WO1996023902A1 - Method of quantitative analysis of cholesterol - Google Patents

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Definitions

  • the present invention relates to a method for efficiently measuring cholesterol in high-density riboprotein by a simple operation using a small number of samples without the need for pretreatment such as centrifugation.
  • Lipids such as cholesterol are combined with avocant in serum to form lipoprotein.
  • Riboproteins are classified according to their physical properties into chiromicron, ultra-low-density riboprotein, low-density riboprotein, high-density riboprotein (HDL), and so on.
  • LDL is known to have atherosclerosis-inducing properties
  • HDL is known to exhibit an anti-atherosclerotic effect.
  • Epidemiologically, cholesterol levels in HDL have been shown to be inversely related to the frequency of atherosclerotic diseases, and are nowadays used to prevent or diagnose ischemic heart disease. The measurement of cholesterol in HDL is widely performed.
  • a precipitant is added to a sample to aggregate riboproteins other than HDL, and this is centrifuged. This is a precipitation method in which the cholesterol in the supernatant containing only the removed HDL is measured.
  • riboproteins other than HDL are aggregated in advance, only cholesterol in HDL is enzymatically reacted, and then the enzyme is deactivated and the aggregate is redissolved and the absorbance is measured.
  • a method Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 6-224110
  • this method requires an operation of adding the reagent at least three times, so that it can be applied only to a limited number of automatic analyzers, and has a problem in versatility.
  • when re-dissolving the precipitate it was not satisfactory in terms of damage to analytical equipment and reagent disposal, such as the use of high-concentration salts.
  • an object of the present invention is to provide a method for quantitatively determining cholesterol in HDL which can be efficiently measured by a simple operation without the need for pretreatment such as centrifugation, and can be applied to various automatic analyzers. Is to provide.
  • the present inventors have conducted intensive studies. As a result, after adding a substance that forms a complex with a riboprotein other than HDL and a surfactant to a sample, cholesterol is measured enzymatically. It has been found that cholesterol in HDL can be quantified efficiently and that it can be applied to automatic analyzers.
  • the present invention relates to a method for measuring cholesterol (hereinafter, measuring cholesterol) by adding a substance that forms a complex with a lipoprotein other than high-density riboprotein and a surfactant to a sample containing lipoprotein.
  • the present invention relates to a method for quantifying cholesterol in a special high-density riboprotein.
  • the substance that forms a complex with a riboprotein other than HDL used in the present invention may be a substance having a difference in affinity between HDL and a riboprotein other than HDL, such as dextran sulfate, phosphotungstic acid, and the like.
  • Polyanions such as heparin; divalent gold ions such as magnesium ion and calcium ion; water-soluble polymers such as polyethylene glycol; and antibodies to riboproteins other than HDL. These substances can be used alone or in combination of two or more. Of these, it is particularly preferable to use a combination of polyadione and a divalent metal ion.
  • the amount of these substances used is not particularly limited, and varies depending on the type of the substances. However, it is only necessary that these substances and a riboprotein other than HDL form a complex at the time of measurement. It may or may not be formed.
  • the concentration when mixed with the sample is 0.02 to 2% by weight of polyadion, 10 to 50 mM of divalent metal ions. It is particularly preferable to use the polyanion in a range of 0.05 to 1 weight by weight and a divalent metal ion of 20 to 20 mM.
  • boroxyethylene alkyl ether examples thereof include alkyl phenyl ether, boroxyethylene-polyoxypropylene condensate, boroxyshethylene alkyl ether sulfate, and alkylbenzene sulfonate.
  • polyoxyethylene alkyl ethers include polyoxyethylene cetyl ether (HLB14) (commercially available products such as Emulgen 220 (manufactured by Kao Corporation)); Examples of ter are boroxyethylene nonylphenyl ether (HLB15) (commercially available, such as Emulgen 913 (manufactured by Kao Corporation)); polyoxyethylene-polyoxypropylene condensate is a commercially available product As pull mouth nick F88 (manufactured by Asahi Denka Co., Ltd.); and as boroxyethylene alkyl ether sulfate, polyoxyethylene sodium lauryl ether sulfate (commercially available such as Emal 20C (manufactured by Kao Corporation)). ; CT / JP9S / 00641 Thorium is preferred.
  • surfactants can be used alone or in combination of two or more.
