UA128451C2 - Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3 - Google Patents

Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3 Download PDF

Info

Publication number
UA128451C2
UA128451C2 UAA201910132A UAA201910132A UA128451C2 UA 128451 C2 UA128451 C2 UA 128451C2 UA A201910132 A UAA201910132 A UA A201910132A UA A201910132 A UAA201910132 A UA A201910132A UA 128451 C2 UA128451 C2 UA 128451C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
domain
amino acid
antigen
acid sequence
antibody
Prior art date
Application number
UAA201910132A
Other languages
English (en)
Inventor
Деак Лаура Кодаррі
ДЕАК Лаура КОДАРРИ
Єнс Фішер
Енс ФИШЕР
Забіне Імхоф-Юнг
Забине ИМХОФ-ЮНГ
Крістіан Кляйн
Кристиан КЛЯЙН
Штефан ЗЕБЕР
Патрік Алєксандер Аарон Вебер
Патрик Александер Аарон ВЕБЕР
Маріо Перро
Марио ПЕРРО
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of UA128451C2 publication Critical patent/UA128451C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/66—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a swap of domains, e.g. CH3-CH2, VH-CL or VL-CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Винахід стосується біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з PD1, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з LAG3. Винахід також стосується полінуклеотиду, що кодує біспецифічне антитіло, прокаріотичної або еукаріотичної клітини-хазяїна, фармацевтичної композиції, способу одержання біспецифічного антитіла. 266 266

Description

(57) Реферат:
Винахід стосується біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ГАЗ. Винахід також стосується полінуклеотиду, що кодує біспецифічне антитіло, прокаріотичної або еукаріотичної клітини-хазяїна, фармацевтичної композиції, способу одержання біспецифічного антитіла.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
Цей винахід відноситься до біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, та другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з АСЗ, зокрема до біспецифічних антитіл, що додатково містять Ес-домен, який містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес-рецептором, зокрема з Есу-рецептором. Винахід також відноситься до способів отримання цих молекул і до способів їхнього застосування.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Важливість імунної системи в захисті від злоякісних новоутворень заснована на її здатності виявляти і знищувати аномальні клітини. Тим не менш, деякі пухлинні клітини можуть уникати імунної системи, викликаючи стан імуносупресії (7ймодеї! еї аїЇ., Маїшге Кемівемув ІттипоЇоду 6 (2006), 715-727). Т-клітини відіграють важливу роль у противірусних та протипухлинних імунних відповідях. Відповідна активація антигенспецифічних Т-клітин призводить до їх клонального розмноження і надбання ними ефекторних функцій, а в разі цитотоксичних Т-лімфоцитів (ЦТЛ) дозволяє їм специфічно лізувати цільові клітини. Основні зусилля були зосереджені на Т- клітинах щодо терапевтичного маніпулювання ендогенним протипухлинним імунітетом завдяки їх здатності вибірково розпізнавати пептиди, отримані з білків у всіх клітинних компартментах; їхній здатності безпосередньо розпізнавати та вбивати антигенекспресуючі клітини (за допомогою СО8" ефекторних Т-клітин; також відомих як цитотоксичні Т-лімфоцити (ЦТЛ)) та їхні здатності організовувати різноманітні імунні відповіді (за допомогою СО4: Т-хелперів), які інтегрують адаптивний і вроджений ефекторні механізми. Дисфункція Т-клітин виникає в результаті тривалого впливу антигена: Т-клітина втрачає здатність проліферувати в присутності антигена та поступово втрачає здатність продукувати цитокіни і лізувати цільові клітини.
Дисфункціональні Т-клітини були названі виснаженими Т-клітинами та вони не здатні проліферувати та виконувати ефекторні функції, такі як цитотоксичність і секреція цитокінів, у відповідь на стимуляцію антигеном. Подальші дослідження продемонстрували, що виснажені Т- клітини характеризуються стійкою експресією інгібуючої молекули РО-1 (білок запрограмованої смерті клітини 1) і що блокування взаємодій РО-1 і РО-Ї1 (ліганд РО-1) може обернути виснаження Т-клітин і відновити антигенспецифічні Т-клітинні відповіді у мишей, які інфіковані
ВЛХМ (Вагбег еї а!., Маїшге 439 (2006), 682-687). Однак націлювання лише на шлях РО-1 - РО-І 1 не завжди призводить до оборотного виснаження Т-клітин (СепПгіпд еї а!., бзавігоепіегоіоду 137 (2009), 682-690), що вказує на те, що інші молекули, ймовірно, залучені у виснаження Т-клітин (Закиївнпі, У. Ехрегітепіа! Мед. 207 (2010), 2187-2194).
Ген активації лімфоцитів-3 (АСЗ або СО223) був спочатку виявлений в експерименті, призначеному для селективного виділення молекул, які експресуються в ІЛ-2-залежній лінії МК- клітин (Тебе! Е еї а!., Сапсег І ей. 235 (2006), 147-153). | АОЗ є унікальним трансмембраним білком зі структурною гомологією до СО4 з чотирма позаклітинними доменами, подібними до суперсімейства імуноглобулінів (01-04). Мембранно-дистальний домен ІдсС містить коротку амінокислотну послідовність, так звану додаткову петлю, яка не розпізнається в інших білках суперсімейства Ід. Внутрішньоклітинний домен містить унікальну амінокислотну послідовність (КІЕЕГЕ, ЗЕО ІО МО: 75), яка необхідна для того, щоб | АСЗ впливав негативно на функцію Т- клітин. ГАЗ може розщеплюватися за з'єднувальним пептидом (СР) за допомогою металопротеаз з утворенням розчинної форми, яка виявляється в сироватці. Як і СО4, білок
Г АСЗ зв'язується з молекулами ГКГС класу ІІ, проте з більш високою афінністю та у відмінному від СО4А сайті (Ниага еї а. Ргос. Май. Асад. 5сі. ОБА 94 (1997), 5744-5749). | ДОЗ експресується
Т-клітинами, В-клітинами, МК-клітинами і плазмоцитоїдними дендритними клітинами (рос) і збільшується кількісно після активації Т-клітин. Він модулює функцію Т-клітин, а також гомеостаз Т-клітин. Підмножина типових Т-клітин, які є анергічними або проявляють порушення своїх функцій, експресує ГАСЗ3. ГДЗ Т-клітини накопичуються в місцях пухлин і під час хронічних вірусних інфекцій (5іего еї аІ. Ехреп Оріп. Тег. Тагдеїв 15 (2011), 91-101). Було показано, що ГАСЗ бере участь у виснаженні СО8 Т-клітин (ВІіасКбигп єї аїЇ. Масиге Іттипої. 10 (2009), 29-37). Таким чином, існує потреба в антитілах, які протидіють активності І АСЗ і можуть бути використані для генерації та відновлення імунної відповіді щодо пухлин.
Моноклональні антитіла до | АСЗ були описані, наприклад, у УМО 2004/078928, де заявлено композицію, що містить антитіла, які специфічно зв'язуються з СО223, і протиракова вакцина. У
МО 2010/019570 розкрито людські антитіла, які зв'язують ГАСЗ, наприклад, антитіла 25Е7 і 26Н10. 005 2011/070238 відноситься до цитотоксичного анти-ГАСЗ антитіла, придатного для лікування або профілактики відторгнення трансплантата органа та аутоїмунного захворювання.
У УМО 2014/008218 описано антитіла до ГАЗ з оптимізованими функціональними 60 властивостями (тобто зі зменшеними сайтами дезамідування) у порівнянні з антитілом 25Е7.
Крім того, антитіла до ГАЗ розкриті у МО 2015/138920 (наприклад, ВАРОБ50О), МО 2014/140180,
МО 2015/116539, УМО 2016/028672, МО 2016/126858, УМО 2016/200782 ії УМО 2017/015560.
Білок запрограмованої смерті клітини 1 (РО-1 або СО279) є інгібуючим членом сімейства рецепторів СО28, яке також включає СО28, СТІ А-4, ІСО5 і ВТІ А. РО-1 є рецептором клітинної поверхні та експресується на активованих В-клітинах, Т-клітинах і мієлоїдних клітинах (ОКалакі еї аї. (2002) Сит. Оріп. Іттипої. 14:391779-82; Веппей еї аї. (2003) 9. Іттипої. 170:711-8).
Структурно РО-1 являє собою мономерний трансмембранний білок типу 1, що складається з одного позаклітинного варіабельного домену імуноглобуліну і цитоплазматичного домену, що містить імунорецепторний тирозиновий інгібуючий мотив (ІТІМ) і імунорецепторний тирозиновий переключаючий мотив (ІТ5М). Активовані Т-клітини тимчасово експресують РО, але стійка гіперекспресія РОЇ і його ліганда РОТ сприяє виснаженню імунітету, що призводить до персистенції вірусних інфекцій, ухилення пухлини від імунологічної відповіді, збільшення числа інфекцій та смертності. Експресія РО1 індукується за допомогою впізнавання антигена через рецептор Т-клітин, і його експресія підтримується головним чином за допомогою безперервної передачі сигналів рецептора Т-клітин. Після тривалого впливу антигена локус РОЇ не може бути повторно метильований, що сприяє постійній гіперекспрессії. Блокування шляху РОЇ може відновити функціональність виснажених Т-клітин при злоякісному новоутворенні та хронічних вірусних інфекціях (5Пегідап, Макиге ВіоїесппоІоду 30 (2012), 729-730). Моноклональні антитіла до РО-1 були описані, наприклад, в УМО 2003/042402, МО 2004/004771, МО 2004/056875, МО 2004/072286, МО 2004/087196, МО 2006/121168, МО 2006/133396, МО 2007/005874, МО 2008/083174, МО 2008/156712, МО 2009/024531, МО 2009/014708, МО 2009/101611, МО 2009/114335, УМО 2009/154335, МО 2010/027828, МО 2010/027423, МО 2010/029434, МО 2010/029435, МО 2010/036959, МО 2010/063011, МО 2010/089411, МО 2011/066342, МО 2011/110604, УМО 2011/110621, УМО 2012/145493, УМО 2013/014668, УМО 2014/179664, і УМО 2015/112900.
Біспецифічні Ес-діатіла, що мають імунореактивність до РОЇ і Г(АОЗ для застосування в лікуванні злоякісного новоутворення або захворювання, пов'язаного з патогеном, таким як бактерія, грибок або вірус, описані в М/О 2015/200119. Однак існує потреба в створенні нових біспецифічних антитіл, які не тільки одночасно зв'язуються з РОЇ і ГАСЗ Її, таким чином, вибірково націлюються на клітини, які експресують як РОЇ, так і ГАСЗ, але також виключають блокування І АСЗ на інших клітинах, враховуючи широкий патерн експресії ГАЗ. Біспецифічні антитіла за цим винаходом не тільки ефективно блокують РОЇ і ГАОЗ на Т-клітинах з надекспресією як РО, так і ГАСЗ, вони дуже селективні щодо цих клітин і, таким чином, можна уникнути побічних ефектів при введенні високоактивних антитіл до І АСЗ3.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Цей винахід відноситься до біспецифічних антитіл, що містять щонайменше один антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітини 1 (РО), і щонайменше один другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (АС3). Ці біспецифічні антитіла мають перевагу, оскільки вони забезпечують кращу селективність і, можливо, ефективність, ніж стратегії комбінування анти-
РО! ї анти-Г АСЗ. Крім того, вони характеризуються тим, що демонструють зменшений ефект поглинання (як показано за допомогою зменшеної інтерналізації Т-клітин), вони переважно зв'язуються як з типовими Т-клітинами, так і з Трег, і здатні відновлювати ефекторні функції Т- клітин за рахунок Трег пригнічення, вони демонструють підвищену специфічну по відношенню до пухлинну активність ефекторних Т-клітин і посилення ерадикації пухлини іп мімо.
В одному аспекті винахід забезпечує біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітини 1 (РО), і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (АСЗ), при цьому зазначений перший антигензв'язуючий домен, специфічно зв'язується з РО, містить: домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність 56010 МО: 1, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 2, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІО МО: З; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮО МО: 4; (ії) НУВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 52ЕО ІО МО: 5, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 10 МО: 6.
Зокрема, запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий 60 домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітини 1 (РОТ), і другий антигензв'язуючих домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-З (ГАС), при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, який являє собою Ес-домен Ідс, зокрема
Ес-домен Ідс1 або Ідб4, і при цьому Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес-рецептором, зокрема, з Есу-рецептором.
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГГ АСЗ, містить: (а) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 14, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 15, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 16; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 560 І МО: 17, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 10 МО: 18, (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 19; або (Б) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 22, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 23, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 24; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 25, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮО МО: 26, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 27; або (с) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 30, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 31, ї (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 32; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 33, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 56010 МО: 34, Її (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 35; або (4) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 38, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 39, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 40; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 41, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІО МО: 42, і (її) НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮО МО: 43; або (є) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 46, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 47, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 48; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 49, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 560 10 МО: 50, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 51.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 7, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 8, або (Б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зхЕО ІЮО МО: 10, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5260 1О МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 11, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить бо амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 12, або
(є) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 13.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАОЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, специфічно зв'язується з РО, містить домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО
ІО МО: 9, ії домен МІГ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 10.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з ГАЗ, містить (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 21, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 28, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 29, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: З6, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 37, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 44, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 45, або (е) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 52, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 53.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з І АОЗ, містить (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 54, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 55, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 62, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 63, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 64, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 65, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 66, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 67.
Крім того, запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 20, ії домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 21, або домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ
МО: 52, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 53.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЛ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 21.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОМ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, містить домен МН, що 60 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 56, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 57.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому біспецифічне антитіло являє собою гуманізоване або химерне антитіло. Зокрема, біспецифічне антитіло являє собою гуманізоване антитіло.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен підкласу людського ЇДО1 з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А їі
РЗ290 (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
Крім того, запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ3, як описано в цьому документі раніше, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, що містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої та другої субодиниць
Ес-домену. В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, в якому перша субодиниця
Ес-домену містить виступи, а друга субодиниця Ес-домену містить отвори відповідно до способу "виступи-в-отвори". Зокрема, перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 53540 і Т366УУ (нумерація ЕО), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни У349С, 73665 і 7407М (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий Бар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АС.
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому в одному з РГар-фрагментів варіабельні домени
МІ. ї МН замінені один на одного, так що домен МН є частиною легкого ланцюга, а домен МІ є частиною важкого ланцюга. Зокрема, запропоновано біспецифічне антитіло, в якому в першому
Еаб-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Гар-фрагмент, де в константному домені СІ амінокислоту в положення 124 незалежно заміщують лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу БО за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (23) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). Зокрема, запропоновано біспецифічне антитіло, в якому в другому Габ-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, в константному домені СІ, амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщують лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3З, що містить (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 97, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 99, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 бо ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 101, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 102, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 104, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105, або (4) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 106, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 107, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105.
Більш конкретно, запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АС3З, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95
Фо ідентичністю до послідовності ЗЕО 10 МО 96: перший легкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5Е0 10 МО: 98, другий важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 100, і другий легкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зХЕО ІЮ МО: 101.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому біспецифічне антитіло містить ЕРар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3, який злитий з С-кінцем Ес-домену.
Зокрема, запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮО МО 96: перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 144, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 101.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому біспецифічне антитіло містить третій Габ-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АС3. В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, в якому два Бар-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, є ідентичними.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАОЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому ЕРабр- фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, що містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 118, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, 60 другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 119, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 120, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 121, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 122, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | ДОЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому один з
Еаб-фрагментів, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів.
У конкретному аспекті запропоновано біспеціфичне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95
Фо ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 96, перший легкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ МО: 98,
Зо другий важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 145 і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 101.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому біспецифічне антитіло містить четвертий Габ-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО1. В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, в якому два Раб-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, є ідентичними.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, як описано в цьому документі раніше, при цьому два Еабр- фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і при цьому кожен злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, відповідно.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, що містить: (а) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 до ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮО МО: 114, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 ІЮО МО: 101, або (р) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 до ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮО МО: 116, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮО МО: 99, або 60 (с) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 117, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 115, ї два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 105.
У ще одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два
Еаб-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ІГАСЗ, і одноланцюговий Рар (зсЕаб), що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ. Зокрема, 5сЕар, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, що містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЕС) ІЮ МО: 119, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 124, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЕС) ІЮ МО: 121, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 105.
У ще одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два фрагмента Раб, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АСЗ, і домен МН і МІ, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ.
В одному аспекті домен МН антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РО, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, а домен Мі. антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РОЛ, злитий через пептидний лінкер з
С-кінцем іншого важкого ланцюга. У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІО МО: 126, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5620 10 МО: 127, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 ІЮ МО: 109.
Згідно з іншим аспектом винаходу запропоновано полінуклеотид, що кодує біспецифічне антитіло, як описано в цьому документі раніше. У винаході додатково запропоновано вектор, зокрема вектор експресії що містить полінуклеотид за винаходом і прокаріотичну або еукаріотичну клітину-хазяїна, яка містить полінуклеотид або вектор за винаходом. У деяких варіантах здійснення клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, зокрема клітину ссавця.
В іншому аспекті запропоновано спосіб отримання біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АОЗ, як описано в цьому документі, який включає етапи а) трансформації клітини-хазяїна векторами, що містять полінуклеотиди, які кодують зазначене біспецифічне антитіло, Б) культивування клітини-хазяїна в умовах, що підходять для експресії біспецифічного антитіла, і с) виділення біспецифічного антитіла з культури. Винахід також охоплює біспецифічне антитіло, що отримали способом за винаходом.
Винахід, крім того, забезпечує фармацевтичну композицію, яка містить біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючийдомен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, і щонайменше один фармацевтично прийнятний наповнювач. 60 Винахід також охоплює біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен,
який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, яка містить біспецифічне антитіло, для застосування в якості лікарського засобу.
В іншому аспекті винахід забезпечує біспецифічне антитіло, що містить біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ3, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, яка містить біспецифічне антитіло, для застосування ії) при модуляції імунних відповідей, таких як відновлення активності Т-клітин, ії) при стимуляції Т-клітинної відповіді, ії) при лікуванні інфекцій, їм) при лікуванні онкологічного захворювання, м) для затримки прогресування онкологічного захвлрювання, мі) в продовженні життя пацієнта, що страждає на онкологічне захворювання.
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, яка містить біспецифічне антитіло, для застосування в лікуванні захворювання у людини, який цього потребує. У конкретному аспекті винахід забезпечує біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГГ АСЗ, або фармацевтичну композицію, що містить біспецифічне антитіло, для застосування при лікуванні онкологічного захворювання.
У додатковому конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, або фармацевтична композиція, що містить біспецифічне антитіло, для застосування в модуляції імунних відповідей. В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І! АСЗ, або фармацевтичну композицію, що містить біспецифічне антитіло, для застосування при лікуванні хронічної вірусної інфекції.
Винахід також забезпечує специфічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, що містить біспецифічне антитіло, для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, при цьому біспецифічне антитіло вводять у комбінації з хіміотерапевтичним агентом, опроміненням та/або іншими агентами для застосування в імунотерапії онкологічного захворювання. У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АС3, як описано в цьому документі, або фармацевтична композиція, що містить біспецифічне антитіло, для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, при цьому біспецифічне антитіло вводять у комбінації з анти-
СЕА/анти-СОЗ біспецифічним антитілом.
Також запропоновано застосування біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, як описано в цьому документі, для виготовлення лікарського засобу для лікування захворювань у індивідуума, який цього потребує, зокрема, для виробництва лікарського засобу при лікуванні онкологічного захворювання, а також способу лікування захворювання у індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму терапевтично ефективної кількості композиції, що містить біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, у фармацевтично прийнятній формі. У певному аспекті захворювання являє собою онкологічне захворювання. В іншому конкретному аспекті захворювання являє собою хронічну вірусну інфекцію. В іншому аспекті запропоновано спосіб модуляції імунних відповідей у індивідуума, що включає введення зазначеному індивідууму терапевтично ефективної кількості композиції, що містить біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
Г|АСЗ, як описано в цьому документі, у фармацевтично прийнятній формі. У будь-якому з вищевказаних аспектів індивідуумом переважно є ссавець, зокрема людина. 60 Винахід також забезпечує специфічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, що містить біспецифічне антитіло, для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, при цьому біспецифічне антитіло вводять у комбінації з хіміотерапевтичним агентом, опроміненням та/або іншими агентами для застосування в імунотерапії онкологічного захворювання.
Крім того, запропоновано спосіб інгібування росту пухлинних клітин у індивідуума, що включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла, яке містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО1, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АОСЗ, як описано в цьому документі, щоб пригнічувати ріст пухлинних клітин. Індивідуум переважно являє собою ссавця, зокрема людину.
СТИСЛИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фіг. 1: Схематичне зображення різних форматів біспецифічних антитіл анти-РО1Т/анти-І АС, описаних у цьому документі. На Фіг. ТА зображений біспецифічний формат 1-41, в якому РО1- зв'язуючий домен містить кросоверний Раб (сго55ГРаб) (із обміном доменів МНЛ/І), а ГАОЗ3- зв'язуючий домен містить домени СНІ і СК з амінокислотними мутаціями для підтримки відповідного спарювання ("заряджені варіанти"). Ес-частина містить мутації "виступ-в-отвір" (показана чорною стрілкою) і амінокислотні мутації І 234А, І 235А і РЗ290б, які майже повністю перешкоджають зв'язуванню з Есу-рецептором людського Ес-домену ЇдО1 (показано білою областю). На Фіг. 18 продемонстровано формат 2-1 з двома анти-І АСбЗ-зв'язуючими Рар- доменами, що містять мутації в СНІТ/СК, і РО1-зв'язуючим Рар-доменом, злитим на С-кінці одного важкого ланцюга. На Фіг. 1С продемонстровано аналогічний формат 2-1 з двома анти-
ГАСіЗ-зв'язуючими Раб-доменами, що містять мутації в СНІ/СК, але РБЮО/1-зв'язуючий одноланцюговий 5сЕар-домен злитий на С-кінці одного важкого ланцюга. На Фіг. 10 продемонстровано формат 2-1 з двома РГаб-доменами, що зв'язують анти-! АСЗ, і МН і МІ, що зв'язують РОЇ, кожен з яких злитий з одним із С-кінців важких ланцюгів. На Фіг. 1Е продемонстровано конструкт, подібний до наведеного на Фіг. 10, однак зі сконструйованим дисульфідним зв'язком між УН і МІ, а на Фіг. 1Е продемонстровано варіант з сайтом фурину. На
Фіг. 15 продемонстровано біспецифічний формат 2-2 з двома анти-І АСбЗ-зв'язуючими Еаб- доменами, що містять мутації в СНІТ/СК, і двома РО1Т-зв'язуючим кросоверними Рар-доменами, злитим на С-кінці кожного важкого ланцюга. На Фіг. 1Н продемонстровано біспецифічний формат 1-41 (що називається "транс"), в якому РО1-зв'язуючий домен містить кросоверний Бар (з обміном доменів МНЛ/І), а ГАСЗ-зв'язуючий домен злитий з його доменом МН на С- кінці ланцюга з Ес-отвором. Домен І адЗ містить домени СНІ і СК з амінокислотними мутаціями для підтримки відповідного спарювання ("заряджені варіанти"). На Фіг. 1І продемонстровано формат транс 2-41, в якому РО1-зв'язуючий домен містить кросоверний Раб (із обміном доменів МНЛ/І) і один ГАСЗ-зв'язуючий домен, що містить домени СНІ і СК з мутаціями амінокислот для підтримки відповідного спарювання ("заряджені варіанти"), і другий ГАСЗ-зв'язуючий домен злитий з його МН-доменом на С-кінці ланцюга з Ес-отвором.
Фіг. 2: Вплив антитіл а АсС-3 на цитотоксичне вивільнення гранзиму В і секрецію ІЛ-2 С04 Т- клітинами людини, спільно культивованими з алогенними зрілими дендритними клітинами. На
Фіг. 2А продемонстровано вплив антитіл а'-АсС3З3, як описано в цьому документі, на секрецію гранзиму В, а на Фіг. 28 продемонстровано вплив антитіл а АСЗ на секрецію ІЛ-2.
Фіг. 3: Вплив антитіл абАСЗ у комбінації з антитілом аРО1ї (0376) на вивільнення цитотоксичного гранзиму В СО4 Т-клітинами людини, спільно культивованими з лімфобластною
В-клітинною лінією (АКН?77). Показано порівняння різних антитіл аІ АсЗ у комбінації з антитілом аРО1 (0376) і одним тільки антитілом аРО1 (0376).
Фіг. 4: Вплив антитіл аїАСЗ у комбінації з антитілом аРО1 (0376) на Трег пригнічення вивільнення гранзиму В і ІФН-у СО4 Т-клітинами людини, спільно культивованими з опроміненими алогенними МКПК. На Фіг. 4А продемонстровано вивільнення гранзиму В у порівнянні з одним лише аРОр1 (0376), а на Фіг. 4АВ продемонстровано вивільнення ІФН-у у порівнянні з одним тільки аРО1 (0376).
Фіг 5: Одночасне зв'язування і димеризація рецептора, викликані зв'язуванням біспецифічних анти-РО1/анти-І АОЗ антитіл з рекомбінантними РО1-Ї ад3" клітинами. На графіку показана хемілюмінесценція (виміряна в ОВ) в залежності від концентрації антитіла. На Фіг. 5А і
Фіг 5В продемонстровано порівняння біспецифічних анти-РО1/анти-ЇАСЗ антитіл. і моноспецифічних анти-(ЇАСЗ антитіл. Тільки біспецифічні формати були здатні індукувати хемілюмінесценцію. Конкурентний експеримент продемонстровано на Фіг. 50. Якщо одне і теж 60 біспецифічне антитіло вносили в присутності або антитіла а АС3 (0156, МОХ25Е7), або анти-
РО! антитіла (0376), сигнал був або майже інгібований (для конкуренції РОТ), або щонайменше значно знижений (Гад3). Додатковий конкурентний експеримент продемонстровано на Фіг. 50.
Конкуренція біспецифічного анти-РО1/анти-Ї АСЗ антитіла з тим самим анти-РО1 антитілом (0376), а також рекомбінантним білком І АСЗ: Ес (0160) практично усувала сигнал, в той час як присутність тієї ж зв'язуючої речовини аг Аз (0156) призводила тільки до часткового пригнічення, і при цьому два додаткових анти-І АСЗ антитіла 0414 і 0416 істотно не модулювали сигнал.
Фіг. 6: Порівняння одночасного зв'язування біспецифічних анти-РО1Т/анти-І ДСЗ антитіл в різних форматах (1-4-1 у порівнянні з 2-1) і з різними зв'язуючими речовинами аї! АСЗ3. На Фіг. бА продемонстрована крива зв'язування для конструкту 0799 (анти-РО1 (0376)/анти-Г АОЗ (0416) у форматі 1-1). Крива зв'язування для конструкту 8311 (анти-РО1 (0376)/анти-Г ДОЗ (0416) у форматі 142) продемонстрована на Фіг. 6В. На Фіг. 6С продемонстрована крива зв'язування для конструкту 0927 (анти-?РО1 (037б)/анти-Г АСЗ (0414) у форматі 141). Крива зв'язування для конструкту 8310 (анти-РО1 (0376)/анти-І АоЗ (0414) у форматі 142) продемонстрована на Фіг. 6.
Фіг. 7: Порівняння одночасного зв'язування біспецифічних анти-РО1/анти-І АСЗ антитіл в різних форматах (2-1 у порівнянні з 2-2) і з різними зв'язуючими речовинами аг А(с3. На Фіг. 7А продемонстрована крива зв'язування для конструкту 8310 (анти-РО1 (0376)/анти-Г ОЗ (0414) у форматі 1-2). Крива зв'язування для конструкту 8970 (анти-?РО1 (0376)/анти-Г ДОЗ (0414) у форматі 2-2) продемонстрована на Фіг. 7В. На Фіг. 7С продемонстрована крива зв'язування для конструкту 8311 (анти-РО1 (0376)/анти- АСЗ (0416) у форматі 1-2). Крива зв'язування для конструкту 8984 (анти-РО1 (0376)/анти-І АоЗ (0416) у форматі 2-42) продемонстрована на Фіг. 70. Криві зв'язування для конструктів 0725 (анти-РО1 (0376б)/анти-І ДОЗ (0414) у форматі транс 1-1) ї 0750 (анти-РО1 (0376) / анти-Г АОЗ (0414) у форматі транс 1-2) продемонстровані на Фіг. 7Е порівняно з кривою зв'язування конструкту 0927 (анти-РО1(0376)/анти-І АСЗ3(0414) у форматі 1-1). Ці 3 конструкти також порівнювали в комерційному комбінованому аналізі за геном- репортером РО1/ АСЗ, і відповідні криві зв'язування продемонстровані на Фіг. 7Е.
Фіг. 8: Інтерналізація біспецифічних анти-РО1/анти-Ї АСЗ антитіл у різних форматах і вихідного анти-Ї АСЗ антитіла через З години після додавання до введення активованих Т- клітин, які вводяться, як виміряно за допомогою проточної цитометрії. На Фіг. 8А продемонстрована репрезентативна гістограма експерименту, відсоток інтерналізації для різних форматів наведений на Фіг. 88.
Фіг. 9: Аналіз в часі демонструє більш високу локалізацію на мембрані формату 1-1 біспецифічного анти-РО1/анти-ЇАСЗ антитіла (0927) у порівнянні з іншими форматами, які проявляють більш високу ступінь інтерналізації. На Фіг. 9ЗА продемонстровані флуоресцентні зображення, виконані за допомогою конфокальної мікроскопії через 15 хвилин, 1 годину і З години. Активовані СО4 клітини зображені у вигляді чорних кіл. Флуоресцентні зображення для антитіла до ТІМ3З показані в якості прикладу сильної інтерналізації. Кількісний аналіз зображень продемонстровано на Фіг. 98.
Фіг. 10: Зв'язування з типовими Т-клітинами в порівнянні з Трег. На Фіг. 10А-10С продемонстровані дані від одного репрезентативного донора, що демонструють зв'язування з типовими Т-клітинами (чорна крива) і Трег (сіра область). Зв'язування анти-І АСЗ антитіла 0414 (пи 951 РОГАГА) продемонстровано на Фіг. 10А, на Фіг. 108 ї 10С продемонстровано зв'язування анти-?РОЇ антитіла 0376 і біспецифічного анти-?РО1/анти-Ї АСЗ антитіла (0927), відповідно. На Фіг. 100 продемонстрована дельта геометричної середньої інтенсивності флуоресценції цієї молекули, пов'язаної з типовими Т-клітинами, у порівнянні з Трег у тому ж зразку. Результати (медіана) взяті з З незалежних експериментів з З різними донорами.
Фіг. 11: Спільне блокування РО! і Трег зберігає ефекторні функції їтип (типових Т-клітин) від
Трег пригнічення. Продемонстровано відсоток Трег пригнічення гранзиму В, що секретується
Ттип після 5 діб спільного культивування. Результати (медіана) взяті з 10 незалежних експериментів з 10 різними донорами. Р-значення розраховували з використанням двофакторного дисперсійного аналізу.
Фіг. 12: Вплив блокування РО-1 і ГАС-3 на секрецію гранзиму В і ІФН-у С04 Т-клітинами з
МКПИК пацієнтів з меланомою після вторинної імунної відповіді за допомогою імуногенних пептидних пулів меланома-антиген. На Фіг. 12 продемонстровано порівняння впливу на вивільнення гранзиму В і ІФН-у, що викликане одним анти-?РО1 (0376), комбінацією анти-РО1 (0376) з а АсЗ (0414) і біспецифічним антитілом 0927 (анти-?О1 (0376)/анти-і АОЗ (0414 ) у форматі 1--1). Продемонстровано кратне збільшення продукції гранзиму В і ІФН-у у порівнянні зі стимульованим пептидним пулом СО4 Т-клітин від МКПК 12 пацієнтів з меланомою. 60 Фіг. 13: Вплив біспецифічних антитіл аРО1/а| АСЗ на цитотоксичне вивільнення гранзиму В людськими СО4 Т-клітинами, спільно культивованими з лімфобластною В-клітинною лінією (АКН?77). Різні біспецифічні анти-РО1/анти-ЇАСЗ антитіла, як описано в цьому документі, порівнюють з антитілами, що використовуються в стандартах надання медичної допомоги або клінічних випробуваннях.
Фіг. 14: Дослідження ефективності у гуманізованих мишей, які заражені аденокарциномою підшлункової залози, ВХРОСЗ. У комбінації з СЕАСАМ СОЗ ТОВ тільки біспецифічне антитіло агРОтТ/а| АСЗ забезпечувало статистично значущий захист від пухлин у порівнянні з типовими антитілами до РОЇ. Зображені криві росту пухлини у гуманізованих мишей, яким підшкірно вводили клітини ВХхРСЗ і яких лікували зазначеними молекулами у комбінації з СЕАСАМ5-ТСВ.
Фіг. 15: Вимірювання об'єм пухлин (мм3 -/- СПС (стандартна похибка середнього значення)) протягом 47 діб показані для кожної окремої тварини, що демонструє однорідність групової протипухлинної відповіді. Криві росту пухлини продемонстровані для групи носія на Фіг. 15А, для одного СЕАСАМ5о СОЗ ТОВ (2,5 мг/кг) на Фіг. 15В, для комбінації СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ з ніволумабом (1,5 мг/кг) на Фіг. 15С, для комбінації СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ з пембролізумабом (1,5 мг/кг) на Фіг. 150, для комбінації СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ з РО1/ АСЗ 0927 на Фіг. 15Е (1,5 мг/кг) і на
Фіг. 15Е (З мг/кг біспецифічного антитіла).
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ
Визначення
Якщо не вказано інше, технічні та наукові терміни, що використовуються в цьому документі, мають те ж значення, що і в цілому використовується в галузі техніки, до якої відноситься цей винахід. Для цілей інтерпретації цього опису будуть застосовуватися наступні визначення, і за необхідності терміни, що використовуються в однині, будуть також включати множину і навпаки.
Використовуваний у цьому документі термін "антигензв'язуюча молекула" відноситься в найширшому сенсі до молекули, яка специфічно зв'язує антигенну детермінанту. Прикладами антигензв'язуючих молекул є антитіла, фрагменти антитіл і каркасні антигензв'язуючі білки.
Термін "антитіло" в цьому документі використовується в самому широкому сенсі і охоплює різні структури антитіл, включаючи, але не обмежуючись ними, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, моноспецифічні і мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіл, за умови, що вони демонструють бажану антигензв'язуючих активність.
Використовуваний в цьому документі термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, отриманого з популяції по суті однорідних антитіл, тобто окремі антитіла, що входять до складу популяції, є ідентичними та/або зв'язують один і той самий епітоп, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад, що містять мутації, що зустрічаються в природі або виникають під час отримання препарату моноклонального антитіла, такі варіанти зазвичай присутні в невеликих кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, що зазвичай включають різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклональних антитіл направлено проти однієї детермінанти на антигені.
Термін "моноспецифічне" антитіло в контексті цього опису означає антитіло, яке має один або більше сайтів зв'язування, кожен з яких зв'язується з одним і тим самим епітопом одного і того ж антигена. Термін "біспецифічне" означає, що антитіло здатне специфічно зв'язуватися щонайменше з двома різними антигенними детермінантами, наприклад, з двома сайтами зв'язування, кожен з яких утворений парою варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (МН) і варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МГ), зв'язуються з різними антигенами або з різними епітопами на одному і тому ж антигені. Таке біспецифічне антитіло має формат 1-1. Інші формати біспецифічних антитіл мають формати 2-1 (включаючи два сайти зв'язування для першого антигена або епітопа і один сайт зв'язування для другого антигена або епітопа) або формати 2-2 (містять два сайти зв'язування для першого антигена або епітопа і два сайти зв'язування для другого антигена або епітопа). Як правило, біспецифічне антитіло містить два антигензв'язуючих сайти, кожен з яких специфічний для певної антигенної детермінанти.
Термін "валентний", що використовується в цій заявці, означає наявність певного числа зв'язуючих доменів в антигензв'язуючій молекулі Як такі, терміни "двовалентний", "чотиривалентний" і "шестивалентний" означають наявність у антигензв'язуючій молекулі, двох зв'язуючих доменів, чотирьох зв'язуючих доменів і шести зв'язуючих доменів, відповідно.
Біспецифічні антитіла відповідно до винаходу є щонайменше "двовалентними" і можуть бути "тривалентними" або "мультивалентними" (наприклад, "чотиривалентними" або "шестивалентними"). У конкретному аспекті антитіла згідно з винаходом мають два або більше сайтів зв'язування і є біспецифічнимиг. Тобто антитіла можуть бути біспецифічними навіть в тих 60 варіантах, коли є більше двох сайтів зв'язування (тобто антитіло є тривалентним або мультивалентним).
Терміни "повнорозмірне антитіло", "інтактне антитіло" і "повне антитіло" використовуються в цьому документі як взаємозамінні для позначення антитіла, що має структуру, по суті подібну зі структурою нативного антитіла. "Нативні антитіла" відносяться до молекул, що зустрічаються імуноглобуліну, які мають різні структури. Наприклад, нативні антитіла (9 являють собою гетеротетрамерні глікопротеїни з молекулярної масою близько 150000 дальтон, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, з'єднаних дисульфідними зв'язками. У напрямку від М- до С-кінця кожний важкий ланцюг має варіабельну область (УН), також звану варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким ідуть три константних домени (СНІ, СН2 і СНЗ), також звані константною областю важкого ланцюга. Аналогічно, від М- до С-кінця кожний легкий ланцюг має варіабельну область (МІ), також звану варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким іде константний домен легкого ланцюга (СІ), також званий константною областю легкого ланцюга. Важкий ланцюг антитіла може бути віднесений до одного з п'яти типів, званих « (ІдА), б (940), є (ЧЕ), у (94) або нм (І9М), деякі з яких можуть бути додатково розділені на підтипи, наприклад ут (Ідс1), у2 (902), уЗ (Ід03), у4 (954), а1 (ІДА1) їі а2 (ІдАг).
Легкий ланцюг антитіла може бути віднесений до одного з двох типів, званих каппа (к) і лямбда (Х), на основі амінокислотної послідовності його константного домену. "Фрагмент антитіла" відноситься до молекули, відмінної від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, яка зв'язує антиген, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіл включають, але не обмежуються ними, Ем, Раб, Раб ЕРаб'-5Н, Е(аб)»г; діатіла, тріатіла, тетратіла, фрагменти сго55РаБб; лінійні антитіла; молекули одноланцюгових антитіл (наприклад, 5сЕм); мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл і однодоменних антитіл. Для огляду деяких фрагментів антитіл див. Нидзоп еї аї., Маї Меса 9, 129- 134 (2003). Для огляду фрагментів 5сЕм див., наприклад, РійсКк(ййп, іп Те РІаптасоїоду ої
Мопосіопаї! Апііроаіев, мої. 113, Возепригу апа Моотге єдвз., Зргіпдег-Мепад, Мем МоїКк, рр. 269-315 (1994); див. також УМО 93/16185; і патенти США Мо Мо 5571894 та 5587458. Для обговорення фрагментів Раб та Е(ар)г, що містять залишки епітопа, який зв'язує рецептор реутилізації, і мають збільшений період напіввиведення іп мімо, див. патент США Мо 5869046. Діатіла представляють собою фрагменти антитіл з двома антигензв'язуючими доменами, що можуть бути двовалентними або біспецифічними, див., наприклад, ЕР 404097; М/О 1993/01161; Ниадзоп еї а!., Маї Меа 9, 129-134 (2003); і НоїІпдег еї а!., Ргос Маї! Асаа 5сі О5А 90, 6444-6448 (1993).
Триатіла та тетратіла також описані в публікації Нидзоп еї аї., Маї. Мей. 9:129-134 (2003).
Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь або частину варіабельного домену важкого ланцюга або весь або частину варіабельного домену легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах здійснення однодоменне антитіло являє собою людське однодоменне антитіло (Юотапії5, Іпс., Уолтем, Массачусетс; див., наприклад., патент США Мо 6248516 В1). Крім того, фрагменти антитіл містять одноланцюгові поліпептиди, що мають характеристики домену МН, а саме, здатність збиратися разом з доменом М, або домену МІ, а саме, здатність збиратися разом з доменом МН у функціональний антигензв'язуючий сайт і тим самим забезпечуючи антигензв'язуючу властивість повнорозмірних антитіл. Фрагменти антитіл можуть бути отримані різними способами, включаючи, але не обмежуючись цим, протеолітичне розщеплення інтактного антитіла, а також продукцію рекомбінантними клітинами-хазяями (наприклад, Е. соїї чи фагом), як описано в цьому документі.
Розщеплення інтактних антитіл папаїном дає два ідентичних антигензв'язуючих фрагмента, званих "гар-фрагментами", кожен з яких містить варіабельні домени важкого і легкого ланцюгів, а також константний домен легкого ланцюга і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. Використовуваний в цьому документі термін "Рар-фрагмент" відноситься до фрагменту антитіла, що містить фрагмент легкого ланцюга, що містить домен МІ. і константний домен легкого ланцюга (СІ), а також домен МН і перший константний домен (СНІ) важкого ланцюга. Раб'-фрагменти відрізняються від БГаб-фрагментів додаванням кількох залишків на карбоксильному кінці СНІ домену важкого ланцюга, включаючи один або більше цистеїнів з шарнірної області антитіла. Гар'ЄЄН являють собою Рар'-фрагменти, в яких залишок (залишки) цистеїну константних доменів мають вільну тіольну групу. Обробка пепсином дає Е(аб')г2- фрагмент, який має два антигензв'язуючих сайти (два РГаб-фрагменти) і частину Ес-області.
Термін "сгоз5-ар фрагмент" або "хРар фрагмент" або "кросоверний Раб-фрагмент" відноситься до Еар-фрагмента, в якому відбувається обмін варіабельних областей, або константних областей важкого і легкого ланцюга. Можливі дві різні композиції ланцюгів кросоверної молекули Раб, які включені в біспецифічні антитіла відповідно до винаходу: З 60 одного боку, варіабельні області важкого і легко ланцюга Раб обмінюються, тобто кросоверна молекула Бар містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області легкого ланцюга (МІ) і константної області важкого ланцюга (СНІ), і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області важкого ланцюга (МН) і константної області легкого ланцюга (СІ). Ця кросоверна молекула Раб також називається Стго55ЕРар (мин. З іншого боку, коли константні області важкого і легкого ланцюга Бар обмінюються, кросоверна молекула Рар містить пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області важкого ланцюга (МН) і константної області легкого ланцюга (СІ), і пептидний ланцюг, що складається з варіабельної області легкого ланцюга ( МІ) і константної області важкого ланцюга (СНІ). Ця кросоверна молекула
Еаь також називається Сговз5Рарб (сі сні). "Одноланцюговий Бабр-фрагмент" або "зсЕбар" являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (МН), константного домену антитіла 1 (СНІ), варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МІ), константного домену легкого ланцюга антитіла (СІ) і лінкера, при цьому зазначені домени антитіл і вказаний лінкер мають один з наступних порядків в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МН-СНІ -лінкер-МІ -СІ, Б) МІ-СІ -лінкер -
МУН-СНІ, с) МН-СЇІ -лінкер-МІ-СНІ або 4) МІ-СНІ -лінкер-УН-СІ; і при цьому зазначений лінкер являє собою поліпептид щонайменше з 30 амінокислот, переважно від 32 до 50 амінокислот.
Зазначені одноланцюгові Рар-фрагменти стабілізуються за допомогою природнього дисульфідного зв'язку між доменом Сі і доменом СНІ. Крім того, ці одноланцюгові молекули
Раб можуть бути додатково стабілізовані шляхом генерації міхланцюгових дисульфідних зв'язків за допомогою вставки залишків цистеїну (наприклад, положення 44 у варіабельній області важкого ланцюга і положення 100 у варіабельній області легкого ланцюга згідно з нумерацією за Кабатом). "Кросоверний одноланцюговий Раб-фрагмент" або "х-зсбар" являє собою поліпептид, що складається з варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (МН), константного домену антитіла 1 (СНІ), варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МІ), константного домену легкого ланцюга антитіла (СІ) і лінкера, при цьому зазначені домени антитіла і вказаний лінкер мають один з наступних порядків в напрямку від М-кінця до С-кінця: а) МН-СІ -лінкер-МІ -СНІ і Б)
МІ-СНІ-лінкер-МН -СІ; при цьому МН і МІ утворюють разом антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з антигеном, і при цьому вказаний лінкер являє собою поліпептид, що містить щонайменше 30 амінокислот. Крім того, ці молекули х-з:сбаью можуть бути додатково стабілізовані шляхом генерації міжланцюгових дисульфідних зв'язків за допомогою вставки залишків цистеїну (наприклад, положення 44 у варіабельній області важкого ланцюга і положення 100 у варіабельній області легкого ланцюга згідно з нумерацією за Кабатом). "Одноланцюговий варіабельний фрагмент (зсЕм)" являє собою злитий білок, що складається з варіабельних областей важкого (Мн) і легкого ланцюгів (Мі) антитіла, з'єднаних з коротким лінкерним пептидом, що містить від 10 до приблизно 25 амінокислот. Лінкер зазвичай багатий гліцином для гнучкості, а також серином або треоніном для розчинності і може або з'єднувати М-кінець Мн з С-кінцем Мі, або навпаки. Цей білок зберігає специфічність вихідного антитіла, незважаючи на видалення константних областей і введення лінкера. зсЕум-антитіла, наприклад, описані в Ноивіоп, 9.5., Меїйоавз іп Епгутої. 203 (1991) 46-96). Крім того, фрагменти антитіл містять одноланцюгові поліпептиди, що мають характеристики домену УН, а саме, здатність збиратися разом з доменом МІ, або домену МІ, а саме, здатність збиратися разом з доменом МН у функціональний антигензв'язуючий сайт і тим самим забезпечуючи антигензв'язуючу властивість повнорозмірних антитіл. "Каркасні антигензв'язуючі білки" відомі в цій галузі техніки, наприклад, фібронектин і сконструйовані білки з анкіриновим повтором (ОАКРіп) були використані в якості альтернативних каркасів для антигензв'язуючих доменів, див., наприклад, Себрацег апа 5Ке!їта,
Епаіпеєегтеєа ргоївїп зсаноїа5 ах пехі-депегаїйоп апіїроду Іпегарешісв. Ст Оріп Спет Віої! 13:245- 255 (2009) і ЗіШштрр еї а!., Оагріпе: А пем/ депегайоп ої ргоївїп Іпегареціїсв. Огид ОРізсомегу Тодау 13:695-701 (2008). В одному аспекті винаходу каркасний антигензв'язуючих білок вибирають з групи, що складається з СТІ А-4 (Емірсау), ліпокалінів (антикалін), молекули, отриманої з білка
А, такої як 7-домен білка А (афітіло), А-домену (Амітег/Махіроду), сироваткового трансферину (транс-тіло); сконструйованого білка з анкіриновим повтором (САРРІПпП), варіабельного домену легкого ланцюга або важкого ланцюга антитіла (однодоменне антитіло, одАт), варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (нанотіло, амН), фрагментів Умая, фібронектину (Аамесіїп), домена лектину С-типу (тетранектин); варіабельного домену нового рецептора антигену бета- лактамази (фрагменти Укмалв), людського гамма-кристаліну або убіквітину (молекули афіліна); домену Кунітц-типу інгібіторів протеази людини, мікротіла, такого як білки з сімейства кноттинів, пептидні аптамери та фібронектин (аднектин). СТІ А-4 (білок 4, асоційований з цитотоксичними 60 Т-лімфоцитами) являє собою рецептор сімейства СО28, що експресується в основному на СО4
4 Т-клітинах. Його позаклітинний домен має конформацію, подібну до варіабельного домена Ід.
Петлі, відповідні до СОК антитіл, можуть бути заміщені гетерологічною послідовністю для додання різних властивостей зв'язування. Молекули СТІ А-4, сконструйовані так, щоб мати різну специфічність зв'язування, також відомі як Емібоду (наприклад, О57166697В81). Еміроду мають приблизно той самий розмір, що і виділена варіабельна область антитіла (наприклад, доменного антитіла). Для отримання додаткової інформації див. Чдоигпа! ої Іттипоіодісаї
Меїноаз 248 (1-2), 31-45 (2001). Ліпокаліни являють собою сімейство позаклітинних білків, які транспортують невеликі гідрофобні молекули, такі як стероїди, біліни, ретиноїди і ліпіди. Вони мають жорстку вторинну структуру типу бета-складчастості з декількома петлями на відкритому кінці конічної структури, які можуть бути сконструйовані для зв'язування з різними цільовими антигенами. Антикаліни мають розмір від 160 до 180 амінокислот і є похідними ліпокалінів. Для отримання додаткової інформації див. Віоспіт Віорпуз Асіа 1482: 337-350 (2000), 05725029781 і 0520070224633. Афітіло являє собою каркас, отриманий з білка А З(арпуіососсив ацйгеив5, який може бути сконструйований для зв'язування з антигеном. Домен складається з триспірального пучка з приблизно 58 амінокислот. Бібліотеки були отримані шляхом рандомізації поверхневих залишків. Для отримання додаткової інформації див. Ргоївіп Епо. Оев. Зеї. 2004, 17, 455-462 і
ЕР 1641818А1. Авімери являють собою мультидоменні білки, отримані з сімейства А-доменного каркаса. Нативні домени розміром приблизно 35 амінокислот набувають певної структури, що зв'язана дисульфідними зв'язками. Різноманітність отримують шляхом перегрупування природних варіацій, які проявляються сімейством А-доменів. Для отримання додаткової інформації див. Маште ВіотесппоЇоаду 23 (12), 1556 - 1561 (2005) і Ехреп Оріпіоп оп Іпмезіідайопаї!
Огидз 16 (6), 909-917 (Уипе 2007). Трансферин являє собою мономерний сироватковий транспортний глікопротеїн. Трансферини можуть бути сконструйовані для зв'язування різних цільових антигенів шляхом введення пептидних послідовностей в пермісивну поверхневу петлю. Приклади сконструйованих трансферинових каркасів включають транс-тіло. Для отримання додаткової інформації див. У. Віої. Спет 274, 24066-24073 (1999). Сконструйовані білки з анкіриновим повтором (ОАКРІП) отримані з анкірина, що відноситься до сімейства білків, які забезпечують прикріплення інтегральних мембранних білків до цитоскелету. Один анкіриновий повтор являє собою мотив з 33 залишків, що складається з двох альфа-спіралей і бета-вигину. Вони можуть бути сконструйовані так, щоб зв'язувати різні цільові антигени шляхом рандомізації залишків в першій альфа-спіралі і бета-вигину кожного повтору. Їхня поверхня зв'язування може бути збільшена шляхом збільшення кількості модулів (спосіб дозрівання афінності). Для отримання додаткової інформації див. У. Мої. Віої. 332, 489-503 (2003), РМАБ5 1004), 1700-1705 (2003) і 9. Мої. Вісі. 369, 1015-1028 (2007) і 05200401320284А1.
Однодоменне антитіло являє собою фрагмент антитіла, що складається з одного мономерного варіабельного домену антитіла. Перші одиничні домени були отримані з варіабельного домену важкого ланцюга антитіла з верблюдів (нанотіла або фрагменти МНН).
Крім того, термін "однодоменне антитіло" включає автономний варіабельний домен важкого ланцюга людини (аУН) або фрагменти Укман, отримані з акул. Фібронектин являє собою каркас, який може бути сконструйований для зв'язування з антигеном. Аднектини складаються з основного ланцюга природної амінокислотної послідовності 10-го домену з 15 повторюваних ланок людського фібронектина типу ШІ (ЕМ3). Три петлі на одному кінці бета-сендвіча можуть бути сконструйовані так, щоб дозволити аднектину специфічно розпізнавати терапевтичну мішень, що представляє інтерес. Для отримання додаткової інформації див. Ргоївіп Епо. Юев. зЗе!. 18, 435-444 (2005), 0520080139791, УМО2005056764 і )5681841881. Пептидні аптамери являють собою комбінаторні молекули розпізнавання, що складаються з константного каркасного білка, зазвичай тіоредоксіна (ТіхА), який містить обмежену варіабельну пептидну петлю, вставлену в активний сайт. Для отримання додаткової інформації див. Ерегі Оріп. Віої.
Тпег. 5, 783-797 (2005). Мікротіла отримані з мікропротеїнів, що зустрічаються в природі, довжиною 25-50 амінокислот, які містять 3-4 цистеїнові містки. Приклади мікропротеїнів включають Каїаїаві, конотоксин і кноттини. Мікропротеїни мають петлю, що може включати до 25 амінокислот, не зачіпаючи загальну складчастість мікропротеїну. Для отримання додаткової інформації про сконструйовані домени ноттина див. УМО2008098796. "Антигензв'язуюча молекула, що зв'язується з тим самим епітопом", що і еталонна молекула, відноситься до антигензв'язуючої молекули, яка блокує зв'язування еталонної молекули з її антигеном у конкурентному аналізі на 50 95 або більше, і навпаки, еталонна молекула блокує зв'язування антигензв'язуючої молекули до її антигена в конкурентному аналізі на 50 95 або більше.
Використовуваний в цьому документі термін "антигензв'язуючий домен" або 60 "антигензв'язуючий сайт" відноситься до частини антигензв'язуючої молекули, яка специфічно зв'язується з антигенною детермінантою. Більш конкретно, термін "антигензв'язуючий домен" відноситься до частини антитіла, що містить область, яка специфічно зв'язується з частиною або повним антигеном і є комплементарною їм. Коли антиген великий, антигензв'язуюча молекула може зв'язуватися тільки з певною частиною антигена, ця частина називається епітопом. Антигензв'язуючий домен може бути забезпечений, наприклад, одним або більше варіаабельними доменами (також званими варіабельними областями). Переважно антигензв'язуючий домен містить варіабельну область легкого ланцюга антитіла (МІ) і варіабельную область важкого ланцюга антитіла (МН). В одному аспекті антигензв'язуючий домен здатен зв'язуватися зі своїм антигеном і блокувати або частково блокувати його функцію
Антигензв'язуючі домени, що специфічно зв'язуються з РОТ або з | АСЗ, включають антитіла і їхні фрагменти, як додатково визначено в цьому документі. Крім того, антигензв'язуючі домени можуть включати каркасні антигензв'язуючі білки, наприклад такі, що зв'язують домени, які засновані на сконструйованих повторюваних білках або сконструйованих повторюваних доменах (див., наприклад, УМО 2002/020565).
Використовуваний в цьому документі термін "антигенна детермінанта" являє собою синонімом "антиген" і "епітоп" і відноситься до сайту (наприклад, безперервної ділянки амінокислот або конформаційної конфігурації, що складається з різних областей несуміжних амінокислот) на макромолекулі поліпептиду, з яким зв'язується антигензв'язуючий фрагмент, утворюючи комплекс антигензв'язуючий фрагмент-антиген. Придатні антигенні детермінанти можуть бути виявлені, наприклад, на поверхнях пухлинних клітин, на поверхнях інфікованих вірусом клітин, на поверхнях інших уражених клітин, на поверхні імунних клітин, в сироватці крові у вільному вигляді, і/або в позаклітинному матриксі (ЕСМ). Білки, що використовуються в якості антигенів в цьому винаході, можуть являти собою будь-яку нативну форму білків з будь- якого джерела, яке відноситься до хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо не вказано інше. У конкретному варіанті здійснення антиген являє собою людський білок. Коли в цьому документі робиться посилання на конкретний білок, цей термін охоплює "повнорозмірний", непроцесований білок, а також будь-яку форму білка, яка є результатом процесингу в клітині. Термін також охоплює варіанти білка, що зустрічаються в природі, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти.
Під "специфічним зв'язуванням" мається на увазі, що зв'язування є селективним для антигена і може бути відокремлене від небажаних або неспецифічних взаємодій. Здатність антигензв'язуючої молекули зв'язуватися зі специфічним антигеном може бути виміряна або за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА), або за допомогою інших способів, відомих фахівцеві в цій галузі техніки, наприклад, за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ППР) (аналіз на приладі ВіАсоге) (І ЩШебіай еї аї., Сіусо 9 17, 323-329 (2000)) і стандартних аналізів зв'язування (НееІеу, Епдосг Кез 28, 217-229 (2002)). В одному варіанті здійснення ступінь зв'язування антигензв'язуючої молекули з неспорідненим білком становить менш ніж близько 10 95 від зв'язування антигензв'язуючої молекули з антигеном, як виміряно, наприклад, за допомогою ППР. У деяких варіантах здійснення молекула, що зв'язується з антигеном, має константу дисоціації (Ка) х 1 мкМ, х 100 НМ, «: 1О НМ, 1 НМ, 0,1 НМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нм (наприклад, 107 М або менше, наприклад, від 107 М до 10-3 М, наприклад, від 109 М до 1073 М). "Афінність" або "афінність зв'язування" відноситься до сили загальної суми нековалентних взаємодій між одним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитілом) і його партнером по зв'язуванню (наприклад, антигеном). Якщо не вказано інше, як використовується в цьому документі, "афінність зв'язування" відноситься до внутрішньої афінності зв'язування, яка відображає взаємодію 1: 1 між членами пари зв'язування (наприклад, антитілом і антигеном).
Афінність молекули Х до її партнеру У зазвичай може бути представлена константою дисоціації (Ка), яка є відношенням констант швидкості дисоціації і асоціації (Кої і Коп, відповідно). Таким чином, еквівалентні афінності можуть включати різні константи швидкості, за умови, що співвідношення констант швидкості залишається незмінним. Афінність може бути виміряна загальноприйнятими способами, відомими в цій галузі техніки, у тому числі описаними в цьому документі. Конкретним способом вимірювання афінності є поверхневий плазмонний резонанс (ППР).
Використовуваний в цьому документі термін "висока афінність" антитіла відноситься до антитіла, що має для цільового антигена Ка 109 М або менше, а ще більш конкретно, 1079 М або менше. Термін "низька афінність" антитіла відноситься до антитіла, що має Ка 108 або вище.
Антитіло з "дозрілою афінністю" відноситься до антитіла з однією або більше змінами в одній або більше гіперваріабельних ділянках (НМК) порівняно з вихідним антитілом, яке не 60 містить таких змін, такі зміни, призводять до підвищення афінності антитіла до антигена.
Терміни "біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ГАЗ", "біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з РОЇ і ГАС3", "біспецифічна антигензв'язуюча молекула, специфічна для РОТ, і ГАЗ "або" анти-РО1/анти-І| АОЗ антитіло" використовуються в цьому документі як взаємозамінні і відносяться до біспецифічного антитіла, яке здатне пов'язувати РОЇ і ГАЗ з достатньою афінністтю, так що антитіло може використовуватися в якості діагностичного та/або терапевтичного агента при націлювання на
РОТІ ГАСЗ.
Термін "РО1", також відомий як білок запрограмованої загибелі клітин 1, являє собою мембранний білок типу І з 288 амінокислот, який був вперше описаний в 1992 році (Ізйіда еї аї.,
ЕМВО .., 11 (1992), 3887-3895). РО-1 є членом розширеного сімейства регуляторів Т-клітин
СО28/СТІ А-4 і має два ліганда, РО-І 1 (87-НІ1І, СО0274) і РО-І2 (87-ОС, СО273). Структура білка включає позаклітинний домен Ідм, за яким іде трансмембранна область і внутрішньоклітинний хвіст. Внутрішньоклітинний хвіст містить два сайти фосфорилювання, розташованих в імунорецепторному тирозиновому інгібуючому мотиві і імунорецепторному тирозиновому перемикаючому мотиві, що свідчить про те, що РО-1 негативно регулює сигнали ТКР. Це узгоджується зі зв'язуванням фосфатаз 5НР-1 ії ЗНР-2 з цитоплазматичним хвостом РО-1 при зв'язуванні ліганда. Хоча РО-1 не експресується на наївних Т-клітинах, його експресія підвищується після активації опосередкованої Т-клітинним рецептором (ТКР), їі він спостерігається як на активованих, так і на виснажених Т-клітинах (Адаїа еї аї., Іпї. Іттипоїіоду 8 (1996), 765-772). Ці виснажені Т-клітини мають дисфункціональний фенотип і нездатні відповісти відповідним чином. Хоча РО-1 має відносно широкий патерн експресії, його найбільш важлива роль, ймовірно, полягає в тому, що він є коінгібіруючим рецептором Т-клітин (Спіпаї єї а!І., Ттепав іп Рнаптасоіодіса! бсіепсез 36 (2015), 587-595). Таким чином, сучасні терапевтичні підходи спрямовані на блокування взаємодії РО-1 з його лігандами для посилення Т-клітинної відповіді. Терміни "запрограмована загибель клітин 1", "запрограмована смерть клітин 1", "білок
РОТ", "РО-1", "РО1", "рОСО1", "ПРО-1" ї "ПиРО-І" можуть використовуватися як взаємозамінні і включають варіанти, ізоформи, видові гомологи людського РО-1ї і аналоги, які мають щонайменше один загальний епітоп з РО-1. Амінокислотна послідовність людського РО наведена в ОпіРгої (м/млу. ипіргої.огу), номер доступу 015116 (ЗЕО ІО МО: 128).
Терміни "анти-?РОЇ антитіло" і "антитіло, що містить антигензв'язуючий домен, який зв'язується з РОТ" відносяться до антитіла, яке здатне зв'язувати РОЇ, особливо поліпептид
РОТ, що експресується на поверхні клітини, з достатньою афінністтю, так що антитіло може використовуватися в якості діагностичного і/або терапевтичного агента при націлювання на
РОТ. В одному аспекті ступінь зв'язування анти-РО1 антитіла з неспоріднених білком, які не є
РОТ, становить менш ніж близько 10 95 від зв'язування антитіла з РО, як виміряно, наприклад, за допомогою радіоіїмуноаналіза (РІА) або проточної цитометрії, що включає флюоресцентно- активоване сортування клітин (БАС5), або за допомогою аналізу методом поверхневого плазмонного резонансу з використанням біосенсорної системи, такої як система ВіасогеФ. У конкректних аспектах антигензв'язуючий білок, який зв'язується з людським РО, має значення
Ко афінності зв'язування для зв'язування з людським РОТ «х 1 мкМ, х 100 НМ, « ТО НМ, «1 НМ, х 0,1 нМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 109 М або менше, наприклад, від 109 М до 1073 М, наприклад, від 109 М до 10-33 М). В одному кращому варіанті здійснення відповідне значення Ко афінності зв'язування визначають в аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу з використанням позаклітинного домену (ЕСО) людського РОЇ (РО1-ЕСО) для афінності зв'язування РО1. Термін "анти-?РО1 антитіло" також охоплює біспецифічні антитіла, які здатні зв'язувати РОЇ і другий антиген.
Терміни "ГАсС3" або "І ад-3" або "ген активації лімфоцитів 3" або "СО223", використовувані в цьому документі, відносяться до будь-якого нативного ГАСЗ з будь-якого джерела, що відноситься до хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші та щури), якщо не вказано інше. Термін охоплює "повнорозмірний" непроцесований ГАЗ, а також будь-яку форму ГАСЗ, отриману в результаті процесингу в клітині. Термін охоплює також варіанти ГАСЗ3, які зустрічаються в природі, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. В одному кращому варіанті здійснення термін "ГАЗ" відноситься до людського ГАЗ. Амінокислотна послідовність типового процесованого (без сигнальних послідовностей) І АСЗ наведена в 5ЕО І МО: 73. Амінокислотна послідовність типового позаклітинного домену (ЕСО) ГАЗ наведена в ЗЕО ІЮО МО: 74.
Терміни "анти-І ДОЗ антитіло" і "антитіло, що зв'язується з | АСЗ" відносяться до антитіла, яке здатне зв'язувати І АСЗ з достатньою афінністтю, так що антитіло може використовуватися в 60 якості діагностичного та/або терапевтичного агента при націлювання на І АС3. В одному аспекті ступінь зв'язування анти-ЇАСЗ антитіла з неспоріднених білком, який не є ГАЗ, становить менш ніж близько 10 95 від зв'язування антитіла з | АС3З, як виміряно, наприклад, за допомогою радіоїмуноаналіза (РІА). У деяких варіантах здійснення антитіло, яке зв'язується з ГАЗ, має константу дисоціації (Ка) х 1 мкМ, х 100 НМ, «: 1О НМ, 1 НМ, 0,1 НМ, «х 0,01 нМ або х 0,001 нм (наприклад , 109 М або менше, наприклад, від 109 М до 10-33 М, наприклад, від 109 М до 10-13
М). У певних аспектах анти-І АСЗ антитіло зв'язується з епітопом І АСЗ, який є консервативним серед ГАЗ від різних видів. В одному кращому варіанті здійснення "анти-Г АСЗ антитіло", "антитіло, що специфічно зв'язується з ГАСЗ людини" і "антитіло, яке зв'язується з І ДОЗ людини" відноситься до антитіла, що специфічно зв'язується з антигеном ГАСЗ людини або його позаклітинним доменом (ЕСО) з афінністтю зв'язування зі значенням Ко 1,0 х 108 моль/л або нижче, в одному варіанті здійснення із значенням Ко 1,0 х 109 моль/л або нижче, в одному варіанті здійснення із значенням Ко від 1,0 х 1029 моль/л до 1,0 х 10-33 моль/л. У цьому контексті афінність зв'язування визначають за допомогою стандартного аналізу зв'язування, такого як метод поверхневого плазмонного резонансу (ВіАсогеб, СЕ-Неайпсаге Уппсала, Швеція), наприклад, з використанням позаклітинного домену ГАЗ. Термін "анти-Г АСЗ антитіло" також охоплює біспецифічні антитіла, які здатні зв'язувати І АСЗ і другий антиген. "Блокуюче" антитіло або "антагоністичне" антитіло являє собою антитіло, що пригнічує або знижує біологічну активність антигена, який воно зв'язує. У деяких варіантах блокуючі антитіла або антагоністичні антитіла по суті або повністю пригнічують біологічну активність антигена.
Наприклад, біспецифічні антитіла відповідно до винаходу блокують сигналінг через РО-1 і
ГАСЗ3, щоб відновити функціональну відповідь Т-клітин (наприклад, проліферацію, продукцію цитокінів, знищення цільових клітин) з дисфункціонального стану на стимуляцію антигеном.
Термін "варіабельна область" або "варіабельний домен" відноситься до домену важкого або легкого ланцюга антитіла, який приймає участь у зв'язуванні антигензв'язуючих молекули з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ, відповідно) нативного антитіла зазвичай мають подібні структури, при цьому кожен домен містить чотири консервативні каркасні області (ЕК) і три гіперваріабельні області (НУК). Див., наприклад, Кіпаї еї аї., Киру Іттипоїіоду, 61й ед., М.Н. Егеетап апа Со., раде 91 (2007). Одного домену МН або
МІ. може бути достатньо для надання антигензв'язуючої специфічності.
Використовуваний в цьому документі термін "гіперваріабельна область" або "НМК" відноситься до кожної з областей варіабельного домену антитіла, які є гіперваріабельні за послідовностю та/або утворюють структурно певні петлі (тіперваріабельні петлі"). Як правило нативні чотириланцюгові антитіла містять шість НМЕ; три в МН (НІ, Н2, НЗ)ітри вм (І1, 12,
Ї3). НМК зазвичай містять амінокислотні залишки з гіперваріабельних петель та/або з "областей, що визначають комплементарність" (СОК), при цьому останні мають найвищу варіабельність послідовності і/або беруть участь у розпізнаванні антигена. Типові гіперваріабельні петлі розташовуються у амінокислотних залишків 26-32 (І 1), 50-52 (12), 91-96 (3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2), ї 96-101 (НЗ). (Споїйіа апа І е5К, У. Мої. Вісі. 196:901-917 (1987).)
Типові СОК (СОК-І1, СОВ-І2, СОВ-І3, СОВ-НІ, СОВ-Н2, і СОК-НЗ3) розташовуються у амінокислотних залишків 24-34 І 1, 50-56 І 2, 89-97 І 3, 31-358 НІ, 50-65 Н2 і 95-102 НЗ. (Кабаї єї а!., Зедоепсез ої Ргоївіпв ої Іттипоіодісаї Іпіегеві, Бій Еа. Рибріїс Неацй 5егмісе, Маїйопаї Іпзійшев ої Неай, Веїпезаа, МО (1991).) Гіперваріабельні області (НМВ) також називають областями, що визначають комплементарність (СОР) і ці терміни використовуються в цьому документі як взаємозамінні щодо частин варіабельної області, які утворюють антигензв'язуючі області. Ця конкретна область була описана Кабраї еї аІ., Ш.5. Оері. ої Неайй апа Нитап 5егмісев5, "Бедепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодісаї! Іпієгевзі" (1983) і Споїніа еї аї!., У. Мої. Віої. 196:901-917 (1987), при цьому визначення включають амінокислотні залишки, що перекриваються, або підмножини амінокислотних залишків при порівнянні один з одним. Проте, передбачається, що застосування будь-якого визначення для посилання на СОК антитіла або його варіантів знаходиться в межах обсягу терміна, визначеного і використовуваного в цьому документі.
Відповідні амінокислотні залишки, які охоплюють СОК, як визначено в кожному з наведених вище посилань, наведені нижче в Таблиці А як порівняння. Точні числа залишків, які охоплюють конкретні СОК, будуть варіюватися в залежності від послідовності і розміру СОК. Фахівці в цій галузі техніки можуть зазвичай визначати, які залишки складають конкретну СОК, враховуючи амінокислотну послідовність варіабельної області антитіла.
Таблиця А
Визначення СОВ! 1 Нумерація всіх визначень СОР в Таблиці А відповідає системам нумерацій, викладеним
Кавбаї еї а. (див. нижче). 2"АрМ" з малої літери "Б", як використовується в Таблиці А, відноситься до СОР, як визначено за допомогою програмного забезпечення для моделювання антитіл "АВМ" від
Охгога Моїіесшіаг.
Кабаї еї а!. також склали систему нумерації послідовностей варіабельної області, яка може бути застосована до будь-якого антитіла. Фахівець у цій галузі техніки може однозначно використати цю систему "нумерації за Кабатом" для будь-якій послідовності варіабельної області, не покладаючись на будь-які експериментальні дані, крім самої послідовності.
Використовуваний в цьому документі термін "нумерація за Кабатом" відноситься до системи нумерації, встановленої Кабаї еї аІ., 0.5. ЮОері. ої Неайй апа Нитап 5бегмісе5, "Зедиепсе ої
Ргоївіп5 ої Іттипоїодіса! Іпіеге5Її" (1983). Якщо не вказано інше, посилання на нумерацію конкретних положень амінокислотних залишків у варіабельній області антитіла відповідають системі нумерації за Кабатом.
За винятком СОКІ! в МН, СОК зазвичай містять амінокислотні залишки, які утворюють гіперваріабельні петлі. СОК також містять "визначаючі специфічність залишки" або "БО", які являють собою залишки, які зв'язуються з антигеном. 5ОК містяться в областях СОК, званих вкороченими СОК, або а-СОК. Типові а-СОВ (а-СОВ-І1, а-СОВ-12, а-СОВ-І3, а-СОВ-НІ, а-
СОВ-Н2 ї а-СОВ-Н3З) розташовуються із амінокислотними залишками 31-34 11, 50-55 12, 89-96
ІЗ, 31-358 НІ, 50-58 Н2 ї 95-102 НЗ. (Див. АІтадго апа Егапе5зоп, Егопі. Віозсі. 13:1619-1633 (2008).) Якщо не вказано інше, залишки НМК і інші залишки у варіабельному домені (наприклад, залишки ЕК) пронумеровані в цьому документі згідно Карбаї еї аї. "Каркасна область" або "РК" відноситься до залишків варіабельного домену, що відрізняються від залишків гіперваріабельної області (НМК). ЕК варіабельного домену зазвичай складається з чотирьох доменів ЕК: ЕК, ЕК2, ЕКЗ і ЕКА4. Відповідно, послідовності НМК і ЕК, як правило, розташовуються в наступному порядку в МН (або М): ЕК1-НІ1(11)-ЕВ2-НІ(І2)-ЕВЗ-
НЗ(Г3)-ЕНА. "Акцепторна людська каркасна область" для цілей цього винаходу являє собою каркасну область, що містить амінокислотну послідовність каркасної області варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркасної області варіабельного домену важкого ланцюга (МН), отриману з каркасної області імуноглобуліну людини або людської консенсусної каркасної області, як визначено нижче. Акцепторна людська каркасна область, "отримана з" каркасної області імуноглобуліну людини або людська консенсусна каркасна область, може містити таку ж амінокислотну послідовність або може містити зміни амінокислотної послідовності. У деяких варіантах здійснення число замін амінокислот становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, 3 або менше або 2 або менше. У деяких варіантах здійснення послідовність акцепторної людської каркасної області МІ ідентична з послідовністю каркасної області МІ людського імуноглобуліну або людської консенсусної каркасної області.
Термін "химерне" антитіло відноситься до антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга отримана з конкретного джерела або виду, в той час як залишок важкого і/або легкого ланцюга отримано з іншого джерела або виду. "Клас" антитіла відноситься до типу константного домену або константної області, що належить його важкому ланцюгові. Існує п'ять основних класів антитіл: ІдА, дО, ІДЕ, Ід, і ІДМ, ії деякі з них можуть бути далі розділені на підкласи (ізотипи), наприклад, Іде, да», ІдСз, Ід,
ІА, і ІдА». Константні домени важкого ланцюга, які відповідають різним класам імуноглобулінів,
називаються с, 5, є, у, і М, відповідно. "Гуманізоване" антитіло відноситься до химерних антитіл, що містить амінокислотні залишки з нелюдських НМК і амінокислотні залишки з людських ЕК. У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло буде містити по суті все з щонайменше одного і, як правило, двох варіабельних доменів, в яких всі або по суті всі НМК (наприклад, СОК) відповідають таким з антитіл нелюдського походження, і всі або по суті всі ЕК відповідають таким з людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити щонайменше частину константної області антитіла, отриманої з людського антитіла. "ЧГуманізована форма" антитіла, наприклад нелюдського антитіла, відноситься до антитіла, яке піддали гуманізації. Іншими формами "гуманізованих антитіл", які охоплюються цим винаходом, є ті, в яких константна область була додатково модифікована або змінена в порівнянні з формою вихідного антитіла для створення властивостей відповідно до винаходу, особливо щодо зв'язування С14 і/або зв'язування Ес- рецептора (ЕсК). "Людське" антитіло являє собою антитіло, що має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності антитіла, що продукується організмом людини або клітиною людини, або отриманого з джерела, відмінного від людини, яке використовує репертуари антитіл людини або інші послідовності, що кодують антитіла людини. Таке визначення людського антитіла явно виключає гуманізоване антитіло, що містить нелюдські антигензв'язуючі залишки.
Використовуваний в цьому документі термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, отриманого з популяції по суті однорідних антитіл, тобто окремі антитіла, що входять до складу популяції, є ідентичними та/або зв'язують один і той самий епітоп, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад, що містять мутації, що зустрічаються в природі або виникають під час отримання препарату моноклонального антитіла, такі варіанти зазвичай присутні в невеликих кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, що зазвичай включають різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклональних антитіл направлено проти однієї детермінанти на антигені.
Таким чином, визначення "моноклональний" вказує на характеристику антитіла, яке отримане по суті з однорідної популяції антитіл, і не повинно бути витлумачено як необхідність отримання антитіла яким-небудь конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла для використання відповідно до цього винаходу можна отримати за допомогою різних способів, включаючи, без обмежень, метод гібридоми, методи рекомбінантних ДНК, методи фагового дисплея і способи з використанням трансгенних тварин, що повністю або частково містять локуси людського імуноглобуліну, при цьому такі способи і інші типові способи отримання моноклональних антитіл описані в цьому документі.
Термін "Ес-домен" або "Ес-область" в цьому описі використовується для визначення С- кінцевої області важкого ланцюга антитіла, що містить щонайменше частину константної області. Термін включає нативні послідовності Ес-області і варіанти Ес-областей. Зокрема, Ес- область важкого ланцюга людського ЇД знаходиться в межах від Суз226 або від Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак, Ес-область може містити або не містити С- кінцевий лізин (Гуз447). Амінокислотні послідовності важких ланцюгів завжди представлені С- кінцевим лізином, проте варіанти без С-кінцевого лізину включені до винаходу.
Ес-область дО містить домен СНІ Ідс і домен СНЗ Ід. "Домен СН2" Ес-області людського дО зазвичай знаходиться в межах від амінокислотного залишку в положенні близько 231 до амінокислотного залишку в положенні близько 340. В одному варіанті здійснення вуглеводний ланцюг з'єднано з доменом СНІ. У цьому документі домен СН2 може являти собою домен СН2 з нативної послідовністю або варіант домену СН2. "Домен СНЗ" містить ділянку із залишками С- кінця до домену СН2О в Ес-області (тобто від амінокислотного залишку приблизно в положенні 341 до амінокислотного залишку приблизно в положенні 447 дб). Область СНЗ3 в цьому документі може являти собою домен СНЗ з нативної послідовністю або варіант домену СНЗ (наприклад, домен СНЗ з введеним "випинанням" ("виступом") в одному його ланцюзі і відповідною введеною "порожниною" ("отвором") в іншому його ланцюзі; див. патент США Мо 5821333, який включений в цей документ за допомогою посилання). Такі варіанти доменів СНЗ можуть бути використані для прискорення гетеродімерізації двох неїідентичних важких ланцюгів антитіл, як описано в цьому документі. Якщо не вказано інше, нумерація амінокислотних залишків в Ес-області або константної області здійснюється відповідно до системи нумерації
Е), також званої індексом Є), як описано в КавБбаї еї аїЇ., ЗХедоепсез ої Ргоїеіпз ої Іттипоіодіса!
Іптегезі, Бій Ей. Рибіїс Неацй 5егуісе, Маїйопаї Іпвійшез ої Неайн, Веїпезаа, МО, 1991.
Технологія "виступ-в-отвір" описана, наприклад, в 05 5731168; 005 7695936; Віаддугау еї аї.,
Ргої Епу 9, 617-621 (1996) і Сапег, У Іттипої Меїп 248, 7-15 (2001). Зазвичай спосіб включає 60 введення випинання ("виступу") на поверхні зв'язування першого поліпептиду і відповідної порожнини ("отвора") на поверхні взаємодії другого поліпептиду, так що випинання може бути розташоване в порожнині так, що сприяє утворенню гетеродимера і перешкоджає утворенню гомодимеру. Випинання конструюють шляхом заміни невеликих бічних ланцюгів амінокислот з поверхні зв'язування першого поліпептиду більшими бічними ланцюгами (наприклад, тирозином або триптофаном). Компенсаторні порожнини ідентичного або схожого розміру з випинаннями створюються на поверхні взаємодії другого поліпептиду шляхом заміни великих бічних ланцюгів амінокислот дрібнішими (наприклад, аланіном або треоніном). Випинання і порожнина можуть бути отримані шляхом зміни нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептиди, наприклад, за допомогою сайт-специфічного мутагенезу або пептидного синтезу. У конкретному варіанті здійснення модифікація виступу включає амінокислотну заміну ТЗ6бУМ в одній з двох субодиниць Ес-домену, а модифікація отвору включає амінокислотні заміни 73665, ІЗ68А і
У407М в інший з двох субодиниць ЕРс-домену. У ще одному конкретному варіанті здійснення субодиниця Ес-домену, що містить модифікацію виступу, додатково містить амінокислотну заміну 5354С, а субодиниця Ес-домену, що містить модифікацію отвора, додатково містить амінокислотну заміну 3490. Введення цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес-області, таким чином, додатково стабілізуючи димер (Сапег, У) Іттипої! Меїносдз 248, 7-15 (2001)).
Передбачається, що "область, яка еквівалентна Ес-області імуноглобуліну" включає алельні варіанти Ес-області імуноглобуліну, що зустрічаються в природі, а також варіанти, які мають зміни, які викликають заміни, додавання або делеції, але які суттєво не знижують здатність імуноглобуліну опосередковувати ефекторні функції (наприклад, антитілозалежну клітинну цитотоксичність). Наприклад, одна або більше амінокислот можуть бути видалені з М-кінця або
С-кінця Ес-області імуноглобуліну без істотної втрати біологічної функції. Такі варіанти можуть бути обрані відповідно до загальних правил, відомих у цій галузі техніки, таким чином, щоб надавати мінімальний вплив на активність (див., наприклад, Воуле, 4). О. еїаї., Зсіепсе 247:1306- 10 (1990)).
Термін "ефекторні функції" відноситься до тих біологічних активностей, пов'язаних з Ес- областю антитіла, які змінюються в залежності від ізотипу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіл включають: зв'язування Сід і компліментзалежну цитотоксичність (КЗЦ); зв'язування з Ес-рецептором; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ); антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АЗКФ); секрецію цитокінів, опосередковане імунним комплексом поглинання антигену антигенпрезентуючими клітинами, зниження експресії клітинних поверхневих рецепторів (наприклад, В-клітинного рецептора) і В-клітинну активацію. "Активуючий Ес-рецептор" являє собою Ес-рецептор, який після захоплення Ес-областю антитіла викликає сигнальні події які стимулюють несучу рецептор клітку для виконання ефекторних функцій. Активуючі Ес-рецептори включають ЕсуВШа (СО1ба), Есуві (С0О64),
ЕсуВПа (С032), і ЕсаВІ (СО89). Конкретним активуючим Ес-рецептором є людський ЕсувВШа (див. ОпіРтгої, номер доступу Мо РО8637, версія 141).
Термін "пептидний лінкер" відноситься до пептиду, який містить одну або більше амінокислот, зазвичай близько 2-20 амінокислот. Пептидні лінкери відомі в цій галузі техніки або описані в цьому документі. Відповідними неімуногенними лінкерними пептидами є, наприклад, пептидні лінкери ((545)п, (504)п або б4 (504), де "п" зазвичай являє собою число від 1 до 10, як правило, від 2 до 4, зокрема, 2, тобто пептиди, вибрані з групи, що складається з бО5О5 (5ЕО
ІЮ МО: 129у ссса5Басосе (5БО 10 МО: 130) 5оообоБ5ОСоС (5БО ІО МО: 131) і ссосвососвБОоОсОсо (5БО ОО МО: 132), але також включають послідовності ОБРО5555055 (З5ЕО ІЮ МО: 133), (45) з (ЗЕО ІО МО: 134), (245) « (ЗЕО ІЮ МО: 135), ОБО БИБОИБ5 (5ЕО І МО: 136), ОБОБОМИ5 (5ЕО ІЮ МО: 137), СЯБОВИБО (5ЕО І МО: 138), СОЯБОВО (5ЕО І МО: 139), со5О (5ЕО ІЮО МО: 140), сОо5ОМОо5О (5ЕБО ІЮО МО: 141), бОМОо5О5О (5БО ІО МО: 142) і соМО5О (5ЕБЕО ІЮ МО: 143). Пептидними лінкерами, що представляють особливий інтерес є 5О0 (245) (5ЕО ІЮ МО: 129), (с45)»2 або ООСОС5ОСОО5 (ЗЕО ІЮ МО: 130), (245)з (ЗЕО ІЮ МО: 134) і (С45)4 (ЗЕО ІО МО: 135), зокрема, (б45)2 або ОССОс5ОСОО5 (5БЕО ІЮО МО: 130).
Термін "злитий з" або "зв'язаний з" означає, що компоненти (наприклад, антигензв'язуючих домен і ЕС-домен) зв'язані пептидними зв'язками або безпосередньо, або через один або більше пептидних лінкерів.
Термін "амінокислота" що використовується в цій заявці, позначає групу карбокси-а- амінокислот, які зустрічаються в природі, що містять аланін (трилітерний код: аа, однолітерний код: А), аргінін (агу, К), аспарагін (азп, М), аспарагінову кислоту (азр, 0), цистеїн (сув, С), глутамін (діп, 0), глутамінову кислоту (дій, Е), гліцин (діу, б), гістидин (Пів, Н), ізолейцин (Пе, І), лейцин (Іеи, У), лізин (уз, К), метіонін (теї, М), фенілаланін (ре, Е), пролін (рго, Р), серин (зег, 60 5), треонін (ІНг, Т), триптофан (ігр, УМ), тирозин (ІУг, У), і валін (маї, М).
"Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" щодо послідовності еталонного поліпептиду (білка) визначається як відсоткова частка амінокислотних залишків в кандидатній послідовності, які ідентичні амінокислотним залишкам в послідовності еталонного поліпептиду після вирівнювання послідовності і внесення, у разі потреби, гепів для досягнення максимальної процентної ідентичності послідовностей, але без урахування будь-яких консервативних замін як частини ідентичності послідовностей. Вирівнювання в цілях визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей може здійснюватися різними способами, які відомі фахівцеві в цій галузі техніки, наприклад, з використанням загальнодоступного комп'ютерного програмного забезпечення, такого як ВІ АТ, ВІ А5Т-2, АГІСМ. 5АММІ або програмного забезпечення Медаїїдп (ОМАБТАК). Фахівці в цій галузі техніки можуть визначити відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Однак для цілей цього винаходу значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей генеруються з використанням комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГІСМ-2. Комп'ютерна програма для порівняння послідовностей АГІОМ-2 розроблена компанією Сепепіесі! Іпс., і вихідний код було подано разом з документацією користувача в Бюро реєстрації авторських прав США, Вашингтон, округ Колумбія, 20559, де вона зареєстрована під Мо реєстрації авторського права США ТХО510087. Програма АГІОМ-2 знаходиться у вільному доступі в
Сепепіесі, Іпс., Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія, або її можна скомпілювати з вихідного коду. Для застосування в операційній системі ОМІХ, що включає цифрову версію ОМІХ
У4.0О0, програму АГІОМ-2 слід скомпілювати. Усі параметри порівняння послідовностей встановлюються програмою АГІОМ-2 і залишаються незмінними. У тих випадках, коли для порівняння амінокислотних послідовностей використовується АГІСМ-2, 95 ідентичності амінокислотної послідовності цієї амінокислотної послідовності А до, з, або по відношенню до цієї амінокислотної послідовності В (що в альтернативному варіанті може бути сформульоване як ця амінокислотна послідовність А, яка має або містить певний 95 ідентичності амінокислотної послідовності до, з або по відношенню до цієї амінокислотної послідовності В) розраховують наступним чином: 100 помножити на співвідношення Х/У, де Х являє собою число амінокислотних залишків, які оцінювались програмою вирівнювання послідовностей АГІСМ-2 як ідентичні співпадання при програмному вирівнюванні А і В, і де У являє собою загальну кількість амінокислотних залишків в В. Слід розуміти, що якщо довжина амінокислотної послідовності А не дорівнює довжині амінокислотної послідовності В,9о ідентичності амінокислотних послідовностей А до В не дорівнює 95 ідентичності амінокислотних послідовностей В до А. Якщо спеціально не вказано інше, всі значення 95 идентичності амінокислотної послідовності, які використовується в цьому документі, отримують, як описано в попередньому абзаці з використанням комп'ютерної програми АГІСМ-2.
У певних аспектах розглядаються варіанти амінокислотних послідовностей біспецифічних антитіл згідно винаходу, представлених у цьому документі. Наприклад, може бути бажано покращити афінність зв'язування і/або інші біологічні властивості біспецифічних антитіл.
Варіанти амінокислотних послідовностей біспецифічних антитіл можуть бути отримані шляхом введення відповідних модифікацій в нуклеотидну послідовність, що кодує молекули, або шляхом пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції , та/або вставки, та/або заміни залишків в амінокислотних послідовностях антитіла. Будь-яка комбінація делеції, вставки і заміни може бути зроблена для досягнення кінцевого конструкту, за умови, що кінцевий конструкт має бажані характеристики, наприклад, зв'язування антигену. Сайти для мутагенезу з замінами, що представляють інтерес включають НМК і каркасні області (ЕВ).
