UA73276C2 - A humanized antiboby being specifically bonded to the protein of alpha-activation of fibroplasts (fap?). - Google Patents

Description

Опис винаходу

Даний винахід стосується протеїнів антитіл, що специфічно зв'язують протеїн альфа активації фібробласта 2 (ЕАРо). Крім того, цей винахід стосується застосування цих антитіл із діагностичними й терапевтичними цілями, а також способів одержання антитіл.

Інвазійний ріст злоякісних пухлин епітеліальної тканини є пов'язаним із цілим рядом характерними змін у підтримуючій стромі на клітинному и молекулярному рівнях. Найбільш постійною ознакою на молекулярному рівні реактивної строми в більшості випадків злоякісних пухлин епітеліальної тканини є індукція протеїну альфа активації фібробласта (далі ГАР), молекули клітинної поверхні реактивних фібробластів строми, які було ідентифіковано з використанням моноклонального антитіла Е19 |Сагіп-Спеза Р., СІЯ 3.0). ії Кейід МУ... "СеїЇ зипПасе діусоргоївіп ої огеасіїме вігота! бргоріазів аз а роїепів! апіроду агдеї іп Ппитап еріїнеїіа! сапсегв", Ргос. Май. Асад. Зсі. 87: 7235 (1990)). Виходячи з того, що антиген ЕАР вибірково експресується в стромі цілого ряду епітеліальних карцином незалежно від їхньої локалізації і гістологічного типу, було вирішено розробити концепцію візуалізації, діагностики й лікування злоякісних пухлин епітеліальної тканини й деяких інших хвороб, яка б використовувалася у функції мішені БАР. З цією метою було створено моноклональне антитіло, що специфічно зв'язувалося з ЕАР, позначене як Е19 і описане в патентах ОБ 5059523 і

МО 93/05804, зміст яких у повному обсязі включено в даний опис як посилання.

Одна з серйозних проблем, що виникають при застосуванні іп мімо на людях антитіл, одержаних із джерел, 70 які відрізняються від організму людини, полягає в тому, що при цьому в людини майже відразу виробляється людське антитіло до такого нелюдського, що знижує ефективність антитіла в організмі пацієнтів й улоеможливлює тривале введення. Гуманізацію (перетворення на людську форму) нелюдських антитіл, як правило, можна здійснити одним із двох методів: (1) шляхом конструювання нелюдських/людських химерних антитіл, коли варіабельні ділянки нелюдського антитіла зв'язуються з константними ділянками людського антитіла (ІВоціаппе с б... Ногиті М. і 5пйцітап М.). "Ргодисіоп ої Типсіопа! спітегіс тоизе/литап апіїроду" Майте 312: 643 Ге) (1984)) або (2) шляхом трансплантації гіперваріабельних зон (СОК) з нелюдських варіабельних ділянок у людські варіабельні ділянки й наступного сполучання цих "перетворених людських" варіабельних ділянок із людськими константними ділянками |Кіесптапп Ї., Сіагк М., МУаідтапп Н. і МУіпіег б. "Кезпаріпд питап апііроду ог

Іпегару", Маїшге 332: 323 (1988)). Химерні антитіла, незважаючи на те, що їхня активність значно перевищує ї-оі таку мишачих, можуть викликати в людини реакцію на мишаче антитіло |(ГоВиді А.Р., МУ/пееіег К.Н., Тгапд 9уУ., |їч-ш

Наупез А. Кодеге К., Нагмеу Е.В., Зцп Ї., СПгауер 9. і Кпагаєїї М.В. "Моизе/питап спітегіс топосіопаї! апіроду іп тап: Кіпейсв апа іттипе гезропве. Ргос. Май. Асай. 5сі. 86: 4220 (1989)). Людські антитіла з сч трансплантованими СОК або "перетворені людські" антитіла містять лише невелику частину або взагалі не со містять послідовностей протеїну, які можна було б ідентифікувати як антитіла, що походять із миші. Незважаючи 32 не те, що гуманізоване (перетворене на людську форму) шляхом трансплантації СОК антитіло може викликати ті т чи інші імунні реакції, такі, як антиалотипічна або антиідіотипічна, які так само можна виявити навіть при застосуванні природних людських антитіл, антитіло з трансплантованими СОК повинно бути в значній мірі менш імуногенним ніж мишаче антитіло, що дасть змогу здійснювати пролонговане лікування пацієнта. «

Іншою проблемою, що виникає при комерційному застосуванні антитіл для діагностики, візуалізації і З7З 10 терапії, є необхідність їхнього добування у великих кількостях. У багатьох випадках рекомбінантна експресія с природного, химерного антитіла і/або антитіла з трансплантованими СОК у системах для культивування клітин є "з дуже низькою. Фактори, що зумовлюють низьку продуктивність, можуть залежати від вибору лідерних послідовностей і клітин-хазяїв для виробництва, а також від невідповідної складчастості ланцюга протеїну й зниженої секреції. Невідповідна складчастість може призвести до поганого збирання важких і легких ланцюгів 75 або транспорту некомпетентної конформації, що перешкоджає секреції одного або обох ланцюгів. У цілому, і вважається, що І -ланцюг відповідає за здатність до секреції зібраного протеїну. У деяких випадках, здійснивши о кілька або навіть лише одну заміну, можна досягти підвищення продуктивності антитіл.

Внаслідок важливої ролі, яку з клінічного погляду відіграють використовувані для діагностики й терапії о конкретних хвороб людини антигени зі специфічною імунологічною спрямованістю іп міго і іп мімо, постійно -І 50 зростає потреба в антитілах, що поєднали б у собі такі особливості, як специфічність у відношенні до

Ф антигенів, низька імуногенність і підвищена продуктивність.

Отже, основною метою даного винаходу є розроблення протеїнів антитіла, що поєднали б такі властивості, як специфічність зв'язування з РАР, низька імуногенність у відношенні до людини й підвищена продуктивність у рекомбінантних системах. 59 Вищенаведена технічна проблема вирішується застосуванням варіантів здійснення даного винаходу,

ГФ) наведених у формулі винаходу. т Даний винахід стосується протеїнів антитіла, що мають гіперваріабельні ділянки моноклонального антитіла

Е19 (АТСС реєстраційний номер НВ 8269), причому протеїни антитіла специфічно зв'язуються з протеїном активації фібробласта, які відрізняються тим, що вони мають модифікації каркасної ділянки, які забезпечують 60 підвищення продуктивності в клітинах-хазяях у порівнянні з химерним антитілом, що включає варіабельні ділянки

Е19 і сторонні константні ділянки.

У контексті даного опису терміносполучення "протеїн антитіла" означає протеїн, що володіє специфічністю моноклонального антитіла у відношенні до зв'язування антигену.

Терміносполучення "гіперваріабельні ділянки моноклонального антитіла" означає амінокислотні бо послідовності, що беруть участь у специфічному зв'язуванні антигену за Кебатом |Кабраї Е.А.т УУи Т.Т., Репу

Н.М., Сойеазтап К.5. і РоеМег С. "Зедцепсевз ої Ргоївіпв ої Іттипоіодіса! Іпіегевї" (5--е видання) МІН

Рибіїсайоп о Мо91-3242. И.5. Юерапйтепі ої Неакф апа Нитап Зегмісе5, Рибііс Неакй бЗегмісе, МаїйопаїЇ

Іпзійшез ої Неа, Веїпезаа, МО, (1991)), а також Споїпіа і І езК (Споїніа і І езК 9.Мої. Вісі. 196: 901-917(1987)).

У контексті даного опису терміносполучення "модифікації каркасної ділянки" означає зміну, делецию або додавання однієї або кількох амінокислот до варіабельних ділянок, що оточують окремі гіперваріабельні ділянки. Модифікації каркасної ділянки можуть діяти на імуногенність, продуктивність або специфічність зв'язування протеїну антитіла.

Терміносполучення "протеїн активації фібробласта (ГАР)", що також позначається як протеїн альфа активації 7/0 Фібробласта (ГАРо), являє собою зв'язаний з мембраною пгікопротеїн, який належить до сімейства серинпротеаз (МУО 97/34927). Ні про БАР, що виділяється, ні про такий, що секретується, немає ніякої інформації. РГАР можна охарактеризувати, якщо зв'язати його з моноклональним антитілом Е19 (Е19 можна добути з лінії клітин гібридоми під реєстраційним номером НВ 8269, депонованої в АТСС).

Термінсполучення "специфічне зв'язування протеїну активації фібробласта" протеїном антитіла в контексті 7/5 даного опису відноситься до його здатності специфічно розпізнавати й зв'язувати людські клітини, що експресують ЕАР. Специфічність зв'язування протеїнів за даним винаходом можна визначити стандартними методами оцінки специфічності зв'язування, наприклад, такими, описаними з ілюстративними цілями в прикладах 6, 8 і 12.

Терміносполучення "химерне антитіло" означає протеїн антитіла, що має варіабельні ділянки легкого й важкого ланцюгів, такі, як наведені на мал.17 і 18, а також сторонні константні ділянки. "Сторонні константні ділянки" в контексті даного опису означають константні ділянки, відмінні від константних ділянок Е19. При порівнянні протеїну антитіла за даним винаходом із химерним антитілом буде очевидним, що останнє повинне містити такі самі константні ділянки, що і протеїн антитіла. Винятково з метою демонстрації і порівняння як приклад використовували людську константну ділянки важкого й легкого ланцюгів, наведену на мал.19-22. с

З метою створення протеїнів антитіла за даним винаходом на базі РНК, екстрагованої з клітин лінії гібридоми Е19 (реєстраційний номер АТСС НВ 8269), було визначено нуклеотидні послідовності генів важкого й о легкого ланцюгів мишачого антитіла, що експресують Е19.

В одному з варіантів здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, що має гіперваріабельні ділянки моноклонального антитіла Е19 (реєстраційний номер АТСС НВ 8269), причому ці нові протеїни антитіла «о зо специфічно зв'язуються з протеїном активації фібробласта (ЕГАР) і відрізняються тим, що мають модифікації каркасної ділянки, які дають змогу досягти підвищеної продуктивності в клітинах-хазяях у порівнянні з - химерним антитілом, що включає варіабельні ділянки Е19 і сторонні константні ділянки, причому цей протеїн Га антитіла добувають із мишачого антитіла, позначеного Е19 (реєстраційний номер АТСС НВ 8269).

З метою одержання гуманізованих ЕАР-специфічних протеїнів антитіла конструювали химерне антитіло, що і.

Зз5 мало варіабельні ділянки легкого й важкого ланцюгів Е19 і, відповідно, людські константні ділянки легкого й ї- важкого ланцюгів. Конструювання й виробництво химерних мишачих/людських антитіл, що з метою ілюстрації наведено в прикладах 1 і 2, є добре відомими процесами (Воцііаппе та ін. (1984), див. вище).

Варіабельні ділянки протеїнів антитіла за даним винаходом, як правило, зв'язуються принаймні з частиною константної ділянки імуноглобуліну (Ес), зазвичай, людського. Послідовності ДНК людської константної ділянки «

Виділяються добре відомими методами з різноманітних людських клітин, але, насамперед, із імморталізованих шщ с В-югітин |див. Кабаї та ін., вище й УУО 87/02671). Отже, протеїни антитіла за даним винаходом можуть містити й всю константну ділянку або тільки її частину за умови, що вони будуть специфічно зв'язуватися з антигеном «» ЕАР. Вибір типу й довжини константної ділянки залежить від того, чи переслідується наявність ефекторних функцій типу фіксації комплементу або залежної від антитіла цитотоксичності, а також від необхідних фармакологічних властивостей протеїну антитіла. Протеїн антитіла за даним винаходом може являти собою -І тетрамер, що складається з двох пар легкий ланцюг/важкий ланцюг, або димер, тобто складатися з пари легкий ланцюг/важкий ланцюг, наприклад, Рар- або Ем-фрагмент. о Отже, ще одним об'єктом даного винаходу є протеши антитіла, які відрізняються тим, що вони мають ко варіабельну ділянку легкого ланцюга й варіабельну ділянку важкого ланцюга, кожна з яких з'єднується з 5р людською константною ділянкою. Зокрема, варіабельна ділянка легкого ланцюга з'єднується з людською і каппа-константною ділянкою (константна ділянка каппа-ланцюга) й варіабельна ділянка важкого ланцюга - з

Ф людською гамма-1-константною ділянкою (константна ділянка гамма-1-ланцюга). Фахівцям також відомо про інші людські константні ділянки, придатні для гуманізації легкого й важкого ланцюгів.

Таким чином, в одному з варіантів протеїни антитіла за даним винаходом містять людську каппа-константну

Ділянку.

У наступному варіанті здійснення даного винаходу протеїни антитіла за даним винаходом містять людську іФ) гамма-1-константну ділянку. ко Конкретний протеїн "химерного антитіла Е19" (сЕ19) складається з варіабельних і константних ділянок важкого й легкого ланцюгів, наведених на мал.17-22. сСЕ19 виявляє специфічність зв'язування й високий авідитет бо до антигену ГАР. Як продемонстровано в прикладові 2, експресія сЕ19 у СОЗ-клітинах (добутих із нирки африканської зеленої мавпи) є невисокої і становить від приблизно 10 до бОонг/мл, що принаймні в 10 разів нижче ніж у більшості антитіл.

Щоб спробувати підвищити рівень експресії сЕ19, лідерну послідовність Мі -ділянки Е19 модифікували, замінивши пролін на лейцин у положенні -9. Ця заміна амінокислоти в лідерній послідовності дала змогу 65 принаймні в 2 рази збільшити кількість химерного антитіла, що продукується в СОз-клітинах. З метою експресії цього конкретного химерного антитіла в СО5Б-клітинах використовували таку мутантну лідерну послідовність легкого ланцюга:

МОБОАОМІ МІ ГІ УУУЗОТоОо і таку лідерну послідовність важкого ланцюга:

МОУУБУУМРІ РЕГІ ЗОТАСМІ 5.

За даним винаходом терміносполучення "підвищена продуктивність" у клітинах-хазяях відноситься до значного підвищення рівня експресії і/або виходу очищеного антитіла в порівнянні з рівнем експресії і/або виходом очищеного химерного антитіла, що не має вищенаведених модифікацій каркасної ділянки. Двома конкретними прикладами, що демонструють підвищення продуктивності, не обмежуючи обсягу даного винаходу, 7/0 є підвищення продуктивності в системі експресії СО5-клітин (приклади 2 і 5) і в системі експресії СНО-клетин (приклади 10 і 11).

Мутація лідерної послідовності уможливлює лише двократне підвищення рівня експресії химерного антитіла

Е19, тоді як значне підвищення за даним винаходом означає підвищення рівня експресії і/або виходу очищеного антитіла принаймні в 10 разів.

У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняється тим, що їхні рівні експресії в неочищених зразках середовищ, визначені за допомогою ЕЇ ІЗА і/або за виходом очищених антитіл, перевищують рівень експресії і/або вихід очищених химерних антитіл, що не мають модифікацію каркасної ділянки, принаймні в 10 разів.

У ще кращому варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що їхні рівні експресії в неочищених зразках середовищ, визначені за допомогою ЕГІЗА і/або за виходом очищених антитіл, перевищують рівень експресії і/або вихід очищених химерних антитіл, що не мають модифікації каркасної ділянки, принаймні в 20 разів.

В оптимальному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що їхні рівні експресії в неочищених зразках середовищ, визначені за допомогою ЕЇ ІЗА і/або за виходом очищених сч об антитіл, перевищують рівень експресії іМабо вихід очищених химерних антитіл, що не мають модифікації каркасної ділянки, принаймні в 100 разів. і)

Підвищену продуктивність рекомбінантних протеїнів за даним винаходом можна продемонструвати на прикладі еукаріотних клітин, зокрема, еукаріотних клітин СО і СНО (клітини яєчника китайського хом'ячка) (див. приклади 5 і 11). Ге зо У наступному варіанті здійснення даний винахід стосується рекомбінантних протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що вони характеризуються підвищеною продуктивністю в еукаріотних клітинах. -

У бажаному варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що еукаріотна с клітина являє собою клітину яєчника китайського хом'ячка (СНО-клітину).

Під час створення даного винаходу цілком несподівано було встановлено, що певні модифікації каркасної ме)

Зв ЗОНИ варіабельних ділянок легкого ланцюга зумовлюють підвищену продуктивність протеїнів антитіла за даним ї- винаходом. Було добуто три версії перетворених варіабельних ділянок легкого ланцюга, позначені як версії А, В і С і наведені на мал.1-6.

У версіях А, В і С варіабельних ділянок легкого ланцюга було виявлено істотно підвищену продуктивність у

СНо-клітинах (див. приклад 11). Незважаючи на те, що версії А і С варіабельних ділянок легкого ланцюга « відрізняються від версії В варіабельної ділянки лише двома загальними амінокислотними залишками, для них є з с характерним ще істотніше підвищення продуктивності. Існує принаймні ще 10-кратне розходження за рівнями секреції антитіла між версією В перетвореного людського легкого ланцюга Е19 і версіями А або С. Амінокислотні з послідовності версій А і В перетвореного людського легкого ланцюга Е19 відрізняються одна від одної лише двома залишками в положеннях 36 (заміна Туг на Ре) і 87 (заміна Туг на Авр) (номенклатура за Кебатом). Ця

Негативна дія на секреторну здатність антитіл з умістом версії В варіабельної ділянки легкого ланцюга буде -І непрямою, якщо в результаті замін Туг на Авзр і Туг на РіПе, як окремих, так і в комбінаціях, утвориться неправильна складчастість протеїну. Проте, це припущення є малоймовірним, оскільки експерименти зі о зв'язування антигену показали, що імуноглобуліни з умістом версії В легкого ланцюга Е19 мають такий самий ко авідитет, що й версії А і С легкого ланцюга Е19, а це дозволяє припустити, що вони не можуть мати значні порушення складчастості.

Ш- Залишок 87 у версії В перетвореного людського легкого ланцюга Е19, імовірно, відповідає за зменшення

Ф секреції в порівнянні з версіями А і С.

У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, в яких амінокислота в положенні 87 за Кебатом ділянки легкого ланцюга не являє собою аспарагін.

У ще бажанішому варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла, в яких амінокислота в положенні 87 за Кебатом ділянки легкого ланцюга належить до ароматичних або аліфатичних амінокислот.

Ф) У ще бажанішому варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, в яких амінокислота в ка положенні 87 за Кебатом ділянки легкого ланцюга являє собою тирозин або фенілаланін.

У наступному варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла, в яких амінокислота в положенні 36 за бор / Кебатом ділянки легкого ланцюга належить до ароматичних амінокислот.

У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується специфічних протеїнів антитіла, які одержуються з описаних нарізно перетворених варіабельних ділянок легкого й важкого ланцюгів.

З метою здійснення даного винаходу оптимальними є версії А і С варіабельної ділянки легкого ланцюга, що зумовлюється їхньою дуже високою продуктивністю при повному зберіганні специфічності ЕАР-зв'язку й низької 65 імуногенності. Ці параметри є особливо важливими при порівнянні з химерним антитілом, що має варіабельні ділянки Е19 і такі самі константні ділянки, а також при порівнянні з версією В легкого ланцюга.

Отже, за одним із варіантів здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла з умістом варіабельної ділянки легкого ланцюга, наведеної в ЗЕО ІЮ МО:2.

У наступному варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що варіабельна ділянка легкого ланцюга кодується нуклеотидною послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО:1.

У ще одному з варіантів даний винахід стосується протеїнів антитіла з умістом варіабельної ділянки легкого ланцюга, наведеної в ЗЕО ІЮ МО:6.

У наступному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що варіабельна ділянка легкого ланцюга кодується нуклеотидною послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:5. 70 У даному винаході також описано кілька різноманітних варіабельних ділянок важкого ланцюга, що набувають максимальної продуктивності у сполученні з версіями А і С варіабельної ділянки легкого ланцюга.

В одному з варіантів здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла з умістом варіабельної ділянки важкого ланцюга, яка відповідає будь-якій з послідовностей, наведених у ЗЕО ІЮ МО:8, 10, 12, 14.

У наступному варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що варіабельна ділянка важкого ланцюга кодується нуклеотидною послідовністю, яка відповідає будь-якій з послідовностей, наведених у ЗЕО ІЮО МО:7, 9, 11, 13.

У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла з умістом варіабельної ділянки легкого ланцюга, наведеної в ЗЕО ІЮ МО:2, і варіабельної ділянки важкого ланцюга, представленої в ЗЕО ІЮ

МО:12. Буде оптимальним, якщо цей протеїн антитіла додатково міститиме константну ділянку легкого ланцюга, 2о наведену в ЗЕС ІЮ МО:20, і константну ділянку важкого ланцюга, представлену в ЗЕО ІЮ МО:22.

Отже, ще одним об'єктом даного винаходу є протеїн антитіла з умістом амінокислотної послідовності, наведеної в ЗЕО І МО:2. У бажаному варіанті цей протеїн антитіла додатково містить амінокислотну послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ МО:12. Ще бажаніше, якщо цей протеїн антитіла крім того міститиме амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО:20, і амінокислотну послідовність, наведену в ЗЕО ІЮ с 2в МО:22. Наступним об'єктом даного винаходу є описаний у цьому розділі протеїн антитіла, кон'югований з радіоактивним ізотопом, бажано з 731, 125), 186Ке, 188Ке або 929у, Ще одним об'єктом даного винаходу є молекула о

ДНК, що кодує протеїн антитіла, описаний у цьому розділі. Наступним об'єктом даного винаходу є клітина-хазяїн, що несе таку молекулу ДНК. Крім того, об'єктом даного винаходу є описаний у цьому розділі спосіб одержання протеїну антитіла, що полягає в культивуванні такої клітини-хазяїна в умовах, коли протеїн (Те) антитіла експресується клітиною-хазяїном, і виділенні протеїну. Ще одним об'єктом даного винаходу є фармацевтична композиція, що включає протеїн антитіла за даним винаходом і фармацевтичне придатний - носій. У наступному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, Ге що варіабельна ділянка легкого ланцюга кодується нуклеотидною послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО, а варіабельна ділянка важкого ланцюга - нуклеотидною послідовністю, наведеною в ЗЕО ІЮ МО:11. і.

В оптимальному варіанті даний винахід стосується протеїнів антитіла з умістом варіабельної ділянки - легкого ланцюга, наведеної у ЗЕО ІЮО МО:2, і варіабельної ділянки важкого ланцюга, представленої в ЗЕО ІЮ

МО:8.

У ще одному з варіантів здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що « варіабельна ділянка легкого ланцюга кодується нуклеотидною послідовністю, наведеною в 5ЕО ІЮ МО-1, а 70 варіабельна ділянка важкого ланцюга - нуклеотидною послідовністю, представленою в ЗЕО ІЮ МО:7. 8 с Гуманізація варіабельної ділянки мишачого антитіла здійснюється добре відомими в даній галузі методами. В ц ЕР 0239400 описано трансплантацію СОК варіабельної ділянки миші в каркасну ділянку людської варіабельної "» зони. У МО 90/07861 наведено способи перетворення трансплантованого СОК варіабельної ділянки шляхом інтродукції додаткових модифікацій каркасної ділянки. У МУУО 92/11018 описано способи одержання

Ггуманізованого Їд шляхом об'єднання СОК-донорів із каркасною ділянкою акцептора, що має високий рівень -І гомології з каркасною ділянкою донора. У УМО 92/05274 описано одержання каркасної ділянки мутантних антитіл із використанням у функції вихідного мишачого антитіла. Крім того, гуманізацію мишачих моноклональних антитіл о описано в ЕР 0368684, ЕР 0438310, МО 92/07075 і МО 92/22653. Отже, фахівець у даній галузі може одержати ко антитіла за даним винаходом, використовуючи у функції вихідного відоме з літератури мишаче моноклональне антитіло Е19 і застосовуючи методи, відомі в даній галузі, наприклад, такі, описані в МО 92/05247. Молекули

Ше ДНК, що кодують протеїни антитіла за даним винаходом, так само можна добути з використанням відомих у

ФО даній галузі методів синтезу, наприклад, за допомогою хімічного синтезу відповідних олігонуклеотидів і наступних легування й ампліфікації (див., наприклад, ЕгапкК та ін., Меїййодз Епгутої. 154: 221-249(1987)|.

Ще одним об'єктом даного винаходу є молекули нуклеїнової кислоти з умістом кодувальної інформацію для вищенаведених протеїнів антитіла за даним винаходом. У бажаному варіанті молекула нуклеїнової кислоти за даним винаходом являє собою таку з умістом нуклеотиднуї послідовності, наведеної в ХЕО ІЮ МО, З, 5, 7, 9, о 11, 13 або 15. ко Наступним об'єктом даного винаходу є вектор з умістом рекомбінантної ДНК, який несе нуклеотидну послідовність будь-якої зі згаданих нуклеїнових кислот, причому є бажаним, щоб ця нуклеотидна послідовність бо була функціонально зв'язаною з послідовністю, що контролює експресію, як це відбувається в експресійних векторах. У бажаному варіанті це буде експресійний вектор з умістом рекомбінантної ДНК.

Ще одним об'єктом даного винаходу є клітина-хазяїн, що несе вищенаведений, у бажаному варіанті експресійний, вектор. Функцію такої клітини-хазяїна може виконувати прокаріотна або еукаріотна клітина. У бажаному варіанті така клітина-хазяїн являє собою еукаріотну клітину, дріжджову клітину або клітину ссавця. 65 Ще бажаніше, якщо вона буде СНО-клетиною (клітиною яєчника китайського хом'ячка) або СО5-клітиною.

Отже, наступним об'єктом даного винаходу є спосіб одержання протеїнів антитіла за даним винаходом. Такий спосіб включає стадії: (а) культивування згаданої клітини-хазяїна в умовах, коли протеїн антитіла експресується клітиною-хазяїном, і (б) виділення протеїну антитіла.

Бажано використовувати клітини-хазяї, що являють собою клітини ссавця, насамперед, СНО- або

СбоО5-клітини. Клітини-хазяї для одержання протеїнів антитіла за даним винаходом трансфікуються одним вектором-носієм одиниці експресії легксого або важкого ланцюга |див., наприклад, МО 94/11523)|. В одному з бажаних варіантів здійснення способу одержання протеїнів антитіла за даним винаходом застосовують 7/0 Клітини-хазяї, які відрізняються тим, що їх котрансфікують двома плазмідами-носіями одиниць експресії легкого й важкого ланцюга |див., наприклад, ЕР 0481790).

Протеїни за даним винаходом являють собою специфічний інструмент для спрямованого перенесення терапевтичних агентів до антигену ГАР. Отже, в наступному варіанті здійснення даний винахід стосується протеїнів антитіла, які відрізняються тим, що їх кон'юговано з терапевтичним агентом. З безлічі терапевтичних агентів, відомих у даній галузі, бажано застосовувати такі, як радіоїзотопи, токсини, токсоїди, запальні агенти, ферменти, антизначеннєві молекули, пептиди, цитокіни й хіміотерапевтичні агенти. З радіоізотопів у функції терапевтичного агента можна застосовувати радіоізотопи з гамма-, бета- й альфа-випромінюванням (у бажаному варіанті В-випромінюванням). Оптимальними з радіоіїзотопів з В-випромінюванням, що дозволяють здійснювати локалізоване опромінення й руйнування злоякісних пухлинних клітин, є "бреній, "ЗЗреній, "З'йод і Збітрій, Отже, радіоїзотопи з групи, що включає "Збреній, "ЗЗреній, "З'йод і Убітрій, є оптимальними для використання у функції терапевтичних агентів, кон'югованих із протеїнами антитіла за даним винаходом.

Наприклад, для введення радіоактивної мітки в антитіло за даним винаходом можна застосовувати метод, описаний у УУО 93/05804.

Наступним об'єктом даного винаходу є протеїни антитіла, які відрізняються тим, що вони є міченими. Таке Ге! антитіло-носій специфічної для ГАР мітки дає змогу локалізувати і/або виявити антиген ЕАР іп міго і іп мімо. о

Під міткою розуміють маркер, що виявляється безпосередньо або непрямо. Під непрямим маркером мається на увазі маркер, який неможливо виявити як такий, що, отже, потребує додаткового, специфічного для нього маркера, який виявляється безпосередньо. З метою здійснення даного винаходу у функції міток бажано користуватися маркерами, що виявляються. Із широкого ряду маркерів, що виявляються, оптимальними є такі з (Се) групи, що включає ферменти, барвники, радіоізотопи, дигоксигенін і біотин.

Ще одним об'єктом даного винаходу є протеїни антитіла, які відрізняються тим, що вони кон'югуються з - агентом візуалізації. З існуючого рівня техніки відомо про цілий ряд агентів візуалізації, насамперед, Ге радіоїзотопів. З метою здійснення даного винаходу бажано застосовувати радіоїзотопи з со гамма-випромінюванням, оптимальним з яких є "йод.

Наступним об'єктом даного винаходу є фармацевтичні композиції з умістом вищенаведеного протеїну ї- антитіла за даним винаходом і фармацевтичне придатного носія. Такі фармацевтичні композиції можуть застосовуватися для лікування пухлин, коли останні виникають унаслідок активації фібробластів строми. Існує два принципи протипухлинної імунотерапії строми, що можуть діяти синергічно: (а) немодифіковане « (некон'юговане, "оголене") антитіло за даним винаходом викликає імунне порушення або запальні реакції в стромі пухлини, у той час як (б) із використанням антитіла, кон'югованого з терапевтичним агентом, таким, як т с радіоїзотоп або інша токсична сполука, уможливлюється локалізоване опромінення й руйнування злоякісних в пухлинних клітин. Отже, ще одним об'єктом даного винаходу є застосування згаданого протеїну антитіла у » процесі готування фармацевтичної композиції, насамперед, для лікування пухлин.

У наступному варіанті здійснення даного винаходу фармацевтичні композиції містять протеїн антитіла за даним винаходом, у вищенаведений спосіб кон'югований з терапевтичним агентом, і фармацевтичне придатний - носій, які можна застосовувати для лікування пухлин, що з'явилися внаслідок активації фібробластів строми. В о іншому варіанті фармацевтичні композиції містять протеїн антитіла за даним винаходом, у вищенаведений спосіб кон'югований з агентом візуалізації, і фармацевтичне придатний носій, і можуть використовуватися для іме) візуалізації наявності активованих фібробластів строми в рані, що гоїться, на запаленій ділянці шкіри або в - 50 пухлині в пацієнта. З найбільшим успіхом згадані фармацевтичні композиції застосовуватимуться для лікування злоякісних пухлин, таких, як навколоректальні пухлини, великолітинний рак легені, пухлини молочної залози,

І) рак голови й шиї, пухлини яєчника, пухлини легені, інвазивні пухлини сечового міхура, пухлини панкреатичної залози й метастазуючі пухлини головного мозку.

Лікування тварин або людини вищенаведеними композиціями здійснюється внутрішньовенна або в інший спосіб, наприклад, системно або локально з їхнім застосуванням до хворої тканини або органу, залежно від типу о й походження хвороби або мети лікування, наприклад, чи лікується пухлина або інше. Так, системний механізм дії є бажаним, коли лікуються різноманітні органи або системи органів, наприклад, при системних автоїмунних ко хворобах або алергіях, при трансплантаціях сторонніх органів або тканин, або при пухлинах, що є дифузійними або якщо виникають проблеми з їхньою локалізацією. До локального механізму удаються, коли передбачається 60 виключно локальні прояви неопластичної або імунологічної дії композицій за даним винаходом, наприклад, при локальних пухлинах.

Протеїни за даним винаходом можна застосовувати різноманітними методами, відомими в даній галузі, насамперед, шляхом внутрішньовенної ін'єкції або прямої ін'єкції у тканини-мішені. З метою системного застосовування їх уводити є бажаним внутрішньовенна, внутрішньоваскулярно, внутрішньо м'язово, 65 внутрішньоартеріально, внутрішньочеревинно, орально або внутрішньотрахеально. У бажаному варіанті локальне застосування композицій за даним винаходом являє собою підшкірне, внутрішньошкірне,

внутрішньокардіальне, внутрішньочасточкове, інтрамедулярне, внутрішньолегеневе введення, безпосереднє оброблення або таке поблизу хворої тканини (сполучної, кісткової, м'язової, нервової або епітеліальної).

Залежно від бажаних тривалості й ефективності лікування фармацевтичні композиції антитіла вводяться одноразово або багатократно, наприклад, періодично, можливо щодня протягом кількох днів, тижнів або місяців, у різноманітному дозуванні.

З метою одержання композицій антитіла, що застосовуватимуться у вищенаведені способи, фахівець може використовувати відомі фізіологічно придатні стерильні розчини для ін'єкцій. Для готування готового до застосування розчину для парентеральної ін'єкції або інфузії використовуються легко доступні водні ізотонічні 7/0 розчини, такі, як фізіологічні розчини або розчини відповідного протеїну плазми. Фармацевтичні композиції можуть мати форму ліофілізатів або безводних препаратів, що відновлюються з використанням відомих розчинів для ін'єкцій безпосередньо перед застосуванням за стерильних умов, наприклад, як набір складових. Кінцеву форму композицій антитіла за даним винаходом готують для ін'єкції, інфузії або перфузії шляхом змішування очищених антитіл за даним винаходом зі стерильним фізіологічним розчином, у який можуть додаватися /5 Загальновідомі носії і/або домішки (наприклад, сироватковий альбумін, декстроза, бісульфіт натрію, ЕДТК).

Кількість уведеного антитіла залежить від природи хвороби. У випадку пацієнтів, що хворіють на рак, уведена доза "оголеного" антитіла може знаходитися в діапазоні від 0,1 до 100мг/м2, у бажаному варіанті від 5 до БОмг/м2 на сеанс. Для радіоактивно мічених, наприклад, із використанням 131йоду, антитіл необхідно визначити максимальну стерпну дозу (МТО) що не повинна перевищувати дози, рекомендовані з терапевтичного погляду. Потім із використанням такого антитіла, шляхом повторної (щомісячної або щотижневої) внутрішньовенної інфузії дози, що не досягає МТО (|див., наприклад, УМеїї та ін., 9. Сііп. Опсої. 12: 1193-1203 (1994)3), проводиться курс лікування хворих на рак пацієнтів.

Отже, одним із об'єктів даного винаходу є застосування протеїнів антитіла за даним винаходом для лікування раку. В бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується застосування протеїнів антитіла за с даним винаходом, у вищенаведений спосіб кон'югованих із терапевтичним агентом, для лікування раку. В о наступному бажаному варіанті даний винахід стосується застосування протеїнів антитіла за даним винаходом, кон'югованих із агентом візуалізації з метою візуалізації активованих фібробластів строми. У ще одному з бажаних варіантів даний винахід стосується застосування мічених протеїнів антитіла за даним винаходом з метою виявлення активованих фібробластів строми в зразку. (Се)

Одним із об'єктів даного винаходу є спосіб лікування пухлин, коли пухлина виникає внаслідок активації фібробластів строми, що володіють здатністю специфічно формувати комплекс із протеїнами антитіла за даним - винаходом, що є присутніми у формі "оголених"/лЛемодифікованих антитіл, модифікованих протеїнів антитіла, СМ таких, як злиті протеїни, або протеїнів антитіла, кон'югованих із терапевтичним агентом, який полягає в уведенні пухлини в контакт із терапевтично ефективною кількістю згаданих антитіл. У бажаному варіанті о здійснення даний винахід стосується вищенаведеного способу лікування пухлин, коли пухлина являє собою таку їх» з умістом ракових клітин, що належить до групи злоякісних пухлин, яка включає навколоректальні пухлини, великоклітинний рак легені, пухлини молочної залози, рак голови й шиї, пухлини яєчника, пухлини легені, інвазивні пухлини сечового міхура, пухлини панкреатичної залози й метастазуючі пухлини головного мозку. «

Вищенаведений спосіб лікування пухлин може здійснюватися іп міїго або іп мімо.

Наступним об'єктом даного винаходу є спосіб виявлення активованих фібробластів строми в зоні загоєння - с рани, запалення або в пухлині, який відрізняється тим, що а (а) зразок, що може містити активовані фібробласти строми, вводять у контакт із протеїном антитіла за ,» даним винаходом в умовах, придатних для формування комплексу з антитіла й антигену, (б) виявляється комплекс, тобто визначається присутність активованих фібробластів строми в зоні загоєння рани, запалення або у злоякісній пухлині. -і У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується способу виявлення активованих фібробластів о строми в пухлині, коли пухлина являє собою таку з умістом ракових клітин, що належить до групи злоякісних пухлин, яка включає навколоректальні пухлини, великоклітинний рак легені, пухлини молочної залози, рак іме) голови й шиї, пухлини яєчника, пухлини легені, пухлини сечового міхура, пухлини панкреатичної залози й -1 50 метастазуючі пухлини головного мозку. Оптимальними протеїнами антитіла за даним винаходом є протеши, які відрізняються тим, що їх мітять у вищенаведений спосіб. 4) Ще одним об'єктом даного винаходу є спосіб візуалізації активованих фібробластів строми в зоні загоєння рани, запаленої тканини (у тому числі при ревматоїдному артриті й цирозі) або в пухлині пацієнта, який відрізняється тим, що (а) хворій людині вводять протеїн антитіла за даним винаходом, кон'югований з агентом візуалізації, за умов, придатних для утворення комплексу антитіло-антиген, о (б) здійснюють візуалізацію будь-якого держаного в такий спосіб комплексу, іме) (в) в такий спосіб візуалізують активовані фібробласти строми в пацієнта.

У бажаному варіанті здійснення даний винахід стосується вищенаведеного способу візуалізації активованих 60 фібробластів строми в пухлині, коли пухлина являє собою таку з умістом ракових клітин, що належить до групи злоякісних пухлин, яка включає навколоректальні пухлини, великоклітинний рак легені, пухлини молочної залози, рак голови й шиї, пухлини яєчника, пухлини легені, пухлини сечового міхура, пухлини панкреатичної залози й метастазуючі пухлини головного мозку.

Наступним об'єктом даного винаходу є спосіб виявлення строми пухлини, який відрізняється тим, що 65 (а) придатний зразок уводять у контакт із протеїном антитіла за даним винаходом в умовах, які сприяють формуванню комплексу антитіла й антигену,

(б) виявляють будь-який сформований в такий спосіб комплекс, (в) співвідносять присутність цього комплексу з присутністю строми пухлини.

З метою здійснення даного винаходу протеїни антитіла за даним винаходом у бажаному варіанті мітять маркером, що виявляється.

Ще одним об'єктом даного винаходу є спосіб візуалізації строми пухлини в пацієнта, який відрізняється тим, Що (а) хворій людині вводять протеїн антитіла за даним винаходом, кон'югований з агентом візуалізації, за умов, що сприяють утворенню комплексу антитіло-антиген, 70 (б) здійснюють візуалізацію будь-якого одержаного в такий спосіб комплексу, тобто візуалізують строму пухлини в пацієнта.

Мал.1. Послідовність ДНК версії А перетвореної людської варіабельної ділянки легкого ланцюга Е19 (пЕ191І у), ЗЕО ІЮ МО.

Мал.2. Амінокислотна послідовність версії А перетвореної людської варіабельної ділянки легкого ланцюга 75.19 (пР191х), ЗЕО ІЮ МОС2.

Мал.3. Послідовність ДНК версії В перетвореної людської варіабельної ділянки легкого ланцюга Е19 (пЕ191І в), ЗЕО ІО МО:3. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділені жирним шрифтом.

Мал.4. Амінокислотна послідовність версії В перетвореної людської варіабельної ділянки легкого ланцюга

Е19 (пЕ191І в), ЗЕО ІЮ МО 4. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.5. Послідовність ДНК версії С перетвореної людської варіабельної ділянки легкого ланцюга Е19 (пЕ19І с), ЗЕО ІО МО:5. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.б. Амінокислотна послідовність версії Б перетвореного людського легкого ланцюга Е19 (ПЕ19І сс), ЗЕО

ІО МО:6. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.7. Послідовність ДНК версії А перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 сч дв (ПЕТ9НА), ЗЕО Ю МО:7.

Мал.8. Амінокислотна послідовність версії А перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга і)

Е19 (пЕ19НУХА), 5ЕО ІЮ МО:8.

Мал.З9. Послідовність ДНК версії В перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 (ПЕ19Нв), ЗЕО І МО:9. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділено жирним шрифтом. Ге зо Мал.10. Амінокислотна послідовність версії Б перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга

Е19 (пЕ19Нв), 5ЕО ІЮО МО:10. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом. -

Мал.11. Послідовність ДНК версії С перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 с (пЕ19І с), ЗЕО ІО МО 11. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.12. Амінокислотна послідовність версії В перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга ме)

Е19 (пЕ19Нс), ЗЕО ІО МО 12. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом. ї-

Мал.13. Послідовність ДНК версії Ю перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 (пЕ19Ноб), ЗЕО ІО МО:13. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.14. Амінокислотна послідовність версії О перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга

Е19 (пеЕ191І 3), ЗЕО ІЮ МО:14. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом. «

Мал.15. Послідовність ДНК версії Е перетвореної людської варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 з с (ПЕТ9Не), ЗЕО І МО:15. Відмінні від версії А нуклеотиди підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.16. Амінокислотна послідовність перетвореної версії Е людської варіабельної ділянки важкого ланцюга ;» Е19 (пЕ19НЕ), 5ЕО ІО МО 16. Відмінні від версії А амінокислоти підкреслено й виділено жирним шрифтом.

Мал.17. Амінокислотна послідовність химерної варіабельної ділянки легкого ланцюга Е19 (спЕ19І С), ЗЕ ІЮ 45. МО:16. -І Мал.18. Амінокислотна послідовність химерної варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19 (СпПЕ19НС), ЗЕО ІЮ

МО:18. і Мал.19. Послідовність ДНК людської каппа-константної ділянки легкого ланцюга, БЕО ІЮ МО: 19. ко Мал.20. Амінокислотна послідовність людської каппа-константної ділянки легкого ланцюга, БЕО ІЮ МО:20.

Мал.21. Послідовність ДНК людської константної ділянки важкого ланцюга, ЗЕО ІЮ МО:21. - Мал.22. Амінокислотна послідовність людської константної ділянки важкого ланцюга, ЕС ІЮ МО:22.

Ф Мал.23. Експресійні вектори клітин ссавців, що застосовувалися для одержання химерних і перетворених антитіл людини з людськими легкими каппа-ланцюгами й людськими важкими гамма-1-ланцюгами.

А. Експресійний вектор легкого ланцюга: рКМ10О0

Б. Експресійний вектор важкого ланцюга: роІ0105.

Мал.24. Послідовність ДНК і амінокислотна послідовність мишачої варіабельної ділянки легкого ланцюга Е19,

Ф) модифіковані з метою їхнього застосування при конструюванні химерного легкого ланцюга Е19. Сайти рестрикції ка виділено жирними літерами. Підкреслено послідовність Козака, СОК з 1 по З і сайт сплайсингу донора.

Мал.25. Послідовність ДНК і амінокислотна послідовність мишачої варіабельної ділянки важкого ланцюга бо Е19, модифіковані з метою застосування при конструюванні химерного важкого ланцюга Е19. Сайти рестрикції виділено жирними літерами. Підкреслено послідовність Козака, СОК з 1 по З і сайт сплайсингу донора.

Мал.26. Послідовність ДНК химерного антитіла Е19, клонована в експресійному векторі ссавців рКМ100.

Сайти рестрикції виділено жирними літерами й підкреслено. Також підкреслено СОК з 1 по З і сайт сплайсингу донора. Ця послідовність являє собою послідовність ДНК легкого ланцюга мишачого Е19, клоновану всередині 65 еукаріотного експресійного вектора рКМ100. Останній має версію кКДНК гена людської каппа-константної ділянки (алотип Кт/(3)), яка закінчується сильною штучною послідовністю, що її термінує. Крім того, ген стійкості проти неоміцину (Мео) також закінчується цією штучною послідовністю й орієнтується аналогічно касеті експресії легкого кагша-ланцюга.

Основними компонентами еукаріотного експресійного вектора рКМ100 є: 1-6- сайтЕсоКі 7-1571- промотор/енхансер НСММІі (людський цитомегаловірус) 583-587- ТАТАА-бокс 610- сайт ініціації транскрипції 728-736- сайт сплайсингу донора 70 731- початок інтрона 1557- кінець інтрона 1544-1558- сайт сплайсингу акцептора 1590-1598- послідовність Козака 1599-1658- пептидна лідерна послідовність 1659-1997- легкий ланцюг мишачого Е19 1996-2004- сайт сплайсингу донора 2011-2657- копія КДНК гена людської каппа-константної ділянки (алотип Кт(З3)) 2664-2880- штучна послідовність зраС2, що термінує згадану копію 2887-7845- ДНК-фрагмент вектора роМ2пео, що включає ген стійкості проти ампіциліну (Атр) (орієнтований 2о В протилежному напрямку), сайти ініціації реплікації СОЇЕЇ і 5М40, а також ген, що зумовлює стійкість проти неоміцину Мео (орієнтований аналогічно касеті НСММІ-КСТ) 7852-8068- штучна послідовність зраС2, що термінує вищенаведений фрагмент ДНК

Ця послідовність закінчується безпосередньо проти ходу транскрипції поза сайтом ЕсокіІ (положення 1-6) у точці початку послідовності. Якщо ця послідовність ДНК виконує роль вектора, вона повинна бути кільцевою. сч

Мал.27. Послідовність ДНК химерного антитіла Е19, клонована в експресійному векторі ссавців роІЮО105.

Сайти рестрикції виділено жирними літерами й підкреслено. Також підкреслено СОК 1-3 і сайт сплайсингу і) донора. Ця послідовність являє собою послідовність ДНК важкого ланцюга мишачого Е19, клоновану в еукаріотному експресійному векторі рОІ0105. Цей вектор має версію кДНК гена людської гамма-1-константної ділянки (алотип СіІт (поп-а, 2,-х), також відомий як алотип зт(17)). Ге зо Основними компонентами конструкції РКМ100 є: 1-2501- послідовність, що базується на рВК322 і включає ген стійкості проти ампіциліну, сайт ініціації - реплікації СоїЕЇї, сайт ініціації реплікації 5М40 і деформований ранній промотор 540 с 2502-3226- ген апіт 3233-4073- полі-А-послідовність 5М40 тощо. і) 4074-4079- леговані сайта Ватні і Ваї!р! (Ве) ї- 4080-4302- сайт 5РА і сигнал термінації С2 4303-5867- промотор НСММі 5879-5885- унікальний сайт рестрикції НіпаїЇ для клонування генів варіабельних ділянок імуноглобуліну 5886-5894- послідовність Козака « 5895-5951- сигнальний пептид з с 5952-6323- важкий ланцюг мишачого Е19 6323-6330- сайт сплайсингу донора ;» 6331-6336- унікальний сайт рестрикції Ватні для клонування генів варіабельних ділянок імуноглобуліну 6337-7388- копія кКДНК гена людської гамма-1-константної ділянки, що передує інтронові завдовжки 62 пари

ОСНОВ

-І 7389-7709- послідовність Агпіе, що термінує згадану копію.

Застосована в цій послідовності людська гамма-1-константна ділянка має алотип Сіт (поп-а, 2-х), також о відомий як алотип Ст(17), для якого є характерною наявність залишку глютамінової кислоти (Е) в положенні 356 ко (за Еи-нумерацією), залишку метіоніну (М) у положенні 358 (за Еи-нумерацією) і залишку лізину (К) у положенні 5оро0214 (за Еи-нумерацією). У вищенаведеній послідовності ці залишки підкреслено.

Ш- Мал.28. Спосіб конструювання перетвореного людського легкого ланцюга Е19, що базується на ПЛР. На

Ф цьому малюнку схематично зображено стратегію конструювання. Пунктирними лініями позначено комплементарну послідовність із принамні 21 пари основ між праймерами.

Мал.29. Нуклеотидна й виведена амінокислотні послідовності версій А, В і С перетворених людських варіабельних ділянок легкого ланцюга Е19. Проведено аналіз нуклеотидної і виведеної амінокислотних послідовностей і здійснено порівняння результатів із послідовностями версії А, штрихами позначено нуклеотиди, (Ф) ідентичні цій послідовності, а крапками - аналогічні їй амінокислоти. Нумерація амінокислот відповідає такій, ка описаній у КаБбаї та ін. (1991). Прямокутником позначено місця розташування СОМ.

Мал.30. Послідовність ДНК Е19а (версія А перетвореного людського легкого ланцюга), клонована в во експресійному векторі ссавців рРКМ100. Сайта рестрикції виділено жирними літерами й підкреслено. Також підкреслено СОК 1-3 і сайт сплайсингу донора. Ця послідовність являє собою версію А перетвореного легкого ланцюга Е19, клоновану всередині еукаріотного експресійного вектора..рКМ100. Останній містить версію КДНК гена людської каппа-константної ділянки (алотип Кт/(3)), яка закінчується сильною штучною послідовністю, що її термінує. Крім того, ген стійкості проти неоміцину Мео також закінчується цією штучною послідовністю й 65 орієнтується в такому самому напрямку, що і касета експресії легкого каппа-ланцюга.

