WO2000020009A1 - Antibacterial agents and process for producing the same - Google Patents

Description

明 細 書

抗菌剤及びその製造法 技術分野

本発明は抗菌剤に関し、 特別には胃潰瘍や胃癌の原因菌であるへリコバクタ一

• ピロリ (Helicobactor pylori ) の除菌に有効なフコィダンに代表される硫酸 化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の誘導体およびその製造法に - 関するものである。

従来、 胃潰瘍の治療剤としては、 胃酸分泌抑制を目的とした H ₂ブロッカーゃプ 口トンポンプ阻害剤および胃粘膜保護剤が一般に用いられている。 これらの薬剤 は有効な治療効果を示すものの、 Helicobactor pylori の感染者の場合は再発を 繰り返すことが知られている。

また、 この Helicobactor pylori菌の感染者には、 統計的に胃癌の発症率が高 いことも知られている。 このため消化性潰瘍の根本的な治療もしくは胃癌の予防 という観点から、 Helicobactor pylori の除菌を含む治療が必要であることが指 摘されている （浅香正博著、 Helicobactor pylori と胃粘膜病変 （先端医学社、 1995年 7月 1日） ； 日本消化器病学会編、 Helicobactor pylori 治療ガイドライ ン資料、 Helicobactor pylori 治療検討委員会） 。

これらの指摘に基づいて、 抗生物質と胃酸分泌抑制剤とを併用した除菌ダ治療 が行われている。 しかしながら、 この方法は除菌効果が高いものの、 比較的多量 の抗生物質を用いるために下痢の発症や耐性菌の出現等の問題が生じている。 一方、 本発明者らはモズクや青海苔等の部分分解物から調製されたオリゴ糖の 誘導体が胃潰瘍に対して治療促進作用を示すのみならず、 Helicobactor pylori に対する定着阻害作用や抗菌効果をも示すことを先に見出した （特開平 1 1 一 6 0 5 9 0号公報） 。 しかしながら、 この誘導体物質は、 潰瘍の治療促進作用は強 いものの、 その抗菌作用は未だ満足すべきものに至っていない。

係る状況下において、 本発明者らは鋭意研究を行った結果、 硫酸化多糖類又は 硫酸化多糖類を酸処理等によりオリゴ糖とし、 更に過ヨウ素酸酸化、 対応するァ ミン類 （抗菌物質） との反応、 及び還元処理により糖誘導体を製造し、 このもの が Helicobacter pylori に対して高い親和性及び優れた抗菌効果を有しているこ とを確認し、 本発明を完成するに至った。

即ち、 本発明の目的は tfelicoftactor pWori に対して高い親和性を有し、 Heli cobactor pylori に対して特異的な抗菌効果を有する抗菌剤を得ることにある。 発明の開示

本発明に係る抗菌剤は、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ- 糖に抗菌物質が結合した化学構造を有することを特徴とするものである。

好ましい態様としての本発明に係る抗菌剤は、 次の化学構造を有することを特 徴とするものである。

Y - O C H ( A H ₂ N H R ) „ 又は Y— B H ₂ N H R

[式中、 Yは硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ 糖。 Aは Yの還元末端糖を還元後、 酸化剤を用いて酸化することにより生じたァ ルデヒド基に由来する炭素。 Bは Yの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素 。 Rは 1級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、 又は抗菌物質 をスぺーサーを介して前記 A炭素又は B炭素に結合する抗菌物質誘導体。 n == 1 又は 2 ]

また、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の好ましい態様 としては、 フコィダン又はフコィダンを部分分解したォリゴフコース、 もしくは 力ラゲナン又は力ラゲナンを部分分解した力ラビオースを挙げることができる。 本発明はまた、 前述の抗菌剤を有効成分とする ffe 'cotecior pWori菌用抗菌 剤を提供する。

本発明は更に、 前述の抗菌剤を有効成分とする消化器潰瘍予防 ·治療剤も提供 する。

本発明に係る抗菌剤の製造法は、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解し たオリゴ糖の還元末端の糖残基のアルデヒド基を、 直接又は酸化分解により末端 糖残基を開環させる工程と、

