UA129245C2 - Склад вакцинної композиції від вірусу денге - Google Patents

Склад вакцинної композиції від вірусу денге Download PDF

Info

Publication number
UA129245C2
UA129245C2 UAA202004101A UAA202004101A UA129245C2 UA 129245 C2 UA129245 C2 UA 129245C2 UA A202004101 A UAA202004101 A UA A202004101A UA A202004101 A UAA202004101 A UA A202004101A UA 129245 C2 UA129245 C2 UA 129245C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
dengue
virus
vaccine
tpg
composition
Prior art date
Application number
UAA202004101A
Other languages
English (en)
Inventor
Майкл С. Райан
Шеррі-Енн П. Мартін
Шерри-Энн П. Мартин
Морріса Джоунз
Морриса Джоунз
Джастін Станбро
Джастин Станбро
Акгілеш Бгамбгані
Акгилеш Бгамбгани
Джеффрі Томас Блю
Джеффри Томас Блю
Гайді Джоан Пікслі
Гайди Джоан Пиксли
Ерін Дж. Ґрін-Трекслер
Эрин Дж. Грин-Трекслер
Лінн Енн Ісопі
Линн Энн Исопи
Original Assignee
Мерк Шарп Енд Доум Елелсі
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мерк Шарп Енд Доум Елелсі filed Critical Мерк Шарп Енд Доум Елелсі
Publication of UA129245C2 publication Critical patent/UA129245C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Винахід стосується складу вакцини від вірусу денге, які містять щонайменше один живий атенуйований вірус денге, буфер, сахарозу, похідне целюлози, лужну або лужноземельну сіль і амінокислоту.

Description

Галузь техніки
Даний винахід стосується складів вакцини від вірусу денге, які містять щонайменше один живий атенуйований вірус денге або живий атенуйований химерний флавівірус, буфер, цукор, похідне целюлози і цукровий спирт або гліколь і, необов'язково, амінокислоту і лужну або лужноземельну сіль; і склади вакцини від вірусу денге, які містять щонайменше один живий атенуйований вірус денге або живий атенуйований химерний флавівірус, буфер, цукор, щонайменше, 150 мг/мл, носій і, необов'язково, лужну або лужноземельну сіль або лужну або лужноземельну сіль і амінокислоту.
Рівень техніки
Сімейство Ріамімігідае включає прототип вірусу жовтої гарячки (УРЕ), чотири серотипи віруси денге (ОЕММ-1, ОЕММ-2, СЕММ-3 ії ОЕММ-4), вірус японського енцефаліту (Е), вірус кліщового енцефаліту (ТВЕ), вірус Західного Ніла (МУМ), вірус енцефаліту Сент-Луїс (ЗІ Е) і близько 70 інших вірусів, які викликають хвороби. Флавівіруси є маленькими вірусами в оболонці, які містять один геном з позитивною ниткою РНК. Десять генних продуктів кодовані однією рамкою зчитування і транслюються у вигляді полібілка, організованого в порядку: капсид (С), "премембрана" (ріМ, яка обробляється до "мембрани" (М) безпосередньо перед виділенням віріону з клітини), "оболонка" (Е), потім неструктурні (М) білки М51, М52а, М52р, М53, М54а,
М54Б5 ії М55 (розглядаються в Спатрбегєх, ГТ. у). еї аіІ., Аппиа! Нем Містобіо! (1990) 44:649-688;
Непснаї, Е. А. апа Риіїпак, 4. В., Сіїп Містгобріо! Веу. (1990) 3:376-396). Окремі флавівірусні білки потім утворюються через точні події процесингу, медийовані хазяїном, а також кодовані вірусом протеази.
Оболонка флавівірусів утворюється з мембрани клітини-хазяїна і містить кодовану вірусом мембрану, закріплену на мембрані (М), і глікопротетїни оболонки (Е). Глікопротеїн Е є найбільшим вірусним структурним білком і містить функціональні домени, відповідальні за приєднання до поверхні клітини, і інтра-ендосомальні злиті активності. Він також є основною метою імунної системи хазяїна, спричиняючи утворення антитіл, які нейтралізують вірус, які асоційовані із захисним імунітетом.
Віруси денге передаються людині комарами роду Аеде5, насамперед, А. аедурії і А. аІрорісїи5. Зараження вірусами денге призводить до різної клінічної практики від неочевидного або помірного гарячкового захворювання, через класичну гарячку денге (ОЕ) до геморагічної гарячки денге/шокового синдрому денге (ОНЕ/055). Гарячка денге характеризується високою температурою, болем у суглобах і м'язах, висипом, лімфаденопатією і лейкопенією (сірбопв, К.
М. апа 0. МУ. Мацшднп, Війїви Меаіса! Уоштаї! (2002) 324:1563-1566). ОНЕ/0О55 є більш важкою формою інфекції, що найчастіше виникає у дітей, відміченою судинною проникністю і/або важкими геморагічними виявами, що варіюють від присутності петехії і синців до спонтанного важкого крововиливу і глибокого шоку. Без діагностики і швидкого медичного втручання несподіване настання і швидкий розвиток ОНЕ/О55 можуть бути смертельним за відсутності лікування.
Віруси денге є найбільш значною групою вірусів, що передаються членистоногими, у значенні глобальної захворюваності і смертності при близько ста мільйонах випадків інфекції денге щорічно, які включають, щонайменше, 36 мільйонів випадків гарячки і 250000-500000 випадків ОНЕ/055 ((зибіег, 0. 9., Сііп. Місгобіої. Кеу. (1998) 11:480-496; сірроп», зирга). У зв'язку з глобальним зростанням населення, урбанізацією населення, особливо в тропіках, і відсутністю стійких заходів боротьби з комарами, комарі-переносники денге розширили своє поширення в тропіках, субтропіках і деяких помірних областях, що привело до ризику зараження денге для більше половини населення світу. Сучасне пересування на реактивних літаках і еміграція людей сприяли глобальному поширенню серотипів денге так, що множинні серотипи денге зараз є ендемічними в багатьох регіонах. Є збільшення частоти епідемій денге і випадків
ОСНЕ/055 останні 20 або більше років. Наприклад, у Південно-Східній Азії ОНЕ/О55 є провідною причиною госпіталізації і смерті серед дітей (Сибіег, вище; Сірроп5 апа Мацйднп, вище).
Зараз розвиток вакцин від флавівірусів досягається зі змінним успіхом. Існує чотири основні підходи, які використовують у спробі отримати можливі вакцини для захисту від захворювання, викликаного флавівірусами: живий атенуйований, інактивований нативний вірус, рекомбінантний субодиничний білок і вакцини на основі ДНК. Жива атенуйована вакцина від вірусу жовтої гарячки доступна протягом десятиріч, і останнім часом жива послаблена вакцина від японського енцефаліту була зареєстрована в різних країнах світу. Застосування вакцин на основі інактивованих нативних вірусів було продемонстроване для вірусів ТВЕ і ХЕ у вигляді кількох доступних зареєстрованих продуктів. Неїп2 еї аї. РІамімігиз апа Паміміги5 массіпе5. Массіпе 30: 4301-06 (2012). 60 Незважаючи на успіх вакцин від УР, УЕ і ТВЕ, описаних вище, використання способів живого атенуйованого вірусу і інактивованого вірусу для розробки вакцина від вірусу денге зіткнулося зі значними труднощами. Існує чотири серотипи віруси денге (ФЕММ1, ОЕММ2, ОЕММЗ і ОЕММУ), і було виявлено, що штами кожного серотипу циркулюють по всіх ендемічних денге регіонах у всьому світі. Природна інфекція надає довготривалий імунітет до інфікуючого серотипу, але не до інших серотипів денге. Більш важкі форми захворювання (ОНЕ/055) виникають найчастіше після вторинної інфекції денге, коли після зараження одним серотипом вірусу денге слідує друге зараження іншим серотипом. Вважається, що більш частий зв'язок ОНЕ і 055 зі вторинним зараженням денге виникає через не нейтралізуючі антитіла, що викликані зараженням вірусом одного типу, які посилюють інфекційність другим типом вірусу денге (антитіло-залежне посилення - АЗП).
Зараз більшістю вакцин, які клінічно тестуються, є живі, послаблені вакцини. Використання інактивованих можливих вакцин також вивчене. Наприклад, в му еї а. (патент США 6,432,411) описана чотиривалентна субодинична вакцина, яка містить ОЕМ1-4 80 95 Е (пептидна ділянка
РЕМІ1-4, що відповідає амінокислотам 1-395 ОЕММУ-2 поліпептиду в оболонці) білки. В Іму еї аї, вище, також описані композиції, які містять ОЕММ 1-4 80 95 Е і ад'ювант ІЗСОМАТКІХО). У СоПег еї аі. (МО 2012/154202) описані чотиривалентні склади, що містять ОЕМ1-4 80 95 Е з ОЕМ 1-4.
Інактивовані віруси також можуть використовуватися як потенційні кандидатні вакцини або як компоненти ефективної вакцини (Риїпак еї а). Массіпе 23: 4442-4452 (2005), 5 6190859, 005 6254873 і біегпег еї ан. УМО 2007/002470). Композиції, що містять живу атенуйовану вакцину від вірусу денге і інактивовану вакцину від денге, описані в Міжнародній заявці на патент Мо
РСТ/О514/042625 (МО2014/204892).
Нативні віруси є одними з найбільш часто використовуваних антигенів у кількох вакцинних продуктах через їх здатність викликати гуморальні і клітинні імунні відповіді. Вакцинні продукти, які містять нативні віруси, складно стабілізувати, оскільки вони чутливі до тепла, заморожування/розморожування і інших стресів під час обробки, що призводить до значних втрат ефективності. Ці продукти звичайно зберігають замороженими (нижче -20 С) або у вигляді висушеного порошку. Заморожені продукти нелегко зберігати і розповсюджувати, оскільки вони вимагають суворої відповідності вимогам холодового ланцюга для запобігання втраті ефективності. Сушіння нативних вірусів, особливо оболонкових вірусів, часто призводить до значних втрат ефективності через стреси заморожування і сушіння, що зустрічаються у процесі сушіння. Тому в даній галузі техніки існує необхідність у створенні стабільних складів вірусу денге.
Суть винаходу
Даний винахід стосується стабільних складів живої атенуйованої вакцини денге. Додавання похідного целюлози і цукрового спирту або гліколю поліпшує стабільність і/або вихід після сушіння. Альтернативно, додавання цукру у кількості щонайменше 150 мг/мл поліпшує стабільність і/або вихід після мікрохвильового сушіння.
У одному аспекті винахід стосується складу, який містить живу атенуйовану вакцину денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус (ЖАХВ), буфер при рН від близько 6,5 до 8,5, цукор, гліколь або цукровий спирт і похідне целюлози, вибране з групи, яка складається з карбоксиметилцелюлози, гідроксипропілделюлози (ГПЦ), гідроксипропілметилцелюлози (ГПМЦ), 2-гідроксієтилцелюлози (2-ГЕЦ), кроскармелози і метилцелюлози або їх фармацевтично прийнятної солі; необов'язково лужну або лужноземельну сіль і, необов'язково, амінокислоту, вибрану з групи, яка складається з Айа, Азр, Ні, І еи, Гуз, Сп, Рго або Сім, або їх поєднання.
У одному варіанті буфер вибирають із групи, яка складається з сукцинату, гістидину, фосфату, ТКІ5, Віб-Тгіх, МЕ5, МОР5, НЕРЕЗЄ, ацетату і цитрату, або їх поєднання. У іншому варіанті лужною або лужноземельною сіллю є хлорид магнію, хлорид кальцію, хлорид калію, хлорид натрію або їх поєднання. У додатковому варіанті цукром є трегалоза або сахароза. У одному варіанті похідним целюлози є фармацевтично прийнятна сіль карбоксиметилцелюлози.
У іншому варіанті гліколь вибирають з групи, яка складається із пропіленгліколю, поліпропіленгліколю, етиленгліколю, поліетиленгліколю і монометилових ефірів поліетиленгліколю. У додатковому варіанті цукровим спиртом є гліцерин.
У іншому аспекті склад містить живу атенуйовану вакцину денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус у кількості приблизно 100-10000000 БУО/мл, буфер при рН від приблизно 6,5 до 8,5, приблизно 50-300 мг/мл цукру, приблизно 2,5-10,0 мг/мл пропіленгліколю (ПГ) або гліцерину, і приблизно 0,3-140 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію (КМЦ натрію), 60 необов'язково приблизно 10-150 мМ Масі і, необов'язково, приблизно 10-100 мм амінокислоти,
вибраної з групи, яка складається з АПа, Авр, Нів, І ем, Гуз, Сп, Рго або Сім, або їх комбінацію; живу атенуйовану вакцину денге у кількості приблизно 100-100000 БУО/мл, приблизно 5-300 мМ гістидину, ТКІЗ, Вібз-Ттіз або фосфатний буфер, або їх комбінацію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 50-300 мг/мл цукру, приблизно 3-10 мг/мл пропіленгліколю або гліцерину і приблизно 3-10 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію, необов'язково, приблизно 15-75 мМ Масі, і, необов'язково приблизно 10-75 мМ амінокислоти, вибраної з групи, яка складається з Аа, Ар,
Ніз, Гей, Гуз, Сіп, Рго або Сі, або їх комбінацію; живу атенуйовану вакцину денге при приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 5-300 мМ буферу на основі фосфату калію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 60-120 мг/мл сахарози або трегалози або їх комбінації, приблизно 3-7 мг/мл пропіленгліколю або гліцерину, і приблизно 3-7 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90000, і приблизно 30-90 мМ Масі, і необов'язково приблизно 10-75 мМ амінокислоти І еи, Гуз або Сім, або їх комбінацію; живу атенуйовану вакцину денге при приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 11 мМ буферу на основі фосфату калію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 90 мг/мл сахарози, приблизно 5 мг/мл пропіленгліколю або гліцерину, приблизно 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90,000, і приблизно 75 мМ МасіЇ; живу атенуйовану вакцину денге при приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 11 мМ буфер на основі фосфату калію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 90 мг/мл сахарози, приблизно 5 мг/мл пропіленгліколю, приблизно 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90000, приблизно 50 мМ Масі, і приблизно 25 мМ Гей; живу атенуйовану вакцину денге при приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 11 мМ буферу на основі фосфату калію при рН приблизно 7,5, приблизно 90 мг/мл сахарози, приблизно 5 мг/мл пропіленгліколю, приблизно 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90000, і приблизно 30 мМ МасСі У одному аспекті представлених вище варіантів склад додатково містить приблизно 90-200 мг/мл трегалози.
У переважному варіанті винаходу склад містить живу атенуйовану вакцину денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус у кількості приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 11 мМ буферу на основі фосфату калію при рН приблизно 7,5-8, приблизно 90 мг/мл сахарози, приблизно 110 мг/мл трегалози, приблизно 5 мг/мл пропіленгліколю, приблизно 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90000, приблизно 50 мМ Масі і приблизно 25мМ Геи. У одному аспекті представлених вище варіантів склад додатково містить поверхнево-активну речовину, вибрану з полоксамеру 188 і полоксамеру 407 при приблизно 0,0001-5 95 мас./об.
Винахід також стосується складу, який містить живу атенуйовану вакцину денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус у кількості приблизно 100-10000000 БУО/мл, буфер при рН приблизно 6,5-8,5, цукор у кількості приблизно 150-300 мг/мл, носій, вибраний з групи, яка складається з полівінілпіролідону (ПВП), карбоксиметилцелюлози, гідроксипропілделюлози (ГПЦ), гідроксипропілметилцелюлози (ГПМЦ), 2-гідроксіегилцелюлози (2-ГЕЦ), кроскармелози, метилцелюлози або їх фармацевтично прийнятної солі, людського сироваткового альбуміну (ЛСА) і желатину; необов'язково, лужну сіль або лужноземельну сіль у кількості приблизно 5-100
ММ; необов'язково, амінокислоту Сп, Рго або Сім, або їх комбінацію.
У одному варіанті буфер вибирають з групи, яка складається з сукцинату, гістидину, фосфату, ТКІ5, Вібз-Тгізх, МЕ5, МОР5, НЕРЕЗ5, ацетату і цитрату, або їх комбінації. У іншому варіанті лужною або лужноземельною сіллю є хлорид магнію, хлорид кальцію, хлорид калію, хлорид натрію або їх комбінація. У додатковому варіанті цукром є трегалоза або сахароза, або їх комбінація. У одному варіанті відношення сахарози до трегалози становить 1:1-1:4. В іншому варіанті носієм є карбоксиметилцелюлоза натрію, ГПМЦ, ЛСА або желатин.
У іншому аспекті винахід стосується складів живої атенуйованої вакцини денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус у кількості приблизно 200-100000 БУО/мл, буфер при рН приблизно 6,5-8,0, приблизно 150-300 мг/мл цукру у вигляді комбінації сахарози і трегалози, приблизно 0,3-40 мг/мл КМЦ натрію, ЛСА, ГПМЦ або желатину, необов'язково, приблизно 10- 100 мм лужної або лужноземельної солі, і, необов'язково приблизно 5-25 мМ глутамінової кислоти; живу атенуйовану вакцину денге у кількості приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 5-300 мМ гістидину, ТКІ5 або фосфатного буферу або їх поєднання при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 50-100 мг/мл сахарози, приблизно 90-200 мг/мл трегалози, приблизно 0,3-10 мг/мл
КМЦ натрію або приблизно 10-40 мг/мл желатину, і приблизно 30-90 мМ лужної або 60 лужноземельної солі; живу атенуйовану вакцину денге у кількості приблизно 600-20000 БУО/мл,
приблизно 5-20 мМ фосфату калію при рН приблизно 7-8, приблизно 75 мг/мл сахарози, приблизно 175 мг/мл трегалози, приблизно 5 мг/мл КМЦ натрію зі середньою молекулярною масою приблизно 90000, і приблизно 30 мМ Масі; живу атенуйовану вакцину денге у кількості приблизно 600-20000 БУО/мл, приблизно 5-20 мМ фосфату калію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 75 мг/мл сахарози, приблизно 175 мг/мл трегалози, приблизно 25 мг/мл желатину і приблизно 30 мМ МасСі; живу атенуйовану вакцину денге у кількості приблизно 600-20000
БУО/мл, приблизно 5-20 мМ фосфату калію при рН приблизно 7,0-8,0, приблизно 250 мг/мл сахарози і приблизно 50 мг/мл ПВП К12. У одному аспекті представлених вище варіантів, склад додатково містить поверхнево-активну речовину, вибрану з полоксамеру 188 і полоксамеру 407
У кількості приблизно 0,0001-5 95 мас./об.
У деяких аспектах представлених вище варіантів склад додатково містить алюмінієвий ад'ювант. Вказані вище склади можуть бути заморожені або ліофілізовані, або відновлені у розчині. У одному варіанті відновлення проводять приблизно 0,5-1,0 мл фізіологічного розчину, води або бактеріостатичної води для ін'єкцій (БВДІ) і, необов'язково, розріджувачем, що містить алюмінієвий ад'ювант. У іншому варіанті складом є водний розчин до ліофілізації або мікрохвильового сушіння у вакуумі.
У одному варіанті жива послаблена вакцина денге містить чотиривалентний живий атенуйований вірус денге або живий атенуйований химерний флавівірус. У іншому варіанті
ЖАВ або ЖАХВ містить вірусний геном, який містить делецію приблизно 30 нуклеотидів, що відповідає ТІ/-2 структурі петля на стеблі 3 нетрансльованої (НТР) ділянки; який знижує реплікативну здатність вірусу. У додатковому варіанті живим атенуйованим вірусом денге є
ЖАВ, який містить вірусний геном, який містить делецію приблизно 30 нуклеотидів, що відповідає ТІ/-2 структурі петля на стеблі 3' нетрансльованої (НТР) ділянки, і є імуногенним проти серотипу денге 3, де вірусний геном ЖАВ додатково містить делецію нуклеотидів проти ходу транскрипції від АЗО делеції, що відповідає ТІ -3 структурі З'НТР.
У переважних варіантах винаходу живою атенуйованою вакциною денге є жива атенуйована чотиривалентна вакцина, яка містить ОЕМТАЗО вірус, ОЕМ2/4А30 вірус (0ОЕМ2 АЗОЖАХВ на
СЕМА кістяку), ЮЕМЗАЗО вірус і ЮОЕМ4АЗО вірус. У іншому переважному варіанті живим атенуйованим вірусом денге є ЖАВ, який містить ГОЄМ1АЗ30-1545, гОЕМ2/4АЗ0 (МЕ)-1495,7163, "ОєЕМЗАЗО/31-7164 ії гГОєМА4дЗО-7132,7163,8308.
Короткий опис креслень
ФІГ. 1: Дія КМЦ натрію, ПГ, амінокислот на ОЕММА вихід ліофілізації для ОЕМА складів.
ФІГ. 2: Дія КМЦ натрію, ПГ, амінокислот на ОЕММА стабільність для ОЕМА складів. Склад 26 (У не тестують через руйнування коржика після зберігання при 25 "С.
ФІГ. 3: Дія цукрового спирту на ОЕММА вихід ліофілізації для ОЕМА складів.
ФІГ. 4: Дія цукрового спирту на ОЕММА стабільність для ОЕМА складів.
ФІГ. 5: Дія рН на ОЕММА вихід ліофілізації для ОЕМА складів.
ФІГ. 6: Дія рН на ОЕММА стабільність для ОЕМА складів.
ФІГ. 7: Дія буферу на ОЕММА вихід ліофілізації для ОЕМА складів.
ФІГ. 8: Дія буферу на ОЕММА стабільність для ОЕМА складів.
ФІГ. 9: Дія Масі концентрації на ОЕММА вихід ліофілізації для ОЕМА складів.
ФІГ. 10: Дія Масі концентрації на ОЕММА стабільність для ОЕМА складів.
ФІГ. 11: Дія пропіленгліколю і гліцерину на вихід ліофілізації серотипів Денге.
ФІГ. 12: Дія пропіленгліколю і гліцерину на стабільність серотипів Денге.
ФІГ. 13: Дія 1-15 концентрації на відносну ефективність заморожених, висушених мікрохвилями (МХС) і ліофілізованих (ліо.) ОЕМ складів.
ФІГ. 14: Дія 1-15 концентрації на відносну ефективність заморожених, висушених мікрохвилями (МХС) і ліофілізованих (ліо.) ОЕМ2 складів.
ФІГ. 15: Дія 1-15 концентрації на відносну ефективність заморожених, висушених мікрохвилями (МХС) і ліофілізованих (ліо.) ОЕМЗ складів.
ФІГ. 16: Дія 1-15 концентрації на відносну ефективність заморожених, висушених мікрохвилями (МХС) і ліофілізованих (ліо.) ПОЕМА складів.
ФІГ.17: Відносна ефективність заморожених, висушених мікрохвилями (МХС) і ліофілізованих (ліо.) ПОЕМІ складів.
ФІГ. 18А- В: А) Стабільність чотиривалетних складів при 37 "С через один тиждень. В)
Стабільність чотиривалетних складів при 25 "С через один місяць.
ФІГ. 19А-0: Стабільність чотиривалетних складів (ОЕМ1-ОЕМЕУ) при 2-8 "С, тестована кожні З місяці аж до 18 місяців.
Детальний опис винаходу 60 В описі і в прикладеній формулі винаходу форми в однині включають посилання на множину, якщо контекст явно не наказує на інше.
Посилання на "або" вказує одну або обидві можливості, якщо контекст явно не диктує одну зі вказаних можливостей. У деяких випадках "і/або" використовують для виділення однієї або обох можливостей.
Термін "приблизно", при модифікації кількості (наприклад, мМ або М) речовини або композиції, частки (06б./0б. або мас./об.) компоненту складу, рН розчину/складу, значення параметра, що характеризує стадію у способі, або подібного, стосується зміни чисельної кількості, яка може виникнути, наприклад, при типовому вимірюванні, маніпуляціях і відборі зразків, що застосовуються при приготуванні, характеризації і/або застосуванні речовини або композиції; при інструментальній помилці в цих методиках; при різницях у виробництві, джерелі або чистоті інгредієнтів, що застосовуються для отримання або застосування композицій, або проведенні методик; і подібних. У певних варіантах, "приблизно" може означати зміну на 5 0,1 сю, 0,5 сю, 1 сю, 2 сю, З сю, 4 сю, 5 У або 10 95.
Термін "об'ємоутворювальні агенти" включає агенти, які забезпечують структуру сублімованого продукту. Звичайні приклади, що використовуються для об'ємоутворювальних агентів, включають маніт, гліцин і лактозу. На доповнення до отримання фармацевтично естетичного коржика, об'ємоутворювальні агенти можуть також надавати корисні властивості відносно зміни температури руйнування, забезпечення захисту від замерзання-розморожування і підвищення стабільності білка протягом тривалого зберігання. Ці агенти також можуть служити модифікаторами тонічності. "Посилальний зразок вірусу денге" має той же склад компонентів вірусу денге і співвідношення компонентів, як і зразок складу вірусу денге, що тестується, і стосується твердої композиції відразу ж після сушіння складу вірус денге в тих же умовах, що і зразок складу вірусу денге, що тестується (тобто ліофілізація, сушіння мікрохвилями, сушіння ліосферами), або вказаної вище висушеної твердої композиції, яка зберігається в умовах, де є відсутність або мінімальна втрата інфекційності вірусу денге (тобто зберігається при або нижче -70 С); або замороженого твердого складу вірусу денге при -70 "С. "Гліколь" стосується хімічної сполуки з двома гідроксильними групами. "Втрата інфекційності" стосується порівняння втрати вірусної реплікації зразка вірусу денге, що тестується, до посилального зразка вірусу денге із застосуванням способів, відомих у даній галузі техніки. В одному варіанті втрату інфекційності вимірюють із застосуванням аналізу відносної інфекційності денге. У іншому варіанті втрату інфекційності вимірюють (із застосуванням аналізу бляшкоутворення.
Терміни "ліофілізація", "ліофілізований" і "сублімований" стосується способу, який продукт сушить спочатку заморожуванням з подальшим видаленням льоду або замороженого розчинника сублімацією у вакуумному середовищі. Ексципієнт може бути доданий у склади перед ліофілізацією для поліпшення стабільності ліофілізованого продукту при зберіганні. "Ліосфера" в даному описі стосується висушених заморожуванням єдиних тіл, які містять терапевтично активний агент, який по суті є сферичним або яйцеподібним. У деяких варіантах діаметр ліосфери становить від приблизно 2 до приблизно 12 мм, переважно, від 2 до 8 мм, наприклад, від 2,5 до 6 мм або від 2,5 до 5 мм. У деяких варіантах об'єм ліосфери становить від приблизно 20 до 550 мкл, переважно, від 20 до 100 мкл, наприклад, від 20 до 50 мкл. У варіантах, де ліосфера по суті не є сферичною, розмір ліосфери може бути описаний відносно її співвідношення сторін, яке являє собою відношення найбільшого розміру до найменшого розміру. Співвідношення сторін ліосфер може становити від 0,5 до 2,5, переважно, від 0,75 до 2, наприклад, від 1 до 1,5. "Вакуумне сушіння мікрохвилями" в даному описі стосується способу сушіння, при якому використовують опромінення мікрохвилями (також відоме як радіаційна енергія або неіонізуюче опромінення) для утворення висушених вакцинних продуктів (переважно, «695 вологи) вакцинного складу сублімацією. У деяких варіантах мікрохвильове сушіння проводять, як описано в ОЗ2016/0228532. У одному варіанті мікрохвильове опромінення проводять у форматі хвиль, які розповсюджуються. "Відновленим розчином" є такий, який отриманий розчиненням висушеного вірусу у твердій формі (такій як ліофілізований коржик) в розріджувачі так, що вірус диспергується у відновленому розчині. Відновлений розчин підходить для введення (наприклад, внутрішньом'язового введення), і необов'язково може підходити для підшкірного введення. "Сіль(солі)" у даному описі означають кислі солі, отримані з неорганічними і/або органічними кислотами, а також основні солі, отримані з неорганічними і/або органічними основами.
Фармацевтично прийнятні (тобто не токсичні, фізіологічно прийнятні) солі є переважними, хоча 60 інші солі також використовують. Типові основні солі включають солі амонію, солі лужних металів, такі як солі натрію, літію і калію, солі лужноземельних металів, такі як солі кальцію і магнію, солі цинку, солі з органічними основами (наприклад, органічні аміни), такі як М-Ме-О- глюкамін, холін, трометамін, дициклогексиламіни, тре-бутиламіни і солі з амінокислотами, такими як аргінін, лізин і тому подібне. "Цукровий спирт" стосується багатоатомних спиртів, які отримані з цукру і мають загальну формулу НОСНУСНОН)СНеОН, п-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10. Приклади включають, але не обмежені ними, маніт, сорбіт, еритрит, ксиліт і гліцерин.
У даному описі "х 95 (мас./об.)" еквівалентно х г/100 мл (наприклад, 5 95 мас./об. дорівнює 50 мг/мл).
Термін "живий атенуйований вірус денге", який також називається тут "ЖАВ", означає знижену здатність вірусу денге спричиняти захворювання порівняно з диким типом вірусу денге.
Фахівець у даній галузі техніки зрозуміє, що віруси можуть піддаватися мутації при культивуванні, пасируванні або поширенні. ЖАВ може містити природні мутації, на доповнення до мутацій, викликаних у цілях клонування. ЖАВ може бути гомогенною або гетерогенною популяцією з відсутністю, однією або більше такими мутаціями.
Термін "живий атенуйований химерний вірус" (альтернативно, "живий атенуйований химерний флавівірус") або "ЖАХВ" стосується живого послабленого химерного вірусу, де вірусний геном містить кістяк першого флавівірусу (включаючи С, М51, МЗ2А, М52В, М53, М54А,
М54В і М55 гени) і передмембранний (рімМ) і оболонковий (Е) гени другого флавівірусу, де другий флавівірус вибирають з ОЕММ1, ОЕММ2, ОЕММУЗ або ОЕММ4. Першим флавівірусом може бути відмінний серотип денге або інший флавівірус, такий як вірус жовтої гарячки.
Термін "А30 ЖАВ" стосується живого атенуйованого ОЕМ1, ОЕМ2, СЕМЗ або СЕМА вірусу, де
ЖАВ містить вірусний геном, який містить делецію приблизно 30 нуклеотидів (п), що відповідає
ТІ2 структурі петля на стеблі 3 нетрансльованої (НТР) ділянки від приблизно пі 143 до приблизно пі 172, що знижує реплікативну здатність вірусу (див. МО 03/092592 і М/пйенпеай еї аІ., патент США Мо 8,337,860).
Термін "430 ЖАХВ" стосується живого атенуйованого химерного флавівірусу (ЖАХВ) з
РЕММ 1-4, де ЖАХВ містить вірусний геном, який містить делецію приблизно 30 пі, що відповідає Т12 структурі петля на стеблі 3' нетрансльованої (НТР) ділянки від приблизно пі 143 до приблизно пі 172, що знижує реплікативну здатність вірусу (див. МО 03/092592 і УуУнйенеавй еї аІ., патент США Мо 8,337,860).
Термін "А30/А31 ЖАВ" стосується живого атенуйованого ОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ або ОЕМА вірусу, де вірусний геном містить делецію приблизно 30 пі в Т12 структурі петля на стеблі 3"
НТР, і додатково містить окрему делецію, яка не сполучається, проти ходу транскрипції приблизно 31 пі на приблизно пі 258-228 3' НТР, яка видаляє послідовність аж до, і включаючи
ТІ-3 гомологічну структуру так, що делеція розповсюджується до 5' межі ТІ -3 гомологічної структури денге З'НТР. Див. УУпнепеай еї аї!., патент США 8,337,860. У переважних варіантах винаходу, ОЕМЗ ЖАВ містить АЗО/АЗІ1 мутації.
Термін "А30/А31 ЖАХВ" стосується живого атенуйованого химерного ОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ або РЕМА вірусу, як описано вище, де вірусний геном химерного вірусу містить 30 пі делецію
ТІ2 структури петля на стеблі 3' НТР, і додатково містить окрему делецію, яка не сполучається, проти ходу транскрипції 31 пі 3' НТР, яка видаляє ТІ -3 структуру, як описано вище.