Основними компонентами вектора є:

7-1571- промотор/енхансер НСММі 583-587- ТАТАА-бокс 610- сайт ініціації транскрипції 728-736- сайт сплайсингу донора 731- початок інтрона 1557- кінець інтрона 1544-1558- сайт сплайсингу акцептора 1590-1598- послідовність Козака 70 1599-1658- пептидна лідерна послідовність 1659-1997- версія А перетвореного легкого ланцюга Е19 1996-2004- сайт сплайсингу донора 2011-2657- копія КДНК гена людської каппа-константної ділянки (алотип Кт(З3)) 2664-2880- штучна послідовність зраС2, що термінує згадану копію 2887-7845- ДНК-фрагмент вектора роМ2пео, що включає ген стійкості проти ампіциліну (Атр) (орієнтований у протилежному напрямку), сайта ініціації реплікації СоїЕЇ і 5М40, а також ген, що зумовлює стійкість проти неоміцину Мео (орієнтований аналогічно касеті НСММІ-КСТ) 7852-8068- штучна послідовність зраС2, що термінує вищенаведений фрагмент ДНК.

Ця послідовність закінчується безпосередньо проти ходу транскрипції поза сайтом ЕсокіІ (положення 1-6) у точці початку нижченаведеної послідовності. Якщо ця послідовність ДНК виконує роль вектора, вона повинна бути кільцевою.

Мал.31. Спосіб конструювання перетвореного людського важкого ланцюга Е19, що базується на ПЛР. На цьому малюнку схематично зображено стратегію конструювання. Пунктирними лініями позначено комплементарну послідовність із принаймні 21 пари основ між праймерами. сч

Мал.32. Нуклеотидна й виведена амінокислотні послідовності версій А-Е перетворених людських варіабельних ділянок важкого ланцюга Е19. Проведено аналіз нуклеотидної і виведеної амінокислотних (8) послідовностей і здійснено порівняння результатів із послідовностями версії А, штрихами позначено нуклеотиди, ідентичні цій послідовності, а крапками - аналогічні їй амінокислоти. Нумерація амінокислот відповідає такій, описаній у КаБбаї та ін. (1991). Прямокутником позначено місця розташування СОМ. Ге зо Мал.33. Послідовність ДНК Е19НА (версія А перетвореного людського важкого ланцюга), клонована в експресійному векторі ссавців рОІ0О10О5. Сайти рестрикції виділено жирними літерами й підкреслено. Також - підкреслено СОК 1-3 і сайт сплайсингу донора. Ця послідовність являє собою послідовність ДНК еукаріотного с експресійного вектора роІ0105, що містить версію А перетвореної варіабельної ділянки важкого ланцюга Е19.

Цей вектор має версію кДНК гена людської гамма-1-константної ділянки (алотип Ст (поп-а, 27,-х), також відомий і) зв як алотип От(17)). Основними компонентами конструкції є: ї- 1-2501- послідовність, що базується на рВК322 і включає ген стійкості проти ампіциліну, сайт ініціації реплікації СоїЕЇї, сайт ініціації реплікації 5М40 і деформований ранній промотор 540 2502-3226- ген апіт 3233-4073- 5М40-полі-А-послідовність тощо « 4074-4079- леговані сайта Ватні і Ваї!р! (Ве) з с 4080-4302- сайт 5РА і сигнал термінації С2 4303-5867- промотор НСММі ;» 5879-5885- унікальний сайт рестрикції НіпаїЇ для клонування генів варіабельних ділянок імуноглобуліну 5886-5894- послідовність Козака 5895-5894- сигнальний пептид -І 5952-6323- важкий ланцюг мишачого Е19 6323-6330- сайт сплайсингу донора о 6331-6336- унікальний сайт рестрикції Ватні для клонування генів варіабельних ділянок імуноглобуліну ко 6337-7388- копія кКДНК гена людської гамма-1-константної ділянки, що передує інтронові завдовжки 62 пари

ОСНОВ

Ш- 7389-7709- послідовність Агпіе, що термінує згадану копію.

Ф Застосована в цій послідовності людська гамма-1-константна ділянка має алотип Сіт (поп-а, 2-х), також відомий як алотип Зт(17), для якого є характерною наявність залишку глютамінової кислоти (Е) у положенні 356 (за Еи-нумерацією), залишку метіоніну (М) у положенні 358 (за Еи-нумерацією) і залишку лізину (К) у положенні дво 214 (за Еи-нумерацією). У вищенаведеній послідовності ці залишки підкреслено.

Мал.34. Випадки сплайсингу РНК важкого (панель А) і легкого (панель Б) ланцюгів, що мають місце при

Ф) експресії антитіла Е19 у клітинах ссавців - схематичне зображення. ка А. Сплайсинг РНК важкого ланцюга

Б. Сплайсинг РНК легкого каппа-ланцюга во Мал.35. Залежність зв'язування надосадової рідини І АНАд з СО8-ЕАР від концентрації.

Мал.з6. Зв'язування біотинованої І АНА з людським БАР.

Мал.37. СО8-ГРАР несе епітоп Е19, що виявлено з використанням сЕ19.

Приклади

Приклад 1: Конструювання мишачих-людських химерних генів 65 Створювали химерне антитіло Е19 (сЕ19), що включало мишачі М,;- і Мн-ділянки, зв'язані з людськими константними ділянками каппа- й гамма-1-ланцюга відповідно. Для модифікації 5- і 3З'-послідовностей, що фланкують послідовності кКДНК, які кодують мишачі М, - і Му-ділянки, використовували ПЛР-праймери (таблиця 1).

Конструювали ПЛР-праймери, специфічні у відношенні до М-ділянки легкого ланцюга Е19. Потім ці адаптовані мишачі варіабельні ділянки Е19 субклонували в експресійних векторах, що функціонують у клітинах ссавців, де вже міститься людська каппа-(вектор рРКМ100) або гамма-1-(вектор рОІО105)константні ділянки (Мал.23). З метою ефективної транскрипції легкого й важкого ланцюгів у цих векторах використовуються промотор/енхансер людського цитомагаловірусу (НСММ). Вектори також містять сайт ініціації реплікації ЗМ40, що уможливлює здійснення ефективної реплікації ДНК і наступної експресії протешу в СО5-клітинах. Створювали експресійні вектори, що несли варіабельні ділянки, вбудовані у формі Ніпап-ВатнНі-фрагментів ДНК. Для інтродукції цих 70 сайтів рестрикції на 5-(Ніпан) ї 3(«ВатНі)кінці КДНК, що кодують М-ділянки, створювали ПЛР-праймери. Крім того, останні також будували для інтродукції послідовності Козака (ЗССОССАСС) на 5-кінці КДНК легкого й важкого ланцюгів, що дозволяло ефективно здійснювати трансляцію (Когак М. "Аї Іеазі віх писіеойідез ргеседіпд Ше АЦЄ іпйіаюг содоп еппапсе ігапвіайоп іп татітаїйап сеїЇв", 9. Мої. Віої. 196: 947 (1987) і інтродукувати сайти сплайсингу донора на 3-кінці кКДНК легкого й важкого ланцюгів із метою об'єднання (сплайсингу) варіабельних ділянок із константними ділянками. ПЛР-праймери, що використовували для конструювання легкого й важкого ланцюгів химерного Е19, наведено в таблиці 1. Послідовності ДНК і амінокислотні послідовності мишачих М, - і Мн-ділянок, адаптованих для застосування в конструкції легкого й важкого ланцюгів химерного Е19, зображено на Мал.24 і 25. Послідовності ДНК легкого й важкого ланцюгів мишачого Е19, клоновані в еукаріотних експресійних векторах рКМ100 ї реІ0105 відповідно, наведено на Мал.26 127.

Таблиця 1

ПЛР-праймери для конструювання химерного антитіла Е19

Таблиця |: ПЛР-праймери для конструювання химерного антитіла Е19. -- ТА. Варіабельна ділянка легкого ланцюга с

І. Праймер для конструювання 5-кінця (37-мірний) о 5-САСА ААССТТ ОССОССАСС АТО САТ ТСА САб ОСС САО-З

Ніпаці мМрЗблАо послідовність Козака 2. Праймер для конструювання 3'-кінця (35-мірний) І«о) 5-ССОА ССАТСС АСТСАСО ТТТ САС СТС САС СТТ ОСТ-3

Ватні сайт сплайсингу донора -

Б. Варіабельна ділянка важкого ланцюга с 1. Праймер для конструювання 5'-кінця (37-мірний) со 5-САСА ААССТТ ЙССОССАСС АТО ОА ТО лОС ТО ОТС-3

Ніпаші мом 5мУ в. послідовність Козака 2. Праймер для конструювання 3'-кінця (35-мірний) 5-СССА ССАТСС АТССАСС ТА ОбА БАС ОТ САС ТОА- «

Ватні сайту сплайсингу донора 70 Приклад 2: Експресія й активність зв'язування химерного антитіла Е19 як с Двома плазмідними ДНК, що кодують легкий і важкий ланцюги химерного Е19 (див. приклад 1), :з» котрансфікували СО5-клітини, оцінюючи тимчасову експресію химерного антитіла Е19, як це описано нижче. По завершенні інкубації протягом 72год. середовище збирали, центрифугували з метою видалення клітинних уламків і аналізували з використанням ЕГІЗА на виробництво людського ІдсС1-подібного антитіла. Надосадову - 15 рідину СО5-клітин з умістом химерного антитіла Е19 аналізували на здатність зв'язуватися з клітинами лінії НТ 1080 (див. приклад 13), що експресували на поверхні антиген ЕАР. (95) Трансфекція СО5-клітин методом електропорації т Функціонуючі в клітинах ссавців експресійні вектори рОІЮ105 і рКМ100, що містять химерні або перетворені людські версії важкого й легкого ланцюгів відповідно, тестували в СО5-клітинах, оцінюючи тимчасову експресію -і 50 антитіл Е19. СО57-клітини загальновідомим методом пересіювали у середовище ОМЕМ (каталоговий номер

Ф фірми Сібсо ВКІ 41966) з умістом пеніциліну (5бод./мл), стрептоміцину (5Омкг/мл), І-глютаміну й 10905-вої інактивованої шляхом нагрівання фетальної телячої сироватки без умісту гаммаглобуліну (ФТС каталоговий номер фірми Нагпап Зега-іав 00001). ДНК інтродукували в СОб-клітини методом електропорації з використанням пристрою типу Сепе Риїзаг (фірма ВіоКад). ДНК (1Омкг із кожного вектора) додавали до аліквот 25 по О,8мл, що включали 1х10'клітин/мл, у забуференому фосфатом фізіологічному розчині (ЗФР, без Са?" і

Ф) Ма). Імпульс створювали при напрузі 19008 і ємності конденсатора 25мкФ. Після відновлення протягом 10хв. ка при температурі навколишнього середовища одержані в результаті електропорації клітини додавали до 8 мл середовища ОМЕМ, доповненого 596 ФТС. По завершенні інкубації при 372 протягом 72год. середовище бо Збирали й центрифугували з метою видалення клітинних уламків. Його зберігали за стерильних умов при 42С протягом нетривалих періодів часу або при -202С протягом триваліших періодів.

Метод ЕГІЗА для оцінки концентрацій злитого антитіла Ідс1/каппа в надосадових рідинах СО5-клітин

Зразки антитіл, добутих у трансфікованих СО5-клітинах, аналізували методом ЕГІЗА з метою визначення кількостей продукованого химерного або перетвореного людського антитіла. Для цього планшети б5 сенсибілізували козячим антитілом до людського ЇдДС (специфічним у відношенні до Ес у-фрагмента) (фірма

Уасквоп ІттипоКезеагсі Іарогайгіев Іпс., Мо109-005-098). Далі готували послідовні розведення зразків

СОзЗ-клітин і додавали в кожну комірку. По завершенні інкубації протягом 1 год. при 37 2С і наступного промивання додавали кон'юговане з пероксидазою з хрону козяче антитіло до людського легкого каппа-ланцюга (фірма Зідта, А-7164). Після інкубації протягом ЗОхв. при 372С і промивання при кімнатній температурі протягом

ЗОхв. додавали субстрат К-блакитний (суміш 3,3,5,5'-тетраметилбензидину й перекису водню, фірма Віоповіїсв

Гітйеа, МоКкВ175). Реакцію припиняли, використовуючи розчин Кей Біор (Віопозіїсв І ітйей, МоК520), і за допомогою мікропланшет-ридера при б5Онм визначали оптичну густину. Як стандарт використовували очищене людське ІдС1/каппа-антитіло (фірма Зідта, І-3889) визначеної концентрації.

Експресія химерного антитіла Е19 у СО5-клітинах виявилася невисокою (таблиця 2), знаходячись у діапазоні 70. від 10 до бонг/мл, що мінімум у 10 разів нижче, ніж експресія більшості антитіл.

З метою підвищення рівня експресії химерного антитіла Е19 лідерну послідовність М -ділянки Е19 змінювали шляхом заміни лейцину на пролін у положенні -9. Така амінокислотна заміна в лідерній послідовності дозволила принаймні вдвічі збільшити кількість химерного антитіла, що продукується в СОЗ-клітинах.

За результатами оцінки клітинного зв'язування було встановлено, що химерне антитіло Е19 зв'язується з 75 ЕАР-мішенню специфічно і з очікуваним авідитетом. антитіла Е19 у надосадових рідинах

Со5-клітин (наведено результати трьох проведених незалежно одна від одної трансфекцій)

Важкий ланцес| Лежлйкалталанцює (У мкм) см о (Се)

Приклад 3: Конструювання версій А-С (І А-І с) перетвореного людського легкого ланцюга Е19 їч-

Конструювання першої версії перетвореної людської М |-ділянки (І д) здійснювали з використанням

ПЛР-фрагментів, що перекриваються, за методом, описаним у Оацдпегпу В.ІГ., ОСемМагпіпо УА. ам М.Е., Камка СМ

ОМУ., Зіпдег І. і Мак О.Е., "Роїутегазе спаіїйп геасіоп (РСК) Тасіїйабгев (Ше сіопіпд, СОК-адгайіпод, апа со гарід ехргезвіоп ої тигіпе топосіопа! апіїроду аїгесіеїй адаіїпвї Ше СО18 сотропепі ої Іеикосуїе іпіедгіпв. Мисі. Асід. Кев. 19: 2471 (1991). Синтезували 10 олігонуклеотидів, що складалися з п'яти пар праймерів, і -

АРСКК1-ма!1, міа2-маЗ, міа40О-маб5, міаб-ма7 і ма8-АРСКА4 (таблиця З і Мал.28). Між сусідніми парами праймерів знаходилася послідовність, що перекривала їх, яка складалася принаймні з 21 пари основ (Мал.28).

АРСКІ1 і АРСКА гібридизувалися з фланкуючими послідовностями вектора руС19. Створювали мутагенні « праймери, причому це здійснювалося таким чином, щоб їхній 5'-кнець розташовувався безпосередньо за кодоном у нестрогому положенні. Цю стратегію застосовували з метою нейтралізації випадкового додавання т с одного нуклеотиду на 3-кінець ланцюга, комплементарного мутагенному праймерові, з використанням ч ДНК-полімерази в процесі ПЛР (|(Зпатоскв А.О. і Зпам/ Р.Е., "Ітргомей ргітег девідп їог РОСК-разеа, » зі(е-дігесіей тиадепевзів", Мисі. Асій. Кевз. 20: 1147 (19923). Відповідну пару праймерів (0,2мМкМ кожного) об'єднували з 1Онг версії "В" перетвореної людської І 25М, -ділянки КкКДНК і тод. ДНК-полімерази АтріїТад (фірма

Рекіп ЕІтег Сефв) у Хомкл ПЛР-буфера, що містив Трис-НСЇІ (1О0мМ) (рна,3), КСІ (50мМ), дНТФ (200мкМ) і МосСі» - (1,5мМ). Цю суміш покривали мінеральним маслом і здійснювали ПЛР із 25 циклів, кожний з яких уключав стадію о денатурації при 942С протягом 1хв., стадію ренатурації праймера при 552С протягом хв. і стадію подовження при 722 протягом 2хв. Далі проводили 1 цикл, що включав додаткову стадію подовження при 722 протягом о 10хв., після чого суміш охолоджували до 42. Проміжок часу між стадіями ренатурації праймера й подовження -і 20 становив 2,5хв. ПЛР-продукти, одержані в результаті 5 реакцій (А, Б, В, Г ї Д), потім очищали методом гель-електрофорезу з наступної елюцією ДНК із використанням набору Ууігага СК ргерз (фірма Рготеда). ши ПЛР-продукти А, Б, В, Г і Д об'єднували за їхньою комплементарністю один з одним. В другій серії ПЛР

ПЛР-продукти Б і В та Г і Д (5Онг кожного) додавали до 5Омкл суміші для ПЛР (як описано вище), кожні з яких містили по тод. ДНК-полімерази АтріїТад (фірма Регкіп ЕІтег Сефв). Реакції повторювали протягом 20 циклів 29 аналогічно вищенаведеному за винятком того, що температуру ренатурації підвищували до 6020. У третій

ГФ) серії ПЛР ПЛР-продукти Е і Є піддавали ПЛР-ампліфікації з використанням мікролітрових сумішей кожної з т проведених раніше ПЛР і відповідних пар ПЛР-праймерів (міа2-ма5 або маб-АРСК4). Суміші для ПЛР містили 1од. ДНК-полімерази АтріїТад у 5Омкл суміші для ПЛР (як описано вище). їх ампліфікували, здійснюючи одну стадію з 25 циклів. У четвертій серії ПЛР ПЛР-продукт Ж піддавали ПЛР-ампліфікації з використанням 60 мікролітрових сумішей кожної з попередніх сумішей для ПЛР і маі2-АРСКА у функції пари ПЛР-праймерів. І, нарешті, за допомогою двостадійної ПЛР, аналогічної вищенаведеній, ПЛР-продукти А і Ж об'єднували за їхньою комплементарністю з використанням у функції праймерів, що термінували послідовності, КОР і ОР. Повністю сконструйований фрагмент, що відповідав повній перетвореній М,-ділянці Е19 людини з умістом лідерної послідовності, розщеплювали з використанням Ніпаї і Ватні і клонували у векторі рОС19 для секвенування. 62 Клоніз правильною послідовністю ДНК позначили як гезпЕ19І а (Мал.29). Цей клон субклонували в еукаріотному експресійному векторі РКМ100. Послідовність ДНК гезпЕ19І а, клоновану в рКМ100, наведено на Мал.30.

Другу версію перетвореної людської М,-ділянки (І в) Е19 конструювали, використовуючи схему, аналогічну такій, описаній для І д, за винятком того, що праймери міа4 і міа7 було замінено на мір4 і мір7 відповідно (таблиця 3). Послідовність ДНК І в зображено на Мал.29.

Третю версію перетвореної людської М,-ділянки (Ії с) Е19 конструювали, використовуючи набір для сайтспрямованого мутагенезу ОцікСпапдетм фірми Зігаїадепе. Метод ОцікСпапде-сайтспрямованого мутагенезу здійснювали відповідно до інструкцій виробника, використовуючи гезпЕ19іа у векторі рКМ100 у функції дволанцюгової ДНК-матриці. Необхідні для цього протоколу мутагенні олігонуклеотидні праймери 70. Е19І-с-значеннєвий і Е19І с-антизначеннєвий (таблиця 3) створювали відповідно до інструкцій виробника.

Коротко метод полягає в наступному: обидва мутагенних праймера містили необхідну крапчасту мутацію (кодон

ТТТ у положенні 49 (Рпе) у послідовності Кебата заміняли на кодон ТАТ, що кодує Туг). Ці праймери ренатурували до однієї і тієї ж послідовності в протилежних ланцюгах І д у векторі РКМ100. Крапчасту мутацію визначали шляхом секвенування ДНК повної М, -ділянки. Послідовність ДНК І с зображено на Мал.29. З метою 75 усунення можливості виникнення випадкової мутації в рКМ100О в ході ПЛР, М ; -ділянку вирізували з вектора рРКМІТОО у формі Ніпап/ВатНі-фрагмента і повторно субклонували в немодифікованому векторі рКМ100, розщепленому з використанням двох згаданих рестриктаз.

Таблиця З

ПЛР-праймери для конструювання перетворених людських варіабельних ділянок легкого ланцюга Е19 1. Праймери для синтезу версії "А"

Е19уїа1 (36 тег):

У СТСАТСАСААТОТСТОСОВАСОЛАССТОСААСССАС З сч

Е19у1а2 (29 тег); (о) 5 СТССОСАСАСАТТОТСАТОАСССААТСТО З

Е19Маз (45 тег): 5 ОААТАТААААСОСТСТОАСТООАСТТОСАСТТОАТОСТООСССТ З о їч-

Е19М1а4 (72 тег):

У САСТСАСАОССТТТТАТАТТСТАЧЙАААТСААААСААСТАСТТОСССТ се

СОТАТСАССАСАААССАССАСАССС З со

Е19Ма5 (44 тет): у 5 АССССАСАТТСССТАОТОСТАОСССААААСАТОАОСАСТТТООО 3

К19МІаб (67 тег): , 5 ТАОСАСТАСООСААТСТОООСТАССТОАТАССТТСАСТООСАОТО «

СОТТТОбСАСАСАСТТСАСССТОУ - с Е19м1а7 (53 тег): ц 5 СТСОСТТОТССОААССТОАССОСАТАССТААЛАТАТТОСТОАСА "» СТААТАААС З

Е19у1а8 (33 тег): -1 5 ОСТСАСОТТСОСАСААСОСАССААОСТОСАААТ З о 2. Праймери для синтезу версії "В"

Е19У154 (72 тег): : о 5 САОТСАОСАОССТТТТАТАТТСТАСАААТСААААВААСТАСТТОО - 50 ССТОСТТССАССАСАААССАОСАСАССС 3 4) БЕ19У167 (57 тег):

У ОТСССТТОТССОААСОТОЛОСОВАТАОСТААААТАТТОСТОАСА

ОТСАТАААСТОСС У

3. Праймери для синтєзу версії "С" (Ф; Е19І «значеннєвий (34 шег): з У СССАДАСТОСТСАТСТАТТОСОСТАССАСТАбОО 3

КІ9І с-антизначеннєвий (34 тег); бо 5 СССТАСТОСТАОСССААТАСАТОАОСАСТТТОСО 3 б5

4. Праймери для гібридизації з фланкуючими послідовностями вектора

РОСІЯ

АРСВІ (17 тег, значеннєвий праймер; 0/ У-ТАСОСАААСССОСТСТО-3

АРСКІ (18 тег, антизначеннєвий с праймер): І У-ОАСТОСАССАТАТОСОСТ-З

КЕР (-24) (16 тег, значеннєвий праймер) 5-ААСАССТАТОАССАТО-3

ЦШР (-40) (17 тег, антизначеннєвий праймер): 5-СТТТТСССАСТСАСОАС-З 70 Приклад 4: Конструювання версій А-Е (НА-Не) перетвореного людського важкого ланцюга Е19

Версію "А" перетвореної людської Мн-ділянки (Н д) Е19 конструювали з використанням методів ПЛР, аналогійних таким, описаним для конструювання версії "А" перетвореної людської М |-ділянки Е19 (їі д) (Мал.31). ДНК-матриця являла собою версію "А" перетвореної людської М н 226 (едег О.).Р., Медпоск ТА.,

Таппег Ї., Ногпег Н.С., Ніпез О.К., Кееп 5., ЗаІдапна .-)., допев Т., Егі» І.С. і Вепаід М.М, "Нитапігайоп ої /5 тоцве апцпроду адайві Ппитап аірпа-4 іпіеогіп:; а робепіна! (Ппегарешіс ог (Ше (геайтепі ої тиКріе зсІеговіз", Нит. Апіїрод. 8: З (1997)). Створювали шість ПЛР-праймерів, які синтезували, щоб сконструювати версію "А" перетвореної людської Мн-області 19 (таблиця 4). ПЛР-продукти А, В, С ії О одержували, використовуючи у функції пар ПЛР-праймерів АРСК1-Мна!, Мпа2-Мназ, Мпа4-Мпа5 і Мнаб-АРСКА відповідно.

Умови, за яких проводилася ПЛР, в основному відповідали описаним для конструювання перетвореної людської Мі-ділянки Е19. Клон із правильною послідовністю ДНК позначили як гезпЕ19На (Мал.З2). Цей клон субклонували в еукаріотному векторі рОІ0О105. Послідовність гезпЕ19На, клоновану в рОІО105, наведено на

Мал.33.

Третю версію перетвореної людської Мн-ділянки Е19 (Но) конструювали з використанням схеми, аналогічної такій, описаній для НА, за винятком того, що праймер Мпа заміняли на Мис (таблиця 4). Послідовність ДНК Н с сч зображено на Мал.32. Другу (Нв) і четверту (Но) версію перетвореної людської Му-ділянки Е19 конструювали на основі ПЛР-мутагенезу, описаного Каттап зі співавторами |Каттап М., І ашїв 9., Зспеї! 9. Її Сгопепрогп В., (8) "Карій іпзепіопа! тиадепезів ої ОМА ру роїутегазе спаіп геасіоп (РСК)" Мисі. Асідв Кев. 17: 54040 (1980).

Для Нв і Но використовували мутагенний праймер Е19УНБабв (заміна Туг-91 на Рпе-91, таблиця 4) у парі з АРСК4 у ПЛР із використанням у функції ДНК-матриці Н д ії Нс відповідно. ПЛР-продукти МНЬ Її МНа розщеплювали (9 зо рестриктазами Рв! і Ватні і субклонували в гезпЕ19На і гезпЕ19Нс відповідно, попередньо розщеплених двома згаданими рестриктазами. Послідовності ДНК Нв і Но зображено на Мал.32. -

Версію "Е" перетвореної людської Мн-ділянки Е19 (Н є) конструювали на базі методів ПЛР-мутагенезу, с описаних у Каттагп зі співавторами (1989).

Для гезпЕ19Не використовували мутагенний праймер Е19МзесіІНе (таблиця 5) у парі з праймером ме)

Е19МНіпа!й («таблиця 5) у ПЛР із використанням клонованої у функціонуючому в клітинах ссавців ї- експресійному векторі рОІО105 Но у функції ДНК-матриці. Відповідну пару праймерів (0,2мМкМ кожного) об'єднували з 1Онг кКДНК версії "А" перетвореної людської Му-ділянки 226 у 100мкл ПЛР-буфера з умістом ІСІ (ТОМ), (МН/)»ЗО,) (10ММ), трис-НСІ (20мМ) (рнН8в,8), МаозО, (2мМ), 0,195 тритону Х-100 і дНнТФ (200мкМ).

Реакційні суміші покривали мінеральним маслом і витримували при 9492 протягом бхв. Потім додавали од. «

ДНК-полімерази ЮОєер Мепі (фірма Мем Епдіапа Віоіабв) | "Ної Зіаг" РОК; Спои О., Кизвеї! М., Вігсп О., Каутопа Ще с У. ії Віоспй МУ. "Ргемепіоп ої рге-РСК тів-ргітіпд апа ргітег дітегігайоп ітргомевз Іом-сору-питбрег й атрійісайопе" Мисі. Асіав Кев. 20: 1717 (1992) і проводили ПЛР із 25 циклів у термокомірці типу «» ТА О-Тпегторіоск Тпепта! Сусіег (фірма Віотеїйга, Геттінген, Німеччина). Кожний цикл уключав стадію денатурації при 942С протягом 1хв., стадію ренатурації праймера при 702С протягом хв. і стадію подовження при 722С протягом 2хв. Далі проводили 1 цикл, що включав додаткову стадію подовження при 722 протягом -і 10хв., після чого суміш охолоджували до 42С. ПЛР-продукти екстрагували й очищали зі стандартного агарозного сю гелю з 1,495 ТАЕ з використанням набору для гель-екстракції типу ОІАдцісктм відповідно до протоколу виробника (фірма ОІАСЕМ Ца., Великобританія). Потім ПЛР-продукт М не розщеплювали рестриктазами Мвсі і Ніпан і іме) вбудовували в гезпЕ19Нс, клонований у рОІ0105, попередньо розщепленому двома згаданими рестриктазами. -1 50 Сайт рестрикції, розпізнаваний МесіІ, являє собою унікальний сайт для усіх версій перетвореної людської

Мрн-ділянки і є відсутнім в експресійному векторі рОІО105. Сайт рестрикції, розпізнаваний Ніпаї!, являє

І) собою унікальний сайт рОІ0О105 для клонування генів М н-ділянки імуноглобуліну. Компетентні у відношенні електропорації клітини Е.соїї лінії ХІ-14 Ві пе трансформували їмкл лігованої ДНК і висівали на агарозні пластини з умістом ампіциліну. Потім колонії піддавали скринингу на присутність і коректний розмір уставок, здійснюючи з цими колоніями пряму ПЛР ((зиззому Ю. і Сіасквоп Т., "Оігесі сіопе спагасієгігайоп їот ріадцез

Ге! апа соіопіез ру (пе роїутегазе спаїп геасійоп", Мисі, Асій Кев. 17: 4000 (1989)) з використанням праймерів

НСМІ ї Нису1, що гібридизувалися з фланкуючими послідовностями вектора рсІО1О5 (таблиця 5). ДНК з о позитивних колоній добували за допомогою набору Ріазтій Міді, додержуючись протоколу виробника (фірма

ОІАСЕМ ЦЕа., Великобританія). Секвенування ДНК здійснювали дидезокси-методом на основі розриву ланцюга 60 (Запдег ЕР. Міскієп 5. і Соцівоп А., "ОМА зедиепсіпуд мйй о сНаіп-іегтіпайпо іппірйоге", Ргос. Маїй). Асад.

Зсі. О.5.А. 74: 5463 (1977)) безпосередньо з кільцевої векторної ДНК шляхом загальноприйнятої теплової денатурації (Апдегзеп А., РеЧЦегезоп А. і Ківідвзеп Т., "А Таві ап вітріє іЇесппідцез їог зедцепсіпуд ріазтій

ОМА м/йй зедиепазе изіпд Ппеаї аепайшгайоп", Віоїесппідчез 13: 678 (1992)) з використанням секвенази 2.0 (фірма О5В, Клівленд, штат Огайо). Послідовність ДНК гезпЕ19Не наведено на Мал.32. бо Таблиця 4

ПЛР-праймери для конструювання версій А-О перетворених людських варіабельних ділянок важкого ланцюга

Таблиця 4: ПЛР-праймери для конструювання версій А-Ю перетворених людських варіабельних. ділянок важкого ланцюга 1. Праймери для синтезу версії "А;

Е19упа! (47тег):

ОТОТАТТСАСТОААООТОТАТСТАСТАСТТТТАСАОСТОАСТТТСАС 3"

ЕІ9уна? (53 тет): : 70 У ТАСТАСАТАСАССТТСАСТОААТАСАССАТАСАСТОССТТАСАСА сосссстоз

Е19унаЗз (71 тег):

У СССТТОААСТТСТОСТТОТАСТТАССААТАССАТТОТТАОСАТТА

АТАССТОСТАТССАСТОСАОССТТТО У

Е19уВНай (71 тег):

У / ТААСТАСААССАСААСТТСААОИОССОООССАССТТОАССОТАСОСАА

СТСТОССАССАССОССТАСАТОС 3

ЕІ9упа5 (63 тег):

У ОССАТООСССТООТСОТААССАТАСОСОАТТСТТСТТСТООСОСА

СТАСТАСАСТОСАСТОТОСУ

Е19Унаб (48 тпег);

У СТАТОСТТАСОСАССАСОСССАТОСТАТОСАСТАСТОСОСТСААОС

ААСУ с о 2. Праймери для синтезу версії "С"

Е19Упс4 (71 тек):

У ТААСТАСААССАСААСТТСААОСОССОООТСАССАТСАССОСТАСАС

АССТСТОССАССАССОССТАСАТОО 3 со 3. Праймери для синтезу версій "В" 170" ч-

Е19УпЬде (27 тег):

У ССАСАСТОСАСТСТАСТТСТОСОССАС У се х 4. Праймери, шо гібридизуються з фланкуючими послідовностями со векторарОС19 325 АРСКІ (17 тет, значеннєвий праймер) 5-ТАСОСАААССОССТСТО-У в

АРСКА (18 тег, антизначеннєвий праймер) 5-САСТОСАССАТАТОСОСТ-3

Таблиця 5: ПЛР.-праймерин для конструювання версії Е перетворених людських варіабельних ділянок важкого ланцюга « 1. Праймери для синтезу версії "Б"

Е19МзсїНе (65 тет, антизначеннєвий): шщ с Таблиця 5 а ПЛР-праймери для "» конструювання версії Е перетворених щ людських варіабельних ділянок важкого ланцюга 4 Праймери, що гібридизуються з фланкуючими послідовностями

Ш- векторарОС19 оз АРСКІ (17 тег, значеннєвий праймер) 5-ТАСССАААССОССТСТС-

АРСКА (І8 тег, антизначеннєвий праймер) У-САСТОСАССАТАТОСОСТ-3 о Таблиця 5: ПЛР-праймери для конструювання версії Є перетворених -І 20 людських варіабельних ділянок важкого ланцюга 1. Праймери для синтезу версії "Е" м, ЕТ9МзеїНе (65 тег, антизначеннєвий): 5 ССТТІССССАСОООССТОТСТААСССАСТОТАТОСТОТАТТСАСТОАА осто

Месі

ГФ) ТАТОСАСТАСТТТССАСТАСТТІ 3 2. Праймери. що тгібридизуються з фланкуючими послідовностями ко функціонуючого в клітинах ссавців вектора РО10105

НСМІ (28 тет, значеннєвий) У-СТСАССОТССТТОСАСАСОСОСТСТОСОСА-З во Нисуу (17 тет, антизначеннєвий) 7- ГЕССАОСАСОСТОССАО-3

Приклад 5: Концентрації перетвореного людського антитіла Е19 у надосадових рідинах СО5-клітин

СОз-клітини трансфікували однією парою із серій конструкцій перетвореного людського антитіла Е19 і визначали концентрацію людського антитіла методом Ідс1/Каппа-ЕЇ І5А, як це описано в прикладі 2. 65 Таблиця 6 антитіла Е19 у надосадових рідинах СО5-клітинах ; то

Ів 20 антитіла Е19 у надосадових рідинах СОЗ-клітин с зв о

Ф

» - ся со

Випадки сплайсингу РНК, що є необхідним для експресії генів імуноглобуліну в клітинах ссавців

Зо Обидва експресійні вектори, що функціонують у клітинах ссавців, тобто рКМ100 ї рОІО105, містять інтрон т між варіабельною й константною ділянками, який видаляється в процесі експресії гена, в результаті чого утворюється матрична РНК. Випадок сплайсингу, що включає рекомбінацію ДНК між сайтами сплайсингу донора важкого або легкого ланцюга й сайтом сплайсингу акцептора імуноглобуліну наведено на Мал.З34. « ю Приклад 6: Аналіз зв'язування сЕ19 і Ї АНс з клітинами людини, що експресують ЕАР, методом проточної З7З цитометрії с Оцінювали здатність І АНс зв'язуватися як з рекомбінантним, так і з ГАР, що ендогенно експресується на "з клітинній поверхні.

Приклад визначення зв'язування | АНс із клітинним ЕАР.

У функції клітин-мішеней застосовували природні клітини пухлини людини лінії МЕ-ЗН, що експресують ГАР

ІЗПпігавита К. та ін., Сапсег, 55: 2521-2532 (1985)), і трансфіковані БАР людські лінії пухлинних клітин. - Ефективність І АНс оцінювали за допомогою цитофлуорометричних аналізів, що дозволяли визначити пряме (4) зв'язування з клітинами-мішенями, а також виходячи з інгібування зв'язування з РЕАР мишачим Е19 або химерним антитілом СЕ19. о Використовували такі антитіла й лінії клітин, як Е19 (мишаче моноклональне антитіло до людського ЕАР, -І 50 підклас ІдДС1), тідо (мишачий імуноглобулін, клас Іде), сСЕ19 (химерне моноклональне антитіло до людського

Ф ЕАР, підклас ІдС1), І АНс (перетворене моноклональне антитіло до людського БАР, підклас Ідс1), пІдС1 (людський імуноглобулін, підклас ІдсС1), МЕ-ЗН (лінія клітин людської злоякісної фіброзної гістоцитоми),

НтТ-1080 (лінія клітин людської фібросаркоми), клон 33 НТ-1080ГАР (лінія клітин НТ-1080, трансфікована кКДНК, що кодує людський ЕАР). Антитіла биотинували у спосіб, описаний в прикладах 8 і 12. 99 Безпосереднє зв'язування І АНбс із РАР на поверхні людських ліній пухлинних клітин

ГФ) В ході дослідження 5х10? пухлинних клітин інкубували з визначеними концентраціями випробуваного або з контрольного антитіла в загальному об'ємі О0,2мл забуференого фосфатом фізіологічного розчину (ЗФР), доповненого 196-вим бичачим сироватковим альбуміном (БСА), протягом ЗОхв. на льоді. Потім клітини двічі во промивали 2мл ЗФР, ресуспендували в 0,2мл ЗФР, доповненого 195 БСА, як вторинний реагент додавали розведене у співвідношенні 1:20 мишаче антитіло до людського ідо, мічене ФІТЦ (фірма Оіапіма) та інкубували протягом ще ЗОхв. на льоді.

В іншому варіанті дослідження 5х10 пухлинних клітин інкубували з визначеними концентраціями міченого біотином сСЕ19 у загальному об'ємі О0,2мл ЗФР, доповненого 195-вого БСА, протягом ЗОхв. на льоді. Потім клітини 65 двічі промивали 2мл ЗФР, ресуспендували в 0,2мл ЗФР, доповненого 195 БСА, та інкубували протягом наступних

ЗОхв. на льоді з розведеним у співвідношенні 1:40 стрептавідином-ФІТЦ (фірма Оіапіма) у функції вторинного реагенту.

Клітини знову двічі промивали 2мл ЗФР, ресуспендували в загальному об'ємі О0,бмл ЗФР, доповненого 195 параформальдегіду (ПФА), і витримували на льоді. Флуоресценцію однієї клітини визначали цитофлуорометрично, аналізуючи клітинну флуоресценцію зеленого кольору при 488нм в аналізаторі клітин з активованою флуоресценцією типу ЕРІСЗ ХІ (фірма СоцйКег).

Конкуренція І АНс з біотинованим сСЕ19 за зв'язування з РАР на клітинній поверхні людських ліній клітин, що експресують ЕАР

В ході дослідження 5 х10? пухлинних клітин інкубували з визначеними концентраціями неміченого 70 випробуваного або контрольного антитіла разом з 1мкг/мл міченого біотипом антитіла СЕ19. Потім клітини двічі промивали 2мл ЗФР, ресуспендували в 0,2мл ЗФР, доповненого 195 БСА, інкубували протягом ще ЗОхв. на льоді з розведеним у співвідношенні 1:40 стрептавідином-ФІТЦ (фірма Оіапіма) у функції вторинного реагенту й інкубували протягом наступних ЗОхв. на льоді.

Потім клітини двічі промивали 2мл ЗФР, ресуспендували в загальному об'ємі О,5мл ЗФР, доповненого 195 75 ПФА і витримували на льоді. Флуоресценцію однієї клітини визначали цитофлуорометрично, аналізуючи клітинну флуоресценцію зеленого кольору при 488нм в аналізаторі клітин з активованою флуоресценцією типу ЕРІСЗ Хі. (фірма Соццег).

Як сЕ19, так і | АНс, залежно від концентрації, специфічно зв'язувалися з клоном 33 трансфікованих БАР людських пухлинних клітин лінії НТ-ТО8ОБАР (таблиця 8). Не було виявлено ніякого зв'язування з

ЕАР-негативними клітинами лінії НТ-1080 (таблиця 9). Як сЕ19, так і ГАНс, залежно від концентрації, специфічно зв'язувалися з людськими клітинами лінії МЕ-ЗН, що ендогенно експресують ЕАР (таблиця 10).

Біотиноване сЕ19 зв'язувалося з клоном 33 людської лінії НТ-1080БАР (таблиця 11) залежно від концентрації. З РАР-негативними клітинами лінії НТ-1080 зв'язування не спостерігалося (таблиця 12).

Зв'язування біотинованого СЕ19 із клоном 33 клітин лінії НТ-1080ЕАР інгібувалося як неміченим сЕ19, так і Га Ннеміченим І АНс (таблиця 13).

Було встановлено, що химерне моноклональне антитіло до людського БАР сЕ19, а також перетворене і9) людське антитіло до людського РАР І АНс (приклад 10) зв'язуються безпосередньо з ГАР, що експресується на поверхні людських ліній клітин, в результаті ендогенної експресії цього протеїну, або в результаті трансфекції клітин кКДНК, що його кодує. Також було встановлено, що зв'язування залежить від концентрації. (Те)

Зв'язування біотинованого сЕ19 може інгібуватися як неміченим сЕ19, так і неміченим І! АНс.

Цитофлуометричний аналіз безпосереднього зв'язування, а також інгібування реагентів, що зв'язуються - специфічно, дав змогу встановити специфічність химерного СЕ19 і перетворених людських антитіл ІАНС У. с відношенні до ЕАР, що експресується на клітинній поверхні. со зв ча із клітинами клону 33 НТ-ТО8ОБАР

Концентрація антитіла (нг/мл) « 4 З с Поет НИ НИХ НЯ НЕ И НОСННЯ з ово 11оиз т є з нетрансфікованими клітинами НТ-1080 ко Концентрація антитіла (нг/мл) 9 й ово ом ом

Ф) з бо Концентрація антитіла (нг/мл) юю 11111051 86128 бо БО0 н/про 1,8 1,3 з БАР із клітинами клону 33 НТ-ТО80ОБАР

Концентрація антитіла (нг/мл) о в000081 05. т5

ЕАР із нетрансфікованими клітинами НТ-1080

Концентрація антитіла (нг/мл) печені пеню нн Бал ння вне Яни сч о в 1111м11111м (Се) зо м й до ЕАР із біотинованим СЕ19 за зв'язування з клітинами клону 33 НТ-ТО80ОБАР со зв е01вю0000000100тя м

С 0100001100103ю11111180 01000101 88 « з я с ! т пит нн нн По що с іме) 20 Біотиноване СЕ19 використовували в концентрації мкг/мл у всіх експериментах, зведених у таблицю 13. і Приклад 7: Імуноефекторні функції моноклонального антитіла І АНс в експериментах іп мйго

Ф Цей експеримент проводили з метою виявлення, з якою активністю моноклональне антитіло (МАт) І дНс зі специфічністю у відношенні антигену активації фібробласта (ГАР) може розчиняти мішені, що експресують ЕАР, у присутності комплементу людини або людських мононуклеарних лейкоцитів.

Зокрема вивчали здатність І АНс опосередковувати цитотоксичну дію на клітини клону 33 НТ-1080ЕАР, що на своїй поверхні експресують людський ЕАР. Цитотоксичність визначали іп мійго у такий спосіб: мічені У'Сг

Ф) клітини-мішені інкубували в присутності | АНс з людською сироваткою у функції джерела комплементу або з ко людськими ММС (мононуклеари периферичної крові), що відігравали роль клетин-ефекторів. Для кількісної оцінки лізису кліток-мішеней використовували мічення 9 Сг. 60 Використовували такі антитіла й лінії клітин: І АНс (перетворене людське антитіло до людського ЕАР, підклас

І9О1), пд (людський ізотип ІдДС1, контроль), 35193 (мишаче моноклональне антитіло до ДОЗ І емгізУ (один з антигенів Льюіса), тідо (мишачий Ідс, контроль), НТ-1080 (людська фібросаркома), клон 33 НТ-1080ЕАР (лінія клітин НТ-1080, трансфікована кДНК, що кодує людський ЕАР), МСЕ-7 (клітини лінії аденокарциноми молочної залози людини). 65 Опосередкований комплементом лізис клітин-мішеней в присутності І АдНс

Пухлинні клітини мітили радіоактивним ізотопом шляхом інкубації в середовищі ЕРМІ1640 з 100мкКі У Сг

(фірма МЕМ) при 372. протягом год. Потім клітини двічі промивали середовищем без ?'Сг і ресуспендували в концентрації 2х10клітин/мл.

Людська сироватка, що виконувала функцію джерела комплементу, являла собою свіжовиготовлену сироватку з крові ряду добровольців. Кров брали шляхом пункції з вени руки, витримували при кімнатній температурі протягом год. до моменту згортання й зберігали при 4 оС протягом ночі. Далі сироватку відокремлювали методом центрифугування й відбирали з осаду.

Випробуване антитіло розбавляли з маткового розчину до відповідної концентрації середовищем для культури клітин КРМІ1640. 1х105 радіоактивно мічених пухлинних клітин з випробуваної лінії інкубували протягом 2год. при 372 в термостаті (95905 повітря й 595 СО») з різноманітними концентраціями випробуваного або контрольного антитіла й 25о06.96 людської сироватки у функції джерела комплементу людини. Інкубацію здійснювали тричі в О-подібних 96-коміркових планшетах у загальному об'ємі 200мкл середовища КРМІ1640. По завершенні інкубації планшети центрифугували, видаляли 100мкл надосадової рідини й підраховували радіоактивність, для чого користувалися 72. дічильником гамма-променів. Загальну радіоактивність визначали для 107 клітин-мішеней. Спонтанне виділення визначали як радіоактивність, що випромінювалася клітинами у відсутності як антитіла, так і комплементу в процесі зазначеного періоду інкубації. Питомий лізис розраховували з такого рівняння: питогалія лізяс (ЗБ - . Іактивність у зражу) -Іспонтаннаактивність х100

Імаксимальна активність) "Іспонтанна активні сть)

Залежна від антитіла клітинна цитотоксичність (АЗКЦ) ГАНс

Пухлинні клітини мітили радіоактивним ізотопом шляхом інкубації в середовищі ЕРМІ1640 з 100мкКі "Сг при 372 протягом год. Потім клітини двічі промивали середовищем без З'Сг і ресуспендували в концентрації 2х105клітин/мл. см

ММС (мононуклеари периферичної крові) добували з периферичної крові методом пункції з вени руки у о) здорових добровольців. Щоб запобігти згортанню, додавали 2095-вий цитратний буфер. ММС з 4мл цього препарату крові очищали центрифугуванням (ЗОхв. при 4009 і кімнатній температурі) на Змл середовища для фракціонування лімфоцитів (фірма Воейгіпдег МаппНеїт, Німеччина). ММС (мононуклеари периферичної крові) Ге зо добували з градієнта, тричі промивали й розбавляли середовищем КРМІ1640 до відповідної концентрації.

Лімфокінактивовані кілери (ГАК-клітини) добували з ММС (мононуклеари периферичної крові) шляхом інкубації - протягом 5 днів при 37 С в термостаті (95950 повітря, 595 СО 5) з початковою концентрацією клітин є 1,3х10Уклітин/мл у присутності 100од. рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини (І/-2). Випробуване антитіло со розбавляли з маткового розчину до відповідної концентрації середовищем для культури клітин КРМІ1640.

Зо 1х107 радіоактивно мічених пухлинних клітин з випробуваної лінії інкубували протягом 5год. при 37 2С в в. атмосфері 5956 СО» з різноманітними концентраціями випробуваного або контрольного антитіла й ММС. ММС додавали в кількості, достатній для досягнення необхідного співвідношення ефектор:клітина-мішень. Інкубацію здійснювали в О-подібних 96б-коміркових планшетах у загальному об'ємі 200мкл середовища КРМІ1640 з « дублюванням.

По завершенні інкубації планшети центрифугували, відбирали 100мкл надосадової рідини й підраховували З с радіоактивність, для чого користувалися лічильником гамма-променів. Загальну радіоактивність визначали для "з 107 клітин-мішеней. Спонтанне виділення визначали як радіоактивність, випромінену клітинами-мішенями у відсутності як антитіла, так і клітин-ефекторів у процесі зазначеного періоду інкубації.

Питомий лізис розраховували з такого рівняння: питомий лізис (9 - - Івктивність у зражу) -(спонтаннаактивність х1пп г) Імлаксигмальна активність) "(спонтанна актявність

Опосередкований антитілом викликаний комплементом лізис пухлинних клітин о Ніякого специфічного у відношенні до І АНс опосередковуваного комплементом лізису (що перевищує лізис, -І 20 виявлений при використанні ізотипу у функції контролю) у клітинах клону 33 НТ-1080ГАР, оброблених концентраціями І АНс до 5Омкг/мл, виявлено не було (таблиці 14 і 15а). с Літичну активність людської сироватки, що використовували як джерело комплементу, було виявлено на основі лізису клітин лінії аденокарциноми молочної залози людини МОСЕ-7 у присутності 12,5мкг/мл мишачого моноклонального анти-і емізУ антитіла 35193, здатного до активації комплементу (таблиця 156). 59 Опосередкований антитілом клітинний лізис пухлинних клітин

ГФ) У присутності /АНс у концентрації до ЛОмкг/мл ніякої АЗКЦ ( залежної від антитіла клітинної

ГФ цитотоксичності) І АНс, опосередковуваної ММС людини (таблиця 16) або людськими ІАК-клітинами (лімфокінактивовані кілери, таблиця 17)), у відношенні до клітин клону 33 НТ-1080ЕАР, яка б перевищувала таку, виявлену при використанні ізотипу у функції контролю, при співвідношенні ефектор:мішень 50:1 виявлено бо не було.

За результатами аналогічних експериментів іп міго з використанням комплементу людини або людських ММС у функції ефекторних механізмів, людське моноклональне антитіло до ЕАР І АНс не виявляло чітко вираженої цитотоксичної дії яка б перевищувала таку використовуваних у функції контролю ізотопів на клон 33 лінії в пухлинних клітин НТ-1080ЕАР, що експресує ЕАР.

