BE483577A - - Google Patents

Description

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  PROCEDE DE FABRICATION DE PREPARATIONS A BASE   DEVOIE      PRIORITE:   
La présente invention est relative à l'accroissement de l'efficacité des extraits de foie par digestion avec la papa- ine et vise à augmenter l'utilité du foie en vue de la fabri- cation de produits utiles dans le traitement de l'anémie per- nicieuse et des états connexes, ainsi qu'à fabriquer, à par- tir de tels produits, des concentrés destinés à être adminis- trés par la voie parentérale et/ou par la bouche. 



   On sait (voir la demande de brevet belge déposée le et ayant pour titre: "procédé pour ex- traire du foie les principes actifset éléments nutritifs qu'il contient et produit en résultant", que l'action de la papa±ne sur le foie émincé, dans les conditions spécifiées dans la demande susdite, amplifie d'une façon marquée la pro- 

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 priété que possède le foie entier non fractionné de lutter contre l'anémie pernicieuse, c'est-à-dire augmente son effi- cacité en tant qu'agent "anti-anémique". 



   Toutefois, jusqu'à ce jour on n'a pas déterminé celle des fractions du foie entier ou émincé dont l'efficacité est amplifiée par l'action de la papaïne, et il est difficile de préparer un produit purifié à un degré élevé .satisfaisant et propre à permettre à la matière obtenue conformément à ladite demande d'être administrée par la voie parentérale. 



   La présente invention envisage la fabrication d'une sé- rie de préparations à base de foie destinées à être adminis- trées par la bouche dans le traitement de l'anémie pernici- euse, de l'anémie mégalocytique réfractaire, de l'anémie mé-    galocytique de la nutrition et des états connexes ; que   d'une série de préparations à base de foie destinées à être administrées par la voie parentérale, principalement pour le traitement de l'anémie pernicieuse, quoiqu'elles soient aussi utiles dans le traitement d'autres anémies mégalocytiques. 



   D'une façon générale, l'invention consiste à soumettre une fraction de foie entier à l'action de la papaïne. Le pro- duit résultant peut être sèché ou partiellement concentré par l'élimination d'eau (de préférence à basse température, par exemple de l'ordre de 45  C); ou bien il peut être soumis à des méthodes de fractionnement. 



   La Demanderesse a découvert, comme résultat d'expérien- ces, que la fraction du foie qui est extraite du foie entier par l'eau chaude est rendue plus efficace par la   papalne   et que, après digestion, cette fraction peut être fractionnée sans difficulté, en vue de concentrer ou d'accroître son ef-   fica,cité   en tant qu'anti-anémique, par l'application de cer- taines des méthodes utilement adoptées pour fractionner des extraits aqueux et non digérés de foie. 



   Conformément à un mode de réalisation de l'invention, 

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 EMI3.1 
 on mélange une certaine quantité de foie émince (par exemple 158 kg) avec de l'eau froide (par exemple 182 litres) et on rend de préférence le mélange légèrement acide par l'addition d'une faible quantité d'acide sulfurique   (p.ex.80   millilitres ) et chauf- fe le mélange (par exemple à 70 C) jusqu'à ce que toute la matiè-    re thermiquement coagulable ait été coagulée ; sépare l'extrait   aqueux de la portion insoluble du mélange, par filtration ou au- trement, et on le refroidit à environ 60 C.

   On ajoute de la   papaï-   ne (par exemple 60 gr) en solution ou en suspension dans de l'eau (par exemple 4,54 litres) de préférence après l'avoir activée à l'aide de sulfure de sodium (0,2 gr.par exemple) ou d'un autre a- gent activant ou accélérateur approprié. On règle le pH, si né- cessaire, à une valeur de l'ordre de 5,6 et on laisse incuber le mélange à environ 60 C pendant un temps d'une durée convenable (par exemple environ 2 heures). En vue de détruire l'activité de la papaïne, on élève alors rapidement à 100 C la températu- re du mélange digéré et on fait bouillir ce mélange pendant le minimum de temps (environ 5 minutes) propre à assurer une telle inactivation, puis on le filtre, ou on le clarifie de quel- que autre manière. 



   La préparation ainsi obtenue, après réduction à un état solide ou sous forme d'une solution concentrée facile à ad- ministrer, possède des propriétés thérapeutiques analogues à celles du produit faisant l'objet de la demande de brevet belge précitée, en ce sens qu'elle effectue le traitement satisfaisant non seulement de l'anémie pernicieuse, mais aus- si, dans certains cas, de l'anémie macrocytique réfractaire. 



  Elle peut être sèchée ou fractionnée par les méthodes de fractionnement connues applicables aux extraits non digérés de foie, suivant qu'on désire un produit solide ou liquide destiné à être administré par la bouche ou un liquide brut ou ayant subi un haut degré de purification et propre à être administré efficacement en très petites doses par la voie 

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 parentérale. 



