<Desc/Clms Page number 1>
Dérivés du glycérol, un procédé de préparation de ces dérivés et des compositions thérapeutiques Les contenant.
L'invention concerne des dérivés du glycérol intéressants pour leur activité anti-tumorale, une méthode de préparation de ces dérivés et des compositions thérapeutiques les contenant.
L'invention concerne des dérivés du glycérol de formules générales Ia, Ib et Ic
EMI1.1
dans lesquelles : - Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle inférieur comprenant au maximum 5 atomes de carbone ; - R représente un groupe alcoyle linéaire ou ramifié comprenant de 10 à 24 atomes de carbone ; - R3 représente un radical aryle ou alcoyle, CONH-alcoyl,
CON-dialcoyl, chaque radical alcoyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ;
EMI1.2
0 n - A représente :-P-0- (CH,),-,-C- (CH,)-,-C-NH- (CH,)-, 1-u 0 0 0 0
EMI1.3
n étant un entier compris entre 2 et 10 ;
<Desc/Clms Page number 2>
- Y représente les ammoniums quaternaires suivants :
ammo- nium, alcoyl ammonium, dialcoylammonium, trialcoylammo- nium, chaque radical alcoyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, ou un hétérocycle saturé ou insaturé contenant l'azote comme hétéroatome, et leurs sels thérapeutiquement acceptables.
L'invention concerne également un procédé de préparation des dérivés du glycérol la, Ib et Ic, comprenant la réaction, dans un solvant aprotique, en présence d'une base organique, à une température comprise entre 0 et 80 C, et sous circulation d'azote, respectivement des composés de formules IIa, IIb et IIc
EMI2.1
dans lesquelles R1, R2 et R3 sont comme définis ci-dessus et B2 représente -NR1'R2 ou -N (SO2CH2#)R2, R1' représentant un alcoyle inférieur comprenant au maximum 5 atomes de carbone ;
EMI2.2
avec un excès stoechiométrique de 10 à 100 % du composé sélec-
EMI2.3
0 tienne parmi Cl- ! ] Br- (CH-C-Cl ou O=C=N (CHBr 0 n. - n 0 (n étant défini ci-dessus) et un excès stoechiométrique de 30 à 50 % du composé Z, sélectionné parmi l'amine associée aux ammoniums quaternaires Y définis ci-dessus, et, pour l'obtention des composés Ib ou Ic dans lesquels Rl représente l'hydrogène, l'hydrogénolyse du groupe protecteur -SO2CH2#.
<Desc/Clms Page number 3>
Dans certains cas, le réactif Z peut être également le solvant de la réaction, et la définition"un excès stoEchiométique"n'a alors plus de signification.
Comme la réaction est identique pour l'obtention des composés Ia, Ib et Ic, elle sera illustrée uniquement pour le composé Ia par le schéma réactionnel I (page 5).
Les dérivés du glycérol et, plus particulièrement, les dérivés de la phosphocholine, sont déjà décrits, par exemple, dans le brevet EP 130527 ; un de ces composés efficaces pour le traitement du cancer : l'octadécylamino- 3-tétradécyl-Q-1-propanediol-1, 2-phosphocholine-0-2, et un composé de référence : Et-lS-OCHg (méthoxy-PAF, Andreesen,
1988), ont été retenus pour la comparaison avec les composés de l'invention. Les résultats ont montré que les composés de l'invention ont une activité anti-tumorale plus grande, comme le prouvent les résultats du test pharma- cologique ci-joint.
L'invention concerne finalement des compositions thérapeutiques contenant un des composés de l'invention, comme ingrédient actif, en mélange avec des diluents et/ou supports appropriés.
Les différents composés de départ IIa, IIb et IIc peuvent être préparés selon les schémas réactionnels II, III, IV et
V (pages 6 à 9).
Le composé de départ IIa peut être préparé selon le schéma réactionnel II : la particularité de ces réactions réside dans l'étape 3a-) 4a : le mécanisme comprend 2 substi- tutions de type SN2, avec la migration des groupes -OR3 et -NRJR, comme le décrit K. Suzuki, K. Okano dans
Synthesis 723 (Sept. 1983).
<Desc/Clms Page number 4>
Le composé de départ IIb peut être préparé : - selon le schéma réactionnel III : le composé IIb peut comprendre un groupe protecteur lorsque le radical R1, du composé final Ib, est l'hydrogène ; une déprotection par hydrogénolyse est ensuite conduite sur le composé final ; - selon le schéma réactionnel IV, voie A ou B, spécifiquement lorsque R3 représente le radical - CONH-alcoyl ou-CON-dialcoyl ; le composé de départ 6b du schéma réactionnel IV est identique au composé 2a du schéma réactionnel II.
En ce qui concerne le composé IIc (schéma réactionnel V), on se référera au composé IIb, premier alinéa.
Ces étapes sont décrites dans les exemples préparatifs suivants.
<Desc/Clms Page number 5>
SCHEMA REACTIONNEL I
EMI5.1
<Desc/Clms Page number 6>
SCHEMA REACTIONNEL II
EMI6.1
<Desc/Clms Page number 7>
SCHEMA REACTIONNEL III
EMI7.1
<Desc/Clms Page number 8>
SCHEMA REACTIONNEL IV
EMI8.1
<Desc/Clms Page number 9>
SCHEMA REACTIONNEL V
EMI9.1
<Desc/Clms Page number 10>
I. Exemple préparatif du composé de départ IIa, selon le schéma réactionnel II : R1=CH3, RC1gH R3=CH3 Etape 1 : (N-méthyl-octadécylamino)-3-propanediol-l, 2 (la) Un mélange de glycidole (4 ml, 60 mmol) et de N-méthyloctadécylamine (16 g, 60 mmol) dans du toluène anhydre (50 ml), est porté au reflux, sous agitation, pendant 3 heures. Après évaporation du solvant, le résidu est cristallisé et l'on obtient 16 g (84 %) du composé souhaité. mp = 59 C (hexane).
M=357 CCM rf : 0,25 (CHCI3/MeOH, 80 : 20 v/v) IR (cm-l) (nujol) 3300 (OH) ; 1090,1050 (C-O) RMN-1H : CDC13, (TMS) 300 MHz 0, 82 (t, 3H, CH3) ; 1,25 [s, 30H, (CH) ls] ; 1,45 (t, 2H, NCH2CH2) ; 2,3 (s, 3H, NCH3) ; 2,5 (m, 4H, CH2-N-CH2) ; 3,3 (large s., 1H, OH) ; 3, 5 (m, 2H, H2COH) ; 3, 75 (m, 1H, CHOH).
