TWI857553B - 艾杜糖醛酸酶穩定劑及其用途 - Google Patents

Abstract

本揭示內容是關於可穩定重組人類α-艾杜糖醛酸酶活性的化合物，以及以該化合物來治療和/或預防溶小體儲積症(LSD)(例如，第I型黏多醣症)的用途。所揭示化合物具有式(I)結構，

，其中n是一介於0至2間的整數，X₁是O或-NH，X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C1-10烷基，Y是H或

，其中m及p可分別是0或1，X₃是S、O或-NH；X₄是O、-NH、亞甲基或-CH₂(C_1-10)烷基，且A是芳基、雜芳基、或雜環基，分別有或無一或多個選自鹵素、羥基、胺基及磷酸根之取代基。

Description

艾杜糖醛酸酶穩定劑及其用途

本揭示內容係關於黏多醣症的治療，詳言之，係關於可穩定重組人類α-艾杜糖醛酸酶(rh-α-DUA)活性的新穎化合物，以及以該些新穎化合物來治療和/或預防第I型黏多醣症(MPSI)的用途。

黏多醣症(MPS)是因為可催化特定糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)降解的酵素(例如，硫酸皮膚素(DS)及硫酸乙醯肝素(HS))活性不足所引起的疾病。GAGs包含長鏈沒有分支的聚糖，特徵是具有重複的雙醣單元。因這類酵素活性不足導致GAGs聚積在細胞內，受此種酵素活性不足影響的個體細胞中的溶酶體會持續造成組織永久性傷害，進而影響個體本身外貌、體能及器官功能，甚至是心智發展。

各類型黏多醣症係以GAG降解路徑上受影響的酵素來區分。舉例來說，第一型黏多醣症(MPSI)是因可將HS末端α-艾杜糖醛酸加以水解的α-艾杜糖醛酸酶(α-DUA)活性不足所致。MPSI的臨床表徵與殘留的酵素活性多寡相關。治療MSP的方法有許多種，大部分都專注於可管理疾病進程的酵素替代療法(enzyme replacement therapy,ERT)或是基因療法。ERT是對患者投予體外製造的天然或重組酵素(例如，重組人類α-艾杜 糖醛酸酶，rh-α-DUA)；至於基因療法則是對患者投予可於其體內表現重組酵素的載體。然而，接受ERT或是基因治療的患者，在經過長期治療後往往會對用於治療的酵素產生排斥性抗體，造成療效不佳。

有鑒於此，相關領域亟需一種改良方法，以便能治療和/或預防與體內大量聚積HS所引起的疾病或症狀，特別是MPSI。

本揭示內容的發明人設計並合成了多種以艾杜糖醛酸/亞胺艾杜糖醛酸為基礎而開發出來的新穎化合物，用來穩定α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)並減輕這類酵素所感受到的環境壓力，因此可改善糖胺聚糖(例如，HS)末端α-L-艾杜糖醛酸的水解程度。因此，這些新合成的化合物是潛在可用來開發能治療和/或預防與HS聚積所致疾病(例如，MPSI)之藥物的化合物。

因此，本揭示內容的第一態樣是關於一種新穎的具有式(I)結構之化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，

其中，n是一介於0至2間的整數；X₁是O或-NH；X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C_1-10烷基， Y是H或

，其中m及p可分別是0或1；X₃是S、O或NH；X₄是O、-NH、亞甲基或-CH₂(C_1-10)烷基；且A是芳基、雜芳基、或雜環基，分別有或無一或多個選自鹵素、羥基、胺基及磷酸根之取代基。

依據本揭示內容一較佳實施方式，在式(I)化合物中，n是1，X₁是O，X₂是-NH，且Y是H。

依據本揭示內容一較佳實施方式，所述化合物具有式(II)結構，

其中，X₁是O或-NH；X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C_1-10烷基；且R₁、R₂及R₃可分別為H或是磷酸根。

依據本揭示內容某些實施方式，所述具有式(1I)結構之化合物可以是以下任一者：

依據本揭示內容一較佳實施方式，所述式(II)化合物是

本揭示內容第二態樣是提供一種用以治療或預防一疑似患有第一型黏多醣症(MPSI)之個體的藥學組合物。所述藥學組合物包含一有效治療量或一有效預防量之上述式(I)化合物，以及一藥學上可接受的載體。

就藥學組合物的總重量而言，所述式(I)化合物約佔藥學組合物總重量的0.1%至99%。在某些實施方式中，所述式(I)化合物至少約佔藥學組合物總重量的1%。在特定實施方式中，所述式(I)化合物至少約佔藥學組合物總重量的5%。在其他實施方式中，所述式(I)化合物至少約佔藥學組合物總重量的10%。再依據其他實施方式，所述式(I)化合物至少約佔藥學組合物總重量的25%。

較佳是，在式(I)化合物中，n是1，X₁是O，X₂是-NH，且Y是H。

依據本揭示內容某一較佳實施方式，所述化合物具有式(II)結構，

其中，X₁是O或-NH；X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C_1-10烷基；且R₁、R₂及R₃可分別為H或是磷酸根。

依據本揭示內容某些實施方式，所述具有式(1I)結構之化合物可以是以下任一者：

依據本揭示內容一較佳實施方式，所述式(II)化合物是

本揭示內容也係關於一種用以治療或預防一疑似患有第一型黏多醣症(MPSI)之個體的方法。所述方法包含在對該個體投予本發明藥 學組合物之前、之後獲同時，給予一重組之人類α-艾杜糖醛酸酶(rh-α-DUA)。

本揭示內容也涵蓋可用來治療或預防一疑似患有第一型黏多醣症(MPSI)之個體的套組。所述套組包括，至少一第一容器，其內含有所述式(II)化合物；以及一第二容器，其內含有rh-α-DUA。

