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Articles de fabrication.
Référence croisée à des applications apparentées.
La présente demande revendique le bénéfice de la demande de brevet provisoire n 60/132 036 déposée le 30 avril 1999.
Domaine de l'invention.
La présente invention concerne des inhibiteurs d'enzyme phosphodiestérase (PDE) hautement sélectifs et leur utilisation dans des articles de fabrication pharmaceutiques. En particulier, l'invention concerne des inhibiteurs puissants du type phosphodiestérase 5 (PDE5) spécifique au 3', 5'monophosphate de guanosine cyclique qui, lorsqu'ils sont incorporés à un produit pharmaceutique, sont utiles pour le traitement d'un dysfonctionnement sexuel. Les articles de fabrication décrits dans la demande sont caractérisés par des inhibiteurs de PDE5 sélectifs et, en conséquence, apportent des avantages dans des domaines thérapeutiques où l'inhibition du PDE5 est souhaitée, en minimisant ou en éliminant les effets secondaires défavorables résultant de l'inhibition d'autres enzymes de type phosphodiestérase.
Arrière-plan de l'invention.
Les effets biochimiques, physiologiques et cliniques d'inhibiteurs de phosphodiestérase spécifique au 3', 5'-monophosphate de guanosine cyclique (PDE spécifique au cGMP) suggèrent leur utilité dans une variété d'états d'affection dans lesquels on souhaite une modulation des muscles lisses et des fonctions rénales, hémostatiques, inflammatoires et/ou endocriniennes. La phosphodiestérase spécifique au cGMP
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de type 5 (PDE5) est la principale enzyme d'hydrolyse du cGMP dans des muscles lisses vasculaires et son expression dans le penile corpus cavernosum a été déjà mentionnée (Taher et coll. J. Urol., 149 : 285A (1993)).
La PDE5 est donc une cible attractive dans le traitement d'un dysfonctionnement sexuel (Murray, DN & P 6 (3) : 150-56 (1993)).
Un produit pharmaceutique, qui fournit un inhibiteur de PDE5, est couramment disponible et commercialisé sous la marque déposée VIAGRA@.
L'ingrédient actif du VIAGRA (B est le sildénafil. Le produit est vendu sous la forme d'un article de fabrication comprenant des comprimés de sildénafil de 25,50 et 100 mg et une notice explicative. La notice explicative établit que le sildénafil est un inhibiteur de PDE5 plus puissant que d'autres phosphodiestérases connues (supérieur à 80 fois pour l'inhibition de la PDE1, supérieur à 1000 fois pour l'inhibition de la PDE2, de la PDE3 et de la PDE4). On a indiqué que la valeur ICso du sildénafil contre la PDE5 était de 3 nM (Drugs of the Future, 22 (2), pages 128-143 (1997) ) et de 3,9 nM (Boolell et coll., Int. J. of Impotence Res., 8 pages 47-52 (1996) ).
Le sildénafil est décrit comme ayant une sélectivité de 4000 fois pour la PDE5 par rapport à la PDE3 et une sélectivité de seulement de 10 fois pour la PDE5 par rapport à la PDE6. On pense que son manque de sélectivité relative pour la PDE6 est la base des anomalies apparentées à la vision des couleurs.
Bien que le sildénafil ait obtenu un important succès commercial, il a tourné court en raison de ses importants effets secondaires défavorables, notamment une rougeur faciale (taux
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d'incidence de 10%). Des effets secondaires désavantageux limitent l'utilisation du sildénafil chez des patients souffrant d'anomalies visuelles, d'hypertension et, ce qui est très important, chez les individus qui utilisent des nitrates organiques (Welds et coll., Amer. J. of Cardiology. 83 (5A), pages 21 (C)- 28 (C) (1999)).
On pense que l'utilisation de sildénafil chez des patients prenant des nitrates organiques provoque une chute cliniquement importante de la pression sanguine qui pourrait mettre le patient en danger. En conséquence, la notice explicative pour le sildénafil fournit des contre-indications strictes contre son emploi en combinaison avec des nitrates organiques (par exemple la nitroglycérine, le mononitrate d'isosorbide, le dinitrate d'isosorbide, le tétranitrate d'érythrityle) et d'autres donneurs d'oxydes nitriques sous une forme quelconque, régulièrement ou par intermittence, du fait que le sildénafil potentialise les effets hypotenseurs des nitrates. Se référer à C. R. Conti et coll., Amer. J. of Cardiology, 83 (5A), pages 29C-34C (1999).
Ainsi, même avec la disponibilité du sildénafil, il reste un besoin d'identifier des produits pharmaceutiques améliorés utilisables dans le traitement d'un dysfonctionnement sexuel.
L'invention vise un article de fabrication à usage pharmaceutique humain, comprenant une notice explicative, un récipient et une forme de dosage orale comprenant un inhibiteur de PDE5 sélectif en doses unitaires comprises entre environ 1 et 20 mg par forme de dosage. Les effets bénéfiques de l'invention ont été observés dans des études cliniques et en découvrant qu'un inhibiteur de PED5 sélectif répondant aux
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critères suivants permettait l'administration orale efficace d'environ 1 à environ 20 mg par forme de dosage sans contre-indications généralement nécessaires pour les produits inhibiteurs de PDE5, tels que des avertissements visant des anomalies de la vision.
Un inhibiteur de PDE5 sélectif de l'invention présente :
1) au moins une différence de 100 fois des valeurs
IC5o pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDE6 pour un inhibiteur de PDE5 particulier (c'est-à-dire que la valeur ICso par rapport à la
PDE5 est d'au moins 100 fois inférieur à la valeur ICso par rapport à la PDE6) ;
2) au moins une différence de 1000 fois des valeurs
ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDElc ; et
3) une valeur ICso inférieure à 10 nM.
De manière importante, les études cliniques ont également révélé qu'on pouvait obtenir un produit efficace ayant une tendance réduite à provoquer des rougeurs chez des individus sensibles. De manière tout à fait inespérée, le produit peut également être administré avec des effets secondaires cliniquement insignifiants associés aux effets combinés d'un inhibiteur de PDE5 et d'un nitrate organique. La contre-indication que l'on pensait nécessaire pour un produit contenant un inhibiteur de PDE5 est donc inutile lorsqu'un inhibiteur de PDE5 sélectif, tel que défini ci-dessus, est utilisé comme décrit dans la présente demande.
L'invention vise donc une thérapie efficace pour un dysfonctionnement sexuel chez des individus qui ne pouvaient être traités antérieurement ou souffraient d'effets secondaires inacceptables, notamment chez des individus ayant une affection
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cardio-vasculaire, tels que les individus nécessitant une thérapie aux nitrates, ayant souffert d'un infarctus du myocarde plus de trois mois avant le début de la thérapie du dysfonctionnement sexuel, et souffrant d'une attaque cardiaque par congestion de classe 1, comme défini par la New York Heart Association (NYHA), ou chez des individus souffrant d'anomalies de la vision.
Résumé de l'invention.
L'invention vise un article de fabrication à usage pharmaceutique humain comprenant une notice explicative, un récipient et une forme de dosage orale comprenant environ 1 à environ 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif par forme de dosage.
L'invention vise par ailleurs un procédé de traitement d'états dans lesquels on souhaite une inhibition de la PDE5, ledit procédé comprenant l'administration à un patient qui en a besoin d'une forme de dosage orale contenant environ 1 à environ 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif, selon les besoins, jusqu'à une dose totale de 20 mg/jour. L'invention vise par ailleurs l'utilisation d'une forme de dosage orale comprenant un inhibiteur de PDE5 sélectif en dose d'environ 1 à environ 20 mg pour le traitement d'un dysfonctionnement sexuel.
Les états spécifiques qui peuvent être traités par le procédé et l'article de l'invention comprennent, mais sans limitation, un dysfonctionnement de l'érection chez les hommes et un dysfonctionnement sexuel chez les femmes, en particulier des troubles d'excitation chez les femmes, également connus comme troubles d'excitation sexuelle chez les femmes.
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En particulier, l'invention vise un article de fabrication pour usage pharmaceutique humain comprenant : (a) une forme de dosage orale comprenant environ 1 à environ 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif ayant : (i) au moins une différence de
100 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDE6, (ii) au moins une différence de
1000 fois des valeurs IC5o pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDElc, (iii) une valeur ICso inférieure à
10 nM, et (iv) une biodisponibilité suffisante pour être efficace en dosages oraux unitaires d'environ 1 à environ 20 mg ;
(b) une notice explicative montrant que l'inhibiteur de PDE5 est utile pour le traitement d'un dysfonctionnement sexuel chez un patient qui en a besoin, et est exempt de contre-indications associées à l'administration de nitrates organiques ; et (c) un récipient.
L'invention concerne par ailleurs un article de fabrication pour usage pharmaceutique humain comprenant : (a) une forme de dosage orale comprenant environ 1 à environ 20 mg d'inhibiteur de PDE5 sélectif ayant :
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(i) au moins une différence de
100 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDE6, (ii) au moins une différence de
1000 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDElc, (iii) une valeur ICso inférieure à
10 nM, et (iv) une biodisponibilité suffisante pour être efficace en dosages oraux unitaires d'environ 1 à environ 20 mg ; (b) une notice explicative montrant que l'inhibiteur de PDE5 est utile pour le traitement d'un dysfonctionnement sexuel chez un patient qui en a besoin, et qui utilise un nitrate organique ; et (c) un récipient.