   Des fractions de l'extrait aqueux susmentionné peuvent être traités par la   papalne   d'une manière similaire. Par exem- ple, la Demanderesse a aussi découvert que la portion de matière du dit extrait qui est soluble dans de l'alcool à   70%,   d'une part, et la matière qui est insoluble dans de 1' alcool à 70%, d'autre part, ont leur efficacité accrue, en tant qu'agents anti-anémiques, bien que la fraction insolu- ble dans l'alcool soit essentiellement inactive, du point de vue thérapeutique, avant le traitement par la papaïne. 



   La Demanderesse a établi expérimentalement que les mé- thodes de fractionnement suivantes peuvent être appliquées à l'extrait de foie aqueux digéré susmentionné en vue de la fabrication de produits destinés à être administrés par voie parentérale et propres à lutter contre l"anémie pernicieuse et de.s états connexes: a) Précipitation par l'acide Reinecke, suivie d'une dé-   composition du précipité ; absorption sur du charbon de   bois, suivie d'un lavage à l'aide d'alcool à 50% - 60%; c)   précipitation par l'addition de sulfate d'ammonium ; solu-   tion dans de l'alcool à 70% - 80%; e) solution dans des sol-    vants phénoliques ; f)élimination du précipité produit par l'addition d'acétate de plomb ;

   g)précipitation par l'acide   phosphotungstique, suivie de la régénération du précipité. 



   A titre d'illustration, on donnera ci-après quelques exemples du traitement de l'extrait de foie susmentionné, aqueux, digéré, chauffé et clarifié: 
Exemple 1. 



   On concentre la matière pour l'amener à l'état solide en en éliminant l'eau dans le vide à une température de 45  C. Le produit -dont la biotine que contenait le foie a été éliminée - comprendra, sous une forme rendue plus efficace, sensiblement toute l'activité anti-anémique et les autres 

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 substances physiologiquement actives qui sont présentes dans le foie, telles que la vitamine B 1, l'acide nicotini- que, la pyridoxine, l'acide pantothénique, l'acide folique, etc.. Un gramme de ce produit solide aura été dérivé de 18 grammes environ de foie entier. Une dose curative pour le traitement du cas moyen de l'anémie pernicieuse à l'état de rechute, dans le cas de l'administration par la bouche, est de 7 grammes par jour. 



    Exemple ?    
La matière susmentionnée est concentrée par l'élimina- tion d'eau à des températures peu élevées (telles que 45  C) dans le vide à un degré tel que, après l'addition d'aromati- sants et d'un volume convenable d'alcool et/ou de glycérine à titre d'agents préservateurs, un cm3 aura été dérivé de 8 grammes environ de foie. La composition et les propriétés physiologiques de cette préparation liquide seront essentiel- lement analogues à celles du produit de l'exemple 1, et 14,8 c.c. de la dite préparation, administrés journellement par la bouche, assureront le traitement satisfaisant d'un cas d'anémie pernicieuse en état de rechute. 



     Exemple   3. 



   A 454 litres de la ligueur digérée chaude utilisée dans l'exemple précédent, ajouter 16 litres d'acide crésylique et 182 Kg de sulfate d'ammonium; remuer le mélange et séparer les couches d'acide crésylique d'avec la couche aqueuse de sulfate d'ammonium par tout moyen convenable, cette dernière couche pouvant, si on le désire, être de nouveau épuisée à   l'aide de nouvelles quantités d'acide crésylique ; à   la solution d'acide crésylique combinée ainsi obtenue (libre de sulfate d'ammonium) deux volumes d'éther éthylique ou d' un solvant similaire; séparer de la solution d'éther et d'   acide crésylique le précipité engendré ; ce précipité   avec de l'éther; dissoudre dans de l'eau le précipité lavé ; éliminer l'éther de la solution aqueuse par une chaleur mo- 

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 dérée;

   diluer la solution libre d'éther à un degré corres- pondant à tout équivalent de foie désiré, et ajouter un a- gent préservateur approprié, par exemple 0,3% de tricrésol   ou 0,1% de parachlor-métacrésol ; en filtrant à   travers un dispositif approprié retenant les germes. 



   Ce produit contiendra sensiblement la totalité du prin- cipe anti-anémique présent dans la liqueur de digestion, ain- si que, en substance, la totalité de la riboflavine, de l' acide folique et des autres vitamines présentes dans le foie et solubles dans les solvants phénoliques. Une dilution pré- parée de telle manière que un millilitre ait été dérivé de 10 grammes de foie aura une teneur en éléments solides com- prise en   5%   et 7%; et une dose de dix   millilitr.permettra   de traiter d'une manière satisfaisante un cas moyen d'anémie per- nicieuse en état de rechute pendant 14 jours. 



   Une solution correspondant à un équivalent de foie plus élevé aura une teneur en éléments solides accrue dans une me- sure correspondante et donnera une dose effective plus faible. 



   Exemple 4. 