комплементом лізис (у 95) клону 33 лінії пухлинних клітин-мішеней

НТ-1О80РГАР, опосередкований ГАНс овююм010000085 ломеамл/// 17777770 т Інкубація: 2год. при 372С, 2595 сироватка, узята в добровольців А або Б, у функції джерела комплементу комплементом лізис (у 95) клону 33 лінії пухлинних клітин-мішеней

НТ-1О8ОБАР. опосередкований людським моноклональним антитілом до РАР ІГАнНсС сч 2в о

Ф зо т сч о зв м

Інкубація: 2год. при 372С, 2595 сироватка, узята в добровольців А, Б або В, у функції джерела комплементу « - с а Питомий, викликаний і лІНІ ПуХЛИННИХ КЛлЛІТИН-міІШЕВЕНВеИ

МСЕ-7, опосередкований мишачим моноклональним антитілом до І ежмівУ 35193 -

Фо од | о м -62 дово

Ф отож | 00 вою 0 о вот | 0 о з овавомюми 0123 бо вв Інкубація: 2год. при 372С, 2595 сироватка, узята в добровольців А, Б або В, у функції джерела комплементу антитіла клітинна цитотоксичність) (питомий лізис у 965) у відношенні до клону 33 лінії пухлинних клітин-мішеней НТ-Т1О80ОГАР людських ММС (мононуклеари периферичної крові), опосередкована І дНо. Клон ЗЗНТ-ТО80ОГАР

Концентрація антитіла (у мкг/мл) о

Інкубація: 5год. при 372С, 107 клітин-мішеней, співвідношення ефектори:клітини-мішені 50:1 клітинна цитотоксичність) (питомий лізис у 90) ГАК-клітин (лімфокінактивовані кілери) у відношенні до клону 33 лінії пухлинних клітин-мішеней НТ-1080ЕАР, опосередкована ІдНс

Концентрація антитіла (у мкг/мл) см 5 о

Фо їч-

Інкубація: 5год. при 372С, 107 клітин-мішеней, співвідношення ефектори':клітини-мішені 50:1.

Приклад 8: Імуногістохімічний аналіз зв'язування моноклонального антитіла ЇЇ АНс з нормальною й сч неопластичною тканинами людини со

Цей експеримент проводили з метою визначення характеристик зв'язування гуманізованого МАт ЇЇ. дНс з

Зо нормальною й неопластичною тканинами людини. -

Використовували такі антитіла: І АНс, сЕ19 і йідСї у функції негативного контролю. їх безпосередньо біотинували відомими в даній галузі методами й використовували в концентраціях від 2,5 до 0,25мг/мл у 295

БСА/ЗФР (бичачий сироватковий альбумін у забуференому фосфатом фізіологічному розчині). Мишаче МАт Е19 « використовували як надосадову рідину культури тканини гібридоми Е19 у концентраціях від 1:5 до 1:10 у 295 - 70 БСА/ЗФР. с В ході імунохімічних аналізів використовували такі реагенти: комплекс стрептавідин-пероксидаза (фірма

Із» Месіог ІГарз, Вигпідате, СА), комплекс авідин-біотин-пероксидаза (фірма Месіог І арв), біотиноване кінське антимишаче антитіло. (фірма Месіог І арз), ДАВ (діамінобензидин, фірма Зідта Спетіса! Со., Сент-Луїс, МО,

США), гематоксилін Гарриса.

Оцінювали свіжозаморожені зразки тканини, такі, як нормальна тканина ободової кишки, молочної залози, і легені, шлунка, панкреатичної залози, шкіри, гортані, сечового міхура, гладкої і скелетної мускулатури. оз Вивчені тканини пухлин уключали карциноми молочної залози, ободової кишки, стравоходу, матки, яєчника, панкреатичної залози, шлунка, голови й шиї. о Користувалися відомим у даній галузі непрямим імуноперексидазним методом (Сагіп-Спеза Р., Са .У., -і 20 Кенід МУ.0., "Се! випасе діусоргоївіп ої геасіїме звігота! Тіргоріавів аз роїепііа!ї апіроду їагдеї іп пітап еріїпеїйа!І сапсеге", Ргос. Май). Асай. Зсі. ОБА 87: 7235-7239 (1990)) з використанням свіжозаморожених зрізів щи товщиною БбБмкм. ДАВ використовували у функції субстрату для кінцевого продукту реакції. Зрізи піддавали контрастному фарбуванню гематоксиліном Гарриса й оцінювали у відношенні експресії антигену.

Експресія І АНс у нормальних людських тканинах 29 Вивчені нормальні тканини виявилися негативними у відношенні експресії Ї дАНсо за винятком нормальної

ГФ) тканини панкреатичної залози, в якій було виявлено підгрупу позитивних ендокринних клітин в острівцях юю Лангергансена (А-клітини), що включала ІАНс, сЕ19 і 19 (таблиця 18). При використанні у функції негативного контролю пІдС1 (людський імуноглобулін підкласу Іде) ніякої імунореактивності виявлено не було.

Експресія І АНс у пухлинах 60 При вивченні зразків тканини пухлин було виявлено практично однакову схему експресії І дНс, сЕ19 і Е19 у фібробластах строми пухлини. Сильна й однорідна експресія відбувалася в більшості вивчених випадків, насамперед, у зразках злоякісних пухлин, добутих із молочної залози, ободової кишки, легені, панкреатичної залози й плоскоклітинних карцином (5ОСС) голови й шиї (таблиця 19). При використанні у функції негативного контролю ПпІдС1 ніякої імунореактивності виявлено не було. бо ІЇАНс, сЕ19 ї Е19 виявили імунореактивність у відношенні до фібробластів строми пухлини у вивчених зразках раку епітелію, але у відношенні до фіброцитів клітин мезенхіми нормального органа або клітин паренхіми нормального органа дорослої людини ні | АНс, ні СЕ19 не виявили ніякої імунореактивності. Остання у відношенні до ГАР спостерігалася лише в підгрупі ендокринних клітин в острівцях панкреатичної залози, ймовірно, в А-клітинах, що продукують глюкагон, і в 4-х з 9-ти вивчених зразків матки, що являли собою підгрупи фібробластів строми в цих тканинах.

За результатами імуногістохімічного аналізу І АНс у нормальних людських тканинах і карциномах людини, що експресують ЕАР, було виявлено однакову схему зв'язування для І АНс, СЕ19 і мишачого МАт Е19. 70 Таблиця 18

Імунореактивність МАт І дНс, СЕ19 і Е19

У відношенні до нормальних тканин людини тдаюта 04

Зоепітеліальні клітини протекіалов 10100107 мептеляльнкйени 77171711 21212111 777202 5010001 телуча тання 11111111 вон сдни 11111111 тн нМтТтт тини нини др стберкеновифити 11000101 сполужатаня 11717177

Стедємяи 015

Кжфювоносні судини 01001001 мовотишковестетня 00000101 дрхо0олежняєюи 00000014 епітелію о

Сталюювийхящ 15 т чттнтининнни нини ни ливі 00000000 о зов 01111111 - пневмоцити сит 11) ин нин нини» алевеслярні аю 11111111 є вльвеолявнкаияи 11111111 1771112 25000110 шу 8 о шлунок З зБО000опвовнішнійвелтвлй 01 т- сулюнеттн нний

Селевнтни 015 паретальні (обкладкові) клітини нин я ПО ПО М влиювютня 000015

Зонейровндокринні клини 001 н- с т чТтнттннннини нини нини . вон сдни 11111111 щ бтадімям 1 - гладкі м'язи вх 11111111 я зовнішній 000 в телуча тання 11111111 с такий шен 11 ептелійвороюютит 01 з пелуча тання 11111111 що оствмямо 0111 й вон сдни 11111111

Клімфоїдна тжанин 0103001 з з«ч ч чани бутлі 7000 ел тенняї/ 00011111

Ф. ртадюмяи 11 юю Зювоносі судини 10100101 підшлункова залоза 103101 во рептелійлотоє 1

Зацинарний епітелій 00101 - острівці Лангерганса: ПОП ПИ ПО ПО війни сажі вво00сбютини - сполучна тканина - - -

кювонюнсдни 111110,101150001- беви 000 шию 0000 рлуватиентяйй 000 тУчФ тТтТттТттнининишн нний етелуча тання 11111111 сталіювийхрящо 11111111 чтчттеУултинининннниннининни оо свелтнмям 10000115

ЧИННИКИ шини пижюдняяти 1110015 слімфатичністуєи 11111111 сполужатання 17777777 зо Сжювоюєнсджнио 11111111 тен 11111111 зервонайбиатта 11111111 ння нн о и ПО и ПО тела жання 11111115 20 лечна 1 еяеми 1

Сжвнітююй 11111111

У чн ни ши нн нини щитовидна зало 11111112 офолілярнийелтелій 11111111 о парафолідлявнтни 1 пелуча тання 11111111 передмова злою 11111111 заловиєтийелтей 011

АННИ п НЯ ПОЛОН ПОЛО НЯ ПОЛО ОО КАН Є яю 170

Самяннаьн 0010 м 000

ДОН сп ПОЛОН ПОЛОН НОЯ НО КАК ет юма 11115001 шийамати 111 бе шою 00001- З с зн ПО Я Я ПОЛЯ ПО вдтік 11000101

І» валом 11111111 м 00110111 жк вв (жеююнсдни 00000000 - мей 71711711 зоаоловню моя 11111111 о т чТфнтТттТтнннин нн нини ння нини ю нейюотальіяяяи 11001001 раю осжеююсвни 00000000 шко 11111110 т мелеюлярийшеє 11111111 зежютий лине 11111111

Сян 0010

Кровоносні судиви 11111111 о ше 11111113 екамознинелтяй 015 т меяююи 77171717

Мо Означає кількість зразків тканини, добутих із різних пацієнтів. " Ідентифікація А-клітин на базі морфології і локалізації усередині острівців

Я Позитивна імунореактивність у стромі 4-х із 9-ти вивчених зразків. Позитивні зразки являють собою зразки ранньої (2) і проміжної (2) фаз проліферації ендометрію. 65 Приклад 9: Видоспецифічність зв'язування І АНс у зрізах тканин

Цей експеримент проводили з метою оцінки імуногістохімічними методами реактивності І АНс із тканинами,

добутими з миші, пацюка, кролика й супотоїдив мавп.

В ході цих експериментів у функції негативного контролю також використовували сЕ19 і людський Ідс1 (підт). Для імуногістохімічних аналізів застосовували такі реагенти: комплекс стрептавідин-пероксидаза (фірма Месіог І арз, Вигідате, СА), ДАБ (фірма Зідта Спетіса! Со., Сент-Луїс, МО, США), гематоксилін Гарриса.

Для експериментів використовували свіжозаморожені зразки таких тканин, добутих із миші, пацюка, кролика й супотоїЇдив мавп: головний мозок, печінка, легеня, нирка, шлунок, панкреатична залоза, тонкий кишечник, тимус, шкіра, м'язи, серце, селезінка, яєчник, матка й сім'яники. Як позитивний контроль у кожний експеримент уключали зрізи нормальних панкреатичних залоз людини й зразок карциноми молочної залози. 70 Імуногістохімія

Для аналізу 5 свіжозаморожених зрізів товщиною 5мкм використовували відомий у даній галузі непрямий імунопероксидазний метод (|Сагіп-Спеза Р., СІЯ 13). і Кейід МУ). "Се звипасе діусоргоїеіп ої геасіїме вігота! Тіргоріавів аз а роїепіа! апіроду їагдеї іп Ппитап еріїеЇйаі! сапсеге", Ргос. Май. Асай. зЗсі. 87: 7235 (1990)). Антитіла І АНс, сЕ19 і підт (по мкг/мл) біотинували добре відомим у даній галузі методом і /5 Виявляли з використанням комплексу стрептавідин-пероксидаза. ДАВ використовували у функції субстрату для кінцевого продукту реакції. Зрізи піддавали контрастному фарбуванню гематоксиліном Гарриса й оцінювали у відношенні експресії антигену.

За результатами експериментів було встановлено, що вивчені нормальні тканини не реагували ні з | АНс, ні з СЕ19 (таблиця 1).

У застосованих як позитивний контроль людських панкреатичних залозах було виявлено, що І! АНс і сЕ19 зв'язуються з підгрупою ендокринних клітин в острівцях Лангерганса, що раніше було встановлено для Е19. Крім того, зв'язування ЇЙ АНсо і сЕ19 спостерігалося у фібробластах строми пухлини в зразку карциноми молочної залози.

В ході цих експериментів імуногістохімічні аналізи нормальних тканин, добутих із миші, пацюка, кролика й сч об Ссупотоїдиз мавп, не дали змоги виявити яке-небудь зв'язування І! АНс чи сЕ19. о

Ф зо тен юю 00101011 юратоловноючою | 7317113 т юю 00000101 сч

Ст НИ ПО ПО ПОН птелатоцити 011 о зв вюдтатад 1723131 21 1 5031 м меня 01110111 пт тДМИНИ ЧНІ ПОЧНИ ПЧ ПОН алюви 11013101 « яко 111 шуби 11 8 с епелйтувнх 17331013 . ту ши и По НЯ г» заловитийелтетй 1210

Стадімям 00 ідшлунюва злюж (01111

В. Пеквоюинніяцині 0051 с екююинноств 0200 яшенюо 0011111 з зловити теля 201 - 5 стадамяи 0000303 тим т сю 1 шбва 01110111 рати 17711771 17001

Стетювізаюи 121213 о волосяні фолути 020 ю белинмяи 0110 виє 00111111 сени 11117111 бо Спмещии 011 як 11111

СФфоліюдлярнийсттеля | 23100 бевюма 11

Мй ги я Я По НЯ - міометрій - - - -

Сшшеант 31-31 1-1 век 011 ептелй туютж | же | я | я спелучна жання 0020123

Приклад 10: Створення ліній клітин, що продукують химерні й перетворені моноклональні антитіла до ЕАР

Метою цього експерименту була демонстрація процесу одержання стабільних ліній клітин за даним винаходом, що експресують І АНс, І дНА, І вНв, І вНор і сЕ19 у СНО-клетинах лінії 0544. Одержували стабільні лінії клітин, трансфіковані гуманізованим або химерним антитілами Е19. їхню ідентичність перевіряли методом

ПЛР-ампліфікації варіабельних ділянок важкого й легкого ланцюгів із використанням у функції матриці геномної

ДНК, що добувалася з кожного трансфектанта.

СНо-клітини лінії 00544 витримували у середовищі 5ЕМ-ЇІ без умісту сироватки. Ліпофектин і середовище

ВЕМ-Ї без сироватки посталялися фірмою сірсо/ВКІ. Генетицин і всі рестриктази поставляла фірма Воепйгіпдег

Маппвіеїт. Полімеразу Ріи поставляла фірма 5іга(адепе.

ДНК для трансфекції виділяли з клітин Е.соїї, використовуючи Оіагікег Махі Сагігіддез (фірма Оіадеп) відповідно до інструкцій постачальника. Усі препарати ДНК оцінювали шляхом розщеплення рестриктазами.

Послідовності варіабельних ділянок І АНс у відповідних векторах аналізували за допомогою секвенатора типу

АВІ РВІЗМ 310 (фірма Регкіп-ЕІтег).

Додаткову інформацію, що стосується застосованих векторів і послідовностей ДНК, можна знайти у вищенаведених прикладах.

Трансфекція СНО-клетин лінії 44

Клітини на логарифмічній фазі росту висаджували в 6б-коміркові планшети з умістом 1Імл свіжого середовища с 8ЕМ-Ї, СНО-клітини лінії ОС44 котрансфікували плазмідами, що кодують важкий і легкий ланцюги гуманізованої (3 або химерної версій Е19 за допомогою трансфекції ліпосомами. Ліпосоми одержували, використовуючи б мкл реагенту ліпофектину й О,5мкг кожного вектора (один для важкого ланцюга й один для легкого), аналогічно трансфекції з використанням І іроїесіАМІМЕ, за винятком того, що реагенти розводили в середовищі ЗЕМ-Ї.

Через 24год. клітини розбавляли в співвідношенні 1:10 середовищем ЗЕМ-Ї з умістом ЗО0Омкг/мл генетицину. ї-оі

Після охолодження початкової фази знищення клітин (10-14 днів) концентрацію генетицину зменшували до - 200мг/мл і до кінцевої концентрації З;НМ додавали метотрексат. Через 10-14 днів концентрацію метотрексату збільшували доти, поки не досягали такої в 2ОНМ. с

ПЛР-ампліфікація ДНК трансфектантів со 107 СНо-клітин лінії 00544 центрифугували в мікроцентрифузі Еппендорфа протягом нетривалого періоду м часу при максимальній швидкості обертання, однократно промивали ЗФР і один раз повторно пелетували.

Геномну ДНК одержували шляхом осадження етанолом після лізису ДСН і оброблення уламків протеїназою К.

З метою ампліфікації варіабельної ділянки важкого або легкого ланцюга з використанням у функції матриці геномної ДНК застосовували суміш з умістом одного з нижченаведених праймерів, дДНТФ, буфера й полімерази « 20 Рім. Добуті в результаті ПЛР продукти розщеплювали відповідною рестриктазою. Їхню ідентичність перевіряли з методом електрофорезу на агарозному гелі. с Набір праймерів для легкого ланцюга: ;» 5-САС АСА ТТО ТСА ССС ДАТ СТО-3" РКМ 1690

Б-САС АСТ САТ ААА СТО ССА САТ СТТ-3' РКМ 19308 ш- Набір праймерів для важкого ланцюга: (95) 5-ТТО АСА ССТ СТО ТС ОСА СС ТТ-3 РО 5863 іме) 5-СОС ОСА САС САТ ССА СТО АСС Т-3 РО 63328 - 50

Нерозщеплений ПЛР-продукт важкого ланцюга мав очікуваний розмір у 469 пар основ, а довжина 4) ПЛР-продукту легкого ланцюга становила очікувані 286 пар основ. Перевірку ідентичності здійснювали шляхом оброблення рестриктазами ВзїЕЇ! (важкий ланцюг) або МіаМ (легкий ланцюг).

Лінії СНО-клітин трансфікували | АНс, І АНА, І вНв, І вНо, а також сЕ19. Одержували стійкі проти генетицину

Лінії, що піддавали дальньої селекції за ознакою стійкості проти метотрексату. В результаті ПЛР-ампліфікації з наступним розщепленням рестриктазами ДНК легкого й важкого ланцюгів одержували очікувані смуги. й о перевіряли ідентичність трансфектантів І АНс, І АНА, І вНбв, І вНбо. ко Описані клітини весь час знаходилися у середовищі без умісту сироватки й не оброблялися ніякими продуктами тваринного походження, наприклад, трипсином. 60 Одержували трансфіковані лінії клітин-продуцентів, що експресували моноклональні антитіла І АНс, АН,

І вНв, І вНр і сЕ19. Їхню ідентичність перевіряли шляхом ПЛР-ампліфікації і розщеплення растриктазами добутих

ПЛР-продуктів варіабельних ділянок важкого й легкого ланцюгів.

Приклад 11: Експресія протеїнів антитіла в клітинах яєчника китайського хом'ячка лінії ОС44 і їхнє очищення

Метою даного експерименту були експресія й очищення МАт Г АНс, АНА, І вНв і Г8Но для визначення їхніх 65 характеристик. Крім того, у цьому експериментові передбачалося здійснення кількісного аналізу ЕГІ5ЗА з метою оцінки концентрацій антитіла як у зразках неочищених середовищ, так і в очищених зразках Ід, і визначення за результатами цього аналізу відносних рівнів експресії різних гуманізованих конструкцій Е19.

Вирощені в середовищі без умісту сироватки СНоО-клітини лінії 00344 і метотрексат із чистотою, що відповідала нормам фармакопеї США (О5Р-чистота) поставлялися фірмою Віоїесппіса! Ргодисіоп Опії ої те Ог.

Кап! Тротае зтрьн, Вірегасі, Німеччина; обидва продукти можна також придбати в торгівельній мережі. Клітини весь час знаходилися в середовищі без умісту сироватки. Останнє, в даному випадку ЗЕМ-ЇІ, поставляла фірма бірсо/ВкКІ. Протеїн-А-агарозу поставила фірма Ріегсе Спетіса! (Індіанаполіс, ІМ, США). Стандартні зразки людського Ід (каталоговий номер І 3889), таблетки паранітрофенілфосфату (М 2640), бичачий сироватковий альбумін (БСА) (А 7906) і специфічне кон'юговане з лужною фосфатазою козяче антитіло до каппа-ланцюга 7/0 людини (А 3813) поставила фірма Зідта Спетіса! (Сент-Луїс, МО, США). Специфічне кон'юговане з лужною фосфатазою козяче антитіло до людського гамма-ланцюга поставлялося фірмою Ддасквоп Іттипогезеагсі

І арогайігіев (через фірму Зігайесп Зсіепійіс). ТВ5 (забуферений трис фізіологічний розчин) містив Масі (150мММ), 5ОмМ-трис, рнН7,5.

Умови культивування клітин, використовуваних для експресії антитіл Клітини культивували й уводили в /5 матраци типу Т-175 у середовищі ЗЕМ-Ї без умісту сироватки (нікого перемішування не здійснювали).

Середовище містило 20Омкг/мл генетицину й метотрексат (2О0нМ) (без антибіотиків). Клітини пересіювали методом розведення. Вони не склеювалися й виростали з утворенням невеликих кластерів. Коли клітини досягали стаціонарної фази росту, середовище збирали й центрифугували з метою видалення клітин, які зберігали при -202С до моменту застосування.

Очищення І АНс

Всі стадії очищення здійснювали при 4 2С. Колонку типу С10/10 (фірма РІаптасіа Ріпе СПНетіса!5) упаковували протеїн-А-агарозою (об'єм гранул Змл). Колонку промивали ТВ5 і однократно попередньо елюювали 0,1М Ма-цитратним буфером. рН стабілізували на відмітці 3,0, щоб запобігти утворенню на колонці вільно зв'язаного матеріалу. Потім колонку повторно врівноважували ТВ5. Температуру навколішнього Га середовища стабілізували на 42С. Використаним надосадовим рідинам культури давали відтати, перед тим, як починати хроматографію на протеїні-А, центрифугували при 10000хд протягом ЗОхв. з метою видалення уламків о і розбавляли рівним об'ємом ТВ5. Цей продукт завантажували в колонку з протеїном-А зі швидкістю 0,бмл/хв., використовуючи перистальтичний насос типу Р-1 (фірма РНагтасіа), і промивали ТВ5 доти, поки абсорбцію при 280нм було неможливим виявити. Елюцію антитіла починали при 280нм. їмл фракції елюйованого продукту (Се) збирали в пробірки з умістом достатньої для нейтралізації цитратного буфера кількості трис-буфера, рно.

Фракції з умістом протеїну об'єднували й концентрували, використовуючи пристрій для фільтрації типу Атісоп із - фільтром УМ-30О0, з паралельним діалізом у протитечії ЗФР. Колонку відразу регенерували ТВ5. Аналіз С зв'язування протеїну з барвником проводили за допомогою набору для визначення протеїнів фірми ВіоКкай (Негсшез, Каліфорнія) відповідно до інструкцій виробника, використовуючи як стандарт бичачий сироватковий о з5 альбумін. че

Аналіз ІдО (гамма-імуноглобулін) людини методом ЕГІЗА

Планшети для ЕГІЗА покривали (сенсибілізували) протягом ночі ї0О0мкл специфічного кон'югованого з лужною фосфатазою козячого антитіла до людського гамма-ланцюга в концентрації 0,4мг/мл у буфері для « сенсибілізації поверхонь при 42С. Сенсибілізувальне антитіло видаляли й планшети блокували 290-вим БСА в ЗФР протягом 2год. Всі наступні стадії здійснювали при 372С. Блокувальний буфер заміняли зразками антитіл - с або використовуваним як стандарт людським Ідс1, розведеним у буфері для розведення, готували послідовні ч розведення в об'ємі 200мл і інкубували протягом 1год. Негативний контроль уключав буфер для розведення » і/або культуральне середовище нетрансфікованих клітин. Комірки промивали, додавали 100мкл специфічного кон'югованого з лужною фосфатазою козячого антитіла до людського каппа-ланцюга, розведеного в співвідношенні 1:5000, й інкубували протягом год. Комірки промивали, додавали 1О0Омкл буфера для - проведення реакції і інкубували ЗОхв. Реакцію припиняли, додаючи Маон (1М), і за допомогою планшет-ридера о для ЕЇІЗА визначали абсорбцію при 4О05нм. Результати аналізували методом ітеративної апроксимації чотирипараметричної кривої. ко Аналіз амінокислот проводили відомими в даній галузі методами. - 20 Одержували моноклональне антитіло ІАНс, що очищали до гомогенного стану методом афінної хроматографії на протеїні-А. Аналіз ЕГІЗА з використанням у функції стандарту людського (ДО1 дав змогу 4» встановити, що вихід І АНс перевищує 7095. За даними, добутими шляхом гель-електрофорезу в

ДСН-поліакриламідному гелі, чистота продукту перевищувала 9095. Репрезентативні дані щодо експресії і типові рівні виходу після очищення зведено в таблицю 21. щі й виходу очищеного антитіла зо б5

В ході цього експерименту було одержано репрезентативні дані щодо експресії кожного антитіла до ЕГАР. Дані щодо виходу по завершенні афінної хроматографії на протеїн-А-агарозі було одержано на основі оцінки зв'язування протеїну з барвником очищеного Ід з використанням БСА у функції стандарту.

Приклад 12: Зв'язування моноклонального антитіла І АНс з виділеним рекомбінантним ЕАР людини

Метою цього експерименту була характеризація зв'язування І АНс з виділеним рекомбінантним РАР людини.

Оцінка СО8-ГАР методом ЕГІЗА

Планшети для ЕГІЗА покривали (сенсибілізували) протягом ночі 100мкл мишачого антищурячого антитіла (фірма бЗідта Спетіса!, КО761), розведеного у співвідношенні 1:2000 у буфері для сенсибілізації поверхонь при 420. Сенсибілізувальне антитіло видаляли, після чого планшети блокували 296-вим БСА в ЗФР протягом 7/0 год. Всі наступні стадії здійснювали при кімнатній температурі Блокувальний буфер заміняли 100-мілілітровими зразками щурячого антитіла до СО8 (фірма РІагтіпдеп) у концентрації мг/мл і інкубували протягом год. Планшети промивали, додавали 100мкл надосадової рідини культури СО8-ЕАР (див. приклад 14) (1:2 у ЗФР) і давали зв'язатися протягом 1год. Планшети знову промивали, додавали зразки антитіла (дворазові послідовні розведення) в об'ємі 10Омкл і інкубували протягом год. Негативний контроль уключав ДО людини 75 іїабо культуральне середовище нетрансфікованих клітин. Комірки промивали, додавали 100мкл мишачого антитіла до людського ІдДО1, кон'югованого з пероксидазою хрону (НЕР) (фірма 7утеа, 05-3320), розведеного у співвідношенні 1:500 буфером для розведення, й інкубували протягом год. Комірки промивали, додавали 10Омкл субстрату для НЕР (азинобіс(З-етилбензтіазолін-6-сульфонова) кислота, фірма Зідта Спетіса!, А9941) і інкубували протягом бОхв. Реакцію припиняли, додаючи Маон (1М), і за допомогою планшет-ридера для ЕГІЗА го визначали абсорбцію при 405/490нм. Результати аналізували методом ітеративної апроксимації чотирипараметричної кривої.

В альтернативному варіанті планшети безпосередньо сенсибілізували СЕ19. У вищенаведений спосіб із цими планшетами давали зв'язатися РАР (рекомбінантний ЕРАР людини, див. приклад 13) і додавали біотиноване | АНс ("мкг/мл). Зв'язування антитіла визначали з використанням кон'югата НКР-стрептавідин, як це описано вище. с

Солюбілізація зв'язаного з мембраною ГАР людини

Клітини лінії 293ЕАР 1/2 або контрольні клітини лінії 293, що експресують ЕАР, промивали ЗФР і лізували з о використанням 1905-вого тритону Х-114 у забуференому трис фізіологічному розчині. Ядра й уламки видаляли центрифугуванням при 10000хд. Надосадову рідину розділяли на фази (Езігеіспег А., МУопіепа А., Веїйп 0., зЗспейпіпо МУУ.О., Мазаїїй 9.О., "СНагасіегігайоп ої сейшаг бБіпаіпу вйе бог (Ше пшгоКіпазе-їуре ріазтіподеп «о зо асімайог", у. Віої. Спет., 264: 1180-1189 (1989)), що здійснювалося з метою збагачення мембранних протеїнів.

Добуту за допомогою детергенту фазу збирали й розбавляли буфером з умістом 195-вого емпігену ВВ (фірма в

СаІроспет), щоб запобігти повторній агрегації тритону Х-114. З цим продуктом здійснювали хроматографію на су конканавалін-А-агарозі (Кейіпуд МУ.)., Сагіп-Спеза Р., Неаіеу ОН. Би 5.Ї.,, Огег Н.ІЇ., 5спжар М., АЇїБіпо

АР. Я Г30., "Кедшаєйоп апа Ппе(еготегіс вігисішге ої ЛБгоріазі асіїмайоп ргоївіп іп о погта! апа і, їгазіогтеа сеї ої тезепспутаї! апа пепгоесіодептаї огідіп", Сапсег Кев. 53: 3327-3335 (1993). ї-

Біотинування | АНс

І АНсе (1-2мг) піддавали діалізу в протитечії бікарбонатного буфера (50ММ) і біотинували з використанням 10-кратного молярного надлишку сульфосукцинімідил-б6-біотинамідогексаноату (МНЗ-І С-біотин) (фірма Ріегсе

Спетіса!ї, Косктога, Іллінойс, США) протягом 2год. при кімнатній температурі. Продукт, що не прореагував, « 70 видаляли шляхом повторного мікродіалізу в мікроконцентраторі. шщ с Короткочасні трансфекції й Клітини лінії СО5-7 (Американська колекція типових культур тканин, реєстраційний номер СКІ-1651) «» котрансфікували методом електропорації векторами, що кодують важкий і легкий ланцюги І АНс.

Моноклональне антитило до СО8 іммобілізували на титрувальних мікропланшетах. СО8-РАР із середовища

Культури клітин комах, інфікованих бакуловірусами, давали зв'язатися з цими планшетами. Використане -і середовище культур клітин СО5-7, короткочасно трансфікованих двома різними векторами, що кодують | АНс, послідовно розбавляли й додавали в комірки з умістом іммобілізованого СО8-РАРІ АНс зв'язувалося з о виділеним іммобілізованим протеїном СО8-ЕАР (Мал.35). В надлишковій рідині уявно трансфікованих культур ка клітин СО5-7 зв'язування виявлено не було.

Рекомбінантний, зв'язаний з мембраною РАР, добутий за допомогою детергенту з екстрактів клітин лінії

Ше 293ЕАР 1/2 або з контрольних екстрактів, послідовно розводили й іммобілізували з використанням химерного

Ф моноклонального антитіла Е19, зв'язаного з титрувальними мікропланшетами. Біотиноване І АНс зв'язувалося рекомбінантним ЕАР людини, іммобілізованим за допомогою сЕ19 (Мал.36) залежно від концентрації.

Антитіло І АНс розпізнавало виділений іммобілізований рекомбінантний РАР людини, що ніс епітоп мишачого

Е19. Антитіло І АНс зв'язувалося як із СО8-РГАР, що продукувався клітинами комах, так і з протеїном РАР, продуцентами якого були клітини лінії 293ЕАР 1/2. іФ) Надосадові рідини культур із СО5-7-клітин, трансфікованих векторами важкого й легкого ланцюгів, що ко кодують І АНс, або векторами без ДНК (контроль), збирали через З дні після трансфекції. СО8-РАР іммобілізували з використанням антитіла до СО8, як це описано вище. Шляхом послідовного розведення бо надосадових рідин клітин СО5-7 давали зв'язатися з іммобілізованим СО8-РАР і потім виявляли з використанням антитіла до людського ІдДС1, кон'югованому з НКР. Далі готували послідовні розведення добутих за допомогою детергенту екстрактів клітини лінії 293ЕАР 1/2, що експресує ЕАР, або контрольних клітин лінії 293 і додавали в сенсибілізовані СЕ19 титрувальні мікропланшети. Додавали біотиноване | АНс і з використанням кон'югата

НеР-стрептавідин визначали його зв'язування. 65 Приклад 13: Характеристики клітин фібросаркоми лінії НТ-1080 і людських ембріональних клітин нирки, трансфікованих кКДНК людського ГАР

Протеїн активації фібробласта (ЕАР) являє собою зв'язаний з мембраною протеїн-носій епітопу Е19, що експресується на поверхні фібробластів строми пухлини. З метою визначення характеристик моноклональних антитіл до ГАР одержували лінії клітин, що екс пресують рекомбінатний протеїн ЕАР, і відповідних контрольних клітин, позбавлених ЕАР.

Використовували клітини лінії НТ-1080 (реєстраційний номер СС. 121) і людські ембріональні клітини нирки лінії 293 (реєстраційний номер СКІ. 1573), одержані з Американської колекції типових культур тканин (Мериленд,

США). Трансфектам поставила фірма Рготеда (Медисон, М/І). Генетицин і всі рестриктази поставлялися фірмою

Воепгіпдег Мапппеїт. ДНК для трансфекцій виділяли з клітин Е. соїї, використовуючи Оіагікег Махі Сагігіддез 7/0 «фірма Сіадеп) відповідно до інструкцій постачальника. Всі препарати ДНК оцінювали шляхом розщеплення рестриктазами. Послідовності векторів аналізували з використанням секвенатора типу АВІ РКІЗМ 310 (фірма

Регкіп-ЕІтег).

Додаткову інформацію щодо векторів і застосованих послідовностей ДНК можна знайти в (Зсапіап М.)., Каї

В.К., Само В., Сагіп-Спеза Р., Зап2-Мопсавзі М.Р., Неаїіеу 9.Н., СІЯ ї30., Кейціпд МУ... "МоїІесшіаг сіопіпд ої 7/5 Лбгоріазі асіїманйоп ргоїєїп арна, а тетрег ої зегіпе ргоївазе Тату зеїесімему ехргевзей іп звіготаї

Тргоріазів ої еріїпеїйаі! сапсегв", Рос. Май. Асай. Зсі. ОБА, 89: 10832-10836 (1992)). Послідовність. кКДНК

ЕАР депонована в банк генів (реєстраційний номер НЗО9287).

Культура клітин і імуноаналізи

Клітини НТ-1080 трансфікували 1мг ДНК, використовуючи трансфектам відповідно до інструкцій виробника.

Людські ембріональні клітини нирки лінії 293 трансфікували 1О0мг ДНК з використанням фосфату кальцію |Вгапп

М.К., ВусКіеу М.9У., допез ЗМР, Воппег Т.І., "Ехргезвіоп ої сіопей тигвзсагіпіс гесеріог іп АЗУ | сеїЇв", Мої.

РПпагтасої., 32: 450-455 (1987)). Через 24год. клітини розбавляли з розрахунку 1:10 свіжим середовищем з умістом 200мг/мл генетицину. Колонії збирали й оцінювали методом імунофлуоресценції у відношенні експресії

ЕАР, як це описано в |(Кейід МУ.)., Сагіп-Спеза Р., Вегевіога Н.К., Оейдеп Н.РЕ., Меіатейа М.К., ОСІа І... "Сеї| сч ов 8ИПасе діусоргоїєїпй ої Ппитап загсотав: ашегепі ехргеввіоп іп погта! апа таїдпапі (взцез апа сийигей сеї", Ргос. Май). Асад. 5сі. 85: 3110-3114 (1988). і)

Імунопреципітацію з сЕ19 проводили з метаболічно міченими клітинами, як це описано в |Кейцід МУ..,

Сагіп-Снпеза Р., Неаієу 9У.Н., Би 5.Ї., Огег Н.ІЇ., 5спжар МІ, АїБріпо А.Р, Са .)., "Кедшіайоп апа Ппефеготегіс зігисійге ої ЯПргоріаві асіїманоп ргоїеіїпй іп погта! апа ігапвїогтей сеїз ої тезепспута! ап4 пешгоесіодегта! «о зо опідіп", Сапсег Кев. 53: 3327-3335 (1993).

Клітини ліній НТ-1080 і 293 тестували у відношенні експресії антигену БАР за допомогою - імунофлуоресцентних аналізів із використанням антитіл до ЕАР, в результаті чого було встановлено, що вони є с антигеннегативними клітинами. Трансфекція цих клітин вектором ЕАРЗ8 дала змогу одержати стійкі проти генетицину клони. Виділені клони збирали й аналізували у відношенні експресії БАР методом ме) імунофлуоресценції. Було виявлено два клони клітин, позначені як 33 НТ-1080ОБАР і 293БАР 1/2, що ї- експресували зв'язаний із клітинною поверхнею протеїн РГАР (встановлено з використанням антитіла сЕ19).

Фарбування клітин клонів 33 НТ-1О8ОБАР і 293БАР 1/2, що не володіють проникністю, антитілом сЕ19 підтвердило локалізацію на клітинній поверхні протеїну ЕАР.

В результаті імунопреципітації радіоактивно міченого протеїну БАР з екстрактів мічених З5-метіоніном « Клітин клонів 33 НТ-ТО80ОБАР і 293БАР 1/2 за допомогою сЕ19 з'вилася смуга 9ЗкДа, яку виявили методом 8 с авторадіографії. Ця смуга не виявлялася в імунопреципітатах в екстрактах батьківських клітин лінії НТ-1080 й або 293. "» Дві стабільно трансфіковані лінії клітин, клони 33 НТ-1080ЕАР і 293ЕАР 1/2, експресують ЕАР на поверхні клітин, що було встановлено за допомогою імунологічних аналізів МАт до ЕАР. Ні батьківські клітини НТ-1080,

Ні такі 293 не експресують РАР із такою інтенсивністю. -І Приклад 14: Одержання й характеристики злитого протеїну СО8-ЕАР

Розчинну форму РАР (протеїн активації фібробласта) людини у формі злитого протеїну СО8-РАР одержували о в клітинах комах із метою характеризації антигензв'язувальної ділянки МАт до БАР з умістом Ї. дАНс. Для ко здійснення секреції протеїну і створення додаткової епітопної мітки було вибрано мишачий СО8. - 50 КДНК, що кодує позаклітинний домен СО8, який складається з перших 189 амінокислот мишачого СОва (банк генів М12825), зв'язували з кКДНК позаклітинного домена БАР (амінокислоти 27-760), що здійснювалося,

ФО головним чином, методом, описаним у Гапе зі співавторами (апе Р., ВгосКег Т., Ниреіїе 5., Радомап Е.,

І агамесспіа А., МеСоппеїЇ, "Боїшбіе СО40 Ідапа сап геріасе (Ше погта! Т сеїІ-дегімеа СО40 Іїдапа відпа! Ю У сеї іп Т сеїІ-дерепдепі асіїмайоп", 9. Ехр. Мей. 177: 1209-1213 (1993)), з використанням стандартних протоколів ПЛР.

Автентичність усіх клонів перевіряли шляхом секвенування ДНК. Добуту ДНК вбудовували у вектор рМ11393

Ф, (фірма Іпмігодеп). Трансфекцію клітин лінії 519 (фірма Іпмйгодеп) цим вектором і ампліфікацію одержаного ко рекомбінантного бакуловірусу здійснювали за відомими методами (Васціомігиз Ехргеззіоп Месіогв. А І арогайгу

МапиаІ. 'КейшШу О.К., Мійег СК. Гискомжм М.А. (ред.), Схга Опімегейу Ргезв: Мем МогКк, 1994). бо Використовуване середовище клітин лінії Нідй БРіметм (фірма Іпмйгодеп), що протягом 4 днів інфікували рекомбінантним бакуловірусом СО8-ЕАР, збирали й очищали методом ультрацентрифугування.

ЕПЗА (твердофазний імуноферментний аналіз) СО8-РАР описано вище (приклад 12).

Інфіковані вірусом СО8-ЕАР культури клітин комах, що секретують у середовище злитий протеїн-носій епітопу

Е19, розпізнавали за допомогою антитіла до РГАР (Мал.1). Ні середовище для культури клітин як таке, ні 65 середовище клітин комах, інфікованих злитим протеїном СО8-СО401І, не зв'язувалися антитілом до ЕАР.

Розчинний протеїн СО8-ЕАР, що ніс епітоп Е19, секретувався в середовище з умістом інфікованих культур клітин комах. Надосадові рідини клітинних культур, інфікованих контрольною конструкцією, не містили антиген-носій епітопу Е19.

Розчинну форму ЕАР, тобто СО8-РАР, одержували в клітинах комах, причому було встановлено, що

СО8-РАР несе епітоп, розпізнаваний сЕ19.

Надосадові рідини клітин комах, інфікованих рекомбінантним бакуловірусом, що кодує злитий протеїн

СО8-РАР або СО8-СО40Ї, збирали через 4 дні після інфікування. Середовище для культури клітин без умісту останніх використовували як додатковий контроль (середовище). Послідовно виготовлені розведення цих продуктів додавали в сенсибілізовані за допомогою антитіла до СО8 мікротитрувальні планшети й давали 70 відбутися зв'язуванню. Потім додавали сЕ19 (мг/мл) і знову чекали, поки не відбудеться зв'язування. Останнє

СЕ19 визначали за допомогою антитіла до ЇдДС1 людини, кон'югованому з пероксидазою хрону.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Воєргіпдег Іпде)пеїт Іптеспатіопаї сшьн «120» Специфічне у відношенні ЕАРа (протеїн альфа активації фібробласта) антитіло з підвищеною продуктивністю «130» 12-196-РСТ «1402 РСТ/ЕРОЗ/02711 «141» 1999204-22 «1502 ЕР 98107925.4... «151» 1398-04-30 «160» 101 «170» РабепсІп мМек. 2.ї «210з 1 см «211» 339 Ге) «212» ДНК «2135 Ношмо заріепз «1005 1 І аасасєсусча сдасссааєс Ессадасься сгсЧассосаї сесєзоддода дачадссасс 60 «о абсзассдса адсссадеіса дадсстїїса гагсссауаа аїсазаацаа ссасскадес 120 з0 кддсаєсадс адааассаду асадссассс азвастсстса ЕсСЕбссадудс саасастачо 180 чааєсстдада басссдаєсач ЧчЕссаздсасс адссдоєссо ддасадасьс сасссеісасс 240 в. ассадсздсс сдсадудстЧа адчасусудса чеЕссаєсасї дісадсааса стстадссає 300 ссасЕсасцадє ссоддасааду дассазадєдч дазагагваа 335 с . (зе) «2102 2 «211» 113 3о «2125 РВт - 213» Нощо зарієпз «4005 2 !

Азр І1е Уаї Меїсї ТбІчІ б1п бек Рго Азр бек їеч А1а Ма! бек Пецй б1у « 2 5 10 15 сій АБУ Аїа ТЕ Ті Азп оСуз БДуз бЗег Бех Сіп Бек ГПеп Тем Тух Бех З с 29 25 зо п Ага Авпобіп уз Азп оТуг цей А1а Тер Тук б1п сіп Буз Рго 1у сіп

Р. я 35 40 415

Рго Рго уз Пец Без Їїе Ре Трр А1їа бек Тиг Ако бі Зек б1іу Маї 5о 55 60 -і

Вго Ар Ак РПе бек с1іу Зег с1у Рбе с1у ТЕ Азр Рпе ТБгропбеу ТВхг 65 то 75 8о (95)

І1є 5ег 5Зег Без біп діа біц Азр Маї А1їа Ма) Туг Туг Суз біп бій ко 85 зо з5 -І 20 ТУК Рпе Бек Тук Рго Пемш ТБх Рів біу біп біу Тпт Буз Уаї бі 116 160 | 105 110 4) І І ау «210» З 29 «211» 339 «212» ДНК

Ф) «213» Нощто зарієепз5 ко бо б5

«4005 З : часаєсуєда єдасссаасс бссадасссі їбдоассусує сіссачдууа чааудссасес 60 агсаассдса аціссадтса дЧадсстсеса тасеєстадаа ассазааацаа стасесодсс 120

Едоасхссадс ауазассачу асадссассс ааастсстса сссЕєбсоадас бадсаскадуч 180 чааєссочоч сасссдастад чсєсачєодс аусоусуєссу дудасачасксь сассеєсасс 240 ассадсаасс гдсадуссда адасоєодса укссаєдасї дєсаасаава ЕкЕсадстає 300 ссдсссасос ссоддасаацу дассаадяєу дааасаааа 339 «2102 4 «211» 113 «2125 РТ «2132 Ното зарієепз «41005 4

Азр Іі Маї Мес тк Сіп бек Рро Азр бБег Пец Аіа УМа1ї Бек Печ с1у 1 5 й 10 15 - бі Агу Аза тТпг Ї1е Азп Суз Був бег Бек біп Зег Гей йеч Туг бек 20 25 зо

Ага Азпобіб Пуз Азд о Тую ей Віа Тгр Ре біп біп о буз Рго б1у бід 35 Ї 40 45

Рго Рго Буз ей Гец І1е Рпе Ттр А1а бех Тпг Ак бій бек С1іу Маї 5о0 5 бо

Бго Авр Ага Рпе Бак біу Бек б1у Рпе б1у Тйг Азр РБе Тк Бей ТЕГ 65 й то 75 50

І1е бБег бег Пец біп А1а біз Азр Уа! Аза Уа1 Туг Азр Суз біп біп 85 о 95

Тук рРпе бек Тук Рто Пец Тих Рпе бсіу біп б51у тТвг Буз Уаї Сі 11е се по 105 110 5» і і о

Гу «210» 5 «211» 339 ї-о «212» ДНК : ї- «213» Ното заріепь5 «400» 5 с часаєтчіЧа ксасссазбс сссацдастість сЕдЧсіЯЧЕЧє сессадоддча дадоддссасе 60 аєсаассдса ассссастса дадсссстра басеіссадаз абсаазадаа стастбддсес 129 со тЧЧсаїєсадо ацдадассацу асацдссассс ааасссстса сстаїєсдачс тадсастачоа 180 ачдааєссдодоа басстдчасач Чессаччсдос адсуаосг59д дсдасасасьсє сасссссасс 240 че аксадсазчсс сусаудссда ачаєусєцуса деЕстаєсасі дссадсааса СЕсЕацсктає 300 ссостсаєсуо ссоддасаадо дассаачуєту сааагазаа 339 «210» 6 «рі1» 113 « «2122 РВТ «213з Ното заріепз а с «00» є п Азр т1іе ма1і Мес ТІ сіп бек Рко Азр бег Пец А1ї1а Маї бБег Геч сіу » ! и 1 5 10 15 сі Ака Аза Тйгої11е АзпоСувз Бу Зек бек біп Зек Пец Пец Туг 5ег 20 І 25 30 - Ак Авпобіп Гуз Азп Тук Бей Аза ТІр Туг бій біп уз Рго біу б3іп 35 40 45 (95) ко - 4) ко 60 б5

Рго Рко уз Бец Пец Т1е Туг Трр Аза Бек Тпг Акгу Сі 5Зег сі1у чаї зо 55 50

Рко Азр Аг Рпе бЗег біу бЗег з1у РБе ббіу Таг Авр Рпе ТК Гей ТЕ 65 7о 75 80 :

І1е бек Зег Гец біп А1їа б1ц Ар уаї Діа Ма1ї Тухк Тук Суз бід сіп 85 90 95

Тус РНе бек Туг Рго Бей Тк Ріє біу сС1іп С1у ТБйх Пуз Маї біз І12 100 105 110

Був . 70 У «2102 7 «2112 372 «2122 ДНК «2135 Ното заруєпз «4005 7 садуадкусаас саусусадіс суасуссдаа дсдаачаааєс ссоугасстс суєуааадес 60 адсЕдсаааа ссаубацаста сассстсасЕ сазсасасса сасасесссу: садасададєс 120 сседассаваа доссудачсо дасадоазддї астаасссста асазєдодбає єсссаастас 180 аассадааці Есааудуссая доадссассієо ассдбадуса айсстядссад сассдсскас 240 асодчаассує ссадессдсу соссоаддас астусадсст астастудсус садуаадчагасча 300 абсасстаса ассасдасцча пдодссатасЕ аєдчастасе ооддЧдєсаадчод аассствувс 360 ассяжстссь са 372 «210» В «211» 124 «2122 РВЕ . «2132 Номо зарієпз с 7 о «4005 в біп Маї бій Пец Маї сіп бек біу Аїа сіц УМаї уз Буз Рко Сіу діа 1 5 10 15

Зеї Ма1ї Буз Маї бек Суз Гуз ТБг бег Аку Тук ТЕ Ре Тиг обі) ТУух 20 25 зо ісе) 30 -

Твс 1іеє Ніз Тер маі1і Аку бсіп А1а Рго біу біп дк Бей сій Тер 116 і - 35 40 45 с сіу б21іу І1е Азп Рго Азп Азп біу І1е Рко Азп Ту Азвп біп уз Ре 50 55 60 со руз с1у Ак Азїа Тпї Беп Тпк о Уаї с1іу Пув Бек А1їа Бек Тпг Аза Туг че 3о 65 70 75 во

Меє біс цец бЗеї Бек Пен Агу бек Сіц Азр Так А1а Уа1 Тук Тук Суз 85 зо 95

А1а АхгЧ Ас Ага І11е А1а Тусє б1зіу Туг Азр бі сіу Ніз Аїа Меє Азр « 120 105 110 40 -

Тух Тер бі1у біп с1у ТВг Пец маї тт ма! Зек беєг с 115 120 . ит «іа» 5 «2115 372 «212» ДНК 45 «213» Ното зарієпз - (95) : ко 20 - 4) ко 60 бо

«400» З сздадсдсаас сачсасадіс судсдссдаа десдаадазас ссдуєудсеєс суєуазаціс 60 адссдсаааа ссадсадаса сассіЕтсасс даасасасса басастадує бадасачасс 120 сссддссааа частодчачся дасадуадах ассаасссса асаатддтає єсстаасксаєс 180 зассадаауу ссаадцдусєся доссассстоа ассусацадса ацестассад сассосстас 210 аєуоаассує ссадссідся соссуаддає астдсацчіст асссстосус садаауаада 300 аїсдсссата дісасдасча дудассаєдсе аєдазстасе Чдодуєсааду аассстсцес 360 ассЯдєстсст са зт «2105 10 ї «2115 124 «2125 РВТ «213» Ното зарієепз «400» 10 сіп о маї біп ред УМа1і! біп бек С1у діа бій уаї Буз Буз рРко біу А1а

Я 1 ' 5 10 15

Бек Маії уз Маі Зег Суз Буз Тис бек Аку Тук Таг Рпе ТЬЕ Січ Туг 29 25 зо

ТВК о І11е нів Тгр Маї дкод біп А1а Рко б1іу 5б1п Агу рем Сім Тгрої18 35 40 45 біу біу І12е Авпорго Азп оАзп о б1у т11е Рго АзпоТуг Аза обіп Буз Ре 5а «55 во

Пув біу Аку А1а Твг Бей ТипгоМаї 01іу пуз бек Аза бек Тік Аїа Тук 65 70 75 80

Мес біцш Пец бек бек Мей Ага Бек біц Азр ТБг Аїа Уаї Тує РрБе сСуз 85 90 95 , с

Азїа Агу Аг Ага І1е Азїа Туг сіу Тук Азр січ б1у Ніз Аїа Меї Азр 100 105 по о

Тух Тер п1у 5іп бу Тпх Пец Маї ТЬг Уаї бех 5ех 115 120 «2105 1 ікс, «211» 372 «212» ДНК - «213» Ното зарієпз с «400» 11 садчдєдсаас сзасоусадбіс садсуссуаа Чсдаадааас ссядсЯдстсс субдаааціс 60 со адссдсаааа сстадсадаєта сасстссасї даасасасса васассдуудуде гасасасоєс 1720 сссодссааа достауасто ЧасасувочЕ ассааєссста аса«судтає єсссаастас 180 в. аассачааці Есаачцчадссу дудссассаєс ассадбадаса ссЕссуссад сассусстасєс 240 аєдччаасуЧї ссадссрусу сессдададас астусадеься асбассосує садааазача 300 агсусстасоу удуссасудасса одассаєусе асуддасстасії одддассаацоа аасссЕсдЕс 360 ассдєсссск са 372 «210» 12 «2115 124 8 с «2122 РЕТ «213 Нощшо зарієп5 . ит «400» 12 бій Маї біп пцец Маї бій бек біу діа Ссіц Уаї Пуз Буз Рго Сіу Аїа 1 5 10 15

Зег Маї цуз Маіїії Бек Суз Буз Тих Зег Аку Тук Тіг РБа ТпПг біз Тук -і 20 25 зо (95) . ко - 4) ко 60 б5

Тіг о ї11є Ніз Тгр Уаі АгЯд біп Аза Рго біу біп Аг о Бесш біз Ткр І12 з5' 40 45 сіу бі1у І1є Азп Рко Азп Азп б1у І1е Рго Азп Тук Азп б1іп Пуз Рпе 50 8 во руз бБіу Аг Маї ТБ 116 Тв УМаї Азр Ті бЗег Аза Бек Тпх Аза Тук 65 70 75 о

Меб біц Бей бек бек цеч Аку Зек біц Азр Так Аза Ма1ї Тук Тук Суз 85 І зо 95 !

