、約35℃或約36℃。

在一些實施例中，絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物之pH係介於以下中之任一者之間：約6至約7、約6至約7.5、約6.5至約8、約6.5至約7.5或約6.5至約7。在一些實施例中，絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物之pH係以下中任一者：約6、約6.2、約6.4、約6.5、約6.6、約6.8、約7、約7.2、約7.4、約7.5、約7.6、約7.8或約8。

在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在上述溫度及/或上述pH下保持大於以下時間中之任一者：約6.5小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時或約20小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在上述溫度及/或上述pH下保持以下時間中之任一者：約6.5小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時或約20小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在上述溫度及/或上述pH下保持介於以下時間中之任一者之間：約6小時至約48小時、約6小時至約24小時、約6小時至約20小時、約6小時至約12小時、約6小時至約15小時、約6小時至約16小時、約6小時至約18小時、約6小時至約10小時或6小時至約8小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在上述溫度及/或上述pH下保持以下時間中之任一者：約6.5小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時或約20小時。在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物進一步包含陽離子聚合物。在一些實施例中，陽離子聚合物係PEI。在一些實施例中，PEI濃度(在組合物中)係0.1%(v/v)、0.1%(v/v)、0.2%(v/v)、0.25%(v/v)、0.3%(v/v)、0.35%(v/v)、0.4%(v/v)、0.45%(v/v)或0.5%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.1%(v/v)至約0.4%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.6%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.4%(v/v)中之任一者。在一些實施例中，PEI濃度係約0.2%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.4%(v/v)。

在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在約28℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在約30℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體之組合物在約34℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物進一步包含陽離子聚合物。在一些實施例中，陽離子聚合物係PEI。在一些實施例中，PEI濃度(在組合物中)係0.1%(v/v)、0.1%(v/v)、 0.2%(v/v)、0.25%(v/v)、0.3%(v/v)、0.35%(v/v)、0.4%(v/v)、0.45%(v/v)或0.5%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.1%(v/v)至約0.4%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.6%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.4%(v/v)中之任一者。在一些實施例中，PEI濃度係約0.2%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.4%(v/v)。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.6%(v/v)之PEI。

在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約28℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約30℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約34℃之溫度及約6之pH下保持約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時或約22小時。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.2%(v/v)之PEI。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.4%(v/v)之PEI。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.6%(v/v)之PEI。

在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約28℃之溫度及約6之pH下保持大於或等於約16小時或約20小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約30℃之溫度及約6之pH下保持大於或等於約16小時或約20小時。在一些實施例中，使絮凝步驟中之包含抗-c-met抗體及陽離子聚合物之組合物在約34℃之溫度及約6之pH下保持大於或等於約16小時或約20小時。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.2%(v/v)之PEI。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.4%(v/v)之PEI。在一些實施例中，陽離子聚合物係濃度為約0.6%(v/v)之PEI。

在抗-c-met抗體之純化中使用絮凝步驟可獲得下文所提供之一或多種改良。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以改良絮凝有效性(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時可達成更佳離心分離(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時可達成更佳的濃縮物及/或蛋白質A彙集物穩定性(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以改良穩定性，從而使濃縮物及/或蛋白質A彙集物可保持在15℃至25℃(例如，約15℃、約20℃或約25℃中之任一者)下。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以改良針對濃縮物之過濾、蛋白質A負載及/或稍後層析步驟(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以減少雜質，包括(但不限)DNA及HCP，例如ECP(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以允許額外稀釋，從而降低固體含量百分比(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，額外稀釋改良離心機產率(例如，與不存在絮凝步驟下之相同方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以增加離心機流動速率(例如，與不存在絮凝步驟下之相同方法相比)。在一些實施例中，離心機流動速率之增加允許更短處理時間及實質上等效之分離(例如，與不存在絮凝步驟下之相同方法相比)。在一些實施例中，使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時以改良絮凝有效性(例如，與不存在絮凝步驟之純化方法相比)。在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物進一步包含陽離子聚合物。在一些實施例中，陽離子聚合物係PEI。在一些實施例中，PEI濃度(在組合物中)係0.1%(v/v)、0.1%(v/v)、0.2%(v/v)、0.25%(v/v)、0.3%(v/v)、0.35% (v/v)、0.4%(v/v)、0.45%(v/v)或0.5%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.1%(v/v)至約0.4%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.6%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.4%(v/v)中之任一者。在一些實施例中，PEI濃度係約0.2%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.4%(v/v)。

在一些實施例中，當使包含抗-c-met抗體之組合物在30℃或更大之溫度及約pH 6之pH下保持超過6小時(例如，約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約22小時或24小時)時，在抗-c-met抗體之純化中使用絮凝步驟可獲得任一或多種改良。在一些實施例中，使組合物在30℃或更大之溫度及約pH 6之pH下保持約16小時或更長時間。在一些實施例中，使組合物在30℃或更大之溫度及約pH 6之pH下保持約10小時或更長時間。在一些實施例中，使組合物在30℃或更大之溫度及約pH 6之pH下保持約12小時或更長時間。在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物進一步包含陽離子聚合物。在一些實施例中，陽離子聚合物係PEI。在一些實施例中，PEI濃度(在組合物中)係0.1%(v/v)、0.1%(v/v)、0.2%(v/v)、0.25%(v/v)、0.3%(v/v)、0.35%(v/v)、0.4%(v/v)、0.45%(v/v)或0.5%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.1%(v/v)至約0.4%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.6%(v/v)、約0.2%(v/v)至約0.4%(v/v)中之任一者。在一些實施例中，PEI濃度係約0.2%(v/v)。在一些實施例中，PEI濃度係約0.4%(v/v)。

在一些實施例中，該方法進一步包含離心。在一些實施例中，該方法進一步包含親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)，例如彼等下文所述者。在一些實施例中，該方法進一步包含一或多個離子交換層析步驟，例如彼等下文所述者中之任一者。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟及離心(例如，6000 rpm，20 lpm，Q/σ=6×10^-3 L/hr/m²)，之後b)親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)。

在一些實施例中，該方法進一步包含過濾(例如，在離心後)。在一些實施例中，過濾係深度過濾。

在一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物係由細胞培養物之均質化產生。在一些實施例中，細胞培養物係大腸桿菌細胞培養物。在一些實施例中，將細胞培養物均質化，其中所得包含抗-c-met抗體之組合物包含約8-20%固體。

另外，本文提供使用親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法。在一些實施例中，該方法包含在蛋白質A樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，該方法包含在蛋白質A樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

蛋白質A樹脂之實例包括(但不限於)MabSelect^TM、MabSelect Sure^TM、Prosep vA、Prosep Ultra-Plus及/或 POROS MabCapture A。在一些實施例中，蛋白質A樹脂包含瓊脂糖基質。在一些實施例中，包含瓊脂糖基質之蛋白質A樹脂係MabSelect SuRe^TM及MabSelect^TM。在一些實施例中，蛋白質A樹脂係MabSelect SuRe^TM樹脂(GE Healthcare(Piscataway,NJ)；包含結合瓊脂糖基質之源自耐鹼性蛋白質A之配體之樹脂)。例如，在一些實施例中，該方法包含在MabSelect SuRe^TM樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。

在一些實施例中，蛋白質A親和力層析之流動速率係介於以下中之任一者之間：約5 CV/小時至約40 CV/小時、約15 CV/小時至約40 CV/小時、約20 CV/小時至約40 CV/小時或約25 CV/小時至約40 CV/小時。

蛋白質A樹脂可經平衡緩衝液平衡，且隨後可將包含各種雜質(例如，所收穫細胞蛋白質(例如，ECP))之未經純化及/或部分純化抗-c-met抗體加載至經平衡樹脂上。當抗-c-met抗體流動經過樹脂時，抗-c-met抗體及各種雜質吸附至經固定蛋白質A。可使用洗滌緩衝液來去除一些雜質，例如宿主細胞雜質，但非抗-c-met抗體。用溶析緩衝液自樹脂溶析抗-c-met抗體。

用於蛋白質A親和力層析之平衡緩衝液可包含Tris及鹽。可用鹽之實例包括(但不限於)氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂及/或氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約7.1、約7.3、約7.5、約7.7或約7.9。

用於蛋白質A親和力層析之洗滌緩衝液可包含緩衝液。可用緩衝液之實例包括(但不限於)精胺酸緩衝液、乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及/或磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，緩衝液係磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液係磷酸鉀。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液係磷酸鈉。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液之濃度係介於約0.1 M與約1.0 M之間。例如，在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液之濃度係以下中任一者：約0.2 M、約0.4 M、約0.6 M、約0.8 M或約0.1 M。在一些實施例中，洗滌緩衝液之pH係以下中之任一者：約7.0、約7.25、約7.5、約7.75或約8.0。

用於蛋白質A親和力層析之溶析緩衝液可包含緩衝液。可用緩衝液之實例包括(但不限於)精胺酸緩衝液、乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及/或磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，緩衝液係磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液係磷酸鉀。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液係磷酸鈉。在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液係甘胺酸磷酸鹽。在一些實施例中，磷酸鹽緩之濃度沖液係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，磷酸鹽緩衝液之濃度係以下中任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，溶析緩衝液之pH係以下中之任一者：約3.1、約3.3、約3.5或約3.7。在一些實施例中，溶析緩衝液之導電率係介於約0.9 mS/cm與約1.1 mS/cm之間。在一些實施例中，溶析緩衝液之導電率係以下中之任一者：約0.9 mS/cm、約1.0 mS/cm或約1.1 mS/cm。例如，在一些實施例中，該方法包含在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及用溶析緩衝液溶析抗-c-met抗體，其中溶析緩衝液包含濃度為約0.075 M且導電率介於約0.9 mS/cm與約1.1 mS/cm間之甘胺酸磷酸鹽。MabSelect SuRe^TM樹脂係經由環氧樹脂活化偶合至耐鹼性重組蛋白質A配體之高度交聯之瓊脂糖基質。

在一些實施例中，該方法進一步包含絮凝步驟，例如彼等上文所述者。在一些實施例中，該方法進一步包含離心。在一些實施例中，該方法進一步包含一或多個離子交換層析步驟，例如彼等本文所述者中之任一者。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟及離心，之後b)蛋白質A親和力層析(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)，之後c)一或多次離子交換層析。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於1,800 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於以下中之任一者：約1,700 ng/mg、約1,600 ng/mg、約1,500 ng/mg、約1,400 ng/mg、約1,300 ng/mg、約1,200 ng/mg、約1,100 ng/mg或約1,000 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約800 ng/mg與約1,200 ng/mg之間或介於約900 ng/mg與約1,100 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在MabSelect SuRe^TM樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於以下中之任一者：約40%、約35%、約30%、約25%或約20%(與不存在絮凝步驟之相同純化方法及/或不存在絮凝步驟及作為蛋白質A親和力層析樹脂之Prosep vA之相同純化方法相比)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使蛋白質A親和力層析後之PEI降至小於以下中之任一者：約50 μg/mL、約45 μg/mL、約40 μg/mL、約35 μg/mL或約30 μg/mL。在一些實施例中，蛋白質A親和力層析後之PEI不可檢測。在一些實施例中，蛋白質A親和力樹脂係瓊脂糖基質。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

本文進一步提供純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法，其包含一或多個離子交換層析步驟。在一些實施例中，離子交換層析係陰離子交換(AE)層析。在一些實施例中，離子交換層析係陽離子交換(CE)層析。

例如，本文提供純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法，其包含在弱AE樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收抗-c-met抗體。在一些實施例中，弱AE樹脂係以穿流模式運行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

弱AE樹脂通常含有三級或二級胺官能基，例如DEAE (二乙基胺基乙基)。弱AE樹脂之實例為業內已知且包括(但不限於)DEAE Sepharose Fast Flow、Capto DEAE、POROS D、Toyopearl DEAE 650C、Toyopearl DEAE 650M、Toyopearl DEAE 650S、TSKgel DEAE 5PW 30及/或TSKgel DEAE 5PW 20。在一些實施例中，弱AE樹脂係Capto DEAE(附接至經化學修飾之高流動瓊脂糖基質之弱二乙基胺基乙基陰離子交換劑)。在一些實施例中，弱AE樹脂係DEAE Sepharose Fast Flow。

在一些實施例中，弱AE層析之流動速率係以下中之任一者：約100 cm/小時、約125 cm/小時、約150 cm/小時、約175 cm/小時、約250 cm/小時、約500 cm/小時、約750 cm/小時、約1000 cm/小時、約1250 cm/小時或約1400 cm/小時。

弱AE樹脂可經平衡緩衝液平衡，且隨後可將包含各種雜質(例如，所收穫細胞蛋白質(例如，ECP))之未經純化或部分純化抗-c-met抗體加載至經平衡樹脂上。當抗-c-met抗體流動經過樹脂時，雜質吸附至弱AE樹脂，而抗-c-met抗體存於穿流中。

用於弱AE層析之平衡緩衝液包括(但不限於)Tris緩衝液、甘胺酸緩衝液、CAPSO、CAPS、CHES、TAPS及/或磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，用於弱AE層析之平衡緩衝液包含Tris及鹽。可用於平衡緩衝液中之鹽之實例包括(但不限於)氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂及/或氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，用於弱AE層析之平衡緩衝液包含甘胺酸、磷酸鹽及Tris。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.15 M之間或介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.001 M與0.01 M.之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.001 M、約0.0025 M、約0.005 M、約0.0075 M或約0.01 M。在一些實施例中，甘胺酸之濃度係介於約25 mM至約100 mM之間。在一些實施例中，磷酸之濃度係以下中之任一者：約2.5 mM、約5.0 mM、約7.5 mM或約10.0 mM。在一些實施例中，磷酸之濃度係介於約2.5 mM至約10.0 mM之間。在一些實施例中，甘胺酸之濃度係以下中之任一者：約25 mM、約50 mM、約75 mM或約100 mM。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH高於所關注多肽(例如，抗-c-met抗體)之pI。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係介於約8.7與約9.1之間。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約8.7、約8.8、約8.9或約9.0。在一些實施例中，高於所關注多肽(例如，抗-c-met抗體)之pI之pH產生所關注多肽上之淨負電荷。在一些實施例中，所關注多肽(例如，抗-c-met抗體)上之淨負電荷導致所關注多肽與弱陰離子樹脂間之吸引力。在一些實施例中，所關注多肽(例如，抗-c-met抗體)之pI介於約8.2與約8.4之間(例如，約8.2、約8.3及/或約 8.4)。

在一些實施例中，該方法進一步包含絮凝步驟，例如上述者。在一些實施例中，該方法進一步包含離心。在一些實施例中，該方法進一步包含如上文所述之蛋白質A親和力層析。在一些實施例中，該方法進一步包含一或多個其他離子交換層析步驟，例如彼等本文所述者中之任一者。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟，b)離心步驟，之後c)親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)，之後d)弱陰離子交換層析。在一些實施例中，本文提供純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法，其包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，d)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及e)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於約200 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於或等於以下中之任一者：約300 ng/mg、約275 ng/mg、約250 ng/mg、約225 ng/mg、約200 ng/mg、約190 ng/mg、約180 ng/mg或約170 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約150 ng/mg與約190 ng/mg之間或介於約160 ng/mg與約180 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於約75%、70%、65%、60%或55%(與沒有絮凝步驟、以Prosep vA作為蛋白質A親和力層析樹脂、及/或弱CE樹脂(例如，CM Sepharose)之相同方法相比)。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於約200 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於或等於以下中之任一者：約300 ng/mg、約275 ng/mg、約250 ng/mg、約225 ng/mg、約200 ng/mg、約190 ng/mg、約180 ng/mg或約170 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約150 ng/mg與約190 ng/mg之間或介於約160 ng/mg與約180 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於約75%、70%、65%、60%或55%(與沒有絮凝步驟、以Prosep vA作為蛋白質A親和力層析樹脂、及/或弱CE樹脂(例如，CM Sepharose)之相同方法相比)。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一所述純化方法之一些實施例中，該方法進一步包含在強CE樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

強CE交換樹脂通常含有鋶離子。強CE樹脂之實例為業內已知且包括(但不限於)MiniS PC 3.2/3、Mini S 4.6/50 PE、Mono S 5/50GL、RESOURCE S、SOURCE 15S、SOURCE 30S、SP Sepharose Fast Flow、POROS HS 50、MacroCap SP、HiTrap SPFF、HiTrap Capto S、SP Sepharose XL、Toyopearl SP 550c、SP Sepharose BB、TSKGel SP-5PW-HR20、Toyopearl SP 650c、Toyopearl MegaCap II SP-550EC、Toyopearl SP-550C、Toyopearl GigaCap S-650M、Toyopearl SP-650M、Toyopearl SP-650S、TSKgel SP-3PW 30、TSKgel SP 5P@ 30、TSKgel SP-5PW 20、Capto S及/或Fractogel SO3。在一些實施例中，強CE樹脂係POROS HS 50(附接至經交聯聚(苯乙烯-二乙烯基苯)載體基質之磺丙基表面官能基)。在一些實施例中，強CE樹脂係SP Sepharose Fast Flow。在一些實施例中，強CE樹脂係Toyopearl SP 550c。

在一些實施例中，強CE層析之流動速率係介於以下中之任一者之間：約50 cm/小時至約500 cm/小時、約50 cm/小時至約250 cm/小時及/或約250 cm/小時至約500 cm/小時。在一些實施例中，流動速率係以下中之任一者：約105 cm/小時、約125 cm/小時、約135 cm/小時、約145 cm/小時、約155 cm/小時、約165 cm/小時、約185 cm/小時及/或約250 cm/小時。

