UA128041C2 - Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта - Google Patents

Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта Download PDF

Info

Publication number
UA128041C2
UA128041C2 UAA202104068A UAA202104068A UA128041C2 UA 128041 C2 UA128041 C2 UA 128041C2 UA A202104068 A UAA202104068 A UA A202104068A UA A202104068 A UAA202104068 A UA A202104068A UA 128041 C2 UA128041 C2 UA 128041C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
sho
shk
still
shi
shchi
Prior art date
Application number
UAA202104068A
Other languages
English (en)
Inventor
Джон М. Седіви
Джон М. Седиви
Чекко Марко де
Original Assignee
Браун Юніверсіті
Браун Юниверсити
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Браун Юніверсіті, Браун Юниверсити filed Critical Браун Юніверсіті
Publication of UA128041C2 publication Critical patent/UA128041C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується способу лікування пов'язаного з віком запалення шляхом введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості щонайменше одного інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ).

Description

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Даний винахід стосується галузі медичної хімії. Зокрема, відповідно до даного винаходу запропонований спосіб лікування, запобігання та обернення пов'язаного з віком запалення шляхом введення інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ) пацієнту, який цього потребує.
Пов'язане з віком запалення може бути у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз (БАС), хвороба Паркінсона, хвороба Гентінгтона, втрата зору, втрата слуху, дегенеративні захворювання периферичної нервової системи, або дисфункція серцево- судинної системи, лобно-скронева деменція (ЛОД), розсіяний склероз (РС), синдром Айкарді-
Гутг'єрес, прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП), остеоартрит, старіння шкіри, атеросклероз, викликані хіміотерапією небажані явища, порушення функціонування гематопоетичних стовбурових клітин, остеопороз, порушення фізичного функціонування та/або фіброз легенів, або у пацієнта, що має потребу в загоєнні ран або регенерації тканин.
ПОЛОЖЕННЯ ВІДНОСНО ДОСЛІДЖЕНЬ АБО РОЗРОБОК, ЯКІ ФІНАНСУЮТЬСЯ З
ФЕДЕРАЛЬНОГО БЮДЖЕТУ
Даний винахід було розроблено за підтримки наступним фінансуванням: стипендія постдокторанта СіІепп/АРАК, |пілотний грант МІН Р2О 5М119943 СОВКЕ; МІН ЕЗ31 АСО43189;
МІН Т32 АсСО41688; МІН Е31 АСО50365; стипендії у галузі біотехнології та спортивної медицини,
Фармацевтична школа, Болонський університет, Болонья, Італія; МІН К37 АСО16667, КО1
АСО24353, РОТ АСО51449, премія за прориви у геронтології СіІепп-АРАВ; МІН НОТ АСІОБОБ582,
Р2гО йМ109035; МІН ВЗ37 АСО16694, РОТ АСОБ51449).
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Кількість людей, які будуть доживати до 60 або більше років, росте по всьому світу.
Очікують, що між 2012 та 2050 роками відсоток кількості людей у віці 60 років і старше зросте з 809 мільйонів до 2 мільярдів (або з 11 95 до 22 95 популяції).(1| Серед основних причин смерті у літньому віці є декілька хронічних станів, включаючи хвороби серця, рак, діабет, хворобу
Альцгеймера та інфекцію. Важливо, що багато даних щодо пов'язаних з віком захворювань і саме старіння сильно пов'язані з хронічним запаленням на низькому рівні. (2,3,4| Системне хронічне запалення може прискорювати старіння. |5| Дійсно, багато маркерів запалення є важливими прогностичними факторами смертності літніх людей. б)
Зо Незважаючи на цей загальний зв'язок між старінням, запаленням та хронічними захворюваннями, був досягнутий лише обмежений прогрес у розумінні механізмів, які контролюють пов'язане з віком запалення, та причинно-наслідкові зв'язки даних регуляторних факторів з хронічними дегенеративними захворюваннями не повністю зрозумілі. Краще розуміння ролі даних регуляторних факторів у пов'язаному з віком запаленні має привести до нових стратегій продовження здоров'я популяції похилого віку.
З цієї причини, у даній галузі існує потреба у кращому лікуванні та запобіганні пов'язаного з віком запалення та пов'язаних з віком розладів.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Даний винахід дає краще розуміння механізмів, що лежать у основі пов'язаного з віком запалення, та ролі останнього у старінні, а також відповідно до даного винаходу запропоновані композиції та способи запобігання та зменшення пов'язаного з віком запалення та розладів.
Ретротранспозовані елементи (КТЕ) мають шкідливий вплив на багатьох рівнях, та недостатність систем нагляду хазяїна, отже, може призводити до негативних наслідків. Проте, внесок активності КТЕ у старіння та пов'язані з віком захворювання був невідомий. У основі винаходу лежить декілька емпіричних спостережень, включаючи спостереження, що у процесі клітинного старіння підвищується рівень транскрипції елементів ГІМЕ-1 (11), та вони активують відповідь інтерферону | типу (ІЕМ-І). Відповідь ІЕМ-І являє собою новий фенотип пізнього клітинного старіння та сприяє підтримці асоційованого зі старінням секреторного фенотипу (ЗА5БР). Відповідь ІЕМ-І запускається цитоплазматичною кКДНК 11, та його антагоністами є інгібітори зворотної транскриптази (ІЗТ), які інгібують зворотну транскриптазу (ЗТ) 11. Лікування літніх мишей ІЗТ ламівудином негативно регулювало активацію ІБМ-І| та пов'язане з віком запалення у деяких тканинах. Відповідно, активація КТЕ - це важливий компонент стерильного запалення, яке є відмітною ознакою старіння, та ЗТ 11 є підходящою мішенню для лікування пов'язаних з віком розладів.
У відповідності з даним винаходом запропонований спосіб лікування, запобігання та/або обернення пов'язаного з віком запалення у пацієнта, який цього потребує, шляхом введення пацієнту терапевтично ефективної кількості щонайменше одного інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ).
При порівняльній оцінці декількох лікарських засобів ІЗТ у аналізі доза-відповідь інгібування бо активності 11, два лікарські засоби ІЗТ - ценсавудин та ельвуцитабін - проявили несподівано чудову здатність пригнічувати активність Ї1 миші та людини. Згідно з даним винаходом додатково запропонований спосіб лікування, запобігання та/або обернення пов'язаного з віком запалення у пацієнта, який цього потребує, шляхом введення пацієнту терапевтично ефективної кількості ценсавудину та/або ельвуцитабіну.
Пов'язане з віком запалення пов'язане з підвищеною експресією 11, накопиченням цитоплазматичної кДНК 11, активацією відповіді ІЕМ-І та/або посиленням прозапального стану
ЗАБР. Лікарський засіб ІЗТ вводять у кількості, достатній для запобігання або обернення щонайменше однієї з перерахованих подій: підвищення експресії 11, накопичення цитоплазматичної кКДНК 11, активації відповіді ІЕМ-І та/або прозапального стану 5А5Р.
Пов'язане з віком запалення, яке можна попередити, лікувати або обернути за допомогою способів відповідно до даного винаходу, присутнє у пацієнта, що має захворювання або розлад, включаючи, але не обмежуючись перерахованими: хворобу Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз (БАС), хворобу Паркінсона, хворобу Гентінгтона, втрату зору, втрату слуху, дегенеративні захворювання периферичної нервової системи, або дисфункцію серцево- судинної системи, лобно-скроневу деменцію (ЛОД), розсіяний склероз (РОС), синдром Айкарді-
Гутг'єрес, прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП), остеоартрит, старіння шкіри, атеросклероз, викликані хіміотерапією небажані явища, порушення функціонування гематопоетичних стовбурових клітин, остеопороз, порушення фізичного функціонування та/або фіброз легень, - або у пацієнта, що потребує загоєнні ран або регенерації тканин. У одному варіанті реалізації пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера. У альтернативному варіанті реалізації пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є
БАС.
Також запропонований спосіб відтермінування (затримки прояву) або обернення прогресування патології що лежить у основі захворювання або розладу, викликаного пов'язаним з віком запаленням (першопричина патології), що включає введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості щонайменше одного ІЗТ. У деяких варіантах реалізації пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера або БАС та відчуває ослаблення одного або більше симптомів хвороби Альцгеймера або БАС у порівнянні з такими перед першим введенням ІЗТ пацієнтові. У деяких варіантах реалізації один або більше симптомів хвороби
Зо Альцгеймера включають втрату пам'яті, розміщення предметів не на тих місцях, забування назв місць чи об'єктів, повторення питань, меншу пристосованість до нових обставин, замішання, дезорієнтацію, обсесивну поведінку, компульсивну поведінку, марення, афазію, порушення сну, перепади настрою, депресію, тривогу, фрустрацію, збуджений стан, труднощі при виконанні просторових задач, агнозію, труднощі при пересуванні, втрату маси, втрату здатності говорити, втрату короткочасної пам'яті або втрату довготривалої пам'яті.
У деяких варіантах реалізації зменшення одного або більше симптомів хвороби
Альцгеймера оцінюють відповідно до настанови з діагностики та статистики психічних розладів (05М-5) Г7/|. У деяких варіантах реалізації зменшення симптомів визначають, використовуючи когнітивну субшкалу шкали оцінки тяжкості хвороби Альцгеймера (АБАБ-со9д). У деяких варіантах реалізації зменшення симптомів визначають, використовуючи шкалу оцінки змін клініцистом на підставі опитування (СІВІС-ріи5). У деяких варіантах реалізації зменшення симптомів визначають, використовуючи шкалу оцінки повсякденної діяльності (АОІ). У деяких варіантах реалізації зменшення симптомів триває 1-36 місяців.
У деяких варіантах реалізації будь-яку зміну у першопричинній патології виявляють шляхом детектування біомаркеру до та після введення ІЗТ. У деяких варіантах реалізації біомаркер являє собою р-амілоїд або білок Там. У деяких варіантах реалізації біомаркер детектують за допомогою ПЕТ -візуалізації У деяких варіантах реалізації першопричинну патологію ідентифікують шляхом вимірювання рВ-амілоїду або білку Там у спинномозковій рідині. У деяких варіантах реалізації першопричинну патологію ідентифікують шляхом вимірювання об'єму головного мозку до та після введення ІЗТ. У деяких варіантах реалізації першопричинну патологію обертають або відтерміновують на 1-36 місяців.
У деяких варіантах реалізації щонайменше один Ії являє собою нуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази (НІЗТ). У деяких варіантах реалізації щонайменше один НІЗТ вибраний
З перерахованих далі: абакавір (ЗІАГЕНУ), абакавір/ламівудин (Епзиком), абакавір/ламівудин/зидовудин (ТРИЗИВІР'"М), адефовір, аловудин, амдоксовір, априцитабін,
АТРИПЛА?, БАРАКЛЮД", БІКТАРВІЄ, ценсавудин, КОВІРАЦИЛ'"М рАРО/ЮХО, 0-04ЕС, дексельвуцитабін, диданозин (ВІДЕКС"М), диданозин з пролонгованим вивільненням (Відекс
ЕС), аотТсС, ЕРА, емтрицитабін (ЕМТРИВА"М), емтрицитабін/ленофовіру алафенамід (ДЕСКОВІЄ), емтрицитабін/ленофовіру дизопроксилфумарат (ТРУВАДАЄ), ельвуцитабін, бо фосалвудин, ламівудин/зидовудин (КОМБІВІР"М), ЕВІПЛЕРА"М, ГЕНВОЯФ, ХІВІД"М, КІВЕКСАТМ,
ламівудин (ЕПІВІР"М), ЛОДЕНОЗИН"М, ОДЕФСЕЙ?, ПРЕВЕОНЕ, рацивір, стампідин, ставудин (ЗЕРИТ"М) СТРИБІЛД?У, ТЕНОФОВІР'М, тенофовіру дизопроксилфумарат (ВІРЕАД"М),
ТРИУМЕКУ, Тризивір, ВЕМЛІДІ? та/або зидовудин (РЕТРОВІР'"М). У деяких варіантах реалізації щонайменше один НІЗТ являє собою ценсавудин. У деяких варіантах реалізації щонайменше один НІЗТ являє собою ельвуцитабін.
У деяких варіантах реалізації щонайменше один ІЗТ являє собою ненуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази (ННІЗТ). У деяких варіантах реалізації щонайменше один ННІЗТ вибраний з перерахованих далі: делавірдин (ОМ), ефавіренц (ЕРМ), етравірин, невірапін (ММР) та/або рилпівірин.
У деяких варіантах реалізації пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та спосіб додатково включає введення щонайменше одного другого терапевтичного агенту, корисного для лікування симптомів хвороби Альцгеймера. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент вибраний з перерахованих далі: донепезил, галантамін, мемантин та/або ривастигмін. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою антитіло, яке зв'язується з В-амілоїдом або білком Тац. У деяких варіантах реалізації зазначене антитіло зв'язується з р-амілоїдом та являє собою бапінейзумаб. У деяких варіантах реалізації зазначене антитіло зв'язується з білком Тай та являє собою АВВМ-8Е12. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою вакцину проти В-амілоїду або білку Там. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою агент, який знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду або Там. У деяких варіантах реалізації другий терапевтичний агент знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду та являє собою інгібітор В-секретази 1 (ВАСЕ). У деяких варіантах реалізації інгібітор ВАСЕ вибраний з перерахованих далі: СТ5-21166, ланабецестат (А2О3293), І 2886721 та верубецестат (МК-8931). У деяких варіантах реалізації другий агент знижує або змінює вміст у головному мозку Таи та являє собою нікотинамід, або МРТОС211.
У деяких варіантах реалізації пацієнт страждає на БАС, та спосіб додатково включає введення щонайменше одного другого терапевтичного агенту, корисного для лікування симптомів БАС. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий агент, корисний для
Зо лікування БАС, являє собою едаравон та/або рилузол. У інших варіантах реалізації щонайменше один другий агент являє собою інгібітор інтегрази. У деяких варіантах реалізації інгібітор інтегрази вибраний з перерахованого далі: ауринтрикарбонова кислота, похідні ауринтрикарбонової кислоти, ВМ5 538158, складний ефір кавової кислоти та фенетилового спирту, похідні складного ефіру кавової кислоти та фенетилового спирту, куркумин, похідні куркумину, цикорієва кислота, похідні цикорієвої кислоти, З,5-дикофеоїлхінова кислота, похідні
З3,5-дикофеоїлхінової кислоти, 55К364735С,1 870 812 та І-25 870810, МК 0518, кверцетин, похідні кверцетину, ралтегравір, 5-1360, тирфостин, похідні тирфостину та/або зинтевір (АК- 177).
У деяких варіантах реалізації оцінюють наявність у пацієнта одного або більше симптомів або патології захворювання впродовж 1-36 місяців після першого введення ІЗТ пацієнту.
У деяких варіантах реалізації ІЗТ інгібує активність зворотної транскриптази 11 у клітині пацієнта.
Також запропонований спосіб запобігання початку хвороби Альцгеймера у пацієнта, у якого підозрюють наявність легкого когнітивного розладу або передклінічної хвороби Альцгеймера, що включає введення терапевтично ефективної кількості щонайменше одного ІЗТ пацієнту, який цього потребує.
Інші варіанти реалізації також описані та перераховані у даній заявці.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
З метою ілюстрування деякі варіанти реалізації даного винаходу показані на фігурах, описаних нижче. Одні і ті ж символи на фігурах позначають одні й ті же елементи всюди у даному описі. Проте, повинно бути зрозуміло, що даний винахід не обмежується конкретними показаними конфігураціями, розмірами та пристроями. Фігури описані далі.
На фіг. 1 показана активація 11, ІЕМ-І та БА5Р у старих клітинах. Експресію генів оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР. Очищену полі(А)-РНК використовували у всіх дослідженнях І 1. Фіг. 1а.
Динаміка активації 1. Р-значення розраховували відносно РП - контрольних клітин раннього пасажу. Фіг. 15. Схематичне представлення стратегії ЗТ-ПЛР 11. Синя - смислова; червона - антисмислова (АС). Специфічність праймерів див. на фіг. 6-й; розробку праймерів див. у розділі "Методи". Праймери для амплікону Е використовували у (а) та (є). Фіг. 1сє5. Ланцюг-специфічну транскрипцію 1 оцінювали, застосовуючи амплікони А-Р. Також детектували транскрипцію з бо антисмислового промотору 5'-чсетрансльованої області (НТО). Стар (П) - пізнє старіння клітин
(16 тижнів). Фіг. 14. Індукція рівнів МРНК ІЄМ-с та ІЄМ-В1. Фіг. те. Темпоральна індукція генів, зв'язаних з пошкодженням ДНК (р21, також відомий як СОКМ1ТА), ЗАБР (11-18, СС12, 1-6,
ММРЗ) та відповіддю ІЕМ-І (ІВЕ7, ТЄМ-а, ІЄМ-В1, ОАБ51). Кластеризацію рядів розраховували як кореляцію Пірсона-1. Рес - реплікативне старіння; ВОС - викликане онкогеном старіння клітин (викликане інфікуванням На-КА5); ВСПС - викликане стресом передчасне старіння клітин (опромінення гамма-променями). Контролі: РП - ранній пасаж; ПВ - інфікування пустим вектором; КОНТР. - без опромінення. (а, с-е), п-3 незалежні біологічні зразки, повторювали у двох незалежних експериментах. (а, с, 4) Результати являють собою середнє ж С.О. "Р«х0,05, яер«0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 2 показана регуляція активації Ї/1 та індукції ІРЕМ-І. Фіг. 2а - експресія та імунопреципітація хроматину (СПІР) КВІ1 та фіг. 250-ЕОХАТ1. Експресію вимірювали за допомогою
ЗТ-КкПЛР та імуноблоттингу (ліві панелі). Зв'язування з елементами 11 оцінювали за допомогою
СПІР-КПЛР (праві панелі). Специфічність праймерів див. на фіг. 65. «ВІ: 5-НТО, відкрита рамка зчитування (ВРЗ) 1 та ВР32, праймери для ампліконів А, Е та Е, відповідно. ЕОХА!1: праймери для ампліконів А-Е. Кількісну ПЛР нормували на введений хроматин. Стар (Р) - раннє старіння клітин (8 тижнів). Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. 20-е. ЕВІ, ЕОХА1 або ТКЕХ1 надекспресували (НЕ) або пригнічували за допомогою кшРНК та визначали вплив на експресію
Г1, ТЕМ-с та ІЕМ-В1 за допомогою ЗТ-КПЛР очищеної полі(А)-РНК. У всіх випадках лентивірусні вектори використовували для доставки втручань безпосередньо у старі клітини у 12 тижнів (точка О, фіг. ба), та клітини збирали для аналізу через чотири тижні (точка Е, 16 тижнів).
Контролями слугували неінфіковані старі клітини, зібрані у той же час (точка Е, 16 тижнів). Для кожного гену використовували дві різні кшШРНК (а, Б). Праймери для амплікону ЕЕ використовували для 11. Фіг. 2ї. КВІ1 надекспресували (НЕ), як описано вище, та його зв'язування з 5-НТО оцінювали за допомогою СПІР-КПЛР (амплікон А). Фіг. 29. Активація експресії 1, ІЄМ-сж та ІРЕМ-В1 після потрійного (ЗХ) втручання із застосуванням 5ПКВІ1 (а), 5АТКЕХІ (а) та ЕОХА1-НЕ у клітинах раннього пасажу. Лентивірусні інфекції здійснювали послідовно з селекціями по чутливості до лікарського препарату на кожному етапі (5пКВ1, пуроміцин -: 5АТЕЕХТ, гігроміцин -- РЕОХА1-НЕ, бластицидин). Фіг. 20. Експресію генів шляху
ІЕМ-І визначали за допомогою панелей КТ2 Ргойег РОК аїтау (Оіадеп). Нормована середня
Зо експресія показана для всіх 84 генів панелі. Червоні символи: гени зі значно підвищеною експресією. Пунктирні лінії показують границі ж2-разової зміни. (а, Б, Мп), п-З незалежні біологічні зразки, повторювали у 2 незалежних експериментах. (с-9), п-З незалежні експерименти. (а-9)
Результати являють собою середнє ж С.О. хР«к0,05, "Р«0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. З показано, що видалення І 1 ослаблює активацію ІЕМ-І та зменшує відповідь 5А5Р.
Фіг. За. Клітини досліджували за допомогою імунофлуоресцентної (ІФ) мікроскопії, застосовуючи антитіла до одноланцюгової ДНК (олЛДНК) або до білку ВРЗ1 11. Видна ярка точка олДНК у старих клітинах, яка колокалізована із помітною точкою ВРЗ1. Даний експеримент незалежно повторювали тричі з подібними результатами. Масштабна лінійка - 10 мкм. Фіг. 30. Старі клітини обробляли кшРНК 11 (застосовуючи лентивірусні вектори, як описано на фіг. 2с, е, або ЗТС (7,5 мкМ) між 12 та 16 тижнями старіння. Вплив на відповідь ІЕМ-І визначали за допомогою ЗТ-КПЛР, ЕГІЗА або імуноблоттингу. Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. Зс.
Клітини мітили ВгаШ впродовж 2 тижнів (з додаванням або без 7,5 мкМ ЗТС), мічену ДНК імунопреципітували та проводили кількісний аналіз вмісту у ній послідовності І 1 шляхом аналізу методом мультиплексної кількісної ПЛР ТадМап16 (фіг. 16, амплікон ЕР). РП (спок.) - форми спокою клітини раннього пасажу. Фіг. За, ліва панель, РеС-клітини: гени ІЕМАКІ та ІЕМАК2 піддавали мутагенезу, застосовуючи систему СКІЗРЕ/Са59, доставлену за допомогою лентивірусних векторів безпосередньо у старі клітини. Як і при втручаннях з використанням
КШРНК, клітини інфікували у 12 тижнів та збирали у 16 тижнів старіння (див. фіг. 1а4-ї, див. розділ "Методи"). Права панель, клітини з ВСПС: втручання СКІЗБРЕ/Са59 здійснювали на клітинах раннього пасажу та підтверджений клон опромінювали, щоб викликати ВСПС. Фіг. Зе. ВОС та
ВСПС викликали, як на фіг. 14, та клітини збирали через 20 днів (ВОС) або 30 днів (ВСПС). ЗТ (7,5 мкМ) був присутній повсюди. Експресію генів ІЕМ-І (ІЕМ-а, ІКЕ7, ОА5БІ1) вимірювали за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. Зї. Здійснювали серійний пасаж клітин до досягнення реплікативного старіння (РеС) з присутнім повсюди ЗТС (10 мкМ) та оцінювали темпоральну індукцію генів відповіді ЗАР (І -18, СС12, 1-6, ММРЗ). (р-4, У, п-3 незалежні експерименти. (е) п-:З незалежні біологічні зразки, повторювали у 2 незалежних експериментах. (р-ї) Результати являють собою середнє ж С.О. "Рх0,05, РахО0,01. (р, а-ї) непарні двосторонні І-критерії, (с) однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм множинних порівнянь Т'юкі.
На фіг. 4 показано, що 11 активуються з віком у тканинах м'язів, та прозапальна відповідь бо ІЕМ-І ослабляється завдяки лікуванню ІЗТ. Фіг. 4а. Присутність білюу ВРЗ1І 11 у тканинах досліджували за допомогою ІФ мікроскопії. Кількісний аналіз експресуючих ВРЗ1 клітин показаний на правій панелі; оцінювали по три тварини та щонайменше по 200 клітин на тварину для кожної умови. Масштабна лінійка - 4 мкм. Фіг. 4р. Активацію 1 у старих клітинах досліджували шляхом одночасного зафарбовування на активність ЗА-Д-Ссаї та білок ВРЗ31 за допомогою ІФ (печінка самців, 5 та 26 місяців). Масштабна лінійка - 4 мкм. Експеримент незалежно повторювали три рази з одержанням подібних результатів. Фіг. 4с. мишам вводили
ЗТС (2 мг/мл) у питній воді у зазначеному віці впродовж двох тижнів та умертвляли їх після лікування. Експресію р16б, гену відповіді ІЕМ-І (ЕМ-0) та маркеру прозапального стану (ІІ-б) оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР. Див. на фіг. 14 додаткові тканини та гени. На діаграмах розмаху показаний діапазон даних (вуса), 25-й та 75-й процентилі (ящик), середні значення (пунктирна лінія) та медіани (суцільна лінія). Кожна точка являє собою одну тварину. 5 місяців, п-8; 26 місяців, п-12; 29 місяців, п-б. Фіг. 44. Мишей у віці шести місяців опромінювали нелетальною дозою та експресію 11, р16 та типових генів відповіді ІЕМ-Ї (Шп-с, Оав51) оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР у зазначені моменти часу після опромінення. Графічне представлення як у (с); без опромінення, п-З тварин у віці З місяців, п-5 тварин у віці 6 місяців; опромінені, п-4 тварин у віці З місяці, п-5 тварин у віці б місяців. Фіг. 4е. Інфільтрацію макрофагами білої жирової тканини та нирки оцінювали за позитивними по Е4/80 клітинами (95 від всіх ядер). п-5 тварин у групі (жирова тканина); п-8 (нирка). Діаметр волокна скелетного м'язу вимірювали (подробиці див. у розділі "Методи") та наносили на графік у вигляді сукупної діаграми розмаху. п-5 тварин на групу, всього 500 волокон. Гломерулосклероз оцінювали на зафарбованих
Шифф-йодною кислотою (ШИК) зрізах (подробиці див. у розділі "Методи") як суму всіх клубочків з балом З або 4, поділену на загальну кількість. п-7 тварин на групу, 40 клубочків на тварину.
Графічне представлення аналогічне (с). Обробка ЗТС тривала 2 тижні для білої жирової тканини та 6 місяців (20-26 місяців) для інших тканин. Пунктирне коло показує границі одного клубочку. Масштабна лінійка - 50 мкм. Фіг. 44. Порушення механізмів нагляду за 11 приводить до хронічної активації відповіді ІЕМ-І. СІД: стимульований інтерфероном шлях ДНК. "Р«е0,05, яер«0,01, непарні двосторонні і-критерії (а, 4, е) або однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм множинних порівнянь Т'юкі (с, е біла жирова тканина).
На фіг. 5 представлена схема послідовності молекулярного шляху клітинного старіння, що приводить до пов'язаного з віком "стерильного" запалення.
На фіг. 6 показане встановлення культур старих клітин та аналіз активації І 1 та ІЄМ-І. Фіг. ба. Схема пасажів для одержання тривало культивованих реплікативно старих клітин (подробиці у розділі "Методи"). Точка А була прийнята за нуль часу у стані старіння. Фіг. 6р-а.
Підтвердження старого статусу культур. Показаний типовий експеримент; інші експерименти контролювали таким же чином та отримували результати, які відповідали цим вихідним даним.
РП - контрольні клітини раннього пасажу; Стар (Р) - раннє старіння клітин (8 тижнів); Стар (П) - пізнє старіння клітин (16 тижнів). Фіг. 60, Клітини мітили Вга4О впродовж б годин. Включення
ВгаЦ (8) та асоційовану зі старінням клітин активність ВД-галактозидази (5А-рВ-саї) (9| визначали, як зазначено. Фокуси пошкодження ДНК візуалізували, застосовуючи антитіла у-Н2АХ та імунофлуоресцентну мікроскопію (ІФ). (10| Фіг. бс, Експресію білків р2! (СОКМІА) та р16 (СОКМ2А) визначали за допомогою імуноблоттингу. «ЗАРЮОН слугувала контролем завантаження. Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. ба. Експресію генів, характерних для
ЗАБР, визначали за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. бе. Активацію 1 у процесі старіння штамів фібробластів ІМК-90О та УМІ-38 оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР, застосовуючи очищену полі(А)-РНК та праймери для амплікону Е (фіг. 15). Фіг. 67. ЗТ-ПЛР довгих фрагментів проводили з праймерами А-прямий та С-зворотний (амплікон С) та праймерами А-прямий та О-зворотний (амплікон Н) (фіг. 16, таблиця 1) та кКДНК клонували та секвенували. Декілька спроб використання того ж протоколу на проліферуючих клітинах з раннього пасажу не привели до одержання яких-небудь клонів 1. Послідовності картували на демаскованому еталонному геномі, вимагаючи 100 95-0ї ідентичності. Таким чином змогли картувати 658 клонів, 51 додатковий клон містив щонайменше 1 неспівпадіння та, отже, можливо являв собою елементи, які поліморфні у лінії клітин, та 58 являли собою артефакти клонування. Серед 658 картованих клонів було представлено 224 унікальні елементи (таблиця 3). Інтактні елементи являють собою підгрупу повнорозмірних елементів, аннотованих без інактивуючих ВРЗ мутацій. Розмір елементів відповідає кількості раз, яку елемент був представлений серед 658 клонів. Фіг. ба.
Короткий опис результатів ПЛР довгих фрагментів, представлених на фіг. 6ї та у таблиці 3. фіг. 6. Виявлене у геномі число копій елементів, детектованих за допомогою наших ампліконів (розташування ампліконів див. на фіг. 16 та стратегію розробки праймерів див. у розділі "Методи"). Передбачено: ПЛР іп в5іїїсо (подробиці див. у розділі "Методи"). Спостерігається: бо кількісну ПЛР проводили на 1 нг геномної ДНК та нормували на відомий однокопійний локус.
Фіг. бі. Активацію генів ІЄМ-с та ІЄМ-В1 у процесі старіння клітин М/-38 та ІМК-90 визначали за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. б). Підтвердження старіючого статусу клітин при ВОС (20 днів, фіг. бе) та ВСПС (30 днів, фіг. бе) за активністю 5А-Д-СЗаї. ПВ - контрольний пустий вектор; КОНТР. - клітини без опромінення. Фіг. б6К. Підтвердження експресії мРНК повнорозмірного /1 у всіх формах старіння клітин із застосуванням ЗТ-КПЛР з праймерами для ампліконів А та Е на очищеній полі(А)-РНК. Пізніше початок активації показано шляхом порівняння днів 9 та 20 для
ВОС та днів 12 та 30 для ВСПС. (р-е, І-К), п-3 незалежні біологічні зразки, повторювали у 2 незалежних експериментах. Результати являють собою середнє ж С.О. " Р«е0,05," РахО0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 7 показано картування сайтів ініціації транскрипції у елементах 11, активованих під час старіння клітин. ПЛР зі швидкою ампліфікацією кінців кДНК (5 КАСЕ) проводили з праймерами С та О (фіг. 1а, таблиця 1) на клітинах у стані пізнього старіння (16 тижнів, точка Ю на фіг. ба), продукти клонували та окремі клони секвенували за Сенгером (подробиці див. у розділі "Методи"). Фіг. 7а. Отримували множинне вирівнювання послідовностей 50 картованих клонів з консенсусною послідовністю Ї1Н5 за допомогою програмного забезпечення МАЕЕТ.
Консенсусна послідовність Ї1Н5 показана зверху. Штрихування синім кольором вирівняних клонів показує ступінь їх ідентичності з консенсусною послідовністю. Вертикальна зелена лінія позначає початок (положення 1) консенсусної послідовності Ї1Н5. Вертикальні червоні лінії позначають короткі гепи (1-4 нуклеотиди), відкриті у консенсусній послідовності Ї1Н5 окремими клонами. Консенсусна послідовність для 50 клонів показана знизу та була отримана за допомогою «аїЇміем/. Відомо, що ініціація транскрипції 1 неточна, причому більшість сайтів ініціації зустрічається на відстані ж/- 50 п.о. від консенсусного сайту ініціації, та одна підгрупа знаходиться настільки далеко як 4180 п.о. (11) Фіг. 7Б. Короткий опис результатів картування та класифікації клонів за сімействами елементів 1/1. Відносні сайти ініціації розраховували по відношенню до консенсусного сайту ініціації І1Н5. Програмне забезпечення КерЕпгісп(|12 використовували, щоб зарахувати клони до сімейств І 1.
На фіг. 8 показана еволюція транскриптомних змін під час прогресування старіння клітин.
Секвенування РНК (КМА-5ед) проводили на ранніх проліферуючих клітинах ГЕ1 (РП) та культурах 8-ми тижнів (Стар-Р) та 16б-ти тижнів (Стар-П) старіння клітин (точки С та 0,
Зо відповідно, у Додаткових даних на фіг. ба). Результати аналізували, застосовуючи трифакторне порівняння: РП у порівнянні зі Стар-Р, РП у порівнянні зі Стар-П та Стар-Р у порівнянні зі Стар-
П (подробиці див. у розділі "Методи"). Фіг. ва. Пропорційні за площею узагальнені діаграми
Венна, що зображують перетини трьох порівнянь для наступних наборів даних. і-її - гени зі значно підвищеною експресією та зниженою експресією (ряд 2х на панелі Б). ії-їм - важливі шляхи КЕСО, ідентифіковані за допомогою аналізу представленості груп генів (С5ЕА). Помітна значна еволюція транскриптома у пізній період старіння клітин, прикладом якої є великі зміни (особливо підвищення експресії) у диференційно експресованих генах, а також шляхах. у-мі - значно змінювані гени у групах генів ІЕМ-І та ЗА5Р (див. у таблиці 4 анотування груп генів).
Помітно, що велика частина змін у генах 5АБ5Р відбувається рано, тоді як велика складова змін у ІТЕМ-І специфічна для пізнього старіння клітин. Фіг. 805. Коротке уявлення значно змінюваних генів з використанням фіксованого порогу очікуваної частки помилкових відхилень (ОК) («0,05) та порогів з варіабельною кратністю зміни (2х, 1,75х та 1,5х). Фіг. вс. Аналіз ОБЕА шляхів КЕСО.
Подання у вигляді теплової карти показує шляхи зі значно підвищеною експресією червоним кольором (також див. панель е) та шляхи зі зниженою експресією синім кольором. Незначні порівняння показані чорним кольором; вертикальні анотації відносяться до діаграм Венна у (а, іі-їм). Примітно, що у групи генів БАР експресія підвищується рано, тоді як у групи генів ІЕМ-І експресія підвищується пізно. Фіг. 8а. Теплові карти значно змінюваних генів у групах генів ІЕМ-Ї та 5БА5Р. Вертикальні анотації відносяться до діаграм Венна у (а, м-мі). Фіг. ве. Перелік шляхів
КЕС зі значно підвищеною експресією, ідентифікований за допомогою О5ЕА (див. у таблиці 5 перелік усіх шляхів). НВЗ - нормовані показники збагачення. Групи генів ІЕМ-І ТА ЗА5Р виділені жовтим кольором. Помітно значне підвищення експресії ІЄМ-І між раннім та пізнім старінням клітин. Червоним шрифтом позначені шляхи КЕСО, що вказують на визначення цитозольної
ДНК та відповідь інтерферону І типу у пізньому періоді. Фіг. 81-49. Профілі О5ЕА груп генів ІЕМ-Ї та 5А5Р для всіх порівнянь; ЕОК виділено жовтим кольором. Примітно, що експресія ІЕМ-Ї значно підвищують для РП Стар-П та Стар-Р Стар-«П, але не для РП Стар-Р, та що підвищення експресії БАР значиме для РП Стар-Р та РП Стар-П, але не для Стар-Р Стар-П. п-З незалежні біологічні зразки. Аналізували значимість результатів диференційної експресії, застосовуючи інтерфейс СО5ЕА СепеРайцегп, та робили поправку результатів на множинні порівняння шляхом коригування номінальних р-значень із застосуванням методу Беньяміні- 60 Хохберга (подробиці див. у розділі "Методи").
На фіг. 9 показана характеристика ефекторів І 1 та відповіді ІЄМ-І. Фіг. да. Експресію ТКЕХ1 визначали за допомогою ЗТ-КПЛР та імуноблоттингу. Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. 9р. Експресію генів сімейства КВ порівнювали за допомогою ЗТ-КПЛР. Підтверджували, що у пар праймерів для всіх генів була еквівалентна ефективність. Фіг. 9с. Збагачення НЗ3КоОтез та
НЗК2г7теЗз елементів 1 досліджували за допомогою СПІР-КПЛР. (використовували праймери
ПЛР, показані на фіг. 1р: 5-НТО, амплікон А; ВРЗ1, амплікон Е; ВРЗ2, амплікон Е). Фіг. 94. Дані
СпІР-зед з проекту ЕМСОЮЕ досліджували для виявлення факторів транскрипції, які зв'язуються з консенсусною послідовністю 11. Кратність зміни І0дг збагачення у порівнянні з контролями вхідної ДНК показана для зазначених ліній клітин. Було задокументоване зв'язування УУ1 з промотором 11/13), та його використовували у якості позитивного контролю.
СЕВРВ використовували у якості негативного контролю. Схематичне зображення, яке ілюструє координати 11 та важливі особливості, приведено вище. Амплікони А-Е такі ж, як показано на фіг. 10. Фіг. 9е. Транскрипційну активність інтактної 5'-НТО 11 або НТО, у якій відсутній сайт зв'язування ЕОХАї (НТО-Д), визначали, використовуючи смисловий та антисмисловий репортери, якими котрансфікували клітини раннього пасажу /Е1, або з плазмідою експресії
ЕОХАЇ, або з пустим вектором (ПВ). Фіг. 9. Здійснювали нокдаун ЕОХАЇ у старих клітинах за допомогою 5ПРОХАЇ (а) (див. також фіг. 2е та фіг. 10а), та зв'язування з 5'-НТО 11 (ампліконом
В) визначали за допомогою СПІР-КПЛР. Фіг. 9д. Здійснювали нокдаун КВІТ, ТКЕХ!1 та ектопічну експресію ЕОХА1 у клітинах раннього пасажу у всіх одинарних (1Х), подвійних (2Х) та потрійних (ЗХ) комбінаціях та оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР, застосовуючи очищену полі(А)-РНК, активацію експресії 1, ІЕМ-« та ІЕМ-В1 (праймери для амплікону Е). Показано три контролі: клітини, інфіковані сторонньою кшШРНК (5ПОЕР) або експресійною конструкцією (ІГас2), або неінфіковані клітини раннього пасажу (РП). Фіг. 9. Зайнятість 5-НТО 11 КВІ та РОХАЇ!1 у клітинах з ЗХ визначали за допомогою СПІР-КПЛР, яку проводили, як на фіг. 2а, б. Праймери для ампліконів А та В використовували для КВІ1 та ЕРОХАТ, відповідно. Для порівняння також показані окремі втручання у клітини раннього пасажу за допомогою 5пКВІ1 (а) або експресії
КДНК РОХАТ (РП РГОХА1-НЕ). Фіг. 9і. Підтвердження експресії мРНК повнорозмірного 11 у клітинах з ЗХ із застосуванням ЗТ-КПЛР з праймерами для ампліконів А та Е на очищеній полі(А)-РНК. КОНТР. - клітини, інфіковані сторонньою кшРНК (5пОЕР). Фіг. 9). Представлення у
Зо вигляді теплової карти, що показує усі біологічні повтори для 67 генів, що значно змінюють експресію у клітинах Стар та/або ЗХ (фіг. 21, таблиця 6). Кластеризацію стовбців розраховували як кореляцію Пірсона-1. Ряди були згруповані у функціональні підгрупи відповіді ІЕМ-ЇІ. Фіг. УК.
На діаграмі Венна показано перекривання між 67 генами, які значно змінюються. (а-ї, й) п-З незалежні біологічні зразки, повторювали у двох незалежних експериментах. (9, ії), п:З незалежні експерименти. (а-ї). Результати являють собою середнє ж С.О. "Рх0,05, "Реб0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 10 показана ефективність генетичного та фармакологічного втручань. Фіг. 1ба.
Нокдауни за допомогою двох різних кшШРНК (а, Б) або ектопічну експресію кКДНК (фіг. 105) здійснювали у старих клітинах, як описано на фіг. 249, е, д (також див. розділ "Методи").
Ефективність даних маніпуляцій оцінювали на відповідних мішенях за допомогою ЗТ-КкПЛР та імуноблоттингу. Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. 10с. Експресія мРНК та білку КВІ1,
ТКЕХ!1 та РОХАЇ після потрійного (ЗХ) втручання (фіг. 29. Фіг. 104. Вплив обробки З3ТС на відносну поширеність послідовностей Ї1Н5 у старих клітинах визначали за допомогою мультиплексної кількісної ПЛР ТадМап на загальній ДНК (набір праймерів 6, таблиця 1).
Початок стар. - 0 тижнів старіння (фіг. Та; точка А на фіг. ба). ЗТС вводили безперервно з початку старіння до моменту збору через 16 тижнів. Фіг. 1О0е. Застосовували репортерну систему 1 з подвійною люциферазою (|14|Ї, щоб визначити вплив введення дози З3ТС на ретротранспозицію. Репортери 11 вводили у клітини раннього пасажу, застосовуючи лентивірусні вектори (подробиці див. у розділі "Методи"), та клітини обробляли ЗТС впродовж 4 днів перед збором та аналізом. /М111 - дефектний репортер, який несе мутації у ВРЗ1 (відсутність ЗТС); І ТВЕР - здатний до ретротранспозиції репортер. Фіг. 10Її. Вплив введення дози
ЗТС на відповідь ІЕМ-І. Після експерименту вище (4) проводили подальшу обробку за допомогою ЗТ-КПЛР, щоб визначити експресію ІЕМ-а та ІЄМ-В1. Фіг. 109. Нокдауни І 1 проводили за допомогою двох різних КшШРНК (а, Б) у старих клітинах (як на фіг. 24, е, 9) або клітинах ЗХ (як на фіг. 29). Ефективність впливу на експресію 1/1 оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР, застосовуючи очищену полі(А)-РНК та праймери РЕ. Фіг. 100. У клітинах у експерименті у (49) досліджували рівні білюу ВРЗ1 за допомогою імунофлуоресценції (ІФ). Аналіз зображень проводили за допомогою програмного забезпечення СеїЇІРгойег (подробиці див. у розділі "Методи"). 2200 клітин досліджували для кожної умови (УОФ, умовні одиниці флуоресценції). 60 Фіг. 10ї. Обробку кштРНК 11 у експерименті у (9) замінили на обробку ЗТС (10 мкМ) впродовж такого ж періоду часу. Фіг. 10). Досліджували вплив п'яти різних ІЗТ (або комбінацій) на відповідь
ІЕМ-І. АТ (зидовудин, 15 мкм), АВС (абакавір, 15 мкм), ЕТС (емтрицитабін, 10 мкМ), ЗТС (що також називається ламівудином або епівіром, 10 мкМ), ТАМ (тризивір, комбінація 15 мкМ АТ, 15 мкм АВС та 7,5 мкМ ЗТС). Клітини обробляли впродовж 4 тижнів між 12 та 16 тижнями старіння клітин (фіг. Та; точки О та Е на фіг. Та). Клітини ЗХ (фіг. 27) обробляли ЗТС впродовж 48 годин після завершення останньої селекції лікарським засобом. Експресію ІЕМ-«4 визначали за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. 10К. Клітини Неї а котрансфікували нативним репортером 11 (р 0143) 5)| разом з плазмідними векторами кшРНК (подробиці див. у розділі "Методи".
Ретротранспозицію оцінювали як СЕР-позитивні клітини, та нокдауни 5пЇ/1 нормували на негативний контроль 5ПІ ис. Абсолютна середня частота ретротранспозиції (відсоток СЕР- позитивних клітин) складала 4,1, що відповідало опублікованим значенням для використовуваного репортеру (р0О143)53. Фіг. 10Ї1. Нокдауни сзЗА5 та 5ТІМО проводили у старих клітинах або клітинах ЗХ, як і з іншими кшРНК (фіг. 2а, є, д та а, 9 вище). Фіг. 10т.
Зниження передачі сигналу інтерферону після опосередкованої СКІ5РК інактивації генів
ІЕРМАК!І та ІРМАКЗ2 перевіряли за відсутністю транслокації ІКЕ9У у ядро та фосфорилюванням
ЗТАТЗ2 у відповідь на стимуляцію інтерфероном. Клітини інфікували лентивірусними векторами, що експресують Са59 та направляють РНК (НРНК) для обох ІЕМАК!І та ІЕМАКа2 (ЛІЕМАК, див. розділ "Методи"). Після інфекції клітини повторно висівали на покривні стекла, обробляли інтерфероном впродовж 2 годин та досліджували за допомогою ІФ мікроскопії. Експеримент повторювали тричі з подібними результатами. (а-і, |) п-З3 незалежні експерименти. (К) п-З незалежні біологічні зразки, повторювали у 2 незалежних експериментах. (а-Ї)Й Результати являють собою середнє ж С.О. Рх0,05, Р«О0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 11 показана характеристика цитоплазматичної ДНК у старих клітинах. Фіг. 11а.
Клітини у спокої та старі клітини обробляли ВгйШ, як на фіг. За, та локалізацію у клітині включення ВгаШ візуалізували за допомогою ІФ мікроскопії. Проліферуючі клітини - РП (прол.) - показані у якості позитивного контролю включення ВгдО у ядро. Кількісний аналіз сигналів проводили, застосовуючи програмне забезпечення СеїЇЇРгойег (права панель, див. розділ "Методи"). Досліджували 2200 клітин для кожної умови (УОФ, умовні одиниці флуоресценції).
Фіг. 116. Старіючі (та контрольні РП) клітини (ні ті, ні інші не мічені Вга0) фракціонували на
Зо ядерні та цитоплазматичні фракції, та представленість послідовностей 11 у даних компартментах (а також цілих клітинах) оцінювали за допомогою кількісної ПЛР, як на фіг. За (аналіз методом мультиплексної кількісної ПЛР ТадМап116, амплікон Е, фіг. 15). Варто відмітити, що одиниці осі У відрізняються у 10 разів між лівою та правою панелями. Фіг. 11с. За допомогою
ІФ мікроскопії досліджували присутність у клітинах білку ВРЗ1, гібридів РНК-ДНК та одноланцюгової ДНК (олДНК). Антитіла див. у розділі "Методи" та у таблиці 2. Сигнал РНК-ДНК у старих клітинах головним чином колокалізувався з сигналом ВРЗІ1 та втрачався після обробки
РНКазою А. Сигнал олДНК також колокалізувався з сигналом ВРЗ1 та виявлявся після обробки
РНКазою. Експеримент повторювали три рази з одержанням подібних результатів. Фіг. 114.
Осаджену ДНК, що містить ВгаШ (фіг. Зс, панель (а) вище, див. розділ "Методи") клонували та секвенували за Сенгером. З усього 96 досліджених клонів 37 картували на 11. Червоні прямокутники представляють відносні положення даних клонів на консенсусній послідовності
І1. Фіг. 11е. Старі клітини, мічені ВгаЦ (фіг. Зс, панель (а) вище), імунопреципітували антитілами проти ВгдШ, та представленість послідовностей І 1 у осадженій ДНК оцінювали за допомогою кількісної ПЛР з праймерами, які охоплюють усі елементи 11 (фіг. 165, с). Фіг. 117. Старі клітини обробляли кшРНК 11 (застосовуючи лентивірусні вектори, як описано на фіг. 109) між 12 та 16 тижнями старіння, та визначали експресію генів ЗБА5Р. Фіг. 119. Транскрипцію усіх елементів 1 1 миші оцінювали ланцюг-специфічним способом, використовуючи ту ж стратегію, яку застосовували по відношенню до елементів 1 людини (фіг. 15, с). Амплікони (позначені М/-7, щоб відрізнити їх від специфічних для людини праймерів) відповідають 5'-НТО (М/), ВРЗ1 (Х),
ВРЗ2 (У) та 3-НТО (7). Послідовності праймерів також див. у розділі "Методи" та у таблиці 1 (набори праймерів 37, 48-50). Полі(А)У-РНК отримували з білої жирової тканини самців.
Оцінювали всього 12 тварин (З групи по 4 тварини у кожній) у трьох незалежних експериментах.
Фіг. 11п. Експресія трьох на даний момент активних сімейств елементів І 1 миші. Праймери були розроблені таким чином, щоб відрізнити поліморфізми 5'-НТО сімейств МаА, Мам та Ту (див. розділ "Методи", набори праймерів 51-53 у таблиці 1). ЗТ-КПЛР проводили, як у (Її) вище (без специфічності до ланцюгу). (а, Б, е) п-З незалежні біологічні зразки, повторювали у двох незалежних експериментах. (Її), п-З3 незалежні експерименти. (а, е-!) Результати являють собою середнє С.О. РО,05, "РхО0,01. (а) однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм множинних порівнянь Т'юкі, (БЮ, е-П) непарні двосторонні І-критерії. бо На фіг. 12 показаний ефект порушення активації 1, цитоплазматичного шляху виявлення
ДНК або передачі сигналів інтерферону на експресію ІЕМ-І та відповіді БА5Р. Фіг. 12а. Клітини
ЗХ обробляли кшРНК 1 або ЗТС впродовж 48 годин, як описано на фіг. 109, і. Вплив на відповідь ІЕМ-І визначали за допомогою ЗТ-КПЛР, ЕГІЗА або імуноблоттингу. Результати на гелях див. на фіг. 16. Фіг. 125. Здійснювали серійний пасаж клітин до досягнення реплікативного старіння (Рес) з ЗТС (10 мкМ), присутнім на всьому протязі, як на фіг. ЗІ, та експресію інгібіторів сак раг1 та р1б6 оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. 12с. Старі клітини обробляли кшеРНкК проти ССА5 або 5ТІМО між 12 та 16 тижнями старіння (як описано на фіг. 10), та визначали експресію генів відповіді ІЕМ-! (ІЕМ-сй, ІКЕ7, ОАБІ1). Фіг. 124. Нокдауни сОА5 та 51ТІМО здійснювали за допомогою кшРНК у клітинах ЗХ (як на панелі (с) вище), та експресію генів ТЕМ-Ї досліджували за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. 12е. Здійснювали нокдаун сОАБЗ та 5ТІМО у старих клітинах за допомогою кшРНК (як на панелі (с) вище) та експресію генів відповіді БА5Р (І -1рД,
ССІ2, 1-6, ММРЗ) аналізували за допомогою ЗТ-КПЛР. Фіг. 121, д. Активність К-9 порівнювали з такою для ЗТС у старих клітинах та клітинах ЗХ. Культури старих клітин обробляли між 12 та 16 тижнями (як на фіг. ЗБ), а культури ЗХ - впродовж 48 годин (як на панелі (а) вище). Вплив на експресію генів ІЕМ-І (ІЕМ-са, ІКЕ7, ОАБІ1) та генів БАЗР (11 -1Д8, 1/-6, ММРЗ) оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР. (а-9), п-3 незалежні експерименти. (а-9у) Результати являють собою середнє х С.О. Р«х0,05, ""Рх0,01, непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 13 показана оцінка експресії р1б6, ВРЗ1 11 та р5ТАТІ у старих клітинах та зразках шкіри з людей похилого віку. Фіг. 1За. Детектування імунофлуоресценції (ІФ) р1б та ВРЗ1 у ранньому пасажі, ЗХ та старіючих клітинах. Фіг. 1365. Типові зображення комбінованого забарвлювання ВРЗІЇ та р1іб або ВРЗІ1р та рзЗТАТІ у дермі людини. Експерименти, представлені на панелях (а, Б), незалежно повторювали три рази з одержанням вихідних результатів. Фіг. 1З3с. Клітини висівали на покривні стекла, зафарбовували та здійснювали кількісний аналіз, як описано у розділі "Методи". Оцінювали 200 клітин у множині полів зору для кожної умови. УОФ, умовні одиниці флуоресценції. На вставках показаний 95 клітин, виявлених у кожному квадранті. Фіг. 1340, є. Розповсюдженість клітин з ВРЗ1 та р1б або ро5ТАТІ у шкірі людини. Отримували кріозрізи біоптатів шкіри та зафарбовували, як описано у розділі "Методи". 200 дермальних фібробластів у множині полів зору оцінювали для кожного суб'єкта. Показані сукупні результати для чотирьох суб'єктів (800 клітин). Фіг. 137. Результати у (с) та (4)
Зо перераховували, щоб показати відносну розповсюдженість ріб- клітин серед усіх клітин, та
ВРЗ1- клітин у пулі ріб- клітин. Фіг. 13д. Результати у (е) перераховували як у (1). Фіг. 130.
Характеристика людей, що беруть участь у аналізі дермальних фібробластів. Дані зразки збирали у ході тривалого дослідження довгожительства І еідеп Гопдеміу Зішау. (16) Зразки, використовувані тут, були вибрані довільно із залишків матеріалу. Аналіз індукованих дисфункцією теломер сайтів (ТІР) |(17| оснований на двопараметричній (кольоровій) візуалізації теломер (із застосуванням зонду РБІЗН) та імунофлуоресцентному детектуванні сайтів пошкодження ДНК (із застосуванням антитіла 5З3ВРІ). Внаслідок обмеженої кількості матеріалу не представлялось можливим комбінувати детектування ріб з експериментами ТіІЕ у трикольоровому експерименті.
На фіг. 14 показаний вплив лікування ЗТС або К-9 на експресію генів 11, р16, ІЕМ-І та БАЗР у тканинах миші. фіг. 14а-с. Мишам у зазначеному віці безперервно вводили ЗТС впродовж двох тижнів (див. також фіг. 4с, е, фіг. 154-ї та розділ "Методи"). Для всіх умов експресію МРНК І 1, р1б, трьох типових генів відповіді ІЕМ-Ї (Іи-с, Іг7, Оа51) та трьох типових генів ЗА5Р (1І-6, Мтр3,
Раїї) оцінювали за допомогою ЗТ-КПЛР. У жодному випадку експресія через 5 місяців ї- ЗТ значно не відрізнялася від контролю без лікарського засобу; отже, отримані результати не показані на фігурі (усі зібрані дані див. у таблиці 7). На діаграмах розмаху показаний діапазон даних (вуса), 25-й та 75-й процентилі (ящик), середні значення (пунктирна лінія) та медіани (суцільна лінія). Кожна точка являє собою одну тварину. Фіг. 14а. Вісцеральна біла жирова тканина, самці мишей. 5 місяців, п-8 тварин; 26 місяців, п-12 тварин; 26 місяців ї- ЗТС, п-12 тварин. Фіг. 145. Вісцеральна біла жирова тканина, самки мишей. 5 місяців, п-8 тварин; 26 місяців, п-12 тварин; 26 місяців ї- ЗТС, п-12 тварин. Фіг. 14с. Печінка, самці мишей. 5 місяців, п-8 тварин; 26 місяців, п-10 тварин; 26 місяців ї- ЗТС, п-10 тварин. Фіг. 140. Мишам у віці 26 місяців вводили К-9 або ЗТС у питній воді впродовж двох тижнів та аналізували за допомогою
ЗТ-КПЛР, як описано вище. НЛ - не лікували. Вісцеральна біла жирова тканина, самці мишей, п-7 тварин у кожній групі. Результати являють собою середнє ж С.О. "Р«х0,05, "РахО0,01, однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм множинних порівнянь Т'юкі.
На фіг. 15 показана комбінована оцінка старіння клітин, маркери ІЕМ-І, БА5Р та 11 та вплив
ЗТС на пов'язані з віком фенотипи у тканинах миші. Фіг. 15а, Б. Проводили ІФ тотального препарату білої жирової тканини самців мишей у віці 5 місяців та 26 місяців (3 2 тижнями 60 обробки ЗТС та без обробки). У (а) втрата ламіну В1 (маркеру старіння клітин) колокалізувалася з ІС-6 (маркер БАБР). В (6) реа! (маркер ІЕМ-Ї) колокалізувався з ВРЗ1 (маркер 11). Фіг. 15с.
Кількісний аналіз експериментів, показаних на (а) та (Б). Для кожної умови оцінювали чотири тварини та щонайменше 200 клітин на тварину. Фіг. 154. Нейтральні ліпіди зафарбовували
ВООБІРУ, щоб візуалізувати зрілі адипоцити у тотальних препаратах, та макрофаги детектували за допомогою ІФ, застосовуючи антитіло Е4/80. Фіг. 15е. Вплив 2 тижнів лікування ЗТС на адипогенез оцінювали шляхом вимірювання середнього розміру адипоцитів (ліва панель) та за допомогою ЗТ-КПЛР, щоб визначити експресію ключових адипогенних генів (праві панелі; Асаса - ацетил-КоА карбоксилаза 1; Серра-ССААТ/енхансер-зв'язуючий білок альфа; Разп - синтаза жирних кислот; 5геррі - білок 1, зв'язуючий регуляторний елемент стеролу). На діаграмах розмаху показаний діапазон даних (вуса), 25-й та 75-й процентилі (ящик), середні значення (пунктирна лінія) та медіани (суцільна лінія). Розмір адипоцитів (забарвлену ВОСІРМ площу) розраховували, застосовуючи СеїІРгопйег; показані сукупні результати для 5 тварин та всього 500 клітин. У результатах ЗТ-кКПЛР кожна точка являє собою одну тварину; п-б тварин. Фіг. 15Г.
Експресію гену Оср1 (термогенін) у бурій жировій тканині визначали за допомогою ЗТ-КкПЛР, та вона представлена як у (е). п-5 тварин. Фіг. 159. Експресію мРНК 1/1 визначали за допомогою
ЗТ-кПЛР, та вона представлена як у (е). 5 місяців, п-8 тварин; 26 місяців, п-12 тварин; 29 місяців, п-6 тварин. (е-9) Результати являють собою середнє ж С.О. "Р«х0,05, "РахО0,01. (с, е ліва панель, Її, 9у однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм множинних порівнянь Т'юкі, (е праві панелі) непарні двосторонні І-критерії.
На фіг. 16 показані скановані зображення необроблених імуноблотів. Фіг. 16А. Панель а, показаний блот 1-КВІ1: 1. РП; 2. Стар (П); 3. НЕ - Стар; 4. Стар (Р); панель Б, показаний блот 2-
ТКЕХТ: 1. РП; 2. Стар (Р); 3. Стар (П); та панель с, показаний блот 3-РОХАТ: 1. РП; 2. Зупинка; 3. Стар (Р); 4. Стар (П). Фіг. 168: панель й, показаний блот 4-КВ1: 1. РП; 2. ЗХ; панель є, показаний блот 5-ТЕЕХІ1: 1. РП; 2. ЗХ; та панель Її, показаний блот 6-ЕОХА!1: 1. РП; 2. ЗХ. Фіг. 16С. Панель 9. показаний блот 7-КВ1: 1. Стар (П); 2. 5пКВ1(Б); 3. 5пКВІ1 (а); 4. НЕ-КВІ1; панель
Р, показаний блот 8-ТКЕХТ1: 1. Стар (П); 2. 5АТЕЕХ1 (Б); 3. 5ЗАИТКЕХТ (а); 4. НЕ-ТЕЕХТ1; та панель і, показаний блот 9-РОХАТ1: 1. 5ЗПЕОХАЇ (а); 2. ЗАЕОХА (Б); 3. Стар (П); 4. ОЕ-РОХАТ. Фіг. 160.
Панель |, показаний блот 10-5ТАТ2: 1. ЗХ; 2. 5111; 3. НІЗТ; 4. ЛІРМАК; 5. РП; панель К, показаний блот 11-ІВЕ7: 1. РП; 2. 5П11; 3. ЗХ; 4. 5Пп1 1; 5. ЛІЕМАЕ; панель І, показаний блот 12-
ЗТАТ2: 1. Стар (П); 2. ЛІЕМАЕК; 3. 51 1; 4. НІЗТ; та панель т, показаний блот 13-ІКЕ7: 5. Стар (П); 6. ЛІЕМАК; 7. 5п11; 8. НІЗТ. На Фіг. 16Е показано: панель п, показаний блот 14 - р1іб (СОКМ2А): 1. РП; 2. Стар (Р); 3. Стар (П); та панель о, показаний блот 15 - р2ї (СОКМІА): 1.
РП; 2. Стар (Р); 3. Стар (П).
На фіг. 17 показаний вплив адефовіру та ламівудину на викликані старінням клітин підвищення поширеності послідовності 1, експресію генів інтерферону та експресію генів
ЗАБР. На фіг. 17а зображено вплив 5 мкМ адефовіру та ламівудину на поширеність послідовності 1 (число копій) у трьох різних лініях клітин фібробластів людини: І Е1, ІМЗО,
ММІ38, визначений із застосуванням аналізу методом кількісної ПЛР. На фіг. 17р зображено вплив 5 мкМ адефовіру та ламівудину на експресію генів інтерферону для двох генів інтерферону (ІЕМ-са та ІЕМ-ВІ1) у двох лініях клітин (І Е1 та ІМК90). На фіг. 17с зображено вплив 5 мкМ адефовіру та ламівудину на два гени ЗА5Р (ІІ -6 та ММРЗ) у лінії клітин ГЕ1. На фіг. 17а зображено вплив більш високих доз адефовіру та ламівудину (10 мкМ та 50 мкМ) на експресію генів інтерферону (ІЄМ-а та ІЄМ-В1) у лінії клітин І Е1.
На фіг. 18 показане інгібування активності Її миші вісьмома сполуками ІЗТ: ламівудин (3ТС); ставудин; емтрицитабін; априцитабін; тенофовіру дизопроксил; ценсавудин; ельвуцитабін та тенофовір. Отримували дозозалежну відповідь на активність ретротранспозиції активного ГІМЕ-1 миші, застосовуючи клітини Не! а, у першому експерименті (фіг. 18А) та у другому незалежному експерименті (фіг. 188).
На фіг. 19 показане інгібування активності Її людини трьома сполуками ІЗТ: ламівудин (3ТС); ценсавудин та ельвуцитабін. Отримували дозозалежну відповідь на активність ретротранспозиції активного ГІМЕ-1 людини, застосовуючи клітини Неїа, у першому експерименті із застосуванням ламівудину (З3ТС); ценсавудину та ельвуцитабіну (фіг. 19А); та у другому експерименті із застосуванням ламівудину (З3ТС) та ельвуцитабіну (фіг. 19В).
На фіг. 20 показана життєздатність клітин НеГа після обробки 10 різними сполуками ІЗТ: ламівудин (З3ТС); ставудин; емтрицитабін; априцитабін; тенофовіру дизопроксил; ценсавудин; ельвуцитабін; тенофовір та стауроспорин.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Повинно бути зрозуміло, що деякі аспекти, способи, варіанти реалізації, варіації та особливості даного винаходу описані нижче з різними рівнями деталізації, щоб забезпечити 60 значне розуміння цього винаходу.
Наступний опис конкретного(-их) аспекту(-ів) за своїм характером лише ілюстративно та ні у якій мірі не призначений для обмеження обсягу винаходу, його застосувань або використання, які можуть, звичайно, змінюватися. Даний винахід описано у відповідності з необмежуючими визначеннями та термінологією, включеними у дану заявку. Дані визначення та термінологія не призначені для обмеження обсягу або здійснення даного винаходу, та присутні виключно з метою ілюстрування та опису. Хоча композиції або процеси описані як такі, що використовують конкретні матеріали або порядок окремих етапів, має бути зрозуміло, що ці матеріали або етапи можуть бути взаємозамінними, таким чином, що опис винаходу може включати безліч частин або етапів, упорядкованих безліччю способів, що без зусиль зрозуміє фахівець у даній галузі.
ВИЗНАЧЕННЯ
Визначення деяких термінів, які використовуються у цьому описі та Формулі винаходу, що додається, представлені нижче. Якщо не вказано інакше, всі технічні та наукові терміни, що використовуються у цьому описі, мають ті ж значення, які зазвичай розуміє середній фахівець у галузі, до якої належить даний винахід.
У цьому описі та Формулі винаходу, що додається, форми однини включають посилання на множину, якщо тільки у змісті явно не вказується на інше. Наприклад, термін "клітина" включає комбінацію двох або більше клітин, тощо.
Термін "приблизно" або "близько" при згадці значення або параметру, як правило, використовується, щоб включити кількості, що відхиляються у межах 5 95, 10 Фо, 15 95 або 20 95 у будь-якому напрямку (більшому або меншому) від зазначеної кількості, якщо тільки не вказано або не очевидно з контексту інше (за винятком випадків, коли така кількість буде менше 0 95 або буде перевищувати 10095 від можливого значення). У цій заявці згадка "приблизно" або "близько" значення або параметру включає (та описує) варіанти реалізації, які спрямовані на це значення або параметр. Наприклад, опис, що посилається на "приблизно Х", включає опис "Х".