Etape 2 : (N-méthyl-octadécylamino) -3-trityloxy-l-propan-ol-2 (2a) 50 mmol du composé la sont traités pendant 12 heures, avec
60 mmol de chlorure de trityl et de 120 mmol de triéthylamine dans 150 ml de toluène porté à ébullition. Après des traitements classiques, l'huile restante est chromatographiée (chromatographie flash, éluant : chloro- forme), pour obtenir le composé 2a (rendement 85 %). mp = 45 C.
CCM rf : 0,44 (CHCI3/MeOH 95 : 5 v/v)
IR (cm) 3500 (OH) ; 3080,3050, 3020 (ArCH) ; 1600 (C=C) ; 1080 (C-O)
RMN-1H : 300 MHz, CDC13, ó (TMS)
2,3 (s, 3H, NCHJ ; 2,5 (m, 4H, CH-N-CHz) ; 3,2 (2m, 2H,
EMI10.1
CHzOtrityl) ; 3, 9 (m, lH, H-COH) ; 7, 3, 7, 5 (m, 15H, trityl).
<Desc/Clms Page number 11>
Etape 3 : (N-méthyl-octadécylamino) -3-méthanesulfonyloxy-2-trityloxy-l propane (3a)
18 g (30 mmol) du composé 2a sont dissouts dans 100 ml d'éther anhydre et 50 ml de dichlorométhane. 6,84 g (60 mmol) de chlorure de méthanesulfonyle dans 50 ml de dichlorométhane sont alors ajoutés sous agitation et le mélange est ainsi porté au reflux pendant 5 heures. Après addition d'eau, la phase organique est décantée, séchée et évaporée. Le produit brut obtenu, est chromatographié (éluant : chloroforme), pour obtenir 16,7 g du composé 3a (80 %).
M=677
CCM rf : 0,25 (CHC13)
IR (cm-l) 1600 (C=C) ; 1370,1180 (SO2) ; 1080 (C-O)
RMN-IH : 300 MHz CDC13
2,2 (s, 3H, NCH) : 2,4 (m, 2H, NCH2) ; 2,65 (m, 2H, CH2N) ;
3 (s, 3H, CH3SO2) ; 3,35 (m, 2H, CH2OTr) ; 4 (m, 1, CHOSO2).
Etape 4 :
Méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino) -2-trityloxy-l propane (4a)
Ce composé est obtenu par réaction du composé 3a sur du méthoxyde de sodium. Rendement 68 %.
M=613
CCM rf : 0, 42 (CHC13/MeOH) ; 98 : 2 ; v/v)
IR (cm-l) 1120 (C-O-Me) 1050 (C-O) RMN-1H : 300 MHz CDC13 Ó (TMS)
2,2 (s, 3H, NCH3) ; 2,4 (m, 2H, NCH2) ; 3,05 (quintet, 1H,
CHN) ; 3,3 (s, 3H, OCH3) ; 3,35 (d, 2H, CH2OCH3) ; 3,6 (d, 2H, CH2OTr).
Etape 5 :
Méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino)-2-propanol (IIa)
<Desc/Clms Page number 12>
EMI12.1
Ce composé est obtenu par l'hydrogénolyse du composé 4a, dans du chloroforme, pendant 5 heures, à 400C et sous 40 psi (275880 Pascals), en utilisant du palladium (10 %) sur charbon actif comme catalyseur.
CCM rf : 0,17 (CHC13/MeOH ; 95 : 5 ; v/v) M=399.
IR (cm -1) 3410 (OH) ; 1120 (C-O-Me) ; 1050 (C-O-C) RMN-1H : 300 MHz, ô
EMI12.2
2, 25 (s, 3H, N-CH3) ; 2, 5 (m, 2H, NACH2) ; 3 (m, lH, CHN) 3, 30 (m, 3H, CHOCH,, OH) ; 3, 35 (s, 3H, OCH3) ; 3, 6 (m, 2H, CHOH).
II. Exemple préparatif du composé de départ IIb, selon le
EMI12.3
schéma réactionnel III : RCHs, RzigH, R :, =CH :, Etape 2 : Phényl-2-méthoxy-5-dioxane-1,3 (2b) Le composé 1b : phényl-2-hydroxy-5-dioxane-l, 3, est préparé selon Verkaade P. E. et Van Roon J. D. (Rec. Trav. Chim.
Pays-Bas, 61,831, 1942). mp = 80 C.
10 g de sels de sodium du composé 1b, obtenu par réaction avec de l'hydrure de sodium dans du diméthylformamide, est traité avec 16 g de iodure de méthyle. Le mélange est agité à 50 C pendant 5 heures, puis la diméthylformamide est éliminée sous vide. Le résidu ainsi obtenu est dissout dans du dichlorométhane, lavé et séché. Le solvant est évaporé et le produit résultant est chromatographié sur silicagel (éluant : dichlorométhane) pour obtenir le composé 2b.
Rendement : 75 %. mp : 51 C ; M = 194 CCM rf : 0, 32 (éther de pétrole/diéthyl éther 50 : 50) IR (cm-1) 3100, 3060,3040 (CH,#), 1600 (C=Cl), 1100 (C-O) RMN-1H : 60 MMz, CDCl3 TMS (#)
EMI12.4
3, 4 (s, 3H, OCH3) ; 3, 8 (s, 1H, HCOMe) ; 4 (m, 4H, CH-O) ;
EMI12.5
5, 5 (s, lH, 0 ) ; 7. 4 (m, 5H, ). ors 0 H 0 H
<Desc/Clms Page number 13>
Etape 3 : Benzyloxy-3-méthoxy-2-propanol (3b) 4,2 g du composé 2b sont dissouts dans 10 ml de tétrahydrofuranne à OOC. Puis on ajoute doucement et sous agitation, une solution de BH3 dans du tétrahydrofuranne (lM, 30 ml). L'agitation est ainsi maintenue pendant 48 heures à température ambiante. Le mélange est ensuite refroidi à 0.
C, plongé brusquement dans de l'eau froide et extrait avec de l'éther. Le solvant est éliminé et le produit brut obtenu est chromatographié (éluant : éther de pétrole/éther successivement à 80 : 20 puis 70 : 30 par volume), pour obtenir 2,6 g (62 %) du composé 3b (composé visqueux).
