WO1996037507A1 - L-aspartyl-l-thienylalaninmethylester, verfahren zu deren herstellung und verwendung als süssstoff - Google Patents

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WO1996037507A1
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Christian Noe
Antje Weigand-Becker
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid

Definitions

  • Aspartame is replaced by a thienylalanine group and has an increased or at least the same sweetness compared to aspartame.
  • the present invention accordingly relates to L-aspartyl-L-thienylalanine methyl ester of the formula
  • RH or CH can be 3 .
  • a in the formula I thus denotes a radical of the formula Ila or Ilb which can optionally be substituted by a methyl radical.
  • Examples include 2'-thienyl, 3'-thienyl, 2 '- (5' -methyl) thienyl, 2 '- (4' -methyl) thienyl or 3 '- (5' -methyl) thienyl.
  • X is preferably a 2'-thienyl, 3 'thienyl or 2' - (5 'methyl) thienyl radical.
  • connections can be made chemically or enzymatically. Conventional chemical methods are preferably used. For example, L-aspartic acid, the ⁇ -amino group and the ⁇ -carboxyl group of which are protected, is converted into a reactive derivative by activation of the ⁇ -carboxyl group, which is condensed with the hydrochloride of the corresponding thienylalanine compound, whereupon the protective groups are split off after the condensation he follows.
  • Preferred protecting groups are, for example, the benzyloxycarbonyl group (Z) or the tert for the amino function. Butyloxycarbonyl distr (Boc), and for the ß-carboxyl group the tert-butyl group (t-Bu).
  • the two protective groups can then be split off in one step by acidolysis (HBr / CH 3 COOH or HF).
  • the ⁇ -carboxyl group can also be activated by a method known from the prior art, for example by the azide, the mixed anhydride, the active ester or the carbodiimide method.
  • the .alpha.-carboxyl group of L-aspartic acid, the .alpha.-amino group and .beta.-carboxyl group are protected, for example the .beta.-tert.-butyl ester of .beta.-N-benzyloxycarbonyl-aspartic acid.
  • activated for example by reaction with trichlorophenol in the presence of dicyclohexylcarbodiimide (DCC).
  • DCC dicyclohexylcarbodiimide
  • Suitable solvents are, for example, ethyl acetate.
  • the mixture is then heated to about 15 to 30 ° C., stirred for a further 5 to 30 minutes, and the precipitated urea is filtered off, several times
  • (S) -N-Benzyloxycarbonylaspartic acid- ⁇ -tert-butyl ester can, for example, analogously to E. Wünsch, A. Zwick, Z.physiol. Chem. 328 (1962) 235.
  • the coupling with the hydrochloride of the corresponding thienylalanine compound then takes place in the presence of an acid scavenger, such as triethylamine, pyridine and the like.
  • the product obtained in the previous step is preferably dissolved in a suitable, anhydrous solvent, such as DMF, and stirred at +5 to -10 ° C. in the presence of the acid scavenger with the hydrochloride compound for several days, preferably 2 to 5 days.
  • a suitable, anhydrous solvent such as DMF
  • the coupling product is preferably isolated by extraction, for example with ether and ice water, drying the organic phase, for example with sodium sulfate, magnesium sulfate and distilling off the solvent. Then again flashing over silica gel.
  • the hydrochloride of the (S) -3- (2 '-thienyl) alanine methyl ester is, for example, from J. Dünn. J. biol. Chem. 234 (1959), p. 802, (S) -3- (3 '-thienyl) alanine is described, for example, in K. Dittmer et al., J. Am. Chem. Soc. 71 (1949), p. 1201. This is done after the coupling
  • Deprotection for example by adding HBr and glacial acetic acid, followed by the desired end product in salt form can be isolated.
  • the cleavage takes place at a temperature of 15 to 30 ° C., preferably at room temperature, with dropwise addition of a solution of HBr in glacial acetic acid to an glacial acetic acid solution of the product obtained in the previous step and with stirring for 1 to 4 hours.
  • the hydrobromide compound is dissolved in water and a base, for example a basic ion exchanger such as Amberlite, is added and the mixture is stirred at 30 to 60 ° C. for 10 to 60 minutes.
  • a base for example a basic ion exchanger such as Amberlite
  • the solid is then filtered off, washed with water and the eluate and the washing solution are concentrated in vacuo to such an extent that the corresponding end product precipitates, which is then filtered off and dried.
  • the present invention accordingly furthermore relates to a process for the preparation of compounds of the formula
  • RH or CH can be 3 , which is characterized in that a compound of the formula
  • the compounds of the formula I according to the invention are distinguished by a sweetening power which is improved or the same size as in the prior art, even when small amounts are added, and are therefore suitable for use as an artificial sweetener.
  • Another object of the present invention is accordingly the use of compounds of the formula
  • RH or CH 3 can be as an artificial sweetener.
  • example 1 RH or CH 3 can be as an artificial sweetener.
  • reaction solution was then partitioned between 160 ml of ice water and 100 ml of ether, the aqueous phase was extracted several times with ether and the combined organic phases were washed with saturated sodium chloride solution.
  • the ether solution was dried with sodium sulfate and the solvent was distilled off.
  • the crude product thus obtained was flashed over 220 g of silica gel with petroleum ether: ether (gradient of 6: 4 from 1: 2).
  • IH, Th-H 5.90 (d; IH, CONH), 5.06 (s; 2H, OCH 2 ), 4.73 (m; IH, ⁇ -CH), 4.50 (m; IH, ⁇ -CH), 3.66 (s; 3H, OCH 3 ), 3.08 (m; 2H, -CH 2 -), 2.85 (dd; IH, CH from -CH 2 -), 2.50 (dd; IH, CH from -CH 2 -), 1.36 (s; 9H, CH 3).
  • C-NMR (CDCI 3 ): ⁇ 171.26 (s; CO), 171.07 (s; CO), 170.19 (s; CO), 155.89 (s; CONH), 136.01 (s; CH), 135.69 (s; C-3-Th), 128.49 (d; CH), 128.22 (d; CH), 128.17 (d; CH), 127.07 (d; CH), 125.86 (d; CH), 122.89 (d; CH), 81.76 (s; OC quart ), 67.15 (t; OCH 2 ), 52.88 (q; OCH 3 ), 52.25 (d; ⁇ -CH), 50.97 (d; ⁇ -CH), 37.15 (t; -CH 2 ), 32.12 (t; -CH 2 -), 27.93 (q; CH 3 ).
  • the activated Amberlite was stirred with a solution of 3.5 g (9.20 mmol) 9 in 50 ml water for 30 min at 45 ° C. The solid was filtered off, washed with 30 ml of water, digested again with 50 ml of water at 45 ° C. and the eluate and the washing solutions were greatly concentrated in vacuo. When cooling, colorless needles precipitated out, which were filtered off and dried.