Консервативні заміни представлені в Таблиці В під заголовком "Кращі заміни" і додатково описані нижче з посиланням на класи амінокислотних бічних ланцюгів (1) - (6). Амінокислотні заміни можна вводити в молекулу, що представляє інтерес, і проводити скринінг отриманих продуктів щодо необхідної активності, наприклад, збереженого/покращеного зв'язування антигена, зниженої імуногенності або покращеної АЗКЦ або КЗЦ.
Таблиця В залишок заміни заміни
Таблиця В залишок заміни заміни
Ше() 11111111 |Сеш;МаМесАа; Рпеснорлейцин.///// Пе цец(Ю 7771111 |Норлейцинойе Ма; МесАювіРйєї Ме С
Амінокислоти можуть бути згруповані у відповідності до загальних властивостей бічного ланцюга: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, І ей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Су, зег, ТНг, Азп, Сп; (3) кислотні: Ар, СІМ; (4) основні: Нів, Гуз, Аго; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюгів: Су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ре.
Неконсервативні заміни включають заміщення представника одного з цих класів іншим класом.
Термін "варіанти амінокислотної послідовності" включає істотні варіанти, в яких є амінокислотні заміни в одному або більше залишках гіперваріабельної області вихідної антигензв'язуючої молекули (наприклад, гуманізованого або людського антитіла). Як правило, отриманий варіант (и), обраний () для подальшого вивчення, матиме (уть) модифікації (наприклад, покращення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищену афінність, знижену імуногенність) в порівнянні з вихідним антитілом, і/або буде мати по суті збережені певні біологічні властивості вихідної антигензв'язуючої молекули. Типовий варіант заміни являє собою антитіло з дозрілої афінністтю, яке може бути легко отримано, наприклад, із застосуванням методів дозрівання на основі фагового дисплея, таких як ті, що описані в цьому документі. Якщо коротко, один або більше залишків НМК піддають мутації, і варіанти антигензв'язуючих молекул відображаються на фагові та піддають скринінгу на предмет певної біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування). У деяких варіантах здійснення заміни, вставки або делеції можуть відбуватися в одній або більше НМК, за умови, що такі зміни суттєво не знижують здатність антигензв'язуючих молекули зв'язувати антиген. Наприклад, у
НМК можна робити консервативні заміни (наприклад, консервативні заміни, запропоновані в цьому документі), які суттєво не знижують афінність зв'язування. Корисний метод ідентифікації залишків або областей антитіла, які можуть бути мішенями для мутагенезу, називається "аланін-скануючим мутагенезом", як описано Сиппіпдайат апа Умеїї5 (1989) 5сіепсе, 244: 1081- 1085. У цьому способі залишок або група цільових залишків (наприклад, заряджені залишки, такі як Агод, Авр, Ні, Гуз і СІмш) ідентифікуються і замінюються нейтральною або негативно зарядженоїю амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном) з метою визначити, чи впливає це на взаємодію антитіла з антигеном. Додаткові заміни можуть бути внесені в ті розташування амінокислот, які проявляли функціональну чутливість до початкових замін.
Альтернативно або додатково, кристалічна структура комплексу антиген-антигензв'язуюча молекула дозволяє ідентифікувати точки контакту між антитілом і антигеном. Такі контактні залишки й сусідні залишки можуть бути використані в якості мішеней або виключені в якості кандидатів на заміщення. Можна проводити скринінг варіантів, щоб визначити, чи мають вони необхідні властивості.
Амінокислотні вставки включають аміно- і/або карбокси-кінцеві злиття з діапазоном довжини від одного залишку до поліпептидів, що містять сто або більше залишків, а також вставки одного або більше амінокислотних залишків всередині послідовності. Приклади кінцевих вставок включають біспецифічні антитіла з М-кінцевим залишком метіоніла. Інші інсерційні варіанти молекули включають злиття з М- або С-кінцем з поліпептидом, яке збільшує період напіввиведення в сироватці біспецифічного антитіла.
У певних аспектах біспецифічні антитіла, представлені в цьому документі, змінюють для збільшення або зменшення ступеня, до якого антитіло є глікозильованим. Варіанти глікозильованих молекул можуть бути легко отримані шляхом зміни амінокислотної послідовності таким чином, що створюється або видаляється один або більше сайтів глікозилювання, наприклад вуглеводи, приєднані до Ес-домену, можуть бути змінені. Нативні антитіла, що продукуються клітинами ссавців, зазвичай містять розгалужений біантенний олігосахарид, який зазвичай приєднується за допомогою М-зв'язку до Азп297 домену СН2 Ес- області. Див., наприклад, М/гідні еї аІ. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997). Олігосахарид може включати різні вуглеводи, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (СіІсМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СісМАс в "стовбурі" біантенної олігосахаридної структури. У деяких варіантах здійснення модифікації олігосахариду в біспецифічних антитілах відповідно до винаходу можуть бути зроблені для створення варіантів з певними покращеними властивостями. В одному аспекті запропоновано варіанти біспецифічних антитіл, що мають вуглеводну структуру, в якій відсутня фукоза, що приєднується (прямо чи опосередковано) до
Ес-області. Такі варіанти фукозилювання можуть мати покращену функцію АЗКЦ, див., наприклад, публікації патентів США МоМео ОБ 2003/0157108 (Ргезіа, І.) або 05 2004/0093621 (Куоула НакКо Кодуо Со., ца). Інші варіанти біспецифічних антитіл згідно винаходу включають варіанти з розділеними олігосахаридами, наприклад, в яких біантенний олігосахарид, приєднаний до Ес-області, ділиться навпіл СіІсСМАс. Такі варіанти можуть мати знижене фукозилювання і або покращену функцію АЗКЦ, див., наприклад, МО 2003/011878 (деап-Магїгеї еї аІх); патент США Мо 6602684 (тапа еї а); ії 005 2005/0123546 (тапа еї аї.). Також пропонуються варіанти з щонайменше одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Ес-області. Такі варіанти антитіл можуть мати покращену функцію КЗЦ і описані, наприклад, в УМО 1997/30087 (Рагеї! еї аІ.); УМО 1998/58964 (Ка/и, 5.); і ММО 1999/22764 (Ка/и, 5.).
У певних аспектах може бути бажаним створення цистеїн-сконструйованих варіантів біспецифічних антитіл згідно винаходу, наприклад, "тіоМкАт", в яких один або більше залишків молекули заміщені залишками цистеїну. У конкретних варіантах здійснення заміщені залишки розташовані в доступних сайтах молекули. Таким чином, в результаті заміни таких залишків на цистеїн, реактивні тіольні групи розташовуються в доступних сайтах антитіла і можуть бути використані для кон'югації антитіла з іншими компонентами, такими як лікарські компоненти або лінкер-лікарські компоненти, для створення імунокон'югата. У конкретних випадках здійснення будь-який один або більше з таких залишків можуть бути заміщені цистеїном: М205 (нумерація за Кабатом) легкого ланцюга; А118 (нумерація Е)) важкого ланцюга; і 5400 (нумерація Е)) Ес- області важкого ланцюга. Цистеїн-сконструйовані антигензв'язуючі молекули можуть бути отримані, як описано, наприклад, в патенті США Мо 7521541.
У конкретних аспектах біспецифічні антитіла, запропоновані в цьому документі, можуть бути додатково модифіковані, щоб утримувати додаткові небілкові компоненти, які відомі в цій галузі техніки і легко доступні. Компоненти, які підходять для дериватизації антитіла, включають, але не обмежуються ними, водорозчинні полімери. Необмежуючі приклади водорозчинних полімерів включають, без обмежень, полієтиленгліколь (ПЕГ), сополімери етиленгліколю/пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі- 1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксану, сополімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (або гомополімери, або статистичні сополімери), декстран або полі (н-вінілпірролідон) поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, сополімери проліпропіленоксідалетиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерин), полівініловий спирт та їхні суміші. Поліетиленгліколю пропіональдегід може мати переваги у виробництві завдяки його стабільності у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, прикріплених до антитіла, може варіюватися, і якщо приєднано більше одного полімеру, вони можуть бути однаковими або різними молекулами. Загалом, кількість і/або тип полімерів, використовуваних для дериватизації, може бути визначений на основі міркувань, що включають, але не обмежуються ними, конкретні властивості або функції антитіла, що підлягає покращенню, незалежно від того, чи буде похідне біспецифічного антитіла використовуватися в терапії за певних умов тощо. 60 В іншому аспекті запропоновані кон'югати антитіла й небілкового фрагмента, які можна вибірково нагрівати шляхом впливу іонізуючого випромінювання. В одному варіанті здійснення небілковий фрагмент являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат, М.М. єї аї!., Ргос. Май). Асай. Зсі.
ИБА 102 (2005) 11600-11605). Іонізуюче випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі і включає, але не обмежується цим, довжини хвиль, які не завдають шкоди звичайним клітинам, але які нагрівають небілковий фрагмент до температури, за якої клітини, розташовані близько до кон'югата антитіла-небілковий фрагмент, гинуть. "Імунокон'югат" являє собою антитіло, кон'юговане з однією або більше гетерологічними молекулами (ою), включаючи, але не обмежуючись цим, цитотоксичний агент.
Термін "полінуклеотид" відноситься до виділеної молекули або конструкту нуклеїнової кислоти, наприклад, матричної РНК (мРНК), отриманої з вірусу РНК, або плазмідної ДНК (пДНК).
Полінуклеотид може містити звичайний фосфодіестерний зв'язок або нестандартний зв'язок (наприклад, амідний зв'язок, такий, що виявлено в пептидних нуклеїнових кислотах (ПНК).
Термін "молекула нуклеїнової кислоти" відноситься до будь-якого одного або більше сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, фрагментів ДНК або РНК, присутніх у полінуклеотиді.
Під "виділеною" молекулою нуклеїнової кислоти або полінуклеотидом мають на увазі молекулу нуклеїнової кислоти, ДНК або РНК, яку було видалено з її природного середовища.
Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид, що кодує поліпептид, що міститься у векторі, вважається виділеним для цілей цього винаходу. Додаткові приклади виділеного полінуклеотиду включають рекомбінантні полінуклеотиди, які містяться в гетерологічних клітинах-хазяях, або очищені (частково або практично) полінуклеотиди в розчині. Виділений полінуклеотид включає полінуклеотидну молекулу, що міститься в клітинах, які зазвичай містять полінуклеотидну молекулу, але полінуклеотидна молекула присутня поза хромосоми або в області хромосоми, що відрізняється від її природного розташування в хромосомі. Виділені молекули РНК включають РНК-транскрипти іп мімо або іп міо згідно з винаходом, а також форми позитивних і негативних ланцюгів і дволанцюгові форми. Виділені полінуклеотиди або нуклеїнові кислоти згідно з винаходом додатково включають такі молекули, які отримані синтетичним шляхом. Крім того, полінуклеотид або нуклеїнова кислота можуть являти собою або можуть включати регуляторний елемент, такий як промотор, сайт зв'язування рибосоми або термінатор транскрипції.
Під нуклеїновою кислотою або полінуклеотидом, які мають нуклеотидну послідовність щонайменше, наприклад, на 95 95 "Ііьдентичну" до еталонної нуклеотидної послідовності згідно з винаходом, мається на увазі, що нуклеотидна послідовність полінуклеотиду ідентична до еталонної послідовності, за винятком того, що полінуклеотидна послідовність може включати до п'яти точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів еталонної нуклеотидної послідовності. ІНШИМИ словами, для отримання полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність щонайменше на 95
Фо ідентичну до еталонної нуклеотидної послідовності, аж до 5 95 нуклеотидів в еталонній послідовності може бути видалено або заміщено іншим нуклеотидом, або число нуклеотидів аж до 5 95 від загальної кількості нуклеотидів в еталонній послідовності може бути вставлено в еталонну послідовність. Ці зміни еталонної послідовності можуть відбуватися в 5- або 3- кінцевих положеннях еталонної нуклеотидної послідовності або в будь-якому місці між цими кінцевими положеннями, по черзі або індивідуально серед залишків в еталонній послідовності, або в одній або більше суміжних групах всередині еталонної послідовності. На практиці, використовуючи відомі комп'ютерні програми, такі, що обговорювалися вище для поліпептидів (наприклад, АЇІС2М-2) можна визначити звичайним шляхом, чи є будь-яка конкретна полінуклеотидна послідовність щонайменше на 80 95, 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичною до нуклеотидної послідовності згідно з винаходом.
Термін "касета експресії" відноситься до полінуклеотиду, що генерується рекомбінантно або синтетично, з рядом певних елементів нуклеїнової кислоти, які забезпечують транскрипцію конкретної нуклеїнової кислоти в цільовій клітині. Рекомбінантна касета експресії може бути включена в плазміду, хромосому, мітохондріальну ДНК, пластидну ДНК, вірус або фрагмент нуклеїнової кислоти. Як правило, рекомбінантна частина касети експресії з вектора експресії включає, крім інших послідовностей, послідовність нуклеїнової кислоти, яка має бути транскрибована, і промотор. У деяких варіантах здійснення касета експресії відповідно до винаходу містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули відповідно до винаходу або їхні фрагменти.
Термін "вектор" або "вектор експресії" є синонімом "конструкту експресії" і відноситься до молекули ДНК, яка використовується для введення і спрямування експресії конкретного гена, з яким вона функціонально пов'язана, у цільову клітину у цільовій клітині. Термін включає вектор як структуру нуклеїнової кислоти, що самореплікується, а також вектор, вбудований у геном 60 клітини-хазяїна, в яку він був введений. Вектор експресії згідно з винаходом містить касету експресії. Вектори експресії забезпечують транскрипцію великих кількостей стабільної мРНК. Як тільки вектор експресії знаходиться всередині цільової клітини, молекула або білок рибонуклеїнової кислоти, який кодується геном, продукується за допомогою клітинної транскрипції і/або механізму трансляції. В одному варіанті здійснення вектор експресії відповідно до винаходу містить касету експресії, яка містить полінуклеотидні послідовності, які кодують біспецифічні антигензв'язуючі молекули відповідно до винаходу або їхні фрагменти.
Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїв" і "культура клітин-хазяїв" використовуються як взаємозамінні і відносяться до клітин, в які була введена екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяї включають "трансформанти" і "трансформовані клітини", які включають первинну трансформовану клітину і її потомство, незалежно від кількості пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним за вмістом нуклеїнової кислоти з вихідної кліткою, але може містити мутації. Даний опис включає мутантне потомство, для якого притаманні таж сама функція або біологічна активність, яку спостерігали під час скринінгу або відбору з первинно трансформованих клітин. Клітка-хазяїн являє собою клітинну систему будь-якого типу, яку можна використовувати для отримання біспецифічних антигензв'язуючих молекул згідно з винаходом. Зокрема, клітина-хазяїн являю собою прокаріотичну або еукаріотичну клітину-хазяїна. Клітини-хазяї включають культивовані клітини, наприклад, культивовані клітини ссавців, такі як клітини СНО, клітини ВНК, клітини М5О, клітини
ЗР2/О, клітини мієломи МО, клітини мієломи миші РЗ3Хб6З, клітини РЕК, клітини РЕБ.СЄ або клітини гібридоми, клітини дріжджів, клітини комах і клітини рослин, і це лише деякі з них, але також і клітини, що містяться в трансгенній тварині, трансгенній рослині або культивованих рослинних або тваринних тканинах. "Ефективна кількість" агента відноситься до кількості, необхідної для того, щоб призвести до фізіологічних змін в клітині або тканині, в які його вводять. "Терапевтично ефективна кількість? агента, наприклад, фармацевтичної композиції відноситься до кількості, ефективній в дозах і протягом періодів часу, необхідних для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату. Терапевтична ефективна кількість агента, наприклад, усуває, зменшує, затримує, мінімізує або запобігає несприятливим впливам захворювання. "Індивідуум" або "суб'єкт" є ссавцем. Ссавці включають, але не обмежуються ними, одомашнених тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людей і приматів, які не є людиною, таких як мавпи), кролів і гризунів (наприклад, мишей і щурів). Зокрема, індивідуум або суб'єкт являє собою людину.
Термін "фармацевтична композиція" відноситься до препарату, який знаходиться в такій формі, яка забезпечує ефективність біологічної активність активного інгредієнта, що міститься в ньому, і не містить додаткових компонентів, що є неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому повинна бути введена композиція. "Фармацевтично прийнятний наповнювач" відноситься до інгредієнта у фармацевтичній композиції, що відрізняється від активного інгредієнта та є нетоксичним для суб'єкта.
Фармацевтично прийнятний наповнювач включає, але не обмежується ними, буфер, стабілізатор або консервант.
Термін "листок-вкладиш" відноситься до інструкцій, які зазвичай вкладають в комерційні упаковки терапевтичних продуктів для продажу, що містять інформацію про показання, використання, дозування, прийом, комбіновану терапію, протипоказання та/або застереження, що стосуються використання таких терапевтичних продуктів.
У цьому документі термін "лікування" (і його граматичні варіанти, наприклад, "лікувати" або "процес лікування") відноситься до клінічного втручання при спробі змінити природний хід захворювання у індивідуума, що піддається лікуванню, і може здійснюватися для профілактики або в процесі клінічного прояву патології. Бажані ефекти лікування включають, без обмежень, запобігання виникненню або рецидиву захворювання, полегшення симптомів, зменшення будь- яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, запобігання метастазуванню, зниження швидкості прогресування захворювання, покращення або тимчасове полегшення патологічного стану і ремісію або покращення прогнозу. В деяких варіантах здійснення антитіла за винаходом використовують для затримки розвитку захворювання або уповільнення прогресування захворювання.
Використаний в цьому документі термін "онкологічне захворювання" відноситься до проліферативних захворювань, таких як лімфоми, лімфоцитарні лейкози, рак легені, недрібноклітинний рак легені (М5СІ), бронхіолоальвеолярний рак легені, рак кісток, рак підшлункової залози, рак шкіри, рак голови або шиї, меланома шкіри або інтраокулярна бо меланома, рак матки, рак яєчників, рак прямої кишки, рак анальної області, рак шлунку, рак шлунково-кишкового тракту, рак товстої кишки, рак молочної залози, рак матки, карцинома фаллопієвих труб, карцинома ендометрія, карцинома шийки матки, карцинома піхви, карцинома вульви, хвороба Ходжкіна, рак стравоходу, рак тонкої кишки, рак ендокринної системи, рак щитоподібної залози, рак паращитоподібної залози, рак надниркової залози, саркома м'яких тканин, рак сечовипускального каналу, рак статевого члена, рак простати, рак сечового міхура, рак нирки або сечоводу, нирково-клітинна карцинома, карцинома ниркової миски, мезотеліома, гепатоцелюлярний рак, рак жовчних шляхів, новоутворення центральної нервової системи (ЦНС), пухлини осі хребта, гліома стовбура головного мозку, мультиформна гліобластоми, астроцитоми, шваноми, епендимоми, медулобластоми, менінгіоми, плоскоклітинні карциноми, аденома гіпофізу та саркома Юінга, у тому числі рефрактерні види будь-якого з вищевказаних видів злоякісних новоутворювань, або комбінація одного або більше з вищевказаних видів злоякісних новоутворювань.
Біспецифічні антитіла за винаходом
Винахід забезпечує нові біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітини 1 (РОТ), і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (І АСЗ), з особливо корисними властивостями, такими як продуктивність, стабільність, афінність зв'язування, біологічна активність, специфічне націлювання на певні Т-клітини, ефективність націлювання і зниження токсичності.
У певних аспектах запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, який демонструє зменшену інтерналізацію при зв'язуванні з поверхнею Т-клітин. Інтерналізація являє собою важливе поглинання для молекули, яка може розкладатися протягом декількох годин, в той час як цільові рецептори швидко повторно експресуються на поверхні клітини, готової пригнічувати ТКР-сигналінг. У додаткових аспектах запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ГАОЗ, який переважно зв'язуються з типовими Т-клітинами, а не з Трег. Це вигідно, тому що націлювання на ГАС-3 на Трег з використанням блокуючих антитіл може бути шкідливим, збільшуючи їхню переважну функцію і, у кінцевому підсумку, маскуючи позитивний блокуючий ефект щодо інших Т-клітин. У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, який здатний відновлювати ефекторні функції Т-клітин від Трег пригнічення. В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І! АСЗ, яке здатне індукувати секрецію гранзиму В СО4 Т-клітинами при спільному культивуванні з лінією пухлинних клітин
АКН77, як показано в представленому в цьому документі аналізі У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ГАСЗ, який демонструє підвищені специфічні для пухлини ефекторні функції Т-клітин та/або посилює цитотоксичний ефект Т-клітин. В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, який демонструє підвищену ерадикацію пухлини іп мімо.
А. Типові біспецифічні антитіла, які зв'язуються з РО і Ії АСЗ
В одному аспекті у винаході запропановано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3, при цьому зазначений перший антигензв'язуючий домен, специфічно зв'язується з РОМ, містить домен МН, що містить: () НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зБЕО ІЮ МО: 1, (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 2, і (її) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 3; і домен МІ, що містить: () НУВ-І11, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 4; (і) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 5, і (її) НУВ-І 3, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 6.
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить Ес-домен, який являє собою Ес-домен дос, 60 зокрема, Ес-домен 901 або Ес-домен Ід54, і причому Ес-домен має знижену або навіть скасовану ефекторну функцію. Зокрема, Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес-рецептором, зокрема, з Есу-рецептором.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І! АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, який являє собою Ес-домен Ідс, зокрема Ес-домен Ідс1 або Ес-домен Ідс4ї, і при цьому Ес- домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес- рецептором, зокрема, з Есу-рецептором.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, містить: (а) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 14, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 15, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 16; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 17, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 10 МО: 18, (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 19; або (Б) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 22, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 23, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 24; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 25, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮО МО: 26, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 27; або (с) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 30, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 31, ї (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 32; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 33, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 560 10 МО: 34, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 35; або (4) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 38, (і) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 39, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 40; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 41, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІО МО: 42, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 43; або (є) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 46, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 47, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮО МО: 48; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 49, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 560 10 МО: 50, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 51.
В додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 7, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 8, або (Б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить бо амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 10, або
(с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5260 1О МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 11, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 12, або (є) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 13.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, містить: (а) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 80, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 81, (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 82; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 83, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮО МО: 84, (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 85; або (Б) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 88, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 89, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 90; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 91, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІО МО: 92, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 93.
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 86, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 87, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 94, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 95.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГГ АСЗ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 20, і домен Мі, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 21, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 28, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 29, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІО МО: З6, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 37, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 44, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 45, або (є) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 52, ії домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 53.
В іншому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, містить домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 56, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 57, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 58; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 59, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 56010 МО: 60, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 1 МО: 61. 60 В додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГГ АСЗ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 54, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 55, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 62, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 63, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 64, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 65, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 66, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 67.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АОЗ, при цьому перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, містить домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 21, або домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ
МО: 52, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 53.
В одному аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить перший антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з РОТ, який містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 10, і другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з ГАСЗ, який містить домен УН, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 21.
В додатковому аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, що містить домен МН, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 562 ІЮ МО: 10, ії другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з
АСЗ, який містить домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5260 ІО МО: 52, і домен
МІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 53.
В іншому аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, що містить домен МН, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 10, і другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з | АСЗ, який містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 62, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 63.
У ще одному аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить перший антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з РОТ, який містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність зФЕО ІЮО МО: 86, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 87, і другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з ГАСЗ, який містить домен
МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 62, і домен Мі, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 63.
У ще одному аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить перший антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з РОТ, який містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮО МО: 94, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 95, і другий антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з ГАСЗ, який містить домен
МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО ІО МО: 62, і домен Мі, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 63.
У додатковому аспекті біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ3, являє собою людське, гуманізоване або химерне антитіло. Зокрема, воно являє собою гуманізоване або химерне антитіло.
В одному аспекті біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
АС3З, є двовалентним. Це означає, що біспецифічне антитіло містить один антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і один антигензв'язуючий домен, який специфічно 60 зв'язується з І АОЗ (формат 1-1).
Зо
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, причому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РОТ, ї другий Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ. У конкретному аспекті в одному з Габ-фрагментів варіабельні домени УМ. і МН замінені один на одного, так що домен УН є частиною легкого ланцюга, а домен МІ. є частиною важкого ланцюга. У конкретному аспекті в першому ЕРаб-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3, при цьому біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 97, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 99, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 101, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 102, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 104,
Зо другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105, або (4) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 106, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 107, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105.
Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5262 ІЮО МО: 97, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО: 99, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮО МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 101, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 102, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5260 ІЮ МО: 104, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 103, ії другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 105, або (4) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5хЕО ІЮО МО: 106, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0О ІЮ МО: 107, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 103, ії другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0О ІЮО МО: 105.
Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг що містить 60 амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 101.
У додатковому аспекті запропоновано біспечифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий Еаб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
Г АСЗ, який злитий з С-кінцем Ес-домену. Зокрема, Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, злитий з С-кінцем ЕС-домену через його домен УН (формат транс 1-1).
У конкретному аспекті біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності «ЕЕ 10 МО: 96, перший легкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 52ЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 І МО: 144, ії другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ МО: 101. Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮ МО: 144, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 101.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РОТ, другий Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АСІ3, і третій РГар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ. У конкретному аспекті Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів.
У цьому аспекті біспецифічне антитіло є тривалентним з двовалентним зв'язуванням з І АСЗ і моновалентним зв'язуванням з РОЇ. Це означає, що біспецифічне антитіло містить один антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і два антигензв'язуючих домени, які специфічно зв'язуються з І ДСЗ (формат 2-1).
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3, при цьому біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 118, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 119, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 120, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 5О0 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 121, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності 5ЕСО 10 МО: 122, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 60 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 105.
Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52ЕО 1О МО: 118, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5260 ІО МО: 119, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 120, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮО МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮО МО: 121, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 122, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 ІЮО МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5260 ІО МО: 103, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 105.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший ЕРаб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РОТ, другий Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АСІ3, і третій Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому один з Раб-фрагментів, що містять антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів (формат транс 2-1).
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 145 і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮ МО: 101. Зокрема, біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 145, і два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 то ідентичністю до послідовності зЕО ІЮ МО: 101.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два РГаб-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з Г АСІЗ, і одноланцюговий Раб (зсЕаб), що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ. Зокрема, зсЕар, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОМ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3, при цьому біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЕС) ІЮ МО: 119, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 124, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЕС) ІЮ МО: 121, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 99, або 60 (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮ МО: 105.
Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 119, їі два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 101, або (Б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 124, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 121, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5Е0О ІЮ МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 103, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 105.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два Рар-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, і домен МН ії МІ, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РОТ. Зокрема, домен УН антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РО1, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, а домен Мі. антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РОТ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем іншого важкого ланцюга.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 52ЕО ІЮО МО: 126, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІЮО МО: 127, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності
ЗЕО ІО МО: 109. Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 126, другий важкий ланцюг що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 127, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 109.
У додатковому аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РО, другий Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АСІЗ3, третій Гар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ГАСЗ, і четвертий Еаб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО1.
У цьому аспекті біспецифічне антитіло є чотирихвалентним з двовалентним зв'язуванням з
ГАСЗ і двовалентним зв'язуванням з РО1. Це означає, що біспецифічне антитіло містить два антигензв'язуючих домени, які специфічно зв'язуються з РО, і два антигензв'язуючих домени, які специфічно зв'язуються з І АСЗ (формат 2-2).
В одному аспекті біспецифічне антитіло за винаходом містить: (а) два легких ланцюги та два важких ланцюги антитіла, що містить два РГар-фрагменти, що містять антигензв'язуючі домени, які специфічно зв'язуються з ГГ АОЗ, і (Б) два додаткових Рар-фрагмента, що містять антигензв'язуючі домени, які специфічно зв'язуються з РОТ, причому кожен із зазначених додаткових Баб-фрагментів з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів (а).
У конкретному аспекті пептидний лінкер являє собой ((545)4. В іншому аспекті два додаткових Габ-фрагмента, що містять антигензв'язуючі домени, які специфічно зв'язуються з
РО, являють собою кросоверні Раб-фрагменти, при цьому варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного, і кожен з ланцюгів МІ -СН з'єднаний через пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів (а).
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий 60 домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому кожний з двох Рар-фрагментів, містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і при цьому кожен злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, відповідно.
У конкретному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить: (а) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 до ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮО МО: 114, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 ІЮО МО: 101, або (р) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 до ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮО МО: 116, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ФЕО ІЮО МО: 99, або (с) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 117, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕСО ІЮ МО: 115, ї два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 105.
Більш конкретно, біспецифічне антитіло містить: (а) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 114, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 115, їі два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність 52ЕО ІЮО МО: 101, або (Б) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 116, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 115, їі два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність зхЕО ІЮО МО: 99, або (с) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 117, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 115, їі два другі легкі ланцюги, які містять амінокислотну послідовність 5260 1Ю МО: 105.
Модифікації Ес-домену, що знижують зв'язування Ес-рецептора та/або ефекторну функцію
У певних аспектах запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І! АСЗ, при цьому біспецифічне антитіло містить Ес-домен, що містить одну або більше амінокислотних модифікацій, які зменшують зв'язування з Ес- рецептором, зокрема з Есу-рецептором, і зменшують або відміняють ефекторну функцію.
У певних аспектах одна або більше амінокислотних модифікацій можуть бути введені в Ес- область антитіла, запропонованого в цьому документі, тим самим генеруючи варіант Ес-області.
Варіант Ес-області може містити послідовність Ес-області людини (наприклад, Ес-область ІдС1,
Ід02, (ДЗ або Ідс4 людини), що містить амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну) в одному або більше амінокислотних положеннях.
У наступному розділі описані кращі аспекти біспецифічних антигензв'язуючих молекул за винаходом, що містять модифікації Ес-домену, що знижують зв'язування Ес-рецептора та/або ефекторну функцію. В одному аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, який містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з Г(АОЗ, при цьому Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес-рецептором, зокрема, з
Есу-рецептором. Зокрема, Ес-домен належить до підкласу ЇЯ01 людини з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А і РЗ3290 (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
Ес-домен дає відповідні фармакокінетичні властивості біспецифічних антитіл за винаходом, включаючи тривалий період напіввиведення в сироватці, який сприяє відповідному накопиченню в цільової тканини, і оптимальному співвідношенню в розподілі між тканиною і кров'ю. У той самий час це може, однак, привести до небажаного націлювання біспецифічних антитіл згідно винаходу на клітини, які експресують Ес-рецептори, а не на кращі клітини, які несуть антиген. Відповідно, у конкретних варіантах здійснення Ес-домен біспецифічних антитіл за винаходом проявляє знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором та/або знижену ефекторну функцію в порівнянні з нативним Ес-доменом Ідс, зокрема, Ес-доменом Ідс1 або Ес- доменом Ідс4. Більш конкретно, Ес-домен являє собою ЕС-домен Ідс1. 60 В одному такому аспекті Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула за винаходом, що містить зазначений Ес-домен) проявляє менш ніж 50 95, переважно менше ніж 20 95, більш переважно менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 5 95 афінності зв'язування з Ес -рецептором у порівнянні з нативним Ес-доменом Ідс1 (або біспецифічною антигензв'язуючою молекулою за винаходом, що містить нативний Ес-домен Ідс1) та/або менш ніж 50 95, переважно менше ніж 20 95, більш переважно менше ніж 10 95 і найбільш переважно менше ніж 5 95 ефекторної функції в порівнянні з нативним Ес-доменом Ідс1і1 (або біспецифічною антигензв'язуючою молекулою за винаходом, що містить нативний Ес-домен
ІдС1). В одному аспекті Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула за винаходом, що містить зазначений Ес-домен) по суті не зв'язується з Ес-рецептором та/або не індукує ефекторну функцію. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою Есу-рецептор. В одному аспекті Ес-рецептор являє собою людський Ес-рецептор. В одному аспекті Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсукКІШа, ЕсукК!І або ЕсукКІІа, найбільш конкретно людський ЕсукІШа. В одному аспекті Ес-рецептор являє собою інгібуючий Ес- рецептор. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою інгібуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсуКіІВ. В одному аспекті ефекторна функція являє собою одну або більше з КЗЦ, АЗКЦ, АЗКФ і секреції цитокінів. У конкретному аспекті ефекторна функція являє собою АЗКЦ. В одному аспекті Ес-домен проявляє по суті подібну афінність зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (ЕБсКп) в порівнянні з нативним Ес-доменом ІдО1. По суті аналогічне зв'язування з ЕсКп досягається, коли Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула за винаходом, що містить зазначений Ес-домен) проявляє більш ніж близько 70 95, зокрема, більш ніж близько 80 95, більш конкретно, більш ніж близько 90 95 афінності зв'язування нативного Ес-домену ІдсС1і (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули за винаходом, що містить нативний Ес-домен Ідс1) з ЕсКп.
У конкретному аспекті, Ес-домен конструюють так, щоб мати знижену афінність зв'язування з Ес-рецептором та/або знижену ефекторну функцію в порівнянні з несконструйованим Ес- доменом. У конкретному аспекті ЕРс-домен біспецифічної антигензв'язуючої молекули за винаходом містить одну або більше амінокислотних мутацій, які знижують афінність зв'язування
Ес-домену з Ес-рецептором та/"або ефекторною функцією. Як правило, одна і та ж або більш амінокислотних мутацій присутні в кожній з двох субодиниць Ес-домену. В одному аспекті амінокислотн мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором. В іншому аспекті амінокислотна мутація знижує афінність зв'язування Ес-домену з Ес-рецептором щонайменше в 2 рази, щонайменше в 5 або щонайменше в 10 разів. В одному аспекті біспецифічна антигензв'язуюча молекула за винаходом, що містить сконструйований Ес-домен, проявляє менше 20 95, зокрема, менше 10 95, більш конкретно, менше 5 95 афінності зв'язування з Ес-рецептором в порівнянні з біспецифічними антитілами за винаходом, що містять несконструйований Ес-домен. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою Есу- рецептор. В інших аспектах Ес-рецептор являє собою людський Ес-рецептор. В одному аспекті
Ес-рецептор являє собою інгібуючий Ес-рецептор. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою інгібуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсукКіІІВ. У деяких аспектах Ес-рецептор являє собою активуючий Ес-рецептор. У конкретному аспекті Ес-рецептор являє собою активуючий людський Есу-рецептор, більш конкретно людський ЕсукІПШа, Есукі або
ЕсукКіІїа, найбільш конкретно людський ЕсукІШа. Переважно зв'язування з кожним з цих рецепторів зменшується. У деяких аспектах афінніть зв'язування з компонентом комплементу, зокрема, афінність зв'язування з С14, також знижується. В одному аспекті афінність зв'язування з неонатальним Ес-рецептором (ЕсКп) не знижується. По суті аналогічне зв'язування з ЕсКп, тобто збереження афінності зв'язування Ес-домену із зазначеним рецептором, досягається, коли Ес-домен (або біспецифічна антигензв'язуюча молекула відповідно до винаходу, що містить зазначений Ес-домен) проявляє більше ніж близько 70 95 афінності зв'язування несконструйованої форми Ес-домену (або біспецифічної антигензв'язуючої молекули відповідно до винаходу, що містить зазначену несконструйованої форму Ес-домену) з ЕсКп. Рс-домен або біспецифічна антигензв'язуюча молекула відповідно до винаходу, що містить зазначений Ес- домен, може проявляти більше ніж близько 80 95 і навіть більше ніж близько 90 95 такої афінності. У деяких варіантах здійснення винаходу Ес-домен біспецифічної антигензв'язуючої молекули відповідно до винаходу має знижену ефекторну функцію у порівнянні з несконструйованим Ес-доменом. Знижена ефекторна функція може включати, але не обмежується цим, одне або більше з наступного: знижену комплементзалежну цитотоксичність (КЗЦ), знижену антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ), знижений антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АЗКФ), знижену секрецію цитокінів, знижене бо опосередковане імунним комплексом поглинання антигена антигенпрезентуючими клітинами,
знижене зв'язування з МК-клітинами, знижене зв'язування з макрофагами, знижене зв'язування з моноцитами, знижене зв'язування з поліморфно-ядерними клітинами, знижений сигналінг, індукуючий апоптоз, зменшене дозрівання дендритних клітин, або знижене преміювання Т- клітин.
Антитіла зі зниженою ефекторною функцією включають антитіла з заміною одного або більше залишків Ес-області 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 (патент США Мо 6737056). Такі Ес- мутанти включають Ес-мутанти з замінами в двох або більше амінокислотних положеннях 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий "САМА" Ес-мутант із заміною залишків 265 і 297 на аланін (патент США Мо 7332581). Описано деякі варіанти антитіл з покращеним або зменшеним зв'язуванням з ЕсК. (наприклад, патент США Мо 6737056; МО 2004/056312 і ЗПіейа5, К.Г. еї аї., 9.
ВіоЇ. Спнет. 276 (2001) 6591-6604).
В одному аспекті винаходу Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні Е233, І 234, 1235, М297, РЗЗ3З1 і РЗ29. У деяких аспектах Ес-домен містить амінокислотні заміни І234А і
Ї235А ("ГАГА"). В одному такому варіанті здійснення Ес-домен являє собою Ес-домен Ідс1, зокрема, Ес-домен людського Ідс1. В одному аспекті Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329. У більш конкретному аспекті аминокислотная заміна являє собою РЗ29А або
РЗ296, зокрема, РЗ3290. В одному варіанті здійснення Ес-домен містить амінокислотну заміну в положенні РЗ329 і додаткову амінокислотну заміну, обрану з групи, що складається з Е2З3ЗР,
Ї234А, 1235А, 1235Е, М297А, М2970О0 або РЗ3315. У більш конкретних варіантах здійснення Ес- домен містить амінокислотні мутації /234А, 1235А і РЗ29б6 ( "РЗ3296 ІАГА"). Комбінація амінокислотних замін "3295 І АГА" практично повністю усуває зв'язування Есу-рецептора з Ес- доменом людського ЇдДС1, як описано в заявці на патент РСТ Мо М/О 2012/130831 АТ. Таким антитілом є Їдс1 з мутаціями 1 234А і І 235А або з мутаціями 1 234А, І 235А і РЗ329СО (нумерація відповідно до індексу ЄШ за Кабатом, КаБбаї єї аЇ., Зедоепсез ої Ргоїєїп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегеві,
БІ Еа. Рибіїс Неайй 5егмісе, Маїйопаї! Іпвійшез ої Неаці, Веїйезаа, МО, 1991).
В одному аспекті біспецифічне антитіло відповідно до винаходу містить (всі положення відповідно до індексу БО за Кабатом) () гомодимерну Ес-область підкласу їДс1 людини необов'язково з мутаціями Р3290, І 234А і І 235А, або (ії) гомодимерну Ес-область підкласу ЇДдс4 людини необов'язково з мутаціями РЗ329б, 5228Р і 1235Е, або (ії) гомодимерну Ес-область підкласу ЇД01 людини необов'язково з мутаціями РЗ3296, І 234А, І 235А, І253А, НЗ1ОА ї Н4З5А, або необов'язково з мутаціями РЗ29б, 1234А, І235А, НЗ1І0ОА, Н4іЗЗА і У436А, або (їм) гетеродимерну Ес-область, де один поліпептид Ес-області містить мутацію Т36бУМ, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З68А і у407У, або де один поліпептид Ес-області містить мутації Т36бУМ і у349С, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З68А, уУ407М і 5354С, або де один поліпептид Ес-області містить мутації Т36бУМ і 5354С, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З368А, У407М і У349С або (м) гетеродимерну Ес- область підкласу ЇДС1 людини, де обидва поліпептиду Ес-області містять мутації РЗ3290, І 234А і 1235А, і один поліпептид Ес-області містить мутацію Т36б6МУМ, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З368А і У407У, або де один поліпептид Ес-області містить мутації 366 і у7349С, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І 368А, У407М і 5354С або де один поліпептид Ес-області містить мутації Т36бУМ і 5354С, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З68А, У407М і 73496.
В одному аспекті Ес-домен являє собою Ес-домен Ідб4. У більш конкретному варіанті здійснення Ес-домен являє собою Ес-домен ІдО4, що містить амінокислотну заміну в положенні 5228 (нумерація за Кабатом), зокрема амінокислотну заміну 5228Р. У більш конкретному варіанті здійснення Ес-домен являє собою Ес-домен ІдС4, що містить амінокислотні заміни
Ї235Е і 5228Р і РЗ3296. Ця амінокислотна заміна знижує іп мімо обмін Гар-фрагментами Ід4- антитіл (див. 5іибрепгацсі еї а!., Огид Меїаброїїзт апа Оізрозйіоп 38, 84-91 (2010)). Таким чином, в одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить (всі положення відповідно до індексу Б за Кабатом) гетеродимерну Ес-область підкласу Їдс54 людини, при цьому обидва поліпептида Ес-області містять мутації РЗ3290, 5228Р і І235Е і один поліпептид Ес-області містить мутацію Т366УМ, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З368А і 407, або де один поліпептид Ес-області містить мутації Т36бУМ і у349С, а інший поліпептид Ес- області містить мутації Т3665, І З368А, у407М і 5354С, або де один поліпептид Ес-області містить мутації Т36бУМ ії 5354С, а інший поліпептид Ес-області містить мутації 73665, І З368А, У407М і
У3496.
Антитіла зі збільшеним періодом напіввиведення і опокращеним зв'язуванням з неонатальним Ес-рецептором (ЕсКп), який відповідає за передачу материнських ДС до плоду (Сцуег, В.І. еї аї., У. Іттипої. 117 (1976) 587-593, і Кіт, .К. еї аї., У. Іттипої. 24 (1994) 2429- 60 2434), як описано в 05 2005/0014934. Ці антитіла містять Ес-область з однієї або більше замінами, які покращують зв'язування Ес-області з ЕсКп. Такі варіанти Ес включають варіанти з замінами при одному або більше залишках Ес-області: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміну залишку Ес-області 434 (патент США Мо 7371826). Див. також Юипсап, А.К. апа М/іпіег, 0.,
Маїшге 322 (1988) 738-740; 005 5648260; 005 5624821; ії УМО 94/29351, що стосуються інших прикладів варіантів Ес-області.
Зв'язування з Ес-рецепторами може бути легко визначено, наприклад, за допомогою ІФА або поверхневого плазмонного резонансу (ППР) з використанням стандартних приладів, таких як прилад ВіАсоге (СЕ Неайсаге), і такі Ес-рецепторами можуть бути отримані шляхом рекомбінантної експресії. У цьому документі описано такий відповідний аналіз. Альтернативно, афінність зв'язування Ес-доменів або активуючих клітини біспецифічних антигензв'язуючих молекул, що містять Ес-домен для Ес-рецепторів, може бути оцінена з використанням клітинних ліній, про які відомо, що вони експресують конкретні Ес-рецептори, наприклад, людських МК- клітин, експресуючих ЕсуШа-рецептор. Ефекторна функція Ес-домену або біспецифічних антитіл згідно винаходу, що містять Ес-домен, може бути виміряна способами, відомими в цій галузі техніки. Відповідний аналіз для вимірювання АЗКЦ описаний в цьому документі. Інші приклади аналізів іп мійго для оцінки активності АЗКЦ молекули, що представляє інтерес, описані в патенті США Мо 5500362; Неївігот еї аї. Ргос Маї! Асай Зсі ОБА 83, 7059-7063 (1986) і
Неїїбвігот еї аїЇ., Ргос Май Асай 5сі ОБА 82, 1499-1502 (1985); патенті США Мо 5821337;
Втадетапп еї а!., У Ехр Мей 166, 1351-1361 (1987). В альтернативному варіанті можуть бути використані способи нерадіоактивного аналізу (див., наприклад, спосіб нерадіоактивного аналізу цитотоксичності АСТІ "мМ для проточної цитометрії (СеПеспоїіоду, Іпс., Маунтін-В'ю, штат Каліфорнія) і спосіб нерадіоактивного аналізу цитотоксичності СуїюТох 962 (Рготеда,
Медісон, штат Вісконсін). Придатні ефекторні клітини для таких аналізів включають мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) і природні клітини-кілери (МК).
Альтернативно або додатково, активність АЗКЦ молекули, що представляє інтерес, можна оцінити іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як описано в Сіупез еї а). Ргос Маї! Асай зЗсі ОБА 95, 652-656 (1998).
У наступному розділі описані кращі аспекти біспецифічних антитіл згідно винаходу, що містять модифікації Ес-домену, що знижують зв'язування Ес-рецептора і/або ефекторну функцію. В одному аспекті винахід відноситься до біспецифічного, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язує РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують афінність зв'язування антитіла з Ес-рецептором, зокрема, з Есу- рецептором. В іншому аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з Г(АОЗ, при цьому Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які знижують ефекторну функцію. У конкретному аспекті
Ес-домен належить до підкласу ЇЯ01 людини з амінокислотними мутаціями І234А, 1235А і
РЗ296 (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
Модифікації Ес-домену, що сприяють гетеродимеризації
Біспецифічні антигензв'язуючі молекули відповідно до винаходу містять різні антигензв'язуючі домени, злиті з однією чи другою з двох субодиниць Ес-домену, з цієї причини дві субодиниці Ес-домену можуть міститися в двох неідентичних поліпептидних ланцюгах.
Рекомбінантна коекспрессія цих поліпептидів і подальша димеризація призводить до виникнення кількох можливих комбінацій двох поліпептидів. Таким чином, для підвищення виходу і чистоти біспецифічних антитіл згідно винаходу при рекомбінантній продукції буде вигідно вводити в Ес-домен біспецифічних антигензв'язуючих молекул відповідно до винаходу модифікацію, що сприяє асоціації необхідних поліпептидів.
Відповідно, в конкретних аспектах винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з Г(АОЗ, при цьому Ес-домен містить модифікацію, що сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес-домену. Сайт найбільш значної міжбілкюової взаємодії між двома субодиницями Ес-домену Їдб людини знаходиться в домені
СНЗ Ес-домену. Таким чином, в одному аспекті зазначена модифікація знаходиться в домені
СНЗ Ес-домену.
У конкретному аспекті зазначена модифікація являє собою так звану модифікацію "виступ-в- отвір", що містить модифікацію "виступ" в одній з двох субодиниць Ес-домену і модифікацію "отвір' в інший з двох субодиниць Ес-домену. Таким чином, винахід відноситься до 60 біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий сайт, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому перша субодиниця Ес-домену містить виступи і друга субодиниця Ес-домену містить отвори відповідно до способу "виступи-в-отвори". У конкретному аспекті перша субодиниця Ес- домену містить амінокислотні заміни 5354С і Т36б6УУ (нумерація ЕМО), а друга субодиниця Ес- домену містить амінокислотні заміни У349С, 73665 і 7407М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
Технологія "виступ-в-отвір" описана, наприклад, в 5 5731168; 05 7695936; Кіаджмау еї аї.,
Ргої Епд 9, 617-621 (1996) і Сапег, У Іттипої Мей 248, 7-15 (2001). Зазвичай спосіб включає введення випинання ("виступу") на поверхні зв'язування першого поліпептиду і відповідної порожнини ("отвора") на поверхні взаємодії другого поліпептиду, так що випинання може бути розташоване в порожнині так, що сприяє утворенню гетеродимера і перешкоджає утворенню гомодимеру. Випинання конструюють шляхом заміни невеликих бічних ланцюгів амінокислот з поверхні взаємодії першого поліпептиду більшими бічними ланцюгами (наприклад, тирозином або триптофаном). Компенсаторні порожнини ідентичного або схожого розміру з випинаннями створюються на поверхні взаємодії другого поліпептиду шляхом заміни великих бічних ланцюгів амінокислот дрібнішими (наприклад, аланіном або треоніном).
Відповідно, в одному аспекті в домені СНЗ першої субодиниці Ес-домену біспецифічних антигензв'язуючих молекул відповідно до винаходу амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, що має більший об'єм бічного ланцюга, тим самим створюючи випинання внутрі домену СНЗ першої субодиниці, яке може розміщуватися в порожнині всередині домену СНЗ другої субодиниці, а в домені СНЗ другої субодиниці Ес-домену амінокислотний залишок замінений амінокислотним залишком, що має менший об'єм бічного ланцюга, в результаті чого утворюється порожнина в домені СНЗ другої субодиниці, внутрі якої може розміщуватися випинання, що знаходиться в межах домену СНЗ першої субодиниці.
Випинання і порожнина можуть бути отримані шляхом зміни нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептиди, наприклад, за допомогою сайт-специфічного мутагенезу або пептидного синтезу.
У конкретному аспекті в домені СНЗ3 першої субодиниці Ес-домену залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком триптофану (Т366ММ), а в домені СНЗ другої субодиниці Ес- домену залишок тирозину в положенні 407 замінений залишком валіну (У407М). В одному аспекті в другій субодиниці Ес-домену додатково залишок треоніну в положенні 366 замінений залишком серину (13665), а залишок лейцину в положенні 368 замінений залишком аланіну (І З68А).
У ще одному додатковому аспекті в першій субодиниці Ес-домену додатково сериновий залишок в положенні 354 замінений залишком цистеїну (5354С), а в другій субодиниці Ес- домену додатково залишок тирозину в положенні 349 замінений на залишок цистеїну (349).
Введення цих двох залишків цистеїну призводить до утворення дисульфідного містка між двома субодиницями Ес-домену, що додатково стабілізує димер (Сапег (2001), У Іттипої Меїподз 248, 7-15). У конкретному аспекті перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 5354С і
Т36бУМ (нумерація ЕО), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни У349С, 73665 і у407М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
Але також можуть використовуватися альтернативно або додатково інші технології "виступи-в-отвори", описані в ЕР 1870459. В одному варіанті здійснення мультиспецифічне антитіло містить мутації К4090 ії КЗ70ОЕ в домені СНЗ "ланцюга з виступами" і мутації 0О399К і
ЕЗ57К в домені СНЗ "ланцюга з отвором" (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить мутацію Т36б6УУ в домені СНЗ "ланцюга з виступами" і мутації 73665, І З3684А і 7407М в домені СНЗ "ланцюга з отвором" і, крім того, мутації
К4090 і КЗ70Е в домені СНЗ "ланцюга з виступами" і мутації 0О399К і ЕЗ57К в домені СНЗ "ланцюга з отвором" (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить мутації У349С і Т36бУМ в одному з двох доменів СНЗ ї мутації 5354, 73665, 1368А і У407М в іншому з двох доменів СНЗ, або мультиспецифічне антитіло містить мутації У349С і Т366УУ в одному з двох доменів СНЗ, і мутації 5354С, 73665, І З68А і У407М в другому з двох доменів СНЗ і, крім того, мутації К4090 і
КЗ7ОЕ в домені СНЗ "ланцюга з виступами" і мутації О399К і ЕЗ57К в домені СНЗ "ланцюга з отвором" (нумерація відповідно до індексу БО за Кабатом).
В альтернативному аспекті модифікація, що сприяє асоціації першої і другої субодиниць Ес- області, включає модифікацію, що опосередковує ефекти електростатичних сил, наприклад, як описано в публікації РСТ УМО 2009/089004. Як правило, цей спосіб включає заміну одного або більше амінокислотних залишків вна поверхні взаємодії двох субодиниць Ес-домену зарядженими амінокислотними залишками, так що утворення гомодимеру стає електростатично бо невигідним, а гетеродимеризація електростатично вигідною.
Крім "технології виступ-в-отвір" в цій галузі техніки відомі інші способи модифікації доменів
СНЗ важких ланцюгів мультиспецифічного антитіла для забезпечення гетеродимеризації. Дані технології, особливо ті, які описані в М/О 96/27011, УМО 98/050431, ЕР 1870459, УМО 2007/110205, МО 2007/147901, МО 2009/089004, МО 2010/129304, МО 2011/90754, МО 2011 / 143545, МО 2012/058768, МО 2013/157954 і МО 2013/096291 розглядаються в цьому документі в якості альтернативи "технології виступ-в-отвір" у комбінації з біспецифічним антитілом.
В одному аспекті в біспецифічному антитілі підхід, описаний в ЕР 1870459, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла. Цей підхід заснований на введенні заряджених амінокислот з протилежними зарядами в певних положеннях амінокислот на поверхні взаємодії доменів СНЗ/СНЗ між як першим, так і другим важким ланцюгом.
Відповідно, в цьому аспекті в третинній структурі мультиспецифічного антитіла домен СНЗ першого важкого ланцюга і домен СНЗ другого важкого ланцюга формують поверхню взаємодії, яка розташована між відповідними доменами СНЗ антитіла, при цьому кожна з відповідних амінокислотних послідовностей домену СНЗ першого важкого ланцюга і амінокислотних послідовностей домену СНЗ другого важкого ланцюга містять набір амінокислот, який розташований на вказаній поверхні взаємодії в третинній структурі антитіла, при цьому з набору амінокислот, який розташований на поверхні взаємодії в домені СНЗ одного важкого ланцюга, перша амінокислота замінюється позитивно зарядженою амінокислотою і з набору амінокислот, який знаходиться на поверхні в домені СНЗ другого важкого ланцюга, друга амінокислота заміщена негативно зарядженою амінокислотою. Біспецифічне антитіло відповідно до цього аспекту в цьому документі також позначається як "СНЗ (/-) - сконструйоване біспецифічне антитіло" (де абревіатура "/-" позначає протилежно заряджені амінокислоти, які були введені у відповідні домени СНЗ).
В одному аспекті в СНЗ (-/-) - сконструйованому біспецифічному антитілі позитивно заряджену амінокислоту обирають з К, К і Н, а негативно заряджену амінокислоту обирають з Е або 0.
В одному аспекті в СНЗ (-/-) - сконструйованому біспецифічному антитілі позитивно заряджену амінокислоту обирають з К і К, а негативно заряджену амінокислоту обирають з Е
Зо або 0.
В одному аспекті в СНЗ (-/-) - сконструйованому біспецифічному антитілі позитивно заряджена амінокислота являє собою К, а негативно заряджена амінокислота являє собою Е.
В одному аспекті в СНЗ (ї7/-) - сконструйованому біспецифічному антитілі в домені СНЗ3 одного важкого ланцюга амінокислоту К в положенні 409 заміщують на 0, і амінокислоту К в положенні заміщують на Е, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту О в положенні 399 заміщують на К, і амінокислоту Е в положенні 357 заміщують на К (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2013/157953, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла. В одному варіанті здійснення в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на К, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту ЇЇ. в положенні 351 заміщують на Ю (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). В іншому варіанті здійснення в домені СНЗ3 одного важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на К, і амінокислоту Її в положенні 351 заміщують на К, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту Ї в положенні 351 заміщують на О (нумерація відповідно до індексу БЮ за Кабатом).
В іншому аспекті в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на К, і амінокислоту Її в положенні 351 заміщують на К, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту Ї в положенні 351 заміщують на О (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом). Крім того, щонайменше одна з наступних замін міститься в домені СНЗ3 іншого важкого ланцюга: амінокислоту У в положенні 349 заміщують на Е, амінокислоту У в положенні 349 заміщують на 0, а амінокислоту ЇЙ в положенні 368 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). В одному варіанті здійснення амінокислоту І. в положенні 368 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2012/058768, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла. В одному аспекті в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту І в положенні 351 заміщують на У, і амінокислоту У в положенні 407 заміщують на А, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на А, і амінокислоту К в положенні 60 409 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЕОМ за Кабатом). В іншому варіанті здійснення, додатково до вищезазначених замін, в домені СНЗ другого важкого ланцюга щонайменше одну з амінокислот, яка знаходяться в положеннях 411 (спочатку Т), 399 (спочатку р), 400 (спочатку 5), 405 (спочатку Е ), 390 (спочатку М) і 392 (спочатку К), заміщують (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). Кращими замінами є: - заміна амінокислоти Т в положенні 411 амінокислотою, обраною з М, К, ОО, К, О, Е ії М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), - заміна амінокислоти О в положенні 399 амінокислотою, обраною з К, МУ, У і К (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), - заміна амінокислоти 5 в положенні 400 амінокислотою, обраною з Е, 0, К і К (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), - заміна амінокислоти Е в положенні 405 амінокислотою, обраною з І, М, Т, 5, М і М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом); - заміна амінокислоти М в положенні 390 амінокислотою, обраною з К,К і ОО (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом); і - заміна амінокислоти К в положенні 392 амінокислотою, обраною з М, М, К,Ї, Бі Е (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В іншому аспекті біспецифічне антитіло сконструйовано відповідно до МО 2012/058768), тобто в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту І в положенні 351 заміщують на У, і амінокислоту М в положенні 407 заміщують на А, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на У, і амінокислоту до в положенні 409 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу БО за Кабатом). В іншому варіанті здійснення мультиспецифічного антитіла в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту У в положенні 407 заміщують на А, і в домені СНЗ3 іншого важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на А і амінокислоту К в положенні 409 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). В останньому вищезгаданому варіанті здійснення в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту К в положенні 392 заміщують на Е, амінокислоту Т в положенні 411 заміщують на Е, амінокислоту О в положенні 399 заміщують на
К і амінокислоту 5 в положенні 400 заміщують К (нумерація відповідно до індексу БУ за
Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2011/143545, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла. В одному аспекті амінокислотні модифікації в доменах СНЗ обох важких ланцюгів здійснюються в положеннях 368 і / або 409 (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2011/090762, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга біспецифічного антитіла. УМО 2011/090762 відноситься до амінокислотних модифікацій відповідно до технології "виступ-в-отвір" (КІН). В одному варіанті здійснення в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на М/, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту У в положенні 407 заміщують на А (нумерація відповідно до індексу БЮ за
Кабатом). В іншому варіанті здійснення в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту Т в положенні 366 заміщують на У, а в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту ХУ в положенні 407 заміщують на Т (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2009/089004, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга біспецифічного антитіла. В одному варіанті здійснення в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту К або М в положенні 392 заміщують негативно зарядженою амінокислотою (в одному варіанті здійснення на Е або 0, в одному кращому варіанті здійснення на 0) і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга амінокислоту ЮО в положенні 399, амінокислоту Е або О в положенні 356 або амінокислоту Е в положенні 357 заміщують позитивно зарядженою амінокислотою (в одному варіанті здійснення на К або ЕК, в одному кращому варіанті здійснення на К, в одному кращому варіанті здійснення амінокислоти в положеннях 399 або 356 заміщують на К) (нумерація відповідно до індексу БЮ за Кабатом). В одному додатковому варіанті здійснення, додатково до вищезазначених замін, в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту К або ЕК в положенні 409 заміщують негативно зарядженою амінокислотою (в одному варіанті здійснення на Е або, в одному кращому варіанті здійснення на 0) (нумерація згідно індексом БІО за Кабатом). У ще одному додатковому аспекті, додатково або в якості альтернативи до вищезазначених замін, в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту К в положенні 439 і/або амінокислоту К в положенні 370 незалежно одну від одної заміщують негативно зарядженою амінокислотою (в одному варіанті здійснення на Е або 0, в одному кращому варіанті здійснення на 0) (нумерація 60 відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті підхід, описаний в УМО 2007/147901, використовується для підтримки гетеродимеризації першого важкого ланцюга і другого важкого ланцюга мультиспецифічного антитіла. В одному варіанті здійснення в домені СНЗ одного важкого ланцюга амінокислоту К в положенні 253 заміщують на Е, амінокислоту О в положенні 282 заміщують на К, а амінокислоту
К в положенні 322 заміщують на 0, і в домені СНЗ іншого важкого ланцюга, амінокислоту О в положенні 239 заміщують на К, амінокислоту Е в положенні 240 заміщують на К, а амінокислоту
К в положенні 292 заміщують на О (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
С-кінець важкого ланцюга біспецифічного антитіла, як зазначено в цьому документі, може являти собою повнорозмірний С-кінець, який закінчується амінокислотними залишками ФГК (фосфогліцераткінази). С-кінець важкого ланцюга може бути вкороченим С-кінцем, в якому один або два С-кінцевих амінокислотних залишку були видалені. В одному кращому аспекті С-кінець важкого ланцюга являє собою вкорочений С-кінець, який закінчується ФГ.
В одному аспекті із всіх аспектів, описаних у цьому документі, біспецифічне антитіло, що містить важкий ланцюг, що включає С-кінцевий домен СНЗ, як зазначено в цьому документі, містить С-кінцевий гліцин-лізиновий дипептид (5446 і К447, нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). В одному варіанті здійснення всіх аспектів, як зазначено в цьому документі, біспецифічне антитіло, що містить важкий ланцюг, що включає С-кінцевий домен СНЗ, як зазначено в цьому документі, містить С-кінцевий залишок гліцину (5446, нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
Модифікації в Раб-доменах
В одному аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший Еар- фрагмент, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий Раб-фрагмент, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому в одному з РГар-фрагментів здійснюють обмін або варіабельних доменів МН і МІ, або константних доменів СНІ і СІ. Біспецифічні антитіла отримують за технологією Сто5зітарб.
Поліспецифічні антитіла з заміною/обміном доменів в одному зв'язуючому плечі (Стоз6МаруУн-мі. або СтозвбМаьсн-СіІ) докладно описані в М/О2009/080252, УМО2009/080253 і
ЗсНаєїег, М/. еї аі. РМАБ5, 108 (2011) 11187-1191. Вони чітко зменшують побічні продукти, викликані невідповідністю легкого ланцюга проти першого антигена з неправильним важким ланцюгом проти другого антигена (в порівнянні з підходами без такого обміну доменами).
У конкретному аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший
Еаб-фрагмент, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий Рар-фрагмент, який специфічно зв'язується з | АСЗ, при цьому в одному з РГаб-фрагментів варіабельні домени МІ. і МН замінені кожен один на одного, так що домен МН є частиною легкого ланцюга, а домен МІ є частиною важкого ланцюга. У конкретному аспекті біспецифічне антитіло являє собою антитіло, в якому в першому Рар-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
РОТ, варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного.
В іншому аспекті і для подальшого покращення відповідного спарювання біспецифічне антитіло, що містить перший Еаб-фрагмент, який специфічно зв'язується з РО, і другий ЕРабр- фрагмент, який специфічно зв'язується з | АСЗ, може містити різні заряджені амінокислотні заміни (так звані "заряджені залишки"). Ці модифікації вводяться в кросоверні або некросоверні домени СНІ і Сі. Такі модифікації описані, наприклад, в УМО 2015/150447, МО 2016/020309 і
РСТ/ЕР2О016/073408.
У конкретному аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший
Еаб-фрагмент, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий Раб-фрагмент, який специфічно зв'язується з ГАС, при цьому в одному з Еаб-фрагментів в константному домені Сі амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщують на лізин (К), аргінін (В) або гістидин (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу БО за Кабатом). У конкретному аспекті біспецифічне антитіло являє собою антитіло, в якому в другому Рар-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ТІМЗ3 константним доменом СІ, амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщують на лізин (К), аргінін (К) або гістидин (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу БЮ за Кабатом).
У конкретному аспекті винахід відноситься до біспецифічного антитіла, що містить перший
Еаб-фрагмент, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий Рар-фрагмент, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, при цьому в одному з доменів Сі. амінокислота в положенні 123 (нумерація 60 ЕУ) була замінена аргініном (К), а амінокислота в положенні 124 (нумерація Е)) була замінена на лізин (К), і в одному з доменів СНІ амінокислоти в положенні 147 (нумерація ЕШ) і в положенні 213 (нумерація ЕМ) були замінені глутаміновою кислотою (Е). У конкретному аспекті біспецифічне антитіло являє собою антитіло, в якому в другому Раб-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, амінокислота в положенні 123 (нумерація ЕУ) була замінена аргініном (К), а амінокислота в положенні 124 (нумерація ЕШ ) була замінена на лізин (К), і в одному з доменів СНІ амінокислоти в положенні 147 (нумерація
Е) і в положенні 213 (нумерація ЄС) були заміщені глутаміновою кислотою (Е).
У додатковому аспекті біспецифічне антитіло являє собою двовалентне антитіло, що містить: а) перший легкий ланцюг і перший важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном, і
Б) другий легкий ланцюг і другий важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном, при цьому варіабельні домени МІ ї МН другого легкого ланцюга і другий важкий ланцюг замінені один на одного.
Антитіло згідно з а) не містить модифікацію, як описано згідно Б), а важкий ланцюг і легкий ланцюг згідно з а) є ізольованими ланцюгами.
В антитілі згідно з Б) в легкому ланцюзі варіабельний домен легкого ланцюга МІ. замінений варіабельним доменом важкого ланцюга УН зазначеного антитіла, а всередині важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга УН замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ. зазначеного антитіла.
В одному аспекті () в константному домені Сі першого легкого ланцюга згідно з а) амінокислоту в положенні 124 (нумерація за Кабатом) заміщують позитивно зарядженою амінокислотою і при цьому в константному домені СНІ першого важкого ланцюга згідно з а) амінокислоту в положенні 147 або амінокислоту в положенні 213 (нумерація відповідно до індексу ЕМО за Кабатом) заміщують негативно зарядженою амінокислотою або (ії) в константному домені Сі другого легкого ланцюга згідно з Б) амінокислоту в положенні 124 (нумерація за Кабатом) заміщують позитивно зарядженою амінокислотою, і при цьому в константному домені СНІ другого важкого ланцюга згідно з Б) амінокислоту в положенні 147 або амінокислоту в положенні 213 (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом) заміщують негативно зарядженою амінокислотою.
В іншому аспекті () в константному домені Сі першого легкого ланцюга згідно з а) амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщують на лізин (К), аргінін (К) або гістидин (Н) (нумерація за Кабатом) (в одному кращому варіанті здійснення незалежно на лізин (К) або аргінін (К)), і при цьому в константному домені СНІ першого важкого ланцюга згідно з а) амінокислоту в положенні 147 або амінокислоту в положенні 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу
БО за Кабатом) або (її) в константному домені Сі другого легкого ланцюга згідно з б) амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщують на лізин (К), аргінін (К) або гістидин (Н) (нумерація за Кабатом) (в одному кращому варіанті здійснення незалежно на лізин (К) або аргінін (К)) ії при цьому в константному домені СНІ другого важкого ланцюга згідно з б) амінокислоту в положенні 147 або амінокислоту в положенні 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу
Є) за Кабатом).
В одному аспекті в константному домені Сі другого важкого ланцюга амінокислоти в положеннях 124 і 123 заміщують на К (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті в константному домені Сі другого важкого ланцюга амінокислоту в положенні 123 заміщують на К, а амінокислоту в положенні 124 заміщують на К (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті в константному домені СНІ другого легкого ланцюга амінокислоти в положеннях 147 і 213 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЄШ за Кабатом).
В одному аспекті в константному домені СІ першого легкого ланцюга амінокислоти в положенні 124 і 123 заміщують на К, а в константному домені СНІ першого важкого ланцюга амінокислоти в положенні 147 і 213 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу БЮ за
Кабатом).
В одному аспекті в константному домені Сі першого легкого ланцюга амінокислоту в положенні 123 заміщують на К, а амінокислоту в положенні 124 заміщують на К, а в константному домені СНІ першого важкого ланцюга амінокислоти в обох положеннях 147 і 213 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті в константному домені Сі другого важкого ланцюга амінокислоти в 60 положенні 124 і 123 заміщують на К, і при цьому в константному домені СНІ другого легкого ланцюга амінокислоти в положенні 147 і 213 заміщують на Е, а у варіабельному домені МІ. першого легкого ланцюга амінокислоту в положенні 38 заміщують на К, у варіабельному домені
МН першого важкого ланцюга амінокислоту в положенні 39 заміщують на Е, у варіабельному домені МІ з другого важкого ланцюга амінокислоту в положенні 38 заміщують на К, а у варіабельному домені МН другого легкого ланцюга амінокислоту в положенні 39 заміщують на Е (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою двовалентне антитіло, що містить: а) перший легкий ланцюг і перший важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном, і
Б) другий легкий ланцюг і другий важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном, при цьому варіабельні домени МІ ї МН другого легкого ланцюга і другого важкого ланцюга замінені один на одного, і при цьому константні домени Сі і СНІ другого легкого ланцюга і другого важкого ланцюга замінені один на одного.
Антитіло згідно з а) не містить модифікації, як описано згідно з Б), а важкий ланцюг і легкий ланцюг згідно з а) являють собою ізольовані ланцюги. У антитілі згідно з Б) в легкому ланцюзі варіабельний домен легкого ланцюга У. замінений варіабельним доменом важкого ланцюга УН зазначеного антитіла, а константний домен легкого ланцюга Сі замінений константним доменом важкого ланцюга СНі зазначеного антитіла; і всередині важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга УН замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ. зазначеного антитіла, а константний домен важкого ланцюга СНІ замінений константним доменом легкого ланцюга Сі зазначеного антитіла.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою двовалентне антитіло, що містить: а) перший легкий ланцюг і перший важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном, і
Б) другий легкий ланцюг і другий важкий ланцюг антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном, при цьому константні домени Сі ії СНІ другого легкого ланцюга і другого важкого ланцюга замінені один на одного.
Антитіло згідно з а) не містить модифікацію, як описано згідно Б), а важкий ланцюг і легкий ланцюг згідно з а) є ізольованими ланцюгами. У антитілі згідно з Б) в легкому ланцюзі константний домен Сі. легкого ланцюга замінений константним доменом важкого ланцюга СНІ зазначеного антитіла; і всередині важкого ланцюга константний домен важкого ланцюга СНІ1 замінений константним доменом легкого ланцюга Сі. зазначеного антитіла.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою біспецифічне антитіло, що містить: а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном і складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, і р) один, два, три або чотири одноланцюгових Рар-фрагмента, що специфічно зв'язуються з другим антигеном, при цьому зазначені одноланцюгові Еар-фрагменти згідно з б) злиті з зазначеним повнорозмірним антитілом згідно з а) через пептидний лінкер на С- або М-кінці важкого або легкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті один або два ідентичних одноланцюгових РГар-фрагмента, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С-кінці важкого або легкого ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті один або два ідентичних одноланцюгових Раб (зсРар)-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С- кінці важкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті один або два ідентичних одноланцюгових Раб (зсЕБаб) - фрагмента, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С- кінці легкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті два ідентичних одноланцюгових Раб (зсРар)-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С-кінці кожного важкого або легкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті два ідентичних одноланцюгових Раб (5сРар)-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С-кінці кожного важкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті два ідентичних одноланцюгових Раб (зсЕаб)-фрагменти, що зв'язуються з другим антигеном, злиті з повнорозмірним антитілом через пептидний лінкер на С-кінці кожного легкого ланцюга зазначеного повнорозмірного антитіла.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою тривалентне антитіло, що містить: 60 а) повнорозмірне антитіло, що специфічно зв'язується з першим антигеном і складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, р) перший поліпептид, що складається з ра) варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (УН) або рр) варіабельного домену важкого ланцюга антитіла (МН) і константного домену антитіла 1 (СНІ), при цьому вказаний перший поліпептид злитий з М-кінцем його МН-домену через пептидний лінкер С-кінця одного з двох важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла, с) другий поліпептид, що складається з са) варіабельного домену легкого ланцюга антитіла (МІ) або сь) варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) антитіла і константного домену легкого ланцюга (СІ) антитіла, при цьому вказаний другий поліпептид злитий з М-кінцем домену МІ. через пептидний лінкер
С-кінця іншого з двох важких ланцюгів зазначеного повнорозмірного антитіла, і при цьому варіабельний домен важкого ланцюга (МН) антитіла першого поліпептиду і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла (МІ) другого поліпептиду разом утворюють антигензв'язуючий домен, що специфічно зв'язується з другим антигеном.
В одному аспекті варіабельний домен важкого ланцюга антитіла (УН) поліпептиду згідно з Б) і варіаабельний домен легкого ланцюга антитіла (МІ) поліпептиду згідно з с) зв'язані і стабілізовані за допомогою міжланцюгового дисульфідного містка шляхом введення дисульфідного зв'язку між наступними положеннями: () від положення 44 варіабельного домену важкого ланцюга до положення 100 варіабельного домену легкого ланцюга , або (її) від положення 105 варіабельного домену важкого ланцюга до положення 43 варіабельного домену легкого ланцюга, або (її) від положення 101 варіабельного домену важкого ланцюга до положення 100 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація завжди відповідно до індексу ЄЮ за
Кабатом).
Способи введення неприродніх дисульфідних містків для стабілізації описані, наприклад, в
МО 94/029350, Раіадораї, У., єї аї., Ргої. Епд. (1997) 1453-1459; Кобауазвні, Н., єї аї!., Мисі. Мед.
Зо Віо!І. 25 (1998) 387-393; і 5сПтіаї, М., еї аІ., Опсодепе 18 (1999) 1711-1721. В одному варіанті здійснення необов'язковий дисульфідний зв'язок між варіабельними доменами поліпептидів в положеннях Б) і с) знаходиться між положенням 44 варіабельного домену важкого ланцюга і положенням 100 варіабельного домену легкого ланцюга. В одному варіанті здійснення необов'язковий дисульфідний зв'язок між варіабельними доменами поліпептидів в положеннях
Б) ї с) знаходиться між положенням 105 варіабельного домену важкого ланцюга і положенням 43 варіабельного домену легкого ланцюга (нумерація завжди відповідно до індексу Є за
Кабатом). В одному варіанті здійснення кращим є тривалентне біспецифічне антитіло без зазначеної необов'язкової дисульфідної стабілізації між варіабельними доменами МН і МІ. одноланцюгових Рар-фрагментів.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою триспецифічне або тетраспецифічне антитіло, що містить: а) перший легкий ланцюг і перший важкий ланцюг повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном, і
Б) другий (модифікований) легкий ланцюг і другий (модифікований) важкий ланцюг повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном, при цьому варіабельні домени МІ і МН замінені один на одного, і/або при цьому константні домени СІ і
СНІ замінені один на одного, і с) при цьому від одного до чотирьох антигензв'язуючих доменів, що специфічно зв'язуються з одним або двома додатковими антигенами (тобто з третім і/або четвертим антигеном), злиті через пептидний лінкер з С-або М-кінцем легких ланцюгів або важких ланцюгів а) і/або Б).
Антитіло згідно з а) не містить модифікації, як описано згідно з р), а важкий ланцюг і легкий ланцюг згідно з а) являють собою ізольовані ланцюги.
В одному аспекті триспецифічне або тетраспецифічне антитіло містить згідно з с) один або два антигензв'язуючих домени, які специфічно зв'язуються з одним або двома додатковими антигенами.
В одному аспекті антигензв'язуючі домени обирають з групи зсЕм-фрагмента і 5сЕар- фрагмента.
В одному аспекті антигензв'язуючі домени являють собою зсЕу-фрагменти.
В одному аспекті антигензв'язуючі домени являють собою зсЕРар-фрагменти. 60 В одному аспекті антигензв'язуючі домени злиті з С-кінцем важких ланцюгів а) і/або б).
В одному аспекті триспецифічне або тетраспецифічне антитіло містить згідно з с) один або два антигензв'язуючих домени, що специфічно зв'язуються з одним додатковим антигеном.
В одному аспекті триспецифічне або тетраспецифічне антитіло містить згідно з с) два ідентичних антигензв'язуючих домени, що специфічно зв'язуються з третім антигеном. В одному крщому варіанті здійснення такі два ідентичних антигензв'язуючих домени злиті обидва через один і той самий пептидний лінкер з С-кінцем важких ланцюгів а) і Б). В одному кращому варіанті здійснення два ідентичних антигензв'язуючих домени являють собою або в5сгЕу- фрагмент, або зсЕРар-фрагмент.
В одному аспекті триспецифічне або тетраспецифічне антитіло містить згідно з с) два антигензв'язуючих домени, що специфічно зв'язуються з третім і четвертим антигеном. В одному варіанті здійснення зазначені два антигензв'язуючих домени злиті через один і той самий пептидний елемент з'єднання з С-кінцем важких ланцюгів а) і 5). В одному кращому варіанті здійснення зазначені два антигензв'язуючих домени являють собою або 5сЕм- фрагмент, або зсЕРар-фрагмент.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою біспецифічне, чотиривалентне антитіло, що містить: а) два легких ланцюга і два важких ланцюга антитіла, що специфічно зв'язуються з першим антигеном (і містять два Гар-фрагменти),
Юр) два додаткових РГар-фрагмента антитіла, що специфічно зв'язуються з другим антигеном, при цьому зазначені додаткові РГаб-фрагменти злиті як через пептидний лінкер, так і з С-або М- кінцем важких ланцюгів а), і при цьому в Гар-фрагментах були виконані наступні модифікації () в обох Раб-фрагментах а) або в обох Раб-фрагментах Б) варіабельні домени МІ і УНН замінені один на одного, і/або константні домени Сі. і СНІ замінені один на одного, або (її) в обох Раб-фрагментах а) варіабельні домени МІ і МН замінені один на одного, а константні домени Сі їі СНІ замінені один на одного, і в обох Габ-фрагментах Б) варіабельні домени МІ ії МН замінені один на одного, або константні домени Сі і СНІ замінені один на одного, або (її) в обох Раб-фрагментах а) варіабельні домени МІ і МН замінені один на одного, або константні домени Сі їі СНІ замінені один на одного, і в обох Раб-фрагментах Б) варіабельні домени У. і МН замінені один на одного, а константні домени Сі. і СНІ замінені один на одного, або (м) в обох Раб-фрагментах а) варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного, і в обох
Еаб-фрагментах Б) константні домени Сі і СНІ замінені один на одного, або (у) в обох Раб-фрагментах а) константні домени СІ і СНІ замінені один на одного, і в обох
Еаб-фрагментах Б) варіабельні домени МІ. і МН замінені один на одного.
В одному аспекті зазначені додаткові ЕБаб-фрагменти злиті в равному ступені через пептидний лінкер, або з С-кінцем важких ланцюгів а), або з М-кінцем важких ланцюгів а).
В одному аспекті зазначені додаткові Рар-фрагменти злиті як через пептидний лінкер, такі з
С-кінцем важких ланцюгів а).
В одному аспекті зазначені додаткові Гар-фрагменти злиті через пептидний лінкер з М- кінцем важких ланцюгів а).
В одному аспекті в Гар-фрагментах здійснюють такі модифікації: в обох РГар-фрагментах а) або в обох Рар-фрагментах Б) варіабельні домени Мі і МН замінюють один на одного, і/або константні домени СІ і СНІ замінені один на одного.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою чотиривалентне антитіло, що містить: а) (модифікований) важкий ланцюг першого антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном і містить першу пару доменів МН-СНІ, при цьому С-кінець зазначеного важкого ланцюга, М-кінець другої пари доменів МН-СНІ зазначеного першого антитіла злиті через пептидний лінкер, р) два легких ланцюга зазначеного першого антитіла а), с) (модифікований) важкий ланцюг другого антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном і містить першу пару доменів МН-СІ, при цьому С-кінець зазначеного важкого ланцюга, М-кінець другої пари доменів МН-СЇ зазначеного другого антитіла злиті через пептидний лінкер, і а) два (модифікованих) легких ланцюга зазначеного другого антитіла с), кожен з яких містить пару доменів СІ -СНІ.
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить: а) важкий ланцюг і легкий ланцюг першого повнорозмірного антитіла, що специфічно 60 зв'язується з першим антигеном, і
Б) важкий ланцюг і легкий ланцюг другого повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з другим антигеном, при цьому М-кінець важкого ланцюга з'єднаний з С-кінцем легкого ланцюга через пептидний лінкер.
Антитіло згідно з а) не містить модифікації, як описано в Б), а важкий ланцюг і легкий ланцюг являють собою ізольовані ланцюги.
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном і складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, і
Б) Ем-фрагмент, що специфічно зв'язується з другим антигеном, що містить домен МНЕа і домен МІ 2, при цьому обидва домени зв'язані один з одним через дисульфідний місток, де тільки або домен УН2, або домен МІ 2 злиті через пептидний лінкер з важким або легким ланцюгом повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном.
У біспецифічному антитілі важкі ланцюги і легкі ланцюги згідно з а) являють собою ізольовані ланцюги.
В одному аспекті другий домен МН2 або домен МІ2 не злитий через пептидний лінкер з важким або легким ланцюгом повнорозмірного антитіла, що специфічно зв'язується з першим антигеном.
У всіх аспектах, як зазначено в цьому документі, перший легкий ланцюг містить домен МІ і домен Сі, а перший важкий ланцюг містить домен УН, домен СНІ, шарнірну область, домен
СН? і домен СНЗ.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою тривалентне антитіло, що містить: а) два Габ-фрагменти, що специфічно зв'язуються з першим антигеном,
Б) один кросоверний ЕРар-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном, в якому СНІ і домен СІ. замінені один на одного, с) одну Ес-область, що містить перший важкий ланцюг Ес-області і другий важкий ланцюг другої Ес-області, при цьому С-кінець доменів СНІ двох РГар-фрагментів зв'язаний з М-кінцем поліпептидів Ес- області важкого ланцюга, і де С-кінець домену СІ. кросоверного Гар-фрагмента зв'язаний з М- кінцем домену МН одного з фрагментів.
В одному аспекті біспецифічне антитіло являє собою тривалентне антитіло, що містить: а) два Габ-фрагменти, що специфічно зв'язуються з першим антигеном,
Б) один кросоверний ЕРар-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном, в якому здійснено обмін СНІ і домена Сі. один на одного, с) одну Ес-область, що містить перший важкий ланцюг Ес-області і другий важкий ланцюг другої Ес-області, при цьому С-кінець домену СНІ першого Баб-фрагмента зв'язаний з М-кінцем одного з поліпептидів Ес-області важкого ланцюга, а С-кінець СІ -домену кросоверного Габ-фрагмента зв'язаний з М-кінцем іншого поліпептиду Ес-області важкого ланцюга, і де С-кінець домену СНІ другого Гар-фрагмента зв'язаний з М-кінцем домену МН першого Рар-фрагмента або з М-кінцем
МН домену кросоверного Рар-фрагмента.
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить: а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном і складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, і
Бр) Рарб-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном, що містить домен МУНА2 і домен МІ/2, що містить фрагмент важкого ланцюга та фрагмент легкого ланцюга, при цьому всередині фрагмента легкого ланцюга варіабельний домен легкого ланцюга МІ2 замінений варіабельним доменом важкого ланцюга МН2 зазначеного антитіла, і всередині фрагмента важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга УН2 замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ 2 зазначеного антитіла при цьому Раб-фрагмент важкого ланцюга вставлений між доменом СНІ одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла і відповідної Ес-областю повнорозмірного антитіла, а М- кінець Рар-фрагмента легкого ланцюга кон'югований з С-кінцем легкого ланцюга повнорозмірного антитіла, який зв'язаний з важким ланцюгом повнорозмірного антитіла, в яку вставлений Гар-фрагмент важкого ланцюга.
В одному аспекті біспецифічне антитіло містить: а) повнорозмірне антитіло, яке специфічно зв'язується з першим антигеном і складається з двох важких ланцюгів антитіла і двох легких ланцюгів антитіла, і
Б) Рарб-фрагмент, який специфічно зв'язується з другим антигеном, що містить домен МНЕ і домен МІ/2, що містить фрагмент важкого ланцюга і фрагмент легкого ланцюга, при цьому 60 всередині фрагмента легкого ланцюга варіабельний домен легкого ланцюга МІ/2 замінений варіабельним доменом важкого ланцюга МН2 зазначеного антитіла, і всередині фрагмента важкого ланцюга варіабельний домен важкого ланцюга УН2 замінений варіабельним доменом легкого ланцюга МІ 2 зазначеного антитіла, і при цьому С-кінець фрагмента важкого ланцюга
Еаб-фрагмента кон'югований з М- кінцем одного з важких ланцюгів повнорозмірного антитіла та
С-кінець фрагмента легкого ланцюга Баб-фрагмента кон'югований з М-кінцем легкого ланцюга повнорозмірного антитіла, яке об'єднують з важким ланцюгом повнорозмірного антитіла, з яким кон'югований фрагмент важкого ланцюга Раб-фрагмента.
Полінуклеотиди
Винахід, крім того, відноситься до виділених полінуклеотидів, які кодують біспецифічне антитіло, як описано в цьому документі, або його фрагмент.
Термін "молекула нуклеїнової кислоти" або "полінуклеотид" включає будь-яке з'єднання та/або речовину, яка містить полімер нуклеотидів. Кожен нуклеотид складається з основи, зокрема пуринової або піримідинової основи (тобто цитозину (С), гуаніну (С), аденіну (А), тиміну (Т) або урацилу (03), цукру (тобто дезоксирибози або рибози) і фосфатної групи. Часто молекула нуклеїнової кислоти описується послідовністю основ, причому зазначені основи являють собою первинну структуру (лінійну структуру) молекули нуклеїнової кислоти.
Послідовність основ зазвичай представлена від 5' до 3. У цьому документі, термін молекула нуклеїнової кислоти охоплює дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК), включаючи, наприклад, комплементарну ДНК (кДНК) і геномну ДНК, рибонуклеїнову кислоту (РНК), зокрема, матричну
РНК (мРНК), синтетичні форми ДНК або РНК і змішані полімери, що містять дві або більше цих молекул. Молекула нуклеїнової кислоти може бути лінійною або кільцевою. Крім того, термін молекула нуклеїнової кислоти включає як смислові, так і антисмислові ланцюги, а також одноланцюгові та дволанцюгові форми. Крім того, описана в цьому документі молекула нуклеїнової кислоти може містити природні або неприродні нуклеотиди. Приклади природних нуклеотидів включають модифіковані нуклеотидні основи з дериватизованими цукрами або фосфатними основними ланцюгами або хімічно модифікованими залишками. Молекули нуклеїнової кислоти також включають молекули ДНК і РНК, які підходять в якості вектора для прямої експресії антитіла іп міго за винаходом та/або іп мімо, наприклад, у хазяїна або пацієнта.
Такі вектори ДНК (наприклад, кДНК) або РНК (наприклад, мРНК) можуть бути немодифікованими або модифікованими. Наприклад, мРНК може бути хімічно модифікована для підвищення стабільності вектора РНК та/або експресії кодованої молекули так, щоб мРНК можна було ввести суб'єкту для вироблення антитіла іп мімо (див., наприклад, біааІег еп аї,
Маїиге Меадісіпе 2017, опубліковано в мережі 12 червня 2017 м, адоїі: 10.1038/пт.4356 або ЕР 2101823 В1). "Виділений" полінуклеотид відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, яка була виділена з компонента її природного середовища. Виділений полінуклеотид включає молекулу нуклеїнової кислоти, що міститься в клітинах, які зазвичай містять молекулу нуклеїнової кислоти, але молекула нуклеїнової кислоти присутня позахромосомно або в місці локалізації хромосом, яке відрізняється від її природного хромосомного розташування.
Виділені полінуклеотіди, що кодують біспецифічні антитіла за винаходом, можуть бути експресовані у вигляді одного полінуклеотиду, який кодує всю антигензв'язуючу молекулу, або у вигляді безлічі (наприклад, двох або більше) полінуклеотидів, які спільно експресуються.
Поліпептиди, що кодуються полінуклеотидами, які спільно експресуються, можуть зв'язуватися, наприклад, через дисульфідні зв'язки або іншими способами, з утворенням функціональної антигензв'язуючої молекули. Наприклад, частина легкого ланцюга імуноглобуліну може кодуватися окремим полінуклеотидом з частини важкого ланцюга імуноглобуліну. При спільній експресії, поліпептиди важкого ланцюга будуть зв'язуватися з поліпептидами легкого ланцюга з утворенням імуноглобуліну.
У деяких аспектах виділений полінуклеотид кодує поліпептид, що міститься в біспецифічному антитілі за винаходом, як описано в цьому документі.
В одному аспекті цей винахід відноситься до виділених полінуклеотидів, які кодують біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітини 1 (РО), і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (ГАЗ), при цьому вказаний перший антигензв'язуючий домен, специфічно зв'язується з РО, містить домен МН, що містить (ї) НМК-
НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБО 10 МО: 1, (її) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5БО 10 МО: 2, ії (її) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: З; і домен Мі, що містить (ї) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 4; (ії) НМК-1І2, що містить амінокислотну послідовність 52ЕО 1ІО МО: 5, і 60 (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 10 МО: 6.