А1а Ага Агу Ага ї11е Аза Туд біу Тухг Азр Бі сіу Ніз діа Мебє Азр 70 100 105 110

Тут ТЕр бі1у сіп Щ1у ТВг печ Маї ТЬх Уаї Бек бек 115 120 «210» 13 «2112 377 «2122 ДНК «2132 Ношщо 5зарієпз «а0оз 13 саддсдслас садсодсадіс соддсоуссдаа ддеудаачдадас ссоуеідсстс сусдазадктс 60 адсєдсаааа стадстадаста сасстїсасті даасасасса басастодує сСадасачаєсс 120 сесуддссаза дасеісаздєоа чатздчачоє аєсваєссста асаагудеає сессазастас 180 аассадааці Есазудудссу зассассасс ассобтадаса ссіссассад сассасстас 240 асадаасьду ссадссстдсу стссуаодас ассосадеісс асссссссус садаачаача 300 ассасскаєу уссасуасуа удудссаєдсї асадастасс чудоассаауа аасосетоасс 360 ассатстесе са й 372 «210» 14 с «211» 124 «2122 РЕТ 7 о «2132 Ното зарієпа «400» 14 біп Маї1! біп Пец Маї біп бек сС1у А1а бій Ма! цуз уз Ркго б1у А1а 1 5 10 15 ре)

Бех Чаї Пув'мМаї бЗек Сув Був ТВ Бек Аку Тук Тс Рпе ТЕ біч туг ча 20 25 30 ; с

ТвВгоІ11в Ніз Ткр Уа) Акуд бів Аза Рко б1у біп Аг Бей бій Тер ї112 со біу біу Т1е Азп о Рго Азов Ази біу І11е Ркго Азп о Тут Аза 5б1п о Буз РБе 35 Бо 55 50 -

Вуз С1у Аг маї ТЬг о І1е Тік Маї Азр Тпгобег А1їа Беїг ТЬК Аїа Тух 65 70 75 во

Меб січ Бей Зес Зек йец Агу Бек сіц Азр Тс діа Ма1ї Тук Ре Суб « 85 90 95 40 Я -

Віа Аг9 Ага Ага І1е Аїа Туг сіу Туг Азвр сі біу Ніз А1їа Меє Азр с 106 105 Мо :з» Тує Тгр Сіу сіп сіу Тпх пес Ма) Твх Уаї бег 5ек 115 120 45 «210» 15 -І «2115 372 (95) ко - 4) ко 60 б5

«212з ДНК «213» Номо зарієп5 «400» 15 саччєусаас садтосаціс суусусстваа дЕдаздааас ссудгтосвЕсС сосдзаадіс 60 адсЕусазаа сіачсусата сасстусасі даатсасасса Сасассауує садасацдуасс 120 сстдуссааа чустудачсу часачддадає ассаассста асаатоутає ссстаастас 180 аассадаачі ссзачдадссЯя осдссассаєс ассатадаса ссіссадссад сассядсстас 240 ахгадчаастоє ссадссіусу сіссудаддас астусадеьсь астастядсус сасаадааса 309 ассусстаєд дісасчасцса дадссасості асудастасї обауссаадоа аасссткуаєс 360 ассусстост са 372 «2102 16 «2112 124 й . «2122 РАТ «213» Нощто заріеп5 «4005 16 біп Маї біп Пец Маі біп бек сіу Аїа біц Маї Був Гуз Рго б1у А1а 1 5 й 10 15

Зегт Ма! Пуз ма1ї бЗег Суз Буз ТЕ бек біу Тух Тіг Рпє ТЬг Січ Тук

Тнх Іїеє Ніз Тгр мМа1ї Аку біп Аіїа Рго б1іу сіп Ах9 рео біз Тер 118 35. 40 45 20 сіу біу Т1е Ап оРго Азп Азп біу І1е Рго Азп Туг Азпобіп Буз Рпе 50 55 во цу бі1у Аго маї ТІ ІТїе ТНх Уа1ї Азр тік Зек А1а бек ТНг А1їа Туг 65 то 75 80 меє бій пцец зег Зек Ппец Агу бек б1М Авр ТБг Аза Ма! Тук Туг Суз с 25 85 90 з5 о

Аїа Ах Аку Ако Іїе Аза Тук біу Тук Авр біз біу Ніз Аїа Меє Азр 100 105 119

Тук Тер сіу біп б1у Так Пес Маї ТНг Ма) Бек Зек 115 Й 120 (Се) 30 їч- «2105 17 «211» 220 «2127 РВТ с «213» Штучна послідовність со «гг» «2232 Опис штучної послідовності: химерна варіабельна ділянка легкого ланцюга іч «4005 17

Азр І1е Уаї Мет бер біп бег Рго Бех беї Бе) Аза Уаї бек Уа1ї С1у ї 5 10 15 « 10 Був Уа! Тс Меб 5ег Суз Пуз бег бек Сіп ЯЗеї Тїей цен Туг бек 20 25 зо І шщ с Акад Азп біп уз Авзп тує Без Аіа Тер Рпе Сіп біп Пуз Рхо біу біп 35 40 45 ;з» " Бек Рко пуз рей Пец 116 Рпе Ткр Аїа Зек ТАК Аку січ бек біу чаї 50 55 во - (95) ' ко - 42) ко 60 б5

Рко Азр Ак Рпе Так о біу бек сіу Рпе б1іу ТркК Авр РБе Азп Гей ТЕГ 65 7а 75 Во

І1е Бек бек Ма1ї біп Азія біз Азр йеп А1а Ма1ї Тук Авзр Суз біп біп 85 зо 95

Туг пе Бек Тугк Рко їеч Тік РБе сі1іу Аіїа сСіу Тиг Шуз їецп іч пей 1050 135 110

Туз Аг ТІ Маї А1а Д1а Ркго бег Ма1ї Ре І1)е Рре Рко Рко беїг Авр 115. 120 125 70 січ біп бец пуз бек с1іу Так Аза бек Маї Маї Суз рей беч Азп Азп 130 135 140

Рпе Туг Рго Ага біц Аїа Буз Маї біп Тер Пцуз Маї Азр Азп Аїа Геч 145 150 155 160 біп бек 01у Азп бек біп б1іц Бег Уаї Тах бі біп Азр Бех Буз Азр 165 170 175

Беї Тип Тур Зек Пец Бек бек Тіг Пец ТпЕ Бей бек Гуз АТа Азр Тує 180 185 150 січ Буз Ніз Буз Ма) Ту Аїа Суз Сі УМаї ТБ Ніз сіп с1іу Бем Зек 195 200 205

Зек Рко Уа! Ти Пуз 5еїг Рие Азп Ару бі1у біц Суз 210 215 220 «2105 18 «2112 453 «212» РВТ с «213» Штучна послідовність «2205 і) «223» Опис штучної послідовності: химерна варіабельна ділянка важкого ланцюга «400» 18 ма1 бів Гец біп біп Зек о біу Бго бі) Тец Ма1ї Пуз Рхо біу діа бек 1 5 10 15 ісе)

Маі Бпуз Мес Зек Суз цЦуз Тік бек АгЯ Тух ТПтг Рпе ТІ біц Тугє ТОг - 20 25 зо . : . с

І1е Ніз Ткхр Ма1ї Асу біп бех Ніз біу буз Бех це Сі Тер І116 сіу «0 45 со сіу Т1е Азп о Рго Азп оАзп біу Т1е рРко Азп Тух Азпосіпй Пуз Рпе Буз

Зо 50 55 бо ї-

Сіу Акч Аза Таг пед Тис оМаї біу Буз Бек Бек Бек ТНІ А1а Тук Меє 65 то 75 во 5ій Бем Ак Бех бе тТпІ Бек біз Ар Бек А1Та Уаї Тух РБе Суз Аза « 85 80 95 -

Акд Ага Ак І1е Аіа Тук біу Тук Азр бій б1у Ніз Аза Мей Азр Тук с 109 105 110 :з» Ттр б1у біп сіу тіс обек Уаї ТЬг Маї бег бек діа Бек Так Буз Сіу 115 120 125

Рго Бек Маї Рпе Рко Пец Аїа Рхо 5ех бек ПЦувз Бег ТПх Бек с1іу б1у 130 135 140 -І й (95) ко - 42) ко 60 б5

ТькЕ Аїа діа цей сіу Суз Бей Маї Ббуз Азр о ТтТук Рпе Рко бім Рго Уаї 145 150 155 160

ТБІ Уа1і бек Тур Азп Бек б1у А1а Пец ТП бек біу Маї Ніз Так Ре 165 170 175

Рхко діа маї цен біп бек бек біу Бецш Тук бек Пцезч бБег Бег Уаї Уа1ї 180 185 199

ТвЕ Ма1 Рго бег бЗег бек Без бСіу Тк Сіп ТВг Тух І1)е Суз Азп Уа1ї 135 200 205

Авп оНіз ПЦуз Рго Зек Азп ТпгоБуз Ууаї Азр о Буз Шуз Маї бій Рко Буз 210 215 220 бек Суз Азр. уз ТПг Ніз Тпт Суз Рго Рго Суз Рко Аза Рго б1й Бей 225 230 235 240 їец сіу б1іу Вго Бех Маї РПе Пе Ріпе Рго Рго Ппуз Рго Буз Азр ТТГ 245 250 255 їец Мес І1е бек Аку Тег о Рго біц ма1ї ТвВксоСуз Ууаї Маї Ма!) Азр Уді1 253 265 270

Бех Ніз бій Азр Рго біц Уаї Дуз РБе Авп Тгр Тух Маї Азр б1у чаї 275 280 285 січ Маї Ніз Авп діа руз ТВх Був Рго Акд біз сій біп Туг Авпобег 290 295 зоо0 тик Тух Аг Ма1 Уаї бек Маї ГШец Тв Уа! йеш Ніз біп Азр Ткр Гей 305 310 315 320

Азп о біу Був біз Туг Був Сув Був Ма) Бех Авп Був Аїа Пе Рго діа с 325 зо 335 7 о вВго ї1е біц.цуз ТПг І1е бек Пуз А1іа Пуз біу біп Рто Агд бій Ркго 340 345 350 біп Уа1ї Тує ТІ Пе Рго Ркго Бег Ака бій бі. Меє Тр Шуз Азп біп 355 зво 365 (Се)

Уа! Зет Пец ТЕ Суз Пед Маї йуз С1у Ріе Тук Рго бек Азр І1еє Аїа 370 375 380 у

Ммаї бій ТІр сій Зех Азп біу біп Рко сСіц Азп о Азп о Тує Гуз ТпгОтВБЕ сем 385 390 395 400

Ро Рко Маї Пец Ар бЗег Азр о б1іу Бек Рпе Рпе ем Тук Бех Був Пец о 405 410 415

Я в.

ТБт маї1 Ар Пуз Зек Аку Тер біп б1іп б1у Аяп о Маї Рве бех Суз 5ег 420 425 430

МУМаї Меє ніз сій А1іа бБец Ніз Азп Ніз Тук Тк Сіп Буз Бек Ген Бех 435 440 445 « цей бек Рго б1у Буз шщ с 450 . ;з «2105 19 «211» 321 «2122» ДНК «2132 Ното зарієпз - (95) ко - 4) ко 60 б5

«100» 19 сдгастас9у стдсассаєс босессссатс ссссосуссає седаєдачса Яссдааатсся 60 чодаастяссь ссудскасасЯ сесустдаає аасееЕстаєс ссадасадус сааадкасаєд 120 саЧааччсод абаасдссстї ссаассузує аасесссачу ададессссас асадсадцчає 180 ацсааддаса дсасссасад ссісаусаце асссвдасоєс Едаусааадс адассасчауд 240 заасасазад єстасуссся сазадесасс сассачцудсс сцадсесдсс суєсасазач 300 адскєсааса Фдууудачачво Є 321 «210» 20 «211» 107 «2122 РВТ «213» Ното зарієпе «4005 20

Ах Так маї1 Аїа А1їа Рго Бек Уаї Рпе Іїе РіПе Рго Рко беїг Азр с1ц 1 5 10 15 51п Бен Буз бек біу Тих Аїа бех Уаї Чаї Суз Пец Гей Азо А5зп Рае 22 25 за

Е

Тук Рго Акуд с10 АТїа Пуз Маї б1й Тер оПуз Ма1ї Азр о Азп Аза Гео біп 35 «0 25

Зеї б1іу Азп о бЗехг біп біч Бер Маї ТБк бій бБію Азр зЗеї Пуз Авзр Зег 50 55 60

Тас Тук бег Пец Зес 5ег ТВх Гец Тс о БПем 5ег Пуз А1іїа Адвр Туг сі 65 70 75 ва їпувз Ніз буз Маі Тук діа Суз сій Уаї ТБІ Ніз біп біу цей бек бек 85 90 95

Рто Уаї ТЬг був Зек Рпе Азп Агуд сіу біч Суз Га 100 І: 105 з і) «2105 21 «211» 990 «212 ДНК «2135 Ното заріепз (Се) 30 «400» 21 ассеЕссасса адудсссаєс дасссЕссес стадсассст ссессвадацч сасстссоачу 60 че досасачсуд ссссЯдпустая ссеудссаац дастассссс сеуаассазі: часодсчєсу 120 хчдаасссад адсуссседас садсудсоасо сСасасстєсс содссуюєссь асадеусстса 180 сем ачдассскаст сссісадсад сусузсдасс дксяссстсса дсачессоуу сасссадаєс 240 сасаєстуса асуєдазїса савадсссаус аасассазауу судасаацаа адссоаадчссс 300 со заассеєтуса асааваастсса сасаєуссса ссусусссач сассідаасе ссгодасода 360 ссуєссачестб Есстсбсссс сссазаасос аадуасасєссс бсасдаксто ссоддасссст 420 35 чачуссасає удсуєаЧсодЕ ддасоєдадс сасузадаєс седасдссаа деЕхсааскод 480 ї- їасасадЧаст псоасосдадоас дсаєсазбасс аадасаазоас сасоачадча чсадіасаас 540 адсасусасс додсодоєсад саїсстсасс дісстясасс адсассоасс даасаусалзоа 600 чЧадсасааці одсаацаксос саасазадсс стсоссадссс ссзссдадаа аассакєстьсс 660 зазуссазаачЧ оосадссссу адаассасау Чеосасассс басссссаїс ссуддачуава 720 « агозссааца ассадуєсау оссоуасссус студесааадч уссїссаєсс садсуасаєс 780 чссчсддЧадс додададсаа сддодсадссу дадаасаасї асаацассає достсссогоа 840 40 ссддассссу асудсбсссв сбссстстас адсаадетса ссуктоацасаа Чадсадоєсоюя 900 - садсачосда асусоссссс асуссссусу асдсасдаца сіссудсасаа ссассасасу 560 с сачаацдаусєс ЕЄсессстоєс гсссодаєаава за0 . ит «210» 22 . «211» 330 «2122 РТ 45 «213» Нота зарівп» - (95) ко 20 - 4) ко 60 бо

«4005 22

Віа Зек Тк Буз бБіу Рко Зетх Ма1ї Ре Рхко Бей Аза Рго бек Бек Буз і 5 10 15 бек Тік Бек. біу С1іу Таг діа А1їа Пец сіу Суз Гей Маї ДЦуз Азр о Тукг 20 25 зо

Ре Рко бій БРко Маї ТБкг Ма! Бек Тгр Азп бЗегт 01у Аїа Пец Тр 5Зес 35 40 45 біу Маї Ніз Тиг Рпе Рго Аіа Маї Пец сіп бек бек біу Ббеп Тук 5ег 50 55 во йеч Бех Бек Маї Маї Тк Маї Рго Бег бек Зег Без біу ТБх біп Ттпг 5 т7о 75 80

Тугт І1е Суз Азп Ма) Ап Ніз Зуз Рко 5Зек Азп ТБг Буз Ма1ї Азр Цуз 85 90 95 цуз Ма1ї сій Вко цуз Бек Суз Азр Пуз Таку Ніз ТЬБг Суз Рко Рко Суз 100 105 110

Ркго Аїа Рко сій Пец бец біу 61у Рго бек Ма1ї Рпе Пец Рпе Рго бкКо 115 120 125 пцуз Рго уз. Азр ТВх реп Мес І1е бек Ага Так Ргро с1и Уаї тах Суз 130 135 140

Маї маї Маї Азр Маї Бек Ніз бій Азр Рко біц Маї Буз Рпе Азп Тер 195 150 155 160 тус Маї Азр сіу Маї сі Маї Ніз д8п А1Т1а буз ТБЕ Ббуз Рго Акд ої 1685 170 175 біч бій Туг Азп бег Тйг Ту Агд Маї Уаї бек Маі Пец ТЕ Маї їец с 180 185 190 о

Ніз біп Азр Тер Без Азп біу Ппуз біц Тук Буз Суз Буз Ма1ї 5Зег Азп 195 200 205

Бйуз А1а Гей Ртго А1а Рко 116 01 цуз Тих І12е Бег уз Аза Пуз біуУ 210 215 220 (Се)

Сіп БРго Акуд біц Рко бід Маі1ї Туг ТБкопецп БРго Рко б5еїг Агу біц бій у 225 230 235 240 с

Мекс Тис Пуз Авзп біп Маї бек Ппеп ТвЕ Суз Пей Ма! Ппуз с1у Рпе Тук 245 250 255 со

Рко бек Азр І1їе Аза Ма) сій Ткр бій бег Азп біу біп Рго бій Азп 260 265 270 в.

Азп Тур Пуз ТЬк Тпк Рко Рко Маї Пец Азр Бек Азр Сбіу Бак Ріпе Ріг 275 280 285 їец Тук бек Буз Гцец Того ма! Азр Цуз 5еїх Агуд Ткр біп біп б1у Азп « 290 295 зо0 : ; 7

Маї Рпе Бек Суз Бех Ма) Ме Нів бій А1їа Із Ніз Азп Ніз Туг ТіБг с 305 310 315 320 :з» бій пуз бек Пец бек йец бек Рго Ф1у уз 325 ззо «210» 23 -І «2112 427 (95) ко - 4) ко 60 б5 -ДО-

«2122 ДНК «213» Нощо заріепз «100» 23 Й зацссгдсся ссассаєдуа сссасадуєс сацуєсства бассаскадсс дстасодудса 60 єсЕЧЯасасстї ссдоодсаасає сусдаєдеса садсстссає ссессстаус бабсоїтсачьк 120 ччадачдааца сбсасстаєдау ссусаадесс адссададсс сЕсвакасад ксобааєссаа 180 аадаастаєсє бдуєсєстЗУВ ссадсадаау ссабудсаує сесстааасє дстдакьскс 240 сдадсаєсса ссадоуаатсо содудЕсссї даєсяасссса садодсачкод аєкЕсоддасу 300 частєсааєс гїсассаєсац садсусосад чдсьсасцчасс сдодсадсеса сдассуєсад 360 саатаєссса ускаєссоосі сасуєЕсуає дсеуддасса вассудаусс даагсуєцчад 420 тадаєсс 427 «210» 24 «2112 133 «2122 РЕТ «213» Ното заріепз «4005 24 мех Азр бек біп Аіа біп Маї1ї Пец Мебс Пец Бей Рхо Без ТкроУа1ї Б5ег 1 5 10 15 сіу Твг Суз біу Азр І1е Маї Меї 5ек б1іп 5ех Рго бек Бех реп Аа зо

Маї Бе Уаї біу бі Пу5з Маї ТЕ Меє бЗег Суз ПЦуз 5Зеї бек 01п 5ег 20 35 40 45 їечц Пец Тут Зек Аку Азп біп БДуз АзпоТуг бец Аза Тгр Рбе бій біп 5О й 55 80

Туз Вго сзіу біп бек Рко Шуз Пец Пец 116 Ре Ткр Аза бек ТІ Аг 65 70 75 8о с 25 сій Зех біу Уаі Рго Азр Агу Рае ТЬк біу бек біу Рпе біу ТБЕ Азр Ге) 85 зо 95

Рпе А5п оїец Тік Т1е Бег Зег мМаії біп Аїа бі Адзр Бец Аїа Уаї Туг 100 | 105 110

Азр о Суз бів біп Тук Рре Зек Тук Рго КГец ТЬг Ре б1у Аіа біу ТЬг іс), 115 120 125 у

Пуз Пей бій Беч Буз , 130 сем «2105 25 о 2112 457

Зо «2122 ДНК - «2135 Номо зарієпз «400» 25 аачесєсадссоЯа ссассаєсуду асдудадуєсау сесьсеЕсвсі сссесссуєс аддаастудса БО « ччсдссстст седаудєсса одссдсаасач сстодасстуд асстоаусава дусстудувес 120 ссвзусазаца тдсссідсаа частустстада басасаєсса стдаасасас сасасассоу 180 чеЕчадасача осссасодаваа чадссссдач СаоЧассоуад усатєааєсс ваасавасоує 240 - акссстаасу асаассадаа зЕссаауудс адуддссасає сдассосачду саааєсстсс 300 с засассуссх асасудачес ссодсадсстоа асассіудачоа аксссасудї стасьєсьЯє зе и усагадаацаа даассосста бдЧЕвасуас дадодссаєд стаєсодасєта стддодуєсавя 420 а чЧчааассссач гсассуєбстс стсачууєуад єдчатес 457 «210» 26 «211» 143 , -І «212» РЕТ Й (95) ко 20 - 4) 25 ко 60 бо -Д1-

«2132 Ното зарієпз «00» 26

Мек біу Тгр бБег ТІр Маї Рйе Бей Ріпе рен цем бек біу Таг Аїа Сбіу 1 5 10 15 чаї Пей Зеє бій уаї сіп Без бів біп 5еї піу Рго 51 Бец Уа1ї цуз го , 25 зо

Рго 51у Аза Зех Уаї Ппуз Мес бек Сув цЦуз ТВт Бек Акд Тук тТБг Ре 35 40 45 70 ТвВгобіц Тус Тв ЇІїе Ніз Тер Уаї Акуд б1п бек Ніз Сі1у Буз Зекх Гей 50 55 бо сій Тер о І1е сіу б1у тів Азп Рго Азп Азпосіу Т1іе РкКо Авп Тут Азп 65 то 75 во біп цПуз Рпе Був біу Ак А1а ТБг Бей Тк УМаіїі 51у Буз бек Зек Бек 85 90 95

Тих А1їа Туг Меє сіб Бец Аку Бег Пец; ТВкЕ бег бій Азр Зек Аза Уа1 100 105 110

Тук Рпе Суз А1іа Агу Агу Аку 116 Аза Тух біу Тук Авр біц с1іу Нів 115 120 125

Аза Ммеє Азр Тух Тгр б1іу біп біу Тк обЗег о УМаї ТБу Уаії бек 5ет 130 135 1439 «210» 27 «211» 8068 «212з ДНК се «2132 Номо заріепз з і) «4005 27 й чаасеуссадс асастодсуд ссостастад ссассаасау саассаатта сздоддесаюе 60 адеєсатаус ссабастасдо адссссусує басаєаасьє асудеаааєд дсссадсстуд 120 сеуассуссс засуасесос дсессаєкдас дісзасааєу асуктаєсоссс ссасаусаас 180 дссаакацуд аствсссаєс дасяєсааєу дубодадіат їсасудтааа стдсссастт 240 со

Часаціасає саадедтаїєс ахатуссаад їтасодссоссюї асбдасуєса аєдасудсаа 300 30 ахгоадсссясс кодсаїстасд сссадтасає дассесассч засіссссса сосбоадсадта 360 саєстасоса єбадуесаєсу ссасеіассає дабдасусод секс ддсаде асаєсааєоя 420 і зсосоддасадч сочессбасї сасудучатт сссаазіссс сассссассо асогссааєча 480 чачессоасук сдздсассааа агсаасоууа сісксссадаа суссусааса асіссусссос 540 се аєсдасясаа асдаусадка досуєсотасу чечдчадчяєсс сасасаадса дадсссоєск 600 ауєдаассує сачаєсуєсєсії удацдасусса ЕссасосьЯє сЕсдасстсс атадаачаса 660 со ссддудассуа сссадссєсс дсддссодда асодсдсасс дувасосоуда КЕссссубос 720 35 саздачсдас ддсааустассу сссабсададі срасачасєсс ассссествуда стссстаєдс 780 М аєостатасе ссЕстЕодсЕ БдачаЧЕстає асасссссдс їЕссесавує сабасдєдає 840 часасадстї адсссатачу сасоадувсає сдассастав судассаєссс сссассдату 300 асчасасс:с ссассастаа сссасазсає сдсісЕссСус сасаастсстс ссктаксдасс 960 асасодссааї асасстобесто єсацчачассу асасоцассс сусаєєссеса садцчасуаФду 1020 тстсатстакї хаїстасада сісасацаса саасассасс уссссесадеу сссусачьст 1080 « ухасєаааса гаасуєссдча сссссасусу аагсссададо асядсасссся дасасадацєє 1140 сЕжстссоЯЧЕ адсодсодау сстссасатс суаассскоас ссссавассє ссачесчаскс 1200 40 асзассусіс сдсадсєссї тодсосстівас адбададасс адастсадус асадсасчає 1260 - чессассасс ассачсцсос садсасавсдс соусадсудса садсаєадкуї ссудаазаєуа 1320 с Здсісудауад сддасеваса ссоядседасуєс аєссдчаада сссааудсаз сддсасаача 1380 ч згачасасадчодс ассечачіто Ес ссссд агаасадіса дадасаасьс ссугсусадс 1440 а дстдтїаасч чочЧчазчодса чугфсачістя адсзостастс зсісссодсса сосудсуссає 1500 сачасатаає адссдасача стаасацаст сосессєсссс асоудесесе єссдсадеса 1560 ссасссесда сасусяксіс дадаацчесссу ссуссассає даасеісасад дсссацоєссс 1620 45 статуєтасе очссустаєуо уураєстоддса сстасоддада сассдсдато ссасауєскс 1680 саєсесссссс адстдбдсса дЕсЯЧададча апдсбастаї дадсгдсаауд сссвуссада 1740 - | десЕЕсрбака сЕСсСсСадазає саааачааст асссуддссто декуссадсад дзадссачоус 1800 (95) іме) 20 - 4) іме) 60 бо -дД2-

ачЕстссстаа асбоссдаєь ссссочдсає ссассачуда аєссоддауес сседаєсясь 1860

Есасачусач сосчаєссууд асчдаєстса асстісассаїє садсадеЕЧеу сачасесачя 1920 асссдоасачт ссабсасьчу садсаасаєтї бсадссаєсс дсссасЯєвс сабосссуда 1980 ссавадсідда дсідааасує Ччадчсачаєсс абсєдочаса адсасуссує сЕссСЕдссСту 2040 тссстідасає дссссуєуає сасодсосааа саасасаєсс азучосадаа стссокскаст 2100 їааасассає сссдсссусЕ ЄсесЕссіса даастдсуду седсассаєс гаєссттсаєс 2160 сгсссдссає сідаєцадса деЕсдаааїст дудаасвосся седЕсаєЯєо сстустдває 2220 аасетусктасс ссадчадачус сагачкасац госазудсдуу абаасуєссї ссааєсудує 2280 аасстсссаду ачачеЧісас асзосадцас ачсаадбаса дсасстасад ссісадсауе 2340 ассстсасас сдацдсаазус адастаєсчад азасасададц сстасаєссту сдвацісаєс 2400 саєсачудсс хгпапстсусс суссасваау адссссааса дуучачачсу ссадчачачач 2460 аауьуссссс асстдстссь садесссадс седасссссі сссассстсс дуссестуас 2529 70 сестсЕтЕсса саудддасстї асесстаєту судссстсса удсксаєстсЕ сассесассс 2580 ссстсстссс сссеЕдуссКЕ дассаєсудсса асучєстдачу адааєдааса аатааачсча 2640 аєссссусас сгдхсЯдсяда сстстаатааза дасасстаць стсастадає асоогусдесуа 2700 чЕссЕссосу сдсауєдсест сбсаєсьдуад дссадутаду дседуссеівба даачадададч 2760 ачассадаас дасіссааца чссасаддза часадуєсач адассссасі ддасзаасад 2820 сддстаздасі стдсассата асасасааєс аасачудуач сЧадст:ддаа агтсадстаде 2880 дазЕсссїса адассааачЧу дссесуєдає асудсстабьб сбрасадуєса асодссабоат 2940 аасвзаєодцЕє ссЕсадасдї садуєдасас кЕстісодода аахдкдсдсо даасссстає 3000 тЕЧЕЕсатес ссстазабас абгсазатас обахсссоссс збодадасаає засссіуавта 3060 затассссаа гаасассдаа заадогачау сасуачкаєс саасаєтесс дідЕсосссу 3120 таєкссссвс гтсосоуусає сесассевсс вбасеЕссусс сасссадааа садасідусаза 3180 ачсаазацає дсєЧазуаєс ауєсгЕсодусус ассачсдуує басаєсуаас суддчаєсссаа 3240 садсаЧеізад агсссєдаца ЯасЕбЕсдссс сдаадаасцє ЕКсЕссаасдча Єдаасаєстск 3300 тазадеЕссто ссабуєтоусоа судтаєсаєс ссогдєсдас дссодосазу адсаасесся 3360 тхсчссусака састаєссьс адаасудассї одЕсєдачсас Ссассаціса садаааацса 3420 ссскасадаї дусаєцасач баадачааєсс абсоддсадьаст дссаїбаасса сдаусчаксаа 3480 састідсдадсс дяасттасссс суасаасоає соддачоассуя аадаадссаа ссасістьсо 3540

Чсасаасата чдобоассасу таасссуссї сдассУс9уд саассоуаус сдаасозауєс 3600 сасассазас дасдадсоса зсассасчає дсстадсачса асодсаасаа сдссадасосда 3660 астаєсаасе досчаастас бсастсссадс сссссудусаа саастсаасад ассочатоуа 3720

Ччосадастаза дЕсодсадаас сасісссося сссдусссб ссуаседусе доссваєстос 3780 сдасаваєсе ддадссодєд апсогучуєс ссусодтаєс ахєсдсадсас содадссада 3840 см тКддсазаодассс ссссдбаєсу бадссаєста сасдоасчацу адссадасаа ссасодаєса 3900 асуааакаца садассЯястч ацасадатос стсассЧабїу ааусаєссодЕ аасстдссада 3960 Ге) ссаацітсас ссасабтасас сссадчаєсса сСісваазассс сасстєтєсааї ссазазудає 4020 сеівадчеЧааву аєссесуссєд асааєсеЕсає чассааааєс ссеєаасудєд адеЕсСсесаєє 4080 ссассдадсо ссадассссу бадаааачає сааадсаєся ссскдадаєс ссссстсеся 4140 чсадсустаакс состуссвас ааасазааааа ассассуста ссадсаяцеду сссасікасс 4200

Чааєсаада стассаасьс СБЕБЕссудза доїаассодес Єссадсацаа сдсадахтаєс 4260 «о азатасстоуєс сесєскаЧіує ауссусадьс аддесассаєс сЕсаачаасе ссасаусасс 4320

Чдсстасатас стісусстссус сааєсстасі ассачсудсс астдссачся чдссасавааєс 4380

Фдсассісасс дадЕксодасе саадасдаєа дЕКассодає аадодсусадс даєсддасья 4440 і засчаччдЧос ссобусасас адсссадсії ддадсдзася асссасассу аассдадаєа 4500 сесасаусцї чдадссасдадч азадсоуссас дсессссуаа додасааасод содасачата 45650 сеІ

Ессадсаачс часадчуєсу даасауцаца дсусасуачу уадсссссаз додуавасус 4620 стчесаєссс сасачссстяа Єсодиассссу ссассістда сссдаосясс даєтсссово 4680 со асчсісаЯдсса дчададусуда дссбаєддаа ааасодссацс аасусудсся ЄБЕсвасоціс 4740 секудссткс гастууосЕк ЕсусеЕсасає дсессскссї дсуєстатссс ссодасеєссає 4800 -

Зо чоаєаассує асбассусся сБдадсдадс буасассдсї содссосадсс даасцассоа 4860 чсосачстад ссауссасся аддааосода ачадсуєстя абдсоутаке єссєссттас 4920 ссаєссдсЯс дагтассссас ассцдсасата деЕдсассістс адгасааєсії дсесеЕдаєдс 4980 сетсасаусса ачссачсаса састссяста ссуссасоебд астдодссаї дастдсусєсс 5040 сдасасссус сазасасссдс бдасусуссс сдасуддссе дессосессс дусаєссоєт 5100 « тасачасазву стосоассує ссссоууадс сосасоєуєс адасцЕресс ассоуусаєса 5160 ссдзазсоасо саадаасачсї дсддаасдєу єЧЕсСадісад часов оцааз дсссссацчаєс 5820 їсессадсад дсадааосає дсааацсаєа сабстсаассі адссадсаас садцдсусссс 5980 - адсадосадча адтасусааа дсаєбусаєсі саатссаціса дсаассаєад гсссасссст 5340 с заскссдссс агсссдссосс баасеьссасс садсесссусс саєбссссдс сссактодесо 5400 ч асстаастсксє сссаєссасо сададоассда дассаясстісяЯ десістдадс сассссадаа 5460 а асачсоачуа дусесксску чаччсексачу сісбсдсаза аадссадстї сасастассу 5520 саадсассса дадсусаадч дсЕдстааау даздсадаасє асабадааву ссадеіссуса 5580 чазасдутує сЧассссада сааасуєсєсад стастадуєсє ахссодасаа дадазаасас 5640 аадсодсадад адаааусауд бадсссасад гадасссаса сдудссасадс сбачастодас 5700 зчссстасад асадсаадсу аассодаатї дссачсЕда9 дсусссестяа ЧчсазоадчЕеЕбсад 5760 -І Чаачссссдс азадсазасї сдаєсудссссє ссвдссасса аудаєссцах дусдсадуда 5820 і95) іме) - 20 42) 25

Ф) іме) 60 бо -А3-

ассаацаєст уаєсавадада саусаєсєзаоу ассоуєстсдс ахсоаєєуаас задаєдовт: 5880 чЧсасцдсачеає сстссдуссоя сосудоабада сачуставєсс уустаєдасо дудсасазса 5940 чЧасааєсодс састсечаєя ссуссосаєх ссодстдєса дсадсаччодас дессудстсе 6000 кЕєсассаау ассдасссує ссудсдссс дзаєсдаассу саддассачоа садсусудесє 6060 ассасадссЯ дссасцасод дсувЕссссЯ сусадстосу сесуасуєса ссастдааде 6120 чочаацдодас содстадассає сдадсуааяє дссододусад чассеісссуї саєстсаєсстї 6180 хасесссдсс дадаааціає ссаєсабєдадс бсдабасааєд содусдассос асасоасеїда 6240 хссадуссаєс сссссаєссу ассассаадс дазасаєсцс ассуадсчад сасуєастся 6300 часодаачсс дЧксксуєсд аїсадчдаєча сссудасоуаа уадсаєсаду достсассс 5360 ачссдаассд єссоуссадас гсаачдасяся сакасссчас сосчаауаєс ссоєссусдаєс 6420 ссасуасчає ЧдсссудсЕвбдс сдаатаєсає са ддаааає суссоассккх седЧчаєьсає 6480 счастаєсус судсЕчЧЧєЯ баддсодсассо стаєсадуас асадсудєсод свасссуєца 6540 7170 кагсоссдаа дассссодсЯа Чсудаасоаудс єдассоассвс сеЕСЯсУасьсе асчдтаєсос 6600 сдсессссрає ссосадсуса Есусєстьста єсдссексов дасдадцеєстї сссдадсусу 6660 асестдЧчуЧс ссЧазаєдас суассаадсо асдсссаасс гассаєсасу адаєксссає 5720

Ессассдссо сстбстаєда задуєсодос сесодааєся бЕссссудса соссудстду 6780 асазаєссісс адсясууада ссєсасассу садцсЕєсстїсу сссассссуд одсесуаєссс 6840 сеЕсусЯаЧсЄ досісадсєд сбуссідаду сброддасуасс Есосодадеє стассдудсад 5900 сїЧдсаааєссо ссддсассса доааассаус адсдусстатєс сясусаєсса кусссссуаа 63650 стоссацзцчачі адададуасас саєдадссасх Есддссссуд аєстєбдсєда аддаассяка 7020 стЕссусЧуу дедасасаає содасааасї асстасадад асстїааадсе стаадуусаза 7080 тасаваастс Єсаадчсасаї аасоєуєсаа ассаседаєт стаасезесе дгротасеста 7140 чассссаасс сагодаасто асодаасддда дсачедосСЯс аабдсстсса асдчаддазаа 7200 сстаЕЕЕсоас ссадаадааа сєдссаєстач сдаєсчассау дстастостд асестсааса 7260 тЕсЕастссі ссазаазаца ацадазачує адаадасссс ааучасессс стгсадааєтє 7320 чЧстаачеькЕє ссаадссасо стобосстау саасачаасо сусасстест сбЯдстсатеєва 7380 сассасааау чЧчазааачсьу састдсстаса саачааааєс агадааазає асЕссдтаас 7440 сеЕссаєаад аудсасааса дісабааєса бвасавраєту КЕКЕссессса сессасаєву 7500

Чсасадачед єсЕдссакка абаастасус їсазаааєка Едсасськса дсссескаає 7560 ссгосзаачуач Чусаасазуу аасаєсестає дсасаусусс седастачад ассатаасса 7620 дссасассас асеЕсдсададч чЕсксасЕсу сссбазаааа ссссссасас стссссстда 7680 асстдааваса сааааєчаає зсазаєсоссу ствссаатиє усссаксоса осесасаато 7740 уссасаваса аздсаасадсе агссасадаєї ссасаааєдла аусасесстье ссасєдсаєє 7800 стачЧЕсоагоЧ сгсдсссааа сссатсааса їтасстсаєса сусссодаєс гзасаавада 7850 с таєсекассвЕ саєсацдасає деадсЧкЕоає ЕЕссувуєа саеуеоссьсє асссудадає 7920 саасізадос содЧдссісодоа чдуауодусад десадааєда суссаачадс сасадчуаацчу 7980 Го) садчесачач ассссассоду асааасвуєсуд Чстддассся дсассасаас асасзаєсява 9040 сачазучачіч адсіддзааї стодссадс во «2102 28 І«о) «211» 239 «212» РВТ їм- «213» Ното зарієпь «во» в. с

Азр Бек б51п діа сіп Уаї рей Мебс їеи Бей Рго ГПец Тгроуаї 5ек б1у 1 5 10 15 со

Тпг Суз б1у Азр І1е Ма1 Мебє Зег б1п Зехс Рко бек Бех Беч А1а Уаї у 20 25 зо бек Маї Сіу шій Пуз Ма! Тіг Меє 5Зег Суз Буз бек 5ег б1іп бег Гем 35 40 45 « їешй Тук Бег Агу Азп Сіп Був Азп о Тук Пец А1а Тгр Ре бій біп Буз 50 55 во - с Рко сіу біп Зек Рко Гуз Пец Пеш 11ів Рпе Тер А1а Бех Тпг Ага с є5 7о 75 во ;» ій Бек біу Ма! Рго Азр Агу Ре Тік б1іу бек біу Рре сіу ТВг Азр Рбє 85 90 95

АзпоГем Тпг о Її1е Бек Бек Уаї Сіп А1а січ Азр Бец Аїа маї Тук Азр -І 100 105 110 (95) ко 20 - 4) 25 ко 60 бо -ДА-

Суз біп біп Тук Рпе бБес Тук Рго рес Тк Рпе сіу Аза С1у ТНг Буз 115 Й 120 125 йеп бі Бей Буз Аку Ті Уаї А1їа Аза Рго Бех Маї Рпе Ті1є Ррбе Рко 130 135 140

Рко Зех Дзр сії біп Пес Гуз Бех біу ТБг Ліа б5ег Маї Маї Сув їец 145 й 150 155 160 еп Азп АзпоРйе Тук Рго Агуд бід Аїа Зуз маї біп Тер ПЦуз Ма1ї Азр 165 170 175 70 Азп А1а пбем біп бек біу Азп бек сіп Сіц Зек Уаї Тк бій біп Азр 180 185 130

Зек уз Ар бек Тіг Тур бек Пец бег бБег ТПг Бец Тс Пец Бек Туз 195 200 205 й

Аза Азр Тут біч Пуз Ніз Пуз мМа1і Туг А183 Суз б1о Маї ТЬк Ніз біп 210 215 220 біу Бей бек бек Рко Уа1ї Так Буз бек РіБе Азп Аку біу бій Суз 225 230 235 «210» 29 «2115 7731 «212з ДНК «213з Ното зарієп5 «41005 29 їтссаадасча азоддоассісу Єдагасусся агЕвеваєач дсгааєсуєса Сдасаатзає 60 чЧчссссссад асусєсадуєа асастссссо дудаазаєуєо сосудаассс ссаствуєкк 120 абсрессеаа астасатєсаа абаєосаєсс дстсаєдаца саасаасссї дасаааєдск 180 сем саасаасає суазааадца азаутасчач саєтєсаасає ссссдєаєсо сссесаєвсся 240 сьссектасу дсасестусєсс сессвусссс сасесассса Чазасассуу содзаачсаваа 300 Ге) ачасоссдаа даєсачісду дсдсасчаці додЕсасаєс даасьсуаєс ссаасадсЯяд 360 баауаєссії дачацсевсс дсессуаача асусьсєсса асуаєдадса сесессааааї 420 сстустаєді досусддсас баєсссубує сдасодссоддо саададсвас ссодессоуссо 480 сасасассаєсє ксесадзаєд асесудуссуа усасссасса дігсасадааа адсаєсттас 540 чоаєсдусаєу асадсаадзд аастаєдсад соссодссава ассаєсдачсо агалаасасстояс 600 (Се)

Чассаассса сіїссдасаа сузєсудадо ассдаадчад стаассосьс Сг сдсасаа 660 сакгдудудає сакдтаасьс десксдаєсу ссудуаассо дадсковасо аводссасаєс 720 ї- азасодасуач сусодасасса суасасссудс адсааєудса асаасаєтос дсазастате 780 зассдудсуаа стасесассс сауссбсссу дсаасааєса асадастоуа содадосодча 840 тааадссдса удассасссс Босоустсддс ссвсссоудсі аадаседассва ссасідаєаа 900 с асстодуадсс ууєчадсяса чдассссосод сассаксдса дсассоддоадс садаєоусаа 960

Зсссксессуї аєсусадева стасасоас дадуадісад осаассаїуд агуагсоааа 1020 с їачасачаєс дсєдадасад дедссссасї уаєсаадсає соусаассує садассаацє 1080

Есастсасає асассссбада єсЧасссааа астесастсс саасстазааа оччаєстадчує 1140 у чаачаєрссс: ссбдасааєс ссасдассаа аассссстаа согоачтссс ссбссаста 1200 адсачтсадасє сесабацдаза ацсаєсазачо ассЕссссда даєсстессс єсстдсусує 1260 аассбядсьдс Есдсааасаз ааааассасс пссассадсо чдбсасссдЕЕ гассодаєса 1320 ададссасса астстЕсЕЕс сдаачусаас гддсЕссадес ачадсосаца сассааасасє 1380 їЧЕссуссса ссдсадссує адхссадудсса ссассссава зассстосад сассусстас 1440 « асассосост содстаатсс бусгассаць чддссостядсс адстоуссаса апссясцест 1500 кассадатсд дасссаадас Чатстацчтсасс дсасаацусо садсядцесда Чсбсгасода 1560 шщ чадсссусус асасадссоса зосгодуадсу аасцдасєстас ассаавассца дасасстаса 1620 с чсчгдачсса сдадааадсу ссасоссїсс садаадудада агодсодаса досаєссоде 1580 задсодсвод дссудаасач Чачадсясас дадададссс ссадудучаа асдсскоута 1740 "» ксстссасаде ссідссуФуї гЕсуссассо ссдасеєдад суєсдчатєстє єдсоаасасес 1800 п ЧчесачучочЧо содадсстає ууааааасоас садсаасясяа дсстєссвас уурсєсссдос 1860 сЕкссСоскаЯ ссттссастс асасеатестс гсссусуєта Ссссссуаєь ссогддаєсаа 1920 ссукассасс чессЕсдаче Чадссудасас сусісцссус адссдаасда ссдадсосад 1980 сзачссачіч адсадуаау сддаададсая сстдаєдсяау аєкектстісс ггасдсаєсс 2040 -І чЕчсодасе ссасассуса бактацсадсас гстсачтаса аєсстостссо асоссосата 2100 чЕсазауссад сасасасссс дстакєсоста соаїдчастуоч ссасадесос дссссдасає 2160 (95) ко 20 - 4) 25 ко 60 бо -ДБ-

ссдссзасас ссусвдасос дссссдасоя ЧсссЯссідс ссссуусаєс сусссасача 2220 саздстаєда ссуєсссссуд здадсідсасо сдФесададує ссссассдєс ассассуааа 2280 сасусдадас адсаєдсаєс ссазесадусс аусаассаса дісссудсссс таасессосс 2340 саєсссуссс стаастіссує ссадеєссяс ссаєссьссЯя ссссатдудсї дассааєтвє 2400 ксесаєссає усададдсся аддссудсссс дуссбссдад сбаєсссада адсаусдачеа 2460 ачадссЕЕсЕс одуадссссад дссссвдсаа ааладссауст сасадсссад чассодсдаєт 2520