  • C-NMR (D 2 0): ⁇ 178.46 (s; CO), 175.68 (s; CO), 172.03 (s; CO), 139.08 (s; C-3-Th), 130.92 (d; CH) , 129.20 (d; CH), 125.91 (d; CH), 56.55 (q; OCH 3 ), 55.69 (d; ⁇ -CH), 53.14 (d; ⁇ -CH), 39.57 (t; -CH 2 -) , 33.50 (t; -CH 2 -).
  • the product was not stable even when stored in the refrigerator and should therefore be implemented as soon as possible.
  • the aqueous phase was saturated with sodium chloride and extracted several times with ether.
  • the combined organic phases were dried with sodium sulfate and the solvent was evaporated off under a slight vacuum.
  • the product has a very strong tendency to polymerize and should therefore not be heated, isolated under an inert atmosphere if possible, or processed immediately.
  • reaction solution was extracted with ethyl acetate until exhaustion, the combined organic phases were washed with saturated sodium chloride solution and washed with
  • the aqueous phase was evaporated to dryness, taken up in 70 ml of water and added to 250 ml of activated DOWEX 50 ion exchanger. The suspension is stirred for 30 min at room temperature, the ion exchanger is filtered off and washed with water until the eluate has a neutral reaction. The ion exchanger was then digested several times with 1 M ammonia solution until the filtrate had a negative ninhydrin sample. The combined ammoniacal filtrates were evaporated to dryness in vacuo and the remaining (S) -amino acid was dried in vacuo.
  • reaction solution was partitioned between 80 ml of ice water and 50 ml of ether, the aqueous phase was extracted several times with ether and the combined organic phases were washed with saturated sodium chloride solution.
  • the ether solution was dried with sodium sulfate and the solvent was distilled off.
  • the crude product thus obtained was flashed over 220 g of silica gel with petroleum ether: ether (gradient from 6: 4 to 1: 2).
  • C-NMR (CDC1 3 ): ⁇ 171.02 (s; CO), 170.91 (s; CO), 170.25 (s; CO), 155.95 (s; CONH), 139.31 (s; C-2-Th), 136.09 (s; Cl-Ph), 134.59 (s; C-5-Th), 128.55 (d; CH), 128.22 (d; CH), 128.05 (d; CH), 126.93 (d; CH), 125.06 ( d; CH), 81.80 (s; OC quart ), 67.20 (t; OCH 2 ), 53.29 (q; OCH 3 ), 52.42 (d; ⁇ -CH), 51.04 (d; ⁇ -CH), 37.36 (t ? -CH 2 -), 32.09 (t; -CH 2 -), 27.98 (q? CH 3 ), 15.23 (q? CH 3 ).
  • C NMR (D 2 0): ⁇ 175.21 (s; CO), 175.01 (s; CO), 171.04 (s; CO), 142.88 (s; C-2-Th), 138.30 (s; C- 5-Th), 129.71 (d; CH), 127.84 (d; CH), 57.14 (d; ⁇ -CH), 55.79 (q; OCH 3 ), 52.00 (d; ⁇ -CH), 37.48 (t; - CH 2 -), 33.33 (t; -CH 2 -), 16.96 (q; CH 3 ).
  • the activated Amberlite was with a solution of 2.80 g (7.10 mmol) 17 in 50 ml of water for 30 min stirred at 45 ° C. The solid was filtered off, washed with 30 ml of water and the eluate and the washing solutions were greatly concentrated in vacuo. When cooling, colorless needles precipitated out, which were filtered off and dried.
  • C NMR (D 2 0): ⁇ 178.49 (s; CO), 175.21 (s? CO), 172.09 (s; CO), 142.87 (s; C-2-Th), 138.37 (s; C- 5-Th), 129.66 (d; CH), 127.81 (d; CH), 57.03 (d; ⁇ -CH), 55.74 (q; OCH 3 ), 53.21 (d; ⁇ -CH), 39.62 (t; - CH 2 -), 33.45 (t; -CH 2 -), 16.90 (q; CH 3 ).

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Abstract

L-Aspartyl-L-thienylalaninmethylester der Formel (I), in der A einen Rest der Formel (IIa) oder (IIb) bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann, ein Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Süssstoff.

Description

L-ASPARTYL-L-THIENYLALANINMETHYLESTER, VERFAHREN ZU DEREN HERSTELLUNG UND VERWENDUNG ALS SÜSSSTOFF
Künstliche Süssstoffe finden in einer Vielzahl von Nahrungsmitteln Anwendung, wobei Saccharin, Cyclamat, Acesulfam-K und Aspartam zu den bekanntesten verwendeten künstlichen Süssungsmitteln zählen. Der Einsatz von Saccharin und Cyclamat gab jedoch immer wieder Anlass zu Diskussionen über ihre gesundheitliche Unbedenklichkeit und führte so zur Entwicklung neuer Süssstoffe mit hoher Süsskraft. So finden in jüngster Zeit die Süssstoffe Aspartam und Acesulfam-K zunehmende Verbreitung als Lebensmittel¬ zusatzstoff, in deren Folge zahlreiche Untersuchungen über ihre Eigenschaften und Einsatzmöglichkeiten durchgeführt wurden. Da Acesulfam-K in seinen geschmacklichen Qualitäten an Aspartam nicht heranreicht, ist Aspartam das bekanntere und häufiger eingesetzte künstliche Süssungsmittel. Da jedoch manche Personen die Einnahme von Aspartam nicht vertragen, etwa bei Stoffwechselerkrankungen die im Zusammenhang mit Phenylalanin stehen, liegt die eigentliche Problemlösung auf dem Gebiet der künstlichen Süssstoffe noch immer auf der Entwicklung neuer Produkte, die gut verträglich sind und eine hohe Süsskraft aufweisen. Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es demnach, Verbindungen zu finden, die die Nachteile der bisher bekannten Süssstoffe nicht aufweisen und die eine gegenüber dem Stand der Technik gleich grosse oder erhöhte Süsskraft aufweisen. Aus dem Stand der Technik, etwa aus J. Med. Chem. 1990, 33, Seiten 1676 - 1682, sind beispielsweise Verbindungen bekannt, bei welchen die Phenylalaningruppe von Aspartam ersetzt wurde. Es wurden dabei 8 L-Aspartyl-dipeptide, die von heterocyclischen Glycinestern abgeleitet wurden hergestellt und'unte sucht. Dabei wurde jedoch festgestellt, dass die ß-Thienylalaninfenchyl- esterverbindungen (Verbindung 14) keine Süsskraft besitzen.
Unerwarteterweise wurden nun Verbindungen gefunden, bei welchen die Phenylalaningruppe des
Aspartams durch eine Thienylalaningruppe ersetzt ist und die eine gegenüber Aspartam erhöhte oder zumindest gleich grosse Süsskraft aufweisen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind demnach L-Aspartyl-L-thienylalaninmethylester der Formel
Figure imgf000004_0001
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000004_0002
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann.
A bedeutet somit in der Formel I einen Rest der Formel Ila oder Ilb der gegebenenfalls durch einen Methylrest substituiert sein kann.