以下將詳細說明本揭示內容之一或多個實施方式。在參閱以下的詳細說明及請求範圍後，本揭示內容諸多伴隨的特徵及優點當可輕易瞭解。

須知前述一般性說明以及以下的詳細說明，都僅是例舉，用以進一步說明所請求之發明。

在參閱以下實施方式的詳細說明、申請專利範圍及附隨圖式後，本揭示內容及其他特徵、態樣及優點將更明顯易懂，其中：第1圖為實施例1化合物/rh-α-IDUA在GM1391纖維母細胞中進行的rh-α-IDUA穩定性試驗結果，其中(A)為以rh-α-IDUA(0.1nM)及化合物12或27b(100μM)共同處理細胞來篩選實施例1化合物的結果；(B)為化合物12、27a或27b與rh-α-IDUA(1nM)之劑量依賴試驗；(C)為化合物12及rh-α-IDUA(0.1nM)共同處理對IDUA活性的影響，及(D)為化合物12及rh-α-IDUA(0.1nM)共同處理對降低細胞內HS量的影響。每一數據都是三重複之平均值±SD，以單項變異數之事後檢定分析對單獨使用rh-α-IDUA進行分析後，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；及 第2圖為化合物12/rh-α-IDUA在GM02846纖維母細胞中進行的rh-α-IDUA穩定性試驗結果，其中(A)IDUA活性；(B)為降低細胞內HS量的結果，每一數據都是三重複之平均值±SD，以單項變異數之事後檢定分析對單獨使用rh-α-IDUA進行分析後，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。

1.定義

除非另有所指，否則在本文中當以「取代(substituted)」一詞來描述一化學結構或部分基團時，係指該化學結構或部分基團的一或多個氫原子被另一原子、部分基團(moiety)或官能基所取代，所述官能基包含，但不限於，-OH、-O(H₂PO₃)、烷基(例如，甲基、乙基、丙基、叔-丁基)、烷氧基、烷醯氧基(alkanoyloxy，例如，-OAc)、烯基、芳基、芳氧基、鹵素、或鹵烷基。

「雜環基(heterocyclyl)」是指一原子團具有環狀碳原子、1至4個環狀雜原子，其中每個雜原子分別選自氮，氧，硫，硼，磷和矽之3至10員非芳香環狀系統(「3-10員雜環基」)。在包含一或多個氮原子的雜環團裡，在原子價允許下，該原子可以連接至碳原子或氮原子。雜環基可以是單環(「單環雜環基」)，或一融合、橋連或螺環的環狀系統，例如一雙環系統(「雙環雜環基」)，其可以是飽和也可以是部分不 飽和。環狀雜環基雙環系統可以包括一或多個雜原子在一或兩個環內。雜環基包括雜芳基。雜環基也包括環狀體系統，其中環狀雜環如上文所定義，與一或多個碳環團融合，其中連接點可以是在環狀碳環基或環狀雜環基，或環狀系統上，其中環狀雜環如上文所定義，與一或多個芳香基團或雜芳基團融合，其中連接點是在雜環上，在此情況下，環狀雜環系統內部碳原子的編號是指定的連續編號。除非另有指明，在每個實例中雜環基可非必要地被分別取代，意即，無取代基(某「無取代基的雜環基」)或一或多個取代基(某「有取代基的雜環基」)。在某些實施例中，雜環基團是沒有取代基的3-10員雜環基。在某些實施例中，雜環基是有取代基的3-10員雜環基。

在某些實施例中，一雜環基團是指一具有環狀碳原子和1-4個環狀雜原子的5-10員非芳香環系統，其中每一個雜原子選自氮、氧、硫、硼、磷和矽組成的群組中(「5-10員雜環基」)。在某些實施例中，一雜環基團是指一具有環狀碳原子和1-4個環狀雜原子之5-8員非芳香環狀系統，其中每個雜原子選自氮、氧和硫組成的群組中(「5-8員雜環基」)。在某些實施例中，一雜環基團是指一具有環狀碳原子和1-4個環狀雜原子之5-6員非芳香族環狀系統，其中每個雜原子選自氮、氧和硫組成的群組中(「5-6員雜環基」)。在一些實施例中，該5-6員雜環基有1-3個環狀雜原子，其係選自氮、氧和硫組成的群組中。在某些實施例中，該5-6員雜環基有1-2個環狀雜原子，其係選自氮、氧和硫組成的群組中。在某些實施例中，該5-6員雜環基有一環狀雜原子，其係選自氮、氧和硫組成的群組中。

含有一雜原子的3員雜環基實例包括，但不限於，3-氮丙啶基(azirdinyl)、環氧乙烷基、硫雜環乙基(thiorenyl)。含有一個雜原子的4員雜環基團實例包括，但不限於，吖丁啶(azetidinyl)、環氧丙環(oxetanyl) 基和硫雜環丁基(thietanyl)。含有一個雜原子之5員雜環基團的實例包括，但不限於，四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫噻吩基、吡咯啶基、二氫吡咯基、吡咯-2,5-二酮。含有兩個雜原子之5員雜環基團的實例包含，但不限於，二氧戊環(dioxolanyl)、環氧蜜呋喃基(oxasulfuranyl)、二硫呋喃基(disulfuranyl)、和噁唑啶-2-酮。含有3個雜原子的5員雜環基團實例包括，但不限於，三唑啉基、噁二唑基(oxadiazolinyl)、噻二唑基(thiadiazolinyl)。含有一個雜原子之6員雜環基團的實例包括，但不限於、哌啶基、四氫吡喃基、二氫吡啶基和噻吩基。含有兩個雜原子之6員雜環基團的實例包括，但不限於，哌嗪基、嗎啉基、二噻基、和二氧陸圜基。含有三個雜原子之6員雜環基團的實例包括，但不限於，三嗪基(triazinanyl)。含有一個雜原子之7員雜環基團的實例包括，但不限於，氮雜環庚基，氧雜環庚基(oxepanyl)和硫雜環庚基(thiepanyl)。含有一個雜原子之8員雜環基團的實例包括，但不限於，偶氮啃基(azocanyl)、氧啃基(oxecanyl)和硫啃基(thiocanyl)。5員雜環基團融合至C6芳香環(在本文也稱為5,6-雙環雜環)的實例包括，但不限於，二氫吲哚基，異二氫吲哚基，二氫苯呋喃基，二氫苯噻吩基和苯並噁唑酮基(benzoxazolinonyl)等等。6員雜環基團融合至一芳香環(在本文也稱為6,6-雙環雜環)包括，但不限於，四氫喹啉基和四氫異喹啉基等等。