Есусдссааа сссдасудса аїсстадесч даасцусеЧає аддаєстсає ссссуссудєс 2580 аксасддієсс дассасєдаа стіусатсассе дссдЯдсусссс аааасабода Чассдусазву 2640 аасацадасс вассстацес єссустсвчу аасдадккса адсастєсса аадааєцасс 2700 асаассєссї садтдадааачу базасадаас стдуєсаскта гудуусадудаз аасстудєвс 2760 хссассссту адагдзаєсоя асстістазач дасзузасєта асасацчессї садсадачаа 2820 сесааачаас сассасчадуд адсссаєтсЕ сеєбдссаааа чссстодаєсоа гасстсаацча 29850 70 стгаєсдаас аассодааєс додсазосааа Ччрацасаєуд їссучасаче сучзчачасаує 2940 кссдсЕсасс адуаауссаї даассаасса дуссассеіса дассстссусЄ дасзадуаєс 3000 асдсадуаає сбсудааадсда сасускЕссс ссадаааєсу асстідоаддаа асасазаєстх 3060 стсссадазї асссаудусєді ссссЕссдад убссадучаду азазадусає саздсаєзад 3120 тЕсдазуссу асдачаацчаа ачастаасач уаачатустх ссааустьстьс сустсссстсо 3180 стааадстає дсабЕсЕсає аацассаєду часеткссуєс дассссадає ссседєдазсо зго ааавссєЕтасі сстдгоодсосЄ дасасааїсу уасагастас ссасадачає сеааадсьст 3300 зачосагваса газааацтссс ааусстаєсаа сусоссазас сасстцаєссст аастоатєстої 3360 19 ЧчтасеЕстадча Есссаасста будуаассдаї уаасдуцаце ачЧчечдатудаа фоссеЕєксаає 3420

Чаддаайаасс гФдЕЕксодсіс адаадаааєд ссаєсстадеуд асоаєдадас сассдсьдас 3480 тпкЕсаасаєхї стасссстісс зааазачаау адааадусау задассссаа дцасссссст 3540 їсадааєссус саауєсессу дадссаєдесї десдєсгадса асадааскст бБасскуаскЕє 3600 чоссатстаса ссасазадда азаадссдса стустатаса здаазаєтає удааааатає 36560 ссідсаассс ссасаацчівау усасаасзує басазЕсаса асасассдєхь сЕсссттасії 3720 ссасасачус атачаубсаєс судссаєсаає аастаєдстс азазаєсуєу сасеєєсаде 3780 сЕКЕсааєсї осааауудді: баасааддаа сакесдаєдї агадктуєссть дастадачає 3840 сасааєсадс сасассасає гсЯдсадаччує сссассбдсї Сгзазааасс їсссасассї 3900 сесссгдаас сеЕдааасаста ааасудаатос засос ускаасстдс гтаседсадс 3960

Есасзасоує сасагаєсава усаатаусаї сасазаєссс зсадасаааду састесьссс 4020 астдсатєссо ауссосаусь суєссаааст сабссааєуіа ссеваєсасу сстддаєста 4080 асаааацата Естаєсеєса єсацдатаєаї дЕоссадсЕс сесасуєдса дсассєестає 4140 сгададодсса ддсасодста дсесссадссод асодучасудс садаасдасе ссаадзаєсста 4200 с садчаадаса адссауадас сссассудас ааасауєдас содассстус ассастаасасєс 4260 асааєссааса доаздуачеєсад стоудааасбо дссадсуаає сссадсасас кгаудсудссояї 4320 Ге) бастадскає сааєсадусаасє саассасудч сеісаєсадтії сасадсссає асасууацдеіє 4389 ссудсастаса саасесасоау баваєсоадссс дсстодудстда ссосссаасу асссссусос 4440 аткЕдасуєса аєзаєсдасує акадсссссахє адсаасусєсса абачадасьс їссаєсдасу 4500 ссаасудосд дадсасекас даатавассоус ссасссоудса деасаєсазу сдбаєсаєає 4560

Чдесазатасу сесссіаєсу асоїсаасуа соаусазаєста сссусстадс агтасуссса 4620 (Се)

Часасасдасєс Есасдоадася сесстасєсдЯд дсадсасаєс сасодтаєссад ссассоассає 4580 їассавадід агоасодбссс уддсаусасає сааєодусує ддасадсоді седасссаса 4740 чн чоччаєсрсса адістссасс ссаєсуасує саасучдодаче се сссдос ассааааєса 4800 асддцдасЕєї ссааааєцсс дтавасаассіс суссссаєбсу асосаааєдоа ссоупйсасдсо 4860 сасасадеда садобссаса саздсадачс ссУусЕЕадсу аассоєсача ссусстодад 4920 с асдссаєсса саосочсЕЕсу ассіссасау аасасассоу дассчаєсса дссесссасоу 4989 ссудучаасоуд босастадаа сосодаєссс ссобуссаад аосуасоїаа дсассодсста 5040 Гео) стачсадестає аддсссассс ссттадсссс ббаєасабсос сатассдЕс седассводо 5109

ЧЕсвавасас ссссусеєссс ссаєуєсаєа дуєзасууса бсадсссадсс сатадчаєоаєу 5160 че соаостассазс саєсатвчас сасссссста ссдоасдасуа сасссессає бассааєсса 5220 їаасаєдусе сесрудссаса астстсрсса сСсдуссасає дссаасасас суусстссад 5280 ачассуасаєс здуасессудїта гсЕїстасадчу асадуддсессс абеЕсаєсвраєс гасаватсса 5340 саєбатасаас ассассяїсс ссадбадссся садесвссраї їааасаєзас ассадаєстьс 5400 сасосчааєс ссуадегасяє дЕсссодаса кдадсестсс бсесуцвадся сучас 5460 « тасаєссчад ссссдсЕссс асдсстссад сдасесаєуу єсасесЯадса дсбсстсуцеєє 5520 сстіаасачдсу садудссадас ссадасасау сасчаєсуєсєсс ассассассаз дрдбассуса 5580 з саачуссуєд дсоубадоає асдсусесда аааєсдауеєс ододадсоду сесдсяссоє 5640 с сЧчасдсаєсу уддаачассса аччосадсудс ауаачаауає усадоасазчсс чзадесксаєсає 5700 чЧІсссдасаа чачуссацчаду їаасісссує сосудсоссу Ссаасчасоу ададсачеує 5760 п захссдадса дсасссоаєсд ссассдсодсу сояссассада сакаакадсі: дсасадасьаа 5820 а садасвдєєс ссссссабоу обссЕскссЯ сачесассує ссссдасасу суссссудада 5880 засссдссоас сассаєадда сддадсецяЯад сс ссесре бсгсстуєса ддаастясад 5940 чсассстсс соаддєссад ссдсаасадЕ сбадасстса удсеЕсодЕЧаадч ссрдадасьє 6000 садсааачаї дссстодсаац асссстацає асасасьсас єдаатасаєс акасассуду 6060 таадасачад ссасудавац азссссЧасії дчагєадачо басбаасссї засаасдуєса 6120 - і тЕсстааска саассадаацд Ессагодчуса зудассасаєс сдастутадує ааусссісса 6180 (65) ко - 20 4) 25

Ф) ко 60 бо -4В-

дчсассуєста сабууадесбс сдсадсссда сассеЕдадуа СЕстдусадеьс стасеестоєд 6240 саадаачаачу аассусстаї садссасодасу ачадссатоас бабсодастас содчодеЕсазд 5300 чаассссаці сассуєсесс Есадусчауе дчаєсссвссуд сосстдауес сацетстасс 6360 ссасассосу дссасабуус ассассссес седсадссьс сассаасуудс ссаєсуцЕсть 6420 сссссстдос ассскссісс аададсасся стууучоддсас адсодсссесбу дчостасстда 6480 тсазодчасса стсссоссдаа ссоуусдасоуц собссобсодаз ссосададсосс стуассадсо 6540 асусдсасас ссссссоудсЕї десстасаче ссесадасє стастсссїс апсачеадЕєЧа 6600 суассусасс сіссадсадс сгддусассс адасстасає седсаасуєу азгсасаадес 6660 ссадсаасас саадуєуддас аадаазуєсу адсссаааїєс гтрадсдасааа астсасасає 6720 чсссассясу сссадсассс даастсссоад здводассаєе адбосссстс сессссссаа 6780 аасссаадца сасссесаєо аєсссссЯда сссседадухє сасасусобу чіаасодасу 6840

Едадссасуа адассстдад дісаачієса астсутасоє суасудсосу дачуєсосакта 6900 70 акассаадас ааачссдсод Ччаччадсаус асаасадсас убассоддасЯ дссадсуєсс 69560 їсассуєссї адсассаддас судссдааєу дсааддадса сааусдсаад деісеЕссааса 7020 азоссссссс адсссссаєс Задаааасса Ессссаааус саазадудсау ссссуадаас 7080 сасадосуєа сассссдссс ссаєссесууя заауачаєсуас саачаассау десадсстда 7140 сессасссЯдЯє сааадасессс бассссацед асаєссоссЯї досассдадач адсаактадас 7200 адссодадаа саастасаад ассасодсссс ссубустдда стссдасудс сссрвскесс 7260

Кстасадсяаа дсісассЯчсу дасаадачса чусадсадса чодчаасуєс тЕстсасцст 7320 ссуєдаєдса Едаддссстд сасаассасе асасдсадаа дадссістсс сбдескссод 7380

Чіааваєчачі дсоасуассу дсааассссо сессоссадас сстсодсауєс здсасчадуає 7440 чесЕдусасу хасссесседь асахтассвсс содуусудссса дсатоодааає азадсассод 7500 аєстаатааа адасаєссаїє сЕссасєтача табосуєсьє дассксстос осдсаусуєс 7569 сстаєсесдча дассацятач уастсчуссії адуаЧчачаад задоссадаа гдастссаад 7620 адстасацуа адасачасса дадассссас гбоудасаааса агдастучдас бстдсассає 7680 аасасасаас сазасадоудча ЧчЕдадстуоа засєксуєтад суузаєсааєє с 7131 «2105 30 «2112 472 «212» РЕТ й «213» Нощо зарієпз «4005 30 ! с

Мес б51у Тер Бек Ткр мМмаї Ре Беш Рібеє Ппей пйеч бек сіу ТЕ Аза с1у 1 5 10 15 Го)

Уаї Пец бек бій Ма! біп бе біп біп б5ех с)іу Рхо сі Бец маї Буз 270 25 30

Рко б1у діа Зег ма1і Буз Меє 5ех Суз ПЦуз Тік 5ек Агу Тук ТБк Рце Ге) 35 40 45 їм-

ТПг біц Ту Тс 116 Ніз ТгроУМа1ї Аг Сіп бек Ніз б1у Пуз бек Гец 50 55 во с б1іц Ткр І1е сб1у 51іу 11е Азп Рго Азп Азпобіу т1е Рко Азп Тук Азп є5 то 75 во со сіп уз Рпе цуз біу Агу діа Тіх пйем ТЬкоУгаї біу Був бек 5ег 5ег че 85 зо 35

ТЕ Аза Туг Меї біц Гео Акуд Бек без Тк Зек бій Авр бЗес Азїа Уаї 100 105 110

Тут Рпе Суз А1тїа Аху Аку Ак їІ1е А1а Тує сіу Туг Азр біч біу Ніз « 115 120 125 в с А1а Мес Азр Туг Тер сіу біп Сіу Тс бер Маї Тиг Ма)! Бег 5ег Зек 130 135 140 ;з» и ТиЕ Пуз б1у Рко бек Ма1 ВБе Рго йеч Азїа Рго 5есг 5Звг Буз бек ТПЕ 145 150 155 їво зЗзек біу с1іу Тпг Аза діа Пец сіу Суз цей ма)! Буз Азр Туг Ріе Рго -1 165 170 115 (95) ко - 4) ко 60 б5 -А7-

сій Рто Маї Тіг Маї бек ТІр Азп бек 51у Аза Бей Тіг бек С1у МУа1! 180 185 190

Ніз ТвВЕ Рре Вго діа Маї Ге сін Зег бЗег біу Бем Тук Бек Пец 5ех 195 290 205

Бек Ма1ї Уаї Тих Уаї Рко Бек Ззек Бек Пец б1у ТНЕ сій Твк Тух 11е 210 215 220

Суз Азп оУаії Азп Ні Пуз Рго бек Азп Тс о Буз Маї Азр о Буз Пцуз Маї 225 230 235 250 70 Січ Рко Буз Бек Суз Азр Був ТіБг Нівз Тапг о Суз Рко Рго Суз Рго Аїа 245 250 255

Рго сій Бей офеч б5іу біу Рко Зегт Маії Рбе Мей вПе Рго Рко Пуз Рхо 250 ' 265 270

Бу Азр ТВ Пен Меб її1є бек Агу ТБхоРго бі Маї ТБг Суз Маії Уаї 275 280 285

Маї Азр Уа1 Зек Ніз січ Азр Рко Сі Маї Буя Рів Азп Тер Тук Маї 2зо 235 оо

Азр с1У уаї віч Уаї Ніз Азп діа Гуз ТіБг о Ббуз Рго Аг бі 01ц бід зо5 10 315 зго

Тухк Азп Бек ТВх Тух Ако о Маї Маї Зек Чаї ем Тпг Маії Тен Ніз біп 325 330 335

Азр Тр оцечц Азп біу Пуз С1ц Туг Пуз Суз Буз Маї бек Азп Буз Аіа 340 345 350 цеч Рго Аза Рто І1е Сіц Буз Тіх І1е бек Пуз А1а уз Сіу біп Ркго Ге! 355 зво 365 щі 6)

Акч оСьм о Рко біп УМаї Туєє ТБк Пем Рко Рго Зек Ак б1и бі Меї Тс зт «375 зво

Вуз Азпобіп Маї Бек цем ТПх Суз Бей Маї Гуз СЬу РПпе Туг Рко бБекх 3в5 90 3з5 400 «о

Азр І1е Аїа Маї бій Тгр бій бЗег Азп о біу біп Рко 020 Азп Азп Тук 405 410 415 і -

Кпуз Тьк Тв Рго Рго Уа! рем Азр зек Азр біу бер Рпе Рбпе йеч Тук сем 425 425 430 со

Зек Був Пец ТЕ Уа! Азр Гуз бек Аку Тір біп біп б1у Азп Уа! Ре 435 340 445 в.

Бек Суз ет Ууаї Мес Ніз бій А1Та рей Ніз дзп Ніз тТуг Таг обіп Гуз 450 455 160

Зет Пец бек Тез бек Рго сіу уз « 465 470 - «210» 31 й с «211» 339 а «212» ДНК а «2135 Ното зарієпз «4905 зі часаєтуєца судасссааєс сссачассст Єсаусеідбсоє сссадаоуа дадчоассасе 60 зссаассдса адкссадіса чадсссссста баскстадаа ассаааадаа стасссдасс 120 - і сЧдгсассадс адазассадд асадссассс ааасьсстса сстЕссЧадс садсастаау 180 (95) ко - 42) ко 60 б5 -АВ-

чаассеЧачу сасссдаєайд дессачедує зачЕЧочЧчЕсвд ддасадассь сассстьсаєсс 240 ассадсадсс схосадустда адасозсдуса зестассасі десадсааса ксссадстат 300 ссусссасуї ссудасааду дчассаачуєу даааєсаааа 339 «210» 32 «2115 113 «гі2з ВТ «213» Ното заріепз «4005 32

Азр І1е Маї Мек Трг біп бЗег Рго Азр 5Зег Тей Азїа Ма1 5ек Печ 51у 70 1 5 10 15 січ Ак Аїа ТБг І1е Азп о Суз уз Бек Бек біп бек Пви рем Тук бек 20 25 Зо

Ага Азп біп Буз Азп о Тук Тей Аза Тер Туг біп біп о Ппуз Рто б1у Сіп 35 40 45

Рто Рго Пуз їецп ІТвец Ті Рпе Тер Аїа бег ТЬг Акуд бій бек С1у Маї зо "55 во

Рго А5р АкФ Ріе Зег б1іу Бек Сіу Рпе біу ТЕ Азр Рпе Тіт Пец ТОг 65 70 75 во

І1е Бек 5екх рей б1іп Аза біч Азр о маі Аїа Ма! Тук Тук Суз Сіп біп 85 зо 55

Тук Ріе бек Тук Рго Пей ТНк РНе сіу біп б1у ТНг Буз Маї б)ц ї1є 100 105 110

Туз с з о «210» 33 к«2117» 113 «2125 РВЕ «213» Ното заріепз «00» 33 ї-о

Азр І1їе Уаї Мебє Тв; сіп бек Рго А5р б5ег Беч А1їа МУа1ї Зех Пец біу - 1 5 10 15 бі АкЧ Аза Тпх І11е Ази Суз Пуз бек Зеї біп Зек Пео пе) Тух Бег с 20 25 зо со

Ак Авп осіп Буз Ап оТує Бем Ата Тер Рпе біп біп Муз Рго б1у біп 35: 40 45 у

Рго Рко Пуз Бей Пец 116 пе Тер А1іа бег ТПг АкЧ о біц Зет б1у Уаї 50 55 І)

Рго Азр Ага Рпє бек сіу бЗег біу Ріе Сіу ТП Азр рРпе Тік Беч Таг « 65 7о 758 80

Т1е Зек Бек Пец сід діа Сі Азр о Маї А1із Маї Туг Азр Суз 51іп о сіпй 8 с 85 20 95 "» Тух Рпе Бек Тух Ркго Пец Тих Рре біу біп Сіу Тс Буз Ма1ї бін ї1е "п 100 105 119

Куч т - «2105 34 о «?115 113 ко - 4) ко 60 б5 -До-

«2122 РЕТ «2135 Ното заріепз «400» 34

АБр І1є Ма! Мехє ТЬг біп Бек Рго Азр бегт їец А1а Уаі 5ех Печ біу 2 5 10 15 1 біз Ард Аза Тік 11е Азп Суз Буз бек 5ек біп бек Пец Пем Тук зек 20 25 30

Ак Азп обіп руз Азп Тук Бе Аїа Ткр Туг сіп сіб Пцуз Рго с1у сі 35. 45 45

Рко Рго йуз Бей цей Ізе Тук Тур віза бБеї ТПкЕ Акгу бі Бек б1у Маї 5о 55 бо

Рко Азр Агро Рпе бек біу бег біу Ре б1у Тік Азр Ре Тих Пем Тпг 55 то 75 во

І1е бек беїг Тец біп А1іа біц Азр оУаї Аіа Ууаї Тук Тук Суз сів біп 85 20 95 о

Тукг Рпе Бек Тур Рко Гей Тих Рпе б1у біп біу ТНЕ Буз Маї1ї бі Ше 100 105 по пув : «210» 35 «211» 8058 «212 ДНК «2132 Ното зарівпз с «4100» 35 чааксссадс асастддсяуд ссдєтбастадч сЕаєсаасац бааєсааєта судууєсавс 60 Ге) ацдіссаєадс ссабсакаєдчу адсєссусоає сасасаассї асуасаааєа дессуссвуа 120 стідассяссс аасцассссс дсссассдас дссаасєлаєо асусаєуєксе ссатачтаас 180 чссзасачдод ассгсссаєї дасоуєсаато очЕудачкає стасодбсааа седсссасес 240

Ччасацтасає саадеідсасс асасуссаау сасосссссо ассоасоєса ассасудсаз 300 асаддсссусс гадсаєтаса сссадсасаїє дасстітасодд дастьскссса сксЕдасадка 360 Ге) сасстасдса стадеєсаєсу статєсассає собчасосоч ЕСЕсоусачЕ асассавсод 420 чсасадчасач содЕссдась сасудодаєс сссаадеістс сассссаєса асодєсаатод 480 - чавЕсєЧЕЕЄ вБадсассааа ассаасоуцда ссїсссааза єЄдгсуєааса асЕссдессс 540 агсдасосаа абудусаучіа сосясосасо Ччедодасуєс батагсаадса дадсесоєсе 600 засазассуї садаєсосстї ддадасясса сссасодассбудє бЕсСсЧасстсс асадаачаса 650 с ссаддассяда Ессадссісс дедасесдоада асадсдсаєс ддоаасасуда Єбесссотус 720 сгададтдас дізачеіассу сстасадачі ссагаддссс ассссссбодд сттстбакєде 780 Ге) аєаставасе дсссткдасс бдсадессає асассссосяс СЕссісаєує сатадчатоахє 840 часасадссє адсссасасо басдудєсає ссассаєтає єсассасьсс сстаскоддєа 900 ч- асчабасеЕсс ссабсассаз сссасаасат здосЕсьстас сасаасссто Кесагсацех» 960 асгастдссаає асастдуссї Ссадацдаско асасадасос састасєтесса сазуаєсддчоя 1020 ксесасссає сабтстасаза ксасатата саасассасс деіссссацід сссосадсес 1980

КЕаєсаааса саасусацдаа сссссасоясо аасстісоауує асосускссу дасаєсаоадсі 1140 сЕксессуЧЕ аосудсадад сесЕссасаєс суадссстдс соссабудєсь ссаздеуаєсс 1200 « аєдассЯссс оддсадсксся суссссіазсе аусочдачдассо адастсзадс асацсасцат 1260

Чдсссассасс ассаусчсудс сосасаздцс сасодсодЕа Чдасктакасої ссдаааатца 1320 -о чЧчсесодоудач садоєсссуса ссусеуасусєс асеЕсодаача стгсаадоасад сддсадаача 1380 с ачассосадус адссдачеьсд Ес сЕсро асазуадеса дададєзасес ссуєсудсоаді 14450

Чесогсааса усусасудса єусадссса адсадсасіс дЕсосеЧсесу сусудсоассас 1500 "» сазасаєаає адссдасадча сгаасздасс ассссєсксс акадассесе сстктосадєса 1550 п ссуксстЕда сасядсдісьс додавусссу ссяссассає ддадасадас асасссстдс 1620 тахсочатасї чдскусссоодоа чсЕссздуєє сстіссоддача саєтіусдабо асссваєсте 1680 сачассствї досЕЧесїсо ссадсодуада зуадссассає саастдсаач Ессасісача 1740 честссвавта єсстадааає саааауаась ассстаддссстд усассадсад ааассадчає 1800 -1 адссасссаа аскісстсаєс ссЕсдЯаЯста дсастадчоада акстачодата сссцатауає 1860 їсадсадсад сддосісдод асадасскса сссксассає садсадссту сапйдссдаач 1920 сю агусдуасаці єсаскассує садсаатаєс Єсадссаєссс дебсасоєтсс доасаасуда 1980 іме) 20 - 4) 25 іме) 60 бо ссаачуєуда аагаааасяє чадксодаєсс асєсіудчадаєса адсаєустує ССвсесоєстоа 2040 єссстаасає усссідсдає сасдсусааа сазсасассе ааддусадаа сеЕсеЧЕвася 2100 савасассаї сстобвсуст бсстссстса усаасвусуу седсассатс Бугстесаєс 9160 кссссуссає стуаєдадса дтєдавасся усозастусся стзїсососо сссудскоаає 2220 аасскстаєс ссадададас сааадсасач сддаадуєуд абаасусєсся ссааєсодує 22780 аасссссаду ачачдіуєсаєс адаздсаудас зусавуцаса дсассвасад ссісадсадс 2340 ассстдасис сдадсааацдес адастасдад заасасаааєц єссасассод сдаадесасс 2400 саксаєчучес сдацсьсясс субсасааач адссссааса дадоадачся ссадачодадч 2360 азасассссс асстастсст садттссадс стдассосся сссаєссттї судссеседас 2520 ссЕКЕсусса саадочасстї асссстаєсу садессстсса дсесаєссесї сассвсассо 2580 сссесссосЕ ссевуЧессс аастаєсодста абсуссучадоа адаас:дааса аагсааачсса 2640 акєсессусас ссуєадеоуа ссстаахєзааа дасаєсєстаєє сссаєсадає асасуєдеька 2700 70 ФЕЕссЕсасо сасаусоссі стасссодад ссадостача сссодсстіко Чдддаасдада 2760 адчассазаає Чассссазца дстасадчаа уудсачоєсач ачассссаст дудасазасас 2820

Едоастодасї ссдсассаба асасасааєс аасачучудчач єчЧадссзчаа агстостадс 28980 чаасесссда зоасуааачи дсстсчудає асусстасту сбасапаєса аєдссаєтає 2940 заєааєдосє єсесадасує сачуєдоасас ЕСтссоудса аасдєусосу даасссстає 3000 сЕасстасьс состааатстас асссазасахт уктасссуссс аєдадасаат аассстчаса 3060 засдсітусаа баахассоаа азаууагозо сасоауктаєє саасатєссс Чдсуусєсусесся 3120 сакесссттЕ ЕЕЕдсудсат ЕЕсуссьвсос вдЕсЕЕсдся сасссадзаа суссддєдаа 3180 ачдсаазадає дседаадзеЕс адеЕсЧададЕдс асчадсддує басаєсдаас боддаєсьсаа 3240 садсадсаач ассесссдаца Яссексдссс суаачаасяє СЕбсесааєуа Єдадсастьї 3300 їаазасіссу стаєоєоддсо соуваєстаєс ссобадвЕдас дсосдоадсаадч адсаастсояа 3360 гсоссасата сасхсастстс ачааєсасісї пдодссдадсас бсассацеіса садаааацса 3420 тсскасоудаї досаєдасад гзаададааєс аєосадеусеЕ дссабєаасса єчЧадедастаа 3480 сассдсядсс аасттасьїс сдасаасдаї соддаддчасся ааддадссаа ссадсестссе 3540 сасаасата судчаєссаєсу саасеЕсассї сСуаєсуїсуу чаассудаєчс сдаасуаваує 3600 сасассааас дасчаусочса асассасааї усссусауса асддасаасаа сускасусаа 3660 астастстаасі сусудаасстаєсє Етасстстадс сЕссссудсаа саастаасад астододабгдса 3720

Ччсазасаза дседсадцас сассїстосо сісеудссссЕ сеуусьдЧаст дакссаєсоє 3780 хаасзааєся даадссоддесЧ адсовадаєс Есосоудваєс аєтасадсас суддадссадча 4840 сачсаадссс ксссобаєсу садетасска сасчасчоод адссасосаа стаєсуаєда 3900 асчааасача сачцассаску ачаєаучсдс стсаседаєє ааусаєстує зассуссаца 3960 ссааубстас ссагастасас єсСрадаєсуа ГЕсаааастіб састсстазас ссазаадучає 4020 с стадуєдаау абестсрЕБд асааєссссаї дассааааєс ссссазасаясо адктсксоєє 4080 ссасєдадся ссачассссу Садазаадає сзааочатст ссесдадаєс себесвссвст 4140 о дсусусааєс судсідссус ааасазааза ассассЯяста ссадсосіду ЕЕЕЧЕссдсс 4900

Ччоаєсаздад стассаастс сЕсЕсссоаа дусаастддс Кбсадсадау содсадаєаєсс 43260 ааасассуєс стсстадсоє адссугаусс адудссассас сксаадаасі седбадсаєсс 4320

Чессасаєас стсостсрус сазесстдсс ассадсддсї дебдссадеЯ дсдаєсаацчетс 4380 чсдссесасс дауссоддасе саадасдаєа дЕсассддає азачдсодсадс даєсЯадоста 4440 аасччсочуЄ ссусусасас адсссадсєї суадсдаасу асссасассо аасбсадата 4500 (Се) сстіасадсуї даяссасуац аазусяассас дсіссссуаа уучачаагаачу соддасадчаква 4560 їссодЧсааус дусачасчсіся уаасадоача дсудсасуадч дачстсссазу даддазасоє 4620 ча стчутатссї сатачссссту ксудастссу ссасссстяа стбузусаєс дЧассссьоєа 4680 зхчсссуєса дчодудсуча дсстасодаа ааасуссвзос аасосодсст сСсссасоде: 4740 см сстдассЕсЕ госсодуссЕє сеоусесасає чеЕссЕсЕссЕ десуєкатссс сеуаєстстя 4800

Чоасаассує ассассуссс сЕдаусдадс сдаєассосі суссусадсс даасдассоа 4880 со чсосаадсчач ссадссдадсо зсдаатсода ачадсЯссто абсасяуватєє бссстссттас 4920 чсаєседсЯдс чеутгаксссас ассдсасаєо стусастістьс адсасааєст дсєстдаєує 4980 3 соусаєадчета адссадсаєа сассіссдсса ссадсстасуєу ассудучєсаєт достососсо з040 - счасасссус саасасссос бдасодсядссс бдасодастї пдксбостссс досаєссяєт 5100 сасадасава стогЧассує ссссуададс бдсасасусс ададавссьс ассдєсаєса 5160 ссдавасосу сдайчсадсе дсддааксаса соссачессач чособоуаааа уссссосадуає 5220 кссссадсад дсадаадіасє чсазацсаєа саєсссааєї адбссзодсаас садусєссссс 5280 адсгцдсаца адксасусааг чдсасдсаєст сааттадсса дсаассасач ссссссест 5340 « аасутссассс ассссусссс баасіссусс савесссусо саєссьссус сессатадеко 5400 аседасеєтет єстагссасу садачассоа доассассесу ассесеЕЧаує батеЕссадаа 5460 8 псачсдадчуа дассЕкссса дасоасстачоа стссєсусаза аадссадсеє сасоассчссу 3529 с саадсасєса дадсосаабу дсбустааау дазасудаас асусадазааду ссадтссуса 5580 а пааасодсдс хдассссуса Єудаасуєсау ссассдчдостї аєссодасаа судаааасас 5640 а аздсдсаазу ачазачсачу садсссусад содоссгаса стоддсоасадс тадассодас 5700 часссгасоа асадсаачсу аассоуаакт дссадстузда дедсссесву таза єда 5760 чааудссссдес ааадслааст дчасодусЕся стсдссдсса вууасссдає дасосаддає 5820 ассаасасстї сассаацада садччаєдачо ассосеЕссус аєчаєєдаас аздасоадаєт 5880 ссасосадокї їстссаяддсса сеЕсодусода дадастассс сустаєдасех уадсасааса 59840 -І чесааєсудс Боскстдаба ссоссусЯасе ссоддссуєса оссасададудс пасссоддесєсст 6000 і95) іме) - 20 42) 25

Ф) іме) 60 бо жЕЕссдусаач ассдоасстдї ссоусудсссї удаасдааскоя садуччасдчаду сапсосадеє 6060 аєсуєдустя Чссасудасуу чесодсессству сасзуссасу сосуасуєта ссастодаадс 6120 чадзаачаддас сяддссдстах сгаддосчаває дссосоадсад дассссстаї саєсссасст 6180 кЧсЕССсСтосс дадааадсає ссакєсаєдус счаєсдсааєд суасодсвдс абасусеЕєда 6240 хссодскасс содсосасєєсу ассассазує дааасаєссус асссадсдау сасутасься 6300 часдоаачсс чоссісодісу ассазауасда сссддасдаа дадсатсачцу Чустсаасасе 6360 задссуаасбсо сссоссадас Есаадчусосо сасуссстас здосуаддаїс бсуєсуєцаєс 6420 ссатудсчає осссуссвас суааєаєсає досддзазаає дуссуєсься стодаєссат 6480 счаседЕдос содстодЧсЧ садсодассу ссассаддас аєадсаєсодд стасссуєда 6540 таєсдстдаа дадсссдосу дсдаасдаде саассоастєс стсавоусЕвЕ асудтаєсаяас 6вО0 состсссуає ссосадсуса Єсдссьєсва ЄсусстЕсЕї дасдадеєсес ссьдадсоду 6660 асессодаЧЕ Єсуааасчас сдассаадса асдсссаасс бдссаєсаєдч ацчассєсцчає 6729 гссассусся сссбссаєда ааооЕсодус сЕсодзааєсу ЕесЕссодддча суссодстау 5780 ассаєсстсс ассусодуда ссссаєсуссу задскссксЯ сссассссдуд дсссдаєссс 5840 сссасчачеє зчЕссачесса стдсстуачо ссучасзаєсс Ссоусодазесв стассодсад 6900 сусаваєсся гсоддсаєсса бдааассадс адсодустакс сосусавсса судсссссувза 6960 седсадчаці додсадусас уасяддссост Есоуссссуу аєсеЕссуєсєЧа адчаассяса 7020 сессеЧсдос дсдасасаасє сддасааасії асстасацад асстааадсії стгаадуєлаа 7080 таглаааєтє стазоаєдрає заасубоаєсаа ассаседаєє стааскудєкс ссдтаєеста 7140 чЧчассссаасс сасосааассу аєдазсоцуца асадсдчадсоу аасуссіста асдадуааза 7200 сссоассбсдс ссадаацааа бдссаєссач сдаєчаєдац устассдссоа асссесваса 7260 сттстастсссї ссаававача ачадааачас адаацасссс задчассссс стесадааєс 7320 чсктаачьсіс сгдауссаєу седедЕссауд саасадааст сеЕтоссЕдсе ссоссаєста 7380 сассасазаау саазазадстд састдстата сазадаааатєї асддазааає асеседтаас 7440 сегсакаачі адудсаєсааса уєтасаасса сзасаєсасьу ЕБЕбЕссота стссасасадч 75900 чсасадачеіч сседстаєста асаастаєує ссазаааєтд суБасстста ЯсеЕСсЕсаає 7580 їгудсааадчоад дссадсагуд аасаєєсдає Ччеасадкосс Есдассадад аєсасааєса 76520 дссатассас астстодсасад дуссссасско сегсааазая ссбсссасас сессосстда 7еЄВО ассідаааса сазаасчаає ЧдсааєсассЯ тЕастадстхї Ядствассдса ассбсасаасо 7740 чсесасаааса азусаасадс ассасадаєт ссасазаєаа адсасткїї ссастдсатт 7800 ссадсєдсад Сссцессааа сесаєсялаєо гассткабса сдсссосаєс сазсзаааца 7860 хасстасьсс састадасає чеЕдсдєссадЕ сссссаваєу сацедсстся аєссдчаваадсе 7920 садосасацас гссасстсдау чаоадодддуач дссадааєца сіссазауадс гасаччазуд 7980 саччссачад ассссастуд асазасаціу дсідсастусь усассагтаас асасааєтсаа 8040 се сачдчасачсд застуцадає єсоастадс вобв о «2105 36 «2115 234 ка122 РАТ «21325 Ното зарієпз Ге) к4005 36

Меє бі ТПпг.Азр ТВх Пец печ рей Тер Маї Пец Тец цен Ттр Маї Рго в. 1 5 10 15 с біу бек бег спіу Азр І1є Маї Мес ТПг о біп бЗег ВРго Авзвр Зег Гей А1а 20 25 30 со маї бек цем біу біш Ак Аза ТБІі І1їе Азп Суз Пуз бег бег біп 5ег

Зо 35 40 45 -

Бей грец Тухг 5ес Аго Азпобіп Буз АзпоТук о Бец Аза Тер Тук біп біп 5О 55 во

Туз Рго сіу сіп Рко Рго Буз Пец Пец 11е РБе Ткр А1а 5ег Тк АкФ « 5 750 75 во : о, с 51іц бек біу маі Рко Азр Ак РБе Бек біу бек біу Ріе біу ТЬг Авзр 85 з0 5 . а Рпе Твг рец Тих І1е беїх Бе рез біп Аіа бі Азр Маї А1іа маї тТух 100 105 110

ТУк Ссуз біп. біп Тук Рпе Бек Тук Рго Мевц Тпг о Ріе сСіу біп сіу тег 115 120 125 -І і95) іме) - 20 42) 25

Ф) іме) 60 бо пув маії січ їїеє Пуз Аку Маї Рпе Ії Ріе рРко Рхо ех Азр 013 Сіп 130 135 140

ТБїей Пуз Бек біу Тпх Аїа Бек Маії Маї Сув МПез Пец Азп Ази Рібе Тук 145 150 155 160

Ріо Ага січ діа Був маї біп Тгр о Пузв Маї АБр Азп Аза їем біп бег 165 170 175 сіу Азп о бБег біп біц бек Ма1 ТБг бій біп Азр обБеї Буз Азр о бЗег ТВх 180 185 190 70 ТУук Бек їй бек Бех Тіг фей Тиг їни бек пуз Аза Азр Тук біч Буз 195 2060 205

Ніз цуз Маї Тук Аїа Суз бій Маї ТаЕг Ніз сіп біу Пе Зег Бег Рго 210 215 220

Маї їх Ппуз Бег Рпе Азп Ако б51у Сіцп сСуз 225 230 7 «2105 37 «2115» 372 «212» ДНК «2132 Ното заріепь «400537: сад: чдсааєс їадсдсадтс соадсоссуаа дкуаадавас ссудедсске сусузаадсс 60 зассдгтазааа скгадсадаса сассьссаст сваактасасса сасассудас Сачасачуєсс 120 сседассааа чдассудсадесу часасаадаї абсазеЕсста асаабуддсає Есстдастас 180 авссадаачі їсзачодссо ЧЗассасстсч ассотадоса адудбстусєсазч сассусстаєс 240 аєддааседі ссадсстдсу сессдадудаєс ассусадіст асрастасос садаадаача 300 аєсдсстаєа сстасуасуа доддссатась акддассасі ододуссагод аассстбуєс 360 се ассувєстсся са 372 7 о «2105 385 «211» 124 «2122 РЕТ «213» Номо зарієпз Й Ге) 30 «1005 38 біп Уа1 сів Бей уа) біп бек біу Аїа Сі Ма! Пуз Пуз Рго с1у А1а в. 1 5 10 15 с бек уаї Пуз Маії 5ек Суз Пуз ТЬт бек Аку Туг Тпр о РБе Тік біч Тук 2 25 за со

ТВг Ті Ні5 Тер Маї Аку біп Аіа Рко біу біп Агд Печ Січ Тер 11е 35 в. 35 40 145 сіу біу 11е Азп Рго Азп Азп о біу І1е Ро Азп о Тук Азпобіп Буз Рве зо 55 во

Муз біу Ака АТа ТБг Пец Так оМаї б1у Буз бБеї Аза бек ТНхІ Аза Тух « 55 70 75 8о з 40 І с Меє бій рец бег беї Пез Аку бЗег сій Азр ТЬк діа Маї Туг Тук Су5 85 90 95 . а А1а АкЧд АкФ4 Агу І1е Аїа Тук сіу Тут Азр Сіц сіу Ніз Діа Мет Азр 100 ! 105 110

ТУК Тер біу біп біу Тпк о Ббец уа1! Тако ома1ї Зех б5ег 45 115 120 - (95) ко 20 - 4) ко 60 бо

«210» 39 «7112» 124 «2122 РЕТ «2132 Номо заріепе . «або» з с іп Уаї б1іп бец Маї сіп Зек б1іу А1їа бі Уаії Буз пув Рго бсіу А1а 1 5 19 15

Чех Маї Був Маї Бек Суз Був Трг Бек Аг Тук ТБЕ РБе Тпх січ Тух 20 25 зо

ТнЕ І12е Ніз Тер Уаї Акуд біп Аїа Рко біу біп Аку Гец бі Тер І1е 35 40 45 сіу біу І1е АзпоРго Азп Азп біу Т1є Рко Азп Туг Авп біп Гуз Рпе 50 55 ва

Був спіу Аг Аіа ТК Пес Тік оМаї біу уз бек діа 5ех Тиг А1іа тТуг 65 70 75 во

Меї біш Пед бЗег Зек Пец Ако Зек бій Азр Тк А1а Уаї Тух Рре Суз 85 50 95

Аїа Ак Ага Ак І1е Аза Тук сіу Тук Азр бі» біу Нів А1а Ме Ар 100 й 105 110

Тук Тер сіу біп біу Так Ббец Маї Тк Уаї Зек Бек 115 120 «2105» а0 «кв1ї1» 124: «2122 РЕТ «2135 Ното зарієпа с «400» 49 Го)

Сбіп Маї біп Пец Маї біл бБес біу А1а біб Мах Пуз Ппуз Рго п1у Аїа 1 5 10 15

Зек Уаі Шцуз Маї 5ег Суз Буз ТІ Бек Ака Тух Ті Рпе Тк біц Туг 20 25 зо : (Се)

ТНЕ І1в Ніз Тур Маї дДго б1п діа Рго біу б5іп Ддга їец бій Ткр Це ча біу біу тіе АзпоРко Ази Авзп о сіу Іїе Рко Азп Тук Азп біп Буз Рве с 5О 55 бо со

Туз біу Аху Ма) Тпх ї11е Тпх Уаї Азр Тпх Зех Аза Зек ТБг Аза Туг 35 65 70 75 ва -

Ммеє біц Бец Бек бек Пец Аку Зек біц Азр Тк Аза Маї Тук Тук Суз

Й 35 зо 25 діа Аку Аху Ака І1їе А1іа Туг Сіу Туг Азр біц біу Ніз А1а Мес Азр « 105 105 110 40 Тукг ТЕр біу сіп Сіу ТІ Без Маї ТБ Уаі 5ег бЗеєг но) с 115 120 . "» «2102 41 «2112 124 «2125 РВТ 45 «213» Ното заріепз - (95) ко - 42) ко 60 б5 -5Д-

«4005 41 біп ма) біп пцец маї біп бек біу Аіїа бій Ма1ї Був Муз Рко біу А1та 1 5 10 15

Зек Маї Пуз Маії 5Зег Суз Бруз Так Бек біу Тук Трх Рпе ТБг бі Туг 20 25 зо

ТвІ І1е Ніз Тгр Маї Аку біп Ліа Рго Сіу біп Аху Бец біц ТІр Ії1е 35 40 45 сіу біу Іїе Азп Рго Азп о Азпд біу 11е Рго Азцп Тугк Азп біп Був Ріє 50 55 60 70 Туз біу АкЧч Маї ТК І1е ТБг Уа1 Авр ТІ бек А1їа бБег ТЬБг А1а Туг 55 70 75 во

Мес бій Гейобех бек Гей Ако бек бій Азр Тр діа УМа1ї Туг Тук Суз 85 90 5

Аїа Акад Ат Ага Т1е Аза Туг сіу Тухїт Азр бій б1у Ніз Аїа Меє Азр 100 105 116

Тук Тер біу біп біу Тпх Пец Ма1ї ТНІ Уа! бек Бек 115 120 «2105» 42 «2112 7731 «212» ДНК «2134» Номо зарієйз «в00» 42 гЕдаадасцча аадчдаєссся Єдасасдсся абсЕєвасад Чгїаасуєса єЧчатавсває 60

ЧассЕсссад асоуєсадуєд усасьссєсу дудазаєчід сусоудаассс стаєте 129 с аксебсєсстаа агасасссва акасутаєссс ддессаєсуада саабаассстя дактаазатсаст 180 ссзаєаасає суазлааадца адачсаєсчад саєссаасає стссдбаєся ссссстаєтос 240 о сЕгЕссросу дсабсссасс ЕбссбускКсе состсассса дааасоустду сдаазутааа 300 ачасастісаа чдассадссоФ Чеусасдазі сдусбасаєс даассадатс ссаасачсоФд 360

Каачаєсстб дачачівссс пдссссозача асесссссса асчасчадса себе садацчі 420 сссастасає сососоусає сасссососоє сдасдссодо саададсаас ссадісасся 480 сабтасастас ссссадаасч асотоддскда Чеасссасса удугсасадаза адсаєсекає 540 ччасачодсасоа асаусаадаз аастасдсад сестдссабса ассаєдадса асаасассос 600 іс), чассаасеса стєссдасаа суабєсодаду ассугадцау ссаассоссї ссЕсдсасаа 650 сасдудчадас сасусаастс ассттдаєсоя ссодддаассд чадстузася аадссасаєс 720 - азасуасуад суєдасасса содаєдссвудс аусазсудса асаасоасвус дсазастаєт 780 зассяддсоза стасівсасіс СаасЕсссса усаасаасса зсадассоцда содадодсозда 840 см єгаазактоса чдассастсс гдсодсесудс сетсссодсЕ дадстоссева сгоссдаєла 900 акгседдассс оауєсдадсоєд дадгсссасоу баєсаєсдса дсассддудс садаєдаєла 960 со чесссесссЯд ассостадеькса бсбсасасачас здаусадесад дсаастакоз асчаасуазла 1020 стадасадаєс Чдстдадаєау дсасстсасі дабтїазасає сддеаасєдЕ садассааці 1080

Зо стасссасасє асастєсада єсдаєєкада астєсаєссї баасєтсааза содакстауує 1140 - чаздавсстЕ ЕссЧаєсааєс осаєдассад аакссстсаа сЯєчацЕссє суєсссаста 1200 адсчссадас сссдсадааз адаєсаазоауч аєсессесда даєсссетсвс сЕстдсосЯає 1260 аакстадстас Егсдсааасаа ааадассаєс дессассадсяа дсадеЕсовЕ сдссуцдаєса 1320 ачдачстасса асссксссс соаадутаас сдудссєсадс ауадсодсаца сассаваєаєс 1380 « тхуссескскта Чсогадссаї адісадусса ссасіїсвад застістуєад сассусстаєс 1440 зкассссосі стасвьазісс сдЕсассаці дастдссдсс адсоусцтата асісусусєсь 1500 бассочаЧЕвод дасесаадас часауЕсасс ддасаадасу сачсоадЧчісода Яседаасоддчу 1560 - ачусссукус асасачессса дсобузадсу аасоасстас ассчдаасіца часасстаса 1620 с ссчсчадста сдачаазачсу ссасоуєтьісс сузадочацча аауосучаса чусасссоує 1680 и задсочсауу дЕсоддаасац дадассусас дачодадсеє ссадчаддудаа зсусстдоєта 1790 а тсЕсКасадс сседксодадє сесудссассє ссдасссувад суссуаєссс сусдасосьс 1800 чЕсапдачдуча содацесстає ддаавзаасудс сачсазасуся дессесесссас дустсстдос 1860 сСЕСЕСЯсСьад ссксссосес асасостсто ссстосуєта бссессвуаєтє ссогудаєсаа 1920 ссабаєсасс дссссгдадт дчацеєдасас сдсісЯдссЯс ачссуаасуа ссоадсодсад 1980 счачесадіу адсуадудаадч соддзасадасу ссітуабасод басесьстсс ссасясаєст 2040 -І усдсадсасс ссасассодса сасадсссас ссісадсаса асссястссЯ абадссасаса 2100 (95) іме) 20 - 4) 25 іме) 60 бо

ЧеЕсаадссад Бабасасссс дссаєсусса собуастоду ссаєдастус досссуасаєс 21650 ссдссаасас ссусєдасус дсссідасуу дсісуєссдс ссссоддсаєс сусссасада 2220 саадссдЕЧа ссаєсіссод дадсесодсасоа сЯссацчачуудє сЕгсассоуєс атсассодаза 2280 сосусдадує адусасосаєс єсааєтаціс адсаассаєа деЕсссдсссс Гаастссясс 2340 саєсссдссс стаастьссує ссацесссдс ссаєссьссу ссссагдассе дЧассзаєстє 2400 ссесастсає дсадачдодсєсо адассуєссс чудсссстдад срабссссада ачсаусочасо 2460 ачдссЕсЕ ддзадчассвау дсЕсЕсусаа азадстадесї басадсьсад доссдсдчаєт 2520 гсудсоссаза ссідасадуса абсссадсцї сдаадчоссаді адчаєсттає ссссостосс 2580 аксасодоассс дассаєєцаа ссусаєсуюс дссЯбадїссс аааасаєчод чЧчагссдасаво 2540 засодадасс сассссоусс сссусссаду аасозусєсса адсассссса азуазаєдасс 2700 асаасстсЕс садсдуагоу базасадааї ссудсуаєса бооддсачдаа аасстдуєєс 2760 сссазкссссу адаадаассу ассссгааау дасадаасса арахтадсЕсу садсачадаа 2820 сісааауаас сассасчаду адсьсасткї себдссадааа ЧдЕсодаєда суссєсаацча 2880 ссібассдаас аассоддааєї удудсааутаза діауасаєод сЕсоуатадс сучачусачі 2940

ЕстЯасЕсСасс зодаадссає саассаасса ууссассеса дасесЕссдс дасааддаєс 3000 асусадчаатї ссдазадчеца сасуєссьес ссадаааєто атестодаааз ахатааастє 3060 стсссадаах асссададсух сессстссдачй дсссасуадуо аазааудсає сзадсаєсазу 3120

ЕсеЕдаадссї асдацсазуза адаскаасад даадчасодст: ссаадесстс косіЕсСсСссєс 3180 сстааадстах дсатсесєсаї аадассаєоо дастєссодсь доасссстачає ссесдсдадо 3240

Чаассттасе Естасудсує дасаєгаєсу дасааастас стасадачає Єсааацдстст 3300 задасаваста саяазастссє аадсдсасаз суєдЕсааас састдаєсст засєдієвдв 3360 чсассстада єсссаялсста годзассуає даасчодадс адсоаатудаа сусстестаає 3420 чаддазаасс ЕЧЕЕссЯдсьсС адаадаааєд ссаєстадчьу аєдаїєдацдус гассосєдає 3480

Есісаасаєт сктассссбсс аааааауаау адаазадсад аадассссаа одасссссст 3540 хсадааєсус зад дауєсасгусе одЕдкестадса абадваассся сестсусеке 3600

Чсваєсваса ссасазауда азаачстдса сетдстактаса адааааєсає ддазаааєсає 3650 жседтаасся сЕаєзаусад дсаєзасаує басааїсаса асабасьдес ЕсСЕЕсСссася 3720 ссасасачдуас агададсцес боскаєссаає аастаєдсес авазаассосо касссссадс 3780 сЕсссаассї діазаасусді гагсаауаза тасесдасає агадсосстс дастадчачатє 3850 саєялаєсадс састассасає сгдсададає ксвастівсастї гтадаазасс Есссасасст 3900 ссссссдаас сідазасата ааасчааєтос аасстуєсасе чссаасссує ссасудсаде 3960 ссасаагодс сасазаєада дсааєадсає сасазаєтїс асаваєааад сасесЕстус 4020 ассдсасьсу адеботЯдсЕ Єдессавзасе саєсаасдва ссстасєсагуд бссодаєста 4080 асазаацата жкаєєєсса ссадасаєоє дсуєєоуєсь єссодтаводса деодссьстстає 4146 см студуадЧеасса чусасадсва дсестсдадоу адооддадус садаасєоасе ссзадаєеста 4200 садуаачуса сдесадачає сссастодас азасадесодс Кудчассстос ассасазсас 4260 Ге) асаассааса чоучачедач стаддааатсс дссадсодаає Сссадсасас садсаядссує 4320 састадссаєсє саасаусзає сааєсасоадд дуссаєссадсє сасадсссає актаєдсачіс 4380 ссусуєстаса сазасісєасуд саааєодссс дсссдусьуа ссудсссзасу ассессуссс 4440 аєткдасуєса згаатцчасяє аєдЕссссає адгаасудсса абадодасьє сссакеЕдасу 4500 гсааєсчазсу чЧадсасссас дусааассує ссасссудса дтасаєсаау согракєсаває 4560 Ге.

