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La présente intention concerts ia nouveau a:ca:pc de préparation de pGptid pas uno réaction 6e transposition.
Tous lea 7â,-!t;; connus juequ 1 à présent: PO\I' In préparation de peptides reposent sur la liaison sUDaQaa1v de groupes Vi.il.7'eteLir..,9A .'IJ GS1.?46Wii groupes l.ltJ.e<f.ui:.SAtrJ7' la fOl"ITIlJ.1;it:1 de la liaison peptidique pouvant avoir lieu suivant; l'un ou
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l'autre des types de réaction suivants
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a) Le dérivé réactif au groupe acide, d'un amino-acide protégé à l'atome d'azote, réagit sur le groupe aminogène libre d'un second amino-acide ou mieux sur son ester :
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b) Un amino-acide substitué à l'azote réagit sur un dérivé d'un second amino-acide dont l'atome d'azote est activé :
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Un aperçu des variations possibles parmi ces types de réaction, se trouve par exemple dans l'article de Th.
Wieland, "Angewandte Chemie" 66, 507 (1954). Les synthèses récentes de peptides dans'lesquelles la réaction d'un aminoacide substitué à l'azote avec un ester d'amino-acide a lieu directement (voir par exemple J.C. Sheehan, Journal of the American Chemical Society 77, 1067 (1955) et 78, 1367 (1956 , ont lieu intermédiairement en passant par l'un des types de réaction ci-dessus..
Bien que les possibilités de préparation de peptides connues depuis longtemps, ainsi que celles qui ont été trouvées ces dernières années, aient conduit à de beaux résultats, il s'est toutefois toujours montré des inconvénients dûs au principe de la liaison successive de groupes carboxyliques avec des groupes aminogènes. Ces inconvénients se font sentir surtout lors de la préparation de peptides supérieurs; si,
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par exemple, les dérivés dipeptidiques 1 et Ils
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formés dans un premier stade, doivent être unis, dans un second stade, pour donner un tétrapeptide, au moins l'un des substituants à l'azote, R, et l'un des groupes esters, R', doivent être éliminés, avant que la liaison en dérivés tétrapeptidiques III ou IV
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puisse avoir lieu.
De la même manière, lors de la prolongation succès- sive d'une chaîne peptidique de un amino-acide chaque fois, il est nécessaire, à chaque phase, d'éliminer un substituant à l'azote ou de scinder un groupe ester, avant que la nouvelle liaison peptidique puisse être formas.
La littérature est riche en exemples dans lesquels la scission de substituants à l'azote ou de groupes esters, conduit à des complications qui ne peuvent être surmontées que par des moyens détournés. C'est pourquoi le besoin se fait sentir depuis longtemps déjà de pouvoir disposer d'un procédé nouveau de ayathèse de peptides.
Le nouveau procédé de préparation de peptides selon la présente invention, par une réaction de transposition,
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consiste à traiter par des agents basiques új J6r1vé3 d g ..rnïno-4-id ou de peptides portante z, 1 :J::t::.,jmité m.i3nc ; :¯ un l",:;:;t.;: acyle de formule V
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d=ni ILqu3llc Ar rp:"'tbnt'3 un resta au pluj binucléaiyj d'un COLlpoGé do caractère aromatique sur 1#quel 1 - : :;, , cbstitu.1 sont fixé::! en position ortho, et duns laqucllo X iii atonie d'oxygène ou de soufra et R est mis pour le 's:'3t?cdivcJent d'un acide a-:2l,1inocarbo i!lique, notanim.:r.-nt d'un c..d.L3acida naturel., ou à traiter par des agonto bniqucm tJ;:; sels de ces composês.
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Le reste de formule :
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représente, d'après la définition ci-dessus, le reste d'un
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acide o-hydroxy- ou o-mercapto-carboxylique, par exemple celui de l'acide salicylique ou de l'acide thiosalicylique.
R représente spécialement un reste d3 formule s
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dans laquelle R' représente de l'hydrogène ou un rst'3 orgml1que, not'-'mment le reste d'une chaîne latérale pl"û68nto d.%ns
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des amino-acides naturels.
On peut schématiquement se représenter que la t@ansposition des composés, indiquée ci-dessus, a'lieu de manière que le reste -CO-R-NH2 est détaché de X, tourné de 1800 et intercale entre le groupe -C- et le reste aminogène ou peptidique qui lui est initialement lié, de sorte qu'il se forme des peptides de la formule générale VI suivante :
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Le mécanisme de la transposition peut (en prenant comme exemple la synthèse de l'ester méthylique de la salicoylalanyl-glycine) être rendu par le schéma suivant :
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En ré6tant plusieurs fois la trsn3poait1on, on peut, suivant cette méthode, édifier des chaînes peptidique par exemple suivant le schéma suivant :
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Comme il ressort du schéma réactionnel ci-dessus, l'amino-acide qui doit être nouvellement additionné s'intercala à chaque phase entre le groupe acyle et le reste d'amino-acide ou de peptide auquel il est lié. Suivant ce nouveau procédé, il est donc possible, lorsqu'on édifie une chaîna peptidque, de conserver le même substituant à l'azote et le même groupe ester pendant tous les stades réactionnels.