L'invention vise également un article de fabrication pour usage pharmaceutique humain comprenant : (a) une forme de dosage orale comprenant environ 1 à 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif ayant : (i) au moins une différence de
100 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDE6, (ii) au moins une différence de
1000 fois des valeurs ICso pour
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l'inhibition de la PDE5 par rapport à la PDElc, (iii) une valeur ICso inférieure à
10 nM, et (iv) une biodisponibilité suffisante pour être efficace en dosages oraux unitaires d'environ 1 à environ 20 mg ;
(b) une notice explicative montrant que l'inhibiteur de PDE5 est utile pour le traitement d'un dysfonctionnement sexuel chez un patient qui en a besoin, et qui souffre d'un état choisi dans le groupe constitué d'une affection de la rétine, d'une propension aux rougeurs, d'une propension à des anomalies de la vision, à une attaque cardiaque par congestion de classe 1, à un infarctus du myocarde 90 jours ou plus avant le début du traitement du dysfonctionnement sexuel, et leurs combinaisons ; et (c) un récipient.
Description détaillée de l'invention.
Dans le cadre de l'invention tel que décrit ci-dessous, on définit comme suit les termes et les abréviations suivants.
Le terme"récipient"désigne un réceptacle quelconque et son couvercle convenant au stockage, à l'expédition, à la distribution et/ou à la manipulation d'un produit pharmaceutique.
Le terme"ICso"est la mesure de la puissance d'un composé pour inhiber une enzyme PDE particulière (par exemple, PDElc, PDE5 ou PFE6). La valeur ICso est la concentration d'un composé qui entraîne une
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inhibition de 50% de l'enzyme dans un essai de réponse à une dose unique. La détermination de la valeur ICso d'un composé est aisément réalisée par une méthodologie in vitro connue généralement décrite par Y. Cheng et coll., dans Biochem. Pharmacol., 22, pages 3099-3108 (1973).
L'expression"notice explicative"désigne les informations accompagnant le produit qui donnent une description de la manière dont le produit doit être administré ainsi que les données de sécurité et d'efficacité requises pour permettre au médecin, au pharmacien et au patient de prendre une décision informée concernant l'utilisation du produit. La notice explicative est généralement considérée comme "l'étiquette"d'un produit pharmaceutique.
L'expression"forme de dosage orale"est utilisée dans un sens général pour se référer à des produits pharmaceutiques administrés par voie orale. Les formes de dosage orales sont, selon les experts en la technique, censées comprendre des formes telles que des formulations liquides, des comprimés, des capsules et des gélules.
L'expression"inhibiteur de PDE5 sélectif" définit un inhibiteur de PDE5 ayant :
1) une valeur ICso pour l'inhibition de la PDE5 d'au moins 100 fois inférieure à la valeur IC50 pour l'inhibition de la PDE6 ;
2) une valeur ICso pour l'inhibition de la PDE5 d'au moins 1000 fois inférieure à la valeur ICso pour l'inhibition de la PDElc ; et
3) une valeur ICso pour l'inhibition de la PDE5 inférieure à 10 nM.
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Les inhibiteurs de PDE5 sélectifs ont une structure chimique qui varie de manière notable et leur utilisation dans l'invention ne dépend pas de la structure chimique, mais plutôt des paramètres de sélectivité et de puissance qui sont décrits dans la demande.
L'expression"anomalie de la vision"désigne une vision anormale caractérisée par une vision bleuvert dont on pense qu'elle est provoquée par l'inhibition de la PDE6.
Le terme "rougeur" désigne une rougeur épisodique du visage et du cou attribuée à une vasodilatation provoquée par l'ingestion d'un médicament, habituellement accompagnée d'une sensation de chaleur sur le visage et le cou et quelquefois accompagnée d'une transpiration.
L'expression"médicament libre"désigne des particules solides d'un médicament qui ne sont pas noyées de manière intime dans un coprécipité polymère.
Comme mentionné précédemment, l'invention vise un article de fabrication à usage pharmaceutique humain, comprenant une notice explicative, un récipient et une forme de dosage comprenant environ 1 à environ 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif par forme de dosage unitaire. Un inhibiteur de PDE5 sélectif utilisable dans l'invention est un inhibiteur de PDE5 ayant :
1) au moins une différence de 100 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDE6 ;
2) au moins une différence de 1000 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDElc ; et
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3) une valeur ICso inférieure à 10 nM ; et est suffisamment biodisponible pour être efficace en doses unitaires d'environ 1 à environ 20 mg.
La différence est exprimée par le rapport PDE6/PDE5 des valeurs IC50, c'est-à-dire que le rapport de la valeur ICso par rapport à la PDE6 à la valeur ICso par rapport à la PDE5 (PDE6/PDE5) est supérieur à 100, mieux encore supérieur à 300, bien mieux encore supérieur à 500.
De la même manière, le rapport de la valeur ICso par rapport à la PDElc à la valeur ICso par rapport à la PDE5 (PDElc/PDE5) est supérieur à 1000. Les inhibiteurs de PDE5 préférés ont une différence supérieure à 3000 fois entre l'inhibition de la PDE5 et l'inhibition de la PDElc, mieux encore une différence supérieure à 5000 fois entre la valeur ICso par rapport à la PDE5 et celle par rapport à la PDElc. La puissance de l'inhibiteur, comme représenté par la valeur ICso par rapport à la PDE5, est inférieure à 10 nM, de préférence inférieure à 5 nM, mieux encore inférieure à 2 nM, bien mieux encore inférieure à 1 nM.
La notice explicative fournit une description de la manière dont le produit pharmaceutique doit être administré conjointement avec les données de sécurité et d'efficacité nécessaires pour permettre au médecin, au pharmacien et au patient de prendre une décision informée concernant l'utilisation du produit. La notice explicative est généralement considérée comme l'étiquette du produit pharmaceutique. La notice explicative incorporée au présent article de fabrication indique que l'inhibiteur de PDE5 sélectif est utile dans le traitement d'états dans lesquels on souhaite une inhibition de la PDE5. La notice
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explicative fournit également les instructions sur le mode d'administration d'une ou plusieurs formes de dosage unitaires d'environ 1 à environ 20 mg selon les besoins jusqu'à une dose totale maximale de 20 mg/jour.
De préférence, la dose administrée est d'environ 5 à environ 20 mg/jour, mieux encore d'environ 5 à environ 15 mg, bien mieux encore d'environ 5 mg ou d'environ 10 mg de forme de dosage administrée une fois par jour, selon les besoins.
Les états préférés à traiter comprennent un dysfonctionnement sexuel (notamment un dysfonctionnement de l'érection chez les hommes ; et un dysfonctionnement sexuel chez les femmes, mieux encore des troubles d'excitation chez les femmes (FAD)).
L'état préféré à traiter est le dysfonctionnement de l'érection chez les hommes.
De manière importante, la notice explicative supporte l'utilisation du produit pour traiter un dysfonctionnement sexuel chez des patients souffrant d'une affection de la rétine, par exemple une rétinopathie diabétique ou une retinitis pigmentosa, ou chez des patients qui utilisent des nitrates organiques. La notice explicative est donc de préférence exempte de contre-indications associées à ces états et, en particulier, à l'administration de la forme de dosage avec un nitrate organique. Mieux encore, la notice explicative est également exempte de toutes précautions ou avertissements tous associés à des affections de la rétine, en particulier la retinitis pigmentosa, et associés à des individus qui sont sujets à des anomalies de la vision.
De préférence, la notice explicative mentionne également des incidences de rougeurs en dessous de 2%, de
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préférence en dessous de 1%, mieux encore en dessous de 0,5%, chez les patients auxquels la forme de dosage est administrée. Le taux d'incidence de rougeurs montre une nette amélioration par rapport aux produits pharmaceutiques antérieurs contenant un inhibiteur de PDE5.
Le récipient utilisé dans le présent article de fabrication est classique dans la technique pharmaceutique. En général, le récipient est un emballage pelliculé, un paquet en feuille métallique, une bouteille de verre ou de matière plastique avec son bouchon ou son couvercle associé, ou un autre article de ce type convenant à une utilisation par le patient ou le pharmacien. De préférence, le récipient est dimensionné de manière à recevoir 1-1000 formes de dosage solides, de préférence 1 à 500 formes de dosage solides, bien mieux encore 5 à 30 formes de dosage solides.
Les formes de dosage orales contiennent, comme cela est admis par les experts en la technique, par exemple, des formes telles que des formulations liquides, des comprimés, des capsules et des gélules. De préférence, les formes de dosage sont des formes de dosage solides, en particulier des comprimés comprenant environ 1 à 20 mg d'un inhibiteur de PDE5 sélectif. N'importe quel excipient pharmaceutiquement acceptable pour un usage oral convient à la préparation de ces formes de dosage. Des formes de dosage pharmaceutiques appropriées comprennent des formes de coprécipité décrites, par exemple, dans le brevet U. S. n 5 985 326 délivré à Butler et incorporé à la présente demande par référence.