Термін "ЖАЧВ" або "жива послаблена чотиривалентна вакцина денге" або "ЖАЧВ вакцина" стосується вакцини, яка містить ефективну кількість ОЕМ! ЖАВ або ЖАХВ, ОЕМ2 ЖАВ або
ЖАХВ, ОЕМЗ ЖАВ або ЖАХВ і 0ЕМ4 ЖАВ або ЖАХВ. У одному варіанті щонайменше один з
ЖАВ або ЖАХВ денге містить АЗО мутацію ТІ-2 структури в 3' НТР, як описано вище і в УМО 03/092592. У деяких переважних варіантах ЖАЧВ містить наступні ознаки: (1) гОЕМ1АЗО, який є
СЕММІ ЖАВ, де ОЕММІ вірусний геном містить 30 пі делецію, що відповідає ТІ 2 структурі петля на стеблі в 3' НТР; (2) г0ОЕМ2/4А30, який є ОЕММ2 ЖАХВ, що містить ОЕММ2 ргМ їі Е гени на
РЕММА кістяку, де ОЕМА кістяк містить 30-пі делеції, що відповідає ТІ 2 структурі петля на стеблі в З НТР; (3) г0ОєМЗАЗО/АЗ1, який є ОЕММЗ ЖАВ, де ЮОЕММЗ вірусний геном містить ЗО пі делецію, що відповідає Т/2 структурі петля на стеблі в 3 НТР і окрему делецію, яка не сполучається, проти ходу транскрипції 31 пі, що відповідає ТІ-3 структурі З' НТР; і (4) "ОЕМ4АЗО, який є ОЕММ4 ЖАВ, де ОЕММА вірусний геном містить 30 пі делецію, що відповідає
ТІ2 структурі петля на стеблі в 3' НТР (див. Фігуру 1 з МО2016106107). "Нереплікаційна вакцина" стосується вакцини від вірусу денге для профілактики або лікування зараження вірусом денге або його клінічних симптомів, вибраної з рекомбінантної субодиничної вакцини, інактивованої вакцини, кон'югованої вакцини або ДНК вакцини. "Інактивована вакцина" стосується вакцини, яка містить ефективну кількість убитого або не 60 активного цільного вірусу денге і фармацевтично прийнятного носія, де вірус інактивований будь-якими засобами, включаючи хімічні сполуки, тепло або опромінення. Інактивована вакцина має низьку залишкову інфекційність після інактивації, наприклад «5 бляшкоутворювальних одиниць (БУФ)/мл після інактивації. У переважних варіантах є дуже низька кількість залишкової інфекційності після інактивації, наприклад х4 БУО/мл, «3 БУО/мл або «2 БУО/мл, «1 БУО/мл, 50,5 БУО/мл або «0,1 БУО/мл. БУО конкретної вакцини може бути визначено, наприклад, з використанням аналізу бляшкоутворення, аналізу імунозабарвленням або іншого способу, відомого в даній галузі техніки для визначення інфекційності вірусу. "Кон'югована вакцина" стосується вакцини, яка містить денге антиген, ковалентно приєднаний до білка-носія. "ДНК вакциною" є вакцина, яка містить послідовність нуклеотидів, яка кодує антиген білка денге, включаючи білки денге, фрагменти білка денге і злиті білки денге, і їх варіанти. ДНК вакцини містять плазмід (наприклад, ДНК або вірусний плазмід), який містить послідовність нуклеотидів, які кодують цільовий антиген, функціонально зв'язаний з промотором. "Субодинична вакцина" стосується вакцини, яка включає один або більше компонентів антигену денге, але не повні віруси денге, таких як імуногенні епітопи денге, білки денге, злиті білки антигену денге, включаючи злиття антигенів різних серотипів денге, або фрагменти білка денге. Субодиничні вакцини в даному описі можуть бути одновалентними (містити один антиген денге) або мультивалентними (містити більше одного компоненту антигену). У переважних варіантах субодинична вакцина є чотиривалентною.
Термін "прайм-буст" стосується терапевтичного режиму, який включає (1) введення пацієнту, який потребує такого, першої композиції вакцини від вірусу денге, де композиція містить (а) щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або живий атенуйований химерний флавівірус (ЖАХВ), і (5) фармацевтично прийнятний носій; (2) очікування, поки мине певна кількість часу; і (3) введення пацієнту другої композиції вакцини від вірусу денге або інактивованої вакцини денге. Друга композиція вакцини від вірусу денге може бути такою ж або відмінною від першої композиції вакцини від вірусу денге. У одному варіанті другою вакциною від вірусу денге є жива атенуйована вакцина денге або рекомбінантна субодинична вакцина денге. Вакцини від вірусу денге, що застосовуються в композиціях відповідно до даного винаходу, використовують для отримання реакції антитіл, які нейтралізують вірус, на гомологічні віруси денге у людини.
Термін "лікування" стосується як терапевтичного лікування, так і профілактичних або превентивних заходів. До осіб або пацієнтів, "які потребують" лікування, належать ті, у кого вже є інфекція денге, з або без виявлення яких-небудь клінічних симптомів, а також ті, які перебувають у зоні ризику зараження денге. Лікування пацієнта вакцинними композиціями від денге відповідно до даного винаходу включає одне або більше з наступних: виклик/підвищення імунної реакції проти денге у пацієнта, виклик реакції антитіла, яке нейтралізує вірус, проти одного або більше вірусів денге, профілактика, полегшення, пригнічення або зниження імовірності клінічних виявів денге у пацієнтів, які були заражені денге, профілактика або зниження імовірності розвитку гарячки денге, ОНЕ або 055 і/або іншого захворювання або ускладнення, пов'язаного із зараженням денге, зниження тяжкості або тривалості клінічних симптомів зараження денге і/або інших захворювань або ускладнень, пов'язаних з денге, і профілактика або зниження імовірності зараження денге.
Термін "фармацевтично ефективна кількість" або "ефективна кількість" означає введення достатньої кількості вакцинної композиції пацієнту для отримання бажаного ефекту, включаючи, але не обмежуючись: виклик/лпідвищення імунної реакції проти денге у пацієнта, виклик/підвищення реакції антитіла, яке нейтралізує вірус, проти денге у пацієнта, профілактика або зниження імовірності зараження денге, профілактика або зниження імовірності рецидиву зараження денге, профілактика, полегшення або пригнічення клінічних виявів денге у пацієнтів, які були заражені денге, профілактика гарячки денге, ОНЕ і/або О55, або зниження тяжкості або тривалості захворювання, пов'язаного з денге. Фахівець у даній галузі техніки зрозуміє, що цей рівень може варіювати.
Термін "імунна відповідь" стосується опосередкованої клітинами (Т-клітинами) імунної відповіді і/або антитільної відповіді (В-клітини).
Термін "пацієнт" стосується ссавця, здатного до інфікування вірусом денге, таким як ОЕМ,
РЕМ2, ОЕМЗ або ОЕМ4, який отримує вакцинні композиції від денге, описані тут, включаючи і імунокомпетентних, і імунокомпрометованих осіб. У переважних варіантах пацієнтом є людина.
Як визначено тут, "пацієнт" включає або тих, хто вже заражений гарячкою денге, внаслідок природного зараження або вакцинації, або тих, які можуть бути піддані впливу в майбутньому. "ІЗСОМ-подібним ад'ювантом" є ад'ювант, який містить імуностимулюючий комплекс 60 (І5СОМ), який складається з сапоніну, холестерину і фосфоліпіду, які разом утворюють характерну вміщену частинку, що має унікальну сферичну клітиноподобну структуру, яка сприяє її функції (огляд див. у Ваїт апа МіїснеїЇ, Іттипоїоду апа Сеїї Віоіоду 74: 8-25 (1996)). Цей термін включає як ІЗСОМ "М ад'юванти, які отримують з антигеном і містять антиген всередині ІЗСОМ М частинки, так і ІЗСОМ М матричні ад'юванти, які є порожнистими ад'ювантами типу ІЗСОМ, які отримують без антигену. У переважних варіантах композицій і способів, представлених тут, ад'ювант типу ІБСОМ є ІЗСОМ М матричний частковий ад'ювант, такий як ІЄСОМАТКІХ "М, який виробляють без антигену (І5СОМ'М і ІЗЄСОМАТНКІХ "М є зареєстрованими торговими марками
С5І Пітйеа, РаїКкміПе, А!йзігаїіа).
Позначення ""ОЕМ1ТАЗ0-1545" стосується рекомбінантного денге 1 вірусу, де вірусний геном містить (1) 30 пі делецію ТІ 2 структури петля на стеблі 3" НТР і (2) заміщення на нуклеотидному положенні 1545 на С, яке відбувається після адаптації вірусу до росту в клітинах Мего.
Позначення ""СОЕМ2/4АЗО(МЕ)-1495,7163" стосується рекомбінантного химерного денге 2/4 вірусу, де вірусний геном містить: (1) денге 4 кістяк (С, М51, М52А, М52В, М53, М54А, М548В,
М55 гени), що містить (ї) 30 пі делецію ТІ 2 структури петля на стеблі 3" НТР, і (ії) заміщення на нуклеотидному положенні 1495 на и і 7163 на С, яке виникає після адаптації вірусу до росту в клітинах Мего, і (2) денге 2 рі М і Е гени.
Позначення "«"СОЕМЗ3АЗО0/31-7164" стосується рекомбінантного денге З вірусу, де вірусний геном містить: (1) 30 пі делецію ТІ 2 структури петля на стеблі 3' НТР, (2) окрему 31 пі делецію в
З'НТР, проти ходу транскрипції АЗО мутації, яка видаляє ТІ-3 структуру, і (3) заміщення на нуклеотидному положенні 7164 на С, яке виникає після адаптації вірусу до росту в клітинах
Мего.
Позначення ""ОЕМ4430-7132,7163,8308" стосується рекомбінантного денге 4 вірусу, де вірусний геном містить: (1) 30 пі делецію ТІ 2 структури петля на стеблі 3' НТР і (2) заміщення на нуклеотидному положенні 7132 на І, 7163 на С і 8308 на С, яке виникає після адаптації вірусу до росту в клітинах Мего. "М180" стосується чотиривалентної субодиничної вакцини, яка складається з усічених оболонкових глікопротеїнів (ОЕМ-80Е) з кожного з 4 серотипів вірусу денге (ОЕММ1, СЕММ2,
РЕММЗ ії ОЕММ4), де кожний з Е білків становить приблизно 80 95 від довжини дикого типу Е, починаючи від амінокислотного залишку 1 на його М-кінці так, що вказаний Е білок секретується в середовище для вирощування при рекомбінантному експресуванні в клітині хазяїна. Див.
Сопег еї а. МО 2012/154202.
Наступні абревіатури використовують тут, і вони мають наступні значення: С означає ген капсиду денге, ОЕМ (альтернативно, ОЕМУ) означає вірус денге, ОЕ означає гарячку денге, ОНЕ означає геморагічну гарячку денге, 055 означає шоковий синдром денге, п означає години, СГТ означає середнє геометричне титру, ВМ означає внутрішньом'язово, ІМХ означає Ізсотайіх "М,
УЕ означає японський енцефаліт, ЖАВ означає живий атенуйований вірус, М5 (що застосовується в М51-М55) означає неструктурний, пі означає нуклеотид, БУО означає бляшкоутворювальні одиниці, ріМ означає ген передмембрани денге, ПК означає підшкірно,
ТВЕ означає кліщовий енцефаліт, НТР означає нетрансльовану ділянку, МУМ (альтернативно,
МУММ) означає вірус Західного Ніла, УЕ (альтернативно, УЕМ) означає вірус жовтої гарячки, і Ул означає дикий тип.
Жива атенуйована вакцина від вірусу денге
Як указано вище, композиції вакцини від вірусу денге відповідно до даного винаходу містять живу атенуйовану вакцину денге, яка містить щонайменше один ЖАВ, вибраний з групи, яка складається з вірусу денге 1 типу (ОЕМ), вірусу денге 2 типу (ОЕМ2), вірусу денге З типу (ОЕМЗ) і вірусу денге 4 типу (ОЕМ4), або ЖАХВ. У одному варіанті ЖАВ або ЖАХВ містить вірусний геном, який містить Т/-2 АЗО модифікацію в З'НТР, і де ЖАВ або ЖАХВ: викликає імунну відповідь проти денге, викликає відповідь антитіла, яке нейтралізує вірус, проти денге, захищає від або знижує імовірність зараження або знижує тяжкість або тривалість його клінічних виявів. У варіантах винаходу жива атенуйована вакцина денге є одновалентною, двовалентною, тривалентною або чотиривалентною, тобто викликає імунну відповідь проти або захищає від одного, двох, трьох або чотирьох серотипів ОЕМ 1-4, відповідно. У переважних варіантах даного винаходу жива атенуйована вакцина денге є чотиривалентною, тобто викликає імунну відповідь проти або захищає від серотипів 1-4 ОЕМ, і містить ОЕМ1, ОЕМ2,
РЕМЗ і ОЕМА компонент, де кожний компонент є ЖАВ або ЖАХВ.
У додаткових варіантах винаходу жива атенуйована вакцина денге є чотиривалентною ЖАВ або "ЖАЧВ" (тобто містить живі послаблені віруси денге з ОЕММ 1-4, або живі атенуйовані химерні флавівіруси з ОЕЄММ 1-4, як визначено тут, або їх комбінацію, де щонайменше один з
ЖАВ або ЖАХВ є АЛЗОЖАВ або АЗОЖАХВ). У додаткових варіантах винаходу жива атенуйована 60 вакцина денге є чотиривалентною і містить щонайменше один химерний флавівірус, де химерний флавівірус містить вірусний геном, який містить нуклеотидну послідовність, що кодує ріМ і Е білки одного серотипу вірусу денге, і нуклеотидну послідовність, що кодує капсидний і неструктурний білки різних флавівірусів, де химерний флавівірус є атенуйованим. У деяких варіантах винаходу капсидний і неструктурний білки химерного флавівірусу походять з інших серотипів денге, ніж ргМм і Е білки.
У деяких варіантах винаходу кожний ЖАВ або ЖАХВ компонент ЖАЧВ відповідно до даного винаходу містить живий атенуйований вірус, який незалежно є або атенуйованим химерним флавівірусом, або атенуйованим вірусом денге, що містить ТІ/-2 АЗО модифікацію в З'НТР вірусного геному. Атенуація вірусу денге досягається через ТІ/-2 АЗО модифікацію. Однак додаткові атенуюючі мутації також можуть бути включені в один або більше компонентів вакцини, включаючи, але не обмежуючись ними: мутації в положеннях 1495, 1545, 7132, 7163, 7164 і 8308. Атенуюючі мутації можуть бути досягнуті різними методами, включаючи методи, відомі в даній галузі техніки, такі як серійне розбавлення на культурі тканини або більш визначені генетичні маніпуляції. Мутації, що використовуються для атенуації вірусів денге і химерних вірусів денге, відомі в даній галузі техніки. Див., наприклад, МО 02/095075, УМО 2006/44857, патент США Мо 7,189,403, патент США Мо 8,337,860, УМО 2003/103571, УМО 2000/014245 їі УУО 2008/022196. Відомі атенуйовані штами денге також можуть використовуватися у композиціях тут, такі як штами, описані в УМО 06/134433, УМО 2006/134443,
МО 2007/141259, МО 96/40933, МО 2000/057907, МО 2000/057908, УМО 2000/057909, МО 2000/057910 ї УМО 2007/015783.
Переважні варіанти композицій відповідно до даного винаходу містять чотиривалентну живу атенуйовану вакцину денге (ЖАЧВ). Така чотиривалентна жива атенуйована вакцина може містити чотири атенуйовані віруси денге (ЖАВ), три ЖАВ і один атенуйований штам химерного флавівірусу (ЖАХВ), два денге ЖАВ і два ЖАХВ, один денге ЖАВ і три ЖАХВ, або чотири
ЖАХВ.
У переважних варіантах ЖАЧВ містить наступні ознаки: (1) ГОЕМ1АЗО, який є ОЕММІ ЖАВ, де ОЕММ'І вірусний геном містить 30 пі делецію, що відповідає ТІ 2 структурі петля на стеблі в 3"
НТР; (2) гОєМ2/4АЗ0, який є ОЕММ2 ЖАХВ, що містить ОЕММ2 ргІМ і Е гени на ОЕММА кістяку, де
РЕМА кістяк містить 30-пі делецію, що відповідає ТІ 2 структурі петля на стеблі в 3' НТР; (3) "ОЕМЗ АЗО/АЗ1, який є ОЕММЗ ЖАВ, де ЮОЕММЗ вірусний геном містить 30 пі делецію, що відповідає Т12 структурі петля на стеблі в 3' НТР і окрему делецію, яка не сполучається, проти ходу транскрипції 31 пі, що відповідає ТІ -3 структурі З' НТР; і (4) гОЕЄМА4АЗО, який є ОЕММ4А ЖАВ, де ОЕММА вірусний геном містить 30 пі делецію, що відповідає ТІ 2 структурі петля на стеблі в 3'
НТР.
У варіантах даного винаходу, які містять химерні флавівіруси, кожний химерний флавівірус містить вірусний геном, який містить нуклеотидні послідовності, що кодують ргМ і Е білки одного серотипу вірусу денге, і нуклеотидні послідовності, які кодують капсидний і неструктурний білки (тобто "основ") різних флавівірусів, де кожний з химерних флавівірусів послаблений. Способи конструювання штаму рекомбінантного живого атенуйованого флавівірусу можуть включати використання відомого атенуйованого штаму як основи, де спосіб включає заміщення придатних генів (ргМ і Е) від спорідненого цільового вірусу на еквівалентні гени вірусу-основи.
Наприклад, цей підхід був використаний для М/УММ, де химерним вірусом є міжтиповий химерний на основі атенуйованого ОЕМ-4 штаму, що містить рІіМ і Е гени М/ММ (Вгау, М. еї аї., У. Мігої. (1996) 70:4162-4166; Спеп, МУ/., єї аї., у. Міко!. (1995) 69:5186-5190; Вгау, М. апа І аї, С.-9., Ргос.
Маї!. Асай. 5сі. ОБА (1991) 88:10342-10346; І аї, С. у. еїа!., СіІїп. Оіадп. Міко!. (1998) 10:173-179).
Іншим підходом є використання УЕ 170 атенуйованого штаму жовтої гарячки як основи для розвитку рекомбінантних химерних вакцин, який раніше використовували для УЕ вірусу, ОЕМ вірусів і МУМ вірусу. Химерна вакцина від жовтої гарячки може бути сконструйована такою, що містить кістяк жовтої гарячки, через заміну генів, що кодують ргім і Е білки з будь-якого штаму жовтої гарячки, наприклад, УЕМ 170, на гени серотипу денге. Після ДНК клонування РНК зчитують і трансфікують у клітини Мего з отриманням химерних вірусів, що мають ЕМ 170 механізм реплікації і зовнішньою оболонкою спорідненого вірусу денге. Див. Спцігакпоо еї аї.,
Уоитаї! ої Мігоіоду, 74(12): 5477-5485 (2000); Су єї а!., Массіпе 28: 632-649 (2010); Мопаїй Т.Р.
Адм Міги5 Нез (2003) 61:469-509; Мопаїн еї аї. Ргос. Май). Асайд. 5сі. ОБА (2006) 103:6694; і УМО 98/37911. Таким чином, в деяких варіантах винаходу жива атенуйована вакцина денге містить (1) щонайменше один химерний флавівірус, який містить ргМ і Е білки одного серотипу денге і кістяк жовтої гарячки, і (2) щонайменше один ЖАВ або ЖАХВ, який містить вірусний геном, який містить З0-нуклеотидну делецію ТІ -2 структури петля на стеблі З'НТР.
Химерні живі атенуйовані флавівіруси, що використовуються в композиціях відповідно до 60 даного винаходу, можуть також містити химерний вірус денге, де вірусний геном містить рі М і Е гени одного серотипу вірусу денге і капсидний і неструктурний гени різних серотипів вірусу денге. У варіантах, де химерний вірус містить кістяк з другого серотипу денге, кістяк денге містить делецію приблизно 30-нуклеотидів З'НТР, яка відповідає ТІ --2 структурі петля на стеблі і, необов'язково, може містити додаткові атенуюючі мутації. Будь-який атенуйований вірус денге або вірус денге дикого типу може використовуватися як кістяк химерного вірусу, введенням 30- нуклеотидної делеції ТІ -2 структури петля на стеблі у вірусний кістяк атенуйованого денге або вірусний кістяк денге дикого типу. Атенуація кістяка вірусу денге може бути досягнута через серійний пасаж, через введення певних генетичних мутацій або через використання відомих атенуйованих штамів денге. Химерні вакцини від денге описані, наприклад, в УУптенеаа еї аї.
МО 03/092592. У деяких варіантах винаходу жива атенуйована вакцина містить химерний флавівірус, де капсидний і неструктурний білки отримують із серотипів денге, відмінних від ргМ і
Е білків.
Композиції вакцини від вірусу денге відповідно до даного винаходу містить ефективну кількість живої атенуйованої вакцини від вірусу. У деяких варіантах винаходу ефективність живої атенуйованої вакцини від денге становить від 10 до приблизно 1х107 бляшкоутворювальних одиниць (БУС). У альтернативних варіантах ефективність живої атенуйованої вакцини від денге становить від приблизно 1х102 до приблизно 1х106 БУО. У інших варіантах ефективність живої атенуйованої вакцини від денге становить від приблизно 1х103 до приблизно 1х105 БУО.
Аналізи вірусних бляшок визначають кількість бляшкоутворювальних одиниць (БУС) у вірусному зразку. Коротко, в аналізі імунного бляшкоутворення денге моношар клітин хазяїна (наприклад, клітини Мего), що злився, заражають вірусом денге при варіюючому розбавленні і покривають напівтвердим покриттям, яке містить метилцелюлозу, для запобігання безладному поширенню вірусної інфекції. Інфіковані вірусом клітини лізують і розповсюджують інфекцію на сусідні клітини, де повторюють цикл інфекція-лізис. Інфіковані клітини утворюють бляшку (групу інфікованих клітин Мего, оточених не інфікованими клітинами), яка може бути видна візуально після фіксації і імунного забарвлення із застосуванням анти-денге серотипу моноклональних антитіл (тАБ). Бляшки рахують, і результати, в поєднанні з коефіцієнтами розбавлення, використовують для розрахунку кількості бляшкоутворювальних одиниць на мл (БУО/мл) у зразках. Результат ефективності денге БУО/мл представляє кількість інфекційних частинок у зразку і оснований на припущенні, що кожна утворена бляшка є типовою для однієї інфекційної вірусної частинки.
Субодинична вакцина денге
У деяких варіантах винаходу склади додатково містять рекомбінантну субодиничну вакцину від денге, яка містить один або більше білків антигенів денге. У переважних варіантах цього аспекту винаходу рекомбінантна субодинична вакцина від денге містить один або більше білків денге, злитих білків або їх фрагмент або фрагменти. В інших переважних варіантах рекомбінантна субодинична вакцина від денге містить оболонку денге або Е білок, або його фрагмент.
У інших переважних варіантах рекомбінантна субодинична вакцина від денге є чотиривалентною, тобто викликає імунну відповідь проти всіх чотирьох серотипів денге.
Рекомбінантна субодинична вакцина від денге може містити чотири рекомбінантні білки денге або менше чотирьох, наприклад, рекомбінантний ЮЕМІ білок, рекомбінантний ОЕМ2 білок і рекомбінантний ОЕМЗ/4 злитий білок. У деяких варіантах рекомбінантна субодинична вакцина від денге містить глікопротеїн оболонки вірусу денге або його фрагменти, ОЕМІ1-4 (наприклад,
РЕМ1-8ОЕ, ОЕМ2-80Е, 0БЕМЗ3-80Е, 0ЕМ4-80Е або ОЕМ4-80Е7ір), який утворюється і секретується з використанням рекомбінантної системи експресії. Вказана субодинична вакцина може необов'язково містити ад'ювант, як описано більш детально нижче.
У деяких варіантах цього аспекту винаходу рекомбінантна субодинична вакцина від денге містить один або більше очищених білків оболонки вірусу денге ("Е"), фармацевтично прийнятний ексципієнт, де кожний Е білок становить приблизно 80 95 довжини дикого типу Е, починаючи з амінокислотного залишку 1 в його М-кінці так, що вказаний Е білок секретується у середовище для вирощування при рекомбінантному експресуванні в клітині хазяїна, і де композиція спричиняє утворення нейтралізуючих антитіл у людини. У деяких варіантах винаходу рекомбінантна субодинична вакцина від денге додатково містить ефективну кількість ад'юванта. У деяких варіантах винаходу ОЕМ-4 Е білок є двомірним ("СЕМ4-80ЕЛір"), як описано в 05 6,749,857 і УМО 2012/154202.
У деяких варіантах цього аспекту винаходу Е білки в композиції, описаній вище, рекомбінантно утворюються і експресуються в клітини хазяїна комах. У інших переважних 60 варіантах Е білок рекомбінантно утворюється і експресується в клітинах хазяїна ЮОгозорнйЙа теїаподавзіег 5сппеїдег 2 (52).
Рекомбінантні Е білки вірусу денге можуть бути отримані методами системи експресії клітинної культури, в якій використовують клітини ЮОгозорпйа Зсппеїдег 2 (52). Ця система була продемонстрована для отримання рекомбінантних оболонкових білків денге, які зберігають подібну природному структуру (Си22иБбБо еї аї., Сіїп. Оіадп. Га. Іттипої. (2001) 8:1150-55;
Моаіз еї аї., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. (2003) 100:6986-91; Моаів еї аї., Майте (2004) 427:313-9; 7папа еї аї., Бігисіиге (2004)12(9):1607-18). Також було показано, що ця система експресії експресує інші рекомбінантні оболонкові білки від інших флавівірусів, таких як віруси Західного Ніла, японського енцефаліту, гепатиту С і кліщового енцефаліту. Рекомбінантні оболонкові білки денге можуть бути усічені на С-закінченні, залишаючи 80 95 природного оболонкового білка ("80"). Таким чином, 8ОЕ визначений як приблизно перші 80 95 послідовних амінокислот Е білка, починаючи з амінокислоти 1 на його М-кінці.
Як указано вище, деякі варіанти цього аспекту винаходу містять усічені 8ОЕ білки, які складаються з приблизно 80 95 довжини дикого Е, починаючи з амінокислотного залишку 1 на його М-кінці. Е білки, що використовуються в деяких варіантах винаходу, мають видалену частину мембранного якора (приблизно останні 10 95 Е на карбокси закінченні) білка. Іншими словами, усічені 80Е білки, що використовуються в деяких варіантах винаходу, складаються з перших 90 95 послідовних амінокислот Е, починаючи з амінокислоти 1 його М-закінчення, таким чином дозволяючи йому секретуватися у позаклітинне середовище, сприяючи відновленню.
Усічення може додатково видаляти "стовбурову" частину Е білка, який зв'язує 8ОЕ частину з частиною мембранного білка; стовбурова частина не містить гідних уваги антигенних епітопів і тому не включена в переважні антигени, ФЕМ1-80Е, ОЄМ2-80Е, ОЕМЗ3-80Е, ОЕМ4-80Е або ОЕМа4- 8ОЕ2ір. Більше 90 95, але менше 100 95 Е білка може бути клоновано і секретовано, тобто білок може мати довжину 90 9У0о-, карбокси усічену, і може включати частину трансмембранного домену доти, поки усічений ЄЕ білок секретується. "Секретований" означає здатний до секретування, і звичайно секретований, з трансформованих клітин у системі експресії. Таким чином, фахівець у даній галузі техніки зрозуміє, що Е білки денге, які використовують у композиціях і способах відповідно до даного винаходу, можуть варіюватися від 80 95, представлених тут, доти, поки білок секретується. У переважних варіантах кожного аспекту даного винаходу, ОЕМ Е білки становлять приблизно 80 95 довжини, починаючи з М-кінцевої амінокислоти оболонкового білка і закінчуючи амінокислотою в інтервалі 393-401 амінокислоти, наприклад, від амінокислоти 1 до амінокислоти 395 вірусу денге 2 типу. У альтернативних варіантах кожного аспекту винаходу Е білок денге може мати приблизно 75 95, приблизно 85 95, приблизно 90 95, приблизно 95 95 або приблизно 98 95 послідовних амінокислот Е, починаючи з амінокислоти 1 на його М-кінці. У типових варіантах аспектів винаходу ОЕМ Е білок містить приблизно 8095 послідовних амінокислот Е білка, починаючи з амінокислоти 1 його М- закінчення; такий як ОЕМ1-80Е, як зазначено нижче в 5ЕО І МО:1, ОЕМ2-80Е, як зазначено нижче в 5ЕО ІЮ МО:2, ОЕМ3-80Е, як зазначено нижче в ЗЕО І МО:З і ОЕМ4-80Е, як зазначено нижче в ЗЕО ІЮО МО 4.
Секретований Е білок також може містити домени, які сприяють димеризації, такі як в ОЕМ4- 8ОЕ7ір білку, так, що імуногенність рекомбінантного білка додатково поліпшується. Типовий
РЕМА4-80ЕЛір білок містить послідовність амінокислот, вказану нижче в 5ЕО ІЮО МО:5. У деяких варіантах цього аспекту винаходу ОЕМІ, ОЕМ2 ії ОЕМЗ 80Е антигени, включені в композицію, є мономерними, і СЕМА 80Е антиген є двовимірним.
У альтернативних варіантах цього аспекту винаходу ОЕМ1-80Е, ЮЕМ2-8ВОЕ, СЕМЗ-80Е і
РЕМА4-80Е білки в композиції є мономерними. У таких варіантах ОЕМ4 компонент присутній в кількості, що становить від приблизно 1,5 до приблизно З разів від окремих кількостей ОЕМ,
РЕМ2 і ОЕМЗ білків, переважно, приблизно 2 разів від кількості ОЕМ1, ОЕМ2 і ОЕМЗ компонентів (білків). У переважних варіантах цього аспекту винаходу відношення ОЕМ1:0ОЕМ2:0ЕМЗ3:0ЕМА антигенів у композиціях становить приблизно 1:1:1:2.
У варіантах винаходу, які містять Е білки денге, кількість кожного Е білка в композиції становить від приблизно 0,5 мкг до приблизно 500 мкг. У альтернативних варіантах кількість кожного Е білка становить від приблизно 0,5 мкг до приблизно 450 мкг, 0,5 мкг до приблизно 400 мкг, 0,5 мкг до приблизно 350 мкг, 0,5 мкг до приблизно 300 мкг, 0,5 мкг до приблизно 250 мкг, 0,5 мкг до приблизно 200 мкг, 0,5 мкг до приблизно 150 мкг, 0,5 мкг до приблизно 100 мкг, 0,5 мкг до приблизно 50 мкг, 5,0 мкг до приблизно 500 мкг, 5,0 мкг до приблизно 450 мкг, 5,0 мкг до приблизно 400 мкг, 5,0 мкг до приблизно 350 мкг, 5,0 мкг до приблизно 300 мкг, 5,0 мкг до приблизно 250 мкг, 5,0 мкг до приблизно 200 мкг, 5,0 мкг до приблизно 150 мкг, 5,0 мкг до приблизно 100 мкг, 5,0 мкг до приблизно 50 мкг, 10 мкг до приблизно 500 мкг, 10 мкг до 60 приблизно 450 мкг, 10 мкг до приблизно 400 мкг, 10 мкг до приблизно 350 мкг, 10 мкг до приблизно 300 мкг, 10 мкг до приблизно 250 мкг, 10 мкг до приблизно 200 мкг, 10 мкг до приблизно 150 мкг, 10 мкг до приблизно 100 мкг, 10 мкг до приблизно 50 мкг, 25 мкг до приблизно 500 мкг, 25 мкг до приблизно 450 мкг, 25 мкг до приблизно 400 мкг, 25 мкг до приблизно 350 мкг, 25 мкг до приблизно 300 мкг, 25 мкг до приблизно 250 мкг, 25 мкг до приблизно 200 мкг, 25 мкг до приблизно 150 мкг, 25 мкг до приблизно 100 мкг або від 25 мкг до приблизно 50 мкг. У додаткових переважних варіантах кількість кожного Е білка в композиції становить від приблизно 1,0 мкг до приблизно 100 мкг. У ще додаткових варіантах кількість кожного Е білка в композиції вибирають з приблизно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 або 500 мкг.