CCM rf : 0, 23 (éther de pétrole/diéthyl éther 50 : 50 v/v) M = 196 IR (cm-1 3400 (OH) ; 3100-3060-3040 (CH, O) ; 1600 (C=C) ; 1100 (C-O) RMN-1H : CDC13, TMS. (6) 60 MHz 2,6 (lH, OH) ; 3,4 (s, 3H, OCH3) ; 3,5 (m, 5H, glycerol)
EMI13.1
7, 3 (5H, 4, 5 (s, 2H, CH, ) ; 7, 3 (5H, ).
Etape 4 : Benzyloxy-3-méthoxy-2-méthanesulfonyloxy-l-propane (4b) On ajoute, sous agitation, 6,84 g (60 mmol) de chlorure de méthanesulfonyl dans 50 ml de dichlorométhane, à une solution de 5,88 g (30 mmol) du composé 3b et 10 ml de tri- éthylamine dans 100 ml d'éther anhydre et 50 ml de dichlorométhane ; le mélange est ainsi porté au reflux pendant 5 heures. Après addition d'eau, la phase organique est décantée, séchée et évaporée. Le produit brut obtenu est chromatographié (éluant : éther de pétrole/éther 80 : 20 par volume), pour donner 6 g (74 %) du composé 4b (composé visqueux).
CCM rf : 0,35 (CHC13) M = 274 IR (cm-l 1600 (C=C) ; 1350 (SC) ; 1170 (SO2) 1100 (C-O-) RMN-1H : CDC13, TMS (5) 60 MHz
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
3 (s, 3H, SO2CH3) ; 3, 4 (s, 3H, OMe) ; 3, 5 (d, 2H, CH2OCH2#) ; 3,8 (m, 1H, HCOMe) ; 4,4 (m, 2H, CH2OSO2) ; 4,6 (s, 2H, CH2#) ; 7,4 (5H,#).
Etape 5 : Benzyloxy-3-méthoxy-2-N, N-(méthyl-octadécyl)-propylamine (5b) 5,4 g (20 mmol) du composé 4b sont dissouts dans 15 ml de diméthylsu1foxyde, et ajoutés à une solution de 5,7 g (20 mmol) de N-méthyl-octadécylamine et 1,4 ml de triéthylamine dans 60 ml de diméthylsulfoxyde. Le mélange est agité à 80 C pendant 24 heures. Après élimination du solvant, le résidu obtenu est dissout dans du dichlorométhane, lavé avec de l'eau et séché. Le produit brut est chromatographié (éluant : dichlorométhane/méthanol 98 : 2 par volume) pour donner 4,2 g (46 %) du composé 5b (composé visqueux).
EMI14.2
CCM rf : 0, 42 (CHCl/MeOH 95 : 5, v/v) M = 461 IR (cm 1100 (C-O-) RMN-'H : CDC13, TMS (5) 60MHz 0, 9 (t, 3H, CH3) ; 1, 25 (large sing, 32H) ; 2, 3 (s, 3H, NCH3) ; 2, 6 (m, 4H, CH-N-CH) ; 3, 45 (s, 3H, OCH3) ; 3, 6 (m, 3H, CHOMe et CHOCH) ; 4, 6 (s, 2H, CH ? 7, 4 (5H, ).
Etape 6 : (N-méthyl-octadécylamino)-3-méthoxy-2-propanol (IIb) Ce composé est obtenu par hydrogénolyse, du composé 5b dans du chloroforme, pendant 5 heures, à 40 C et sous 40 psi (275880 Pascals), en utilisant du palladium (10 %) sur charbon actif comme catalyseur.
CCM rf : 0, 35 (CH2Clz/MOH, 95 : 5, v/v). M = 371 IR (cm 3450 (OH) ; 1110 (C-O-Me) ; 1060 (C-OH) RMN-1H : 60MHz, CDC13, 6 2, 3 (s, 3H, NCH3) ; 2, 6 (m, 4H, CHzNCH2) ; 3, 45 (s, 3H, OCH3) ; 3, 6 (m, 3H, CHOMe et CHOH) ; 5, 3 (1H, OH).
<Desc/Clms Page number 15>
EMI15.1
III. Exemple préparatif du composé de départ IIb, selon le schéma réactionnel III : Ri==CH :,, RCsH, R : ; ==CHg Le procédé est identique à celui de l'exemple préparatif II.
Etape 2 : Phényl-2-éthoxy-5-dioxane-l, 3 (2b) Rendement : 70 % CCM rf : 0,74 (CHCl/MeOH, 98 : 2, v/v) Etape 3 : Benzyloxy-3-éthoxy-2-propanol (3b) Rendement : 78 % CCM rf : 0,47 (CH2Cl2/MeOH, 98 : 2, v/v) Etape 4 : Benzyloxy-3-éthoxy-2-méthanesulfonyloxy-l-propane (4b) Rendement : 71 % CCM rf : 0,59 (CH2Cl2/MeOH, 99 : 1, v/v) Etape 5 : Benzyloxy-3-éthoxy-2-N, N- (méthyl-octadécyl) propylamine (5b) Rendement : 61 % CCM rf : 0,44 (CH2C12/MeOH, 95 : 5, v/v) Etape 6 : (N-méthyl-octadécylamino)-3-éthoxy-2-propanol (IIb) Rendement : 92 % CCM rf : 0,32 (CH2C12/MeOH, 95 : 5, v/v) IV. Exemple préparatif du composé de départ IIb selon le schéma réactionnel.
III : Rl =H, R2=C1SH37, R3=CH3 Le procédé des étapes 1 à 4, est identique au procédé des étapes 1 à 4 de l'exemple préparatif II.
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
Etape 5 : octadécylamino-3-méthoxy-2-benzyloxy-l-propane (5b) Le procédé est le même que celui décrit à l'étape 5 de l'exemple préparatif II, mais en remplaçant la N-(méthyl)octadécylamine par l'octadecylamine.
CCM rf : 0,39 (CH2Cl2/MeOH, 95/5, v/v).
Etape 6 : Protection du groupe amino N, N- (benzylsulfonyl octadécyl) amino-3-méthoxy-2-benzyloxy- 1-propane (5'b) Le composé 5'b est obtenu par réaction du chlorure de benzylsulfonyl sur le composé 5b, dans du dichlorométhane, en présence de triéthylamine et à la température ambiante, pendant 24 heures.