В. Рекомбінантні способи
Антитіла можуть бути отримані з використанням рекомбінантних способів і композицій, наприклад, як описано в патенті США 4816567. Для цих способів запропонована одна або більше виділених нуклеїнових кислот, Що кодують антитіло.
У разі нативного антитіла або фрагмента нативного антитіла потрібні дві нуклеїнові кислоти, одна для легкого ланцюга або його фрагмента і одна для важкого ланцюга або його фрагмента.
Така (ї) нуклеїнова (ії) кислота(и) кодує (ють) амінокислотну послідовність, яка містить МІ, та/або амінокислотну послідовність, яка містить МН антитіла (наприклад, легкий та/або важкий ланцюг(и) антитіла). Ці нуклеїнові кислоти можуть перебувати в одному і тому ж векторі експресії або в різних векторах експресії. У разі деяких біспецифічних антитіл з гетеродимерними важкими ланцюгами потрібні чотири нуклеїнові кислоти, одна для першого легкого ланцюга, одна для першого важкого ланцюга, що містить перший гетеромономерний поліпептид Ес-області, одна для другого легкого ланцюга і одна для другого важкого ланцюга, що містить другий гетеромономерний поліпептид Ес-області. Чотири нуклеїнові кислоти можуть міститися в одній або більше молекул нуклеїнових кислот або векторах експресії. Наприклад, така (ї) нуклеїнова кислота(и) кодує (ють) амінокислотну послідовність, що містить перший МІ, та/або амінокислотну послідовність, яка містить перший МН, включаючи першу гетеромономерну Ес-область, та/або амінокислотну послідовність, яка містить другий МІ. та/або амінокислотну послідовність, яка містить другий МН, що містить другу гетеромономерну Ес- область антитіла (наприклад, перший та/або другий легкі талабо перший та/або другий важкі ланцюги антитіла). Ці нуклеїнові кислоти можуть перебувати в одному і тому ж векторі експресії або в різних векторах експресії, зазвичай ці нуклеїнові кислоти розташовані в двох або трьох векторах експресії, тобто один вектор може містити більше однієї з цих нуклеїнових кислот.
Прикладами цих біспецтфічних антитіл є Стоз5Маб і біспецифічні Т-клітини (див., наприклад, зЗсНаєтег, МУ. еї аІ., РМАБ, 108 (2011) 11187-1191). Наприклад, один з гетеромономерних важких ланцюгів містить так звані "мутації виступу" (Т36бУМ і, необов'язково, одну з 5354С або У349С), а інший містить так звані "мутації отвору" (73665, І З368А і У407М і необов'язково У349С або
З354С) (див., наприклад, Сапег, Р. еї а!., Іттипоїесппої. 2 (1996) 73).
В одному аспекті запропонована виділена нуклеїнова кислота, що кодує біспецифічне антитіло, яке описане в цьому документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, яка містить Мі та/або амінокислотну послідовність, яка містить МН антигензв'язуючих доменів, які специфічно зв'язуються з РО і | АОЗ відповідно (наприклад, у легкому та/або важкому ланцюгах антитіла). У додатковому аспекті запропоновано один або більше векторів (наприклад, векторів експресії), що містять таку нуклеїнову кислоту. У додатковому аспекті запропонована клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. В одному такому аспекті клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована): (1) перший вектор, що містить першу пару нуклеїнових кислот, які кодують амінокислотні послідовності, одна з яких містить перший МІ, а інша містить перший МН антитіла, і другий вектор, що містить другу пару нуклеїнових кислот, які кодують амінокислотні послідовності, одна з яких містить другий Мі, а інша містить другий МН антитіла, або (2) перший вектор, що містить першу нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, яка містить один з варіабельних доменів (переважно варіабельний домен легкого ланцюга), другий вектор, що містить пару нуклеїнових кислот, які кодують амінокислотні послідовності, одна з яких містить варіабельний домен легкого ланцюга, а інша містить перший варіабельний домен важкого ланцюга, і третій вектор, що містить пару нуклеїнових кислот, які кодують амінокислотну послідовності, одна з яких містить відповідний інший варіабельний домен легкого ланцюга, як у другому векторі, а інша містить другий варіабельний домен важкого ланцюга, або (3) перший вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить перший МІ. антитіла, другий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить перший МН антитіла, третій вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить другий МІ. антитіла, і четвертий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить другий МН антитіла. В одному аспекті клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну, наприклад, клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО) або лімфоїдну клітину (наприклад, клітину ХО, М50, 5р20). В одному аспекті запропоновано спосіб отримання біспецифічного антитіла, при чому спосіб включає культивування клітини-хазятна, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, як зазначено вище, в умовах, що підходять для експресії антитіла, і, можливо, видалення антитіла з клітини- хазяїна (або середовища для культивування клітин-хазяїв).
Для рекомбінантної продукції біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий 60 домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, нуклеїнову кислоту, що кодує біспецифічні антитіла, наприклад, як описано вище, виділяють і вставляють в один або більше векторів для подальшого клонування та/або експресії в клітині-хазяїні. Така нуклеїнова кислота може бути легко виділена та ссеквенована з використанням звичайних процедур (наприклад, з використанням олігонуклеотидних зондів, які здатні специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкі та легкі ланцюги антитіла).
Відповідні клітини-хазяї для клонування або експресії кодуючих антитіла векторів включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, які описані в цьому документі. Наприклад, антитіла можна продукувати в бактеріях, зокрема, якщо глікозилювання та Ес-ефекторні функції не є необхідними. Для експресії фрагментів антитіл і поліпептидів у бактеріях див., наприклад, патенти США 5648237, 5789199 і 5840523. (Див. також Спапоп, К.А., Іп: Меїподз іп МоїІесшаг
Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (ед.), Нитапа Ргев55, Тома, МУ (2003), рр. 245-254, де описана експресія фрагментів антитіл в Е. сої) Після експресії антитіло може бути виділено з маси бактеріальних клітин у розчинній фракції і може бути додатково очищено. На додаток до прокаріотів, придатних для клонування або експресії векторів, що кодують антитіло, є еукаріотичні мікроорганізми, наприклад, міцеліальні гриби або дріжджі, у тому числі штами грибів і дріжджів з "гуманізованими" шляхами глікозилювання, що призводить до продукції антитіла з профілем глікозилювання, частково або повністю характерним для людини.
Див. Сегподгов5, Т.О., Маї. Віоїесй. 22 (2004) 1409-1414: 1 Її, Н. еї аї., Маї. Віотесн. 24 (2006) 210-215.
Придатні для експресії глікозильованих антитіл клітини-хазяї також походять від багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Виявлені численні штами бакуловірусів, які можна використовувати у комбінації з клітинами комах, особливо для трансфекції клітин б5родорієга
Пидірегаа.
Культури клітин рослин також можуть бути використані в якості хазяїв. Див., наприклад, патенти США Мо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (опис технології
РІГАМТІВООІЕЗТМ для отримання антитіл у трансгенних рослинах).
Клітини хребетних також можуть бути використані в якості хазяїв. Наприклад, можна використовувати лінії клітин ссавців, які адаптовані для росту в суспензії. Інші приклади відповідних клітинних ліній ссавців-хазяїв являють собою лінію нирки мавпи СМ1, трансформовану 540 (СО5-7); лінію ембріональних клітин людської нирки (293 або 293 клітини, як описано, наприклад, у Сгапат еї аї., У. Сеп Мігої. 36 (1977) 59-74); клітини нирки новонародженого хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (клітини ТМА4, як описано, наприклад, в
Маїпег, 9.Р., ВіоІ. Нергод. 23 (1980) 243-252); клітини нирки мавпи (СМ1); клітини нирки африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирки собаки (МОСК); клітини печінки щура ВийаЇо (ВК. ЗА); клітини легенів людини (МУ138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТК, як описано, наприклад, в МаїНег", .).Р. єї а)., АппаЇ5 М.У. Асад. 5сі. 383 (1982) 44-68; клітини МКС 5; і клітини Е54. Інші відповідні лінії клітин ссавців включають клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини ОНЕК-СНО (пацб, с. еї аї!., Ргос. Маї!. Асай. зЗсі. ОБА 77 (1980) 4216-4220); і клітинні лінії мієломи, такі як ХО, М5О ії Зр2/0. Огляд деяких ліній клітин-хазяїв ссавців, придатних для отримання антитіл, див., наприклад, Халакі, Р. апа Уми,
А.М., Меїнодіз іп МоїІесшціаг Віоіоду, Мої. 248, Го, В.К.С. (еа.), Нитапа Ргев5, Тоїоула, МУ (2004), рр. 255-268.
С. Аналізи
Біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, запропоновані в цьому документі, можуть бути ідентифіковані, піддані скринінгу або охарактеризовані на предмет їхніх фізичних/хімічних властивостей та/або біологічних активностей за допомогою різних аналізів, відомих у цій галузі техніки. 1. Аналізи афінності
Афінність біспецифічних антигензв'язуючих молекул, антитіл і фрагментів антитіл, запропонованих у цьому документі, до відповідних антигенів може бути визначена відповідно до способів, описаних у Прикладах, за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (ППР) з використанням стандартних приладів, таких як прилад ВіасогеФ (СЕ НеаїйїПсаге), і рецептори або такі цільові білки можуть бути отримані шляхом рекомбінантної експресії. Конкретний ілюстративний і типовий варіант прикладу здійснення для вимірювання афінності зв'язування описаний в Прикладах 2, 8 або 11. Відповідно до одного аспекту, Ко вимірюють за допомогою 60 поверхневого плазмонного резонансу з використанням приладу ВІАСОКЕФ 1100 (СЕ 5О0
Неайвсаге) при 25 76. 2. Аналізи зв'язування та інші аналізи
В одному аспекті біспецифічні антитіла за винаходом тестують на їхню антигензв'язуючу активність, наприклад, за допомогою відомих способів, таких як ІФА, вестерн-блот тощо
Зв'язування біспецифічних антитіл, представлених у цьому документі, з відповідним рекомбінантним антигеном або антигенекспресуючими клітинами може бути оцінено за допомогою ІФА, як описано в Прикладах 8 або 11.
У додатковому аспекті свіжі мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) використовують в аналізах зв'язування щоб продемонструвати зв'язування з різними мононуклеарними клітинами периферичної крові (МКПК), такими як моноцити, МК-клітини і Т- клітини.
В іншому аспекті клітинний димеризаційний аналіз використовували для демонстрації димеризації або в результаті зв'язування/взаємодії двох різних рецепторів РОЇ і ГАЗ, які злиті в цитоплазмі з двома фрагментами ферменту, при лігуванні або зшиванні з біспецифічним антитілом проти обох мішеней. Таким чином, тільки один рецептор не проявляє ферментативну активність. Для цієї специфічної взаємодії цитозольні С-кінці обох рецепторів окремо були злиті з гетерологічними субодиницями репортерного ферменту. Одна тільки субодиниця ферменту не проявляла репортерну активність. Однак очікувалося, що одночасне зв'язування з обома рецепторами призведе до локального цитозольного накопичення обох рецепторів, комплементації двох субодиниць гетерологічного ферменту і, нарешті, до утворення специфічного і функціонального ферменту, який гідролізує субстрат, тим самим генеруючи хемілюмінесцентний сигнал (Приклад 11). 3. Аналізи активності
В одному аспекті запропоновані аналізи для ідентифікації біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, що має біологічну активність.
Біологічна активність може включати, наприклад, здатність посилювати активацію та/або проліферацію різних імунних клітин, особливо Т-клітин, секрецію імуномодулюючих цитокінів, таких як ІФН-у або ІФН-альфа, блокування шляху РОЇ, блокування шляху ГАСЗ, знищення пухлинних клітин. Запропоновані антитіла, що також мають таку біологічну активністю іп мімо та/або іп міїго.
У певних аспектах антитіло за винаходом тестують на таку біологічну активність. В одному аспекті запропоновано аналіз імунних клітин, який вимірює активацію лімфоцитів від одного індивідуума (донор Х) до лімфоцитів від іншого індивідуума (донор У). Реакція змішаної культури лімфоцитів (РЗ3КЛ) може демонструвати ефект блокування шляху РОЇ до ефекторних клітин лімфоцитів. Т-клітини в аналізі тестували на активацію та їхню секрецію ІФН-гамма в присутності або відсутності біспецифічних антитіл за винаходом. Аналіз більш докладно описаний в Прикладі 9.
О. Імунокон'югати
У винаході також запропановано іммунокон'югати, що містять біспецифічне антитіло за винаходом, яке кон'юговане з одним або більше цитотоксичними агентами, такими як хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби, агенти, які інгібують ріст, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактерій, грибків, рослин або тварин або їхні фрагменти) або радіоактивні ізотопи.
Е. Способи і композиції для діагностики та виявлення
У певних аспектах будь-яке з біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, що представлене в цьому документі, може бути корисним для виявлення в біологічному зразку присутності як РОТ, так ії ГАЗ. Використаний в цьому документі термін "виявлення" охоплює кількісне або якісне виявлення. В окремих випадках здійснення біологічний зразок містить клітину або тканину, таку як стовбурові ракові клітини ГМЛ (гострого мієлоїдного лейкозу).
В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло для застосування в способі діагностики або виявлення. У додатковому аспекті запропоновано спосіб виявлення присутності в біологічному зразку як РОЇ, так і ГАСЗ3. У деяких варіантах здійснення спосіб включає приведення в контакт біологічного зразка з біспецифічним антитілом, як описано в цьому документі, в умовах, що допускають зв'язування біспецифічного антитіла як з РОЇ, такіз | АсСЗ, і виявлення того, чи утворюється комплекс між біспецифічним антитілом і обома антигенами.
Такий спосіб може являти собою спосіб іп міо або іп мімо. В одному варіанті здійснення 60 біспецифічне антитіло використовується для відбору суб'єктів, які підходять для терапії біспецифічним антитілом, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з антитілом до ГАСЗ, причому, наприклад, РОЇ і ГАСЗ являють собою біомаркери для відбору пацієнтів.
У певних аспектах запропоновані мічені біспецифічні антитіла. Мітки включають, але не обмежуються ними, мітки або фрагменти, які виявляються прямим способом (наприклад, флуоресцентні, хромофорні, електронно-щільні, хемілюмінесцентні та радіоактивні мітки), а також фрагменти, такі як ферменти або ліганди, які виявляються непрямим способом, наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярних взаємодій. Типові мітки включають радіоізотопи З2Р, 14С, 1251, ЗН та 131І, флуорофори, такі як хелати рідкоземельних елементів або флуоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люциферазу світляка та бактеріальну люциферазу (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хрону (ПХ), лужну фосфатазу, Д- галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, оксидази вуглеводів, наприклад, глюкозооксидазу, галактозооксидазу і глюкозо-6-фосфатдегідрогеназу, оксидази гетероциклічних сполук, такі як
Ууриказа та ксантиноксидаза, в поєднанні з ферментом, який використовує пероксид водню для окислення попередника забарвлювача, наприклад, ПХ, лактопероксидазу або мікропероксидазу, біотин/авідин, спінові мітки, мітки-бактеріофаги, стабільні вільні радикали.
Е. Фармацевтичні композиції, склади та шляхи введення
У додатковому аспекті винахід відноситься до фармацевтичних композицій, які містять будь- яке з біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, яка запропонована в цьому документі, наприклад, для застосування по кожному з нижченаведених терапевтичних способів. В одному варіанті здійснення фармацевтична композиція містить будь- яке з біспецифічних антитіл, які запропоновані в цьому документі, і щонайменше один фармацевтично прийнятний наповнювач. В іншому варіанті здійснення фармацевтична композиція містить будь-яке з біспецифічних антитіл, які запропоновані в цьому документі, і щонайменше один додатковий терапевтичний агент, наприклад, як описано нижче.
Фармацевтичні композиції за цим винаходом містять терапевтично ефективну кількість одного або більше біспецифічних антитіл, розчинених або диспергованих у фармацевтично прийнятному наповнювачі. Фрази "фармацевтичні або фармакологічно прийнятний" відносяться до молекулярних речовин і композицій, які зазвичай нетоксичні для реципієнтів у використовуваних дозах і концентраціях, тобто не викликають небажаних алергічних або інших несприятливих реакцій при введенні тварині, такій як, наприклад, людина, в залежності від обставин. Приготування фармацевтичної композиції яка містить щонайменше одне біспецифічне антитіло і, необов'язково, додатковий активний інгредієнт, буде відомо фахівцям в цій галузії техніки в контексті цього відкриття, прикладом якого є Кетіпдіоп'є РПагтасецшціїсаї!
Зсіепсе5, 181п Ед. Маск Рііпіпд Сотрапу, 1990, що включено в цей документ за допомогою посилання. Зокрема, композиції являють собою ліофілізовані склади або водні розчини.
Використовуваний в цьому документі термін "Фармацевтично прийнятний наповнювач" включає всі без винятку розчинники, буфери, дисперсійні середовища, що покривають речовини, поверхнево-активні речовини, антиоксиданти, консерванти (наприклад, антибактеріальні агенти, протигрибкові агенти), ізотонічні агенти, солі, стабілізатори та їхні комбінації, як відомо фахівцеві у цій галузії техніки.
Парентеральні композиції включають композиції, призначені для введення шляхом ін'єкції, наприклад, підшкірної, внутрішньошкірної, внутрішньовогнищевої, внутрішньовенної, внутрішньоартеріальної, внутрішньом'язової, інтратекальної або внутрішньочеревної ін'єкції.
Для ін'єкції біспецифічні антитіла за винаходом можуть бути приготовлені у формі водних розчинів, переважно у фізіологічно сумісних буферах, таких як розчин Хенкса, розчин Рінгера або фізіологічний сольовий буфер. Розчин може містити рецептурні агенти, такі як суспендуючі, стабілізуючі та/або диспергуючі агенти. Альтернативно, біспецифічні антитіла можуть бути у формі порошку, призначеного для розведення перед застосуванням відповідним носієм, наприклад, стерильною апірогенною водою. Стерильні розчини для ін'єкцій одержують шляхом включення злитих білків за винаходом у необхідній кількості у відповідному розчиннику з різними іншими компонентами, що вказані нижче, за необхідності. Стерильність може бути легко досягнута, наприклад, за допомогою фільтрації через стерильні фільтрувальні мембрани.
Зазвичай дисперсії готують шляхом включення різних стерилізованих активних інгредієнтів у стерильний носій, який містить основне дисперсійне середовище та/або інші інгредієнти. У разі стерильних порошків для приготування стерильних розчинів, суспензій або емульсій для ін'єкцій кращими способами приготування є технології вакуумної сушки або ліофільної сушки, які дають 60 вихід у вигляді порошку активного інгредієнта плюс будь-який додатковий бажаний компонент з
Б2 їхніх рідких середовищ, попередньо підданих стерилізації фільтрацією. Рідке середовище повинне бути належним чином забуферене, якщо необхідно, і рідкий розчинник перед ін'єкцією необхідно зробити ізотонічним за допомогою достатньої кількості фізіологічного розчину або глюкози. Композиція повинна бути стабільною в умовах виробництва і зберігання, та захищатися від контамінуючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії та гриби. Зрозуміло, що контамінація ендотоксином повинна бути мінімальна і підтримуватися на безпечному рівні, наприклад, менше 0,5 нг/мг білка. Відповідні фармацевтично прийнятні наповнювачі включають, але не обмежуються ними: буфери, такі як фосфат, цитрат і інші органічні кислоти; антиоксиданти, включно з аскорбіновою кислотою і метіоніном; консерванти (такі як хлорид октадецилдиметилбензиламонію; хлорид гексаметонію; хлорид бензалконію, хлорид бензетонію; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; З-пентанол та м-крезол); низькомолекулярні (менше ніж близько 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші вуглеводи, включно з глюкозою, манозою або декстринами; хелатоутворювальні агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворювальні протиїіони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 2п-білок); та/або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Водні ін'єкційні суспензії можуть містити сполуки, які збільшують в'язкість суспензії, такі як натрію карбоксиметилцелюлоза, сорбіт, декстран або тощо. Необов'язково, суспензія також може містити відповідні стабілізатори або агенти, які збільшують розчинність сполук, що дозволяє отримувати висококонцентровані розчини. Крім того, суспензії активних сполук можуть бути приготовані у вигляді відповідних масляних ін'єкційних суспензій. Відповідні ліпофільні розчинники або носії включають жирні олії, такі як кунжутне масло, або синтетичні складні естери жирних кислот, такі як етилолеат або тригліцериди, або ліпосоми.
Активні інгредієнти можна включити в мікрокапсули, приготовані, наприклад, за допомогою методів коацервації або міжфазної полімеризації наприклад, у мікрокапсули з гідроксиметилцелюлози або желатину та мікрокапсули з полі-(метилметацелату), відповідно, в колоїдні системи доставки ліків (наприклад, ліпосоми, альбумін), мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі способи розкриті у Ветіпаїоп'5
Рпагтасешііса! 5сіепсез (181й Ей. Маск Р'гіпіпд Сотрапу, 1990). Можуть бути приготовані препарати з уповільненим вивільненням. Відповідні приклади препаратів з уповільненим вивільненням включають напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, що містять поліпептид, причому ці матриці представлені у вигляді формованих виробів, наприклад, плівок або мікрокапсул. У конкретних варіантах здійснення пролонговане всмоктування композиції, введеної шляхом ін'єкції може бути викликано застосуванням в композиціях агентів, які уповільнюють абсорбцію, таких як, наприклад, моностеарат алюмінію, желатин або їх комбінації.
Приклади фармацевтично прийнятних наповнювачів в цьому документі додатково включають агенти для диспергування лікарських засобів, такі як розчинні нейтрально-активні глікопротеїни гіалуронідази (5НАБЕСР), наприклад, людські розчинні глікопротетїни гіалуронідази РІН-2О, такі як гНиРН2гОо (НУ ЕМЕХО, Вахіег Іпіегпайопаї, Іпс.). Деякі типові 5ЗНА5БЕСР і способи їхнє застосування, у тому числі "НиРН2О, описані в патентних публікаціях
США Мо 2005/0260186 та 2006/0104968. В одному аспекті ЗХЗНАБЕОР об'єднують з однією або більше додатковими глюкозаміногліканазами, такими як хондроїтинази.
Ілюстративні ліофілізовані композиції антитіл описані в патенті США Мо 6267958. Водні композиції антитіл включають препарати, описані в патенті США Мо 6171586 та М/о 2006/044908, причому останні композиції включають гістидин-ацетатний буфер.
На додаток до композицій, описаних раніше, біспецифічні антитіла також можуть бути складені у вигляді депо-препарату. Такі препарати тривалої дії можуть вводити шляхом імплантації (наприклад, підшкірно або внутрішньом'язово) або за допомогою внутрішньом'язової ін'єкції. Так, наприклад, біспецифічні антитіла можуть бути складені з відповідних полімерних або гідрофобних матеріалів (наприклад, у вигляді емульсії в прийнятній олії) або іонообмінних смол або у вигляді важкорозчинних похідних, наприклад, у вигляді важкорозчинної солі.
Фармацевтичні композиції, що містять біспецифічні антитіла за винаходом, можуть бути отримані за допомогою звичайних процесів змішування, розчинення, емульгування, інкапсуляції, захоплення або ліофілізації. Фармацевтичні композиції можуть бути складені загальноприйнятим способом з використанням одного або більше фізіологічно прийнятних 60 носіїв, розріджувачів, наповнювачів або допоміжних речовин, які полегшують технологію виготовлення білків у препарати, які можуть бути використані фармацевтично. Відповідний склад залежить від вибраного шляху введення.
Біспецифічні антитіла можуть бути складені в композицію у формі вільної кислоти або основи, нейтральній або сольовій формі. Фармацевтично прийнятні солі являють собою солі, які по суті зберігають біологічну активність вільної кислоти або основи. Вони включають солі приєднання кислоти, наприклад, ті, які утворені вільними аміногрупами білкової композиції, або які утворені з неорганічними кислотами, такими як, наприклад, соляна або фосфорна кислоти, або такими органічними кислотами, як оцтова, щавлева, винна чи мигдальна кислота. Солі, які утворені з вільними карбоксильними групами, також можуть бути отримані з неорганічних основ, таких як, наприклад, гідроксиди натрію, калію, амонію, кальцію або заліза; або таких органічних основ як ізопропіламін, триметіламін, гістидин або прокаїн. Фармацевтичні солі мають тенденцію бути більш розчинними у водних та інших протонних розчинниках, ніж відповідні форми вільної основи.
Композиція в цьому документі може також містити більше одного активного інгредієнта, якщо це необхідно для конкретного симптому, що підлягає лікуванню, переважно тих, які мають додаткові активності, які не мають негативного впливу одна на одну. Такі активні компоненти відповідно присутні в комбінації в кількостях, ефективних для передбачуваної мети.
Композиції, які використовуються для введення іп омімо, зазвичай є стерильними.
Стерильність може бути легко досягнута, наприклад, за допомогою фільтрації через стерильні фільтруючі мембрани. б. Терапевтичні способи і композиції
Будь-яке з біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
ІГАСЗ, яке запропоноване в цьому документі, можна використовувати в терапевтичних способах.
Для використання в терапевтичних способах біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як визначено в цьому документі, можуть включати до складу препарату, дозувати і вводити за допомогою способів, які узгоджуються з належною медичною практикою. Чинники, які слід враховувати в цьому контексті, включають конкретний розлад, що підлягає лікуванню, конкретного ссавця, що підлягає лікуванню, клінічний стан окремого пацієнта, причину розладу, область доставки агента, спосіб введення, схему введення та інші чинники, відомі лікарям-практикам.
В одному аспекті запропоновані біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як визначено в цьому документі, для застосування в якості лікарського засобу. У додаткових аспектах запропоновані біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АОЗ, як визначено в цьому документі, для застосування при лікуванні захворювання, зокрема, для застосування при лікуванні онкологічного захворювання. У деяких варіантах здійснення запропоновані біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАОЗ, для використання в способі лікування. В одному аспекті запропоновано біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АС3, як описано в цьому документі, або фармацевтичну композицію, яка містить біспецифічне антитіло, для застосування в лікуванні захворювання у людини, який цього потребує. У деяких варіантах здійснення винахід відноситься до біспецифічних антитіл, які містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, для використання в способі лікування індивідуума, що має захворювання, що включає введення індивідууму терапевтично ефективної кількості біспецифічного антитіла. В окремих варіантах здійснення захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою онкологічне захворювання. В іншому аспекті захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою інфекційне захворювання, зокрема хронічну вірусну інфекцію, таку як ВІЛ (вірус імунодефіциту людини), ВГВ (вірус гепатиту В), ВГС (гепатит С), ВПГ1 (вірус простого герпесу типу 1), ЦМВ (цитомегаловірус),
ВЛХМ (вірус лімфоцитарного хоріоменінгіту) або ВЕБ (вірус Епштейна-Барр). Суб'єкт, пацієнт або "індивідуум", який потребує лікування, зазвичай є ссавцем, більш конкретно людиною.
У додатковому аспекті у винаході запропановано використання біспецифічних антитіл, що 60 містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як визначено в цьому документі раніше, при виготовленні або приготуванні лікарського засобу для лікування захворювання у індивідуума, який потребує цього. В одному варіанті здійснення лікарський засіб призначений для застосування в способі лікування захворювання, що включає введення індивідууму, який страждає на це захворювання, терапевтично ефективної кількості лікарського засобу.
У певних аспектах захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативну хворобу, зокрема онкологічне захворювання. Приклади онкологічного захворювання включають рак сечового міхура, рак головного мозку, рак голови та шиї, рак підшлункової залози, рак легені, рак молочної залози, рак яєчників, рак матки, рак шийки матки, рак ендометрія, рак стравоходу, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак прямої кишки, рак шлунку, рак простати, рак крові, рак шкіри, плоскоклітинний рак, рак кісток і рак нирок. Інші порушення проліферації клітин, які можна лікувати з використанням біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з (АСЗ3 за винаходом, включають, але не обмежуються цим, новоутворення, розташовані в черевній порожнині, кістці, молочній залозі, травневій системі, печінці, підшлунковій залозі, очеревині, ендокринних залозах (наднирковій залозі, паращитоподібній залозі, гіпофізі, яєчках, яєчниках, тимусі, щитоподібній залозі), оці, голові та шиї, нервовій системі (центральній та периферичній), лімфатичній системі, тазі, шкірі, м'яких тканинах, селезінці, області грудної клітини та сечостатевій системі. Також включені передракові стани або ураження та метастази злоякісних новоутворень. У певних аспектах злоякісне новоутворення вибирають з групи, що складається з нирково-клітинного раку, раку шкіри, раку легені, колоректального раку, раку молочної залози, раку головного мозку, раку голови та шиї. У додаткових аспектах злоякісне новоутворення вибирають з карциноми, лімфоми (наприклад, лімфоми Ходжкіна та неходжкінської лімфоми), бластоми, саркоми і лейкоза. В іншому аспекті злоякісного новоутворення, яке підлягає лікуванню, вибирають з плоскоклітинного раку, дрібноклітинного раку легені, недрібноклітинного раку легені, аденокарциноми легені, плоскоклітинного раку легені, раку очеревини, гепатоцелюлярного раку, раку шлунково-кишкового тракту, раку підшлункової залози, гліоми, раку шийки матки, раку яєчників, раку печінки, раку сечового міхура, гепатоми, раку молочної залози, раку товстої кишки, колоректального раку, раку ендометрія або матки, раку слинної залози, раку нирки, раку печінки, раку простати, раку вульви, раку щитоподібної залози, раку печінки, лейкозу та інших лімфопроліферативних захворювань, а також різних видів раку голови та шиї.
У додатковому аспекті захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою інфекційне захворювання, зокрема хронічну вірусну інфекцію. Термін "хронічна вірусна інфекція" відноситься до суб'єкта, ураженого або інфікованого хронічним вірусом. Прикладами хронічних вірусних інфекцій є вірус імунодефіциту людини (ВІЛ), вірусна інфекція гепатиту В (ВГВ), вірусна інфекція гепатиту С (ВГС), вірус простого герпесу 1 (ВПГ1), цитомегаловірус (ЦМВ), вірус лімфоцитарного хоріоменінгіту (ВЛХМ) або вірус Епштейна-Барр (ВЕБ).
Фахівець у цій галузі техніки легко визнає, що в багатьох випадках біспецифічна молекула може не забезпечувати лікування, а може давати тільки часткову користь. У деяких варіантах здійснення фізіологічні зміни, які мають певну користь, також вважаються терапевтично корисними. Таким чином, у деяких варіантах здійснення кількість біспецифічного антитіла, яке забезпечує зміна фізіологічного стану, вважається "ефективною кількістю" або "т-ерапевтично ефективною кількістю".
У додатковому аспекті винахід відноситься до способу лікування захворювання у індивідуума, який включає введення зазначеному індивідууму терапевтично ефективної кількості біспецифічних антитіл, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується до | ДОЗ за винаходом. В одному варіанті здійснення зазначеному індивідууму вводять композицію, що містить біспецифічне антитіло за винаходом у фармацевтично прийнятній формі. В окремих варіантах здійснення захворювання, яке підлягає лікуванню, являє собою проліферативне захворювання. У конкретному варіанті здійснення захворювання являє собою онкологічне захворювання. У деяких варіантах здійснення спосіб додатково включає введення індивідууму терапевтично ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад, протиракового засобу, якщо захворювання, що підлягає лікуванню, являє собою онкологічне захворювання. В іншому аспекті захворювання являє собою хронічну вірусну інфекцію. "Індивідуум" відповідно до будь-яким з вищевказаних варіантів здійснення може бути ссавцем, переважно людиною.
Для запобігання або лікування захворювання відповідна доза біспецифічних антитіл, що 60 містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, ії другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АОЗ за винаходом (при використанні окремо або в комбінації з одним або іншими додатковими терапевтичними агентами) буде залежати від типу захворювання, що підлягає лікуванню, шляху введення, маси тіла пацієнта, типу злитого білка, тяжкості та перебігу захворювання, від того, чи вводиться біспецифічне антитіло для профілактичних або терапевтичних цілей, від попередніх або паралельних терапевтичних втручань, історії хвороби пацієнта та реакції на злитий білок, а також рішення лікаря. У будь-якому випадку, фахівець, відповідальний за введення, буде визначати концентрацію активного (их) інгредієнта (ів) в композиції і відповідну (і) дозу (и) для конкретного суб'єкта. У цьому документі розглядаються різні схеми застосування препарату, включаючи, але не обмежуючись, одноразове або багаторазове введення в різні моменти часу, болюсне введення та імпульсна інфузія.
Біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, як визначено в цьому документі, відповідним чином вводять пацієнту за один раз або протягом серії процедур. Залежно від типу та тяжкості захворювання вихідною потенційною дозою для введення пацієнту може бути доза від приблизно 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, від 0,1 мг/кг до 10 мг/кг) біспецифічного антитіла, будь то, наприклад, одне або більше окремих введень або безперервна інфузія. Одна типова добова доза може варіюватися від близько 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від факторів, згаданих вище. Для повторних введень протягом декількох діб або довше, залежно від стану, лікування зазвичай триватиме до тих пір, поки не відбудеться бажане пригнічення симптомів захворювання. Одна типова доза біспецифічного антитіла повинна знаходитися в діапазоні від близько 0,005 мг/кг до близько 10 мг/кг. В інших прикладах доза також може становити від близько 1 мкг/кг маси тіла, близько 5 мкг/кг маси тіла, близько 10 мкг/кг маси тіла, близько 50 мкг/кг маси тіла, близько 100 мкг/кг маси тіла, близько 200 мкг/кг маси тіла, близько 350 мкг/кг маси тіла, близько 500 мкг/кг маси тіла, близько 1 мг/кг маси тіла, близько 5 мг/кг маси тіла, близько 10 мг/кг маси тіла, близько 50 мг/кг маси тіла, близько 100 мг/кг маси тіла, близько 200 мг/кг маси тіла, близько 350 мг/кг маси тіла, близько 500 мг/кг маси тіла до близько 1000 мг/кг маси тіла або більше на введення і будь-який діапазон, виведений з описаного вище. У прикладах похідного діапазону з чисел, перерахованих у цьому документі, діапазон від близько 5 мг/кг маси тіла до близько 100 мг/кг маси тіла, від близько 5 мкг/кг маси тіла до близько 500 мг/кг маси тіла тощо, можна вводити, грунтуючись на числах, описаних вище. Таким чином, пацієнту може бути введена одна або більше доз у близько 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 5,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-яка їхня комбінація). Такі дози можуть вводити періодично, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, так, щоб пацієнт отримував від близько двох до близько двадцяти або, наприклад, близько шести доз злитого білка). Може бути призначена спочатку більш висока навантажувальна доза, за якою йде одна або кілька нижчих доз. Проте, можуть бути корисні інші схеми лікування. Прогрес цієї терапії легко контролювати за допомогою традиційних способів і аналізів.
Біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, як визначено в цьому документі, зазвичай використовуються в кількості, ефективній для досягнення поставленої мети. Для застосування в лікуванні або запобіганні хворобливого стану біспецифічні антитіла за винаходом або їхні фармацевтичні композиції вводять або застосовують у терапевтично ефективній кількості. Визначення терапевтично ефективної кількості знаходиться в межах можливостей фахівців у цій галузі техніки, особливо в контексті докладного опису, представленого в цьому документі.
Для системного введення терапевтично ефективна доза може бути спочатку оцінена з аналізів іп мійго, таких як аналізи клітинних культур. Потім на тваринних моделях можна розрахувати дозу для досягнення діапазону концентрацій в кровотоці, який включає ІСво, як визначено в культурі клітин. Така інформація може бути використана для більш точного визначення корисних доз у людини.
Початкові дози також можуть бути оцінені за даними іп мімо, наприклад, на тваринних моделях, з використанням методик, які добре відомі в цій галузі техніки. Фахівець у цій галузі техніки може легко оптимізувати введення людям на основі даних, отриманих з досліджень на тваринах.
Кількість і інтервал дозування можна регулювати індивідуально, щоб забезпечити рівні біспецифічного антитіла в плазмі, які є достатніми для підтримки терапевтичного ефекту.
Звичайні дози для пацієнтів для введення шляхом ін'єкції становлять від близько 0,1 до 50 мг/кг/доба, зазвичай від близько 0,5 до 1 мг /кг/ідоба. Терапевтично ефективні рівні в плазмі 60 можуть бути досягнуті шляхом введення декількох доз щодоби. Рівні в плазмі можуть бути виміряні, наприклад, за допомогою ВЕРХ.
У випадках місцевого введення або селективного поглинання ефективна локальна концентрація біспецифічного антитіла може не бути пов'язана з концентрацією в плазмі.
Фахівець у цій галузі техніки зможе оптимізувати терапевтично ефективні місцеві дози без надмірного експериментування.
Терапевтично ефективна доза біспецифічних антитіл, описаних у цьому документі, зазвичай забезпечує терапевтичну користь, не викликаючи суттєвої токсичності. Токсичність і терапевтична ефективність злитого білка можуть бути визначені стандартними фармацевтичними процедурами на клітинній культурі або експериментальних тваринах.
Аналізи клітинних культур і дослідження на тваринах можна використовувати для визначення
ГОво (доза, летальна для 50 95 популяції) ії ЕЮхо (доза, терапевтично ефективна для 50 95 популяції). Співвідношення доз між токсичним та терапевтичним ефектами являє собою терапевтичний індекс, який може бути виражений як співвідношення І ЮО50/ЕЮОзо. Біспецифічні антитіла, які демонструють великі терапевтичні показники, є кращими. В одному варіанті здійснення біспецифічне антитіло за винаходом проявляє високий терапевтичний індекс. Дані, отримані з аналізів клітинних культур і досліджень на тваринах, можуть бути використані при складанні діапазону доз, придатних для застосування у людей. Доза переважно знаходиться в діапазоні концентрацій в кровотоці, які включають ЕО»о з мінімальною токсичністю або без неї.
Доза може змінюватися в цьому діапазоні в залежності від безлічі факторів, наприклад, використовуваної лікарської форми, використовуваного способу введення, стану суб'єкта тощо.
Точний склад, спосіб введення та доза можуть бути вибрані окремим лікарем з урахуванням стану пацієнта (див., наприклад, Ріпа| еї аї!., 1975, іп: Те Рпаппасоіодіса! Вазібв ої ТПегарешісв,
Сп. 1, р. 1, включений в цей документ за допомогою посилання у всій своїй повноті).
Лікуючий лікар для пацієнтів, яких лікують біспецифічними антитілами за винаходом, знає, які коли припинити, перервати або скорегувати введення через токсичність, дисфункції органів тощо. І навпаки, лікуючий лікар також знав би, як скорегувати лікування до більш високих рівнів, якщо клінічна відповідь не була достатньою (виключно з токсичністю). Величина введеної дози при лікуванні розладу, що представляє інтерес, буде варіюватися залежно від тяжкості патологічного стану, що підлягає лікуванню, від шляху введення тощо. Тяжкість патологічного стану може, наприклад, оцінюватися частково за допомогою стандартних методів оцінки для прогнозування. Крім того, доза і, можливо, частота введення дози також будуть варіюватися залежно від віку, маси тіла і відповіді окремого пацієнта.
Інші агенти та способи лікування
Біспецифічні антитіла, що містять перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, як описано в цьому документі раніше, можуть вводитися в комбінації з одним або більше іншими агентами в терапії. Наприклад, біспецифічне антитіло відповідно за винаходом можна вводити щонайменше з одним додатковим терапевтичним агентом. Термін "терапевтичний агент" охоплює будь-який агент, який можна вводити для лікування симптому або захворювання у індивідуума, що потребує такого лікування. Такий додатковий терапевтичний агент може містити будь-які активні інгредієнти, які підходять для конкретного показання, що піддається лікуванню, переважно ті, які мають комплементарні активності, які не мають небажаного впливу один на одний. В окремих варіантах здійснення додатковий терапевтичний агент являє собою інший протираковий агент.
В одному аспекті винаходу біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АС3З, як описано в цьому документі, або фармацевтична композиція, що містить зазначене біспецифічне антитіло, призначені для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, при якому біспецифічне антитіло вводять у комбінації з хіміотерапевтичним агентом, опроміненням та/або іншими агентами для застосування при імунотерапії онкологічного захворювання.
У конкретному аспекті винаходу біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | АСЗ, як описано в цьому документі, або фармацевтична композиція, що містить зазначене біспецифічне антитіло, яке призначене для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, при якому біспецифічне антитіло вводять у комбінації з активуючим Т-клітини анти-СОЗ біспецифічним антитілом, зокрема, анти-
СЕА/анти-СОЗ біспецифічним антитілом. В одному аспекті анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло являє собою активуюче Т-клітини анти-СОЗ біспецифічне антитіло, що містить другий 60 антигензв'язуючий домен, що містить (а) варіабельну область важкого ланцюга (МнСЕА), що містить послідовність СОК-НІ 5ЕО ІЮ МО: 154, послідовність СОМК-Н2 5ЕО ІЮО МО: 155 і послідовність СОВ-НЗ 5ЕО ІО МО: 156, та/або варіабельну область легкого ланцюга (МІіСЕА), що містить послідовність СОК-І1 ЗЕО ІО МО: 157, послідовність СОК-1/2 5ЕО ІЮО МО: 158 і послідовність СОК-І З 5ЕО ІЮ МО: 159, або (Б) варіабельну область важкого ланцюга (УнСЕА), що містить послідовність СОК-НІ ЗЕО ІО МО: 162, послідовність СОК-Н2 5ЕО ІО МО: 163 і послідовність СОК-НЗ 5ЕО ІО МО: 164, та/або варіабельну область легкого ланцюга (МІіСЕА), що містить послідовність СОК-І1 5ЕО ІО МО: 165, послідовність СОК-1/2 5ЕО ІО МО: 166 і послідовність СОК-ІЗ 5ЕО ІО МО: 167. В одному аспекті анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло являє собою активуюче Т-клітини анти-СОЗ біспецифічне антитіло, що містить варіабельну область важкого ланцюга (УнСЕА), що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 160, та/або варіабельну область легкого ланцюга (МіІСЕА), що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 161, або другий антигензв'язуючий домен, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга (МнСЕА), що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 168, та/або варіабельну область легкого ланцюга (МІіСЕА), що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 169.
У додатковому аспекті анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло містить Ес-домен, що містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес-рецептором та/"або ефекторну функцію. Зокрема, анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло містить Ес- домен ІДдС1, що містить амінокислотні заміни І 234А, І 235А і РЗ329О.
У конкретному аспекті анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло містить поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності ЗЕО ІЮ МО: 146, поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності 5ЗЕО ІО МО: 147, поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 905, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності зЗЕО ІЮО МО: 148, і поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99
Фо ідентичний послідовності 5Е0О ІЮ МО: 149. У додатковому конкретному варіанті здійснення біспецифічне антитіло містить поліпептидну послідовність ЗЕО І МО: 146, поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 147, поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 148 і поліпептидну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 149 (СЕА СОЗ ТОВ).
У додатковому аспекті анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічне антитіло містить поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності зЗЕО ІЮ МО: 150, поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності 5ЗЕО ІО МО: 151, поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 9Уо, 98 95 або 99 95 ідентичний послідовності зЗЕО ІЮО МО: 152, і поліпептид, який щонайменше на 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99
Фо ідентичний послідовності 5Е0О ІЮ МО: 153. У додатковому конкретному варіанті здійснення біспецифічне антитіло містить поліпептидну послідовність ЗЕО ІО МО: 150, поліпептидну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 151, поліпептидну послідовність 5ЕО ІО МО: 152 і поліпептидну послідовність 560 1Ю МО: 153 (СЕАСАМ5 СОЗ3 ТОВ).
В іншому аспекті запропоновано фармацевтичну композицію, що містить біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з (АСЗ, як описано в цьому документі, і активуюче Т-клітини анти-СОЗ біспецифічне антитіло, зокрема, анти-СЕА/анти-СОЗ3 біспецифічне антитіло. У конкретному аспекті фармацевтична композиція призначена для застосування в комбінованому, послідовному або одночасному лікуванні захворювання, зокрема, для лікування онкологічного захворювання. Більш конкретно, композиція призначена для застосування при лікуванні солідних пухлин.
В іншому аспекті у винаході запропановано спосіб лікування або затримки прогресування злоякісного новоутворення у індивідуума, що включає введення суб'єкту ефективної кількості біспецифічного антитіла, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується до І АСЗ, як описано в цьому документі, у комбінації з активуючим Т-клітини анти-СОЗ біспецифічним антитілом, зокрема, анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічним антитілом або анти-БоЇК1/анти-СОЗ біспецифічним антитілом.
Такі інші агенти відповідним чином присутні в комбінації в кількостях, які ефективні для передбачуваної мети. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості використовуваного злитого білка, типу розладу або лікування та інших чинників, що обговорюються вище. Біспецифічні антитіла зазвичай використовуються в тих самих дозах і такими самими способами введення, як описано в цьому документі, або приблизно від 1 до 99 бо доз, описаних у цьому документі, або в будь-якій дозі і будь-яким способом, який емпірично/клінічно визначений як відповідний. 60 Такі види комбінованої терапії, зазначені вище, включають комбіноване введення (де два або більше терапевтичних агентів включено в одну і ту саму або окремі композиції) і роздільне введення, і в цьому випадку введення біспецифічного антитіла може відбуватися до, одночасно та/або після введення додаткового терапевтичного агента та/або ад'юванта.
Н. Продукти виробництва
В іншому аспекті винаходу запропановано продукт виробництва, що містить речовини, корисні для лікування, профілактики та/або діагностики розладів, описаних вище. Продукт виробництва містить контейнер і етикетку або листок-вкладиш на контейнері або зв'язаний з ним. Відповідні контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци, пакети з розчинами для внутрішньовенного введення тощо. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластик. Контейнер містить композицію, одну або в комбінації з іншою композицією, яка ефективна для лікування, профілактики та/або діагностики патологічного стану, і може мати стерильний вхідний отвір (наприклад, контейнер може являти собою пакет з розчинами для внутрішньовенного введення або флакони з пробкою, яка проколюється за допомогою голки для підшкірних ін'єкцій). Щонайменше один активний агент в композиції являє собо. біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, як визначено в цьому документі раніше.
На етикетці або листку-вкладиші в упаковці зазначено, що композиція використовується для лікування вибраного патологічного стану. Крім того, продукт виробництва може містити (а) перший контейнер з композицією, яка міститься в ньому, при цьому композиція містить біспецифічне антитіло за винаходом; і (Б) другий контейнер з композицією, яка міститься в ньому, при цьому композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний агент. Продукт виробництва в цьому варіанті здійснення винаходу може додатково містити листок-вкладиш в упаковці із зазначенням, що композиції можуть бути використані для лікування конкретного патологічного стану.
В альтернативному або додатковому варіанті продукт виробництва може додатково містити другий (чи третій) контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буферний розчин, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (ВМУРІ), фосфатно-сольовий буферний розчин, розчин
Рінгера та розчин декстрози. Додатково можуть бути включені інші речовини, бажані з комерційної та споживчої точки зору, включно з іншими буферами, розчинниками, фільтрами, голками та шприцами.
Таблиця С (послідовності): 11070011 назва | 77777777 Послідовність/:///://///:(/У/Ж
НУВ-НІ важкого
НУВ-Н2 важкого
НУВ-НЗ важкого
НУВА-11 легкого ланцюга,
НУВ-12 легкого ланцюга,
НМУВ-І3 легкого ланцюга, ворону варіабельний домен ЕМІ/"МЕЗОСОЇ МКРОСБІ КІ БХСААБИаЕєЗЕЗБУТМ5УМУВОТ 7 важкого ланцюга УН, РЕКАГОММУАТІЗаСОВОІММРєРОБУКОаВЕТІЗАОМАКМТІ МІ.
РО1-0103 ЕМ55І М5БЕОТА МУСМ СТО ВУМЕАГ о5МмС,ОСТОУТУ55 варіабельний домен КІМ ТО5РАБІ РУБІ а ОВАТІБСВА5ЗБЕВМОТ5ОМ5ЕІНМ МО легкого ланцюга МІ, ОВРООБРКИ МАЗУТ ЕБОМРАНЕЗабБавеТОЕТІ ТІОРМЕ
РО1-0103 АВОМАТУУСООММОУРМТЕССИСТКІ ЕК поабельний домен ЕМО ЕЗОССІ МОРОЗІ ВІ ЗЄСААЗОЕ5Е55УТМОУМУВО ваккого ланцюга МН АРОКОЇ ЕМУАТІЗССОВОЇМУРОБУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ М
РОЇ-0103. 01 (РОЇ 0376 ГОММ5І ВАЕОТАУМУСМІ І Та вУМЕАІ оБУСОСТІ МУТУ55 гуманізований варіант - | ФІММТО5РОБІ АУБІ ФАЕВАТІМСКАЗЕЗМОТЗОМЗЕІНМ МО 10 варіабельний домен ОКРООБРКИИ МАО ЕБОМРОНЕЗИаБОБОТОВЕТІ ТІВ О легкого ланцюга МІ РО1- АЕОСМАМУУСООММОУРМТЕСОСТКУЄБЇІК
Таблиця С (послідовності): 1111 Назва. | 77777711 Послідовністьу/:.:/:/3/:///:/4Жи 77777.7.юЮИ ТО103 01 (РОТ 0376 нн васіабельний ен 7 |ОУУМТОЗРІ ЗІ РУТІ СОРАЗІЗСВАЗЕЗМОТЗОМОЕІНМХО 11 петого пан юга М. Ррі-| ОВРООЗРАІ ШУ ВУЗІ ЕЗОУРОВЕЗО5О5ОТОЕТІКІВВМ 0103 0? ц ЕАЕОМОУУУСООМУОУРМТЕСОСТКУЕЇїК васіабельний ен 7 | ЕЇМІ ТО9РАТІ 5І ЗРСЕВАТІ ЗСВАЗЕЗМОТЗОМОБІНМ ХО 12 р д ОКРООБРВІИ ІМВ55ТІ ЕЗОІРАВЕЗО5О5СТОЕТІ ТІ Е легкого ланцюга МІ- РОТ-Ї РЕДЕДУУУСООМУВУРМ/ТЕСОСТКУ ІК 0103 03 ОО о гумансований варант - ТЕМІ ТО5РАТІ ЗІ. 5РСОЕВАТІ ЗСВАЗЕБМОТЗОМОЕІНМИУО 13 р д ОКРООЗРВІ ПУВЗ58ТІ ЕЗСІРАВЕЗО5О9СТОЕТІ ТІВ Е легкого ланцюга МІ. РОТ-Ї РЕДЕАДУУУСООМУрУРМ/ТЕСОСТКУ ІК 0103 04 оо о
НМУВ-НІ1 важкого ланцюга, агАс3(0414). | СУТММ
НМУВ-Н2 важкого ланцюга, асАСЗ(0414) мМІЗМИрсастУ УтТОоб5УКОа
НМУВ-НЗ важкого ланцюга, агдс3(0414).. | З-ТОТТІУО5 Оу
НУВА-11 легкого ланцюга,
НН лет ВАБОБІБ5М. М
НУВ-12 легкого ланцюга, аг АСЗ(0414 ААЗТ ОБ
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
Нв лет ООТУЗОРІ т варіабельний домен ЕМО ЕЗОСО ГМОРОСБІ ВІ. ЗСААЗОРІБО ваккого ланцюга УН ОУТМММУВОА РОКОЇ ЕМУМАМ ІЗМИрОССТУУ а АСЗ(041 4) ' ТО5УКОВЕТІ 5ВООЕКМТІ У І ОММ5І ВАЕЄО ТАУУУСАКОІ.
ТОТТІ МО5оУ МСОСТІ УТУ5 5 варіабельний домен ІОМТО5РББ І БАБМООВМТ ІТСВАБОБІВ 5БМІ ММУМООКР 21 легкого ланцюга МІ, СКАРКГИІМА А5ТІ О5С2УРЗ НЕЗОаЗОаБОИтТОо ЕТІ ТІ ОР а даз(0414 ЕОЕБАТУМСОО ТУ55РІ ТЕСО СТКМУБЇїК
НМУВ-НІ1 важкого ланцюга, агАс3(0403).. | С7ТМН
НМУВ-Н2 важкого ланцюга, ас АСЗ(0403) г Ум раасту утМ5УкКа
НМУВ-НЗ важкого ланцюга, агдс3(0403). | ТОТЗІУСУ Оу
НУВА-11 легкого ланцюга,
НУК лег ВАБОБІБ5М. М
НУВ-12 легкого ланцюга, а АСЗ(0403 ААЗЗІОЗ
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
НН з лег ООТУТРІТ варіабельний домен ЕМО ЕЗОСО ГМОРОСОБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕО в ваккого пан а МН РУТМНУ/УВОА РОКОГЕМУВІ. УЗМ/ОССОСТУУ аГАСЗ(О 403) ' ТМ5УКОВЕТІ 5ВОМ5КМТІ М ГОММ5І ВАЕО ТАМУЕСАКАЇ
ТОТ5І МаХОоМ СОС МтУ5 5 варіабельний домен ІОМТО5РББ І БАБМООВМТ ІТСВАБОБІВ 5БМІ ММУМООКР 29 легкого ланцюга МІ, СМАРКІГІМА АБЗ ОБИаМРО ВЕЗОа5О50ТО ЕТІ ТІ55БІ ОР аі дДа3(0403 ЕОРБАТУМСОО ТУ5ТРІ ТЕСО СТКМЕЇК
НМУВ-НІ1 важкого ланцюга, агАс3(0411). | С7ТММ
НМУВ-Н2 важкого ланцюга, агАСЗ(0411) МІЗМИІПОСАТУ МХАОЗУКО
НУВ-НЗ важкого стро Ма5 ру во
Таблиця С (послідовності): 17771111 назва. | 77777777 Послідовнсть7/://:/://С-ШИ 11717171 |ланцюгеасдо3(041у | ССС: /::ДЗ КО
НУВА-11 легкого ланцюга,
Нв лег ВАВОВІУВМІ. М
НУВ-12 легкого ланцюга, а АСЗ(0411 АЗЗЗІОЗ
НМУВ-І3 легкого ланцюга, аг АоЗ3(0411 ОО ГУЗТРІТ варіабельний домен ЕМНІ Г ЕБОСО І МОРОСБІ ВІ 5СААБОРІМО
Р д ОУТМММУВОА РОКСІ ЕМ/УВУ ІЗМИОССАТУУ
З6 важкого ланцюга МН, | дО5УКОВЕТІ ЗВООЕКМТІ У ГОММ8І ВАЄО ТАУУУСАКСІ. аг даз(0411) о тротмавру мусостІі ту 5 варіабельний домен ІОМТО5РББ І БАБМООВМТ ІТСВАБОБІМ 5БМІ ММУМООКР 37 легкого ланцюга МІ, СКАРКІ МА 5551 О5ОаМРБО ВЕЗ5Оа505О0Т0О ЕТІ ТІ ОР аг дсзЗ(0411 ЕОБАТУУСООЮ ТУ5ТРІ ТЕССа аТКМУБїК
НМВ-НІ важкого ланцюга, агдс3(0417).. | С/АМ5
НМВ-Н2 важкого ланцюга, ас АСЗ3(0417) сІОМБаУУТтУ УТОБУКО
НМВ-НЗ важкого ланцюга, агдс3(0417).. | "НЗОШПУМОА РО
НУВА-11 легкого ланцюга,
НН лет ВАВОВІВМІ. М
НУВ-12 легкого ланцюга, агАсЗ(0417 ААЗЗІОЗ
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
НУК лег ООТУБТРІ т варіабельний домен ЕМОЇ МЕБОСО І МОРОСБІ ВІ АСААБОЕТЕ5 з ваккого пан а МН ОМАМОМ/УВОА РОКСІ ЕМ/У5О ІОМ5ОУУТУУ а АСЗ(041 7 ' ТОБМКОВЕТІ БНОЮМКМТІ М І ОММ5І ВАЕО ТАММІ СТКТН
БОГММОАБО МмУсОоатТММтМ 55 варіабельний домен ІОМТО5РББ І БАБМООВМТ ІТСВАБОБІВ 5БМІ ММУМООКР легкого ланцюга МІ, СКАРКІ МА АБО О5ОМРУО ВЕЗОа505О0Т0О ЕТІ ТІ ОР аг АсзЗ(0417 ЕОБАТУУСООЮ ТУ5ТРІ ТЕССа аТКМУБїК
НМВ-НІ важкого ланцюга, агдс3(0416).. | С/АМ5
НМВ-Н2 важкого ланцюга, ас АСЗ3(0416) сІОМБаУУТтУ УТОБУКО
НМВ-НЗ важкого ланцюга, агАдс3(0416 ТН5епУМоА РО!
НУВА-11 легкого ланцюга,
НУК лег ВАВОВІВМІ. М
НУВ-12 легкого ланцюга, аг АСЗ(0416 ОАЗБІЕЗ
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
НН лег ОО5У5ТРІТ варіабельний домен ЕМОЇ МЕБОаСО І МОРОСБІ ВІ АСААБОЕТЕ5
Бо ваккого пан а МН ОМАМОМ/УВОА РОКСІ ЕМ/У5О ІОМ5ОУУТУУ а АСЗ(041 в) ' ТОБМКОВЕТІ БНОЮМКМТІ М І ОММ5І ВАЕО ТАММІ СТКТН
БОГММОАБО МмУсОоатТММтМ 55 варіабельний домен ТОГТОБРБУБ І БАБМООВМТ ІТСВАБОБІВ БМ ММУМООКР 53 легкого ланцюга МІ, СКАРКИІМО АБЗБОІ ЕС МР НЕЗОЗОаБИто АТІ ТІЗ5І ОР аг дсз3(0416 ЕОБАТУУСОО 5У5ТРІ ТЕСО ОТКМБІК варіабельний домен ОМОГ ООСМ/ САС ІІ КРОЕТІ 51 ТСАУУСОаБЕ5
БА важкого ланцюга УН, ОМ ММ МУМІВОР РОКОГЕУЛИЕ ІМННОаБТМОМ вМ5-986016 РБІ КЗАМТІ 5 ГОТ5КМОБ5І. КІ В5ЕМТААОТ АМУМСАБОУ5 (МО2014/008218 і ОМЕММУЕОРМУ СХОСТІ УТУ55
Таблиця С (послідовності): 171111 назва// | 1 Послідовнсть7/7/:///0.:/ГЗ/: 11100 0фОоБОТВЮВЗавгЯВ)/О/ | ССС варіабельний домен легкого ланцюга МІ. ЕІМГТО5РАТ І 5І 5РОЕВАТ І 5СВАБОБІВ ЗМІ АМУМООКР вМ5-986016 СОАРАЦІМО АБМААТОИІРА НЕБО5Оа5ОТО БТІ ТІЗБІ ЕР (МмО2014/008218 і ЕОРАМУУСОО АБММУ/РІ ТРОО СТМІ БІК
О52016/0326248
НМУВ-НІ важкого 56 ланцюга, ОЖУМ/М
МОХ25Е7(25Е7
НМУВ-Н2 важкого 57 ланцюга, ЕІМНМОаМТМ5МРБІ Кк
МОХ25Е7(25Е7
НУВ-НЗ важкого 58 ланцюга, СУБОМЕМММЕ
МОХ25Е7(25Е7
НУВА-11 легкого ланцюга,
НУВ-12 легкого ланцюга, ово моху ЕМАТ1
НМУВ-І3 легкого ланцюга, варіабельний домен ОМОГОСМУ/САС І КРУЕТІ 9. ТСАУУСОЗЕ5 важкого ланцюга МН, | дууууМУІВОР РОКСІ ЕУЛОЕ ІМНМОМТМОМ 62 МОХ25Е7 (25Е7) (082011/0150892 і РБІ КЗ5АМТІ 5 І ОТ5КМОГ5І. КІ АВБМТААОТ АМУУСАБОУ5
УМО2014/008218 ОМЕМММ/гГОРМ СОСТІ МТУ55 варіабельний домен легкого ланцюга МІ, ЕІМГТО5РАТ І 5І 5РОЕВАТ І 5СВАБОБІВ БМ АММООКР 63 МОХ25Е7 (25Е7) СОАРАЦІМО АБМААТОИІРА НЕБО5Оа5ОТО БТІ ТІЗБІ ЕР (052011/0150892 і ЕОРАМУУСОО АБММУ/РІ ТРОО СТМІ БІК
МО2014/008218 варіабельний домен ОСІОІГ МО5ОРЕ І ККРОЕТУКІ ЗСКАЗСОЕТІ Т важкого ланцюга МН, | ХуЗМММУВОТ РОКСІ КУ/МОМУ ІМТОТСЕРТУ 64 гуманізоване ВАРО5О (ГАСБ25) АБОРКОВРЕАБЕ 5І ЕТ5АБ5ТАБ І ОІММІ КМАО ТАТУЕСАВМР
Пе2015/0259420 РУУУаТтТММАЕ АМОУМСОСТТ УТУ55 варіабельний домен легкого ланцюга МІ, ІОМТОТТ55 І БАБІ СОРМТ ІЗС5550015 ММІ МИМООКР 65 гуманізоване ВАРО5О ратуУКм'И му Т5ТтІНІ МР НАЕЗОаБОаБОТтО У5І ТІБМІ ЕІ. (ГАС5Б25) ЕПІАТУУСООЮ УУМІ РМУТРСО СТКМУЕБЇїК
О52015/0259420 варіабельний домен ОМОЇ МЕЗО СО ММОРОВБІ ВІ 5СААБИаЕТЕ5 важкого ланцюга УН, 5ЗУОМНУММУВОА РОКОГЕММАМ М/МрОаБМКУМ мМОХхаг6бнІ10 (26Н10) (05 | АОБУКОВЕТІ 5АОМ5КМТІ М ГОММ5І ВАЕО 2011/0150892 ТАМУУСАВЕМ АМАБМОЮХОаМО УМ СсОСсТТУТМ 55 варіабельний домен ЕІМГТО5РИТ І 5І 5РОЕВАТ І ЗСВАБОБУ5 67 легкого ланцюга ЗЗМУ АМУООК РООАРА ІМ САЗЗААТИЇІР
МОХхаг6бнІ0о (26Н10) (05 | ОВЕ5Оа5О50Т ОБТІТІЗАВГЕ РЕОРГАМУУСО 2011/0150892 ОХаБЗРЕТЕРО РОТКМОІК константна область ВАТУААРБУРІ ЕРРБОЕОЇ КО СТАБУМСІ І М МЕМРАЕАКМО легкого каппа-ланцюга | МКУМОМАГО5а МБОЕЗМТЕОЮ 5КОЗТУБІ 55 людини ТТ ЗКАОМЕ КНКУМАСЕМТ НОСІ. 55РУТК БЕМАСЕС константна область ОРКААРБМТІ. ЕРРБЗБЕЕЇ ОА МКАТІ УСІ 15 ОРЕМРОАМТМУА легкого каппа-ланцюга | МКАОБЗЗРУКА СМЕТТТРУКО 5БММКУААББУ людини І 5ТРЕОМКВ НАБУЗСОМТН ЕО5ТМЕКТМА РТЕС5 важкого ланцюга М МЗОАЇ ТОМ НТЕРАМО55 СІ 51 55УМТ б2
Таблиця С (послідовності): 1777111 назва.///// | 77777711 Послідовнсть/://://)/С/:("«ИУ/Н/(Ж людини, отримана з ЇдДс1| МРОБ5бОІ аТОТ МІСМУМНКРО МТКМОККМЕР
К5СОКТНТСР РСОСРАРЕНІ ССО РБУРІ ЕРРКР КОТІ МІБАТР
ЕМТСМММОМ5 НЕОРЕМКЕММ МУМООМЕМНМА
КТКРАЕЄОУМ 5ТУАММ5МІ т М НООСУМІ МОК
ЕМКСКУ5МКА І РАРІЕКТІ5 КАКООРНАЕРО МУМУТІ РРОВОЕ
І ТКМОМБІ ТО І МКОЕМРБОЇ АМЕМЕБМООР
ЕММУКТТРРМ ГО50О5ЕРІ М БК ТМОКВАМ
ОООСММЕБСОМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКОІ 5І ЗРО
АБТКОРБМЕР І АРЗББКОТ5Оа СТААГ ОСІ МК ОМЕРЕРМУМТУ5
М/М5ОАЇ ТОМ НТЕРАМІ О55 СІ М5І 55МУМТ константна область УРБУББІ аТтОТ МІСМУМНКРО МТКМОККМЕ Р важкого ланцюга КЗ5СОКТНТСР РСОРАРЕАДАСОИ РБОМУРГІ ЕРРКР КОТІ МІБАТР 71 людини, отримана з ЕМТСМММОМ5 НЕОРЕМКЕММ УМРОМЕМНМА
І9С1, з мутаціями І234А КТКРАЕЄОУМ 5ТУАММ5МІ т М НООСУМІ МОК
І225А гРЗгОС "" ЕМКСКУ5МКА І САРІЕКТІ5 КАКООРВАВЕРО УМТІ РРОЕВОЕ
І ТКМОМБІ ТО І МКОЕМРБОЇ АМЕМЕБМООР
ЕММУКТТРРМ ГО50О5ЕРІ М БК ТМОКВАМ
ОООСММЕБСОМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКОІ 5І ЗРО
АБТКОРБМЕР І АРСЗА5Т5Е 5ТААІ СС МК ОМЕРЕРУТУ5
М/М5ОАЇ ТОМ НТЕРАМІ О55 СІ М5І 55МУМТ
МРБББУ аТКТ УТСОММОНКРУО МТКМОКАМЕ5 константна область КУОСРРСРБСР АРЕРІ СОРБМУ РІ ЕРРКРКОТ І МІЗАТРЕМТ 79 важкого ланцюга СУУМОУБОЕО РЕМОЄММУМО СМЕМНМАКТК людини, отримана з ІДС4 РАЕЄОЕЄМ5ТУ АМУ5БМІ ТМ Н ОБМЛІ МОКЕУК ' СКМ5МКОИЇ Р5 БІЕКТІЗКАК СООРАЕРОМУТ І РРООБЕМТК
МОМ5БІ ТС МК ОЕМРБОІАМЕ МЕБМООРЕММ
МКТТРРМІГО5 ОС5ЕБРІ МАГ ТМОКЗЕМ Ов
МУМЕ5С5ММНЕ А НМНУТОКЗ І 51 5І С
МРУММ/АОЕСА РАОЇІ РОБ5БРТІ РІ ОСІ БИ А
АС,СУТМОНОРО 5ОРРАААРОСН РІ АРаОРНРАА
РБОБМСОРАРАВ УТМІ БМОРОС І А5ОВІ РІ ОР
ВМО СЕНОВО КООЕБІ МІ АР АВКАСАСЕМХА
ААМНІ ВОВАЇГ. 5СВІ ВІ ВІ 240 АБМТАбРРОаБ
ІГААБОМ/МІ М СБЕ5БАРОВАВРА 5БУНМєКМНОО
Типова людська СВАВМРМВЕ5РН ННІ АЕБ5НІ Р РОМ5РМО5БО Р 73 послідовність І АОЗ (без | ОСІ ТУВрО ЕМУ5ІМУМІ Т МІ аг ЕРРТРІ. ТУХАСАСаЗАМУ сигнальної СІ РСВІ РАСМ СТА5РЕЇ ТАКУ ТРРОСОРОЇІ. послідовності) МмТармМорЕТІ ВІ ЕОМБОАДОА СТУТСНІНІ О
ЕООЇ МАТМТІ. АПТУТРКОЕ С5РОБІ ОК СЕМТРУБООЕ
ВЕУМ/55І. ЮТР БОВ5ЕБОРУ/Ї ЕАОБАОТ І 50
РЖОСОЇІ МОСЕ ВІЇ СААМУЕТ ЕІ 5Б6РИДОН5
СВАРСОАЇ РАС НІ Р ЯМІ БІЛ УТА ЕСЕНІ М/УАВОМУ
ВРАВЕ5АЇ ЕО СІНРРОАДОБК ІЕЕ ЕОЕРЕР ЕРЕРЕРЕРЕР
ЕРЕРЕО1.
МРУММ/АОЕСА РАОЇІ РОБ5БРТІ РІ ОСІ БИ А
АС,СУТМОНОРО 5ОРРАААРОСН РІ АРаОРНРАА
РБОБМСОРАРАВ УТМІ БМОРОС І А5ОВІ РІ ОР
ВМО СЕНОВО КООЕБІ МІ АР АВКАСАСЕМХА
ААМНІ ВОВАЇГ. 5СВІ ВІ ВІ 240 АБМТАбРРОаБ
Позаклітинний домен ІГААБОМ/МІ М СБЕ5БАРОВАВРА БУНМ ЕМО 74 ГАСЗ людини (ЕСО) СЕМРМВАВЕ5РН ННІ АЕБ5ЕЇ Р РОМБРМОБОР
МОСІТУВра ЕММ5ІМУМІ Т МІ ОГЕРРТРІ. ТУМАСАОБНМУ
СІ РСВІ РАСМ СТА5РЕЇ ТАКУ ТРРОСОРОЇІ.
УТармМООгЕТІ АГЕОМБОАОА СТУТСНІНГ О
ЕООЇ МАТМТІ. АПТУТРКОЕ С5РОБІ ОК СЕМТРУБООЕ
ВЕУМ/55І. ЮТР БОВ5ЕБОРУ/Ї ЕАОБАОТ І 50
РЖОСОЇ МОСЕ ВІЇ СААМУЕТ ЕІ 55РИАДОН5
Таблиця С (послідовності): 17771111 назва.//// | 77777711 Послідовнсть7/://:/:/ С: 11111111 |ТОВАРОАГРАСНІ
КІЕЕГЕ (частина 75 внутрішньоклітинного КІЕЕГЕ домену ГАЗ) праймер геНС.ир аадсіїдсса ссаддадас юдасідсос даснс праймер гЕНСї.до ссайдаща доагосссода а праймер
ВСРСВ ЕНІ С. Ієадег.йу | 29асаща д99іссссос праймер
ВСРСВ. пискарра.гем дашсаасі дсісаїсада ддс
НМВ-НІ важкого в ланцюга, РО1-0098 УЗІТтЗрУ
НМВ-Н2 важкого
НМВ-НЗ важкого ланцюга, РО1-0098 НОЗАРМУРО
НУВА-11 легкого ланцюга, нуви т ЗОМІуНнЗОсМтУ
НУВ-12 легкого ланцюга,
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
РО1-0098 ОЗНЕРІ. варіабельний домен РОМОГОЕБОРОЇ МКРБООБІ БІ ТСТУТахвіТт5ОМАММУАО важкого ланцюга УН, РОаОКГЕУМІ СМІТ УавєТтмМмМРБІК5ОВІБЗІЗАОТ5КМОЕНІ ОЇ.
РО1-0098 МО5МАТЕОТАТУУСАВМНазАРММУЕО УМ СИТІ ТУ55 варіабельний домен ОМІ МТОТРІ БІ РИБІ в ФОАбБІБСНОБОМІМНООаМтТмУ| ЕМ У 87 легкого ланцюга МІ, ГОКРООБРМ ІМКМЗАВЕБамМРОВЕЗаБаваТтоОТІ КІЗВА
РО1-0098 МЕАЕОІ аУУМСЕО,аЗНЕРІСТЕСАСТКІ ЕІ К
НМВ-НІ важкого ланцюга, РО1-0069 вуТЕТрУ
НМВ-Н2 важкого
НМВ-НЗ важкого в ланцюга, РО1-0069 вІТТагА
НУВА-11 легкого ланцюга, нувит я ЗКСУЗТе5УЕ
НУВ-12 легкого ланцюга,
НМУВ-І3 легкого ланцюга,
РО1-0069 ЗВЕЕРИ варіабельний домен ОМО! ОБОРЕЇ МАРОУМБУКІЗСКОаБамТтТЕТОМАМНУУКО 94 важкого ланцюга УН, ЗНАВТІ ЕУЛОМІБТУВадТМММОКЕКОКАТМТМОКОООТАХУ
РО1-0069 ГЕГАЄЕМТ5ЗЕОБАІУУСАНІ СИТТагА Му СОСТтТІ МТ МА варіабельний домен РІМГТО5РАБІ АУМ5І ООВАТІБСНАЗКаМУ5Т55У5ЕМНУ МО 95 легкого ланцюга МІ, ОКРВОРРКІ ІКУ АВМ ЕЗБОМРАНЕЗаЗО5ОТОЕТІ МІНРУ
РО1-0069 ЕЕЕОААТУМСННЗВЕЕРМТРСИСТКІ ЕК
РІММТО5РОБІ АМ5І СЕВАТІМСКАЗЕЗМОТ5ОМ5ЕІНМУ МО
ОКРООБРКИ ЇМАЗОТІ ЕС МРОВНЕБОаЗОБОТОНЕТІ ТІ О
АЕОМАУУУСООМУОУРМТРООСТКУБІК5ЗАЗТКОаРОУМЕР важкий ланцюг 1 з 1--1 ГАРББЗКОТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБММЗОАІ ТОМ
РОТ1/Л АСЗ 0799 НТЕРАМГО5501І 51 55УМГУРБІББІ ЕТОТМІСМУМНКРОМ на основі ТКУОККМЕРКЗСОКТНТСОСРРСОРАРЕААДСОРОМРЕЇ ЕРРКРК
РОТ1(0376)/аІ АСЗ (0416) | ОТ МІЗВТРЕМУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМИМ УМО МЕМНМАК
ТКРЕЕЕОУМЗТУАМУМУ5МІ ТМ НОМ МОКЕМКСКУ5МКАЇ.
САРІЕКТІЗКАКООРАВЕРОММТІ РРСВОЕЇТКМОМ5І МС М
КОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ О5БОСБЕРІ КІ.
Таблиця С (послідовності): 11107711 назва. | 77717171 Послідовність 11111111 |ТУОК5АМООСМУЄ5ЗСЗУМНЕАІНМНУТОКВІЗІЗРОК:С
ЕМОЇ МЕЗО ОЇ МОРОСБІ ВІ АСААБСЕТЕЗОМАМОУМ УВО
АРОКОа! ЕМУЗаІЮМЗОаМУТУУтТрЗУКОаВЕТІЗАООУКМТІ М
ГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗа ІММОАєБОМ СОС ТМУТУ5
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ 97 важкий ланцюг 2 з 141 | МІСМУМНКРОМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РОЛ АСЗ 0799 РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ Т
КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО
КБІ 5І РОК
ЕМО ГЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОЕЗЕЗБ5УТМЗУМУНО
АРОКОЇ ЕМУАТІЗССОВОЇМУРОБУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ М легкий ланцюг 1 з 1--1 ГОММ5І ВАЕОТАУМУСМІ І Та вУМЕАІ оБУСОСТІ МУТУ55
РОЛ АСЗ 0799 АЗМААРБЗУРІРРРБОБОЇ КИ ТАБУМСГ І ММЕМРАЕАКМОМУ
КМОМАГОБаМ5ОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕК
НКУУАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС
РІОГТО5РББІ БАБМОДАМТІТСВАБОБІЗЗМУІ МУ МООКРО
КАРКІ ГІМОАББІ ЕБСУРЗАЕЗОВИаБО ТОАТІ ТІЗІ ОРЕОГ легкий ланцюг 2 з 141 АТУУСОО5У5ТРІ ТЕС, ТКУЄІКАТУААРЗУРІЕРРЗОВКІ.
РОЛ АСЗ 0799 КБатАЗБУМСТ ММЕМРАВЕАКМОМКМОМАГОБаИмМмОЕБМТЕ
ОО5КОБТУ5БІ 551ТІ ТІ ЗКАЮМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55Р УТ
КЗЕМАСЕС
ЕМО ГЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОРІРОВСУТММУУВОА
РОКОаГЕУУМАМІБОСсСОСОИТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ МУ
ГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ МаБОММИаЦОСТІ МТУ
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5 важкий ланцюг 2 з 141 | ММ5ОСАЇ ТЗОУНТЕРАМІ О55(01І М5І 55УУГУРБЗББІ ТО 100 РОЛ АСЗ 0927 МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО на основі РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
РОТ(0376)/аІ АСЗ (0414) | МОСМЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОСУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ Т
КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО
КБІ 5І РОК
РІОМТО5РББІ БАБМОО ВМТ СВАБОБІЗЗМІ МУ МООКРОа
КАРКІ ГІМААБТІ О5СаУРЗАЕЗОВИаБО ТОРТІ ТІЗГОРЕОЕ 101 легкий ланцюг 2 з 141 АТУУСООТУ55РІ ТЕС, ТКУБІКАТМААРЗУРІЕРРЗОВКІ.
РОЛ АСЗ 0927 КБатАЗБУМСТ ММЕМРАВЕАКМОМКМОМАГОБаИмМмОЕБМТЕ
ОО5КОБТУ5БІ 551ТІ ТІ ЗКАЮМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ 55Р УТ
КЗЕМАСЕС
РІМГТО5РАБІ АУМ5І СОВАТІЗСВАЗКаУЗТЗЗУЗЕМНУ УО
ОКРАОРРКІГІКМАЗМІ ЕБСУМРАНЕЗОЗИОБОаТОБТІМІНРМУ
ЕЕЕОААТУУСННЗВЕЕРМТРССИИТКІ ЕІКОЗАЗТКОаРЗМУЕР важкий ланцюг 1 з 151 ГАРББЗКОТЗОСТАА аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ/МЗОАІ ТИМ
РОЛ АСЗ 0222 НТЕРАМІ О55О01І 51 55 УРБЗББІ С ТОТМІСМУМНКРЗМ 102 на основі РО1(0069)/ ТКУОККУЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОИРБУРБІ ЕРРКРК а АСЗ(МОХ25БЕТ) ОТ МІЗЕТРЕУТСУМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УУрамЕМНМАК
ТКРАЕЕОММЗТУВУУБМІ ТМ НООМ/Л МОКЕУКСКУЗМКАЇ.
САРІЕКТІЗКАКООРАВЕРОУМТІ РРСОВОЕЇ ТКМОУБІ МС М
КОЕУРБОІАМЕЖМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5БОСОЗЕРІ У5КІ.
ТУОКЗАМООСМУЕЗСЗУМНЕАЇІНМНУТОКБІ БІ Рак важкий ланцюг 2 з 141 ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО 103 РОЛ АСЗ 0222 РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
К-АЗМТААОТАУУУСАРаУЗОМЕУМУ ЕОРМСОСТІ УТ У
Таблиця С (послідовності): 11077111 назва. | 77717171 Послідовністьд////////СССсСсС у
А5БТКОРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ Т
КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО
КБІ 5І РОК
ОМОГ ООБОРЕЇ МАРОУЗБУКІЗСКОаБахуТЕТОМАМНУ/УКО
ЗНАВТІ ЕУЛОаМмІЗТУЗар ТМУМОКЕКОКАТМТУОК5ЗОЗТАМУ 104 легкий ланцюг 1 з 1-1 ГЕСАВМТ5ЕОБАІЇМУСАВІ СТТагЕАУУМСОСТІ МТУБААБУ
РОЛ АСЗ 0222 ААРБЗУРІЕРРРБОЕОЇ Ка ТАБУМСІ І ММЕМ РАЕАКМОМКМУО
МАГ О5БОМЗОЕЗУТЕООБКОБЗТУБІ 55211 ТІ БКАОМЕКНКМУМ
АСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕС
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ ЗБСВАБОБІЗЗМУІ АММООКРО
ОАРАПІІМОАЗМААТИаЇ РАНЕЗИаЗаЗОИтТОгТІ ТІЗОІ ЕРЕОБ 105 легкий ланцюг 2 з 141 АМУУСООВММУУ/РІ ТЕСОСТМІ ЕІКАТУАДАРЗУРІЕРРРЗОВК
РОЛ АСЗ 0222 І КБатАБММУСІ І ММЕУРАЕАКМОМКМОМАГОБаМЗОЕЗМТ
ЕООБКОБТУБІ 55171 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р МУ
ТКЗЕМВОСЕС
РМ МТОТРІ БГРУИБ ЯарОАБІЗСНЗЗОМУНЗМВИМТМІ ЕМ/У
ГОКРООБРМ ПИКУЗАВЕЗаМУРОВЕЗОЗИаБОТОЕТІ КІЗА
МЕАЕОІ ЧУУУСЕОСЗНЕРІТЕРСАСТКІ ЕІ КОЗАЗТКОаРЗМУЕ важкий ланцюг 1 з 141 РГАРЗЗ5КЗТЗОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБУММЗОАІ 50
РОІ/Л АСЗ 0224 МНТЕРАМІ О5501І 51 55УМ ГУРБББІ ЕТО ГМІСМУМНКРБ 106 на основі РО1(0098)/ МТКМОККУЕРКЗСОКТНТОСРРСОРАРЕААСОРБУРГІ ЕРРКР а АСЗ(МОХ25ЕТ) КОТ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕУКЕММУ УМО МЕМНМА
КТКРАЕЕОСУМЗТУВМУМУМІ ТМ НОСУМІ МОКЕУКСКУЗМКА
І САРІЕКТІЗКАКООРЕЕРОМУМУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ М/С
УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБООБЗЕРНІ 5
КТК АВМ ООСММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 5І РОК
РМОГОЕБОРОЇ УКРБОБІ БІ ТСТУТахувіІтОМАММУМВОЕ
РООКІ ЕУМ СМ ТУЗаєтммиМРБІКЗВІЗІЗАОТЗКМОГНОЇ. 107 легкий ланцюг 1 з 1-41 М5УМАТЕОТАТУУСАВУНавАРМУМЕВОУМ СИТІ ТУ55АБ5
РОЛ АСЗ 0224 МААРБЗУРІЕРРРБЗОЕОЇ КЗатАЗУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМ/ КУ
РМАГОБОМ5ОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ 55171 ТІ БКАОМЕКНК
МУАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55
СОРКАРБЗМЕРІ АРССОаОТРЗБТМУТІ СІ УКОаМІ РЕРУТМТ важкий ланцюг М/МЗСТІ ТМОМАТЕРЗБМНОЗБИЇ М5І 55БМУБУТ55БОРМТО 108 а АСЗ(0156) (МОХ25Е7) ММАНРАТМТКМОКТУАРЗТОЗКРТСРРРЕЇ І СаРБМУРІЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУБОВОРЕМОЄ ТМ МІММЕОУВТ
АВРРІ ВЕСОРМ5ЗТІВМУМУ5ЗТІ РІАНОСМ/Л ВЕАКЕРКСКУНМКА
ГРАРІЕКТІЗКАВСОРІ ЕРКУУТМОРРАЕБЕЇ 55855351 ТОМІ
МОаЕМРБОІЗМЕМЕКМОаКАЄОМУКТТРАМІ ОБОСИаБМУРІ ММК
ЗУРТЗЕМОВООМЕТСЗУМНЕАСНМНУТОКІЗАЗРаК
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ ЗБСВАБОБІЗЗМУІ АММООКРО
ОАРАПІІМОАЗМААТИаЇ РАНЕЗИаЗаЗОИтТОгТІ ТІЗОІ ЕРЕОБ 109 легкий ланцюг АМУУСООВММУУ/РІ ТЕСОСТМІ ЕІКАТУААРЗУРІЕРРРБОЕО аг Асз3(0156) (МОХ25Е7) | І КС ТАБУМСІ І ММЕМРАВЕАКМОМКМОМАГОБОМЗОЕЗМТ
ЕООБКОБТУБІ 55171 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р МУ
ТКЗЕМВОСЕС а дсаз3(0414 РОКОаГЕУМАМІЗУуОСсССсСОаТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ М
Таблиця С (послідовності):
Назва. | 77777171 Послідовністьу//.7..:/: 3
ГОММЗІВАЕОТАМУУУСАКОЇІ ТОТТІ УОЗ ООСТІ ТУ
ЗООРКАРЗУЕРІ АРССООТРОБЗТМУТІ ОСІ УКОХІ РЕРМТУТ
МУМУСТІ ТМОУВТЕРЗУВОЗ95СІ У8І 55УУ5УТ5550ОРМТС
МУАНРАТМТКУОКТУАРЗТСЗКРТСРРРЕП СОРОУВБІЕРР
КРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗОРОРЕМОЄТМ/МІММЕОУВТ
АВРРІ ВЕООЄМ5ТІВМУЗ5ТІ РІАНОЮУМІ ВОКЕЕКСКУНМКА
РАРІЕКТІЗКАВСОРІ ЕРКУУТМОРРВАЕЕЇ 558551 ТОМІ
МОЕХУРЗОІЗМЕМЕКМОКАЕОМУКТТРАМІ О50О5УРІ УМКІ.
ЗУРТЗЕМОВСООУЕТСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІЗВЗРОК
ФІОМТО5РЗЗІ БАЗМАЮВМТІТСВАЗОВІЗЗМІ ММ УООКРО
КАРКИ ІМААЗТІ О5БОУРЗВЕЗО5О5СТОЕТІ ТІЗ8І ОРЕОЄ що легкий ланцюг АТУУСООТУЗ9РІ ТЕФОСТКУЕІКОТУААРЗУРІЕРРЗОЕЄОЇ. а даз3(0414) КЗОТАБЗУУСИ ММЕУРВЕАКУСМ/ КОМА О5ОМ5ОЕВМТЕ
ОО95КОЗТУЗІ 55171 ТІ ЗКАОУЕКНКУХАСЕМТНОСІ 55РМТ
КЗЕМВОЕС
ЕМОГУЕЗОСОІГ МОРССОЗІ ВІГАСААЗОЕТЕЗОУАМОМ УВО
АРОКОСЇІ ЕМ/УЗСІОМ5СУУТУУТОУКОВЕТІЗВООУКМТІ У
ІГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗО УМО АєОМ СОСТМУТУЗ
ЗООРКАРЗУЕРІ АРССООТРОБЗТМУТІ ОСІ УКОХІ РЕРМТУТ
. МУМУСТІ ТМОУВТЕРЗУВОЗ95СІ У8І 55УУ5УТ5550ОРМТС 112 ВАС) МУАНРАТМТКУОКТУАРЗТОЗКРТСРРРЕП СОРОУБІЕРР
КРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУУОУЗОРОРЕМОЄТМ/МІММЕОУВТ
АВРРІ ВЕООЄМ5ТІВМУЗ5ТІ РІАНОЮУМІ ВОКЕЕКСКУНМКА
РАРІЕКТІЗКАВСОРІ ЕРКУУТМОРРВАЕЕЇ 558551 ТОМІ
МОЕХУРЗОІЗМЕМЕКМОКАЕОМУКТТРАМІ О50О5УЕІ УМКІ.
