CH357729A

CH357729A - Procédé pour la préparation de glutathion

Info

Publication number: CH357729A
Authority: CH
Inventors: Amiard Gaston; Heymes Rene; Velluz Leon
Original assignee: Roussel Uclaf
Priority date: 1955-12-23
Filing date: 1956-12-14
Publication date: 1961-10-31

Description


  



     Procédé    pour la préparation de glutathion
   L'objet    du présent brevet est un   procédé    de préparation du L-glutathion ou   dy-L-glutamyl-L-cystéinyl-    glycine,   tripeptide-naturel    de   formule    :
EMI1.1     
 dont   l'importance physiologique    a   óté    mise en   évidence    dans le    <  <  Symposium    of glutathione - Proceedings of the Symposium held at Ridgefield,   Connecticut,    Novembre 1953, New York Acad. Press.   1954     .



   Ce   composé était difficilement accessible    jusqu'ici, les   méthodes employées    utilisant   généralement    comme agent de blocage de la fonction mercaptan, le chlorure de   benzoyle.    On   aboutissait généralement    a, u peptide correspondant au glutathion dont la fonction amine était bloquée par un groupement carbobenzoxy, le soufre   étant benzylé.

   Comme l'hydro-    génolyse ne peut   pas s'appliquer    aux   compos, és   
S-benzylés, on était astreint, en dernier lieu,   à 1ibérer    la   fonction mercaptan    du glutathion soit par action du sodium dans   l'ammoniaque liquide,    soit par action de   l'indure    de phosphonium, deux   méthodes    difficilement applicables dans   l'industrie.   



   Dans le   brevet suisse N     338197 la titulaire a décrit la   préparation des N-trityl-aminoacides    et leur utilisation   pour    la préparation de N-peptides par la méthode aux anhydrides mixtes, Il a été montré ultérieurement dans   le    brevet suisse   No    343407, que les   N-trityl-aminoacides permettaient    un   accès aisé    aux N-trityl-peptides en les faisant réagir sur 1'ester d'un aminoacide   en présence    de   dicyclohexylcarbo-    diimide, agent de   condensation préconisé    en synthèse peptidique par Sheehan et Hess (J. Am.

   Chem.   Soc.,    1955, 77, 1066) pour d'autres   dérivés    d'aminoacides, 1'ester du peptide   N-trityle    ainsi obtenu   étant ensuite      saponifié    puis   détritylté    par   l'acide acétique    aqueux chaud.



   Finalement, il a   éé préconisé dans    le brevet suisse   No    348161   l'emploi    de   l'ester a-benzylique    de   l'acide N-trityl-glutamique pour accéder    aux   Y-glut-    amyl-peptides par   oondensation    en présence de dicychlohexylcarbodiimide avec un ester bezylique   d'un    aminoacide. On   libòre ensuite    les fonctions acides du   Lrglutamyl-peptide-N-trityle    par hydrogénolyse et   détrityle    par   l'acide acétique    aqueux chaud.



   Le   L-glutathion    est   préparé    par   synthèse selon    le   procédé    de la   pr6sente invention    au départ de la   L-cystéine    de formule I, la   première étape    consiste à trityler la   L-cystéine,    par exemple par réaction du chlorure de trityle sur la L-cystéine dans un   mélange    d'eau et   d'un    solvant approprié comme l'alcool ou   1'6ther an pr6sence    d'une base organique   telle que    la   diéthylamine qui    a   été utilisée    par Zervas   (IVe Congres International    de Chimie pure et appli  queue)

      pour la   tritylation    d'a-aminoacides non   sou-      frets.    On   eviteaini    la   préparation préalable    de l'ester de la L-cystéine avant tritylation et sa saponifica  tion ultérieure.    On peut séparer la N, S-ditrityl  cyseine    de   formule 11    sous forme de son sel de diéthylamine grâce à l'imolubilité de ce sel dans   l'éther    et l'alcool. Au cours de la réaction, il se forme simultanément un peu de   S-trityl-L-cysteine    de formule III, qu'il est facile de séparer en mettant à profit son insolubilité dans   l'éther.    