IR (cm-1) 1350 et 1190 (SO2) Etape 7 : N,N- (benzylsulfonyl octadécyl) amino-3-méthoxy-2 propane- 01-1 (IIb) Le clivage du groupe benzyl est obtenu en utilisant Me3SiI dans du dichlorométhane à température ambiante pendant 20 minutes.
CCM rf : 0, 21 (hexane, acétate d'éthyl 70 : 30 v/v).
V. Exemple préparatif du composé de départ IIb, selon le schéma réactionnel IV, voie A : R1CH3, R2=C18H37,
EMI16.2
S 3 R3=-CNHCH : t a 0 Etape 1 : (N-méthyl octadécylamino)-3-méthylcarbamoyloxy-2-trityloxy-1 propane (7b)
<Desc/Clms Page number 17>
La préparation du (N-méthyl-octadécylamino) -3-trityloxy-1 propane-ol-2 6b est illustrée par l'exemple préparatif I (étape 2).
Une solution de (N-méthyl-octadécylamino) -3-trityloxy-1propane-ol-2 6b (6. 10-3M), de pyridine (1 ml) et d'isocyanate de méthyl (1, 2 ml) dans du benzène anhydre (45 ml), est chauffée à 40 C pendant 3 jours. Après élimination du solvant, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne, avec CH2Cl2 comme éluant, pour obtenir le composé 7b.
Rendement : 80 % M = 661 CCM rf : 0,65 (CHC13/MeOH, 98 : 2, v/v) IR (cm-l) 3350 (NH) ; 3080, 3050, 3020 (ArCH), 1695 (C=O) 1600 (C=C) RMN-IH : 60 MHz, CDC13, TMS, s 2,8 (d, 3H, CONHCH3) ; 3,4 (m, 2H, CH2OTr) ; 4,8 (m, 1H, CONCH3) ; 5 (m, 1H, HCOCON) Etape 2 : (N-méthyl octadécylamino)-3-méthylcarbamoyloxy-2 propaneol-l (IIb)
EMI17.1
Ce composé est obtenu par hydrogénolyse du composé 7b.
CCM rf : 0, 35 (CHC13/MeOH, 90 : 10, v/v) M = 414 RMN-1H : 60 MHz, CDC13, TMS, 1,8 (1H, OH) ; 3,8 (d, 2H, CHOU) ; 5 (m, 1H, HCOCON) ; 6,4 (1H, CONHCH3)
EMI17.2
VI. Exemple préparatif du composé de départ IIb, selon le schéma réactionnel IV, voie B : RCHg, RigH-r,
EMI17.3
R, =-CN (CH,), n 0
<Desc/Clms Page number 18>
Etape 1 : (N-méthyl octadécylamino)-3 [N,N-(diméthyl) carbamoyloxy]-2 trityloxy-1-propane (7b) Une solution de (N-méthyl-octadécylamino) -3-trityloxY-l propane-ol-2 6b (5,4 mmol) et 1,4 g (13,5 mmol) de chlorure de diméthylcarbamoyl dans 30 ml de pyridine, est portée au reflux pendant 3 jours. Après élimination de la pyridine, le résidu obtenu est dissout dans du dichlorométhane, lavé et séché.
Le solvant est évaporé et le produit brut est chromatographié sur silicagel pour obtenir 1, 53 g (42 %) du composé 7b.
M = 675 CCM rf : 0,1 (CH2Cl2/MeOH, 91 : 1, v/v) IR (cm-1700 (C=O) ; 1600 (C=C) RMN-1H : 60 MHz, CDC13, TMS, ó 2,3 (s, 3H, NCH3) ; 2,4 (m, 2H, NCH2) ; 2,6 (m, 2H, CH2N) ;
2,8 [s, 6H, CON (CH3) 2] ; 3, 3 (m, 2H, (CH2Otrityl) ; 7,3 (m,
15H, trityl) Etape 2 : (N-méthyl octadécylamino)-3-[N,N-(diméthyl) carbamoyloxY]-2 propane-ol-1 (IIb)
Ce composé IIb est obtenu par hydrogénolyse du composé 7b.
M = 428
CCM rf : 0,43 (CH2Cl2/MeOH, 90 : 10, v/v)
IR (cm-1700 (C=O)
RMN-1H : 60 MHz, CDCl3, TMS, #
2,9 [s, 6H, N (CH3) ] ; 3, 8 (d, 2H, CHOH) ; 4 (1H, OH) ; 4,9 (m, lH, HCOCON)
VII. Exemple préparatif du composé de départ IIc, selon le schéma réactionnel V : R1=CH3, R2=C18H37, R3=CH3
<Desc/Clms Page number 19>
Etape 1 : Phényl-2-méthoxyméthyl-4-dioxolan-l, 3 (2c)
Le procédé d'obtention du composé 2c, est identique au procédé décrit dans l'exemple préparatif II, étape 2, mais 5en utilisant le phényl-2-hydrométhyl-4-dioxolanne-l, 3 lc au lieu du phényl-2-hydroxY-5-dioxanne-l, 3 lb (rendement
75 %). Produit visqueux.
CCM rf : 0,60 (CH2C12/MeOH, 98 : 2 v/v)
EMI19.1
RMN-1H : CDC13, TMS, 60MHz
EMI19.2
6. 3, 35 (s, 3H, OCH3). 3, 6 (m, 2H, CHOCHg) ; 3, 9 (m, 3H, CHO, CHO) ; 5, 8 (d, 1H, 0,/if ;). 7, 4 (m, 5H, if ;). c /C, 0 H Etape 2 : Méthoxy-3-benzyloxy-2-propanol (3c) Ce composé est obtenu par le même procédé que celui décrit dans l'exemple préparatif II, étape 3, mais en utilisant le phényl-2-méthoxyméthyl-4-dioxolanne-l, 3 2c au lieu du phényl-2-méthoxy-5-dioxanne-l, 3 2b.
Rendement : 71 % CCM rf : 0, 23 (éther de pétrole/diéthyléther, 50 : 50 v/v) RMN-1H : CDC13, TMS, 60MHz, s 2,5 (lH, OH) ; 3,3 (s, 3H, OCH3) ; 3,6 (m, 5H, squelette du glycérol) ; 4,6 (s, 2H, Cl20) ; 7,3 (5H, ).