Dans des formes de réalisation préférées, la forme de dosage unitaire de l'invention est une forme
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solide exempte d'un coprécipité de l'inhibiteur de PDE5, mais contient plutôt un inhibiteur de PDE5 solide sous la forme d'un médicament libre.
De préférence, les comprimés comprennent des excipients pharmaceutiques généralement reconnus comme sûrs tels que le lactose, la cellulose microcristalline, l'amidon, le carbonate de calcium, le stéarate de magnésium, l'acide stéarique, le talc et le dioxyde de silicium colloïdal, et sont préparés par des techniques de fabrication pharmaceutiques standard, telles que décrites dans Remington's Pharmaceutical .Sciences, gs édition., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990).
Ces techniques comprennent, par exemple, une granulation humide suivie d'un séchage, d'un broyage et d'une compression en comprimés avec ou sans enrobage d'un film ; une granulation à sec suivie d'un broyage, une compression en comprimés avec ou sans enrobage d'un film ; un mélange à sec suivi d'une compression en comprimés avec ou sans enrobage d'un film ; des comprimés moulés ; une granulation humide suivie d'un séchage et d'une introduction dans des capsules de gélatine ; un mélange à sec introduit dans des capsules de gélatine ; ou une suspension ou une solution introduite dans des capsules de gélatine. Généralement, les formes de dosage solides ont des marques d'identification qui sont imprimées sur la surface.
L'invention est basée sur des essais détaillés et des tests cliniques et sur les observations inespérées que des effets secondaires dont on pensait précédemment qu'ils indiquaient une inhibition de la PDE5 peuvent être réduits à des niveaux cliniquement insignifiants par la sélection d'un inhibiteur de PDE5 sélectif ayant les
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caractéristiques spécifiques soulignées dans la présente demande, à savoir :
1) au moins une différence de 100 fois des valeurs ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDE6 ;
2) au moins une différence de 1000 fois des valeurs
ICso pour l'inhibition de la PDE5 par rapport à la
PDElc ; et
3) une valeur ICso pour l'inhibition de la PDE5 inférieure à 10 nM.
Cette observation inespérée a permis le développement d'articles de fabrication qui contiennent un inhibiteur de PDE5 sélectif en formes de dosage unitaires d'environ 1 à 20 mg, qui, lorsqu'ils sont administrés oralement, minimisent les effets secondaires non souhaités que l'on considérait antérieurement comme inévitables. Ces effets secondaires comprennent une rougeur faciale, des anomalies de la vision et une réduction significative de la pression sanguine, lorsque l'inhibiteur de PDE5 est administré seul ou en combinaison avec un nitrate organique.
L'effet minimal d'un inhibiteur de PDE5 présent, administré en formes de dosage unitaires d'environ 1 à environ 20 mg, par rapport à la PDE6 permet également l'administration d'un inhibiteur de PDE5 sélectif à des patients souffrant d'une affection de la rétine, telle qu'une rétinopathie diabétique ou une retinitis pigmentosa.
Un inhibiteur de PDE5 sélectif de ce type,
EMI15.1
c'est-à-dire la (6R-trans) -6- (1, 3-benzodioxol-5-yl) - 2, 3, 6, 7, 12, 12a-hexahydro-2-méthylpyrazino[1', 2' : 1, 6] pyrido[3, 4-b]indole-1, 4-dione, également dénommée (6R, 12aR)-2, 3, 6, 7, 12, 12a-hexahydro-2-méthyl-6- (3, 4-
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méthylène-dioxyphényl) pyrazino[2', l' : 6, l] p. yrido [3, 4b] indole-l, 4-dione, est décrit par Daugan dans le brevet U. S. n 5 859 006 et est représenté par la formule structurelle suivante (I) :
EMI16.2
On a constaté dans des études cliniques humaines que le composé de formule (I) exerçait un impact minimal sur la pression sanguine systolique lorsqu'il était administré conjointement avec des nitrates organiques.
Par contre, le sildénafil, lorsqu'il est administré avec des nitrates, montre une réduction supérieure à quatre fois de la pression sanguine systolique par rapport à un placébo, ce qui entraîne les contre-indications de la notice explicative du VIAGRA (D et les avertissements à certains patients.
Les inhibiteurs de PDE5 sélectifs varient notablement en structure chimique et l'utilisation d'un inhibiteur de PDE5 sélectif, tel que défini dans l'invention, ne dépend pas d'une structure chimique particulière, mais plutôt des paramètres critiques soulignés dans la demande. Cependant, les composés préférés ayant la puissance et la sélectivité requises
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peuvent être aisément identifiés par des tests décrits dans la demande à partir de ceux décrits par Daugan
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dans le brevet U. S. n 5 859 006, par Daugan et coll. dans le brevet U. S. n 5 981 527 et par Daugan et coll. dans le brevet U. S. n 6 001 847, chacun de ces brevets étant incorporé à la présente demande par référence.
Des composés préférés du brevet U. S. n 5 859 006 de Daugan et du brevet n 5 981 527 de Daugan et coll. sont représentés par la formule structurelle (II) suivante :
EMI17.2
dans laquelle : R est choisi dans le groupe constitué de l'hydrogène, d'un halogène et d'un alkyle en Cl-6 ;
R1 est choisi dans le groupe constitué de l'hydrogène, d'un alkyle en Cl-6, d'un alcényle en C2-6, d'un alcynyle en C2-6, d'un haloalkyl en Cl-6, d'un cycloalkyle en C3-8, d'un cycloalkyle (C3-8) alkyle en Cl-3, d'un arylalkyle en Cl-3, dans lequel l'aryle est un phényle ou un phényle substitué par un à trois substituants choisis dans le groupe constitué d'un halogène, d'un alkyle en Cl-6, d'un alcoxy en Cl-6, d'un méthylènedioxy et de leurs mélanges, et d'un hétéroarylalkyle en Cl-3, dans lequel l'hétéroaryle est un thiényle, un furyle ou un pyridyle, chacun étant facultativement substitué par un à trois substituants
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choisis dans le groupe constitué d'un halogène, d'un alkyle en Cl-6, d'un alcoxy en Cri-6 et de leurs mélanges ;
R2 représente un noyau aromatique monocyclique facultativement substitué choisi parmi le benzène, le thiophène, le furanne et la pyridine, ou un noyau bicyclique facultativement substitué :
EMI18.1
fixé au restant de la molécule par l'entremise d'un des atomes de carbone du noyau de benzène, et dans lequel le noyau fusionné A est un noyau à 5 ou 6 membres, saturé ou partiellement ou complètement insaturé, et comprend des atomes de carbone et, en option, un ou deux hétéroatomes choisis dans le groupe constitué de l'oxygène, du soufre et de l'azote ;
R3 représente de l'hydrogène ou un alkyle en Ci-3, ou RI et R3 représentent conjointement une chaîne alkyle ou alcényle à 3 ou 4 membres ; et les sels et les solvates de ces composés.
D'autres composés préférés sont ceux de formule (II) dans lesquels : RO est de l'hydrogène, un halogène ou un alkyle en Cl6 ;
Rl est de l'hydrogène ou un alkyle en Cri-6 ; R2 est le noyau bicyclique :
EMI18.2
qui peut être facultativement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi un halogène et un alkyle en Cl-3 ; et
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R3 est de l'hydrogène ou un alkyle en Cl-3.
Le tableau I suivant illustre les valeurs ICso de la PDE5 et de la PDE6 pour des inhibiteurs de PDE5 sélectifs représentatifs décrits dans le brevet U. S. n 5 859 006, comme déterminé par des procédures décrites dans la demande.
EMI19.1
<tb>
<tb>
Tableau <SEP> I
<tb> Composé <SEP> ICso <SEP> PDE5 <SEP> (nM) <SEP> ICso <SEP> PDE6 <SEP> (nM) <SEP> PDE6/PDE5
<tb> 1 <SEP> 5 <SEP> 663 <SEP> 133
<tb> 2 <SEP> 2 <SEP> 937 <SEP> 469
<tb> 3 <SEP> 2 <SEP> 420 <SEP> 210
<tb> 4 <SEP> 5 <SEP> 729 <SEP> 146
<tb> 5 <SEP> 2, <SEP> 5 <SEP> 3400 <SEP> 1360
<tb>
Le composé 5 du tableau I a la formule structurelle (I) et présente en outre une valeur ICso contre la PDElc de 10 000 et un rapport PDElc/PDES de 4000.