   La N,   S-ditrityl-L-cysteine    obtenue à partir de son sel de   diéthylami, ne est condensée    avec un ester de cette glycine, par exemple le   glycinate    d'éthyle ou   de méthyle,    en présence   d'un    carbodiimide   disubstitué    tel que le dicyclohexylcarbodiimide, le   diisopropylcarbodiimide    ou le   méthyl-terbutylcarbo-    diimide.   L'ester    de la   N, S-ditrityl-L-cysteinyl-glycine    de formule IV ainsi obtenu est   détritylé    sur   l'atome      d'azote,    par exemple au moyen d'acide chlorhydrique en solution hydroacétonique à température ambiante.



  On fait ensuite réagir lacide N-trityl-L-glutamique de formule   VI,    avec 1'ester de   S-trityl-L-cysteinyl-    glycine en présence   d'un    carbodiimide   disubstitué    pour obtenir 1'ester du N, S-ditrityl-L-glutathion de formule VII.

   On saponifie ensuite 1'ester du tripeptide avec   formation    du N, S-ditrityl   glutathion,    puis on   détrityle celui-ci,    en   général    d'abord sur l'atome d'azote, par exemple au moyen d'acide acétique aqueux chaud,   on aboutit    au S-trityl-L-glutathion de formule VIII, lequel est à son tour   détritylé    sur l'atome de   soufre, par    exemple par traitement avec une solution   chloroformique    d'acide chlorhydrique gazeux. On obtint ainsi le chlorhydrate de L-glutathion d'où on libère le L-glutathion de formule IX.



  Les   réactions susmentionnées    peuvent   etre illustrées    par les   équations    suivantes :
EMI2.1     


<tb>  <SEP> HS-CH2-CH-COOH
<tb>  <SEP> I
<tb>  <SEP> 2
<tb>  <SEP> I
<tb> C6H5 <SEP> CoH5
<tb> C6Hs/C-S-CH2-ICH-COOH <SEP> + <SEP> CoH7C-S-CH2-ICH-COOH
<tb> CsHs/I <SEP> CeHs <SEP> CsHs/NH
<tb>  <SEP> C6H5
<tb>  <SEP> C6Hs
<tb>  <SEP> (III)
<tb>  <SEP> (II)
<tb>  <SEP> H2N-CH2-COOR
<tb>  <SEP> en <SEP> présence <SEP> de <SEP> dicyclohexylcarbodiimide
<tb> C6Hs\,
<tb> CeHs-C-S-CH2-CH-CONH-CH2-COOR
<tb> C6H5 <SEP> C6H, <SEP> 5
<tb>  <SEP> NH-CC6Hs
<tb>  <SEP> Cr, <SEP> H5
<tb>  <SEP> (IV)
<tb> CsHs\
<tb> C6Hs <SEP> jC-S-CH2-CH-CO-NH-CH2-COOR
<tb> C6H5 <SEP> NH2
<tb>  <SEP> HOOC-CH2-CH2-CH-COOH
<tb>  <SEP> I
<tb>  <SEP> /CcHs
<tb>  <SEP> /NH <SEP> C/C <SEP> H
<tb>  <SEP> C6H.

   <SEP> 5
<tb>  <SEP> /C6H5
<tb> CsHs
<tb> C6Hs\C-S-CH2-CH-CONH-CH2-COOR
<tb>  <SEP> I
<tb> CEHs/NH
<tb>  <SEP> CL
<tb>  <SEP> UR2
<tb>  <SEP> I
<tb>  <SEP> C6H5 <SEP> CH2
<tb>  <SEP> I
<tb>  <SEP> C6HsC <SEP> ¯NH¯ <SEP> CH
<tb> /I <SEP> (VII)
<tb>  <SEP> CcHs/, <SEP> ICOOH
<tb>  
EMI3.1     