「芳香基」是指一實質具有6-14環狀碳原子並且不含雜原子(「C_6-14芳基」)的單環或多環(例如，雙環或三環)之4n+2芳香環狀系統(例如，具有6，10，或14個π電子共享的環狀排列)。在某些實施例中，芳基有6個環狀碳原子(「C₆芳香基」；例如苯基)。在某些實施例中，芳香基有10個環狀碳原子(「C₁₀芳香基」；例如，萘基裡的1-萘基和2-萘基)。在某些實施例中，芳基有14個環狀碳原子(「C₁₄芳香基」；例如， 蒽基)。「芳基」還包括多環系，其中的芳香環，如上述定義，與一或多個碳環基或雜環基融合，其中連接點是於芳香基上，在這種情況下，芳香環狀系統內部碳原子的編號是以連續的編號指定之。除非另有指明，每個實例中芳香基可被非必要地分別取代，即無取代基的(「無取代基的芳香基」)或有一或多個取代基的(「有取代基的芳香基」)。在某些實施例中，芳香基是無取代基的C_6-14芳香基。在某些實施例中，芳香基是有取代基的C_6-14芳香基。

「雜芳基(heteroaryl)」是指具有環狀碳原子和芳香環內1-4個環狀雜原子的5-10員單環(每個雜原子分別選自氮、氧和硫組成之群組)(「5-10員雜芳基」)或雙環4n+2芳香族環狀系統(例如，具有6或10個π電子共享的環狀排列)。雜芳基團內包含一或多個氮原子，在原子價允許下連接至碳原子或氮原子。雜芳基的雙環系統可以包括一或多個雜原子在其之一或兩個環內。「雜芳基」還包括環狀雜芳基(如上文所定義)與一或多個碳環基團或雜環基團融合的環狀系統，其中連接點在環狀雜芳基上，在這種情況下，環狀雜芳系統內部成員的編號是以連續的編號指定之。「雜芳基」還包括環狀雜芳基(如上文所定義)融合至一個或多個芳香基的環狀系統，其連接點是在芳香環或雜芳環上，在這種情況下，成員的編號指定給所有在環狀融合(芳香基/雜芳基)的成員。二環雜芳基團其中一個環不包含雜原子(例如吲哚基，喹啉基，咔唑基等等)，連接點可以在任一環上，即，在雜原子的環上(例如，2-吲哚基)，或不含雜原子的環上(例如，5-吲哚基)。

在某些實施例中，雜芳基是具有環狀碳原子和1-4雜原子的5-10員芳環體系(「5-10員雜芳基」)，其中每個雜原子可以是氮、氧或硫。在某些實施例中，雜芳基是含碳原子及1-4個雜原子的5-8員芳 香環系統，其中雜原子可以是氮、氧、或硫(「5-8員雜芳基」)。在某些實施例中，雜芳基團是含有碳原子和1-4個雜原子的5-6員芳環體系，，其中每個雜原子可以是氮、氧或硫(「5-6員雜芳基」)。在某些實施例中，5-6員雜芳基團有1-3個雜原子係選自氮、氧和硫組成的群組。在某些實施例中，5-6員雜芳基有1-2個雜原子係選自氮，氧和硫組成的群組。一些實施例中，5-6員雜芳基有1個雜原子係選自氮，氧和硫組成的群組。除非另有指明，每個實例裡雜芳基團可以含有非必要取代基，即無取代基(「無取代基的雜芳基」)，或一或多個取代基(「有取代基的雜芳基」)。在某些實施例中，雜芳基團是無取代基的5-14員雜芳基。在某些實施例中，雜芳基為有取代基的5-14員雜芳基。

含一個雜原子之5員雜芳基團實例包括，但不限於，吡咯基、呋喃基和噻吩基。含兩個雜原子的5員雜芳基團實例包括，但不限於，咪唑基，吡唑基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基和異噻唑基。含3個雜原子之5員雜芳基團實例包括，但不限於，三唑基，噁二唑基和噻二唑基。含4個雜原子之5員雜芳基團實例包括，但不限於，四唑基。含一個雜原子的6員雜芳基團實例包括，但不限於，吡啶基。含兩個雜原子的6員雜芳基團實例包括，但不限於，噠嗪基，嘧啶基和吡嗪基。含3或4個雜原子的6員雜芳基團實例包括，但不限於，三嗪基和四嗪基。含一個雜原子之7員雜芳基團實例包括，但不限於，氮庚因基(azepinyl)，氧庚因基(oxepinyl)，硫庚因基(thiepinyl)。5,6-雙環雜芳基實例包括，但不限於，吲哚基，異吲哚基，吲唑基，苯並三唑基，苯並噻吩基，異苯並噻吩基(isobenzothiophenyl)，苯並呋喃基，苯並異呋喃(benzoisofuranyl)，苯並咪唑基，苯並噁唑基，苯並異噁唑基，苯並惡二唑基，苯並噻唑基，苯並異噻唑基，苯噻二唑基(benzthiadiazolyl)，中氮茚基和嘌呤基。6,6-雙環雜芳基團實例包括，但不限於，二氮雜萘基，蝶啶，喹啉基，異喹啉基， 噌啉基，喹喔啉基，酞嗪基和喹唑啉基。

「鹵(halo)」或「鹵素(haolgen)」是指氟(-F)，氯(-Cl)，溴(-Br)，或碘(-I)。

本文所述的原子(atom)、部分基團(moiety)或基(group)在價數允許下，除非明確指出，否則可以是無取代基的或有取代基的。名詞「非必要性取代(optionally substituted)」是指有取代基的或無取代基的。

本揭示內容並不侷限於上述取代基範例。

「鹽(salt)」在此係指酸(例如，本發明化合物)與鹼作用後所形成的鹽類。所述鹼包括有機或無機類型的鹼，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、胺類、烷胺等等。

「溶合物(solvate)」一詞是指化合物透過溶解反應而與溶劑結合(association)在一起而產生的一種化合物形式。物理性的結合可以包括氫鍵。傳統溶劑包括水、甲醇、乙醇、醋酸、二甲基亞砜(DMSO)、四氫呋喃(THF)，二乙醚等等。本文所述的化合物可以被製備成結晶形式或是溶劑化形式。合適的溶合物包括藥學上可接受的溶合物，還包括化學計量的溶合物和非化學計量的溶合物。在某些情況下，溶合物是可以被單離的，例如，當一或多個溶劑分子被包含在結晶固體的晶格中。「溶合物」包括溶液相的溶合物和可單離的溶合物。