在一些實施例中，強CE層析之導電率小於約1.9 mS/cm(在約pH 8.9-9.0下)及/或小於約2.4 mS/cm(在pH 9.0或更大下)。在一些實施例中，導電率係介於約1.4 mS/cm與約1.9 mS/cm之間(在約pH 8.9至pH 9.0下)或介於約1.4 mS/cm與約1.9 mS/cm之間(在約pH 8.9至pH 9.5下)。

強CE樹脂可經平衡緩衝液平衡，且隨後可將包含各種雜質(例如，所收穫細胞蛋白質(例如，ECP))之未經純化或部分純化抗-c-met抗體加載至經平衡樹脂上。當抗-c-met抗體流動經過樹脂時，抗-c-met抗體及各種雜質吸附至經固定強CE樹脂。可使用洗滌緩衝液來去除一些雜質，例如宿主細胞雜質，但非抗-c-met抗體。在一些實施例中，利用平衡緩衝液作為洗滌緩衝液。用溶析緩衝液自樹脂溶析抗-c-met抗體。

用於強CE層析之平衡緩衝液可包含MOPS。在一些實施例中，平衡緩衝液中之MOPS之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，MOPS之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約7.0、約7.1、約7.2、約7.3或約7.4。

用於強CE層析之溶析緩衝液可包含MOPS及乙酸鹽。在一些實施例中，鹽係乙酸鉀。在一些實施例中，鹽係乙酸鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之MOPS之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，MOPS之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，乙酸鹽之濃度係以下中之任一者：約0.1 M、約0.15 M、約0.2 M、約0.25 M或約0.3 M。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約7.0、約7.1、約7.2、約7.3或約7.4。

在一些實施例中，該方法進一步包含絮凝步驟，例如上述者。在一些實施例中，該方法進一步包含離心。在一些實施例中，該方法進一步包含如上文所述之蛋白質A親和力層析。在一些實施例中，該方法進一步包含一或多個其他離子交換層析步驟，例如彼等本文所述者中之任一者。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟，之後b)離心步驟，之後c)親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)，之後d)弱陰離子交換層析，之後e)強陽離子交換層析。例如，在一些實施例中，純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及h)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，d)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及e)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於約70 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於或等於以下中之任一者：約60 ng/mg、約55 ng/mg、約50 ng/mg、約45 ng/mg、約40 ng/mg、約35 ng/mg或約30 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約30 ng/mg與約50 ng/mg之間或介於約35 ng/mg與約45 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及e)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於約85%、80%、75%、70%、65%或60%(與沒有絮凝步驟、以Prosep vA作為蛋白質A親和力層析樹脂、及/或弱CE樹脂(例如，CM Sepharose)之相同純化方法相比)。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，g)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及h)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於約70 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於或等於以下中之任一者：約60 ng/mg、約55 ng/mg、約50 ng/mg、約45 ng/mg、約40 ng/mg、約35 ng/mg或30 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約30 ng/mg與約50 ng/mg之間或介於約35 ng/mg與約45 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，g)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及h)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於約85%、80%、75%、70%、65%或60%(與沒有絮凝步驟、以Prosep vA作為蛋白質A親和力層析樹脂、及/或弱CE樹脂(例如，CM Sepharose)之相同純化方法相比)。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一所述純化方法之一些實施例中，該方法進一步包含在強AE樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

強AE交換樹脂通常含有四級銨離子。強AE樹脂之實例為業內已知且包括(但不限於)Mini Q PC 3.2/3、Mini Q 4.6/50 PE、Mono Q 5/50 GL、Mono Q PC 1.6/5、RESOURCE Q、HiTrap Q HP、HiTrap Q FF、HiPrep SP FF、Q Sepharose Fast Flow、Capto Q、HiTrap Q XL、POROS HQ 50、Toyopearl SuperQ-650C、Toyopearl QAE-550C、Toyopearl Q-600CAR、Toyopeawrl GigaCap Q-650M、Toyopearl SuperQ-650M、Toyopearl Super Q-650S、TSKgel SuperQ-5PW 30、TSKgel SuperQ-5PW 20及/或Fractogel TMAE。在一些實施例中，強AE樹脂係Q Sepharose Fast Flow(附接至高度交聯之瓊脂糖載體基質之-O-CH₂CHOHCH₂OCH₂CHOHCH₂N⁺(CH₃)₃表面官能基)。在一些實施例中，強AE樹脂係Capto Q。在一些實施例中，強AE樹脂係Q Sepharose Fast Flow。

在一些實施例中，強AE層析之流動速率係介於以下中之任一者之間：約50 cm/hr至約500 cm/hr、約50 cm/hr至約250 cm/hr及/或約250 cm/hr至約500 cm/小時。在一些實施例中，流動速率係以下中之任一者：約105 cm/小時、約125 cm/小時、約135 cm/小時、約145 cm/小時、約155 cm/小時、約165 cm/小時、約185 cm/小時及/或約250 cm/小時。

在一些實施例中，強AE層析之導電率係小於約1.9 mS/cm(在約pH 8.9-9.0下)及/或小於約2.4 mS/cm(在pH 9.0或更大下)。在一些實施例中，導電率係介於約1.4 mS/cm與約1.9 mS/cm之間(在約pH 8.9至pH 9.0下)或介於約1.4 mS/cm與約1.9 mS/cm之間(在約pH 8.9至pH 9.5下)。

強AE樹脂可經預平衡緩衝液、之後平衡緩衝液平衡，且隨後可將包含各種雜質(例如，所收穫細胞蛋白質(例如，ECP))之未經純化或部分純化抗-c-met抗體加載至經平衡樹脂上。當抗-c-met抗體流動經過樹脂時，抗-c-met抗體及各種雜質吸附至經固定強AE樹脂。可使用洗滌緩衝液來去除一些雜質，例如宿主細胞雜質，但非抗-c-met抗體。在一些實施例中，利用平衡緩衝液作為洗滌緩衝液。用溶析緩衝液自樹脂溶析抗-c-met抗體。

用於強AE層析之預平衡緩衝液可包含Tris及鹽。可用於預平衡緩衝液之鹽之實例包括(但不限於)氯化鉀、氯化鈉、硫酸鎂、硫酸鈉、乙酸鈉及/或檸檬酸鈉。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.1 M與約1.0 M之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.1 M、約0.25 M、約0.5 M、約0.75 M或約1.0 M。在一些實施例中，預平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約8.7、約8.8、約8.9、約9.0、約9.1或約9.2。

用於強AE層析之平衡緩衝液可包含Tris及鹽。可用於平衡緩衝液之鹽之實例包括(但不限於)氯化鉀、氯化鈉、硫酸鎂、硫酸鈉、乙酸鈉及/或檸檬酸鈉。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.01M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1M。在一些實施例中，平衡緩衝液之pH係以下中之任一者：約8.7、約8.8、約8.9、約9.0、約9.1或約9.2。

用於強AE層析之洗滌緩衝液可包含Tris及鹽。可用於洗滌緩衝液之鹽之實例包括(但不限於)氯化鉀、氯化鈉、硫酸鎂、硫酸鈉、乙酸鈉及/或檸檬酸鈉。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.01 M與0.1 M之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，洗滌緩衝液之pH係以下中之任一者：約8.7、約8.8、約8.9、約9.0、約9.1或約9.2。

用於強AE層析之溶析緩衝液可包含Tris及鹽。可用於預平衡緩衝液之鹽之實例包括(但不限於)氯化鉀、氯化鈉、硫酸鎂、硫酸鈉、乙酸鈉及/或檸檬酸鈉。在一些實施例中，鹽係氯化鉀。在一些實施例中，鹽係氯化鈉。在一些實施例中，平衡緩衝液中之Tris之濃度係介於約0.01 M與約0.1 M之間。例如，在一些實施例中，Tris之濃度係以下中之任一者：約0.01 M、約0.025 M、約0.05 M、約0.075 M或約0.1 M。在一些實施例中，鹽之濃度係介於約0.015 M與0.15 M之間。例如，在一些實施例中，鹽之濃度係以下中之任一者：約0.015 M、約0.045 M、約0.075 M、約0.095 M或約0.115 M。在一些實施例中，洗滌緩衝液之pH係以下中之任一者：約8.7、約8.8、約8.9、約9.0、約9.1或約9.2。

在一些實施例中，該方法進一步包含絮凝步驟，例如上述者。在一些實施例中，該方法進一步包含離心。在一些實施例中，該方法進一步包含如上文所述之蛋白質A親和力層析。在一些實施例中，該方法進一步包含一或多個其他離子交換層析步驟，例如彼等本文所述者中之任一者。在一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟，之後b)離心步驟，之後c)親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)，之後d)弱AE層析，之後e)強CE層析，之後f)強AE層析。例如，在一些實施例中，純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，h)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，i)在強AE樹脂(例如，Q Sepharose Fast Flow、Capto Q或POROS HQ 50)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，及j)自強AE樹脂溶析抗-c-met抗體。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物h)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，i)在強AE樹脂(例如，Q Sepharose Fast Flow、Capto Q或POROS HQ 50)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及j)自強AE樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降至小於約50 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg或約10 ng/mg。在一些實施例中，使HCP(例如，平均HCP)降至介於約1 ng/mg與約15 ng/mg之間或介於約5 ng/mg與約15 ng/mg之間。在一些實施例中，該方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，h)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，i)在強AE樹脂(例如，Q Sepharose Fast Flow、Capto Q或POROS HQ 50)上加載包含抗-c-met抗體之組合物及j)自強AE樹脂溶析抗-c-met抗體，且其中使HCP(例如，平均HCP)降低大於約55%、約 50%、約45%、約40%、約35%或約30%(與沒有絮凝步驟、以Prosep vA作為蛋白質A親和力層析樹脂、及/或弱CE樹脂(例如，CM Sepharose)之相同純化方法相比)。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一本文所述方法之一些實施例中，該方法進一步包含超濾及/或滲濾。在一些實施例中，該方法包含a)絮凝步驟，之後b)離心步驟，之後c)親和力層析(例如，蛋白質A親和力層析)，之後d)弱AE層析，之後e)強CE層析，之後f)強AE層析，之後g)超濾及/或滲濾。例如，在一些實施例中，純化包含抗-c-met抗體之組合物之方法包含a)使包含抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，b)離心包含抗-c-met抗體之組合物，c)在蛋白質A親和力樹脂(例如，MabSelect SuRe^TM樹脂)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，d)自蛋白質A親和力樹脂溶析抗-c-met抗體，e)在弱AE樹脂(例如，DEAE Sepharose Fast Flow或Capto DEAE)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，f)從來自弱AE樹脂之穿流液中回收抗-c-met抗體，g)在強CE樹脂(例如，SP Sepharose Flast Flow、POROS HS 50或Toyopearl SP 550c)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，h)自強CE樹脂溶析抗-c-met抗體，i)在強AE樹脂(例如，Q Sepharose Fast Flow、Capto Q 或POROS HQ 50)上加載包含抗-c-met抗體之組合物，j)自強AE樹脂溶析抗-c-met抗體，及k)使來自強AE樹脂之包含抗-c-met抗體之溶析液經受超濾(例如，10 KDa再生纖維素超濾膜)及/或滲濾。純化抗-c-met抗體之方法之步驟可以任何順序完成。在一些實施例中，該等步驟係依序進行。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。

在任一純化方法之一些實施例中，存於包含抗-c-met抗體之組合物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。在任一純化方法之一些實施例中，存於包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量小於或等於以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係介於以下中之任一者之間：約0.001 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.2 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.1 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.2 pg/mg或約0.01 pg/mg與約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量係藉由PCR測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之浸出蛋白質A(LpA)小於或等於約2 ng/mg。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LpA小於或等於約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係介於以下中之任一者之間：約0.001 ng/mg與約2 ng/mg、約0.01 ng/mg與約2 ng/mg、約0.1 ng/mg與約2 ng/mg或約1 ng/mg與約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係以下中之任一者：約1 ng/mg、約1.25 ng/mg、約1.5 ng/mg、約1.75 ng/mg或約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA之百分比係藉由浸出蛋白質A配體分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LAL小於或等於約0.01 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL小於或等於以下中之任一者：約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.002 EU/mg或約0.001 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係介於以下中之任一者之間：約0.0001 EU/mg與約0.01 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.007 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.006 EU/mg或約0.0001 EU/mg與約0.005 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係以下中之任一者：約0.01 EU/mg、約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.004 EU/mg、約0.003 EU/mg或約0.002 EU/mg。在一些實施例中，LAL之百分比係藉由LAL分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之聚集物的平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比係藉由尺寸排除層析(SEC)分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之單體的平均百分比大於或等於約99.5%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比大於或等於以下中之任一者：約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約99.5%與約99.999%、約99.5%與約99.99%、約99.6%與約99.999%、約99.6%與約99.99%、約99.7%與約99.999%、約99.7%與約99.99%、約99.8%與約99.999%、約99.8%與約99.99%或約99.9%與約99.999%、約99.9%與約99.99%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係以下中之任一者：約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之片段的平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係以下中之任一者：約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%、約0.1%或約0%。在一些實施例中，片段不可檢測。在一些實施例中，片段之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之酸性變體的平均百分比小於或等於約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%、約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約1%與約20%、約5%與約20%或約10%與約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%或約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之主峰的平均百分比大於或等於約75%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比大於或等於約77.5%、約80%、約82.5%或約85%中之任一者。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約75%與約95%、約77.5%與約95%、約80%與約95%、約82.5%與約95%或約85%與約95%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係以下中之任一者：約75%、約77.5%、約 80%、約82.5%或約85%。在一些實施例中，主峰之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。在任一純化方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之鹼性變體的平均百分比小於或等於約2.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係介於以下中任一者之間：約0.001%與約2%、約0.01%與約2%、約0.001%與約1.5%或約0.01%與約1.5%、約0.001%與約1.0%或約0.01%與約1.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係以下中之任一者：約2%、約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

本文進一步提供經純化抗-c-met抗體及包含經純化抗-c-met抗體之組合物。在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體係藉由任一本文所述純化方法純化。在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體可藉由任一本文所述純化方法獲得。在一些實施例中，存於包含可藉由任一本文所述純化方法純化及/或獲得之經純化抗-c-met抗體之組合物中的HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，存於包含可藉由任一本文所述純化方法純化及/或獲得之經純化抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中的平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於批次(例如，整批)中之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量小於或等於以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係介於以下中之任一者：約0.001 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.2 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.1 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.2 pg/mg或約0.01 pg/mg與約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA 含量係以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量係藉由PCR測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之浸出蛋白質A(LpA)小於或等於約2 ng/mg。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LpA小於或等於約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係介於以下中之任一者之間：約0.001 ng/mg與約2 ng/mg、約0.01 ng/mg與約2 ng/mg、約0.1 ng/mg與約2 ng/mg或約1 ng/mg與約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係以下中之任一者：約1 ng/mg、約1.25 ng/mg、約1.5 ng/mg、約1.75 ng/mg或約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA之百分比係藉由浸出蛋白質A配體分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LAL小於或等於約0.01 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL小於或等於以下中之任一者：約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.002 EU/mg或約0.001 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係介於以下中之任一者之間：約0.0001 EU/mg與約0.01 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.007 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.006 EU/mg或約0.0001 EU/mg與約0.005 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係以下中之任一者：約0.01 EU/mg、約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.004 EU/mg、約0.003 EU/mg或約0.002 EU/mg。在一些實施例中，LAL之百分比係藉由LAL分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之聚集物的平均百分比小於或等於約0.3%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之聚集物之平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比係藉由尺寸排除層析(SEC)分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之單體的平均百分比大於或等於約99.5%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之單體之平均百分比大於或等於約0.3%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比大於或等於以下中之任一者：約99.6%、約99.7%、約99.8% 或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約99.5%與約99.999%、約99.5%與約99.99%、約99.6%與約99.999%、約99.6%與約99.99%、約99.7%與約99.999%、約99.7%與約99.99%、約99.8%與約99.999%、約99.8%與約99.99%或約99.9%與約99.999%、約99.9%與約99.99%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係以下中之任一者：約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之片段的平均百分比小於或等於約0.3%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之片段之平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係以下中之任一者：約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%、約0.1%或約0%。在一些實施例中，片段不可檢測。在一些實施例中，片段之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之酸性變體的平均百分比小於或等於約20%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之平均酸性變體小於或等於約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%、約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約1%與約20%、約5%與約20%或約10%與約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%或約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之主峰的平均百分比大於或等於約75%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之主峰之平均百分比大於或等於約75%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比大於或等於約77.5%、約80%、約82.5%或約85%中之任一者。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約75%與約95%、約77.5%與約95%、約80%與約95%、約82.5%與約95%或約85%與約95%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係以下中之任一者：約75%、約77.5%、約80%、約82.5%或約85%。在一些實施例中，主峰之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV 部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之鹼性變體的平均百分比小於或等於約2.0%。另外，本文提供包含抗-c-met抗體之組合物，其中存於組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。本文進一步提供包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)，其中存於組合物中之鹼性變體之平均百分比小於或等於約2.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係介於以下中任一者之間：約0.001%與約2%、約0.01%與約2%、約0.001%與約1.5%或約0.01%與約1.5%、約0.001%與約1.0%或約0.01%與約1.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係以下中之任一者：約2%、約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)濃度大於或等於以下中之任一者：約0.5 mg/mL、約1 mg/mL、約1.5 mg/mL或約2 mg/mL。在任一組合物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)濃度小於或等於以下中之任一者：約0.5 mg/mL、約1 mg/mL、約1.5 mg/mL或約2 mg/mL。