 Le nouveau procédé excelle donc par une grande simplicité car il   n'utilise    qu'un minimum de stades et un seul et   unique réactif    de blocage du soufre et de   l'azote.    Ses particularités marquantes sont la détritylation séective à l'azote par   l'action de l'acide    acétique aqueux à chaud ou de   l'acide chlorhydrique    en solution hydroacétonique à froid,

   et la   détrityla-    tion du   S-trityl-L-glutathion    au soufre par l'acide chlorhydrique gazeux en   chloroforme, réactions    faciles   à réaliser à l'échelle    industrielle et ne provoquant   auoune racémisation.    En outre, il utilise la conden  saut, ion    de l'acide N-trityl-L-glutamique avec les esters de la   S-trityl-L-cysteinyl-glycine.   



   Dans les exemples suivants, les points de fusion sont des points de   fusion inskantanée déterminés    sur bloc de Maquenne. Les   formules    des composés figurent sur le   schéma annexé à    la fin de la description.



  Le mode   opératoire décrit    peut   être évidemment    employé au départ des aminoacides racémiques ou des énantiomorphes. De même, il est possible de   détrityler    le N,   S-ditrityl-L-glutathion simultanement      à l'azote    et au soufre. On peut notamment changer de solvant, utiliser un autre ester   de la S-trityl-Lr    cystéinyl-glycine que celui   mentionné, ou    employer, comme agent de condensation, un autre carbodiimide   disubstitué    que ceux   mentionnés.   



   Exemple
 Préparation de la N,   S-ditrityl-L-cysteine   
 de   formule 11   
 Dans une solution, refroidie à 0  C, de 25 g de   chlorhydrate    de cystéine, de formule   I [&alpha;]D20 = +5,5     (c = 1    /o,    acide chlorhydrique N) dans 480   cm3    d'eau, on introduit,   sous courant d'azote    et agitation   m6canique, 480 cm3 d'6ther    et 80   cm3      de diethyl-    amine et refroidit à - 5  C. Sans   interrompre l'agita-    tion, on introduit rapidement   120 g    de chlorure de trityle et poursuit l'agitation pendant trois heures.



  Le   mélange réactionnel    devient une masse pâteuse assez difficile à agiter. On ajoute alors 150 à 200   cm3    de   chloroforme, décante    la phase aqueuse qui ne renferme que du chlorhydrate de   diéthylamine    et le chlorhydrate de cystéine qui n'a pas réagi. La
S-trityl-cystéine estérifiée par le   chlorure    de trityle ainsi que la N,   S-ditrityl-L-cystéine    sous forme de   sel    de   diéthylamine    et d'ester tritylique, passent dans la couche organique qu'on lave   à nouveau    avec 300 cm3 d'eau, sèche la solution chloroformique éthérée sur sulfate de soude et   concentre, après    filtration, à petit volume.

   On ajoute alors 100   cm3    d'alcool contenant 1 cm3 de diéthylamine et distille le solvant jusqu'à ce qu'il   ait entraîné    tout le   chloroforme. Le    sel de   diéthylamine    de la   N,-S-ditrityl-cysteine    de formule
II cristallise. On complète la cristallisation   plar addi-    tion progressive de 100   cm3      d'éther,    glace, essore et sèche.

   On obtint ainsi 55 g de sel pur se présentant sous forme d'aiguilles [a]   D20 = + 71  #   1 (c = 2    /o,    chloroforme), solubles en   chloroforme, très    peu solu  bles    en alcool, insolubles dans 1'eau et   l'éther.    Les   réactions à    la ninhydrine et au nitroprussiate de sodium sont négatives.



  Analyse : C45H46O2N2S = 678,91
Calculé : C 76,61 % H 6,83 % N 4,13 % S 4,72 %   Trouvé : C79,    4    /o H6,    9   O/o N 4, 0'O/o S 4,    7    /o   
Ce   composé    n'est pas   décrit    dans la littérature.