Les structures des composés 1-5 du tableau I sont identiques à la formule structurelle (II) dans laquelle R , RI, R2 et R3 sont comme suit :
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EMI20.1
<tb>
<tb> Composé <SEP> R0 <SEP> R1 <SEP> R1 <SEP> R1
<tb> 1 <SEP> H <SEP> # <SEP> # <SEP> H
<tb> 2 <SEP> H <SEP> CH1 <SEP> # <SEP> H
<tb> 3 <SEP> H <SEP> # <SEP> # <SEP> H
<tb> 4 <SEP> H <SEP> H <SEP> # <SEP> CH3
<tb> 5 <SEP> H <SEP> CH1 <SEP> # <SEP> H
<tb>
EMI20.2
Les données du tableau I indiquent qu'on préfère particulièrement un composé de formule structurelle (I), dans laquelle R est de l'hydrogène ou un alkyle en Cl, R2 est :
EMI20.3
EMI20.4
et R3 est de l'hydrogène.
De préférence, A est :
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EMI21.1
Les composés préférés sont les suivants : (6R, 12aR)-2, 3,6, 7,12, 12a-hexahydro-2-méthyl-6- (3, 4méthylènedioxyphényl) pyrazino [2', l' : 6, l] pyrido [3, 4-b] indole-1, 4-dione ; et
EMI21.2
(3S, 6R, 12aR)-2, 3, 6, 7, 12, 12a-hexahydro-2, 3-diméthyl-6- (3, 4-méthylènedioxyphényl) pyrazino[2', l' : 6, 1]-pyrido [3, 4-b]indole-1, 4-dione ; et les sels et solvates pharmaceutiquement acceptables (par exemple les hydrates) de ceux-ci.
D'autres exemples de composés utilisables dans l'invention sont ceux décrits par Daugan et coll. dans le brevet U. S. n 6 001 847 et le document WO 97/43287 incorporés à la demande par référence.
D'autres exemples de composés susceptibles d'être utilisés dans l'invention sont décrits dans la demande PCT/EP98/06050, qui désigne les articles U. S. intitulés"Composés chimiques"des inventeurs A. Bombrun et F. Gellibert, dont la description est spécifiquement incorporée à la présente demande par référence.
Cette classe de composés a la formule structurelle (III) :
EMI21.3
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et les sels et les solvates (par exemple les hydrates) dans lesquels :
C représente un groupe hétéroaryle à 5 ou 6 membres contenant au moins un hétéroatome choisi dans le groupe constitué de l'oxygène, de l'azote et du soufre ;
R12 représente de l'hydrogène ou un halogène ; R est choisi dans le groupe constitué des éléments suivants :
hydrogène, nitro (N02), trifluorométhyle, trifluorométhoxy, halogène, cyano (CN), un groupe hétérocyclique à 5 ou 6 membres contenant au moins un hétéroatome choisi dans le groupe constitué de l'oxygène, de l'azote et du soufre, facultativement substitué par C (=O) ORa ou un alkyle en Cl-4, un alkyle en C1-6 facultativement substitué
EMI22.1
h par ORh, un alcoxy en Ci-3, h C (=0) Rh, OC (=0) OR\ C (=0) ORh, al kylène (Cl-4) Het, alkylène (Cl-4) C (=0) ORh,
EMI22.2
h OC-al kylène (Cl-4) C (=0) ORh, h al kylène (Cl-4) O-al kylène (Cl-4) C (=0) ORh, C (=0) NRS02RJ, C (=0) alkylène (Cl-4) Het, alkylène (Cl-4) NRhR\
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EMI23.1
h i alcénylène (C2-6) NRhRi, C (=0) NR"R\ C (=0) NR'hRi h C (=0)
NRhalkylène (Cl-4) ORi, C (=0) NRhal kylène (Cl-4) Het, OR\ 0-alkylène (C2-4) NR"R\ O-alkylène (Cl-4) CH (ORh) CH2NRhRi, O-al kylène (Cl-4) Het,
EMI23.2
h O-alkylène (C2-4) ORh, 0-alkylène (C2-4) NR"C (=0) OR", h i NR R h h i NRhalkylène (C1-4) NRhRi, h i NRhC (=0) Ri, h h i NR C (=O) NR R N (S02alkyle (Cl-4) 2, NRh (S02alkyle (Ci-4),
SO2NRhRi, et O-SCtrifluorométhyle ;
R14 est choisi dans le groupe constitué de l'hydrogène, d'un halogène, de ORh, d'un alkyle en C1-6, N02 et NRhRi ;
ou
R13 et R14 sont pris conjointement pour former un composant à chaîne alkylène ou alcénylène à 3 ou 4 membres d'un noyau à 5 ou 6 membres contenant facultativement au moins un hétéroatome ;
R15 est choisi dans le groupe constitué de l'hydrogène, d'un halogène, de N02, d'un trifluorométhoxy, d'un alkyle en Cl-6, d'un O-alkyle en Cl-6 et de C (=O) OR ;
EMI23.3
R16 est de l'hydrogène, ou R15 et R16 sont pris conjointement pour former un composant à chaîne alkylène ou alcénylène à 3
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ou 4 membres d'un noyau à 5 ou 6 membres contenant facultativement au moins un hétéroatome ;
Het représente un groupe hétérocyclique à 5 ou 6 membres contenant au moins un hétéroatome choisi dans le groupe constitué de l'oxygène, de l'azote et du soufre, et facultativement substitué par un alkyle en Cl-4
Rh et Ri peuvent être identiques ou différents et sont choisis indépendamment parmi l'hydrogène et un alkyle en Cl-6 ;
EMI24.1
Ri représente un phényle ou un cycloalkyle en C4-6, dans lequel le phényle ou le cycloalkyle en C4-6 peut être facultativement substitué par un ou plusieurs h atomes d'halogène, un ou plusieurs C (=O) ORh, ou un ou plusieurs OR ;
n est un nombre entier de 1, 2 ou 3 ; et m est un nombre entier de 1 ou 2.
Préparations.
Préparation de PDE5 humaine.
La production par recombinaison de PDE5 humaine est effectuée essentiellement comme décrit dans l'exemple 7 du brevet U. S. n 5 702 936 incorporé à la demande par référence, si ce n'est que le vecteur de transformation de levure utilisé, qui est dérivé du plasmide ADH2 basique décrit par V.
Price et coll. dans Methods in Enzymology, 1985, pages 308-318 (1990), incorporait des séquences de promoteur et de terminateur d'ADH2 de levure plutôt que des séquences de promoteur et de terminateur d'ADH1 et que l'hôte Saccharomyces cerevisiase était la souche BJ2-54 déficiente en protéase déposée le 31 août 1998 auprès de l'American Type Culture Collection, Manassas, Virginie, sous le numéro d'immatriculation ATTC 74465.
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On a fait croître des cellules d'hôte transformées dans un milieu de 2X SC-leu, pH 6,2, avec des traces de métaux, et des vitamines. Au bout de 24 heures, un milieu YEP contenant du glycérol est ajouté en concentration finale de 2X YEP/3% de glycérol. Environ 24 heures après, les cellules sont recueillies, lavées et stockées à-70 C.
Des pastilles cellulaires (29 g) sont dégelées sur de la glace avec un volume égal d'un tampon de lyse (25 mmoles de tris-Cl, pH 8,5 mmoles de MgCl2, 0,25 mmole de dithiothréitol, 1 mmole de benzamidine et 10 umoles de ZnS04). Les cellules sont lysées dans un microfluidiseur avec du N2 à 20 000 psi.
Le lysat est centrifugé et filtré à travers des filtres jetables de 0,45 um. Le filtrat est appliqué à une colonne de 150 ml de Q Sepharose Fast Flow (Pharmacia).
La colonne est lavée avec 1,5 volume de tampon A (20 mmoles de bis-tris propane, pH 6,8, 1 mmole de MgCl2, 0,25 mmoles de dithiothréitol, 10 umoles de ZnS04) et éluée avec un gradient échelonné de 125 mmoles de NaCl dans le tampon A suivi d'un gradient linéaire de 125-1000 mmoles de NaCl dans le tampon A.
Des fractions actives issues du gradient linéaire sont appliquées à une colonne de 180 ml d'hydroxyapatite dans un tampon B (20 mmoles de bistrispropane (pH 6,8), 1 mmole de MgCl2, 0, 25 mmole de dithiothréitol, 10 umoles de ZnS04 et 250 mmoles de KCl). Après chargement, la colonne est lavée avec 2 volumes de tampon B et éluée avec un gradient linéaire de 0-125 mmoles de phosphate de potassium dans le tampon B. Les fractions actives sont regroupées, précipitées avec du sulfate d'ammonium à 60% et remises en suspension dans un tampon C (20 mmoles de bis-tris
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propane, pH 6,8, 125 mmoles de NaCl, 0,5 mmole de dithiothréitol et 10 umoles de ZnS04). Les fractions regroupées sont appliquées à une colonne de Sephacryl S-300HR de 140 ml et éluées avec le tampon C.
Les fractions actives sont diluées jusqu'à 50% de glycérol et stockées à-20 C. Les préparations obtenues sont environ 85% pures par détermination par SDS-PAGE.
Essai d'activité de la PDE.