可藉由業內已知方法量測HCP(例如，ECP)之含量。例如，可使用用於大腸桿菌蛋白質之多產品三明治(sandwich)ELISA來量化ECP之含量。將親和力純化山羊抗完整ECP抗體固定於微量滴定板孔上。在孔中培育彙集試樣之稀釋液，之後與偶聯至辣根過氧化物酶之親和力純化山羊抗-完整ECP一起培育。利用鄰苯二胺二鹽酸鹽檢測辣根過氧化物酶酶促活性。藉由在微量滴定板讀數器中讀取490 nm下之吸光度來量化ECP。使用4-參數電腦曲線擬合程式來產生標準曲線，且自動計算試樣濃度。在分析前，用分析稀釋劑稀釋試樣。可在分析稀釋劑中實施2倍連續稀釋，以使得吸光度讀取屬於標準曲線之範圍內。ELISA之分析範圍通常為1.56 ng/mL至100 ng/mL。

另外，可藉由業內已知方法量測DNA含量，該等方法包括(但不限於)如實例中所述之PCR或rtPCT。可藉由業內已知方法量測LpA含量，該等方法包括(但不限於)如實例中所述之ELISA。可使用動力學顯色法LAL分析來量測細菌內毒素，該方法在本文中闡述為如實例中所述之美洲鱟試劑(LAL)。可藉由業內已知方法量測單體、聚集物及片段之百分比，該等方法包括(但不限於)如實例中所述之尺寸排除層析。可藉由業內已知方法量測主峰、酸性變體及鹼性變體之百分比，該等方法包括(但不限於)如實例中所述之陽離子交換層析。

III.重組方法

用於本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法中之抗-c-met抗體可藉由(例如)如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組合物產生。在一個實施例中，提供編碼抗體之經分離核酸。此核酸可編碼抗體中包含VL之胺基酸序列及/或包含VH之胺基酸序列(例如，抗體之輕鏈及/或重鏈)。在又一實施例中，提供一或多個包含此核酸之載體(例如，表現載體)。在又一實施例中，提供包含此核酸之宿主細胞。在一個此類實施例中，宿主細胞包含以下載體(例如，已經以下載體轉化)：(1)包含核酸之載體，該核酸編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列；或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在又一實施例中，宿主細胞包含以下載體(例如，已經以下載體轉化)：(1)包含核酸之載體，該核酸編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列及包含Fc區之胺基酸序列；或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體及包含編碼包含Fc區之胺基酸序列之核酸的第三載體。單臂抗體之產生闡述於(例如)WO 2005/063816中。

用於選殖或表現編碼抗體之載體之適宜宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。例如，抗體可在細菌中產生，特定而言在無需糖基化及Fc效應子功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，例如，參見美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號、WO/05/063816(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其闡述抗體片段在大腸桿菌中之表現)。表現後，可自細菌細胞團以可溶部分形式分離抗體且可進一步純化。

除原核生物外，真核微生物(例如絲狀真菌或酵母)亦係編碼抗體之載體之適宜選殖或表現宿主，包括糖基化途徑已「經人類化」從而產生部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)及Li等人，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。

用於表現糖基化抗體之適宜宿主細胞亦源自多細胞有機體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出可與昆蟲細胞聯合使用之諸多桿狀病毒菌株，尤其用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞。

亦可使用植物細胞培養物作為宿主。例如，參見美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(闡述在轉基因植物中產生抗體之PL抗體TM技術)。

亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。例如，可使用適於懸浮液生長之哺乳動物細胞系。可用哺乳動物宿主細胞系之其他實例係由SV40轉化之猴腎CV1系(COS-7)；人類胚腎系(293或293細胞，如(例如)Graham等人，J.Gen Virol.36：59(1977)中所述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠支持細胞(TM4細胞，如(例如)Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)中所述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如(例如)Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)中所述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他可用哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞系，例如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞系之綜述，例如，參見Yazaki及Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa, NJ)，第255-268頁(2003)。

在一個實施例中，宿主細胞係原核生物(例如大腸桿菌)細胞。在一個實施例中，提供製備抗體之方法，其中該方法包含在適於表現抗-c-met抗體之條件下培養包含編碼抗-c-met抗體之核酸之大腸桿菌宿主細胞，及藉由上述方法自大腸桿菌宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在一個實施例中，宿主細胞係真核細胞，如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供製備抗體之方法，其中該方法包含在適於表現抗-c-met抗體之條件下培養包含編碼抗-c-met抗體之核酸的宿主細胞，及藉由上述方法自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗-c-met抗體。

為重組產生抗體，分離編碼抗體(例如，如上文所述)之核酸並將其插入一或多個載體中以進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此核酸可使用習用程序容易地分離出來並定序(例如，藉由使用能與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)。

IV.抗-C-Met抗體

本文提供包含經純化抗-c-met抗體之組合物及/或抗-c-met抗體用於本文所述純化方法中。可用抗-c-met抗體包括以足夠親和力及特異性與c-met結合且可降低或抑制一或多種c-met活性之抗體。經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體可用於調節 HGF/c-met相關效應之一或多個態樣，包括(但不限於)c-met活化、下游分子信號傳導(例如，有絲分裂促進劑活化之蛋白質激酶(MAPK)磷酸化)、細胞增生、細胞遷移、細胞存活、細胞形態發生及血管生成。該等效應可藉由任何生物學相關機制調節，包括破壞配體(例如，HGF)與c-met之結合、c-met磷酸化及/或c-met多聚化。在一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體干擾涉及c-met/HGF活性之疾病或病況。

在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係抗-c-met抗體片段。在一些實施例中，抗-c-met抗體係IgG1抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係IgG2抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體具有對c-met具有特異性之單一抗原結合臂。

在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價。單價抗體亦可藉由業內已知方法製得，例如，包括(但不限於)WO 2007/147901(闡述離子相互作用)、WO 2007/059782、WO 2007/048037、WO 2008/145137(非糖基化單價抗體)、WO 2009/089004(闡述靜電牽引效應)、WO 2010/129304(闡述藉由在於多肽間之界面處接觸之胺基酸中引入取代來製備異多聚分子之方法)、WO 2010/063785、WO 2011/133886及/或WO 2005/063816，該等案件之內容以整體引用方式併入本文中。

在一些實施例中，抗-c-met抗體片段可包含單一抗原結合臂及Fc區。抗-c-met抗體片段闡述於本文中且為業內已知，其呈單臂形式。因此，在一些實施例中，抗-c-met抗體片段係包含Fc區之單臂抗體(即，重鏈可變結構域與輕鏈可變結構域形成單一抗原結合臂)，其中Fc區包含第一及第二Fc多肽，其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，第一及第二Fc多肽形成比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高抗-c-met抗體之穩定性的Fc區。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19、CH1序列及第一Fc多肽之第一多肽，以及(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20及CL1序列之第二多肽。在一些實施例中，抗-c-met抗體進一步包含(c)包含第二Fc多肽之第三多肽。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體片段包含二價抗體之抗原結合位點且因此保留結合抗原之能力。在一些實施例中，抗-c-met抗體片段當存於二價抗體中時包含Fc區且保留通常與Fc區相關之生物學功能中之至少一者，例如FcRn結合、抗體半衰期調節、ADCC功能及補體結合。在一些實施例中，抗-c-met抗體片段不具有ADCC功能及/或補體結合活性。在一些實施例中，抗-c-met抗體片段係活體內半衰期與二價抗體實質上相似之單價抗體。例如，此一抗體片段可包含連接至能賦予片段活體內穩定性之Fc序列的抗原結合臂。在一些實施例中，Fc多肽包含野生型鉸鏈序列之部分或全部(通常於其N端)。在一些實施例中，Fc多肽不包含功能或野生型鉸鏈序列。

在一些實施例中，抗-c-met抗體片段係單臂抗體，如WO 2005/063816中所述。在一些實施例中，抗-c-met抗體之Fc區包含第一及第二Fc多肽，其中第一及第二多肽相對於野生型人類Fc各包含一或多個突變。在一些實施例中，空腔突變係T366S、L368A及/或Y407V。在一些實施例中，凸起突變係T366W。在一些實施例中，第一多肽包含圖1中繪示之Fc序列且第二多肽包含圖2中繪示之Fc序列。在一些實施例中，抗-c-met抗體可包含至少一個促進抗體片段內Fc序列之異源二聚化，同時使同源二聚化最小化之特性。

在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，阻斷抗-c-met抗體或拮抗性抗-c-met抗體完全抑制抗原之生物學活性。對於需要拮抗功能且其中抗-c-met抗體之二價性在結合至靶抗原後會導致不合意之激動效應(即使其係呈Fab片段之拮抗性抗-c-met抗體)之病理學病況之治療而言，單臂抗體之單價特性(即，包含單一抗原結合臂之抗體)可產生及/或確保在抗-c-met抗體結合至靶分子後之拮抗功能。此外，包含Fc區之單臂抗體之特徵在於，與具有類似/實質上相同之抗原結合特性之Fab形式相比之極佳藥物代謝動力學屬性(例如活體內延長之半衰期及/或降低之清除率)，由此克服使用習用單價Fab抗體之主要缺點。

經純化抗-c-met抗體及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體(其可以單臂抗體形式提供)包括彼等業內已知者(例如，參見Martens,T.等人，Clin.Cancer Res.12(20 Pt.1)：6144(2006)；US 6,468,529；WO 2006/015371；WO 2007/063816及WO 2010/045345，該等文獻以整體引用方式併入本文中)。在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含由雜交瘤細胞系產生之單株抗體之HVR序列中的一或多者，該雜交瘤細胞系係以美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)登錄號ATCC HB-11894(雜交瘤1A3.3.13)或HB-11895(雜交瘤5D5.11.6)寄存。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體，其包含ATCC登錄號ATCC HB-11894(雜交瘤1A3.3.13)或HB-11895(雜交瘤5D5.11.6)之輕鏈可變結構域之HVR中之一或多者及/或重鏈可變結構域之HVR中之一或多者及Fc多肽。

在任一經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體包含含有圖1中繪示之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列(SEQ ID NO：1-3)中一或多者的輕鏈可變結構域。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含含有圖1中繪示之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列(SEQ ID NO：4-6)中一或多者的重鏈可變結構域。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含含有圖1中繪示之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列(SEQ ID NO：1-3) 中一或多者的輕鏈可變結構域及圖1中繪示之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列(SEQ ID NO：4-6)中之一或多者。在一些實施例中，重鏈可變結構域包含圖1中繪示之HVR1-HC、HVR2-HC及HVR3-HC序列(SEQ ID NO：4-6)中之一或多者及圖1中繪示之FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC及FR4-HC序列(SEQ ID NO：11-14)中之一或多者。在一些實施例中，輕鏈可變結構域包含圖1中繪示之HVR1-LC、HVR2-LC及HVR3-LC序列(SEQ ID NO：1-3)中之一或多者及圖1中繪示之FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC及FR4-LC序列(SEQ ID NO：7-10)中之一或多者。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體，其包含輕鏈可變結構域之HVR(SEQ ID NO：1-3)中之一或多者及/或重鏈可變結構域之HVR(SEQ ID NO：4-6)中之一或多者及Fc多肽。

在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體包含：(a)至少1個、2個、3個、4個或5個選自由以下組成之群之HVR序列：(i)包含序列A1-A17之HVR-L1，其中A1-A17係KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：23)；(ii)包含序列B1-B7之HVR-L2，其中B1-B7係WASTRES(SEQ ID NO：24)；(iii)包含序列C1-C9之HVR-L3，其中C1-C9係QQYYAYPWT(SEQ ID NO：25)；(iv)包含序列D1-D10之HVR-H1，其中D1-D10係GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：26)；(v)包含序列E1-E18之HVR-H2，其中E1-E18係GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：27)；及(vi)包含序列F1-F11之HVR-H3，其中F1-F11係XYGSYVSPLDY(SEQ ID NO：28)且X不為R；及(b)至少一種變體HVR，其中該變體HVR序列包含至少一個SEQ ID NO：23、24、25、26、27或28中繪示之序列之殘基的修飾。在一些實施例中，抗-c-met抗體之HVR-L1包含序列SEQ ID NO：23。在一些實施例中，HVR-L2包含序列SEQ ID NO：24。在一些實施例中，HVR-L3包含序列SEQ ID NO：25。在一些實施例中，HVR-H1包含序列SEQ ID NO：26。在一些實施例中，HVR-H2包含序列SEQ ID NO：27。在一些實施例中，HVR-H3包含序列SEQ ID NO：28。在一些實施例中，HVR-H3包含TYGSYVSPLDY(SEQ ID NO：29)。在一些實施例中，HVR-H3包含SYGSYVSPLDY(SEQ ID NO：30)。在一些實施例中，包含該等序列(如本文所述之組合中)之抗-c-met抗體經人類化或為人類。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體，其包含輕鏈可變結構域之HVR(SEQ ID NO：23-25)中之一或多者及/或重鏈可變結構域之HVR(SEQ ID NO：26-30)中之一或多者及Fc多肽。

本文亦提供經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於本文所述純化方法中之抗-c-met抗體，其包含1個、2個、3個、4個、5個或6個HVR，其中各HVR包含選自由SEQ ID NO：23、24、25、26、27、28及29組成之群之序列，由其組成或基本上由其組成，且其中SEQ ID NO：23對應於HVR-L1，SEQ ID NO：24對應於HVR-L2，SEQ ID NO：25對應於HVR-L3，SEQ ID NO：26對應於HVR-H1，SEQ ID NO：27對應於HVR-H2，且SEQ ID NO：26、27或28對應於HVR-H3。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、24、25、26、27及29。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、24、25、26、27及30。

變體HVR可在HVR內具有一或多個殘基之修飾。在一些實施例中，HVR-L2變體在以下位置之任一組合中包含1至5個(1個、2個、3個、4個或5個)取代：B1(M或L)、B2(P、T、G或S)、B3(N、G、R或T)、B4(I、N或F)、B5(P、I、L或G)、B6(A、D、T或V)及B7(R、I、M或G)。在一些實施例中，HVR-H1變體在以下位置之任一組合中包含1至5個(1個、2個、3個、4個或5個)取代：D3(N、P、L、S、A、I)、D5(I、S或Y)、D6(G、D、T、K、R)、D7(F、H、R、S、T或V)及D9(M或V)。在一些實施例中，HVR-H2變體在以下位置之任一組合中包含1至4個(1個、2個、3個或4個)取代：E7(Y)、E9(I)、E10(I)、E14(T或Q)、E15(D、K、S、T或V)、E16(L)、E17(E、H、N或D)及E18(Y、E或H)。在一些實施例中，HVR-H3變體在以下位置之任一組合中包含1至5個(1個、2個、3個、4個或5個)取代：F1(T、S)、F3(R、S、H、T、A、K)、F4(G)、F6(R、F、M、T、E、K、A、L、W)、F7(L、I、T、R、K、V)、F8(S、A)、F10(Y、N)及F11 (Q、S、H、F)。各位置後圓括號中之字母指示闡釋性取代(即，替代)胺基酸；如熟習此項技術者會明瞭，其他胺基酸作為取代胺基酸之適宜性在本文所述之背景下可使用業內已知及/或本文所述技術來常規地評價。在一些實施例中，HVR-L1包含序列SEQ ID NO：23。在一些實施例中，變體HVR-H3中之F1係T。在一些實施例中，變體HVR-H3中之F1係S。在一些實施例中，變體HVR-H3中之F3係R。在一些實施例中，變體HVR-H3中之F3係S。在一些實施例中，變體HVR-H3中之F7係T。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係T或S，F3係R或S，且F7係T。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係T，F3係R且F7係T。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係S。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係T，且F3係R。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係S，F3係R且F7係T。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係T，F3係S，F7係T且F8係S。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H3，其中F1係T，F3係S，F7係T且F8係A。在一些實施例中，該變體HVR-H3抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1及HVR-H2，其中各按順序包含SEQ ID NO：1、2、3、4及5繪示之序列。在一些實施例中，該等抗體進一步包含人類亞組III重鏈框架共有序列。在該等抗體之一些實施例中，框架共有序列在71位、73位及/或78位處包含取代。在該等抗體之一些實施例中，71位係A，73位係T及/或78位係A。在該等抗體之一些實施例中，該等抗體進一步包含人類κI輕鏈框架共有序列。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含變體HVR-L2，其中B6為V。在一些實施例中，該變體HVR-L2抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、25、26、27及28中繪示之序列。在一些實施例中，該變體HVR-L2抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、25、26、27及29中繪示之序列。在一些實施例中，該變體HVR-L2抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、25、26、27及30中繪示之序列。在一些實施例中，該等抗-c-met抗體進一步包含人類亞組III重鏈框架共有序列。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，框架共有序列在71位、73位及/或78位處包含取代。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，71位係A，73位係T及/或78位係A。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，該等抗體進一步包含人類κI輕鏈框架共有序列。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含變體HVR-H2，其中E14係T，E15係K且E17係E。在一些實施例中，抗-c-met抗體包含變體HVR-H2，其中E17係E。在一些實施例中，該變體HVR-H3抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、24、25、26及28中繪示之序列。在一些實施例中，該變體HVR-H2抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、24、25、26及29中繪示之序列。在一些實施例中，該變體HVR-H2抗-c-met抗體進一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1及HVR-H3，其中各按順序包含SEQ ID NO：23、24、25、26及30中繪示之序列。在一些實施例中，該等抗-c-met抗體進一步包含人類亞組III重鏈框架共有序列。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，框架共有序列在71位、73位及/或78位處包含取代。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，71位係A，73位係T及/或78位係A。在該等抗-c-met抗體之一些實施例中，該等抗體進一步包含人類κI輕鏈框架共有序列。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含(a)包含以下序列之重鏈可變結構域：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及/或(b)包含以下序列之輕鏈可變結構域：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體，其包含(a)輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：20)及/或(b)重鏈可變結構域(SEQ ID NO：19)及(c)Fc多肽。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體包含(a)包含以下序列之重鏈可變結構域之HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及/或(b)包含以下序列之輕鏈可變結構域之HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體，其包含(a)輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：20)及/或(b)重鏈可變結構域(SEQ ID NO：19)及(c)Fc多肽。在一些實施例中，Fc區係人類IgG(例如，IgG1、2、3或4)之Fc區。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)且第二Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)且第二Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體係抗-c-met抗體片段，其中抗體片段包含(a)第一多肽，其包含含有SEQ ID NO：19之重鏈可變結構域、CH1序列(例如，SEQ ID NO：16)及第一Fc多肽；及(b)第二多肽，其包含含有SEQ ID NO：20之輕鏈可變結構域及CL1序列(例如，SEQ ID NO：15)。在一些實施例中，Fc區係人類IgG(例如，IgG1、2、3或4)之Fc區。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體係抗-c-met抗體片段，其中抗體片段包含(a)第一多肽，其包含含有SEQ ID NO：19之重鏈可變結構域、CH1序列(例如，SEQ ID NO：16)及第一Fc多肽；(b)第二多肽，其包含含有SEQ ID NO：20之輕鏈可變結構域及CL1序列(例如，SEQ ID NO：15)；及(c)第三多肽，其包含第二Fc多肽，其中重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域係以複合物形式存在且形成單一抗原結合臂且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，第一及第二Fc多肽形成比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性的Fc區。在一些實施例中，Fc區係人類IgG(例如，IgG1、2、3或4)之Fc區。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)且第二Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)且第二Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)。