Cela constitue un grand progrès par rapport à toutes les synthèses de
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peptides connues, dans lesquelles on doit, à chaque st@de réactionnel, scinder un substituant à l'azote et/ou un groupe ester, comme cela a été dit ci-dessus.
Dans la réaction conforme au présent procédé, on peut utiliser, comme agents basiques, aussi bien des bases inorganiques, par exemple un bicarbonate alcalin, un carbonate alcalin ou un hydroxyde alcalin, que des bases organiques, notamment des bases organiques tertiaires par exemple la triéthylamine, la tributylamine, les N-alcoylpipéridines ou la pyridine. Le cas échéant, la basicité propre de la matière de départ suffit déjà pour déclencher la transposition.
Lorsqu'on utilise des bases inorganiques, la réaction a lieu avantageusement dans des solvants renfermant des hydroxyles, par exemple dans l'eau, dans des alcools ou dans des phénols; lorsqu'on utilise des baoes organiques, on préférera des solvants exempts d'hydroxyles, comme le chloroforme, le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le diméthylformamide.
La température réactionnelle peut varier dans de larges limites. De préférence, on travaille à des températures voisines de 25 C ou à des températures inférieures.
Un grand avantage de ce procédé réside dans le fait que, dans les conditions douées dans lesquelles la réaction do transposition a lieu, il ne se produit pas.de racémisation de restes amino-acides optiquement actifs.
Le groupe N-acyle des peptides N-acylés obtenus lors
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doe la transposition conforma au présent procdJ, peut StriJ par exemple par traitement avec du zcjil,;n dans de l'ammonîac liquide, le cas échéant après hydrolyse de groupes ester.-, présents et/ou après ëthërification du groupe -XH, ce qui donne naissance aux peptides I1b!'\,.;J correspondants.
Les substances obtenues conform6ment au prdoant proaddé peuvent par suite être utilisées, p3.r c;<Y 131e, comici produits interMëdia.ir.as pour la p;>4p.z-.ition de pcptid":1] nntUl" ..:J.:::, p.:# exemple de pepti<3.'s exerçant une action thé, .:;ti;flioe :: ; antîbaotêrielle, ou pour la préparation do p.;p.iid#c ;== ,z <;
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un effet hormonal.
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Les dérives d t #nino-a.c ldj ou de p#tptl<1;. u %:.l:J.lF... i coinh.# substances de départ et qvi, à l'extrémité a!.d.îi*.;,'! ,t portent un reste acyle de formuj,' V.), p=auvt:nt Qtr' obt;#i:.v,> pii-t' exemple par hydrogénation dE::; azîdo-coiiipoLi-z3 o..,-,i;.,>i,r.:ài,' .nl;c présentant un reste acyle de formule'VII.),, ou par dàé;, >."vc . bonzo:zylation des carbobenzoxy-compozda cor:r.'e2ponclr1l;';"J,
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comportant un reste acyle de formula VIII.)
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Lorsqu'on fait agir avec précaution des a.lci:..l1r. sur les de.rlvés d'amine-acides ou de peptides qui portent un e-stc acyle de formule VIII.) (voir ci-do1313un} on forme des té::;:'1't;b de l'urée, par exemple à partir de l'ester mtthyli1U':' da
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L;¯-'Cc.'¯:'.é000iW.0':..,T .',,:;m'I 't',''¯3;;. "ralW ,,G:l.rI T':L't's:
J IX,, ' .........,;,J ¯'1ov .1 - -'" -¯.f.l ........... t-f"''' t:J"'ui ''",.J.J' y en forno l'urne Y
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A partir des dÓr1v'a ce .1<lß'É9 de ce tp0; il t:e G2?"i.ly lorsqu'on continua le tritsent 8,:;,{;,,\:tL;! le.'. d;)1,':lvéI!'J d e C:'>n1:1rJO"'citef,j ou de peptides Indiquua r.lhIII#,. i:;i:1.>i! l;.&:;co..
4 <1:;Jpé.ix>'c poiiz- le présent 1!J:'océ;'idé, portant un ;4Y."1'L'' i?cO;J.ro zizi t C7; ï;lEx..t'¯,: '\.1', qui , en milieu a.l(,H9.1:1.X1, 201'1Íi t"nm3pmJr1'1 ;flà,>:><:,i '1;>;;mont en les produits 3''G,."C.''fi:'.C'itll'IC?',.' 'l,'C11'Cfï'rl:?J au P!OCÔ(:'.
La présente intention concerne G-;.d:3tl' fi#' tt 1;1 t:;/,,; de produits industriels nouvet-u--e par exemple cil tant zus produits intermédiaires pour la préparation dg SJ..:!tr0f:3 produits J ':.:3 :9.aay len produits conformes a ceux définis ci-âGÍ'm:\" L'invention est décrite plus en détail eana les '8:'=!inpl'ef3 non limitatifs qui suivent. 11.g températures ;.W7.1t
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indiquées en degrés centigrades.
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Exemple 1.
Dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne absolu, on dissout 1,5 g de perchlorate de l'ester méthylique de l'O-(DL-phénylalanyl) -salicoyl-glycine de formule :
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et ajoute la solution obtenue à une solutic ino@mile de trié,. ty lamine dans 150 cm3 de méthanol, refroidie à - 5@, agite une heure à la température ambiante, évapore à sec sous vi@e, répartit entre de l'acétate d'éthyle et de l'acide chlorhydrique binormal, sépare, lave la solution dans l'acétate d'éthyle avec une solution à 10% de bicarbonate de potassium et à l'enu, la sèche,et après avoir évaporé l'acétate d'éthyle, on obtient,
sous forme cristallisée, 1,12 g (95% de la théorie) de l'ester méthylique de la salicoyl-DL-phénylalanyl-glycine, de formule :
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Ce produit fond à l'état brut à 159 - 1640 et, après cristallisation au moyen de méthanol et d'eau, à 165 - 166 .
Le perchlorate utilisé comme matière de départ peut être préparé comme suit :
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Dans 100 cm3 de méthanol on traite à 0 par du gaz
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chlorhydrique 2,9 g de salleoylglycine et laisse la solution reposer pendant une nuit. Après évaporé le méthanol, on répartit le résidu huileux entre une solution aqueuse de bicarbonate et de l'acétate d'éthyle, sèche la solution d'acétate d'éthyle
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et 1'évapore à ace sous vide, Pac r0oriBtsl1iation au moyen de peu de i'i1ét11anol et d'eau ou dans du bDnzt,riz-,,e on obtient l'ester méthylique de la salleoylglyclnee fudsnt 'i 9 Rendement 86%.
Dans 25 em3 d'éther absolu, on met oii suj;t,rr >la:> lo chl.orure de oêll'lbobenzoxY..DL...pl1énylalanyle.j! obtenu ira. partir de 3 g (10 taMol) de carbobenzoxy-DL-phénylalanln2# puis on refroidit a - 70 0 Tout en agitant fO!.t1mant" on ajoute alors goutte a. goutte un mélangea préalablement refroidi a - 1, 1,50X de 10 em3 de pyridine et 1,4 em3 (10 mt>ioi) de tri- éthylamine, de manière que la température ne soit pas supérieure à - 60 .
A - 70 , on ajoute alors goutte à goutte, en agitant fortement, une solution de 1,2 g (5,7 mMol) d'ester
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méthylique de salleoylglyclne dans 30 cm3 d'éther absolu. Il précipite alors du mélange réactionnel un fin précipité blanc. On laisse remonter la température à - 15 et laisse reposer pendant une nuit à cette température. A une température de
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bain (Í'3 35ç, on évapore sous vide .l'éther et. ,1'-' ::;"'.t"'iJl1:,':: " niôlangi qui est devenu aun-aran,, zjui<..rô>.i: ?;1,t le l',5.:id'..1 entre de l'acide chlorhydrique binormal et de J 1 C&';.;IJ d'éthyle.
On lave ensuite ce dernier avec d3 1ac1c chlcrhydrique binormal, avec un±. solution a 10 6 b['41''tC:::..::t'2 Ce potassium, puis alternativement avec urJ ;O::'l't:.:',,::.n bino:i.',:.J.10 de carbonate de sodium et à l'eau, pu!:.: finji.l......!.int aJ=3 (1" l'eau, sosho sur du Liu 1 .''r.L' ca "'c 11u'"1 'et ' i'¯:.ßi: - ..< l' 'J1':' Il route 2,39 g d un 'j-":;"'ic" ',-.-;1" ,.. of"" " " ¯-'. i.,. -;:,=>"<..,'.- lise, après adjonction d9étl':'J"', 1,9 y (6 ci¯ ::,1 .=Mw¯--.cy d'ester méthylique de 1 ' 0- (c arbobcnzo:,mj-DL-b1;-l1<z,.> l i =1= ..= 1 ] ; salleoylglycine incolox>-1. Peur le ;z;u39.i"'- a:p cn 1: i - ry: ..:.:'¯: .. , au moyen de méthanol et deau.
Il fond pax 12:! - 12!" 5 Dans 50 en3 d'acide acétique gl!'.11, on :i .,. :;..nv. x,5 g e3. mî401 ) d'ests:' méthylique de l'0-(csrbobjsc:r/-DLphényl-alanyl)-sal1coylglycine, ajoute 3j,l Cll;-'" il IU:,1 col'.1ticn normale de ijCI04 dans de 1"acide acétique jlt-airl et 1 gj dj charbon au palladium â 10% do palladium, puis fait p'::J;:"'..::" dj l'hydrogène va la température ambiante. Au bout de-,, 30 r.1inut:).. on ne paut plus, à l'aide d'une solution ti'iyc'srr:y.:: J... baryum, déceler de CO 2 dans 13 gaz qui se degaj.
On c1: )ar filtration le charbon au palladium, puis 1r .::;;: à 3.',ßida cétique glacial et évapore le filtrat iour viao j. 1;.0 . 0..1 prend dans le tétrahydrofuranne le résidu incolore v1tux ajoute environ une quantité triple do bin±éne3 cn aliloJ:"Q[l1t
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la cristallisation par frottement, le perchlorate de l'ester
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méthylique de l'0-(DL-phénylalanyl)-sallaoyl-glycine commence à cristalliser. On obtient 1,15 g (80% de la théorie) d'un composé fondant a 161 - 164 . Pour l'analyse, on recristallise
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ce produit au moyen de tétrahydrofuranne et de benzène. Ce composé fond alors à 162 - 1650, en se décomposant. Une
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nouvelle recristalliaation conduit à un aba3sai . da point de fusion.
Exemple 2.