この開環されたアルデヒド基に対応する抗菌物質のアミンを作用させてシッフ 塩基を生成させる工程と、

この生成されたシッフ塩基を還元する工程とを備えたことを特徴とするもので ある。

本発明による抗菌剤では、 フコィダン、 力ラゲナン、 ラムナン硫酸、 コンドロ ィチン硫酸、 へパリン、 デルマタン硫酸、 ケラタン硫酸等の硫酸化多糖類又はそ の部分分解により調製されるオリゴ糖に抗菌物質が結合されているものであるた め、 Helicobactor pylori に対して高い親和性を呈し、 Helicobactor pylori に 対して特異的な抗菌効果を示す。

即ち、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖は ife 'cotecior . pylori に高い親和性を有し、 Helicobactor pylori に特異的に吸着又は結合し て Helicobactor pylori の胃壁に対して定着阻害を起こす。 本発明は、 この硫酸 化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖の ffeJicotector pylori に対 する特異性を利用し、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖に 抗菌物質を結合させた抗菌剤、 即ち、 抗菌物質を有効的にfeh'coわ actor pWori に作用させることのできる新規な抗菌剤を提供するものである。

本発明に係る硫酸化多糖類としては、 高い抗菌効果が得られると言う観点から 、 フコィダン又は力ラゲナン、 特にフコィダンが好ましい。

また、 本発明の抗菌剤は、 Uslicobactor pylori以外の病原性細菌に対しても 抗菌効果を有するため、 これらの病原性細菌に適用してもよい。

本発明の好ましい態様による抗菌剤は、 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分 分解したオリゴ糖の還元末端に抗菌物質が結合された次の化学構造を有するもの である。

Y - O C H ( A H ₂ N H R ) _n 又は Y— B H ₂ N H R

[式中、 Yは硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ 糖。 Aは Yの還元末端糖を還元後、 酸化剤を用いて酸化することにより生じたァ ルデヒド基に由来する炭素。 Bは Yの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素 。 Rは 1級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、 又は抗菌物質 をスぺ一サーを介して前記 A炭素又は B炭素に結合する抗菌物質誘導体。 n = 1 又は 2 ]

具体的には、 式中の Yはフコィダン、 力ラゲナン、 ラムナン硫酸、 コンドロイ チン硫酸、 へパリン、 デルマタン硫酸、 ケラタン硫酸等の硫酸化多糖類又はその 部分分解により調製されるオリゴ糖であって、 一部の水酸基は硫酸エステル化さ れていてもよい。 硫酸化多糖類としては、 分画サイズの異なる限外濾過膜を組み 合わせて分子量 3 0 0〜5 0 0 0程度に調製したオリゴ糖を用いれば、 より少量 の抗生物質量で高い抗菌効果が得られ、 特に分子量 3 0 0〜 1 0 0 0が好ましい 。 より詳細には、 フコィダンでは分子量 3 0 0〜5 0 0 0程度、 特に分子量 5 0 0〜 3 0 0 0が好ましく、 力ラゲナンでは、 分子量 3 0 0〜2 0 0 0程度、 特に 分子量 3 0 0 - 9 0 0が好ましい。

式中の Rは、 1級アミノ基を有するか、 又はアミノ基を導入したセフヱム系、 ― ペニシリン系、 アミノ酸糖体系、 マクロライ ド系、 ピリ ドカルボン酸系、 ォキサ フヱム系、 モノバクタム系、 力ルバぺネム系、 テトラサイクリン系、 ペプチド系 やクロラムフヱニコール、 サルファ剤等の抗菌物質、 もしくはこれらの物質にス ぺ一サ一導入した誘導体であればよい。

具体的には、 セフヱム系抗菌物質としては、 Cefotaxime, Cephalotin, Cephal oridine, Cephalexin, Cefradine, Cefazolin, Ceftezol, Cephapirin, Cephace trile, Cefoxitin, Cefmetazole, Cefroxime, Cefotiam, Cephamandole, Cefsul odine, Ceftizoxime, Ceftazidime, Cefotetan, Cefmenoxime, Ceftriaxone, Ce foperazone, Cefbuperazone, Cefixime等が挙けりれる ₀