在一些實施例中，抗-c-met抗體或其抗體片段，其中該抗體包含(a)第一多肽，其包含含有SEQ ID NO：19之重鏈可變結構域、CH1序列及第一Fc多肽；(b)第二多肽，其包含含有SEQ ID NO：20之輕鏈可變結構域及CL1序列；及(c)第三多肽，其包含第二Fc多肽，其中該重鏈可變結構域及該輕鏈可變結構域係以複合物形式存在且形成單一抗原結合臂，其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在且形成比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性之Fc區。在一些實施例中，Fc區係人類IgG(例如，IgG1、2、3或4)之Fc區。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)且第二Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，第一Fc多肽包含繪示於圖2中之Fc序列(SEQ ID NO：18)且第二Fc多肽包含繪示於圖1中之Fc序列(SEQ ID NO：17)。

在一些實施例中，抗-c-met抗體包含(a)包含重鏈之第一多肽，該多肽包含序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRS YVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：21)；(b)包含輕鏈之第二多肽，該多肽包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：22)；及包含Fc序列之第三多肽，該多肽包含序列DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：18)。在一些實施例中，重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域係以複合物形式存在且形成單一抗原結合臂，且其中第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。在一些實施例中，第一及第二Fc多肽形成比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性的Fc區。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體係單價抗體。在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體係人類化、人類或嵌合抗體。

在一些實施例中，編碼本文所述抗-c-met抗體中任一者之多核苷酸之表現使得可產生抗-c-met抗體。在一些實施例中，編碼抗-c-met抗體中任一者之多核苷酸係在活性外或活體內(例如，在CHO細胞或大腸桿菌細胞中)表現。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於本文所述純化方法中之抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗(可互換稱為MetMAb)，即包含Fc區之單臂抗體。昂拉妥珠單抗之序列顯示於圖1及2中。昂拉妥珠單抗(亦稱為OA5D5v2及MetMAb)亦闡述於(例如)WO 2006/015371；WO 2010/04345；及Jin等人，Cancer Res(2008)68：4360中。本文亦預期且涵蓋昂拉妥珠單抗之生物類似形式用於醫藥調配物中。

在一些實施例中，經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於本文所述純化方法中之抗-c-met抗體特異性地結合c-met Sema結合域或其變體之至少一部分。在一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗劑。在一些實施例中，抗-c-mer拮抗性抗體特異性地結合選自由以下組成之群之序列中之至少一者：LDAQT(SEQ ID NO：31)(例如，c-met之殘基269-273)、LTEKRKKRS(SEQ ID NO：32)(例如，c-met之殘基300-308)、KPDSAEPM(SEQ ID NO：33)(例如，c-met之殘基350-357)及NVRCLQHF(SEQ ID NO：34)(例如，c-met之殘基381-388)。在一些實施例中，抗-c-met拮抗性抗體特異性地結合藉由選自由以下組成之群之序列中至少一者之部分或全部形成的構形表位：LDAQT(SEQ ID NO：31)(例如，c-met之殘基269-273)、LTEKRKKRS(SEQ ID NO：32)(例如，c-met之殘基300-308)、KPDSAEPM(SEQ ID NO：33)(例如，c-met之殘基350-357)及NVRCLQHF(SEQ ID NO：34)(例如，c-met之殘基381-388)。在一些實施例中，拮抗性抗體特異性地結合與序列LDAQT(SEQ ID NO：31)、LTEKRKKRS(SEQ ID NO：32)、KPDSAEPM(SEQ ID NO：33)及/或NVRCLQHF(SEQ ID NO：34)具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%序列一致性或相似性之胺基酸序列。在一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單臂抗體。為篩選結合至所關注抗體所結合抗原上之表位的抗體，可實施常規交叉阻斷分析，例如抗體，A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory，編輯Harlow及David Lane(1988)中所述者。

適用於本發明方法中之其他抗-c-met抗體闡述於本文中且為業內已知。例如，揭示於WO 05/016382中之抗-c-met抗體(包括但不限於抗體13.3.2、9.1.2、8.70.2、8.90.3)；抗-c-met抗體，其係由以ICLC編號PD 03001寄存於Genoa之CBA之雜交瘤細胞系產生或識別HGF受體之β鏈之細胞外結構域上之表位，且該表位與由單株抗體所識別者相同)；揭示於WO 2007/126799中之抗-c-met抗體(包括但不限於04536、05087、05088、05091、05092、04687、05097、05098、05100、05101、04541、05093、05094、04537、05102、05105、04696、04682)；揭示於WO 2009/007427中之抗c-met抗體(包括但不限於於2007年3月14日以編號I-3731、於2007年3月14日以編號I-3732、於2007年7月6日以編號I-3786、於2007年3月14日以編號I-3724寄存於CNCM,Institut Pasteur,Paris,France之抗體)；揭示於20110129481中之抗-c-met抗體；揭示於US20110104176中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2009/134776中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2010/059654中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2011/020925中之抗-c-met抗體(包括但不限於自於2008年3月12日以編號I-3949寄存於CNCM,Institut Pasteur,Paris,France之雜交瘤及於2010年1月14以編號I-4273寄存之雜交瘤分泌之抗體)；揭示於WO 2011/110642中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2011/090754中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2007/090807中之抗-c-met抗體；揭示於WO 2012059561A1中之抗-c-met抗體。

在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價抗體，其包含含有所關注抗體之重鏈可變結構域及IgG之CH2及CH3結構域之第一蛋白質鏈及包含所關注抗體之輕鏈可變結構域及該 IgG之CH2及CH3結構域之第二蛋白質鏈的異源二聚物。在一些實施例中，抗-c-met抗體係單價抗體，其包含含有可變輕鏈區及恆定輕鏈區之輕鏈，其中恆定輕鏈區經修飾以使其不含有能夠形成二硫鍵之胺基酸。在一些實施例中，抗-c-met抗體係包含可變重鏈區及恆定重鏈區之單價抗體，其中恆定重鏈區經修飾以使其不含有能夠形成二硫鍵之胺基酸。在一些實施例中，抗-c-met抗體係包含隆凸：孔洞型突變之單價抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係包含一或多種選自由以下組成之群之CH3突變的單價抗體：R238Q、R238Q、D239E、K292R、Q302E、P328L、R285Q、S314N、N322K、M327V、K339R、Q349E、I352V、R365H、F366Y及P375L。在一些實施例中，抗-c-met抗體係包含輕鏈-Fc融合物之單價抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係包含鉸鏈缺失之單價抗體。

在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體可干擾HGF/c-met活化，包括(但不限於)干擾HGF與c-met之細胞外部分之結合及受體多聚化。在一些實施例中，抗-c-met抗體可用於治療或診斷與HGF/c-met途徑之異常或不期望之信號傳導相關之病理學病況。在一些實施例中，抗-c-met抗體可調節HGF/c-met途徑，包括調節c-met配體結合、c-met二聚化、活化及與HGF/c-met信號傳導相關之其他生物學/生理學活性。在一些實施例中，抗-c-met抗體可破壞HGF/c-met信號傳導途徑。在任一本文所述抗-c-met抗體之一些實施例中，抗-c-met抗體與c-met之結合抑制HGF對c-met之活化。在任一抗-c-met抗體之一些實施例中，抗-c-met抗體與細胞中c-met之結合抑制細胞之增生、存活、散佈、形態發生及/或運動性。

在一些情形下，可有利地具有不干擾配體(例如HGF)與c-met結合之抗-c-met抗體。因此，在一些實施例中，抗-c-met抗體不結合c-met上之HGF結合位點。在一些實施例中，抗-c-met抗體不會實質上抑制HGF與c-met之結合。在一些實施例中，抗-c-met抗體不會實質上與HGF競爭與c-met之結合。在一個實例中，抗-c-met抗體可與一或多種其他拮抗性聯合使用，其中拮抗劑係靶向HGF/c-met軸內之不同過程及/或功能。因此，在一些實施例中，抗-c-met抗體結合至c-met上與另一c-met拮抗劑(例如藉由以美國典型培養物保藏中心登錄號ATCC HB-11894寄存之雜交瘤細胞系(雜交瘤1A3.3.13)產生之單株抗體之Fab片段)所結合表位不同之表位。在另一實施例中，抗-c-met抗體不同於(即，其並非)藉由以美國典型培養物保藏中心登錄號ATCC HB-11894寄存之雜交瘤細胞系(雜交瘤1A3.3.13)產生之單株抗體之Fab片段。

在一些實施例中，抗-c-met抗體結合第一動物物種之c-met，且不會特異性地結合第二動物物種之c-met。在一些實施例中，第一動物物種系人類及/或靈長類動物(例如，食蟹猴(cynomolgus monkey))，且第二動物物種係鼠類(例如，小鼠)及/或犬類。在一些實施例中，第一動物物種係人類。在一些實施例中，第一動物物種係靈長類動物，例如食蟹猴。在一些實施例中，第二動物物種係鼠類，例如小鼠。在一些實施例中，第二動物物種係犬類。

在一些實施例中，抗-c-met抗體在該個體中很少誘發至不誘發免疫原性反應。在一些實施例中，抗-c-met抗體誘發臨床上可接受程度或小於臨床上可接受程度之免疫原性反應。

在任一經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，經改變抗體具有一些但非全部效應子功能。在一些實施例中，抗-c-met抗體不具有補體消耗及/或ADCC活性。在一些實施例中，量測所產生免疫球蛋白之Fc活性以確保僅維持期望性質(例如，半衰期，而非補體消耗及/或ADCC活性)。可實施活體外及/或活體內細胞毒性分析來確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。例如，可實施Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合能力(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞上之表現匯總於Ravetch及Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)之第464頁表3中。用以評價所關注分子之ADCC活性之活體外分析之實例闡述於US專利第5,500,362號或第5,821,337號中。用於此等分析之可用效應子細胞包括周邊血單核細胞(PBMC)及天然殺傷(NK)細胞。或者或另外，可在活體內(例如在諸如揭示於Clynes等人PNAS(USA)95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。亦可實施C1q結合分析來確認抗體不能與C1q結合且因此缺少CDC活性。為評價補體活化，可實施CDC分析，例如如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所述。亦可使用業內已知方法實施FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體經糖基化。在一些實施例中，抗-c-met抗體實質上無糖基化。

經純化抗-c-met抗體組合物及/或用於純化方法中之抗-c-met抗體可藉由各種業內已知分析來表徵其物理/化學性質及生物學功能。經純化抗-c-met抗體可藉由一系列分析來進一步表徵，該等分析包括(但不限於)N端定序、胺基酸分析、非變性尺寸排除高壓液相層析(HPLC)、質譜、離子交換層析及木瓜蛋白酶消化。

在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，可將抗-c-met抗體純化(1)至大於95重量%之抗體，如藉由Lowry方法所測定，且最佳大於99重量%之抗體，(2)至藉由使用旋杯式序列分析儀足以獲得至少15個N端或內部胺基酸序列殘基之程度，或(3)至同質性，如藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用考馬斯藍(Coomassie blue)或銀染色所量測。

此外，在任一本文所述經純化抗-c-met抗體組合物及/或純化方法之一些實施例中，抗-c-met抗體可單獨或組合納入如下文第1-8部分中所述之任一特徵：

1.抗體親和力

在一些實施例中，抗-c-met抗體之解離常數(Kd)為1 μM、100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM、0.01 nM或0.001 nM(例如10^-8 M或更小，例如10^-8 M至10^-13 M，例如10^-9 M至10^-13 M)。

配體與其受體之結合親和力可使用多種分析中之任一者測定，且以多種定量值來表示。抗原結合分析為業內已知且可用於本文中，包括(但不限於)使用諸如以下等技術之任何直接或競爭性結合分析：西方墨點(western blot)、放射免疫分析、酶聯免疫吸附分析(ELISA)、「三明治」免疫分析、基於表面電漿共振之分析(例如BIAcore分析，如PCT申請公開案第WO 2005/012359號中所述)、免疫沈澱分析、螢光免疫分析及蛋白質A免疫分析。

因此，在一些實施例中，結合親和力係以Kd值表示且反映結合親和力(例如，具有最小化親合力效應)。所選抗-c-met抗體通常將對c-met具有足夠強之結合親和力，例如，抗體可以介於100 nM與1 pM間之Kd值結合人類c-met。

2.抗體片段

在一些實施例中，抗-c-met抗體係抗體片段。抗體片段包括(但不限於)Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂、Fv、單臂抗體及scFv片段以及下文所述之其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人Nat.Med.9：129-134(2003)。關於scFv片段之綜述，例如，參見Pluckthün， The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編輯(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包含補救受體結合表位殘基且具有延長之活體內半衰期之Fab及F(ab')₂片段的論述，參見美國專利第5,869,046號。其他單價抗體形式闡述於(例如)WO 2007048037、WO 2008145137、WO 2008145138及WO 2007059782中。單臂抗體闡述於(例如)WO 2005/063816中。雙鏈抗體係具有兩個抗原結合位點之抗體片段，其可為二價或具有雙特異性。例如，參見EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三鏈抗體及四鏈抗體亦闡述於Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)中。

單一結構域抗體係包含抗體中重鏈可變結構域之全部或一部分或輕鏈可變結構域之全部或一部分的抗體片段。在一些實施例中，單一結構域抗體係人類單一結構域抗體(Domantis有限公司，Waltham,MA；例如，參見美國專利第6,248,516 B1號)。

可藉由各種技術來製備抗體片段，包括(但不限於)蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌或噬菌體)來產生，如本文所述。

3.嵌合及人類化抗體

在一些實施例中，抗-c-met抗體係嵌合抗體。某些嵌合抗體闡述於(例如)美國專利第4,816,567號及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如，源自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(例如猴)之可變區)及人類恆定區。在又一實例中，嵌合抗體係類別或亞類已自親代抗體發生變化之「類別轉換」抗體。嵌合抗體包括其抗原結合片段。

在一些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。通常，將非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，而保留親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包含一或多個可變結構域，其中HVR(例如，CDR)(或其部分)係源自非人類抗體，且FR(或其部分)係源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦可包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如，獲得CDR殘基之抗體)之對應殘基取代以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。

人類化抗體及其製備方法綜述於(例如)Almagro及Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)中，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；Queen等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36：25-34(2005)(闡述SDR(a-HVR)接枝)；Padlan，Mol.Immunol.28：489-498(1991)(闡述「表面重塑」)；Dall'Acqua等人，Methods 36：43-60(2005)(闡述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人，Br.J.Cancer，83：252-260(2000)(闡述FR改組之「引導選擇」方法)。

可用於人類化之人類框架區包括(但不限於)：使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(例如，參見，Sims等人J.Immunol.151：2296(1993))；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體之共有序列的框架區(例如，參見，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等人J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(經體突變)框架區或人類種系框架區(例如，參見，Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及自篩選FR文庫獲得之框架區(例如，參見，Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。

4.人類抗體

在一些實施例中，抗-c-met抗體係人類抗體。可使用業內已知之各種技術來產生人類抗體。人類抗體概述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。

可藉由向轉基因動物投與免疫原來製備人類抗體，該轉基因動物已經改良以產生完整人類抗體或具有響應抗原性激發之人類可變區的完整抗體。此等動物通常含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分，該等基因座代替內源免疫球蛋白基因座，或存於染色體外或隨機整合至動物染色體中。在此等轉基因小鼠中，內源免疫球蛋白基因座通常已不活化。關於自轉基因動物獲得人類抗體之方法的綜述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。例如，亦參見美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，其闡述XENOMOUSE^TM技術；美國專利第5,770,429號，其闡述HUMAB®技術；美國專利第7,041,870號，其闡述K-M MOUSE®技術；及美國專利申請公開案第US 2007/0061900號，其闡述VELOCIMOUSE®技術。可進一步(例如)藉由與不同人類恆定區組合來修飾由此等動物產生之完整抗體的人類可變區。