ЗУРТЗЕМОВСООУЕТСЗУМНЕАІ НМНУТОКЗІЗВЗРОК
РІО ТОЗРУЗЗІ ЗАЗУМОЮВМТІТСВАЗОВІЗЗМІ ММ УООКРО
КАРКИ ІМОА5УІ ЕЗОУРЗВЕЗОЗО5СТОАТІ ТІЗЗІ ОРЕОБ 1413 |легий ланцюг АТУУСОО5У5ТРІ ТЕФОСТКУЕІКОТУААРЗУРІЕРРЗОЕЄОЇ. а даз3(0416) КЗОТАБЗУУСИ ММЕУРВЕАКУСМ/ КОМА О5ОМ5ОЕВМТЕ
ОО95КОЗТУЗІ 55171 ТІ ЗКАОУЕКНКУХАСЕМТНОСІ 55РМТ
КЗЕМВОЕС
ЕМО ЕЗОСОІ МОРОСЗІ ВІ ЗСААЗОРІРОЮУТММММВОА
РОКОЇ ЕМ/УАМІЗМ/УрРаСОТУУТОЗУКОВЕТІЗВООЕКМТІ У
ІГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ ХО5ОУМСОСТІ УТ
ЗАЗТКОРОЗМУЕРІ АРЗОЗКЗТЗОСТААІ ОСІ МЕОМЕРЕРМУТУЗ
МУМЗСАЇ ТЗОУНТЕРАМІ О95С1І У8І 55УМУТУРУЗБУІ СТОТ
ЖМІСМУМНКРУМТКУОЕКУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕААСОС
РЗМУЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕМКЕММУ У важкий ланцюг з 242 МООМЕУНМАКТКРВЕЕОУ МТ УВУ МІ ТМІ НОСУЛІ МОКЕ 114 |РОТЛ.АСЗ 8970 УКСКУЗ9МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУУТІ РРОЗВОБЇ ТК на основі МОМУЗ8І ТСІ УКСЕУРЗОТАМЕМ ЕЗЄМООРЕММУКТТРРМІ ОЗ
РО1(0376)У/а! АОЗ (0414) | ОО5ЕЕІ УЗКІ ТМОКЗВУ/ООСМУЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОК 8І 8 ЗРОСО50000500 005000 О9ЕМО ГЕЗОССІ МО
РОСЗІ ВІ ЗСААЗСЕЗЕЗ5УТМОМУВОАРОКОЇ ЕМ/МАТІЗО
СОВОЇУУРОЗУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ У ОММ8І ВАЕОТАМУ
УСМИ ТОВУУЕАІ О5МУСОСТІ УТУ55АЗУААРЗМУБІЕРРІЗО
ЕОІЇ КЗОТАЗУМСИ ММЕУРВЕАКУСМ/КУОМА! О5ОМ5ОЕЗ
МТЕООЗКОЗТУЗІ 5511 ТІ ЗКАОУЕКНКУУАСЕУТНОСІ 55
РУТКЗЕМВОЕС
РІММТО5РОЗІ АМЗІ СЕВАТІМСКАЗЕЗМОТЗОМЗРІНМ ХО
ОКРОО5РКІ ПУ В55ТІ ЕЗОУРОВЕ5О5О5СТОЕТІ ТІЗ5О 115 легкий ланцюг 1 з 242 АЕОМАУУУСООММОУРМТЕСОСТКУБІКЗЗАЗТКОаРЗМУЕР
РОЛ АСЗ 8970 І АРОЗКУТЗОСТААІ ОСІ УКОУЕРЕРУТУЗМ/М5САІ ТОМ
НТЕРАМІ 05521 У8І 957 УТУРБЗУВІ СТОТМІСМУМНКРЗМ
ТКУОККУЕРКЗС
Таблиця С (послідовності): 1077111 Назва//// | 77771717 Послідовність////////77ССсСсС
РОЛ АСЗ 8984 АРОКОа! ЕМУЗаІЮМЗОаМУТУУтТрЗУКОаВЕТІЗАООУКМТІ М на основі ГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗа ІММОАєБОМ СОС ТМУТУ5
РО1(0376)/аі АСЗ (0416) | БАБТКОРОЗМУМЕРІ АРОБКОТЗОаСТААГ асСІ МЕОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕИОРАЕРОМУМТІ РРЗНОБЇ ТК
МОМ5І ТОЇ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 05 разгЕг Мк ТК АМООСММЕ5СЗУМНЕАЇІ НМНУТОК
ЗІ БІГ ЗРОСЯОСОСОСБОСОСОВОСИСБЗЕМОЇ ЕЗОСИЇ МО
РОСБІ ВІ БСААБОЕЗЕЗ5У ГТМОБМ УВОАРОКИЇ ЕММАТІЗОа ,савВрІММРОБУКОаВЕТІЗВОМКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАМУ
УСМІ ГТОВУМЕАЇ О5БМИОСТІ МУТУ55АВМААРЗУРІЕРРБЗО
ЕОЇ КБаТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУУКУОМАГОБаМ5ОЕЗ
МТЕООБКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОЮМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55
РУТКЗЕМАСЕС
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55
А5БТКОРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У важкий ланцюг з 2 2 УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ 117 РОТ/Л АСЗ 9010 УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКЕИОРАЕРОМУМТІ РРЗНОБЇ ТК на основі РО1(0376)/ МОМ5І ТОЇ УКОЕМРБОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ 05 а даз(моха5Е7) разгЕг Мк ТК АМООСММЕ5СЗУМНЕАЇІ НМНУТОК
ЗІ БІГ ЗРОСЯОСОСОСБОСОСОВОСИСБЗЕМОЇ ЕЗОСИЇ МО
РОСБІ ВІ БСААБОЕЗЕЗ5У ГТМОБМ УВОАРИОаКИаїЇ ЕММАТІЗОа ,савВрІММРОБУКОаВЕТІЗВОМКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАМУ
УСМІ ГТОВУМЕАЇ О5БМИОСТІ МУТУ55АВМААРЗУРІЕРРБЗО
ЕОЇ КБаТАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУУКУОМАГОБаМ5ОЕЗ
МТЕООБКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОЮМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55
РУТКЗЕМАСЕС
ЕМО ГЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОРІРОВСУТММУУВОА
РОКОаГЕУУМАМІБОСсСОСОИТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ МУ
ГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ МаБОММИаЦОСТІ МТУ
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У важкий ланцюг 1 з 2 41. | МОЯСМЕУМНМАКТКРАЕЕОУМОЗТУВУММІ ТМІ НОБУУІ МОКЕ 118 РОЛ АСЗ 8310 УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т на основі КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О аг даз(0414УРОТ (0376) | БОБЕР ЗК ТМОКЗАУМОССМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТО кБІ БІ ЗРОСОаЗСОСВЗсасаававЕМО ЕЗОВИї М
ОРОСБІ ВІ ЗСААБОЕЗЕЗЗ5У ТМЗУУВОАРОКОИЇ ЕМ/МАТІВ сааврієМРОБУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМ
УС ТанвуУмгАІОБМСОСТІ УТУ55АЗМААРЗУРІЕРРБ
РЕОЇ КБаТтАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУКУОМАГОоЗИМБО
ЕЗБМТЕООБКОБЗТУБІ 55111 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕУТНОІ.
ЗЗРУТКЗЕМАСЕС
ЕМО ГЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОРІРОВСУТММУУВОА
119 важкий ланцюг 2 з 2-1 РОКОаГЕУУМАМІБОСсСОСОИТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ МУ
РОЛ АСЗ 8310 ГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ МаБОММИаЦОСТІ МТУ
ЗАЗІКОРЗУЕРІ АРОЗКЗТЗаСсТААГасІі МЕОМЕРЕРУТУ5
Таблиця С (послідовності): 11077111 назва. | 77717177 Послідовністьу///////////СССсСсС у
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ Т
КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО
КБІ 5І РОК
ЕМОЇ МЕЗО ОЇ МОРОСБІ ВІ АСААБСЕТЕЗОМАМОУМ УВО
АРОКОа! ЕМУЗаІЮМЗОаМУТУУтТрЗУКОаВЕТІЗАООУКМТІ М
ГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗа ІММОАєБОМ СОС ТМУТУ5
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У важкий ланцюг 1 з 2 41 | МОЯСМЕУМНМАКТКРАЕЕОУМОЗТУВУММІ ТМІ НОБУУІ МОКЕ 120 РОЛ АСЗ 8311 УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т на основі КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О аг дсз3(0416УРОТ (0376) | БОБЕР ЗК ТМОКЗАУМОССМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТО кБІ БІ ЗРОСОаСОСВЗаааОС,СОаБЕМО ЕЗОССИЇ М
ОРОСБІ ВІ ЗСААБОаЕЗЕЗ5У ТМЗУУВОАРОКОИЇ ЕМ/МАТІВ сааврієМРОБУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМ
УС ТанвуУмгАІОБМСОСТІ УТУ55АЗМААРЗУРІЕРРБ
РЕОЇ КБаТтАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУКУОМАГОоЗИМБО
ЕЗБМТЕООБКОБЗТУБІ 55111 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕУТНОІ.
ЗЗРУТКЗЕМАСЕС
ЕМОЇ МЕЗО ОЇ МОРОСБІ ВІ АСААБСЕТЕЗОМАМОУМ УВО
АРОКОа! ЕМУЗаІЮМЗОаМУТУУтТрЗУКОаВЕТІЗАООУКМТІ М
ГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗа ІММОАєБОМ СОС ТМУТУ5
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ 124 важкий ланцюг 2 з 2 41 | МІСМУМНКРУОМТКМОЕКУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РОЛ АСЗ 8311 РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОЕЇ Т
КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО
КБІ 5І РОК
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55
А5БТКОРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У важкий ланцюг 1 з 2-41 | МОЯСМЕУМНМАКТКРАЕЕОУМЗТУВУММІ ТМІ НОБУУІ МОКЕ 122 РОЛ АСЗ 1252 УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т на основі КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О аг дазЗ(25Е7УРОТ (0376) | БВООЗЕРІ УК ТМОК5АУМОССМУЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТО кБІ БІ ЗРОСОаСОСВЗаааОС,СОаБЕМО ЕЗОССИЇ М
ОРОСБІ ВІ ЗСААБОаЕЗЕЗ5У ТМЗУУВОАРОКОИЇ ЕМ/МАТІВ сааврієМРОБУКОВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАМ
УС ТанвуУмгАІОБМСОСТІ УТУ55АЗМААРЗУРІЕРРБ
РЕОЇ КБаТтАБМУМСІ І ММЕМРАЕАКМОУКУОМАГОоЗИМБО
ЕЗБМТЕООБКОБЗТУБІ 55111 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕУТНОІ.
ЗЗРУТКЗЕМАСЕС
Таблиця С (послідовності): 1077111 Назва//// | 77717177 Послідовністьд//////////ССССсС
РОЛ АСЗ 8312 РОКОаГЕУУМАМІБОСсСОСОИТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ МУ на основі ГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ МаБОММИаЦОСТІ МТУ аг дсаз(0414УРОЇ (0376) | БАБТКаОРОМЕРІ АРЗЗБКЗТЗОСТААІЇ ОСІ МЕОМЕРЕРУТУЗ
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ТО
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т
КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОК5АМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО кб ЗІ ЗРОС,аСОВБОСОСОСЗвОСаОСИаСЗОЇММТО5РОБ
ГАУБІ СЕВАТІМСКАБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУМООКРООРКИ І
УА55ТЕЗОаМРОВЕЗОЗОБОИТОгТІ ТЗІ ОАЕОМАМУМСО
ОММОУРМТЕСОСТКМУБІКАТУААРЗУРІЕРРБОЕОЇІ КБатА
ЗУММСИП ММЕМРЕЕАКМОУУКМОМАЇ О5ОМЗОЕЗУМТЕООЗК
О5ТУБ5І 551 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОСІ 55Р УТК5ЕМ ваєсассазОСОовасаоБасааЗасасЗаваавЕМ
ОП ЕЗОССОЇ МОРОСБІ ВІ ЗСААБОГЗЕЗЗУТМЗУММУВОАР екагємМАТІЗааавВрІУРОБУКОаВЕТІЗВОМКМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУМУСМІ ТавВУМЕА ОБМИОСТІ МУЗА
ТКаРБЗМЕРІ АРЗБКЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ
ЗОБА Т5аУНТЕРАМІ О55(11І 51 55ММТУРЗББИТОТМІС
МУМНКРОМТКМОККМЕРКЗС
ЕМОЇ МЕЗО ОЇ МОРОСБІ ВІ АСААБСЕТЕЗОМАМОУМ УВО
АРОКОа! ЕМУЗаІЮМЗОаМУТУУтТрЗУКОаВЕТІЗАООУКМТІ М
ГОММ5І ВАЕОТАУМІ СТКТНЗа ІММОАєБОМ СОС ТМУТУ5
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ТО
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т
КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О важкий ланцюг 1 3 2 41 | БОО5ЕН УК ТМОКЗАМООСММЕ5СЗУМНЕАІ НМНУТО 124 РОЛ АСЗ 8313 кб БІ ЗРОСО,аСОВЗОСООСЗвОСОоБОСОСЗОЇММТО5РОБ на основі ГАУБІ СЕВАТІМСКАБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУМООКРООРКИ І аг дсз3(0416УРОТ (0376) | УА55ТІ ЕЗИУМРОВЕЗИаБОаЗОИтОгТІ ТЗІ ОАЕОМАУУУСО
ОММОУРМТЕСОСТКМУБІКАТУААРЗУРІЕРРБОЕОЇІ КБатА
ЗУММСИП ММЕМРЕЕАКМОУУКМОМАЇ О5ОМЗОЕЗУМТЕООЗК
О5ТУБ5І 551 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОСІ 55Р УТК5ЕМ ваєсассазОСОовасасБасваосзасаозаваавЕМ
ОП ЕЗОССОЇ МОРОСБІ ВІ ЗСААБОГЗЕЗЗУТМЗУММУВОАР екагємМАТІЗааавВрІУРОБУКОаВЕТІЗВОМКМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУМУСМІ ТавВУМЕА ОБМИОСТІ МУЗА
ТКаРБЗМЕРІ АРЗБКЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ
ЗОБА Т5аУНТЕРАМІ О55(11І 51 55ММТУРЗББИТОТМІС
МУМНКРОМТКМОККМЕРКЗС
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55 важкий ланцюг 1 з 241 |АЗТКОРОМЕРІ АРОЗКЗТЗИаСсТААЇ аСІ МЕОМЕРЕРУТУ5 125 РОЛ АСЗ 1088 М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5БИЇ БІ 55БУМТУРЗББІ ТО на основі МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО аг дазЗ(25Е7УРОТ (0376) | РЕОМЕ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМКЕММУ У
УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ Т
КМОУБІЛМ СІ УКОЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О
Таблиця С (послідовності): 1177111 назва// | 17/11 Послідовнсть////://С зразеЕг УК ТМОК5АМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО кб БІ ЗРОСОаСОВБОСЯОСЗСаСсСОоБОСОСИЗОММТО5РОБ
ГАУБІ СЕВАТІМСКАБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУМООКРООРКИ І
УАЗ ЕЗОУМРОВЕЗОЗОаЗаИТОЕТІ ТІЗБІ ОАЕОМАУУУСО
ОММОУРМТЕСОСТКМУБІКАТУААРЗУРІЕРРБОЕОЇІ КБатА
ЗУММСИП ММЕМРЕЕАКМОУУКМОМАЇ О5ОМЗОЕЗУМТЕООЗК
О5ТУБ5І 551 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕУТНОСІ 55Р УТК5ЕМ ваЕссасоБОссвазаасоБасаваЗаасвОоасвааБЕМ
ОП'ЕЗБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБОЕЗЕЗ5УТМЗУМУВОАР екагємМАТІЗааавВрІУРОБУКОаВЕТІЗВОМКМТІ МІ О
ММ5І ВАЕОТАУМУСМІ ТавВУМЕА ОБМИОСТІ МУЗА
ТКаРБЗМЕРІ АРЗБКЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБУУМ
ЗаАІ Т5аУНТЕРАМІ 0551. 51 55 МУРБЗББІ ТОМІ
МУМНКРОМТКМОККМЕРКЗС
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55
А5БТКОРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О55О01І 51 55УУГУРЗББІІ ИаТОТ важкий ланцюг 1 з 2 41 МІСМУМНКРОЬМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РОЛ АСЗ 0918 РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У пе Паосов тре онАКтК ЕЕот л орнт ек аі-Аез(гЗЕЛРОТ (0376) | КМОУВІ ЗСАУКСЕУРЗОТАУЕМ/ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО кБІ БІ ЗЗРОСО,аСОСОВ9ОаооБаассаОСИаСЗЕМО М ЕВБОСО
ГМОРОСБІ ВІ БСААБОГЗЕЗЗУ ТММ УВОАРаКагігєЕММА тізасавріУРОЗУКОаВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕО
ТАУУУСУ тав оБМУСОСТІ ТУ
ОМОГ ОСМ/САСІ І КРОЗЕТІ ІІ ТСАУМаСЕЗОМУММУМВО
РРОКОЇ ЕММІСЕІМНМОИ МТ МЗМРБІ КЗАМТІ БІ ОТ5КМОБІ.
КГАЗМТААОТАУУУСАРСУЗОМЕУМУ ЕОР СОСТІ УТУ55
А5БТКОРБОМЕРІ АРОЗКЗТЗИасСТААЇ аСІ УКОМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О55О01І 51 55УУГУРЗББІІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО важкий ланцюг 2 з 251 РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У 127 РОЛ АСЗ 0918 УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ
УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАВЕРОМУМТІ РРСОВОЕЇ Т
КМОМУБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О зразеЕг УК ТМОК5АМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО кб ЗІ ЗРОССОаСОВОСООСЗОСОСО,ОСаСЗОММТО5РОБ
ГАУБІ СЕВАТІМСКАБЕЗМОТЗОМЗЕІНМУМООКРООРКИ І
УАЗ ЕЗОУМРОВЕЗОЗОаЗаИТОЕТІ ТІЗБІ ОАЕОМАУУУСО
ОММОУРМ ТЕСОСТКМЕК номер доступу ОпіРгої 015116
МОІРОАРМ/РМУ УМ/АМІ ОЇ СУМУ А РОМ/Р О5РОВ
РУМРРТЕБРА ГП УУТЕСОМА ТЕТО5ЕЗМТ5
ЕБЕМІМУ/УАМ 5РУЬМОТОКІ А АЕРЕОНБОРСО 128 РОЇ людини ООСВАЕВМТОЇ. РМОВОЕНМ5У УВАНАМОБИТ
МІ СОАЇІБІ АР КАОЇІКЕБІ ВА ЕІ ВМТЕВВАЕ МРТАНРОРОР
ВАРАСОРОТІ У Мауса Са5 І МИ УМУМІ АМ ІСЗВААВСТІ
САВЕТОСОРІ К ЕОРБАУМРУЕ5 УЮМає! СОРОМУ
ВЕКТРЕРРУР СУРЕОТЕМАТ ІМЕРЗОМОИаТ5
ЗРАННОБЗАЮВИа РАБАОРІ АРЕ ОВС НОМУ РІ.
Таблиця С (послідовності): 11077111 назва. | 77777777 Послідовність//://:/:////:(/У/К/ Ср
Пептидний лінкер
ОКТНТОРРСОРАРЕДАСОИРБУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТС
УУМОУЗ5НЕОРЕУКЕММ МУВОМЕУНМАКТКРЕАЕЕЄОСУМ5ТУ
ВУМ5МІ ТМЕНОБУУЛ МОКЕМКОСКУ5ЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКОа
ОРЕЕРОМУСТІ РРЗВОЕЇ ТКМОМУ5І БСАУКОЕМРБОІАМЕМУ важкий ланцюг 2 з 1-1 ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБРОаЗЕРІ УК ТУКА ОССМ 144 РО1/Л АСЗ 0725 (транс 1 | МЕ2ЄС5УММНЕАЇ НМНУТОК5БІ І ЗРОКОСОСОСЗсСЗС,СИаСЗЕМО -1) ПЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОРІРОЮСУТММУУВОАРаК на основі ГАОЗ(0414) СГЕМУАМІЗМ ССС СТ УМ ТОБУКОВЕТІЗАООЕКМТІ М ОМ
М5І ВАЕОТАУУУСАКИІ ТО МавриУмаості МТУ55А5
ТКаРБЗМЕРІ АРЗБКЗТЗОаСТААІ СІ МЕОМЕРЕРУТУБУУМ
ЗаАІ Т5аУНТЕРАМІ 0551. 51 55 МУРБЗББІ ТОМІ
МУМНКРОМТКМОЕКМЕРКЗС
ЕМО ГЕБОСИЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОРІРОВСУТММУУВОА
РОКОаГЕУУМАМІБОСсСОСОИТтУМТОоБУКОаВЕТІЗАООЕКМТІ МУ
ГОММ5І ВАЕОТАУУУСАКСІ ТОТТІ МаБОММИаЦОСТІ МТУ
ЗАЗТКОРБЗМУЕРІ АРОБКЗТЗаСсТААГасСІ МЕОУМЕРЕРУТУ5
М/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О55ОЦІ 51 55УУГУРБЗББІ аТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОЕКУМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕААСО
РЗБУМЕГЕРРКРКОТІ МІЗЕТРЕУТСУУМОУМЗНЕО РЕУКЕММ/ У важкий ланцюг 2 з 2-1 УВрамЕУНМАКТКРАЕЄОММЗТУВУММІ ТМ НОБУЛ МОаКЕ 145 РО1Т/Л АСЗ 0750 (транс | УКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКСООРАВЕРОМУСТІ РРЗАОЕЇ Т 2-1) КМОМУ5І БСАУКагУРЗВІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О на основі ГАОЗ(0414) зразеЕг УК ТМОКЗАМООСМУЕ5СЗУМНЕАНМНУТО кбІ 5І РОКОССОСВОСИОИБЕМО ЇЇ ЕЗОСОЇ МОРОСБІ ВІ
ЗСААБОРІЕВОМТММУМУВОАРОКОИЇ ЕМУУАМІЗсСОСТУ
УТО5УКОВЕТІЗАООЕКМТІ М ОММ5І ВАЕОТАУУУСАКИЇ.
ТОП МОБОММ ОСТІ УТМУ55АЗТКОРБЗМУЕРІ АРЗБЗК5ОТ5 а,ОСТААГасСІ МЕОМЕРЕРУТУБУ/МЗОАЇ Т5ОУНТЕРАМІ О5
За М5І 55 ТУРІ С ТОГМІСМУМНКРОМТКМОЕКМЕР ко
РІОМТО5РББІ БАБМО ОВУ ТІТСКАБААУИа ГТУМАМУМООКР
Легкий ланцюг СКАРК ІМ5АБУВАКАСУРЗАЕЗОаЗИаБаТОЕТІ ТЗІ ОРЕО 146 "СЕА ові" ЕАТУМСНОМУУТУРГЕТЕСОСТКІ ЕІКАТМААРЗМУРІЕРРЗОЕ (СЕА ТСВ) ОЇ КЕ ТАБУМСІ І ММЕУРАЕАКМОУМКМОМАГ О5ОМЗОЕБМ
ТЕООБКОБЗТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55Р
УТКЗЕМВОСЕС
Легкий ланцюг ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТСО55Т ЗАМ ГЗММАМУ/МОЕ гуманізованого КРООАРЕВНИ ІСТ МКАВАРСТРАВЕЗО5І І С КААЇ ТІ ЗА 147 СОЗ сновгт (Стоввіаб, МІ - ОРЕОЕАЕМУСАЇ МУЗМІ МУуУРааСИТКІ ТМ ББАВТКОаРЗМУЕ
СНІ) ' РГАРЗЗ5КЗТЗОаСТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУЗУМ МЗИАІ ТО (СЕА ТСВ) МНТЕРАМІ О55(01І 51 55УМ ГУРБББІ ЕТО ГМІСМУМНКРБ
МТКМОККУЕРКЗС гуманізоване СОЗ сновг?. | АРООСІ ЕМ МСОУМІМТКТИаИєЕАТУМЕЕРКСАМТЕТТОТЗТОТА
Таблиця С (послідовності): 11077111 назва | 77717171 Послідовність//////7СсСсСсСсС (Стозвтар МН-СК)- УМЕГ 5 А5ВОТАУУМСАВУМОГАУУМЕАМОУУМСООСТТМУТ
Ес(виступ) РЗ29ОІ АГА | МОБАЗТКОРОЗМЕРІ АРОЗКОТЗОСТАА аСІ МКОМЕРЕРМТ (СЕА ТОВ) УБММЗИАЇ Та МНТЕРАМІ О5501І 51 55УУГУРЗББІ СТ
ОТМІСМУМНКРОЬМТКУОККУЕРКЗСВСсВВСОСБОСССИаЗЕМО
ПЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗИОЕТЕ5 ТМАММУ УВОАРО
КОГЕМУ5ЗВІВЗЕКУМММАТУМАОБУКОВЕТІЗАООБКМТІ МІ.
ОММ5І ВАЕОТАУУУСУВНО МЕаМЗУУЗУМЕАУМ СО,ТІ МТ
У5ЗАБМААРЗМРІЕРРБОБОЇ КБаТтТАБУМСГІ ММЕМРАЕАК
МОМ КМОМАГОБаИмМ5ОЕБМТЕООКОЗТУБІ ЗТ ТІ КА
МЕКНКМУМАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕСОКТНТСРРОРА
РЕААДССРБЗУНІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУЗНЕОРЕ
УКЕММ УМВОМЕУНМАКТКРАЕЕОСУМОЗТ УАМБ ТМ НОЮ
МІ МаОКЕМКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУМТІ РР
СЕБЕ ТКМОМУ5І МС УКОЕМРЗОІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТ
ТРРМ'ОБРОа5ЕРІ УК ТМОКЗАМО,ММЕ5СЗУМНЕАСН
МНУТОКБІ І ЗРаТк
ОМОЇ МОБСОАЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМ ТЕТЕЕЄСММУУМВО
АРСОСІ ЕМ/МОУМІМТКТаЕАТУМЕЕРКОСАВМТЕТТОТ5Т5ТА
УМЕГВ5І А5ВОТАУУМСАВМ ОБАМУМЕАМО УМ ООСТТМУТ
УБЗАБТКОаРОЗМУЕРІ АРЗЗБКЗТЗОСТААІ СІ МКОМЕРЕРМТ
СЕА снідтяовоз (УН-СНІ))- УБММЗИАЇ Та МНТЕРАМІ О5501І 51 55УУГУРЗББІ СТ 149 Рс(отвір) РЗ29СТ АГА ОТМІСМУМНКРУЬМТКУМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕАА (СЕА ТСВ) СОаРБЗМУБГЕРРКРКОТІ МІЗАЕТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМУКЕМ
М УУрамЕУНМАКТКРАЕЕЄОММЗТУВУУМІ ТМ НОБУМІ М
СКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАВЕРОМУСТІ РРЗНО
ЕСТКМОМУ5І ЗСАУКОЕУРБОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРР
УгоБравзРЕе ЗКУ оКкВАМОСамММЕЗОСЗУМНЕАСНМНУ
ТОКБІ5І 5РаК
ЕМО ГЕБОСИОЇ МОРОСБІ ВІ БСААЗОЕТЕЗТУАММУ УВО
АРОКОЇ ЕМУЗВІВЗКУМММАТУМАрЗУКОВЕТІЗАВОБКМТ 150 СОЗ МН-СЇ (СЕАСАМ5 | М'ОММ5І ВАЕОТАУУУуСєУВнНОаМеЕаМЗУУУБАУМУсОо,Т
ТОВ) ГУТУ55АБМААРБЗУРБІЕРРБОЕОЇ КБСТАБУМСІ І ММЕМРАЕ
АКМОМКМОМАЇ О5ОМЗОЕЗУТЕООКОБЗТУБІ 551ТІ ТІ 5К
АОУЕКНКУУАСЕМТНОІ 55РУТКЗЕМАСЕС
ОМОЇ МОБСОАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИОЕМІКО ТУМНУУВО
АРСОСІ ЕМ/МОВІОРАМОМЗКУУРКЕРОСАМТІТАОТОТТА
УМЕГ 55І АВБЕОТАУУУСАРЕВУУУБОУАМАУМ ОСТІ МТМ
ЗЗАЗТКОаРОЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗИаСТААЇ СІ МЕОМЕРЕРУТМУ
Гуманізоване СЕА МН- | БИИМ5ОСАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О5501І 51 55УМГУРБЗББІ ТО 151 СНІ (ЕЕ)-Ес (отвір, ТМІСМУМНКРУЬМТКМОЕКМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕАДО
РЗ2ОС АГА) СРЗУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАЕТРЕУТСУММОУМЗНЕОРЕМКЕМУУ (СЕАСАМ5 ТОВ) МУВОаМУЕУНМАКТКРЕЕЄОУМЗТУАУУМІ ТМ НОВСУЛ МО К
ЕУКСКМУ5МКАЇ САРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМСТІ РРЗВОБЇГ.
ТКМОУБІ БСАУКОЕМРОВІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ. рБразЕРУЗКІ ТМОКЗАУМОСОМУЕ5СЗУМНЕАЇІ НМНУТ
ОКО БІ ЗР
ОМОЇ МОБСОАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИОЕМІКО ТУМНУУВО
АРСОСІ ЕМ/МОВІОРАМОМЗКУУРКЕРОСАМТІТАОТОТТА
УМЕГ 55І АВБЕОТАУУУСАРЕВУУУБОУАМАУМ ОСТІ МТМ гуманізоване СЕА УН- ЗЗАЗТКОаРОЗМУЕРІ АРЗЗКЗТЗаСсТААЇ СІ МЕОМЕРЕРУТМУ
СНІ (ЕЕ)-СОЗ МІ-СНІ-Ес ЗММЗОАІТ5аМУНТЕРАМГ О5501І БІ 5БУМТУРЗЗІГИТО 152 (виступ, РЗ29С ГАГА) ТМІСМУМНКРУЬМТКУОЕКУЕРКЗСС ССО БВ СОБОДМУМ (СЕАСАМ5 теВ) ТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТСО5ЗТаАМТТЗММАМУМОЕКРОЮ
АєРВНаІФСТМКААРСТРАВЕБЗО5І І СОКААЇ ТІ БЇВАОРЕОЕ
АЕМУСАЇ М/УЗМІ ММУРОСИТКІ ТМІ ББАЗТКОРБЗУЕРІ АРЗ
ЗК5ТЗаСаСТААІ сс МКОМЕРЕРУТУЗУММЗИАІ Т5ОаМУНТЕР
АМІОБЗИЇ М5І 55УМТМРЗБ ОТО ТМІСМУМНКРЗМТКМО
Таблиця С (послідовності): 11107711 назва. | 77771771 Послідовність////////ССССсСсС
ККУЕРКЗСОКТНТСОРРСОРАРЕААСОРБУРНБІ ЕРРКРКОТІ МІ
ЗАТРЕМТСУММОУЗНЕОРЕУКЕМУУУрОМЕУНМАКТКРЕАЕ
ЕОУМ5ТУВМУУЗМІ ТМ НОУМІ МОКЕУКСКУЗМКАЇ САРІЕ
КТІЗКАКЕОРЕЕРОММУТІ РРСОВОЕЇ ТКМОМУБІ М/СІ УКОБЕМР
ЗБІАМЕМЕЗМОСОРЕММУКТТРРМІ О5ОСБЗЕРІ КІ ТУКЬ
ВУМОдамМмуЕ5СЗУМНЕАНМНУТОКОІ БІ ЗР
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАСЕЗМОІРа Маг НУМО . ОКРООАРАП ІМВАЗМААТОИІРАНЕЗИЗИаБЗаИтОгТтІ ТІ Е вв ою СЕА МИ ОО ТРЕОРАУУУСООТМЕОРУТЕСОСТКІ ЕІКВТУААРЗУРІЕРР (СЕАСАМ5 ТСВ) ЗОВАКІ КЗСТАБУМОЇ І ММЕМР ВЕАКМОМ КМОМА О5ОМ5О
ЕЗБМТЕООБКОБЗТУБІ 55111 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМУТНОСІ.
ЗЗРУТКЗЕМАСЕС
ОМОЇ МОБСОАЕУККРОАБУКУЗСКАБИаМ ТЕТЕЕСММУ УВО 160 СЕА УН АРСОСІ ЕМ/МСОУММТКТаИєЕАТУУМЕЕРКОС ВУТЕТТОТ5Т5ТА
УМЕГ 5 А5ВОТАУУМСАВУМОГАУУМЕАМОУУМСООСТТМУТ
УЗ
РІОМТО5РББІ БАБМОО ВМТ СКАБААУа ГТУМАМУМООКР 161 СЕА М СКАРК ІМ5АБУВАКАСУРЗАЕЗОаЗИаБаТОЕТІ ТЗІ ОРЕО
ЕАТУМСНОМУТМУРІ ЕТЕСОСТКІ ЕК
ОМОЇ МОБСОАЕУККРИЗЗУКУЗСКАБИОЕМІКО ТУМНУУВО
АРСОСІ ЕМ/МОВІОРАМОМЗКУУРКЕРОСАМТІТАОТОТТА 168 |СЕАУН(СЕАСАМ5) УМЕГ 581 ВЗЕОТАУУУСАРЕСУУУВОУАМАУМ СОСТІ УТУ в
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАСЕЗМОІРа Маг НУМО 169 СЕА МІ (СЕАСАМ5) ОКРООАРАП ІМВАЗМААТОИІРАНЕЗИЗИаБЗаИтОгТтІ ТІ Е
РЕОРАУУУСООТМЕОРУТРСОСТКІ ЕК
Наступні пронумеровані абзаци (пункти) описують аспекти цього винаходу: 1. Біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітин 1 (РОТ), і другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (І АОЗ), причому зазначений перший антигензв'язуючий домен, специфічно зв'язується з РОТ, містить: домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність 56010 МО: 1, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 2, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІО МО: З; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮО МО: 4; (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 5, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 52Е0 10 МО: 6. 2. Біспецифічне антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес- домен, який являє собою Ес-домен Ідс, зокрема, Ес-домен ЇдС1 або Ес-домен Ідся, і при цьому
Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес- рецептором, зокрема, з Есу-рецептором. 3. Біспецифічнеї антитіло за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС3З, містить (а) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 14, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 15, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 16; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 17, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 10 МО: 18, (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 19; або (Б) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 22, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 23, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 24; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 25, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІЮО МО: 26, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 27; або (с) домен МН, що містить: (І) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 30, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 31, ї (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 32; і домен МІ, що містить: () НМА-ІТ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 33, (ії) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5Е0 ІО МО: 34, (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 35; або (4) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 38, (і) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 52ЕО ІЮО МО: 39, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 40; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 41, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮО МО: 42, і (її) НУВА-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 43; або (є) домен МН, що містить: () НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 46, (ії) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 47, і (ії) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 48; і домен МІ, що містить: () НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 49, (ії) НМВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність 560 10 МО: 50, і (ії) НМА-І3, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮО МО: 51. 4. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-3, яке відрізняється тим, що перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, містить: (а) домен МН, що містить: амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 7, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 8, або (Б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 10, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 52Е0О ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 11, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 12, або (є) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 52Е0О ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 13. 5. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-4, яке відрізняється тим, що другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 21, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 28, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 29, або 60 (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: З6, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 37, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 44, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 45, або (е) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 52, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 53. б. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-4, яке відрізняється тим, що другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, містить: (а) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 54, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 55, або (б) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 62, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 63, або (с) домен МН, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 64, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 65, або (4) домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 6б, і домен Мі, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 67. 7. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-5, яке відрізняється тим, що перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 20, ії домен МІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 21, або домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ
МО: 52, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 53. 8. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-5, яке відрізняється тим, що перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, містить домен УН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 20, і домен МІ, що містить амінокислотну
Зо послідовність зЗЕО ІЮ МО: 21. 9. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-4 або 6, яке відрізняється тим, що перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 9, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 10, другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з Г АСЗ, містить домен МН, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 56, і домен МІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 57. 10. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-5, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло являє собою гуманізоване або химерне антитіло. 11. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-10, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен підкласу ЇД01 людини з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А і
РЗ290 (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). 12. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-11, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен, що містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої та другої субодиниць Ес-домену. 13. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12, яке відрізняється тим, що перша субодиниця Ес-домену містить виступи, а друга субодиниця Ес-домену містить отвори відповідно до способів "виступи-в-отвори". 14. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-13, яке відрізняється тим, що перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 5354С і Т366УУ (нумерація Е), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни У349С, 73665 і У407М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). 15. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен, перший Раб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО1, і другий Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АС. 16. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-15, яке відрізняється тим, що в одному з Рар- фрагментів варіабельні домени МІ. і УН замінені один на одного, так що домен МН є частиною легкого ланцюга, а домен МГ. є частиною важкого ланцюга. 60 17. Біспецифічне антитіло за пп. 15 або 16, який відрізняється тим, що в першому Рар-
фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОЇ, варіабельні домени У. і МН замінені один на одного. 18. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-17, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Гар-фрагмент, при цьому в константному домені Сі. амінокислота в положенні 124 незалежно заміщена лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщені глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом). 19. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 15-18, яке відрізняється тим, що в другому
Еаб-фрагменті міститься антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, у константному домені Сі амінокислота в положенні 124 незалежно заміщують лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщують глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу
ЕЦ за Кабатом). 20. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19, що містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5Е0 ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮО МО: 97, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІЮО МО: 99, або (б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІЮ МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮ МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 101, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 102, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮ МО: 104, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 105, або (4) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 106, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 107, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 105. 21. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить третій Еар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з | ДОЗ. 22. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21, який відрізняється тим, що два
Еаб-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з
І АСЗ, є ідентичними. 23. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21, або 22, яке відрізняється тим, що
Еаб-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО1, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів. 24. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21-23, що містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 118, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 115, 60 другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 119, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 101, або (б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 120, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 121, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5Е0 10 МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІО МО: 122, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 115, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕБЕО 10 МО: 103, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 105. 25. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21-23, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить четвертий Рар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ. 26. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21-23, або 25, яке відрізняється тим, що два Еаб-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, є ідентичними. 27. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19, або 21-23, або 25, або 26, який відрізняється тим, що кожний з двох Рар-фрагментів, містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, и при цьому кожен злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, відповідно. 28. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-19 або 21-23, або 25-27, що містить: (а) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95
Фо ідентичністю до послідовності 52ЕО ІЮО МО: 114, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ МО: 101, або (Б) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95
Фо ідентичністю до послідовності зЗЕО ІЮО МО: 116, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 56200 ІЮ МО: 115, ії два других легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕО ІЮ МО: 99, або (с) два важкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності «ЕС ІЮО МО: 117, два перші легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ХЕО ІЮ МО: 115, ї два других легкі ланцюги, що містять амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 ідентичністю до послідовності ЖЕО ІЮ МО: 105. 29. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два Габ-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАСЗ, і оодноланцюговий Бар (зсЕар), що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ. 30. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14 або 29, який відрізняється тим, що зсЕаб, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів. 31. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14, або 29, або 30, що містить: (а) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5260 10 МО: 123, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5262 10 МО: 119, ї два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІЮО МО: 101, або (б) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 905 60 ідентичністю до послідовності 5260 10 МО: 124, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 562 100 МО: 121, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності зЕО ІЮО МО: 99, або (с) перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 90 ідентичністю до послідовності 5260 10 МО: 125, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 10 МО: 103, ї другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 560 ІЮ МО: 105. 32. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен, два Габ-фрагменти, кожен з яких містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АОЗ, і домен МН і МІ, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РО. 33. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-14 або 32, яке відрізняється тим, що домен
МН антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РОТ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем одного з важких ланцюгів, і домен МІ антигензв'язуючого домену, який специфічно зв'язується з РОЇ, злитий через пептидний лінкер з С-кінцем іншого важкого ланцюга. 34. 1-14, або 32, або 33, що містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності ЗЕ ІО МО: 126, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5ЕО ІО МО: 127, і два легкі ланцюги, кожен з яких містить амінокислотну послідовність щонайменше з 95 95 ідентичністю до послідовності 5Е0 ІЮО МО: 109. 35. Полінуклеотид, що кодує біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34. 36. Вектор, зокрема, вектор експресії, що містить полінуклеотид за п. 35. 37. Прокаріотична або еукаріотична клітина-хазяїн, що містить полінуклеотид за п. 35 або вектор за п. 36. 38. Спосіб отримання біспецифічного антитіла за пп. 1-34, що включає культивування клітини-хазяїна за п. 37 в умовах, які підходять для експресії біспецифічного антитіла, і виділення біспецифічного антитіла з культури. 39. Фармацевтична композиція, яка містить біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 і щонайменше один фармацевтично прийнятний наповнювач. 40. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 або фармацевтична композиція за п. 39 для застосування в якості лікарського засобу. 41. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 або фармацевтична композиція за п. 39 для застосування ії) при модуляції імунних відповідей, таких як відновлення активності Т-клітин, і) при стимуляції Т-клітинної відповіді, ії) при лікуванні інфекцій, їм) при лікуванні онкологічного захворювання, м) для затримки прогресування онкологічного захвлрювання, мі) в продовженні життя пацієнта, що страждає на онкологічне захворювання. 42. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 або фармацевтична композиція за п. 39 для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання. 43. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 або фармацевтична композиція за п. 39 для застосування в профілактиці або лікуванні хронічної вірусної інфекції. 44. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-34 або фармацевтична композиція за п. 39 для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, які відрізняються тим, що біспецифічне антитіло вводять у комбінації з хіміотерапевтичним агентом, опроміненням та/або іншими агентами для застосування в імунотерапії онкологічного захворювання. 45. Спосіб інгібування росту пухлинних клітин у індивідуума, що включає введення індивідууму ефективної кількості біспецифічного антитіла за будь-яким із пп. 1-34 для пригнічення росту пухлинних клітин.
ПРИКЛАДИ
Нижче наведені приклади способів і композицій відповідно до винаходу. Зрозуміло, що різні інші варіанти здійснення можуть бути здійснені на практиці, враховуючи загальний опис, наведений вище.
Матеріали і загальні способи
Загальна інформація про нуклеотидні послідовності легких і важких ланцюгів імуноглобулінів 60 людини наведена в: КаБбаї, Е.А., еї аІ., ЗХедоепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоїодіса! Іпіегеві, 5Ій едй.,
Рибіїс Неайй З5егуісе, Маїйопаї! Іпвійшевз ої Неайй, Вешезаа, МО (1991). Амінокислоти ланцюгів антитіл пронумеровані і позначені відповідно до системами нумерації за Кабатом (КаБбаї, ЕА, єї аім. Зедиепсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпієгтеві, Бій ей. Рибієс Неайй 5Зегмісе, Маїопаї
Іпвійшез ої Неакй, Вем(Шезаа, МО (1991)), як визначено вище.
Технології рекомбінантної ДНК
Для виконання маніпуляції з ДНК використовували стандартні методи, як описано в затрьгоок, «4. еї а)І., МоіІесшаг Сіопіпд: А Іабогаїюгу тапиаї!; Соїй ріпа Натог І арогаюгу Ргезв,
Соїй Зргіпд Нагрог, Мем/ МогкК, 1989. Молекулярно-біологічні реагенти використовували відповідно до інструкцій виробника.
Синтез генів
Необхідні сегменти генів отримували з олігонуклеотидів, отриманих за допомогою хімічного синтезу. Сегменти генів довжиною 6000-1800 п. н., що були фланковані одиничними сайтами розщеплення ендонуклеази рестрикції, були зібрані шляхом відпалу і лігування олігонуклеотидів, включаючи ампліфікацію ПЛР, і пізніше клоновані через зазначені сайти рестрикції, наприклад, Крпі / Засі або Авсі / Расі в клонуючий вектор росА4 на основі рРРОКзЗстірі (Зігаїадепе). Послідовності ДНК субклонованих фрагментів гена підтверджували за допомогою секвенування ДНК. Фрагменти для синтезу генів замовляли відповідно до наведених описів в
Сепеаг (Регенсбург, Німеччина).
Визначення послідовності ДНК
Послідовності ДНК визначали шляхом секвенування дволанцюгової ДНК, що проводилось в
Медісепотіх стьЬН (Мартинсрід, Німеччина) або Зедцізегуе стрН (Фатерштеттен, Німеччина).
Аналіз послідовності ДНК і білка й управління даними послідовності
Пакет програмного забезпечення (СС (Сепеїйс5 Сотриїег Стор, Медісон, штат Вісконсін) версії 10.2 і пакет Іпїотах Месіогї МТ1 Аймапсе зийе версії 8.0 використовували для створення послідовностей, картування, аналізу, анотації та ілюстрації.
Вектори експресії
Для експресії описаних антитіл були застосовані варіанти плазмід експресії для транзієнтної експресії (наприклад, в НЕК293) в клітинах, заснованих або на організації КДНК з промотором
ЦМвВ-інтрон А чи без нього, або на геномній організації з промотором ЦМВ.
Крім касети експресії антитіл вектори містили: - точку початку реплікації, яка забезпечує реплікацію цієї плазміди в Е. сої, і - ген В-лактамази, який надає стійкості до ампіциліну в Е. соїї.
Транскрипційна одиниця гена антитіла складалася з наступних елементів: - унікальний (ії) сайт (и) рестрикції на 5'-кінці - негайно-ранній енхансер і промотор з цитомегаловірусу людини, - з наступною послідовністю інтрону А в разі організації кДНК, - Б-нетрансльована область гена антитіла людини, - сигнальна послідовність важкого ланцюга імуноглобуліну, - ланцюг людського антитіла (дикого типу або з обміном доменів) або у вигляді КкДНК, або у вигляді геномної організації з екзон-інтронною організацією імуноглобуліну - 3-нетрансльована область з сигнальною послідовністю поліаденілювання, і - унікальний (ії) сайт (и) рестрикції на 3'-кінці.
Злиті гени, що містять ланцюги антитіл, як описано нижче, генерували за допомогою ПЛР та/або синтезу генів і зрирали відомими рекомбінантними способами і методиками шляхом з'єднання відповідних сегментів нуклеїнової кислоти, наприклад, використовуючи унікальні сайти рестрикції у відповідних векторах. Субклоновані послідовності нуклеїнових кислот були перевірені за допомогою секвенування ДНК. Для транзієнтних трансфекцій великі кількості плазмід отримували шляхом виготовлення препаратів плазміди з трансформованих культур Е. соїї (Мисіеорбопа АХ, Маспегеу-Мадеї).
Методи культивування клітин
Використовували стандартні методи культивування клітин використовували, як описано в
Ситепі Ргоїосоїв іп Сеї! Віоїосду (2000), Вопітасіпо, 9У.5., Оаззо, М., Напога, 9.В., Пірріпсой- зЗепмапя, у. апа Матада, К.М. (едв.), Чоп УМіеу 4 5опв5, Іпс.
Мультиспецифічні антитіла експресували шляхом тимчасової транзієнтної котрансфекції відповідних плазмід експресії в адгезивно зростаючих НЕК293-ЕВМА або в клітинах НЕК29-Е, що ростуть в суспензії, як описано нижче.
Транзієнтні трансфекції в системі НЕК29З3
Усі антитіла і біспецифічні антитіла були отримані шляхом транзієнтної трансфекції клітин 293Е з використанням системи Егеевіуіе (ТпегтоРізпег). У ній клітини 293Е культивували в 60 середовищі Е17, трансфікували 293Егее (Момадепе) і через 4 години підживлювали 4 мМ МРА і компонентом РЕееа 7 і 0,6 95 глюкозою через 16 годин. Крім того, був використаний набір для системи експресії Ехрі293Е "м Ехргеззіоп Зузіет Кії (ПепторРізНег). У ній клітини Ехрі293БЕ тм культивували в середовищі для експресії Ехрі293 "м і трансфікували з використанням набору для трансфекції Ехрібесіатіпе "м 293 відповідно до інструкцій виробника. Через покращену стабільність і чистоту та зменшену тенденцію до агрегації біспецифічних антитіл Сто55МАБУМ. з додатково введеними зарядженими парами амінокислот на поверхні взаємодії СНІ1/СІ (див. положення у відповідних послідовностях для отримання додаткової інформації) ніяких змін співвідношення плазмід не застосовували. Тому відносне співвідношення плазмід 1:1:1:1 для 1-1 СтоззМаб або 1:1:1 для 242 Стоз5Маб використовували для спільної трансфекції плазмід з
ІС, НС, кросоверним С і кросоверним НС. Клітинні супернатанти збирали через 7 діб та очищали за допомогою стандартних способів.
Визначення білка
Концентрацію білка в очищених антитілах і похідних визначали шляхом визначення оптичної щільності (ОЩ) за 280 нм, використовуючи молярний коефіцієнт екстинкції, розрахований на основі амінокислотної послідовності відповідно до Расе, еї аї., Ргоївіп 5сіепсе, 1995, 4, 2411- 1423.
Визначення концентрації антитіл в супернатантах
Концентрацію антитіл і похідних у супернатантах клітинних культур оцінювали за допомогою имунопреципітації з використанням гранул агарози з білком А (Коспе). 60 мкл агарозних гранул з білюом А промивають тричі в ТВ5-МР4АО (50 мМ Трис, рН 7,5, 150 мМ Масі, 1 95 Нонідет-Р40).
Потім 1-15 мл супернатанту клітинної культури наносять на агарозні гранули з білком А, попередньо врівноважені в ТВ5-МР40. Після інкубації протягом 1 год за кімнатної температури гранули промивають на фільтраційній колонці ОКгаїтее-МС (Атісоп) один раз 0,5 мл ТВ5-МР4О, двічі 0,5 мл 2х фосфатно-сольового буфера (2хФОБ, Коспе) та короткочасно чотири рази 0,5 мл 100 мМ Ма-цитратом рН 5,0. Зв'язане антитіло елюють додаванням 35 мкл буфера для зразків МИРАСЕФ І О5 (Іпуи/йгодеп). Половину зразка об'єднують з відновлюючим агентом для зразка МИРАСЕФ або залишають невідновленим, відповідно, і нагрівають протягом 10 хв. за 70 "б. Потім 5-30 мкл наносять на 4-12 95 Біс-Трис ДСН-ПААГ МиРАСЕФ (Іпмігодеп) (з буфером
МОР5Б для електрофорезу в поліакриламідному гелі за присутності додецилсульфату натрію (ДСН-ПААГ) у невідновлювальних умовах із буфером МЕ5 з антиоксидантною добавкою для рухомого буфера МиРАСЕФ (Іпийгодеп) для ДСН-ПААГ-електрофорезу у відновлювальних умовах) і забарвлюють Кумасі синім.
Концентрацію антитіл і похідних у супернатантах клітинних культур кількісно вимірювали за допомогою афінної ВЕРХ хроматографії. Коротко, супернатанти клітинних культур, що містять антитіла і похідні, які зв'язуються з білком А, наносили на колонку Арріїед Віозузіетв5 Рогов А/20 в 200 мМ КНеРО»х, 100 мм цитрату натрію, рН 7,4 і елюювали з матриці з використанням 200 мМ
Масі, 100 мм лимонної кислоти, рН 2,5 в системі Адіепі НРІС 1100. Елюйований білок визначали кількісно за поглинанням в УФ-спектрі та інтеграції площ піків. Очищене стандартне
Ідс21-антитіло слугувало стандартом.
Альтернативно, концентрацію антитіл і похідних у супернатантах клітинної культури вимірювали за допомогою сендвіч-ІдС-ІФА. Коротко, 9б-лункові мікротитраційні планшети зЗігеріамуєеі з високим зв'язуванням стрептавідину А (Коспе) покривають 100 мкл/лунка біотинільованою молекулою для захоплення Е (ар)2«п-Есу» ВІ (Оіапома) проти Їдс людини у концентрації 0,1 мкг/мл протягом 1 години за кімнатної температури або, альтернативно, протягом ночі за 4 "С, і потім тричі промивають 200 мкл/лунку ФСБ, 0,05 95 твіном (РВ5Т,
Зідта). 100 мкл/лунка серійних розведень у ФСБ (5ідта) відповідних супернатантів клітинних культур, що містять антитіло, додавали в лунки і інкубували протягом 1-2 годин на шейкері для мікротитраційних планшетів за кімнатної температури. Лунки промивали три рази 200 мкл/лунка
РВ5Т, Її зв'язане антитіло детектували за допомогою 100 мкл Е(аб)2«пЕсу»РОЮ (ПОіапома) в концентрації 0,1 мкг/мл як антитіла для виявлення протягом 1-2 годин на шейкері для мікротитраційних планшетів за кімнатної температури. Незв'язане детектуюче антитіло тричі промивали за допомогою 200 мкл/лунка РВ5Т, і зв'язане детектуюче антитіло детектували шляхом додавання 100 мкл АВТ5/лунка. Визначення поглинання здійснювали на спектрометрі
Тесап РіІног при довжині хвилі вимірювання 405 нм (еталонна довжина хвилі 492 нм).
Очищення білка
Білки очищали від фільтрованих супернатантів клітинних культур у відповідності зі стандартними протоколами. Коротко, антитіла наносили на колонку з білком А-сефарозою (СЕ
Неайсаге) і промивали ФОБ. Елюювання антитіл виконували за рН 2,8 з наступною негайною нейтралізацією зразка. Агрегований білок відокремлювали від мономерних антитіл за 60 допомогою ексклюзійної хроматографії (Зирегдех 200, СЕ Неайсаге) у ФСБ або в 20 мМ гістидину, 150 мМ Масі, рН 6,0. Фракції мономерних антитіл об'єднували, концентрували (якщо необхідно), наприклад, з використанням відцентрового концентратора МІ .ІРОРКЕ Атісоп ОКга (Номмо (номінальне відсікання за молекулярною масою) 30), заморожували і зберігали при -20 "б або -80 "б. Частину зразків забезпечували для подальшого аналізу білка і аналітичного визначення характеристик, наприклад, за допомогою ДСН-ПААГ-електрофорезу, ексклюзійної хроматографії (ЕХ) або мас-спектрометрії.
ДСН-ПААГ-електрофорез
Гелеву систему МИРАСЕФ Рге-Саві (Іпийгодеп) використовували відповідно до інструкції виробника. Зокрема, використовували 10 95 або 4-12 95 гелі МИРАСЕФ МомехФ Віз-ТВІ5 Рге-
Савзі (рН 6,4) і МИРАСЕФ МЕЗ5 (відновлені гелі з антиоксидантною добавкою для рухомого буфера МиРАСЕФ) або рухомий буфер МОРЗ (невідновлені гелі).
Аналітична ексклюзійна хроматографія
Ексклюзійну хроматографію (ЕХ) для визначення агрегації і олігомерного стану антитіл проводили методом ВЕРХ хроматографії. Коротко, антитіла, очищені білком А, наносили на колонку Тохоп ТЗКаде! З30005УМ в 300 мМ Масі, 50 мМ КНгРОК»НРО»Х, рН 7,5 на системі
Адіїепі НРІ С 1100 або на колонку бирегдех 200 (СЕ Неайпсаге) в 2хФОБ на системі Оіопех
НРІ С. Елюйований білок визначали кількісно по поглинанню в Уф-спектрі і інтеграції площ піків.
Стандарт для гель-фільтрації ВіоКай 151-1901 слугував в стандартом.
Мас-спектрометрія
У цьому розділі описується характеристика мультиспецифічних антитіл з обміном МНЛ/І. (МНЛ// Сто55Мар) з акцентом на їхню правильну збірку. Очікувані первинні структури були проаналізовані за допомогою мас-спектрометрії з іонізацією електророзпиленням (ЕР-МС) деглікозильованих інтактних Сто55Мар і деглікозильованих / розщеплених плазміном або альтернативно деглікозильованих / обмежено розщеплених І узС Стоз5Марб.
МНЛ/І. Стоз5Маб піддавали деглікозилюванню М-глюкозидазою Е у фосфатному буфері або трис-буфері за 37 "С протягом до 17 годин за концентрації білка 1 мг/мл. Розщеплення плазміном або обмежене розщеплення ГузС (Коспе) проводили з використанням 100 мкг деглікозильованих УНЛ/І. СтоззМаб у трис-буфері, рН 8, за кімнатної температури протягом 120 годин і за 37 "С протягом 40 хвилин, відповідно. Перед мас-спектрометрією зразки знесолювали за допомогою ВЕРХ на колонці з сефадексом 525 (СЕ Неайсаге). Загальна маса була визначена за допомогою ІЕР-МС на системі М5 МАХІЗ 465 ОНК-ОТОЕ (ВгиКег БВаїйюгпік), обладнаною джерелом Тгімегза МапоМаїге (Адміоп).
Визначення зв'язування і афінності зв'язування мультиспецифічних антитіл з відповідними антигенами з використанням поверхневого плазмонного резонансу (ППР) (ВІАСОКЕ)
Зв'язування отриманих антитіл з відповідними антигенами досліджують за допомогою поверхневого плазмонного резонансу з використанням приладу ВІАСОВЕ (СЕ Неайнсаге
Віозсієпсез АВ, Упсала, Швеція). Відповідне програмне забезпечення Віасоге Емаїшайоп
Зоїпмаге використовується для аналізу сенсограм і для розрахунку даних афінності.
Приклад 1
Отримання анти-РО-1 антитіл
Імунізація мишей
Мишей ММРНЇ імунізували генетично, використовуючи вектор експресії плазміди, що кодує повнорозмірний людський РО-1, шляхом внутрішньошкірного введення 100 мкг векторної ДНК (ріазхітід15300 пРО1-її) з подальшою електропорацією (2 квадратних імпульси по 1000 В/см, тривалість 0,1 мс, інтервал 0,125 с, за яким слідують 4 квадратних імпульси 287,5 В/см, тривалість 10 мс, інтервал 0,125 с. Миші отримували по 6 послідовних імунізацій на 0, 14, 28, 42, 56, 70 ї 84 добу. Кров відбирали на 36, 78 і 92 добу і отримували сироватку, яку використовували для визначення титру за допомогою ІФА (див. нижче). Тварин з найвищими титрами відбирали для повторної імунізації на 96 добу шляхом внутрішньовенної ін'єкції 50 мкг рекомбінантної химери людський РОТ - людський Ес, і через З доби після повторної імунізації виділяли моноклональні антитіла за технологією гібридоми шляхом злиття спленоцитів клітинної лінії мієломи.
Визначення сироваткових титрів (ІФА)
Химеру людського рекомбінантного РОЇ з Ес людини іммобілізували на 9б-лунковому планшеті МОМС Махізогр в концентрації 0,3 мкг/мл, 100 мкл/лунка у ФСБ з подальшим: блокуванням планшета 2 95 кротеїну С у ФСБ, 200 мкл/лунка; застосуванням серійних розведень антисироваток у двох повторностях, у 0,5 9о кротеїну С у ФСБ, 100 мкл/лунка; виявленням за допомогою НЕР-кон'югованого козячого антимишачого антитіла (даск5оп
Іттипогезеагсп/Оіапома 115-036-071; 116000). Для всіх етапів планшети інкубували протягом 1 60 год за 37 "С. Між усіма етапами планшети промивали З рази 0,05 95 Твіна 20 у ФСБ. Сигнал посилювали шляхом додавання розчинного субстрату ВМ ВіІсе РОО (Коспе), 100 мкл/лунка; і зупиняли додаванням 1 М НС, 100 мкл/лунка. Оптичну щільність зчитували за 450 нм проти еталону 690 нм. Титр визначали як розведення антисироватки, що приводить до напівмаксимального сигналу.
Приклад 2
Характеристика анти-РО1 антитіл/ в'язування анти-РО1 антитіл з людським РО1
ІФА для пи РО1
Покриті стрептавідином планшети Мипс тахізогр (МістоСоаї, Мо 11974998001), покривали 25 мкл/лунка біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіз і інкубували за 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-РО1 або еталонних антитіл (людські анти-РО1; Носпе/мишачі анти-РО1; Віоієдепа; кат. 329912) і інкубували протягом 1 год. за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка козячого антилюдського Н -- Г-РОЮ (А, ЛЕА109-036- 088) / овечого антимишачого- ГОЮ (СЕ НеайНсаге; МА9З310) у розведенні 1:2000/1:1000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (НКоспе, кат. Мо 11835033001) та інкубували до досягнення ОЩ 2-3. Вимірювання проводили за 370/492 нм.
Результати ІФА наведені у вигляді значень ЕСово Інг/млі у зведених Таблицях 1 і 2 нижче.
Клітинний ІФА для РОЇ
Адгезивну клітинну лінію СНО-КІ!, стабільно трансфіковану плазмідою 15311 НПРО1- її роб Мео, що кодує повнорозмірний людський РОТ, і селекцію з 2418 (маркер стійкості до неоміцину в плазміді) висівали в концентрації 0,01 х10Еб клітин/лунка в 384-лункові планшети з плоским дном і культивували протягом ночі.
На наступну добу додавали 25 мкл/лунка зразка РО1 або еталонного антитіла проти РОЇ людини (Коспе)/проти РОТ миші (Віоієдепа); кат.: 329 912) і інкубували протягом 2 годин за 4 7 (щоб уникнути інтерналізації). Після ретельного промивання (1х90 мкл/лунка РВ5Т) клітини фіксували додаванням 30 мкл/лунка 0,05 95 глутаральдегіду (Зідта, кат. Мо: (55882, 25 95), розведеного в буфері 1хФБ, і інкубували протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка РВ5Т) для виявлення додавали 25 мкл/лунка вторинного антитіла: козячого антилюдського Н ж Г-РОЮ (ІВ, ЛАТ09-036-088) / овечого антимишачого РОЮ (СЕ
МАЗУЗ10) з подальшою 1-годинною інкубацією за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка РВ5ОТ) додавали 25 мкл/лунка розчину субстрату ТМВ (Коспе 11835033001) та інкубували до досягнення ОП 1,0-2,0. Вимірювання в планшетах проводили за 370/492 нм.
Результати клітинного ІФА наведені у вигляді значень "ЕСзо СНО-РО1" Інг/млі в Таблиці 2 нижче.
ІФА для РОТ яванського макака (супо)
Покриті стрептавідином планшети Мипс тахізогр (МістоСоаї, Мо 11974998001), покривали 25 мкл/лунка біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіз і інкубували за 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-РО1 або еталонних антитіл (людське анти-РО1; Роспе) та інкубували 1 год за кімнатної температури на шейкері.
Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5ЄТ) додавали 25 мкл/лунка козячого антилюдського Н - Г-РОЮ (А, УА109-036-088) у розведенні 1:1000 та інкубували за кімнатної температури протягом 1 год. на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВБ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Росне, 11835033001) та інкубували до досягнення ОП 2 - 3. Вимірювання проводили за 370/492 нм.
Результати ІФА наведені у вигляді значень ЕСзо |нг/мл| в зведених Таблицях 1 і 2.
Аналіз заміни ліганда РО-ІЇ 1
Покриті стрептавідином планшети Мипс тахізогр (МісгоСоаї, Мо 11974998001), покривали 25 мкл/лунка біотинільованого РО1Т-ЕСО-АміНіз і інкубували за 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-?РО1 або еталонних антитіл (людські анти-РО1; Коспе/мишачі анти-РО1; ВіоІедепа; кат.: 329912) і інкубували 1 год. за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка РО-І 1 (рекомбінантна химера В7-НІТ/РО-І 1 Ес-людини; 156-887, К 4. 0) та інкубували 1 год. за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка козячого антилюдського Н жк І-РОЮ (У, 109-036-088) у розведенні 1:1000 та інкубували за кімнатної температури протягом 1 год. на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували до досягнення ОП 2 - 3. Вимірювання 60 проводили за 370/492 нм.
Результати ІФА наведені у вигляді значень ІСзо Інг/мл| в зведеній Таблиці 1 нижче.
Аналіз заміни лиганда РО-І 2
Покриті стрептавідином планшети Мипс тахізогр (МісгоСоаї, Мо 11974998001), покривали 25 мкл/лунка біотинільованого РО1-ЕСО-АміНіз і інкубували за 4 "С протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-РО1 або еталонних антитіл (мишаче анти-пиРО1; Коспє) та інкубували 1 год. за кімнатної температури на шейкері.
Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка РО-І2 (рекомбінантна химера В7-ОС/РО-І2 ЕРсо-людини; 1224-РІ-100, МК 48. 0) та інкубували 1 год. за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка козячого антилюдського Н я Г-РОЮ (ЛЕ, 109-036-088) у розведенні 1: 2000 та інкубували за кімнатної температури протягом 1 год. на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5ЗТ) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (ХКосне,
Ме11835033001) та інкубували до ОЩ 2-3. Вимірювання проводили за 370/492 нм.
Результати ІФА наведені у вигляді значень ІСзо Інг/мл| у зведеній Таблиці 1 нижче.
Картування епітопів за допомогою ІФА / конкурентного аналізу зв'язування
Планшети Мипс Махізогр (Мипс Мо 464718) покривали 25 мкл/лунка захоплюючого антитіла (козячий антимишиний ІдсС; УА; 115-006-071) і інкубували протягом 1 години за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) планшети блокували протягом 1 години 2 95 -ним буфером ФСБ, що містить БСА за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВЗТ) додавали 25 мкл зразків мишачого анти-?РО1 та інкубували 1 год. за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) захоплююче антитіло блокували за допомогою 30 мкл/лунка мишачого Ід (ЛІК; 015-000-003) протягом 1 години за кімнатної температури на шейкері. У той самий час біотинільоване РО1-ЕСО-АмінНіз попередньо інкубували з другим зразком антитіл протягом 1 години за кімнатної температури на шейкері. Після промивання планшета для аналізу (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) суміш антитіл до РО1 переносили на планшет для аналізу і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка стрептавідину-РОЮ (Коспе, Мо 11089153001) у розведенні 1: 4000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВЗТ) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, Мо 11089153001) та інкубували до досягнення ОЩ 1,5-2,5. Вимірювання проводили за 370/492 нм. Епітопні групи визначали за допомогою ієрархічної кластеризації проти еталонних антитіл.
Таблиця 1
Зв'язування, інгібування РО-1 1 і групи епітопних областей типових антитіл (ІФА)
Антитіло ІФА РО-І2 ІФА
ЕК»бо Інг/мл| ЕК»во (нг/мл ІС (за конкурентним во (НГ/мл| ІСво |нг/мл| : аналізом)
РОТО05О | 179 | 98 | 7128. | 3 | 1
РОЇ0069 | 457 | 227 | 225. (| 88 | 6
РОЇ0078 | 263 | 224 | х | 8 | 2
Таблиця 2
Біохімічне та клітинне зв'язування гуманізованих антитіл до РОМ, отриманих з вихідного мишачого антитіла РО1-0103 (ІФА)
ЕКбо (нг/млі| ЕКбо (нг/млі| ЕКбво (нг/млі
Таблиця 2
Біохімічне та клітинне зв'язування гуманізованих антитіл до РОМ, отриманих з вихідного мишачого антитіла РО1-0103 (ІФА)
ЕКбо (нг/млі| ЕКбо (нг/млі| ЕКбво (нг/млі
Характеристика гуманізованих анти-РО-1 антитіл за допомогою Віасоге
Аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу (ППР) використовували для визначення кінетичних параметрів зв'язування між декількома мишачими РО1-зв'язуючими речовинами, а також між комерційними стандартами, що зв'язують людський РО1. Отже, антилюдський ІдСї був іммобілізований шляхом приєднання аміну до поверхні сенсорного чипу
СМ5 (Віасоге). Потім проводили захоплення зразків і зв'язування з ними пи РО1-ЕСО. Поверхню сенсорного чипу регенерували після кожного циклу аналізу. У результаті отримували константу рівноваги та кінетичні константи швидкості шляхом підгонки даних до моделі взаємодії
Ленгмюра 11.
Близько 2000 одиниць відповіді (ОВ) 20 мкг/мл антилюдського ДС (ЗЕ Неайсаге, Мо ВЕ- 1008-39) були зв'язані з проточними комірками 1 і 2 (альтернативно: З і 4) сенсорного чипу СМ5 в приладі Віасоге Т200 за рН 5,0 з використанням набору для амінного сполучення, що поставляється СЕ Неаййсаге.
Зразок і рухомий буфер являли собою НВЗ-ЕР -- (0,01 М ГЕПЕС, 0,15 М Масі, З мм ЕДТА, 0,05 95 об./06. ПАР Р20, рН 7,4). Температура проточної комірки була встановлена на 25 "С, а температура у відсіку для зразка - 12 "С. Система була заповнена рухомим буфером.
Зразки вводили протягом 20 секунд з концентрацією 10 НМ і зв'язували з другою проточною коміркою. Потім повний набір концентрацій людського РО1-ЕСО (144 нМ, 48 нМ, 16 нМ, 5,33 НМ, 1,78 нМ, 0,59 нМ, 0,20 нм ї 0 нМ) вводили в кожен зразок протягом 120 с, після чого час дисоціації становив 30/300 с і дві стадії регенерації по 20 секунд з З М МаосСі»г, з яких на останній була "додаткова промивка після ін'єкції" з рухомим буфером.
У результаті дані подвійного контролю були апроксимовані до моделі взаємодії Ленгмюра 1: 1 з використанням програмного забезпечення Віасоге Т200 ЕмаїЇчайоп. Отримані значення Ко, Ка і Кланаведені в Таблиці 3.
Таблиця З
Константи кінетичної швидкості і константи рівноваги для химерного РО1-0103 і г уманізованих антитіл до РО, визначені за допомогою Віасоге химернеРО1-0103 | 386405 | 307204 | 08 г
Як показано в Таблиці 3, всі гуманізовані версії химерного РО1-0103 (створення див. у прикладі б) демонструють кінетичні властивості, схожі з вихідним антитілом (химерне РО1- 0103).
Кінетика
Сенсор СМ5 серії 5 був встановлений в систему Віасоге 4000, і точки виявлення були гідродинамічно приведені у відповідність до інструкцій виробника.
Поліклональне кроляче Ідсб-антитіло «ІДСЕСУуМ» К (даскзоп ІттипоКезеагсі І арогайгіе5
Іпс.) іммобілізували при 10000 ОВ в точках виявлення 1 і 5 в проточних комірках 1, 2, З і 4.
Зв'язування здійснювали за допомогою сполуки ЕОС/МН5 відповідно до інструкцій виробника.
Точки, які залишилися в проточних комірках слугували еталоном. Буфер для зразків являв собою системний буфер з додаванням 1 мг/мл карбоксиметилдекстрана.
В одному варіанті здійснення аналіз проводили за 25 "С. В іншому варіанті здійснення аналіз проводили за 37 "С. 50 нМ кожного мишачого моноклонального антитіла захоплювали на поверхні сенсора шляхом введення протягом 1 хв. за 10 мкл/хв. Потім відповідні антигени вводили в серії концентрацій 100 нМ, 2х33 нМ, 11 нМ, 4 нМ, 1 нМ і системний буфер 0 нМ при 30 мкл/хв. протягом 4 хв. під час фази асоціації. Дисоціацію контролювали протягом ще 4 хв.
Систему захоплення оновлювали, використовуючи 3-хвилинну ін'єкцію 10 мМ гліцину рН 1,5 при 30 мкл/хв. Відповідні кінетичні дані були розраховані з використанням програмного забезпечення Віасоге емаїЇчайоп відповідно до інструкцій виробника.
Картування епітопів
Прилад Віасоге 4000 був обладнаний сенсором Віасоге САР і був підготовлений відповідно до рекомендацій виробника. Буфер для приладу являв собою НВ5-ЕТ (10 мМ ГЕПЕС, рн 7,4, 150 мМ Масі, З мМ ЕДТА, 0,005 95 мас./об. Твін 20). Прилад запускали при 25 70.
Усі зразки розводили в системному буфері. Біотинільований антиген 35 кКДа РО1-ЕСО-Амінів був захоплений при 200 ОВ на поверхні сенсора САР шляхом 1-хвилинної ін'єкції зі швидкістю 30 мкл/хв. в проточних комірках 1, 2, З і 4 в точках 1 і 5. Точки 2, З і 4 слугували еталоном. В іншому варіанті здійснення біотинільований антиген РО1-ЕСО-Амінів 35 кДа був захоплений при 200 ОВ на сенсорі САР подібним чином.
Потім первинне антитіло вводили при 100 нМ протягом З хвилин зі швидкістю 30 мкл/хв. з подальшим введенням вторинного антитіла при 100 нМ протягом З хвилин при швидкості 30 мкл/хв. Первинне антитіло вводили до повного насичення поверхні представленого антигена. В кінці фаз звіту про первинне і вторинне введення антитіл були встановлені точки "пізнього зв'язування" (ВІ) для моніторингу реакції зв'язування відповідних антитіл. Молярне співвідношення розраховували як відношення між відповіддю зв'язування вторинного антитіла "ВІ2" ї відповіддю первинного антитіла "ВІ1". Молярне відношення використовували як індикатор доступності антигена вторинного антитіла, коли антиген вже утворював комплекс з первинним антитілом.
Комплекси повністю видаляли з поверхні сенсора шляхом введення протягом 2 хв. за 30 мкл/хв. буфера для регенерації 2М гуанідин-НСІ. 250 мМ Масон, як рекомендовано виробником, з подальшим введенням протягом 1 хв. при 30 мкл/хв. системного буфера.
Приклад З
Вплив різних анти-РО-1 антитіл на продукцію цитокінів в реакції змішаної культурі лімфоцитів (РЗКЛ)
ЗА) Реакція змішаної культури лімфоцитів (РЗКЛ) являє собою аналіз імунних клітин, який вимірює активацію лімфоцитів від одного індивідуума (донора Х) щодо лімфоцитів від іншого індивідуума (донора МУ). Реакцію змішаної культури лімфоцитів використовували для демонстрації ефекту блокування шляху РОЇ до ефекторних клітин лімфоцитів. Т-клітини в аналізі тестували на активацію і секрецію ІФНУ в присутності або у відсутності анти-РО1 мкАт.
Для виконання алогенної РЗКЛ мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) щонайменше від чотирьох здорових донорів невідомого типу НіІА були виділені центрифугуванням в градієнті щільності з використанням пробірки І еиКозер (Стгеїпег Віо Опе, 227288). Коротко, зразки гепаринізованої крові розбавляли триразовим об'ємом ФСБ, і аліквоти по 25 мл розведеної крові нашаровували в пробірки ІеикКозер об'ємом 50 мл. Після центрифугування при 800 д протягом 15 хвилин за кімнатної температури (без перерви) фракції, що містять лімфоцити, збирали, промивали у ФСБ і використовували безпосередньо в функціональному аналізі або ресуспендували в заморожуючому середовищі (10 956 ДМСО, 90 95 фетальна бичача сироватка (ФБС)) при 1.0Е07 клітин/мл і зберігали в рідкому азоті. Окремі двофакторні РЗ3ЗКЛ були організовані шляхом змішування МКІК від двох різних донорів зі співвідношенням клітин 1:1 стимулятор/респондер, і спільні культури аналізували щонайменше в двох повторностях в плоскодонних 9б-лункових планшетах протягом 6 діб за 37 "С, 5 95 СО: у присутності різного діапазону концентрацій очищених анти-РО1 моноклональних антитіл РО1- 0050, РО1-0069, РО1-0073, РО1-0078, РО1-0098, РО1-0102, РО1-0103 або без них. Як еталонні анти-РО1 антитіла були синтезовані антитіла, що містять домени МН і МІ. або ніволумабу (також відомого як МОХ-5С4 або МОХ-1106), або пембролізумабу (також відомого як МК-3475 або Огд 1.09А), і клоновані з основними ланцюгами людського Ідс1 (з мутаціями І 234А, І1235А і РЗ3290 (індекс ЄЮ за Кабатом)). В якості негативного контролю не використовували ні антитіло, ні антитіло ізотипічного контролю, а в якості позитивного контролю використовували рекомбінантний ІЛ-2 людини (20 ЕбО/мл (ЕО-експериментальні одиниці). Через б діб з кожної культури відбирали 100 мкл середовища для вимірювання цитокінів. Рівні ІФН-гамма вимірювали з використанням набору ЕГІЗА ОрІЕЇА (ВО Віозсієпсев).
Результати наведені в Таблиці 4 (секреція/вивільнення ІФНУу). Анти-РОЇ моноклональні антитіла стимулювали активацію Т-клітин і секрецію ІФНу залежним від концентрації чином.
Значення збільшення секреції ІФН-у у 96 розраховували по відношенню до продукції ІФН-У в 60 РЗКЛ без додавання будь-яких блокуючих мкАт (значення ІФН-у, індуковане базальною алогенною стимуляцією, як Е-сх) і РЗКЛ з додаванням 20 ЕО/мл рекомбінантного рекомбінантного ІЛ-2 людини (позитивний контроль - 100 95 значення ІФН-гамма як Е ч« с) і розраховували за формулою: Відносна стимуляція | У0| - (Приклад - БЕ-с) / (Е -- с - Е-с)"7100
Таблиця 4
Відсоток секреції ІФН-гамма після алогенної стимуляції і обробки анти-РО-1 антитілом в порівнянні з ефектом обробки рекомбінантним людським ІЛ-2 (20 ЕО/мл) (- 100 95 збільшення) в якості позитивного контролю 00 шуй | ме | го | їлооо | Ефетееокл (мкг/мл)
РОТ005О |777717174477777771711196 | 96 2Ю5Ю| ДБ933 | Юющ фЗ(фМ -н-яюк
РОТ0069 |777717171760777171711117111176Ї111771111155 |1.Ю77171717сня щі
РОЇ-0078 | -.юЙЙ64.7777711799. | 2 Ющюлл72 | 21 1 щ -
Деякі блокуючі антитіла до РОЇ РО1-0050, РОТ1-0069, РО1-0073, РО1-0078, РО1-0098, РО1- 0102, РО1-0103 проявляли сильну імуномодулюючу активність за рахунок посилення секреції інтерферону-гамма (ІФН-у) (для всіх антитіл дані не наведено).
ЗВ) У наступному експерименті оцінювали химерний РО1-0103 (ізотип людського ЇдД1 з мутаціями І/234А, 1235А і РЗ29б (індекс БО за Кабатом)). Блокування РОЇ за допомогою химерного РО1-0103 сильно посилює секрецію ІФН-гамма через алогенні стимульовані первинні
Т-клітини людини. Химерне РО1-0103 було сильнішим, ніж еталонні анти-РО1 антитіла. Для порівняння були синтезовані і клоновані еталонні анти-РО1 антитіла, що містять домени МН і МІ. або ніволумаба (також відомого як МОХ5С4 або МОХ-1106), і пембролізумаба (також відомого як МК-3475 або Ого 1.09А), і клоновані з основними ланцюгами людського ЇдС1 (з мутаціями
Ї234А, 1 235А і РЗ329С (індекс ЄЮ за Кабатом)).
ЗС) У додаткових експериментах імуномодулюючу активність гуманізованих варіантів анти-
РО-1 антитіл РО1-0103 (гуманізовані антитіла РО1-0103-0312, РО1-0103-0314, на Фіг. 2 і 3, див. також в прикладі 9 нижче) а) вивільнення ІФНУ (секреція); б) вивільнення ФНП-альфа (секреція) оцінювали в РЗКЛ, як описано вище. Ефект химерного антитіла РО1-0103 і його гуманізованих варіантів порівнювали з еталонними анти-РО1 антитілами, що містять домени МН і Мі або ніволумабу (також відомого як МОХ5С4 або МОХ-1106), або пембролізумабу (також відомого як
МК-3475 або Ого 1.09А) з основними ланцюгами людського ІдС1 (з мутаціями 1 234А, І 235А і
РЗ29б (індекс БО за Кабатом)). Після б діб культивування із РЗКЛ відбирали 50 мкл супернатанту і вимірювали кілька цитокінів в одній культурі, використовуючи аналіз Віо-Ріех Рго тм Нитап СуїоКіпе ТиИ1/Т02 Авзау (Віо-Кай Іарогайгіе5 Іпс.). (дані наведені не для всіх цитокінів). Химерне антитіло РО1-0103 і його гуманізовані варіанти (РО1-0103 0312 ії РО1- 0103 0314) були більш ефективними в порівнянні з еталонними анти-РОЇ антитілами в посиленні активації Т-клітин і секреції ІФН-гамма. Крім того, химерне антитіло РО1-0103 ї його гуманізовані варіанти підсилюють секрецію фактора некрозу пухлини альфа (ФНП-альфа) та ІЛ- 12 антигенпрезентуючими клітинами і збільшують здатність моноцитів/макрофагів або антигенпрезентуючих клітин стимулювати Т-клітини.
Приклад 4
Вплив блокування анти-РО-1 антитіл на цитотоксичне вивільнення гранзиму В і секрецію
ІФН-у С04 Т-клітинами людини, що спільно культивувалися з алогенними зрілими дендритними клітинами
Для подальшого вивчення ефекту обробки анти-РО-1 в алогенних умовах ми розробили аналіз, в якому свіжі очищені СО4 Т-клітини спільно культивують протягом 5 діб в присутності алогенних зрілих дендритних клітин, отриманих з моноцитів, (ЗДК). Моноцити були виділені зі свіжих МКПК за один тиждень до цього шляхом адгезії до пластику з подальшим видаленням неприкріплених клітин. Потім ми отримували незрілі ДК з моноцитів шляхом культивування їх протягом 5 діб в середовищі, що містить ГМ-КОФ (50 нг/мл) та ІЛ-4 (100 нг/мл). Щоб викликати дозрівання незрілих ДК, ми додавали ФНО-са, ІЛ-18Д ії ІЛ-Є (по 50 нг/мл кожен) в середовище для культивування протягом 2 додаткових діб. Потім ми оцінили дозрівання ДК, вимірявши на їхній поверхні експресію головного комплексу гістосумісності класу ІІ (ГКГС І), СО80, СО83 і СО86 за допомогою проточної цитометрії (І ЗКЕопезза, ВО Віозсіепсев).
У день мінімальної реакції змішаної культури лімфоцитів (мРЗКЛ) СО4 Т-клітини збагачували за допомогою набору з мікрогранулами (Міпйепуї Віоїес) з 108 МКПК, отриманих від неспорідненого донора. Перед культивуванням СО4 Т-клітини мітили 5 мкМ карбокси- флуоресцеїн-сукцинімідиловим складним естером (СЕ5Е). 105 204 Т-клітин потім висівали в 96- лунковий планшет разом зі зрілими алло-ДК (5: 1) в присутності або у відсутності блокуючого анти-РО1 антитіла (або РО1-0103, химерного РО1-0103, або гуманізуваних антитіл РО1-0103. - 0312, РО1Т-0103-0313, РО1Т-0103-0314, РО1-0103-0315, скорочено 0312, 0313, 0314, 0315), в концентрації 10 нг/мл, якщо не вказано інше на фігурах.
Через п'ять діб супернатант клітинних культур збирали і використовували для вимірювання рівнів І?Н-у за допомогою ІФА (КУО зузіетв). Клітини залишали за 37 "С на додаткові 5 діб в присутності боді Рід (Брефельдін А) і СоЇді бор (Монензин). Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і м фіксуючим барвником Адца (Іпийгодеп) для прижиттєвого забарвлення/забарвлення мертвих клітин, після чого проводили попередньо з фіксацію/пермеабілізацію в буфері Ріх/|Репт Вийег (ВО Віозсієпсе).
Внутрішньоклітинне забарвлювання проводили для гранзиму В (ВО Віозсіепсе), ІФН-у ї ІЛ-2 (обидва від еВіозсіепсе).
Усі гуманізовані варіанти РО1-0103 (гуманізовані антитіла РО1-0103-0312, РО1Т-0103-0313,
РО1-0103-0314, РО1-0103-0315, скорочено 0312, 0313, 0314, 0315) виявилися однаково ефективними для підвищення рівня гранзиму В і гамма-інтерферону (дані не наведено).
Приклад 5
Химерні похідні антитіла до РОЇ
Химерні антитіла до РОЇ були отримані шляхом ампліфікації варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів мишачих анти-РО1 антитіл РО1-0098, РО1-0103 за допомогою ПЛР та клонування їх у вектори експресії важких ланцюгів у вигляді злитих білків з основними ланцюгами людського Ідс1/людського СНІ-шарнір -СН2-СНЗ з мутаціями 1 234А, І 235А і РЗ2ОС (індекс ЄЮ за Кабатом)) (лейцин 234 для аланіну, лейцин 235 для аланіну, пролін 329 для гліцину), які блокують ефекторні функції і вектори експресії легких ланцюгів у вигляді злитих білків з людською константною областю каппа-ланцюга (С-карра). Потім плазміди С їі НО спільно трансфікували в НЕК293 і очищали через 7 діб з супернатанту стандартними способами очищення антитіл. Химерні анти-РО1 антитіла були перейменовані в химерні спіРО1- 0098 (спіРО1-0098) ії химерні РО1-0103 (спіРО1-0103). Для порівняння були синтезовані і клоновані еталонні анти-РОЇ антитіла, що містять домени МН і Мі або ніволумаба (також відомого як МОХ-5С4 або МОХ-1106), і пембролізумаба (також відомого як МК-3475 або Ога 1.09А), і клоновані з основними ланцюгами людського Ід (з мутаціями І 234А, І 235А і РЗ290а (індекс ЄЮ за Кабатом)).
Приклад 6
Отримання, експресія та очистка гуманізуваних варіантів анти-РО1 антитіла РО-0103 (пиМар
РО-0103) і їхня характеристика
Гуманізація доменів МН і МІ. мишачого анти-РО1 антитіла 0103
На основі амінокислотної послідовності мишачих доменів МН і МІ мишачого анти-РО1 антитіла РО1-0103 (5ЕО ІО МО: 7 і 8) були отримані варіанти гуманізованих анти-РО1 антитіл.
Гуманізований МН-варіант заснований на зародковій лінії людини ІМТ НУН З 23 у комбінації з У-елементом зародкової лінією людини І2НУБ-0О1 з декількома мутаціями. (що покладено в основу 5ЕО ІЮ МО: 9).
Гуманізовані варіанти МІ засновані на людських зародкових лініях ІМТ НУК 4 1,
ІМТ НУК 2 30, ІМТ НУК 3 11 іІМатТ НУК 1 39 у комбінації з дУ-елементом зародкової лінії людини І2КУ1-01. Різні мутації призводили до гуманізованих варіантів від 5ЕО ІЮ МО: 10 до
ЗЕО ІЮО МО: 13.
Гуманізовані амінокислотні послідовності для варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів РО1-0103 були назад трансльовані в ДНК, в результаті були отримані СМОА (СепАГп) і потім клоновані у вектори експресії важкого ланцюга у вигляді злитих білків з людськими основними ланцюгами ІдДС1і/людським СНІ-шарнір -СН2 -СНЗ з мутаціями ГАГА і РО (лейцин 234 з аланіном, лейцин 235 с аланіном, пролін 329 з гліцином), скасовуючи ефекторні функції, або вектори експресії легких ланцюгів у вигляді білків злиття з людською константною областю каппа-ланцюга (С-Карра). Потім плазміди І С і НС спільно трансфікували в НЕК293 і очищали через 7 діб з супернатанту стандартними способами очищення антитіл. Отримані гуманізовані антитіла до РО названі таким чином:
Таблиця 5
Послідовності МН і МІ. гуманізованих варіантів антитіл РО1-0103
Гуманізовані антитіла РО1- |гуманізований варіант УН/5ЕО | гуманізований варіант М /5ЕО 10 0103 ІО МО: МО:
РО1-0103-0312 ЗЕО ІЮО МО: 9 ЗЕО ІЮО МО: 10
РО1-0103-0313 ЗЕО ІЮО МО: 9 ЗЕО ІО МО: 11
РО1-0103-0314 ЗЕО ІЮО МО: 9 ЗЕО ІЮ МО: 12
РО1-0103-0315 ЗЕО ІЮО МО: 9 ЗЕО ІЮ МО: 13
Варіанти гуманізованих антитіл РО1-0103 і вихідне химерне РО1-0103 були охарактеризовані як описано вище. Результати наведені в Таблиці 6.
Таблиця 6
Короткий опис результатів для варіантів гуманізованих антитіл РО1-0103 і вихідного химерного РО1-0103 химернеу 7 | РО-0103-0312 | РО-0103-0313. РО-0103-0314 | РО-0103-0315
М Кози 28 151,8 19/2,3 1,6/1,5 175
СНО-РОЇ ЕК5о
ІСво РО-І-1, 2 (НМ)
Реакція змішаної культури ни я ни я п лімфоцитів
Перехресна реактивність у 0,08 0,05 0,04 яванського макака (ЕКсхо (нМІ)
Гуманізований варіант РО-0103-0312 далі позначається як клон антитіла агО1 РО1-0376.
Приклад 7
Отримання анти-І АСЗ антитіл
Імунізація кролів
Запатентовані трансгенні кролі Коспе, що експресують репертуар гуманізованих антитіл, були імунізовані плазмідною ДНК, яка експресує І АСЗ3.
Групу з З кролів імунізували генетично, використовуючи вектор експресії плазміди, що кодує повнорозмірний ГАЗ людини (15352 ріпігопА ТІ-падз ОМА-ІМ5), шляхом внутрішньошкірного введення 400 мкг векторної ДНК з наступною електропорацією (5 квадратних імпульсів за 750
В/см), тривалість 10 мс, інтервал 1 с). Кролі отримали 7 послідовних імунізацій на 0, 14, 28, 49, 70, 98 і 126 добу. Кров (10 95 від загального об'єму крові) відбирали на 35-у, 77-у, 105-у і 133-у добу. Готували сироватку, яку використовували для визначення титру за допомогою ІФА (див. нижче), і виділяли периферичні мононуклеарні клітини, які використовували як джерела антигенспецифічних В-клітин у процесі клонування В-клітин, описаному нижче.