У даній заявці термін "або" означає "та/або". У даній заявці мається на увазі, що термін "та/або", використовуваний у такому формулюванні як "А та/або В", включає обидва А та В; А або В; А (окремо) та В (окремо). Аналогічним чином, мається на увазі, що у обсяг терміну "та/або", використовуваного у такому формулюванні як "А, В та/або С", входить кожен з наступних варіантів реалізації: А, В та С; А, В або С; А або С; А або В; В або С; А та С; А та В; В
Зо та С; А (окремо); В (окремо) та С (окремо).
Повинно бути очевидно, що у всіх випадках, коли варіанти реалізації описані у даній заявці з терміном "що включає", також запропоновані у іншому випадку аналогічні варіанти реалізації, описані з використанням термінів "що складається з" та/або "що складається по суті 3". Також зрозуміло, що у всіх випадках, коли варіанти реалізації описані у даній заявці з терміном "що складається по суті з", також запропоновані у іншому випадку аналогічні варіанти реалізації, описані з використанням терміну "що складається 3".
Повинно бути зрозуміло, що деякі особливості цього винаходу, які для ясності описані у даній заявці у контексті окремих варіантів реалізації, також можуть бути запропоновані у комбінації у одному варіанті реалізації. | навпаки, різні особливості даного винаходу, які для стислості описані у контексті одного варіанту реалізації, також можуть бути запропоновані окремо або у будь-якій підкомбінації. Крім того, згадка значень, виражених діапазонами, включає всі без винятку значення всередині даного діапазону.
Термін "суб'єкт" відноситься до ссавця, включаючи, але не обмежуючись перерахованими: собаку, кішку, коня, корову, свиню, вівцю, козу, курчатко, гризуна або примата. Суб'єкти можуть являти собою домашніх улюбленців (наприклад, собак, кішок), сільськогосподарських тварин (наприклад, корів, коней, свиней, курей тощо), лабораторних тварин (наприклад, мишей, щурів, кроликів тощо), але не обмежені ними. Суб'єкти включають людей. Суб'єкт, який являє собою людину, може являти собою суб'єкта дитячого, дорослого або похилого віку. Суб'єкт, який являє собою людину, може бути будь-якої статі.
Терміни "ефективна кількість" та ""ерапевтично ефективна кількість" включають кількість, достатню для запобігання або зниження вираженості прояву захворювання або медичного стану, такого як пов'язаний з віком розлад. Повинно бути очевидно, що у даній галузі відомо багато способів визначення ефективної кількості для даного застосування. Наприклад, можна використовувати фармакологічні способи визначення дозування у терапевтичному контексті. У контексті терапевтичного або профілактичного застосування кількість композиції, яку вводять суб'єкту, буде залежати від типу та тяжкості захворювання та від особливостей суб'єкта, таких як загальний стан здоров'я, вік, стать, маса тіла та переносимість лікарських засобів. Вона також буде залежати від ступеня, тяжкості та типу захворювання. Кваліфікований фахівець зможе визначити відповідні дозування в залежності від даних та інших чинників. Зазначені 60 композиції також можна вводити у комбінації з однією або більше додатковими терапевтичними сполуками.
У даній заявці терміни "процес лікування", або "лікування", або "лікувати", або "полегшення", або "полегшувати" відносяться як до (1) терапевтичних заходів, які зцілюють, уповільнюють, зменшують симптоми та/або зупиняють прогресування діагностованого захворювання або інфекції, так і до (2) профілактичних або попереджувальних заходів, які запобігають або уповільнюють розвиток захворювання або інфекції.
У даній заявці термін "тривале" введення означає, що терапевтичний агент або лікарський засіб вводять впродовж періоду щонайменше 12 тижнів. Це включає випадок, коли терапевтичний агент або лікарський засіб вводять таким чином, що він ефективний понад, або впродовж, періоду, що становить щонайменше 12 тижнів, та не обов'язково має на увазі, що саме введення відбувається впродовж 12 тижнів, наприклад, якщо застосовують композиції з уповільненим вивільненням або тривало діючий терапевтичний агент або лікарський засіб.
Таким чином, суб'єкта лікують впродовж періоду, що становить щонайменше 12 тижнів. У багатьох випадках тривале введення відбувається впродовж щонайменше 4, 5, 6, 7, 8, 9 місяців або більше, або впродовж щонайменше 1, 2, 3, 5, 7 або 10 років, або довше.
У даній заявці термін "вікове запалення" (або "пов'язане з віком запалення") означає запалення, зазвичай хронічне, зокрема, хронічне системне запалення, яке виникає при збільшенні віку. Таке запалення можна спостерігати після віку 30, 35 або 40 років, але зазвичай спостерігають у суб'єктів у віці 45, 50, 55 або 60 або більше років. У багатьох випадках це може бути запалення на низькому рівні.
У даній заявці термін "хронічне запалення" означає запалення (наприклад, запальний стан), яке спостерігається постійно або тривалий час у організмі суб'єкта. Загалом, це означає запальну відповідь або стан тривалістю 20, 25 або 30 днів або довше або 1 місяць або довше, зокрема, щонайменше 2 або 3 місяці або довше. Хронічне запалення призводить до прогресуючого зсуву у типі клітин, присутніх у осередку запалення. Хронічне запалення може бути передумовою до розвитку безлічі захворювань або розладів, включаючи, зокрема, дегенеративні захворювання або захворювання або стани, пов'язані з втратою юнацького функціонування або зі старінням.
У даній заявці термін "системне запалення" означає запалення, яке не обмежене
Зо конкретною тканиною, або осередком, або локалізацією у організмі. Зазначене запалення може бути поширеним (генералізованим) по всьому організму. У системне запалення зазвичай залучені ендотелій та інші системи органів.
У даній заявці термін "запалення на низькому рівні" (вказаний термін використовують у даній заявці як синонімічний терміну "запалення низького ступеня") характеризується дво-триразовим підвищенням системних концентрацій цитокінів, таких як ТМЕа, І/-6 та СЕР, наприклад, які вимірюють у плазмі або сироватці. Підвищення може бути по відношенню або у порівнянні з нормальними концентраціями або еталонними концентраціями, наприклад, концентраціями, які визначили у конкретній еталонній групі або популяції суб'єктів, наприклад, молодих суб'єктів (наприклад, молодих дорослих) або здорових суб'єктів, наприклад, суб'єктів, які не страждають на будь-яке захворювання або стан, включаючи будь-яке запальне захворювання, або у яких немає запалення. Підвищення також може бути у порівнянні з рівнем концентрації у суб'єкта перед розвиненням запалення. Запалення на низькому рівні можна спостерігати за відсутності явних ознак або симптомів захворювання. Таким чином, запалення на низькому рівні може являти собою субклінічне запалення. У якості альтернативи, у суб'єкта із запаленням на низькому рівні може не бути клінічно діагностованого стану або захворювання, але можуть виявлятися деякі ознаки або симптоми запальної відповіді або запального стану. Іншими словами, можуть бути присутні ознаки або симптоми впливу запалення на організм, але вони можуть ще не прогресувати до явного або помітного захворювання.
У даній заявці термін "ракове запалення" означає запалення, яке відбувається у контексті раку та може, у якості альтернативи, бути назване "пов'язаним з раком запаленням".
Встановили, що запалення є характерною ознакою раку та може бути необхідне для онкогенезу та підтримки ракового стану. Симптоми раку пов'язані із запаленням. Таким чином, у суб'єкта з раком може бути присутнім або проявлятися запалення, яке може являти собою запалення на низькому рівні або периферичне запалення, яке обговорювалося вище, та, зокрема, хронічне або системне запалення, яке обговорювалося вище.
Якщо немає інших визначень, всі терміни (включаючи технічні та наукові терміни), які використовуються у даній заявці, мають ті ж значення, які зазвичай розуміє середній фахівець у галузі, до якої належить даний винахід. Крім того, має бути зрозуміло, що терміни, такі як терміни, визначення яких наведено у широко використовуваних словниках, слід тлумачити як 60 такі, що мають значення, яке узгоджується з їх значенням у контексті відповідної галузі техніки та даного опису, та не слід тлумачити у ідеалізованому або занадто формальному сенсі, якщо тільки вони явно не визначені таким чином у даній заявці.
ФАРМАЦЕВТИЧНІ КОМПОЗИЦІЇ
Композиції та способи відповідно до даного винаходу можна застосовувати для лікування індивіда, який цього потребує. У деяких варіантах реалізації індивід являє собою ссавця, такого як людина, або відмінного від людини ссавця. При введенні тварині, такій як людина, композицію або сполуку переважно вводять у вигляді фармацевтичної композиції, що містить, наприклад, сполуку відповідно до даного винаходу та фармацевтично прийнятний носій.
Фармацевтично прийнятні носії добре відомі у даній галузі та включають, наприклад, водні розчини, такі як вода або фізіологічний буферний сольовий розчин, або інші розчинники або середовища, такі як гліколі, гліцерин, масла, такі як оливкове масло, або органічні ефіри для ін'єкцій. У кращих варіантах реалізації, у яких такі фармацевтичні композиції призначені для введення людині, зокрема, для інвазивних шляхів введення (тобто таких шляхів, як ін'єкція або імплантація, при яких уникають транспорту або дифузії через епітеліальний бар'єр), водний розчин є апірогеним або по суті апірогеним. Допоміжні речовини можна вибрати, наприклад, таким чином, щоб вони здійснювали відстрочене вивільнення агенту або селективне націлювання на одну або більше клітин, тканин або органів. Фармацевтична композиція може знаходитися у формі одиничних доз, такий як таблетка, капсула (включаючи капсулу з покритими частинками та желатинову капсулу), гранула, ліофілізат для відновлення вмісту вологи, порошок, розчин, сироп, супозиторій, форма для ін'єкції або тому подібні форми.
Композиція також може бути присутньою у системі трансдермальної доставки, наприклад, у шкірному пластирі. Композиція також може бути присутньою у розчині, що підходить для місцевого введення, такому як лосьйон, крем або мазь.
Фармацевтично прийнятний носій може містити фізіологічно прийнятні агенти, які діють, наприклад, щоб стабілізувати, підвищити розчинність або підвищити всмоктування сполуки, такої як сполука відповідно до даного винаходу. Такі фізіологічно прийнятні агенти включають, наприклад, вуглеводні, такі як глюкоза, сахароза або декстрани, антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота або глутатіон, хелатуючі агенти, низькомолекулярні білки або інші стабілізатори або допоміжні речовини. Вибір фармацевтично прийнятного носія, включаючи
Зо фізіологічно прийнятний агент, залежить, наприклад, від шляху введення композиції. Препарат або фармацевтична композиція може являти собою систему доставки лікарського засобу, яка самоемульгується, або систему доставки лікарського засобу, яка самомікроемульгується.
Фармацевтична композиція (препарат) також може являти собою ліпосому або іншу полімерну матрицю, у яку може бути укладено, наприклад, сполуку відповідно до даного винаходу.
Ліпосоми, наприклад, які містять фосфоліпіди або інші ліпіди, являють собою нетоксичні, фізіологічно прийнятні носії, які метаболізуються, які відносно просто отримувати та вводити.
Формулювання "фармацевтично прийнятний" використовується у даній заявці по відношенню до тих сполук, матеріалів, композицій та/або лікарських форм, які у межах ретельної медичної оцінки підходять для застосування у контакті з тканинами людей та тварин, не викликаючи надмірну токсичність, подразнення, алергічну відповідь або іншу проблему або ускладнення, які відповідають прийнятному співвідношенню користь/ризик.
Формулювання "фармацевтично прийнятний носій" у даній заявці означає фармацевтично прийнятний матеріал, композицію або середовище, таке як рідкий або твердий наповнювач, розчинник, допоміжна речовина, розчинник або інкапсулюючий матеріал. Кожен носій повинен бути "прийнятним" у тому сенсі, що він сумісний з іншими інгредієнтами складу та не шкідливий пацієнту. Деякі приклади матеріалів, які можуть служити у якості фармацевтично прийнятних носіїв, включають: (1) цукри, такі як лактоза, глюкоза та сахароза; (2) крохмалі, такі як кукурудзяний крохмаль та картопляний крохмаль; (3) целюлозу та її похідні, такі як карбоксиметилцелюлоза натрію, етилцелюлоза та ацетат целюлози; (4) порошковий трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) допоміжні речовини, такі як масло какао та супозиторні воски; (9) масла, такі як арахісове масло, бавовняне масло, сафлорове масло, кунжутне масло, оливкова олія, кукурудзяна олія та соєве масло; (10) гліколі, такі як пропіленгліколь; (11) поліоли, такі як гліцерин, сорбіт, маніт та поліетиленгліколь; (12) ефіри, такі як етилолеат та етиллаурат; (13) агар; (14) буферні речовини, такі як гідроксид магнію та гідроксид алюмінію; (15) альгінова кислота; (16) апірогенну воду; (17) ізотонічний сольовий розчин; (18) розчин
Рінгера; (19) етиловий спирт; (20) фосфатно-буферні розчини; та (21) інші нетоксичні сумісні речовини, використовувані у фармацевтичних складах.
Фармацевтичну композицію (препарат) можна вводити суб'єкту за будь-яким з безлічі шляхів введення, включаючи, наприклад, пероральне введення (наприклад, рідкі лікарські форми, такі 60 як у вигляді водних або безводних розчинів або суспензій, таблетки, капсули (включаючи капсули з покритими частинками та желатинові капсули), болюси, порошки, гранули, пасти для нанесення на язик); всмоктування через слизову оболонку порожнини рота (наприклад, сублінгвально); підшкірне введення; трансдермальне введення (наприклад, у вигляді пластиру, прикріпленого до шкіри); та місцеве введення (наприклад, у вигляді крему, мазі або спрею, нанесеного на шкіру). Сполуку можна також включити до складу для інгаляції. У деяких варіантах реалізації сполуку можна просто розчинити або суспендувати у стерильній воді.
Подробиці відносно відповідних шляхів введення та композицій, придатних для них, можна знайти, наприклад, у (патентах США Мо 6110973; 5763493; 5731000; 5541231; 5427798; 5358970 та 4172896, а також у патентах)|, цитованих у них.
Склади можуть бути зручним чином представлені у одиничній лікарській формі, та їх можна отримати за допомогою будь-яких способів, добре відомих у галузі фармацевтики. Кількість активного інгредієнту, яку можна об'єднати з матеріалом-носієм для отримання лікарської форми, що містить одну дозу, буде змінюватися в залежності від хазяїна, якого лікують, конкретного способу введення. Кількість активного інгредієнта, яку можна об'єднати з матеріалом-носієм для отримання лікарської форми, що містить одну дозу, як правило, буде являти собою таку кількість сполуки, яка робить терапевтичну дію. Як правило, зі ста відсотків ця кількість буде знаходиться у діапазоні від приблизно 1 відсотку до приблизно дев'яноста дев'яти відсотків активного інгредієнту, переважно від приблизно 5 відсотків до приблизно 70 відсотків, найкраще від приблизно 10 відсотків до приблизно 30 відсотків.
Способи отримання даних складів або композицій включають етап приведення у контакт активної сполуки, такої як сполука відповідно до даного винаходу, з носієм та необов'язково з одним або більше додатковими інгредієнтами. Зазвичай, склади отримують шляхом рівномірного та ретельного приведення у контакт сполуки відповідно до даного винаходу з рідкими носіями, або тонкоподрібненими твердими носіями, або обома типами носіїв, а потім, за необхідності, формування отриманого продукту.
Склади відповідно до даного винаходу, які підходять для перорального введення, можуть перебувати у формі капсул (включаючи капсули з покритими частинками та желатинові капсули), крохмальних облаток, пігулок, таблеток, льодяників (з використанням ароматизованої основи, зазвичай сахарози та камеді акації або трагаканту), ліофілізату, порошків, гранул або у
Зо вигляді розчину або суспензії у водній або безводній рідині, або у вигляді рідкої емульсії типу масло у воді або типу вода у маслі, або у вигляді еліксиру або сиропу, або у вигляді пастилок (з використанням інертної основи, такої як желатин та гліцерин, або сахароза та камедь акації) та/або у вигляді рідин для полоскання рота та у тому подібних формах, кожна з яких містить заздалегідь визначену кількість сполуки відповідно до даного винаходу у якості активного інгредієнту. Композиції або сполуки можна також вводити у вигляді болюса, електуарія або пасти.
Для отримання твердих лікарських форм для перорального введення (капсул (включаючи капсули з покритими частинками та желатинові капсули), таблеток, пігулок, драже, порошків, гранул та тому подібних форм), активний інгредієнт змішують з одним або більше фармацевтично прийнятними носіями, такими як цитрат натрію або дикальційфосфат, та/або будь-якими з наступних агентів: (1) наповнювачі або розріджувачі, такі як крохмалі, лактоза, сахароза, глюкоза, маніт та/або кремнієва кислота; (2) зв'язувальні речовини, такі як, наприклад, карбоксиметилцелюлоза, альгінати, желатин, полівінілпіролідон, сахароза та/або камедь акації; (3) зволожувачі, такі як гліцерин; (4) дезінтегруючі агенти, такі як агар-агар, карбонат кальцію, картопляний або маніоковий крохмаль, альгінова кислота, деякі силікати та карбонат натрію; (5) агенти, що уповільнюють розчинення, такі як парафін; (6) прискорювачі всмоктування, такі як сполуки четвертинного амонію; (7) змочувальні агенти, такі як, наприклад, цетиловий спирт та гліцерінмоностеарат; (8) абсорбенти, такі як каолін та бентонітова глина; (9) лубриканти, такі як тальк, стеарат кальцію, магнію стеарат, тверді полієтиленгліколі, лаурилсульфат натрію та їх суміші; (10) комплексоутворюючі агенти, такі як модифіковані та немодифіковані циклодекстрини; та (11) забарвлюючі агенти. У разі капсул (включаючи капсули з покритими частинками та желатинові капсули), таблеток та пігулок фармацевтичні композиції можуть також містити буферні речовини. Тверді композиції подібного типу можна також застосовувати у якості наповнювачів у м'яких та твердих желатинових капсулах, використовуючи такі допоміжні речовини як лактоза або молочні цукри, а також високомолекулярні полієтиленгліколі та тому подібні агенти.
Таблетку можна отримати шляхом пресування або формування, необов'язково з одним або більше додатковими інгредієнтами. Пресовані таблетки можна отримати із застосуванням зв'язувальної речовини (наприклад, желатину або гідроксіпропілметілцелюлози), ковзкої 60 речовини, інертного розчиннику, консерванту, дезінтегруючого агенту (наприклад,
крохмальгліколяту натрію або перехресно-зв'язаної карбоксиметилцелюлози натрію), поверхнево-активного або диспергуючого агенту. Формовані таблетки можна отримати шляхом формування у відповідному пристрої суміші порошкованої сполуки, зволоженої інертним рідким розріджувачем.
На таблетки та інші тверді лікарські форми фармацевтичних композицій, такі як драже, капсули (включаючи капсули з покритими частинками та желатинові капсули), пігулки та гранули, необов'язково можна нанести риски або отримати їх з покриттям та оболонками, такими як ентеросолюбільне покриття та інші покриття, добре відомі у галузі складання фармацевтичних композицій. їх також можна включити до складу лікарських форм для забезпечення повільного або контрольованого вивільнення з них активного інгредієнту, застосовуючи, наприклад, гідроксипропілметилцелюлозу у різних співвідношеннях, щоб домогтися бажаного профілю вивільнення, інші полімерні матриці, ліпосоми та/або мікросфери.
Їх можна стерилізувати, наприклад, шляхом фільтрації через затримуючий бактерії фільтр або шляхом включення стерилізуючих агентів у формі стерильних твердих композицій, які можна розчинити у стерильній воді або деяких інших стерильних середовищах для ін'єкцій безпосередньо перед застосуванням. Дані композиції можуть також необов'язково містити замутнюючі агенти та можуть мати такий склад, що вони вивільняють активний(-ї) інгредієнт(и) тільки, або переважно, у деякій частині шлунково-кишкового тракту, необов'язково відстроченим способом. Приклади інкапсулюючих композицій, які можна застосовувати, включають полімерні речовини та віск. Активний інгредієнт також може бути у мікроінкапсульованій формі, за необхідності, з однією або більше з описаних вище допоміжних речовин.
Рідкі лікарські форми, придатні для перорального введення, включають фармацевтично прийнятні емульсії, ліофілізати для відновлення вмісту вологи, мікроемульсії, розчини, суспензії, сиропи та еліксири. Додатково до активного інгредієнту рідкі лікарські форми можуть містити інертні розріджувачі, які широко застосовуються у даній галузі, такі як, наприклад, вода або інші розчинники, циклодекстрини та їх похідні, солюбілізуючі агенти та емульгатори, такі як етиловий спирт, ізопропіловий спирт, етилкарбонат, етилацетат, бензиловий спирт, бензилбензоат, пропіленгліколь, 1,3-бутиленгліколь, масла (зокрема, бавовняне, арахісове, кукурудзяне, із зародків пшениці, оливкове, рицинове та кунжутне масла), гліцерин,
Зо тетрагідрофуриловий спирт, поліетиленгліколі та складні ефіри жирних кислот та сорбітану, та їх суміші.
Крім інертних розріджувачів пероральні композиції також можуть містити ад'юванти, такі як змочувальні агенти, емульгуючі та суспендуючі агенти, підсолоджувачі, ароматизатори, барвники, віддушки та консервуючі агенти.
Суспензії додатково до активних сполук, можуть містити суспендуючі агенти, такі як, наприклад, етоксильовані ізостеарилові спирти, поліоксиетиленсорбіт та складні ефіри сорбітану, мікрокристалічна целюлоза, метагідроксид алюмінію, бентоніт, агар-агар та трагакант, та їх суміші.
Лікарські форми для місцевого або трансдермального введення включають порошки, спреї, мазі, пасти, креми, лосьйони, гелі, розчини, пластирі та лікарські форми для інгаляції. Активну сполуку можна змішати у стерильних умовах з фармацевтично прийнятним носієм та з будь- якими консервантами, буферами або пропелентами, які можуть знадобитися.
Мазі, пасти, креми та гелі можуть містити, додатково до активної сполуки, допоміжні речовини, такі як тваринні та рослинні жири, масла, віск, парафін, крохмаль, трагакант, похідні целюлози, поліетиленгліколі, силікони, бентоніти, кремнієву кислоту, тальк та оксид цинку, або їх суміші.
Порошки та спреї можуть містити, додатково до активної сполуки, допоміжні речовини, такі як лактоза, тальк, кремнієва кислота, гідроксид алюмінію, силікати кальцію та поліамідний порошок, або суміші цих матеріалів. Спреї можуть додатково містити звичайні пропеленти, такі як хлорфторвуглеводні та леткі незаміщені вуглеводні, такі як бутан та пропан.
Трансдермальні пластирі мають додаткову перевагу, забезпечуючи контрольовану доставку сполуки відповідно до даного винаходу у організм. Такі лікарські форми можна отримати шляхом розчинення або диспергування активної сполуки у підходящому середовищі. Сприяючі всмоктуванню речовини також можна застосовувати для підвищення проникнення сполуки через шкіру. Швидкість такого проникнення можна контролювати або за допомогою контролюючої швидкість проникнення мембрани, або шляхом диспергування сполуки у полімерній матриці або гелі.
Формулювання "парентеральне введення" та "вводили парентерально" у даній заявці означають способи введення, відмінні від ентерального та місцевого введення, зазвичай бо шляхом ін'єкції та включають, без обмеження, внутрішньовенну, внутрішньоочну (таку як інтравітреальна), внутрішньом'язову, інтраартеріальну, інтратекальну, внутрішньокапсулярну, внутрішньоочну, внутрішньосерцеву, внутрішньошкірну, інтраперитонеальну, транстрахеальну, підшкірну, внутрішньошкірну, внутрішньосуглобну, підкапсулярну, субарахноїдальну, внутрішньохребетну та внутрішньостернальну ін'єкцію та інфузію. Фармацевтичні композиції, які підходять для парентерального введення, містять одну або більше активних сполук у комбінації з одним або більше фармацевтично прийнятними стерильними ізотонічними водними або безводними розчинами, дисперсіями, суспензіями або емульсіями, або стерильними порошками, вміст вологи яких можна відновити стерильними ін'єкційними розчинами або дисперсіями безпосередньо перед застосуванням, які можуть містити антиоксиданти, буфери, бактеріостатичні засоби, розчинені речовини, які роблять склад ізотонічним крові передбачуваного реципієнта, або суспендуючі або згущуючі агенти.
Приклади підходящих водних та безводних носіїв, які можна застосовувати у фармацевтичних композиціях відповідно до даного винаходу, включають воду, етанол, поліоли (такі як гліцерин, пропіленгліколь, поліетиленгліколь та тому подібні), та відповідні їх суміші, рослинні масла, такі як оливкове масло, та органічні ефіри для ін'єкцій, такі як етилолеат.
Приклади відповідних водних та безводних носіїв, які можна застосовувати у фармацевтичних композиціях відповідно до даного винаходу, включають воду, етанол, поліоли (такі як гліцерин, пропіленгліколь, поліетиленгліколь та тому подібні), та відповідні їх суміші, рослинні масла, такі як оливкове масло, та органічні ефіри для ін'єкцій, такі як етилолеат. Відповідну плинність можна підтримувати, наприклад, шляхом застосування обволікаючих матеріалів, таких як лецитин, шляхом підтримки необхідного розміру частинок у разі дисперсій, та шляхом застосування поверхнево-активних речовин.
Дані композиції також можуть містити ад'юванти, такі як консерванти, змочувальні агенти, емульгуючі агенти та диспергуючі агенти. Запобігання дії мікроорганізмів можна гарантувати шляхом додавання різних антибактеріальних та протигрибкових агентів, наприклад, парабену, хлорбутанолу, фенолсорбінової кислоти та тому подібних агентів. Також може знадобитися додати у композиції ізотонічні агенти, такі як цукри, хлорид натрію та тому подібні агенти. Крім того, пролонгованого всмоктування лікарської форми для ін'єкції можна досягти шляхом додавання агентів, які відтерміновують всмоктування, таких як моностеарат алюмінію та
Зо желатин.
У деяких випадках для того, щоб продовжити дію лікарського засобу, бажано уповільнити всмоктування лікарського засобу з підшкірної або внутрішньом'язової ін'єкції. Цього можна досягти шляхом застосування рідкої суспензії кристалічного або аморфного матеріалу з поганою розчинністю у воді. Швидкість всмоктування лікарського засобу потім залежить від швидкості його розчинення, яка, у свою чергу, може залежати від розміру кристалів та кристалічної форми. У якості альтернативи, уповільненого всмоктування парентерально введеної лікарської форми досягають шляхом розчинення або суспендування лікарського засобу у масляному середовиці.
Депо-форми для ін'єкцій одержують шляхом формування мікроінкапсульованих матриць обговорюваних сполук у полімерах, які біорозкладаються, таких як полілактид-полігліколід.
Залежно від співвідношення лікарського засобу та полімеру та природи конкретного використовуваного полімеру, швидкість вивільнення лікарського засобу можна контролювати.
Приклади інших полімерів, які біорозкладаються, включають полі(ортоефіри) та полі(ангідриди).
Депо-склади для ін'єкцій також отримують шляхом укладення лікарського засобу у ліпосоми або мікроемульсії, які сумісні з тканинами організму.
Для застосування у способах відповідно до даного винаходу активні сполуки можна давати у чистому вигляді або у вигляді фармацевтичної композиції, що містить, наприклад, від 0,1 до 99,5 95 (більш переважно від 0,5 до 90 95) активного інгредієнту у комбінації з фармацевтично прийнятним носієм.
Способи введення також можуть бути запропоновані за допомогою пристроїв, які перезаправляються або біорозкладаються. Різні полімерні пристрої для повільного вивільнення були розроблені та досліджені іп мімо у останні роки для контрольованої доставки лікарських засобів, включаючи білкові біофармацевтичні засоби. Різні біосумісні полімери (включаючи гідрогелі), включаючи як полімери, що біорозкладаються, так і полімери, що не розкладаються, можна застосовувати для отримання імплантату для уповільненого вивільнення сполуки. у конкретній цільовій ділянці.
Фактичні рівні доз активних інгредієнтів у фармацевтичних композиціях можна змінювати, щоб отримати кількість активного інгредієнту, яка ефективно призводить до досягнення бажаної терапевтичної відповіді для конкретного пацієнта, композиції та способу введення, без 60 токсичної дії на пацієнта.
Обраний рівень дозування буде залежати від різних факторів, включаючи активність конкретної сполуки або комбінації використовуваних сполук, або її складного ефіру, солі або аміду, шляху введення, часу введення, швидкості виведення конкретної(-их) використовуваної(- их) сполуки(сполук), тривалості лікування, інших лікарських засобів, сполук та/або матеріалів, що застосовуються у комбінації з конкретною(ими) використовуваною(ими) сполукою(ами), віку, статі, маси тіла, стану, загального стану здоров'я та анамнезу пацієнта, якого лікують, і тому подібних факторів, добре відомих у галузі медицини.
Лікар або ветеринар із середнім рівнем компетенції у даній галузі може легко визначити та призначити необхідну терапевтично ефективну кількість фармацевтичної композиції.
Наприклад, лікар або ветеринар може почати з доз фармацевтичної композиції або сполуки на рівнях, нижчих ніж необхідні для надання бажаної терапевтичної дії, та поступово підвищувати дозування до досягнення бажаного ефекту. Під "терапевтично ефективною кількістю" мають на увазі концентрацію сполуки, якої достатньо, щоб викликати бажану терапевтичну дію. Як правило, зрозуміло, що ефективна кількість сполуки буде змінюватися в залежності від маси тіла, статі, віку та анамнезу суб'єкта. Інші фактори, які впливають на ефективну кількість, можуть включати, але не обмежені перерахованими: тяжкість стану пацієнта, розлад, який лікують, стабільність сполуки та, за необхідності, інший тип терапевтичного агента, який вводять разом із сполукою відповідно до даного винаходу. Більш велику сумарну дозу можна доставити шляхом безлічі введень агенту. Способи визначення ефективності та дозування відомі фахівцям у даній галузі.(1 8)
Зазвичай, відповідна добова доза активної сполуки, що використовується у композиціях та способах відповідно до даного винаходу, буде являти собою таку кількість сполуки, яка являє собою найменшу дозу, ефективну для надання терапевтичної дії. Така ефективна доза, як правило, буде залежати від факторів, описаних вище.
За необхідності, ефективну добову дозу активної сполуки можна вводити у вигляді однієї, двох, трьох, чотирьох, п'яти, шести або більше часткових доз, які вводять окремо з відповідними інтервалами впродовж дня, необов'язково у вигляді лікарських форм, що містять одну дозу. У деяких варіантах реалізації даного винаходу активну сполуку можна вводити по два або три рази щодня. У інших варіантах реалізації активну сполуку будуть вводити раз на день.
Зо Пацієнт, який отримує дане лікування, являє собою будь-яку тварину, яка цього потребує, включаючи приматів, зокрема, людей; та інших ссавців, таких як представники родини конячих, бичачих, свинячих, овечих, котячих та собачих; домашніх птахів; та домашніх улюбленців у цілому.
У деяких варіантах реалізації сполуки відповідно до даного винаходу можна застосовувати окремо або вводити спільно з іншим типом терапевтичного агенту.
Відповідно до даного винаходу запропоноване застосування фармацевтично прийнятних солей сполук відповідно до даного винаходу у композиціях та способах відповідно до даного винаходу. У деяких варіантах реалізації запропоновані солі відповідно до даного винаходу включають, але не обмежені солями алкіл-, діалкіл-, триалкіл- або тетраалкіламонію. У деяких варіантах реалізації запропоновані солі відповідно до даного винаходу включають, але не обмежені солями І -аргініну, бенентаміну, бензатину, бетаїну, гідроксиду кальцію, холіну, деанолу, дієтаноламіну, діетиламіну, 2-(діетиламіно)етанолу, етаноламіну, етилендіаміну, М- метилглюкаміну, гідрабаміну, 1Н-імідазолу, літію, І -лізину, магнію, 4-(2-гідроксиетилуморфоліну, піперазину, калію, 1-(2-гідроксиетил)піролідину, натрію, триетаноламіну, трометаміну та цинку.
У деяких варіантах реалізації запропоновані солі відповідно до даного винаходу включають, але не обмежені солями Ма, Са, К, Мо, 7п або інших металів. У деяких варіантах реалізації запропоновані солі відповідно до даного винаходу включають, але не обмежені солями 1- гідрокси-2-нафтойної кислоти, 2,2-дихлороцтової кислоти, 2-гідроксиетансульфонової кислоти, 2-оксоглутарової кислоти, 4-ацетамідобензойної кислоти, 4-аміносаліцилової кислоти, оцтової кислоти, адипінової кислоти, І-аскорбінової кислоти, І-аспарагінової кислоти, бензолсульфонової кислоти, бензойної кислоти, (ж)-камфорної кислоти, (ж)-камфор-10-сульфонової кислоти, капринової кислоти (деканової кислоти), капронової кислоти (гексанової кислоти), каприлової кислоти (октанової кислоти), карбонової кислоти, коричної кислоти, лимонної кислоти, цикламової Кислоти, додецилсірчаної Кислоти, етан-1,2-дисульфонової кислоти, етансульфонової кислоти, мурашиної кислоти, фумарової кислоти, галактарової кислоти, гентизинової кислоти, (а-глюкогептонової кислоти, а-глюконової кислоти, а-глюкуронової кислоти, глутамінової кислоти, глутарової кислоти, гліцерофосфорної кислоти, гліколевої кислоти, гіппурової кислоти, бромистоводневої кислоти, соляної кислоти, ізомасляної кислоти, молочної кислоти, лактобіонової кислоти, лауринової кислоти, малеїнової кислоти, І-яблучної 60 кислоти, малонової кислоти, мигдальної кислоти, метансульфонової кислоти, нафталін-1,5-
дисульфонової кислоти, нафталін-2-сульфонової кислоти, нікотинової кислоти, азотної кислоти, олеїнової кислоти, щавлевої кислоти, пальмітинової кислоти, памоєвої кислоти, фосфорної кислоти, пропіонової кислоти, І-піроглутамінової кислоти, саліцилової кислоти, себацинової кислоти, стеаринової кислоти, бурштинової кислоти, сірчаної кислоти, І-винної кислоти, тіоціанової кислоти, п-толуолсульфонової кислоти, трифтороцтової кислоти та ундециленової кислоти.
Фармацевтично прийнятні солі приєднання кислоти можуть також існувати у вигляді різних сольватів, наприклад, з водою, метанолом, етанолом, діметилформамідом та тому подібними розчинниками. Суміші таких сольватів також можна отримати. Джерелом такого сольвату може бути розчинник кристалізації може бути властивістю, властивою розчиннику, що використовується при отриманні або кристалізації, або може бути зовнішнім по відношенню до розчиннику.
Змочувальні агенти, емульгатори та ковзкі речовини, такі як лаурилсульфат натрію та стеарат магнію, а також забарвлюючі агенти, розділювальні агенти, покривальні агенти, підсолоджувачі, ароматизатори та віддушки, консерванти та антиоксиданти також можуть бути присутніми у композиціях.
Приклади фармацевтично прийнятних антиоксидантів включають: (1) водорозчинні антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота, цистеїну гідрохлорид, бісульфат натрію, метабісульфіт натрію, сульфіт натрію та тому подібні антиоксиданти; (2) розчинні у маслі антиоксиданти, такі як аскорбілпальмітат, бутилгідроксианізол (ВНА), бутилгідрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропілгалати, альфа-токоферол та тому подібні антиоксиданти; та (3) хелатуючі агенти, такі як лимонна кислота, етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТА), сорбіт, винна кислота, фосфорна кислота та тому подібні агенти.
РОЛЬ СТАРІННЯ КЛІТИН У СТАРІННІ ТА ПОВ'ЯЗАНИХ З ВІКОМ ЗАХВОРЮВАННЯХ
На фіг. 5 представлена схема послідовності, що описує молекулярний шлях старіння клітин, що приводить до пов'язаного з віком стерильного запалення, що описане більш докладно нижче.
Підвищення експресії ретротранспозованих елементів (КТЕ)
Відомо, що транскрипція КТЕ активується у старих клітинах |19| та у деяких тканинах миші.
Зо (20) Раніше було показано, що три регуляторні фактори беруть участь у регуляції І 1: ЕОХА1,
КВ, ТКЕХ1. Було описано, що у старих клітинах підвищується експресія ЕОХАТ, (21) та він зв'язується з промотором 11. (22| Було описано, що КВ репресує елементи 11. |23| Було описано, що повна втрата ТКЕХІ (генеративна делеція) приводить до аутоімунного захворювання (синдром Айкарді-Гут'єрес, АО5), яке пов'язане з активацією 11. (24)
Хоча було описано, що дані три регуляторні фактори грають роль у регуляції І 1, результати, представлені у даному описі, вперше демонструють, що неправильної регуляції комбінації даних трьох факторів достатньо, щоб забезпечити можливість активації ендогенних елементів
Ї1 у нормальних клітинах. Див. приклад 2. Більше того, у відповідності 3 даним винаходом запропонований перший опис пізнього клітинного старіння як окремої тимчасової, та до даного часу невідомої, стадії старіння клітин, для якої характерне підвищення експресії елементів І 1 та запуск відповіді ІЕМ-І. Див. приклад 1.
Накопичення цитоплазматичної кКДНК 11
Існування цитоплазматичної кКДНК 11 було відомо. Було показано, що одним її джерелом є мітохондрії. (25| Повідомлялося, що хромосомна ДНК "витікає" з ядер у цитоплазму у старих клітинах. (26) Її згодом назвали "цитоплазматичними фрагментами хроматину" (ЦФХ, ССР) (271 та пізніше описали її наявність у старих клітинах. (28) Проте, у жодному з даних повідомлень не згадували КТЕ та 11 як компоненти ЦФХ.
Результати у цьому описі показують не тільки те, що послідовності ДНК 1/1 виявлені у цитоплазмі старих клітин, але також що їх кількість більше, ніж у ядерних послідовностях ДНК.
Див. приклад 3. З цієї причини, раніше описане просте витіснення частини хромосомної ДНК з ядра у цитоплазму не може пояснити більшу кількість послідовностей І 1, що спостерігається тут.
Хоча раніше повідомляли, що кількість ДНК 1 була підвищена у клітинах, позбавлених
ТАЕХІТ (даб) (29|, та що кДНК 11, яка накопичується у клітинах з нокаутом ТКЕХ!1, була цитоплазматичної локалізації, ІЗОЇ АС є рідкісним аутоїмунним захворюванням, яке не пов'язане з віком. Навпаки, результати, представлені у даному описі, дозволяють прийти до висновку, що присутність цитоплазматичної ДНК 1 властива старим клітинам - одному з основних факторів, що стимулюють старіння організму та захворювання, пов'язані зі старінням.
Індукція ІЕМ-І та взаємовплив на імунну систему, посилення ЗА5Р бо Раніше повідомляли, що цитоплазматична ДНК (і, зокрема, ЦФХ) упізнається сенсорним сигнальним шляхом сбАБ/5ТІМО, який, отже, викликає запальний стан. ІЗ1)| У контексті старіння клітин даний прозапальний стан відомий як асоційований зі старінням клітин секреторний фенотип (ЗА5Р). У даних повідомленнях показали, що БА5Р щонайменше частково залежить від ЦФХ, оскільки нокдаун компонентів сигнального шляху сСОЗАБ/ЗТІМО зменшував 5АЗ5Р.
Також повідомляли, що відповідь ІЕМ-І є частиною даного прозапального каскаду. ІЗ2| Вище зазначено, що в жодному з даних попередніх повідомлень не пов'язували елементи І/1 з активацією 5БА5Р за допомогою ЦФХ.
Результати, представлені у даному описі, доводять, що ДНК 11 не тільки становить значну частину ЦФХ, яким збагачена цитоплазматична ДНК у порівнянні з ядерними послідовностями, але вона також функціонально значима для активації БА5Р. Зокрема, результати, представлені у даному описі, показують, що зменшення кількості цитоплазматичної ДНК 11, або за допомогою кКшШРНК до Ї1, або шляхом блокування зворотної транскрипції Ї1 за допомогою лікарських засобів - ІЗТ, зменшувало як відповідь ІЕМ-ЇІ, так ії БА5Р у старих клітинах. Важливо відзначити, що результати, представлені у даному описі, являють собою перший доказ, що підтверджує, що лікування за допомогою ІЗТ може ефективно обернути як ІЕМ-Ї, так і прозапальний ЗАБ5БР після того, як вони повністю встановилися у старих клітинах. Див. приклади
З та 4.
Усі попередні дослідження, що мають відношення до терапії, були обмежені перешкоджанням сигнальному шляху виявлення ДНК сОАБ/ЗТІМО, наприклад, що показують, що кКшШРНК проти компонентів шляху сОАБ/ЗТІМО негативно регулювала відповідь ІЕМ-І та
ЗАБР. ІЗ3,34| Хоча можна припустити, що застосування низькомолекулярних інгібіторів сигнального шляху ССАБ/ЗТІМО буде знижувальним чином регулювати 5А5Р, таке лікування призведе до підвищеної сприйнятливості до вірусних, бактеріальних інфекцій та інфікування іншими патогенами.
Підхід націлювання лікарських засобів ІЗТ у відповідності з даним винаходом на синтез ДНК
Ї1 звернений до кореня проблеми, так як він націлений на агент, який є початковою причиною (саму ДНК І), а не на наступні події процесингу, такі як сигнальний шлях виявлення ДНК
СОАБ/5ТІМО, або навіть ще більш далекі компоненти сигнальних шляхів інтерферону або імунітету. Автори даного винаходу розуміють, що всі дані наступні компоненти мають незамінні
Зо клітинні функції, і, отже, націлювання на них порушить, у деякому аспекті, нормальні фізіологічні процеси. З іншого боку, ДНК 11 являє собою унікальний "чужорідний" компонент, фармакологічному націлюванню на який можуть перешкоджати тільки "побічні" ефекти.
У останні роки стало ясно, що старіння клітин є одним з основних факторів, що сприяють старінню організму та пов'язаним зі старінням захворюванням. ІЗ5| Отже, присутній значний інтерес у "сенотерапевтичних засобах", які блокують шкідливий вплив старих клітин. (Зб)
Основні зусилля були спрямовані на "сенолітичні" лікарські засоби, які селективно знищують (Її, отже, видаляють) старі клітини з тканин. "Сеноморфіки" були класифіковані як невеликі молекули, які пригнічують старіючі фенотипи без знищення клітин. Ми вважаємо за краще називати такі лікарські засоби "сеностатичними" лікарськими засобами, щоб особливо підкреслити, що їх основна дія полягає у зупинці або блокуванні шкідливого впливу старих клітин, зокрема, ЗА5Р.
Результати у цьому описі демонструють, що у клітинах людини та у моделях на мишах ІЗТ є сеностатичні лікарські засоби, які обертають ЗАБР старих клітин і, отже, послаблюють пов'язаний з віком прозапальний стан. Результати у цьому описі також описують, які конкретно
ІЗТ, та у яких дозах, особливо ефективні для обернення ЗА5БР. Широка ефективність ІЗТ як сеностатичних лікарських засобів, які можуть лікувати безліч пов'язаних з віком станів, раніше не була описана у даній галузі.
Стимуляція пов'язаного з віком "стерильного" запалення
Стерильне запалення, також відоме як запальне старіння (іпПаттадіпод), є характерною ознакою старіння та чинником, що сприяє безлічі пов'язаних з віком захворювань. (37,38)
Результати у цьому описі свідчать про те, що активація елементів І 1 (та необов'язково інших
КТЕ) викликає запальне старіння, та що ЗТ Ї1 є підходящою мішенню для лікування пов'язаного з віком запалення та вікових розладів.
У цьому описі запропоновані конкретні приклади старих мишей, у яких пов'язані з віком патології можна обернути або щонайменше зменшити шляхом введення ІЗТ. Наприклад, показано, що НІЗТ ламівудин (також відомий як ЗТС або епівір) обертає або знижувальним чином регулює: - Панель маркерів ІЄМ-І та БАБ5БР, виміряних за допомогою ЗТ-КкПЛР у багатьох тканинах; - Інфільтрацію макрофагів у білу жирову тканину та тканину нирки, виміряну за допомогою 60 ІФ мікроскопії;
- Атрофію м'язів, виміряну за діаметром м'язового волокна; - Гломерулосклероз нирки, виміряний за допомогою патологічної оцінки забарвлених ШИК зрізів; - Атрофію адипоцитів, виміряну за допомогою мікроскопу за розміром клітин та шляхом аналізу за допомогою ЗТ-КПЛР ключових адипогенних генів; та - Термогенез, виміряний шляхом аналізу за допомогою ЗТ-КПЛР експресії Оср1.
Таким чином, у відповідності з даним винаходом запропоноване застосування ІЗТ у якості "сеностатичних" лікарських засобів, які здатні зупиняти або блокувати шкідливий вплив старих клітин, зокрема, 5АБ5Р, та попереджати або обертати пов'язані з віком запалення та розлади.
НУКЛЕОЗИДНІ ІНГІБІТОРИ ЗВОРОТНОЇ ТРАНСКРИПТАЗИ (НІЗТ)
НІЗТ являють собою активні інгібітори зворотної транскриптази, виявлені у ретровірусах, таких як вірус імунодефіциту людини (ВІЛ). Різні нуклеозидні інгібітори зворотної транскриптази можуть активуватися різним способом, але у них однаковий механізм дії. НІЗТ, як правило, активуються фосфорилюванням клітинними ферментами з утворенням трифосфатної форми.
Вона потім конкурує з клітинними трифосфатами, які є субстратами для провірусної ДНК, що продукується вірусною зворотною транскриптазою. НІЗТ були першим типом лікарських засобів, доступних для лікування вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-інфекції) та синдрому набутого імунодефіціту (СНІД).
У таблиці 8 представлений перелік звичайних схвалених лікарських засобів НІЗТ або комбінованих лікарських засобів НІЗТ, що застосовуються для лікування ВІЛ-інфекції та СНІДУ.
Вище описано, відповідно до способів винаходу, що НІЗТ можна застосовувати у якості "сеностатичних" лікарських засобів, які здатні зупиняти або блокувати шкідливий вплив старих клітин, зокрема, 5АБР, та запобігати або обертати пов'язані з віком запалення та розлади.
Лікарські засоби на основі НІЗТ, які можна застосовувати у способах даного винаходу, включають, але не обмежені перерахованими: Амдоксовір, Априцитабін (АТС), АТРИПЛАФ (ефавіренц/емтрицитабін/тенофовіру дизопроксил), БАРАКЛЮДО (ентекавір; ЕТМ), БІКТАРВІФ (біктегравір/оемтрицитабін/тенофовіру алафенамід), Ценсавудин (ІММ; ВМ5-986001; ОВР-601; фестинавір) КОМБІВІР'М (зидовудин/ламівудин), КОВІРАЦИЛ'"М (емтрицитабін; ЕТО),
БАРО/ЛЮХО (активний метаболіт БАРО-2,6-діамінопуриндіоксолан), ДЕСКОВІЄЮ
Зо (емтрицитабін/тенофовіру алафенамід), О-Б04ЕС (Дексельвуцитабін; Реверсет; ІМСВ-8721; ОРОС 817), ат 0 (2'-дезокси-3'-окса-4-тіоцитидин; ВСН-10652), Ельвуцитабін ЕМТРИВА"М (емтрицитабін), ЕПІВІР"М (ламівудин; ЗТС), ЕРаА (4"-етиніл-2-фтор-2-дезоксиаденозин; МК- 8591), ЕВІПЛЕРА"М (рилпівірин/емтрицитабін/тенофовіру дизопроксил), ГЕНВОЯФ (елвітегравір/кобицистат/емтрицитабін/тенофовіру алафенамід), ХІВІД'М (залцитабін; аас),
КІВЕКСА"М (абакавір/ламівудин), ЛОДЕНОЗИН"М (Р-йдА), ОДЕФСЕЙФ (рилпівірин/тенофовіру алафенамід/емтрицитабіну, ПРЕВЕОНФОФЕ (адефовіру дипівоксил), Рацивір, (СМ; ((/-)- емтрицитабін), РЕТРОВІР'М (зидовудин; 20ОМ; азидотимідин; АТ), Стампідин, СТРИБІЛДФ (Елвітегравір /кобіцистат/емтрицитабін/тенофовіру дизопроксил), ТЕНОФОВІР'М (ТОБ, різ-РросС
РМРА), ТРИУМЕКФ (долутегравір/абакавір/ламівудин), ТРИЗИВІР'"М (абакавір/ламівудин/зидовудин), ТРУВАДАФ (емтрицитабін/тенофовіру дизопроксил), ВЕМЛІДІФ (тенофовіру алафенамід; ТАЕ), ВІДЕКС"М (диданозин, аа), ВІРЕАД'М (тенофовіру дизопроксил),
ЗІАГЕНМ (абакавір; 159089), та ЗЕРИТ"М (ставудин; а4т).
У дозах, що застосовуються для терапії ВІЛ/СНІД, дані лікарські засоби можуть викликати широкий діапазон побічних дій. Звичайні побічні дії НІЗТ включають, серед іншого, токсичність для мітохондрій (пов'язану з інгібуванням мітохондріальної полімерази), нейропатію, панкреатит, стеатоз печінки та молочнокислий ацидоз, мієлосупресію, симптоматичну міопатію та кардіоміопатію. ЗОЇ Хоча НІЗТ можна застосовувати у дозах, схвалених для лікування
ВІЛ/СНІД, для попередження або лікування пов'язаних з віком запалення та розладів можна застосовувати більш низькі дози, щоб уникнути побічних дій, пов'язаних з більш високими дозами. У одному варіанті реалізації дозування, що застосовується для попередження або лікування пов'язаних з віком запалення та розладів, становить половину (50 95) дозування, схваленого для лікування ВІЛ/СНІД (див. Таблицю 9). У альтернативному варіанті реалізації застосовуване дозування становить 75 95 від дозування, схваленого для лікування ВІЛ/СНІД. У ще одному альтернативному варіанті реалізації застосовуване дозування становить 25 95 від дозування, схваленого для лікування ВІЛ/СНІД. У інших альтернативних варіантах реалізації застосовуване дозування становить 90 95, 80 Зо, 70 90, бО Зо, 40 У, З0 Зо, 20 95, або 10 95 від дозування, схваленого для лікування ВІЛ/СНІД. У інших альтернативних варіантах реалізації застосовувана доза становить від 0,1 до 99,5 905, від 10 до 90 905, від 20 до 80 905, від 25 до 75 95, від ЗО до 70 95, від 40 до 60 95 або від 45 до 55 95 від дозування, схваленого для лікування 60 ВІЛ/СНІД.
У деяких варіантах реалізації суб'єкту проводять тривале введення одного або більше лікарських засобів ІЗТ згідно з визначенням у даній заявці. У одному варіанті реалізації суб'єкта лікують впродовж періоду, що становить щонайменше 12 тижнів. У багатьох випадках тривале введення здійснюють впродовж щонайменше 4, 5, 6, 7, 8, 9 місяців або більше, або впродовж щонайменше 1, 2, 3, 5, 7 або 10 років або більше.
ПОВ'ЯЗАНІ З ВІКОМ РОЗЛАДИ
У зв'язку з тим, що старіння клітин є одним з основних факторів, що сприяють старінню організму та пов'язаним зі старінням захворюванням |40)Ї, способи у відповідності 3 даним винаходом можна застосовувати для попередження або лікування розладів або захворювань, які пов'язані зі старінням клітин, зокрема, у яких присутність старих клітин ймовірно робить шкідливу дію, шляхом введення одного або більше сеностатичних лікарських засобів ІЗТ.
Розлади або захворювання, які пов'язані зі старінням клітин, включають, але не обмежені перерахованими: хворобу Альцгеймера, 1(|41| бічний аміотрофічний склероз (БАС), атеросклероз, І421| хворобу Гентінгтона, втрату зору, втрату слуху, дегенеративні захворювання периферичної нервової системи, дисфункцію серцево-судинної системи, І43| атеросклероз, лобно-скроневу деменцію (ЛОД), розсіяний склероз (РОС), синдром Айкарді-Гут'єрес, прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП), викликані хіміотерапією небажані явища (наприклад, пригнічення функції кісткового мозку, кардіотоксичність, рецидив раку, тромби, втомлюваність),
Ї44і порушення функціонування гематопоетичних стовбурових клітин, І45| остеоартрит, (46) остеопороз, І(47| хворобу Паркінсона, (48) порушення фізичного функціонування, І49| фіброз легень, І50) старіння шкіри, загоєння ран та/або регенерацію тканин. (511
СПОСОБИ ЛІКУВАННЯ, ПОПЕРЕДЖЕННЯ ТА ОБЕРНЕННЯ ПОВ'ЯЗАНОГО 3 ВІКОМ
ЗАПАЛЕННЯ ЗА ДОПОМОГОЮ ІЗТ
Запропоновано спосіб лікування, попередження та обернення пов'язаного з віком запалення у пацієнта, який цього потребує, шляхом введення інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ) пацієнту, який цього потребує. Пов'язане з віком запалення може бути у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз, хвороба Паркінсона, хвороба Гентінгтона, втрата зору, втрата слуху, дегенеративні захворювання периферичної нервової системи та дисфункція серцево-судинної системи.
Зо У одному варіанті реалізації запропонований спосіб відтермінування або обернення прогресування патології, що лежить у основі пов'язаного з віком запального розладу, який включає введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості щонайменше одного інгібітору зворотної транскриптази (І3Т). У деяких варіантах реалізації пацієнт відчуває ослаблення одного або більше симптомів хвороби Альцгеймера у порівнянні з такими перед першим введенням ІЗТ пацієнтові.
У іншому варіанті реалізації запропонований спосіб попередження початку пов'язаного з віком запального розладу у пацієнта, у якого підозрюють наявність легкого когнітивного порушення, що включає введення щонайменше одного ІЗТ пацієнту, який цього потребує.
У деяких варіантах реалізації НІЗТ являє собою абакавір, ламівудин, зидовудин, емтрицитабін, тенофовіру дизопроксилфумарат, тенофовіру алафенамід, диданозин, ставудин, априцитабін, аловудин, дексельвуцитабін, амдоксовір, фосалвудин або ельвуцитабін. У інших варіантах реалізації ІЗТ являє собою абакавір (Зіаген), абакавір/ламівудин (Епзиком), абакавір/ламівудин/зидовудин (Тризивір), ламівудин/зидовудин (Комбівір), ламівудин (Епівір), зидовудин (Ретровір), емтрицитабін/тенофовіру дизопроксилфумарат (Трувада), емтрицитабін (Емтрива), тенофовіру дизопроксилфумарат (Віреад), емтрицитабін/тенофовіру алафенамід (Дескові), диданозин (Відекс), диданозин з пролонгованим вивільненням (Відекс ЕС) або ставудин (Зерит). У іншому варіанті реалізації НІЗТ являє собою ценсавудин.
У деяких варіантах реалізації щонайменше один ІЗТ являє собою ненуклеозидний інгібітор зворотної транскриптази (ННІЗТ). У деяких варіантах реалізації щонайменше один НІЗТ являє собою Ефавіренц (ЕРЕМ), Невірапін (МУР), Делавірдин (ОГ М), Етравірин або Рилпівірин.
У додатковому варіанті реалізації ІЗТ інгібує активність зворотної транскриптази І 1 у клітині, наприклад, у клітині головного мозку, пацієнта.
У випадках, коли ІЗТ є схваленим ЕБА лікарським засобом, ІЗТ можна вводити у терапевтично ефективних кількостях, які схвалені для терапевтичного застосування. У інших варіантах реалізації ефективні кількості можна визначити за допомогою не більше ніж проведення звичайного експерименту. Наприклад, ефективні кількості можуть бути у діапазоні від приблизно 1 нг/кг до приблизно 200 мг/кг, від приблизно 1 мкг/кг до приблизно 100 мг/кг або від приблизно 1 мг/кг до приблизно 50 мг/кг. Дозування композиції може являти собою будь-яке дозування, включаючи, але не обмежуючись приблизно 1 мкг/кг. Дозування композиції може 60 являти собою будь-яке дозування, включаючи, але не обмежуючись перерахованими:
приблизно 1 мкг/кг, приблизно 10 мкг/кг, приблизно 25 мкг/кг, приблизно 50 мкг/кг, приблизно 75 мкг/кг, приблизно 100 мкг/кг, приблизно 125 мкг/кг, приблизно 150 мкг/кг, приблизно 175 мкг/кг, приблизно 200 мкг/кг, приблизно 225 мкг/кг, приблизно 250 мкг/кг, приблизно 275 мкг/кг, приблизно 300 мкг/кг, приблизно 325 мкг/кг, приблизно 350 мкг/кг, приблизно 375 мкг/кг, приблизно 400 мкг/кг, приблизно 425 мкг/кг, приблизно 450 мкг/кг, приблизно 475 мкг/кг, приблизно 500 мкг/кг, приблизно 525 мкг/кг, приблизно 550 мкг/кг, приблизно 575 мкг/кг, приблизно 600 мкг/кг, приблизно 625 мкг/кг, приблизно 650 мкг/кг, приблизно 675 мкг/кг, приблизно 700 мкг/кг, приблизно 725 мкг/кг, приблизно 750 мкг/кг, приблизно 775 мкг/кг, приблизно 800 мкг/кг, приблизно 825 мкг/кг, приблизно 850 мкг/кг, приблизно 875 мкг/кг, приблизно 900 мкг/кг, приблизно 925 мкг/кг, приблизно 950 мкг/кг, приблизно 975 мкг/кг, приблизно 1 мг/кг, приблизно 5 мг/кг, приблизно 10 мг/кг, приблизно 15 мг/кг, приблизно 20 мг/кг, приблизно 25 мг/кг, приблизно 30 мг/кг, приблизно 35 мг/кг, приблизно 40 мг/кг, приблизно 45 мг/кг, приблизно 50 мг/кг, приблизно 60 мг/кг, приблизно 70 мг/кг, приблизно 80 мг/кг, приблизно 90 мг/кг, приблизно 100 мг/кг, приблизно 125 мг/кг, приблизно 150 мг/кг, приблизно 175 мг/кг, приблизно 200 мг/кг або більше. У інших варіантах реалізації дозування складає 1 мг - 500 мг. У деяких варіантах реалізації дозування складає 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140 або 150 мг. Дані дози можуть бути одиничними або розділеними та можуть вводитися один або більше разів на день. Наведені вище дозування є прикладами середнього випадку, але можуть бути індивідуальні випадки, у яких варто вводити більш високі або нижчі дозування, та вони входять у обсяг даного винаходу. На практиці лікар визначає терапевтично ефективні кількості та фактичну схему введення доз, яка найбільше підходить для окремого суб'єкта, які можуть змінюватися в залежності від віку, маси тіла та відповіді конкретного суб'єкта.
ЇЗТ можна вводить один, два або три рази на добу впродовж від 1 дня до кінця життя, або впродовж від 1 дня до 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9 або 10 або більше років, або доти, поки ІЗТ не викликає неприйнятні побічні дії або більше не буде приносити користь.
У пацієнта відстежують зміни у симптомах пов'язаного з віком запального захворювання. У одному варіанті реалізації спостерігається зменшення симптомів. У іншому варіанті реалізації симптоми залишаються приблизно такими ж, та немає ознак прогресування. По відношенню до хвороби Альцгеймера, такі симптоми включають втрату пам'яті, розміщення предметів не на тих
Зо місцях, забування назв місць чи об'єктів, повторення питань, меншу пристосованість до нових обставин, замішання, дезорієнтацію, обсесивну поведінку, компульсивну поведінку, марення, афазію, порушення сну, перепади настрою, депресію, тривогу, фрустрацію, збуджений стан, труднощі при виконанні просторових завдань, агнозію, труднощі при пересуванні, втрату маси, втрату здатності говорити, втрату короткочасної пам'яті або втрату довготривалої пам'яті.
Способи для контролювання та вимірювання будь-яких змін даних симптомів можна здійснити за допомогою стандартних способів або шляхом проведення звичайного експерименту.
У одному варіанті реалізації симптоми легкого когнітивного порушення та будь-яку зміну у симптомах хвороби Альцгеймера визначають, використовуючи критерії, запропоновані у ОЗМ-5.
У іншому варіанті реалізації симптоми легкого когнітивного порушення та будь-яку зміну у симптомах хвороби Альцгеймера визначають, використовуючи шкалу оцінки змін клініцистом на підставі опитування (СІВІС-рійи5). У іншому варіанті реалізації симптоми легкого когнітивного порушення та будь-яку зміну у симптомах визначають, використовуючи шкалу оцінки змін клініцистом на підставі опитування (СІВІС-ріив5).
Будь-яку зміну у симптомах можна відстежувати впродовж 1-36 місяців або більше, наприклад, впродовж 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25,26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 або 36 місяців.
У іншому варіанті реалізації у пацієнта відстежують зміну у патології, що лежить у основі хвороби Альцгеймера. У одному варіанті реалізації спостерігається ослаблення першопричинної патології. У іншому варіанті реалізації першопричинна патологія залишається приблизно на тому ж рівні та не спостерігаються ознаки прогресування.
У деяких варіантах реалізації будь-яку зміну у патології що лежить у основі хвороби, виявляють шляхом детектування біомаркеру до та після введення ІЗТ. У одному варіанті реалізації біомаркер являє собою р-амілоїд або білок Тай. У іншому варіанті реалізації біомаркер детектують за допомогою ПеЕТт-візуалізації. У іншому варіанті реалізації першопричинну патологію ідентифікують шляхом вимірювання об'єму головного мозку до та після введення ІЗТ.
У деяких варіантах реалізації першопричинна патологія обертається або затримується її прояв на 1-36 місяців, наприклад, на 1,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 або 36 місяців після першого введення 60 ІЗТ.
У деяких варіантах реалізації пацієнту також вводять щонайменше один другий терапевтичний агент, корисний для лікування симптомів пов'язаного з віком запального розладу. У одному варіанті реалізації пацієнтові вводять щонайменше один другий терапевтичний агент, корисний для лікування хвороби Альцгеймера. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою донепезил, галантамін, ривастигмін або мемантін. У іншому варіанті реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою антитіло, яке зв'язується з В-амілоїдом або білком Тац. У іншому варіанті реалізації зазначене антитіло зв'язується з В-амілоїдом та являє собою бапінейзумаб. У іншому варіанті реалізації зазначене антитіло зв'язується з білком Таи та являє собою АВВУ-8Е12. У іншому варіанті реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою вакцину проти В-амілоїду або білку Там. У іншому варіанті реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою агент, який знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду або Таи. У іншому варіанті реалізації другий терапевтичний агент знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду та являє собою інгібітор В-секретази 1 (ВАСЕ). У іншому варіанті реалізації інгібітор ВАСЕ являє собою СТ5-21166, верубецестат (МК 8931), ланабецестат (А2О3293) або І 2886721. У іншому варіанті реалізації другий агент знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду або змінює вміст у головному мозку Там та являє собою нікотинамід, або МРТОС211.
Зазначений щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна вводити окремо або разом у складі єдиної фармацевтичної композиції.