   A 454 litres du produit de l'exemple 3, ajouter 9 kg. d'acétate de plomb, sous forme du produit solide ou d'une solution aqueuse, et, après avoir mélangé intimement, ajouter une solution de soude caustique aqueuse jusqu'à ce que le pH (mesuré de préférence à l'aide d'une électrode de verre) ait été porté à 7,5 ; filtrer le mélange ou séparer de quelque autre manière la phase liquide de la phase solide ;    de l'acide sulfurique de manière à obtenir un pH de 4,5 ; ter 20 gr. de sulfate d'ammonium par litre de filtrat ; trer ou autrement séparer la portion ou phase aqueuse d'avec   le précipité, qui consiste essentiellement en du sulfate de plomb ; ajouter 100 cc d'acide crésylique et 400 gr. de sulfa-    te d'ammonium par litre de filtrat ;

   la solution d'aci-   de crésylique d'avec la couche aqueuse inférieure (la couche 

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 de sulfate d'ammonium aqueuse peut, si on le désire, être 
1 soumise à un nouvel épuisement avec des quantités supplémen- taires d'acide crésylique); ajouter à la solution d'acide cré- sylique, combinée, limpide et libre de sulfate d'ammonium deux volumes d'éther éthylique ou d'un solvant similaire ;   le précipité et laver ce précipité avec de l'éther; dissoudre   le précipité dans de l'eau et épuiser cette solution avec de   l'éther pour éliminer les traces d'acide crésylique ; à   un degré correspondant à l'équivalent de foie désiré ;   un agent préservateur approprié, par exemple 0,3% de tricrésol     @   ou 0,1% de para-chlor-méta-crésol;

   stériliser par filtration à travers un dispositif retenant les germes. 



   Une solution préparée de telle sorte que un millilitre ait été dérivé de 50 gr. de foie aura une teneur en éléments so- lides de 18% environ ; et une dose de 2   millilitr,   assurera de manière satisfaisante le traitement d'un cas moyen d'anémie pernicieuse en état de rechute pendant 14 jours. 



   ' Ce produit contient le facteur de traitement de l'anémie pernicieuse, mais ses teneurs en riboflavine et en acide foli- que sont moindres en comparaison avec le produit de l'exemple 3. 



   Il ressort de ce qui précède: que des préparations conformes à l'invention et destinées au traitement de l'ané- mie pernicieuse et d'autres anémies macrocytiques peuvent être rendues aussi efficaces que les produits correspondants préparés à partir d'extraits de foie non digérés, bien que leur fabrication n'exige qu'une quantité de foie inférieure à la moitié de celle exigée par les dits produits préparés   à partir d'extraits de foie non digérés ; est possible   de fabriquer des produits qui sont aussi efficaces, avec des doses plus petites, que des produits similaires fabriqués à   partir du foie entier protéolysé ; que l'extrait de foie   aqueux protéolysé obtenu peut facilement être fractionné par 

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 des méthodes connues. 



   Etant donné que tous les produits susmentionnés con- tiennent, en raison de leur traitement protéolytique, des substances physiologiquement actives libérées, tous ces produits sont supérieurs à toutes les préparations non pro- téolysées, à base de foie, servant au traitement de l'anémie pernicieuse et d'autres anémies macrocytiques.

Claims (1)

1. REVENDICATIONS ET RESUME.

   L'invention a pour objet : procédé de fabrication de produits ou préparations à base de foie destinés au traite- ment de l'anémie pernicieuse et des états connexes, ce pro- cédé étant caractérisé par les points suivants, considérés séparément ou en combinaisons diverses: 1 . Il consiste à soumettre à l'action de la papaïne la portion du foie entier qui est soluble dans l'eau.

   2 . On soumet à l'action de la papaïne la portion du foie entier qui est soluble dans l'eau et qui n'est pas coa- gulée par la chaleur.

   3 . Le traitement est réalisé dans un milieu aqueux légèrement acide.

   4 . Le pH du mélange légèrement acidifié est de l'ordre de 5,6.

   5 . Selon une forme de réalisation préférée, on mélange du foie émincé avec de l'eau froide, de préférence légèrement acidifiée ; on chauffe le mélange jusqu'à ce que toute la matière thermiquement coagulable ait été coagulée ; sépare l'extrait aqueux de la portion insoluble du mélange ; ajou- te de 1a papaïne en solution ou en suspension, de préférence après l'avoir activée à l'aide de sulfure de sodium ou d'un autre agent activant convenable ; incube le mélange, de préférence à 60 C; on chauffe le mélange à 100 C, de préfé- rence rapidement; et on détruit l'activité de la papaïne par une ébullition de la péri ode minimum propre à assurer une <Desc/Clms Page number 9> telle inactivation.

   6 . Le produit peut être soumis à l'opération supplé- mentaire qui consiste à le sècher ou à le concentrer partiel- lement ou à le soumettre à un ou plusieurs fractionnements.

   L'invention a, en outre, pour objet, à titre de produits industriels nouveaux, les préparations obtenues par la mise en pratique de ce procédé.