Визначення сироваткових титрів (ІФА)
Людський рекомбінантний білок Г(АСЗ іммобілізували на 96б-лунковому планшеті МОМС
Махізогр в концентрації 2 мкг/мл, 100 мкл/лунка в ФОБ з подальшим: блокуванням планшета 2 до -ним кротеїном С в ФСБ, 200 мкл/лунка; застосуванням серійних розведень антисироваток в двох повторностях, в 0,5 95 кротеїні С в ФСБ, 100 мкл/лунка; виявленням або з (1) НЕР- кон'югованим ослячим антитілом проти дО кролика (даскзоп Іттипогезеагсп/Оіапома 711-036- 152; 116000), або (2) НКР-кон'югованим кролячим антитілом проти Їдс людини (Рієгсе/ пегто
Зсієпійс 31423; 1/5000) або з (3) біотинільованим козячим антитілом проти людського каппа- антитіла (ошПегп Віоїесп/Віо2о! 2063-08, 1/5000) і стрептавідином-НЕКР; кожен розводиться в 0,5 95 кротеїні С в ФСБ, 100 мкл/лунка. Для всіх етапів планшети інкубували протягом 1 год за 37
"б. Між усіма етапами планшети промивали З рази 0,05 95 Твіном 20 у ФСБ. Сигнал посилювали шляхом додавання розчинного субстрату ВМ Вісе РОЮ (Коспе), 100 мкл/лунка; і зупиняли додаванням 1 М НСЇ, 100 мкл/лунка. Оптичну щільність зчитували за 450 нм проти 690 нм як еталон. Титр визначали як розведення антисироватки, що приводить до напівмаксимального сигналу.
Виділення мононуклеарних клітин периферичної крові кроля (МКПК)
Були відібрані зразки крові імунізованих трансгенних кролів. Цільну кров, що містить ЕДТА, розбавляли вдвічі 1хФОБ (РАА, Пашинг, Австрія) перед центрифугуванням в градієнті щільності із використанням середовища для виділення лімфоцитів ІУутрпоїЇуїе-Маттаї! (Седапапе
І абогаїогієх, Берлінгтон, Онтаріо, Канада) відповідно до інструкцій виробника. МКПК двічі промивали 1хФоБ.
Середовище ЕЇ -4 В5
ЕРМІ 1640 (Рап Віоїесі, Айденбах, Німеччина) з додаванням 10 95 ФБС (Нусіопе, Логан,
Юта, США), 2 мМ глутаміну, 1 95 розчину пеніциліну/стрептоміцину (РАА, Пашинг, Австрія), 2 мМ пірувата натрію, 10 мМ ГЕПЕС (РАМ Віоїесі, Айденбах, Німеччина) і 0,05 мМ р-меркаптоетанолу (Сібсо, Пейслі, Шотландія).
Покриття планшетів білковим антигеном б-лункові планшети для стерильних клітинних культур покривали ЕСО людського ГАЗ, кон'югованого з частиною Ес людини (2 мкг/мл) в карбонатному буфері (0,1 М бікарбонат натрію, 34 мМ дінатрійгідрокарбонат, рН 9,55) протягом ночі за 4 "С.
Планшети тричі промивали в стерильному ФСБ перед використанням.
Виснаження клітин (а) Стерильні б-лункові планшети (зі ступенем чистоти для культури клітин), покриті злитим моношаром клітин СНО, використовували для виснаження макрофагів/моноцитів за допомогою неспецифічної адгезії, а також неспецифічних лімфоцитів, що зв'язуються. (Б) Порожні стерильні б-лункові планшети (зі ступенем чистоти для культури клітин) використовували для виснаження макрофагів і моноцитів та інших клітин за допомогою неспецифічної адгезії.
Половина зразка МКПК була використана для (а), і половина для (Б).
Кожну лунку заповнювали максимально 4 мл середовища і до 6х106 МКПК від імунізованого кроля і залишали для зв'язування протягом 1 години за 37 "С в інкубаторі. Клітини в супернатанті (лімфоцити периферичної крові (РВІ)) використовували для стадії пенінгу антигеном.
Збагачення В-клітин на антигені ГАЗ
Білковий антиген: У покриті білком б-лункові планшети для культури тканини ГАСЗ3-ЕСО- пиЕс, висівали до бх1096 РВІ на 4 мл середовища із стадії виснаження з використанням порожнього б-лункового планшета і залишали для зв'язування протягом 1 години за 37 "С в інкубаторі. Не прикріплені клітини видаляли шляхом обережного промивання лунок 1-2 рази і1хФоБ. Залишок клітин, що прикріпилися, відокремлювали трипсином протягом 10 хв. за 37 "С в інкубаторі Обробку трипсином припиняли за допомогою середовища Е!/-4 В5. Клітини зберігали на льоду до імунофлуоресцентного забарвлення.
Антиген клітинної поверхні: У б-лункові планшети для культур тканин, покриті моношаром людських ГАСЗ-позитивних клітин СНО, висівали до 6 х105 РВІ на 4 мл середовища із стадій виснаження з використанням покритого СНО б-лункового планшета і залишали зв'язуватися протягом 1 години за 37 "С в інкубаторі. Не прикріплені клітини видаляли шляхом обережного промивання лунок 1-2 рази їхФСБ. Залишок клітин, що прикріпилися, відокремлювали трипсином протягом 10 хв. при 37 "С в інкубаторі. Обробку трипсином припиняли за допомогою середовища ЕЇ -4 В5. Клітини зберігали на льоду до імунофлуоресцентного забарвлення.
Імунофлюоресцентне забарвлення і проточна цитометрія
Анти-Ідє ФІТЦ (АБО Зегоїес, Дюссельдорф, Німеччина) і анти-пиСкК ФЕ (Оіапома, Гамбург,
Німеччина) використовували для сортування окремих клітин. Для забарвлення поверхні клітини зі стадії виснаження і збагачення інкубували з анти-Іде ФІТЦ і анти-пиСКкК-ФЕ антитілом у ФСБ і інкубували протягом 45 хвилин в темряві за 4 "С. Після забарвлення МКПК двічі промивали холодним ФСБ. Наприкінці, МКПК ресуспендували в холодному ФСБ і негайно піддавали аналізу за допомогою проточної цитометрії. Йодид пропідію в концентрації 5 мкг/мл (ВО
РПпаптіпдеп, Сан-Дієго, Каліфорнія, США) додавали до аналізу за допомогою проточної цитометрії, щоб розрізнити мертві і живі клітини. Весіоп Оіскіпвоп ЕГАС5АГгіа, обладнаний комп'ютером і програмним забезпеченням РАС5ОЇма (ВО Віозсіепсе5, США), використовували для сортування окремих клітин. 60 Культивування В-клітин
Культивування В-клітин кроля проводили способом, описаним Зеебег еї аїЇ. (5 Зеебег еї аї.
Ріо5 Опе 9 (2), е86184. 2014 Ре 04). Коротко, поодинокі відсортовані В-клітини кроля інкубували в 9б-лункових планшетах з 200 мкл/лунка середовища ЕЇ -4 В5, що містить клітини
Рапзогбіп (1: 100000) (СаІрбіоспет (МегсК), Дармштадт, Німеччина), 5 95 супернатанта тимоцитів кроля (МісгоСоаї, Бернрід, Німеччина) і гамма-опромінені мишачі клітини Тімом ЕЇГ--4 В5 (5 х1бе5 клітин/лунка) протягом 7 діб при 37 "С в інкубаторі. Супернатанти культури В-клітин видаляли для скринінгу, а залишки клітини збирали негайно і заморожували при -80 "С в 100 мкл буфера
КІТ (Оіадеп, Гільден, Німеччина).
Виділення М-доменів антитіл до ГАЗ ПЛР-ампліфікація М-доменів
ПЛР-ампліфікація М-доменів
Загальну РНК отримували з лізату В-клітин (ресуспендували в буфері ВІ Т - Оіадеп - кат. Мо 79216), використовуючи набір РНК МисіеобЗріп 8/96 (Маспегеу 4 Маде!; 740709.4, 740698) відповідно до протоколу виробника. РНК елюювали с использованиєм 60 мкл РНКази без води. 6 мкл РНК використовували для генерації кКДНК за допомогою реакції зворотної транскриптази з використанням ЗирегМіх для синтезу першого ланцюга Бирегзсгірі ПІ (Іпмітодеп 18080-400) і оліго- аТ-праймера відповідно до інструкцій виробника. Усі етапи виконували в системі Натійоп
МІ. аг. 4 мкл кКДНК використовували для ампліфікації варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів імуноглобуліну (МН і М) за допомогою АссиРгіте Зирегптіх (Іпийтодеп 12344-040) в кінцевому об'ємі 50 мкл з використанням праймерів "НС. ир їі ТБНО.ао для важкого ланцюга і
ВеРСА ЕНІ С Іеєадегпм і ВсРСА пиСКарралтем для легкого ланцюга (Таблиця 7). Усі прямі праймери були специфічними для сигнального пептиду (відповідно МН і МІ), тоді як зворотні праймери були специфічними для константних областей (відповідно МН і МІ). Умови ПЛР для
Ним. були наступними: Гарячий старт при 94 "С протягом 5 хв.; 35 циклів по 20 с при 94 "С, 20 с при 70 "С, 45 с при 68 "С і кінцева елонгація при 68 "С протягом 7 хв. Умови ПЛР для КЬМН були наступними: Гарячий старт при 94 "С протягом 5 хв.; 40 циклів по 20 с при 94 "С, 20 с при 527 С, 45 с при 68 "С і кінцева елонгація при 68 "С протягом 7 хв.
Таблиця 7
ЗЕО ІЮ МО: 78
ЗЕО ІЮ МО: 79 8 мкл з 50 мкл розчину для ПЛР завантажували в 48 Е-СЗе! 2 95 (Іпмйгодеп 8008-02).
Позитивні реакції ПЛР очищали з використанням набору Мисіеобріп Ехігасі ІІ (Маснегеу 4. Мадеї; 740609250) відповідно до протоколу виробника і елюювали в 50 мкл буфера для елюювання. Усі етапи виконували в системі Натікоп МІ. Єапеї.
Рекомбінантна експресія кролячих моноклональних двовалентних антитіл
Для рекомбінантної експресії кролячих моноклональних двовалентних антитіл продукти ПЛР, що кодують МН або МІ, клонували у вигляді КДНК у вектори експресії за допомогою методу клонування липких кінців (К5 Нашпп еї аї., Відтесппіднез (1992) 13, 515-518; М Ії еї аї., Маїште
Меїтпоаз (2007) 4, 251-256). Вектори експресії містили касету експресії, що складалася з 5'- промотора ЦМВ, включаючи інтрон А, і послідовність поліаденілювання З 'ВОН. На додаток до касети експресії плазміди містили точку початку реплікації, отриману з риС18, і ген бета- лактамази, що забезпечує стійкість до ампіциліну, для ампліфікації плазміди в Е. сої.
Використовували три варіанти базової плазміди: одну плазмиду, що містить константну область кролячого ЇдС, призначену для прийому областей МН, у той самий час маючи константну область ЇС каппа людини для прийому областей МІ. Лінеаризовані плазміди експресії, що кодують константну область каппа або гамма і вставки МІЛ/Н, ампліфікували за допомогою ПЛР з використанням перекриваючих праймерів. Очищені продукти ПЛР інкубували з ДНК- полімеразою Т4, яка генерувала одноланцюгові липкі кінці. Реакцію зупиняли додаванням дЦтТФ.
На наступному етапі плазмиду і вставку об'єднували і інкубували з гесА, який індукував сайт- специфічну рекомбінацію. Рекомбіновані плазміди були трансформовані в Е. соїї. Наступного дня вирощені колонії відбирали і тестували на правильну рекомбіновану плазмиду з використанням плазмідного препарату, рестрикційного аналізу і секвенування ДНК.
Для експресії антитіл виділені плазміди НС і С транзієнтно трансфікували в клітини
НЕК?293, і супернатант збирали через 1 тиждень.
Приклад 8
Характеристика анти-І| АСЗ антитіл
Таблиця 8
Короткий опис характеристик різних анти-І ДОЗ антитіл анти-їадз агАсзЗіагГ АсзЗ аг доз аг лсзЗіаг лсзЗз| МОХх- ВМ5- | МОХ- |Гуманізоване антитіла (0403) | (411) | (414) | (416) | (417) 257 1986016| 26Н10 ВАР (25Е7) (26НІ10) 1050 (ГАС525)
Ко МІ не не що е 2.82 Е-| не не визн. не | не визн. не визн. моновалентне!| визн. | визн. не 11 визн. визн.
Бівалентне не не вИЗН не не не визн. не не визн не визн. визн. | визн. визн. | визн. визн. . те р ж в 10
Е-06 | Б-05 | Е-04 | Е-04 | Е-05 Е-04 Е-04
Епітопна Е5 група ЕЗ ЕЗ ЕЗ Е2Ь ЕЗ (01- Е5 Е4 Еге петля)
ГКГСО П/ кн зіетн|ономе| слянюв сло,
Інфлексна точка ІФА зое| яз | ви | 372 278. 75 клітин СНО ' ' ' ' '
Інг/млі
ІФА для І адЗ людини
Планшети Мипс Махізогр (Мипс 464718) покривали 25 мкл/лунка рекомбінантного химерного білка людського ГАС-3 Ес (НУО бузієтв, 2319-І 3) при концентрації білка 800 нг/мл і інкубували за 4 "С протягом ночі або протягом 1 год. за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВЗТ) кожну лунку інкубували з 90 мкл блокуючого буфера (ФСБ -- 2 95 БСА - 0,05 95 Твін-20) протягом 1 години за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-ЇадЗ3 в концентрації 1-9 мкг/мл (розведення 1: З в буфері ОЗЕР) і інкубували 1 год. за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка кон'югату НЕР з козячим антитілом проти к-ланцюга людського Ід (Міїїроге, АРБО2Р) у розведенні 1: 2000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували протягом 2-10 хв. Вимірювання проводили на приладі Тесап Заїйтге 2 за 370/492 нм.
ІФА для зв'язування І адЗ на клітинній поверхні 25 мкл/лунка ГадЗ3 клітин (рекомбінантні клітини СНО, які експресують Гад3, 10000 клітин/лунка) висівали в 384-лункові планшети, призначені для культури тканини, (Согпіпо, 3701) і інкубували за 37 "С протягом однієї або двох діб. На наступну добу після видалення середовища додавали 25 мкл зразків анти-Іад3 (розведення 1: З в буфері ОЗЕР, починаючи з концентрації 6-40 нМ) і інкубували протягом 2 годин за 4 "С. Після промивання (1х90 мкл в
РВ5Т) клітини фіксували додаванням 30 мкл/лунка глутаральдегіду до кінцевої концентрації 0,05 95 (б5ідта, кат. Мо: (535882), протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка кон'югату НЕР з козячим антитілом проти к-ланцюга людського Ід (Міїїроге, АРБО2Р) у розведенні 1: 1000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували протягом 6-10 хв. Вимірювання проводили на приладі Тесап Заїйтге 2 за 370/492 нм.
Характеристика анти-І| АСЗ антитіл за допомогою ППР (Віасоге)
Аналіз на основі поверхневого плазмонного резонансу (ППР) використовували для визначення кінетичних параметрів зв'язування між анти-іадЗ3 антитілами в двовалентному форматі або у вигляді моновалентних Раб-фрагментів і позаклітинних доменів (ЕСО), мічених людським Ес І адЗ людини, за 25 70.
Тому дві проточні комірки біосенсорного чопа С1 були приготовлені в Віасоге Т200 шляхом іммобілізації нейтравідіна, розведеного до 25 мкг/мл в ацетатному буфері рН 4,5, для використанням "майстра іммобілізації". Це призвело до рівня іммобілізації близько 1900 ОВ.
Потім кон'югат СаріигебеЇесі 7м Віоїп Апіі-Ідб-Ес (людський) зв'язували з нейтравідіном, використовуючи розведення 20 мкг/мл у рухомому буфері (НВЗ-ЕР «т, СЕ НеайЙнсагеє).
Сам спосіб складався з чотирьох команд за цикл. Перша команда: захоплення - 46 ОВ пи ад3-Ес (20 с, 10 мкл/хв.). Друга команда: введення проби протягом 120 секунд з наступною дисоціацією протягом 1200 с при швидкості потоку 30 мкл/хв. Третя і четверта команда: оновлення шляхом введення гліцину-НСІ рН 1,5 протягом 30 секунд. Ряд розведень (3,13 НМ - 200 нМ, дворазові розведення у рухомому буфері) кожного Гар-фрагмента антитіла і додаткові холості цикли потім вимірювали з використанням раніше описаного способу. Потім використовували програмне забезпечення Віасоге 1200 ЕмаЇцайоп для отримання кінетичних значень шляхом застосування апроксимації з використанням рівняння Ленгмюра 1: 1 з параметром апроксимації Кітах, встановленим в "Іоса!", оскільки рівні захоплення не були повністю відтворені. Результати (значення Ко і значення Ка) наведені в Таблиці 8.
Картування епітопів
Епітоп-специфічне сортування проводили з використанням аналізу на основі поверхневого плазмонного резонансу (ППР). Тому агенти, що зв'язують аіад3, були зв'язані з пи адЗ3 на приладі Віасоге Т200. Потім оцінювали доступність інших речовин, що зв'язують до раніше сформованого комплексу аї ад3З - пи! ад3, який зв'язує.
Для проведення цього аналізу використовували набір БА САР (СЕ Неайсаге). Якщо не вказано інше, аналіз проводили відповідно до інструкції набору ЗА САР. Прогін включав тільки один тип циклу. Після гібридизації розведення в 10 нМ біотинільованого пиЕс-міченого пи адзЗ дозволяло зв'язуватися зі стрептавідином на сенсорному чопі протягом 20 с при швидкості потоку 10 мк/хв. Потім перший 200 нМ зразок, розведений у рухомому буфері, впорскували протягом 180 с при швидкості потоку 30 мкл/хв, після чого відразу ж слідував другий зразок у тих самих умовах. Потім поверхню регенерували.
Потім зразки були розподілені по різним епітопним групам з подібними патернами конкуренції. Була проведена перша груба категоризація, заснована на відносній відповіді другої ін'єкції з використанням порогового значення 6,1 ОВ, яке було трохи вище найвищого значення, що спостерігається при введенні зв'язуючої речовини в якості першого та другого зразка. Усі значення та висновки були остаточно підтверджені візуальним оглядом сенсограм.
Результати наведені в Таблиці 8. Були ідентифіковані три основні структури епітопа (Е1, Е2 і
ЕЗ). Оскільки а ад3-0416 і гуманізоване ВАР 050 спільно використовують одну і ту ж групу, але не повністю пригнічують один одного, вони були віднесені до підгруп Е2Б і Е2с.
Зв'язування анти-І ад3З антитіл від трансгенних (19) кроликів з рекомбінантними супо І адз- позитивними клітинами НЕК
На додаток до аналізу зв'язування з використанням клітин НЕК, рекомбінантно експресуючих людський ГадЗ3 на поверхні, також оцінювали зв'язування з супо Ііадз- позитивними клітинами НЕК. Для цього експерименту заморожені клітини НЕК2О9ЗЕ, раніше транзієнтно трансфіковані | АО-3 яванського макака, відтаювали, центрифугували та повторно додавали у ФСОБ/2 95 ФБС. 1,5х105 клітин/лунка висівали в 96-лункові планшети. Анти-і ааЗ антитіла додавали до кінцевої нормованої концентрації 10 мкг/мл. Для стандартів і в якості контролів, аутофлуоресценції та позитивного контролю (Медагех 25Е7), а також контролю ізотипу (пиЇдс1 від бідта, кат. Мо 15154, дані не показані) антитіла були отримані та виміряні в експерименті. Клітини НЕК інкубували із зазначеними антитілами протягом 45 хвилин на льоду, двічі промивали 200 мкл охолодженого на льоду буфера ФСБ, що містить 2 95 ФБС, перед вторинним антитілом (міченим АФЦ козячим антитілом проти каппа Їде людини, Іпмйгодеп, кат.
Мо МНІ1О515) додавали ( 1:50 розбавляли в РАС5-РиПег/лунка) і додатково інкубували протягом 30 хвилин на льоду. Клітини знову двічі промивали 200 мкл охолодженого на льоду буфера
ФСОСБ/2 95 ФБС, після чого зразки нарешті ресуспендували в 150 мкл буфера для проточної цитометрії і вимірювали зв'язування на модулі НТ5 ЕАС5 САМТО-Ї.
Результати: У наведеній нижче таблиці показано зв'язування і перехресна реактивність різних анти-І ад3 антитіл з клітинами НЕК293, експресуючими супої! АС3, зв'язування або дано у вигляді о позитивних клітин, або у вигляді геометричної середньої інтенсивності сигналу.
Таблиця 9
Зв'язування різних анти-І АСЗ антитіл з рекомбінантними супо І адЗз-позитивними клітинами НЕК
Еталонне антитіло до ГАЗ
Зв'язування анти-їадЗ3 антитіл від ї9 кроликів з (активованими) МКПК/І-клітинами, експресуючими І ад3, яванського макака
Після зв'язування з рекомбінантним білком І адз і І ад3, що експресується рекомбінантно на клітинах ссавців, також оцінювали зв'язування з Гад3, що експресується на активованих Т- клітинах яванського макака.
Характеристики зв'язування новостворених анти-ІадЗ3 антитіл (отриманих від трансгенних кролів Коспе) з І ад3, які експресуються на клітинній поверхні Т-клітин або МКПК яванського макака, були підтверджені за допомогою проточної цитометрії. Хоча І ад3 не експресується на наївних Т-клітинах, він активується при активації та/або на виснажених Т-клітинах. Таким чином, мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) яванського макака отримували зі свіжої крові яванського макака і потім активували шляхом попередньої обробки СО3/С028 (1 мкг/мл) протягом 2-3 діб. Активовані клітини були згодом проаналізовані на експресію Гад3: Якщо коротко, 1-3х105 активованих клітин забарвлювали протягом 30-60 хвилин на льоду зазначеними анти-їадЗ3 антитілами та відповідними контрольними антитілами в кінцевій концентрації 10 мкг/мл. Зв'язані анти-Їад3 антитіла виявляли за допомогою кон'югованих з флуорохромом вторинних антитіл проти Їдс людини або вторинних антитіл проти ЇдС кролика.
Після забарвлення клітини двічі промивали ФОСБ/2 95 ФБС і аналізували на ЕАС5 Еопезза (ВО).
Результати: У наступній таблиці наведений відсоток І адЗ-позитивних клітин в активованих
МКПК яванського макака.
Таблиця 10
Зв'язування різних анти-І АОЗ антитіл з (активованими) МКПК Т-клітинами яванського макака, що експресують ГГ адз
Фо позитивних клітин (РВІ) сорз/сра2гв
Еталонне антитіло до ГАСЗ (гуманізоване ВАРОБО (ГАС525))
На активованих Т-клітинах яванського макака всі кролячі анти-іїадЗ3 антитіла продемонстрували значне зв'язування з ІГад3" клітинами. Таким чином, усі новостворені антитіла демонструють підвищений відсоток позитивних клітин у порівнянні з людськими анти-
Ї ад3 еталонними антитілами (наприклад, такими як МОХ25Е7, ВМ5-986016).
Інгібування зв'язування ГАС-3 з ГКГСО-ІІ, який експресується на пухлинних клітинах АЗ375 людини (за допомогою ІФА) 25 мкл/лунка клітин АЗ75 (10000 клітин/лунка) висівали в 384-лункові планшети, призначені для культури тканини, (Согпіпа, 3701) і інкубували за 37 "С протягом ночі. Анти-І ад3 антитіла попередньо інкубували протягом 1 години з біотинільованим ГІ адЗ3 (250 нг/мл) в середовищі для культивування клітин в розведеннях 1: З, починаючи з концентрації антитіла З мкг/мл. Після видалення середовища з лунок з засіяними клітинами 25 мкл попередньо інкубованих сумішей антитіло-Гад3 переносили в лунки та інкубували протягом 2 год. за 4 "С. Після промивання (1х90 мкл в РВ5Т) клітини фіксували додаванням 30 мкл/лунка глутаральдегіду до кінцевої концентрації 0,05 95 (бЗідта , кат. Мо: 55882), протягом 10 хвилин за кімнатної температури.
Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка полі-НАР40- стрептавідину (Рйгдегаіїй, 65К-5104РНЕРХ) у розведенні 1: 2000 або 1: 8000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували протягом 2-10 хв.
Вимірювання проводили на приладі Тесап Заїйге 2 за 370/492 нм.
Інгібування зв'язування І АС-3 з ГКГСО-ЇЇ, який експресується на пухлинних клітинах АЗ75 людини (за допомогою проточної цитометрії)
Принцип аналізу: Для вивчення антагоністичної функції анти-і адЗ3 антитіл було проведено конкурентний аналіз ГКГСО-ІІ: І ад3. ГКГО-ІЇ» людські клітини АЗ375 забарвлювали біотинільованим злитим білком Гад3: Ес власного виробництва з попередньої інкубацією або без попередньої інкубації з анти-Їад3 антитілами. Цей аналіз був вивчений в конкурентному експерименті з використанням проточної цитометрії: Клітини АЗ75 (АТС, Мо СКІ -1619) культивували протягом 2-3 пересівів у середовищі ЕМ Ігла, доповненому солями Ерла (ЕВ55) (РАМ, кат. Мо РО4-00509), 10 95 ФБС, 2 мМ І-глутаміну, їх МЕАА і 1х пірувату натрію. Усі антитіла розводили в буфері для проточної цитометрії до кінцевої концентрації 20 мкг/мл в 25 мкл (в 9б6-лункових планшетах з О- подібним дном). 25 мкл біотинільованого рекомбінантного злитого білка ГАС-3: Ес власного виробництва додавали до кінцевої концентрації 10 мкг/мл або до середовища, або до анти-і ааЗ антитіл або контролів і попередньо інкубували протягом 30 хв. за кімнатної температури.
Клітини АЗ75 промивали ФСБ і доводили до 3х105 клітин/мл у ФОБ. 100 мкл висівали на лунку в 9б-лунковий У-подібний планшет. Планшети центрифугували і супернатант видаляли. Потім до клітин додавали попередньо інкубувану суміш злитого білка | АС-3: Ес/антитіла (50 мкл/лунка) та інкубували протягом 1 години за кімнатної температури. Після цього клітини промивали 200 мкл буфера для проточної цитометрії. Для виявлення біотинільованого білка ГадЗ3: Ес, зв'язаного з клітинним ГКГС-ІЇ, використовували козяче анти-біотинове антитіло, яке кон'юговане з АФК, в концентрації З мкл/зразок (Міпепуі Віоїес, кат. Мо 130-090-856) і інкубували протягом додаткових 10-15 хвилин. Після забарвлення клітини знову промивали і потім переносили в 150 мкл буфера для проточної цитометрії (ФСОБ/2 95 ФБС) в О-подібний планшет і аналізували на
ЕАС5 Сапіо-ІІ з використанням модуля НТ5.
Два анти-Гад3 антитіла (клони 25Е7 і 26Н10; Медагех) слугували в якості позитивного контролю та Їдс1 людини (5ідта, кат. Мо І5154) в якості відповідного ізотипічного контролю. Усі антитіла використовували в кінцевій концентрації 10 мкг/мл.
Результати: У наведеній нижче таблиці показаний результат аналізу методом проточної цитометрії, що демонструє відсоток інгібування зв'язування білка Її ад3 з ГКГСО-ЇЇ на клітинах (розрахований як знижений сигнал зв'язування по відношенню до максимального значення у відсутності блокуючого антитіла).
Таблиця 11
Зв'язування різних анти-І АСЗ антитіл з (активованими) МКПК / Т-клітинами яванського макака, що експресують І ад3
Безмкат////////111111111111111111111111111111Ї111111111111111001
Ці дані підтверджують функціональну взаємодію з І адЗ і блокування клітинної взаємодії всіх тестованих антитіл.
Нейтралізуюча активність нових анти-іад3 антитіл в стандартному біоаналізі блокування
ГАСЗ ВіІоскаде Віо/репортерному аналізі
Щоб перевірити нейтралізуючу активність нових анти-іІ ад3 антитіл у відновленні пригніченої
Т-клітинної відповіді іп мійго, використовували комерційно доступну репортерну систему. Ця система складається з ефекторних клітин Гадз3" МЕАТ Уигкаї (Рготеда, кат. Мо С5194801), ГКГО-
НП» клітин Каїї (АТСС, Мо СІ/-86) і суперантигена. Коротше кажучи, система репортерів заснована на трьох етапах: (1) суперантиген-індукована активація клітин МЕАТ, (2) інгібування активуючого сигналу, опосередкованого інгібуючою взаємодією між ГКГСО-ІІЇ (клітинами Каїї) та ефекторними клітинами І ад3- МЕАТ дигКкаї, і (3) відновлення сигналу активації МЕАТ І адз- антагоністами/нейтралізуючими злитими конструктами амнН-Ес.
Для цього експерименту культивували ефекторні Т-клітини Ка) і Гад-35 УшкаїМЕАТ-Іис2, як описано в інструкції постачальника. Серійні розведення (40 пг/мл-50 мкг/мл) декількох анти-І адЗ і еталонних антитіл готували в середовищі для аналізу (КРМІ 1640 (РАМ Віоїесіп, кат. Мо РО4- 18047), 1 95 ФБС) у 96-лункових культуральних планшетах з плоским, білим дном (Совіаг, кат. Мо 3917). 1х1095 клітин Гад3" МЕАТ-дигКаї/лунка) додають до розчину антитіла. Після цього етапу в суміш клітин дигак/антитіл додавали 2,5х107 клітин Раї/лунка, а також суперантигена 5ЕО в кінцевій концентрації 50 нг/мл (Тохіп Тесппоіоду, кат. Мо ОТ303). Після інкубації протягом шести годин за 37 "С і 5 95 СОг2 субстрат Віо-Сіо (Рготеда, Мо (37940) нагрівали до кімнатної температури і додавали 75 мкл на лунку, інкубували протягом 5-10 хвилин, після чого вимірювали загальну люмінесценцію було виміряно на рідері Тесап Іпіпйе відповідно до рекомендацій виробника набору.
У таблиці показано відновлення ГКГС-ІІ / адЗ-опосередкованого пригнічення сигналу МЕАТ- люциферази різними анти-Ї ад3 антитілами при стимуляції 5ЕО (дано у вигляді значень ЕК»бо):
Таблиця 12
Результати з різними анти-І АСЗ антитілами в стандартному біоаналізі блокування ГАЗ
ВіІосКаде Віо/репортерному аналізі
ЕталоннемМОХа5Е7 177111 78/59 | 86 | -:И «т
ЕталоннеВМ5-986016..-:/;//6/171717171сснот.// | / 96 |771717 нт щі
ГАСБ25 ШИ ' ШИ н. т. молекули являють собою молекули, які не тестували цьому експерименті
Приклад 9
Функціональна характеристика анти-І| АОЗ антитіл
У Таблиці 13 узагальнені біологічна активність і ефекти різноманітних анти-| АСЗ антитіл (окремо або в комбінації з анти-?РОЇ антитілами) в різних аналізах, як описано в цьому документі.
Таблиця 13
Короткий опис біологічної активності різних анти-І АСЗ антитіл (окремо або в комбінації з анти-РО1 антитілами)
Анти- Анти- Анти- Анти- Анти- Еталонне 2
Тип аналізу Ї аз Ї аз Ї аз Ї аз ІЇад3 | ЄЕталонне 1 | гуманізоване асдсзЗ | асдсЗ ) агдсзЗз | агдозЗ | агдозЗз |ІВМ5 986016 ВАРОБО 0403 0411 0414 0416 0417 ГАСБ2г5
МРЗКЛ башив
МРЗКЛІЛ) | - ЇЇ жк їж | -н їх | нн
СрагАВНУЇ | ЇЇ я-нї нії Їх Її
Трег шт 1-1 (Гранзим В)
Трег пригнічення ж ж щ щ (ФН-у)
МКПК пацієнтів З ж меланомою
Вплив блокування РО-1 і | АС-3 на цитотоксичне вивільнення гранзиму В і секрецію ІЛ-2 СО4
Т-клітинами людини, спільно культивованими з алогенними зрілими дендритними клітинами
Для скринінгу анти-І АС-3 блокуючих антитіл у комбінації з анти-РО-1 в алогенних умовах був розроблений аналіз, в якому свіхоочищені СО4 Т-клітини спільно культивують протягом 5 діб в присутності алогенних зрілих дендритних клітин, отриманих з моноцитів, (ЗДК). Моноцити були виділені зі свіжих МКПК за один тиждень до цього шляхом адгезії до пластику з подальшим видаленням неприкріплених клітин. Потім з моноцитів отримували незрілі ДК шляхом культивування їх протягом 5 діб в середовищі, що містить ГМ-КСФ (50 нг/мл) та ІЛ-4 (100 нг/мл).
Щоб викликати дозрівання незрілих ДК, ми додавали ФНО-альфа, ІЛ-1бета та ІЛ-6 (по 50 нг/мл кожен) в середовище для культивування протягом 2 додаткових діб. Потім оцінювали дозрівання
ДК шляхом вимірювання на їх поверхні експресії головного комплексу гістосумісності класу ЇЇ (ГКГС І), 6080, С083 ії СО86 за допомогою проточної цитометрії (І ЗКЕопезза, ВО Віозсіепсев).
У день мінімальної реакції змішаних культур лімфоцитів (МРЗКЛ) С04 Т-клітини збагачували за допомогою набору з мікрогранулами (Мійепуі Віоїес) з 108 МКПК, отриманих від неспорідненого донора. Перед культивуванням СО4 Т-клітини мітили 5 мкМ карбокси- флуоресцеїн-сукцинімідиловим складним естером (СЕБЕ). 105 С04 Т-клітин потім висівали в 96- лунковий планшет разом зі зрілими алло-ДК (5: 1) у присутності або у відсутності блокуючого анти-РО-1 антитіла аРоО1 (0376) (5 РО1-0103-0312, як описано в цьому документі раніше або в заявці РСТ РСТ/ЕР2016/073248) окремо або в комбінації з химерними анти-Ї АС-3 антитілами (аг доз (0403) до а АС (0418)) або еталонними антитілами (гуманізоване ВАРОБО (І АО525) і
ВМ5 986016) в концентрації 10 мкг/мл. ОР47 являє собою людський Ідс, який не зв'язуються, з мутацією ГАГА в Ес-частини, щоб уникнути розпізнавання ЕсукК, і його використовували в якості негативного контролю.
Через п'ять діб супернатанти клітинних культур збирали і використовували для вимірювання рівнів ІЛ-2 за допомогою ІФА (КО 5узіетв), і клітини залишали за 37 "С протягом додаткових 5 годин у присутності Соїді Рід (Брефельдін А) і СоЇді Фор (Монензин). Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і фіксуючим барвником Ада (Іпийгодеп) для прижиттєвого забарвлення/забарвлення мертвих клітин, після чого проводили фіксацію/пермеабілізацію в буфері Ріх/Рептп Вибйег (ВО Віозсіепсе). Ми провели внутрішньоклітинне забарвлення на гранзим В (ВО Віозсіеєпсє) та ІФН-у (еВіозсієпсе).
Результати наведені на Фіг. 2А і 28.
Вплив блокування РО-1 і ГАО-3 на цитотоксичне вивільнення гранзиму В СО4 Т-клітинами людини, спільно культивованими з лімфобластною В-клітинною лінією (АКН?77).
У функціональних дослідженнях СО4 Т-клітини спільно культивували з лінією пухлинних клітин АКН77, лімфобластною В-клітинною лінією, яка експресує більш низькі рівні РОІ-1, ніж
ЗДК, щоб краще охарактеризувати внесок антагонізму ГАС-3 в блокування РО-1. Інша частина експериментальної установки і показання залишалися незмінними від мРЗКЛ. Анти-Ї Ас-3 антитіла (а Аз (0414) і а АОЗ (0416), вибрані на основі їх здатності спільно секретувати ІЛ-2 та гранзим В в мРЗКЛ) в комбінації з анти-РО-1 антитілом, викликали більш значуще збільшення секреції гранзиму В СО4 Т-клітинами у порівнянні з еталонними анти-ІЇА(С-3 антитілами (гуманізоване ВАРОБО (ГАС525) і ВМ5 986016) (Р «0,05) і одним анти-РО-1 (Р «0,01), як продемонстровано на Фіїг. 3.
Вплив блокування РО-1 і ГАС-3 на Трег пригнічення вивільнення гранзиму В та ІФН-у СО4 Т- клітинами людини, спільно культивованими з опроміненими алогенними МКПК.
У функціональних дослідженнях, що включають аналізи пригнічення регуляторними Т- клітинами (Трег), МКПК від одного і того ж донора були розділені на дві проби: одна була збагачена СО4 Т-клітинами, а інша - Трег, визначеними як СО4-СрабБлоп 201270 Т-клітини, за допомогою набору мікрогранул (Мінепуї Віоїес). Після очищення двох популяцій СО4 Т-клітини мітили 5 мкМ карбокси-флуоресцеїн-сукцинімідилового складного ефіру (СЕБЕ), а Трег мітили 5
МКМ СеїІ-Ттасе-Міоїег (СТМ), щоб потім можна було розрізнити їх за допомогою проточної цитометрії.
Потім і СО4 Т-клітини (105), і Трег (105) спільно культивували в 9б-лунковому планшеті в співвідношенні 1: 1 разом з опроміненими СО4-виснаженими МКПК (105) від неспорідненого донора в присутності або у відсутності анти-І АС-3 антитіла (а АСЗ (0414) і а Аз (0416) або еталонних анти-І АС-3 антитіл (гуманізовані ВАРОБ5О (І АС525) і ВМ5 986016) у комбінації з анти-
РО-1 антитілом аРО1 (0376) в концентрації 10 мкг/мл. В якості контролю для оцінки величини пригнічення ефекторних функцій СО4 Т-клітин за допомогою Трег СО4 Т-клітини (105) також спільно культивували з опроміненими МКПК (105) у відсутності Трег.
Через п'ять діб супернатанти клітинних культур збирали і використовували для вимірювання рівнів ІФН-у за допомогою ІФА (КО зузіетв), і клітини залишали за 37 "С протягом додаткових 5 годин у присутності СбоїЇді Рійд (Брефельдін А) і боді є(ор (Монензин). Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і барвником Ада (Іпийгодеп) для прижиттєвого забарвлення/забарвлення мертвих клітин після чого проводили фіксацію/пермеабілізацію в буфері Ріх/Репт Вийег (ВО Віозсіепсе). Внутрішньоклітинне забарвлення проводили на гранзим В (ВО Віозсієпсе) і ІФН-у (еВіозсіепсе). Результати представлені на Фіг. 4А і 4В.
Анти-І АО-3 антитіла (а АОЗ (0414) і а доз (0416), у комбінації з анти-РО-1 антитілом аРо1 (0376) (- РО1-0103-0312, із заявки РСТ РСТ/ЕР2016/073248) викликали вихід Ттип з жорсткого контролю регуляторними Т-клітинами, про що свідчить секреція значно більш високої кількості гранзиму В, ніж Ттип, в присутності тільки анти-РО-1 (Р «0,05) або у відсутності інгібіторів контрольної точки (Р «0,001). Еталонні анти-І АС-3 антитіла (гуманізовані ВАРОБО (І АО525) і
ВМ5 986016) у комбінації з анти-РО-1 не суттєво зберігали ефекторні функції Ттип від Трег пригнічення. Аналогічні результати були отримані для ІФН-у, навіть якщо різниця не досягла статистичної значущості лише з 4 донорами.
Вплив блокування РО-1 і | АС-3 на секрецію гранзиму В і ІФН-у СО4 Т-клітинами з МКПК пацієнтів з меланомою після вторинної імунної відповіді за допомогою імуногенних пептидних пулів меланома-антиген.
Раніше було описано, що МКПК пацієнтів з меланомою містять вимірювану частоту неоантиген-специфічних Т-клітин. Таким чином, для цілей перевірки концепції ми протестували анти-І 2-3 антитіло (0414) з анти-РО-1 в порівнянні з одним анти-РО-1 на МКПК пацієнтів з меланомою, повторно стимульованих протягом ночі імуногенними пептидними пулами асоційованих з меланомою антигенів. 105-105 МКПК від пацієнтів з меланомою, яких інкубували за кімнатної температури в присутності або у відсутності насичуючих концентрацій (10 мкг/мл) з одним анти-РО-1 (0376), у комбінації з анти-І АС-3 антитілом (а АОЗ (0414) - (0414), 10 мкг/мл). Потім Т-клітини повторно стимулювали протягом ночі імуногенним пулом пухлинних антигенів, таких як МАСЕА!,
МАСЕАЗ, МАСЕАЯ4, Меїап-А/МАНВТ-1, МУЕ5О-1, білок меланоцитів Ріте! 17 др100, тирозиназа, тирозиназа-залежний білок 2 в присутності інгібіторів транспорту білка Соїді Рід (Брефельдін
А) і Соїді бор (Монензин).
Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і фіксуючим барвником Адца (Іпийгодеп) для прижиттєвого забарвлення/забарвлення мертвих клітин, після чого проводили фіксацію/пермеабілізацію в буфері Ріх/Регт Вийег (ВО Віозсієпсе).
Внутрішньоклітинне забарвлення проводили на гранзим В (ВО Віозсіепсе) і ІФН-у (еВіозсіепсе).
Комбінація анти-І АС-3 і анти-РО-1 антитіл (Р «0,01 і Р «0,001) значно (Р «0,01 ії Р «0,0001) посилювала специфічні для пухлинного антигена ефекторні функції Т-клітин (тобто секрецію 60 гранзима В і ІФН-у), в той час як тільки блокування РО-1 не продемонстрував жодного ефекту
(дані не показані).
Приклад 10
Генерація та отримання біспецифічних анти-РО1/анти-І АОЗ антитіл 10.1. Отримання та експресія біспецифічних антитіл, які зв'язуються з РОЇ і ГАСЗ3 з обміном/заміною доменів УН/МІ. (Сто55МАБУ"УУ в одному зв'язуючому плечі та з одиночними зарядженими амінокислотними замінами на поверхні взаємодії СНІ1/СІ.
Мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з людським РО і людським ГАСЗ, були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі293Е, як описано вище.
Мультиспецифічні антитіла 1-1 Сто55МАБУММ також описані у УМО 2009/080252.
Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в Таблиці 14. Схематична структура біспецифічних антитіл 141 Сто55МАБУ"М продемонстрована на Фіг. ТА.
Таблиця 14
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І.С) і важких ланцюгів (НС) з обміном/заміною доменів МНЛ/І. (1-1 Сто55МАБУМ)
РОЛ АСЗ 0799
РО1(0376)/ ЗЕО І МО:96 ЗЕО ІЮ МО:97 ЗЕО І МО:98 ЗЕО І МО:99 а дсз3(0416
РОЛ АСЗ 0927
РО1(0376)/ ЗЕО І МО:96 ЗЕО ІЮ МО:100 ЗЕО І МО:98 ЗЕО ІЮ МО:101 а дсаз3(0414
РОЛ АСЗ 0222
РєРО1(0069)/ ЗЕОІОМО102 |5ЕО І МО7Л0З ЗЕОІО МО: 104 |5ЕО І МО7105 а даз(25Е7
РОЛ АСЗ 0224
РєРО1(0098)/ ЗЕОІО МО106 |5ЕО І МО7Л0З ЗЕОІО МО:107 |5ЕО І МО7105 а даз(25Е7
Для всіх конструктів "виступи-в-отвори" була використана технологія гетеродимеризації з типовою заміною виступу (Т366УУ) в першому домені СНЗ і відповідними замінами отворів (13665, І368А ії У410М) у другому домені СНЗ3 (а також двома додатковими введеними залишками цистеїну 5354С/7349'С) (міститься у відповідних зв'язаних послідовностях важкого ланцюга (НС), які зображені вище). 10.2. Отримання й експресія мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РОТ ії І АСЗ, з обміном/заміною доменів СНІТ/СК (242 Стоз5Марениск) в двох зв'язуючих плечах і з замінами заряджених амінокислот на поверхнях взаємодії СН1/СІ. інших
У цьому прикладі мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з людським РОЇ і людським
ТІМЗ3, були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів, і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі293Е, як описано вище. Мультиспецифічні антитіла 2-42 Сто55МАБСНІСК також описані у УМО 2010/145792.
Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в Таблиці 15. Схематична структура біспецифічних антитіл 242 Сто55МАБеНІСКк продемонстрована на Фіг. 1А.
Таблиця 15
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС) з обміном/заміною доменів МНЛ/І. (242 Сто55МАБеНСК)
РОТ/Л АСЗ 8970
РОТ/Л АСЗ 8984
Таблиця 15
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС) з обміном/заміною доменів МНЛ/І. (2-2 Сто55МАБЕУНІСК) 2х с 2хІсС2
РОЦОЗИвУалсяеЯ 77777711 10.3. Отримання й експресія мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РОТ ії І АСЗ, з обміном/заміною доменів СНІТ/СК (2-1 Стоз5Марениускю в одному зв'язуючому плечі (РО1 сго55Рар, яке злите з С-кінцем важкого ланцюга виступу Ес), і з зарядженими амінокислотними замінами на поверхнях взаємодії СНІ1/СІ. інших
У цьому прикладі мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з людським РОТ і людським
ТІМЗ3, були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів, і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі293Е, як описано вище. Мультиспецифічні антитіла 2-1 Сто55МАБреНИСк також описані у УМО2013/026831.
Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в Таблиці 16. Схематична структура біспецифічних антитіл 241 Сто55МАБУНИСк продемонстрована на Фіг. 18.
Таблиця 16
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І.С) і важких ланцюгів (НС) з обміном/заміною доменів НТ/СК (241 Стоз5Марентск) 2х се
РОЛ АСЗ 8310 аг даз(0414)/ ЗЕОІО МО: 118 |5ЕО ІЮ МО:119 ЗЕОІО МО-115 |5ЕОІЮ МО 101
РО1(0376
РОТІЛАСЗ 8311 аг даз(0416)/ ЗЕОІО МО20 |5ЕО І МО7121 ЗЕОІО МО: 115 |5ЕО ІО МОС:99
РО1(0376
РОТІЛАСЗ 1252 а даз(25Е7)/ ЗЕОІО МО22 |5ЕОІЮ МО7Л0З ЗЕОІО МО-115 |5ЕОІЮ МОл105
РО1(0376
Альтернативно, РО1 сгоз5Рар, яке злите з С-кінцем важкого ланцюга з виступом Ес, може бути замінене одноланцюговим Раб (зсЕабр). Такі мультиспецифічні 2-41 антитіла, що містять зсеЕар, описані також в УМО2010/136172 і можуть бути експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в
Таблиці 17. Схематична структура біспецифічних антитіл 2-1 з зсРар, злитим на С-кінці важкого ланцюга з виступом Ес, продемонстрована на Фіг. 1С.
Таблиця 17
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС), з РО1 зсЕар
РОЛ АСЗ 8312 аг даз(0414)/ ЗЕО ІЮ МО23 ЗЕО ІЮ МО:119 ЗЕО ІЮ МО:101
РО1(0376
РОЛ АСЗ 8313 аг даз(0416)/ ЗЕО І МО:124 ЗЕО І МО721 ЗЕО І МО:99
РО1(0376
РОЛ АСЗ 1088 а даз(25Е7)/ ЗЕО ІЮ МО125 ЗЕО ІЮ МОТ0З ЗЕО Ір МО:105
РО1(0376 10.4. Отримання й експресія мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РОТ і ГАСЗ з
МНЛІ/І, кожен з яких злитий на С-кінці важких ланцюгів (формат 2--1 РКІТ)
У цьому прикладі мультиспецифічні антитіла, які зв'язуються з людським РОЇ і людським
ТІМЗ3, були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів, і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі293Е, як описано вище. Цей тип мультиспецифічних 2-1 антитіл також описаний в УМО 2010/115589.
Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в Таблиці 18. Схематична структура біспецифічних антитіл типу 241 РКІТ продемонстрована на Фіг. 10.
Таблиця 18
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС), з доменами МН і МІ, злитими з С-кінцями важких ланцюгів
РОЛ АСЗ 0918 а даз(25Е7)/ ЗЕО ІЮ МО126 ЗЕО ІЮ МО:127 ЗЕО Ір МО:109 аРОр1(0376 10.5. Отримання й експресія мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РОТ і ГАСЗ з обміном/заміною доменів МНЛ/І. (формат 14-41 Стоз3Марунм: транс) в одному зв'язуючому плечі і з замінами заряджених амінокислот на поверхнях взаємодії СН1Т/СІ ГдОоЗ Раб, злитого з С- кінцем важкого ланцюга з Ес-отвором
Були отримані мультиспецифічні антитіла, які моновалентно зв'язуються як з людським РО, такі з людським ГАСЗ, причому Баб ГАСЗ злитий через свій варіабельний домен важкого ланцюга з С-кінцем одного з важких ланцюгів, переважно важкого ланцюга з Ес-отвором.
Молекули, були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів, і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі293Е, як описано вище. Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в Таблиці 19.
Схематична структура біспецифічних антитіл 141 Стоз3Марунм: транс продемонстрована на фіг. 1Н.
Таблиця 19
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС), з аг доз Раб, злитим з С-кінцями важких ланцюгів
РОЛ АСЗ 0725 аг даз(0414)/ ЗЕО І МО:96 ЗЕО ІЮ МО:144 ЗЕО ІЮ МО:98 | БЕО ІО МО:101 аРОр1(0376 10.6. Отримання та експресія мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РО і ГАЗ з обміном/заміною доменів МНЛ/І. (формат 241 СтозеМарунм: транс) в одному зв'язуючому плечі і з замінами заряджених амінокислот на поверхнях взаємодії СНІ1/СІ. двох | ДОЗ Раб, один з яких злитий з С-кінцем важкого ланцюга з Ес-отвором
Були отримані мультиспецифічні антитіла, які моновалентно зв'язуються з людським РО! і двовалентно зв'язуються з людським І АСЗ, причому Раб ГАСЗ злитий через свій варіабельний домен важкого ланцюга з С-кінцем одного з важких ланцюгів, переважно важкого ланцюга з Ес- отвором. Молекули були отримані за допомогою класичних методик молекулярної біології, що описані в розділі загальних способів, і транзієнтно експресовані в 293Е з клітин Ехрі29ЗЕ, як описано вище. Мультиспецифічні антитіла були експресовані з використанням плазмід експресії, що містять нуклеїнові кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, наведені в
Таблиці 20. Схематична структура біспецифічних антитіл 2-1 Стоз5МарУнм- транс продемонстрована на фіг. 11.
Таблиця 20
Амінокислотні послідовності легких ланцюгів (І С) і важких ланцюгів (НС), причому один з а 43
Еаб злите з С-кінцями важких ланцюгів
РОЛ АСЗ 0750 аг даз(0414)/ ЗЕО І МО:96 ЗЕО ІО МО:145 ЗЕО ІЮ МО:98 | БЕО ІО МО:101 аРОр1(0376 10.7 Очищення та характеристика мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РО! і ТІМЗ
Експресовані раніше мультиспецифічні антитіла очищали від супернатанту за допомогою комбінації афінної хроматографії з білком А і ексклюзійної хроматографії. Усі мультиспецифічні антитіла можуть бути отримані з достатніми виходами і є стабільними. Отримані продукти були охарактеризовані по відношенню до ідентичності з використанням мас-спектрометрії та аналітичних властивостей, таких як чистота за допомогою ДСН-ПААГ-електрофорезу, вміст мономерів і стабільність.
Мас-спектрометрія
Очікувані первинні структури були проаналізовані за допомогою мас-спектрометрії з іонізацією електророзпиленням (ІЕР-МС) деглікозильованих інтактних Сто55Маб Рш деглікозильованих/розщеплених плазміном або альтернативно деглікозильованих/ обмежено розщеплених Гуз Сто55Маб.
СНІТ/СК Сто55Маб піддавали деглікозилюванню за допомогою М-глюкозидази Е у фосфатному буфері або трис-буфері за 37 "С протягом 17 годин при концентрації білка 1 мг/мл.
Розщеплення плазміном або обмежене розщеплення ГузсС (Коспе) проводили з використанням 100 мкг деглікозильованих СНІ/СК Сто55Маб в трис-буфері, рН 8, за кімнатної температури протягом 120 годин і за 37 "С протягом 40 хвилин, відповідно. Перед мас-спектрометрією зразки знесолювали за допомогою ВЕРХ на колонці з сефадексом 525 (СЕ Неаїїйсаге). Загальна маса була визначена за допомогою ІЕР-МС на системі М5 МАХІЗ 46 ОНЕ-ОТОЕ (ВгиКег Баїюпік), обладнаною джерелом Тгімегза МапоМаїге (Адміоп).
Стабільність мультиспецифічних антитіл
Щоб оцінити стабільність конструктів антитіл, термічну стабільність, а також температури початку агрегації оцінюють у відповідності з наступною процедурою. Зразки зазначених антитіл готують в концентрації 1 мг/мл в 20 мМ гістидин/гістидинхлорид, 140 мМ Масі, рН 6,0, переносять в 10 мкл мікрокювету, і реєструють дані статичного розсіювання світла, а також дані флуоресценції при збудженні лазером з довжиною хвилі 266 нм за допомогою приладу
Оріїйт1000 (Амасіа Іпс.), в той час як зразки нагрівають зі швидкістю 0,1 "С/хв. від 25 "С до 90 "с.
Температура початку агрегації (Тадо) визначається як температура, за якої інтенсивність розсіяного світла починає збільшуватися. Температура плавлення (Тл) визначається як інфлексна точка на графіку залежності інтенсивності флуоресценції від довжини хвилі.
Приклад 11
Характеристика біспецифічних анти-РО1/анти-І АСЗ антитіл 11.1 Аналіз зв'язування за допомогою ІФА
ІФА для пи РО1
Покриті стрептавідином планшети Мипс тахізогр (МісгоСоаї, Мо 11974998001), покривали 25 мкл/лунка біотинільованого РО1Т-ЕСО-АміНіз в концентрації 500 нг/мл і інкубували за 4" протягом ночі. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-РО1 антитіл в зростаючих концентраціях і інкубували протягом 1 години за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка козячого антилюдського Ні -РОЮ (А, ЛАТ09-036-098) у розведенні 1: 5000 та інкубували за кімнатної температури протягом 1 год. на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували до досягнення ОП 2-3. Вимірювання проводили за 370/492 нм.
Клітинний ІФА для РОЇ людини
Адгезивну клітинну лінію СНО-КІ!, стабільно трансфіковану плазмідою 15311 НПРО1- її рОС Мео, що кодує повнорозмірний людський РОТ, і селекцію 5418 (маркер стійкості до неоміцину в плазміді) висівали в концентрації 0,01 х10Еб клітин/лунка в 384-лункові планшети з плоским дном і культивували протягом ночі.
На наступну добу додавали 25 мкл/лунка зразка РО1 або еталонного антитіла проти РОМ людини (Коспе)/проти РОЇ миші (ВіоіІедепа; кат.: 329 912) і інкубували протягом 2 годин за 4 С (щоб уникнути інтерналізації). Після ретельного промивання (1х90 мкл/лунка РВ5Т) клітини фіксували, додаючи 30 мкл/лунка 0,05 95 глутаральдегіду (Зідта, кат. Мо: (35882, 25 б), розведеного в буфері 1х ФСБ, і інкубували протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка РВ5Т) для виявлення додавали 25 мкл/лунка вторинного антитіла: козячого антилюдського Не -РОЮ (ВА, ЛЛАІТ09-036-088)/овечого антимишачого РОЮ (СЕ
МАЗУЗ10) з подальшою 1-годинною інкубацією за кімнатної температури на шейкері. Після промивання (3х90 мкл/лунка РВ5ОТ) додавали 25 мкл/лунка розчину субстрату ТМВ (Коспе 11835033001) та інкубували до досягнення ОП 1,0-2,0. Вимірювання в планшетах проводили за 370/492 нм.
Результати клітинного ІФА наведені у вигляді значень "ЕКсо СНО-РО1" ІНМІ в Таблиці 21 нижче.
ІФА для І адЗ людини
Планшети Мипс Махізогр (Мипс 464718) покривали 25 мкл/лунка рекомбінантного химерного білка людського І АС-3 Ес (НУО бузієтв, 2319-І 3) при концентрації білка 800 нг/мл і інкубували за 4 "С протягом ночі або протягом 1 год. за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) кожну лунку інкубували з 90 мкл блокуючого буфера (ФСБ -- 2 95 БСА - 0,05595 Твін-20) протягом 1 години за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка буфером РВ5Т) додавали 25 мкл зразків анти-їадЗ3 в концентрації 1-9 мкг/мл (розведення 1: З в буфері О5ЕР) і інкубували 1 год. за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка кон'югату НКР з козячим антитілом проти к-ланцюга людського Ід (Міїроге, АРБ5О2Р) у розведенні 1: 2000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВЗТ) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували протягом 2-10 хв.
Вимірювання проводили на приладі Тесап Заїйге 2 за 370/492 нм.
ІФА для зв'язування І адЗ на клітинній поверхні 25 мкл/лунка їад3 клітин (рекомбінантні клітини СНО, які експресують ІааЗ, 10000 клітин/лунка) висівали в 384-лункові планшети, призначені для культури тканини, (Сопіпод, 3701) і інкубували за 37 С протягом однієї або двох діб. На наступну добу після видалення середовища додавали 25 мкл зразків анти-І ад3 (розведення 1: З в буфері ОБЕР, починаючи з концентрації 6-40 нМ) і інкубували протягом 2 годин за 4 "Сб. Після промивання (1х90 мкл в
РВ5Т) клітини фіксували додаванням 30 мкл/лунка глутаральдегіду до кінцевої концентрації 0,05 95 (бідта, кат. Мо: 45882), протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка кон'югату НАР з козячим антитілом проти к-ланцюга людського Ід (Міїїроге, АРБО2Р) у розведенні 1: 1000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5Т) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (НКоспе, 11835033001) та інкубували протягом 6-10 хв.
Вимірювання проводили на приладі Тесап Зайге 2 за 370/492 нм. Результати клітинного ІФА наведені у вигляді значень "ЕКоо СНО-І АСЗ" |НМІ в Таблиці 21 нижче.
Інгібування зв'язування І АС-3 з ГКГСО-ЇЇ, який експресується на пухлинних клітинах АЗ75 людини (за допомогою ІФА) 25 мкл/лунка клітин АЗ75 (10000 клітин/лунка) висівали в 384-лункові планшети, призначені для культури тканини, (Согпіпд, 3701) і інкубували за 37 "С протягом ночі. Анти-І ад3 антитіла попередньо інкубували протягом 1 години з біотинільованим І адЗ (250 нг/мл) в середовищі для культивування клітин в розведеннях 1: З, починаючи з концентрації антитіла З мкг/мл. Після видалення середовища з лунок з засіяними клітинами 25 мкл попередньо інкубованих сумішей антитіло-їадЗ3 переносили в лунки та інкубували протягом 2 год. за 4 "С. Після промивання (1х90 мкл в РВ5Т) клітини фіксували додаванням 30 мкл/лунка глутаральдегіду до кінцевої концентрації 0,05 95 (бідта кат. Мо: (35882), протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВ5ЗТ) додавали 25 мкл/лунка полі-НАР40- стрептавідину (Рії2дегаій, 65К-5104РНЕРХ) у розведенні 1: 2000 або 1: 8000 і інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Після промивання (3х90 мкл/лунка з буфером РВЗТ) додавали 25 мкл/лунка субстрату ТМВ (Коспе, 11835033001) та інкубували протягом 2-10 хв.
Вимірювання проводили на приладі Тесап байге 2 за 370/492 нм. Результати аналізу інгібування за допомогою ІФА наведені у вигляді значень "ЕКво ГКГС ІІ / ІФА" |НМІ в Таблиці 21 нижче.
Таблиця 21
Короткий опис зв'язування різних біспецифічних анти-РО1/анти-І АСЗ антитіл
ІФА пиРОТ | ІФА пиГАСЗ | ЕКоо СНО-РОТ ІЕКсо СНО-ІГ АСЗІ ГКГО-ПИЛФА
В ЕКбо (нМІ ЕКбо (нМІ ЕКво (НМІ ЕКбо (нМІ ІСво (НМІ
РОЛ АСЗ 0927 (РО1-
РОЛ АСЗ 0799 (РО1-
РОЛ АСЗ 0222 (РО1-
РОЛ АСЗ 0224 (РО1-
РОЛ АСЗ 8310 (РО1-
РОЛ АСЗ 8311 (РО1-
РОЛ АСЗ 1252 (РО1-
РОЛ АСЗ 8970 (РО1-
РОЛ АСЗ 8984 (РО1-
РОЛ АСЗ 9010 (РО1- 11.2 Зв'язування за допомогою Віасоге
Антигензв'язуючі властивості мультиспецифічних антитіл, які зв'язуються з РО! і | ДОЗ
Зв'язування мультиспецифічних антитіл з їх відповідними цільовими антигенами, тобто РОЇ і ТІМ3, оцінювали за допомогою Віасогеф).
Зв'язування РОТ може бути оцінене у відповідності з наступною процедурою:
Антилюдський Ес до був іммобілізований шляхом приєднання аміну до поверхні сенсорного чипу СМ5 (Віасоге). Потім проводили захоплення зразків і зв'язування з ними пи РО1-ЕСО.
Поверхню сенсорного чипу регенерували після кожного циклу аналізу. В результаті отримували константу рівноваги та кінетичні константи швидкості шляхом підгонки даних до моделі взаємодії Ленгмюра 1:1.
Близько 10000 одиниць відповіді (ОВ) 20 мкг/мл антилюдського (95 (ЗЕ Неайнсаге Мо ВЕК- 1008-39) були зв'язані з усіма проточним комірками сенсорного чипу СМ5 в Віасоге Т200 з використанням набору для амінного сполучення, що поставляється СЕ НеайНсаге. Зразок і рухомий буфер являли собою НВ5-ЕР -- (0,01 М ГЕПЕС, 0,15 М Масі, З мМ ЕДТА, 0,05 95 об./об.
ПАР РІО, рН 7,4). Температура проточної комірки була встановлена на 25 "С, а температура у відсіку для зразка - 12 "С. Система була заповнена рухомим буфером.
Різні зразки вводили протягом 15 секунд з концентрацією 10 нМ їі послідовно зв'язували з проточними комірками 2, З і 4. Потім повний набір концентрацій людського РО1-ЕСО (300 нм, 100 нм, 2х33,3 НМ, 11,1 нМ, 3,7 нМ, 1,2 нМ їі 2х0 нМ)) вводили в кожен зразок протягом 300 с, після чого час дисоціації становив 10/600 с і дві стадії регенерації по ЗО секунд з З М Масі», з яких на останній була "додаткова промивка після ін'єкції" з рухомим буфером. В результаті дані подвійного контролю були апроксимовані до моделі взаємодії Ленгмюра 1: 1 з використанням програмного забезпечення Віасоге 200 ЕмаїІчаїйоп.
Зв'язування І АОЗ оцінювали відповідно до такої процедури:
Для виконання цього аналізу використовували набір Віасоге БА САР, який поставляється
СЕ Неайсаге. Значення кінетичних параметрів були отримані за 25 "С в буфері НВ5-ЕР - (Се
Неайнсаге).
Чип 5А САР був закріплений в Віасоге Т200, як визначено в інструкції до набору САР. Метод прогону містить чотири команди. Спочатку реагент САР вводили протягом 300 с при швидкості потоку 10 мкл/хв. для гібридизації іммобілізованих одноланцюгових ДНК з використанням команди "Сепега!". За цією командою іде 15-секундна ін'єкція розведення 1 мкг/мл позаклітинного домену, міченого біотинільованим людським Ес ГадЗ3 людини, у рухомому буфері. Це призводить до рівня захоплення близько 50 ОВ. Одноциклову команду використовували для введення п'яти різних концентрацій зразка (100 нМ - 6,25 нМ, 2-кратне розбавлення) з наступною фазою дисоціації тривалістю 1200 секунд. Потім чип був регенерований, як визначено в інструкції до набору 5А САР.
Нарешті, отримані криві були оцінені з використанням програмного забезпечення Віасоге
Т200 Емаїчайоп версії 3.0.
Результати: Взаємодії не відповідали моделі зв'язування Ленгмюра 1:1, тому що всі зразки, крім 0799 і 0927, мають два І адЗ-зв'язуючих фрагмента і, отже, демонструють авідність. Так як 0799 і 0927 містили невеликі помилки спарювання, наприклад, популяції бівалента, вони також демонстрували деяку авідність.
Тому сенсограмми були ранжовані тільки відповідно до їх швидкісті дисоціації. Це було зроблено шляхом візуального порівняння одноциклових кінетичних кривих. При цьому було показано, що комплекс 0416-ад3 ЕСО більш стабільній, ніж будь-який інший в цьому наборі зразків. Моновалентний формат «І ад3» Стоз5тар (0799) як і раніше проявляє більш низьку швидкість дисоціації, ніж будь-який інший зразок в цьому експерименті.
Крім того, було видно, що афінний комплекс І ад3-0414/ ад3-0927-І ад3 ЕСО є найслабшим з тих, що спостерігаються в цьому експерименті. Афінно-зв'язуючі ділянки 0414 і 0416 можуть бути приблизно порівняні з афінними ділянками їх одновалентних відповідних ділянок 0927 і 0799 Сто55таь. Результати наведені в Таблиці 22.
Таблиця 22
Якість зв'язування біспецифічних антитіл РО1-І АСЗ, яке визначається вимірюванням ППР
Оцінка авідності форматів транс в порівнянні з 141 біспецифічними антитілами 0927 і 0799:
Константи дисоціації біспецифічних молекул (зразок) і їх окремих мішеней, а також комбінації РО! і | АСЗ (аналіт) були визначені для оцінки приросту авідності, що забезпечується зв'язуванням з усіма валентностями одночасно.
Перед вимірюванням на Віасоге 8К був приготовлений сенсорний чип СМ5 з використанням стандартного набору для амінного сполучення, що поставляється СЕ НеайПсаге. Отримане в результаті власного виробництва антитіло, спрямоване проти специфічної мутації в Ес-частині зразка (тобто Ес-частини, яка несе мутації Ра АГ А), яка називається в цьому документі анти-
РОГАГА антитілом (такі антитіла описані в МО 2017/072210), проте було розведено до концентрації 50 мкг/мл в ацетатному буфері рН 5,0. Воно було зв'язане усіма проточними комірками та каналами зі швидкістю потоку 8 мкл/хв протягом 1200 с, що призвело до відклику зв'язування близько 19000 ОВ.
Буфер НВ5Б-ЕР: (СЕ НС) використовували в якості рухомого буфера для підготовки сенсорного чипу, а також самого основного циклу. Аналіз починали після запуску, що складається з трьох 17-секундних ін'єкцій зразка з подальшим етапом регенерації з використанням 10 мМ розчину МаонН. На першому етапі різні зразки були захоплені анти-
РОГАГА антитілом на двох окремих канальних проточних комірках на поверхні сенсорного чипу шляхом ін'єкції його протягом 17 с при швидкості потоку 10 мкл/хв. По-друге, одну з трьох аналізованих речовин (РОТ, І АСЗ3-Ес, злиття 242 РО1/ АСЗ3-Ес) і впорскували в обидві проточні комірки протягом 200 с при швидкості потоку 50 мкл/хв., за якою слідував проміжок 1000 с (600 з в разі ГАОЗ3-Ес) фази дисоціації. Нарешті, комплекс анти-РО| АГА антитіло/зразок розчиняли двома послідовними ін'єкціями (тривалістю 30 с) 10 мМ МаоН. Кожне окреме кінетичне визначення складалося з чотирьох циклів з різними концентраціями аналіту (0 нМ, 5 НМ, 258М і 100 нм).
Отримані дані були оцінені з використанням програмного забезпечення Віасоге 8К
ЕмаїІнайоп боймаге. Була застосована відповідна дисоціація 1:1, і отримані значення Ка були перетворені в комплекс періоду півжиття в хвилинах. Різниця між авідним зв'язуванням зв'язуючої молекули злитого антигена РО1Т/Л ад3-Ес, і її основною конкретною частиною (або
РО, або Гад3) була розрахована і відсортована за однією з трьох категорій, що описують приріст стабільності при мультивалентному та біспецифічному зв'язуванні (Таблиця 23).
Таблиця 23
Збільшення стабільності комплексу, що забезпечується авідністю біспецифічних антитіл РО1-
АСЗ, яка визначається вимірюванням ППР 11.3. Димеризація клітинного РО1 і ГАСЗ після одночасної взаємодії за допомогою анти-
РО1/анти-І АСЗ біспецифічних антитіл
Біспецифічні анти-РО1/анти- АСЗ антитіла отримували в різних форматах, як описано в
Прикладі 10. Цей клітинний аналіз використовували для демонстрації димеризації або, нарешті, зв'язування/взаємодії двох різних рецепторів, які злиті в цитоплазмі з двома фрагментами ферменту, при лігуванні або перехресному зшиванні з біспецифічним антитілом проти обох мішеней. Таким чином, тільки один рецептор не проявляє ферментативну активність. Для цієї специфічної взаємодії цитозольні С-кінці обох рецепторів окремо були злиті з гетерологічними субодиницями репортерного ферменту. Одна тільки субодиниця ферменту не проявляла репортерну активність. Однак очікувалося, що одночасне зв'язування конструкту біспецифічного анти-?РО1/анти-- АСЗ антитіла з обома рецепторами призведе до локального цитозольного накопичення обох рецепторів, комплементації двох субодиниць гетерологічного ферменту і, нарешті, до утворення специфічного і функціонального ферменту, який гідролізує субстрат, тим самим генеруючи хемілюмінесцентний сигнал.
Щоб проаналізувати ефект перехресного зв'язування біспецифічних анти-РО1/анти-І АСЗ антитіл, 10000 РО1Ч дОЗ3» людських клітин О2О5/лунка висівали в білі 96-лункові планшети з плоским дном (совіаг, кат. Мо 3917) і культивували протягом ночі в середовищі для аналізу. На наступний день клітинне середовище видаляли та заміняли свіжим середовищем. Готували розведення антитіл або лігандів і додавали титровані кількості зазначених (біспецифічних) антитіл і інкубували за 37 С протягом 2 годин. Потім додавали суміш субстрат/буфер (наприклад, реагент для виявлення РаїйпНипіегРїазі)) і знову інкубували протягом 1 години. Для вимірювання хемілюмінесценції, індукованої при одночасному зв'язуванні та димеризації, використовували рідер для множинного зчитування Тесап.
Результати представлені на Фіг. 5А і 5В. На графіку показана хемілюмінесценція (виміряна в
ОВ) в залежності від концентрації антитіла. Моноспецифічні (бівалентні) анти-І АСЗ антитіла не здатні викликати хемолюмінесцентний сигнал, тоді як всі біспецифічні анти-РО1/анти-І АСЗ антитіла індукують хемолюмінесцентний сигнал в залежності від концентрації.
Щоб продемонструвати специфічність одночасного зв'язування (та індукції сигналу люмінесценції), був проведений конкурентний експеримент: Як показано перед обробкою біспецифічним антитілом (1252), індукувався сигнал люмінесценції в залежності від дози (Фіг. 50). Якщо одне і теж біспецифічне антитіло вносили в присутності або антитіла а! АсЗ3 (0156,
МОХ25Е7), або анти-РО1 антитіла (0376), сигнал був або майже інгібований (для конкуренції
РОТ), або щонайменше значно знижений (ГАСЗ3). Обидва вихідних антитіла являють собою ті ж зв'язуючі речовини, що і біспецифічні антитіла (1252, формат 2-1 ГАСЗ/РО1). Кожне з конкуруючих антитіла вводили в постійній концентрації 20 мкг/мл.
Результати подальшого експерименту продемонстровані на Фіг. 50. Подібно попередньому конкурентному експерименту, інкубація з вихідними антитілами аг АсЗ3 (0156) або РО1 (0376; кожне постійно в концентрації 10 мкг/мл) впливала на властивості зв'язування біспецифічного антитіла (1 252, формат 2-41 біспецифічного а! АС3-0156 і РО1-0376) для РОТ клітин з подвійною експресією І ад3, виміряних за сигналом люмінесценції. Конкуренція з анти-РО1 антитілом (0376), а також з рекомбінантним білком ГАСЗ: Ес (0160) практично усувала сигнал, тоді як присутність єдиної зв'язуючої речовини а доз (0156) призводила тільки до часткового пригнічення. Два інших анти-І АСЗ антитіла 0414 і 0416, які зв'язуються з епітопом, відмінним від 0156, не конкурували за зв'язування з біспецифічним антитілом, що містить зв'язуючу речовину аГ доз (0156), тому що вони не модулювали сигнал значно.
У наступному експерименті порівнювали одночасне зв'язування біспецифічних анти-
ГАСЗ/анти-РОЇ1 антитіл, що містять різні зв'язуючі речовини агГгдозЗ (0414 проти 0416) та різні формати (1.41 у порівнянні з 2-41) (Фіг. БА-60)). Як описано вище, було протестовано кілька анти-
ГАСЗ/анти-РО1 біспецифічних антитіл або у форматі 14-41 Стоз5Маь (0799 і 0927), або у форматі 2---1 (два І адЗ-зв'язуючі плеча і один злитий С-кінцевий РОТ сго55Бар-фрагмент: 8311 та 8310).
На Фіг. бА і 6В продемонстровані криві (поглинання в залежності від концентрації) для конструктів з речовиною аі(Ас3-0416, а на Фіг. 6С і 60 криві для відповідних конструктів зі з'єднанням а Ас4-0414. Усі протестовані конструкти були здатні зв'язуватися з клітинами і викликати хемолюмінесценцію. Розраховані значення ЕКхо для кривих зв'язування наведені в
Таблиці 24 нижче.
Таблиця 24
Значення ЕкК»бо, які виміряні в димеризаційному аналізі зв'язування . . . Молекулярна
В іншому експерименті порівнювали одночасне зв'язування біспецифічних анти-І АсСЗ/анти-
РО1 антитіл, що містять іншу зв'язуючу речовину а! АсЗ (0414 в порівнянні з 0416) і різні формати (2-1 в порівнянні з 2-2) (фіг. 7А-7О)). Були протестовані біспецифічні анти-І АСЗ/анти-
РО! антитіла у форматі 2-1 (два ГАСЗ-зв'язуючі плеча і один злитий з С-кінцем РОТ сгоз5ЕРар- фрагмент: 8311 і 8310) або у форматі 2-2 сгоззтаб (два І АсСЗ-зв'язуючі плеча і два злитих з С- кінцем РОТ сгоз5Бар-фрагмента: 8970 та 8984). На Фіг. 7А і 7В продемонстровані криві (поглинання в залежності від концентрації) для конструктів з речовиною аІ АСЗ3-0414, а на Фіг. 7С і 70 криві для відповідних конструктів зі з'єднанням а АсС4-0416. Усі протестовані конструкти були здатні зв'язуватися з клітинами і викликати хемолюмінесценцію. Розраховані значення
ЕК»о для кривих зв'язування наведені в Таблиці 25 нижче.
Таблиця 25
Значення ЕкК»бо, які виміряні в димеризаційному аналізі зв'язування . . . Молекулярна
У наступному експерименті одночасне зв'язування біспецифічного анти-Іі АбСЗ/анти-РО1 антитіла РОТЛАСЗ 00927 в класичному форматі 1-1 Сто55МАБУ"М- порівнювали з біспецифічними анти-І(АсСЗ/анти-РОЇ антитілами у форматі транс 1-1 (РОІЛАСЗ 0725) і форматі транс 2-41 (РО1/ АСЗ 0750). Для цього експерименту були застосовані наступні зміни в способі. Щоб проаналізувати ефект перехресного зв'язування різних форматів анти-І АбСЗ/анти-
РО! антитіл, 7500 РО1-Ч АдСЗ: клітин Ш2О5 людини/лунка висівали в білі 96-лункові планшети з плоским дном разом з непослідовними розведеннями антитіл (остаточний варіант) концентрації від 0,29 до 5484 пМ) та інкубували протягом 20 год. за 37 "С в СОбг-інкубаторі. Потім планшети для аналізу доводили до кімнатної температури і додавали суміш субстрат/буфер (реагент для виявлення РаїйпНипіегЕїазі, Оізсомегх) і знову інкубували протягом 4 годин. Для вимірювання хемілюмінесценції, індукованої при одночасному зв'язуванні та димеризації, використовували планшет-рідер 5ресігаМах Г (МоїІесшаг Оемісев).
На Фіг. 7Е криві залежності доза-відповідь (люмінесценція від концентрації) антитіл РО1-
ГАЗ 1-1 Сто55Маб (0927), 14-41 біспецифічних транс-Сто55Маб з М-кінцевим аРо1 їі С-кінцевих аг доз (0725), а також 241 транс Сто55Мар з М-кінцевим аРО1 ії М-плюс С-кінцевим аі(ГдоЗ
(0750). У порівнянні з РОТ/Л ДОЗ 0927 ефект перехресного зв'язування рецептора ГАЗ РО! у
РО1Т/Л дАОЗ 0725 явно вище, тоді як ефект для РО1/ АОЗ 0750 трохи нижче. 11.4. Вимірювання біспецифічних варіантів анти-ІЇАбз/анти-РО1 транс-СтоззМар в комбінованому репортерному аналізі РО-1 і | АО-3
Щоб перевірити нейтралізуючу активність різних форматів анти-РО1-ЇАСЗ антитіл при відновленні пригніченої Т-клітинної відповіді іп міо, використовували комерційно доступну репортерну систему. Комбінований біоаналіз РО! і | ДОЗ складається з репортерних клітин, що експресують РО1-, І АС3- і Т-клітинний рецептор (ТКР), ГКГО-ІІ- ії РОЇ 1-експресуючих пухлинних клітин і ТКР-активуючого антигена.
Ефекторними клітинами є Т-клітини Уигкаї, які експресують людський РОТ, людський І АОЗ, людський ТКР і репортер люциферази, який регулюється елементом відповіді МЕАТ (МЕАТ-АЕ).
Цільовими клітинами є клітини АЗ75, які експресують людський РО-І 1. Коротше кажучи, система репортерів заснована на трьох етапах: (1) ТКР активованої антиген-індукованої активації МЕАТ- клітин, (2) інгібуванні активуючого сигналу, опосередкованого взаємодією між ГКГСІЇ (клітини
АЗ75) ії ГАЗ (клітини дика), а також РО-Ї1 (клітини АЗ75) Її РОТ (клітини ЧУигткаю і (3) відновленні сигналу активації МЕАТ за допомогою РОЇ і ГАсСЗ-антагоністичних/нейтралізуючих антитіл.
Для цього експерименту 1х107 цільових клітин АЗ75 на лунку інкубували протягом ночі з активуючим ТКР антигеном (Рготеда) в 9б6-лункових планшетах для аналізу з плоским дном у
СоО»-інкубаторі за 37 "С. Потім середовище з планшетів видаляли і додавали серійні розведення (кінцева концентрація для аналізу від 0,01 нМ до 857 нМ) анти-І АсСЗ/анти-РОЇ1 антитіл, а також 5х107 ефекторних клітин дигКаї на лунку. Після Є години інкубації за 37 "С в СОг-інкубаторі аналітичні планшети доводили до кімнатної температури і в кожну лунку додавали 80 мкл субстрату ОМЕ-Сіо Ех (Рготеда). Після 10 хв інкубації люмінесценцію вимірювали в планшет- рідері ЗресігаМах ГГ (МоїІесшаг Оемісе5). Очікувалося, що одночасне зв'язування конструкту біспецифічного анти-РО1/анти-ГАСЗ антитіла з обома рецепторами призведе до локального цитозольного накопичення обох рецепторів, комплементації двох гетерологичних субодиниць ферменту і, нарешті, до утворення специфічного і функціонального ферменту, який гідролізує субстрат, тим самим генеруючи хемілюмінесцентний сигнал. На Фіг. 7Е зображені криві залежності доза-відповідь (люмінесценція в залежності від концентрації) біспецифічних анти-
РОТ/анти- ГАОЗ антитіл 141 Стоз5Мар (0927), 141 транс-Стоз5Маб з М-кінцевим аРО!1 їі С- кінцевим агдозЗ (0725), а також 2-41 транс Стоз5Мар з М-кінцевим аРО1 і М-плюс С-кінцевим агдоЗ (0750). Здатність 0927 і 0725 відновлювати активацію репортерних клітин шляхом блокування взаємодії РО! і | АСЗ з їх відповідними лігандами можна порівняти, тоді як для 0750 вона вище. Це також продемонстровано значеннями ЕКбхо, наведеними в Таблиці 26.
Таблиця 26:
Значення ЕкКоо, які виміряні в комбінованому репортерному аналізі РО-1 і Г АО-3 . . . Молекулярна
ІРОМАСІЗОЇБО 77777711 |транс2аї | 192888... | 06 г Фф(
Приклад 12
Функціональна характеристика біспецифічних анти-РО1/анти-І АСЗ антитіл 12.1. Зниження інтерналізації при зв'язуванні з поверхнею Т-клітин
Вимірювання інтерналізації рецепторів за допомогою проточної цитометрії
Інтерналізація рецепторів являє собою важливе поглинання для молекули, яка може розкладатися протягом декількох годин, в той час як цільові рецептори швидко повторно експресуються на поверхні клітини, готової пригнічувати ТКР-сигналінг. Тому ми оцінили інтерналізацію рецепторів при зв'язуванні наших конструктів за допомогою проточної цитометрії, де зразки, які забарвлені різними біспецифічними форматами за 4"с, використовували як еталон для порівняння із зразками, які інкубували за 37 "С протягом З годин після забарвлення за 4 "С.
На третю добу поліклонально активовані СО4 Т-клітини, попередньо культивовані з 1 мкг/мл зв'язаного в планшеті анти-СОЗ і 1 мкг/мл розчинних анти-СО28 антитіл, інкубували в присутності анти-ГАСЗ або біспецифічних анти-РО1/анти-І АОЗ антитіл "у двох повторностях)
протягом ЗО хвилин за 4 "С.Потім клітини відмивали, розділяли на дві групи, одну з яких інкубували протягом З додаткових годин за 37 "С, а іншу негайно забарвлювали міченим вторинним антитілом (еВіозсіепсе), після чого фіксували за допомогою ВО Сеї! Ріх. Після 3- годинної інкубації також другу групу клітин забарвлювали міченим вторинним антитілом після чого проводили фіксацію. Після забарвлення клітини двічі промивали ФСОБ/2 95 ФБС перед детекцією.
Клітини були отримані в І 5КЕопезза (ВО Віозсієпсев5), і рівні експресії виявлюваного антитіла на клітинної поверхні порівнювали між двома групами. Результати представлені на Фіг. 8В. Ми спостерігали, що через З години всі біспецифічні формати, а також моноспецифічне двовалентне антитіло а АС-3 були інтерналізовані, однак біспецифічні анти-РО1Т/анти-І АОЗ у форматі 1--1 (РОТ1/Л АОЗ 0799 и РО1 / Ї АСЗ 0927) були найменш інтерналізовані.
Візуалізація локалізації та інтерналізації антитіл за допомогою флуоресцентної конфокальної мікроскопії
Активовані СО4-позитивні клітини забарвлювали СМЕОВА (Іпуийгодеп) і поміщали на круглі покривні скельця, які оброблені ретронектином (ТаКага Віо). Клітинам давали для адгезії 4 години за 37 "С перед міченням флуоресцентними антитілами (1 мкг/мл: а-І АСЗ (1 256), 1-1
РОТЛАСЗ біспецифічне (0927), РО1-ЇАСЗ 1-2 біспецифічне (8310) і РО1--АСЗ 2-42 біспецифічне (8970), мічені АІеха 647), додавали безпосередньо в живильне середовище протягом різних періодів часу (15 хвилин, 1 година і З години). Холодний ФСБ (і опа) використовували для гасіння реакції і вимивання незв'язаних антитіл. Потім клітини фіксували за допомогою Суїоїїх (ВО) протягом 20 хвилин за 4 "С та двічі промивали ФСБ (І опа). Потім покривні скельця переносили і монтували на предметні скельця з допомогою БІпоготоицпі о (еВіозсіеєпсе) і витримували в темряві за 4 "С протягом ночі перед отриманням зображення. А)
Флуоресцентні зображення продемонстровані на Фіг. 9А. Білий сигнал являє собою локалізацію міченого антитіла. В) Інтенсивність флуоресцентного сигналу від мембранної КОЇ (області, яка представляє інтерес) цільових клітин була розділена на інтенсивність флуоресцентного сигналу від КОЇ цитоплазми тих самих клітин, що призвело до співвідношення, яке відображається на діаграмах. Для порівняння зразків використовували однофакторний дисперсійний аналіз з критерієм найменшої значущої різниці Фішера) (С - р «0,055. - р «0,01). Результати представлені на Фіг. 9В. Аналіз в часі демонструє більш високу мембранну локалізацію біспецифічних антитіл і антитіл до ГАСЗ у порівнянні з внутрішньоклітинною кластеризацією антитіл до ТІМЗ (використовується в якості контролю). Ми спостерігали, що через З години всі біспецифічні формати, а також моноспецифічне двовалентне антитіло аг до-3 були інтерналізовані, за винятком тільки біспецифічного 141 РО1/ АСЗ (0927) (Фіг. 9А).
Флуоресцентну конфокальну мікроскопію виконували на інвертованому ЗМ 700 7еї55 з олійно-іммерсійним об'єктивом при бО-кратному збільшенні. Зображення збирали з використанням програмного забезпечення 7еп (7еєї55), підключеного до мікроскопа. Аналіз зображень проводили за допомогою програмного забезпечення Ітагіз (Віріапе; Охіога
Іпвігитепі), а статистичний аналіз виконували за допомогою програмного забезпечення
СтарнРаай Ргізт (Старпрад боїїмаге). 12.2. Зв'язування з типовими Т-клітинами в порівнянні з Трег
Бажана властивість цільових РО1-І АОЗ біспециічних антитіл полягає в здатності переважно зв'язуватися з типовими Т-клітинами, а не з Трег, оскільки ГАСЗ на Трег, мабуть, негативно регулює їх супресивну функцію. Тому націлювання ГАСЗ на Трег з блокуючими антитілами може бути негативним, збільшуючи їх переважну функцію і, у кінцевому підсумку, маскуючи позитивний блокуючий ефект щодо інших Т-клітин. Тому ми оцінили конкурентне зв'язування різних форматів біспецифічних анти-РО1/анти-іАСЗ з активованими типовими та регуляторними Т-клітинами, що культивуються разом.
Регуляторні Т-клітини («Трег) і типові Т-клітини (Ттип) були відсортовані від здорових донорських МКПК (МіКепуї), мічених 5 ММ мембранними барвниками СейПтгтгасеміоЇеї або СЕБЕ, відповідно, і культивували разом в співвідношенні 1:11 протягом З діб з 1 мкг/мл зв'язаних на планшеті анти-СОЗ і 1 мкг/л розчинних анти-СО28 антитіл. На 3-ю добу клітини інкубували протягом 30 хв. за 4"С або з міченими безпосередньо анти-?РО1, анти-ЇАСЗ або біспецифічними антитілами, фіксували за допомогою ВО Сеїї! Ріх, і сортували в І 5КЕогпезза (ВО
Віозсіепсев5).