ペニシリン系抗菌物質としては、 Ampicillin, Benzyl -PC, Phenethicillin, P ropicilin, Methicillin, Zxaci llin, Cloxacillin, Amoxicillin, Cyclacillin ， Carbenicillin, Sulbenici llin, Piperacillin等が挙げられる ₀

アミノ酸糖体系抗菌物質としては、 Ka細 ycin, Bekanamycin, Tobramysin, Di bekacin, Gentamicin, Amikacin, Habekacin, Neomycin B, Paromomycin等が挙げ られる。

マクロライ ド系抗菌物質としては、 Erythromycin, Kitasamycin, Acetyl kitas amycin, Oleandomycin, Josamycin, Acetylspiramycin, Midecamycin等が挙けり れる。

ピリ ドカルボン酸系抗菌物質としては、 Nalidixic acid, Oxolinic acid, Nor floxacin, Piromidic acid, Ofloxacin, Ciprofloxacin等が挙げられる。

ォキサフヱム系抗菌物質としては、 Latamoxef等が挙げられる。

モノバクタム系抗菌物質としては、 Sulfazecin, Monobactant等が挙げられる。 力ルバぺネム系抗菌物質としては、 Thienamycin等が挙げられる。

テトラサイクリン系抗菌物質としては、 Tetracycline, Chlortetracycline, 0 xytetracycline, Demethl Cholrtetracycline, Doxycycline, Methacycline, Mi nocycl ine等が挙げられる。

ぺプチド系抗菌物質のうち前述の各抗菌物質に含まれる以外のものとしては、

Gramicidin, Penicil lin, Polymyxin, Gramicidin S, Vioniycin, Actinomycin が挙げられる。

この抗菌剤は、 特に Jfeh'cofcactor pWori に対して高い親和性を有し、 Helico bactor pylori に特異的に吸着又は結合するため、 特に He licobac tor pylori 菌 用抗菌剤として有効である。 更に、 Helicobactor pylori菌を特異的に阻害する ため、 消化器潰瘍予防'治療剤として用いることができる。

この硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖の誘導体製造法の 一実施の形態としてォリゴフコース誘導体の製造法を以下に示す。

ステップ 1 ： フコィダンを含有する海藻類 （モズク、 クロメ、 ヒバマ夕等の褐 藻類） より多糖を公知の抽出方法 （例えば、 松田和雄著、 生物化学実験法 No. 2 0、 多糖の分離'精製法、 学会出版センター等） にて抽出する。

ステップ 2 ：得られたフコィダンを 0. 05M〜0. 1M程度の塩酸もしくはトリフル ォロ酢酸の溶液に溶解し、 1 0 0 °C、 1 0分〜 2 0分加熱処理してオリゴ糖化し 、 水酸化ナトリウムにて中和する。 このオリゴ糖化は、 フコィダナ一ゼ （フコィ ダン分解酵素） を用いて行ってもよく、 その際の反応条件は適宜決定すればよい 。 こうして得られたオリゴ糖の溶液に N a B H ₄を加え、 室温もしくは 4。Cにて 1 6時間、 還元処理を行う （特開平 6 - 2 4 7 8 6 1公報、 特開平 7 - 1 3 8 1 6 6号公報参照） 。

ステップ 3 ：ステップ 2の操作により得られたオリゴ糖のアルジ卜一ル体の溶 液を電気透析 （マイクロァシライザ一、旭化成社製） にて脱塩する。

ステップ 4 ：ステップ 3の溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリゥムを加え氷温下で 1 時間程度反応する （反応時間は糖鎖の構造により、 例えば 1—3結合のオリゴ糖 などの場合、 より長時間反応してもよい） 。 反応液に過ヨウ素酸に対し過剰量の エチレングリコールを加え、 更に 1時間反応する。 本液をステップ 3と同様の方 法で脱塩する。 本操作により還元末端にアルデヒド基を有するオリゴ糖が得られ る。