Etape 3 : Méthoxy-3-benzyloxy-2-méthanesulfonyloxy-l-propane (4c) Ce composé est obtenu par le même procédé que celui décrit dans l'exemple préparatif II, étape 4, mais en utilisant le méthoxy-3-benzyloxy-2-propanol 3c au lieu du benzyloxy-3- méthoxy-2-propanol 3b (rendement : 64 %).
<Desc/Clms Page number 20>
: CM rf : 0, 35 (CHC13) RMN-1H CDCl3, TMS, 60MHz, # 3 (s, 3H, SO2CH3) ; 3,4 (s, 3H, OCHI) 3,5 (d, 2H, CH2OCH3) ; 3,8 (m, H, HC-OCH, O) ; 4,4 (m, 2H, CHOIS02) ; 4,65 (s, 2H, CH2#) ; 7,3 (5H, 4 > ).
Etape 4 : Méthoxy-3-benzyloxy-2-N-méthyl-N-octadécyl-propylamine (5c) Ce composé est obtenu par le même procédé que celui décrit dans l'exemple préparatif II, étape 5, mais en utilisant le méthoxy-3-benzyloxy-2-méthanesulfonyloxy-1-propane 4c au lieu du benzyloxy-3-méthoxy-2-méthanesulfonyloxy-1-propane 4b.
Rendement : 50 % CCM rf : 0, 42 (CH2Cl3/MeOH, 95 : 5, v/v) RMN-1H : 60 MHz, s 0,9 (t, 3H, CH3) ; 1,3 (large s, 32H) ; 2,3 (s, 3H, NCH3) ; 2,5 (m, 4H, CH2NCH2) ; 3,4 (s, 3H, OCH3) ; 3,6 (m, 3H, CH2OMe, CHOCH2#) ; 4,7 (s, 2H, Chia+) ; 7,3 (5H, #).
Etape 5 : (N-méthyl-octadécylamino)-3-méthoxy-l-propan-ol-2 (IIc) Ce composé est obtenu par hydrogénolyse du composé 5c dans les mêmes conditions que l'étape 6 de l'exemple préparatif II.
Rendement : 90 % CCM rf : 0,35 (CH2Cl2/MeOH, 95 : 5, v/v) VIII. Exemple préparatif du composé de départ IIc, selon le schéma réactionnel V : R1=H, R2=C18H37, R3=CH3 Les étapes 1 à 3 sont identiques aux étapes 1 à 3 de l'exemple préparatif VII.
<Desc/Clms Page number 21>
Etape 4 à 6 : La préparation de la méthoxy-3-benzyloxy-2-N-octadécyl propylamine 5c, la réaction de protection du groupe amino pour obtenir la méthoxy-3-benzyloxy-2-N- (benzylsulfonyl- octadécyl) propylamino 5'c, et le clivage du groupe benzyl, sont identiques à ce qui est décrit dans les étapes 5 à 7 de l'exemple préparatif IV.
L'invention sera mieux comprise par la description des exemples suivants : Exemple 1 : Méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino)-2-propanol phosphocholine
EMI21.1
Composé de formule Ia dans laquelle RCHg, RCH, RCHs,
EMI21.2
o 0 à + A=-P-O (CH),-, Y=N (CH,), 1- 0
EMI21.3
2 g (5 mmol) de méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino)-2-propanol IIa et 3 ml de triéthylamine, sont dissouts dans 20 ml de benzène anhydre, et le mélange est refroidi à 50C sous circulation d'azote. 1 g (7 mmol) de chloro-2-oxo-2dioxaphospholane-1,3, 2 dans 4 ml de benzène, est ajouté sous agitation, et l'agitation est maintenue toute la nuit.
Le sel d'amine est filtré et lavé avec du benzène. Le filtrat est évaporé sous pression réduite jusqu'à siccité.
Le résidu est dissout dans 20 ml de cyanure de méthyl anhydre et transféré dans un réacteur. On ajoute alors 20 ml de cyanure de méthyl saturé par de la triméthylamine gazeuse, et le mélange est ainsi chauffé à 650C pendant 24 heures. Le solide formé lors du refroidissement, est filtré et chromatographié sur silicagel (éluant chloroforme/méthanol 90 : 10, puis 70 : 30 par volume, puis le méthanol) pour obtenir 1,1 g (39 %) du composé souhaité.
<Desc/Clms Page number 22>
M = 564 ; mp = 244 C.
CCM rf : 0,256 (CHCl3/MeOH/NH4OH ; 70 : 30 : 7, v/v/v) IR (cm-1240 (P=O) ; 1090 (C-O) ; 1040 (P-O-) RMN-H : 500 MHz CD30D (TMS) ó
EMI22.1
0, 8 (t, 3H, CH) ; 1, 25 [large s, 30H, (CH) is] ; 1, 45 (t, 2H, NCHzCHz) i 2/3 (s, 3H, NCH3) ; 2, 45 (m, 2H, NACH2) ; 2, 9 (m, 1H, CHN) ; 3, 3 (s, 3H, OCH3) ; 3, 35 [s, 9H, N (CH3) 3] i 3, 5 (m, 2H, CH. OCH, 3, 5 (m, 2H, C ! zOCH3) ; 3, 7 (m/2H, CHzN) ; 3, 95 (m, 2H, CHOP) ; 4,25 (m, 2H, POCHEZ).
Exemple 2 :
EMI22.2
Bromure de méthoxY-3- (N-méthyl) octadécylamino-2-[ (N-pyridinium)-6'hexanoyloxyl-1 propane Composé de formule Ia dans laquelle Rl =CH3, Rz=ClsH37'R3=CH3,
EMI22.3
A=-C- (CH2) 5-'n=5, y=m- OD 0
EMI22.4
Du méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino)-2-propanol IIa (3, 5 g, 9 mmol) et de la triéthylamine (25 mmol) dans 15 ml de chloroforme sans éthanol, sont ajoutés goutte à goutte à une solution de chlorure de bromo-5 hexanoyl (10 mmol) dans 10 ml du même solvant, à 0 C et sous circulation d'azote. Le mélange est agité pendant 15 heures à température ambiante. Après évaporation du solvant, 30 ml de pyridine anhydre sont ajoutés au résidu obtenu, et le mélange est alors agité pendant 24 heures, à 80 C et sous azote.