   A partir des eaux mères de cristallisation on obtient un   deuxième    jet de produit portant le rendement global à 70 g environ. En reprenant ce sel par   l'eau acidulée, on    le   décompose    avec mise en liberté de la N, S-ditrityl-L-cystéine de   formule II,    qui peut être facilement extraite par   l'éther dans    lequel elle est assez soluble.   L'évaporation    de   l'éther fournit le    produit   brut à l'état    amorphe.

   Le résidu provenant de la concentration de la   solution mère éthéro-    alcoolique du sel de   diéthylamine    de la N, S-ditrityl  L-cystéine    et renfermant les esters trityliques de la   S-trityl-L-cystéine et    de la N,   S-ditrityl-L-cysteine    est traité dix minutes au reflux par   l'acide acétique      aqueux à    50 % en solution éthérée. Il fournit un mélange de N,   S-ditri, tyl-L-cystéine et    de S-trityl-Lcystéine qu'on peut séparaer grâce à l'insolubilité de   cette defnière dans l'éther. La S-trityl-L-cystéine    est   purifiée    par recristallisation en   alcool.

   Elle    se   pré-    sente alors en aiguilles,   F = 202-205  C, [&alpha;]D20      ¯-I-19    1 (c = 2%, soude N/10), solubles dans les   alcalis dilués aqueux,    peu   solubles dans l'alcool    et les acides dilués aqueux,   insolubles    dans   l'éther    et l'eau. Elle donne une réaction positive à la ninhydrine et une   réaction négative    au   nitroplussiate de    sodium.



  Analyse C22H21O2NS = 363,47
Calculé : C 72,69 % H 5,825 N 3,85% S 8,82%
Trouvé : C 72, 8 % H 6,0 % N 3,6 % S 8, 4   0/o   
 Condensation de la N,S-ditrityl-L-cystéine, II,
 avec le glycinate d'éthyle
 On dissout 13, 6 g (0, 02mol.) de sel de   diéthyl-    amine de la N, S-ditrityl-L-cystéine dans 50   cm3    de chloroforme et agite avec 20 cm3 d'acide chlorhydri que normal pour libérer l'acide qui passe dans le chloroforme.

     Après décantation,    on sèche la couche   chloroformique    sur sulfate de soude, filtre, distille à sec sous vide et reprend par 20   cm3    de chlorure de   méthylène.    On verse dans cette solution, en agitant, 2, 5 g de glycinate d'éthyle dissous dans 10 cm3 de chlorure de   méthylène    et 5 g de dicyclohexylcarbodiimide, abandonne une nuit, ajoute 1 cm3 d'acide acétique pour détruire le   d'icyclohexylcarbodiimide    en excès, filtre le   précipité    de   dicyclohexylurée      formé    et lave ce   précipité    au chlorure de   méthylène.   



  Après avoir réuni le   filtrat    et le liquide de lavage   dans, une    ampoule   à décanter,    on lave   à l'acide    chlorhydrique normal pour   éliminer    le glycinate d'éthyle qui n'a pas réagi, puis   a 1'eau, a 1'ammaniaqwe    et à l'eau. Le chlorure de   méthylène    est   séché    sur sulfate de sodium, filtré et   évaporé à    sec. On obtient ainsi environ 16 g de N,   S-ditrityl-L-cysteinyl-glycinate    d'éthyle de formule IV   (R = CHS)    sous forme de produit brut   pulvérulent, suffisamment    pur pour la suite des   opérations.   



     Détrtylation à    l'azote
 du N, S-ditrityl-L-cystéinyl-glycinate d'éthyle
 de   f ormule I V   
 16 g du   derive de formule IV    est repris par 40 cm3 d'acétone. On ajoute 10 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N et agite à la température ambiante. La   solution    se clarifie d'abord avec un   léger échauffe-    ment puis se trouble par suite de la   cristallisation    du   triphénylcarbinol.