ステップ 5 ：ステップ 4で調製した試料に 0.5M濃度となるように酢酸を加え、 室温下で 2 0時間反応させる （非還元末端側の糖鎖が酸化されない条件であれば 本操作を省略してもよい） 。 反応液を、 目的とする分画分子量の限外濾過膜もし くは透析膜を用いて脱塩及びエチレングリコールやその分解物を除き、 オリゴ糖 を得る。 またオリゴ糖画分はこれらの方法で精製する以外に、 活性炭クロマトグ - ラフィ一やゲル濾過等を用いて所望の分子量サイズに調製してもよい。

ステップ 6 ：オリゴ糖画分を水に溶解し、 導入する抗菌剤を加え室温にて 1時 間反応し、 シッフ塩基を形成させる。

ステップ 7 ：ステップ 6で得られた液にボランジメチルァミンを加え、 室温下 にて 20時間反応させ、 シッフ塩基を還元する。 還元剤には、 ボランジメチルァ ミ ンの他に、 本発明の目的に適合するような還元剤 （例えば、 ボラントリメチル ァミ ン、 N a CNBH₃、 N a BH₄など） が適宜利用できる。

ステップ 8 ：反応終了後、 限外濾過もしくは透析により過剰の試薬を除く。 過 剰試薬が除去された還元液は凍結乾燥等で乾燥させるか、 イオン交換クロマトグ ラフィ—等で更に精製してもよい。 この方法により得られたォリゴ糖誘導体は、 消化器潰瘍の原因菌である ife 'cotecior pylori に対する抗菌効果を有すること が確認された。

尚、 ステップ 2及び 3を省略し、 フコィダンそのものから多糖誘導体を調製し ても同様の効果を得ることができる。 また、 本発明の抗菌剤の投与量は、 通常の 医薬の場合と同様に、 好ましくは医師による処方に従って任意に選ぶことができ るが、 例えば分子量 5 0 0〜3 0 0 0ォリゴフコースより調製した誘導体を用い る場合には、 成人に対し 1 O Omg/日〜 5 0 0mgZ日、 特に 2 00mgZ日 〜3 0 OmgZ日の投与を行えば、 副作用を抑制すると共に、 高い抗菌効果を得 ることが可能となる。 抗菌効果を得るためには、 フコィダンの分子量が大きいほ どその投与量も多量となるため、 前記の分子量以外のものを用いる際には、 適宜 添加量を調節すればよい。

本発明の抗菌剤の剤形は、 任意に選択することができる。 しかしながら、 一般 的には、 本剤を薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合し、 且つ必要 に応じて、 溶剤、 分散剤、 乳化剤、 緩衝剤、 安定剤、 賦形剤、 結合剤、 崩壊剤、 潤沢剤等を加えて、 錠剤、 顆粒剤、 散剤、 粉末剤、 カプセル剤等に製剤して使用 するのが適当である。

本発明は以上説明した通り、 Helicobactor pylori に対して高い親和性を有し 、 Helicobactor pylori に対して特異的な抗菌効果を有する抗菌剤を得ることが できるという効果がある。 - 図面の簡単な説明

図 1は 0F-CTXの^{1 3} C— N M Rを示す線図である。 縦軸は計測シグナルの相対 強度、 横軸は周波数 （H z ) である。

図 2は 0F-CTXと CTXとのfe 'cotector pylori 増殖阻害効果を示す線図である 。 縦軸は濁度 （600nm) 、 横軸は添加量 （ g/mL) である。 発明を実施するための最良の形態

実施例 1 . ォリゴフコース誘導体の製造

(1·1)フコィダンの抽出及びォリゴフコースの製造

沖縛モズク Cladosiphon okainuranus Tokida) を脱イオン水にて塩抜きを行つ た後、 藻体 1 k g当たり 1 リッ トルの割合で脱イオン水に懸濁し、 本懸濁液を塩 酸で p H 2とした。 本液を 100°C、 10分間加熱抽出後、 ガーゼにて藻体を濾別し、 濾液を更に遠心し不溶物を除いた （9000rpm、60分） 。