Beispiele dafür sind 2'-Thienyl, 3'-Thienyl, 2 '-(5 '-Methyl)thienyl, 2 '-(4 '-Methyl)thienyl oder 3 '-(5 '-Methyl)thienyl. Bevorzugt bedeutet X einen 2'-Thienyl-, 3 '-Thienyl- oder 2 '-(5 '-Methyl) thienylrest.
Die Herstellung der erfindungsgemässen Verbindungen kann auf chemischem oder enzymatischem Weg erfolgen. Bevorzugt werden konventionelle chemische Verfahren angewandt. So wird beispielsweise L-Asparaginsäure, deren α-Aminogruppe und ß-Carboxylgruppe geschützt sind, durch Aktivierung der α-Carboxylgruppe in ein reaktives Derivat überführt, das mit dem Hydrochlorid der entsprechenden Thienylalaninverbindung kondensiert wird, worauf im Anschluss an die Kondensation die Abspaltung der Schutzgruppen erfolgt.
Bevorzugte Schutzgruppen sind dabei beispielsweise für die Amino-Funktion die Benzyloxycarbonylgruppe (Z) oder die tert. Butyloxycarbonylgruppe (Boc), sowie für die ß-Carboxylgruppe der tert.-Butylrest (t-Bu). Die
Abspaltung der beiden Schutzgruppen kann dann in einem Schritt acidolytisch (HBr/CH3COOH oder HF) erfolgen.
Anstelle der oben angeführten Schutzgruppen bzw. Abspaltungsmethoden können jedoch auch andere aus dem Stand der Technik der Peptidsynthesen bekannte Schutzgruppen oder Abspaltungsmethoden eingesetzt werden.
Die Aktivierung der α-Carboxylgruppe kann ebenfalls nach einer aus dem Stand der Technik bekannten Methoden, beispielsweise nach der Azid-, der gemischten Anhydrid-, der Aktivester- oder der Carbodiimidmethode erfolgen.
Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird somit zuerst die α-Carboxylgruppe der L-Asparaginsäure, deren α-Aminogruppe und ß-Carboxylgruppe geschützt sind, beispielsweise die α-Carboxylgruppe von (S)-N-Benzyloxycarbonyl- asparaginsäure-ß-tert.butylester, aktiviert, etwa durch Reaktion mit Trichlorphenol in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid (DCC). Dazu wird eine Lösung der Asparaginsäure und Trichlorphenol, das bevorzugt in leichtem Überschuss eingesetzt wird, bei +10 bis -10°C mit DCC versetzt und 2 bis 10 Stunden gerührt. Als Lösungsmittel eignet sich dabei beispielsweise Ethylacetat. Anschließend wird auf etwa 15 bis 30°C erwärmt, noch 5 bis 30 Minuten gerührt, der ausgefallene Harnstoff abfiltriert, mehrmals mit
Ethylacetat gewaschen und das Filtrat im Vakuum vom Lösungsmittel befreit. Das zurückbleibende Öl wird sodann über Kieselgel mit einem Petrolether/ Ether-Gemisch geflasht. Das Edukt für diesen Reaktionsschritt,
(S)-N-Benzyloxycarbonylasparaginsäure-ß-tert.butylester kann beispielsweise analog E. Wünsch, A. Zwick, Z.physiol. Chem. 328 (1962) 235 hergestellt werden. Anschliessend erfolgt die Kupplung mit dem Hydrochlorid der entsprechenden Thienylalaninverbindung in Gegenwart eines Säurefängers, wie etwa Triethylamin, Pyridin u.a.
Bevorzugt wird dabei das im vorangegangenen Schritt erhaltene Produkt in einem geeigneten, wasserfreien Lösungsmittel, wie etwa DMF, gelöst und bei +5 bis -10°C in Gegenwart des Säurefängers mit der Hydrochloridverbindung noch mehrere Tage, bevorzugt 2 bis 5 Tage, gerührt.
Die Isolierung des Kupplungsproduktes erfolgt bevorzugt durch Extraktion beispielsweise mit Ether und Eiswasser, Trocknung der organischen Phase, etwa mit Natriumsulfat, Magnesiumsulfat und Abdestillieren des Lösungsmittels. Anschliessend erfolgt wiederum das Flashen über Kieselgel. Das Hydrochlorid des (S)-3-(2 '-Thienyl)alaninmethylester ist beispielsweise aus J. Dünn. J. biol. Chem. 234 (1959), S. 802 bekannt, (S)-3-(3 '-Thienyl)alanin ist beispielsweise in K. Dittmer et al., J. Am. Chem. soc. 71 (1949), S. 1201 beschrieben. Im Anschluss an die Kupplung erfolgt die
Schutzgruppenabspaltung etwa durch Zusatz von HBr und Eisessig, worauf das gewünschte Endprodukt in Salzform isoliert werden kann.
Die Abspaltung erfolgt dabei bei einer Temperatur von 15 bis 30°C, bevorzugt bei Raum¬ temperatur, unter tropfenweiser Zugabe einer Lösung von HBr in Eisessig zu einer Eisessig-Lösung des im vorangegangenen Schrittes erhaltenen Produktes und unter 1 bis 4-stündigem Rühren.
Anschliessend werden die Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in Ether oder Dioxan aufgenommen und das ausfallende Produkt abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Um das gewünschte Endprodukt aus dem so erhaltenen Hydrobromid zu isolieren, wird die Hydrobromidverbindung in Wasser gelöst und mit einer Base, beispielsweise mit einem basischen Ionentauscher, wie etwa mit Amberlite, versetzt und 10 bis 60 Minuten bei 30 bis 60°C gerührt. Der Feststoff wird dann abfiltriert, mit Wasser gewaschen und das Eluat, sowie die Waschlösung im Vakuum so stark eingeengt, dass das entsprechende Endprodukt ausfällt, das sodann abfiltriert und getrocknet wird.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel
Figure imgf000007_0001
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000008_0001
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine Verbindung der Formel
B
in der B eine Aminoschutzgruppe und Y eine Carboxyschutzgruppe bedeutet, in Gegenwart eines Säurefängers mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000008_0003
in der A obige Bedeutung hat, zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000008_0004
CO2CH3 umgesetzt wird, in der B und Y obige Bedeutung haben, worauf nach Abspaltung ender Schutzgruppen auf acidolytischem Weg, die Isolierung der entsprechenden Verbindung der Formel I aus dem so gewonnenen Salz mittels einer Base erfolgt.