Якщо пов'язаний з віком запальний розлад являє собою БАС, тоді пацієнту можна вводити щонайменше один другий агент, корисний для лікування симптомів БАС. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий агент являє собою інгібітор інтегрази. У деяких варіантах реалізації інгібітор інтегрази являє собою ралтегравір, куркумин, похідні куркумину, цикорієву кислоту, похідні цікорієвої кислоти, 3,5-дикофеоїлхінову кислоту, похідні 3,5-дикофеоїлхінової кислоти, ауринтрикарбонову кислоту, похідні ауринтрикарбонової кислоти, складний ефір кавової кислоти та фенетилового спирту, похідні складного ефіру кавової кислоти та фенетилового спирту, тирфостин, похідні тирфостину, кверцетин, похідні кверцетину, 5-1360, зінтевір (АК-177), І -870812, та І -25 870810, МК-0518, ВМ5-538158 або С5КЗ364735С. |52)
У пацієнта можна відстежувати поліпшення симптомів БАС. Такі симптоми включають один або більше з таких симптомів: труднощі при ходьбі або здійсненні нормальних щоденних активностей, спотикання та падіння, слабкість ніг, стоп або щиколоток, слабкість рук або незграбність, невиразну мову або утруднення при ковтанні, м'язові судоми, судомні рухи рук, плечей або язика, неадекватний напад плачу, когнітивні зміни та зміни поведінки.
Будь-яку зміну у симптомах можна відстежувати впродовж 1-36 місяців або більше, наприклад, впродовж 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8,9, 10,11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 або 36 місяців. У деяких варіантах реалізації патологія, що лежить у основі, обертається або затримується її прояв на 1-36 місяців, наприклад, на 1, 2,
З3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 або 36 місяців після першого введення ІЗТ.
СОЛІ, ФАРМАЦЕВТИЧНІ КОМПОЗИЦІЇ ТА НАБОРИ
Способи у відповідності 3 даним винаходом можна здійснити шляхом введення щонайменше одного ІЗТ у вигляді чистої сполуки або у вигляді фармацевтичної композиції.
Введення фармацевтичної композиції або чистої сполуки ІЗТ можна здійснити до або після встановлення клінічного діагнозу розладу, пов'язаного із запаленням, пов'язаним з віком.
Звичайно фармацевтичні композиції стерильні та не містять токсичних, канцерогенних або мутагенних сполук, які будуть викликати небажану реакцію при введенні.
Додатково запропоновані набори, що містять щонайменше один ІЗТ та необов'язково щонайменше один другий терапевтичний агент, корисний для лікування або попередження розладу, пов'язаного із пов'язаним з віком запаленням, упаковані окремо або разом, та вкладиш з інструкціями щодо застосування даних активних агентів. У одному варіанті реалізації щонайменше один ІЗТ упакований окремо разом з інструкціями щодо введення разом з щонайменше одним другим терапевтичним агентом. Зазначені щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна вводити одночасно або послідовно, щоб досягти бажаного ефекту. Крім того, ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна вводити у одній композиції або у двох окремих композиціях.
Приклади щонайменше одного другого терапевтичного агенту, корисного для лікування хвороби Альцгеймера, який може знаходитися у наборі, включають донепезил, галантамін, ривастигмін та мемантин. Інші необов'язкові терапевтичні агенти, які можуть знаходитися у 60 наборі, включають антитіло, яке зв'язується з В-амілоїдом або білком Там. У одному варіанті реалізації зазначеним антитіло зв'язується з В-амілоїдом та являє собою бапінейзумаб. У іншому варіанті реалізації антитіло зв'язується з Там та являє собою АВВУ-8Е12.
У іншому варіанті реалізації набір може містити щонайменше один другий терапевтичний агент, який являє собою вакцину проти рВ-амілоїду або білку Та.
У іншому варіанті реалізації набір може містити щонайменше один другий терапевтичний агент, який знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду або білку Там. У деяких варіантах реалізації другий терапевтичний агент, який змінює або знижує вміст у головному мозку В-амілоїду, являє собою інгібітор В-секретази 1 (ВАСЕ). У певному варіанті реалізації інгібітор ВАСЕ являє собою СТ5 21166, верубецестат (МК-8931), ланабецестат (А2О3293) або
І у2886721, кожен з яких брав участь у клінічних випробуваннях для лікування хвороби
Альцгеймера.
У іншому варіанті реалізації набір може містити другий агент, який знижує або змінює вміст у головному мозку Таи та являє собою нікотинамід, або МРТОС211.
У деяких варіантах реалізації пацієнт страждає на БАС та набір додатково містить щонайменше один другий агент, корисний для лікування БАС. У інших варіантах реалізації ІЗТ упакований окремо разом з інструкціями щодо введення щонайменше одного другого терапевтичного агенту для лікування БАС. У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий терапевтичний агент для лікування БАС являє собою едаравон або рилузол.
У деяких варіантах реалізації щонайменше один другий агент являє собою інгібітор інтегрази. У деяких варіантах реалізації інгібітор інтегрази являє собою ралтегравір, куркумин, похідні куркумину, цикорієву кислоту, похідні цикорієвої кислоти, З,5-дикофеоїлхінову кислоту, похідні 3,5-дикофеоїлхінової кислоти, ауринтрикарбонову кислоту, похідні ауринтрикарбонової кислоти, складний ефір кавової кислоти та фенетилового спирту, похідні складного ефіру кавової кислоти та фенетилового спирту, тирфостин, похідні тирфостину, кверцетин, похідні кверцетину, 5-1360, зинтевір (АК-177), І-870812, та І -25 870810, МК-0518, ВМ5-538158 або сзКкЗ647350. 53
Другий терапевтичний агент вводять у кількості, достатній для надання їм бажаної терапевтичної дії. Діапазон ефективних доз для кожного необов'язкового терапевтичного агенту відомий у даній галузі, та необов'язковий терапевтичний агент вводять індивіду, який цього
Зо потребує, у межах таких встановлених діапазонів.
У обсяг даного винаходу входить отримання та застосування солей ІЗТ. У цій заявці "фармацевтично прийнятна сіль" відноситься до солей або цвіттер-іонних форм ІЗТ. Солі ІЗТ можна отримати на останніх етапах виділення та очищення сполук або окремо шляхом приведення у взаємодію сполуки з відповідною кислотою. Фармацевтично прийнятні солі ІЗТ можуть являти собою солі приєднання кислоти, утворені з фармацевтично прийнятними кислотами. Приклади кислот, які можна застосовувати для отримання фармацевтично прийнятних солей, включають неорганічні кислоти, такі як азотна, борна, соляна, бромистоводнева, сірчана та фосфорна кислоти, та органічні кислоти, такі як щавлева, малеїнова, бурштинова та лимонна кислоти. Лише деякі з прикладів солей ІЗТ включаються, але не обмежені перерахованими солями: гідрохлорид, гідробромід, гідройодид, сульфат, бісульфат, 2-гідроксиетансульфонат, фосфат, вторинний кислий фосфат, ацетат, адипат, альгінат, аспартат, бензоат, бісульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, диглюконат, гліцеринфосфат, гемісульфат, гептаноат, гексаноат, формат, сукцинат, фумарат, малеат, аскорбат, ізетіонат, саліцилат, метансульфонат, мезитиленсульфонат, нафтиленсульфонат, нікотинат, 2-нафталінсульфонат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенілпропіонат, пікрат, півалат, пропіонат, трихлорацетат, трифторацетат, фосфат, глутамат, бікарбонат, пара- толуолсульфонат, ундеканоат, лактат, цитрат, тартрат, глюконат, метансульфонат, етандисульфонат, бензолсульфонат та пара-толуолсульфонат. Крім того, доступні аміногрупи, присутні у ІЗТ, можуть бути кватернізовані метил-, етил-, пропіл- та бутилхлоридами, бромідами та йодидами; диметил-, діетил-, дибутил- та діамілсульфатами; децил, лаурил, міристил та стерилхлоридами, бромідами та йодидами; та бензил- та фенетилбромідами. У світлі описаного вище, мається на увазі, що будь-яка згадка про ІЗТ, що зустрічається у даній заявці, включає
ІЗТ, а також його фармацевтично прийнятні солі, гідрати або сольвати.
У обсяг даного винаходу входить отримання та застосування сольватів ІЗТ. Сольвати зазвичай істотно не змінюють фізіологічну активність або токсичність сполук та, відповідно, можуть діяти як фармакологічні еквіваленти. Термін "сольват" у даній заявці являє собою комбінацію, фізичну взаємодію та/або сольватацію сполуки відповідно до даного винаходу молекулою розчиннику, такою як, наприклад, дисольват, моносольват або гемісольват, де співвідношення молекули розчиннику до сполуки відповідно до даного винаходу становить 60 приблизно 2: 1, приблизно 1: 1 або приблизно 1: 2, відповідно. Така фізична взаємодія включає різні ступені іонних та ковалентних зв'язків, включаючи водневий зв'язок. У деяких випадках сольват можна виділити, наприклад, коли одна або більше молекул розчиннику включені у кристалічну гратку кристалічної твердої речовини. Таким чином, у обсяг терміну "сольват" входять як сольвати у рідкій фазі, так і сольвати, що піддаються виділенню. ІЗТ може бути присутнім у вигляді сольватованих форм з фармацевтично прийнятним розчинником, таким як вода, метанол та етанол, тапередбачається, що у обсяг даного винаходу входять як сольватована, так і несольватована форми ІЗТ. Один тип сольвату являє собою гідрат. "Гідрат" відноситься до конкретної підгрупи сольватів, у якій молекула розчиннику являє собою воду.
Сольвати зазвичай можуть функціонувати як фармакологічні еквіваленти. Отримання сольватів відомо у даній галузі. Див., наприклад, Саїга та інш. (2004), (54| у якій описане одержання сольватів флуконазолу з етилацетатом та водою. Аналогічне одержання сольватів, гемісольватів, гідратів та тому подібних описані у Мап Топаег та інш. (2004) |55| та Віпобат та інш. (2001). І56|Ї Звичайний необмежуючий процес отримання сольвату включатиме розчинення щонайменше одного ІЗТ або щонайменше одного другого терапевтичного агенту у бажаному розчиннику (органічному, воді або їх суміші) при температурах вище 20 "С до приблизно 25 "С, потім охолодження розчину при швидкості, достатній для утворення кристалів, та виділення кристалів за допомогою відомих способів, наприклад, фільтрації. Аналітичні методики, такі як інфрачервона спектроскопія, можна застосовувати для підтвердження присутності сольвату у кристалі сольвату.
Щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент звичайно вводять у суміші з фармацевтичним носієм з одержанням фармацевтичної композиції, вибраної з урахуванням передбачуваного шляху введення та стандартної фармацевтичної практики.
Фармацевтичні композиції для застосування у відповідності 3 даним винаходом складають звичайним способом, застосовуючи один або більше фізіологічно прийнятних носіїв, що містять допоміжні речовини та/або добавки, які полегшують обробку щонайменше одного ІЗТ та щонайменше одного другого терапевтичного агенту.
Дані фармацевтичні композиції можна виробляти, наприклад, за допомогою звичайних процесів змішування, розчинення, гранулювання, дражування, емульгування, інкапсулювання, укладення у оболонку або ліофілізації. Відповідний склад залежить від обраного шляху
Зо введення. Коли терапевтично ефективну кількість щонайменше одного ІЗТ та/або щонайменше одного другого терапевтичного агенту вводять перорально, композиція зазвичай знаходиться у формі таблетки, капсули, порошку, розчину або еліксиру. При введенні у формі таблетки композиція може додатково містити твердий носій, такий як желатин або ад'ювант. Пігулка, капсула та порошок містять від приблизно 0,01 95 до приблизно 9595 та переважно від приблизно 1 95 до приблизно 50 95 щонайменше одного ІЗТ та щонайменше одного другого терапевтичного агенту. При введенні у рідкій формі можна додати рідкий носій, такий як вода, нафтопродукт або масла тваринного або рослинного походження. Рідка форма композиції може додатково містити фізіологічний сольовий розчин, розчини глюкози або інших сахаридів, або гліколі. При введенні у рідкій формі композиція містить від приблизно 0,1 95 до приблизно 90 95, та переважно від приблизно 1 95 до приблизно 50 95, за масою, щонайменше одного ІЗТ та щонайменше одного другого терапевтичного агенту.
Коли терапевтично ефективну кількість щонайменше одного ІЗТ та щонайменше одного другого терапевтичного агенту вводять шляхом внутрішньовенної, шкірної або підшкірної ін'єкції зазначена композиція знаходиться у формі апірогенного прийнятного для парентерального введення водного розчину. Отримання таких прийнятних для парентерального введення розчинів з відповідним урахуванням рн, ізотонічності, стабільності та тому подібного, знаходиться у межах компетенції у даній галузі. Бажана композиція для внутрішньовенної, шкірної або підшкірної ін'єкції зазвичай містить ізотонічне середовище.
Щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна легко об'єднати з фармацевтично прийнятними носіями, добре відомими у даній галузі. Стандартні фармацевтичні носії описані у Кетіпдіоп'є Рпагтасеціїса! зсіепсев. І57| Такі носії дозволяють включати активні агенти у форму таблеток, пігулок, драже, капсул, рідин, гелів, сиропів, суспензій, суспензій та тому подібні форми для перорального прийому всередину суб'єктом, якого лікують. Фармацевтичні композиції для перорального застосування можна отримати шляхом додавання щонайменше одного ІЗТ та/"або щонайменше одного другого терапевтичного агенту до твердої допоміжної речовини, необов'язково перемелювання отриманої у результаті цього суміші та обробку суміші гранул, після додавання відповідних добавок, за необхідності, з отриманням таблеток або серцевин драже. Підходящі допоміжні речовини включають, наприклад, наповнювачі та препарати целюлози. За необхідності можна додати дезінтегруючі бо агенти.
Щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна включити до складу для парентерального введення шляхом ін'єкції, наприклад, у формі болюсної ін'єкції або безперервної інфузії. Склади для ін'єкції можуть бути представлені у одиничній лікарській формі, наприклад, у ампулах або у багатодозових контейнерах з доданим консервантом.
Композиціям можна надавати такі форми як суспензії, розчини або емульсії у маслянистих або водних середовищах, та вони можуть містити такі агенти для отримання лікарської форми, як суспендуючі, стабілізуючі та/або диспергуючі агенти.
Фармацевтичні композиції для парентерального введення містять водні розчини активного агенту у водорозчинній формі. Крім того, суспензії щонайменше одного ІЗТ та щонайменше одного другого терапевтичного агенту можна отримати у вигляді відповідних маслянистих суспензій для ін'єкції. Підходящі ліпофільні розчинники або середовища включають жирні масла або синтетичні ефіри жирних кислот. Водні суспензії для ін'єкції можуть містити речовини, які підвищують в'язкість суспензії. Необов'язково суспензія також може містити відповідні стабілізатори або агенти, які підвищують розчинність сполук та дозволяють отримання високо концентрованих розчинів. У якості альтернативи, композиція у відповідності з даним винаходом може бути у формі порошку для розведення у підходящому середовищі, наприклад, стерильній апірогенній воді, перед застосуванням.
Щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент також можна включити до складу ректальних композицій, таких як супозиторії або мікроклізми з утриманням, наприклад, що містять звичайні основи для супозиторіїв. Додатково до складів, описаних раніше, щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент також можна включити до складу у вигляді депо-препарату. Такі склади тривалої дії можна вводити шляхом імплантації (наприклад, підшкірної або внутрішньом'язової) або шляхом внутрішньом'язової ін'єкції Таким чином, наприклад, щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна включити до складу з відповідними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, у вигляді емульсії у підходящому маслі) або іонообмінними смолами.
Зокрема, щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент можна вводити перорально, букально або сублінгвально у формі таблеток, що містять допоміжні речовини, такі як крохмаль або лактоза, або у капсулах або капсулах яйцевидної форми, або
Зо окремо, або у суміші з допоміжними речовинами, або у формі еліксирів або суспензій, що містять ароматизатори або фарбувальні агенти. Такі рідкі препарати можна отримати з фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, такими як суспендуючі агенти.
Щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент також можна вводити шляхом парентеральної ін'єкції, наприклад, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, підшкірно або внутрішньокоронарно. Для парентерального введення щонайменше один ІЗТ та щонайменше один другий терапевтичний агент зазвичай застосовують у формі стерильного водного розчину, який може містити інші речовини, наприклад, солі або моносахариди, такі як маніт або глюкоза, щоб зробити розчин ізотонічним крові.
Деякі варіанти реалізації технології, описаної у даній заявці, можна визначити відповідно до будь-якого з наступних пронумерованих абзаців:
Спосіб лікування, попередження та/або обернення пов'язаного з віком запалення у пацієнта, який цього потребує, що включає введення терапевтично ефективної кількості інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ) пацієнту, який цього потребує, який відрізняється тим, що ІЗТ включає ценсавудин або ельвуцитабін.
Спосіб відповідно до абзацу 1, який відрізняється тим, що пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз (БАС), хвороба Паркінсона, хвороба Гентінггона, втрата зору, втрата слуху, дегенеративні захворювання периферичної нервової системи, або дисфункція сердечно-судинної системи, лобно-скронева деменція (ЛОД), розсіяний склероз (РОС), синдром Айкарді-Гут'єрес, прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП), остеоартрит, старіння шкіри, атеросклероз, викликані хіміотерапією небажані явища, розлад функціонування гематопоетичних стовбурових клітин, остеопороз, розлад фізичного функціонування та/або фіброз легень, - або у пацієнта, який потребує загоєння ран або регенерації тканин.
Спосіб відповідно до абзацу 1, який відрізняється тим, що пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера.
Спосіб відповідно до абзацу 1, який відрізняється тим, що пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є БАС.
Спосіб затримки прояву або обернення прогресування патології що лежить у основі розладу, викликаного пов'язаним з віком запаленням, що включає введення пацієнту, який бо цього потребує, терапевтично ефективної кількості інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ),
причому зазначений ІЗТ включає ценсавудин або ельвуцитабін.
Спосіб відповідно до абзацу 5, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера або БАС та відчуває ослаблення одного або більше симптомів хвороби
Альцгеймера або БАС у порівнянні з такими перед першим введенням пацієнту.
Спосіб відповідно до абзацу б, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та один або більше симптомів включають втрату пам'яті, розміщення предметів не на тих місцях, забування назв місць або об'єктів, повторення питань, меншу пристосованість до нових обставин, замішання, дезорієнтацію, обсесивну поведінку, компульсивну поведінку, марення, афазію, порушення сну, перепади настрою, депресію, тривогу, фрустрацію, збуджений стан, труднощі при виконанні просторових задач, агнозію, труднощі при пересуванні, втрату маси, втрату здатності говорити, втрату короткочасної пам'яті або втрату довготривалої пам'яті.
Спосіб відповідно до абзацу 6, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та зменшення одного або більше симптомів оцінюють у відповідності з ОЗ5М-5.
Спосіб відповідно до абзацу 6, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають, використовуючи когнітивну субшкалу шкали оцінки важкості хвороби Альцгеймера (АБАБ-соа).
Спосіб відповідно до абзацу 6, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають, використовуючи шкалу оцінки змін клініцистом на підставі опитування (СІВІС-ріив5).
Спосіб відповідно до абзацу б, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають, використовуючи шкалу оцінки повсякденної діяльності (А.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 6-11, який відрізняється тим, що зменшення симптомів відбувається впродовж 1-36 місяців.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 6-11, який відрізняється тим, що будь-яку зміну у першопричинній патології виявляють шляхом детектування біомаркеру до та після введення ІЗТ.
Спосіб відповідно до абзацу 13, який відрізняється тим, що біомаркер являє собою р-амілоїд або білок Тац.
Зо Спосіб відповідно до абзаців 13 або 14, який відрізняється тим, що біомаркер детектують за допомогою ПЕТ -візуалізації.
Спосіб відповідно до абзаців 13 або 14, який відрізняється тим, що біомаркер детектують шляхом вимірювання у спинномозковій рідині.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 6-11, який відрізняється тим, що першопричинну патологію ідентифікують шляхом вимірювання об'єму головного мозку до та після введення ІЗТ.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 6-17, який відрізняється тим, що першопричинну патологію обертають або відтерміновують на 1-36 місяців.
Спосіб попередження початку хвороби Альцгеймера у пацієнта, у якого підозрюють наявність легкого когнітивного розладу, що включає введення пацієнту, який цього потребує, терапевтично ефективної кількості інгібітору зворотної транскриптази (ІЗТ), причому зазначений
ІЗТ включає ценсавудин або ельвуцитабін.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-19, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера або легкий когнітивний розлад, та додатково включає введення щонайменше одного другого терапевтичного агенту, корисного для лікування симптомів хвороби Альцгеймера.
Спосіб відповідно до абзацу 20, який відрізняється тим, що щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою донепезил, галантамін, ривастигмін або мемантин.
Спосіб відповідно до абзацу 20, який відрізняється тим, що щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою антитіло, яке зв'язується з В-амілоїдом або білком Таиц.
Спосіб відповідно до абзацу 22, який відрізняється тим, що антитіло зв'язується з рД- амілоїдом та являє собою бапінейзумаб.
Спосіб відповідно до абзацу 22, який відрізняється тим, що антитіло зв'язується з білюом Таи та являє собою АВВМУ-8Е12.
Спосіб відповідно до абзацу 20, який відрізняється тим, що щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою вакцину проти В-амілоїду або білку Та.
Спосіб відповідно до абзацу 20, який відрізняється тим, що щонайменше один другий терапевтичний агент являє собою агент, який знижує або змінює вміст у головному мозку Д- амілоїду або Там. 60 Спосіб відповідно до абзацу 26, який відрізняється тим, що другий терапевтичний агент знижує або змінює вміст у головному мозку В-амілоїду та являє собою інгібітор Д-секретази 1 (ВАСЕ).
Спосіб відповідно до абзацу 27, який відрізняється тим, що інгібітор ВАСЕ являє собою СТ5- 21166, верубецестат (МК-8931), ланабецестат (А2ОЗ3293) або І 2886721.
Спосіб відповідно до абзацу 26, який відрізняється тим, що другий агент знижує або змінює вміст у головному мозку Таи та являє собою нікотинамід, або МРТОС211.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1, 2 або 4, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на БАС, та який додатково включає введення щонайменше одного другого агенту, корисного для лікування БАС.
Спосіб відповідно до абзацу 30, який відрізняється тим, що лікарський засіб, корисний для лікування БАС, являє собою едаравон або рилузол.
Спосіб відповідно до абзацу 30, який відрізняється тим, що щонайменше один другий агент являє собою інгібітор інтегрази.
Спосіб відповідно до абзацу 32, який відрізняється тим, що інгібітор інтегрази являє собою ралтегравір, куркумин, похідні куркумину, цикорієву кислоту, похідні цикорієвої кислоти, 3,5- дикофеоїлхінову кислоту, похідні 3,5-дикофеоїлхінової кислоти, ауринтрикарбонову кислоту, похідні ауринтрикарбонової кислоти, складний ефір кавової кислоти та фенетилового спирту, похідні складного ефіру кавової кислоти та фенетилового спирту, тирфостин, похідні тирфостину, кверцетин, похідні кверцетину, 5-1360, зинтевір (АК-177), І/-870812, та 1-25 870810, МК-0518, ВМ5-538158 або С5К364735С.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-33, який відрізняється тим, що оцінюють наявність у пацієнта одного або більше симптомів або патології захворювання через 1-36 місяців після першого введення ІЗТ пацієнту.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-34, який відрізняється тим, що ІЗТ інгібує активність зворотної транскриптази І 1 у клітині пацієнта.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-35, який відрізняється тим, що ІЗТ являє собою ельвуцитабін.
Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-35, який відрізняється тим, що ІЗТ являє собою ценсавудин.
Зо Спосіб відповідно до будь-якого одного з абзаців 1-35, який додатково включає введення щонайменше одного другого терапевтичного агенту пацієнту.
Спосіб відповідно до абзацу 38, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на хворобу
Альцгеймера, та щонайменше один другий терапевтичний агент корисний для лікування симптомів хвороби Альцгеймера.
Спосіб відповідно до абзацу 38, який відрізняється тим, що пацієнт страждає на бічний аміотрофічний склероз (БАС), та щонайменше один другий терапевтичний агент корисний для лікування БАС.
Приклади
Даний винахід тепер описано у загальних рисах, його буде легше зрозуміти, посилаючись на наступні приклади, які включені у дану заявку виключно з метою ілюстрування деяких аспектів та варіантів реалізації винаходу та не призначені для обмеження цього винаходу.
МЕТОДИ
Культивування клітин
У даному дослідженні використовували декілька різних штамів нормальних фібробластів людини. Клітини ГЕ1 отримували з ембріональної тканини легені, як було описано. ІБ58) Дані клітини безперервно використовувались у нашій лабораторії з моменту їх виділення у 1996 році.
Для даного дослідження вилучали та використовували вихідні зразки, які були заморожені у 1996 році та безперервно зберігалися у нашій лабораторії. Клітини ІМАЕ-90 та УМІ-38 отримали з
АТОСС. Жодна з даних ліній клітин не перерахована у базі даних Міжнародного комітету з аутентифікації клітинних ліній (ІСІ АС). Дані лінії нормальних фібробластів культивували, використовуючи фізіологічні умови вмісту кисню (92,5 95 М2, 5965 002, 2,595 О2), у поживній суміші Хема Е-10 (Тпепто Зсіепійіс) з 15 96 фетальною бичачою сироваткою (ФБС, Нусіопе).
Середовище додатково доповнювали І! -глутаміном (2 мМ), пеніциліном та стрептоміцином. І59)
Культури клітин періодично досліджували на наявність зараження мікоплазмою за допомогою набору для детектування мікоплазми МусоАеткв (І опа).
Для отримання реплікативно старих (РЕС) клітин, культури ГЕ1 серійно розмножували до припинення проліферації. При кожному пасажі після досягнення 80 956 конфлюентності клітини трипсинізували та розбавляли 1:4. Отже, кожен пасаж еквівалентний приблизно двом подвоєнням популяції. У культурах ранніх пасажів час між пасажами був постійним та становив бо приблизно З дні. У міру наближення культурами до старіння час між пасажами поступово збільшувалася. Інтервал у 2-3 тижні свідчив про те, що культура перебувала на передостанньому пасажі. У цей момент після досягнення 8095 конфлюентності клітини пересівали при розведенні 1:2 та даний момент часу позначали як останній пасаж (точка А на
Фіг. 2а). Деякий ріст клітин зазвичай ще відбувається у наступні 2-3 тижні, але культури не досягають 80 95. У даній схемі експерименту більшість клітин у культурі входять у стан старіння впродовж 3-4-тижневого вікна, середина якого знаходиться грубо близько моменту останнього пасажу (сірий стовпчик на Фіг. 2а). У точці В (4 тижні) культури трипсинізували та пересівали, як описано, ІБОЇ щоб видалити невелику фракцію збережених клітин з контактним інгібуванням.
Культури знову пересівали у точці С (8 тижнів).
Викликаного онкогеном старіння клітин (ВОС) досягали шляхом інфікування проліфберуючих клітин ГЕ1 плазмідою ріепіі СММ Казм12 Мео (Адддепе, плазміда Мо 22259). Освіта лентивірусних частинок та процедура інфікування описані нижче. Після закінчення інфікування клітини пересівали при 15-20 95 конфлюентності та проводили селекцію за допомогою (5418 при концентрації 250 мкг/мл, яку постійно підтримували до завершення експерименту. Середовище міняли кожні З дні до збору культур у зазначені моменти часу. Викликаного стресом передчасного старіння клітин (ВСПС) досягали шляхом опромінення рентгенівськими променями у дозі 20 Гр при швидкості 87 сГр/хвил. у одній фракції, застосовуючи джерело гамма-випромінювання цезій-137 (Могаіїоп Саттасеї 40). Клітини були конфлюентні на 15-20 95 на момент опромінення. Середовище замінювали негайно після опромінення та з інтервалами у
З дні після цього. Клітини 2937 (Сіопіесі)) використовували для упаковки лентивірусних векторів та культивували їх при 37 "С у ОМЕМ з 10 95 ФБС в умовах нормального вмісту кисню (повітря, доповнене 5 95 СОг).
Інгібітори зворотної транскриптази (ІЗТ)
Усі ІЗТ (ламівудин, ЗТС; зидовудин, АТ; абакавір, АВС; емтрицитабін, ТС), використовувані у даному дослідженні, були фармацевтичної чистоти (ШОР) та були отримані від А!йгобіпдо Ріпапта, Хайдарабад, Індія. Для одержання тризивіру (ТМ) його компоненти (АВС, АЛІ та ЗТС) об'єднували у підходящих кількостях.
Умови утримання мишей
Мишей С57ВІ/62У обох статей отримували з колоній старих гризунів з Національного
Зо інституту з проблем старіння (МІА) (611 у віці 5 та 18 місяців. Тварин у віці 5 місяців умертвляли після короткочасного (впродовж 1 тижня) періоду акліматизації, різні тканини збирали, швидко заморожували у І М2 та зберігали при -80 "С. Тварин у віці 18 місяців поміщали до досягнення ними бажаного віку. Мишей поселяли у спеціальний вільний від патогенів сертифікований
Міжнародною асоціацією з атестації та акредитації утримання лабораторних тварин (АААГАС) віварій бар'єрного типу. Клітки, устілку (устілка з деревини листяних порід Запі-спір) та корм (Ригіпа Гар Спом/ 5010) стерилізували шляхом автоклавування. Корм та воду (також стерилізували) надавали без обмежень. Використовували цикл світла/темноти по 12 годин (у 7 ранку світло вмикали, у 7 вечора вимикали). Підтримували температуру 70 "Е та вологість 50 95.
Всіх тварин оглядали щоденно та зважували раз на тиждень. У пробному експерименті три групи по 10 тварин у кожній лікували ЗТС, розчиненим у питній воді (1,5 мг/мл, 2,0 мг/мл, 2,5 мг/мл) безперервно починаючи з 18 місяців і до умертвіння у 24 місяці. Четвертій (контрольній) групі давали ту ж воду без лікарського засобу. Не спостерігали значної відмінності у поведінці, масі тіла або виживаності між 4 групами впродовж всього експерименту. Один раз під час експерименту (у віці 20 місяців) у тварин одноразово брали приблизно 70 мкл крові з хвостової вени. Зібрану плазму пересилали у Центр клінічної фармакології та аналітичної хімії СЕАК університету Північної Кароліни для аналізу ЗТС. Для групи 2 мг/мл концентрація ЗТС у плазмі в середньому складала 7, мкМ. Дану дозу лікарського засобу вибрали для подальших експериментів, щоб імітувати терапевтичну дозу проти ВІЛ у людини (300 мг на добу, 5-8 мкМ у плазмі). (б2| Для експериментів, представлених у даному повідомленні, тварини старіли всередині лабораторії до досягнення ними віку 26 місяців. Потім їх довільно розподіляв на дві групи технічний спеціаліст, який не був засліплений у відношенні зовнішнього вигляду або інших особливостей тварин. Одну групу лікували впродовж 2 тижнів 2 мг/мл ЗТС у питній воді, а іншій (контрольній) групі давали ту ж воду без лікарського засобу, яку вводили тим же способом.
Після закінчення періоду лікування всіх тварин умертвляли та збирали з них тканини, як описано вище. Усіх тварин з обох груп включили у всі наступні експерименти. Експеримент проводили у окремих випадках на самцях та самках тварин. Проводили нелетальне опромінення всього організму (6 Гр), як описано, І6З| та зразки тканин тримали на сухому льоді.
ПЛР
Для всіх експериментів використовували пристрій АВІ МіїА 7 (Арріїеа Віозуз(етв5). Кількісну бо ПЛР ДНК проводили, застосовуючи систему ТадмМап (Арріїеа Віозузі(етв), як описано у Сошаї та інш. (2009). (64| 100 пг очищеної геномної ДНК використовували із зазначеними праймерами (див. таблицю 1). Кількісну ПЛР із зворотною транскрипцією (З3Т-КПЛР) РНК проводили, застосовуючи систему ЗУВК Сгеєп (Аррій Віозубієт5). Поліаденільовану РНК використовували у всіх експериментах, у яких оцінювали транскрипцію елементів 11, та загальну РНК використовували для всіх інших генів. Загальну РНК отримували, застосовуючи реагент Тризол (Іпмігодеп). Полі(А)-РНК виділяли із загальної РНК, застосовуючи модуль для виділення полі(А)-мМРНК за допомогою магнітних гранул МЕВМехі (Мем; Епдіапа ВіоїІабв).
Проводили зворотну транскрипцію 1 мкг загальної РНК або 10 нг полі(А)-РНК з одержанням
КДНК у 50 мкл реакційної суміші, застосовуючи набір ТадМап (Арріїеа Віозуєіетв). Для того щоб оцінити ланцюг-специфічну транскрипцію, випадкові праймери у реакції ЗТ заміняли на ланцюг- специфічний праймер до цільової РНК. 1 мкл кожної реакційної суміші ЗТ використовували у наступних реакціях кількісної ПЛР. ЗАРОН використовували у якості контролю для нормування у експериментах з клітинами людини. Середнє арифметичне значення для Сарай та двох додаткових контролів (Н5ро0 та бЗи5В) використовували для нормування експериментів ЗтТ-
КПЛР з тканинами мишей, за виключенням печінки, яку нормували на Нер9О0 та бСи5В. Для вимірювання транскрипції 1 зразки полі(А)-РНК ретельно розщеплювали вільною від РНКаз
ДНКазою (Сіадеп) перед синтезом кКДНКб. Ефективність розщеплення ДНКазою оцінювали із застосуванням контролів без використання ферменту ЗТ.
Розробка праймерів для ПЛР
Набори праймерів з 1 по 5 (таблиця 1, амплікони А-Е на фіг. 165) до Ї1 людини були розроблені таким чином, щоб переважно ампліфікувати елементи підсімейств специфічного для людини ІТ НЗ5 та еволюційно недавнього специфічного для приматів І 1РА(2-6), як описано далі.
По-перше, отримували консенсусні послідовності елементів Ї1Н5 та І ТРА2-І 1РАб з Кербразе (Дослідницький інститут генетичної інформації (Сепеїїс Іптогтайоп Кезеагсп Іпбзійше І651)). По- друге, отримували консенсусну послідовність даних шести послідовностей за допомогою інструменту для множинного вирівнювання послідовностей СіІивіа! Отеда. І6Б6,67| Потім здійснювали розробку праймерів на загальному консенсусі за допомогою Ргітег3 та ВІ А5Т, застосовуючи інструмент Ргітег-ВІАЗТ МеСВІ. І68,69| Пари праймерів до 1/1 оцінювали проти їх мішеней, застосовуючи інструмент Іп-Зіїсо РСК, І70)Ї на останній зборці геному (п938) з
Зо мінімальним ідеальним співпадінням на 3'-кінці кожного праймеру, рівним 15. Праймери до
ВРЗ2 (набір праймерів 6, амплікон Е на фіг. 15) були розроблені Соишга! та інш. (2009), щоб вони переважно націлювалися на І! 1Н5. Праймери для оцінки транскрипції активних елементів І1 миші (набір праймерів 37, таблиця 1) розробляли на об'єднаній консенсусній послідовності сімейств І 1 МаА та І 117, отриманій з Кербазе, та перевіряли, як описано вище. Пари праймерів до 11, що перекривають усю довжину даних елементів (набори праймерів 48-50), були розроблені із застосуванням тієї ж стратегії. Пари праймерів, специфічні до трьох активних сімейств елементів Ї1 миші (набори праймерів 51-53), були розроблені з використанням поліморфізмів у області 5-НТО. Аналіз за допомогою ЗТ-КПЛР. транскрипції Ї1 проводили на очищеній полі(А)-РНК, застосовуючи спосіб ЗУВЕ. Огееп. Для всіх інших (не 11) генів, кожен раз, коли це було можливо, праймери були відділені щонайменше одним інтроном у послідовності геномної ДНК (як зазначено у таблиці 1). Праймери до сімейств ІЕМ-альфа людини були розроблені проти консенсусної послідовності для всіх послідовностей генів ІЕМ-альфа людини (ІЄМАТ, ІЕМАг, ІРМА4, ІРМАБ, ІЕМАб, ІЄМА?7, ІРМАВ, ІЕМАТО, ІРМАТ3З, ІРМА14, ІРМАТ16, ІЄМА17,
ІЕМА21), згенерованої за допомогою інструменту для множинного вирівнювання послідовностей
Сіиєта! Отеда. Усі праймери проти мишачих мішеней були розроблені, як описано вище, та представлені у таблиці 1. Послідовності праймерів, які відповідають консенсусу для всіх генів сімейства ІРМ-альфа миші, а також гену ІЕМВІ1, були отримані з публікації Сашієг та інш. Г711
Для вимірювання відносного числа копій 1 у геномі (клітини людини) використовували мультиплексний спосіб ТадМап, розроблений Сошаі та інш. (2009) (72)|. Дані праймери перераховані як набір Моб та набір Ме7 (з відповідними зондами МІС та ЄЕАМ) у таблиці 1.
Імунопреципітація хроматину
Усі експерименти СПІР проводили, застосовуючи набір для СПІР з центрифужною колонкою
Спготаїгар (Рогмаї). Коротко, 2х109 клітин перехресно зв'язували у культуральних чашках за допомогою 195 формальдегіду (10 хвил., кімнатна температура), реакцію гасили гліцином, промивали двічі льодяним ФБР (що містить інгібітор протеаз) та, нарешті, зшкрябували у мікроцентрифужну пробірку. Осади клітин ресуспендували у 0,4 мл гіпотонічного буферу та інкубували впродовж 10 хвил. на льоду. Ядра осаджували центрифугуванням, ресуспендували у 0,3 мл лізуючого буферу та руйнували ультразвуком, застосовуючи пристрій Віогиріог ОСО- 200 (Оіадепоаеє) із встановленим імпульсом "високий" (30 сек, а потім 30 сек спокою) впродовж бо сумарного часу 10 хвил. Екстракти центрифугували у мікроцентрифузі (максимальна швидкість,
Зо хвил., 4 "С), щоб видалити уламки клітин, супернатанти переносили у нові пробірки та зберігали при -80 "С. Кількість екстракту, що містить 2 мкг ДНК, змішували з 4 мкг антитіла та завантажували на твердофазну матрицю з білком А Спготаїгар. Імунокомплексам дозволяли сформуватися впродовж ночі при 4 "С при легкому струшуванні, після чого зразки промивали та 5 елюювали, слідуючи протоколу виробника. ДО кролика та 1 95 вхідної ДНК використовували у якості контролів. 1 мкл імунопреципітованої ДНК використовували у кожній реакції кількісної
ПЛР.
Осадження ВгаШ
Для отримання клітин у спокої проліферуючі клітини ростили до 50 95 конфлюентності, замість додавання сироватки у середовище використовували 0,195 ФБС та інкубацію продовжували до моменту збору. Клітини у спокої та старі клітини безперервно мітили впродовж двох тижнів бромдезоксиуридіном (ВгаШ Іабеїїпуд геадепі, Тпепто Ріхпег), слідуючи протоколу виробника для мічення культивованих клітин. Клітини збирали та підраховували: обробляли по 5х10» клітин на умову. Геномну ДНК очищали шляхом екстракції фенолом- хлороформом, обробляли РНКазою А, а потім розщепляли, застосовуючи пристрій Віогиріог
ИСО-200 (встановлений імпульс "низький", 30 сек. включений та 30 сек вимкнений, всього 10 хвил.). Пробірки з ДНК інкубували у термоблоці (100 "С) впродовж рівно однієї хвилини, а потім швидко заморожували у рідкому азоті. Пробіркам дозволяли розморозитися при кімнатній температурі та додавали по 1 мкг очищеного антитіла проти ВгаЦШ |ВО Ріапгтіпдеп, Мо у каталозі 555627| на пробірку разом з магнітними гранулами з білком А/5 та буфер для розведення для
СПІР. Імунні суспензії інкубували впродовж ночі при 4 "С при постійному обертанні. Імунологічно захоплену мічену Вг(4О ДНК очищали за допомогою набору для імунопреципітації хроматину
Мадпа СПІР тпм д/з (МійШроге бідта). Незв'язану ДНК зберігали у якості вихідної. 1 мкл імунопреципітованої ДНК використовували у кожній реакції кількісної ПЛР. У якості альтернативи, для збагачення одноланцюжковими міченими Від ДНК, опосередковану нагріванням денатурацію опускали та зразки обробляли для осадження ВгаШ, як описано вище.
Потім отримували другий ланцюжок ДНК шляхом додавання суміші випадкових праймерів (Тпепгто РізПпег), буферу для реакції синтезу другого ланцюгу, ДНТФ та ДНК-полімерази І (РОЇ І,
Мем Епдіапа Віоїаб5). Реакційну суміш інкубували впродовж 4 годин при 16 "С, а потім очищали
Зо шляхом екстракції фенолом-хлороформом. Після синтезу другого ланцюгу дд6цДНК кінці ДНК добудовували за допомогою набору Епа-й ОМА Епа-Кераїг (Ерісепіег, Мо у каталозі ЕКО720).
Фрагменти з тупими кінцями клонували, застосовуючи набір для ПЛР-клонування 7его Війпі
ТОРО (ТПпегто Рїзпег), а потім використовували для трансформації хімічно компетентних Е. соїї
Опе Зпої ТОР10 (Тпепто Ріб5пег, Мо у каталозі С404010). Окремі колонії збирали та піддавали секвенуванню за Сенгером, застосовуючи праймер до промотору Т7, у ВесКтап СошийКег
Сепотісв.
Секвенування РНК (КМА-5ед)
Загальну РНК з раннього пасажу, ранніх старіючих та глибоко старих клітин (фіг. ба) екстрагували, як описано вище. Загальну РНК обробляли за допомогою набору Шитіпа Тгибед зЗігапає!д Тоїаї АВМА Віро-7его та проводили секвенування спарених кінців 2х125 п.о. на
НізЗед2500 Шитіпа, застосовуючи реагенти версії 4, у Весктап Сошнег Сепотіс5 Іпс. Для кожного зразку отримували більше 70 мільйонів прочитань. Експеримент з секвенування РНК проводили у трьох біологічних повторах.
Необроблені зчитування секвенування РНК вирівнювали зі зборкою геному людини сОгСпЗ8, застосовуючи Нізаїй. (73) Кількість прочитань, картованих на геном, визначали, застосовуючи
ТєаіштеСоицпів. ІТ74| Кількість прочитань потім нормували, застосовуючи спосіб усіченого середнього М-значень (ТММ), у Еддек. |(75)| ЕддеК додатково використовували для одержання диференційної експресії по набору нормованих результатів. Результати диференційної експресії потім ранжували за кратністю зміни 0дг та вводили у інтерфейс СепеРацет для
СОЗЕА Ргегапкейд, використовуючи 1000 пермутацій, щоб визначити збагачення шляхами КЕСО,
ЗА5Р та відповіді інтерферону. Г(76,77| Результати потім корегували на множинні порівняння шляхом корегування номінального р-значення із застосуванням способу Беньяміні-Хохберга. 7/8) Результати відображували, застосовуючи програмне забезпечення СЕМЕ-Е. 179)
Аналіз іп 5іїсо факторів транскрипції, що зв'язуються з | 1
Спектри факторів транскрипції створювали, використовуючи дані СпІР-зед з проекту
ЕМСОЮОЕ (номери доступу СБО О5Е2961 та О5Е32465). Прочитання СпПІР-зед факторів транскрипції та контролю вхідної ДНК вирівнювали з консенсусною послідовністю І1Н5, застосовуючи роуліе1. (ВО Розраховували кратність зміни до збагачення на пару основ консенсусної послідовності Ї1Н5, використовуючи покриття прочитань СпІР-хзед факторів бо транскрипції на мільйон картованих прочитань (КРМ) у порівнянні зі значеннями КРМ для контролю вхідної ДНК та згладжували шляхом локально зваженого згладжування діаграми розсіяння (І ОЕ55) з параметром а-0,1. Загальну кількість картованих прочитань, використаних у нормуванні ЕРМ, визначали за окремим вирівнювання роуліеї з геномом людини (па919).
Конструювання репортерів ЕОХА1
Репортерні плазміди промотору ІГ1-Ї1УМТ та 11 ає!ї (390-526) - отримували від Сергія
Дмитрієва, Інститут біоорганічної хімії, Москва. І81,82| Обидві містили люциферазу у якості репортеру, клоновану у смисловій орієнтації Для того щоб визначити антисмислову транскрипцію з тієї ж плазміди, вставляли усилений варіант жовтого флуоресцентного білку (ЕЖМЕР) у зворотній орієнтації проти ходу транскрипції від 5-НТО 11, як описано далі.
Послідовність ЕМЕР вирізали з рЕМЕР-М1 |Сіопіесп, Мо у каталозі 6006-1| за допомогою рестриктаз Аде! та Мої та створювали тупі кінці. Плазміди Ї1М/Т та І/1ае! розщеплювали рестриктазою Хбаї, створювали тупі кінці та обробляли РазіАР (Регтепіа5). Успішну вставку антисмислової ЕМЕР перевіряли із застосуванням праймерів ПЛР АААСТТТСТТАТООСССОСОС (у ЕЖМЕР) та оСТОдДАСТТОТООСССОТТТА (у промоторі 1) та секвенування за Сенгером.
Плазміду рсОМАЗ.1/ ас використовували у якості контролю котрансфекції. Експерименти з люциферазою та р-галактозидазою проводили, як описано. ІЗЗ| ЕМЕР-М1 використовували у якості позитивного контролю для детектування сигналу ЕМЕР. Котрансфекції проводили на клітинах раннього пасажу ГЕ1, застосовуючи ліпофектамін з реагентом Ріи5 (Іпмігодеп), слідуючи інструкціям виробника.
Лентивірусні вектори
Конструкції отримували із загальнодоступних депозитаріїв, як зазначено нижче. Отримували віриони та інфікували клітини-мішені, як описано. І84| Послідовності КШРНК отримували з Те
ЕМАЇ Сопзогішт (ТКС), (85) клонували у вектори рі Ко.1 третього покоління та досліджували їх ефективність. Чотири селектуємі маркери використовували для забезпечення можливості селекції множиною лікарських засобів: рі КО.1 риго (2 мкг/мл) та рі КО.1 пудго (200 мкг/мл) (Ададепе, плазміда Мо 8453, 24150), р кКо.1 ріавзі (5 мкг/мл) (Ададепе, плазміда Мо 26655), рГКоО.1 пео (250 мкг/мл) (Ааддепе, плазміда 13425). рі КО-АВ1-5пПеЕМАвЗ та рі КО-АВ1-5иИАМА19 (Ададепе, плазміди Ж 25641 та 25640) |86| Для БГОХАї використовували кшРНК
ТАСМО000014881 (а) та ТКСМО000014882 (Б). Для ТКЕХІ використовували кшШРНК
Зо ТАСМО000007902 (а) та ТЕСМО000011206 (5). Для нокдауну 11 були розроблені та досліджені дев'ять КШРНК, з яких для двох (5ПІ 1 11 до ВРЗ1, ААВСАСАСАТОСАСАССОТАТОТ та 511 44 до
ВРЗ2 ААСАСАСАТОСАСАССОТАТОТ) виявили значний нокдаун (фіг. 1094), та вони були вибрані для подальшої роботи. Решта сім кшШРНК не викликали або викликали мінімальний нокдаун. Для
СОАБ використовували кшРНК ТКСМО000128706 (а) та ТЕСМО000128310 (Б). Для 5ТІМО використовували кшРНК ТКСМО000161345 (а) та ТКСМО000135555 (Б).
У всіх експериментах з ектопічної експресії використовували конструкції, отримані у
ОВРеоте СоїПаброгайоп |І87| у лентивірусному векторі рі Х304 (стійкому до бластицидину,
Ададепе, плазміда 25890), та їх отримували з депозитарію плазмід ОМАБИ. ІВ88| АВ! (ссбоВгоаа304 06846, НеС0О00434323), ТАЕХІ1 (сс5бВгоаа304 02667, НеС0О0445909), ГОХА1 (ссбрВгоаа304 06385, НеС0О0441689).
Усі втручання у старі клітини починали шляхом інфікування клітин у 12 тижнів старіння (точка 0 на фіг. ба). Після селекції підходящими лікарськими засобами клітини інкубували до 16 тижнів старіння (точка Е на фіг. ба), а потім збирали для подальшого аналізу.
Втручання ЗХ проводили шляхом інфікування клітин раннього пасажу ГЕ1 послідовно векторами рі кКо.1 риго 5пКВ, рі Ко.1 пудго 5пТКЕХІ та рі Х304 ріазі РОХА! (фіг. 10с). Після кожної інфекції наростаючий стійкий до лікарського засобу пул клітин відразу ж інфікували наступним вектором. Після третьої інфекції клітини збирали для подальшого аналізу через 48 годин після завершення селекції лікарським засобом. Інфікування також здійснювали у різних комбінаціях, та у кожному випадку вони приводили до активації експресії 11, початку старіння клітин та індукції відповіді ІЕМ-І. Зазначену вище послідовність вибирали, так як вона приводила до найбільш ефективної селекції клітин для подальшого аналізу. Для того щоб забезпечити можливість додаткового (четвертого) втручання у клітини ЗХ (5011, 5п5ТІМО або 5пСОАБ), шпильки, націлені на КВІ1, переклонували у рі Ко.1 песо, таким чином, вивільнюючи рі-Ко.1 риго для четвертого гену, що цікавить. Це дозволяло ефективно здійснити процес селекції лікарським засобом та зібрати зразок через 48 годин після останньої селекції.
Репортери ретротранспозиції
Двовекторну репортерну систему з подвійною люциферазою, описану Хіе та інш. (2011), І89) пристосовували для лентивірусної доставки. Репортери І1КР-Ріис переклонували з плазмід руУМАЗ55 та руМмАЗ66 у лентивірусний каркас рі Х304. руМмАЗ355 містила функціональний активний бо елемент І ТР, тоді як руУМАЗб66б містила мутований елемент Г1КР(І)М111), що несе дві міссенс-
мутації у ВРЗ1, який нездатний до ретротранспозиції. Клітини раннього пасажу ГЕ1 інфікували
КіІйс, що експресує лентивірус та ген стійкості до пуроміцину. Об'єднані стійкі до лікарського засобу клітини потім інфікували високим титром частинок з конструкціями рі Х304-М/АЗ55 або рі хз04-М/АЗ66. Негайно після інфікування клітини обробляли впродовж чотирьох днів ЗТ (при зазначених концентраціях). Клітини потім збирали та аналізували у них активності люцифераз
Кішис та РіІис. Клітини Неї а котрансфікували репортером ретротранспозиції нативного 11 рі 0143
І9ОЇ з векторами рі КО (зпПі ис, 51 11 та 5011 44), застосовуючи Бибепе НО (Рготеда).
Культивування клітин, трансфекцію та аналіз ретротранспозиції проводили, як описано вище.
Активність ретротранспозиції нормували на активність ІІвР, котрансфікованого з 5П ис.
Проводили по три незалежні експерименти для кожної конструкції.
Ідентифікація експресованих елементів Її за допомогою ЗТ-ПЛР довгих фрагментів та
БРКАСЕ
Загальну РНК збирали з клітин, застосовуючи реагент Тризол (Іпмігодеп). Отриману РНК додатково очищали, застосовуючи набір РигейпкК КМА Міпі (Іпмйгодеп), з розщепленням
ДНКазою І. З елюйованої загальної РНК виділяли полі(А)-РНК, застосовуючи модуль для виділення полі(А)-мРНК за допомогою магнітних гранул МЕВМехі (Мем! Еподіапа Віоїар5). Прямий праймер (МОЇ 15ОТКРЕАБНЕ, набір праймерів 1, таблиця 1) застосовували з будь-яким з двох зворотних праймерів (МОГ 15ОТЕРЕСЕ, набір праймерів 3, розмір амплікону 537 п.о., або
МО 15ОТКРЕОК, набір праймерів 4, розмір амплікону 654 п.о.). Застосовували високоточну термостабільну зворотну транскриптазу (набір Ругозсгірі ЕТ-РСК Маєвіег Міх, І исідеп) з 10 нг полі(А)-мРНК на реакцію та ампліфікували впродовж 10 циклів. У якості негативних контролів використовували реакційну суміш без матриці та оброблені РНКазою А зразки. Отримані амплікони клонували у вектор ТОРО-ТА (Іпмігодеп) та отримані у результаті цього плазміди використовували для трансформації хімічно компетентних Е. соїї Опе пої ТОР10. Окремі колонії збирали та проводили секвенування за Сенгером, застосовуючи праймер для секвенування до промотору Т7, у ВесКтап СоциМег (Сзепотіс5. 96 реакцій секвенування (1 планшет) проводили для кожної пари праймерів у чотирьох експериментах, сумарно 768 секвенованих клонів. З результатів секвенування видаляли праймери ЗТ-ПЛР, та вирівнювали їх з геномом людини (ЗКСП38) за допомогою ВІ А5Т з ціною співпадіння/неспівпадіння «1, -4, дозволяючи видоспецифічні повтори для Ното зарієп5. Оцінювали тільки ідеальні співпадіння та аннотували їх геномні координати. 658 клонів можна було картувати на еталонному геномі, 51 містили щонайменше 1 неспівпадіння та, отже, можливо являли собою елементи, які були поліморфні у лінії клітин, та 58 були артефактами клонування. Якщо клон був наданий у множині випадків ідеальної ідентичності, тоді використовували фракційну кількість шляхом ділення підрахованої кількості на кількість елементів з такою ж послідовністю. Кожен картований клон додатково аналізували, застосовуючи І 1Хріогег, (91| щоб виявити особливості класифікації елементу І 1 та інтактний він або ні.
У якості альтернативи, полі(А)-РНК, виділену як описано вище, піддавали швидкій ампліфікації кінців КДНК (КАСЕ). Кожна реакційна суміш містила 10 нг полі(А)-РНК, та її обробляли, застосовуючи набір 5'ЮКАСЕ Зузівєт (Ппегто Рібхпег, Мо у каталозі 18374-0411. Два антисмислові ген-специфічні праймери (С5Р), використовувані для 5'КАСЕ, перераховані далі: у якості З5Р1-МОЇ 15ОТЕРКОК (набір праймерів 4, таблиця 1), та у якості гніздового о5Р2-
МОІГ15ОТКРАСК (набір праймерів 3, таблиця 1). Продукти ампліфікації клонували та секвенували, як описано вище, застосовуючи праймер для секвенування до промотору 17, у
ВесКтап СошПег Сепотіс5. Всього секвенували 94 клони: 26 містили, головним чином, ділянку полі(С), утворену на етапі створення хвосту у протоколі КАСЕ, та 18 неможливо було картувати на геном людини. Решта 50 картованих клонів містила послідовності І 1, та їх вирівнювали з консенсусною послідовністю І 1Н5, використовуючи установку 295 95 ідентичності у положення х 1-450. І92| Картовані клони також приписували окремим сімействам 11, застосовуючи програмне забезпечення КерЕпгісп. (93| Попарні вирівнювання з консенсусом проводили за допомогою ГАГІСМ. 194| Множинні вирівнювання послідовностей розраховували, застосовуючи
МАЕРЕТ (множинне вирівнювання із застосуванням швидкого перетворення Фур'є) з алгоритмом
ІЇ-ІМ5-і (точний для вирівнювання «200 послідовностей). (95| Візуалізацію вирівнювання, розцвічування 95 ідентичності та консенсус отримували за допомогою аїміему. (96)
Створення та аналіз нокаутів СКІЗРЕ-Саз9
Досліджували три різні послідовності НРНК для кожного ланцюгу рецептору ІЕМАК (ІЕМАК1 та ІЕМАК2), перераховані у ресурсі СеСКО версії 2.0 (Гепд 2папд Габ, МІТ 197,981), та вибрали наступні: ІЕМАКІ (НОЇ ЇрА 29983) ААСАСОСАОССОАТОАСТСТОТА; ІЕМАК2 (НОЇ ЇБА 29985)
СТОТАТАТСАСССТООТОТТ. Са5з9 та нРНК доставляли, використовуючи один лентивірусний бо вектор (ГепіСкіІЗРК м2, Бепд 2папод Гар, МІТ; Ададепе, плазміда Мо 52961), що несе ген стійкості до пуроміцину. Ефективність мутагенезу СКІЗРАК-Са59, на основі якої вибрали зазначені вище дві НРНК, оцінювали за допомогою обробки інтерфероном інфікованих клітин та тих, що пройшли селекцію лікарським засобом Гуніверсальний інтерферон І типу, РВІ. Аналіз зЗсіепсе, Мо у каталозі 11200-1| та відстежування транслокації у ядро фосфо-5ТАТЗ2 та ІКЕ9 за допомогою імунофлуоресценції. Відсутність транслокації означала відсутність відповіді ІЕМ-Ї та, отже, втрату функції ІЕМАК. Експериментальні процедури проводили, слідуючи протоколам, наданим 2папуд ар. (99,100| У експерименті, показаному на фіг. Зп (РесС) та фіг. ТОК, використовували обидві нНРНК ІЕМАКІ та ІРЕМАК2 для обробки одних і тих же клітин, щоб додатково підвищити ефективність порушення відповіді ІМЕ-І. Для клітин раннього пасажу та старих клітин здійснювали коїнфікування векторами ІЕМАКІ та ІРМАК2, а потім селекцію пуроміцином. Для старих клітин високим титром лентивірусних частинок обробляли старі клітини у 12 тижнів старіння клітин (точка 0, фіг. ба), та клітини аналізували через 4 тижні (точка
Е, фіг. ба). Для експерименту, показаного на фіг. Зп (ВСПС), редактовані клітини раннього пасажу клонували шляхом клонування потомства однієї клітини. 24 окремі клітини виділяли, застосовуючи технологію СейПКай (Сеї! Місгозузіет5), та розмножували. Геномний скринінг сайтів розрізання СКІЗРК проводили за допомогою СКІЗРЕ бЗедиепсіпуд Зегмісе (ССІВ ОМА
Соге, Лікарня загального профілю Массачусетса). (101| Успішний нокаут ІЕМАКІ та ІЕМАК2 підтвердили у чотирьох з 24 розмножених клональних ліній клітин.
Імуноблоттинг
Клітини збирали у буфер для зразку Леммлі (60 мМ Тріс, рН 6,8, 2 95 ДСН, 10 95 гліцерин, 100 мм ДТТ) та кип'ятили впродовж 5 хвил. при 100 "С. Екстракти цільних клітин (60 мкг білку) розділяли за допомогою ЕФ ТА ПААГ/ДСН ТА переносили на мембрани Ітторбіїоп-РІ. (МіпПіроге).
Неспецифічне зв'язування блокували шляхом інкубації у 4 95 бичачому сироватковому альбуміні (БСА; Тпегто Різпег) та 0,195 твін-20 на ФБР впродовж 1 год. при кімнатній температурі.
Первинні антитіла розбавляли у блокуючому розчині та інкубували впродовж ночі при 4 "С.
Перелік усіх первинних антитіл представлений у таблиці 2. Вторинні антитіла розбавляли у блокуючому розчині та інкубували впродовж 1 години при кімнатній температурі. Сигнали детектували, застосовуючи систему візуалізації у інфрачервоному діапазоні І І-СОВ Одуззеу (І 1І-
СОК Віозсіепсе5). Для кількісного аналізу сигналів усі зразки, які необхідно було порівняти,
Зо розділяли на одному гелі. Стандарти завантаження візуалізували на тому ж блоті, що і тестовані зразки, застосовуючи 2-кольорову систему ГІ-СОК. Смуги візуалізували та здійснювали кількісний аналіз, застосовуючи програмне забезпечення І І-СОБК. Кількісний аналіз усіх смуг, які необхідно було порівняти, проводили на одному зображенні, та сигнали смуг знаходилися у межах лінійного діапазону детектування пристроєм.
Імунофлуоресцентна мікроскопія, проведена на клітинах у культурі
Клітини ростили на покривних стеклах та зразки обробляли, як описано раніше. (1021
Первинні антитіла приведені у таблиці 2. Зафарбовування олДНК проводили, як описано у
Тпотав та інш. (103| Коротко, клітини, висіяні на покривні стекла, фіксували на льоду за допомогою 4 95 параформальдегіду (ПФА) впродовж 20 хвил., а потім інкубували у 100 95 метанолі при -20 "С впродовж ночі. Клітини потім обробляли 200 мг/мл РНКази А при 37 "С впродовж 4 годин. Клітини блокували 395 БСА та інкубували впродовж ночі при 4 "С з первинними антитілами, розведеними у 395 БСА. Зображення отримували, застосовуючи конфокальний лазерний скануючий мікроскоп І 5М 710 7еї55 або інвертований флуоресцентний мікроскоп Ті-5 Мікоп. Усі налаштування мікроскопу були встановлені для збору зображень нижче насичення, та їх зберігали постійними для всіх отриманих зображень у одному експерименті, як описано раніше. (104| Аналіз зображень проводили, як описано нижче для тканин.
Панелі для ПЛР
Загальну РНК збирали з клітин, як зазначено вище (кількісна ПЛР) та аналізували, застосовуючи панель для проведення ПЛР КТ Ргойег"мМ Нитап Туре І Іпіегегоп Кезропзе від
Оіадеп (Ме у каталозі РАН5З-0167 Е-4). Реакції зворотної транскрипції проводили за допомогою набору Оіадеп КТ? Рігеї Бігапа (Ме у каталозі 3304041, використовуючи 1 мкг загальної РНК у якості вихідного матеріалу. У 102 мкл суміші із завершеною реакцією додавали 650 мкл загальної суміші Оіадеп ЕТ? 5УВЕ ОСгееп КОХ ЯРСЕ. Мавхіегтіх |Ме у каталозі330521| та 548 мкл вільної від РНКаз води, чистої для молекулярного аналізу, та аналізували у 384-лунковому блоці на пристрої МіА 7 Арріїей Віозуєіет5. При всіх процедурах слідували протоколам виробника. Усі умови аналізували у трьох повторах. Результати аналізували, використовуючи
Сепесіоре Раїа Апаїузі5 Сепіег від Оіадеп. (105| Коротко, значення Сі нормували по панелі генів домашнього господарства (НКО). Значення АС; розраховували між значенням для гену, бо що цікавить, (ОЇ) та середнім значенням для НКО. Кратність зміни потім розраховували,
застосовуючи формулу 27Аст, Нижню межу детектування встановлювали на Сі, рівний 35. Для будь-якого СОЇ, щоб вважати значення значимим, встановлювали наступні фільтри: (ї) зміна у експресії » у 2 рази; та (ії) р-значення 20,05. Крім того, гени із середнім Сі»32 як у контрольному, так і у тестованих зразках, також видаляли.
Твердофазний імуноферментний аналіз (ЕЕГ ІЗА)
Проводили кількісний аналіз рівнів інтерферону ВД за допомогою набору для аналізу ЕГІЗА сироватки МегіКкіпе-Н5 Нитап Іпіепегоп Веїа бегит (РВІ Авзау Зсіепсе, Мо у каталозі 41415).
Культуральні середовища кондиціонували впродовж 48 годин перед збором. Для видалення частинок та уламків аліквоти по 1 мл центрифугували 5 хвил. при 5000 х 49. Усі інкубації проводили у закритій камері при кімнатній температурі (22-257С), намагаючись уникнути коливань температури. 50 мкл буферу для зразку, а потім 50 мкл розчину розведеного антитіла додавали у кожну лунку. Нарешті, додавали по 50 мкл на лунку тестованих зразків, стандартів або пустих контролів. Планшети запечатували та струшували при 450 об/хвил. впродовж 2 годин. Після закінчення періоду інкубації вміст планшету видаляли та лунки промивали три рази 300 мкл розведеного розчину для промивання. У кожну лунку додавали по 100 мкл розчину НКР та інкубували впродовж 30 хвил. при постійному струшуванні. Лунки випорожняли та промивали чотири рази розчином для промивання. У кожну лунку додавали по 100 мкл розчину субстрату
ТМВ. Планшети інкубували у темноті впродовж 30 хвил. Нарешті, у кожну лунку додавали по 100 мкл зупиняючого реакцію розчину та впродовж 5 хвил. реєстрували поглинання на 450 нм.