人類抗體亦可藉由基於雜交瘤之方法製得。已闡述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜交骨髓瘤細胞系。(例如，參見Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker公司，New York,1987)；及Boerner等人，J.Immunol.,147：86(1991)。)經由人類B細胞雜交瘤技術產生之人類抗體亦闡述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)中。額外方法包括彼等闡述於(例如)美國專利第7,189,826號(闡述來自雜交瘤細胞系之單株人類IgM抗體之產生)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(闡述人類-人類雜交瘤)中者。人類雜交瘤技術(三源雜交瘤 (Trioma)技術)亦闡述於Vollmers及Brandlein，Histology及Histopathology，20(3)：927-937(2005)以及Vollmers及Brandlein，Methods and Findings in Experimental及Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)中。

亦可藉由分離選自人類源噬菌體展示文庫之Fv純系可變結構域序列來產生人類抗體。然後，此等可變結構域序列可與期望之人類恆定結構域組合。自抗體文庫選擇人類抗體之技術闡述於下文中。

5.源自文庫之抗體

可藉由針對具有一或多種期望活性之抗體篩選組合文庫來分離抗-c-met抗體。例如，業內已知用於產生噬菌體展示文庫及自該等文庫篩選具有期望結合特性之抗體的各種方法。該等方法可(例如)參見Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等人，編輯，Human Press,Totowa,NJ,2001)，且進一步闡述於(例如)以下中：McCafferty等人，Nature 348：552-554；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Bradbury，Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編輯，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)。

在一些噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)來單獨選殖V_H及V_L基因譜且將其隨機重組於噬菌體文庫中，然後可篩選抗原結合噬菌體，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)中所述。噬菌體通常展示呈單鏈Fv(scFv)片段或呈Fab片段之抗體片段。來自免疫化源之文庫可向免疫原提供高親和力抗體而無需構築雜交瘤。或者，可選殖天然譜(例如，自人類)以向各種無任何免疫之非自體抗原亦及自體抗原提供單一抗體源，如由Griffiths等人，EMBO J,12：725-734(1993)所述。最後，亦可藉由以下方式以合成方式製得天然文庫：選殖來自幹細胞之未重排V-基因片段，且使用含有隨機序列之PCR引物編碼高度可變CDR3區並在活體外達成重排，如由Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)所述。闡述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括(例如)：美國專利第5,750,373號及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。

自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段可視為本文中之人類抗體或人類抗體片段。

6.多特異性抗體

在一些實施例中，抗-c-met抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在一些實施例中，結合特異性中之一者係針對抗原且另一者係針對任另一抗原。在一些實施例中，雙特異性抗體可結合至抗原之兩個不同表位。亦可使用雙特異性抗體將細胞毒性劑局域化至表現抗原之細胞。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段形式製得。

製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.10：3655(1991))及「隆凸於孔洞中(knob-in-hole)」改造(例如，參見美國專利第5,731,168號)。亦可藉由以下方式來製備多特異性抗體：改造用於製備抗體Fc-異源二聚體分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(例如，參見美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science 229：81(1985))；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體(例如，參見Kostelny等人，J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙鏈抗體」技術(例如，參見Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(scFv)二聚體(例如，參見Gruber等人，J.Immunol.152：5368(1994))；及製備三特異性抗體，如(例如)Tutt等人，J.Immunol.147：60(1991)中所述。

本文亦包括經改造以具有三個或更多個功能抗原結合位點之抗體(包括「章魚抗體」)(例如，參見US 2006/0025576A1)。

本文之抗體或片段亦包括含有結合c-met以及另一不同抗原之抗原結合位點的「雙重作用之FAb」或「DAF」(例如，參見US 2008/0069820)。

7.抗體變體

在一些實施例中，涵蓋抗-c-met抗體之胺基酸序列變體。例如，可能期望改良抗體之結合親和力及/或其他生物學性質。抗體之胺基酸序列變體係藉由向編碼抗體之核苷酸序列中引入適宜修飾或藉由肽合成來製備。此等修飾包括(例如)抗體胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入及取代之任一組合以達成最終構築體，前提為最終構築體具有期望特性，例如抗原結合性。

a.取代、插入及缺失變體

在一些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗-c-met抗體變體。用於取代誘變之所關注位點包括HVR及FR。保守取代顯示於表1之「保守取代」標題下。更多實質性變化提供於表1之「實例性取代」標題下，且如下文參照胺基酸側鏈類別進一步所述。可將胺基酸取代引入所關注抗體及經篩選具有期望活性之產物中，該期望活性係(例如)經保留/改良抗原結合、經降低免疫原性或經改良ADCC或CDC。

可根據常見側鏈性質對胺基酸進行分組：(1)疏水性殘基：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性殘基：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性殘基：Asp、Glu； (4)鹼性殘基：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；(6)芳香族殘基：Trp、Tyr、Phe。

非保守取代需要將該等類別之一的成員交換為另一類別。

一種取代變體類型涉及取代親代抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個超變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物學性質(例如，增加之親和力、降低之免疫原性)中具有修飾(例如，改良)及/或實質上保留親代抗體之某些生物學性質。實例性取代變體係親和力成熟抗體，其可便利地(例如)使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(例如彼等本文所述者)產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且將變體抗體展示於噬菌體上並篩選特定生物學活性(例如結合親和力)。

可對HVR作出變化(例如，取代)以(例如)改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點」(亦即，由在體細胞成熟過程期間經受高頻率突變之密碼子編碼的殘基)(例如，參見Chowdhury，Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行，其中測試所得變體V_H或V_L之結合親和力。藉由自二級文庫構築及重新選擇來達成親和力成熟已闡述於(例如)Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等人編輯，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由各種方法(例如，易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之誘變)中之任一者將多樣性引入所選用於成熟之可變基因中。然後建立二級文庫。然後篩選文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方法，其中將若干HVR殘基(例如，一次4-6個殘基)隨機化。可特異性地鑑別(例如，使用丙胺酸掃描誘變或建模)參與抗原結合之HVR殘基。特定而言，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。

在一些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要此等改變不會實質上降低抗體結合抗原之能力即可。例如，可對HVR作出不實質上降低結合親和力之保守改變(例如，本文所提供之保守取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR外部。在上文所提供變體V_H及V_L序列之一些實施例中，各HVR未經改變，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。

用於鑑別抗體上可靶向用於誘變之殘基或區域的可用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如Cunningham及Wells(1989)Science,244：1081-1085中所述。在此方法中，已鑑別殘基或目標殘基組(例如，帶電殘基，例如arg、asp、his、lys及glu)，並由中性或帶負電之胺基酸(例如，丙胺酸或多丙胺酸)代替以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。或者或另外，以抗原-抗體複合體之晶體結構鑑別抗體與抗原間之接觸點。可靶向此等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選物或將其排除。可篩選變體以確定其是否含有期望性質。

胺基酸序列插入包括胺基-及/或羧基端融合物(長度在一個殘基至含有上百或更多殘基之多肽範圍內)、以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包括酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽與抗體N端或C端之融合物。

b.糖基化變體

在一些實施例中，改變抗-c-met抗體以增加或降低抗體糖基化之程度。可藉由改變胺基酸序列從而產生或去除一或多個糖基化位點來便利地達成抗體糖基化位點的添加或缺失。

倘若抗體包含Fc區，則其所附接之碳水化合物可有所改變。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含具支鏈、二分枝寡糖，其通常藉由N-連接附接至Fc區之CH2結構域的Asn297。例如，參見Wright等人TIBTECH 15：26-32(1997)。該寡糖可包含各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及附接至二分枝寡糖結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可修飾抗體中之寡糖以產生具有某些改良性質之抗體變體。

在一些實施例中，提供具有缺乏附接(直接或間接)至Fc區之岩藻糖之碳水化合物結構的抗體變體。例如，此抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20% 至40%。岩藻糖之量係藉由計算糖鏈內Asn297處之岩藻糖相對於附接至Asn 297之所有糖結構(例如複雜、雜合及高甘露糖結構)之總和的平均量來測定，如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，如(例如)WO 2008/077546中所闡述。Asn297係指位於Fc區中大約297位處之天冬醯胺殘基(Fc區殘基之Eu編號)；然而，因抗體中具有微小序列變化，故Asn297亦可位於297位上游或下游之大約±3個胺基酸處，亦即，介於294位與300位之間。此等岩藻糖基化變體可具有經改良ADCC功能。例如，參見美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)、第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo有限公司)。與「去岩藻糖基化」或「岩藻糖-缺乏」抗體變體有關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能產生去岩藻糖基化抗體之細胞系之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其在實例11中)及基因剔除細胞系，例如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8剔除CHO細胞(例如，參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO 2003/085107)。

進一步提供二等分寡糖之抗體變體，例如，其中附接至抗體Fc區之二分枝寡糖由GlcNAc二等分。此等抗體變體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變體之實例闡述於(例如)WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)、美國專利第6,602,684號(Umana等人)及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在附接至Fc區之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體變體。此等抗體變體可具有經改良CDC功能。此等抗體變體闡述於(例如)WO 1997/30087(Patel等人)、WO 1998/58964(Raju,S.)及WO 1999/22764(Raju,S.)中。

c. Fc區變體

在一些實施例中，可將一或多種胺基酸修飾引入抗-c-met抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變體。Fc區變體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。

在一些實施例中，涵蓋具有一些(但非全部)效應子功能之抗體變體，此使其成為應用之合意候選物，在該等應用中抗體之活體內半衰期較為重要，但某些效應子功能(例如補體及ADCC)係不必要或有害的。可實施活體外及/或活體內細胞毒性分析來確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。例如，可實施Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺少FcγR結合能力(因此可能缺少ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞中之表現匯總於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-492(1991)之第464頁表3中。評價所關注分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例闡述於美國專利第5,500,362號(例如，參見Hellstrom,I.等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))中。或者，可使用非放射性分析方法(例如，參見用於流式細胞術之ACTI^TM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司，Mountain View,CA)及CytoTox 96^®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。用於此等分析之可用效應子細胞包含周邊血單核球(PBMC)及天然殺傷(NK)細胞。或者或另外，可在活體內(例如，在諸如揭示於Clynes等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中之動物模型等動物模型中)評價所關注分子之ADCC活性。亦可實施C1q結合分析來確認抗體不能與C1q結合且因此缺少CDC活性。例如，參見WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評價補體活化，可實施CDC分析(例如，參見 Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可使用業內已知方法來實施FcRn結合及活體內清除/半衰期測定(例如，參見Petkova,S.B.等人，Int'l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。

具有降低之效應子功能之抗體包括彼等具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者的取代者(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297經丙胺酸取代之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。

闡述具有改良或降低之與FcR之結合的某些抗體變體。(例如，參見美國專利第6,737,056號、WO 2004/056312及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。

在一些實施例中，抗體變體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代之Fc區，例如，在Fc區之298位、333位及/或334位處(殘基之EU編號)之取代。

在一些實施例中，Fc區有所改變，從而改變(亦即，改良或減小)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人，J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所述。

具有延長之半衰期及改良之與新生Fc受體(FcRn)之結合的抗體(其負責將母體IgG轉移至胎中)(Guyer等人，J. Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))闡述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代的Fc區。此等Fc變體包括彼等在以下Fc區殘基之一或多者處具有取代者：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，取代Fc區殘基434(美國專利第7,371,826號)。

亦參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及與Fc區變體有關之其他實例之WO 94/29351。

d.半胱胺酸改造之抗體變體

在一些實施例中，可能期望產生半胱胺酸改造之抗體，例如「硫代MAb」，其中抗-c-met抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基出現於抗體之可及位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團藉由可位於抗體之可及位點處，且可用於使抗體偶聯至其他部分(例如藥物部分或連接體-藥物部分)以產生免疫偶聯物，如本文進一步所述。在一些實施例中，以下殘基中之任一或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)、重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。半胱胺酸改造之抗體可如(例如)美國專利第7,521,541號中所述來產生。

e.抗體衍生物

在一些實施例中，抗-c-met抗體可經進一步修飾，以含有業內已知且易於獲得之其他非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(N-乙烯基基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化之多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有穩定性而在製造方面具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或不具支鏈。附接至抗體之聚合物的數目可有所變化，且若附接一個以上之聚合物，則其可為相同或不同分子。通常，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可根據包括(但不限於)以下在內之考慮因素來確定：欲改良抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法，等。

在另一實施例中，提供抗-c-met抗體與非蛋白質性部分之偶聯物，其可藉由暴露於輻射來選擇性加熱。在一些實施例中，非蛋白質性部分係碳奈米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可具有任一波長，且包括(但不限於)如下波長之輻射：其不會危害正常細胞，但將非蛋白質性部分加熱至可將毗鄰抗體-非蛋白質性部分之細胞殺滅的溫度。

8.免疫偶聯物

本發明亦涵蓋包含偶聯至一或多種細胞毒性劑之抗-c-met抗體的免疫偶聯物用於本文所述經純化-c-met抗體組合物及/或純化方法中，該等細胞毒性劑係(例如)化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，細菌、真菌、植物或動物來源之蛋白質毒素、酶促活性毒素、或其片段)或放射性同位素。

在一些實施例中，免疫偶聯物係抗體-藥物偶聯物(ADC)，其中抗體係偶聯至一或多種藥物，該等藥物包括(但不限於)類美登素(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧裏斯他汀(auristatin)，例如單甲基奧裏斯他汀藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；多拉司他汀；卡奇黴素或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res.53：3336-3342(1993)；及Lode等人，Cancer Res.58：2925-2928(1998))；蒽環抗生素，例如道諾黴素或多柔比星(參見Kratz等人，Current Med.Chem.13：477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj.Chem.16：717-721(2005)；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King等人，J.Med.Chem.45：4336-4343(2002)；及美國專利第6,630,579號)；胺甲蝶呤；長春地辛；紫杉烷，例如多西他賽、太平洋紫杉醇、拉羅他塞(larotaxel)、特西他塞(tesetaxel)及歐他紫杉烷(ortataxel)；單端孢黴烯；及CC1065。

在一些實施例中，免疫偶聯物包含偶聯至酶促活性毒素或其片段之本文所述抗-c-met抗體，該酶促活性毒素或其片段包括(但不限於)白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素(ricin)A鏈、相思豆毒素(abrin)A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、α-八疊球素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、美洲商路(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒素(curcin)、巴豆毒素(crotin)、皂質草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素(gelonin)、米托潔林(mitogellin)、侷限麴菌素、酚黴素、伊諾黴素(enomycin)及單端孢黴烯。

在一些實施例中，免疫偶聯物包含偶聯至放射性原子以形成放射性偶聯物的本文所述抗-c-met抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性偶聯物。實例包括At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²、Pb²¹²及Lu之放射性同位素。當偶聯物用於檢測時，其可包含用於閃爍研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，MRI)之自旋標記，例如碘-123(再次)、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。

抗-c-met抗體與細胞毒性劑之偶聯物可使用各種雙官能蛋白質偶合劑製得，例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、亞胺基噻(IT)、亞胺酸酯之雙言能衍生物(例如二亞胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science,238：1098(1987)中所述來製備。經碳-14標記之1-異硫氰酸苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於放射性核苷酸與抗體偶聯的實例性螯合劑。參見WO 94/11026。連接體可係促進細胞毒性藥物在細胞內釋放之「可裂解連接體」。例如，可使用酸不穩定性連接體、肽酶敏感性連接體、光不穩定性連接體、二甲基連接體或含有二硫化物之連接體(Chari等人，Cancer Res.52：127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。

本文之免疫偶聯物或ADC明確地涵蓋(但不限於)此等使用以下交聯劑試劑製備之偶聯物：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、硫代-EMCS、硫代-GMBS、硫代-KMUS、硫代-MBS、硫代-SIAB、硫代-SMCC及硫代-SMPB、以及SVSB((4-乙烯基碸)苯甲酸琥珀醯亞胺酯)，以上試劑可自市面購得(例如，購自Pierce Biotechnology公司，Rockford,IL.,U.S.A)。