Чссагосася сссссбаксо асуксаасуда сучсааасуу сссосстуче агтасдссса 4620

Чеасаєдасс ссаєдудасті сесстасЕвд дсадтасаєс тасоубаєтсад гсаєсустає 4680 тассаєдаса асасудссіє досадтасає сзаєдудсої доавадсаді ссасєсасу 1740 - чечаєсссса адеЕстссаєс ссакєсцасці сааєадчаадчі сЕЧтЕєкддс ассааааєса 4800 асдадастсї ссаазаєсуєс дсаасаасіс суссссаєьу асусазаєацч чдсаусадусу 4860 сем хасасочесо чадуєсктаєта сааздсадчадс ссусссадед аассоассада бсоссесоад 4920 асдссаєсса суссуєтссЯ ассіссасад аадасассод чассдаєсса чостссусуа 4980 Гео) ссуудаасоу тасассоуудаа содссдаєссс ссугтодссаад адсдасобаа дтассядсста 5040 качацЕсскає адосссассс ссестіодсбсс сСтавосаєудс бсабсассявіє ЕсадЯасеьсоЧа 5100 ч-

ЧЕстасасас сесеуссесс хсасустата зусчаєсоууста саусствасс татацчасука 5160 чассассдас сасстаєєдас састсссоста Єсддсдасцча бастстссає сассваєсса 5220 сбаасасдасу сессоссаса асессстста сСсдустатає дссаасасас сассстєсад 5280 адассдасас додастстдста єсЕссасацу асдадасстс астсастасс басаваєсса 5340 сасавасаас ассассцісс ссацдтудсссо садесссбає сазасатаас дедоздаєссс 5400 « сасусадааєс ссддадсасує дссссодаса садустссЕсС єссодсадсу дсодадссєс 5460 їсасаєссдад ссскодсбссс абсадсссоссад садастісаєудуд єсосссадса дсесствуєє 5520 сстаасадсд удадассадас сбадосасад сасуаєдсосс ассассасса садсоссуса 5580 - сагччссоїу чзсодЕадсає акссЧсссда азатуацесс дацдоадсодуа сестасассує 5640 с сдасдсвЕсї Зуаадасіса адосазасдус адаадаачає осадеасадс: чЧаусссоєсає 5700 ч Чесссдасаа ЧацЕсачдаду гаасісссяє гдсадЕдсвд ссаасодсау асоодсадтоє 5760 а адсссдадса абсасссодєсєсд сідссусусу суссассада саєзаєадсї дасадасксаа 5820 сазаскЕсссс скссссабєуу дбсссесссу сачесассоє сеєсдасасу суссссодуа 5880 аясЕсдссус сассасадас соддасстоддс дедЕдссу сесустсасс дедусессвуя 5940

Чудсссасад ссададєосад седувусаді ссудсдссца адтсозадава сесуцкасеє 6000 ссусчааадї сачссосааа астсадтадає асассрссас созабасасс атасастода 6060 -І скачасадує ссскудссаа адассадауь дуасадуаця бассаяатссї аасаатодса 6120 і95) іме) - 20 42) 25

Ф) іме) 60 бо тЕсствасса саассауаад сбсаазудсс доддссассся дассутацуєс аздЕстодсса 5180

Чсассудсста сатгддаасто бссадсстуєс дсгссдауда састусачіс тастастдсу 6240 ссачаздаау аабсосстає дассасоасо здудуссатує сахтучастас соодоадссаау 6300 ддаассстсдк сассдеЕстсс ссадоєссаче дсаєссісьу сусссодудєс садссстувс 63650 ссасассусу одссасаєсудс ассасстстс кбудсадсстс сассааддус ссаєсодест 6429

Ессссстудс асссссстсс аацадсассї стддадодсас адсддсессяд достоусссод 6480 їсазуцчаста стсссссцаа ссоусдасад сЧдссдбддаа сссадудсдсс сстдассадсо 6540

ЧедЕдсасас сесссосудесї дсстасаде себсаддаст стастссстс адсачсуєад 6600 коассчсасс стссадсаус ссадосассс адасстасає ссдсаасухєу аахсасаацс 6660 ссадсаасас саводсдуас аадазацесд адсссаааєс єЕдЕдасаза асісасасає 6720 зсссасеоєу сссадсасст даассссідо додддассуєс зуссссссєс бсесссссяаа 6780 аасссаауца сассестсаєу асессссуда сесссуцадцї сасатасаса ча сабаса 6840 сдадссасза адасссєдау Чісзауссса астуусасує ФтдасуасясЯ дадуєасаса 6900 асдссаадас авадссасуу садсадсачі: асазсадсас дсассодЧчосу чісадсяссс 6950 ссассассстї усассаччас соуЧдссдааєсу дусазудауса саацсусаау дсссссааса 7020 аадсссіссс адсссосаєс уадаазаєса їсессаазаус сааадуасад ссссдадаас 7080 сасацдчідта сассстусєсс ссагсссодо адчачаєдас сзадаассаєч чісзуссєцда 7140 сседсссуде сададдстсс каєсссадсу асаєсуєсоує ссачЕЧЯадЧад адсаасачас 79200 азссудадаа саасстасазу ассасассіс ссдтоассодда сессчасоас Ссосьєсеєсс 7260

Естасассаз чсісассобсд здасаацадса собудсадса пдадаасасс сссєсатасть 7320 ссцєсатуса ссадоастстЯ сасаассась асасусадаа чадсстстстсс стуїсессод 7380 чказаєчачі дсдасодссо усаадссссд сессссудус Есссодсодеєс дсасчаудсає 7440

Чесессддсася сасссссвдс асаєсассєсс судаддсоссса дсаєуддазааї ааздсассод 7300 аєстаатааа ачасасьетас стесастада забуто суєх давссЕсвЧЕ дсодсадедсс 7560 сссаєсводда дчоссадуєад одудссдусссї дЧдуддадоуду дадуссачаа Єдасессаач 7620 застасадда адосачуєса дадассссас боддасазаса чЕдостадас бсрдсассає 7680 заасасасаатї саасасодуда дсЧчадсеода засстудсЕзо суааєвааєє с 7731 «2105 43 «2112 472 «217225 РЕТ «213» Ното зарієпа «400» 43 с

Ме Азр Ткр Тиг Тгр Ак Уаї Рпе Суз Бей Пец Аїа Маї діа Рко б1у 1 5 10 15 (о)

А1а нів Бек б1п Ма1ї біп Пец Маі бів бек б5іу Аі1а бі Ма1ї Буз Гуз 2а 25 30

Рко б1у Аїа Бех Уві ув Чаї бек сув ПЦуз Тс бек Ак Тухк Те Ре (се) 35 40 45 їм-

ТпЕ бі Туг ТЕ І1е піз Тер ма1і! Ак біп Аїа Рко біу біп Ак йец 50 55 І-19) с б1ій Тер І1е біу сіу ї1е Азп Ро Азп о Азп о біу 119 Рго Азп Тух Азп 65 70 75 во і) біп Був Рре пуз біу Ак А1іа Тпг Пец ТІ Ма! біу Пуз Бек Аїа Зег . 85 зо 95

Тв о Аїа Тух Меє б1іц Пец бЗеї бет Пец Аг 5ек біз Азр Тпг діа Уаї 100 105 110 «

Тус Тук Суб5 А1а Акуд Ак АгЯ ї11є А1їа Тух сіу Тук Азр бі біу Ні 115 120 125 - с А1їа Мег Азр Тук Тгр о б1у біп С1у Ти» о Ббец Уді ТЕ Уаї бек бек 5ек 130 135 150 "з . " Твгоцув б1у Рго бек уаї Рпе Рго цем Діа Рхо Бек Бех Буз Бек ТЕ 145 150 155 160

Зек сіу біу Тіг Аїа АТа Печ біу Суз Пцец Маї Шуз Адвр Тух Рпе Рго -і 1655 170 75 (95) ко 20 - 4) 25 ко 60 бо бі Рко Маії Так Маї бЗек Тер Авхп о Зег Сіу А1а Гей ТБг бек б1у Маї 180 185 190

Ніз ТЕ Рпе Рко Аїа Уа! їец біп Бек Бек с1у пем Тух Зак Бец Зесг 195 200 205

Бек Маї Ма1ї ТЕ Уаії Рко Бек бБег Зек Без біу Тк біп ТБ Тук І1е 210 215 220 сСув АзпоМмаї Азп о ніз Пуз Рго Зех АзпоТВх уз Уаї дДзр о буз Був Маї 225 - 230 235 240 710 біц Рго Ббуз бек Суз Азр Пуз Так Ніз Твіг о Суз Рко Рго Суз Рго А13 245 250 255

Рго сіц Пцеч Пец біу біу Рго бЗег ма1 Рпе Пецп РНе Рко Рго Бу5 Рко 260 265 270

Туз Азр ТПгоГец Має І1в бек Ако ТБс о Рго бій Маї ТБ о Суз Уа1ї Ууаї 275 . 280 285 -

Уа1і Азр Маї 5ег Ніз біц Азр Рко біц Маї Пуз Рре АзпоТір Туг Уаї 290 295 Зоо

Авр біу Маї біц Уа) Ніх Азп Аїа буз Тк о Буз Рко Ага бін б1ц Сбіп 305 310 315 320

Тук Деп бек Тк Туг Агд Маї Маї бек Уаії Пец Тих Маї Теч Ніз біп 325 330 335

Азр ТкЕр Пей Азп о сіу Пув 015 Тукг Пуз Суз Пйуз Маї бек Азвп о пуз А1а3 -340 345 350 пе Рго діа Рго ї1е бій Пуз ТНЕ І1їе бег уз Аіа Пуз 2іу біп Рго с 355 зва ЗБ о

Ага біб Рко біп Ма! Ту ТК Пец Рко Рго 5Зег Аку бій бі Меє Тих 370 375 зво

Туз Азп сід Ма! 5Зег Пец Тібг Суз Без Ма1і цуз біу Рпе Тук Рко 5еї 385 390 395 100 (Се)

Авр І18є А1іа Ма1ї бій Ткр біц Бек Азп біу біп Рхо Сім АзлоАЗзпотТук ч- 405 410 415 пуз ТВі тик Рго Рхо Уа: Бей Азр бек Азр о біу бек Рпе Рре Гей Туг с 420 425 439 со

Зек Пуз Бец Тс оМаії Азр Буз Зеї Аку Тгр біп біп біу АзпоУа1 Ре 435 440 445 -

Бек Суз Бек Маі Мес Ніз бій Аза Ббец Ніз Авп Ніз Тук ТНг біп Гуз 450 . 455 460

Зек Бей Бек Пен бег Рго біу Гуз « 465 470 - с «2102 44 «211 25 "з «2172» ДНК й «2135 Нощто зарієеп: «00» 44 ассусстссї свдабдаату даєсс 25 - (95) ко - 42) ко 60 б5

«210» 45 «211» 14 «212з ДНК «2132 Ното зарієпаз . . «4005 45 ссісеЕстєуєс адсе 14 «2102 46 Й «2112 14 «2122 ДНК «213» Ношо заріепз «00» 46 пстсссттос адос 15 «210» 47 «211» 4 «2122 РЕТ «213з Ното заріепз «400» 47

ТвЕ Уаї Бек 5ег о . 1 «210» 48 «211» 4 ; «212» Рвт «213» Ношо 5аріепз «400» 48 сі

Бек Так Буз сіу а о «2105 49 «2115 27 «2122 ДНК «2135 Ното зарієп85з (Се) «200» 49 у ассотссссЕ садсстссас сазудос 27 ! с «210» 50 «21ї5 В о «2122 РЕТ

Зо «213» Ново заріепз . ї- «4005 50

Тис Маї бек бЗег бег Тпх Буз б1у 1 5 « 406 «2105 51 - «21125 27 ! с «212з ДНК «213» Ното зарієпз . ит «4005 51 ассдсссссї садссіссас сааучас 27 -І «210» 57 (95) ко - 4) ко 60 б5

«2115 8 «2122 РЕТ «213» Ножо зарієпз «400» 52

ТпІ Ма) бек бег Аїа бесг Тпг уз 01у 1 5 «2105 53 «2115 22 «212» ДНК «2132 Ното зарієпз : «4005 53 дазасаааас чідадіддає сс 22 «2105 54 «2115 27 «2122 ДНК «2132» Нощо зарівепз «4002 54 сеЕбесскссє садуаастуї ддскдса 27 «2105 55 «211» 4 «2122 ВВТ - «213» Ношто зарієпз «4005 55

Таг Уаі дДіа діа 1 : с 7 о -2102 56 «2112 24 «2122 ДНК к213з Ното зарієепа «400» 56 (Се) чЧчаавасаааас здаастідтадс вуса 24 чн «2105 57 с «2115 7 «212» РВТ со «2132 Ното зарієтп5 «400» 57 | | -

Зі ті руз Таж Уаї діа Аїа 1 5 «2105 58 й « «211» 24 «2125 ДНК не с «2132 Номо зарієпз ч «а00з 58 ит Чазаєаааас узасєусодс суса 24 к210з 53 «2112 В - (95) ко - 42) ко 60 б5

«2122 РЕТ «213» Ното зарієпз «4005 59 січ 11е Буз'Акуд Твг Маїі Аїа Аза 1 5 «210» 50 «2115 20 «2122 ВВ «213» Нощо заріепз «400» 60 -

Мех Азр Зекг сіп Атїа сіп мМаї Бем Меє Пец беш Без цей Тгр Ма1! 5ес і 5 10 15 сіу ТБЕ Суз сС1іу 270 : «210» 1 «2112» 19 «2122 РЕТ «2132 Нощо заріепз «4005» в1

Меє сіу Тгр бек Тгр Маї Ріе пец Ре лец цец бек б1іу Так Аза бу 1 5 10 15

Уаі Пец Бег к«Р102 62 с «2112 9 «212» ДНК (о) «2132» Ношо зарієй5 «490» 562 : чссоссасс а (Се) «210» 63 че «2117 37 «212» ДНК с «213» Шсучна послідовність «220» со «223» Опис штучної послідовності: праймер че «4005 63 садаавчсс: дссусєсасса соуасссаса дасссад 37 «210» 64 « -2115 5 «2122 РЕТ - с «213» Номто заріецз «400» 64 : :з» Мех дер Бех сіп діа сіп 1 8 «2105» 65 -І «2115 35 (95) ко - 42) ко 60 б5

«2127 ДНК «213» штучна послідовність «223» Опис штучної послідовності: праймер «4100» 65 ссдадзчаєсс астсасуюісє садсєссадс єс 35 «2105 656 «2115 37 70 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «400» 66 садааацсїє дссоссасса Судчасодая стоуаєе 37 «2105 67 , «2112 6 «2122 РВТ «21325 нНошо заріепв «4005 67

Меє сіу ТтТігр б5ег Тгр Маї 1 5 «2105» 68 «211» 35 с «212» ДНК «213» Штучна послідовність (о) «220» «223 Опис штучної послідовності:прайнмер «400» 68 Ге) ссдадуаєсс астсассєда чддацдасадеод ассда 35 їч- «2105 69 Й «2112» 36 с «2122 ДНК «213» Штучна послідовність Гео) к2205 3о «223» Опис штучної послідовності:праймер т «4005 ва

ЧдЕсассасаа ЕЧЕсеіссдда сдаасстоуда асссад зе «2105 70 «211» 29 - с «2125 ДНК «213» Штучна послідовність . и? «2205 «223з Опис штучної послідовності: праймер «4005 70 сЕссудачас астчсаасча сссаакссос 29 - (95) ко - 42) ко 60 б5

«210» 71 «211» 45 «2122 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «4005 71 даахасазаа дуссссдасс дуасскусага ксасддбуа сесес 45 «2102 72 «211» 72 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2203 «223» Опис штучної послідовності: праймар «4002 72 садтсацацс стїЕгагаїс стауазаєса азацаасстаєсє СсодссЕуає ассадсачдчаа 60 ассауцасацч се 72 «2105 73 «2115 44 «212» ДНК Й «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності праймер «400» 73 с ассссадає: ссстадсЯдсс аусссааагау асдчаууатс вад 44 щі 6) «210» 74 «211» 67 «212 ДНК «213» Штучна послідовність (Се) «22а» «223» Опис штучної послідовності: праймер че «4005 74 с садсастасо дзасссдоду басседаєаа дЕссачеідудс аседаЧческсЯ сдасачассє 60 сасссес 57 со «2105 75 у «211» 53 «212» ДНК «213з Штучна послідовність «2» « «223» Опис штучної послідовності: праймер «400» 75 с ЧЕсссттЯсс созасдєдад судасадсва зазбастуєс дасадтіааса вас 53 . "» «210» 78 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність - (95) ко

- 42)

ко 60 б5

«223» Опис штучної послідовності: праймер «41005 76 чЧчстсасассс ддасвзадодда ссавзвочзізда за зі «2105 77 «2115 72 «212» ДНК «2132 Штучна послідовність «2205 І «223» Опис штучної послідовності :праймер «40023 77 сауісачадче сесстагаст стацазатса ааздаастас Єсоддссесує Ессадсадаа 60 ассаддасач се 72 «2105 78 «211» 57 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «400» 78 І

ЧЕсссібуєс сдаасуєдач судаєсадусса азасакродст дасаоссаса аастодсс 57 «2105 79 «2112 34 ! с «212з ДНК «213» Штучна послідовність о «220» «223» Опис штучної послідовності:праймеюр «4005 79: (Се) зо сссавасксс гсассбастт чдестадсасЕ адочЧ 34 у «2105» 80 «211» За с «212» ДНК «213» Штучна послідовність ме) «220» ї- «2232 Опис штучної послідовності: праймер «43005 80 ссстацеусє адсссаасад асчадуачєс сЧад 34 « «210» 81 шщ «9711» 17 с «212» ДНК «213» Штучна послідовність ;» щі «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «4002 81 -І стасчсааасо дестсте 17 (95) іме) - 42) іме) 60 б5

«2105 82 «211» 18 «212з ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності : праймер «00» 82 чадсдсасса стаєдсачЕ 18 «210» 83 «2112 16 «2122 ДНК «213» Штучна послідовність «220» І «223» Опис штучної послідовності: праймер «400» 83 аасадссаєо ассаєд 16 «за» ВА «112 17 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «00» 84 .-

ЧЕКЕксссау ссасдає І 17 Ге щі 6) «210» 85 «2112 47 , Й «2125» ДНК і «213» Штучна послідовність «220» ісе) з0 «223» Опис штучної послідовності: праймер чн 4005 85 чоуктасссау єдаадуєуса Естассадтс єсасадсбсда сесесас 47 се со «2105 Вб «2115 53 39 «2125 дик - «213» Штучна послідовність «2205 «223» Опис штучної послідовності: праймер І « «4002 85 - тачтацатстас асстрсасьо азгасассаї асаскдадЕеЕЄ адчасачуссс стад 53 и «2105 87 и?» «211» 71 «212з ДНК «2132 Штучна послідовність «2202 - і «223» Опис штучної послідовності: праймер (95) ко - 42) ко бо б5

«4005 87 : сссттаааєт Ессуддссдка дстадуаата ссаєтуєвтад даєстааваєс Есстаєссаєс 60 гссацесстсте Ч 71 «210» 88 «2112 71 «2127» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 й «223» Спис штучної послідовності:праймер «4005 88 таастасаас садааустсса адсуссодас сасстсдасс деЕасудсааує ссуссадсас БО сусссасакч в 71 «2105 89 «2112» 63 «2127 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «800» ва чсасучсссЕ суєсусаасс абасуєсдаєт сеЕсссвссдоа сосадсадта дастдсачбд 60 тес й 63 «2102: 90 «2115» 48 «212» ДНК Ге! «213» Штучна послідовність щі 6) «220» «223» Опис штучної послідовності праймер «414002» З0 ссаєсоаєсєтас дасдасоадсс акядссаєдса сеЕасєдсдоЯї сааодаас 48 Ге) , «2105 91 : о «211з 71 «212» ДНК с «2135» Штучна послідовність со «220» «223» Опис штучної послідовності:праймер - к4а0о» ві саастасаас садаауєіса аздуссодуЧЕ сассаєсасс убадасассї стдссадсас БО сасстасасо д 71 «210» 32 «211» 27 - «2122 ДНК с «213» Штучна послідовність . и?» «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер 15 «4005 92 й

Чаасастдса дістассеїсе дсуссаз 27 - (95) ко - 42) ко 60 б5

«210» 93 - «211» 17 «2122 ДНК «2132» Штучна послідовність 2 «220» : «223» Опис штучної послідовності :праймер «ро» з3 тасасааасс дсстстс 17 706 «2102 94 «211» 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності праймер «00» 94 дасгоосаєса КабдсаЧі Й . ІВ «210» 95 «2115 75 «2125 ДНК : «213» Штучна послідовність «2202 «223» Опис штучної послідовності: праймер «41400» 95 ссЕсЕдЯсса ддсодссідсс саасссачіо багадсовак ксадедааду согтатссась 60 се адсссссаст адЯсс 75 о «2105 96 «2115 28 «2122» ДНК «213» Штучна послідовність І«о) «220» М «223» Опис штучної послідовності:праймер «4205 96 се здгсассуєсс ссЧасасясу ссссодча 28 : со «2105 97 ч- к2112 17 «2122 ДИК «213» Штучна послідовність «220» | « «223» Опис штучної послідовності: праймер «4002 97 - с гхЧаадчадча дстчссад 17 . и"? «2105 98 «2112 22 «212» ДНК . «213» Штучна послідовність - «220» (95) ко

- 4)

ко 60 б5

«223» Опис штучної послідовності: праймер «4005 98 чачасаттає аасссааєст се 22 «2102 99 «9112 25 «2127 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: праймер «400» з9 часасесаса аастдссаса ссосес 25 «2105 100 «2і1з 23 «2122 ДНК «213» Штучна послідовність сч «220» о «223» Опис штучної послідовності: праймер «4005 100 й ' со тссасасЯсу Есссосчаавч сс 23 їч- с «210» 101 «2112 22 : Шк ч«212з ДНК чн «213з Штучна послідовність «2205 « «223з Опис штучної послідовності:праймер - с «4005 101 . з» дасусацдаад асссасссас се 22 -І (95) ко -0.750 42

Ф) ко бо 65

МАЛ. 1 1 11 21 зі 41

САСАТТОТСА ТСАСССААТС ТССАСАСТСТ ТТООСТОТСТ СТСТАССОСА

51 61 71 81 91

САСССССАСС АТСААСТОСА АСТСОСАСТСА САСОСТТТТА ТАТТСТАСАА

101 111 121 131 141

АТСАААЛАСАА СТАСТТООСС ТОСТАТСАСС АСАААССАСО АСАСССАССС

151 161. 171 181 191 70 АААСТСОСТСА ТСТТТІТСССС ТАССАСТАбО САБТСТОСОб ТАССТОАТАЄ 201 211 221 231 241

СТТСАСТОСС АСТСОСТТТО ОСАСАСАСТТ САСССТСАСС АТТАОСАССС

251 261. 271 281 291

ТОСАбССТСА АСАТОТОССА СТТТАТТАСТ СТСВОСААТА ТТТТАССТАТ зо1 311 321 335 339

ССОСТСАССТ ТОССАСААСО САССААОСТО САААТАААА

МАЛ. 2 1 11 21 31 41

РІУМТОЗРОЗ САУЗОСЕКАТ ІМСКБЗОБІ УБЗЕМОКМУБА ИУООКРООРР

51 61 71 в1 91

КЬПІРНАЄТЕ ББСУРОЕРООС БСЕСТОЕТІТ ІЄББОАЕОУА УУУСООУЕЗУ сч 101 111 29 РІОТЕСОСТКУ БЇК (о)

МАЛ. З ї-о зо к 1 . 11 21 31 41 сч

САСАТТСТОА ТОАСССААТС ТССАСАСТСТ ТТСОСТОТСТ СТСТАССОСА

51 ві з7і в1 91 Ге)

САСОСССАСС АТСААСТОСА АСТОСАСТСА САСССТТТТА ТАТТСТАОВА з5 101 111 121 131 141 -

АТСАЛААСАА СТАСТТООСС ТОСТТССАСС АСАААССАСС АСАСССАССС

151 161 171 181 193

ААЛАСТОСТСА ТСТТТТОСОС ТАОСАСТАСО СААТСТОбОоС ТАССТСАТАС « 201 211 221 231 241 ю СТТСАСТООС АСТООСТТТО ОСАСАСАСТТ САСССТСАСС АТТАССАССС З 251 261 271 281 291 с ТОСАСОСТСА АСАТСТОССА СТТТАТСАСТ СТСЬАСААТА ТТТТАССТАТ "» заї 311 321 331 335 , ССОСТСАССТ ТСООАСААОС САССААССТО САААТАДАА -І (95) ко - 20 4)

Ф) ко бо б5

МАЛ. 4 1 11 21 31 лі

РІУМТОБРОЄ ГАУБЬСЕВАТ ІМСКЯВЗОБІЇ, УЗВМОКМУСЬ ФРООКРООРР 9 51 61. 71 ві 91

КЬБІЕМАБТЕ ЕЄСУРОКЕ5С БСЕСТОЕТЬТ ІЗБІОАЕОМА УТРСООУЕБУ 101 111

РІТЕСОСТКУ БІК

70 ,

МАЛ. 5 1 11 21 зі 41

САСАТТСТСА ТСАСССААТС ТОСАСАСТСТ ТТООСТОТСТ СТСТАССОбА 51 61: 71 81 31

САСССССАСС АТСААСТОСА АСТССАСТСА САСССТТТТА ТАТТСТАСАА

101 111 121 131 141 р. АТСААААСАД СТАОТТОСОС ТОСТАТСАСС АСАААССАСО АСАСССАССС 151 161 171. 181 191

АВАСТССТСА ТСТАТТОСОС ТАССАСТАСО СААТСТОССО ТАССТОАТАЄ

201 211 221 231 241

СТТСАСТООС АСТООСТТТО ОСАСАСАСТТ САСССТСАСС АТТАбСАССС 251 261 271 2в1 291 сч в ТОСАСОСТОА АСАТОТООСА СТТТАТТАСТ СТОАОСААТА ТТТТАССТАТ 301 зії 321 331 339 (о)

СОССТСАССТ ТСОСАСААСО ОАССААССТО САААТААЛА

(се) зо Кк

МАЛ. 5 с 1 11 , 21 31 41 о

РІУМТОЄРОЯЇ ГАУБІСЕВАТ ІМСКЕВОбІЯ,. УЗВМОКМУТА МУООКРООРР їм 51 ві 71 ві 91

КІПІУМАВТВ ЕЗСУРОВЕОС ЗОРОТОЕТІТ ІЗВГОАЕОМА УУУСООУЕВУ

1013 7 111

РОТРСОСТКУ БІК « - с . а -І (95) ко - 20 4)

Ф) ко бо б5

МАЛ. 7 1 і

САССТОСААС ТАСТОСАСТС ССОСОСССАА СТСААСАЛАС ССОССТОСТТС

51

ССТОСАААСТС ДОСТСТАААА СТАСТАСАТА САССТТСАСТ СААТАСАССА

101

ТАСАСТОССТ ТАСАСАСОСС ССТОСССАЛА СОСТОСАСТО САТАССАОСТ

151

АТТААТССТА АСААТСОТАТ ТОСТААСТАС ААССАСААСТ ТовАССОССС 201

ССССАССТТО АССОТАОССА АОТСТОССАС САСССССТАС АТОСВАСТОТ

251

ССАСССТОСО СТОСОАССАС АСТОСАСТСТ АСТАСТСССС САСААСААСА зов

АТСОССТАТО СТТАСОСАСОА СОБССАТОСТ АТОСАСТАСТ СОССТСАЛОС

381 372

ААСССТТОТО АСССТСТОСТ СА

МАЛ. 8 1 11 21 31 41

ОУОІОЗОАЕ УККРСАБУКУ ЯСКТОВУТЕТ БУТІННУКОА РОСОВШЕНІСС сч 5і ві т ві 91

ІМРЮМСІРМУ КОКЕКСВАТІ, ТУСКБАБТАУ МЕБ5Б5ОКОЕО ТАУХУСАВЕКЕ о 101 111 121-124

ІАУСУОЕСНА МручСОСсТІ ТУу55 зо МАЛ. 9 іш чн і Ге

САССТОСААС ТАСТОСАСТС ССОСОСССАА СТСААСАВАС ССОСТОоСТТС с 51

СОТОАААСТО АОСТСТАЛАА СТАСТАСАТА САССТТСАСТ СААТАСАССА ї- 101

ТАСАСТООСТ ТАСАСАСОСС ССТООССАЛА СОСТОСАСТО САТАССАССТ

151

АТТААТССТА АСААТОСТАТ ТОСТААСТАС ДАССАСААСТ ТСААСоСССО « 201

СОССАССТТС АСССТАСОСА АСТСТОССАС САСССОСТАС АТОСААСТОТ в) с 251 «з ССАОССТОССО СТСССАССАС АСТОСАСТСТ АСТТСТОСОС САСААСААСА и 301 Й

АТСОССТАТС СТТАССАССА СОСССАТОСТ АТОСАСТАСТ ССОСТСААСС

351 372 - 35 ААСССТТСТС АСССТСТОСТ СА (95) ко -1 20 4) (Ф) ко 60 65

МАЛ. 10 1 11 21 КУ аї 2 ОМОБПУОБ5бАБ УККРОАБУКУ ШСКТЕВУТЕТ БУТІННУВОА РООВІЕНІОС 51 ві 73 ві е1

ІМРММОСІРМУ МОКЕКОСКАТІ,. ТУСКВАБТАУ МЕБ55ІВЗЕО ТАМУКСАВЕА 101 111 121-124

ІАУСУОЕСНА МОхУМСОСтТІ ТУБ5 70

МАЛ. 11 1

САССТОСААС ТАСТОСАСТО ССССОСССАА СТОАДАСАААС ССОоСсТОСТТС ві !

ССТОСАВАСТС АССТСТАААА СТАСТАСАТА САССТТСАСТ СААТАСАССА

101

ТАСАСТСОСТ ТАСАСАСОСС ССТООССАЛА СССТОСАСТО САТАССАОСТ

151

АТТААТСОСТА АСААТОСТАТ ТОСТААСТАС ААССАСААСТ ТСААбСОоссб 201

ССТСАССАТС АСССТАСАСА ССТСТОССАС САССОССТАС АТОСААСТОТ сч 251

ССАСССТОСО СТСССАССАС АСТОСАСТСТ АСТАСТОСОС САОДАСААСА о 301.

АТСОССТАТО СТТАССАССА ОСОССАТОСТ АТОСАСТАСТ ОСОСТСААОС

351 372

ААСССТТСТС АСССТСТОСТ СА со "а с

МАЛ. 12 со - 1 1 21 31 41

ОУОГМОЯСАБ УККРСАЗУКУ 5СКТЯДУТЕТ ЕБЕУТІНМИУКОА РСОВЛЕМІСС 51 61 зі ві зі «

ІМРМЮСІРМУ МОКЕКСВУТІ ТУРТ5ЗАБТАУ МЕБ55ІВЗЕР ТАУТУУСАВНЕ дю 101 111 121-128 з

ІДУСХУРЕСНА МрУМСОСТЬУ ТУ55 с . а -І (95) ко -0. 2 4) (Ф) ко 60 65

МАЛ. 13 "

САССТОСААС ТАСТОСАСТС СОССОСССАА СТОААСАААС ССбОТОоСТТС 51

ССТСАААСТС АССТОТАААА СТАСТАСАТА САССТТСАСТ СААТАСАССА

101

ТАСАСТОСССТ ТАСАСАСССС ССТОСССААА СОСТОбАСТО САТАССАОСТ 151

АТТААТОССТА АСААТОСТАТ ТОСТААСТАС ААССАСААСТ ТсААобоСсо 70 201

ССТСАССАТС АСССТАСАСА ССТСТОССАС САСССССТАС АТОСААСТОТ

251 .

ССАСССТОСО СТСССАОбАС АСТОСАСТСТ АСТТСТОСОС САСАДСААСА зо1

АТСОССТАТО СТТАССАССА СООССАТОСТ АТОСАСТАСТ ССОСТСААСо з51 : 372

АВСССТТСТС АСССТСТОСТ СА

МАЛ. 14 1 11 21 31 41

ОУОГХОБ5САЕ УККРОАБУКУ 5СКТОВУТЕТ ЕТТІНЯУКОА РСОВБОЕМІСС 51 61 т71 ві 91

ІМРММСІРМУ МОКЕКСКУТІ ТУРТВАБТАУ МЕБББЬКБЕО ТАМУЕСАВКЕ с 101 111 121-124 о

ІАУСУПЕСНА МруМсостЬУ ТУ58 І

МАЛ. 15 , ї-о ча 1

САССТОСААС ТАСТОСАСТО ССССОССОВА СТОВАСАААС СССсСсТОоСТТС с зі

ССТОАААСТС АССТОТАААА СТАСТОСАТА САССТТСАСТ СЛАТАСАССА о 101 в.

ТАСАСТОССТ ТАСАСАСССС ССТСОССААА бОСТОСАСТО САТАбСАССТ 151

АТТААТССТА АСААТОСТАТ ТСОСТААСТАС ААССАбААСТ ТСАдооссСсо 201 «

СОТСАССАТС АССОТАСАСА ССТСТОССАб САССОССТАС АТОСААСТОТ 0251 ШИ З с ССАСССТОСО СТОССАСОАС АСТОСАСТСТ АСТАСТОСОС САСААСААСА зо1 :з» АТСОССТАТО СТТАСОАСОА СССССАТОСТ АТОСАСТАСТ ОбОСТСААОо 3151 ; 3172

ААСССТТСТС АСОСТСТОСТ СА

-І (95) ко -0.720 42) (Ф. ко 60 65

МАЛ. 16 1 11 21 зі 41

ОУОБУОЗСАЕ УККРОСАБУКУ Б5СКТ5СУТЕТ ЕУТІНИУКОА РООКОЕМІОС ві ві 7і 81 зі

ІМРММСІРМУ МОКЕКСКУТІ ТУБТБА5ТАУ МЕББОКБЕО ТАМУУСАВКВ 101 111 121-124

ІАХУСХОБСНА МмруюсостімМ ТтУ58

МАЛ. 17 1 0ІУМБОВРБО БАМОУСЕКУТ МОСКОВІЇ. У5ВМОКМУБДА МЕООКРООБР 51

КІОПЛІККАЄТЕ ЕБОСУРОКЕТО 5ОЕСТОЕМІТ І155УСОДЕОБА УХОСООКЕВУ 191

РЕЬТЕСАСТКІ. ЕОКЕТУААРУ УЕІТЕРРЗОБО ІК5СТАБУУС ЬОММЕУРКЕА 151 ' .

КУОЯКУЮМАІ, ОбСМ8ОВ5УТ БОрековту5 ревтЬТІеКкКА ДЮХЕКНКУТАС 201

ЕУТНОСІ5БР УТКОЕМКСЕС се

МАЛ. 18 о ії (Се) зо УО1О0О5ОРБІ, УКРОАБУКМО СКТОБУТЕТЕ УТІННУВОЗН СКОБЕНІССІ Кк 51

МРММСОСІРМУМ ОКЕКОСКАТІЛТ УСКОББТАУМ БЕБАБІТ5ЕОВ АМУКСАКЕКІ сч 101

АЧОУОЕСНАМ ОУЯСОСТОУТ УЗБАБТКОРО УМЕРІАРБОБЗКО Т5ОСТААОС со 151 І І

ІУКОУБРЕРУ ТУБММ5ОАЦТ 5ОУНТЕРАУЬ О5501,75Ь55 УУТУРБЗЗБІС - 201

ТОТХУІСМУМН КРОМТКУРКК УЕРКБСОКТИ ТОРРОРАРЕЇ, ПОСОРБУМЕШЕР 251 Й

РКРКОТІМІ5 КТРЕУТСУУУ ОУЗНЕЮРЕУК ЕМЯЖУЮОМЕМ НМАКТКРЕБЕ « зоїх бУМетТуКУУЄ МОСТУ НОрМ. МОКЕХКСКУ5 МКАГБРАРІЄЕК ТІБКАКСОРВ т с 351 . ЕРОУУТІОРРО КЕЕМТКМОУЗ БТСІУКСЕУР 50ТАУЕМЕВМ СОРЕММУКТТ т 401 п

РРУЦОБОСБЗЕ ВЕБУЗКОТУЮК 5ЕМООСМУЕ5 СБ5УМНЕАСНМ НУТОКБІ 515 451 рак -І (95) ко - 50 4) (Ф. ко 60 65

МАЛ. 19 340 350 360 370 зво

ССТАСТСТОС СТОСАССАТС ТСТСТТСАТС ТТССССССАТ СТОАТОСАССА

390. 400 410 420 азо

СТТСАААТСТ ССААСТОССТ СТСТТСТСТО ССТОСТОААТ ААСТТСТАТС

440 а5о 460 470 48о 70 ССАСАСАСОС САААСТАСАС ТОСААССТОО АТААСССОСТ ССААТССОСТ 4230 500 510 520 530

ААСТСССАСС АСАСТОТСАС АСАССАОСАС АССАЛОСАСА ССАССТАСАС

580 550 560 570 580

ССТСАССАСС АСОСТСАСОС ТОАССАДАСС АСАСТАСОСАС АААСАСАЛАС

590 6оо 610 620 єзо

ТСТАССССТО ССААСТСАСС САТСАБОССС ТСАССТСССС ССТСАСАЛАС

640 650 66о

АССТТСААСА СОССАСАСТСТ

МАЛ. 20 с 114 124 134 144 154 о

ЕТУААРЕУРІ ЕРРЕРЕОЬКО СТАБУУСІШМ МЕУРЕБАКУО МЮЛОМАТО5О 1654 174 184 194 204

МЕОЕБУТЕОр ЄКОСТУБІя ТІТЬБ5КАУЄ КНКУУХАСЕУТ НОСІБЕРУТК 214-220 ісе) зо 8

ЕКВСЕС | м с со - - с . а -І (95) ко -14.50 4)

Ф) ко во б5

МАЛ. 21 Що

Й остео АСООбСССАТС ОСТСТТСССС СТОбСАСОСТ ССТОСВАСАС

САССТСТОбО СОСАСАОСОС СОСТОСОСТо ССТОСТСААС САСТАСТТОС

СССААССССТ САСССТСТОС ТОСААСТСАС ОСОСССТСАС сАсСОбСоТо б сисвосттес СОССТСТОСТ АСАСТОСТСА ОСАСТСТАСТ СССТСАОСАЄ

ССТОСТОАСС СТОСССТОСА ОСАССТТОСО САСССАСАСС ТАСАТСТОСА

АССТСААТСА СВАССССАСС ААСАССААСС ТОСАСААбАА АСТТСАСССС ів рллтсттото АСААЛАСТСА САСАТОСССА СССТОСССАС САССТОААСТ

ССТОСОСОСА ССОТСАСТСТ ТОСТСТТССС СССАВААССС ААССАСАССС

ТСАТОАтСте ССОСАССССТ САССТСАСАТ СССТОСТОСТ ОСАССТСАСС й сАсоласвсс СТСАОСТСАА СТТСААСТОС ТАССТОСАСО ССОТОСАСОТ

ССАТААТОСС ААСАСАЛАСС СОСОССАССА ОСАСТАСААС АОСАССТАСС востостсАс ССТОСТСАСС ОТССТОСАСС АССАСТСОСТ СААТОССААС дв сАотАсваст ССАДОСТСТС СААСААДССС СТСССАСССС ССАТССАСАА о

ААССАТСТОС АААСССАААС СОСАСССССО АСААССАСАб СТОТАСАССС

ТОСОСССАТе ССООСАССАС АТСАССААСА АССАССТСАС ССТОАССТОоС зо СТОСТСАААС бСТТСТАТОС САСССАСАТС СССОТОСАСТ СССАСАССАЛ ші

ТОООСАсссе САСАЛСААСТ АСААСАССАС СССТОСОСТо СТОбАСТОСО сч рсоостостт СТТОСТСТАС АОСАЛОСТСА СССТОСАСАА САССАССТОС с з САССАОСОСА АССТСТТСТС АТОСТСССТО АТОСАТОАбС СТСТОСАСАА їм

ССАСТАСАСС САСААСАССС ТСТОССТОТС ТССОСОТАВА

МАЛ. 22 « 125 : - с веТКОРБУР ПАРЯБКУТЯС СТААЦОСТІУК ПУГРЕРУТУЄ ИМ5САБТеСУ з» НТЕРАУЦОБЕ бІУБІЯ5УУТ УРОБ5БІСТОТ ТІСМУМНКРО МТКУОККУЄР

КВСОКТНиТСР РСРАРЕЇСО РЗУРЬЕРРК? КОТІМІЯВТР. ЕУТСУУУЮВУВ -1 7 НЕОРЕУКЕМИ УХУОСУЕУНМА КТКРЕББОУМ сТУКУУЄУЬТ УБНООМІМОК о УКСКУЄНКА ПРАРІЕКТІЗ КАКСОРКЕРО УУТЬРРЯВЕЕ МТКМОУБЬТС о ІМКОРУРЕІ АУБЕЧЕЄМСОР ЕММУКТТРРУ 1О50С5ЕЕБУ БКОТУрКОКИ -1 20 425 | 454

ООСКУРЯСЯУ МНЕАБНМНУТ ОКБЬОБОРСК

4)

Ф) ко во б5

МАЛ. 23А

Ватні Ве (Ви й сснн- Во ВІ ген отікості пео з ше», , промотор НСМУ ре Н ше дтів ча Ь. / у ми вмадетт Ват ні рКМчІва «й сайт ініціації реплікації 5У40--- лей 7.7 т.п.Нн. в І

В... людська константна ділянка 5май (без масштабу) ШИ о каппа-ланнцюта (КЛНК) ни Апче «А ; А Є.О. ВаанеВей (Ви ч ши " о Стерн спійкості проти ампіциліну | сайт ініціації реплікації Соїві енхансер/промотор/інтронні елементи НСМУї мкожинний сайт клонування; 5' Міні-Нілап)-Бан-Хаї-Ватні 3 послідовність сигналу терміняції «рас (також називається Агніє) фрагмент вектора рем 2псо й Апєе ЕСОКІ І

Ванувановам 05: тенстпкості чн "сміє видко промотов НОМУ;

МАЛ. 235 й ся м й С. г) дефектний 5у40е Ж В ніч сайт ініціації реплікації 540... -ій -..МС5 вмасї ро10185 й (се) . шк 7.3 ж.п.н. Щ.. ; (без масштабу) в бат ні че хх "дюдська конствитна ділянка початок реплікації СоїБІ. «-- ох, «5 тамма:1-ланцюга (КДНК) со ве тА ватноввй (вил) м сайт ініціації реплікації Соїбї Агпів -

Б енхансер/промотор/інтронні елементи НСМУЇ . множинний сайт клонування: У" Міш-НіпапІ-5ве83871-Ртеї-Бай- «

Храї-Расі-ВатнНі 3 406 її послідовність сигналу термінації храс (тякож називається Агпіє) - с ШЕ фрагмент вектора рем аапіг . и? - (95) іме) - 42) іме) 60 б5

МАЛ. 24 І ніпагтІї задссЕСссосСсАЙСакодаєсссасаддсссадаєссссаєдесассяссоссасаодса 1 ясяяятнянжня няня жи житя няння яння

Єссчаасоссостобсасстаадчс дсссоадіссаасоаасасааєдасодсчасасеса с й послідовність Козака

М Р 50дАОмМ МР сссадксассідедаЯдасаєсасчасдг:сасачісьссатссіссстадссагдссадее бі сля ттяяжии няня житя жит живити яю ацассагуддасассссідсаасассасазіЧчссадзачсаддачадассдасасацісаа 5606 Тс 97У9 М 5.958555 А М 5 У чаадачааяєзссаскакдадессусаадсссадссадаачсесьсстагасадссоасаассяа 101 сясяянння вия нижня няня житя жня тижня тт вини сессесссіссаасоасасьсзасаєс са сачеЕсссодаааасасассадсаєсадее

С ЕЕ КМ т М 5 ск 5 5195 0 ПП у 5 К М о . сон 1 аачаасстасекудсесадсгссадсадзачесаадаоасачесссстааассосьдастьсьс 181 Яся яви няння тижня житя нижня гссссуаєоаассяадассазоачссасссЕсазссссяссачадчасе сдасцастіаааза

КОМ У й А М ОК 0 0 Кк Р С 0 5 Р КК ЬЬІ1 в

СЧачсасссассадочааєссададчЕсСсссдаєсасьссасацчасачесозастсдадасе сч 29 ді стлясялятюти тити життя нят жнив виняттнняя о асссаєаядсчаєсссісадассоссачудасьадечаачіасссяєсасстгсааассскас и А 5 Т КК ЕЕ 5 б М Р ОО В ЕЕ То 56 ЕС т ср 2 (Се) 30 даськсааєсьсассаксадчсадідсосачоссуаадасстдасадескасдасеоессад чн

ЗОЇ сяяти ження життя жити няня жи тт ня я ссазачссадацчсодсачісуссасасаєссдяасссссддассяссааасастьчасаєттьс с

О ЕЕ МК ь т І 8 8 М 0 А ЕЕ 0 А МУ Ху р со с 35 сагсасестздссасссостсасчєссадсасіодаассаачесеовачсьчальсстово ч- 161 сяяти вт житя фе иня т и ж жи т янятятяя ч:сакаазассадаєадасчачіосаадссасаассссаяадсесасссосдаситтосАсто . сайт сплайсингу докора

ОО КЕ ЕЕ 5 У Р 0 ТК б АС ТК ЕК « 40 сок З й з с ватні ч тТачаєсе и? 421 7------ 421

Асесєазда ; 45 -І (95) іме) 20 -І 42) іме) 60 бо

МАЛ. 25

Нідпаттї

ААССТТССССССАССАТОССАТОСАССТОСОТСТТТСТСТТТСТОСТОТСАССААСТОСА з ся жити ит жк нят вт яняня

ТРСОААСОССОСТОСТАСССТАССТОСАСССАСАЛАСАСАААСАССАСАСТОСТТОАССТ послідовність Козака

М Є "7 Б Ж М в її ЕЕ Б ї, 5 6 т А 70 ССТСТОСТСТСТСАССТОСАССТОСААСАСТСТОСАССТОАОСТОСТОСААСССТОССОСТ бі сежентяяняжтянння ми дян вини жи ження

ССАСАССАСАСАСТССАССТССАССТІТСТСАСАССТОСАСТОСАССАСТТСССАСССССА б М Ь 85 ЕЕ У 0 її 0 0 8 б Р ЕЕ Б М КР б А 18 ТСАСТАААСАТСТОСТОСААСАСТТСТАСАТАСАСАТІТСАСТОААТАСАССАТАСАСТОС 121 ссснстятажаи тт сг титидитити тт я ження ження

АСТСАТТТСТАСАССАССТІТСТОСААСАТСТАТОТСТААСТОСАСТТАТОТОСТАТОТСАСС

5 У Кк мМ Б С КТ 5 КК У т в Т Б Ук т ІН сок 1

СТСАСАСАСАСССАТОСАЛАСАСССТТОАСТОСАТТОСАСОТАТТААТССТААСААТОСТ

181 ясна риття фжится тт житт тт жит ти життя

САСТСТСТСТСОСТАССТТТСТОСОААСТСАССТААССТОСАТААТТАССАТТОТТАССА ув ов не квБИиИ І осІ РМ срк 2 с

АТТССТААСТАСААССАСААСТТСААОСОСАСОСССАСАТТОАСТСТАСОСААСТОСТСС (о) 241 --- сс фис сити финти тити жисттивинятяя я

ТААССАТТСАТСТТАСТСТТСААСТТССССТОССОСТСТААСТОАСАТСССТТСАССАОС

І Р М У мМ о Кк вк Кк с вд т ь т мМ б Кк 55 с зо ща

АССАССОССТАСАТССАССТОСОСАСССТОАСАТСТОАОСАТТСТОСОСТСТАТТТСТОТ

301 с-г он офипт тити птн ст фени тижня сч

ТССТООСССАТСТАССТОСАССССТОССАСТСТАСАСТОСТААСАССССАСАТАААСАСА со 5 ТТ А У М ЕЕ ЇЙ ЛВ 5 І. т 5 Е 0 65 А М хх Е С їм-

ССААСААСААСААТОСССТАТОСТТАССАССАОСОССАТОСТАТОСАСТАСТОСССТСАВ

3бі сяяти нити винятки житя ж

ССТТСТТСТТСТТАССССАТАССААТОСТОСТОССОСТАСОАТАССТСАТСАССССАСТТ «

А В ЕК КК І А у б У 0 ЕЕ б НН А М руно ср З - с !