Значення, зареєстровані для пустих контролів, віднімали із значень для стандартів, а також для зразків, щоб прибрати фон. Одиниці оптичної густини (ОГ) наносили на графік, використовуючи 4-параметричну апроксимацію стандартної кривої, та використовували для розрахунку титрів інтерферону у зразках.
Зразки тканин людини
Зразки шкіри людини збирали у ході дослідження І еідеп І опдемйу 5іцау, (106,1071 та вони були надані Медичним центром Лейденського університету, Нідерланди. Отримували інформовану згоду, та усі протоколи були схвалені етичним комітетом Медичного центру
Лейденського університету. Зразки збирали у вигляді біоптатів товщиною 4 мм, отриманих шляхом щипкової біопсії на усю товщину, заливали середовищем для одержання зрізів при
Зо оптимальній температурі (ОСТ), швидко заморожували та зберігали при -80 "С. Дослідники були засліплені у відношенні всього, крім віку та статі суб'єктів. Із залитих ОСТ зразків отримували кріозрізи товщиною 8 мкм, застосовуючи кріомікротом Геіса СМ30505. Стекла фіксували 4 95
ПФА та 0,5 95 тритоном Х-100 на ФБР (попередньо нагрітим до 37 "С) впродовж 20 хвил. при кімнатній температурі. Не проводили додаткову пермеабілізацію. Інкубації з антитілом передував етап блокування 4 95 бичачим сироватковим альбуміном (БСА; фракція М, Тпепгто
Еівпег), 2 9 сироваткою осла, 295 сироваткою кролика та 0,196 тритоном Х-100 на ФБР впродовж 1 години при кімнатній температурі. Первинні антитіла розбавляли у описаному вище блокуючому розчині (1:200) та інкубували впродовж ночі при 4 "С на качалці у вологій камері.
Вторинні антитіла (мічені АіІехагіног 546 та АІехагРіног 647, І їе ТесппоЇодієх) також розбавляли у блокуючому розчині та інкубували впродовж 2 годин при кімнатній температурі. По три 15 хвил. етапи промивання у ФБР, що містить 0,2 95 тритон Х-100, йшло після кожної інкубації з антитілом. Здійснювали контрастне забарвлювання ядер за допомогою 2 мкг/мл САРІ на ФБР, що містить 0,2 95 тритон Х-100, впродовж 15 хвил. Забарвлені стекла заключали у РгоїЇ опа
Апійаде Моипіапі без САРІ (І їе Тесппоїіодієб5) та візуалізували за допомогою конфокального лазерного скануючого мікроскопу 2еї55 І 5М 710. Для кожного поля отримували серію зрізів по осі 7, що охоплюють усю товщину тканини. Усі установочні параметри мікроскопу та час експозиції встановлювали таким чином, щоб отримати зображення нижче насичення, та тримали постійними для всіх зображень, отриманих у межах одного експерименту. Аналіз зображень проводили, застосовуючи або програмне забезпечення СеїПРгойег, (108| або відкрите програмне забезпечення Ітаде./ від МІН. (109) Ядра визначали, використовуючи канал
БАРІ. Контури клітин визначали шляхом радіального розширення маски для ядер, використовуючи функцію Ргорадагїе, доти, поки не був досягнутий поріг інтенсивності у каналах
АІехагіног 546 та АІехагіног 647. Інтенсивність флуоресценції всередині даних областей потім реєстрували у обох каналах. Для кожного зразку реєстрували всього 200 ядер у множині полів зору. Зрізи тканин миші обробляли та аналізували таким же чином, як описано вище.
Зразки тканин миші
Загальну РНК екстрагували з 50 мг вісцеральної жирової тканини, тканини тонкого кишечнику, тканини скелетних м'язів, бурої жирової тканини або тканини печінки шляхом подрібнення, а потім гомогенізації у тризолі (Іпмігодеп) із застосуванням гомогенізатору Ромег бо Сеп 125 (Різспег зЗсієпійіс). Після розділення фаз РНК у водному шарі очищали, застосовуючи набір для виділення РНК РигеїїпкК ЕМА Міпі (Іпмігодеп) з розщепленням ДНКазою І. Щоб оцінити експресію генів за допомогою ЗТ-КПЛР, здійснювали зворотну транскрипцію 1 мкг загальної
РНК, як описано вище. У кожному окремому експерименті усі зразки обробляли паралельно та без засліплення.
Візуалізацію тотального препарату білої жирової тканини здійснювали, слідуючи способу, описаному у Магііпе2-Запіїбайе? та інш. (2014). (110) Коротко, білу жирову тканину (вісцеральні відкладення) розділяли на шматочки 0,5-1 см" та інкубували у 10 мл свіжого фіксуючого буферу (195 ПФА на ФБР, рН 7,4) впродовж 30 хвил. при кімнатній температурі при легкому покачуванні. Після трьох етапів промивання за допомогою ФБР, тканинні блоки розрізали на шість рівних шматочків. Усі наступні інкубації проводили у циліндричних мікроцентрифужних пробірках ємкістю 2 мл. Перед інкубацією з первинним антитілом проводили етап блокування за допомогою 595 БСА, 0,1 95 сапоніну на ФБР впродовж 30 хвил. при кімнатній температурі.
Первинні антитіла розбавляли у описаному вище блокуючому розчині (1:200) та інкубували впродовж ночі при 4 "С при легкому покачуванні. Вторинні антитіла (забарвлені АІехаРБіцог 546,
АІехагРіног 594 та АІехагіног 647, І Ме ТесппоЇодієз) також розбавляли у блокуючому розчині та інкубували впродовж 2 годин при кімнатній температурі. По три 10 хвил. етапу промивання у
ФБР йшло після кожної інкубації з антитілом. Антитіло-незалежне зафарбовування ядер та ліпідів проводили після імунологічного зафарбовування: САРІ та ВОБІРМ (Тпепто Рівпег) розбавляли у ФБР з 5 95 БСА та інкубували із зразками тканин впродовж 20 хвил. з наступними трьома етапами промивання, як описано вище. Зафарбовані зразки акуратно поміщали на оптимізовані для конфокальної візуалізації предметні стекла з лунками з боросилікатного скла
Мо 1,5. Маленька крапля ФБР попереджала висихання. Отримані зображення аналізували, як описано вище.
Одночасне зафарбовування активності ЗА-рД-Саї та білку ВРЗ1 у зрізах печінки здійснювали шляхом зафарбовування спочатку ЗА-В-Саі, як описано. (111| Потім зразки піддавали тепловому демаскуванню епітопів шляхом обробки паром впродовж 20 хвил. у буфері для демаскування антигену (10 мМ Тріс, 1 мМ ЕДТА, 0,05 95 твін 20, рН 9,0). Зразки потім обробляли для імунофлуоресцентного зафарбовування, як описано вище ("Зразки тканин людини").
Отримували кріозрізи тканини нирки, збереженої у ОСТ, обробляли впродовж 10 хвил. 0,5 95
Зо (маса/об'єм) перйодною кислотою, потім зафарбовували реагентом Шифф-йодною кислотою (Рієпег Зсіепійіс, Мо у каталозі 5532-500) впродовж 10 хвил. Зафарбовані зрізи тканини поміщали у Зпапдоп Ада Моипі (Різпег Зсіепійіс, Мо у каталозі 14-390-5), а потім візуалізували шляхом освітлення методом світлого поля. Гломерулосклероз оцінювали, як описано. (1121
Коротко, 40 клубочків на тварину оцінювали засліпленим способом та розподіляли бали від 1 до 4: бал 1-«25595 склерозу; 2-25-50 95 склерозу; 3-50-75 95 склерозу; 4--7595 склерозу.
Властивістю, застосовуваною для оцінки склерозу, була інтенсивність та глибина проникнення забарвлення у ШИК-позитивні ушкодження всередині клубочків. На фіг. 4е приведений приклад склерозованого клубочку, який виглядає більш зморщеним та забарвлюється ШИК більш інтенсивно.
Чотириголові м'язи заливали ОСТ, робили зрізи товщиною 12 мкм та поміщали у гістологічне середовище на позитивно заряджених стеклах. Зрізи фарбували Н 8 Е (гематоксилін, З хвил., а потім еозин, 30 сек). Залиті стекла візуалізували за допомогою мікроскопу 2еї55 Ахіомегі 200М, обладнаного камерою для кольорової зйомки 7еі5 МАЕС5. Для вимірювання діаметру м'язового волокна вимірювали найменшу відстань поперек - 100 м'язових волокон на тварину, застосовуючи програмне забезпечення Ітаде.), як описано (1131.
Критерій Колмогорова-Смирнова використовували для оцінки статистичної значущості відмінностей між отриманими розподілами.
Статистична обробка
Ехсеї! використовували для проведення загального статистичного аналізу (середні значення,
С.О., І-критерії і т.д.). Програмне забезпечення К для статистичних розрахунків (64-бітна версія 3.3.2) використовували для однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм множинних порівнянь Т'юкі. Для узгодженості порівнянь значимість на всіх фігурах позначена, як описано далі: "Р«е0,05, Р«0,01. Розміри вибірок вибирали на основі попереднього досвіду та раніше опублікованих експериментів, у яких спостерігали відмінності. Не використовували статистичний тест, щоб заздалегідь визначити розмір вибірки. Жоден зразок не був виключений. Усі спроби реплікації були успішними. Не було знахідок, які б не повторювалися або були б не відтворювані. Природа та кількості аналізованих зразків (позначені п) у кожному експерименті перераховані на підписах до фігур. Кількість незалежних експериментів також перераховано на підписах до фігур. При кількісному аналізі результатів вимірювання бо імунофлуоресценції дослідники були засліплені. Поля зору або зрізи тканин для кількісного аналізу вибирали довільно та оцінювали, застосуючи методи, зазначені для окремих експериментів. При оцінці гломерулосклерозу та діаметру м'язових волокон дослідники були також засліплені. Для експериментів із секвенування РНК та експериментів з панелями ПЛР статистична обробка описана внизу зазначених розділів (вище).
ПРИКЛАД 1 АКТИВАЦІЯ 11 ТА ІНТЕРФЕРОНУ ПРИ СТАРІННІ КЛІТИН
Активність КТЕ може викликати аберантну транскрипцію, альтернативний сплайсинг, інсерційний мутагенез, ушкодження ДНК та нестабільність геному. І114| Послідовності, що походять з КТЕ, складають дві треті геному людини, І115) хоча значна більшість була активна мільйони років тому та більше не інтактні. Єдиним КТЕ людини, здатним до автономної ретротранспозиції, є довгий диспергований елемент-!1 (ГІМЕ-1, або 11). Проте, генеративна активність ЇЇ є основним джерелом структурного поліморфізму у людини. (116| Усе більше фактів вказує на активацію КТЕ у деяких типах раку, у головному мозку дорослого та у процесі старіння. |117,118,119,120| Механізми клітинного захисту включають гетерохроматинізацію даних елементів, шляху невеликих РНК, які націлені на зазначені транскрипти, та механізми противірусного вродженого імунітету. (121| Соматична активація КТЕ з віком консервативна у дріжджів та Огозорпіа, та зниження активності КТЕ робить корисну дію. (221
На фіг. Та та фіг. ба-е показано, що транскрипція 1 активувалася експоненціально у процесі реплікативного старіння (Рес) фібробластів людини, зростаючи у 4-5 разів до 16 тижнів після припинення проліферації, що називали пізнім старінням клітин. Множина праймерів для
ЗТ-кПЛР була розроблена, щоб детектувати еволюційно нещодавні елементи 11 (І 1нНЗ-І1 РАБ; фіг. 16, фіг. 6П). Рівні полі(А)- РНК 11 зростали у 4-5 разів у клітинах на стадії пізнього старіння (РесС) у смисловому, але не у антисмисловому напрямку протягом усього елементу (фіг. 1с).
Амплікони, отримані у результаті ЗТ-ПЛР довгих фрагментів (фіг. 15), секвенували за Сенгером, виявив 224 елементи, дисперговані по всьому геному; одна третина (75, 33,5 95) являла собою
ЇНЗ, з яких 19 (25,3 Фо, 8,5 95 від загальної кількості) були інтактними (тобто анотованими як такі, що не містять інактивуючих ВРЗ мутацій; фіг. 6ї, 9). Також проводили 5'КАСЕ з тими ж праймерами та виявили, що більша частина транскриптів І 1 з підвищеною експресією у старих клітинах ініціювалась всередині або поряд з 5'-НТО (фіг. 7).
Елементи /1 можуть стимулювати відповідь ІЕМ-І. (123) На фіг. 1а та фіг. бі показано, що
Зо інтерферони ІЕМ-с та ІРМ-В1 індукувалися до високих рівнів у клітинах на стадії пізнього старіння. Старіння клітин проходить через ранню фазу відповіді на ушкодження ДНК, за якою слідує відповідь ЗАЗ5Р. |124) У отриманих результатах у даній заявці задокументована третя та ще більш пізня фаза, що характеризується підвищенням експресії І 1 та відповіді ІЕМ-Ї (фіг. Те), яка раніше не була описана, можливо, потому що у більшості досліджень зосереджувалися на більш ранніх моментах часу. Аналіз повного транскриптому ЕМА-5ед підтвердив, що ЗАЗР та відповіді ІЕМ-І розділені у часі (фіг. 8). Пізню фазу активації /1 та індукції ІЕМ-І також спостерігали при викликаному онкогеном старінні клітин (ВОС) та викликаному стресом передчасному старінні клітин (ВСПС) (фіг. 1е, фіг. 1), К).
ПРИКЛАД 2 МЕХАНІЗМИ АКТИВАЦІЇ 1 1
Для того щоб досліджувати, як механізм нагляду не справляється у процесі старіння клітин, досліджували три фактори: ТКЕХ1І, КВІ та ЕОХА1. ТКЕХ1 являє собою 3'-екзонуклеазу, яка руйнує чужорідні ДНК, що вторгаються, та його втрата була асоційована з накопиченням цитоплазматичної кКДНК 1-1. (125) На фіг. да показано, що експресія ТКЕХ1 значно знижувалася у старих клітинах. Було показано, що КВІ1 зв'язується з повторюваними елементами, включаючи 11, та викликає їх гетерохроматинізацію. (126) На фіг. 2а показано, що експресія
КВІ сильно знижувалася у старих клітинах (РесС); тоді як експресія інших представників сімейства ЕВ (ЕВІ 1, КВІ 2) не змінювалася (фіг. 95). Збагачення КВІ1 5'-НТО елементів І 1 було видно у проліферуючих клітинах, знижувалося при ранньому старінні клітин та ставало недетектованим у більш пізній час (фіг. 2а). Це збігалося зі зменшенням кількості міток
НЗКОтез та НЗК27тез у даних областях (фіг. 9с).
Для того щоб визначити нові фактори, які взаємодіють з 5'-НТО 11, ми досліджували базу даних ЕМСОЮЕ СНПІР-зед та виявили, що провідний фактор транскрипції РЕОХАТ зв'язується з даною областю у декількох лініях клітин (фіг. 94). Експресія ЕОХА!1 підвищена у старих клітинах.
МП27 На фіг 25 показано, що ЕБОХАї пов'язаний з центральною областю 5-НТО 11.
Використовуючи репортери транскрипції, ми виявили, що делеція сайту зв'язування ЕОХА1 знижувала як смислову, так і антисмислову транскрипцію з 5-НТО 11 (128) (фіг. У9е). Отже, спостережувана неправильна регуляція даних трьох факторів у старих клітинах може викликати активацію 1 за допомогою трьох додаткових механізмів: втрата КВІ у результаті зниження репресії гетерохроматину, підвищення рівнів ЕОХАТ у результаті активації промотору 11 та бо втрата ТКЕХ! у результаті порушення видалення кДНК 11.
Отже, вплив дії на експресію КВІ, РОХАТ або ТКЕХІ у повністю старих клітинах досліджували, застосовуючи лентивірусні вектори (фіг. 1О0а, Б). Ектопічна експресія. КВ1 пригнічувала підвищену експресію 11, ІЄМ-са та ІЕМ-В1 у старих клітинах, тоді як його нокдаун додатково збільшував їх експресію (фіг. 294). Надекспресія КВІ також відновлювала його присутність у 5-НТО 11 (фіг. 2с). Та навпаки, нокдаун ЕОХА1 зменшував його зв'язування з 5'-
НТО 11 (фіг. 9) та знижував експресію 1, ІЕМ-сж та ІЕМ-В1, тоді як надекспресія ЕОХА1 підвищувала рівні Г1, ІЕМ-са та ІЕМ-В1 (фіг. 2е). Відповідні результати також отримали шляхом впливу на ТКЕХ! (фіг. 29). Отже, кожен з даних факторів робив значимий ефект на регуляцію
Ї1 та відповіді ІЄМ-І у старих клітинах.
Одиночні або подвійні втручання, націлені на дані фактори, викликали лише невеликі зміни експресії І 1 та ІЕМ-І у зростаючих клітинах раннього пасажу. Хоча деякі з даних ефектів були статистично значущими, їх затьмарювало потрійне втручання (3Х) шляхом комбінування нокдаунів КВІ1 та ТКЕХ!1 з надекспресією ЕОХАТ1, що призводило до масштабної індукції І 1 та експресії ТЕМ-Ї (фіг. 27, фіг. 9д-і та фіг. 10с). Отже, у нормальних здорових клітинах у всіх трьох ефекторах повинні бути відхилення, щоб ефективно вивільнити І 1.
ПРИКЛАД З НАСЛІДКИ АКТИВАЦІЇ 1 1
Для того щоб більш детально оцінити активацію ІЕМ-І за допомогою 11, ми досліджували експресію 84 генів у даному шляху, використовуючи панелі ПЛР. Ми спостерігали розгорнуту відповідь, причому експресія більшості генів була підвищена (фіг. 2, фіг. 9), Ю): у 68 95 (57/84) експресія була значно підвищена у старих клітинах та у 52 95 (44/84) експресія була підвищена у клітинах ЗХ. Отримані результати підтверджують та додатково уточнюють транскриптомний аналіз КМА-зеа (фіг. 8).
Виявили, що деякі НІЗТ, розроблені проти ВІЛ, також інгібують активність ЗТ 11. (129) Ми також розробили кшРНК проти І 1, дві з яких знижували рівні транскрипції на 40-50 95 та 70-90 95 у глибоко старих клітинах та клітинах ЗХ, відповідно (фіг. 109). Рівні білку ВРЗ1 були відповідно знижені у глибоко старих клітинах (фіг. 51). Нарешті, зазначені КЮШРНК також зменшували ретротранспозицію рекомбінантних конструкцій репортеру 11 (фіг. 10К).
У клітинах, позбавлених ТКЕХІ, виявляють цитоплазматичну ДНК 11, накопичення якої можна інгібувати за допомогою НІЗТ. (130| Хоча відсутність включення Вга є канонічною
Зо властивістю старих клітин (фіг. 6Б), тривале мічення виявило ДНК, яка була переважно цитоплазматичною та високо збагаченою послідовностями 11 (фіг. 11а, Б). Синтез цитоплазматичної ДНК Ї1 можна було майже повністю блокувати за допомогою НІЗТ ламівудину (З3ТС) або кшРНК до 11 (фіг. За, с). За допомогою антитіла проти гібридів ДНК:'РНК виявили цитоплазматичний сигнал у старих клітинах, який у значній мірі колокалізувався з білюом ВРЗ1 та перетворювався у сигнал олЛДНК після розщеплення РНКазою (фіг. 11с). Аналіз мічених ВгаО послідовностей 1 у старих клітинах показав, що вони локалізовані по всьому елементу 1/1 (фіг. 114, е). Відносне збільшення кількості послідовностей І 1Н5 у загальній клітинній ДНК також можна виявити за допомогою аналізу методом кількісної ПЛР 6,16.
І131,1321 ЗТС у діапазоні 7,5-10 мкМ повністю блокував таке збільшення у старих клітинах і також гасив активність репортеру ретротранспозиції 1-1 (фіг. 104, є).
Нокдаун І/1 за допомогою кшРНК або обробка клітин за допомогою ЗТС значно знижували рівні інтерферону, а також більш широко зменшували відповідь ІЕМ-І як у клітинах на стадії пізнього старіння, так і у клітинах ЗХ (фіг. ЗБ, фіг. 12а). ЗТС у діапазоні 7,5-10 мкм оптимально інгібував відповідь ІЕМ-І та був найбільш ефективним з 4 досліджених НІЗТ (фіг. 10, |). Відносні ефективності НІЗТ узгоджуються з їх здатністю інгібувати І 1 людини КТ15. ЗТС також протидіяв відповіді ІЕМ-І при інших формах старіння клітин - ВОС та ВСПС (фіг. Зе).
Клітини пересівали за постійної присутності ЗТС з проліферативної фази до глибокої старості клітин. ЗТС значно не впливав на час входження у стан старіння клітин, індукцію р21 або р16, або ранню відповідь 5А5Р, таку як підвищення експресії І -8 (фіг. Зї, фіг. 125). Проте, масштаб пізньої відповіді БАЗР (такої як індукція ССІ2, І/-6 та ММР3З) значно зменшувався.
Обробка кштРНК 11 також знижувала рівні експресії ІЇ/-б6 та ММРЗ у клітинах на стадії пізнього старіння (фіг. 115). Отже, хоча активація І 1 та наступна відповідь ІЕМ-І наступали відносно пізно, вони вносять важливий внесок у зрілий БА5Р та прозапальний фенотип старих клітин.
ЗТС не впливав на рівні транскрипту 11 (фіг. 10ї), дозволяючи припустити, що відповідь ІМЕ-І запускається КДНК ІГ1. Як прогнозує дана модель, нокдаун компонентів шляху визначення цитозольної ДНК, сОАЗ або 5ТІМО, (133) інгібував відповідь ІЕМ-І як у клітинах на стадії пізнього старіння, так і у клітинах ЗХ (фіг. 10І та фіг. 12с, а), а також негативно регулював відповідь БА5Р у клітинах на стадії пізнього старіння (фіг. 12е).
НІЗТ, модифіковані алкілом у положенні 5'-рибози, не можуть бути фосфорильовані та, бо отже, не інгібують ферменти ЗТ. Проте, вони мають природну протизапальну активність,
пригнічуючи опосередковані Р2х7 події, які активують шлях інфламасоми МІ КРЗ. (1341 Три- метокси-З3ТО (К-9) при концентрації 10 мкМ або 100 мкМ не інгібував відповідь ІЕМ-ЇІ ні у клітинах на стадії пізнього старіння, ні у клітинах ЗХ (фіг. 125). Отже, для дії ЗТС на шлях ІЕМ-І потрібно інгібування ЗТ. При високих концентраціях (100 мкМ) К-9 виявляв деяку інгібувальну активність щодо маркерів запалення (фіг. 129).
Для перевірки ролі передачі сигналів інтерферону у ЗА5Р, рецептори ІЄМ-а/р (ІЕМАКТІ та 2) були інактивовані за допомогою СЕІЗРЕ/Са59. Ефективна зупинка передачі сигналів ІЕМ-Ї досягалася як у клітинах раннього пасажу, так і у клітинах у стані глибокого старіння (фіг. 10т).
Як при реплікативній, так і при ВСПС формах старіння клітин, втрата передачі сигналів інтерферону антагонізувала пізні (ССІ 2, 1-6, ММРЗ), але не ранні (І--1рф) маркери 5А5Р (фіг. за). Цей результат додатково демонструє, що передача сигналів ІЕМ-І сприяє встановленню повної та зрілої відповіді БА5Р у старих клітинах.
ПРИКЛАД 4 АКТИВАЦІЯ 1/1 У ТКАНИНАХ ЛЮДИНИ ТА МИШІ
Активацію експресії 1 при раку у людини детектували за допомогою антитіла ВРЗ1. (135)
Той же реагент показав розповсюджену експресію ВРЗ1 як у старих клітинах, так і у клітинах ЗХ (фіг. ва, с, У. У біоптатах шкіри нормальних людей похилого віку ми виявили, що 10,7 95 дермальних фібробластів були позитивні по маркеру старіння клітин ріб, що знаходиться у межах діапазону, задокументованого при старінні приматів (136) (фіг. 136, а, ї, п). Деякі з позитивних по ріб дермальних фібробластів були також позитивні по ВРЗ1 (10,3 95). Варто відмітити, що ми ніколи не спостерігали ВРЗ1 за відсутності експресії р1б6. Ми також виявили, на рівні окремих клітин, присутність фосфорильованого ЗТАТІ, що узгоджується з наявністю передачі сигналів інтерферону у мікрооточенні тканини (137 (фіг. 130, е, 9). Отже, у фракції старих клітин у нормальних людей спостерігається активація 1/1, що узгоджується з накопиченням даних подій під час прогресування старіння клітин.
Потім ми досліджували мишей та виявили, що експресія мРНК І 1 поступово підвищувалася з віком у деяких тканинах (фіг. 159). Виявлені послідовності РНК 1 переважно являли собою смисловий ланцюг, представлений повсюди у елементі, та виявлялись усі три активні сімейства
Ї1 (фіг. 119, М). На рівні білку, зустрічальність позитивних по ВРЗ1 11 клітин підвищувалась у тканинах з віком (фіг. 4а). Області забарвлення ВРЗ1 колокалізувались з активністю
Зо асоційованою зі старінням клітин рД-галактозидази (5А-В-саї) (фіг. 45). Експресія декількох генів відповіді ТЕМ-Ї (Іи-а, 17, Оав51), а також прозапальних маркерів та маркерів БА5Р (ІІ-6, МтрЗз,
Раї1, також відомий як 5егріпе17) підвищувалась у тканинах старих мишей (фіг. 4с, фіг. 14).
Підвищення експресії Ї1 та генів відповіді ІЕМ-І (Ми-сй, Оа51) також спостерігали у моделі викликаного експериментально старіння клітин (молоді тварини, піддані опроміненню сублетальними дозами; фіг. 44).
Старих тварин (26 місяців) лікували впродовж двох тижнів ЗТС (вводили у воді у терапевтичних для людини дозах). Ми виявили велику та значну знижувальну регуляцію відповіді ІЕМ-І та полегшення прозапального стану 5АБР (фіг. 4с; весь набір даних див. на фіг. 14 та у таблиці 7). Експресія МРНК 11 та р1б6 незначно знижувалася, у більшості випадків не досягаючи статистичної значущості. К-9 не впливав ні на відповідь ІЕМ-Ї, ні на відповідь БА5Р.
Імунофлуоресцентний аналіз зрізів тканини підтвердив, що у старих клітинах спостерігався
ЗА5Р, та у експресуючих ВРЗ1 клітинах спостерігалася активована передача сигналів ІЕМ-Ї (фіг. 15Ба-с). Лікування ЗТС значно знижувало як ІЕМ-І, так і ЗАЗР, але не експресію 1/1 або присутність старих клітин. Отже, НІЗТ можна категоризувати як "сеностатичні" агенти, щоб відрізнити їх від "сенолітичної" терапії, яка видаляє старі клітини з тканин. (138,139)
Знижений адипогенез (140) та термогенез І141| властиві природному старінню, та обидва були підвищені у старих тварин через 2 тижні лікування ЗТС (фіг. 154-5). На фіг. 4е показано, що більш тривале лікування (у віці від 20 до 26 місяців) ефективно боролося з декількома відомими фенотипами старіння: (ії) інфільтрацією макрофагами тканин - відмітною ознакою хронічного запалення, (142,143) (і) гломерулосклерозом нирки І|144| та (ії) атрофією скелетних м'язів. (145
Найбільшу відповідь спостерігали для інфільтрації макрофагами білої жирової тканини, яка поверталася до юнацьких (5 місяців) рівнів всього лише після 2 тижнів лікування ЗТ.
Активація ендогенних елементів 1 та настання стійкої активації відповіді ІЕМ-І є новим фенотипом старих клітин, включаючи старі клітини, що зустрічаються у природі, у тканинах.
Даний фенотип поступово розвивається у процесі відповіді старінням клітин та, схоже, є важливим, але досі недооціненим компонентом ЗА5БР. Ми показали, що експресія трьох регуляторних факторів КВ1, ЕОХА!Т та ТКЕХ!1 змінюється під час старіння клітин, та що дані зміни як достатні, так і необхідні, щоб дозволити активацію транскрипції елементів 11 (фіг. 49).
Отже, множина механізмів нагляду повинна бути порушена, щоб вивільнити 11, що підкреслює бо важливість збереження даних елементів у репресованому вигляді у соматичних клітинах.
Активація передачі сигналів вродженого імунітету у відповідь на активацію !/1 під час старіння клітин та старіння організму відбувається шляхом стимулюючого інтерферон шляху
ДНК (СІД). Цитоплазматична ДНК може походити з декількох джерел, таких як мтДНК, вивільнена з мітохондрій, які находяться у стресових умовах, (146| або цитоплазматичні фрагменти хроматину (ЦФХ), вивільнені з пошкоджених ядер. (147,148| Результати даного винаходу дозволяють припустити, що кКДНК 11 є важливим індуктором ІЕМ-І у старих клітинах.
Примітно, що лікування НІЗТ ефективно протидіяло не тільки відповіді ІЄМ-І, але також, більш широко, зменшувало пов'язане з віком хронічне запалення у множині тканин.
Стерильне запалення, також відоме як запальне старіння, є відмітною ознакою старіння організму та фактором, що сприяє множині пов'язаних з віком захворювань. І(149,150)
Результати даного винаходу свідчать про те, що активація елементів І 1 (та необов'язково інших
КТЕ) викликає запальне старіння, та що ЗТ Ї1 є підходящою мішенню для лікування пов'язаного з віком запалення та розладів.
ПРИКЛАД 5 ВПЛИВ АДЕФОВІРУ ТА ЛАМІВУДИНУ НА ВИКЛИКАНЕ СТАРІННЯМ КЛІТИН
ПІДВИЩЕННЯ ПОШИРЕНОСТІ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ 11, ЕКСПРЕСІЇ ГЕНІВ ІНТЕРФЕРОНУ ТА
ЕКСПРЕСІЇ ГЕНІВ 5АБР
Вплив адефовіру та ламівудину на викликане старінням клітин підвищення поширеності послідовностей 1/1, експресію генів інтерферону та експресію генів БА5Р оцінювали у лініях фібробластів людини.
Поширеність послідовності Ї1 (число копій) оцінювали у трьох різних лініях фібробластів людини: І Е1, ІМК9ОО, У/З38, - застосовуючи аналіз методом кількісної ПЛР. Результати аналізу нормувати на поширеність 55 рДНК. Контроль (КТРЛ) являв собою необроблені проліферуючі клітини раннього пасажу. Лікарські засоби вводили безперервно у середовищі, починаючи з декількох пасажів до старіння клітин, при старінні клітин, а потім до пізнього старіння клітин. "Старі" зразки збирали через чотири місяці після початку старіння клітин. Обидва лікарські засоби додавали у середовище при концентрації 5 мкМ. Червоний стовпчик в умовах "старі": культури без лікарських засобів через 4 місяці у стані старіння клітин. На фіг. 17а показано, що число копій І 1 підвищувалося при старінні клітин у всіх трьох лініях клітин, та обидва лікарські засоби значно запобігали даному підвищенню, причому адефовір був дещо ефективнішим, ніж ламівудин.
Вплив 5 мкМ адефовіру та ламівудину на експресію генів інтерферону оцінювали у двох лініях клітин (Е1 та ІМКО0О) та на двох генах інтерферону (ІЕМ-а та ІЕМ-ВІ1), як описано на фіг. 17а, за виключенням того, що експресію зазначених генів вимірювали за допомогою ЗТ-КкПЛР.
На фіг. 17р показано, що висока експресія генів інтерферону у старих клітинах значно знижувалася у всіх випадках під впливом обох лікарських засобів, та знову адефовір був дещо більш ефективним, ніж ламівудин. Червоні стовбці являють собою культури без лікарських засобів через 4 місяці старіння клітин.
Вплив 5 мкМ адефовіру та ламівудину на експресію генів БАР оцінювали у одній лінії клітин (ГЕ1), використовуючи два гени ЗА5Р (1-6 та ММРЗ). КТРЛ являв собою експресію у нормальних, до старіння, необроблених клітинах. На фіг. 17с показано, що спостерігали підвищення експресії зі старінням клітин (червоні стовпчики), та у обох випадках експресія генів 5А5Р значно знижувалася після обробки лікарськими засобами, причому адефовір був дещо більш ефективнішим, ніж ламівудин.
Нарешті, вплив високих концентрацій ламівудину та емтрицитабіну (10 мкМ та 50 мкМ) на експресію генів інтерферону (ІЕМ-а та ІЄМ-В1) оцінювали у лінії клітин ГЕ1. Це здійснювали шляхом пасирування клітин І Е1 до стану старіння, підтримки їх у стані старіння клітин впродовж трьох місяців, додавання лікарських засобів, витримування клітин у присутності лікарських засобів впродовж 1 місяця, потім збору через 4 місяці. Експресію генів інтерферону оцінювали за допомогою ЗТ-КОЛР. КТРЛ являв собою клітини, оброблені, як описано вище, але без лікарських засобів. На фіг. 174 показано, що при концентрації 10 мкМ ламівудин знижував індукцію ІЕМ-І та був дещо ефективнішим, ніж емтрицитабін. При концентрації 50 мкМ ламівудин насправді викликав підвищення експресії інтерферонів, навіть перевершуючи рівні, що спостерігаються у необробленій клітині. Вважають, що таке підвищення було викликане токсичністю лікарського засобу на даних високих рівнях. Навпаки, емтрицитабін при концентрації 50 мкМ знижував експресію інтерферонів, навіть до нижчого рівня, ніж зниження, що спостерігається при 10 мкМ.
Відповідно, при високих дозах токсичність ІЗТ може погіршувати їх здатність зупиняти або блокувати шкідливий вплив старих клітин та їх здатність попереджати або обертати пов'язане з віком запалення та розлади. 60 ПРИКЛАД 6 ПОРІВНЯЛЬНА ОЦІНКА ДЕКІЛЬКОХ ІЗТ У АНАЛІЗІ ДОЗА-ВІДПОВІДЬ
ІНГІБУВАННЯ АКТИВНОСТІ І 1 У КЛІТИНАХ МИШІ ТА ЛЮДИНИ
Оцінювали здатність восьми сполук ІЗТ інгібувати активність ГІМЕ-1 (11) у аналізі ретротранспозиції 11 миші: ламівудину (3ТС); ставудину; емтрицитабіну; априцитабіну; тенофовіру дизопроксилу; ценсавудину; ельвуцитабіну та тенофовіру. Три сполуки ІЗТ оцінювали у аналізі ретротранспозиції 1 людини: ламівудин (З3ТС); ценсавудин та ельвуцитабін.
Аналіз ретротранспозиції ГІМЕ-1 миші
Кодуюча подвійну люциферазу плазміда руУхХО16, що містить елемент 1/1 миші, була описана у Хіе та інш., 2011. 151) Ламівудин (З3ТС), ставудин (а4Т), емтрицитабін, априцитабін, тенофовіру дизопроксил та тенофовір придбавали у АК Зсіеєпсе. Ельвуцитабін отримували за допомогою синтезу на замовлення. Ценсавудин синтезували у Опсоїу5 ВіоРВпагта. Клітини раку шийки матки НеГа культивували при 37 "С у термостаті з вологістю 5 95 СОг у модифікованому за способом Дульбекко середовищі Ігла (ОМЕМ) з високим вмістом глюкози (4500 мг/л глюкози),
Ї-глутаміном, піруватом натрію та бікарбонатом натрію (бЗідта), доповненому 10 95 термоінактивованою фетальною бичачою сироваткою (Тпепто Різпег).
Аналізи проводили, як описано у Хіе та ін., 2011, (151)| з декількома модифікаціями.
Репортерний аналіз проводили у 96-лункових білих планшетах з оптичним дном. 6000 клітин
Нега висували у кожну лунку за 24 години до трансфекції та обробки сполуками. Усі сполуки ресуспендували у ДМСО. Концентрації вихідного розчину змінювалися від 50 мМ до 1,25 ММ в залежності від розчинності сполуки. Отримували серійні розведення (1:3) у ДМСО. Десять різних концентрацій кожної сполуки досліджували у трьох повторах. Середовище, що містить різні концентрації сполук, отримували шляхом додавання 2 мкл розведення сполуки у 1 мл культурального середовища. Кінцева концентрація ДМСО у середовищі становила 0,2 95.
Реагент для трансфекції РизЕМЕФ НО (Рготеда) використовували для трансфекції плазмідою руУхХоО16 клітин. Суміш для трансфекції отримували у ОрРІМЕМ (Тпегто Різпег), використовуючи співвідношення реагенту та ДНК 3,511, слідуючи інструкціям виробника. Культуральне середовище видаляли з клітин та відкидали. Суміш для трансфекції (5 мкл) змішували з середовищем, що містить сполуку (100 мкл/лунку), та цю суміш додавали до клітин кожної лунки. Клітини інкубували впродовж 48 год. при 37 "С/ 5 965 СО».
Зо Проводили кількісний аналіз активності люциферазного репортеру за допомогою системи для репортерного аналізу Юиаї!-І исітегазеФф (Рготеда), слідуючи інструкціям виробника для багатолункових планшетів з наступною модифікацією: Клітини лізували безпосередньо у багатолунковому планшеті за допомогою 30 мкл пасивного лізуючого буферу (РІ. В) впродовж 20 хвил. при кімнатній температурі при плавному струшуванні, щоб гарантувати повний лізис клітин (замість 20 мкл РІВ впродовж 15 хвил.). Вимірювали сигнали люциферази РігеПу та
КепіШа, застосовуючи багатомодовий спектрофотометр для прочитання мікропланшетів зресігаМах іЗх. Для вимірювання сигналів Рігепу та Кепійа використовували час накопичення сигналу 100 мс та 10 мс, відповідно. Відносну активність 1 розраховували як РігепПйу/КепіМНйа " 10000. Результати інгібування доза-відповідь апроксимували чотирипараметричним логістичним рівнянням, використовуючи нелінійну регресію (застосовуючи Ссгарпрай Ргізт 8), щоб визначити значення ІСзо для кожного інгібітору. Експеримент проводили двічі, незалежно.
Результати
Криві інгібування доза-відповідь для восьми сполук ІЗТ у двох незалежних експериментах представлені на фіг. 18А та фіг. 188, відповідно. Значення ІСхо коротко представлені у таблиці 10. Неочікувано, для двох сполук ІЗТ - ценсавудину та ельвуцитабіну - виявили набагато більш низькі значення ІСво (приблизно 100 нМ), ніж для інших сполук ІЗТ, таким чином, вони проявили неочікувану інгібувальну активність у відношенні І 1 миші.
Аналіз ретротранспозиції І ІМЕ-1 людини
З огляду на їх несподівану здатність пригнічувати активність 1 миші, досліджували здатність ценсавудину та ельвуцитабіну пригнічувати активність ЇЇ людини. Ламівудин також досліджували для порівняння.
Дослідження 1 людини проводили дуже подібним чином з такими для миші. рУХО17, що кодує послідовність ГІМЕ-1 людини, "7 використовували замість руУхХО16. Так як людська конструкція давала менший сигнал, сполуки інкубували з клітинами впродовж 72 годин замість 48 годин та клітини висівали при щільності 2000/лунку замість 6000б/лунку. Крім того, співвідношення реагенту для трансфекції та ДНК становило 2: 1 замість 3,5: 1.
Результати
Криві інгібування доза-відповідь для трьох сполук ІЗТ представлені на фіг. 19А-В та значення ІСво коротко представлені у таблиці 11. Знову, ценсавудин та ельвуцитабін проявили 60 неочікувану інгібувальну активність у відношенні 1 людини (ІСсо приблизно 100 нМ) у порівнянні з ламівудином (ІСзо більше 800 нМ).
Аналіз життєздатності клітин
Вище описано, що токсичність ІЗТ може порушити їх здатність зупиняти або блокувати шкідливий вплив старих клітин та їх здатність запобігати або обертати пов'язане з віком запалення та розлади. Потенційну токсичність ламівудину (3ТС); ставудину; емтрицитабіну; априцитабіну; тенофовіру дизопроксилу; ценсавудину; ельвуцитабіну та тенофовіру оцінювали у аналізі життєздатності клітин у дозах, що використовуються для отримання кривих доза- відповідь інгібування 11.
Клітини НеГа обробляли різними концентраціями восьми сполук ІЗТ впродовж 48 годин.
Життєздатність клітин вимірювали за допомогою люмінесцентного аналізу життєздатності клітин СеїїТйетг-Сіо? (Рготеда?) та представляли у вигляді відсотку життєздатних клітин у порівнянні з необробленими клітинами. Стауроспорин, який, як відомо, викликає загибель клітин, використовували у якості контролю.
Результати
На фіг. 20 показано, що вісім сполук ІЗТ не приводили до яких-небудь значимих рівнів загибелі клітин у протилежність контролю - стауроспорину.
На закінчення, обидва ценсавудин та ельвуцитабін проявили несподівану здатність пригнічувати активність І 1 миші та людини (ІСзо приблизно 100 нМ), не викликаючи токсичність у аналізі життєздатності клітин при дозах до 2 мкМ.
Таблиці, описані у даному описі, представлені нижче.
Таблиця 1
Перелік праймерів, використовуваних у аналізі ПЛР 5-НТО 1ІМЕ-1Ї, положення 12-31,
МО 15ОТАРА смислова орієнтаціяг.
Набір АГ 5-нНТО МЕ, положення 64-83, прайме МОІ15О0ТАРА | ССААВАтТасйССОпААТАСОА |антисмислова орієнтаціяг. рів 1 АН АААТСАСССО,ТСТІСТОаССтТ | Використовували у експериментах ЗТ-
Амплікон А, КПЛР для оцінки експресії РНК ІН. фіг. 16 Використовували у експеримента
СПІР. 5-НТО 1 ІМЕ-1, положення 402-421, смислова орієнтаціяг.
Набір МОЇ 15ОТАВЕ 5-НТО ТІМЕ-1, положення 454-473, прайме мМмрілозОотАВА СаАСАТСАААСТаСААОСИСсо | антисмислова орієнтаціяг. рів 2 Амплікон вісС,сасСсастттатТТАССТА |Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 16 КПЛР для оцінки експресії РНК ІН.
Використовували у експеримента
СПІР. 5-НТО 1 ІМЕ-1, положення 474-492, смислова орієнтаціяг.
Набір МО 15ОТАСЕ 5-НТО 1 ІМЕ-1, положення 530-549, прайме МОЇ 15ОТАСА | ТАААСАДдаСасасСаацАА антисмислова орієнтаціяг. рів З Амплікон сІАд,сАдсатапАаСсСТАСАСАСИ | Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 16 КПЛР для оцінки експресії РНК ІН.
Використовували у експеримента
СПІР. 5-НТО 1 ІМЕ-1, положення 619-638, смислова орієнтаціяг.
Набір МОГ 15ОТАОЕ 5-НТО 1 ІМЕ-1, положення 647-666, прайме МО 15ОТвОоВА | дададасСАаТаатТТсСТоСсСА |антисмислова орієнтаціяг. рів 4 Амплікон ріІсСАаТСТассСатсСТСАСАТ |Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 16 КПЛР для оцінки експресії РНК ІН.
Використовували у експеримента
СПІР.
ВРЗ1 ГІМЕ-1, положення 1395-1414, смислова орієнтаціяг.
Набір МОІЛОВеТЕ ВРЗ1 ГІМЕ-1, положення 1508-1527, прайме МОІЛОВЕІА |АССТаААдатТаАСОацпасцАСЦА |антисмислова орієнтаціяг. рів 5 Амплікон ЕІ сСсТассттастАпАТТОасиОс | Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 16 КПЛР для оцінки експресії РНК ІН.
Використовували у експеримента
СПІР.
ВРЗ2 ПІМЕ-1, положення 5731-5753, смислова орієнтаціяг.
ВРЗ2 ГІМЕ-1, положення 5772-5794, антисмислова орієнтаціяг.
Зонд для експериментов ТадМап.
ОВЕ2Е САДАСАССаСАТАТТСТСАСТО ОРЕ2Е та ОРЕ2В. використовували у
Набір |ОВГ2В А експериментах ЗТ-КПЛР 5УВК Огееп прайме | Зонд окЕ2 сттостататсСАТтатаАТСТо й ш ' . для оцінки експресії РНК ІН, та ре Фо 7 АССТОССААТТОААС міс оо оразом 3 00 зондом оНгг фіг. г використовували у експеримента
КПЛР ТадМап на геномній ДНК, щоб визначити відносне число копій елементів ЇТ1Н. Праймери розробили та перевірили, як описано3.
Ген рибосомної 55 РНК, смислова орієнтація.
Ген рибосомної 55 РНК, антисмислова орієнтація.
Зонд для експериментів Тадмап.
Набір Б5Е до отаАТотовоАластА Використовували для внутрішнього прайме 55 нормування, разом з набором рів 7 551330НД ТАМ праймерів 3, у експериментах кпПЛР
ТадмМап она огеномній ДНК, щоб визначити відносне число копій елементів Г1Н.
Праймери розробили та перевірили, як описаноз.
САРБН, смислова орієнтація.
САРБН, антисмислова орієнтація.
Набір Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК прайме САРОНЕМУ тадцватСААТААСОИСИтТО |гену САРОН (ММ 001256799). рів 8 САРОНАМ вААДСИатТаААсатСасАстТсСА |Праймери захоплюють інтрон.
Використовували у якості внутрішнього нормалізатору у експериментах щодо експресії генів.
Інтрон 4 САРОН, смислова орієнтація. пра йме САРОНІМТАЕ. | ССАССАСТОАСТОСААСАСА орієнтація. САРОН, антисмислова рів 9 9АРОНІМТЯВ |0 СТАОТТОССТОСССАААОСА Використовували у якості негативного контролю у експериментах СПІР.
Консенсус інтерферону альфа, смислова орієнтація.
Консенсус інтерферону альфа, антисмислова орієнтація.
Набір |(АСРІІЕМАРМ/ | ПТФАТаССААССАСТТССАС | Консенсус інтерферону альфа, прайме |АСРІІЕМАВМІ | ТТСАТСССАдДИ,САССАСАТОА |антисмислова орієнтація. рів 10 |(АСРІІЕМАВМ2 | ТАТТОССАДИаСАС!САСАТОА |Використовували у експериментах ЗТ-
КПЛР для оцінки сукупної експресії генів інтерферону альфа людини. Усі
З праймери використовували у одній реакції.
Набір ІЕМВІ1, смислова орієнтація. прайме МОІЕМВІРЕМ |(АСасСасСАТТОАССАТСТАТ | ЕМВ, антисмислова орієнтація. рів 11 МОІЕМВ1 М СТСТСАТТССАСССАСТОаСтТ |Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК гену ІЕМВІ (ММ 002176).
ЕВІ, смислова орієнтація.
Набір |монедвіАє | АСТСТСАССТОССАТОТТОС | 281, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 12 МОНЗАВІАВ (АтТоСатасАстостаттота гену ВВІ (ММ 000321). Праймери захоплюють інтрон.
ЕВІ, смислова орієнтація.
Набір ЕВІ1, антисмислова орієнтація. тайм МОТО (ОТТО лА | Виристовували для ЗГАПИР, мен рів 13 гену КВІТ (ММ 0028955). Праймери захоплюють інтрон.
КВІ2, смислова орієнтація.
Набір МОНеРІЗОЕ | АСТСОСССАССССТСАСАТ ЕВІ2, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 14 МОНОРІЗОВ |ІтТоСсСстТоСАсаСсататАастт гену БВІ?2 (ММ 005611). Праймери захоплюють інтрон.
Набір МОТВЕХІСО5 ТКЕХ'Т, смислова орієнтація. прайме Е тооосСстТСасАТСТТААСАС /|ТЕЕХТ, антисмислова орієнтація. рів 15 МОТВЕХІТСО5 | СМААДАААСАТаАсИас!ІТСТОС | Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК в гену ТКЕХІ (ММ 007248). Праймери
11111111 |захоплюютьінтрон..д///7/://///З/-Ш
ЕОХАТ, смислова орієнтація. пра йме МОН5РОХАТЕ | ССААСАССОСССАССТАСАС Використовували для стента НК рів 16 МОНЗРЕОХАТВА | ТФОДАссАастАаатасвсиасиаТос гену ЕОХАЇ (ММ. 004496). Праймери захоплюють інтрон.
ММРІ, смислова орієнтація.
Набір ЛІММРІ ЕМ АаССТТоСААСТОТасАСИТАА | ММР'І, антисмислова орієнтація. прайме ХІММРІВУ тат Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНКІ рів 17 ССОпАТОАТСТОСССТОАСАА |гену ММРІ1 (ММ 001145938).
Праймери захоплюють інтрон.
ММРЗ, смислова орієнтація.
Набір ЛІММРЗЕМУ годаосттАсАтТАСлавАТТО ММРЗ, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 18 УММРЗАМ САС ЗАСТТТоАсАОСТТТоТ гену ММРЗ (ММ 002422). Праймери захоплюють інтрон.
І.6, смислова орієнтація.
Набір Лів дАСтовсАсААААсААоСТаА І.Є, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 19 УЛ вАМ дослвасллатотостоАтто гену 6 (ММ 000600). Праймери захоплюють інтрон.
СХ 8 (ІІ 8), смислова орієнтація.
Набі ат тТаАдАдада,асвастаАсцАА | СХСІ 8 (ІІ 8), антисмислова п займе ЗЛІ ВЕМУ тт орієнтація.
ТЛІ 8АМ СССТАСААСАСПСАСССАСАСАА | Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК
Р ТАС гену СХСІ8 (ММ 000584). Праймери захоплюють інтрон.
ССІ2, смислова орієнтація.
Набір ССІ2, антисмислова орієнтація. . УСС 2 ААСАССАТТатТОаССААдааА прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 21 УСС 2вУ тсаслатттасатттаст гену ССІ2 (ММ 002982). Праймери захоплюють інтрон.
АСААТОСОСАСАААССТТОТС СХС12, смислова орієнтація.
Набір ЛІСХСІ2 М т СХСІ2, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 22 МСхХОСІ2вУ соттотавтолоттавАтто генусхсСІ2 (ММ 002089). Праймери захоплюють інтрон.
І--1фД, смислова орієнтація.
Набір ПІВЕТАЕМУ оосолоталАлтаАтовоттА І/-1ф, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 23 І ТВЕТАВМ отосалосласлоттоАтото гену ПІВ (ММ 000576). Праймери захоплюють інтрон
ІКЕ9, смислова орієнтація.
Набір ІЕЕ9, антисмислова орієнтація. . МОІВГЗЕМУ СААДСТОДОаИСССССТТТСАА прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 24 МОІВГЗАМ сасоСбаттатАпАТаААСаИТт гену ІБЕ9 (ММ 006084). Праймери захоплюють інтрон
ІКЕ7, смислова орієнтація.
Набір ІЕЕ7, антисмислова орієнтація. . МОІВЕ7ЕМУ сасСстТацпсААААССААСТТОСИ прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 25 МОІВЕ7ВМ аТТАТСССасСсАаСАТСАССА гену ІБЕ7 (ММ 001572). Праймери захоплюють інтрон
ОАБІ, смислова орієнтація.
Набір ОАФБІ, антисмислова орієнтація. рів 26 гену ОАБЗІ (ММ 016816). Праймери захоплюють інтрон
Набір АСОСаТаСтТатаААААСАдДАСАА | сбАБ, смислова орієнтація. . НЗСаАБЕМУ . . прайме НеССАЄВУ а СОАБ, антисмислова орієнтація. рів 27 асТосССАСТаАСТОаТтСстТтОаАса | Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК
І --17 7/7 ож захоплюють інтрон
ЗТІМО, смислова орієнтація. прайме НОБТІМОТАМ |АТАТСТОСОССТОАТОСТОС | вудористовували для ЗТ-ЖПЛЕ мРНК рів 28 гену ТМЕМ173 (ММ 198282).
Праймери захоплюють інтрон
СОКМІА, смислова орієнтація. прайме ПСОКМТАРМ | ЗАОАСТСТСАО ОТО в дористовували для ЗТПЛЕ мРНК рів 29 гену СОКМІТА (ММ 000389). Праймери захоплюють інтрон
СОКМаА (р16), смислова орієнтація.
Набір СОКМ2А (р16), антисмислова прайме ТІСОКМ2АРМУ | СССААсСатсссСтТСАСАСАТС |орієнтація. рів 30 ТІСОКМ2АВМ |СссСтТатАасаАСсСТТСОсатаА |Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНКІ гену СОКМ2А (ММ 000077). Праймери захоплюють інтрон
Сарай, смислова орієнтація.
Сарай, антисмислова орієнтація.
Набір Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК прайме МаАРОНЕ ссасСбасАТСТТСсТтТата гена САРОН (ММ 008084.3). рів 31 МаАРОНА атТаАСсСАсСасСсассССААТА Праймери захоплюють інтрон.
Використовували у якості внутрішнього нормалізатору у експериментах щодо експресії генів.
Незробарб!, смислова орієнтація.
Незробар!, антисмислова орієнтація.
Набір ММНО5РОЗОАВІ1 Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНКІ прайме Е ССАССАСССТастотТатАСТА | гену Норобар1 (ММ 008302). рів 32 ММН5РООАВІ | ССТСТОСАТаСТОаСАСТТОС |Праймери захоплюють інтрон.
В Використовували у якості другого нормалізатору у експериментах щодо експресії генів.
Св, смислова орієнтація. би5р, антисмислова орієнтація. прайме ММОВВАХ |ССТОАССТІТОТОАОСАКОО ена СиоЬ (НМ, 010368). Праймери рів 33 захоплюють інтрон. Використовували у якості другого нормалізатору У експериментах щодо експресії генів.
Консенсус інтерферону альфа, смислова орієнтація.
Консенсус інтерферону альфа,
Набір СВСОМІЕМАЕ тЄтаАТаСсАССАСаТасцстся антисмислова орієнтація. прайме СВСОМІЕМАВ АдадаасСТоТоСАСАСТТСТасСТт | Використовували у експериментах ЗТ- рів 34 ста КПЛР для оцінки сукупної експресії генів інтерферону альфа миші.
Праймери розробили та перевірили, як описано".
Ії, смислова орієнтація.
Набір СВІВЕ7ЕМУ СТоСТОАССОСАСССТТО Ін, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 35 СВІВЕ7ВМУ сттсттАСТастаааасСсСАТ гену 7 (ММ 016850). Праймери захоплюють інтрон.
Оаз1, смислова орієнтація.
Набір ММОАВІВЕ ТсТОоСстТТТАТОССССТТССС Оа5»1, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів36 | ММОАБІВА |ТООАСТОССАТАСТОССАСО | ена ПО (ММ 001083925). Праймери захоплюють інтрон.
58-НТО ГІМЕ-1 миші, положення 392-
УКСІМЕТ ЕМ 412, смислова орієнтація.
Набір ГУКОИМЕТВАМ 5-НТО / ПІМЕ-1 миші, 596-616, прайме | Амплікон М, СТОСТО ес АТ антисмислова орієнтація. рів 37 |додат. дані, Використовували у експериментах ЗтТ- фіг. 61. КПЛР для оцінки експресії РНК 11 миші.
Сакпга, смислова орієнтація.
Набір Сакпга, антисмислова орієнтація. . РІбМоизенг ссалсасасс,татТасСАТ прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 38 РІбМоизей тТАСТаААСИаТтТассСАТСА гену Сакп?а (ММ 009877). Праймери захоплюють інтрон.
Мтр3, смислова орієнтація. (райме СВММРОРИ САС ТО АТО СТ В стовували для ЗТ ПЛ мРНК рів 39 СВММРЗАМ ССААСТасСавААаАТОСАСТО гену Мтр3 (ММ. 0108209). Праймери захоплюють інтрон.
ІІ-6, смислова орієнтація.
Набір СВІЇ ЕМ са АодосАоАсттодолалО ІІ-6, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 40 СВІ єм сао ОЗАТТТООсАсАОАА гену б (ММ 031168). Праймери захоплюють інтрон.
Раї1, смислова орієнтація.
Набір Раї1, антисмислова орієнтація. прайме ММА СВО Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 41 гену Раїї (ММ 008871). Праймери захоплюють інтрон.
Асаса, смислова орієнтація. прайме |АРАСАСАЄ /|СТООСТОСАТОСАТТАТОТСА | ву ористовували для ЗТ-КПЛР. МРНК рів 42 АРАСАСАН тастАдаАдстасосататаАА гену Асаса (ММ 133360). Праймери захоплюють інтрон.
ЕРазп, смислова орієнтація.
Набір ЕРазп, антисмислова орієнтація. . АРЕАБМЕ стасатТаасСтТАТОАТТАТОС прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 43 АРЕАЗМА дсатта7астатостотатАат гену Базп (ММ 007988). Праймери захоплюють інтрон. оегерп, смислова орієнтація.
Набір гер, антисмислова орієнтація. прайме АРОНЕВВ САТ ОСА Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 44 гену 5герИ (ММ 011480). Праймери захоплюють інтрон.
Набі С/ЕВРОа, смислова орієнтація. п займе АРСЕВРАЕ тпсасватСасСстТасАТСТСТА |С/ЕВРО, антисмислова орієнтація. пав АРСЕВРАН ТСАдДаспАпАААССАССАСОС | Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНКІ й гену С/ЛЕВРа (ММ 007678).
Асаср, смислова орієнтація.
Набір АРАСАСВЕ долаосвласастослават Асаср, антисмислова орієнтація. прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 46 АРАСАСВА полАсАтОовАотосАССТвОТ гену Асасб (ММ 133904). Праймери захоплюють інтрон.
Ррагоу, смислова орієнтація.
Набір Рраго, антисмислова орієнтація. . АРРРАНИЕ тсастаАтТасАСТассСтТАТ прайме Використовували для ЗТ-КПЛР. мРНК рів 47 АРРРАНОВ ааААТасаАатааТСсТТоСА гену Ррагу (ММ. 011146). Праймери захоплюють інтрон.
Набі МОММІлтоОВ 1 ВРЗ1 ГІМЕ-1 миші, положення 1341- п займе ЕМОММІЛОВЕ|АТСТаТСТоССАССИТСТОСтТ |1360, смислова орієнтація. пав 1КАмплікон Х) ТОСТоСаТтТТАССтТСасс ВРЗ1 ГІМЕ-1 миші, положення 1460- р додат. дані, 1441, антисмислова орієнтація.
фіг. 61. Використовували у експериментах ЗТ-
КПЛР для оцінки експресії РНК 11 миші.
ВРЗ32 ГІМЕ-1 миші, положення 4786-
МОММтовЕ2 4805, смислова орієнтація.
Набір | ЕМОММІЛОВЕ ВРЗ32 ГІМЕ-1 миші, положення 4939- прайме |(2КАмплікон "У, о ООТАОАСТСАСССОСАЯ 4920, антисмислова орієнтація. рів 49 |додат. дані, Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 61. КПЛР для оцінки експресії РНК 11 миші. 3-НТО ГІМЕ-1 миші, положення 6344-
МмОоММ зт 6363, смислова орієнтація.
Набір | ЕМОММ/ ЗТ 3-НТО ГІМЕ-1 миші, положення 6538- прайме | ККАмплікон 7, Сет ОТО 6519, антисмислова орієнтація. рів 50 |/|додат. дані, Використовували у експериментах ЗТ- фіг. 61. КПЛР для оцінки експресії РНК 11 миші. 5-НТО /( ІМЕ-1 миші, смислова
Набір орієнтація. прайме МОММІ1ТЕЕ |АТСаСАССАпАдапСАСАСОа 5-нТО ШМЕ-1 миші, антисмислова рів 51 МОММІ1ТЕА (АТасСаАдсСсастаста орієнтація.
Праймери ампліфікують один з поліморфізмів сімейств І-1 ГКІ-1П). 5-НТО /( ІМЕ-1 миші, смислова . орієнтація. пра йме МОММІ МОМ АСАСААССОСАСССААТОСА /5-НТО ПМЕ-1 миші, антисмислова у асо атассСсСсСТтАСТСАСАС -|орієнтація. рів 52 |В Прай г: раймери ампліфікують один з поліморфізмів сімейств І 1 Мам). 5-НТО /( ІМЕ-1 миші, смислова
Набір орієнтація. прайме МОММІ1МОрАР| ТССССАССССаАТССТААСАС 5-нТО ШМЕ-1 миші, антисмислова рів 53 МОММІМОАР| СстТотТасСАааСААаСТСТСтТт ОО |орієнтація.
Праймери ампліфікують один з поліморфізмів сімейств 1 МаА(Мм-МІ). 1 Усі послідовності приведені у орієнтації 5-3. Набори праймерів 1-30 специфічні для перерахованих генів людини; набори праймерів 31-53 специфічні для миші. 2 Усі положення ГІМЕ-1 зазначені відносно консенсусної послідовності Ї1Н5 (Кербазе, пОру/Лумли. ді пої. ого/гербазв/).
З Див. Сошта!, М.с. та інш. І 1 геігоїгапх5роз5йіоп іп питап пешгаї! ргодепійог сеїЇ5. Маїиге 460, 1127-31 (2009). 1 Див. Сашііег, б. Та інш. А їуре І іпФепегоп ашосгіпе-рагасііпе Іоор ів іпмоїмей іп ТоїІ-їКе гесеріог-іпдисеай іпіепеиКкіп-12р70 зесгтейоп Бу депагйіс сеїІв5. У. Ехр. Мей. 201, 1435-46 (2005).
Таблиця 2
Перелік антитіл
Вид
Антитіло поході | Постачальник Номер у Застосування ження каталозі антитіла . , Контроль завантаження при імуноблоттингу 8с-56330 (УС8) Пмунофлуоресценція іозсіеєпсе5
ТВЕХІ Сеї! Зідпаїїпо 12215
ГОХА! аб170933
ГОХА! аб5089 СПІР посфо ВТАТ З0-8394 Імунофлуоресценція поофаТАТя МиіПіроге 07-224 Імунофлуоресценція
ЗТАТ2 Сеї! Зідпаїїпо 45945
ІВЕ? ар109255
ІВЕ9 МВР2-16991 | Імунофлуоресценція вор .
Х-НгАХ 05-636 | Імунофлуоресценція
МАрЕ?7-26 Пмунофлуоресценція
Гібриди ДНК-РНК ЕМНОО! (59.6) | Імунофлуоресценція
Зс-6216 (С-20) Імунофлуоресценція
Сеї! Відпаїїпо 12912 Імунофлуоресценція
ВРЗ1 ГІМЕ-1 Кролик Подарунок від К.Н. Витв, Імунофлуоресценція людини р Уопп5 Норкіпв! У уоресценц . У.О. Воеке, арЕгАдоО2 (НармАб, .
ВРЗ1 ГІМЕ-1 миші Кролик | клон МУЦ-2-1 2 Імунофлуоресценція 1 Див. Коаіс, М. Та інш. Гопд іпіегерегзейа еІетепі-1 ргоїєїп ехргеззіоп із а НайПта!к ої тапу
Ппитап сапсег5. Ат. У). Раїної. 184, 1280-6 (2014).