La pyridine est éliminée sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne (éluant CHC13 puis CHC13/MeOH 90 : 10) pour obtenir 2, 47 g (70 %) du composé souhaité.
M = 627 CCM rf : 0, 19 (CHC13/MeOH, 70 : 30, v/v) IR (cm-1740 (C=O) ; 1640 (pyridine) RMN-1H : 500 MHz, CDC13, TMS s
<Desc/Clms Page number 23>
EMI23.1
1, 4 (m, 2H, COCH, CH, CH,) ; 1, 6 (m, 2H, COCH, CH,) ; 2, 1 (m, +''"""'+ 2H, CHCH-N) ; 2, 35 (t, 2H, COCHE) ; 5, 05 (t, 2H, CHN) ; pyridinium 8, 1 (t, 2H, his) ; 8, 6 (d, 1H, H Il) ; 9, 5 (d, 2H, H). s Exemple 3 : Bromure du méthoxy-3 (N-méthyl) octadécylamino-2-[ (N-pyridinium) -5' pentylcarbamoyl]-l propane Composé de formule Ia dans laquelle R1=CH3, Rz=C1SH37'R3=CH3,
EMI23.2
A=-C-NH (CH,) s, n=5, Y=- 0 0
EMI23.3
Un mélange comprenant du méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino)-2 propanol IIa (3, 5 g, 9 mmol), d'isocyanate de (bromo-5)-pentyl (12 mmol) et 30 ml de pyridine, est chauffé pendant 2 jours à 80 C, sous circulation d'azote.
La pyridine est éliminée sous vide et le résidu obtenu est dissout dans du chloroforme, lavé et séché. Le solvant est évaporé et le résidu obtenu chromatographié (éluant : CHCl3 puis CHCI3/MeOH, 95 : 5, 90 : 10) pour obtenir 2, 1 g (40 %) du composé souhaité.
M = 642 CCM rf : 0, 23 (CHCI3/MeOH, 70 : 30, v/v) IR (cm-l 3350 (NH), 1720, CONH), 1640 (pyridine) RMN-1H : 500 MHz, CDCl, TMS s 1, 4 (m, 2H, COCHzCHCHJ ; 1, 6 (m, 2H, COCHCH) ; 2, 1 (m, 2H, CH-CH2-N) ; 3, 25 (t, 2H, CONCH2) 5, 05 (t, 2H, CHAN) ; 5, 6 (NH) ; pyridinium 8, 1 (t, 2H,H) ; 8, 6 (d, 1H, H) ; 9. 5 (d, 2H, H Exemple 4 : (N-méthyl-octadécylamino) -3-méthoxy-2-propanol phosphocholine Composé de formule Ib dans laquelle Ri=CHs, RCgH, RCHg
<Desc/Clms Page number 24>
EMI24.1
0 à + A=-P-O (CH,),, Y=N (CH,) te 0 Ce composé est préparé par la même méthode que celle décrite dans l'exemple 1, mais en utilisant le (N-méthyl-octadécylamino)-3-méthoxy-2-propanol IIb à la place du méthoxy-3- (Nméthyl)-octadécylamino-2-propanol lia.
Rendement : 46 % M = 564 CCM rf : 0, 22 (CHCl/MeOH/NHOH, 70 : 30 7, v/v/v) IR (cm-1) 1240 (P=O) ; 1100 (C-O-) ; 1040 (P-O).
RMN-1H : 500 MHz, CD3OD, TMS (5) 0, 9 (t, 3H, CH) ; 1, 25 [large s, 30H, (CH,) ] ; 1, 5 (m, 2H, NCHCH) ; 2, 27 (s, 3H, NACH3) ; 2, 4 (m, 2H, NCH,) ; 2, 55 (m, 2H, CHAN) ; 3, 2 [s, 9H, N (CH,),] ; 3, 45 (s, 3H, LOCH3) 3, 55 (m, 1H, CHOCH3) 3, 65 (t, 2H, CHN) ; 3, 9 (m, 2H, CHOP) ; 4, 3 (m, 2H, POCHE.
Exemple 5 : (N-méthyl-octadécylamino)-3-éthoxy-2-propan-ol-l phosphocholine Composé de formule Ib dans laquelle Ri=CHs, RCigHs,
EMI24.2
0 n + R3=C2Hs, A=-P-O (CHJ,-, Y=N (CH3) 3 1- 0
EMI24.3
Ce composé est préparé par la même méthode que celle décrite dans l'exemple 1, mais en utilisant le (N-méthyl- octadécylamino)-3-éthoxy-2-propanol IIb à la place du méthoxy-3- (N-méthyl-octadécylamino) -2 propanol IIa.
Rendement : 32 % MH = 579 CCM rf : 0,195 (CHCl3/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v) RMN-1H : 500 MHz, CD3OD, TMS, #
<Desc/Clms Page number 25>
EMI25.1
0, 9 (2t, 6H, 2CH3) ; 1, 25 [large s, 30H, (CH2) lS] ; 1, 5 (m, 2H, NCHCH) ; 2,27 (s, 3H, NCH3)+ ; 2,4 (m, 2H, NCH) ; 2,55 (m, 2H, CH2N) ; 3,2 [s, 9H, N (CH3) 3] ; 3, 55 (m, 1H,
EMI25.2
HOCH3) ; 3, 65 (t+q, 4H, CHN+OCH) ; 3, 9 (m, 2H, CHOP) ; 3, 9 (m, 2H, CH20p) 4,3 (m, 2H, POCH2).
Exemple 6 : Octadécylamino-3-méthoxy-2-propan-ol-l phosphocholine
EMI25.3
Composé de formule Ib dans laquelle Ri=H, RzigHy, RH,
EMI25.4
N, N- (benzylsulfonyl octadécyl) amino-3-méthoxy-2-propan ol-l phosphocholine Ce composé est obtenu par le même procédé que décrit l'exemple 1, mais en utilisant du N, N- (benzylsulfonyl octadécyl) amino-méthoxy-2-propan-ol-l IIb au lieu du méthoxy- 3- (N-méthyl-octadécylamino) -2-propanol IIa.
Rendement : 35 % CCM rf : 0,29 (CHC13/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v) RMN-1H : 500 MHz, CD3OD, TMS (5)
EMI25.5
Octadécylamino-3-méthoxy-2-propane-ol-l phosphocholine Réaction de déprotection : Le composé est obtenu par hydrogénolyse du N, N- (benzylsul- fonyl octadécyl) amino-3-méthoxy-2-propane-ol-1 phosphocholine, en utilisant du Nickel de Raney comme catalyseur.