  • the amount of use is not particularly limited, but the concentration when mixed with a sample is 0.01 to 5% by weight, particularly 0.1 to 5% by weight. It is preferable to use it in the range of 0.5 to 1% by weight.
  • a substance that forms a complex with a riboprotein other than HDL and a surfactant are added to the specimen.
  • these substances may be mixed and added as the same reagent. Alternatively, they may be added as separate reagents.
  • a sample to which a substance that forms a complex with a riboprotein other than HDL and a surfactant is added is directly subjected to cholesterol measurement. That is, it is not necessary to perform pretreatment such as centrifugation.
  • any known enzymatic assay can be used.
  • a method using a combination of cholesterol esterase and cholesterol oxidase as an enzyme reagent a method using a combination of cholesterol esterase and cholesterol dehydrogenase can be used. And the method used.
  • a method using a combination of cholesterol esterase and cholesterol oxidase is preferred.
  • the cholesterol concentration to be measured can be determined.Furthermore, for the purpose of improving the accuracy of analysis, the concentration of the cholesterol is determined. The cholesterol concentration can also be determined by comparing the signal amounts at the two points in time (two-point method).
  • the method of finally detecting cholesterol after adding these enzyme reagents and the like is not particularly limited. For example, an absorbance analysis performed by further combining peroxidase and a chromogen, a coenzyme and hydrogen peroxide are used. Examples include a method of direct detection.
  • 0.2 ml of an aqueous solution containing 0.3% of dextran sulfate and 2% of magnesium chloride is mixed with 0.2 ml of a sample, and the solution is mixed at 300 Orpm with 10 ml. Centrifugation was performed for minutes. The upper 50 ⁇ was collected, mixed with the same cholesterol measuring reagent as described above, and incubated at 37 ° C for 10 minutes. Then, the absorbance at 545 nm was measured to determine the cholesterol concentration in HDL.
  • Sample 4 contains 0.2% of sodium phosphotungstate, 1.8 gZ £ of dextran sulfate, 10 OmM of magnesium chloride, and a polyoxyethylene-polyoxypropylene condensate (Buruguchi Nick F-68, Asahi A reagent containing 0.2% (300%) was added, and then the same cholesterol measuring reagent 100% as in Example 1 was added.