   Après    avoir abandonné un quart   d'heure,    on ajoute au filtrat 10   cm3    d'eau et distille une partie de   l'acétone, on dilue    par 50   cm3    d'eau et extrait le chlorhydrate   da S-trityl-L-cysteinyl-gly-    cinate d'éthyle au   chloroforme à    deux reprises. Les extraits chloroformiques réunis sont   séchés    sur sulfate de soude et évapor6s à sec après filtration.   Le    résidu est repris par   100      cm3    d'éther et 50   cm3      d'éther    de   pétrole,    le composé de formule V (r = C2H5) précipite à l'état pulvérulent.

   Après   essorage    et lavage   à l'éther,    il est   seche. Il est    suffisamment pur pour la condensation avec l'acide
N-trityl-glutamique. Le rendement est de 8, 4 g de chlorhydrate de   S-trityl-cysteinyl-glycinate d'ethyle    de formule V brut (soit   86, 0/o    par   rapport à    la N, S  ditrityl-Lrcysteine    de départ).



   Par saponification de ce produit par deux minutes de chauffage au bain-marie dans 10 volumes de   potasse hydroalcoolique    normale suivie d'une acidification, filtration et   recristallisation    en alcool aqueux, on obtient l'hydrate de   S-trityl-L-cysteinyl-    glycine sous   forme de feuillets incolores,    F =   1200    C environ (avec   déshydratation), [&alpha;]D20 = + 17,5  # 1    (c = 2    /o,    soude N/10 en   mathanol a 90 /o)      (pro-    duit anhydre).

   Le produit se déshydrate à 80  C.   Il    est soluble dans le   chloroforme    et les alcalis dilués aqueux, peu soluble dans les acides dilués aqueux et   l'alcool,    insoluble dans l'éther. Il ne donne pas de   réaction avec    le nitroprussiate de soude.



  Analyse : C24H24N2O3S = 420,52
Calculé : C 68,54 % H 5,75 % N 6,66 % S 7,62 %
Trouvé : C 68,3 % H 5,   8 O/o    N 6, 4 % S 7, 2 %
 Ce composé est nouveau.



   Préparation de l'acide   N-trityl-L-glutamique   
 Cet acide est obtenu par   hydrogénolyse sélective    du N-trityl-glutamate de dibenzyle. 57 g de N-tritylglutamate de   dibP < nzyle, decrit    dans le brevet suisse   No    344714, sont dissous dans 500   cm3 d'acétate    d'éthyle.

   On introduit du noir palladié (préparé par   hydrogénation d'un mélange    de 15 g de noir   végétal    et 5   cm3    de chlorure   palladeux à    20    /o    dans 200   cm3    d'eau) et ajoute 27 cm3 de   triéthylamine    pour salifier l'acide N-trityl-glutamique au fur et à mesure de sa libération par hydrogénolyse et éviter ainsi la   détritylation.    On   hydrogène jusqu'à    fixation de la   quantité théorique d'hydrogène,    ce qui demande   environ quarante-cinq minutes,    essore le catalyseur, le lave   à l'acétate d'éthyle,

   réunit    le liquide de lavage au   filtrat précédent    et concentre à 100   cinq    environ.



  Après refroidissement, il y a prise en masse. On   ajoute 100 cm3 d'ether,    essore, lave   à l'éther    et sèche   à 800    C.   Il    y a départ partiel de   triéthylamine    et lon obtient finalement 32 g de sel acide de   triéthyl-      amine    de l'acide N-trityl-glutamique. Une   récupéra-      tien à    partir des eaux mères porte le rendement global   a 81' /o (40 g).    Le sel acide se   recristallise    dans l'acétae d'éthyle.

   Il sc pr6sente sous forme d'aiguilles, F = 100  C   (pâteux), [&alpha;]D20 = -32  #    2 (c = 2    /0,    chloroforme), solubles dans l'eau, le chloroforme et   l'alcool,    insolubles dans   l'éther.   