ВачнІ з» ОСААССТСАСТСАСССТСТОСТСАОСТОАСТОСВТСС

Др сяяти життя ження ------- 46

ССТТООАСТСАСТОССАСАОССАСТССАСТСАССсТАаС сайт сплайсяинсу ДонНора -І б т б У тм 5 (95) ко -14.50 4) ко во б5

МАЛ. 26/1

І ре І 1 дааєссссадс асасідосуу сосЧЕсАСТАС ТТАТТААТАС ТААТСААТТА

БР СбООСТсАТТ «ІКСТТСАТАСС ССАТАТАТОС АСТТІСССССТ ТАСАТАдСТТ 191 АСОСТАДАТО ССССОССТОб СТОАССОССС ААССАССССС ССССАТТОАС 70 151 СтТСААТААТС АСОТАТСТТС ССАТАСТААС СССААТАСОС АСТТТССАТТ 201 САССТСААТО ОСТОСАСТАТ ТТАСОСТААА СТОСОСАСТТ ОССАСТАСАТ 251 СААСТОТАТС АТАТОССАДО ТАСОСССССТ АТТОАСОТСА АТОАСОСТАА 3035 АТОССССОСС ТОССАТТАТО СССАСТАСАТ САССТТАТОС ОАСТТТССТА 351 СтТТООСАОТА САТСТАСОТА ТТАСТСАТОС СТАТТАССАТ оОТоАТосСОос 401 тТтІТТООСАСТ АСАТСААТОб. СССТОСАТАС СОСТТТСАСТ САСОСОСАТТ 451 ТССААСТСТС САССССАТТС АСОТСААТОС ОАСТТТОТТТ ТООСАССААА 501 АТСААСОСсА СТТТССАААА ТСТОСТААСА АСТССОССОСС АТТСАСССАА 551 АТОСОССОСТА ОБССТОТАСО СТСОБАОСТО ТАТАТААОССА сдестТоотТтТт 601 АСТСААСССТ САСАТССССТ ССАСАСОССА ТОСАСОСТОоТ ТТТОАССТОоС о 651 АТАСВАСАСА СсОБобАсСебА ТССАСССТОС ВССОСОбОСА АССОТОСАТТ 701 СОААСОСОбА ТТСССССОТОС СААСАСТОАС СТААСТАССОЯ ССТАТАСАСТ со 751 СТАТАСОССС АССОССтТТоо СТІСТТАТОС АТОСТАТАСТ стттТТоостТ М 801 ТтОбОСТСТАТ АСАСССССОС ТТОСТСАТоТ ТАТАОСТОАТ СОТАТАОСТТ с 851 дОССТАТАСО ТОТООСТТАТ ТОАССАТТАТ ТОАССАСТСС ССТАТТОСТО со 901 АССАТАСТТТ ССАТТАСТАА ТССАТААСАТ СОСТСТТТОС САСААСТоТо - 951 ТТТАТТООСТ АТАТОССААТ АСАСТОТОСТ ТСАСАСАСТО АСАСОСАСТО 10095 ТОТАТТТТТА САССАТООСО ТСТСАТІТАТ ТАТТТАСАДА ТТСАСАТАТА « 1051 СААСАССАСС СТССССАСТО СССОСАСТТТ ТТАТТАААСА ТААСоТОоОоСАд З - 1103 ТСтТоСАСОСО ААТСТоСОоСТ АссТсттосо САСАТОСООСТ стІСТССОСТ " 1151 АСССССОСАС СТІСТАСАТС ССАССССТОС ТСССАТОССТ ССАСССАСТС -1 45 1201 АТССТСОСТОС СОСАбСТОСТ ТОСТОСТААС АСТОССАСССС АбАСТТАССС о 1251 АСАССАССАТ ССССАССАСС АССАСТОТОС СОСАСААОСС сотосСсстТА ко - 20 4) 25

Ф) ко 60 бо

МАЛ. 26/2 1301 бОоСсСтТАТСТСТ СТСААААТОА оСстСададаз сядаасссяаса ссасідасас

В АК1 Ії 1351 асссоддаада сЕсаадасад содсздавча адасосадоас адссдваєса 1401 соді сссд асазуазсоса дачуєзассос ссяЯяссдсодс зссассааса 1451 ч4сачЧчачадса чзЕдсачісвд зосаусассс чЕсассассу сосоасассас то 1501 садасасаає адссдасача сеаасачасі чсЕССЕСсССсСс агоддсесссе

Міч 1 Ніпа Ії 1551 сессасаакса ссаасссскда сасасуєсЕс дчадавясЕсо СССССАССАТ

М

1 Крп І 1501 ОСАТТСАСАС ССССАбСТТС ТТАТОТІАСТ СССОСТАТОО СТАТСТОСТА п 5БО А 0 У пом 0 рим У в ас 1651 ССТСТОСОСА САТТОТСАТО ТСАСАСТСТО САТОСТОССТ АоСТОтТстТеСА т с бо 1 м М Б ОБ Р 55 А У 58 1701 СтТТОбАСАбА АДОСТТАСТАТОСАССТОСААС ТОСАСТСАСА СССТТТТАТА

У бе Км тм ск б о 5 БУ

Хваї СсрЕ 1 1751 ТЕСТАСАААТ СААААСААСТ АСТТОСССТО СТТССАССАС ААСоСАссОС

З Км о КМ У Б0ОА ЕЕ 90 КР 1801 АСТСТОСТАА АСТОСТОАТТ ТІСТОбОСАТ ССАСТАСОСА АТСТОобОоСТо о 5 РК ьЬ І.І Е М А 5 ТТ Кк Е Ба У с - ск 2. 1851 ССТОАТСОСТ ТСАСАСОСАС ТОСАТТТСОС АСОСАТТТСА АТСТСАССАТ і) ок Е ТТ 0 5 п ЕЕ с ТТ ВЕ м й ті 1901 САОСАСТОТОс САСОСТСАСС АССТОССАСТ ТТАТОСАСТОТ САССААТАТТ 5 5 М 0 АБ 0 ьЬ А М ХХ Вс оо (Се) 1951 ТТАССТАТСС ОСТСАССТТС ОСТОСТОбСА ССААССТОСА ССТОАААСОотТ -

РЕ 5 ХХ Р БТ ЕЕ б А с ТТ КЕ І КЕ с со з

Ван І со 2001 САСТедаєсс АТСТОСССАТА АССАТОСТСТ ТТТСТоТСТа ТСССТААСАТ че 2051 ОСССТОТОАТ ТАТОСОСААА СААСАСАССС ААбСОСАСАА СТІТСТТАСТ 2101 тТАВАСАССАТ ССТСТТТОСТ ТСТІТССТСА СОДАСТОТОС СТОСАССАТС

Т У А А Р « 2151 ТЄтТСТТСАТС ТТОСССССАТ СТСАТСАССА СТТСАААТСТ ССААСТОССтТ

М Е 1 Е Р ОР 5 В ЕОМ КБ б т А т с 2201 СтТоТТОоТСтТо ССТОСТСААТ ААСТТСТАТС ССАСАСАбОС САААОТАСАС ц 5 ММС йьи М'Є У Р КЕ ЕЕ А км о а 2251 ТОбААССТОоС АТААСОСОСТ ССААТСОССТ ААСТСССАСС АСАСТСТСАС "Кк х о М А її 0 5: м 5 ЛЮ о БЕ 5 М т 2301 ВСАБСАСОСАС АССААССАСА ОСАССТАСАС ССТСАССАСС АСССТОАСоС

ЕЕ 0 п 5 ко 5 т х 5 М о5 5 тт -І (95) іме) - 50 42)

Ф) іме) 60 б5

МАЛ. 26/3 2351 ТОСАССАААСС АСАСТАССАС АААСАСАДАС ТСТАСОССТО ССААСТСАСС й 8 Кк А 0 У ЕЕ КО НО ЖК М ХХ А СБ МУ т 2301 сСАТСАСОбСС ТОАССТСОСС СОТСАСАБАС АОСТІСААСА СОоСсдСАсато

НО б ЬьБ Б Р М т Кк Б ЕМ кс ЕС 2451 ТТАСАСОСАС дАСТОССССС АССТОСТОСТ САСТТССАОС СТОАСССОСТ 2501 СССАТССТТТ ОСССТСТОАС ССТТТТТССА САССОСАССТ АССССТАТТО 70 2551 СОСТССТССА ОСТСАТСТТТ САССТСАССС СССТОСТоСТ ССТТОбСТТЕ 2601 ААТТАТОСТА АТОСТТОСАСО АСААТОААТА ААТАДАСТСА АТСТТТОСАС 2651 СТСТОСтТОСА ТСТААТАААА САТАТТТАТТ ТТСАТТАСАТ дтоТОоТСстТТО 2701 сТТТТТТСтТОо ТОСАСТОССТ СТАТСТОСАС ОССАССТАСс осТооСссттс 2751 ССОСАСОСОС АбОССАСААТ САСТОСААСА ССТАСАССАА СССАССТСАС 2801 АСАССССАСТ ССАСАААСАС ТОССТОСАСТ СТОСАССАТА АСАСАСААТС 2851 ААСЛОСОСАС ТОАОСТОСАА АТТТОСТАСС СААТТСТТОА АСАССЛАЛОС 2903 СССТОСТСАТ АСОССТАТТТ ТТАТАОСТТА АТСТСАТСАТ ВАТААТОСТТ 2953 ТСТТАСАССТ САОСТОССАС ТТТТСССССА ААТСТОСОСО СААССССТАТ сч 3001 ТТСТТТАТТТ ТТСТАЛАТАС АТТСАААТАТ СТАТОСОСТС АТОАСАСААТ о 3051 ААСССТСАТА ААТОСТТСАА ТААТАТТСАА АЛАССААСАЄ ТАТСАСТАТТ 3101 СААСАТТТСС ОТОТСОСОСТ ТАТТСОСТТТ ТТТОСоОСАТ тТтТтТОоССстТТеС с 3151 ТСТТТТТОСТ САСССАСААА СОСТОСТОАА АбТААААСАТ ОСТОААСАТС м 3201 АСТТОССТОС АССАСТОССТ ТАСАТССААС ТОСАТСТСАА САбСОСТААС с 3251 АТССТТОАСА СТТТТОСССС ССААСААСОТ ТТТОСААТСА ТСАбСАСТТТ со 3301 ТАААСТТСТО СТАТСТООСО СОСТАТТАТС СССТОТТОАС ОССОСОСААС в 3351 АОСААСТООС ТССССОСАТА САСТАТТСТС АСААТСАСТТ ССТТОАСТАС 39401 ТСАССАСТСА САСААЛАДОСА ТСТТАСОСАТ бОСАТСАСАС ТАДСАСААТТ « 3451 АТОСАСТОСТ СССАТААССА ТОАСТСАТАА САСТОССОСС ДАСТТАСТТС не - 3501 ТСАСААСОКТ СвсАССАССЯ ААССАССТАА ССОСТТТТТТ ССАСААСАТО

І 3551 СОССАТСАТО ТААСТСОССТ ТОАТССТТОСС СААССОСАСС ТСААТОАДОС - 75 3650) САТАССАААС САССАСССТО АСАССАССАТ СССТОСАбСА АТОССААСАА (95) ко -0..50 4) (Ф) ко бо 65

МАЛ. 26/4 Й 3651 ССТТОССОСАА АСТАТТААСТ СОСОАЛАСТАС ТТАСТСТАСС ТТСССОССАА 3701 СААТТААТАС АСТОСАТОСА СОСОСАТААА СТТОСАССАС САСТТСТОСО 3751 стТосоСсстт ССобСТооСтТ ССТТТАТТОС ТСАТАААТСТ ОбАСоСОСТе 3801 АбСОТСОСТС ТСОСОСТАТС АТТОСАССАС ТОССОССАСА ТОСТААбССС 70 3851 ТССССТАТСС ТАСТТАТСТА САССАСОССО АСТСАСОСАА СТАТОСАТСА 3901 АССДААТАСА САСАТСОСТО АСАТАССТОС СТСАСТСАТІ ДАССАТТОСТ 3951 ААСТСТСАСА ССААСТТТАС ТСАТАТАТАС ТТТАСАТТСА ТТТААААСТТ 75 4001 САТТТІТТААТ ТТААААССАТ СТАССТСАЛС АТОСТІТТТО АТААТСТСАТ 4051 САССАДАДТС ССТТААССТО АСТТТТОСТТ ССАСТСАССС ТСАСАССССС 4101 ТАСААААСАТ САААССАТСТ ТСТТОСАСАТС СТІТТТТТСТ ОСОСОТААТС 4151 ТОСТОСТТСС АЛАСАЛАДАД АССАССОСТА ССАССОсТОс ТТтІсТтТТоСс 4201 ССАТСААОАС СТАССААСТО ТТІТТОСОАА ОСТААСТООС ТТСАОСАбАС 4251 СССАСАТАСС АААТАСТОТС СТТСТАСТОТ АбСССТАСТТ АббССАССАС 4301 ТТСААСААСТ СТОТАССАСС СССТАСАТАС СТСОСТСТОС ТААТОСТОТТ о 4351 АССАСТСССТ ОСТОССАСТО СОСАТААСТО СТОТСТТАСС псОбТтТОпАСТ 4401 СААбАССАТА СТТАССССАТ ДАСССОСАСС ССТоССОСТо ААСсбобоСстТ як 4451 ТССТОСАСАС АОСССАОСТТ ССАССОААСС АССТАСАССС ВАСТОАСАТА ча 45901 ССТАСАОСОТ ОАОСТАТСАО АААССОССАС ОСТТСССОАА СССАСАЛАСО сч 4551 СОСАСАССТА ТССООТАДОС бОСАССОТСО СААСАССАСА ССССАССАСС со 4601 САОСТТССАС СОСОЛАдССС СТООТАТСТІ ТАТАСТОСТо тТооботтТоо - 4651 ССАССТСТОдА СТТОДСССТС САТТТІТТСТО АТОСТСОТСА ССООСССОбА 4701 ОССТАТОСАА АААССССАОС АДАСССОСССТ ТТТТАСОСТтТ ССсТОбсСТТТ «

Взрі111 ат5) ТОСТОбССтТтТ ТТОСТСАСАТ ОТТСТТТССТ ОСОТТАТОСС СТОАтТтТСтТОоТ о) - 4803 ССАТААССОСТ АТТАССОССТ ТТОАСТСАСС ТСАТАССССТ сосСосАоСС " 4851 СААССАСССА ЄСОСАССОАС ТСАСТСАССО ВОСААОСОСА ВОдоСОоССтТО - 45 4901 АТОСОСТАТТ РТСТССТТАС ССАТСТСТОС ОСТАТТТСАС АССОСАТАТОо (95) го -0.720 4»

Ф) го 60 65

МАЛ. 26/5

В5Е11071 4951 СТОСАСТСТС АСТАСААТСТ ОСТОСТСАТОС СОСАТАСТТА АСССАСТАТА ? 5001 САСТССОСТА ТСОСТАССТО АСТООСТСАТ СОоСТоСОССС ССАСАСССоС 5051 СААСАСССОС ТОАСОСОССС ТтбАССсооСстТТ оТСТОСТССС бОСАТоСоСТ 510354 ТАСАСАСААС ЄТОТСАССоТ СТОССбОбАСС ТОСАТОСТОТО АсАоСТтТтТС т 5151 АСОССТСАТСА СССАААСОСО ССАСССАССТ СТОСААТОТО ТОТСАсТТАо 5201 ОСТСТОСАДА СТССССАСОС ТССССАСОСАО ССАБААСТАТ ССАААССАТО

З253 САТСТОААТТ АСТСАССААС САСССТОССС АССАСОСАСА АСТАТОСАДА з 5301 БСАТССАТСТ СААТТАСТСА ССААССАТАС ТОССОССССТ ААСтТеСсоССсС 5351 АТОССОСССС ТААСТоСоСС сСАСсТтТоСОоСе САТтТСТОСОС СССАТООоСТОо 5401 АСТААТІТТТ ТТТАТТТАТО САСАСОСОСА ввссосСтою ссстетолос 20 . БЕЗ І1/АУк Ії 5451 ТАТТССАСАА СТАСТОДОСА СОСТТІТТТО САСОССТАСО СТТТТОСААА 5501 АДАССТАОСТТ САСССТОСОС СААОСАСТСА ОбОСССААСо ОСТОСТАААС 5551 СААССОСДАС АССТАСАААО ССАСТССОСА СААдСОСТОС ТОАССССОСА с що 95601 ТСААТОТСАС СТАСТОСОСТ АТСТОСАСАА СОСААААСОС ААССОСАЛАС о 5651 АСАААССдОос ТАОСТТОСАС ТОСОСТТАСА ТООССАТАСС ТАСАСТОСОС 5701 ОСОТТТТАТСС АСАБСААбСО ААССОБААТТ СССАоСТОсСЬ оСоСОСтТСто іс), 7 375 СТААСОТТОо СВАССССТОС АААСТАААСТ ССАТООССТТТ СТТоСсоСсСА в ва1 І1/Вс1 І сч 5801 АССАТСТСАТ СОСССАСбОС АТСАЛЯОАТСТ САТСААСАСА САССАТОдОоС з851 АТССТТТСОС АТОАТТСААС ААСАТССАТтТ ССАСОоСАссТ тТетТоессоссо о щі 5901 СТТОССТОСА САСССТАТТС ОбСТАТОСАСТ СОССАСААСА САСААТОоССС т 5953 ТОСТСТСАТо ССбСССТОоОТТ ССОбСТОТСА бСоСАССоосС боссосттстТ « 5001 ТТІТОТСААС ДСССАССТОТ ССОСТОСОССТ СААТОААСТО САОСАССАСо

Мес Ії - с 6051 САССОСОССТ АТССТОССТО СОСАССдАССС ССоТТОСтТТо СОСАССстТотТо :з» 6РОР СтТеОАСОТТО ТСАСТОАЛОС ОССААСОСАС ТООСТОСТАТ ТОбОСОААСТ 5151. ОСССОССООСАС САТСТОСтТОоТ САТСТСАССТ ТОСТОСТОССС САбАААСТАТ -І щі 5201 ССАТСАТОСС ТОАТОСААТО СОбСООСТОС АТАСОСТЕОА ТОССОСТАСС (95) іме) - 50 42) (Ф, іме) 60 б5

МАЛ. 26/6 6251 ТОСССАТТСО АССАССААОС САААСАТОСС АТСОАбССАб САССТАСТОС 6303 САТОСААССС ОбТСТІСТОС АТСАСбСАТСА ТСТОСАССА САССАТСАбо 6351 СОСТООСОСС АССССААСТС ТТСИССАСОС ТСААСОоСоСО САТОССССАС 5401 СОССАОбАТС ТССТОСТОАС ССАТОСОСАТ СССТОСТТОС СОААТАТСАТ 5451 ССТОСАДААТ СОССОСТТТІ СТОСАТТСАТ СОАСТОТОоСС ССсОоСТОосстТо 6501 тоссослссо СТАТСАССАС АТАСССТТОС СТАССССТОА ТАТТОСТОАА 6551 САОСТТООСО ССбААТОоСОоС ТСАССОСТТО СТОСТОоСТТтТ АСОбТАТоОС 6601 СОСТОССОАТ ТОССАВСОСА ТСООСТТСТА ТОСССТРСТТ САСОАСТІСТ 6651 ТСТОАбСОСС АСтСтосост ТОСАЛАТСАС ССАССААСОСО АСОСССААСС 6701 ТОССАТСАСС АСАТТТССАТ ТССАСССССС ССТІСТАТСА ААсоОТТОоСОоС 56751 ТТСОСААТСО ТІТТСССОбА СОССООСТОС АТОАТОСТОС дОоСОосСоСОобА . бЗта І МЕЧ І 6801 ТСТСАТОСТО САСТТСТТоС СоСАСеСсоебо ОСТОСАТССС СТОССсАСсТТ 56851 ССТТСАССТО СТОССТСАСО СТОСАССАСС ТСОСОСАСТТ СТАССООСАС 6801 ТОСАВАТССИ ТОСОСАТОСА ССАААССАСС АСОСОСТАТС СОСОСАТОСА о 5951 ТОССССССАА СТОСАССАСТ ОСООАСОСАС сСАтТОоСССОоСтТ ттТОостТосСооо 7001 АТСТТТСТСА ДОСААССТТА СТТСТСТОСТ СТОАСАТААТ ТОСАСАААСТ 7051 АССТАСАСАС АТІТАААССТ СТААССТААА ТАТААААТТТ ТТАВОТОТАТ ші 7101 ААТСТСТТАА АСТАСТОАТТ СТААТІСТТТ ОТСТАТТТТА САТТССААСС сч 7151 ТАТОСААСТО АТСААТОССА ЗСАСТОСТОС ААТОССТТТА АТОАССАААА со 7201 ССТОТРЕТТОС ТСАСААСААА ТОССАТСТАС ТОСАТОАТСАС ОСТАСТОоСТОо - 7251 АСТСТСААСА ТТСТАСТОСТ ССААЛАЛАОА АСЬСАААОСТ АЄААСАСССС 7301 ААССАСТТТІС СТТСАСААТТ ОСТААСТТТТ ТТОАСТСАТО СТОТОТТТАС « 7351 ТААТАСААСТ СТТОСТТОСТ ТТОСТАТТТА САССАСАААС САААВАССТо - - 7401 САСТОСТАТА САВСААВАТТ АТООАЛААВАТ АТТС ТСТААС СТТТАТААСТ

Б 7251 АСОСАТААСА СТТАТААТСА ТААСАТАСТО ТТТТТТСТТА СТОСАСАСАб 7501 ОСАТАСАСсТтО ТСТОСТАТТА АТААСТАТОС ТСААВААТТО ТОТАССТТТА -1 . (65) ко -1 50 4) (Ф, ко бо 65

МАЛ. 2677 7551 ОСТТТТТААТ ТТСТАААСОС СТТААТААСО ААТАТТТСАТ СТАТАСТОСС 95 7601 ТТСАСТАСАС АТСАТААТСА СССАТАССАС АТТТСТАбАС СТІТТАСТТО 7651 СТТТАДАВАА ССТСССАСАС СТСССССТОА АССТОАААСА ТААЛАТСЛАТ

Мап І І 7701 ОСАдДтТТОТТО ТРОТТААСТТ СТТТАТТОСА ОСТТАТААТО СТТАСАААТА то 7753 АВОСААТАСС АТСАСАВАТТ ТСАСАААТАА АОСАТІТТТТ ТСАСТОСАТТ 7801 СТАСТТОТОО ТТТСТОСАЛА СТСАТСААТО ТАТСТТАТСА ТОТСТОСАТС 7851 ТААТААААСА ТАТТТАТТТТ САТТАСАТАТ СсСТОТоТТоСТ ТтттТтСтСто 7901 САСТСССТСТ АТСТОСАСОС САбСТАСССС ТОбОСТТоСо СоАОССОбАС 7951 СССАСААТСА СТОСААСАСС ТАСАОСААСС САССТСАСАЄ АССССАСТоО 8001 АСАААСАСТО ССТОСАСТСТ ССАССАТААС АСАСААТСАА САбСССАСТО 8051 АССТОСАААтТ ТТОоСтТАСС с ге) (се) зо м с со - - с . а -І (95) ко - 20 4) (Ф) ко во 65

МАЛ. 26/7 7551 ОСТТТТТААТ ТТСТАААССО СТТААТААСО ААТАТТТСАТ СТАТАСТОС 9 76501 ТТОАСТАСАС АТСАТААТСА СССАТАССАС АТТТСТАСАО СТТТТАСТТ 7651 СТТТАААААА ССТСССАСАС СТСССССТСА АССТОАААСА ТААЛАТСАА! 77201 оСААТтСТт ТТСТТААСТТ СТІТАТТОСА ССТТАТААТО СТТАСАААТЕ

ТО 7751 ААОСАВТАСС АТСАСАААТТ ТСАСАААТАА АССАТТТТТТ ТСАСТОСАТІ 7805 СТАСТТСТОс ТТТСТССАЛА СТСАТСААТО ТАТСТТАТСА ТОТСТОСАТС 7851 ТААТААААСА ТАТТТАТТТТ САТТАСАТАТ СТОТОТТОСТ ТТТТтсТото 79 7901 САСТОССТСТ АТСТОСАСОС САбСТАССОС ТобОСТТоСо ОСАбОСССАо 7951 БССАСААТСА СТОСААСАОС ТАСАССААСО САОСТСАСАС АССССАСТОО 8001 АСАААСАСТО ССТОСАСТСТ ССАССАТААС АСАСААТСАА САСОССАСТО 70 8051 достосАААТ ТТОСтТАСС

МАЛ. 27/1 с » 1 ТТСААСАССАААССОССТОСТСАТАСОССТАТТТТТАТАОСТТААТСТСАТСАТААТААТ о 61 ЄСТТТСТТАСАССТСАССТООСАСТТТТСОООСАААТСТОСОСОСААССССТАТТТСТТТ 121 АТІТТІСТААДАТАСАТТСАААТАТОТАТССОСТСАТОАСАСААТААСССТОАТАААТОСТ Ге) 30 181 ТСААТААТАТТОАААААССАЛОАСТАТСАСТАТТСААСАТТТОССТОТССОССТТАТТСС їм- 241 СТТТТТТОСООСАТТТТОССТТССТСТТТТТОСТСАСССАСАААСОСТОСТОАААСТААА сч 301 АБАТОСТОСААСАТСАСТТОССТОСАСОАСТСОСТТАСАТССААСТОСАТСТСВАСАССОС со 35 361 ТААСАТОСТТОАСАСТТТТООСССССААСААСОТТТТОСААТСАТСАССАСТТТТАААСТ ї- 421 ТСТОСТАТСТОССОСОСТАТТАТОСССТСТТОАСОССООССААСАССААСТОССТОСССО 483 САТАСАСТАТТСТСАСААТСАСТТОСТТОАСТАСТОАССАСТСАСАСААЛАССАТСТТАС « зд 5 ЗАЗ СА ТОАСАСТААСАОААТТАТСАСТОС РОС САТААССАТ АТ ВАТААСАСТО - с 603 СОССААСТТАСТТСТОСАСАВССАТООСАССАССОААССАССТААССОСТТТТТТОСАСАА ; » 561 САТСССОСАТСАТСТААСТООССТТОАТССТТООСААССОСАССТОСААТСААСССАТАСС 721 АААСЕАССАССОТСАСАССАССАТОССТОСАВСААТОССААСВАССТТОСОСАААСТАТТ - 781 ААСТОССОСААСТАСТТАСТСТАССТТСССОССАДСААТТААТАСАСТОСАТОСАСССОСА (95) ко -.20 4) (Ф. ко 60 б5

МАЛ. 27/2 : 841 ТАААСТТССАССАССАСТТСТОСОСТОООСССТТССООСТООСТОСТТТАТТОСТОАТАА 901 АТСТССАСССССТСАСССТОССТСТОССОСТАТСАТТОСАССАСТОСОСССАСАТССТАА з61 ССССТССССТАТСОТАСТТАТСТАСАССАСОСОСАСТСАСОССААСТАТОСАТОААССАдА 1021 ТАСАСАСАТСССТСАСАТАЄСТОССТСАСТСАТТААОСАТТССТААСТОТСАОАССАЛОТ то 10681 ТТАСТСАТАТАТАСТТТАСАТТСАТТТААЛАСТТСАТТТТТААТТТААЛАССАТСТАОСТ 1141 СААСАТОСТТТТТСАТААТСТСАТСАССААААТСССТТААССТОАСТТТТОСТТОСАСТО 1201 АСОСТСАСАСССССТАСААААСАТСАЛАССАТСТТСТТСАСАТОСТІТТТТТСТОСОССТ 79 1261 ААТСТОСТОСТТССАААСААДАААААССАССССТАССАССОСТОСТТТСТТТОССООАТСА 1323 АСАССТАССЛАСТСТІТТТОССААССТААСТОССТТСАССАСАССОСАСАТАССАВАТАС 1381 ТОТОСТТСТАСТОСТАССССТАСТТАСОССАССАСТТСААСААСТСТСТАССАСОСССТАС 3441 АТАССТСОСТСТОСТААТОСТОТТАССЛОТСОСТОСТОССАСТОССОАТААСТОСТСТСТ 1501 ТАСОСОСТТОСАСТСААСАССАТАСТТАССССАТААСОСОСАССОСТОССОСТОМАСОСО 1561 СОСТУСОТОСАСАСАССССАОСТТОСАСССААССАССТАСАСССВАСТОВСАТАССТАСА ов 1621 ОССТОЛОСТАТСАСАААСССССАСОСТТССССААССОЛОЛААСССОСАСЛОСТАТССОСТ о 1681 ААСССССАСССТООСААСАССАСАССССАССАСОСАССТТССАССОССАААСОССТОСТА 1741 ТСТТТАТАСТОСТСТСООСТТТООССАССТСТСАСТТОАСССТОСАТТТТТОТОАТОСТС 1803 СТСАСООССОСОСАСССТАТОСАААЛААССССАССААСОССОССТТТТТАСОСТТССТОСС Фо

Ї верідЛії Шо їм 1851 СТТТТОСТСОССТТТТОСТСАСАТЯТТСТТТОСТОССТТАТОСССТОАТТСТОТОСАТАА 1921 СССТАТТАСССССТТТСАСТОАССТОАТАССОСТООССОСАССССААСОАСССАССССАС с 1983 ССАСТСАСТСАСОСАССААССССААСАСССССТСАТОСОСТАТТТТСТОСТТАСОСАТСТ й 5 зо41. дтосовтктІтТСАСА СОС АТАТОСТОСАСТСТСАСТАСАКТСТОСТСТОМТОССЯСАТА 2101 СТТААСССАСТАТАСАСТОСОСТАТСОСТАССТОАСТО СОТ СТО Стос ССС 2161 ССОССААСАСССССТСАСОСОСССТОАСОООСТІСТСТОСТОССООСАТССОСТТАСАСА їх с 7 2221 саАОСтотоАСССТСТСССОСАССТОСАТСТОТСАСАССТТТТСАСОСТСАТСАСОСААА хз» 2281 СОСССОАСССАССАТОСАТСТСААТТАСТСАССААССАТАСТОССОССССТААСТОСОСС 2341 САТСССОССССТААСТССОСССАСТТСООСОСАТТСТССОССССАТООСТСАСТААТТТТ -1 79 заві тт ТАТО С сосооо осот стстоАоСТТТССАСААстАстолс с 2461 АСССТТТТТТОСАООССТАВОСТТТТОСАААААССТАССТТАСАССТСАССССТОССАТТ іме) -.20 4; іФ) іме) бо 65

МАЛ. 27/33 2521 ТОСССОССАААСТТСАСОССААТССТАСССТСААСОСТОСТАОСАТТТТАТССССССстТоСС 2581 АТСАТССТТССАССАТТОААСТОСАТОСТСОСССТОТСОССААДАТАТСОбСАТТООСАдо 2641 ААСОСАСАССТАСССТОСССТССОСТСАССААССАСІТСААСТАСТТССАДАСААТСАСС 2701 АСААССТОСТТСАСТОСААССТАААСАСААТСТООТОАТТАТООСТАССААААССТОСТТО 70 2761 ТОСАТІССТОАСАДСААТОССАССТІТАААССАСАСААТТААТАТАСТТСТСАСТАСАСАА 2821 СТСАААСААССАССАССАОСАССТСАТТТТСТТОССААЛАСТТТССАТОСАТОССТТААСА 2881 СТТАТТОААСААССОСКАТІСОСААСТАЛАСТАСАСАТОСТТТОСАТАСТСОСАСОСАСТ 2941 ТСТОТТТАССАССААСССАТОДАТСААССАСОССАССТОСАСАСТСТТТСТОАСААССАТС щі 3001 АТОССАССААТТТОАААСТСАСАССТТТТТСССАСАААТТСАТТТОСОСАААТАТАААСТТ 3061 СТОССАСААТАСССАСОССТОСТСТСТОАОСТССАССАССАЛАЛАСОССАТСААСТАТААС 31121 ТТТСААСТСТАССАСААСАААСАСТААСАССААСАТОСТТТСААСТТСТСТОСТОСССТС зіві СТАААССТАТОСАТТТТТАТААСАССАТООСАСТТТТОСТОССТІТ АОС СТАС 3241 СААССТТАСТІТСТОТОСТОТСАСАТААТТОСАСАЛАСТАССТАСАСАСАТТТАААОСТСТ 3301 ААССТАААТАТААААТТТТТААОТОТАТААТОТСТТАААСТАСТОАТЕСТААТТОСТТТСТ сч 3361 СТАТТТТАСАТТССААССТАТОСААСТОАТОВАТОСОВОСАСТОСТОСААТОССТЕТААТ о 3421 САССАДААССТСТТТТОСТСАСААСАААТОССАТСТАСТОАТСАТОАСОСТАСТОСТОАС з481 ТСТСААСАТТСТАСТОСТОСААЛАВАВААОАСАААССТАСВАСАЄСССААССАСТТТССТ 3541 ТСАСААТТОСТААСТІТТТТОАСТУСАТОСТОТСТТТАСТААТАСААСТСТТОСТТОоСТтТІ ші 3601 ССТАТТТАСАССАСАВАССАВАААСЄСТОСАСТОСТАТАСЛАСААААТТАТОСАААААТАТ сч з6в1 ТСТОТАЛССТТТАТААСТАСОСАТААСАСТТАТААТСЬТВАСАТАСТОТТТТТТСТТАСТ со 3721 ССАСАСАСОСАТАСАСТОТСТОСТАТТААТААСТАТОСТСАААААТТСТОТАССТТТАОС м 7 3781 ТЕТТТААТТТСТАААССССТТААТААССЛАТАТТТОАТСТАТАСТОССТТОСАСТАСАОАТ 3841 САТААТСАСССАТАССАСАТТТСТАСАССТТТТАСТТ СТІТААААААССТОСССАСАССТ « 3901 СССССТОАЛССТСАААСАТАВААТОААТОСАМТТЕРТСТТОТТААСТТОТТТАТТОСАСС З с 7 завї ТТАТААТОСТТАСАААТАААССААТАССАТСАСАЛАТТТСАСАРАТАВАССАТТТТТТТС : з» 4021 АСТОСАТТСТАСТТОТОСТТТОТССАААСТСАТСААТОТАТСТТАТСАТОТСТОСАТСТА 4081 АТААВАСАТАТТТАТТТТСАТТАСАТАТСТОТСТТОСТТТТТТОТОТОСАСТОССТСТАТ - 75 ма СТОСЛСОССАССТАСОССТОСССТТСОСОСАСССССАССССАСААТСАСТОСААСАССТА сю 4201 САССААСОСАССТСАСАСАССССАСТОЗАСАААСАСТОССТОСАСТСТОСАССАТАДСАС го -0.720 4»

Ф) го 60 65

МАЛ. 27/44

ЕСОК І

4261 АСАДТСААСАСОССАСТОАССТОСАААТТТОСТАСССААТТосзусасастядасадссяї 9 4321 сАСТАСТ ТАТТААТАСТААТСААТТАСОССОХСАТТАСТТСАТАССССАТАТАТОСАСТТ 4381 ССОССТТАСАТААСТТАСОСТАААТОСССССССТООСТОАССОСССААССАССССссСоСсСС 4441 АТТСАССТСААТААТСАССТАТОТІСССАТАСТААСОССААТАСССАСТТТССАТТОАСС 4501 ТСААТОСССТОСАСТАТТТАСОСТАААСТОСССАСТТООСАСТАСАТСААСТОТАТСАТАТ 45651 СССААСТАСОСССССТАТТСАССТСААТОСАСССТАВАТСССССОССТОССАТТАТОСССА 46213 СТАСАТСАССТТАТОССАСТТТОСТАСТТОССАСТАСАТСТАОСТАТТАСТСАТСОСТАТ 4681 ТАССАТОСТСАТССССТТТТОССАСТАСАТСААТОВОССТООАТАССССТТТСАСТСАСо 4741 СССАТТТССАЛИТСТОСАССССАТТСАСОСТСААТОСОСАСТТТСТТТТОССАССААААТСА 4801 АСОССАСТТТССААААТСТОСТААСААСТОСОССССАТТСАСОСАААТОоСОСОСТАСОСОо 2 4861 ТСТАСОСТСОСАСОТСТАТАТААОСАСАССТ ССТТТАСТОДАСССТСАСАТООССТОСАС 4821 АСОССАТССАСОСТОТТТТСАССТОСАТАСААСАСАСССОСАСООАТССАСОСТОСОСОС 4881 ССООСААСССТОСАТТОСЛАСССССАТТСССССТОССВАСАСТОАССТААСТАСОСССТА 5041 ТАСАСТСТАТАСССССАСССОСТТОССТТСТТАТОСАТОСТАТАСТОТТТІТОССТТОСо с

Ври11021 5101 СТСТАТАСАСССССОСТТОССТСАТОТТАТАССТСАТОСТАТАССТТАСССТАТАССТОТОо о 5161 ССТТАТТОАССАТТАТТОАССАСТОСССТ АТТОСТСАССАТАСТТТССАТТАСТААТССА 5221 ТААСАТОССТСТТТОССАСААСТСТСТТТАТТОССТАТАТОССААТАСАСТСТОСТТСАС (Се) 8281 АСАСТОСАСАСССАСТСТОТАТТТТТАСАССАТОСОСТСТСАТТТАТТАТТТАСАААТТСА їм- 5341 САТАТАСААСАССАСССТССССАСТОСССОСАСТТТТТАТТАААСАТААССТООСАТСТС с 5401 САСОССААТСТООСОТ. АССТСТТОСОВАСАТОСОСТ СТІСТеСОСТАССОССОСАССТТС (зе)

Зо 5461 ТАСАТСССАССССТОСТОССАТОССТОСАССОАСТСАТОСТОССТОСОСАССТОСТТОСТ - 5521 ССТААСАСТОСАСОССАСАСТТАСОСАСАССАССАТОСССАССАССАССАСТСТОССОСА зв5в1 СААСССССТОССОСТАСОСТАТСТОТСТОАЛААТСАССТСОЗудадсаевее сасассас « 5641 с дасдсасхсудвадасьса595садс а свовадвачасосва кдачеся са - с 5701 чзсЕсугвасаададссадаччсаасьсссЯс сасадсассассазсачсо9ад9дасвосо ; » 5751 ачессічадсачтасесзсгассоссясаяасосодссассаадасасазі ачссоаасазаєсяа 5623 савасте: ЕссссессасадасєссттЕссоасад ксассдкссе дао Стос і 5881 ДОСТТОССОССАССАТОССАТОСАОСТОССТСТТТСТСТТТСТОСТОТСАССААСТОСАЄ с МС Я 5 МЕ Ей 5 т А ко -1 50 4) (Ф, ко бо 65

МАЛ. 27/5 (ВУуц ІТ) 5941 СТСТОСТСТСТОАОСТОСАССТОСААСАСТСТОСАССТСАССТОСТОААоССТОоССОоСТТ б М 0 5 ЕЕ М 000950 РЕ, М Кк Ра АдА

Хба І Ога ІЇІ 5001 САСТАААСАТСТОСТОСАВСАСТТСТЬОАТАСАСАТЕСАСТОААТАСАССАТАСАСТОСО

Б м Кк мМ 5 С Кк ТЯ В Ху т ЕЕ Т Б у т її НМ

Ср і 6061 ТСАСАСАСАСССАТОСАВАСАСССТТСАСТОСАТТОСАССТАТТААТССТААСААТССТА

У Кк о 8 НС Кк 5 ьЬьЕИ І б б ІМ Р М М С 6121 ТУССТААСТАСААССАСААСТТСААСОССАССОССАСАТТСАСТСТАЙССААСТОСТССА

І Р М У й 0 К БЕ К б В А ТТ Ь т М с КБ Б сов 2 6181 ССАССОССТАСАТОСАССТОССОСАСССТОАСАТСТСАОСАТТСТОоСОСТСТАТТтТСТОоТо 5 т А Х М ЕЕ Б А 5 І, ТТ 5 БЕ 0 5 А М ХУ в С 6241 СААОЛАСААСААТООССТАТОСТТАССАССАСОСССАТОСТАТОССАСТАСТОСОСТСАДо

А В В КК І А У Сб. у Р БЕ С НА М ру сок 3 ватн 1 6301 СААССТСАСТСАСССТСТССТСАССТОАСТОСАТОСТОТОССССтТоСсесСосАОСТСТоТС б т 5 м т мМ 8 5 6361 ССАСАССОСОСТСАСАТОССАССАССТСТСТТОСАСССТОССАССААСОССССАТСОСТСТ 8 ТТ Кб Р Б У 6421 ТОССССТОССАСССТОСТОСААСАССАССТСТОСССОСАСАСССОСССТОСОСТОССТоо

Е Р ь А Р 8 5 К 6 Т 5 00 ТАХА ось . АчЧе І се 6481 ТСААССАСТАСТТСССССААСОСОСТОАССОТСТОСТОСААСТСАСССОСССТОАССАОСС

У КВ У Б Р ЕЕ Р У Т У 5 М М 5 б А т (о) 6541 ССОТОСАСАССТТОССООСТСТОСТАСАСТОСТСАССАСТСТАСТОССТСАССАОССТОС о У НТ Е Р А М ьо 5:хжД5 05555 У

ВБЕБ ІІ Ге) зо 6601 ТаДОССТаСССТССАССАОСТТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСААСОСТОААТСАСАЛОС

У т мМ в 855 кб тот ІС юю ХУ мн - 6661 ССАОСААСАССЛААССТОСАСААСАДАСТТОАССССАЛАТСТТОСТОАСААААСТСАСАСАТ с

Р 5 М ТТ Кк М о Кк КУ ЕЕ Р Кк 5 Св Кк т нт ' Ге) 6721 ССССАСОСТОСССАССАССТСААСТОСТОССОССАСССТСАСТСТТОСТСТТССССССАА

Зо С ОР Р С в А Р Б І, о б б Р 5 М Б їж РР - 6781 ДАСССАДССАСАСССТСАТОСАТСТОССССАССССТОАОСТСАСАТОССТОСТОСТОоСАСО -. КВ КО т МІ 5 ВТР ЕМ тс М УМ « 6841 ТСАСССАСОААСАСССТОАССТСААСТТСААСТОСТАССТОСАССОСОТОСАОСТОСАТА

У 5 НЕ ОВ ЕЕ М КК ЖЕ М М У М ОО М БУК шщ с 6901 АТОССААСАСАААССССССОСАССАССАСТАСААСАССАСОТАСССОСТОСТСАСССТСС "» М А КК ТТ Кк Р В БЕ Е 00 хх М 5 ТТ ХХ В МУ м 5 ХХ п 5961 ТСАСССТОСТОСАССАССАСТОССТСААТОССАДОССАСТАСААСТОСААСОСТСТОСААСА 15 ь т м ьнНноОоо я ьо ке ХУ Кс Кк мб -І (95) ко -І 4) ко 60 65

МАЛ. 27/76 7021 ААССССТСССАССССССАТОССЛОЛАВАССАТСТОСАААСССАААСОССАССССССАСААС

К А Ь В А Р І Б К ТТ І 6 К А Кк б о Р ВЕ 7081 САСАСОТОСТАСАСССТОСССССАТССССССАСОСАСАТОСАССААОСААССАССТСАОССТОА

Р 0 М ХХ ТТ й в Р 5 Я Б ЕЕ М т Кк мМ о мМ 5 7143 ССТОССТОСТСАААСССТТСТАТСССАСССАСАТСОССОТОСАСТОССАСАССААТОССС

Т С ьо У Кк б ЕЕ У Р 5 0 1 А М Б М ЕЕ 5 М б 70 7201 АСССОСАСЛАСААСТАСААСАССАСОССТОСССТОСТОСАСТОССАСОооСТОоСтТтТСтТТСС

О Р Б М М ху Кк т т Р Р М Ь р 5 0 б 8 БЕ Е 7261 ТСТАСАОСАЛОСТСАССОТОСАСААСАССАССТОССАССАССОСААССТСТЕСТСАТОСТ й У в Кт мок ВМ ОооО МУ ЕЕ 5 С 1321 СССТСАТОСАТСАСОСТСТОСАСААССАСТАСАСССАСААСАСССТСТОССТоТСТоСоо 5 М М НН ЕЕ А 0 Но мМ Но У т 0 Кк 55 5 ЬБ Р

МаоМ І 7381 СТААДАТСАСТОССАСОСССОССААСССССОСТОСССОООСТСТОССССТОССАССАССАТ б Кк й 7441 ОСТТООСАСОТАСОСССТОТАСАТАСТТСССООССОСССАССАТОСАААТАААССАССОоС 7501 АТСТААТААААСАТАТТТАТТТТСАТТАСАТАТСТОСТОТТОСТТТТТТоТсТосСАСТОСС 7561 ТСТАТСТОСАОСССАССТАОСОСТОСССТТСОСООАСССОСАСОССАСААТСАСТОСААЄ 7621 АССТАСАССААОССАСОТСАБАСАССССАСТОСАСАДАСАСТОССТОСАСТСТОСАССАТ с 7581 ВАСАСАСААТСААСАССОСАСТОАССТоОСаааєксЧствоасдавісааксс 7731 о

МАЛ. 28 (Се)

АРСВ1 чмз7 мів маб май - -. - -- 333-373 -3 с

ЛІДЕРНА ПОСЛЕО-сру ри Шия кущ Ге)

ДОВНІСТЬ і. ЗМ ії - мат «аз «Та? «іа? АвСсДді

Ф-- -- ЕЕ-- --- - «

АРСВІ А чіві 79 182 БВ мігз 1236 В 12? З чів "ів чіа чІа й " чіаї чіаб5 чіав АРСКА і чіг2 Т "іа

Ї

(95) ! с ко "126 АРСВА з с аРС: А й їх ла? АРСЕЄ о іме) воР ОР 60 65

МАЛ. 29 1 19 вом мото ав в 85 А М ьо ЕЕ в к

А САС АТТ СТО АТС АСС САА ТСТ ССА САС ТТ о тТтТо сст Сто тТстТ СТА боб сАб Або ОСС нин пи нн п п п п п п п п п п о п п п п п п п п п п п п п п о п в п в ож и нн нн а а п нн т и п т п м м п пл п п п м п м 20 сові 27 А В с 0 ЕЕ ж За 32 І т І " СЕ 5, 8 о 5 ї їй У 5 к м с Кк М у

ВК АСС АТС ААС ТОС|ААЄ ТС АТ САС АСС СТІ ТТА ТАТ ТСТ АСА дАТ САА лАС ААС ТАС шини помпи п т т т о нн п нини и нитку, и ун ун и кн м кн нн п в п п В 23 . -- 1

Ач ЖЖ 000 КР с 0 вк ььіаі тА

А тТТс бСС|Тбб ТАТ САС САС ААА ССА СА САС ССА ССС АвАА СТО сте АтТе ттт|Тес сст нич ИН НМ п п НА сш ли и нку кн т о у нн нт п п т пк нн п п в пи чн п п п п п и ше ен ин и п п п нн п п п м р р Тв 52 сок: 70

Г- т Кк Е іа хм 7 о Кк т 5 с 2 б Е с 7 р

А АБС АСТ ласо САА ТСТІООО СТА ССТ бАТ Або ТІ АСІ ОбС АбТ ббОЗ Ттт Особ вАСА САС

ВЕ ши шк я ЕН я яхлриня яко ти жи ни ян тн ня лиж ння яка тик они кл в Ек у и и п п п п п п п т п а інно п п о й щі сеІ " ве о)

БоОотТьЬ т 1 08 85 Ь 0 А Б Ю М А мМ я т с

А ТТС АЄС СТО АСС АТТ АОС АбС СТО САб ОСТ ОАА САТ ОГО ОСА ОТТО ТАТ ТАС ТОТ

І: ие теми ен а пн чи м п м м п пи

Сотня 1.0 214011140 1123-14 212 2 14 ві штатні тт «о 85. ср 107 че и и пи жи и и пи хи ах і и пи пк п и з и І У

Ар ослф СА ТАТ ТТТ АСС ТАТ СОС СТ АСС|ТЕС ОСА САА бос АСС ААС СТО ОАА АТА ДА с шу ши Ек рн п п м мини ун и и у п м и чи ки не о м ж п в п пп яння ння 5-2 - - ;» п -І 50 бо б5