Die erfindungsgemässen Verbindungen der Formel I zeichnen sich durch eine gegenüber dem Stand der Technik verbesserte oder gleichgrosse Süsskraft selbst bei Zugabe geringer Mengen aus und eignen sich deshalb zur Verwendung als künstlicher Süssstoff.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demnach die Verwendung von Verbindungen der Formel
Figure imgf000009_0001
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000009_0002
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann, als künstlicher Süssstoff. Beispiel 1
Herstellung von α-Aspartyl-L-(2-t__ienyl)alanin,
Methylester (1)
1.1. (S)-N-Benzyloxycarbonyl-asparaginsäure-ß- tert.-butyl-α-2 ,4,5-t ichlorphenylester (4)
Figure imgf000010_0001
Eine Lösung von 7.5 g (23.2 mmol) (S)-N-Benzyloxycarbonyl-asparaginsäure-ß-tert.butyl¬ ester und 5.05 g (25.6 mmol) Trichlorphenol in 60 ml Ethylacetat wurde bei 0 °C mit 4.74 g (23.3 mmol) DCC versetzt und im Eisbad 4 h lang gerührt. Nach weiteren 15 min Rühren bei Raumtemperatur wurde der ausgefallene Harnstoff abfiltriert, mehrmals mit Ethylacetat gewaschen und das Filtrat im Vakuum von Lösungsmittel befreit. Das zurückbleibende öl wurde über 260 g Kieselgel mit Petrolether (40 - 60 °C) /Ether (Gradient von 9:1 bis 7:3) geflasht.
Ausbeute :
8.3 g, (71%), farbloses Öl
Rf = 0.28 (Petrolether:Ether - 9:1)
[α]23 D= -6°, (c = 1.0, CH2C12)
^-H-NMR (CDC13): δ = 7.56 (s; 1H, CH) , 7.42 - 7.32 (m; 6H, C6H5, CH), 5.91 (d; 1H, NH) , 5.18 (s; 2H, OCH2), 4.92 (m; 1H, CH) , 3.14 (dd; 1H, CH von -CH2-) , 2.92 (dd? 1H, CH von -CH2-), 1.48 (s; 9H, CH3).
"C-NMR (CDC13): δ = 169.87 (s; COO) , 168.39 (s; COO) , 155.97 (s; CONH) , 145.44 (s; C) , 135.99 (s; C) , 131.55 (s; C), 130.87 (d; CH) , 128.56 (d; CH) , 128.29 (d; CH) , 128.13 (d; CH) , 125.86 (s; C) , 125.11 (d; CH) , 82.40 (s; OC), 67.36 (t; OCH2), 50.58 (d; CH) , 37.68 (t; -CH2-), 28.03 (g; CH3).
1.2. L-ß-ter .Butyl-N-carbobenzoxy-α-aspartyl-L- (2-thienyl)alanin; Methylester (5)
Figure imgf000011_0001
8.0 g (15.91 mmol) 4 werden in 50 ml wasserfreiem DMF gelöst und bei 0 °C mit 3.53 g (15.91 mmol) (S)-3-(2 '-Thienyl)-alanin, Methylester, Hydrochlorid und 2.20 ml (15.91 mmol) Triethylamin versetzt und 3 Tage bei 0 - 4°C gerührt. Die
Reaktionslösung wurde anschliessend Eiswasser und Ether verteilt, die wässrige Phase mehrmals mit Ether extrahiert, die vereinigten organischen Phasen mit Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel abdestilliert. Das so erhaltene Rohprodukt wurde über
220 g Kieselgel mit Petrolether:Ether (Gradient von 6:4 aus 1:2) geflasht. Ausbeute :
5.7 g (73 %), farbloser Feststoff, Smp: 56 - 57 °C Rf = 0.36 (Petrolether :Ether = 1:2), [α]25 D = + 41.5 (c = 0.89, CH2C12)
XH-NMR (CDC13): δ - 7.30 - 7.25 (m? 5H, C6H5), 7.07 (dd; IH, Th-H-3), 7.02 (bs; IH, CONH), 6.85 (dd; IH, Th-H-4), 6.78 (dd; IH, Th-H-5 ) , 5.90 (d; IH, CONH), 5.06 (s; 2H, OCH2), 4.77 (m; IH, CH) , 4.50 (m; IH, CH) , 3.67 (s; 3H, OCH3) , 3.28 (m; 2H, -CH2-) , 2.85 (dd; IH,
CH von -CH2-), 2.55 (dd; IH, CH von -CH2-), 1.36 (s; 9H, CH3).
13C-NMR (CDCI3): δ = 170.99 (s; CO) , 170.81 (s; CO) , 170.31 (s; CO) , 156.51 (s; CONH), 137.02 (s; C) , 136.08 (s; C), 128.06 (d; CH) , 128.23 (d; CH) , 128.06 (d; CH) , 127.07 (d; CH) , 126.99 (d; CH) , 124.86 (d; CH) , 81.82 (s; OC), 67.21 (t; OCH2), 53.35 (g; OCH3), 52.45 (d; CH), 51.09 (d; CH) , 37.28 (t; -CH2-) , 31.85 (t; -CH2-) , 27.99 (g; CH3).
C24H30N2O7S (490.58):
Ber.: C 58.76 H 6.16 N 5.71
Gef.: C 58.55 H 6.12 N 5.66
1.3. N-L-α-Aspartyl-L-(2-thienyl)alanin, Methylester, Hydrobromid (6)
Figure imgf000012_0001
- 11 -
Eine Lösung von 5.0 g (10.2 mmol) 5 in 20 ml Eisessig wurde bei Raumtemperatur tropfenweise mit 15 ml (61.2 mmol) einer 4.1 M (33 %) Lösung von HBr in Eisessig versetzt und 2 h gerührt. Die Lösungsmittel wurden im Wasser¬ strahlvakuum abdestilliert und der ölige Rückstand mit 100 ml Ether digeriert. Dabei fiel ein farbloses Kristallpulver aus, welches abfiltriert und im Vakuum getrocknet wurde.
Ausbeute :
3.6 g (93 %), farblose Nadeln, Smp: 45 - 46 °C
Rf = 0.30 (EtOAc:MeOH = 1:1), [α]2s D = - 1.97° (c =
1.17, H20)
- -NMR (D20): δ = 7.30 (dd; IH, Th-H-3), 6.98 (dd; IH, Th-H-4), 6.70 (dd; IH, Th-H-5), 4.72 (m; IH, CH) , 4.30 (m; IH, CH) , 3.72 (s; 3H, OCH3), 3.43 (dd; IH, CH von -CH2-), 3.33 (dd; IH, CH von -CH2-) , 2.97 (m; 2H, -CH2-), 1.36 (s; 9H, CH3).
"C-NMR (D20:d6-DMSO = 7:1): δ = 173.73 (s; COO), 169.68 (s; COO), 139.39 (s; C), 128.90 (d; CH) , 128.63 (d; CH), 126.87 (d; CH) , 55.91 (d; CH) , 54.53 (q; OCH3) , 50.67 (d; CH) , 36.27 (t; -CH2-), 31.95 (t; -CH2-)
C12H17BrN2OsS (381.25):
Ber.: C 37.81 H 4.49 N 7.35
Gef.: C 38.09 H 4.81 N 7.19 1.4. Herstellung von N-L-α-Aspartyl-L- (2-thienyl)alanin, Methylester (1)
Figure imgf000014_0001
20 ml stark basischer Ionenaustauscher
(Amberlite IRA-400) wurden über Nacht in gesättigter wässriger Natriumacetatlösung gerührt. Anschliessend wurde der Ionenaustauscher abfiltriert und mit Wasser neutral gewaschen. Der so aktivierte Amberlite wurde mit einer
Lösung von 3.1 g (8.10 mmol) 6 in 50 ml Wasser 30 min bei 45 °C gerührt. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit 30 ml Wasser gewaschen und das Eluat, sowie die Waschlösungen im Vakuum stark eingeengt. Beim Abkühlen fielen farblose Nadeln aus, welche abfiltriert und getrocknet wurden.