Таблиця З
Перелік експресованих елементів 11, ідентифікованих за допомогою ЗТ-ПЛР довгих фрагментів 1-07 спг14 63115693-63121722 (6029 п.о.) ітнь5 16 так 1-09 сих 11934270-11940496 (6226 п.о.) ітнь5 10 Так 1-13 сп17 66596080-66602096 (6016 п.о.) ітнь5 9 Так 1-20 спг14 70546288-70552339 (6051 п.о.) ітнь5 б Так (1-24 сг 49679257-49685289 (6032 п.о.) ітнь5 5 Так 1-25 спа 21158389-21164420 (6031 п.о.) ітнь5 5 Так (1-54 сп17 9614984-9621024 (6040 п.о.) ітнь5 З Так 1-55 сих 155515003-155521032 (6029 п.03 | 11 Н5 2125 Так 1-58 сих 47782657-47 788686 (6029 п.о.) ітнь5 2125 Так 1-59 сп 118851349-118857375 (6026 по) | 11 Н5 2125 Так 1-62 спг16 9583477-9589517 (6040 п.о.) ітнь5 2125 Так 1-76 спг2 166987450-166993486 (6036 по) | 11 Н5 2 Так 1-85 спг8 128451975-128458006 (6031 по) | Н5 18 Так
Г1-116 спо 104517585-104523614 (6029 п.03 | Н5 1 Так
Г1-143 сп 180865798-180871853 (6055п.03 | Н5 1 Так
Г1-171 спо 98781926-98787958 (6032 п.о.) ітнь5 08 Так
Г1-172 спгб 2416758-2422787 (6029 п.о.) ітнь5 08 Так ї1-180 спгЗ 159094350-159100395 (6045п.03 | Н5 1 Так
Г1-218 сп15 70728652-70734159 (5507 п.о.) ітнь5 1 Так 1-06 сг 70193829-70199858 (6029 п.о.) ітнь5 18 1-08 спа 87346624-87352647 (6023 п.о.) ітнь5 11 1-17 спа 78346978-78353011 (6033 п.о.) ітнь5 7 1-23 спг18 13975361-13980770 (5409 п.о.) ітнь5 5 1-31 спг9 110787598 - 110793630 (6032 п.о) 11 Н5 4 1-35 сп 196218871 - 196224903 (6032 п.о) | 11 Н5 4 1-37 спгЗ 103555522 - 103561554 (6032 по) | 11 Н5 4 1-38 спт2 3498696-3504729 (6033 п.о.) ітнь5 4 1-40 спг16 65686512-65692528 (6016 п.о.) ітнь5 4 1-41 сих 50018977-50025006 (6029 п.о.) ітнь5 4 1-45 спа 136292503 - 136298555 (6052 п.о.) 11 Н5 4 1-50 спгЗ 26397518-26403541 (6023 п.о.) ітнь5 З 1-56 спг2го 23422609-23428641 (6032 п.о.) ітнь5 2125 1-57 сп 125119462 - 125125488 (6026 по.) | 11 Н5 2125 1-60 спг2го 11629280-11635312 (6032 п.о.) ітнь5 2125 1-61 спЗ 76612324-76618354 (6030 п.о.) ітнь5 2125 (1-64 спг2 86660186-86666388 (6202 п.о.) ітнь5 2 1-72 спгЗ 132945507 - 132951535 (6028 по.) 11 Н5 2 1-80 спо 166966282 - 166972316 (6034 по) (11 Н5 2 1-81 спа 19077399-19083430 (6031 п.о.) ітнь5 2 1-86 сг 96846151-96852181 (6030 п.о.) ітнь5 18 1-87 спг2 230336570 - 230342014 (5444 по. (11 Н5 18 1-88 спа 135177641 - 135183248 (5607 по.) 11 Н5 18 1-89 спа 52534972-52540999 (6027 п.о.) ітнь5 18 1-90 спо 81612591-81618619 (6028 п.о.) ітнь5 2 1-91 спг8 128890989-128897136(6147 п.о.) ітнь5 2 1-96 спг11 87339532-87345562 (6030 п.о.) ітнь5 2 1-97 спо 177771244 - 177777273 (6029 по | 11 Н5 2 1-98 спо 166140692 - 166146724 (6032 по) | 11 Н5 2 ї1-100 спа б2726449-62732470 (6021 п.о.) Іїтнь5 1 5О0 ї1-103 сп 80942648-80948701 (6053 п.о.) ілнь5 1
Г1-114 спо 105775021 - 105781052 (6031 п.о.) | Т1Н5 1
Г1-115 сп 34144346-34150370 (6024 п.о.) ілнь5 1 ї1-133 сп 113530583 - 113536613 (6030 п.о.) 1 1Н5 1
Г1-135 сп 180330072 - 180336104 (6032 п.о.) 1 Т1Н5 1 1-136 сп 118634254 - 118640283 (6029 п.о.) 1 1Н5 1
Г1-137 сх 54117700-54123731 (6031 п.о.) ілнь5 1 ї1-138 сх 147650235 - 147656268 (6033 п.о.) 1 1Н5 1 1-142 сп 187217153 - 187223183 (6030 п.о.) 1 1Н5 1 1-144 спа 69772911-69778942 (6031 п.о.) ілнь5 1 1-149 сп 239622999 - 239629024 (6025 п.о.) 1 1Н5 1
Ї1-150 сп 146716693 - 146722719 (6026 п.о.) 1 Т1Н5 1
Г1-157 спгЗ 19495494-19501518 (6024 п.о.) ілнь5 1 1-169 сп 58383173-58389205 (6032 п.о.) ілнь5 о8
Г1-170 спгб 19761393-19767419 (6026 п.о.) ілнь5 о8
Г1-173 спе 36112007-36118038 (6031 п.о.) ілнь5 о8 1-179 спгб 112700246 - 112706279 (6033 п.о.) 1 Т1Н5 1 1-181 спгЗ 108745901 - 108751932 (6031 п.о.) | Т1Н5 1 1-182 спг4 15838047-15844384 (6337 п.о.) ілнь5 1 1-184 спів 135872363 - 135878417 (6054 п.о.) 1 1Н5 1
Г1-187 спи 58673408-58679295 (5887 п.о.) ілнь5 1 1-194 сп 85745020-85749612 (4592 п.о.) ілнь5 1
І1-196 спт5 82882394-82888420 (6026 п.о.) ілнь5 1
Г1-197 спт5 51416717-51422747 (6030 п.о.) ілнь5 1 1-199 спе 4730230-4736261 (6031 п.о.) ілнь5 1 ї1-212 спгЗ 54393823-54400093 (6270 п.о.) ілнь5 1 1-05 спгЗ 141764155 - 141770160 (6005 п.о.) І 1РА2 24 1-10 спг4 164097249 - 164103279 (6030 п.о.) І 1РА2 9 1-12 сп17 61106730-61112789 (6059 п.о.) І1РА2 9 1-18 спг22 11955882-11962029 (6147 п.о.) І1РА2 6 1-22 спа 67896709-67902725 (6016 п.о.) І1РА2 5 1-27 спгЗ 175781211 - 175786413 (5202 п.о.) ПІ 1РА2 5 1-30 спи 73637028-73643060 (6032 п.о.) І1РА2 5 1-33 спг4 98316999-98322499 (5500 п.о.) І1РА2 4 1-34 спгЗ 178856449 - 178862480 (6031 п.о.) І 1РА2 4 1-39 сп 169251062 - 169257094 (6032 п.о.) І 1РА2 4 1-42 спгЗ 119000971 - 119006991 (6020 п.о.) І 1РА2 4 1-53 сп 106424883 - 106430882 (5999 п.о.) І 1РА2 З 1-66 сп14 86095435-86101470 (6035 п.о.) І1РА2 2 1-73 спг4 65992800-65998803 (6003 п.о.) І1РА2 2 1-74 спо 99149238-99155259 (6021 п.о.) І1РА2 2 1-75 сп 72826947-72833271 (6324 п.о.) І1РА2 2 (1-77 сп З2461029-32467034 (6005 п.о.) І1РА2 2 1-83 спгЗ 67082246-67088304 (6058 п.о.) І1РА2 2
Г1-101 спа 102826678 - 102832665 (5987 п.о.) І 1РА2 1 ї1-105 спг2го 25326450-25331184 (4734 п.о.) І1РА2 1
Ї1-107 спи 50978555-50984571 (6016 п.о.) І1РА2 1 ї1-108 спг4 102204431 - 102210459 (6028 п.о.) І 1РА2 1 1-11 сх 113084049 - 113090072 (6023 п.о.) І 1РА2 1
Г1-118 спгг1 9333222-9339374 (6152 п.о.) І1РА2 1 ї1-123 спе 129037643 - 129043675 (6032 п.о.) І 1РА2 1 1-125 сп 85454310-85460328 (6018 п.о.) І1РА2 1 1-128 сп 4611929-4617955 (6026 п.о.) І1РА2 1
Ї1-130 спг16 48768072-48774104 (6032 п.о.) І1РА2 1
Г1-191 спгб 162989238 - 162995263 (6025 п.о.) І 1РА2 1 ї1-132 спів 68358979-68364479 (5500 п.о.) І1РА2 1
І1-134 спо 65160518-65166549 (6031 п.о.) І1РА2 1
1-140 спг4 119273614 - 119279671 (6057 п.о.) І 1РА2 1 1-145 спгЗ 24088959-24094992 (6033 п.о.) І1РА2 1
Г1-151 спа 108993448 - 108999474 (6026 п.о.) І 1РА2 1 1-164 сп17 д1200368-41206401 (6033 п.о.) І1РА2 1
Г1-167 спгЗ 118910744 - 118916772 (6028 п.о.) І 1РА2 1
Г1-175 спе 197687033 - 197693062 (6029 п.о.) І 1РА2 1
Г1-177 сх 154935536 - 154941561 (6025 п.о.) І 1РА2 1
І 1-186 спгб 83797243-83803271 (6028 п.о.) І1РА2 1
І1-188 спів 87621331-87626401 (5070 п.о.) І1РА2 1
І1-189 спт1 100649611 - 100655672 (6061 п.о.) І 1РА2 1 1-198 спт5 54904988-54911051 (6063 п.о.) І1РА2 1 ї1-202 спе 153781069 - 153787086 (6017 п.о.) І 1РА2 1
Ії1-209 сп 85923568-85927951 (4383 п.о.) І1РА2 1 1-211 спе 156251019 - 156257086 (6067 п.о.) І 1РА2 1
І1-215 спг4 132940946 - 132946970 (6024 п.о.) І 1РА2 1 1-221 сх 50056644-50062676 (6032 п.о.) І1РА2 1
І1-223 сх 113337323 - 113343354 (6031 п.о.) І 1РА2 1 1-03 сп19 42768603-42774543 (5940 п.о.) ІТ1РАЗ З1 1-04 спів 55046402-55052502 (6100 п.о.) ІТ1РАЗ 28 1-11 спа 118657390 - 118663531 (6141 п.о.) І 1РАЗ 9 1-15 сп 176307883 - 176313876 (5993 п.о.) І 1РАЗ 7 1-19 спг4 175016241 - 175022252 (6011 п.о.) І 1РАЗ 6 1-26 спІ18 49212269-49218417 (6148 п.о.) ІТ1РАЗ 5 1-29 спт1 22646426-22652446 (6020 п.о.) ІТ1РАЗ 5 1-36 спе 22980654-22984410 (3756 п.о.) ІТ1РАЗ 4 1-44 спо 109602039-109607567(5528 п.о.) ІТ1РАЗ 4 1-46 сп 63728965-63735094 (6129 п.о.) ІТ1РАЗ 4 1-48 сп14 38631448-38637485 (6037 п.о.) ІТ1РАЗ 4 1-49 сп19 42743461-42749399 (5938 п.о.) ІТ1РАЗ 4 1-52 спг4 123632778 - 123638935 (6157 п.о.) І 1РАЗ З 1-65 спе 96375482-96381632 (6150 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-69 сп 100662482 - 100668126 (5644 п.о.) І 1РАЗ 2 1-70 сп 25077154-25083186 (6032 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-78 спа 78502931-78509088 (6157 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-82 спгб 80844240-80850277 (6037 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-84 спів 69015505-69021651 (6146 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-94 спг4 88916060-88922204 (6144 п.о.) ІТ1РАЗ 2 1-104 спг4 142249845 - 142255868 (6023 п.о.) І 1РАЗ 1
Ї1-110 спгЗ 24276690-24282186 (5496 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-113 спг4 119061402 - 119067563 (6161 п.о.) І 1РАЗ 1
Г1-117 спа 10343959-10349500 (5541 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-121 спгЗ 112658647 - 112664665 (6018 п.о.) І 1РАЗ 1 1-124 спг9 68274827-68280864 (6037 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-126 сп 75792130-75798187 (6057 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-139 спт1 31540511-31546645 (6134 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-141 спгЗ 145924279 - 145930431 (6152 п.о.) ІІ 1РАЗ 1
Г1-147 спів 91887863-91893862 (5999 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-148 сх 94858876-94864901 (6025 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-152 спІ18 55886913-55892940 (6027 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-154 спг9 125006549 - 125012715 (6166 п.о.) І 1РАЗ 1
Г1-156 спгб 71826216-71832235 (6019 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-158 спів 91191345-91197369 (6024 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-159 спа 55586438-55592480 (6042 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-165 спе 97521921-97528067 (6146 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-166 спгб 126670052 - 126676070 (6018 п.о.) І 1РАЗ 1 1-174 спа 80143556-80149577 (6021 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-176 спа 51562132-51568340 (6208 п.о.) ІТРАЗ 1
Г1-178 спг9 17536062-17542081 (6019 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-183 спа 80074170-80080329 (6159 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-185 спгб 48733849-48740059 (6210 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-190 спг4 82171911-82177138 (5227 п.0о.) ІТ1РАЗ 1 1-191 спт5 32045176-32051279 (6103 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-192 сп17 71351460-71357401 (5941 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-193 сп 99339116-99345270 (6154 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-195 сп 122509114 - 122515140 (6026 п.о.) І 1РАЗ 1 ї1-200 спо 35855169-35861196 (6027 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-201 спа 31159575-31165595 (6020 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-203 сп14 37766297-37772332 (6035 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-206 сп14 56013511-56019543 (6032 п.о.) ІТ1РАЗ 1 ї1-210 спе 95866030-95872191 (6161 п.о.) ІТ1РАЗ 1 1-214 спг4 94835259-94841286 (6027 п.о.) ІТ1РАЗ 1
Г1-217 сп 84049212-84055231 (6019 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-219 спг16 12069684-12075804 (6120 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-222 сх 55680654-55686684 (6030 п.о.) ІТ1РАЗ 1
І1-224 сх 149432338 - 149438331 (5993 п.о.) І 1РАЗ 1 1-01 спІ18 9165216-9171138 (5922 п.о.) ІТ1РА4 46 1-14 спгЗ 29978961-29984962 (6001 п.о.) ІТ1РА4 7 1-16 спгб 83330453-83336586 (6133 п.о.) ІТ1РА4 7 1-21 спгб 139217130 - 139223263 (6133 п.о.) І 1РА4 6 1-28 спів 49874774-49880758 (5984 п.о.) ІТ1РА4 5 1-32 сп 176077678 - 176083819 (6141 п.о.) І 1РА4 4 1-43 сп 33095404-33101548 (6144 п.о.) ІТ1РА4 4 1-47 спг4 48864081-48870233 (6152 п.о.) ІТ1РА4 4 1-51 сп 130779991 - 130786158 (6167 п.о.) І 1РА4 З 1-63 спгб 7942696-7948800 (6104 п.о.) ІТ1РА4 2 1-71 сп 56505920-56512049 (6129 п.о.) ІТ1РА4 2 1-79 спо 93517474-93523652 (6178 п.о.) ІТ1РА4 2 1-92 спгг1 9182589-9188720 (6131 п.о.) ІТ1РА4 2 1-93 спг4 173772935 - 173779072 (6137 п.о.) І 1РА4 2 1-95 сп 125011752 - 125017885 (6133 п.о.) І 1РА4 2 1-99 спг9 906827 73-90689210 (6437 п.о.) ІТ1РА4 2 ї1-102 спо 64014843-64021048 (6205 п.о.) ІТ1РА4 1 ї1-112 спт5 76776415-76782548 (6133 п.о.) ІТ1РА4 1
Г1-119 спа 11373698-11379329 (5631 п.о.) ІТ1РА4 1 1-120 сп19 24012879-24018978 (6099 п.о.) ІТ1РА4 1 1-122 спгЗ 99031289-99037430 (6141 п.о.) ІТ1РА4 1 1-129 спо 15664019-15669631 (5612 п.о.) ІТ1РА4 1
І1-146 спг4 90478877-90483706 (4829 п.о.) ІТ1РА4 1 ї1-153 сх 76878709-76885597 (6888 п.о.) ІТ1РА4 1
Г1-155 спІ18 43282426-43288579 (6153 п.о.) ІТ1РА4 1 1-160 сп19 20486826-20493102 (6276 п.о.) ІТ1РА4 1
Г1-161 сп 200181868 - 200188010 (6142 п.о.) І 1РА4 1 ї1-162 спт1 100034468 - 100040624 (6156 п.о.) І 1РА4 1 ї1-163 спг2го 29365560-29370431 (4871 п.о.) ІТ1РА4 1 1-168 сп 78706259-78712394 (6135 п.о.) ІТ1РА4 1
І1-204 сп 83178675-83184836 (6161 п.о.) ІТ1РА4 1 ї1-205 спгЗ 39366145-39372264 (6119 п.о.) ІТ1РА4 1 ї1-208 спІ18 45793571-45799710 (6139 п.о.) ІТ1РА4 1
І1-216 сп 39030830-39036977 (6147 п.о.) ІТ1РА4 1 ог |вє, (ювоговонхюююьюте» Рв 6 1-67 спа 370113-376219 (6106 п.о.) ІЇТ1РАБ5 2
1-68 спг11 95811406-95816742 (5336 п.о.) ІТ1РАБ5 2
Г1-106 спо 109822318 - 109828350 (6032 п.0о.) ІІ 1РАБ5 1 ї1-109 сих 12102927-12109072 (6145 п.о.) ІТ1РАБ5 1
Г1-127 спа 59474627-59479488 (4861 п.о.) ІТ1РАБ5 1
Г1-207 сп15 99827462-99833366 (5904 п.о.) ІТ1РАБ5 1
Г1-213 спгЗ 146434278 - 146440207 (5929 п.о.) (І 1РАБ5 1 ше
Інтактний Ї1Н5 71,9 10,9 19 8,5
Неінтактний ГТНЗ 132,1 201 56 25,0
ІГ1РА2 124 18,8 48 21,4
ІТРАЗ 166 25,2 58 25,9
ІРА 118 17,9 34 152
Таблиця 4
Перелік генів, використовуваних у О5ЕА, для ІЕМ-І (50 генів) и нини («2 ( Ло
Назва гену ген
Таблиця 5
Аналіз ОБЕА сигнальних шляхів КЕ, що порівнює ранній пасаж з раннім старінням клітин
Експресія підвищилася з раннього пасажу (РП) до раннього старіння клітин (СТАР-Р) р знач знач пиши ши а Я ПО ПОЛЯ
КЕСО АЗТНМА 28 10,7237|1,7864|-1,00БЕ-03|«1,00Е-02
КЕСО ОВАЕТ МЕНБОВ НОБТ ОІБЕАБЕ 0,685211,7654 -1,00Е-03|с1,00Е-02
КЕсс СЕ. АОНЕБІОМ МОГЕСОГЕ5 САМ5 0,557811,7538|«1,00Е-031с1,00Е-02
КЕСО ОГЕАСТОВУ. ТВАМ5ВОСТІОМ 0,49651|1,74681-1,00Е-03|с1,00Е-02
КЕСО ТУРЕ І ОІАВЕТЕ5 МЕШІТОВ 41. 10,64571| 1,714 |«1,00Е-03Їс1,00Е-02
КЕСО ГУ5ОБОМЕ 0,538811,6878|«1,00Е-03|«1,00Е-02
КЕОб СОМРІЕМЕМТ АМО. СОАООГАТОМ. САВСА 0,578611,68541-1,00Е-03/-1,00Е-02
КЕСС ЕСМ ВЕСЕРТОВ ІМТЕВАСТІОМ 0,512311,5487 |«1,00Е-03|с1,00Е-02
КЕСС, ГЕІЗНМАМІА. ІМЕЕСТІОМ 68 10,5688|1,65591| 1,79Е-03 | 1,51Е-02
СО5ТОМ 5АБР 85 10,547111,6517| 1,80Е-03 | 1,51Е-02
КЕСС РВІОМ РІЗЕАБЕ5 34 10,6326|1,6397| 1,84Е-0О3 | 1,51Е-02
Код ТОКІМЕ СУТОКІМЕ НЕСЕРТОНОМТЕНАСЇ зва | ОАБв1 115705 1,62Е-03 1151-02
Кево топ. КЕ ВЕСЕРТОВ. ВІЄМАЦМО. РАТНМ ве о, 48681 1,492 | 1,73Е-03 1151-02
КЕсаса АОТОІММОМЕ ТНУВОЇЮ ОІЗЕАБЕ 48 10,560511,5336) 3,77Е-03 | 2,66Е-02.
КЕСО ЕМООСУТО5І5 174 10,436511,4427| 5,21Е-03 | 3,49Е-02.
КЕСО МІВАЇ МУОСАВОІТІВ 68 10,531311,5277 8,68Е-03 | 5,47Е-02.
Ки НІВ КЕ НЕСЕРТОВ ВІЄМАНМО РАТНМ вт вів 14977 9062-03 | 5.47Е-02
КЕСС ІМТЕБТІМАЇ ІММОМЕ МЕТМОВК БОВ
ІФА. РВОООСТІОМ 450 |оввав 1,567 | 1,08Е-02 | 6,11Е-02
КЕС2О НУРЕВТВОРНІС САВОІОМУОРАТНУ НСМ | 83 10,481411,4387) 1,08Е-02 | 6,11Е-02.
Стор сОНОдетУє ПОдМО НЕСЕРТОВ МТЕНА 20 0.377911,29281 112Е-02 | 614Е-02
КЕбо АМТІСЕМ. РНОСЕВБІМО. АМО. РНЕВЕМТАТІ 73 |ововє 149141 28Е-02 | в,81Е-02
КЕССО ЕРІТНЕНАЇ СЕ 5ІСМАЦІМО ІМ.
НЕШПСОВАСТЕВ. РУГОВІ. ІМЕЕСТІОМ вт |овтов 1,5038) 1,646-02 | 8,00Е-02
КЕСО 5ТАВСН АМО 5ОСВО5Е МЕТАВОГІЗМ 45 |0,538211,4727 | 1,68Е-02 | 8,00Е-02.
КЕСО МАРК 5ІСМАГІМО РАТНУАУ 268 10,375111,2821) 1,64Е-02 | 8,00Е-02.
КЕС2О АЗСОВВАТЕ АМО АГОАВАТЕ МЕТАВОГІЄМІ 21 10,676611,5631) 2,06Е-02 | 9,32Е-02.
Кесо Мор ИКЕ НЕСЕРТОВ. ВІЄМАНМО. РАТНМ во ово 461437 2,16Е-02 | 9,БАЕ-02
КЕСО АВС ТВАМОРОВТЕН5 0,544 |1,46851| 2,51Е-02 | 1,08Е-01
КЕСО СУТОБОГІС ОМА 5ЕМ5ІМО РАТНУУДУ 52 |10,535711,4752) 2,64Е-02 |11,11Е-01
КОС МАТОНА. КІНЧЕН. СЕН. МЕСІАТЕО. СУТОТ 12 о, 4218 1,3254| 2,83Е-02 | 1 16Е-01
КЕСО ОТНЕВ СІМСАМ РЕСВАВАТІОМ 16 10,696711,5277 3,13Е-02 | 1,24Е-01
КЕССО АГ АМІМЕ АЄРАВТАТЕ АМО СІ ШТАМАТЕ
" МЕТАВОМІ5М 32 |о5тав 1,4414| 3,22Е-02 | 1,24Б-01
КЕСС НЕМАТОРОЇЕТІС СЕ. ГІМЕАДСЕ 85 10,4547|1,3563| 3,42Е-02 | 1,27Е-01
КЕСС СІ МСО5АМІМОСІ УСАМ. ВІО5УМТНЕ5ІБ /"СНОМОВОТІМ ЗШ ЕАТЕ 22 |овіт2 1,4675| 3,59Е-02 | 1,27Б-01
КЕС2Оа АВВНУТНМОСЕМІС ВІСНТ.
МЕМТВІСШАВ САВОІОМУОРАТНУ. АВУС 74 Ат 1,3664| 3З,54Е-02 1,27Б-01
КЕСС ОІГАТЕО САВОІОМУОРАТНУ 90 1044531 1,348 | 3,55Е-02 |1,27Е-01
КЕСО АП'ОСВАЕТ ВЕОЕСТІОМ 35 10,560711,4452) 3,92Е-02 | 1,36Е-01
КЕСО САГСІШМ 5ІСМАГІМО РАТНМ/АДУ 173 10,395611,2886)| 4,46Е-02 | 1,52Е-01
КЕСасе ВЕСШСАТІОМ ОБ АСТІМ СМТОЗКЕГЕТОМ | 210 10,370811,24261| 4,93Е-02 | 1,62Е-01
КЕСО 5ТЕВОЇЮ НОВМОМЕ ВІОЗУМТНЕБІ5 49 10,498211,3661) 5,14Е-02 | 1,66Е-01
КЕСО ПІМОГЕІС АСІЮ МЕТАВОГІЗМ 29 10,566411,3972) 5,98Е-02. | 1,90Е-01
КЕСО ЕГОСАЇ. АОНЕБІОМ 197 10,364611,2184) 6,69Е-02 | 2,09Е-01
СД ТЕОКОСУТЕ ТНАКВЕМООТНЕОАЬ МІНА тв. о, 401611,2474. 7,64Е-02 | 2,З4Е-01
КЕСО ВЕТІМОЇ МЕТАВОГІМ 56 10,4497|1,2695| 9,09Е-02 | 2,70Б-01
КЕСО СНЕМОКІМЕ 5ІСМАСІМО РАТНМ/АУ 183 1Т0,360211,1945) 9,02Е-02 | 2,70Е-01
КЕбО МАВСОГАН ВМООТН. МОВСІЕ. СОМТНАСТІ 12 ово 12155 9,52Е-02 | 2,78Е-01
КЕбО. РАТНОСЕМІС ЕВСНЕНІСНІА. СОЦ ІМЕЕСТІ вза одате 12529|1,16Е-01 3,33Е-01
КЕСС-ОІ МСО5РНІМООПІРІЮ. ВІОБУМТНЕ5ІБ-
САМСЦО-5ЕВІЕв тво оведт ото) ЗЕ -ої 4,70Е-01
КЕСО. 5РНІМООГІРІО. МЕТАВОМІЗМ 1,2155)| 1,79Е-01 | 4,70Е-01
КЕСО ВЕСШАТІОМ ОЄ АОТОРНАСУ 32 10,474811,2109) 1,75Е-01 | 4,70Е-01
КЕСО АВАСНІЮОМІС АСІЮ МЕТАВОГІЄМ 58 10421211,1842) 1,78Е-01 | 4,70Е-01
КЕСО МЕГАМОМА 071 10,4044| 1,182 | 1,76Е-01 | 4,70Е-01
КЕСО МЕТАВОГІ5М ОБ ХЕМОВІОТІС5 ВУ І І
СУТОСНВОМЕ РАБО ва |одовт 1,1816| 1,88Е-01 | 4,86Б-01
КЕСО АХОМ СПІОАМСЕ 0,354 |1,11881| 2,01Е-01 | 5,12Е-01
КЕССе 5МАВЕ ІМТЕВАСТІОМ5. ІМ. І І
МЕВІСОАВ. ТВАМЄРОВТ 0,456 |1,1899) 2,08Е-01 | 5,23Е-01
КЕСО МІСОТІМАТЕ АМО МІСОТІМАМІОЕ І
МЕТАВОГІЄМ 22 |овогв 1,17911| 2,20Б-01 | 5,31 Е-01
КЕССО. ТАЄТЕ ТВАМ5ВОСТІОМ 5О 1Т0,4249| 1,165 | 2719-01 | 5,31 Е-01
КЕСС. МІТВОСЕМ МЕТАВОГІЗМ 23 10,5036|1,17691| 2,24Е-01 | 5,33Е-01
КЕССО РРАВ 5ІСМАМО РАТНМ/АУ 69 10,3797|1,10451| 2,63Е-01 | 5,77 Е-01
КЕСС АК СТАТ 5ІСМАГІМОа РАТНУАДУ 0,334 11,0743) 2,65Е-01 | 5,77Е-01
КЕСО АРОРТОЗБІ5 86 10,366911,09961| 2,67Е-01 | 5,77 Е-01
КЕс2О ОВС МЕТАВОГІЗМ ОТНЕВ ЕМ2УМЕ5 44 |04154|1,1191| 2,81Е-01 | 5,Ь98Б-01
КЕС2О ОВС МЕТАВОГІЗМ СУТОСНВОМЕ Р45О0 0,3754 2,93Е-01 | 6,17Е-01
КЕСС ІМО5ІТОЇ. РНОЗРНАТЕ МЕТАВОГІ5М 54 10,388711,09051| 3,04Е-01 | 6,32Е-01
КЕ. РНОБРНАТІВУНМОВІТОЇ. БІМАЦМО. БУТ 73 ово 10598 3,33Е-01. 6,77Е-01
КЕсСО СІ УСО5РНІМСОГІРІЮ. ВІО5БУМТНЕ5І5 І АСТ о 25 |0,44341,0764| 3,А1Е-01 | 6,86БЕ-01
АМО МЕОГАСТО 5ЕВІЕ5
КЕСС АІ2НЕІМЕН5 ОІЗЕАЗЕ 153 10,322611,0359) 3,57Е-01 | 7,10Е-01
СОБТОМ ІЕМ-1 50 10,378111,0455) 3,69Е-01 | 7,18Е-01
КЕСас ЕВОСТОЗЕ АМО МАММОЗЕ МЕТАВОЇІЯМ | 34 10,397111,0438) 3,81Е-01 | 7,24Е-01
КЕсс СІ МСО5АМІМОСІ САМ. ВІО5УМТНЕ5ІБ І І "НЕРАВАМ ЗЕАТЕ ге |одове 1,0321 | 3,84Е-01 | 7,24Б-01
КЕСО РАМТОТНЕМАТЕ АМО СОА ВІОБУМТНЕБІВ! 16 10,468711,0325) 4,21Е-01 | 7,67Е-01
КЕСО М СІГУСАМ ВІО5УМТНЕВІБЄ 46 10,379811,0231 4,32БЕ-01 | 7,67Е-01
КЕСО САГАСТО5Е МЕТАВОГІЗМ 26 10,413211,0123) 4,50Е-01 | 7,83Е-01
КЕСО СІ МСЕВОМІРІЮО МЕТАВОГІЗМ 43 10,367910,9942) 4,71Е-01 | 8,12Е-01
КЕСО ГОМО ТЕВМ РОТЕМТІАТІОМ 66 10,340810,9796 | 4,99Е-01 | 8,36Е-01
КЕССс ВЕМІМ АМСІОТЕМ5ІМ 5У5ТЕМ 0,4406 4,95Е-01 | 8,36Е-01
КЕСО МАТИВІТМ ОМ5ЕТ ОІАВЕТЕ5 ОБ І І
ТНЕ УОШМС 250 одова|оюттзі 5,17Е-01 | 8,41Б-01
КЕСОа МУМТ БІСМАНМО РАТНУАУ 149 10,3005І10,9739| 5,21Е-01 | 8,41 Е-01
КЕ2СО ЕС САММА В МЕОІАТЕО І І
РНАСОСУТОВІ5 ва ові 0,9621) 5,27Е-01 | 8,41Е-01
КЕСО ТОЕ ВЕТА БІОМАТІМО. РАТНМ/ДУ 0,319 10,96161| 5,47Е-О1 | 8,41 Е-01
КЕСО ВЕТА АГАМІМЕ МЕТАВОГІЗМ 22 |10,404610,9468) 5,33Е-01 | 8,41 Е-01
КЕСО ЕВВВ бІСМАІМОа РАТНУАУ 86 10,313310,9462 5,80Е-01 | 8,41 Е-01
КЕСО ВГАСОЕВ САМСЕВ 0,359 |0,9449| 5,46Е-01 | 8,41 Е-01
КЕсСса а УСОБМІ РНОБРНАТІОЮОМИ ІМОБІТОЇ.
КЕСС! СІ МСІМЕ 5БЕВІМЕ АМО ТНАЕОМІМЕ
КЕсСОа РЕМТО5Е АМО СІ ОСОВОМАТЕ
КЕСО АОНЕНЕМ5 УЛОМСТІОМ 77777777 1168 (03059 0,8855| 6972-01 (9266-01
КЕсСа ВІО5УМТНЕБІВ ОРГ ОМЗАТОВАТЕЮО
КЕСС МАБОРВЕ5Б5ІМ ВЕС АТЕО М/АТЕН
КЕСО ОМАН БІОМАПІМО РАТНМАМ 77198 (02748 0,8397| 8,54Е-01 |1,00Е 00)
КЕССО МЕГАМОСЕМЕБІЄЇ -777777777рррирюиИиИиИинл1 98 02604 0,7985| 9,00Е-01 (1,00 00
КЕСО ВЕМАЇ СЕП ОСАВСІМОМА 77777771 66 (0,243 0,7008|19,72Е-01 |1,00Е 00)
КЕсСОа АМІМО 5БОСАВ АМО МОСІ ЕОТІОЕ
КЕСС МАГІМЕ ГЕОСІМЕ АМО ІБОГЕОСІМЕ
КЕСО, РВОХІМАЇ. ТОВОГЕ ВІСАВВОМАТЕ
КЕСО АГООЗТЕВОМЕ ВЕСШГАТЕО. ЗО0ІОМ
КЕСО СІМОХМУГАТЕ АМО РІСАВВОХУГАТЕ
КЕСО РВОЗТАТЕ САМСЕН 77/77/7717 | 89 Гб32годо09982|4,27Е-01 | 7,63Е-01
КЕСО РБЗ БІСМАІІМО РАТНУУАМ 77/77 66 (Г0,344111,0082| 4,49Е-01 | 7,83Е-01
КЕСО РАМСВЕАТІС САМСЕН 7777/7171 | 69 (Г0,29280,8606| 7,77Е-01 |9,60Е-01
КЕСО, РОВАРНУВІМ АМО. СНООВОРНМЦ.
Таблиця 6
Короткий опис результатів аналізу ПЛР Оіадеп 11111111 Стар(П)клітини, | Клітини3зХ ш--о 330 ОК ває Ж | вже генів ідсоток генів ідсоток
Генизпідвищеною експресією | 77 | 9296 | 80 | 9595
Гени, щопройшли, зізниженою експресією. | 1 | 195 | 0 | о95
Гени, якіпройшли фільтри, унікальні | 23 | 2795 | 9 | 1195 1 Усі відсотки розраховані відносно загальної кількості генів (84), виявлених на панелі.
Результати для всіх 84 генів, зображені за допомогою діаграм розкиду, представлені на фіг. 2н. 2 Сума генів з підвищеною та зниженою експресією, які пройшли набір фільтрів значимості, визначення фільтрів див. у розділі "Методи". з Змінені гени, що пройшли фільтри значимості, які унікальні або для клітин СТАР (П), або для клітин ЗХ. я Змінені гени, які пройшли фільтри значимості, загальні для клітин СТАР (П) та для клітин ЗХ (виявлені у обох типах клітин). » Змінені гени, які пройшли фільтри значимості, які виявлені у клітинах СТАР (П) та/або у клітинах ЗХ. Представлення даного набору генів (67) у вигляді теплової карти показане у розділі Додаткові дані, фіг. 4), К. бо
Таблиця 7
Кратності зміни у віковій групі 11111101 РІЄ | іРМА | ІВЕ7 | ОАБІ | 16 | ММРЗ | РА 11101110 (РІЇЄ ОПЕМА (ІВЕ7 ЦОАБІ б |ММРЗ3 |РАЇ 7777771717.7юмю | Рая | 0342| 0982 | 0868 | 0,769 1,059 1,011 | 0,916 7777юр/ию | 0884 |0412| 0394 | 0835) 1441 1003 | 0663 | 0,695 11111111 | аз | 3419 | 1,540 | 0953 0,791 0848 | 1,660 | 1291 77717171... | їов5 | 7107 | 1037 | 1079 | 0355 0,881 | 0,755 | 2511 77717171. | 0755 | 0,552| 1,886 | 1397 | 1,799 1,352 | 1,971 | 0,914 7777юр/ию | 0979 |7,408)| 0557 | 0679) 0,977 | лл12 | 0913 | 0,596 77777юрм/ию | 0692 |0388| 0,729 | 1127 | 1183 | 0,792 | 0539 | 1,033 нини 11111111 | 1464 | 0457 | 2748 | 1153 | 1521 0924 | 0601 | 0,842 77777717.7юмрмю | 0484 |0,957| 2909 | 1132 | 6031 5604 | 1,946 | 2212 77771717171717.7юЮюЮюЮ | 1829 |0270| 0645 | 0684) 1,317 | 1,622 | 0711 | 1,683 77717171. | 2537 |0л04| 0465 | 0565) 0,037 1,920 | 0,635 | 0180 71111111 0747 | 0541 | 0346 | 0960 | 1,603 | 0,751 | 0476 | 0980 нини 77777.7юрмрмю | 8930 | 7,799 | 1,336 | 1478 | 0423 | 3264 | 1275 | 1,842 777777.7.7юмю | 688 | 4441 | 8010 | 1439 | 0531 3254 | 2541 | 3243 777777171717.7юрюр 1710959 | 2,315 | 22657 | 1,891 | 0516 19464) 5831 | 32301 77771717171717171.7.7.юрю | 713251 | 4668 | 24009) 1,007 | 4476 10,752| 6,948 | 5159 11111111 | 23 | 4457 | 17239 | 2233 | 0231 | 4028 | 1,564 | 0306 77117171 | 4278 | 1,361 | 12879 | 1461 | 1,699 4,075 | 0,764 | 9,405 77777.7юмрмю | 2796 | 2689| 0531 | 1971 | 4666 | 7083 | 161 | 16692 17111111. | 6245 | 3,037 | 13,076 | 1,660 | 2248 | 8бг2 | 3317 | 1188 7777717171717.7.7юК | 4788 | 1,777 | 10981 | 1422 | 0963 | 3,754 | 1,551 | 1,605 71111111. 6397 | 2,575 | 13,747 | 1240 | 0598 14603) 0982 | 4307 71111111 | 7793 | 3,327 | 16220 | 1120 | 0986 | 9,347 | 4,554 | 2206 нини 77717171... | 2лво | 3,653 | 2941 | 0506 | 0,643 | 1,553 | 0,972 | 1,056 77111711 | 2оБЗ | 1,731 | 4156 | 0498 0055 2194 | 1,618 | 2696 77777717.7юрмрю | 1491 |71и68| 1283 | 0424 | 0482 0686 | 1,650 | 0,493 77111111. | 6524 | 0,844 | 1,601 | 0954 1,094 1,395| 1,033 | 1,562 7777.7юрм/ию | 2863 | 7243| 8335 | 0831 | 0695 1291 | 166 | 1,675 777777171717.7ю | 7191 | 3,690 | 19836 | 0891 | 7,091 8,067 | 4484 | 2347 77111111. | 5433 | 2458| 3,982 | 3302 | 3,841 0654 | 09374 | 0529 71111111 | 8817 | 235 | 6531 | 0беоз| 1,945 219 | 1,543 | 0,747 777717171717171717.7.юЮИ | 4409 |4053| 8932 | 1155 0,636 3177 | 3,656 | 8508 777777.7.7юмюрю | 5864 | 1,969 | 5514 | 0беБО | 0565 1148 | 1,964 | блтг 71111111 | 2745 | 1,326 | 621 | 1866 | 1469 | 4866 | 1,637 | 7913
Таблиця 8
НІЗТ, схвалені у якості терапевтичних засобів проти ВІЛ назва дорослого
Нуклеозидні/нуклеотидні інгібітори зворотної транскриптази (НІЗТ)
ЗІАГЕНМ | Абакавір 300 мг таблетка 300 мг двічі на день або 600 мг раз на день
ЕМТРИВА"М |Емтрицитабін 200 мг капсула 200 мг раз на день
ЕПІВІР'"М Ламівудин 150 та 300 мг таблетки 150 мг двічі на день або 300 мг раз на день 100 мг 5 раз на день
РЕТРОВІР'"М | Зидовудин 100 та 250 мг капсули або 250 мг двічі на день
ВІРЕАДТМ Тенофовіру дизопроксил 245 мг таблетка 245 мг раз на день
Комбінації НІЗТ з фіксованою дозою
КІВЕКСАТМ | Абакавір/ламівудин Таблетка містить: 600 мг Одна таблетка раз на абакавіру та 300 мг ламівудину | день
Абакавір/ламівудин/ Таблетка містить: 300 мг Одна таблетка раз на
ТРИЗИВІР'"М абакавіру, 150 мг ламівудину та зидовудин день 300 мг зидовудину
Емтрицитабін/ Таблетка містить: 200 мг Одна таблетка раз на
ТРУВАДАФ . емтрицитабіну та 245 мг тенофовіру дизопроксил : день тенофовіру дизопроксилу
Емтрицитабін/ Таблетка містить: 200 мг Одна таблетка раз на
ДЕСКОВІЄЮ тенофовіру алафенамі емтрицитабіну та 10 або 25 мг ень
РУ д тенофовіру алафенаміду д
Таблетка містить: 150 мг Одна таблетка раз на
КОМБІВІР'М |Ламівудин/зидовудин ламівудина та 300 мг он р зидовудина д
Ефавіренц/ Таблетка містить: 600 мг
АТРИПЛАФ | емтрицитабін/ ефавіренца, 200 мг Одна таблетка раз на . емтрицитабіну та 245 мг день тенофовіру дизопроксил : тенофовіру дизопроксилу
Рилпівірин/ Таблетка містить: 25 мг
ЕВІПЛЕРАТМ | емтрицитабін/ рилпівірину, 200 мг Одна таблетка раз на . емтрицитабіну та 245 мг день тенофовіру дизопроксил : тенофовіру дизопроксилу
Не . Таблетка містить: 25 мг - Рилпівірин /тенофовіру рилпівірину Одна таблетка раз на
ОДЕФСЕЙФ |алафенамід/ ". . . 25 мг тенофовіру алафенаміду, | день емтрицитабін : та 200 мг емтрицитабіну
Таблетка містить: 150 мг
Елвітегравір/ кобіцистат/ | елвитегравіру, 150 мг
ГЕНВОЯФ емтрицитабін/ кобіцистату, 200 мг Одна таблетка раз на . . . день тенофовіру алафенамід |емтрицитабіну, 10 мг тенофовіру алафенаміду
Таблетка містить: 150 мг
Елвітегравір /кобіцистат/ | елвітегравіру, 150 мг Одна табпетка раз на
СТРИБІЛДФО | емтрицитабін/ кобіцистату, 200 мг д Р . . день тенофовіру дизопроксил |емтрицитабіну та 245 мг тенофовіру дизопроксилу
Долутегравір/абакавір/ Таблетка містить: 50 мг Одна таблетка раз на
ТРІУМЕКФ : долутегравіру, 600 мг абакавіру ламівудин : день та 300 мг ламівудину
Таблиця 9
Більш низькі дозування (50 95) НІЗТ назва дорослого або 300 мг раз на день мг раз на день мг двічі на день абакавіру та 150 мг ламівудину | день тенет ПОД шт МЕ
ТРИЗИВІР'"М абакавіру, 75 мг ламівудину та зидовудин день 150 мг зидовудину
Емтрицитабін/ Таблетка містить: 100 мг Одна таблетка раз на
ТРУВАДАФ тенофовіру емтрицитабіну та 120 мг д Р дизопроксил тенофовіру дизопроксилу день
Емтрицитабін/ Таблетка містить: 100 мг Одна таблетка раз на
ДЕСКОВІЄЮ тенофовіру емтрицитабіну та 5 або 12 мг д Р алафенамід тенофовіру алафенаміду день
Таблетка містить: 75 мг Одна таблетка раз на
КОМБІВІР'"М Ламівудин/зидовудин |ламівудину та 150 мг день р зидовудин
Ефавіренці/ Таблетка містить: 300 мг
АТРИПЛАФ емтрицитабін/ ефавіренца, 100 мг Одна таблетка раз на тенофовіру емтрицитабіну та 120 мг день дизопроксил тенофовіру дизопроксилу
Рилпівірин/ Таблетка містить: 12 мг
ЕВІПЛЕРАТМ емтрицитабін/ рилпівірину, 100 мг Одна таблетка раз на тенофовіру емтрицитабіну та 120 мг день дизопроксил тенофовіру дизопроксилу
Рилпівірин / Таблетка містить: 12 мг - тенофовіру рилпівірину, 12 мг тенофовіру | Одна таблетка раз на
ОДЕФСЕИФ алафенамід/ алафенаміду та 100 мг день емтрицитабін емтрицитабіну
Елвітегравір/ Таблетка містить: 75 мг кобіцистат/ елвитегравіру, 75 мг Одна табпетка раз на
ГЕНВОЯФ емтрицитабін кобіцистату, 100 мг д Р /генофовіру емтрицитабіну, день алафенамід 10 мг тенофовіру алафенаміду
Елвітегравір Таблетка містить: 75 мг /кобіцистат/ елвітегравіру, 75 мг Одна табпетка раз на
СТРИБІЛДО емтрицитабін/ кобіцистату, 100 мг д Р . . день тенофовіру емтрицитабіну та 120 мг дизопроксил тенофовіру дизопроксилу - / Габлетка містить: 25 мг ламівудин 2 день та 150 мг ламівудину
Таблиця 10
Інгібування активності І 1 миші
Визначення ІСвзо для дев'яти сполук для інгібування активності ретротранспозиції активних
ПІМЕ-1 миші у клітинах НегГа. Активність ретротранспозиції визначали за допомогою подвійного люциферазного репортеру руУхХО16. Клітини обробляли різними концентраціями кожної сполуки та одночасно трансфікували руУХО16. Люмінесценцію вимірювали через 48 год. після трансфекції. Експеримент незалежно проводили два рази.
Таблиця 11
Інгібування активності 1 людини
Визначення ІСво для трьох сполук для інгібування активності ретротранспозиції активних
ІІМЕ-1 людини у клітинах Неї а. Активність ретротранспозиції визначали за допомогою подвійного люциферазного репортеру руУХО17. Клітини обробляли різними концентраціями кожної сполуки та одночасно трансфікували руУхХоО17. Люмінесценцію вимірювали через 72 год. після трансфекції. Експеримент незалежно проводили два рази.
Джерела інформації: 1. Епдеї, Р. (2014). Тпезе 5іаддегіпд Мар 5пом/ Ном/ Миспй Те Ууопіа'в Роршіайоп Ів Адіпа.
Вивіпез5 Іпзідег, Мау 16, 2014. 2. Спипд Н У, еї аї., (2009). МоІесшаг іпПаттаїйоп: ипаеєгріппіпа5 ої адіпуд апа аде-геєїаїейд дієсвах5ев5. Адеїпа Нев. Нему. 8(1): 18-30 3. 4. Рамуеїес С, еї аї., (2014). ІпШаттаїйоп, адеїпд апа спгопіс дізеазе. Сшитепі Оріпіоп іп
Іттипоіоду. 29: 23-28. 5. дик, 0. еї аї., (2014). Спгопіс іпїаттаїйоп іпдисевз івіотеге дузійпсіоп апа ассеїегаїев5 адеїпд іп тісе. Майте Соттипісайіопв, Мо! 5, Апісів: 4172. 6. 5іпон, Т. 5 Мемтап, А.В. (2011). Іпїаттаїйогу такегз іп роршіайоп 5іцаїез ої адіпд. Адеїіпд
Вез Нем. 10(3): 319-329. 7. Оіадповіїс апа еїаїівіїса! Мапиа! ої Мепіа! Різогаєгв, Ей Еайіоп, рр. 602-614, Атетгісап
Рзуспіайніс Авзосіайоп Рибіїзпіпу, УМазпіпоюп, ОС (2013). 8. спо, С. б Зеаїму, У.М. (2007). Апаїузів ої сеї! сусіє рпазез апа ргодгезвіоп іп сийигей татитаїап сеї. Меїподз 41, 1433-50. 9. Нанапа, К., Сатріві, У. в Оітгі, С.Р. (2007). Меїнодь їо адеїесі Біота!/Кеге ої сеїїшаг вепезсепсе: Ше 5епезсепсе-аззосіаїеай реїа-даіасіозідазе аззау. Меїштоавз Мо). Віої. 371, 21-31. 10. Нетід, М. еї аї. (2004). Теотеге 5попепіпу ігіддег5 зепезсепсе ої питап сеїІв ШТтоцдп а рашмау іпмоїміпд АТМ, ро5З, апа ре (СІРІ), би пої ріб(ІМКаа). Мої. Сеїї! 14, 501-513. 11. Вапоууаїа, 5.Н., єї а. (2009). Мапу ПІМЕТ еІетепів сопітібшіе (о Ійе ігапзсіріоте ої питап зотаїс сеї. сепоте Віо! 10, А100.
12. Стівсіопе, З5.У., еї аї. (2014). Тгапзстірійопа! Іапазсаре ої герейіме еіетепів іп поптаї апа сапсег питап сеї. ВМО Сепотісв 15, 583. 13. АШапікаг", У.М., еї аї. (2004). А УМ1-Біпаіпуд 5іїе і гтедцігтей г ассигаїє питап ГІМЕ-1 їапвсетіріоп іпіайоп. Мисівіс Асід5 Нез. 32, 3846-55. 14. Хіє, У., еї аї. (2011). Спагасівгігайоп ої 11 гемоїгапзрозйіоп м/йй пПідн-єпгоцднриї диа!-
Іосітетазе аззауз. Мисієїс Асіа5 Нез 39, е16. 15. Ап, МУ., еї аї. (2011). Снагасівгігайоп ої а зупіпеїййс питап ГІМЕ-1 гекгоїтапзрозоп ОВЕеив-
Не. Моб ОМА 2, 2. 16. Зспоептакег", М., еї аї. (2006). ЕЄмідепсе ої депеїйс епгісптепі Гог ехсеріїопаї! зигміма! ивіпд а тату арргоаспн: ІНе І відеп І опдемйу Зщшау. Єиг. У. Нит. Сепеї. 14, 79-84. 17. Нетіа, Ц., еї а. (2004). Теїотеге 5Ппопепіпа Міддег5 зепезсепсе ої питап сеї ШтгоцдП а рашмау іпмоїміпд АТМ, ро5З, апа ре (СІРІ), би пої ріб(ІМКаа). Мої. Сеїї 14, 501-13. 18. беє, е.9., ІззеІрбаснег єї аї. (1996) Наттізоп'є Ргіпсірієз ої Іпієтта! Меадісіпе 13 єд., 1814- 1882. 19. Ое Сессо, М., єї аї. (2013). Сепотев ої геріїсаймеіу зепезсепі сеї ипаєгоао діобаї ерідепеїйс снапдез Ієадіпу о депе зіїєпсіпу апа асіїмайоп ої ігапхрозабіє вІетепів. Адіпа Сеї! 12, 247-256. 20. ЮОе Сессо, М., еї аї. (2013). Ттапзрозабріє єієтепії ресоте асіме апа тобріє іп Ше депотез ої адіпд таттаїйап зотаїс їі55йев5. Адіпа (АІрбапу МУ). 21. 1, О., еї а. (2013) РЕОХА!Т теєадіаїтез р1б(ІМКаа) асіїмайноп дигіпа сеїЇШіаг зепезсепсе. ЕМВО
У 32, 858-873. 22. Зип, Х., єї а). (2018). Тгтапзстгіріоп Тасіог ргоїййпу гемєа!5 тоїесціаг спогеодгарну апа Кеу гедшайюгв ої питап геїгоїгапзрозоп ехргезвіоп. Ргос Маї! Асай 5сі 0 5 А 115, Е5526-Е5535. 23. Мопісуа-Оигапдо, 0О.Е., еї аїЇ. (2009). ЕЄЕрідепеїйс сопігоЇ ої таттаййап ГІМЕ-1 гемоїгапзрозоп бу геїіпоріазіота ргоїєїп5. Миїаї Нез 665, 20-28. 24. Зівївоп, О.В., еї а). (2008). Ттех! ргемепів сеїІ-іпійпвіс іпіайоп ої ашоіїттипну. Сеї! 134, 587-598. 25. Меві, А.Р., еї аї. (2015). Міоспопага! ОМА б5іге55 ргітев5 їйе апіїміга! іппаїє іттипе гезропзе. Маїшйге 520, 553-557.
Зо 26. Імапом, А., вї аї. (2013). | ухозхоте-тевдіаївйд ргосеззіпуд ої спготаїйнп іп зепезсепсе. .) Сеї!
Віо! 202, 129-143. 27. Вои, 2., вії а. (2017). Суюріазтіс спготаїйнп ііддег5 іпїаттаїйіоп іп зепезсепсе апа сапсег.
Маїшге 550, 402-406. 28. ТаКапавні, А., еї а). (2018). Юомпгедшіайоп ої суюріаєтіс ОМабе5 ів Ітріїсаїейд іп суюріазтіс ОМА асситиїайоп апа 5АБ5Р іп зепезсепі сеїЇв. Маї Соттитп 9, 1249. 29. Тнотав, С.А., вї а. (2017). Модеїїпу ої ТВЕХ1-дерепаєпі ашоіїттипе адізвазе изіпд питап віт сеїЇв підніїднів І 1 асситиіайоп аз а 5о0шгсе ої пешгоіїпіаттаїцйоп. Сеї! 5ієт Сеї! 21, 319-331 еЗ318. 30. Тнотав, С.А., вї а. (2017). Модеїїпу ої ТВЕХ1-дерепаєпі ашоіїттипе адізвазе изіпд питап віт сеїЇв підніїднів І 1 асситиіайоп аз а зошгсе ої пепгоіпЯаттаїйоп. СеїЇ Сїет Сеї! 21, 319-331 еЗ318. 31. Оои, 2., вії а. (2017). Суюріазтіс спготаїйнп ііддег5 іпїаттаїйіоп іп зепезсепсе апа сапсег.
Маїшге 550, 402-406.
З2г. ТаКапавпі, А., еї а). (2018). Юомпгедшіайоп ої суїоріазтіс ЮОМабзев5 і5 ітріїсаїей іп суюріазтіс ОМА асситиїайоп апа 5АБ5Р іп зепезсепі сеї. Маї Соттип 9, 1249. 33. ро, 2., вї а). (2017). Суїоріазтіс спготаїнп ігіддег5 іпПаттаїіоп іп зепезсепсе апа сапсег.
Маїшге 550, 402-406. 34. ТаКапавпі, А., еї а). (2018). Юомпгедшіайоп ої суїоріазтіс ЮОМабзев5 і5 ітріїсаїей іп суюріазтіс ОМА асситпшіаїйоп апа 5АБ5Р іп зепезсепі сеї. Маї Соттитп 9, 1249. 35. І оре2-Ойп, С., еї а). (2013). Тне НаПтаїкзв ої адіпо. Сеї! 153, 1194-1217. 36. пНирз//еп.м/іКіредіа.огу/лмікі/Зепоїпегару 37. Егапсезсепі, Сб. 6 Сатріві, у). (2014). Снгопіс іпїтаттаїйоп (іпПаттадіпо) апа їв роїепііа! сопігршіоп юю аде-аззосіаїеа дізеазезв. у. Сегопіо!. А Віої. сі. Мей. 5сі. 69 Биррі. 1, 54-9. 38. І оре2-Ойп, С. еї а). (2013). Тне Найтаїкз ої адіпа. Сеї! 153, 1194-217. 39. Зайіп, 5., (2012). Апіїміга! Адепів (Спаріег 49). Іп: Вавіс апа Сіїпіса! Рнаптасоіоду. 126.
Каїгипду ВО, Мавієгв 5В, Тгемог АУ (Едіогв). МеСтам/-НІЇ / Гапде. (Ассез55-Медісіпе). 40. І оре2-Онп, С., еї а). (2013). Тне НаПтаїкз ої адіпо. Сеї! 153, 1194-1217. 41. Виввіап, Т.)., єї а). (2018). Сівагапсе ої зепезсепі діа! сеї ргемепі5 їай-дерепаепі раїпоіоду апа содпіїме десіїпе. Маїшге 562, 578-582.
42. Спів, В.С, еї аі. (2016). Зепезсепі іпіїта! тат сеїІ5 аге деїеїегіоив аї аї! віаде5 ої аїйегозсіеговів. 5сіепсе 354, 472-477. 43. ВаКег, 0.9., еї аї. (2016). Маїштапу оссиитіпа ріб(Іпк4а)-робіййме сей 5попеп Ппеайну
ІТезрап. Майшге 530, 184-189. 44. Оетагіа, М., єї аї. (2017). СеПШаг бепезсепсе Рготоїев5 Адмегзе ЕПесів ої Спетоїпегару апа Сапсег Реїіарзе. Сапсег Оівсом 7, 165-176. 45. Спапо, 9., еї аі. (2016). Сієагапсе ої зепебвсепі сеї ру АВТ263 ге|имепаїе5 адеа
Ппетаїйороїеїйс вієт сеїЇ5 іп тісе. Маї Меса 22, 78-83. 46. Зспагег, М.9., еї аї. (2017). СеПШаг б5епезсепсе теаіагев їргоїїс ри!топагу адізеазе. Маї
Соттип 8, 14532. 47. Еат, у.М., еї а). (2017). Тагдеїнпу сеїІшШаг зепезсепсе ргемепів аде-теїіаїєйд ропе Іо55 іп тісе.
Маї Меа 23, 1072-1079. 48. Спіпіа, 5.9., еї а). (2018). СеПШіаг бепезсепсе Із Іпдисед Бу Ше Епмігоптепіа! Мешгоїохіп
Рагадцаї апа Сопітіршіев ю Мецгораїпоіоду Гіпкейд ю Ратжкіпзоп'з Оізеазе. Сеї! Вер 22, 930-940. 49. Хи, М., еї аї. (2018). Зепоїуїйсв ітргоме рпузіса! тпсїоп апа іпстєазе ІМезрап іп ой аде.
Маї Меа 24, 1246-1256. 50. Зспаїег, М.)., еї а). (2017). Сеїшаг взепезсепсе тедіаїев Пгоїїс ритопагу дізеазе. Маї
Соттип 8, 14532. 51. Оетаїпіа, М., еї аї. (2014). Ап еззепіаї! гоЇїє Тог зепезсепі сеї іп оріїта! жопа Неаїїпд
ТІгоцди зестеїйоп ої РОСЕ-АА. Оем Сеї! 31, 722-733. 52. Зее, 0.5. Риріїзней Раїепі Арріїсайоп 2018/0050000. 53. Зее, 0.5. Рибіїзней Раїепі Арріїсайоп 2018/0050000. 54. Саїга М., еї аї. (2004). Ргерагайоп апа сгувзіа! сНагасієгігайоп ої а роїутогрі, а топоНуагаїє, апа ап еїну! асеїаіє 5оЇмаїє ої Ше апійипда! Посопаоіе. У. Рпаптасеші. з5бі., 93(3):601-611. 55. Мап Топдег БЕ.С., еї аї. (2004). Ргерагайоп апа Рпузісоспетіса! Спагасієгігайоп ої 5
Місіозатіде боїмаїез апа 1 Нетізоїмаїє. ААРБ РНагт. 5сі. Тесп., 5(1): Апісіє 12. 56. Віпдапат А.Г.., єї аї. (2001). Омег опе пПипагеа з5оїмаїезв ої зиагйіагоїе: зоЇмаїе5 апа аддисів ої зиМайіагоїє. Спет. Соттип. 7: 603-604.
Зо 57. Вгом/п, У.Р., еї аї., (1997). Вуравз ої зепезсепсе айег аізгиріїп ої ра! СІРТЛМАНІ депе іп поптаї адіріоїд питап ргобріавзів5. Зсіепсе 277, 831-834. 58. Вгом/п, У.Р., еї аї!., (1997). Вуравз ої зепезсепсе айег аівгиріїоп ої ра1СІРТІ/МАНІ депе іп поптаї адіріоїд питап ргобріавзів5. Зсіепсе 277, 831-834. 59. Нетіяд, М. еї а!., (2004). Теїотеге зпопепіпд Піддег5 зепезсепсе ої питап сеї ШтгоцдП а рашмау іпмоїміпд АТМ, ро5З, апа ре (СІРІ), би пої ріб(ІМКаа). Мої. Сеї! 14, 501-513. 60. Ритадаїїї, М., еї аї!., (2014). аріє сеїшміаг зепезсепсе ів аззосіаїєйа м/йй регвівіїеєпі ОЮА асіїманоп. РІГо5 Опе 9, е110969. 61. мумлу.піа.пін.дом/гезеатсп/дар/адед-гтодепі-соіопіез-папароок б2. ЕїІ5е, І... еї аїІ. (2012). Рпаптасокіпеїйс5 ої Іатімидіпе апа Іатімидіпе-шірпозрнаїе апйег адтіпівігайоп ої З00 тіїїднкате апа 150 тіїїднкате опсе дайу то Неайну моЇшпіеегв: тевийв ої Ше
ЕМСОНЕ 2 5щшау. Апіітістор. Адепів Спетоїпег. 56, 1427-1433. 63. І є, О.М. еї аї. (2010). Іопігіпу гадіайоп-іпдисей Іопд-їегт ехргезвіоп ої зепезсепсе таткегв іп тісе і5 іпаерепаеєпі ої ро3 апа іттипе віайшв5. Адіпд Сеї! 9, 398-409. 64. Сошаї, М.С. еї аї. (2009). 11 "екоїгапзрозйоп іп питап пешгаї ргодепіог сеїІв. Маїиге 460, 1127-1131. 65. пиру/Ллумлиу. дігпе.ого/геррбазе/ирааїе/ргомзе.рпр 66. пир/Лимлиу. ері.ас.ик/Гооів/тза/сіивіа!о/ 67. 1, М. еї ах. (2015). Тне ЕМВІ-ЕВІ Біоіптогтаїйсв5 мжеб апа ргоодгаттаїіс 015 їатеуогк.
Мисівїс Асіах Нев. 43, М/580-584. 68. пИр/Лумлу. побі. піт. пій.дом/ргіте!ї-Біаві/ 69. Ме, 9. еї аї. (2012). Ргітег!-ВІ АТ: а оо! ю аевзідп іагаєї-зресіїйс ргітегв ог роїутегазе сНаїйп гєасіїоп. ВМО Віоіп?. 13, 134. 70. поро //депоте.ис5с.еди/сді-біп/пдРег 71. Сашієг, ах. еї аї. (2005). А їуре І іпіепегоп ашостгіпе-рагасііпе Іоор ів іпмоїмей іп ТоїІ-ІїКе гесеріог-іпдисей іпіепеиКіп-12р70 зесгеїйоп Бу депанййс сеїІв. ). Ехр. Мед. 201, 1435-1446. 72. бошаї, М.С. еї а). (2009). 11 "екоїгапзрозйоп іп питап пешгаї ргодепіог сеїІв. Маїиге 460, 1127-1131. 73. Кіт, О., еї а. (2015). НІБАТ: а Тавзі з5ріїсед аїїдпег м/йй ІОм/ тетогу гедцігетепів. Маї
Меїподвз 12, 357-360.
74. Мао, У., еї аї. (2014). твєаїштеСоипів: ап ейісіеєпі депега! ригрозе ргодгат ог аззідпіпд ведшиепсе геадз юю депотіс їеаїшигев. Віоіпгоптаїййсв5 30, 923-930. 75. Нобріпзоп, М.О., еї аї. (2010). еддеВ: а Віосопдисіог расКаде їог айегепіа! ехргезвіоп апаїувів ої діда! депе ехргеззіоп даїа. Віоіпіогтаїййсз 26, 139-140. 76. Веїсн, М. еї аї. (2006). сепеРацет 2.0. Маї Сепеї 38, 500-501. 77. Зургатапіап, А. еї а). (2005). Сепе зеї епгісптепі апаїузів: а Кпоу/Ледде-базейд арргоасі
Тог іпіегргеїїпуд депоте-м/іде ехргезвіоп ргоїйев. Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А 102, 15545-15550. 78. Вепіатіпі, М. 5 Носпбрега, У. (1995). Сопігоїїїпуд Ше Таїве аізсомегу гаїе: а ргасіїса! апа роуепиї арргоасіп о типйіріє їевііпд. У НКоу еіаї ос В 57, 289-300. 79. пир/Лумлу. Бгоадіпвійше.ога/сапсег/зоймагте/йЕМЕ-Е 80. Іапдтеєаа, В. (2010). Аїйдпіпд 5йпой зедиепсіпу тгеайб мййп Воулів. Сит. Ргоїос.