L'activité de la PDE5 peut être mesurée par des essais standard dans la technique. Par exemple, l'activité spécifique d'une PDE quelconque peut être déterminée comme suit. Des essais de PDE en utilisant une technique de séparation au charbon de bois sont réalisés essentiellement comme décrit par Loughney et coll. (1996) dans The Journal of Biological Chemistry, 271 : 796-806. Dans cet essai, l'activité de la PDE5 convertit le [P] cGMP en [32p] 5'GMP en proportion de la quantité d'activité de la PDE5 présente. Le [32p] 5'GMP est ensuite converti quantitativement en phosphate [32p] libre et en adénosine non étiquetée par l'action d'une 5'-nucléotidase de venin de serpent. Par suite la
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quantité de [32p] phosphate libérée est proportionnelle à l'activité enzymatique.
L'essai est réalisé à 30 C dans un mélange réactionnel de 100 pi contenant (en concentrations finales) 40 mmoles de tris-Cl (pH 8, 0), 1 pmole de ZnS04, 5 mmoles de MgClz et 0, 1 mg/ml d'albumine de sérum bovin. La PDE5 est présente en quantité qui donne une fraction inférieure à 30% de l'hydrolyse totale du substrat (conditions d'essai linéaires). L'essai est amorcé par l'addition de substrat (1 mmole de [P] cGMP) et le mélange est incubé pendant 12 minutes. 75 ug de venin de crotalus atrox sont ensuite ajoutés et l'incubation est
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continuée pendant 3 minutes supplémentaires (15 minutes au total). La réaction est arrêtée par addition de 200 ml de charbon de bois activé (25 mg/ml de suspension dans 0,1 mole de NaHPO,, pH 4).
Après centrifugation (750 x g pendant 3 minutes) pour sédimenter le charbon de bois, un échantillon du liquide surnageant est prélevé pour la détermination de la radioactivité dans un compteur à scintillation et l'activité de la PDE5 est calculée. Les préparations ont des activités spécifiques d'environ 3 pmoles de cGMP hydrolysés par minute par milligramme de protéine.
Préparation de PDE6 bovine.
La PDE6 bovine est fournie par le Dr. N. Virmaux, INSERM U338, Strasbourg. Des rétines de bovins sont préparées comme décrit par Virmaux et coll., FEBS Letters, 12 (6), pages 325-328 (1971) ; se référer également à A. Sitaramayya et coll. dans Exp.
Eye Res., 25, pages 163-169 (1977). En bref, sauf spécification contraire, toutes les opérations sont réalisées au froid et à la lumière rouge atténuée. Les yeux sont conservés au froid et dans le noir pendant une période allant jusqu'à 4 heures après abattage.
La préparation d'un segment extérieur de rétine bovine (ROS) suit fondamentalement les procédures décrites par Schichi et coll. dans J. Biol.
Chem., 224 : 529 (1969). Dans un essai typique, 35 rétines de bovins sont broyées dans un mortier avec 35 ml de 0,066 mole de tampon de phosphate, pH 7,0, préparé jusqu'à 40% avec de la saccharose, le tout étant suivi d'une homogénéisation dans un homogénéiseur de Potter (20 courses vers le haut et le bas). La suspension est centrifugée à 25 000 x g pendant 20 minutes. La pastille est homogénéisée dans 7,5 ml
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d'un tampon de phosphate de 0,006 mole (40% dans de la saccharose) et soigneusement statifiée par usage de 7,5 ml de tampon de phosphate (ne contenant pas de saccharose).
La centrifugation est réalisée dans un rotor basculant à 45 000 x g pendant 20 minutes et produit une pastille qui est noire dans sa partie inférieure et présente également une bande rouge à l'interface de 0,066 mole de phosphate-40% de saccharose/0,066 mole de phosphate (ROS brut). La matière rouge à l'interface est éliminée, diluée avec un tampon de phosphate appliquée par filage sur une pastille et redistribuée dans de la saccharose tamponnée à 40%, comme décrit ci-dessus. Cette procédure est répétée deux ou trois fois jusqu'à ce qu'il ne se forme plus de pastille. Le ROS purifié est lavé dans un tampon de phosphate et finalement appliqué par filage sur une pastille à 25 000 x g pendant 20 minutes. Toutes les matières sont ensuite maintenues congelées jusqu'à utilisation.
Des extraits hypotoniques sont préparés en mettant en suspension le ROS isolé dans 10 mmoles de tris-Cl, pH 7,5, 1 mmole d'EDTA et 1 mmole de dithioérythritol, le tout étant suivi d'une centrifugation à 100 000 x g pendant 30 minutes.
On indique que la préparation a une activité spécifique d'environ 35 nmoles de cGMP hydrolysées par minute par milligramme de protéine.
Préparation de PDElc à partir de cellules de Spodoptera fugiperda (Sf9).
Des pastilles cellulaires (5 g) sont dégelées sur de la glace avec 20 ml de tampon de lyse (50 mmoles de MOPS, pH 7,4, 10 pmoles de ZnS04, 0,1 mmole de CaCl2, 1 mmole de DTT, 2 mmoles de benzamidine HC1,
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5 ug/ml chacune de pepstatine, de leupeptine et d'aproténine). Les cellules sont lysées par passage à travers une cellule sous pression de French (SLMAminco) tandis que les températures sont maintenues en
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dessous de 10 C. L'homogénéisât cellulaire obtenu est centrifugé à 36 000 tr/min à 4 C pendant 45 minutes dans une ultracentrifugeuse de Beckman en utilisant un rotor de type TI45.
Le liquide surnageant est mis au rebut et la pastille obtenue est remise en suspension avec 40 ml d'un tampon de solubilisation (tampon de lyse contenant 1 mole de NaCl, 0,1 mole de MgCIs, 1 mmole de CaCl2, 20 ug/ml de calmoduline et 1% de sulfobétaïne SB12 (Z3-12) par application d'ultrasons en utilisant un tuner Vibracel avec une micropointe pendant 3 x 30 secondes. Cette opération est réalisée dans un mélange broyé de glace/sel pour le refroidissement. Après application des ultrasons, le mélange est lentement mélangé pendant 30 minutes à 4 C pour terminer la solubilisation des protéines liées à la membrane. Ce mélange est centrifugé dans une ultracentrifugeuse de Beckman en utilisant un rotor de type TI45 à 36 000 tr/min pendant 45 minutes.
Le liquide surnageant est dilué avec un tampon de lyse contenant 10 ug/ml d'inhibiteur de calpaïne I et II. La protéine précipitée est centrifugée pendant 20 minutes à 9000 tr/min dans un rotor JA-10 de Beckman. Le liquide surnageant récupéré est ensuite soumis à une chromatographie sur agarose Mimetic Blue AP.
Pour mettre en oeuvre la colonne d'agarose Mimetic Blue AP, la résine est initialement protégée par l'application de 10 volumes de lit de polyvinylpyrrolidine à 1% (c'est-à-dire un poids moléculaire de 40 000) pour bloquer des sites de liaison non
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spécifiques. La PVP-40 liée de manière lâche est éliminée par lavage avec 10 volumes de lit de 2 moles de NaCl et 10 mmoles de citrate de sodium à pH 3,4. Juste avant l'addition de l'échantillon de PDElc solubilisé, la colonne est équilibrée avec 5 volumes de lit de tampon de colonne A (50 mmoles de MOPS, pH 7,4, 10 pmoles de Zens04, 5 mmoles de MgCIs, 0,1 mmole de CaCl2, 1 mmole de DTT, 2 mmoles de benzamidine HC1).
L'échantillon solubilisé est appliqué à la colonne selon un débit de 2 ml/min avec un recyclage tel que l'échantillon total est appliqué 4 à 5 fois en 12 heures. Une fois que le chargement est terminé, la colonne est lavée avec 10 volumes de colonne du tampon de colonne A, suivis de 5 volumes de colonne du tampon de colonne B (le tampon de colonne A contenant 20 mmoles de 5'-AMP), le tout étant suivi de 5 volumes de colonne du tampon de colonne C (50 mmoles de MOPS, pH 0,7, 10 pmoles de ZnS04, 0,1 mmole de CaCl2, 1 mmole de dithioérythritol et 2 mmoles de benzamidine HC1).
L'enzyme est éluée en trois mélanges successifs. Le premier mélange est constitué d'une enzyme issue d'un lavage de 5 volumes de lit avec un tampon de colonne C contenant 1 mmole de cAMP. Le deuxième mélange est constitué d'une enzyme obtenue à partir d'un lavage de 10 volumes de lit avec un tampon de colonne C contenant 1 mole de NaCl. Le mélange final d'enzyme est constitué par lavage de 5 volumes de lit avec un tampon de colonne C contenant 1 mole de NaCl et 20 mmoles de cAMP.
Les mélanges actifs d'enzyme sont recueillis et le nucléotide cyclique éliminé par chromatographie à filtration de gel classique ou chromatographie sur résines d'hydroxyapatite. Après élimination des
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nucléotides cycliques, les mélanges d'enzyme sont dialysés contre un tampon de dialyse contenant 25 mmoles de MOPS, pH 7,4, 10 umoles de ZnSO4, 500 mmoles de NaCl, 1 mmole de CaClz, 1 mmole de dithiothréitol, 1 mmole de benzamidine HC1, le tout étant suivi d'une dialyse contre un tampon de dialyse contenant 50% de glycérol. L'enzyme est rapidement congelée à l'aide de glace sèche et stockée à-70 C.