Ausbeute :
1.8 g (74 %), farbloses Nadeln, Smp: 223 - 225 °C
Rf= 0.405 (EtOAc:MeOH=l:l) , [α]23 D = + 43°, (c = 0.71,
HOAc)
^-N R (D20): δ *•*** 7.28 (dd; IH, Th-H-3) , 6.96 (dd; IH, Th-H-4), 6.88 (dd; IH, Th-H-5) , 4.69 (m; IH, CH) , 4.15 (m; IH, CH) , 3.69 (s? 3H, 0CH3), 3.40 (dd; IH, CH von -CH2-), 3.28 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.71 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.60 (dd, IH, CH von -CH2-). 13C-NMR (dg-DMSO): δ = 172.29 (s; CO) , 170.97 (s; CO) , 170.70 (s; CO), 138.44 (s; C) , 127.00 (d; CH) , 126.70 (d; CH), 124.92 (d; CH) , 53.70 (q; OCH3), 52.15 (d; CH), 50.48 (d; CH) , 37.41 (t; -CH2-) , 30.82 (t; -CH2-).
Figure imgf000015_0001
Ber.: C 47.99 H 5.37 N 9.21
Gef.: C 47.70 H 5.60 N 9.33
Beispiel 2
Herstellung von N-L-α-Aspartyl-L-(3-thienyl) alanin, Methyl es er (2)
2.1. (S )-3-( 3 '-Thienyl) -alanin, Methylester, Hydrochlorid (7)
Figure imgf000015_0002
Durch eine Suspension von 4.00 g (23.4 mmol) (S)-3-(3 '-Thienyl)-alanin in 150 ml wasserfreiem Methanol wurde bei Raumtemperatur 3 h ein starker Strom trockener Chlorwasserstoff geleitet.
Das Lösungsmittel wurde anschliessend bis zur Trockne abgedampft, der Rückstand mit 20 ml Methanol aufgenommen und mit Ether bis zur vollständigen Fällung versetzt. Das ausgefallene Produkt wurde abfiltriert und getrocknet.
Ausbeute :
4.6 g (89 %), bräunlicher Feststoff, Smp: 174 - 176 °C
Figure imgf000015_0003
^•H-NMR (D20): δ = 7.41 (dd; IH, Th-H-4), 7.22 (d; IH, Th-H-2), 6.93 (d; IH, Th-H-5), 4.35 (t; IH, α-CH), 3.77 (s; 3H, 0CH3), 3.25 (d; 2H, -CH2-).
"C-NMR (D20): δ = 172.6 (s; COO), 136.1 (s; C) , 130.6 130.1, 127.4 (d; C) , 56.2 (d; α-CH), 56.1 (q; OCH3), 32.5 (t? -CH2-).
2.2. L-ß-tert.Butyl-N-carbobenzoxy-α-aspartyl-L- (3-thienyl) alanin, Methylester (8)
NH
Figure imgf000016_0001
6.8 g (13.5 mmol) 4 wurden in 50 ml wasserfreiem DMF gelöst, bei 0 °C mit 3.00 g (13.5 mmol) 7 und 1.87 ml (13.5 mmol) Triethylamin versetzt und 3δbei 0 - 4°C gerührt.
Die Reaktionslösung wurde sodann zwischen 160 ml Eiswasser und 100 ml Ether verteilt, die wässrige Phase mehrmals mit Ether extrahiert und die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Die Etherlösung wurde mit Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel abdestilliert. Das so erhaltene Rohprodukt wurde über 220 g Kieselgel mit Petrolether:Ether (Gradient von 6:4 aus 1:2) geflasht.
Ausbeute :
5 .2 g ( 79 %) , farbloser Feststoff , Smp : 74 - 76 °C Rf= 0.364 (Petrolether : Ether=l : 2 ) , [ α] 25 D = + 31.2 ° ( C = 1 . 1 , CH2C12 )
XH-NMR (CDC13): δ = 7.30 - 7.25 (m; 5H, C6HS), 7.18 (m; IH, Th-H), 6.98 (m; IH, Th-H), 6.82 (m? IH, Th-H), 5.90 (d; IH, CONH), 5.06 (s; 2H, OCH2), 4.73 (m; IH, α-CH), 4.50 (m; IH, α-CH), 3.66 (s; 3H, OCH3), 3.08 (m; 2H, -CH2-), 2.85 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.50 (dd; IH, CH von -CH2-), 1.36 (s; 9H, CH3).
"C-NMR (CDCI3): δ = 171.26 (s; CO) , 171.07 (s; CO) , 170.19 (s; CO), 155.89 (s; CONH), 136.01 (s; CH) , 135.69 (s; C-3-Th) , 128.49 (d; CH) , 128.22 (d; CH) , 128.17 (d; CH) , 127.07 (d; CH) , 125.86 (d; CH) , 122.89 (d; CH), 81.76 (s; OCquart), 67.15 (t; OCH2), 52.88 (q; OCH3), 52.25 (d; α-CH), 50.97 (d; α-CH), 37.15 (t; -CH2), 32.12 (t; -CH2-), 27.93 (q; CH3).
2.3. N-L-α-Aspartyl-L-(3-thienyl)alanin, Methylester, Hydrobromid (9)
Figure imgf000017_0001
Eine Lösung von 5.0 g (10.2 mmol) 8 in 50 ml Eisessig wurde bei Raumtemperatur tropfenweise mit 15 ml (61.2 mmol) einer 4.1 M (33 %) Lösung von HBr in Eisessig versetzt und 2 h gerührt.
Die Lösungsmittel wurden anschliessend im Wasserstrahlvakuum abdestilliert und der ölige Rückstand mit 100 ml Ether digeriert. Dabei fiel ein farbloses Kristallpulver aus, welches abfiltriert und im Vakuum getrocknet wurde. Ausbeute :
3.7 g (95 %), farblose Nadeln, Smp: 82 - 84 °C
Rf = 0.371 (EtOAc:MeOH = 1:1), [α]2s D = +27° (c = 1.0,
HOAc)
XH-NMR (D20): δ = 7.39 (m; IH, Th-H), 7.18 (m; IH, Th-H), 6.98 (m; IH, Th-H), 4.74 (m; IH, α-CH), 4.28 (m; IH, α-CH), 3.70 (s; 3H, OCH3), 3.22 (dd; IH, CH von -CH2-), 3.15 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.95 (m; 2H, -CH2-).