Віоіптоптаїййсв Спарієї 11, Опії 11.7. 81. АіІехапагома, Е.А. єї аї. (2012). бепвзе ігапзстгірів огідіпаїед їот ап іпіегтпа! ран ої Ше питап геїгоїгапвровзоп ГІМЕ-1 5 ОТА. Сепе 511, 46-53. 82. Оіоупіком, І.А. єї аї. (2007). А Кеу гоїє ої Ійе іпіегтпа! гедіоп ої Ше 5'-ипігапзіаїей гедіоп іп
Ше питап 11 гемоїгап5розоп Мапзсгіріюп асіїмпу. Мої. Віої. (Мо5кК) 41, 508-514. 83. АіІехапагома, Е.А. єї аї. (2012). бепве ігапзсетгірібв огідіпаїед їот ап іпіетаї! рай ої Ше питап геїгоїгапвровзоп ГІМЕ-1 5 ОТА. Сепе 511, 46-53. 84. про /Лимлу.ададепе. огаЛоо!5/ргоїосо!5/ріко/ 85. пир/Лимли.бгоаа. тії. еди/депоте бБіолЛиіс//паї. піті 86. Міснаца, К. еї аї. (2010). Рпаптасоїіодіс іппібйоп ої сусіїп-дерепаепі Кіпазе5 4 апа 6 атевів Ше дгоули ої діобіазіюта типйопте іпігасгапіа! хеподгайв. Сапсег Нез. 70, 3228-3238. 87. ппр/Ллимум.опПеотесоїІарогайоп.огуд/ 88. пирз//дпази.ога/ОМАВИО/Ноте.до 89. Хіє, МУ. єї аї. (2011). СНагасієгігайоп ої 11 гейоїгаперозйіоп м/йй Нідп-ІптоцаНриї аца!-
Іосітетазе аззауз. Мисієїс Асіа5 Нез 39, е16. 90. Ап, МУ., єї а. (2011). Спагасівгігайоп ої а зупіпеїййс питап ГІМЕ-1 гекоїгапзрозоп ОВЕеив-
Не. Моб ОМА 2, 2. 91. Реп2Коїег, Г., еї а). (2005). І 1Вазе: їот їшпсійопаї! аппоїайоп 0 ргедісіоп ої асіїме І ІМЕ-1 еіетепів. Мисієїс Асіа5 Нез 33, 0498-5000. 92. пир/Лимли. діт пет.ого/ерразе/ирааїє/огомве.рпр 93. Стівсіопе, 5.МУ., єї а). (2014). Тгапвстгіріопаї! Іапазсаре ої герешіме еіетепів іп поттаї апа сапсег питап сеї. ВМО Сепотісв 15, 583. 94. Спій5, В.С, єї аї. (2015). СеЇШіаг зепезсепсе іп адіпд апа аде-геіаїєд аізеазе: пот теспапіствз о (егару. Маї. Мед. 21, 1424-1435. 95. Кап, К. є іапаїєу, О.М. (2013). МАРЕТ типйіріє зедоепсе аїіїдптепі зоїмаге мегвіоп 7: ітргометепів іп репоптапсе апа изабіїйу. Мої Віо! Емо! 30, 772-780. 96. Магегтоизе, А.М. еї аї. (2009). даїміем Мегвіоп 2--а тиПіріє зедоепсе аіїдптепі еапог апа апаїувів жоїКрепси. Віоіптоптаїсв 25, 1189-1191. 97. пнр//депоте-епаіпеегіпд.ога/десКко/?"раде іа-15 98. бЗапіапа, М.Е., єї аїЇ. (2014). Ітргомед месіої5 апа депоте-м/іде Іргагієв ог СВІ5РА всетеєпіпа. Маї. Метод 11, 783-784. 99. пир//депоте-епдіпеегіпа.ога/деско/лир-сопіеп/иріоадз/2013/12ЛепіСВІЗР Вм2-апа-
Іепіїсшціде-оїїдо-сіопіпа-ргоїосої. раї 100. ЗнаІет, О. еї аї. (2014). бепоте-5саіє СВІЗРА-Сав59 КпосКоці зстеєпіпд іп питап сеїїв5. зЗсієпсе 343, 84-87. 101. поро //Зпасоге.тдп.Нагмага. еди/ 102. КтеїїЇїпо, .А. еї аї. (2011). Аде-аз55осіаїеай іпстеазе іп Пегтегоспгтотаїййс тагкз5 іп тигіпе апа ргітаге їізвцев. Адіпа Сеї! 10, 292-304. 103. Тротав, С.А. єї аї. (2017). Модеїпд ої ТВЕХ1-дерепаєпі ашоіттипе аізєазе ивіпд
Ппитап 5ієт сеїІв піднінів 11 асситишиїайоп ав а 5о0шгсе ої пешгоіпПаттаїйоп. Се! іет Сеї! 21, 319-331 ев. 104. Куеїїпа, «.А. еї аї. (2011). Аде-аззосіаїес іпстєавзе іп НеФ(егоспготаїйс таїкзв іп тигіпе апа ргітаге їізвцев. Адіпа Сеї! 10, 292-304. 105. пир/Лимлу.діадеп.сот/ив/5пор/депез-апа-раїймауз/даїа-апаїувів-сепівг-омегуієм-раде/ 106. Зспоептакег", М. еї а!. (2006). Емідепсе ої депеїйс епгісптепі Гог ехсерііопаї! зигміма! ивіпд а тату арргоасн: ІНе І еідеп Гопдемійу зішау. Ешг. У. Нит. Сепеї. 14, 79-84. 107. М/аа||ег, М.Е. еї аї. (2012). Те питбег ої рібіМК4а розійме сеїї5 іп питап 5Кіп гтеПесів ріогодіса! аде. Адіпу Сеї! 11, 722-725.
108. КатепівКу, Г., єї аї. (2011). Ітргомей зігосіиге, Шпсіоп апа сотраїйріїйу ог СеїПРгойег: тоамшіаг підн-тпгопдприї ітаде апаїувів зоїмаге. Віоіпгоптаїййсз 27, 1179-1180. 109. пир:/итзругер. пін. дом// 110. Мапіпе-Запірапел, С, еї аїЇ. (2014). Ітадіпа м/ййе адірозе іїз5цє м/йй сопіосаї тістозсору. Меїйтод5 Епгутої 537, 17-30. 111. нанапа, К., Сатріві, у. б Оітгі, С.Р. Меїнодз юю аеїесі ріотаїКегз ої сеїШіаг зепезсепсе:
Ше 5епезсепсе-аззосіаїей Беїа-даіасіозідазе аззау. Мешод5 Мої. Вісі. 371, 21-31 (2007). 112. ВакКег, 0.9., еї аї. (2016). Маїштапйу осситіпуд ріб(Іпк4а)-розйїме сеї 5пойеп пеайу
ІТезрап. Майшге 530, 184-189. 113. де Копіпо, А.Р., еї аї. (2011). Нереїйіме єіетепі5 тау сотрігізе омег їмо-ШПікав ої Ше питап депоте. РІо5 Сепеї. 7, е1002384. 114. Ниапо, С.В., єї а!ї. (2012). Асіїме ігаперовійоп іп депотев. Аппи. Нем. Сепеї. 46, 651-675. 115. де Копіпо, А.Р., еї аї. (2011). Нереїйіме єіетепі5 тау сотрігізе омег їмо-ШПікав ої Ше питап депоте. РІо5 Сепеї. 7, е1002384. 116. Напскв, 0.0. б Кааліап г, Н.Н. (2012). Асіїме питап гепоїгапзрозопв: мапайоп апа дізеазе. Сит. Оріп. Сепеї. Оєм. 22, 191-203. 117. Нодіс, М., еї аї. (2014). І опуд іпіегзрегзей еІєетепі-1 ргоївіп ехргезвіоп і5 а Наїйтаж ої тапу питап сапсегв5. Ат. У). РаїШшої!. 184, 1280-1286. 118. Еерміп, ..А., єї аї. (2014). Мобіїє ОМА еєІетепів іп Ште депегаїйоп ої адімег5йу апа сотріехіу іп Ше Бгаїп. Маї Неум. Мепговсі. 15, 497-506. 119. Ое Сессо, М., еї а). (2013). Сепотев5 ої геріїсаймеу зепезсепі сеї ипдегдо діобаї ерідепеїйс снапдез Ієадіпу о депе зіїєпсіпу апа асіїмайоп ої ігапзрозабіє єІетепів. Адіпд Сеї! 12, 247-256. 120. Мап Меїег, М., єї аї. (2014). 5ІВТ6 герге55е5 ГІМЕ1 гемоїгапзрозопз Бу гірозуїаїйпд КАРІ ри Іі гергезвіоп Таїїв м/їй віге55 апа аде. Мах Соттип 5, 5011. 121. Куєїйп9, У.А., еї аі. Сопігіршіоп ої геіоїтапзрозабріє єІєтепів адіпа. іп Нитап
Веїгоїгапзрозопз іп Неайй апа бівзеавзе (єд. Стівіоїагі, с.) 297-321 (Зргіпдег Іпіегпайопаї, 2017). 122.1. 123. МоїКтап, Н.Е. 4 Бівїівоп, О.В. (2014). Тне епету м/ййіп: епдодепои5 геіговіетепів апа ашоіїттипе адізеазе. Маї. Іттипої. 15, 415-422. 124. Заіата, В., єї а. (2014). СеІміаг зепезсепсе апа її енесюг ргодгатв. Сепез Оеєм 28, 99- 114. 125. Тнпотав, С.А., єї аї. (2017). Модеїїпа ої ТВЕХ1-дерепаєпі ашоіїттипе дізєазе ивіпд
Ппитап 5ієт сеїІв Підніднів 11 асситишиїайоп ав а 5о0!йгсе ої пепгоіпЯаттаї!оп. Се! бієет Сеї 21,
З5 319-331 ев. 126. Івнак, С.А. єї аї. (2016). Ап АВ-Е2Н2 сотріех теаіаев віїєпсіпд ої герейіме ОМА зедиепсев. Мої! Сеї! 64, 1074-1087. 127. МоїКтап, Н.Е. 45 Бівїівоп, О.В. (2014). Тне епету м/йШіп: епдодепои5 геїгоєЇетепів апа ашоіїттипе адізеазе. Маї. Іттипої. 15, 415-422. 128. МоїКтап, Н.Е. 4 Бівїівоп, О.В. (2014). Тне епету м/ййіп: епдодепои5 геіговіетепів апа ашоіїттипе адізеазе. Маї. Іттипої. 15, 415-422. 129. БВаї, Ї.., еї аї. (2011). ЕмМесі ої гемег5зе Мапзсгіріазе іппірйог5 оп ГІМЕ-1 апа Тут гемегїзе тмапзстгіріазе асіїмйіез апа оп ГІМЕ-1 гемомапзрозійоп. ВМО Віоспет. 12, 18. 130. Тнпотав, С.А., єї аї. (2017). Модеїїпа ої ТВЕХ1-дерепаєпі ашоіїттипе дізєазе ивіпд
Ппитап 5ієт сеїІв Піднінів 1 асситишиїайоп аз а зошгсе ої пепйгоіпПаттаї!оп. Сеїї сїет Сеї 21, 319-331 ев. 131. Ое Сессо, М., еї а). (2013). Сепотев5 ої геріїсаймеу зепезсепі сеї ипдегдо діобаї ерідепеїйс снапдез Ієадіпу о депе зіїєпсіпу апа асіїмайоп ої ігапхрозабіє вІетепів. Адіпа Сеї! 12, 247-256. 132. Сошаї!, М.Сх., еї аі. (2009). 11 геїоїмаперовіоп іп питап пешга! ргодепійог сеїІв. Маїиге 460, 1127-1131. 133. Опапучлапі, В., еї а. (2017). Суїозоїїс зепвіпа ої іттипо-віїтиаюшгу ОМА, Ше епету мйпіп.
Сит Оріп Іттипо! 50, 82-87. 134. Бомлег, В.у., еї а. (2014). МисіІєовіде гемег5е ігапзсгіріазе іппіріог5 роззев5 іІпігіпвіс апіїі- іпЯаттаїйогу асіїмпу. Зсіепсе 346, 1000-1003. 135. Нодіс, М., еї а. (2014). Гопд іпіегерегзей єІєтепі-1 ргоїєїп ехргезвіоп і5 а Наїїтак ої тапу питап сапсегв5. Ат. У). Раїшої!. 184, 1280-1286. 136. Нетіа, О., еї а!. (2006). СеПІШіаг зепезсепсе іп адіпд ргітаїйев5. Зсієпсе 311, 1257. 137. Сорре, .Р., єї а. (2010). Тне зепезсепсе-аззосіаїей зестеїюгу рпепоїуре: Ше даїкКк зіде ої 60 їштог зирргезвіоп. Аппи. Неу. Раїпої. 5, 99-118.
138. Спапа, 9., еї аІ. (2016). Сівагапсе ої 5епевзсепі сеї ру АВТ263 ге|шимепаїе5з адєа
Ппетаїйороїеїйс вієт сеїЇ5 іп тісе. Маї Меса 22, 78-83. 139. пи, У., еї аІ. Те АспіШев' Невї ої зепезсепі сеїїв: їот ШМапвсгіріоте о зепоїуїїс агдв.
Адіпу Сеї! 14, 644-58 (2015). 140. ТенКопіа, Т., еї а!. (2010). Рак їізвиє, адіпо, апа сеїЇШІаг зепезсепсе. Адіпд Сеї! 9, 667-684. 141. Майзоп, М.Р. (2010). Регзресіїме: Ооєз ргоу/п Гаї ргоїесі адаїіпві дізєазез ої адіпд? Адєїпд
Вез Нем 9, 69-76. 142. ТенКопіа, Т., еї а!. (2010). Рак їізвиє, адіпо, апа сеїЇШІаг зепезсепсе. Адіпд Сеї! 9, 667-684. 143. ЕРгазса, 0. 8 Віотбего, В.В. (2016). Іпїаттадіпуд дестєазез адаріїме апа іппаїе іттипе гезропзез іп тісе апа питапв. Віодегопіоіоду 17, 7-19. 144. ВакКег, 0.9., еї аІ. (2016). Маїштапйу осситіпуд ріб(ІпК4а)-розйїме сеї впопеп Ппеайу
ІТезрап. Майшге 530, 184-189. 145. ВакКег, 0.9., еї а). (2011). Сівагапсе ої рібіпнк4а-розіїме зепезсепі сеїІ5 аєЇауз адеєїпа- аззосіаїва адізогаєг5. Майте 479, 232-236. 146. М/еві, А.Р. 5 Зпадеї, с.5. (2017). Міюспопагіа! ОМА іп іппаїе іттипе гезропзе5 апа іпїаттайюгу раїйпоіоду. Маї Нем Іттипої 17, 363-375. 147. Оои, 2., еї аї. (2017). Суюріазтіс спготаїййп ігіддеге іпЧаттаїйоп іп зепезсепсе апа сапсег. Маїшге 550, 402-406. 148. ТаКаНавпі, А., еї аї. (2018). Юомпгедшіайоп ої суїоріабєтіс ЮОМавзев і5 ітріїсаїей іп суюріазтіс ОМА асситиїайоп апа 5АБ5Р іп зепезсепі сеїЇв. Маї Соттитп 9, 1249. 149. Ргапсезсепі, С., 5 Сатріві, у. (2014). Спгопіс іпїаттацйоп (іпЧаттадіпо) апа її роїепіаї сопігршіоп ю аде-аззосіаїей адізеазезв. у. Сіегопіо!. А Віої. сі. Мед. 5сі. 69 Биуррі 1, 54-9. 150. І оре2-Огп, С., еї аі. (2013). Те паїтагкз ої адіпо. СеїІ 153, 1194-1217. 151. Хіє У., Воз5ег 9У.М., Тпотрзоп Т.І., ВоеКе 9.0. (2011). Ап М/. СНагасієгіганйоп ої 11 гемоїгапзрозйоп м/йп підпн-ійгоцаприї аца!-Іосітегазе аззаув. Мисівїс Асіа5 Нев. 39: е16.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
-1105 ВВОМ/М ОМІМЕВН5ІТУ «120» КОМПОЗИЦІЇ ТА СПОСОБИ ЛІКУВАННЯ, ЗАПОБІГАННЯ ТА ОБЕРНЕННЯ
ПОВ'ЯЗАНОГО З ВІКОМ ЗАПАЛЕННЯ ТА РОЗЛАДІВ -130» 405505-571001У/0 «1405» РСТ/О52020/015043 -1415 2020-01-24 «150» 62/907,251 «151» 2019-09-27 -150» 62/797,109 -1515 2019-01-25 -1605» 114 «170» Раїепіп версії 3.5 -2105 1 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 1 аааачашен аддссодаос 20 -21052 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «40052 дсюдаасцо ддссоша 20 «2105 З «2115 21 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид «4005 З аадасаса!д сасасдіаю ї 21 «2105» 4 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид «400» 4 аасаддадсу ащдацдісі а 21 «21055 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний олігонуклеотид «4005 5 дюїагаса дссісощи 20 «21056 «2115» 20 «212» ДНК -213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 6 дссаадаїда ссдааіадда 20 «2105 7
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 7 аааїсассся Іісйсідсді 20 «2105 8 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 8 сдадаїсааа сідсааддсау 20 «2105» 9 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 9 ссдодссдуси ющШассіа 20 «2105 10 «211519 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 10 бо Тааасааадс ддссдадаа 19
«2105 11 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 11 ададаюдад ссіасадада 20 «210512 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 12 адададсавді дойсіссса 20 «210513 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 13 садісідссс днсісадаї 20 «2105» 14 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 14 ассідаааді засдаддада 20 «210515 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 15 сеідссідс тадайоода 20 «210516 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 16 сааасассадс аїайнсісас їса 23 «210517 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 17 спседі ссацідаїс їса 23 «210518 «211515 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний зонд «4005 18 аддюодаааї даас 15 «2105» 19 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 19 сісдісюаї сісддаадсі аад 23 «210» 20 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 20 дсодісіссс аїссаадіас 20 «2105 21 «2115 14 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний зонд «400» 21 адодісдддс сіда 14 «2105» 22
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 22 пдаддісаа юаадддаіс 20 «210» 23 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 23 дааддідаад дісодадіса 20 «210» 24 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 24 ссаддадіда діддаадаса 9 21 «2105» 25 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 25 бо сіадндссі ссссааадса 20
«210» 26 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 26 пдаюдосаа ссаднссад 20 «2105» 27 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 27
Ісаїсссаад садсадаюа 20 «210» 28 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 28 тднсссаад садсадаюа 20 «2105» 29 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 29 асодссосаї! дассаїсіаї 20 -2105» 30 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 30 дісісансс адссадідсі 20 «2105 31 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 31 асісісассі сссаїдіїдс 20 «2105 32 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 32 аїссоїдсас іссіднегд 20 -2105» 33 «2115» 20 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 33 ссаадаадса сісідсідіа 20 «2105» 34 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 34 дсаддадай сідсаїсасі а 21 2105 35 «211519 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 35 адісдсссас сссісадаї 19 -2105» 36 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 36 псссіссад сдіщдіадсії 20 -2105 37
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 37
Іссссійс9доу аїснаасас 20 -2105» 38 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 38 сдааааадаї дададісдс 20 2105» 39 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 39 ддаадассдд ссадсіадазд 20 «2105» 40 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 40 бо щдааддадіа аіддодаїсс 20
«2105» 41 «2115» 24 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 41 адссіссаа сісіддадіа ащі 24 «2105» 42 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 42 ссдаюдаїсі ссссідасаа 20 «210» 43 «2115» 24 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 43 сссассцас агїасаддай дода 24 «210» 44 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 44 сссадаснй сададсніс їса 23 «210» 45 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 45 сасіддсада ааасаассід аа 22 «210» 46 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 46 ассаддсаад ісіссісаї! да 22 «2105» 47 «2115» 24 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 47
Ящщщаад аддасщдада айс 24 «210» 48 «2115» 24 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 48 сссіасааса дасссасаса аїас 24 «2105» 49 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 49 аадассайцо ддссаадда 20 2105 50 «211519 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 50 псоадаавійї аддашасі 19 «2105 51 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 51 адааюдодса дааадсної сі 22 «2105 52
Зо «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 52 сенедчдіс аайодаш дс 22 -2105 53 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 53 сдссадідаа адатюоасії аї 22 «2105» 54 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 54 сіддааддад саснсаїсі ді 22 2105 55 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 55 бо саасідаддс ссссшсаа 20
«2105 56 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 56 сосссаної ададаавдаї 20 «2105 57 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 57 ддсюдаааа ссаасносд 20 -2105 58 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 58 одНаїсссдс адсаїсасда 20 2105 59 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 59 ддадассса ааддоанодда 20 2105» 60 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 60 аддаадсада аддісісасс 20 «2105 61 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 61 асдюдсідід аааасааада ад 22 «2105 62 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 62 дісссасіда сідісдазд 9 21 -2105» 63 «2115» 20 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 63 адаісідсду сідаїсстс 20 «2105» 64 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 64 адісідсідоа ддасадшаї 20 -2105 65 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 65 дадасісіса дддісдаааа са 22 -2105» 66 «211519 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 66 пседдщад соданада 19 «2105» 67
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 67 сддааддісс сісадасаїс 20 -2105» 68 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 68 сссідіадда ссісодіда 20 2105» 69 «211518 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 69 сддссдсаїс нена 18 -2105 70 «211518 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 70 бо дюассаддс дсссаала 18
«2105 71 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 71 ссассасссі дсісідіасіа 21 «2105 72 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 72 ссісіссаїд дідсасійсс 20 «2105» 73 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 73 сдщдассн дідадсаасд 20 «210» 74 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 74 сідсіссаїа сісдсісіда 20 «2105» 75 «211518 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 75
Іїстдаюдсад саддщаяд 18 «210» 76 «2115» 24 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 76 аддаосісісс адаснеїдс ісід 24 «2105 77 «211518 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 77 сіссідадса садсснЯ 18 «210» 78 «2115» 20 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 78 диснНасід сіддддссаї 20 2105» 79 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 79
Істдсшаї дддоаснсода 20 -2105» 80 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 80
Ісдасіссса їасісссада 20 -210» 81 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 81 сідссндса адаадададс 20 -2105» 82
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 82 адідсідсді Ісщаїйдаїд 20 -2105» 83 «211516 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 83 ссададссаї дідсаї 16 «210» 84 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 84 тТасдідаасд Посссаїса 20 -2105» 85 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 85 бо дасісаадда юддаїесщі 20
-2105» 86 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 86 ссаасідсда адаїссасід 20 -2105» 87 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 87 сддададдад асіїсасада дода 23 -2105» 88 «2115 23 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 88 шессасдаї Псссадада аса 23 -2105» 89 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 89 ддаадддсаа сащдассада 20 2105» 90 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 90 аасідсісії ддісддааад 20 «2105» 91 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 91 сіддсюсаї ссайаїйдіс а 21 «2105» 92 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 92 даїадасід сссдідідаа 20 2105» 93 «2115» 20 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 93 сідсдідодсі аїданатща 20 «210» 94 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 94 асносці саїсідіаді 20 2105» 95 «2115 21 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 95 асішссії аасоддасс 1 21 -2105» 96 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 96 саїсісдасс адідісідїї 20 2105» 97
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 97 псодаїсос ддаїсісіа 20 -2105» 98 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 98
Іїсааддадаа ассассасда 20 2105» 99 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 99 адаадсдадс асідсааадді дю 22 -2105100 «2115 22 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 100 бо ддаадаюда сіссассіда й 22
«2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 101 нсосідаїд сасідссіаї 20 «2105102 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 102 ддаадсодад даїснсса 20 -2105103 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 103 аїсідісісс саддаісідсі 20 «2105» 104 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220»
Зо «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 104
ІссіссдШ ассшсдсс 20 2105105 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 105 оаснсодіда адіадсюда 20 «2105106 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 106 псонадад ісасдссдад 20 «2105» 107 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 107 адссаааща адассідд 20 -2105 108 «2115» 20 «212» ДНК 60 213» Штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 108 ааддаддадс агадідісса 20 «2105» 109 «211519 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 109 аїссддасса даддасада 19 «2105 110 «211516 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «400» 110 адодсдассад сідсід 16 «2105 111 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 111 ададаассду асссааїсса 20 «2105112
Зо «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 112 одсндідссс сіасісадас 20 «2105 113 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005 113
Іссссасддд аїссіаадас 20 «2105 114 «2115» 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний праймер «4005» 114 сістідсадас аадсісісії 20

Claims (19)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта, який цього потребує, який включає введення терапевтично ефективної кількості інгібітора зворотної транскриптази (ІЗТ) пацієнту, причому зазначений ІЗТ включає 4'"-етиніл-2-фтор-2'--дезоксіаденозин, ценсавудин або ельвуцитабін, у якому пов'язане з віком запалення пов'язане з підвищенням експресії довгого диспергованого елемента-1 (11), накопиченням цитоплазматичної кКДНК довгого диспергованого елемента-1 (11), активацією відповіді інтерферону І типу (ІЕМ-І) або посиленням прозапального стану асоційованого зі старінням клітин секреторного фенотипу (ЗА5Р); та пов'язане з віком запалення спостерігають у пацієнта, що страждає на захворювання або розлад, вибрані з групи, що складається з: хвороби Альцгеймера, бічного аміотрофічного склерозу (БАС), хвороби Паркінсона, хвороби Гентінгтона, втрати зору, втрати слуху, дисфункції серцево-судинної системи, лобно-скроневої деменції (ЛСД), розсіяного склерозу (РОС), синдрому Айкарді-Гут'єрес, прогресуючого над'ядерного паралічу (ПНП), остеоартриту, атеросклерозу, остеопорозу та фіброзу легенів.
2. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є хвороба Альцгеймера.
3. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта, у якого є БАС.
4. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з хворобою Паркінсона.
5. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з хворобою Гентінгтона.
6. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з ЛОД.
7. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з РС.
8. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта із синдромом Айкарді- Гут'єрес.
9. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з ПНП.
10. Спосіб за п. 1, у якому пов'язане з віком запалення присутнє у пацієнта з остеоартритом. Зо
11. Спосіб за п. 1, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера або БАС та відчуває ослаблення одного або більше симптомів хвороби Альцгеймера або БАС у порівнянні з такими перед першим введенням пацієнту.
12. Спосіб за п. 11, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та один або більше симптомів включають втрату пам'яті, розміщення предметів не на тих місцях, забування назв місць або об'єктів, повторення питань, меншу пристосованість до нових обставин, замішання, дезорієнтацію, обсесивну поведінку, компульсивну поведінку, марення, афазію, порушення сну, перепади настрою, депресію, тривогу, фрустрацію, збуджений стан, труднощі при виконанні просторових завдань, агнозію, труднощі при пересуванні, втрату маси, втрату здатності говорити, втрату короткочасної пам'яті або втрату довготривалої пам'яті.
13. Спосіб за п. 1, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та зменшення одного або більше симптомів оцінюють згідно з ОЗМ-5.
14. Спосіб за п. 1, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають, використовуючи когнітивну субшкалу шкали оцінювання важкості хвороби Альцгеймера (АБСАБ-со9).
15. Спосіб за п. 1, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають, використовуючи шкалу оцінювання змін клініцистом на підставі опитування (СІВІС- рів).
16. Спосіб за п. 1, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та зменшення симптомів визначають із застосуванням шкали оцінки повсякденної діяльності (А0І.
17. Спосіб за будь-яким з пп. 1-16, який додатково включає введення щонайменше одного другого терапевтичного агента пацієнту.
18. Спосіб за п. 17, у якому пацієнт страждає на хворобу Альцгеймера, та щонайменше один другий терапевтичний агент є корисним для лікування симптомів хвороби Альцгеймера.
19. Спосіб за п. 17, у якому пацієнт страждає на БАС, та щонайменше один другий терапевтичний агент є корисним для лікування БАС.
В в Ку Маки Я І Тонке Му с пути Дт Екрани веж влюмано ВІ У одчискківе ее МУ І РОК Міккі ство я "Дкнакака МІЯ КМТ ре ке дея чНе У Яанахе реве нй МИ сетер дк анцкя д мно 5 АНЕКВОХ шої МЯНЖ» дн и АЖ "ЕЙ тк мох м -оожЕ зав РІ шо ТВЖВК : генак «НЯ я К х МЕ МНЕ леж сіл х ТЕЯВК - ХНЯСТОВУМ Я КН в Е ? МОНК і -х і ї хі Е - есе КК. З - ї- ї з КЕ : х. лах в ЩЕ косо Х як з - ЩЕ ї З века: ВАНЯ ОЗ р окр ЩО з В ЖІ ПечааК с є АЕКМЕІУК ма - КЕШ и їх. кшх з ОК : ІЗ закохя чу 1000ОЩЕ 7 и о ОН ММА є і пеу ії кі я ДЕ Е ОН : г 7 ще Те КАЖАН ТИ І Хе БОТЕТ вк - мл ЕМ МНКИ я ККМ ій КО? КО: ї ша ЯК В БК ОС ЕЕ х Я : дж ти шо р МІНИ МИ БК МИ і р ШЕ Ов Киенетпите те рпеттттветтеттюрттттння шодо а ВКА ат СЕ Ж 8 в - 7 ВОЗИ ВЕСЬ М ші В « В АЖ -к жкжлжж» КАК: «В пд ВТ ом ща . ТЕЗ 2 віха Я х им Кт пік ху Фу УЖЕ Ко в що ЕСЕ: : він у Ах ж ро АСР; яеиункова В а НН І МАВ КЕ ко г ПІД ЕЕ или ПОТ Кк : - : ооо ооо т х стежка ШЕКИК ка ТК ТК вити Ти Ден ; : Кесоеееееееееенни З ММИТВКОНИИКХ Б о НН В ПБЦКх І СТ ооо лів и : ТУМАН ВЕ ВИ: ЗОВНІ ОСІ АХ щ ди нн З -ї МК М: З ри щУМЦИ ОЗ ТМИ и н" джеми ке маниВ авіа аглкя І ВЕБЛЕН Ор ПИ чо ок чо Ки . 000 ВО ЕТУ екол я ПИВ У У ЕН УВО КН. ваш ВК Ко БИК ВЕ Мак пух ко 2 Є битищаці в Кравс скит нтиті сек; чо Кк тий с «ук КТК МУ пинаМиКх ее мое і гене ме ТИН втне Моря 7 ї Теж я Ка м Бе: Жошреії З схему з упаде ПК » НН БІ ні КЕ ке за тонн спмнннпнн ККД Атннвіпнннн ї їв к МЕ ї х за ех т - пр г ок ж ма днів БО ОВ хОНТР я Ж ОВ сн ЩІ о ХАН нет КК КЕ т нос вух МК Ши ша ж її ДЛ кн ВВ кн ВВ КВ хх см же і і ОО чи Ін ко ОКЖЕВЕ Мк г ММ ХОохУх І ОХ М сукні ТТВВОХ ТЕ УТ 1 МУ ст М. х й ї к СО еВ М МВВХ МКК г КВК ВАХ ВЕ жк ї с І ЗО УМ К НВ КМ ВК КЕ сік ок ВОМ ее 00: ВО КК ЖОВ я ж ем у В КЕКВ яко КО БЕ ОЗ ВОК ЗАЧ я ЗДО КЕ і ЕВ ССО т, Ов Я М КК ОКО м ОО КК АЖ тет ер 1 Є А їх Ки оКиЕ ія Ех ВІВ о ех | З дя Же я ї г ОК КК К квас кх у Ва У 5 МСЕ ко НЕЯ З КОх г х ,. МО ЯКА ОВ Ок ери В ВЕ со ВХ МЕЖ ККУ. м т Кок ї ЕОМ ЕМ ВОНО ЗОНА ПЕ Ким ЕВ ОКХ вк али КОгХ ІБ пеВКО АВ дец К шви ї 5. зу и З КИ «Ти «ТЕ ОККО В т КОКО ох Ху Ки В ЗК щу ТЕ ОО М КОКО о Ощ п, хх Її КН ВВ ВВА М ши ОО СО МА : ї й їх ме х ТЯ "ОБОВ МКй ОІД Мо ОО се ще МАХ «Бакіров: 0 ВДНасна яноповя і ТКА, ДУМКУ "Клх ЩЕ анна т Оу дровами кан те К Мівзчеацне маков рану я
Фіг. В В Активність КБ ствах кпітичих дмтнщи сту дх УИЩМОТО МЕ І НКИ дитин ПХТ пУх нити: а ї Е ах як деитнаність ГОХАТ встав нетяНаХ Напсирзценів ; Експрес Звклеваник СН прпенм ; мая «БИ ЛЕНВесЕ дод ЗУЧЯКВаННя х МЕ СН Експо Звезхванво дп іЗ ЕЕ -ки зокре Об терня Фінену ді, п ЗЕВННВИ Я БОБ нт ЕЙ ІЗ ІЗ хРеараМй ЕН лк вч ї схе 5 НК 1 ПУ, ке ІЕЕ У Кри межи ВЕ пе а що ЗА ЕеМг ЗБ Отев пом етар язкабхзв З та 8 Н ше лтввійВ кре М | КО о Хо сохАОТІВЕХ сг. з МО ве ил Б в ОКХ, м вит хв КЕ ге: ї 3 їі еВ Е ! тих -е ; я дом Че БВУНИ КАН Ж оЗгммО А їх роя а | 5 і тож ОП рух як ЕВ Ба я. о Я | в але ка ст Б Ко ш ОО ШОМУ." во з хв ОС Е шої в БР ОЇ 00 повен ОВ | о В у д Бл пл ОІВ д ОМ о В - ВО дея хх с яп МАЕ 5 с ша - ШОЮ ПА ой га ВО па БІ . дім. КВ Б мером ОМ Е г хг ща дл щі шле і ок шт Ка - ШІОТО! Тк т в шко й 11 АП рІ У Ж ОА - УМ К-т МК - Кові С МОЯ г ж риму я шо я КО Шота фу ЗОБУ І па МОЯ г лан Ом цд шо оО Ма МАТ фе о ТВ що ІК Ж тд Пп З ОПОР, ех, НУ Ж МО ЩА з МАСІ МОЮ на ЕОщ й ща сома пі МАМИ ІІ Ж, Чу до, з про а че КІЛ У ст сю ях МЕ я І «а хз 11 ІМК УК с. ОО ШИХ ЕМ ОА по Ж А од у Є : ПОМ . КІСТ дашІТ их пи я дО ТЕМА ВОМ ПОЛЯ МКК Сх МК Оу їх оф ка ММ ОМа ВК Юх О ів ней 1 «МІК І ТОК Кок ІЕЕ Кд ВМО МИК К З Еш ВІД ОФИД ІЗ ІС ОА пт 11 я
АТМ. УІПА СК ТЕТ КУ Ед БЕЗ ІА чай оре Кі ПК МАААЛККня, пок БІ 1 КІНА ФВ т. МОХ КОМІ ТИХ МЕН Кін 7 вин іІМмз І по и шо ще АНА АКА АЕН ов ння МР НН пет ЕКЗ пу є МІК Етно М - «ех ще Не НИК НЕБІ ПРІ ВНЕ НОВ вилов А ОВО ОВО Маре ви лея ї СН ва УНІ є е у дупи в ДО погткко цекітя х тп Кіш МХ КІ ТИНаХ Креми Х КЕ що пу -. струмки же х ; Б учЕ ЗБЕ шставнк яттинак Ктвучачни в РИКАЇ в старих кит инах Потужне вгпручнанвя Кк 4 НО МИ их 7 5 МНН МНаклвух Наден х . сичкатнеі тот Зі» іі т С ч- да «Недеєжлреся 000 Кокдаун Норман кегля Ж ТК ЧЕ Зизіри 1К ря ге КК Худ їх де. ШОЕ з ак МУ МУ . еналав їх кохіг стер НН Хррзаж ки шк КМ НЕ КР айв НВ: ТЕ ОХАНЕ Званоуве о СК І ів. Вк Бо ЕГО 159 ЕВ И Ж ЩО БО ЩЕ тав 1 що 1 Фо Урок сови У з змо ТЕЙ їОоль ве | ся ві 5 й з о і не ше ЗІ Ж сні ге во щі у с кож ту З ей МАХ лай ЦЕХ НЕ З : жа чі Щ фа ї З яонн ве Е з КОтз МК 1 | ' : І Н че. Що ж І А я К ша КЗ : ! ! 2 Ух Н «рок шо МАЕ я т ОДА - х Ж З их Зм Ох КІ щ Гн Як пи Р 1 ек ху Як ро сей їх РАН х, МА ОК ХУ в Є ; ше м» У хе т Фрукт х КТ Мощі по щ по Емо та ОВ ПЕ к оса 0ОЖа и ха вд: тя дао - па ал т ха І і х Же У с ПТ а Ми Ех г Пт ие 1-4 ше МАЕ ОК М вдрооеич ТК хе. З і Ша А У Гея Я цтжогл ї РІ ми КщоО т я КЕ: х ще їх КРОК ох Ка А ЩОжх, КА Па Ж ЩО ї КЗ х жом оОКа Ай БИ ЛО а що ЛІВ З КА очка ст КМ: ж ЖЕО ї ЕН «й ПО ша по ЗО КЖИ ех ще хо ВО сна ЗЕ Яд ЛІ ШОК: жо га КО М ай Я ОМ 007 ШУ що М та ШК ОА ТЕ га М ОБРІЇ КОКЗ ПР бі БО З Мк щх Б я сте ваз КЗ ка ІБК 54 БЕ БІО ДМ гі ЦО ЖАУ Бо хх Кк шо МИ Тра шц Ми ОБ КУЖШИ МИ пЕИ КИМ Кома ЄЖ о ро мч й ПИ, ЩИУ ОХ в Ух ж ап ус КИ ХО Мо им ех пл ї пт. БА ОКУХ 1. КК ВКА З ЗО Межа ся ЗБК РОКІ КОКО Р ех ОН в т Б КИ ПО НН пов ОК ОО кН ММ НК КО а МОБ С Я ОБР ї нам ПК хо ТК ЖАХ що ІК М ї АРани Хей т жі ма я т м ї У х ХК Мк юю ї А щих З МОРЕ КОВБК ЧЕКМ 1 жк: 00011 ІВМжх ЕК МЕНЯ ПЕК З М ЗА ЕКИЕННЯ ЩО Ме ВКЯИ Мова ТЕКИ
Фіг. 2 м Й Б В Желе в КК пила х мог своп рем КИ, Міручання ВТНЕХТ Е Старих вагекнах Ана певису ЖК Мипакопоеня Нокдаух хар КЛЕН Клена ЯХ Хіти ше ЗЕзружонк КОРОК осу нн ою крам 7 ХЕ ци АК х Е - НК ТЕН се Кв - Я 8 в СІЙ зак до Зк лиці пен Ж оба ом Кк ТЕ х шк що ЗЕИШЕЖВНЕ МЖЕНЕЕХІК шко во зи А Ж Іа Ж сіб ОКОМ, : би те В шій Ж да хх то х М й ї МИ Ж ва З п Ж ін ї- во ах т же а Я х КОЖ 5 т : ОЕМ КЗ зи а х ЗВ ЯЖ кіш в / : С Ж п оо ЖК й І схо "дов ех . Бе 2 ; п З ПІ шо Р ЕЕ -е ВО ЖК пух оо щаок с м м М - Ук Я: і пори 8 ї и сх ТЕО ДИ к- х В і х Я о 8 БУ Ж піка І А У ту ее ОВС в под як МОСТІ КИ ОМ З ща : З КС ую Ж у дих З СВ ННЯ В ке р ох сяк КОЖ и їх секлкитня Ма одкчткле дик ї- ІшШРІКш. д я к- ВХ 5 т ши я омхнзниаси жі й хуте Не з ЗМичиасу Ма Б х шо У о КУ ще ЖК ни Жпнунь ОКХ т Межі « -і МЕ ОКХ ні АокІ жк У Оки тих Где я ВОНИ КЛ НКИ ПИВ тр Ох б КІ. ее а я НЕЗМІННА ВЕВ МЕ Не знов ЕК БІБ ОЇ «4 с А ВЕК В о ТНМК МО 7 І ЗК ТЕ: Я Хе В ВЖИ ВО ЛЕМ: НЕК рн ЕКЗ т й т т т т т т т т т І. т АБЗ МИМО ВИ: ПО Кв з ВХ тем ик УА. а од ж «М з А 0 що М НІ о ДИ МОВО ОВК ЧО фе А НК ЗЕ З ще «ек «В Не ще РО жави Во Емма іш Ккрипцемчи сктомнвема З МЕО Жак ШОЕ ЕН Екепрян, М Евспресва У ї СО ди з
Фіг. 2 (продовження) Е ь і маж вмч З НК в мтомо міт ШтдучЕння ні Крила тннна ЗАДНЯ В стевне КВІТКАХ ХВТЕНИЧаНнЯ ДОКТ МЕ мах: " ї «т. щи Тк іх хну т мм МИЙЛчХ ща ідо мцих 5 ВЕ-ВПНЕ ща АФ ННИТВХ ЛшНи. ВЕ Накевнвния Ед ще о зе х сх ОЗОН КН В ЗОН НВ ОН ЗКУ В ВВ ОЦ ТВ И НЕ ща Кі 1 З ТЕ Іа и З У ВК ВМ. - пови ню с 1; з тку су и М М ЛЕМ ЕЕ ВНУ ВІ з ЕВочНІ з ЕТ КВЕД о КК ПОМ ОХ. 1, ек ТЕМІ Я ЩО Ж Ко ЗО В ВАК А. ОСРТЖКЖУМ. кн Е ЦЕ а й Тх зх 7: ЗВО ПОВ ВА: М З се " З шк ТЕ с Мт о ВВ ОК МО ОО ик МИ ої я м кому му ОВО ня ОН ВАК я - ЗО сс, : ТК ПЕК У- КЕ, ОО и ВОК У МИ Ф 1 тк : я Оснк ї- ; ШІ о А І В т мА Ух -к ОО ОВ ще ЩЕ ооо ооо ооо ооо оон Іо оодооодоо. хо СЕ о ші КЗ ей МА ОК В ЗО ПОМ ОО: Я й Шо Кот ще М у ЦЗ ОКО ВОК я ЗКУ а ЗЕШтТя БО! 7 ОКХ гУ «Мо Ж ІД хтУ МОМ ЗО Кн ВО ОМ м ЗБК ОК. до: своя 0 КОМА Ж хх ІЗ п ОМ КК В ЗО щі ВО Е ЖЕ ї Х ХУ а х КО КК хи КОКО Кен МКК КМИН ОУН шо риму МЕДІ 2 ОКО КЕ. з у, ит
КО. ВОК МВ ЗБ 5, ЕЙ ' ПК КК ЖЕ що ід Ко К: пд. КЕКВ хх ВЕ КО В ПО т Біде ЕКО | Кк ВеБ ОК Рош ия МЕ ех ПЕОМ МОМ ОО ВО ВХ Я ИН НК ФРІ З БНО го г В о В Я КУКА ії Е що - - пОЕ ТК ОО ВОНО ОМ МУ. КУ с ву М У ан ТТ с М М ща ЖИ Мащи БЕВТИ Ж МІ КО ЗОВ. й ОО КОВ НХ ОО ОО ТС ННЯ. ОО ПЕК КИ Я пе ВЕ М й " Ч ВОНО МО ВОК. оон у Мис вази МЕ аа МИ. й ООН КК ВИК МОХ Моця Ве: шоп ДАЛА ЖЕК Ма сяк 0 ЖОВТИХ ВОК Он ЗК КНУ. « к рес щі я їх МОЮ ОО МО ше З ЗЕ ан За уи чу йнх ти. "ОБО ЗО ЗК ве 3 З щ У п ке їх ет тах В МТК ДО пнів ОО І М В Зк чан КЕ . ливі юфІ М У ооо о ен С не що Вста ВЕКАВ ЗБК леМЕВ
ОК. ОО ВОК ОХ. як З АЮ М : ще ї щінт: ЗК ях ЗМО и МО НН: х 1 те Я пра их сах М ий -й ЗМОВ В МОВ. ВЕ 3 ВО КВ Мена Ол їла А КВ ВО ОХ. УТ й З ж чо т в М ВОМ о КО Ок Ох - Зо З в ОМ я М ще щ пд В ді к. ВХ. ще Тк Ву бо ЗК З КО п М ОО В я ді ВОМ Ж ОДБ ЗЕ 5 7 ВОМ ЗЕКОО ЗО: г З КО З ШЕ ЕМ. МК М «Ж ЩО пкИІЕВВЇІІІІМІВВВВОВ В ЗІОООЄЄСВВЮТЮЛЬОСИ ОО ЗЄС я Ще МУ ФІШКИ Ми ТК Ох ще З ЕЕ ше 0 НН. : ід 3 Б З Я т ВК сах. У З вів ще ща ОШИКРІННН НЕ КК НК МКЯ КВ 5 БЕ с 1 ТЕ ме Нш х ЖМШМЕпИ ШТАМ лм і їх Ум ко ШТ. МИЙКУ Я ШЕ КІКА ШІ ЛЕТИ ІА щи А Оу Є на «КИ КК МЕ ЛИ ША а ЖК ге х Тк ни ВІВ ЗТ КОН ЕХ З КК у ЗАКО я ЗОМ ЕІ ІК Де М ТК В їх іх ДЗ х п. ШНННИ ПМА ЖЕЛЕ БОМ КИ В В У шХ ср, РОДЕ ма Ом: ВЕ Км. ОЙ Сх ХК. є ськ її - м ДЗ учить с х ВАЖКУ Мои ше пику лу х с ЗА ло КВ КУ ЧК ЛЯ КС ОК МКУ
Фіг. З її Ковкв Є на ЩА Її ЗЕ ще ЗК на жк: їх 7 Го зи ВИМ сіло ет г : сире Колив скат вк Мертва са М Тл клжат печами ЗТ ОЗ, 1 НЯ З овеча В ка БАЖО при ТА 1438 ї я я ВАК НИ КС ша -1 щі днк пе У Оп р А «ЗУ хх що а о- х а щіла; З ве нк Ж «що ЯАЩ з ше ІБЮ ї о 303 Бан у По час ї що че мо БР а ЩЕ ат З зе З сх щі к З ОА пи щ- : ще У ПИВ ї 2. І жд ШІ Оп ПК : р: ЗШ чх КО Ї «т - .х Ж дах А Ж ВІ ОО Ж У МОЖ аку хе т шт ОМ А СВО М ж 3 сх З Хе 1 с й щх ш М мні Мав 1 Ох ЖОМ ни З МАХ 4 Мов Ж шко ДЕ Гм ШО 4 МО Я. ко 3 ІВ 1 КН т її МОУ ше КОШИКИ ві КТ ша г Ек ЩІ м МА -ї й ! М Мох КОВЕЕННЯ пе кі ЦК ши 8 х ЕХ У й ВА НІ ТЕХ, І І ОпА ЕЕ ВУ БОБ З шо БО сі шк МОЯ ії . Ка хі Ком щі У ВЕ щі ваги БАК. М М за З и а ща п ОКУ ПОПОВА ЕЕ: Її Б ке о З а КОСІ ПВ -3 Же ЕХ я Ва м ПЕ ЛШ ШОК . КЕКВ ПУ - ПІАША СМ ХО ММА МИМО МО т ПИ. В ТОК, ШЕ МОВ Що М МОЖЕ ме ММ Хек я МЕ 3 ще КД ! сх Не г КЕ КО Ша КА п в ТА їв, В ОТ 5 ПЕ нів п В щі пюр Я ЙОАН ПМК: ТИМ КВ о КХ ІЕМ См ЕІ ї ши ПМК ОК Зо ПИВ СОМ Б Ж ОК пе ШИН п ПЕ ПОВ КІ - ЖК МЕ ЖЕ ї ж ОСАКА ЗОЖА ОКУ ПОШТУ 1 20 КЕ МАВ ЕКах Ка - ПАЛКИМ НВ ОК КК МК у КОЖ ПЕКІНА ОЇ З АНА 1 Ма МЕ ЕКаз УТ АК ван ПЕКИ. щи. ЗИМА КА КУ ЗХ НИ ОЯ У ПТМ ОВ М М шої ОК п ТАК мч ЗМК я й БНО КОНЯ зи БОМ Х ЩЕ ОО Б КА КІ У КК КО поОЗК? КК й ПЕК г ж и 1, БК ПОМ МОХ ШУ У нн ван А ві ши шо по х ТЕ МІК КИЖ ЗХ у ТО КО Ки тихі ста дк лляна Вл ММ со Та СИНЯ ПКТ твжніЗ стен е -е а 1 У ї АЕОАМО т 1 В КЕ ЩЕ МЕ м Ти стан нн она ДИ ОТ п клНиХ вна стане жит й 5 ї МК. хелЕ ков старннма 00 Теожовів во
Фіг. З хутня ВВ КТВреНИ . З (продовж виттнх ження) й Киспоеи піна йно а ствоа що ТОМИ ю хе с ит т т- ;. Де СтТерЯєчкЕ пехннах ь оооосовоовововеояе роко ТЕ мив У МОМ ВО ВЕ я ставюв о КВ ЗО ін НК то НИ КЛУТНКЯХ ЕНН не по о ЗО а в Ва з КОВЦЕВ кое: НК СЯ « ВО ОО А ВК п спо В Що М ВОК У ОО ДО ОХ Зева ВСЯКЕ епос ктнндннтнттння СХ КО ох ї5 М ОО ов ОО Знвва МЕЖ НТИМН г І Ох ї Х - ВОЗ ОО ОХ їх ві НИМ гр. В У їх: о п М свв . ОО ОО МОХ пожіх дня : МО ОО ОО 5 ЗКУ, тлхи пах дах " М о ОО ОО ЗБ нку, См З Б ови х Звання МО М ЕЕ . ОС МОН ОХ МОХ М Х ОО ОО ех дово у о . с ОО ОО ОО ие Ви дю їх М ОО ОО МО І БЕ В печін ОО В п СУ в ОО ВО СОМ УК Мо молюся. УК Той ОХ М З ОО ОО МО ума Я т ха Ння им в си в. с кеВ ня. с в ЕЕ С. МОЯ ЕЕ ОО по ВО ШОК ПОЖЕЖ . ССС ДО - ОО ПО ПО воді пока оя МО ПОВ ОКХ ОХ КО ОО ках сек пасти ОК ЗХ ОХ ОО МОХ ОО ее, ЕМ 3 ЩУКИ т ОО МОМ ВО ОО ОХ ОО ХНН Б ях МГІЦеач МО я ХО ОК о КО ОО ЗО о НІКИНУ ЕМ З. ту ее ТО ВО ОК паж а Бенкет их КОКО ОО ДО МО ЕЕ ПАК шарах МК ПОМ ди ФриМиЕ За ОС ЦУ: у ОО ПАБ ЖЕ ВК ЗОН ХВ МВ, а ЕЕ ССС ОО « ! СТВ, Си Я щиИМ ОО я М Шоноінй пп ооо цщвіцГгЗгЗг ВО кп Мр Я ЩА я, ро ОО ОО Яивив С а тижмі я ря дя: ЗЕеП-ВВ Нижній В ВО па Тк), тар ЖеДИНТ і до Ма Нажкіх ред в ДАКЕ в НЕ . ВВЕ цк Ши жи ТеВНиНЯ Дитини ст еВу Б БАРУ ВЕ ЯКУ М ВАН «Може й й говнаєьком ПОНЕМенн стання ВЕЖ нн сш ПОМ, ЩИККМ : Тева рОслх вав ВОДІННЯ МЕТА Іде Бої Ех Дт їх ХК МЕЖІ т. КЕТНМ
НЕ. ЩО нку ян АТМ - З ЗЕЖУМУЯ тКОМмин Сх х зе ї мн ЇЖУ Ак 3 Я АБраео с: Біх ЗТТях пен Мо де 3 : БОШ УВК ння с. Ма ЕТ ЕІ їн ! «Кк со Кок зехему ДОК сеї т А ї Е 1 Ко Меп я ки пт ТЕ З і оті : т ром ІКЕнненЕНИ ї ДЕ ення х ТОБ МЕН х Е Ся ї п ЖЖ ше жі ЕТО ї розро и АК : ї Х 0 ЩА КЕ Тк Е 3 ШЕ ШНКСУ Зп с ї І 7 У. х емо ОІВ щі КО ще Ех т і щі «і 5 г ОО РОТ жо Я а: КЕ т КО; ТІ х око З Сх : З ост х п. ЩЕ жо уз їз г 4 КО Ве В ОЗ : 5 «ро ОБО Що КО і і і хх жо ЗКУ Тек 3 1 1 Я Мк У - ї «і 3 ЖК же 1 Б я Бів зо «т У щі т, І ВИРІ в ОБІД сша «| БЕ д Е ЕХ Кок ЗО Єкра; шо ЗО цик Ме БО тро во БЕ ШЕ ї я ОЖ ЖК ОЗ й і 5 УА РОоєЖЕ ї КОЖ КЕ 5 х НІ ТЕ ОК З ХК Т ех І ОС ях жк ЖЕ дрон Ії ЧА вої З ЗА ек пий ЕОщЕ У х хи ЩІ 3 ї Ії Моди «В ТІ Засл я На і ої ТОК ка кі 5 я ДЕ рЕ нин ОІД МЕ ї жрдит КО МЕ : -х їх шо 1 шНХ КЕ АЗК ско і: їй КОЮ Ще І ЩО ОМ, КА У пути 2ї їх ва Же Кк ЕЕ з во ПУ СВ ЖК Днодтнтдетнння ОВЕС КО ТЕ В Ко і ВМ кечу кн В Ед І.О З ее 1 и й З Ух плдннних ЦО: У КЕ хз! кю «о КЗ ЕЕ с НЕК сн АК з В хх сени кю с Діденннх хе 1 М пт ян ож ОЗ дити ід пис алое ех днк АВ ТО Левине де кох Фіг 4 певне с Ж
Е ї Кефітне ВИК: ВКККІ МК ТО НІЙ НО хипе ТаННе. Званема задень хх Кітий хх Мирне що МЕ 000000 ЕЛОМЕООНВОСютевНх КЕЛКХ пуд ер Піуру КИ КККККККОКК доти тоди ртя т няття тятянянтнян ПВ Гм я 5 зі шко о. Зерханим якізхин Грека АЗИ БО б еВ 0. С уеснннінінК вк" . шо тре тра ОО МААААААТЬЙ ! Ера в ЕВ ЕЕ . лм ;
Е.О о БЕ в і ж ШОВК ОКО етвкознвнатни Гоуювиех : Но» БЕ - нен Варни - ото р. РУ Я В ак ДЕК КАК КОКО «фекитені а СВБВЕКУ хе жиру: ї що ви о торів ення дкаяя и ши ще ов ву БЖ в ій Кон висвх. Я БД ВН М Ії ї ху а М я КА о дО ли Кат сі Віти Ві Вісті 2 пн о. МАЛА вав НИ дк іевцй М Ян Міелування сатернуронатах її
Фіг. 4 (продовження!) ВОЛЬ СТАРІННЯ КЛІТИН В ПОВ'ЯЗАНОМУ Я ВІКОМ ЗАПАЛЕННІ Старіння кпітин Підвищення експресії НЕ (Зокрема, ММС Накопичення цитоплазматичної КДНК Е індукція ІМ-Ї (За доповнено САУ ТМ ді Взаємовзплив на імунну систему, посилення ЗА. Стимупиція пов'язаного з віком «стерильного» запалення
Фіг. 5 а Ї їх є т жом щем. км если, си кіс кеонік пух У гестозі, Ко: хм в Веренеиту еоблинаст репеатевного стерня Енепресі не Ветхезів ВК. ХИОналогіВ пасе : ще ї / З СПОНИлИр паса - Кк іа. то В Щеня КЕ Я ВІК вн з щи що 3 З х в пе КЕ жк Ки до Е ї ; Коші 1 зх кОм Мо ково 0 ЗБиВе в. шо і Ж шеф За КТК В ЗВ хи І Ж у. Я ва КО ди Вих ДЖ умі о В яп 7 ХХ бжт ІМК я ї 4 КО КО хан ЛУ ТО В ел» щу пен В ї пяяяяяя КО 22 З вк Ока 5 м М КВУ НИ є . ; шик комч ї Шо ОО ЖКЕ шо к ше се швом юн їй ШОВ ї ях Фокс си р 7 ОХ и ех сих БІО З Б що 7 ї о Ж я Ба: ЖИ і Мушу Е З п ЖЖ що й 5 т : : Ох м шк Щи я КОКО СК УК. КЕ ЯН ох - : ї . КОКО кн з КЕ я ОО ОО З ее СК Ї до В : : ЕЕ я і З БІ хо КЕ, Ку оях ще аоЕя : Код доз МІЕШЩЕ хай МІК 5 М Ота хе ік шва кн КОЖ Же КО ОБ я КОЖ іави ся -й й Пезатен о фан о пПеНЕ ОЇ Но | ОО БЕ ТЬ МК КІ г , ЕН ке геї КБ зу Ж Но З Мі ОО КЕН паші ОКОМ хі ку т Вр. ско. ЩО КУЩ. ЩО : В дю їй МЕНЯ МО ї Тх Мч КІН ІК Кри : : : Кок во 17 ЖИ Міша Ок. БЕК 2 МО шЕ ї ше : Е 2 Мп з Ко ТЕ 1 МАЕ Ж КЗ Мі по В 5 : : Е ло - КИ В ТУГО КИ т БД бу СГ «В Лкбореюючеюсуєкю струсу суєту ок су юні 1 КК, КРБ ТУТ ЕКе шк Еш ее с ц х Ї х хх се я я ЗИ Є В ТО, ЗОРЕ М ВХ ОБМИВМ тї Я оо ї 5 ОО ПЕК. У моя ДЕНАКАКЕИ п Поки її Ванни . ФК шк МК КАПЕЛИ Ск ОМ Час беж) ще КО Ж ВТБ НОВ ч Е племен скинім ХЕ Язик Енсповов іа ОА МЕФНеЦ КУ КК те. Же З З, б т 1 с п Я ! За старі ем «Я СІВВ з і щем ВІВ ХЕ дення, Бр екаи в - За змо ЗД х МК ТЕ ї - щ хв ах З щі : ! і щ- хх «м ак ї Я Ще яті и МОВО сення ї щох ЕоиМ я КСО хе щі клі «е п 53 то дя ОЇ ід БУ ти ж ах ОКУ дО ОБОКУ. Сей ак КД КУ хх ї БУ їй ше сх у ШІ ї ща Жосу я шт З А В 5 І ОО ЩО ями 01 Р ОВ КОВО Я й 2 МВА ох я ТЕ ке Ва Код МЛ шо ча М смт ою ВИ в хх пшР ОЇ ї ЗОМ а х ЩЕ . ТО вро д БКИ - ща пл Ка ї ОБ з ЯМ: сеї М А ЕЕ ОП що хі шк КД ї ї ВІ. БО щу зх тей ОТОЖ ММА ЗЕ КИ З Ж З МАЕ ОА кН Фе КИ за де КА В ТЕ і ж про ле, МОЖЕ ЕІ ЛЖИ ОКошай СЕР У Ох Кох ГО М ВЗ М СО У ОК. Мй ХР Ка З 3 Мой МИ ! А КИ жд В ЮК М А ОМ КЛ Х ЕОР Окли «ТО ЗЕ В В Кос дея Ан й ія ки М ще Ук ж гу и Тк токзльж ЗКУ ДЕ акти я по ТІК не КА ЖЕН МНЕ Млітнна ВВ тини МАВ ка КК мок с Ж 3 ов,
Фіг. 6 з . МОЙ ом стік Мел Кеспоесованмі спементв 5 вип я . ТП ЗВ ідеморочамійні елементи Я ТО Кохдутц влемам ПО их шжшхактм: вламеати МпОш Ка м ше ПЖЖЕИОТЕ: Зп ГКІ ЯВІР ІДОПЕ ІК дл ПИШИ и я ВЕЖ ЛІТ МОЖЕ ШОМО МЕТ я ІІІ МІ МОП ОМ ПІН ШИ Ж жало МІ МИ МОПЖЕ ОМ ТІ ТІ ВМлРІД ОМ ЛІД ЛТОІШ ЩІ її ЗИ ЛИЙ МІ КЕ ТІ УТ Де ТАЦІ п МОВІ Ів у АЛІ МОМ ДЖ КН ОО и ОТИТІ КОТІ І ДОП - пОгЕдл От ШІ рух, ВЖК ЖАХ ІК піп ти Ж ОХ МпОМОМО ІК МОМ ХІ МЖИЖЕХ й МОМОГРОШ МО ФІЛ МЕ ПІІ4ШРМ Я ше ЗОДМШ ОПО ПОТІМ ІМК М пат Не - ЗНКЯ Ме Ж КАК и ПИ КІМ МОМОБІ ІІТ ПІТ 1 п ШТОК ХТО МЕМ ПІЕЖОКТОВІЖТ ТЕО ТОМ І поле лі СТО щроФ плити МІХ КІМИ Ілля ПИРІЙ поті ПОЛІ ПІ СТШуЙЛ 1 г КІМ ОЇ ОТ о ІВДЛЬ ОГО їж ЖБК КЛІ МО ІИМІЖИ ВИК МЕЖІ ПІ ГІ МІЖ МИМО Троаще т МОДИ ТИ МАТИ ТОІИЖ ІТ ФІ СИ КОМИ МІК ОТО ЕОМ плани ПОТ ОРОЖЦЮті ПРОМО ТІ ПІВ ФТІ ІЕТКІ СХ мк ОКО ШИМИ ОКО Я МЕМ ІІІ ІЕМ ОМ Проєцютьмиєти ЗИ ЩЛИЛИ МОІШЖМЛОМІ ТІ и ПОМ ІБОМ МО РРОМОЇІ С ВОПИИЖжІЛ ІМТ бю тт ІСЖУК МІЛ ОТ ОТ ОПТОМ пи ни М сше ЖІ І Жив вк Я с в п В В ПІК ЯН ть ТЕО ЖЖ ПО ГРОБІ БІ 2ОМ ІЙ ФІМИ СЛР ТІ ОШИІТЖ ПІІ ІмОЖт пл ОМО ФО ШОІБСІ ТИ ТШОМІШ БІ: ОТЕУЮМ ПОМ ЇВ ОПОГІМХ шиншил шрІівевни ТИВНО шив Ева т є ; щі ку в :
Фіг. 5 (продовження!)