Інактивована вакцина денге
Інактивовані вакцини денге містять один або більше цільних інактивованих вірусів денге і/або один або більше інактивованих химерних вірусів денге. У деяких варіантах цього аспекту винаходу інактивована вакцина денге є чотиривалентною і містить цільний інактивований ОЕМ,
БЕМ2, ОЕМЗ і ОЕМ4. У альтернативних варіантах інактивована вакцина містить чотири інактивовані химерні віруси денге. У ще інших варіантах інактивована вакцина є чотиривалентною і містить один або більше цільних інактивованих вірусів денге і один або більше інактивованих химерних вірусів денге, наприклад, інактивований цільний ОЕМ вірус, інактивований цільний ОЕМ вірус, інактивований ОЕМЗ химерний вірус і інактивований ОЕМА химерний вірус. Фахівець у даній галузі техніки зрозуміє, що будь-яке поєднання інактивованих цільних або химерних ОЕМ вірусів може використовуватися у чотиривалентних композиціях і способах відповідно до даного винаходу, доти, поки вакцина вражає всі чотири серотипи денге.
Інактивовані вакцини денге, що застосовуються у композиціях і способах винаходу, описані в Ршїпак еї аїЇ. Массіпе 23: 4442-4452 (2005), 005 6190859, 05 6254873 і З(егпег еї аІ. М/О 2007/002470. Альтернативно, штами вірусу денге і химерні штами денге/химерні штами флавівірусу можуть бути інактивовані для застосування у композиціях способами, відомими в даній галузі техніки, наприклад, хімічними сполуками, теплом або опроміненням.
Отже, даний винахід також стосується вказаних вище складів, які містять ефективні кількості живої атенуйованої вакцини від денге і нереплікаційної вакцини від денге, де жива послаблена вакцина від денге містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус (ЖАХВ), де ЖАВ або ЖАХВ містить вірусний геном, який містить 3З0-нуклеотидну делецію ТІ-2 структури петля на стеблі в
З'НТР. У деяких варіантах винаходу нереплікаційну вакцину від денге з композицій вакцин від вірусу денге даного винаходу вибирають з рекомбінантної субодиничної вакцини від денге або інактивованої вакцини від денге. У одному варіанті склад ліофілізований, заморожений, висушений мікрохвилями або має ліосфери з ефективними кількостями живої атенуйованої вакцини від денге і нереплікаційної вакцини від денге. У іншому варіанті склад живої атенуйованої вакцини від денге відновлюють рідким розчином, який містить нереплікаційну вакцину від денге, наприклад, М180.
У переважних варіантах винаходу жива атенуйована і нереплікаційна вакцини від денге є чотиривалентними (тобто містять ОЕМІ1, СЕМ2, ОЕМЗ ії СЕМА компоненти або викликають імунну відповідь проти ОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМ ії ОЕМ).
Ад'юванти
Спільне введення вакцин зі сполуками, які поліпшують імунну відповідь проти цільового антигену, відомими як ад'юванти, ретельно вивчали. На доповнення до підвищення імунної реакції проти цільового антигену, деякі ад'юванти можуть використовуватися для зниження кількості антигену, необхідного для виклику бажаної імунної реакції, або зниження кількості ін'єкцій, необхідних у клінічному режимі для того, щоб викликати імунну відповідь і забезпечити захист від захворювання.
Виходячи з цього, склади вакцини від вірусу денге відповідно до даного винаходу можна застосовувати як ад'юванти. Ад'ювантом складів, описаних тут, може бути будь-який ад'ювант, який забезпечує бажану функцію, як описано вище, і не інактивує або значно впливає на титр
ЖАВ або ЖАХВ композиції.
Було визначено, що сполуки на основі алюмінію мають ад'ювантну активність більше 60 років тому (огляд див. в Гіпабіад, Е.В. Іттипої. апа Сеї! Віої. 82: 497-505 (2004); Вауог еї аї.
Массіпе 20: 518-523 (2002)). Алюмінієві ад'юванти звичайно вважаються безпечними при застосуванні у придатних дозах. Багато з них були схвалені для введення людині контролюючими органами по всьому світу.
Отже, сполуки на основі алюмінію, такі як гідроксид алюмінію (АКОН)з), гідроксифосфат алюмінію (АІРО»), аморфний сульфат гідроксифосфату алюмінію (АСГА) або так званий "алюм" 60 (КА(5О4)12Н2О) (див. Кіевїп еї аї!., Апаїузів ої аїштіпит Нуагохурпо5рнаїе массіпе адіимапів Бу АЇ
МАБ5 ММА., У. Рнагт. 5сі. 89(3): 311-21 (2000)), можуть бути об'єднані з представленими тут композиціями. У типових варіантах представленого тут винаходу алюмінієвим ад'ювантом є гідроксифосфат алюмінію або АСГА. У альтернативних варіантах алюмінієвим ад'ювантом є ад'ювант на основі фосфату алюмінію, позначений тут "АФА". У інших варіантах ад'ювантом є гідроксид алюмінію.
Фахівець у даній галузі техніки зможе визначити оптимальну дозу алюмінієвого ад'юванта, яка і безпечна, і ефективна для підвищення імунної реакції на цільові віруси денге. Обговорення профілю безпеки алюмінію, а також кількості алюмінію, включені в ліцензовані ЕЮОА вакцини, представлено в Вауїог еї аї., Массіпе 20: 518-523 (2002). Загалом, ефективна і безпечна доза алюмінієвого ад'юванта варіюється від 50 мкг до 1,25 мг елементарного алюмінію на дозу (концентрація від 100 мкг/мл до 2,5 мг/мл).
Таким чином, конкретні варіанти даного винаходу включають композиції, які містять живу атенуйовану вакцину від вірусу денге і додатково включають алюмінієвий ад'ювант. У варіантах винаходу композиції денге містять ад'ювант, який містить від приблизно 50 мкг до приблизно 1,25 мг елементарного алюмінію на дозу вакцини. У інших варіантах алюмінієвий ад'ювант на дозу композиції вакцини містить кількість елементарного алюмінію, що становить від приблизно 100 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 100 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 500 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 400 мкг, від приблизно 100 мкг до приблизно 300 мкг, від приблизно 100 до приблизно 250 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 1,25 мг, від приблизно 200 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 200 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 500 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 400 мкг, від приблизно 200 мкг до приблизно 300 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 1,25 мг, від приблизно 300 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 300 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 500 мкг, від приблизно 300 мкг до приблизно 400 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 1,25 мг, від приблизно 400 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 400 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 400 мкг до приблизно 500 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 1,25 мг, від приблизно 500 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 500 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 800 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 700 мкг, від приблизно 500 мкг до приблизно 600 мкг, від приблизно 600 мкг до приблизно 1,25 мг, від приблизно 600 мкг до приблизно 1,0 мг, від приблизно 600 мкг до приблизно 900 мкг, від приблизно 600 мкг до приблизно 850 мкг, від приблизно 600 мкг до приблизно 800 мкг або від приблизно 600 мкг до приблизно 700 мкг.
Інші ад'юванти, які можуть використовуватися в поєднанні з композиціями вакцини від вірусу денге відповідно до даного винаходу, включають, але не обмежені ними, ад'юванти, що містять
Сро олігонуклеотиди або інші молекули, які діють на (оїІ-подібні рецептори, такі як ТІ КА і ТІ КО (огляди дані в Юашибепрегдег, С.А., Сип. Оріп. Мої. Тег. 9(1):45-52 (2007); ЮОшщіє еї аї.,
Іттипоїодіса! Немівжв 239(1): 178-196 (2011); Недауаї еї а!., Медісіпа! Незеагсп Неміємв З2(2): 294-325 (2012)) включаючи ліпополісахарид, монофосфориловий ліпід А і 4-фосфати аміноалкілглюкозамініду. Додаткові ад'юванти, що застосовуються в композиціях відповідно до даного винаходу, включають імуностимулюючі олігонуклеотиди (МО; см, наприклад, Ш.5. 7,113,535 їі 0.5. 7,470,674); Т-хелперні епітопи, ліпід-А і його похідні або варіанти, ліпосоми, фосфат кальцію, цитокіни (наприклад, гранулоцитарний макрофаг-колонієстимулюючий фактор (СМ-С5Е) 1-2, ТЕМ-с, Е-ЗІ), 26040, Сбр28, СО70, 11-12, білок теплового шоку (Н5Р) 90, СО134 (0Х40), СОР137, СоМмассіпе НТ, неіонні блокспівполімери, неповний ад'ювант Фрейнда, хемокіни, токсин холери; Е. соїї термолабільний ентеротоксин; коклюшний токсин; мурамілдипептид, аналоги мурамілпептиду, МЕ59, 5АЕ, імуностимулюючі комплекси, біорозкладані мікросфери, поліфосфазен; синтетичні полінуклеотиди.
Додаткові ад'юванти для застосування з композиціями, описаними тут, є ад'ювантами, які містять сапоніни (наприклад, О521), окремо або в поєднанні з холестерином і фосфоліпідом в характеристичній формі ІЗСОМ (Сїімуностимулюючий комплекс", огляд представлений у Ваїт апа бо МіїснеїІ, Іттипоїоду апа Сеїї Віоїоду 74: 8-25 (1996); и 5Кепе апа Бийоп, Меїйподз 40: 53-59
(2006)). Такі ад'юванти називаються тут "ад'юванти на основі сапоніну". У конкретних варіантах представлених тут композицій мутантні токсини і/або білки токсинів об'єднані з ад'ювантом типу
ІЗСОМ або "ІБСОМ", який є ад'ювантом з матричними частинками І5СОМ, таким як
ІЗСОМАТКЇІХ "М, який виробляють без антигену (ІЗСОМ "М і ІЄСОМАТКІХ "М є зареєстрованими торговими марками С5І І ітіїтей, РагкміПе, А!йвігаїа).
Склади
Склади або композиції відповідно до даного винаходу містять живу атенуйовану вакцину від денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус (ЖАХВ), буфер при рН приблизно 6,5-8,5, цукор, гліколь або цукровий спирт і похідне целюлози, вибране з групи, яка складається з карбоксиметилцелюлози, гідроксипропілделюлози (ГПЦ), гідроксипропілметилцелюлози (ГПМЦ), 2-гідроксіегилцелюлози (2-ГЕЦ), кроскармелози і метилцелюлози, або їх фармацевтично прийнятної солі; необов'язково, лужної або лужноземельної солі, і, необов'язково, амінокислоти, вибраної з групи, яка складається з АПа, Азр, Нів, І еиц, Г ув, Сп, Рго або Сім, або їх поєднання.
У іншому аспекті винаходу склад містить живу атенуйовану вакцину від денге, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ЖАВ) або щонайменше один живий атенуйований химерний флавівірус у кількості приблизно 20-200000,00 БУО/мл, буфер при рН приблизно 6,5-8,5, цукор у кількості приблизно 150-300 мг/мл, носій, вибраний з групи, яка складається з полівінілпіролідону (ПВП), карбоксиметилцелюлози, гідроксипропілделюлози (ГПЦ), гідроксипропілметилцелюлози (ГПМЦ), 2-гідроксіетилцелюлози (2-ГЕЦ), кроскармелози, метилцелюлози або їх фармацевтично прийнятної солі, людського сироваткового альбуміну (ЛСА) і желатину; необов'язково лужної солі або лужноземельної солі у кількості приблизно 5- 100 мм; і, необов'язково, амінокислоти Сп, Рго або Сім, або їх поєднання.
У одному варіанті жива атенуйована вакцина від денге має концентрацію 100-10000000
БУО/мл, 100-100000 БУО/мл або 600-20000 БУО/мл у складі У іншому варіанті жива атенуйована вакцина від денге має концентрацію 200-200000 БУО/мл, 600-200000 БУО/мл або 600-100000 БУО/мл у складі.
У переважних варіантах похідне целюлози є аніонним і утворює сіль, наприклад, натрієву або калієву сіль карбоксиметилцелюлози у кількості приблизно 0,3-10 мг/мл, 1-10 мг/мл, 3-7 мг/мл або 5 мг/мл у складі живої атенуйованої вакцини від денге. Сіль карбоксиметилцелюлози доступна у типі високої в'язкості зі середньою молекулярною масою приблизно 700000; типі середньої в'язкості зі середньою молекулярною масою приблизно 250000; і типі низької в'язкості зі середньою молекулярною масою приблизно 90000. У одному варіанті похідним целюлози є сіль карбоксиметилцелюлози зі середньою молекулярною масою приблизно 700000 у кількості приблизно 0,3-1,5 мг/мл в складі живої атенуйованої вакцини від денге. У іншому варіанті похідним целюлози є сіль карбоксиметилцелюлози зі середньою молекулярною масою приблизно 250,000 у кількості приблизно 1-4 мг/мл. У додатковому варіанті похідним целюлози є сіль карбоксиметилцелюлози зі середньою молекулярною масою приблизно 90000 у кількості приблизно 3-7 або 3-10 мг/мл. У ще одному варіанті похідним целюлози є сіль карбоксиметилцелюлози зі середньою молекулярною масою від приблизно 50000 до 1000000 у кількості приблизно 0,3-10 мг/мл.
У одному варіанті буфер вибирають з групи, яка складається з фосфату, сукцинату, гістидину, ТКІ5, МЕ5, МОР5Б, НЕРЕЗ, ацетату і цитрату у кількості приблизно 5-300 мМ, 5-20
ММ, 10-12 мМ або 11 мм.
Лужна або лужноземельна сіль може забезпечити стабілізуючу дію і може бути вибрана з групи, яка складається з хлориду магнію, хлориду кальцію, хлориду калію, хлориду натрію або їх поєднання у кількості приблизно 10-150 мМ, 10-100 мм, 15-75 мм, 30-90 мм, 75 мм, 50 мМ або 30 мМ.
Амінокислота може бути вибрана з групи, яка складається з Маї, Пе, Аа, Ар, Нів, І еи, І ув,
Сп, Рго або Си, або їх поєднання у кількості 10-100, 10-75, 10-50, 20-30 або 25 мМ. У іншому варіанті амінокислота може бути вибрана з групи, яка складається з АПа, Ар, Нів, І еи, Гуз, Сп,
Рго або Сім, або їх поєднання у кількості 10-100, 10-75, 10-50, 20-30 або 25 мМ. У одному варіанті амінокислотою є Гуз, ей або Сіш. У іншому варіанті амінокислотами є Гец їі Си. У іншому варіанті амінокислотою є І еиц, І уз, Сім або Аа. У іншому варіанті амінокислотою є Ї еи.
Цукор і гліколь або цукровий спирт може діяти як кріопротектор або стабілізуючий ексципієнт. У одному варіанті цукор міститься у концентрації 50-300 мг/мл. У іншому варіанті цукром є трегалоза або сахароза, або їх поєднання, у кількості приблизно 60-120 мг/мл, 90-110 мг/мл або 80-100 мг/мл. У одному варіанті відношення сахарози до трегалози становить 1:1-1:4. 60 В іншому варіанті сахароза становить 90 мг/мл і трегалоза становить 90-200 мг/мл, і,
переважно, 110 мг/мл. У іншому варіанті гліколем є пропіленгліколь, і цукровим спиртом є гліцерин або сорбіт у кількості приблизно 2,5-7,5 мг/мл, 3-7 мг/мл або 5 мг/мл.
Композиції відповідно до даного винаходу можуть бути введені суб'єкту одним або кількома способами, відомими фахівцеві в даній галузі, наприклад, парентерально, трансмукозально, трансдермально, внутрішньом'язово, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньоназально, підшкірно, внутрішньочеревинно, і відповідним чином складені.
У одному варіанті композиції відповідно до даного винаходу вводять епідермальною ін'єкцією, внутрішньом'язовою ін'єкцією, внутрішньовенною, внутрішньоартеріальною, підшкірною ін'єкцією або ін'єкцією в слизову дихальних шляхів рідкого препарату. Рідкі склади для ін'єкцій включають розчини і подібні. Композиція відповідно до даного винаходу може бути складена у вигляді флаконів з однократною дозою, флаконів із множиною доз або у вигляді попередньо заповнених шприців.
У іншому варіанті композиції відповідно до даного винаходу вводять перорально і, таким чином, складають у формі, придатній для перорального введення, тобто у вигляді твердого або рідкого препарату. Тверді пероральні склади включають таблетки, капсули, пілюлі, гранули, пелети і подібні. Рідкі пероральні склади включають розчини, суспензії, дисперсії, емульсії, масла і подібні.
У одному аспекті винаходу складом є твердий висушений склад, отриманий ліофілізацією, заморожуванням, сушінням мікрохвилями або утворенням ліосфер. У одному варіанті твердий висушений склад отримують або проводять способом сушіння мікрохвилями, описаним в прикладі 7. Склади можуть зберігатися при -70 "С, -20 "С, 2-8 "С або при кімнатній температурі (25 або 37 "С). Висушені склади можуть бути описані за допомогою маси компонентів у флаконі з однократною дозою, але вони варіюються по різних дозах або розмірах флакона.
Альтернативно, висушені склади відповідно до даного винаходу можуть бути описані за допомогою кількості компоненту як відношення маси компоненту до маси лікарської речовини (ЛР) в одному зразку (наприклад, флаконі). Це відношення може бути виражене як процент. Такі відношення відображають внутрішньо властивість висушених складів відповідно до даного винаходу, незалежно від розміру флакона, дозування і протоколу відновлення. У інших варіантах, складом є ліосфери.
У іншому аспекті винаходу складом є відновлений склад. Висушений твердий склад може бути відновлений в різних концентраціях залежно від клінічних факторів, таких як спосіб введення або дозування. Наприклад, висушений склад може бути відновлений у високій концентрації (тобто в невеликому об'ємі), якщо необхідно для підшкірного введення. Високі концентрації також можуть бути необхідні, якщо дозування потрібне для конкретного суб'єкта, зокрема, при підшкірному введенні, коли об'єм ін'єкції необхідно мінімізувати. Подальше розбавлення водою або ізотонічним буфером може легко використовуватися для розбавлення лікарського продукту до більш низької концентрації. Якщо бажана ізотонічність при низькій концентрації лікарського продукту, висушений порошок може бути відновлений в стандартному низькому об'ємі води і потім додатково розбавлений ізотонічним розріджувачем, таким як 0,9 95 хлорид натрію.
Відновлення звичайно проводять при температурі приблизно 25 "С для повної гідратації, хоча інші температури можуть використовуватися при бажанні. Час, необхідний для відновлення, залежить, наприклад, від типу розріджувача, кількості ексципієнту(ів) і вірусу або білка. Типові розріджувачі включають стерильну воду, бактеріостатичну воду для ін'єкцій (БВДІ), рН буферований розчин (наприклад буферований фосфатом фізіологічний розчин), стерильний фізіологічний розчин, розчин Рінгера або розчин декстрози. Об'єм відновлення може становити приблизно 0,5-1,0 мл, переважно, 0,5 мл або 0,7 мл. У одному варіанті однократна доза має об'єм 0,5 мл. У іншому аспекті у винаході представлений спосіб отримання рідкого складу, який включає стадії відновлення складів відповідно до даного винаходу розріджувачем, як описано вище.
У іншому варіанті винаходу складом є водний розчин, отриманий до ліофілізації, заморожування, сушіння мікрохвилями або отримання ліосфер.
Способи отримання ліосфер
Способи отримання ліосфер описані в публікації заявки на патент США 0520140294872, опис якої включений сюди як посилання повністю. Спосіб включає поширення щонайменше однієї рідкої краплі, яка має по суті сферичну форму, на твердій і плоскій поверхні (тобто такій, що не містить стінок зразка або порожнин), заморожування краплі на поверхні без контакту краплі з кріогенною речовиною і ліофілізацію замороженої краплі з отриманням висушеної опуклості, яка є по суті сферичною за формою. У патенті США Мо 9,119,794, опис якого 60 включений сюди як посилання повністю, також описані способи отримання ліосфер. Одиничні об'єми, що містять суміш водного середовища, утворюють на твердому елементі, що містить порожнини. Твердий елемент охолоджують нижче температури замерзання суміші, порожнини заповнюють сумішшю і суміш отверджується, поки знаходиться в порожнині, утворюючи одиничні форми. Одиничні форми сушать у вакуумі з отриманням ліосфер.
У інших варіантах ліосфери формують в по суті сферичну форму і отримують заморожуванням крапель рідкої композиції або бажаного біологічного матеріалу на плоскій, твердій поверхні, зокрема, поверхні, яка не має порожнин, з подальшою ліофілізацією одиничних форм. У публікації заявки на патент США Мо О52014/0294872, опис якої включений сюди як посилання, описані подібні способи отримання ліосфер.
Коротко, в деяких варіантах спосіб включає поширення щонайменше однієї рідкої краплі, що має по суті сферичну форму, на твердій і плоскій поверхні (тобто такій, що не містить стінок зразка або порожнин), заморожування краплі на поверхні без контакту краплі з кріогенною речовиною і ліофілізацію замороженої краплі з отриманням висушеної опуклості, яка є по суті сферичною за формою. Спосіб може використовуватися в режимі високої продуктивності з отриманням множини висушених опуклостей при безперервному поширенні бажаної кількості крапель на твердій, плоскій поверхні, заморожуючи краплі і ліофілізуючи заморожені краплі.
Опуклості, отримані цим способом з рідкого складу, можуть мати високу концентрацію біологічного матеріалу (такого як терапевтичний білок), і може бути об'єднана в сукупність висушених опуклостей.
У деяких варіантах твердою плоскою поверхнею є верхня поверхня металевої пластини, яка має нижню поверхню, яка знаходиться у фізичному контакті з тепловідведенням, адаптованим для підтримання температури верхньої поверхні металевої пластини на рівні -90 "С або нижче.
Оскільки верхня поверхня металевої пластини знаходиться при температурі нижче точки заморожування рідкого складу, краплі замерзають практично миттєво, як тільки нижня поверхня краплі торкається верхньої поверхні металевої пластини.
У інших варіантах тверда плоска поверхня є гідрофобною і містить верхню поверхню з тонкої плівки, яка витримується при приблизно 0 "С під час стадії поширення. Поширена крапля замерзає при охолоджуванні тонкої плівки до температури нижче температури замерзання складу.
Спосіб ліофілізації
Ліофілізовані склади відповідно до даного винаходу отримують ліофілізацією (сушінням виморожування) передліофілізаційного розчину. Сушіння виморожуванням супроводжується заморожуванням складу з подальшою сублімацією води при температурі, придатній для первинного сушіння. У цих умовах температура продукту знаходиться нижче евтектичної точки або температури розкладання складу. Звичайно температура полиці для первинного сушіння становить від приблизно -50 до 25 "С (за умови, що продукт залишається замороженим під час первинного сушіння) при придатному тиску, що варіюється звичайно від приблизно 30 до 250 мТорр. Склад, розмір і тип контейнера, в якому зберігається зразок (наприклад, скляного флакона), і об'єм рідини зумовлюють час, необхідний для сушіння, який може варіюватися від кількох годин до кількох днів (наприклад, 40-60 год.). Стадія вторинного сушіння може проводитися при приблизно 0-40 "С, залежно, насамперед, від типу і розміру контейнера і типу білка, що застосовується. Час вторинного сушіння зумовлюється бажаним рівнем залишкової вологи в продукті, і звичайно становить щонайменше приблизно 5 годин. Звичайно вміст вологи у ліофілізованому складі становить менше приблизно 5 95, і, переважно, менше приблизно 3 95.
Тиск може бути таким же, який застосовується під час стадії первинного сушіння. Умови сушіння виморожуванням можуть варіюватися залежно від складу, розміру флакона і лотків для ліофілізації.
У деяких випадках може бути бажано ліофілізувати або сушити мікрохвилями склад у контейнері, в якому буде проводитися відновлення, для того, щоб уникнути стадії перенесення.
У цьому випадку контейнером може бути, наприклад, флакон 2, 3, 5, 10 або 20 мл.
Способи застосування
Варіанти даного винаходу також включають одну або більше вакцинних композицій або складів від денге, описаних тут (і) для застосування в, (ії) для застосування як лікарського засобу або композиції для, або (ії) для застосування в приготуванні лікарського засобу для: (а) терапії (наприклад, тіла людини); (Б) медицина; (с) інгібування реплікації вірусу денге, включаючи ЮЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ і/або ОЕМА4; (а) виклику імунної реакції або захисної імунної реакції проти одного або більше з ПОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ і/або ОЕМ; (є) виклику реакції антитіла, яке нейтралізує вірус, проти одного або більше типів денге; (Її) лікування або профілактики зараження вірусом денге; (9) профілактики рецидиву зараження вірусом денге; (п) зниження 60 розвитку, настання або тяжкості патологічних симптомів, пов'язаних із зараженням вірусом денге і/або зниження імовірності зараження вірусом денге або, (ї) лікування, профілактики або затримання настання, тяжкості або розвитку асоційованого з денге захворювання, включаючи, але не обмежуючись ними: гарячку денге, геморагічну гарячку денге і синдром шоку денге. При такому застосуванні вакцинні композиції від денге необов'язково можуть використовуватися в поєднанні з одним або більше ад'ювантами (наприклад, АСГА, фосфатом алюмінію, гідроксидом алюмінію, таким як АІнуагодеЇ?),, або іншим ад'ювантом на основі солі алюмінію, ад'ювантом на основі сапоніну, таким як ІЗСОМАТКІХ"М (С51, Ц.), Ті К-агоністом або жировими наночастинками, описаними тут).
Профілактичне лікування може проводитися із застосуванням вакцинної композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу, як описано тут. Композиція відповідно до даного винаходу може вводитися населенню загалом або тим персонам, які схильні до підвищеного ризику зараження денге, наприклад, тим персонам, які живуть або подорожують у ті частини світу, в яких переважають комарі роду Аедев. "Ті, що потребують лікування" включають тих, хто вже заразився денге (наприклад, заражених одним або більше з ОЕМІ, СЕМ2, ОЕМЗ або ОЕМЯ), а також тих, хто схильний до інфекції, або будь-яку людину, для якої бажано знизити імовірність зараження.
Вакцинні композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу можуть бути складені і введені пацієнту із застосуванням методів, добре відомих в даній галузі техніки. Керівництво з фармацевтичного введення, загалом, представлене в, наприклад, Массіпе5 Едвз. РіоїКіп апа
Огепзівіп, М/.В. бЗапаєт5 Сотрапу, 1999; Ветіпдюп'я РПаптасешіїса! бсіепсез 207 Еайіоп, Еа.
Сеппаго, Маск Рибіїзпіпу, 2000; и Модегп Рпагтасеціїсв 274 Еайіоп, Ед. ВапКкег апа Апоадезв,
Магсе! Оеккег", Іпс., 1990.
Отже, у винаході представлений спосіб виклику захисної імунної реакції у пацієнта проти зараження денге, який включає стадію введення пацієнту імунологічно ефективної кількості будь-якої вакцинної композиції від вірусу денге, описаної тут. У одному варіанті вакцинну композицію від вірусу денге вводять спільно, в поєднанні з іншими вакцинами для лікування або профілактики захворювань від вірусу Зіка, кору-паротиту-краснухи або вітряної віспи.
Також в даному винаході представлений спосіб лікування зараження денге, або лікування будь-якого патологічного стану, асоційованого із зараженням денге, де таке лікування включає профілактику зараження і зниження тяжкості клінічних симптомів, затримку або запобігання розвитку захворювання і/або зниження імовірності зараження або його клінічних симптомів; де спосіб включає стадію введення пацієнту імунологічно ефективної кількості будь-якої з вакцинних композицій, описаних тут.
Додаткові варіанти винаходу включають введення двох або більше композицій відповідно до
З5 даного винаходу пацієнту в режимі примування/стимулювання. Отже, винахід стосується способу профілактики або зниження імовірності зараження денге у пацієнта, який потребує такого, що включає стадії: (а) введення першої вакцинної композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу пацієнту; (Б) очікування протягом певного періоду часу після стадії (а); (с) введення пацієнту другої вакцинної композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу; і (4) необов'язково, повторення стадій (Б) і (с); де у пацієнта запобігається зараження денге або знижується імовірність зараження денге.
У варіантах вказаного вище способу вакцинні композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу мають форму замороженої рідини. У альтернативних варіантах вакцинні композиції від вірусу денге ліофілізовані або висушені мікрохвилями і відновлені стерильним розріджувачем до введення пацієнту.
Кількість часу між першою дозою вакцинної композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу і другої дози вакцинної композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу або будь-якої подальшої дози становить від приблизно 2 тижнів до приблизно 2 років. У переважних варіантах винаходу час, який проходить між множиною введень, становить від 2 місяців до 12 місяців. У альтернативних варіантах цього аспекту винаходу кількість часу між кожним введенням кожної дози вакцинної композиції незалежно вибирають із групи, яка складається з 2 тижнів, 1 місяця, 2 місяців, З місяців, 4 місяців, 5 місяців, 6 місяців, 7 місяців, 8 місяців, 9 місяців, 10 місяців, 11 місяців, 12 місяців, 13 місяців, 14 місяців, 15 місяців, 16 місяців, 17 місяців, 18 місяців, 19 місяців, 20 місяців, 21 місяця, 22 місяців, 23 місяців і 24 місяців.
У деяких варіантах винаходу перша і друга вакцинні композиції від вірусу денге є однаковими. У альтернативних варіантах перша і друга вакцинні композиції від вірусу денге є не 60 однаковими.
Вакцинні композиції від вірусу денге відповідно до даного винаходу можуть вводитися різними способами. У переважних варіантах винаходу композиції відповідно до даного винаходу вводять парентерально, наприклад, внутрішньошкірно, підшкірно або внутрішньом'язово.
Підшкірне і внутрішньом'язове введення може проводитися із застосуванням, наприклад, голкових або безголкових шприців.
Описані тут композиції можуть вводитися методом, сумісним зі складом, що дозується, і в такій кількості, яка є імунологічно ефективною для лікування і/або зниження імовірності зараження денге. Доза, що вводиться пацієнту в контексті даного винаходу, повинна бути достатньою для виклику позитивної реакції у пацієнта протягом часу, такої як зниження рівня вірусу денге, або для зниження імовірності зараження денге. Кількість вакцин, що вводяться від вірусу денге, може залежати від пацієнта, який лікується, включаючи вік, стать, масу тіла і загальний стан здоров'я. У зв'язку з цим точна кількість вакцини, необхідна для введення, буде базуватися на думці лікуючого лікаря. При визначенні ефективної кількості вакцини, що вводиться при лікуванні або профілактиці зараження денге, терапевт може оцінити рівні в плазмі, розвиток захворювання і утворення антитіл проти денге. У будь-якому випадку придатні дози імуногенних композицій відповідно до даного винаходу можуть бути легко визначені фахівцем в даній галузі техніки.
Придатні режими дозування переважно визначають, беручи до уваги фактори, добре відомі в даній галузі техніки, включаючи вік, масу тіла, стать і медичний стан пацієнта; спосіб введення; бажаний ефект; і конкретну композицію, що застосовується. Час прийому доз залежить від факторів, добре відомих в даній галузі техніки, і можуть варіюватися від 2 тижнів до 24 місяців. Після початкового введення, одна або більше додаткових доз можуть бути введені для підтримки і/або збільшення титрів антитіл.
Винахід також стосується способів профілактики зараження денге або профілактики або полегшення його симптомів, що включають стадії: введення пацієнту, у якого запобігають або полегшують зараження денге або його симптоми, композицій вакцини від вірусу денге. Інші варіанти цього аспекту винаходу включають проходження певної кількості часу між введенням вакцинної композиції від вірусу денге і введенням другої дози вакцинної композиції від вірусу денге.
У описаному вище способі перша вакцина від денге є, переважно, чотиривалентною, і містить ОЕМІ, БЕМ2, ОЕМЗ ії СЕМ 4 компонент, де кожний компонент містить або живий атенуйований вірус денге, або живий атенуйований химерний флавівірус, як описано тут. У типових варіантах жива атенуйована вакцина денге містить чотири химерні флавівіруси; де кожний з химерних флавівірусів містить ргМ і Е білки одного серотипу вірусу денге і капсидний і неструктурний білки різних флавівірусів, де кожний з химерних флавівірусів послаблений. У певних варіантах капсидний і неструктурний білки чотирьох химерних флавівірусів походять із вірусу жовтої гарячки. У альтернативних варіантах капсидний і неструктурний білки кожного з чотирьох химерних флавівірусів походять з інших серотипів денге, ніж ргМ і Е білки.