  • the cholesterol concentration in HDL was determined in the same manner as in Example 1.
  • the precipitation method was also measured in the same manner as in Example 1.
  • cholesterol in HDL can be quantified efficiently by a simple operation without the need for pretreatment such as centrifugation.
  • a specific measurement can be performed by a simple operation with a small number of samples, it can be applied to various automatic analyzers and is extremely useful in the field of clinical examination.

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Description

明 細 書
コレステロールの定量方法 技術分野
本発明は、 遠心分離などの前処理の必要がなく、 少ない試料で簡便な操作によ り効率良く高比重リボタンパク質中のコレステロールを測定する方法に関する。 背景技術
コレステロール等の脂質は、 血清中においてァボタンパクと結合し、 リボタン パク質を形成している。 リボタンパク質は物理的な性状の違いにより、 カイロミ クロン、 超低比重リボタンパク、 低比重リボタンパク （L D L) 、 高比重リボ夕 ンパク （HD L) 等に分類される。 これらのリボタンパク質のうち、 L D Lは動 脈硬化惹起性を有し、 一方 HD Lは抗動脈硬化作用を示すことが知られている。 疫学的には、 HD L中のコレステロ一ル値は動脈硬化性疾患の発症頻度と逆相 闋を示すことが証明されており、 今日では、 虚血性心疾患の予防や診断を目的と して、 HD L中のコレステロ一ルの測定が広く行われて 、る。
H D L中のコレステロールの測定方法としては、 例えば超遠心分離によつ て HD Lを他のリボタンパク質と分離した後、 コレステロ一ル測定に供する方法 や、 電気泳動によって分離した後に脂質の染色を行って、 その発色強度を測定す る方法等が知られている。 しかしながら、 これらの方法は、 いずれも、 操作が煩 雑であったり、 多数の検体を処理できないなどの問題があり、 日常的にはほとん ど用いられていなかった。
HD L中のコレステロ一ルの測定方法として、 現在臨床検査の領域で一般に広 く用いられている方法は、 検体に沈殿剤を加えて HD L以外のリボタンパク質を 凝集させ、 これを遠心分離によって取り除き、 分離された HD Lのみを含む上清 中のコレステロールを測定する沈殿法である。
この方法は、 超遠心法や電気泳動法に比較して簡便であるものの、 沈殿剤を加 えて分離する操作を含むために、 比較的多量の検体量を必要とし、 また分析誤差 を生じる可能性も高く、 全分析工程を完全に自動化することはできなかった。 一方、 酵素的に HD L中のコレステロールを分別定量する方法も検討されてい る。 例えば、 胆汁酸塩又は非イオン系界面活性剤の存在下に、 酵素反応を行う方 法 （特開昭 6 3 - 1 2 6 4 9 8号公報） が知られている。 この方法は、 反応初期 の酵素反応速度は L D L濃度に比例し、 その後 HD L中のコレステロ一ル濃度に 比例することを利用したものであるが、 HD L中のコレステロールと他のリポ夕 ンパク質中のコレステロールの反応を完全に分別することはできず、 測定される 対象が L D L中のコレステロールから HD L中のコレステロールへと、 段階的に ではなく、 オーバーラップしながら徐々に変化していくため、 正確な方法とは言 い難かった。
また、 HD L以外のリボタンパク質を予め凝集させておき、 HD L中のコレス テロールのみを酵素的に反応させた後に、 酵素を失活させると同時に凝集を再溶 解して吸光度を測定するという方法 （特開平 6— 2 4 2 1 1 0号公報） が知られ ている。 しかしながら、 この方法は、 少なくとも 3回の試薬を添加する操作が必 要であるため、 限定された自動分析装置にしか適用できず、 汎用性の点で問題が あった。 また、 沈殿の再溶解に際しては、 高濃度の塩を使う等、 分析機器に対す るダメージゃ試薬廃棄の点でも満足できるものではなかった。
従って、 本発明の目的は、 遠心分離などの前処理の必要がなく、 簡便な操作で 効率良く測定することができ、 種々の自動分析装置に適用することができる HD L中のコレステロールの定量方法を提供することにある。
かかる実情において、 本発明者らは鋭意研究を行った結果、 検体に、 H D L以 外のリボタンパク質と複合体を形成する物質と界面活性剤を添加した後、 酵素的 にコレステロ一ルを測定すれば、 H D L中のコレステロ一ルを効率良く定量する ことができ、 しかも自動分析装置にも適用できることを見出し、 本発明を完成し 発明の開示