Ж ЕЖСПІОСпИ: влеМаНхи ь кюкюккюк кю кокон в Млртроні кишНе А ізогехк зенім дхімх 1 Ше - СК числа ки ВТМ ЗернтжнНнях рих лох а ев а КН я іден же що х ВОЗ пр: кс ско Гея ік БЕК НВ ог мих КУ Дипизан Передано сетер ов сімейства Жахшть С Е ЩЕ їдкк сікрамгвпементв З Е ско в Тв ке кое жк як У 1 Ух ЕДНВ вкря їй МА й ж Ки і Не нем КІМІ КЕ т ям кода «і дожнени пд, т 5 ТО ІК Бе евктн я КЕ ЩЕ М м їх сг ї Ре ЗМУЮ Бе С КЕ й У й іх; Кк ма хх Ж ФА ВІКО М З ц АХ КК пні те ТА В ен; ЯК ко Ж ще БК ї ай М З ЗЕ і джтннаців ЕМ-Ї і х КЕ У їх ММ. М КЕ Муки х їх їх із ся У. 5. 5. Що ря й ще ДкгИВНЕтЬ ЗА-Ве Експовесз всіх спежентів ії Канни ЩЕ Клін МАУ зд гл за пах зе Я поняття В Й пря ян Б ТОВ айв «Ж КА спнттнтня 8. хо Три м 7 МЕТА ТРУ роя ТЯ Прати ож тк ТСН ЕМО. ККОКІРІ ОКА КИ ОВ ТЖнВ. ОМ МНЕ; чи з Фе оси Ек ОБЖ та. «м т птах КАЛ М и АН старі сх щу СМ ДНЕ КАЗНИКІВ: ВЕСНА са ето дня КОДЕК ЗОВКК 7 ог Ж де зх яко З ї 1 чи Кк. Шх ї зт хх Кк : Я ВК ях У ї що ЇХ : ОКО ля, с хх п І х ро мих ї я зх КТ - 5 ШИ і Ж ї ат ок г КАК еі о Он п Н : Я з І жо шо АК що ВН мч ока : з «ко : і дк т их у як ЯКЕ ко ацвемЕ ж ої Ж оо ВЕ оо, ОО БІ ЩЕ ОЗ ЖЖ лю ою ок і Ж Ми Ж ЧИ осей "х хі я Те зх нку ЩЕ ЩА ОД. 5. КК І ш НЯ п ЖОМУ І з и : ЗШ У КО 7 ро ве дО КІ ша що З МУ у хх 1 М ТЯ "я ОО ТЕЙ МУ. НЯ кох щі их Ж М : їх : пої ; аа ; СИ ШУ Кк т Ел ай Б ше ой М Я ОО Жов их Я Я : мож а ІК кщосБИ НН ТЯ ОБ МОХ ХА З ТО «т ОКУ ІД чи Мі ОЇ дО пок ли КО щи ї хх Кк . КО т де ї М - 1 ЩІ я то Ба ку ЕИ ОТ КА шій. МД о БО Ф 1 п Х ка а во ОБО БООКРЕ ЕКО ЖК Ні -ео КН г т Пп З що Обі її що ха воемча ака ва ЖІ ПА щу хІ щі ОК ау лк ут ш ША й То КК ТТЛ ВХ што Ж Є шт ха шкООБАТ тм кт ГУ Ка у Б кю М ФК МИ щ- Кк М МЕМ ні « Божко Гл паї ЕМО І Жан М Ки ЛЕВ Х «а дних Га КАХ зо Кл ОКА фе ри п МИ КЕ Я ОО ВА ОБО КА МОЖ Бл вк Мі кош ОК ЕКО Бр КЕ ЇЇ па Її. нан Др кектаітня ТЕКА ж Поки ДО ПАК ДК КА КАХ Ж ВУХ сі сива М ї З ї й Е її ї ов ПКУ лю дела ка. Го " А У їх !
Фіг. 5 (продовження!)
х . є М 3. ть: 2 а Вирівнювання послідовностей, отриманих за допомогою 5 "НАСЕ а Вирівнювання послпідовностем, отриманих за допомогою В З й - сх е совки как Початок комевнеусу ТНЕУ і са і ох як, лам я 4 4 «Ж :. че их ОМ Он 3 о В тв В с З її ; ї і х : сага тов туї сажки Мі ше еео факс Уколи и Тева Коня ан Кансенсує 15 КОМУ М КО ВЕ В КОКЕ БЕК МК ВИК КИ КВ ЗІ БЕБІ НЄ СБК З Е й й ЖК МК ; Я К їх 1 и ше х дм пейахтви тем зам ие В КК КЕ ЗУ ПИ ВК В МАЛЯ отиту ТВО НО КК ВК ВЕ ТОК ЕВ п м КОХ ще що аа 5 КО КК НЕО ЗО ВК В КВ ВЕ і паски У НН ІК М М М Я ше КВ ооо НОВ от нон НОМ КЕКВ В СКМ КВ ОКО ВЕ В КН ВВ ВЕ В ЗОВ; дж ши якими трак кси ик ПН В КН ОВ МВ Я х ХЕ ЕЕ «и ВК КН "ЕК ВКеК КЕ МНК КК ЕЗВЕВа В У ї КО КЕ З СК МИХ психо хк тих яю тя кит яті тури --ВАІЕКІ ЯКЕ М МИ ЕВ ЕІ МВВ КІ В КЕ КК ху ПЮДВЕА, бен овен п ЕН о нн и в В Б БУ ОБ З ик Ам ах люд «Ерні кіккк 0 смак ти «З КККу че еяккік о нак иа ПОКИ я КАК Кріон Кік шк Ж Вед МІК КМИН КНКНом ее вкЕ ах ВМІВ ВО с ЕЕ Б ще ВЕЖІ песни ВВ КК КН КВ МОКОВН ВІВ пи ООН ТО І. її о чик хи Мо т Таж, Мазахеазииихх, лі Мексики АЛ Кизил КВК ЦКОххни щи сич до ККУ пах: ях ВОВИХ тини ІВ СВО ВК МН Ну ПВ ОКО во ох пх оо еко ми хх, заліки хаус Под в ККзЖоих КИ МАКИ КВК Я КЕ КМ ЛУ Ід ХК пити р м нот суто ВВНЗ МКК КВК С В ОК ЕН х ПУ Кт піші п МК НО В НЄ Х ЕЕДОДЕЕЖІ септики «СВО ОНКО ен Ви ВВ, пен ое ЗАКО 5 Х щу им ами ее хх КІВ ЕВ КВК КЕ КЕ ЯКО ЗК МЕД нееогмот ит тт тнн т ттн ОВК КННВ В; ВЕК ЗУ ВУ пок тк ОО МеВ ОВ ЗД етикетних их В МОВА БУ ВЕ ЕЕ КЕК ВО еВ в. в ТУ ШЕ щи. . мк осВЕшмлхІ м Іі р ЕІ КВК ВК КЕКВ ОХ ОК КОКО ОК ЖЕК сит кит нки ня ши НН М МЕ БЕ УТ ХМ еВ. вна ве Ми поем ох о ее ме МО п ЗІ ВАТИ: ОДНЕ ВОК ВЕ ТК КК ТОК ВК Оу ВВ ЗК УК КВУ КМ КО КИ СЕТИ 5 кісток КІВ КА КК ев и ВАК ж о МЖК пот и и дути м фути СВК ії. МО х ско да ах. : 7 ОК есе КК Ки Я ШУ мух МАМІ КВН и КК х Кк х я сх Кк ча ІА іч ЗУ у сі ХК ик яж. тла ов са ко оклику віх КІВ пк кІнК Кк МІ ЖК КК ХК Я ПЕТ ЗМІНЕНІ МЕЖ Я тт ВеНК Хе ВЕ оВя ЗЕ КВ МЕККА КОКО і хв ор ми А НЯ з я у пн НВО Б В ВЕЛЕДВЕМЯК о о ИВКО ОВЕН КВН ЗЕ КОВО нове КН МОМ КК ж Кк ато, - т МНК В АВ ляти т 7 ВМ сет Мних ий ит В В НМ КН ВЕ 0. пф нд «жк Ми ОВК 75 я і КК А В ВЕ ЕК ВХ ШЕ сотні д нин пк ОВК ек воО ВЕ ВО МО "мм июня яка км м мох мк м юю а мк мк жк мов мом мк м мк мкВ М МК Ек. Ух МІХ ММ у: С і ж до ему ; і зх ОО ле М 1 х ях тай ке МИНЕ ЕН ИН Ох г З ш ЕН ЕНН о ВЕК КВ КИНУВ щі де і ЗКУ АВК Ка ее ЗВ НК Це ев ке тк МОН КОВО ооо пе вне ЖІ ЕК нки зоре е вк Вовк Ки ВЕК КЕКВ В КОВО В ВВ В бос Кох вх вт о нн но ШО НК с п 1 ОХ я КО КК ВОК ОХ ж ж. ЯКУ а МОЖ Ух ЗУ С КУ. ЗК х КОМО ЗК ОК . хі с сова с й, ооо п. о о п ох КО 5000 ОО Ос КЕ ЗК ВЕ З а о. Пс ОкоНееене о 5 о шк і. 3. о о о. ік Коен Ме КОЖ о ще о. Хо Ох НК ЗЕ У ЖК с о Ех г НН - ж п ще с п о - пс пі п с с ше г в. с п: о. о. с ск 1. п. ХМ З в. КОХ ЗК ке ОО В АК, НН її пов. о. п. о ки 1: п Б. Ох Б еВ Бо З о. сн її о - ОН нт КЕКВ ЕЕ Но ЗХ о. п ПЕК Ве НВК Сх сов її с с -- :- Ще певне воно Кк с; М о п Ж Екон Ме В Б о. п. Я о п Н що. . о. х о. Б о нн с 0. Б с о. віх о. ЕЕ с о. о с 5 с 0. ООН о: с ше ОО В о о. А ее с п с г 0. КЕ о. З І. . . З кн о по о 0 . о. У с ОО еОНЕНК у о. МЕЗО а о. и ОВО: ОО оо с о І о. З і. о .- и: 0. в. о. У о я о. ЗО У с 5. с ОКЕ МОРЯ ОО, ОКО Я п:
с . а. щ о ЕВ ОВ о. . о п о м ЕН о. ЕПОХ й ок ЗА о. ЗЕ о. ще о 0 КОКО Ток ЗК КЕКВ ко В ДСН Х ТОВ ПОКЖККХ ККУ КО З ОККО ОХ З ЗХ С пс с . їі о . о 0 с с спинна і ве; сова нн хе З НК ах сіеск ВЕ ЖАКА ке ЗОВ зле ай и ;довження)
Фіг. 7 (продовже і ак що ; дак зво 415 і ЗК Кк - Кіхот екв су що дові: ВЕ КК ВМ Ко о ра ке 7 пеВК КВК ВИК В ЕЕ ВВ Її я КИКТОККН М НВК НМ о ВВ БВ 7 . ех ии тини тя увнов певен вве ов вва» - ше 0 фа тери тм оо Кв КОКВВ соти ПІЦ допити п кокон с 7 пане с 5 я ПИ Кв і. я а о ; нн ПЕТЛІ її пед Кв няння нн ЛО с фвовоно р тютюн тині яті тр о ще п ооаов села . с КК ОХ КЕ ВВ ЖЕ. піт ОВ ОК о о ОВО ВВ В пенні зщке ПК. о ХЕ ВО И КЮВ. МЕ що З ши оте о о ооцев бетнння Пен и А я ВВ ТОК ЕВ М. пн ї о шичНнеННОе ії ши
С. ЗО ОО ЕВ ж п ДИНИ ВЕ ВЕО шк шия пино «ту вер ее Вик я КУ МУ кА таня пи МКК ВВ. КІВ Ока Вони ке МО У дк кев нене КО Бе ехо о. ЗИМИ БУКВУ ї ся о но 0 у ненні ОО в. о о п ик хоВе В вони Кн че ПКУ КМУ Зх УА ж МКК КМ.
і. пеня З ЗЕ жави тя нн я нг. 7 (продовження.
Фіг. 7 (прод моло деки дою К ме ХК фам і ки АЕН АХ сі ОК ВЕН уми ЗЕ ОК КОВО ВК ВОВК МОБ МОН АК ЖОТЕ пиття тити ит хижих ит хи яти ки тики уж ти хи фетуитти ин ухи тих чен ни У т ПІК КЕА НК В ЕК ЕМ М ВМКМКМ І с ку В. с ІЗ Консенсує кпонів З МАСС і І
Фіг. 7 (продовження!) ссзоеоно кеотан тан нон п п пон т ОВ В Ве оно вва: КИ М НТ ВК х їх ДОБ КІ КВК ОКО п: І є її З В пт» я КЕ: о ТЕ п СОБКО п. ОЗ
0. Ко | ТІК: й ЕК АН В пе ОК КК ОН - ОК КК ФК ВВ ОБУ КВ КО З МО ОК В
0. ся Я ПО с со а с х Ва С Ко п ОМВК КОВКА ЗК КК ОО КО 5 5 о: весен ан ї о: г вими пинт фунти НН о о. о. х В каменя ям опоф фе тити свои чт ве мм Ж тех в. З шо о. ОХ . рт внНН
' . і Е І і і і
Фіг. 7 (продовження!
хі І МК ОХ х ЩО п КО дОЕТ ок оте еп Ви с т шо ко п Ох с. Мои п ЕВКН ОН ЗВО АНТЕН В ХИТ Ки ЖЖ ХК КВК о фе ками кА УЕХМ ВККЖ УВК її | орекрев в кенив ХК З МВ КК КК УВК Кук Ко яю ТТЕХ ДУУУЖЕ тити КОМ он КОМ по м ми їн й х. ї ни т ем тк ПК ТК ТК КК ака ха па ко с ин Б ши Оу» Трон ом ев м;
с . її - 1! я ОВНА КК ри КК 5 КЕ о КОХ КЕ «МКК а ес ев се з . 0 піша ен нене ее ою в ее КО ВО ов ох вм о в ти Й КУТУ ВЕК Хоми ВХ ВИМИ МЕЧ х і. СО лах ОО ВЕ В, она ня й ша пи с ПЕ оо оо вв ково овен Ж ВЖК 5. о ння ЕКО КВ ВН ЗК ХУ ХХ ЩО ХЕ МІКС КК М ХЕ ММ ЖЕЖОІХУМАНОХ 0 КАК ХЕКУКЖЕ КЕКВ ЕУРВВЕВНСУ і. ЕКОН пики ОВК ВЕК МОЯ ОККО ВУХ ев кВ ОКЕАН ен МК КВ МТК ЖЕ ЗАТОК С ша ни ПЕКУН ВЕ зе і. п в КО ОВО ВО коханок нен СОКИ ТОК КЕКВ Ку КВК ЕВ КОНЮ ВАКККУК КК КВК КВК ВИ х. ЩЕ У ОКО КМ КК В 3 ово лк ТК МУУХех ОЕОТьХ УКХ КОМІ НХ ро БО КО ОО Кок ОО М ДеЕМІкіпем хе ки ке ик вки ОО САМ ВУ се АК КК Ко ОЕМ ВЕ Я МИ В ЕЕ Хі 5 кі ХА оте ОКХ ХОБІ пед Ки ПОЛО КН КК х пе С ТУВ КЕКВ КЕ КК НН ве ЗА Її ОО о ОККО КЕ МА Вона ОКЕАН ЕВ НН КІЗ КУ Ех МЕТУ КЕ х КК. МеЗКВ Зіни т ВК ОК КЕ по МОБ НО Ох оо еАЮО. ОБ: Кв и ов ОНИ з по. КОХ НО пе ОО ОБО МК пот в НН ТО ВЕ ОК ВОК ВО КО ЗБ шок вив НВ х МЕ ЗК МКК С с з ЕХО М І ІНК моти ХАКІ кеВ ато ек Ке ХО В НО т 1. ОБ п ОХ ІВ. ре и ее В: А ЗК я ЕКО Аа Дн В СО ні ев ОЕМ ВК ОВ ВМ х ех БОС Кох КИМ У о ЗК МОНО ех» КОЖЕН МКК КОКО ВК . ПОН: Ми КМ -БЕ ЖЕННЯ ЕК К я ЕЕ ке п п пон оо ее не о
В о. п ІЕЕ В с хе в-во КОХ Коко ОВК М. КОКО ЕЕ КА ФУКО В ЕВ ИНВНЕ щу і ЗО ЕІ Оман КК КВ МО мілкі пеки М ЗЕ о ТЕО ПЕ МОЯ пов оон І теж ВВЕ КЕ т КСО ово ее и ок КВ КОВО отри МИ й нан : а я Я. ще ЕВ пеМ Кік МК : МНЕ КЕКВ ВЕБ В БОКС ВА ЕЕ ВАН ВЕВЕНКН Я Жах вх ; з ВК ОО Он пон З В ВХ х х нини нини нн пен нини нет ннння ЛК ЕК ЕП ЕД ЗОВ ВВ за ОО, шне і : : КК КК о і Їх КВ о о ооо о і пон в : ХО КА ПІСКИ Х Ж 2 х (Фіг. 7 (продовження! Звадаені дав З ВАСЕ Секвеновані клони БЕ Пенетою 0 в. Я від ЕЕ плоди ка по, В яд за5 й до пд, Ех з ВИ пз, р пт Ті іти ще тент пететтетттютя Сеевистю МКуькшть 5 вт х її М а Не тара В М БІБ г та МЕ у Я пух м а ММ ї В Ф ення)
іг. 7 (продовження) - в ща КАМЕК КН ВЕБ ГЕННІ ЦЕНА ІВ пре ани піемВ; «НЕ Мо: хан ові а: обстеннпідне:о 0 Йсттенмвня. ВЗ Щнях КСО підонек. М Шахи КЕОО ІВ хо й ен Я й свв У Щівяки КОС піде, «ВА Шункхн КЕ зниж. ВО НЕ ланя ІН ЗЯНЙСі гени ЗАС
«В . «ть 8 ух ха В --е Ж ! М ВАН ВсЕ гени ХАР є а . ; а хх З ХХХ д с М з ОЗ КАК Х ще ОХ ХХ : Х с С ІІ «КЕ Зх я . ж . . . і. х . В, п с. Є 5-5 са ВЕУ СК ІК 5 х Х Р ЕНН КУ СХ "З Хм тини ОХ Х З х ї С Се ТИКИ ИИННХ В у . ВОНО 5 . . о. х ді и у оон х: Бе й в ОХ ЗКОХ КУ с. БЕ: зх а і ВЕК ОВ що, 0. й в. й є Ко М А дея фе СИ М МК НН Б В ї Же АКА ВАСЯН з ВЕД РИ Снар-Р ВВР бутан В В Єкар-й БУ їх Стаючй, старе
Фіг. 5
ЗЕ ОА длкккнм взо 1 Ваго ви 2 с тічн ТА зна 0 и де нок КО те ЧІ у Ну ІК а с їі ех до щу ВА до ТЕ ня т т: Я: і у ох Ло. тщ: 4 В зн о х ді с а зн ні шк її пк на ця 2 М З т ня ях пл 1 я Е МК 5 мето Тані е МК 4 с ситет на т, дл м я т т в ТЕ 7 г - ЕХ с 4. х У ІЗ епв що В. с яці ну КЕ лм М ТІ У чі М а ав АВ й Я 7 4 карт ШЕ п "М ей ТЕ М ца КИ Я т ЗЕ ; я ати ск КН ч ові «5 їй т» пес ке в й їК - І з аа ой ги А і ЩЕ. : арт я х шНН М ще е ти а че ней Я т т. їе ЕМ
І. Б вк а ок 5 МВ й Ех «ке м з НЯ й
І. о бо ! п. - ОМ Я ах ож де "У о ГК и - о 0 щ ви я й а І. . «Е КУ а ща я се а їх і І. ВЗ о но ще : дося й ІК о А ЗЕ Ж КУ ТС ще «КЕ щи ще ; З о це о У Ї в и о І. ще В їх - с г ге а г | І. : : КА Зх о. о їе Хх ох СВІ с. ще а КІ 5 іх за Ме СЕ г в в я і. хо о. ще Кк що о о ко К о ще в. п. | с т: ів. т - щ п ще НЕ щу : В ЗК в ук 2 В хх Ж ж ТЕ у и ОМ З Бе з і. с ІК й й г о щ ї і
І. ік Н Ко с ща її : В ях що ДЕС Ко ях З цк ке СВ і о с І. ща ї В 5 х з че В КМ о щи «5 о п що І. о в 4 З ях що МК о п
І. й З І її (В З ще од шк В пк ко М ЕК ж ще ; жк Бо Є о о: Не КАТ с ща і. пе
І. - Бе РК в в с. ЗЕ | о Я о о в ЯН о. С |. їх що . сх с о по о і й
ЕЕ . п (КН ВАХ На м і. я ; о пово мк зх В я г ї о в І сх ТІ о ОХ КК ; З МК х
І. Б о | ху я дО в ї о ПВ ЩО що іх " НЕ: ВЕ пе І. ще В С -. ТА Й Ко гу х х ши
І. . о -Р «НІ що о й в о и. я х ов інв а що І. іх і ше дя БАН Б В ши ще о о Ей; м зів стжн ї - о я п ву ДЕН що І | ще КВ як по я ще Ме ЖЕ з щі КО т щи х . - ща ЩЕ " ї ще Од у і о се дуже їм ї її в о п. І я в " її т «Е : КОХ я о о : МК хе щ Ко КЕ о. г я п зу «з і - щ ХВ |! о» Й ЦИ ! и ха й В З ХЕ пе т ї М С БЕ «а Ї о п КАНОЕ г чт, : ВХ ох х о т - З З по Її "яи о МАЕ З ТЗ СЕ 4 шко о. Я КЕ о ВЕ ІЙ і МАВ ! М іх ОО 5. З ОБ КУ с ХХ щ ї. вний. о Мо КУ п з В що ВО а і її ТЕ В ж ТЗ ще З - Ми й ;Х СК З ще й ЩО - 5 ТЗ й о Б Я Зх ТЕН т ВКА ка. КЕ я З й ї КНТ я і. Те пе УМ і що я й 7 ; ех 3 дте її в : ЗХ ВХ Х що ї Фі яз В оо с іг - КЕ З ще В Ге о ЩА а ( глобальний ; о її п Ку Сей І... цк про ХЕ бальний - о до ії е Е. і що ов ї її І. З і че ї З В ве е М КЗ ТЗ ще ни 7 , хо Щ Що що а є ї . ще З - о що ще а ще со З й 3 п ж
Я
Б.
є Аналі ВЗКВ всіх вНяХів КК Підвищення експресії між раннім пасяжені раннім старінням клан РИ Стаю- В. ПДВ Казка вншхх Кон НУ рнач нан вена ДОЧКА с ВО ВН МАКС ПААКІ МОВ НОМ НАВ 5 Я кТЛОЕ ктВЕЮ ВЕН ВЕН МОСС АВ о КО ВВ ПЕК СУБ нн о кари ТК ОВ СК МЕН в в Ки В ЕК ОВС ХКИ Х ПЕ х Ен ЗОБУ «ТОП т ОБ АЇ МОНО СЕВ САНИ КО ее о В В ШИ СМ ВКСКРТОК МТНАСТОЮ а ОБО ЗОН «1 ОБ ВВА ЕН сосні ОК НЕК КК ВН КН ОКО ОБВЕ ВЕСЕНТОХ ЯТЕВАЄТ Сн АН МНЕ ТОЩО МИЕ ВЕСЕРТО ВВА ЕТ С ОК СЕК ОР о ОО ВТМ СВ СНО ЄВА, нене ення пн и одн МНС КТЕ в В в ИН ОВ Підвищення вхспресії між ранніх паражеміі пізнім пера тю у КЕ хоч з СТавінням кан ЕП СТВ ВДВ ння ско отоннй ВОВВОКХ нооеомттетон В КО рсоНа ОН. В Ва ОВ ше в в В в В В В ПЕК ОАВКВ В снентттт н вов ОК п ЕЕОЗ КОЕ ВКХ Б ВИНОМ МОБ ее ДОВ «Це «БЛЕМ КІВ ВС ТЯМ ОВ оо Кк НН СЕ Не НН М КЕ ЕК СК ОО сх ОХ ХАУ су СКК оо ос пня ЕОКОА НУЄ ПОЕМ ЕСеО ОМ КАК те ВК КО В ОХ ЗНО МКУ ВОСЕНИ Н НЕВАЬ я ТВ КЕ КМ ва БНО МЕ ТАВОЦОМ СТО Я 5 о но о в вин м В ве Весна канон А АЕН ох в ЕХ БНВО ОКОМ ВО ННЕс Ас ЗМІЯ КАНА т ЗМ МЕ Я ох: ВККС КИ ВК ВАМИ В ОА СВК НК Ве ревним ЯВНІ БЕАМЕ плямажнляюнн я Я а ма яв ом ШК НЕСКИ ТОК ВЕК ОВ М В Підвищення експресії мок занне старінням клітин пізнім станням клітин тап Р Став Пов шини її ше її шо МЕС тав ши НО хе 3 ІОБОКИАСТМЕ МОАНО ПЕСКРІОК ІМІЕКАЄТ 070 ЗОБА єБО0БОЄ «ДОБОВІ
Фіг. Є (продовження!
ї Ой, збагачення групи генів 1еМ-Ї тї ц х ор юки, ; т т е ЯК фею гу з в РП.Ствр-Р піде. тав Й пдв. Старер, стар підв. ПЕД Кене кінні нен роду ек жкакк сок екснктннн вро КО дет М ЯКО як ет ОЦК КОКО М т ЯМЕНОК и і є п. М ше сх х І ох с г хх МА ях, 5 з 4 Мк М з КА а ш Я ДК офоннннттнннннтнтс оккснтннки а, щЕ те ї я ЖК Тя ке М я МК - ак 5 А ха МТ дом кдд як кт чнтудкчите чо жить чн ПИ ШИМИ я ЕХ ореВАН ЕТ ш БОБ шо ї Е рН 10 ВО ВО НБН ЩІ і віорН ОО і МКК им В Кум ЕМ Кн тини ит с МАК ноти и КОШЕЯ ЗО ВВ ОМ В ту ХОБІ ооо вдо ОО її чия Я Ж: сажі 5 ї5ї ї уже х 5: М НИЗНенНе, Корея я Назмтне. корененія ЗОвозктив. Корекація :
т. . я « З ть : їх е 5 ння шш ї 4 нення пенсннннв - дл тили птн 5 В НВИННЕ. НОрОЯНІ 5... хорепнців Яни ВПВтНВ. Кореляція - анжипуввли в упоряд - Ранжирували вулеряд- Ренжирували в упорад- ковани най Даних кованим набрю даних ковання набю даних Е зх ай вк ек т «ж ютутіах ШОВ ІХ БОГА, збагачення групи генів ЗАБА я сок рол, ІЧ ху печені яти; М боки - РП Стає піде. МИ Став дя. СтЯрек Став лід. МЕС дпнчятнтдлтяннттня тля чн ная т тан ТД рання чання тля чн Алан Кн у у риття дня ння тя чи тт хпитя кій я ЕлК: Ех мор куки ММ с ом пк мими оте КМ Вер ШКО и ЗНЮБКОВО ит 0 хОВЕРОВ, Б щі т й я Но о і чн в й М і рок " х ВК ря ОО нн Ве І - я Кт ази ЦК НЕТ В зусее ан Ж вве кт кре ІІ ВИ МОБ ОКХ ЗМК ОБО: МЕНЕ 10 З ЕВ х . ЕЕ С ШЕ Є . |. БТ її | ОБО . ; я ЗК Вт КВК, ХМК сили ІЕМ В ов Е В ще: ОЕМКОН ковки й пий щ хе Кен ново оо ї ща ЩО А НЕЯМКНЄ, КОреНяя у ЗЗАТНН. НЕО ЦЕЙ о ЯКБЕНЕ, КОНЯ НЯ ї й т й Ми : нг ск, якос т «В Негатне КОВАЛиВИЯ З Кегоїнв кореня Мегатив, ноя: Ще Ж орі мя ше ніна Жов іо зимову ко ет их мм Ранжинували в уперед- Ранжирувани в пюрид» Ранжитували в'упорад- кований най даних хоБанимМ набів даних кований наз) даних х Б жх
Фіг. 5 (продовження),
з нта Се. в ь є Ж ехучуктьикя тую сі ів коза унимавниЗ В повин |. Енсповсів Сиспресія Мітки гетерохпоманяна в влементах ІЗ зр ; п плачу : із ії ЕК тих ЕК к КІМЕИстТВа НЕ 5 зо, ПОКЯНВЕО 55 ОККО
5. Кускрурулаумуклиннм, З уд мулу ни и ун м нн нн У: Кот т Зх ЕЕ и Ж є Ки КЕРІ І ІМК МИ КУ таті хара ЕТ укр Й дж о ! Ї Е ї Хв х У Ноже Ж Ма Н ; ен тт 0 а у ОХ ож Вод соло доме ВО У ФО ВО ОВ я ес В В тн А | сік с во З ціз ша У сі шо КР ВЮ З аа ! ща мон ; ФУ 1-3 ЖЕ Ос, ки мл У 23 жд ВЗ їла «ех - ОО к Еге щ ЗА от вк ВЧ зу : КЕ КЕ я ; Ба МУК і. як Кт МОЗу А а ОО ЕюО ОХ яз СВО ВК во у : м ОТ ЗНУ вх яп я З РАІ Я М В жо М щ шві Я У ШЕ ОК ОМ Ел 2 - пе ВО МЖК ОКО ЖКу КУ ГИ ИМ БОЛря я Ку ТЛ ї о НУ ше сне Мк Бра КО ВМО ТИХ з ЩІ Ж БиБУ ООЛюД ї - й МЕ ОХ йод. ТВ МІЖ ШОМУ МОДІ що Вид ЮИИ и ші ле арЕ А БК: ОВ І Е.: пе МІ ЛВ Ел У Б МО Я Баш ІК у Км п: ОТ рір вв АК Кв ви МЕ ЩЕ до Я ВИ ЯК БОБ КИ Ки РОЗА СЕ КО КО ЛЯ їтЗ Кіз га КЕ ВВ Буря пд мили той МОЯ ее то вн о ІА ТКА : Ж ЖЕК ей БОМ Ба ВЛА ОБОХ ВД як КБ КИ КД, ШІ и ПІК «НЕК ад ей ВКА ВИЯБШЖ РОБИ БОКИ КБ ОБ Я КД Шк. ОЙ РЕ Ки БВ ВО ВІКА МОБ МОВИ шроту ШОК ОБО ЖОМУ. ТОЛИ що З и: МК ши Мй ВОК им ІТИ РКК нки ПЗ іх МО КК Йди ім Я Д- : с тики, 7 НЕ я а шк ОУЕН Х Кк озукКех Сер я ра Ге ТЕ НЕ Ох жу Я МеНК білок В ОЯВТА І Б. ВЗ ВО 5 ВР ВРУ й є ї У жарт т дл вх. ій ско що чакри пор сел усуває КУ В я зе Активація (1 за допомогою РОХА! Сяе Я Її т. НИ ЧИ пух я лет т ти ток чн Газркхуя екіІдСьКкоКкТч ах М шля ї- БОЦТеЄТТВва ек зл КМИСЛОВа за НТНсМиСОВа в ЕОА ме пишних и од Дід рюосюожкжкажккккик ГКД Д кроехжувююннжкжнкнно Я де Ки ож ам пок х о сш є -що У шко ЯН с пд В КК кн КК кн Кк інн, ке Ек З . ее тя тя "а шРОхаї дич паста і
3. ТВ Ж іт с. ки я я. КД» ше Івченка де зе МУ хе УМ ит м. кт. х я Б З хі ї БІБ КЕ з ще е КК ти : - : ще й м У Є т т жи 2 : КЗ ї ооо ооо ооо ооо оо подо ооо осо Сум Що : ; шк КД ки дк кяхажиннну Е ЗОМ М Я МЕЗО зей Н жна КЕ М ПІ х МО у у Же дя | ЕК зх М ще ві М дл Той : шета: МОБ М КХ я : В Е схню кА ОО с ОК ЯМІ і 5 Оу і "МІ ММ зх А рос що В Е їй По а 4.5 | жа ну Е як : ОХ ЩЕ ОККО КК НН ЩЕ ГО шк я ЦЯ ві Б т Я ше З п с М Хлдквіла мив ї МТ х Ух сееЯМХхх ем ОМС Фк шк М - ВТК я сь ї Той : х ПОГ ТВВС ОО ' що Бдиа т 01000 жі ММ КМ ОК ОКХ ЖЖ ОК а дк г ЩА Ор КИ ше св ск В дн КІ ММ я ЕН У ве В А Ко с-ще ВОНО КУ ТО ВК ОО МОЖ Ох йьх ШИК ОТЕКХ : ЕОДЛРО Ж ве ОВ ВО КЗ ТИ чо ше КО ак ОБОМА БОЇ ха ОКО КК ОКБЕКИВ оо КА Фе беж Тиша ЦІВ х ОБО Б Е ВІВ особи о Ж шо Кома ОЕИ і ; пови СОЯ Кл. в аа в Б шен М ЕК З КУБА еВ КУ ук Кий КИ ЕМ ВІ жк ОО З З ОКА - п жк КОХ В КУ МОЯ КОМ ОВО СД ОЇ їтевюде Ж А а хх х ОК ее ВО КОХ ХА БУТИ ї А Ж. СЕНЕЕ . ще ЇХ о. . . сх УК А Я Бе М Кок иа НУ і ! ща ее :
хх. ХХ М ОК КК по. кА па Ах я В Ме Тебе Дисетьянкя Денні ення я 00 Ведовівх АННА МТ й СК на 5АНТО
СкенетоУнова шк ; трмоване порушення шкКОНТе и ушення експресії ефеки В ТК. "ОВ ще Же ! ектів 3 ПО конгрові | вк сне я ОН сша МК ї Б яка КХ гропі ККУ вів І . БАМИ х в ех ІІ 4 тлі іден ЖК КЕ хх ші. хв Ані. т. х то я де їв. ие НЕ я ох ї їх З ЖНАМІ і ТІ рі ! КО МИ8 : ії З зімухеу І 13 їх 1.43 і що ! ї Ї Бек хх їз що їх і і ей ' ШУ : М ВЕЖ БІ і З ! їі то ВН Моє жі щен ни і Ед ! її Б ЗвВВ, ВОХАННЕ ші ши ; о. що Ь ху Я хх 3 ' ї ї о. іш ще ' ї їх Що ЗЕ, ПЕНІ га ШЕ ее Ш й ? г і ек ох Й 1 Я 1 | і с МИТІ мах ся ек Н 5 УКХ. : і КИ ' кас ЗК ГНН АК ПОМ С КЕ : ' ОО. ш ПМ М рат нку Мер Н ше Її І о ї ТКА ВНЕ ЗИ Косеожю ; М удав і : се ! а ш ТТ пу В Ка ІА дн у : ПК ! а ; МОЙ ОО сок в і п Р й т з З Я І ПМ ЩЕ З Із А т Х 5 АТАКИ ех - Ра І Екегвові я За п сплив тя тк - і я Енстпровнія ЯЕНК З зай що оф ой ни пресів ВРНК е обро За дай 0 з ; у Я і оС зх "х ж й Й мере ЖК х МИХ, 5 яд реч Х ет зе с с ї Ще свВея ек чи це аве ВВИ ще - ки щу че . С мА киев лий ТИ йн- ОКА Експрая ек пре БЕ УА шо МКК З) І зах Я рперан ів ар - дк т . пак яма: БРОНІ док вв ; ЗАП АБАВНЕ НВК ЛНІВ в 5 ши В р 78 г зі з ВД 4 Боні рення шК КН ВК ооох ШО ши ШЕ жі бе Шк В ол я : З с... мох Е її її З мя І і ся і В зву А Мх, ях КОЛ : і вен МЕ Б КЕ кт що вк ОЗ ІЙ вм --к пе КО Ох «о хе 2-4 бля ет г Б х ' ІЧ
ОО. ШЕ щі ох ща р гор : і ОХ Я ОО ода 4 М М В ай Бу | 1 ШЕ ще. Ох М й РОС ОГу хе му ск х т М Я З г СЕ А НУ птн ОО о от ШІ ше ОО ТЯ Мк АЖ : ОС ше п з : щі Мо ЯКО ва ки Я РОБ ОБ І Би Ко ока ке Я і В БЕ Ей А КОКО ОКА КУ їх 3 ї Я ОКО Я шок Й Її Ді болянльк хе іі ОК БО ВО х ше іш ШЕ ше СЕУ рак ПА ляяккалх КОМ й М НИ кА мя стю я и у ; в і ВЕ "ЗК саке, ї ВЕУ ех ЧР на Я-НТО дви ям МЕ " ВЕН «кВ ян Є
Фіг. 9 - 5 (продовження)
ик т. КО Ва
: К. я Ми й : ї Я ТЕ ї ; в ша Не їж! як ЕЕ ва ЗК: В гла коор в о. вк сш їм Во й З ей ТК я Ко В КЗ ЕК сжх КЕ НЯ ме Ще ще В ви І щЩ І г ЗВ т М іа: ін. з ЩЕ НЕО нвитее КОВІ ТЕ п ше а о. Б ІН а с: Е ЕК г о - ох М її З КВ хе у З о: я а з ща Ки - з ня і В Ес : і с: че КТ г о р Я : : я Я ЩЕ / В о: ий її КЕ БД пе КЕ я 0 т пі ОО ж щі їдкі с І ША їі З г ну ЩЕ її 55 Ж и І о: т БИ НУ о я щ се ЕК м ШИ ЕЕ ща ТА т рі о Ко г. ї ОХ ще Я В ЩЕ о я т ще і 5 я ОО і я ОО Мо її ЖЕ х іх о ав ІК Ї
І . - УЗ пе о й. ще т с. Шо Томи . 5 і ВО С як ЗеЙ : З що й Не ц х о й Є нд ї ОЗ го її ЩО г . А її. Ле СЕ став в З і 1 КЕ є. І 5 нак КВ ОО. її оче ща МО З НО З КА Вк м У ва Мои ТЯ т Зк ІБ; і шик. Я - ща : гї зн й ТІ МКК КЕ і не КЕ 5 іже ТА що щї З вся г кА нок ні. А Я Рея КУ ї. У п її со С А М З же ЕЕ Е ї . ков Ж її о Й В З МО в ТЕНи МН С я А її е НУ ВО х ; Н ВО її ТЯ х ВО КІ. х - : щі о в СЯ ТІ іх сли Ме її - А і зон я : ї Я ї хе і як її ТЕО ЩЕ як М с Е ї ОН ОК жк їі ви ОТ 5 Га НОЙ щ ня Ко щеш деасва в й о в дн «ен ві в лвВу (про дав женн я)
В е ЖК: СЕКТИ ВНВ. им Р ще-жк, ЦО Ви ність кдд і аг М КВЕЧЕ ЩІ ТЕЖ: з Киця мя МКК АХІ ех ІВ: 1 пс: таж КО ТКА Пед Хючсмоа 5 ІАЕ. ж жмохх жо кх р 2 г клич яко г тує Б ЗЛАК В 3 КЕКВ Ста Тл п ЗВ Тім тн те в х МОЗ кі ІЕХНТОКУ. Те ДНУ КЕИ ть сита лічної з Ор ни ІЩЕ фе БЕ ЩЕ я КТВПІЧНИХ ПКС Є она аж АН ке ян х ї ВЕ яд вкспрве ДНК ЕТ хм КОМЕТ 3 з 3 ВПЕКАЙ ї8 о ВКА деко ДИ т М шо я Зі А У БВ я і У тек - Темоовине я ЕНЕЙ и ЩЕ то ОЙВ 7 ЗАБОМАТ В кіВявх ті ПЕС ще щі дування и І За В 1 ко ще . й ХХ ТАЄ У МОЮ С Відкекида В 7 й їх ї ТІ хх М : Бод Кт ТАЖА ММ х ід ухя ЗКУ ЖЖ х ШИ сх ї З хто З: х 5 ФЕЯ кої х их ІНК, та. хе ТИ Мх пд КДД їж щи ід АЖ, що с тс у СКАЗ ПЕ Б ТОЙ 0 і : Пе їх ер -3 ж х Ви ши ід: ї хг 2 ща Фо ТЕ Ж а А п ДИТ ЕХ Ух БЕК ЩА Іо М Я мо шо змащи. Ж ту, - ща СМ т (2 НА ОЙ 3 КМ я І т іл ПшШ ШИХ х. ше ї ЖЕО їх 3 и Ах, от, ПОМ К ЗО ЕК ОЕ ПУХ 1 Жвх жея дя ЯН ОБ ку и ся - І па ПК Ж ЖЕ МІ ЖІ і: ЖЕКи пк ні п М Хе : код а ОО шт ЕХ т І ВК комі ТЕ і в КЗ тк ЯЗ в ЗО ЕСа МЕНЕ Ви ЩО ХХ «і Я ТЕ і Ж Во З НЕ з ЕК КЕ І Ок КВ ВОК І а КАТ КО К і х ОО Бе щ х. як МВ ПУ ЕЕ ЗИ ПО М М. Я ї - МОЯ Як дм х МОМ ЩІ КІЗ ІК ПЕВ ККУ ж ТОК Оті: : ЗОШ Ма 5 т ле їх дж Й КООВК. ВІ і МОЖУ ХО -ОЮ КО КО т: оОЖа МОЗ ке сх МЕН КОКО ФАК ЕТО кі ТЕО ОХ ще НЕ КІЗ БОБ я Беши НАМИ ЕН 1 х ТВ Ох БЕ КИ О.І «В Кй С ек - ТВ, МОХ ЕК «ше 4 КБ: «А з ше ЗИНК ІДИ й кН ? ж ЩЕ ірішу 1 Ту як З 8. КЗ м Но НК Ві А ЩЕ Ко ТРТЕХ ід: ЗК З кі ТАК Є РВК ок. вичьОшМ ІЕЕ: п Ор в ін а м МАК пог МО. й Торти нт, зЕММ нок. МК сюй КК МІК тай. тиністе Зх вручення; і З рнежн МеНК пт Вірчн іде дике ЯКЕ я шко МНЕ вня Км ди ай ЯЯ ТОМ ї нак ЩО ІК Іде Н чек Імзимиці . ХО щ «ВКМ Тетржввння КЕ Шк: З акія? З Е 7 г Ее соку их ех а ех. з Е ї - БіНМ: ЯЩцдутх МнЕрУНЧан хх Я їм хх Ж Б штУ дк ВЖЕ й регпретрн док ЕТ жх я КУ неї - т дю - К. КТ тил па КЕ пн ЖК ВК ше ЗсиШини ІВ НК - З «ТЗ Беатек СВ НЕ я: непо дЕехТИННіСтЬ НИК КЗ КІ Бе Б ра шт їд ст Б Ж мхро пен ф Н щ- Ге Ма одне ве Мч з нок оауни хх М ІЩЕ Ор ох їх 1 Ж і хе Є 5 ж ТКУ мох с У За а пк, Мая Ох : ОБОХ за ід пвх шо 5 ефе Е а мини Я ЕК ох З ЕЛ ЕЕ МО 7 Мк п Ше і ді т Кен В Пт неї ЕЕ х І В НЕ Ії те ХК : КО - 0-х / 3 о жан с ТК ЩЕ НЯ що З Ме 17 М ЗІ хі ОХ жа ями ти мя ї БОДК 7 з ек з хі к ІМ 5 з я ЕК ном о ва іди їж кіт І шо РО Марі КЕ що - т. ТК в їх нн -Е Наши їі ще: це 1-Х я КЕ ПР КЗ. Ого шь ї х ї А У, щлУУ з ПО хТтВКИ Ж щ5 ках ХЕ ШК ТЕХ ЕОР х х х ЇЇ ї ! КЕ ЕЕ ее у УМ: У КУ м ОА У. З т ж я х ; Мк З М БУ Ки ІРО Бо пох ве я ше ши Кот ВЕЖ Б іш КУ СОКУ хх А бееттятсху МА : я З ді й Е їх Ви й юн ЕЕ ОБ да ве Шк Жов кл ВА То Кт, Мт Я ВЕ КК кОІІВИ" щи ил КЕ - п У ре к т Нк г хз Й т МОХ ї:-4х ще з ЦЕ ен К. Х а ака ТЯ - Е У з - ТЕ НА Оу КУ і ЩІ НМ те з КВН хо кед х т ВЛ ПЕ -Е КУ Я тк їх х 5 с Бе ОК Е ОХ . що ООМИНЕ щдк М КЕ пп Ї"З шк 5 пк її 1 БЕЗ її в : «КНКа КВ пон, фс І ях ї Ха МО ОО з зо МНК НК у 3 ЩОВЕ.. Жов кох ММК ВОЗ :
У. йо ху с, З : Оле ві на зх МИМО ке І . УЗН 2 Бош КО СКД ке з «я МОЗ Ох те ор ОЛИВ ЕЕ МО СКМ хх ЖАВ так Е ВОМ от з м ГУ хек ЖЕО ПО КАЯ КОЮ г же с у МОХ ШМК ПЕ А ММ ох Же Мі ві МЕ КОЖ. ОО
І . екз ПМ ШМК неї В кати: Деттенв вибНК Кт вн ; ХЕ ОК ще с БЕ я зайві ВД ї ск Ген п Ср я 5 - ВХ зекнняи сужаіпив ся дивна З Її ах ВО СОЯ ПИТИ аа У плн ху кі ОО МІ зо З - пав С ще ООН с КУ т - іх півнЕ ВН Вплив в КОХ о. А ТУ вн ше х ЗИ Х - С В с ге ЛЮ ет ВВ ки в З шах ІЖУ на ак ЗО с ОО гавя Пре : ЦІВ ЖАН; ЖК на дети Ваци Ех МО М 5. Зі: й х. ї ші КІ пити. ох УхХ ЗА ЗК х ОКА ОО в Ії хз Кі ' ЗА рве сек сок ета Ка лете к ВН пн я Я ех КАК ЖЕ: і ЗЕУКУ КМ Кен се По ОООООО ВХ ОО о ї "КЕ їз МОм ма з дитин ше щі ЗО 5 т 5 хх «Ж В. З шен МВ щі тн їЗ ОО В ОХ іх соя» 2 ру ї- й плин ех сир т. ВО 5, м 4 щи У: Ох Мона ЕТ - В І 0, щ І ЕК ек «Коен 5 МЕЖ В ВІК КОХ ЗО ПО о я - мк Вот пен - придане їх ї « ВО с 5 1 з х вовк : В 5 мн : - ОК 3 т я РОК шу 3 я т дення ! - ВОВОС ВО МОХ 5 Я ий де ДАМО ч ; ї сх Я пед 7 ! З ВО а. щої і ше З ши ш, | сон що : ЗО М ща КЗ с М пу Іо доші 3 3 дих ! В ВО с шик МЕ ВО МОЇ ТОК, я 5 ща трунутеиих 55 я : є ЗО с ех ЩІ вв. КІ ті ОЗ ТЯ кан ех ! хі ОО У кж ЗО . НУ Їх і ща ї 11 ТУ ВУЗ скит В ' се МОЯ с 1 Б БОГ І шко БАК 3 Еш і Шо о За Я тю кі В аа мч я МТ шН ОО АЛЕ а дош пі з ї СК дія З ІК. ї ОО ДОК ЖІ рр 4 М МЕТАН З ПИ ! х ще Ах лі ї Ма ІК А ЗВ м и ІгІ ' Е ; щи ДЕДАХУВАКААТХ З ї М М щі іш хх х пд тн ' ї же Ух МОЇ НИ ач І: ї ННИВ ТИ Я 1 ЯК М І Я ВУД
КЕ. таук. ці т У пов іч ддуя і СІ МІД: ОКМАНЕК МК АКА 15 х пот МІХ ТІ т прю Кема Едх КА хх вна Есе ІМ М, ЩО кЕКМК і Кент ММК т МЕЖ ОА вінентюв т чі ще МКК Са ту Кх у НИВИ САТ: Мах нене ОЕМ, звЕ5 ауні СВАЖІВННЕ. МЕМ : зем Мк ект ка ЗНМ. Кфек ТММ ж І ЕЕ БУК те п Кфективніств МЕРА. і КАНІВ Щі Як ОС сотка: злу шен ОП омеках вящн з пнаК Та клини пеквеогв некауту АЕМАВ БО А ОР мя я МУ МТВ Ж: Б сов КЕКВ ПЕ ОК Мк В Яолю ж М МУ їх сн КЕ КК окки зок ВИС жу о и : ї т. ві щ, ЩІ го ї ОО ОВ ста с-м х ро 5 Зони МІ З ЗБЕ т ОККО МОХ Зоо і В щей зе ж з УЖ ТА або Е ОВ ОО НН МО покнвквнех Ста кН нки » ЕН сю оту - ї ХО я: Ко ОО ОО ОО зо МКух Ж м Жах ї дах ї Е КО Б о У МО о ОО ення я ВЕ : ТТ пі ОК ке ПКВНВНВВЯ ЗО У У МОУ КК с Е 1 Н с ЗА: Кі т3 хе ОЇ ї Е ОК ЗО ВО ЕЕ ОО поз у КІ ОО: Ж ші ТЕХ хі Е ОО МОХ ОО ПИВ Ве ЗО По йон М -- З Я ОС Ум : я ОХ В З МОХ Во КоЯ ЯН ол За ПЕЖО тА ї Ед Й т ОХ ОО КК ОО ВО ЗО й М чл ще Б ШОЛОМ Е Я Ко Е ОКО ОХ ВОВК ПО ОО о.
ПЕ. гі и КН НН Е ІЛ КД ої ОО ОК УК її ще ЗО їз КН ШО й Ед З Кі ЕХ ОО КО У ОКХ соку ооо ВОМ ко КО Я РЕ ЗЕ й ЕП ї Не ЕХ ЕНН З о ОВ ен Во Ж т Кри з кі. З І.О ЕЕ" ен, о ПО оов З Зоя МОЯ З І Е МИ КЕ Е ЩшО а Е ОО ОК ОО НН дО Енн ЕС ке 5 ЕХ З: її ТОБ М. ОО ПЕ я Ко ВО Еко ТИМ по КЕКЖМТ У Е ОО ПО ОКО КЕ НК Ко ЕХО КОХ НКУ ОК ТЕО, Е сно ОО ПО ОБОХ О ОХ СОСКИ, кої ЕВ НЯ КЕ вве вс ЗОЗ НН С МОЯ МО м т НЕ ОО оон ВО В ЗО КЕ ДО я Я нн снення ОО хе ВО МО ВО МОМ ОХ М п о я о ВО ТСБЕСВОВ ОХ Я Ох М 55 о СООНКМх М НН ОБО у ВО МОЯ тих в ОХ КЕН ОО МОЯ МУ Кт Ії МОМ ПО ОО КН ЕХ Ми ее ОО МОЯ ОО
Фіг. 0 І ДЕКАН І НеЕКЕ з о : : т глищ ке 55 їпродовж Зо бівжекюо РУ ВЕВОВ довження) ДЕКАВ ЕВ я агсівкамх ВК іі ь ЧЕчеане БО ноейеьновнетьмоє ДНК лукан чне с хи НЕ Здоеіяк НК ІЗ ВП: Біт кУвиі Зчав кВ оодоо ж СО деох товкціонивання я
-. ВЕС ВО СОЯ ОАЕ ро ду Фріквокв т Тр кН ши ше ки БЕХ цим ВОНО до ВОМ МО ВОМ МО КЗЕЖНЖНИ ЗЕ КО ЩЕ . . ПВ В МОХ сх в Я ре ОО | р ПН ВИН Я лаві щу 1 і ще ОП стер І а В ОВ ВОК дере мк со а п. КЕ! і ОО ВОЮ С пить Я і -х В ПО ОО ї в шо Ше КО М Бо жо ОК ЕК ВУХ ВОМ в Б. | о ВОМ ВК г їй тА Як ще с Ф ЗМОВ овнввВ ВО ЗОБОВ ї З: шко 1 ж її КОКО КОКО КО її Ка ; я ВО ОО в Ще Же с я п ї п ПО я ВА й шо ЕВ У МО в ЩІ ЩО В МО Я її Х сш ши. є ВО ВОМ 1 в В ши. З ВО о Ж ів я п мМ ОО ОХ п ШЕ й ж МИМО В он з Б еще і і во. КА ВОК ши я - пре В ДМзормоюсее Др Се Яка Пуща А НОЖ ЯДВа ср , вки них- Я ХУКІХННАаМа Триди НЕ: БУК в я ї : риде ДНУ: МНК в унтоенеквамі старих вот Картуваяня в Не ; топрвоні старих літня Картуаання клонів ЯКО) і сиві . сяде їж й важ ни Кн ж на ЕД з БНіпвані Пе вм МУ Ст МВ праски Ж кер ск ще СН ПЕК х В 55 КЕ сне ї ! і сне 5 с КОХ а В ЕВ й й и г. | ; З бохо У я З ЗО Ше я зу і ша г 5 ох дя ВО о о ї5 Хх танні о, . ї З Ж КОКО КО МО ПОКИ ви, о ОВ МКК ОО ОО їК сеї кА нин в шк БАНК з вію УОООВВООЯ ВОК КВ ОВ зоЖа Керн ке вне т се ВІОВМО ЗОХ ОХ О М - фу ря жк -, ПО МО С ЗО М ПО к В Сов, п до о У о Моно ка ж - мя «ко умі МІ т М ВМО ОХ АКА КК щ- щ ще Ден ї І ВХ ПОККЕ ОВК В ОО КелУВЦЦ ЦІ ад ЕОМ ПИ ооо. по ШЕ КЕпХ Кент За В ОЗ Кі ОО В ВО КН Ддевк: веовтекеа М се я ще зав МО МО лДеЕНЕ воснатоВя Б б вежі в і ж 5 55 я МОХ щи Мак и-И ек ОХОТИ ваЗІКи ї кВ ЗО МОХ ВОМ цех 5 о и ПО В я У ї ! У Б хр ВОВК ОО ВО ВХ Е ня о я 5 : о го З ВОМ ВО о ТИ де во я т і М ВО ПСО ОО ЕЕ ОК Ші хпщОМм М І 55 ще! п п ЗОООООООВНН ЗВОВОООВОВВВ М ЗІ дев як пе х о зни Пі з Ве АБ ПЕ дкпліншЮх
Фіг. 11 КЕ псзікс міх Вильз ве нНК і на Е і я ІН Ккспоесія вої аментіві і вАоровс копресія всіх впежментів 1 миші Сіменс и АЖ И Каре Щ М самих Вік гос Меселектнана Мисетех вій я та о Ех ! вна Меселентумева дитемислов: і і стаю Я з 4 фун сіна Як іх же ТЗ міжце 7 чі СХ НМ а) прово ена ще 1 я . о в ни ех чу ; - зоні ях Б. ; р що ШЕ УМО с ЩА хх її | с У З коде а роя Ех ; Е ж Ом ш ек ЖИ Та ВЕ. З Ба ! і . як ж лек як жк як фрі Ж В т і Ж еВ сх Мет еко - мін чу Б "7 ! ! г - г 15. бо во г і ак жо МУ у З з: Я - «кі п шк ї ЧЕ ЖК Мох шиї шов ке З ЩІ ІЗ 5 дек З уз ЗМР см Б мік ХУ мя ке І «5 хе і те З о о ШО я кг КА Я а рн Я 8 Ми. шк З КДЖ УА ти А є МАТКА. я ШЕ Ох 7 че ГІ Її 5 шпон « орати паж поем ре щи сі. ТУ ш Ем ЯМ З З я й ом діди тижвцріинИ Х це Пт дм Код хг 5 п ПЕН г 1 їх пря кими з. е КИ ря 3 За мак шо КА є ель шо ЩА ШК БО БУКВИ я Ко, й ї КО ВЕН хщЯ В ТИМ Ї ОО М Я Кг У з УК Кн і КЕ КІЖОКЯ 1 КІТ ВИ «і Я І МЕ У МЕ ТУ гаки я ПЕ ще В | що кож й СН ЕЕ ї Гу пал ОО КЕ ІНК тю 3 хх КК Фі БЕК Уг шк а МК Б ТК МОВ рр МЕ ШУ ме ШК еще | КЕ - Ки ОО А Ту т І і 1 зт «с УК т ХОМ КО | МДЖ МОНО 4 ЖІ жЖ Те З туя ї о ї 5 З Ще хіх р М п Ж ВІЧІ ле С кі Ач чу УМ, яв ге й-є Ме Тк у Дн ЗО віль Ж І Зоя с У ту ік У У -х З па те ДеНЕ по мії Ж 7 фік НИМ х зжісе жо, й к Кк МК ймиункои БМ в милікн Бмепнком ту
Фіг. 11 (продовженн ї «ення піуриооох ь Дует і в'яді учи прим їв нпітинак Зх зе Уа ХУ Ф ЗЕ п З» ТЕНЕКИВ як уже рт тт ща ; : ТЕКНЕКЯ піна С збе т Кк Я пе со жувати ди ІНН КОВО іх Ота Же свя ЩЕ ек да, 1 иа БЖ КІ т ле щі х ті МЕМ МЕ дез ща анйХ Пе Б ї МУК я ВЗ же ЕК НУ се Кк ха ВН ЕН КУ Тих ко ряе ТЕЖ ж БК и Ї ТК
ЖЕ . пе сити з ВУ І Е акме і : і п ОС Галю кої зЕте ї ТАК те К . лк. п З ях с Ж ЖИ ких Ж пре р Кк ФО Во Я ММЗ зок ; ЇЇ що З стра Ко - ' п їОООдко я з ніх д З пл сна сх Ши Р І с. ОВ я ж Ам ча з З де ж й де ж а ху п, ЕТ ЖЕ Кт, ех шУ З Ж ї : 5 жо гурт Ще ОБ рум тує Ф З я З вк ЯКО БО КО ТК - Ба я ДЯ сх кл З шу 7 Її ке ТМ Е з жк. З МОХ ЩО тех М з що М їв : МОХ ЗА ЖЕ : ее Кей З яви М У щі т М ос і ШК ж зна ОЕМ БУ З щи я ще ко ВАСКО КОЖ Е г МО х Б ОСИ Бо 1 й ща КІ що Коші ТИКИ пох М хо ЖЕЖ Щщ З во МОХ ен МІ т ОК ТОК ЖК з МОЖ мих КЕ з БУ В ЗВО Кл. шли ЖЕ шщм МжМшИЯЕ ОО МІД ме - з ША БЕК ОО Мч ВД а і НН МЕ МОм С з вро АКЕ ї ВО КИ М Ізя ВОФДХУ ї ТТ МАЕ х МДЕ ІЕЕ МЕМ СОН ОО Ме 2100 БО гом МЕ в - ТІК КВ ОКОМ й ЛЕ лм Кік. у Ж М Мої 200 ОО « З ПВ Ку НВ КИ ях ОО ІЕШИК ВІКИ З Мт МАК Я дм ВІВ - ОК ки КА В ї л ВОК МЛ МИ 4 ой КОМИ З КЕ ЕД ОО РЕ КСКА ЩО МК Ва КО КОКО ПЛР Ох МОЯ ДЕ Кв Пе 1 Ви ОК Ще ЖИМ й ПК МЕ хо 4 ЩЕ Ії п ТКА : я АДККККАХАМКА МКК си КВ ОО КО А З ММ ЕВ . ММ МЕНА КО В Уже ягч у Кузня МК МИТИ А МК БОНКУ СТЕК АН ХА НОЯ ше шия МКМ А по Пе Та КОМ ща Ь М ре, ЯК МО БИК ВК Ко Де МК НЕ ПА я х 1 ф ї дк птах ще ПАНА КА М ОБЛ ОКА ОТ ЩІ ще х я КО В КВ Ж Ех ПКУ їх й І Ще РАКА АКА х х а : ОВК с мами гц сотня «ххх юю що Й 4ї МЖК НИ Хихеній пл ко Яноза хви спа ЗИМ На Кі ве «НІВ КТ ДМНН де. НК еца і: ММ на Кот я Ве -ке МКУ рони; 3 сум ке що зи кал Кале ке нЕ свАЗ МТМО нам ТЕТ ОМ дих Соя ХА З ВЧ На ШВА гавинмих їх ЖОВ У п ТКУ ВІН, ВХ 1 ЗИ п МАМ БІВІММИХ Екран ! Зла ЗркуАнУ тах Я Я ЖЕК ІА В ! ка щу : МТК ЗЕ ЗІ Ек еи М ОЗ БЕБНОННО ; 1 ТЕ ож ЖЕК ! їж щи ї ет вух Ж ЯКІ ко ТЗ ННО ще ; З МЕЖА 4 храми З ве З Ай. ЛЕТ - х о: ех ких М же М 3 Ох ши Я ооо ум у КО (ВОК ле Н іш в ях янв же РОК я В чі їй ж і : В ЖЕ сте ! З т У У ще екю оорУмлях Тек - С ВЕ ї ф ! Ал учи о вч її с хх 3 я ЕЕ а с Ті их : 7 Ко З ув ие єю ян ММ щи ж У ЩІ А Кк мя. З її я З ту як 4 Ус -х 3 їх их жд ДИВ З Кт хи ЕК КОЖ ау і ї й ШЕ? ЖІ 1 де ЕЕ У ВЗ ! я ТО ти КО Мо хі ї м. хе 3 ж КХ хх СОН з Я Б Ж КТ тд т зх : 5 3 - Я р га з Я тин т КВ ХЕ З У ХА Я Б 3 . М ла ША. ще ! З БК я КОХ МД КОЖ п. в до Я я ТУ 3 ООП Ір М ТО ЯК Бен ТВ ОБ ЗК 1 ТА ха їі Не ї зи МОМЕ КМ ПИВ Та М кн МА ї Я На и В КА я Ж 3 РОН щ- Те ММ М що М кі ЕХ 4 Би Мо ї ОМ Іо ШО ! ПК КИжІН як КОКО ШИ Ге Мох КІ це 3
1. мі С КОМ де ху які рі їх І ПИШИ КОКО ШОВ го Я ЕМ МО кеш Жди ВХ пар М шо М 3 ЕМВ с шк ПО ЕК ІМ ТЕ Межі і М м 1 ДЕЛЬ ПТ МК ді ЮК ВЕК МО За М щ МЕ Но І о щх. КН КК МКК ї ТОМИ М Ж п. Х. у ТАтІКІОСМИНИ ти ї покою КЕ с вх МІД З ДИКЕ КМ Кк Я ОСХМЛЕМ Я ї ЖЕК ІЖКХ ВА Ед» ВЕ Яна «З ЕВ ОХ М 4 ее М В Ко І ко ля ТЕМ ДЕ? СКД З КК КК КВУ плов с Мах гу В : УВУ кВ МАЩО Мах щи ГАК Ж т МІ
КОЖ. «ВК ШМмя: ШЕ КІ Мн ПЕРО АКВУ.
Фіг. 12 Ж с пеодеж каре КОВІ Її ВМ и СОТ І піл (УА ша хе ОЛКО на БАС МІВ КИ. ТЕ т. вт унутоя І І, хи КТ ИщЕ Дія метою (КЗ на Веде ЕМ Те с : | " ОТО НЕ НЕДОК Ще гли ЗКУ шал гГед хм ї КАМ М ори не Вел зо ОВТ даю з по : Ж ку оЖкокХіМ: КУ УКВ ж АМКУ - ща АПІГНКН ЯК ; КІЖКНИ ВМ КЗ МЕМ Пе ЕН ккд З Ха их ех пен 7 ЕЕ КК Б ЗІ и сн - : ух ЗЄС ПОчМНК КОТ ЕК 8 ее ух ними
В. мо ї мкм 0 0ОЕАОТОднюм ко мКМІ З ПК Не вианни ЩА ША 4 ко г че ТЕКИ ОИОмКМ Ка НК З БЕ я нн но Й пит що МВ. КВ во З пк КВК КОТ НКЮ МЖК не мех МКМ ен «ОАЕ нн р ЕН щі з що 4 ВО ди ках п з : МВ, АВ, зво ря пише Ж КА Щк: жЖт пЮТ КИТА п - ВОДВІхи хошею ХЕ х : Ж и ЩО БО 5 Я со З й ЖОВ РОК Я ОБЖ щк зе ТЕ «зві ЕМ ЗО М дих : Мт ще: «ДУ ях 3 ОО М й зм ОО Тео аа Ах вк Ж и Е : ЦЗ ше МО КЗ ж ІБ ОР УВК М ЗУ 1 а УКХ чі щи ЩЕ :7 РУКА пд У ШИ ака г щі КОКО ІК ЕХ ШИК ЗЕ п О їй ОК т. І М ок КК ну ЖІ ЩК: ше ЗУ г шо Е жа ОМ ка Мт ЗВО МИХ В ОКО МИТ. «МЛ КА 41 пе и щи ЗУ пу са І У У ев в МЕЖ ЕХ І ЕЯ РА дО ЗБ зпк ББНщеЯ ОВ т зів ие ІщЩЩЕИ ше ше ІА БК ОБ А ОКХ ІА МІ ПД ШИЯ, МІФАМИ БІК КЕ ОЖХ А ШИШКА ВО КОТ ОА под й МЛЕОКОЕШЕЬХ ФОМІН МК ПЕК, МІЖ г КЕНЕ Й ЕХ ВН ПКТОКХ ах Код й МИХ ПИ ПИЛА ЩИЩ. МА ку ЕІ ШИН ДЯ БЕКОН ОВК З ї ПОКИ ЕК М М я пе Ма Бо і Б ш СКК і КАХ тут КОТИ ХХ МР КМ КЕ ЛЕО шо В ОБОМА НД МО КИ ї дев ЕК ДАМА КК У ОКХ МИШІ БО КА МДЖ МАО З се Ї й їх пе поча ТА ЖК ЕМ, МОУ и КО. ПОЖЕЖ ЗВО КА ЗЕД ЖК ЩІ 7 хх це КАБ Ка ДДМА МІ У МИША МИТ, ПМЖ ООП К і «БЕХ ї УЖ ЖЕК поет СМТ ШК ПА ї ЖК а і пед и ж ККД 7 7 ях ЗКОе М ие я Же ОБЩКК бАм Ех Ом а МИ Мети ЕК ни А Ст ни ЗУ ОО ню КІНТНКИ, Каитичи їх меру евро я ЕМВЕНОК й й ще Ко ККЗ ник кл В Ве ЗЕ КК ре ЗМК Ижм ї ще - . ЗЕ КПК : як ху ї ГА : ШО се --х «5 й ї а сов ви І ЖК яко шо ; З З Ех ос ща УП о щу слу - Ох це ді НЯ З щі : «Зх нт чт ОХ а КЕ х Лк : Ї зки т У До щк З дме Тоощор ЩО НК аа «В віх шк РН БА, ЖЖ Зави МОЗ ТЕ І БЖ сет нак ОКО щк пит по БЮ Ки м М : в ШО пшоно МУ ТА жі Ж МО Ти Св ку : ПЕНЯ ота С ЕВ А вий М БІО З А І ЕЕ о мишу й ; МКОМИЕ КМ ОМА и і па пед ї ШО БВ ВЛ У КЕ ХХ ТУ ВОК Ох ЗЕ ОХ З БЕ КО АВ ; ШЕ А ОКА МО Іва Кх С и ЖЕ дів Ка Ву вона Кри МОДА Ки х ня с ХУ ЕК и МІХ хо похо заду ДЕД АЕЕ о Я ВХ ме я У т. пен нн ЕС я-Е о МІ НУО МЕ Фіг с . 1 2 Ї т . про овЖженНнЯ!