CCM rf : 0,17 (CHCl3/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v)
<Desc/Clms Page number 26>
M = 550 RMN-1H : 500 MHz, CD3OD, TMS (#) 3 (m, 2H, NCHz) ; 3,15 (m, 3H, NH et CH2N) ; 3,45 [s, 9H,
EMI26.1
N (CH3) 3] ; 3, 65 (s, 3H, OCH3) : 3, 8 (m, 3H, CHOCH3 et 4, 4 2H, CH20p) CHAN) ; 4, 2 (m, 2H, POCH) ; 4, 4 (m, 2H, CHOP).
Exemple 7 : (N-méthyl octadécylamino) -3-méthylcarbamoyloxy-2-propan-ol-l phosphocholine
EMI26.2
Composé de formule Ib dans laquelle Ri=CHs, RCigH, 0 m + R3=-CNHCH3, A=-P-O (CH2),-, Y=N (CH3) 3 a 1- 0 0
EMI26.3
Une solution de chloro-2-oxo-2-dioxaphospholane (2 g, 14 mmol) dans du benzène (4 ml), est ajoutée, sous circulation d'azote, à une solution refroidie (SOC) et agitée de (N-méthyl-octadécylamino)-3-méthylcarbamoyloxy-2propane-ol-l IIb (2,9 g, 7 mmol) et de 3 ml de triéthylamine dans du benzène anhydre (20 ml). Le mélange est agité pendant 8 heures à température ambiante, puis filtré. Le filtrat est évaporé sous pression réduite.
Le résidu est dissout dans CH3CN anhydre (50 ml) et transféré dans un réacteur. 30 ml de CH3CN saturé par NMe3 gazeux sont ajoutés et le mélange est ainsi chauffé à 650C pendant 24 heures. Le solvant est ensuite évaporé et le résidu obtenu est chromatographié sur silicagel (éluant CHCl3/MeOH
EMI26.4
90 : 10 puis 70 : 30 et 30 : 70, puis méthanol) pour obtenir 1, 74 g (43 %) du composé souhaité.
MH+ = 581 CCM rf : 0, 26 (CHC13/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7) IR (cm-3350 (NH) 1700 (C=O 1250 (P=O) ; 1100, 1050 (C-O-C et P-O-C) RMN-1H : CD3OD, s (TMS), 500 MHz 2, 3 (s, 3H, NCH3) ; 2, 45 (m, 3H, NCH) ; 2, 6 (m, 2H, CHN) ; 2, 75 (d, 3H, CONCH3) ; 3, 4 [s, 9H, N (CH3) 3] ; 3, 7 (m, 2H, CH : N) ; 3, 95 (m, 2H, CHOP) ; 4, 3 (m, 2H, POCHEZ) ; 5 (m, 1H, HCOCON) ; 7 (1H, CONH)
<Desc/Clms Page number 27>
EMI27.1
Exemple 8 :
(N-méthyl octadécylamino) -3- (N, N- (diméthyl) carbamoyloxY]-2propane-01-1 phosphocholine Composé de formule Ib dans laquelle RCHg, RigHsy,
EMI27.2
0 a + R3=-CN (CH3) Zf A=-P-O (CHZ) Zf Y=N (CH3) 3 "'- 0 0 Ce composé est obtenu par le même procédé que décrit l'exemple 7, mais en utilisant du (N-méthyl octadécyl-
EMI27.3
amino)-3 [N, N- (diméthyl) carbamoyloxy]-2 propane-ol-1 au lieu du (N-méthyl octadécylamino)-3-méthylcarbamoyloxy-2 propane-ol-1.
Rendement : 40 % MH = 594 CCM rf : 0,3 (CHCl3/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v) IR (cm-l 1700 (C=O) ; 1250 (P=O) ; 1100, 1050 (C-O-C, P-O-C) RMN-1H : CD3OD, TMS, 500 MHz, # 2,2 (s, 3H, NCH3) ; 2, 35 (m, 2H, NCH2) ; 2,55 (m, 2H,
EMI27.4
CH2N) ; 2, 85 [d, 6H, CON (CH3) 2] ; 3, 25 [s, 9H, N (CH3) 3] ; 3,55 (m, 2H, CH2N) ; 3,9 (m, 2H, CH2OP) ; 4,25 (m, 2H, POCHEZ) ; 4,95 (m, 1H, HCOCON) Exemple 9 :
(N-méthyl-octadécylamino)-3-méthoxy-l-propan-ol-2 phospho- choline
EMI27.5
Composé de formule Ic dans laquelle R1=CH3, R=Cl8H37,
EMI27.6
o 0 m + R, =CH., Y=-P-0 (CHz) 2, Y=N (CH3) 3 1- 0 Ce composé est obtenu par le même procédé que décrit l'exemple 1, mais en utilisant du (N-méthyloctadécylamino)- 3-méthoxy-l-propan-ol-2 (IIc) au lieu du (N-méthyl-octa- décylamino) -2-méthoxy-3-propanol (IIa).
<Desc/Clms Page number 28>
CCM rf : 0,24 (CHCl3/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v) Rendement : 35 % mp : 248 C IR (cm-1) 1240 (P=O) ; 1100 (C-O) ; 1040 (P-0) RMN-1H : 500MHz, CD3OD, (TMS) #
EMI28.1
0, 82 (t, 3H, CH3) ; 1, 25 [s, 30H, (CHz) ] ? 1, 45 (t, 2H, N-CHzCHs) ; 2, 2 (s, SH.
NCH3) ; 2, 35 (m, 2H, NCHz) ; 2, 55 (m, 2H, CHzN) ; 3, 2 [s, 9H, N2 (chu 3, 35 (s, 3H, OCH3) ; 3, 5 (m, 2H, CH, OCHA) 3, 6 (m, 2H, CH2N+) ; 4, 25 (m, 2H, POCH2) ; 4, 3 (1H, 4, 3 (lH, CHOP). Exemple 10 :
EMI28.2
Octadécy1amino-1-méthoXY-3-propan-ol-2 phosphocholine Composé de formule le dans laquelle Ri=H, RzigHgy, I=CHs,
EMI28.3
o 0 m + A=-P-O (CH,) Y=$ (CH 1- 0
EMI28.4
Ce composé est obtenu par le même procédé que décrit dans l'exemple 6, en utilisant la préparation et la déprotection du N, N- (benzylsulfonyloctadécyl) amino-l-méthoxy-3 propan ol-2 phosphocholine.