En présence de 5 g de charbon au palladium, à 10% de palladium, on secoue dans une atmosphère d'hydrogène, une, solution, dans 200 cm3 d'acide acétique glacial absolu et 10 cm3 d'une solution normale d'acide perchlorique dans de l'acide acétique glacial, de 5 g de l'ester méthylique de
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l'0-(Oarbobenzoxy-DL-phénylalanyl)-salicoylgiyoine de formule .
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jusqu'à ce qu'il ne se forme plus de CO2. On évapore à sec à une température de bain de 40 . dissout dans 200 cm3 de tétrahydrofuranne absolu et verse cette solution dans 400 cm3 d'une solution binormale de triéthylamine dans du méthanol absolu, refroidie à - 5 .
La suite de l'opération est effectuée suivant les indications de l'exemple 1; on obtient ainsi 3 g
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(85% de la théorie) d'ester du salicoyl-dipeptide de la formule indiquée à l'exemple 1, sous forma cristallins.
Exemple 3.
Dans 20 cm3 de méthylcellosolve, on soumet à une hydrogénolyse, en présence de 10 équivalents de triéthylamine, 1 g d'ester méthylique d'O-(carbobenzoxy-DL-phénylalanyl)salicoylgalycine (préparation et formule voir exemples 1 et 2).
Comme catalyseur on utilise du charbon au palladium. Après avoir évaporé et traité comme dans l'exemple 1, on obt@ent l'@ster attendu du salicoyl-dipeptide, d'un point de fusion de 165 . Sa formule est indiquée à l'exemple 1.
Exemple 4.
Dans 75 cm3 d'acétone, on dissout 1 g du dérivé de l'urée de formule :
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ajoute à la solution 75 cm3 d'une ,solution décinormale d'hydroxyde de sodium et abandonne le tout à lui-même pendant une nuit à la température ambiante. La pH tombe alors à 7 et la réaction d'hydroxyle phénolique au chlorure ferrique est positive.
On acidifie, reprend dans l'acétate d'éthyle, lave la phase organique avec de l'acide chlorhydrique binormal, extrait jusqu'à épuisement et alternativement
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avec une solution à 10% de bicarbonate de potassium et avec de 1 eau, et obtient à partir de l'extrait obtenu au bicarbonate et à l'eau, de manière usuelle, 0,86 g (97% de la théorie) d'un acide d'abord huileux qui cristallise par broyage avec de l'éther et fond alors à 210 - 211 . Il possède la formule suivante .
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Le dérivé de l'urée utilisé comme matière de départ peut être préparé comme suit :
On agite pendant peu de temps avec 20 cm3 d'une solution binormale d'hydroxyde de sodium refroidie à la glace, une solution, dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle, de 2,8 g (5,7 mMol) de l'ester méthylique de l'0-(carbobenzoxy-DL-
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phény1alany1)-salicoylglyoineo A c8té de produits de saponifi- cation acides, il se forme le dérivé carbamidique qui reste dans l'acétate d'éthyle sous la forme d'un corps neutre.
Après avoir lavé à neutralité, séché et évaporé la solution d'acétate d'éthyle, on obtient 1,1 g d'un résidu huileux que l'on reprend dans l'acétone. En ajoutant de l'éther, on obtient en frottant pour amorce? la cristallisation, 670 mg de cristaux incolores 30% de la théorie} du dérivé de l'urée indiqué ci-dessus, d'un point d fusion de 158 - 159 . Les
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:'';Hd::nent8 n sont pas pVa.4l.nfYa lJliJ.C.fôO et vam%1=nt entr:1 20 et ",3 Pour la purification et l nalyae, on j;';:!'1atallce .: ce C:Cïîl.)O;G àa lru.:8,3 au moyen d t3.:tQli 5 et f i',#1!':X' ",' L'?1'"?
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d'un point de fusion de 158,5 - 160 .
Exemple 5 -----------
Dans 100 cm3 d'une solution binormale de tri- éthylamine dans du chloroforme absolu, on dissout à la tempé- rature ambiante 1 g de perchlorate de l'ester méthylique de
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l'0-(L-phénylalanyl)-xaliaoylglycine (formule of. exemple 1). On laisse reposer deux heures, évapore à sec sous vide, traite suivant l'exemple 1 wat obtient avec un rendement quantitatif
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l'ester méthylique de la 8al,coYl-L-phénylalaloYl-g1ycine (formule donnée à l'exemple 1), d'un poil Je fusiu. de 70.,5-71,5' L cxl p -5, 'o 1 ( e 1 dans 1 dioxanne).
Le perchlorate serv net de matière de départ peut être préparé suivant le procède décrit à l'exemple 1 pour
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la forme DL. Ester méthylique de l'0-(carbobensoxy-L-ph'.y1a:any.j--ealiQOylglyc3ne : cristaux obtenus au moyen d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, fondant à 109 , rendement en produit pur : 78%. Perchlorate de l'ester méthylique de
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10. --phnylalanylj-saliaayxglycine, cristaux obtenus au moyen de tétrahydrofuranne et d'un peu d'éther de pétrole d'un point de fusion de 175-179 (décomposition), rendement an produit pur : 65%.