У той час як моноспецифічне вихідне анти-Іі АСЗ антитіло однаково добре зв'язується з Трег і типовими Т-клітинами (Фіг. 10А), аналог анти-?РО1 зв'язується переважно з типовими Т- клітинами через більш високі рівні експресії РОЇ на ефекторних Т-клітинах, ніж на Трег (Фіг. 108). Цікаво, що також формат 1-4-1 біспецифічного антитіла РО1/Л ДОЗ (0927) зберігав здатність 60 переважно зв'язуватися з типовими Т-клітинами, ніж з Трег (Фіг. 10С). Це найкраще зв'язування з типовими Т-клітинами також можна візуалізувати, демонструючи різницю (дельта) сигналу на типових Т-клітинах у порівнянні з сигналом на Трег (Фіг. 100). Формати 21 і 2-2 не виявляють селективності, яка обумовлена авідністю, для ефекторних Т-клітин і можуть бути порівняні за їх зв'язуванням з моноспецифічним анти-І| АОЗ антитілом. 12.3 Вплив блокування РО-1 і ГАС-3 на Трег пригнічення вивільнення гранзиму В і ІФН-у
Ср4 Т-клітинами людини, спільно культивованими з опроміненими алогенними МКПК
Далі було перевірено, чи будуть відмінності у властивостях зв'язування форматів біспецифічних антитіл забезпечувати якусь функціональну перевагу для Ттип в порівнянні з
Трег. У функціональних дослідженнях, що включають аналізи пригнічення регуляторними Т- клітинами (Трег), МКПК від одного і того ж донора були розділені на дві проби: одна була збагачена СО4 Т-клітинами, а інша - Трег, визначеними як СО4-СбО25гип 01270 Т-клітини, за допомогою набору мікрогранул (Мікепуї Віоїес). Після того як дві популяції були очищені, СО4 Т- клітини були помічені 5 мкМ карбокси-флуоресцеїн-сукцинімідиловим складним естером (СЕЗЕ), в той час як Трег були помічені 5 мкМ барвником СеїІ-Тгтасе-Міоіеї (СТМ), щоб мати можливість розрізняти їх пізніше за допомогою проточної цитометрії.
С0р4 Т-клітини (107) ії Трег (105) потім спільно культивували в 9б-лунковому планшеті в співвідношенні 1:11 разом з опроміненими МКПК (107) від неспорідненого донора в присутності або у відсутності наших анти-І АСЗ антитіл (цільове 0414 і резервне 0416) або конкурентних анти-Г-АСЗ антитіл (ВМ5-986016 і гуманізованого ВАРО5БО) у комбінації з нашим анти-РОї антитілом в концентрації 10 мкг/мл. В якості контролю для оцінки величини пригнічення ефекторних функцій СО4 Т-клітин за допомогою Трег, СО4 Т-клітини (105) також спільно культивували з опроміненими МКПК (105) у відсутності Трег.
Через п'ять діб ми зібрали супернатанти клітинних культур, які пізніше використовували для вимірювання рівнів ІФН-у за допомогою ІФА (КО 5узіетв), і залишали клітини за 37 "С на додаткові 5 годин у присутності Соїді Рійд (Брефельдін А) і СоїЇді Фор (Монензин). Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і барвником Ада (Іпийгодеп) для прижиттєвого забарвлення/забарвлення мертвих клітин після чого проводили фіксацію/пермеабілізацію в буфері Ріх/Репт Вийег (ВО Віозсіепсе). Ми провели внутрішньоклітинне забарвлення на гранзим В (ВО Віозсієпсе) та ІФН-Уу(еВіозсієпсе).
Результати представлені на Фіг. 11.
Наше біспецифічне антитіло РО1/Л АС-3 (0927) викликало вихід Ттип з жорсткого контролю регуляторними Т-клітинами, про що свідчить секреція значно більш високої кількості гранзиму
В, ніж Ттип, в присутності вихідного анти-РОЇ антитіла або одного пембролізумабу (Р«0,05) або у відсутності інгібіторів контрольної точки (Р«0,001). Конкурентне анти-Г АСЗ антитіло ВМ5- 986016 у комбінації з ніволумабом істотно не зберігало ефекторні функції Ттип від пригнічення
Трег. 12.4 Вплив біспецифічних антитіл до РО-1// АС-3 на цитотоксичне вивільнення гранзиму В людськими СО4 Т-клітинами, які спільно культивуються з лімфобластною В-клітинною лінією (АВН?7)
Ми оцінили здатність наших різних форматів біспецифічних антитіл індукувати секрецію гранзиму В СО04 Т-клітинами при спільному культивуванні з лінією пухлинних клітин АКН?77 в порівнянні з комбінацією вихідних анти-РОї1 і анти-Ї АСб-З і з анти-РО-1 антитілами, що використовуються в стандарті лікування.
Всього було протестовано 6 форматів, З з яких були отримані від комбінації анти-РО1 (0376) і анти-ГАСЗ (гуманізоване 1256, химерних 0414) і З додаткових формати від анти-РО1 (0376) і анти-І АС-3 (гуманізованих 1257, химерних 0416) антитіл.
Як видно на Фіг. 13, два біспецифічних формати, 1-1 (0927) і 2-2 (8970), отриманих з анти-
ГдАОЗ (гуманізованого 1256, анти-Ї АСЗ 0414 як ІдДС1 РОЇ АГА) і анти-РОЇ (0376), також як і комбінація вихідних антитіл, значно посилювала секрецію гранзиму В СО4 Т-клітинами у порівнянні з необробленими СО4 Т-клітинами (Р-0,0005, Р-0,01 і Р-0,0001, відповідно).
Відповідний формат 2-41 (8310) продемонстрував аналогічну тенденцію, однак він не досяг статистичної значущості (Р--0,07).
Що стосується біспецифічних антитіл, отриманих комбінуванням анти-І АС-3 (гуманізоване 1257, анти-Г АСЗ 0416 в якості (951 РОГАГА) з анти-РО1 (0376), то формат 1-1 (0799) і 242 (8984) значно збільшував частоти гранзим-В-позитивних СО4 Т-клітин у порівнянні з необробленими С04 клітинами (Р-0,0032 і Р-0,0064, відповідно).
Ні ніволумаб, ні пембролізумаб істотно не сприяли більш високій секреції гранзиму В СА Т- клітинами у порівнянні з клітинами, культивованими у відсутності інгібіторів контрольної точки. (Фіг. 13). 60
Таблиця 27
Вплив протестованих біспецифічних антитіл РО1-І АСЗ на цитотоксичне вивільнення гранзиму В 12.5 Вплив блокування РО-1 і ГАС-3 на секрецію гранзиму В і ІФН-у С04 Т-клітинами з МКПК пацієнтів з меланомою після вторинної імунної відповіді за допомогою імуногенних пептидних пулів меланома-антиген
Раніше було описано, що МКПК пацієнтів з меланомою містять вимірювану частоту неоантиген-специфічних Т-клітин. Отже, для підтвердження концептуальних цілей комбінація анти-Г АС-3 антитіла (0414) плюс анти-РО-1 (0376) в порівнянні з похідним біспециіїчного антитіла у форматі 1-1 (0927) або тільки анти-РО-1 була протестована на МКПК пацієнтів з меланомою, повторно стимульованих протягом ночі пептидними пулами асоційованих з меланомою антигенів. 105-106 МКПК від пацієнтів з меланомою, інкубували за кімнатної температури в присутності або у відсутності насичуючих концентрацій (10 мкг/мл) тільки анти-РО-1 (0376) у комбінації з анти-І АС-3 (0414, 10 мкг/мл) антитілом або біспецифічним антитілом формату 1-1 (0927, 20 мкг/мл). Потім Т-клітини повторно стимулювали протягом ночі пулом імуногенних пухлинних антигенів, таких як МАСЕАТ, МАСЕАЗ, МАСЕАЯ, Меїап-А/МАВТ-1, МУЕ5О-1, білок меланоцитів
Рітеї 17 др100, тирозиназа, тирозиназа-залежний білок 2 в присутності інгібіторів транспорту білка Соїді Рішд (Брефельдін А) і СоЇді Фор (Монензин).
Потім клітини промивали, забарвлювали на поверхні антитілом проти СО4 людини і прижиттєвим/мертвим фіксуючим барвником Адча (Іпийгодеп), попередньо З фіксацією/пермеабілізацією в буфері Ріх/Репт Вийег (ВО Віозсіепсе). Внутрішньоклітинне забарвлення проводили на гранзим В (ВО Віозсієпсе) і ІФН-у (еВіозсієпсе).
Обидві комбінації анти-І АС-3 і анти-РО-1 антитіл (Р «0,01 ії Р «0,001), ії біспецифічного антитіла (Р «0,01 и Р «0,0001) значно посилювали специфічні для пухлинного антигена ефекторні функції Т-клітин (тобто секрецію гранзиму В і ІФН-у), в той час як блокування РО-1 саме по собі не продемонструвало ніякого ефекту (Фіг. 12).
Приклад 13
Потужний протипухлинний ефект при комбінованій терапії біспецифічними антитілами
РО1/Л АСЗ і СОЗ ТОВ СЕАСАМ5 іп мімо
Молекули ТОВ були отримані відповідно до способів, описаних у М/О 2014/131712 А1 або
МО 2016/079076 А1. Отримання анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічного антитіла (СЕА СОЗ3 ТОВ або СЕА ТОВ), використаного в експериментах, описано в Прикладі З УМО 2014/131712 А1. СЕА
СО ТОВ являє собою антитіло "2-1 Їдс СгоззРар" і складається з двох різних важких ланцюгів і двох різних легких ланцюгів. Точкові мутації в домені СНЗ ("виступи-в-отвори") були введені для прискорення складання двох різних важких ланцюгів. Обмін доменів МН і МІ. в СОЗ-зв'язуючому
Еар здійснювали для того, щоб сприяти правильній збірці двох різних легких ланцюгів. 2-1 означає, що молекула має два антигензв'язуючі домени, специфічних для СЕА, і один антигензв'язуючий домен, специфічний для СОЗ3. СЕА СОЗ ТОВ містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮО МО: 146, 5ЕО ІЮ МО: 147, 5ЕО ІЮО МО: 148 та 5ЕО ІЮО МО: 149. СЕАСАМ5
СО3З ТОВ має той самий формат, але містить іншу зв'язуючу речовину СЕА і містить точкові мутації в доменах СН і Сі зв'язуючої речовини СОЮЗ, щоб підтримувати правильне спарювання легких ланцюгів. СЕАСАМ5 СО ТОВ містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 150, 5ЕО
ІО МО: 151, БЕО ІО МО: 152 та 5ЕО ІО МО: 153. а) Експериментальний матеріал і способи
Біспецифічне антитіло РОТЛ АСЗ 0927 тестували в концентрації 1,5 мг/кг або З мг/кг у комбінації з СОЗ ТОВ людини СЕАСАМ5 на моделі раку підшлункової залози людини ВХРОЗ.
Клітини ВХРОЗ прищеплювали підшкірно з клітинною лінією фібробластів миші (313) гуманізованим М5О мишам.
Приготування лінії клітин ВХРОЗ: Клітини ВХРОЗ (клітини раку підшлункової залози людини)
були спочатку отримані з ЕСАСС (Європейська колекція клітинних культур) і після розмноження депоновані у внутрішньому банку клітин СіІусап. Клітини ВХРОЗ культивували в КРМІ, що містить 10 95 ФБС (РАА І арогайогієз, Австрія), 1 96 сІшщатах. Клітини культивували при 37 "С у водонасиченому середовищі при 5 95 СО».
Підготовка повністю гуманізованих мишей: Самок мишей М5О у віці 4-5 тижнів на початку експерименту (лабораторія Джексона) розміщали в умовах відсутності специфічних патогенів з щоденними циклами 12 год. світла/12 год. темряви відповідно до встановлених рекомендацій (СУ-5оЇаз; ЕеїЇаза; Тіегеспб). Протокол експериментального дослідження був розглянутий і схвалений місцевим урядом (Р 2011/128). Після прибуття тварин утримували протягом одного тижня, для звикання до нового середовища та спостереження. Безперервний моніторинг здоров'я проводили на регулярній основі. Мишам МО вводили внутрішньочеревно 15 мг/кг бусульфана, а через добу внутрішньовенну ін'єкцію 1х105 людських гемопоетичних стовбурових клітин, виділених з пуповинної крові. На 14-16 тижні після ін'єкції стовбурових клітин у мишей відбирали кров сублінгвально і аналізували кров методом проточної цитометрії по відношенню до успішної гуманізації. Ефективно щеплених мишей рандомізували відповідно до частоти їх Т-клітин в різних групах лікування.
Ефективність експерименту: Повністю гуманізованих мишей НЗО-МЗО підшкірно заражали 1х105 клітин ВХРОЗ (клітинна лінія карциноми підшлункової залози людини, що експресує
СЕАСАМ5) на 0 добу в присутності матригелю в співвідношенні 1:11. Пухлини вимірювали 2-3 рази в тиждень протягом усього експерименту за допомогою штангенциркуля. На 15 добу мишей рандомізували за розміром пухлини із середнім розміром пухлини 250 мм3 і починали щотижневу заплановану терапію (носій (гістидиновий буфер), анти-РО1 (0376), ніволумаб, пембролізумаб або анти-РО1-ЇАСЗ3З 0927), за допомогою внутрішньочеревної ін'єкції максимально 400 мкл. Ріст пухлини вимірювали 2-3 рази в тиждень з використанням штангенциркуля, а об'єм пухлини розраховували наступним чином:
Ту: (МУ2/2) х І (МУ: ширина, І довжина)
Дослідження було припинено на 47 добу. р) Результати
Вимірювання об'ємів пухлин (мм3 4/- СПС) протягом 47 діб показані як середній об'єм у відповідній групі лікування мишей на Фіг. 14. Лікування СЕАСАМ5-ТСВ демонструє тільки прогресування захворювання, ідентичне необробленій групі носія. Навпаки, ніволумаб і пембролізумаб зменшували ріст пухлини, однак, не досягаючи контролю росту пухлини.
Несподівано було виявлено, що біспецифічне антитіло РОТ/Л АСЗ 0927 в концентрації З мг/кг повністю пригнічувало ріст пухлини у всіх тварин, які отримували лікування, демонструючи синергізм спільного блокування І АС-3 на додаток до РО-1.
На Фіг. 15А-15Е показані вимірювання об'ємів пухлин (мм3 -4/- СПС) протягом 47 діб для кожної окремої тварини, що демонструє однорідність протипухлинної відповіді в кожній групі.
Статистична значущість була розрахована з використанням критерію Даннета на підставі одноразової обробки СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ. Для перевірки значних відмінностей в групових середніх для множинних порівнянь автоматично проводиться стандартний дисперсійний аналіз (АМОМА) з використанням критерію Даннета. Критерій Даннета перевіряє, чи відрізняються середні значення від контрольної групи.
Отримані значення ТО і ТОК показані в Таблиці 28 (ТС означає інгібування росту пухлини,
ТбІ» 100 означає регресію пухлини, а Т0І-100 визначається як зупинка росту пухлини, ТОК означає співвідношення лікування до контролю, ТСК-1 означає відсутність ефекту і ТСК-0 визначається як повна регресія).
Таблиця 28
Інгібування росту пухлини (ТО) і співвідношення лікування до контролю (ТОК) на 46-у добу
СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ 2,5 мг/кгнанти-
СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ 2,5 мг/кг - анти- пембролізумаб 1,5 мг/кг
Порівняння з контролем далі показано у вигляді р-значень з використанням критерію
Даннета.
Лікування за допомогою СЕАСАМ5 СОЗ ТОВ не може контролювати ріст пухлини в разі раку підшлункової залози. Однак його комбінація з біспецифічним антитілом анти-РО1/Л АсЗ 0927 призводить до сильного впливу на контроль пухлини дозозалежним чином. Статистичний аналіз продемонстрував, що комбінація з анти-РОТЇЛАСЗ 0927, але не з анти-РО1 антитілами ніволумабом і пембролізумабом, в обох концентраціях призводила до статистично значущої відмінності в контролі росту пухлини в порівнянні з одноразовим введенням, що свідчить про перевагу біспецифічного анти-РО1/ АСЗ антитіла в порівнянні з пригніченням тільки РОТ, що призводить до зупинки росту пухлини.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«11905 Б. НожЕтапп-іа КосНе до «120» Біспецифічні антитіла, які специфічно зв'язуються з РО1 і Г доз «130» РЗ4215-М0 «1505 ЕРІ7165125.0 «1515 2017-04-85 «160» 169 «170» РабептІп версії 3.5 «2105 1 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-НІ важкого ланцюга, РО1-0103 «4005 1 с1у Рпе 5ег Ре 5ег 5ег Туг 1 5 «2105» 2 «2115 З «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-Н?2 важкого ланцюга, РО1-0103 «4005» 2 о1у о1У Аге 1 «2105 З «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220»
«223» НМК-НЗ важкого ланцюга, РО1-0103 «400» з
Те б1у Аге Маї Туг Ріе АТа Геи А5р 1 5 «2190» 4 «211» 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І1 легкого ланцюга, РО1-0103 «400» 4 5ег бі 5ег Маї А5р ТиПг 5ег А5зр Азп 5ег Ре 1 5 10 «2105» 5 «211» З «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І12 легкого ланцюга, РО1-0103 «400» 5
Агв 5ег 5ег 1 «210» 6 «211» 6 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-ІЗ легкого ланцюга, РО1-0103 «400» 6
Авзп Туг Азр Маї Рго Тер 1 5 «210» 7 «211» 126 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, РО1-0103 «4005 7 бі Маї ІІе Ге Маї бІ1и б5ег б1у ос1у с1у Ге Маї Гу5 Рго є1у о01у 1 5 10 15
5ег Ге Гуз Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе бег Рпе бег 5ег Туг 20 25 за
Тиг Мет 5ег Тер Маї Аге біп Тиг Рго бТ1и Гу5 Аг Ге Азр Тгр Маї 35 4о 45
А1їа Тпг І1е 5ег бі1у б1у б01у Аг А5р І1е Туг Туг Рго Азр 5ег Маї1 5а 55 ва
Гуз б01у Аг Рпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азп АТа Гу5 Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Геи бІи Меї б5ег бег Ге Меї б5ег 01 Азр ТиИг АТа Геи Туг Туг Су 85 90 95
Маї Гей Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе А1а Гей Азр 5ег Тер О1у б1п 196 195 116 о1у Тиг 5ег Ма1ї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «21905 8 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, РО1-0103
Зо «4005 8
Гуз ІІе Маї Гей ТиПг б1іп 5ег Рго А1а 5ег Геци Рго Маї 5ег Ге о01у 1 5 19 15 біп Агб Аїа Тиг ІТ1е 5ег Су5 Аг» АТа 5ег біи 5ег Ма1ї Азр ТНг 5ег 20 25 за
Авр Абзп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1п б1п Аг» Рго б01у б1п 5ег Рго 35 40 45
Гуз Ге Ге ІІе Туг Аг 5ег 5ег ТПг Ге б1и 5ег бі1у Маї Рго Аа 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег Аг ТПг Азр Ре Тиг Ге ТиИг І1е дор 65 78 75 2
Рго Маї бі А1ї1а Азр Ар УМаї Аїа Тиг Туг Туг Суб б1п бІп Ап Туг 85 90 95
А5зр Маї Рго Тер Тиг Рпе с1у с1у с1у Тиг Гуз Ге біи Ше Гуз 196 195 116 «2195 9 «2115» 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» гуманізований варіант - варіабельний домен важкого ланцюга МН РО1-
0183 01 (РО1 8376) «4005 9 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе бег Рпе бег 5ег Туг 20 25 за
Тиг Мет 5ег Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Ге оІТи Тер Маї 35 4о 45
А1а Тпг І1е 5ег б1у б1у с1у Аге Азр І1е Туг Туг Рго Ар 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аг Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Азп бег Гуз Ап Тиг Гей Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
Маї Гей Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе А1а Гей Азр 5ег Тер О1у б1п 1868 185 116 о1у Тиг Гей Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120
Зо «2195 16 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» гуманізований варіант -варіабельний домен легкого ланцюга МІ РО1-0193 01 (РО1 8376) «4005 18
Ар І1е Маї Меї Тпг біп 5ег Рго А5зр 5ег Гей АТа Маї 5ег Гей 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа Тиг ІТе Азп Су5 Гуз АТа б5ег бі 5ег Маї А5р Тиг 5ег 20 25 за
Авр Абзп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго б01у б1п 5ег Рго 35 ад 45
Гуз Ге Ге І1е Туг Аг 5ег 5ег ТИг Ге бі 5ег бІ1у Маї Рго Азр 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 5ег Ге біп АТїа бі А5р Маї Аїа Маї Туг Туг Су5 б1іп біп Азп Туг 85 90 95
Авзр Маї Рго Тер Тпг Рпе б1у б1п б1у Тиг Гух Маї бІи Це Гу
196 195 116 «2105 11 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» гуманізований варіант -варіабельний домен легкого ланцюга МІ РО1- 0123 802 «4005 11
Авзр Маї Маї Меї Тпг біп 5ег Рго Ге 5ег Гей Рго Маї Тиг Ге с01у 1 5 19 15 б1п Рго Аї1а 5ег І1е 5ег Суб Аге Аїа б5ег бі 5ег Маї А5р Тиг 5ег за 20 А5зр Абп о 5ег Рпе ІТе Ні5 Тер Туг біп б1іп Аге Рго б1у біп 5ег Рго 4о 45
Агв Ге Ге І1е Туг Аге 5ег 5ег ТПг Ге бі 5ег б1у Маї Рго др 5а 55 6о 25
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе ТиИг Ге Гуз Іе 5ег 65 768 75 80
Аге Маї бі Аїа бІи Азр Маї с1у Маї Туг Туг Су5 біп б1іп Азп Туг
Зо 85 90 95
Авзр Маї Рго Тер Тпг Рпе б1у б1п б1у Тиг Гух Маї бІи Це Гу 196 195 116 35 «219» 12 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» гуманізований варіант -варіабельний домен легкого ланцюга МІ РО1-0193 83 «4005» 12 бій ІІе Маї Ге ТНг біп 5ег Рго АТа ТПг Геи 5ег Гей 5ег Рго 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТа б5ег бі 5ег Маї А5р Тиг 5ег 20 25 за
Авр Абзп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго б01у б1п 5ег Рго 35 4о 45
Агв Ге Ге І1е Туг Аг 5ег 5ег ТПг Ге бІи 5ег б1у Іе Рго А1а 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80
5ег Ге бІ1и Рго бі Азр Рпе Аїа Маї Туг Туг Су5 б1п біп Азп Туг 85 90 95
Авзр Маї Рго Тер Тпг Рпе б1у б1п б1у Тиг Гух Маї бІи Це Гу 1868 185 116 «2105 13 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» гуманізований варіант -варіабельний домен легкого ланцюга МІ РО1-0193 04 «4005 13 бі ІІе Маї Ге Тиг б1п б5ег Рго Аїа Тиг Ге 5ег Геци 5ег Рго б1у 1 5 19 15 бій Агб АТїа Тиг оГеи б5ег Су5з Аг» АТа 5ег бі 5ег Маї Азр Тиг 5ег 20 25 за
Авр Абхп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1іп б1п Гух5 Рго б01у б1п бег Рго 35 ад 45
Агв Ге Ге І1е Туг Аг 5ег 5ег ТПг Ге бІи 5ег б1у Іе Рго А1а 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 5ег Ге бІ1и Рго бі Азр Рпе Аїа Маї Туг Туг Су5 б1п біп Азп Туг 85 90 95
А5зр Маї Рго Тер Тиг Рпе с1у біп б1у ТиИг Гу5х Маї б1и Ше Гуз 196 195 116 «2105» 14 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, аг до3(0414) «4005» 14
Авр Туг Тиг Меї Азбтп 1 5 «2105» 15 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, аг до3(0414) «4005» 15
Маї І1е б5ег Тгр Азр бі1у б1у б1у Тиг Туг Туг Тиг А5зр 5ег Маї Гу 1 5 19 15 а1у «210» 16 «2115 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, аг до3(0414) «4005» 16 о1у Геи Тиг Азр Те Тс Гей Туг б1у 5ег А5р Туг 1 5 19 «2105» 17 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-11 легкого ланцюга, аГдо3(0414) «4005» 17
Зо
Аге Аї1а бег б1іп б5ег І1е 5ег 5ег Туг Геи Авп 1 5 19 «210» 18 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, а/до3(0414) «4005» 18
А1а Аї1а б5ег ТНг Геи б1іп 5ег 1 5 «2105 19 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І3 легкого ланцюга, аГдо3(0414) «400» 19 б1п б1п Тис Туг 5ег 5ег Рго Геи ТНг 1 5
«2105» 20 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, агАло3(0414) «4005» 20 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар А5р Туг за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Ге соІи Тер Маї 35 ад 45 20 А1а Маї І1е 5ег Тер Азр б1у б1у б1у Тиг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80 25
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1їа Гуз б1у Гей ТПг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 1У 196 195 116 б1п с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2190» 21 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, аг АО3(0414) «4005» 21
А5зр ІТ1е біп Меє Тиг о біп 5ег Рго 5ег 5ег Гей 5ег Аї1а 5ег Маї 01У 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго Оо01у Гуз АТа Рго Гуз Гей Гей І1е 35 ад 45
Туг Аї1а Аїа 5ег ТиПг Ге б1іп б5ег б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п Тиг Туг 5ег 5ег Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у бІ1у б01у Тиг Гух Маї їм Це Гу 1868 185 «2105» 22 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, аг доз3(0403) «4005 22
Авзр Туг Тиг Меї Ні 1 5 «2105 23 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, аг доз3(0403) «4005 23
Ге Маї 5ег Тгр Азр б1у б1у с1у Тиг Туг Туг ТНг Азп 5ег Маї Гуз 1 5 19 15 а1у «2105» 24 «2115 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, аг доз3(0403) «4005» 24
А1їа І1е Тпг Азр ТПг бег Ге Туг б1у Туг Азр Туг 1 5 19 «2105» Щ 25 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І1 легкого ланцюга, а! доз3(908403) «4005 25
Аге Аї1а бег б1іп б5ег І1е 5ег 5ег Туг Геи Авп
1 5 19 «2105» 26 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, аГдо3(0403) «4005 26
А1а Аї1а 5ег 5ег Гей б1іп 5ег 1 5 «2105» 27 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І3 легкого ланцюга, аг доз3(90403) «4005 27 б1п б1п Тис Туг 5ег Тис Рго Геи ТНг 1 5 «2105» 28 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, аг доз3(0403) «4005 28 бі Маї б1п Ге Ге бІ1и б5ег б1у б1у б1у Ге Маї б1п Рго с1у с01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе ТиИг Ріпе Ар Азр Туг 20 25 за
Те Мет ніх Тер Маї Аге б1п АТа Рго с1у Гух5 с01у Геи с1и Тер Маї 35 4о 45 5ег Ге Маї 5ег Тгр Азр б1у б1у б01у ТиИг Туг Туг ТиПг Азп 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТиИг І1е 5ег Аге Ар Абхп 5ег Гуз Абп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Рпе Су 85 90 95
А1їа Гу5 Аїа І1е ТПг А5р Тиг о б5ег Ге Туг б1у Туг Азр Туг Тер 01у 196 195 116 б1п с1у ІІе Геу Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 29 «211» 1867 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, аг доз3(0403) «4005 29
Ар І1е бі1іп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
Ар Агев Маї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг за 20 Ге Азп Тер Туг біп б1іп Гу5 Рго б01у Азп АТа Рго Гуз Гей Ге Пе 4о 45
Туг Аїа А1їа 5ег 5ег Ге біп 5ег б01у Маї Рго 5ег Аге Рпе 5ег б01у 5а 55 6о 25 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе А1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п Тиг Туг 5ег Тиг Рго Геи
Зо 85 90 95
Тиг Ре с1у бІ1у б01у Тиг Гух Маї їм Це Гу 186 185 35 «2195 30 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, аГдо3(0411) «4005 з8
А5зр Туг Тиг Меє Авп 1 5 «210» 31 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, аГдо3(0411) «4005 31
Маї І1е б5ег Тгр Азр бі1у с1у Аїа ТиИг Туг Туг А1а Азр 5ег Маї Гу 1 5 19 15 а1у «2105 32 «2115 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, аГдо3(0411) «4005 32 б1у Ге Тпг Азр Азр Тиг Гей Туг 01у 5ег Азр Туг 1 5 19 «2105 Зз3 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-11 легкого ланцюга, аГАдо3(0411) «4005 з3
Аге Аї1а бег б1іп б5ег І1е Уаї 5ег Туг Геи Авп 1 5 19
Зо «2105» 34 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, аГАдо3(0411) «4005 34
А1а бег бег 5ег Ге біп 5ег 1 5 «2105» 35 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І3 легкого ланцюга, а! до3(90411) «4005 35 б1п б1п Тис Туг 5ег Тис Рго Геи ТНг 1 5 «2105» 36 «2115 121 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, агАо3(90411) «400» 36 бІи Маї Ні5х Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Маї Ар А5р Туг 20 25 за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Ге соІи Тер Маї 35 40 45 5ег Маї І1е 5ег Тгр Азр б1у б1у Аїа ТиИг Туг Туг А1їа Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б01у Аг Рпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азр Рпе Гу5 Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1тїа губ б1у Геи Тпг А5р Азр Тйг Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 01у 196 195 116 б1п с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 37 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга Мі, аг Ас3(0411) «400» 37
Ар І1е бі1іп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
А5зр Аге Маї Тиг Іе ТиИг Су5 Аге Аїа 5ег біп 5ег І1е Уа! 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго Оо01у Гуз АТа Рго Гуз Гей Гей І1е 35 м) 45
Туг Аї1а 5ег 5ег 5ег їеи біп б5ег б1у Ма! Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п Тиг Туг 5ег Тиг Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у бІ1у б01у Тиг Гух Маї їм Це Гу 186 185 «2105 38 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, а! до3(80417) «4005 38
Азр Туг Аїа Меї 5ег 1 5 «2105 39 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, аГдо3(0417) «4005 39 о1у ІІе Ар Абп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр бег Маї Гу 1 5 19 15
Зо с1у «2105» 4606 «2115 13 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, аГАдо3(0417) «400» 40
Тиг о Ніх 5ег бІ1у Ге І1е Маї Азп Азр А1їа Рпе Азр І1е 1 5 19 «210» 41 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-11 легкого ланцюга, аг до3(0417) «4005» 41
Аге Аї1а бег б1іп б5ег І1е 5ег 5ег Туг Геи Авп 1 5 19 «2105» 42
«2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, аГдо3(0417) «4005» 42
А1а Аї1а 5ег 5ег Гей б1іп 5ег 1 5 «210» 43 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І3 легкого ланцюга, аГдо3(0417) «400» 43 б1п б1п Тис Туг 5ег Тис Рго Геи ТНг 1 5 «2105» 44 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, агАо3(0417) «4005» 44 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аге Ге АТїа Су5 Аїа Аїа б5ег біу Ре ТНг Рпе бег Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї 35 ад 45 б5ег б1у ІІе А5зр Ахп 5ег б1у Туг Туг ТНг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТїа бІи Азр ТиИг АТа Маї Туг Геци Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Ме Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120
«2105» 45 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, агАо3(0417) «4005» 45
Ар І1е біп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег Ге б5ег Аїа 5ег Маї 01у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг за
Гей Азп Тгр Туг б1іп б1п ух Рго сО1у Гуз АТа Рго Гу Геи Геи І1е ад 45 20 Туг Аїа Аїа 5ег 5ег Ге біп 5ег б1у Маї Рго 5ег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у Тиг А5зр Ре ТиИг Ге Тпг І1е 5ег бег Ге бІ1п Рго 65 768 75 80 25 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п Тиг Туг 5ег Тиг Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у с1у б1у Тиг Гух5 Маї ої І1е Гу
Зо 1868 185 «2105» 46 «2115 5 «212» Білок 35 «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, аГдо3(0416) «400» 46
Азр Туг Аїа Меї 5ег 1 5 «210» 47 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, аГдо3(0416) «4005» 47 б1у ІІе А5р Азп 5ег б1у Туг Туг ТНг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї Гу 1 5 19 15 а1у
«2105» 48 «2115 13 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, аГдо3(0416) «4005 48
Тиг о Ніх 5ег бІ1у Ге І1е Маї Азп Азр А1їа Рпе Азр І1е 1 5 19 «2105» 49 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-11 легкого ланцюга, а/Гдо3(0416) «4005» 49
Аг Аї1а 5ег біп 5ег І1е 5ег 5ег Туг Геи Абп 1 5 19 «2105 50 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, аГАдо3(0416) «4005 50
Азр Аї1а бег 5ег Ге б1и 5ег 1 5 «2105» 51 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І3 легкого ланцюга, а/Гдо3(0416) «4005» 51 б1п б1п 5ег Туг 5ег Тиг Рго Геи ТЕиг 1 5 «2105 52 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220»
«223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, агАо3(0416) «4005 -чЖ552 біи Маї б1іп Геи Маї б1и 5ег б1у с1у б1у Ге Ма! б1п Рго с1у с01У 1 5 19 15 5ег Ге Аге Ге АТїа Су5х Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе ТиИг Рпе бег Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тгр Маї 35 40 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 5а 55 ве
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Азр Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Ге б1іп Мет Абзп 5ег Ге Аг» АТїа бій Азр ТПг Аїа Маї Туг Геи Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї А5зп Аз5р А1іа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Ме Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105 53
Зо «211» 1867 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга Мі, аг до3(0416) «4005 53
Ар І1е б1п Ге Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Ге Азп Тер Туг біп б1п Гу5 Рго с01у Гу5 АТа Рго Гуз Гей Ге Пе 35 ад 45
Туг А5зр Аїа 5ег 5ег їеи б1и бег б1у Ма1ї Рго бег Аге Рпе 5ег с1у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Аїа ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бі А5р Рпе А1іа ТиИг Туг Туг Су5з б1п б1п 5ег Туг бег ТиИг Рго Ге 85 90 95
Тиг Ре с1у бІ1у б01у Тиг Гух Маї їм Це Гу 1868 185
«2105» 54 «2115» 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, ВМ5-986016 «4005 «чхщх54 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 40 45 20 б1у бІи ІТ1е Ап Ні5 Аг» б1у 5ег ТНг Абзп 5ег Азп Рго 5ег Геи Гу 5а 55 6о 5ег Аге Маї Тиг Ге 5ег Ге Азр ТИг о 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80 25
Гуз Ге Аг бег Ма1ї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 о1у Тиг Гей Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105 -«.55 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ ВМ5-986016 «4005 Б.55 бій ІІе Маї Ге ТНг біп 5ег Рго АТа ТПг Геи 5ег Гей 5ег Рго 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТїа б5ег біп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей А1їа Тгр Туг б1п б1п ух Рго 01у б1п АТа Рго Аг Гей Геи І1е 35 ад 45
Туг А5зр Аїа б5ег Абзп Аге Аїа Тпг б1у І1е Рго А1іа Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге с1и Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а Маї Туг Туг Суб б1п б1п Аге 5ег Азп Тгр Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у бІп о1у Тиг Азп Ге б1и Пе Гу 1868 185 «2105 56 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НІ важкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «4005 56
А5р Туг Туг Тер Авбп 1 5 «2105 57 «2115 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-Н2 важкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «4005 57 бі ІТІе Абп Ні Азп бІ1у А5зп ТПг Абзп 5ег Азп Рго бег Геи Гуз 5ег 1 5 19 15 «2105 58 «2115» 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-НЗ важкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «4005 58 о1у Туг 5ег А5р Туг бІи Туг Азп Тер Рпе 1 5 19 «2105 59 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-І1 легкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «4005 59
Агв Аї1а бег б1п 5ег І1е 5ег 5ег Туг Геи А1а 1 5 19 «2105» 60
«2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-12 легкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «400» 60
А5зр АТїа 5ег А5зп Аге АІТа ТНг 1 5 «210» 61 «2115 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМВ-ІЗ легкого ланцюга, МОХ25Е7 (25Е7) «400» 61 б1п б1п Аг бег Азп Тер Рго Геи ТНг 1 5 «2105» 62 «2115» 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, МОХ25Е7 (25Е7) «4005» 62 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Гей ТИг Сузх Аїа Маї Туг б1у б1у 5ег Ріпе 5ег Азтр Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 40 45 б1у бІи ІТ1е Ап Ні5 Ап бІ1у Абп ТНг Абзп 5ег Азп Рго 5ег Геи Гуз 5а 55 6о 5ег Аге Маї Тиг Ге 5ег Ге Азр ТИг о 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї Тйг Аза АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 Аа 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 о1у Тиг Гей Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120
«2105» 63 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, МОХ25Е7 (25Е7) «400» 63 бі ІІе Маї Ге Тиг о б1п 5ег Рго Аїа Тиг Ге 5ег Ге 5ег Рго 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТїа б5ег біп 5ег І1е 5ег 5ег Туг за
Гей А1їа Тгр Туг б1п б1п ух Рго 01у б1п Аа Рго Аг Гей Геи І1е 20 Туг Азр Аїа 5ег Азп Аге А1ї1а ТПг б1у І1е Рго А1їа Аге Рпе 5ег б1у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег бег Ге с1и Рго 65 768 75 80 25 бі Азр Рпе АІ1а Маї Туг Туг Суб б1п б1п Аге 5ег Азп Тгр Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у бІп с01у Тиг Азп Ге бІ1и Пе Гу
Зо 1868 185 «2105» 64 «2115» 125 «212» Білок 35 «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, гуманізоване ВАРО5О (ІдО0525) 40 «400» 64 б1п Іе б1п Ге Маї б1п 5ег с01у Рго бІи Ге Гу5 Гуз Рго с1у си 1 5 19 15 45 Те Маї Гуз ІТе 5ег Су5х Гу5 АТа 5ег б1у Рпе ТНг Ге Тиг Азп Туг 20 25 за с1у Меї Азп Тгр Маї Аге б1іп Тиг Рго б1у Гуз о1у Ге Гуз Тер Меї 35 ад 45 о1у Тер ІІе Аб5п Тиг Азр Тйг б1у бІи Рго Те Тугс АТа А5р Азр Рпе 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе А1а Ре 5ег Гей бі Тиг бег Аї1а 5ег Тиг АТа 5ег 65 768 75 80
Гей б1іп І1е Ап А5п Ге Гуз Азп АТїа А5зр Тиг Аїа Тиг Туг Рпе Су 85 90 95
А1а Агв Абп Рго Рго Туг Туг Туг бі1у ТиПг Азп Ап Аї1а бі АТа Мей 196 195 116
Ар Туг Тгр б1у біп б1у Тег Тиг о Маї Тис Маї 5ег 5ег 115 120 125 «2105» 65 «211» 187 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, гуманізоване ВАРО5О (ІдО0525) «400» 65
Ар І1е бі1п Меї Тпг біп Тийг Тиг бег 5ег Гей 5ег А1а 5ег Гей 01у 1 5 19 15
А5зр Аге Маї Тиг Іе 5ег Су5 5ег 5ег 5ег біп Азр І1е 5ег А5п Туг 20 25 за
Геи Меж Тер Туг б1п б1п ух Рго Азр б01у ТиИг Маї Гуз Маї Ге І1е 35 ад 45
Туг Туг Тс о бег Тиг Ге Ніх Ге б1у Маї Рго 5ег Аге Рпе 5ег о1у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег бІ1у ТиПг Азр Туг б5ег Ге Тиг І1е 5ег Абтп Ге О1и Ге 65 768 75 80 бі Азр ІІе АТїа Тийг Туг Туг Су5х б1п б1п Туг Туг Азп Геи Рго Тгр 85 90 95
Те Ре б1у біп с1у Тиг Гу5х Маї б1и Пе Гу 1868 185 «2105» 66 «2115 122 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, МОХ26НІ10 (26Н19) «4005» 66 б1п Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у б1у б1у Маї Маї б1п Рго о1у Аге 1 5 19 15 5ег Ге Аг Гей 5ег Су5х АТа Аїа 5ег б1у Рпе Тиг Рпе 5ег 5ег Туг 20 25 за с1у Ме Ні5 Тгр Маї Аге б1п А1а Рго б1у ух с1у Ге сІТ1и Тер Маї 35 4о 45
А1їа Маї І1е Тер Туг Азр б01у 5ег А5п Гуз Туг Туг Аїа Ар 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аг Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Азп бег Гуз Ап Тиг Гей Туг 65 768 75 80
Гей біп Мет Абзп б5ег Гей Аге АТа бі Азр Тиг АТа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге бі Тгр Аїа Маї А1а 5ег Тгр Азр Туг б1у Меї Ар Ма1 Тер 196 195 116 б1у бІ1п б1у Тис Тиг Маї Тиг Уаї 5ег 5ег 115 120 «2105» 67 «211» 188 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, МОХ26НІ10 (26Н19) «4005» 67 бі ІІе Маї Ге Тиг о б1іп б5ег Рго б1у Тиг Ге 5ег Ге бег Рго б1у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТїа б5ег біп 5ег Маї 5ег 5ег 5ег 20 25 за
Туг Ге АТїа Тер Туг б1п б1п Гу5 Рго оТ1у б1п Аїа Рго Аге Гей Ге
Зо 35 4о 45
І1е Туг б1у А1їа 5ег б5ег Аг Аіїа Тпг б1у І1е Рго А5р Аге Ріпе 5ег 5а 55 6о б1у б5ег б1у б5ег б1у Тиг Азр Ре ТНг Ге Тиг І1е 5ег Аге Геи о1Ти 65 768 75 80
Рго бі Ар Рпе АТїа Маї Туг Туг Су5 біп б1п Туг б1у 5ег 5ег Рго 85 90 95
Рпе Тийг Рпе б1у Рго б1у ТиИг Гуз Маї Азр І1е Гу 1868 185 «210» 68 «211» 187 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» константна область легкого каппа-ланцюга людини «400» 68
Аге Тпг о Маї Аїа Аїа Рго 5ег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго 5ег Азр О0Їи 1 5 19 15 б1п Гей Гуз б5ег б1у ТиИг АТї1а 5ег Маї Маї Су5х Геи Ге Абзп Азп Рпе 20 25 за
Туг Рго Аге бІи АТа ух Маї б1п Тер Гуз Маї Азтр Азп Аа Геи б1п 35 40 45 5ег б01у Азп 5ег біп бі 5ег Маї Тиг бІ1и біп А5р 5ег Гу Азр 5ег 5а 55 6о
Тиг о Туг 5ег Ге 5ег о 5ег Тиг Ге Тиг Ге 5ег Гу5 АТа Азр Туг би 65 768 75 80
Гуз Ні5 Гуз Маї Туг АТїа Су5 біи Маї Тиг Ні5 біп с01у Гей 5ег 5ег 85 90 95
Рго Маї Тпг Гуз бег Рпе Аб5п Аге б1у 01и Су 1868 185 «2105» 69 «211» 185 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» константна область легкого лямбда-ланцюга людини «400» 69 б1п Рго Гуз АТїа АТїа Рго бег Ма1ї Тиг Гей Ре Рго Рго 5ег 5ег би 1 5 19 15 б1и Гей бІ1п А1а Азп Гуз АТїа ТПг Гей Маї Су5х Ге І1е 5ег Азр Рпе
Зо 20 25 за
Туг Рго б1у АТа Маї ТиИг Маї Аїа Тер Гуз АТа А5р 5ег 5ег Рго Маї 35 Гуз АТїа б1у Маї біи Те Тиге Те Рго 5ег Гуз біп 5ег Абп Азп Гуз 5а 55 6о
Туг Аїа А1їа 5ег 5ег Туг Ге б5ег Ге Тиг Рго бі біп Тер Гуз 5ег 65 768 75 80 40
Ні5 Агев 5ег Туг 5ег Суз біп Маї Тег Ні5х б1и б1у 5ег Тиг Ма1ї си 85 90 95
Гуз ТАг Маї АТа Рго Тийг бі Су 5ег 45 1868 185 «2105» 76 «2115» 329 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» константна область важкого ланцюга людини, що отримана з ІрС1 «4005 79
А1а бег Тиг Гух б1у Рго 5ег Маї Ре Рго Гей АТа Рго 5ег 5ег Гу 1 5 19 15
5ег ТИг о 5ег бІ1у б1у Тиг Аїа Аїа Геи с1у Су5 Ге Маї Гуз Азр Туг 20 25 за
Рпе Рго бі Рго Маї Тпг Маї 5ег Тер Ахзп 5ег б1у АїТа Геи Тиг 5ег 35 ад 45 с1у Маї Ні5 Тег Ре Рго Аїа Маї Гей б1п 5ег 5ег б1у Геи Туг 5ег 5а 55 6о
Ге 5ег 5ег Маї Маї ТиИг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Ге б1у Тиг бІ1п Тиг 65 768 75 80
Туг ІІе Суб Азп Маї Азп Ніх Гуз Рго 5ег Азп ТиПг Гуз Маї А5ор Гу 85 90 95
Гуз Маї бІи Рго Гу5 5ег Су5 Азр Гу ТИг Ні Тиг Су Рго Рго Су 196 195 116
Рго Аїа Рго бІ1и Ге Ге біу с1у Рго бег Ма1ї Рпе Ге РіНе Рго Рго 115 120 125
Гуз Рго Гуз Азр ТИг Ге Меї І1е 5ег Аг ТиИг Рго біи Маї Тиг Су 130 135 140 маї мМаї Маї Азр Маї 5ег Ні5 бі Аб5р Рго біи Маї Гуз Рпе Азп Тер 145 156 155 1606
Туг Ма1ї Азр бІу Маї біи Маї Ніб5 Азп АТїа Гу5 Типг Гуз Рго Аге би 165 176 175
Зо бі б1п Туг Азп 5ег ТИг о Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Гей Тиг Маї Ге 188 185 199
Ні5 біп Азр Тер Ге Азп бІ1у Гуз бІи Туг Гуз Сух Гуз Маї 5ег Авп 195 200 205
Гуз АТа Ге Рго А1а Рго І1е бІ1и ух Тйг Іе 5ег їТу5 АТа Гуз О01у 210 215 220 біп Рго Аге бІи Рго біп Маї Туг Тиг Гей Рго Рго 5ег Аге Азр О1и 225 230 235 240
Гей ТПг Гуз Азп біп Маї 5ег Гей ТИйг Су5х Гей Маї ух б1у Ре Туг 245 250 255
Рго бег Азр І1е А1їа Маї бі Тер бІ1и б5ег Азп б01у б1п Рго 01и Азбп 260 265 278
Авп о Туг Гуз Те Те Рго Рго Маї Ге Азр бег Азр б01у 5ег Ре РПе 275 280 285
Гей Туг 5ег Гуз Ге Тиг Маї Азр Гу5 бег Аге Тгр біп біп с1у Авп 2908 295 зев маї Рпе 5ег Суб бег Маї Мет Ні5 бій АТа Гей Ні5 А5зп Ні Туг Тиг 305 318 315 3206 б1п Гу5 б5ег Ге 5ег Гей 5ег Рго 1у 325
«2105 71 «2115» 329 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» константна область важкого ланцюга людини, що отримана з ІрС1 з мутаціями І234А, 1235А і рРЗ3296 «4005 71
А1а бег Тиг Гух б1у Рго 5ег Маї Ре Рго Гей АТа Рго 5ег 5ег Гу 1 5 19 15 5ег ТИг о 5ег бІ1у б1у Тиг Аїа Аїа Геи с1у Су5 Ге Маї Гуз Азр Туг за
Рпе Рго бі Рго Маї Тпг Маї 5ег Тер Ахзп 5ег б1у АїТа Геи ТНг 5ег 20 35 4о 45 с1у Маї Ні5 Тег Ре Рго Аїа Маї Гей б1п 5ег 5ег б1у Геи Туг 5ег 5а 55 6о 25 Ге 5ег 5ег Маї Маї ТиИг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Ге б01у Тиг б1п Тиг 65 768 75 80
Туг ІІе Суб Азп Маї Азп Ніх Гуз Рго 5ег Азп ТиПг Гуз Маї А5ор Гу 85 99 95
Зо
Гуз Маї бІи Рго Гу5 5ег Су5 Азр Гу ТИг Ні Тиг Су Рго Рго Су 196 195 116
Рго Аїа Рго бі Аїа Аїа бі1у с1у Рго бег Ма1ї Ре Ге РіНе Рго Рго 115 120 125
Гуз Рго Гуз Азр ТИг Ге Меї І1е 5ег Аге ТиИг Рго бі Маї Тиг Су 130 135 140 маї мМаї Маї Азр Маї 5ег Ні5 бі Аб5р Рго біи Маї Гуз Рпе Азп Тер 145 156 155 1606
Туг Маї Азр бІу Маї біи Маї Ніб5 Азп АТїа Гу5 Тиг Гуз Рго Аге О1Їи 165 176 175 бі б1п Туг Азп 5ег ТИг о Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Гей Тиг Маї Ге 180 185 1990
Ні5 біп Азр Тер Ге Ап бТ1у Гуз бІи Туг Гуз Суб Гуз Маї 5ег Азвп 195 200 205
Гуз АТ1а Ге б1у А1а Рго І1е бІ1и ух Тйг Іе 5ег їТу5 АТа Гуз О01у 210 215 220 біп Рго Аге бІи Рго біп Маї Туг ТНг Гей Рго Рго 5ег Аге Азр Си 225 230 235 240
Гей ТПг Гуз Азп біп Маї 5ег Гей ТИйг Су5х Гей Маї ух б1у Ре Туг 245 250 255
Рго бег Азр І1е Аїа Маї бі Тер бі бег Азп б1у біп Рго б1и Аб5п 260 265 278
А5зп о Туг Гуз Тс Те Рго Рго Маї Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе 275 280 285
Гей Туг 5ег Гуз Ге ТиИг Маї Ар Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІп О1у Азбп 298 295 зев
Маї Рпе бег Су5х бег Маї Мет Ніх бі А1ї1а Гей Ніб5 Абзп Ніх Туг ТНг 305 310 315 320 б1п Гу5 б5ег Ге 5ег Гей 5ег Рго 1у 325 «2105 72 «211» 326 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» константна область важкого ланцюга людини, що отримана з Івб4 «4005 72
А1а бег ТиИг Гух б1у Рго б5ег Маї Ре Рго Гей АТа Рго Су5 5бег Агеб 1 5 19 15 б5ег ТИг 5ег бі 5ег Тиг АТа АТа Гей сІ1у Су5 Ге Маї Гу5 Азр Туг 20 25 за
Рпе Рго бі Рго Маї Тпг Маї 5ег Тер Ахзп 5ег б1у АїТа Геи ТНг 5ег ад 45 35 с1у Маї Ні5 Тег Ре Рго Аїа Маї Гей б1п 5ег 5ег б1у Геи Туг 5ег 5а 55 6о
Гей б5ег 5ег Маї Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег бег Ге 01у Тиг Гуз ТЕиг 65 78 75 2
Туг Тег Суз Азп Маї Ар Ніх Гуз Рго 5ег Азп ТиПг Гуз Маї А5ор Гу 85 90 95
Агев Маї бі 5ег Гу5 Туг б1у Рго Рго Су5 Рго 5ег Су5 Рго Аа Рго 196 195 116 бі Рпе Гей б1у с1у Рго б5ег Ма1ї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу Рго Гу 115 120 125
Авр Тпг Ге Меї І1їе бег Аге ТИг Рго бІ1и Маї Тиг Сух Маї Маї Маї 130 135 140
Ар Маї бег б1п бі А5зр Рго бІи Маї б1п Рпе Азп Тгр Туг Маї Ар 145 156 155 1606 с1у Маї бІи Маї Ніб5 Азп АТа Гу5 Тиг Гу5 Рго Аге бі бІ1и б1п Рпе 165 176 175
Ап бег ТИг о Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1іп Ар 188 185 199
Тер Ге Ап б1у Гу5 бІи Туг Гу5 Сух Гуз Маї б5ег Азп Гуз О1у Ге 195 2080 205
Рго б5ег б5ег І1е бІи Гу5 Тпг І1е б5ег Гу5 АТа Гух бІ1у бІ1п Рго Аге 210 215 220 бі Рго біп Маї Туг Тиг Гей Рго Рго 5ег біп біи біи Мет ТНг Гу 225 230 235 240
Авп біп Маї 5ег Ге ТПг Су5х Гей Маї ух б1у Рпе Туг Рго 5ег Ар 245 250 255
І1е Аїа Маї бТ1и Тер бі бег Ап біу біп Рго бІи Абтп Азп Туг Гуз 260 265 278
Тиг Те Рго Рго Маї Ге Ар бег Азр б1у 5ег Рпе Ріпе Гей Туг 5ег 275 280 285
Агв Ге ТиИг Маї Ар Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІи б1у Азп Маї Ре 5ег 2908 295 зев
Суз 5ег Маї Мет Ні5 бі АТа Ге Ні5 Азп Ні5 Туг Тиг бі1п Гуз 5ег 305 318 315 3206
Гей 5ег Геи 5ег Геи О01у 325
Зо «2105 73 «211» 497 «212» Білок «2135 Ното 5аріеп5 «4005 73
Маї Рго Маї Маї Тер Аї1а б1п бІи с01у А1а Рго А1а б1іп Геи Рго Су 1 5 19 15 5ег Рго Тиг І1е Рго Ге б1п Азтр Геи 5ег їеци Ге Аге Аге А1а о1у 20 25 за
Ма1ї Те Тер бІ1п Ніб5 біп Рго Азр бег б1у Рго Рго А1а Аїа АТа Рго 35 40 45 с1у Ніх Рго Ге АТа Рго б1у Рго Ні5 Рго Аїа А1їа Рго 5ег 5ег Тгр 5а 55 6о б1у Рго Аг Рго Аге Аге Туг Тйг о Маї Ге 5ег Маї с1у Рго с1у с1У 65 768 75 80
Гей Аге 5ег б1у Агв Ге Рго Гей біп Рго Аге Маї б1іп Гей А5р ОЇи 85 90 95
Аге б1у Аге б1іп Аге б1у Ар Рпе 5ег Геи Тер Гей Аге Рго АІ1а Аге 196 195 116
Аге Аї1а Азр АТїа б1у бі Туг Аг» А1а А1а Маї Ні5 Ге Аге А5р Аге
115 120 125
А1а Гей бег Су5 Агв Гей Аге Гей Аге Ге б1у б1п Аї1а 5ег Меї Тиг 130 135 140
А1а бег Рго Рго б1у бег Ге Аге АІа 5ег Азр Тгр Маї Те Геи Азбп 145 156 155 1606
Су5 5ег Ре 5ег Аг Рго Азр Аге Рго Аї1а 5ег Маї1ї Ні5 Тгр Ріпе Аге 165 176 175
Ап Аге б1у б1п б1у Аге Маї Рго Маї Аге бІи 5ег Рго Ні Ні Ні 188 185 199
Ге АТа бі 5ег Ре Гей Ре Гей Рго біп Маї 5ег Рго Мет Ар 5ег 195 200 205 с1у Рго Тер б1у Су5 ІІе Ге Тег Туг Аге Азр б1у Рпе Азп Маї 5ег 210 215 220
ІТІе Меє Туг Ап Ге Тпг Маї Геи б1у Ге бІТ1и Рго Рго Тиг Рго Геи 225 230 235 240
Тиг Маї Туг Аїа б1у Аїа с1у б5ег Аге Маї о1у Геи Рго Су Агев Геи 245 250 255
Рго Аїа бі1у Маї б1у ТПг Аге 5ег Рпе Ге ТиПг АТа Гу5 Тер Тиг Рго 260 265 278
Рго біу б1у б1у Рго Азр Ге Гей Маї Тиг бІу Азр Азхп бІ1у А5зр РНе 275 280 285
Тиг Ге Аг Ге бі Ар Маї б5ег біп А1ї1а біп А1а с1у Тпг Туг ТНг 2908 295 зев
Су5 Ні І1е Ні5х Ге біп бІ1и б1п б1п Ге Азп Аїа Тиг Маї Тиг Ге 305 318 315 3206
А1їа І1е І1е Тиг Маї ТПг Рго Гуз бег Ре б1у 5ег Рго о1у 5ег Геи 325 3ззеа 335 со1у Гу5х Гей Ге Су5х бІи Маї Тег Рго Маї 5ег с1у біп б1и Аге Рпе 340 345 3506 маї Тер 5ег 5ег Ге А5зр ТНг Рго 5ег біп Аге 5ег Рпе 5ег 01у Рго 355 36а 365
Тер Ге 61 АТа б1п б1и АТа б1п Ге Ге 5ег біп Рго Тер бІп Су 379 375 380 б1п Геи Туг б1п с1у бІи Агв Ге Гей б1у Аї1а Аїа Маї Туг Рре Тпг 385 390 395 лев б1и Гей б5ег б5ег Рго б1у АТїа біп Аг 5ег 01у Аге АТа Рго с1у А1Та 4085 416 415
Гей Рго Аїа о1у Ні5 Ге їеи Гей Рпе Ге І1е Ге со1у Маї Геци 5ег 420 425 4зо
Гей Ге Ге Гей Маї Тиг б1у АТа Рпе с1у Рпе Ні Геи Тер Аге Аге 435 440 445 б1п Тер Ас Рго Аг Аге Рпе 5ег АТа Ге бі б1п б1у І1е Ні Рго а5а 455 460
Рго біп Аїа б1іп 5ег Гу5 І1е б1и бі Ге б1и б1п бі Рго о1и Рго 465 470 475 а8о бІи Рго біи Рго біи Рго біи Рго бі Рго б1и Рго б1и Рго б1и б1п 485 490 495
Геи «2105» 74 «211» 422 «212» Білок «2135 Ното 5аріеп5 «4005 74
Маї Рго Маї Маї Тер Аї1а б1п бІи с01у А1а Рго Аїа б1іп Геи Рго Су 1 5 19 15 5ег Рго Тиг І1е Рго Ге б1п Азтр Геи 5ег їеци Ге Аге Аге А1а о1у 20 25 за
Маї Те Тер бІ1п Ніб5 біп Рго Азр бег б01у Рго Рго А1а АІТа Аа Рго
Зо 35 4о 45 с1у Ніх Рго Ге АТа Рго б1у Рго Ні5 Рго Аїа А1їа Рго 5ег 5ег Тгр 5а 55 6о б1у Рго Аге Рго Аге Аге Туг Тйг Маї Гей б5ег Ма! б1у Рго с1у 1у 65 768 75 80
Гей Аге 5ег б1у Агв Ге Рго Гей біп Рго Аге Маї б1іп Гей А5р ОЇи 85 90 95
Аге б1у Агв б1іп Аге б1у Азр Рпе бег Геи Тер Гей Аге Рго АТа Аге 196 195 116
Аге Аї1а Азр АТїа б1у бі Туг Аг» А1а А1а Маї Ні5 Ге Аге А5р Аге 115 120 125
А1а Гей бег Су5 Агв Ге Аге Гей Аге Ге б1у б1п А1а 5ег Меє ТЕиг 130 135 140
А1а б5ег Рго Рго б1у 5ег Ге Аге АТа 5ег Азр Тгр Ма! Пе Геи Авп 145 156 155 1606
Суб 5ег Рпе бег Аге Рго Ар Аге Рго А1ї1а бег Маї Ніх Тер Ре Аге 165 176 175
Ап Аге б1у б1п б1у Аге Маї Рго Маї Аге бІи 5ег Рго Ні Ні Ні 180 185 1990
Гей Аїа бі бег Рпе Ге Ре Гей Рго б1п Маї 5ег Рго Меє дА5р 5ег
195 200 205 с1у Рго Тер б1у Су5 ІІе Ге Тег Туг Аге Азр б1у Рпе Азп Маї 5ег 210 215 220
ІТІе Меє Туг Ап Ге Тпг Маї Геи б1у Ге бІТ1и Рго Рго Тиг Рго Геи 225 230 235 240
Тиг Маї Туг Аїа б1у Аїа с1у б5ег Аге Маї о1у Геи Рго Су Агев Геи 245 250 255
Рго Аїа бі1у Маї б1у ТПг Аге 5ег Рпе Ге ТиПг АТа Гу5 Тер Тиг Рго 260 265 278
Рго біу б1у б1у Рго Азр Ге Гей Маї Тиг бІу Азр Азхп бІ1у А5зр РНе 275 280 285
Тиг Ге Аг Ге бі Ар Маї б5ег біп А1ї1а біп А1а с1у Тпг Туг ТНг 2908 295 зев
Су5 Ні І1е Ні5х Ге біп бІ1и б1п б1п Ге Азп Аїа Тиг Маї Тиг Ге 305 318 315 3206
А1їа І1е І1е Тиг Маї ТПг Рго Гуз бег Ре б1у 5ег Рго о1у 5ег Геи 325 3ззеа 335 со1у Гу5х Гей Ге Сух бІи Маї Тс Рго Маї 5ег с1у біп б1и Аге Рпе 340 345 3506 маї Тер 5ег 5ег Ге А5зр ТНг Рго 5ег біп Аге 5ег Рпе 5ег 01у Рго 355 36а 365
Тер Ге 61 АТа б1п 010 А1їа б1п Ге Ге бег б1іп Рго Тер б1п Су 379 375 380 б1п Геи Туг б1п с1у бІи Агв Ге Гей б1у Аї1а Аїа Маї Туг Рре Тпг 385 390 395 лев б1и Гей б5ег б5ег Рго б1у АТїа біп Аге б5ег б1у Аге АТа Рго с1у А1Та 4085 416 415
Гей Рго Аїа о1у Ні Ге 420 «2105 75 «2115 6 «212» Білок «2135 Ното 5аріеп5 «4005 75
Гуз І1е 01 оТи Ге оїи 1 5 «21905 76 «2115» 37 «2125» ДНК «213» Штучна послідовність
«223» праймер гЬнС.ир «4005 76 аавстївсса ссасввавас ТеРествсСЕС ТВВСТТС 37 «2195 77 «211» 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» праймер гЬнНСж.до «4005 77 ссатсєсевІва вевІвсссва в 21 «2195 78 «211» 26 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» праймер ВСРСК ЕНІС Іеадег. їм «4005 78 асевасаїва врветссссвс 20 «2195 79
Зо «211» 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» праймер ВСРСК пПисСКарра. гем «4005 79 ваєстсаасеї всЕСсСатсава тес 24 «219» 80 «2115 8 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» НМК-НІ важкого ланцюга, РО1-0098 «400» 80 с1у Туг 5ег Іе ТНг 5ег А5зр Туг 1 5 «219» 81 «2115» З «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-Н?2 важкого ланцюга, РО1-0098
«400» 81
Туг 5ег 01у 1 «2105» 82 «211» 9 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-НЗ важкого ланцюга, РО1-0098 «400» 82
Ні5х 01у 5ег АТа Рго Тгр Туг Рпе др 1 5 «210» 83 «211» 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І1 легкого ланцюга, РО1-0098 «400» 83 5ег біп Азп І1е Маї Ні5 б5ег Азр б1у Азп ТЕиг Туг 1 5 10 «210» 84 «211» З «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І12 легкого ланцюга, РО1-0098 «400» 84
Гуз Ма1ї 5ег 1 «210» 85 «211» 6 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-ІЗ легкого ланцюга, РО1-0098 «400» 85 о1у 5ег Ні5 Ре Рго Геи 1 5 «210» 86
«2115» 120 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, РО1-0098 «400» 86
А5зр Маї біп Гей б1п б1и 5ег б01у Рго с01у Гей Маї Гу5 Рго 5ег б1п 1 5 19 15 5ег Ге 5ег Гей ТИг Сух ТиИг о Маї Тис с1у Туг 5ег І1е Тиг 5ег дор 20 25 за
Туг Аїа Тер Азп Тгр І1е Аге біп Рпе Рго о1у Азр Гуз Гей си Тер 35 40 45
Геи б1у Туг Іе Тиг Туг 5ег бІ1у Рпе Тиг Ап Туг Азп Рго 5ег Геи 5а 55 ве
Гуз б5ег Агв І1е 5ег І1е 5ег Аг А5р ТИг о бег Гуз Азп бІп Ре РПе 65 768 75 80
Ге бІ1п Ге Азп 5ег Маї АТа Тиг бій Азр Тиг АТа Тиг Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге Тгр Ніх б1у бег А1а Рго Тгр Туг Рпе Азр Туг Тер О1у Аге 196 195 116
Зо о1у Тиг Тиг Ге Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 87 «2115 112 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, РО1-0098 «400» 87
Ар Маї Геи Меї Тпг біп Тийг Рго Ге 5ег їеи Рго Маї 5ег Гей 01у 1 5 19 15
Ар біп А1а 5ег І1їе бег Суб Агре бег 5ег біп Азп І1е Маї Ні 5ег 20 25 за
А5зр б1у А5зп Тиг Туг Ге бі Тер Туг Геи біп Гу5 Рго с1у б1іп 5ег 35 ад 45
Рго Ахп Ге Ге І1е Туг Гу5 Ма! б5ег Аге Аге РПе бег ОсТ1у Маї1! Рго 5а 55 6о
Авр Аге Рпе 5ег б1у бег б1у бег б1у ТиПг Азр Ре ТиИг Геи Гу І1е 65 768 75 80 5ег Аге Ма! бІи Аїа бі Азр Ге б1у Ма1! Туг Туг Сух5 Рпе бІп с1у
85 90 95 5ег Ні5 Ре Рго Ге ТПг Ріпе б1у Аїа сТ1у ТиИг Гух Ге си Гей Гу 166 105 116 «210» 88 «211» 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-НІ важкого ланцюга, РО1-0069 «400» 88 о1у Туг Тиг Ре Тиг Азтр Туг 1 5 «210» 89 «211» З «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-Н?2 важкого ланцюга, РО1-0069 «400» 89
Туг 5ег 01у 1 «210» 99 «211» 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-НЗ важкого ланцюга, РО1-0069 «400» 90 о1у ІШе Тиг Тиг с1у Рпе А1Та 1 5 «210» 91 «211» 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І1 легкого ланцюга, РО1-0069 «400» 91 б5ег Гуз б1у Маї 5ег ТНг б5ег 5ег Туг 5ег РНе 1 5 10 «2105» 92 «211» З
«212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-І12 легкого ланцюга, РО1-0069 «4005» 92
Туг А1а 5ег 1 «219» 93 «2115 66 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» НМК-ІЗ легкого ланцюга, РО1-0069 «400» 93 5ег Аг бІи Рпе Рго Тгр 1 5 «219» 94 «211» 118 «212» Білок «213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» варіабельний домен важкого ланцюга МН, РО1-0069 «400» 94 біп Маї біп Ге біп б1п 5ег бІ1у Рго б1и Ге Маї Аг» Рго с1у Маї 1 5 18 15 5ег Маї Гуз І1е 5ег Су5х Гу5х б1у 5ег б1у Туг Тиг Рпе Тпг Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє Ні5 Тер Маї Гуз б1п 5ег Ні5 А1а Аге Тиг Геи би Тер І1е 35 40 45 со1у Маї ІІе 5ег ТиИг Туг б5ег б1у Азр Тийг Азп Туг Азп біп Гу Рпе 5а 55 во
Гуз Азр Гуз АТа Тиг Мет ТиИг Маї Азр Гуз бег 5ег 5ег ТиИг АІТа Туг 65 78 75 80
Ге 61 Ге АТїа Аге Мет Тиг о 5ег бій Азр 5ег Аїа І1е Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аг Геи с1у І1е ТиИг Тиг б1у Ре А1а Туг Тер б01у б1п о1у ТЕиг 1868 185 116
Геи Маї Тиг Маї 5ег А1а 115 «2195 95
«2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» варіабельний домен легкого ланцюга МІ, РО1-0069 «4005» 95
А5зр ІТе Маї Гей Тиг біп 5ег Рго Аїа 5ег Гей АТа Ма! 5ег Ге 01Уу 1 5 19 15 б1п Аге АТа Тийг І1е б5ег Су5 Аге АТа б5ег Гуз б1у Маї 5ег Тиг 5ег 20 25 за 5ег Туг 5ег Рпе Меї Ніх Тер Туг біп б1п Гу5 Рго Аге біп Рго Рго 35 40 45
Гуз Ге Ге ІІе Гуз Туг Аї1а 5ег Туг Ге бІи 5ег 01у Маї Рго А1а 5а 55 ве
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег бІ1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Азп І1е Ні 65 768 75 80
Рго Маї бі біи бІи Азр Аїа Аїа ТиИг Туг Туг Су5 Ні Ні 5ег Аг 85 90 95 бі Рпе Рго Тгр Тиг Рпе о1у с1у о1у Тиг Гуз Ге оТи І1е Гу 196 195 116
Зо «2105» 96 «211» 443 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 1-41 РО1/Г! доз 0799 «400» 96
Ар І1е Маї Меї Тпг біп 5ег Рго А5зр 5ег Гей АТа Маї 5ег Гей 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа Тиг ІТе Азп Су5 Гуз АТа 5ег бі 5ег Маї А5р Тиг 5ег 20 25 за
Авр Абзп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго б01у б1п 5ег Рго 35 40 45
Гуз Ге Ге І1е Туг Аг 5ег 5ег ТиИг Ге бІи 5ег с1у Маї Рго Ар 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 5ег Ге біп АТа бі Ар Маї Аїа Маї Туг Туг Су5 біп бІ1п Азп Туг 85 90 95
Авр Маї Рго Тер Тпг Рпе б1у б1п б1у ТиИг Гу5х Маї б1и Ше Гуз 5ег
196 195 116 5ег АТа 5ег ТиИг Гуз б1у Рго б5ег Маї Рре Рго Ге Аїа Рго 5ег 5ег 115 120 125
Гуз б5ег ТИг бЗег б1у б1у Тиг АТа А1ї1а Ге сІ1у Су5 Ге Маї Гуз др 130 135 140
Туг Ре Рго бІи Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азп 5ег б1у А1Та Геи ТНг 145 156 155 1606 5ег б1у Маї Ні5 Тег Ріпе Рго Аїа Маї Геи б1п бег 5ег О01у Геи Туг 165 176 175 б5ег Ге б5ег 5ег Ма! Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег 5ег їеи 01у ТНг б1п 188 185 199
Тиг о Тугс ІТе Суб Абзп Маї Азп Ні Гу5 Рго бег Абзп ТИг Гуз Ма1ї А5р 195 200 205
Гуз Гуз Маї бі Рго Гу5 5ег Суз Абзр Гу5 ТПг Ніх Тиг Суб Рго Рго 210 215 220
Су5 Рго Аїа Рго бі Аїа А1їа біу с1у Рго бег Маї Рпе Ге Ре Рго 225 230 235 240
Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Ге Меї І1е бег Аге ТНг Рго бІ1и Ма1! Тпг 245 250 255
Сузх маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 бій Азр Рго біи Маї Гу5 Ре Ап 260 265 278
Тер Туг Маї Азр б1у Маї бІ1и Маї Ні5 Ап Аїа Гу5 ТНг Гу Рго Аге 275 280 285 бі бІ1и б1п Тугс Азп бег Тйг Туг Агсв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї 2908 295 зев
Гей Ні5 біп Азр Тгр Ге Азп бІ1у Гу5 бТ1и Туг Гуз Сух Гуз Ма1ї 5ег 305 310 315 3206
Ап Гу5 АТа Геи б1у Аї1а Рго І1е 01 ух Тиг І1е 5ег Гуз Аа Гу 325 330 335 б1у бІ1п Рго Аге бі Рго біп Маї Туг Тиг Ге Рго Рго Су5 Аге Азр 340 345 3506 б1и Гей Тиг Гуз Азп біп Маї 5ег Гей Тер Су5х Геи Маї Гуз с1у Рпе 355 36а 365
Туг Рго 5ег Азр І1е Аіа Маї бій Тер б1и б5ег Ахп б01у бІп Рго си 379 375 380
Ап Абп о Туг Гу5 Те Те Рго Рго Маї Ге Азр б5ег Азр б1у бег РПе 385 390 395 лев
Рпе Ге Туг 5ег Гуз Ге Тиг Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр бІ1п б1п о1у 4085 416 415
Авп Маї Рпе 5ег Су5 бег Маї Меї Ні5 бі АТа Гей Ні Азп Ні Туг 420 425 4зо
Тиг біп Гуз 5ег Ге 5ег Геи бег Рго о1у Гу 435 440 «2105» 97 «211» 452 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г! доз 0799 «400» 97 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 б5ег Ге Агб Ге Аїа Су5 АТа Аїа 5ег б1у Рпе ТНг Ре 5ег Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї 35 4о 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТїа бІи Азр ТиИг АТа Маї Туг Геци Су 85 90 95
Те оГу5 Те Ні 5ег б1у Ге ІІе Маї Ап Азр Аїа Ре Азхр Пе Тер 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Меї Маї ТиИг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег ТиПг Гуз о1у Рго 115 120 125 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 130 135 140
А1їа Аї1а Ге с1у Су5 Ге Маї бІи Азр Туг Рпе Рго бІ1и Рго Маї Тиг 145 156 155 1606
Маї бег Тгр Азп бег б1у А1а Гей ТПг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Ре Рго 165 176 175
А1Т1а Маї Ге б1п б5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Гей 5ег 5ег Маї Маї Тиг 188 185 199
Маї Рго бег 5ег бег їеу б1у Тиг біп Тиг Туг І1е Суб Азп Маї Азвп 195 200 205
Ні5х Гу Рго бег Абзп ТИг о Гух Маї Азр бІи Гу5 Маї бІи Рго Гу 5ег 210 215 220
Су5з Азр Гуз Тиг Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго АТїа Рго би Аа А1а
225 230 235 240 с1у б1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТЕиг Геи 245 250 255
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 260 265 278
Ні5 бі Азр Рго бі Маї ух Ре Азп Тгр Туг Маї Азр о1у Маї о1їи 275 280 285
Маї Ні5 Азхп АТа Гу5 ТПг Гу Рго Аге бІи бІи б1п Туг Азп бег ТАг 2908 295 зев
Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Ге Ні5 б1п А5зр Тер Геи Абп 305 318 315 3206 со1у Гу5 бІи Туг Гуз Су5 Гу5 Маї б5ег Ахп Гуз Аїа Ге соТ1у АТа Рго 325 330 335
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п 340 345 3506
Маї Су5 Тиг Гей Рго Рго 5ег Аге Азр бІи Гей Тиг Гуз Азп біп Маї 355 зва 365 5ег Ге 5ег Су5х АТїа Маї ух б1у Ре Туг Рго бег Ар І1Іе А1а Уаї 379 375 380 біи Тер бій б5ег Азп бІ1у біп Рго бІ1и Абп Азп Туг Гу Те Тс Ресо 385 390 395 лев
Рго Маї Ге Азр б5ег Азр біу 5ег Рпе Рпе Геи Маї бег Гуз Гец Тпг 4085 416 415
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІп б1у А5п Маї Рпе 5ег Су5 бег Маї 420 425 4зо
Мет ніх бІ1и АТїа Ге Ніб5 Азп Ні5х Туг Тиг б1іп Гу5 бег Геи 5ег Геи 435 440 445 5ег Рго О1у Гу а5а «2195 98 «2115» 227 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 1 з 1-41 РО1/Г! доз 0799 «4005 98 біи Маї біп Гей Гей бІ1и 5ег б1у б1у с1у Ге Маї б1п Рго с1у с1Уу 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе бег Рпе бег 5ег Туг 20 25 за
Тиг Мет 5ег Тер Маї Аге бі1п АІТа Рго б1у ух с1у Ге бІи Тгр Маї 35 ад 45
А1а Тпг І1е 5ег б1у б1у с1у Аге Азр І1е Туг Туг Рго Ар 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТиИг І1е 5ег Аге Ар Ахп 5ег Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
Маї Гей Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе А1а Гей Азр 5ег Тер О1у б1п 1868 185 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег Аїа 5ег Маї А1їа Аїа Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе ІТе Рпе Рго Рго 5ег Азр біи б1п Гей ух 5ег б1у ТНг Аа 5ег 130 135 140
Маї Маї Суз Гей Ге Абзп Абзп Рпе Туг Рго Аге бІ1и АТа Гу5 Маї б1п 145 156 155 1606
Тер Гуз Маї Азр Азп А1їа Ге б1іп 5ег б1у Азп 5ег біп бІи бег Маї 165 176 175
Тиг бі б1іп Ар 5ег Гуз Азр б5ег ТИг Туг б5ег Ге 5ег 5ег Тиг Геи
Зо 180 185 199
Тиг Ге 5ег Гуз АТа Ар Туг бІи Гу Ніх Гуз Ма! Туг АТа Су5 О1Їи 195 200 205 маї Тиг Ні5 б1іп б1у Гей 5ег 5ег Рго Маї Тиг Гу5 5ег Рпе Азп Аг 210 215 220 о1у сІи Су 225 «2105» 99 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г! доз 0799 «4005 99
Ар І1е б1п Ге Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго Оо01у Гуз АТа Рго Гуз Гей Гей І1е 35 4о 45
Туг А5зр Аїа 5ег 5ег їеи бі бег б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Аїа ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п б5ег Туг 5ег Тиг Рго Геи 85 90 95
Те Ре бІ1у б1у б1у Тиг Гу5х Маї 610 Іе Гу5 Аге ТиИг Маї А1а А1Та 196 195 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго 5ег А5р Аге Гуз Ге Гуз 5ег 01у 115 120 125
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге О1и А1а 130 135 140
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 145 156 155 1606 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Гей 5ег Гу5 АТа Азр Туг бІи Гу5 Ні Гу5 Маї Туг 188 185 199
А1їа Су5 бі Ма1ї! Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег бег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 195 200 205
Зо
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 210 «2105» 188 «211» 451 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г! доз 0927 «4005» 180 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар А5р Туг 20 25 за
Те Мет Ап Тгр Маї Аг б1п АТа Рго сІ1у Гуз с1у Ге біи Тер Маї 35 ад 45
А1їа Маї І1е 5ег Тгр Азр б1у б1у б1у ТиИг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су
85 90 95
А1тїа Гуз б1у Гей Тпг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 1206 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 146
А1а Ге б1у Сух Ге Маї 61 Авбр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606 б5ег Тгр Азп 5ег б1у АТїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
Авр Гу5 Тйг Ніх Те Суб Рго Рго Суз Рго АТа Рго 01 АТа АТїа с1у 225 230 235 240 б1у Рго 5ег Маї Рпе Ге Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТИг Геми Мет 245 250 255
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї Ар Маї 5ег Ні5 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 298 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Ар Тгр Гей Азп о1у 305 318 315 3206
Гуз Ти Туг Гуз Суб Гуз Маї 5ег Азп Гуз АТа Ге с01у Аїа Рго Пе 325 330 335 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго б1іп Маї 340 345 3506
Суб Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Ар біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 355 36а 365
Гей бег Суб АТа Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 378 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абп Тугс губ Те Те Рго Рего 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гу5 Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авр губ бег Аге Тгр біп б1іп бІ1у Азп Маї Рпе 5ег Су5х бег Ма1 Мет 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1іп Гу5 бег Гей бег Геи 5ег 435 440 445
Рго О1у Гу а5а «210» 181 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г! доз 0927 «4005» 181
Ар І1е біп Мет Тиг біп 5ег Рго б5ег б5ег Ге 5ег Аї1а бег Ма1 с1у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1іп Гу5 Рго о1у Гу5 АІТа Рго їух5 Ге Ге Ше
Зо 35 4о 45
Туг Аї1а Аїа 5ег ТиПг Ге б1іп б5ег б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о бЗег б1у 5ег б1у Тпг Азр Рпе ТиИг Ге ТНг І1е 5ег 5ег Гей бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п Тиг Туг 5ег 5ег Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре б1у бІ1у б1у Тиг Гуз Маї б1и ІІе Гу5 Агев Тиг Маї Аї1а А1а 196 195 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго 5ег А5р Аге Гуз Ге Гуз 5ег 01у 115 120 125
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге С1и А1а 130 135 140
Гуз Маї бі1п Тер Гуз Маї Азр Азп АТїа Ге б1іп 5ег 01у А5п 5ег біп 145 156 155 1606 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг 188 185 199
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег
195 200 205
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 210 «210» 182 «211» 443 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 1-41 РО1/Г!АОЗ 0222 «4005» 182
Ар І1е Маї Геи Тпг біп б5ег Рго АІ1а 5ег Гей АТа Маї 5ег Гей 01у 1 5 19 15 б1п Аге АТа ТПг І1е 5ег Су5 Аг АТа б5ег Гуз б1у Маї 5ег Тиг 5ег 20 25 за 5ег Туг 5ег Рпе Меї Ніх Тер Туг біп б1п Гу5 Рго Аге біп Рго Рго 35 4о 45
Гуз Ге Ге ІІе Гу5 Туг АТа 5ег Туг Ге бІи 5ег с01у Маї Рго АТа 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег бІ1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Азп І1е Ні 65 768 75 80
Зо
Рго Маї бі бІ1и 61 Ар Аїа Аїа Тийг Туг Туг Су5 Ніб5 Ні 5ег Аге 85 90 95 бі Рпе Рго Тгр Тиг Рпе б1у с1у о1у ТиИг Гуз Геи бі Іе Гуз 5ег 196 195 116 5ег АТа 5ег ТиИг Гуз б1у Рго 5ег Маї Рре Рго Гец А1а Рго 5ег 5ег 115 120 125
Гуз 5ег ТНг 5ег б1у с1у ТНг Аїа Аїа Ге с1у Су5 Ге Маї Гуз А5р 130 135 140
Туг Ре Рго бІи Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азп б5ег б1у АТа Геи Тпг 145 156 155 1606 5ег б1у Маї Ні5 Тег Ріпе Рго Аїа Маї Геи б1п бег 5ег О01у Геи Туг 165 176 175 5ег Ге 5ег б5ег Маї Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег 5ег їеу 01у ТНг б1п 180 185 199
Тиг о Тугс ІТе Суб Абзп Маї Азп Ні Гу5 Рго бег Абзп ТИг Гуз Ма1ї А5р 195 200 205
Гуз Гуз Маї бІи Рго Гу5 бег Суб Ар Гуз Тиг Ні Тиг Суб Рго Рго 210 215 220
Су5 Рго Аїа Рго бі Аїа А1їа біу с1у Рго бег Маї Рпе Ге Ре Рго 225 230 235 240
Рго Гух Рго Гуз Азр ТИг оїеи Мет ІТ1е 5ег Аге ТИг Рго бІи Маї ТЕиг 245 250 255
Сузх маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 бій Азр Рго біи Маї Гу5 Ре Ап 260 265 278
Тер Туг Маї Азр б1у Маї бІ1и Маї Ні5 Ап Аїа Гу5 ТНг Гу Рго Аге 275 280 285 бі бІ1и б1п Тугс Азп бег Тйг Туг Агсв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї 2908 295 зев
Гей Ні5 біп Азр Тгр Ге Азп бІ1у Гу5 бТ1и Туг Гуз Сух Гуз Ма1ї 5ег 305 310 315 3206
Ап Гу5 АТа Геи б1у Аї1а Рго І1е 01 ух Тиг І1е 5ег Гуз Аа Гу 325 330 335 б1у бІ1п Рго Аге бі Рго біп Маї Туг Тиг Ге Рго Рго Су5 Аге Азр 340 345 3506 б1и Гей Тиг Гуз Азп біп Маї 5ег Гей Тер Су5х Геи Маї Гуз с1у Рпе 355 36а 365
Туг Рго 5ег Азр І1е Аіа Маї бій Тер б1и б5ег Ахп б01у бІп Рго си 379 375 380
Ап Абп о Туг Гу5 Те Те Рго Рго Маї Ге Азр б5ег Азр б1у бег РПе
Зо 385 390 395 лев
Рпе Ге Туг 5ег Гуз Ге Тиг Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр бІ1п б1п о1у 4085 416 415
А5зп Маї Ре 5ег Суб5 5ег Маї Мет Ні5 бі Аїа Ге Ні5 Азп Ні Туг 420 425 4зо
Тиг біп Гуз 5ег Ге 5ег Геи бег Рго о1у Гу 435 440 «2105» 183 «211» 450 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г!АОЗ 0222 «400» 183 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с01у Аїа с1у Геи Гей Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 4о 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап бІ1у Абзп ТИПг Абзп бег Ап Рго бег Геи Гу 5а 55 6о 5ег Аге Маї Тиг Ге 5ег Ге Азр ТИг о 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Азп Тгр Рпе Азр Рго Тгр с1у б1Іп 196 195 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТа б5ег ТиПг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТїа Рго бег бег Гуз бег ТПг 5ег б1у б1у Тиг АТа Аїа 130 135 140
Геи б1у Су5х Гей Маї 61 Азр Туг Рпе Рго бІи Рго Маї Тиг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175
Ге бІ1п 5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Гей 5ег 5ег Маї Маї Тиг Маї Рго 188 185 199 5ег 5ег 5ег Ге б1у ТПг бі1п Тиг Туг І1е Су5 Абзп Маї Автп Ні Гу 195 200 205
Зо
Рго бег Ахп ТИг о Гу5 Маї Азр бІіи Гу5 Маї бІ1и Рго Гуз 5ег Су А5р 210 215 220
Гуз Те Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго 610 Аїа А1їа с1у О01у 225 230 235 240
Рго бег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Геи Меї І1е 245 250 255 б5ег Аге ТНПг Рго біи Маї Тиг Су5х Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 О1и 260 265 278
Авр Рго бі Маї Гу5 Рпе Азп Тер Туг Ма1ї Азр б1у Маї бІи Маї Ні 275 280 285
Авп АТїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг Аге 2908 295 зев
Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Гей Ні5 б1п Азр Тер Ге Ахтп О1у Гу 305 310 315 3206 бі Туг Гуз Суз Гу5 Маї б5ег Азп Гух АТа Ге 01у АТа Рго Іе си 325 330 335
Гуз Тйг Іе 5ег Гу5 АТа Гу5х б1у біп Рго Аге бі Рго біп Маї Су 340 345 3506
ТигоГеи Рго Рго 5ег Аге Азр бі Ге ТиПг Гуз Абзп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365
5ег Суз Аїа Маї Гуз б1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е А1а Маї си Тер 379 375 380 бі б5ег Абп б1у біп Рго бій Ап Азп Туг Гу5 Тс Те Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Ре Ре Ге Маї б5ег Гуз Ге Тиг Маї Ар 4085 416 415
Гуз б5ег Аге Тгр біп б1п б1у Азп Ма1ї Ре б5ег Су5 5ег Маї Меє Ні 420 425 4зо б1 АТїа Гей Ні Ап Ні5х Туг ТиПг бІп Гу5 5ег Геи бег Геи 5ег Рго 435 440 445 о1у Гуз а50 «210» 164 «2115» 225 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 1 з 1-41 РО1/Г!АОЗ 0222 «4005» 184 біп Маї біп Геи біп б1п 5ег б1у Рго бІ1и Ге Маї Аге Рго с1у Маї 1 5 19 15 5ег Маї Гуз І1е 5ег Су5х Гу5х б1у 5ег б1у Туг Тиг Рпе Тпг Азр Туг 20 25 за