"C-NMR (D20): δ = 172.13 (s; COO), 171.84 (s; COO), 167.63 (s; CON-H) , 137.30 (s; C-3-Th) , 127.55 (d; CH) , 125.87 (d; CH) , 122.56 (d; CH) , 54.43 (d; α-CH), 53.54 (q; OCH3), 49.79 (d; α-CH), 35.31 (t; -CH2-) , 31.21 (t; -CH2-).
C12H17BrN205S . 0.40 H20 (388.46):
Ber.: C 37.10 H 4.62 N 7.21 Gef.: C 37.15 H 4.70 N 7.08
2.4. N-L-α-Aspartyl-L-(3-thienyl)alanin, Methylester (2)
Figure imgf000018_0001
3
20 ml stark basischer Ionenaustauscher (Amberlite IRA-400) wurden über Nacht in gesättigter wässriger Natriumacetatlösung gerührt. Anschliessend wurde der Ionenaustauscher abfiltriert und mit Wasser neutral gewaschen.
Der so aktivierte Amberlite wurde mit einer Lösung von 3.5 g (9.20 mmol) 9 in 50 ml Wasser 30 min bei 45 °C gerührt. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit 30 ml Wasser gewaschen, nochmals bei 45 °C mit 50 ml Wasser digeriert und das Eluat, sowie die Waschlösungen im Vakuum stark eingeengt. Beim Abkühlen fielen farblose Nadeln aus, welche abfiltriert und getrocknet wurden.
Ausbeute :
2.3 g (83 %), farbloses Nadeln, 234 - 235 °C
Rf = 0.408 (EtOAc:MeOH = 1:1), [α]23 D =+30 °, (c = 1.0,
HOAc)
- -NMR (D20): δ = 7.39 (m; IH, Th-H), 7.17 (m; IH, Th-H), 7.00 (m; IH, Th-H), 4.70 (m; IH, α-CH), 4.16 (m; IH, α-CH), 3.70 (s; 3H, OCH), 3.20 (dd; IH, CH von -CH2-), 3.11 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.72 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.64 (dd, IH, CH von -CH2-).
"C-NMR (D20): δ = 178.46 (s; CO) , 175.68 (s; CO) , 172.03 (s; CO) , 139.08 (s; C-3-Th) , 130.92 (d; CH) , 129.20 (d; CH) , 125.91 (d; CH) , 56.55 (q; OCH3) , 55.69 (d; α-CH), 53.14 (d; α-CH), 39.57 (t; -CH2-) , 33.50 (t; -CH2-).
C12H16N205S . 0.70 H20 (312.95):
Ber.: C 46.06 H 5.60 N 8.95 Gef.: C 46.06 H 5.53 N 8.81
Beispiel 3
N-L-α-Aspartyl-( -[2-(5-methyl)- hienyl]alanin,
Methylester (3) 3.1. 2-Hydroxymethyl-5-methyl-thiophen (10)
Figure imgf000020_0001
Eine Lösung von 50 ml (456 mmol) 5-Methylthiophen-2-carbaldehyd in 350 ml Ethanol wurde unter Eiskühlung und Rühren portionsweise mit 13.2 g (347 mmol) Natriumborhydrid versetzt. Nach vollständiger Zugabe wurden noch weitere 2 h gerührt und die Reaktionslösung anschliessend auf eine Mischung von 400 g Eis und 200 ml gesättigter Ammonium¬ chloridlösung gegossen. Nach Beeendigung der Gasentwicklung wurde die Lösung im Vakuum von Ethanol befreit. Der wässrige Rückstand wurde mehrmals mit Ether extrahiert, die vereinigten etherischen Phasen mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert. Zurück blieb ein öliger Rückstand, welcher bei einem Druck von 20 mbar destilliert wurde. 1. Fraktion: 55 - 100 °C 0.3 g 2. Fraktion: 101 - 99 °C 50.0 g
Das Produkt war auch bei Lagerung im Kühlschrank nicht stabil und sollte daher baldmöglichst umgesetzt werden.
Ausbeute:
50.3 g (86 %) , farblose Flüssigkeit Rf = 0.512 (Petrolether:Ether = 1:1).
^-NMR (CDC13): δ = 6.81 (d; IH, CH) , 6.63 (d; IH, CH) , 4.74 (s; 2H, -CH2-), 2.50 (s; 3H, CH3), 1.75 (bs; IH, OH). 13C-NMR (CDCI3): δ = 141.70 (s; C) , 140.24 (s; C), 125.54 (d; C) , 124.82 (d; C) , 59.86 (t; CH2 ) , 15.39 (q; CH3).
3.2. 2-Bro_nmethyl-5-methyl-thiophen (11)
Figure imgf000021_0001
30 g (234 mmol) 10 in 300 ml wasserfreiem Ether wurden unter Eiskühlung mit einer Lösung von 149 g (550 mmol) Phosphortribromid in 350 ml wasserfreiem Ether innerhalb von 90 min versetzt. Nach 2 h Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionslösung auf 2 kg Eis gegossen und die organische Phase abgetrennt.
Die wässrige Phase wurde mit Natriumchlorid gesättigt und mehrmals mit Ether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im leichtem Vakuum abgedampft.
Ausbeute: 38 g (95 %) , braune Flüssigkeit.
Das Produkt neigt sehr stark zur Polymerisation und sollte daher nicht erwärmt, möglichst unter inerter Atmosphäre isoliert oder sofort weiterverarbeitet werden.
• -NMR (CDCI3): δ = 6.85 (d; IH, CH) , 6.52 (d; IH, CH) , 4.65 (s; 2H, -CH2-), 2.40 (s; 3H, CH3). 3.3. 2-(Acetylamino)-3-[2 '-(5'-methyl)- thienylmethyl]propandisäure, Diethylester (12)
Figure imgf000022_0001
Zu einer Lösung von 3.56 g (155 mmol) Natrium in 200 ml trockenem Ethanol wurde bei Raumtemperatur 33.6 g (155 mmol) Diethyl-acetamidomalonat gegeben und solange gerührt, bis eine klare Lösung entstanden ist. Anschliessend wurden 29.0 g (152 mmol) 11 hinzugefügt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abdestilliert, der Rückstand mit Ether/Wasser (3:1) aufgenommen und die wässrige Phase bis zur Erschöpfung mit Ether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und der Ether abdestilliert.
Rohausbeute: 50 g
Da das Produkt mit Thiophenmethanol und dessen Zersetzungsprodukt verunreinigt war, wurde der Rückstand über 500 g Kieselgel mit Petrolether : Ether = 1:1 geflasht.
Ausbeute :
28 g, (55 %), Smp: 98 - 100°C Rf = 0.4651 (Petrolether:Ether = 1:2).