Exemple 6
A 3,5 g du perchlorate de l'ester méthylique
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de l'0-(EIYCYI)-salicoyl-L-phénylalanine,de formule s
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on ajoute 350 cm3 d'une solution binormale de triéthylamine dans du chloroforme absolu. On laisse reposer deux heures à 25 , traite suivant l'exemple 1 et obtient avec un rendement modéré après cristallisation au moyen de méthanol et d'eau,
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l'ester méthylique de la salicoyl-glgcyl-T-pïényi.a.an3ne de formule :
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d'un point de fusion de 8-150 . [a]4 = + 42,5 t i (0 Q 1,052 dans le dioxanne).
La substance de départ est obtenue comme suit s Dans 14 cm3 d'acide nitrique normal et 20 cm3 d'eau, on dissout 2 g (13,2 mMol) d'hydrazide de l'acide salicylique, ajoute à O 14 cm3 d'une solution normale de nitrite de sodium, agite 30 minutes, essore et lave à l'eau froide. Tout en agitant, on ajoute l'azide ainsi obtenu à une solution de 4,4 g
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(26,4 mMol) de L-pleênylalanîne dans 26, om' d'une solution normale d' hydroxyde de sodium et 20 cm' d'eau, après quoi on
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ajoute à nouveau 17 om' d'une solution normale dthydrodzyd3 de sodium.
Au bout de deux heures et demie, tout est dissous.
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On extrait à l'acétate d'ëthylo, acidifie la solution aquouae avec de l'acide chlorhydriquo à 20% et reprend le précipité dans de l'acétate d'éthyle. Le traitement usuel fournit 2,73 g (73% de la théorie) de saliooyl-L-phénylalanine sous la forme d'une huile incolore qui cristallise lorsqu'on amorce la cristal-
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lisation en frottant. Par recri5tallisatlon au moyen do b,n-'jii3 et d'un peu d'éther de pétrole, on obtient des cristaux fondant à 117 -118 .
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On dissout 1 g de salicoyl-1,-phénylài,,iiinJ dans 50 cm de méthartoi anhydre, sature avec du gaz chloi%;.>iydriqu,-% et laisse reposer une nuit. Le traitement usuel fournit 1 ë de l'ester méthylique huileux de la salicoyl-L-phllyla1h:li.l'lI.
Suivant le procédé indiqué à l'exemple 1, on aoyle 350 mg (1,17 mMol) d'ester méthylique de salicoyl-Lphénylalanine au moyen de 320 mg (1,4 mMol) de chlorure de carbobenzoxy-glycyle. On obtient 496 mg d'ester méthylique
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huileux de l t 0...( carbobenzoxy-g1yaY1)...salicoYl-L-ph'11Yla1an1ne qui cl*nne une réaction négative au chlorure ferrique.
L'hydrogénolyse du carbobenzoxy-compou6 suivant Ko prooddé de l'exemple 7., fournit 443 mg de perchlorate huileux de l'ester méthylique de l0-glycyl-aa.icoyl-L-- phénylalanine que l'on soumet sans autre purification à la transposition.
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Exemple 7
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Dans 120 cm de iîlf''i"L.120.s on dissout ly23 du perchlorate de l'ester mëthylique de l'0-(glyoyl)-salicoylDl.-ph3niJlalatayi-glyci?4t de foiùmle :
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On ajoute aussitôt 0,32 cm3 (ce qui correspond à 0,95 équiva-
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lent) de tri6thylamlne, agite une nuit à 20 , ajoute 5 am 3 d'acide sulfurique binormal, concentre, reprend dans de 18go\tat: d'éth;j11e et de l'acide sulfurique b1normal sépare, lave l'acotais clt6thyle avec de l'acide sulfurique binormal,, puis altcrnativemont avec une solution à 10% de bicarbonate de potal sium et à l'eau, puis finalement à l'eau, sèche et évapore à souri vide.
Il reste 0,94 g (95% de la théorie) d'une huile incolore qui cristallise après adjonction de méthanol et fond alors à 157-158 .. Il s'agit de 1'ester méthylique de
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la salicoyl-glycyl-DL-phénylalanyl-glycine de formule :
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Le perchlorate utilisé comme matière de départ peut être préparé comme suit :
L'ester méthylique de la saicoyl-DL-phénylalanylglycine peut être préparé suivant le procédé indiqué à l'exemple 1.
Dans 25 cm3 d'éther, on met en suspension le chlorure de carbobenzoxy-glycyle obtenu à partir de 2,1 g (10 mMol) de carbobenzoxy-glycine, puis refroidit à -70 . Tout en agitant fortement, on ajoute alors un mélange de 10 cm3 de pyridine et de 1,4 cm3 (10 mMol) de triéth @amine, refroidi à -15 ; la température ne monte pas au-dessus de -60 On ajoute ensuite goutte à goutte une solution de 2,1 g = 5,9 mMol d'ester méthylique de la salicoyl-DL-phénylalanvl-glycine dans du tétrahydrofuranne ; il se forma un précipité blanc pulvérulent.On laisse le mélange se réchauffer jusqu'à -15 et le laisse reposer une nuit à cette température.
Or élimine la pyridine et le tétrahydrofuranne sous vide, reprend dans de l'acide chlorhydrique binormal et de l'acétate d'éthyle, lave ce dernier avec de l'acide chlorhydrique binormal, avec une solution à 10% de bicarbonate de potassium, puis alternativement avec une solution binormale de carbonate de sodium et 1; l'eau, puis finalement à l'eau, sèche sur du sulfate de sodium et évapore sous vide.