Les préparations obtenues sont d'environ > 90% pures par détermination par SDS-PAGE. Ces préparations ont des activités spécifiques d'environ 0,1 à 1, 0 umole de cAMP hydrolysée par minute par milligramme de protéine.
Détermination des valeurs IC5o.
Le paramètre intéressant dans l'évaluation de la puissance d'un inhibiteur d'enzyme compétitif de PDE5 et/ou de PDElc et de PED6 est la constante d'inhibition, c'est-à-dire K. Ce paramètre peut être approché en déterminant la valeur In50, qui est la concentration d'inhibiteur qui entraîne une inhibition d'enzyme de 50% dans un essai de réponse à une dose unique dans les conditions suivantes.
La concentration d'inhibiteur est toujours beaucoup plus grande que la concentration d'enzyme si bien que la concentration d'inhibiteur libre (qui est inconnue) est approchée par la concentration d'inhibiteur totale (qui est connue).
Une plage appropriée de concentrations d'inhibiteur est choisie (c'est-à-dire que des concentrations d'inhibiteur au moins plusieurs fois plus grandes et plusieurs fois moindres que Ki sont présentes dans l'essai). Typiquement, les
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concentrations d'inhibiteur se situent dans une plage de 10 nmoles à 10 umoles.
Les concentration d'enzyme et de substrat sont choisies de telle sorte qu'une proportion inférieure à 20% du substrat soit consumée en l'absence d'inhibiteur (assurant, par exemple, une hydrolyse maximale du substrat de 10% à 15%) si bien que l'activité enzymatique est approximativement constante au cours de tout l'essai.
La concentration du substrat est inférieure à un dixième de la constante de Michaelis (Km). Dans ces conditions, la valeur IC5o se rapprochera étroitement de Ki. Cela est dû à l'équation de Cheng-Prusoff qui lie ces deux paramètres : IC50= Kl (1 +S/Km), le terme (l+S/Km) étant approximativement égal à 1 à de faibles valeurs de S/Km.
La valeur ICso est évaluée à partir des points de données en ajustant les données sur un modèle approprié d'interaction de l'inhibiteur d'enzyme. Lorsqu'on sait que cette interaction implique une
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simple concurrence de l'inhibiteur et du substrat, on peut citer un modèle à deux paramètres : Y = A/ (l+x/B) où Y est l'activité enzymatique mesurée à une concentration de l'inhibiteur de x, A est l'activité en l'absence d'inhibiteur et B est la valeur ICso. Se référer à Y. Cheng et coll. Biochem. Pharmacol., 22 : 3099-3108 (1973).
Les effets des inhibiteurs de l'invention sur l'activité enzymatique de préparations de PDE5 et de PDE6, telles que décrites ci-dessus, sont évalués au cours de l'un ou l'autre de deux essais qui diffèrent l'un de l'autre principalement sur la base de l'échelle
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et qui fournissent essentiellement les mêmes résultais en termes de valeurs ICso. Les deux essais impliquent la modification de la procédure de Wells et coll., Biochim. Biophys. Acta, 384 : 430 (1975). Le premier des essais est effectué dans un volume total de 200 ul contenant 50 mmoles de tris, pH 7,5, 3 mmoles d'acétate de Mg, 1 mmole d'EDTA, 50 ug/ml de nucléotidase de venin de serpent et 50 nmoles [3H]-cGMP (Amersham). Les composés de l'invention sont dissous dans du DMSO finalement présent à 2% dans l'essai.
Les essais sont
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incubés pendant 30 minutes à 30 C et arrêtés par addition de 800 pl de tris (10 mmoles), pH 7, 5, 10 mmoles d'EDTA, 10 mmoles de théophylline, 0,1 mmole d'adénosine et 0,1 mmole de guanosine. Les mélanges sont chargés sur des colonnes de Sephadex QAE de 0,5 ml et élués avec 2 ml de formiate (0,1 mole) (pH 7,4). La radioactivité de l'eluat est mesurée par comptage par scintillation dans une Optiphase Hisafe 3.
Un second essai de PDE à microplaques est développé en utilisant des plaques Multiscreen et un collecteur à vide. L'essai (100 pi) contient 50 mmoles de tris, pH 7,5, 5 mmoles d'acétate de Mg, 1 mmole d'EDTA et 250 ug/ml de nucléotidase de venin de serpent. Les autres composants du mélange réactionnel sont tels que décrits ci-dessus. A la fin de l'incubation, le volume total des essais est chargé sur une plaque de microcolonne Sephadex QAE par filtration.
La radioactivité libre est éluée avec 200 pi d'eau dont des fractions aliquotes de 50 pi sont analysés par comptage par scintillation comme décrit ci-dessus.
Les exemples suivants sont présentés pour illustrer plus en détail la préparation de l'invention
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revendiquée. L'objet de l'invention n'est pas censé se limiter uniquement aux exemples suivants.
EXEMPLE 1. -
Le composé de formule structurelle (I) est préparé comme décrit dans le brevet U. S. n 5 859 006 et formulé en comprimés par granulation humide. De la providone est dissoute dans de l'eau pour préparer une solution à 10%. Le composé actif, de la cellulose microcristalline, de la croscarmellose de sodium et du laurylsulfate de sodium sont ajoutés dans un mélangeur à haut taux de cisaillement et mélangés pendant 2 minutes. Les poudres sont granulées par voie humide avec la solution de providone et de l'eau supplémentaire selon les besoins pour compléter la granulation. Le mélange obtenu est séché dans un sécheur à lit fluidisé avec une entrée d'air à 700 I 50C jusqu'à ce que la perte au séchage soit inférieure à 2,5%.
Les granulés sont envoyés à travers un Comil avec un écran (ou un tamis) approprié et ajoutés dans un mélangeur approprié. La croscarmellose de sodium et le laurylsulfate de sodium extragranulaires ainsi que la silice colloïdale anhydre sont envoyés à travers un tamis approprié (par exemple de 500 um) et ajoutés au mélangeur et mélangés pendant 5 minutes. Du stéarate de magnésium est ajouté et mélangé pendant 2 minutes. Le mélange est comprimé jusqu'à un poids de compression ciblé de 250 mg en utilisant un outillage concave normal rond de 9 mm.
Les comprimés formant noyaux sont enrobés d'une suspension aqueuse d'Opadry OY-S-7322 en utilisant un Accelacota (ou un plateau d'enrobage similaire) en utilisant une entrée d'air à 50-70 C
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jusqu'à ce que le poids des comprimés soit augmenté d'environ 8 mg. L'Opadry OY-S-7322 contient de la méthylhydroxypropylcellulose Ph. Eur., du dioxyde de titane Ph. Eur. et de la triacétine USP. L'Opadry augmente le poids de chaque comprimé à environ 258 mg.
La quantité d'enrobage pelliculaire appliquée par comprimé peut être inférieure à celle mentionnée en fonction du rendement du procédé.
Les comprimés sont introduits dans une plaquette blister et accompagnés d'une notice explicative décrivant la sécurité et l'efficacité du composé.
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<tb>
<tb>
Composants <SEP> Formulations
<tb> (mg <SEP> par <SEP> comprimé)
<tb> Inhibiteur <SEP> de <SEP> PDE5 <SEP> sélectif" <SEP> 1 <SEP> 5
<tb> Phtalate <SEP> d'hydroxypropylméthylcellulose <SEP> 1 <SEP> 5
<tb> Cellulose <SEP> microcristalline <SEP> 221, <SEP> 87 <SEP> 213, <SEP> 87
<tb> Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5,00 <SEP> 5,00
<tb> Laurylsulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2,50 <SEP> 2,50
<tb> Sulfate <SEP> de <SEP> Povidone <SEP> K30 <SEP> 9, <SEP> 38 <SEP> 9, <SEP> 38
<tb> Eau <SEP> purifiée <SEP> USP <SEP> (eau <SEP> d'irrigation) <SEP> q. <SEP> s. <SEP> q. <SEP> s.
<tb>
Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5,00 <SEP> 5,00
<tb> Laurylsulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2,50 <SEP> 2,50
<tb> Silice <SEP> colloidale <SEP> anhydre <SEP> 0, <SEP> 50 <SEP> 0, <SEP> 50
<tb> Stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 1,25 <SEP> 1,25
<tb> Sous-total <SEP> du <SEP> noyau <SEP> total <SEP> 250, <SEP> 00 <SEP> 250, <SEP> 00
<tb> (Enrobage <SEP> d'un <SEP> film <SEP> d'Opadry <SEP> OY-S¯7322) <SEP> Env. <SEP> 8 <SEP> mg <SEP> Env. <SEP> 8 <SEP> mg
<tb>
Composé de formule structurelle (I).
EXEMPLE 2.-
La formule suivante est utilisée pour la préparation d'une forme de dosage finie contenant 10 mg du composé de formule structurelle (I).