МАЛ. 30/1

Бре 1 1 бЗаасгссаде асассдусчу ссЯссСАСТАС ТТАТТААТАб ТААТСААТТА 51 СОбОСТСАТТ АСТТСАТАСС ССАТАТАТОС АСТТСССССТ ТАСАТААСТТ 101 АСОСТАААТС ССССОССТОС СТОАСССССС ААССАССССС ССССАТТСАС 151 СТСААТААТО АССТАТСТТС ССАТАЄТААС СССААТАСОС АСТТТССАТТ 0 201 САССТСААТО ОСТОСАСТАТ ТТАСССТААА СТОСССАСТТ СССАСТАСАТ 251 СААСТОТАТС АТАТСССААС ТАСОСССССТ АТТСАСОТСА АТСАСССТАА 301 АТООСССОСС ТООСАТТАТО СССАСТАСАТ САССТТАТОО САСТТТОСТА 18 351 СТТСССАСТА САТСТАСЯТА ТТАСТСАТОС СТАТТАССАТ. ССТОАТоСОС 401 ТТІТСОСАСТ АСАТСААТОС СССТОСАТАС СССТТТОАСТ САСОСССАТТ 451 ТССААСТСТС САССССАТТО АССТСААТОС САСТТТСТТТ ТОССАССААА 603 АТСААССОСА СТТТССАААА ТСТСОТААСА АСТССССССС АТТСАСОСАВ 7 5531 АТОСССОСТА СОСОТОТАСС СТОССАССТС ТАТАТААССА САОСТСОТТТ 601 АСТОААСССТ САСАТССССТ ССАСАССССА ТОСАСОСТСТ ТТТОАССТеС 651 АТАСААСАСА ССОССАСССА тесАосстОС ОСобССОСсА АСССТОСАТТ сч 75 тор бсААСОСОСА ТТСОСОСТОС САМСАСТСАС СТААСТАССЄ ССТАТАСАЄТ о 751 СТАТАССССС АСССССТТОО СТІСТТАТОС АТОСТАТАСТ СТТТТТООСТ 801 ТОСОСТСТАТ. АСАСССССОС ТТОСТСАТСТ ТАТАСОТОСАТ ССТАТАССТТ с 851 АСССТАТАСО ТСТООСТТАТ ТСАССАТТАТ ТОАССАСТОС ССТАТТОСТО їм- 901 АССАТАСТТТ, ССАТТАСТАА ТССАТААСАТ СОСТСТТТОС САСВАСТСТО с 951 ТТТАТТОССТ АТАТСССААТ АСАСТСТОСТ ТСАСАСАСТО АСАСОСАСТС со 1001 ТЄТАТТТТТА САОСАТООСО ТСТСАТТТАТ ТАТТТАСАДЛА ТТСАСАТАТА ї- 1051 САДСАССАСС СТССССАСТО СССОСАСТТТ ТТАТТАЛАСА ТААССТОСОВ 1101 ТСТОСАСССС ААТСТОСОСТ АССТСТІССО САСАТОСОСТ сттстоебст « 1151 АССОССОСАЄ СТІСТАСАТС ССАбСОСТОС ТСССАТОССТ ССАбССАСТЄ - с 1201 АТСОТСОСТС ООСАССТОСТ ТОСТОСТААС АСТОСАСОСС АСАСТТАССС ;» -І (95) ко -0..50 4) (Ф. ко бо 65

МАЛ. 30/2 1251 АСАбСАССАТ ССССАССАСС АССАСТОТОС СОСАСААбОС ССТООСООТА 2 1301 СОСТАТОТОТ СТОДАААТСА оСстТСодачад садуссгаса ссассцдасас

АКЕЇ її 1353 акгкЕсодаада сЕЕвадусад содсадаааа адакосздде адссавасту 1401 сессдсссся абаачадіса чачодєаасьс ссуккосучЕ десуссвасо 10 1451 асодачдадса чедсадссву адсачкаскс азссоссосса сосасассас 1501 садасаєзає, адссчасача сіаасачасе ЯясссетЕксе асозассссс міч І Ніпа ІІІ 1551 сссосадкса ссдсссссда сасасоуєссс даазвадсьсо СССССАССАТ

М

1601 ССАСАСАСАС АСАСТОСТОС ТАТООбТОоСТ ОСтТОоСТСтбо СТтССАОСТТ 15 ЕЕ то ть мМ ььЬЧ МР (В8рЕ 1 1651 ССТОСОСАСА САТТСТОАТО ДСССААТСТС САСАСТСТТТ СОСТОТОТСТ 56.5 ЩД1м9 мМ тТ05 Р 05 6 А М 5 1701 СТАбСОСАСА ССОССАССАТ СААСТОСАДС ТССАСТСАСА СССТТТТАТА її б ЕЕ В А ТІ МС Кк 5 5.0.ЙД5Б й У хваї сок 1 1751 ТТСТАСАААТ САЛААСААСТ АСТТООССТО СТАТСАОСАС ААЛАССАаСАС 5 КМ 0 Кк мМ У й АЧ оо КР

Крпї 1801 АСССАСССАА АСТОСТСАТС ТТТТОСОСТА ССАСТАСОСА АТСТОСССТА сч

ОО Р Р КК 6 Б І Е М ЛА 56 Т В Б 5 0 У срЕ 2 Ге) 1851 ССТСАТАССТ! ТСАСТОССАС ТОбСТТТОООЗ АСАСАСТТСА СССТОВССАТ

Р ОП ЖК ЕЕ 6 б 6 б ЕЕ а то ЕЕ ть т 1 1901 РТАОСАСССТО САОССТОААС АТОТООСАСТ ТТАТТАСТСОТ САбСААТАТТ 5 5 Б 0 АБ ОМ АМ хм хх с оо (Се) 1951 ТТАССТАТСС ОСТСАССТТС СОАСААБОСА ССААСОТОСА ААТААЛАССТ

КЕ 5 У Р 0 ТЕ б 0 б т КУ ЕЕ І КК - сов 3

Ватн х с 2001 бАСстазасссе АТСТСОСАТА АССАТОСТОТ ТРІСТОТСТо ТОССТААСАТ со 2051 ССССЄТОСТОАТ ТАТОСОСАЛА СААСАСАССС ААОСССАСАА СТТТОТТАСТ ча 2101 ТАААСАССАТ ССТСТІТОСТ ТСТТТССТСА ОСААСТСТОС СТОСАССАТС

І т М А А в 2151 ТОТСТІСАТС ТТСССОССАТ СТСАТСАССА СТІСАААТСТ ОСААСТОССТ

Уч Ж 1 ЕЕ Р Р 5 0 ЕО 6 КБ о тА « 2201 СТОТІСТОоТа ССТОСТСААТ ААСТТСТАТС ССАСАБАССС САААСТАСАб

Б мМ М сь М М ЕХ Р ЖЕ ЕЕ АК МО ші с 2251 ТОСАДОСТОС АТААСОСССТ ССААТСОССТ ДАСТОССАСС АСАСТСТСАС "КУ МАМ 056 М 550 ДФ ЖЕ 5 М т "з 2301 АСЛОСАСОСАС ДОСААССАСА ОСАССТАСАС ССТСАОСАСС АСССТОАСОС " ЕЕ 0 в 5К 0 5т їх 5 В 55 ть т -І (95) ко -І 42) ко 60 б5

МАЛ. 30/33 . 2351 ТСАССАААСС АСАСТАССАС АЛАСАСАААС ТСТАСОССТО ССААСТСАСС

Ь 5 КА 0 ХУ Б КН КК М Ху А С Б ХУ Т 2401 САТСАСОССС ТСАССТОСОС ССТСАСАААС АССТТСААСА СООбАСАСТС

НО б ьЬв 5 Р М ТК 8 ЕЕ М ВК ОС 2451 ттАСАОССАС АВСТОССССС дОСТОоСТоСт споттосАас стодсссест 2501 СССАТОСТТТ СОССТСТОАС ССТТТТТССА СЛОСОСАССТ АССССТАТТО 2551 СОСТОСТССА ОСТСАТСТТТ САССТСАССС СостТеСстТосСтТ ссттсостТтт т 2601 ААТТАТОСТА АТСТТОСАСС АСААТСААТА ДАТАААСТСА АТСТТТОСАС 2651 СТОТОСТОСА ТСТААТААЛА САТАТТТАТТ ТТСАТТАСАТ АТОТСТСТТО 2703 СТТТТТтТСтТо ТОСАСТОССТ СТАТСТОСАС сссАОСТАСЯ сСсТобССсТтОо 2751 ССОСАСССОС АСОССАСААТ САСТССААСА ССТАСЛОСАА СССАСОТСАС 2801 АБАССССАСТ ССАСАДАСАС ТОССТОСАСТ СТОСАССАТА АСАСАСААТС 2851 ААСАССОСАС ТСАССТООЛА АТТТОСТАЄС СААТТСТТОА АСАССААВОС 2901 ОССТОСТОАТ АССССТАТТТ ТТАТАССТТА АТСТСАТСАТ ААТААТЄСТТ 2951 ЖТСТТАСАССТ САССТОССАС ТГТТОСОСОА ДАТСТОСОСО ОААССОСТАТ 3001 ТТОТТТАТТТ ТТСТАААТАС АТТСАААТАТ СТАТССОСТС АТОАСАСАДТ зв 3051 ААСССТОАТА ААТССТІСАА ТААТАТТОАА АААССААСАЄ ТАТСАСТАТТ сч 3101 СААСАТТТОС СТОТОбСОСТ ТАТТОССТТтТ ТТТСОСССАТ ТтТтТоССстТТСс о 3151 ТОТТТТТОСТ САСССАСААА СОСТОСТОАЛ АСТААААСАТ ССТОААСАТС 3201 АСТТСССТОС АССАСТОССТ ТАСАТССВАС ТОСАТСТСАА САССССТАС (се)

Зо 3251 АТССТТСАСА СТІТТСОСОС ССААСААССТ ТТТССААТОА ТОАОСАСТТТ в. 3301 ТАААСТТСТО СТАТОТООСО СССТАТТАТС СССТОТРСАС СССбОССААЄ с 3351 АОСААСТОСС ТСОССОСАТА САСТАТТСТС АСАКТОАСТТ ОСТТСАСТАС і,

Зо 3401 ТСАССАСТСА САСААААССА ТСТТАСОСАТ СССАТСАСАС ТААСАСААТТ в 3451 АТОСАСТОСТ СССАТААССА ТОАОТСАТАА САСТОССОбСС ААСТТАСТТС 3501 ТСАСААСЯАТ СОБАОСАСОС ВАССАССТАА ССОСТТТТТТ ОСАСААСАТО « 3551 ССОбАТСАТО ТААСТОСССТ ТСАТОСТТОО СЛАССОСАСС ТОААТОААСС - с з -І (95) го -0.720 4»

Ф) го 60 65

МАЛ. 30/4 36Оо1 "САТАССАААС САССАСССТо АСАССАССАТ ОССТОСАССА АТОССАДСАА 9 3651 ССТТСсСОСАдД АСТАТТААСТ СОССААСТАС ТТАСТСТАОС ТТСССОССАд 3701 САДТТААТАС АСЄТОСАТОСА БОСОСАТАДА СТТОСАССАС САСТТСТОоСОо 3755 СстТосОССсТт СССССТООСТ СОТТТАТТОС ТСАТАААТСТ СбдосссоТс 38901 дессстоссте ТОССООТАТС АТТССАОСАС ТОСОСССАСА ТОстАВОССС 3851 ТССССТАТОС ТАСТТАТСТА САСОАССОСО АСТСАСССАА СТАТОСАТОА 3901 АСОСАДАТАСА САСАТСОСТО АСАТАСОТОС СТСАСТОАТТ ААССАТТОСТ 395414 ААСТОТСАСА ССААСТІТАС ТСАТАТАТАС ТТІТАбАТТСА ТІТААААСТтТ 4001 САТТТТТААТ ТТААААССАТ СТАСОТСМАС АТОСТІТТРТО АТААТСТСАТ 4051 САССААААТС ССТТААССТО, АСТІТТОСТТ ССАСТСАССО ТСАСАССССО 4101 ТАСААААСАТ САЛАОСАТСТ ТСТТСАСАТС СТТТТТТТСТ ССООСТААТС ап ТОСТОСТТОС АЛАСАААААА АССАССОСТА ССАСССсСТоС ТТТстттосс 4201 ССАТСААСАС СТАССААСТС ТТІТТСОСАА ССТААСТОСС ТЕСАССАСАС 4251 СОСАСАТАСС АААТАСТОТС СТІСТАСТСТ ДОССОТАСТТ АСОССАССАС Га 7279 4301 ТТСАДОААСТ СТОТАССАСС СССТАСАТАС СТООСТСТОС ТААТОСТСТТ о 4351 АССАСТаОСТ ОСТОССАСТо бССАТААСТС СТОТСТТАСС СОСТТОСАСТ 4401 СААСАССАТА СТТАССССАТ ААСССОСАСС ССТСОСОССТо ВАССОоСООсСТ с 4451 ТОСТОСАСАС АССОССАОСТТ ССАСССААСС АССТАСАССО ААСТОАСАТА М 4501 ССТАСАСССТ САССТАТОАС АААСССССАС ОСТТОСОСАА СССАСАААСо сч 4551 СОСАСАСОТА ТОСОСТАЛОоС СССАСОСТОС ОДАСАССАСА ССОСАСОДО со зб 501 ОВОСТТССАС ОСОСАААСОС СТСОТАТСТІ ТАТАСТОСТО ТООССТТТОС м 4651 ССАССТСТОА СТТСАОССТо ОАТІТТТОТо АТОСТОЗТСА СбООСОСОСА 4701 СССТАТОСАА ДААССССАСС ДАССССОССТ ТТТТАСССТТ ССТОСССТТТ і ВзрідЛІЇ « 4753 ТтТОоСстТоосстт ТТОСТСАСАТ СТТІСТТТОСТ СССТТАТССС СТОАТТСТОоТ З7З с 7 4801 ССАТААСССТ АТТАССОССТ ТТОАСТОдоС ТСАТАССОСТ СсосСосАСоС з

-І (95) ко -.20 4)

(Ф) ко 60 65

МАЛ. 3075 шо 485) ОВАССАСССА ССОСАБССАС ТСАСТОАОСО ДОСААССОСА АСАССОоССТО 2 4901 АТССОСТАТТ ТТСТОСТТАС ССАТСТСТОС ССТАТТТСАС АСОССАТАТО 4951 СТОСАСТСТС АСТАСААТСТ ОСТСТСАТСС СОСАТАСТТА СС 5001 САСТССОСТА ТОССТАССТС АСТОССТСАТ СОСТОССССС ССАСАССООС 5053 СААСАСССОС ТСАСОСОССС ТСАССОССТТ СТСТОСТоСС ОбСАТОСОСТ 5101 ТАСАСАСАДС СТОТСАСОСТ СТОСОССАОС ТОСАТОТОТС АСАОСТТТТС 5151 АСССТСАТСА СОСАААСССО ССАСЯОСАССТ СТОСЛАТСТо ТоТСАсТТАС 5201 ботТотТОСААА СТССССАССС ТОСССАССАС ССАСААСТАТ ССАЛААОСАТО 5253 САТСТСААТТ АСТСАССААС САСОСТОССС АССАСОСАСА АСТАТОСААЛА 5301 ССАТОСАТСТ СААТТАСТСА ОСААССАТАС ТОССССССССТ ААСТОСОССС о 5351 АТСССССОСС ТААСТОСОСС САСТТССОСС САТТСТСССС СССАТООСТО 5401 АСТААТТТІТ ТТТАТТТАТС САСАСОСССА ооссосстов осстстолос ! Беч І/АХУХ Її 5451 ТАТТОСАСАА СТАСТОАССА СОСТІТТТТО САООССТАЯО СТТТТасСААА 5501 ААССТАССТТ САСОСТОССО СААССАСТСА СОССССААСО ССТОСТААВо с 2 вве) САЛОСОСААС АСОТАСААЛО ССАСТОСОСА САВАСССТОС ТОЛССССОСА о 560. ТСААТСТСАС СТАСТОСОСТ АТСТОСАСАА ССОСААААСОС ААССОСАААО 5651 АСААЛАССАСС ТАССТТОСАС ТОСССТТАСА ТОСОСАТАСС ТАСАСТОСОС «о 5701 ССОТТТТАТОО АСАСОСААОСО ДАСССОЛАТТ сССАсСТОоОСо ссссостосто їм- 5751 ОТААОСТТОС СААССССТОС АААСТАВАСТ СОАТООСТТТ СТТОССОССА с ва1 І11/8с1 І 5В0Ї АССАТСТСАТ СССССАСССС АТСААСАТСТ САТСААСАСА САССАТСАСО с 5851 АТОСТІТССС АТСАТТСААС ААСАТОСАТТ ССАСОСАОСТ ТСТоСоСССо ч- 5901 СТТООСТОСА САСССТАТТС СОСТАТСАСТ СООСАСААСА САСААТСОСС 5951 ТОСТСТСАТО ССбСССТСТтТ ССООСТСТСА ССоСАСсСоСС ссоСосттСт « р 501 ТЕТТСТСААС всосьсстот ссовтосост ЗААТОКАСТО САССАССАСС -о с 6051 САбСОСебСтТ АТОСТООСТС СССАССАСОС ОССТТОСТТОо СССАССТОоТо ;» -І (9) ік) -0. 2 4;

Ф) ік) 6о 65

МАЛ. 30/66 6101 СТОСАССТТО ТСАСТСААЄС СОСААСОСАС ТООСТОСТАТ ТОоСОоСсАдСТ 6151 оссовоссАє САТСТОСТОТ САТСТСАССТ ТОСТОСТОСС ОАСАЛАСТАТ 6201 ССАТСАТСОС ТОАТОСААТО СОССОССТОС АТАСОСТТОА тТССОобсТАСС 6251 ТОСОСАТТОО АССАССАЛОС САААСАТСОС АТОСАССОВО САССТАСТОС 76 6301 САТОСААССС ОСТСТТСТОб АТСАСОАТСА ТСТОСАСОАА САБСАТСАСОо 6351 СОСТСОСОСС АССОСААСТО ТТСОССАССС ТСААСССОСО САТСССССАС 6401 ОСССАбСАТС ТОСТСОТСАС ССАТСОССАТ СССТОСТТОС ССААТАТСАТ 18 6451 ССТОСААААТ СОССОСТТТТ СТОСАТТСАТ ССАСТСТОСС Соостоссто 6501 тоосавкссо СТАТСАСОДС АТАСССТТОС СТАССОСТОА ТАТТОСТСАА

Є551 САССТТОоССО ССОААТООСС. ТОАССОСТТС СТОСТОСТТТ АССОТАТСОС 6601 СОСРОСОСАТ ТОССАСОССА ТОСССТТСТА ТСОССТТСТТ САССАСТТСТ 70 вві тстоАсосос АСТСТОсОСТ ТСЗАЛАТСАС ССАССАДССС АСОСССААСС 6701 ТОССАТСАСО АСАТТТСОАТ ТССАСОСССС ССТТСРТАТСА АдосТтТосоС 5751 ТРСССААТОС ТТТТССбОСА сзссеостоо АТОАТССТОС лосссобасА сч 6801 ТСТСАТОСТО бАСТТСТТОС СССАСССоВа СсСтТОсСАТОСС СтТососоАсТт о 6851 СОТТСАССТО СТОССТОАЛОО СТООАССАСС ТСОСОСАСТТ СТАСССОоСсАЄ 6901 ТОСАДАТССО ТОСОСАТОСА ССАДАССАСС АСОСОСТАТС СОСССАТОСА с 6951 ТОСОССОСАА СТОСАССАСТ СОСОАОБСАС САТОСсССОСТ ТтТоастТоссоо к 7001 АТСТТТСТСА АССААССТТА СТТІСТОТОСТ СТОАСАТААТ ТОСАСАААСТ сч 7053 АССТАСАСАС АТТТАААССТ СТААССТААА ТАТААААТТТ ТТААСТОТАТ со зв 7101 ААТОТОТТАА АСТАСТСАТТ СТААТТСТТТ СТОТАТТТТА САТТССАдСС м 7151 ТАТОССААСТО АТСААТОСОА ОСАСТОСТОС ААТОССТТТА АТОАССАААА 7207 ССТОТІТТОС ТСАСААСАДА ТОССАТСТАС ТОАТСАТОАС ССТАСТОСТС 7251 АСТСТСААСА ТТСТАСТОСТ ССААААДАСА АСАСАААССТ ДСААСАСССС їх с 7 7301 ДАССАСТТТС СТТСАСААТТ ССТААСТТТТ ТТОАСТСАТе СТОТСТТТАС :» МАЛ. 30/7 7351 ТААТАСААСТ СТТССТТОСТ ТТОСТАТТТА САССАСАААС САААААОСто -1 7 7401 САСТОСТАТА СААСАЛААТТ АТССАААЛАТ АТТСТСТААС СТТТАТААСТ с 7451 АСОСАТААСА СТТАТААТСА ТААСАТАСТО ТТТТТТСТТА СТОСАСАСАС г) 7501 ССАТАСАСТЄ ТСТОСТАТТА АТААСТАТОС ТСАААААТТС ТОТАССТТТА - 2 755,4 ОСТТТТТААТ ТІСТАААСОС СТТААТААСО ДАТАТТТОАТ СТАТАСТОСС

Ф 7601 ТТСАСТАСАС АТСАТААТСА СССАТАССАС АТТІСТАСАб СТТТТАСТТО 7651 .-СТТТАААААА ССТОССАСЬС СТОСЄССТОА АССТСАААСА ТААЛАТОСААТ 7701 сслАттотте ТІСТТААСТТ СТТТАТТОСА ССТТАТААТО ОТТАСАААТА

ГФ! 7751 ААССААТАСС АТСАСАААТТ ТСАСААМТАА АССАТТТТТІ ТСАСТОСАТТ ко 7801 СРАСТТСТОС ТТТСТССААА СТСАТСААТО ТАТСТТАТСА ТОТСТОСАТС й 78514 ТААТААААСА ТАТТТАТТТТ САТТАСАТАТ сСТОТоТТОостТ тТттТТтТотТотОо 7901 САСТОССТСТ АТСТООАСОС САСОТАССОС ТООССТТОбО ссАбСОсОдОо 7951 ОССАСААТОЯ СТОСААСАСС ТАСАССАЛСС САССТСАСАО АССССАСТОС 8001 АСАААСАСТО ОСТОСАСТСТ ССАССАТААС АСАСААТСАА САСООСАОТО 65 вові АССТОСОАААТ ТТОСТАОС

МАЛ. 31

АРСА! чвг? Унає «наб - -- - - з - 6 379 --:----- фунти --

Упеї «ваз «з АРСНА 1

АРСКІ А чі чі Єб "75 пе 00 ам дв АРСКІ Е "3 с ' вче Е 00 авст о

Ф

АРСКІ АРСВА їч- с со - - с . а -І (95) ко - 50 4) ко бо б5

МАЛ. 32/1 і 16 19 мом а 5 0 А ЕЕ М КК Р б дб м Кк

А САБО СТО САА СТА СТО САС ТСС бос ССС САЛА СТ о АЛа ДАЛА ССС ОТ ост. ТС СТО АлА во 1-21 0114021. 0114 011. 1. шен оятя яти гія лтя 1.011311 121111. бо 12214111 41. 312 4340-14 жи шия ги і зіж тні т 11.11.11. 1.

Шожгю сю 1. 214.12 1140212 сг 1 зт 21-14 1 424 41. 111.

Б ст тт чт і. 1. сх 14 11 тя жшх яті тя яю тії сто чи 1. 20 30 сриї 38 мо 5 с кот в в у т в тр ху т ІІ НІМ м

А ПТС АОС ТОТ АЛА АСТ АТ АПА ТАС АСС ТТ АСТІСЛА ТАС АСС АТА сле|ТОоб ст ба нс и нен р ин а и п п т пт п п и пря нин п м пох п ши не нн а а п т п м Ер вия. .ї- 1-4... жена ни ння Ек ин и и и т и п п м м я ----- днк кн

ЗУ 49 52 А 51 56 о А т ав вк ши І сіє І КК вк чн нив їх

А САС ОСС ост бос сСАА АСО СТО СОЛО ТОб АТА ОСА|СОТ АТТ ААТ ССТОАДАС ААТ сстТ о АТТ лин и нт и и п нн п п о п в о т п нн о п п м п п м в п ен п мли т нн в бот тт тт тт тт тя тт тт тт тя т пиннннооюютьсяи с нан ни шин и ит ин т ит и т и ет еп о в о 51 сок 7о 15 в ж У нов к ко к оів А т и тм» б Кк в в

А ССТ ААС ТАС АЛ САС ЛА То зло сосрова ОСС АСС ТЕС АСС ОТА СОС Ада тст бос нина и р и п м п п й х оп п в со пн пн нн п п а о о ою з Ти, по аа в и нн п п п п п и р С ть в у Кт ол - нин нн нн нн о п о о п, по я с «й "шин о чо и м п и п в ча свв у а о ля нин нн о о о п п по С, ся с нема в в ни и о п п п п м ри м пт о р В КИ ж ом дн я Шу слу ' Ге)

Зо 75 в2 А в С в зі - 5 т А х М Е ь 5 5 Ге Кк 5 Е о т А У т т

А вОсС АСС бос ТАС АТО СА СТО ТоС АОС СТ СОС ТоС БАС САС АСТ ОСА СТО ТАЄ ТАС

Енн п т и ит мн м п м п п а п п м п пп вв щи

Фони 110 1311-1111 14 41. 1.41. 12 1. 28111111. « г ни ни ке нн и прин спи м п м п а а в р м м а р р п а р р - с во 11.11 1101. 1.10 1. 1.11 1-11. 11. 12211010 10. . ит - (95) ко - 42) ко 60 б5

МАЛ. 32/2 ! 92 сов 100 А в с р їтї1 0 7 х збі 193

С А Ві Ж Кк г А Кк б ХУ 0 ЕЕ С НН А м рр тін 9 А тТОС беС о АСА|АСА АСА АТС ССС ТАТ СОТ ТАЄ САС САС сс САТ СТ АТС бАЄ ТАС|ТОб сш нини ши нн р нн нн п п п п п в м м п п ЕЕ Я нин не нн ин о о о п но п п о а п п а п о п п п п

Дозяяятяо т ин и и ни о п нн м п о п и тЕЗ нин нн по п о п о о п п в п м п по по п п п в В 104 І аз б ов ть М тм 5

А СТ САА ССА АОС ОСТТ сте АСС СТ ТОС ТоА 19 Во 4280-20-28 0-12 14814118 114 122 н- дого оті 14 22. гію нт. тні ня довж отити ння ния моги.

Б 622 ост тт ож кт тя ті інн нт

МАЛ. 33/1 с 1 ТІСААОАСОААВОСОССТОСТОАТАСОССТАТТТТТАТАОСТТААТОТСАТСАТААТААТ 5) 61 СОТТТСТТАСАСОТСАССТООСАСТТТТССООСАААТОТОСОСОСААССОСТАТТТСТТЕ 121 АТІТІТСТАААТАСАТТСАДАТАТСТАТОСОСТСАТСАСАСААТААСССТОАТАААТОСТ 183 ТСААТААТАТТОАААААССААОАОТАТОАСТАТТСААСАТТТСОСТОТООСССТТАТТОС іш : 241 СТТТТТТООСССАТТТТОССТТОСТОТТТТТОСТСАСССАСАААСОСТОСТОВААСТААА - 303 АБАТОСТОААСАТСАОТТОССТОСАССАСТОССТТАСАТСИААСТОСАТСТСААСАССОС сч 361 ТААСАТССТТСАСАСТІТТСОССССОААСААССТТТТССААТСАТОСАОСАСТТТІТАААСТ о 421 ТСТОСТАТСТОССССССТАТТАТССОСТСТТСАСОССОСОСААСАССААСТОССТОСССС те 481 САТАСАСТАТТСТОСАСААТСАСТТОСТТОАСТАСТСАССАСТСАСАСАЛААССАТСТТАС 541 ОСАТООСАТОАСАСТААСАСААТТАТОСАСТОСТОССАТААССАТОАСТОАТААСАСТОС « рт | в с 691 ССССААСТТАСТТСТСАСААСОАТСОСАССАСССААССАССТААССОСТТТЕТТОСАСАА ; з б САТОССОСАТСАТСТААСТСОССТТОАТССТТОССААССОСАССТОААТОЛАСССАТАСС

ЕБР І

721 АААССАССАСОСТОАСАССАССАТОССТОСАССААТОССААСААССТТОСОСАЛАСТАТТ -І 781 ААСТССССААСТАСТТАСТСТАССТТССССССААСААТТААТАСАСТОСАТОСАСОСССА о їмо) - 50 4; 52 їмо) 60 б5

МАЛ. 33/2 ши 841 ТАААСТТОСАССАССАСТТСТОСОСТОООСССТТССООСТОССТОСТТТАТТОСТОАТАд й 2901 АТСТОСАСССОСТСАСССТООСТСТОССОСТАТСАТТОСАССАСТОСОСССАСАТОСТАА 961 ССССТОССССТАТССТАСТТАТСТАСАСОАСОССОАСТСАСССААСТАТОСАТОСААССАДА 1021 ТАСАСАСАТСОСТСАСАТАССТОССТСАСТСАТТААССАТТОСТААСТСТСАСАССААСТ 70 1081 ТТАСТСАТАТАТАСТТТАСАТТСАТТТААААСТТСАТТТРТАЛТТТААВАССАТСТАССТ 1141 СААСАТОСТТТТТСАТААТСТСАТСАССААДАТСССТІААСОТОАСТТТТОСТТССАСТО 1201 АСССТСАСАСССССТАСАЛЛАСАТСАААССАТСТТСТТСАСАТОСТТТТТТТСТОСоССТ 75 1261 ААТСТОСТОСТТОСАААСАЛАЛАЛАССАСОССТАССАЄСОСТОСТТТСТТТОСОССАТСА 1321 АСАССТАССААСТСТТТТТОССААССТААСТСССТТСАССАСАССОСАСАТАССАЛАТАЄ 1381 ТСТОСТІСТАСТОСТАСССОТАСТТАСОССАССАСТТСАЛОЛАСТСТОТАЮСАССОССТАС 14413 ВТАССТСОСТСТОСТААТОСТСТТАССАСТООСТОСТОССЛОТОСССАТААСТООТОТСТ 7 1501 ТАСССОСТІТОСАСТСААСАССАТАСТТАССЗСАТААСОСОСАССССТООООСТОААСООЮ 1561 СССТТССТОСАСАСАСОССАССТТОСАСООААССАССТАСАССОААСТОАСАТАССТАСА 1621 СССТОАОСТАТСАВАВАСССССАСССТТОСССАЛОССАСАААСОСОСАСАССТАТССОСТ сч 1681 ААССОССАСОСТСОСААСАССАСАОСОСАССАСССАОСТТССАСССССАЛАСОССТОСТА о 1741 ТСТТТАТАСТОСТОТОСОСТТТООССАССТСТОАСТТОАССсТОСАТТТТТОТОАТоСТС 1801 СТСАСОСССССОСАСССТАТОСАЛАКАССССАССААССССОССТТТТТАСОСТІССТовС

ВерІДЛ1Її (Се) зо 1861 СТТТТОСТСОССТРТТОСТСАСАТОТТСТТТОСТОССТТАТССССТОАТТСТОТОСАТАА Кк 1921 СССТАТТАССОССТТРСАСТСАССТОСАТАССОСТОССООСАССССААССАСОСАССССАС сч 1981 ССАСТСАСТОАСССАСОААССОСААСАССОССТОАТОСССТАТТТТСТОСТТАСОСАТСТ со 2041 СТОСОСТАТТТСАСАССОСАТАТООТОСАСТСТСАСТАСААТСТОСТСТСАТОССОСАТА

В551107 І - 2101 СТТААОССАЯТАТАСАСТОСОСТАТСОСТАССТОАСТОСОТСАТСОСТОСОСССОСАСАС 2161 ССОССААСАССОСССТСАСОСССССТСАССОССТТСТСТОСТСОСООСАТССОСТТАСАСА « 2221 СААССТСТОАСССТСТСССОСАССТОСАТОТОТСАСАССТТТТСАСССТСАТСАССОААА - с 70 2281. СЕСОССАСОСАССАТОСАТСТСААТТАСТСАССААССАТАСТОССОССССТААСТОСОСС хз» 2341 САТСССОСОССТААСТССОСССАСТТСОССССАТТСТОСОССОСАТООСТОАСТААТТТТ 2401 ТТТТАТТТАТОСАСАВОСССсАСССССССТОСОССТСТОАССТАТТССАСААСТАСТОАСС - 45 2461 АВСТРІЯ ВЕ ТТОСААЛААСИ: ТАЗСТТАСНЗСТСАВОЗСТОСОКТТ (95) ко -0. 2 4)

Ф) ко 6о 65

МАП. 33/3 2521 ТООССССАЛАСТТСАСОССААТОСТАОССТОААСОСТОСТАССАТТТТАТССССОСТОСС 9 2581 АТСАТОСТТССАССАТТОААСТОСАТООТООСССТОСТОССАВАВТАТСОССАТТОССААО 2641 ААСОБАСАССТАСССТСОССТССИСТСАССААССАСХТСААСТАСТТССАДАСААТСдСС 2701 АСААССТСТТСАСТОСААОСТАААСАСААТСТОСТОАТТАТСОСТАССААААССТОСТТС 70 2761 ТОСАТТССТОСАСААСААТССАССТТТАДАССАСАСААТТААТАТАСТТСТСАСТАСАСАА 2821 СТСАААОВАССАССАСОАОСОАОСТСАТТТТСТТОССААААСТТТОСАТСАТОССТТААСА 2881 СТТАТТСВАСААСОССЛАТТОССААСТАЛАСТАСАСАТОСТТТОСАТАСТОССАСОСАСТ 18 2941 ТСТСТТТАССАОСАВСССАТОААТСААССАСОССАССТСАСАСТСТТТСТОАСААССАТС 3001 АТОСАССААТТТСАААСТОАСАССТТТТТСССАСАЛАТТСАТТТСССОАААТАТАВАСТТ 3061 СТОССАСВАТАСССАССССТОСТСТСТОВОСТОССАССАССАААААСССАТСААСТАТААС 3123 ТТТОААОТСТАССАСААСАВАСАСТААСАССААСАТОСТТТСААСТІСТСТОСТОСССТС 720 зів1і СТАЛАССТАТОСАТТТТТАТААНАССАТ ОСА ТТ ТОСТОВСТТ ТА АТС ТОТОАА 3223 СААССТТАСТТСТОТОСТОТОАСАТААТТОСАСАААСТАССТАСАЛОАСАТТТАЛАССТСТ 3301 ААСОТАААТАТААЛАТТТТТААСТОТАТААТОТСТТААДСТАСТСАТТСТААТТСТТТСсТ сч 3361 СТАТТТТАСАТТССААССТАТОСААСТОСАТОААТООСАССАСТОСТОСААТОССТТТААТ о 3421 САСОСААЛААССТОТТТТОСТОАОААСАЛАТОССАТСТАСТСАТОАТОАСОСТАСТОСТОАС 3481 ТСТСАДАСАТТСТАСТОСТОСААААААСААСАСААДССТАСААСАССССААССАСТТТОСТ 3541 ТСАСААТТОСТААСТІТТТТСАСТСАТОСТОТСТТТАСТААТАСААСТСТТОСТТОСТТТ ші 3601 ССТАТТТАСАССАСАААССАЛАААССТОСАСТОСТАТАСААСАЛААТТАТОСАААААТАТ сч 3661 ТСТОТААССТТТАТААСТАСОСАТААСАСТТАТААТСАТАДСАТАСТСТТТТТТСТТАСТ со з5 3721 ССАСАСАСОСАТАСАСТСТСТОСТАТТААТААСТАТОСТСАААААТТСТОТАССТТТАСС Кк 3781 ТТТТТААТТТСТАААССОСТТААТААССААТАТТТСАТСТАТАСТОССТТСАСТАСАСАТ зв41 САТААТСАСССАТАССАСАТТТСТАСАССТТТТАСТТОСТТТААЛАААССТОССАСАССТ 3901 СОСССТОААССТСАЛАСКТАААКТВААТВ ТТ.

ТТ ТОТТААСТТВІЗТАТТОСАОС їх с 7 3961 ТТАТААТССТТАСАДАТАААССААТАССАТСАСАААТТТСАСАААТАААССАТТТТТТТС з» 4021 АСТЄСАТТСТАСТТСТОСТТТОТССАААСТСАТСААТСТАТСТТАТСАТСТСТОСАТСТА 4081 АТААААСАТАТТТАТТТТСАТТАСАТАТСТСТСТТОСТТТТТТСТОТОСАСТОССТСТАТ - 45 4141 СТОСАСОСССАССТАССОСТООССТТООСОСАСООССАССССАСААТСАСТОСААСАССТА (95) ко - 4)

(Ф) ко 60 65

МАЛ.. 33/4 тт 4201 САбСАДСОСАССТОСАСАСАССССАСТОСАСАААСАСТСОСТОСАСТСТОСАССАТААСАС 4281 АСАЖТСАЛСАООО САТ АВСТОВАЛАТТТЄСТА С т сацса саседасоазесак 4321 АСТАСТТАТТАМТАСТАВТСААТТАСОСОСТСАТТАСТТСАТАССССАТАТАТ ОСАСТТ 4381 СССОССТТАСАТААСТТАСОСТАААТСССССОССТСССТСАСССССсСАДССАСОоСсССоСсСС то 441 АТТОАССТСААТААТСАССТАТСТТСССАТАСТААССССВАТАСОСАСТТТССАТТОАСО 4501 ТСААТОСОТОСАо ТАТТТАСОЗТАВАСТОСССАСТТОССАЄТАСАТ СААСТОТАТСАТАТ 4561 СССААСТАСОСССССТАТТСАССТСААТОАСОСТАААТОСОС совсс ТОБСАТТАТССССА 4621 СТАСАТСАССТТАТССОСАСТТТССТАСТТОССАЄ ТАСАТСТАСЯТАТТАСТСАТОЯ СТАТ 4581 ТАССАТОСТСАТОСОСТТТТСОСАСТАСАТСААТООСССТОСАТАСОССТТТО АСТСАСо 4741 СОСАТТТССААОТСТОСАССССАТТОАСОТСААТСОСАСТІТСОТТТТОССАССАЛААТСА аво1 АСЕССАСТТТССААВАТСТОСТААСААСТССОССССАТТСАСОСАДАТОСССОСТАССОС 4861 ТСТАСОСТОСОЗАОСТСТАТАТАВОСАСАССТОСТТТАСТОААСССТСАОАТоОССТОВАо 4аз21 АССССАТССАСОСТОТТТТОАССТОСАТАВАЛОАСАССООСАСОСАТОСАОССТООССОС 4981 СССОСААСССТОСАТТОСААСИСОСАТТСССССТОССААСАСТОАССТААСТАСССССТА с щі 5ОЗІ1 ТАСАСТСТАТАСССССАСССССТТООСТІСТТАТОСАТОСТАТАСТСТТТТТОССТІбОС о 5101 ВТСТАТАСАСССССОСТТОСТСАТОТТАТАССТОАТОСТАТАО СТА ОСТАТАССТСТО 5161 ОСТТАТТОАССАТТАТТОАССАСТОСССТАТТОСТОАССАТАСТІТ ССАТТАСТААТССА (се) 5221 ТААСАТООСТСТІТСССАСААСТСТСТІТТАТТОССТАТАТСССААТАСАСТОТОСТТСАЄ ї- 5281 АСАСТОАСАССОАДСТСТОТАТТТТТАСАООАТОЗООТСТСАТІТАРТАТТТАСАААТТСА с 5341 САТАТАСААСАССАСССТОСССАСТОСССОСАСТТТТТАТТАААСАТААСОТОСССАТСТС (зе) 54д1 о САСОССААТСТО ВОАС ВІ САТООВСТСТТСТОСОСТАССО ОВТ С - 5461 ТАСАТСССАССС СТОСТОССАТОССТССАСССАСТ сАТОСТСО СТССССАССТОСТТОСТ 5за1 ССТААСАСТООАСОССАСАСТТАСОСАСАОСАССАТОСССАССАССАССАСТОСТОСОССА « 0 5581 СААСОСССТОСОСОТАСССТАТСТОТСТСАААДТСАССТСоЯдаадсодост сдсассос 8 с 5641 ЄЧасудсасссодаадасссзаддсадсддсадаада ачає зсвадсячо ка и часа ; » 5701 а4ссссЗасаададссададасаасссссоссдсадкоссдєсаасадсдчадодсачеі чи 15 5761 азессдацсадсасссадЕсосєЕдссосасясассассачасає аасазскдасазчассаа -І 5821 сачдасьдксссіссссакоцаассьсуссьодсачі сассут сек часа сет (65) ко - 50 4)

(Ф, ко 60 б5

МАЛ. 33/5

Ніпа 111 . 5881 ДОСТТССССССАССАТОСАСТОСАССТОбСОССТОоТТТТОССТоСТоосССстТобстТостІЄ

М ря тив ЕС ЬЬАУ АР 5941 ОБОСССАСАСССАОСТОСААСТОСТОСАСТОСПССССССААСТОАЛАСАААСССОСТОСТТ

Я А НН 5 0 У 0 Хо 5 с АЕ У КК Р б А (рРич ІТ) (Бре І) 6001 СССТСАЛАСТСАССТОТААААСТАСТАСАТАСАССТТСАСТСААТАСАССАТАСАСТОСО 5 м Кк мМ 8 С Кк т 5 КУ ТЕ ТТ 6 ж т І НН 70 мес 1 сок і 6061 РТТАСАСАСОССССТООССАДАСОСТОСАСТОСАТАССВОСТАТТААТОСТААСВАТОСТА

М БК 0 А РО 0 АЬ ЕМ І с ІМ РМ М 6321 ТТССТААСТАСААССАСААСТТСААСОССССОПССАССТТОАСССТАОССЛАСТСТОССА

І Р М у М 0 КК ЕЕ К С Я АТ т У 0 Кк 5 А

СОЕ 2 - 6181 ПСАСССССТАСАТОСААСТСТОСАСССТОСОСТСССАССАСАСТОСАСТСТАСТАСТОСС 5 Т А ХХ М ЕЕ Ь 5 5 Й БК 5 ЕЕ РОТ А М хх їх с 2241 ССАСААСААСААТООССТАТОСТТАСОАССАСОСОСАТИСТАТОСАСТАСТОСОСТСАдО

А КК В В І А У б її р ЕЕ сб НН А мМ рр у м бо

СРЕ З ватюН І 6301 СААСССТТОТСАССОТСТОСТСАСОТСАСТОСАТОСТСТОССССТСОсоСсСАССТСТОоТе ст ьУтмч в 6361 ССАСАСОССОСТСАСАТОСССАССАССТСТСТТССАСССТССАССААСОССССАТОССТСТ 5 ТТ Кб Р Б У с 5421 ТОССССТОССАСССТОСТОСААСАВСАССТСТоосОобСАСсАососсостовостосстов

Е Р Б А Р 5 Б К 5 ТТ 5 б 0 ТА дБ с сі і) вче ї 6481 ТСААССАСТАСТІСССОССАЛОСОСТОАСОСТОТООТОВААСТСАСОСОСССТодСсСАоСсЯ

М КО ХХ Е Р ЕЕ Р У ТТ мМ 5 Я М 5 б, ьТт зо 6541 СССТОСАСАССТТССССОСТСТОСТАСАСТОСТСАССАСТОТАСТОССТОАССАОССТоа

Я М НН т Е Р А м 5 055 б їх 55 -

ВясЕ ТІ 5601 ТОСАСССТОСССТССАССАОСТТОСОСАСССАСАССТАСАТСТОСАДСОСТСАДТСАСАдОС с

М т М в 5555070 т 1 с м Ум НнКк со 6661 ССАССААСАССААСОТОСАСААСАААСТТСАССССАДАТСТТОТСАСААААСТСАСАСАТ

Р" 5 М ТК У 0 КК ОМ ЕЕ Р К 5 с о Кк т нт в. 5721 ССССАССОТОСССАССАССТОВАСТОСТОСОООСАССОТСАСТСТТОССТСТТССССССАА

СР В С Р А РЕ з Б б б Р 5 М Ж 6 ЕЕ РР 6781 ДАСССАДОССАСАСССТСАТСАТСТОССССАССССТОСВОСТСАСАТОССТОСТОСТОСАСо «

КР КО ть МІ 5 КТ ВЕ М т су м мо 8 с 6841 ТОАСССАССААСАСССТОАССТСААСТТСААСТОСТАСОТОПАСОССОТССАССТОСАТА з» М 5 НЕ 0 Р Б М КЕ М Я У М о б М ЕХ Н п - - 6901 АТОСССАЛСАСАААССООСООПАОСАССАСТАСААСАССАССТАСССССТОоСТОлвОСТОС

ЩН А К ТТ К Р Ж БЕ ЕЕ 9 ї М 5 ТТ У В У У 5 У -І (95) іме) -І 42) іме) 60 65

МАЛ. 33/6 6961 ТСАССОТССТОСАССАОСАСТООССТОСААТООСААОЗАСТАСАЛАСТОСААССТСТССАДСДд от чно мок Ех кс Кк У б М 2 7021 ДАБСССТОССАОССССССАТОСАСААААССАТСТССАААСССАЛАСОССАОССССОАСДАС

К А Б Р А Р Ї Е К ТТ Її 5 К А ХК б 0 РВЕ 7081 САСАССТОТАСАСССТОСССССАТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСА

Р ОО М У Т Б Р Р 8 В Б ЕЕ М т Кк М о хм БІ 70 7141 ССТОССТОСТСАВАСОСТТСТАТОССАСССАСАТСОСССТОСАСТОССАСАССААТСОСС

ТТ С Пп М Ко ЕХ Р БО І А М БЕ МЕ М 7201 АОССССАСААСААСТАСААСАССАСОССТОСССТОСТОСАСТоССАСсостТостТТСсттос

ОО Р ЕЕ НН М Я Кт ТР Р М МО 505 ЕЕ Е 7261 ТСТАСАССААССТОАСССТОСАСКАСАССАССТСОСАССАССОСААССТСТТСТСАТОСТ 15 м ХУ 58 хх ьтУВ Кк ни о00 нм хи ЕВ С 7321 СССТОСАТОСАТОАОССТСТОСАСААССАСТАСЬСОСАВАВОВООСТСТоССТоТСТоСов

М М НН ЕЕ А її Я М НН У 7 0 Кк 5 6 5 Хх5 Р

Мам І 7381 СТАААТСАСТОССАСОСССоОСААСССССОСТОССОООСТСТООСОСТОССАССАССАТ с Кк ж й 720 2441 ССТТОССАССТАСССССТОТАСАТАСТТОССОСССССССАССАТОСАААТААЛОСАСССО 7501 АТСТААТААААСАТАТТТАТТТТСАТТАСАТАТОТОТСТРОСТТТТТТОТСТОоСАСТОСС 7561 ТСТАТСТОСАССССАССТАССССТСОаССТТООСОСАССПОПАСОССАСААТОДСТОСААО сч 7621 АОСТАСАСОААСССАССТСАСАСАССССАСТОСАСАААСАСТОССТОСАСТСТОСАССАТ о 7681 ААСАСАСААТСААСАСООССАСТСАССТосСсаазіссгостазсчааєсааесс 7731 (Се)

МАЛ. 34А м

ІНТРОН с

З-кінець У-гена вкласти вант нини киянин яння нина жита якяхжттяя 0 5-ЮНепЬ СНІ

АССОТС ТСС тСА Сг оТСАСТОСАТОС-(М)8-ССТСТСТІ Ся Ст СС» і)

ТМ й В айт сплайсингу 5 КІ тойговля сину ВаліНі лайт свт нигу чн --ССАСС Аа СОС с І б т Кк у

АССОТСТоСтсяЯ би ТС АСС ААо бос т М 5 5 5 Дт Кк б не) с у . «» АСС ОТО ТОС ТСА ССС ТС АСС ААС СОС

ТМ 55 А 5 т Кк 5 -І (95) ко -0. 2 4) ко 60 65

МАЛ. З4Б І І

ІНТРОН

Чжінаюме Муканя ооусцаваисльс.с-навоовікасківссвив-чатіванчнвоянтеттяко- У ЯНеть константиної ділянки капна-даннюта

САА АТА ААл сх СТАСТОСАТОСАМН о СТІСТТТССТСАс г оК-

Е |! КЕ сайтсалайсимгу 0 Ватні сайт сплайсннгу донора я донора -АСТ СТО ОСТ ОСА

ТУ А А

ІЙ

САА АТА ААА СЄиихбА АСТ ТО ОСТ ОСА

Е |! Кк т М А АХА й у

САА АТА ААА ССА АСТ ОТО ОСТ ОСА

Б І Кк В т ХУ А А

МАЛ. 35 1500 о ВІВНІ с

Фо Контраль о

В

- 1000 ц

С ш а (Се) рев; . з Я

Во 5 і - ї : сч 10 100 1000

Зо Відносне розведення ї-

З с . ит -і (65) ко -І 50 4) (Ф, ко 60 б5

МАЛ. 36 й єю ай 293РАР 2 ш

З о х 70 Во о

З - . 500 : : 8: мя « вед: екз о Вис і 10 100 1000

Відносне розведення

МАЛ. 37 с (8) 15 що СОВЕАР 14 о СсОов-Ссоад, й г середовище і-й 12 чн 5 .

РИШНН сч

З ж б8 - со а ще і - в я - оч 0.2 | ч 4 г г и т й ча Отут - с 0 ро п титр і : 10 100 1000 . и?

Відносне розведення -і

Claims (1)

1. Формула винаходу юю Гуманізоване антитіло, яке специфічно зв'язується з протеїном альфа активації фібробластів (ЕАРА), у якому варіабельна та константна ділянки важкого ланцюга мають амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:12 та -І 20 ЗЕ І МО:22 відповідно, а варіабельна та константна ділянки легкого ланцюга мають амінокислотну Ф послідовність ЗЕО ІЮ МО:2 та 5ЕО ІЮ МО:20 відповідно або його модифіковані варіанти, які мають таку ж саму біологічну активність.

   Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2005, М 7, 15.07.2005. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і ГФ) науки України. іме) 60 б5