On obtient 3 g d'un résidu incolore (91% de la théorie) qu'on ne peut purifier qu'en le recristallisant à plusieurs reprises dans un mélange de chloroforme et d'Éther.
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On obtient l'ester méthylique à l'état pur pour l'analyse,
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de l'0carbobenzoxy-.glycyl)-salicoyl-DL-phenylalanyl-glycin sous la forme de petites aiguilles très fines, fondant à 141,5-143,5 .
Dans 25 cm3 d'acide acétique glacial et en
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pedsence de 1,33 cm d'une solution normale d'acide porchloriquc dans de l'acide acétique glacial et de 300 mg de charbon au palladium à 10% ds :9al1ad:.ttUl.. on soumet à i'h dr.oii.:iolii.
725 mg (lue33 mlfiol) dtat,-.^cr mûthYliquc Ci l'0-(oarbobunscyLorsque la paeio est termîndo, on sépare le charbon par l'il tra tien et évapore 1@ filtrat sous vide à 'lU'\,) ;:':'qJ":;l'ature ie bain de 40 . La ;>ì=idu cristallise ëtana un mélaagc d'acide acétique glacial it à'é.lli-=;%On obtient ainsi le perchlorate de l'eilar mJthy11quo do 110...( glycyl)...ca11coYl..DL...ph6nYlalal1IYl-g¯ycine BOUS la for4,h.,> de fines petites aiguilles qui fondent à 1840 en se désompoaant.
Lorsque, pour la purification et l'analyse, on recristallis ( ce composé dans un mélange d'acide acétique glacial et d'éther, le point de fusion baisse à 1800 (avec décomposition).
Exemple
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Dans 100 com3 de chloroforme ou de t<àtrahy;Âr o±:ii.a:zne, on mat en suspension 1 g de perchlorate de l'ester mélhyliqu.i de 11 0-( glTcYl)..salicoYl..DL""phénYlnlat1Yl-glyc1ne.'l ajoute à la
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suspension obtenue un équivalent de triéthylamine et laisse le tout reposer 12 heures à une température do 20 .En concentrant et en reprenant dans de l'acétate d'éthyle et de l'acide chlorhydrique binormal, on obtient, à cote de glycine
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et d'ester méthylique de la salleoyl-DL-phénylalanyl-g.yoins, l'ester méthylique, décrit ci-dessus, de la salleoyl-glycyl- DL-phénylalanyl-glyoine.
Exemple 9 @
On procède comme dans l'exemple 8, mais utilise 3 équivalents de triéthylamine et obtient ainsi, sous forma
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pure, l'ester attendu du oalleoyl-tripetide. Exemple 10
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--...-....-........
Suivant les indications données dans les exemples 8 et 9, on traite par 3 équivalents de triéthylamine, 1 g de
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perchlorate de l'ester méthylique de 1'0-(glyayl)-saliooyl- L-phénylalanyl-glyoine (formule comme dans l'exemple 7), et l'on obtient avec un rendement théorique l'ester méthylique
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de la salicoyl-glyoyl-L-phénylalanyl-glyoine. Cet ester cristallise dans un mélange de méthanol et d'eau avec 1 mol d'eau de cristallisation et fond à 92-930 [a]D24- -16,7 ¯ 2 (c = 1,02 dans le dioxanne). En ce qui concerne la formule, voir l'exemple 7.
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Le perchlorate servant de matière de dJpart peut Qtre préparé suivant le procédé décrit dans l'exemple 7 pour
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Iti forme DL. Ester méthylique de l'0-(oarboben3oxy-glycyl)- 8a:Licoyl-1-phén'ylalanyl-g1ycinè : cristaux obtenus au moyen d'éthyle et d'4thar de pétrole, fondant à 157-159 . Perchlorate de l'ester méthylique Je l'0-'(glyoyl)-'Gallooyl-*Lphénylaianylglyciiae poudre microoristal11ne fondant à 110..120 en se décomposant après avoir broyé avec du chloro- forme. Ce perchlorate doit être utilise sous cette forme
Exemple Il
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",,,"--"¯""".IIS"""'" Chaque fola 1 g de perchlorate de l'ester méthyliquo-t'L' 1.
JO-(DI,,,,phél1ylalal1Yl)-aa11coYl-DL...phél1ylalanyl-glycine G#> formule
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est ; a) dissous dans 100 cm3 d'une solution binormale de triéthylamine dans du chloroforme ou du phénol, et la solution ainsi obtenue est abandonnée à elle-même pendant 14 heures à 21 .
@
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b) mis en suspension dans 100 cm3 de méthanol ou de chloroforme ou de tétrahydrofuranne, puis la suspension
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est additionnée de 3 équivalents de triéthylamine et abandonna à elle-même pendant 14 heures à 21 ; c) mis en suspension dans 80 à 100 cm3 de chloroforme ou de tétrahydrofuranne, puis la suspension est additionnée d'un équivalent de triéthylamine et conservée une nuit à la température ambiante'
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d) mis en suspension dans 80 à 100 "' 6j chloro- forme ou de tétrahydrofuranne, puis la suspension est @d- ditionnée de 0,95 équivalent de triéthylaminc et comservée une nuit à la température ambiante;
e) dissous dans 100 cm3 de pyridine anhydre et la solution est abandonnée à elle-même pendant une nuit à 21 .