^-NMR (CDC13): δ = 6.75 (bs; IH, NH) , 6.55 - 6.50 (m; 2H, Th-H-3,-4), 4.25 (q; 2H, OCH2), 3.78 (s; 2H, -CH2-) , 2.40 (s; 3H, CH3), 2.05 (s; 3H, Acetyl-CH3), 1.30 (t; 6H , CH3 ) .
13C-NMR (CDCI3). δ = 168.87 (s; CONH), 166.97 (s; COO), 139.22 (s; C) , 133.88 (s; C) , 126.99 (d; CH) , 124.60 (d; CH) , 66.83 (s; C) , 62.45 (t; OCH2), 32.64 (t;-CH2-), 22.80 (q; CH3), 14.99 (q; CH3), 13.76 (q; CH3).
ClsH21NOsS (327.40):
Ber.: C 55.03 H 6.47 N 4.28
Gef . : C 55.06 H 6.43 N 4.34
3.4. (R,S)-2-(Acetylamino)-3-[(5'-methyl)-2'- thienyl]propansäure (13)
Figure imgf000023_0001
32.9 g (100.5 mmol) 12 wurden in 200 ml
10%iger Natronlauge suspendiert und 3 h unter Rückfluss erhitzt, wobei der Feststoff in Lösung ging.
Anschliessend wurde mit konz. Salzsäure unter Eiskühlung bis pH = 1 angesäuert, wobei ein farbloser
Niederschlag entstand. Es wurde erneut 3 h unter
Rückfluss erhitzt.
Die Reaktionslösung wurde nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur bis zu Erschöpfung mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen und mit
Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, der Rückstand im Vakuum getrocknet.
Ausbeute :
21.1 g (93 % d. Th. ) , farbloser Feststoff, Smp: 165 - 166 °C
• -NM (d6-DMSO): δ = 8.22 (d; IH, NH) , 6.65 (d; IH, CH), 6.59 (d; IH, CH) , 4.34 (m; IH, α-CH), 3.15 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.99 (dd? IH, CH von -CH2-), 2.37 (s? 3H, Ac-CH3), 1.84 (s; 3H, CH3).
"C-NMR (d6-DMSO): δ = 172.6 (s; COOH) , 169.3 (s; CONH), 137.7 (s; C), 137.5 (s? C) , 126.0 (d; CH) , 124.8 (d; CH), 53.5 (d; α-CH), 31.3 (t; -CH2-), 22.4 (q? Ac-CH3) , 14.8 (q; CH3).
C10H13NO3S (227.29):
Ber.: C 52.85 H 5.76 N 6.16 Gef.: C 52.83 H 5.76 N 6.06
3.5. (S)-2-Ami o-[2'-(5'-methyl)-thienyl]propansäure (14)
Figure imgf000024_0001
Eine Lösung von 13 g (157 mmol)
Natriumkarbonat und 19.0 g (84.0 mmol) 13 in 800 ml Wasser wurde mit 2 N Salzsäure auf pH 7.5 - 8 eingestellt und mit 5.0 g Acylase versetzt. Die Suspension wurde 24 h bei Raumtemperatur gerührt. Anschliessend wird mit konzentrierter
Salzsäure auf pH 1-2 angesäuert und das denaturierte Enzym durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde erschöpfend mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum blieb (R)-13 als ein bräunliches Kristallpulver zurück, welches im Vakuum getrocknet wurde.
Ausbeute:
8.9 g (94 %), farbloses Kristallpulver, Smp: 164 °C, [α]23 D = - 41 ° (c = 1.0, MeOH)
Die wässrige Phase wurde bis zur Trockne einrotiert, mit 70 ml Wasser aufgenommen und auf 250 ml aktivierten DOWEX 50 -Ionenaustauscher gegeben. Die Suspension wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt, der Ionenaustauscher abfiltriert und solange mit Wasser gewaschen, bis das Eluat neutral reagierte. Anschliessend wurde der Ionenaustauscher mehrmals mit 1 M Ammoniaklösung digeriert, bis das Filtrat eine negative Ninhydrinprobe aufwies. Die vereinigten ammoniakalischen Filtrate wurden bis zur Trockene im Vakuum einrotiert und die zurückbleibende (S)-Aminosäure im Vakuum getrocknet.
Ausbeute:
7.7 g (100%), braunes Kristallpulver,
Smp: 252 - 253 °C
Rf = 0.281 (EtOAc:MeOH = 1:1)
[α]23 D= - 3° (c = 1.0, 2N HC1) Literatur : Smp: 253-5 °C
^-NMR (D20): δ = 6.66 (d; IH, CH) , 6.60 (d; IH, CH) , 3.67 (t; IH, α-CH), 3.21 (d; 2H, -CH2-), 2.35 (s; 3H, CH3).
"C-NMR (D20): δ = 180.4 (s; COOH) , 142.7 (s; C) , 138.5 (s; C), 129.6.1 (d; CH) , 127.7 (d; CH) , 58.0 (d; α-CH), 35.5 (t; -CH2-), 16.9 (q; CH3).
3.6. (S)-2-Ami o-3-[2-(5-methyl)-thienyl]propansäure, Methylester, Hydrochlorid (15)
Figure imgf000026_0001
Durch eine Suspension von 3.1 g (16.7 mmol) 14 in 100 ml wasserfreiem Methanol wurde unter heftigem Rühren 3 h ein starker Strom von trockenem
Chlorwasserstoff eingeleitet. Anschliessend wurde das Reaktionsgemisch bis zur Trockene eingeengt, der Rückstand mit Methanol aufgenommen und die Lösung mit Ether versetzt. Dabei fiel das Produkt als farbloser Feststoff aus, welcher abfiltriert und im Vakuum getrocknet wurde.
Ausbeute:
3.8 g (96%), farblose Nadeln, Smp: 170 - 172 °C Rf = 0.739 (EtOAc: MeOH = 1:1)
Figure imgf000026_0002
XH-NMR (D20): δ = 6.78 (d; IH, CH) , 6.70 (d? IH, CH) , 4.40 (t; IH, α-CH), 3.44 (d, 2H, -CH2-) , 2.40 (s? 3H, CH3).
"C-NMR (D20): δ = 172.42 (s; CO) , 144.16 (s; C) , 134.93 (s? C), 131.26 (d; CH) , 128.36 (d; CH) , 56.60 (q; OCH3), 56.47 (d; α-CH), 32.56 (t? -CH2-) , 17.05 (q; CH3). C9H14C1N02S . 0.25 H20 (240.24)
Ber.: C 45.00 H 6.08 N 5.83
Gef.: C 45.08 H 5.91 N 5.92
3.7. L-ß-tert.Butyl-N-carbobenzoxy-α-aspartyl-L- [2-(5-methyl)thienyl]alanin, Methylester (16)
Figure imgf000027_0001
5.50 g (10.9 mmol) 4 werden in 50 ml wasserfreiem DMF gelöst und bei 0 °C mit 2.6 g (10.9 mmol) 15 und 1.51 ml (10.9 mmol) Triethylamin versetzt und 3 Tage bei 0 - 4°C gerührt.