А1їа Меж Ні5 Тер Маї Гуз б1п бег Ні5 А1а Аге Тиг Ге б1и Тер І1е 35 ад 45 со1у Маї ІІе 5ег ТиИг Туг б5ег б1у Азр Тийг Азп Туг Азп біп Гу Рпе 5а 55 ве
Гуз Азр Гуз АТа ТИг Мет ТиИг Маї Азр Гуз 5ег бег бег ТиИг Аа Туг 65 768 75 80
Ге 61 Ге АТїа Аге Мет Тиг о 5ег бій Азр 5ег Аїа І1е Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аг Геи б1у Іе ТиИг Тиг б1у Рпе А1а Туг Тгр б1у біп с1у Тпг 196 195 116
Ге Маї Тиг Маї 5ег А1ї1а Аїа 5ег Маї Аїа А1ї1а Рго 5ег Уа1! Рне Пе 115 120 125
Рпе Рго Рго 5ег Азр біи біп Ге Гух б5ег б1у ТПг АТа б5ег Маї Маї 130 135 140
Су5х Ге Ге Азп Ап Ре Туг Рго Аге бІ1и АТа Гух5 Маї б1п Тер Гу 145 156 155 1606
Маї Азр Азхп А1їа Гей біп бег б1у Абп б5ег біп б1и б5ег Маї Тиг си 165 176 175 б1п Ар б5ег Гуз Азр б5ег ТиИг Туг 5ег Гей б5ег 5ег Тиг Геи ТЕиг Гей 180 185 199 5ег Гуз АТїа Азр Туг бІіи Гух Ні5 Гуз Ма! Туг Аїа Сух біи Маї ТНг 195 200 205
Ні5 біп б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег Ріре Азп Аг» б1у О1Ти 210 215 220
Су 225 «210» 185 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 2 з 1-1 РО1/Г!АОЗ 0222 «400» 165 бі ІІе Маї Ге Тиг б1п б5ег Рго Аїа Тиг Ге 5ег Геци 5ег Рго б1у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТїа б5ег біп 5ег І1е 5ег 5ег Туг
Зо 20 25 за
Гей А1їа Тгр Туг б1п б1п ух Рго 01у б1п АТа Рго Аг Гей Геи І1е ад 45 35 Туг Азр АТа 5ег Ахп Аге АТа ТиПг б1у І1е Рго Аїа Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге с1и Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а Маї Туг Туг Суб б1п б1п Аге 5ег Азп Тгр Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре б1у бІп б01у ТиПг Азп Ге б1и І1е Гу5 Агев ТиИг Маї Аї1а А1а 1868 185 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго 5ег А5р Аге Гуз Ге Гуз 5ег 01у 115 120 125
Тег АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Азп Азп Рпе Туг Рго Аге би АТа 130 135 140
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 145 156 155 1606 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг
188 185 199
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 195 200 205
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 210 «210» 186 «211» 444 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 1-1 РО1/Г! дОоЗ 0224 «400» 186
Ар Маї Геи Меї Тпг біп Тег Рго Ге 5ег Ге Рго Маї 5ег Геи о01у 1 5 19 15
Ар біп А1а 5ег І1їе бег Суб Агре бег 5ег біп Азп І1е Маї Ні 5ег 20 25 за
А5зр б1у А5зп Тиг Туг Ге бі Тер Туг Ге б1п Гу5 Рго с1у біп 5ег 4о 45
Рго Ахп Ге Ге І1е Туг Гу5 Ма! б5ег Аге Аге РПе бег ОсТ1у Маї1! Рго 5а 55 6о
Зо
Авзр Аге Рпе 5ег б1у бег б1у 5ег б1у ТиИг А5р Ре Тиг Гей Гу І1е 65 768 75 80 5ег Аге Ма! бІи Аїа бі Азр Ге б1у Ма1! Туг Туг Сух5 Рпе бІп с1у 35 85 90 95 5ег Ні5 Рпе Рго Ге Тпг Рпе с1у Аїа о1у Тиг Гуз Ге 01и Геи Гу 196 195 116 б5ег 5ег АТа 5ег ТПг Гуз б1у Рго 5ег Маї Ре Рго Ге АТа Рго 5ег 115 120 125 5ег Гуз 5ег Тиг 5ег б1у с1у Тиг Аїа А1їа Ге с1у Су5 Геци Маї Гу 130 135 140
Авр Туг Рпе Рго бі Рго Ма1ї Тиг Маї 5ег Тер Азп 5ег о1у Аа Ге 145 156 155 1606
Тиг о 5ег б1у Маї Ні5х Те Ре Рго А1їа Маї Ге б1п 5ег 5ег О1у Геи 165 176 175
Туг 5ег Ге 5ег 5ег Маї Ма! Тпг Маї Рго бег бег 5ег їеу с1у ТНг 188 185 199 біп Те о Туг Те Су5 Ап Маї Ап Ні Гу Рго б5ег Азп ТИг Гуз Маї 195 200 205
Ар Гу5 Гуз Маї бі Рго Гу5 5ег Су5з Азр Гу5 Тиг Ні Тиг Су5 Рго 210 215 220
Рго Су5 Рго Аїа Рго бі Аїа А1їа бі1у б1у Рго 5ег Маї Рре Гей Рпе 225 230 235 240
Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Гей Меї І1е 5ег Аге Тиг Рго сІи Маї 245 250 255
Тиг о Сузх Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5х бі Азр Рго бі Маї Гу5 РНе 260 265 278
Авп Тер Туг Маї Азр б1у Маї бІи Маї Ні5 Абп АТа Гу5 Тиг Гуз Рго 275 280 285
Аге бі бі б1п Туг Абзп 5ег Тиг Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Гей ТЕиг 298 295 зев
Уаї Ге Ні5 бІ1п Ар Тгр Ге Ахп б1у ух бІи Туг Гу Су5 Гуз Маї 305 318 315 3206 б5ег Азп Гуз АТа Гей с1у АТа Рго І1е с1и Гу5 ТНг І1е 5ег Гуз АТа 325 330 335
Гуз б1у біп Рго Агев бі Рго біп Маї Туг Тиг Гей Рго Рго Су5 Аге 340 345 3506
Ар бій Ге ТПг о Гу5 Азп б1іп Маї бег Ге Тер Су5 Геи Маї Гуз 01у 355 36а 365
Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е Аїа Маї бі Тер б1и 5ег Ахп с0Т1у бІп Рго
Зо 378 375 380 б1и Абп Азп о Тугс Гуз ТВг Тс Рго Рго Маї Ге Азр бег Азр о1у 5ег 385 390 395 лев
Рпе Рпе Ге Туг б5ег Гуз Ге ТиИг Маї Азр Гу5 5ег Аге Тгр біп б1п 4085 416 415 о1у Азп Маї Рпе 5ег Суб бег Ма1ї Меї Ніб5 бі А1ї1а Гей Ні А5тп Ні 420 425 4зо
Туг Тиг біп Гуз 5ег Ге 5ег Ге 5ег Рго о1у Гу 435 440 «210» 187 «2115» 227 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 1 з 1-1 РО1/Г! дОЗ 0224 «4005» 187
Ар Маї б1п Геи біп б1и б5ег бІ1у Рго 01у Гей Маї Гу5 Рго бег біп 1 5 19 15 5ег Ге 5ег Гей ТИг Сух ТиИг о Маї Тис с1у Туг 5ег І1е Тиг 5ег дор 20 25 за
Туг Аїа Тер Азп Тгр І1е Аге біп Рпе Рго о1у Азр Гуз Гей си Тер 35 ад 45
Геи б1у Туг Іе Тиг Туг 5ег бІ1у Рпе Тиг Ап Туг Азп Рго 5ег Геи 5а 55 6о
Гуз б5ег Агв І1е 5ег І1е 5ег Аг А5р ТИг о бег Гуз Азп бІп Ре РПе 65 768 75 80
Ге бІ1п Ге Азп 5ег Маї АТа Тиг бій Азр Тиг АТа Тиг Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге Тгр Ніх б1у бег А1а Рго Тгр Туг Рпе Азр Туг Тер О1у Аге 196 195 116 с1у Тиг Тиг Ге Тиг Маї б5ег 5ег АТїа б5ег Маї А1їа Аїа Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе І1Те Рпе Рго Рго бег Азр бІ1и біп Ге Гуз 5ег б1у Тиг АТа 5ег 130 135 146
Маї Маї Суз Гей Ге Абзп Абзп Рпе Туг Рго Аге бІ1и АТа Гу5 Маї б1п 145 156 155 1606
Тер Гуз Маї Азр Ахзп АТа Ге біп 5ег б1у Азп 5ег біп біи 5ег Маї 165 176 175
Тиг бі б1іп Ар 5ег Гуз Азр б5ег ТИг Туг б5ег Ге 5ег 5ег Тиг Геи 188 185 199
Зо
Тиг Ге 5ег Гуз АТа Ар Туг бІи Гу Ніх Гуз Ма! Туг АТа Су5 О1Їи 195 200 205
Ма1ї Те Ні5 б1п б1у Ге б5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег Рпе Азп Аге 210 215 220 о1у сІи Су 225 «2190» 188 «211» 443 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг аг Аб3(0156) (МОХ25Е7) «4005» 188 біп Маї біп Геи б1іп б1п Тер с1у АТа сІ1у Ге Гей Гу5 Рго 5ег Си 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Гей ТИг Сузх Аїа Маї Туг б1у б1у 5ег Ріпе 5ег Азтр Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 4о 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап б1у Абзп ТПг Абзп бег Абзп Рго 5ег Геици Гу
5а 55 6о 5ег Аге Маї Тиг Ге 5ег Ге Азр ТИг о 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї Тйг Аза АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 Аа 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 1868 185 116 с1у Тиг Гей Маї Тиг Маї б5ег 5ег б01у бІп Рго Гу5 АТа Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТа Рго Су5 Су5 б1у Ар Тиг Рго 5ег 5ег ТНг Ма1! ТНг 130 135 140
Геи б1у Сух Ге Маї Гу5х б1у Туг Ге Рго бі Рго Маї Тиг Маї ТНг 145 156 155 1606
Тер Абзп о 5ег бІу ТИг Ге Тс Азп б1у Маї Аге Тиг Рпе Рго 5ег Маї 165 176 175
Аге біп бег 5ег бі1у Ге Туг 5ег Ге 5ег 5ег Маї Маї 5ег Маї Тиг 180 185 199 5ег 5ег 5ег біп Рго Ма1ї Тиг Суб Азп Маї АТа Ні5 Рго АТа Тиг А5бп 195 200 205
Те Гуз Маї Азр Гуз Тиг Маї АТа Рго 5ег Тиг Су5 5ег Гу5 Рго Тпг 210 215 220
Суб Рго Рго Рго 01 Ге Геи біу б1у Рго бег Ма1ї Рпе І1е Ре Рго 225 230 235 240
Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Ге Меї І1е бег Аге ТНг Рго бІ1и Ма1! Тпг 245 250 255
Су5зх Маї Маї Маї Азр Маї 5ег біп А5р Ар Рго бі Маї біп Рпе ТНг 260 265 278
Тер Туг Іе Азп Азп біи біп Маї Аге ТНг АїТа Аге Рго Рго Геи Аге 275 280 285 бі бі1п біп Ре Азп 5ег Тпг І1е Аге Маї Маї 5ег ТНг Геи Рго І1е 2908 295 зев
А1а Ні5 біп Ар Тгр Ге Аг бІ1у Гуз бІи Рпе Гуз Су Гу5 Ма1ї Ні 305 318 315 3206
Ап Гу5 АТа Гей Рго Аї1а Рго І1е бІш ух Тиг Іе 5ег Гу5 АТа Аге 325 330 335 с1у б1п Рго Ге бІи Рго Гу5 Ма1ї Туг Тиг Мех о1у Рго Рго Аг би зад 3а5 3506 б1и Гей б5ег 5ег Аге б5ег Ма! 5ег Гей Тиг Су5 Меї І1е Азп о1у Рпе 355 360 365
Туг Рго 5ег Азр І1е 5ег Маї бІ1и Тер бТ1и Гу5 Ахп с0Т1у Гуз АТїа О1Їи 379 375 380
Авр Абзп о Туг Гух Те Тс Рго АТа Маї Ге Ар б5ег Азр о1у 5ег Туг 385 390 395 лев
Рпе Ге Туг Азп Гу5 Ге бег Маї Рго Тпг 5ег б1и Тер б1п Аге б1у 4085 416 415
А5зр Маї Рпе Тиг Суб5 5ег Маї Мет Ні5 бі Аїа Ге Ні5 Азп Ні Туг 420 425 4зо
Тиг біп Гуз 5ег І1е 5ег Аге бег Рго О1у Гу 435 440 «2105» 189 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг аг Аб3(0156) (МОХ25Е7) «400» 189 бі ІІе Маї Ге Тиг б1п б5ег Рго Аїа Тиг Ге 5ег Геци 5ег Рго б1у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге АТїа б5ег біп 5ег І1е 5ег 5ег Туг
Зо 20 25 за
Гей А1їа Тгр Туг б1п б1п ух Рго 01у б1п АТа Рго Аг Гей Геи І1е 4о 45 35 Туг Азр АТа 5ег Ахп Аге АТа ТиПг б1у І1е Рго Аїа Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге с1и Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а Маї Туг Туг Суб б1п б1п Аге 5ег Азп Тгр Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре б1у бІп б01у ТиПг Азп Ге б1и І1е Гу5 Агев ТиИг Маї Аї1а А1а 1868 185 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго б5ег Азр б1и б1п Ге Гуз 5ег б1у 115 120 125
Тег АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Азп Азп Рпе Туг Рго Аге би АТа 130 135 140
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 145 156 155 1606 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг
188 185 199
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 195 200 205
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 210 «2105» 110 «211» 444 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг аГгАо3(0414) «4005» 116 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Су5з Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар Ар Туг 20 25 за
Те Мет Ап Тгр Маї Аг б1п АТа Рго сІ1у Гуз с1у Ге біи Тер Маї 4о 45
А1їа Маї І1е 5ег Тгр Азр б1у бІ1у б1у Тиг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Зо
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге А1а бІи Азр ТиИг АТа Маї Туг Туг Су 35 85 90 95
А1тїа Гуз б1у Гей Тпг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 01у 196 195 116 біп б1у Тйг Геи Маї Тиг о Маї 5ег 5ег бІ1у бІп Рго Гу5 АІТа Рго 5ег 115 120 125
Маї Рпе Рго Гей АТїа Рго Су5х Суб б1у А5зр Тиг Рго 5ег 5ег Тиг Маї 130 135 140
Тиг Ге б1у Су5х Ге Маї Гуз б1у Туг Ге Рго бІи Рго Ма1ї Тиг Маї 145 156 155 1606
Тиг о Тер Азп бег б1у Тис оГеи Тс Азп б1у Маї Аге Тис Рпе Рго 5ег 165 176 175
Маї Агев біп 5ег 5ег бі1у Ге Туг 5ег Гей 5ег 5ег Маї Маї 5ег Маї 188 185 199
Те о5ег б5ег о 5ег біп Рго Ма! Тиг Суб Азп Маї АТа Ні5 Рго Аїа Тиг 195 200 205
Ап Тйг оГуз Маї Азр Гу5 Тийг о Маї АТа Рго 5ег Тиг Су5 бег Гу Рго 210 215 220
Тиг оСуб Рго Рго Рго бІ1и Ге Ге б1у б1у Рго б5ег Ма1ї Рпе І1е Ре 225 230 235 240
Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Гей Меї І1е 5ег Аге Тиг Рго сІи Маї 245 250 255
Тиг о Сузх Маї Маї Маї А5зр Маї 5ег біп Азр Азр Рго бі Маї б1п РНе 260 265 278
Тиг Тер Туг ІІе Аб5п Азп бі біп Маї Аге Тиг АїТа Аге Рго Рго Ге 275 280 285
Аге бі біп б1п Рпе Абзп 5ег Тиг І1е Аге Маї Маї 5ег Тиг Геи Рго 298 295 зев
І1е Аїа Ні5 бІ1п Ар Тер Ге Аге бі1у Гу5 бІіи Ріпе Гуз Су Гуз Маї 305 318 315 3206
Ні5 Азп Гуз АТа Гей Рго АТа Рго І1е б1и Гу5 ТНг І1е 5ег Гуз АТа 325 330 335
Аге бі1у біп Рго Ге бі Рго Гу5 Маї Туг Тиг Меє О01у Рго Рго Аге 340 345 3506 бі бІ1и Гей б5ег 5ег Аге бег Маї 5ег Ге ТиПг Сух Меє І1е Азп б1у 355 36а 365
Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е бег Ма! бі Тер си Гух5 Ахп оТ1у Гуз Аа
Зо 378 375 380 б1и Ар Азп о Тугс Гу ТВг Тйг Рго АТа Маї Ге Азр бег Азр о1у 5ег 385 390 395 лев
Туг Ре Геи Туг Азп Гуз Ге 5ег Ма! Рго Тиг 5ег б1и Тер б1п Аг 4085 416 415 с1у Азр Маї Рпе Тиг Суб5 бег Маї Меї Ніх5 бі А1ї1а Гей Ні А5тп Ні 420 425 4зо
Туг Тиг біп Гуз 5ег І1е 5ег Аг 5ег Рго о1у Гу 435 440 «2105 111 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг аГгАсо3(0414) «400» 111
Ар І1е бі1іп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго Оо01у Гуз АТа Рго Гуз Гей Гей І1е 35 4о 45
Туг Аї1а Аїа 5ег ТиПг Ге б1іп б5ег б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 768 75 80 бій Азр Рпе АТа Тиг Туг Туг Су5 біп б1п ТНг Туг 5ег 5ег Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре б1у бІ1у б1у ТиИг Гуз Маї б1и І1е Гу5 б1у ТиИг Маї А1а А1а 196 195 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго б5ег Азр б1и б1п Ге Гуз 5ег б1у 115 120 125
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге С1и А1а 130 135 146
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 145 156 155 1606 бі б5ег Маї Тиг бі б1п А5зр б5ег Гу5 Ар б5ег ТиИг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг 188 185 199
Зо
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 195 200 205
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 218 «2105» 112 «211» 445 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг аГгАдо3(90416) «400» 112 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 б5ег Ге Агб Ге Аїа Су5 АТа Аїа 5ег б1у Рпе ТНг Рне 5ег Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї 35 ад 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг
65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТїа бі Азр Тиг А1Та Маї Туг Геи Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тис Меї Маї Тиг Маї 5ег б5ег б1у б1п Рго Гу5 АТа Рго 115 120 125 5ег Ма1ї Ре Рго Ге Аїа Рго Су5 Су5х б1у А5р Тиг Рго бег 5ег ТНг 130 135 140 маї Тиг Геи с1у Су5х Ге Маї Гуз 01у Туг Ге Рго бІи Рго Ма1ї ТнНг 145 156 155 1606
Ма1ї Те Тер Азп бег б1у ТиПг Гей ТПг Азп б1у Маї Аге Тиг Рпе Рго 165 176 175 5ег Ма1ї Аге бІп 5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Ге б5ег бег Маї Маї 5ег 188 185 199
Маї Тпг бег 5ег о бег біп Рго Маї ТиПг Су5х Азп Маї А1а Ні Рго А1а 195 2080 205
Тиг о Азп Те Гуз Маї Азр Гуз Тиг о Маї Аїа Рго 5ег Тиг Су 5ег Гу 210 215 220
Рго Тиг Суб Рго Рго Рго бі Гей Ге б1у бІ1у Рго 5ег Ма1ї Рпе Пе 225 230 235 240
Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гух Азр ТНПг Геи Меї І1е 5ег Аге Тиг Рго о1Їи 245 250 255
Маї Тпг Суз Маї Маї Маї Азр Маї б5ег біп Ар Азр Рго бІи Маї б1п 260 265 278
Рпе Тиг Тер Туг І1е Абхп Ахп біи біп Маї Аге ТНг АїТа Аге Рго Рго 275 280 285
Гей Агв бІи б1іп біп Ре А5п б5ег ТиПг І1е Аге Ма! Маї 5ег Тиг Геи 2908 295 зев
Рго ІТе А1а Ні5 бІ1п А5р Тгр Гей Аг» С1у Гу5 бІи Рпе Гу Су Гу 305 318 315 3206
Маї Ніб5 Азп Гух АТїа Ге Рго АТа Рго І1е бІи Гу5 Тиг Іе 5ег Гу 325 330 335
А1а Агев б1у б1п Рго Ге бі Рго Гуз Ма1ї Туг Тиг Мет о1у Рго Рго 340 345 3506
Аге бі бі Ге бег бег Аге бег Маї 5ег Гей Тиг Су5х Меє І1е Аз5п 355 36а 365 с1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е 5ег Маї бІ1и Тгр би Гу5 Азп с1у Гу 379 375 380
А1їа бі А5р Абп Туг Гу5 Тс Тс Рго Аїа Маї Гей А5р 5ег Азр 01у 385 390 395 лев 5ег Туг Ре Гей Туг Азп Гуз Ге 5ег Маї Рго Тиг 5ег бІи Тер б1п 4085 416 415
Аге б1у А5зр Маї Рпе ТПг Су5х бег Маї Мет Ніб5 бі А1Та Гей Ні А5бп 420 425 4зо
Ні5 Туг ТНг біп Гуз 5ег І1е 5ег Аг 5ег Рго о1у Гуз 435 440 445 «210» 113 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг аГгАдо3(90416) «400» 113
Ар ІТ1е біп Ге Тиг о б1іп 5ег Рго б5ег б5ег Ге 5ег Аїа бег Ма1 с1у 1 5 19 15
Ар Агев Ма1ї ТПг І1е ТПг Суб Аге А1а 5ег б1іп 5ег І1е 5ег 5ег Туг 20 25 за
Гей Азп Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго Оо01у Гуз АТа Рго Гуз Гей Гей І1е
Зо 35 4о 45
Туг А5зр Аїа 5ег 5ег їеи бі бег б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о бЗег б1у 5ег б1у Тпг Азр АТа ТиИг Ге ТНг І1е 5ег 5ег Гей бІп Рго 65 768 75 80 бі Азр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб б1п б1п б5ег Туг 5ег Тиг Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре б1у бІ1у б1у ТиИг Гуз Маї б1и І1е Гу5 б1у ТиИг Маї А1а А1а 196 195 116
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго б5ег Азр б1и б1п Ге Гуз 5ег б1у 115 120 125
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге С1и А1а 130 135 140
Гуз Маї бі1п Тер Гуз Маї Азр Азп АТїа Ге б1іп 5ег 01у А5п 5ег біп 145 156 155 1606 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег 165 176 175 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг 188 185 199
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег
195 200 205
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 210 «210» 114 «211» 695 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг з 2-2 РО1/! доз 8970 «400» 114 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар Азр Туг 20 25 за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Ге соІи Тер Маї 35 4о 45
А1а Маї І1е 5ег Тер Азр б1у б1у б1у Тиг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Зо
Гей біп Меї Абзп бег Ге Аге Аї1а бІи Азр Тиг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1тїа Гуз б1у Гей Тпг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг Гуз б1у Рго 5ег 115 120 125 маї Рпе Рго Гей АТа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у с1у Тиг АТа 130 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї бі Азр Туг Ре Рго бІіи Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Маї Ге біп 5ег 5ег бі1у Ге Туг 5ег Гей 5ег 5ег Маї Маї Тиг Маї 180 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Абзп ТНПг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї 01 Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
Авр Гу5 Тйг Ніх Те Суб Рго Рго Суз Рго АТа Рго 01 АТа АТїа с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е 5ег Аге Тпг Рго біи Маї ТиИг Су5х Маї Маї Маї А5р Маї 5ег Ні 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 310 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тпг Іе 5ег Гу5 АТа Гух сІ1у б1п Рго Аг» бІ1и Рго біп Маї 340 345 3506
Туг Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Ар біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 355 36а 365
Гей ТПг Сух Ге Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абп Тугс губ Те Те Рго Рего
Зо 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Туг б5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
А5зр Гуз 5ег Аге Тгр біп біп б1у Азп Ма! Рпе 5ег Су5 5ег Ма1ї Меї 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег 435 440 445
Рго б1у бі1у с1у б5ег біу б1у с1у б1у б5ег с1у с1у б1у с1у 5ег 01у а5а 455 460 с1у б1у б1у 5ег бІи Маї б1п Ге Гей бі 5ег б1у б1у с1у Геи Маї 465 470 475 а8о б1п Рго б1у б01у 5ег Гей Агв Ге бег Су5 А1ї1а А1їа б5ег с1у Ріпе 5ег 485 490 495
Рпе 5ег 5ег Туг Тиг Меє 5ег Тгр Маї Аг біп Аї1а Рго с1у Гуз о1у 5аа 5805 519
ІГеи бІи Тер Маї А1а Тйг І1е 5ег б1у б01у б1у Агев Азр І1е Туг Туг 515 520 525
Рго Ар бег Маї Гу5 б1у Аге Ре ТПг І1е 5ег Аге А5р Абзп 5ег Гуз 53а 535 540
Абп Тпг Ге Туг Ге біп Меї Азп б5ег Ге Аге АТїа б1и Азр Тиг А1Та
545 559 555 550
Маї Туг Туг Сух5х Маї Ге Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе АТа Геи др 565 579 575 5ег Тгр б1у бІп б1у ТиПг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег Маї А1а 580 585 599
А1а Рго бег Ма! Рпе І1е Рпе Рго Рго 5ег Ар бІи біп Гей Гуз 5ег 595 вад 6о5 с1у Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Гей Абп Азп Рпе Туг Рго Аге О1Їи 616 615 620
А1Т1а Гуз Маї б1п Тер Гуз Маї Азр Ахп А1їа Гей біп 5ег бІ1у Азп 5ег 625 6за 635 640 б1п бІ1и б5ег Маї Тис бІи бІп А5р 5ег Гуз А5зр 5ег Тиг Туг 5ег Геи 645 6509 655 5ег 5ег ТИг Гей ТИг Ге 5ег о Гу5 АТа Азр Туг бІи Гу Ні Гу Маї 6ва 665 6709
Туг Аїа Су5х бІи Маї Те Ніх б1іп с01у Ге 5ег б5ег Рго Маї1ї Тиг Гу 675 680 685 5ег Рпе Азп Аге б1у О1и Су 690 695
Зо «210» 115 «2115» 216 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг 1 з 2-2 РО1/Г! ДОЗ 8970 «400» 115
А5зр ІТ1е Маї Меє Тиг б1іп 5ег Рго А5р 5ег Гей АТа Ма! 5ег Ге 01Уу 1 5 19 15 б1и Аге АТа Тиг І1е Ап Суб Гу5 А1їа 5ег бі б5ег Маї А5р Тиг 5ег 20 25 за
Авр Абзп бег Рпе І1е Ні5 Тгр Туг б1п б1п Гу5 Рго б01у б1п 5ег Рго 35 ад 45
Гуз Ге Ге ІІе Туг Аг 5ег бег ТИг Ге бІи б5ег 01у Маї Рго А5р 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 б5ег Ге біп Аїа бій Азр Маї Аїа Ма! Туг Туг Су5 біп біп Азп Туг 85 90 95
Авр Маї Рго Тер Тпг Рпе б1у б1п б1у ТиИг Гу5х Маї б1и Ше Гуз 5ег 196 195 116
5ег АТїа 5ег Тиг Гуз б1у Рго бег Маї Рпе Рго Ге АТ1а Рго 5ег 5ег 115 120 125
Гуз 5ег ТНг 5ег б1у с1у ТНг Аїа Аїа Ге с1у Су5 Ге Маї Гуз А5р 130 135 140
Туг Ре Рго бІи Рго Ма! Тиг Маї 5ег Тгр Азхп бег С1у АїТа Геи ТНг 145 156 155 1606 5ег б1у Маї Ні5 Тег Ріпе Рго Аїа Маї Геи б1п бег 5ег О01у Геи Туг 165 176 175 5ег Ге 5ег бег Маї Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег б5ег Ге об1у Тиг б1п 180 185 199
Тиг о Тугс ІТе Суб Абзп Маї Азп Ні Гу5 Рго бег Абзп ТИг Гуз Ма1ї А5р 195 200 205
Гуз Гуз Маї 01и Рго Гу 5ег Су 210 215 «210» 116 «211» 696 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг з 2-2 РО1/! доз 8984
Зо «400» 116 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге АТїа Су5 Аїа Аїа б5ег біу Рпе ТНг Рпе бег Ар Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї 35 40 45 5ег б1у ІТ1е Ар Ахп бег бІ1у Туг Туг Тйг Туг Туг Тпг Азр 5ег Маї! 5а 55 6о
Гуз б01у Аг Рпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азр Маї Гу5 Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТїа бІи Азр ТиИг АТа Маї Туг Геци Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Меї Маї ТиИг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег ТиПг Гуз о1у Рго 115 120 125 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 130 135 140
А1їа Аї1а Ге с1у Су5 Ге Маї бІи Азр Туг Рпе Рго бІ1и Рго Маї Тиг 145 156 155 1606
Маї бег Тгр Азп бег б1у А1а Гей ТПг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Ре Рго 165 176 175
А1їа Уаї Ге б1п бег бег б1у Гей Туг 5ег Гей б5ег 5ег Маї Маї Тиг 188 185 199 маї Рго 5ег 5ег 5ег ей б1у Тиг біп ТиИг Туг І1е Су5 Азп Маї Азп 195 200 205
Ні5х Гу Рго бег Абзп ТИг о Гух Маї Азр бІи Гу5 Маї бІи Рго Гу 5ег 210 215 220
Су5з Азр Гуз Тиг Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго АТїа Рго би Аа А1а 225 230 235 240 с1у б1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТЕиг Геи 245 250 255
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 260 265 278
Ні5 бі Ар Рго біи Маї Гу5 Рпе Азп Тгр Туг Ма1ї Азр б1у Маї си 275 280 285
Маї Ні5 Азхп АТа Гу5 ТПг Гу Рго Аге бІи бІи б1п Туг Азп бег ТАг 2908 295 зев
Зо
Туг Агв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Геи Ні5 б1іп Азр Тер Геи Азбп 305 318 315 3206 со1у Гу5 бІи Туг Гуз Су5 Гу5 Маї б5ег Ахп Гуз Аїа Ге соТ1у АТа Рго 325 3ззеа 335
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п 340 345 3506 маї Туг Тиг Гей Рго Рго 5ег Аге Ар бі Гей ТНг Гуз Ап бІп Маї 355 36а 365 5ег Ге ТИг Су5з Ге Маї Гуз б1у Ре Туг Рго б5ег Азр І1е АТа Маї 379 375 380 б1и Тер бІ1и б5ег Абп бІ1у біп Рго бІи Абп Абп Тугс Гу5 Те Те Рего 385 390 395 лев
Рго Маї Ге Азр б5ег Азр біу 5ег Рпе Рпе Геи Туг бег Гуз Геи Тпг 4085 416 415
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1п б1п б1у А5п Маї Рпе 5ег Су5 бег Маї1! 420 425 4зо
Меє ніх бій АТа Ге Ніб5х Азп Ніх Туг Тиг біп Гу5 5ег Геи 5ег Геи 435 440 445 б5ег Рго б1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у с1у 5ег б1у с1у с01у с1у 5ег а5а 455 460 с1у с1у б1у б1у 5ег бІи Маї б1іп Гей Гей бі 5ег с1у о1у с1у Гей 465 470 475 а8о маї біп Рго б1у б1у 5ег Ге Аге Гей 5ег Су5 Аїа А1їа 5ег б1у Рпе 485 490 495 5ег Рпе 5ег бег Туг ТИг Меї 5ег Тгр Маї Аге б1іп А1а Рго О1у Гу 5аа 5805 519 о1у Ге бІи Тгр Маї Аїа Тийг І1е 5ег б1у б01у ос1у Аге Азр Пе Туг 515 520 525
Туг Рго Азр б5ег Маї Гуз б1у Аге Ріпе ТНг І1е бег Аге А5р Азп 5ег 53За 535 540
Гуз Азп Тс оГеи Туг Ге біп Меє Азп 5ег Гей Аге АТа бІи Азр ТЕг 545 559 555 550
А1Т1а Маї Туг Туг Су5 Маї Ге Ге Тиг б01у Аг» Маї Туг Ріпе Аа Геи 565 579 575
Ар бег Тгр б1у біп б1у Тийг Гей Маї ТиИг Маї 5ег 5ег Аїа 5ег Маї 580 585 599
А1їа Аї1а Рго 5ег Уаї Ре І1е Рпе Рго Рго 5ег Азр 01и б1п Геи Гу 595 вав 605 5ег б1у Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Ріпе Туг Рго Аге 616 615 620 б1ш АТа Гу5 Маї б1п Тер Гу5 Маї Ар Азп А1а Ге б1п б5ег С1у Авп 625 6за 635 640 б5ег біп бІ1и 5ег Маї Тиг бІи біп А5р 5ег Гу5 Азр 5ег ТНг Туг 5ег 645 6509 655
Гей б5ег 5ег ТиИг Ге ТИг Ге б5ег Гуз АТа Азр Туг би Гуз Ні Гу 6ва 665 6709
Ммаї Туг Аїа Сух5х бІи Маї Тег Ні5х б1іп с01у Ге 5ег бег Рго Ма1! Тпг 675 680 685
Гуз бег Ре Ап Аге б1у би Су 690 695 «210» 117 «211» 694 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг з 2-2 РО1/Г! ДОЗ 9010 «400» 117 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 ад 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап бІ1у Абзп ТИПг Абзп бег Ап Рго бег Геи Гу 5а 55 6о б5ег Аге Ма! ТИг Гей 5ег Ге Азр Тиг 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Маї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1Та 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТїа б5ег ТиИг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТїа Рго бег бег Гуз бег ТПг 5ег б1у б1у Тиг АТа Аїа 130 135 140
Ге с01у Су5х Ге Маї бі Ар Туг Рпе Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175
Зо
Гей б1іп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге 5ег бег Ма1ї Маї Тиг Маї Рго 188 185 199 5ег 5ег 5ег Ге б1у ТПг бі1п Тиг Туг І1е Су5 Абзп Маї Автп Ні Гу 195 200 205
Рго бег Ахп ТИг о Гу5 Маї Азр бІіи Гу5 Маї б1и Рго Гу5 5ег Су А5р 210 215 220
Гуз Тег Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго б1и Аїа Аїа с1у с01Уу 225 230 235 240
Рго бег Маї Ре Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тпг Ге Меї Пе 245 250 255 5ег Аге ТИг о Рго бі Маї Тиг Суб Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 О01Їи 260 265 278
Авр Рго бі Маї Гу5 Рпе Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї бІи Ма1ї Ні 275 280 285
Авп АТїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг Аге 2908 295 зев маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Ге Ніх б1іп Азр Тгр Ге Азп О1у Гу 305 318 315 3206 бі Туг Гуз Суз Гу5 Маї б5ег Азп Гух АТа Ге 01у АТа Рго Іе си 325 330 335
Гуз Тг І1е 5ег Гуз АТа Гуз о1у біп Рго Аге б1и Рго біп Маї Туг 340 345 3506
Те Ге Рго Рго 5ег Агев Азр бі Ге ТНг Гуз Азп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365
Тиг Суб Ге Маї Гу5х б1у Ре Туг Рго бег Азр І1е АїТїа Уаї с1и Тер 379 375 380 бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гуз Тис Тс Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у б5ег Рпе Рпе Гей Туг 5ег Гу5 Ге Тиг Маї Ар 4085 416 415
Гуз б5ег Аге Тгр біп б1п б1у Азп Ма1ї Ре б5ег Су5 5ег Маї Меє Ні 420 425 4зо бій АТа Гей Ніб5 Азп Ніх Туг Тиг бі1п Гуз бег Ге бег Ге 5ег Рго 435 440 445 с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у с1у с01у с1у 5ег с1у 01у а5а 455 460 с1у б1у 5ег бІи Маї б1п Гей Ге бІ1и б5ег б1у 01у о1у Ге Ма1ї б1п 465 470 475 а8о
Рго б1у б1у 5ег Гецп Агв Ге 5ег Су5 Аїа А1їа 5ег б1у Рре 5ег Рпе 485 490 495 5ег 5ег Туг Тиг Мет 5ег Тгр Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз О1у Ге 5аа 5805 519 бі Тер Маї АТїа Тиг І1е 5ег б1у с1у б1у Аг Азр Іе Туг Туг Рго 515 520 525
Авр бег Маї Гух б1у Аг Ре Тиг І1е 5ег Аге Ар Абзп 5ег Гу Авп 53а 535 540
Тиг Ге Туг Ге б1іп Меї Абзп 5ег Ге Аге АТа бі Азр Тиг АТа Маї 545 559 555 550
Туг Туг Сузх Маї Ге Геи Тиг б1у Аге Ма! Туг Рпе АТа Геи Азр 5ег 565 579 575
Тер б1у б1іп б1у Тс о Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Маї Аї1а А1а 580 585 599
Рго 5ег Маї Рпе ІТе Рпе Рго Рго бег Азр бІи біп Гей Гу5 5ег 01у 595 вав 605
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге С1и А1а 616 615 620
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 625 6за 635 640 б1и 5ег Маї Тис бІи бІ1п А5р 5ег Гуз Ар 5ег Тиг Туг 5ег Геи 5ег
645 6509 655 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг 6ва 665 6709
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 675 680 685
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 690 «210» 118 «211» 695 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-1 РО1/Г! ДОЗ 8310 «400» 118 бі Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег бІ1у б1у б1у Ге Маї б1п Рго с1у с1у 1 5 19 15 б5ег Ге Агб Ге 5ег Су5 АТїа Аїа 5ег б1у Ре І1е Ре Ар Азр Туг 20 25 за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гух5 б1у Ге с1и Тер Маї ад 45
Зо
А1їа Маї І1е 5ег Тгр Азр б1у б1у б1у ТиИг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аг Рпе Тиг І1е 5ег Аге Ар Азр Ріе Гу Абп Тиг Геи Туг 35 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1Та Гуз б1у Ге ТиИг Ар Тис Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тгр 01У 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Ма1ї Рпе Рго Ге Аїа Рго бег 5ег Гу5 бег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї 61 Авбр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 160 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Ммаї Геи біп 5ег б5ег б01у Ге Туг 5ег Ге 5ег 5ег Ма! Уа1ї! Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
А5зр Гуз Те Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго б1и АТа Аї1а с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї Ар Маї 5ег Ні5 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге ТНг Маї Гей Ні5 б1іп Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 318 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго біп Маї 340 345 3506
Туг Тег Ге Рго Рго Су5 Аге Азр біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 355 36а 365
Гей Тгр Сух Гей Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер 610 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гу5 Тс ТВг Рго Рго 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Туг б5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авр губ бег Аге Тгр біп б1іп бІ1у Азп Маї Рпе 5ег Су5х бег Ма1 Мет 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег 435 440 445
Рго б1у бі1у с1у б5ег біу б1у с1у б1у б5ег с1у с1у б1у с1у 5ег 01у а5а 455 460 сб1у б1у б1у 5ег бі Маї б1п Гей Ге бІ1и 5ег б1у с1у с1у Геи Маї 465 470 475 а8о б1п Рго б1у б01у 5ег Гей Агв Ге бег Су5 А1ї1а А1їа б5ег с1у Ріпе 5ег 485 490 495
Рпе бег бег Туг Тпг Меє б5ег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго о1у Гуз о1у 5аа 5805 519
ІГеи бІи Тер Маї А1а Тйг І1е 5ег б1у б01у б1у Агев Азр І1е Туг Туг
515 520 525
Рго Ар бег Маї Гу5 б1у Аг Ріпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азбзп 5ег Гу 53а 535 540
Абп Тпг Ге Туг Ге біп Меї Азп б5ег Ге Аге АТїа б1и Азр Тиг А1Та 545 559 555 550
Маї Туг Туг Сух5х Маї Ге Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе АТа Геи др 565 579 575 5ег Тгр б1у бІп б1у ТиПг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег Маї А1а 580 585 599
А1Та Рго 5ег Ма! Рпе ІТ1е РНе Рго Рго 5ег А5р бІи біп Гей Гу 5ег 595 вав 605 с1у Тиг АТа б5ег Маї Маї Су5 Ге Гей Азп Азп Рпе Туг Рго Аге би 616 615 620
А1тїа Гу5 Маї б1п Тер Гуз Маї Ар Азп АІ1а Гей б1іп 5ег о1у Азп 5ег 625 6за 635 640 б1п бІ1и б5ег Маї Тис бІи бІп А5р 5ег Гуз А5зр 5ег Тиг Туг 5ег Геи 645 6509 655 5ег 5ег ТИг Гей ТИг Ге 5ег о Гу5 АТа Азр Туг бІи Гуз Ні Гу Маї 6ва 665 6709
Туг АТїа Су5 бі Маї Тиг Ні5х біп б01у Ге 5ег 5ег Рго Маї1ї Тиг Гуз 675 680 685 5ег Рпе Азп Аге б1у 01и Су 690 695 «210» 119 «211» 451 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 2-1 РО1/! ДОЗ 8310 «400» 119 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар А5р Туг 20 25 за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Ге соІи Тер Маї 35 4о 45
А1а Маї І1е 5ег Тер Азр б1у б1у б1у Тиг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1Та Гуз б1у Гей Тиг Азр Те Тс Гей Туг б1у 5ег Азр Туг Тгр 01У 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 1306 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї 61 Авбр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Ммаї Геи біп 5ег б5ег б01у Ге Туг 5ег Ге 5ег 5ег Ма! Уа1ї! Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг біп Тйг Туг Іе Су5 Абп Маї Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
Авр Гу5 Тйг Ніх Те Суб Рго Рго Суз Рго АТа Рго 01 АТа А1а с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е 5ег Аге Тпг Рго біи Маї ТиИг Су5х Маї Маї Маї А5зр Маї 5ег Ні 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 310 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гу5 АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тпг Іе 5ег Гу5 АТа Гух сІ1у б1п Рго Аг» бІ1и Рго біп Маї 340 345 3506
Суб Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Азр бІ1и Ге Тиг Гу5 Азп біп Маї 5ег 355 36а 365
Гей бег Суб АТа Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абзп Тубс Гу5 Те Те Рго Рего
385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авзр Гу5 бег Аге Тгр біп біп с1у Ахп Маї Рпе 5ег Суб бег Ма1 Мей 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег 435 440 445
Рго о1у Гуз а5а «2190» 126 «211» 696 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-1 РО1/! доз 8311 «400» 120 біи Маї б1п Геи Маї бі 5ег б1у с1у б1у Геи Ма! б1п Рго с1у о1у 1 5 19 15 5ег Ге Аге Ге АТїа Су5х Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе ТиИг Рпе бег Азр Туг 20 25 за
Зо
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї ад 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 35 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Ге б1іп Мет Абзп 5ег Ге Аг» АТїа бій Азр ТПг Аїа Маї Туг Геи Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Меї Маї ТиИг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег ТиПг Гуз о1у Рго 115 120 125 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 130 135 140
А1їа Аї1а Ге с1у Су5 Ге Маї бІи Азр Туг Рпе Рго бІ1и Рго Маї Тиг 145 156 155 1606 маї 5ег Тер Азп 5ег б1у АТїа Ге Тпг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг РНе Рго 165 176 175
А1їа Уаї Ге б1п бег бег б1у Гей Туг 5ег Гей б5ег 5ег Маї Маї Тиг 188 185 199
Маї Рго бег 5ег бег їеу б1у Тиг біп Тиг Туг І1е Суб Азп Маї Азвп 195 200 205
Ні5 Гу5 Рго 5ег Азп ТИг Гух Маї Азр бі Гуз Маї с01и Рго Гуз 5ег 210 215 220
Су5з Азр Гуз Тиг Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго АТїа Рго би Аа А1а 225 230 235 240 с1у б1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТЕиг Геи 245 250 255
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 260 265 278
Ні5 бі Азр Рго бі Маї ух Ре Азп Тгр Туг Маї Азр о1у Маї о1їи 275 280 285 маї Ні5 Азп АТа Гу5 Тиг Гуз Рго Аг» бі біи біп Туг А5зп 5ег ТЕг 2908 295 зев
Туг Агв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Геи Ні5 б1іп Азр Тер Геи Азбп 305 318 315 3206 о1у Гу5 бІи Туг Гу5 Су5 Гу5 Маї б5ег Ахп Гуз Аїа Ге о1у АТа Рго 325 330 335
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п
Зо зад 3а5 3506
Маї Туг Тиг Гей Рго Рго Су5х Аге Азр бІи Гей Тиг Гух Азп біп Маї 355 36а 365 б5ег Ге Тер Су5х Гей Маї Гу5х б1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е А1а МУаї 379 375 380 б1и Тер бІи бег Азп бІ1у б1іп Рго бІи Абп Абп Туг губ Те ТВг Рго 385 390 395 лев
Рго Маї Ге Азр б5ег Азр біу 5ег Рпе Рпе Геи Туг бег Гуз Геи Тпг 4085 416 415
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІ1п б1у Ап Маї Рпе 5ег Су5 5ег Маї1 420 425 430
Мет ніх бІ1и АТїа Ге Ніб5 Азп Ні5х Туг Тиг б1іп Гу5 5ег Геи 5ег Геи 435 440 445 б5ег Рго б1у б1у б1у 5ег б1у с1у б1у с1у 5ег с1у с1у с1у с01у 5ег а5а 455 460 с1у с1у б1у б1у 5ег бІи Маї б1іп Гей Гей бі 5ег с1у о1у с1у Гей 465 470 475 а8о
Маї біп Рго с1у б1у бег Гей Аге Ге 5ег Су5х Аї1а А1їа 5ег с1у Рпе 485 490 495 5ег Рпе 5ег бег Туг ТИг Меї 5ег Тгр Маї Аге б1іп А1а Рго О1у Гу
5аа 5805 519 о1у Гей бІи Тгр Маї Аїа ТиИг І1е 5ег б1у с1у с1у Аге Азр І1е Туг 515 520 525
Туг Рго Азр б5ег Маї Гуз б1у Аге Ріпе ТНг І1е бег Аге А5р Азп 5ег 53а 535 540
Гуз Азп Тс оГеи Туг Ге біп Меї Ахп 5ег Геи Аге Аїа бі А5р ТНг 545 559 555 550
А1тїа Маї Туг Туг Суб5 Маї Ге Гей ТиПг б1у Аге Маї Туг Рпе Аа Ге 565 579 575
А5зр 5ег Тгр б1у біп б01у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег Аїа 5ег Маї 580 585 599
А1їа Аї1а Рго 5ег Уаї Ре І1е Рпе Рго Рго 5ег Азр 01и б1п Геи Гу 595 вав 605 5ег б1у ТПг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Абп Рпе Туг Рго Аге 616 615 620 б1ш АТа Гу5 Маї б1п Тер Гу5 Маї Ар Азп А1а Ге б1п б5ег С1у Авп 625 6за 635 640 5ег біп бі 5ег Маї Тиг бі біп А5р 5ег Гуз Азр 5ег Тпг Туг 5ег 645 6509 655
Ге 5ег 5ег ТИг Гей ТИг Ге 5ег Гуз АТа Азр Туг си Гу Ні Гуз 6ва 665 6709
Ммаї Туг Аїа Сух5х бі Маї Тег Ніх біп б01у Гей б5ег 5ег Рго Маї Тиг 675 680 685
Гуз бег Ре Ап Аге б1у би Су 690 695 «210» 121 «211» 452 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 2-41 РО1/! доз 8311 «400» 121 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аге Ге АТїа Су5х Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе Тиг Рпе бег Азр Туг 20 25 за
А1Т1а Меє 5ег Тгр Маї Аг б1іп А1а Рго с1у Гуз сІ1у Ге бІи Тер Маї 35 4о 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Маї Гуз Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Ге б1іп Мет Аб5п 5ег Ге Аг» АТїа бій Азр ТиПг АТа Маї Туг Геи Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тис Меї Маї Тиг Маї 5ег 5ег Аїа 5ег Типг Гуз О1у Рго 115 120 125 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 130 135 146
А1їа Аї1а Ге с1у Су5 Ге Маї бій Азр Туг Рпе Рго бІи Рго Маї ТНг 145 156 155 1606 маї 5ег Тер Азп 5ег б1у АТїа Ге Тпг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг РНе Рго 165 176 175
А1їа Уаї Ге б1п бег бег б01у Гей Туг 5ег Ге 5ег б5ег Маї Маї Тиг 188 185 199
Маї Рго бег 5ег бег їеу б1у Тиг біп Тиг Туг І1е Суб Азп Маї Азвп 195 200 205
Ні5х Гу Рго б5ег Азп ТИПг Гуз Маї Азр біи Гу5 Маї бІи Рго Гу 5ег 210 215 220
Су5з Азр Гуз Тиг Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго АТїа Рго би Аа А1а 225 230 235 240 б1у б1у Рго 5ег Маї Ре Гей РНе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тпг Геи 245 250 255
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 260 265 278
Ні5 бі Азр Рго бі Маї ух Ре Азп Тгр Туг Маї Азр о1у Маї о1їи 275 280 285
Маї Ні5 Азхп АТа Гу5 ТПг Гу Рго Аге бІи бІи б1п Туг Азп бег ТАг 298 295 зев
Туг Агв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Геи Ні5 б1іп Азр Тер Геи Азбп 305 318 315 3206 с1у Гуз бІіи Туг Гуз Су5 Гуз Маї 5ег Ахп Гу5 АТа Ге с1у АТа Рго 325 330 335
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п 340 345 3506
Маї Су5 Тиг Гей Рго Рго 5ег Аге Азр бІи Гей Тиг Гуз Азп біп Маї 355 36а 365 5ег Ге 5ег Су5х Аїа Маї Гуз б1у Ре Туг Рго б5ег Азр І1е АТа Маї
379 375 380 б1и Тер бІ1и б5ег Абп бІ1у біп Рго бІи Абп Абп Тугс Гу5 Те Те Рего 385 390 395 лев
Рго Маї Ге Азр б5ег Азр біу 5ег Рпе Рпе Геи Маї бег Гуз Геи Тпг 4085 416 415
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІп б1у А5п Маї Рпе 5ег Су5 бег Маї 420 425 4зо
Мет ніх бІ1и АТїа Ге Ніб5 Азп Ні5х Туг Тиг б1іп Гу5 5ег Геи 5ег Геи 435 440 445 5ег Рго о1у Гу а5а «2105» 122 «211» 694 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-41 РО1/Г! АОЗ 1252 «400» 122 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Зо
Тиг Ге 5ег Ге ТИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5ег Ар Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 35 ад 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап бІ1у Абзп ТИПг Абзп бег Ап Рго 5бег Гей Гу 5а 55 6о б5ег Аге Ма! ТИг Гей 5ег Ге Азр Тиг 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Маї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Ма1ї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТїа б5ег ТиИг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТїа Рго бег бег Гуз бег ТПг 5ег б1у б1у Тиг АТа Аїа 130 135 140
Ге с01у Су5х Ге Маї бі Ар Туг Рпе Рго бІ1и Рго Маї ТНг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175 ей б1п 5ег бег б1у Ге Туг бег Ге 5ег бег Маї Маї Тиг Маї Рго 188 185 199 б5ег 5ег б5ег Ге б1у Тиг б1п Тиг Туг Іе Су5 Азп Маї Ап Ні Гуз 195 200 205
Рго бег Ахп ТИг о Гу5 Маї Азр бІ1и Гу5 Маї бІи Рго Гу5 бег Су Ар 210 215 220
Гуз Те Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго 610 Аїа А1їа с1у О01у 225 230 235 240
Рго бег Маї Ре Гей Рпе Рго Рго ух Рго Гуз Азр Тиг Ге Мет Пе 245 250 255 5ег Аге ТИг о Рго бі Маї Тиг Суб Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 О01Їи 260 265 278
А5зр Рго біи Маї Гуз Рпе Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї біи Маї Ні5 275 280 285
Авп АТїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг Аге 2908 295 зев
Маї Маї б5ег Маї Гей Тиг Маї Ге Ніх5 б1п Азр Тгр Гей Ахтп О1у Гу 305 318 315 3206 бі Туг Гуз Суз Гу5 Маї б5ег Азп Гух АТа Ге 01у АТа Рго Іе си
Зо 325 3ззеа 335
Гуз Тг І1е 5ег Гуз АТ1а ух бІ1у біп Рго Аге бІ1и Рго б1п Ма1ї Туг 340 345 3506
Те Ге Рго Рго Суб Агв Азр бі Ге ТНг Гуз Азп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365
Тер Сузх Ге Маї ух б1у Ре Туг Рго 5ег Азр І1е А1а Маї си Тер 379 375 380 бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гуз Тис Тс Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Ре Ге Туг бег Гуз Ге Тиг Маї др 4085 416 415
Гуз б5ег Аге Тгр біп б1п б1у Азп Ма1ї Ре б5ег Су5 5ег Маї Меє Ні 420 425 4зо бій АТа Гей Ніб5 Азп Ніх Туг Тиг бі1п Гуз бег Ге бег Ге 5ег Рго 435 440 445 с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у с1у с01у с1у 5ег с1у 01у а5а 455 460 с1у б1у 5ег бІи Маї б1п Гей Ге бІ1и б5ег б1у 01у о1у Ге Ма1ї б1п 465 470 475 а8о
Рго б1у б1у 5ег Гецп Агв Ге 5ег Су5 Аїа А1їа 5ег б1у Рре 5ег Рпе
485 490 495 5ег 5ег Туг Тиг Мет 5ег Тгр Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз О1у Ге 5аа 5805 519 бі Тер Маї А1а Тиг І1е 5ег б1у о1у б1у Аге Азр І1е Туг Туг Рго 515 520 525
Авр бег Маї Гух б1у Аг Ре Тиг І1е 5ег Аге Ар Абзп 5ег Гу Авп 53За 535 540
Тиг Ге Туг Ге б1іп Меї Абзп 5ег Ге Аге АТа бі Азр Тиг АТа Маї 545 559 555 550
Туг Туг Су5х Маї Гей Ге Тис с1у Аге Маї Туг Ре АїТа Геи Ар 5ег 565 579 575
Тер б1у б1іп б1у Тс о Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Маї Аї1а А1а 580 585 599
Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго б5ег Азр б1и б1п Ге Гуз 5ег б1у 595 вав 605
Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5х Ге Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аге С1и А1а 616 615 620
Гуз Маї б1п Тер Гуз Ма1ї Азр Азп А1Т1а Ге б1іп б5ег б01у Азп 5ег б1іп 625 6за 635 640 бі б5ег Маї Тиг бі б1п А5зр б5ег Гу5 Ар б5ег ТиИг Туг 5ег Геи 5ег 645 6509 655 5ег ТИг Ге Тиг Ге 5ег о Гу5 АТїа Ар Туг бі Гу5 Ніх Гуз Ма1ї Туг 6ва 665 6709
А1їа Су5 бі Ма1ї Тег Ні5 б1п б1у Ге 5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег 675 680 685
Рпе Ахп Аге с1у бІи Су 690 «210» 123 «211» 941 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-41 РО1/Г! АдОЗ 8312 «400» 123 бі Маї б1п Гей Ге бІ1и б5ег б1у б1у с1у Ге Маї б1п Рго о1у о1у 1 5 19 15 б5ег Ге Агб Ге 5ег Су5 АТїа Аїа 5ег б1у Ре І1е Ре Ар Азр Туг 20 25 за
Тиг о Меє Азп Тер Маї Аг біп Аїа Рго б1у Гуз с1у Ге бІи Тгр Маї 35 4о 45
А1їа Маї І1е 5ег Тгр Азр б1у б1у б1у ТиИг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б01у Аг Рпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азр Рпе Гу5 Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1тїа Гуз б1у Гей Тпг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 140
А1а Гей с1у Су5 Ге Маї б1и Азр Туг Ре Рго бі Рго Ма! Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
А5зр Гуз Те Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго б1и АТа Аї1а с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї Ар Маї 5ег Ні5 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге ТНг Маї Гей Ні5 б1іп Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 318 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго біп Маї 340 345 3506
Туг Тег Ге Рго Рго Су5 Аге Азр біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег
355 36а 365
Гей Тгр Сух Гей Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абп Тугс губ Те Те Рго Рего 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Туг б5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авр губ бег Аге Тгр біп б1іп бІ1у Азп Маї Рпе 5ег Су5х бег Ма1 Мет 420 425 4зо
Ні5 бі АТа Ге Ніб5 Азп Ніх Туг Тиг бІ1п Гу5 бег Ге 5ег Геи 5ег 435 440 445
Рго б1у бі1у с1у б1у б1у б5ег с1у б1у б1у с1у 5ег б1у с1у є1у 01у а5а 455 460 5ег бі1у б1у б1у б1у 5ег Азр І1е Маї Меї Тпг б1іп 5ег Рго Ар 5ег 465 470 475 а8о
Гей Аїа Маї 5ег Ге б01у 01 Аге А1ї1а ТиПг І1е Азп Су5 Гу5 АІТа 5ег 485 490 495 б1и 5ег Маї А5зр ТИг о бег Азр Азп 5ег Рпе І1е Ніх Тгр Туг бІ1п б1п 5аа 5805 519
Гуз Рго б1у біп 5ег Рго Гу5х Ге Ге І1е Туг Агеб 5ег 5ег ТНг Геи 515 520 525 б1и 5ег бІ1у Маї Рго Азр Аге РПе бег б1у 5ег б1у бег Ту ТНг А5р 53а 535 540
Рпе ТиИг Ге Тиг І1е б5ег бег Ге біп Аїа б1и Азр Маї Аїа Маї Туг 545 559 555 550
Туг Суб біп бІп Абзп Туг Азр Маї Рго Тер Тиг Ре сб1у б1п о1у Тиг 565 579 575
Гуз Маї 61 ІІе Гу5 Аг Тийг Маї А1ї1а А1а Рго 5ег Ма1ї Рпе І1е Ре 580 585 599
Рго Рго 5ег Азр бІи біп Ге Гуз б5ег б1у Тиг А1ї1а 5ег Маї Маї Су 595 вав 605
Гей Ге Абзп Азп Рпе Туг Рго Аг бІи Аїа Гу5 Маї б1п Тер Гу5 Маї 616 615 620
Авр Ахп АТїа Геи біп бег б1у Абп бег біп б1и 5ег УМаї Тиг СІ б1Іп 625 6за 635 640
Авр бег Гуз Ар бег Тиг Туг 5ег Ге 5ег 5ег ТиИг Ге Тиг Гей 5ег 645 6509 655
Гуз АТа Азр Туг бІи Гу5 Ні Гу5 Ма1! Туг Аїа Сух5 бі Ма1ї ТНг Ні 6ва 665 6709 б1п б1у Гей бег 5ег Рго Маї ТиПг Гух5 бег Рпе Азп Аге б1у си Су 675 680 685 с1у б1у б1у б01у 5ег б1у б1у б1у с01у 5ег сб1у с1у с1у с1у 5ег 01у 690 695 7808 с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у с1у с1у б1у 5ег о01и Маї 785 718 715 720 біп Гей Гей бі 5ег б1у б1у с1у Ге Маї б1п Рго с1у о1у 5ег Геи 725 730 735
Агв Ге бег Сух Аї1а ДАіа 5ег б1у Рпе 5ег Рпе 5ег 5ег Туг Тиг Мет 748 745 7509 5ег Тгр Маї Аге біп Аїа Рго бі1у ух с1у Ге бІи Тер Маї А1а ТНг 755 760 765
І1е 5ег б1у с1у б1у Агв Азр І1е Туг Туг Рго Азр бег Маї Гуз о1у 778 775 780
Аге Рпе ТиПг І1е бег Аге А5р Азп бег Гу Азп ТиИг Геи Туг Ге б1п 785 798 795 зев
Ме Абп 5ег Ге Аге АТа бій Азр ТНг АТа Маї Туг Туг Су Маї Геи 8085 816 815
Гей ТПг б1у Аге Маї Туг Рпе АТа Ге Азр б5ег Тер б1у бІ1п о1у ТЕиг 820 825 830
Зо
ІГеи Маї Тиг Маї бег 5ег А1їа б5ег ТиПг Гуз бІ1у Рго 5ег Маї Ре Рго 835 840 845
Гей А1ї1а Рго 5ег бег Гу5 5ег Тиг 5ег б1у о1у Тиг АТ1а АТа Гец о01у 8508 855 зво
Су5х Ге Маї Гуз Азр Туг Ре Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азвп 865 870 875 880 б5ег б1у АТа Ге Тпг 5ег бІ1у Маї Ні5 ТНг Рпе Рго А1а МУаї Геи б1п 885 890 895 5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Ге бег 5ег Ма! Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег 9080 9985 910 5ег Ге б1у Тийг б1іп Тис Туг І1е Су5 Ап Маї Азп Ніх Гу Рго 5ег 915 920 925
Ап Тйг Гуз Маї Азр Гуз ух Маї б1и Рго Гуз 5ег Суб 930 935 940 «2105» 124 «211» 942 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-1 РО1/! доз 8313
«4005» 124 бі Маї б1п Ге Маї бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аге Ге АТїа Су5х Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе ТиИг Рпе бег Азр Туг 20 25 за
А1їа Меє бег Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге би Тер Маї 35 40 45 5ег б1у ІТ1е Азр Абзп 5ег бІ1у Туг Туг Тиг Туг Туг ТиПг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б01у Аг Рпе Тпг І1е 5ег Аге А5р Азр Маї Гу5 Азп Тиг Геи Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТїа бІи Азр ТиИг АТа Маї Туг Геци Су 85 90 95
ТигоГу5 Те Ні 5ег б1у Ге І1е Маї Абзп Азр Аїа Рпе Азр І1е Тгр 196 195 116 с1у б1п б1у Тиг Меї Маї ТиИг Маї 5ег 5ег А1їа 5ег ТиПг Гуз о1у Рго 115 120 125 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 130 135 140
А1Т1а Аї1а Ге с01у Су5х Ге Маї бі А5р Туг Рпе Рго бІи Рго Маї Тиг 145 156 155 1606
Маї бег Тгр Азп бег б1у А1а Гей ТПг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Ре Рго 165 176 175
А1їа Уаї Ге б1п бег бег б1у Гей Туг 5ег Гей б5ег 5ег Маї Маї Тиг 188 185 199
Маї Рго бег 5ег бег їеу б1у Тиг біп Тиг Туг І1е Суб Азп Маї Азвп 195 2080 205
Ні5х Гу Рго бег Абзп ТИг о Гух Маї Азр бІи Гу5 Маї бІи Рго Гу 5ег 210 215 220
Суз Азр Гуз Тиг Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго АТа Рго біи АїТа АТа 225 230 235 240 с1у б1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТЕиг Геи 245 250 255
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 260 265 278
Ні5 бі Азр Рго бі Маї ух Ре Азп Тгр Туг Маї Азр о1у Маї о1їи 275 280 285
Маї Ні5 Азп АТа Гу5 Тиг Гу Рго Аге бІи бІи б1п Туг Азп бег ТНг 2908 295 зев
Туг Агв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Геи Ні5 б1іп Азр Тер Геи Азбп 305 318 315 3206 о1у Гу5 бІи Туг Гу5 Су5 Гу5 Маї б5ег Ахп Гуз Аїа Ге о1у АТа Рго 325 3ззеа 335
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п 340 345 3506 маї Туг Тиг Гей Рго Рго Су5 Аге Ар біи Гей ТНг Гуз Азп бІп Маї 355 36а 365 5ег Ге Тгр Су5х Ге Маї Гуз б1у Ре Туг Рго б5ег Азр І1е АТа Маї 379 375 380 б1и Тер бІи бег Азп бІ1у б1іп Рго бІи Абп Абп Туг губ Те ТВг Рго 385 390 395 лев
Рго Маї Ге Азр б5ег Азр біу 5ег Рпе Рпе Геи Туг бег Гуз Геи Тпг 4085 416 415
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1п бІ1п б1у Ап Маї Рпе 5ег Су5 5ег Маї1 420 425 4зо
Меє ніх бій АТа Ге Ніб5х Азп Ніх Туг Тиг біп Гу5 5ег Геи 5ег Геи 435 440 445 5ег Рго б1у бІ1у б1у б1у с1у 5ег б1у с1у с1у с1у 5ег с1у о1у о1у а5а 455 460
Зо с1у 5ег б1у б1у б1у б1у б5ег Ар І1е Маї Меї Тиг б1п 5ег Рго А5р 465 470 475 а8о 5ег Ге Аїа Маї 5ег Ге б1у 01 Аг АТїа ТиИг Іїе Ап Су Гуз Аа 485 490 495 5ег бі 5ег Маї А5зр ТиПг о 5ег Ар Азп 5ег Рпе І1е Ні5 Тер Туг б1п 5аа 5805 519 біп Гуз Рго б1у біп 5ег Рго Гух Ге Ге Ше Туг Аге 5ег 5ег Тпг 515 520 525
ІГеи 61 5ег бІ1у Маї Рго А5зр Аге Рпе 5ег б1у 5ег б01у б5ег О1у ТЕиг 53а 535 540
Авр Рпе ТПг Геи ТПг І1їе бег 5ег Гей біп А1а б1и Азр Маї А1а Маї 545 559 555 550
Туг Туг Суз бІп б1іп Азп Туг Азр Маї Рго Тгр Тиг Рпе б1у сб1п с1у 565 579 575
Тиг о Гуз Маї бІи І1е Гу5 Аге ТиИг Маї Аїа А1їа Рго бег Ма1ї Рне Це 580 585 599
Рпе Рго Рго 5ег Азр біи біп Гей Гух5х 5ег бІ1у Тиг АТа 5ег Ма1! Маї 595 вав 605
Суб Гей Ге Азп Азп Рпе Туг Рго Аге бі АТа Гу Маї б1п Тер Гу 616 615 620
Маї А5зр Азп АТїа Ге біп 5ег бІ1у Абзп 5ег б1іп бі 5ег Маї Тиг си 625 6за 635 640 біп Ар б5ег Гу5 Азр 5ег ТиИг Туг 5ег Ге 5ег 5ег ТНг Геи ТНг Геи 645 6509 655 5ег Гуз АТїа Азр Туг бІіи Гух Ні5 Гуз Ма! Туг Аїа Сух біи Маї ТНг 6ва 665 6709
Ні5х б1іп б1у Гей 5ег 5ег Рго Маї ТиПг Гуз бег Рпе Азп Аге О1у О1и 675 680 685
Сузх б1у с1у б1у б1у 5ег б1у б1у с1у с1у бег б1у с1у с1у с1у 5ег 690 695 7808 с1у б1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у б1у с1у о1у 5ег Ти 785 718 715 720 маї біп Ге Ге бІ1и 5ег с1у б1у б1у Ге Маї б1п Рго б1у с1у 5ег 725 730 735
Гей Агв Ге б5ег Суз А1а А1а б5ег б1у Ре бег Рпе 5ег 5ег Туг ТЕиг 748 745 7509
Мет 5ег Тер Маї Аг» б1п АТа Рго с1у Гух5 О01у Ге бІи Тгр Маї А1Та 755 760 765
Тиг І1е 5ег бІ1у б1у б01у Агв Азр І1е Туг Туг Рго А5р 5ег Маї1 Гу 778 775 780 о1у Аге Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ап бег Гуз Азп Тиг Геи Туг Геи 785 798 795 зев біп Ме Абп б5ег Ге Аг» АТа бІи Азр Тйг АТа Маї Туг Туг Су Маї 8085 816 815
Гей Ге Тиг б1у Аге Маї Туг Рпе А1а Ге Азр 5ег Тгр с1у біп с1Уу 820 825 830
Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег АТїа 5ег ТиПг Гуз б1у Рго бег Ма1! РНе 835 840 845
Рго Ге Аїа Рго б5ег бег їу5 5ег ТПг бег б1у с1у Тпг Аа Аа Ге 8508 855 зво с1у Су5х Ге Маї Гуз Азр Туг Ре Рго бі Рго Ма! Тиг Маї 5ег Тер 865 870 875 880
А5зп 5ег б1у Аїа Ге Тпг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї Геи 885 890 895 б1п 5ег б5ег б1у Гей Туг 5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї Рго 5ег 9080 9805 910 5ег 5ег Ге б1у ТПг біп Тиг о Туг Іе Су5х Абп Маї Авп Ні Гу Рго 915 920 925 5ег А5зп ТИПг о Гуз Маї Азр Гух Гу5 Маї бІ1и Рго Гуз 5ег Су
930 935 940 «210» 125 «211» 940 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-1 РО1/! ДОЗ 1088 «400» 125 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 20 35 40 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап бІ1у Абзп ТИПг Абзп бег Ап Рго бег Геи Гу 5а 55 6о 25 б5ег Аге Ма! ТИг Гей 5ег Ге Азр Тиг 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Зо
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТа б5ег ТиПг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТїа Рго бег бег Гуз бег ТПг 5ег б1у б1у Тиг АТа Аїа 130 135 140
Ге с01у Су5х Ге Маї бі Ар Туг Рпе Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175
Гей б1п 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге 5ег бег Маї Маї Тиг Маї Рго 188 185 199 5ег 5ег 5ег Ге б1у ТПг бі1п Тиг Туг І1е Су5 Абзп Маї Автп Ні Гу 195 200 205
Рго бег Ахп ТИг о Гу5 Маї Азр бІи Гу5 Маї бТ1и Рго Гуз 5ег Су А5р 210 215 220
Гуз Тег Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго б1и Аїа Аїа с1у с01Уу 225 230 235 240
Рго бег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Геи Меї І1е 245 250 255
5ег Аге ТИг о Рго бі Маї Тиг Суб Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 О01Їи 260 265 278
А5зр Рго бі Маї Гу5х Рпе Азп Тгр Туг Маї Азр с1у Маї с1и Маї Ні 275 280 285
Авп АТїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг Аге 2908 295 зев
Маї Маї 5ег Маї Ге Тпг Маї Ге Ні5 біп Азр Тер Геи Ап Сс1у Гу 305 318 315 3206 бі Туг Гуз Суз Гу5 Маї б5ег Азп Гух АТа Ге 01у АТа Рго Іе си 325 3ззеа 335
Гуз ТПг І1е 5ег Гуз АТїа Гуз бІ1у біп Рго Аге бі Рго біп Маї Туг 340 345 3506
Те Ге Рго Рго Суб Агв Азр бі Ге ТНг Гуз Азп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365
Тер Сузх Ге Маї Гуз б1у Ре Туг Рго 5ег Азр І1е Аїа Маї си Тер 379 375 380 бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гуз Тис Тс Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Гей Туг 5ег ух Ге Тиг Маї Ар 4085 416 415
Гуз б5ег Аге Тгр біп б1п б1у Азп Ма1ї Ре б5ег Су5 5ег Маї Меє Ні 420 425 4зо бі АТа Гей Ніб5 Абп Ні5 Туг ТПг біп Гу5 5ег Ге 5ег Ге 5ег Рго 435 440 445 с1у б1у б1у б1у б1у б5ег б1у б1у с1у б1у 5ег б1у б1у с1у о1у 5ег а5а 455 460 с1у б1у б1у б1у 5ег Азр ІІе Маї Меї Тиг б1іп 5ег Рго А5р 5ег Геи 465 470 475 а8о
А1їа Уаї б5ег Гей б1у 61 Аге АТа ТПг І1е Ап Су5 Гуз АТа 5ег ОЇи 485 490 495 5ег Ма1ї А5зр Тиг 5ег А5р А5зп 5ег Рпе І1е Ні5 Тер Туг бІп б1п Гу 5аа 5805 519
Рго б1у біп 5ег Рго Гуз Ге Ге Іе Туг Агре 5ег 5ег ТНг Геи си 515 520 525 5ег б1у Маї Рго А5р Аг РПе б5ег б01у 5ег б1у б5ег б01у Тиг Азр РІНе 53а 535 540
Тиг Се Тис І1е 5ег 5ег Ге біп Аїа б1и Азр Маї Аїа Уаї Туг Туг 545 559 555 550
Су5 б1іп б1п Азп Туг Азр Маї Рго Тгр Тиг Рпе б1у б1іп о1у Тиг Гу
565 579 575
Ммаї бі І1е ух Аге ТиПг Маї АТїа АІа Рго 5ег Маї Рпе І1е Рпе Рго 580 585 599
Рго бег Азр бІіи б1іп Ге Гу5 5ег біу Тпг Аїа 5ег Маї Маї Су Геи 595 вав 605
Гей Азп Ап Рпе Туг Рго Аге бІи АТа ух Маї б1п Тер Гу5 Маї1ї Ад5р 616 615 620
Авзп Аїа Ге б1іп бег б1у А5п 5ег біп б1и б5ег Маї Тиг бІи б1п др 625 6за 635 640 б5ег Гуз Азр 5ег ТПг Туг 5ег Ге 5ег 5ег Тиг Ге Тиг Геи 5ег Гуз 645 6509 655
А1тїа Азр Туг бІи Гу5 Ні5 ух Маї Туг Аї1а Су5 бІи Маї Тиг Ні5 б1п 6ва 665 6709 о1у Геи б5ег 5ег Рго Маї Тиг Гуз бег Рпе Абп Аге б1у бТ1и Су б1у 675 680 685 с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у с1у с01у с1у 5ег с1у 01у 690 695 7808 с1у б1у 5ег б1у с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у с01у 5ег бІи Ма1ї б1п 785 718 715 720
Ге Ге бі 5ег біу б1у с1у Ге Маї б1п Рго с1у с01у 5ег Геи Аг; 725 730 735
Гей б5ег Сузх АТїа А1а 5ег б1у Рпе 5ег Рпе 5ег 5ег Туг Тиг Меє 5ег 748 745 7509
Тер Маї Агє бІп А1ї1а Рго с1у Гу5 01у Ге бІи Тер Маї Аїа Тиг І1е 755 760 765 5ег б1у б1у б1у Агв Ар І1е Туг Туг Рго Азр бег Маї Гуз О1у Аге 778 775 780
Рпе Тийг І1е 5ег Аг Ар Азп 5ег Гуз Азп ТИгоГеи Туг Геи б1іп Меє 785 798 795 зев
А5зп 5ег Ге Аг АТа бІи Азр Тийг Аїа Маї Туг Туг Су5 Маї Геи Геи 8085 816 815
Тиг б1у Аг Маї Туг Рпе А1їа Гей А5р 5ег Тгр б1у б1іп о1у Тиг Ге 820 825 830
Маї Тег Маї 5ег бег А1а 5ег Тиг Гуз 01у Рго 5ег Маї Рпе Рго Геи 835 840 845
А1а Рго бег 5ег їу5 бег ТИг б5ег б1у б01у Тиг Аїа А1а Гей О1у Су 8508 855 зво
Геи Маї Гуз Азр Туг Ре Рго бІи Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азп 5ег 865 870 875 880 со1у АТїа Гей Тиг б5ег бІ1у Маї Ні5х Тиг Рпе Рго А1їа Маї Геи б1п 5ег 885 890 895 5ег 01у Геи Туг 5ег Ге 5ег бег Маї Ма! Тпг Маї Рго бег 5ег 5ег 988 9985 910
Геи б1у Тег бІ1п Тис Тугс І1е Су5 Абзп Маї Ап Ні Гуз Рго б5ег Авп 915 920 925
Те Гуз Маї Азр Гуз Гуз Маї бІ1и Рго Гуз 5ег Су 930 935 940 «210» 126 «211» 589 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 1 з 2-41 РО1/Г! АдоЗ 0918 «400» 126 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е
Зо 35 4о 45 с1у бІи ІІе Аб5п Ніх Ап бІ1у Абзп ТИПг Абзп бег Ап Рго бег Геи Гу 5а 55 6о б5ег Аге Ма! ТИг Гей 5ег Ге Азр Тиг 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Ріпе Ар Рго Тгр о1у б1п 196 195 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТа б5ег ТиПг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге АТїа Рго бег бег Гуз бег ТПг 5ег б1у с1у Тиг АТа Аїа 130 135 140
Ге с01у Су5х Ге Маї Гу5 Азр Туг Рпе Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175
Гей б1п 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге 5ег бег Маї Маї Тиг Маї Рго 188 185 199 5ег 5ег 5ег Ге б01у ТПг бі1п Тиг Туг ІІе Су5 Абп Маї Азп Ні Гуз
195 200 205
Рго бег Абзп ТИг о Гу5 Маї Азр Гух Гу5 Маї бІ1и Рго Гуз 5ег Су А5р 210 215 220
Гуз Те Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго А1їа Рго бі Аїа Аїа с1у 01у 225 230 235 240
Рго бег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Геи Меї І1е 245 250 255 5ег Аге ТИг о Рго бі Маї Тиг Суб Маї Маї Маї Аз5р Маї 5ег Ні5 би 260 265 278
А5зр Рго бі Маї Гу5 Рпе Азп Тгр Туг Маї Азр с1у Маї бІ1и Маї Ні 275 280 285
Авп Аїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бій б1іп Туг Азп бег ТиИг Туг Аге 2908 295 зев
Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Гей Ні5 б1п Азр Тер Ге Ахтп О1у Гу 305 318 315 3206 бі Туг Гуз Су5 Гуз Маї б5ег Азп Гуз АТїа Ге б1у Аїа Рго Пе би 325 3ззеа 335
Гуз ТПг І1е 5ег Гуз АТ1а Гуз б1у біп Рго Аге бі Рго бІп Маї Су 340 345 3506
Те о Гей Рго Рго 5ег Аге Азр бі Ге Тиг Гуз Азп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365 5ег Суз Аїа Маї Гуз б1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е А1а Маї си Тер 379 375 380 бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гуз Тис Тс Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Ре Ре Ге Маї б5ег Гуз Ге Тиг Маї дор 4085 416 415
Гуз б5ег Аге Тгр біп б1п б1у Азп Ма1ї Ре б5ег Су5 5ег Маї Меє Ні 420 425 4зо бій АТа Гей Ніб5 Азп Ніх Туг Тиг бі1п Гуз бег Ге бег Ге 5ег Рго 435 440 445 с1у б1у б1у б1у б1у б5ег б1у б1у с1у б1у 5ег б1у б1у с1у о1у 5ег а5а 455 460 с1у с1у б1у б1у 5ег бІи Маї б1іп Гей Гей бі 5ег с1у о1у с1у Гей 465 470 475 а8о
Маї біп Рго с1у б1у бег Ге Аге Ге 5ег Су5 Аїа А1а 5ег оО1у РПе 485 490 495 5ег Рпе 5ег бег Туг ТИг Меї 5ег Тгр Маї Аге б1іп А1а Рго О1у Гу 5аа 5805 519 о1у Ге бІи Тгр Маї Аїа Тийг І1е 5ег б1у б1у с1у Агв Азр Пе Туг 515 520 525
Туг Рго Азр б5ег Маї Гуз б1у Аге Ріпе ТНг І1е бег Аге А5р Азп 5ег 53За 535 540
Гуз Азп Тс оГеи Туг Ге біп Меє Азп 5ег Гей Аге АТа бІи А5р ТЕг 545 559 555 550
А1Т1а Маї Туг Туг Су5 Маї Ге Ге Тиг б01у Аг» Маї Туг Ріпе Аа Геи 565 579 575
Ар бег Тгр б1у біп б1у ТИг Гей Маї ТиИг Маї 5ег 5ег 580 585 «210» 127 «211» 580 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 2-41 РО1/! доз 0918 «400» 127 б1п Маї б1п Ге б1п б1п Тер с1у АТа о1у Ге Геи Гу5 Рго 5ег би 1 5 19 15
Тиг Ге 5ег Ге ТиИг Суз Аїа Маї Туг с1у б1у бег Рпе 5бег А5р Туг
Зо 20 25 за
Туг Тер Азп Тер І1е Агб біп Рго Рго сТ1у Гуз о1у Геи оси Тер І1е 4о 45 35 б1у бІи ІТ1е Ап Ні5 Ап б1у Абп ТНг Абзп 5ег Азп Рго 5ег Геи Гу 5а 55 6о 5ег Аге Маї Тиг Ге 5ег Ге Азр ТИг о 5ег Гуз Азп біп Рпе 5ег Геи 65 768 75 80
Гуз Ге Аг бег Ма1ї ТПйг Аїа АТа Азр ТиПг АТа Маї Туг Туг Су5 А1а 85 90 95
Рпе б1у Туг 5ег Азр Туг біи Туг Абп Тгр Рпе Азр Рго Тгр о1у б1п 1868 185 116 с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї б5ег 5ег АТа б5ег ТиПг Гуз б1у Рго 5ег Маї 115 120 125
Рпе Рго Ге Аїа Рго 5ег 5ег Гуз бег ТиПг 5ег б1у б1у ТНг АїТа АТа 130 135 140
Геи б1у Су5х Гей Маї Гуз Азр Туг Рпе Рго бІи Рго Маї Тиг Маї 5ег 145 156 155 1606
Тер Абзп 5ег бІу АТїа Ге ТиПг обег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго АТа Маї 165 176 175
Гей б1п 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге 5ег бег Маї Маї Тиг Маї Рго
188 185 199 5ег 5ег 5ег Ге б1у ТПг бі1п Тиг Туг І1е Су5 Абзп Маї Автп Ні Гу 195 200 205
Рго бег Абзп ТИг о Гу5 Маї Азр Гух Гу5 Маї бІ1и Рго Гуз 5ег Су А5р 216 215 220
Гуз Те Ні Тиг Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго 610 Аїа А1їа с1у О01у 225 230 235 240
Рго бег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТПг Геи Меї І1е 245 250 255 б5ег Аге ТНПг Рго біи Маї Тиг Су5х Маї Маї Маї Азр Маї 5ег Ні5 О1и 260 265 278
Авр Рго бі Маї Гу5 Рпе Азп Тер Туг Ма1ї Азр б1у Маї бІи Маї Ні 275 280 285
Авп АТїа Гу5 ТИг о Гу5 Рго Аге бІи бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг Аге 2908 295 зев
Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Гей Ні5 б1п Азр Тер Геи Ахтп О1у Гу 305 310 315 3206 бі Туг Гуз Суз Гу5 Маї б5ег Азп Гух АТа Ге 01у АТа Рго Іе си 325 330 335
Гуз ТПг Іе 5ег Гуз АТа Гу5 б1у біп Рго Аге бі Рго біп Маї Туг 340 345 3506
ТигоГеи Рго Рго Суб5 Аге Азр бі Ге ТиПг Гуз Абзп біп Маї 5ег Геи 355 36а 365
Тер Сузх Ге Маї Гуз бТ1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е Аїа Уаї с1и Тер 379 375 380 бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гуз Тис Тс Рго Рго Маї 385 390 395 лев
Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Ре Ге Туг бег Гуз Ге Тиг Маї др 4085 416 415
Гуз 5ег Аг Тгр біп біп б1у Азп Ма! Ре 5ег Су5 5ег Маї Мет Ні 420 425 4зо б1 АТїа Гей Ні Абп Ні5х Туг ТиПг б1Іп Гу5 5ег Геи бег Ге 5ег Рго 435 440 445 с1у б1у б1у б1у б1у б5ег б1у б1у с1у б1у 5ег б1у б1у с1у о1у 5ег а5а 455 460 с1у б1у б1у б1у 5ег Азр І1е Маї Меї Тиг б1п 5ег Рго Азр 5ег Геи 465 470 475 а8о
А1їа Уаї б5ег Гей б1у 61 Аге АТа ТПг І1е Ап Су5 Гуз АТа 5ег ОЇи 485 490 495
5ег Ма1 А5зр Тиг 5ег Азр Азп б5ег Ре І1е Ніх Тер Туг б1п б1п Гу 5аа 5805 519
Рго б1у біп 5ег Рго Гу5 їеу Ге І1е Туг Аге 5ег бег Тиг Гей би 515 520 525 5ег б1у Маї Рго Ар Аге РПе бег бі1у 5ег б1у 5ег б1у ТПг Азр Ре 53а 535 540
Те оГеи Те І1е 5ег 5ег Ге біп Аїа бі Азр Маї А1їа Уа1ї Туг Туг 545 559 555 550
Су5х біп б1іп Азп Туг Азр Маї Рго Тер Тпг Рпе с1у біп о1у Тиг Гу 565 579 575 маї бІи І1е Гу 580 «210» 128 «211» 288 «212» Білок «2135 Ното 5аріеп5 «400» 128
Мет б1п Іе Рго б1п АТа Рго Тгр Рго Маї Маї Тер АТа Маї Геи б1п 1 5 19 15
Гей 01у Тер Аг Рго б01у Тер Ріпе Геи А5р 5ег Рго А5р Аге Рго Тгр
Зо 20 25 за
Авп о Рго Рго ТПг Рпе бег Рго АТа Ге Ге Маї Маї Тис бІ1и о1у А5р 4о 45 35 А5зп АТїа Тис Рпе Тиг Суб 5ег Рпе б5ег Азп Тиг 5ег бі бег Рпе Маї 5а 55 6о
Гей Азп Тгр Туг Аге Меї 5ег Рго 5ег Азп біп ТиПг Ар Гуз Геи Аа 65 768 75 80
А1а Рпе Рго бІи Ар Аге 5ег біп Рго б1у б1іп Азр Су5 Аге Рпе Аге 85 90 95
Маї Те біп Гей Рго Азп б1у Аге Ар Ре Ніх Меї бег Уаї Маї Аге 1868 185 116
А1а Агв Агв Ап Ар бег б1у Тиг Туг Ге Су5 б1у Аї1а І1е 5ег Ге 115 120 125
А1а Рго Гу5 АТа біп Іе Гу5 бІ1и 5ег Ге Аге АТа бІ1и Гей Аге Маї 130 135 140
Тиг бі Агсе Агв АТа біи Маї Рго Тиг АТа Ніб5 Рго 5ег Рго 5ег Рго 145 156 155 1606
Аге Рго Аїа с1у біп Рпе б1п Тйг Ге Маї Маї с1у Маї Ма1ї с1у 01у 165 176 175
Гей Геи б1у б5ег Ге Маї Ге Ге Маї Тер МаїЇ Ге Аїа Маї Пе Су
188 185 199 5ег Аге Аїа Аїа Аг б1у ТПг Іїе с1у А1їа Аге Аг ТНПг б1у бІп Рго 195 200 205
Гей Гуз бІи Азр Рго 5ег А1їа Маї Рго Маї Рпе 5ег Ма1ї Азр Туг 01у 210 215 220 б1и Гей Азр Ре б1п Тер Агв бІи Гу5 Тийг Рго бІ1и Рго Рго Маї Рго 225 230 235 240
Су5х Маї Рго бі б1іп Тиг бі Туг Аїа ТНг І1е Маї Рпе Рго 5ег с1у 245 250 255
Меє б1у Тиг 5ег 5ег Рго Аїа Аг» Аге біу 5ег АТїа Ар с1у Рго Агб 260 265 278 5ег АТа біп Рго Ге Аге Рго бі Азр б1у Ніб5 Су5 5ег Тер Рго Геи 275 280 285 «210» 129 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер 645 «4005» 129
Зо со1у с1у с1у Оо1у 5ег 1 5 «2105» 138 «2115 169 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер (645)2 «400» 138 с1у б1у с1у б01у 5ег с1у сб1у с1у о1у 5ег 1 5 18 «210» 131 «2115» 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер (564)2 «400» 131 5ег б1у с1у б1у б1у 5ег с1у с1у С1у с1У 1 5 19
«210» 132 «2115» 14 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер 04(5604)2 «400» 132 с1у с1у б1у б1у 5ег б1у сб1у б1у с1у 5ег б01у с1у о1у О01у 1 5 19 «2105» 133 «2115» 16 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «400» 133 о1у 5ег Рго б01у 5ег 5ег 5ег 5ег о1у 5ег 1 5 16 «210» 134 «2115 15 «212» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер (645)3 «400» 134 с1у сб1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у б1у 5ег б1у 01у ос1у о1у 5ег 1 5 19 15 «2105» 135 «2115» 206 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер (645)4 «400» 135 сб1у с1у б1у б1у 5ег б1у б1у б1у с1у 5ег б1у б1у б1у с1у 5ег 01у 1 5 19 15 со1у с1у о1у 5ег 20 «210» 136 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«223» Пептидний лінкер «400» 136 о1у 5ег б1у 5ег б1у 5ег о1у 5ег 1 5 «210» 137 «211» 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «400» 137 б1у б5ег б1у 5ег 01у Ап О1у 5ег 1 5 «210» 138 «211» 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер
«400» 138 с1у б1у 5ег б1у 5ег о1у 5ег 01у 1 5
«210» 139 «2115 6 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«220» «223» Пептидний лінкер «400» 139 со1у с1у 5ег о01у 5ег с1у 1 5 «210» 1406 «211» 4 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «400» 140 со1у с1у 5ег 01у
«210» 141 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «400» 141 с1у б1у 5ег б1у Азхп о1у 5ег 01у 1 5 «210» 142 «2115 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «400» 142 с1у б1у Азп б1у 5ег о1у 5ег 01у 1 5 «210» 143
Зо «2115 66 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Пептидний лінкер «4005» 143 со1у б1у Азхп б1у 5ег о1у 1 5 «210» 144 «211» 461 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 151 РО1/!АбЗ 0725 (141 транс) «400» 144
Авр Гу5 Тйг Ніх Те Суб Рго Рго Суз Рго АТа Рго 01 АТа АТїа с1у 1 5 19 15 б1у Рго 5ег Маї Рпе Ге Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр ТИг Геми Мет 20 25 за
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї Ар Маї 5ег Ні5 35 ад 45 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 5а 55 6о
Ні5 Азп АТа Гу5 Тпг Гуз Рго Аге бі бі б1іп Туг Азп 5ег Тиг Туг 65 768 75 80
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Азр Тгр Гей Азп 01Уу 85 90 95
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 196 195 116 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго біп Маї 115 120 125
Суб Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Ар біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 130 135 140
Ге 5ег Су5х Аїа Маї Гуз б1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е Аїа Маї си 145 156 155 1606
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абп Тугс губ Те Те Рго Рего 165 176 175
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гуз Гей Тиг Маї 188 185 199
Авр губ бег Аге Тгр біп б1іп бІ1у Азп Маї Рпе 5ег Су5х бег Ма1 Мет 195 200 205
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег 210 215 220
Рго б1у Гуз біу с1у б1у с1у 5ег б1у с1у с1у с1у 5ег бІ1и Маї б1п 225 230 235 240 ей Ге бі б5ег б1у б1у б1у Гей Маї б1п Рго с1у о01у 5ег Геци Аге 245 250 255
Гей бег Сузх АТїа А1а 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар Азр Туг Тиг Меє Абп 260 265 278
Тер Маї Агє бІп А1їа Рго с1у Гу5 01у Ге бІи Тер Маї АТа Маї І1е 275 280 285 5ег Тгр Азр б1у б1у сТ1у Тиг Туг Туг Тс Ар бег Маї Гуз О1у Аге 2908 295 зев
Рпе Тиг ІТе 5ег Аге Ар Азр Рпе Гу5 Азп ТИг Ге Туг Ге б1іп Меї 305 318 315 3206
Ап бег Ге Аге Аїа бі Азр Тиг АТїа Маї Туг Туг Су5 АТа Гуз о1у 325 330 335
Гей ТПг Азр Тиг Тс Ге Тугс б1у 5ег Азр Туг Тер 01у бІ1п о1у Тис 340 345 3506
ІГеи Маї Тиг Маї бег 5ег А1їа б5ег ТиПг Гуз бІ1у Рго 5ег Маї РНе Рго
355 36а 365
Гей А1ї1а Рго 5ег бег Гу5 5ег Тиг 5ег б1у о1у Тиг АТ1а АТа Гец о01у 379 375 380
Су5х Ге Маї бІи Азр Туг Ре Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азвп 385 390 395 лев 5ег б1у АТїа Гей ТиПг 5ег б1у Маї Ні5є Тиг Ре Рго А1а Маї Гец б1п 405 410 415 5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Ге бег 5ег Ма! Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег 420 425 4зо б5ег Ге б1у Тиг біп Тиг Туг ІТе Су5 Азп Маї Азп Ні Гу Рго 5ег 435 440 445
Ап Тйг Гуз Маї Азр бі ух Маї б1и Рго Гуз 5ег Суб а5а 455 460 «210» 145 «211» 685 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» важкий ланцюг 2 з 2-41 РО1/!АбЗ 0750 (2-1 транс) «400» 145