У деяких варіантах цього аспекту винаходу другою вакциною від денге є чотиривалентна рекомбінантна субодинична вакцина від денге, яка містить Е білки денге або їх фрагменти, з
РЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ ії ОЕМ4. Субодиничні вакцини, що застосовуються в способі відповідно до даного винаходу, описані тут. У переважних варіантах кожний з білків Е становить приблизно 80 96 довжини дикого типу Е з ОЕМ1, ОЕМ2, СЕМЗ і ОЕМА4, починаючи від залишку амінокислоти 1 на М-кінці.
Приклади
Приклади послідовностей живого атенуйованого вірусу денге, що застосовуються в цих дослідженнях, включають гОЕМ1 - гОЕМІТАЗ30-1545 РММУБ (5ЕБО І МО: 6) гОЕМ2 - "ОЕМ2/4АЗО(МЕ)-1495,7163 РМУБ5 (5ЕО ІО МО: 7); "ОЄМЗ - "ОЕМЗ3АЗ0/31-7164 РМУБ5 (5ЕО І
МО: 8); і гОЕМА - "«ОЕЄМ4АЗ30-7132,7163,8308 РМУБ5 (5ЕО ІО МО: 9).
Таблиця 1
Короткий опис змін послідовності РММ5 ОЕММ1
Номер Ген Номер амінокислоти нуклеотиду РМУБ білка РМУБ5 1544" 1545 15497 "Введений з метою стабілізації і клонування
Таблиця 2
Короткий опис змін послідовності РМУ5 ОЕММ2
Номер г - ся Номер амінокислоти : ся нуклеотиду ен Оригіналь-ний РМУЄ білка Оригіналь-ний РМУ клон КДНК клон КДНК 1490 1495 7132 мар | с 07, 702 | т | пе 7163 Мар 7166 Мар 7169 М54р
Таблиця З
Короткий опис змін послідовності РМУ5 ОВЕММУЗ
Номер Ген Номер амінокислоти нуклеотиду РМУ5 білка РМУ5 1539 1681 2095 ЕЕ ЇЇ с 1 7 1 з88 | ї6е | їє 7164 Мар 7304 М54р 8082 10533 З'НТР
Таблиця 4
Короткий опис змін послідовності РМУ5 СОЕММ4
Номер г - ся Номер амінокислоти : ся нуклеотиду ен Оригіналь-ний РМУЄ білка Оригіналь-ний РМУ клон КДНК клон КДНК 2440 МБ т | с 1 76 (| Ма | Аа 7132 мар | со 077 702 | т | те 7153 Мар Маї»Аїа 7163 М54р 8308
РЕММІ, 2, З ї 4 дикий тип і оригінальний клон кКДНК у вказаних вище таблицях відповідають серотипу вірусу денге, описаному в УУпенеай, 5. 5. еї аї., У Міго! 77:1653-1657 (2003); Віапеу, 9.
Е. ес аі. Тпе Атетгісап |оитаї ої Моріса! теаісіпе апа Ннудіепе 71:811-821 (2004); Віапеу, 9. Б., Ук. еї а!., ВМС Іпіесі із 4:39 (2004); Витріп, А. Р. еї а)., Те Атегісап |оигпаї ої ігоріса! теадісіпе апа
Нпудіепе 65:405-413 (2001).
Вказані вище версії живого атенуйованого вірусу денге позначені як ОЕММІ або ОЕМ,
РЕММ2 або ОЕМ2, СЕММЗ або ОЕМЗ ії ОЕММА4 або ОЕМА нижче в прикладах. Для прикладів 1-6 склади мають питому активність 2х107 БУО/мл кожного ОЕММ1, ОЕММ2, ОЕМУЗ або ОЕММ4. Для прикладів 7-10 склади мають питому активність 1,5х107 БУО/мл кожного ОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМ3З або
РЕМА.
Приклад 1
Дія СМС, П'Г ї амінокислот (порівняно зі складом ЮОепдмахіає)) на ОЕЄММ4
Три окремі аналізи провели для дослідження дії різних ексципієнтів на вихід ліофілізації і стабільність ОЕММ4. Склади перераховані в таблиці 5.
Таблиця 5
Композиції складів складу карбоксиметилцелюлози натрію рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рН 7,5 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ Г. аргініну рН 7,5 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мм хлориду натрію, 5 мг/мл 19 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ Г. глутамінової кислоти рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ ГІ. лейцину рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ ГІ. проліну рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл гліцерину рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рн 7,5 сечовини, 15 мг/мл суміші амінокислот" карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рн 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рн 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рн 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл гліцерину, 5 мг/мл сечовини рН 7,5 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 201 мг/мл середовища Лейбовіца І -15 56 без фенолового червоного", 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ ГІ. лейцину рН 7,5 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ ГІ. лейцину рН 7,5
Таблиця 5
Композиції складів складу 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мм хлориду натрію, 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ Г. лейцину, 0,01 95 полоксамеру 188 рН 7,5 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мм хлориду натрію, 5 мг/мл 104 карбоксиметилцелюлози натрію, 5 мг/мл пропіленгліколю, 25 мМ ГІ. лейцину, 25 мМ
Ї. глутамінової кислоти, рН 7,5 " Середовище Лейбовіца І -15 без фенолового червоного є розчином виробництва Нусіопе
І арогаїогієв, Іпс.
Аналіз 1: ОЕММА складають у 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози і 75 мМ Масі (склад 3) з додаванням 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію (КМЦ натрію) (склад 4) або додаванням 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл пропіленгліколю (склад 5).
Аналіз 2: Склад 5 тестують проти порівнянних складів, які містять або 25 мМ лейцину (склад 20) або 25 мМ проліну (склад 21), а також 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мМ масі, 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл пропіленгліколю.
Аналіз 3: Склад 20 тестують проти порівнянного складу, який містить 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл пропіленгліколю і 25 мМ глутамінової кислоти (склад 19) і складу Оепдмахіафб (склад 26), який складається з 37,5 мг/мл сорбіту, 75 мг/мл сахарози, 55 мг/мл трегалози, 25 мг/мл сечовини, 6 мМ ТРІ5, 15 мг/мл суміші амінокислот.
Для всіх аналізів зразки заморожують і частину зберігають при -70 "С у вигляді заморожених рідких контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С як контроль, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування зразки 25 С заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге (АВІД) разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
АВІД є клітинним аналізом відносно інфекційності, що застосовується для вимірювання інфекційності зразків складу вірусу денге, на основі експресії оболонкового білка. Клітини Мего вміщують в 96б-ямкові титрувальні мікропланшети, інкубують протягом 24 годин і потім заражають серійним розбавленням ОЕМІ, ОЕМ2, ОЕМЗ і/або ОЕМА посилальний стандартом і позитивним контролем, специфічним для серотипу, що тестується, на доповнення до продуктів, що тестуються. Заражені клітини інкубують протягом 48 годин, і потім фіксують клітини розбавленим розчином формальдегіду. Фіксовані клітини потім пермеабілізують перед додаванням первинного антитіла (кролячого анти-ОЕМ серотип-специфічного МАБ) в планшети і інкубуванням протягом ночі. Після промивання планшетів вторинне антитіло (ослячий МІ 637- кон'югований антикролячий ІдсС, КЯО бувзієт5) додають в ямку й інкубують при кімнатній температурі протягом 22 год. Після промивання планшетів додають ФСБ в ямку у препарат для аналізу зображень із застосуванням рідера для візуалізації МіпіМах (Моіесшаг Оемісев).
Відносну активність (95 ВА) зразків (відносно посилального стандарту) розраховують із застосуванням програми ЗОоЙМАХ Рго (МоЇІесшаг Оемісе5) із застосуванням зменшеної 4- параметричної логістичної кривої.
Вихід ліофілізованих зразків розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня значення інфекційності перетворюють в логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Синергетичний ефект спостерігають для поєднання КМЦ натрію і пропіленгліколю, що дає поліпшений вихід ліофілізації і стабільність. Додавання лейцину додатково поліпшує вихід і стабільність. Склади, які містять КМЦ натрію, пропіленгліколь і лейцин або глутамінову кислоту, дають поліпшений вихід ліофілізації порівняно зі складом Юепдмахіа. Див. фігури 1-2. Точку стабільності зразків 1 тиждень 25 "С для складу 26 не тестують через руйнування коржика після зберігання при 25 76.
Приклад 2
Дія цукрового спирту на ОЕММА:
ЕММА складають в основному складі 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі і 5 мг/мл КМЦ натрію рН 7,5 з 5 мг/мл пропіленгліколю (склад 5), 5 мг/мл гліцерину (склад 22) або 25 мг/мл сорбіту (склад 13) як цукрових спиртів.
Зразки заморожують, і частину зберігають при -70С у вигляді заморожених рідких контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування 25 "С зразки заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
Вихід ліофілізації розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня значення інфекційності перетворюють у логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Цей приклад демонструє, що і пропіленгліколь, і гліцерин поліпшують вихід ліофілізації і стабільність ОЕММА порівняно із сорбітом (див. фігури З і 4).
Приклад З
Дія рН на ОЕММАУ:
ЕММА складають у склад 22 (11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ натрію, 5 мг/мл гліцерину при рн 7,0, 7,5 або 8,0).
Зразки заморожують, і частину зберігають при -70С у вигляді заморожених рідких контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування 25 "С зразки заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
Вихід ліофілізації розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня значення інфекційності перетворюють у логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Фігури 5 і Є демонструють, що ОЕММА може бути складений у склад 22 прирН 7,0Одо рН 8,0.
Приклад 4
Дія буферу на ОЕММА4:
У аналізі 1 ОЕММА складають в основний склад 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл гліцерину з альтернативними буферними системами, доведеними до рн 7,5.
Склад 22 містить 11 мМ фосфату калію і склад 25 містить 11 мМ ТКІ5 на доповнення до основного складу.
У аналізі 2 ОЕММА складають в основний склад 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл пропіленгліколю з альтернативними буферними системами, доведеними до рн 7,5. Склад 5 містить 11 мМ фосфату калію і склад 57 містить поєднання 5,5 мМ гістидину і 5,5
ММ ТКЇІ5 на доповнення до основного складу.
Зразки заморожують, і частину зберігають при -70С у вигляді заморожених рідких контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування 25 "С зразки заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
Вихід ліофілізації розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня значення інфекційності перетворюють у логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Фігури 7 і 8 демонструють, що ОЕММА може бути складений у множині буферних систем при рН 7,5, включаючи фосфат калію, ТКІ5 або поєднання гістидину і ТКІ5.
Приклад 5
Дія Масі на ОЕММ4:
ЕММА складають у основний склад 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 5 мг/мл КМЦ натрію і 5 мг/мл пропіленгліколю з інтервалом концентрації Масі 15-75 мМ.
Зразки заморожують, і частину зберігають при -70С у вигляді заморожених рідких 60 контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування 25 "С зразки заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
Вихід ліофілізації розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня значення інфекційності перетворюють у логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Фігури 9 ії 10 показали, що вихід ліофілізації і стабільність ОЕММ4 протягом 1 тижня при 25 С були однаковими при зміні концентрації від 15 до 75 ММ.
Приклад 6
Дія пропіленгліколю і гліцерину на всі серотипи денге:
БЕММ1, ОЕММ2, ОЕММЗ ії ОЕММА готують у вигляді одновалентних лікарських продуктів у складі 5 (11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ, 5 мг/мл пропіленгліколю), складі 20 (11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 50 мМ Масі, 5 мг/мл
КМЦ, 5 мг/мл пропіленгліколю і 25 мМ лейцину) і складі 22 (11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 75 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ, 5 мг/мл гліцерину) при рН 7,5.
Зразки заморожують, і частину зберігають при -70С у вигляді заморожених рідких контролів, а частину ліофілізують. Після ліофілізації деякі зразки зберігають при -70 "С, і ті, що залишилися, вміщують при 25 "С на 1 тиждень. Після інкубування 25 "С зразки заморожують і тестують в аналізі відносної інфекційності денге разом із замороженими рідкими контролями і замороженими ліофілізованими контролями. Тестують два окремі флакони кожного зразка.
Вихід ліофілізації розраховують діленням результату інфекційності ліофілізованого зразка на результат інфекційності замороженого рідкого контролю. Для розрахунку логістичної функції втрати після зберігання при 25 "С протягом одного тижня, значення інфекційності перетворюють у логарифмічну шкалу, і логарифмічний результат для 1 тижня при 25 "С віднімають від результату -70 "С ліофілізованого контролю для кожного складу.
Фігури 11 і 12 показують, що пропіленгліколь і гліцерин стабілізують всі чотири серотипи в поєднанні із сахарозою, масі і КМЦ натрію.
Приклад 7
СФГ (сахароза, фосфат калію, глутамінова кислота) отримують у вигляді ТОХ розчину з концентрацією, вказаною нижче в таблиці 6.
Таблиця 6
Також отримують наступні інші розчини: 650 мг/мл сахарози, 650 мг/мл трегалози, дигідрат, 200 мг/мл желатину, 150 мг/мл аргініну і 20 мг/мл людського сироваткового альбуміну (ЛСА).
СФГ, сахарозу, трегалозу, желатин, аргінін і ЛСА фільтрують з ПЕС 0,22 мкм фільтрами
Зіегісир. Розчини, 1-15 Лейбовіца і ОЕМ1 об'єднують з отриманням кінцевих складів, показаних нижче:
Таблиця 7 175 мг/мл Трегалози 175 мг/мл Трегалози, 2,5 мг/мл ЛСА
З ВЕ вносите ськ 5 175 мг/мл Трегалози, 25 мг/мл Желатину 6 Щ250 мг/мл І--15, 11 ММ Фосфату калію, 6 мМ І--глутамінової кислоти, 150 мг/мл Сахарози 75 мг/мл Трегалози
Таблиця 7 з Поло о рон пияееве я тись 75 мг/мл Трегалози, 40 мг/мл Аргініну 175 мг/мл Трегалози, 25 мг/мл Желатину 75 мг/мл Трегалози, 40 мг/мл Аргініну
Склади заповнюють в 2К скляні флакони у кількості 0,5 мл і заморожують при -1157С протягом 15 хвилин. Після заморожування флакони сушать у мікрохвильовій вакуумній сушарці (МХС). Після сушіння деякі флакони вміщують для тестування стабільності при 25 "С на 1 тиждень. Потім флакони піддають тестуванню активності із застосуванням аналізу відносної інфекційності денге (АВІД).
Спосіб мікрохвильового сушіння
Продукт, який висушується в мікрохвильовій вакуумній сушарці (МХС), заморожують в інтенсивному потоці повітря і завантажують у сушильну камеру. У камері швидко створюють вакуум до нижче 100 мТорр. Після досягнення встановлення вакууму, магнетрони (тобто кількість магнетрона і вихідну потужність) вибирають так, щоб почати сушіння продукту.
Мікрохвилі (опромінення використовують у форматі блукаючої хвилі) працюють у режимі сканування з алгорифмом, який циклічно повторює вибрані магнетрони (наприклад, 2 магнетрони із всього 4 магнетронів), вмикаючи і вимикаючи кожні 30 секунд для однорідного розподілу енергії. Більше того: гідродинамічне навантаження у верхній частині пристрою дозволяє однократне проходження мікрохвилі через зразок, що мінімізує будь-яке втручання відбитої мікрохвилі, тим самим дозволяючи контрольовану сублімацію. Енергію збільшують через цикл сушіння для досягнення кінцевої температури 30-45 "С. Після сушіння вакуум руйнують у камері, і продукт герметично запечатують.
Таблиця 8 в | 1 | 2 | 4 | 5 | 6 | 7 | 9 | м | 12 | з 250 мг/мл /|250 мг/мл І--| 250 мг/мл 1І-1250 мг/мл|250 мг/мл /|250 мг/мл/|250 мг/мл |450 мг/мл /|450 мг/мл |450 мг/мл
І-15, 15, 15,11 мМ І-15, І-15, І-15, І-15, І-15, І-15, І-15, 11 мМ 11 мм Фосфату 11 мм 11 мМ 11 мм 11 мМ 11 мМ 11 мм 11 мМ
Фосфату| Фосфату | калію, 6 мМ | Фосфату | Фосфату | Фосфату | Фосфату | Фосфату | Фосфату | Фосфату калію, 6 | калію, б мМ ІЇ-глута- калію, 6 | калію, 6 | калію, 6 | калію, 6 | калію, 6 | калію, 6 | калію, б
ММ 1- ІЇ-глута- мінової ММ 1- ММ 1- ММ 1- ММ 1- ММ 1- ММ 1- ММ 1- глута- мінової кислоти, 75 | глута- глута- глута- глута- глута- глута- глута- кислоти, мг/мл Сахарози, | кислоти, | кислоти, | кислоти, | кислоти, | кислоти, | кислоти, |кислоти,, 75 мг/мл | Сахарози, 175 мг/мл | 75 мг/мл |150 мг/мл/ 75 мг/мл | 75 мг/мл | 75 мг/мл | 75 мг/мл | 75 мг/мл
Сахарози| 175 мг/мл | Трегалози, |Сахарози,| Сахарози ІСахарози, Сахарози,| Сахарози ІСахарози,|Сахарози,
Трегалози 2,5 мг/мл. /|175 мг/мл 75 мг/мл | 75 мг/мл 175 мг/мл 75 мг/мл
ЛСА Трегало- Трегалози!| Трегало- Трегало- | Трегало- зи, 25 зи, 40 зи, 25 зи, 40 мг/мл мг/мл мг/мл мг/мл
Желатин Аргінін Желатину)| Аргінін таязк| 55 вв | те ме | в | 89 ва | 25 | вв св
Вихід ее »|нівіні»||н|ні о
Ср. лог.
Вихід після заморожування/розморожування (З/Р), вихід після сушіння і логістичної функції втрати при 25"С протягом 1 тижня визначають для всіх складів. Вихід після заморожування/розморожування (З3/Р) розраховують діленням заявленої відносної активності на очікувану відносну активність для заморожених контролів при -70"С. Вихід після сушіння розраховують діленням відносної активності висушеного продукту на відносну активність замороженого контролю. Логістичну функцію втрати розраховують перетворенням відносної активності в момент часу ТО висушеного продукту і продукту після тестування стабільності протягом 1 тижня при 25"С в логарифми розрахунком 0910. Після перетворення цифр у логарифм, момент часу стабільності віднімають від моменту часу ТО для визначення логістичної функції втрати при 25 "С протягом 1 тижня.
Склади 2, 4, 5 і 12 показали найкраще поєднання виходу З/Р, виходу після сушіння і логістичної функції втрати при 25 "С протягом одного тижня. Всі чотири склади містять 225 95 дисахариду (сахарози і/або трегалози).
Таблиця 9
Перелік інтервалів ексципієнтів складів із таблиці 7
Кількість (на дозу 0,5 мл) 37,5 мг - 75 мг
Фосфат калію (одноосновний, безводний)
Фосфат калію (двоосновний, безводний)
І -глутамінова кислота (мононатрієва сіль, моногідрат) 37,5 мг - 87,5 мг
Людський сироватковий альбумін (ЛСА)
Приклад 8
СФГ (сахароза, фосфат калію, глутамінова кислота) отримують за прикладом 7.
Також отримують наступні інші розчини: 650 мг/мл сахарози, 650 мг/мл трегалози, 5М хлориду натрію (Масі) і 10 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію (КМЦ натрію).
Всі розчини фільтрують через ПЕС 0,22 мкм фільтри 5їепсир. Розчини і вірус денге ОЕМ!1 або ОЕМА об'єднують з отриманням кінцевих складів, показаних в таблиці з результатами.
Склади заповнюють в 2К скляні флакони у кількості 0,5 мл і заморожують при -1157С протягом 15 хвилин. Після заморожування флакони сушать у мікрохвильовій вакуумній сушарці (МХС). Після сушіння деякі флакони вміщують для тестування стабільності при 25 "С на 1 тиждень. Потім флакони піддають тестуванню активності із застосуванням аналізу відносної інфекційності денге (АВІД).
Таблиця 10
ОЕМ! Ср. лог ОЕМА Ср. лог. Запишкова
Склади втрати 25 70 | втрати 2570 о волога (95) 1 тиждень 1 тиждень 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 0,55 0,55 5,6520,75 75 мг/мл Сахарози, 175 мг/мл Трегалози 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 75 мг/мл Сахарози, 175 мг/мл Трегалози, 30 мМ 0,46 0,54 5,6150,40
Масі 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 75 мг/мл Сахарози, 175 мг/мл Трегалози, 30 мМ 0,59 4,5850,33 масі, 5 мг/мл КМЦІЦ натрію 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 112 0,95 3,7120,22 75 мг/мл Сахарози, 75 мг/мл Трегалози 11 мМ Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 75 мг/мл Сахарози, 75 мг/мл Трегалози, 30 мМ масі 0,51 4,т550,54 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 75 мг/мл Сахарози, 75 мг/мл Трегалози, 30 мМ 1,07 0,65 3,98:0,01 масі, 5 мг/мл КМЦІЦ натрію 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 0,83 1,82 2.205012 75 мг/мл Трегалози 11 мм Фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 75 мг/мл Трегалози, 30 мМ Масі 118 1,33 3,4350,19
Логістичну функцію втрати розраховують перетворенням відносної активності у момент часу
ТО висушеного продукту і продукту після тестування стабільності протягом 1 тижня при 25 "С в логарифми розрахунком І 04910. Після перетворення цифр в логарифм момент часу стабільності віднімають від моменту часу ТО для визначення логістичної функції втрати при 25 "С протягом 1 тижня.
Результати показали, що для складів ОЕМ, що містять 2 25 95 дисахаридів, спостерігається найменша логістична функція втрати при 25 "С протягом одного тижня. Склади ОЕМА з » 15 95 дисахаридів і ЗО мМ солі мали найменшу логістичну функцію втрати при 25 "С протягом одного тижня. Для складів, що містять 2 15 95 дисахаридів і сіль, додавання КМЦ натрію допомогло знизити залишкову вологу.
Таблиця 11
Перелік інтервалів ексципієнтів складів із таблиці 10
ПРИКЛАД 9
Склади їх СФГ (11 мМ фосфату калію, 6 мМ І -глутамінової кислоти, 0,22 М сахарози) з кількостями, що змінюються, 1-15 (90 95, 45 У і 25 95) і ОЕМ1, ОЕМ2, ОЕМЗ або СОЕМ4. Основним компонентом в 1-15 Лейбовіца є Масі (137,39 мМ). Тому 90 95 1-15 дорівнює 123,65 мМ Масі, 45 95 1-15 дорівнює 61,83 мМ Масі їі 25 95 І -15 дорівнює 34,35 мМ Масі.
Склади заповнюють у 2К скляні флакони у кількості 0,5 мл і заморожують при -1157С протягом 15 хвилин. Після заморожування флакони сушать у мікрохвильовій вакуумній сушарці (МХС). Потім флакони піддають тестуванню активності із застосуванням аналізу відносної інфекційності денге (АВІД).
Склади, швидко висушені у МХС, були більш стабільними, ніж склади, висушені ліофілізацією (див. фігури 13-16). У вказаному вище складі виявилося, що концентрація солі 261,83 мМ Масі поліпшує стабільність ОЕМА під час сушіння, що не спостерігається для інших трьох типів (ОЕМ1, ОЕМ2 і ОЕМ).
Приклад 10
Також роблять наступні розчини: 500 мг/мл сахарози, 250 мг/мл трегалози, ТМ хлориду натрію (МасСі) і 10 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію (КМЦ натрію), 100 мг/мл полівінілпіролідону (ПВП), 100 мМ фосфату калію, 500 мг/мл пропіленгліколю і стерильна вода.
Всі розчини фільтрують через ПЕС 0,22 мкм фільтри 5іегісир. Розчини і вірус денге (ОЕМІ1) об'єднують з отриманням наступних складів: 11 мМ фосфату калію, 90 мг/мл сахарози, 5 мг/мл
КМЦ натрію, 5 мг/мл ПГ; 11 мМ фосфату калію, 200 мг/мл сахарози, 50 мг/мл ПВП К12; 11 мм фосфату калію, 75 мг/мл сахарози, 175 мг/мл трегалози, 30 мМ Масі, 5 мг/мл КМЦ.
Склади заповнюють у 2К скляні флакони у кількості 0,5 мл і заморожують при -1157С протягом 15 хвилин. Після заморожування флакони сушать у мікрохвильовій вакуумній сушарці (МХС). Потім флакони піддають тестуванню активності із застосуванням аналізу відносної інфекційності денге (АВІД).
Фігура 17 показує, що відносна активність флаконів для складів, висушених в мікрохвильовій вакуумній сушарці, більше або дорівнює тим, які висушені в ліофілізаторі.
Таблиця 12
Перелік інтервалів ексципієнтів складів із фігури 17
Приклад 11
Чотиривалентні склади (склад 20) ОЕММ1, СЕММ2, ОЕММЗ ії ОЕММА ліофілізують і зберігають при 37 "С протягом одного тижня (фігура 18А), 25 "С протягом одного місяця (фігура 188) і 2- 8 "С протягом 18 місяців (фігури 19А-О). Активність аналізують аналізом бляшкоутворення (як описано раніше в тексті) в кожний момент часу. Контрольний зразок, що зберігається при -70 "С, тестують в аналізі бляшкоутворення в тому ж прогоні аналізу, як і кожний момент часу перевірки стабільності. Логістичну функцію втрати для кожного моменту часу розраховують відніманням логарифмічного результату стабільності зразка від -70 "С контрольного зразка. Фігури 18А-В і 19А-О показують логістичну функцію втрати протягом часу для кожного із серотипів у чотиривалентному складі 20. Стовпчики помилки означають дві стандартні помилки середньої логістичної функції втрати, розрахованої в кожний момент часу. Склад 20 забезпечує термічну стабільність для всіх чотирьох серотипів денге у чотиривалентній вакцині при 37 "С, 25 70 і 2- 8 "С, що підтверджується мінімальною втратою активності, що спостерігається через 1 тиждень, 1 місяць і 18 місяців, відповідно.
Приклад 12
Аналіз бляшкоутворення з високою пропускною спроможністю
Аналіз бляшкоутворення з високою пропускною спроможністю, аналіз "мікробляшки (мкБ)" є автоматизованим, мініатюризованим аналізом бляшкоутворення денге, що проводиться в 96- ямковому мікропланшеті. Коротко, клітини Мего висівають у планшети для культивування тканин з чорними стінками і прозорим дном в БСС ОріїРго з 2 95 І -глутаміном у кількості 40000 клітин на ямку. Клітини залишають з'єднуватися протягом ночі при 37 "С, 5 95 рбО», »90 95 ВВ. Вірус попередньо розбавляють у відновленому сироватковому середовищі ОріїМЕМ і потім серійно розбавляють 1:2 у середовищі в ультранизьких планшетах для сполуки. Рослинне середовище видаляють із клітинних планшетів, застосовуючи обережне відсмоктування, і 25 мкл/ямку інокуляту переносять з планшета для серійного розбавлення в клітинний планшет. Адсорбція вірусу проходить протягом 4 годин при 37 "С, 5 95 рбО», »90 95 ВВ. Після інкубування адсорбції 175 мкл/ямку двофазного поживного середовища додають у кожну ямку для інгібування вірусної секреції і поширення. Залежно від серотипу, зараження проходить протягом 2 або З днів у вказаних вище умовах інкубації.
Підраховані бляшки
БУО
Після інкубації зараження двофазне поживне середовище забирають, і клітини фіксують 3,7 У5 формальдегідом у ФСБ. Планшети пермеабілізують 0,595 Тийоп Х-100 в ФСБ, потім блокують 1 95 АБС у ФСБ. Типоспецифічні кролячі моноклональні антитіла, потім антикролячі
АІехаРіІног488 використовують для флуоресцентного забарвлення вірусних бляшок. Планшети візуалізують із застосуванням Регкіп ЕІтег Епбідні і флуоресцентні бляшки рахують із застосуванням алгоритму автоматизованого підрахунку. Титр визначають із застосуванням рівняння нижче з ямок, які містять імпульси дійсного об'єкта, які потрапляють у критерії під РВіракуй читв р втежно г ррактван вн ин. Х загальне розбавлення мл Об'ємінокуляту (мл)
Проводять два дослідження, в яких чотиривалентні склади ОЕЄММ1, ОЕММ2, ОЕММЗ ії ОЕММ4 ліофілізують у складах, описаних в таблиці 13, і зберігають при 25 "С протягом одного тижня.
Кожний склад містить 9 95 сахарози, 11 мМ фосфату калію, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи при рН 7,51 різні кількості КМЦ або ПГ. Активність аналізують аналізом бляшкоутворення з високою пропускною спроможністю, описаним вище, в кожний момент часу. Контрольний зразок, що зберігається при -70 "С, також тестують в аналізі. Логістичну функцію втрати для кожного моменту часу розраховують відніманням логарифмічного результату стабільності зразка з - 707С контрольного зразка. У таблицях 14а і 14р6 показані логістичні функції втрати протягом часу для кожного із серотипів у різних чотиривалентних складах. Концентрації 0,2 У5-1 96 КМЦ або ПГ у різних поєднаннях показують однакову стабільність один для одного і підвищену стабільність для складів без поєднання.
Таблиця 13.
Чотиривалентні склади еи, рН 7,5 9 у5 сахарози, 11 мМ фосфату калію, 0,5 У КМЦ, 50 мМ . пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,2 95 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,3 95 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Гени, рН 7,5 0,595 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,895 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,995 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,595 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,895 ПГ пропіленгліколю, 50 мМ Масі, 25 мМ Геи, рН 7,5 0,595 ПГ
Таблиця 14а
Дія концентрації КМЦ і ПГ на стабільності при 25 70
Н ОЕММІ лог. ЕММА лог. ОСЕМУЗ лог. ЕММА лог. омер тиждень, 25 "С)| тиждень, 25 "Сі| тиждень, 25 "Сі тиждень, 2576 ов КкмМу, опо 7145 | бе2г | 017 | 009 | 022
Таблиця 14р
Дія концентрації КМЦ і ПГ на стабільність при 25 70
ОСЕММІ лог. ЕММА лог. ОСЕММЗ лог. ОЕММА лог.
Номер
Склад скла втрати, 1 втрати, 1 втрати, 1 втрати, 1 ду тиждень, 25 "С| тиждень, 25 "С| тиждень, 25 "С| тиждень, 2570 0,5 КкМЦ.0,59пПго, 2го | 09 | 030 | 015 | 006 0,2 95 КМЦ, 0,5 95 ПГ 0,3 95 КМЦ, 0,5 95 ПГ 0,4 95 КМЦ, 0,5 95 ПГ 0,1 96 КМЦ, 0,5 95 ПГ 0,5 95 КМЦ, 0,2 95 ПГ 0,5 95 КМЦ, 0,3 95 ПГ 0,5 95 КМЦ, 0,7 95 ПГ 0,5 95 КМЦ, 0,1 95 ПГ
Всі публікації, згадані в даному документі, включені як посилання з метою опису і розкриття методологій і матеріалів, які можуть бути використані в зв'язку з даним винаходом.
Описавши тут різні варіанти винаходу з посиланням на прикладені креслення, потрібно розуміти, що винахід не обмежений цими точними варіантами, і що в нього можуть бути внесені різні зміни і модифікації фахівцем в даній галузі техніки без відступу від обсягу або суті винаходу, визначеного в прикладеній формулі винаходу.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 Мекск 5Ппакр « РоПпше Согр.
Вуап, МісПпаєеї 5.
Маквіп, 5Пегсгіе-Апп Р.
Чопев, Моггіва С.
ЗБапрго, бивтіп
Впапріпапі, АКП11е5П
Віце, сдеттїгеу Тпотшав
Ріхіеу, Неї1ді соаппе сгееп-Тгехіек, Егіп, 7.