Die Reaktionslösung wurde zwischen 80 ml Eiswasser und 50 ml Ether verteilt, die wässrige Phase mehrmals mit Ether extrahiert und die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Die Etherlösung wurde mit Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel abdestilliert. Das so erhaltene Rohprodukt wurde über 220 g Kieselgel mit Petrolether:Ether (Gradient von 6:4 aus 1:2) geflasht.
Ausbeute :
4.2 g (76 %), farbloser Feststoff, Smp: 56 - 57 °C
Rf = 0.462 (Petrolether :Ether = 1:2),
[α]23 D = + 37.1 °, (c = 1.24, CH2C12)
XH-NMR (CDC13): δ = 7.38 - 7.33 (m; 5H, C6H5), 7.08 (bd; IH, CONH), 6.62 (d; IH, Th-H), 6.56 (d; IH, Th-H), 5.97 (d; IH, CONH), 5.14 (s; 2H, OCH2), 4.80 (m; IH, α-CH), 4.58 (m; IH, α-CH), 3.75 (s; 3H, OCH3), 3.27 (m? 2H, -CH2-), 2.90 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.64 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.41 (s; 3H, CH3), 1.44 (s; 9H, CH3).
"C-NMR (CDC13): δ = 171.02 (s; CO) , 170.91 (s; CO) , 170.25 (s; CO) , 155.95 (s; CONH), 139.31 (s; C-2-Th) , 136.09 (s; C-l-Ph) , 134.59 (s; C-5-Th) , 128.55 (d; CH) , 128.22 (d; CH) , 128.05 (d; CH) , 126.93 (d; CH) , 125.06 (d; CH), 81.80 (s; OCquart), 67.20 (t; OCH2), 53.29 (q; OCH3), 52.42 (d; α-CH), 51.04 (d; α-CH), 37.36 (t? -CH2-), 32.09 (t; -CH2-), 27.98 (q? CH3), 15.23 (q? CH3).
3.8. N-L-α-Aspartyl-[2-(5-methyl)thienyl)]alanin, Methylester, Hydrobromid (17)
Figure imgf000028_0001
Eine Lösung von 4.0 g (7.93 mmol) 16 in 20 ml Eisessig wurde bei Raumtemperatur tropfenweise mit 11.6 ml (47.6 mmol) einer 4.1 M (33 %) Lösung von HBr in Eisessig versetzt und 2 h gerührt.
Die Lösungsmittel wurden im Wasserstrahlvakuum abdestilliert und der ölige Rückstand mit 100 ml Ether digeriert. Dabei fiel ein farbloses Kristallpulver aus, welches abfiltriert und im Vakuum getrocknet wurde. Ausbeute :
3.0 g (96 %), beigefarbenes Kristallpulver, Smp: 78 - 79 °C Rf = 0.387 (EtOAc:MeOH = 1:1), [α]25 D = +26.7° (c = 0.75, HOAc)
^•H-NMR (D20): δ = 6.67 (d; IH, Th-H), 6.62 (d; IH, Th-H), 4.73 (m; IH, α-CH), 4.32 (m; IH, α-CH), 3.71 (s; 3H, OCH3), 3.33 (m; 2H, -CH2-) , 3.00 (m; 2H, -CH2-) , 2.37 (s; 3H, CH3).
"C-NMR (D20): δ = 175.21 (s; CO) , 175.01 (s; CO) , 171.04 (s; CO), 142.88 (s; C-2-Th) , 138.30 (s; C-5-Th) , 129.71 (d; CH) , 127.84 (d; CH) , 57.14 (d; α-CH), 55.79 (q; OCH3), 52.00 (d; α-CH), 37.48 (t; -CH2-) , 33.33 (t; -CH2-), 16.96 (q; CH3).
3.9. Herstellung von N-L-α-Aspartyl-(L-[2-(5-methyl)- thienyl]alanin, Methylester (3)
Figure imgf000029_0001
20 ml stark basischer Ionenaustauscher (Amberlite IRA-400) wurden über Nacht in gesättigter wässriger Natriumacetatlösung gerührt. Anschliessend wurde der Ionenaustauscher abfiltriert und mit Wasser neutral gewaschen.
Der so aktivierte Amberlite wurde mit einer Lösung von 2.80 g (7.10 mmol) 17 in 50 ml Wasser 30 min bei 45 °C gerührt. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit 30 ml Wasser gewaschen und das Eluat sowie die Waschlösungen im Vakuum stark eingeengt. Beim Abkühlen fielen farblose Nadeln aus, welche abfiltriert und getrocknet wurden.
Ausbeute :
1.6 g (72 %), farbloses Nadeln, Smp: 234 - 235 °C Rf - 0.428 (EtOAc:MeOH = 1:1), [α]25 D = + 45 °, (c = 0.75, HOAc)
XH-NMR (D20): δ = 6.68 (d; IH, Th-H), 6.63 (d; IH, Th-H), 4.67 (m; IH, α-CH), 4.19 (m; IH, α-CH), 3.72 (s; 3H, OCH3), 3.32 (dd; IH, CH von -CH2-), 3.22 (dd? IH, CH von -CH2-), 2.75 (dd; IH, CH von -CH2-), 2.63 (dd, IH, CH von -CH2-Hz) .
"C-NMR (D20): δ = 178.49 (s; CO) , 175.21 (s? CO) , 172.09 (s; CO) , 142.87 (s; C-2-Th) , 138.37 (s; C-5-Th) , 129.66 (d; CH) , 127.81 (d; CH) , 57.03 (d; α-CH), 55.74 (q; OCH3), 53.21 (d; α-CH), 39.62 (t; -CH2-), 33.45 (t; -CH2-), 16.90 (q; CH3).

Claims

PATENTANSPRÜCHE
L-Aspartyl-L-thienylalaninmethylester der Formel
Figure imgf000031_0001
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000031_0002
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann.
Verbindungen der Formel I, nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass A einen 2 '-Thienyl-,
3 '-Thienyl- oder 2 '-(5 '-Methyl)thienylrest bedeutet.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der
Formel
Figure imgf000031_0003
CO2CH3
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000032_0001
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel
Figure imgf000032_0002
in der B eine Aminoschutzgruppe und Y eine Carboxylschutzgruppe bedeutet, in Gegenwart eines Säurefängers mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000032_0003
in der A obige Bedeutung hat, zu einer Verbindung der Formel
B
NH
Figure imgf000032_0004
CO2CH3 umgesetzt wird, in der A, B und Y obige Bedeutung haben, worauf nach Abspaltung der Schutzgruppen auf acidolytischem Weg, die Isolierung der entsprechenden Verbindung der Formel I aus dem so gewonnenen Salz mittels einer Base erfolgt. Verwendung von Verbindungen der Formel
Figure imgf000033_0001
in der A einen Rest der Formel
Figure imgf000033_0002
bedeutet, worin R H oder CH3 sein kann, als künstlicher Süssstoff.
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