<Desc/Clms Page number 36>
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<tb>
<tb>
Ingrédients <SEP> Quantité <SEP> (mg)
<tb> Granulation
<tb> Inhibiteur <SEP> de <SEP> PDE5 <SEP> sélectif'10, <SEP> 00
<tb> Lactose <SEP> monohydraté <SEP> 153,80
<tb> Lactose <SEP> monohydraté <SEP> (séché <SEP> par <SEP> pulvérisation) <SEP> 25,00
<tb> Hydroxypropylcellulose <SEP> 4,00
<tb> Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 9,00
<tb> Hydroxypropylcellulose <SEP> (EF) <SEP> 1,75
<tb> Laurylsulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 0,70
<tb> 35,00
<tb> Poudres <SEP> externes
<tb> Cellulose <SEP> microcristalline <SEP> (granulaire-102) <SEP> 37,50
<tb> Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 7,00
<tb> Stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> (végétal) <SEP> 1,25
<tb> Total <SEP> 250 <SEP> mg
<tb> Enrobage <SEP> d'un <SEP> film <SEP> (environ) <SEP> 11,25
<tb>
De l'eau purifiée USP est utilisée dans la fabrication des comprimés.
L'eau est éliminée au cours du traitement et des niveaux minimaux restent dans le produit fini.
Les comprimés sont fabriqués en utilisant un processus de granulation humide. Une description étape par étape du procédé est la suivante. Le médicament et les excipients à granuler sont tamisés à des fins de sécurité. L'inhibiteur de PDE5 sélectif est mélangé à sec avec du lactose monohydraté (séché par pulvérisation), de l'hydroxypropylcellulose, de la croscarmellulose de sodium et du lactose monohydraté. Le mélange pulvérulent obtenu est granulé avec une solution aqueuse d'hydroxypropylcellulose et de laurylsulfate de sodium en utilisant un granulateur Powrex ou un autre granulateur approprié à haut taux de cisaillement. De l'eau supplémentaire peut être ajoutée pour atteindre le point final souhaité.
Un broyeur peut
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être utilisé pour décomposer les grumeaux du produit de granulation humide et faciliter le séchage. La granulation humide est séchée en utilisant soit un sécheur à lit fluidisé soit un four de séchage. Une fois que le matériau est séché, il peut être calibré pour éliminer les gros agglomérats éventuels. De la cellulose microcristalline, de la croscarmellose de sodium et du stéarate de magnésium sont tamisés par souci de sécurité et ajoutés aux granulés calibrés à sec. Ces excipients et le produit de la granulation sèche sont mélangés jusqu'à uniformité en utilisant une trémie à culbutage, un mélangeur à ruban ou un autre équipement de mélange approprié. Le processus de mélange peut être séparé en deux phases.
La cellulose microcristalline, la croscarmellose de sodium et le produit de granulation séché sont ajoutés au mélangeur et mélangés au cours de la première phase, le tout étant suivi de l'addition du stéarate de magnésium à ce produit de granulation et d'une seconde phase de mélange.
Le produit de granulation mixte est ensuite comprimé en comprimés en utilisant une machine de compression rotative. Les comprimés formant noyaux sont enrobés d'un film par une suspension aqueuse du mélange de couleurs approprié dans un plateau d'enrobage (par exemple l'Accelacota). Les comprimés enrobés peuvent être légèrement saupoudrés de talc pour améliorer les caractéristiques de manipulation des comprimés.
Les comprimés sont introduits dans des récipients en matière plastique (30 comprimés par récipient) et accompagnés d'une notice explicative décrivant la sécurité et l'efficacité du composé.
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EXEMPLE 3.-
La formule suivante est utilisée dans la préparation d'une forme de dosage finie de 5 mg du composé de formule structurelle (I).
EMI38.1
<tb>
<tb>
Ingrédients <SEP> Quantité <SEP> (mg)
<tb> Granulation
<tb> Inhibiteur <SEP> de <SEP> PDE5 <SEP> sélectif'2, <SEP> 50
<tb> Lactose <SEP> monohydraté <SEP> 79,395
<tb> Lactose <SEP> monohydraté <SEP> (séché <SEP> par <SEP> pulvérisation) <SEP> 12,50
<tb> Hydroxypropylcellulose <SEP> 2,00
<tb> Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 4,50
<tb> Hydroxypropylcellulose <SEP> (EF) <SEP> 0,875
<tb> Laurylsulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 0,35
<tb> Poudres <SEP> externes
<tb> Cellulose <SEP> microcristalline <SEP> (granulaire-102) <SEP> 18,75
<tb> Croscarmellose <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 3,50
<tb> Stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> (végétal) <SEP> 0,63
<tb> Total <SEP> 125 <SEP> mg
<tb> Enrobage <SEP> d'un <SEP> film <SEP> (environ) <SEP> 6,875
<tb>
La forme de dosage de l'exemple 3 est préparée de manière identique à la forme de dosage de l'exemple 2.
EXEMPLE 4.-
EMI38.2
<tb>
<tb> Capsule <SEP> de <SEP> solution
<tb> Ingrédient <SEP> mg/capsule <SEP> Pour-cent <SEP> (%)
<tb> Inhibiteur <SEP> de <SEP> PDE5 <SEP> sélectif" <SEP> 10 <SEP> 2
<tb> PEG400 <SEP> NF <SEP> 490 <SEP> 98
<tb> Poids <SEP> de <SEP> remplissage <SEP> 500 <SEP> 100
<tb>
Les capsules de gélatine sont remplies de manière précise en pompant un volume de remplissage précis de formulation de médicament prédissoute dans la
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cavité partiellement scellée d'une capsule. Immédiatement après le remplissage par injection de la formulation de solution médicamenteuse, la capsule est complètement scellée à chaud.
Les capsules sont introduites dans des récipients en matière plastique et accompagnées d'une notice explicative.
EXEMPLE 5.-
Cette étude est une étude d'interaction de médicament en pharmacologie clinique randomisée, double aveugle, contrôlée par placebo et à double croisement qui évalue les effets hémodynamiques d'une administration concomitante d'un médicament d'étude inhibiteur de PDE5 sélectif (c'est-à-dire le composé de formule structurelle (I)) et de nitrates à effets courts sur des volontaires mâles en bonne santé. Dans cette étude, les sujets reçoivent soit le médicament étudié en dose de 10 mg soit un placebo, quotidiennement pendant 7 jours. Le 6è, ou le 7"'jour, les sujets reçoivent de la nitroglycérine sublinguale (0,4 mg) tandis qu'ils sont couchés sur une table inclinée.
La nitroglycérine est administrée trois heures après le dosage du médicament étudié et tous les sujets conservent le comprimé de nitroglycérine sous leur langue jusqu'à qu'il se soit complètement dissous. Les sujets sont inclinés à 70 avec la tête vers le haut toutes les cinq minutes pendant un total de 30 minutes avec une mesure de la pression sanguine et du rythme cardiaque. Il n'y a pas de discontinuité parmi les 22 sujets mâles en bonne santé (âgés de 19 à 60 ans) qui participent à cette étude.
Dans une analyse préliminaire de cette étude, le médicament étudié est bien toléré et il n'y a pas
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d'effets désavantageux graves. Il n'y a pas de variations associées au médicament étudié dans des évaluations de sécurité en laboratoire ou des ECG à 12 conducteurs. Les effets désavantageux les plus courants sont les maux de tête, une dyspepsie et un mal au dos. L'étude montre des effets minimaux sur la pression sanguine systolique moyenne et sur la réduction maximale moyenne, induite par la nitroglycérine, de la pression sanguine systolique ainsi que sur la réduction maximale, induite par la nitroglycérine, de la pression sanguine systolique parmi tous les patients.
EXEMPLE 6.-
Dans deux études randomisées double aveugle contrôlées par placebo, le composé de formule structurelle (I), dans une plage de doses à la fois en dosage quotidien et en thérapie à la demande pour des rencontres sexuelles et des rapports sexuels chez soi est administré à des patients qui en ont besoin. Des doses de 5 à 20 mg du composé de formule structurelle (I) sont efficaces et n'entraînent pas de rougeur ni d'anomalies de la vision. On a constaté qu'une dose de 10 mg du composé de formule structurelle (I) était tout à fait efficace et présentait des effets secondaires minimaux (pas de rougeur et pas de vision bleue).
La fonction érectile est évaluée par l'International Index of Erectile Function (IIEF) (Rosen et coll., Urology, 49, pages 822-830 (1997)), des agendas de tentatives sexuelles et une question de satisfaction globale. Le composé de formule structurelle (1) améliore notablement la fonction érectile telle qu'évaluée à tous les points finals. Dans des régimes à la fois"à la demande"et en doses quotidiennes, le
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composé de formule structurelle (I) améliore de manière significative la fonction érectile en doses entre 1 et 20 mg.
EXEMPLE 7.-
Une troisième étude clinique est une étude double aveugle randomisée contrôlée par placebo utilisant le composé de formule structurelle (I) (le médicament étudié) administré"à la demande"à des patients mâles ayant un dysfonctionnement d'érection.
Le médicament étudié est administré sur une période de 8 semaines pour le traitement d'un dysfonctionnement d'érection (ED) chez les mâles. Le dysfonctionnement d'érection (ED) est défini comme l'incapacité persistante à atteindre et/ou maintenir une érection adéquate pour permettre des performances sexuelles satisfaisantes. Un dosage"à la demande"est défini comme une administration intermittente du médicament étudié avant une activité sexuelle attendue.