V.醫藥調配物

本文亦提供包含經純化抗-c-met抗體組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗體之醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥組合物係穩定液體醫藥組合物。在一些實施例中，抗-c-met抗體係拮抗性抗-c-met抗體。在一些實施例中，醫藥調配物係液體醫藥調配物。在一些實施例中，醫藥調配物適於投與個體(例如，人類)。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物之批次(例如，整批)中的平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量小於或等於以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係介於以下中之任一者：約0.001 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.2 pg/mg、約0.001 pg/mg與約0.1 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.3 pg/mg、約0.01 pg/mg與約0.2 pg/mg或約0.01 pg/mg與約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量及/或平均DNA含量係以下中之任一者：約0.3 pg/mg、約0.25 pg/mg、約0.2 pg/mg、約0.15 pg/mg或約0.1 pg/mg。在一些實施例中，DNA含量係藉由PCR測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之浸出蛋白質A(LpA)小於或等於約2 ng/mg。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LpA小於或等於約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係介於以下中之任一者之間：約0.001 ng/mg與約2 ng/mg、約0.01 ng/mg與約2 ng/mg、約0.1 ng/mg與約2 ng/mg或約1 ng/mg與約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA及/或平均LpA係以下中之任一者：約1 ng/mg、約1.25 ng/mg、約1.5 ng/mg、約1.75 ng/mg或約2 ng/mg。在一些實施例中，LpA之百分比係藉由浸出蛋白質A配體分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之平均LAL小於或等於約0.01 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL小於或等於以下中之任一者：約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.002 EU/mg或約0.001 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係介於以下中之任一者之間：約0.0001 EU/mg與約0.01 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.007 EU/mg、約0.0001 EU/mg與約0.006 EU/mg或約0.0001 EU/mg與約0.005 EU/mg。在一些實施例中，LAL及/或平均LAL係以下中之任一者：約0.01 EU/mg、約0.007 EU/mg、約0.006 EU/mg、約0.005 EU/mg、約0.004 EU/mg、約0.003 EU/mg或約0.002 EU/mg。在一些實施例中，LAL之百分比係藉由LAL分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之聚集物的平均百分比小於或等於約0.3%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)的醫藥調配物，其中存於組合物中之聚集物之平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，聚集物之百分比及/或聚集物之平均百分比係約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，聚集物之百分比係藉由尺寸排除層析(SEC)分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之單體的平均百分比大於或等於約99.5%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)的醫藥調配物，其中存於組合物中之單體之平均百分比大於或等於約0.3%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比大於或等於以下中之任一者：約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約99.5%與約99.999%、約99.5%與約99.99%、約99.6%與約99.999%、約99.6%與約99.99%、約99.7%與約99.999%、約99.7%與約99.99%、約99.8%與約99.999%、約99.8%與約99.99%或約99.9%與約99.999%、約99.9%與約99.99%。在一些實施例中，單體之百分比及/或單體之平均百分比係以下中之任一者：約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%或約99.9%。在一些實施例中，單體之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之片段的平均百分比小於或等於約0.3%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)之醫藥調配物，其中存於組合物中之片段之平均百分比小於或等於約0.3%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比小於或等於約0.2%或約0.1%中之任一者。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約0.001%與約0.3%、約0.01%與約0.3%、約0.001%與約0.2%或約0.01%與約0.2%。在一些實施例中，片段之百分比及/或片段之平均百分比係以下中之任一者：約0.3%、約0.25%、約0.2%、約0.15%、約0.1%或約0%。在一些實施例中，片段不可檢測。在一些實施例中，片段之百分比係藉由SEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之酸性變體的平均百分比小於或等於約20%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)的醫藥調配物，其中存於組合物中之酸性變體之平均百分比小於或等於約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%、約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約1%與約20%、約5%與約20%或約10%與約20%。在一些實施例中，酸性變體之百分比及/或酸性變體之平均百分比係以下中之任一者：約20%、約18.5%、約17.5%、約15%或約12.5%。在一些實施例中，酸性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之主峰的平均百分比大於或等於約75%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)的醫藥調配物，其中存於組合物中之主峰之平均百分比大於或等於約75%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比大於或等於約77.5%、約80%、約82.5%或約85%中之任一者。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係介於以下中之任一者之間：約75%與約95%、約77.5%與約95%、約80%與約95%、約82.5%與約95%或約85%與約95%。在一些實施例中，主峰之百分比及/或主峰之平均百分比係以下中之任一者：約75%、約77.5%、約80%、約82.5%或約85%。在一些實施例中，主峰之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

在任一調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。在任一醫藥調配物之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)中之鹼性變體的平均百分比小於或等於約2.0%。另外，本文提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之醫藥調配物，其中存於組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%。本文進一步提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)的醫藥調配物，其中存於組合物中之鹼性變體之平均百分比小於或等於約2.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比小於或等於以下中之任一者：約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係介於以下中任一者之間：約0.001%與約2%、約0.01%與約2%、約0.001%與約1.5%或約0.01%與約1.5%、約0.001%與約1.0%或約0.01%與約1.0%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比及/或鹼性變體之平均百分比係以下中之任一者：約2%、約1.5%、約1.25%、約1.1%或約1%。在一些實施例中，鹼性變體之百分比係藉由HPIEC分析測定。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

醫藥調配物係藉由以凍乾調配物或水溶液形式混合此具有期望純度之抗體與一或多種醫藥上可接受之可選載劑來製備，該等載劑係(例如)彼等Remington之Pharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro,A編輯(1990)中所述者。醫藥上可接受之載劑在所用劑量及濃度下通常對接收者無毒，且包括(但不限於)：緩衝液，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如十八基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨(benzalkonium chloride)；苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型表面活性劑，例如聚乙二醇(PEG)。本文之實例性醫藥上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，例如可溶性中性活性玻璃尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人類可溶性PH-20玻璃尿酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(HYLENEX®,Baxter International公司)。某些實例性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)闡述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，將sHASEGP與一或多種其他糖胺基聚糖酶(例如軟骨素酶)組合。

實例性凍乾抗體調配物闡述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括彼等闡述於美國專利第6,171,586號及第WO 2006/044908號中者，後一些調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。

活性成份亦可分別裝入藉由(例如)凝聚技術或界面聚合製備之微膠囊(例如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠質藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或粗滴乳液中。此等技術揭示於Remington之Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.編輯(1980)中。

可製備緩釋製劑。緩釋製劑之適宜實例包括含有抗體之固態疏水性聚合物之半透性基質，該等基質係呈成形物件形式，例如，膜或微膠囊。

欲用於活體內投與之調配物應無菌。此可在製備調配物之前或之後根據熟習此項技術者已知用於產生適於投與人類個體之無菌醫藥調配物之程序達成，該等程序包括經過無菌過濾膜過濾。

本文醫藥調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成份，較佳為彼等具有相互間不會產生不利影響之互補活性者。此等分子適宜以對預定目的有效之量以組合形式存在。

在一些實施例中，醫藥調配物包含含有經純化抗-c-met抗體及/或藉由本文所述方法純化之抗體、聚山梨醇酯、糖及緩衝液之組合物。聚山梨醇酯之實例包括(但不限於)聚山梨醇酯20(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單月桂酸酯)、聚山梨醇酯40(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單棕櫚酸酯)、聚山梨醇酯60(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單硬脂酸酯)及/或聚山梨醇酯80(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單油酸酯)。糖包括(但不限於)葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、葡聚糖、丙三醇、葡聚糖、赤蘚醇、甘油、阿糖醇(arabitol)、木糖醇、山梨醇、甘露醇、蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、葡糖醇、麥芽糖醇、拉克替醇(lactitol)、異麥芽酮糖等。組胺酸緩衝液之實例包括(但不限於)組胺酸氯化物、組胺酸琥珀酸鹽、組胺酸乙酸鹽、組胺酸磷酸鹽、組胺酸硫酸鹽。在一些實施例中，醫藥調配物包含(a)包含經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體之組合物，其中抗-c-met抗體係以介於約50 mg/mL與約75 mg/mL間之濃度存在；(b)pH為5.0至5.4之組胺酸乙酸鹽緩衝液，其中組胺酸乙酸鹽緩衝液之濃度係介於約1 mM與約20 mM之間；(c)蔗糖，其中蔗糖之濃度係介於約100 mM至約150 mM之間；及(d)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯20之濃度大於0.02% w/v。在一些實施例中，醫藥調配物包含(a)組合物包含經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體係以約60 mg/mL之濃度存在；(b)pH為5.4之組胺酸乙酸鹽緩衝液，其中組胺酸乙酸鹽緩衝液之濃度係約10 mM；(c)蔗糖，其中蔗糖之濃度係約120 mM；及(d)聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯20濃度係約0.04% w/v。在一些實施例中，醫藥調配物在投與前經稀釋(例如，在鹽水中稀釋至1 mg/mL)。

此外，本文提供包含醫藥調配物之小瓶及將該等小瓶歸檔之方法。在一些實施例中，在具有可藉由注射器刺穿之塞子之小瓶內提供醫藥調配物，其較佳呈水性形式。合意地，將小瓶在約2-8℃以及最高30℃下儲存24小時直至將其投與有需要之個體。小瓶可為(例如)15 cc小瓶(例如用於600 mg劑量)或20 cc小瓶(例如用於900 mg劑量)。

VI.用途及活療方法

經純化抗-c-met抗體組合物、包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物及/或藉由本文所提供方法純化之抗-c-met抗體可用於調節與HGF/c-met信號傳導軸失調相關之疾病狀態。HGF/c-met信號傳導途徑參與多種生物學及生理學功能，包括(例如)細胞增生及血管生成。

本文提供抑制c-met活化之細胞增生之方法，該方法包含使細胞或組織與經純化抗-c-met抗體組合物、包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體(包含有效量之抗-c-met抗體)接觸，藉此抑制與c-met活化相關之細胞增生。在一些實施例中，細胞增生性病症與增加之c-met之表現或活性或肝細胞生長或二者相關。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由免疫組織化學)。在一些實施例中，細胞增生係癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌或乳癌。在一些實施例中，癌症係IIIb期及/或IV期。在一些實施例中，癌症係局部晚期或轉移性癌症。在一些實施例中，療法係二線或三線療法(例如，二線或三線NSCLC療法)。在一些實施例中，癌症係EGFR突變型。在一些實施例中，癌症係EGFR野生型。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由免疫組織化學(IHC))。

本文提供治療個體之與c-met活化失調相關之病理學病況之方法，該方法包含向該個體投與經純化抗-c-met抗體組合物、包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物及/ 或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體(包含有效量之c-met抗體)，藉此治療該病況。在一些實施例中，病理學病況係癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌或乳癌。在一些實施例中，癌症係IIIb期及/或IV期癌症。在一些實施例中，癌症係局部晚期或轉移性癌症。在一些實施例中，療法係二線或三線療法(例如，二線或三線NSCLC療法)。c-met活化(且因此信號傳導)失調可因許多細胞變化所致，包括(例如)HGF(c-met之同源配體)及/或c-met本身之過表現。在一些實施例中，癌症係EGFR突變型。在一些實施例中，癌症係EGFR野生型。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由IHC)。

本文亦提供抑制表現c-met或肝細胞生長因子或二者之細胞之生長之方法，該方法包含使該細胞與經純化抗-c-met抗體組合物、包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物及/或藉由本文所述方法純化之抗體(包含抗-c-met抗體)接觸，藉此抑制該細胞之生長。在一些實施例中，該細胞之生長至少部分地取決於c-met或肝細胞生長因子或二者之生長增強效應。在一些實施例中，使該細胞與由不同細胞表現之HGF接觸(例如，經由旁分泌效應)。

本文亦提供治療或預防癌症之方法，其包含投與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物、包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌或乳癌。在一些實施例中，癌症係IIIb期及/或IV期癌症。在一些實施例中，癌症係局部晚期或轉移性癌症。在一些實施例中，療法係二線或三線療法(例如，二線或三線NSCLC療法)。在一些實施例中，癌症係EGFR突變型。在一些實施例中，癌症係EGFR野生型。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由IHC)。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係21天週期之第1天投與之約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約10 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係於28天週期之第1天及第15天投與之約10 mg/kg。

在任一方法之一些實施例中，包含抗-c-met抗體之組合物及/或包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。在任一方法之一些實施例，包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)及/或包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物之批次(例如，整批)中之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.2、約8.3及/或約8.4。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

可使用本文所述方法來影響任何適宜病理學狀態，例如，與HGF/c-met信號傳導途徑失調相關之細胞及/或組織。在任一本文所述方法之一些實施例中，本文所述方法中所靶向之細胞係癌細胞。例如，癌細胞可係選自由以下組成之群者：乳癌細胞、結腸直腸癌細胞、肺癌細胞、乳頭狀癌細胞(例如，甲狀腺之乳頭狀癌細胞)、結腸癌細胞、胰腺癌細胞、卵巢癌細胞、宮頸癌細胞、中樞神經系統癌細胞、成骨性肉瘤細胞、腎癌細胞、肝細胞癌細胞、膀胱癌細胞、胃癌細胞、頭頸鱗狀癌細胞、黑素瘤細胞及白血病細胞。在一些實施例中，本文所述方法中所靶向之細胞係過度增生性及/或增生性細胞。在一些實施例中，本文所述方法中所靶向之細胞係發育不良性細胞。在再一實施例中，本文所述方法中所靶向之細胞係轉移性細胞。

在任一方法之一些實施例中，該方法進一步包含其他治療步驟。例如，在一些實施例中，該方法進一步包含使靶向細胞及/或組織(例如，癌細胞)暴露至輻射治療或第二治療劑(例如，化學治療劑)之步驟。例如，提供治療或預防癌症之方法，其包含投與(i)經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體及(ii)第二治療劑。在一些實施例中，第二治療劑係EGFR抑制劑(例如，埃羅替尼(erlotinib))、VEGF抑制劑(例如，貝伐單抗(bevacizumab))、紫杉烷(例如，太平洋紫杉醇)。

在任一本文所述方法之一些實施例中，該方法進一步包含投與有效量之第二治療劑。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約10 mg/kg。

在一些實施例中，第二治療劑係EGFR抑制劑。在一些實施例中，EGFR抑制劑係埃羅替尼(N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺)。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係21天週期之第1天投與之約15 mg/kg。例如，提供治療癌症(例如，NSCLC)之方法，其包含投與(i)經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體係以每三週15 mg/kg之劑量投與；及(ii)埃羅替尼(N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基甲氧基)-4-喹唑啉胺)，其中埃羅替尼係以在三週週期內每天150 mg之劑量投與。

在一些實施例中，第二治療劑係紫杉烷(例如，太平洋紫杉醇)。在一些實施例中，癌症係乳癌。在一些實施例中，乳癌係ER-陰性、PR-陰性及HER2-陰性(ER-、PR-及HER2-；或三陰性)轉移性乳癌。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量於28天週期之第1天及第15天為約10 mg/kg。例如，提供治療癌症(例如，乳癌)之方法，其包含投與(i)經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體係於28天週期之第1天及第15天以10 mg/kg之劑量投與；及(ii)太平洋紫杉醇，其中太平洋紫杉醇係於28天週期之第1天、第8天及第15天藉由IV輸注以90 mg/m²之劑量投與。在一些實施例中，該方法增加患者存活，降低患者癌症復發風險及/或增加患者存活可能性。在一些實施例中，該方法進一步包含投與抗-VEGF抗體(例如，貝伐單抗)。例如，提供治療癌症(例如，乳癌)之方法，其包含投與(i)經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體，其中抗-c-met抗體係於28天週期之第1天及第15天以10 mg/kg之劑量投與；(ii)抗-VEGF抗體(例如，貝伐單抗)，其中抗-VEGF抗體係於28天週期之第1天及第15天以10 mg/kg之劑量投與；及(iii)太平洋紫杉醇，其中太平洋紫杉醇係於28天週期之第1天、第8天及第15天藉由IV輸注以90 mg/m²之劑量投與。

經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。例如，經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體可與第二治療劑(例如，另一抗體、化學治療劑(包括化學治療劑之混合劑)、其他細胞毒性劑、抗血管生成劑、細胞介素及/或生長抑制劑)共投與。在一些實施例中，同時或依序投與第二治療劑。第二治療劑可與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由方法純化之抗-c-met抗體分開投與，但作為相同治療方案之一部分。倘若經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體抑制腫瘤生長，則可尤其合意地將其與一或多種亦抑制腫瘤生長之其他治療劑組合。例如，可在治療方案中(例如在任一本文所述疾病(包括結腸直腸癌、轉移性乳癌及腎癌)之治療中)將經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體與EGFR抑制劑、抗-VEGF抗體及/或抗-ErbB抗體組合。

此等上文所述組合療法同時涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包括於相同或單獨調配物中)及單獨投與(在此情形下，可在投與其他治療劑及/或佐劑之前及/或之後投與醫藥調配物)。

因此，在任一本文所述方法之一些實施例中，該方法包含靶向以下細胞，其中該細胞(例如，癌細胞)與相同組織來源之正常細胞相比更豐富地表現c-met或肝細胞生長因子或二者。c-met-表現細胞可藉由來自多種源之HGF調節，即以自分泌或旁分泌方式調節。c-met活化及/或信號傳導亦可獨立於配體進行。因此，在一些實施例中，靶向細胞中之c-met活化獨立於配體進行。

可向人類個體投與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體用於治療目的。此外，可向表現與免疫球蛋白交叉反應之抗原之非人類哺乳動物(例如，靈長類動物、豬或小鼠)投與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體用於獸醫目的或作為人類疾病之動物模型。

可使用經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體來治療、抑制與一或多種抗原分子之異常表現及/或活性相關之疾病、病症或病況，延遲其進展，預防/延遲其復發，改善或預防該等疾病、病症或病況，該等疾病、病症或病況包括(但不限於)惡性及良性腫瘤；非白血病及淋巴樣惡性腫瘤；神經元病症、神經膠質病症、星狀細胞病症、下丘腦及其他腺體病症、巨噬細胞病症、上皮病症、間質病症及囊胚腔病症；及發炎病症、血管生成及免疫學病症。

在任一方法之一些實施例中，向患者投與包含經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體與細胞毒性劑偶聯之免疫偶聯物。在一些實施例中，免疫偶聯物及/或其所結合抗原由細胞內在化，從而增加免疫偶聯物在殺傷其所結合靶細胞方面之治療功效。在一些實施例中，細胞毒性劑靶向或干擾靶細胞之核酸。

經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體(及任一其他治療劑)可藉由任何適宜手段投與，包括非經腸、肺內及鼻內、以及(若期望用於局部治療)病灶內投與。非經腸輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜腔內或皮下投與。在一些實施例中，經靜脈內投與抗體。可藉由任一適宜途徑給藥，例如藉由注射，例如靜脈內或皮下注射，此部分地端視投與時間長短而定。本文涵蓋各種給藥方案，包括(但不限於)在不同時間點單次或多次投與、濃注投與及脈衝輸注。

以與優良醫療實踐一致之方式給予並投與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體。在此背景下，考慮因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病況、病症起因、藥劑遞送位點、投與方法、投與時間安排及醫療從業者已知之其他因素。經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體不必(但視情況)與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量端視調配物中之抗體之量、病症或治療之類型以及上文所論述之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量且以上文所用之投與途徑或本文所述約1%至99%之迄今所用劑量或以經驗/臨床確定為合適之任一劑量及任一途徑使用。