須知若未以粗體或虛線標出一結構或其之一部分的立體化學，即代表該結構或該結構之部分應被解釋為涵蓋其全部立體化學結構。此外，圖示或化學式中任何看似價數不足的原子，都推定其連接有足量的氫原子以滿足價數要求。

彼此不呈鏡像的立體異構物被稱為「非鏡像異構物(diastereomers)」，彼此無法重疊的鏡像物被稱為「鏡像異構物(enantiomers)」。當化合物具有不對稱中心時，例如，鍵結到四個不同的 基團，會產生一對鏡像異構物。鏡像異構物以它的不對稱中心的絕對組態為特徵，用Cahn和Prelog的R-和S-排序法則，或用分子旋轉平面偏極光的方式指定為右消旋或左消旋(即，如(+)或(-)-異構物)。掌性化合物可以單獨或其混合物存在。當混合物含相同比例的鏡像異構物時被稱為「外消旋混合物」。

除非另有所指，否則化合物之「治療有效量(therapeutically effective amount)」是指足以對疾病的治療或管理產生治療效果或延遲該疾病之一或多個病徵的化合物用量。一化合物的治療有效量是指單獨使用該化合物或與其他藥劑合併使用該化合物時，可對疾病的治療或管理產生治療效果或延遲該疾病之一或多個病徵的該化合物用量。「治療有效量」包含足以改善疾病的整體治療效果、減輕或避免症狀，或提高另一治療藥劑之治療效果的用量。

除非另有所指，否則化合物之「預防有效量(prophylactically effective amount)」是指足以預防疾病或預防該疾病之一或多個病徵再現的化合物用量。一化合物的預防有效量是指單獨使用該化合物或與其他藥劑合併使用該化合物時，可預防疾病或該疾病之一或多個病徵再現的該化合物用量。「預防有效量」包含足以改善疾病的整體預防效果、減輕或避免症狀，或提高另一治療藥劑之預防效果的用量。

除非另有所指，否則「治療(treat,treating or treatment)」是指當患者罹患特定疾病時，對該患者實施可減輕該疾病之嚴重程度或一或多個病徵或延緩疾病進程的舉措。

在本文中，「個體(subject)」或是「患者」(patient)可互換地使用，且意思是指能夠以本揭示內容的化合物治療的哺乳類動物(包含人類)。所述「哺乳動物」(mammal)是指哺乳綱(class)的所有成員，其包含人類、靈長類、馴養動物及家畜(例如兔、豬、羊、牛)以及動物園圈養動物、用於運動的動物或寵物；以及囓齒類(例如小鼠與大鼠)。再者，除非明確指出性別，否則「個體」或「患者」(patient)一詞均有包含男性(雄性)及女性(雌性)。因此，「個體」或「患者」包含受益於本揭示內容的治療方法的任何哺乳動物。「個體」或「患者」的例示包含，但不限於：人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、猴、豬、山羊、牛、馬、犬、貓、鳥及禽類。在較佳的實施方式中，個體是一人類。

本文使用的「約」(about)通常指一給定數值或範圍的10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例或反射角)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。

除非上下文另有明確說明，本文所使用的單數形式「一」(a,an)以及「該」(the)均包含複數形式。

2.新穎的艾杜糖醛酸酶穩定劑

因此，本揭示內容首要目標為提供一種式(1)化合物、其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，

其中，n是一介於0至2間的整數；X₁是O或-NH；X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C_1-10烷基，Y是H或

，其中m及p可分別是0或1；X₃是S、O或-NH；X₄是O、-NH、亞甲基或-CH₂(C_1-10)烷基；且A是芳基、雜芳基、或雜環基，分別有或無一或多個選自鹵素、羥基、胺基及磷酸根之取代基。

依據本揭示內容一較佳實施方式，在式(I)化合物中，n是1，X₁是O，X₂是-NH，且Y是H。

依據本揭示內容某些較佳實施方式，所述化合物具有式(II)結構，

其中，X₁是O或-NH；X₂是O、-NH或-NR^a，其中R^a是C_1-10烷基；且 R₁、R₂及R₃可分別為H或是磷酸根。

依據本揭示內容某些實施方式，所述式(1I)化合物可以是以下任一者：

依據本揭示內容一較佳實施方式，所述式(II)化合物是

本揭示內容化合物具有一或多個立體中心，因此可以鏡像異構物之外消旋混合物或是非鏡像異構物之混合物形式存在。因此，本發明也涵蓋這些化合物之純的立體化合物，以及其之混合物。可利用高效液體色層分析(HPLC)自外消旋混合物中單離出欲求的鏡像異構物或是以任何適當的方法(例如，利用具有光學活性的分割劑(resolving agent))從外消旋混合物中分割出欲求的鏡像異構物。視所選用分割劑的光學性質，可將兩鏡像異構物中之一者，以高產率、高光學純度之不溶性鹽類的形式單離出來，另一鏡像異構物則以可溶狀態留在溶液中。

本發明因此更包含所揭示化合物的立體化合物之混合物，也包含所揭示化合物(立體異構物之純化合物或是其之混合物)的組態異構物(configuration isomers)(例如，與雙鍵無關之順-式及反式-異構物)。

3.用途

本發明也涵蓋一種治療或預防一患有第一型黏多醣症(MPSI)之個體的方法。所述方法包含在對該個體投予重組之人類α-艾杜糖醛酸酶(rh-α-DUA)之前、之後或同時，對該個體投予一治療有效量或一預防有效量之本發明式(I)化合物。

本發明式(I)化合物的投予量較佳是每天0.01毫克至5000毫克間，例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、 770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、2,200、2,300、2,400、2,500、2,600、2,700、2,800、2,900、3,000、3,100、3,200、3,300、3,400、3,500、3,600、3,700、3,800、3,900、4,000、4,100、4,200、4,300、4,400、4,500、4,600、4,700、4,800、4,900、5,000毫克。本發明式(I)化合物的投予量更佳是每天0.1毫克至2500毫克間，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、 2,200、2,300、2,400、2,500毫克。本發明式(I)化合物的投予量最佳是每天1毫克至1000毫克間，例如1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1,000毫克。

可將本發明式(I)化合物的單日使用劑量劃分成為以每天一或多次方式使用，例如每天兩次或三次。舉例來說，每日劑量1000毫克可以分成每天兩次，每次500毫克方式來使用。須知每一劑量都由一或多種藥學形式組成，例如，500毫克劑量可由每劑250毫克的兩劑組成。