  Analyse : C30H38O4N2 = 490, 63
Calculé : C 73,   44 O/o    H 7, 81    /o    N 5, 71    /o   
Trouvé ; C 73,2 % H 7, 9 % N 5, 5    /o   
 Ce composé est nouveau.



   Par reprise au chloroforme et décomposition par la   quan, tité calculée d'acide chlorhydrique,    il donne l'acide N-trityl-glutamique de formule VI  &  l'état amorphe   [a] D =-f-27, 5    2   (c = 2 O/o, m6thanol).   



  Le même acide   peut être    obtenu par tritylation directe de   l'acide L-glutamique    en présence de   diethylamine dans.    des   conditions    similaires   à celles      décrites pour    la   tritylation    de la   cystéine ou    encore, par saponification du   N-trityl-glutamate de-mono-      méthyle ou éthyle.    Ce produit donne des sels bien oristallisés avec la   diéthylamine    et le L   (+)-thréo-l-      p-nitrophényl-2-aminopropanc-1,    3-diol.



   Condensation de l'acide N-trityl-glutamique
 avec le S-trityl-L-cystéinyl-glycinate d'éthyle
 et saponification
 18 g de chlorhydrate de   S-trityl-L-cysteinyl-gly-    cinate d'éthyle sont dissous dans 50 cm3 de chlorure de   méthylène.    On lave la solution avec de l'ammoniaque mormal en   léger excès    pour déplacer la base, puis   à l'eau, sèche    sur sulfate de sodium, filtre et ajoute 9, 5 g de dicyclohexylcarbodiimide puis 19, 6 g de sel acide de   triéthylamine    de l'acide N-trityl-glutamique décrit ci-dessus.

   Après une nuit, on ajoute 2   cm2    d'acide acétique pour détruire le dicyclohexyl carbodiimide en excès et filtre la   dicyclohexylurée      formée après    un quart d'heure   d'abandon.    Après essorage et lavage au chlorure de   méthylène    de la   dicyclohexylurée,    on réunit les chlorures de   méthy-      lène,    on les lave   à l'acide    chlorhydrique N/2, puis à   l'eau, sèche    sur sulfate de soude, filtre et évapore à sec.

   On obtient ainsi   l'ester éthylique    du   N, S-ditri-    tyl-L-glutathion brut de formule VII, que   l'on    reprend par   l'alcool    dont on distille une partie pour chasser le chlorure de   méthylène.    On chauffe au bain-marie et ajoute petit à petit 80   cm3    de soude normale. La saponification est terminée en dix   minou-    tes. On dilue par 200   cm3    d'eau, refroidit à la   tem-      pérature    ambiante et acidifie par 81 cm3 d'acide chlorhydrique N et extrait au chloroforme.

   L'extrait   chloroformique    est   lavé à l'eau, séché    sur sulfate de soude et   évaporé à sec    sous vide après filtration. On obtient ainsi un résidu amorphe constitué par le
N, S-ditrityl-L-glutathion.



     Détritylation à l'azote    du N, S-ditrityl-L-glutathion
 Le résidu obtenu est repris par 60   cm3    d'acide acétique aqueux à 50    /o    et chauffé cinq minutes au bain-marie. Le   triphénylcarbinol précipite.    On dilue par 500   cm3    d'eau environ et extrait au chloroforme.



  L'extrait chloroformique est   lave a 1'Eau, seche    sur sulfate de soude,   filtré, passé    au noir puis concentre à faible volume. On précipite le S-trityl-L-glutathion brut de formule VIII par addition d'alcool absolu, essore et lave   à l'alcool    puis à l'éther. Après séchage, on obtient   16 g    (soit un rendement de   70 ouzo    par rapport aux deux constituants de départ) de S-trityl
L-glutathion brut VIII sous forme de produit   pulvé-    rulent blanc.