對於疾病之預防或治療而言，經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體之適當劑量(當單獨使用或與一或多種其他治療劑組合使用時)應端視所欲治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體係用於預防性抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗-c-met抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體適宜一次性或經一系列治療投與患者。端視疾病之類型及嚴重程度而定，藉由(例如)一或多次單獨投與或藉由連續輸注將約10 mg/kg、約15 mg/kg或更大(例如，15 mg/kg至20 mg/kg)劑量之抗-c-met抗體投與患者。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係21天週期之第1天投與之約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約10 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係於28天週期之第1天及第15天投與之約10 mg/kg。

可間歇地(例如約每週、約每2週、約每3週或約每4週中之任一者)投與劑量。

在經若干天或更長時間重複投與時，端視病況而定，治療通常持續至對疾病症狀之期望阻抑出現為止。然而，可使用其他劑量方案。此療法之進展可容易地藉由習用技術及分析來監測。

VII.製造物件

提供製造物件及其用於治療、預防及/或診斷病症之用途，該製造物件包含經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物、醫藥調配物包含純化抗-c-met抗體組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體。該製造物件包含容器及位於該容器上或與該容器相連之標記或包裝插頁。適宜容器包括(例如)瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可自諸如玻璃或塑膠等各種材料形成。容器容納自身或在與另一組合物組合時有效用於治療、預防及/或診斷病況之經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗) 組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體，且可具有無菌存取埠(例如該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子之小瓶)。例如，本文提供包含容器之製造物件及套組，該容器具有經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體。標記或包裝插頁指示，組合物用於治療所選病況，例如癌症。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、胃癌、結腸直腸癌或乳癌。在一些實施例中，癌症係IIIb期及/或IV期癌症。在一些實施例中，癌症係局部晚期或轉移性癌症。在一些實施例中，療法係二線或三線療法(例如，二線或三線NSCLC療法)。在一些實施例中，癌症係EGFR突變型。在一些實施例中，癌症係EGFR野生型。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由免疫組織化學)。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係21天週期之第1天投與之約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約10 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係於28天週期之第1天及第15天投與之約10 mg/kg。

提供包裝製造物件之方法，其包含添加包含抗-c-met抗體之組合物及/或包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物，其中組合物及/或醫藥調配物中之HCP小於或等於約50 ng/mg。此外，提供包裝製造物件之方法，其包含添加包含抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)及/或包含經純化抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物之批次(例如，整批)，其中批次之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.3、約8.4及/或約8.5。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

亦提供包含含有抗-c-met抗體之組合物及/或包含抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物之容器(例如，小瓶)，其中組合物或醫藥調配物中之HCP係以小於或等於約50 ng/mg存於組合物中。亦提供包含含有抗-c-met抗體之組合物之批次(例如，整批)及/或包含抗-c-met抗體組合物之醫藥調配物之批次(例如，整批)之容器(例如，小瓶)，其中批次中之平均HCP小於或等於約50 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP小於或等於以下中之任一者：約34 ng/mg、約30 ng/mg、約25 ng/mg、約20 ng/mg、約19 ng/mg、約18 ng/mg、約17 ng/mg、約16 ng/mg、約15 ng/mg、約14 ng/mg、約13 ng/mg、約12 ng/mg、約11 ng/mg、約10 ng/mg或約9 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係介於以下中之任一者之間：約5 ng/mg與約20 ng/mg、約5 ng/mg與約25 ng/mg、約5 ng/mg與約15 ng/mg、約1 ng/mg與約30 ng/mg、約1 ng/mg與約25 ng/mg、約1 ng/mg與約20 ng/mg、約1 ng/mg與約15 ng/mg或約1 ng/mg與約10 ng/mg。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係以下中之任一者：約5 ng/mg、約5.5 ng/mg、約6.5 ng/mg、約7 ng/mg、約7.5 ng/mg、約8 ng/mg、約8.5 ng/mg、約9 ng/mg、約9.5 ng/mg、約10 ng/mg、約10.5 ng/mg、約11 ng/mg、約11.5 ng/mg、約12 ng/mg、約12.5 ng/mg、約13 ng/mg、約13.5 ng/mg、約14 ng/mg、約 14.5 ng/mg、約15 ng/mg、約15.5 ng/mg、約16 ng/mg、約16.5 ng/mg、約17 ng/mg或約17.5 ng/mg。在一些實施例中，抗-c-met抗體係在大腸桿菌中產生。在一些實施例中，HCP及/或平均HCP係ECP及/或平均ECP。在一些實施例中，抗-c-met抗體係第IV部分中所述之抗體。在一些實施例中，抗-c-met抗體係約100 kDa。在一些實施例中，抗-c-met抗體之pI係約8.3、約8.4及/或約8.5。在一些實施例中，抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。

此實施例中之製造物件可進一步包含指示第一及第二抗體組合物可用於治療特定病況(例如癌症)之包裝插頁。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌(NSCLC)、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、胃癌、結腸直腸癌或乳癌。在一些實施例中，癌症係IIIb期及/或IV期。在一些實施例中，癌症係局部晚期或轉移性癌症。在一些實施例中，療法係二線或三線療法(例如，二線或三線NSCLC療法)。在一些實施例中，癌症係EGFR突變型。在一些實施例中，癌症係EGFR野生型。在一些實施例中，癌症係c-met陽性(表現高程度之c-met，例如，藉由免疫組織化學)。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係約15 mg/kg。在一些實施例中，抗-c-met抗體之劑量係21天週期之第1天投與之約15 mg/kg。

或者或另外，在任一製造物件之一些實施例中，製造物件可進一步包含第二(或第三)容器，該容器包含醫藥上可接受之緩衝液，例如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及用戶角度考慮所期望之其他材料，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針及注射器。

此外，製造物件可包含(a)第一容器，其中含有經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體；及(b)第二容器，其中含有組合物，其中該組合物進一步包含細胞毒性劑。

在一些實施例中，第二治療劑係EGFR抑制劑。在一些實施例中，EGFR抑制劑係埃羅替尼(N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺)。在一些實施例中，製造物件包含用於投與約15 mg/kg抗-c-met抗體調配物(於21天週期之第1天投與)及150 mg埃羅替尼(在3週週期內每天投與)之說明書。在一些實施例中，製造物件包含用於治療癌症(例如，NSCLC)之說明書。

在一些實施例中，第二治療劑係紫杉烷(例如，太平洋紫杉醇)。在一些實施例中，製造物件包含用於投與約10 mg/kg抗-c-met抗體調配物(於28天週期之第1天及第15天投與)及90 mg/m²太平洋紫杉醇(於28天週期之第1天、第8天及第15天藉由1V輸注投與)之說明書。在一些實施例中，製造物件包含第三容器，其中含有組合物，其中該組合物包含第三治療劑，其中該第三治療劑係抗-VEGF抗體(例如，貝伐單抗)。在一些實施例中，製造物件包含用於投與約10 mg/kg抗-c-met抗體調配物(於28天週期之第1天及第15天投與)、90 mg/m²太平洋紫杉醇(於28天週期之第1 天、第8天及第15天藉由IV輸注投與)及10 mg/kg抗-VEGF抗體(例如，貝伐單抗)(於28天週期之第1天及第15天投與)之說明書。在一些實施例中，製造物件包含用於治療癌症之說明書。在一些實施例中，癌症係乳癌(例如，ER-陰性、PR-陰性及HER2-陰性(ER-、PR-及HER2-；或三陰性)轉移性乳癌)。在一些實施例中，該方法增加患者存活，降低患者癌症復發風險及/或增加患者存活可能性。

應理解，任一上述製造物件可包括經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或藉由本文所述方法純化之抗-c-met抗體替代或以及抗-c-met抗體之免疫偶聯物。

本文進一步提供製備本文所述製造物件中任一者之方法。

以下係經純化抗-c-met抗體(例如，昂拉妥珠單抗)組合物及/或純化抗c-met-抗體之方法之實例。應理解，根據上文所提供之一般說明，可實踐各種其他實施例。

實例 實例-昂拉妥珠單抗純化方法

材料及方法

E.大腸桿菌蛋白質(ECP)合量分析

使用三明治ELISA來檢測並量化大腸桿菌蛋白質(ECP)(當存於產物試樣中時)。將對ECP具有特異性之親和力純化抗體固定至微量滴定板孔上。ECP若存於試樣中，則結合經塗佈抗體。利用偶聯至辣根過氧化物酶(HRP)之抗-ECP檢測所結合ECP，該辣根過氧化物酶與受質 3,3',5,5'-四甲苯聯苯胺(TMB)反應並產生比色信號。抗-ECP試劑係內部針對大腸桿菌蛋白質之複雜混合物研發。使用5參數曲線擬合程式來產生標準曲線，且自標準曲線外推試樣濃度。

DNA合量分析

為檢測並量化產物試樣中之大腸桿菌DNA，自試樣提取DNA且使其經受使用PCR引子及探針之TaqMan即時聚合酶鏈反應(PCR)。量化擴增子(擴增產物)，與在DNA擴增期間連續量測之螢光發射之增加成正比。使用標準曲線來量化試樣中大腸桿菌DNA之量。

LpA合量分析

使用三明治ELISA實施此測試程序以檢測並量化蛋白質A(當存於產物試樣中時)。將雞抗葡萄球菌蛋白質A抗體固定於微孔滴定孔上。在孔中培育前預處理試樣、標準物及對照，其中蛋白質A結合經塗佈抗體。利用偶聯至HRP之雞抗蛋白質A檢測所結合蛋白質A，該HRP與受質3,3',5,5'-TMB反應並產生比色信號。此預處理係基於蛋白質A自蛋白質A/IgG複合物之解離，從而使蛋白質A完全可用於其檢測試劑(Zhu-Shimoni等人，J.Immunol.Methods 341：59-67(2009)。因此，其允許檢測蛋白質A而不會有來自試樣中過量產物分子之干擾。在分析中使用對應於固定於蛋白質A管柱上之配體之特異性配體(例如，ProSep-vA或MabSelect SuRe^TM)作為標準物。使用5參數曲線擬合程式來產生標準曲線，且自標準曲線外推試樣濃度。

LAL合量分析

細菌內毒素係革蘭氏陰性(gram-negative)細菌之細胞壁之脂多糖(LPS)組份，其可藉由破壞微生物細胞或藉由自活細胞脫落來釋放。使用動力學顯色方法藉由美洲鱟試劑(LAL)來檢測並量化細菌內毒素。根據USP及Ph.Eur.要求對此分析進行資格認定。

動力學顯色方法係基於細菌內毒素之存在使LAL試劑中之酶原活化。在活化後，酶催化發色團之裂解，從而產生經分光光度量化之黃色。色彩變化速率與所存在內毒素之量及反應時間成正比。自內毒素濃度與產生顯著量之色彩所需反應時間間之log/log相關性產生標準曲線。

單體、片段及聚集物分析

使用尺寸排除層析來監測昂拉妥珠單抗在天然條件下之尺寸異質性，其中採用TSK-GEL G3000SW_XL管柱來分離昂拉妥珠單抗高分子量物質(聚集物)、主峰(單體)及低分子量物質(片段)。

主峰、酸性變體及鹼性變體分析

使用陽離子交換層析來定量監測電荷異質性，其中採用Dionex ProPac弱陽離子交換管柱來將昂拉妥珠單抗分離成酸性區、主峰及鹼性區。

結果

昂拉妥珠單抗係當前在大腸桿菌中產生之單臂單價抗-c-met抗體。假定需要使單價抗體之聚集(形成多聚物及寡聚物)最小化，維持單價結構(而非形成具有兩條重鏈及兩條輕鏈之激動性二價抗體)及/或因昂拉妥珠單抗及宿主細胞雜質/污染物之靜電性質極為類似，則如表2中所詳述繼續進行多種昂拉妥珠單抗純化方法。

上述方法產生具有如表3中所述屬性之包含昂拉妥珠單抗之組合物之整批。

在比較方法A與方法B時，差異使包含昂拉妥珠單抗之組合物之純化方法及/或純度顯著改良，如表4中所概述所觀察。

如表4中所述，方法A純化與方法B相比之一個差異係層析步驟2(層析2)自強CE管柱變成弱CE管柱。在研發方法B時，評估潛在CE樹脂。使用CM Sepharose FF(弱CE樹脂)、SP Sepharose FF(強CE樹脂)及SP XL樹脂(強CE樹脂)實施CE樹脂篩選。弱CE樹脂與SP Sepharose FF(強CE樹脂)相比顯示更佳ECP清除，如表5中所示。弱CE樹脂亦可再生回其初始外觀，而其他樹脂在鹼再生後呈褐色。此外，當彙集0.5-0.5 OD時，來自弱CE樹脂及強CE樹脂(SP Sepharose FF)運行之最後部分具有50%聚集物。相比之下，當彙集1-1 OD時，自彙集物去除此聚集物，且觀察到在該等彙集物中小於1%之聚集物含量而不會顯著影響產物產率。

此外，在研發方法B時，評估潛在疏水相互作用層析(HIC)樹脂之最終層析步驟。如表6中所顯示，經由AKTA探測方法評估HIC樹脂，即來自GE Health Science之 Phenyl Sepharose FF HiSub(樹脂1)、來自TOSOH之Toyopearl Phenyl-650M(樹脂2)、來自TOSOH之Toyopearl Hexyl-650C(樹脂3)及來自TOSOH之Toyopearl Butyl-650M(樹脂4)，且使用以下運行條件處理：模式：穿流，pH 7.0；流動速率：150 cm/hr；及最大負載密度：50 mg/ml。使樹脂在5管柱體積(CV)之緩衝液(0.3 M Na₂SO₄，50 mM Na₃PO₄，pH 7.0)中平衡。將條件化SP Sepharose XL彙集物試樣(1：1條件化，0.6 M Na₂SO₄，0.1 M Na₃PO₄，pH 7.0緩衝液；起始彙集物準則：0.5 OD)加載至管柱上，且使用15-20 CV之緩衝液(0.3 M Na₂SO₄，50 mM Na₃PO₄，pH 7.0)溶析所關注蛋白質(昂拉妥珠單抗)，且結束彙集物準則為0.5 OD。

基於如表6中所顯示之結果，HIC樹脂Phenyl Sepharose HiSub具有最佳總體性能，其中相對於HiPropyl之70%(數據未顯示)達成82%之步驟產率及121 ppm ECP之雜質清除及1.4%聚集物。

在比較方法B與方法C時，差異使包含昂拉妥珠單抗之組合物之純化方法及/或純度顯著改良，如表7中所概述所觀察。

在研發方法C時，為消除強CE樹脂負載之所需pH調節，使用於弱CE及強CE管柱中之緩衝液自MES變成MOPS。此亦具有促進易處理性之優點。下表8顯示在弱CE樹脂上進一步純化之MOPS與MES之比較，產生類似ECP值。當自方法B條件(25 mM MES，60 mM NaOAc pH 6.5)變成25 mM MOPS，50 mM NaOAc pH 7.1時，觀察到相當結果。

另外，當運行具有pH 6.5或7.0之負載之強CE樹脂時，較高pH負載似乎產生較佳ECP清除，如表9中所顯示。此外，產率相當，如表9中所顯示。

在如圖4中所顯示梯度溶析條件下運行之強AE樹脂(Q Sepharose FF)可較好地解決ECP及聚集物。圖4中之層析圖包括ECP(ng/mL)及聚集物%之跡線(注意，圖4中之OA5D5係昂拉妥珠單抗)。ECP及聚集物之分佈指示，強AE樹脂將充分去除ECP且可替代HIC樹脂作為最終層析步驟。亦參見表10。

研究以下條件以確定是否可運行強AE樹脂之參數及操作範圍而不會影響產物純度及回收。利用40 mM、45 mM及50 mM NaCl在溶析緩衝液中進行運行。在8.7、8.9及9.2下測試溶析緩衝液之pH。在10 mM、25 mM及30 mM NaCl下測試洗滌緩衝液之鹽濃度。亦藉由以15 g/L負載密度運行來測試低加載強AE管柱之效應。所有運行皆證明最終強AE樹脂操作條件之穩健性，如表11中所顯示。

在比較方法C與方法D時，差異使包含昂拉妥珠單抗之組合物之純化方法及/或純度顯著改良，如表12中所概述所觀察。

與方法C相比，當在離心前利用之稀釋度增加10%時，方法D之蛋白質A彙集物產物回收率增加約10%(平均蛋白質A彙集物質量(正規化)：方法C-1X及方法D-1.1X)。在此實例中，離心步驟之產物回收率之淨改良在下游轉變成蛋白質A之產物回收率之淨增加。

在比較方法D與方法E時，差異使包含昂拉妥珠單抗之組合物之純化方法及/或純度顯著改良，如表13中所概述所觀察。

將絮凝步驟添加至方法D。如方法E中使濃縮物在如表14中所顯示升高溫度下保持延長時段，使一些原本在蛋白質A彙集物中溶析之雜質絮凝。然而，絮凝步驟導致濁度增加，此阻礙蛋白質A加載過程。藉由測試用於上游誘導絮凝步驟之多個溫度及時間，可在方法中使用現有離心及過濾技術使任何增加之濁度最小化及/或將其去除，而不會損害增強之純化。