上清を N a O Hにて中和後、 0. 2M濃度になるようにメタ過ヨウ素酸ナ卜リゥム を加え、 混入してくるアルギン酸ゃゥロン酸成分を分解した。 遮光下にて 2 0時 間反応後、 エチレングリコールにて反応を停止した。 本液に水素化ホウ素ナトリ ゥムを 0. 2M濃度になるように加え、 室温にて 16時間反応した。 本液を限外濾過 （ 分画分子量 5， 000 ) にて濃縮後、 透析した。 透析内液を塩酸にて p H 2とし、 10 0°C、 10分間加熱処理した。 処理液を透析後、 凍結乾燥しフコィダンを得た （4 g 1 1 kg湿藻体） 。

(1·2)ォリゴフコースの調製と過ヨウ素酸酸化 フコィダンを 200mg/niLの濃度に溶解し、 0.075M〜0.1M濃度となるように塩酸 (又はトリフルォロ酢酸でも可） を加えた。 100°Cにて 10分、 加熱後、 室温まで冷 却する。 本液を N a OHにて中和後、 Na BH₄ をフコィダン 1 gにっき 200ingの 割合で加えた。 4 °Cにて 20時間反応した。

反応液を酢酸にて ρΗ 6とし、 電気透析装置 （旭化成、 マイクロァシライザ一 、 AC220膜使用） にて脱塩した。 脱塩後、 試料溶液に 0.2M濃度となるように、 N a I 04 を加え、 氷温下にて 1時間反応させた。 反応液にエチレングリコールを - 過ヨウ素酸に対し 2当量加え、 氷温下にて更に 1時間反応した。 反応液を分画分 子量 1000の限外濾過膜 （ミ リポア社製） にてろ過、 濃縮した。 内液を凍結乾燥し 、 ォリゴフコースのアルデヒド誘導体を得た （収率約 25%) 。

(1·3)抗菌物質との力ップリング反応及び還元反応

(1·2)で製造したオリゴ糖のアルデヒド誘導体 （5 g) を水 lOOmLに溶解し、 1 gのセファトキシナム （CTX) を加えた。 0.5M、 N aHCOs溶液 （pH8.5) を lmL加え、 室温下で 1時間反応下。 反応後、 ボランジメチルァミン複合体を、 1 g加え、 室温下にて 20時間反応させた。 反応液は、 分画分子量 1000の透析膜に て、 一昼夜、 透析後、 凍結乾燥して目的とする試料 （OF- CTX) を得た （収量 1.14 g) 。 図 1は得られた OF CTXの¹³ C— NMRを示す線図である。 得られた OF- CTX の具体的な構造は次の化学式 （ 1 ) に示す通りである。

化学式 （ 1 )

(1·3)と同様に、 セファトキシナムの変わりにアンピシリンと反応させ、 反応液 を同様に処理し、 ォリゴフコースアンピシリン誘導体 （0F-AM) を得た。 得られた OF- AMの具体的な構造は下記の化学式 （2) に示す通りである。 ォリゴフコース 2 gを 80mLの 40%エタノール水に溶解 （0.05M、 N a C0₃) 。 12 -アミノラウリン酸 （C 1 2) 、 350mgを加え、 45°C 1時間反応した。 ボランジ メチルアミンを 30(kg加え、 45°Cにて 16時間反応した。

化学式（2) 3

0H

~ K3Fucl^ OCH

反応後分画分子量 1000カツ卜の透析チューブにて透析した。 透析物の凍結乾燥 品 （875mg) を lOmLの水に溶解し、 ED C 500mgを加えた。 室温で 2時間反応後 、 セファトキシナム N aを 350mg加え、 4時間反応した。 反応後分画分子量、 100 0の透析膜にて 2日間透析後、 凍結乾燥し誘導体を得た （OF- C12-CTX、 収量 384mg ) 。 得られた OF- C12-CTXの具体的な構造は下記の化学式 （3) に示す通りである アミノラゥリル酸 4.5gを 200DILの 30%エタノール水に懸濁し、 N a OHを適宜 加え、 溶解した。 溶液に 14.5 gのォリゴフコースを加え、 40°C、 1時間反応した 。 ボランジメチルァミンを 3 g加え、 4ITCにて 20時間反応した。 塩酸で p H 5と し、 9000rpm、 分遠心後、 上清を分画分子量 1000カツ 卜の透析膜にて透析した。 透析物をろ過後、 凍結乾燥し、 ォリゴフコースのアミノラゥリル酸誘導体を得た (収量 2.67 g) o