式(I)化合物的用量、途徑及劑量排程將視所欲治療、預防或管理的適應症，以及患者的年齡、性別及病況等因子而定，前述這些因子所扮演的角色乃是習知技藝人士所熟知的，其可透過常規試驗來決定。

依據一較佳實施方式，在式(I)中，X是O，Y是H，且合併施用本發明化合物與重組之人類α-艾杜糖醛酸酶(rh-α-DUA)可提高IDUA活性並降低個體體內HS的量。

4.藥學配方

本揭示內容也涵蓋可適合與rh-α-DUA一同使用來治療或預防第一型黏多醣症(MPSI)的藥學組合物。

在某些實施方式中，本發明式(II)化合物是與一或多種藥學上可接受的佐劑一起被配製成藥學組合物。本發明式(II)化合物約佔藥學組合物總重量的0.1%至99%間。在某些實施方式中，本發明式(II)化合物約佔藥學組合物總重量的至少1%。在特定實施方式中，本發明式(II)化合物約佔藥學組合物總重量的至少5%。在其他實施方式中，本發明式(II)化合物約佔藥學組合物總重量的至少10%。在某些實施方式中，本發明式(II)化合物約佔藥學組合物總重量的至少25%。

特定藥學組合物是適合口服、穿黏膜(經由鼻腔、舌下、陰道內、頰內或直腸內)、注射(例如，皮下、靜脈、灌注、肌肉或動脈內)或穿皮單一劑型。適合的劑型實例包括，但不限於，藥錠、剝半藥錠(caplets)、膠囊(capsules)(例如，彈性明膠軟膠囊)、藥片(cachets)、口含片(troches)、菱形錠(lozenges)、分散物(dispersions)、栓劑(suppositories)、軟膏(ointments)、糊劑(cataplasm)、泥劑(paste)、粉劑(powders)、敷料(dressing)、霜劑(creams)、膏藥(plasters)、溶液(solutions)、貼布(patches)、氣溶膠(aerosols)(例如鼻噴劑或吸入劑)、膠(gels)。適合口服或穿黏膜的液體劑型實例包括，但不限於懸浮液(suspensions)(水性或非水性液體懸 浮液、油在水中之乳化液或水在油中之乳化液)、溶液、及酏劑(elixirs)。適合注射的液體劑型可以是能被重組成液體劑型的無菌固體(例如，晶體或非晶型化合物)。

所選用的配方應該適合所使用的投藥路徑。舉例來說，口服藥需要有腸衣塗層，以保護化合物不受胃酸破壞。類似的，配方也可包含可幫助傳送活性成分到標的作用區域的成分。舉例來說，可以脂質體形式來投予化合物，以保護其不被酵素破壞，並幫助將其傳送到循環系統內及穿過細胞膜到細胞內欲作用的位置。

可利用溶解劑、乳化劑及表面活性劑(例如，α-環糊精或是β-環糊精)，以及非水性溶劑將難溶性藥物併入至液體劑型(包括可重組使用的劑型)中，這類非水性溶劑的實例包括，但不限於，乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲醯胺，二甲亞砜(DMSO)，生物相容性油(例如，棉仔油、核桃油、玉米油、橄欖油、蓖麻油、及芝麻油)，甘油，四氫糠醇(tetrahydrofurfuryl alchol,THFA)，聚乙二醇，山梨醣醇之脂肪酸酯及前述化合物的混合物(例如，DMSO：玉米油)，諸如卵磷脂醯膽鹼(EPC)、大豆磷脂醯膽鹼(SPC)、1,2-二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、1,2-二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、膽固醇、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)之類的油脂，以及PEG-2000。依據較佳實施方式，式(I)化合物是與油脂類製成適合口服或注射型的脂質體劑型。

劑型的組成、形狀及型態將視最終應用而定。舉例來說，急症治療劑型中所含活性成分用量將遠高於慢性治療劑型。類似的，注射 劑型中所含活性成分用量也將遠低於口服劑型。習知技藝人士應能輕推知本發明這些劑型所需的其他事項之變化。

4.1 口服劑型

適合經口服用的本發明藥學組合物形式包括，但不限於，藥錠(如，可嚼式藥錠)、剝半藥錠、膠囊、及液體(例如，糖漿)。這類劑型豬含有預定量的活性成分，並可以習知方法製成。

口服劑型典型係將活性成分與至少一種賦形劑混合成混合物後，再依據傳統製作藥學配方的方式製作而成，並視藥劑所欲施用的途徑來挑選適合的賦形劑。

由於口服劑型使用便利，因此藥錠及膠囊成為最具優勢的劑型。可視需求，以標準的溶液或非溶液式技術，對藥錠外層進行塗佈。可以傳統藥學製法製作。一般來說，藉由讓活性成分與液態載體、極細的固態載體或兩者均勻地混合後，再形塑成欲求外形後，製成所欲之藥學組合物或劑型。也可在固體劑型中加入崩散劑，促使其可快速溶解。也可在劑型(如，藥錠)中混入潤滑劑。

4.2 非經腸胃道的劑型

非經腸胃道的劑型可透剁多種途徑來使用，包括但不限於，靜脈、肌肉內或動脈內等途徑。由於這種施用方式會繞過患者本身對抗病菌的防衛系統，因此這類劑型通常需製成無菌狀態或是使用前能被無菌儲存狀態。非經腸胃道的劑型包括，但不限於，可立即被注射的溶液、能被溶解或懸浮於藥學可接受之注射載體的乾燥粉末、可立即被注射的懸浮液、或是乳化液。

可作為非經腸胃道的劑型的載體實例乃是此領域具有普通技藝人士所孰知的。這些載體實例包括，但不限於，氯化鈉溶液、林格氏溶液、葡萄糖；與水互溶之載體實例包括，但不限於，乙醇、聚乙二醇、聚丙二醇；非溶液型載體實例包括，但不限於，油脂、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、十四酸異丙酯、及苯甲酸苯甲酯。