La population étudiée est constituée de 212 hommes d'au moins 18 ans ayant un dysfonctionnement d'érection moyen à sévère. Le médicament étudié est administré oralement sous la forme de comprimés de coprécipité préparés selon le brevet U. S. n 5 985 326 délivré à Butler. Le médicament étudié est administré en doses de 2 mg, 5 mg, 10 mg et 25 mg,"à la demande" et pas plus d'une fois toutes les 24 heures. On n'autorise pas de traitement avec tous les nitrates, les antifongiques azole (par exemple le cétoconazole ou l'itraconazole), la warfarine, l'érythromycine ou les anti-androgènes à tout moment au cours de l'étude. Aucune autre médication, traitement ou dispositif approuvé ou expérimenté utilisé pour traiter l'ED n'est
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autorisé (e). Quarante et un sujets reçoivent un placebo.
Les deux variables d'efficacité principales sont l'aptitude d'un sujet à pénétrer sa partenaire et son aptitude à maintenir une érection au cours de rapports sexuels, comme mesuré par l'International Index of Erectile Function (IIEF). Le questionnaire de l'IIEF contient 15 questions et constitue une mesure brève et fiable de la fonction érectile. Se référer à R. C. Rosen et coll., Urology, 49, pages 822-830 (1997).
Les variables d'efficacité secondaires sont les notes de l'IIEF décernées pour la fonction érectile, la fonction orgasmique, le désir sexuel, la satisfaction dans les rapports sexuels et la satisfaction globale ; l'aptitude du patient à atteindre une érection, l'aptitude à introduire son pénis dans la vagin de sa partenaire, l'achèvement des rapports sexuels avec éjaculation, la satisfaction avec la dureté de son érection et la satisfaction globale, tous ces éléments étant mesurés par l'agenda Sexual Encounter Profile (SEP) ; et une question d'évaluation globale posée à la fin de la période de traitement. Le SEP est un instrument de notation des patients documentant chaque rencontre sexuelle au cours de l'étude.
L'analyse de la sécurité de l'étude comprend tous les sujets enrôlés et est évalué en évaluant tous les effets adverses rapportés ainsi que les changements des valeurs cliniques de laboratoire, les signes vitaux, les résultats d'examens physiques et les résultats d'électrocardiogrammes.
Au point final, les patients qui ont évalué leur aptitude de pénétration (question IIEF 3) comme
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"presque toujours ou toujours"sont les suivants : 17,5% dans le groupe placebo, 38,1% dans le groupe de 2 mg, 48,8% dans le groupe de 5 mg, 51,2% dans le groupe de 10 mg et 83,7% dans le groupe de 25 mg. Des comparaisons ont révélé des différences statistiquement significatives du changement de l'aptitude de pénétration entre le placebo et tous les niveaux de doses du médicament étudié.
Au point final, les patients qui ont évalué leur aptitude à maintenir une érection (question IIEF 4) au cours de rapports sexuels comme"presque toujours ou toujours"sont les suivants : 10, 0% dans le groupe placebo, 19, 5% dans le groupe de 2 mg, 32,6% dans le groupe de 5 mg, 39,0% dans le groupe de 10 mg et 69,0% dans le groupe de 25 mg. La comparaison révèle des différences statistiquement significatives de changements de l'aptitude de pénétration entre le placebo et les trois niveaux de doses les plus élevés du médicament étudié.
Globalement, cette étude montre que la totalité des quatre doses du médicament étudié, à savoir, 2 mg, 5 mg, 10 mg et 25 mg, prises"à la demande", produit une amélioration significative, par rapport au placebo, dans les performances sexuelles d'hommes ayant un dysfonctionnement d'érection comme évalué par l'IIEF, par des agendas de patients évaluant la fréquence de rapports sexuels satisfaisants et la satisfaction sexuelle et par une évaluation globale. Cette amélioration est démontrée dans une large population étudiée qui comprend des patients qui présentent tous des gravités de dysfonctionnement d'érection. Les effets les plus adverses ont une gravité moyenne ou modérée. De manière notable, aucun
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effet adverse en rapport avec des perturbations de la vision des couleurs n'est rapporté par aucun patient.
Les résultats combinés des études cliniques montrent que l'administration d'un composé de formule structurelle (I) traite efficacement le dysfonctionnement d'érection de mâles, comme illustré dans le tableau suivant.
EMI44.1
<tb>
<tb>
DOMAINE <SEP> DE <SEP> LA <SEP> FONCTION <SEP> ERECTILE <SEP> IIEF
<tb> (changement <SEP> par <SEP> rapport <SEP> à <SEP> la <SEP> base)
<tb> Dose <SEP> unitaire <SEP> Moyenne <SEP> + <SEP> ET
<tb> Placébo <SEP> 131 <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> 5, <SEP> 3
<tb> 2 <SEP> mg <SEP> 75 <SEP> 3, <SEP> 9 <SEP> 6, <SEP> 1 < <SEP> 0,001
<tb> 5 <SEP> mg <SEP> 79 <SEP> 6, <SEP> 6 <SEP> 7, <SEP> 1 < <SEP> 0,001
<tb> 10 <SEP> mg <SEP> 135 <SEP> 7, <SEP> 9 <SEP> 6, <SEP> 7 < <SEP> 0,001
<tb> 25 <SEP> mg <SEP> 132 <SEP> 9, <SEP> 4 <SEP> 7, <SEP> 0 < <SEP> 0,001
<tb> 50 <SEP> mg <SEP> 52 <SEP> 9, <SEP> 8 <SEP> 5, <SEP> 5 < <SEP> 0,001
<tb> 100 <SEP> mg <SEP> 49 <SEP> 8, <SEP> 4 <SEP> 6, <SEP> 1 < <SEP> 0,001
<tb>
n est le nombre de sujets, ET est l'écart-type.
Cependant, on a également observé dans les études cliniques combinées que le pourcentage d'effets adverses émergeant du traitement augmentait avec l'augmentation de la dose unitaire du composé de formule structurelle (I), comme illustré dans le tableau.
EMI44.2
<tb>
<tb>
Effets <SEP> adverses <SEP> émergeant <SEP> du <SEP> traitement <SEP> (%)
<tb> Dose <SEP> unitaire <SEP> (mg)
<tb> Effet <SEP> Placébo <SEP> 2 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 100
<tb> Mal <SEP> de <SEP> tête <SEP> 10 <SEP> 12 <SEP> 10 <SEP> 23 <SEP> 29 <SEP> 34 <SEP> 46
<tb> Dyspepsie <SEP> 6 <SEP> 3 <SEP> 14 <SEP> 13 <SEP> 19 <SEP> 20 <SEP> 25
<tb> Mal <SEP> de <SEP> dos <SEP> 5 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 15 <SEP> 18 <SEP> 24 <SEP> 22
<tb> Myalgie <SEP> 3 <SEP> 0 <SEP> 3 <SEP> 9 <SEP> 16 <SEP> 20 <SEP> 29
<tb> Rhinite <SEP> 3 <SEP> 7 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 4 <SEP> 0 <SEP> 2
<tb> Conjonctivite <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 2 <SEP> 5
<tb> oedème <SEP> paupière <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 3
<tb> Rougeur <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> < 1 <SEP> 0 <SEP> 3 <SEP> 7
<tb> Anomalies <SEP> de <SEP> la <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<SEP> 0 <SEP> 0
<tb> vision
<tb>
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Le tableau ci-dessus montre une augmentation des effets adverses à des doses unitaires de 25 à 100 mg. En conséquence, même si l'efficacité du traitement de l'ED est observée pour des doses de 25 mg à 100 mg, les effets adverses observés pour des doses de 25 à 100 mg doivent être prises en compte.
Conformément à l'invention, une dose unitaire d'environ 1 à environ 20 mg, de préférence d'environ 2 à environ 20 mg, mieux encore d'environ 5 à environ 20 mg, bien mieux encore d'environ 5 à environ 15 mg, administrée jusqu'à un maximum de 20 mg par période de 24 heures, à la fois traite efficacement l'ED et minimise ou élimine l'occurrence d'effets secondaires adverses. Il est important de noter qu'aucune anomalie de la vision n'est rapportée et que la rougeur est essentiellement éliminée. Non sans surprise, on constate, en plus du traitement de l'ED chez des individus, avec environ 1 à environ 20 mg de dose unitaire du composé de formule structurelle (I), avec un minimum d'effets secondaires adverses, que les individus soumis à une thérapie par des nitrates peuvent également être traités pour l'ED par le procédé et la composition de l'invention.
Les principes, formes de réalisation et modes de fonctionnement préférés de l'invention ont été décrits ci-dessus. L'invention destinée à être protégée ici n'est cependant pas censée être limitée aux formes particulières décrites, du fait qu'elles doivent être considérées comme illustratives plutôt que restrictives. Des variantes et des modifications peuvent être réalisées par les experts en la technique sans sortir du cadre de l'invention.