得られた誘導体を 40mLの水に懸濁し、 メタノールを溶解するまで加えた。 塩酸 で p H 5とし、 水溶性カルボジィミ ド 3.5g、 N—ヒドロキシスクシィミ ド 1.5g を加え、 室温下 20時間反応した。 反応液を透析後、 凍結乾燥し、 乾燥物 1.2 gを水 20mLに溶解した _c

化学式（ 3 )

この液に 0.5 gのアンピシリンナトリウムを加え、 1M、 N aHC〇₃をlmL加 えた。 室温下、 20時間反応後、 反応液を、 1000カツ卜の透析膜にて透析する。 透析内液をろ過後、 凍結乾燥しオリゴフコースにスぺ一サを導入したアンピシリ ン誘導体 (0F-C12-AM) を得た （収量 230.6mg) 。 得られた OF- C12-AMの具体的な構 造は下記の化学式 （4) に示す通りである。 化学式 （4 ) H

H 実施例 2. カラビオース誘導体の製造

/c力ラゲナン （10 g ) を lOOmLの 0. 3 N硫酸に含水した。 40°Cにて 20時間、 浸透 後、 100°Cにて 10分、 加熱した。 室温まで放置後、 中和した。 遠心分離 （20000 r p m、 30分） により不要物を除去後、 マイクロァシライザ一にて脱塩し、 凍結乾 燥することで 9. 74 gの力ラビオースが得られた。

得られた力ラビオース 1 gにアンピシリン 1 gを加え 20mLの脱イオン水に溶解 したものと、 力ラビオース 1 gにセフォトキシナム 1 gを加え 20mLの脱イオン水 に溶解したものとを用意した。

35°Cにて 1時間反応後、 ポランジメチルァミン複合体を各々に 1 gずつ加え、 25°Cにて 20時間反応した。 反応液に l mLの 1 Mの酢酸緩衝液 （p H 4. 6) を加え、 予め平衡化しておいたマイクロプレップ H I G H Q ( 15mL) に供した。 80mLの 50 mM酢酸緩衝液にて溶出させた。 これにより、 未反応の抗生物質及びボランが溶 出する。 続いて 80mLの 1 Mの N a C 1を含む同緩衝液で溶出させた。

この画分を集め、 電気透析にて脱塩後、 分画分子量 500カツ 卜の透析膜にて透析 を行った。 透析物を回収し、 凍結乾燥することにより、 力ラビオースアンピシリ ン誘導体 (CarrabioAM) 587mg、 及び力ラビオースセフォ卜キシナム誘導体 (Car rabioCTX) 437mgを得た。 得られた力ラビオースアンピシリン誘導体 （CarrabioAM) 及びカラビオースセ フォトキシナム誘導体 （CarrabioCTX) の具体的な構造式は下記の化学式 （5) 及 び化学式 （ 6 ) に示す通りである。

化学式 （5)

CarrabioAM

化学式 （6) CarrabioCTX

CH3

実施例 3. Helicobacter pylori に対する抗菌作用の検証 1

Helicobactor pylori 増殖阻害活性は以下の方法で測定した。 1 mLのブルセラ 培地に tfeJicotecior pyJori臨床分離株 （1.5 x 10⁸CFU/mL) を lOO L加え、 更に lmg/mLの OF- CTX若しくはセファ トキシナム （CTX) を 0， 3， 6， 9, 1 2 β L ずつ加える。 37°Cにて 3日間培養後、 濁度 （ A 600m) を測定し増殖率を測定した 。 結果を図 2に示す。