本発明は、 リポタンパク質を含む検体に、 高比重リボタンパク質以外のリポ夕 ンパク質と複合体を形成する物質及び界面活性剤を添加した後、 酵素的測定法 (こ よりコレステロールを測定することを特徵とする高比重リボタンパク質中のコレ ステロールの定量方法に係るものである。
発明を実施するための最良の形態 本発明で用いられる H D L以外のリボタンパク質と複合体を形成する物質とし ては、 H D Lと H D L以外のリボタンパク質とで親和性に差がある物質であれば 良く、 例えばデキストラン硫酸、 リンタングステン酸、 へパリン等のポリアニォ ン；マグネシウムイオン、 カルシウムイオン等の 2価金厲イオン；ボリエチレン グリコール等の水溶性高分子； H D L以外のリボタンパク質に対する抗体などが 挙げられる。 これらの物質は 1種又は 2種以上を組み合わせて用いることができ る。 また、 これらのうち、 特にポリア二オンと 2価金属イオンを組み合わせて用 いるのが好ましい。
これらの物質の使用量は特に制限されず、 また物質の種類により異なるが、 こ れらの物質と H D L以外のリボタンパク質とが測定時に複合体を形成していれば よく、 凝集物を形成していても、 又は形成していなくてもよレ、。 例えば、 ポリア 二オンと 2価金厲ィォンを組み合わせて用いる場合、 試料と混合したときの濃度 が、 ポリア二オン 0 . 0 2〜2重量％、 2価金属イオン 1 0〜5 0 O mMとなるの が好ましく、 特にポリア二オン 0 . 0 5〜 1重量 、 2価金属イオン 2 0〜 2 0 O mMとなる範囲で用いるのが好ましい。
また、 本発明で用いられる界面活性剤としては、 コレステロールの酵素的測定 系に対して阻害効果を有するもの、 すなわちリボタンパク質を溶解しないものが 好ましく、 例えばボリォキシエチレンアルキルエーテル、 ボリォキシエチレンァ ルキルフヱニルエーテル、 ボリォキシエチレン—ポリオキシプロピレン縮合物、 ボリォキシェチレンアルキルエーテル硫酸塩、 アルキルベンゼンスルホン酸塩等 が挙げられる。 これらのうち、 ポリオキシエチレンアルキルエーテルとしてはポ リオキシエチレンセチルエーテル （H L B 1 4 ) (市販品としてはエマルゲ ン 2 2 0 (花王社製） 等） が；ボリォキシエチレンアルキルフエ二ルェ一テルと してはボリォキシエチレンノニルフエニルエーテル （H L B 1 5 ) (市販品とし てはェマルゲン 9 1 3 (花王社製） 等） が；ポリオキシエチレン-ポリオキシプ ロピレン縮合物としては、 市販品としてプル口ニック F 8 8 (旭電化社製） 等が；ボリォキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩としてはポリオキシエチレン ラウリルエーテル硫酸ナトリウム （市販品としてはエマール 2 0 C (花王社製） 等） が； CT/JP9S/00641 トリウムが好ましい。
これらの界面活性剤は、 1種又は 2種以上を組み合わせて用いることができ、 その使用量は特に制限されないが、 試料と混合した時の濃度が 0. 0 1〜5重量 %、 特に 0 . 0 5〜1重量％になるような範囲で用いるのが好ましい。
本発明においては、 まず HD L以外のリボタンパク質と複合体を形成する物質 及び界面活性剤を検体に添加するが、 その際には、 これらの物質を混合して同一 の試薬として添加しても、 またそれぞれ別個の試薬として添加してもよい。 次に、 このように H D L以外のリボタンパク質と複合体を形成する物質及び界 面活性剤を添加した検体を、 直接コレステロールの測定に付す。 すなわち、 遠心 分離などの前処理を行う必要はない。
コレステロ一ルの測定方法としては、 公知の酵素的測定法のいずれをも用いる ことができ、 例えば酵素試薬としてコレステロールエステラーゼ及びコレステロ ールォキシダーゼを組み合わせて用いる方法、 コレステロールエステラーゼ及び コレステロールデヒドロゲナ一ゼを組み合わせて用いる方法等が挙げられる。 こ れらのうち、 コレステロールエステラーゼ及びコレステロールォキシダ一ゼを組 み合わせて用いる方法が好ましい。
酵素試薬を添加した後、 一定時間のシグナル量を測定することにより、 測定対 象であるコレステロール濃度を求めることができ、 更に分析の正確度を高める目 的で、 酵素試薬を添加した後、 定まった 2点の時間におけるシグナル量を比較す ることによつても （2 point法） 、 コレステロールの濃度を求めることができる。 また、 これらの酵素試薬等を添加した後、 最終的にコレステロールを検出する 方法は特に制限されず、 例えばパーォキシダーゼと色原体を更に組み合わせて行 う吸光度分析、 補酵素や過酸化水素を直接検出する方法等が挙げられる。
実施例
次に、 実施例を挙げて本発明を更に説明するが、 本発明はこれら実施例に限定 されるものではない。
実施例 1
リボタンパク質を含む血清検体 N o . l〜N o . 1 0について、 本発明方法及 び従来の沈殿法により、 HD L中のコレステロールを定量し、 これらの測定値を 比較した。 結果を表 1に示す。
すなわち、 検体 4〃 に、 リンタングステン酸ナトリウム 0. 2%、 塩化マグ ネシゥム 1 0 Οπι及びボリォキシエチレン—ポリオキシプロピレン縮合物 （プル 口ニック F— 68、 旭電化社製） 0. 5%を含む試薬 300 を加え、 次にコ レステロールエステラーゼ 0.