On obtient dans tous ces cas l'ester méthylique
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de la xalicoyl-DL--phénylalanyl-DL-phénylalanyl-glycine, do formule
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Il cristallise dans l'éthanol et un peu d'eau et fond à 181-184 .
Le perchlorate de l'ester méthylique de l'O-
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(DL-phény1alanyl)-salic0./1-DL-phény1alanyl-g1ycine utilisé comme matière de départ peut être préparé de la façon suivante:
Suivant l'exemple 1, on transforme en chlorure 0,299 g de carbobenzoxy-DL-phénylalanine (1 mMol) et les fait réagir sur 450 mg (1,25 mMol) d'ester méthylique de la
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salicoyl-DL-phénylalanyl-glycine dans 2 ci de pyridine. Le traitement subséquent est identique à celui indique à l'exemple 1.
L'ester méthylique de .' 0- ( SrhObellzOxy-D:. -,h";n;:l;. 1 < /1).. salleoyl-DL-phénylalanyl-glycîne obtenu est un Mélange huileux du d1aatéréomères. L'hydrogénolyse suivant les i. : : \.Jatl01'lZl <1# l'exemple 1 fournit avec un rendement quantitatif un mélange, cristallisant partiellement, de perchlorates stéréoisomères
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de ltester méthylique de l'0-'(DL-'phënylalany.T.)-"salicoyl-DL'phny.a,anyl.-g.ye.ne, qui peut être utilisd <iL;>ecteTfi3At f cette forme.
Exemple 12
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Dans 100 cm de ' 1. i ?' :,i .r.:":l.,y on met en suspension 1 g d'iodhydrate d'anilide 1r in ,3.,!D,">h±nylalanyl)-thlo-Balicoyl<-glyaine fondant à 1'?lÎ;1.'Jfù, en se décomposant, de formule :
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ajoute à la suspension 3 équivalents de triéthylamine et conserve 12 heures à 22 .
On obtient l'anilide de la thio-
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sa11coYl-phénYla1anY1-g1ycine, de formule :
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L'iodhydrate utilisé comme matière de départ peut être préparé comme suit
A 1 g (2,91 mMol) d'un mélange de dichlorure du disulfure de l'acide thiosalicylique et de 1,50 g (10 mMol;
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dtani11de de la glycine dans 10 cm3 de tétrahydrofuranno., on ajoute, à O , 10 cm3 de pyridine et laisse reposer 14 heures à 0 .
Après avoir évaporé sous vide, avoir réparti entro de l'acétate d'éthyle et de l'acide ohlorhydrique avoir ensuite extrait la solution d'acétate d'éthyle avec une solution de bicarbonate et avoir évaporé sous vide l'acétate d'éthyle, on isole à l'état brut le disulfure de l'anilide de la thio- salicoyl-glycine 1 cristaux, obtenus au moyen d'acide acétique glacial et d'eau, fondant à 208-210 , rendement 1 g (61% de la thdorie).
Dans 100 cm3 d'éthanol et 20 cm3 d'eau, on met en suspension 1 g (1,75 mMol) du disulfure. A la suspensionbouillante, on ajoute 2 g de zinc en poudre et, lentement,
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20 3 !acide chlorhyc1ric!u:; binor'i'jll tl"'avail1a.lt i,i.., d'acide ohlorhydriquB travaillaut
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atmosphère d'azote ou d'anhydride carbonique. Lorsque tout
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vst passe en solution; on ajoute encore à chaud 200 c. d'au et laisse reposer 14 heurvJ à 00. Oa -ju2pare par filtration le'3 cristaux précipites G?r;niliûc àe la thlosallcoylglycin<3 las sécha et les recristallise au moyen d'acétate d'ethylo et de benZG110. Point do fusion 177-179 , rondement 860 mg (86# de
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la théorie).
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C01'.\illle indiqua eang lexeMpI 1, on trnnsfoi'Me chlorure d'acide 600 mg (2 mî=lol) de capbobenzoxy-DLph4nyla.aiilrie et fait r6agîr le chlorure d'acide obtenu, dans 10 cm3 de pyrldirlo, sur 286 mg d tanl1ido d'3 la thiosalleoylg'lyciue (1 mi>Iol) . Après avoir :La pyridino soue v1(1 on repartit le résidu entre 6 11ac';;ta d '&thY1C et do l'acids (,hlorÍ:lyc.;::'iquê" extrait la solution d'acétate d'6thylo jusqu'à épuisement avec une solution de bicarbonate, la lave juaqix'à --<action neutre la sèche et l'évapora sous vide.
Apres rC0itallisation dans un mélange de mcbhauol et d'un peu d'eau, on ob.bi;:nï 550 mg (62% de la théorie) dtanilîde de la S-(ear'u-obc.lZoxy.DL-ph0nylalanyl)-th101:ml1coYlglyc1'i:1eg fondant à 1119 Dans 20 cm3 d'acide aodtique glacial, on dissout 1[ C 0 mg OI'7:t nf101) d'an11iQ' de la S-(08rbob'9nzo:y-DL''I>h0l1ylal!l:.lyl) ,.'i::hiosalicoylglycin0 et t.P=ii<.e le tout à uae température ck: bain. de 600e pendant 3 h2urs3 iveo 500 mg d'iodurc de phosphouium. Après avoir xépaié par filtration Illodur,- de
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phosphonium qui n'a pas réagir on élimine l'acide acétique
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gJac 1 al sous vide, le résidu crietal1isw spontanément. On li reoristallise au moyen d'acide acétique glacial et d'un peu d'éther de pétrole.