図に示した通り、 OF CTXは/ fe 'cotecior pylori に対し 6 / g 7m Lの濃度で ほぼ完全に増殖を阻害した。 本活性はセファ トキシナムより若干弱いものの、 0F - CTX分子中のセファトキシナム含有量はモル比でフコース量の約 1/10であること から、 OF- CTXの活性は CTX単体の活性よりも高いものであると考えられる。

実施例 4 . Heli∞bactor pylori に対する抗菌作用の検証 2

Helicobactor pylori を 25mLのブルセラ培地に懸濁し、 各 500〃 Lずつ分注し、 本液に 30 Lの培地のみ、 l mg/mLの OF- CTXを加え、 0 °Cにて 0〜 2 5分処理する 。 UOOOrpBK 7分遠心後、 沈渣を l mLの培地に再懸濁し、 その内 100 / Lずつ分注 する。 本液に 1 mLの培地を加え、 3 7 °Cにて 3日間培養後、 600nmにおける濁度を- 測定した。 その結果、 対照群の濁度が 0. 494であるのに対し、 OF- CTX前処理群の濁 度は 0. 153であり、 約 70 %の増殖阻害効果を示したことになる。

以上のように、 本発明によれば、 フコイダンゃォリゴフコースの誘導体は feJi cobactor pylori に対し抗菌作用を有し、 且つ実施例 4に示したように、 これら 誘導体は洗浄後も効果を示すことから、 Helicobactor pylori に接着し、 効果を 示すものと考えられた。 これにより、 これらの誘導体は ZfeJicoわ actor pyJori に 指向性 （特異性） を有した抗菌剤として、 胃潰瘍や胃癌の治療に有益な薬剤とし て利用できる。

実施例 5 . Helicobactor pylori に対する抗菌作用の検証 3

Helicobactor pylori 培養菌体を 1. 5 x 10⁸ CFU/mLとなるように 5 % F C Sを含 むブルセラ培地に懸濁し、 200 // Lずつ 96穴マイクロプレートに撒いた後、 実施例 2で得られた力ラビオースアンピシリン誘導体 （CarrabioAM) 、 カラビオースセ フォトキシナム誘導体 （CarrabioCTX) (各 l mg/mL) を 2 // Lずつ撒いた。 攪拌 後、 37°Cにて微好気下の条件で 3日間培養し、 600I における濁度を測定した。 そ の結果、 対照群の吸光度は 0. 835であったのに対し、 力ラビオースアンピシリン誘 導体 （CarrabioAM) 添加群では 0. 003、 力ラビオースセフォトキシナム誘導体 (C arrabioCTX) 添加群では 0. 000で完全に tfeiicotector pylori の増殖を抑制した。

Claims

請求の範囲

1 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖に抗菌物質が結合 した化学構造を有することを特徴とする抗菌剤。

2 次の化学構造を有することを特徴とする請求項 1に記載の抗菌剤。

Y-OCH (AH₂NHR) „ 又は Y— BH₂NHR

[式中、 Yは硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ 糖。 Aは Yの還元末端糖を還元後、 酸化剤を用いて酸化することにより生じたァ ― ルデヒド基に由来する炭素。 Bは Yの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素 。 Rは 1級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、 又は抗菌物質 をスぺーサーを介して前記 A炭素又は B炭素に結合する抗菌物質誘導体。 n= 1 又は 2]

3 硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖が、 フコィダン又 はフコィダンを部分分解したオリゴフコース、 もしくは力ラゲナン又はカラゲナ ンを部分分解したカラビオースであることを特徴とする請求項 1に記載された抗 菌剤。

4 請求項 1に記載の抗菌剤を有効成分とする e 'cotecior pylori 菌用抗菌 剤。

5 請求項 1に記載の抗菌剤を有効成分とする消化器潰瘍予防 ·治療剤。 6 請求項 1に記載された抗菌剤の製造法において、

硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したォリゴ糖の還元末端の糖残基の アルデヒド基を、 直接又は酸化分解により末端糖残基を開環させる工程と、

この開環されたアルデヒド基に対応する抗菌物質のアミンを作用させてシッフ 塩基を生成させる工程と、

この生成されたシッフ塩基を還元する工程とを備えたことを特徴とする抗菌剤 の製造法。