4.3 穿皮膜、表面塗抹及口腔黏膜劑型

穿皮膜、表面塗抹及口腔黏膜劑型包括，但不限於，眼藥水、噴劑、氣溶膠、乳霜(creams)、乳液(lotions)、軟膏(ointment)、凝膠、溶液、乳化液、懸浮液或其他習知型式。穿皮膜劑型也包括所謂的「儲劑型(reservoir type)」或是「基質型(matrix type)」貼布，可將其貼在皮膚或穿在身上一段時間，好讓欲求量的活性成分可穿透至皮膚內。

可用來製作穿皮膜、表面塗抹及口腔黏膜劑型的載體及其他材料乃是此領域具有普通知識者孰知的，並可依特定藥學組合物所欲使用的組織類型，來挑選適合的載體使用。

視所欲治療的身體部位，可在施用本發明活性成分之前、同時或之後，合併使用其他成分。舉例來說，可使用促穿膜劑(penetration enhancer)來幫助傳送活性成分到組織內。

可調整藥學組合物或劑型之pH值或視所欲使用藥學組合物之組織來調整藥學組合物或劑型之pH值，以改善一或多種活性成分的傳送效率。類似的，也可調整溶劑載體極性、離子強度、或張力來改善活性成分的傳送效率。也可在藥學組合物或劑型內加入硬脂酸酯類的化合物來變一或多種活性成分的親水性或疏水性，以改善傳送效率。據此，硬脂 酸酯類的化合物可做為配方的油脂載體，或乳化劑或介面活性劑，以及促吸收劑或促穿皮劑。可使用活性成分之不同鹽類、水合物或是溶合物來調整所得組合物的性質。

5.套組

本揭示內容也涵蓋可用來治療或預防一個體之MPS1的套組。

依據本揭示內容之套組包括，至少一第一容器，其內含有所述式(I)化合物；以及一第二容器，其內含有rh-α-IDUA；以及一使用說明，提供使用者如何使用本套組之說明性文字。該使用說明可以手冊、錄影帶、CD、VCD、或DVD形式存在。容器的實例包括，但不限於，小管、試管等。

以下將透過實施方式(僅為說明本發明之用，非用以限制本發明範疇)來說明本發明內容。這些實施方式雖為典型會使用的實施方式，但所屬技術領域具有普通技藝人士，應能使用其他方法、技術來取代所述實施方式。

實施例

材料與方法

細胞培養

每一種在此所使用的細胞都是在37℃、5% CO₂潮濕環境於添加有10%胎牛血清(FBS)、盤尼西林(100單位/毫升)、鏈黴素(100μg/毫升)之培養基中進行培養。

IDUA活性抑制試驗

將待測試化合物與人類rh-α-IDUA(Aldyrazyme®，最終濃度為1.2nM)及螢光基質(4-MU-IdoA，)以最終濃度為100μM於pH 3.5的緩衝液(50mM NaOAc,150mM NaCl)中一起混合，之後於37℃下在384-孔的微型培養盤中培育30分鐘。最後加入終止溶液(500mM Na₂CO₃,pH 10.8)並讀取產物在以355nm激發波長激發後，在460nm發射波長下所發出的螢光強度。原始螢光強度須先扣除背景值(亦即，自溶液本身發出的螢光)。篩選出可抑制人類rh-α-IDUA酶活性的化合物後，對其進一步測試以定出IC₅₀及K_i值。

實施例1 化學合成式(I)化合物

依據流程1-5所示步驟來合成本發明式(I)化合物。

1.1 IdoA-型C-糖苷12

合成反應始於製備數公克重之中間體8，透過Moffett(J Am Chem Soc 1954,2813(12),3310-3315)所描述的4-步驟方法從D-葡萄糖醛酸內酯(7)開始製備。以三甲基丙烯矽烷對中間體8進行C-醣基化，可將首旋異構物9及10分開，個別產率為38%及34%。透過NMR來定出兩化合物的掌性及組態，結果顯示化合物9具有⁴C₁椅型組態，化合物10則仍維持為構型異構物。接著，利用Lemieux-Johnson氧化及還原性胺化將IdoA-型C-糖苷9在C-1位置的丙烯基轉變成具有N-保護基一級胺11，接著去保護基後可得C-糖苷12。

流程1：製備IdoA-型C-糖苷12(CIdoA 12)

化合物12 ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.63-1.73(m,1H),2.02-2.10(m,1H),3.05(ddd,J=13.2,7.6,6.0Hz,1H),3.07-3.15(m,2H),3.33(dd,J=9.3Hz,1H),3.33-3.40(m,1H),3.57(dd,J=9.6,6.5Hz,1H),4.23(d,J=6.5Hz,1H).¹³C NMR(150MHz,D₂O)δ 176.4,74.8,73.7,73.0,71.9,70.3,36.8,26.8.[C₈H₁₅NO₆+H]⁺ 222.0972，實際值222.0968.

1.2 非對映異構物15a及15b

依據Tashiro(Bioorganic Med.Chem 2013,21(11),3066-3079)所描述的方法，從D-葡萄糖開始製備化合物13。之後，以苯甲基羥基胺將化合物13縮合，可獲得N-苯甲基-N-糖苷羥基胺14(87%)。將化合物13第6個碳上之矽烷基的保護基去除後，再施以AllMgCl加成反應，可成功地產生數公克重的加成物。依據NMR分析，可知加成物是以1：3的比例混合組成的混合物。此一非對映異構物混合物可分出化合物15a(少量，產率約15%)及15b(主要化合物，產率39%)。

流程2：製備非對映異構物15a及15b

或者也可利用流程3所揭示的步驟來合成化合物15a及15b，其中以苯甲基胺將化合物13縮合，可獲得N-苯甲基-N-糖苷胺18(84%)。接著，對化合物18施以AllMgBr非對映異構選擇性加成反應，可成功地產生化合物15a及15b比例為5：1的加成物。

流程3：另一種立體選擇性製備非對映異構物15a及15b的方法

1.3 CIdoADNJ 23

對化合物15b實施N-Boc保護，接著，以甲氧甲基縮醛基對氧原子進行保護，再以TBAF去除矽烷基上的保護基後，可獲得化合物19(3個步驟後的產率為76%)。接著，依序執行Swern氧化、Pinnick氧化、Steglich酯化、及去除N-Boc保護基，進而將化合物19轉變為化合物20(4步驟後的產率為42%)。在活性化分子篩存在下，於100℃下以MsCl將化合物20甲烷磺醯化，進而生成具有N-苯甲基保護且在第6個碳上有甲酯基 的亞胺糖21，產率為66%。依照流程2所揭示自化合物9生成CIdoA 12類似的步驟，從亞胺糖21合成化合物23(4步驟後的產率為39%)。

流程4：由非對映異構物15b製備CIdoADNJ 23

化合物23 ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.98-2.09(m,1H),2.25-2.34(m,1H),3.08-3.19(m,2H),3.49(dt,J=7.5,7.0Hz,1H),3.54(dd,J=7.6Hz,1H),3.60(dd,J=7.4Hz,1H),3.90(dd,J=7.6,4.7Hz,1H),4.15(d,J=4.7Hz,1H).¹³C NMR(150MHz,D₂O)δ 170.5,72.4,70.1,68.3,55.3,54.6,36.4,27.3.HRMS calcd for[C₈H₁₆N₂O₅+H]⁺ 221.1132，實際值221.1130.