     Détritylaton    du   S-trityl-L-glcctathion   
 5 g de   dérivé    de   formule    VIII sont dissous dans 50 cm3 de   chloroforme    anhydre. On fait passer de l'acide chlorhydrique gazeux anhydre pendant quelques minutes. La solution se trouble et le chlorhydrate brut du L-glutathion de formule IX, précipite.



  On ajoute 50   cm3 d'6ther    anhydre, agite, essore le chlorhydrate hygroscopique, lave   à l'éther    sur filtre, le dissout dans 10 cm3 d'eau distillée et ajoute à cette solution, petit à petit, de l' Amberlite  IR4B de   façon à    ajuster le   PEI à    2. On filtre la   resine echan-    geuse d'ions, lave   à l'eau    et concentre le filtrat réuni aux eaux de lavage sous vide et sous azote, presque à sec, la température du bain-marie étant de   40     C.



  Le résidu est repris par   l'alcool à    75   n/o. Apres    abandon en exsiccateur, le L-glutathion   cristallise.    On 1'essore, lave   à l'alcool    et sèche. Le produit est identique sous tous les rapports au L-glutathion naturel.

Claims

REVENDICATION Procédé de préparation du L-glutathion, caracté- risé en ce qu'on trityle la L-cystéine, on fait réagir la N, S-ditrityle-L-cysteine ainsi obtenue en présence d'un carbodiimide disubstitué avec un ester de la glycine, on détrityle sur l'atome d'azote l'ester du dipeptide obtenu, on condense 1'ester de S-trityl-L cystéinyl-glycine ainsi formé avec l'acide N-trityl-Lglutamique en présence d'un carbodiimide disubstitué, on saponifie 1'ester du tripeptide avec formation du N, S-ditrityl-L-glutathion, on détrityle celui-ci sur l'atome d'azote et de soufre, puis on laisse cristalliser le L-glutathion.

SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce qu'on prépare la N, S-ditrityl-L-cysteine par action d'un excès de chlorure de trityle sur une solution aqueuse du sel de diéthylamine-de la cystéine en présence d'alcool ou d'éther, on isole le sel insoluble de diéthylamine de la N, S-ditrityl-L-cysteine, on libère la N, S-ditrityl-L-cysteine par acidification et extraction.

2. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que 1'ester de glycine employé est le glycinate de méthyle, de benzyle ou d'éthyle.

3. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce que le carbodiimide disubstitué est le dicyclohexylcarbodiimide.

4. Procédé suivant la revendication, caractérisé en ce qu'on détrityle l'ester de N, S-ditrityl-L-cys téinyl-glycine sur l'atome d'azote, par action de 1'aï- de chlorhydrique hydroacétonique ou par 1'acide ace- tique aqueux chaud.

5. Procédé suivant la revendication et la sous- revendication 4, caractérisé en ce qu'on condense 1'ester de S-trityl-L-cysteinyl-glycine avec l'acide N-trityl-L-glutamique en présence de dicyclohexyl- carbodiimide.

6. Procédé suivant la revendication et les sousrevendications 4 et 5, caractérisé en ce qu'on saponifie 1'ester du N, S-ditrityl-L-glutathion obtenu en N, S-ditrityl-L-glutathion.

7. Procédé suivant la revendication et les sousrevendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'on détri- tyle le N, S-ditrityl-L-glutathion sur l'atome d'azote par action de l'acide chlorhydrique hydroacétonique ou par l'acide acétique aqueux chaud.

8. Procédé suivant la revendication et les sousrevendications 4 à 7, caractérisé en ce qu'on détrityle le S-trityl-L-glutathion par l'acide chlorhydrique gazeux en chloroforme.

9. Procédé suivant la revendication et les sousrevendications 4 à 8, caractérisé en ce qu'on libère de son chlorhydrate, au moyen d'une résine échan- geuse d'ions, le L-glutathion, puis on laisse cristalliser ce dernier.

UCLAF Mandataire : A. Braun, Bftle