Іворі, Ппуппе Аппе «1205 СКЛАДИ ВАКЦИННИХ КОМПОЗИЦІЙ ВІД ВІРУСУ ДЕНГЕ «1305 24547У-ЩО-РСТ «1605 19 «1705 РавепсІпПп уегквзіоп 3.5 «2105 1 «2115 395 «212» білок «213» денге 1 «4005 Ж 1
Меє Агуд Сув Ма1ї с1у І1е сіу Бек Агд АБр Рпе Уаі сі с1у Гей бБег 1 З 10 15 с1у А1ї1а ТПг Тер Уаї Авр Уа1 Уа1! гец сіц Нів сі1іу Бек Сув Уаї тТПпг
20 25 30
ТПпгЕ Меє Аїа пубв Авр пуб Рго ТПг Гей АБр т1е бій Іїейп Те Гув ТПг 35 40 45 сій Уаі1 ТПпг АвБп о Рго Аїа Уаї Ггец Агуд пув Гец Сув І1їе біц Атїа Гув 50 55 бо
І1е Бек АвБп ТПг ТПг Тпг Авр о бБег Агуд Сув Рго ТПг біп сС1у бій Аїта 65 70 75 80
ТПгЕ гец Уаі сій сій сіп Авр Аза Авп Рпе Уаї Суб Агуд Агд ТПг РіПе 85 90 935 ма1 Авр Агуд с1у Тер б1у АвБп б1у Сув с1у Гей Рпе с1у Ппув с1у бБег 100 105 110
Теч Іїе ТПпПг Сув Аїа Ппув Рпе Ппув Сув Уаї ТПг пув Ге біц 01у Гув 115 120 125
І1е Уаї сбіп Ту б1цп АвБп Гей пув Туг Бек Уа1 І1їе Уаї ТіПг Уаї Нів 130 135 140
Зо
ТП б1у Авр сіп Нів біп Уаї б1у АвБп сі Бек ТПг сіц Нів с1у Тс 145 150 155 160
ТПг Аїа ТПг І1е ТПг Рго біп Аза Рго ТПг 5Бег бій чІ1е сіп Гец ТЕГ 165 170 175
Авр Тук с1у Аїа їецш ТПг Гей Авр Сув бБег Рго Агуд ТПг с1у Тец Авр 180 185 190
Рпе АБп бій Меє Уаї тей Гей ТпПг Меє Ггув бій Гув Бек Тер Іец Уаї1ї 195 200 205
Нів пув біп Тер Рбе гец АвБр Іецй Рго тей Рго Тгр ТПг Бек с1у А1а 210 215 220 век ТПпПг Бек біп сбіц ТПг Тер АБп о Агуд біп Авр Гец Гец Уаї ТПг РіПе 225 230 235 240 пув ТПпг Азїа Нів АтТа пув пув сбіп сіц Уаї Уаї Уаї Іец сб1у Бек сіп 245 250 255 бо сі б1у Аї1а Меє Нів ТПг Атїа теп ТПг с1у Аїа ТПг сб1ц І11е с1іп Ттбг 260 265 270
Зо зек біу ТПг ТПг ТПпг чІ1е Рпе Аїа сіу Нів Іец Гуз Сув Агд Гецй Гув 275 280 285
Мес Ар Ппув Гецш ТПг Ггецп Ппув с1і1у Мес бек Тук Уаі Меє Сув ТПгЕ с1У 290 295 300 зек Рпе пув Гей бі пув біц Ма1ї Аїа сіц ТП о біп Нів с1у ТПг Уаї 305 310 315 320 пе Маї бі1п чІ1е Ппув Тук бій с1у ТПг Авр Аїа Рго Сув пув І1е Рго 325 330 335
Рпе Бек ТПг біп Авр бій Агуд б1у Уа1і ТПпг біп АБп б1у Агуд Тей Ше 340 345 350
ТПгЕ АТа Авп оРго чІ1е Уаії ТПг Авр пув бій губ Рго Уаі АБп І1е б1ц 355 360 365
Аза бій Рго Рго Рпе с1у бій Бек Туг І1е Уаі І1е С1у Аї1а щу б1ци 370 375 380
Зо пув Аїа Гей Ппув Гей Бек Тер Рпе Ппув пув Щ1У 385 390 395 «2105 2 «2115» 395 «212» білок «2135» денге 2 «4005 2
Мес Агуд Сув ч1І1е б1у І1їе Бек Абвп Агуд Авр Рпе Уаі сій сіу Уаї 5ег 1 5 10 15 сі1у б1у Бек Тер Уаї Авр ІчІ1е Уа1! гец сіц Нів сіу Бек Сув Уаї тТПпг 20 25 30
ТПпгЕ Меє АтТа пув Авп опув Рго ТПг тей Авр Рпе сій Гей І1ї1е Ггув ТПг 35 40 45 сій Аїа Ппув біп Рго Аїа ТПг Гец Агуд пув Туг Сув І1е біц Атїа Гув зо зо бо
Те ТпПг АБп оТПг Тс Тпг Авр о Бег Агуд Сув Рго ТПг біп с1у біц Рго 65 70 75 80 60
ТП гец Ап сій сбіц біп Авр о Тув Агуд Рпе Уаї Сув пув Нів Бек Меє 85 90 935
Ууаї Авр Агуд б1у Тер с01у Авп біу Сув б1у Гей Рпе с1у Ппув б1у Щ1У 100 105 110
І1е Маї ТПпг Сув А1їа Меє Рпе ТПпг Сув Гув ув АБп Меє сій с1Уу Гув 115 120 125
І1е Уаї біп Рго б1ц АБп Гей сі Тугє ТПг Уа1! Уаї І1е ТПг Рго Нів 130 135 140 зек б1у бі1іш сі Нів Атїа Уаі1 сіу АвБп Авр ТПг б1у Кпув Нів с1УуУу Гув 145 150 155 160 сій Уа1ї Ппув Іїе ТПг Рго Ссіп Бек Бек Іїе ТПг сбіц Аза сбіц Гец ТПг 165 170 175 сіу Тук б1у ТпПг Маї ТПг Меє сі Сув Бек Рго Агуд ТПг с1у Геч Авр 180 185 190
Рпе АвБп бій Меє Уаї Іїей гей біп Меє Гув АвБр ув АТїа Тер Іец Уаї1ї
Зо 195 200 205
Нів Агуд б1іп Тер Рбе гец АвБр Іецй Рго ІТей Рго Тгр Гей Рго сС1у А1а 210 215 220
Авр ТтТПг обіп б1у Бек АвБп Тгр ТІ1е біп ув бій ТПпг Гей Уа1 ТПпг РПе 225 230 235 240
Тпув АБп оРго Нів АТа пув пув сбіп Авр Уаї Уаї Уаї Іец с1у Бек сіп 245 250 255 сіш б1у А1їа Меє Нів ТПг Атїа геш ТПг с1у Аїа ТПг сб1іш ч11е с1іп Меє 260 265 270 зек Бек б1у АвБп Гей гейш Рпе ТПг сіу Нів Іїец туз Сув Агд ІТецй Агд 275 280 285
Мес Ар пув Ггец біп Гецш Ппув сіу Мес бек Тук бек Меє Сув ТПг с01У 290 295 300 їпув Рпе пув уаї уаї пув бій І1е Аїа сіц ТП о біп Нів с1у ТПпгс шт1е 305 310 315 320 60 уаї ІчІ1ї1е Агуд Уаї сбіп Ту біц с1у Авр сіу Бек Рго Сув пув І1е Рго
325 330 335
Рпе сіц І1ї1е Месє АБр тей бій пув Агуд Нів Уа1! Гей сСіу Агд Іецй І1е 340 345 350
ТПгЕ Маї Авп о Рго чІ1е Уаії ТПг бій пув Авр Бек Рго Уаі АБп І1е б1ц 355 360 365
Аза бій Рго Рго Рпе б1у Авр Бек Туг І1е І1е І1е с1у Уа1 бій РгО 370 375 380 сіу біп Гецшп Ппув Гец Авр Тер Рпе Ппув пув Щ1У 385 390 395 «2105 З «2115 393 «212» білок «213» денге З «4005 з
Мес Агуд Сув уаї с1у Маії с1у Авп Агуд Ар Рпе Уаі сій сіу Гей 5ег 1 5 10 15
Зо с1у А1ї1а ТПг Тер Уаї Авр Уа1 Уаі1! гец сіц Нів сі1у б1у Сув Уаї тТПпс 20 25 30
ТПпгЕ Меє АтТа пув Авп опув Рго ТПг тей АвБр чІ1е сій Гей біп Ггув ТПг 35 40 45 сій Аза ТПпПг сіп Гец Аїа ТПг о Гец Агуд пув Гец Сув І1е біц 01Уу Гув зо 55 бо
І1е ТПг АБп о чІ1е ТПг ТПг Авр о бБег Агуд Сув Рго ТПг біп сС1у бій Аїта 65 70 75 80
І1е гец Рго біц б1іц бі1іп Авр сбіп Авп Ту Уа1 Сув пув Нів ТПг тус 85 90 935
Ууаї Авр Агуд б1у Тер б1у Авп сб1і1у Сув біу гей Рпе сіу Ппув сіу б5ег 100 105 110 пе Маї тПпг Сув Атїа пув Рпе сі1іп Сув Гей сі Бек чІ1е бій с01У Гуз 115 120 125 уаї уаї сбіп Нів сій Авп о Гец пув Туг ТПпг Уаї ч11е ч1І1е ТПг Уа1ї Нів бо 130 135 140
ТП б1у Авр сіп Нів біп Уаї б1у АБп бій ТпПгс сбіп б1у Уа1 ТПбг А1а 145 150 155 160 сій І1їе ТПг Рго сіп Аїа Бек ТПг Уаї сбіц Аза ІчІ1їе Гец Рго біц Туг 165 170 175 сіу Тйг Ггец б1у Гей сі Сув Бек Рго Акуд ТПг сіу Ггец Авр Рпе АвпП 180 185 190 сі Меє чІ1е Гей гейш ТП Меє пув Авп о пув Аїа Тер Меє Уаї Нів Аг4д 195 200 205 сіп Тер Рпе Рпе Авр Гей Рго Гец Рго Тер ТПг Бек б1у Аза ТПг ТП 210 215 220 сій ТП Рго ТПг Тер Ап о Агуд пув біц Гец Гец Уаї ТПг Рпе Гув Авп 225 230 235 240
Аза нів Аїа пув ув біп бій Уаї Ууаї Ууаї геш с1у Бек сб1іп біц 0Щ1У 245 250 255
А1ї1а Меє Нів ТПг Аза геп ТП с1у Аїа ТПг біц ч1І1е сб1п АвБп б5ек Щ1У 260 265 270 сі1у ТпПг Бек І1їе Рпе Аїа сіу Нів Гец пув Сув Агд тей Гув Ме Авр 275 280 285 пув Ге біц Гецшп Ппув сіу Мес Бек Туг Аїа Мес Сув Гец Ап о ТПгЕ РПе 290 295 300 уаї гей пув пув біц Уа1! Бек біц ТПг біп Нів сі1іу ТПг ІчІ1е тей І1е 305 310 315 320 пув Уа1 біц Тук Ппув сіу біц Авр Аїа Рго Сув Пув І1е Рго РПе 5ег 325 330 335
ТПпгЕ бі Авр с1у біп б1у пув Аїа Нів АБп с1у Агд Гей І1е ТПг А1а 340 345 350
АвпоРго Маї Маї ТПг пув пув бій бій Рго Уаі АБп І1е бій Аза б1ц 355 360 365
Рго Рго Рпе с1у бій Бек АБп І1е Уаі І1е с1у І1їе сС1у АБр Гув Аїа 370 375 380 60 тен пув Іїе АБп Тер Тук Ппув пув Щ1У 385 390 «2105 4 «2115» 395 «212» білок «213» денге 4 «4005 4
Мес Агуд Сув уаї с1у Маії с1у Авп Агуд Азвр Рпе Уаі сій сіу Уаї 5ег 1 5 10 15 сі1у б1у А1ї1а Тер Уаї Авр гей Уаі1! гец сіц Нів сі1у б1у Сув Уаї тТПпс 20 ТПпгЕ Меє Ата сіп с1у Ппув Рго ТПг Тей Авр Рпе сій Гей І1ї1е Ггув ТПг
ТПгЕ Аїа пув сій Маії Аїа Гей гей Агуд Тпг Туг Сув І1е бій Аза б5ег 25 зо 55 бо
І1е Бек АБп І1е ТПг ТПг Аза ТПпг Агуд Сув Рго ТПг біп с1у бій РгОо 65 70 75 80
Зо
Тук гец пув бій сій сбіп Авр сбіп сіп Туг ч11е Сув Агуд Агуд Авр Уаї 85 90 935 35
Ууаї Авр Агуд б1у Тер б1у АвБп сб1у Сув б1і1у Гей Рпе сіу пув с1у с01У 100 105 110 40 ма1т1 уаї трпг Сув Аїа пув Рпе Бек Сув Бек б1у Ппув чІ1е ТПг С1у Авп 115 120 125
Тїец уаї бі1іп ч1І1е бій Авп Гей сіц Тук ТПг Уаї Уаї Уаї ТПпг Уаї Нів 45 130 135 140
Авпос1у Авр ТПг Нів Аза Уаї с1у Авп Авр ТПг Бек АвБп Нів біу Уаї 145 150 155 160
ТПгЕ Атїа ТПг І1е ТПг Рго Агуд Бек Рго Бек Уаії сій Уаї пув Гей Рго 165 170 175
Авр Ту б1у бій Гей ТПг тей Авр Сув бій Рго Агуд Бек б1у І1е Авр 180 185 190 бо Рпе Авп сій Меєс І1е Ггецшп Меє пув Месє пув Ппув Ппув ТПг Тер Гей Уаї 195 200 205
Нів пув біп Тер Рбе гец АвБр Іецй Рго Іїей Рго Тгр Аїа Аза сС1у А1а 210 215 220
Авр ТП Бек біц Уаї Нів Тер АвБп Тугє пув біц Агуд Меє Уаї Тс РіПе 225 230 235 240 пув Ммаї Рго Нів Аїа пув Агуд біп Авр Уаї ТіПг Уаї Іец сб1у Бек сіп 245 250 255 сі б1у А1їа Меє Нів Бек Аїа еп ТПг с1у Аїа ТПг сі Уаї Авр 5ег 260 265 270 с1у Авр б1у АБп Нів Меє Туг Аїа сіу Нів Іїец туз Сув Кув Ууаї Агд 275 280 285
Мес біц пув Гец Агуд ч11е пув сіу Месє бек Тук ТПг Меє Сув Бек с01У 290 295 300 пув Рпе Бек І1їе Авр пув біш Меє Аїа сіц ТПг о біп Нів б1у ТПпгс тТпс 305 310 315 320
Зо уаї уаї пув Маї Ппув Тук бі с1у Аїа сіу Аїа Рго Сув Ппув Уаї Рго 325 330 335
І1е сій І1е Агуд АБвр Уаї Авп пув б1іш пув Маї Уа1ї С1у Агуд І1е Пе 340 345 350 зек Бек ТПг Рго Рпе Аїа сіц Тук ТПг Ап Бек Уаї ТПг АБп І1е с1ц 355 360 365 теп бій Рго Рго Рпе сіу Авр Бек Туг Іїе Уаії І1ї1е с1у Уаїії 01У Авр 370 375 380 зек А1їа тей ТПпг гейш Нів Тер Рбе Агд пув 01У 385 390 395 «2105 15 «2115» 451 «212» білок «213» штучна послідовність «2205 «223» РЕМА-ВОБлір «4005 5 60
Мес Агуд Сув уаї с1у Маії с1у Авп Агуд Азвр Рпе Уаі сій сіу Уаї 5ег
Зб
1 5 10 15 сі1у б1у А1ї1а Тер Уаї Авр гей Уаі1! гец сіц Нів сі1у б1у Сув Уаї тТПпс 20 25 30
ТПпгЕ Меє Аа сіп сіу пуб Рго ТПг Гей Авр Рпе бій Іїей І1е Ггув ТПг 35 40 45
ТПгЕ Аїа пув сій Маії Аїа Гей гей Агуд Тпг Туг Сув І1е бій Аза б5ег 50 55 бо
І1е Бек АБп І1е ТПг ТПг Аза ТПпг Агуд Сув Рго ТПг біп с1у бій РгОо 65 70 75 80 тук пеш пув бі бій б1п Авр сбіп с1іп Туг ч11е Сув Агуд Агуд Авр Уаї1ї 85 90 935
Ууаї Авр Агуд б1у Тер б1у АвБп сб1у Сув б1і1у Гей Рпе сіу пув с1у с01У 100 105 110 уаї уаї тПпг Сув Аїа Гпув Рпе Бек Сув Бек сі1у пуб І1е ТПг с1у Авп 115 120 125
Зо
Тїец уаї бі1іп ч1І1е бій Авп Гей сіц Тук ТПг Уаї Уаї Уаї ТПпг Уаї Нів 130 135 140
Авпос1у Авр ТПг Нів Аза Уаї с1у Авп Авр ТПг Бек АвБп Нів біу Уаї 145 150 155 160
ТПг АТа ТПг о І1е ТПг Рго Агуд Бек Рго Бек Уаї сбіцш Уаї Пув тей Рго 165 170 175
Авр Ту б1у бій Гей ТПг тей Авр Сув бій Рго Агуд Бек б1у І1е Авр 180 185 190
Рпе АБп бій Меє І1е тей Меє пув Меє Гпув Гпув Гув ТПг Тер Іец Уаї 195 200 205
Нів пув біп Тер Рбе гец АвБр Іецй Рго Іїей Рго Тгр Аїа Аза сС1у А1а 210 215 220
Авр ТП Бек біц Уаї Нів Тер АвБп Тугє пув біц Агуд Меє Уаї Тс РіПе 225 230 235 240 бо пув Ма1! Рго Нів Аїа пув Агуд бі1п Авр Уа1ї ТПг Уаї Ігец с1у Бек с1іп 245 250 255 сі б1у А1ї1а Меє Нів Бек Аїа Гей ТПг сіу Аїа Тс біц Уаї Авр 5ег 260 265 270 с1у Авр б1у АБп Нів Меє Туг Аїа сіу Нів Іїец туз Сув Кув Ууаї Агд 275 280 285
Мес біц пув Гец Агуд ч11е пув сіу Месє бек Тук ТПг Меє Сув Бек с01У 290 295 300 ув Рпе Бек І1е Авр пув бій Мес АТа сій ТПг біп Нів с1у ТП Ттбг 305 310 315 320 уаї уаї пув Маї Ппув Тук бі с1у Аїа сіу Аїа Рго Сув Ппув Уаї Рго 325 330 335
І1е бій І1е Агуд АвБр Маї АБп пув бій пуб Уаі1і Уа1і сС1у Агу ІШе Ше 340 345 350 зек Бек ТПг Рго Рпе Аїа сіц Тук ТПг Ап Бек Уаї ТПг АБп І1е с1ц 355 360 365
Зо теп бій Рго Рго Рпе сіу Авр Бек Туг Іїе Уаії І1ї1е с1у Уаїії 01У Авр 370 375 380 зек Аїа Ггеш ТПг Гей Нів Тер Рпе Агуд пув сбі1у сб1у с1у с1у Бек 01У 385 390 395 400 сіу сб1у сі1у ТПпгЕ сіу сіу сіу Бек біу біу бі1у Бек Рго Агуд Меє Гувг 405 410 415 сбіп тец бій Авр пув Ма1ї бій сій Гец Гец Бек Тув АвБп Туг Нів Іецй 420 425 430 сій АвБп біц Уаї Аїа Агд Гецш Ппув Ппув Ггец Уаі с1у бій Агд сі1у с1У 435 440 445
Сув С1у Щ1У 450 «2105 6 «2115» 10705 «2125 РНК «213» штучна послідовність бо «2205 «223» рпЕМУ1
Зв
«4005 б адиидичади сцасудиддас сдасаадаас адицисдаац сддаадсиицд сицаасоачад бо
Чписчаасади ипицицаццад ададсадацс исидацдаас аассаасуда аааадчасд9ду 120 чсдассдиси цисаацацудс идааасудсудс дадааассудс дидисаасид ииисасадаи 180 ддсдаачдада писисаааад дацйидсицис аддссаадда сссацдааац пддидачоддс 240 7 пиичачцадса писсцаадац пцисцчадссац ассиссааса дсаддааши пдоасчадацд 300 дддсисацис аадаадаацу дадсдацсаа адидичасудд ддицисаада аадааацйсис З6о ааасацудицуд аасацаацуда асаддаддаа аадайсидид ассацдсисс цсайдсидси 420 дсссасадсс спддсдицсс ацсидассас ссдаддддада дадссдсаса пдачадичад 480 саадсаддаа ададдаааац сасицицдии цаадассиси дсаддидиса асацдидсас 540 7 ссичацидса апддацицдуд дададичацу пдаддасаса айдассцаса аайдсссссд 6оо дацсасидад асддаассад апдасдицда сидицддидс аацдссасудд адасачдоади бо чдассчацудда асацдиицсис ааасиддида асассдасда дасааасудци ссдисдсаси 720 ддсассасас диадддсицд дисчадааас аадаассддаа асдиддацди ссисидаачдЧ 780 сдсицддааа сааацасааа аадиддадас спдддсисид адасасссад дацисасодди 840 7 чдачадсссии пишсцадсас ацдссачадд аасацссацс асссадааад ддайсайици 900 чацицидсид ацдсидудцаа сиссацссац ддссацдсуда пдсодпдуддаа чаддадсаасад 960 адасиисдцд дааддасиди саддадсчас дидддиддач диддчасиду адсачцддаад 1020 чпидсдисаси ассацуддсаа аадасааасс аасасиддас ацидаасиси идаадасдда 1080 ддисасааас ссидссдисс пдсдсаааси дидсацидаа дсчаавацац сааасассас 1140 7 сассдацисуд адацдиссаа сасааддада адссасдсид диддаадаас аддасасддаа 1200 сипидидиди сдасдаасуди псдиддасад аддсиддддс аапддичдцд ддсчацисдд 1260 ааааддчадс пшіаацаасди дидсчаадици цаадидидид асаааасидуд ааддааадач 1320 адиссаацац даааасицаа аацацисади дачадисасс дцасасасид дадассадса 1380 ссаадицуда аацдадасса садаасацууд аасаасидса ассацаасас сисаадсисс 1440 7 сасдисудаа ацасадсида садасчасуд адсисцааса пиддацидии сассцадаас 1500 адддсчадас шишаацдада пддидипдии дасаацуддаа ааасдацсди ддсисдисса 1560 сааасаацуд писцадаси цассасидсс пиддассисуд ддддсписаа сацсссаада 1620 чдасицддаац адасаадаси пдсиддисас ацичаадаса дсисацдсаа аааадсадда 1680 адчадисучца сцаддацйсас аадааддадс аацдсасаси дсдиицдасид дадсдасада 1740 7 аацссааасуд псиддаасда саасаацици цдсаддасас сидааацудса дасчааааац 1800 ддачааасид асицицаааад ддайдисача цпдиаацдидс асадддисац цсаадичада 1860 чааддаадид дсидадассс адсацддаас пдиисцадид саддичааац асдааддаас 1920 і адацдсасса пдсаадацсс ссцисисуис ссаадацдад аадддадиаа сссадаачод 1980 чадацидача асадссаасс ссацадисас пдасааадаа ааассадиса асацидаадс 2040 ддадссасси пшишдддидада дсчасациди ддчаддадса ддидааааад сицидаааси 2100 аадсиддиис аадаадддаа дсадцачадуд даааацдици даадсаасид сссддцддадс 2160 асдааддацуд дссацссиду дадасасидс апдддасцис ддиисцачад даддддидии 2220 7 сасдисидид ддаааасида цасассадац пшишидддаси дсдчацддад шишидицисад 2280 сддидициси цддассацда адачаддаац адддацисид сидасацуддс цаддацчааа 2340 сисааддадс асдисссици саацдасуцуд цайсдсадици ддсацддиса сасидцасси 2400 аддадисацуд диисаддсдуд асисдддацуд пдиааацйсаас пддаааддса дадаасисаа 2460 апдиддаадс ддсациицид цсассаацда адиссасасс пддасададс аачачаааци 2520 7 ссаддссдас пссссцаада дасчацсадс ддссациддд ааддсачоддда аддадддиди 2580 чдидиддааци сдацсадсса сисдисисда даасацсацуд пддаадсааа цайсааацода 2640 апшааассас ацсицасицуд аааацдасац дааацичаса диддисдчад дадасдичад 2700 чддааисиид дсссааддаа адаааацдац чаддссасаа сссацуддаас асааачасис 2760 чдиддаааадс пддддаааад ссааависац аддадсадац дцасадааца ссассцисац 2820 7 сацсдасудс ссааасассс садаацдссс пдацчаассаа ададсацуда асацичоддда 2880 адиидаадас цацддацицд даацицисас дасааасача пддипдааац пдсдидасис 2940 сцасасисаа дидидидасс ассддсчаац дисадсидсс ацсааддача дсааадсади 3000 ссацдсидас апддддчиаси ддачадааад пдаааадаас дадасичоода адииддсаад Зо6о адссиссцис ацадаадича адасацдсац сипддссаааа псссасасис цацпддадсаа 3120 о чддадиссид дааадидада пдацаацсесс ааадачацац ддаддассаа чацйсисадса 3180 саасцасада ссаддачаци цсасасааас адсадддсесд пддсасицдуд дсаадичада 3240 асчадацици дацичацудцд ааддцассас пдипдицдид дацдаасаци диддааачсд 3300 аддассацси сицадаасса саасадисас аддааадаса айссацдаац ддидсидчад 3360 ацйсицдсасуд ппасссссосс цасдицисаа аддадаадас дддидспдди асддсачода 3420 7 аацсадасса дисааддада аддаададаа ссчадичаад цсаацддиси сидсадддис 3480 аддадаачдид дасадицици сасчаддаси дсчацдсачца цсаацаацда псдаададди 3540 бо аачдадацсс адацддадса даааавцдси дацдасидда асациддсид пдицйссисси 3600 цсисасаацуд ддасаашіида сацддаацда исидацсадд счацдцацса пддицпддадс З66о саасдсциса дасаадацуд ддацдддаас аасудцассцча дсичцидацдд ссасицисад 3720 аачдадасса айдиисдсад псдддсчаси диписдсада пшіаасацсцча дадаадииси 3780
Чпсицсицаса дичддашида дисиддиддс айсидцадаа счассаааци ссичададда 3840 дсчаддддач ддасицдсаа пдддсайсац дацдицдааа пшасидасид ацицисадис 3900 7 асацсадсча пдддсчасси пдсидисици аасациидис аааасаасци пшсацидса 3960 сцацдсацудд аадасаацуд сцацдачаси дисаацидчца цпсисисиицсс спичацдсси 4020 диссасдаси цсисаааааа саасацддси пссддидицд спдддацйсис пиддацодсаа 4080 ассасцаасс апдицисица цаасадаааа саааацсиду ддааддаааа дсиддссиси 4140 саацдаадда ашшацддсид пиддаачади цадсацисци сцаадицисас цисисаадаа 4200 7 чдачцдидсса счадсиддсес сасчаацадс чоддаддсацуд сиаацадсац дичацдисац 4260 апйсиддаадс псддсесдаци цацсасидда дааадсддси даддисисси дддаадаада 4320 адсадаасас псиддидсси сасасаасац асчадиддад диссаадацуд апддаассац 4380 даааачааад дацдаадада дадацдасас асисассаци сиссисааад саасисидси 4440 адсаацсиса ддддчиачасс саацдисаац ассддсдасс сисицидиди ддиайиииид 4500 7 дсадааааад ааасададац саддадидси ацпдддасаса сссадсссис садаадидда 4560 аададсадис спидацдацуд дсацичачад аацисиссаа ададдациди пдддсаддис 4620 исаадчцадда диаддадици цисаадаадд сдидииссас асаацдиддс асдисассад 4680 чдддадсидис сисацудцасс аадддаадад асиддаасса адиидддсса дидисааааа 4740 адасиидацс цсачацоддад даддичддад диписаадда пссиддаасу сдддадаада 4800 7 адидсаддид апйидсидицуд аассуддддаа даассссааа аацдцасада садсдсс9д49д 4860 чассцисаад ассссидаад дсдаадшидуч адссачадси счадасшша аасссддсас 4920 апйсиддацси ссцацсдида асададачдудд ааааачадца ддисиичацуд дааачцддади 4980 ддидасааса адиддцасси асдисадидс сацадсисаа дсчааадсац сасаадаачдЧ 5040 дссисцасса дадацидадуд асчдаддидци цаддаааада аасицаасаа цпаацддасси 5100 7 асацссадда псдуддааааа саадаадача ссциссадсс ацадиссуцд аддссачааа 5160 аадааадсид сдсасдсчад цсичадсисс сасаададци дисдсцисид ааацддсада 5220 ддсдсисаад ддаацдссаа цааддцацса дасаасадса дидаададид аасасас9д9д 5280 аааддадача диидассичца пдидисасудс сасицисаси апдсдисисс пдисиссиди 5340 чададииссс ааццчацааца пдаццацйсац ддацдаадса сациисассуд ацйссадссад 5400 7 сачадсадсс ададддчцача цсисаасссуд адидддчацд ддидаадсад сидсдайици 5460
А сацдасадсс асисссссосуд дайсуддидда ддссицисса сададсаацуд садицацесса 5520 адачдаддаа ададасацис сидааадацс ацпддаасиса ддсчацдаси ддацсасида 5580 і чпицсссадди аавасадиси ддипидиисс аадсацсааа исаддааацуд асацидссаа 5640 сидиицаада аадаацдудда аасдддидди ссаацидадс адааавасци пидасасида 5700 дчассадааа асаааавачца асдасидудда счацдицдис асаасадаса цайссдааац 5760 дддадсааас писсдадссуд асадддциаац адасссдадд сддидссида аассдудчаац 5820 асчаавадац ддсссададс дидисациси адссуддассуд ацдссадида сидиддсчад 5880 7 сдссдсссад аддададдаа даациддаад даассаааац ааддааддсд айсадцачац 5940 ичасацдудда садссисцаа аааадацда ддассасдсес сациддасад аадсааааац бо дсиссцидас аасацаааса сассадаадд дациацссса дсссисицид адссддадад 6бово адаааадчади дсадсаачад асддддааца садасцчасудд ддидаадсда ддаааасдци 6120 сдиддадсис ацпдадаадад дадайсчасс пдисидодсча цссцасааад пидссисада 6180 7 аддсицссад цасиссдаса дааддиддид сицидацодду даааддааса ассаддидии 6240 чддаддадаас ацддасдидуд адайсиддас аааадаадда дааадааада аасчасдасс 6300 ссдсиддсид дацдссадаа сацасисида сссасиддси спдсдсдаац цсааададии 636о сдсадсадда адаадаадсуд цсисаддида ссцаацацца дааачадудда аасицссаса 6420 асацичаасу сааадддсесс адаасдссци ддасааисид дичацдицдс асаасисида 6480 7 асааддадда ааадссцаца дасасдссац ддаадаасца ссадасасса цадааасдци 6540 аацдсиссцча дсичцидачад сидидсидас пддиддадид асдиидиицси цссцацсаду бо ааддддисча ддааавасац ссациддсси асисидсдуцд апйидссисаа дидсасидии бево апддацддсс адидиддаас сссациддац адсддсесиси ацсацчцасидд адиисициси 6720 чацддидицд сичациссад адссудасад асадсдсаси ссасаадаса ассадсчадс 6780 о ачасдиддцд ацаддисиди цацисацдац ацидасадид дсадссаацуд адачддадаци 6840 асиддааасс асааадаадуд ассиддддац пддисацдса дсидсидааа ассассацса 6900 чдсидсаацуд сиддасуцад ассцасацес адсицисадсс пддасисиси айдсадиддас 69во сасаасааци ацсасиссса пдацдадаса сасаацидаа аасасаасуд сааацайцис 7020 ссидасадси ацидсааасс аддсадсчац апидацддда спидасаадд дайддссаац 7080 7 ацсааадацуд дасачаддад циссасициси сдссицдуддда пдсчацисис аддидаассс 7140 дсидасдсид асадсддсдда цпацичацдси адиддсисац цацдссачаа пиддассс9д 7200 бо асидсаадса ааадсцасца дадаадсиса аааааддаса дсадссдудаа цаацдааааа 7260 сссаасидис дасдддацсд пидсаачада пшишддассси диддиичасуд ацдсааааци 7320 чдааааасад счаддссааа чаацдицдци дачасишидс асацсасада иссиссидац 7380 дсддассаса пдддссицди дидаацссац сасасцадсс асиддассис пдассасдси 7440 чидоададдда исиссаддаа аацйисиддаа сассасдаца дсддидисса пдодасааасац 7500 пииичадддда адичайцсцад саддадсадд исиддссици исациаацда аайсисцпаду 7560 7 аддаддчадуд ададдсасудуд дадсссаадуд ддааасасид ддадааааац ддаааадаса 7620 дсчааассаа пидадсаади садаацисаа сасицасааа аддадиддода шацададаи 7680 ддачадацси даадссааад аддддичааа аададдадаа асдасцааас асдсадидис 7740 чададдаасуд дссааасида ддиддипиди ддададдаас спидидааас садаадоддаа 7800 адисачадас сисддицдид даададдидд сиддисацац цацидсодсид ддсидаадаа 7860 7 адисасадаа дидаааддац асасдаааду аддассидда сацдаддаас саацсссаац 7920 ддсаассчац ддацддаасс цадцааадси ацасиссуудд ааадацдцац цсиицасасс 7980 ассидадааа пдидасассс псипидидида цпациддидад пссисиссда асссаасчац 8040 адаадаадда адаасдичас дидиисцааа дацддиддаа ссацддсиса даддааасса 8100 апицидсаца аааацисцаа айсссцацац дссдадидид дпадааасци пддадсааац 8160 7 дсааадаааа сацддаддаа цпдсчадидсуд ааацссасис цсаадаааси ссасисацода 8220 аачцдчасидуд диписацудцуд даасаддааа сацидидиса дсадцаааса пдасайсчад 8280 аацдсидсча аацсдациса саацддсиса саддаадсса асачацдааа дадасдчцидда 8340 сичаддсдси ддаасаадас апдиддсади адаассадад диддссаасс цадачацсац 8400 чдадссададуд ацададааца чаааааацуда асасааацса асацддсаци айдацдадда 8460 7 саацссацас аааасацудда ссцацсацдуд айсацацдад дисаадссац саддацсадс 8520 сисацссацуд дисаацддид пддидадаси дсчаассааа ссацдддацд цсацисссац 8580 ддисасасаа ацадссацда сидасассас асссицидда саасададдд пдиццааада 8640 чааадиидас асдсудцасас саааадсудаа асдаддсаса дсасааацца пддаддидас 8700 адссаддидд пацддддци писисисцад ааасаааааа сссадаацси дсасаадада 8760 7 ддадиисаса адаааадиса ддисааасудс адсчацидда дсадидиисуд пидацдаааа 8820 исаацддаас исадсаааад аддсадидда адацдаасудд писидуддасс пидидсасад 8880 адададддад списацааас ааддаааацу цпдссасдиди дисцчасааса пдачдддааа 8940 чадададааа аааичаддад адициисуддааа ддсаааадда адисдсдсаа цпапддцпасац 9000 чдиддичдодда дсдсдсиции цададицида адсссицдди писацдаацу аадацсасид 9060 7 диисадсада дадаацисас цсадиддади ддааддадаа ддасиссаса аасицддача 9120 сачасисада дасацацсаа адациссадуд дддааачацуд цацдсадацуд асасадсс9д 9180 апдддасаса адаацаасад аддайцдацси цсадаацдад дссааависа сидасацсац 9240 і ддаассидаа сайдсссцчац пддсесасдис аацсцицчаад сцаассцасс аааасаадачи 9300 адчааддудицд сададассад сдааавгацуд аассдидацуд дайдисацац ссадасдида 9360 ссадачадда адиддасадд пиддаассца пддсичааас ассцисасса асачддаддс 9420 ссаасцааца адасааацуд адисидаддд ааисицициса сссадсдаац пддааасссс 9480 ааацсцадсс дааададисс цсдасиддци даааавгвасац ддсассдада ддсидаааад 9540 7 аацддсаацс адиддадацуд асидидидди дааассааци дацдасадац пидсаасадс 9600 сичаасадси пидаацдаса пдддааадди аадаавадас ацассдсаац дддаассицс 9660 аааадчдацодд аайдайиддс аасаадидсс пиисидциса сассациисс ассадсидац 9720 чачдааддац дододадддада чадиддидсс ацдссдсаас саадацдаас пидиаддацад 9780 ддссададца цсасаадудсуд ссуддацддад спидададаа асидсацудсс цаддсаадис 9840 7 ачацдсасаа апдиддсадс пдацдцасци ссасаддада даспидадац цпадсддсчаа 9900 чпдсчацсиди исадссуцис садиидацид ддисссаасс адссуцасса ссиддисдац 9960 ссацдсссас сацсаацудда чпдасаасада адасацдицд исадидидчда ачаддайцид 10020 чачададдаа аасссацудда чддаддасаа дасисацдид иссадицдудад аадасдицесс 10080 ачассцадда аааадддаад айсаацддид пддайсссца ацаддсицчаа садсасдадс 10140 7 сассидддсес ассаасачцас аадиддссац ааассаадид адааддсиса пидддаацда 10200 чаашциацсца дасцисацуда сайсаацдаа дадацисааа аасдададид ацйсссдаадд 10260 ддсасисидуд чаадссааси сацисасааа ачаааддааа ацаааааацс ааасааддса 10320 адаадисадд ссддаццаад ссацадсасуд дпаададсца пдсидссиди дадссссдаце 10380 сааддасуца ааачудаадис аддссдааад ссасддцисуд адсаадссди дсидссидца 10440 о дсиссацсди доаддацйдцаа ааасссуддда ддсидсааас сацддаадси диасдсац9дд 10500 чддачадсадас чадиддичад аддадасссс йсссаадаса саасдсадса дсддддессса 105560 адасчададд ичададдада ссссссусас аасаасааас адсачацида содсидоадада 10620 чассададац ссидсидиси сцасадсацсе ациссаддса садайсуддаа даааацддаа 10680 чпадидсидци даацсаасад дицси 10705