Figure imgf000007_0001
コレステロールォキシダーゼ 0. 2U Zm パーォキシダーゼ 0. 3 U/ 、 N, N—ジメチルメタ トルイジン 0. 04%、 4ーァミノアンチピリン 0. 005 %及び0. l ^Tr i t on X- 1 00を含むコレステロール測定試薬 1 00〃 を加えた。 その後、 545 nmにおける吸光度の差を測定することにより、 HDL中のコレステロ一ル濃度を 求めた。 なお、 以上の操作は、 日立 7 1 50型自動分析装置を用いて行った。
—方、 沈殿法により HDL中のコレステロールを測定するには、 デキストラン 硫酸 0. 3%及び塩化マグネシウム 2%を含む水溶液 0. 2m£を、 検体 0. 2m£ と混和し、 300 Orpmで 1 0分間遠心分離を行った。 この上淸 50 ^を採取 し、 前記と同様のコレステロール測定試薬 と混合し、 37°Cで 1 0分間イン キュペートした後、 545mnにおける吸光度を測定し、 HDL中のコレステロ一 ル濃度を求めた。
表 1
Figure imgf000007_0002
表 1の結果より、 本発明方法は簡便な操作であるにもかかわらず、 従来の沈殿 法と同程度の測定値が得られた。
実施例 2
リボタンパク質を含む検体 No. 1 l〜No. 20について、 本発明方法及び 従来の沈殿法により、 HDL中のコレステロールを定量し、 これらの測定値を比 較した。 結果を表 2に示す。
すなわち、 検体 4 に、 リンタングステン酸ナトリウム 0. 2%、 デキスト ラン硫酸 1. 8 gZ£、 塩化マグネシウム 1 0 OmM及びポリオキシエチレンーポ リオキシプロピレン縮合物 （ブル口ニック F— 6 8、 旭電化社製） 0. 2%を含 む試薬 3 0 0〃^を加え、 次に実施例 1と同様のコレステロール測定試薬 1 0 0 ^を加えた。 以下、 実施例 1と同様にして、 HDL中のコレステロール濃度を 求めた。
また、 沈殿法についても実施例 1と同様にして測定した。
表 2
Figure imgf000008_0001
表 2の結果より、 本発明方法は少ない試料を用い、 簡便な操作で行うことがで きるにもかかわらず、 従来の沈殿法と同程度の測定値が得られた。
産業上の利用可能性
本発明によれば、 遠心分離などの前処理の必要がなく、 簡便な操作で効率良く HDL中のコレステロールを定量することができる。 また、 少ない試料で、 簡便 な操作により、 特異的な測定が可能であるため、 種々の自動分折装置に適用する ことができ、 臨床検査の領域においても極めて有用である。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . リポタンパク質を含む検体に、 高比重リボタンパク質以外のリボタンパク質 と複合体を形成する物質及び界面活性剤を添加した後、 酵素的測定法によりコレ ステロールを測定することを特徴とする高比重リポタンパク質中のコレステロ一 ルの定量方法。
2 . 高比重リボタンパク質以外のリボタンパク質と複合体を形成する物質及び界 面活性剤を添加した検体を、 直接コレステロールの測定に付す請求項 1記載の高 比重リボタンパク質中のコレステロールの定量方法。
3 . 高比重リボタンパク質以^^のリボタンパク質と複合体を形成する物質力 \ ポ リア二オン、 2価金厲イオン、 水溶性高分子化合物又は高比重リボタンパク質以 外のリボタンパク質に対する抗体である請求項 1又は 2記載の高比重リボタンパ ク質中のコレステロールの定量方法。
4 . 界面活性剤が、 リポタンパク質を溶解しないものである請求項 1〜3のいず れか 1項記載の高比重リボタンパク質中のコレステロールの定量方法。
5 . コレステロールの測定を、 コレステロールエステラーゼ及びコレステロール ォキシダーゼを組み合わせて行う請求項 1〜4のいずれか 1項記載の高比重リボ 夕ンパク質中のコレステロールの定量方法。
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DK95913411T DK0753583T3 (da) 1995-01-31 1995-04-03 Fremgangsmåde til kvantitativ analyse af cholesterol
US08/704,681 US5773304A (en) 1995-01-31 1995-04-03 Method for quantitatively determining cholesterol
MX9604514A MX9604514A (es) 1995-01-31 1995-04-03 Metodo para determinar cuantitativamente colesterol.
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Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5962340A (en) * 1994-11-02 1999-10-05 Wako Pure Chemical Industries Ltd. Homogeneous immunoassay method utilizing 5-300 mM magnesium
ES2165947T3 (es) 1995-07-21 2002-04-01 Wako Pure Chem Ind Ltd Metodo para medir la cantidad de un constituyente contenido en una lipoproteina especifica.