另外，在篩選不同蛋白質A樹脂後，在方法D與方法E之間改變蛋白質A樹脂。比較如表15中所顯示之蛋白質A樹脂顯示，蛋白質A樹脂2(MabSelect Sure^TM)與蛋白質A樹脂1及Prosep Ulta Plus(PUP)相比使ECP顯著更低。另外，蛋白質A樹脂2將PEI清除至低於可檢測程度，而蛋白質A樹脂1及PUP則不能。殘餘PEI可引起問題，此乃因殘餘 PEI在結合下游樹脂上之結構域方面可勝過產物，藉此降低產物結合能力並導致不穩定性質。即使存在較小濃度之殘餘PEI亦可損害純化效率。在方法D(其使用蛋白質A樹脂1作為蛋白質A樹脂)中，產物必須首先經弱CE步驟處理以達成PEI之含量與蛋白質A樹脂2相當。蛋白質A樹脂2自包含昂拉妥珠單抗之蛋白質A樹脂負載清除殘餘陽離子聚合物絮凝劑(PEI)之能力係獨特且出人意料的。蛋白質A樹脂2之功效因其所提供增強之靈活性及方法穩健性而有價值。此外，蛋白質A樹脂2與蛋白質A樹脂1(其平均為21 ng/mg)相比不浸出蛋白質A配體(結果<2 ng/mg)，且蛋白質A樹脂2彙集物之色彩與Prosep vA及PUP相比有所降低(數據未顯示)。

此外，蛋白質A溶析緩衝液間之比較顯示，甘胺酸/磷酸相對於乙酸鹽/乙酸溶析緩衝液使經調節彙集物具有更低導電率(在調節至高pH用於加載下游弱AE樹脂後)且彙集物體積、彙集物pH、滴定劑體積及產率相當，如表16中所顯示。利用甘胺酸/磷酸溶析緩衝液所實現經調節彙集物導電率之降低代表顯著改良之製造效率，此乃因彙集物無需1：1稀釋，從而與方法D相比使負載體積/負載處理時間降低50%。

亦在方法D與方法E之間改變第二層析步驟(層析2)。實施28種樹脂之高通量機器人篩選以力圖鑑別弱CE樹脂(層析2步驟)之更有效替代方案。弱CE樹脂在去除ECP方面係有效性最低之步驟且先前主要因其處置殘餘PEI之能力而必需。隨著殘餘PEI因蛋白質A樹脂2而不再成為問題，期望更有效之層析2樹脂。首先，針對產物結合篩選12種AE樹脂、8種CE樹脂及8種HIC樹脂。根據此篩選，使用蛋白質A樹脂2彙集物作為負載，針對ECP結合進一步測試8種AE樹脂、8種CE樹脂及4種HIC樹脂。對於各樹脂而言，測試48種條件，從而收集超過2300個數據點。令人驚奇地，對於幾乎所有所測試樹脂而言，在產物吸附與ECP吸附之間皆存在強相關。該等觀察與對最終層析(final chromatography,Final Chrom)彙集物實施之其他分析結果(數據未顯示)結合表明，引起問題之ECP(即彼等保留在整個方法中者)與產物共有類似靜電及疏水性質，由此有助於達成具有異常挑戰性之分離。根據機器人篩選，在昂拉妥珠單抗產物與ECP之間顯示可辨別差異之唯一樹脂類型係弱AE樹脂，且即使如此，操作窗口仍較小(關於Capto DEAE，參見上圖，且藍色框為操作窗口)，如圖5中所顯示。

在比較方法E與方法F時，差異可使包含昂拉妥珠單抗之組合物之純化方法及/或純度顯著改良，如表17中所概述所觀察。

弱AE平衡/洗滌緩衝液間之比較顯示，甘胺酸、磷酸鹽、Tris(GPT)緩衝液藉由消除層析圖之前緣上之彎曲及背側上之隔開洗滌峰產生更類似於框之穿流步驟。GPT在方法F中係更有效之緩衝液，且其使用益處包括彙集物及緩衝液體積降低25%、層析圖形狀之可變性因負載pH波動較小而降低及結束彙集基於光學密度替代體積而較穩健，如圖6中所顯示。

對強AE最終層析步驟實施之部分因子多變量DOE揭示，在允許範圍之右下角中負載導電率與負載pH之間有不利相互作用，如圖7中所顯示。此角附近之操作與其他條件(約90%)相比顯示顯著較低之產率(60-70%)。在此角附近且與產率損失一致，觀察到在層析圖上昂拉妥珠單抗蛋白質之吸光度信號(數據未顯示)向負載相末端顯著穿透(breakthrough)，從而表明產物與樹脂間之結合能力因電荷-電荷相互作用不足而降低。為減輕過早穿透及隨後產率損失之風險，在方法F中使導電率之目標操作條件左移以避免出現該角附近之情況。

部分參考文獻列表

Angeloni, D.等人(2003)。J Biol Chem. 279(5):3726-3732。

Antipenko, A.等人(2003)。Neuron 39, 589-598。

Bardelli, A.等人(1997)。Oncogene 15, 3103-3111。

Bertotti, A.及Comoglio, P. M. (2003)。Trends Biochem Sci 28, 527-533。

Bladt, F.等人(1995)。Nature 376, 768-771。

Blechman, J. M.等人(1995)。Cell 80, 103-113。

Boix, L.等人(1994)。Hepatology 19, 88-91。

Bottaro, D. P.等人(1991)。Science 251, 802-804。

Bussolino, F.等人(1992)。J Cell Biol 119, 629-641。

Coltella, N.等人(2003)。Faseb J 17, 1162-1164。

Cooper, C. S.等人(1984)。Nature 311, 29-33。

Di Renzo, M. F.等人(1995)。Clin Cancer Res 1, 147-154。

Ferguson, K. M.等人(2003)。Mol Cell 11, 507-517。

Furge, K. A.等人(2000)。Oncogene 19, 5582-5589。

Garrett, T. P.等人(2002)。Cell 110, 763-773。

Gherardi, E.等人(2003)。Proc Natl Acad Sci U S A。

Giancotti, F. G.及Ruoslahti, E. (1999)。Science 285, 1028-1032。

Giordano, S.等人(2002)。Nat Cell Biol 4, 720-724。

Giordano, S.等人(1989)。Oncogene 4, 1383-1388。

Giordano, S.等人(2000)。Faseb J 14, 399-406。

Hamanoue, M.等人(1996)。J Neurosci Res 43, 554-564。

Hartmann, G.等人(1994)。J Biol Chem 269, 21936-21939。

Jeffers, M.等人(1996)。Mol Cell Biol 16, 1115-1125。

Jeffers, M., Schmidt等人(1997)。Proc Natl Acad Sci U S A 94, 11445-11450。

Jin, L.等人(1997)。Cancer 79, 749-760。

Kuniyasu, H.等人(1993)。Int J Cancer 55, 72-75。

Lev, S.等人(1992)。J Biol Chem 267, 10866-10873。

Liu, C.等人(1992)。Oncogene 7, 181-185。

Lokker, N. A.等人(1992)。Embo J 11, 2503-2510。

Lorenzato, A.等人(2002)。Cancer Res 62, 7025-7030。

Love, C. A.等人(2003)。Nat Struct Biol 10, 843-848。

Maina, F.等人(1996)。Cell 87, 531-542。

Matsumoto, K.及Nakamura, T. (1993)。Exs 65, 225-249。

Maulik, G.等人(2002)。Cytokine Growth Factor Rev 13, 41-59。

Meiners, S.等人(1998)。Oncogene 16, 9-20。

Morello, S.等人(2001)。J Cell Physiol 189, 285-290。

Naka, D.等人(1992)。J Biol Chem 267, 20114-20119。

Naldini, L.等人(1991)。Embo J 10, 2867-2878。

Natali, P. G.等人(1996)。Int J Cancer 69, 212-217。

Nguyen, L.等人(1997)。J Biol Chem 272, 20811-20819。

Nusrat, A.等人(1994)。J Clin Invest 93, 2056-2065。

Ogiso, H.等人(2002)。Cell 110, 775-787。

Olivero, M.等人(1996)。Br J Cancer 74, 1862-1868。

Olivero, M.等人(1999)。Int J Cancer 82, 640-643。

Orian-Rousseau, V.等人(2002)。Genes Dev 16, 3074-3086。

Park, M.等人(1986)。Cell 45, 895-904。

Peek, M.等人(2002)。J Biol Chem 277, 47804-47809。

Pelicci, G.等人(1995)。Oncogene 10, 1631-1638。

Plotnikov, A. N.等人(1999)。Cell 98, 641-650。

Ponzetto, C.等人(1994)。Cell 77, 261-271。

Ponzetto, C.等人(1996)。J Biol Chem 271, 14119-14123。

Robertson, S. C.等人(2000)。Trends Genet 16, 265-271。

Royal, I.及Park, M. (1995)。J Biol Chem 270, 27780-27787。

Schmidt, C.等人(1995)。Nature 373, 699-702。

Schmidt, L.等人(1997)。Nat Genet 16, 68-73。

Schmidt, L.等人(1999)。Oncogene 18, 2343-2350。

Suzuki, K.等人(1994)。Hepatology 20, 1231-1236。

Tamagnone, L.等人(1999)。Cell 99, 71-80。

Tempest, P. R.等人(1988)。Br J Cancer 58, 3-7。

Trusolino, L.等人(2001)。Cell 107, 643-654。

Uehara, Y.等人(1995)。Nature 373, 702-705。

Van Vactor, D. V.及Lorenz, L. J. (1999)。Curr Biol 9, R201-204。

Weidner, K. M.等人(1996)。Nature 384, 173-176。

Wiesmann, C.等人(1997)。Cell 91, 695-704。

Wiesmann, C.等人(1999)。Nature 401, 184-188。

儘管出於清晰理解之目的藉助闡釋及實例在某些細節上闡述了上述發明，但該等說明及實例不應解釋為限制本發明範圍。本文所引用所有專利及科學文獻之揭示內容皆以整體引用方式明確地併入本文中。

圖1繪示c-met之短半衰期及長半衰期激動劑及拮抗劑之一般結構。

圖2繪示昂拉妥珠單抗(MetMAb或OA5D5.v2)之框架(FR)、超變區(HVR)、第一恆定結構域(CL或CH1)及Fc區(Fc)之胺基酸序列。所繪示Fc序列包含「孔洞」(空腔)突變T366S、L368A及Y407V，如WO 2005/063816中所述。

圖3繪示包含「隆凸」(凸起)突變T366W之Fc多肽之序列，如WO 2005/063816中所述。在一些實施例中，包含此序列之Fc多肽與包含圖1之Fc序列之Fc多肽形成複合物以產生Fc區。

圖4繪示加載至在梯度溶析條件下運行之強AE樹脂(Q Sepharose FF)上之包含昂拉妥珠單抗之弱CE樹脂彙集物(CM Sepharose FF)的層析圖。

圖5A繪示Capto DEAE及昂拉妥珠單抗(MetMAb)log10 KPi之機器人篩選之等高線圖結果(x軸為pH且y軸為離子強度且框為操作窗口)。圖5B繪示Capto DEAE及ECP ng/mL之機器人篩選之等高線圖結果(x軸為pH且y軸為離子強度且藍色框為操作窗口)。

圖6A及B繪示使用(A)Tris、NaCl平衡/洗滌緩衝液及(B)甘胺酸、磷酸鹽、Tris(GPT)平衡/洗滌緩衝液之Capto DEAE平衡/洗滌緩衝液之層析圖。

圖7繪示對Q Sepharose Fast Flow最終層析步驟實施之部分因子多變量DOE(x軸為導電率mS/cm且y軸為pH)。

<110> 美商建南德克公司

<120> 抗-C-MET抗體之純化

<130> P4807R1

<140> 101143324

<141> 2012-11-20

<150> 61/562,925

<151> 2011-11-22

<150> 61/562,429

<151> 2011-11-21

<160> 34

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /註=「人工序列之說明：合成肽」

<400> 1

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /註=「人工序列之說明：合成肽」

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /註=「人工序列之說明：合成肽」

<400> 3

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

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<221> source

<223> /註=「人工序列之說明：合成肽」

<400> 4

<210> 5

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<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 除Arg外之任何胺基酸

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Claims

一種包含抗-c-met抗體之組合物，其中宿主細胞蛋白質(HCP)之含量係小於或等於約50 ng/mg，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
一種包含抗-c-met抗體之組合物，其中HCP之含量小於或等於約50 ng/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate，LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約 75%，且該包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
一種包含抗-c-met抗體之組合物，其中HCP之含量小於或等於約15 ng/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之DNA含量小於或等於約0.3 pg/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之LpA小於或等於約2 ng/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之美洲鱟試劑(LAL)小於或等於約0.01 EU/mg，該包含抗-c-met抗體之組合物中之聚集物之百分比小於或等於約0.3%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之單體之百分比大於或等於約99.5%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之片段之百分比小於或等於約0.3%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之酸性變體之百分比小於或等於約20%，該包含抗-c-met抗體之組合物中之主峰之百分比大於或等於約75%，且該包含抗-c-met抗體之組合物中之鹼性變體之百分比小於或等於約2.0%，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
一種純化抗-c-met抗體之方法，其包含使包含該抗-c-met抗體之組合物在大於28℃之溫度及介於約pH 6與約pH 8間之pH下保持超過6小時，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
如請求項4之方法，其中該方法進一步包含離心該包含該抗-c-met抗體之組合物。
如請求項4至5中任一項之方法，其中該方法進一步包含在MabSelect SuRe樹脂上加載該包含該抗-c-met抗體之組合物及溶析該抗-c-met抗體。
一種純化抗-c-met抗體之方法，其包含在MabSelect SuRe樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物及溶析該抗-c-met抗體，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
如請求項4、5及7中任一項之方法，其中該方法進一步包含在弱陰離子交換樹脂上加載該包含該抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收該抗-c-met抗體。
如請求項8之方法，其中該弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。
一種純化抗-c-met抗體之方法，其包含在弱陰離子交換樹脂上加載包含抗-c-met抗體之組合物，並從穿流液中回收該抗-c-met抗體，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
如請求項10之方法，其中該弱陰離子交換樹脂係以穿流模式運行。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該方法進一步包含在強陽離子交換樹脂上加載該包含該抗-c-met抗體之組合物及溶析該抗-c-met抗體。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該方法進一步包含在強陰離子交換樹脂上加載該包含該抗-c-met抗體之組合物及溶析該抗-c-met抗體。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該方法進一步包含超濾及/或滲濾該包含該抗-c-met抗體之組合物。
一種包含藉由如請求項4至14中任一項之方法中所純化或所獲得之抗-c-met抗體之組合物，其中該抗-c-met抗體包含含有序列KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO：1)之HVR-L1、包含序列WASTRES(SEQ ID NO：2)之HVR-L2、包含序列QQYYAYPWT(SEQ ID NO：3)之 HVR-L3、包含序列GYTFTSYWLH(SEQ ID NO：4)之HVR-H1、包含序列GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO：5)之HVR-H2及包含序列ATYRSYVTPLDY(SEQ ID NO：6)之HVR-H3，其中該抗-c-met抗體包含單一抗原結合臂且包含Fc區，其中該Fc區包含第一及第二Fc多肽，且其中該等第一及第二Fc多肽係呈複合物存在。
如請求項15之組合物，其中宿主細胞蛋白質(HCP)之含量小於或等於約50 ng/mg。
如請求項1至2或16之組合物，其中該HCP之含量介於約1 ng/mg與15 ng/mg之間。
如請求項1至3及16中任一項之組合物，其中該HCP係大腸桿菌(E.coli)蛋白質(ECP)。
如請求項1至3、15及16中任一項之組合物，其中該抗-c-met抗體包含(a1)含有以下序列之重鏈可變結構域：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及(b)含有以下序列之輕鏈可變結構域：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。
如請求項19之組合物，其中該Fc區比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性。
如請求項1至3、15及16中任一項之組合物或方法，其中該第一Fc多肽包含圖1中繪示之Fc序列(SEQ ID NO：17)，且該第二Fc多肽包含圖2中繪示之Fc序列(SEQ ID NO：18)。
如請求項1至3、15及16中任一項之組合物，其中該抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗(onartuzumab)。
如請求項1至3、15及16中任一項之組合物，其中該抗-c-met抗體與昂拉妥珠單抗結合相同表位。
如請求項1至3、15及16中任一項之組合物，其中該抗-c-met抗體之pI介於約8.0與約8.5之間。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該抗-c-met抗體包含(a)含有以下序列之重鏈可變結構域：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：19)及(b)含有以下序列之輕鏈可變結構域：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：20)。
如請求項26之方法，其中該Fc區比包含該抗原結合臂之Fab分子更能提高該抗體片段之穩定性。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該第一Fc多肽包含圖1中繪示之Fc序列(SEQ ID NO：17)，且該第二Fc多肽包含圖2中繪示之Fc序列(SEQ ID NO：18)。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該抗-c-met抗體係昂拉妥珠單抗。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該抗-c-met抗體與昂拉妥珠單抗結合相同表位。
如請求項4、5、7、10及11中任一項之方法，其中該抗-c-met抗體之pI介於約8.0與約8.5之間。
一種醫藥調配物，其包含如請求項1至3或15至24中任一項之組合物。
一種如請求項31之醫藥調配物之用途，其用於製造用以抑制c-met活化之細胞增生之藥劑。
一種如請求項31之醫藥調配物之用途，其用於製造用以調節與HGF/c-met信號傳導軸失調相關之疾病之藥劑。
一種如請求項31之醫藥調配物之用途，其用於製造用以治療患有增生性病症之個體之藥劑。
如請求項34之用途，其中該增生性病症係癌症。
如請求項35之用途，其中該癌症係肺癌、神經膠母細胞瘤、胰腺癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、結腸直腸癌及/或乳癌。
如請求項32至36中任一項之用途，其中該藥劑係用於與第二治療劑一起投與。
一種製造物件，其包含含有如請求項31之醫藥調配物之容器。
一種製備如請求項38之製造物件之方法。