«2105 7 «211» 10618 «212» РНК 60 «213» штучна послідовність
«223» рРЕМУ2 «4005 17 адиидичади сидидиддас сдасааддас адциссааац сддаадсиицд сицаасасад бо
Чписчаасади пидицидаац адададсада исисиддааа аацдаассаа сдааааааду 120 чддичадасс ассицисаац ацдсидааас дсдададааа ссдсуцацса ассссисаад 180 7 ддсиддидаа дадацисиса ассддасици пшсидоддаа аддасссича сддацдацдс 240 чадсацисац сасдишшид сдадиссици ссацсссасс аасадсаддд ацисидаада 300 чачддддаса дипдаадааа аацааддсса цсаадачаси дацйиддацис аддааддчада З6о чаддссдсац дсидаасацс пидаасудда даааааддис пдсаддсацуд айсашцацдс 420 чдациссаас адидацддсд писсацицаа ссасасуцаа суддадаасса сасацдацсд 480 7 исадцадаса ададаааддд аааадисцис пидиццаааас ададдацдди дидаасацди 540 дчасссисац ддссацддас спипддидаац пдидидаада цасаацсасуд цасаадидис 6оо сисцисисад дсадааицдаа ссадаадаса падацидицд дидсаасиси асдиссасац бо дддчаасича цпдддасдиди ассассасад дадаасасад аададааааа адацсадид 720 сасисдицсс асацдидудда апдддасиду адасасдаас пдааасацдд айдисацсад 780 7 ааддддсесид дааасацудсс сададаацид ааасицддац спидадасац ссаддсиицча 840 ссачаацуддс адсаацссид дсацасасса цаддаасдас асацииссаа ададсссида 900 чпицисацсци асидасадси дисдсиссци сааицдасаац дсдицдсаца ддаачцацсаа 960 ачададасции цпдиадаачддд диписаддад даадсиддди пдасачадис пшадаасачд 1020 чдаадсидиди дасдасдацу дсааааваса аассаасаци ддацицидаа сидацааааа 1080 7 садаадссаа асаассидсс асисцаадда адчасидцац ададдсааад сидассааса 1140 саасаасада айсисдсидс ссаасасаауд дадаассцчад ссцааацдаа дадсаддаса 1200 аааддицсди сидсааасас цссацддцду асададдацу дддааачодада пдиддайчац 1260 чпиддаааадд аддсашидицд ассидидсца пдицсасацуд сааааадаас ацйддааддаа 1320 аадисдидса ассадаааас пиддаачаса ссацидидац аасассисас псаддддаад 1380 7 адсацдсади суддааацудас асаддаааас апддсаадда аацсааааца асассасада 1440 дипссацсас адаадсадад пидасаддси апддсасиди сасдацддаа пдсициссда 1500 даасдддсеси сдасцисаац дадацддиди пдсидсааац ддааааагинчааа дсипддасидд 1560 чдсасаддса ацддииссца дассидссди пдссацддси дсссоудадсуд дасасасаад 1620 дацсааацид дацасадааа дадасацидуд цсасицисаа ааацссссац дсдаадааас 1680 7 аддацдицди пдичицдуда цпсссаадаад дддссацдса сасадсасис асаддддсса 1740 садаааисса дайдисацса ддааасичас пдицсасадд асацсисаад пдсаддсида 1800 ддачддасаа асцасадсис аааддаацди сацасисчац дидсасадда аадиичааад 1860 і чпидидаадда аачадсадаа асасаасацу даасаацади чайсададца саачцацдаад 1920 дддасддиис цссацдцаад ацйсссицицд адачаацуда пшишддааааа адасайдици 1980 чаддисдсси дайцасадис аасссаацсуд цаасадаааа адачадссса дисаасацад 2040 аадсадаасс цссацисуда дасадсчаса цсацсачадуд адчцададссуд ддасаацида 2100 адсисаасид диичаадааа ддаадицисца псддсесааац дипидадаса асаацдачдЧад 2160 7 чадсдаачад аапддссаци пшаддидаса садсицддда шишиддацсс спдддадаад 2220 чпдицчцасацс чацаддааад дсисиссасс аадииицисудуч адсааисцац дддасидсси 2280 чсадидддди сисацддаси айдаааацсес исачаддади саццацсаса пддачаддаа 2340 чдаасисдад даасасциса ацддсчацда сдидсацадс чдичоддадда айсасисипди 2400
Чписидддсци сасадцисаа дсадасацудд дипдидиддс дисацддади дододааадаац 2460 7 чдаачдидидуда аадсддааци пипдиддиид асаасуцдса сасицуддаса даасадцаса 2520 аациисаасс ададисссса дсдадасчад сдисидсаац апшааацудсс сасааадачд 2580 дддисидидуд ааичадацса ассасдаддс пддаааацди сацдиддаад сааацаасса 2640 асдадсчааа спацдиисис пдудудаадчдад дасацдасси сасидцадид дсиддддачд 2700 чдаачдддади дипдассааа ддсаададад сасисасасс сссадидади дайсидааац 2760 7 ацписацуддаа дасацуддудда ааадсааааа псцисасссс адаадсаада аацадсасац 2820 чпиичаацада суддассадас ассисидаац дссссаацда асдаададса чддаасисис 2880 чидаддидда адасчацудда чпипддсацди исасдассаа сачацддацуд ааациссдад 2940 ааддаадиис адаадидиди дассасадди цаацдисадс пдсааццааа дайсадааад 3000 сидидсацдс пдасацддди цациддачад ададсисааа ааассадасс пддсадачад Зо6о о адааадсацс цсичацидаа дидааавасац дисидидудсс саадасссас асасидидда 3120 дсаацддади дсиддааадс садацдсиса циссааааицс ацайдсдддс ссицицисас 3180 адсасаацца ссдссадддс цайдссасудс ааассуидудд сссацддсас пшіададсааац 3240 чададачцада сициддадаа пдссссуддаа саасадисас аацисаддад дацидидасс 3300 ачададдсесс айсицидадуд ассассасид сацсиддааа асчадисасуд саацддидси 3360 7 дссдсиссид сасдацдсси сссицаадди псичдуддада адачцдддидс пддчачоддда 3420 чдададашіад дсссицдади дааааадаауд адаасацудди саааисасад дидасддссд 3480 бо чдасадддсас айсадаааси шишисцацдд дисидицдид ссидассицд пшидиддваад 3540 аацдсицдад дадаададис асчаддааас асацдачаци адиидиддицд айсасисици 3600 дидсчацсац ссидуддаддс сисасацуда цпддасичаси асдадсссис айсацдичад З66о дддасасчац дисидудчада ацаддаддас адацссасси адссацсацуд дсадидииса 3720 адацдисасс аддачасдцд спдддидиди пшцчааддаа асисасциса адададасад 3780 сасчаацудди аацаддаацу дссацдасаа сддидсицис аациссасац дассичачод 3840 7 аасисацида пддаацацса сипдддасчаа пишидсцааа аацадиааса садицидаса 3900 асасссаади дддаассица дсисицисси пдасицисац аадацсааса айдссацидд 3960 чисацддсиид даддассаци ацддсидиди пдипидидди сасасисаци ссицидидса 4020 ддасаадсид цпсцисааааа садисисаци дддчадааац аасадсасис айссцчаддад 4080 сссаадсиси дссадидцас сцаацдасис пшіацдааадд адссисаада адайсицЧддс 4140 7 сисичаасда дддсачаацуд дсидидддии пддичадиси сичаддаадс дсисицичаа 4200 адааидацди сссцицадси ддсссаацдд пддсаддадд сичасцисид дсддсичасд 4260 чдачдадидд чадсисадса дайсидисас чададааддс сдссаасуцуд садидододацд 4320 ааацддсада сацаасаддс цсаадсссаа цсацадаади даадсаддачц даадачдадси 4380 сицисиссац асдддасудис даддааасса ацацдацаас ссицицдудцд ааасиддсас 4440 7 чдачаасади дисаддисис цасссспду саациссади сасаацдасс ичацдддацаса 4500 чдиддсаади даааасасаа адацсаддад сссидидудда сдиссссиса сссодсидсса 4560 сцаааавадс сдсасидиси дааддадиди асаддайсац дсааададдд пацисоддда 4620 ааасисадди пцддадчаддад ацасасацудд ааддидцаци цсасасаацу пддсацодчаа 4680 саададдацс адидайсидс сасдадасид ддадацидда дссацйсицдуд дсидасдиса 4740 7 ддаацдасац дацацсачас ддидддаддач ддаддсицду адасааачцуд дасааадаад 4800 аадасдииса ддиссисудсс ацадаассад даааавацсс цааасацудис сааасддааас 4860 спддссиции саадасссца асиддадааа пиддадсади аасаццадац цисааасссд 4920 даасдисидд писисссацс ацсаасадда ааддаааади сайсддасис цпцапддааачд 4980 чадчадичас сааацсадди дацчасдиса дидссацаас дсаадссддаа адаациддад 5040 7 адссадацца пдаадиддац даддасацици писдааадаа аадациааси ацаацддаси 5100 часассссдуа адсиддааад асааааадаа писициссацс аачадидада даадсстиаа 5160 аааддаддси асдаасицид апишицадсис ссасдадади ддиддсддсс дадачоддаад 5220 аддсссчасуд цддасидсса айссдичацс адассссадс пдидааацса даасасасад 5280 чаадададачц пдиадассис апдидисацу саассцисас аасаадасци пидисацсаа 5340 7 ссадддицсс аааццасаас сичацачдида цпддайдаадс асациисасс дацйссцписча 5400 дидисдсддс цададдачас айсисдасса дддиддааац дддададдса дсадссацси 5460 исацдассдс аассссиссс ддадсдасад айсссицисс ссададсаас адсссаацад 5520 і аадасацсда дадддаааци ссуддааадди сацддаасас адддиицсдас пддачаасад 5580 асчассаадуд даааасидид пддицидиис ссадсацааа адсиддааац дасацидсаа 5640 апидицидад ааадисддда аадааадица цссадиидад цаддаааасс пшидацасад 5700 адчацссааа аасдааасис асуддасцчддд асицидидди сасчасадас ацацсидааа 5760 чдддддссаа пиичададсс додадададида чадасссцад аадацдссис аадссаулша 5820 7 чпссцчассада чдддссадад ададисацшии чадсаддисс цациссадид асиссадсаа 5880 дсдсидсиса дадаададудд сдаачаддаа ддаасссадс асаадаадас дассаачасд 5940 чпицисиссудуа адасссасца ааавгацдацуд аадацсацудс ссасиддаса даадсааада бо чдсидспида саацацсцас ассссадаад ддайсацисс аасацидици ддиссддааа 6бово дддаааавас ссаадссаци дацддадади писдссисад аддддаасаа аддаадасии 6120 7 чпидиддааци аацдаддада ддадассцис сддидиддси дадсчацчцаад диадсписцид 6180 спиддсациис піасааадац сдддаацдди дсцисасадуд ддааадааац аассааацци 6240 чадаадаааа сачцддаддии дааашшиуда счадададудд адаааадааа аадсиааддс 6300 саадацддии адацдсасди дцпачасдсид ассссацддс пшидааддачц писааддади 636о чпидссадидуд ааддаадади ацаасисисуд асацссцаас ададацидсс адицидссаа 6420 7 сичассицис сисцчадддсес аадсисдссс пидацчаасац адисацдсис сасасаасад 6480 ааададчадуд дадддсесчац саасасдссс пдаасудааси пссуддадиса сиддааасас 6540 чисацдсиди адсиицасца ддидсчацда садсаддсац сийссидици писацдсаад бо ддаааддаац адддааацид цсаацдддии пдачаассац пдсддиддси адиддсицдс бево чсидддцадс адааацисаа ссссадидда чадсддссис ааисачасца дадиишиис 6720 о чисацддцаси дипдачассуд даассадааа аасаааддас сссасаадас ааисаашида 6780 чсчасдисац ацидассаци сисассацса пиддисцаац адсадссаас дадацдддадас 6840 чдацидаааа аасааааасуд дайиицддди пичассадди ааавасадаа ассассацес 6900 чсдацдидда сиидадасса дсиисадсац ддасдсисца пдсадцадсс ассасаацис 69во чдасисссац дсидадасас ассацадааа асасдисуддс саассцацси сцадсадсса 7020 7 Чпидссаасса ддсадссдис счаацддддсе пиддаааадд айддссдсис сасадаац9уд 7080 ассисддиди дссдсидича дсаацдддац дсчацисиса адидаассса ацаассцпида 7140 бо садсацссци адисацдсци писдидсаси ацдсаацаац аддсссадда пидсаддсаа 7200 аадссасаад ададдсссад ааааддасад сидсидддац сацдааааац сссасадидд 7260 асдддачаас адцаацадац сцадаассаа цайссцацда сссаавацци даааадсаацй 7320 чадддсадди сацдсчасца дисицдидид сиддасааси асисцидацуд адаасаасац 7380 дддсицисид пдаадисицд асициддсса саддассаац спидассицд пдддадоадса 7440 асссдддаад дипицддаас асдассацад ссудцацссас сдссаасаци писаддддаа 7500 7 чдичасицддс дддадспдда спиддсицици сасисацааа даацдсасаа ассссцадда 7560 чддддаасиду дассасадда дадасасиду дададаачдид даададасад сцааасисац 7620 чадасадааа ададицшидаа дадцачцаааа даадиддаац асчадаадцуд дасаддасид 7680 аадссаадис пдсссидааа дайдддисца ааацсаадса цдсадиацса ададддисса 7740 дчаадацсад апддацидии дадачачуода пддиааадсс аааадддааа дипдиадацйс 7800 7 чпидасидиду дачаддадда чддисицаци асацуддсдас асисаадаас дидасидаад 7860 чдааадддца часаааадда ддиссаддас айдаадаасс дацисссацуд дсчасишацд 7920 чдичпддаации ддисааасис сацисадддд пидасдидици сцасааассс асададсаад 7980 чддасассси дсисидидац ациддддади сайсцисцаа пссаасааца даддааддаа 8040 даасациаад адиииидаад апддиддадс сапддсисис цисаааасси даацисидса 8100 7 чсааадисси чаассссцас ацдссаасад исацадаада дсиддадааа сидсададаа 8160 аасацддидуд даассиидис адайдсссудс пдиссаддаа сиссасссац дадацдчаци 8220 чдддидисадуд адсдисдудда аасацидида дсисидидаа сасаасацса аадайдичди 8280 чдаасаддци сасаасаадд сачаддааас ссасичцацда дааддасуца дайсицоддад 8340 саддаасчдад аадидисисс асидааасад ааааассада сацдасаацс апидоддадаа 8400 7 ддсиисадсуд айидсаадаа дадсасааад ааассиддса пшацдацсад даааасссац 8460 асадаассид ддсдиайсац ддаадсчацуд аадсиссцис дасаддсиси дсацессисса 8520 чддидаасудд ддидудчаааа сидсцаасаа аасссидудда чдидацисса ацддидасис 8580 адичадссац дасадачаса ассссицицуд ддсаасааад адидицисааа дадааддчдд 8640 ацассадаас ассасаасса ааасссудудца сасдаацудди цацдассасуд асадссааци 8700 7 ддсидидддс ссиссицудда аадаадаааа айсссадаси дидсасаадд даададииса 8760 цсисаааади чадацсааас дсадссацад дсдсадисци исаддаадаа садодацодда 8820 сацсадссад пдаадсидид аацдасадсс ддипицдодда асиддицдас ааадааачодд 8880 сссцасасса ддаадддааа пдидаайсди дидисцацаа сацдацддда ааасдидада 8940 аааадичадд ададицидудс ададссаадуд даадссдадс аацйсиддчас апдиддсчидд 9000 7 чадсдсддии псиддаации даадсссидд диииицидаа пдаадацсас пддициддса 9060 чадаааацис ацддадидда диддаачодду ааддисидса садацидодода цацацйссид 9120 аддадачада саадааддац ддадассцаа цпдиацдсида цпдасасадса ддсидддаса 9180 і саадааисас пдаддацдас сцписаааацу аддаасидац сасуддаасад апддсисссс 9240 ассасаадац ссцадссааа дссацициса аасцаассца цсаааасааа диддидааад 9300 иссисадасс сасассодсдуд ддадсоддида чододачацсац айссаддааа дассааадад 9360 дчадиддаса адицддааса цпацддицида асасацисас саасацуддаа диисаасиса 9420
Чпссудссааац ддаадсидаа ддадисацса сасаадацуда сацдсадаас ссаааадддчи 9480 7 чдааадааад адицдадааа чддсидааад адидиддиди сдасаддиаца аададдацод 9540 саацсадиду адасдацидс диддидаадс сссцчадацда даддициддс асицсссисс 9600 исписцидаа сдасацоддда ааддидадда аадасацисс дсадидддаа ссайсчаадд 9660 чачцддааааа сиддсаадад дийссицици дсисссасса сицисасаад айсиичацда 9720 аддацддссд сисасчадци дииссацучца дааассадда пдаасидача дддададсса 9780 7 даацсисуса дддадсчпдда пддадсичаа дадааасадс сидссидддс ааадсичасд 9840 сссадацудцд дисдсичацуд цасциссаса даадддацси дсдиццадсс цссацддесса 9900 чапдсисадс адицииссаасу даайддаццис саасаадсад аасаасацддда цсаацессасд 9960 сисацсасса диддайдасс асидаадача пдсисааади диддаасада дидиддачад 10020 аадасаассс цаацацдаси дасаадасис садиссацис дидддаадац ацассицасс 10080 7 чадддаааад ададдашицд пддидиддац сссидацицдд асицисицсс ададссасси 10140 чдаддсдаадаа сацисасасуд дссацаассс аддисаддаа ссидацсдда ааададдаац 10200 асдиддацца сацдссадца ацдаааадац асадидсисс цписадчадачи дааддадиис 10260 цдапааццасс аасаасааас ассаааддси ацйидаадиса ддссаспиди дссасддици 10320 чадсааассд пдсидссиди адсиссдсса ацаацддчад дсдцаацаай ссссаддаддад 10380 о дссацдсдсс асддаадсид чцасдсдиддс ацациддаси адсуддичада ддадасссси 10440 сссацсасид асаааасдса дсаааадддд дсссаадаси ададдичада ддадассссс 10500 ссаасасааа аасадсачац пдасдсидду ааачассада дацйссидсид псисидсаас 105560 ацсаацссад дсасададсд ссдсаадачуд дайшддидии дипдайссаа саддаиси 10618 «2105 8 «211» 10645 «212» РНК «213» штучна послідовність бо «2205 «223» РЕМУЗ
«4005 8 адиидичади сцасудиддас сдасаадаас адицисдаси сддаадсицд сицаасоачад бо часидасади пицицаццад ададсадацйс исидацдаас аассаасуда аааадчасд9ду 120 ааавассдиси ацсаацацус пдааасодсди дадааассди дидисаасид дайсасадиаи 180 ддсдаачдада писисаадад дасидсидаа сддссаадда ссааидааац пддичацчддс 240 7 диисацадси циссисадац цисцчадссац цссассдаса дсаддадиси пддсчадачд 300 дддаассици аадаадисудд дддсцаццаа ддиссидада ддсиисаада аддадацйсис З6о ааасацдсид адсаццацса асадасудаа ааадасацсд сисидисиса пдапдачдии 420 ассадсааса спидсицисс асцидасцис асдадацуда дадссдсдса пдацидидад 480 чдаадаацудаа ададдаааац сссцчасицци цаадасадсс псиддаацса асацдидсас 540 7 асисацадсс апддацицдуд дададацдцд пдацдасасуд дисассцаса аайдссссси 6оо сацчасидаа диддадссид аадасацида сидсиддидс аассицасац сдасачдоади бо чдассчасуда асдидсаацс аадсиддада дсасадасус дасаавадач сддиддсдаци 720 адсиссссац дисддсацууд дасиддасас асдсасссаа ассиддацди сддсидаачЧ 780 адсичддада саддисдада аддчададас апдддсесици аддсасссад ддиисасаац 840 7 асчадсссцча пшисццидссс ашшасачадд сасициссицд асссадааад пддичайици 900 сачасцасца апдсиддиса ссссацссац дасаацдада пдсдидоддад паддааасад 960 адацицидид дааддссчац саддадсчас дидддицдас диддидсисуд адсасдадчдд 1020 чдидидидаси ассацуддсча адаасаадсс сасдсицддац ацададсисс адаадассда 1080 ддссасссаа спддсдассс цааддаааси ацдчцацидад ддаааавгацца ссаасудиаас 1140 7 аассдасиса аддидсссса сссааддудда адсдациица ссидаддадс аддассадаа 1200 ссасдидидс аадсасасац асудиддасад аддсидддда аасддичдцд дипидипидд 1260 саадддаадс спддиаасац дсдсдаааци цсааидицид даацсаачад адддаааади 1320 ддидсадсац дадаассиса аацасассди сацсацсаса дидсасасад дадацсааса 1380 ссаддидудда аацдааасус адддадисас ддсидадача асассссадд сацсаассди 1440 7 чдаадссацс ицчассидаац ацддаассси пдоддсчадаа пдсисассас ддасадуши 1500 адациисаац дааацдацици пдичдасаац даадаасада дсацддацдд цасацадаса 1560 апддициции дассцассци цассацуддас айсаддадси асаасадааа сассаассид 1620 даачаадааа дадсиисицуд цдасацисаа ааасдсасац дсаааваадс аадаадчади 1680 ддиссичцудда псдсаачадуд дадсаацудса сасадсасид асаддадсча сададацесса 1740 7 аассисадда ддсасаадча пшицдсуддуд дсасичаааа цдиадасиса адачддасаа 1800 апиддаасис ааддддацда дсчацдсаац дидсиидаац дссицидиди пдаадааада 1860 адисиссудаа асдсаасацу ддасаачцаси сацсааддци дадчцасааад дддаадачодс 1920 і ассиидсаад айиссициси ссасудадда пддасаадудд ааадсссаса апддсадаси 1980 дацсасадси аасссадидуд цдассаадаа ддаддадсси дисаацацид аддсадаасс 2040
Чпссицицдудд дааадсааца чадиаашідуд ааииддадас ааадсспіда ааашиаасид 2100 дчасаадчаад ддаадсисда пидддаадац диисдаддсес асидссадад дидсаадоасд 2160 сацддссацс пидуддадаса садссидудда сицпиддацса диаддиддцд пицааацис 2220 7 ашшаддаааа апддидсасс ааачацицудд аадидсичас асадсссчац пшадидвадви 2280 сиссиддача апдаавацид даачаддиди ссицицаасс пддачаддди пдаацисааа 2340 ааасасчади ацдадсиича дсидсациди дачаддаацс ашцасасиси айсидддадс 2400 сдиддидсаа дсидасацдд ддидидисац ааасиддааа ддсааадаас псааацдцдд 2460 аадиддааци писдисасца ацпдаддисса сассиддаса дадсаацаса аациисаадс 2520 7 адасиссссс аааадасиду сдасадссац пдсаддсдси пдддадаацд дадидидсд9д 2580 аацсаддисуд асаассадаа цпддадаасси спидиддаад сааацадсса апдаасидаа 2640 сцасацацца пдуддааааса асацсаааци аасддчадии дидддидача цпаацидаддаи 2700 сичададсаа дддаавгадаа сасцаасасс асаасссацуд даасцаааац ацисацоддаа 2760 аасацуддуда ааддсдаада цадидасадс пдааасасаа аациссисци цсацаачада 2820 7 чдаддссааас асассадади диссаадицдс сисаададса чддаацдиди додадоацодда 2880 адацчасудда писддадиси цсасаасцаа сацацддсид ааасиссудад адачцдцасас 2940 ссаасчацди дассасаддс цаацдисуддс адссдичаад дацдададдад ссдцасасдс 3000 сдасацдддс цациддачад ааадссаааа даацддаади цддаадсчад ааааддсацйс Зо6о ссисачадад дпаааавасси дсасацддсс ааааацсасас асисицидда дсаацддиди 3120 о дсчададади дасацдацса цпсссааадад псиддсидди сссациисудс аасасаасча 3180 саддсссуда цассасассс ааасуддсадд асссиддсас пшаддаааац пддадсчдда 3240 сцисаасчац пдидааддаа саасадииди сацсасадаа аапидидуда саададдесс 3300 ацсасидада асаасаасад пдисадддаа диидацасас даацддидии дссдсисдид 3360 часасцишсси ссссидсдац асацдуддада адасддсидс пдодчацддса чддааашад 3420 7 асссацциаац дадааадаад адаасацудди ааадисициичца дисисадсад ддадиддааа 3480 ддиддачаас цисасаацдд дидисиидид пшишддсаацс сипицидаад аддидачдад 3540 бо аддаааации дддаааавгадс асацдацидс аддддиисис цисасдицид цасиссицси 3600 сисадддсаа ацаасацуда дадасацуддс дсасасасис ацаацдацид ддиссаасдс З66о сисидасада апдддаацдд дсдисасица ссцадсацид апидсаасац піаааациса 3720 дссацииицд дсипиддадац псиписсидад дааасидаса псцададааа апичацидии 3780 чдддадичддд пиддссацудуд саасаасуци асаасидсса даддасацид аасааачоддс 3840 чдаачцддаача дсиичадддс цсацддсиси цаааццааца асасаацицуд ааасацасса 3900 7 асчацддасуд дсаццадиси сссцчаацуцуд цисааацаса ацицисасди пдасидицдс 3960 спддадааса дссасссида пшшиддссдуда аацйиисисци пидссадиди дссадисиис 4020 чадсацдадуд аааасадаци ддсисссаац ддсидидодса дсчацдддад пциссасссси 4080 ассасицици апицисадци пдааадачас дсисаааадуд адаадсиддс сасидаацода 4140 чдддддидацд дсидицддас пидидадчцац псцадсчади цпсисиссича ддаацдасди 4200 7 дсссацддси ддассаццад пддсидоддодд спидсидача дсдидсчасуд цсачаасидд 4260 сасдисадса дассисасид цадаааааадс адсадацудцд асачдоддадуд аададдсида 4320 дсааасадда дидисссаса ацичаацдац сасадиидац дасдацддаа саацдадаацй 4380 ааагадацдац дадасидада асацсичцаас адидсицицуд аааасадсац цасчаачади 4440 чдисаддсаци пишссацаси ссацасссудс аасасидицд дисиддсаса спиддсаааа 4500 7 дсааасссаа адайссдудид цссчацдудда сдиицсссадс сссссадада сасадааадс 4560 адаасиддаа дааддддици ацаддацсаа дсадсаадда айшицидуда ааасссаади 4620 чдддддичдда диасааааад ааддадиицци ссасассацуд цддсасдиса саададдадс 4680 адидиидаса сасаацуддда ааадасидда ассааасидуд дсчадсдида ааааадацси 4740 чдациисачас ддаддаддац ддааацидад цдсасаацуд саааааддад аддаддидса 4800 7 ддичацидсс дцпададссид ддаадаассс ааадаасици сааассацдс саддсайици 4860 ссадасааса асаддддада цпаддадсдац пдсасиддас цисаадссид даасиисаду 4920 айсисссацс ацааасадад адддааадди асидддацид цацддсаацуд дадиддисас 4980 ааадаацудди ддсчацдиса диддаачцадс асааасааац дсадаассад асддассдас 5040 ассадачдицуд даадаадада пдиисааааа дсдаааисца ассацаацудд айсиссацес 5100 7 сдддисадда аадасдсуда аацацйсиисс адсчацидии адададдсаа псаададасд 5160 сичааддаси сцаацииидуд сассаасаад ддладицдса дсидадачцдд аадаадсаци 5220 чааадддсис ссаацаадди ацсааасаас пдсаасаааа псидаасаса садддадада 5280 чацидицдац сцаацдидсс асдсаасуци сасааицдсди пидсидисас садисадоади 5340