JP3193634B2 (ja) * 1996-05-29 2001-07-30 第一化学薬品株式会社 Ｌｄｌコレステロールの定量方法
ATE304608T1 (de) 1996-12-09 2005-09-15 Denka Seiken Kk Verfahren zur bestimmung des cholesteringehalts von high-density-lipoproteinen
CA2344055C (en) * 1998-09-18 2010-08-17 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for fractional determination of cholesterol in lipoproteins and a reagent therefor
US20020188315A1 (en) * 1998-12-31 2002-12-12 Guzman Jose F. Gel tourniquet cuff
EP1148142B1 (en) 1999-01-20 2008-02-27 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for quantitating triglyceride in lipoprotein
JP3441993B2 (ja) * 1999-01-27 2003-09-02 松下電器産業株式会社 コレステロールセンサ
CA2366663A1 (en) * 1999-03-24 2000-09-28 Mitsuaki Yamamoto Method for quantitating cholesterol
CN1167809C (zh) 1999-06-21 2004-09-22 第一化学药品株式会社 以游离型胆固醇为底物的酶的反应促进物质
JP3686326B2 (ja) 2000-11-08 2005-08-24 アークレイ株式会社 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片
MXPA03004206A (es) 2000-11-14 2003-09-22 Daiichi Pure Chemicals Co Ltd Metodo de ensayo de lipido y reactivo para su uso en el mismo.
US6898728B2 (en) * 2001-09-25 2005-05-24 Sun Microsystems, Inc. System domain targeted, configurable interconnection
ATE384135T1 (de) 2002-01-30 2008-02-15 Denka Seiken Kk Verfahren zur quantifizierung von cholesterin in hd-(high density)-lipoprotein und reagenszusammensetzungen
EP1555326B1 (en) * 2002-10-16 2009-11-25 Kyowa Medex Co., Ltd. Method and reagent for measuring cholesterol in high density lipoproteins
AU2003301324A1 (en) * 2002-10-16 2004-05-04 Kyowa Medex Co., Ltd. Method and reagent for measuring cholesterol in high-density lipoproteins
US20050032141A1 (en) * 2003-07-17 2005-02-10 Dimagno Theodore John Dry analytical element for high-density lipoprotein cholesterol quantification
US7435577B2 (en) * 2004-02-03 2008-10-14 Polymer Technology Systems, Inc. Direct measurement of chlolesterol from low density lipoprotein with test strip
US7625721B2 (en) 2004-02-03 2009-12-01 Polymer Technology Systems, Inc. Non-precipitating bodily fluid analysis system
CN1918303A (zh) * 2004-04-15 2007-02-21 协和梅迪克斯株式会社 高密度脂蛋白中胆甾醇的测定方法
WO2006033733A1 (en) * 2004-08-17 2006-03-30 Polymer Technology Systems, Inc. Bodily fluid analysis system
US20060062690A1 (en) 2004-08-17 2006-03-23 Polymer Technology Systems, Inc. Apparatus and method of manufacturing bodily fluid test strip
US8119360B2 (en) * 2005-02-14 2012-02-21 Kyowa Medex Co., Ltd. Method, reagent and kit for determination of cholesterol in remnant-like particles (RLP)
TWI372783B (en) * 2005-04-27 2012-09-21 Kyowa Medex Co Ltd A process for measuring the cholesterol in high density lipoprotein
CN100365409C (zh) * 2005-06-01 2008-01-30 王贤理 一种测定低密度脂蛋白胆固醇的试剂及制备方法
WO2007007392A1 (ja) 2005-07-11 2007-01-18 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 新規ポリマー及びこれを用いたコレステロール測定法
JP4884012B2 (ja) * 2006-01-25 2012-02-22 シスメックス株式会社 高密度リポタンパク質中コレステロール測定試薬キット及び測定方法
GB0609493D0 (en) * 2006-05-12 2006-06-21 Oxford Biosensors Ltd Cholesterol sensor
GB0609494D0 (en) * 2006-05-12 2006-06-21 Oxford Biosensors Ltd HDL cholesterol sensor using specific surfactant
AU2008261868B2 (en) * 2007-06-08 2014-03-13 Quest Diagnostics Investments Llc Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility
US8247235B2 (en) 2007-06-08 2012-08-21 Quest Diagnostics Investments Incorporated Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility
US9354200B1 (en) 2008-08-07 2016-05-31 Quest Diagnostics Investments Incorporated Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer
US20120107850A1 (en) * 2009-07-15 2012-05-03 Panasonic Corporation Analysis reagent and analysis device having the analysis reagent carried therein
JP5813284B2 (ja) 2009-10-26 2015-11-17 デンカ生研株式会社 ＡｐｏＥ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＨＤＬ中コレステロールの測定方法
WO2012011563A1 (ja) * 2010-07-23 2012-01-26 デンカ生研株式会社 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