й ТК КЕ еВ Утатах в в ТК покіг с ха для ки Ма Вже ВИЗ 1 вхунетур КВ Бін ЗРО в тканині нюднн ідерною Клін Деми І де т сосен ск НУ С ТЕННЖ Я вита еАХ сетЕуКікУ сота Р ік Стері; ЗБУВНУУ ОБеТВОЗІ сБОВКУХ БИК вла юва вевеяжО ЗДО Я ВВ КОКО екв яв ОО В З ОО ЗВ В ІОН ПО І В ПО ВОК Ко КО ОО В М о ВХ М ОК ОК ОО в В ОВ В М МО М ОС ОО ОО ОО ВО СО ПО В МОВ М А МО КОХ ПО ОО ОО ПН о М В В ОКО ВМО М І В М Б В В ОКХ КО ,,ІюМО ММ НК І ПП М ІК М І М М М М М о ВО ПО ВО М МОМ КЕ НК оф ЗОН І ВО В ОО ОВУ М М ВО ОО М ЗОМ ВО М В ПО І ОМ І ПП М М М В В М М І КП ІП М У ОО о я ОО І ХО ня ВООВВВН В ХОМ ВО ВОК ОО М и КОМ ОН ХХ ОО В В МОМ ОО ОО ВО М ОО М ОО І ПО І В І У ВО ПК КО З ОО КО ЗО ОО В ОВ ВИ ВК М І ПОМ Я, ВВІВ БУЗОК БО. ОО В І МОВ В В МВ МО МОУ а М М І ПІІ ОО МЕ У В оо но МО І В. ОО я ОО М ОО КО Є ОО ОО и я ОО о ОО В МО МО ВО по сс я (її) г УК С ММ 0 МО КОВО ких ВИКО КУКИ МКК КИХ КО ПО ОК ОО ОО о ОМ є й г ІЛИК г меня кори ВАЗА Ер В куплет МОЗ Тр в укани нЕДНУВ ЗУ ЗЕ тут х х й Що вид п шт НЯ зам ЗЕ НПердяжнеани чинна стМ Ен ОК ШО о шШ НН В рн о В пк У М ПЛИНИ КК В ЕЕ НК З КК днк пе Єкид В КН тб ств. ВЕК ТУШ рок в Я В КВ дв ОККО Я о НИ 5 ШИ З вдо ПИВА ЖЕНЕ СВК ЕЗ НЕ ЕКНКЕи ки Я ще ИЙ ШОН В ДЕШЕВЕ ДЕ е ВЕК хм ПППДИЩКМ ПИ и др 3 ЖИЛИ МІК Мо М ВАН ркм в Я жа КІ ВК х Дар КОКО Ж ЕКО БУ БЕ МОП КО КОЖНЕ ж с ДЖ ях ш Пи КК А ШИШКИ КК дн у Ж ди они фаз о но яма Ма ММ З вх ВВЕ ши МНН Я 0 ЗБК 0 КК КК У. ПОБИВ я Б ОВЕЛЯ ДУ І пОПИ не ЕК ОО ЛЕ щОпя ла Ех От тя 7 А кис МІ З КНУ сок освітних и сем зо кн: ККУ Ве Н перги БК ЕМНЕ) Св а КМУ НУ Сергей БР ТУОВМ
Фіг. 15 - т отжхою показ ВеЗті ас чввтуві Пещвивевність ставих 6 ек ко ЗІ мм клеми: БМВ ЕНСТх СОКИ м З зи вик и - . ї пачка. лужну ОРЗ ТВО ТАТ у культи Поширеність СЕБЕ чо МЕТКИ сиТНЄ яНОДеМ, яВЕ бейуть участь у ВЕВМОМЬНІ ВНКООЛАСТИ дктнаованих | ТРУ ТІ клітин ре о ве в. оно неок смт ран нт ТЕН... пет тест я ПН й ВЕ ЩІ Гу бу ЖЕ ТК НК ЯЗ з вн ЗК «Ж суб ок ще «В МЕЖ Е ШТ: ЯК дк ер неекх а їх ву век рей шко си ее А ВМ НК МКК Ме ВД ЕХ ЖЕК Хе БИ ВАХ КЕХЕК; бля В «тестетекєеяет соте етя ответ твітя тео» ях ЕК ДК НЕ в. че де 5 ше жд джу й ОК у Іще ЩІ ВЕ й Ж Еш КЗ Ма ; ЗИ КЕКВ КИПИКО п лем У. ! З я Що ши я їх ж я х ї в Бе 333 ГО СЕ Ми иКЯ " тя хх 5 і - пе о А 7 ПОВЕ Шера М Бе Є Хх 5 5 ЗА " х КК Ж адм тов 22 кум . М с щу - й ВАК ЯКУ і : В у ду кі 23 ПТ ДИ ДЦ У М с, т КТ ОД юю КЕ порадите й Гопинлеви я Що Ок МК з- г Берміянеяї ЗД сСевевне В ло МАУ ВУЖЖИ ПИ НИК У МИ К «ко. го шекуе Ж ВК ОК они Покнранисть вОТАЇ ; Ба а пя па п п ло хВКЗ ТТ вуцтем о Ж ша по А «Ж . Єбідкцрлна СИ Я с я х тре Синай ВРУ УДО ВОТАТІ ДР Й Менех ши він рю па ше ЧЕТ ЖНЕЧЕ як Уа хх ян ви ОІВ век КЕ Шнеє ДМ щ я Гікуазина хи ЗТ інв ова уканияа, сЗВцИ цкуниня хи ЗК. 1ЖМНОма знаних, КВ А їЕ за. На бий ї зЗймхе Мі «і МЕ «М «В с КК «ен - Ми «ВК З ооо лодаукуит у дурня З Пррохььиььнку (У ДЕ фААААААААМААНААьМ ХАЙ фан Дрю 0 уд пн Крик МОЯ - ща о сану ї ї МН З ЗБ ЕЯЇВК ен ДК ке | ВЕК Ко х х. 3 8. 35 їго Іо її АЖ « ярої 1 г хни 01 налу г МІ кою : ЩЕ с Е ю М 1 5 хі з що сек ЕЙ т. 45 Я я чо х Е жо КЕ кій Кебоюи З вч ОМ ! я ЗИ т КО БІТ ї Ку у Її : ТО Ше 3 і їж З ся Е Н : : с : ще : КЕ Е ї ї 1 Її ! с Ех Кам НИ . : их єї І 5 ї й ї : 3 | з яКЯ а Одрі ше роїв ше х Ма хв І Ксду : У: і і Е і з Ок і з ОБ «МІ ,ИЕ СО: ,. Ж КЕ а 2 : ї ї : 3 - ШІ С АК ж: 14 В т Б пе о ш ат З бах 1 і З дО ТВ в п 14 ЗЕ еко АЗЕВОЗЕ Ор : Я Я. ШЕ З ! з
8. ї «ЕІ їх Ж ях МЕ ї Ше ХЕ Е запи їх Н я З : 3 ву з Тк я БЕ У ОЖИО ж п -Е З ї ЦЕ Ї хі : Ко 5-4 ОС з в Б ел ЕІ В пи ЖК т З КЕ с : еЩО фо Щі з
Ор. я ек шЖ Трек» є і я: ОД А 5 3.3 «Б ща я Ех ТОК шт. ск : ї Ше ое пе хе «ща чл З Ж і од дн Е «1 еВ ї палі АК фа ї АМАХ ОВ к - З з п: 1... ЖЖ 2 вм у Ех : щ. Б Ух ще 1.5 ек І повік Ї ХЕ Я ще ч зм БЖ ха жі" Ж кл. 1 ка ї КА ДЬ БТ в Ї Пбемі НО КВ 1. 1, З 5 а х - б ОЖщпЕКи Ед ША -- ШИ, Ж 740 г зи ех УМ ЕЕ З З хо МЕ кт 1 м я у ЕЛ ше 15 фак МІК Есе: ех ТЕ : ОЖЖ, Ж ї ік ех з - МУ КК КЕ х. їж ча Ко: : Ек : ща Ат - ІЧ 1 с Фрбсехекеххинхучєхумюй ТУ сексу руху їх сеертсууй Пеедкєк А хек ШК еехууєтсдєкм 0 руху 5 ок С 5 ей УС я: Я м : я ЕВ Фр фогігчеї7. Те билося ць байці іще пед тм мин Жим їн бміитямі Же падій Ех (ЗК шко КК ЗВЕНЦЕ Зветвневциї НВСіміся хНя місні ІК імя Вінс иЦІ рда: . МОДТЕ бусаетоной тівхякох укхх Пкуванна щиЩщНИ АТХ кни ІКЖНИВМО СЕМКМ; :х ех КУЩ їж флней ж зда шічі кій за ДІВ а І ШН КМ пе В 5 ЖИ ах Й В уко Кави Ко ллжнАму КУ фАллаАжкААЖААЛТАМ рн Орла В КЕ з УЖ сю у : Є : с 3 ! Не Е «- БЕЗ та Я І Т : т і м. ВХ Ті ос ЩЕ Еф ня « ах ро : ЕІ ою З ШЕ У ІЗ гу цк ті г; і : ІЧ 3 ! Е кож Са Ук х Є Ко, З 1 кож З - х ї | -і : ТЕ КО ; кох зі Н З БЕ Її г : ЩЕ ; хх. ж ї ся : з | з дк я на РЕ В : сбеня очи Ро ї ; 14 : 7 | ! роя дію чк «Е Рос й ще 5-3 «і і ра У г Я : віх : і В кох кі - Ух Ж "їі І СУ ТЯ ек. З я ие СХ м я : : 5 ї от - з: фе КА т ж ех ТРЕВЕЛ ! 1 ЕЕ з Еш 13 щ 01 1е з ТТ щ- ка ЗК ШЕ : ї : ДА хі Я : «МИ ті ХМ, вх Ж, ЛЕ ХХ ШІ 3. ї Д мі Е ХХ т я 1 ща покер т А ек ІК ХЕ «ШМК 1 Н як Ки Ії ФІ, : Е : Ша 1 Зої КІ є о ВІ ВЕ до ; МЕ " хі ї ей жі миши, кої ми 4 5 "ЕК сем і. є ПЕ ту А Е - Я -т ЖЕ ЕТ Її ШЕ х «КЗ і КАМ ее мн М ФО Кт : Кк ї тШхт ж о кі ВІ ОІВ АН о ХХ ЖІ Ж и М ЖК - БЕ у кх ї УКХ і ТЕ ДМ Ех і Ми ЕН ХХ а б ТЕ ох, «КЕ З кх ТІЇ ДОМІ бас шо «Пп к Ма КОТ окт Кк НИ с Же ОК еу ра Би те зма! Те за І іш і обо ТИ зав МО ЯР Еш Бе І ок її ї Я хи а ня ХА їх УК пемия Е : - А х МЖ ХУ ВХ п ДЕ МЕ Кк «кої й ІЧ 3 ! Дрбоссуєєсоуєтюв Пен ПАЯКу ЇХ коукввех Пресс вот Ціехдесдеєщю? Дбееедсст КВ яв 5 5 КВ ЕВ БВ М 5 КУ їміивь Ек ся ци ха іву це Віімедцй Вієїтніоді ц Кі Змнчці Крекери Ех меди МИ МНК, мМ ЧИ ИН КОКО МхХ ВІЗКИ ОЧІ КК ІВ ХХ ЕВСКЦІ
Фіг. 14 Кк Пуючаениз мишей ЗТ п'яна гам ІНкюуяення мишеня уптечнма, СІ 1 кій ее щ-х Гах З май За дю с М си ММ ди «Ма ши КК 0 п сх гг он В ни нн и М МЕ в змити НТР ОО нак их «АХ ХОМ г му ЗИМ ЕІ ОК хи пеня 2004 ах МА 3 х БЕЖ КЕ ві їх «ж КО В: НОЙ ат - з 1 за : їх З В ЩА і ядер ет ЮК КОРЖ хх з і о Ех са ТЕ м зехжекуннию КО УМХ ї «ПЕ ха х І ї 3 53 ж І В мух хх ха | ГУ і : 3 У є я т шк : 3 : - сит ї Ко ї з 3 що пебокии «п ї 3 Н что:13 ра ї з 4 що т : Ж ; ТЕМ - 130 р «1 я «ж х ї - : Ух соя ГНЕ З ї 1. Ж ї їй ка 13 В 1 Кз : Ж ОО: ЖЕ ке ї 4 3 г : КУ 1 Е ї ї 3 З ОД НЯ їх т кіз іх ВІ І Ії кції : Х ха ких «Е «хи ї х ї з З не ГО Іл З їж «лїх їх ЗА ших ж 1 МОЩІ ї Е З її 3 що т ВО пе тої х ХК п Кн "ої з МОЇ ї у Кк «ше з 3 А 4 «КМ | в енм МІ у «ЛВ : ї «МО У ОКО «кт її Кл «3 їх РТ Я БОБ 8 З ї З кі «ох й КІ КІ фор тд 3 я КО Ж ещі В На хе "Еш РІЗНЕ І КО і З з З КЕ моз ахх ЕЕ КЕ Б З МК І жор ор'зруним. і ЩЕ ї щЩ. КК од «ЕХ й З МИ ж ХХ ІОВА «З 5 4 кі М 471 «ЩЕ еВ р «М з З як зе ЗК о, у и КК я пд т З кі ЖЕ й «ВІ нії К.М шк я ТЕ т з Кер ЕІ хх І МО и -ЖМІ МЕ ЖЕ щі. си Я хан мА кА МИ І клю У ФММ т ОК м ий так її Ко із Ти за хі Це ЕОР я РиМ 130 ву ІЗ печах ж ХЕ М З жех Є ше 1 ММ Ме М ОА зд МІХ Мбоюоототлоюттисй Пооесловоютюютнний Дккистсмнннн ПМ юдюдоттеий ЗРбопооююютотетсой Пос ФКоні Вс топооюьть Пбоссорютдаютютти Фосоодоюююдовеюднх Зростає Мюбтетюдодетеводю! Зрюсслюютьютююх ПМАЮ содою ФЕМа россии ДО одосеорегетоея ти Пе Зі хе і й я Жерішміии й Бо» бурачатакї і вк Ку ко «азс м бодесмії ек інши ік яма ЕІ щкімісиці: Ерец Віче ЕЕ сек ММ іс Кчпшах епрчакова МАМІ ЗЕ ня ств мекнюї. баки тини жк мили У кКуУННЯ КЗ ня ЩОнх мещех жирова хканняв какцу з за ; с я пе ххх ; - дк ВІЙ - м: -Ж а М «ЛЕ - БЕХ - Бай ду ррееееекекеєююююєссой З Куфссюсюююєююссесссу убооєєтресюєєюююююс З ресеесюсююююєсссєь СХ Куріссссєсссосюссюс Дрдректєюєкюєююєкюєсюєсу Дн посюфкжюєюєюєюкюю нон ЯКЕ Я шк ОК ння ння Х пит ЮК оЩф опи тт " ЗО рожі бр ВО ОДТТТх б у опиух кН Моне їз) Я Тв ВІЗ Мох її Ж із МЕ 1 3 Ж НЄ, Е хо НК ХМ ВЖК сх ТЕЛ ТОД ох ВЖЕ и сих В Я зи ЗХ. Е ех ї х 2 їх : х ' Е 1 ОЗ от хз : «т Е ї Ну ї : Н В! 1 і ї ЕК Ток . 5 ДМ ї ї кох з 1 х таз Ті їх Кр: Ех ї : Кох з 1 ху тост и ї ї : ї ї ж ї 3 ї 1-3 Ж зи. ЩІ ї з і Кт 2 : КО і ЯЗ хх р. ШИК ОО Тік : : Зк - : : їх Кі з 3 т Я ОО ЯК КЕ ї А ШУ ТЕДДІ ї : 3 ї 15 1 ї г «Ж «Бу БІ 1 ще : їі ря «у і З : ДІ ПІ її т Кобем м Ж. Я: Е ї КЗ З М «Ії мм КО зтк5 МУ їй хх Кк оїне | Я дія У я ТЕ хат мі (4, ї З КЕ є зд А КО - р | От кї хх и які Ма жи БІ 14 Б ОрУ КОЗА Ки кої : ї їх оче мі з 31-х Го я У КО ПЕ 1 и КОТ МУ АК а вх їх. ил І фе щм я з ВО й Три Мах «М МІ ї ща а тром ака АКА І г ї МО з За Маю ОЗ ех ук МА ШИХ ОМ том Ве А чит хо .МІ ' шО з іжмж Ух х ом ЩЕ ОХ «КІВ ЖЖ и зхх ОВ «Тл оуш ем з шах у п. ЗИ р Е ОКО іі М ую ТОБ : ОКХ Іо У ріс її Кеш іп МІ п ті льЬКІ МОЖ це І жк ОБО м п ЕЕМММ ес.ї ТЗІ ки я ч еМц егув МАМ Оу МАМІ я род ї В их КУМ ЕК хЮ КУТУ Іза зи ІКИ КІ УМ ех 3 м Ех В КИ вик Ух АНІ іх МЕ КЕ «5 В ех ОТАК гі | ях ями же НЕ КЕ б ни ка МЕ Ма ве З МЕ КК СН Ка Но С БА ВЖК С НЕ Ка МЕ
Фіг. 14 (продовження!
з 1 в їх Е дет се, . о . нет Копоканізація сигналів стання АБО 0 Калокалізаці пет: ЦО, ГЕБКНИК КЕ ек ВЛ ДЕННЯ З о Кеапокалізація сисеав МІ знвліж нина бвижще в нішинй Ленісяю ЗТ НК ня ел ковокалця ЕК ТОМ ОК КВ: ОВО се КВ спон еВ СВО ЕН енишіні вини о 5555555 5.5 Первнрннисте стад ЯНА НТ З - В ПО ОО С ОдОр ковани ОК І У ОО 5 ОО У ДАНЕ актнаавюх МА кЛев п М ПО дви п с бно ЯНВ Обов ОО М М М М М В ОО Є ОО ї ТЕТ ОО ОКО о КОКО ж ПО ОВ В ОВ Я х М МК 1КЕДЕ ЗК КОХ М ОО КО пох МКК в сах м лин: ВОЮ ОВ ВХ ПООККК М М М Я А ПЕК ща о ОО ВО Пе и тер шия ли с ІНВ - кс 0000 НОСИ АНЕТЯ М М ОВО В М ОО ОВ ма « спе У п о М Ох Веівеансть С ввслеавних (ВЕ во Б ОО ЯМ енрнавнво ТАТИ, нувени ПО В ОО СО ооо Ко оо ОХ ДК секс ух ік уреккаик ТО я п ЕП ат кі МО М и я іш БИ Т-ЖЯ пов ее Пор р ЗВ В ОБНМ жим вм ПМ ВНУ ПО Ки ПО Кая пок НИ ПО я М ОХ МЕ ОБЖ Я МЕ нн, Во ОО ОПО М т ТО жил « ІА ОО МК ооо ооо вові Фо ооо оо з о ОО ОО ОО М ОО Е п ЕЕ В 5 с Ен с , и ПО ВК у ОО Ко ВЕУ КК НАМ ООН ОБ 5 с МО М ОО Ка Б. ОК ї ОО я п. а ОО (ріг. 15 Кк злу ї
«Я. Одночасне борбування Фут Її арипоцитів; маквегів У нн Буре жирове п осахозукачек ки г МУМя КОНЕМ Не клиялю зва Дені кейси дек кове вх - Кене де їх се: по уд КЕ ШО КО се їх . з В аа Зк В З нем : ; сК як ВВЕ: ск, 16 їх З ХМ ОКХ . Ж БОНН о м А КІВ ТЕ ев ОХ 5 . І шк пр па ТОтух ЕНН А ВИК . . ща мо. Ж Моя, ВО сті шо а В З . вд Б «ВКА І по щ. ще їх о "ше за еВ Ки СХ щш скриня
ЕХ . . ЯМ дови іже «щі ЧІ 8 0 БО т
7 . о . : Жов 1 ов я АОС ет ОВ ідея я . о. ЗМ е ЕН Арк М х . МОВ ЕН а В Пор в р й З ОХ : ЖУК. Її М ЖЕ : БО 5 , В Х зо ; яки і І Е хх тк я ШУ гХ ОО щх що - ВН Не Б ав я й Бех ке ПОМ КК ОО М жк і МЕ ві ЗУ БА п о. У КСВ З КВ "а 4 М М РУ їв о. о. АКІБ «ВОЮ. Ох , ле Ще ЗХ Зх : Пенал осткя 5 в дід А : з х ХХ : Кк ЕККУЧХ Ж КОЖЕ УА ТЕ Е Кі тк са З що Є ОО ВІН МеВі Яхве М во ж с во му Вік снісяці Він місяВі? За МО . . : га ето ва ям епі дк : т с ЩЕ Єкспренія МЕНК СТ а старнених теюнинах мекей о. . - Бара воза ОХ : тканина Я жа Генна Х УЖЕ : Земне КВК. стр КМ дон си шо г | М я С де щкивка до тнвь ШО ВЕН т о. : Я: 3 3 ях ї вельнх ЕК АІЯЖку НН о. . ОХ Ж Щ ШЕ Я, : Кс о. . о. : о й А Я я. КЕ ОО ЕН и Урі 7 - МО . СЯ Ж: с ЯЗ БИ я т» . : БО ВТ М ОВ ОО ЗХ й Б а КАН. За МІК А Ж ї Же ди З БЕЛА жо як ї : КЗ ї ді Її ві Її кі ї Мети Тих Пед ттух Й ниття ТИ в УАДУ ААУ КкуКАх Вік іже яції Ві сві щік інезяції
Фіг. 15 (продовження!)
а пли туї ОО НВ ї 5 кН ї і не їй ен ОККО с з - ЗАРОК о поко кв и САРОН ія ПЕКИ В МНН ї З КВН кокон : ; А ОК озон я ОО я х 1 4 кеВ о. ЗО ОСКОЯ ПЕ Ин з па с а КК і с 0000000 ОО МОВ ОО о Кен її МКК ОН ХК нн ВО ЕВ о о г с шо с ПЕ ВК КИ ХК п с с ПЕ Сх с сш щу тс Б. т х Ко я: що ВОНО п КА Я КК Ен с НЯ с ше ПО СК У ОО ПЕК її п о І ООН КПКУ ОН КК ШЕ К ща ОН У Он с поле В оо. ПИ я ОКОККВЯ ПК я ПЕКИ ЕЕ КО 0. г с КЕ ЕЕ во се пев Ме КАН ПЕКИ ПЕВ о с в с о р с о слот ; її ЕХ о пт ЕНН с Блот ПО с я | с ще ї - як о ; я , з | ЕНН КЕНЕ ШН ЕНН в й г ЗЕ З : ОА ї і Ж 7 . . НЕ ЗАМ ; с ї М З я ПК В а Зк З: с. ЕЕ КУ до З: -е с У І сок НН: ж о ДФ С її. . і о - ММЗ ЗК шк ДЕ СОЯ КЕН ов 0 ще . ї З с о в с Ко ЗУ: ОХ се ОБ СВнери вк о
ОБ . і ки а шо ШЕ се КН МК ВК НН оно: ОО Ж х В НН: ох ОО о. чн: п ОО ноя ІЗ Ї г: ПЕ ПЕК ОК ЕК М ЗК й ДЕН ПООК с САН . . Я п» в ї с с с о . . З с КО Я о Я о МЕИККНИНИНИКИИ КОН ПОНДИМ ПЕ ОЕШЕЕ НС с о СХ я сг сЄє Пл пу гухрах КО ді З МА о 3 ще кох ОК САР Н о. хехохев: ЗАРОН вх. що з а КИ кн є З у хх БЕ ЕНН КИМ ПИШНЕ СОН З З ОК З т с : - й - с ЗХ КОХ ОО ЗО о - я ОХ є СХ КУ о о З ОХ о дн с КК З хе . Ов Ох о я Зоо ше КОКО ее троем Ви ж Кк ОХ У КЕДИ с Я М З ЖК СО Кк КЕНЕ КО ОК ОКОМ ЕЕ
. о. ще с с Ох їх с - - с ж с На с с ЖК о с ОБ ще с с С о є с : с є М п с я о с
Фіг. 16А до бота "РОМ У ! як РК Пт ; с ще ОБ ОО ОО ОВО ОО днини Ж Ко ше Кв що по її с с -я-ї- с с с па. 000000 її. пав КК зрос н и КН с с с -с ССС понос с с по с , кате пон вв з ПЕК САРІ р» САРОН се секеооекиикх н - 2 Шен ще пл шо. ВХ о ща З У ІТ ПЕ: зх С що п - о я 5.
шо. о як М. с й ЕЕ с о.
о . : я ТОК ех 5 53 їй п. у п ЗХ о. З ШО ОСШОКИ сс ої с и о. о с Б ЖУК ШОК УК КОМ : пот 6 руд КОХА ЗАРОЇ я БАРОН пи з ! З г ВОК ВОК ВОВВ еВ пе М пе с шо док ж яе- Я . с шо Її. до о нн и. о ДСС її. с ша. с КЕКВ о. ОО. ОО о
Фіг. 168
Блог за САН зі КИ ТЯ ненні кн ненкоснкнннх я КЕКА КК КК М п. с З о ЕН . є о : . ОО с 0.
о. є ї 5 с я з ПЕКИ У. ОК ОК З ; З о . т о. нт г 3 - зе ж 3 1234 СОН ов В ВВ ОО Б БО пе В ПК МОХ М п що ПЕК КК КЕ ШЕ КО ОО а М В В БО З Соя МКК КК У Її блот 7 гру ді от з я а зл . . - а я с Б: ОО я. пня -но оо ОО М В її. . ЕЕ. МО ОКО с
ЕО. о. З ши я КК КК КК МНН МВА
Фіг. 16
ОА 12 щ 8041 ЗЕ о ко і Уч, с ме с пана ак й с ЕХ М Са с ОК ХМ чу КЕ о ще СО В се С г Ех о с.
1. ее ПА КО 5 с . о т о. і ом щі г . | пе ха й р с. І і р о г З о В о. 5 с . 1 МЕ З ще КЗ ЗК к ЕЕ о. І ЗК 5 . с й З А КО . . с їв . 6. я о. о. ха о. о | о. | . о о о пе ши |і - ОО Ох КН З . в ша т. -- ; с п. Є щу 5 М 5 СОКУ М с ЕЕОНООЕВ ШК Я й сх хо З о ОО З М х МАК ЕХ я Кн о й З як и | В ' СХ ОО КЕ о Ж: ОХ о що с Сх шо Ів ех п о с. . с ; о к п . но
З о. З ОКО с Бк я с і ОВ ЗО МОХ е о З ж 13 ар У ЗО с ще с о. Як; Ох а 7 КК г о С с що КК Ух Ек е . о СК ЕК ОК ОК МОХ Я
' о. с А сх о с й : є о м З ОАЕ ОХ х - г Її М ХХ ще Зх ООН ик р. ях хх хх З . . пЕЕОВОНОІ 2 ї й и шщ - й | І о ВО: о. ї г Й г й о сКа г і с т ММ Я о АР 33 й с Ід М с уз . | . 4 Її ТИКИ сх ТИКИ Ух НИ о Ве КК : плат Ов о, - о Олю 13 сш. о. г - : МД «з дО сш ХК о. с . : зле пн» с с " г Х я пз С | З с м їх -- о с я я ЕК ЩЕ с . п ж й й і ї " В Ко ПЕЛИИИЕ х ПИТ ПЕ см НЕ ЕККЕХ с ИН ЕК о -- тв 5 п с ТО панни ше де Мона : БЕ с г 0 око ЇЇ. Б " нннитнення ше о. - г с г 5 хе С с са ДОКовасиЬ ; с те о. ЕН СО о г кОО з о і с с г і ДЕН ХХ Ки ПАК МИ ПЕ ш ПК Зх и ПН Ки Я З г о с 7 : с п т, г с о пс о ї с 3 1 - МО п З Є ЗЯ : с З о Я ЕЕ ме о г. Фф ВЕУ КЕ іг. 160 п блогів ще СаО і й і й "й Ф(Д-"- с... У де КЕ. шини КВ ВИ, шик, ше оно хх ВМ В оо с. ОО З: Бе 0000000: КК В п о. : с 3. о. З: шу а бот А ВВ а стар Я НЕ я Стар; я. Стару!
В. блют? « ТВЕХЕ У РП, 2 Став (ВЗ. Стар ії)
є. Блез ЗА ХА К ТОРТ 2. дупинка, З. Стар (Р; остео (ПІ Я блот а ВВ Я ЯХ ее блот 5 -ТНЕХЕ РИ ХХ Є Бблють- РОХАК 1 РА Я ЗХ що бат 7 - БВ, Старе Я БАК ВУ З. ЗАВ ах Я СЕ-ВВ МК блот 8 ТКЕХЕ У Стар (Й Я 5АТКЕХМ (ОК З еАТНЕХІ (ах; 5 НЕ-ТНЕХІ Ко Блот я ЕОХАК «ВЕПХАТ (ві: 7. еВЕОХАТІВК З. Став ПК й. НЕ-ЕОХАЇ М Бл ОА МАТИ ЯК я а З НЕ я ДІЕМАВ Я. РП К блог ПВЕК ВПУ БАС З. ЗК 6 НСБ 5. АЕМАВ Ї блает й ЗБ Стар ПЕ 9. ДЕКАН Я піт ОТ т. блет 13 А ВЕ 5. Стар 01 6. ДІЕМАВ; ТІ ЗВ: 8. МТ п. Блот 15 я ЛЬ СОХМІАКТ ВТ Я Стар (03 Стар) Фо Блог В по СКК МІАК, ВЕ У Стар ЕК З. Став фіг. 16Е ї КН св п З я Число на с ік че - Й КОХ ОК Ж фут мими дореннннннннннянняненнянняняях 7 вопрос І снів ах шо нні Н фен ї я ю Щ- 0 фе бе авуванюа т осящ пЕя ї1 вве 4 ЄП ї т ук Я її х же ТУ Зк ще : МК БЛОКУ й рве - ТА пе себя, : кі шу й хм - що ідо г : ІК А ; ЖІ ї з ее ЕМ ДНК БЕ: ї ! ОА ей ща 7 Тв їохаї вла т Аї - кро ії 1 ла х і о На Ко Ов Вот Брови ОК Роя щ КО Тл КД: МЕ Вк НМ ; М Ії ї ов ОЗ КУ А ОХ хі т ОБО кої впр ОО 2-Х БО» пи РО СЩр о рю Ус и г ОА КОХ ВК РОК зд БУ КМ те в БОГА ОК рр РОЗМОВ Я БК Я БИ сте ОКО Уся Божий оо БІК І АОС ява ВИХ ВОК о й вро Вл ее ОКО раї кі Б БА не ОКХ й ї жо шН и ї ДЯ Клло туА а ї ; ЦЕ лу ее шу Яд ї ЕН пло КК ; ес вто ши очі ях КиЖсиі ї ков и КАК ; Кл во ЩКОХ ВО ща фмм ЕУХ ; впро аеро Би Ко Її ОБОХ й - КОХ тва і крок и й інбро кВ боки МКК оон фей КВ» С «ні вві ління е ВЖК и слу У ЕКЗ ТВ Яхлескучу ОЮА -ї с КОНТ та КОМІВ Старе КОМІР Спа : і фожеум ! іжду мука і ким В інтере і типу т х, о; Ка КИ Дод вне ну ке нддмхннннчикикхикчідхнкчикюу руським трджкчкнхикчикихкудюкчкннння ЕХ ве я рон : Е ж «їх 5 х ЯМ ще ше ; -Е 1 ек у тку та ; кре КОБІ дл Ел А 4 о о їж КЕ ші і Же КО ил ТЕ п-пі Я ов ит ме . ВИХ шІЩ3 - ; Ж У : о ї м х ш:ІЛА ї ОБР роги тат ОО М щ Коротюк С.У ен ОК подив БТІ Бер пОБРІЇИ ІМ ; - МЕТ БОЩТ ТКА ВК ЩОБ ву Бе ро 2 Коник ТМ Ж ште КК М ОКО г ТК БЕ й Б, ОК шо БУ я ЛАТ у ша ВТК ЖК ра СК А пидюоюУ ОВ фону мо ро р М КОБЮ БІК ема о А я аю в ДАО пед ІК о ую т и МОЙ ШІ роту чи ру ПЕ ршОи Ор ке ВГ я ОБЛ я я Кай ро рижики в 12 ІЕлх Еге хе М ВаКЯ м ВКОЕ М Експрес ОЖНБИ ОАЕ У ЗАБІГ ЕК ОХ к ща Б МК Здрнемнния СТАТ ї Сх СЕБЕ кеВ п Зх не я во дО і я ЗКІАДОЯМЕО сту КЕ ак ї щ савані, : а хл У А пЕМІУпЕ З Кі 5 здо Би ду У лі 4 ї Ж у ог х оо ІЗ шк Ба хлй я лу п- БОЖОЇ Конті й и ВИК и й. Ми ай щік ий рови У и МУ Бору Кот ії -х БО шию ОК МУК вк Бе и хо БО ї ши 5 ОШ ОК шШМ і а Бін хи Ер тай Оу і и ЕТ вого і Е-Ох т І купі Ват ї х КО КОКю Б. 1 До пою персон (В оо офис сто вснтокбюняй Мт теттх тісту сти КаМІВ Старі КОВІР Стр а Інтерферния г тну ШУ " боях ЖЕ Їх ТК: З десекуєт 2007 рен нн, хтМеЯ ПАУЗ ВИЯ г м УНН ИНЕ Е дк 1 АЛЕТЕКЕТОВТЯВВ шк ; і Ор я ОМ єтдння вт, Ж СІЛИ вої к-т Кі х. х СІ І. ще ї шо (1 п і и о НК. НК ОК ни М жю п і НУ мк : Ух ох І Ла ї ЖЕ МАСА Ох Її ТІ У й їх Моз т г те ї ії ЕЙ ла т. м. Я т шЕкх Е В Тих 104 мк КО шк 2 МІД То Комо ШК Бош БУР ШИМЗ БЕХ ВЕУ Кор ВИМИ ра ром ги у КО ЬКХ та УКХ М УМ Її Ти БУМ БОЖУ шк ЛІ БОКИ ОО Ка Мо МА КИЛИМ 14 ГУК рода й ЕКЗ ТА жа БИ Мих : Ж УА М ШК їі й ММ пуб шиї тлі ! и Єна Дб 1 ли нн и В Ат для МКК ТТ озон си Хомик ой и КОВІ Ме ЗОН КОНТ ек ЗНее є Паміведин Ставудин Ге, КН а і. с У ! дао т 8 ще т у -В ЩЕ й Ї КИ х . Ж е рем ш ке | КЕ - ще й- : Ох Донна Кк се ДНУ Я а т я х ї х в о З з Кк ї ж їде Мо Я З х РИ - КИ: о К Мод ТО), мим Годіставудину, нкм - Ектрицитасін Априцитанн ШИ сі 55 же олякі ВОМУ фея т ЕК к КЕ ч 3 Ж т дос 5 в я пе т З щеч
5. ї до ме Бе ху то З х з 5 ВІ ей Ж дяк КОД нн вт в КЕ ск а Я й з У З її Кі й ї я ее п . й й 7 х шо К. ; ШИ . : У - Бя од емтрицитайня, мем Мав априцетавні, нем КТ ГЕ в ік г як кі екжтт уки -о БЕННВОТОУ ДИЗОПООКСМА се Цевсовудин С фкдд усе Згух Ф Щ ща ЗЕ -к Во х І че ТД е-я Фо що Я зах МОЇ Пот ЩО хх 7 ЖЖ оосхкї : ще КМ К Є КА Є дня є ще ЩІ Мне Я ДЕД Ь оююнункннккноржнкнрнккнккьнякх Я зов я у й х Є ї оо т їх к хх х е ї- х се зи раки 5 т орех ар свх ЧК Год темефровру дизапроксмні, мкм ав (ценсавудим), мМ Сл Еповуцитабін Теновювір Є Ву ех в р КТ. а НК в ее ве Ор о х пе т Б Ж х 5 4 шодо о, о, Дт їй М І т т ї т т 1 ш- ж х х 4 У з Щ їх щи х й х З і КУ пе У ко! 5 цк ше . А ; жо Я, ї ї й і обівльнуцитаєн), мкм і ор ітенобюов), мем
Фіг. 1ВА
- Пазшулим | Ставудин о К з- 8 те КО сдлевоя Ж у Е ну | ї 7 Шо її ог ї з Я і о В Кофнунвню « Зв х 5 Ж я Е БО З с (У и сх їси Товіставудині ям ПОБО СО - Емтрицитен - Априцитабін с НК СВД у У ї шо сх Ж В м, КН ен уд їй ї С. Т Же КВ зей Ж ь - Б на шк М ж в ок Х Ж д тк. я АК їх ЯКО Петюх тю ка во в. о. й Десерт Кен ЗВ ЩІ фену 3 хи уту «М 7 3 іду Ки А х м ізуемтрицизнашн) кій Ксц вермут, мк - Тенофювіву дизопрокоми Ценсавудин ОН ва
З. дво вя ще ЩЕ хх ОВК як КО с жа ЩО ж ша ЯН ау ЯК вед пе У і а т З і ще щ ХВ ' и ге го де Вод з дет 5 З ФфКенехтіхтняняня сор содою "7 з. вишила М офладколівляму дах Шви 5 «Крут ртттуттн "ОВ одутетеоогереесетеедрететеотертеттесснт «ов танофоавну дизопроксялі, МЕМ Гоц'ввносавудині МКМ г еко те СО СНО - Елюевуцітавін - Тенофювн - Ка о НОВ» - Е Я жна Ще ї я ях хе С: Е х Ше та к ї Ех ОО -- : В Шк С к Ей Х Х й а у ОВК ет фо Я шо Я о Я я Код'єльнуцитав нем мою стендові, щем 7 фену вимову я коки курив ГОСТ Я
Фіг. 18 й Ламівудин Ценсавудин шо. І Ж снх с ЩО - у. ше о, --ї я х АМО лу Є ЩЕ | це є ЖЕ З. ЖЖ пок хе її у й ; Бе ч БО реве пе у Яку ДО фррненннуентторихтюрн у вну ЇВ. фену роснусттссн ї ж гз ка 7 сова с 5 АЖ Ж. Мово, мем Год іценсвнудині, якм СКИТ ГОМ ко Бпьвуднтавін ЕН щ- Ж ож ке НО М пк ї- Є; Бе фр няння Води. з ОО ЩУР сеееееетеоуєесеоеетреееееееесерееееессвсертенітесссссу ТИ Ге а Я я У ї Кк Я Є з. Сеча тя З в, і ва гепввуцитаєні мкм ї Ламівнялин Ценсавудин кання Кв КН НО. де г З ев. ку ЩО Жох ва яко З й: фрегат сно жі в рес лют вне - Жооуміроеівксвюссв дя Я айв й а У ге У ї к 5 о Ку ху 5 ще я Моб (3 мем Год шенсевудині, мем
Фіг. 19
UAA202104068A 2019-01-25 2020-01-24 Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта UA128041C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962797109P 2019-01-25 2019-01-25
US201962907251P 2019-09-27 2019-09-27
PCT/US2020/015043 WO2020154656A1 (en) 2019-01-25 2020-01-24 Compositions and methods for treating, preventing or reversing age-associated inflammation and disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA128041C2 true UA128041C2 (uk) 2024-03-20

Family

ID=71735994

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202104068A UA128041C2 (uk) 2019-01-25 2020-01-24 Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта

Country Status (17)

Country Link
US (3) US11793814B2 (uk)
EP (1) EP3914604B1 (uk)
JP (2) JP7503558B2 (uk)
KR (1) KR20210137434A (uk)
CN (1) CN113631563B (uk)
AU (1) AU2020211600B2 (uk)
BR (1) BR112021014576A2 (uk)
CA (1) CA3125991A1 (uk)
CL (1) CL2021001951A1 (uk)
DO (1) DOP2021000157A (uk)
IL (1) IL285072A (uk)
MX (1) MX2021008751A (uk)
PH (1) PH12021551734A1 (uk)
SG (1) SG11202107145SA (uk)
UA (1) UA128041C2 (uk)
WO (1) WO2020154656A1 (uk)
ZA (1) ZA202104678B (uk)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3914604B1 (en) 2019-01-25 2026-03-04 Brown University Compositions comprising censavudine or elvucitabine for treating age-associated inflammation and disorders
US20220160710A1 (en) * 2019-03-08 2022-05-26 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating or preventing alzheimer's disease
US12350264B2 (en) 2019-11-22 2025-07-08 Brown University Compositions and methods for treating, preventing or reversing age-associated inflammation and disorder
WO2021102423A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Brown University Compositions and methods for treating, preventing or reversing age-associated inflammation and disorders
US20230310309A1 (en) * 2020-08-25 2023-10-05 Merck Sharp & Dohme Llc Injectable depot compositions for the delivery of antiviral agents
KR20230107543A (ko) * 2020-09-23 2023-07-17 트랜스포손 테라퓨틱스, 인코포레이티드 질병을 치료하기 위한 line-1 억제제
TW202228724A (zh) * 2020-09-23 2022-08-01 美商昂克萊亞製藥公司 以反轉錄酶抑制劑治療癌症之方法
CN116669745A (zh) * 2020-09-23 2023-08-29 转位治疗股份有限公司 治疗疾病的line-1抑制剂
KR20230157430A (ko) * 2021-03-15 2023-11-16 트랜스포손 테라퓨틱스, 인코포레이티드 Cns 및 전신 질병을 치료하기 위한 line-1 억제제
CN113134003A (zh) * 2021-05-11 2021-07-20 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 拉米夫定在制备治疗阿尔茨海默症药物中的应用
KR20240017910A (ko) * 2021-06-04 2024-02-08 트랜스포손 테라퓨틱스, 인코포레이티드 인지 향상제로서 line-1 억제제
US20240277712A1 (en) * 2021-06-14 2024-08-22 Kyushu University, National University Corporation Treatment and prevention of developmental disorders and mental diseases
US20250134895A1 (en) * 2021-08-16 2025-05-01 University Health Network Methods and compositions for treating alpha-synuclein-mediated neurodegeneration
US20250017903A1 (en) * 2021-10-22 2025-01-16 Suzhou Auzone Biological Technology Co., Ltd. Use of edaravone in treatment of autism spectrum disorder
GB202115281D0 (en) * 2021-10-23 2021-12-08 Queens Univ Of Belfast Cardiovascular disease treament or prevention
WO2023105283A1 (en) * 2021-12-08 2023-06-15 Fundacio Privada Institut De Recerca De La Sida - Caixa Nucleoside reverse transcriptase inhibitors for use in down syndrome and alzheimer`s disease therapy
US20250170158A1 (en) * 2022-02-22 2025-05-29 Rome Therapeutics, Inc. Methods of treating medical conditions using censavudine or a related compound
IL315480A (en) 2022-03-15 2024-11-01 Rome Therapeutics Inc Compounds and methods for treating disease
WO2023178128A1 (en) * 2022-03-15 2023-09-21 Rome Therapeutics, Inc. Methods of treating medical conditions using islatravir or a related compound
CN114958852A (zh) * 2022-06-09 2022-08-30 赛业（苏州）生物科技有限公司 一种Ifnar1基因敲除小鼠动物模型的构建方法及其应用

Family Cites Families (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4172896A (en) 1978-06-05 1979-10-30 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. Methane-sulfonamide derivatives, the preparation thereof and composition comprising the same
GB9217295D0 (en) 1992-08-14 1992-09-30 Wellcome Found Controlled released tablets
GB9315856D0 (en) 1993-07-30 1993-09-15 Wellcome Found Stabilized pharmaceutical
US5541231A (en) 1993-07-30 1996-07-30 Glaxo Wellcome Inc. Stabilized Pharmaceutical
US5358970A (en) 1993-08-12 1994-10-25 Burroughs Wellcome Co. Pharmaceutical composition containing bupropion hydrochloride and a stabilizer
AU2483599A (en) 1998-01-29 1999-08-16 Sepracor, Inc. Pharmaceutical uses of optically pure (-)-bupropion
ATE250622T1 (de) 1999-05-12 2003-10-15 Yamasa Corp 4'-c-ethynyl-pyrimidine nukleoside
WO2002062197A2 (en) 2000-12-19 2002-08-15 Hospital For Special Surgery Markers for disease susceptibility and targets for therapy
US20050113324A1 (en) 2003-01-15 2005-05-26 Bondarev Igor E. Modulation of line-1 reverse transcriptase
EP1613263A4 (en) 2003-01-31 2007-11-28 Pathologica Llc MONITORING AND TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS
CN102174038A (zh) 2003-02-19 2011-09-07 耶鲁大学 用于治疗病毒感染的抗病毒核苷
US7344860B2 (en) 2003-04-03 2008-03-18 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide encoding a novel human P2X7 splice variant, HBMYP2X7v
WO2005067908A2 (en) 2004-01-05 2005-07-28 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Memantine for the treatment of mild and mild-to-moderate alzheimer’s disease
CA2502109C (en) 2004-03-24 2010-02-23 Yamasa Corporation 4'-c-substituted-2-haloadenosine derivative
HRP20080554B1 (hr) 2006-03-29 2014-11-21 Gilead Sciences, Inc. Postupak priprave inhibitora proteaze hiv
UA98775C2 (uk) * 2006-09-29 2012-06-25 Айденікс Фармасутікалз, Інк. Енантіомерно чисті фосфоіндоли як інгібітори віл
AU2007314282A1 (en) * 2006-10-31 2008-05-08 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Elvucitabine pharmaceutical compositions
WO2009005693A1 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Gilead Sciences, Inc. Novel hiv reverse transcriptase inhibitors
ES2533863T3 (es) 2007-06-29 2015-04-15 Korea Research Institute Of Chemical Technology Inhibidores novedosos de la transcriptasa inversa de VIH
EP2228373B1 (en) 2007-12-27 2017-02-08 Oncolys BioPharma, Inc. METHOD FOR PRODUCING 4'-ETHYNYL d4T
US8445669B2 (en) 2008-04-10 2013-05-21 Hamari Chemicals, Ltd. Production process of ethynylthymidine compounds from 5-methyluridine as a starting material
US8513205B2 (en) 2008-04-11 2013-08-20 Yale University Potent chimeric NRTI-NNRTI bifunctional inhibitors of HIV-1 reverse transcriptase
DE102008029460A1 (de) 2008-06-20 2009-12-31 Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo Zavod Ekologicheskoy Tekhniki I Ekopitaniya 'diod' Taxifolinderivate zur Prophylaxe und Behandlung von neurologischen und psychiatrischen Störungen des zentralen Nervensystems
EP2537839B1 (en) 2010-02-15 2016-12-14 Nissan Chemical Industries, Ltd. B-dihydrofuran deriving compound, method for producing b-dihydrofuran deriving compound or b-tetrahydrofuran deriving compound, b -glycoside compound, method for producing b-glycoside compound, and method for producing 4'-ethynyl d4t and analogue compounds thereof
WO2012068630A1 (en) * 2010-11-26 2012-05-31 The University Of Melbourne Methods and compositions comprising antagonists of type 1 interferon-mediated signalling for reducing a neuroinflammatory response in the central nervous system following a stroke
NO2665471T3 (uk) 2011-01-19 2018-05-26
CN103687860B (zh) * 2011-07-22 2016-06-08 埃科特莱茵药品有限公司 作为p2x7受体拮抗剂的杂环酰胺衍生物
WO2013057469A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Cipla Limited Pharmaceutical antiretroviral compositions
RU2014140177A (ru) 2012-03-05 2016-04-27 Сипла Лимитед Фармацевтические антиретровирусные композиции
EP2852583A1 (en) 2012-05-23 2015-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Sulfilimine and sulphoxide methods for producing festinavir
EP2893014A4 (en) * 2012-09-05 2016-06-08 Cold Spring Harbor Lab TRANSPORTABLE ELEMENTS, TDP-43 AND NEURODEGENERATIVE DISEASES
EP2971120B1 (en) * 2013-03-15 2018-06-06 Cold Spring Harbor Laboratory Transposon activation during aging and neuronal decline
IN2013MU01749A (uk) 2013-05-15 2015-06-26 Cipla Ltd
WO2014201122A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Bristol-Myers Squibb Company Tert-butyl-sulphoxide method for producing festinavir
US9549942B2 (en) 2013-07-15 2017-01-24 Research & Business Foundation Sungkyunkwan University Composition for preventing or treating degenerative brain diseases including compound downregulating expression of BACE1 proteins
US9326983B2 (en) * 2013-08-01 2016-05-03 University Of Kentucky Research Foundation Compositions and methods for treating retinal degradation
IL286427B2 (en) * 2014-01-28 2024-08-01 Mayo Found Medical Education & Res Inhibitors bcl-2 anti-apoptotic protein family members for treatment of non cancer pulmonary disease or an opthalmic disease
WO2015143712A1 (en) 2014-03-28 2015-10-01 Merck Sharp & Dohme Corp. 4'-substituted nucleoside reverse transcriptase inhibitors
EP2965760A1 (en) 2014-07-09 2016-01-13 Université de Montpellier Combination of antiretroviral agents for use in the prevention or treatment of chronic inflammatory diseases
FR3027804A1 (fr) 2014-10-31 2016-05-06 Centre Nat Rech Scient Utilisation d'un inhibiteur de transcriptase inverse dans la prevention et le traitement des maladies degeneratives
US10059940B2 (en) 2015-01-27 2018-08-28 Minghong Zhong Chemically ligated RNAs for CRISPR/Cas9-lgRNA complexes as antiviral therapeutic agents
WO2016138425A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 University Of Kentucky Research Foundation Compositions and methods for treating retinal degradation
WO2016149561A1 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Oak Crest Institute Of Science Subdermal implants for the sustained delivery of water-soluble drugs
US9687547B2 (en) 2015-05-28 2017-06-27 Immunomedics, Inc. T20 constructs for anti-HIV (human immunodeficiency virus) therapy and/or vaccines
AU2016272089B2 (en) 2015-06-03 2021-02-18 Triastek, Inc. Dosage forms and use thereof
US10765679B2 (en) 2015-07-04 2020-09-08 Emory University Use of TREM-1 inhibitors for treatment, elimination and eradication of HIV-1 infection
PE20181016A1 (es) 2015-08-10 2018-06-26 Merck Sharp & Dohme Compuestos antivirales de fosfodiamida de ester de beta aminoacido
MX391226B (es) 2015-09-23 2025-03-21 Merck Sharp & Dohme Llc Inhibidores de transcriptasa inversa de nucleosido 4'-substituido y preparaciones de los mismos.
US20180360959A1 (en) * 2015-09-25 2018-12-20 Universität Duisburg-Essen Agents inhibiting kallikrein-8 for use in the prevention or treatment of alzheimer's disease
EP3355924A1 (en) 2015-09-29 2018-08-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Methods of treating and preventing amyotrophic lateral sclerosis
US10745428B2 (en) 2015-12-10 2020-08-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Antiviral phosphodiamide prodrugs of tenofovir
US10450335B2 (en) 2015-12-15 2019-10-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral oxime phosphoramide compounds
US20170232020A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Cipla Limited Pharmaceutical compositions
JOP20170038B1 (ar) 2016-02-12 2021-08-17 Merck Sharp & Dohme مركبات للاستخدام لعلاج عدوى بفيروس hiv والوقاية منه
AU2017231824B2 (en) 2016-03-09 2021-07-01 Alios Biopharma, Inc. Acyclic antivirals
JP6934019B2 (ja) 2016-05-12 2021-09-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 抗ウイルス薬を送達するための薬物送達システム
WO2017222903A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Drug delivery system for the delivery of antiviral agents
CN119462611A (zh) 2016-08-19 2025-02-18 吉利德科学公司 用于预防性或治疗性治疗hiv病毒感染的治疗性化合物
EP3503895B1 (en) 2016-08-25 2021-09-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral prodrugs of tenofovir
US10266558B2 (en) 2016-10-07 2019-04-23 Alexandre Vasilievich Ivachtchenko Macroheterocyclic nucleoside derivatives and their analogues, production and use thereof
EP3532069A4 (en) 2016-10-26 2020-05-13 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIVIRAL ARYL AMID PHOSPHODIAMID COMPOUNDS
US20180153859A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 T3D Therapeutics, Inc. Methods of treating or preventing cognitive impairment using indane acetic acid derivatives based on apoe4 genotype
JOP20190130A1 (ar) 2016-12-02 2019-06-02 Merck Sharp & Dohme مركبات حلقية غير متجانسة رباعية الحلقات مفيدة كمثبطات إنزيم مدمج لفيروس نقص المناعة البشرية (hiv)
US11123355B2 (en) 2016-12-22 2021-09-21 Idenix Pharmaceuticals Llc Antiviral benzyl-amine phosphodiamide compounds
JP6938637B2 (ja) 2016-12-22 2021-09-22 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． テノホビルの抗ウイルス性脂肪族エステルプロドラッグ
AU2018210001A1 (en) 2017-01-23 2019-08-01 Health Research, Inc. Inhibition of endogenous reverse transcriptase and targeting of cells for prophylaxis and therapy of cancer and aging
EP3609508A4 (en) 2017-04-10 2021-02-10 Merck Sharp & Dohme Corp. ACTIVE SUBSTANCE RELEASE SYSTEM FOR THE RELEASE OF ANTIVIRAL ACTIVE SUBSTANCES
TW201906834A (zh) 2017-05-02 2019-02-16 英商Viiv醫療保健英國(No.5)有限公司 人類免疫不全病毒複製之抑制劑
BR112019027993A2 (pt) 2017-07-04 2020-07-07 Cavidi Ab métodos para avaliar a susceptibilidade de um vírus ao tratamento com um fármaco inibidor de uma enzima do vírus do tipo selvagem, para avaliar se um paciente tratado para uma infecção viral tem necessidade de alterar a terapia farmacológica com um fármaco inibidor da enzima viral e para determinar a carga de um vírus em uma amostra do paciente e a dita resistência do vírus ao tratamento com um fármaco inibidor de uma enzima do vírus do tipo selvagem, e, sistema
JP2020527570A (ja) 2017-07-18 2020-09-10 ヴィーブ ヘルスケア カンパニー 組み合わせ薬物療法
TWI687415B (zh) 2017-08-17 2020-03-11 美商基利科學股份有限公司 Hiv蛋白質膜抑制劑之固體形式
AR112412A1 (es) 2017-08-17 2019-10-23 Gilead Sciences Inc Formas de sal de colina de un inhibidor de la cápside del vih
US11040975B2 (en) 2017-12-08 2021-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Carbocyclic nucleoside reverse transcriptase inhibitors
US20190185508A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Deuterated nucleoside reverse transcriptase inhibitors
CN111971284A (zh) 2017-12-27 2020-11-20 埃默里大学 核苷和/或nadph氧化酶(nox)抑制剂作为髓样特异性抗病毒剂的联合模式
CA3126348A1 (en) 2018-01-12 2020-07-18 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Antiviral prodrugs and formulations thereof
EP3762396A1 (en) 2018-03-07 2021-01-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property (No.2) Limited Compounds useful in hiv therapy
US12280063B2 (en) 2018-06-20 2025-04-22 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Anti-retroviral therapies and reverse transcriptase inhibitors for treatment of Alzheimer's disease
CN109893536B (zh) 2018-07-02 2021-04-27 河南真实生物科技有限公司 4’-取代核苷的晶型、制备和应用
EP3821015A4 (en) 2018-07-09 2022-07-13 Codexis, Inc. GENETIC DEOXYRIBOSE PHOSPHATE ALDOLASES
JP7773906B2 (ja) 2018-07-09 2025-11-20 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー ４’－エチルヌクレオシド類似体の酵素的合成
AU2019302423B2 (en) 2018-07-09 2024-11-21 Codexis, Inc. Engineered purine nucleoside phosphorylase variant enzymes
KR20210033492A (ko) 2018-07-16 2021-03-26 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hiv의 치료를 위한 캡시드 억제제
EP3823632B1 (en) 2018-07-17 2025-10-29 Merck Sharp & Dohme LLC Efda in combination with doravirine for use in treating f227c mutated hiv infections
WO2020018399A1 (en) 2018-07-19 2020-01-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphinic amide prodrugs of tenofovir
AU2019317810A1 (en) 2018-08-09 2021-02-25 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Compounds useful in HIV therapy
JP2021536444A (ja) 2018-08-30 2021-12-27 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、(ナンバー2)、リミテッドGlaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Ｈｉｖ療法に有用な化合物
EP3849982A1 (en) 2018-09-14 2021-07-21 VIIV Healthcare UK (No.5) Limited Inhibitors of human immunodeficiency virus replication
JP7433303B2 (ja) 2018-09-20 2024-02-19 ヴィーブ ヘルスケア ユーケー（ナンバー５）リミテッド ヒト免疫不全ウイルス複製の阻害剤
MX2021003633A (es) 2018-10-16 2021-05-27 Res Triangle Inst Dispositivo de depósito biodegradable subcutáneo.
US11203591B2 (en) 2018-10-31 2021-12-21 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
WO2020092528A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
CA3122576C (en) 2018-12-20 2025-11-25 Merck Sharp & Dohme Llc CRYSTALLINE FORMS OF THE NRTTI COMPOUND OF 4'-ETHYNYL-2-FLUORO-2'-DESOXYADENOSINE
EP3897740A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 The University Of Liverpool Nrti therapies
EP3914604B1 (en) 2019-01-25 2026-03-04 Brown University Compositions comprising censavudine or elvucitabine for treating age-associated inflammation and disorders
US20220160710A1 (en) * 2019-03-08 2022-05-26 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating or preventing alzheimer's disease
KR20220066071A (ko) * 2019-08-23 2022-05-23 유니버시티 오브 버지니아 페이턴트 파운데이션 염증 질환을 표적하는 ddx17 및 nlrc4

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020211600B2 (en) 2026-04-09
CN113631563B (zh) 2025-07-18
ZA202104678B (en) 2024-11-27
JP2024116287A (ja) 2024-08-27
JP7503558B2 (ja) 2024-06-20
BR112021014576A2 (pt) 2021-10-05
JP7728402B2 (ja) 2025-08-22
WO2020154656A1 (en) 2020-07-30
US20240197745A1 (en) 2024-06-20
PH12021551734A1 (en) 2022-07-25
CN113631563A (zh) 2021-11-09
MX2021008751A (es) 2021-11-12
AU2020211600A1 (en) 2021-07-22
EP3914604B1 (en) 2026-03-04
EP3914604A4 (en) 2022-10-19
CL2021001951A1 (es) 2022-04-08
EP3914604A1 (en) 2021-12-01
US20210106586A1 (en) 2021-04-15
SG11202107145SA (en) 2021-08-30
IL285072A (en) 2021-09-30
CA3125991A1 (en) 2020-07-30
JP2022521454A (ja) 2022-04-08
US20260021101A1 (en) 2026-01-22
US12246022B2 (en) 2025-03-11
KR20210137434A (ko) 2021-11-17
DOP2021000157A (es) 2021-11-21
US11793814B2 (en) 2023-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA128041C2 (uk) Спосіб лікування пов'язаного з віком запалення у пацієнта
Aksoy et al. Interactions between tsetse and trypanosomes with implications for the control of trypanosomiasis
Lin et al. Characterization of two mosquito STATs, AaSTAT and CtSTAT: Differential regulation of tyrosine phosphorylation and DNA binding activity by lipopolysaccharide treatment and by Japanese encephalitis virus infection
JP2022019747A (ja) Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
HUE026089T2 (hu) NGF elleni antitestek és eljárás alkalmazásukra
CN108997498A (zh) 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途
HU230629B1 (hu) Emlős citokin: interleukin-B30 és rokon molekulák
CN107949387A (zh) 用谷氨酰胺酶抑制剂治疗肺癌
Jayaramu et al. Studies on expression pattern of toll-like receptor 5 (TLR5) in Edwardsiella tarda infected Pangasianodon hypophthalmus
UA126962C2 (uk) Композиція та спосіб контролю зараження членистоногих паразитами і шкідниками
Shrestha et al. Bumped kinase inhibitor 1369 is effective against Cystoisospora suis in vivo and in vitro
CN110312522A (zh) 赖氨酸特异性组蛋白脱甲基化酶-1抑制剂及其用途
CN111989103A (zh) 药物组合物、其治疗方法和用途
EP3107558B1 (en) Treating infection
KR20130139512A (ko) Ｍｄｍ２ 억제제를 유효성분으로 포함하는 노화 억제용 조성물
TW201041515A (en) Antiparasitic agent for fish and method of controlling proliferation of fish parasites
UA119032C2 (uk) Фармацевтична композиція для лікування блокади ремієлінізації при захворюваннях, які пов'язані з експресією білка оболонки herv-w
US10092566B2 (en) Composition for controlling a gut immunity and use thereof
KR20230145014A (ko) Opa1 억제에 의한 조골세포 활성화를 통한 골형성 촉진 유도용 또는 골질환 치료용 조성물
JP5031163B2 (ja) 寄生性原虫類の蔓延から生ずる疾患の処置のためのトリアジノン化合物
EP2723355B1 (en) Conditional knockout mutants of sortilin-like receptor in apicomplexan parasites and uses thereof
TW200835505A (en) 2-{[2-(substituted amion)ethyl]sulfonyl}ethyl N, N, N', N'-tetrakis(2-chloroethyl)phosphorodiamidates
EP4253566A1 (en) Marker of calcium-overload-mediated neuronal death and application thereof
RU2812903C2 (ru) Композиции и способы лечения, предотвращения и обращения связанного с возрастом воспаления и расстройств
Calkins Gap junctions in the mosquito, Aedes aegypti