Чпссааасцас аасиидацаа чаацддацда ддсисациис асадасссад ссадцацадс 5400 7 ддсчададудд цасацацсаа сисдидчцадуд аапдоддадад дсадссдсаа пишисацдас 5460 адссасассс ссипддаасад сидацдссци цссисададс аасдсиссаа пцисаадацода 5520 адааададас ацассадаас дсисацддаа писаддсаац даацддацца ссдасицидс 5580 і сдддаачасд дидиддицид псссцадсац сааадсидда аацдасачад сааасидсии 5640 дсддааавац ддаааавадд йсацисааси цадчцаддаад асиииидаса садаацацса 5700 ааадасчааа сцааацдаци дддасициди ддидасааса дасациисад ааачдддадс 5760 саавииисааа дсадасадад пдайсдассс аадаадацди сисаадссад пдацицидас 5820 адасудассс дадсдсдида пссиддсудуд ассаацдсса дисассуцад сдадсдсидс 5880 7 дсаааддадча дддададицуд дсаддаассс асааавадаа ааидассаац асачацисац 5940 дддссадссс сисаацаацу ацдаадасса пдсисасиду асадаадсаа ааайдсидси бо адасаасацс аасасассад аадддайсац ассадсисис пшидаассад ааадддадаа 6бово дисадссудсс ацадасддсуд аацассдсси даадддидад пссаддаада ссиисдцидда 6120 асисацдадуд аддддидасс цсссадицид дсчадсссац ааадцадсац садаадддацч 6180 7 сааачачаса дачадааади ддидициицда цпддадаасус аасаацсааа пшишцададва 6240 чдаачацддац диддааацси ддасааадда аддадаааад аааааацида дассчадоацд 6300 дсичдацдсс сдсасичаци садацсссци адсдсисаад даацисаадд асицидсддс 636о чддачадааад исаацидссс пидайсииди дасадаааца ддаададицдс сиисасаспи 6420 адсисасада асдадааасуд сссиддасаа псиддидацуд пидсасасди садаасачодд 6480 7 сдддадддсс цасаддсацу садиддадда асцассадаа асаацуддааа сасисичаси 6540 ссидддасис апдацйссиди цаасаддидуд адсаацдсии писцидачац саддиааачЧ бо чациддааад асцисаацад дасисацицд цпдиадсидси цссадсддча пдичацддац бево ддсидацдис ссасиссаац ддайсдсдис пдссацадис спиддадиции пшацдачодди 6720 чдичасичаца ссадаассад аааадсадад аасиссссаа дасаацсаас псдсачацди 6780 о сдидачаддс ацасисасас пддсидсаац адцадсадсс аацдааацдд дасидичода 6840 аассасааад ададацичад дааицдиссаа адаассадди диидицисис саассадсча 6900 чпичаддацдид дасицдсасс садсацсадс сиддасацид часдсидидуа ссасаасади 69во аачаасасса апдицдадас ацассачцада даациссаса дсаааицдиди сссиддсадс 7020 чачадссаас саддсадицдд иссидацудудда пичадасааа ддацддссда чайсдаааац 7080 7 ддасичаддс дидссасчац пддсасидудд пидичациса саадидаасс сасцаасиси 7140 сасадсддса диисиссидс цадссасуса пшацдсчаци ацаддиссад дацидсаддс 7200 бо аааадссаси сдидаадсис ааааааддас адсидсицдда ацаацдаада айссаасодди 7260 ддачдддача ацдасаачцад ассчадацсс пдиаацачас дайссаааац пидаааадса 7320 асчаддасад дичацдсисс пддиийсидид цдсадиисаа спишиидичцаа пдадаасацйес 7380 апдддсиции пдидаадсис цаасссцадс сасаддасса ацаасаасас псидддаач 7440 ацсассидудд аадцисидда асассасдац адсидицисс апддсдааса исипичадачдЧ 7500 чадсчацича дсаддадсид ддсиийдсици цисцацсацуд аааицсадицуд даасаддааа 7560 7 чададддаса дддисасадуд дидааассци дддадаааад пддааавада аацидааиса 7620 ашчассссуду ааададицид ассцицасаа дааацссуда ацсасидаад пддачадаас 7680 адаадссааа даадддицда ааададдада аацаасасас сайдссдиди ссададдсад 7740 сдсааваасци сааиддиицсуд пддададааа сапддисацс сссдааддаа дадисачада 7800 сичаддсиди ддаададдад дсиддисача пацидидса ддасидаааа аадицасада 7860 7 адидсдадда цасасаааад дсддсссадуд асацдаадаа ссадцассцча пдисцасача 7920 сддацддаас ацадисаади цаацдадидуд аааддацдцд пшцчацйсиис сассидаааа 7980 чдидидачаси сцацидидид асациддада айсцисасса адсссаасад пддаадааад 8040 садаассаца ададисиида адацддицда ассацддсча адааацаасс адииицдсац 8100 чааадчацид аасссицаса пдссаасиди дацидадсас счадааадас часаааддаа 8160 7 асачддадда апдсицдида дааацссаси сисасдааас цссасдсасуд ааацдцасид 8220 чдачацйсцаац ддсасаддса ацайсдицис цисадисаас апддиацсса дацидсчаси 8280 чаасадацис асаацдасас ацаддадасс сассацадад ааадацдидда айичаддадс 8340 ддддасссда сацдисаацу суддаассада аасасссаас апддацдиса пдддоадааад 8400 аачаадаадд айсааддадуд адсацадицис аасацддсас цацдацдацуд аааацссича 8460 7 чаааасдцдд дсичассацуд дайссцчацда адичааддсес асаддсисад ссиссиссац 8520 чачааачцуда дисдидааас цпссисасудаа ассацдддац диддидссса пддидасаса 8580 чацддсаацу асддачасаа ссссацисуду ссадсааадд диииицааад адааадцидда 8640 сассаддаса сссадассца пдссаддаас аадаааддии ацддадацса садсддаачд 8700 дсичиддада асссидуддаа ддаасаааад асссадацца цдиасдадад аддадиисас 8760 7 ааааааддис адаассаасуд садсчацудддд сдссдицици асададдада ассаачоддда 8820 садидсчада дсидсидицуд аддацдаада ацисиддааа сисдиддаса дадаасдида 8880 асиссасааа пидддсаади диддаадсид сдиицасаас апдацддудса ададададаа 8940 чдааасичуда дадицидоудса аадсаааадуд садчададсс ацацддчцаса пдиддичоадд 9000 адссадачас спидадиисуд аадсасисуд ацисицааац даадассаци ддиисисдсд 9060 7 чдаааасиси часадиддад чадааддада аддасидсас аадсидддач асайсицаад 9120 адасациисс аадачасссуд даддадсчац диацдсидац дасасадсид дипдддасас 9180 аадаачцааса даадацдасс цпдсасаацда ддааагвгаацс асасадсааа пддасссида 9240 і асасаддсад пшадсааасу сцацацисаа дсисасацас саааасааад пддисааади 9300 исаасдасса асиссааадд дсасуддцаац ддасацсаца исцпаддааад ассааададу 9360 садиддасад дидддаасци апддисидаа цасацисасс аасачцддаад сссадичаац 9420 садасааацу дааддадаад дидидиидис дааддсадас сисдадаасс сисацсидси 9480 ададаадааа дичасасаац ддипддааас ааааддадид дададдичаа ааадаацчддс 9540 7 сацсадсддд дацдацидсуд пддидааасс аацидацдас аддиисдсса айпдсссидси 9600 чпдсссидаац дасацдуддаа аадичаддаа ддасачасси саацддсадс сацсаааддчуд 9660 ачддсацдац пддсаасадд псссипцисид сисссассас пиисацдаац пдаисацчдаа 9720 адачддаада аадииддчцад писссидсад ассисаддац даацциаацсу ддададсдчад 9780 аацсисисаа ддадсаддац ддадссичад адааасидса пдссцадуда аадссцчасдс 9840 7 ссааацдидуд асисисацди асицисасад аададайсци адасчадсац ссаасдссац 9900 апдицсадса дцассадисс апидддиссс сасаадсада асдасдидди сцацисацдс 9960 исассацсад пддацдасца садаадасац дсичасидци чподдаасаддд пдиддачада 10020 ддачаацсса пддацддаад асаааасисс адисаааасс пдддаадаця писсацацси 10080 адддаадада даадассааий ддидсддацс асисацидди сисасцисса дадсаассид 10140 7 ддсссадаас ацасицасуд саацссааса ддидадаадс сицачаддса ацдаададиаи 10200 исиддасчас айдссцписда пдаададаци саддааддад даддадисад адддадссац 10260 пиддчааасу чаддаачида аааададдса аасидисадд ссассичаад ссасадчцасд 10320 чаадчдаадсид пдсадссиди дадссссддис сааддасудии аааадаадаа дисаддссса 10380 ааадссасдд пиидадсааа ссдидсидсс пдиддсиссуд исдидодддас диаааасситд 10440 о чддаддсидсд асцадсддии ададдадасс ссисссудида сасаасдсад садсддддсес 10500 саадасчада ддичададда дассссссдс ааачааагас адсачацида сдсидддада 105560 чассадачац ссидсидиси ссисадсацс ациссаддса садаасдсса даааацоддаа 10620 чпадидсидци даацсаасад дицси 10645 «2105 1
«211» 10618
«212» РНК
«213» штучна послідовність бо «2205
«223» РЕМУ4
«4005 9 адиидичади сидидиддас сдасааддас адциссааац сддаадсиицд сицаасасад бо
Чписчаасади пидицидаац адададсада исисиддааа аацдаассаа сдааааааду 120 чддичадасс ассицисаац ацдсидааас дсдададааа ссдсуцацса ассссисаад 180 ддичддидаа дадацисиса ассддасици пшсидоддаа аддасссича сддацдацдс 240 7 чадсацисац сасдишшид сдадиссици ссацсссасс аасадсаддд ацисидаада 300 чачддддаса дипдаадааа аацааддсса цсаадачаси дацйиддацис аддааддчада З6о чаддссдсац дсидаасацс пидаасудда даааааддис аасдацааса пидсидидси 420 чдацисссас судцаацддсд пийисссиса дсасаадада чддсдаассс сисацдацад 480 чдасааааса чдаааддддд адассисиси пдициаадас аасадчадддд айсаасааац 540 7 дсасисисац пдссацддас пидддидааа пдидидадда сасидисасуд цацааацодсс 6оо сссцчасидуди саацассддаа ссидаадаса пидацидсид дидсаассис асдисцасси бо дддисацудча пдддасацудс асссададсу дадаасудад асдададаад сдсисадчиад 720 сцичаасасс асацисадда апдддайиду ааасаададс пдадасачцдд айдисачсд9д 780 ааддддсицд даадсацдси садададчцад ададсиддац асисадааас ссаддацисд 840 7 сдсисицддс аддацичацуд дсичацацда пидддсааас аддаацссад сдаасидиси 900
Чпсицидисси ааидацдсид дисдссссац ссцчасудаац дсдацдсудца ддадпаддаа 960 асададасци пдиддаадда дисисаддцд дадсацддди сдассиддцд спадаасачд 1020 чаддацдсди сасаассацу дсссадддаа аассаассци ддацицидаа сидасциаада 1080 саасадссаа ддаадиддси сидицаадаа ссчацидсац пдаадссиса ацацсаааса 1140 7 чаасчасуддс аасаадацуди ссаасдсаад дададссица исидааадад даасаддасс 1200 аасадцасац пидссудада дайдиддчад асададддцд дддсаацддс пдиддсицди 1260 чпиддаааадд аддадиидид асацдидсда адициисацуд писддуддаад ацаасаддса 1320 апииддисса аацидадаас спидаачцаса садиддицди аасадиссас аацддадаса 1380 сссацдсади аддааацдас асацссаацс ацддадичас адссацдача асисссаддчи 1440 7 сассацсуди ддаадисааа пидссдуддаси ацпддадааси аасасисдац пдидаассса 1500 ддисиддаац пдасиицаац дадацдацис пдацдаааац дааааадааа асацддсисд 1560 чпдсачаадса айддишишид дайсидссис циссацуддас адсаддадса дасасацсад 1620 аддиисасид дааицасааа дададаацудд цдасацичцаа ддииссисац дссаададас 1680 аддацдидас адидсидуда цпсисаддаад дадссацдса писидсссис дсиддадесса 1740 7 садаадидда сиссддидац ддааацсаса пдицидсадд асацсичаад цдсааадисс 1800 дчачддадаа апидадаацс аадддаацди сацасасдац дидиисадда аадиццисаа 1860 чпидасааада дацддсадаа асасадсацуд ддасаасади ддидааадис аадиацдаад 1920 і дидсиддадс пссдидцааа диссссацад адачаачада пдиааасаад дааааадчид 1980 чпидаддсдцдац сацйсисацес ассссишодд сидадаацас саасадидца ассаасацад 2040 аацичадаасс ссссицидудд дасадсчаса цадидачадд пдичддааас адсдсациаа 2100 сасиссацид диисаддааа дддадиисса пддсаадац дипидадисс асацасадад 2160 дидсаааасуд аацддссаци сцаддидааа садсицдудда пшишиддцисс дипдодцпддас 2220 7 чпдиисасацс ацидддааад дсидидсасс аддиииодуа аадидидцац асаассацди 2280 чиддаддади сисацддацуд айчадаацсс чаацишдддии сичадидицид пддациддаса 2340 сдаасисдад даасасциса апддсчацда сдидсачадс пдичддадчада айсасисиди 2400
Чписидддсци сасадцисаа дсадасацудд дипдидиддс дисацддади дододааадаац 2460 чдаачдидидуда аадсддааци пипдиддиид асаасуцдса сасицуддаса даасадцаса 2520 7 аациисаасс ададисссса дсдадасчад сдисидсаац апшааацудсс сасааадачд 2580 дддисидидуд ааичадацса ассасдаддс пддаааацди сацдиддаад сааацаасса 2640 асдадсчааа спацдиисис пдудудаадчдад дасацдасси сасидцадид дсиддддачд 2700 чдаачдддади дипдассааа ддсаададад сасисасасс сссадидади дайсидааац 2760 ацписацуддаа дасацуддудда ааадсааааа псцисасссс адаадсаада аацадсасац 2820 7 чпиичаацада суддассадас ассисидаац дссссаацда асдаададса чддаасисис 2880 чидаддидда адасчацудда чпипддсацди исасдассаа сачацддацуд ааациссдад 2940 ааддаадиис адаадидиди дассасадди цаацдисадс пдсааццааа дайсадааад 3000 сидидсацдс пдасацддди цациддачад ададсисааа ааассадасс пддсадачад Зо6о адааадсацс цсичацидаа дидааавасац дисидидудсс саадасссас асасидидда 3120 о дсаацддади дсиддааадс садацдсиса циссааааицс ацайдсдддс ссицицисас 3180 адсасаацца ссдссадддс цайдссасудс ааассуидудд сссацддсас пшіададсааац 3240 чададачцада сициддадаа пдссссуддаа саасадисас аацисаддад дацидидасс 3300 ачададдсесс айсицидадуд ассассасид сацсиддааа асчадисасуд саацддидси 3360 дссдсиссид сасдацдсси сссицаадди псичдуддада адачцдддидс пддчачоддда 3420 7 чдададашіад дсссицдади дааааадаауд адаасацудди саааисасад дидасддссд 3480 чдасадддсас айсадаааси шишисцацдд дисидицдид ссидассицд пшидиддваад 3540 бо аацдсицдад дадаададис асчаддааас асацдачаци адиидиддицд айсасисици 3600 дидсчацсац ссидуддаддс сисасацуда цпддасичаси асдадсссис айсацдичад З66о дддасасчац дисидудчада ацаддаддас адацссасси адссацсацуд дсадидииса 3720 адацдисасс аддачасдцд спдддидиди пшцчааддаа асисасциса адададасад 3780 сасчаацудди аацаддаацу дссацдасаа сддидсицис аациссасац дассичачод 3840 аасисацида пддаацацса сипдддасчаа пишидсцааа аацадиааса садицидаса 3900 7 асасссаади дддаассица дсисицисси пдасицисац аадацсааса айдссацидд 3960 чисацддсиид даддассаци ацддсидиди пдипидидди сасасисаци ссицидидса 4020 ддасаадсид цпсцисааааа садисисаци дддчадааац аасадсасис айссцчаддад 4080 сссаадсиси дссадидцас сцаацдасис пшіацдааадд адссисаада адайсицЧддс 4140 сисичаасда дддсачаацуд дсидидддии пддичадиси сичаддаадс дсисицичаа 4200 7 адааидацди сссцицадси ддсссаацдд пддсаддадд сичасцисид дсддсичасд 4260 чдачдадидд чадсисадса дайсидисас чададааддс сдссаасуцуд садидододацд 4320 ааацддсада сацаасаддс цсаадсссаа цсацадаади даадсаддачц даадачдадси 4380 сицисиссац асдддасудис даддааасса ацацдацаас ссицицдудцд ааасиддсас 4440 чдачаасади дисаддисис цасссспду саациссади сасаацдасс ичацдддацаса 4500 7 чдиддсаади даааасасаа адацсаддад сссидидудда сдиссссиса сссодсидсса 4560 сцаааавадс сдсасидиси дааддадиди асаддайсац дсааададдд пацисоддда 4620 ааасисадди пцддадчаддад ацасасацудд ааддидцаци цсасасаацу пддсацодчаа 4680 саададдацс адидайсидс сасдадасид ддадацидда дссацйсицдуд дсидасдиса 4740 ддаацдасац дацацсачас ддидддаддач ддаддсицду адасааачцуд дасааадаад 4800 7 аадасдииса ддиссисудсс ацадаассад даааавацсс цааасацудис сааасддааас 4860 спддссиции саадасссца асиддадааа пиддадсади аасаццадац цисааасссд 4920 даасдисидд писисссацс ацсаасадда ааддаааади сайсддасис цпцапддааачд 4980 чадчадичас сааацсадди дацчасдиса дидссацаас дсаадссддаа адаациддад 5040 адссадацца пдаадиддац даддасацици писдааадаа аадациааси ацаацддаси 5100 7 часассссдуа адсиддааад асааааадаа писициссацс аачадидада даадсстиаа 5160 аааддаддси асдаасицид апишицадсис ссасдадади ддиддсддсс дадачоддаад 5220 аддсссчасуд цддасидсса айссдичацс адассссадс пдидааацса даасасасад 5280 чаадададачц пдиадассис апдидисацу саассцисас аасаадасци пидисацсаа 5340 ссадддицсс аааццасаас сичацачдида цпддайдаадс асациисасс дацйссцписча 5400 7 дидисдсддс цададдачас айсисдасса дддиддааац дддададдса дсадссацси 5460 исацдассдс аассссиссс ддадсдасад айсссицисс ссададсаас адсссаацад 5520 аадасацсда дадддаааци ссуддааадди сацддаасас адддиицсдас пддачаасад 5580 і асчассаадуд даааасидид пддицидиис ссадсацааа адсиддааац дасацидсаа 5640 апидицидад ааадисддда аадааадица цссадиидад цаддаааасс пшидацасад 5700 адчацссааа аасдааасис асуддасцчддд асицидидди сасчасадас ацацсидааа 5760 чдддддссаа пиичададсс додадададида чадасссцад аадацдссис аадссаулша 5820 чпссцчассада чдддссадад ададисацшии чадсаддисс цациссадид асиссадсаа 5880 7 дсдсидсиса дадаададудд сдаачаддаа ддаасссадс асаадаадас дассаачасд 5940 чпицисиссудуа адасссасца ааавгацдацуд аадацсацудс ссасиддаса даадсааада бо чдсидспида саацацсцас ассссадаад ддайсацисс аасацидици ддиссддааа 6бово дддаааавас ссаадссаци дацддадади писдссисад аддддаасаа аддаадасии 6120 чпидиддааци аацдаддада ддадассцис сддидиддси дадсчацчцаад диадсписцид 6180 7 спиддсациис піасааадац сдддаацдди дсцисасадуд ддааадааац аассааацци 6240 чадаадаааа сачцддаддии дааашшиуда счадададудд адаааадааа аадсиааддс 6300 саадацддии адацдсасди дцпачасдсид ассссацддс пшидааддачц писааддади 636о чпидссадидуд ааддаадади ацаасисисуд асацссцаас ададацидсс адицидссаа 6420 сичассицис сисцчадддсес аадсисдссс пидацчаасац адисацдсис сасасаасад 6480 7 ааададчадуд дадддсесчац саасасдссс пдаасудааси пссуддадиса сиддааасас 6540 чисацдсиди адсиицасца ддидсчацда садсаддсац сийссидици писацдсаад бо ддаааддаац адддааацид цсаацдддии пдачаассац пдсддиддси адиддсицдс бево чсидддцадс адааацисаа ссссадидда чадсддссис ааисачасца дадиишиис 6720 чисацддцаси дипдачассуд даассадааа аасаааддас сссасаадас ааисаашида 6780 о чсчасдисац ацидассаци сисассацса пиддисцаац адсадссаас дадацдддадас 6840 чдацидаааа аасааааасуд дайиицддди пичассадди ааавасадаа ассассацес 6900 чсдацдидда сиидадасса дсиисадсац ддасдсисца пдсадцадсс ассасаацис 69во чдасисссац дсидадасас ассацадааа асасдисуддс саассцацси сцадсадсса 7020
Чпидссаасса ддсадссдис счаацддддсе пиддаааадд айддссдсис сасадаац9уд 7080 7 ассисддиди дссдсидича дсаацдддац дсчацисиса адидаассса ацаассцпида 7140 садсацссци адисацдсци писдиссаци ацдсаацаац аддсссадда пидсаддсаа 7200 бо аадссасаад ададдсссад ааааддасад сидсидддац сацдааааац сссасадидд 7260 асдддачаас адцаацадац сцадаассаа цайссцацда сссаавацци даааадсаацй 7320 чадддсадди сацдсчасца дисицдидид сиддасааси асисцидацуд адаасаасац 7380 дддсицисид пдаадисицд асициддсса саддассаац спидассицд пдддадоадса 7440 асссдддаад дипицддаас асдассацад ссудцацссас сдссаасаци писаддддаа 7500 чдичасицддс дддадспдда спиддсицици сасисацааа даацдсасаа ассссцадда 7560 7 чддддаасиду дассасадда дадасасиду дададаачдид даададасад сцааасисац 7620 чадасадааа ададицшидаа дадцачцаааа даадиддаац асчадаадцуд дасаддасид 7680 аадссаадис пдсссидааа дайдддисца ааацсаадса цдсадиацса ададддисса 7740 дчаадацсад апддацидии дадачачуода пддиааадсс аааадддааа дипдиадацйс 7800 чпидасидиду дачаддадда чддисицаци асацуддсдас асисаадаас дидасидаад 7860 7 чдааадддца часаааадда ддиссаддас айдаадаасс дацисссацуд дсчасишацд 7920 чдичпддаации ддисааасис сацисадддд пидасдидици сцасааассс асададсаад 7980 чддасассси дсисидидац ациддддади сайсцисцаа пссаасааца даддааддаа 8040 даасациаад адиииидаад апддиддадс сапддсисис цисаааасси даацисидса 8100 чсааадисси чаассссцас ацдссаасад исацадаада дсиддадааа сидсададаа 8160 7 аасацддидуд даассиидис адайдсссудс пдиссаддаа сиссасссац дадацдчаци 8220 чдддидисадуд адсдисдудда аасацидида дсисидидаа сасаасацса аадайдичди 8280 чдаасаддци сасаасаадд сачаддадас ссасичацда дааддасуца дайсицоддад 8340 саддаасчдад аадидисисс асидааасад ааааассада сацдасаацс апидоддадаа 8400 ддсиисадсуд айидсаадаа дадсасааад ааассиддса пшацдацсад даааасссац 8460 7 асадаассид ддсдиайсац ддаадсчацуд аадсиссцис дасаддсиси дсацессисса 8520 чддидаасудд ддидудчаааа сидсцаасаа аасссидудда чдидацисса ацддидасис 8580 адичадссац дасадачаса ассссицицуд ддсаасааад адидицисааа дадааддчдд 8640 ацассадаас ассасаасса ааасссудудца сасдаацудди цацдассасуд асадссааци 8700 ддсидидддс ссиссицудда аадаадаааа айсссадаси дидсасаадд даададииса 8760 7 цсисаааади чадацсааас дсадссацад дсдсадисци исаддаадаа садодацодда 8820 сацсадссад пдаадсидид аацдасадсс ддипицдодда асиддицдас ааадааачодд 8880 сссцасасса ддаадддааа пдидаайсди дидисцацаа сацдацддда ааасдидада 8940 аааадичадд ададицидудс ададссаадуд даадссдадс аацйсиддчас апдиддсчидд 9000 чадсдсддии псиддаации даадсссидд диииицидаа пдаадацсас пддициддса 9060 7 чадаааацис ацддадидда диддаачодду ааддисидса садацидодода цацацйссид 9120 аддадачада саадааддац ддадассцаа цпдиацдсида цпдасасадса ддсидддаса 9180 саадааисас пдаддацдас сцписаааацу аддаасидац сасуддаасад апддсисссс 9240 і ассасаадац ссцадссааа дссацициса аасцаассца цсаааасааа диддидааад 9300 цссисадасс сасассдсудуа ддадсддида чпддачцацсац айссаддааа дассааадад 9360 дчадиддаса адицддааса цпацддицида асасацисас саасацуддаа диисаасиса 9420
Чпссудссааац ддаадсидаа ддадисацса сасаадацуда сацдсадаас ссаааадддчи 9480 чдааадааад адицдадааа чддсидааад адидиддиди сдасаддиаца аададдацод 9540 7 саацсадиду адасдацидс диддидаадс сссцчадацда даддициддс асицсссисс 9600
Чпсииспидаа сдасацдудда ааддидадда аадасашисс дсадидддаа ссайсцпаад 9660 чачцддааааа сиддсаадад дийссицици дсисссасса сицисасаад айсиичацда 9720 аддацддссд сисасчадци дииссацучца дааассадда пдаасидача дддададсса 9780 даацсисуса дддадсчпдда пддадсичаа дадааасадс сидссидддс ааадсичасд 9840 7 сссадацудцд дисдсичацуд цасциссаса даадддацси дсдиццадсс цссацддесса 9900 чацдсисадс адииссаасуд даапддицис саасаадсад аасаасацудуч исаацссасду 9960 сисацсасса диддацдасс асидаачача пдсисааади чиддаасача дичиддачад 10020 аадасаассс цаацацдаси дасаадасис садиссацис дидддаадац ацассицасс 10080 чадддаааад ададдашицд пддидиддац сссидацицдд асицисицсс ададссасси 10140 7 чдаддсдаадаа сацисасасуд дссацаассс аддисаддаа ссидацсдда ааададдаац 10200 асдиддацца сацдссадца ацдаааадац асадидсисс писададади дааддадицс 10260 чпдчааццасс аасаасааас ассаааддси ацидаадиса ддссаспиди дссасддици 10320 чадсааассд пдсидссиди адсиссдсса ацаацддчад дсдцаацаай ссссаддаддад 10380 дссацдсдсс асддаадсид чцасдсдиддс ацациддаси адсуддичада ддадасссси 10440 о сссацсасид асаааасдса дсаааадддд дсссаадаси ададдичада ддадассссс 10500 ссаасасааа аасадсачац пдасдсиддуу ааадассада дайссидсид цсисцдсаас 105560 ацсаацссад дсасададсуд ссодсаачачу дайишддидии дипдайссаа саддииси 10618

Claims (4)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Склад, який містить такі компоненти: а) жива атенуйована чотиривалентна вакцина денге, яка містить: і) 100-10000000 БУО/мл вірусу "ОЕМТАЗО, ії) 100-10000000 БУО/мл вірусу гОєЕМ2/4АЗ0, ії) 100-10000000 БУО/мл вірусу "гОЕМЗАЗО/З1, і їм) 100-10000000 БУО/мл вірусу ГОЕМА4АЗ0О; Б) 11 мМ буфера на основі фосфату калію за рН 7,0-8,0, с) 90 мг/мл сахарози, 60 а) 5 мг/мл пропіленгліколю, е) 5 мг/мл карбоксиметилцелюлози натрію,
У 50 мМ Масі і 9) 25 ММ Геи.
2. Склад за п. 1, в якому буфер на основі фосфату калію має рн 7,5.
3. Склад за п. 1, в якому вакцина включає: і) 200-200000 БУО/мл вірусу гОЕМ1ТАЗО, її) 200- 200000 БУО/мл вірусу ГОЕМ2/4АЗО, ії) 200-200000 БУО/мл вірусу ГОЕМЗАЗО/З1, і ім) 200-200000 БУО/мл вірусу ГОЕМААЗО.
4. Склад за п. 1, в якому ГОЕМІТАЗО являє собою г0ОєМ1АЗ30-1545; г0ОЕМ2/4А30 являє собою ГОЕМ2/4АЗ30 (МЕ)-1495,7163; гОєЕМЗАЗО0/31 являє собою г0ОєЕМЗАЗО0/31-7164; і гОЕЄМААЗО являє собою гОЕМ4АЗ30-7132,7163,8308. 8 Дія КМ, НІ, амінокислот на вихід ліюфілізані ВЕМУЗ4
Б. ВОК пре рент ВО 160Ж нини НН 5 МОЖ ння рення вв ЩО 100Ж ння фе Я ВОЖ ня ШІ ше щ шк Ж до БА ж боку т І: іс ШОК рвані ен т ДК Я НН ср Я КЕКВ пунк КА КВ КК не З й 5 5 20 гашиш я 26 ща Номер склалу
Фіг. 1 тай іс Же ІТ г чт зе с зучі акт ву. Уа т Ай КМИН, ПІ, амінокислот на стайільність ПЕТЯ се : : г - 05 ек її ще " ї : ї ї : - ї - Я настої Ї і НИ : Аналез З ї д зльналув і і Аналіз 3 і даже З ї - Ї ; : щ ; ї : ї Бий я ї 2 ї с ї : ї
Ж . ; Е З і : : Мк | . Що АЙ АЛ АХА АХА МАЛА а ї ї ї їх: ї : ї З Б Ї - | ї ї-н ТУ: ї ї ї ї ЩЕ Мр і ГЕ :
є у. Тр Е і : ї КК ї їх к т - Ко ї НЕ ї т Ї Зк ї А і ї ру : М : А ї Об ї ЩЕ : - МК Ко : ї КО ї З мису ГЕ Ї гу: Ка : - ох шк ож С М ЩЕ Е о Ме рий ща! Бд р А ї я Би жи КО ря МК Ж Ж : шк щи ж Тихі ої рий Вк КИ З о - ї т МУКУ Ми я тех ОО фку Вих; п 1 СЯ ї шо ож ; 4 : й ї в й й "ЩЕ 0 2 я 28 -к : т А - о щі н сраку се пр - УМ не КллЕТУ де я
Фіг. 2 ча «ех ще -У т . . 3 У со тарт т Ж А цукрового снирту на вихії ліобфілнані ПЕМУЯ Ф е- зп ОО ТОД пня У Н ї п І ї ща і їх Ж і ї - ! «ох ' ї - як ї йо Я шу. хххлллхххлллххлллхлхлллххалахлхлллххалахххлллххллахххаллххалахххлллххалахххлллххалахххаллххллахххаллххлллхххлллххллахххлллхххлахахалахххлахххалахххллх г КЕ 7 ї їх ' : я ' ї р ще ї ї Ж ВВ 00 щ- ! 3 ї роз і пері ; ї -- рик ї щі ; 1 Кмин ї ще і КИЕВ і як рак! КЕ си ї -к з ит т рими ї зни І Кир Млини і ' МО г яти ї ОО БДЕ--- ов ПЕ : щ І і БИК Ко ит ї М ! Б Коти Кен Н ма жк ' НИ Ки и 7 я Ма ' ет Ки ий, ї ш й -АА- оо о сія дя ї ЧЕ ! ПИ ШО Усе : Зо жд Пенн Мини пис : це ри ЕК фо Кт р іх еф ттттни их і ший Кк Ми ї кі І ДАК БЕК я КК Н ' Микити МЕС ВК ї в Ох «А дпегтттттт тн КК ОВК й пттисттет тп ВК ККВК к птетттттт трлн СКК КК КК тететтттттня Е 7 з Ї ; х 5 15 те а ва: К філ спеотко т Номер складу А г ее з а. є - з . щини хи ї пат т Дія цукрового гннрту на стабільність ПЕМ Я т-5 - 00 зе за х Як їх Я ка : Ук Г - : 43 1 ? 0 3 4 Я т «т Ї о - ЩА Е і Е - яр ї і ПУЛ - пло т ух я у КПТ тЯ т ї | ря ПИ ж ! пу ДЕД їх Г ЕК Ми х й по Я - : о о и з зо 00 ПІД Ян тт Денне що Кен се АК ї Ї КК ки и у житя щ ої Г пити ж ик ШУ ик - : Коли Ку я ех Ї кий ка Я пит ха З 00000000 КК... МК: КПК 00111111.