JP5671029B2 (ja) * 2010-07-23 2015-02-18 デンカ生研株式会社 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
US9250211B2 (en) 2010-12-30 2016-02-02 Quest Diagnostics Investments Incorporated Magnetic separation of lipoproteins using dextran sulfate
US9080201B2 (en) 2011-03-16 2015-07-14 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring cholesterol in HDL subfraction, and reagents and kit therefor
CN110042146B (zh) 2011-11-11 2023-09-01 雅培快速诊断国际无限公司 血样本的化验方法
JP6054051B2 (ja) 2012-04-11 2016-12-27 デンカ生研株式会社 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロール（−ｃ）の亜分画定量方法
EP2891718B1 (en) 2012-08-31 2019-01-30 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring cholesterol in high-density lipoprotein
ES2765475T3 (es) * 2014-08-12 2020-06-09 Shino Test Corp Proceso de producción de una solución de sustrato para medir la actividad lipasa y método de simplificación de la producción
CN105137099A (zh) * 2015-09-08 2015-12-09 长春理工大学 一种用次血红素六肽测定血清总胆固醇方法
CN120118970A (zh) * 2023-12-08 2025-06-10 南京晶捷生物科技有限公司 总胆固醇检测复合酶液、检测试纸和检测系统

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06242110A (ja) * 1993-02-17 1994-09-02 Internatl Reagents Corp リポ蛋白分画中の成分の定量方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2128670B2 (de) * 1971-06-09 1977-06-30 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Immunologische isoenzym-bestimmungsmethode
CH582884A5 (ja) * 1973-12-10 1976-12-15 Hoffmann La Roche
US4226713A (en) * 1978-04-24 1980-10-07 Goldberg Jack M Diagnostic agents
US4215993A (en) * 1978-12-04 1980-08-05 Data Medical Associates, Inc. Precipitating reagent and method for isolation and determination of high density lipoproteins in human serum
US4210557A (en) * 1978-12-15 1980-07-01 Beckman Instruments, Inc. Non-high density lipoprotein precipitant
FR2513766B1 (fr) * 1981-09-28 1985-09-13 Biomerieux Sa Procedes et reactifs de separation selective des lipoproteines de faible densite ldl et de quantification de leurs composants
US4946796A (en) * 1982-01-05 1990-08-07 International Institute Of Cellular & Molecular Pathology Method of immunoassay
DE3338836A1 (de) * 1983-10-26 1985-05-09 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur bestimmung der low density lipoproteine (ldl) und reagenz zu seiner durchfuehrung
EP0229767B1 (en) * 1985-03-18 1990-09-26 Royal Free Hospital School Of Medicine Improvements relating to the detection of viruses and antibodies
JPS6242110A (ja) * 1985-08-20 1987-02-24 Fujitsu Ltd 露光装置
DE3636851A1 (de) * 1986-10-29 1988-05-11 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung des cholesterins der hdl-fraktion
US5215886A (en) * 1987-06-22 1993-06-01 Patel P Jivan HDL determination in whole blood
US4900662A (en) * 1987-07-21 1990-02-13 International Immunoassay Laboratories, Inc. CK-MM myocardial infarction immunoassay
US5030555A (en) * 1988-09-12 1991-07-09 University Of Florida Membrane-strip reagent serodiagnostic apparatus and method
DE3929032C2 (de) * 1989-09-01 1998-09-03 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Bestimmung von HDL-Cholesterin mittels eines Schnelldiagnostikums mit integriertem Fraktionierschritt
US5403745A (en) * 1990-04-27 1995-04-04 Genzyme Corporation Determination of analytes in biological fluids in the presence of substances interfering with assays therefor
US5286626A (en) * 1991-12-13 1994-02-15 Actimed Laboratories, Inc. Process and apparatus for direct determination of low density lipoprotein

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06242110A (ja) * 1993-02-17 1994-09-02 Internatl Reagents Corp リポ蛋白分画中の成分の定量方法

Also Published As

Publication number Publication date
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GR3035274T3 (en) 2001-04-30
CN1072724C (zh) 2001-10-10

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