1.4 CIdoA 27及CIdoADNJ 28a-c

有了化合物12及23之後，可透過形成醯胺鍵的方式，以帶有負電荷磷酸基團之取代基試劑24-26將其耦接到化合物12及23的一級胺上，接著再去除保護基即可生成CIdoA 27a-c及CIdoADNJ 28a-c。

流程5：製備化合物27a-c及28a-c

化合物27a ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.5-1.6(m,1H),1.9-2.0(m,1H),3.1(t,J=8.8Hz,1H),3.1-3.2(m,1H),3.2-3.3(m,1H),3.5(s,2H),3.6(t,J=8.9Hz,1H),3.6-3.7(m,2H),4.4(d,J=6.2Hz,1H),7.1(d,J=8.3Hz,2H),7.2(d,J=8.4Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 174.5,173.3,163.0(q,J=35.4Hz),151.1,130.5,130.4,120.7,120.7,116.3(q,J=291.7Hz),74.6,73.7,73.4,72.6,69.9,41.7,36.3,29.9.³¹P NMR(202MHz,D₂O)δ -2.6.HRMS calcd for[C₁₆H₂₂NO₁₁P-H]^- 434.0858，實際值434.0833

化合物27b

-46.4(c 0.30,H₂O)¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.5-1.6(m,1H),1.9-2.0(m,1H),3.1-3.2(m,2H),3.3(dt,J=14.1,6.9Hz,1H),3.5(s,2H),3.6(t,J=8.9Hz,1H),3.6-3.7(m,2H),4.4(d,J=6.1Hz,1H),7.0-7.0(m,2H),7.0(d,J=8.5Hz,1H),7.3(t,J=7.8Hz,1H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 174.1,173.0,162.9(q,J=35.5Hz),152.0,136.4,130.1,125.1,121.3,119.2,116.2(q,J=291.4Hz),74.6,73.6,73.2,72.6,69.8,42.2,36.4,29.9.³¹P NMR(202MHz,D₂O)δ -2.8.HRMS calcd for [C₁₆H₂₂NO₁₁P-H]^- 434.0858，實際值434.0837.

化合物27c ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.5-1.6(m,1H),1.9-1.9(m,1H),3.1(t,J=8.9Hz,1H),3.2(dt,J=13.1,6.3Hz,1H),3.3(dt,J=13.6,6.6Hz,1H),3.6(s,2H),3.6(t,J=9.0Hz,1H),3.6-3.7(m,2H),4.3(d,J=6.0Hz,1H),7.0-7.1(m,1H),7.2-7.3(m,3H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 174.1,173.2,163.0(q,J=35.8Hz),150.5,131.3,128.9,126.1,124.3,120.1,116.3(q,J= 291.2Hz),74.7,73.6,73.3,72.6,70.0,37.3,36.4,29.8.³¹P NMR(202MHz,D₂O)δ -2.8.HRMS calcd for[C₁₆H₂₂NO₁₁P-H]^- 434.0858,實際值434.0833.

化合物28a ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.8-1.9(m,1H),2.1-2.2(m,1H),3.2-3.3(m,2H),3.4-3.5(m,1H),3.5(s,2H),3.6(t,J=5.9Hz,1H),3.8(t,J=5.7Hz,1H),4.1(t,J=4.7Hz,1H),4.3(d,J=3.9Hz,1H),7.1(d,J=8.2Hz,2H),7.2(d,J=8.1Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 175.5,169.4,162.9(q,J=35.7Hz),151.0,130.5,130.4,120.8,120.7,116.2(q,J=291.4Hz),70.6,69.1,68.1,55.1,54.1,41.5,35.6,28.2.³¹P NMR(202MHz,D₂O)δ -2.7.HRMS calcd for[C₁₆H₂₃N₂O₁₀P-H]^- 433.1018，實際值433.0994.

化合物28b ¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.8-1.9(m,1H),2.1-2.2(m,1H),3.2-3.4(m,2H),3.4-3.5(m,1H),3.6(t,J=5.8Hz,1H),3.8(t,J=5.8Hz,1H),4.1(t,J=4.9Hz,1H),4.3(d,J=3.7Hz,1H),7.0-7.0(m,3H),7.3(t,J=8.2Hz,1H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 175.1,169.4,162.9(q,J=35.2Hz),152.0,136.3,130.1,125.1,121.0,116.2(q,J=292.0Hz),70.6,69.1,68.1,55.1,54.2,42.0,35.6,28.2.³¹P NMR(202MHz,D₂O)δ -2.6.HRMS calcd for[C₁₆H₂₃N₂O₁₀P-H]^- 433.1018，實際值433.0995.

化合物28c產率31%.

-17.5(c 0.29,H₂O).¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 1.9-1.9(m,1H),2.1-2.2(m,1H),3.3-3.3(m,1H),3.3-3.3(m,1H),3.5(d,J=6.6Hz,1H),3.6(s,1H),3.7(t,J=5.1Hz,1H),3.8-3.8(m,1H),4.1-4.1(m,1H),4.3-4.3(m,0H),7.1-7.1(m,1H),7.2-7.3(m,4H).¹³C NMR(151MHz,D₂O)δ 175.1,166.9,162.9,150.4,131.7,129.0,126.0,124.4,119.9,117.3,115.3,70.7,69.1,68.2,55.3,54.1,37.5,35.6,28.1.³¹P NMR (202MHz,D₂O)δ -2.9.HRMS calcd for[C₁₆H₂₃N₂O₁₀P-H]^- 433.1018,實際值433.0993.