ах. їх. у фе и имх и кита «3 : : руки Ек ие г : КЕ ОМ КАК - Е Бор они и ат - 00 . : -- з ре де ш й ІЗ че їй «ще , - нн пав ху 2 в че клал ж х Ух км, ся тре н ще ш КІ о ВЖК ВЕЖУ Ж Лія БА на вихід ліюфілізанн ПЕ УЗ ее ЩЕ : ї-к М їх Ї ще Ї ей і НУ - Ї т " г З т- км Ї 3 шк " Її ОО Пи у ! С ї и Ор аиу ЖУКИ М и, ще Ї они инни ЗК ок що Соник ин Ух -- ; ПОКИ Злити м ; ПЕ Др ях ж ен отит Диня і жк «ій т Ви Кф У Кф оф д- х. г КЕН МИ І Я г Кук ЖИ ' - г лення 3 тих І -к шк Ї ик МИХ у І ! и й Ки тки тя уки З ще Ї и Мои оо ртв ща Ї Ой и Коокеветея чн о г ин Уа Ки ех й ї их Кай и ки тай г ема ЖЕКи ик їй Кит МКК А ! щ Ї пня ук вв ли ко. о г при кити я КИ що як Ск и ни и -щбо От Он КРИЛ И КИ КОТИК ! --х ї ми но кни - г ит мМ Кия Ки В зн г ких МУКА Ки сх чу г ока Кит ДК фея хх 105- Ед ння КОКОС : не | КЕКВ ШОК и. ! Ба Ї ення МО КЕЙ ТЯ пов КК МЕКСИКА ол, тк КИ Еф т КК п 2 ша Кен ТЕКА пунк н | ПЕК ПОД КД - як плин ОН Косово - п зії. КА А АК КК знос нь о КК. хе А мк.
ж х. т ї З 22, в 7.0 22, ВН 75 22, рН Во ше жк їж т М ж ж Ж е -- Номер складу тих А й ил є як й тр з ох : ящтжх Б Ав рН на стабільність ВЕ МУЗ 2 ШО ОФудфсрянтттттттттттттттттттннтннтнтнтнтнтнтнтнтнттнтттттттттн Е ної і
Е . Е - 3 т і ВО ФО5 ост Кк " і Ї і щ : потен ! ж З зе клин і Бо і ЕК ки ; - тк Ми і тх мк Н УДК Ан ! що ! Ки і 3 я і зна З Ми і т- Ку пад почти КЕ КЙ У УЧИ ф уч у у у у чт х5 015 і Мило, ї 2 З оо ї х. Н Крик ! ху З КИМ тим ! - з и ! Мк й і в КИ ПХТ ИЙ фл ААУ , з Мис ! щш і МИ ик і ве . ПАКТ і ех. Мухи яти 2 005 і Коен і Ку х ї Ки і Н Ок ! Ех : ПЕК ; і , ! УК в і цк і Ук З і т--ї Ж 7 1 реаакозка; АС рий г т З 3 вк Кт і м і Х. і Ф і ве Е щщ і ! а «Й ДВ, зеентттттттттттттеттететтттттеттеттеттеттнетоненненнннннняя з 1 ї ЩЕ З е ' - з і що і і ш- й 14 і За ех і Е З ПИ Фо ро пи рмннннциннин ш- , : Е 22 22, В 75 22, вн Во я 22, вн 70 22, рН 7. 2, рН В. Е -- : ІТорсле стату щ-- гір кЕлалУ х птов- У . . 8 Ж ох вх ЇМ вто «Ня буферу на вихіх ліофілізані ПЕМУЯ т Ж х н дух ТЕ З г су ї ц Анатз і Аналіз 2 ! п с ї с я нн нин нн є ії З їмо зиму 3 па : р З 5 ' «Ти СИ Е - кокжткх, норки В ек ; АК КК і щощ ох По М од сок опти СТВ Ми мя : я тину ЛА вк ї ОХ тної ких пеня Кон і що Ж м СС ПИ а Вод і Ох ний ковй пе пЕСКя по : ен. пий ВОЗИ Мети З ж ДО Я ЕЕ Бетонні ХК мл ИН Мини ки Корея і -- сек и аб Оу 3 а ий и и Мис І ж лижні пи ки Квтя Кит оенся З х ет ОО Мак Кук ії - і пити, ки пон ии Оки ї «Щ пари фо пиф кю жа сх он пок ери ли Кон сен і дО ник ПЕ С КЕСеОЕтя і д ж, Енктя не Кен і вх Я как МИ По и Ки юю 3 За і - ябеєюююєєє КК еютететєтретттєтєтя од сееоеетеекревететето ВВ КК пеккететте рт КК деетчючеетеї й 2 З 57 Ттералетя сю НЕ г ск лі х ск ж щи ит Ан буферу на єтабітльність ЗВЕМУЯ ЕІ : з дак ї А ожтоостім р: НИ: Аналіз і Е Аналіз 2 Бе ; і ї ша ще: ЯЗ ї ї їж з й Х ДМ ОО ООТООТ ДТО ОТО ОО ТО ТООТООТООТ ОО оетоосетстя З 5 . У ї ї Е дО : і Ї ке огЗ : і ї Щі -к кл Е о т Е о г : 7 и ї я ЩО о ї тм ко Е м є ей с Ї що : пе я КА : рих т Ж ї ТК пд ї Бити укися ех рн й і 5 ї в чт ска 2 Котиний Е Мих и риси М ооте ї ве ля ї Кесефея окт з Ж ; ки и итиянк ї Кок ех -- ї НК ких Е Кий кити і ен енеф ки и р ми ПН он ї Ки кю ї Мк ПРІ Р В т тота ян ет Ї Ки пк ї» а 05 ї Ге Я де Е о кнк и х в; пк ся 7 Ки яке де я : ери ий итин КУ І: х Е я аю ких и юи ї- : Ки жі Ки ук, я Кия паяти аке ге пкт я д ї Миття СЕК ОО кн 7 2 25 5 57 Номер складу та рт ке ь. чн . - Ж С й, ї. вч 4 то т тя Дія концентранії ХасСі на вихіл ліофілізанії ПЕМ УЗ Фк я : ЩЕ доню! Ї ХО дод дент в шк - і ш шк ї ї ОМ : пек і : ме ; фе РАК : Ї хх ак де екв НИК і ж : роки Ме пи : же : фу Й Я и ї зх ; ї Имя еко ска Я рн Н - о, ї фея СОЛО Кр ик Н Ки ї фену ПЕКИ КАК ок туті Її -оОж зло РОСИ КИ КВК тя КИЙ і їн е Я фолитюктя Кия Кт тиж ї пт її фея и як ши о і д ї Ук кранами санки МИ ї у ся рекекен Крик кс К и до і ; Киняя Є Ей Кей ОНЯ і Чек х а, Ж такс КН ж, ї -- с ї Кия ЕЙ НИЙ вся : й зв Коен СИ НЕ КЕ : паях Кит и кит сені ї п ох і Б ие І ик і ОМмМ о ММ 48, ЗБНЯМ ОО, ММ Кк к ж вм А 5 Кг М М м 7 в | М: Кк «і ВИ г х Б щі З Номерсклалуії концентрація Мас
Трек . с щ жи т кт їх пт Дія концентрані МасСіна стабільність ВЕМУЯ 05 т в г я Г 7 й Б Г - 0 ї Ї кг Е ооо чай Ї яка Ми |: У то |: Ко й ТЗ - й З тт ж щ-е що г ТЕ пк Г М х Г 1 че ЕВ : 1 : що я Ї Тоня Її ї щ С ККУ | ел ЕЕ | ор ! семи шко С пиття | ет ш Б г С і КА з ря Е ре НА | ин Ми Ж во ж. пики | и Киеве ща | нти ке І Кен х | Лек ие ий МУК щ й ДОКИ Спи ники Вр аи в і тя сири я БК То 5,75ММ 45, БОММ 46, ЗоММ о 47, 5ММ : З 4 з ОО хай ОК ОО о ММ 45, Тим З ММ ОО, ОМ -014 " є Намер осклалуї концентратя масі пра оку такт х Е : пк шуй 2.8 ве Дія пропіленьліколю і глінернну на вихози лікнфіліванії Б керотнцівленгеє ще ж Я Пе про АКА 2-7е Н Ех : дак ї ; : пе ї : : -к ї : : з тек і Ї : : з : : : т : і ї : як З ХК т м г : мк я і дк і т : ОК ше ! пет і Гей 3 КО Х Бр : Ї ВОК ТТ Т еВ: : : т : Ор ж в, МИ ше т ВХ фо ВИК. о В Кон нн М - бив Ко Кажеав ДН ЕТАП Е вет еуки т БОЮ Овен пф Я і БИ : ЗЕМО Ж ВОК фе Я 1 З ТИКИ : титех і ВОК овен Си ; ШЕ ; хі : ї КО м | ї ЗА ІІ т я пе ї Кк МІ 111 Ко Е КИМ : ТТ ПЕЧЯ : - ВО ДО БЕК Ж г ПЕНЯ 0 нн М ше М ЕМ НК ве 1 ДЯ З МАВ ; хх х пил: ОК пе: ОХ КАТІ ро є ОО ЕХ о Не РО ЕЕ і ро Я ПД ПО : межи : «У ЕН СИ Ме БеШЕЯПИКХ КО БОЕНІ : ск : о ЕТ НК ори ОК ; КФК : шо ща шк Я кеш ПЕ шт - Бо п ПД : БИКА і як ї Е я: к КИ ї ВІ ІЛІТІ х. хх Бо ке а С ; А ше «щ : ї щи ки 11 11Я : ВН І р ; Ко КО НН Я : НН З:
т С. Мо Е ри І кх ати 111111 х МУХИ ВМО : о ЩІ МЕНЕ п БЕ КО чих ї Е и Туя ВЖИ пи: бехних : КУКИ х М : ек ї І и 111 имя: ни ї МИМО І21 Же х : Ж М; АЛАНА КИМ ПН: ХК : НИ І ВЕМ : -їШ г М; АННИ с ПО Кя ї СКК ЮК Н р ЕН ав ка НУЮО КЕДИ ОХ і КЕНІЯ й п Метан КАК ННЯ яр пен ВАК МА НЯМ сут КИ ВМ КЖОММ Я х 5 20 за ех на Нах ша жд шамерткладу ш- дя пренпнюеніліколяю кІліневинеу на сІаОМмьність в г не серотипів ленге ще п З Н є . Е Гял таж З щ- ї гЕ | ! т ! ад ' є : ЕЕ 0 "в і х І : З шо Ма Ї З ! щ | І ; ; я І ' ї : т- дз ни «ДВ фон нюх ню фон шк г кої Мак же Її ЗІ
- . БИ ГОБОБе : тт р ЕК ш ЕД КИГО і Же АТ нт рія х й пе Ол ОБ ШЕМІ а | ВИК о шфЦИЗПКТ КО ей З -к З МКК ВО БУКА : КК пово ШИЯ : ЩО фе фр БАН ння 0 ЕП КО ЕМО "б м: КО ВОМ Ко шеИ ПИ їн ї- | ра ОБЕРИ Беж КО БЕЄТИВО х ЗОБІ - вВпв--- ОБ зн ОБ Б --я 00 БО --4 Б ЕМ : С їх Ех Ї КУПИ КУ м х жи ІІ ІЗ ще 7 і ККУ ОБУ И ПИ ЖОКх Е ку 1113 ї М З Мся т ОЕМ ООБЯ ! т п 4. Кир 3-3... ВИНИ 5.4 Би ЦК КМ що І ососрююкю 1 ХЕ ї ж І Н :
З . ї : т ї Щі Ь ї «ОО ср ненні «У не пк 5 ї " | ! ПОДИВ бот Бе Їй т не З о 24 Бої ж тт А Помер склидуУ
Фіг. 12 г -к Ще їі 15 титрування: БЕМІ шо и зв У ; -ш не - ие її Ж Тло а дк о. СТОК Св пет 4 х АК Су Кия 5 я сх еукно Где ке : ет уиЖЕи Ж, в С ДО о ше свистстй ве и мол оВ ой ил Ов ус зт пн Кия тя ди ин ж Кклох У дя НЯ КА В с Мн сккфя ІІ пон МІК «З и той п па песо ІНК рин и я ой ачьк с ! Я є х й чо 45 25 Б ечвтттолятінитт ЕМ концентрація І -15 КВ може у ян НА ржте я То с пд кут тт Га Заморожування ЦІ МАЄ 0 СЗЗ Людфілізамія
Фіг. 13 с й ж ро Її 15 титрування: ШЕ МО - 0 ги ся ВКА КУ - ой той ил ж пня жк пут пк їй; 3 З ЕЙ пери --е Цинк паю -к з Мих пи Зк з пл В с лллллллллллллллллллллллллллялллл ВОК о лллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллллляллл ВО ОЙОД сти ЕЕ дну у Мих и ІК т Мих и Ї ру с Мих У ІКТ М Мік МУ п ІКТ Я век Кри кн ІК ; Кк пи яв ІКТ пофкісьня пе Ким КА КІВІ сних - Ж КЗ ер... хи іподдрнтттии ТТ ЖК 00000000... ІК 0000000000000000 «ве Ми КК нн ТМ и І шк миля Б с и й и Ін и НІ пи І ще Ки ІК пен сл ЖІ щ Ті: м ТИ НЕБА КИ ЕП ром ко нн нн щ я В ПІ и ІІ - КВ І КІТ пакт БІ -Е КЕ Пр т НІ МЕ 2 ; ж І ЕВ, АННИ иа я 11 Ж тя пий 12113 Бен ее пи: КЕ Кк яУж и ПЕК Я ; ОО НН пи МІХ кн 11 х. б й вве КК ММ ее юсккюс усьо КК оюсцрюсьсс КЕ АМ МКК Кв сюсснр ! 90 45 | 25 с упаттвттттуткі коду Концентрація |в КД У т ар Б тт, ті жк КЗ Заморожування ШІ ОМІХС 0 БЗЛіюфілізапія
Фіг. 14 ке дт вух: желв ях вик г КГ-15 титрування: БЕ М поро А А А те тт тет ЕЕЕ ЕЕ тЕ ЕЕ тет тест тек Нікітін нік ніна 800 : : З . ка 3 ї жк сл Н ї ї т ! ї : Тож км : ПЕКИ а ск ! мін Мити ЕЗ 5 В ефе тт тт и ККД иа дання яння ян тку уюючююєьхх -к х З Ки Я 4 ня ах 1 Ем З етики щ ся Бе шиККИ -ш Ко ЖК ж оо і Ен кет Кл Ел фиИ Киев їв з Кия фо д поря тт мк пос В петля ИЙ яд КІ МИХ Іф куту - ж еко Кир От тиме фею ин КІТ - ся Кох тт КТК З з Ка ди... ЕК 00000000. Е ДАН У дня 2 ! СН я Поуутке Кейн» ди ІІ КІТ ж ТЯ Кипиие Б І і ІВЖ 4 0 Й ре ЕІ Кер жк ке фе ІН о Ей мн ЗІ НІК сж КІТ ! їку ми ІТК ІККх ВН ох я пк: і п | КИЯН У пи Се М ЕНН ж ще й й и КК - вк кА М КА МВА юки ОА, й У є ї . ї Чо «8 23 Ко дехуеу, ; ї тож ще т. ря зх «о Ковпентрація : им Я с де ПО ЕК т тк в СЯ Заморожунання ОМА КЕ Пюдйилізанія
1-15 титрування: ПЕМЯ рення : 7 т ях де З й дно) иинмииииипипичиннимх міння Рош т Н сиру чи Мотя в що й жо | Ос с З пи ї МК Ж ІН ПИ п як 1 МІНІВ а ЕНН ие ях щі й ч ї 11 и и : Мт НІ дк Ж ша я НЕ І Ме ре Н ОЗ БІ2: пк ТІ Кутя м я ї пи ее ПО т ОБ НН я и 100А-255 с ме КСО ! ни 1 Квт КЕ вия як і ее пе КК е нн Во ни НН ше У Нр -к і КІ АЖ ке В ВЕНИ -е і о КІЗ КО НИ пеки о В Дн М ОК дннннарлннники НН пкт КК ДМ лллачяняяняя (ее т ї о що 45 25 Концентрація ТЯ Заморожування ЦЯ АЄ 0 КБУ Линбиваанія
Фіг. 16 Склади: лів ло МІХ С 1000 : 2 " - : в - Кз ' : шк ї ї с ; дача дл сля зілля ка : СА і ех С д оо З КК я щ ех се Ман Ка Я тб ноя ТТ Ки А; МО х Кая Ж КОНІ дж кит Ї що З ОН М СЕ т : а щ с КІН З І! поки В Гоян кА Кф ВТ й и ВІК ЕК ти ЗІ ІВ у ших ш ли Я 9 С - 200 о Пр ПИТ --к то ек Щ В БО пк ки щі пи З Ж ДК а ЕН : х СО жи ші НН С НІ КО ше 1 пл КУ Я ше НП мМ фосфату калію, 0 1і мМі фосфату калію. Р м фосфату калію, мг'члоахарозн, З мг/мл МЮ мг/млесахарозм, й 73 мгімлосахарозно 175 КМИН Я мгамлій змгімл ПН Кі мгбмлотрегалози, ЗО мі МаСі б мімл КАН Складн в я т стіхоттй ка ох КЕ Заморожування ШІ Ліюфілаания МС
Фіг. 17
Чотиривалентна логістична функція втрати я чи - черезі тиждень при 4 пе 5 ! - дО ей . що - Ж 07 ж ОВ шо ж і Коти тя попи : ко | 7 пит Стик п СЕ ДО бе КЕ одн Кс Я етотюмрттм Я ККмоитткртииь Я ИН Дн ВЕУ рЕМУЄ ВЕМУЗ ЕХУЯ Що ПеОотьИ
Фіг. 18А т сх Чотирнвалентна логістична бункнія втрати що через і тиждень пон С ВО ух ) ще п. Ук - о, фр и ККУ 5 й й ! и сої ой ки ті РЕМ ОЕМ ЕМО ДЕК Серотиг
Фіг. 188 т БЕМУІ логтетична функція втрати прин 2-8 - Ї к Д.Я пря ВЕ се б0003008000080001250015 В -в Часімісяції не
Фіг. 15А т ке БЕМУЗ логістична функція втрати прин 2-87 ЩО ях, Ф й о З б З т 15 Ме що Часіміяці
Фіг. 1965
UAA202004101A 2017-12-07 2018-12-03 Склад вакцинної композиції від вірусу денге UA129245C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762595842P 2017-12-07 2017-12-07
PCT/US2018/063541 WO2019112921A1 (en) 2017-12-07 2018-12-03 Formulations of dengue virus vaccine compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA129245C2 true UA129245C2 (uk) 2025-02-26

Family

ID=66750326

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202004101A UA129245C2 (uk) 2017-12-07 2018-12-03 Склад вакцинної композиції від вірусу денге

Country Status (26)

Country Link
US (3) US20200390877A1 (uk)
EP (1) EP3720487A4 (uk)
JP (1) JP7042341B2 (uk)
KR (1) KR102494651B1 (uk)
CN (2) CN117752780A (uk)
AU (1) AU2018381213B2 (uk)
BR (1) BR112020011205A8 (uk)
CA (1) CA3083772A1 (uk)
CL (1) CL2020001463A1 (uk)
CO (1) CO2020006836A2 (uk)
CR (1) CR20200242A (uk)
DO (1) DOP2020000098A (uk)
EA (1) EA202091398A1 (uk)
EC (1) ECSP20032084A (uk)
GE (2) GEAP202315384A (uk)
IL (2) IL274897B2 (uk)
JO (2) JOP20200140B1 (uk)
MA (1) MA51060A (uk)
MX (1) MX2020005857A (uk)
NI (1) NI202000039A (uk)
PE (1) PE20210654A1 (uk)
PH (1) PH12020550734A1 (uk)
SG (1) SG11202005251VA (uk)
UA (1) UA129245C2 (uk)
WO (1) WO2019112921A1 (uk)
ZA (2) ZA202002999B (uk)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019112921A1 (en) 2017-12-07 2019-06-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of dengue virus vaccine compositions
WO2022094816A1 (en) * 2020-11-04 2022-05-12 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Solid formulation
EP4419205A4 (en) * 2021-10-20 2025-06-11 Solventum Intellectual Properties Company COMPOSITIONS CONTAINING PHOSPHATE AND ARGININE AND THEIR ADMINISTRATION FOR SUPPRESSION OF VIRULENCE
JP2025534345A (ja) * 2022-09-29 2025-10-15 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 核酸および他の分子の移送、保管および送達のための方法および組成物
EP4356925B1 (en) 2022-10-18 2025-09-10 Takeda Vaccines, Inc. Dengue vaccine formulation
WO2024118542A1 (en) 2022-11-28 2024-06-06 Takeda Vaccines, Inc. A method for the quantitative determination of human serum albumin monomer in virus-containing pharmaceutical compositions
WO2024236132A1 (en) * 2023-05-17 2024-11-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Formulations to stabilize virus-based therapeutics
WO2024236136A1 (en) * 2023-05-17 2024-11-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Formulations to stabilize virus-based therapeutics
WO2025027616A1 (en) * 2023-08-01 2025-02-06 Serum Institute Of India Private Limited Freeze-dried viral vaccine compositions and method of manufacturing thereof
WO2025132735A1 (en) * 2023-12-20 2025-06-26 Intervet International B.V. A freeze-dried composition containing live attenuated pathogens, a process for preparing a freeze-dried composition, a vaccine, and a method of vaccinating a host animal
CN118853589B (zh) * 2024-07-03 2025-04-01 中国科学院武汉病毒研究所 一种黄热病毒疫苗株3’utr缺失突变体的拯救及在制备减毒活疫苗中的应用
WO2026077983A1 (en) * 2024-10-08 2026-04-16 Sanofi R&D Vaccins Compositions and methods for stabilizing live-attenuated flaviviruses

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1018556B1 (en) 1991-09-19 2005-11-23 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the Secretary of the Department of HEALTH AND HUMAN SERVICES Chimeric and/or growth-restricted flaviviruses
FR2702660B1 (fr) * 1993-03-17 1995-05-24 Karl Simpson Compositions thérapeutiques stabilisées et leur procédé de préparation.
US6254873B1 (en) 1995-04-17 2001-07-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Inactivated dengue virus vaccine
US6190859B1 (en) 1995-04-17 2001-02-20 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Method and kit for detection of dengue virus
US6432411B1 (en) 1999-07-13 2002-08-13 Hawaii Biotechnology Group Recombinant envelope vaccine against flavivirus infection
US20030180352A1 (en) * 1999-11-23 2003-09-25 Patel Mahesh V. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
CA2966716C (en) 2001-05-22 2019-11-26 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Cretary, Department Of Health And Human Services Development of mutations useful for attenuating dengue viruses and chimeric dengue viruses
US7476390B2 (en) * 2002-02-26 2009-01-13 Maxygen, Inc. Flavivirus antigens
MXPA04009394A (es) * 2002-03-26 2005-01-25 Inmunex Corp Metodos para utilizar ligando flt3 en procedimientos de inmunizacion.
ATE481982T1 (de) 2002-05-03 2010-10-15 Us Gov Health & Human Serv Dengue-vakzine mit einer gemeinsamen 30 nukleotid-deletion im 3'-utr der dengue-typen 1 und 2.
US20050123550A1 (en) * 2003-05-12 2005-06-09 Laurent Philippe E. Molecules enhancing dermal delivery of influenza vaccines
US20060177468A1 (en) 2005-01-05 2006-08-10 Philadelphia Health and Education Corporation (d/b/a Drexel University College of Medicine Delivery vehicles, bioactive substances and viral vaccines
CA2612047C (en) 2005-06-24 2015-05-12 Intervet International B.V. Inactivated chimeric vaccines and related methods of use
AU2006299310A1 (en) 2005-10-04 2007-04-12 Alk-Abello A/S Solid vaccine formulation
BRPI0616879A2 (pt) * 2005-10-04 2011-07-05 Alk Abello As formulação de vacina sólida
PL2589602T3 (pl) 2006-08-15 2016-11-30 Rozwinięcie komponentów szczepionki przeciwko wirusowi dengi
US20080275030A1 (en) * 2007-01-19 2008-11-06 Sveinbjorn Gizurarson Methods and Compositions for the Delivery of a Therapeutic Agent
WO2009014774A1 (en) 2007-04-06 2009-01-29 Inviragen, Inc. Methods and compositions for live attenuated viruses
EP2143440A1 (fr) * 2008-07-09 2010-01-13 Sanofi Pasteur Agent stabilisant et composition vaccinale comprenant un ou plusieurs flavivirus vivants atténués
US8785173B2 (en) * 2008-09-24 2014-07-22 Medimmune, Llc Methods for purification of viruses
WO2010037402A1 (en) 2008-10-02 2010-04-08 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
RU2012140691A (ru) 2009-03-13 2014-03-27 Лентиген Корпорейшен Вакцины на основе неинтегрирующегося ретровирусного вектора
GB201002419D0 (en) * 2010-02-12 2010-03-31 Isis Innovation Stable live vaccine formulations
AU2011367817B2 (en) 2010-10-29 2015-05-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Recombinant subunit dengue virus vaccine
EP2714076A1 (en) 2011-05-26 2014-04-09 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Inactivated dengue virus vaccine
ES2729967T3 (es) 2012-02-07 2019-11-07 Infectious Disease Res Inst Formulaciones de adyuvante mejoradas que comprenden agonistas de TLR4 y métodos para usar las mismas
US9314519B2 (en) * 2012-08-21 2016-04-19 Intervet Inc. Liquid stable virus vaccines
US9974850B2 (en) * 2013-01-25 2018-05-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunogenic compositions and uses thereof
US9254332B2 (en) * 2013-03-15 2016-02-09 Arecor Limited Stable aqueous formulations of adenovirus vectors
JP2016523251A (ja) 2013-06-21 2016-08-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． デングウイルスワクチン組成物およびその使用方法
EP3057612B1 (en) 2013-10-16 2020-05-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Method of obtaining thermostable dried vaccine formulations
CN105636609A (zh) 2013-10-25 2016-06-01 白血球保健股份有限公司 一种新颖的生产稳定疫苗的方法
US20160310412A1 (en) 2013-12-16 2016-10-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Microneedle
IL310015B2 (en) * 2013-12-31 2026-02-01 Access To Advanced Health Inst Single vial formulation
WO2015130157A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Universiti Malaya Enhancement of dengue virus production
ES2981476T3 (es) 2014-12-22 2024-10-09 Merck Sharp & Dohme Llc Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas
CN107949636B (zh) * 2015-06-04 2021-11-09 香港大学 活减毒病毒以及生产和使用方法
US20180296663A1 (en) * 2015-06-17 2018-10-18 Curevac Ag Vaccine composition
US10004795B2 (en) 2015-09-08 2018-06-26 Fundacao Butantan Process for preparing an attenuated tetravalent dengue vaccine
WO2017056101A1 (en) * 2015-09-30 2017-04-06 Panacea Biotec Limited Stable live attenuated recombinant dengue vaccine
BE1024160B9 (fr) 2015-12-22 2017-12-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Formulation immunogène
WO2017165736A1 (en) 2016-03-25 2017-09-28 Visterra, Inc. Formulation of antibody molecules to dengue virus
JP2019511533A (ja) * 2016-04-13 2019-04-25 タケダ ワクチン, インコーポレイテッドTakeda Vaccines, Inc. 小児及び若年成人のデングウイルスに対するワクチンの組成物及び方法
JPWO2017179726A1 (ja) * 2016-04-15 2019-05-23 国立大学法人大阪大学 中和抗体を誘導するが感染増強抗体の誘導を抑制するデングワクチン抗原
TW202309276A (zh) 2016-08-03 2023-03-01 美商武田疫苗股份有限公司 用於與經改良之調配物一起穩定黃病毒的組成物及方法
US20190275136A1 (en) 2016-09-19 2019-09-12 Vaxess Technologies, Inc. Vaccine formulations with increased stability
WO2018183429A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Addition of nucleases directly to cell culture to facilitate digestion and clearance of host cell nucleic acids
MY209364A (en) 2017-10-16 2025-07-03 Serum Institute Of India Pvt Ltd Stable vaccine compositions comprising inter alia live attenuated recombinant flavivirus and process for preparation thereof
WO2019112921A1 (en) 2017-12-07 2019-06-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of dengue virus vaccine compositions

Also Published As

Publication number Publication date
BR112020011205A2 (pt) 2020-11-17
US11883480B2 (en) 2024-01-30
SG11202005251VA (en) 2020-07-29
EA202091398A1 (ru) 2020-09-01
AU2018381213A1 (en) 2020-06-11
NI202000039A (es) 2020-09-24
WO2019112921A1 (en) 2019-06-13
ZA202002999B (en) 2026-01-28
ZA202407615B (en) 2025-04-30
US20200390877A1 (en) 2020-12-17
AU2018381213B2 (en) 2022-03-17
US12208135B2 (en) 2025-01-28
ECSP20032084A (es) 2020-08-31
KR20200096272A (ko) 2020-08-11
JOP20250145A1 (ar) 2025-06-18
JOP20200140B1 (ar) 2025-10-01
CO2020006836A2 (es) 2020-06-19
US20230061673A1 (en) 2023-03-02
CR20200242A (es) 2020-07-17
DOP2020000098A (es) 2020-08-31
IL316312A (en) 2024-12-01
MA51060A (fr) 2021-03-17
US20240131144A1 (en) 2024-04-25
JP7042341B2 (ja) 2022-03-25
PH12020550734A1 (en) 2021-04-19
JOP20200140A1 (ar) 2022-10-30
PE20210654A1 (es) 2021-03-31
EP3720487A4 (en) 2026-01-14
IL274897B1 (en) 2024-11-01
GEP20237539B (en) 2023-09-11
MX2020005857A (es) 2020-09-09
KR102494651B1 (ko) 2023-01-31
IL274897B2 (en) 2025-03-01
CN117752780A (zh) 2024-03-26
EP3720487A1 (en) 2020-10-14
BR112020011205A8 (pt) 2023-02-07
GEAP202315384A (en) 2023-05-25
CN111447947B (zh) 2024-01-12
CA3083772A1 (en) 2019-06-13
IL274897A (en) 2020-07-30
CL2020001463A1 (es) 2020-09-25
JP2021505588A (ja) 2021-02-18
CN111447947A (zh) 2020-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA129245C2 (uk) Склад вакцинної композиції від вірусу денге
DK2552465T3 (en) Stabilization of virus particles
US20230277654A1 (en) Stable formulations of cytomegalovirus
BRPI0614265A2 (pt) uso de uma vacina do vìrus da febre amarela e de uma vacina de flavivìrus quimérico e kit contendo referidas vacinas
CN105246506A (zh) 登革病毒疫苗组合物及其使用方法
EP3236997B1 (en) Dengue virus vaccine compositions and methods of use thereof
US12605437B2 (en) Single shot Chikungunya virus vaccine
JP6426695B2 (ja) 弱毒生アルファウイルス製剤のための組成物および方法
JP7612138B2 (ja) フラビウイルス属ウイルスの弱毒化ウイルス及びその使用
EA041699B1 (ru) Составы вакцинных композиций от вируса денге
WO2026052881A1 (en) Chikungunya virus vaccine multidose formulation and use thereof in outbreaks
AU2011234269B2 (en) Stabilisation of viral particles