On obtient 200 mg (50% de la théorie) d'iodhydrate de l'anilide de la S-(DL-phénylalanyl)-thio-
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salîcoylglycîne, fondant à 190-196 (en se décomposant), et suintant à partir de 176 .
La scission du groupe N-acyle dans les composas
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obtenus suivant les exemples ci-dessus peut at -- cXàcu'c±c, par exemple, comme suit : z . DL-phép.Y.al!lnYl-gl;yc1ne 1. Sa.icoy.-DL--phnylalanyâg.yc3.ne.
Dans 1,2 cm3 d'une solution demi-normale d'hydroxyde de sodium (0,6 mMol), on dissout 100 mg (0,28 mMol) d'ester
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méthylique de la saliaoyl-DL-phénylalanylglyaine obtenu suivant les indications de l'exemple 1, et laisse reposer 15 heures à la température ambiante. On acidifie avec de l'acide chlorhydri- que binormal, extrait à l'acétate d'éthyle, lave ce dernier à neutralité, sèche, évapore sous vide et obtient la saliooyl-
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DL-phénylalanylglyeine sous la forme d'une écume incolore avec un rendement de 85 mg (90% de la théorie); cristaux obtenus au moyen d'alcool et d'eau, fondant à 212-214 .
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2. o.-mhy1-sal3coyl-DLrpnny3.a,anylglycine.
Dans 12 cm3 de dioxanne, on dissout 535 mg (1,5 mMol) d'ester méthyliquc de la salicoyl-DL-phénylalanyl-
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glycine et ajoute 5 ml'Jol de diazométhane dans de l'éti12r.
Après avoir laissé reposer 6 heures, on évapore à sec sous vide la solution qui est toujours encore jaune et saponifie directement le résidu avec 1,8 cm3 d'une solution normale
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d'hydroxyde de sodium dans 10 em3 dtacdtone. Au bout do 2 heures on acidifie, élimine 1'acétone sous vide, reprend le précipita dans de l'acétate d'éthyle., lave la solution d'acétate
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d'éthyle Jusqu'à réaction neutre, seehe et évapora à ses. Ou obtient ainsi 360 mg (67% de la th6arte) d' .,J.ùàtiiyl-i,ùii,.;yilDL..ph6nylalanylglycine que l'on sotunet àiroctél, ;>nt au ti>#5.ri:.i>=iùi indiqué 01-densoue, 3.
Traitement par le sodium dans de l 'sIIl2on1ao litfn1a:... a) Dans 70 cm"dfammon1ao liquida, on dissout 3,42 g (10 mt401) de nalleoyl-DL-ph6nylalanylglyolne ou 3o56 g (10 1::ilal) d'0-mé'bhyl-salicoyl-.DpMnylalanylglyoine et ajoute 1,84 s de sodium. Lorsque tout le sodium a réagi, on évapore l'au@@oniac
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et reprend le résidu dans 50 em3 d'acide chlorhydrlque bai- normal. Après avoir extrait à l'acétate d'éthyle, on évapore la solution aqueuse acide à son, reprend le résidu dans de l'alcool absolu, filtre et évapore l'alcool sous vida.
Il
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reste le chlorhydrate de la DL-phn11alan31g1yoine. b) On procède comme indiqué sous a), en utilisant 0,92 g de sodium. c) On procède oomme indiqué Bous a), en utilisant 0,46 g de sodium.
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II. CMycyl-DL-phënylalanyl-glyoine 1. Salicoyl-giycyl-Dh-phnylalanylglyeine.
Dans 6 em3 d'une solution demi-normale d'hydrocyd de sodium, on dissout 413 mg (1 mMol) d'ester méthylique de la salicoyl-glyoyl-DL-phénylalanylglycine décrit à l'exemple 7, et laisse le tout reposer pendant 16 heuras à 20 . Après avoir acidifié, on extrait à l'acétate d'éthyle, lave ce dernier jusqu'à réaction neutre et évapore sous vide On obtient 330 mg (83% de la théorie) d'un résidu cristallin incolore qu'on recristallise au .oyen d'alcool et dteau, en vue de la purification et de l'analyse. Il fond à 203-205 .
2. Traitement par le sodium daias de l'ammoniac liquide.
Dans 20 cm3 d'ammoniac liquide, on dissout 1 g
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(2,5 nfl401) de sa..coyl-glycy3.-DL :hdnylalanyl-giya.ne et ajoute 0,46 g de sodium. Lorsque tout le sodium a réagi, on évapore l'ammoniac et reprend le résidu dans de l'eau. Après avoir amené à un pH de 6 à 7 à l'aide d'un échangeur d'ions acide (Amberlite IR 120), avoir filtre et avoir extrait à l'acétate d'éthyle, on évapore à sec la solution aqueuse et
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obtient dans le résidu la glycyl-:I>L-phénylale.nylglyc1ne.