M = 550 CCM rf : 0,20 (CHCl3/MeOH/NH4OH, 70 : 30 : 7, v/v/v) RMN-1H : 500 MHz, CD3OD, (TMS) # 2,9 (m, 3H, NH et NCH2) ; 3,1 (m, 2H,CH2N) ;+ 3,4 [s, 9H, N (CHJ, J ; 3,55 (s, 3H, OCH3) ; 3,7 (m, 2H, CH2N) ; 3,85 (m, 2H, CH2OMe) ; 4,5 (m, 2H, POCH2) ; 4,6 (m, 1H, CHOP).
TOXICITE La toxicité des composés de l'invention, a été déterminée per os sur la souris, par des méthodes usuelles. Leurs DLso sont supérieures à 650 mg/kg.
<Desc/Clms Page number 29>
PHARMACOLOGIE Les composés selon l'invention, ont été étudiés pour leur habilité à inhiber la prolifération de cellules tumorales in vitro.
Ils inhibent la prolifération des cellules tumorales HL. 60 et A. 427 après 24 heures.
HL. 60 : cellule de leucémie promyélocytique A. 427 : cellule de carcinome pulmonaire Ils montrent un effet cytostatique à la dose de 0,02 mM qui n'est pas une dose toxique pour les deux lignées de cellules tumorales humaines. La lignée de cellules de carcinome pulmonaire semble plus sensible que la lignée de cellule de leucémie promyélocytique.
L'effet des composés selon l'invention, sur la prolifération à long terme, est décrit plus précisément comme suit.
Tous les exemples de l'invention ont été testés et comparés avec deux composés voisins, retenus dans l'état de la technique :-l'octadécyl-0-1 méthylglycéro-0-2 phosphocho- line-3 (Et-18-0CH3 ou méthoxy-PAF, Andreesen,
1988).
- l'octadécyl-3 tétradécyl-O-l propane-diol-
1, 2-phosphocholine-0-2 [composé (D) ; Brevet
EP 130 527].
Pour cette étude, une lignée de cellules d'adénocarcinome de côlon, appelée aussi HT. 29, a été utilisée ; ce sont des cellules capables d'adhérer à un substrat. Les cellules HT. 29 sont cultivées dans un milieu Mc Coy, complété avec du sérum bovin foetal 10 % (SBF ; Gibco). Le milieu de croissance contient 100 U/ml de pénicilline et 100 gg/ml de streptomycine (Flow Labs).
<Desc/Clms Page number 30>
Les composés de l'invention ainsi que les composés (D) et Et-lS-OCHg, sont dissouts dans une solution contenant 60 % d'éthanol et 40 % de tampon salin de phosphate. Les dilutions en série sont préparées dans le même tampon phosphate.
La dose testée est de 0,02 mM. Le temps de traitement dure 24 heures à 37oC.
L'effet des composés de l'invention sur la prolifération des cellules à long terme et sur leur survie, a été évalué en étudiant l'efficacité de clonage et la morphologie des colonies de cellules HT. 29. Pour mener cette étude, 5. 102 de cellules HT. 29, préalablement traitées par les différents composés, pendant 24 heures, sont déposées dans des fioles de culture tissulaire de 25 cm2.
EMI30.1
Ces cultures cellulaires sont alors incubées à 37 C pendant 15 jours. A la fin de ce temps d'incubation, les cultures cellulaires sont rinsées deux fois avec le tampon phosphate, fixées avec de l'éthanol à 70 % pendant 30 minutes et teintées pendant le même temps avec du Giemsa 10 % (Sigma Chemicals).
Les résultats correspondent à la valeur de 1'"efficacité de clonage relative", calculée comme suit :
EMI30.2
Nombre de colonies formées E. C. = x 100 Nombre de cellules recouvertes et sont rassemblés dans les tableaux suivants.
Il a été montré que les colonies formées, après traitement par les composés de l'invention, ont perdu leur profil régulier, ont une réaction plus faible à la tache de Giemsa et leur taille est plus petite que les colonies non traitées.
<Desc/Clms Page number 31>
EMI31.1
<tb>
<tb>
COMPOSES <SEP> E. <SEP> C. <SEP> (%) <SEP> COMPOSES <SEP> E.C. <SEP> (%)
<tb> Témoin <SEP> 100 <SEP> + <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> EX <SEP> 5 <SEP> 20, <SEP> 6 <SEP> + <SEP> 1, <SEP> 7**
<tb> Etch <SEP> 39. <SEP> : <SEP> t. <SEP> 1,5 <SEP> EX <SEP> 6, <SEP> 26,4 <SEP> + <SEP> 1, <SEP> 7**
<tb> (D) <SEP> 34 <SEP> +2,3 <SEP> **
<tb> EX <SEP> 7 <SEP> 22,3 <SEP> + <SEP> 2,2 <SEP> ***
<tb> EX <SEP> 1 <SEP> 21,9 <SEP> + <SEP> 1,0 <SEP> ***
<tb> EX <SEP> 8 <SEP> 19,9 <SEP> + <SEP> 0,9 <SEP> ***
<tb> EX <SEP> 2 <SEP> 24,3 <SEP> + <SEP> 1,4 <SEP> **
<tb> EX <SEP> 3 <SEP> 27,1 <SEP> + <SEP> 2,1* <SEP> EX9 <SEP> 20,2 <SEP> + <SEP> 1,2 <SEP> **
<tb> EX <SEP> 4 <SEP> 45, <SEP> 6 <SEP> + <SEP> 3, <SEP> 0 <SEP> NS <SEP> EX <SEP> 10 <SEP> 25, <SEP> 4 <SEP> + <SEP> 2,
<SEP> 7
<tb>
Les symboles statistiques se réfèrent à la comparaison entre chaque composé et le composé Et-18-0CH3. Les différents symboles : NS, *, ** et *** signifient que le résultat est respectivement non significatif, significatif, très significatif et hautement significatif.
POSOLOGIE
En thérapie humaine, Les composés de L'invention sont administrés de préférence par voie I. V. La posoLogie usuelle est de 2, 5 à 5 mg/dm2 par jour, 3 à 6 jours par mois en perfusion lente.