實施例2 實施例1之化合物的特性分析

2.1 IDUA抑制活性分析

在本實施例中分別評估每一實施例1所合成化合物抑制人類rh-α-IDUA活性的能力，並以螢光基質4-MU-IdoA來決定每一化合物的IC₅₀，結果示於表1中。

CIdoA類似物27a-c的IC₅₀數值均在較低數值之微莫耳範圍內，代表這些化合物較CIdoADNJ類似物28a-c(其IC₅₀數值約在250μM左右)更能抑制人類rh-α-IDUA活性。IC₅₀數值由6.7μM(化合物12)降低至1.0μM(化合物27c)顯示與帶有特定方位之負電荷磷酸基團耦接，可以改善化合物抑制IDUA活性的能力，因此在本揭示內容中化合物27c是最強的抑制劑。至於CIdoADNJ系列類似物，化合物28c的效果明顯優於系列中其他化合物。

^a NI代表濃度為250μM時其抑制活性小於10%。^b 250μM時的抑制%。

2.2 α-IDUA穩定劑

在本實施方式中，於兩種MPSI細胞株內(即，GM01391和GM02846，每一細胞株之IDUA酵素活性都不足)評估每一實施例1所合成化合物，作為穩定劑穩定α-IDUA酵素活性的能力。

據此，合併以rh-α-IDUA(0.1nM)及化合物12、27a-c(100μM)或是rh-α-IDUA單獨來處理GM01391細胞1天，接著，清洗細胞1天。將細胞收取下來後、裂解、與螢光基質共同培育後，測量IDUA活性。結果示於第1圖中。

以rh-α-IDUA單獨來處理細胞後，可大幅提升細胞原先不足之IDUA活性。此外，化合物12及27b可分別提高細胞的IDUA活性約1.4及1.6倍(相對於rh-α-IDUA單獨處理而言)(第1圖，(A))。相反的，在以化合物27c共同處理的細胞中，則IDUA活性呈現中等程度下降，此推測是因為化合物27c本身乃是rh-α-IDUA抑制劑所致。此外，以化合物27a共同處理細胞，發現其改善IDUA活性的程度有限。

為確認CIdoA類似物12、27a或27b是否為潛在的IDUA穩定劑，特為執行了劑量相關試驗，結果顯示在GM01391細胞株中，合併使用rh-α-IDUA(1nM)及化合物12(500μM)，其IDUA活性高了約1.7倍(較單獨以rh-α-IDUA處理而言)；至於合併使用rh-α-IDUA(1nM)及化合物27a(500μM)，其IDUA活性則明顯受到抑制(第1圖，(B))。

合併使用rh-α-IDUA(1nM)及化合物12處理GM01391細胞，可提高細胞的IDUA活性，且活性增加的程度呈現劑量相依特性(相對於單獨以rh-α-IDUA處理而言)，顯示化合物12可穩定rh-α-IDUA，並改 善細胞吸收rh-α-IDUA的能力(第1圖，(C))。此外，當rh-α-IDUA的濃度被提高到1nM時，化合物12的劑量相依性就更明顯了。

合併使用rh-α-IDUA(1nM)及化合物12處理的時間圖顯示，即使細胞經過8天清洗，化合物12提高IDUA活性的能力仍然存在。

一般來說，MPS患者因缺乏可降解GAGs的溶酶體酵素(包括IDUA)，故導致GSGs聚積在體內。因此，相較於測量MPDS-相關酵素活性，監控GAGs下降量，反而可更直接地來評估合併使用蛋白穩定劑以增強蛋白藥藥效的效果。結果，我們建立了一種定量偵測HS(一種過量儲存在MPSI患者體內的GAGs)以評估化合物12對MPSI患者潛在治療效果的方法。

從經處理的細胞中抽取HS並以化學方式將之裂解為雙醣作為HS的生物性釋放標記，其可以LC-MS/MS來測量(並以化學合成的新穎雙醣作為內部標準品)。利用前述這種以細胞為底的HS測量法，來定量CIdoA類似物12。相較於單獨使用rh-α-IDUA，合併使用化合物12及rh-α-IDUA來處理GM01391，可以增加GM01391細胞內聚積之HS下降的量，且此一下降量的增加在統計上具有顯著性(第1圖，(D))。類似情況也見於以化合物12及rh-α-IDUA處理的GM02846細胞，化合物12可提高rh-α-IDUA活性，且此一IDUA活性增加與化合物12的用量呈現劑量相依性(第2圖，(A))；相較於單獨使用rh-α-IDUA而言，合併使用化合物12及rh-α-IDUA可明顯減少HS的聚積量(第2圖，(B))。

整體而言，經由細胞分析IDUA活性試驗以及定量分析GM01391及GM02846細胞中HS的量，可證明化合物12是IDUA的穩定劑，具有潛在治療MPSI的效果。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

Claims (11)

1. 一種具有式(I)結構之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，

   

   其中，n是1；X₁是O；X₂是-NH； Y是H或

   

   ，其中m及p分別是1；X₃是O；X₄是亞甲基；且A是苯基，有或無一或多個磷酸根之取代基。
2. 如請求項1所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，其中在式(I)中，n是1，X₁是O，X₂是-NH，且Y是H。
3. 如請求項1所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，其中該化合物具有式(II)之結構

   

   其中，X₁是O；X₂是-NH；且R₁、R₂及R₃可分別為H或是磷酸根。
4. 如請求項3所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物，其中該化合物是

   
5. 如請求項3所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合 物或立體異構物，其中該化合物是

   

   。
6. 一種如請求項1所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或立體異構物之用途，其係可用來製備一種可用來治療罹患第I型黏多醣症(MPSI)之個體的藥物，該個體在被投予該藥物之前、期間或之後，曾接受過重組人類α-艾杜糖醛酸酶之治療。
7. 如請求項6所述之用途，其中在式(I)中，n是1，X₁是O，X₂是-NH，且Y是H。
8. 如請求項6所述之用途，其中該化合物具有式(II)之結構

   

   其中，X₁是O；X₂是-NH；且R₁、R₂及R₃可分別為H或是磷酸根。
9. 如請求項8所述之用途，其中該化合物是

   
10. 如請求項8所述之用途，其中該化合物是

    
11. 如請求項8所述之用途，其中該個體是人類。