Зо бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Геи Ма1ї б1п Рго є1у 01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар А5р Туг 20 25 за
Тиг Мет Азп Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у Гуз о1у Геи оІТи Тер Маї 35 ад 45
А1а Маї І1е 5ег Тер Азр б1у б1у б1у Тиг Туг Туг Тиг Азр 5ег Маї 5а 55 6о
Гуз б1у Аг Рпе ТПг І1е 5ег Аг А5р Ар Рпе Гуз Азп ТиИг Геци Туг 65 768 75 80
Гей біп Меї Азп бег Ге Аге АТа бІи Азр ТиИг АТїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1тїа Гуз б1у Гей Тпг Азр Тс Тс Ге Туг б1у 5ег Азр Туг Тгр б1у 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Ммаї Рпе Рго Гей АТа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег Тпг 5ег б1у б1у ТНг А1Та 130 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї 61 Авбр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606
5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тийг 5ег б1у Ма1ї Ніх Тпг Рре Рго Аїа 165 176 175
Ммаї Геи біп 5ег б5ег б01у Ге Туг 5ег Ге 5ег 5ег Ма! Уа1ї! Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге б1у Тийг б1п Тиг Туг І1е Су5х Азп Маї Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
Авр Гу5 Тиг Ні Тис Суб5 Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго бі Аїа А1а с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е 5ег Аге Тпг Рго біи Маї ТиИг Су5х Маї Маї Маї А5р Маї 5ег Ні 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Азр Тгр Гей Азп 01Уу
Зо 305 310 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тпг Іе 5ег Гу5 АТа Гух сІ1у б1п Рго Аг» бІ1и Рго біп Маї 340 345 3506
Суб Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Ар біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 355 36а 365
Гей бег Суб АТа Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абп Тугс губ Те Те Рго Рего 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
А5зр Гуз 5ег Аге Тгр біп біп б1у Азп Ма! Рпе 5ег Су5 5ег Ма1ї Меї 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег 435 440 445
Рго б1у Гу5 сб1у б1у бі1у б1у 5ег бі1у б1у с1у с1у бег с0Ти Маї б1п а5а 455 460 ей Ге бі б5ег б1у б1у б1у Гей Маї б1п Рго с1у о01у 5ег Геци Аге
465 470 475 а8о
Гей бег Сузх АТїа А1а 5ег б1у Рпе І1е Рпе Ар Азр Туг Тиг Меє Абп 485 490 495
Тер Маї Агє бІп А1їа Рго с1у Гу5 01у Ге бІи Тер Маї АТа Маї І1е 5аа 5805 519 5ег Тгр Азр б1у б1у сТ1у Тиг Туг Туг Тс Ар бег Маї Гуз О1у Аге 515 520 525
Рпе Тийг І1е 5ег Аг Ар Ар РПе Гу5 Азп ТИгоГеи Туг Геи б1п Меє 53а 535 540
А5зп 5ег Ге Аг АТа бІи Азр Тиг Аїа Маї Туг Туг Су5 АТа Гуз О01Уу 545 559 555 550
Гей ТПг Азр Тиг Тс Ге Тугс б1у 5ег Азр Туг Тер 01у бІ1п о1у Тис 565 579 575
ІГеи Маї Тиг Маї бег 5ег А1їа б5ег ТиПг Гуз бІ1у Рго 5ег Маї Ре Рго 580 585 599
Гей А1ї1а Рго 5ег бег Гу5 5ег Тиг 5ег б1у о1у Тиг АТ1а АТа Гец о01у 595 вад 6о5
Су5х Ге Маї бІи Азр Туг Ре Рго бі Рго Маї Тиг Маї 5ег Тер Азвп 616 615 620 б5ег б1у АТа Ге Тпг 5ег б1у Маї Ні5 ТНг Рпе Рго А1а Уаї Геи сб1п 625 6за 635 640 5ег 5ег б1у Ге Туг 5ег Ге бег 5ег Ма! Маї Тиг Маї Рго 5ег 5ег 645 6509 655 5ег Ге б1у Тийг б1іп Тис Туг І1е Су5 Ап Маї Азп Ніх Гу Рго 5ег 6ва 665 6709
Ап Тйг Гуз Маї Азр бі ух Маї б1и Рго Гуз 5ег Суб 675 680 685 «210» 146 «2115» 215 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг СЕА (СЕА ТСВ) «400» 146
Ар І1е бі1іп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
А5зр Аге Маї Тиг Іе Тиг Су5х Гуз Аїа 5ег Аїа Аїа Ма! с1у Тиг Туг 20 25 за
Ммаї Аї1а Тгр Туг біп б1іп Гу5 Рго о1у Гу5 АТа Рго Гуз Гей Геи І1е 35 4о 45
Туг 5ег Аїа 5ег Туг Аг Гуз Аге б1у Маї Рго бег Аге Рпе 5ег 01у 5а 55 6о бЗег б1у 5ег б1у Тпг Азр Рпе ТиИг Ге ТНг І1е 5ег 5ег Гей бІп Рго 65 768 75 80 бі Абр Рпе АІ1а ТиИг Туг Туг Суб Ні5х б1п Туг Туг Тиг Туг Рго Геи 85 90 95
Рпе Тиг Рпе с1у б1іп б1у ТПйг Гух Ге бі Іе ух Аге Тиг Маї Аїа 196 195 116
А1а Рго бег Ма! Рпе І1е Ре Рго Рго 5ег Ар бІи біп Гей Гу 5ег 115 120 125 с1у Тиг АТа б5ег Маї Маї Су5 Ге Гей Азп Азп Рпе Туг Рго Аге би 130 135 140
А1Т1а Гуз Маї б1п Тер Гуз Маї Азр Ахп А1їа Гей біп 5ег бІ1у Азп 5ег 145 156 155 1606 б1п бІ1и б5ег Маї Тис бІи бІп А5р 5ег Гуз А5зр 5ег Тиг Туг 5ег Геи 165 176 175 5ег 5ег ТИг Гей ТИг Ге 5ег о Гу5 АТа Азр Туг бІи Гу5 Ні Гу Маї 188 185 199
Туг Аїа Су5х бІи Маї Те Ніх б1іп с01у Ге 5ег б5ег Рго Маї1ї Тиг Гу 195 200 205 5ег Рпе Азп Аге б1у О1и Су 210 215 «210» 147 «2115» 214 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг СОЗ (СЕА ТСВ) «400» 147 біп АТа Маї Ма! ТНиг б1п 01 Рго 5ег Гей Тиг Ма! 5ег Рго с1у о1у 1 5 19 15
ТигоМаї Тис о Ге Те Сузх б1у бег 5ег ТНг б1у А1а Маї Типг ТНиг 5ег 20 25 за
Ап Туг АТїа Азп Тгр Маї б1п бІи Гу5 Рго б1у б1п А1їа Рпе Аге 01у 35 ад 45 ей ІІе б1у б1у ТНг Абп Гуз Аге АТа Рго б1у Тиг Рго АТа Аге РПНе 5а 55 6о 5ег 01у 5ег Гей Ге с1у с1у Гу5 АТїа Аїа Ге ТиПг Ге б5ег О1у А1а 65 768 75 80 б1п Рго бІи Азр бІ1и АТа бІи Туг Туг Суб АТ1а Ге Тер Туг 5ег Авп 85 90 95
Гей Тгр Ма1ї Рпе б1у б1у с1у ТиИг Гу5 Ге Тиг Маї Ге 5ег 5ег А1а 1868 185 116 5ег ТИг Гуз б1у Рго 5ег Ма1ї! Рпе Рго Ге Аїа Рго 5ег бег Гу 5ег 115 120 125
Те о 5ег б1у б1у Тпг АТїа АТа Ге с1у Су5х Ге Маї Гу5 Ар Туг Рпе 130 135 140
Рго бі Рго Маї Тиг Маї бег Тгр Ахп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег 01у 145 156 155 1606
Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1іа Маї Гей б1іп 5ег б5ег о1у Геи Туг 5ег Геи 165 176 175 5ег 5ег Маї Маї ТиИг Маї Рго б5ег 5ег 5ег їеи б1у Тиг біп Тиг Туг 180 185 199
ІТе Су5 Абп Маї Абп Ні Гу5 Рго бег Азп ТиИг Гу Маї Ар Гу Гуз 195 200 205 маї біи Рго Гуз 5ег Су 210 «210» 148 «211» 694 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА СОЗ сго55тав МНоеК Жс виступ РЗ29БІ АГА (СЕА ТСВ) «400» 148 б1п Маї б1п Ге Маї бІ1п 5ег б1у Аїа бІи Маї Гу5 Гу5 Рго о1у А1а 1 5 19 15 5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5х Гуз АТїа 5ег б1у Туг Тийг Рпе Тиг бІи РНе 20 25 за с1у Меї Азп Тер Маї Аге б1п А1а Рго с1у б1іп б1у Ге сбТ1и Тер Меє 35 40 45 с1у Тер ІІе Ап Тиг Гуз Тийг б1у бІи Аїа Те Тугс Маї сїи ос1и Рпе 5а 55 6о
Гуз б01у Аг Ма! ТНг Рпе Тиг о Тиг Азр Тйг о 5ег Тс 5ег ТНг АТа Туг 65 768 75 80
Мет бІи Гей Аге 5ег Гей Аге 5ег Ар Азр ТиПг А1їа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге Тгр Азр Рпе Аіа Туг Туг Маї бі АТа Меє А5р Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Тс Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег
115 120 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї Гуз Азр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 188 185 199
Рго 5ег 5ег 5ег Ге б1у Тиг біп Тиг Туг ІІе Су5 Ап Маї А5п Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Ар Гуз Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
Ар біу б1у с1у б1у б5ег б1у с1у б1у о01у 5ег бІи Маї б1п Гей Ге 225 230 235 240 б1и 5ег б1у б1у б1у Гей Маї б1п Рго б1у о1у 5ег Гец Аге Геи 5ег 245 250 255
Су5х Аї1а А1їа б5ег б1у Ре Тиг Ре 5ег ТиИг Туг Аїа Мет Азп Тер Маї 260 265 278
Агев біп Аїа Рго б1у Гуз с1у Ге біи Тгр Ма! 5ег Аге ІТ1е Аге 5ег 275 280 285
Гуз Туг Азп Азп Туг Аїа Тийг Туг Туг Аїа Азр 5ег Маї Гуз О1у Аге 2908 295 зев
Рпе Тийг І1е 5ег Аг Ар Ар 5ег Гуз Азп ТИгоГеи Туг Геи б1п Меє 305 318 315 3206
Ап бег Ге Аге Аїа бі Азр Тиг А1а Маї Туг Туг Су5 Маї Аге Ні 325 3ззеа 335 о1у Азп Рпе б1у Ап 5ег Туг Ма1ї 5ег Тер Ре А1а Туг Тгр с1у б1Іп 340 345 3506 б1у ТНг Гей Маї ТиИг Маї 5ег б5ег АТїа 5ег Маї Аїа АТа Рго 5ег Маї 355 36а 365
Рпе І1Те Рпе Рго Рго бег Азр бІ1и біп Ге Гуз 5ег б1у Тиг АТа 5ег 379 375 380
Маї Маї Суз Гей Ге Абзп Абзп Рпе Туг Рго Аге бІ1и АТа Гу5 Маї б1п 385 390 395 лев
Тер Гуз Маї Азр Азп А1їа Ге б1іп 5ег б1у Азп 5ег біп бІи бег Маї 4085 416 415
Тиг бі б1іп Ар 5ег Гуз Азр б5ег ТИг Туг б5ег Ге 5ег 5ег Тиг Геи 420 425 4зо
Тиг Ге 5ег Гуз АТа Ар Туг бІи Гу Ні Гуз Ма! Туг АТа Су5 Оо1Ти 435 440 445
Ма1ї Те Ні5 б1п б1у Ге б5ег 5ег Рго Ма1ї Тиг Гуз 5ег Рпе Азп Аге а5а 455 460 с1у бІи Суб Азр Гу Тиг Ніб5 Те Суб Рго Рго Сух Рго АТїа Рго Оо1Їи 465 470 475 а8о
А1а Аїа с1у 01у Рго 5ег Маї Ре Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Ар 485 490 495
Тиг Ге Мет І1е 5ег Аге ТИг о Рго бі Маї Тиг Су5х Маї Маї Маї дор 5аа 5805 519
Уаї бег Ні5 бІи Аб5р Рго бі Маї Гу5 Рпе Азп Тер Туг Маї Азр 01у 515 520 525
Ммаї бі Маї Ніх Ахп Аї1а Гу5 Тиг Гуз Рго Аге бІи бІи б1п Туг Авп 53За 535 540 5ег ТИг о Туг Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1Іп А5р Тгр 545 559 555 550
Ге Азп б1у Гуз біи Туг Гуз Су5 Гуз Маї 5ег Азтп Гуз АТа Ге 01У 565 579 575
А1а Рго І1е бІи Гу5 ТПг І1е 5ег їТу5 АТ1а Гуз б1у б1п Рго Аге О1Їи 580 585 599
Зо
Рго біп Маї Туг Тиг Ге Рго Рго Су5 Аге Азр бІи Геи Тиг Гу Авп 595 вав 605 б1п Маї 5ег Ге Тер Су5х Ге Маї Гуз б1у Рпе Туг Рго 5ег Азр І1е 616 615 620
А1їа Маї бі Тер бі бег Ап б1у біп Рго бІи Ап Аб5п Тугс Гуз Тпг 625 6за 635 640
Те Рго Рго Маї Гей Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе РНе Геи Туг 5ег Гуз 645 6509 655
Гей ТИг Маї Азр Гуз 5ег Аг Тгр б1іп б1іп с1у Ахп Маї Рре 5ег Су 6ва 665 6709 5ег Маї Мет Ні5 бі Аїа Ге Ніб5 Абзп Ніх Туг Тийг біп Гу5 5ег Геи 675 680 685 5ег Ге 5ег Рго о1у Гу 690 «210» 149 «211» 451 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА МНСНІ Ес отвір РЗ29бІАГА (СЕА ТСВ)
«400» 149 б1п Маї б1п Ге Маї б1п 5ег б1у АТа бІи Маї Гу5 Гу5 Рго с1у А1Та 1 5 19 15 5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5х Гуз АТїа 5ег б1у Туг Тийг Рпе Тиг бІи РНе 20 25 за с1у Меї Азп Тгр Маї Аг» б1п А1а Рго б1у біп с01у Гей бІи Тер Мей 35 40 45 с1у Тер ІІе Ап Тиг Гуз Тийг б1у бІи Аїа Те Тугс Маї сїи ос1и Рпе 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Маї Тпг Ре Тиг Тиг Ар Тис 5ег Тс 5ег Тиг АїТа Туг 65 768 75 80
Мет бІи Гей Аге 5ег Гей Аге 5ег Ар Азр ТиПг А1їа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге Тгр Азр Рпе Аіа Туг Туг Маї бі АТа Меє А5р Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Тс Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 140
А1а Гей с1у Су5 Ге Маї Гуз Азр Туг Ре Рго бі Рго Ма! Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у А1їа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тег Рпе Рго А1Та 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Маї! Азтп Ні 195 2080 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Ар Гуз Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
А5зр Гуз Те Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго сб1и Аїа Аїа с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї А5р Маї 5ег Ні5 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи бі біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге Тиг Маї Ге Ні5 б1п Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 318 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТїа Рго І1е 325 3ззеа 335 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго біп Маї 340 345 3506
Су5 Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Азр бі Ге Тиг Гу Азп біп Маї1ї 5ег 355 36а 365
Гей бег Суб АТа Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер бі 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Абзп Тубс Гу5 Те Те Рго Рего 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авр Гу5 бег Аге Тгр біп біп с1у Азп Маї Ре 5ег Суб5 бег Ма1 Мет 420 425 4зо
Ні5 бі АТа Ге Ні5 Азп Ніх Туг ТиИг біп Гуз 5ег їеи 5ег Геи 5ег 435 440 445
Рго о1у Гуз а5а
Зо «210» 150 «2115» 232 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СОЗ МН-СІ (СЕАСАМ5 ТСВ) «4005 158 бІи Маї б1п Ге Гей бІ1и б5ег б1у с1у б1у Ге Маї б1п Рго є1у о01у 1 5 19 15 5ег Ге Аг Ге 5ег Суз Аї1а Аїа 5ег б1у Рпе ТиИг Рпе бег Тиг Туг 20 25 за
А1тїа Меж Азп Тгр Маї Аге б1п АТа Рго с01у Гу5 о1у Ге бІи Тер Маї 35 4о 45 б5ег Аге ІТе Аге 5ег Гуз Туг Азп Азп Туг АТїа ТНг Туг Туг А1Та д5р 5а 55 6о 5ег Маї Гуз б1у Аг Рпе ТПг І1е 5ег Аге Ар А5р 5ег Гуз Азп ТНг 65 768 75 80
Гей Туг Геи бІп Мет Абп 5ег Гей Аге Аїа бІи Азр Тийг АТа Маї Туг 85 90 95
Туг Суб Маї Аге Ні5 б1у Азп Ріпе б01у Азп 5ег Туг Ма1ї! 5ег Тер Ре
196 195 116
А1їа Туг Тгр б1у біп б1у Тийг Гей Маї ТИг Маї 5ег 5ег АТа 5ег Маї 115 120 125
А1їа Аї1а Рго 5ег Уаї Ре І1е Рпе Рго Рго 5ег Азр 01и б1п Геи Гу 130 135 140 5ег б1у Тиг АТа 5ег Маї Маї Су5 Ге Гей Абп Азп Рпе Туг Рго Аге 145 156 155 1606 б1ш АТа Гу5 Маї б1п Тер Гу5 Маї Ар Азп А1а Ге б1п б5ег С1у Авп 165 176 175 б5ег біп бІ1и 5ег Маї Тиг бІи біп А5р 5ег Гуз Азр 5ег Тиг Туг 5ег 188 185 199
Гей б5ег 5ег ТиИг Ге ТИг Ге б5ег Гуз АТа Азр Туг би Гуз Ні Гу 195 200 205
Ммаї Туг Аїа Сух5х бі Маї Тег Ніх біп б01у Гей б5ег 5ег Рго Маї Тиг 210 215 220
Гуз бег Ре Ап Аге б1у би Су 225 230 «210» 151 «211» 449 «212» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕАСАМ5 МН-СНІ(ЕЕ)-Ес (отвір, РЗ296 ІАГА) «400» 151 б1п Маї б1п Ге Маї б1п б5ег б1у АТїа бІи Маї Гуз Гу5 Рго о1у 5ег 1 5 19 15 б5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5 Гу5х АТа 5ег б1у Ре А5зп ІТе Гу5 Ар Тег 20 25 за
Туг Мет Ніх Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у б1іп с1у Ге бІи Тер Меї 35 4о 45 о1у Аге ІТе А5р Рго АТа Ахп бІ1у Ап бег Гуз Туг Маї Рго Гу Рпе 5а 55 6о б1п б1у Аге Маї Тийг Іе ТиИг А1Т1а Ар Тийг 5ег Тиг о бег Тиг АТа Туг 65 768 75 80
Мет бІ1и Гей бег 5ег Гей Аге 5ег бі Азр ТиПг А1їа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1Т1а Рго Рпе б1у Туг Туг Маї 5ег Азр Туг Аїа Меї А1а Туг Тер 01У 196 195 116 б1п б1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег б5ег Аї1а 5ег Тиг о Гу5 О1у Рго 5ег 115 120 125
Маї Рпе Рго Гей Аїа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у о1у Тиг А1а 130 135 140
А1а Гей с1у Су5 Ге Маї б1и Азр Туг Ре Рго бі Рго Ма! Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 188 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 2080 205
Гуз Рго 5ег Азп ТИг Гуз Маї Азр бІи Гуз Маї бІи Рго Гуз 5ег Су 210 215 220
А5зр Гуз Те Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго б1и АТа Аї1а с1у 225 230 235 240 о1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Рпе Рго Рго Гу5 Рго Гуз Азр Тиг Геми Мей 245 250 255
І1е б5ег Аге ТИг о Рго бі Маї ТНг Су5 Маї Маї Маї Ар Маї 5ег Ні5 260 265 278 б1и Ар Рго бі Маї Гу5 Ре Азп Тгр Туг Маї Азр б1у Маї о1и Маї 275 280 285
Ні5 Азп АТа Гуз Тиг Гуз Рго Аге біи б1и біп Туг Азп бег Тиг Туг 2908 295 зев
Аге Маї Маї 5ег Маї Ге ТНг Маї Гей Ні5 б1іп Азр Тгр Гей Азп 01Уу 305 318 315 3206
Гуз бІи Туг Гуз Суз ух Маї б5ег Азп Гуз АТа Ге с01у АТа Рго І1е 325 330 335 бі Гу5 Тиг І1е 5ег Гу5 АТа Гуз о1у б1іп Рго Аге бі Рго біп Маї 340 345 3506
Суб Тиг Ге Рго Рго 5ег Аге Ар біи Ге Тпг Гу5 Азп біп Маї1ї 5ег 355 зва 365
Гей бег Суб АТа Маї ух б1у Рпе Туг Рго б5ег Азр І1е АТїа Маї си 379 375 380
Тер 610 5ег Азп б1у біп Рго бі Абп Азп Туг Гу5 Тс ТВг Рго Рго 385 390 395 лев
Маї Ге Азр 5ег Азр б1у 5ег Рпе Рпе Ге Маї 5ег Гуз Гей Тиг Маї 4085 416 415
Авр губ бег Аге Тгр біп б1п бІ1у Азп Ма1ї Ре б5ег Сух5х бег Ма1ї Мей 420 425 4зо
Ні5 61 Аїа Ге Ні Абзп Ніх Туг Тиг б1п Гу5 бег Геи бег Геи 5ег
435 440 445
Рго «210» 152 «211» 674 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕАСАМ5 МН-СНІ(ЕЕ)-СОЗ МІ -СНІ1-Ес (виступ, РЗ296 І1АГА) «400» 152 б1п Маї б1п Ге Маї б1п б5ег б1у АТїа бІи Маї Гуз Гу5 Рго о1у 5ег 1 5 19 15 5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5з Гу5 АТїа 5ег б1у Рпе Абзп І1е Гу5 А5зр Тпг 20 25 за
Туг Мет Ніх Тер Маї Аге біп Аїа Рго с1у б1іп с1у Ге бІи Тер Меї 35 40 45 б1у Аг ІТе Ар Рго АТа Азхп бІу Азп 5ег Гуз Туг Маї Рго Гуз Рпе 5а 55 6о б1п б1у Аге Маї Тийг Іе ТиИг А1Т1а Ар Тийг 5ег Тиг о бег Тиг АТа Туг 65 768 75 80
Зо
Мет бІ1и Гей бег 5ег Ге Аге 5ег бі Азр ТиИг Аїа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Рго Рпе с1у Туг Туг Маї 5ег Азр Туг АТїа Меє А1а Туг Тер 01у 196 195 116 б1п с1у Тиг Гей Маї Тис Маї б5ег 5ег Аїа 5ег Тиг Гуз ОТ1у Рго 5ег 115 120 125 маї Рпе Рго Гей АТа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег б1у с1у Тиг АТа 130 135 140
А1а Ге б1у Сух Ге Маї 61 Авбр Туг Ре Рго бІ1и Рго Маї Тиг Маї 145 156 155 1606 5ег Тгр Азп б5ег б1у Аїа Ге Тиг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Рпе Рго А1а 165 176 175
Уаї Ге біп 5ег бег б1у Ге Туг б5ег Ге бег 5ег Маї Маї Тиг Маї 180 185 199
Рго бег бег 5ег Ге біу Тйг б1іп Тйг Туг І1е Су5 Абп Ма! Азп Ні 195 200 205
Гуз Рго 5ег Азп ТПг Гуз Маї Азр бІи Гу5 Маї бІ1и Рго Гу5 5ег Су 210 215 220
Ар біу б1у с1у б1у бег б1у б1у б1у б01у 5ег б1п А1а Маї Маї Тис 225 230 235 240 б1п бІ1и Рго бег Гей Тиг Маї 5ег Рго б1у б1у Тиг Маї Тиг Геи Тпг 245 250 255
Суз б1у 5ег 5ег Тпг б1у АТа Ма1ї Тиг ТНг 5ег Азп Туг АІТа Азп Тер 260 265 278
Ммаї біп бІи ух Рго б1у б1п А1їа Рпе Аг б1у Гей І1е с1у о1у ТЕиг 275 280 285
Ап Гу5 Аге АТа Рго б1у Тийг Рго А1а Аге Рпе 5ег О1у 5ег Геци Ге 2908 295 зев со1у с1у Гу5 АТ1а АТа Гей Тиг Ге 5ег б1у А1їа б1п Рго бІи А5р би 305 310 315 3206
А1їа бі Туг Туг Су5 Аї1а Ге Тер Туг 5ег Азп Гей Тгр Маї Ре 01у 325 330 335 б1у б1у Тпг Гу5х Ге ТиИг о Маї Гей б5ег 5ег АТа 5ег Тиг Гуз О1у Рго 340 345 3506 5ег Ма1 Ре Рго Ге Аїа Рго бег 5ег ух бег Тиг 5ег б1у с1у ТНг 355 36а 365
А1їа Аї1а Ге с1у Су5 Ге Маї Гуз Азр Туг Рпе Рго бІи Рго Маї ТЕиг 379 375 380
Маї бег Тгр Азп бег б1у А1а Гей ТПг 5ег б1у Маї Ні5 Тиг Ре Рго
Зо 385 390 395 лев
А1їа Уаї Ге б1п бег бег б1у Гей Туг 5ег Гей б5ег 5ег Маї Маї Тиг 4085 416 415 маї Рго 5ег 5ег 5ег ей б1у Тиг біп ТиИг Туг І1е Су5 Азп Маї Азп 420 425 4зо
Ні5х Гу Рго бег Абзп ТИг оГух Маї Азр Гух Гу5 Маї бІи Рго Гу 5ег 435 440 445
Су5з Азр Гуз Тиг Ні Те Суб Рго Рго Су5 Рго АТїа Рго би Аа А1а а5а 455 460 с1у б1у Рго б5ег Маї Рпе Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТЕиг Геи 465 470 475 а8о
Мет І1е 5ег Аге ТИг Рго бі Маї Тийг Су5х Маї Маї Маї Ар Маї 5ег 485 490 495
Ні5 бі Ар Рго біи Маї Гу5 Рпе Азп Тгр Туг Ма1ї Азр б1у Маї си 5аа 5805 519
Маї Ні5 Азп АТа Гу5 ТПг Гу Рго Аге бІи бІи б1п Туг Азп б5ег ТНг 515 520 525
Туг Агв Маї Маї 5ег Маї Геи Тиг Маї Геи Ні5 б1іп Азр Тер Геи Азбп 53а 535 540 со1у Гу5 бІи Туг Гуз Су5 Гу5 Маї б5ег Ахп Гуз Аїа Ге сОТ1у АТа Рго
545 559 555 550
Іе бІи Гу5 Тиг І1е б5ег їу5 АТа Гу5 б1у б1п Рго Аге б1и Рго б1п 565 579 575
Маї Туг Тиг Гей Рго Рго Су5х Аге Азр бІи Гей ТПг Гух Азп біп Маї 58 585 599 5ег Ге Тгр Су5х Ге Маї Гуз б1у Ре Туг Рго б5ег Азр І1е АТа Маї 595 вад 6о5 б1и Тер бІ1и б5ег Абп бІ1у біп Рго бІи Абп Абзп Туг Гу5 Те Те Рего 616 615 620
Рго Маї Гей А5р б5ег Ар б1у 5ег Рпе Рпе Геи Туг 5ег Гуз Гей ТНг 625 6за 635 640
Маї Азр Гуз 5ег Аге Тгр б1іп бІп б1у Абп Маї Рпе 5ег Су5 5ег Маї 645 6509 655
Мет ніх бІ1и АТїа Ге Ніб5 Азп Ні5х Туг Тиг б1іп Гу5 5ег Геи 5ег Геи 6ва 665 6709 5ег Рго «210» 153 «2115» 218 «212» Білок
Зо «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕАСАМ5 МІ-СІ (ВК) «400» 153 бі ІІе Маї Ге Тиг б1п б5ег Рго Аїа Тиг Ге 5ег Геци 5ег Рго б1у 1 5 19 15 бій Агб АТїа ТНгоГеи б5ег Су5 Аг» АТа бІ1у бі 5ег Маї Азр Пе Рпе 20 25 за со1у Маї с1у Ре Гей Ніх5 Тер Туг б1п б1п Гу5 Рго б1у біп АТа Рго 35 ад 45
Агв Гей Ге І1е Туг Аг АІа 5ег Абп Аге А1ї1а Тиг б1у ІТе Рго А1Та 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 5ег Ге бі Рго бІ1и Азр Рпе Аїа Маї Туг Туг Су5 біп б1п ТНг Авп 85 90 95 бій А5р Рго Туг Тиг Рпе с1у біп с1у Тпг Гух5х Ге бІи Ше Гуз Аг 196 195 116
Тиг о Маї Аї1а Аїа Рго бег Маї Рпе І1е Рпе Рго Рго 5бег А5р Аге Гу 115 120 125
Гей Гуз 5ег бІ1у ТПг А1їа 5ег Маї Маї Су5х Гей Ге Абзп Азп Ре Туг 130 135 140
Рго Аг» бі АТа Гух Маї б1іп Тер Гу5х Маї Ар Азп АТа Ге б1іп 5ег 145 156 155 1606 о1у Абп б5ег біп бІ1и бег Маї Тег бІи б1п А5р 5ег Гуз Азр 5ег. Тпг 165 176 175
Туг 5ег Ге б5ег 5ег ТИг о Геи Тиг Ге 5ег Гу5 АТа Азр Туг ОЇ Гу 188 185 199
Ні5х Гуз Маї Туг Аїа Су5х бІ1и Маї Тиг Ніх біп б1у Ге бег 5ег Рго 195 2080 205
Маї Тег Гуз 5ег Рпе А5п Аге о1у О1и Су 210 215 «210» 154 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОКІ1 «4005» 154 бі Рбе б1у Мет Азп 1 5 «210» 155 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОВК2 «400» 155
Тер Те Азп Тиг Гух Те б1у 610 АТа Тиг Туг Маї сб1и би Рпне Гу 1 5 19 15 а1у «210» 156 «2115» 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОКЗ «400» 156
Тер Азр Рпе АТа Туг Туг Ма! бІ1и А1їа Меї Азтр Туг
1 5 19 «210» 157 «2115 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-І СОК1 «400» 157
Гуз Аїа 5ег Аїа А1ї1а Маї с01у Тиг Туг Маї А1Та 1 5 19 «210» 158 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-І СОВ2 «400» 158 5ег А1Т1а 5ег Туг Аге Гуз Аге 1 5 «2105 159
Зо «2115 169 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-І СОКЗ «400» 159
Ні5х б1п Туг Туг Тиг Туг Рго Ге РіНе ТНг 1 5 18 «210» 160 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА МН «400» 160 б1п Маї б1п Ге Маї б1п 5ег б1у АТа бІи Маї Гу5 Гу5 Рго с1у А1Та 1 5 19 15 б5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5х Гу5 АТа 5ег б1у Туг ТНг Рпе Тиг бІи Рпе 20 25 за с1у Меї Азп Тгр Маї Аг» б1п А1а Рго б1у біп с01у Гей бІи Тер Мей 35 40 45 с1у Тер ІІе Ап Тиг Гуз Тийг б1у бІи Аїа Те Тугс Маї сїи ос1и Рпе 5а 55 6о
Гуз б1у Аге Маї Тпг Ре Тиг Тиг Ар Тис 5ег Тс 5ег Тиг АїТа Туг 65 768 75 80
Мет бІи Гей Аге 5ег Гей Аге 5ег Ар Азр ТиПг А1їа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Аге Тгр Азр Рпе Аіа Туг Туг Маї бі АТа Меє А5р Туг Тер 01у 196 195 116 б1п б1у Тиг Тис Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «210» 161 «211» 188 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА МІ «400» 161
Ар І1е бі1іп Меї Тпг біп 5ег Рго бег 5ег ей б5ег А1а 5ег Маї 01у 1 5 19 15
А5зр Аге Маї Тиг Іе Тиг Су5х Гуз Аїа 5ег Аїа АТа Ма! с1у Тиг Туг 20 25 за
Ммаї Аї1а Тгр Туг біп б1іп Гу5 Рго о1у Гу5 АТа Рго Гуз Гей Геи І1е 4о 45 35
Туг 5ег Аїа б5ег Туг Аг Гуз Аге б1у Маї Рго 5ег Аге Рпе 5ег О1у 5а 55 6о 5ег б1у 5ег б1у ТиПг Азр Рпе ТПг Геи ТНг І1е бег 5ег Ге бІп Рго 65 78 75 2 бі Азр Рпе А1а ТиИг Туг Туг Суб Ні5х бІп Туг Туг Тиг Туг Рго Геи 85 90 95
Рпе Тиг Рпе б1у б1п с01у Тиг Гуз Гей бІ1и Пе Гу 186 185 «210» 162 «2115 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОВІ1 (СЕАСАМ5) «400» 162
Ар Тпг Туг Меї Ні 1 5
«2190» 163 «2115 17 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОВ2 (СЕАСАМ5) «400» 163
Агв І1е А5зр Рго Аїа Ап б1у Азп б5ег Гу Туг Маї Рго Гуз Ре б1п 1 5 10 15 а1у «210» 164 «2115» 12 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-НСОВЗ (СЕАСАМ5) «41400» 164
Рпе б1у Туг Туг Маї б5ег Азр Туг Аїа Меє Аа Туг 1 5 10 «2190» 165 «2115» 15 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-ІСОВ1 (СЕАСАМ5) «400» 165
Агв Аї1а б1у бІ1и бег Маї А5зр І1е Рпе б1у Маї о1у РНе Геи Ні 1 5 10 15 «2190» 166 «2115 7 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА-ІСОВ2 (СЕАСАМ5) «400» 166
Аге Аї1а бег Аб5п Аге АІа ТЕиг 1 5 «2190» 167 «211» 9 «212» Білок
«213» Штучна послідовність «223» СЕА-ІСОВЗ (СЕАСАМ5) «400» 167 б1п б1п Тс Аб5п бІ1и Авр Ргсо Тугс Тег 1 5 «210» 168 «2115 121 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА МН (СЕАСАМ5) «400» 168 б1п Маї б1п Ге Маї б1п б5ег б1у АТїа бІи Маї Гу5 Гу5 Рго о1у 5ег 1 5 19 15 5ег Маї Гуз Маї 5ег Су5х Гу5 Аїа 5ег б1у Рпе Азп І1е Гу5 Азр ТНг 20 25 за
Туг Мет Ніх Тер Маї Аге біп А1а Рго с1у б1іп б1у Ге сбТ1и Тер Меє 35 ад 45 б1у Аг ІТе Ар Рго АТа Азп бІ1у Азп б5ег Гуз Туг Маї Рго Гу5 РНе 5а 55 6о б1п б1у Аге Маї Тийг Іе ТиПг АТа Ар Тиг о 5ег Тиг 5ег Тис АТа Туг 65 768 75 80
Мет бІ1и Гей бег 5ег Гей Аге 5ег бі Азр ТиПг А1їа Маї Туг Туг Су 85 90 95
А1а Рго Рпе с1у Туг Туг Маї 5ег Азр Туг Аїа Меї Аї1а Туг Тгр б1у 1868 185 116 б1п с1у Тиг Ге Маї Тиг Маї 5ег 5ег 115 120 «2190» 169 «2115 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» СЕА МІ (СЕАСАМ5) «400» 169 бій ІІе Маї Ге ТНг біп 5ег Рго АТа ТПг Геи 5ег Гей 5ег Рго 01у 1 5 19 15 б1и Аге АТа ТИг Гей бег Су5х Аге Аїа б1у бі 5ег Маї Азр Пе Рпе 20 25 за со1у Маї с1у Ре Гей Ніх5 Тер Туг б1п б1п Гу5 Рго б1у біп АТа Рго 35 ад 45
Агв Гей Ге І1е Туг Аг АТа 5ег Азп Аге АТа ТиПг б1у І1е Рго АТа 5а 55 6о
Аге Рпе бег б1у бег б1у 5ег б1у ТПг Азр Рпе Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 768 75 80 5ег Ге бі Рго бі Ар Рпе Аїа Маї Туг Туг Су5 біп бІп Тиг Азбп 85 90 95 б1и Ар Рго Туг Тиг Рпе б1у біп о1у Тиг Гуз Ге си І1е Гу

Claims (5)

196 195 116 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Біспецифічне антитіло, що містить перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з білком запрограмованої смерті клітин-1ї (РОТ), ії другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з геном активації лімфоцитів-3 (ГАС3З), причому біспецифічне антитіло є двовалентним і містить Ес-домен, де перший Раб-фрагмент містить зазначений перший антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, що містить домен МН, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ПО МО: 9, і домен МІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 10, і другий Рар-фрагмент містить другий антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ІГ АС3, що містить домен УН, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 20, і домен МІ, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 21.
2. Біспецифічне антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес- домен, який являє собою Ес-домен Іда, зокрема Ес-домен ІДС1 або Ес-домен Ідса, і при цьому Ес-домен містить одну або більше амінокислотних замін, які зменшують зв'язування з Ес- рецептором, зокрема з Есу-рецептором.
3. Біспецифічне антитіло за п. 1 або 2, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить Ес-домен підкласу ЇД21 людини з амінокислотними мутаціями І 234А, І 235А і РЗ29СО (нумерація відповідно до індексу Є за Кабатом).
4. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-3, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить ЕГс-домен, що містить модифікацію, яка сприяє асоціації першої та другої субодиниць Ес-домену.
5. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-4, яке відрізняється тим, що перша субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни 53540 і ТЗ36б6УУ (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а друга субодиниця Ес-домену містить амінокислотні заміни У349С, 73665 і У407М (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
6. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-5, яке відрізняється тим, що в одному з ЕРар- фрагментів варіабельні домени МІ і МН замінені один на одний так, що домен МН є частиною легкого ланцюга, а домен У є частиною важкого ланцюга.
7. Біспецифічне антитіло за п. 5 або б, яке відрізняється тим, що в першому Рар-фрагменті, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з РОТ, варіабельні домени МІ і МН замінені один на одний.
8. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-7, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить РГар-фрагмент, при цьому в константному домені Сі амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщають лізином (К), аргініном (Р) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщають глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом).
9. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 6-8, яке відрізняється тим, що в другому Еар- фрагменті, який містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з ГАЗ, у константному домені Сі амінокислоту в положенні 124 незалежно заміщають лізином (К), аргініном (К) або гістидином (Н) (нумерація відповідно до індексу ЄЮ за Кабатом), а в 60 константному домені СНІ амінокислоти в положеннях 147 і 213 незалежно заміщають глутаміновою кислотою (Е) або аспарагіновою кислотою (0) (нумерація відповідно до індексу Е)О за Кабатом).
10. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-9, яке містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5620 10 МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52Е2 ІЮО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗБО ІО МО: 100, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:
101.
11. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-9, яке відрізняється тим, що біспецифічне антитіло містить другий Гар-фрагмент, що містить антигензв'язуючий домен, який специфічно зв'язується з І АСЗ, який злитий з С-кінцем Ес-домену.
12. Біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-9 або 11, яке містить перший важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 96, перший легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 560 ІО МО: 98, другий важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність 52ЕО ІЮО МО: 144, і другий легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 101.
13. Полінуклеотид, що кодує біспецифічне антитіло за будь-яким з пп. 1-12.
14. Прокаріотична або еукаріотична клітина-хазяїн, що містить полінуклеотид за п. 13.
15. Спосіб одержання біспецифічного антитіла за пп. 1-12, що включає культивування клітини- хазяїна за п. 14 в умовах, придатних для експресії біспецифічного антитіла, і виділення біспецифічного антитіла із культури.
16. Фармацевтична композиція, яка містить біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 і щонайменше один фармацевтично прийнятний наповнювач.
17. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 або фармацевтична композиція за п. 16 для застосування як лікарського засобу.
18. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 або фармацевтична композиція за п. 16 для застосування при лікуванні онкологічного захворювання.
19. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 або фармацевтична композиція за п. 16 для застосування при лікуванні хронічної вірусної інфекції.
20. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 або фармацевтична композиція за п. 16 для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, причому біспецифічне антитіло вводять в комбінації з хіміотерапевтичним агентом, опроміненням та/або іншими агентами для застосування в імунотерапії онкологічного захворювання.
21. Біспецифічне антитіло за будь-яким із пп. 1-12 або фармацевтична композиція за п. 16 для застосування в профілактиці або лікуванні онкологічного захворювання, причому біспецифічне антитіло вводять в комбінації з анти-СЕА/анти-СОЗ біспецифічним антитілом. ДНР Днтк-шлуза її ск Ех Ре-вуштел в Ге-оте»
Фіг. 1д їжнт»- 1 З похо МН о Ж тн сх Шан ООН а о МИ В я кох КО ня СЯ З УК пщх хіт КО є - ПА Бена й Ур-вете ВН я ШЕ чн ВК Мету . вні РІ сні ей СА НЕ ше ВАТА АБЕ у - «ПИСюм, мем в ШИ ОБ хо ПИЛИ ШИМИ ЖИПИИИЯ ДИ ДК кт ун Ко Й Я СК: ЯМ КК КЕ г и У Боаиступ к Що Ееотвр ЗИ КО УНК
СН. шву Ко а. 0 дитей Іо: ЗМК НЕСТИ Ж А жен Прошходнюи писельшівниХ кхаідуця: дат А СПИ МИ й є х М во НН ук Ки фшинни вй ЕФ / А НЕ и МК в. ВА Б Бо -е Є к, ДИМ - Рота СО есовистув ще й. НЕ зма Б лделпя-вО я чн М дитя-узі тн БУ МИ ДВ Ко ШИК ННЯ МЕН ИН . МУ Бо-виступ Ро-отвір ЗЕ ЯК их ФЕН: 0 нео Ве мно
Фіг. 1Е антеі цех сов ШУ РКК ЕЙ ЕХ М У ШК, ДО хо уча у хм ач Ес-отана й Беовистуй м о Сам да парне Ве
ЯН. вт ЧИХ УН М звам о ССЕСТЕОВІИЙ дишЕЛЬСИщНюЙ зв яхи
Фіг. ЛЕ лантк ІЛ шк ма кт КЕНЕ МОМ ДН сен КОМОЮ зву М КШИИИИЛИ ШИПШИНИ Ех 1 ШЕННКВ ТШХ КО В р Я Си кя м я М. ев В ОЦЯ ОН З сківкі яз Б ре ; с ОУН ЕЙ Мою кроея г ІКТ їні їні дити ше Пенродкий дикульфідняй зв'язок
Фіг. 15
Я ; т ета гр ям ШЕ С УНЩЕ ВЕ ММА Вееа КВ НУ ж : ї МИХ ЕВ їх КЕ М ОО нт БАД кю п КИ нак ки (ЕЄЇ
Фіг. 1Н ча дитя її во ЕНН НВО еВ ВЕН ке У ; ОДНІ і ов ЕТ Аяти-вті СЕ СКІВК ке ше шах ЕКО БЕК о Ж і в зсичаса ХМ В. и УЖ ВК І-ї ЗЕЕООУХ
Фіг. І
Протозна цитометрів гознаньу В з Ж ц ж ж З З х Ек - ру З с «5 т Ж з я ж шк Ж а х « зх З о. й і ж она се е о. ях и її 8: ї Ж сою З В З рв о вк ще поя в ря зе ТЕ па в. Я 8. пе ї Ж : о ш я в ж ш Во ще п їй Я 4 ЇЄ Код М й у « о сшйко ЗБ ю М МБ ок й ВК А соб І Я ср Кв я ОК о вою М Ж жа сема А шк к ок У а дане середня СЕН як кн ех ож
Фіг. 2А ін-ж вра Кк 8 х х З Я х - ї т 5 5 х « й я зож зі - ї - « В т Ж їх дж х З З ме. Ж што Ж КИ ЯЖОу д вю х У ше пт ВК В МЕ Мох І Що Ж: х х Е а ат " жо шк Й ШК 5 об ше а У Ж хо ШКО й До у ов» М «а Кк а и и ЯК и КК и і у Кай я ож о х хе Ме ж я а З Ж жа ва й ся кі ел, - - со як с щ ее щей Я дензнів сввяднх вижнаиня СВОЇ ож у У Ї Ко ок ші Ж йду -Е я
Фіг. 28
МАЯ Тлти ми ча АККАТХ тознзим В Р ща ЕТ ду ща - . Ж ул АВАААВТ у: ж Е З х ї Ще - т жо 7 х Ж жк і ї ж т. х соки. пух : їж ж Ор еохюрюх ж я їж веж С х ру ом ж Ж. я Ж
Ж 1. яко жах зн: Кс р ее сезж - Ек з жі жр . В : як в. ПК ж . КЗ До же дк Же де Ей Х а С ду щ -- «Е «У «Х БУ я ее не Я УЗ ке «? я че хе «й хх ік ей «й -в Ка Ж со й ще що я я ще Ки «і я з п ШИ» р ще я Ед донорів Хеекрчауюкв: знкавеажнь КУ Геднанм В мох мл Зя З х ї щі" КЗ вена док. ї з я нн в г ПАКАМА п ЗЕ КУ шт тет як Як ЖЕ : р ; ТЕ як т : у я Ще зх МК я У де жк вОши: шиє Шк Є ШИК) о ее Ух ке ва са с оси о ке я ее а ше З а КО кю КТ З « я З 7 ФУ а че З З Б дено Мохрадне зканавна КПК
Фіг. 4А
Ттмажтрег Не
«В. х й нн В не что кк Кок пенні В п же они Я ПВ Я о пт ШК ТиШКх: Со т ІЙ Ж Я о дв. кине ЕН КБ а . « | я а є З я я 0 З чі еко пам ооо яка й ке Я Кк Ко кошюкоря Мередни воднанния СК
Фіг. 4 ЖК у я - -е б й . ооо солі й с ГОМ Ж отв ясге х Соні зн й сей спе оооса . ся « ЖК й он ри ке ЗУБ х й й ше кате
5. й .К КЕ й за ЦОЖІ т 1ЖИ ж ї й я ЖОВ Ж їх же
К. - хх фронтони ессефіесстененов -а- ПІДЕ лу юю юку тю уч ую, Ер; щі З БУ зані. антів яз еи
Фіг. БА шк | зе ; й сейевь й ік алтнхй ща ЖАЖАНН : диню . Йов» У як 091 що ООов. і ж я зе Та с. и «й 0907 - Ж Ж я вав Ж й ш: ДУХ Ж хх З ОТО не : щем а щи ба Я чо щЕ хони. антитіла (магми
Фіг. 58 те я ж ЗОВ тн | жа Х я -щ- іо і вка КВ
З. Ей а як: їх Мод тм я ; клин судо о я О снилак. Ж «й ж о -жк- меш РОТУ а зомюв ? я - й кий ї ки т НЖодяйння - кі яфттннв ОН ж се ва Беж: З КІЗ: вовни» антитіла ПикгуМмлі
Фіг.
хво. ооейк, «в ТБ А ше 4 с .ш ж поз В с. ве кож дес ї н «М ВИК й одне еетеенкн - ще с дже су Ко за роз 158 - Ж од х ен ж викл Я ї в свй нн нн з ТЕО ТИ Ж а дар ; Дзоаез ЗЕ йо ввнюс- х жодне як тик ЗВ К рф сссесех Ефект ря укосу то т п друку у фулпг с пасе кку уки Я щи ке Я М хо аматіжа ЕТ ЯН
Фіг. 50) за З я Я а в с МЕЖ. : З Х х З Зкхемух те соті
Фіг. А пен нн нн п яКУКе Ж Зк г ї х Но ї деЕх 7 ї Ж г їх х му їх " їв п ж їх КЯ я х Ж її МО Кі з щі Ж с УК т х х и ї поли - Ж ай : до дитини 7 Еш ах шо дн с ї М У МЖК фкеаУекмице
Фіг. 58. АКА КАК КАК КАХ КАК КАК КК КА КАК КАК АХА КАК «сю ЗУ ж х 3 є х. зр с: Ж пЖЕО Кк и Ї 7 хх в є Б КУ ї Ж їх І Є У 3 ї т сит 7 ї : ПІ В век МЕ - с М Зажр У 3 7 ї як Кк Щ ї ї Як 7 жк а ї має фс хо, ; Б СУ ТЕ ЕХ УКЖЕКХ
Фіг. С поки. Зх з Ії ТЯ я й з ок ши 7 ! ї в 1 х дим ХЕ З їх лю ї з
Х Ж. т з х ЖІ и і Е5У ї, к З ке КО з п х : В; ї -к : З ке « . з Е 7 : З Коди у : ! деНУЛ у пи : З ЛКК Кола фак ккд КК кан Ех хх ЗИМ Соомуюженкя
Фіг. 60 у кодовою ТЕ нн Н ЩІ с Е ЗК Кк , 7 5 хх , ї ке І: Е - по 7 і х. НН ще Е до 7 2 І Х : у І - Мои ХЕ у х ї й і К Е : І: Можу Ж у Мт гі . о тн я І ї х : і ї не : сих 7 : ! Му сен Е х х : плов 7 : . І жи ван Ж її ЖЖ ЗК цаМВА Ж дик ши Ж ке я ми ж С х сей с З шк 7 ж їх з Х їх ЗДЕ 27 Ока Я: колу о хек - : фе К. бе хї ; х нн донна нн НК на нн Дн нн нн нн нн В вів жомхлю дак дит : х ее х Там т : Я : ї : - ї лют г ї о0жяже - 21 е ОК 2 ї х де КУ х Ж : ЕК ї ШО га пог гл пи гли і х НН: й : х х кої їх ххх ми х З От : ск Ої т Ес я : ї х шт : : вае ше : : Зхежмцякх
Фіг. 7 зречення зва биту ще ко ша те КУ соди 1 « п ОХх век : мн Ж оз : кое ДЕ З х ше 7 Е Ж - Що зво З ожж ке й: оду, НУ хаекке Кк ск гої квЖе ше ЖЕ а : Ж, и ВКККИю Зеесмещи : ен сн нн у нн ХМК Ця Кн пе ООП о В : пн а Н - я с ї совяавте дзен : Кк й ї х , с УК, Сай ї ро жаКете її : Н КЕ и ї Н «вчи 27 ї і 18 В Ї : хе Ей ї Н 4 ка є ї БфО УЖЕ КЕ М ї ВО скид КІ сн в ї Не ЗК х Кі шк пев : Н х 2 оду хх іо век сани : і ТЕ ж жо : : пусте о ї : ЯКО. яко ї зви ес Ї Н ЗІКККН ЗИМІ ї і м ж Ї ! о ї : Я за : мий ві
Фіг. ТЕ я КК я пІВЕ йо М й и : до В -к - ї вне ян : е Ж : дея юю : Е фс : по З їде захеж ІК !
Фіг. 7Е щі ї 7 ке ях М і 5: А ! -х і ї Ук : ЕХ: їі а і хх Х ї В ккнннннннь о нини і З т їх і СБ 15 Ще : т Кіно утчтомрт же й | сек квдеднея
Фіг. вА о Інтерналізація є ї-клітинах р х в оо - БО. . ВЕ У 5 КО ща . о ї о СЕК і. хх о БАМИ ня ЩЕ Ж 7 З 7 що ко Ж сво Ж Я ей їк о Кв ж в аа Є об обо аа баню З АК
Фіг. 88 2А1 ам іду БРОБА ВОЗ ЗЕМ ЗЕБІ-ЕВх ї-ї ї-х ж ки хо несе ВНЗ со Ноя М. ШОВ Б С ЩЕ ше и ВУ З ше м КЗ . 15 в ж Ор й ща. в Е роса ВЕНИ ех ЩЕ: й Я ше нев ї дб. Же я т я І ж й ше Я о Бо яса т т. Ме УНН: Ї нн ШСЗ Б ЦИ С КН ПЕ вия їсод ще ШЕ и я Ку . Ше В с Шо С Й ШИ и КО ОЙ ЗК, ВЕК кни е МИ Бі ши ши шк з З тод Как кое 5 п и в в і А иа и Я Шо о ЕК я и ре ве Ко ак Я С щи БО і й Б
Фіг. ЗА Ж : мене Я ї ее ее ее У г - Я до ї я 5 і - : 5 : - : 5 : : 104 5 : 884 Хуюююй зно Вк 2 ! Б 44 Ж Я КЗ | жк Ух Й Е в те ОХ 5 ооа-я ке і я ЖЕ й ах? КЕ Ж : - Б; : ук ск ик сх зе У 5 ок ха щу ща жо а мое, Ж Мо ак а а я Ж
Фіг. 98 ВАДИ Я зані т нюх
Фіг. 10А
ВИМИ Хо МОЇ Її ши Я нн ООН -й
Фіг. ЛОВ ем ВАД ЦЕ У вдову ї х ШІ Її І ВО ШОЇ : НЕ ВО ї : 7 в ОО
Фіг. 1ОС Зв'явлазння знттіля тету пор НеНнЕЗ Трог ЗИща 1 : : ше І а Їж , ші й дження чення, по Е В З - Кей ї КУ т «З і я Ж знеких "те и. нн пак чо ж т я к п хх ко ФВ Ан М х г сх се г х. о ох Ж й ее яко ой шк а Но чо Я Ка му У бе а о жо ее є
Фіг. 100
Сумісне блокування РО-Ї тя Трог зберігає екракторні чУункці їтип від Грег пригнічення ш ва 2 ж Ах т вд є ко ее важ С се І ск сожж че Е во й сне ЦО се з Б т ж х левдя Уже ЖЕ перех х кю йокникь тер - Зх ке ак де яймю 00 ЖЕО 00 ваосннуууууутувууууни нн нуту нон кино нн диня т с'Фгчм'ссссссссссннлнлнюнюлюлтвлнлнлнснВєвввн є Ж Ов як я ще ППФП ван
Е Б. ої с ЖЕД в с їй о ш зх Дідро с о я ш с ще ще ех 7 я М ще ще В Зб М І ХЕ ак до й х х х 2 с г
Фіг. 11
Сумісне блокування РО-Ї та Її АС-З посилює спенифічні дпя пухпинного антигена векторні функції 1 -ютітин у МАНЕ пацієнтів з мепаномона їх 7 ЖЕ Е о 7 я Гранзим Ве, КВН ух Б їх в а Гранзим В, ВЕН-х- С в ще ЩЕ -к - С пит, її «У ї ско Щй ТЕ ще -е ЩО в 5 Б дя ре хіх де С а КЗ ЗУ х пе ех її Ж ей а Як М а Кк Донорів іСереднє значення, СПО
Фіг. 12
UAA201910132A 2017-04-05 2018-04-03 Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3 UA128451C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17165125 2017-04-05
PCT/EP2018/058382 WO2018185043A1 (en) 2017-04-05 2018-04-03 Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA128451C2 true UA128451C2 (uk) 2024-07-17

Family

ID=58489657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201910132A UA128451C2 (uk) 2017-04-05 2018-04-03 Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3

Country Status (32)

Country Link
US (2) US11285207B2 (uk)
EP (2) EP4516809A3 (uk)
JP (3) JP6997212B2 (uk)
KR (2) KR102408873B1 (uk)
CN (2) CN110506059B (uk)
AR (1) AR111361A1 (uk)
AU (1) AU2018247794B2 (uk)
CA (1) CA3052532A1 (uk)
CL (1) CL2019002620A1 (uk)
CO (1) CO2019009076A2 (uk)
CR (1) CR20190435A (uk)
DK (1) DK3606955T3 (uk)
ES (1) ES3000582T3 (uk)
FI (1) FI3606955T3 (uk)
HR (1) HRP20241775T1 (uk)
HU (1) HUE069809T2 (uk)
IL (1) IL268527B2 (uk)
LT (1) LT3606955T (uk)
MA (1) MA49038B1 (uk)
MX (1) MX2019011910A (uk)
MY (1) MY199406A (uk)
PE (1) PE20191463A1 (uk)
PH (1) PH12019502282A1 (uk)
PL (1) PL3606955T3 (uk)
PT (1) PT3606955T (uk)
RS (1) RS66357B1 (uk)
SG (1) SG11201909154SA (uk)
SI (1) SI3606955T1 (uk)
SM (1) SMT202500002T1 (uk)
TW (2) TWI690538B (uk)
UA (1) UA128451C2 (uk)
WO (1) WO2018185043A1 (uk)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2991976A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof
DK3356411T3 (da) 2015-10-02 2021-09-06 Hoffmann La Roche Bispecifikke antistoffer, der er specifikke for PD1 og TIM3
CA3132021C (en) 2015-11-18 2024-03-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Pd1 and/or lag3 binders
EP3458485B1 (en) 2016-05-19 2021-12-29 The General Hospital Corporation Tethered interleukin-2 to its receptor il-2rbeta, a platform to enhance natural killer and regulatory t cell activity
EP4201953A1 (en) 2017-04-03 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Immunoconjugates of an anti-pd-1 antibody with a mutant il-2 or with il-15
SG11201909154SA (en) 2017-04-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
KR102294136B1 (ko) * 2017-04-05 2021-08-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-lag3 항체
WO2019099374A2 (en) 2017-11-14 2019-05-23 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for making and using bispecific antibodies
JP7383617B2 (ja) * 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
EP3735254A4 (en) * 2018-01-05 2021-11-03 City of Hope MULTI-SPECIFIC LIGAND BINDERS
CN111655730A (zh) * 2018-01-31 2020-09-11 豪夫迈·罗氏有限公司 包含与lag3结合的抗原结合位点的双特异性抗体
CA3094235A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Her2-targeting antigen binding molecules comprising 4-1bbl
EP3826660A1 (en) 2018-07-26 2021-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 combination therapy for the treatment of cancer
EP4445958B1 (en) 2018-10-19 2025-09-24 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for melanoma
US20220016079A1 (en) 2018-11-26 2022-01-20 Debiopharm International S.A. Combination treatment of hiv infections
MX2021007320A (es) 2018-12-21 2021-07-07 Hoffmann La Roche Moleculas agonistas de union al antigeno cd28 que actuan sobre el tumor.
MX2021008147A (es) * 2019-01-07 2021-08-11 Inhibrx Inc Polipeptidos que comprenden polipeptidos con il-2 modificada y usos de los mismos.
WO2020206169A1 (en) 2019-04-02 2020-10-08 Kupper Thomas S Methods for identifying progression of a primary melanoma
WO2020216348A1 (en) * 2019-04-26 2020-10-29 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Bispecific antibodies against pd-1 and lag-3
KR102700583B1 (ko) * 2019-05-14 2024-08-29 주식회사 프로젠 신규 변형 면역글로불린 fc 융합단백질 및 그의 용도
WO2020256868A1 (en) * 2019-05-16 2020-12-24 Trustees Of Boston University Immune system modulators for the treatment of squamous lung premalignancy
MX2021015648A (es) 2019-06-19 2022-02-03 Hoffmann La Roche Metodo para la generacion de una celula que expresa un anticuerpo multiespecifico multivalente mediante integracion dirigida de multiples casetes de expresion en una organizacion definida.
BR112021025425A2 (pt) * 2019-06-19 2022-02-01 Hoffmann La Roche Método para produzir uma célula de mamífero recombinante e uso de mrna de recombinase cre
KR20220010019A (ko) * 2019-06-19 2022-01-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 정의된 조직에서 다중 발현 카세트의 표적화된 통합에 의해 2가 이중특이성 항체 발현 세포를 생성하는 방법
WO2021021767A1 (en) * 2019-07-30 2021-02-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3/tigit trispecific antibodies and anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
CN114450028A (zh) 2019-09-22 2022-05-06 百时美施贵宝公司 Lag-3拮抗剂治疗的定量空间剖析
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
EP4054723A1 (en) 2019-11-08 2022-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for melanoma
MX2022007790A (es) * 2019-12-23 2022-10-18 Macrogenics Inc Terapia para el tratamiento del cancer.
EP4097131A1 (en) * 2020-01-29 2022-12-07 Merus N.V. Means and method for modulating immune cell engaging effects
KR20220139915A (ko) 2020-02-06 2022-10-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-10 및 그의 용도
JP2023526914A (ja) 2020-05-07 2023-06-26 インターオリゴ・コーポレイション 新規核酸リガンド及びその識別方法
CA3193421A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
WO2022081572A1 (en) * 2020-10-13 2022-04-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Combinatorial immunotherapeutic methods and compositions for pancreatic ductal adenocarcinoma treatment
US20240101666A1 (en) 2020-10-23 2024-03-28 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
CN115819585B (zh) * 2020-12-10 2023-06-02 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗lag-3的单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
SMT202500208T1 (it) 2020-12-28 2025-07-22 Bristol Myers Squibb Co Composizioni anticorpali e metodi per il loro uso
MX2023007846A (es) 2021-01-06 2023-07-07 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto que usa un anticuerpo biespecifico contra pd1-lag3 y un anticuerpo biespecifico de linfocitos t cd20.
US20250051413A1 (en) * 2021-01-12 2025-02-13 Askgene Pharma Inc. Chimeric molecules comprising il-12 agonist polypeptide
WO2022212400A1 (en) 2021-03-29 2022-10-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
EP4337694A1 (en) 2021-05-12 2024-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
KR20240005794A (ko) * 2021-05-18 2024-01-12 쑤저우 카노바 바이오파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 항 pd-1 폴리펩티드 및 그의 용도
CN115536749A (zh) * 2021-06-29 2022-12-30 三生国健药业（上海）股份有限公司 三特异性抗体、其制备方法和用途
CA3223534A1 (en) * 2021-07-02 2023-01-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
KR20240038008A (ko) * 2021-07-28 2024-03-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 암 치료 방법 및 조성물
KR20230022816A (ko) 2021-08-06 2023-02-16 인터올리고 주식회사 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 삼중음성 유방암을 예방 또는 치료하기 위한 약학적 조성물
CN115873116B (zh) * 2021-09-29 2026-04-28 中山康方生物医药有限公司 抗lag3抗体、药物组合物及用途
CA3236173A1 (en) * 2021-10-22 2023-04-27 Centenaire Biosciences, Inc. Antigen-binding protein comprising two fc domains and use thereof
US20240417473A1 (en) 2021-10-29 2024-12-19 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
IL314050A (en) 2022-01-26 2024-09-01 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy for hepatocellular carcinoma
US20250179174A1 (en) 2022-02-25 2025-06-05 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023215560A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Atoosa Corporation Tumor cell/immune cell multivalent receptor engager – bio-nanoparticle (timre-bnp)
CN119562830A (zh) 2022-06-02 2025-03-04 百时美施贵宝公司 抗体组合物及其使用方法
TW202421193A (zh) * 2022-09-28 2024-06-01 美商英塞特公司 抗ｐｄ－１／ｌａｇ－３雙特異性抗體及其用途
CN120731228A (zh) 2022-12-21 2025-09-30 百时美施贵宝公司 肺癌的组合疗法
TW202436339A (zh) 2023-01-31 2024-09-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療選自非小細胞肺癌或三陰性乳癌的癌症之用途
WO2024163477A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 University Of Rochester Immune checkpoint blockade therapy for treating staphylococcus aureus infections
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
JP2026510584A (ja) 2023-03-13 2026-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１－ｌａｇ３二重特異性抗体およびｈｌａ－ｇ ｔ細胞二重特異性抗体を用いる併用療法
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
KR20250160510A (ko) * 2023-03-29 2025-11-13 아케소 바이오파마 컴퍼니 리미티드 항-lag3 항체, 약학적 조성물 및 용도
WO2025145207A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg-depleting agent
WO2025184211A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibody drug conjugates
US20250361320A1 (en) 2024-02-27 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
WO2025245489A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of tumors in subjects having fgl-1 positive samples
US20260115307A1 (en) 2024-10-31 2026-04-30 Bristol-Myers Squibb Company Anti-fucosyl-gm1 antibody drug conjugates

Family Cites Families (210)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
ES2052027T5 (es) 1988-11-11 2005-04-16 Medical Research Council Clonacion de secuencias de dominio variable de inmunoglobulina.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
WO1993016185A2 (en) 1992-02-06 1993-08-19 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5747654A (en) 1993-06-14 1998-05-05 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant disulfide-stabilized polypeptide fragments having binding specificity
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6066322A (en) 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
EP0941329B1 (en) 1996-11-29 2004-07-21 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Methods for preventing graft rejection in transplantation and for producing a universal gene therapy host cell using lymphocyte activation (lag-3)
DK0979281T3 (da) 1997-05-02 2005-11-21 Genentech Inc Fremgangsmåde til fremstilling af multispecifikke antistoffer med heteromultimere og fælles bestanddele
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
CA2293829C (en) 1997-06-24 2011-06-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
AUPP221098A0 (en) 1998-03-06 1998-04-02 Diatech Pty Ltd V-like domain binding molecules
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
KR100940380B1 (ko) 1999-01-15 2010-02-02 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
MXPA02012867A (es) 2000-06-29 2003-09-05 Abbott Lab Anticuerpos de especificidad doble y metodos para la elaboracion y el uso de los mismos.
JP5291279B2 (ja) 2000-09-08 2013-09-18 ウニヴェルジテート・チューリッヒ 反復モジュールを含む反復タンパク質の集合体
NZ581474A (en) 2001-08-03 2011-04-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
JP4694128B2 (ja) 2002-01-30 2011-06-08 ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド ＴＩＭ−３、Ｔｈ１特異的細胞表面分子に関連した組成物および方法
WO2004087754A1 (en) 2003-04-03 2004-10-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Broad-spectrum in-vivo effective superantigen toxin antagonists based on the interaction between cd28 and the superantigen and uses thereof
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
PT1537878E (pt) 2002-07-03 2010-11-18 Ono Pharmaceutical Co Composições de imunopotenciação
ES2533963T3 (es) 2002-10-10 2015-04-16 Merck Patent Gmbh Composiciones farmacéuticas dirigidas a receptores Erb-B1
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1944320A1 (en) 2002-12-16 2008-07-16 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
WO2004072286A1 (ja) 2003-01-23 2004-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. ヒトｐｄ−１に対し特異性を有する物質
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
AU2004210088A1 (en) 2003-02-06 2004-08-19 Micromet Ag Trimeric polypeptide construct to induce an enduring T cell response
US20060240024A1 (en) 2003-02-28 2006-10-26 The Johns Hopkins University T cell regulation
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
EP1641818B1 (en) 2003-07-04 2008-12-03 Affibody AB Polypeptides having binding affinity for her2
WO2005019255A1 (en) 2003-08-25 2005-03-03 Pieris Proteolab Ag Muteins of tear lipocalin
NZ592039A (en) 2003-08-27 2013-03-28 Ophthotech Corp Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders
PT1692182E (pt) 2003-11-05 2010-05-13 Roche Glycart Ag Anticorpos de cd20 com uma afinidade de ligação acrescida ao receptor fc e uma função efectora acrescida
WO2005056764A2 (en) 2003-12-05 2005-06-23 Compound Therapeutics, Inc. Inhibitors of type 2 vascular endothelial growth factor receptors
KR20050082389A (ko) 2004-02-18 2005-08-23 메덱스젠 주식회사 직렬 연쇄체를 갖는 면역접합체를 포함하는 장기이식합병증 치료용 약제학적 조성물
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CN101198698B (zh) 2005-03-31 2014-03-19 中外制药株式会社 通过调节多肽缔合制备多肽的方法
PL2161336T5 (pl) 2005-05-09 2017-10-31 Ono Pharmaceutical Co Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko białku Programmed Death 1 (PD-1) oraz sposoby leczenia raka z zastosowaniem samych przeciwciał anty-PD-1 lub w połączeniu z innymi środkami immunoterapeutycznymi
KR101510065B1 (ko) 2005-06-08 2015-04-07 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 예정 세포사 1(ｐｄ-1) 경로를 억제함으로써 지속 감염 및 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
JP2006345852A (ja) 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
CA2612241C (en) 2005-07-01 2018-11-06 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
JP5102772B2 (ja) 2005-11-29 2012-12-19 ザ・ユニバーシティ・オブ・シドニー デミボディ：二量体化活性化治療剤
WO2007110205A2 (en) 2006-03-24 2007-10-04 Merck Patent Gmbh Engineered heterodimeric protein domains
CN105837690A (zh) 2006-06-12 2016-08-10 新兴产品开发西雅图有限公司 具有效应功能的单链多价结合蛋白
CN101490085A (zh) 2006-06-12 2009-07-22 特鲁比昂药品公司 具有效应功能的单链多价结合蛋白
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
AU2007331672A1 (en) 2006-12-15 2008-06-19 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
CA2947292C (en) 2006-12-27 2019-07-23 Emory University Compositions and methods for the treatment of infections and tumors
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
EP1958957A1 (en) 2007-02-16 2008-08-20 NascaCell Technologies AG Polypeptide comprising a knottin protein moiety
US9244059B2 (en) 2007-04-30 2016-01-26 Immutep Parc Club Orsay Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
WO2009015917A2 (en) 2007-05-14 2009-02-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Dihydroquinone and dihydronaphthridine inhibitors of jnk
KR101586617B1 (ko) 2007-06-18 2016-01-20 머크 샤프 앤 도메 비.브이. 사람 프로그램된 사멸 수용체 ｐｄ-1에 대한 항체
WO2008156083A1 (ja) 2007-06-18 2008-12-24 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 抗体依存性細胞障害活性を模擬する抗体の結合活性測定法
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
WO2009024531A1 (en) 2007-08-17 2009-02-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
US9416165B2 (en) 2007-10-26 2016-08-16 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting viral replication and improving T cell function employing soluble Tim-3 inhibitors
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
EP3663318A1 (en) 2008-01-07 2020-06-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
RU2531758C2 (ru) 2008-02-11 2014-10-27 Куретек Лтд. Моноклональные антитела для лечения опухолей
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
KR101001360B1 (ko) 2008-06-16 2010-12-14 (주)기가레인 전자 기기의 접지에 전기적으로 연결되는 인쇄회로기판
EP3103875A1 (en) 2008-07-21 2016-12-14 Apogenix AG Tnfsf single chain molecules
AR072999A1 (es) * 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
JP2012500652A (ja) 2008-08-25 2012-01-12 アンプリミューン、インコーポレーテッド 標的化共刺激ポリペプチドおよび癌を処置するための使用方法
ES2545609T3 (es) 2008-08-25 2015-09-14 Amplimmune, Inc. Composiciones de antagonistas de PD-1 y métodos de uso
JP5794917B2 (ja) 2008-09-12 2015-10-14 アイシス・イノベーション・リミテッドＩｓｉｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｅｄ Ｐｄ−１特異抗体およびその使用
CA2736829C (en) 2008-09-12 2018-02-27 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
PL2342226T3 (pl) 2008-09-26 2017-01-31 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ludzkie przeciwciała anty-PD-1, PD-L1 i PD-L2 oraz ich zastosowania
EP2370593B1 (en) 2008-11-28 2016-03-30 Emory University Methods for determining the efficacy of pd-1 antagonists
WO2010084999A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protegene, Inc. Immunosuppressive agents and prophylactic and therapeutic agents for autoimmune diseases
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
US20110313129A1 (en) 2009-02-11 2011-12-22 Life Technologies Corporation Large stokes shift dyes
BRPI1014089A2 (pt) 2009-04-02 2016-04-19 Roche Glycart Ag anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples
PT2417156E (pt) 2009-04-07 2015-04-29 Roche Glycart Ag Anticorpos trivalentes, biespecíficos
AU2010245011B2 (en) 2009-04-27 2015-09-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
AU2010252284A1 (en) 2009-05-27 2011-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
US20130017199A1 (en) 2009-11-24 2013-01-17 AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
SI2519543T1 (sl) 2009-12-29 2016-08-31 Emergent Product Development Seattle, Llc Beljakovine, ki se vežejo s heterodimeri in njihova uporaba
PT2542590T (pt) 2010-03-05 2017-08-31 Univ Johns Hopkins Composições e métodos para anticorpos e proteínas de fusão imunomoduladores direcionados
TW201134488A (en) 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
EP2545078A1 (en) 2010-03-11 2013-01-16 UCB Pharma, S.A. Pd-1 antibody
EP2569337A1 (en) 2010-05-14 2013-03-20 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
WO2011155607A1 (ja) 2010-06-11 2011-12-15 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ－３抗体
CA2802344C (en) 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
SG187746A1 (en) 2010-08-13 2013-03-28 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
PL2635607T3 (pl) 2010-11-05 2020-05-18 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC
HUE029139T2 (hu) 2011-02-10 2017-02-28 Roche Glycart Ag Mutáns interleukin-2 polipeptidek
ES2692268T5 (en) 2011-03-29 2025-02-26 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
AU2012237456B2 (en) 2011-04-01 2017-06-29 Universitat Stuttgart Recombinant TNF ligand family member polypeptides with antibody binding domain and uses thereof
SI2699264T1 (en) 2011-04-20 2018-08-31 Medimmune Llc Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
FR2977674B1 (fr) 2011-07-06 2015-08-14 Cisbio Bioassays Methode amelioree de detection et/ou de quantification d'un analyte present a la surface d'une cellule
EP2543680A1 (en) 2011-07-07 2013-01-09 Centre National de la Recherche Scientifique Multispecific mutated antibody Fab fragments
RU2604814C2 (ru) 2011-07-24 2016-12-10 Кьюртек Лтд. Варианты гуманизированных иммуномодулирующих моноклональных антител
SG2014012298A (en) 2011-08-11 2014-06-27 Medarex Llc Human antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (lag-3), and uses thereof
MY171038A (en) 2011-08-23 2019-09-23 Roche Glycart Ag Bispecific antigen binding molecules
FR2980271B1 (fr) 2011-09-16 2013-10-11 Cisbio Bioassays Procede de determination de la glycosylation d'un anticorps
PT2794905T (pt) 2011-12-20 2020-06-30 Medimmune Llc Polipéptidos modificados para estrutura de anticorpos bispecíficos
KR20140128314A (ko) 2012-02-01 2014-11-05 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 결합제의 결합 파트너 검출 방법
JP5585973B2 (ja) 2012-03-22 2014-09-10 三井造船株式会社 Ｆｒｅｔ計測装置及びｆｒｅｔ計測方法
DK2838918T3 (da) 2012-04-20 2019-08-12 Merus Nv Fremgangsmåder og midler til fremstilling af heterodimere ig-lignende molekyler
WO2013164694A1 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Biocon Limited Targeted/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
LT3495387T (lt) 2012-07-13 2021-11-25 Roche Glycart Ag Bispecifiniai anti-vegf / anti-ang-2 antikūnai ir jų panaudojimas akių kraujagyslių ligoms gydyti
AR092044A1 (es) 2012-08-07 2015-03-18 Roche Glycart Ag Inmunoterapia mejorada
JP6581505B2 (ja) 2012-10-03 2019-09-25 ザイムワークス，インコーポレイテッド 重鎖および軽鎖ポリペプチドの対を定量化する方法
WO2014131712A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
WO2014131711A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US10280221B2 (en) 2013-03-15 2019-05-07 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-LAG-3 binding proteins
JP6742903B2 (ja) 2013-05-02 2020-08-19 アナプティスバイオ インコーポレイティッド プログラム死−１（ｐｄ−１）に対する抗体
TWI888366B (zh) 2013-07-16 2025-07-01 美商建南德克公司 利用pd-1軸結合拮抗劑及tigit抑制劑治療癌症之方法
CA2919725C (en) 2013-08-08 2023-04-18 Cytune Pharma An il-15 and il-15r.aplha. sushi domain based modulokines
AU2014323523B2 (en) 2013-09-20 2020-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-LAG-3 antibodies and anti-PD-1 antibodies to treat tumors
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
RU2016115866A (ru) * 2013-10-11 2017-11-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифические антитела с обменянными доменами и одинаковыми вариабельными доменами легкой цепи
HUE046249T2 (hu) 2013-12-12 2020-02-28 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd PD-1 antitest, antigén-kötõ fragmense, és gyógyászati alkalmazása
WO2015095423A2 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
EP3835318B1 (en) 2014-01-15 2025-10-29 F. Hoffmann-La Roche AG Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
US10794898B2 (en) 2014-01-17 2020-10-06 Regents Of The University Of Minnesota High-throughput, high-precision methods for detecting protein structural changes in living cells
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
CA2935423C (en) 2014-01-24 2023-11-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
PT3556775T (pt) 2014-01-28 2021-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos anti-lag-3 para tratar neoplasias malignas hematológicas
AU2015210750B2 (en) 2014-01-31 2020-08-20 Children's Medical Center Corporation Antibody molecules to TIM-3 and uses thereof
WO2015138920A1 (en) * 2014-03-14 2015-09-17 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
CN106163558A (zh) 2014-04-25 2016-11-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用曲妥珠单抗‑mcc‑dm1和帕妥珠单抗治疗早期乳腺癌的方法
CN104009998B (zh) 2014-06-09 2017-11-17 宇龙计算机通信科技(深圳)有限公司 服务器和数据传输方法
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
RS65573B1 (sr) 2014-08-04 2024-06-28 Hoffmann La Roche Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
CN108064166A (zh) * 2014-10-23 2018-05-22 戊瑞治疗有限公司 Slamf1拮抗剂及其用途
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
ES2763548T3 (es) 2014-11-06 2020-05-29 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-TIM3 y procedimientos de uso
MX391388B (es) 2014-11-14 2025-03-21 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno que comprenden un trímero de ligando de la familia de tnf.
EP3221356B1 (en) 2014-11-20 2020-09-02 F.Hoffmann-La Roche Ag T cell activating bispecific antigen binding molecules against folr1 and cd3
FI4141032T3 (fi) 2014-11-20 2024-07-31 Hoffmann La Roche T-solua aktivoivien bispesifisten antigeeniä sitovien molekyylien ja pd-1-akselia sitovien antagonistien yhdistelmähoito
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
DK3237446T3 (en) 2014-12-22 2021-07-26 Pd 1 Acquisition Group Llc Anti-PD-1-antistoffer
MA41463A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
WO2016210129A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Novel pd-1 immune modulating agents
CN114853891A (zh) 2015-07-22 2022-08-05 索伦托药业有限公司 与lag3结合的抗体治疗剂
MX2018002610A (es) 2015-09-02 2018-09-27 Immutep Sas Anticuerpos anti-lag-3.
DK3356411T3 (da) 2015-10-02 2021-09-06 Hoffmann La Roche Bispecifikke antistoffer, der er specifikke for PD1 og TIM3
EP3356821B1 (en) 2015-10-02 2019-10-23 H. Hoffnabb-La Roche Ag Cellular based fret assay for the determination of simultaneous binding
AU2016329251B2 (en) 2015-10-02 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-PD1 antibodies and methods of use
KR20180054877A (ko) 2015-10-07 2018-05-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 공자극 tnf 수용체에 대해 4가를 갖는 이중특이적 항체
CN114891102A (zh) 2015-10-29 2022-08-12 豪夫迈·罗氏有限公司 抗变体Fc区抗体及使用方法
HK1255463A1 (zh) 2015-11-03 2019-08-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Hbv衣壳组装抑制剂和干扰素的组合疗法
CN109152798B (zh) 2015-12-02 2022-10-21 斯特库比股份有限公司 特异于糖基化的pd-1的抗体及其使用方法
WO2017097728A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bridged piperidine derivatives
SG11201807231QA (en) 2016-02-29 2018-09-27 Ntt Docomo Inc User terminal, radio base station and radio communication method
KR20180130541A (ko) 2016-03-29 2018-12-07 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 글리코실화된 면역체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 선택하는 방법
WO2017194442A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
EP3243832A1 (en) * 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
EP3858858A1 (en) 2016-06-20 2021-08-04 F-Star Delta Limited Binding molecules binding pd-l1 and lag-3
BR112018076525A2 (pt) 2016-06-20 2019-04-02 F-Star Beta Limited membros de ligação a lag-3
CN109983033B (zh) 2016-09-23 2023-10-31 美勒斯公司 调节细胞表达的生物活性的结合分子
EP4201953A1 (en) 2017-04-03 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Immunoconjugates of an anti-pd-1 antibody with a mutant il-2 or with il-15
JP7148539B2 (ja) 2017-04-03 2022-10-05 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 免疫抱合体
JP2020516604A (ja) 2017-04-05 2020-06-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗がん併用療法
KR102737715B1 (ko) 2017-04-05 2024-12-03 르 라보레또레 쎄르비에르 Pd-1, tim-3 및 lag-3을 표적화하는 조합 요법
SG11201909154SA (en) 2017-04-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
KR102294136B1 (ko) 2017-04-05 2021-08-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-lag3 항체
CA3058279A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 F.Hoffmann-La Roche Ag An interleukin-2 immunoconjugate, a cd40 agonist, and optionally a pd-1 axis binding antagonist for use in methods of treating cancer
CA3079036A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted ox40 agonists
CA3092002A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies
CA3094235A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Her2-targeting antigen binding molecules comprising 4-1bbl
MX2021007320A (es) 2018-12-21 2021-07-07 Hoffmann La Roche Moleculas agonistas de union al antigeno cd28 que actuan sobre el tumor.
MX2022012541A (es) 2020-04-15 2022-11-07 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados.
EP4172203A1 (en) 2020-06-25 2023-05-03 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cd3/anti-cd28 bispecific antigen binding molecules
US11865082B2 (en) 2020-09-09 2024-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Combination therapy of PD-1-targeted IL-2 variant immunocytokines and antibodies against human PD-L1
MX2023007846A (es) 2021-01-06 2023-07-07 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto que usa un anticuerpo biespecifico contra pd1-lag3 y un anticuerpo biespecifico de linfocitos t cd20.

Also Published As

Publication number Publication date
CO2019009076A2 (es) 2019-08-30
LT3606955T (lt) 2025-01-27
JP2022033742A (ja) 2022-03-02
CL2019002620A1 (es) 2020-01-10
DK3606955T3 (da) 2025-01-13
CN116375876A (zh) 2023-07-04
TWI690538B (zh) 2020-04-11
IL268527A (en) 2019-09-26
JP2020516252A (ja) 2020-06-11
KR20190126356A (ko) 2019-11-11
HRP20241775T1 (hr) 2025-02-28
PL3606955T3 (pl) 2025-02-24
EP3606955B1 (en) 2024-11-06
HUE069809T2 (hu) 2025-04-28
EP3606955A1 (en) 2020-02-12
KR20220003130A (ko) 2022-01-07
EP4516809A2 (en) 2025-03-05
WO2018185043A1 (en) 2018-10-11
IL268527B1 (en) 2023-11-01
SI3606955T1 (sl) 2025-03-31
BR112019019821A2 (pt) 2020-04-22
KR102408873B1 (ko) 2022-06-15
PT3606955T (pt) 2025-01-09
US11285207B2 (en) 2022-03-29
TW202030207A (zh) 2020-08-16
CR20190435A (es) 2019-11-12
JP7304921B2 (ja) 2023-07-07
CA3052532A1 (en) 2018-10-11
AU2018247794A1 (en) 2019-08-22
TW201841941A (zh) 2018-12-01
CN110506059B (zh) 2023-01-17
MA49038B1 (fr) 2025-01-31
US20180326054A1 (en) 2018-11-15
PE20191463A1 (es) 2019-10-16
MX2019011910A (es) 2020-01-09
US20220387586A1 (en) 2022-12-08
IL268527B2 (en) 2024-03-01
MA49038A (fr) 2020-02-12
MY199406A (en) 2023-10-25
SG11201909154SA (en) 2019-10-30
AR111361A1 (es) 2019-07-03
RU2019134227A (ru) 2021-05-05
JP6997212B2 (ja) 2022-02-04
EP4516809A3 (en) 2025-09-03
RS66357B1 (sr) 2025-01-31
TWI747215B (zh) 2021-11-21
CN110506059A (zh) 2019-11-26
PH12019502282A1 (en) 2020-07-06
FI3606955T3 (fi) 2025-01-08
ES3000582T3 (en) 2025-02-28
JP2023138967A (ja) 2023-10-03
US12611457B2 (en) 2026-04-28
SMT202500002T1 (it) 2025-03-12
AU2018247794B2 (en) 2025-04-17
RU2019134227A3 (uk) 2021-06-10
KR102346336B1 (ko) 2022-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102411490B1 (ko) Cd39에 결합하는 항체 및 이의 용도
UA126188C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка містить домен зв'язування з fap та домен зв'язування з сd40
US20230348584A1 (en) Use of anti-fam19a5 antibodies for treating cancers
JP7360441B2 (ja) メソテリン及びｃｄ１３７結合分子
UA128001C2 (uk) Націлені на пухлину агоністичні cd28-антигензв'язувальні молекули
JP6654187B2 (ja) 抗ｃｄ４０抗体を用いた併用療法
RU2744959C2 (ru) Новые анти-pd-l1 антитела
ES3000582T3 (en) Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
US20250019451A1 (en) Anti-ccr8 antibodies and uses thereof
UA128387C2 (uk) Антитіло до lag3
UA125962C2 (uk) Біспецифічна антигензв'язуюча молекула до ox40 та фібробласт-активуючого білка (fap)
KR20180081606A (ko) 암 치료에서의 단독의, 또는 면역 자극제와 병용한, fgfr2 억제제
JP2022101631A (ja) 抗ｐｄ‐ｌ１抗体とｉｌ‐７との融合
AU2016356686A1 (en) Anti-PD-1 antibodies and therapeutic uses thereof
CN113164538B (zh) 修饰的溶瘤病毒、其组合物和用途
US20240317890A1 (en) Her2 single domain antibodies variants and cars thereof
US20260116986A1 (en) Epo receptor agonists and antagonists
CN118715242A (zh) 包含b7-h3结合多肽的组合物和方法
TW202334233A (zh) 結合γδ T細胞之多肽及其用途
KR20240067076A (ko) 항체의 신규 조합 및 이의 용도
JP2025512377A (ja) ユニバーサルな腫瘍細胞殺傷のための組成物及び方法
CN118638226A (zh) 靶向密蛋白3的嵌合抗原受体和治疗癌症的方法
EP4229090A1 (en) Anti-gpc4 single domain antibodies
US20200270343A1 (en) Anti-vsig10 antibodies and methods of use
RU2815066C2 (ru) Молекулы, связывающие мезотелин и cd137